JP2023532170A - コロナウイルス及び／又は呼吸器合胞体ウイルス感染症の予防の方法 - Google Patents

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Abstract

本発明は、個体におけるコロナウイルス（ＣｏＶ）及び／又は呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症の可能性を予防又は低減するか、個体におけるＣｏＶ及び／又はＲＳＶ感染症に関連する症状の可能性若しくは重症度を予防又は低減するか、個体におけるＣｏＶ及び／又はＲＳＶ感染症の重症度及び／若しくは持続を低減するか、あるいは個体におけるＣｏＶ及び／又はＲＳＶ感染症を治療するか、ＣｏＶ及び／又はＲＳＶ感染症に感染した個体におけるウイルス排出を予防又は低減するか、あるいは集団におけるＣｏＶ及び／又はＲＳＶの伝播を低減するための、方法及び組成物に関するものであり、有効量の巨大分子を個体に投与することを含み、巨大分子は、１つ以上の表面基に結合した１つ以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分を有する３～５世代のデンドリマーを含む。本発明はまた、かかる巨大分子を含む組成物を送達するためのデバイスに関する。

Description

本発明は、個体に有効量の巨大分子を投与することを含む、個体におけるコロナウイルス（ＣｏＶ）及び／又は呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症の可能性を予防又は低減するか、個体におけるＣｏＶ及び／又はＲＳＶ感染症に関連する症状の可能性若しくは重症度を予防又は低減するか、個体におけるＣｏＶ及び／又はＲＳＶ感染症の重症度及び／若しくは持続を低減するか、あるいは個体におけるＣｏＶ及び／又はＲＳＶ感染症を治療するか、ＣｏＶ及び／又はＲＳＶ感染症に感染した個体におけるウイルス排出を予防又は低減するか、あるいは集団におけるＣｏＶ及び／又はＲＳＶの伝播を低減するための方法及び組成物に関する。本発明はまた、巨大分子を含む組成物を送達するためのデバイスに関する。
ウイルス性呼吸器感染症（ＶＲＴＩ）は、世界で最も一般的な感染症であり、公衆衛生上の主要な懸念を示す。呼吸器ウイルスは、全ての年齢層に感染症を引き起こし、罹患率及び死亡率に加担する主要な要因である。疾患重症度は、軽度の一般的な風邪様疾患から、重度の生命を脅かす呼吸器感染症までの範囲に及び得る。ＶＲＴＩの負担は、慢性併存疾患又は臨床的リスク因子を有する個体においてしばしばより著しい。
過去には、かなりの割合の呼吸器疾患は、特定の病原体に帰することができなかった。分子検出及び遺伝子型決定技術の出現により、いくつかの新たに同定された疾患に関与する非インフルエンザ呼吸器ウイルスの認識が大幅に増加してきている。
これらの潜在的な病原体には、コロナウイルス、アデノウイルス、ライノウイルス種、ヒト呼吸器合胞体ウイルス、及びヒトボカウイルスが含まれている。コロナウイルス（ＣｏＶ）は、世界中に普遍的に存在し、比較的軽度の呼吸器疾患（例えば、一般的な風邪）から重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）の出現まで関連している。
コロナウイルスは、プラス鎖、一本鎖ＲＮＡゲノムを有する大型のエンベロープウイルスである。ＣｏＶ感染症は、ヒト及び動物の両方にとって深刻な脅威であり、それらは風土感染症の原因であり、ＳＡＲＳ－ＣｏＶによって引き起こされるＳＡＲＳ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶによって引き起こされる中東呼吸器症候群（ＭＥＲＳ）、及びヒトにおけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２によって引き起こされるコロナウイルス疾患２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）の発生に関与する。ＣＯＶＩＤ－１９は、新たに発見されたＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２によって引き起こされる疾患である。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を有する人々のいくらかは、無症状のままであり、一方、他の者は軽度から中度のＣＯＶＩＤ－１９疾患及びＣＯＶＩＤ－１９肺炎を引き起こす可能性があり、一部の患者は集中治療支援を必要とし、場合によっては、特に高齢者では死に至る可能性がある。発熱、咳、及び味覚喪失などの症状、並びに酸素飽和及び肺聴診所見などの兆候は、最初の最も容易に入手可能な診断情報である。
ヒトでは、ＣｏＶは通常、急性呼吸器感染症を引き起こす。症状及び重症度は、軽度の上気道感染症（例えば、一般的な風邪）から、より重度の急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、肺炎、単独から多臓器不全までの範囲に及び得る。ヒトＣｏＶ毒性の一部は、長い潜伏期間、及び感染して感染性の者が無症状又はしばしば軽度の症状を示すことに帰され、多くの人々は自分が感染していることに気付かず、自分の日常生活を続け、それによって感染を広げていることを意味する。
ＣｏＶの伝播は、通常、鼻粘膜への飛沫を介しており、次いでウイルスが呼吸器に侵入する。また、手を汚染した液滴が、口腔及び／又は鼻粘膜に伝播され得る可能性がある。現在、衛生慣行が伝播を防ぐために推奨されており、疾患は症状管理によって治療される。一般的な風邪の症状などの軽度の症状は、通常、非ステロイド性抗炎症薬で治療される。ワクチンは、本出願の仮出願の出願以降、市販されるようになり、流通を開始している。かなりの数の潜在的な薬剤が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶに関する以前の研究に基づいて提案されており、いくつかの初期臨床試験が行われているが、現在、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染症を治療する非常に高い有効性が証明されている薬剤はない。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクＳタンパク質は、ウイルス侵入のためにＡＣＥ２受容体に結合し、ＰＩＫｆｙｖｅ、ＴＰＣ２、及びカテプシンＬも侵入のために重要であると考えられている。ＵＣＳＤからの最近の試験では、３３２例の高信頼性のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２－ヒトタンパク質－タンパク質相互作用、及び６９例の既存のＦＤＡ承認薬物、臨床試験中の薬物、及び／又は前臨床化合物によって標的化された、６６例の新薬開発につながるヒトタンパク質又は宿主因子が特定された。加えて、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対して開発及び試験中、又は試験された広範囲の薬物があり、例えば、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－６Ｒ、ＣＣＲ５、ＭＥＲＳのＳタンパク質に対する中和抗体、並びにレムデシビル、リバビリン、チロロン、ファビピラビル、カレトラ（ロピナビル／リトナビル）、プレジコビックス（ダルナビル／コビシスタット）、ネルフィナビル、マイコフェノール酸、ガリデシビル、アクテムラ、ＯＹＡ１、ＢＰＩ－００２、イフェンプロジル、ＡＰＮ０１、ＥＩＤＤ－２８０１、バリシチニブ、メシル酸カモスタット、リコリン、ブリラシジン、ＢＸ－２５、及びインターフェロン、より具体的にはＩＦＮβを含む薬物が挙げられる。いくつかの抗ウイルス化合物がＣＯＶＩＤ－１９の治療するために使用されており、疾患持続及び感染指数を低下し得るが、低い有効性（連帯治験、ＷＨＯ）、コスト、及び副作用のため、薬剤は広く使用されていないか、又は規制機関によって承認されていない。
呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）は、Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｄａｅ科のメンバーであり、ほとんどのヒトが２歳までに感染する呼吸器ウイルスである。健常な成人では、症状は軽度であるが、一部の個体では、症状が重度になることがあり（特に乳幼児や高齢者）、入院することになる。ＲＳＶは、世界の小児における急性呼吸器感染症の６０％超に関与している。ウイルスはまた、個体を肺炎又は中耳炎などの二次細菌感染症に対して感受性にし得る。米国では、年間１１，０００～１７，０００人の成人がＲＳＶ感染症で死亡し、年間その数の約１０倍の患者が入院したと推定されている。成人におけるＲＳＶ感染症は、通常、一次感染症ではなく、患者が免疫無防備状態であるか、基礎的な慢性の肺疾患若しくは循環器疾患を有するか、長期療養施設で生活しているか、又は虚弱であるなどの基礎的なリスク因子を有しない限り、主に軽度から中度の重症度である。ＲＳＶの死亡率は、固形臓器及び骨髄移植レシピエントにおけるＲＳＶ感染に起因して、特に感染症が移植手術後数日以内に発生している場合、３０～１００％に達するほど高い。免疫抑制されているか、さもなければ免疫無防備状態である者は、重度のＲＳＶ感染症の増加したリスクにある。ＲＳＶは、高齢者におけるインフルエンザ様疾患の第３の最大の原因である。しかし、それは入院の２番目に大きな原因である。
長年の研究後、ウイルスを減少させるための現在の療法は、症状を治療することに限定され、有効なワクチンはまだ開発されていない。課題のうちの１つは、多くの候補となる細胞受容体が、ＲＳＶ侵入に関して報告されていることであり、アネキシンＩＩ、ＣＸ３ケモカイン受容体１、上皮成長因子受容体（ＥＧＦ）、カルシウム依存性レクチン、Ｔｏｌｌ様受容体４、細胞間接着分子１（ＩＣＡＭ－１）、及びヌクレオリンが含まれる。ＥＧＦのようないくつかの受容体は、ＲＳＶの特定の株のみによって使用されると考えられている。更に、ＲＳＶは急速に進化するウイルスであり、特にＲＳＶはヒトにおけるＢ細胞記憶を回避又は抑制することが知られているため、ワクチン開発を困難にしている。
抗ウイルス性デンドリマーは、選択された動物モデルにおいてＨＩＶ、ＨＰＶ、及びＨＳＶに対する活性を伴って開発されており、例えば、ＷＯ０２／０７９２９９及びＷＯ２００７／０４５００９を参照されたい。しかしながら、抗ウイルス剤は、主に受容体特異性及び作用様式に起因して、ウイルスに対するそれらの作用において一般に選択的である。エンベロープＲＮＡウイルス又はマイナス鎖ＲＮＡウイルスなどの広範なクラスのウイルス病原体のための承認された広域抗ウイルス剤は存在しない。ヘルペスウイルス科などのファミリー内でさえ、１つのウイルスに対して有効な薬剤は、通常、他のウイルスには有効ではなく、例えば、水痘、ＥＢＶ、又はＨＳＶに対する治療は、互いに有効ではない。
ＷＯ０２／０７９２９９ ＷＯ２００７／０４５００９
したがって、ＶＲＴＩ、特にＣｏＶ及び／又はＲＳＶの拡散を防止又は低減することができる薬剤の必要性が依然として存在している。ＶＲＴＩ、特にＣＯＶ及び／又はＲＳＶにおける疾患の重症度及び持続を低減する必要性も依然として存在している。
本発明者らは、デンドリマー巨大分子であるＳＰＬ７０１３が、インビトロでＣｏＶ及びＲＳＶに対する活性を有することを認めている。したがって、ＳＰＬ７０１３及び構造的に関連する化合物は、ＣｏＶ及び／又はＲＳＶの伝播を低減すること、並びに関連する状態の発生率、重症度、及び持続を予防又は低減することに有用性が認められるであろう。態様において、本発明は、個体におけるコロナウイルス（ＣｏＶ）及び／又は呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症の可能性を予防又は低下する方法を提供し、方法は、
個体に、有効量の巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩、又は巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む組成物を投与することを含み、
巨大分子は、３～５世代のデンドリマーを、デンドリマーの１つ以上の表面基に結合した１つ以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分とともに含む。
態様において、本発明は、個体におけるコロナウイルス（ＣｏＶ）及び／又は呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症に関連する症状の可能性又は重症度を予防又は低減する方法を提供し、方法は、
個体に、有効量の巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩、又は巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む組成物を投与することを含み、
巨大分子は、３～５世代のデンドリマーを、デンドリマーの１つ以上の表面基に結合した１つ以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分とともに含む。
態様において、本発明は、個体におけるコロナウイルス（ＣｏＶ）感染症の可能性を予防又は低減する方法を提供し、方法は、
個体に、有効量の巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩、又は巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む組成物を投与することを含み、
巨大分子は、３～５世代のデンドリマーを、デンドリマーの１つ以上の表面基に結合した１つ以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分とともに含む。
態様において、本発明は、個体におけるコロナウイルス（ＣｏＶ）感染症に関連する症状の可能性又は重症度を予防又は低減する方法を提供し、方法は、
個体に、有効量の巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩、又は巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む組成物を投与することを含み、
巨大分子は、３～５世代のデンドリマーを、デンドリマーの１つ以上の表面基に結合した１つ以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分とともに含む。
態様において、本発明は、個体におけるコロナウイルス（ＣｏＶ）感染症の重症度及び／又は持続を低減する方法を提供し、方法は、
個体に、有効量の巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩、又は巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む組成物を投与することを含み、
巨大分子は、３～５世代のデンドリマーを、デンドリマーの１つ以上の表面基に結合した１つ以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分とともに含む。
態様において、本発明は、個体におけるコロナウイルス（ＣｏＶ）感染症を治療する方法を提供し、方法は、
個体に、有効量の巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩、又は巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む組成物を投与することを含み、
巨大分子は、３～５世代のデンドリマーを、デンドリマーの１つ以上の表面基に結合した１つ以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分とともに含む。
態様において、本発明は、コロナウイルス（ＣｏＶ）に感染した個体におけるウイルス排出を予防又は低減する方法を提供し、方法は、
個体に、有効量の巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩、又は巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む組成物を投与することを含み、
巨大分子は、３～５世代のデンドリマーを、デンドリマーの１つ以上の表面基に結合した１つ以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分とともに含む。
態様において、本発明は、集団におけるコロナウイルス（ＣｏＶ）の伝播を低減する方法を提供し、方法は、
集団の一部の呼吸器に、有効量の巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩、又は巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む組成物を投与することを含み、
巨大分子は、１～８世代のデンドリマーを、デンドリマーの１つ以上の表面基に結合した１つ以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分とともに含む。
態様において、本発明は、個体における呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症の可能性を予防又は低減する方法を提供し、方法は、
個体の呼吸器に、有効量の巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩、又は巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む組成物を投与することを含み、
巨大分子は、３～５世代のデンドリマーを、デンドリマーの１つ以上の表面基に結合した１つ以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分とともに含む。
態様において、本発明は、個体における呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症に関連する症状の可能性又は重症度を予防又は低減する方法を提供し、方法は、
個体の呼吸器に、有効量の巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩、又は巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む組成物を投与することを含み、
巨大分子は、３～５世代のデンドリマーを、デンドリマーの１つ以上の表面基に結合した１つ以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分とともに含む。
態様において、本発明は、個体における呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症の重症度及び／又は持続を低減する方法を提供し、方法は、
個体の呼吸器に、有効量の巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩、又は巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む組成物を投与することを含み、
巨大分子は、３～５世代のデンドリマーを、デンドリマーの１つ以上の表面基に結合した１つ以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分とともに含む。
態様において、本発明は、個体における呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症を治療する方法を提供し、方法は、
個体の呼吸器に、有効量の巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩、又は巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む組成物を投与することを含み、
巨大分子は、３～５世代のデンドリマーを、デンドリマーの１つ以上の表面基に結合した１つ以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分とともに含む。
態様において、本発明は、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）に感染した個体におけるウイルス排出を予防又は低減する方法を提供し、方法は、
個体の呼吸器に、有効量の巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩、又は巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む組成物を投与することを含み、
巨大分子は、３～５世代のデンドリマーを、デンドリマーの１つ以上の表面基に結合した１つ以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分とともに含む。
態様において、本発明は、集団における呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の伝播を低減する方法を提供し、方法は、
集団の一部の呼吸器に、有効量の巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩、又は巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む組成物を投与することを含み、
巨大分子は、１～８世代のデンドリマーを、デンドリマーの１つ以上の表面基に結合した１つ以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分とともに含む。
いくつかの実施形態において、ＣｏＶは、アルファコロナウイルス、ベータコロナウイルス、ガンマコロナウイルス、及びデルタコロナウイルスから選択される。いくつかの実施形態において、ＣｏＶは、ベータコリナウイルス（Ｂｅｔａｃｏｒｉｎａｖｉｒｕｓ）である。
いくつかの実施形態において、ＣｏＶは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２又はその変異体のサブタイプである。いくつかの実施形態において、ＣｏＶは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である。
いくつかの実施形態において、ＲＳＶは、サブタイプＡ若しくはサブタイプＢ、又はそのサブタイプ若しくは変異体である。いくつかの実施形態において、ＲＳＶは、サブタイプＡである。
いくつかの実施形態において、デンドリマーは、
であり、式中、Ｒの少なくとも５０％は、
であり、薬学的に許容される塩は、ナトリウム塩である。
態様において、本発明は、個体におけるコロナウイルス（ＣｏＶ）感染症の可能性を予防若しくは低減するか、又はそれを治療するか、個体におけるＣｏＶ感染症の重症度及び／又は持続を低減するか、ＣＯＶに感染した個体におけるウイルス排出を予防又は低減するか、あるいは、集団におけるＣｏＶの伝播を低減するための組成物を提供し、組成物は、
有効量の巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩、又は巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含み、
巨大分子は、３～５世代のデンドリマーを、デンドリマーの１つ以上の表面基に結合した１つ以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分とともに含む。
態様において、本発明は、巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩、又は巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む、鼻、口腔、又は肺組成物を送達するためのデバイスを提供し、
巨大分子は、３～５世代のデンドリマーを、デンドリマーの１つ以上の表面基に結合した１つ以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分とともに含む。
態様において、本発明は、有効量の巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩、又は巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む組成物を提供し、
巨大分子は、３～５世代のデンドリマーを、デンドリマー及びＣａｒｂｏｐｏｌ９７４又はＣａｒｂｏｐｏｌ９７１の１つ以上の表面基に結合した１つ以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分とともに含み、
組成物は、巨大分子に対して約１：２０～約１：１０のｗ／ｗ比のＣａｒｐｏｂｏｌ９７４又はＣａｒｂｏｐｏｌ９７１を含む。
態様において、本発明は、有効量の巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩、又は巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む組成物を提供し、
巨大分子は、３～５世代のデンドリマーを、デンドリマー及びＣａｒｂｏｐｏｌ９７４の１つ以上の表面基に結合した１つ以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分とともに含み、
組成物は、約０．０５％ｗ／ｗ～約５％ｗ／ｗ、又は約０．０５％ｗ／ｗ～約３％ｗ／ｗ、又は約０．０５％ｗ／ｗ～約２％ｗ／ｗ、又は約０．０５％ｗ／ｗ～約１％ｗ／ｗ、又は約０．０５％ｗ／ｗのＣａｒｂｏｐｏｌ９７４を含む。
態様において、本発明は、有効量の巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩、又は巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む組成物を提供し、
巨大分子は、３～５世代のデンドリマーを、デンドリマー及びＣａｒｂｏｐｏｌ９７１の１つ以上の表面基に結合した１つ以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分とともに含み、
組成物は、約０．０５％ｗ／ｗ～約１％ｗ／ｗ、又は約０．０５％ｗ／ｗ～約１．５％ｗ／ｗ、又は約０．０５％ｗ／ｗ～約１．８％ｗ／ｗのＣａｒｂｏｐｏｌ９７１を含む。
態様において、本発明は、巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩、又は巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む組成物を含む、鼻防湿被覆物（ｎａｓａｌ ｍｏｉｓｔｕｒｅ ｂａｒｒｉｅｒ ｄｒｅｓｓｉｎｇ）を提供し、
巨大分子は、３～５世代のデンドリマーを、デンドリマーの１つ以上の表面基に結合した１つ以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分とともに含む。
本明細書の任意の実施形態は、特に明記しない限り、任意の他の実施形態に必要な変更を加えて行われるものとする。例えば、当業者は、本発明の方法のために上述した巨大分子の例が、本発明の組成物にも同様に適用されることを理解するであろう。
本発明は、例示のみの目的が意図されている、本明細書に記載の特定の実施形態による範囲に限定されるべきではない。
機能的に等価な製品、組成物、及び方法は、本明細書に記載されるように、明らかに本発明の範囲内である。
本明細書全体を通して、特に別段の記載がない限り、又は文脈上別段の要求がない限り、単一のステップ、物質の組成物、ステップの群、又は物質の組成物の群に対する言及は、それらのステップ、物質の組成物、ステップの群、又は物質の組成物の群のうちの１つ及び複数（すなわち、１つ以上）を包含するものとみなされる。
本発明は、以下の非限定的な実施例によって、及び添付の図面を参照して以下に説明される。
巨大分子ＳＰＬ－７６７４、ＳＰＬ－７６１５、ＳＰＬ－７６７３、ＢＡＩ－７０２１、ＢＲＩ－２９９９、及びＢＲＩ－２９９２の名称及び構造を提供する。 ウイルス感染細胞における細胞壊死効果（ＣＰＥ）の低下、及びベロＥ６細胞のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ｈＣｏＶ－１９／Ａｕｓｔｒａｌｉａ／ＶＩＣ０１／２０２０）感染に対するＳＰＬ７０１３の選択性によって測定された抗ウイルス効果を示す。表示は以下の通りである。ＥＣ５０＝５０％有効濃度、ＥＣ９０＝９０％有効濃度、ＣＣ５０＝５０％細胞傷害性濃度、ＳＩ＝選択性指標（ＣＣ５０／ＥＣ５０）、ＳＤ＝標準偏差、ＮＣ＝未計算、Ｎ／Ａ＝該当せず。 ベロＥ６細胞におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ｈＣｏＶ－１９／Ａｕｓｔｒａｌｉａ／ＶＩＣ０１／２０２０）複製に対するＳＰＬ７０１３による４日目のＣＰＥの減少によって測定される抗ウイルス活性の用量反応曲線、及び細胞対照のパーセントとしての細胞生存率を提供する。Ａ．感染する１時間前の細胞培養－アッセイ１（左パネル）及びアッセイ２（右パネル）。Ｂ．感染した１時間後の細胞培養－アッセイ１（左パネル）及びアッセイ２（右パネル）。 Ａ．細胞培養の感染前に、ウイルス及びＳＰＬ７０１３を１時間混合した。ＥＣ５０及びＣＣ５０値並びに選択性指標を示す。ポイント及び誤差バーは、三重測定読み取りの平均±ＳＤを表す。Ｂ．感染後８時間で上清に分泌されたウイルスの量をＴＣＩＤ５０によって決定した。ＳＰＬ７０１３（０．３４５ｍｇ／ｍＬ、正方形）、レムデシビル（５μＭ、灰色三角形）、ヒドロキシクロロキン硫酸塩（１５μＭ、円形）、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ｈＣｏＶ－１９／Ａｕｓｔｒａｌｉａ／ＶＩＣ０１／２０２０）のみ（黒色三角形）。グラフ上の各ポイントは、ウイルス感染後の示された時間に化合物を添加した後、１サイクルの複製後に存在するウイルス力価を表す。ＳＰＬ７０１３における感染性ウイルス力価は、全ての時点で検出下限（ＬＬＯＤ）を下回った。 図５。Ａ．ベロＥ６細胞及びＢ．Ｃａｌｕ－３細胞で感染後４日目に、感染ウイルス放出（Ｌｏｇ１０ｐｆｕ／ｍＬ）によって測定した、細胞におけるＳＰＬ７０１３のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（２０１９－ｎＣｏＶ／ＵＳＡ－ＷＡ１／２０２０）抗ウイルス活性の用量反応及び細胞傷害性分析を示す。ポイント及び誤差バーは、三重測定読み取りの平均±ＳＤを表す。 図５の続き。 ベロＥ６細胞における感染後９６時間の平均感染性ウイルス（Ｌｏｇ１０ｐｆｕ／ｍＬ）の減少によって測定される、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（２０１９－ｎＣｏＶ／ＵＳＡ－ＷＡ１／２０２０）に対するＳＰＬ７０１３の殺ウイルス効果を提供する。 ベロＥ６細胞における感染後１６時間で、平均感染性ウイルス（Ｌｏｇ１０ｐｆｕ／ｍＬ）の減少によって測定される、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（２０１９－ｎＣｏＶ／ＵＳＡ－ＷＡ１／２０２０）に対するＳＰＬ７０１３の殺ウイルス効果を提供する。ＳＰＬ７０１３（０．００４６～３０ｍｇ／ｍＬ）を、１０５及び１０４ｐｆｕ／ｍＬのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（２０１９－ｎＣｏＶ／ＵＳＡ－ＷＡ１／２０２０）とともに、３０秒、１分、５分、及び１５分間インキュベートした。処理したウイルスをベロＥ６細胞に添加し、上清中の感染性ウイルス量を感染の１６時間後にプラークアッセイによって決定した。Ａ．１０４ｐｆｕ／ｍＬウイルス接種を使用したＳＰＬ７０１３殺ウイルス活性の用量反応。ポイント及び誤差バーは、三重測定読み取りの平均±ＳＤを表す。Ｂ．１０ｍｇ／ｍＬのＳＰＬ７０１３によるウイルス量のｌｏｇ１０減少（ベースラインに対して）。カラム及び誤差バーは、３重測定読み取りの平均±ＳＤを表す。 Ａ．ｈＡＣＥ２トランスジェニックマウスにおけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に対するＳＰＬ７０１３の評価を、鼻腔投与７日間後に示す。Ｂ．ＳＰＬ７０１３によるベロＥ６細胞のＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク発現レンチウイルス感染の阻害を示す。 図９。Ａ．ＳＰＬ７０１３による感染前及び感染後の処理後のＨｅｐ－２細胞におけるヒト呼吸器合胞体ウイルス（ＨＲＳＶ）の阻害を示す。Ｂ．ＳＰＬ７０１３による処理前及び処理後のＨｅｐ－２細胞におけるＨＲＳＶの細胞傷害性を示す。 図９の続き。 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（２０１９－ｎＣｏＶ／ＵＳＡ－ＷＡ１／２０２０）に対するＳＰＬ７０１３及びイオタ－カラギーナンの抗ウイルス効果を、ヒト気管支上皮一次細胞（ＨＢＥｐＣ）における感染後４日目に、ヌクレオカプシド（ｎｇ／ｍＬ）の減少によって測定して示す。アストドリマーナトリウム（０、１．１、３．３、及び１０ｍｇ／ｍＬ）又はイオタ－カラギーナン（０、６、６０、及び６００μｇ／ｍＬ）を感染の１時間前に細胞培養に添加した。Ａ．ＳＰＬ７０１３抗ウイルス活性の用量反応を示す。ポイント及び誤差バーは、三重測定読み取りの平均±ＳＤを表す。Ｂ．カラギーナン抗ウイルス活性の用量反応を示す。ポイントは、１つの多重測定を表す。点線は、陽性対照であるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ｐＡｂで達成された阻害レベルを示す。 Ａ．ＳＰＬ７０１３による処理後にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓｌｏｖａｋｉａ／ＳＫ－ＢＭＣ５／２０２０ウイルスによって感染させたベロＥ６細胞におけるＲＴ－ｑＰＣＲ結果。全ての実験は、独立して１回繰り返した（ｎ＝２）。結果は、感染した非処理対照細胞と比較したＲＮＡ発現のパーセンテージとして表される。Ｂ．ＳＰＬ７０１３による処理後にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓｌｏｖａｋｉａ／ＳＫ－ＢＭＣ５／２０２０ウイルスによって感染させたベロＥ６細胞における蛍光焦点。全ての実験は、独立して１回繰り返した（ｎ＝２）。力価は、免疫蛍光焦点アッセイを使用して決定した。 Ａ．ＳＰＬ７０１３による処理後の健常ベロＥ６細胞の生存率。細胞をＳＰＬ７０１３とともに１時間プレインキュベートした。全ての実験は、独立して１回繰り返した（ｎ＝２）。生存率は、ＭＴＳ生存率アッセイを使用して評価した。Ｂ．ＳＰＬ７０１３による処理後のＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２ Ｓｌｏｖａｋｉａ／ＳＫ－ＢＭＣ５／２０２０感染したベロＥ６細胞の生存率。ウイルスによる感染前に、細胞をＳＰＬ７０１３とともに１時間プレインキュベートした。ウイルスを細胞とともに４８時間インキュベートした。全ての実験は、独立して１回繰り返した（ｎ＝２）。生存率は、ＭＴＳ生存率アッセイを使用して評価した。
定義
冠詞「ａ」及び「ａｎ」は、本明細書において、冠詞の文法的目的語の１つ以上（すなわち、少なくとも１つ）を指すために使用される。例として、「要素」は、１つの要素又は１つを超える要素を意味する。
本明細書及び後続の特許請求の範囲全体を通して、文脈が別段必要としない限り、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、並びに「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」及び「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変形は、記載された整数若しくはステップ、又は整数若しくはステップの群の包含を意味するが、任意の他の整数若しくはステップ、又は整数若しくはステップの群の排除を意味しないと理解される。
本明細書で使用される場合、「約」という用語は、参照数量、レベル、値、寸法、サイズ、又は量に対して最大で３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、又は１％変化する数量、レベル、値、寸法、サイズ、又は量を指す。
本明細書で使用される場合、「個体」という用語は、ＣｏＶウイルス感染症及び／又はＲＳＶウイルス感染症に感受性である任意の個体を指す。特定の実施形態において、個体は、胎児、乳児、小児、初期成人、及び成人を含むヒトである。いくつかの実施形態において、個体は、ヒト成体である。一実施形態において、個体は、動物である。実施形態において、小児は、年齢で１６歳未満、年齢で１４歳未満、年齢で１２歳未満、年齢で１０歳未満、年齢で５歳未満、年齢で３歳未満、年齢で２歳未満、年齢で１歳未満、年齢で６ヶ月未満、年齢で３ヶ月未満、及び年齢で１ヶ月未満のうちの１つ以上である。実施形態において、小児は、１２歳以上である。実施形態において、乳児は、早産児である。一実施形態において、成人は、高齢成人である。実施形態において、成人は、年齢で６０歳超、年齢で６５歳超、年齢で７０歳超、年齢で７５歳超、年齢で８０歳超、年齢で８５歳超、年齢で９０歳超のうちの１つ以上である。いくつかの実施形態において、個体は、ヒトである。いくつかの実施形態において、個体は、免疫無防備状態である。いくつかの実施形態において、個体は、最近、手術を受けている。いくつかの実施形態において、個体は、手術後１日、又は２日、又は３日、又は４日、又は５日、又は６日、又は７日、又は１．５週、又は２週、又は３週である。いくつかの実施形態において、個体は、移植レシピエントであるか、又は移植レシピエントになる。いくつかの実施形態において、個体は、肺移植レシピエント、又は骨髄若しくは幹細胞レシピエントであるか、あるいはそれらになる。いくつかの実施形態において、個体は、呼吸状態を有する。いくつかの実施形態において、呼吸状態は、喘息、慢性閉塞性肺疾患、睡眠時無呼吸、肺気腫、肺がん、嚢胞性線維症、気管支炎、慢性気管支炎、肺炎、胸水、百日咳、ＣＯＶＩＤ－１９、石綿症、気管支拡張症、肺気腫、ケイ肺症、及び結核のうちの１つ以上から選択される。
本明細書で使用される場合、「防止」又は「予防」という用語は、感染症若しくはその症状に罹患するか、又はそれを発症する可能性を低減することを指す。防止は完全である必要はなく、対象が最終的に感染症又はその症状に罹患しないか、又は発症しないことを意味しない。
本明細書で使用される場合、「治療すること」又は「治療」という用語は、所望の治療転帰を少なくとも部分的に得ることを指す。実施形態において、治療は、ＣｏＶ及び／又はＲＳＶ感染症の１つ以上の症状の出現を予防又は遅延することを含む。実施形態において、治療は、ＣｏＶ及び／又はＲＳＶ感染症の１つ以上の症状の発症を停止又は低減することを含む。
本明細書で使用される場合、「感染症の重症度を低減すること」という語句又は類似の語句は、個体における、ウイルスの力価、ウイルス感染症の持続、個体におけるウイルス感染症の１つ以上の症状の厳しさ又は持続、のうちの１つ以上を低減することを含む。実施形態において、ウイルス感染症は、ＣｏＶ及び／又はＲＳＶウイルス感染症である。
本明細書で使用される場合、「ＣｏＶ及び／又はＲＳＶ感染症の持続」という用語は、個体がＣｏＶ及び／若しくはＲＳＶ感染症、又はＣｏＶ及び／若しくはＲＳＶ感染症によって引き起こされる症状を有する期間を指す。
本明細書で使用される場合、「巨大分子及びその薬学的に許容される塩」という語句は、文脈上必要に応じて「巨大分子」と互換的に使用される。
本明細書で使用される場合、「ＳＰＬ７０１３」は、アストドリマーナトリウム（ＩＮＮ，ＵＳＡＮ）、ＣＡＳ番号６７６２７１－６９－５を指す。ＳＰＬ７０１３はまた、２，６－ビス－｛（１－ナフタレニル－３，６－ジスルホン酸）－オキシアセトアミド｝－２，６－ビス－２，６－ビス－２，６－ビス－（２，６－ジアミノ－ヘキサノイルアミノ）－２，６－ジアミノ－ヘキサン酸（ジフェニルメチル）－アミド，ポリナトリウム塩、又は
テトラヘキサコンタナトリウムＮ２，Ｎ６－ビス｛Ｎ２，Ｎ６－ビス［Ｎ２，Ｎ６－ビス（Ｎ２，Ｎ６－ビス｛Ｎ２，Ｎ６－ビス［（３，６－ジスルホナトナフタレン－１－イルオキシ）アセチル］－ｌ－リシル｝－ｌ－リシル）－ｌ－リシル］－ｌ－リシル｝－Ｎ１－（ジフェニルメチル）－ｌ－リシンアミドとしても知られる。
本明細書で使用される場合、「アストドリマー」は、ＣＡＳ番号１３７９７４６－４２－５を指す。また、２，６－ビス－｛（１－ナフタレニル－３，６－ジスルホン酸）－オキシアセトアミド｝－２，６－ビス－２，６－ビス－２，６－ビス－（２，６－ジアミノ－ヘキサノイルアミノ）－２，６－ジアミノ－ヘキサン酸（ジフェニルメチル）－アミド、又は
Ｎ２，Ｎ６－ビス｛Ｎ２，Ｎ６－ビス［Ｎ２，Ｎ６－ビス（Ｎ２，Ｎ６－ビス｛Ｎ２，Ｎ６－ビス［（３，６－ジスルホナトナフタレン－１－イルオキシ）アセチル］－ｌ－リシル｝－ｌ－リシル）－ｌ－リシル］－ｌ－リシル｝－Ｎ１－（ジフェニルメチル）－ｌ－リシンアミドとしても知られる。
巨大分子及びその薬学的に許容される塩
本開示は、巨大分子及び／又はその薬学的に許容される塩の使用を含む。巨大分子が複数のスルホン酸基を含み得るため、薬学的に許容される塩は、複数のカチオンを含み得る。
薬学的に許容される塩は、任意の好適なタイプのものであり得る。好適な塩の例には、金属塩（例えば、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム、及び亜鉛塩）、有機塩（例えば、Ｎ，ＮＩ－ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、ジシクロヘキシルアミン、シクロヘキシルアミン、メグルミン、（Ｎ－メチルグルカミン）、及びプロカインなどの有機アミン）、四級アミン（例えば、コリン）、スルホニウム塩、及びホスホニウム塩が含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、塩は、ナトリウム及びカリウム、特にナトリウムから選択される。実施形態において、塩は、ナトリウム塩である（例えば、ポリナトリウム塩であり得る）。
当業者は、多くの有機化合物が、それらが反応する溶媒中、又はそれらが沈殿若しくは結晶化する溶媒中で錯体を形成することができることを理解するであろう。これらの錯体は「溶媒和物」として知られている。例えば、水との錯体は、「水和物」として知られている。化合物が溶媒を取り込むとき、水和物などの溶媒和物が存在する。本発明の巨大分子並びにその塩は、溶媒和物の形態で存在し得ることが理解されよう。好適な巨大分子の溶媒和物は、会合した溶媒が薬学的に許容されるものである。
本発明に使用される巨大分子は、デンドリマーの１つ以上の表面基に結合した１つ以上のスルホン酸若しくはスルホネート含有部分を有する３～５世代のデンドリマーを含む。本発明に有用なデンドリマーは、その表面上に１つ以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分を提示することができる、３～５世代の任意の好適なデンドリマーであり得る。いくつかの実施形態において、デンドリマーは、３～５世代を有する、ポリリジン、ポリグルタメート、ポリアスパルテート、ポリアミドアミン（ＰＡＭＡＭ）、ポリ（エーテルヒドロキシルアミン）、ポリエーテル、ポリエステル、又はポリ（プロピレンイミド）（ＰＰＩ）デンドリマーから選択される。いくつかの実施形態において、デンドリマーは、２～６世代を有する。いくつかの実施形態において、デンドリマーは、３～４世代を有する。いくつかの実施形態において、デンドリマーは、４世代を有する。いくつかの実施形態において、デンドリマーは、ポリリジン、ポリグルタメート、及びポリアスパルテートを含む群から選択されるアミノ酸デンドリマーである。
巨大分子はまた、デンドリマーの最も外側の世代の１つ以上の表面官能基に結合した１つ以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分を含む。例えば、デンドリマーがポリリジン、ポリアミドアミン、ポリ（エーテルヒドロキシルアミン）、又はポリ（プロピレンイミド）デンドリマーである場合、表面官能基はアミノ基であり、デンドリマーがポリグルタメート又はポリアスパルテートデンドリマーである場合、表面官能基はカルボン酸である。
デンドリマーは、中心コア部分から放射状に伸びる複数の分岐モノマーからなる分岐高分子巨大分子である。分岐点の数は、デンドリマーコアからその表面に移動すると増加し、モノマー（又は構築ユニット）の連続した層又は「世代」によって定義される。構築ユニットの各世代は、コアからの距離を示すように番号付けされている。例えば、世代１（Ｇ１）は、コアに結合した構築ユニットの層であり、世代２（Ｇ２）は、世代１に結合した構築ユニットの層であり、世代３（Ｇ３）は、世代２に結合した構築ユニットの層である、など。
最も外側の世代の構築ユニットは、デンドリマーの表面を提供し、少なくとも１つのスルホン酸又はスルホネート含有部分が共有結合している官能基を提示する。スルホン酸又はスルホネート含有基は、表面官能基に直接的に結合され得るか、又はリンカーを介して表面官能基に結合され得る。
本明細書に企図されるデンドリマーは、当技術分野で既知の方法によって調製することができる。例えば、それらは、収束的な手段（この場合、効果的に、分岐が予めに形成され、次いでコアに結合される）又は発散的な手段（この場合、層又は世代がコアから外側に連続的に構築される）のいずれかで調製され得る。これらの両方の方法は、当業者には十分に理解されるであろう。
例えば、リジンデンドリマーの場合、発散的合成は、アミド化化学を使用して、リジン残基の層のアミン基とアミノ保護リジンのカルボキシル基との反応を伴って、デンドリマーを「成長」させ、次の世代の構築ユニットを形成し得る。次いで、保護基を除去して、新世代のリジン構築ユニットのアミノ基を提示し得る。
デンドリマーは、任意の好適なコアを含み得る。本明細書で使用される場合、「コア」は、モノマー又は構築ユニットの世代が（発散プロセス又は収束プロセスのいずれかを介して）構築される部分を指し、モノマー又は構築ユニットの層が連続して生成される（又は予め形成された「分岐」が結合される）少なくとも１つの反応性又は官能性部位を有する任意の部分であり得る。
コアは、構築ユニットとの反応に好適な反応性基を有するコア前駆体から形成され得、例えば、コアは、１、２、３、又は４個の反応性基を有するコア前駆体から形成され得る。本明細書に企図されるいくつかの例示的な好適なコアには、構築ユニット又はモノマーの層若しくは世代が結合することができるアミノ、カルボキシル、チオール、アルキル、アルキニル、ニトリル、ハロ、アジド、ヒドロキシルアミン、カルボニル、マレイミド、アクリレート、又はヒドロキシ基から独立して選択される１、２、３、若しくは４個の反応性基を有するコア前駆体から形成されるものが含まれる。
いくつかの実施形態において、コアは、アミド結合を介して２つの構築ユニットに共有結合され、各アミド結合は、コア内に存在する窒素原子と、構築ユニット内に存在するアシル基の炭素原子との間で形成される。したがって、コアは、例えば、２つのアミノ基を含むコア前駆体から形成され得る。
コア部分は、構築ユニットと同じであり得るか、又は異なり得る。
例示的なコアには、ポリアミノハイドロカーボン、ジスルフィド含有ポリアミン、ポリ（グリシジルエーテル）、アミノエタノール、アンモニア、アリールメチルハリド、ピペラジン、アミノエチルピペラジン、ポリ（エチレンイミン）、アルキレン／アリーレンジチオール、４，４－ジチオ酪酸、メルカプトアルキルアミン、チオエーテルアルキルアミン、イソシアヌレート、複素環、マクロ環、ポリグリシジルメタクリレート、ホスフィン、ポルフィン、オキシラン、チオラン、オキセタン、アジリジン、アゼチジン、マルチアジド官能性、シロキサン、オキサゾリン、カルバメート、又はカプロラクトンが含まれる。
本明細書に企図されるコア部分のいくつかの非限定的な例には、アンモニア、並びにエチレンジアミン、１，４－ジアミノブタン、及び１，６－ジアミノヘキサンなどのジアミノＣ２～Ｃ１２アルカンが含まれる。しかしながら、コアは必ずしも各末端に単一の反応性基を有する直鎖部分ではないことが理解されるであろう。非線形、環状、又は分岐のコア部分もまた、本発明によって企図される。例えば、ベンズヒドリルアミン（ＢＨＡ）などのアリールメチルアミンは、好適なコアである。いくつかの実施形態において、コアは、ベンズヒドリルアミン（ＢＨＡ）基：
であるか、又はそれを含む。
いくつかの好ましい実施形態において、コアは、ベンズヒドリルアミン－リジンコア（ＢＨＡＬｙｓ）である。ＢＨＡＬｙｓコアは、以下の構造：
を有し、デンドリマーでは、２つの窒素原子を介して構築ユニットに共有結合されている。ＢＨＡＬｙｓコアは、例えば、コア前駆体：
から形成され得、２つの反応性アミノ窒素を有する。
いくつかの好ましい実施形態において、コアは、Ｌ－リジン残基を含むＢＨＡＬｙｓコアである。
いくつかの好ましい実施形態において、コアは、Ｌ－リジン残基を含有するＢＨＡＬｙｓコアである。
デンドリマーはまた、１つ以上の構築ユニットを含む。いくつかの実施形態において、デンドリマーの構築ユニットは、
リジン構築ユニット：
、アミドアミン構築ユニット：
、エーテルヒドロキシアミン構築ユニット：
、プロピレンイミン構築ユニット：
、グルタミン酸構築ユニット：
、アスパラギン酸構築ユニット：
、ポリエステル構築ユニット：
、及び
ポリエーテル構築ユニット：
から選択される。
いくつかの好ましい実施形態において、構築ユニットは、リジン残基、例えば、
である。
いくつかの好ましい実施形態において、構築ユニットは、Ｌ－リジン残基、例えば、
である。
いくつかの実施形態において、デンドリマーの構築ユニットは、リジン又は以下の式：
の化合物から選択されるリジン類似体であり、式中、Ｋは、不存在であるか、又は－Ｃ１－６アルキレン－、－Ｃ１－６アルキレンＮＨＣ（Ｏ）－、－Ｃ１－６アルキレンＣ（Ｏ）－、－Ｃ１－３アルキレン－Ｏ－Ｃ１－３アルキレン－、－Ｃ１－３アルキレン－Ｏ－Ｃ１－３アルキレンＮＨＣ（Ｏ）－、及び－Ｃ１－３アルキレン－Ｏ－Ｃ１－３アルキレンＣ（Ｏ）－から選択され、
Ｊは、ＣＨ又はＮから選択され、
Ｌ及びＭは、独立して、不存在であるか、又は－Ｃ１－６アルキレン－又は－Ｃ１－３アルキレンＯＣ１－３アルキレンから選択され、ただし、Ｌ及び／又はＭが存在しない場合、Ｊは、ＣＨであり、
＊＊は、リジン又はリジン類似体とデンドリマーのコア又は前の世代の構築ユニットとの間の結合を示し、
＊＊＊は、リジン若しくはリジン類似体と、その後の世代のリジン若しくはリジン類似体との間の結合を示すか、又はデンドリマーの表面アミノ基を形成する。
例示的なリジン類似体構築ユニットは、
構造：
を有するグリシル－リジン１と、
以下の構造を有し、ａが、整数１又は２であり、ｂ及びｃが、独立して、整数１、２、３、又は４である、類似体２と、
、
以下の構造を有し、ａが、整数０、１、又は２であり、ｂ及びｃが、独立して、整数２、３、４、５、又は６である、類似体３と、
、
以下の構造を有し、ａが、整数０、１、２、３、４、又は５であり、ｂ及びｃが、独立して、整数１、２、３、４、又は５である、類似体４と、を含み、
、式中、各＃は、コアの窒素原子又は前の世代の構築ユニットの窒素原子とアミド結合を形成するカルボキシル基のカルボニル残基を示し、構築ユニットの任意のメチレン基は、メチレンオキシ（ＣＨ２－Ｏ）又はエチレンオキシ（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）基によって置換され得るが、ただし、これは構築ユニット内にカーボネート（－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－）又はカルバメート（－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｎ－）部分の形成をもたらさない。
他の適切な構築ユニット／構築ユニット前駆体は、
以下の構造を有し、ａが、０～２の整数であり、ｂ及びｃが、同じであるか、又は異なり、１～４の整数であり、Ａ１及びＡ２が、同じであるか、又は異なり、ＮＨ２、ＣＯ２Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、Ｘ、アリル－Ｘ、エポキシド、アジリジン、Ｎ３、又はアルキンから選択され、Ｘが、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、又はＩである、類似体５と、
、
以下の構造を有し、ａが、０～２の整数であり、ｂ及びｃが、同じであるか、又は異なり、２～６の整数であり、Ａ１及びＡ２が、同じであるか、又は異なり、ＮＨ２、ＣＯ２Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、Ｘ、アリル－Ｘ、エポキシド、アジリジン、Ｎ３、又はアルキンから選択され、Ｘが、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、又はＩである、類似体６と、
、
以下の構造を有し、ａが、０～５の整数であり、ｂ及びｃが、同じであるか、又は異なり、１～５の整数であり、Ａ１及びＡ２が、同じであるか、又は異なり、ＮＨ２、ＣＯ２Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、Ｘ、アリル－Ｘ、エポキシド、アジリジン、Ｎ３、又はアルキンから選択され、Ｘが、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、又はＩである、類似体７と、を含み、
、式中、各＃は、コアの窒素原子又は前の世代の構築ユニットの窒素原子とアミド結合を形成するカルボキシル基のカルボニル残基を示し、
構築ユニットの任意のメチレン基は、メチレンオキシ（ＣＨ２－Ｏ）又はエチレンオキシ（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）基によって置換され得るが、ただし、これは構築ユニット内にカーボネート（－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－）又はカルバメート（－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｎ－）部分の形成をもたらさない。
いくつかの実施形態において、巨大分子は、リジン構築ユニットを有するポリリジンデンドリマー、特にベンズヒドリルアミン基を有するポリリジンデンドリマーであり、例えば、デンドリマーは以下：
に示される通りであり、
式中、
である。
いくつかの態様において、デンドリマーは、３～５世代の構築ユニットを含有し、例えば、いくつかの実施形態において、それはコアを含み、３～５世代は構築ユニットからなる。いくつかの実施形態において、デンドリマーは、ＢＨＡＬｙｓコア及び３～５世代のリジン構築ユニットを含む。いくつかの実施形態において、デンドリマーは、スルホン酸又はスルホネート含有部分との結合（直接的に又はリンカーを介してのいずれか）のために、構築ユニットの表面層上に１６、３２、又は６４個の窒素原子を提供する。いくつかの実施形態において、デンドリマーは、スルホン酸又はスルホネート含有部分との結合（直接的に又はリンカーを介してのいずれか）のために、構築ユニットの表面層上に、３２個の窒素原子を提供する。
スルホン酸含有又はスルホネート含有部分は、デンドリマーの表面上にスルホン酸又はスルホネート基を提示することができる部分である。いくつかの実施形態において、スルホン酸又はスルホネート含有部分は、１つのスルホン酸又はスルホネート基を有する。他の実施形態において、スルホン酸又はスルホネート含有部分は、２つ以上のスルホン酸又はスルホネート基、例えば、２つ若しくは３つのスルホン酸又はスルホネート基、特に２つのスルホン酸又はスルホネート基を有する。いくつかの実施形態において、スルホン酸又はスルホネート含有部分は、フェニル基又はナフチル基などのアリール基、特にナフチル基を含む。いくつかの実施形態において、スルホン酸含有部分又はスルホネート含有部分は、２つのスルホン酸又はスルホネート部分、例えば、３，６－ジスルホナトナプチル部分によって置換されたナフチル基（ナフチルジスルホネート部分とも称される）を含む。いくつかの実施形態において、ナフタレンの１位を介してデンドリマーに接続された３，６－ジスルホナトナプチル部分が使用される。
スルホネート含有部分が存在する場合、部分は、イオン形態（－ＳＯ３ －）又は塩の形態、例えば、ナトリウム塩（－ＳＯ３Ｎａ）で存在し得る。
好適なスルホン酸又はスルホネート含有部分の例には、限定されないが、
－ＮＨ－（ＣＨ２）ｎＳＯ３ －、－（ＣＨ２）ｎＳＯ３ －、
が含まれ、
式中、ｎは、０又は１～２０の整数であり、ｍは、１又は２の整数であり、ｐは、１～３の整数である。いくつかの実施形態において、ｐ＝２である。
いくつかの実施形態において、スルホン酸含有部分又はスルホネート含有部分は、
特に
から選択される。
いくつかの実施形態において、２つ以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分が、デンドリマーの表面上に存在する。いくつかの実施形態において、少なくとも５、少なくとも１５、又は少なくとも３０以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分が、デンドリマーの表面上に存在する。いくつかの実施形態において、３２以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分が、デンドリマーの表面上に存在する。
いくつかの実施形態において、スルホン酸又はスルホネート含有部分は、デンドリマーの表面アミノ基に直接的に結合される。他の実施形態において、スルホン酸又はスルホネート含有部分は、リンカー基を介してデンドリマーの表面アミノ基に結合される。
好適なリンカー基には、１つ以上の非隣接炭素原子が、任意選択的に酸素若しくは硫黄原子によって置換されて、エーテル、チオエーテル、ポリエーテル、若しくはポリチオエーテルを提供する直鎖若しくは分岐鎖のアルキレン若しくはアルケニレン基、又はＸ１及びＸ２が、独立して、－ＮＨ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、及び－Ｃ（Ｓ）から選択され、Ｒ１及びＲ２が、独立して、水素若しくは－Ｃ１－６アルキルから選択され、ｑが、１～１０の整数であり、リンカーが、２つ以上のＣＨ２基を含み、任意選択的に１つ以上の非隣接（ＣＨ２）基が－Ｏ－又は－Ｓ－で置換されてエーテル、チオエーテル、ポリエーテル、又はポリチオエーテルを形成し得る、基－Ｘ１－（ＣＨ２）ｑ－Ｘ２若しくは－Ｘ１－（ＣＲ１Ｒ２）ｑ－Ｘ２－が含まれる。
いくつかの実施形態において、リンカーは、基－Ｘ１－（ＣＨ２）ｑ－Ｃ（Ｏ）－であり、式中、Ｘ１は、スルホン酸又はスルホネート含有部分に結合され、Ｏ、ＮＨ、及びＳからなる群から選択され、ｑは、１～３の整数であり、－Ｃ（Ｏ）－基の炭素は、デンドリマーの表面アミノ基に結合されている。
いくつかの実施形態において、リンカーは、基－Ｘ１－（ＣＲ１Ｒ２）ｑ－Ｃ（Ｏ）－であり、式中、Ｘ１は、スルホン酸又はスルホネート含有部分に結合され、Ｏ、ＮＨ、及びＳからなる群から選択され、Ｒ１及びＲ２は、独立して、水素又は－Ｃ１－６アルキルから選択され、ｑは、１～３の整数であり、－Ｃ（Ｏ）－基の炭素は、デンドリマーの表面アミノ基に結合されている。
いくつかの実施形態において、リンカーは、
＃－Ｏ－（ＣＲ１Ｒ２）－Ｃ（Ｏ）－＊であり、
式中、Ｒ１は、－Ｃ１－６アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、又はヘキシル）であり、Ｒ２は、水素であり、＃は、スルホン酸含有部分との結合を示し、＊は、デンドリマーの表面アミノ基との結合を示す。
いくつかの実施形態において、リンカーは、
＃－Ｏ－（ＣＨ２）ｑ－Ｃ（Ｏ）－＊であり、
式中、ｑは、１～６の整数であり、＃は、スルホン酸含有部分との結合を示し、＊は、デンドリマーの表面アミノ基との結合を示す。
特定の実施形態において、リンカーは、
＃－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－＊であり、
式中、＃はスルホン酸含有部分との結合を示し、＊はデンドリマーの表面アミノ基との結合を示す。
いくつかの実施形態において、スルホン酸－又はスルホネート含有部分は、リンカー基を介してデンドリマーの表面アミノ基に結合され、リンカー－スルホン酸／スルホネート部分は、
、又はその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態において、スルホン酸又はスルホネート含有部分は、
であり、リンカーは、
＃－Ｏ－（ＣＲ１Ｒ２）－Ｃ（Ｏ）－＊であり、
式中、Ｒ１は、－Ｃ１－６アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、又はヘキシル）であり、Ｒ２は、水素であり、＃は、スルホン酸含有部分との結合を示し、＊は、デンドリマーの表面アミノ基との結合を示す。
いくつかの実施形態において、スルホン酸又はスルホネート含有部分は、
であり、リンカーは、
＃－Ｏ－（ＣＨ２）ｑ－Ｃ（Ｏ）－＊であり、
式中、ｑは、１～６の整数であり、＃は、スルホン酸含有部分との結合を示し、＊は、デンドリマーの表面アミノ基との結合を示す。
本発明に有用な例示的なデンドリマーには、式Ｉ、ＩＩ、及びＩＩＩ：
、
、
、又はその薬学的に許容される塩が含まれ、
式中、各Ｒ基は、式ＩＶの基又は水素によって表され、
ただし、少なくとも１つのＲ基は、式ＩＶの基である。
特定の実施形態において、２つ以上のＲ基は、式ＩＶの基であり、例えば、いくつかの実施形態において、Ｒ基のうちの少なくとも１０個は、式ＩＶの基であり、Ｒ基のうちの少なくとも１５個は、式ＩＶの基であり、Ｒ基のうちの少なくとも２０個は、式ＩＶの基であり、Ｒ基のうちの少なくとも２５個は、式ＩＶの基であり、又はＲ基のうちの少なくとも３０個は、式ＩＶの基である。いくつかの実施形態において、Ｒ基の全てが、式ＩＶの基である。
いくつかの実施形態において、デンドリマーは、
であり、式中、Ｒの少なくとも２５％は、
であり、薬学的に許容される塩は、ナトリウム塩である。
いくつかの実施形態において、デンドリマーは、
であり、式中、Ｒは、水素又は
であり、Ｒの少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、又は少なくとも９０％は、
であり、薬学的に許容される塩は、ナトリウム塩である。
いくつかの実施形態において、巨大分子は、式Ｉ：
のデンドリマーであり、式中、Ｒは、式ＩＶ：
の基を表し、
式中、＊は、デンドリマーの表面アミノ基との結合点を表し、薬学的に許容される塩は、ナトリウムである。
いくつかの実施形態において、デンドリマーは、
であり、式中、Ｒは、水素又は基Ｒ’であり、
Ｒ’は、結合したスルホン酸又はスルホネート含有部分で、スルホン酸又はスルホネート含有部分は、
であり、リンカーは、
＃－Ｏ－（ＣＲ１Ｒ２）－Ｃ（Ｏ）－＊であり、
式中、Ｒ１は、－Ｃ１－６アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、又はヘキシル）であり、Ｒ２は、水素であり、＃は、スルホン酸又はスルホネート含有部分との結合を示し、＊は、デンドリマーの表面アミノ基との結合を示し、
Ｒの少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、若しくは少なくとも９０％、又は全てが、Ｒ’であり、薬学的に許容される塩は、ナトリウム塩である。
いくつかの実施形態において、デンドリマーは、
であり、式中、Ｒは、水素又は基Ｒ’であり、
Ｒ’は、結合したスルホン酸又はスルホネート含有部分で、スルホン酸又はスルホネート含有部分は、
であり、リンカーは、
＃－Ｏ－（ＣＨ２）ｑ－Ｃ（Ｏ）－＊であり、
式中、ｑは、１～６の整数であり、＃は、スルホン酸又はスルホネート含有部分との結合を示し、＊は、デンドリマーの表面アミノ基との結合を示し、Ｒの少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、若しくは少なくとも９０％、又は全てが、Ｒ’であり、薬学的に許容される塩は、ナトリウム塩である。
式Ｉの特定のデンドリマーは、全てのＲ基を式ＩＶの基として有する（ＳＰＬ７０１３）。アストドリマーナトリウムとしても知られるＳＰＬ７０１３は、構造：
を有する。
いくつかの実施形態において、巨大分子は、アストドリマーである。いくつかの実施形態において、巨大分子は、アストドリマーの薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態において、その薬学的に許容される塩は、ＳＰＬ７０１３（アストドリマーナトリウム）である。
式ＩＩの特定のデンドリマーは、全てのＲ基を式ＩＶの基として有する（ＳＰＬ７３２０）。式ＩＩＩの特定のデンドリマーは、全てのＲ基を式ＩＶの基として有する（ＳＰＬ７３０４）。
式Ｉ、ＩＩ、及びＩＩＩのデンドリマーの合成は、ＷＯ０２／０７９２９９に記載されている。
いくつかの実施形態において、巨大分子は、ＳＰＬ－７６７４、ＳＰＬ－７６１５、ＳＰＬ－７６７３、ＢＡＩ－７０２１、ＢＲＩ－２９９９、及びＢＲＩ－２９９２ではない。これらの分子の構造が、図１に示される。
コロナウイルス
本明細書で使用される場合、「コロナウイルス」又は「ＣｏＶ」の一般名で知られる「コロナウイルス科」は、エンベロープ型、プラス鎖、一本鎖ＲＮＡウイルスである。コロナウイルス科の２つのサブファミリーである、レトウイルス亜科及びオルトコロナウイルス亜科がある。コロナウイルスの系統発生は、コロナウイルス科研究グループ（Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｉｄａｅ Ｓｔｕｄｙ Ｇｒｏｕｐ）（２０２０）に概説されている。
一実施形態において、ＣｏＶは、属であるアルファコロナウイルス（アルファＣｏＶ）、ベータコロナウイルス（ベータＣｏＶ）、ガンマコロナウイルス（ガンマＣｏＶ）、及びデルタコロナウイルス（デルタＣｏＶ）から選択される。
一実施形態において、アルファＣｏＶは、コロナウイルス２２９Ｅ（ＨＣｏＶ－２２９Ｅ）、ヒトコロナウイルスＮＬ６３（ＨＣｏＶ－ＮＬ６３）、伝染性胃腸炎ウイルス（ＴＧＥＶ）、ブタ流行性下痢ウイルス（ＰＥＤＶ）、及びネコ感染性腹膜炎ウイルス（ＦＩＰＶ）から選択される。
一実施形態において、ベータＣｏＶは、ヒトコロナウイルスＨＫＵ１（ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１）、ヒトコロナウイルスＯＣ４３（ＨＣｏＶ－ＯＣ４３）、重症急性呼吸器症候群関連コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）、重症急性呼吸器症候群関連コロナウイルス－２（ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２）、中東呼吸器症候群関連コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）、マウス肝炎ウイルス（ＭＨＶ）、及び／又はウシコロナウイルス（ＢＣｏＶ）から選択される。
一実施形態において、ＣｏＶは、ヒトに感染することができる。
一実施形態において、ヒトに感染することができるＣｏＶは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、ＨＣｏＶ－ＯＣ４３、ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１、ＨＣｏＶ－２２９Ｅ、ＨＣｏＶ－ＮＬ６３、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、及びＭＥＲＳ－ＣｏＶ、又はその変異体のサブタイプから選択される。
一実施形態において、ＣｏＶは、ヒトにおける約０．００１～約１０％の死亡率を有する。一実施形態において、ＣｏＶは、ヒトにおける約０．０１～約９％の死亡率を有する。一実施形態において、ＣｏＶは、ヒトにおける約０．０１～約９％の死亡率を有する。一実施形態において、ＣｏＶは、ヒトにおける約０．０１～約７％の死亡率を有する。一実施形態において、ＣｏＶは、ヒトにおける約０．０１～約６％の死亡率を有する。
一実施形態において、ＣｏＶは、最小限の社会的制限が設けられている場合、ヒトにおいて約１．３～約５の１日当たりの時間変化基本再生産数（Ｒｔ）の中央値を有する。一実施形態において、ＣｏＶは、最小限の社会的制限が設けられている場合、ヒトにおいて約１．４～約４のＲｔを有する。一実施形態において、ＣｏＶは、最小限の社会的制限が設けられている場合、ヒトにおいて約１．４～約３のＲｔを有する。一実施形態において、ＣｏＶは、最小限の社会的制限が設けられている場合、ヒトにおいて約１．４～約２．６のＲｔを有する。実施形態において、Ｒｔは、Ｋｕｃｈａｒｓｋｉ ｅｔ ａｌ ２０２０に記載されるように計算される。
一実施形態において、ＣｏＶは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２又はそのサブタイプ若しくは変異体である。一実施形態において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、Ｔａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０２０に記載されるようなＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２サブタイプＬである。一実施形態において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、Ｔａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０２０に記載されるようなＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２サブタイプＳである。実施形態において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ｈＣｏＶ－１９／Ａｕｓｔｒａｌｉａ／ＶＩＣ０１／２０２０又はその変異体である。一実施形態において、ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２は、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＣ＿０４５５１２．２に記載されている配列又はその変異体を含む。一実施形態において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、ＧｅｎＢａｎｋ：ＭＮ９０８９４７．３に記載されている配列又はその変異体を含む。実施形態において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、Ｂ．１．１．７（２０Ｉ／５０１Ｙ．Ｖ１又はＶＯＣ２０２０１２／０１としても知られている）又はその変異体である。実施形態において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、Ｂ．１．３５１（２０Ｈ／５０１Ｙ．Ｖ２としても知られている）又はその変異体である。実施形態において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、Ｐ１（２０Ｊ／５０１Ｙ．Ｖ３としても知られている）又はその変異体である。実施形態において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、Ｂ．１．５２６又はその変異体である。実施形態において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、Ｂ．１．４２７又はその変異体である。実施形態において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、Ｂ．１．４２９又はその変異体である。Ｂ．１．１．７、Ｂ．１．３５１、Ｐ．１、Ｂ．１．４２７、及びＢ．１．４２９変異体は、ＣＤＣによって懸念される変異体（ｖａｒｉａｎｔ ｏｆ ｃｏｎｃｅｒｎ）として分類される。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２変異体の例は、例えば、Ｓｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０及びＴａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０２０に記載されている。Ｆｏｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ（２０２０）は、ゲノム解析に基づいて、３つの変異体である、Ａ、Ｂ、及びＣを発見している。いくつかの実施形態において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２変異体Ａである。いくつかの実施形態において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２変異体Ｂである。いくつかの実施形態において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２変異体Ｃである。
一実施形態において、変異体は、親配列と少なくとも９０％同一である。一実施形態において、変異体は、親配列と少なくとも９２％同一である。一実施形態において、変異体は、親配列と少なくとも９３％同一である。一実施形態において、変異体は、親配列と少なくとも９４％同一である。一実施形態において、変異体は、親配列と少なくとも９５％同一である。一実施形態において、変異体は、親配列と少なくとも９６％同一である。一実施形態において、変異体は、親配列と少なくとも９７％同一である。一実施形態において、変異体は、親配列と少なくとも９８％同一である。一実施形態において、変異体は、親配列と少なくとも９９％同一である。いくつかの実施形態において、親株は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ｈＣｏＶ－１９／Ａｕｓｔｒａｌｉａ／ＶＩＣ０１／２０２０である。いくつかの実施形態において、親株は、ベータＣｏＶ／Ｗｕｈａｎ／ＷＩＶ０４／２０１９である。いくつかの実施形態において、親株は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓｌｏｖａｋｉａ／ＳＫ－ＢＭＣ５／２０２０である。いくつかの実施形態において、親株は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ２０１９－ｎＣｏＶ／ＵＳＡ－ＷＡ１／２０２０である。実施形態において、親株は、Ｂ．１．１．７である。実施形態において、親株は、Ｂ．１．３５１である。実施形態において、親株は、Ｐ１である。
ＣｏＶ感染症は、ラクダ、ウシ、ネコ、及びコウモリを含む異なる動物種において、呼吸器、腸、肝臓、及び神経の疾患を引き起こし得る。
ＣｏＶは、ウイルス液滴と粘膜との接触を通して、１つの個体から別の個体に伝播され得る。典型的には、ウイルス液滴は空気伝播され、鼻気道を含む呼吸器を介して吸入される。典型的には、個体は、ヒト個体である。いくつかの実施形態において、個体は、家畜又は愛玩動物である。典型的には、感染の間、ＣｏＶは、上部呼吸器、例えば、鼻腔に認めることができる。いくつかの例では、ＣｏＶは、下部呼吸器、例えば、気管支及び／又は肺胞に認めることができる。
実施形態において、ＣｏＶ感染症は、発熱、咳、咽喉痛、息切れ、ウイルス排出、呼吸不全、鼻水、鼻づまり、気管支炎、頭痛、筋肉痛、呼吸困難、中度肺炎、重度肺炎、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）のうちの１つ以上から選択される１つ以上の症状を引き起こし得る。実施形態において、ＡＲＤＳは、軽度のＡＲＤＳ（２００ｍｍＨｇ＜ＰａＯ２／ＦｉＯ２≦３００ｍｍＨｇとして定義される）、中度のＡＲＤＳ（１００ｍｍＨｇ＜ＰａＯ２／ＦｉＯ２≦２００ｍｍＨｇとして定義される）、及び重度のＡＲＤＳ（ＰａＯ２／ＦｉＯ２≦１００ｍｍＨｇとして定義される）から選択される。
実施形態において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症は、発熱、咳、咽喉痛、息切れ、ウイルス排出、呼吸不全、鼻水、鼻づまり、気管支炎、頭痛、筋肉痛、呼吸困難、中度肺炎、重度肺炎、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）のうちの１つ以上から選択される１つ以上の症状を引き起こし得る。
実施形態において、巨大分子は、個体のＮＥＷＳ（急性疾患の予後予測スコア（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｅａｒｌｙ Ｗａｒｎｉｎｇ Ｓｃｏｒｅ））又はＮＥＷＳ２スコアを低下させる。別の実施形態において、巨大分子又はその薬学的に許容される塩は、個体のウイルス量を減少させる。当業者は、ウイルス量は、例えば、関連するウイルスヌクレオチド配列に対する定量的逆転写ＰＣＲ（ＲＴ－ｑＰＣＲ）による測定を含む、当業者に既知の任意の方法によって測定することができることを理解するであろう。一実施形態において、ウイルス量は、２０ＣＴ（サイクル閾値）超に低減するか、又は３０ＣＴ超に低減するか、又は３５ＣＴ超に低減するか、又は４０ＣＴ超に低減する。
一実施形態において、巨大分子は、個体のＣｏＶ抗体力価を低下させる。一実施形態において、ＩｇＡ、ＩｇＧ、及び／又はＩｇＭ抗体価は、ＥＬＩＳＡによって測定され、検出可能なレベル未満に低減する。いくつかの実施形態において、抗体は、プロテインＳ又はＮに対するものである。いくつかの実施形態において、試験される試料は、口腔スワブ、鼻腔スワブ、血液試料、咽喉スワブ、又は肺液から採取される。
いくつかの実施形態において、巨大分子は、肺内に保持され、体循環に浸出しない。いくつかの実施形態において、体循環に達する巨大分子の割合は、１０％未満、２５％未満、５０％未満、及び７０％未満である。全身送達は、薬剤学的に活性な薬剤の肺から血液への送達を指し、肺毛細血管内への吸収を直接的に介するか、又は肺リンパ毛細管内への吸収後のいずれかである。
実施形態において、ＣｏＶは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶではない。一実施形態において、ＣｏＶは、アルファＣＯＶではない。一実施形態において、ＣｏＶは、イヌコロナウイルスではない。
呼吸器合胞体ウイルス
本明細書で使用される場合、「呼吸器合胞体ウイルス」又は「ＲＳＶ」の一般名で知られる「オルソニューモウイルス」は、マイナス鎖、一本鎖ＲＮＡウイルスである。ＲＳＶは、ニューモウイルス科のメンバーである。ＲＳＶは、主に呼吸上皮細胞に感染する。Ｂｏｒｃｈｅｒｓ ｅｔ ａｌ（２０１３）に概説されているように、２つの主要な抗原サブグループであるＡ及びＢを有する単一のＲＳＶ血清型がある。サブタイプは、モノクローナル抗体に対するＦ及びＧ表面タンパク質の反応性に基づいて決定することができる。ＲＳＶ感染症は、霊長類、ヒト、ラット、マウス、ウシ、モルモット、フェレット、及びハムスターに症状を引き起こし得る。
一実施形態において、ＲＳＶは、ヒトＲＳＶ（ＨＲＳＶ）である。一実施形態において、ＨＲＳＶは、ＨＲＳＶ ｌｏｎｇである。
一実施形態において、ＲＳＶは、ＲＳＶサブタイプＡ（ＲＳＶＡ）又はＲＳＶサブタイプＢ（ＲＳＶＢ）から選択される。
実施形態において、ＲＳＶＡは、Ｍｅｌｅｒｏ ｅｔ ａｌ（２０１３）に記載されるように、ＧＡ１、ＧＡ２、ＧＡ３、ＧＡ４、ＧＡ５、ＧＡ６、及びＧＡ７クレードから選択される。実施形態において、ＲＳＶＡは、ＧＡ２及びＧＡ５から選択される。実施形態において、ＧＡ２クレードは、ＮＡ１、ＮＡ２、ＣＢ－Ａ、及びＯＮ１遺伝子型を含む。実施形態において、ＲＳＶＢは、ＧＢ１、ＧＢ２、ＧＢ３／ＳＡＢ３、ＧＢ４、及びＢＡのうちの１つ以上である。実施形態において、ＲＳＶＢは、ＢＡクレードである。
実施形態において、ＲＳＶＡは、Ｒａｍａｅｋｅｒｓ ｅｔ ａｌ ２０２０で同定された２３個の遺伝子型のうちの１つのメンバーである。実施形態において、ＲＳＶＡは、遺伝子型Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、Ａ５、Ａ６、Ａ７、Ａ８、Ａ９、Ａ１０、Ａ１１、Ａ１２、Ａ１３、Ａ１４、Ａ１５、Ａ１６、Ａ１７、Ａ１８、Ａ１９、Ａ２０、Ａ２１、Ａ２２、及びＡ２３から選択される。実施形態において、ＲＳＶＢは、Ｒａｍａｅｋｅｒｓ ｅｔ ａｌ ２０２０で同定された６個のＲＳＶＢ遺伝子型のうちの１つのメンバーである。実施形態において、ＲＳＶＢは、遺伝子型Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ４、Ｂ５、及びＢ６から選択される。
実施形態において、ＲＳＶ感染症は、以下の症状：鼻づまり又は鼻水、食欲減退、咳、咳をするときの粘液（黄色、緑色、又は灰色の粘液）、くしゃみ、咽喉痛、軽度頭痛、発熱、喘鳴、呼吸促迫又は呼吸困難、皮膚の青みがかった色（チアノーゼ）、喘息を有する個体における重度の喘息症状、急性気管支炎、重度気管支炎、気道炎症、気道閉塞、慢性閉塞性肺疾患、心うっ血、細菌血症、肺炎、急性中耳炎、及び再発性中耳炎のうちの１つ以上を引き起こす。
ＲＳＶ感染症は、例えば、細菌血症、肺炎、急性中耳炎、及び再発性中耳炎などの二次感染症をもたらし得る。
ＲＳＶは、ウイルス液滴と粘膜との接触を通して、１つの個体から別の個体に伝播され得る。典型的には、ウイルス液滴は空気伝播され、鼻気道を含む呼吸器を介して吸入される。典型的には、個体は、ヒト個体である。いくつかの実施形態において、個体は、家畜又は愛玩動物である。実施形態において、家畜は、ウシである。典型的には、感染の間、ＲＳＶは、上部呼吸器、例えば、鼻腔に認めることができる。いくつかの例では、ＲＳＶは、下部呼吸器、例えば、気管支及び／又は肺胞に認めることができる。
実施形態において、巨大分子又はその薬学的に許容される塩は、個体のウイルス量を減少させる。当業者は、ウイルス量は、例えば、関連するウイルスヌクレオチド配列に対する定量的逆転写ＰＣＲ（ＲＴ－ｑＰＣＲ）による測定を含む、当業者に既知の任意の方法によって測定することができることを理解するであろう。一実施形態において、ウイルス量は、２０ＣＴ（サイクル閾値）超に低減するか、又は３０ＣＴ超に低減するか、又は３５ＣＴ超に低減するか、又は４０ＣＴ超に低減する。
一実施形態において、巨大分子は、個体のＲＳＶ抗体力価を低下させる。一実施形態において、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、及び／又はＩｇＥ抗体価は、ＥＬＩＳＡによって測定され、検出可能なレベル未満に低減する。いくつかの実施形態において、試験される試料は、口腔スワブ、鼻腔スワブ、血液試料、咽喉スワブ、又は肺液から採取される。
いくつかの実施形態において、巨大分子は、肺内に保持され、体循環に浸出しない。
いくつかの実施形態において、体循環に達する巨大分子の割合は、１０％未満、２５％未満、５０％未満、及び７０％未満である。全身送達は、薬剤学的に活性な薬剤の肺から血液への送達を指し、肺毛細血管内への吸収を直接的に介するか、又は肺リンパ毛細管内への吸収後のいずれかである。
ＲＳＶの治療には、入院、集中治療、ＩＣＵ入院、挿管、及び酸素補給のうちの１つ以上が含まれ得る。
方法及び使用
本発明は、個体におけるＣｏＶ及び／又はＲＳＶ感染症の可能性を予防又は低減するか、個体におけるＣｏＶ及び／又はＲＳＶ感染症に関連する症状の可能性を予防又は低減するか、個体におけるＣｏＶ及び／又はＲＳＶ感染の重症度及び／若しくは持続を低減するか、あるいは個体におけるＣｏＶ及び／又はＲＳＶ感染症を治療するか、ＣｏＶ及び／又はＲＳＶ感染症に感染した個体におけるウイルス排出を予防又は低減するか、あるいは集団におけるＣｏＶ及び／又はＲＳＶの伝播を低減するための方法及び組成物に関するものであり、個体に有効量の巨大分子を投与することを含む。
一実施形態において、本明細書に記載の巨大分子は、呼吸器への投与について意図される。本明細書で使用される場合、「呼吸器」という用語は、呼吸中に空気が通過する、口、鼻、咽喉、及び肺によって形成される通路を指す。呼吸器への言及は、上部呼吸器及び／又は下部呼吸器の両方を含む。一実施形態において、本明細書に記載の巨大分子は、上部呼吸器への投与について意図される。一実施形態において、本明細書に記載の巨大分子は、下部呼吸器への投与について意図される。当業者は、上部呼吸器が、鼻腔、口腔、副鼻腔、咽喉、咽頭、及び喉頭のうちの１つ以上を含むことを理解するであろう。当業者は、鼻腔が、前庭領域、嗅覚領域、上鼻甲介、中鼻甲介、下鼻甲介、及び鼻咽頭のうちの１つ以上を含むことを理解するであろう。当業者は、下部呼吸器が、気管、原始気管支（ｐｒｉｍａｒｙ ｂｒｏｎｃｈｉ）、及び肺のうちの１つ以上を含むことを理解するであろう。いくつかの実施形態において、巨大分子は、鼻によって送達される。実施形態において、巨大分子を投与することは、呼吸器の１つ以上の領域の粘膜に投与することを含む。実施形態において、巨大分子は、鼻腔に投与される。実施形態において、本明細書に記載の巨大分子は、鼻粘膜に投与される。実施形態において、巨大分子は、鼻甲介、鼻咽頭、及び／又は中咽頭のうちの１つ以上に投与される。実施形態において、本明細書に記載の巨大分子は、口腔粘膜に投与される。実施形態において、本明細書に記載の巨大分子は、原始気管支の粘膜に投与される。実施形態において、本明細書に記載の巨大分子は、肺の粘膜に投与される。
肺は、活性剤の安定性にとって特に厳しい環境であることが知られている。小分子はすばやく肺上皮を通過し、血管系に取り込まれる。粒子サイズが、肺内の関連する疾患化構造に到達するために重要である。大型粒子を肺に送達する際に遭遇する別の困難は、肺内の繊毛の作用が、肺に送達された薬剤をすばやく除去して、糞便を介して排泄させる傾向があることである。したがって、本発明のいくつかの実施形態の特定の利点は、デンドリマーが、肺環境への投与後に繊毛によって分解又はすばやく排出されないことである。いくつかの実施形態において、巨大分子は、肺内に長期間保持される。いくつかの実施形態において、巨大分子は、肺内に最大、１ヶ月、１週、又は１日保持される。
いくつかの実施形態において、巨大分子は、局所的に投与される。実施形態において、巨大分子は、表皮又は眼に局所的に投与される。いくつかの実施形態において、局所投与は、呼吸器までの投与に及ばない。
いくつかの実施形態において、巨大分子は、皮膚に投与される。例えば、巨大分子は、手、手首、前腕、顔、及び首のうちの１つ以上に皮膚投与され得る。
いくつかの実施形態において、巨大分子は、全身送達のために非経口経路（例えば、静脈内、皮下、又は筋肉内）を介して送達される。いくつかの実施形態において、巨大分子は、ボーラス又は注入によって送達される。いくつかの実施形態において、巨大分子は、注射を介して送達される。いくつかの実施形態において、巨大分子は、静脈内によって送達される。
いくつかの実施形態において、巨大分子は、表面に適用される。いくつかの実施形態において、巨大分子は、金属、高分子であるペイント、プラスチック、及びゴムなど、織物、ポリマー、木材、セラミックス、ガラス、コンクリート、皮膚、ヒトの組織、粘膜、及び骨を含む表面に適用される。いくつかの実施形態において、巨大分子は、グローブ、マスク、ガウン、及びスクラブを含む個人用保護具（ＰＰＥ）に適用される。いくつかの実施形態において、巨大分子は、ワイプ及びティッシュに適用される。いくつかの実施形態において、巨大分子は、患者、テーブル、及び機器を含む手術／医療分野に適用される。手術／医療分野は、ヒト又は獣医学使用のためのものであり得る。
組成物
いくつかの実施形態において、巨大分子及び薬学的に許容される担体を含む組成物が使用される。本明細書に記載される組成物は、例えば、鼻、肺を介した呼吸器投与、眼投与、皮膚投与、及び／又は非経口投与に好適である。
医薬組成物はまた、高分子賦形剤／添加剤又は担体、例えば、ポリビニルピロリドン、誘導体化セルロースであるヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、及びヒドロキシプロピルメチルセルロースなど、微結晶セルロース／カルボキシメチルセルロース、フィコール（高分子糖）、ヒドロキシエチルスターチ（ＨＥＳ）、デキストラート（例えば、２－ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン及びスルホブチルエーテル－β－シクロデキストリンなどのシクロデキストリン）、デキストラン、ＰＶＰ、イヌリン、ポリエチレングリコール、及びペクチンを含み得る。医薬組成物はまた、アミノ酸又は糖担体、例えば、グリシン、ロイシン、アラニン、マンニトール、及びトレハロースを含み得る。組成物は、希釈剤、緩衝剤、結合剤、崩壊剤、増粘剤、滑沢剤、保存剤（抗酸化剤を含む）、香味剤、味覚遮断剤、無機塩（例えば、塩化ナトリウム）、抗微生物剤（例えば、塩化ベンザルコニウム）、甘味料、帯電防止剤、ソルビタンエステル、脂質（例えば、レシチン及び他のホスファチジルコリンなどのリン脂質、ホスファチジルエタノールアミン、脂肪酸及び脂肪エステル、ステロイド（例えば、コレステロール））、並びにキレート剤（例えば、ＥＤＴＡ、亜鉛、及び他のかかる好適なカチオン）を更に含み得る。本発明による組成物における使用に好適な他の薬学的賦形剤及び／又は添加剤は、”Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ： Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ”，１９．ｓｕｐ．ｔｈ ｅｄ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｌｉａｍｓ，（１９９５）、及び”Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ”，５２．ｓｕｐ．ｎｄ ｅｄ．，Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ，Ｍｏｎｔｖａｌｅ，Ｎ．Ｊ．（１９９８）、及び”Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ”，Ｔｈｉｒｄ Ｅｄ．，Ｅｄ．Ａ．Ｈ． Ｋｉｂｂｅ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ，２０００に列挙されている。
担体、賦形剤、又は希釈剤は、任意及び全ての従来の溶媒、分散媒、増量剤、固体担体、水性溶液、コーティング剤、粘度改質剤、等張剤、及び吸収増強若しくは遅延剤、活性増強若しくは遅延剤などのうちの１つ以上を含み得る。薬学的に活性な物質におけるかかる媒体及び薬剤の使用は、当業者に周知であり、それは、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，ＵＳＡに記載されている。任意の従来の担体及び／又は希釈剤が活性成分と不適合であるような場合以外、本発明の組成物におけるそれらの使用が企図される。
いくつかの実施形態において、巨大分子の組成物は、レオロジー改質剤、特にポリアクリル酸（カルボマー）、例えば、ＬｕｂｒｉｚｏｌのＣａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）９７１Ｐ、９７４Ｐ、若しくは７１ＧなどのＣａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）ポリマー、又はＮｏｖｅｏｎ Ｐｏｌｙｃａｒｂｏｐｈｉｌ、あるいはそれらの同等物を含む。いくつかの実施形態において、レオロジー改質剤は、Ｃａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）９７４Ｐである。それらは、アクリル酸のホモポリマーであり得るか、又はペンタエリスリトールのアリルエーテル、スクロースのアリルエーテル、若しくはプロピレンのアリルエーテルと架橋され得る。実施形態において、それは、カルボマーである。実施形態において、それは、カルボキシポリメチレンである。実施形態において、それは、アクリル酸ポリマーである。当業者であれば、鎖は、異なる長さ、異なる程度の架橋、分子量などを有することができ、特定の使用（Ｐによって指定される医薬品など）のために異なるグレードのものであることができることが理解されるであろう。いくつかの実施形態において、Ｃａｒｂｏｐｏｌポリマーは、ＮＦ（国民医薬品集（ｎａｔｉｏｎａｌ ｆｏｒｍｕｌａｔｏｒｙ））バージョンである。当業者は、医薬品及び非医薬品のグレードをいつ使用するのが好適であるかを認識するであろう。レオロジー改質剤は、１～１０％ｗ／ｗ、特に約２～５％ｗ／ｗ、又は０．０１～０．１％ｗ／ｗの量で存在し得る。いくつかの実施形態において、レオロジー改質剤は、カーボポール（ｃａｒｂｏｐｏｌ）である。カーボポールレオロジー改質剤は、０．０１％～１％ｗ／ｗ、又は約０．０１～０．１％、特に０．０５％～０．１％、特に０．０５％ｗ／ｗなどの量で存在する。いくつかの実施形態において、カーボポールは、Ｃａｒｂｏｐｏｌ９７４である。いくつかの実施形態において、Ｃａｒｂｏｐｏｌ９７４は、０．０５％ｗ／ｗ～約５％ｗ／ｗ、又は約０．０５％ｗ／ｗ～約３％ｗ／ｗ、又は約０．０５％ｗ／ｗ～約２％ｗ／ｗ、又は約０．０５％ｗ／ｗ～約１％ｗ／ｗ、又は約１％、又は約０．０５％ｗ／ｗのＣａｒｂｏｐｏｌ９７４などの量で存在する。いくつかの実施形態において、カーボポールは、Ｃａｒｂｏｐｏｌ９７１である。いくつかの実施形態において、Ｃａｒｂｏｐｏｌ９７１は、０．０５％ｗ／ｗ～約１％ｗ／ｗ、又は約０．０５％ｗ／ｗ～約１．５％ｗ／ｗ、又は約０．０５％ｗ／ｗ～約１．８％のＣａｒｂｏｐｏｌ９７１などの量で存在する。いくつかの実施形態において、レオロジー改質剤は、セルロース、例えば、ヒドロキシプロピルメチル－セルロース又は微結晶セルロース／カルボキシメチルセルロースである。いくつかの実施形態において、レオロジー改質剤は、ヒドロキシプロピルメチルセルロースである。いくつかの実施形態において、ヒドロキシプロピルメチル－セルロースは、０．０１％～１％ｗ／ｗ、又は約０．０５～０．５％ｗ／ｗ、特に約０．１％などの量で存在する。いくつかの実施形態において、レオロジー改質剤は、微結晶セルロース／カルボキシメチルセルロースである。いくつかの実施形態において、微結晶セルロース／カルボキシメチルセルロースは、０．５％～５％ｗ／ｗ、又は約１％～３％ｗ／ｗ、特に約２％ｗ／ｗなどの量で存在する。レオロジー改質剤は、組成物が生体接着性／粘膜接着性特性を有することを補助する。
巨大分子の組成物はまた、ポリアミノカルボン酸などのキレート剤を含み得る。特に有用なキレート剤は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）及びその塩である。キレート剤の好適な量は、０．００１％～２％ｗ／ｗ、特に０．００５％～１％ｗ／ｗの範囲にある。いくつかの実施形態において、キレート剤は、０．００１％～０．１％ｗ／ｗ、特に約０．００５％などの低い量で存在する。ゲル組成物に含まれ得る他の成分としては、最大１％ｗ／ｗの量のパラベン、例えば、メチルパラベン及びプロピルパラベン、又はそれらの混合物などの保存剤が挙げられる。パラベンの好適な量は、０．０１％～０．５％ｗ／ｗ、特に０．０１％～０．２％ｗ／ｗの範囲にある。いくつかの実施形態において、メチルパラベンは、０．０５％～０．２％ｗ／ｗ、特に約０．１８％などの量で存在する。いくつかの実施形態において、メチルパラベンは、０．１４％～０．２３％ｗ／ｗなどの量で存在する。いくつかの実施形態において、プロピルパラベンは、０．０１％～０．０５％ｗ／ｗ、特に約０．０２％などの量で存在する。いくつかの実施形態において、プロピルパラベンは、０．０１５％～０．００２５％ｗ／ｗなどの量で存在する。いくつかの実施形態において、塩化ベンザルコニウムは、０．０１％～０．１ｗ／ｗ％の範囲、特に約０．０５％の量で存在する。
組成物に含まれ得る他の成分としては、例えば、最大５％の量で、水などの溶媒、水酸化物及び／又は塩酸などのｐＨ調整剤、並びにグリセリン及びプロピレングリコールなどの軟化剤及び湿潤剤が挙げられる。いくつかの実施形態において、グリセリン（グリセロール）が存在する。いくつかの実施形態において、グリセリンは、０．１％～５％ｗ／ｗ、０．５％～２％ｗ／ｗ、特に約１％ｗ／ｗなどの量で存在する。いくつかの実施形態において、プロピレングリコールが存在する。いくつかの実施形態において、プロピレングリコールは、０．１％～５％ｗ／ｗ、０．５％～２％ｗ／ｗ、特に約１％ｗ／ｗなどの量で存在する。
実施形態において、組成物は、本明細書に記載されるような鼻スプレーデバイスによって送達されるとき、鼻腔内に保湿及び保護バリアを生じる。実施形態において、組成物は、本明細書に記載されるような鼻スプレーデバイスによって送達されるとき、鼻粘膜に保湿及び保護バリアを生じる。
呼吸用組成物（鼻及び口腔）
いくつかの実施形態において、巨大分子を呼吸器に投与することは、巨大分子を、口腔又は鼻経路によって疾患化肺に、鼻経路を介して上部呼吸器に、又は鼻経路を介して鼻腔及び／若しくは鼻粘膜に、送達することを含み得る。例えば、いくつかの実施形態において、巨大分子は、口及び／又は鼻を介した吸入などの吸入によって送達され得る。いくつかの実施形態において、巨大分子は、気管内注入又は吹送によって送達され得る。そのため、巨大分子は、薬学的に活性な薬剤を、疾患化組織又は細胞を標的にする別個の標的化剤を必要とせずに、呼吸器に送達され得る。
例えば、いくつかの実施形態において、医薬組成物は、エアロゾル組成物、噴霧組成物、乾燥粉末組成物、水性組成物、又は吹送組成物であり得る。いくつかの実施形態において、薬学的組成物は、加圧式計量用量吸入器、乾燥粉末吸入器、ネブライザー、スプレーなどに含まれ得る。実施形態において、組成物は、鼻スプレー、口腔スプレー、吸入器、又はネブライザーでの投与に好適である。追加の考察について、Ｚａｒｏｇｏｕｌｉｄｉｓ ｅｔ ａｌ（２０１２）を参照されたい。
いくつかの実施形態において、巨大分子は、鼻送達のために製剤化される。いくつかの実施形態において、巨大分子は、鼻腔への送達のために製剤化される。いくつかの実施形態において、巨大分子は、鼻粘膜への送達のために製剤化される。いくつかの実施形態において、組成物は、鼻甲介、鼻咽頭、及び／又は中咽頭のうちの１つ以上への送達のために製剤化される。
いくつかの実施形態において、医薬組成物は、水性鼻スプレー組成物又は乾燥粉末鼻スプレーなどの鼻内送達に好適であり得る。鼻スプレー組成物は、活性剤の精製水性溶液を保存剤及び等張剤とともに含み得る。かかる組成物は、鼻粘膜に適合するｐＨ及び等張状態に調整され得る。いくつかの実施形態において、巨大分子は、粉末、ゲル、液体、エアロゾル、又はエマルションとして送達される。いくつかの実施形態において、組成物のｐＨは、約４．５～約７．４２である。いくつかの実施形態において、組成物のｐＨは、約５～約７である。いくつかの実施形態において、組成物のｐＨは、約５～約６．５である。いくつかの実施形態において、ｐＨは、約５．５～約６．５である。他の実施形態において、ｐＨは、約７．４である。
いくつかの実施形態において、組成物の浸透圧は、約２００～約７００Ｏｓｍｏｌ／ｋｇである。いくつかの実施形態において、組成物の浸透圧は、約３００～約６００Ｏｓｍｏｌ／ｋｇである。いくつかの実施形態において、組成物の浸透圧は、約３００～約７００Ｏｓｍｏｌ／ｋｇである。いくつかの実施形態において、組成物の浸透圧は、約２００～約４００Ｏｓｍｏｌ／ｋｇ、より好ましくは、約２８０Ｏｓｍｏｌ／Ｋｇである。浸透圧調節剤には、ＮａＣｌ、リジン、ＣａＣｌ２、クエン酸ナトリウムが含まれ、ｐＨ調節剤には、Ｈ２ＳＯ４、ＮａＯＨ、トロメタミン、ＨＣｌが含まれる。いくつかの実施形態において、組成物の浸透圧は、約２００～約４００ｍＯｓｍｏｌである。
いくつかの実施形態において、組成物は、メチルパラベンを約０．１４％～約０．２３％で含む。
いくつかの実施形態において、組成物は、プロピルパラベンを約０．０１５％～約０．０２５％の濃度で含む。
実施形態において、鼻スプレー組成物は、ＣｏＶに対する抗ウイルス活性を有する。実施形態において、鼻スプレー組成物は、ＣｏＶの９０％超、又は９２％超、又は９５％超、又は９９％超、又は９９．９％超を不活性化する。実施形態において、鼻スプレー組成物は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の９０％超、又は９２％超、又は９５％超、又は９９％超、又は９９．９％超を不活性化する。実施形態において、鼻スプレー組成物は、ＣＯＶＩＤ－１９を引き起こすＣｏＶの９０％超、又は９２％超、又は９５％超、又は９９％超、又は９９．９％超を不活性化する。実施形態において、鼻スプレー組成物は、ＲＳＶウイルスに対する抗ウイルス活性を有する。実施形態において、鼻スプレー組成物は、ＲＳＶの９０％超、又は９２％超、又は９５％超、又は９９％超、又は９９．９％超を不活性化する。実施形態において、不活性化は、本明細書に記載される組成物への曝露の少なくとも１分後である。実施形態において、鼻スプレー組成物は、水分層を提供して鼻組織に水分を与え続ける助けをする。鼻組織に水分を与えることは、それを乾燥及び損傷から保護して、ウイルスの浸透をより困難にする。
いくつかの実施形態において、巨大分子は、肺への送達のために製剤化される。中性ｐＨ及び張度は、肺は緩衝化が乏しいため、呼吸器障害を有する患者の気管支収縮を回避する下部呼吸器送達のために重要な因子である。
いくつかの実施形態において、医薬組成物は、０．５μｍ超かつ５０μｍ未満の粒子サイズを有する乾燥粉末であり得る。いくつかの実施形態において、粒子サイズは、５ｕｍ未満、１ｕｍ超である。
いくつかの実施形態において、巨大分子は、約１００ｎｍ未満の粒子サイズを有し得る。他の実施形態において、巨大分子は、ＤＬＳによって約１～約１０ｎｍ、約２～約８ｎｍ、及び約３～約６ｎｍの粒子サイズを有し得る。いくつかの実施形態において、巨大分子は、ＤＬＳ（１０～２ＭのＮａＣｌ中に１ｍｇ／ｍｌ）によって約５ｎｍの平均サイズを有し得る。いくつかの実施形態において、巨大分子は、３０ｋＤａ未満、約１０～約３０ｋＤａ、及び約１０～約２０ｋＤａの分子量を有し得る。
鼻又は口腔送達に好適な成分の例が以下の表１に提供される。
鼻腔内の急速な粘液繊毛クリアランス、並びに鼻リゾチーム及びマクロファージの存在は、粘膜送達に課題を示し得る。粘膜接着性賦形剤が必要とされ得る。意図される投与方式に応じて、組成物は、生体接着剤を含み得る。実施形態において、生体接着剤は、粘膜接着ポリマーである。生体接着剤は、粘度、レオロジー、及び／又は毛様運動周波数（ＣＢＦ）を変化させ得る。粘膜接着ポリマーの例には、ポリ（アクリレート）、キトサン、セルロース及び誘導体としてカルボキシメチルセルロース及びヒドロキシプロピルセルロース、ヒアルロン酸誘導体、ペクチン、トラガント、デンプン、ポリ（エチレングリコール）、硫酸化多糖類、カラギーナン、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、アカシアガム、アルギン酸、及びゼラチンが含まれる。実施形態において、組成物は、鼻粘膜接着成分を含み得る。
しかしながら、粘度が気流を妨げるべきではない。いくつかの実施形態において、組成物の粘度は、１～１００００ｃＰ、又は１～１０００ｃＰ、又は１００～１０００ｃＰ、又は１００～５００ｃＰ、又は１００～４００ｃＰ、又は１５０～３００ｃＰ、又は１５０～２５０ｃＰ、又は１～２００ｃＰ、又は１～１００ｃＰ、又は１～５０ｃＰ、又は１～２５ｃＰ、又は１～１０ｃＰである。好ましい実施形態において、組成物の粘度は、約１～約１０ｃＰである（対照的に、膣使用のためのＳＰＬ７０１３ゲルは、２０，０００～６０，０００ｃＰの粘度を有する）。いくつかの実施形態において、溶液の動粘度は、１０００未満、又は５００ｍｍ２ｓ－１未満である。
肺送達では、粘度は低くすべきである。いくつかの実施形態において、粘度は、２００ｃＰ未満である。いくつかの実施形態において、粘度は、１００ｃＰ未満である。
鼻送達では、粘度は低くすべきである。いくつかの実施形態において、粘度は、１００ｃＰ未満である。いくつかの実施形態において、粘度は、５０ｃＰ未満である。いくつかの実施形態において、粘度は、２０ｃＰ未満である。いくつかの実施形態において、粘度は、１５ｃＰ未満である。いくつかの実施形態において、粘度は、１０ｃＰ未満である。
一実施形態において、鼻組成物は、表２に示される製剤を含む。
いくつかの実施形態において、医薬組成物はまた、任意の他の治療成分、界面活性剤、噴射剤、安定剤などを含み得る。担体は、組成物の他の成分と適合し、そのレシピエントに過度に有害ではないという意味で、薬学的に許容されるものでなければならない。
いくつかの実施形態において、医薬組成物は、０．５μｍ超かつ５０μｍ未満の粒子サイズを生成し得る。いくつかの実施形態において、粒子サイズは、５μｍ未満、１μｍ未満、又は１０μｍ未満である。
一実施形態において、平均粒子サイズは、約０．２１～約－２００μｍである。一実施形態において、平均粒子サイズは、約１～約２００μｍである。一実施形態において、平均粒子サイズは、約１～約５０μｍである。一実施形態において、平均粒子サイズは、約１～約２０μｍである。一実施形態において、平均粒子サイズは、約１～約５μｍである。
いくつかの実施形態において、１～約５μｍの粒子径は、下気道への送達に優れており、５～１０μｍの粒子は、主に気管及び気管支に沈着し、一方、直径＞１０μｍの粒子は、主に鼻に沈着する。通常、空気動力学的直径の中央値が１０μｍ未満の粒子は、鼻呼吸中に下気道に到達することができる。組成物は、液体、ゲル、又は粉末であり得る。
いくつかの実施形態において、より低い気道送達に好適なＤｖ９０は、約５～２０μｍである。いくつかの実施形態において、より低い気道送達に好適なＤｖ５０は、約５～１０μｍである。いくつかの実施形態において、より低い気道送達に好適なＤｖ１０は、約１～５μｍである。いくつかの実施形態において、鼻送達に好適なＤｖ１０は、約１０、１５、又は２０μｍ超である。
鼻送達に好適ないくつかの実施形態において、Ｄｖ５０は、約２０、４０、又は６０μｍ超である。鼻送達に好適ないくつかの実施形態において、Ｄｖ９０は、約６０、８０、又は１０００μｍ超である。
鼻送達に好適ないくつかの実施形態において、粒子の約１０％～約０．５％は、約１０μｍ以下である。鼻送達に好適ないくつかの実施形態において、粒子の約１０％～約０．５％は、約１０μｍ以下である。鼻送達に好適ないくつかの実施形態において、粒子の約７％～約０．５％は、約１０μｍ以下である。鼻送達に好適ないくつかの実施形態において、粒子の約５％～約０．５％は、約１０μｍ以下である。鼻送達に好適ないくつかの実施形態において、粒子の約１０％～約０．５％は、約５μｍ以下である。鼻送達に好適ないくつかの実施形態において、粒子の約７％～約０．５％は、約５μｍ以下である。鼻送達に好適ないくつかの実施形態において、粒子の約６％～約０．５％は、約５μｍ以下である。鼻送達に好適ないくつかの実施形態において、粒子の約５％～約０．５％は、約５μｍ以下である。鼻送達に好適ないくつかの実施形態において、粒子の約１０％未満は、約６μｍ以下である。鼻送達に好適ないくつかの実施形態において、粒子の約１０％未満は、約５μｍ以下である。経鼻送達に好適ないくつかの実施形態において、粒子の約５％未満は、約５μｍ以下である。経鼻送達に好適ないくつかの実施形態において、粒子の約５％未満は、約５μｍ以下である。
眼用組成物
本発明の巨大分子は、眼への適用に好適な任意の組成物、例えば、溶液、軟膏、ゲル、ローションで、徐放性ポリマーで、あるいはコンタクトレンズにコーティング、結合、又は含侵して送達され得る。実施形態において、組成物は、点眼剤で眼に送達することができる。実施形態において、組成物は、スプレーで眼に送達することができる。
「眼への適用に好適である」とは、組成物の任意の成分が、眼又は治療されている対象に長期持続性の有害な効果を引き起こさないことを意味する。投与時の軽度の刺激又は「ヒリヒリする」などの一過性の影響は、長期持続性の有害な効果を伴わずに発生し得る。巨大分子は、単純な水性溶液として製剤化され得る。代替的に、巨大分子は、溶液、ゲル、ローション、又は軟膏中に、例えば、塩及び緩衝剤、並びに他の成分として、保存剤、ゲル化剤、粘度制御剤、眼用潤滑剤、粘膜接着ポリマー、界面活性剤、抗酸化剤などを含むことによって、生理学的に適合する浸透圧及びｐＨのうちの１つ以上を有するように製剤化され得る。
本発明の巨大分子は、上皮上又は上皮内に一定期間保持され、巨大分子が上皮から拡散することを可能にする。かかる拡散は、眼環境への薬物の徐放を提供し、巨大分子の抗ウイルス活性が一定期間にわたって送達され、眼液及び物理的洗浄によって迅速に洗い流されないことを可能にする。巨大分子は、１０分を超える期間、より具体的には１時間を超える期間、より具体的には６時間を超える期間にわたって上皮から放出され得る。
いくつかの実施形態において、本発明は、本明細書に記載される巨大分子と、眼に適合するｐＨ及び浸透圧を提供する少なくとも１つの薬学的に許容される担体と、を含む組成物を提供する。
浸透圧剤として使用され得る好適な眼科的に許容される塩には、ナトリウム、カリウム、又はアンモニウムカチオンと、塩化物、クエン酸塩、アスコルビン酸塩、ホウ酸塩、リン酸塩、重炭酸塩、硫酸塩、チオ硫酸塩、又は重硫酸塩イオンと、を有する塩が含まれる。好適な塩の例には、塩化ナトリウム、塩化カリウム、チオ硫酸ナトリウム、重硫酸ナトリウム、及び硫酸アンモニウムが含まれる。
好適な眼科的に許容されるｐＨ調整剤及び／又は緩衝剤には、酢酸、ホウ酸、クエン酸、乳酸、リン酸、及び塩酸などの酸、水酸化ナトリウム、リン酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、及びトリヒドロキシメチルアミノメタンなどの塩基、並びにクエン酸－デキストロース、重炭酸ナトリウム、及び塩化アンモニウムなどの緩衝剤が含まれる。
好適な保存剤には、塩化ベンザルコニウム、塩化セチヘリメチルアンモニウム、及び塩化セチルピリジニウムなどの安定化アンモニウム化合物、酢酸フェニル水銀などの水銀化合物、イミダゾリジニル尿素、パラベンとしてメチルパラベン、エチルパルンベン、プロピルパラベン、又はブチルパラベンなど、フェノキシエタノール、クロロフェノキシエタノール、フェノキシプロパノール、クロロブタノール、クロロクレゾール、フェニルエチルアルコール、エチレンジアミン四酢酸、ソルビン酸、及びそれらの塩が含まれる。
好適なゲル化剤又は粘度制御剤には、それらが涙液、例えば、まばたき又は涙によって引き起こされる流涙と接触するときに、粘度を増加させるゲル化剤が含まれる。かかるゲル化剤は、涙液ドレナージによる巨大分子の損失を低減するために使用されて、巨大分子が滞留時間、したがって眼又は瞼の上皮層における吸収を増加させることを可能にし得る。好適なゲル化剤には、ゲランガム、特に低アセチル化ゲランガム、アルギン酸ガム、又はキトサンが含まれる。粘度調整剤はまた、メチルセルロース又はエチルセルロースなどのアルキルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース又はヒドロキシプロピルメチルセルロースなどのヒドロキシアルキルセルロース、ヒアルロン酸又はその塩、硫酸コンドロイチン又はその塩、ポリデキストロース、シクロデキシリン、ポリデキストリン、マルトデキストリン、デキストリン、ゼラチン、コラーゲン、ペクチンなどのポリガラクツロン酸誘導体、キサンタンなどの天然ガム、イナゴマメ、アカシア、トランガカント及びカラギーナン、寒天、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、アクリルアミド、アクリル酸、及びポリシアノアクリレートのポリマー、並びにメチルメタクリレート及び２－ヒドロキシ－エチルメタクリレートのポリマーなどのフィルム形成ポリマーを含み得る。粘度制御剤又はゲル化剤は、組成物の０．１％～約６．５％ｗ／ｗ、特に組成物の約０．５％～４．５％ｗ／ｗの量で存在し得る。
好適な潤滑剤には、ポリビニルアルコール、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、及びポリビニルピトリドンが含まれる。
好適な粘膜接着ポリマーには、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリアクリルアミド、ポリカルボフィル、ポリエチレンオキシド、アルギン酸ナトリウム、及びデキストリンが含まれる。
好適な眼科的に許容される界面活性剤には、ポリオキシエチレン脂肪酸グリセリド及びポリオキシエチレン（６０）水素化ヒマシ油を含む植物オイルなどの非１０ｍｃ界面活性剤、並びに、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、並びにオクトキシノール１０及びオクトキシノール４０などのアルキルフェニルエーテルが含まれる。
好適な抗酸化剤には、アスコルビン酸及びメタ重硫酸ナトリウムが含まれる。
眼用軟膏はまた、液体パラフィン、黄色ワセリン、固形パラフィン、及び／又は羊毛脂などの増粘剤のうちの１つ以上を含み得る。
実施形態において、本明細書に記載の眼用組成物は、ＣｏＶ感染症を治療及び／又は予防するために好適である。実施形態において、本明細書に記載される眼用組成物は、ＣｏＶ感染症を有する個体におけるＣｏＶウイルス排出を予防、低減、又は隔離するために好適である。
実施形態において、本明細書に記載の眼用組成物は、ＲＳＶ感染症を治療及び／又は予防するために好適である。実施形態において、本明細書に記載される眼用組成物は、ＲＳＶ感染症を有する個体におけるＲＳＶウイルス排出を予防、低減、又は隔離するために好適である。
本発明の組成物は、局所眼用組成物において上述されるように、当技術分野で一般的に使用される担体、希釈剤、及び賦形剤とともに製剤化され得ることが可能であるが、多くの一般的に使用される保存剤が、局所眼用組成物で使用されるときに欠点を有することは周知である。例えば、いくつかの保存剤は、眼の刺激を引き起こし、長期療法で使用される場合、それらは眼に損傷を引き起こし得る。更に、いくつかの保存剤は、組成物の腐敗を引き起こすいくつかの株の細菌に対して効果的ではない。パラベンは、それらの刺激的な性質のため、一般的に眼科用組成物には不適切とみなされる。いくつかの場合では、点眼剤組成物は、刺激を低減するために保存剤を加えずに製剤化される。しかしながら、かかる組成物は、単回使用でパッケージングされるか、又は開封後に冷蔵されなければならない。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の眼用組成物は、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤とともに、巨大分子の水溶液からなり、少なくとも１つの賦形剤は、７．０～７．６のｐＨ及び２４０～３１０ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧、特に、涙と等張である浸透圧を提供する。他の実施形態において、組成物は、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤とともに、巨大分子の水溶液を含み、少なくとも１つの賦形剤は、７．０～７．５のｐＨ及び２４０～３１０ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧を提供するが、巨大分子以外、保存剤は除かれる。
他の組成物
実施形態において、本明細書に記載の組成物は、皮膚投与に好適であり、水性、ゲル、又はクリーム組成物に製剤化され得る。
実施形態において、本明細書に記載の組成物は、手洗浄、術野準備を含む、表面スプレー、洗浄、又はワイプとしての使用に好適である。
実施形態において、本明細書に記載の組成物は、個人用保護具（ＰＰＥ）、例えば、マスク、グローブ、若しくは手術用ガウン、又はマスク用フィルターに埋め込まれるか、塗布されるか、又は結合される。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の巨大分子は、非経口送達に好適な組成物に製剤化される。例えば、静脈内送達では、組成物は、水性組成物、例えば、リンゲル、生理食塩水、水、若しくはデキストロース溶液であり得、又は使用のために０．９％生理食塩水若しくは５％デキストロースで希釈され得る。
いくつかの実施形態において、組成物は、ロゼンジ又は喉の含嗽薬として製剤化される。ロゼンジ組成物は、例えば、Ｕｍａｓｈａｎｋａｒ ｅｔ ａｌ（２０１６）及びＶｅｒａ ｅｔ ａｌ（２０１４）に記載されている。
本明細書に記載される組成物は、好都合には単位投与形態で提供され得、薬学の分野で周知の方法のいずれかによって調製され得る。本明細書で使用される投薬単位形態は、治療される個体のための単一投与量として適切な物理的に別個の単位を指し、各単位は、所望の予防又は治療効果を生じるように計算された所定量の活性成分を、必要な薬学的担体及び／又は希釈剤とともに含有する。
全ての方法は、巨大分子を１つ以上の付属成分を構成する担体と一緒にするステップを含む。一般に、組成物は、巨大分子を液体担体と一緒にして溶液又は懸濁液を形成することによって調製され得る。かかる投与形態は、期間にわたって（例えば、吸入用量での約数秒から非経口用量での約２～６時間まで、ボーラスでの数秒から注入での２４時間まで）投与されることが企図される。
有効量
本開示の方法は、有効量の巨大分子、又は巨大分子を含む組成物の投与を必要とする。「有効量」とは、所望の応答を少なくとも部分的に達成するか、又は感染症の発症を遅延させるか、その進行を阻害するか、若しくはそれを完全に停止させるのに必要な量を意味する。ヒト患者のための有効量は、例えば、約０．５ｍｇ～約５ｍｇの範囲内に収まり得る。ヒト患者にための効果的な量は、例えば、鼻孔当たりの作動当たり約０．５ｍｇ～約５ｍｇの範囲内に収まり得る。
いくつかの実施形態において、有効量は、約０．０４ｍｇ～約１ｇ、約１０ｍｇ～約５００ｍｇ、約１０ｍｇ～約１００ｍｇ、又は約１００ｍｇ～約５００ｍｇの範囲にある。いくつかの実施形態において、有効量は、約０．５～５ｍｇの範囲にある。いくつかの実施形態において、有効量は、約０．５～１．５ｍｇの範囲にある。いくつかの実施形態において、有効量は、約１ｍｇである。いくつかの実施形態において、有効量は、約０．５ｍｇである。
いくつかの実施形態において、有効量は、約０．１ｍｇ～約１ｇ／ｍ２、約１ｍｇ～約１００ｍｇ／ｍ２、約１０ｍｇ～約１００ｍｇ／ｍ２、又は約１０ｍｇ～約５００ｇ／ｍ２の範囲にある。
いくつかの実施形態において、巨大分子は、１日に０．１～１０ｍｇ／ｋｇで送達される。別の実施形態において、巨大分子は、１日に１０ｍｇ／ｋｇで送達される。別の実施形態において、巨大分子は、１日に０．１～１ｍｇ／ｋｇで送達される。
いくつかの実施形態において、巨大分子は、０．０１～５ｇ／日の注入を介して送達される。別の実施形態において、巨大分子は、０．１～２ｇ／日の注入によって送達される。いくつかの実施形態において、巨大分子は、１～２ｇ／日の注入を介して送達される。いくつかの実施形態において、巨大分子は、０．５～１ｇ／日の注入を介して送達される。
いくつかの実施形態において、巨大分子を含有する組成物は、約０．０５０～約２５μＭの範囲の巨大分子のインビボ濃度を確立するのに有効な量の巨大分子を含有するように製剤化される。インビボ濃度は、血漿中濃度若しくは肺液中濃度、又は肺組織濃度などの組織濃度である。いくつかの実施形態において、巨大分子を含有する組成物は、約１．０、２．０、３．０、４．０、５．０、６．０、７．０、８．０、９．０、１０、１１、１２、１３、１４、又は約１５μＭの巨大分子のインビボ濃度を確立するのに有効な量の巨大分子を含有するように製剤化される。いくつかの実施形態において、巨大分子を含有する組成物は、少なくとも０．５μＭ、少なくとも０．７５μＭ、少なくとも１μＭ、又は少なくとも２μＭの巨大分子のインビボ濃度を確立するのに有効な量の巨大分子を含有するように製剤化される。かかる各値を組み合わせて、約２０μＭ、約１７μＭ、又は約１５μＭの上限値を有する範囲を形成し得る。いくつかの実施形態において、巨大分子を含有する組成物は、約０．１～約１００μＭ、約０．５～約５０μＭ、又は約１～約２５μＭの範囲の巨大分子のインビボ濃度を確立するのに有効な量の巨大分子を含有するように製剤化される。
いくつかの実施形態において、１０～５０ｍｇ／ｋｇの単回用量は、有効濃度を達成するであろう。別の実施形態において、２０～４０ｍｇ／ｋｇの単回用量は、有効濃度を達成するであろう。別の実施形態において、３０ｍｇ／ｋｇの単回用量は、有効濃度を達成するであろう。
典型的には、注入されるとき、巨大分子は、ＥＣ５０を超え、好ましくはＥＣ９０を超え、かつ不当な副作用を回避する巨大分子のインビボ濃度を確立及び／又は維持するような速度で注入される。
いくつかの実施形態において、巨大分子は、少なくとも０．０８μＭ、少なくとも０．９、少なくとも０．７５μＭ、少なくとも１μＭ、少なくとも２μＭ、少なくとも３μＭ、少なくとも４μＭ、少なくとも５μＭ、少なくとも１０μＭ、又は少なくとも２０μＭの巨大分子のインビボ濃度を確立及び／又は維持するような速度で注入される。いくつかの実施形態において、巨大分子は、少なくとも０．００１ｍｇ／ｍｌ、少なくとも０．００５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも０．０１ｍｇ／ｍｌ、少なくとも０．０２ｍｇ／ｍｌ、少なくとも０．０３ｍｇ／ｍｌ、少なくとも０．０４ｍｇ／ｍｌ、少なくとも０．０５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも０．１ｍｇ／ｍｌ、少なくとも０．２ｍｇ／ｍｌ、少なくとも０．３ｍｇ／ｍｌの巨大分子のインビボ濃度を確立及び／又は維持するような速度で注入される。
いくつかの実施形態において、巨大分子は、約０．０１～約１００μＭ、約０．５～約５０μＭ、約１～約５０μＭ、約２～約５０μＭ、約５～約５０μＭ、又は約１０～約５０μＭの範囲の巨大分子のインビボ濃度を確立及び／又は維持するような速度で注入される。
いくつかの実施形態において、巨大分子は、約０．００１ｍｇ／ｍｌ～約２ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌ～約１ｍｇ／ｍｌ、又は約０．０５～約０．５ｍｇ／ｍｌの範囲の巨大分子のインビボ濃度を確立及び／又は維持するような速度で注入される。
いくつかの実施形態において、所望の濃度で巨大分子のインビボ濃度を確立及び／又は維持するために、巨大分子を所望の速度で注入する。例えば、約４００ｍｇ／Ｌの濃度を標的とする場合、注入速度は、いくつかの実施形態において、約５００～約３０００ｍｇ／時間、約１０００～約２０００ｍｇ／時間、又は約１５００～約１６００ｍｇ／時間（例えば、１５８４ｍｇ／時間）（例えば、４００ｍｇ／Ｌ×３．９６Ｌ／時間）の範囲にあり得る。例えば、約２００ｍｇ／Ｌの濃度を標的とする場合、注入速度は、いくつかの実施形態において、約２５０～約１５００ｍｇ／時間、約５００～約１０００ｍｇ／時間、又は約７５０～約８００ｍｇ／時間（例えば、７９２ｍｇ／時間）（例えば、２００ｍｇ／Ｌ×３．９６Ｌ／時間）の範囲にあり得る。
いくつかの実施形態において、有効量は、約０．１％～約１０％ｗ／ｗ、又は約０．５％～約１０％，ｗ／ｗ、又は約０．５％～５％ｗ／ｗ、又は約０．５％～３％ｗ／ｗ、又は約１％～３％ｗ／ｗの巨大分子で製剤化される。いくつかの実施形態において、有効量は、約０．５％ｗ／ｗ、約１％ｗ／ｗ、約２％ｗ／ｗ、約３％ｗ／ｗ、約４％ｗ／ｗ、又は約５％ｗ／ｗの巨大分子で製剤化される。いくつかの実施形態において、組成物は、約０．５ｍｇ／ｍｌ、又は約１ｍｇ／ｍｌ、又は約２ｍｇ／ｍｌ、又は約２．５ｍｇ／ｍＬ、又は約５ｍｇ／ｍｌ、又は約１０ｍｇ／ｍｌ、約２０ｍｇ／ｍｌ、約３０ｍｇ／ｍｌの巨大分子を含む。
いくつかの実施形態において、組成物は、約０．１～約５０ｍｌ、約０．２ｍｌ～約１ｍｌ、約１～約２５ｍｌ、約０．０２５ｍｌ～０．２ｍｌ、又は約５ｍｌの体積で投与される。いくつかの実施形態において、組成物は、約０．０２５ｍｌ、０．０５ｍｌ、０．１ｍｌ、又は約０．２ｍｌの体積で投与される。
送達系で使用する場合、本開示による送達系に含まれる抗ウイルス組成物の量は、例えば、約０．１０ｇ～約２ｇ、又は約０．１ｇ～約０．５ｇ、又は約０．１ｇ～約０．２５ｇであり得る。
いくつかの実施形態において、組成物が鼻送達のためのとき、用量は、２つの作動（スプレー）、すなわち各鼻孔に１つで投与され得る。いくつかの実施形態において、組成物が鼻送達のためのとき、用量は、鼻孔当たり約５μＬ～約２００μＬ、約５μＬ～約１５０μＬ、約５μＬ～約１００μＬ、５μＬ～約８０μＬ、５μＬ～約７０μＬ、５μＬ～約５０μＬ、５μＬ～約４０μＬ、５μＬ～約３０μＬ、又は約５μＬ～約１０μＬの体積で投与され得る。好ましい実施形態において、用量は、鼻孔当たり約１００μＬの体積で投与される。巨大分子は、所望の効果を提供する投薬レジメンで投与され得る。例えば、投薬、巨大分子、又は組成物は、１日当たり１～８回、１日当たり１～６回、１日当たり１～５回、１日当たり１～４回、１日当たり１～３回、又は１日に１回投与され得る。実施形態において、投薬、巨大分子、又は組成物は、１日当たり１～４回投与され得る。実施形態において、巨大分子、又は組成物は、各鼻孔に投与される（例えば、１日に４回は、各鼻孔に１日４回を含む）。いくつかの実施形態において、投薬、組成物、又は巨大分子は、約１～２週間、約１ヶ月、約３ヶ月、又は約６ヶ月間投与される。いくつかの実施形態において、投薬、組成物、又は巨大分子は、１日当たり１回、１日当たり４回、１日当たり６回、又は１日当たり８回投与される。実施形態において、投薬、巨大分子、又は組成物は、最大１日当たり４回投与され得る。実施形態において、投薬、巨大分子、又は組成物は、最大１日当たり８回投与され得る。いくつかの実施形態において、投薬、組成物、又は巨大分子は、最大連続１０日間投与される。いくつかの実施形態において、投薬、組成物、又は巨大分子は、最大連続２０日間投与される。いくつかの実施形態において、投薬、組成物、又は巨大分子は、最大連続３０日間投与される。
送達デバイス
態様において、本発明は、本明細書に記載の巨大分子を含む鼻、口腔、又は肺組成物を送達するためのデバイスを提供する。本明細書に記載されるデバイスは、巨大分子を上部呼吸器及び／又は下部呼吸器に送達することができる。実施形態において、デバイスは、巨大分子を鼻腔に送達することができる。実施形態において、デバイスは、１回以上の用量を送達することができる。実施形態において、デバイスは再利用可能である。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のデバイスは、本明細書に記載の組成物を含む。
実施形態において、デバイスは、鼻送達デバイスである。実施形態において、デバイスは、口腔送達デバイスである。実施形態において、鼻送達デバイスは、スプレー、吸入器、ネブライザー、又は鼻洗浄から選択される。
一実施形態において、デバイスは、鼻スプレーである。実施形態において、鼻スプレーは、ポンプスプレーである。かかるポンプは、作動手段を含むことができる。実施形態において、本明細書に記載の鼻スプレーは、容積型ポンプである。実施形態において、ｈｅポンプは、作動手段をボトルに向けて押すことによって作動され、ピストンは、計量チャンバ内で下方に移動する。計量チャンバの底部にあるバルブ機構は、ディップチューブへの逆流を防止する。そのため、ピストンの下向動作は、空気（プライミングの前）又は液体をアクチュエータに通して外側に押し出し、スプレーを生成する計量チャンバ内に圧力を生じる。作動圧力が除去されると、スプリングが、ピストン及びアクチュエータを最初の位置に戻すようにする。計量チャンバは正確な投薬を確実にし、アクチュエータの先端にある開口旋回チャンバは計量された用量をエアロゾル化する。これらのポンプでは、使用時に微生物汚染を防止するための措置が講じられていないため、組成物はしばしば保存剤を含有し、ほとんどの場合、塩化ベンザルコニウム（ＢＡＣ）又はパラベンを含有する。いくつかの実施形態において、デバイスは、保存剤として銀を使用する。実施形態において、デバイスは、アクチュエータの先端に銀線、銀でコーティングされたスプリング及びボールを使用する。かかるシステムは、微生物が長い投薬間隔の間に組成物を汚染しないようにすることができる。別のアプローチは、チップシール技術を使用して、デバイスへの逆流を防止することである。いくつかの実施形態において、デバイスの各作動によって排出される総体積は、作動当たり約２５～約２００μＬである。いくつかの実施形態において、各作動によって排出される体積は、作動当たり約５０～約１５０μＬである。一実施形態において、各作動によって排出される体積は、作動当たり約１５０μＬである。一実施形態において、各作動によって排出される体積は、作動当たり約１００μｌである。一実施形態において、各作動によって排出される体積は、作動当たり約５０μｌである。
いくつかの実施形態において、各作動は、約１０～約２００μｍの平均粒子サイズを生成する。いくつかの実施形態において、各作動は、約２０～約１８０μｍの平均粒子サイズを生成する。いくつかの実施形態において、各作動は、約４０～約１６０μｍの平均粒子サイズを生成する。いくつかの実施形態において、各作動は、約６０～約１１０μｍの平均粒子サイズを生成する。
いくつかの実施形態において、粒子サイズは、約６０ｍｍ／秒～約１１０ｍｍ／秒の作動速度で測定される。いくつかの実施形態において、粒子サイズは、約６０ｍｍ／秒～約９０ｍｍ／秒の作動速度で測定される。いくつかの実施形態において、粒子サイズは、約６０ｍｍ／秒～約８０ｍｍ／秒の作動速度で測定される。いくつかの実施形態において、粒子サイズは、約６０ｍｍ／秒の作動速度で測定される。いくつかの実施形態において、粒子サイズは、約８０ｍｍ／秒の作動速度で測定される。いくつかの実施形態において、粒子サイズは、分散点から垂直レーザー経路まで約３０ｍｍ～約８０ｍｍの距離で測定され
る。いくつかの実施形態において、粒子サイズは、約４０ｍｍ～約８０ｍｍの距離で測定される。いくつかの実施形態において、粒子サイズは、約５０ｍｍ～約７０ｍｍの距離で測定される。いくつかの実施形態において、粒子サイズは、約５５ｍｍ～約６５ｍｍの距離で測定される。いくつかの実施形態において、粒子サイズは、６０ｍｍ／ｓの作動及び４０～７０ｍｍの距離を使用して測定される。
いくつかの実施形態において、各作動は、４０～７０ｎｍの距離及び６０ｍｍ／秒の作動速度で、少なくとも１０μｍ（すなわち、粒子の１０％が１０μｍ未満の直径を有する）、又は少なくとも１５μｕｍ（すなわち、粒子の１０％が１５μｍ未満の直径を有する）の液滴サイズ分布Ｄｖ１０を生成する。いくつかの実施形態において、各作動は、４０～７０ｎｍの距離及び６０ｍｍ／秒の作動速度で、少なくとも５０μｍ又は少なくとも７０μｍの液滴サイズ分布Ｄｖ５０（中央値）を生成する。いくつかの実施形態において、各作動は、５％未満又は１０％未満の１０μｍ未満の粒子を生成する。
いくつかの実施形態において、距離は、作動手段から測定される。いくつかの実施形態において、距離は、作動手段内の分配開口から測定される。
実施形態において、デバイスは、口腔送達デバイスである。当業者は、口腔送達デバイスが、例えば、Ｉｂｒａｈｉｍ ｅｔ ａｌ（２０１５）又はＣｈａｎｄｅｌ ｅｔ ａｌ（２０１９）に記載されるような肺口腔送達デバイスであり得ることを理解するであろう。実施形態において、口腔送達デバイスは、スプレー、吸入器、ネブライザー、又は口腔洗浄から選択される。実施形態において、デバイスは、１つ以上の用量を送達することができる。実施形態において、デバイスは再利用可能である。実施形態において、スプレーは、多回用量スプレーである。
実施形態において、口腔デバイスは、口腔スプレーである。実施形態において、口腔スプレーは、ポンプスプレーである。
実施形態において、デバイスは、吸入器である。実施形態において、吸入器は、計量用量吸入器である。実施形態において、吸入器は、多回用量吸入器である。実施形態において、吸入器は、乾燥粉末吸入器である。吸入器の例は、Ｃｈａｎｄｅｌ ｅｔ ａｌ（２０１９）に認めることができる。
いくつかの実施形態において、吸入器の各作動によって排出される総体積は、作動当たり約５～約１５０μＬである。いくつかの実施形態において、吸入器の各作動によって排出される総体積は、作動当たり約１０～約１１０μＬである。一実施形態において、吸入器の各作動によって排出される総体積は、作動当たり約２０μＬ～約１００μＬである。一実施形態において、吸入器の各作動によって排出される総体積は、作動当たり約１００μＬである。一実施形態において、吸入器の各作動によって排出される総体積は、作動当たり約４０μＬ～約８０μＬである。
実施形態において、各吸入器作動は、約０．０１～約７μｍの平均粒子サイズを生成する。実施形態において、各ネブライザー作動は、約０．０１～約５μｍの平均粒子サイズを生成する。実施形態において、各ネブライザー作動は、約０．５～約５μｍの平均粒子サイズを生成する。実施形態において、各ネブライザー作動は、約１～約５μｍの平均粒子サイズを生成する。実施形態において、各ネブライザー作動は、約２～約４μｍの平均粒子サイズを生成する。
実施形態において、ネブライザーは、ジェットネブライザーである。実施形態において、ネブライザーは、超音波ネブライザーである。実施形態において、ネブライザーは、振動メッシュネブライザーである。実施形態において、ネブライザーは、呼吸作動式ネブライザーである。実施形態において、ネブライザーは、呼吸増強ネブライザーである。実施形態において、ネブライザーは、Ｓｐｉｒｉｖａ Ｒｅｓｐｉｍａｔ（登録商標）、ＡＥＲｘ（登録商標）Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍ、ＡｅｒｏＥｃｌｉｐｓｅ（登録商標）ＩＩ ＢＡＮ（Ｍｏｎａｇｈａｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、ＣｏｍｐＡＩＲ（商標）ＮＥ－Ｃ８０１（ＯＭＲＯＮ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｅｕｒｏｐｅ ＢＶ）、Ｉ－ｎｅｂ ＡＡＤ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｋｏｎｉｎｋｌｉｊｋｅ Ｐｈｉｌｉｐｓ ＮＶ）、Ｍｉｃｒｏ Ａｉｒ（登録商標）ＮＥ－Ｕ２２（ＯＭＲＯＮ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｅｕｒｏｐｅ ＢＶ）、ＰＡＲＩ ＬＣ（登録商標）Ｐｌｕｓ（ＰＡＲＩ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）、ＰＡＲＩ ｅＦｌｏｗ（登録商標）ｒａｐｉｄ（ＰＡＲＩ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）、及びＡＫＩＴＡ（登録商標）Ｉｎｈａｌａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｃｔｉｖａｅｒｏ）から選択される。
いくつかの実施形態において、ネブライザーによって送達される総体積は、作動当たり約５～約１５０μＬである。いくつかの実施形態において、送達される総体積は、作動当たり約１０～約１１０μＬである。一実施形態において、送達される総体積は、作動当たり約２０μＬ～約１００μＬである。一実施形態において、送達される総体積は、作動当たり約１００μＬである。一実施形態において、送達される総体積は、作動当たり約４０μＬ～約８０μＬである。
実施形態において、ネブライザーは、約０．０１～約７μｍの平均粒子サイズを生成する。実施形態において、ネブライザーは、約０．０１～約５μｍの平均粒子サイズを生成する。実施形態において、ネブライザーは、約０．５～約５μｍの平均粒子サイズを生成する。実施形態において、ネブライザーは、約１～約５μｍの平均粒子サイズを生成する。実施形態において、ネブライザーは、約２～約４μｍの平均粒子サイズを生成する。
鼻スプレー
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される巨大分子又は組成物は、鼻スプレーデバイスを介して鼻腔及び／又は鼻粘膜に送達される。本発明の鼻スプレーデバイスは、本発明の組成物を含む。本明細書に記載される組成物を含む本明細書に記載される鼻スプレーデバイスの作動は、鼻粘膜に保湿保護バリアを送達し、これは鼻粘膜の湿潤を保つのに役立ち、呼吸器ウイルスに対する物理的バリアとして機能する。
実施形態において、本明細書に記載される組成物は、作動時に正確に計量された量の組成物をスプレーとして送達する一体型スプレーポンプユニットを含む容器閉鎖システムにパッケージングされる。実施形態において、スプレーとしての分散は、組成物を鼻アクチュエータ及びその開口部を通過させることによって達成される。
この実施形態において、容器は、約１ｍＬ～約５０ｍＬの組成物を保持する。この実施形態において、容器は、約４ｍＬ～約４０ｍＬの組成物を保持する。この実施形態において、容器は、約８ｍＬ～約２５ｍＬの組成物を保持する。この実施形態において、容器は、約１０ｍＬ～約２０ｍＬの組成物を保持する。この実施形態において、容器は、約１０ｍＬ～約１５ｍＬの組成物を保持する。この実施形態において、容器は、約１０ｍＬの組成物を保持する。実施形態において、デバイスは、多回用量鼻スプレーデバイスである。
実施形態において、鼻スプレーデバイスは、約２０～約１２０回のスプレーの組成物を含む。実施形態において、鼻スプレーデバイスは、約４０～約１００回のスプレーの組成物を含む。実施形態において、鼻スプレーデバイスは、約６０～約８０回のスプレーの組成物を含む。実施形態において、鼻スプレーデバイスは、８０回のスプレーの組成物を含む。好ましい実施形態において、計量された量の組成物は、約１００μＬである。
非滅菌のプレフィルド鼻スプレーデバイスは、少量の保存剤を含有する粘膜接着性製剤に製剤化されたＳＰＬ７０１３からなり、少なくとも鼻甲介、鼻咽頭、及び／又は中咽頭に接着する。粘膜接着性組成物は、風邪、インフルエンザ、及びより重度なＣＯＶＩＤ－１９などの呼吸器疾患を引き起こす呼吸器ウイルスが最初に付着して増殖を開始する、鼻腔に接着する。本明細書に記載の実験に示されるように、ＳＰＬ７０１３は、ＣｏＶ及びＲＳＶに対する抗ウイルス活性を有し、したがって、ＣｏＶ及びＲＳＶなどの呼吸器ウイルスに対する物理的バリアとして機能することができ、呼吸器ウイルス病原体への曝露を低減するのに役立ち、ウイルス感染量を低減する。感染性ウイルス量を低減することは、感染症の獲得又は伝播を防止するのに役立ち得る。物理的なサイズ及び負電荷のため、ＳＰＬ７０１３は局所的な鼻適用後に血流に吸収されない。不活性化されたウイルスは、鼻粘液を介して自然に除去される。
実施形態において、鼻スプレーデバイスは、本明細書に記載の製剤を含む組成物を含む。実施形態において、製剤は、本明細書に記載される変形１である。実施形態において、製剤は、本明細書に記載される変形２である。実施形態において、製剤は、本明細書に記載される変形３である。実施形態において、製剤は、本明細書に記載される変形４である。実施形態において、製剤は、本明細書に記載される変形５である。
実施形態において、本明細書に記載の組成物を含む、本明細書に記載の鼻スプレーデバイスは、作動時に鼻防湿被覆物を送達する。本明細書で使用される場合、「鼻防湿被覆物」は、外部環境に保護水分バリアを提供し、鼻粘膜に水分を与え、それを和らげるために鼻通路（鼻孔）に適用される物質を指す。実施形態において、鼻防湿被覆物は、グローバル医療機器命名コード（Ｇｌｏｂａｌ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｅｖｉｃｅ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ ｃｏｄｅ）４７６７９を有する。
実施形態において、本明細書に記載される鼻防湿被覆物は、以下：ｉ）鼻粘膜を保湿する特性、ｉｉ）ＣｏＶを不活性化する特性、ｉｉｉ）ＣｏＶのウイルス量を低減する特性、のうちの１つ以上を含む。
実施形態において、本明細書に記載される鼻防湿被覆物は、以下：ｉ）鼻粘膜を保湿する特性、ｉｉ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を不活性化する特性、ｉｉｉ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のウイルス量を低減する特性、のうちの１つ以上を含む。
実施形態において、本明細書に記載される鼻防湿被覆物は、以下：ｉ）鼻粘膜を保湿する特性、ｉｉ）ＲＳＶを不活性化する特性、ｉｉｉ）ＲＳＶのウイルス量を低減する特性、のうちの１つ以上を含む。
同時投与
本開示のいくつかの実施形態において、巨大分子又はそれらの塩は、使用される唯一の活性成分であり得るが、他の実施形態において、使用される巨大分子は、１つ以上の更なる活性成分、例えば、ウイルスによる感染症の可能性を予防、治療、又は低減するための更なる活性剤と組み合わせて使用される。一実施形態において、ウイルスは、呼吸器を介して個体に感染することができる。一実施形態において、ウイルスは、呼吸器を介して個体に感染することができ、コロナウイルス、ライノウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、インフルエンザウイルス、合胞体ウイルス、パラインフルエンザ、アデノウイルス、メタニューモウイルス、及びエンテロウイルスから選択される。一実施形態において、ウイルスは、ＣｏＶである。一実施形態において、ウイルスは、ＲＳＶである。
実施形態において、活性剤は、抗ウイルス活性剤、ワクチン、免疫調節剤、気管支拡張剤、抗細菌剤、ノイラミニダーゼ阻害剤、キャップ依存性エンドヌクレアーゼ阻害剤、アダマンタン、抗凝固剤、血小板形成を促進する薬物、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、ビタミン、回復期血漿療法、及び／又は抗炎症剤のうちの１つ以上から選択される。
本明細書で使用される場合、「抗ウイルス活性剤」という用語は、真核生物細胞のウイルス浸透、真核生物細胞内でのウイルス複製、ウイルス組み立て、感染した真核生物細胞からのウイルス放出のうちの１つ以上から選択される少なくとも１つのウイルス作用を特異的に妨害するのに直接的又は間接的に有効であるか、あるいは真核生物若しくは哺乳動物宿主系におけるウイルス力価の増加を非特異的に阻害するか、又はウイルス力価レベルを非特異的に低減するのに有効である、化合物を指す。また、ウイルス感染症に罹患する可能性を予防又は低減する薬剤を指す。
実施形態において、抗ウイルス剤は、Ｇｏｒｄｏｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０又はＧｈａｒｅｅｂ ｅｔ ａｌ（２０２１）に記載される抗ウイルス剤から選択される。実施形態において、抗ウイルス活性剤は、カラギーナン、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－６Ｒ、ＣＣＲ５、ＭＥＲＳのＳタンパク質、並びにリバビリン、チロロン、ファビピラビル、カレトラ（ロピナビル／リトナビル）、プレジコビックス（ダルナビル／コビシスタット）、ネルフィナビル、ミコフェノール酸、ガリデシビル、アクテムラ、ＯＹＡ１、ＢＰＩ－００２、イフェンプロジル、ＡＰＮ０１、ＥＩＤＤ－２８０１、バリシチニブ、メシル酸カモスタット、リコリン、ブリラシジン、ＢＸ－２５、アモスタット、ウミフェノビル、ロピナビル、リトナビル、プルコナリル、及びファビピラビル、インターフェロン（例えば、ＩＦＮβ）、組み合わせた抗マラリアクロロキン、及び抗生物質アジスロマイシン含む薬物のうちの１つ以上から選択される。
実施形態において、抗炎症剤は、インドメタシン、トシリズマブ、ＪＡＫ阻害剤、及びルキソリチニブのうちの１つ以上から選択される。
実施形態において、活性剤は、アセトアミノフェン、モタビズマブ、アルブテロール、エピネフリン、リバビリン、及びパリビズマブのうちの１つ以上から選択される。
カラギーナンの例は、例えば、ＣＡ２６９６００９に記載されている。一実施形態において、カラギーナンは、イオタ－カラギーナン、カッパ－カラギーナン、及びラムダ－カラギーナンから選択される。一実施形態において、カラギーナンは、イオタ－カラギーナンである。
実施形態において、活性剤は、１つ以上のＲＳＶの症状を低減する。実施形態において、ウイルスがＲＳＶである場合、活性剤は、アセトアミノフェン、モタビズマブ、アルブテロール、エピネフリン、リバビリン、及びパリビズマブのうちの１つ以上から選択される。
一実施形態において、抗細菌剤は、抗生物質である。実施形態において、抗生物質は、広域スペクトル抗生物質である。
一実施形態において、免疫調節剤は、免疫抑制剤、サイトカイン阻害剤、抗体、又は免疫刺激剤である。免疫調節剤は、気道の炎症を抑制し得る。
巨大分子又はそれらの塩はまた、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）と組み合わせて使用され得る。例えば、ＮＳＡＩＤは、ＣｏＶ及び／又はＲＳＶ感染症の症状を治療するために使用され得、一方、巨大分子又はその塩は、ウイルスの別の個体への伝播を防止するために使用され得る。
本発明はここで、付随する実施例を参照してより完全に説明される。しかしながら、以下の説明は例示に過ぎず、上記の本発明の一般性に対する制限として決してとられるべきではないことを理解されたい。
実施例１：ＳＰＬ７０１３ ＣＰＥベースの抗ウイルスアッセイ
方法：
ウイルス株：ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ｈＣｏＶ－１９／Ａｕｓｔｒａｌｉａ／ＶＩＣ０１／２０２０は、メルボルンのＰｅｔｅｒ Ｄｏｈｅｒｔｙ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（Ｍｅｌｂｏｕｒｎｅ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ）から贈与された。親ストックとともに受け取った文書は、受領前に、ウイルスが以下のようにベロ細胞における２継代で継代されていたことを示した。作業ストックは、１％（ｗ／ｖ）Ｌ－グルタミン、１．０μｇ／ｍＬのＴＰＣＫ－トリプシン（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ）、０．２％ＢＳＡ、及び１％インスリントランスフェリンセレン（ＩＴＳ）を補充したＬ－グルタミン無添加最小必須培地を含む、ウイルス増殖培地中のベロ細胞における更なる２継代によって作成した。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ２０１９－ｎＣｏＶ／ＵＳＡ－ＷＡ１／２０２０株は、ＢＥＩ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ（ＮＲ－５２２８１）から供給された。ウイルスは、アフリカミドリザル腎臓ベロＥ６細胞又はヒトアンジオテンシン変換酵素２（ｈＡＣＥ２）トランスジェニックマウスからの肺ホモジネートに由来した。
細胞：アフリカミドリザル腎臓（ベロ）細胞（ＡＴＣＣ－ＣＣＬ８１）を継代培養し、１０％（ｖ／ｖ）熱不活化ウシ胎児血清及び１％（ｗ／ｖ）Ｌ－グルタミンを補充したＬ－グルタミン無添加最小必須培地を含む細胞増殖培地中の細胞バンクストックを作成した。細胞ストックを－８０℃で一晩凍結し、次いで、より長期間の保存のために、液体窒素に移した。ベロ細胞を最大１３継代で継代し、その後、新たな作業細胞バンクストックを、更なる使用のために液体窒素から回収した。
試験及び対照化合物の調製：ＳＰＬ７０１３を水に４０ｍｇ／ｍＬで溶解し、ボルテックスし、目視検査して完全な溶解を確認した。陽性対照化合物レムデシビルを、ＤＭＳＯ中の１０ｍＭストックとして調製し、－２０℃で保存した。
アッセイのための細胞の調製：ベロ細胞（ＡＴＣＣ－ＣＣＬ８１）を、９６ウェルプレートに、１００μＬの播種培地（１％（ｗ／ｖ）Ｌ－グルタミン、１％ＩＴＳ、０．２％ＢＳＡを補充した最小必須培地）中に細胞２×１０４個／ウェルで２４時間播種した。プレートを３７℃、５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。
アッセイプレートへの試験試料及び対照試料の添加：体積１４００μＬのウイルス増殖培地（１％（ｗ／ｖ）Ｌ－グルタミン、１％ＩＴＳ、０．２％ＢＳＡ、１μｇ／ｍＬのＴＰＣＫ－トリプシン、１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐを補充した最小必須培地）を、ｖ底縁ＰＣＲプレートの行Ａ、列３～１１に添加した。化合物（４０ｍｇ／ｍＬ）を列２に添加した（１３００μＬ）。１：３の連続希釈を、７００μＬの化合物をカラム２からカラム３に、カラム３からカラム４に移すことをカラム１０まで続けて最後は廃棄することによって作成した。各化合物希釈系列からの体積５０μＬを、アッセイプレートの行Ｂ～Ｇに添加した。ＳＰＬ７０１３を、感染の１時間前又は感染の１時間後にアッセイプレートに添加した。
ウイルスの添加：０．０５のｍｏｉを生じるようにウイルス増殖培地中で希釈した５０μＬ体積のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を、プレートに添加した。このｍｏｉは、４日間で１００％ＣＰＥを提供することが以前に決定された。ウイルスを行Ｂ、Ｃ、及びＤに添加して抗ウイルス活性を評価し、ウイルス無添加のウイルス増殖培地を行Ｅ、Ｆ、及びＧに添加して細胞傷害性を評価した。プレートを、５％ＣＯ２、３７℃、で４日間インキュベートしてからＣＰＥを評価した。
細胞壊死効果（ＣＰＥ）決定：４日間のインキュベーション後、生存細胞を、ＭＴＴで染色することによって決定した。３ｍｇ／ｍＬのＭＴＴ溶液の体積１００μＬをプレートに添加し、５％ＣＯ２インキュベーター中で、３７℃で４時間インキュベートした。真空チャンバに取り付けられたマルチチャネルマニホールドを使用してウェルを乾燥するまで吸引し、２００μＬの１００％２－プロパノールを室温で３０分間添加することによってホルマザン結晶を溶解した。吸光度を、プレートリーダーで５４０～６５０ｎｍで測定した。
有効５０％濃度（ＥＣ５０）の決定：ウイルス感染細胞において陽性対照及び試験品によって達成された細胞保護パーセントは、以下に示す式によって計算された。
細胞保護パーセント＝（［ＯＤｔ］ウイルス－［ＯＤｃ］ウイルス／［ＯＤｃ］モック－［ＯＤｃ］ウイルス）×１００
式中：
［ＯＤｔ］ウイルス＝ウイルス感染細胞に対する所定濃度の試験品又は陽性対照の効果を検査するウェルで測定された光学密度。
［ＯＤｃ］ウイルス＝ウイルス感染細胞に対する陰性対照の効果を検査するウェルで測定された光学密度。
［ＯＤｃ］モック＝模擬感染細胞に対する陰性対照の効果を検査するウェルで測定された光学密度。
略語：ｘ、試験品又は対照品の濃度；ｙ、細胞保護パーセント；Ｍｉｎ、最小；Ｍａｘ、最大；Ｄ、傾斜係数。
５０％細胞傷害性濃度（ＣＣ５０）は、模擬感染細胞の吸光度を対照値の５０％減少させる試験化合物の濃度として定義される。ＣＣ５０値は、（ＯＤｔ）モック／（ＯＤｃ）モックの比として計算した。ＩＤＢＳ ＸＬＦｉｔ４ Ｅｘｃｅｌ Ａｄｄ－ｉｎ（ＩＤ Ｂｕｓｉｎｅｓｓ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ Ｉｎｃ．、Ａｌａｍｅｄａ，ＣＡ）を使用して上述の計算を行った。
感染前予防アッセイ：９濃度のＳＰＬ７０１３（アストドリマーナトリウム）及びレムデシビル対照を、アッセイ培地（ＡＭ）中で３倍連続希釈によって調製し、ベロ細胞に３重測定で添加した。１時間後、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ｈＣｏＶ－１９／Ａｕｓｔｒａｌｉａ／ＶＩＣ０１／２０２０の最小ＭＯＩ（実験的に、感染後４日で１００％ＣＰＥを提供することが決定された）を含有する５０μｌ ＡＭを、化合物及びウイルスのみの対照ウェルに添加した［感染の多重性（ＭＯＩ）＝０．０５］。等量のＡＭのみを、細胞傷害性及び細胞のみのウェルに添加した。レムデシビルは、陽性対照として使用される。
感染後処理アッセイ：感染の４日後に１００％ＣＰＥを提供するように実験的に決定された、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ｈＣｏＶ－１９／Ａｕｓｔｒａｌｉａ／ＶＩＣ０１／２０２０の最小ＭＯＩを含有するＡＭを、ウイルスのみの対照ウェルに添加した。［感染多重性（ＭＯＩ）＝０．０５］。等量のＡＭのみを、細胞傷害性及び細胞のみのウェルに添加した。１時間後、９濃度のＳＰＬ７０１３（アストドリマーナトリウム）［及びレムデシビル対照を、アッセイ培地（ＡＭ）中で３倍連続希釈によって調製し、ベロ細胞に３重測定で添加した。
結果：
実験の結果を表３に提供する。データは、ＳＰＬ７０１３のＥＣ５０が、マイクロモル範囲［２５μＭ及び２４μＭ］にあることを実証し、それがウイルス感染の予防及び治療に有効な抗ウイルス剤であることを示している。加えて、感染前及び感染後アッセイにおける約３．５のＳＩは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２に対するＳＰＬ７０１３の選択性を示す。このアッセイにおける対照の細胞傷害性は、予想よりも大きく、ＳＩは、反復時に５以上であることが予想され得る。
比較すると、クロロキンは８μＭのＩＣ５０及び２６１のＣＣ５０を有し、ＳＡＲＳに対する３０のＳＩをもたらすことが報告されている（Ｋｅｙａｅｒｔｓ ｅｔ ａｌ ２００４）。より最近の研究では、ベータＣｏＶ／Ｗｕｈａｎ／ＷＩＶ ０４／２０１９に対するクロロキンの活性は、ＥＣ５０＝１．１３μＭ、ＣＣ５０＞１００μＭ、ＳＩ＞８８．５０であり、レムデシビルは、（ＥＣ５０＝０．７７μＭ、ＣＣ５０＞１００μＭ、ＳＩ＞１２９．８７）（Ｃｅｌｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｖｏｌｕｍｅ ３０，ｐａｇｅ ２６９－２７１（２０２０及びＥＭＡ Ｃｏｍｐａｓｓｉｏｎａｔｅ Ｕｓｅ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ Ｎｏ．ＥＭＥＡ／Ｈ／Ｋ／５６２２／ＣＵにおいてＧｉｌｅａｄによってＥＣ５０＝０．１３７μＭが報告された。これらのアッセイは、より少ない回数の複製及びより短いインキュベーションを有したため、直接的には比較可能ではない。
実施例２：ＳＰＬ７０１３殺ウイルスアッセイ
２５ｍｇ／ｍＬのＳＰＬ７０１３（アストドリマーナトリウム）を、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の等体積の１０５ＴＣＩＤ５０／ｍＬ単位とともにインキュベートした。ウイルス－化合物混合物を３７℃で６０分間インキュベートし、ＴＣＩＤ５０アッセイによる感染性ウイルス力価の定量のために、９６ウェルプレートに予め播種されたベロ細胞に直ちに力価設定した。プレートを、加湿した５％ＣＯ２雰囲気中、３７℃で３日間インキュベートした。ウイルス誘発性ＣＰＥを視覚的にスコア化した。ウイルス懸濁液のＴＣＩＤ５０は、Ｒｅｅｄ ａｎｄ Ｍｕｅｎｃｈ（１９３８）の方法を使用して決定した。殺ウイルス効果は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２アッセイ培地のみの力価と比較したウイルス力価のパーセント及びｌｏｇ低下として定量化される。対照は、ＡＭ、ＡＭ＋ウイルス、及び陽性対照としてクエン酸ナトリウム６０ｍＭだった。
ＳＰＬ７０１３は、このアッセイにおいて、２５ｍｇ／ｍＬで殺ウイルス活性を示した。アッセイは、化合物が全てのウイルス増殖を停止したことを示した。
実施例３：アストドリマーナトリウム（ＳＰＬ７０１３）は、インビトロでＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の複製を阻害する。
本試験は、インビトロでのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するアストロドリマーナトリウムの抗ウイルス活性を評価した。アストドリマーナトリウムは、感染の１時間前又は１時間後に細胞に添加されたとき、ベロＥ６細胞におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の複製を阻害し、０．０９０～０．７４２μＭ（０．００２～０．０１２ｍｇ／ｍＬ）の範囲でウイルス誘発性細胞壊死効果を低減する５０％有効濃度（ＥＣ５０）を有することが認められた。これらのアッセイにおける選択性指数（ＳＩ）は、２１９７に達するほど高かった。アストドリマーナトリウムはまた、細胞の感染前にウイルスと１時間混合した場合、殺ウイルス評価において有効だった（ＥＣ５０１．８３μＭ［０．０３０ｍｇ／ｍＬ］）。添加時間試験の結果は、試験した全ての時点で感染性ウイルスが検出の下限を下回っていることを示し、早期ウイルス侵段階を阻害する化合物と一致していた。これらのデータは、全ての調査において類似しており、ウイルス－宿主細胞相互作用の阻害に起因するアストドリマーナトリウムの強力な抗ウイルス活性と一致していた。
方法：
ウイルス、細胞培養、アストドリマーナトリウム、及び対照：ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ｈＣｏＶ－１９／Ａｕｓｔｒａｌｉａ／ＶＩＣ０１／２０２０は、メルボルンのＰｅｔｅｒ Ｄｏｈｅｒｔｙ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（Ｍｅｌｂｏｕｒｎｅ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ）から贈与された。ウイルスストックは、１％（ｗ／ｖ）Ｌ－グルタミン、１．０μｇ／ｍＬのＬ－（トシルアミド－２－フェニル）エチルクロロメチルケトン（ＴＰＣＫ）処理トリプシン（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ、ＮＪＵＳＡ）、０．２％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、及び１％インスリン－トランスフェリン－セレン（ＩＴＳ）を補充したＬ－グルタミン無添加最小必須培地（ＭＥＭ）を含む、ウイルス増殖培地中のベロ細胞における２継代によって、３６０Ｂｉｏｌａｂｓ（Ｍｅｌｂｏｕｒｎｅ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ）で作成された。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ２０１９－ｎＣｏＶ／ＵＳＡ－ＷＡ１／２０２０株は、２０２０年１月にＷａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＵＳで臨床疾患（ＣＯＶＩＤ－１９）を発症した呼吸器疾患を有する患者からの中咽頭スワブから単離され、ＢＥＩ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ（ＮＲ－５２２８１）から供給された。ウイルスは、アフリカミドリザル腎臓ベロＥ６細胞又はｈＡＣＥ２ヒトアンジオテンシン変換酵素２（ｈＡＣＥ２）トランスジェニックマウスからの肺ホモジネートに由来した。アフリカミドリザル腎臓ベロＥ６細胞又はヒトアンジオテンシン変換酵素２（ｈＡＣＥ２）トランスジェニックマウスからの肺ホモジネート。
ベロＥ６及びヒトＣａｌｕ－３細胞株を、１０％（ｖ／ｖ）熱不活化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）及び１％（ｗ／ｖ）Ｌ－グルタミンを補充したＬ－グルタミン無添加最小必須培地（ＭＥＭ）で培養した。ベロＥ６及びＣａｌｕ－３細胞を、抗ウイルス及び殺ウイルス試験のために最大１０継代で継代した。２％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を添加したハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＢＳ）を感染のために使用した。２０１９－ｎＣｏＶ／ＵＳＡ－ＷＡ１／２０２０株抗ウイルスアッセイは、０．１の感染多重度（ｍｏｉ）を用いて行った。殺ウイルスアッセイのためのウイルス接種は、細胞２．５×１０４個／ウェルに添加した、１．５ｍＬによる１０４、１０５、及び１０６ｐｆｕ／ｍＬだった。
殺ウイルスアッセイのためのウイルス接種は、１０４、１０５、及び１０６ｐｆｕ／ｍＬだった。所定のインキュベーション期間後、溶液を２０％スクロースクッション（Ｂｅｃｋｍａｎ ＳＷ４０ Ｔｉローター）に通してペレット化し、１．５ｍＬのＭＥＭ中に再懸濁し、次いで、細胞２．５×１０４個／ウェルに添加した。
アストドリマーナトリウムは、水中に８６．２９ｍｇ／ｍＬ又は１００ｍｇ／ｍＬとして調製し、４℃で保存した。アストドリマーナトリウムは、１６５８１．５７ｇ／ｍｏｌの分子量を有する。これらの試験で使用した化合物の純度は、超高性能液体クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ）によって９８．７９％であると評価された。レムデシビル（ＭｅｄＣｈｅｍＥｘｐｒｅｓｓ、ＮＪ，ＵＳＡ）を、ウイルス誘発性細胞壊死効果（ＣＰＥ）阻害及び添加プラークアッセイの時間における陽性対照として使用した。
ウイルス誘発性細胞壊死効果阻害アッセイ：アフリカミドリザル腎臓（ベロＥ６、ＡＴＣＣ－ＣＲＬ１５８６）細胞ストックを、１０％（ｖ／ｖ）熱不活化ＦＢＳ及び１％（ｗ／ｖ）Ｌ－グルタミンを補充したＬ－グルタミン無添加ＭＥＭを含む細胞増殖培地で作成した。ベロＥ６細胞単層を、９６ウェルプレートに、１００μＬ増殖培地（１％（ｗ／ｖ）Ｌ－グルタミン、２％ＦＢＳを補充したＭＥＭ）中に細胞２×１０４個／ウェルで播種し、５％ＣＯ２中、３７℃で一晩インキュベートした。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染は、０．０５のＭＯＩを使用して細胞単層に感染させることによって確立した。アストドリマーナトリウム又はレムデシビルを１：３で９回連続希釈し、各化合物濃度を、抗ウイルス有効性及び細胞傷害性の両方について、３重測定で評価した。アストドリマーナトリウムを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染の１時間前又は感染の１時間後にベロＥ６細胞に添加した。細胞培養物を、ＣＰＥの評価の前に、５％ＣＯ２中、３７℃で４日間インキュベートした。ウイルス増殖培地は、１％（ｗ／ｖ）Ｌ－グルタミン、２％ＦＢＳ、及び４μｇ／ｍＬのＴＰＣＫ処理トリプシンを補充したＭＥＭだった。４日目に、化合物のウイルス誘発性ＣＰＥ及び細胞傷害性を、メチルチアゾリルジフェニル－テトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）アッセイ（ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ、ＮＳＷ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ）を使用して生存細胞を測定することによって決定した。吸光度は、プレートリーダーで、５４０～６５０ｎｍで測定した。
抗ウイルスプラークアッセイ評価及びヌクレオカプシドＥＬＩＳＡ：抗ウイルス評価では、アストドリマーナトリウムを、細胞をウイルスに曝露する１時間前、曝露の時点、及び曝露の１時間後に細胞に添加した。抗ウイルス及び殺ウイルスアッセイの両方では、感染の６時間後、細胞を洗浄して、アストドリマーナトリウム及び／又は上清に残存しているいずれのウイルスも取り除き、かかる方法では初期感染の後、細胞培養をインキュベートし、１６時間又は４日後に上清を回収した。上清中のウイルスの量は、プラークアッセイ（プラーク形成単位［ｐｆｕ］）及びヌクレオカプシド酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって決定した。使用したプラークアッセイは、ｖａｎ ｄｅｎ Ｗｏｒｍ ｅｔ ａｌ（２０１２）に記載されているように、２％カルボキシメチルセルロースオーバーレイ、４％パラホルムアルデヒドによる細胞の固定、及び０．１％クリスタルバイオレットによる染色を利用した。ヌクレオカプシドＥＬＩＳＡアッセイは、Ｂｉｏｓｓ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ＵＳＡ（ＢＳＫＶ０００１）に記載される通りだった。アストドリマーナトリウム細胞傷害性の評価は、ＬＤＨ検出キット（Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ）を使用して、細胞質内の乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）活性を測定することによって、細胞傷害性陽性対照として使用した０．５％サポニンとともに、４日目に行った。
殺ウイルスアッセイ：アストドリマーナトリウムを１：３で９回連続希釈し、三重測定ウェルで試験した。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を、希釈したアストドリマーナトリウムと０．０５のＭＯＩで混合し、５％ＣＯ２中、３７℃で１時間インキュベートした。ウイルスと化合物との混合物を、９６ウェルプレートでベロＥ６細胞単層に添加し、５％ＣＯ２中、３７℃で４日間インキュベートした。４日目に、ウイルス誘発性ＣＰＥを、上述のようにＭＴＴアッセイによって測定した。殺ウイルス評価では、アストドリマーナトリウの濃度ム（０．００４６～３０ｍｇ／ｍＬ）を、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ２０１９－ｎＣｏＶ／ＵＳＡ－ＷＡ１／２０２０とともに、５秒～２時間の範囲の時間インキュベートした。アストドリマーナトリウムの効果を中和するために、プレインキュベート混合物を２０％スクロースクッション（Ｂｅｃｋｍａｎ ＳＷ４０ Ｔｉローター）に通してペレット化することによって、アストドリマー：ウイルス混合物から非結合化合物を分離した。アストドリマーナトリウム含有上清を除去し（すなわち、ＳＰＬ７０１３の効果を中和する）、次いで、ペレット化したウイルスを穏やかに再懸濁し、ベロＥ６又はＣａｌｕ－３細胞培養に添加した。ウイルス感染、細胞培養、及び細胞傷害性評価は、抗ウイルスプラークアッセイセクションで上述したプラークアッセイについて説明した通りだった。
有効濃度（ＥＣ５０及びＥＣ９０）及び細胞傷害性（ＣＣ５０）の決定：ウイルス誘発性ＣＰＥにおける５０％又は９０％の低下（それぞれＥＣ５０又はＥＣ ９０）をもたらす化合物の濃度は、実施例１に記載される式を使用して計算した。４日間の培養後に細胞生存率における５０％の低下（ＣＣ５０）をもたらした化合物の濃度もまた、実施例１に記載の式によって計算した。
添加の時期アッセイ（ＴＯＡ）：ベロＥ６細胞単層を、１％（ｗ／ｖ）Ｌ－グルタミン、２％ＦＢＳを補充したＭＥＭ中で増殖させた。頑強な感染を確実にするために、細胞培養をＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に１のＭＯＩで感染させた。ウイルスを４℃で１時間吸着し、次いで並行培養を、０．３４５ｍｇ／ｍＬアストドリマーナトリウム、１５μＭヒドロキシクロロキン、５μＭレムデシビル、又は陰性対照（アッセイ培地のみ）を添加する前に、３７℃に０分、１５分、３０分、６０分、２時間、４時間、６時間加温した。０分の時点では、試験品又は対照品をウイルス前吸着の直後に添加した。ウイルス感染の８時間後（１サイクルの複製期間）、ウイルスを細胞から各時点で収集した。ウイルスを含有する上清を保持し、ウイルス収率アッセイを介して各時点についてウイルス力価を決定した。
ウイルス収率低下アッセイ：ＴＯＡ試験からのウイルス力価を、組織培養感染用量の中央値（ＴＣＩＤ５０）として定量化した。ＴＣＩＤ５０は、ウイルス力価の尺度であり、組織培養試料の５０％に感染を生じるウイルスの力価を表す。ベロＥ６細胞単層を、１％（ｗ／ｖ）Ｌ－グルタミン、２％ＦＢＳを補充したＭＥＭ中で増殖させた。各時点から収集したウイルスを、３つのウェルに添加し、合計９系列の異なるウイルス濃度のためにプレートにわたって連続して３倍希釈した。ウェルのうちの６つは、アッセイ培地のみを含有し（すなわち、ウイルスなし）、対照として機能した。プレートを３日間インキュベートし、次いで、エンドポイントとして使用したウイルス誘発性ＣＰＥの視覚的スコアリングを用いて、細胞単層を顕微鏡で観察した。ウイルス懸濁液のＴＣＩＤ５０は、Ｒｅｅｄ ａｎｄ Ｍｕｅｎｃｈ（１９３８）の方法を使用して決定した。ウイルス収量を、各時間点について、化合物を添加しなかったときのウイルス増殖に対するパーセンテージとして表した。
結果：
ウイルス誘発性細胞壊死効果阻害アッセイ：２つの独立したウイルス誘発性ＣＰＥ阻害アッセイにおいて、アストドリマーナトリウムは、ベロＥ６細胞におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ｈＣｏＶ－１９／Ａｕｓｔｒａｌｉａ／ＶＩＣ０１／２０２０）複製を用量依存的に阻害した（図２、図３）。アストドリマーナトリウムは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染の１時間前、又は感染の１時間後のいずれかに添加したときに、ウイルス複製を阻害した。アストドリマーナトリウムは、最初に、０．００１３～８．６３ｍｇ／ｍＬ（０．０７８～５２０．４μＭ）の範囲で試験した。アッセイの反復セットにおいて、アストドリマーナトリウムを０．０００１～０．８６ｍｇ／ｍＬ（０．００８～５２．０μＭ）の範囲で試験し、用量反応曲線の下端を更に特徴付けるのに役立てた。アッセイからの有効濃度及び細胞傷害性濃度、並びに選択性指標は、ＣＰＥ決定について図２に個別に平均として示される。ＣＰＥ試験におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するアストドリマーナトリウムでの選択性指標（ＳＩ）は、化合物を感染の１時間前及び感染の１時間後にそれぞれ添加した初期アッセイで７９３～２１９７の範囲であり、細胞傷害性が試験した最高濃度（０．８６ｍｇ／ｍＬ）まで観察されなかった反復アッセイで＞７０～＞８０だった。陽性対照であるレムデシビルもまた、ＣＰＥ阻害アッセイで活性であり、＞３３のＳＩを有した。
抗ウイルス有効性：世界的に多様なＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株を阻害するアストドリマーナトリウムの能力を決定するために、本化合物をベロＥ６細胞及びヒトＣａｌｕ－３細胞における２０１９－ｎＣｏＶ／ＵＳＡ－ＷＡ１／２０２０ウイルスに対して評価した。抗ウイルス読み出し情報は、感染後に上清中に放出された感染性ウイルス又はウイルスヌクレオカプシドのウイルス学的エンドポイントに基づいた。表４及び図５に示されるように、アストドリマーは、ベロＥ６細胞又はＣａｌｕ－３細胞におけるプラークアッセイによって決定されるとき、２０１９－ｎＣｏＶ／ＵＳＡ－ＷＡ１／２０２０株を、それぞれ０．０１９～０．０３２ｍｇ／ｍＬ及び０．０３２０～０．０３７ｍｇ／ｍＬのＥＣ５０で阻害した。これらのデータは、インビトロでのＡｕｓｔｒａｌｉａｎ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２単離物の複製のアストドリマーによる阻害と一致する。上清中に放出されたヌクレオカプシドのＥＬＩＳＡによる用量反応データは、各細胞株における感染性ウイルス放出データと類似していた（データは示さず）。陽性対照であるレムデシビルもまた、プラークアッセイで活性だった。
殺ウイルス有効性：試験は、アストドリマーナトリウムが、ベロＥ６細胞の感染前に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を不可逆的に不活性化することによってウイルス感染性を低減することができるか決定するために行った。アストドリマーナトリウム処理は、ＣＰＥ試験と同様なレベルの抗ウイルス有効性を示し（図２、図４Ａ）、１．８３μＭ（０．０３０ｍｇ／ｍＬ）のＥＣ５０及び１３０のＳＩ、ｎ＝１を有した。感染後の異なる時間（０分、１５分、３０分、１時間、２時間、４時間、及び６時間）に化合物を添加することによって、ウイルス複製の初期、中期、及び後期段階における抗ウイルス活性に関する評価。感染後８時間で上清に分泌されたウイルスの量を、ＴＣＩＤ５０によって決定した。殺ウイルスアッセイは、アストドリマーナトリウムが、ベロＥ６細胞及びヒト気道Ｃａｌｕ－３細胞の感染前に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を不可逆的に不活性化することによってウイルス感染性を低減することができるか調査した。ウイルスとアストドリマーとの最大２時間のインキュベーション及びアストドリマーの中和後、アストドリマー曝露したウイルスを細胞培養物に添加した。１６時間又は９６時間（４日目）のいずれかの後に、細胞培養上清を、分泌された感染性ウイルス及びヌクレオカプシドの量によって決定される子孫ウイルス感染性の評価のために収集した。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２複製ライフサイクルは、約８時間で完了し（Ｏｇａｎｄｏ ｅｔ ａｌ．，２０２０）、これらの試験では、感染後１６時間（２ライフサイクル）又は４日目（１２ライフサイクル）にサンプリングした。起こり得る１２ラウンドの感染を可能にすることにより、４日目（９６時間）のサンプリング時点は、１０６ｐｆｕ／ｍＬのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２をアストドリマーナトリウムに１～２時間曝露することが、ウイルス感染性の用量依存的低下をもたらすことを特定し、１０～３０ｍｇ／ｍＬのアストドリマーナトリウムは、未処理ウイルスと比較して、ベロＥ６細胞において最大＞９９．９９９％（＞５ｌｏｇ１０）低減した感染性、及びＣａｌｕ－３細胞において＞９９．９％（＞３ｌｏｇ１０）低減した感染性を達成した（データは示さず）。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染性はまた、アストドリマー（１０～３０ｍｇ／ｍＬ）の１０６ｐｆｕ／ｍＬウイルスとのインキュベーション時間を１５～３０分に低減したとき、ベロＥ６細胞において最大＞９９．９９９％低減した（データは示さず）。
アストドリマーナトリウム（１～３０ｍｇ／ｍＬ）と１０４、１０５、及び１０６ｐｆｕ／ｍＬのウイルス接種との最短５秒間のインキュベーションは、低減した感染性の証拠をもたらし、１０～１５分間の曝露はウイルス感染性の＞９９．９％の低下を達成するのに十分であり、より大きな低下が、より低いウイルス接種で達成された（＞９９．９９９％、１０４ｐｆｕ／ｍＬのウイルス接種、１０～３０ｍｇ／ｍＬアストドリマーナトリウム、及び１０～１５分間のインキュベーション時間）（表５、図６）。アストドリマー曝露ウイルスによる細胞の感染の１６時間後に評価したとき、＞１０ｍｇ／ｍＬのアストドリマーナトリウムが、曝露からわずか１分以内に＞９９．９％のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（１０４ｐｆｕ／ｍＬ）を不活性化したことが認められた（表６、図７）。アストドリマーナトリウムのウイルスへの３０秒間の曝露は、検出可能な殺ウイルス効果はなかった。
添加の時期アッセイ（ＴＯＡ）：アストドリマーナトリウムの作用機序を更に検討するために、ＴＯＡ試験を行った。化合物を、約８時間で完了するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２複製ライフサイクルの初期、中期、及び後期段階で、ウイルス感染細胞に添加した。感染の０分～６時間後の時間範囲における０．３４５ｍｇ／ｍＬアストドリマーナトリウムの添加は、全ての時点で検出の下限を下回るウイルスレベルをもたらした（図４Ｂ）。この試験結果は、陽性対照（レムデシビル及びヒドロキシクロロキン硫酸塩）及びウイルスのみの培養における全ての同等な時点で検出可能である感染性ウイルスレベルとは対照的だった。ヒドロキシクロロキン硫酸塩は、１５μＭで、いずれの時点でも、ウイルス複製に認識可能な効果を有さなかった。レムデシビル（５μＭ、ＥＣ５０の約５～１０倍）は、感染後１５又は３０分以内に添加した場合、＜１ｌｏｇ１０ＴＣＩＤ５０でウイルス複製を阻害した。
考察：
アストドリマーナトリウムは、インビトロで多様なＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２細胞に対して強力な抗ウイルス活性を示した。抗ウイルス活性は、ＣＰＥの低下、感染性ウイルスの放出、及びウイルスヌクレオカスピドタンパク質の放出によって実証された。抗ウイルス活性は、アストドリマーナトリウムを細胞の感染前に細胞に添加したとき、及び本化合物を既にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に曝露された細胞に添加したときに実証された。不可逆的な殺ウイルス活性は、アストドリマーナトリウムをウイルスとわずか１分間混合したときに実証された。
注目すべきは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２活性について調査中の他の抗ウイルス化合物（Ｐｉｚｚｏｒｎｏ ｅｔ ａｌ．，２０２０）と比較して、アストドリマーナトリウムのＳＩが抗ウイルスアッセイで著しく高いことである。
レムデシビルをＣＰＥ阻害及び抗ウイルスアッセイの抗ウイルス陽性対照として使用し、実験的なＥＣ５０は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の異なる臨床分離株で生成された公開データ（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０２０）と一致した。
抗ウイルスデータは、アストドリマーナトリウムがウイルスライフサイクルにおける初期事象の強力な阻害剤であることと一致する。殺ウイルスアッセイデータは、アストドリマーナトリウム抗ウイルス活性がウイルスとの結合と一致し、それによってウイルスを不可逆的に不活性化し、感染をブロックしたことを示唆している。
ＴＯＡアッセイにおける全ての時点でのウイルス感染の完全な消滅は、アストドリマーナトリウムがウイルス感染及び複製の初期段階を阻害する強力な抗ウイルス剤であることとも一致する。
アストドリマーナトリウムの殺ウイルス活性は、それがウイルス感染及び複製の初期段階を不可逆的に阻害することを実証した。これらの試験結果は、ウイルスの複製及び感染性ウイルス子孫の放出を防止する、ウイルスの結合、融合、及び侵入の強力な阻害を示唆する。これらの試験結果は、ウイルスの複製及び感染性ウイルス子孫の放出を防止する、ウイルスの結合、融合、及び侵入の強力な阻害を示唆する。
本試験のデータは、化合物が、初期のウイルス細胞認識事象を妨げることによって、地理的に多様なＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２分離株に対して抗ウイルス活性を発揮することを示している。アストドリマーナトリウムは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染性をウイルスへの曝露１分後に＞９９．９％低減する強力な殺ウイルス剤である。これらの試験は、アストドリマーナトリウムが、付着などの早期のウイルス侵入ステップを防止することができ、それによってウイルス感染症又は細胞－細胞拡散を低減又は防止することを裏付ける。
ウイルスの標的細胞との結合をブロックするアストドリマーナトリウムなどの抗ウイルス剤は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する予防的及び／又は治療的な薬剤として有用であろう。これらの抗ウイルス試験は、呼吸器への送達のためのアストドリマーナトリウムの再配合が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２伝播をブロックし、他の予防的及び治療的な戦略を増強する効果的な予防戦略であり得ることを示唆する。
実施例４ ：３つのヒトコロナウイルス（ｈＣｏＶ－２２９Ｅ、ｈＣｏＶ－ＮＬ６３、及びｈＣｏＶ－ＯＣ４３）に対するＳＰＬ７０１３の殺ウイルス特性の評価
殺ウイルス懸濁試験（インビトロＴｉｍｅ－Ｋｉｌｌ法）を使用して、ｈＣｏＶ－２２９Ｅ（ＡＴＣＣ番号ＶＲ－７４０）、ｈＣｏＶ－ＮＬ６３（ＺｅｐｔｏＭｅｔｒｉｘ Ｃｏｒｐ． Ｎｏ．０８１０２２８ＣＦ）、及びｈＣｏＶ－ＯＣ４３（ＺｅｐｔｏＭｅｔｒｉｘ Ｃｏｒｐ． Ｎｏ．０８１００２４ＣＦ）に対するＳＰＬ７０１３の殺ウイルス特性を評価した。この試験に使用した試験ウイルスは、ＢＳＬＩ高力価ウイルスストックからのものだった。
使用する日に、ストックウイルスの小分けを－７０℃の冷凍庫から取り出し、試験に使用する前に解凍した。ウイルス株の初期集団からのパーセント及びｌｏｇ１０低下を、試験品に６０秒及び６０分間曝露した後に決定した。ウイルス力価を、５０％組織培養感染用量（ＴＣＩＤ５０）計算を使用して決定した（計数的試験）。
方法：
細胞培養：使用した細胞株は、ヒト肺線維芽細胞（ＭＲＣ－５、ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＣＬ－１７１）、ミドリザル上皮腎細胞（ベロ、ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ－８１）、及びヒト結腸腺がん上皮（ＨＣＴ－８、ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＣＬ－２４４）だった。細胞は、ディスポーザブル細胞培養実験器具で単層として維持し、殺ウイルス懸濁試験のために使用した。試験の前に、宿主細胞培養を２４ウェル細胞培養プレートに播種した。ＭＲＣ－５細胞は、約９０％密集し、コロナウイルス株２２９Ｅで接種するまでに４８時間未満だった。ベロ細胞は、約９０％密集し、コロナウイルス株ＮＬ６３で接種するまでに４８時間未満だった。ＨＣＴ－８細胞は、約８０％密集し、コロナウイルス株ＯＣ４３で接種するまでに４８時間未満だった。増殖培地（ＧＭ）を維持培地（ＭＭ）に置き換え、ウイルス増殖を支持した。
試験品：ＳＰＬ７０１３水溶液９９．１ｍ／ｍＬ。試験品の１５．９９ｍＬ小分けを３４．０１ｍＬの滅菌水に添加し、３１．９５ｍｇ／ｍＬの濃度を得た。試験した最終濃度は、２８．７６ｍｇ／ｍＬだった。
殺ウイルス懸濁試験：ウイルス懸濁試験には、表７に記載されるパラメータが含まれた。
試験：０．５ｍＬ小分けの試験ウイルスを、４．５ｍＬの試験品濃度を含むバイアルに添加した。試験ウイルスを試験品に６０秒及び６０分間曝露した。曝露後直ちに、試験ウイルス／試験品懸濁液をウシ胎児血清で中和し、完全に混合し、ＭＭ中で連続希釈した。各希釈物を４重測定でプレートに加えた。
ウイルス対照：０．５ｍＬ小分けの試験ウイルスを４．５ｍＬのＭＭに添加し、周囲温度で６０秒及び６０分間曝露した。その後の試験ウイルス希釈をＭＭで行い、ＭＭで連続希釈した。各希釈物を４重測定でプレートに加えた。
細胞傷害性対照：０．５ｍＬ小分けのＭＭを、４．５ｍＬの試験品濃度を含むバイアルに添加した。ＭＭ／試験品混合物をウシ胎児血清で中和し、完全に混合してＭＭで連続希釈した。各希釈物を４重測定でプレートに加えた。
中和対照：０．５ｍＬ小分けのＭＭを、４．５ｍＬの未希釈試験品を含むバイアルに添加した。ＭＭ／試験品混合物をウシ胎児血清で１：１０に希釈した。ウイルスの小分けを中和した試験品に添加し、完全に混合して、中和した試験品に１０～２０分間曝露した。中和した試験品／ウイルス懸濁液のその後の１０倍希釈をＭＭで行った。各希釈物を４重測定でプレートに加えた。
中和剤毒性対照：ウイルス感染性に対する中和剤の影響は、中和剤（ウシ胎児血清）にウイルスを添加した後、１０～２０分間曝露することによって評価した。その後、中和した試験製品／ウイルス懸濁液の１０倍希釈をＭＭで行った。各希釈物を４重測定でプレートに加えた。
細胞培養対照：そのままの細胞培養は、細胞培養生存率の対照として機能した。ＧＭは、全ての細胞対照ウェルでＭＭに置き換えられた。
プレートを、ＣＯ２インキュベーター中で１０～１４日間、ＣＯ２インキュベーター中で各ウイルス温度に適するようにインキュベートした。細胞壊死性／細胞傷害性効果は、倒立複合顕微鏡を使用してモニタリングした。
結果：
３つのヒトＣｏＶ株に対するＳＰＬ７０１３の殺ウイルスデータを、表８、表９、及び表１０に提供する。ＳＰＬ７０１３水溶液９９．９１ｍｇ／ｍＬは、ｈＣｏＶ－２２９Ｅの感染性を６０秒及び６０分の曝露後に０．７５ｌｏｇ１０（８２．２２％）低減させ、ｈＣｏＶ－ＮＬ６３の感染性を６０秒の曝露後に０．５０ｌｏｇ１０（６８．３８％）低減させ、６０分の曝露後に０．７５ｌｏｇ１０（８２．２２％）低減させ、ｈＣｏＶ－ＯＣ４３の感染性を６０秒及び６０分後に０．５０ｌｏｇ１０（６８．３８％）低減させた。これらの結果は、ＳＰＬ７０１３が複数のヒトＣｏＶ株に対して活性であることを示す。
実施例５：ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株Ｓｌｏｖａｋｉａ／ＳＫ－ＢＭＣ５／２０２０に対するＳＰＬ７０１３の殺ウイルス特性の評価
ＳＰＬ７０１３の殺ウイルス特性を、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株Ｓｌｏｖａｋｉａ／ＳＫ－ＢＭＣ５／２０２０に対して評価した。この株は、２０２０年３月にスロバキアのＣＯＶＩＤ－１９患者から単離された。
方法：
細胞：ベロＥ６／ＴＭＰＲＳＳ２非ヒト霊長類腎上皮細胞（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｓ、ＵＫ）。
ウイルス：：Ｓｌｏｖａｋｉａ／ＳＫ－ＢＭＣ ５／２０２０は、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｖｉｒｕｓ Ａｒｃｈｉｖｅ ｇｏｅｓ Ｇｌｏｂａｌ（Ｅｖａｇ）プラットフォームを通して供給された。ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２をベロＥ６／ＴＭＰＲＳＳ２細胞株で増幅させて力価測定した。
細胞傷害性及びウイルス定量化（実験１）：細胞を計数し、それらの生存率を、Ｖｉ－Ｃｅｌｌ自動装置を使用して評価した。細胞を約１５，０００個／ウェルで播種した。細胞を、３７℃で１時間、以下のように前処理した。８用量のＳＰＬ７０１３（１０、３．３、１．１、０．３７、０．１２、０．０４、０．０１４、０．００４６ｍｇ／ｍＬ）を、細胞培地で調製した。参照化合物（Ａｐｉｌｉｍｏｄ）を３濃度（１０００、３００、及び１００ｎＭ）で調製した。続いて、Ｓｌｏｖａｋｉａ／ＳＫ－ＢＭＣ５／２０２０を、１０μＬの体積中の１つのＭＯＩ（約０．０１）で予め処理した細胞に添加し、３７℃のインキュベーター内で４８時間インキュベートした。ウイルス量決定（ＲＴ－ｑＰＣＲ）のために上清を収集した。
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６（登録商標）ＡＱｕｅｏｕｓ非放射性細胞増殖アッセイ（ＭＴＳ／ＰＭＳアッセイ）を、プレート対照（ウイルスなし）及び上述のように処理及び感染させたプレートの両方で行った。アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ参照番号Ｇ５４３０）は、製造業者のプロトコルに従って行った。上清をＰＣＲ反応のためにウェルから取り出し、１００μＬの体積の新鮮な細胞培地、及び２０μＬの体積のＭＴＳ／ＰＭＳ試薬を各ウェルに添加した。吸光度を１時間ごとに４時間記録した。
ＲＴｑＰＣＲによるウイルス量の定量は、ＯＲＦ１ａｂ遺伝子を使用して実験の最後に行った。ウイルスキット（Ｍａｃｈｅｒｅｙ－Ｎａｇｅｌ，番号７４０７０９）を使用してＲＮＡを抽出した。ＲＮＡを使用するまで－２０℃で凍結した。ＲＴ－ＰＣＲは、Ｂｉｏ－Ｒａｄ ＣＦＸ３８４（商標）装置及び接続したソフトウェアを使用して、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ（商標）ＩＩＩ Ｏｎｅ－Ｓｔｅｐ ＱＲＴ－ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍキット（市販キット番号１７３２－０２０，Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて行った。
顕微鏡検査（実験２）： 細胞を約１５，０００細胞／ウェルで播種した。細胞を、３７℃で１時間、以下のように前処理した。８用量のＳＰＬ７０１３（１０、３．３、１．１、０．３７、０．１２、０．０４、０．０１４、０．００４６ｍｇ／ｍＬ）を、細胞培地中に調製した。参照化合物（Ａｐｉｌｉｍｏｄ）を３濃度（１０００、３００、及び１００ｎＭ）で調製した。次に、Ｓｌｏｖａｋｉａ／ＳＫ－ＢＭＣ５／２０２０を、細胞に１０μＬの体積の１ＭＯＩ（約０．５）で続けて添加し、３７℃で６時間インキュベートした。細胞を、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（２０１９－ｎＣｏＶ）ヌクレオタンパク質／ＮＰ抗体、ウサギＭａｂ一次抗体（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ，番号４０１４３－Ｒ０１９、１：８０００希釈）を使用して免疫蛍光染色のために固定し、Ｏｐｅｒｅｔｔａを使用して撮像した。ＦＦＵ／ｍＬ。
結果を図１１及び１２に示す。
実施例６：ｈＡＣＥ２トランスジェニックマウスにおけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に対する鼻腔投与７日間後のＳＰＬ７０１３のインビボ評価
方法：
簡単に説明すると、約６～８週齢の５匹のヒトＡＣＥ２トランスジェニックマウスＫ１８－ｈＡＣＥ２（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから入手可能、Ｂ６．Ｃｇ－Ｔｇ（Ｋ１８－ＡＣＥ２）２Ｐｒｌｍｎ／Ｊ，ストック番号０３４８６０）の４群を使用して、インビボでのウイルス量に対するＳＰＬ７０１３の効果を評価した。
これらの群の動物を、１０４ＰＦＵ／μＬのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（全負荷：５×１０５ＰＦＵ）（２０１９－ｎＣｏＶ／ＵＳＡ－ＷＡ１／２０２０株）を含有するウイルス懸濁液の鼻孔当たり２５μＬを用いて鼻腔内接種した。動物に２５μＬ／鼻孔（合計５０μＬ）のＰＢＳ（リン酸緩衝化生理食塩水）又はＰＢＳ中の１％、３％、若しくは５％ＳＰＬ７０１３のいずれかを７日間投与し、１日にＳＰＬ７０１３のそれぞれ０、０．５、１．５、及び２．５ｍｇの全投与（１～６日目）となった。最初の用量のＳＰＬ７０１３は、０日目にウイルス接種の５分前に投与し、次の用量は、０日目にウイルス接種の５分後に投与し、１日目から６日目に１回、各日同じ時間に投与した。動物は７日目に安楽死させた。感染の状態は、鼻腔スワブの試料（７日目）からウイルス量を定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ｑＰＣＲ）によって測定することで決定した。
結果：
７日目に鼻腔スワブにおけるウイルスコピー（ｑＰＣＲ）の用量依存的な減少があり、これは、対照と比較して最高用量レベルで統計的有意性に達した（図８Ａ）。このデータは、鼻に投与した場合、ＳＰＬ７０１３が用量依存的に鼻によって獲得されたＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス量を低減することができることを示す。２．５ｍｇ／日の用量が、ウイルス量を低減するのに最も有効だった。
実施例７：重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ）及び中東呼吸器症候群（ＭＥＲＳ）コロナウイルスに対するＳＰＬ７０１３の抗ウイルス特性の評価
方法：
細胞培養及びウイルス：ｈＡＣＥ２＋及びｈＴＭＰＲＳＳ２＋を発現するＨＥＫ－２９３Ｔ細胞、並びにベロＥ６細胞（ＡＴＣＣ－ＣＲＬ１５８６）を、１０％（ｖ／ｖ）熱不活化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）及び１％（ｗ／ｖ）Ｌ－グルタミンを補充したＬ－グルタミン無添加最小必須培地（ＭＥＭ）で培養した。２％ＦＢＳを添加したハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＢＳ）を感染に使用した。偽型ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１（Ｕｒｂａｎｉ）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（Ｗｕｈａｎ－Ｈｕ－１）、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ（ＨＣｏＶ－ＥＭＣ）レポーターウイルス粒子（ＲＶＰ）を、Ｉｎｔｅｇｒａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ（それぞれカタログ番号ＲＶＰ－８０１、ＲＶＰ－７０１、ＲＶＰ－９０１）によって生成した。ＲＶＰは、異種ウイルスコア上に抗原的に正確なスパイクタンパク質を示し、細胞感染の２４時間以内に、好都合な光学レポーター遺伝子である緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を発現する改変ゲノムを担持する。ｍＦｃタグを有するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）組換えタンパク質（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクＲＢＤ（３１８－５４１）組換えタンパク質（ｍＦｃ－Ｔａｇ）番号４１７０１，Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を、製造業者の説明書に従って使用した。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、及びＭＥＲＳ－ＣｏＶ偽型ＧＦＰレポーターレンチウイルス粒子におけるアッセイ：１００，０００個のベロ６細胞を、アッセイのために９６ウェルプレートのウェルごとに播種した。細胞を播種し、ＤＭＥＭ／１０％ＦＢＳ中で培養した。ＳＰＬ７０１３（ＰＢＳ中に０、１０、及び３０ｍｇ／ｍＬ）をベロＥ６細胞に添加し、１時間後にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、及びＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイク偽型ＧＦＰレポーターレンチウイルス粒子（ＲＶＰ－８０１、ＲＶＰ－７０１、及びＲＶＰ－９０１，Ｉｎｔｅｇｒａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ）（５０μＬ）を添加した。ＧＦＰ陽性又は感染したベロＥ６細胞の割合を、感染の４８時間後に蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）フローサイトメトリーによって決定した。
ｈＡＣＥ２＋ｈＴＭＰＲＳＳ２＋２９３Ｔ細胞に結合するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクの共焦点顕微鏡検査：ｈＡＣＥ２＋ｈＴＭＰＲＳＳ２＋２９３Ｔ細胞をチャンバスライド上で培養した。細胞をＳＰＬ７０１３（ＰＢＳ中０、１ｍｇ／ｍＬ）で１時間処理した後に、ｍＦｃタグを有するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクＲＢＤ組換えタンパク質を負荷した。１時間後、細胞を２回洗浄し、抗ｍＦｃ－ＰＥ ＩｇＧ抗体（１μｇ／ｍＬ）を細胞に添加し、結合したスパイクタンパク質を特定した。３０分後、細胞を再び２回洗浄し、固定して共焦点顕微鏡法によって分析した。
結果：
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、及びＭＥＲＳ－ＣｏＶ偽型ＧＦＰレポーターレンチウイルス粒子におけるアッセイ：ＳＰＬ７０１３は、スパイクタンパク質機能の阻害に、結合、融合、又は両方で特異的な広域スペクトル抗ウイルス効果を有することが認められた。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、及びＭＥＲＳ－ＣｏＶによってコードされる抗原的に正確なスパイクタンパク質を発現する偽型レンチウイルス粒子を使用して、ベロＥ６細胞に感染させた（図８Ｂ）。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、ＡＣＥ２受容体を介してベロＥ６細胞に結合する。ＭＥＲＳ－ＣｏＶは、ジペプチジルペプチダーゼ４（ＤＰＰ４）に結合する。３つのコロナウイルスは全て、ＴＭＰＲＳＳ２プロテアーゼを利用して、それらのＳ１／Ｓ２領域を切断する。ＳＰＬ７０１３は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、及びＭＥＲＳ－ＣｏＶのスパイクタンパク質を発現する偽型レンチウイルスとＶｅｒｏＥ６細胞との結合を、１０及び３０ｍｇ／ｍＬの濃度で強力に阻害した。
ｈＡＣＥ２＋ｈＴＭＰＲＳＳ２＋２９３Ｔ細胞に結合するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク結合の共焦点顕微鏡検査：共焦点顕微鏡検査では、陰性対照（ＳＰＬ７０１３無添加）は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質が、ＳＰＬ７０１３の存在しない細胞膜上でｈＡＣＥ２受容体を発現する細胞に結合することを示した。これは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質と宿主細胞との著しい結合を示す顕微鏡写真における強い緑色免疫蛍光によって実証された（顕微鏡写真は示さず）。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２をＳＰＬ７０１３の存在下で添加した場合、ｈＡＣＥ２受容体を発現する細胞とＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質との検出可能な結合は観察されなかった。これは、顕微鏡写真において緑色免疫蛍光が全く存在しないことによって示された（顕微鏡写真は示さず）。これらの試験によって、ＳＰＬ７０１３がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質をブロックすることによって作用することが確証された。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、ＡＣＥ２受容体を介したウイルスと標的細胞との相互作用を開始する際に不可欠であり、これは細胞の感染につながる。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質と細胞との結合が存在しない場合、細胞の感染は起こり得ない。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ及びＭＥＲＳ－ＣｏＶを用いた本試験は、ＳＰＬ７０１３が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質結合及び感染に対する効力を示す濃度でスパイクタンパク質の結合をブロックすることを実証した。これらの試験は、ＳＰＬ７０１３が、関与する細胞受容体に関わらず、コロナウイルススパイクタンパク質が細胞と相互作用することをブロックする共通のメカニズムを通じて、これらのウイルス全てに対して作用することを示す。まとめると、これらのデータは、ＳＰＬ－７０１３がヒト病原性コロナウイルスに対する抗ウイルス効果を有することを裏付ける。
実施例８：呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）に対するＳＰＬ７０１３の抗ウイルス特性の評価
試験品の濃度は、細胞傷害性試験に従って決定された開始濃度から約１：３希釈を使用して調製した。
宿主細胞培養をＰＢＳで洗浄し、１．０ｍＬ小分けの試験品希釈液を細胞に添加した。次いで、細胞を、平衡化のために１時間±１５分間インキュベートした。インキュベーション後、１．０ｍＬ小分けのウイルスをウェルに添加し、ウイルス吸着のために１時間±１５分間インキュベートした。インキュベーション後、混合物を除去し、ＴＭで置き換えた。次に、プレートをＣＯ２インキュベーター中でインキュベートした。プレートを、ウイルス対照中のウイルスプラークが顕微鏡によって確認できるまで（約５～１０日）インキュベートした。
細胞傷害性対照について、宿主細胞培養をＰＢＳで洗浄した。次に、細胞に１．０ｍＬの最高無毒試験品濃度を重ね、平衡化のために１時間±１５分間インキュベートした。インキュベーション後、１．０μｌ小分けのＭＭ（模擬感染）をウェルに添加し、１時間±１５分間インキュベートした。インキュベーション後、混合物を除去し、ＴＭで置き換えた。次に、プレートをＣＯ２インキュベーター中でインキュベートした。
ウイルス対照について、宿主細胞培養物をＰＢＳで洗浄し、１．０ｍＬ小分けのＭＭ（試験品の代わり）をウイルス対照用に指定したウェルに添加し、平衡化のために１時間±１５分間インキュベートした。インキュベーションが完了した後、１．０ｍＬ小分けのウイルスをウェルに添加し、ウイルス吸着のために１時間±１５分間培養した。インキュベーション後、ウイルスを除去し、ＴＭで置き換えた。プレートを、ＣＯ２インキュベーター中でインキュベートした。
そのままの細胞培養単層を、細胞生存率の対照として使用した。ＧＭを、細胞培養対照ウェル内でＴＭに置き換えた。
インキュベーション後、固定及び染色は、ＴＭを除去し、プレートをＰＢＳで洗浄し、４％ホルムアルデヒド溶液を使用して４～６時間固定することによって行った。固定細胞は、クリスタルバイオレット染色を使用して染色した。細胞溶解の未染色ゾーン（ウイルスプラーク）を計数した。
抗ウイルス処理後試験－試験品細胞傷害性の決定：試験品の最高非細胞傷害性濃度を決定した。宿主細胞培養をＰＢＳで洗浄した。１．０ｍＬ小分けの試験品を細胞に添加し、ＣＯ２インキュベーター中、３７℃±２℃で２４時間±１時間培養した。傷害性を、ＣＣＫ－８アッセイを使用して評価し、ＶＥＲＳＡｍａｘ（商標）調節可能マイクロプレートリーダーを用いて４５０ｎｍで読み取った。抗ウイルス試験に使用した濃度は、細胞傷害性試験で決定した。結果は、１００％の細胞生存率が、細胞対照の平均とほぼ等しい細胞生存率のパーセントとして示される。試験品のＴＣ５０濃度は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ５．０統計ソフトウェアを使用して決定した。抗ウイルス処理後試験は、表１１に概説される手順を含んだ。
試験品の濃度は、細胞傷害性試験に従って決定された開始濃度から約１：３希釈を使用して調製した。
宿主細胞培養をＰＢＳで洗浄し、１．０ｍＬ小分けのウイルスをウェルに添加し、ウイルス吸着のために１時間±１５分間インキュベートした。培養後、ウイルス接種物を除去し、ＴＭ中の試験品濃度の小分けで置き換えた。次に、プレートをＣＯ２インキュベーター中でインキュベートした。次いで、プレートを、ウイルス対照におけるウイルスプラークが顕微鏡によって確認できるまで（約５～１０日）インキュベートした。
細胞傷害性対照について、宿主細胞培養をＰＢＳで洗浄した。次に、細胞を、ＴＭ中の最も高い非毒性試験品濃度で重ね、ＣＯ２インキュベーター中でインキュベートした。
ウイルス対照について、宿主細胞培養物をＰＢＳで洗浄した。１．０ｍＬ小分けの≦１００ＰＦＵ／ｍＬウイルスをウェルに添加し、ウイルス吸着のために１時間±１５分間インキュベートする。インキュベーション後、ウイルス接種物を除去し、ＴＭの小分けで置き換えた。プレートを、ＣＯ２インキュベーター中でインキュベートした。
細胞培養対照について、そのままの細胞培養単層を、細胞生存率の対照として使用した。ＧＭを、細胞培養対照ウェル中でＴＭに置き換えた。
インキュベーション後、固定及び染色は、ＴＭを除去し、ＰＢＳで洗浄し、４％ホルムアルデヒド溶液を使用して４～６時間固定することによって行った。固定細胞は、クリスタルバイオレット染色を使用して染色した。細胞溶解の未染色ゾーン（ウイルスプラーク）を計数した。
抗ウイルス特性の評価：抗ウイルス特性ＥＣ５０及び／又はＥＣ９０は、非線形回帰分析、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ５．０ソフトウェアを使用して決定した。
抗ウイルス検査容認基準：実施例に記載される検証試験は、１）試験試料及び対照試料中のプラークが、計数可能であること、２）顕著な細胞傷害性効果が、細胞傷害性対照に存在しないこと、３）細胞対照ウェルが生存可能であり、ウェルの底部に付着していること、４）培地がプレートの全てのウェルに汚染を有しないこと、を必要とする。
結果：
結果を表１２及び図９に要約する。
実施例９：ＳＰＬ７０１３鼻スプレー
本明細書に記載されるデバイスの実施形態は、鼻スプレーである。鼻スプレーの実施形態が本実施例に提供され、「ＳＰＬ７０１３鼻スプレー」と称される。ＳＰＬ７０１３鼻スプレーは、ＳＰＬ７０１３を含有する水性鼻腔組成物を含み、「ＳＰＬ７０１３鼻スプレー組成物」と称される。ＳＰＬ７０１３は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２及び／又はＲＳＶを含むウイルスを不活性化し、ウイルス量への曝露を低減することが意図されている。ウイルス量を減少させることは、感染症の獲得又は伝播を低減することができる。ＳＰＬ７０１３鼻スプレーは、ＳＰＬ７０１３鼻スプレー組成物を含む場合、鼻腔への投与及び送達に好適な液滴サイズを生成し、１０μＭ以下である５％未満の液滴を有する（１０μＭの粒子は、肺への送達により好適である）。
ＳＰＬ７０１３鼻スプレー組成物を含むＳＰＬ７０１３鼻スプレーからの作用は、鼻粘膜のための保湿及び保護粘膜接着バリアを生成し、呼吸器ウイルスを不活性化及びそれに対するバリアとして作用するために使用することができる。
ＳＰＬ７０１３鼻スプレー組成物は、ＳＰＬ７０１３及び粘度改質性粘膜接着物質を含む。ＳＰＬ７０１３鼻スプレー組成物は、表１４に列挙される「変形４」又は表１３に以下に示される「変形５」に記載される通りである。変形５は、ｐＨが塩酸で追加的に調整された変形４製剤である。製剤は、適切な粘度を達成し、投与の容易さを補助し、鼻腔内の製品の保持を促進するために、カルボマーホモポリマータイプＢを含む。
ＳＰＬ７０１３鼻スプレーは、作動当たり約１００μＬのＳＰＬ７０１３鼻スプレー組成物を送達する１０ｍＬの多回用量、計量鼻スプレーデバイスとして供給される。ＳＰＬ７０１３鼻スプレーの他の実施形態は、わずかに小さいか若しくは大きな体積、又はより小さいか若しくはより大きな計量用量を含み得る。ＳＰＬ７０１３鼻スプレー組成物は、ウイルスの不活性化及びウイルス量への曝露の低減のために、要求に応じて使用者によって最大３０日連続して自己投与することができ、かつ／又は必要に応じて１日に最大４回（各鼻孔に）投与することができる。
国際医療機器名称（Ｇｌｏｂａｌ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｅｖｉｃｅ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ）（ＧＭＤＮ）を参照して、ＳＰＬ７０１３鼻スプレーに適用できる用語は、ＧＭＤＮコード４７６７９を有する「鼻防湿被覆物」である。ＳＰＬ７０１３によるウイルス不活性化のメカニズムの物理的性質、及びデバイスの物理的作用モードを考慮すると、本製品は欧州医療機器指令（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｅｖｉｃｅ Ｄｉｒｅｃｔｉｖｅ）９３／４２／ＥＥＣに基づくクラスＩ医療機器とみなされる。
ＳＰＬ７０１３鼻スプレーは、ＳＰＬ７０１３鼻スプレー組成物を含む場合、作動時に、ｉ）鼻粘膜に適用したときに、呼吸器ウイルスに対するバリアとして作用する保湿及び保護粘膜接着剤製剤、ｉｉ）ウイルスを不活性化し、ウイルス量への曝露を低減すること、ｉｉｉ）ｉ）及び／又はｉｉ）の結果として、ウイルス量を低減することを提供する。ウイルス量の低下は、感染症の獲得又は伝播を防止するのに役立ち得る。
ＳＰＬ７０１３鼻スプレー組成物の容認基準を以下に要約する。鼻スプレー組成物の浸透圧及びｐＨは、５．５～６．５のｐＨで＜５００ｍＯｓｍｏｌの生理学的状況に調整する。浸透圧及びｐＨに関するＳＰＬ７０１３鼻スプレーの容認基準は、それぞれ、２００～４００ｍＯｓｍｏｌ及び５．５～６．５である。ＳＰＬ７０１３鼻スプレーは、典型的には、鼻腔内での保持に好適な、約１ｇ／ｍＬの密度を有する。ＳＰＬ７０１３のアッセイにおける放出及び呼気の容認限度は、０．８０～１．２０％ｗ／ｗである。メチルパラベン及びプロピルパラベンにおける容認基準は、それぞれ０．１４％～０．２３％及び０．０１５％～０．０２５％である。ＳＰＬ７０１３鼻スプレーにおける微生物含有量は、Ｐｈ． Ｅｕｒ．２．６．１２ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｏｎｓｔｅｒｉｌｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ： Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｅｎｕｍｅｒａｔｉｏｎ Ｔｅｓｔｓ及びＰｈ．Ｅｕｒ．２．６．１３ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｏｎ－Ｓｔｅｒｉｌｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ： ｔｅｓｔ ｆｏｒ Ｓｐｅｃｉｆｉｅｄ Ｍｉｃｒｏ－Ｏｒｇａｎｉｓｍｓに従って、微生物限度試験（Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｌｉｍｉｔｓ Ｔｅｓｔ）によって決定される。試験材料に存在する総好気性数並びに総酵母及びカビの両方は、標準的な混釈平板方法論を使用して決定される。微生物含有量に関する仕様は、Ｐｈ．Ｅｕｒ．５．１．４ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓに記載されている確立された限度に従う。特定された生物は、Ｐｈ．Ｅｕｒ ５．１．４，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ Ｎｏｎ－Ｓｔｅｒｉｌｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ ｆｏｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｕｓｅに基づく。
ＳＰＬ７０１３鼻スプレーは、非加圧式コンパクト容器閉鎖システムとしてパッケージ化される。容器閉鎖システムは、ＳＰＬ７０１３鼻スプレー組成物のスプレー液滴１００μＬを投与する送達システム（アクチュエータ付きポンプ）を含む。送達デバイスは、ポリエチレン（ＨＤＰＥ）ボトルにねじ込まれたポンプからなり、ポンプのディップチューブ、ハウジング、ガスケット、及びステムは、ポリエチレンポリマーから作製される。ボールは、ステンレス鋼１．４３０から作製され、耐腐食性である。ライナーは、ポリオキシメチレンから作製される。
実施例１０：ＳＰＬ７０１３鼻スプレーの生物学的評価
実施例９に記載の例ＳＰＬ２０１３鼻スプレーについて、包括的な生物学的評価を行った。
ＳＰＬ７０１３鼻スプレーは、長期間曝露（＞２４時間～３０日）で粘膜（鼻）に接触する表面デバイスである。ＩＳＯ１０９９３に従い、インビトロ細胞傷害性（ＩＳＯ１０９９３－５）、ラットにおける反復投与後の鼻刺激（ＩＳＯ１０９９３－１０）、及びモルモットモデルにおける皮膚感作（ＩＳＯ１０９９３－１０）に関する試験を、実施例９に記載の容器閉鎖システムにパッケージングされたＳＰＬ７０１３鼻スプレーで行った。
インビトロ細胞傷害性：インビトロ細胞傷害性試験の結果は、５，０００μｇ／ｍＬで、ＳＰＬ７０１３鼻スプレーは、細胞傷害性でないことを示した。鼻刺激試験では、ラットは、１００μＬの１％ＳＰＬ７０１３鼻スプレーを各鼻孔に１日４回、１４日連続で投与された。生存段階及び組織病理学的検査からの試験結果は、製品に関連する所見を示さず、ＳＰＬ７０１３鼻スプレーが刺激物ではないことを示す。
皮膚感作：皮膚感作試験は、Ｍａｇｎｕｓｓｏｎ ａｎｄ Ｋｌｉｇｍａｎ（１９６９）によるモルモットマキシミゼーション試験（ＧＭＰＴ）からなる。試験は、１％ＳＰＬ７０１３鼻スプレーが、感作物質ではないことを実証した。
鼻耐容性及びＰＫ：１％又は３％のＳＰＬ７０１３を含有するＳＰＬ７０１３鼻スプレーはまた、ラットに１日に４回（鼻孔当たり５０μＬ）７日間鼻に投与して、局所毒性並びにＳＰＬ７０１３の全身吸収の可能性を試験した。この試験では、ＳＰＬ７０１３鼻スプレーの反復した鼻投与が良好な耐容性を示し、局所又は全身毒性のいかなる臨床的徴候も引き起こさなかった。加えて、血漿試料を本試験の動物から、試験１日目に製品の最初の投与前、及び最初の投与後の１５分、３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、及び６時間で、並びに試験７日目にその日の製品の最後の投与前、及びその日の最後の投与後の１５分、３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、及び６時間で収集した。キャピラリー電気泳動によるプールした血漿試料の生物分析は、１％又は３％ＳＰＬ７０１３鼻スプレーを１日に４回７日間投与した動物からのいずれの試料においても、ＳＰＬ７０１３がアッセイの定量の下限（ＬＬＯＱ、０．５μｇ／ｍＬ）以上で検出されなかったことを示したが、ただし、１％群の動物からの１つの試料は、３時間試料でＬＬＯＱをわずかに上回る結果（０．６３５μｇ／ｍＬ）を示した（データは示さず）。データは、ＳＰＬ７０１３が、１日に４回の７日間投与によるラットの鼻粘膜への適用後に、全身的に吸収されないことを示し、低用量群における１つの試料の結果は収差である。
実施例１１：ＳＰＬ７０１３製剤及び試験
ＳＰＬ７０１３（アストドリマーナトリウム）製剤を、表１４に記載のように調製した。
粘度及び浸透圧は、調製後数時間以内に測定した。結果を以下の表１５に示す。
鼻送達における製剤の適合性を評価するために、製剤を３つの鼻エアロゾルポンプを使用してスクリーニングし、粒子サイズを表１６に示されるように、３０ｍｍ及び６０ｍｍで測定した。
これらの結果は、製剤が、様々な鼻ポンプ送達デバイスにおいて鼻腔内送達に好適な粒子サイズを提供することを実証する。
更なるＤＳＤ試験を変形４製剤で行い、粒子サイズを送達に好適な速度で更に調査し、以下の表１７に示す。実験は、３００ｍｍレンズを備えたＳｐｒａｙｔｅｃ Ｏｐｅｎ Ｓｐｒａｙで行った。
実施例１２：ＳＰＬ７０１３吸湿性評価
吸湿性評価は、ヨーロッパ薬局方５．１１に記載されているように実施した。このアッセイの結果は、以下のように解釈される：潮解性－液体を形成するのに十分な水が吸収される、高い吸湿性－質量の増加が１５％以上である、吸湿性－質量の増加が１５％未満かつ２％以上である、わずかに吸湿性－質量の増加が２％未満かつ０．２％以上である、吸湿性ではない－質量の増加が０．２％未満である場合、化合物は吸湿性ではない。
したがって、ＳＰＬ７０１３は、質量の増加が１５％（２１．９７％）を超えて、高い吸湿性であることが認められた。吸湿性の結果は、カールフィッシャー試験を用いた水分含量分析によって確証された。
実施例１３：一次ヒト気道細胞におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するＳＰＬ７０１３活性
一次ヒト気管支上皮細胞（ＨＢＥｐＣ）（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、ＭＯ，ＵＳＡ）をＨＢＥｐＣ／ＨＴＥｐＣ増殖培地（Ｃｅｌｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、ＣＡ，ＵＳＡ）中で増殖及び維持した。これらの一次細胞は、ＡＣＥ２受容体を発現し、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に対して許容的である。これらの細胞を使用して、一次ヒト気道上皮細胞株におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するアストドリマーナトリウムの抗ウイルス効果を決定した。
細胞は、細胞２．５×１０４個／ウェルに、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ２０１９－ｎＣｏＶ／ＵＳＡ－ＷＡ１／２０２０を１０３ｐｆｕ／ｍＬで１ｍＬ添加して感染させた。陽性対照は、感染時に１０μｇ／ｍＬのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質抗体（ｐＡｂ、Ｔ０１ＫＨｕＲｂ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、ＭＡ，ＵＳＡ）を添加した。イオタ－カラギーナン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、ＭＯ，ＵＳＡ）を一次上皮細胞ヌクレオカプシド及びプラークアッセイに使用して、この物質の抗ウイルス活性をアストドリマーナトリウムと比較した。使用した濃度は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する活性を示すと報告されているものである（Ｂａｎｓａｌ ｅｔ ａｌ．，２０２０）。
ＳＰＬ７０１３（０、１．１、３．３、及び１０ｍｇ／ｍＬ）又はイオタ－カラギーナン（０、６、６０、及び６００μｇ／ｍＬ）を、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染の１時間前にＨＢＥｐＣ細胞に添加した。細胞を感染後４日間培養し、分泌されたＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドの量について細胞上清をＥＬＩＳＡによって分析し、実施例３に記載のように、感染性ウイルスをプラークアッセイによって定量した。
一次ヒト上皮細胞のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染を予防するＳＰＬ７０１３の能力を決定するために、化合物を、ＨＢＥｐＣ細胞培養中の２０１９－ｎＣｏＶ／ＵＳＡ－ＷＡ１／２０２０株について評価した。
ＳＰＬ７０１３は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２によるＨＢＥｐＣ一次細胞の感染を、ウイルス対照に対して、ヌクレオカプシドＥＬＩＳＡによって最大９８％低下させ（図１０Ａ）、プラークアッセイにおいて最大９５％低下させることが認められた（データは示さず）。対照的に、イオタ－カラギーナンによる処理は、この細胞株においてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する最小限の抗ウイルス効果を有し、試験した最高濃度は感染を、ヌクレオカプシドＥＬＩＳＡによってわずか１７％（図１０Ｂ）、プラークアッセイにおいてわずか２１％低下させた（データは示さず）。アストドリマーナトリウムによる阻害の最大レベルは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質抗体（ｐＡｂ，Ｔ０１ＫＨｕＲｂ）陽性対照で達成された阻害に匹敵した。
アストドリマーナトリウムは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２によるヒト気道一次上皮細胞の感染を阻害したが、一方、市販の鼻スプレー製剤におけるポリアニオン化合物であるイオタ－カラギーナンは、以前にベロＥ６細胞におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染を低減することが示されている濃度（Ｂａｎｓａｌ ｅｔ ａｌ．，２０２０）で有意な阻害を提供できなかった。コアを有する概ね球形のスルホン化分子であり、コアから放射状に伸びる密集した分岐であるアストドリマーナトリウムの特有な構造は、分子量の分布を有する直鎖状の硫化分子であるイオタ－キャラギーナン及びヘパリンなどの他のポリアニオン性化合物を超える潜在的な利点を提供するように思われる。筆者らは、イオタ－カラギーナンが殺ウイルス性であることを示すデータを認識しておらず、一方、ヘパリンはＨＳＶビリオン成分との不可逆的な殺ウイルス相互作用の欠如が実証されている（Ｇｈｏｓｈ ｅｔ ａｌ．，２００９）。
実施例１４：ラットＳＰＬ７０１３生体適合性試験
製剤変形４におけるＳＰＬ７０１３の生体適合性試験をラットで実施した（データは示さず）。
製品について、Ｂａｌｂ／ｃ３Ｔ３細胞におけるその細胞傷害性効果を評価するために試験した。結論として、５ｍｇ／ｍｌ ＳＰＬ７０１３の溶液は、細胞傷害性ではない。
製品について、１０匹のアルビノモルモットにおけるその感作特性を、皮内投与及び局所投与に続く１４日後の負荷後に評価するために試験した。結論として、アレルギーに起因する肉眼的な皮膚反応は、負荷段階後に記録されず、製品は、ＩＳＯ１０９９３－１０に従って皮膚感作物質として分類されない。
製品を３匹の雌Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットに、各鼻孔に０．１ｍｌの用量で、鼻腔内経路によって１日に４回、１４日間投与した。死亡は観察されず、試験品の投与に関連する臨床的徴候は観察されず、治療部位に紅斑又は浮腫は確認されず、体重は通常のままだった。上皮における炎症性の変化又は影響の証拠はなかった。結論として、試験品は良好な耐容性を有し、ＩＳＯ１０９９３－１０に従って評価される刺激のいかなる証拠も誘発しなかった。
実施例１５：臨床試験
臨床試験は、各鼻孔に１００μｌを１日に４回、１４日間スプレーデバイスによって投与された製剤変形４中の１％ＳＰＬ７０１３又はプラセボ（製剤４）を受ける４０名の患者で行われた。重篤な有害事象は報告されておらず、製剤は概して最小限の刺激で十分に耐容性だった。
実施例１６：概要
本明細書に記載の実験は、ＳＰＬ７０１３が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の複数の株に対して、かつ異なる細胞株において、非常に高いＳＩで、強力な抗ウイルス活性を実証していることを示している。鼻スプレー中のＳＰＬ７０１３の濃度（１０ｍｇ／ｍＬ）では、感染性ウイルスの減少は、ベロＥ６細胞で＞５ｌｏｇ１０（＞９ ９．９９９％）、Ｃａｌｕ－３細胞で＞３ｌｏｇ１０（＞９９．９％）だった。殺ウイルス活性の動態を検査する試験は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の不活性化が、ＳＰＬ７０１３のウイルスへのわずか５秒の曝露によって、用量依存的に観察することができることを示す。
多くの変形及び／又は修正が、本開示の広範な一般的範囲から逸脱することなく、上述の実施形態に対して行われ得ることが、当業者によって理解されるであろう。したがって、本実施形態は、あらゆる点で、例示的であり、限定的ではないとみなされるべきである。
本明細書で考察、及び／又は参照される全ての刊行物は、その全体が本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２０年４月１５日に出願された「Ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ Ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ ｏｆ Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ」と題されたオーストラリア仮出願第２０２０／９０１１９４号、２０２０年８月２１日に出願された「Ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ Ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ ｏｆ Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ」と題されたオーストラリア仮出願第２０２０／９０２９９３号、及び２０２０年１１月１７日に出願された「Ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ ｏｆ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ」と題されたオーストラリア仮出願第２０２０／９０４２４６号の優先権を主張し、その全内容は参照により本明細書に組み込まれる。
本明細書で考察、及び／又は参照される全ての刊行物は、その全体が本明細書に組み込まれる。
本明細書に含まれている文書、行為、材料、デバイス、物品などの任意の考察は、単に本発明のための文脈を提供する目的のためである。これらの事項のいずれか又は全てが、先行技術の基盤の一部を形成するか、又は本出願の各特許請求の範囲の優先日以前に存在したとして、本発明に関連する分野における一般的な知識であったことを認めるべきではない。
本明細書に開示されるか、又は本出願の明細書に個別的若しくは集合的に示される工程、特徴、整数、組成物、及び／又は化合物、並びに当該ステップ又は特徴のうちの２つ以上の任意かつ全ての組み合わせ。
参考文献
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Ｋｕｃｈａｒｓｋｉ ｅｔ ａｌ（２０２０）Ｌａｎｃｅｔ ｄｏｉ：１０．１０１６／Ｓ１４７３－３０９９（２０）３０１４４－４．
Ｍａｇｎｕｓｓｏｎ ａｎｄ Ｋｉｌｇｍａｎ（１９６９）５２（３）：２６８－７６．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｊｉｄ．１９６９．４２．
Ｐｉｚｚｏｒｎｏ ｅｔ ａｌ（２０２０）Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓ ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ａｎｔｉｖｉｒａｌ．２０２０．１０４８７８．
Ｍｅｌｅｒｏ ｅｔ ａｌ（２０１３）Ｃｕｒｒ Ｔｏｐ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３７２：５９－８２．ｄｏｉ：１０．１００７／９７８－３－６４２－３８９１９－１＿３．
Ｒａｍａｅｋｅｒｓ（２０２０）Ｖｉｒｕｓ Ｅｖｏｌ ２Ｊｕｌ ２４；６（２）：ｖｅａａ０５２．ｄｏｉ：１０．１０９３／ｖｅ／ｖｅａａ０５２．
Ｒｅｅｄ ａｎｄ Ｍｕｅｎｃｈ（１９３８）Ｊ Ｈｙｇ ２７（３）， ４９３－４９７．
Ｓｈｅｎ ｅｔ ａｌ（２０２０）Ｃｌｉｎ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ ｄｏｉ：１０．１０９３／ｃｉｄ／ｃｉａａ２０３．
Ｔａｎｇ ｅｔ ａｌ（２０２０）Ｎａｔ Ｓｃｉ Ｒｅｖ ｄｏｉ：１０．１０９３／ｎｓｒ／ｎｗａａ０３６．
Ｕｍａｓｈａｎｋａｒ ｅｔ ａｌ（２０１６）Ｉｎｔ Ｒｅｓ Ｊ ｏｆ Ｐｈａｒｍ ７（４）：９－１６．
ｖａｎ ｄｅｎ Ｗｏｒｍ ｅｔ ａｌ（２０１２）ＰＬｏＳ ＯＮＥ ７（３）：ｅ３２８５７ ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．００３２８５７．
Ｖｅｒｍａ ｅｔ ａｌ（２０１４）Ｊ ｄｅｒ Ｐｈａｒｍａｚｉｅ Ｆｏｒｓｃｈｕｎｇ ２（１）：１－１０．
Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ（２０２０）Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ ３０（３）， ２６９－２７１ ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓ４１４２２－０２０－０２８２－０．
Ｚａｒｏｇｏｕｌｉｄｉｓ ｅｔ ａｌ（２０１２）Ｉｎｔ Ｊ Ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ７：１５５１－７２．

Claims (72)

  1. ヒト個体におけるコロナウイルス（ＣｏＶ）感染症の可能性を予防又は低減する方法であって、
    前記個体に、有効量の巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩、又は前記巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む組成物を投与することを含み、
    前記巨大分子が、３～５世代のデンドリマーを、前記デンドリマーの１つ以上の表面基に結合した１つ以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分とともに含む、方法。
  2. ヒト個体におけるコロナウイルス（ＣｏＶ）感染症に関連する症状の可能性又は重症度を予防又は低減する方法であって、
    前記個体に、有効量の巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩、又は前記巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む組成物を投与することを含み、
    前記巨大分子が、３～５世代のデンドリマーを、前記デンドリマーの１つ以上の表面基に結合した１つ以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分とともに含む、方法。
  3. 前記ＣｏＶ感染症に関連する症状が、発熱、咳、咽喉痛、息切れ、ウイルス排出、呼吸不全、鼻水、鼻づまり、気管支炎、頭痛、筋肉痛、呼吸困難、中度肺炎、重度肺炎、及び急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）のうちの１つ以上から選択される、請求項２に記載の方法。
  4. ヒト個体におけるコロナウイルス（ＣｏＶ）感染症の重症度及び／又は持続を低減する方法であって、
    前記個体に、有効量の巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩、又は前記巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む組成物を投与することを含み、
    前記巨大分子が、３～５世代のデンドリマーを、前記デンドリマーの１つ以上の表面基に結合した１つ以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分とともに含む、方法。
  5. ヒト個体におけるコロナウイルス（ＣｏＶ）感染症を治療する方法であって、
    前記個体に、有効量の巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩、又は前記巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む組成物を投与することを含み、
    前記巨大分子が、３～５世代のデンドリマーを、前記デンドリマーの１つ以上の表面基に結合した１つ以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分とともに含む、方法。
  6. コロナウイルス（ＣｏＶ）に感染したヒト個体におけるウイルス排出を予防又は低減する方法であって、
    前記個体に、有効量の巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩、又は前記巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む組成物を投与することを含み、
    前記巨大分子が、３～５世代のデンドリマーを、前記デンドリマーの１つ以上の表面基に結合した１つ以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分とともに含む、方法。
  7. ヒト集団におけるコロナウイルス（ＣｏＶ）の伝播を低減する方法であって、
    前記集団の一部の呼吸器に、有効量の巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩、又は前記巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む組成物を投与することを含み、
    前記巨大分子が、１～８世代のデンドリマーを、前記デンドリマーの１つ以上の表面基に結合した１つ以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分とともに含む、方法。
  8. 個体における呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症の可能性を予防又は低減する方法であって、
    前記個体の呼吸器に、有効量の巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩、又は前記巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む組成物を投与することを含み、
    前記巨大分子が、３～５世代のデンドリマーを、前記デンドリマーの１つ以上の表面基に結合した１つ以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分とともに含む、方法。
  9. 個体における呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症に関連する症状の可能性又は重症度を予防又は低減する方法であって、
    前記個体の呼吸器に、有効量の巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩、又は前記巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む組成物を投与することを含み、
    前記巨大分子が、３～５世代のデンドリマーを、前記デンドリマーの１つ以上の表面基に結合した１つ以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分とともに含む、方法。
  10. ＲＳＶ感染症に関連する前記症状が、鼻づまり又は鼻水、食欲減退、咳、咳をするときの粘液（黄色、緑色、又は灰色の粘液）、くしゃみ、咽喉痛、軽度頭痛、発熱、喘鳴、呼吸促迫又は呼吸困難、皮膚の青みがかった色（チアノーゼ）、喘息を有する個体における重度の喘息症状、急性気管支炎、重度気管支炎、気道炎症、気道閉塞、慢性閉塞性肺疾患、心うっ血、細菌血症、肺炎、急性中耳炎、及び再発性中耳炎のうちの１つ以上から選択される、請求項７に記載の方法。
  11. 個体における呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症の重症度及び／又は持続を低減する方法であって、
    前記個体の呼吸器に、有効量の巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩、又は前記巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む組成物を投与することを含み、
    前記巨大分子が、３～５世代のデンドリマーを、前記デンドリマーの１つ以上の表面基に結合した１つ以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分とともに含む、方法。
  12. 個体における呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症を治療する方法であって、
    前記個体の呼吸器に、有効量の巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩、又は前記巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む組成物を投与することを含み、
    前記巨大分子が、３～５世代のデンドリマーを、前記デンドリマーの１つ以上の表面基に結合した１つ以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分とともに含む、方法。
  13. 呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）に感染した個体におけるウイルス排出を予防又は低減する方法であって、
    前記個体の呼吸器に、有効量の巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩、又は前記巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む組成物を投与することを含み、
    前記巨大分子が、３～５世代のデンドリマーを、前記デンドリマーの１つ以上の表面基に結合した１つ以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分とともに含む、方法。
  14. 集団における呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の伝播を低減する方法であって、
    前記集団の一部の呼吸器に、有効量の巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩、又は前記巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む組成物を投与することを含み、
    前記巨大分子が、１～８世代のデンドリマーを、前記デンドリマーの１つ以上の表面基に結合した１つ以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分とともに含む、方法。
  15. 前記ＣｏＶが、アルファコロナウイルス、ベータコロナウイルス、ガンマコロナウイルス、及びデルタコロナウイルスから選択される、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。
  16. 前記ＣｏＶが、ベータコリナウイルス（Ｂｅｔａｃｏｒｉｎａｖｉｒｕｓ）である、請求項１～７又は１５のいずれか一項に記載の方法。
  17. 前記ＣｏＶが、重症急性呼吸器症候群関連コロナウイルス－２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）、ヒトコロナウイルスＯＣ４３（ＨＣｏＶ－ＯＣ４３）、ヒトコロナウイルスＨＫＵ１（ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１）、ヒトコロナウイルス２２９Ｅ（ＨＣｏＶ－２２９Ｅ）、ヒトコロナウイルスＮＬ６３（ＨＣｏＶ－ＮＬ６３）、重症急性呼吸器症候群関連コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）、及び中東呼吸器症候群関連コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）、又はそれらのサブタイプ若しくは変異体から選択される、請求項１～７、１５、又は１６のいずれか一項に記載の方法。
  18. 前記ＣｏＶが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２又はそのサブタイプ若しくは変異体である、請求項１～７又は１５～１７のいずれか一項に記載の方法。
  19. 前記ＲＳＶが、ＲＳＶサブタイプＡ（ＲＳＶＡ）及びＲＳＶサブタイプＢ（ＲＳＶＢ）から選択される、請求項８～１４のいずれか一項に記載の方法。
  20. 投与することが、局所的に投与すること、又は前記呼吸器に投与することを含む、請求項１～７又は１５～１８のいずれか一項に記載の方法。
  21. 局所的に投与することが、手及び／又は顔に投与することを含む、請求項２０に記載の方法。
  22. 前記呼吸器に投与することが、上気道及び／又は下気道に投与することを含む、請求項８～１４又は２０のいずれか一項に記載の方法。
  23. 前記上気道に投与することが、鼻腔、口腔、副鼻腔、咽喉、咽頭喉頭、鼻甲介、鼻咽頭、及び中咽頭のうちの１つ以上に投与することを含む、請求項２２に記載の方法。
  24. 前記上気道に投与することが、鼻粘膜に投与することを含む、請求項２２又は２３に記載の方法。
  25. 前記下気道に投与することが、気管、原始気管支（ｐｒｉｍａｒｙ ｂｒｏｎｃｈｉ）、及び肺のうちの１つ以上に投与することを含む、請求項２２に記載の方法。
  26. 前記個体が、ヒトである、請求項８～１４のいずれか一項に記載の方法。
  27. 前記組成物が、約０．５重量％～約５重量％の前記巨大分子又はその薬学的に許容される塩を含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。
  28. 前記組成物が、約１重量％の前記巨大分子又はその薬学的に許容される塩を含む、請求項１～２７のいずれか一項に記載の方法。
  29. 前記有効量が、用量当たり約０．１～約５ｍｇである、請求項１～２８のいずれか一項に記載の方法。
  30. 前記有効量が、用量当たり約１ｍｇである、請求項１～２９のいずれか一項に記載の方法。
  31. 前記巨大分子又はその薬学的に許容される塩が、鼻スプレー又は口腔スプレーで投与される、請求項１～３０のいずれか一項に記載の方法。
  32. 前記巨大分子又はその薬学的に許容される塩が、１日に１～８回投与される、請求項１～３１のいずれか一項に記載の方法。
  33. 前記巨大分子又はその薬学的に許容される塩が、約１～約２週間、又は約１～約３週間、又は３０日未満投与される、請求項１～３２のいずれか一項に記載の方法。
  34. 個体におけるコロナウイルス（ＣｏＶ）感染症の可能性を予防若しくは低減するか、又はそれを治療するか、個体におけるＣｏＶ感染症の重症度及び／又は持続を低減するか、ＣｏＶに感染した個体におけるウイルス排出を予防又は低減するか、あるいは、集団におけるＣｏＶの伝播を低減するための組成物であって、
    有効量の巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩、又は前記巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含み、
    前記巨大分子が、３～５世代のデンドリマーを、前記デンドリマーの１つ以上の表面基に結合した１つ以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分とともに含む、組成物。
  35. 前記組成物が、鼻生体付着性組成物である、請求項３４に記載の組成物。
  36. 前記組成物が、抗ウイルス活性剤、ワクチン、免疫調節剤（ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ）、抗細菌剤、抗炎症剤、及び鼻生体接着剤から選択される１つ以上の薬剤を追加的に含む、請求項３４又は３５に記載の組成物。
  37. 前記抗ウイルス活性剤が、
    ｉ）抗生物質又は更なるデンドリマーと、
    ｉｉ）カラギーナン、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－６Ｒ、ＣＣＲ５、ＭＥＲＳのＳタンパク質、並びにリバビリン、チロロン、ファビピラビル、カレトラ（ロピナビル／リトナビル）、プレジコビックス（ダルナビル／コビシスタット）、ネルフィナビル、ミコフェノール酸、ガリデシビル、アクテムラ、ＯＹＡ１、ＢＰＩ－００２、イフェンプロジル、ＡＰＮ０１、ＥＩＤＤ－２８０１、バリシチニブ、メシル酸カモスタット、リコリン、ブリラシジン、ＢＸ－２５、インターフェロン（例えば、ＩＦＮβ）、クロロキン、及びアジスロマイシンを含む薬物と、のうちの１つ以上から選択される、請求項３６に記載の組成物。
  38. 前記組成物が、Ｃａｒｂｏｐｏｌ９７４、ヒドロキシプロピルメチル－セルロース、及び微結晶セルロース／カルボキシメチルセルロースのうちの１つ以上を含む、請求項３４～３７のいずれか一項に記載の組成物。
  39. 前記組成物が、グリセリン、プロピレングリコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、塩化ベンザルコニウム、エチレンジアミン四酢酸、及び水酸化ナトリウムのうちの１つ以上を含む、請求項３４～３８のいずれか一項に記載の組成物。
  40. 前記組成物が、
    （ａ）Ｃａｒｂｏｐｏｌ９７４、ヒドロキシプロピルメチル－セルロース、又は微結晶セルロース／カルボキシメチルセルロースのうちの１つ以上から選択されるレオロジー改質剤と、
    （ｂ）メチルパラベン、プロピルパラベン、及び塩化ベンザルコニウムのうちの１つ以上から選択される保存剤と、
    （ｃ）グリセリン、プロピレングリコール、エチレンジアミン四酢酸のうちの１つ以上から選択される賦形剤と、
    （ｄ）ｐＨ調節剤と、を含む、請求項３４～３９のいずれか一項に記載の組成物。
  41. 前記組成物が、前記巨大分子に対して約１：２０～１：１０のｗ／ｗ比のＣａｒｂｏｐｏｌ９７４又はＣａｒｂｏｐｏｌ９７１を含む、請求項３８～４０のいずれか一項に記載の組成物。
  42. 前記組成物が、約０．０５％ｗ／ｗのＣａｒｂｏｐｏｌ９７４又はＣａｒｂｏｐｏｌ９７１、及び約１％ｗ／ｗの巨大分子を含む、請求項３８～４１のいずれか一項に記載の組成物。
  43. 前記組成物が、液体、半固体、固体、及び粉末組成物から選択される形態にある、請求項３４～４２のいずれか一項に記載の組成物。
  44. 前記組成物が、約３．５～約７．５のｐＨ、又は約５．５～約６．５のｐＨを有する、請求項３４～４３のいずれか一項に記載の組成物。
  45. 前記組成物が、約１～約１０ｃＰの粘度を有する、請求項３４～４４のいずれか一項に記載の組成物。
  46. 前記組成物が、鼻スプレー、口腔スプレー、吸入器、ネブライザー、鼻洗浄、又は口腔洗浄からなる群から選択されるデバイスにおける投与に好適である、請求項３４～４５のいずれか一項に記載の組成物。
  47. 前記スプレー、吸入器、又はネブライザーが、約０．１μｍ～約１００μｍのサイズの粒子を生成するための手段を含む、請求項４６に記載の組成物。
  48. 前記粒子の６％未満が、約１０μｍ以下のサイズである、請求項４７に記載の組成物。
  49. 粒子サイズが、粒子を生成するための前記手段から６０ｍｍ／ｓの作動及び４０～７０ｍｍの距離を使用して測定される、請求項４７又は４８に記載の組成物。
  50. 前記組成物が、ＳＰＬ７０１３、水、Ｃａｒｂｏｐｏｌ９７４又はＣａｒｂｏｐｏｌ９７１、ヒドロキシプロピルメチル－セルロース、微結晶セルロース、グリセリン、プロピレングリコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、塩化ベンザルコニウム、及びＥＤＴＡを含む、請求項３４～４９のいずれか一項に記載の組成物。
  51. 前記組成物が、保護着又は洗浄用製品中に存在するか、又はそれらに適用される、請求項３４～５０のいずれか一項に記載の組成物。
  52. 前記保護着が、フェイスマスク、グローブ、及びガウンから選択される、請求項５１に記載の組成物。
  53. 前記洗浄用製品が、ワイプ、術野準備スプレー、又は洗浄溶液から選択される、請求項５１に記載の組成物。
  54. 前記組成物が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２又はそのサブタイプ若しくは変異体の９０％超、又は９２％超、又は９５％超、又は９９％超、又は９９．９％超を不活性化する、請求項３４～５３のいずれか一項に記載の組成物。
  55. 前記組成物が、前記ウイルスへの少なくとも１分間の曝露後に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２又はそのサブタイプ若しくは変異体の９０％超、又は９２％超、又は９５％超、又は９９％超、又は９９．９％超を不活性化する、請求項５４に記載の組成物。
  56. 前記巨大分子又はその薬学的に許容される塩が、３～５世代のリジン構築ユニットを含むデンドリマーであり、前記スルホン酸又はスルホネート含有部分が、ナフチルジスルホネート部分である、請求項１～３３のいずれか一項に記載の方法、又は請求項３４～５５のいずれか一項に記載の組成物。
  57. 前記スルホン酸又はスルホネート含有部分が、
    －ＮＨ－（ＣＨ２）ｎＳＯ３ －、－（ＣＨ２）ｎＳＯ３ －、
    からなる群から選択され、
    式中、ｎが、ゼロであるか、又は１～２０の整数であり、ｍが、整数１又は２であり、ｐが、整数１～３である、請求項１～３３若しくは５４のいずれか一項に記載の方法、又は請求項３４～５６のいずれか一項に記載の組成物。
  58. 前記スルホン酸又はスルホネート含有部分が、
    からなる群から選択される、請求項５７に記載の方法又は組成物。
  59. 前記スルホン酸含有部分が、以下である、請求項５７又は５８に記載の組成物
  60. 前記スルホン酸又はスルホネート含有部分が、リンカーによってデンドリマー末端アミノ基に結合されている、請求項１～３３若しくは５６～５９のいずれか一項に記載の方法、又は請求項３４～５９のいずれか一項に記載の組成物。
  61. 前記リンカーが、１つ以上の非隣接炭素原子が任意選択的に酸素若しくは硫黄原子で置換されているアルキレン基若しくはアルケニレン基、又はＸ１及びＸ２が、独立して、－ＮＨ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、及び－Ｃ（Ｓ）から選択され、ｑが、０若しくは１～１０の整数であり、１つ以上の非隣接（ＣＨ２）基が、－Ｏ－若しくは－Ｓ－で置換され得る、基－Ｘ１－（ＣＨ２）ｑ－Ｘ２－である、請求項６０に記載の方法又は組成物。
  62. 前記リンカーが、＃－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－＊であり、式中、＃が、前記スルホン酸含有部分との結合を示し、＊が、前記デンドリマーの前記末端アミノ基との結合を示す、請求項６１に記載の方法又は組成物。
  63. 前記デンドリマーが、３～４世代を有する、請求項１～３３若しくは５６～６２のいずれか一項に記載の方法、又は請求項３４～６２のいずれか一項に記載の組成物。
  64. 前記デンドリマーが、ポリリジンデンドリマーである、請求項１～３３若しくは５６～６３のいずれか一項に記載の方法、又は請求項３４～６３のいずれか一項に記載の組成物。
  65. 前記デンドリマーが、
    であり、式中、Ｒの少なくとも５０％が、
    であり、前記薬学的に許容される塩が、ナトリウム塩である、請求項６４に記載の方法又は組成物。
  66. 巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩、又は前記巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む、鼻、口腔、又は肺組成物を送達するためのデバイスであって、
    前記巨大分子が、３～５世代のデンドリマーを、前記デンドリマーの１つ以上の表面基に結合した１つ以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分とともに含む、デバイス。
  67. 前記デバイスが、スプレーを送達するための鼻送達デバイス又は口腔送達デバイスである、請求項６６に記載のデバイス。
  68. 前記デバイスが、吸入器又はネブライザーである、請求項６６に記載のデバイス。
  69. 巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩、又は前記巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む組成物を含む、鼻防湿被覆物（ｎａｓａｌ ｍｏｉｓｔｕｒｅ ｂａｒｒｉｅｒ ｄｒｅｓｓｉｎｇ）であって、
    前記巨大分子が、３～５世代のデンドリマーを、前記デンドリマーの１つ以上の表面基に結合した１つ以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分とともに含む、鼻防湿被覆物。
  70. 有効量の巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩、又は前記巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む組成物を含む、組成物であって、
    前記巨大分子が、３～５世代のデンドリマーを、前記デンドリマー及びＣａｒｂｏｐｏｌ９７４又はＣａｒｂｏｐｏｌ９７１の１つ以上の表面基に結合した１つ以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分とともに含み、
    前記組成物が、前記巨大分子に対して約１：２０～約１：１０のｗ／ｗ比のＣａｒｐｏｂｏｌ９７４又はＣａｒｂｏｐｏｌ９７１を含む、組成物。
  71. 有効量の巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩、又は前記巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む組成物を含む、組成物であって、
    前記巨大分子が、３～５世代のデンドリマーを、前記デンドリマー及びＣａｒｂｏｐｏｌ９７４の１つ以上の表面基に結合した１つ以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分とともに含み、
    前記組成物が、約０．０５％ｗ／ｗ～約５％ｗ／ｗ、又は約０．０５％ｗ／ｗ～約３％ｗ／ｗ、又は約０．０５％ｗ／ｗ～約２％ｗ／ｗ、又は約０．０５％ｗ／ｗ～約１％ｗ／ｗ、又は約０．０５％ｗ／ｗのＣａｒｂｏｐｏｌ９７４を含む、組成物。
  72. 有効量の巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩、又は前記巨大分子若しくはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む組成物を含む、組成物であって、
    前記巨大分子が、３～５世代のデンドリマーを、前記デンドリマー及びＣａｒｂｏｐｏｌ９７１の１つ以上の表面基に結合した１つ以上のスルホン酸又はスルホネート含有部分とともに含み、
    前記組成物が、約０．０５％ｗ／ｗ～約１％ｗ／ｗ、又は約０．０５％ｗ／ｗ～約１．５％ｗ／ｗ、又は約０．０５％ｗ／ｗ～約１．８％ｗ／ｗのＣａｒｂｏｐｏｌ９７１を含む、組成物。
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