JP2023531140A - 酵素およびプロバイオティクスを含む組成物、ならびに黄斑変性を予防または治療する方法 - Google Patents

Abstract

本発明は、部分的に、スーパーオキシドジスムターゼ酵素と、プロバイオティクス属細菌、特にアミロリクファシエンスＧＦ４２３またはＧＦ４２４変異株の胞子とを共投与することにより、対象における黄斑変性を予防または治療する方法に関する。本発明はまた、スーパーオキシドジスムターゼ酵素およびプロバイオティクスバチルス属細菌胞子を含む医薬組成物および／または食品組成物を提供する。

Description

関連出願の相互参照

本出願は、２０２０年５月５日に出願された米国仮特許出願第６３／０２０，２４１号に対する優先権の利益を主張し、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

本発明は、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）酵素およびプロバイオティクスバチルス属細菌胞子（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．ｓｐｏｒｅ）を共投与することによって黄斑変性を予防または治療する方法を提供する。黄斑変性を予防または治療するための、ＳＯＤ酵素およびプロバイオティクスバチルス属細菌胞子を含む医薬組成物または食品組成物も本明細書に提供される。

加齢黄斑変性（「ＡＭＤ」）は、中心視力の喪失をもたらす、黄斑の慢性進行性変性病変を指す。黄斑変性は、５０歳を超える成人における視力喪失および不可逆的な中心視力喪失の主な原因である。世界中で２５００万を超える人々がＡＭＤに罹患し、そのような人々の数は、高齢者の急激な増加により急速に増加し続けている。加えて、スマートフォンおよびラップトップなどの電子機器の過度の使用も、今日の人々における黄斑変性の早期発症および罹患率の上昇を引き起こしている。

加齢黄斑変性（ＡＭＤ）の最も重要な原因は、網膜色素上皮（ＲＰＥ）の加齢性萎縮および機能の低下であり、網膜色素上皮は、視覚機能においてカギとなる役割を果たす網膜のホメオスタシスおよび生理学的機能の維持において重要な役割を果たす。さらに、ブルッフ膜の加齢性の異変および脈絡膜毛細血管の変性もＡＭＤの病因に寄与すると考えられている。ブルッフ膜はＲＰＥの基底膜として機能し、脈絡膜毛細血管は神経網膜の一番外側に位置し、光変換（photoconversion）が起こる光受容細胞（または視細胞）に栄養素および酸素を供給する。

加齢黄斑変性は、大きく２つのカテゴリー：ＲＰＥ、ブルッフ膜および脈絡膜毛細血管の変性および機能低下を特徴とするドライ型（または萎縮型）黄斑変性；およびドライ型黄斑変性の症状に加えて、脈絡膜新生血管（ＣＮＶ）を伴うウェット型（または滲出型）黄斑変性：に分類される。

ウェット型黄斑変性は、ドライ型（萎縮型）黄斑変性を有する患者の５～１０％で起こり、未処置のまま放置すると数ヶ月以内に急性失明につながり得る。これは、数年または約１０～２０年の期間にわたって視力低下が進行するドライ型黄斑変性とは対照的である。ドライ型黄斑変性では、網膜下腔および網膜下色素上皮（ＲＰＥ）腔にわたる酸素分圧および栄養素の広範な低下があり、炎症反応を伴う組織における虚血をもたらす。

さらに、酸化ストレスおよび免疫応答において重要な役割を果たす補体系は、脈絡膜新生血管（ＣＮＶ）が網膜下腔および網膜下色素上皮（ＲＰＥ）腔で特徴的に生じるように作用し、漿液性漏出や出血を引き起こす。

血管内皮細胞、ＲＰＥ細胞、ならびに単球およびマクロファージなどの炎症細胞は、脈絡膜新生血管の発生に関与することが知られている。

黄斑変性に対する潜在的な治療には、デコリンペプチド（特許文献１；参照により組み込まれる）またはそのコンジュゲート（特許文献２；参照により組み込まれる）などの抗血管新生剤が含まれる。しかしながら、そのような薬剤は、脈絡膜新生血管または加齢黄斑変性に対して有効であることは示されていない。

ウェット型（または滲出型）ＡＭＤの臨床標準治療は、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）に対する抗体療法である。そのような抗体療法は多くの患者において失明を軽減するのに有効であったが、抗ＶＥＧＦ抗体またはその断片（例えば、アフリベルセプト（aflibercept））は、脈絡膜新生血管の形成および成長を完全には抑制することができず、これは部分的には、その作用が血管新生血管の表面の上皮細胞に限定されるためである。さらに、その抗体は、下層のＲＰＥ組織の破壊から生じる網膜の中心窩における機能的光受容体細胞の最終的な喪失を防ぐのに有効ではなかった。さらに、抗ＶＥＧＦ抗体は硝子体内注射によって投与され、患者に恐怖および副作用を引き起こす。

国際公開第２００５／１１６０６６号 米国特許出願公開第２００９／０２４６１３３号明細書

したがって、硝子体内注射を行わずに黄斑変性を効果的に治療するための経口組成物および方法が非常に必要とされている。

本発明は、少なくとも部分的に、プロバイオティクスバチルス属細菌胞子（または芽胞）と組み合わせたスーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）酵素の経口共投与（oral co-administration）が、黄斑変性（例えば、ウェット型黄斑変性）の予防および治療においてＳＯＤ単独よりも有効であることの発見に基づく。

ＳＯＤは、ＡＭＤの主な原因である活性酸素種を除去する抗酸化酵素である。眼疾患を治療するためにＳＯＤ酵素を経口投与する試みが過去に行われているが、光誘発性酸化ストレスに対する保護効果は得られていない（Sicard et al. (2006) Investigative Ophthalmology & Visual Science 47:2089）。同様に、ＳＯＤを豊富に含むメロン抽出物を含むＧｌｉＳＯＤｉｎ（登録商標）の経口投与は、ヒトにおける新生血管を伴うＡＭＤの発症に対して防御しなかった（Hera et al. (2009) Investigative Ophthalmology & Visual Science 50:258）。さらに、ＧｌｉＳＯＤｉｎ（登録商標）は、セリアック病の公知の危険因子であるグリアジン（コムギタンパク質）をさらに含むため、治療可能な患者集団が制限される。

ＳＯＤ単独は、驚くべきことに、ウェット型黄斑変性の予防および治療に有効であった。プロバイオティクスバチルス属細菌胞子をさらに含む本明細書に提供される組成物および方法は、ウェット型黄斑変性の予防および治療にさらに効果的である。いくつかの実施形態において、シェラックを用いて製剤化することによって、ＳＯＤ酵素は、経口投与されたときに胃酸から保護される。したがって、本開示の組成物および方法は、有効量の活性ＳＯＤを経口送達することができ、それによって硝子体内注射の必要性を排除し、ＡＭＤ治療の治療様式を単純化する。加えて、いくつかの実施形態では、本開示のＳＯＤ酵素は、安全性が証明されている一般に安全と認められる(generally recognized as safe)」（ＧＲＡＳ）細菌に由来する。

経口摂取可能性およびＧＲＡＳ細菌供給源のプロバイオティクスを引き続き重視して、バチルス属細菌胞子は胃のプロテアーゼおよび低ｐＨに対して耐性である。また、バチルス属細菌胞子は、いくつかの国で承認されたＧＲＡＳプロバイオティクスである。ＳＯＤをプロバイオティクスバチルス属細菌胞子と組み合わせることで、ＳＯＤの治療有効性を高め、また必要とされるＳＯＤ酵素の量を減らすことができると考えられる。ＳＯＤとプロバイオティクス胞子の併用療法は、驚くべきことに、治療有効性の改善のみならず、個々の対象動物間での治療有効性の一貫性の改善においても、ＳＯＤ単独よりもさらに効果的であることが見出された。より重要なこととして、本明細書で提供される組成物および方法は、ＣＮＶを抑制し、網膜機能を回復させるのに非常に効果的である。したがって、ＳＯＤ酵素およびプロバイオティクスバチルス属細菌胞子を含むこれらの方法および経口組成物は、ウェット型（または滲出型）黄斑変性を予防または治療するのに非常に効果的である。

ＳＯＤ酵素およびプロバイオティクスバチルス属細菌胞子を含む医薬組成物のｉｎ ｖｉｖｏでの効果を評価するためのマウスでの研究の概略図を示す。 試験物質（バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＧＦ４２４（ＧＦ２０３）株由来の胞子；１０Ｕまたは２０ＵのＧＦ－１０１（ＳＯＤを含む組成物）；ＧＦ１０１とＧＦ２０３の組み合わせ；２０μｇのアフリベルセプト（ＡＦ；陽性対照）；リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ；陰性対照））の投与後のＣＮＶ病変の変化を示す、フルオレセイン蛍光眼底造影画像（上パネル）を示す。下パネルは、ＣＴＦ値を示すグラフを示す。 試験物質を投与したレーザー誘発ＣＮＶマウスに対して行った光干渉断層撮影（optical coherence tomography）によって得られた網膜断層画像を示す。画像は、試験物質の投与後のＣＮＶ病変のサイズの変化を示す。 試験物質を投与したレーザー誘発ＣＮＶマウスに対して行った光干渉断層撮影により得られた網膜断層画像から計算したＣＮＶ病変のサイズを示す。 レーザーを照射した後、試験物質で処置したマウスＣＮＶモデルの網膜電図の結果を示す。 レーザーを照射した後、試験物質を投与したマウスＣＮＶモデルの網膜電図のｂ波振幅の変化を示す。 レーザーを照射し、次いで試験物質を投与したマウスＣＮＶモデルの組織学的分析を示す。観察のために組織をヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した。 レーザーで照射し、次いで試験物質で処置したマウスＣＮＶモデルの網膜における死細胞数の減少を実証するＴＵＮＥＬアッセイの結果を示す。 レーザー照射および各種試験物質の投与後のＶＥＧＦの発現の変化を調べるために行った免疫蛍光染色の結果を示す。 レーザー照射および各種試験物質の投与後のＳＴＡＴ３の発現の変化を調べるために行った免疫蛍光染色の結果を示す。 レーザー照射および各種試験物質の投与後のＨＩＦ－１αおよびＮＲＦ２の発現の変化を調べるために行ったウェスタンハイブリダイゼーションの結果を示す。（Ａ）ウエスタンブロッティングおよび（Ｂ）網膜におけるＨＩＦ－１αおよびＮＲＦ２のレベルの定量的比較。

本発明は、部分的に、黄斑障害（例えば、ＡＭＤ、ウェット型ＡＭＤ）を予防および治療するための組成物および方法に関する。ＳＯＤ酵素およびプロバイオティクスバチルス属細菌胞子を含む経口組成物は、ウェット型ＡＭＤに関連する脈絡膜新生血管（ＣＮＶ）の抑制においてＳＯＤ単独よりも効果的であることが本明細書において発見される。

特定の態様では、本明細書において、必要とする対象に、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）酵素およびプロバイオティクスバチルス属細菌（例えば、バチルス・コアグランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、バチルス・インディカス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｉｎｄｉｃｕｓ）、バチルス・クラウジイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ）、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ））の胞子を投与することを含む、黄斑変性を治療または予防する方法が提供される。

いくつかの実施形態において、ＳＯＤ酵素は、単離された酵素および／または組換え酵素である。いくつかの実施形態では、ＳＯＤ酵素はマンガンに結合する。いくつかの実施形態では、ＳＯＤ酵素は：（ａ）配列番号１に示される配列に対して、少なくともまたは約４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれより高い同一性を有するアミノ酸配列；（ｂ）アミノ酸残基Ａｓｎ７４および／またはＡｓｎ１３７が欠失または置換された、配列番号１に記載のアミノ酸配列；（ｃ）アミノ酸残基Ａｓｎ７４および／またはＡｓｎ１３７がＡｓｐ７４および／またはＡｓｐ１３７で置換された、配列番号１に記載のアミノ酸配列；あるいは（ｄ）配列番号１に示されるアミノ酸配列；を含む。いくつかの実施形態では、ＳＯＤ酵素はシェラックでコーティングされる。

いくつかの実施形態において、ＳＯＤ酵素および／またはバチルス属細菌胞子は、経口で、静脈内に、眼内に、または筋肉内に投与される。好ましい実施形態では、ＳＯＤ酵素および／またはバチルス属細菌胞子は経口投与される。

いくつかの実施形態では、ＳＯＤ酵素は、微生物、好ましくは細菌、好ましくは食品および薬物として使用するために一般に安全と認められる（ＧＲＡＳ）細菌、より好ましくはバチルス属菌種（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｅｃｉｅｓ）の細菌に由来する。いくつかの実施形態では、ＳＯＤ酵素は、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＧＦ４２３株（ＫＣＴＣ １３２２２ＢＰ）またはＧＦ４２４株（ＫＣＴＣ １３２２７ＢＰ）に由来する。

いくつかの実施形態では、プロバイオティクスバチルス属細菌胞子、好ましくはバチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＧＦ４２３株またはＧＦ４２４変異株の胞子は、食品および承認された薬物としての使用に関して一般に安全と認められる（ＧＲＡＳ）。

ある特定の実施形態では、方法は、（ｉ）脈絡膜新生血管（ＣＮＶ）を減少させる；（ｉｉ）網膜における細胞死を減少させる；（ｉｉｉ）網膜における炎症を軽減する；（ｉｖ）網膜における低酸素症を軽減する；（ｖ）網膜における血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）の発現を低減させる；および／または（ｖｉ）網膜機能を増大させる。

いくつかの実施形態では、黄斑変性は加齢黄斑変性（ＡＭＤ）であり、好ましくは、ＡＭＤはウェット型ＡＭＤまたは新生血管を伴うＡＭＤ（neovascular AMD）である。

いくつかの実施形態では、対象は哺乳動物であり、好ましくは、哺乳動物はヒト、イヌ、ネコ、マウス、またはラットである。好ましい実施形態では、対象はヒトである。

いくつかの実施形態では、ＳＯＤ酵素およびプロバイオティクスバチルス属細菌胞子は、逐次的に対象に投与される。

他の実施形態では、ＳＯＤ酵素およびプロバイオティクスバチルス属細菌胞子は、同時に対象に投与される。いくつかの実施形態では、ＳＯＤ酵素およびプロバイオティクスバチルス属細菌胞子を含む組成物が対象に投与される。

いくつかの実施形態では、ＳＯＤ酵素および／またはバチルス属細菌胞子は、医薬組成物または栄養補助組成物中にある。

いくつかの実施形態では、方法は、黄斑変性を治療する少なくとも１つの追加の薬剤を対象に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの追加の薬剤は、ラニビズマブ（ｒａｎｉｂｉｚｕｍａｂ）またはアフリベルセプト（ａｆｌｉｂｅｒｃｅｐｔ）である。

ある特定の態様では、網膜をＳＯＤ酵素およびプロバイオティクスバチルス属細菌（例えば、バチルス・コアグランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、バチルス・インディカス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｉｎｄｉｃｕｓ）、バチルス・クラウジイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ）、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ））の胞子と接触させることを含む、脈絡膜新生血管（ＣＮＶ）を減少させまたは抑制する方法も本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、本方法は、ｉｎ ｖｉｖｏ、ｅｘ ｖｉｖｏ、またはｉｎ ｖｉｔｒｏで実施される。

いくつかの実施形態において、ＳＯＤ酵素は、単離された酵素および／または組換え酵素である。いくつかの実施形態では、ＳＯＤ酵素はマンガンに結合する。いくつかの実施形態では、ＳＯＤ酵素は：（ａ）配列番号１に示される配列に対して、少なくともまたは約４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれより高い同一性を有するアミノ酸配列；（ｂ）アミノ酸残基Ａｓｎ７４および／またはＡｓｎ１３７が欠失または置換された、配列番号１に記載のアミノ酸配列；（ｃ）アミノ酸残基Ａｓｎ７４および／またはＡｓｎ１３７がＡｓｐ７４および／またはＡｓｐ１３７で置換された、配列番号１に記載のアミノ酸配列；あるいは（ｄ）配列番号１に示されるアミノ酸配列；を含む。いくつかの実施形態では、ＳＯＤ酵素はシェラックでコーティングされる。

いくつかの実施形態では、ＳＯＤ酵素は、微生物、好ましくは細菌、好ましくは食品および薬物として使用するために一般に安全と認められる（ＧＲＡＳ）細菌、より好ましくはバチルス属菌種の細菌に由来する。いくつかの実施形態では、ＳＯＤ酵素は、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＧＦ４２３株（ＫＣＴＣ １３２２２ＢＰ）またはＧＦ４２４株（ＫＣＴＣ １３２２７ＢＰ）に由来する。

いくつかの実施形態では、プロバイオティクスバチルス属細菌胞子、好ましくはバチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＧＦ４２３株またはＧＦ４２４変異株の胞子は、食品および承認された薬物としての使用に一般に安全と認められる（ＧＲＡＳ）。

特定の実施形態では、方法は、（ｉ）網膜における細胞死を減少させる；（ｉｉ）網膜における炎症を軽減する；（ｉｉｉ）網膜における低酸素症を軽減する；（ｉｖ）網膜における血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）の発現を低減させる；および／または（ｖ）網膜機能を増大させる。

いくつかの実施形態では、網膜は、黄斑変性に罹患している対象のものである。いくつかの実施形態では、網膜は加齢黄斑変性（ＡＭＤ）に罹患している対象のものであり、好ましくは、ＡＭＤはウェット型ＡＭＤまたは新生血管を伴うＡＭＤである。

いくつかの実施形態では、網膜は哺乳動物のものであり、好ましくは、哺乳動物はヒト、イヌ、ネコ、マウス、またはラットである。好ましい実施形態では、哺乳動物はヒトである。

いくつかの実施形態では、ＳＯＤ酵素およびプロバイオティクスバチルス属細菌胞子は逐次的に網膜に接触する。

他の実施形態では、ＳＯＤ酵素およびプロバイオティクスバチルス属細菌胞子は同時に網膜に接触する。いくつかの実施形態では、網膜をＳＯＤ酵素およびプロバイオティクスバチルス属細菌胞子を含む組成物と接触させる。

いくつかの実施形態では、ＳＯＤ酵素および／またはバチルス属細菌胞子は、医薬組成物または栄養補助組成物中にある。いくつかの実施形態では、ＳＯＤ酵素および／またはプロバイオティクスバチルス属細菌胞子は、医薬組成物中にある。

いくつかの実施形態では、方法は、網膜を、ＣＮＶを減少させるまたは抑制する少なくとも１つの追加の薬剤と接触させることをさらに含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの追加の薬剤は、ラニビズマブまたはアフリベルセプトである。

特定の態様では、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）酵素およびプロバイオティクスバチルス属細菌（例えば、バチルス・コアグランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、バチルス・インディカス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｉｎｄｉｃｕｓ）、バチルス・クラウジイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ）、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ））の胞子を含む医薬組成物が本明細書で提供される。

いくつかの実施形態において、ＳＯＤ酵素は、単離または精製された酵素である。いくつかの実施形態では、ＳＯＤ酵素は組換え酵素である。いくつかの実施形態では、ＳＯＤ酵素はマンガンに結合する。いくつかの実施形態では、ＳＯＤ酵素は：（ａ）配列番号１に示される配列に対して、少なくともまたは約４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれより高い同一性を有するアミノ酸配列；（ｂ）アミノ酸残基Ａｓｎ７４および／またはＡｓｎ１３７が欠失または置換された、配列番号１に記載のアミノ酸配列；（ｃ）アミノ酸残基Ａｓｎ７４および／またはＡｓｎ１３７がＡｓｐ７４および／またはＡｓｐ１３７で置換された、配列番号１に記載のアミノ酸配列；あるいは（ｄ）配列番号１に示されるアミノ酸配列；を含む。いくつかの実施形態では、ＳＯＤ酵素はシェラックでコーティングされる。

いくつかの実施形態では、組成物は経口組成物である。

いくつかの実施形態では、ＳＯＤ酵素は、微生物、好ましくは細菌、好ましくは食品および薬物として使用するために一般に安全と認められる（ＧＲＡＳ）細菌、より好ましくはバチルス属菌種の細菌に由来する。いくつかの実施形態では、ＳＯＤ酵素は、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＧＦ４２３株（ＫＣＴＣ １３２２２ＢＰ）またはＧＦ４２４株（ＫＣＴＣ １３２２７ＢＰ）に由来する。

いくつかの実施形態では、プロバイオティクスバチルス属細菌胞子、好ましくはバチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＧＦ４２３株またはＧＦ４２４変異株の胞子は、食品および承認された薬物としての使用に一般に安全と認められる（ＧＲＡＳ）。

いくつかの実施形態では、組成物は、ＣＮＶを減少させるまたは抑制する少なくとも１つの追加の薬剤；または黄斑変性を治療する少なくとも１つの追加の薬剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、黄斑変性は加齢黄斑変性（ＡＭＤ）であり、好ましくは、ＡＭＤはウェット型ＡＭＤまたは新生血管を伴うＡＭＤである。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの追加の薬剤は、ラニビズマブまたはアフリベルセプトである。

特定の実施形態では、組成物は、（ｉ）脈絡膜新生血管（ＣＮＶ）を減少させる；（ｉｉ）網膜における細胞死を減少させる；（ｉｉｉ）網膜における炎症を軽減する；（ｉｖ）網膜における低酸素症を軽減する；（ｖ）網膜における血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）の発現を低減させる；および／または（ｖｉ）網膜機能を増大させる。

ある特定の態様では、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）酵素およびプロバイオティクスバチルス属細菌（例えば、バチルス・コアグランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、バチルス・インディカス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｉｎｄｉｃｕｓ）、バチルス・クラウジイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ）、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ））の胞子を含む、医療食品または栄養補助食品が本明細書でさらに提供される。

いくつかの実施形態において、ＳＯＤ酵素は、単離または精製された酵素である。いくつかの実施形態では、ＳＯＤ酵素は組換え酵素である。いくつかの実施形態では、ＳＯＤ酵素はマンガンに結合する。いくつかの実施形態では、ＳＯＤ酵素は：（ａ）配列番号１に示される配列に対して、少なくともまたは約４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれより高い同一性を有するアミノ酸配列；（ｂ）アミノ酸残基Ａｓｎ７４および／またはＡｓｎ１３７が欠失または置換された、配列番号１に記載のアミノ酸配列；（ｃ）アミノ酸残基Ａｓｎ７４および／またはＡｓｎ１３７がＡｓｐ７４および／またはＡｓｐ１３７で置換された、配列番号１に記載のアミノ酸配列；あるいは（ｄ）配列番号１に示されるアミノ酸配列；を含む。いくつかの実施形態では、ＳＯＤ酵素はシェラックでコーティングされる。

いくつかの実施形態では、ＳＯＤ酵素は、微生物、好ましくは細菌、好ましくは食品および薬物として使用するために一般に安全と認められる（ＧＲＡＳ）細菌、より好ましくはバチルス属菌種の細菌に由来する。いくつかの実施形態では、ＳＯＤ酵素は、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＧＦ４２３株（ＫＣＴＣ １３２２２ＢＰ）またはＧＦ４２４株（ＫＣＴＣ １３２２７ＢＰ）に由来する。

いくつかの実施形態では、プロバイオティクスバチルス属細菌胞子、好ましくはバチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＧＦ４２３株またはＧＦ４２４変異株の胞子は、食品および承認された薬物としての使用に一般に安全と認められる（ＧＲＡＳ）。

いくつかの実施形態では、医療食品または栄養補助食品は、ＣＮＶを減少させるまたは抑制する少なくとも１つの追加の薬剤；または黄斑変性を治療する少なくとも１つの追加の薬剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、黄斑変性は加齢黄斑変性（ＡＭＤ）であり、好ましくは、ＡＭＤはウェット型ＡＭＤまたは新生血管を伴うＡＭＤである。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの追加の薬剤は、ラニビズマブまたはアフリベルセプトである。

特定の実施形態では、医療食品または栄養補助食品は、（ｉ）脈絡膜新生血管（ＣＮＶ）を減少させる；（ｉｉ）網膜における細胞死を減少させる；（ｉｉｉ）網膜における炎症を軽減する；（ｉｖ）網膜における低酸素症を軽減する；（ｖ）網膜における血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）の発現を低減させる；および／または（ｖｉ）網膜機能を増大させる。

特定の態様では、プロバイオティクスバチルス属細菌（例えば、バチルス・コアグランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、バチルス・インディカス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｉｎｄｉｃｕｓ）、バチルス・クラウジイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ）、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ））の胞子を含む医薬組成物が本明細書で提供される。

いくつかの実施形態では、プロバイオティクスバチルス属細菌胞子は、食品および承認された薬物として使用するために一般に安全と認められる（ＧＲＡＳ）。いくつかの実施形態では、プロバイオティクスバチルス属細菌胞子は、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＧＦ４２３株またはＧＦ４２４変異株の胞子である。

いくつかの実施形態では、組成物は、ＣＮＶを減少させるまたは抑制する少なくとも１つの追加の薬剤；または黄斑変性を治療する少なくとも１つの追加の薬剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、黄斑変性は加齢黄斑変性（ＡＭＤ）であり、好ましくは、ＡＭＤはウェット型ＡＭＤまたは新生血管を伴うＡＭＤである。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの追加の薬剤は、ラニビズマブまたはアフリベルセプトである。

特定の態様では、プロバイオティクスバチルス属細菌（例えば、バチルス・コアグランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、バチルス・インディカス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｉｎｄｉｃｕｓ）、バチルス・クラウジイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ）、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ））の胞子を含む医療食品または栄養補助食品も本明細書で提供される。

いくつかの実施形態では、プロバイオティクスバチルス属細菌胞子は、食品および承認された薬物として使用するために一般に安全と認められる（ＧＲＡＳ）。いくつかの実施形態では、プロバイオティクスバチルス属細菌胞子は、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＧＦ４２３株またはＧＦ４２４変異株の胞子である。

いくつかの実施形態では、医療食品または栄養補助食品は、ＣＮＶを減少させるまたは抑制する少なくとも１つの追加の薬剤；または黄斑変性を治療する少なくとも１つの追加の薬剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、黄斑変性は加齢黄斑変性（ＡＭＤ）であり、好ましくは、ＡＭＤはウェット型ＡＭＤまたは新生血管を伴うＡＭＤである。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの追加の薬剤は、ラニビズマブまたはアフリベルセプトである。

特定の態様において、本明細書に記載の医薬組成物のいずれか１つもしくは組み合わせ、および／または本明細書に記載の医療食品もしくは栄養補助食品のいずれか１つもしくは組み合わせを含むキットが本明細書に提供される。

定義
冠詞「１つの（ａ）」および「１つの（ａｎ）」は、本明細書では、冠詞の文法的対象物の１つまたは１つより多く（すなわち、少なくとも１つ）を指すために使用される。例として、「要素」は、１つの要素または複数の要素を意味する。

「投与する」という用語は、治療がその意図される機能を果たすことを可能にする投与経路を含むことが意図される。投与経路の例には、経口投与、舌下投与、および硝子体内投与が含まれる。本明細書で使用される場合、「加齢黄斑変性」または「ＡＭＤ」という用語は、早期、中期、および進行したＡＭＤを含み、また、ドライ型黄斑変性、地図状萎縮、および新生血管を伴うＡＭＤまたは滲出型ＡＭＤとしても知られるウェット型黄斑変性の両方を含む。

用語「コンジョイント療法（conjoint therapy）」および「併用療法（combination therapy）」は、本明細書で使用する場合、２つ以上の治療物質の投与を指す。併用療法を構成する異なる薬剤は、１つまたは複数の治療剤の投与と同時に、その前に、またはその後に投与され得る。

本明細書中で使用される場合、用語「予防する」、「予防すること」および「予防」は、当該分野で認識され、医学的状態（例えば、視力喪失）または疾患（例えば、黄斑変性）に関連して使用される場合、当該分野でよく理解され、組成物を投与されていない対象と比較して、対象における医学的状態（例えば、ぼやけた視力または視力喪失）の症状の頻度を減らすまたは発症を遅延させる組成物の投与を含む。

用語「対象」または「患者」は、任意の健康なまたは病気の動物、哺乳動物もしくはヒト、または任意の動物、哺乳動物もしくはヒトを指す。いくつかの実施形態では、対象は、黄斑変性（例えば、新生血管を伴う黄斑変性）に罹患している。本発明の方法の様々な実施形態において、対象は治療を受けていない。他の実施形態では、対象は治療を受けている。

本明細書で使用する場合、組成物または薬剤の「治療有効量」という用語は、所望の効果、例えば、眼の黄斑変性に関連する身体的変化の進行の低減、予防もしくは減速、またはそれらから生じる症状（例えば、ドルーゼンの蓄積、眼における異常な血管成長、眼における異常な体液、血液およびタンパク質の漏出など）の進行の低減、予防もしくは減速をもたらす薬剤の量を指す。必要とされる薬剤の正確な量は、対象の種、年齢および全身状態、投与様式などに応じて、対象ごとに変化し得る。しかしながら、任意の個々の場合における適切な「有効量」は、日常的な実験を使用して当業者によって決定され得る。

「治療する（treating）」という用語は、予防的および／または治療的処置を含む。「予防的または治療的」処置という用語は、当該技術分野で認識されており、１つまたは複数の対象組成物の宿主への投与を含む。望ましくない状態（例えば、宿主動物の疾患または他の望ましくない状態）の臨床症状が現れる前に投与される場合、処置は予防的である（すなわち、望ましくない状態を発症することから宿主を防御する）；一方、望ましくない状態の発現後に投与される場合、処置は治療的である（すなわち、既存の望ましくない状態またはその副作用を軽減、改善、または安定化させることが意図される）。

黄斑変性
ＡＭＤの病因は、さまざまな要因により依然として不完全に理解されている。網膜色素上皮層（ＲＰＥ）細胞およびブルッフ膜の老化、眼の血管膜における血流障害、紫外線および青色光への網膜曝露、ならびに遺伝的素因は、ＡＭＤの発症において重要な役割を果たすと考えられる。

ＡＭＤの初期に現れるＲＰＥ細胞の喪失は、主に、抗酸化細胞防御システムの弱化または活性酸素種の濃度の上昇に起因する酸化ストレスによるものであり、したがって、活性酸素種の効果的な除去は、ＡＭＤの予防および治療に必須であり得る。

体内の全酸素消費量の１～５％は、酸化ストレスの主な原因である活性酸素種（ＲＯＳ）に変換される。過酸化物およびフリーラジカルなどの活性酸素種（「ＲＯＳ」）の日常的な生成と解毒との間の不均衡は、細胞構造および機構への酸化的損傷をもたらし得る。ヒト網膜は大量の酸素を消費し、特に、網膜色素上皮細胞は、視細胞の外節を貪食するため、大量の活性酸素種を産生する。加えて、細胞内活性酸素種もミトコンドリア電子輸送系を介して産生される。酸化ストレス誘発性網膜色素上皮細胞は、誘発性アポトーシスを受けるか、またはミトコンドリアＤＮＡ損傷、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）の増加、抗酸化酵素の減少、および炎症反応の増加などの変化を示す。

スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）
スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）は、スーパーオキシド（Ｏ_２－）ラジカルの通常の分子酸素（Ｏ_２）または過酸化水素（Ｈ_２Ｏ_２）のいずれかへの不均化（dismutation）を交互に触媒する酵素である。したがって、ＳＯＤは、活性酸素種を除去することによって酸化ストレスを低減させるのに重要な役割を果たす。ＳＯＤは原核細胞および真核細胞に広く分布しており、それらの異なる種類の金属中心［銅／亜鉛、ニッケル、マンガンおよび鉄］に基づいて４つのファミリーに分類されている。マンガン含有ＳＯＤ［Ｍｎ－ＳＯＤ］は、多くの細菌、真核細胞の葉緑体、ミトコンドリア、および細胞質ゾル（または細胞質基質）に広く存在する。バチルス・アミロリケファシエンスＧＦ４２３株（ＫＣＴＣ １３２２２ＢＰ）由来のＳＯＤ酵素はＭｎ－ＳＯＤであり、配列番号１のアミノ酸配列を有する。バチルス・アミロリケファシエンスＧＦ４２４株（ＫＣＴＣ １３２２７ＢＰ）由来のＳＯＤ酵素もＭｎ－ＳＯＤであり、配列番号１のアミノ酸配列を有する。

ＳＯＤの単離／精製
「単離された」または「精製された」ＳＯＤまたはその生物学的活性部分は、酵素が由来する細胞または組織源からの細胞物質または他の混入タンパク質を実質的に含まない。用語「細胞物質を実質的に含まない」は、タンパク質が、そこから単離されるかまたは組換えによって産生される細胞の細胞成分から分離されたポリペプチドの調製物を含む。いくつかの実施形態では、「細胞物質を実質的に含まない」という用語は、約３０％（乾燥重量で）未満の望ましくないタンパク質、より好ましくは約２０％未満の望ましくないタンパク質、さらにより好ましくは約１０％未満の望ましくないタンパク質、最も好ましくは約５％未満の望ましくないタンパク質を有するタンパク質の調製物を含む。

ＳＯＤは、天然または組換え宿主を含む様々な供給源から単離または精製することができる。例えば、黄斑変性疾患を予防または治療する活性を有するＳＯＤは、バチルス・アミロリケファシエンスＧＦ４２３株またはバチルス・アミロリケファシエンスＧＦ４２４株の培養上清から抽出することができる。まず、バチルス・アミロリケファシエンスＧＦ４２３株またはバチルス・アミロリケファシエンスＧＦ４２４株を各種培地で培養することにより培養物を得ることができる。いくつかの実施形態では、複合培地（ｐＨ６．０～７．０）を使用して、細菌を２５～４２℃で１～４日間増殖させる。バチルス・アミロリケファシエンスＧＦ４２３株またはバチルス・アミロリケファシエンスＧＦ４２４株を培養するための他の好適な培地としては、ＬＢ（Ｌｕｒｉａ－Ｂｅｒｔａｎｉ）培地、ＩＳＰ（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ Ｐｒｏｊｅｃｔ）培地、ＮＡ（栄養寒天）培地、ＢＨＩ（脳心臓輸液寒天）培地、ＳＤＡ（サブロー（ｓａｂｏｕｒａｕｄ）デキストロース寒天）培地、ＰＤＡ（ポテトデキストロース寒天）培地、ＮＢ（ニュートリエントブロス）培地などが挙げられる。好ましい実施形態では、ＬＢ培地、ＩＳＰ培地、ＢＨＩ培地、ＳＤＡ培地、またはＮＢ培地が使用され得る。

ＳＯＤはまた、ＰｕｂＭｅｄまたはＢＲＥＮＤＡ（ｗｏｒｌｄ ｗｉｄｅ ｗｅｂ ａｔ ＢＲＥＮＤＡ－ｅｎｚｙｍｅｓ．ｏｒｇ）などのデータベースに提供される情報を使用して、他の天然または組換え宿主からも供給され得る。

ＳＯＤは、限定はされないが、好ましくは以下の精製方法により精製される。バチルス・アミロリケファシエンスＧＦ４２３株またはバチルス・アミロリケファシエンスＧＦ４２４株を培養して得られた培養物を遠心分離して培養上清を回収する。上清画分を固相抽出によって前処理し、次いで単離し、クロマトグラフィーによって精製する。様々な様式のクロマトグラフィーを使用してＳＯＤを精製することができる。好ましい実施形態では、疎水性相互作用クロマトグラフィーが使用される。

バチルス属細菌胞子
特定の態様において、本明細書において、バチルス属細菌の胞子、および前記バチルス属細菌の胞子を含む組成物（例えば、医薬組成物、栄養補助（nutraceutical）組成物）が提供される。対象の治療および／または新生血管（ＣＮＶ）の減少または抑制におけるそのような胞子および／または組成物の使用が本明細書でさらに提供される。好ましい実施形態において、バチルス属細菌の胞子は、本開示のＳＯＤ酵素と併せて使用される。

胞子形成バシラス網（Ｂａｃｉｌｌｉ）は、多数の分泌タンパク質、酵素、抗菌化合物、ビタミン、およびカロテノイドを産生する（Elshaghabee et al. (2017) Frontiers in Microbiology 8:1490）。この理由から、胞子形成バシラス網は、食物連鎖において（例えば、プロバイオティクスとして）使用されている。しかしながら、これらの細菌またはそれらの胞子は、本開示の方法（例えば、本明細書に記載の疾患の治療のための方法）に関与していなかった。いくつかの実施形態では、例示的なプロバイオティクスバチルス属細菌は、バチルス・コアグランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、バチルス・インディカス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｉｎｄｉｃｕｓ）、バチルス・クラウジイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ）、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、およびバチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）を含む。好ましい実施形態では、プロバイオティクスバチルス属細菌は、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）（例えば、ＧＦ４２３またはＧＦ４２４）である。

医薬組成物
本発明の組成物は、従来の薬学的に許容される担体または賦形剤をさらに含んでいてよい。また、バチルス・アミロリケファシエンスＧＦ４２３またはＧ４２４株由来のＳＯＤ酵素は、薬学的に通常用いられる結合剤、コーティング剤などの様々な添加剤と共に製剤化することができる。

本発明によるＳＯＤを含有する医薬組成物は、薬学的に許容される担体を含んでいてよい。経口投与の場合、薬学的に許容される担体には、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、賦形剤、可溶化剤、分散剤、安定剤、懸濁化剤、着色剤、香味剤などが含まれ得る。局所投与の場合、薬学的に許容される担体には、基剤、賦形剤、滑沢剤、保存剤などが含まれ得る。本発明の医薬組成物は、前述の薬学的に許容される担体と組み合わせて様々な剤形に製剤化することができる。例えば、経口投与の場合、医薬組成物は、錠剤、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、ウエハー剤などの固体または液体剤形に製剤化することができる。また、医薬組成物は、液剤、懸濁剤、錠剤、カプセル剤、徐放性製剤等に製剤化することができる。

一方で、製剤に適した担体、賦形剤および希釈剤の例としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、デンプン、アカシアゴム、アルギン酸塩、ゼラチン、リン酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、水、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、タルク、ステアリン酸マグネシウム、および鉱油などが挙げられる。また、医薬組成物は、充填剤、抗凝集剤、潤滑剤、湿潤剤、香味剤、乳化剤、保存剤などをさらに含むことができる。

本発明の方法において、ＳＯＤ酵素は、シェラックでコーティングされてもよい。ＳＯＤが経口投与されると、ＳＯＤの活性が消化管内で急速に低下し、そのバイオアベイラビリティおよび有効性が低下するという問題が生じることがある。この問題は、ＳＯＤが最も効果的である特定の細胞位置にＳＯＤを送達することが困難であることによってさらに悪化する。したがって、本発明の方法では、ＳＯＤ酵素は溶液中でコーティングされていてよい。具体的には、精製溶液とシェラック含有溶液を混合した後、凍結乾燥する。この凍結乾燥試料を粉末化し、使用するまで約４℃で保存することができる。本発明での使用に好適なコーティングの例としては、シェラック、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ゼイン（ｚｅｉｎ）、オイドラギット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）、およびこれらの組み合わせが挙げられる。

用量
バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂ．ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＧＦ４２３またはＧ４２４株から産生されるＳＯＤを含む本発明の医薬組成物の用量は、治療または予防の目的、予防または治療される患者のタイプ、患者の状態、体重、年齢または性別などを考慮して適切に決定され得る。例えば、本発明の組成物は、有効成分として、バチルス・アミロリケファシエンスＧＦ４２３またはＧＦ４２４株によって産生されるＳＯＤおよびプロバイオティクスバチルス属細菌胞子を治療有効量または栄養的有効濃度で含有し得る。好ましくは、組成物は、組成物の総重量に基づき２～３０００Ｕ／ｍｇの量のＳＯＤ、および様々な量のプロバイオティクスバチルス属細菌胞子を含んでいてよい。

医療食品または栄養補助食品
本発明のさらに別の態様は、黄斑変性および眼の機能の変性低下を予防、改善または治療するための食品、特に栄養補助食品または医療食品であって、バチルス・アミロリケファシエンスＧＦ４２３またはＧＦ４２４株由来のＳＯＤを含有する食品を提供する。バチルス・アミロリケファシエンスＧＦ４２３由来のＳＯＤは、配列番号１のアミノ酸配列を有する。バチルス・アミロリケファシエンスＧＦ４２４由来のＳＯＤも、配列番号１のアミノ酸配列を有する。

本明細書において、「栄養補助食品（“nutraceutical food）」または「医療食品（medical food）」という用語は、正常な機能を維持することによりまたは人体の生理学的機能を活性化することにより、健康を維持または改善するための食品として食品医薬品安全省（Ministry of Food and Drug Safety)によって規定される、人体にとって有益な機能を有する可能性が高いこのような原料または成分を用いて調製される食品を意味するが、必ずしもそれらに限定されず、従来の健康食品の意味を排除するものではない。

本発明の栄養補助食品または医療食品は、黄斑変性を予防または改善する目的で、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、液剤、丸剤などの形態で調製および加工することができる。従来の添加剤としては、例えば、ケトン、グリシン、クエン酸カルシウム、ニコチン酸、ケイ皮酸などの化学合成添加剤；例えば、柿色（persimmon color）、甘草エキス（licorice extract）、結晶セルロース、カオリン顔料、グアーガムなどの天然添加剤；例えばＬ－グルタミン酸ナトリウム製剤、麺用のアルカリ添加剤、保存剤製剤、タールカラー製剤などの混合製剤が挙げられる。例えば、錠剤形態の栄養補助食品は、本発明の有効成分であるＳＯＤと、賦形剤、結合剤、崩壊剤および他の添加剤との混合物を従来の方法により造粒した後、滑沢剤などを添加し、続いてその混合物を圧縮成形するか、または直接圧縮成形することにより製造することができる。また、錠剤形態の栄養補助食品は、必要に応じて矯味剤等を含有していてもよい。

カプセル形態の栄養補助食品のうち、硬カプセル（またはハードカプセル）製剤は、硬カプセルに、本発明の有効成分であるＳＯＤまたは細菌株粉末（strain powder）と賦形剤などの添加剤との混合物を充填することによって調製することができる。軟カプセル（またはソフトカプセル）製剤は、ＳＯＤまたは細菌株粉末と賦形剤などの添加剤との混合物をゼラチンカプセルなどのカプセルに充填することによって調製することができる。軟カプセル製剤は、必要に応じて、グリセリンまたはソルビトールなどの可塑剤、着色剤、保存剤（または防腐剤）などを含んでいてよい。

丸剤形態の栄養補助食品は、本発明の有効成分であるＳＯＤと、賦形剤、結合剤、崩壊剤等との混合物を公知の方法で成形することにより調製することができる。丸剤製剤は、必要に応じて、白糖または他のコーティング剤でコーティングされていてよく、あるいはデンプンまたはタルクなどの物質で表面コーティングされていてもよい。

コジョイント療法または併用療法
併用療法は逐次療法（sequential therapy）であってよく、対象を最初にＳＯＤ酵素で処置し、次いでプロバイオティクスバチルス属細菌胞子で処置するか、またはその逆である。これらは、使用される剤形に応じて、同じ経路または２つの異なる投与経路によって独立して投与することができる。

ＳＯＤ酵素およびプロバイオティクスバチルス属細菌胞子は、単一組成物の一部として同時に投与することができる。

ＳＯＤ酵素およびプロバイオティクスバチルス属細菌胞子は、別々の組成物として同時に投与してもよい。これらは、使用される剤形に応じて、同じ経路または２つの異なる投与経路によって独立して投与することができる。

本明細書で提供される組成物は、黄斑変性を治療するのに有用な活性薬剤の組み合わせ（例えば、ＳＯＤ酵素およびプロバイオティクスバチルス属細菌胞子）を含有する。

本明細書に記載される活性薬剤の組み合わせは、本明細書に提供される方法および組成物に従って、当技術分野で公知の１つまたは複数の他の薬理活性化合物と組み合わせることができる。特定の組合せは、黄斑変性（例えば、ウェット型ＡＭＤ）の治療において、またはＣＮＶの抑制において相乗的に作用すると考えられる。

追加の活性薬剤は、大分子（例えば、タンパク質）または小分子（例えば、合成無機分子、有機金属分子、または有機分子）であり得る。いくつかの実施形態では、ＳＯＤおよびプロバイオティクスバチルス属細菌胞子と組み合わせることができる少なくとも１つの追加の療法は、黄斑変性を治療することができる薬剤またはＣＮＶを減少させもしくは抑制することができる薬剤である。いくつかの実施形態では、薬剤は、米国食品医薬品局によって承認されている。いくつかのそのような実施形態において、薬剤は、ＶＥＧＦの阻害剤であるアフリベルセプトである。他のそのような実施形態では、薬剤は、ＶＥＧＦの別の阻害剤であるラニビズマブである。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される組成物は、一次治療として使用される。他の実施形態において、組成物は、アジュバント療法（または補助療法）として使用される。

いくつかのこのような実施形態において、本明細書において提供される組成物は、１つまたは複数の他の薬理活性化合物の投与の前、それと同時、またはその後に対象に投与され得る。

配列同一性／相同性
機能保存的バリアントは、タンパク質または酵素中の所与のアミノ酸残基を、ポリペプチドの全体的な立体構造および機能を変化させることなく変更したものであり、アミノ酸を類似の特性（例えば、極性、水素結合能、酸性、塩基性、疎水性、芳香族など）を有するアミノ酸で置き換えることを含むが、これらに限定されない。保存アミノ酸と示されるもの以外のアミノ酸はタンパク質において異なっていてよく、その結果、同様の機能の任意の２つのタンパク質間のタンパク質またはアミノ酸配列の類似性のパーセントは変動してよく、例えば、類似性がＭＥＧＡＬＩＧＮアルゴリズムに基づくＣｌｕｓｔｅｒ Ｍｅｔｈｏｄなどによるアラインメントスキームに従って決定される場合、７０％～９９％であり得る。また、機能保存的バリアントは、ＢＬＡＳＴまたはＦＡＳＴＡアルゴリズムによって決定した場合に少なくとも６０％のアミノ酸同一性、好ましくは少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８５％、さらに好ましくは少なくとも９０％、およびさらにより好ましくは少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有し、かつ比較される天然または親タンパク質と同じまたは実質的に同様の特性または機能を有するポリペプチドを含む。

２つの配列間の同一性パーセントは、２つの配列の最適なアラインメントのために導入される必要があるギャップの数および各ギャップの長さを考慮して、配列によって共有される同一位置の数の関数（すなわち、％同一性＝同一位置の数／位置の合計数×１００）である。配列の比較および２つの配列間の同一性パーセントの決定は、以下の非限定的な実施例に記載されるように、数学的アルゴリズムを用いて行うことができる。

２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ＧＣＧ社のウェブサイトのワールドワイドウェブで入手可能）のＧＡＰプログラムを使用し、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックス、ならびに４０、５０、６０、７０、または８０のギャップ重み付け（gap weight）および１、２、３、４、５、または６の長さ重み付け（length weight）を用いて決定することができる。２つのヌクレオチドまたはアミノ酸配列間の同一性パーセントはまた、ＰＡＭ１２０重量残基表（weight residue table）、ギャップ長ペナルティー（gap length penalty）１２およびギャップペナルティー（gap penalty）４を使用して、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれているＥ．ＭｅｙｅｒｓおよびＷ．Ｍｉｌｌｅｒ（ＣＡＢＩＯＳ，４：１１７（１９８９））のアルゴリズムを使用して決定することができる。さらに、２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、Ｂｌｏｓｕｍ ６２マトリックスまたはＰＡＭ２５０マトリックスのいずれか、ならびに１６、１４、１２、１０、８、６、または４のギャップ重み付けおよび１、２、３、４、５、または６の長さ重み付けを使用して、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ＧＣＧ社のウェブサイトのワールドワイドウェブで入手可能）のＧＡＰプログラムに組み込まれているＮｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（４８）：４４４ ４５３（１９７０））アルゴリズムを使用して決定することができる。

さらに、本発明の核酸およびタンパク質配列を「問い合わせ配列（query sequence）」として使用して、例えば関連配列を同定するために公開データベースに対して検索を行うことができる。このような検索は、Altschul, et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403 10のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を用いて行うことができる。ＮＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝１００、ワード長＝１２を用いてＢＬＡＳＴヌクレオチド検索を実施して、本発明の核酸分子に相同なヌクレオチド配列を得ることができる。ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３を用いてＢＬＡＳＴタンパク質検索を実施して、本発明のタンパク質分子に相同なアミノ酸配列を得ることができる。比較目的のためのギャップ付きアラインメントを得るために、Altschul et al., (1997) Nucleic Acids Res. 25(17):3389 3402に記載されているように、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴを利用することができる。ＢＬＡＳＴおよびＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメータを使用することができる（ＮＣＢＩウェブサイトのワールドワイドウェブで入手可能）。

配列
本明細書で使用される場合、コード領域は、アミノ酸残基に翻訳されるコドンを含むヌクレオチド配列の領域を指し、非コード領域は、アミノ酸に翻訳されないヌクレオチド配列の領域（例えば、５’および３’非翻訳領域）を指す。

［に対する］相補性または相補的は、２つの核酸鎖の領域間または同じ核酸鎖の２つの領域間の配列相補性の広い概念を指す。第１の核酸領域のアデニン残基は、残基がチミンまたはウラシルである場合に第１の領域と逆平行である第２の核酸領域の残基と特異的な水素結合（塩基対合）を形成することができることが知られている。同様に、第１の核酸鎖のシトシン残基は、残基がグアニンである場合に第１の鎖と逆平行である第２の核酸鎖の残基と塩基対合することができることが知られている。核酸の第１の領域は、２つの領域が逆平行様式で配置されたときに、第１の領域の少なくとも１つのヌクレオチド残基が第２の領域の残基と塩基対合することができる場合に、同じまたは異なる核酸の第２の領域に相補的である。いくつかの実施形態では、第１の領域は第１の部分を含み、第２の領域は第２の部分を含み、第１および第２の部分が逆平行様式で配置された場合に、第１の部分のヌクレオチド残基の少なくともまたは約５０％、好ましくは少なくともまたは約７５％、少なくともまたは約９０％、または少なくともまたは約９５％が、第２の部分のヌクレオチド残基と塩基対合することができる。他の実施形態では、第１の部分の全てのヌクレオチド残基が、第２の部分のヌクレオチド残基と塩基対合することができる。

核酸は、別の核酸配列と機能的関係に置かれている場合、作動可能に連結されている。例えば、プロモーターまたはエンハンサーは、配列の転写に影響を及ぼす場合に、コード配列に作動可能に連結されている。転写調節配列に関して、作動可能に連結されるとは、連結されているＤＮＡ配列が連続的であり、２つのタンパク質コード領域を連結する必要がある場合、連続的でありかつリーディングフレーム内にあることを意味する。スイッチ配列については、作動可能に連結していることは、配列がスイッチ組換えに影響を及ぼすことができることを示す。

遺伝コード（以下に示す）によって定義されるように、特定のタンパク質のアミノ酸配列と、そのタンパク質をコードすることができるヌクレオチド配列との間には、既知の明確な対応がある。同様に、遺伝コードによって定義されるように、特定の核酸のヌクレオチド配列とその核酸によってコードされるアミノ酸配列との間に既知の明確な対応がある。
遺伝コード
アラニン（Ａｌａ、Ａ） ＧＣＡ、ＧＣＣ、ＧＣＧ、ＧＣＴ
アルギニン（Ａｒｇ、Ｒ） ＡＧＡ、ＡＣＧ、ＣＧＡ、ＣＧＣ、ＣＧＧ、ＣＧＴ
アスパラギン（Ａｓｎ、Ｎ） ＡＡＣ、ＡＡＴ
アスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ） ＧＡＣ、ＧＡＴ
システイン（Ｃｙｓ、Ｃ） ＴＧＣ、ＴＧＴ
グルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ） ＧＡＡ、ＧＡＧ
グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ） ＣＡＡ、ＣＡＧ
グリシン（Ｇｌｙ、Ｇ） ＧＧＡ、ＧＧＣ、ＧＧＧ、ＧＧＴ
ヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ） ＣＡＣ、ＣＡＴ
イソロイシン（Ｉｌｅ、Ｉ） ＡＴＡ、ＡＴＣ、ＡＴＴ
ロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ） ＣＴＡ、ＣＴＣ、ＣＴＧ、ＣＴＴ、ＴＴＡ、ＴＴＧ
リジン（Ｌｙｓ、Ｋ） ＡＡＡ、ＡＡＧ
メチオニン（Ｍｅｔ、Ｍ） ＡＴＧ
フェニルアラニン（Ｐｈｅ、Ｆ） ＴＴＣ、ＴＴＴ
プロリン（Ｐｒｏ、Ｐ） ＣＣＡ、ＣＣＣ、ＣＣＧ、ＣＣＴ
セリン（Ｓｅｒ、Ｓ） ＡＧＣ、ＡＧＴ、ＴＣＡ、ＴＣＣ、ＴＣＧ、ＴＣＴ
トレオニン（Ｔｈｒ、Ｔ） ＡＣＡ、ＡＣＣ、ＡＣＧ、ＡＣＴ
トリプトファン（Ｔｒｐ、Ｗ） ＴＧＧ
チロシン（Ｔｙｒ、Ｙ） ＴＡＣ、ＴＡＴ
バリン（Ｖａｌ、Ｖ） ＧＴＡ、ＧＴＣ、ＧＴＧ、ＧＴＴ
終結シグナル（終止） ＴＡＡ、ＴＡＧ、ＴＧＡ

遺伝暗号の重要かつ周知の特徴は、その冗長性であり、それにより、タンパク質を作製するために使用されるほとんどのアミノ酸について、複数のコードヌクレオチドトリプレットが使用され得る（上記に例示）。したがって、いくつかの異なるヌクレオチド配列が所与のアミノ酸配列をコードし得る。そのようなヌクレオチド配列は、すべての生物において同じアミノ酸配列の産生をもたらすので、機能的に等価であると考えられる（ある種の生物は、一部の配列を、他の配列よりも効率的に翻訳し得るが）。さらに、時折、プリンまたはピリミジンのメチル化バリアントが、所与のヌクレオチド配列中に見出され得る。このようなメチル化は、トリヌクレオチドコドンと対応するアミノ酸との間のコード関係に影響を及ぼさない。

ポリペプチドのアミノ酸配列を変化させる際に、アミノ酸のハイドロパシー（疎水性親水性）指標が考慮され得る。タンパク質に相互作用性生物学的機能を付与する際のハイドロパシーアミノ酸指数の重要性は、当該技術分野において一般的に理解されている。アミノ酸の相対的なハイドロパシー特性は、得られるタンパク質の二次構造に寄与することが認められており、これは次に、そのタンパク質と他の分子、例えば、酵素、基質、受容体、ＤＮＡ、抗体、抗原などとの相互作用を規定する。各アミノ酸は、その疎水性および電荷特性に基づいて、ハイドロパシー指標が割り当てられている：イソロイシン（＋４．５）；バリン（＋４．２）；ロイシン（＋３．８）；フェニルアラニン（＋２．８）；システイン／シスチン（＋２．５）；メチオニン（＋１．９）；アラニン（＋１．８）；グリシン（－０．４）；トレオニン（－０．７）；セリン（－０．８）；トリプトファン（－０．９）；チロシン（－１．３）；プロリン（－１．６）；ヒスチジン（－３．２）；グルタミン酸塩（－３．５）；グルタミン（－３．５）；アスパラギン酸塩（＜ＲＴＩ ３．５）；アスパラギン（－３．５）；リジン（－３．９）；およびアルギニン（－４．５）。

特定のアミノ酸を類似のハイドロパシー指標またはスコアを有する他のアミノ酸によって置換することができ、それでもなお類似の生物学的活性を有するタンパク質をもたらし得ること、すなわち、生物学的機能的に等価なタンパク質が得られることは、当技術分野において公知である。

したがって、上記で概説したように、アミノ酸置換は、一般に、アミノ酸側鎖置換基の相対的類似性、例えば、それらの疎水性、親水性、電荷、サイズなどに基づく。前述の特徴の様々なアミノ酸を考慮した例示的な置換は当業者に周知であり：アルギニンとリジン； グルタミン酸塩とアスパラギン酸；セリンとトレオニン；グルタミンとアスパラギン；ならびにバリン、ロイシンおよびイソロイシンが含まれる。

前述のことを考慮して、ＤＮＡまたはＲＮＡをアミノ酸配列に翻訳するための遺伝コードを使用して、ＤＮＡまたはＲＮＡのヌクレオチド配列を用いてポリペプチドアミノ酸配列を誘導することができる。同様に、ポリペプチドアミノ酸配列については、ポリペプチドをコードすることができる対応ヌクレオチド配列を遺伝コードから推定することができる（これは、その冗長性のため、任意の所与のアミノ酸配列に対して複数の核酸配列をもたらす）。したがって、ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の本明細書における記載および／または開示は、ヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列の記載および／または開示も含むと見なされるべきである。同様に、本明細書におけるポリペプチドアミノ酸配列の記載および／または開示はまた、アミノ酸配列をコードし得る全ての可能なヌクレオチド配列の記載および／または開示も含むと見なされるべきである。

キット
本発明はまた、キットを包含する。例えば、キットは、適切な容器にパッケージングされた、本開示の操作されたまたは天然のポリペプチド（例えば、ＳＯＤ酵素）、バチルス属細菌胞子、本明細書に記載される医薬組成物、本明細書に記載される医療食品もしくは栄養補助食品、例えば、黄斑変性を治療するまたはＣＮＶを減少もしくは抑制する少なくとも１つの追加の薬剤（例えば、ラニビズマブまたはアフリベルセプト）を含む併用療法、またはそれらの任意の組み合わせを含むことができ、さらにこのような試薬を使用するための説明書を含んでいてよい。キットはまた、別の容器にパッケージングされた投与ツールなどの他の構成要素を含んでいてよい。

実施例１．菌株の分離および同定
１）１６Ｓ ｒＲＮＡ分析
Ｂｉ－Ｎｅｘ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入したバチルス・ポリファーメンチカス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｆｅｒｍｅｎｔｉｃｕｓ）から株を単離し（「菌株」）、下記のように菌株を同定および特徴付けた。

菌株を特徴付けするために、形態学的および生化学的検査を実施した。グラム染色された細菌の形態学的検査は、菌株がグラム陽性桿菌（Gram-positive bacillus）であることを示した。また、位相差顕微鏡観察により、菌株が内生胞子を形成することが示された。

菌株のアイデンティティを決定するために、１６ｓ ｒＲＮＡシーケンシング（配列決定）を以下のように行った。菌株のゲノムを精製し（Sambrook, J. et al.: “Molecular Cloning. A Laboratory Manual, 3rd ed.,” 2001, Cold Spring Harbor Press）、Ｉｌｌｕｍｉｎａ ＨｉＳｅｑ ＰＥ１００を用いてシーケンシングした。１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子（配列番号２～１０）の９コピーが見出された。１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子のうち、ＢＰＪＧＰ＿ｒ００１３０（配列番号７）とＢＰＪＧＰ＿ｒ００１６０（配列番号８）は同じ塩基配列を示したが、他の１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子は異なる塩基配列を示した。したがって、この菌株は、異なるヌクレオチド配列を有する８つの１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子を有していた。

１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の９コピーを用いて、以下のデータベースおよびソフトウェア：Ｔｈｅ Ｒｉｂｏｓｏｍａｌ Ｄａｔａｂａｓｅ Ｐｒｏｊｅｃｔ’ｓ Ｃｌａｓｓｉｆｉｅｒ（Wang, Q. et al., Appl Environ Microbiol., 73:5261-5267 (2007)）、Ｌｉｖｉｎｇ Ｔｒｅｅ Ｐｒｏｊｅｃｔ’ｓ Ａｌｉｇｎｅｒ（Pruesse, E. et al., Bioinformatics, 28:1823-1829 (2012)）、およびＥｚＴａｘｏｎ ｄａｔａｂａｓｅ’ｓ Ｉｄｅｎｔｉｔｙ（Kim, O. S. et al., Int J Syst Evol Microbiol., 62:716721 (2012)）を使用して、属識別（genus identification）のための分析を行った。菌株は、上記に列挙した全てのソフトウェアにしたがい、９５％以上の信頼区間でバチルス属のメンバーであると同定された。

単離株の種レベルの識別を、ＥｚＴａｘｏｎ ｄａｔａｂａｓｅ’ｓ Ｉｄｅｎｔｉｔｙ（Kim, O. S. et al., Int J Syst Evol Microbiol., 62:716721 (2012)）を使用して行った。種レベルの識別のための１６Ｓ ｒＲＮＡの識別閾値（identity threshold）についての国際標準は現在存在しないが、９９％が最も広く受け入れられている閾値の最高値である（Yarza, P. et al., Nature Rev. Microbiol., 12: 635645 (2014)）。したがって、９９％閾値を検索標準として使用した。さらに、菌株は８つの異なる１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子を有していたため、１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の各々について検索を行った。見出された参照菌株のうち、共通して見出された参照菌株を選択した。検索により、異なる種に属する８０の異なる参照菌株が同定された。この結果は、バチルス属に属する種が１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の相同性のみを用いたのでは区別できないことを示す以前の研究（Janda J. M. & Abbott S. L., J Clin Microbiol., 45:2761-2764 (2007); Maughan H. & Van der Auwera G., Infect Genet Evol., 11:789-797 (2011)）と合致する。

したがって、菌株のアイデンティティを決定するために、ゲノムに基づく分類を行った。菌株と上記で同定された８０菌株との間の相同性を、ｉｎ ｓｉｌｉｃｏ ＤＮＡ－ＤＮＡハイブリダイゼーション（ＤＤＨ；Auch A. F. et al., Stand Genomic Sci., 28:117-234(2010)）を使用して分析し、７０％を超える相同性を示す参照菌株を選択した。２つの参照菌株が分析で見出され（以下の表１を参照のこと）、菌株に関するゲノムレベルでのそれらのＡＮＩ（平均ヌクレオチド同一性（average nucleotide identity））およびＡＡＩ（平均アミノ酸同一性（average amino acid identity））を確認した（Rodriguez-R L.M. & Konstantinidis K. T., PeerJ Preprints 4:e1900v1 (2016)）。

以下の表１は、ＤＤＨ分析において菌株と最も高い相同性を示した３つの株の１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子、ＤＤＨ、ＡＮＩおよびＡＡＩの分析を示す。

上記のゲノムに基づく比較により、この菌株がバチルス・アミロリケファシエンスに属する微生物であることが同定された。この菌株は、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＧＦ４２３と命名され、２０１７年３月６日にアクセッション番号ＫＣＴＣ １３２２２ＢＰで特許微生物寄託機関である韓国タイプカルチャーコレクション（Ｋｏｒｅａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ）（ＫＣＴＣ）に寄託された。

実施例２．バチルス・アミロリケファシエンスＧＦ４２４変異株の作製
ｓｏｄＡ遺伝子の発現を改善するために、ＵＶ照射によりバチルス・アミロリケファシエンスＧＦ４２３株を変異させた。ＵＶ－変異体ライブラリから、野生株より４．５倍高いＳＯＤ活性を有するバチルス・アミロリケファシエンスＧＦ４２４変異株を選択した。バチルス・アミロリケファシエンスＧＦ４２４のｓｏｄＡ遺伝子は野生型株と同じであることをシーケンシングにより確認した。バチルス・アミロリケファシエンスＧＦ４２４変異株をトリプトソイ（tryptic soy）培地（ＢＤ）中において３７℃で培養した。標準的な方法によってタカラのＡｄｖａｎｔａｇｅ ２ポリメラーゼを用いてＰＣＲを行った。

上記のようにして得られた変異株は、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＧＦ４２４と命名され、特許微生物寄託機関であるＫｏｒｅａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＫＣＴＣ）に２０１７年３月２３日に受託番号ＫＣＴＣ １３２２７ＢＰで寄託された。

実施例３．バチルス・アミロリケファシエンスＧＦ４２３またはＧＦ４２４からのスーパーオキシドジスムターゼの単離／精製
３．１ バチルス・アミロリケファシエンスＧＦ４２３の培養
バチルス・アミロリケファシエンスＧＦ４２３の培養のために、ＬＢ寒天培地（ルリア－ベルターニ（ＬＢ）寒天；１０ｇ／Ｌのトリプトファン、５ｇ／Ｌの酵母エキス、１０ｇ／ＬのＮａＣｌ、１５ｇ／Ｌの寒天）で形成された単一コロニーを３０ｍＬのＬＢ寒天培地に接種し、３７℃で１２時間培養した。種培養物を、１ｍＭの硫酸マンガン（ＭｎＳＯ_４）を含むＬＢ培地３Ｌに再度接種し、３７℃で２０時間培養した。次いで、培養物の一部をＳＯＤの分離に使用した。残りの部分をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、１０ｍＭのリン酸ナトリウム、１３０ｍＭの塩化ナトリウム、ｐＨ７．４）中で１０^１１ＣＦＵ／ｍＬに希釈し、超音波処理し、次いで上清を遠心分離によって収集し、０．４５μｍの孔径を有するフィルターを通して濾過し、凍結乾燥し、次いでｉｎ ｖｉｖｏ実験で使用するまで－２０℃で保存した。

バチルス・アミロリケファシエンスＧＦ４２４株も上記の方法を用いて培養することができる。

３．２ スーパーオキシドジスムターゼの単離および精製
バチルス・アミロリケファシエンスＧＦ４２３株の培養物を３，５７８ｘｇで４℃にて２０分間遠心分離し、上清を回収し、限外濾過（ＭＷＣＯ １０，０００）により１０倍濃縮した。４℃で攪拌しながら濃縮上清３００ｍＬに硫酸アンモニウムを飽和度６０％まで添加し、３０分間攪拌した。その後、３，５７８ｘｇで３０分間遠心分離して上清を回収し、２Ｍの硫酸アンモニウムを含む５０ｍＭリン酸カリウム（ｐＨ７．５）で平衡化したＨｉＰｒｅｐ（商標）Ｐｈｅｎｙｌ ＨＰ １６／１０カラムにロードした。次に、２Ｍ～０．１Ｍの硫酸アンモニウムを含む５０ｍＭリン酸カリウム（ｐＨ７．５）を用いて溶出した。ＳＯＤ含有画分を回収し、ＵＦ（ＭＷＣＯ １０，０００）により濃縮し、５０ｍＭリン酸カリウム（ｐＨ７．５）での透析により脱塩した。ＳＯＤアッセイキット（Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ、米国ミシガン州）を使用してＳＯＤの活性を分析した。ＳＯＤ活性の１単位は、スーパーオキシドラジカルを５０％阻害する酵素の量として定義される。精製ＳＯＤ酵素の活性は２２３１．１２±２６９Ｕ／ｍｇであり、ＳＤＳの分子量は約２２，０００ダルトンであった。

バチルス・アミロリケファシエンスＧＦ４２３に由来するＳＯＤを天然コーティング剤のシェラックでコーティングした。シェラックを５０ｍＭリン酸カリウム（ｐＨ７．０）緩衝液に溶解させ、ＳＯＤの精製溶液と混合し、凍結乾燥した。凍結乾燥試料は粉末形態であり、４℃で保存した。バチルス・アミロリクエファシエンスＧＦ４２３株に由来するＳＯＤをＧＦ－１０１と命名した。

バチルス・アミロリクエファシエンスＧＦ４２４株に由来するＳＯＤ酵素も上記の方法を用いて製造、単離および精製することができる。

実施例４．ＳＯＤのバリアント、ＧＦ－１０３
精製されたＧＦ－１０１においてＡｓｎ７４およびＡｓｎ１３７残基の一部の集団の脱アミド化がトリプシン消化を用いたペプチドマッピングおよびアミノ酸シーケンシング分析によって見出された：Ａｓｎ７４について２１．８％およびＡｓｎ１３７について１１．３％。表２Ａは、ＧＦ－１０１のアミノ酸配列とともに、脱アミド部位およびその部位を有するペプチドを要約する。２つのＡｓｎ残基をＡｓｐに置換して、精製酵素の均質性を改善した。バリアントＳＯＤをＧＦ－１０３と命名した。ＧＦ－１０３のペプチドマッピングは、予想外のペプチドがないことを示した。その後のペプチドのアミノ酸シーケンシング（表２Ｂ）により、ペプチドマッピングの結果が確認された。ＡｓｎのＡｓｐへの置換は、酵素活性および／または安定性に影響を及ぼさなかった。

実施例５．バチルス・アミロリケファシエンスＧＦ４２４変異株の胞子の調製
使用した培地はＳＹＰまたはＤＳＭであった。ＳＹＰ培地は、１．５％のソイトーン（ｓｏｙ ｔｏｎｅ）、０．５％の酵母エキス、０．５％のＫ_２ＨＰＯ_４、０．１％のＭｎＳＯ_４、０．１％のＭｇＳＯ_４、１０ｍＭのＦｅＳＯ_４、０．０４％の（ＮＨ_４）_２ＳＯ_４、０．０４％の（ＮＨ_４）_２ＰＯ_４、０．１％のＣａＣｌ_２、および２％のグルコースを含む。ＤＳＭ培地は、８ｇ／Ｌの Ｂａｃｔｏニュートリエントブロス、１ｇ／ＬのＫＣｌ、０．２５ｇ／ＬのＭｇＳＯ_４、０．１６４１５ｇ／ＬのＣａ（ＮＯ_３）_２、０．９５２１ｍｇ／ＬのＭｎＣｌ_２、および０．１５２ｍｇのＦｅＳＯ_４を含む。ＭｎＳＯ_４、ＭｇＳＯ_４、ＦｅＳＯ_４、（ＮＨ_４）_２ＳＯ_４、（ＮＨ_４）_２ＰＯ_４、およびＣａＣｌ_２は、ｄｄＨ_２Ｏに溶解し、使用前に添加した。

胞子形成誘導
バチルス・アミロリケファシエンスＧＦ４２４株の単一コロニーを、１４ｍＬチューブ中の１ｍＬのＬＢに接種し、３７℃、２００ｒｐｍで１２時間インキュベートした。１ｍＬの培養物を５００ｍＬフラスコ中の５０ｍＬのＬＢ培地に移し、３７℃、２００ｒｐｍで１２時間インキュベートした。次いで、２０ｍＬの培養培地を、２．５Ｌのバッフル付きフラスコ中の１ＬのＳＹＰまたはＤＳＭに移した。接種した培養物を３７℃、２００ｒｐｍで２４時間から最長１２０時間インキュベートした。

胞子洗浄
培養後、培養液にリゾチーム（０．５ｇ／Ｌ）を添加し、３７℃、２００ｒｐｍで１時間インキュベートし、残存する栄養細胞を除去した。粗胞子を６０００ｒｐｍで１０分間の遠心分離によって回収した。粗胞子を以下のようにさらに精製した：水で２回洗浄し、０．０２％ＳＤＳで洗浄し、水で２回洗浄した後、ＰＢＳ溶液に懸濁させる。胞子懸濁液を－２０℃で保存した。胞子の数は、希釈した胞子溶液をＬＢ寒天プレート上に広げた後にコロニーを計数することによって決定した。

実施例６．バチルス・アミロリケファシエンスＧＦ４２３に由来するスーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）の脈絡膜新生血管抑制効果の評価
６．１．実験動物および脈絡膜新生血管（ＣＮＶ）モデルの構築
動物実験は、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）のＡｎｉｍａｌ Ｕｓｅ ａｎｄ Ｃａｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌに従って行った。Ｃ５７ＢＬ／６マウスをＫｏａｔｅｃｈ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入し、１４日間順応させた。次いで、マウスを平均温度１９～２５℃、湿度４０～６０％、平均照度１５０～３００ルクスで、１２時間の明／１２時間の暗サイクルで１７日間飼育した。マウスに飼料および水を毎日自由に与えた。

７週齢のＣ５７ＢＬ／６マウスをケタミン塩酸塩（４０ｍｇ／ｋｇ）とキシラジン塩酸塩（１０ｍｇ／ｋｇ）の混合物で麻酔した後、マウスの眼のブルッフ膜にダイオードグリーンレーザー（５３２ｎｍ、１５０ｍＷ、０．１秒、５０μＭ）を照射して脈絡膜新生血管を誘発した。

６．２ 試験物質の投与
実験動物を下記のように群分けし、レーザーを照射し（０日目）、１日目から試験物質を投与した（図１）。

アフリベルセプトは、加齢黄斑変性を治療するための薬剤としての使用について米国食品医薬品局（ＦＤＡ）によって承認された製品である。陰性対照群およびＣＮＶ誘発群（試験群ＩＩ）には、下で説明するようにプラセボとしてＰＢＳを投与した。ＧＦ－１０１は、バチルス・アミロリケファシエンスＧＦ４２３株に由来するＳＯＤである。ＧＦ－２０３は、バチルス・アミロリケファシエンスＧＦ４２４株から調製された胞子である。

－ 試験群Ｉ（ＮＣ）：ナイーブ対照群
－ 試験群ＩＩ：ＣＮＶ誘発後にＰＢＳを投与した群。１００μＬのＰＢＳを１日目から１２日目まで経口投与した。
－ 試験群ＩＩＩ（ＰＣ）：アフリベルセプトを投与した群。２０μｇのアフリベルセプトを両眼に硝子体内注射した。
－ 試験群ＩＶ：ＣＮＶ誘発後にＧＦ－２０３を投与した群。１００μＬのＰＢＳに溶解したＧＦ２０３（１０^７ｃｆｕ）を、ｌ日目から１２日目まで経口投与した。
－ 試験群Ｖ：ＣＮＶ誘発後にＧＦ－１０１を投与した群。１００μＬのＰＢＳに溶解したＧＦ１０１（１０Ｕ）を、１日目から１２日目まで経口投与した。
－ 試験群ＶＩ：ＣＮＶ誘発後にＧＦ－１０１を投与した群。１００μＬのＰＢＳに溶解したＧＦ１０１（２０Ｕ）を、１日目から１２日目まで経口投与した。
－ 試験群ＶＩＩ：ＣＮＶ誘発後にＧＦ－１０１（１０Ｕ）＋ＧＦ２０３を投与した群。１００μＬのＰＢＳに溶解したＧＦ２０３（１０^７ｃｆｕ）および１００μＬのＰＢＳに溶解したＧＦ１０１（１０Ｕ）を、１日目から１２日目まで経口投与した。
－ ＧＦ－２０３：１ｍＬのアリコートを試験施設の試験物質冷凍庫（－２０℃）に保存し、投与直前に１日１回取り出し、１００μｌを各動物に投与した。
－ ＧＦ－１０１（２０Ｕ）：ＧＦ－１０１のアリコートを試験施設の試験物質冷凍庫（４℃）に保存し、投与直前に１日１回取り出した。２６．６ｍｇのＧＦ－１０１を２ｍＬのＰＢＳと混合することによって２００Ｕ／ｍＬの濃度を有する溶液を調製し、１００μＬの溶液を各動物に投与した。
－ ＧＦ－１０１（１０Ｕ）：ＧＦ－１０１（２００Ｕ／ｍＬ）を２倍希釈して、１００Ｕ／ｍＬの濃度を有する溶液を調製し、１００μＬを各動物に投与した。
－ ＧＦ－２０３＋ＧＦ－１０１（１０Ｕ）：１ｍＬのＧＦ－２０３調製物を１ｍＬのＧＦ－１０１（１００Ｕ／ｍＬ）と混合し、２００μＬの混合物を各動物に投与した。

６．３．動物試験
フルオレセイン蛍光眼底造影画像（ＦＦＡ）
脈絡膜新生血管からのフルオレセイン漏出を、フルオレセイン蛍光眼底造影（Fundus Fluorescein Angiography）（ＦＦＡ）を使用して測定した。蛍光眼底造影は、ｍｉｃｒｏｎ ＩＶイメージングシステムを用いて行った。各試験群のマウスに麻酔下で２％フルオレセインを腹腔内注射し、３～５分間待った後、瞳孔を拡大させ、フルオレセイン蛍光眼底造影（ＦＦＡ）撮影を行い、バックグラウンドを補正し、ＣＴＦ値を算出した。図２に示すように、レーザー照射の１２日後に脈絡膜新生血管（ＣＮＶ）病変が形成されたことが観察された。

本発明の医薬組成物の投与後、蛍光眼底造影により測定したマウスの眼のＣＮＶの領域は、治療開始前のＣＮＶ領域と比較して減少した。減少した網膜厚さは、減少した中心網膜サブフィールド厚さ（ＣＳＴ）、減少した中心点厚さ（enter point thickness）（ＣＰＴ）、または減少した中心窩厚さ（ＣＦＴ）である。

ＰＢＳ投与群（試験群ＩＩ）（１，２７９，５８７±１，０９４，８２７）と比較して、陽性対照アフリベルセプト（ＡＦ）を眼内投与した群（試験群ＩＩＩ）のＣＴＦ値は６７３，５９５±４８６，１４７であり、ＣＮＶ面積は、ＰＢＳ投与群と比較して、５２．６％減少した。ＧＦ－２０３投与群（試験群ＩＶ）（７９９，８４９±６３５，２９９）、ＧＦ－１０１（１０Ｕ）投与群（試験群Ｖ）（１，１２４，６３５±１，２４９，２６７）およびＧＦ－１０１（２０Ｕ）投与群（試験群ＶＩ）（６４５，０９９±５５７，００５）、ならびにＧＦ－１０１（１０Ｕ）＋ＧＦ－２０３投与群（試験群ＶＩＩ）（７８０，５７７±４７１，４３３）は、それぞれ、３７．５％、１２．１％、４９．６％および３９．０％減少したＣＴＦ値を示した。さらに、ＧＦ－１０１（２０Ｕ）を投与した試験群ＶＩおよびＧＦ－１０１（１０Ｕ）＋ＧＦ－２０３を投与した試験群ＶＩＩのＣＮＶ病変は、対照群であるＰＢＳ投与群のＣＮＶ病変と比較して有意に減少したことが観察された（図２を参照のこと）。

光干渉断層撮影（ＯＣＴ）
図１に示すように、レーザー照射後１２日目にフルオレセイン蛍光眼底造影撮影を行い、同時に光干渉断層撮影（ＯＣＴ）を行い、マウス網膜から眼の詳細な切片および３Ｄ画像を得た。フルオレセイン蛍光眼底造影画像でのＣＮＶ病変の中心にＯＣＴビームを通し、各病変部位の断層撮影を行い、画像Ｊプログラムを用いてＣＮＶ病変を定量化した。網膜の断層撮影は、ＯＣＴビームの方向を各レーザーバーン（laser burn）に対して水平および垂直に変えることによって行った。ＣＮＶ病変のサイズを測定し、結果を図３および図４に示す。

光干渉断層撮影（ＯＣＴ）によって測定したマウスの眼の網膜の厚さは、本発明の組成物の投与前に測定した眼の網膜の厚さと比較して減少した。具体的には、ＣＮＶ病変のサイズは、ＰＢＳ投与群（試験群ＩＩ）において４，５４８，１８２±１，９８３，０５５μｍ^３であり、試験群ＩＩＩ（アフリベルセプト投与群）において２，６７４，２７７±１，０６４，９７３μｍ^３であり、ＰＢＳ投与群（試験群ＩＩ）と比較して４１．２％減少した。ＧＦ－１０１（２０Ｕ）投与群（試験群ＶＩ）（３，４７１，４５４±１，５３４，３９５μｍ^３）は、２３．６％減少したＣＮＶ病変を示し、これは、ＣＮＶ病変がＧＦ－１０１（２０Ｕ）の投与によって有意に減少したことを示す。

ＧＦ－２０３投与群（試験群ＩＶ）（４，０８７，９９１±１，９３３，５２２μｍ^３）、ＧＦ－１０１（１０Ｕ）投与群（試験群Ｖ）（３，７７７，３５５±２，３０２，８３４μｍ^３）、ＧＦ－１０１（２０Ｕ）投与群（試験群ＶＩ）（３，４７１，４５４±１，５３４，３９５μｍ^３）およびＧＦ－１０１（１０Ｕ）＋ＧＦ２０３投与群（試験群ＶＩＩ）は、それぞれ、１０．１％、１６．９％、２３．６％および３６．４％減少したＣＮＶ病変を示した。試験群のうち、群ＩＩＩ、ＶＩおよびＶＩＩは、統計的に有意なＣＮＶ病変の減少を示した。

網膜電図検査（ＥＲＧ）
網膜機能を評価するために、マウスを２４時間暗順応させ、レーザー照射後１３日目に暗所で網膜電図検査を行った。網膜電図検査は、眼が特定の光源によって刺激されるときに網膜内の光受容体細胞によって生成される電気的活動を測定する。これらの測定値は、眼の前面（例えば、角膜）および眼の近くの皮膚に配置された電極を通して記録され、それによって網膜電図（ＥＲＧ）と呼ばれるグラフを作成する。

網膜電図検査では、ＣＮＶマウスの両眼を広げて麻酔した後、皮膚、尾、角膜にそれぞれ電極を接触させて網膜電図検査を行った。網膜を０．８ｃｄ・ｓｅｃ／ｍ^２のフラッシュ強度の単一白色光で刺激し、応答値を得た。振幅はａ波の谷からｂ波の頂点まで測定し、測定結果を図５および図６に示す。振幅を網膜機能の指標として評価した。

図５を参照すると、暗順応ｂ波の振幅は、試験群ＩＩ（ＰＢＳ投与群）において２６３．６４±５９．８８μＶであり、試験群Ｉ（正常群）（４２２．２７±２７．３４μＶ）と比較して１５３．１３μＶ減少した。試験群ＩＩＩのｂ波振幅は４０３．９７±５３．７９μＶであり、アフリベルセプトの投与によってこの群の応答性が増大したことを示した。しかしながら、ＧＦ－２０３投与群（試験群ＩＶ）（２５５．２５±７５．６５μＶ）およびＧＦ－１０１（１０Ｕ）投与群（試験群Ｖ）（２８８．２３３±３７．４１μＶ）では、薬物投与による網膜機能の変化は観察できなかった。ＧＦ－１０１（２０Ｕ）を投与した群のｂ波振幅は３１０．８０±５３．４２μＶであり、この群は光に対する応答性が増大したが、統計的有意性は見られなかったことを示す。ＧＦ－１０１（１０Ｕ）およびＧＦ－２０３の組み合わせを投与した群（試験群ＶＩＩ）のｂ波振幅は３５１．６２±４１．５９μＶであり、陰性対照群と比較して有意に増大した。

統計分析
バチルス・アミロリケファシエンスＧＦ４２３株由来のＳＯＤまたはその１００ｋＤ断片の異なる用量における、ＣＮＶを有するレーザースポットの割合を、カイ二乗検定によって対で比較した。結果をバチルス・アミロリケファシエンスＧＦ４２３株に由来するＳＯＤの用量に対してプロットして、最良適合曲線を導出し、これを使用して、ＣＮＶを有するレーザースポットの割合を５０％減少させるＳＯＤの用量（ＥＤ_５０）を計算した。ｐ＜０．０５の信頼水準を統計的に有意とみなした。

６．４．組織学的分析
レーザーによる組織の変化を観察するために、マウスの眼を摘出し、１０％ホルマリンで１０分間固定した後、使い捨てのベースモールドに入れ、ＯＣＴ化合物に包埋し、液体窒素中で急速凍結した。

ヘマトキシリン＆エオシン（Ｈ＆Ｅ）染色
上記の方法によって処理された組織試料を切片化し、スライドに取り付け、その後に約１時間乾燥させ、続いてＣＮＶモデルを構築した。次に、薬物処置によるマウス網膜の変化を観察するために、ヘマトキシリン＆エオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色し、洗浄した。試料をＨＣｌ溶液で処理し、エオシン溶液で３０秒～１分間染色し、次いで再び洗浄した。試料を８０％、８５％、９０％および１００％エタノールで各処理ごとに３分間処理し、次いで各反応について５分間カルボキシレン（carboxylene）およびキシレンと反応させた。次に、包埋組織をバーチャル顕微鏡（ＮａｎｏＺｏｏｍｅｒ ２．０ ＲＳ）で画像化し、その画像を図７に示す。

図７は、正常群と比較したレーザー照射ＣＮＶマウスの眼における脈絡膜新生血管（Ｈ＆Ｅ染色後）を示す。ＣＮＶ誘発後にＰＢＳを投与した群では、レーザー照射部位の組織崩壊とともにＣＮＶの発生が観察された。ＧＦ－２０３投与群（試験群ＩＶ）およびＧＦ－１０１（１０Ｕ）投与群（試験群Ｖ）では、ＣＮＶ病変は有意には減少しなかった。しかしながら、ＧＦ－１０１（２０Ｕ）投与群（試験群ＶＩ）およびＧＦ－１０１（１０Ｕ）＋ＧＦ－２０３投与群（試験群ＶＩＩ）では、ＣＮＶ病変が減少する。

ＴＵＮＥＬアッセイ
ＣＮＶモデルでの薬物処置後のマウスの網膜における死細胞を観察するためにＴＵＮＥＬアッセイを実施した。蛍光検出ＴＵＮＥＬアッセイキットを用いて染色を行った。組織切片をキシレンで脱パラフィンした後、１００％エタノールで２回、９５％エタノールで１回、８５％エタノールで１回、順番に水和させ、次いでＰＢＳで１回洗浄した。組織表面を清潔に拭き、直ちにスライドをプロテイナーゼＫ（２０μｇ／ｍＬ）と共に室温で１５分間インキュベートし、次いでＰＢＳで２回洗浄した。組織表面をきれいに拭き、直ちにスライドを７５μｌの平衡化緩衝液とともに室温で１０秒間インキュベートした。組織表面をきれいに拭き、直ちにスライドを５５μｌの作業強度ＴｄＴ酵素（working strength TdT enzyme）と共に３７℃で１時間インキュベートした。スライドを作業強度停止／洗浄緩衝液と共に１５秒間振盪することによって洗浄し、次いで室温で１０分間インキュベートし、続いてＰＢＳで３回洗浄した。組織表面をきれいに拭き、直ちに６５μｌの抗ジゴキシゲニンコンジュゲートとインキュベートし、遮光条件下、室温で３０分間放置した。スライドをＰＢＳで４回洗浄し、ＤＡＰＩで染色した後、蛍光顕微鏡（ＬＥＩＣＡ ＤＭ ２５００）で観察した。

図８は、ＣＮＶモデルにおける薬物処置後のマウス網膜における死細胞を観察するために実施されたＴＵＮＥＬアッセイを示す。細胞死を示すＴＵＮＥＬ応答が、ＣＮＶ部位および外核層（ＯＮＬ）において集中的に観察された。ＣＮＶ誘発後にＰＢＳで処置した群（試験群ＩＩ）において最も高い死細胞数が見られ、ＧＦ－１０１（２０Ｕ）投与群（試験群ＶＩ）およびＧＦ－１０１とＧＦ－２０３の組合わせを投与した群（試験群ＶＩＩ）における死細胞数は、陽性対照であるアフリベルセプト投与群（試験群ＩＩＩ）の死細胞数と同程度に減少した（図８参照）。

免疫蛍光染色
切片を０．５％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００溶液で透過処理し、ＰＢＳで３回洗浄した（各洗浄について５分）。切片をブロッキング緩衝液（３％ＢＳＡおよび０．５％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００を含む、二次抗体の種（ヤギまたはロバ）の５％正常血清）と共に１時間インキュベートし、続いて３％ＢＳＡおよび０．５％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００を含むＰＢＳ中で抗ＶＥＧＦおよび抗ＳＴＡＴ３一次抗体と共に４℃で一晩インキュベートした。

切片をＰＢＳで５分間、３回洗浄し、１：１０００希釈の二次抗体と共に室温で１時間インキュベートした。次いで、それらをＰＢＳで３回洗浄した（各洗浄について５分）。ＤＡＰＩで染色した後、それらをマウントし、蛍光顕微鏡（ＬＥＩＣＡ ＤＭ ２５００）下で観察した。

図９および図１０は、ＣＮＶモデルにおける薬物処置後のマウス網膜におけるＶＥＧＦおよびＳＴＡＴ３の発現を観察するためのＩＦ染色を示す。ＰＢＳ群において、ＶＥＧＦは、外核層およびＣＮＶ病変において高発現された。しかしながら、ＶＥＧＦ発現レベルは、アフリベルセプト（群ＩＩＩ）、ＧＦ－１０１（２０Ｕ）（群ＶＩ）、およびＧＦ－１０１（１０Ｕ）＋ＧＦ２０３（群ＶＩＩ）によって減少した（図９）。ＣＮＶ病変におけるＳＴＡＴ３レベルも、アフリベルセプト（群ＩＩ）、ＧＦ－１０１（２０Ｕ）（群ＶＩ）、およびＧＦ－１０１（１０Ｕ）＋ＧＦ２０３（群ＶＩＩ）の群において減少した（図１０）。

ウェスタンハイブリダイゼーション
ウェスタンブロットアッセイを実施して、処置に応答した核因子赤血球系２関連因子２（Nuclear factor erythroid 2-related factor 2）（ＮＲＦ２）および低酸素誘導因子－１α（ＨＩＦ－１α）の発現レベルを測定した。網膜をホモジナイズし、次いで全タンパク質をＰｒｏ－ＰＲＥＰ（ｉＮｔＲＯＮ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、韓国）で抽出した。タンパク質濃度は、ＢＣＡタンパク質アッセイキット（Ｔｈｅｒｍｏ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、米国）によって測定した。２０μｇのタンパク質をウェスタンハイブリダイゼーションに使用した。シグナルをゲルドキュメンテーションシステム（Ｆｕｓｉｏｎ ＦＸ ｓｐｅｃｔｒａ）によって可視化した。Ｎｒｆ２およびＨＩＦ－１αのウエスタンシグナルをβ－アクチンのシグナルで正規化した。統計分析をペアワイズｔ検定（pairwise t-test）によって行い、ｐ＜０．０５の信頼水準を統計的に有意とみなした。

図１１は、ＣＮＶモデルにおける薬物処置後のマウス網膜におけるＨＩＦ－１αおよびＮＲＦ２の発現を観察するためのウェスタンハイブリダイゼーションの結果を示す。ＰＢＳ群において、ＨＩＦ－１αのレベルは、ナイーブ群と比較して網膜において増加し、ＮＲＦ２のレベルは減少した。ＮＲＦ２のレベルは、ＧＦ１０１を投与した群（試験群ＶおよびＶＩ）ならびにＧＦ－１０１とＧＦ－２０３の組み合わせを投与した群（試験群ＶＩＩ）において増加した。ＨＩＦ－１αのレベルは、全ての試験群において減少した。ＨＩＦ－１αレベルの最も顕著な減少は、ＧＦ－１０１（１０Ｕ）＋ＧＦ２０３（群ＶＩＩ）の群において観察された。

６．５．結果
血管をフルオレセインで染色し、フルオレセイン蛍光眼底造影を行った。その結果、ＧＦ－１０１（２０Ｕ）投与群（試験群ＶＩ）およびＧＦ－１０１とＧＦ－２０３の組み合わせを投与した群（試験群ＶＩＩ）は有意に低いＣＴＦ値を示した（図２）。

また、ＣＮＶ病変をＯＣＴで測定した。ＯＣＴによるＣＮＶ病変の測定は、フルオレセイン蛍光眼底造影法よりも正確であると考えられる。ＯＣＴの結果はフルオレセイン蛍光眼底造影の結果の傾向を示したが、フルオレセイン蛍光眼底造影において比較的高いＣＴＦ値を示したＧＦ－１０１とＧＦ－２０３の組み合わせを投与した群（図４）において、その効力が最も高いことが示された。

網膜電図検査では、ＣＮＶ誘発群（試験群ＩＩ）での振幅が正常群（試験群Ｉ）に比べて約１５０μＶ減少しており、試験群ＩＩの網膜機能が低下していることが示された。ＧＦ－１０１とＧＦ－２０３の組み合わせを投与した群のｂ波振幅は、光に対する応答性の統計的に有意な増大を示し（図６）、これは、群ＶＩＩの網膜機能が回復したことを示す。

組織学的分析のために、Ｈ＆Ｅ染色によってＣＮＶ病変を分析し、ＴＵＮＥＬ染色を用いてＣＮＶ部位における光受容体細胞の死を分析した。ＣＮＶサイズの増大は周囲組織に影響を及ぼし、この過程で損傷した細胞が外核層（ＯＮＬ）で観察された。しかしながら、ＧＦ－１０１（２０Ｕ）を投与した群（試験群ＶＩ）およびＧＦ－１０１とＧＦ－２０３の組み合わせを投与した群（試験群ＶＩＩ）では、死細胞がほとんど観察されなかった（図８）。代表的な血管新生因子であるＶＥＧＦは、脈絡膜新生血管の形成に対して直接的な効果を有することが知られている。レーザー照射により形成されたＣＮＶ領域において強いＶＥＧＦ発現が認められ、この発現は、ＧＦ－１０１（２０Ｕ）投与群（試験群ＶＩ）およびＧＦ－１０１とＧＦ－２０３の組み合わせを投与した群（試験群ＶＩＩ）で最も効果的に抑制された。

要約すると、ＧＦ－１０１とＧＦ－２０３の組み合わせは、ＣＮＶ病変およびＶＥＧＦ発現の低減によって実証されるように、レーザー照射によって誘発される脈絡膜新生血管を効果的に抑制することによって網膜機能を回復させることが本明細書において実証される。ＧＦ－１０１とＧＦ－２０３の組み合わせは、ＯＣＴでの観察によって判断されるＣＮＶ病変の減少、ＥＲＧによって判断される網膜機能の回復、およびウェスタンハイブリダイゼーションによって判断されるＨＩＦ－１α発現の阻害において、ＧＦ－１０１よりも有効であった。

本開示の組成物は、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂ．ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＧＦ４２３株由来のＳＯＤを含み、優れた抗酸化活性、高度に安定な酵素活性、および優れたｉｎ ｖｉｖｏ安定性を有し、したがって、黄斑変性、特に加齢黄斑変性を予防または治療するための医薬品、食品、医療食品などの材料として有利に使用することができる。

本明細書に提供される説明は、好ましい実施形態の例示であり、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。本発明の趣旨およびその範囲から逸脱することなくその形態および詳細を様々に変更し得ることは当業者であれば容易に理解される。

［アクセッション番号］
寄託機関：ｔｈｅ Ｋｏｒｅａ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
ＫＣＴＣ １３２２２ＢＰ
寄託日：２０１７年３月６日
ＫＣＴＣ １３２２７ＢＰ
寄託日：２０１７年３月２３日

^＊表３に含まれるのは、ＲＮＡ核酸分子（例えば、ウリジンで置き換えられたチミジン）、ならびに表３に列挙される任意の配列番号の核酸配列またはその部分と、それらの全長にわたり、少なくとも５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、またはそれを超える同一性を有する核酸配列を含むＤＮＡまたはＲＮＡ核酸配列である。このような核酸分子は、本明細書にさらに記載される完全長核酸の機能を有することができる。

Claims (75)

1. 黄斑変性を治療または予防する方法であって、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）酵素およびプロバイオティクスバチルス属細菌（例えば、バチルス・コアグランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、バチルス・インディカス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｉｎｄｉｃｕｓ）、バチルス・クラウジイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ）、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、およびバチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ））の胞子を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法。
2. 前記ＳＯＤ酵素が、単離された酵素および／または組換え酵素である、請求項１に記載の方法。
3. 前記ＳＯＤ酵素がマンガンに結合する、請求項１または２に記載の方法。
4. 前記ＳＯＤ酵素が、
   （ａ）配列番号１に記載の配列と少なくともまたは約８５％の同一性を有するアミノ酸配列；
   （ｂ）アミノ酸残基Ａｓｎ７４および／またはＡｓｎ１３７が欠失または置換されている、配列番号１に記載のアミノ酸配列；
   （ｃ）アミノ酸残基Ａｓｎ７４および／またはＡｓｎ１３７がＡｓｐ７４および／またはＡｓｐ１３７で置換されている、配列番号１に記載のアミノ酸配列、または
   （ｄ）配列番号１に記載のアミノ酸配列
   を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
5. 前記ＳＯＤ酵素がシェラックでコーティングされている、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
6. ＳＯＤ酵素および／またはバチルス属細菌胞子が、経口投与、静脈内投与、眼内投与、または筋肉内投与される、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
7. ＳＯＤ酵素および／またはバチルス属細菌胞子が経口投与される、請求項６に記載の方法。
8. 前記ＳＯＤ酵素が、微生物、好ましくは細菌、好ましくは食品および薬物として使用するために一般に安全と認められる（ＧＲＡＳ）細菌、より好ましくはバチルス属細菌に由来する、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。
9. 前記ＳＯＤ酵素が、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＧＦ４２３株（ＫＣＴＣ １３２２２ＢＰ）またはＧＦ４２４株（ＫＣＴＣ １３２２７ＢＰ）に由来する、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
10. プロバイオティクスバチルス属細菌胞子が、食品および承認された薬物として使用するために一般に安全と認められる（ＧＲＡＳ）ものであり、好ましくはバチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＧＦ４２３株またはＧＦ４２４変異株の胞子である、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。
11. （ｉ）脈絡膜新生血管（ＣＮＶ）を減少させる；
    （ｉｉ）網膜における細胞死を減少させる；
    （ｉｉｉ）網膜における炎症を軽減する；
    （ｉｖ）網膜における低酸素症を軽減する；
    （ｖ）網膜における血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）の発現を低減させる；および／または
    （ｖｉ）網膜機能を増大させる
    請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。
12. 黄斑変性は加齢黄斑変性（ＡＭＤ）であり、好ましくは、ＡＭＤはウェット型ＡＭＤまたは新生血管を伴うＡＭＤである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。
13. 前記対象は哺乳動物であり、好ましくは、哺乳動物は、ヒト、イヌ、ネコ、マウス、またはラットである、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
14. 前記対象はヒトである、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。
15. ＳＯＤ酵素およびプロバイオティクスバチルス属細菌胞子が対象に逐次投与される、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。
16. ＳＯＤ酵素およびプロバイオティクスバチルス属細菌胞子が対象に同時に投与される、請求項１～１４に記載の方法。
17. ＳＯＤ酵素およびプロバイオティクスバチルス属細菌胞子を含む組成物が対象に投与される、請求項１６に記載の方法。
18. ＳＯＤ酵素および／またはバチルス属細菌胞子が医薬組成物または栄養補助組成物中にある、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法。
19. 黄斑変性を治療する少なくとも１つの追加の薬剤を対象に投与することをさらに含む、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
20. 前記少なくとも１つの追加の薬剤がラニビズマブまたはアフリベルセプトである、請求項１９に記載の方法。
21. 脈絡膜新生血管（ＣＮＶ）を減少させるまたは抑制する方法であって、網膜を、ＳＯＤ酵素およびプロバイオティクスバチルス属細菌（例えば、バチルス・コアグランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、バチルス・インディカス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｉｎｄｉｃｕｓ）、バチルス・クラウジイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ）、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、およびバチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ））の胞子と接触させることを含む、方法。
22. 前記ＳＯＤ酵素が、単離された酵素および／または組換え酵素である、請求項２１に記載の方法。
23. 前記ＳＯＤ酵素がマンガンに結合する、請求項２１または２２に記載の方法。
24. 前記ＳＯＤ酵素が、
    （ａ）配列番号１に記載の配列と少なくともまたは約８５％の同一性を有するアミノ酸配列；
    （ｂ）アミノ酸残基Ａｓｎ７４および／またはＡｓｎ１３７が欠失または置換されている、配列番号１に記載のアミノ酸配列；
    （ｃ）アミノ酸残基Ａｓｎ７４および／またはＡｓｎ１３７がＡｓｐ７４および／またはＡｓｐ１３７で置換されている、配列番号１に記載のアミノ酸配列、または
    （ｄ）配列番号１に記載のアミノ酸配列
    を含む、請求項２１～２３のいずれか一項に記載の方法。
25. 前記ＳＯＤ酵素がシェラックでコーティングされている、請求項２１～２４のいずれか一項に記載の方法。
26. 前記ＳＯＤ酵素が、微生物、好ましくは細菌、好ましくは食品および薬物として使用するために一般に安全と認められる（ＧＲＡＳ）細菌、より好ましくはバチルス属細菌に由来する、請求項２１～２５のいずれか一項に記載の方法。
27. 前記ＳＯＤ酵素が、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＧＦ４２３株（ＫＣＴＣ １３２２２ＢＰ）またはＧＦ４２４株（ＫＣＴＣ １３２２７ＢＰ）に由来する、請求項２１～２６のいずれか一項に記載の方法。
28. プロバイオティクスバチルス属細菌胞子が、食品および承認された薬物として使用するために一般に安全と認められる（ＧＲＡＳ）ものであり、好ましくはバチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＧＦ４２３株またはＧＦ４２４変異株の胞子である、請求項２１～２７のいずれか一項に記載の方法。
29. （ｉ）網膜における細胞死を減少させる；
    （ｉｉ）網膜における炎症を軽減する；
    （ｉｉｉ）網膜における低酸素症を軽減する；
    （ｉｖ）網膜における血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）の発現を低減させる；および／または
    （ｖ）網膜機能を増大させる
    請求項２１～２８のいずれか一項に記載の方法。
30. 網膜は、黄斑変性に罹患している対象のものである、請求項２１～２９のいずれか一項に記載の方法。
31. 黄斑変性は加齢黄斑変性（ＡＭＤ）であり、好ましくは、ＡＭＤはウェット型ＡＭＤまたは新生血管を伴うＡＭＤである、請求項３０に記載の方法。
32. 網膜は哺乳動物のものであり、好ましくは、哺乳動物は、ヒト、イヌ、ネコ、マウス、またはラットである、請求項２１～３１のいずれか一項に記載の方法。
33. 哺乳動物はヒトである、請求項３２に記載の方法。
34. ＳＯＤ酵素およびプロバイオティクスバチルス属細菌胞子を逐次的に網膜に接触させる、請求項２１～３３のいずれか一項に記載の方法。
35. ＳＯＤ酵素およびプロバイオティクスバチルス属細菌胞子を同時に網膜に接触させる、請求項２１～３３のいずれか一項に記載の方法。
36. 網膜をＳＯＤ酵素およびプロバイオティクスバチルス属細菌胞子を含む組成物と接触させる、請求項３５に記載の方法。
37. ＳＯＤ酵素および／またはプロバイオティクスバチルス属細菌胞子が医薬組成物中にある、請求項２１～３６のいずれか一項のいずれか一項に記載の方法。
38. 網膜を、ＣＮＶを減少させるまたは抑制する少なくとも１つの追加の薬剤と接触させることをさらに含む、請求項２１～３７に記載の方法。
39. 前記少なくとも１つの追加の薬剤がラニビズマブまたはアフリベルセプトである、請求項３８に記載の方法。
40. スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）酵素およびプロバイオティクスバチルス属細菌（例えば、バチルス・コアグランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、バチルス・インディカス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｉｎｄｉｃｕｓ）、バチルス・クラウジイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ）、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、およびバチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ））の胞子を含む医薬組成物。
41. 前記ＳＯＤ酵素が、単離または精製された酵素である、請求項４０に記載の組成物。
42. 前記ＳＯＤ酵素が組換え酵素である、請求項４０または４１に記載の組成物。
43. 前記ＳＯＤ酵素がマンガンに結合する、請求項４０～４２のいずれか一項に記載の組成物。
44. 前記ＳＯＤ酵素が、
    （ａ）配列番号１に記載の配列と少なくともまたは約８５％の同一性を有するアミノ酸配列；
    （ｂ）アミノ酸残基Ａｓｎ７４および／またはＡｓｎ１３７が欠失または置換されている、配列番号１に記載のアミノ酸配列；
    （ｃ）アミノ酸残基Ａｓｎ７４および／またはＡｓｎ１３７がＡｓｐ７４および／またはＡｓｐ１３７で置換されている、配列番号１に記載のアミノ酸配列、または
    （ｄ）配列番号１に記載のアミノ酸配列
    を含む、請求項４０～４３のいずれか一項に記載の組成物。
45. 前記ＳＯＤ酵素がシェラックでコーティングされている、請求項４０～４４のいずれか一項に記載の組成物。
46. 経口組成物である、請求項４０～４５のいずれか一項に記載の組成物。
47. 前記ＳＯＤ酵素が、微生物、好ましくは細菌、好ましくは食品および薬物として使用するために一般に安全と認められる（ＧＲＡＳ）細菌、より好ましくはバチルス属細菌に由来する、請求項４０～４６のいずれか一項に記載の組成物。
48. 前記ＳＯＤ酵素が、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＧＦ４２３株（ＫＣＴＣ １３２２２ＢＰ）またはＧＦ４２４株（ＫＣＴＣ １３２２７ＢＰ）に由来する、請求項４０～４７のいずれか一項に記載の組成物。
49. プロバイオティクスバチルス属細菌胞子が、食品および承認された薬物として使用するために一般に安全と認められる（ＧＲＡＳ）ものであり、好ましくはバチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＧＦ４２３株またはＧＦ４２４変異株の胞子である、請求項４０～４８のいずれか一項に記載の組成物。
50. ＣＮＶを減少させるまたは抑制する少なくとも１つの追加の薬剤をさらに含む、請求項４０～４９のいずれか一項に記載の組成物。
51. 前記少なくとも１つの追加の薬剤がラニビズマブまたはアフリベルセプトである、請求項５０に記載の組成物。
52. （ｉ）脈絡膜新生血管（ＣＮＶ）を減少させる；
    （ｉｉ）網膜における細胞死を減少させる；
    （ｉｉｉ）網膜における炎症を軽減する；
    （ｉｖ）網膜における低酸素症を軽減する；
    （ｖ）網膜における血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）の発現を低減させる；および／または
    （ｖｉ）網膜機能を増大させる
    請求項４０～５１のいずれか一項に記載の組成物。
53. スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）酵素およびプロバイオティクスバチルス属細菌（例えば、バチルス・コアグランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、バチルス・インディカス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｉｎｄｉｃｕｓ）、バチルス・クラウジイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ）、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、およびバチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ））の胞子を含む、医療食品または栄養補助食品。
54. 前記ＳＯＤ酵素が、単離または精製された酵素である、請求項５３に記載の医療食品または栄養補助食品。
55. 前記ＳＯＤ酵素が組換え酵素である、請求項５３または５４に記載の医療食品または栄養補助食品。
56. 前記ＳＯＤ酵素がマンガンに結合する、請求項５３～５５のいずれか一項に記載の医療食品または栄養補助食品。
57. 前記ＳＯＤ酵素が
    （ａ）配列番号１に記載の配列と少なくともまたは約８５％の同一性を有するアミノ酸配列；
    （ｂ）アミノ酸残基Ａｓｎ７４および／またはＡｓｎ１３７が欠失または置換されている、配列番号１に記載のアミノ酸配列；
    （ｃ）アミノ酸残基Ａｓｎ７４および／またはＡｓｎ１３７がＡｓｐ７４および／またはＡｓｐ１３７で置換されている、配列番号１に記載のアミノ酸配列、または
    （ｄ）配列番号１に記載のアミノ酸配列
    を含む、請求項５３～５６のいずれか一項に記載の医療食品または栄養補助食品。
58. 前記ＳＯＤ酵素がシェラックでコーティングされている、請求項５３～５７のいずれか一項に記載の医療食品または栄養補助食品。
59. 前記ＳＯＤ酵素が、微生物、好ましくは細菌、より好ましくは食品として使用するために一般に安全と認められる（ＧＲＡＳ）細菌、より好ましくはバチルス属細菌細菌である、請求項５３～５８のいずれか一項に記載の医療食品または栄養補助食品。
60. 前記ＳＯＤ酵素が、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＧＦ４２３株（ＫＣＴＣ １３２２２ＢＰ）またはＧＦ４２４株（ＫＣＴＣ １３２２７ＢＰ）に由来する、請求項５３～５９のいずれか一項に記載の医療食品または栄養補助食品。
61. プロバイオティクスバチルス属細菌胞子が、食品および承認された薬物として使用するために一般に安全と認められる（ＧＲＡＳ）ものであり、好ましくはバチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＧＦ４２３株またはＧＦ４２４変異株の胞子である、請求項５３～６０のいずれか一項に記載の医療食品または栄養補助食品。
62. ＣＮＶを減少させるまたは抑制する少なくとも１つの追加の薬剤をさらに含む、請求項５３～６１のいずれか一項に記載の医療食品または栄養補助食品。
63. 前記少なくとも１つの追加の薬剤がラニビズマブまたはアフリベルセプトである、請求項６２に記載の医療食品または栄養補助食品。
64. （ｉ）脈絡膜新生血管（ＣＮＶ）を減少させる；
    （ｉｉ）網膜における細胞死を減少させる；
    （ｉｉｉ）網膜における炎症を軽減する；
    （ｉｖ）網膜における低酸素症を軽減する；
    （ｖ）網膜における血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）の発現を低減させる；および／または
    （ｖｉ）網膜機能を増大させる
    請求項５３～６３のいずれか一項に記載の医療食品または栄養補助食品。
65. プロバイオティクスバチルス属細菌（例えば、バチルス・コアグランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、バチルス・インディカス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｉｎｄｉｃｕｓ）、バチルス・クラウジイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ）、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、およびバチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ））の胞子を含む、医薬組成物。
66. プロバイオティクスバチルス属細菌胞子が、食品および承認された薬物として使用するために一般に安全と認められる（ＧＲＡＳ）ものである、請求項６５に記載の医薬組成物。
67. プロバイオティクスバチルス属細菌胞子が、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＧＦ４２３株またはＧＦ４２４変異株の胞子である、請求項６５または６６に記載の医薬組成物。
68. ＣＮＶを減少させるまたは抑制する少なくとも１つの追加の薬剤をさらに含む、請求項６５～６７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
69. 前記少なくとも１つの追加の薬剤がラニビズマブまたはアフリベルセプトである、請求項６８に記載の医薬組成物。
70. プロバイオティクスバチルス属細菌（例えば、バチルス・コアグランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、バチルス・インディカス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｉｎｄｉｃｕｓ）、バチルス・クラウジイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｌａｕｓｉｉ）、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、およびバチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ））の胞子を含む、医療食品または栄養補助食品。
71. プロバイオティクスバチルス属細菌胞子が、食品および承認された薬物として使用するために一般に安全と認められる（ＧＲＡＳ）ものである、請求項７０に記載の医療食品または栄養補助食品。
72. プロバイオティクスバチルス属細菌胞子が、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＧＦ４２３株またはＧＦ４２４変異株の胞子である、請求項７０または７１に記載の医療食品または栄養補助食品。
73. ＣＮＶを減少させるまたは抑制する少なくとも１つの追加の薬剤をさらに含む、請求項７０～７２のいずれか一項に記載の医療食品または栄養補助食品。
74. 前記少なくとも１つの追加の薬剤がラニビズマブまたはアフリベルセプトである、請求項７３に記載の医療食品または栄養補助食品。
75. 請求項４０～５２および６５～６９のいずれか一項に記載の医薬組成物、または請求項５３～６４および７０～７４のいずれか一項に記載の医療食品もしくは栄養補助食品を含む、キット。
    
    

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