JP2023528562A - 血液障害及び／又は関連疾患を治療する、又は予防するための１５－ｈｅｐｅを含む組成物 - Google Patents

血液障害及び／又は関連疾患を治療する、又は予防するための１５－ｈｅｐｅを含む組成物 Download PDF

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Abstract

本開示は、１５－ＨＥＰＥ又はその組成物の投与によって血液障害を治療する、又は予防する方法に関する。【選択図】なし

Description

本出願は、概して、１５－ＨＥＰＥを含む組成物、及びそれを使用する方法に関する。
配列表
本開示は、ＥＦＳウェブを介してＡＳＣＩＩ形式で提出された配列表を含み、その全体は参照により本明細書に組み込まれる。２０２０年４月１日に作成されたＡＳＣＩＩコピーは、１２４３１８－８０１４．ＵＳ００＿ＳＴ２５．ｔｘｔという名称の配列表であり、サイズは３キロバイトである。
血液障害としては、赤血球障害及び血栓形成傾向が挙げられる。赤血球障害は、赤血球（ＲＢＣ）及びその酸素運搬分子であるヘモグロビンの生成、寿命、及び形状に影響を及ぼす疾患の一分類である。これらの疾患は、肺から身体の他の部分への酸素の運搬を阻害する。血栓形成傾向は、静脈及び動脈内で血塊を発生させる対象のリスクを増加させる障害の一分類である。これらの凝血塊は血管から抜け出し、血流を介して臓器に移動し、それによって当該臓器への血流を阻害して虚血を生じさせ得る。これらの疾患は、脳卒中及び／又は肺塞栓症のリスクの増加の原因となる。
本出願は、１５－ヒドロキシエイコサペンタエン酸（１５－ＨＥＰＥ）を含む組成物、並びに様々な疾患及び障害の治療においてかかる組成物を使用する方法に関する。
いくつかの態様では、本開示は、血液障害の治療及び／又は予防を必要とする対象において血液障害を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。
いくつかの態様では、本開示は、血液障害の治療及び／又は予防を必要とする対象において血液障害を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含み、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂質の少なくとも約９０重量％に相当する。
更に別の態様では、本開示は、血液障害の治療及び／又は予防を必要とする対象において血液障害を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含み、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂質の少なくとも約９０％に相当し、対象は、（ａ）赤血球数の増加、（ｂ）赤血球分布幅の低下、及び／又は（ｃ）網状赤血球数の低下のうちの１つ以上を示す。
様々な実施形態では、血液障害は、遺伝性溶血性貧血、後天性溶血性貧血、ファンコニ貧血、鉄欠乏性貧血、葉酸欠乏症、Ｂ１２欠乏症、及び骨髄異形成症候群からなる群から選択される。
いくつかの態様では、本開示は、ヘモグロビン異常の治療及び／又は予防を必要とする対象においてヘモグロビン異常を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。
他の態様では、本開示は、赤血球障害の治療及び／又は予防を必要とする対象において赤血球障害を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。
別の態様では、本開示は、ヘモグロビン異常及び／又は赤血球障害の治療及び／又は予防を必要とする対象においてヘモグロビン異常及び／又は赤血球障害を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含み、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂質の少なくとも約９０重量％に相当する。
更に別の態様では、本開示は、ヘモグロビン異常及び／又は赤血球障害の治療及び／又は予防を必要とする対象においてヘモグロビン異常及び／又は赤血球障害を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含み、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂質の少なくとも約９０％に相当し、対象は、（ａ）赤血球数の増加、（ｂ）赤血球分布幅の低下、及び／又は（ｃ）網状赤血球数の低下のうちの１つ以上を示す。
様々な実施形態では、血液障害、ヘモグロビン異常及び／又は赤血球障害は、遺伝性溶血性貧血、後天性溶血性貧血、ファンコニ貧血、鉄欠乏性貧血、葉酸欠乏症、Ｂ１２欠乏症、及び骨髄異形成症候群からなる群から選択される。
更に別の態様では、本開示は、溶血性貧血の治療及び／又は予防を必要とする対象において溶血性貧血を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含み、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂質の少なくとも約９０重量％に相当する。
いくつかの実施形態では、溶血性貧血は、遺伝性溶血性貧血又は後天性溶血性貧血である。別の実施形態では、後天性溶血性貧血は、感染症に続発して、薬物治療から、血液悪性腫瘍から、自己免疫疾患から、脾機能亢進症から、機械弁の配置、輸血、又はそれらの組み合わせの後にもたらされる。更に別の実施形態では、鎌状赤血球症及び鎌状赤血球貧血は、鎌状赤血球クリーゼ、血管閉塞性クリーゼ、脾臓血球貯留、又はそれらの組み合わせに関連する。
いくつかの実施形態では、対象は、赤血球数の増加、赤血球分布幅の低下、及び網状赤血球数の低下を示す。いくつかの態様では、本開示は、血栓形成傾向障害の治療及び／又は予防を必要とする対象において血栓形成傾向障害を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。
他の態様では、本開示は、血栓形成傾向の治療及び／又は予防を必要とする対象において血栓形成傾向を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含み、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂質の少なくとも約９０重量％に相当する。
別の態様では、本開示は、血栓形成傾向の治療及び／又は予防を必要とする対象において血栓形成傾向を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含み、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂質の少なくとも約９０％に相当し、対象は、（ａ）プロトロンビン時間の延長、（ｂ）活性化部分トロンボプラスチン時間の延長、及び／又は（ｃ）フィブリノゲン濃度の低下のうちの１つ以上を示す。
更に別の態様では、本開示は、静脈血栓塞栓症の治療及び／又は予防を必要とする対象において静脈血栓塞栓症を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含み、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂質の少なくとも約９０重量％に相当する。
一態様では、本開示は、動脈血栓症の治療及び／又は予防を必要とする対象において動脈血栓症を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含み、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂質の少なくとも約９０重量％に相当する。
別の態様では、本開示は、塞栓症の予防を必要とする対象において塞栓症を予防する方法を提供し、方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含み、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂質の少なくとも約９０重量％に相当する。
いくつかの実施形態では、対象は、プロトロンビン時間の延長、活性化部分トロンボプラスチン時間の延長、及びフィブリノゲン濃度の低下を示す。
別の実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、遊離酸形態、エステル化形態、又は塩形態である。更に別の実施形態では、エステル化形態は、アルキルエステル形態又はトリグリセリド形態である。いくつかの実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、１５（Ｓ）－ＨＥＰＥ、１５（Ｒ）－ＨＥＰＥ、又はそれらの組み合わせを含む。
いくつかの実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、エチルエステル（１５－ＨＥＰＥ ＥＥ）の形態であるか、又は１５－ＨＥＰＥは、光学活性エステル（１５（Ｓ）－ＨＥＰＥ ＥＥ）の形態である。
いくつかの実施形態では、組成物は、約１０ｍｇ～約１０，０００ｍｇの１５－ＨＥＰＥを含む。別の実施形態では、組成物は、約１ｇ～約２ｇの１５－ＨＥＰＥを含む。別の実施形態では、組成物は、約２ｇ以上の１５－ＨＥＰＥを含む。更に別の実施形態では、組成物は、体重１ｋｇ当たり約５ｍｇ（ｍｇ／ｋｇ）、約５０ｍｇ／ｋｇ、約２５０ｍｇ／ｋｇ、又は約５００ｍｇ／ｋｇの１５－ＨＥＰＥを対象に提供するように製剤化される。様々な実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、組成物中に存在する全ての脂肪酸の少なくとも約９０重量％に相当する。
いくつかの実施形態では、１５－ＨＥＰＥは経口投与される。様々な実施形態では、組成物は１日当たり１～８個のカプセルで投与される。
実施例１に記載の研究及びその期間の概略図である。
実施例１に記載の研究による、動物の体重変化を示す。
実施例１に記載の研究による、動物の屠殺日の体重を示す。
実施例１に記載の研究による、屠殺日の動物の腎臓重量及び腎臓重量対体重比を示す。 実施例１に記載の研究による、屠殺日の動物の腎臓重量及び腎臓重量対体重比を示す。 実施例１に記載の研究による、屠殺日の動物の腎臓重量及び腎臓重量対体重比を示す。 実施例１に記載の研究による、屠殺日の動物の腎臓重量及び腎臓重量対体重比を示す。
実施例１に記載の研究による、動物の腎臓ヒドロキシプロリン含有量を示す。
実施例１に記載の研究による、動物のシリウスレッド染色を示す。 実施例１に記載の研究による、動物のシリウスレッド染色を示す。 実施例１に記載の研究による、動物のシリウスレッド染色を示す。 実施例１に記載の研究による、動物のシリウスレッド染色を示す。 実施例１に記載の研究による、動物のシリウスレッド染色を示す。 実施例１に記載の研究による、動物のシリウスレッド染色を示す。 実施例１に記載の研究による、動物のシリウスレッド染色を示す。
実施例１に記載の研究による、動物のシリウスレッド陽性領域（％）を示すプロットを示す。
実施例１に記載の研究による、動物のα－ＳＭＡ、ＴＩＭＰ－１、ＴＧＦ－β、及び１型コラーゲンについての遺伝子発現分析を示す。 実施例１に記載の研究による、動物のα－ＳＭＡ、ＴＩＭＰ－１、ＴＧＦ－β、及び１型コラーゲンについての遺伝子発現分析を示す。 実施例１に記載の研究による、動物のα－ＳＭＡ、ＴＩＭＰ－１、ＴＧＦ－β、及び１型コラーゲンについての遺伝子発現分析を示す。 実施例１に記載の研究による、動物のα－ＳＭＡ、ＴＩＭＰ－１、ＴＧＦ－β、及び１型コラーゲンについての遺伝子発現分析を示す。
実施例２に記載の研究及びその期間の概略図である。
実施例２に記載の研究による、動物の体重変化を示す。
実施例２に記載の研究による、動物の屠殺日の体重を示す。
実施例２に記載の研究による、屠殺日の動物の肝臓重量及び肝臓重量対体重比をそれぞれ示す。 実施例２に記載の研究による、屠殺日の動物の肝臓重量及び肝臓重量対体重比をそれぞれ示す。
実施例２に記載の研究による、動物の血清ＡＬＴレベルの変化を示す。
実施例２に記載の研究による、動物の血清総ビリルビンレベルの変化を示す。
実施例２に記載の研究による、動物のシリウスレッド染色及び線維症領域を示す。 実施例２に記載の研究による、動物のシリウスレッド染色及び線維症領域を示す。 実施例２に記載の研究による、動物のシリウスレッド染色及び線維症領域を示す。 実施例２に記載の研究による、動物のシリウスレッド染色及び線維症領域を示す。 実施例２に記載の研究による、動物のシリウスレッド染色及び線維症領域を示す。
実施例２に記載の研究による、動物のシリウスレッド陽性領域（％）を示すプロットを示す。
実施例２に記載の研究による、動物のα－ＳＭＡ、ＴＩＭＰ－１、ＴＧＦ－β、及び１型コラーゲンについての遺伝子発現分析をそれぞれ示す。 実施例２に記載の研究による、動物のα－ＳＭＡ、ＴＩＭＰ－１、ＴＧＦ－β、及び１型コラーゲンについての遺伝子発現分析をそれぞれ示す。 実施例２に記載の研究による、動物のα－ＳＭＡ、ＴＩＭＰ－１、ＴＧＦ－β、及び１型コラーゲンについての遺伝子発現分析をそれぞれ示す。 実施例２に記載の研究による、動物のα－ＳＭＡ、ＴＩＭＰ－１、ＴＧＦ－β、及び１型コラーゲンについての遺伝子発現分析をそれぞれ示す。
実施例３に記載の研究による、ＤＳ１０２（１５－ＨＥＰＥ）がＴＧＦ－βの阻害を誘導したことを示す。 実施例３に記載の研究による、ＤＳ１０２（１５－ＨＥＰＥ）がＴＧＦ－βの阻害を誘導したことを示す。
実施例３に記載の研究による、Ｉ型ＴＧＦ－β受容体、ＩＩ型ＴＧＦ－β受容体、ＩＩＩ型ＴＧＦ－β受容体、ＥＧＦＲ、及びカベオリン－１の膜輸送及び分解に対するＤＳ１０２の効果を示す。 実施例３に記載の研究による、Ｉ型ＴＧＦ－β受容体、ＩＩ型ＴＧＦ－β受容体、ＩＩＩ型ＴＧＦ－β受容体、ＥＧＦＲ、及びカベオリン－１の膜輸送及び分解に対するＤＳ１０２の効果を示す。 実施例３に記載の研究による、Ｉ型ＴＧＦ－β受容体、ＩＩ型ＴＧＦ－β受容体、ＩＩＩ型ＴＧＦ－β受容体、ＥＧＦＲ、及びカベオリン－１の膜輸送及び分解に対するＤＳ１０２の効果を示す。 実施例３に記載の研究による、Ｉ型ＴＧＦ－β受容体、ＩＩ型ＴＧＦ－β受容体、ＩＩＩ型ＴＧＦ－β受容体、ＥＧＦＲ、及びカベオリン－１の膜輸送及び分解に対するＤＳ１０２の効果を示す。 実施例３に記載の研究による、Ｉ型ＴＧＦ－β受容体、ＩＩ型ＴＧＦ－β受容体、ＩＩＩ型ＴＧＦ－β受容体、ＥＧＦＲ、及びカベオリン－１の膜輸送及び分解に対するＤＳ１０２の効果を示す。
実施例４に記載の研究及びその期間の概略図である。
実施例４に記載の研究による、患者のベースラインのリピドームのプロファイルを示す。
Ｅｐｅｌｅｕｔｏｎ（１５－ＨＥＰＥ）及びプラセボを投与された患者におけるインスリン、グルコース、及び遊離脂肪酸のレベルの変化をそれぞれ示すプロットである。 Ｅｐｅｌｅｕｔｏｎ（１５－ＨＥＰＥ）及びプラセボを投与された患者におけるインスリン、グルコース、及び遊離脂肪酸のレベルの変化をそれぞれ示すプロットである。 Ｅｐｅｌｅｕｔｏｎ（１５－ＨＥＰＥ）及びプラセボを投与された患者におけるインスリン、グルコース、及び遊離脂肪酸のレベルの変化をそれぞれ示すプロットである。
Ｅｐｅｌｅｕｔｏｎ及びプラセボを投与された患者におけるＨＯＭＡ－ＩＲ及びａｐｉｄｏ－ＩＲのレベルの変化をそれぞれ示すプロットである。 Ｅｐｅｌｅｕｔｏｎ及びプラセボを投与された患者におけるＨＯＭＡ－ＩＲ及びａｐｉｄｏ－ＩＲのレベルの変化をそれぞれ示すプロットである。
患者における平均ＨｂＡ１Ｃレベルの変化及び１６週目に≧６．５％のＨｂＡ１Ｃレベルを有する患者の割合をそれぞれ示すプロットである。 患者における平均ＨｂＡ１Ｃレベルの変化及び１６週目に≧６．５％のＨｂＡ１Ｃレベルを有する患者の割合をそれぞれ示すプロットである。
Ｅｐｅｌｅｕｔｏｎ及びプラセボを投与された患者の脂質プロファイルの平均変化及び中央値（％）変化をそれぞれ示すプロットである。 Ｅｐｅｌｅｕｔｏｎ及びプラセボを投与された患者の脂質プロファイルの平均変化及び中央値（％）変化をそれぞれ示すプロットである。
Ｅｐｅｌｅｕｔｏｎ及びプラセボを投与された患者におけるコレステロール、トリグリセリド、及びＶＬＤＬ－Ｃのレベルの変化をそれぞれ示すプロットである。 Ｅｐｅｌｅｕｔｏｎ及びプラセボを投与された患者におけるコレステロール、トリグリセリド、及びＶＬＤＬ－Ｃのレベルの変化をそれぞれ示すプロットである。 Ｅｐｅｌｅｕｔｏｎ及びプラセボを投与された患者におけるコレステロール、トリグリセリド、及びＶＬＤＬ－Ｃのレベルの変化をそれぞれ示すプロットである。
ＤＳ１０２を投与された患者の肝毒性脂質プロファイルの変化を示すチャートである。
ＯＷＬ肝臓ケア試験を使用してＤＳ１０２の投与がＮＡＳＨを解決することを実証するプロットである。
ＤＳ１０２及びプラセボを投与された患者におけるＣＡＰによる肝脂肪含有量の変化を示すプロットである。
ＤＳ１０２及びプラセボを投与された患者における炎症性及び線維化促進性タンパク質のレベルの変化を示すチャートである。 ＤＳ１０２及びプラセボを投与された患者における炎症性及び線維化促進性タンパク質のレベルの変化を示すチャートである。 ＤＳ１０２及びプラセボを投与された患者における炎症性及び線維化促進性タンパク質のレベルの変化を示すチャートである。
ＤＳ１０２及びプラセボを投与された患者におけるＮＡＳＨ開発標的を含むタンパク質発現の変化を示すプロットである。
ＤＳ１０２及びプラセボを投与された患者における炎症性及び線維化促進性タンパク質の低減を示す火山プロットである。
ＤＳ１０２及びプラセボを投与された患者における血管接着分子の変化を示すプロットである。
ＤＳ１０２及びプラセボを投与された患者における心血管リスクタンパク質の変化を示すプロットである。
ＤＳ１０２及びプラセボを投与された患者におけるケモカインの変化を示すプロットである。
ＤＳ１０２及びプラセボを投与された患者における腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバーの変化を示すプロットである。
ＤＳ１０２及びプラセボを投与された患者におけるＡＬＰレベルの低減を示すプロットである。 ＤＳ１０２及びプラセボを投与された患者におけるＡＬＰレベルの低減を示すプロットである。
１５－ＨＥＰＥエチルエステルトラフ血漿相対濃度の箱ひげ図である。
１５（Ｓ）－ＨＥＰＥ ＥＥ及びプラセボを投与されたラットにおける赤血球数、赤血球分布幅、及び網状赤血球数の平均変化及び標準偏差をそれぞれ示す棒グラフである。 １５（Ｓ）－ＨＥＰＥ ＥＥ及びプラセボを投与されたラットにおける赤血球数、赤血球分布幅、及び網状赤血球数の平均変化及び標準偏差をそれぞれ示す棒グラフである。 １５（Ｓ）－ＨＥＰＥ ＥＥ及びプラセボを投与されたラットにおける赤血球数、赤血球分布幅、及び網状赤血球数の平均変化及び標準偏差をそれぞれ示す棒グラフである。
１５（Ｓ）－ＨＥＰＥ ＥＥ及びプラセボを投与されたラットにおけるプロトロンビン時間、活性化部分トロンボプラスチン時間、及びフィブリノゲン濃度の平均変化及び標準偏差をそれぞれ示す棒グラフである。 １５（Ｓ）－ＨＥＰＥ ＥＥ及びプラセボを投与されたラットにおけるプロトロンビン時間、活性化部分トロンボプラスチン時間、及びフィブリノゲン濃度の平均変化及び標準偏差をそれぞれ示す棒グラフである。 １５（Ｓ）－ＨＥＰＥ ＥＥ及びプラセボを投与されたラットにおけるプロトロンビン時間、活性化部分トロンボプラスチン時間、及びフィブリノゲン濃度の平均変化及び標準偏差をそれぞれ示す棒グラフである。
本発明は様々な形態で具現化することが可能であるが、いくつかの実施形態の以下の説明は、本開示が本発明の例示としてみなされるべきであり、本発明が、説明する特定の実施形態に限定されることを意図するものではないことを理解してなされる。見出しは、便宜的に提供されているにすぎず、本発明をいかようにも限定すると解釈されるべきではない。任意の見出しの下に示す実施形態は、他のいずれかの見出しの下に示す実施形態と組み合わされ得る。
本出願において特定される様々な定量値における数値の使用は、明示的な別段の規定がない限り、記載した範囲内の最小値及び最大値の両方の前に「約」という単語が付されているかのように近似値として記載する。このように、記載する値からのわずかな変動を使用して、記載する値と実質的に同じ結果を達成することができる。また、範囲の開示は、列挙する最小値と最大値との間のあらゆる値を含む連続的な範囲、及びかかる値によって形成され得る任意の範囲として意図される。また、本明細書で、列挙する数値を任意の他の列挙される数値に分割することによって形成され得るありとあらゆる比（及び任意のかかる比の範囲）も開示する。したがって、当業者は、多くのかかる比、範囲、及び比の範囲が、本明細書に提示する数値から明確に得ることができ、全ての場合において、かかる比、範囲、及び比の範囲が、本発明の様々な実施形態を表すことを理解するであろう。
別段の定義がない限り、本明細書で使用する全ての技術用語及び科学用語は、本開示が関係する当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本開示の実施において、本明細書に記載する方法及び材料と類似又は同等の方法及び材料を使用することができるが、好適な方法及び材料を以下に記載する。本明細書に記載の全ての刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献は、それらの全体が参照により明示的に組み込まれる。矛盾する場合は、定義を含む本明細書が優先される。更に、本明細書に記載の材料、方法、及び例は、例示にすぎず、限定することを意図するものではない。
定義
本明細書で使用する場合、「１５－ＨＥＰＥ」は、１５－ヒドロキシ－エイコサ－５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１３Ｅ，１７Ｚ－ペンタエン酸である。１５－ＨＥＰＥは、１５－ＯＨＥＰＡとも称され、当技術分野で既知の方法に従って、オメガ－３脂肪酸であるエイコサペンタエン酸（「ＥＰＡ」、エイコサ－５，８，１１，１４，１７－ペンタエン酸又は２０：５ｎ－３）から合成され得る。例えば、１５－ＨＥＰＥは、ＥＰＡを酵素１５－リポキシゲナーゼに曝露することによって合成することができる。本明細書で使用する場合、「１５－ＨＥＰＥ」という用語は、その遊離酸形態の１５－ＨＥＰＥ（例えば、１５－ヒドロキシ－エイコサ－５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１３Ｅ，１７Ｚ－ペンタエン酸）及び／又はその薬学的に許容されるエステル、コンジュゲート若しくは塩、又は前述のいずれかの混合物を指す。代わりに、１５－ＨＥＰＥの誘導体を使用し得るが、これには、１５－ＨＥＰＥのヒドロキシ基を欠く任意の誘導体化合物は含まない。いくつかの実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、遊離酸形態で使用される。あるいは、本開示において１５－ＨＥＰＥの薬学的に許容されるエステル又は塩が使用される。いくつかの実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、メチルエステル、エチルエステル、又はメチルエステルとエチルエステルとの組み合わせなどＣ１～４アルキルエステルの形態である。更に別の実施形態では１５－ＨＥＰＥは、グリセリド（例えば、ジグリセリド又はトリグリセリド）の形態である。別の実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、エチルエステルの形態である（本明細書では、Ｅ－１５－ＨＥＰＥ、１５－ＨＥＰＥＥＥ、又はエチル－１５－ＨＥＰＥとも称する）。
１５－ＨＥＰＥはキラル分子であり、（Ｓ）－若しくは（Ｒ）－エナンチオマー形態で、又はラセミ混合物として使用され得る。本明細書で使用する場合、「１５－ＨＥＰＥ」は、立体特異性に関する制限なしに、全てのかかる形態を含む。別の実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、（Ｓ）形態：１５（Ｓ）－ヒドロキシ－（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１３Ｅ，１７Ｚ）－エイコサペンタエン酸又は（Ｒ）形態（（Ｒ）ｆｒｏｍ）：１５（Ｒ）－ヒドロキシ－（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１３Ｅ，１７Ｚ）－エイコサペンタエン酸を含む。更に別の実施形態では、１５－ＨＥＰＥ ＥＥは、（Ｓ）形態：１５（Ｓ）－ＨＥＰＥ ＥＥを含む。
本明細書で使用する場合、「ＤＳ１０２」は、１５－ＨＥＰＥ、１５－ＨＥＰＥ ＥＥ、１５－ＨＥＰＥを含む組成物、１５－ＨＥＰＥ ＥＥを含む組成物、又は１５－ＨＥＰＥ及び１５－ＨＥＰＥ ＥＥを含む組成物を指す。
本明細書で使用する場合、「Ｅｐｅｌｅｕｔｏｎ」は、１５－ＨＥＰＥ、１５－ＨＥＰＥ ＥＥ、１５－ＨＥＰＥを含む組成物、１５－ＨＥＰＥ ＥＥを含む組成物、又は１５－ＨＥＰＥ及び１５－ＨＥＰＥ ＥＥを含む組成物を指す。
本明細書で使用する場合、疾患、障害、又は状態の「治療する（treating）」又は「治療（treatment）」は、少なくとも部分的に、（１）疾患（disease）、障害、又は疾患（condition）を阻害すること、すなわち、疾患（disease）、障害、又は疾患（condition）若しくはその臨床症状の進行を停止させるか、又は低減すること、又は（２）疾患（disease）、障害、又は疾患（condition）を緩和すること、すなわち、疾患（disease）、障害、又は疾患（condition）若しくはその臨床症状の退行を引き起こすことを含む。所与の疾患又は障害に関連する「予防」という用語は、何も起こっていない場合には疾患進行の開始を予防すること、障害若しくは疾患に罹患しやすい可能性があるが、まだ障害若しくは疾患を有すると診断されていない対象において疾患若しくは障害が起こるのを予防すること、及び／又は既に疾患若しくは障害がある場合、更なる疾患／障害の進行を予防することを意味する。
本明細書で使用する場合、「有効量」は、対象に治療効果を与えるために必要とされる活性組成物の量を指す。本明細書で使用する場合、「治療有効量」は、治療されている疾患（disease）、障害、又は疾患（condition）の症状のうちの１つ以上をある程度緩和する、投与されている薬剤又は化合物の十分な量を指す。いくつかの実施形態では、結果は、疾患の徴候、症状、若しくは原因の低減及び／若しくは緩和、又は生物学系の任意の他の所望の変化である。例えば、いくつかの実施形態では、治療的使用のための「有効量」は、過度の有害な副作用を伴わずに疾患症状の臨床的に顕著な低減を提供するために必要とされる本明細書に開示する化合物を含む組成物の量である。いくつかの実施形態では、任意の個々の場合における適切な「有効量」は、用量漸増研究など技術を使用して決定される。「治療有効量」という用語は、例えば、予防有効量を含む。他の実施形態では、式（Ａ）又は式（Ｉ）の化合物などの本明細書に開示する化合物の「有効量」は、過度の有害な副作用を伴わずに所望の薬理学的効果又は治療的改善を達成するのに有効な量である。他の実施形態では、「効果量」又は「治療有効量」は、対象の代謝、年齢、体重、全身的疾患、治療を受けている疾患、治療を受けている疾患の重症度、及び処方医師の判断の変動により、対象ごとに変化することが理解される。本文脈における「薬学的に許容される」という用語は、問題の物質が、対象に対する許容できない毒性、又は組成物の他の成分との相互作用を産生しないことを意味する。
本開示の他の特徴及び利点は、以下の詳細な説明から明らかになるであろう。
組成物
一実施形態では、本開示の組成物は、活性成分として１５－ＨＥＰＥを含む。本文脈における「薬学的に許容される」という用語は、問題の物質が、対象に対する許容できない毒性、又は組成物の他の成分との相互作用を産生しないことを意味する。
一実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、エステルの形態である（本明細書では、Ｅ－１５－ＨＥＰＥ、エチル－１５－ＨＥＰＥ、又は１５－ＨＥＰＥ ＥＥと称する）。別の実施形態では、１５－ＨＥＰＥは１５－ＨＥＰＥのＣ１～Ｃ５アルキルエステルを含む。別の実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、１５－ＨＥＰＥメチルエステル、１５－ＨＥＰＥプロピルエステル、又は１５－ＨＥＰＥブチルエステルを含む。更に別の実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、光学活性１５（Ｓ）－ヒドロキシ－（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１３Ｅ，１７Ｚ）－エイコサペンタエン酸を含む。この異性体は、上記の形態のいずれかで使用され得る。
別の実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、リチウム１５－ＨＥＰＥ、モノ、ジ－、若しくはトリグリセリド１５－ＨＥＰＥ、又は１５－ＨＥＰＥの任意の他のエステル若しくは塩、又は１５－ＨＥＰＥの遊離酸形態を含む。
様々な実施形態では、本開示は、１５－を含む医薬組成物、例えば、経口送達可能な組成物を提供する。一実施形態では、組成物は、治療有効量の１５－ＨＥＰＥを含む。一実施形態では、医薬組成物は、約０．１重量％～約９９重量％、約１重量％～約９５重量％、約５重量％～約９０重量％の１５－ＨＥＰＥを含む。本明細書で提供されるように、「組成物」及び語句「医薬組成物」は、互換的に使用される。
一実施形態では、医薬組成物は、少なくとも約７０重量％、少なくとも約８０重量％、又は少なくとも約９０重量％の１５－ＨＥＰＥを含む。一実施形態では、医薬組成物は、少なくとも約５０重量％、少なくとも約６０重量％、少なくとも約７０重量％、少なくとも約８０重量％、又は少なくとも約９０重量％の１５－ＨＥＰＥを含む。
別の実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、約１ｍｇ～約１０，０００ｍｇ、約２５ｍｇ～約７５００ｍｇ、約２５ｍｇ～約５０００ｍｇ、約５０ｍｇ～約５０００ｍｇ、約５０ｍｇ～約３０００ｍｇ、約７５ｍｇ～約２５００ｍｇ、又は約１００ｍｇ～約１０００ｍｇ、例えば、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１１ｍｇ、約１２ｍｇ、約１３ｍｇ、約１４ｍｇ、約１５ｍｇ、約１６ｍｇ、約１７ｍｇ、約１８ｍｇ、約１９ｍｇ、約２０ｍｇ、約２１ｍｇ、約２２ｍｇ、約２３ｍｇ、約２４ｍｇ、約２５ｍｇ、約５０ｍｇ、約７５ｍｇ、約１００ｍｇ、約１２５ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１７５ｍｇ、約２００ｍｇ、約２２５ｍｇ、約２５０ｍｇ、約２７５ｍｇ、約３００ｍｇ、約３２５ｍｇ、約３５０ｍｇ、約３７５ｍｇ、約４００ｍｇ、約４２５ｍｇ、約４５０ｍｇ、約４７５ｍｇ、約５００ｍｇ、約５２５ｍｇ、約５５０ｍｇ、約５７５ｍｇ、約６００ｍｇ、約６２５ｍｇ、約６５０ｍｇ、約６７５ｍｇ、約７００ｍｇ、約７２５ｍｇ、約７５０ｍｇ、約７７５ｍｇ、約８００ｍｇ、約８２５ｍｇ、約８５０ｍｇ、約８７５ｍｇ、約９００ｍｇ、約９２５ｍｇ、約９５０ｍｇ、約９７５ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１０２５ｍｇ、約１０５０ｍｇ、約１０７５ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１０２５ｍｇ、約１０５０ｍｇ、約１０７５ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１２２５ｍｇ、約１２５０ｍｇ、約１２７５ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１３２５ｍｇ、約１３５０ｍｇ、約１３７５ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１４２５ｍｇ、約１４５０ｍｇ、約１４７５ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１５２５ｍｇ、約１５５０ｍｇ、約１５７５ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１６２５ｍｇ、約１６５０ｍｇ、約１６７５ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１７２５ｍｇ、約１７５０ｍｇ、約１７７５ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１８２５ｍｇ、約１８５０ｍｇ、約１８７５ｍｇ、約１９００ｍｇ、約１９２５ｍｇ、約１９５０ｍｇ、約１９７５ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２０２５ｍｇ、約２０５０ｍｇ、約２０７５ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２１２５ｍｇ、約２１５０ｍｇ、約２１７５ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２２２５ｍｇ、約２２５０ｍｇ、約２２７５ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２３２５ｍｇ、約２３５０ｍｇ、約２３７５ｍｇ、約２４００ｍｇ、約２４２５ｍｇ、約２４５０ｍｇ、約２４７５ｍｇ、約２５００ｍｇ、２５２５ｍｇ、約２５５０ｍｇ、約２５７５ｍｇ、約２６００ｍｇ、約２６２５ｍｇ、約２６５０ｍｇ、約２６７５ｍｇ、約２７００ｍｇ、約２７２５ｍｇ、約２７５０ｍｇ、約２７７５ｍｇ、約２８００ｍｇ、約２８２５ｍｇ、約２８５０ｍｇ、約２８７５ｍｇ、約２９００ｍｇ、約２９２５ｍｇ、約２９５０ｍｇ、約２９７５ｍｇ、約３０００ｍｇ、約３０２５ｍｇ、約３０５０ｍｇ、約３０７５ｍｇ、約３１００ｍｇ、約３１２５ｍｇ、約３１５０ｍｇ、約３１７５ｍｇ、約３２００ｍｇ、約３２２５ｍｇ、約３２５０ｍｇ、約３２７５ｍｇ、約３３００ｍｇ、約３３２５ｍｇ、約３３５０ｍｇ、約３３７５ｍｇ、約３４００ｍｇ、約３４２５ｍｇ、約３４５０ｍｇ、約３４７５ｍｇ、約３５００ｍｇ、約３５２５ｍｇ、約３５５０ｍｇ、約３５７５ｍｇ、約３６００ｍｇ、約３６２５ｍｇ、約３６５０ｍｇ、約３６７５ｍｇ、約３７００ｍｇ、約３７２５ｍｇ、約３７５０ｍｇ、約３７７５ｍｇ、約３８００ｍｇ、約３８２５ｍｇ、約３８５０ｍｇ、約３８７５ｍｇ、約３９００ｍｇ、約３９２５ｍｇ、約３９５０ｍｇ、約３９７５ｍｇ、約４０００ｍｇ、約４０２５ｍｇ、約４０５０ｍｇ、約４０７５ｍｇ、約４１００ｍｇ、約４１２５ｍｇ、約４１５０ｍｇ、約４１７５ｍｇ、約４２００ｍｇ、約４２２５ｍｇ、約４２５０ｍｇ、約４２７５ｍｇ、約４３００ｍｇ、約４３２５ｍｇ、約４３５０ｍｇ、約４３７５ｍｇ、約４４００ｍｇ、約４４２５ｍｇ、約４４５０ｍｇ、約４４７５ｍｇ、約４５００ｍｇ、約４５２５ｍｇ、約４５５０ｍｇ、約４５７５ｍｇ、約４６００ｍｇ、約４６２５ｍｇ、約４６５０ｍｇ、約４６７５ｍｇ、約４７００ｍｇ、約４７２５ｍｇ、約４７５０ｍｇ、約４７７５ｍｇ、約４８００ｍｇ、約４８２５ｍｇ、約４８５０ｍｇ、約４８７５ｍｇ、約４９００ｍｇ、約４９２５ｍｇ、約４９５０ｍｇ、約４９７５ｍｇ、約５０００ｍｇ、約５０２５ｍｇ、約５０５０ｍｇ、約５０７５ｍｇ、約５１００ｍｇ、約５１２５ｍｇ、約５１５０ｍｇ、約５１７５ｍｇ、約５２００ｍｇ、約５２２５ｍｇ、約５２５０ｍｇ、約５２７５ｍｇ、約５３００ｍｇ、約５３２５ｍｇ、約５３５０ｍｇ、約５３７５ｍｇ、約５４００ｍｇ、約５４２５ｍｇ、約５４５０ｍｇ、約５４７５ｍｇ、約５５００ｍｇ、約５５２５ｍｇ、約５５５０ｍｇ、約５５７５ｍｇ、約５６００ｍｇ、約５６２５ｍｇ、約５６５０ｍｇ、約５６７５ｍｇ、約５７００ｍｇ、約５７２５ｍｇ、約５７５０ｍｇ、約５７７５ｍｇ、約５８００ｍｇ、約５８２５ｍｇ、約５８５０ｍｇ、約５８７５ｍｇ、約５９００ｍｇ、約５９２５ｍｇ、約５９５０ｍｇ、約５９７５ｍｇ、約６０００ｍｇ、約６０２５ｍｇ、約６０５０ｍｇ、約６０７５ｍｇ、約６１００ｍｇ、約６１２５ｍｇ、約６１５０ｍｇ、約６１７５ｍｇ、約６２００ｍｇ、約６２２５ｍｇ、約６２５０ｍｇ、約６２７５ｍｇ、約６３００ｍｇ、約６３２５ｍｇ、約６３５０ｍｇ、約６３７５ｍｇ、約６４００ｍｇ、約６４２５ｍｇ、約６４５０ｍｇ、約６４７５ｍｇ、約６５００ｍｇ、約６５２５ｍｇ、約６５５０ｍｇ、約６５７５ｍｇ、約６６００ｍｇ、約６６２５ｍｇ、約６６５０ｍｇ、約６６７５ｍｇ、約６７００ｍｇ、約６７２５ｍｇ、約６７５０ｍｇ、約６７７５ｍｇ、約６８００ｍｇ、約６８２５ｍｇ、約６８５０ｍｇ、約６８７５ｍｇ、約６９００ｍｇ、約６９２５ｍｇ、約６９５０ｍｇ、約６９７５ｍｇ、約７０００ｍｇ、約７０２５ｍｇ、約７０５０ｍｇ、約７０７５ｍｇ、約７１００ｍｇ、約７１２５ｍｇ、約７１５０ｍｇ、約７１７５ｍｇ、約７２００ｍｇ、約７２２５ｍｇ、約７２５０ｍｇ、約７２７５ｍｇ、約７３００ｍｇ、約７３２５ｍｇ、約７３５０ｍｇ、約７３７５ｍｇ、約７４００ｍｇ、約７４２５ｍｇ、約７４５０ｍｇ、約７４７５ｍｇ、約７５００ｍｇ、約７５２５ｍｇ、約７５５０ｍｇ、約７５７５ｍｇ、約７６００ｍｇ、約７６２５ｍｇ、約７６５０ｍｇ、約７６７５ｍｇ、約７７００ｍｇ、約７７２５ｍｇ、約７７５０ｍｇ、約７７７５ｍｇ、約７８００ｍｇ、約７８２５ｍｇ、約７８５０ｍｇ、約７８７５ｍｇ、約７９００ｍｇ、約７９２５ｍｇ、約７９５０ｍｇ、約７９７５ｍｇ、約８０００ｍｇ、約８０２５ｍｇ、約８０５０ｍｇ、約８０７５ｍｇ、約８１００ｍｇ、約８１２５ｍｇ、約８１５０ｍｇ、約８１７５ｍｇ、約８２００ｍｇ、約８２２５ｍｇ、約８２５０ｍｇ、約８２７５ｍｇ、約８３００ｍｇ、約８３２５ｍｇ、約８３５０ｍｇ、約８３７５ｍｇ、約８４００ｍｇ、約８４２５ｍｇ、約８４５０ｍｇ、約８４７５ｍｇ、約８５００ｍｇ、約８５２５ｍｇ、約８５５０ｍｇ、約８５７５ｍｇ、約８６００ｍｇ、約８６２５ｍｇ、約８６５０ｍｇ、約８６７５ｍｇ、約８７００ｍｇ、約８７２５ｍｇ、約８７５０ｍｇ、約８７７５ｍｇ、約８８００ｍｇ、約８８２５ｍｇ、約８８５０ｍｇ、約８８７５ｍｇ、約８９００ｍｇ、約８９２５ｍｇ、約８９５０ｍｇ、約８９７５ｍｇ、約９０００ｍｇ、約９０２５ｍｇ、約９０５０ｍｇ、約９０７５ｍｇ、約９１００ｍｇ、約９１２５ｍｇ、約９１５０ｍｇ、約９１７５ｍｇ、約９２００ｍｇ、約９２２５ｍｇ、約９２５０ｍｇ、約９２７５ｍｇ、約９３００ｍｇ、約９３２５ｍｇ、約９３５０ｍｇ、約９３７５ｍｇ、約９４００ｍｇ、約９４２５ｍｇ、約９４５０ｍｇ、約９４７５ｍｇ、約９５００ｍｇ、約９５２５ｍｇ、約９５５０ｍｇ、約９５７５ｍｇ、約９６００ｍｇ、約９６２５ｍｇ、約９６５０ｍｇ、約９６７５ｍｇ、約９７００ｍｇ、約９７２５ｍｇ、約９７５０ｍｇ、約９７７５ｍｇ、約９８００ｍｇ、約９８２５ｍｇ、約９８５０ｍｇ、約９８７５ｍｇ、約９９００ｍｇ、約９９２５ｍｇ、約９９５０ｍｇ、約９９７５ｍｇ、又は約１０，０００ｍｇの量で本開示の組成物中に存在する。
一実施形態では、本開示の組成物中に存在する１５－ＨＥＰＥは、少なくとも約９０重量％の１５－ＨＥＰＥ（「１５－ＨＥＰＥ」という用語は、本明細書で定義し、例示する）を含む。１５－ＨＥＰＥ組成物は、更に高純度の１５－ＨＥＰＥ、例えば、少なくとも約９５重量％の１５－ＨＥＰＥ、又は少なくとも約９７重量％の１５－ＨＥＰＥを含み得、１５－ＨＥＰＥは、本明細書に記載の１５－ＨＥＰＥの任意の形態である。１５－ＨＥＰＥの純度は、本明細書で提供する１５－ＨＥＰＥの記載のいずれかによって、更に定義され得る（例えば、不純物プロファイル）。
上記は、医薬組成物中の１５－ＨＥＰＥの量及びそれらの純度を考察する。必須脂肪酸の性質及びそれらの合成は、１５－ＨＥＰＥ組成物が、必須脂肪酸代謝カスケードにおいて他の必須脂肪酸からの部分を含み得るようなものである。
一実施形態では、本発明の組成物は、約１０重量％以下、約９重量％以下、約８重量％以下、約７重量％以下、約６重量％以下、約５重量％以下、約４重量％以下、約３重量％以下、約２重量％以下、約１重量％以下、又は約０．５重量％以下のαリノレン酸、ステアリドン酸、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）又はそれらの誘導体など他のオメガ３脂肪酸を含有する。他の実施形態では、かかる他のオメガ３脂肪酸は実質的に存在しないか、又は存在しない。
別の実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、本開示の組成物中に存在する全ての脂肪酸の少なくとも約６０重量％、少なくとも約７０重量％、少なくとも約８０重量％、少なくとも約９０重量％、少なくとも約９５重量％、少なくとも約９７重量％、少なくとも約９８重量％、少なくとも約９９重量％、又は１００重量％に相当する。
一実施形態では、本発明の組成物中に存在する１５－ＨＥＰＥの塩形態は、少なくとも９０重量％の１５－ＨＥＰＥの塩形態を含む。１５－ＨＥＰＥの塩形態を含有する組成物は、更に高純度の、例えば、少なくとも９１重量％、少なくとも９２重量％、少なくとも９３重量％、少なくとも９４重量％、少なくとも９５重量％、少なくとも９６重量％、又は少なくとも９７重量％の１５－ＨＥＰＥの塩形態を含み得る。
１５－ＨＥＰＥの合成からのいくらかの残留エイコサペンタエン酸が存在する場合がある。約１０重量％以下、約９重量％以下、約８重量％以下、約７重量％以下、約６重量％以下、約５％以下、約４％以下、約３％以下、約２％以下、約１％以下、又は約０．５重量％以下のＥＰＡが存在する場合がある。あるいは、ヒドロキシル形態に修飾されていない形態のＥＰＡが実質的に存在しないか、又は存在しない。
一実施形態では、本開示は、カプセルシェルに封入された１５－ＨＥＰＥ又はその誘導体を含む医薬組成物を提供する。一実施形態では、組成物は、１日当たり最大約１ｇ、約２ｇ、約３ｇ、約４ｇ、約５ｇ、約６ｇ、約７ｇ、約８ｇ、約９ｇ、又は約１０ｇの１５－ＨＥＰＥＥ又はその誘導体を提供するのに十分な量で対象に投与される。一実施形態では、組成物は、１日当たり約４ｇ～約８ｇ、約１ｇ～約２ｇ、約２ｇ～約４ｇ、約３ｇ～約８ｇ、約４ｇ～約６ｇの１５－ＨＥＰＥ又はその誘導体を提供するのに十分な量で対象に投与される。一実施形態では、約５００ｍｇ～約１ｇの１５－ＨＥＰＥ又はその誘導体がカプセルシェルに封入される。
一実施形態では、カプセルシェルは、ゼラチン（例えば、より低分子量を有するゼラチンＲＸＬ又は石灰骨ゼラチン）を含む。別の実施形態では、カプセルシェルは、ゼラチンパターンを切断し、その分子量を効果的に低減させるためにタンパク質分解酵素によって処理されたゼラチンＲＸＬを含む。別の実施形態では、医薬組成物は、Ｄ－ソルビトール及び１，４－ソルビタンの１５－ＨＥＰＥエステルを含む。一実施形態では、カプセルシェルは、（ａ）ゼラチンと、（ｂ）Ｄ－ソルビトール及び１，４－ソルビタンのうちの１つ以上から選択される可塑剤と、を含む。一実施形態では、ゼラチンは、米国特許第７，４８５，３２３号に記載されているようなゼラチンであり、その全体は参照により本明細書に組み込まれる。
一実施形態では、可塑剤は、約２０％～約３０％、例えば、約２４％～約２８％、２４％、又は２８％（乾燥ベースで）の量の１，４－ソルビタン、及び約３０％～約５０％、例えば、約３５％～約４５％（乾燥ベースで）のＤ－ソルビトール含有量を含む。
いくつかの実施形態では、カプセルは、硬質ゼラチンカプセルである。別の実施形態では、カプセルは、軟質ゼラチンカプセルである。
いくつかの実施形態では、カプセルシェルは、修飾デンプン、カラギーナン（例えば、紅藻の抽出物）、リン酸二ナトリウム、グリセロール、及び／又はソルビトールを含む。いくつかの実施形態では、カプセルシェルは、水を更に含む。いくつかの実施形態では、カプセルシェルは、約６５℃の温度及び／又は約１２のｐＨまで安定である。
いくつかの実施形態では、カプセルシェルは無臭であり、中性色（例えば、無色、白色、又は透明）を有する。
いくつかの実施形態では、カプセルシェルは、グリセロール、精製水、二酸化チタン、中鎖トリグリセリド、及びレシチンを更に含む。
追加の活性剤
一実施形態では、医薬組成物は、１つ以上の追加の活性剤を更に含む。一実施形態では、医薬組成物は、当該活性剤の一般に認識されている治療有効量よりも少ない量の追加の活性剤を含む。一実施形態では、医薬組成物は、当該活性剤の一般に認識されている治療有効量以上の量の追加の活性剤を含む。追加の活性剤が使用される場合、１５－ＨＥＰＥは、単一の投与単位として同時に製剤化され得るか、又は協調投与、併用投与、若しくは同時投与のために２回～複数回の投与単位として製剤化され得る。
ＥＰＡ自体は、脂肪肝疾患及び／又は心血管疾患の治療に有益な特性を有し、代替の実施形態では、１５－ＨＥＰＥをＥＰＡと組み合わせることが可能である。
一実施形態では、１５－ＨＥＰＥ及び１つ以上の活性剤は、本開示の組成物中に存在するか、又は約１：１０００～約１０００：１、約１：５００～約５００：１、約１：１００～約１００：１、約１：５０～約５０：１、約１：２５～約２５：１、約１：１０～約１０：１、約１：５～約５：１、約１：４～約４：１、約１：３～約３：１、約１：２～約２：１、又は約１：１の１５－ＨＥＰＥ：追加の活性剤の重量比で同時投与される。
剤形
本開示に従って使用するための組成物は、１つ以上の投与単位として製剤化され得る。本明細書における「用量単位」及び「投与単位」という用語は、治療効果を提供するための単回投与に適した量の治療薬を含有する組成物の一部分を指す。かかる投与単位は、１日当たり１回～複数回（例えば、１～約１０回、１～８回、１～６回、１～４回、又は１～２回）、又は治療応答を誘発するために必要な回数を投与され得る。
いくつかの実施形態では、本開示の組成物は、経口送達可能な剤形又は投与単位の形態である。好適な剤形の非限定的な例としては、錠剤（例えば、懸濁錠剤、咬合懸濁錠剤、急速分散錠剤、チュアブル錠など）、カプレット、カプセル（例えば、軟質若しくは硬質ゼラチンカプセル、又はＨＰＭＣカプセル）、ロゼンジ、サシェ、カシェ、トローチ、ペレット、懸濁液、エリキシル、シロップ、又は経口投与に合理的に適合した任意の他の固形剤形が挙げられる。本明細書における「経口送達」及び「経口投与」という用語は、飲み込まれたか否かにかかわらず、薬剤又は組成物が治療中の対象の口内に配置される任意の形態の送達を含む。したがって、これは、口腔投与及び舌下投与、並びに食道投与を含む。
あるいは、本開示の組成物はまた、直腸、局所、又は非経口（例えば、皮下、筋肉内、静脈内及び皮内又は注入）送達のために製剤化され得る。
本開示の組成物中の１５－ＨＥＰＥの量を考察する際に、これはいくつかの剤形に分割され得る。経口投与のためのサイズには制限がある。対象が１日約１～約４ｇの１５－ＨＥＰＥを投与される場合、これは最大４個のカプセルであり得、それぞれ約１ｇの１５－ＨＥＰＥを提供する。
本開示の組成物は、直接吸収される液体剤形若しくは用量単位の形態であり得るか、又は摂取前に食品若しくは飲料と混合され得る。適切な液体剤形の非限定的な例としては、溶液、懸濁液、エリキシル、シロップ、液体エアロゾル製剤などが挙げられる。
別の実施形態では、本開示の組成物は、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含む。本明細書における「薬学的に許容される賦形剤」という用語は、それ自体は治療薬ではなく、治療薬を対象に送達するための担体若しくはビヒクルとして使用されるか、又はその取り扱い若しくは貯蔵特性を改善するために組成物に添加されるか、又は組成物の単位用量の形成を可能に若しくは促進するために組成物に添加され、かつ許容できない毒性又は組成物中の他の成分との相互作用を産生しない、任意の物質を意味する。単なる例として、本開示による医薬組成物は、抗酸化剤、界面活性剤、防腐剤、香味剤、共溶媒、粘度補助剤、懸濁補助剤、及び親油性相のうちの１つ以上を含み得る。
一実施形態では、医薬組成物は、アスコルビン酸、パルミチン酸、パルミチン酸アスコルビル、α－トコフェロール、イデベノン、ユビキノン、フェルラ酸、補酵素Ｑ１０、リコペン、緑茶、カテキン、エピガロカテキン３－ガレート（ＥＧＣＧ）、緑茶ポリフェノール（ＧＴＰ）、シリマリン、コーヒーベリー、レスベラトロール、ブドウ種子、ザクロ抽出物、ゲニステン、ピクノジェノール、ナイアシンアミドなど１つ以上の抗酸化剤を含む。一実施形態では、医薬組成物は、約０．０１重量％～約２重量％の抗酸化剤、例えば、約０．０１重量％、約０．０２重量％、約０．０３重量％、約０．０４重量％、約０．０５重量％、約０．０６重量％、約０．０７重量％、約０．０８重量％、約０．０９重量％、約０．１重量％、約０．１１重量％、約０．１２重量％、約０．１３重量％、約０．１４重量％、約０．１５重量％、約０．１６重量％、約０．１７重量％、約０．１８重量％、約０．１９重量％、約０．２重量％、約０．２１重量％、約０．２２重量％、約０．２３重量％、約０．２４重量％、約０．２５重量％、約０．２６重量％、約０．２７重量％、約０．２８重量％、約０．２９重量％、約０．３重量％、約０．３１重量％、約０．３２重量％、約０．３３重量％、約０．３４重量％、約０．３５重量％、約０．３６重量％、約０．３７重量％、約０．３８重量％、約０．３９重量％、約０．４重量％、約０．４１重量％、約０．４２重量％、約０．４３重量％、約０．４４重量％、約０．４５重量％、約０．４６重量％、約０．４７重量％、約０．４８重量％、約０．４９重量％、約０．５重量％、約０．５１重量％、約０．５２重量％、約０．５３重量％、約０．５４重量％、約０．５５重量％、約０．５６重量％、約０．５７重量％、約０．５８重量％、約０．５９重量％、約０．６重量％、約０．６１重量％、約０．６２重量％、約０．６３重量％、約０．６４重量％、約０．６５重量％、約０．６６重量％、約０．６７重量％、約０．６８重量％、約０．６９重量％、約０．７重量％、約０．７１重量％、約０．７２重量％、約０．７３重量％、約０．７４重量％、約０．７５重量％、約０．７６重量％、約０．７７重量％、約０．７８重量％、約０．７９重量％、約０．８重量％、約０．８１重量％、約０．８２重量％、約０．８３重量％、約０．８４重量％、約０．８５重量％、約０．８６重量％、約０．８７重量％、約０．８８重量％、約０．８９重量％、約０．９重量％、約０．９１重量％、約０．９２重量％、約０．９３重量％、約０．９４重量％、約０．９５重量％、約０．９６重量％、約０．９７重量％、約０．９８重量％、約０．９９重量％、約１重量％、約１．１重量％、約１．２重量％、約１．３重量％、約１．４重量％、約１．５重量％、約１．６重量％、約１．７重量％、約１．８重量％、約１．９重量％、又は約２重量％の１つ以上の抗酸化剤を含む。
治療方法
本明細書に開示する組成物及び製剤は、血液障害の治療及び／又は予防を必要とする対象における血液障害の治療及び／又は予防に使用され得る。いくつかの実施形態では、血液障害は、ヘモグロビン異常、赤血球障害、溶血性貧血、血栓形成傾向障害、静脈血栓塞栓症、動脈血栓症、塞栓症、又はそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態では、方法は、対象に１５－ヒドロキシエイコサペンタエン酸（１５－ＨＥＰＥ）又は１５－ヒドロキシエイコサペンタエン酸（１５－ＨＥＰＥ）を含む組成物を投与することを含む。
本明細書に開示する組成物及び製剤は、血液障害、ヘモグロビン異常、及び／又は赤血球障害の治療及び／又は予防に使用され得る。血液障害は、血液及び血液形成器官に影響を及ぼす疾患の一分類を指す。ヘモグロビン異常及び赤血球障害は血液障害に類似しているが、ヘモグロビン異常及び赤血球障害の両方は、疾患のより狭い分類を定義する。具体的には、ヘモグロビン異常は、ヘモグロビン、赤血球中の酸素輸送タンパク質の欠陥を指す。赤血球障害は、赤血球自体の欠陥を指す。血液障害、ヘモグロビン異常、及び赤血球障害のリスク因子の非限定的な例としては、赤血球数の低下、赤血球分布幅の増加、及び網状赤血球数の増加が挙げられる。血液障害、ヘモグロビン異常、及び赤血球障害の非限定的な例としては、貧血（栄養性貧血及び非栄養性貧血、鎌状赤血球症、鎌状赤血球貧血、β－サラセミア、及び遺伝性球状赤血球症など遺伝性溶血性貧血、感染症、薬物治療、血液悪性腫瘍、自己免疫疾患、脾機能亢進症、機械弁、及び輸血などに続発する後天性溶血性貧血、ファンコニ貧血、鉄欠乏性貧血）、血液がん（リンパ腫、白血病、及び骨髄腫）、凝固障害（血栓形成傾向、血友病、フォン・ヴィレブランド病、及び血小板減少症）、葉酸欠乏症、Ｂ１２欠乏症、及び骨髄異形成症候群が挙げられる。いくつかの実施形態では、鎌状赤血球症及び鎌状赤血球貧血は、鎌状赤血球クリーゼ、血管閉塞性クリーゼ、及び／又は脾臓血球貯留に関連する。
いくつかの実施形態では、対象は、標準を少なくとも１０％下回る、標準を少なくとも１５％下回る、標準を少なくとも２０％未満下回る、標準を少なくとも２５％未満下回る、又は標準を少なくとも３０％下回る赤血球数を有する。
いくつかの実施形態では、対象は、増加した赤血球分布幅を有し、赤血球のサイズが約１５～２０％、約２０～２５％、約２５～３０％、約３０～３５％、又は約３５～４０％変動する。
別の実施形態では、対象は、赤血球の総量の少なくとも約５％、赤血球の総量の少なくとも約１０％、赤血球の総量の少なくとも約１５％、又は赤血球の総量の少なくとも約２０％の増加した網状赤血球数を有する。
いくつかの実施形態では、対象は、約１３５ｍｇ／ｄＬ～約２０００ｍｇ／ｄＬ、例えば、約１３５ｍｇ／ｄＬ～約５００ｍｇ／ｄＬ、約１５０ｍｇ／ｄＬ～約５００ｍｇ／ｄＬ、約２００ｍｇ／ｄＬ～約４９９ｍｇ／ｄＬ、約２００ｍｇ／ｄＬ～＜５００ｍｇ／ｄＬ、約３００ｍｇ／ｄＬ～約１８００ｍｇ／ｄＬ、約５００ｍｇ／ｄＬ～約１５００ｍｇ／ｄＬ、約５００ｍｇ／ｄＬ～約＜２０００ｍｇ／ｄＬ、又は約５００ｍｇ／ｄＬ～約２０００ｍｇ／ｄＬの上昇したベースラインのトリグリセリドレベルを有する。いくつかの実施形態では、対象は、約５０ｍｇ／ｄＬ～約２０００ｍｇ／ｄＬ、例えば、約５０ｍｇ／ｄＬ～約１５００ｍｇ／ｄＬ、約８０ｍｇ／ｄＬ～約１５００ｍｇ／ｄＬ、約５０ｍｇ／ｄＬ～約１９０ｍｇ／ｄＬ、約８０ｍｇ／ｄＬ～約１９０ｍｇ／ｄＬ、約１９０ｍｇ／ｄＬ～約２５０ｍｇ／ｄＬ、約２５０ｍｇ／ｄＬ～約１４００ｍｇ／ｄＬ、約５００ｍｇ／ｄＬ～約１２００ｍｇ／ｄＬ、約５００ｍｇ／ｄＬ～約１５００ｍｇ／ｄＬ、約５００ｍｇ／ｄＬ～約＜２０００ｍｇ／ｄＬ、又は約５００ｍｇ／ｄＬ～約２０００ｍｇ／ｄＬの空腹時のベースラインのトリグリセリドレベルを有する。一実施形態では、対象は、約８０ｍｇ／ｄＬ～約１４００ｍｇ／ｄＬの空腹時のベースラインのトリグリセリドレベルを有する。いくつかの実施形態では、対象又は対象群は、約５０ｍｇ／ｄＬ、約５５ｍｇ／ｄＬ、約６０ｍｇ／ｄＬ、約６５ｍｇ／ｄＬ、約７０ｍｇ／ｄＬ、約７５ｍｇ／ｄＬ、約８０ｍｇ／ｄＬ、約８５ｍｇ／ｄＬ、約９０ｍｇ／ｄＬ、約９５ｍｇ／ｄＬ、約１００ｍｇ／ｄＬ、約１０５ｍｇ／ｄＬ、約１１０ｍｇ／ｄＬ、約１１５ｍｇ／ｄＬ、約１２０ｍｇ／ｄＬ、約１２５ｍｇ／ｄＬ、約１３０ｍｇ／ｄＬ、約１３５ｍｇ／ｄＬ、約１４０ｍｇ／ｄＬ、約１４５ｍｇ／ｄＬ、約１５０ｍｇ／ｄＬ、約１５５ｍｇ／ｄＬ、約１６０ｍｇ／ｄＬ、約１６５ｍｇ／ｄＬ、約１７０ｍｇ／ｄＬ、約１７５ｍｇ／ｄＬ、約１８０ｍｇ／ｄＬ、約１８５ｍｇ／ｄＬ、約１９０ｍｇ／ｄＬ、約１９５ｍｇ／ｄＬ、約２００ｍｇ／ｄＬ、約２０５ｍｇ／ｄＬ、約２１０ｍｇ／ｄＬ、約２１５ｍｇ／ｄＬ、約２２０ｍｇ／ｄＬ、約２２５ｍｇ／ｄＬ、約２３０ｍｇ／ｄＬ、約２３５ｍｇ／ｄＬ、約２４０ｍｇ／ｄＬ、約２４５ｍｇ／ｄＬ、約２５０ｍｇ／ｄＬ、約２５５ｍｇ／ｄＬ、約２６０ｍｇ／ｄＬ、約２６５ｍｇ／ｄＬ、約２７０ｍｇ／ｄＬ、約２７５ｍｇ／ｄＬ、約２８０ｍｇ／ｄＬ、約２８５ｍｇ／ｄＬ、約２９０ｍｇ／ｄＬ、約２９５ｍｇ／ｄＬ、約３００ｍｇ／ｄＬ、約３０５ｍｇ／ｄＬ、約３１０ｍｇ／ｄＬ、約３１５ｍｇ／ｄＬ、約３２０ｍｇ／ｄＬ、約３２５ｍｇ／ｄＬ、約３３０ｍｇ／ｄＬ、約３３５ｍｇ／ｄＬ、約３４０ｍｇ／ｄＬ、約３４５ｍｇ／ｄＬ、約３５０ｍｇ／ｄＬ、約３５５ｍｇ／ｄＬ、約３６０ｍｇ／ｄＬ、約３６５ｍｇ／ｄＬ、約３７０ｍｇ／ｄＬ、約３７５ｍｇ／ｄＬ、約３８０ｍｇ／ｄＬ、約３８５ｍｇ／ｄＬ、約３９０ｍｇ／ｄＬ、約３９５ｍｇ／ｄＬ、約４００ｍｇ／ｄＬ、約４０５ｍｇ／ｄＬ、約４１０ｍｇ／ｄＬ、約４１５ｍｇ／ｄＬ、約４２０ｍｇ／ｄＬ、約４２５ｍｇ／ｄＬ、約４３０ｍｇ／ｄＬ、約４３５ｍｇ／ｄＬ、約４４０ｍｇ／ｄＬ、約４４５ｍｇ／ｄＬ、約４５０ｍｇ／ｄＬ、約４５５ｍｇ／ｄＬ、約４６０ｍｇ／ｄＬ、約４６５ｍｇ／ｄＬ、約４７０ｍｇ／ｄＬ、約４７５ｍｇ／ｄＬ、約４８０ｍｇ／ｄＬ、約４８５ｍｇ／ｄＬ、約４９０ｍｇ／ｄＬ、約４９５ｍｇ／ｄＬ、約５００ｍｇ／ｄＬ、約１０００ｍｇ／ｄＬ、約１１００ｍｇ／ｄＬ、約１２００ｍｇ／ｄＬ、約１３００ｍｇ／ｄＬ、約１４００ｍｇ／ｄＬ、約１５００ｍｇ／ｄＬ、約２０００ｍｇ／ｄＬ、約２５００ｍｇ／ｄＬ、約３０００ｍｇ／ｄＬ、約３５００ｍｇ／ｄＬ、約４０００ｍｇ／ｄＬ、約４５００ｍｇ／ｄＬ、約５０００ｍｇ／ｄＬ、又は約５０００ｍｇ／ｄＬ超の摂食時又は空腹時のベースラインのトリグリセリドレベル（又は対象群の場合はベースラインのトリグリセリドレベルの中央値）を有する。いくつかの実施形態では、対象又は対象群は、８０ｍｇ／ｄＬ以上、約１００ｍｇ／ｄＬ以上、約１２０ｍｇ／ｄＬ以上、約１５０ｍｇ／ｄＬ以上、約１７５ｍｇ／ｄＬ以上、約２５０ｍｇ／ｄＬ以上、約５００ｍｇ／ｄＬ以上、例えば、約１９０ｍｇ／ｄＬ～約２５０ｍｇ／ｄＬ、約８０ｍｇ／ｄＬ～約１９０ｍｇ／ｄＬ、約２５０ｍｇ／ｄＬ～約１４００ｍｇ／ｄＬ、約２００ｍｇ／ｄＬ～約５００ｍｇ／ｄＬ、約３００ｍｇ／ｄＬ～約１８００ｍｇ／ｄＬ、約５００ｍｇ／ｄＬ～約１５００ｍｇ／ｄＬ、約８０ｍｇ／ｄＬ～約１５００ｍｇ／ｄＬ、約８０ｍｇ／ｄＬ～約２０００ｍｇ／ｄＬ未満、約８０ｍｇ／ｄＬ～約２０００ｍｇ／ｄＬ、約５００ｍｇ／ｄＬ～約２０００ｍｇ／ｄＬ未満、又は約５００ｍｇ／ｄＬ～約２０００ｍｇ／ｄＬの摂食時又は空腹時のベースラインのトリグリセリドレベル（又は対象群の場合はベースラインのトリグリセリドレベルの中央値）を有する。
別の実施形態では、対象は、少なくとも約１００ｍｍＨｇ、少なくとも約１１５ｍｍＨｇ、少なくとも約１２０ｍｍＨｇ、少なくとも約１２５ｍｍＨｇ、少なくとも約１３０ｍｍＨｇ、少なくとも約１３５ｍｍＨｇ、少なくとも約１４０ｍｍＨｇ、少なくとも約１４５ｍｍＨｇ、少なくとも約１５０ｍｍＨｇ、少なくとも約１５５ｍｍＨｇ、少なくとも約１６０ｍｍＨｇ、少なくとも約１６５ｍｍＨｇ、又は少なくとも約１７０ｍｍＨｇの上昇したベースラインの血圧を有する。
いくつかの実施形態では、対象は、少なくとも約１００ｍｇ／ｄＬ、少なくとも約１１５ｍｇ／ｄＬ、少なくとも約１２０ｍｇ／ｄＬ、少なくとも約１２５ｍｇ／ｄＬ、少なくとも約１３０ｍｇ／ｄＬ、少なくとも約１３５ｍｇ／ｄＬ、少なくとも約１４０ｍｇ／ｄＬ、少なくとも約１４５ｍｇ／ｄＬ、少なくとも約１５０ｍｇ／ｄＬ、少なくとも約１５５ｍｇ／ｄＬ、少なくとも約１６０ｍｇ／ｄＬ、少なくとも約１６５ｍｇ／ｄＬ、又は少なくとも約１７０ｍｇ／ｄＬの上昇したベースラインの空腹時血糖値を有する。
いくつかの実施形態では、対象は、約６０ｍｇ／ｄＬ未満、約５５ｍｇ／ｄＬ未満、約５０ｍｇ／ｄＬ未満、約４５ｍｇ／ｄＬ未満、約４０ｍｇ／ｄＬ未満、約３５ｍｇ／ｄＬ未満、約３０ｍｇ／ｄＬ未満、約２５ｍｇ／ｄＬ未満、約２０ｍｇ／ｄＬ未満、約１５ｍｇ／ｄＬ未満、約１０ｍｇ／ｄＬ未満、約５ｍｇ／ｄＬ未満の低減したベースラインのＨＤＬ－Ｃレベルを有する。
いくつかの態様では、本開示は、対象において血液疾患を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、１５－ＨＥＰＥを対象に投与することを含む。別の実施形態では、方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを対象に投与することを含む。更に別の実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂肪酸の少なくとも約９０重量％に相当する。
いくつかの態様では、本開示は、対象において血液疾患を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。別の実施形態では、方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。更に別の実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂肪酸の少なくとも約９０重量％に相当する。
いくつかの実施形態では、本開示は、血液障害の治療及び／又は予防を必要とする対象において血液障害を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、１５－ヒドロキシエイコサペンタエン酸（１５－ＨＥＰＥ）又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。別の実施形態では、方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。別の実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂肪酸の少なくとも約９０重量％に相当する。
いくつかの態様では、本開示は、対象において血液疾患を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物の投与前に、対象が血液疾患の少なくとも１つのリスク因子を有すると判定すること、を更に含む。いくつかの実施形態では、方法は、１５－ＨＥＰＥの投与前に、対象のベースラインの赤血球数、赤血球分布幅、及び／又は網状赤血球数を測定することを更に含む。一実施形態では、対象は、赤血球数の増加、赤血球分布幅の低下、及び／又は網状赤血球数の低下を示す。別の実施形態では、方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。更に別の実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂肪酸の少なくとも約９０重量％に相当する。
いくつかの実施形態では、本開示は、血液障害の治療及び／又は予防を必要とする対象において血液障害を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、１５－ヒドロキシエイコサペンタエン酸（１５－ＨＥＰＥ）又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物の投与前に、対象が血液疾患の少なくとも１つのリスク因子を有すると判定すること、を更に含む。いくつかの実施形態では、方法は、１５－ＨＥＰＥの投与前に、対象のベースラインの赤血球数、赤血球分布幅、及び／又は網状赤血球数を測定することを更に含む。一実施形態では、対象は、赤血球数の増加、赤血球分布幅の低下、及び／又は網状赤血球数の低下を示す。別の実施形態では、方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。別の実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂肪酸の少なくとも約９０重量％に相当する。
いくつかの実施形態では、本開示は、ヘモグロビン異常の治療及び／又は予防を必要とする対象においてヘモグロビン異常を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、１５－ヒドロキシエイコサペンタエン酸（１５－ＨＥＰＥ）又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。別の実施形態では、方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。別の実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂肪酸の少なくとも約９０重量％に相当する。
いくつかの実施形態では、本開示は、ヘモグロビン異常の治療及び／又は予防を必要とする対象においてヘモグロビン異常を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、１５－ヒドロキシエイコサペンタエン酸（１５－ＨＥＰＥ）又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物の投与前に、対象がヘモグロビン異常の少なくとも１つのリスク因子を有すると判定すること、を更に含む。いくつかの実施形態では、方法は、１５－ＨＥＰＥの投与前に、対象のベースラインの赤血球数、赤血球分布幅、及び／又は網状赤血球数を測定することを更に含む。一実施形態では、対象は、赤血球数の増加、赤血球分布幅の低下、及び／又は網状赤血球数の低下を示す。別の実施形態では、方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。別の実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂肪酸の少なくとも約９０重量％に相当する。
いくつかの実施形態では、本開示は、赤血球障害の治療及び／又は予防を必要とする対象において赤血球障害を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。別の実施形態では、方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。別の実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂肪酸の少なくとも約９０重量％に相当する。
いくつかの実施形態では、本開示は、赤血球障害の治療及び／又は予防を必要とする対象において赤血球障害を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物の投与前に、対象が赤血球障害の少なくとも１つのリスク因子を有すると判定すること、を更に含む。いくつかの実施形態では、方法は、１５－ＨＥＰＥの投与前に、対象のベースラインの赤血球数、赤血球分布幅、及び／又は網状赤血球数を測定することを更に含む。一実施形態では、対象は、赤血球数の増加、赤血球分布幅の低下、及び／又は網状赤血球数の低下を示す。別の実施形態では、方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。別の実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂肪酸の少なくとも約９０重量％に相当する。
いくつかの実施形態では、本開示は、血液障害、ヘモグロビン異常、及び／又は血液赤血球障害の治療及び／又は予防を必要とする対象において血液障害、ヘモグロビン異常、及び／又は血液赤血球障害を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。別の実施形態では、方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。別の実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂肪酸の少なくとも約９０重量％に相当する。
いくつかの実施形態では、本開示は、血液障害、ヘモグロビン異常、及び／又は血液赤血球障害の治療及び／又は予防を必要とする対象において血液障害、ヘモグロビン異常、及び／又は血液赤血球障害を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物の投与前に、対象が血液障害、ヘモグロビン異常、及び／又は血液赤血球障害の少なくとも１つのリスク因子を有すると判定すること、を更に含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのリスク因子は、赤血球数の低下、赤血球分布幅の増加、及び／又は網状赤血球数の増加である。いくつかの実施形態では、対象は、赤血球数の増加、赤血球分布幅の低下、及び／又は網状赤血球数の低下のうちの１つ以上を示す。
いくつかの実施形態では、本開示は、血液障害、ヘモグロビン異常、及び／又は血液赤血球障害の治療及び／又は予防を必要とする対象において血液障害、ヘモグロビン異常、及び／又は血液赤血球障害を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。別の実施形態では、方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。別の実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂肪酸の少なくとも約９０重量％に相当する。別の実施形態では、血液障害、ヘモグロビン異常及び／又は赤血球障害は、遺伝性溶血性貧血、後天性溶血性貧血、ファンコニ貧血、鉄欠乏性貧血、葉酸欠乏症、Ｂ１２欠乏症、及び骨髄異形成症候群からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物の投与前に、対象が遺伝性溶血性貧血、後天性溶血性貧血、ファンコニ貧血、鉄欠乏性貧血、葉酸欠乏、Ｂ１２欠乏症、及び／又は骨髄異形成症候群の少なくとも１つのリスク因子を有すると判定することを更に含む。いくつかの実施形態では、方法は、１５－ＨＥＰＥの投与前に、対象のベースラインの赤血球数、赤血球分布幅、及び／又は網状赤血球数を測定することを更に含む。一実施形態では、対象は、赤血球数の増加、赤血球分布幅の低下、及び／又は網状赤血球数の低下を示す。
いくつかの実施形態では、本開示は、溶血性貧血の治療及び／又は予防を必要とする対象において溶血性貧血を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。別の実施形態では、方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。別の実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂肪酸の少なくとも約９０重量％に相当する。
いくつかの実施形態では、本開示は、溶血性貧血の治療及び／又は予防を必要とする対象において溶血性貧血を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物の投与前に、対象が溶血性貧血の少なくとも１つのリスク因子を有すると判定すること、を更に含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのリスク因子は、赤血球数の低下、赤血球分布幅の増加、及び／又は網状赤血球数の増加である。いくつかの実施形態では、対象は、赤血球数の増加、赤血球分布幅の低下、及び／又は網状赤血球数の低下のうちの１つ以上を示す。
いくつかの実施形態では、本開示は、溶血性貧血の治療及び／又は予防を必要とする対象において溶血性貧血を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂肪酸の少なくとも約９０重量％に相当する。いくつかの実施形態では、溶血性貧血は、遺伝性溶血性貧血又は後天性溶血性貧血である。別の実施形態では、遺伝性溶血性貧血は、鎌状赤血球症、鎌状赤血球貧血、β－サラセミア、及び遺伝性球状赤血球症からなる群から選択される。更に別の実施形態では、後天性溶血性貧血は、感染症、薬物治療、血液悪性腫瘍、自己免疫疾患、脾機能亢進症、機械弁、及び輸血に続発するものからなる群から選択される。様々な実施形態では、鎌状赤血球症及び鎌状赤血球貧血は、鎌状赤血球クリーゼ、血管閉塞性クリーゼ、及び／又は脾臓血球貯留に関連する。いくつかの実施形態では、対象は、投与後に赤血球数の増加、赤血球分布幅の低下、及び網状赤血球数の低下を示す。
いくつかの実施形態では、本開示は、溶血性貧血の治療及び／又は予防を必要とする対象において溶血性貧血を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂肪酸の少なくとも約９０重量％に相当する。いくつかの実施形態では、溶血性貧血は、遺伝性溶血性貧血又は後天性溶血性貧血である。別の実施形態では、遺伝性溶血性貧血は、鎌状赤血球症、鎌状赤血球貧血、β－サラセミア、及び遺伝性球状赤血球症からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物の投与前に、対象が遺伝性溶血性貧血又は後天性溶血性貧血の少なくとも１つのリスク因子を有すると判定すること、を更に含む。更に別の実施形態では、後天性溶血性貧血は、感染症、薬物治療、血液悪性腫瘍、自己免疫疾患、脾機能亢進症、機械弁、及び輸血に続発するものからなる群から選択される。様々な実施形態では、鎌状赤血球症及び鎌状赤血球貧血は、鎌状赤血球クリーゼ、血管閉塞性クリーゼ、及び／又は脾臓血球貯留に関連する。いくつかの実施形態では、方法は、１５－ＨＥＰＥの投与前に、対象のベースラインの赤血球数、赤血球分布幅、及び／又は網状赤血球数を測定することを更に含む。一実施形態では、対象は、赤血球数の増加、赤血球分布幅の低下、及び／又は網状赤血球数の低下を示す。
本明細書に開示する組成物及び製剤は、血栓形成傾向障害の治療及び／又は予防に更に使用され得る。血栓形成傾向障害は、血栓症のリスクを増加させる異常な血液凝固を特徴とする疾患の一分類を指す。血栓形成傾向障害のリスク因子の非限定的な例としては、プロトロンビン時間の低減、活性化部分トロンボプラスチン時間の低減、及びフィブリノゲン濃度の増加が挙げられる。
いくつかの実施形態では、対象は、標準を少なくとも１０％下回る、標準を少なくとも１５％下回る、標準を少なくとも２０％未満下回る、標準を少なくとも２５％未満下回る、又は標準を少なくとも３０％下回る、低減したプロトロンビン時間を有する。
いくつかの実施形態では、対象は、標準を少なくとも１０％下回る、標準を少なくとも１５％下回る、標準を少なくとも２０％未満下回る、標準を少なくとも２５％未満下回る、又は標準を少なくとも３０％下回る、低減した活性化部分トロンボプラスチン時間を有する。
いくつかの実施形態では、対象は、標準を少なくとも１０％下回る、標準を少なくとも１５％下回る、標準を少なくとも２０％未満下回る、標準を少なくとも２５％未満下回る、又は標準を少なくとも３０％下回る、増加したフィブリノゲン濃度を有する。
いくつかの実施形態では、本開示は、血栓形成傾向障害の治療及び／又は予防を必要とする対象において血栓形成傾向障害を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、１５－ヒドロキシエイコサペンタエン酸（１５－ＨＥＰＥ）又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。別の実施形態では、方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。別の実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂肪酸の少なくとも約９０重量％に相当する。
いくつかの実施形態では、本開示は、血栓形成傾向障害の治療及び／又は予防を必要とする対象において血栓形成傾向障害を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物の投与前に、対象が血栓形成傾向障害の少なくとも１つのリスク因子を有すると判定すること、を更に含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのリスク因子は、プロトロンビン時間の低減、活性化部分トロンボプラスチン時間の低減、及び／又はフィブリノゲン濃度の増加である。いくつかの実施形態では、対象は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物の投与後に、プロトロンビン時間の延長、活性化部分トロンボプラスチン時間の延長、及び／又はフィブリノゲン濃度の低下のうちの１つ以上を示す。
いくつかの実施形態では、本開示は、静脈血栓塞栓症の治療及び／又は予防を必要とする対象において静脈血栓塞栓症を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、１５－ヒドロキシエイコサペンタエン酸（１５－ＨＥＰＥ）又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。別の実施形態では、方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。別の実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂肪酸の少なくとも約９０重量％に相当する。
いくつかの実施形態では、本開示は、静脈血栓塞栓症の治療及び／又は予防を必要とする対象において静脈血栓塞栓症を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物の投与前に、対象が静脈血栓塞栓症の少なくとも１つのリスク因子を有すると決定することを更に含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのリスク因子は、プロトロンビン時間の低減、活性化部分トロンボプラスチン時間の低減、及び／又はフィブリノゲン濃度の増加である。いくつかの実施形態では、対象は、プロトロンビン時間の延長、活性化部分トロンボプラスチン時間の延長、及び／又はフィブリノゲン濃度の低下のうちの１つ以上を示す。
いくつかの実施形態では、本開示は、動脈血栓症の治療及び／又は予防を必要とする対象において動脈血栓症を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、１５－ヒドロキシエイコサペンタエン酸（１５－ＨＥＰＥ）又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。別の実施形態では、方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。別の実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂肪酸の少なくとも約９０重量％に相当する。
いくつかの実施形態では、本開示は、動脈血栓症の治療及び／又は予防を必要とする対象において動脈血栓症を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物の投与前に、対象が動脈血栓症の少なくとも１つのリスク因子を有すると判定すること、を更に含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのリスク因子は、プロトロンビン時間の低減、活性化部分トロンボプラスチン時間の低減、及び／又はフィブリノゲン濃度の増加である。いくつかの実施形態では、対象は、プロトロンビン時間の延長、活性化部分トロンボプラスチン時間の延長、及び／又はフィブリノゲン濃度の低下のうちの１つ以上を示す。
いくつかの実施形態では、本開示は、塞栓症の予防を必要とする対象において塞栓症を予防する方法を提供し、方法は、１５－ヒドロキシエイコサペンタエン酸（１５－ＨＥＰＥ）又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。別の実施形態では、方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。別の実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂肪酸の少なくとも約９０重量％に相当する。
いくつかの実施形態では、本開示は、塞栓症の予防を必要とする対象において塞栓症を予防する方法を提供し、方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物の投与前に、対象が、少なくとも１つの塞栓症を発症するリスク因子を有すると判定すること、を更に含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのリスク因子は、プロトロンビン時間の低減、活性化部分トロンボプラスチン時間の低減、及び／又はフィブリノゲン濃度の増加である。いくつかの実施形態では、対象は、プロトロンビン時間の延長、活性化部分トロンボプラスチン時間の延長、及び／又はフィブリノゲン濃度の低下のうちの１つ以上を示す。
いくつかの態様では、本開示は、対象において内皮機能不全を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、１５－ＨＥＰＥを対象に投与することを含む。別の実施形態では、方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを対象に投与することを含む。更に別の実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂肪酸の少なくとも約９０重量％に相当する。
いくつかの態様では、本開示は、対象におい内皮機能不全を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。別の実施形態では、方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。更に別の実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂肪酸の少なくとも約９０重量％に相当する。
いくつかの態様では、本開示は、細胞ストレスアポトーシスを治療する、予防する、及び／又は低減させる方法を提供し、方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、対象は、Ｂｃｌ－２ファミリー由来のタンパク質、カスパーゼの活性化フラグメント、及び／又は切断されたＰＡＲＰ－１などアポトーシスに関連するマーカーの低減を示す。
いくつかの実施形態では、本開示は、炎症を治療する、予防する、及び／又は低減させる方法を提供し、方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、対象は、Ｔ細胞の活性化、Ｂ細胞の活性化、及び／又は走化性の低減を示す。
本明細書に開示する組成物及び製剤は、心血管疾患又は心血管障害の治療又は予防に使用され得る。一実施形態では、心血管疾患又は心血管障害は、脂質異常症、高脂血症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、原発性高コレステロール血症、原発性高脂血症、一般的な原発性高脂血症、一般的な高コレステロール血症、家族性高脂血症、家族性原発性高脂血症、家族性高コレステロール血症、家族性高トリグリセリド血症、家族性複合高脂血症、家族性欠陥アポリポタンパク質ｂ－１００、二次性高脂血症、混合型高脂血症、心血管疾患、残存心血管リスク、アテローム性動脈硬化プラークの形成／進行の予防、微小血管疾患、大血管疾患、アテローム性動脈硬化症、冠状動脈性アテローム性動脈硬化症、拡張機能障害、心血管リスクの低減、主要な冠状動脈事象の予防、主要な有害な心血管系事象の予防、虚血性事象の予防、心血管系事象の二次／一次予防、心血管系死の予防、心筋梗塞、脳卒中、アンギナ、正常な内皮機能の回復、糖尿病、真性糖尿病、インスリン抵抗性、高インスリン血症、高血糖症、血糖異常、血糖制御の誘導、耐糖能異常、及び空腹時血糖異常から選択される。微小血管疾患の非限定的な例として、網膜症、腎症、及び神経障害が挙げられる。大血管疾患の非限定的な例として、脳卒中、末梢血管疾患、肢虚血、及び心臓病が挙げられる。いくつかの実施形態では、対象は、非アルコール性肝疾患、胆汁うっ滞性肝疾患、腎臓病、又はメタボリックシンドロームを有する。心血管疾患の前述の例のうちのいずれも、心血管代謝性疾患の非限定的な例を指し得る。
いくつかの態様では、本開示は、対象において心血管疾患を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、１５－ＨＥＰＥを対象に投与することを含む。
いくつかの態様では、本開示は、対象において心血管疾患を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。
別の実施形態では、本開示は、糖尿病（例えば、Ｉ型又はＩＩ型）を有する対象において血液障害を予防する方法を提供し、方法は、１５－ＨＥＰＥを対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、１５－ＨＥＰＥの投与前に、対象が糖尿病を有すると判定することを更に含む。別の実施形態では、本方法は、対象の体重当たり約１０ｍｇ（ｍｇ／ｋｇ）、約５０ｍｇ／ｋｇ、約２５０ｍｇ／ｋｇ、又は約５００ｍｇ／ｋｇの１５－ＨＥＰＥを対象に投与することを含む。更に別の実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂肪酸の少なくとも約９０重量％に相当する。
別の実施形態では、本開示は、糖尿病（例えば、Ｉ型又はＩＩ型）を有する対象において血液障害を予防する方法を提供し、方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物の投与前に、対象が糖尿病を有すると判定することを更に含む。別の実施形態では、本方法は、対象の体重当たり約１０ｍｇ（ｍｇ／ｋｇ）、約５０ｍｇ／ｋｇ、約２５０ｍｇ／ｋｇ、又は約５００ｍｇ／ｋｇの１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。更に別の実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂肪酸の少なくとも約９０重量％に相当する。
別の態様では、本開示は、心血管疾患を有する対象において血液障害を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、１５－ＨＥＰＥを対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、１５－ＨＥＰＥの投与前に、対象が心血管を有すると判定することを更に含む。別の実施形態では、本方法は、対象の体重当たり約１０ｍｇ（ｍｇ／ｋｇ）、約５０ｍｇ／ｋｇ、約２５０ｍｇ／ｋｇ、又は約５００ｍｇ／ｋｇの１５－ＨＥＰＥを対象に投与することを含む。更に別の実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂肪酸の少なくとも約９０重量％に相当する。
別の態様では、本開示は、心血管疾患を有する対象において血液障害を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物の投与前に、対象が心血管を有すると判定することを更に含む。別の実施形態では、本方法は、対象の体重当たり約１０ｍｇ（ｍｇ／ｋｇ）、約５０ｍｇ／ｋｇ、約２５０ｍｇ／ｋｇ、又は約５００ｍｇ／ｋｇの１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。更に別の実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂肪酸の少なくとも約９０重量％に相当する。
別の態様では、本開示は、高血圧を有する対象において血液障害を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、１５－ＨＥＰＥを対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、１５－ＨＥＰＥの投与前に、対象が高血圧を有すると判定することを更に含む。いくつかの実施形態では、対象は、少なくとも約１３０ｍｍＨｇ、少なくとも約１３５ｍｍＨｇ、少なくとも約１４０ｍｍＨｇ、少なくとも約１４５ｍｍＨｇ、少なくとも約１５０ｍｍＨｇ、少なくとも約１５５ｍｍＨｇ、少なくとも約１６０ｍｍＨｇ、少なくとも約１６５ｍｍＨｇ、又は少なくとも約１７０ｍｍＨｇの高血圧を有する。別の実施形態では、方法は、約１０ｍｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約２５０ｍｇ／ｋｇ、又は約５００ｍｇ／ｋｇの１５－ＨＥＰＥを対象に投与することを含む。更に別の実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂肪酸の少なくとも約９０重量％に相当する。
別の態様では、本開示は、高血圧を有する対象において血液障害を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物の投与前に、対象が高血圧を有すると判定することを更に含む。いくつかの実施形態では、対象は、少なくとも約１３０ｍｍＨｇ、少なくとも約１３５ｍｍＨｇ、少なくとも約１４０ｍｍＨｇ、少なくとも約１４５ｍｍＨｇ、少なくとも約１５０ｍｍＨｇ、少なくとも約１５５ｍｍＨｇ、少なくとも約１６０ｍｍＨｇ、少なくとも約１６５ｍｍＨｇ、又は少なくとも約１７０ｍｍＨｇの高血圧を有する。別の実施形態では、方法は、約１０ｍｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約２５０ｍｇ／ｋｇ、又は約５００ｍｇ／ｋｇの１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。更に別の実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂肪酸の少なくとも約９０重量％に相当する。
本明細書に開示する組成物及び製剤はまた、心血管疾患、及び／又は血液疾患を有する対象におけるサイトカイン及び／又はケモカインを低減するために使用され得る。非限定的なサイトカイン及び／又はケモカインとしては、α－平滑筋作用（α－ＳＭＡ）、メタロペプチダーゼ阻害剤－１（ＴＩＭＰ－１）、トランスフォーミング増殖因子ベータ－β（ＴＧＦ－β）、及び１型コラーゲンが挙げられる。
別の実施形態では、本発明の組成物で治療すると、対象又は対象群は、以下の転帰のうちの１つ以上を示す。
（ａ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、血清アミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）及び／又はアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）のレベルの増加なし、又は低減、
（ｂ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ビリルビン（ＢＵＮ）レベルの増加なし、又は低減、
（ｃ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、線維症領域の増加なし、又は低減、
（ｄ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、空腹時血糖値の増加なし、又は低減、
（ｅ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、インスリンレベルの増加なし、又は低減、
（ｆ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、アルカリ性リン酸塩（ＡＬＰ）レベルの増加なし、又は低減、
（ｇ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ヘモグロビンＡ１Ｃ（ＨｂＡ１Ｃ）レベルの増加なし、又は低減、
（ｈ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、インスリン抵抗性の恒常性モデル評価（ＨＯＭＡ－ＩＲ）の増加なし、又は低減、
（ｉ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、脂肪組織のインスリン抵抗性（ａｄｉｐｏ－ＩＲ）レベルの増加なし、又は低減、
（ｊ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、総コレステロールレベルの増加なし、又は低減、
（ｋ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、トリグリセリドレベルの増加なし、又は低減、
（ｌ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ジグリセリドレベルの増加なし、又は低減、
（ｍ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、超低密度リポタンパク質コレステロール（ＶＬＤＬ－Ｃ）レベルの増加なし、又は低減、
（ｎ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、レムナント様粒子コレステロール（ＲＬＰ－Ｃ）レベルの増加なし、又は低減、
（ｏ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、非高密度リポタンパク質コレステロール（非ＨＤＬ－Ｃ）レベルの増加なし、又は低減、
（ｐ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、高密度リポタンパク質コレステロール（ＨＤＬ－Ｃ）レベルの低減なし、又は増加、
（ｑ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ－Ｃ）レベルの増加なし、又は低減、
（ｒ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、腎臓ヒドロキシプロリンレベルの増加なし、又は低減、
（ｓ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、インターロイキン－３３（ＩＬ－３３）レベルの増加なし、又は低減、
（ｔ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、インターロイキン－１７（ＩＬ－１７）レベルの増加なし、又は低減、
（ｕ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、アリール炭化水素受容体（ＡｈＲ）のレベルの増加なし、又は低減、
（ｖ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＴＮＦ様リガンド１Ａ（ＴＬ１Ａ）レベルの増加なし、又は低減、
（ｗ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ－α）レベルの増加なし、又は低減、
（ｘ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、インターロイキン－１３（ＩＬ－１３）レベルの増加なし、又は低減、
（ｙ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、インターロイキン－６（ＩＬ－６）レベルの増加なし、又は低減、
（ｚ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、インターロイキン１ベータ－β（ＩＬ－１β）レベルの増加なし、又は低減、
（ａａ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、１型コラーゲンレベルの増加なし、又は低減、
（ｂｂ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、トランスフォーミング増殖因子β（ＴＧＦ－β）レベルの増加なし、又は低減、
（ｃｃ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、α－平滑筋作用（α－ＳＭＡ）レベルの増加なし、又は低減、
（ｄｄ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーメンバー１１Ａ（ＴＮＲＳＦ１１Ａ）レベルの増加なし、又は低減、
（ｅｅ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、セリンプロテアーゼ２（ＰＲＳＳ２）レベルの増加なし、又は低減、
（ｆｆ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、アミンオキシダーゼ、銅含有３（ＡＯＣ３）レベルの増加なし、又は低減、
（ｇｇ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、白血球免疫グロブリン様受容体Ｂ１（ＬＩＬＢＲ１）レベルの増加なし、又は低減、
（ｈｈ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、トランスフェリン受容体タンパク質１（ＴＲ）レベルの増加なし、又は低減、
（ｉｉ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、エラフィン（ＰＩ３）レベルの増加なし、又は低減、
（ｊｊ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、血清アミロイドＡ４（ＳＡＡ４）レベルの増加なし、又は低減、
（ｋｋ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、単球走化性タンパク質－１（ＭＣＰ－１）レベルの増加なし、又は低減、
（ｌｌ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド１６（ＣＣＬ１６）レベルの増加なし、又は低減、
（ｍｍ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ｔｒｅｍ様転写物２（ＴＬＴ２）レベルの増加なし、又は低減、
（ｎｎ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ジペプチジルペプチダーゼ４（ＤＰＰ４）レベルの増加なし、又は低減、並びに
（ｏｏ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、メタロプロテイナーゼ阻害剤－１（ＴＩＭＰ－１）レベルの増加なし、又は低減、
（ｐｐ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、プラスミノーゲンアクチベーター阻害剤－１（ＰＡＩ－１）レベルの増加なし、又は低減、
（ｑｑ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＮＡＦＬＤスコア（ＮＦＳ）の増加なし、又は低減、並びに
（ｒｒ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、線維症－４（ＦＩＢ－４）レベルの増加なし、又は低減、
（ｓｓ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、肝硬度レベルの増加なし、又は低減、
（ｔｔ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、肝臓脂肪含有量の増加なし、又は低減、
（ｕｕ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、グリセロリン脂質レベルの低減なし、又は増加、
（ｖｖ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、血圧の増加なし、又は低減、
（ｗｗ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、強化肝線維症（ＥＬＦ）スコアの増加なし、又は低減、
（ｘｘ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、肺及び／又は皮膚線維芽細胞におけるコラーゲン産生の増加なし、又は低減、
（ｙｙ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、グルコース取り込みの低減なし、又は増加、
（ｚｚ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して肺及び／又は皮膚線維芽細胞の生存率の増加、
（ａｂ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、インターロイキン－８（ＩＬ－８）レベルの変化なし、又は低減、
（ａｃ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、インターロイキン－２３（ＩＬ－２３）レベルの変化なし、又は低減、
（ａｄ）ベースライン、プラセボ対照、及び／若しくは未治療の患者に対して、インターレキン－１１（ＩＬ－１１）レベルの変化なし、若しくは低減、並びに／又は
（ａｅ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、インターフェロンγ（ＩＦＮγ）レベルの変化なし、又は低減、
（ａｆ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、Ｔ及び／又はＢ細胞の活性化の変化なし、又は低減、
（ａｇ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、走化性の変化なし、又は低減、
（ａｈ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、リン酸化Ｂ細胞リンパ腫２（Ｂｃｌ－２）ファミリーメンバーの変化なし、又は低減、
（ａｉ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、カスパーゼの活性化フラグメントレベルの変化なし、又は低減、
（ａｊ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、切断されたポリ（ＡＤＰ－リボース）ポリメラーゼ－１（ＰＡＲＰ－１）レベルの変化なし、又は低減、
（ａｋ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、腹囲の変化なし、又は低減、
（ａｌ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＡＳＴ対血小板分配指数（ＡＰＲＩ）の変化なし、又は低減、
（ａｍ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、肝臓の炎症及び線維症（ＬＩＦ）スコアの変化なし、又は低減、
（ａｎ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、Ｌｏｋスコアの変化なし、又は低減、
（ａｏ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、線維症スコアの変化なし、又は低減、
（ａｐ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、キングスコアの変化なし、又は低減、
（ａｑ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ボナチーニスコアの変化なし、又は低減、
（ａｒ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、一過性エラストグラフィ（ＴＥ）スコアの変化なし、又は低減。
（ａｓ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、血管接着分子の増加なし、又は低減、
（ａｔ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、心血管リスクタンパク質の増加なし、又は低減、
（ａｕ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ケモカインの増加なし、又は低減、
（ａｖ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバーの増加なし、又は低減、
（ａｗ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して赤血球数の変化なし、又は増加、
（ａｘ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して白血球数の変化なし、又は増加、
（ａｙ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して血小板数の変化なし、又は増加、
（ａｚ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対するプロトロンビン時間の変化なし、又は増加、
（ｂａ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対する活性化部分トロンボプラスチン時間の変化なし、又は増加、
（ｂｃ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対してヘモグロビン産生の変化なし、又は増加、
（ｂｄ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対してヘモグロビン四量体のβグロビン鎖の合成の変化なし、又は増加、
（ｂｅ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対する赤血球溶血の変化なし、又は低減、
（ｂｆ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対する息切れの変化なし、又は低減、
（ｂｇ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対する心拍数の変化なし、又は低減、
（ｂｈ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対する脾臓サイズの変化なし、又は低減、
（ｂｉ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対する肝臓サイズの変化なし、又は低減、
（ｂｊ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対する指炎の変化なし、又は低減、
（ｂｋ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対する疼痛発作の変化なし、又は低減、
（ｂｌ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対する異常な血塊の発生の変化なし、又は低減、
（ｂｍ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対する赤血球分布幅の変化なし、又は低減、
（ｂｎ）ベースライン、プラセボ対照、及び／若しくは未治療の患者に対する網状赤血球数の変化なし、若しくは低減、並びに／又は
（ｂｏ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療患者に対するフィブリノゲン濃度の変化なし、又は低減。
一実施形態では、本発明の方法は、対象又は対象群への投与前に、上の（ａ）～（ｂｏ）に記載の１つ以上のマーカー又はパラメーターのベースラインレベルを測定することを含む。別の実施形態では、方法は、（ａ）～（ｂｏ）に記載の１つ以上のマーカー又はパラメーターのベースラインレベルの測定後、本明細書に開示する組成物を対象に投与することと、続いて、当該１つ以上のマーカーの追加測定を行うことと、を含む。
別の実施形態では、例えば、約１～約１２週間、約１～約８週間、又は約１～約４週間の期間にわたっての本発明の組成物での治療時に、対象又は対象群は、すぐ上に記載の転帰（ａ）～（ｂｏ）のうちのいずれか５個以上、いずれか１０個以上、いずれか１５個以上、いずれか２０個以上、いずれか２５個以上、いずれか３０個以上、いずれか３５個以上、いずれか４０個以上、いずれか４５個以上、いずれか５０個以上、いずれか５５個以上、いずれか６０個以上、いずれか６５個以上、いずれか７０個以上、いずれか７５個以上、いずれか８０個以上、いずれか８５個以上、いずれか９０個以上、又は９１個全てを示す。
別の実施形態では、本発明の組成物で治療すると、対象又は対象群は、以下の転帰のうちの１つ以上を示す。
（ａ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、血清ＡＬＴ及び／又はＡＳＴのレベルの増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｂ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＢＵＮレベルの増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｃ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、線維症領域の増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｄ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、空腹時血糖値の増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｅ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、インスリンの増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｆ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＡＬＰレベルの増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｇ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＨＢ１Ａｃレベルの増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｈ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＨＯＭＡ－ＩＲレベルの増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｉ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ａｄｉｐｏ－ＩＲレベルの増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｊ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、総コレステロールレベルの増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｋ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、トリグリセリドレベルの増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｌ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ジグリセリドレベルの増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｍ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＶＬＤＬ－Ｃレベルの増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｎ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＲＬＰ－Ｃレベルの増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｏ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、非ＨＤＬ－Ｃレベルの増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｐ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＨＤＬ－Ｃレベルの低減なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の増加、
（ｑ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＬＤＬ－Ｃレベルの増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｒ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、腎臓ヒドロキシプロリンレベルの増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｓ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＩＬ－３３レベルの増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｔ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＩＬ－１７レベルの増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｕ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＡｈＲレベルの増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｖ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＴＬ１Ａレベルの増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｗ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＴＮＦ－αレベルの増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｘ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＩＬ－１３レベルの増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｙ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＩＬ－６レベルの増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｚ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＩＬ－１βレベルの増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ａａ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、１型コラーゲンレベルの増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｂｂ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＴＧＦ－βレベルの増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｃｃ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、α－ＳＭＡの増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｄｄ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＴＮＲＳＦ１１Ａの増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｅｅ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＰＲＳＳ２レベルの増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減。
（ｆｆ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＡＯＣ３レベルの増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｇｇ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＬＩＬＢＲ１レベルの増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｈｈ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＴＲレベルの増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｉｉ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＰＩ３の増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｊｊ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＳＡＡ４レベルの増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｋｋ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＭＣＰ－１レベルの増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｌｌ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＣＣＬ１６レベルの増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｍｍ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＴＬＴ２レベルの増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｎｎ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＤＰＰ４レベルの増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｏｏ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＴＩＭＰ－１レベルの増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｐｐ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＰＡＩ－１レベルの増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｑｑ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＮＦＳの増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｒｒ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＦＩＢ－４レベルの増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｓｓ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、肝硬度の増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｔｔ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、肝臓脂肪含有量の増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｕｕ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、グリセロリン脂質レベルの低減なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の増加、
（ｖｖ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、血圧の増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｗｗ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＥＬＦスコアの増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｚｚ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、肺及び／又は皮膚線維芽細胞におけるコラーゲン産生スコアの増加なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｙｙ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、グルコース取り込みの低減なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の増加、
（ｚｚ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、肺及び／又は皮膚線維芽細胞の生存率の少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％の増加、
（ａｂ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＩＬ－８レベルスコアの変化なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ａｃ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＩＬ－２３レベルの変化なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、並びに／又は、
（ａｄ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＩＬ－１１レベルスコアの変化なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ａｅ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＩＦＮγレベルの変化なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ａｆ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、Ｔ及び／又はＢ細胞の活性化の変化なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ａｇ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、走化性の変化なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ａｈ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、Ｂｃｌ－２ファミリーメンバーの変化なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ａｉ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、カスパーゼの活性化フラグメントレベルの変化なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ａｊ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、切断されたＰＡＲＰ－１レベルの変化なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ａｋ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、腹囲の変化なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ａｌ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＡＲＰＩの変化なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ａｍ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＬＩＦスコアの変化なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ａｎ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、Ｌｏｋスコアの変化なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ａｏ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、線維症スコアの変化なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ａｐ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、キングスコアの変化なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ａｑ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ボナチーニスコアの変化なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、及び／又は
（ａｒ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ＴＥスコアの変化なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減。
（ａｓ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、血管接着分子の少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％の増加、
（ａｔ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、心血管リスクタンパク質の少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の増加、
（ａｕ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ケモカインの少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の増加、
（ａｖ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバーの少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％の増加。
（ａｗ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、赤血球数の変化なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の増加、
（ａｘ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、白血球数の変化なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の増加、
（ａｙ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、血小板数の変化なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の増加、
（ａｚ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、プロトロンビン時間時間の変化なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の増加、
（ｂａ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、活性化部分トロンボプラスチン時間の変化なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の増加、
（ｂｃ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ヘモグロビン産生の変化なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の増加、
（ｂｄ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、ヘモグロビン四量体のβグロビン鎖の合成の変化なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の増加、
（ｂｅ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、赤血球溶血の変化なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｂｆ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、息切れの変化なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｂｇ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、心拍数の変化なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｂｈ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、脾臓サイズの変化なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｂｉ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、肝臓サイズの変化なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｂｊ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、指炎の変化なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｂｋ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、疼痛発作の変化なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｂｌ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、異常な血塊の発生の変化なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｂｍ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、赤血球分布の変化なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、
（ｂｎ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、網状赤血球数の変化なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減、並びに／又は
（ｂｏ）ベースライン、プラセボ対照、及び／又は未治療の患者に対して、フィブリノゲン濃度の変化なし、又は少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、若しくは少なくとも約９５％の低減。
更なる説明なしに、当業者は、前述の説明及び以下の例示的な実施例を使用して、本開示の薬剤を製造及び利用し、特許請求される方法を実施することができると考えられる。以下の実施例は、本開示の実施を容易にするために提供するものであり、決して本開示の残りの部分を限定するものとして解釈するべきではない。
実施例１：片側尿管閉塞誘導性腎間質性線維症
この研究の目的は、ＵＵＯ誘導性腎間質性線維症に対するＤＳ１０９（１５－ＨＥＴｒＥ）及びＤＳ１０２（１５－ＨＥＰＥ）の効果を調べることであった。
図１は、手術及び治療から研究の１４日目までの研究計画を示す。
１．１ 材料及び方法
試験物質：この研究の試験物質は、ＤＳ１０９（１５－ＨＥＴｒＥ）及びＤＳ１０２（１５－ＨＥＰＥ）であった。各物質の投薬溶液を調製するために、最初にＤＳ１０９を秤量し、次いで０．５％のヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）のビヒクル中に溶解し、ＤＳ１０２を０．５％のＨＰＭＣのビヒクル中に希釈した。
ＵＵＯ手術：研究の０日目に、ペントバルビタールナトリウム麻酔下でマウスにＵＵＯ手術を実施した。最初にマウスの毛を剃り、次いで腹部を切開してマウスの左尿管を露出させた。２点において４－０ナイロン縫合糸で尿管を結紮した。次いで、マウスの腹膜及び皮膚を縫合糸で閉じ、麻酔から回復するまでマウスを清潔なケージに移した。偽手術マウスでは、左尿管を露出させたが、結紮しなかった。
薬物投与：１０ミリリットル（ｍＬ）／キログラム（Ｋｇ）の容量で、ＤＳ１０９及びＤＳ１０２をマウスに経口投与した。
治療用量：ＤＳ１０９は、５、５０、及び２５０ミリグラム（ｍｇ）／Ｋｇの３つの用量レベルで研究の０日目～１３日目に１日１回投与した。ＤＳ１０２は、５０及び５００ｍｇ／ｋｇの２つの用量レベルで研究の０日目～１３日目に１日１回投与した。
動物：７週齢の雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス（すなわち、動物）を、Ｊａｐａｎ ＳＬＣ，Ｉｎｃ．（Ｊａｐａｎ）から入手し、管理条件下で飼育し、通常食（ＣＥ－２、ＣＬＥＡ Ｊａｐａｎ，Ｊａｐａｎ）を与えた。動物は、温度（例えば、２３±２℃）、湿度（例えば、４５±１０％）、照明（例えば、１２時間の人工的な明暗サイクル、８：００～２０：００に点灯）及び換気の管理条件下で、特定病原体除去（ＳＰＦ）施設内で飼育した。実験室で高圧を維持して、施設の汚染を防止した。動物は、ケージ当たり最大４匹のマウスを収容するＴＰＸケージ（ＣＬＥＡ Ｊａｐａｎ）内で飼育した。滅菌ペーパークリーン（Ｊａｐａｎ ＳＬＣ）を寝床に使用し、週に１回交換した。ケージ上部の金属製の蓋に入れた滅菌した固形の通常食を自由に与えた。ゴム栓及びシッパーチューブを備えた水筒から純水も自由に与えた。水筒を週に１回交換し、洗浄し、オートクレーブで滅菌して再利用した。マウスはイヤーパンチで識別し、各ケージには特定の識別コードを付けた。
腎臓生化学の測定：腎臓ヒドロキシプロリン含有量を定量化するために、凍結した左腎臓試料を次のようにアルカリ酸加水分解法で処理した。すなわち、腎臓試料を６５℃で２規定（Ｎ）の水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）中に溶解し、１２１℃で２０分間オートクレーブ処理した。溶解した試料（４００μＬ）を、４００μＬの６Ｎの塩酸（ＨＣｌ）を用いて１２１℃で２０分間酸加水分解し、１０ｍｇ／ｍＬの活性炭を含有する４００μＬの４ＮのＮａＯＨで中和した。ＡＣ緩衝液（例えば、２．２Ｍの酢酸／０．４８Ｍのクエン酸、４００μＬ）を試料に添加し、続いて遠心分離して上清を採取した。ヒドロキシプロリンの標準曲線は、１６μｇ／ｍＬで開始するｔｒａｎｓ－４－ヒドロキシ－Ｌ－プロリン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，ＵＳＡ）の段階希釈で作成した。調製した試料及び標準液（例えば、各４００μＬ）を４００μＬのクロラミンＴ溶液（Ｗａｋｏ Ｐｕｒｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｊａｐａｎ）と混合し、室温で２５分間インキュベートした。次いで、試料をエーリッヒの溶液（例えば、４００μＬ）と混合し、６５℃で２０分間加熱して発色させた。試料を氷上で冷却し、遠心分離して沈殿物を除去した後、各上清の光学密度を５６０ナノメートル（ｎｍ）で測定した。ヒドロキシプロリンの濃度は、ヒドロキシプロリン標準曲線から計算した。腎臓試料のタンパク質濃度を、ビシンコニン酸（ＢＣＡ）タンパク質アッセイキット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，ＵＳＡ）を使用して測定し、計算したヒドロキシプロリン値を正規化するために使用した。腎臓ヒドロキシプロリン含有量は、タンパク質ｍｇ当たりのマイクログラム（μｇ）として表した。
組織病理学的分析：コラーゲンの沈着を視覚化するために、腎臓切片を、ピクロシリウスレッド溶液（Ｗａｌｄｅｃｋ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して染色した。間質性線維症領域の定量化のために、皮質髄質領域における明視野画像を、デジタルカメラ（例えば、ＤＦＣ２９５、Ｌｅｉｃａ Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して２００倍の倍率でキャプチャし、５つの視野／切片における陽性領域をＩｍａｇｅＪソフトウェア（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，ＵＳＡ）を使用して測定した。
定量的ＲＴ－ＰＣＲ：ＲＮＡｉｓｏ（Ｔａｋａｒａ Ｂｉｏ，Ｊａｐａｎ）を使用し、製造元の指示に従って、腎臓試料から全リボ核酸（ＲＮＡ）を抽出した。１μｇのＲＮＡを、２０μＬの最終容量中に４．４マイクロモル濃度（ｍＭ）の塩化マグネシウム（ＭｇＣｌ２）（Ｆ．Ｈｏｆｆｍａｎｎ－Ｌａ Ｒｏｃｈｅ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、４０ＵのＲＮａｓｅ阻害剤（Ｔｏｙｏｂｏ，Ｊａｐａｎ）、０．５ｍＭのｄＮＴＰ（Ｐｒｏｍｅｇａ，ＵＳＡ）、６．２８μＭのランダムヘキサマー（Ｐｒｏｍｅｇａ）、５倍の第１のストランド緩衝液（Ｐｒｏｍｅｇａ）、１０ｍＭのジチオスレイトール（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ＵＳＡ）、及び２００ＵのＭＭＬＶ－ＲＴ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含有する反応混合物を使用して、逆転写した。反応は、３７℃で１時間、続いて９９℃で５分間行った。リアルタイムＰＣＲ ＤＩＣＥ及びＴＢ Ｇｒｅｅｎ（商標）Ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ Ｔａｑ（商標）ＩＩ（Ｔａｋａｒａ Ｂｉｏ）を使用してリアルタイムＰＣＲを実施した。相対的なマイクロＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の発現レベルを計算するために、各遺伝子（例えば、α－ＳＭＡ、ＴＩＭＰ－１、ＴＧＦ－β、及び１型コラーゲン）の発現を参照遺伝子３６Ｂ４（遺伝子記号：Ｒｐｌｐ０）の発現に対して正規化した。ＰＣＲ－プライマーセット及びプレートレイアウトに関する情報を、表１及び表２に記載する。
Figure 2023528562000001
Figure 2023528562000002
試料採取：血清試料については、直接心臓穿刺によって抗凝固剤を含まない血清分離チューブに非空腹時の血液を採取し、４℃にて、３，５００ｘｇで４分間遠心分離した。上清を採取し、輸送するために－８０℃で保存した。腎臓試料については、左腎臓を採取し、水平に２つに切断した。左腎臓の上部をブアン液中で固定し、次いでパラフィン中に包埋した。組織学的分析のためにパラフィンブロックを室温で保存した。左腎臓の下部を冠状に２つに切断した。左腎臓の前部を液体窒素中で急速凍結し、遺伝子発現アッセイのために－８０℃で保存した。左腎臓の後部を液体窒素中で急速凍結し、腎臓生化学のために－８０℃で保存した。
統計的検定：統計分析は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ６（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｉｎｃ．，ＵＳＡ）でボンフェローニ多重比較検定を使用して実行した。＜０．０５のＰ値は、統計的に有意であるとみなした。片側ｔ検定がＰ値＜０．１を返したときは、傾向（trend）又は傾向（tendency）があると想定した。結果は、平均±ＳＤとして表した。
１．２ 実験計画及び治療
研究計画は、以下の研究群を含んだ。
・群１（偽対照）：８匹の偽手術マウスを屠殺まで全く処置をしないままにした。
・群２（ビヒクル）：８匹のＵＵＯマウスに、ビヒクル［０．５％のＨＰＭＣ］を１０ｍＬ／ｋｇの容量で０日目～１３日目に１日１回経口投与した。
・群３（ＤＳ１０９低）：８匹のＵＵＯマウスに、ＤＳ１０９を補充したビヒクルを５ｍｇ／ｋｇの用量で０日目～１３日目に１日１回経口投与した。
・群４（ＤＳ１０９中）：８匹のＵＵＯマウスに、ＤＳ１０９を補充したビヒクルを５０ｍｇ／ｋｇの用量で０日目～１３日目に１日１回経口投与した。
・群５（ＤＳ１０９高）：８匹のＵＵＯマウスに、ＤＳ１０９を補充したビヒクルを２５０ｍｇ／ｋｇの用量で０日目～１３日目に１日１回経口投与した。
・群６（ＤＳ１０２低）：８匹のＵＵＯマウスに、ＤＳ１０２を補充したビヒクルを５０ｍｇ／ｋｇの用量で０日目～１３日目に１日１回経口投与した。
・群７（ＤＳ１０２高）：８匹のＵＵＯマウスに、ＤＳ１０２を補充したビヒクルを５００ｍｇ／ｋｇの用量で０日目～１３日目に１日１回経口投与した。
表３は、研究中の群１～７のそれぞれについて治療スケジュールを要約したものである。
Figure 2023528562000003
動物の監視及び屠殺：マウスの生存率、臨床兆候、行動を毎日監視した。個々の体重は、治療期間中、治療前に毎日測定した。各投与の約６０分後に、毒性、瀕死、及び死亡の有意な臨床兆候についてマウスを観察した。動物は、１４日目にイソフルラン麻酔（Ｐｆｉｚｅｒ Ｉｎｃ．）下での直接心臓穿刺による放血で屠殺した。
１．３ 結果
体重変化及び一般的な考慮事項：図２は、全ての動物の体重変化を示す。全ての動物において、体重は手術後に減少し、治療期間中に徐々に回復した。ビヒクル群の平均体重は、２日目～５日目及び１０日目～１１日目に、偽対照群の平均体重よりも有意に低かった。ビヒクル群と治療群との間では、治療期間中のいずれの日においても平均体重に有意な変化はなかった。治療期間中、全ての群において死亡した動物はいなかった。本研究では、いずれの動物も全身状態の悪化を示さなかった。
屠殺日の体重及び腎臓重量：図３及び表４は、屠殺日の動物の体重を示す。偽対照群とビヒクル群との間では、屠殺日の平均体重に有意な差はなかった。ビヒクル群と治療群との間では、屠殺日の平均体重に有意な差はなかった。
Figure 2023528562000004
図４Ａ～図４Ｄ及び表４は、屠殺日の動物の腎臓重量及び腎臓重量対体重比を示す。ビヒクル群は、偽対照群と比較して平均右腎臓重量の有意な増加を示した。しかしながら、ビヒクル群と治療群との間では、平均右腎臓重量に有意な差はなかった。ビヒクル群はまた、偽対照群と比較して平均右腎臓重量対体重比の有意な増加を示した。ビヒクル群と治療群との間では、平均右腎臓重量対体重比に有意な差はなかった。ビヒクル群はまた、偽対照群と比較して平均左腎臓重量の有意な増加を示した。ビヒクル群と治療群との間では、平均左腎臓重量に有意な差はなかった。最後に、ビヒクル群は、偽対照群と比較して平均左腎臓重量対体重比の有意な増加を示したが、ビヒクル群と治療群との間では、平均左腎臓重量対体重比に有意な差はなかった。
腎臓の化学：図５及び表５は、動物の腎臓ヒドロキシプロリン含有量を示す。ビヒクル群は、偽対照群と比較して腎臓ヒドロキシプロリン含有量の有意な増加を示した。ＤＳ１０９低、ＤＳ１０９高、ＤＳ１０２低、及びＤＳ１０２高群は、ビヒクル群と比較して腎臓ヒドロキシプロリン含有量の有意な低減を示した。ビヒクル群とＤＳ１０９中群との間では、腎臓ヒドロキシプロリン含有量に有意な差はなかった。
Figure 2023528562000005
組織学的分析：図６Ａ～図６Ｇ及び表６は、シリウスレッド染色を示し、図７は動物の線維症領域を示す。図６Ａは、シリウスレッドで染色された腎臓切片の代表的な顕微鏡写真を示す。ビヒクル群は、偽対照群と比較して線維症領域（シリウスレッド陽性領域）の割合の有意な増加を示した。ボンフェローニ多重比較により、ＤＳ１０９中群における線維症領域は、ビヒクル群と比較して低減する傾向にあることが明らかになった。ビヒクル群と他の治療群との間では、線維症領域に有意な差はなかった。顕著な外れ値が存在するためにマンホイットニーＵ検定を実施し、ＤＳ１０９低、ＤＳ１０９中、ＤＳ１０９高、ＤＳ１０２低、及びＤＳ１０２高群の線維症領域は、ビヒクル群と比較して低減する傾向にある（ｐ＜０．１）ことが明らかになった。
Figure 2023528562000006
遺伝子発現分析：α－ＳＭＡ、ＴＩＭＰ－１、ＴＧＦ－β、１型コラーゲンについての遺伝子発現分析を図８Ａ～図８Ｄ及び表７に示す。
Figure 2023528562000007
α－ＳＭＡ：ビヒクル群は、偽対照群と比較してα－ＳＭＡのｍＲＮＡ発現レベルの有意な増加を示した。ビヒクル群と治療群との間では、α－ＳＭＡのｍＲＮＡ発現レベルに有意な差はなかった。
ＴＩＭＰ－１：ビヒクル群は、偽対照群と比較してＴＩＭＰ－１のｍＲＮＡ発現レベルの有意な増加を示した。ビヒクル群と治療群との間では、ＴＩＭＰ－１のｍＲＮＡ発現レベルに有意な差はなかった。
ＴＧＦ－β：ビヒクル群は、偽対照群と比較してＴＧＦ－βのｍＲＮＡ発現レベルの有意な増加を示した。ビヒクル群と治療群との間では、ＴＧＦ－βのｍＲＮＡ発現レベルに有意な差はなかった。
１型コラーゲン：ビヒクル群は、偽対照群と比較して１型コラーゲンのｍＲＮＡ発現レベルの有意な増加を示した。ビヒクル群と治療群との間では、１型コラーゲンのｍＲＮＡ発現レベルに有意な差はなかった。
１．４ 要約
シリウスレッド染色及び腎臓ヒドロキシプロリン含有量によって示されるように、腎線維症は、本研究のビヒクル群において確立された。
ＤＳ１０９：低用量のＤＳ１０９での治療は、ビヒクル群と比較して腎臓ヒドロキシプロリン含有量の有意な低減（ｐ＜０．０５）及び線維症領域の低減傾向（ｐ＜０．１）を示した。中用量のＤＳ１０９での治療は、ビヒクル群と比較して線維症領域で低減傾向（ｐ＜０．１）を示した。最後に、高用量のＤＳ１０９での治療は、ビヒクル群と比較して腎臓ヒドロキシプロリン含有量の有意な低減（ｐ＜０．０５）及び線維症領域の低減傾向（ｐ＜０．１）を示した。
ＤＳ１０２：低用量のＤＳ１０２での治療は、ビヒクル群と比較して腎臓ヒドロキシプロリン含有量の有意な低減（ｐ＜０．０５）、及び線維症領域の低減傾向（ｐ＜０．１）を示した。高用量のＤＳ１０２での治療は、ビヒクル群と比較して腎臓ヒドロキシプロリン含有量の有意な低減（ｐ＜０．０５）、及び線維症領域の低減傾向（ｐ＜０．１）を示した。
結論として、この研究から得られた結果は、ＤＳ１０９及びＤＳ１０２が腎線維形成に対する抑制効果を有し、線維症に進行する慢性腎疾患の治療薬としての可能性があることを示唆している。
実施例２：胆汁うっ滞性肝疾患及び／又は肝線維症胆管結紮（ＢＤＬ）研究
この研究の目的は、ＢＤＬによって誘導された胆汁うっ滞に対するＤＳ０１２の効果を調べることであった。
図９は、手術及び治療から研究の１４日目までの研究計画を示す。
１．１ 材料及び方法
試験物質：この研究の試験物質は、ＤＳ１０２であった。各物質の投薬溶液を調製するために、ＤＳ１０２を０．５％のヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）のビヒクル中に希釈した。
ＢＤＬ手術：研究の０日目に、ペントバルビタール（Ｋｙｏｒｉｔｓｕ Ｓｅｉｙａｋｕ，Ｊａｐａｎ）麻酔下でＢＤＬ手術を実施した。最初にマウスの毛を剃り、腹腔を切り開いて、総胆管を７－０の外科用シルクで２回結紮した。マウスの腹膜及び皮膚を縫合糸で閉じ、麻酔から回復するまでマウスを清潔なケージ（例えば、休息ケージ）に移した。偽手術マウスは、総胆管を露出させたが、結紮しなかった。
薬物投与：１０ミリリットル（ｍＬ）／キログラム（Ｋｇ）の容量で、ＤＳ１０２を経口投与した。
治療用量：ＤＳ１０２は、５０、２５０、及び５００ミリグラム（ｍｇ）／Ｋｇの３つの用量レベルで研究の０日目～１３日目に１日１回投与した。
動物：病原体を含まない６週齢の雄Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスを、Ｊａｐａｎ ＳＬＣ，Ｉｎｃ．（Ｊａｐａｎ）から入手した。動物は、温度（例えば、２３±２℃）、湿度（例えば、４５±１０％）、照明（例えば、１２時間の人工的な明暗サイクル、８：００～２０：００に点灯）及び換気の管理条件下で、特定病原体除去（ＳＰＦ）施設内で飼育した。実験室で高圧を維持して、施設の汚染を防止した。動物は、ケージ当たり最大４匹のマウスを収容するＴＰＸケージ（ＣＬＥＡ Ｊａｐａｎ）内で飼育した。滅菌ペーパークリーン（Ｊａｐａｎ ＳＬＣ）を寝床に使用し、週に１回交換した。ケージ上部の金属製の蓋に入れた滅菌した固形の通常食を自由に与えた。ゴム栓及びシッパーチューブを備えた水筒から純水も自由に与えた。水筒を週に１回交換し、洗浄し、オートクレーブで滅菌して再利用した。マウスはイヤーパンチで識別し、各ケージには特定の識別コードを付けた。
血清生化学の測定：コラーゲンの沈着を視覚化するために、ブアンの固定化肝臓切片を、ピクロシリウスレッド溶液（Ｗａｌｄｅｃｋ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して染色した。線維症領域の定量化のために、シリウスレッドで染色された切片の明視野画像を、デジタルカメラ（ＤＦＣ２９５、Ｌｅｉｃａ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して１００倍の倍率でキャプチャし、５つの視野／切片における陽性領域をＩｍａｇｅＪソフトウェア（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，ＵＳＡ）を使用して測定した。
組織学的分析：コラーゲンの沈着を視覚化するために、腎臓切片を、ピクロシリウスレッド溶液（Ｗａｌｄｅｃｋ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して染色した。間質性線維症領域の定量化のために、皮質髄質領域における明視野画像を、デジタルカメラ（例えば、ＤＦＣ２９５、Ｌｅｉｃａ Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して２００倍の倍率でキャプチャし、５つの視野／切片における陽性領域をＩｍａｇｅＪソフトウェア（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，ＵＳＡ）を使用して測定した。
定量的ＲＴ－ＰＣＲ：ＲＮＡｉｓｏ（Ｔａｋａｒａ Ｂｉｏ、Ｊａｐａｎ）を使用し、製造元の指示に従って、肝臓試料から全リボ核酸（ＲＮＡ）を抽出した。１μｇのＲＮＡを、２０μＬの最終容量中に４．４ｍＭの塩化マグネシウム（ＭｇＣｌ２）（Ｆ．Ｈｏｆｆｍａｎｎ－Ｌａ Ｒｏｃｈｅ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、４０ＵのＲＮａｓｅ阻害剤（Ｔｏｙｏｂｏ，Ｊａｐａｎ）、０．５ｍＭのｄＮＴＰ（Ｐｒｏｍｅｇａ，ＵＳＡ）、６．２８μＭのランダムヘキサマー（Ｐｒｏｍｅｇａ）、５倍の第１のストランド緩衝液（Ｐｒｏｍｅｇａ）、１０ｍＭのジチオスレイトール（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ＵＳＡ）、及び２００ＵのＭＭＬＶ－ＲＴ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含有する反応混合物を使用して、逆転写した。反応は、３７℃で１時間、続いて９９℃で５分間行った。リアルタイムＰＣＲ ＤＩＣＥ及びＴＢ Ｇｒｅｅｎ（商標）Ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ Ｔａｑ（商標）ＩＩ（Ｔａｋａｒａ Ｂｉｏ）を使用してリアルタイムＰＣＲを実施した。相対的なｍＲＮＡの発現レベルを計算するために、各遺伝子（例えば、α－ＳＭＡ、ＴＩＭＰ－１、ＴＧＦ－β、及び１型コラーゲン）の発現を参照遺伝子３６Ｂ４（遺伝子記号：Ｒｐｌｐ０）の発現に対して正規化した。ＰＣＲ－プライマーセット及びプレートレイアウトに関する情報を、表８及び表９に記載する。
Figure 2023528562000008
Figure 2023528562000009
試料採取：血清試料については、直接心臓穿刺によって抗凝固剤を含まない血清分離チューブに非空腹時の血液を採取し、４℃にて、３，５００ｘｇで４分間遠心分離した。上清を採取し、生化学（３０μＬ）及び輸送（残り全て）のために、－８０℃で保存した。肝臓試料については、左側葉を採取し、６つに切断した。２片の左側葉をブアン液中で固定し、次いでパラフィン中に包埋した。試料は、組織学的分析のために室温で保存した。他の２片の左側葉をＯＣＴ化合物中に包埋し、液体窒素で急速凍結した。試料は、－８０℃で保存した。左側葉の残りの部分を液体窒素中で急速凍結し、遺伝子発現分析のために－８０℃で保存した。右中葉、左中葉、右葉及び尾状葉を液体窒素中で急速凍結し、輸送するために－８０℃で保存した。
統計的検定：統計分析は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ６（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｉｎｃ．，ＵＳＡ）でボンフェローニ多重比較検定を使用して実行した。＜０．０５のＰ値は、統計的に有意であるとみなした。片側ｔ検定がＰ値＜０．１を返したときは、傾向（ｔｒｅｎｄ）又は傾向（ｔｅｎｄｅｎｃｙ）があると想定した。結果は、平均±ＳＤとして表した。
１．２ 実験計画及び治療
研究計画は、以下の研究群を含んだ。
・群１（偽対照）：８匹の偽手術マウスを屠殺まで全く処置をしないままにした。
・群２（ビヒクル）：ＢＤＬ手術を施した１５匹のマウスに、ビヒクル［０．５％のＨＰＭＣ］を１０ｍＬ／ｋｇの容量で０日目～１３日目に１日１回経口投与した。
・群３（ＤＳ１０２低）：ＢＤＬ手術を施した１５匹のマウスに、ＤＳ１０２を補充したビヒクルを５０ｍｇ／ｋｇの用量で０日目～１３日目に１日１回経口投与した。
・群４（ＤＳ１０２中）：ＢＤＬ手術を施した１５匹のマウスに、ＤＳ１０２を補充したビヒクルを２５０ｍｇ／ｋｇの用量で０日目～１３日目に１日１回経口投与した。
・群５（ＤＳ１０２高）：ＢＤＬ手術を施した１５匹のマウスに、ＤＳ１０２を補充したビヒクルを５００ｍｇ／ｋｇの用量で０日目～１３日目に１日１回経口投与した。
表１０は、研究中の群１～５のそれぞれについて治療スケジュールを要約したものである。
Figure 2023528562000010
動物の監視及び屠殺：マウスの生存率、臨床兆候、行動を毎日監視した。個々の体重は、治療期間中、治療前に毎日測定した。各投与の約６０分後に、毒性、瀕死、及び死亡の有意な臨床兆候についてマウスを観察した。動物は、ＢＤＬ手術後１４日目にイソフルラン麻酔（Ｐｆｉｚｅｒ Ｉｎｃ．）下での直接心臓穿刺による放血で屠殺した
１．３ 結果
体重変化及び一般的な考慮事項：図１０は、全ての動物の体重変化を示す。偽対照群を除く全ての群において、平均体重は、研究期間中に徐々に減少した。ビヒクル群の平均体重は、２日目～１４日目に、偽対照群の平均体重よりも有意に低かった。ビヒクル群とＤＳ１０２治療群との間では、研究期間中のいずれの日においても平均体重に有意な変化はなかった。
治療期間中、１４日目に達する前に死亡が確認されたマウスは次のとおりであった。すなわち、ビヒクル群において１５匹のうちの３匹のマウスで死亡が確認され、ＤＳ１０２低、ＤＳ１０２中、及びＤＳ１０２高群において、１５匹のうちの７匹のマウスで死亡が確認された。このモデルでは、単に病気誘導による死亡の割合が予想され、観察された死亡の割合は過去のデータと一致している。
屠殺日の体重及び肝臓重量：図１１及び表１１は、屠殺日の動物の体重を示す。ビヒクル群は、偽対照群と比較して屠殺日に平均体重の有意な低減を示した。ビヒクル群とＤＳ１０２治療群との間では、屠殺日の平均体重に有意な差はなかった。
Figure 2023528562000011
図１２及び図１２Ｂ及び表１１は、屠殺日の動物の肝臓重量及び肝臓重量対体重比を示す。ビヒクル群は、偽対照群と比較して平均肝臓重量の有意な増加を示した。ＤＳ１０２高群の平均肝臓重量は、ビヒクル群と比較して低減する傾向にあった。ビヒクル群と他の治療群との間では、平均肝臓重量に有意な差はなかった。ビヒクル群は、偽対照群と比較して平均肝臓重量対体重比の有意な増加を示した。ＤＳ１０２高群の平均肝臓重量対体重比は、ビヒクル群と比較して低減する傾向にあった。ビヒクル群と他の治療群との間では、平均肝臓重量対体重比に有意な差はなかった。
生化学：図１３及び表１２は、動物の血清アミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）を示す。ビヒクル群は、偽対照群と比較して血清ＡＬＴレベルの有意な増加を示した。ビヒクル群とＤＳ１０２治療群との間では、血清ＡＬＴレベルに有意な差はなかった。しかしながら、このモデルの過去のデータから、ＡＬＴレベルは治療なしで１４日目に減少することが知られている。そのため、これは群間の違いを検出する機能に影響を与える可能性がある。
Figure 2023528562000012
図１４及び表１２は、動物の血清総ビリルビンを示す。ビヒクル群は、偽対照群と比較して血清総ビリルビンレベルの有意な増加を示した。ビヒクル群とＤＳ１０２治療群との間では、血清総ビリルビンレベルに有意な差はなかった。
組織学的分析：図１５Ａ～図１４Ｅ及び表１３は、シリウスレッド染色を示し、図１６は動物の線維症領域を示す。図１４Ａは、シリウスレッドで染色された肝臓切片の代表的な顕微鏡写真を示す。ビヒクル群由来の肝臓切片は、偽対照群と比較して、肝小葉の門脈域におけるコラーゲンの沈着の増加、及びＰＶ－ＣＶ又はＰＶ－ＰＶ架橋線維症を示した。ビヒクル群は、偽対照群と比較して線維症領域（シリウスレッド陽性領域）の有意な増加を示した。ＤＳ１０２中群は、ビヒクル群と比較して線維症領域の有意な低減を示した。ＤＳ１０２高群の線維症領域は、ビヒクル群と比較して低減する傾向にあった。ビヒクル群とＤＳ１０２低群との間では、線維症領域に有意な差はなかった。
Figure 2023528562000013
遺伝子発現分析：α－ＳＭＡ、ＴＩＭＰ－１、ＴＧＦ－β、及び１型コラーゲンについての遺伝子発現分析を図１７Ａ～図１７Ｄ及び表１４に示す。
Figure 2023528562000014
α－ＳＭＡ：ビヒクル群は、偽対照群と比較してα－ＳＭＡのｍＲＮＡ発現レベルの有意な増加を示した。ＤＳ１０２高群のα－ＳＭＡのｍＲＮＡ発現レベルは、ビヒクル群と比較して低減する傾向にあった。ビヒクル群とＤＳ１０２治療群との間では、α－ＳＭＡのｍＲＮＡ発現レベルに有意な差はなかった。
ＴＩＭＰ－１：ビヒクル群は、偽対照群と比較してＴＩＭＰ－１のｍＲＮＡ発現レベルの有意な増加を示した。ＤＳ１０２高群のＴＩＭＰ－１のｍＲＮＡ発現レベルは、ビヒクル群と比較して低減する傾向にあった。ビヒクル群とＤＳ１０２治療群との間では、ＴＩＭＰ－１のｍＲＮＡ発現レベルに有意な差はなかった。
ＴＧＦ－β：ビヒクル群は、偽対照群と比較してＴＧＦ－βのｍＲＮＡ発現レベルの有意な増加を示した。ＤＳ１０２高群は、ビヒクル群と比較してＴＧＦ－βのｍＲＮＡ発現レベルの有意な低減を示した。ビヒクル群とＤＳ１０２治療群との間では、ＴＧＦ－βのｍＲＮＡ発現レベルに有意な差はなかった。
１型コラーゲン：ビヒクル群は、偽対照群と比較して１型コラーゲンのｍＲＮＡ発現レベルの有意な増加を示した。ＤＳ１０２高群の１型コラーゲンのｍＲＮＡ発現レベルは、ビヒクル群と比較して低減する傾向にあった。ビヒクル群とＤＳ１０２治療群との間では、１型コラーゲンのｍＲＮＡ発現レベルに有意な差はなかった。
１．４ 要約
この研究では、ビヒクル群の生化学的パラメーター（例えば、ＡＬＴ及び総ビリルビン）、組織学的コラーゲンの沈着（例えば、線維症領域）、及び遺伝子発現レベル（例えば、α－ＳＭＡ、ＴＩＭＰ－１、ＴＧＦ－β、１型コラーゲン）は、偽対照群と比較して有意に増加した。これらの結果は、胆汁うっ滞及び肝線維症がビヒクル群で確立されたことを示唆した。
中用量のＤＳ１０２での治療は、ビヒクル群と比較して線維症領域の有意な低減（ｐ＜０．０５）を示した。高用量のＤＳ１０２での治療は、ビヒクル群と比較してＴＧＦ－βのｍＲＮＡ発現レベルの有意な低減（ｐ＜０．０５）、並びに線維症領域、肝臓重量、肝臓重量対体重比、α－ＳＭＡ、ＴＩＭＰ－１、及び１型コラーゲンのｍＲＮＡ発現レベルの有意に近い低減傾向（ｐ＜０．０１）を示した。これらの結果は、ＤＳ１０２が肝臓における複数の線維化促進性サイトカインの産生を阻害し、肝線維症を抑制する効果があり、胆汁うっ滞性肝疾患の治療薬としての可能性を有することを示す。
実施例３：ＴＧＦ－β受容体、シグナル伝達、及び誘導性線維性タンパク質に対するＤＳ１０２の効果
この研究の目的は、ＴＧＦ－β受容体、ＴＧＦ－β誘導性細胞内シグナル伝達、及び線維化促進性上皮間葉転換タンパク質の発現に対する１５－ＨＥＰＥ及び１５－ＨＥＰＥ ＥＥの効果を調べることであった。
１．１ 材料及び方法
細胞毒性試験：１５－ＨＥＰＥ遊離酸及びエチルエステルの細胞毒性を種々の肝臓（肝細胞がん）細胞株において試験し、試験系における濃度範囲を理解した。
転写活性：プロモーター（ルシフェラーゼ）アッセイを実施して、１５－ＨＥＰＥの投与後のＴＧＦβ誘導性転写活性化を測定した。
ショ糖勾配超遠心分離及び共焦点顕微鏡を使用して、ショ糖によるＴＧＦ－β受容体の１５－ＨＥＰＥ誘導性マイクロドメイン移行を同定した。ＴＧＦ－β受容体のショ糖密度勾配分析は、１００μＭの１５－ＨＥＰＥ及び等容量のＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）で、３７℃にて０、１、４、及び２４時間処理したＭｖ１Ｌｕ細胞（ミンク肺上皮細胞）の原形質膜において実施し、これらの処理した細胞由来の細胞溶解物を、ショ糖密度勾配超遠心分離に供した。次いで、ショ糖勾配画分を、抗ＴβＲ－Ｉ（Ｉ型ＴＧＦ－β受容体）、抗ＴβＲ－ＩＩ（ＩＩ型ＴＧＦ－β受容体）、抗ＴβＲ－ＩＩＩ（ＩＩＩ型ＴＧＦ－β受容体、ベータグリカン）、抗ＥＧＦＲ（上皮増殖因子受容体）、及び抗カベオリン－１の抗体を使用してウェスタンブロットによって分析した。未処理細胞又は１５－ＨＥＰＥで処理された細胞の原形質膜におけるＴβＲ－Ｉ、ＴβＲ－ＩＩ、ＴβＲ－ＩＩＩ、ＥＧＦＲ、及びカベオリン－１の脂質ラフト／カベオラ、及び非脂質ラフトマイクロドメインの局在を評価して、ＴＧＦ－β受容体の膜マイクロドメイン局在化に対する１５－ＨＥＰＥの効果を決定した。
１．２ 結果
ＴＧＦ－β誘導性シグナル伝達及び細胞応答に対する１５－ＨＥＰＥの効果を決定した。ＴＧＦ－β誘導性シグナル伝達に対する１５－ＨＥＰＥの効果を試験するために、ＴＧＦ－β刺激性Ｓｍａｄ２のリン酸化及び核移行を調節する１５－ＨＥＰＥの活性を試験した。それらの両方は、ＴＧＦ－β誘導性細胞応答につながる重要なシグナル伝達事象である。ＴＧＦ－βの重要な生物学的活性の１つは、上皮間葉転換（ＥＭＴ）の原因となる遺伝子の転写活性化であり、これは、創傷治癒、組織線維症、及びがんの進行における重要な事象である。ＨｅｐＧ２及びＬＸＲ細胞におけるＴＧＦβ誘導性上皮間葉転換関連タンパク質（フィブロネクチン、ＰＡＩ－１、Ｎ－カドヘリンなど）の発現に対する１５－ＨＥＰＥの効果を評価した。ＨｅｐＧ２細胞（ヒト肝がん細胞株）を、０．１％のＦＢＳを含むＤＭＥＭ中で１５－ＨＥＰＥステージＩＩの用量を増やして１時間処理し、２００ピコモル濃度（ｐＭ）のＴＧＦ－βの有無にかかわらず４８時間継続的に刺激した。
１５－ＨＥＰＥは、図１８Ａ及び図１８Ｂに示すように、ＴＧＦ－βシグナル伝達を直接阻害した。具体的には、図１８Ａは、１５－ＨＥＰＥがＩＩ型ＴＧＦ－β受容体の分解を誘導し、ＴＧＦ－βによって誘導される上皮間葉転換（ＥＭＴ）（すなわち、線維化促進）タンパク質の産生を遮断したことを示す。ＨｅｐＧ２細胞（ヒト肝がん細胞株）を、０．１％のＦＢＳを含むＤＭＥＭ中で１５－ＨＥＰＥステージＩＩの用量を増やして１時間処理し、２００ピコモル濃度（ｐＭ）のＴＧＦ－βの有無にかかわらず４８時間継続的に刺激した。図１８Ａに示す２つのパネルは、同じ実験条件下で実行された２つの別々の実験である。これらの別々の実験からの結果は、１５－ＨＥＰＥがＴＧＦ－βによって誘導されるＥＭＴタンパク質の産生を遮断し、ＩＩ型ＴＧＦ－β受容体の分解を誘導したことを示す。図１８Ａは、ＴＧＦ－βによって誘導され、心血管リスクの増加に関連するタンパク質であるプラスミノーゲンアクチベーター阻害剤－１（ＰＡ－１）に対する１５－ＨＥＰＥの効果も示す。図１８Ｂは、１５－ＨＥＰＥが肝星細胞におけるＴＧＦ－β刺激性細胞内シグナル伝達（例えば、ＳＭＡＤ２／３のリン酸化）を阻害することを示す。図１８Ｂで実施した実験には、ＬＸ２細胞（ヒト肝星細胞）を０μＭ～１００μＭに増加させた濃度のＤＳ１０２で２４時間前処理した後、３０分間のＴＧＦ－β刺激を行うことが含まれた。実験の結果は、１５－ＨＥＰＥがＴＧＦ－β刺激を阻害することを示した。
ＴＧＦ－β受容体の１５－ＨＥＰＥショ糖密度勾配分析は、１００μＭの１５－ＨＥＰＥ及び等容量のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で、３７℃にて０、１、４、及び２４時間処理したミンク肺上皮細胞（Ｍｖ１Ｌｕ）の原形質膜において実施し、これらの処理した細胞由来の細胞溶解物を、ショ糖密度勾配超遠心分離に供した。次いで、ショ糖勾配画分を、抗ＴβＲ－Ｉ（Ｉ型ＴＧＦ－β受容体－図１８Ｃ）、抗ＴβＲ－ＩＩ（ＩＩ型ＴＧＦ－β受容体－図１８Ｄ）、抗ＴβＲ－ＩＩＩ（ＩＩＩ型ＴＧＦ－β受容体、ベータグリカン－図１８Ｅ）、抗ＥＧＦＲ（上皮増殖因子受容体－図１８Ｆ）、及び抗カベオリン－１の抗体（図１８Ｇ）を使用してウェスタンブロットによって分析した。画分４～５には脂質ラフト／カベオラが含まれていたのに対して、画分７～１０は非脂質ラフト画分であった。１５－ＨＥＰＥでの処理は、ＴβＲ－Ｉタンパク質の存在量に影響を与えなかったが、２４時間の処理でＴβＲ－Ｉの脂質ラフトへの移行を誘導した（図１８Ｃ）。星（★）は、１５－ＨＥＰＥが、対照及びより短い処理期間の存在量と比較して、画分におけるＴβＲ－Ｉの存在量を増加させた（２４時間）ことを示す（図１８Ｃ）。１５－ＨＥＰＥは、１～４時間でＴβＲ－ＩＩの移行を誘導し、２４時間の処置で更に分解を誘導した（図１８Ｄ）。三角形（▼）は、対照細胞と比較して、画分におけるＴβＲ－ＩＩの移行及び存在量の低減を示す（図１８Ｄ）。図１８Ｅ、図１８Ｆ、及び図１８Ｇにおいて、１５－ＨＥＰＥは、ＴβＲ－ＩＩＩ、ＥＧＦＲ、及びカベオリン－１の局在及び存在量を変化させなかった。
１．３ 要約
したがって、まとめると、これらの結果は、遊離酸形態又はエチルエステル形態の両形態の１５－ＨＥＰＥが、ＩＩ型ＴＧＦ－β受容体の移行及び分解を誘導し、ＴＧＦ－β誘導性線維化促進タンパク質の産生を遮断し、肝星細胞においてＴＧＦ－β誘導性細胞内シグナル伝達（ＳＭＡＤ２／３）を阻害したことを示す。そのため、１５－ＨＥＰＥ及び１５－ＨＥＰＥ ＥＥは、ＴＧＦ－βシグナル伝達を直接阻害することができ、これは、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、その他の線維性疾患、心血管代謝性疾患、及びがんの複数の症状を含む複数の線維性疾患の治療における１５－ＨＥＰＥ及び１５－ＨＥＰＥ ＥＥの治療可能性を支持する結果である。
実施例４：ＮＡＦＬＤ患者における経口投与されたＤＳ１０２の有効性
この研究の目的は、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）を有する成人患者の治療において、プラセボに対して、経口投与されたＤＳ１０２カプセルの有効性を評価することであった。
１．１ 研究のエンドポイント
一次エンドポイント：この研究の一次エンドポイントは、ＤＳ１０２投与の有効性及び安全性を含んだ。有効性は、ベースライン～１６週目の血清アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）の変化、及びベースライン～１６週目の一過性エラストグラフィによって測定された肝硬度の変化に基づいて評価された。安全性は、治療中止の原因となった、各治療群において発生した有害事象（ＴＥＡＥ）の数で評価された。
二次エンドポイント：この研究の二次エンドポイントには、以下のうちのいずれか１つの変化が含まれた。すなわち、ベースライン～２、４、８、及び１２週目の血清ＡＬＴ、ベースライン～２、４、８、１２、及び１６週目のアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、ベースライン～２、４、８、１２、及び１６週目のＡＳＴ：ＡＬＴ比、ベースライン～１６週目の線維症－４（ＦＩＢ－４）指数、ベースライン～１６週目のＮＡＦＬＤ線維症スコア（ＮＦＳ）、ベースライン～１６週目の被制御減衰パラメーター（ＣＡＰ）によって測定された肝臓脂肪の変化、ベースライン～１６週目の強化肝線維症（ＥＬＦ）スコア、並びにベースライン～２、４、８、１２、及び１６週目の恒常性モデル評価インスリン抵抗性（ＨＯＭＡ－ＩＲ）及び脂肪組織インスリン抵抗性（ａｄｉｐｏ－ＩＲ）であった。
探索的分析：探索的分析には、総コレステロール、トリグリセリド、超低密度リポタンパク質コレステロール（ＶＬＤＬ－Ｃ）、低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ－Ｃ）、高密度リポタンパク質コレステロール（ＨＤＬ－Ｃ）、非高密度リポタンパク質コレステロール（非ＨＤＬ－Ｃ）、レムナント様粒子コレステロール（ＲＬＰ－Ｃ）、空腹時血糖、インスリン、遊離脂肪酸、及びヘモグロビンＡ１Ｃ（ＨｂＡ１Ｃ）など脂質及び代謝パラメーターの分析が含まれた。追加の探索的分析には、高スループットのリピドミクス及びプロテオミクスが含まれた。
１．２ 研究計画
これは、無作為化、プラセボ対照、二重盲検、並行群、多施設探索第ＩＩａ相研究であり、１８～７５歳のＮＡＦＬＤ患者における経口投与されたＤＳ１０２カプセルの安全性及び有効性、並びに２つの用量のＤＳ１０２及びプラセボ間の用量応答関係を調査した。この研究では、ＮＡＦＬＤが確認された患者の３つの並行群を調査し、１６週間の治療期間にわたって、プラセボと異なる２つの用量のＤＳ１０２とを比較した。この研究は、治療群当たり無作為化された患者が３２人である９６人の評価可能な患者を含むように計画された。
この研究は、２８日間のスクリーニング期間、１６週間の治療期間、及び４週間の経過観察期間からなった。スクリーニング訪問時に、スクリーニング検査を使用して患者を評価した。組み入れ基準を満たし、かつ除外基準を満たさない患者を登録した。
研究の全体的な時間枠の概略図を図１９に提供する。患者が研究に登録されると、ＮＡＦＬＤについてのあらゆる他の治療の使用が制限された。患者に必要であると考えられ、治験責任医師の意見において安全性及び有効性の評価に干渉しないと思われる任意の薬剤（例えば、処方薬及び市販（ＯＴＣ）薬）又は治療的介入は、それらが以下に記載の「併用薬」のリストに含まれていない限り、患者が継続することを許可された。
比較治療期間を開始する前に、患者は自身の疾患のベースライン評価のために施設に戻り、適格な患者は１：１：１の無作為化で３つの並行群治療レジメンのうちの１つに無作為に割り当てられた。
・治療群Ａ：プラセボの５００ｍｇのカプセル２個を１日２回（１日４個のカプセル）、１６週間経口投与。
・治療群Ｂ：ＤＳ１０２の５００ｍｇのカプセル１個及びプラセボの５００ｍｇのカプセル１個を１日２回（１日４個のカプセル）、１６週間経口投与。
・治療群Ｃ：ＤＳ１０２の５００ｍｇのカプセル２個を１日２回（１日４個のカプセル）、１６週間経口投与。
二重盲検状態を維持するために、ＤＳ１０２のカプセル及びプラセボのカプセルは外観が同一であった。
１．３ 患者及びスクリーニング
この研究に参加するために、患者は以下の組み入れ基準の全て満たす必要があり、以下の除外基準のうちのいずれも満たしてはならなかった。組み入れ基準及び除外基準は、スクリーニング訪問時（訪問１）及び治療の開始／ベースライン訪問時（訪問２）に検証した。
この研究の場合の組み入れ基準は次のとおりであった。
・二次的原因がなく、画像又は組織学で肝臓脂肪症の存在によりＮＡＦＬＤと診断された患者。
・ＡＬＴが≧１．５ＵＬＮかつ＜５ＵＬＮを、スクリーニング中に７日以上あけて２回有する患者。
・スクリーニングの３か月以内に、ＮＡＳＨかつ／又は≧Ｆ１の線維症、若しくはＮＦＳが≧－１．４５５、若しくはＦｉｂ－４が≧１．３、若しくはＦｉｂｒｏｓｃａｎが≧８ｋＰａを示す過去の肝生検を有する患者。
・２５．０～４０．０ｋｇ／ｍ２のボディマス指数（ＢＭＩ）を有する患者。制御された肥満又は制御された糖尿病の病歴を有する患者は研究に許可された。
・治験責任医師の意見において、研究前の臨床検査所見が研究への参加を妨げなかった患者。
・１８～７５歳の患者。
・女性患者及び妊娠可能な女性パートナーがいる男性患者は、研究期間中、適切な避妊を使用するか、又はパートナーに不妊化してもらう必要があった。適切な避妊は次のように定義される。全身性ホルモン避妊薬、殺精子剤と組み合わせた子宮内避妊器具若しくは避妊のバリア方法、又は研究治療に関連するリスクの全期間中、彼らの好ましい通常のライフスタイルに沿って異性愛者の性交を控える患者として定義される性的禁欲に同意する。ホルモン避妊薬は、ベースラインの前に少なくとも１か月間安定した用量を服用する必要があった。
・治験責任医師と十分にコミュニケーションを取り、研究の要件を理解して従い、書面によるインフォームドコンセントを理解し、署名することができた患者。
この研究の除外基準は次のとおりであった。
・組み入れ前の３か月間に体重変化が＞５％であるなど、不安定な代謝状態を有する患者。
・胃バイパス手術、同所性肝移植（ＯＬＴ）の病歴若しくは手術歴を有するか、又はＯＬＴに登録された患者。
・制御されていない２型糖尿病、すなわちスクリーニング時にＨｂＡ１ｃ≧９％（７５ｍｍｏｌ／ｍｏｌ）を有する患者。
・以下のうちの１つ以上によって証明される非代償性又は重度の肝疾患の患者：肝硬変が確認されるか、若しくは肝硬変の疑い、食道静脈瘤、腹水、門脈圧亢進症の疑い、スクリーニングの６０日以内の肝疾患による入院、ビリルビンが≧２×ＵＬＮ、又はＡＬＴ若しくはＡＳＴが≧５×ＵＬＮ。ジルベール症候群を有する患者は、コンジュゲートビリルビンが≦１．５×ＵＬＮの場合に適格であった。
・活性であるか、又は内科的治療が必要であった炎症性腸疾患の患者。
・全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）及び／又は関節リウマチ（ＲＡ）など自己免疫疾患と診断されたか、又はそれが疑われる患者。
・治癒的に治療された皮膚がん（基底細胞がん又は扁平上皮がん）以外の非肝臓悪性腫瘍の病歴を有するか、又はそれが活性である患者。
・冠動脈疾患、脳血管疾患、肺疾患、腎不全、深刻な精神疾患、呼吸器又は高血圧疾患、並びに、治験責任医師の意見において患者が研究に参加し、完了することを除外した糖尿病、関節炎などを含む肝疾患以外の重大な全身疾患又は重病を有する患者。
・抗糖尿病治療（インスリン増感剤を含む）及び／又は脂質低下治療を必要とし、スクリーニング前に少なくとも３か月間安定した用量を服用していなかった患者は除外された。患者がインスリン依存性である場合、この治療はスクリーニングの少なくとも３か月前に開始されるべきであったが、用量の変更は許可された。
・治験治療のいずれかの成分に対して既知の過敏性を有する患者。
・スクリーニング時に、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）抗体、Ｂ型肝炎表面抗原、又はＣ型肝炎抗体についての検査で陽性である患者。
・薬物誘導性、自己免疫性肝炎、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、ヘモクロマトーシス、α－１抗トリプシン（Ａ１ＡＴ）欠乏症、ウィルソン病など、他の病因の肝疾患を有する患者。
・治験責任医師の意見において、薬物／溶剤の乱用の重要な病歴を有する患者。
・治験責任医師の意見においてアルコール乱用の病歴を有するか、週当たり２１単位（男性）又は週当たり１４単位（女性）を超えて飲酒する患者（１単位は、１０ｍ又は８ｍｇの純粋なアルコールからなる）。
・ベースラインの４週間前にオメガ３又はオメガ６脂肪酸が豊富な栄養補助食品を使用した患者。
・研究治療の投与初日の３か月前以内に治験薬を用いるいずれかの他の臨床研究に参加した患者。
・妊娠中、妊娠を計画している、授乳をしている、及び／又は試験中に適切な避妊を使用することを望まなかった患者。
・治験責任医師の意見において研究への参加に好適でなかった患者。
１．４ 研究の実施
研究中、スクリーニング訪問後に１０回の診療所への訪問が予定された。すなわち、比較治療期間の開始／ベースライン時に１回（０日目／訪問２）、及び比較治療期間に８回（２週目／訪問３、４週目／訪問４、６週目／訪問５、８週目／訪問６、１０週目／訪問７、１２週目／訪問８、１４週目／訪問９、１６週目／訪問１０）である。最終安全性経過観察訪問（訪問１１）は、訪問１０の４週間後、又は患者が研究を完了しなかった場合は出席した最終訪問の２週間後に実施した。表１７は、研究の臨床訪問について記載したものである。
Figure 2023528562000015
Figure 2023528562000016
スクリーニング訪問（訪問１）：以下のスクリーニング訪問時
スクリーニング訪問（訪問１）：インフォームドコンセントが得られると、患者には特許スクリーニング番号が割り当てられた。理想的には、患者は絶食していた。以下のスクリーニング評価／試料採取を行った。すなわち、組み入れ／除外基準の検証、人口統計データ、病歴、身体検査、１２誘導心電図（ＥＣＧ）、バイタルサイン（血圧、心拍数、及び体温）、臨床検査安全性試験（血液学、血清生化学、及び凝固試験）用の試料、ウイルス学、妊娠検査（妊娠の可能性のある女性患者に対して）、ＡＬＴ、ＡＳＴ試験（スクリーニング中に２回測定したＡＬＴ）、及び併用薬の評価である。予定外の訪問は、有害事象（ＡＥ）、研究プロトコル要件の遵守が困難である場合、又は疾患状態の著しい変化のために患者が予定訪問日の間に訪問する必要があった場合に発生した。医学的に必要な全ての手順に従った。適格である場合、診療所を出る前に、患者は、次回の訪問前に全く朝食をとらないように指示され、最低８時間の絶食期間が与えられた。
治療期間：成功裏にスクリーニング訪問が完了した後、患者は、比較治療期間（１６週間）を開始した。比較治療期間の開始時に、継続的な適格性の確認後、患者は３つの治療レジメンのうちの１つに無作為に割り当てられた。患者は、ＤＳ１０２のカプセル又はプラセボのカプセルの割り当てられた調査医薬品（ＩＭＰ）を、比較治療期間中、１日２回服用した。ＩＭＰの各自己投与は、患者の日記カードに記録された。患者は、朝及び夕方の食事中に、又は食後にＤＳ１０２を服用するように指示された（患者が訪問前にＤＳ１０２の服用を控え、診療所訪問後できるだけ早くＤＳ１０２を服用するように指示された診療所訪問３、４、６、８、及び１０の朝を除く）。ベースラインの開始時（訪問２）、２週目（訪問３）、４週目（訪問４）、８週目（訪問６）、１２週目（訪問８）、１６週目（訪問１０）、及び２０週目（訪問１１）に、患者は、訪問前に最低８時間絶食したかどうか尋ねられた。絶食していなかった場合は、絶食期間の時間が文書化され、患者は絶食期間の時間について再度指示された。次いで、患者には軽い朝食（例えば、お茶又はオレンジジュース及びトースト）が提供された。ベースライン（訪問２）、８週目（訪問８）、及び１６週目（訪問１０）において、患者が軽い朝食をとる前に採血評価を実施した。予定外の訪問は、有害事象（ＡＥ）、研究プロトコル要件の遵守が困難である場合、又は疾患状態の著しい変化のために患者が予定訪問日の間に訪問する必要があった場合に発生した。医学的に必要な全ての手順に従った。研究を早期に中止した患者は、全ての研究関連情報を記録することができるように、患者の離脱後できるだけ早くに訪問１０に予定された研究手順を実行した。治験責任医師の裁量で、試験実施中の任意の時点で尿中ＤＯＡ及びアルコール呼気検査が実施された。
ベースライン（訪問２）：患者は訪問２で調査施設に足を運んだ。採血は、実施した最初の評価であった。採血後、以下の評価を行った。すなわち、組み入れ／除外基準の検証、病歴、身体検査、１２誘導ＥＣＧ、薬物動態サンプリング、バイタルサイン（血圧、心拍数、及び体温）、臨床検査安全性試験（血液学、血清生化学、及び凝固試験）用の試料、脂質プロファイル、尿検査、妊娠検査（妊娠の可能性のある女性患者に対して）、ＡＬＴ、ＡＳＴ試験、ＨＯＭＡ－ＩＲ／Ａｄｉｐｏ－ＩＲ、ＥＬＦ、肝硬度及びＣＡＰ、ＦＩＢ－４、ＮＦＳ（ＢＭＩを含む）、バイオマーカー血液試料、探索的血液試料、患者の無作為化、研究薬／プラセボの投与、ＡＥ評価、及び併用薬の評価である。全ての研究参加基準が満たされた場合、治験責任医師は患者を無作為化し、患者治療パックのうちの１つから指定されたＩＭＰ又はプラセボを患者に提供した。全てのベースライン評価が完了したら、第１の用量のＩＭＰ又はプラセボを施設で投与した。患者は、０日目の夕方に第２の用量のＩＭＰ又はプラセボを服用した。その後、１日２回のカプセル投与を受けた。患者は、施設への再訪問の朝にＩＭＰ又はプラセボを服用した（訪問３）。診療所を出る前に、患者は、次回の訪問前に全く朝食をとらないように指示され、最低８時間の絶食期間が与えられた。
２週目（訪問３）：患者は訪問３で調査施設に戻った。患者は訪問３の朝にＩＭＰ又はプラセボを服用しなかった。以下の評価を行った。すなわち、身体検査、薬物動態サンプリング、バイタルサイン（例えば、血圧、心拍数、及び体温）、ＡＬＴ、ＡＳＴ試験、ＨＯＭＡ－ＩＲ／Ａｄｉｐｏ－ＩＲ、ＡＥ評価、及び併用薬の評価である。ＩＭＰ又はプラセボが戻され、更にＩＭＰ又はプラセボが患者に供給された。患者は、全ての訪問評価が完了するとすぐに、次の用量のＩＭＰ又はプラセボを服用した。引き続き、１日２回のカプセル投与を受けた。この訪問の完了時に、患者は、訪問４で２週間以内に調査施設に戻る必要があることを知らされた。患者は、施設への再訪問の朝にＩＭＰ又はプラセボを服用しなかった（訪問４）。診療所を出る前に、患者は、次回の訪問前に全く朝食をとらないように指示され、最低８時間の絶食期間が与えられた。
４週目（訪問４）：患者は訪問４で調査施設に戻った。患者は訪問４の朝にＩＭＰ又はプラセボを服用しなかった。以下の評価を行った。すなわち、身体検査、薬物動態サンプリング、バイタルサイン（血圧、心拍数、及び体温）、臨床検査安全性試験（血液学、血清生化学、及び凝固試験）用の試料、妊娠検査（妊娠の可能性のある女性患者に対して）、ＡＬＴ、ＡＳＴ試験、ＨＯＭＡ－ＩＲ／Ａｄｉｐｏ－ＩＲ、ＡＥ評価、及び併用薬の評価である。ＩＭＰ又はプラセボが戻され、更にＩＭＰ又はプラセボが患者に供給された。患者は、全ての訪問評価が完了するとすぐに、次の用量のＩＭＰ又はプラセボを服用した。引き続き、１日２回のカプセル投与を受けた。この訪問の完了時に、患者は、訪問５で２週間以内に調査施設に戻る必要があることを知らされた。患者は、施設への再訪問の朝にＩＭＰ又はプラセボを服用しなかった（訪問５）。
６週目（訪問５）：患者は訪問５で調査施設に戻った。ＡＥ評価及び併用薬の評価を行った。ＩＭＰ又はプラセボが戻され、更にＩＭＰ又はが患者に供給された。患者は、全ての訪問評価が完了するとすぐに、次の用量のＩＭＰ又はプラセボを服用した。引き続き、１日２回のカプセル投与を受けた。この訪問の完了時に、患者は、訪問６で２週間以内に調査施設に戻る必要があることを知らされた。患者は、施設への再訪問の朝にＩＭＰ又はプラセボを服用しなかった（訪問６）。診療所を出る前に、患者は、次回の訪問前に全く朝食をとらないように指示され、最低８時間の絶食期間が与えられた。
８週目（訪問６）：患者は訪問６で調査施設に戻った。患者は訪問６の朝にＩＭＰ又はプラセボを服用しなかった。採血は、実施した最初の評価であった。血液後、以下の評価を行った。すなわち、身体検査、薬物動態サンプリング、バイタルサイン（血圧、心拍数、及び体温）、臨床検査安全性試験（血液学、血清生化学、及び凝固試験）用の試料、脂質プロファイル、妊娠検査（妊娠の可能性のある女性患者に対して）、ＡＬＴ、ＡＳＴ試験、ＨＯＭＡ－ＩＲ／Ａｄｉｐｏ－ＩＲ、バイオマーカー血液試料、ＡＥ評価、及び併用薬の評価である。ＩＭＰ又はプラセボが戻され、更にＩＭＰ又はが患者に供給された。患者は、全ての訪問評価が完了するとすぐに、次の用量のＩＭＰ又はプラセボを服用した。引き続き、１日２回のカプセル投与を受けた。この訪問の完了時に、患者は、訪問７で２週間以内に調査施設に戻る必要があることを知らされた。患者は、施設への再訪問の朝にＩＭＰ又はプラセボを服用した（訪問７）。
１０週目（訪問７）：患者は訪問７で調査施設に戻った。ＡＥ評価及び併用薬の評価を行った。ＩＭＰ又はプラセボが戻され、更にＩＭＰ又はプラセボが患者に供給された。患者は、全ての訪問評価が完了するとすぐに、次の用量のＩＭＰ又はプラセボを服用した。引き続き、１日２回のカプセル投与を受けた。この訪問の完了時に、患者は、訪問８で２週間以内に調査施設に戻る必要があることを知らされた。患者は、施設への再訪問の朝にＩＭＰ又はプラセボを服用しなかった（訪問８）。診療所を出る前に、患者は、次回の訪問前に全く朝食をとらないように指示され、最低８時間の絶食期間が与えられた。
１２週目（訪問８）：患者は訪問８で調査施設に戻った。患者は訪問８の朝にＩＭＰ又はプラセボを服用しなかった。以下の評価を行った。すなわち、身体検査、薬物動態サンプリング、バイタルサイン（血圧、心拍数、及び体温）、臨床検査安全性試験（血液学、血清生化学、及び凝固試験）用の試料、妊娠検査（妊娠の可能性のある女性患者に対して）、ＡＬＴ、ＡＳＴ試験、ＨＯＭＡ－ＩＲ／Ａｄｉｐｏ－ＩＲ、ＡＥ評価、及び併用薬の評価である。ＩＭＰ又はプラセボが戻され、更にＩＭＰ又はプラセボが患者に供給された。患者は、全ての訪問評価が完了するとすぐに、次の用量のＩＭＰ又はプラセボを服用した。引き続き、１日２回のカプセル投与を受けた。この訪問の完了時に、患者は、訪問９で２週間以内に調査施設に戻る必要があることを知らされた。患者は、施設への再訪問の朝にＩＭＰ又はプラセボを服用しなかった（訪問９）。
１４週目（訪問９）：患者は訪問９で調査施設に戻った。ＡＥ評価及び併用薬の評価を行った。ＩＭＰ又はプラセボが戻され、更にＩＭＰ又はプラセボが患者に供給された。患者は、全ての訪問評価が完了するとすぐに、次の用量のＩＭＰ又はプラセボを服用した。引き続き、１日２回のカプセル投与を受けた。この訪問の完了時に、患者は、訪問１０で２週間以内に調査施設に戻る必要があることを知らされた。患者は、施設への再訪問の朝にＩＭＰ又はプラセボを服用すべきではない（訪問１０）。診療所を出る前に、患者は、次回の訪問前に全く朝食をとらないように指示され、最低８時間の絶食期間が与えられた。
１６週目（訪問１０）又は早期離脱：患者は訪問１０で調査施設に戻った。患者は訪問１０の朝にＩＭＰ又はプラセボを服用しなかった。採血は、実施した最初の評価であった。血液後、以下の評価を行った。すなわち、身体検査、１２誘導ＥＣＧ、薬物動態サンプリング、バイタルサイン（血圧、心拍数、及び体温）、臨床検査安全性試験（血液学、血清生化学、及び凝固試験）用の試料、尿検査、脂質プロファイル、妊娠検査（妊娠の可能性のある女性患者に対して）、ＡＬＴ、ＡＳＴ試験、ＨＯＭＡ－ＩＲ／Ａｄｉｐｏ－ＩＲ、ＥＬＦ、肝硬度及びＣＡＰ、ＦＩＢ－４、ＮＦＳ［ＢＭＩを含む］、バイオマーカー血液試料、探索的血液試料、ＡＥ評価、及び併用薬の評価である。ＩＭＰ又はプラセボが戻された。更なるＩＭＰ又はプラセボブリスターパック又は患者日記カードは発行されなかった。この訪問での研究評価の完了後、研究の制限が続いた。この訪問の完了時に、患者は、訪問１１で４週間以内に調査施設に戻って、この訪問以降のあらゆるＡＥを評価し、安全性及び有効性評価を実施する必要があることを知らされた。診療所を出る前に、患者は、次回の訪問前に全く朝食をとらないように指示され、最低８時間の絶食期間が与えられた。
経過観察訪問（２０週目／訪問１１）：訪問１０の４週間後（又は早期離脱訪問の２週間後）、患者は調査施設に戻った。以下の評価を行った。すなわち、身体検査、薬物動態サンプリング、バイタルサイン（血圧、心拍数、及び体温）、臨床検査安全性試験（血液学、血清生化学、及び凝固試験）用の試料、妊娠検査（妊娠の可能性のある女性患者に対して）、ＡＬＴ、ＡＳＴ試験、ＨＯＭＡ－ＩＲ／Ａｄｉｐｏ－ＩＲ、バイオマーカー、ＡＥ評価、及び併用薬の評価である。
１．５ 評価
有効性評価は、ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＡＬＴ：ＡＳＴ比、ＨＯＭＡ－ＩＲ／Ａｄｉｐｏ－ＩＲ、ＥＬＦ、肝硬度及びＣＡＰ、ＦＩＢ－４指数、並びにＮＦＳを含んだ。それぞれの詳細な説明を以下に提供する。
ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＡＬＴ：ＡＳＴ比：肝臓酵素（ＡＬＴ及びＡＳＴ）の増加は、肝傷害のマーカーであり、訪問１／スクリーニング（７日以上あけてスクリーニング中に２回）、訪問２／ベースライン、訪問３／２週目、訪問４／４週目、訪問６／８週目、訪問８／１２週目、訪問１０／１６週目、及び経過観察訪問１１／２０週目に評価した。
ＨＯＭＡ－ＩＲ／Ａｄｉｐｏ－ＩＲ：ＨＯＭＡ－ＩＲ／Ａｄｉｐｏ－ＩＲレベルは、インスリン抵抗性を測定する方法である。ＨＯＭＡ－ＩＲは、空腹時血漿インスリン（ＦＰＩ）に空腹時血漿グルコース（ＦＰＧ）を乗じ、定数の４０５で除することによって計算される。Ａｄｉｐｏ－ＩＲは、空腹時非エステル化脂肪酸（ＮＥＦＡ）に空腹時インスリンを乗じることによって計算される。血液試料を採取して、訪問２／ベースライン、訪問３／２週目、訪問４／４週目、訪問６／８週目、訪問８／１２週目、訪問１０／１６週目、及び経過観察訪問１１／２０週目でＨＯＭＡ－ＩＲ及びＡｄｉｐｏ－ＩＲを評価した。全ての対象は、採血前に最低８時間絶食している必要があった。対象が最低８時間絶食しなかった場合、絶食時間の期間を記録し、対象は次の臨床訪問のために適切に絶食するように促された。
ＥＬＦ：ＥＬＦスコアは、メタロプロテイナーゼ組織阻害剤１（ＴＩＭＰ－１）、ＩＩＩ型プロコラーゲンのアミノ末端プロペプチド（ＰＩＩＩＮＰ）、及びヒアルロン酸（ＨＡ）からなる細胞外マトリックスマーカーセットである。ベースライン（訪問２）及び１６週目（訪問１０）に血液試料を採取し、この評価を行った。
肝硬度及びＣＡＰ：肝硬度及びＣＡＰは、一過性エラストグラフィ（例えば、ＦｉｂｒｏＳｃａｎ（登録商標）５０２Ｔｏｕｃｈモデル又は同等物）を使用して評価した。可能であれば、ベースライン（０週目）及び訪問１０（１６週目）について、患者を絶食させ、その日の同時刻にスキャンした。この評価について、以下の条件が満たされた：患者は、肝生検（ＬＢ）に使用される位置と同様の位置で、右腕が頭の後ろで最大外転した状態で背臥位に横たわった；トランスデューサーの先端は、肝臓の右葉上の肋骨の間の皮膚に配置した（医師は肋間腔に配置されたプローブで測定を行った）；ＦｉｂｒｏＳｃａｎ（登録商標）検査中に、Ｍ＋又はＸＬ＋プローブの選択は、Ａｕｔｏｍａｔｉｃ Ｐｒｏｂｅ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎツール（ＡＰＳ）によって決定された（ＡＰＳツールが「ＸＬ＋プローブ」又は「Ｍ＋プローブ」と「ＸＬ＋プローブ」の間で継続的に「切り替え」を使用するように通知する場合、ＸＬ＋プローブのみを使用した）；オペレーターは、超音波時間動画の助けを借りて、大きな血管構造のない肝臓の部分の位置を特定した（測定の深さは、ＸＬ＋プローブでは３５～７５ｍｍ、Ｍ＋プローブでは２５～６５ｍｍであった。探索される容積は３ｃｍ３になる）。オペレーターは、患者ごとに、ＸＬ＋プローブ又はＭ＋プローブを用いて、同じ場所で少なくとも１０回の有効な測定又は最大２０回の試行を含む検査を実行した。検査全体は１０～１５分以上は続かなかった。最終的な硬度及びＣＡＰ値は、有効な測定値の中央値として記録した。
ＦＩＢ－４指数：ＦＩＢ－４指数は、年齢、血小板数、ＡＬＴレベル、及びＡＳＴレベルに基づいており、ベースライン（訪問２）及び１６週目（訪問１０）において評価した。ＦＩＢ－４スコアは、次の式で示すように決定する。
Figure 2023528562000017
ＮＦＳ：ＮＦＳは、年齢、高血糖、ＢＭＩ、血小板数、アルブミンレベル、及びＡＳＴ／ＡＬＴ比に基づいている。ＮＡＦＬＤ線維症スコア＝－１．６７５＋０．０３７×年齢（歳）＋０．０９４×ＢＭＩ（ｋｇ／ｍ２）＋１．１３×ＩＦＧ／糖尿病（はい＝１、いいえ＝０）＋０．９９×ＡＳＴ／ＡＬＴ比－０．０１３×血小板（×１０９／ｌ）－０．６６×アルブミン（ｇ／ｄｌ）。ＮＦＳは、ベースライン（訪問２）及び１６週目（訪問１０）において評価した。
安全性評価は、以下を含んだ。すなわち、病歴、身体検査、ＥＣＧ、バイタルサイン、臨床検査安全性試験（例えば、血液学、血清生化学、凝固、脂質プロファイル、及び尿検査）、ウイルス学、妊娠検査、採血、薬物動態サンプリング、探索的採血、バイオマーカー採血、尿ＤＯＡ及びアルコール呼気検査、有害事象評価、併用薬、生物分析、試料、保管、取り扱い、並びに輸送、並びに制限である。それぞれの詳細な説明を以下に提供する。
病歴：患者の病歴の完全な見直しは、除外基準が満たされていなかったことを確認するために、スクリーニング訪問（訪問１）及びベースライン（訪問２）時に治験責任医師又は被指名人によって行われた。研究に関連する、又はしないとみなされたかどうかにかかわらず、併発する疾患は全て治験責任医師によって報告された。可能な場合、診断日又は疾患の期間を記録した。
身体検査：身体検査（身長及び体重を含む）は、表１９の研究フローチャートに従って、治験責任医師によって、訪問１／スクリーニング、訪問２／ベースライン、訪問３／２週目、訪問４／４週目、訪問６／８週目、訪問８／１２週目、訪問１０／１６週目、及び経過観察訪問１１／２０週目に実施した。この検査はベースラインで完全に完了し、その後は症状に基づいた（つまり、患者からの指摘がない限り、身体系の標準パネルは評価されなかった）。例えば、患者が「発疹」の存在を治験責任医師に報告した場合、皮膚が評価された。臨床的に正当な理由がない限り、追加の身体系を評価する必要はなかった。任意の異常な結果は記録した。ベースライン検査と比較した身体検査の所見の変化をＡＥとして記録した。
ＥＣＧ：１０秒誘導ＩＩリズムストリップでの１２誘導ＥＣＧ １０ｍｍ／１ｍｖ、２５ｍｍ／秒を各時点で記録した。ＥＣＧは、ＧＥ Ｍａｃ １２００又は同等のモデルを使用して記録した。患者は、ＥＣＧが行われる前に、完全に仰臥位で５分間静かに休息した。記録は、訪問１／スクリーニング、訪問２／ベースライン、及び訪問１０／１６週目の表１９の研究フローチャートに示されている日に行った。
バイタルサイン：バイタルサインの測定は、表１９の研究フローチャートに従って、訪問１／スクリーニング、訪問２／ベースライン、訪問３／２週目、訪問４／４週目、訪問６／８週目、訪問８／１２週目、訪問１０／１６週目、及び経過観察訪問１１／２０週目に実施した。バイタルサインの測定は、任意の血液試料を採取する前に実施した。患者が署名した後に所見が得られた場合、臨床的に重要であると考えられた全ての新しい所見又は以前の所見に対する変化を、ＡＥとして記録した。バイタルサインの測定は、仰臥位で実行した血圧（例えば、少なくとも５分間の休息後）の収縮期及び拡張期血圧（ｍｍＨｇ）、安静時に測定した１分当たりの心拍数（ｂｐｍ）、臨床診療に従って測定した温度を含んだ。
臨床検査安全性試験：血液学、血清生化学、凝固、脂質プロファイル、及び尿分析について安全性試験を実施した。血液及び尿試料は、所定の血液学、血清生化学、凝固及び尿分析について、脂質プロファイルと一緒に表１９の研究フローチャートに従って採取した。全ての試料を中央研究所で分析した。全ての対象は、採血前に最低８時間絶食していた。対象が最低８時間絶食しなかった場合、絶食時間の期間を記録し、対象は次の臨床訪問のために適切に絶食するように促された。
・血液学：赤血球数、ヘモグロビン、ヘマトクリット、白血球数、微分白血球数、血小板数、及び網状赤血球を含む全血球数。
・血清生化学：尿素（血中尿素窒素；ＢＵＮ）、クレアチニン、尿酸、総ビリルビン、間接及び直接ビリルビン、ナトリウム、重炭酸カリウム、リン、塩化カルシウム、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、ＡＬＴ／ＡＳＴ比、乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）、クレアチンホスホキナーゼ（ＣＰＫ）、アルブミン、総タンパク質、コレステロール、トリグリセリド、グルコース、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）。
・凝固：プロトロンビン時間（ＰＴ）、国際標準比（ＩＮＲ）、及び活性化部分プロトロンビン時間（ＡＰＴＴ）。
・脂質プロファイル：ＬＤＬ、ＨＤＬ、及びＶＬＤＬ－Ｃ。
・尿検査：ｐＨ、タンパク質、グルコース、血液、ケトン、白血球、白血球エステラーゼ、ビリルビン、比重、ウロビリノーゲン、及び硝酸塩。血液、タンパク質、白血球エステラーゼ、又は硝酸塩／亜硝酸塩が存在する場合は反射マイクロ。
ウイルス学：表１９の研究フローチャートに詳述するように、ＨＩＶ、ＨｅｐＣ、及びＨｅｐＢを含むウイルス学検査を実施するために血液試料を採取した。
妊娠検査：妊娠の可能性のある女性患者に対して、表１９の研究フローチャートに従って、訪問１／スクリーニング、訪問２／ベースライン、訪問４／４週目、訪問６／８週目、訪問８／１２週目、訪問１０／１６週目、及び訪問１１／２０週目に妊娠検査を実施した。
採血：血液試料を取得し、試料の分析及び検証に続いて、各治験責任医師によって臨床的に有意な値について検査結果を見直した。安全性臨床検査を繰り返すには、追加の血液が必要な場合がある。
薬物動態（ＰＫ）サンプリング：ＰＫ分析用の血液試料は、表１９の調査フローチャートに従って、訪問２／ベースライン、訪問３／２週目、訪問４／４週目、訪問６／８週目、訪問８／１２週目、訪問１０／１６週目、及び経過観察訪問１１／２０週目に直接静脈穿刺によって採取した。各時点で１ｍＬの血液試料を採取した。遠心分離後、血漿試料を２つに分け、生物分析アッセイが完了するまで予備試料を中央研究所に保管した。
探索的採血：表１９の研究フローチャートに従って、ベースライン（０週目）及び訪問１０／１６週目に採血し、後日の潜在的な遺伝子アレイ分析又は追加の探索的検査のために保存した。
バイオマーカー採血：表１９の調査フローチャートに従って、ベースライン（０週目）、訪問６／８週目、訪問１０／１６週目、及び経過観察訪問１１／２０週目に採血し、潜在的なバイオマーカー分析のために保存した。
尿ＤＯＡ及びアルコール呼気検査：治験責任医師の裁量で臨床的に適切なように、アルコール呼気検査を実施し、試験の実施中の任意の時点で患者から尿試料を採取し、アンフェタミン、バルビツール酸塩、ベンゾジアゼピン、コカイン、カンナビノイド、及びオピエートを検出するために検査を行った。
併用薬：患者は、スクリーニング前の少なくとも３か月間、安定した用量の任意の併用薬を服用しており、その用量は研究期間全体にわたって安定している必要があった。患者がインスリン依存性である場合、この治療はスクリーニングの少なくとも３か月前に開始されるべきであったが、用量の変更は許可された。
制限：研究は、食事、アルコール、カフェイン、及び身体活動の制限を含む。食事について、患者は、研究中とベースライン前の４週間の両方で、オメガ３又はオメガ６脂肪酸が豊富な栄養補助食品（例えば、タラ肝油カプセル）の摂取を避けた。アルコールについて、患者は、週当たり２１単位（男性）又は週当たり１４単位（女性）を超えるアルコール消費を避けた（１単位は、１０ｍＬ又は８ｍｇの純粋なアルコールからなる）。研究前又は研究中のいずれも、カフェインの制限はなかった。身体活動について、患者は、安全臨床検査（例えば、生化学）の前に少なくとも３～４時間は運動及び激しい身体活動を避ける必要があった。
１．６ 治験薬
ＤＳ１０２のカプセルは、粘度調整剤としての５％ｗ／ｗのコロイド状二酸化ケイ素とともに５００ｍｇの１５－ＨＥＰＥエチルエステル（ＥＥ）を含む白色の不透明な硬質シェルカプセル（サイズ０）であった。
ＤＳ１０２のプラセボ（パラフィンオイル）は、粘度調整剤としての１％ｗ／ｗのコロイド状二酸化ケイ素とともに同等の充填重量の液体パラフィンを含む白色の不透明な硬質シェルカプセル（サイズ０）であった。
ＤＳ１０２及びプラセボのカプセルは、目的外の使用から保護された安全な場所（例えば、施錠されたキャビネット又は薬剤保管室）に２～８℃で保管された。ラベルは用量を盲検化し、無作為化番号が含まれた。
投薬量及び投与：本研究は、全１６週間の期間中１日２回経口投与されるＤＳ１０２とプラセボとの比較を含んだ。最後の治験薬の投与は、１６週目の訪問／早期終了（ＥＴ）訪問の前日に行った。患者は、食事とともに、又は食後にカプセルを服用する必要があった。研究において許可された、他の疾患のための薬剤は、通常どおり服用された。ウォレット付きブリスターパックは４カプセルの７日間からなり、最後に、患者は、割り当てられた薬を１６週間連続して服用した。
１．７ 有害事象及び重篤な有害事象
この研究の有害事象（ＡＥ）及び重篤な有害事象（ＳＡＥ）は次のように定義された。
有害事象（ＡＥ）：治験中のＩＭＰに関連するとみなされるかどうかにかかわらず、治験薬の第１の用量を服用した患者に生じるあらゆる望ましくない経験。ＡＥは、ＩＭＰ及び重症度との関係を定義する症例報告書に記録した。
重篤な有害事象（ＳＡＥ）：治験薬の第１の用量後に患者が重篤な有害事象を経験した場合、その事象はＳＡＥとして記録した。ＳＡＥは、死に至る、生命を脅かす、患者の入院若しくは既存の入院の延長を必要とする、又は持続的若しくは重大な障害／無能力をもたらす、のうちのいずれかを含む、任意の用量での不都合な医学的発生として特徴付けられる。「生命を脅かす」という用語は、事象時に患者が死亡のリスクにあった事象を指す。それがより重篤な場合に、仮定として死亡を引き起こし得る事象は指さない。重要ではあるが、生命を脅かさない事象の例としては、緊急治療室での集中治療、アレルギー性気管支痙攣、入院に至らなかった血液疾患若しくは痙攣、又は薬物依存若しくは薬物乱用の発症が挙げられた。
予期しない有害事象（ＵＡＥ）：治験薬概要書又は製品特性の概要（ＳＰＣ）など同様の製品情報シートでこれまでに報告されていない経験。
ＡＥの強度は、治験責任医師が臨床経験に基づいて定めた、事象の相対的な重症度の推定値である。ＡＥの重大度を評価するために以下の定義を使用した。
・軽度：有害事象は一時的であり、容易に許容された。
・中等度：有害事象は患者に不快感を引き起こし、患者の通常の活動を妨げた。
・重度：有害事象は、患者の通常の活動にかなりの障害となり、活動能力を奪い得るか、又は生命を脅かし得た。
患者の病歴、直近の身体検査所見、及び併用薬を考慮することによって、実験的治療に対するＡＥの因果関係も確立された。ＡＥの因果関係を決定するために以下の定義を使用した。
・関連なし：実験的治療に対して、ＡＥの発症の時間的関係は合理的ではないか、又は別の原因がＡＥの発生を説明し得た。
・関連あり：実験的治療に対して、ＡＥの発症の時間的関係は合理的であり、治療に対する既知の応答パターンに従い、代替の原因がある可能性は低かった。
経過観察期間まで及び経過観察期間を含む研究期間全体にわたって全てのＡＥを報告した。
１．８ 薬物誘導性肝傷害
重度の薬物誘導性肝傷害（ＤＩＬＩ）：認識された原因に関係なく、重度のＤＩＬＩの場合、症状の発現が解消したとみなされるまで治験薬は中止された。治験薬が肝傷害の原因であると判断された場合、その患者では、その薬での再投薬実験を行わなかった。重度のＤＩＬＩは、総ビリルビン＞２×ＵＬＮ又はＩＮＲ＞１．５によって示されるように、肝障害の証拠を規定している。
異常なベースライン肝生化学の患者：異常なベースライン肝生化学を決定する際に、ＵＬＮを使用する代わりに、ベースラインレベルに対して倍増を計算した。したがって、３倍のベースラインＡＬＴ又はＡＳＴ（又は＞２００ＩＵ／Ｌ）の数値に続いて、７２時間以内に繰り返し試験を行い、生化学的変化が改善又は悪化しているかどうかを確認／決定した。ＡＥ情報は、徹底的な身体検査とともに収集した。肝臓病因スクリーニング及び／又は他の適切な試験を行った。肝機能障害が発生した場合、患者は重度のＤＩＬＩとして管理された。重度のＤＩＬＩを満たす基準のいずれかが発生した場合は、薬物治療の一時停止が検討された。
１．９ 重篤な有害反応と予期しない有害反応
有害反応：任意の用量に関連する医薬品に対する全ての有害かつ意図しない応答は、有害な薬物反応とみなされた。「医薬品に対する応答」という句は、医薬品とＡＥとの因果関係が少なくとも合理的な可能性である（すなわち、関係を排除することができない）ことを意味する。市販の医薬品の場合、有害反応とは、有害で意図しない、かつ疾患の予防、診断、若しくは治療、又は生理学的機能の修正のために人間が通常使用する用量で生じる、薬物に対する応答である。
予期しない有害反応：その性質又は重症度が該当する製品情報と一致しなかった有害反応。
疑わしい予期しない重篤な有害反応（ＳＵＳＡＲ）：上の定義によるＩＭＰに関連し得る、予期しない任意の重篤な有害反応。
１．１０ 統計方法論及びデータ管理
この臨床試験では、無作為化、二重盲検、プラセボ対照の並行群間計画を採用した。無作為化は、割り当てのバイアスを最小限に抑え、既知及び未知の患者属性（例えば、人口動態特性）が治療群間で均等にバランスが取れている尤度を増加させるために使用された。盲検化は、データ収集並びに安全性及び有効性の評価中の潜在的なバイアスを低減させるために使用された。比較対照としてのプラセボの使用は、研究期間の短さ及びプラセボ治療の結果であり得る任意の潜在的な長期の不可逆的損傷の欠如に基づいて患者における安全性及び有効性を評価するための合理的な計画として正当化された。
試料サイズの推定：活性薬物群とプラセボ群との間での２０％デルタの反応率、２５％の標準偏差、２０％の脱落率を仮定すると、５％の有意水準及び８０％の出力での統計的検定には群当たり３２人の患者が必要になった。試料サイズは、非盲検者からの推奨に基づいて中間分析で再推定された。一次エンドポイントについて８０％の条件付き出力を達成するには、試料サイズを合計で最大１５０人の患者に増やすことができた。
盲検化及び暗号解読の指示：全ての研究施設の担当者、並びに研究の監視又は実施に関与する担当者は、個々の患者の治療の割り当てに対して盲検化された。無作為化の詳細は厳重に秘密にされ、正式な非盲検化の時まで、権限者が緊急時にのみアクセスできた。試験の盲検化コードは、全ての患者データが記録されて検証され、データベースがロックされた後にのみ解読された。
中間分析及びデータ監視：患者の少なくとも５０％が１６週目の訪問を完了したときの条件付き出力を推定するために、中間分析の安全性を実行した。中間分析は、一次及び共一次有効性エンドポイント並びに二次エンドポイントについて収集されたデータに基づいており、それを使用して、一次研究の目的を達成するために条件付き出力を推定し、試料サイズを潜在的に再推定し、効果の低い治療群を潜在的に除外した。
臨床的に意味のある応答：プラセボと比較して、ＡＬＴ又は肝硬度のより高い平均又は少なくとも２０％の中央値の低減、並びにプラセボと比較してＡＬＴ及び肝硬度の両方のより高い平均又は少なくとも１０％の中央値の低減
分析セットは、登録セット、完全分析セット（ＦＡＳ）、プロトコルごとのセット（ＰＰＳ）、安全性分析セット（ＳＡＳ）、及び薬物動態（ＰＫ）セットを含んだ。各分析セットの詳細な説明を以下に提供する。
登録セット：インフォームドコンセント用紙に署名した患者。スクリーニングの失敗は、資格要件を満たしておらず、かつ無作為化前に研究から離脱した登録母集団由来の患者であった。
ＦＡＳ：研究治療の投与を少なくとも１回受け、ベースライン後の測定が少なくとも１回行われた無作為化患者。患者は、実際に受けた治療に関係なく、無作為化時に割り当てられた治療に従って分析された。
ＰＰＳ：主要なプロトコル違反がなかったＦＡＳの患者からなるＦＡＳのサブセット。全てのプロトコルの逸脱は、データベースロックの前に個別的に評価されて文書化され、大幅な逸脱は、関連する患者のＰＰＳからの除外につながる、有効性の結果への深刻な影響を有するものとみなされた。
ＳＡＳ：研究治療の投与を少なくとも１回受けた患者。患者は、実際に受けた治療に従って分析された。
ＰＫセット：少なくとも１つのＤＳ１０２のＰＫ濃度を有したＳＡＳの患者。患者は、実際に受けた治療に従って分析された。
安全性分析：人口統計、病歴、及び身体検査のデータを、患者ごとに列挙し、記述的に要約した。研究中に記録した全てのＡＥを、Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｆｏｒ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ（ＭｅｄＤＲＡ）の最新版を使用して、系統臓器分類及び基本語にコード化した。ＡＥを、治療、治療との関係、深刻度、及び重症度ごとに表にし、要約した。臨床検査値（例えば、血液学、生化学、及び尿検査）を、各患者について治療及び日ごとに列挙した。検査室の正常範囲外の値を、臨床的有意性に関するコメントとともに個別に列挙し、潜在的に臨床的に有意な異常を強調表示して、治療ごとに要約した。投薬前に得られた臨床検査値を、ベースライン値として定義した。アルコール呼気検査及びＤＯＡ検査の結果を、患者ごとに列挙した。バイタルサインの個別の値を列挙し、治療及び日ごとに記述的に要約した。１２誘導ＥＣＧ評価を、関連する全てのコメントとともに患者ごとに列挙し、治療及び日ごとに要約した。世界保健機関の薬物辞書の最新バージョンに従って薬剤群及びサブ群によって分類された併用薬（存在する場合）を列挙し、治療ごとに要約した。概して、変数の性質に応じた適切な記述統計を適用した。カテゴリ変数は数値及び割合を使用して提示し、連続変数は平均、標準偏差、中央値、最小値、最大値、変動係数、及び患者数を使用して示した。
薬物動態分析：１５（Ｓ）－ＨＥＰＥの血漿濃度を表にし、記述的に要約した。１５（Ｓ）－ＨＥＰＥの個別の及び平均の血漿濃度－時間プロファイルをグラフで示した。
一次変数：一次有効性変数は、１６週目（訪問１０）の血清ＡＬＴのベースラインからの変化であった。共分散分析（ＡＮＣＯＶＡ）モデルを用いて、対応するベースライン値を共変量として含め、活性治療群をプラセボに対して比較した。プラセボに対する比較は、ダネットの多重検定手順に従って行った。欠落している１６週目の値については、使用可能な最後の値を繰り越した（ＬＯＣＦ）。同様の方法を肝硬度に適用した。ＡＬＴについては、縦方向のモデリングを追加で考慮した。
二次変数：二次有効性変数及びベースライン～１６週目（訪問１０）のそれらの変化を、治療群及び訪問ごとに記述統計で要約した。これは、ＡＳＴ、ＡＳＴ：ＡＬＴ比、ＣＡＰによって測定された肝臓脂肪、一過性エラストグラフィによる肝硬度測定、ＦＩＢ－４、ＮＦＳ、ＥＬＦ、及びＨＯＭＡ－ＩＲ／Ａｄｉｐｏ－ＩＲに適用された。活性治療群のベースラインからの変化を、中心効果の項を含むＡＮＯＶＡモデルを用いて、プラセボに対して比較した。全ての治療比較について、５％の有意水準を使用した。
探索的分析：探索的分析には、総コレステロール、トリグリセリド、超低密度リポタンパク質コレステロール（ＶＬＤＬ－Ｃ）、低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ－Ｃ）、高密度リポタンパク質コレステロール（ＨＤＬ－Ｃ）、非高密度リポタンパク質コレステロール（非ＨＤＬ－Ｃ）、レムナント様粒子コレステロール（ＲＬＰ－Ｃ）、空腹時血糖、インスリン、遊離脂肪酸、及びヘモグロビンＡ１Ｃ（ＨｂＡ１Ｃ）など脂質及び代謝パラメーターの分析が含まれた。追加の探索的分析には、高スループットのリピドミクス及びプロテオミクスが含まれた。
１．１１ 結果
この研究は、ＮＡＦＬＤと診断され、１日当たり１ｇ又は２ｇの用量でＤＳ１０２を投与された患者が、代謝過負荷のマーカーの統計的に有意な低減、並びにインスリン感受性及び血糖制御の改善を示したことを実証した。
図２０は、３つの治療群がベースラインでバランスが取れており、リピドミクスプロファイル及びメタボロミクスプロファイルが類似していることを示す。患者のベースライン特性を表１８に示す。患者の１０～１３％は、ベースラインでスタチン療法を受けていた。
Figure 2023528562000018
図２１Ａ～図２１Ｃは、プラセボと比較した、１日当たり１ｇ又は２ｇのいずれかのＤＳ１０２を投与した患者におけるベースライン～１６週のインスリン、グルコース、及び遊離脂肪酸のレベルの変化を示す。グルコース、炭水化物、及び遊離脂肪酸を含む代謝基質がＡＳＨの病因を促進するため、ＤＳ１０２の投与によるインスリン、グルコース、及び遊離脂肪酸のレベルの低減は、臨床的に有意である。
図２２Ａ及び図２２Ｂは、プラセボと比較した、１日当たり１ｇ又は２ｇのいずれかのＤＳ１０２を投与した患者におけるベースライン～１６週のＨＯＭＡ－ＩＲ及びａｄｉｐｏ－ＩＲのレベルの変化を示す。患者は、２ｇのＤＳ１０２を投与された患者について観察したプロトコルごとのセット（ＰＰＳ）の有意な改善とともに、１６週目に両方のインスリン抵抗性指数の改善（例えば、ＨＯＭＡ－ＩＲ及びａｄｉｐｏ－ＩＲのレベルの低減）を示した。
図２３Ａ及び図２３Ｂは、プラセボと比較した、１日当たり１ｇ又は２ｇのいずれかのＤＳ０１２を投与した患者におけるベースライン～１６週の糖化ヘモグロビン（例えば、ＨｂＡ１ｃ）レベルの変化を示す。具体的には、図２３ＡはＨｂＡ１ｃレベルの変化を示し、図２３Ｂはベースラインで高いＨｂＡ１ｃレベルを示したが、１６週目には正常のレベルに達した患者の割合におけるＨｂＡ１ｃレベルの変化を示す。Ｈｂ１Ａｃは、体の赤血球に付着したグルコースの量の尺度であり、長期的な血糖制御について代理であるため、これらの結果は、ＤＳ１０２の投与が臨床的に有意な改善をもたらし、用量依存的に血糖制御を正常化することを示す。
図２４Ａ及び図２４Ｂは、安全性分析セット（ＳＡＳ）における１６週目の患者の脂質プロファイルの平均変化及び中央値（％）変化を示す。これらの結果は、図２５Ａ～図２５Ｃに更に示しており、ＤＳ１０２の投与が、患者における総コレステロール、ＶＬＤＬ－Ｃ、非ＨＤＬ－Ｃ、レムナント様粒子（ＲＬＰ）コレステロール、及びトリグリセリドのレベルの維持又は低減のいずれかにより患者の脂質プロファイルを有意に改善したことを示す。重要なことに、１６週目では低減は平坦にならず、ＤＳ１０２の投与がより長期間の研究において更に大きな変化を誘導する可能性があることを示唆している。
図２６に示すように、ＤＳ１０２の投与は、ＮＡＳＨの肝毒性脂質シグネチャを逆転させ、ＮＡＳＨと診断された患者において変化する複数の脂質クラスを改善する。具体的には、２ｇのＤＳ１０２の投与は、複数の肝毒性ジグリセリドのレベルを有意に低減させ、複数のグリセロリン脂質群のレベルを有意に増加させた。ＮＡＳＨを有する患者は肝臓及び血漿のグリセロリン脂質のレベルが低いため、この所見は重要である。
図２７は、ＤＳ１０２の投与が、ＮＡＳＨについてのＯＷＬ肝臓ケア非侵襲的診断試験など検証済みの診断試験に基づいてＮＡＳＨも解消されたことを示す。ＯＷＬ肝臓ケアは、生検で確認されたＮＡＳＨ患者における血漿リピドミクスに基づいて開発された検査であり、高い予測値を提供する。ＯＷＬ肝臓ケアは、ＮＡＦＬＤと正常な肝臓の患者とを区別するための０．８８の曲線下面積（ＡＵＣ）、及び脂肪性肝炎を有しないＮＡＦＬＤとＮＡＳＨ患者とを区別するための０．７９のＡＵＣを有する。ＤＳ１０２の投与は、１６週目のプラセボと比較して、用量依存的にＯＷＬ肝臓ケアで診断したＮＡＳＨを有意に改善し、正常化した。表１９は、治療群ごとのベースラインでの試験診断を示しており、ほとんどの患者がベースラインでＮＡＳＨ又はＮＡＦＬＤに分類され、２ｇのＤＳ１０２群において患者の割合が低いことを示す。
Figure 2023528562000019
図２８に示すように、ＤＳ１０２の投与は、ＮＡＦＬＤと診断された患者においてＣＡＰによって評価された肝臓脂肪含有量も低減させた。更に、ＤＳ１０２は、より長期間の研究において、より感度の高い方法によって評価した場合に、肝含有量のより大きな変化を誘導することが予想されると考えられる。
表２０に示すように、ＤＳ１０２の投与は患者におけるトリグリセリドレベルも低下させたため、ＤＳ１０２は心血管リスクの低下にも効果的であると考えられる。
Figure 2023528562000020
図２９Ａ～図２９Ｃは、ＤＳ１０２の投与が炎症性及び線維化促進性タンパク質を低減させることを示す。この評価のために、ＤＳ１０２での治療の前後の血液試料を、３５０超の種々のタンパク質バイオマーカーのパネルについて分析した。２ｇのＤＳ１０２での治療は、炎症、線維症、脂質代謝、アポトーシス、及び走化性と関連する１５０超のマーカーの発現を顕著に下方制御した。ＤＳ１０２での治療後、その後の細胞ストレス、炎症、線維症を予防する代謝過負荷及び脂肪毒性の解消が観察された。炎症性及び線維化促進性タンパク質の低減は、ＤＳ１０２がＮＡＳＨの解消及び線維症の予防をもたらす可能性を示唆している。
図３０に示すように、ＤＳ１０２の投与はまた、複数のＮＡＳＨ開発標的の発現を低減させた。特に、２ｇのＤＳ１０２の投与は、ＣＣＲ２／５シグナル伝達（セニクリビロク－Ａｌｌｅｒｇａｎ）、ガレクチン３（ＧＲ－ＭＤ－０２－ガレクチン）、及びＡＯＣ３（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）を含むようにＮＡＳＨ薬物開発標的を低減させた。
図３１の火山プロット（ボンフェローニ及びベンジャミーニ・ホッホベルク検定のデータ）は、２ｇのＤＳ１０２の投与が、タンパク質発現の変化に基づいて炎症性及び線維化促進性タンパク質を低減させたことを示す。表２１は、ボンフェローニ検定に基づいた、最も有意な炎症性及び線維化促進性タンパク質の低減を示す。
Figure 2023528562000021
１ｇのＤＳ１０２の投与はまた、ＴＲの有意な低減を示した。表２２は、線形モデルを用いる分析に基づいた、最も有意な炎症性及び線維化促進性タンパク質の低減を示す。
Figure 2023528562000022
この分析はまた、１ｇのＤＳ１０７群における１個のタンパク質、プラセボ群における０個のタンパク質が、ベンジャミーニ・ホッホベルク検定に基づいて、第１の閾値を超えたことを示した。
図３２に示すように、ＤＳ１０２の投与はまた、複数の血管接着分子の発現を低減させた。血管接着分子はアテローム性動脈硬化症に関与しており、それらの循環レベルは心血管リスクと関連している
図３３に示すように、ＤＳ１０２の投与はまた、心血管リスクの増加と関連する複数のタンパク質の発現を低減させた。
図３４に示すように、ＤＳ１０２の投与はまた、複数の循環ケモカインの発現を低減させた。ケモカインは、アテローム性動脈硬化症の慢性炎症の重要なドライバである。
図３５に示すように、ＤＳ１０２の投与はまた、複数の腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバーの発現を低減させた。腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリのメンバーは、炎症及びアテローム性動脈硬化症に関与している。
ＤＳ１０２はまた、プラセボと比較して安全性及び忍容性の違いが観察されることなく、安全で良好な忍容性であることが証明された。薬物関連の重篤な有害事象（ＳＡＥ）はなく、有害事象（ＡＥ）の発生率は低く、全ての治療群にわたって一貫していた。ほとんどのＡＥは、軽度から中等度かつ一過性であり、治療の中止につながるＡＥを経験した患者はいなかった。各処理群にわたる安全性プロファイルを表２３に示す。
Figure 2023528562000023
ＤＳ１０２はまた、図３６Ａ及び図３６Ｂに示すように、関連する適応症、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、及び原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）の改善における潜在的な有効性について評価された。重要なことに、２ｇのＤＳ１０２の投与は、アルカリ性リン酸塩（ＡＬＰ）及び肝線維症の複数のマーカーを低減させ、ＤＳ１０２がＰＢＣ及びＰＳＣの治療においても有効であることを示唆している。
図３７は、１５－ＨＥＰＥエチルエステル（ＥＥ）トラフ血漿相対濃度の箱ひげ図であり、予想どおり、８週目及び１６週目にＤＳ１０２治療群においてより高い系統的曝露があったことを示す。
１．１２ 要約
全体として、これらの結果は、ＤＳ１０２が代謝負荷を大幅に低減させ、インスリン感受性を改善することにより、ＮＡＳＨ病理の複数の段階を標的にしていることを示す。ＤＳ１０２の投与はまた、ＮＡＳＨと関連する脂質蓄積のレベルを逆転させることにより、患者の脂質プロファイルを改善した。具体的には、ＤＳ１０２を投与されたそれらの患者は、総コレステロール、非ＨＤＬコレステロール、ＲＬＰコレステロール、トリグリセリド、ジグリセリド、及びＶＬＤＬ－Ｃなどを含む肝毒性脂質レベルの蓄積の低減、並びにグリセロリン脂質レベルの増加を示した。ＮＡＳＨと診断された患者は、総コレステロール、トリグリセリド、ジグリセリド、並びにＶＬＤＬ－Ｃのレベルが高く、グリセロリン脂質及びオメガ３ＰＵＦＡのレベルが低いことによって特徴付けられるため、これらの影響は重要である。更に、複数の脂質への変化は、心血管リスクの低減及びメタボリックシンドロームの複数の側面の改善をもたらすことが期待される。
結果はまた、プラセボと比較して大きく統計的に有意な改善を伴う、２ｇ以上のＤＳ１０２の投与を支持する用量依存的効果があることを示唆した。
結論として、ＤＳ１０２は、ＮＡＳＨを治療するための単剤療法又は併用療法の一部のいずれかとして非常に適しており、ＮＡＳＨ又はメタボリックシンドロームを含む心血管代謝性疾患と診断された患者などにおいて心血管リスクを低減すると考えられる。
実施例５：４週間の回復期間を含む、ラットでの強制経口投与による１５（Ｓ）－ＨＥＰＥＥＥの２６週間毒性試験
この研究の目的は、（１）２６週間の強制経口投与によってラットに与えられた、肝臓疾患及び肺疾患の治療に使用される、オメガ－３脂肪酸である１５（Ｓ）－ＨＥＰＥＥＥの潜在的な毒性を決定すること、及び全ての所見の潜在的な可逆性を評価すること、（２）１５（Ｓ）－ＨＥＰＥＥＥの毒物動態特性を決定することであった。
１．１ 研究設計
検査及び対照項目を、１日１回の強制経口投与によって週７日、最低２６週間にわたって適切な動物に投与した。動物ごとの容量は、直近の体重測定に基づいた。用量は、強制経口投与カニューレを取り付けたシリンジを使用して与えた。投与の初日を１日目として指定した。投与製剤を冷蔵庫から取り出し、投与前に少なくとも３０分間撹拌した。投与中にも投与製剤を連続的に撹拌した。
猫背の姿勢、毛の逆立ち及び異常歩行、並びに体重の減少など臨床徴候の発症により、動物３２０６Ｍ、３５１５Ｆ、及び３７０３Ｆへの投与は４５日目から休止し、残りの群３の動物への投与は４８日目から休止した。動物への投与は、６４日目からより低い用量レベル（３０００ｍｇ／ｋｇ／日）で開始することになる。以下の表は、研究で使用した治療（表２３）及び動物群（表２４）を示す。
Figure 2023528562000024
 ａ猫背の姿勢、毛の逆立ち及び異常歩行、並びに体重の減少など、臨床徴候の発症により、動物への投与は、４８日目から休止した。動物への投与は、６４日目からより低い用量レベル（３０００ｍｇ／ｋｇ／日）で開始することになる。
ｂバッチ２５４０Ｍ～１８０１及び２５４０Ｍ～１８０２の調整済み濃度。
ｃバッチ２５４０Ｍ／１９０１及び２５４０Ｍ／１９０２の調整済み濃度。
Figure 2023528562000025
 予備の動物は、４００２Ｍ及び４５０１Ｆ、４５０２Ｆと番号付けされることになる。
回復期間：投与期間の完了時に、指定された回復動物は、最小４週間の回復期間にわたって保持された。
経路の正当化及び投与量レベル：この経路がヒト投与の意図された経路であるため、この研究には、経口投与経路を選択した。１日１回投与されたラットにおける過去２６週間の経口毒性は、試験した最高用量（１ｍｇ／ｋｇ／日）において有害作用を示さなかった。Ｗａｒｒｅｎ，Ｈ（２０１７）．Ａ ２６ Ｗｅｅｋ Ｓｔｕｄｙ ｏｆ １５（Ｓ）－ＨＥＰＥ ＥＥ ｂｙ Ｏｒａｌ（Ｇａｖａｇｅ）ｉｎ Ｒａｔｓ ｗｉｔｈ ａ ４ Ｗｅｅｋ Ｒｅｃｏｖｅｒｙ Ｐｅｒｉｏｄ．Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｓｔｕｄｙ Ｎｏ．５２９１２３を参照されたい。この研究で用量規定毒性が見られなかったことを考えると、追加の２８日間の用量決定試験は、６ｇ／ｋｇ／日の経口最大耐量（ＭＴＤ）を決定した。Ｍｕｒｉｅ，Ｅ（ｏｎｇｏｉｎｇ）．Ａ Ｐｉｌｏｔ ２８－Ｄａｙ Ｓｔｕｄｙ ｏｆ ＤＳ１０２ ｂｙ Ｏｒａｌ Ｇａｖａｇｅ ｉｎ Ｒａｔｓ．Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｓｔｕｄｙ Ｎｏ．５０６６１１を参照されたい。この今回の研究は、このＭＴＤで１５（Ｓ）－ＨＥＰＥ ＥＥ（ＤＳ１０２）の慢性毒性の潜在性を評価してＩＣＨＭ３（Ｒ２）に準拠するために行った。ＩＣＨ Ｈａｒｍｏｎｉｓｅｄ Ｔｒｉｐａｒｔｉｔｅ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ Ｍ３（Ｒ２）．Ｎｏｎｃｌｉｎｉｃａｌ Ｓａｆｅｔｙ Ｓｔｕｄｉｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃｏｎｄｕｃｔ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌｓ ａｎｄ Ｍａｒｋｅｔｉｎｇ Ａｕｔｈｏｒｉｓａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ。
１．２ Ｉｎ－Ｌｉｆｅ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ，Ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｓ，ａｎｄ Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓを参照されたい。
全ての主要研究動物及び回復動物に対して、生存手順、観察、及び測定を行った。毒物動態動物を秤量し、主要研究動物と同時点において臨床観察を記録した。
死亡／瀕死チェックは毎日行った。一般的な健康／死亡及び瀕死について動物を観察した。潜在的な所見の特定又は確認に必要がない限り、観察中に動物をケージから取り出すことはなかった。
臨床的観察：
ケージの側での観察は、毎日行った。潜在的な所見の特定又は確認のためではない限り、観察中に動物をケージから取り出すことはなかった。
詳細な臨床的観察は、毎週行った。検査のために、動物をケージから取り出した。
投与後の観察は、一日を通して定期的に行った。治療に対する反応について全ての動物を検査した。発症、強度、及びこれらの兆候の期間を記録した。投与中及び投与後１時間は、動物に特別な注意を払った。
体重測定は、治療前期間中に２回、投与期間中に１日１回、回復期間中に週２回行った。動物は、個別に秤量した。予定した剖検（主要動物及び回復動物のみ）の初日に重量を記録した。
摂餌量は、１週目に開始し、投与及び回復期間にわたって毎週定量的に測定した。
水の消費量は、水筒の目視検査によって研究を通して定期的に測定した。
眼科検査は、散瞳剤（１％トロピカミド、Ｍｙｄｒｉａｃｙ）適用後に間接検眼鏡を使用して実施した。治療前期間中、全ての主要研究動物及び回復動物を検査した。１３週目及び２６週目の間、主要研究動物（対照及び高用量）を検査した。３０週目に、全ての回復動物を検査した。
１．３ 研究室評価：
臨床病理学
試料採取：回復不能なイソフルラン麻酔下で眼窩洞から採血する場合、剖検の直前ではない限りは尾静脈から採血した。安楽死の順序に従った剖検前に試料を採取しない限り、昇順で動物から採血した。許容サンプリング頻度及び血液量を超えなかった場合、追加の血液試料を得た（例えば、非血清試料の凝固のため）。採取後、試料を適切な研究室に移動して、処理した。試料は、以下の表に従って採取した。
Figure 2023528562000026
 Ｘ＝採取する試料、－＝該当せず。
血液学：抗凝固剤Ｋ２ＥＤＴＡを使用して０．５ｍＬの血液試料を採取した。血液塗抹を標識化し、染色し、保存した。以下のパラメーターに従って血液塗抹を分析した。
Figure 2023528562000027
凝固：処理して血漿にするために抗凝固剤３．８％（ｗ／ｖ）クエン酸三ナトリウムを使用して、０．５ｍＬの血液試料を採取した。凝固を評価するために、以下の凝固パラメーターを測定した。
Figure 2023528562000028
臨床化学：処理して血漿にするために抗凝固リチウムヘパリンを使用して、０．７ｍＬの血液試料を採取した。臨床化学を評価するために、以下のパラメーターを測定した。
Figure 2023528562000029
 ａ総ビリルビンが＞８．５５μｍｏｌ／Ｌである場合、間接ビリルビン及び直接ビリルビンも測定することになる。
尿検査：食物が不在であり、かつ水分が存在する、６時間（＋／－３０分）の期間にわたって動物から尿を採取した。採取後、試料を適切な研究室に移動して、処理した。尿検査を評価するために、以下のパラメーターを測定した。
Figure 2023528562000030
骨髄塗抹分析：全ての動物から骨髄を収集し、１０％の中性緩衝ホルマリン中で保存した。
生物分析及び毒物動態評価
生物分析試料の収集：滅菌針及び使い捨てシリンジを使用し、頸静脈（又は頸静脈にアクセスできない場合は尾静脈）を介して、抗凝固剤Ｋ２ＥＤＴＡを使用して０．５ｍＬの血液試料を採取した。採血スケジュールの完了時に、毒物動態動物を安楽死させた。死体は検査せずに廃棄した。試料は、以下の表に従って採取した。
Figure 2023528562000031
 Ｘ＝採取する試料。－＝該当せず。
ａ試料は、投与前に採取する
ｂ動物３７０２Ｆでは１日目の試料を収集したが、４４日目に、人道的理由でこの動物を安楽死させた。追加試料は、２６週目に動物３７０７Ｆ（０時間ａ採取）及び動物３７０２Ｆ（４時間採取）から採取して、動物３７０４Ｆの欠落した時点を埋め合わせた。
生体分析試料の処理：試料を緩やかに混合し、採血の６０分以内に遠心分離するまで粉砕したウエットアイス上に保持した。試料を１５００ｇ、４℃で１０分間遠心分離した。得られた血漿を分離し、一意にラベル付けした透明ポリプロピレンチューブに移し、ドライアイス上で可能な限り急速に凍結させたか、又は－２０℃に維持するように設定された冷凍庫内で凍結させた。
バイオ分析試料分析：有効な分析手順を使用して、非エステル化ＨＥＰＥ及び総ＨＥＰＥの濃度について血漿試料を分析した。以下を決定した。
ａ） 非エステル化（遊離脂肪酸として血漿中で生じた、又は血漿アルブミンに結合したＨＥＰＥ）。
ｂ） 各試料時間における総（非エステル化ＨＥＰＥ及びエステル化ＨＥＰＥ（例えば、トリグリセリド、コレステロールエステルなど）を定量化する）濃度。
バイオ分析実験室の適切な標準操作手順に従って、この研究のために、非エステル化ＨＥＰＥについて実試料の再分析（ＩＳＲ）を実施した。ラット血漿試料中の総ＨＥＰＥの測定についてのＩＳＲは、上記で参照した分析手順を使用して、試験施設研究番号５２７９４３中に成功裏に行った。この研究で繰り返す必要はない。
全ての残留／保有生物分析試料は、草案の発表後最低６か月間保管した後に廃棄した。あるいは、最終報告の発表が６か月の保有期間の終了前に生じる場合には、６か月の期間よりも前に残留／保有試料を廃棄した。これらの残留／保有試料の早期廃棄はまた、試験責任者によって要求され、承認され得る。
毒物動態評価：毒物動態パラメーターは、Ｐｈｏｅｎｉｘ薬物動態ソフトウェアを使用して推定した。パラメーターの推定には、経口投与経路と一致する非区画アプローチを使用した。全てのパラメーターは、実用的な場合には、１日目及び２６週目の血漿中の１５（Ｓ）－ＨＥＰＥＥＥ組成物の総遊離酸及び非結合遊離酸の濃度から生成した。以下のパラメーターを推定した。
Figure 2023528562000032
部分ＡＵＣ（任意の所与の試料時間の間）が導出され、解釈を補助するために報告され得る。Ｐｈｏｅｎｉｘを使用して、適切なグループ化及びソート変数のための記述統計（Ｃｍａｘ及びＡＵＣ（０－ｔ）の標準誤差）を生成した。ＴＫ表及びグラフも生成した。
１．４ 終了時手順
以下の表は、研究で使用する終末期手順を要約したものである。
Figure 2023528562000033
 Ｘ＝実施する手順：－＝該当なし
ａ組織のリストについては、組織採取及び保存の表を参照されたい。
ｂ標的組織は、肝臓（雄及び雌）、甲状腺（雄及び雌）、腎臓（雌のみ）、胸骨骨髄（雄のみ）である。
予定外の死亡：主要研究動物又は回復動物が研究中に死亡した場合、剖検を行い、特定の組織を保存した。必要に応じて、動物を冷蔵して自己分解を最小限に抑えた。主要研究動物又は回復動物は、試験施設のＳＯＰに従って人道的理由で安楽死させた。体重を記録し、可能であれば、臨床病理パラメーターの評価用の試料を得た。これらの動物を剖検し、特定の組織を保持した。必要に応じて、動物を冷蔵して自己分解を最小限に抑えた。試験中に死亡した、又は人道的理由で安楽死させた毒物動態動物を、限定的な剖検検査に供した。検査は、胸部、腹腔、及び骨盤腔内の臓器及び組織の評価からなり、組織は保持しなかった。限定的な剖検検査の間、潜在的な強制経口投与による外傷の証拠に特別な注意を払った。体重を記録し、毒物動態分析の評価用に試料を採取した。
予定した安楽死：予定した安楽死まで生存した主要研究動物及び回復動物は、濃度が上昇する二酸化炭素に動物を曝露することによって安楽死させた。終末期の体重を記録し、その後、放血させた。可能な場合には、対照を含む各群から同様の数の動物を終日剖検するように、動物を用量群全体で順番に安楽死させた。動物は、予定した剖検前に絶食させなかった。予定した安楽死まで生存した、毒物動態動物は、認められた方法で安楽死させた。剖検は行わず、組織は採取しなかった。
剖検：主要研究動物及び回復動物は、完全剖検に供した。完全剖検は、死体及び筋骨格系；全ての外側面及び開口部；頭蓋腔及び脳の外側面；並びに胸腔、腹腔、及び骨盤腔と、それらに関連する臓器及び組織を含んだ。剖検手順は、動物解剖学及び肉眼的病理学の分野で適切な訓練及び経験を有する、有資格の担当者によって行われた。
臓器体重：組織採取及び保存の表の秤量について確認される臓器は、予定した全ての安楽死動物について、（特に指定がない限り）剖検時に秤量した。死体で見つかった動物、又は不十分な状態若しくは切迫して安楽死させた動物については、臓器の重量を記録しなかった。対臓器は、合わせて秤量した。肉眼的異常の場合は、合計重量に加えて、対の各臓器を秤量し、組織コメントとして入力した。終了時の体重及び脳重量を臓器重量分析に使用した。
組織採取及び保存：以下の表に従って採取した組織を、１０％の中性緩衝ホルマリン中に保存した。
Figure 2023528562000034
Figure 2023528562000035
Ｘ＝実施する手順。－＝該当なし。（１）＝片側。（２）＝両側。
列挙した臓器及び他の臓器の肉眼的異常は、剖検で試料採取し、組織学的分析用に処理し、顕微鏡によって検査する。
ａ予定の剖検及び予定外の剖検（あり得る検査のために）時に２つの骨髄塗抹を大腿骨から採取する。塗抹は、死体で見つかった動物、又は瀕死で安楽死させられた動物からは採取せず、剖検前に冷蔵庫に保存した。骨髄塗抹は空気乾燥させ、ホルマリン中に固定しない。
ｂ眼及び視神経は、デビットソンの固定液中に保存する。精巣及び精巣上体は、デビットソンの修正固定液中に保存する。
ｃ小腸から：パイエル板又は孤立リンパ小節。
ｄ固定後に秤量
１．５ 用量処方及び分析
管理項目：この研究の管理項目は、Ｍｉｌｌｉ－Ｑ水中の０．５％のＨＰＭＣであった。必要に応じて管理項目を調製し、使用しないときは、４℃を維持するように設定された冷蔵庫に保管した。調製した管理項目を冷蔵庫から取り出し、投与前に少なくとも３０分間撹拌した。投与中にも管理項目を連続的に撹拌した。
試験項目：この研究の試験項目は、ＤＳ１０２又は１５（Ｓ）－ＨＥＰＥＥＥであった。試験項目の投与製剤は、投与量レベル要件を満たす適切な濃度で、試験施設において規定された方法に基づいて調製した。投与製剤は毎週調製し、４℃を維持するように設定された冷蔵庫に保管し、毎日投薬した。投与製剤を冷蔵庫から取り出し、投与前に少なくとも３０分間撹拌した。投与中にも投与製剤を連続的に撹拌した。
試料採取及び分析
分析した試料は、規定の安定期間内に提出した。全ての分析された試料は、周囲温度で試験施設の分析実験室に移動させた。全ての残留／保有分析試料は、草案の発表後最低６か月間保管した後に廃棄した。あるいは、最終報告の発表が６か月の保有期間の終了前に生じる場合には、６か月の期間よりも前に残留／保有試料を廃棄した。これらの残留／保有試料の期間前廃棄はまた、治験依頼者との相談後に研究責任者によって承認され得る。以下の表に示すように、分析用に製剤試料を採取した。研究責任者の裁量で、追加試料を採取し、分析することができる。
Figure 2023528562000036
 Ｎ／Ａ＝該当なし。
ａ群２～３の調製の上部、中部、及び下部から得た均質性の結果は、平均化し、濃度結果として利用する。
分析方法
以下に記載の分析は、有効な分析手順を使用して、ＵＶ検出を含むＵＰＬＣによって実施した。
濃度分析：
・分析用試料：上部、中部、及び下部試料を２つずつ（対照用は中部のみ２つ）分析用に送った。濃度のみが評価対象である場合には、中部試料のみを２つ採取した。
・予備試料：上部、中部、及び下部試料を３つずつ（対照用は中部のみ３つ）を試験施設に保持した。予備試料は、研究責任者の裁量で分析され得る。濃度のみが評価対象である場合、中部試料のみを３つ採取する。
・採取容器：適切なサイズのメスフラスコ。
・試料容積：
・群１：５０ｍＬのメスフラスコに０．５ｍＬ。
・群２：５０ｍＬのメスフラスコに０．２５ｍＬ。
・群３：５０ｍＬのメスフラスコに０．２５ｍＬ。
・全ての試料の重量を記録した。
・保管条件：４℃を維持するように設定された冷蔵庫内で保持した。
・合否基準：合否の基準は、理論濃度の±１０％以内の平均試料濃度であった。均質性の場合、合否基準は、群ごとに≦１０％の濃度の相対標準偏差（ＲＳＤ）であった。
安定性分析：試験施設研究番号４３９４１４と併せて以前に実施した安定性分析は、試験項目が、本研究で使用するものをブラケットする濃度で、同一条件下で調製し、保存したときにビヒクル中で安定であることを実証した。Ｒｏｇｅｒｓ，Ｅ（２０１８）．Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ Ｕｌｔｒａ Ｈｉｇｈ－Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ Ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ １５（Ｓ）ＨＥＰＥ ＥＥ ｉｎ ｏｒａｌ（Ｇａｖａｇｅ）Ｄｏｓｉｎｇ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ．Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｓｔｕｄｙ Ｎｏ．４３９４１４を参照されたい。安定性データは、試験施設研究番号４３９４１４ Ｉｄ．の研究記録に保持された。
１．６ 試験システム
動物：試験は、ＣｈａｒｌｅｓＲｉｖｅｒＵＫＬｉｍｉｔｅｄ（Ｍａｒｇａｔｅ，Ｋｅｎｔ，ＵＫ）から購入した雌雄のＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙラットを使用した。初回投薬時の標的年齢は７～８週間であった。初回投薬時の標的重量は、１７５～３００ｇ（雄）及び１２０～２５０ｇ（雌）であった。各動物は、皮下移植された円筒形の「ガラス封止型」トロバン電子マイクロチップを使用して識別された。
１．７ 飼育
住居：投薬開始前に最大３週間の期間にわたって、動物を試験施設の齧歯類用毒物学的設備に順応させた。動物は、無作為に群に割り当てた。雌雄は、別々に無作為化した。健康不良の動物は、群に割り当てなかった。動物は、頂部がステンレス鋼の格子であり、底部は中空ではない、適切なサイズの、吊り下げられたポリカーボネート／ポリプロピレンケージに、ケージ当たり２又は３匹を性別ごとに収容した。滅菌した白色の木材片を寝具材料として使用した。
環境条件：動物部屋環境の標的条件は、以下のとおりであった：温度１９～２３℃；湿度４０～７０％；１時間当たり最低１０回の換気回数；１２時間の明及び１２時間の暗の光サイクル光、温度、及び湿度の制御は自動的に制御され、連続的に監視され、記録された。
餌：ＳＤＳ Ｒａｔ ａｎｄ Ｍｏｕｓｅ（Ｍｏｄｉｆｉｅｄ）Ｎｏ．１ Ｄｉｅｔ ＳＱＣ Ｅｘｐａｎｄｅｄが自由に提供された。公共水道からの水が、水筒から自由に提供された。試験施設で使用された水は、溶解物質、重金属、残留農薬、ｐＨ、硝酸塩、及び亜硝酸塩について定期的な間隔で分析された。微生物学的スクリーニングも行われた。
動物のエンリッチメント：動物は、精神的／環境的エンリッチメントのために社会的に飼育され、研究手順／活動によって中断された場合を除いて、身を隠すための仕掛け及び噛むための物体など物品が提供された。
獣医医療：獣医医療は、研究の過程を通して準備されており、動物は、臨床的徴候又は他の変化によって必要とされるように、獣医スタッフによって検査された。全ての獣医学的検査及び推奨される治療処置が存在する場合、研究記録に文書化された。
１．８ 組織学及び組織病理学
組織学：組織採取及び保存の表で特定された組織をパラフィン中に包埋し、分割し、スライドガラスの上に載せ、ヘマトキシリン及びエオシンで染色した。
組織病理学：組織病理学的評価は、有資格の獣医病理学者又は実験動物病理学分野で訓練を受け、経験を有する獣医病理学者が行った。顕微鏡による検査は、主要研究管理及び高用量動物、予定外の死亡及び肉眼的病変（主要研究低用量群及び回復動物を含む）からの組織について実施した。主要研究高用量群で治療効果が存在した場合、主要研究低用量群及び回復動物からの標的組織の顕微鏡による検査は、治験依頼者の合意及び治験実施計画書の改訂後に行った。
１．９ コンピュータ化システム
コンピュータ化システム：コンピュータ化システムのフォローテーブルは、研究で使用するために利用可能であった。
Figure 2023528562000037
１．１０ 統計分析
投与前期間中に収集したデータを表にし、要約し、統計的に分析した。特に明記しない限り、全ての統計分析は、それぞれの試験段階で行った。予定した機会に収集した数値データ（毒物動態動物からのデータを除く）を要約し、性別及び機会に従って以下に示すように統計的に分析した。
構成変数：体重変化は、予定した各間隔間で計算した。臓器重量対体重は、予定した間隔の終了時体重に対して計算した。臓器重量対臓器重量は、予定した間隔の脳重量に対して計算した。
記述統計分析：平均、標準偏差（又は適切とみなされる場合には％変動係数又は標準誤差）、パーセンテージ、数、及び／又は発生率は、データセットごとに適切に報告した。
推測統計分析：全ての統計分析は、５％の有意水準で行った。全ての一対比較は、両側検定を使用して実施し、特に明記しない限り、１％及び５％の水準で報告した。対象の一対比較を以下に列挙する。
・群２対群１
・群３対群１
分析は、可能な場合には以下のマトリックスに従って行ったが、観察結果が３未満である群は全て除外した。
Figure 2023528562000038
パラメトリック／非パラメトリック：ルビーン検定を使用して、群分散の均質性を評価した。ルビーン検定が有意でなかったか、又はクラスカル－ワリス検定が有意でなかった場合、一般的な一元配置ＡＮＯＶＡ Ｆ検定を使用して群を比較した。一般的なＦ検定又はクラスカル－ワリス検定が有意であることが判明した場合、それぞれダネットの検定又はタンの検定を使用して一対比較を行った。
１．１１ 結果
赤血球数、赤血球分布幅、及び網状赤血球数の変化：図３８Ａ～図３８Ｃは、１５（ｓ）－ＨＥＰＥ ＥＥ又はプラセボを投与されたラットの赤血球数（ＲＢＣ）、赤血球分布幅（ＲＤＷ）、及び網状赤血球数（ＲＥＴＩＣ）の変化を示す。１５（Ｓ）－ＨＥＰＥＥＥ及びプラセボは、最低２６週間にわたって週に７日、強制経口投与で１日１回投与された。各動物の容積は、直近の体重測定に基づいた。表３８に記載するように、６ｇ／ｋｇ／日の最高用量では良好な忍容性が示されず、より低い３ｇ／ｋｇ／日に置き換えられた。
Figure 2023528562000039
ＲＢＣの変化：図３８Ａ及び表３８は、３ｇ／ｋｇ／日用量の投与が対照と比較してＲＢＣの有意な増加をもたらしたことを示す。
ＲＤＷの変化：図３８Ｂ及び表３８は、２ｇ／ｋｇ／日及び３ｇ／ｋｇ／日の両用量の投与が、対照と比較してＲＤＷの有意な低減をもたらしたことを示す。
ＲＥＴＩＣの変化：図３８Ｃ及び表３８は、２ｇ／ｋｇ／日及び３ｇ／ｋｇ／日の両用量の投与が、対照と比較してＲＥＴＩＣの有意な低減をもたらしたことを示す。
これらの結果は、１５－ＨＥＰＥが、ヘモグロビン及び赤血球に影響を与える多数の疾患の治療可能性を有することを示唆している。
プロトロンビン時間、活性化部分トロンボプラスチン時間、及びフィブリノゲン濃度の変化：図３９Ａ～図３９Ｃは、１５（ｓ）－ＨＥＰＥ ＥＥ又はプラセボを投与されたラットのプロトロンビン時間（ＰＴ）、活性化部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ）、及びフィブリノゲン（ＦＩＢ）濃度の変化を示す。１５（Ｓ）－ＨＥＰＥＥＥ及びプラセボは、最低２６週間にわたって週に７日、強制経口投与で１日１回投与された。各動物の容積は、直近の体重測定に基づいた。表３９に記載するように、６ｇ／ｋｇ／日の最高用量では良好な忍容性が示されず、より低い３ｇ／ｋｇ／日に置き換えられた。
Figure 2023528562000040
ＰＴの変化：図３９Ａ及び表３９は、２ｇ／ｋｇ／日及び３ｇ／ｋｇ／日の両用量の投与が、対照と比較してＰＴの有意な低減をもたらしたことを示す。
ＡＰＴＴの変化：図３９Ｂ及び表３９は、２ｇ／ｋｇ／日及び３ｇ／ｋｇ／日の両用量の投与が、対照と比較してＡＰＴＴの有意な増加をもたらしたことを示す。
ＦＩＢ濃度の変化：図３９Ｃ及び表３９は、２ｇ／ｋｇ／日及び３ｇ／ｋｇ／日の両用量の投与が、対照と比較してＦＩＢ濃度の有意な低減をもたらしたことを示す。
これらの結果は、１５－ＨＥＰＥが抗凝固剤及び抗血栓効果を有することを示唆している。
本開示の様々な実施形態を本明細書で以下に説明する。
項Ａ．メタボリックシンドロームの治療及び／又は予防を必要とする対象においてメタボリックシンドロームを治療する、及び／又は予防する方法であって、方法は、対象に１５－ＨＥＰＥ、１５－ＨＥＴｒＥ、又は１５－ＨＥＰＥ及び／若しくはＨＥＴｒＥを含む組成物を投与することを含む、方法。
項Ｂ．心血管代謝性疾患の治療及び／又は予防を必要とする対象において心血管代謝性疾患を治療する、及び／又は予防する方法であって、方法は、対象に１５－ＨＥＰＥ、１５－ＨＥＴｒＥ、又は１５－ＨＥＰＥ及び／若しくはＨＥＴｒＥを含む組成物を投与することを含む、方法。
項Ｃ．メタボリックシンドローム及び／又は心血管代謝性疾患の治療及び／又は予防を必要とする対象においてメタボリックシンドローム及び／又は心血管代謝性疾患を治療する、及び／又は予防する方法であって、方法は、対象に１５－ＨＥＰＥ及び／又は最大約８ｇの１５－ＨＥＴｒＥを含む組成物を投与することを含み、１５－ＨＥＰＥ及び／又は１５－ＨＥＴｒＥは、組成物中の全ての脂肪酸の少なくとも約９０重量％に相当する、方法。
項Ｄ．メタボリックシンドローム及び／又は心血管代謝性疾患の治療及び／又は予防を必要とする対象においてメタボリックシンドローム及び／又は心血管代謝性疾患を治療する、及び／又は予防する方法であって、方法は、対象に最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を投与することを含み、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂肪酸の少なくとも約９０重量％に相当し、対象は、ジグリセリド、グリセロリン脂質、肝臓脂肪、血圧、腹囲、及び／若しくは遊離脂肪酸のレベルの低減、並びに／又はグリセロリン脂質レベルの増加のうちの１つ以上を示す、方法。
項Ｅ．対象における非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）の第１の段階がＮＡＳＨの第２の段階に進行するのを予防する方法であって、方法は、対象に最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を投与することを含む、方法。
項Ｆ．第１の段階は、代謝過負荷、肝臓脂肪含有量及び脂肪毒性の増加、細胞ストレスアポトーシス、炎症、並びに／又は線維形成リモデリングである、項Ｅに記載の方法。
項Ｇ．第２の段階は、肝臓脂肪含有量及び脂肪毒性の増加、細胞ストレスアポトーシス、炎症、並びに／又は線維形成リモデリングである、項Ｅ又はＦに記載の方法。
項Ｈ．心血管疾患の治療及び／又は予防を必要とする、非アルコール性脂肪性肝障害（ＮＡＦＬＤ）、メタボリックシンドローム、及び／又は心血管代謝性疾患を有する対象において心血管疾患を治療する、及び／又は予防する方法であって、方法は、対象に１５－ＨＥＰＥ、１５－ＨＥＴｒＥ、又は１５－ＨＥＰＥ及び／若しくはＨＥＴｒＥを含む組成物を投与することを含む、方法。
項Ｉ．心血管疾患の治療及び／又は予防を必要とする、非アルコール性脂肪性肝障害（ＮＡＦＬＤ）、メタボリックシンドローム、及び／又は心血管代謝性疾患を有する対象において心血管疾患を治療する、及び／又は予防する方法であって、方法は、対象に最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を投与することを含み、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂肪酸の少なくとも約９０重量％に相当する、方法。
項Ｊ．対象は、α－平滑筋作用（α－ＳＭＡ）、メタロペプチダーゼ阻害剤－１（ＴＩＭＰ－１）、トランスフォーミング増殖因子ベータ－β（ＴＧＦ－β）、及び／又は１型コラーゲンのレベルのうちの１つ以上の低減を示す、項Ａ～Ｉのいずれか一項に記載の方法。
項Ｋ．対象は、ジグリセリド、肝臓脂肪、血圧、腹囲、及び／若しくは遊離脂肪酸のレベルの低減、並びに／又はグリセロリン脂質レベルの増加を示す、項Ａ～Ｃ又は項Ｅ～Ｊのいずれか一項に記載の方法。
項Ｌ．対象は、アルカリ性リン酸塩（ＡＬＰ）レベルの低減を示す、項Ａ～Ｋのいずれか一項に記載の方法。
項Ｍ．対象は、血清アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、及び／又はビリルビン（ＢＵＮ）のレベルの低減を示す、項Ａ～Ｌのいずれか一項に記載の方法。
項Ｎ．対象は、線維症領域の低減を示す、項Ａ～Ｍのいずれか一項に記載の方法。
項Ｏ．対象は、ヘモグロビンＡ１Ｃ（ＨｂＡ１Ｃ）、インスリン抵抗性の恒常性モデル評価（ＨＯＭＡ－ＩＲ）、及び／又は脂肪組織のインスリン抵抗性（ａｄｉｐｏ－ＩＲ）のレベルの低減を示す、項Ａ～Ｎのいずれか一項に記載の方法。
項Ｐ．ＮＡＦＬＤは、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）である、項Ｈ～Ｏのいずれか一項に記載の方法。
項Ｑ．心血管代謝性疾患又は心血管疾患は、脂質異常症、高脂血症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、原発性高コレステロール血症、原発性高脂血症、一般的な原発性高脂血症、一般的な高コレステロール血症、家族性高脂血症、家族性原発性高脂血症、家族性高コレステロール血症、家族性高トリグリセリド血症、家族性複合高脂血症、家族性欠陥アポリポタンパク質ｂ－１００、二次性高脂血症、混合型高脂血症、心血管疾患、残存心血管リスク、アテローム性動脈硬化プラークの形成／進行の予防、微小血管疾患、大血管疾患、アテローム性動脈硬化症、冠状動脈性アテローム性動脈硬化症、拡張機能障害、心血管リスクの低減、主要な冠状動脈事象の予防、主要な有害な心血管系事象の予防、虚血性事象の予防、心血管系事象の二次／一次予防、心血管系死の予防、心筋梗塞、脳卒中、アンギナ、正常な内皮機能の回復、糖尿病、真性糖尿病、インスリン抵抗性、高インスリン血症、高血糖症、血糖異常、血糖制御の誘導、耐糖能異常、及び空腹時血糖異常のうちの１つ以上である、項Ｂ～Ｄ又は項Ｆ～Ｐのいずれか一項に記載の方法。
項Ｒ．微小血管疾患は、網膜症、腎症、神経障害、又はそれらの組み合わせである、項Ｑに記載の方法。
項Ｓ．大血管疾患は、脳卒中、末梢血管疾患、肢虚血、心臓病、又はそれらの組み合わせである、項Ｑに記載の方法。
項Ｔ．対象は、超低密度リポタンパク質コレステロール（ＶＬＤＬ－Ｃ）、非高密度リポタンパク質コレステロール（非ＨＤＬ－Ｃ）、及び／又はレムナント様粒子コレステロール（ＲＬＰ－Ｃ）、及び／又は高密度リポタンパク質コレステロール（ＨＤＬ－Ｃ）のレベルの低減を示す、項Ａ～Ｓのいずれか一項に記載の方法。
項Ｕ．対象は、肝硬度、線維症－４（ＦＩＢ－４）、強化肝線維症（ＥＬＦ）スコア、及び／又はＮＡＦＬＤスコア（ＮＦＳ）の低減を示す、項Ａ～Ｔのいずれか一項に記載の方法。
項Ｖ．対象は、プラスミノーゲンアクチベーター阻害剤－１（ＰＡＩ－１）、メタロペプチダーゼ阻害剤－１（ＴＩＭＰ－１）、ジペプチジルペプチダーゼ４（ＤＰＰ４）、ｔｒｅｍ様転写物２（ＴＬＴ２）、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド１６（ＣＣＬ１６）、単球走化性タンパク質－１（ＭＣＰ－１）、血清アミロイドＡ４（ＳＡＡ４）、ホスホイノシチド３（ＰＩ３）、チオレドキシン還元酵素（ＴＲ）、白血球免疫グロブリン様受容体Ｂ１（ＬＩＬＢＲ１）、アミンオキシダーゼ、銅含有３（ＡＯＣ３）、セリンプロテアーゼ２（ＰＲＳＳ２）、及び腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーメンバー１１Ａ（ＴＮＲＳＦ１１Ａ）からなる群から選択される炎症性及び線維化促進性タンパク質の低減を示す、項Ａ～Ｕのいずれか一項に記載の方法。
項Ｗ．対象において胆汁うっ滞性肝疾患を治療する、又は予防する方法であって、方法は、対象に１５－ＨＥＰＥ、１５－ＨＥＴｒＥ、又は１５－ＨＥＰＥ及び／若しくは１５－ＨＥＴｒＥを含む組成物を投与することを含む、方法。
項Ｘ．胆汁うっ滞性肝疾患は、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、進行性家族性肝内胆汁うっ滞、又はそれらの組み合わせである、項Ｗに記載の方法。
項Ｙ．胆汁うっ滞性肝疾患は、薬物誘導性肝傷害、完全非経口栄養（ＴＰＮ）、ウイルス性及びアルコール性肝炎、全身性疾患に続発する胆汁うっ滞、移植片機能不全、肝移植後胆汁うっ滞、膵炎、総胆管結石、ミリッツィ症候群、遺伝性疾患、悪性腫瘍、又はそれらの組み合わせによって引き起こされる、項Ｗ又はＸに記載の方法。
項Ｚ．悪性腫瘍は、肝細胞がん、胆管腫瘍、膵臓がん、又はそれらの組み合わせである、項Ｙに記載の方法。
項ＡＡ．対象は、α－平滑筋作用（α－ＳＭＡ）、メタロペプチダーゼ阻害剤－１（ＴＩＭＰ－１）、トランスフォーミング増殖因子ベータ－β（ＴＧＦ－β）、及び１型コラーゲンのレベルからなる群から選択されるサイトカイン及び／又はケモカインの低減を示す、項Ｗ～Ｚのいずれか一項に記載の方法。
項ＢＢ．対象において腎臓病を治療する、又は予防する方法であって、方法は、対象に１５－ＨＥＰＥ及び／若しくは１５－ＨＥＴｒＥ、又は１５－ＨＥＰＥ及び／若しくは１５－ＨＥＴｒＥを含む組成物を投与することを含み、対象は、腎臓病の少なくとも１つのリスク因子を有する、方法。
項ＣＣ．腎臓病は、腎線維症、尿細管間質性線維症、慢性腎臓病、重度の間質性線維症、腎間質性線維症、及び末期腎疾患からなる群から選択される、項ＢＢに記載の方法。
項ＤＤ．腎臓病は線維症に至る、項ＣＣに記載の方法。
項ＥＥ．腎臓病の少なくとも１つのリスク因子は、糖尿病、高血圧、心血管疾患、糸球体腎炎、及び多発性嚢胞腎からなる群から選択される、項ＢＢ～ＤＤのいずれか一項に記載の方法。
項ＦＦ．対象は、腎臓ヒドロキシプロリンレベルの低減を示す、項ＢＢ～ＥＥのいずれか一項に記載の方法。
項ＧＧ．対象は、α－ＳＭＡ、ＴＩＭＰ－１、ＴＧＦ－β、及び／又は１型コラーゲンのレベルの低減を示さない、項ＢＢ～ＦＦのいずれか一項に記載の方法。
項ＨＨ．対象は、α－ＳＭＡ、ＴＩＭＰ－１、ＴＧＦ－β、及び／又は１型コラーゲンのレベルの低減を示す、項ＢＢ～ＧＧのいずれか一項に記載の方法。
項ＩＩ．対象は、肝臓における線維化促進性サイトカインの低減を示す、項ＡＡ～ＨＨのいずれか一項に記載の方法。
項ＪＪ．線維化促進性サイトカインは、α－ＳＭＡ、ＴＩＭＰ－１、ＴＧＦ－β、１型コラーゲン、インターロイキン１β（ＩＬ－１β）、インターロイキン－６（ＩＬ－６）、インターロイキン－６（ＩＬ－８）、インターロイキン－１３（ＩＬ－１３）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ－α）、ＴＮＦ様リガンド１Ａ（ＴＬ１Ａ）、アリール炭化水素受容体（ＡｈＲ）、インターロイキン－１７（ＩＬ－１７）、インターロイキン－２３（ＩＬ－２３）、インターロイキン－１１（ＩＬ－１１）、及び／又はインターロイキン－３３（ＩＬ－３３）のうちの１つ以上である、項ＩＩに記載の方法。
項ＫＫ．対象は、血管接着分子及び／又はケモカイン及び／又は腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバーの低減を示す、項のＡ～ＪＪのいずれか一項に記載の方法。
項ＬＬ．１５－ＨＥＰＥ、１５－ＨＥＴｒＥ、又は１５－ＨＥＰＥ及び／若しくは１５－ＨＥＴｒＥを含む組成物は、経口投与される、項Ａ～ＫＫのいずれか一項に記載の方法
項ＭＭ．１５－ＨＥＰＥ及び／又は１５－ＨＥＴｒＥは、遊離酸形態、エステル化形態、又は塩形態である、項Ａ～ＬＬのいずれか一項に記載の方法。
項ＮＮ．エステル化形態は、アルキルエステル形態又はトリグリセリド形態である、項ＭＭに記載の方法。
項ＯＯ．１５－ＨＥＰＥは、１５（Ｓ）－ＨＥＰＥ、１５（Ｒ）－ＨＥＰＥ、若しくはそれらの組み合わせを含み、かつ／又は１５－ＨＥＴｒＥは、１５（Ｓ）－ＨＥＴｒＥ、１５（Ｒ）－ＨＥＴｒＥ、若しくはそれらの組み合わせを含む、項Ａ～ＮＮのいずれか一項に記載の方法。
項ＰＰ．組成物は、約１ｇ～約２ｇの１５－ＨＥＰＥ及び／又は１５－ＨＥＴｒＥを含む、項Ａ～ＯＯのいずれか一項に記載の方法。
項ＱＱ．組成物は、約２ｇ以上の１５－ＨＥＰＥ及び／又は１５－ＨＥＴｒＥを含む、項Ａ～ＰＰのいずれか一項に記載の方法。
項ＲＲ．組成物は、約１ｇ又は約２ｇの１５－ＨＥＰＥ及び／又は１５－ＨＥＴｒＥを含む、項Ａ～ＱＱのいずれか一項に記載の方法。
項ＳＳ．組成物は、約１０ｍｇ～約１０，０００ｍｇの１５－ＨＥＰＥ及び／又は１５－ＨＥＴｒＥを含む、項Ａ～ＲＲのいずれか一項に記載の方法。
項ＴＴ．組成物は、約５ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約２５０ｍｇ／ｋｇ、又は約５００ｍｇ／ｋｇの１５－ＨＥＰＥ及び／又は１５－ＨＥＴｒＥを含む、項Ａ～ＳＳのいずれか一項に記載の方法。
項ＵＵ．１５－ＨＥＰＥ及び／又は１５－ＨＥＴｒＥは、組成物中に存在する全ての脂肪酸の少なくとも約９０重量％に相当する、項Ａ～ＴＴのいずれか一項に記載の方法。
項ＶＶ．組成物は、１日当たり１～８個のカプセルで投与される、項Ａ～ＵＵのいずれか一項に記載の方法。
項ＷＷ．方法は、対象に１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を投与することを含む、項Ａ～Ｃ又は項Ｈ～ＶＶのいずれか一項に記載の方法。
項ＸＸ．方法は、対象に１５－ＨＥＴｒＥ又は１５－ＨＥＴｒＥを含む組成物を投与することを含む、項Ａ～Ｃ又は項Ｈ～ＶＶのいずれか一項に記載の方法。
項ＹＹ．血液障害の治療及び／又は予防を必要とする対象において血液障害を治療する、及び／又は予防する方法であって、方法は、１５－ヒドロキシエイコサペンタエン酸（１５－ＨＥＰＥ）又は１５－ヒドロキシエイコサペンタエン酸（１５－ＨＥＰＥ）を含む組成物を対象に投与することを含む、方法。
項ＺＺ．血液障害は、貧血、血液がん、及び凝固障害からなる群から選択される、項ＹＹに記載の方法。
項ＡＢ．貧血は、栄養性貧血及び非栄養性貧血からなる群から選択される、項ＺＺに記載の方法。
項ＡＣ．血液がんは、リンパ腫、白血病、及び骨髄腫からなる群から選択される、項ＺＺに記載の方法。
項ＡＤ．凝固障害は、血栓形成傾向、血友病、フォン・ヴィレブランド病、及び血小板減少症からなる群から選択される、項ＺＺに記載の方法。
項ＡＥ．ヘモグロビン異常の治療及び／又は予防を必要とする対象においてヘモグロビン異常を治療する、及び／又は予防する方法であって、方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ヒドロキシエイコサペンタエン酸（１５－ＨＥＰＥ）を含む組成物を対象に投与することを含む、方法。
項ＡＦ．赤血球障害の治療及び／又は予防を必要とする対象において赤血球障害を治療する、及び／又は予防する方法であって、方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ヒドロキシエイコサペンタエン酸（１５－ＨＥＰＥ）を含む組成物を対象に投与することを含む、方法。
項ＡＧ．ヘモグロビン異常及び／又は赤血球障害の治療及び／又は予防を必要とする対象においてヘモグロビン異常及び／又は赤血球障害を治療する、及び／又は予防する方法であって、方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含み、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂質の少なくとも約９０重量％に相当する、方法。
項ＡＨ．ヘモグロビン異常及び／又は赤血球障害の治療及び／又は予防を必要とする対象においてヘモグロビン異常及び／又は赤血球障害を治療する、及び／又は予防する方法であって、方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含み、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂質の少なくとも約９０重量％に相当し、対象は、
（ａ）赤血球数の増加、
（ｂ）赤血球分布幅の低下、及び／又は
（ｃ）網状赤血球数の低下、のうちの１つ以上を示す、方法。
項ＡＩ．対象は、組成物を投与されていない対照群と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、又は少なくとも３０％の赤血球数の増加を有する、項ＡＨに記載の方法。
項ＡＪ．対照群は、約４×１０１２の赤血球／Ｌの赤血球数を有する、項ＡＩに記載の方法。
項ＡＫ．対象は、組成物を投与されていない対照群と比較して、少なくとも約１５～２０％、少なくとも約２０～２５％、少なくとも約２５～３０％、少なくとも約３０～３５％、又は少なくとも約３５～４０％、の赤血球分布幅の低下を有する、項ＡＨに記載の方法。
項ＡＬ．対照群は、１５％超の赤血球分布幅を有する、項ＡＫに記載の方法。
項ＡＭ．対象は、組成物を投与されていない対照群と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、又は少なくとも約２０％の網状赤血球数の低下を有する、項ＡＨに記載の方法。
項ＡＮ．対照群は、総赤血球数の５％超の網状赤血球数を有する、項ＡＭに記載の方法。
項ＡＯ．溶血性貧血の治療及び／又は予防を必要とする対象において溶血性貧血を治療する、及び／又は予防する方法であって、方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含み、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂質の少なくとも約９０重量％に相当する、方法。
項ＡＰ．溶血性貧血は、遺伝性溶血性貧血又は後天性溶血性貧血である、項ＡＯに記載の方法。
項ＡＱ．遺伝性溶血性貧血は、鎌状赤血球症、鎌状赤血球貧血、β－サラセミア、及び遺伝性球状赤血球症からなる群から選択される、項ＡＰに記載の方法。
項ＡＲ．後天性溶血性貧血は、感染症、薬物治療、血液悪性腫瘍、自己免疫疾患、脾機能亢進症、機械弁、及び輸血に続発するものからなる群から選択される、項ＡＰに記載の方法。
項ＡＳ．鎌状赤血球症及び鎌状赤血球貧血は、鎌状赤血球クリーゼ、血管閉塞性クリーゼ、及び／又は脾臓血球貯留に関連する、項ＡＱに記載の方法。
項ＡＴ．１５－ＨＥＰＥは、エチルエステル（１５－ＨＥＰＥ ＥＥ）の形態であるか、又は１５－ＨＥＰＥは、光学活性エステル（１５（Ｓ）－ＨＥＰＥ ＥＥ）の形態である、項ＹＹ～ＡＳのいずれか一項に記載の方法。
項ＡＵ．ヘモグロビン異常及び／又は赤血球障害は、遺伝性溶血性貧血、後天性溶血性貧血、ファンコニ貧血、鉄欠乏性貧血、葉酸欠乏症、Ｂ１２欠乏症、及び骨髄異形成症候群からなる群から選択される、項ＡＥ～ＡＮのいずれか一項に記載の方法。
項ＡＶ．対象は、赤血球数の増加、網状赤血球数の低下、及び赤血球分布幅の低下を示す、項ＹＹ～ＡＧのいずれか一項に記載の方法。
項ＡＷ．血液障害及び／又は血液疾患の治療及び／又は予防を必要とする対象において血液障害及び／又は血液疾患を治療する、及び／又は予防する方法であって、方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含み、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂質の少なくとも約９０重量％に相当する、方法。
項ＡＸ．１５－ＨＥＰＥは、エチルエステル（１５－ＨＥＰＥ ＥＥ）の形態であるか、又は１５－ＨＥＰＥは、光学活性エステル（１５（Ｓ）－ＨＥＰＥ ＥＥ）の形態である、項ＡＷに記載の方法。
項ＡＹ．血液障害及び／又は血液疾患は、遺伝性溶血性貧血、後天性溶血性貧血、ファンコニ貧血、鉄欠乏性貧血、葉酸欠乏症、Ｂ１２欠乏症、及び骨髄異形成症候群からなる群から選択される、項ＡＷに記載の方法。
項ＡＺ．溶血性貧血は、遺伝性溶血性貧血又は後天性溶血性貧血である、項ＡＹに記載の方法。
項ＢＡ．遺伝性溶血性貧血は、鎌状赤血球症、鎌状赤血球貧血、β－サラセミア、及び遺伝性球状赤血球症からなる群から選択される、項ＡＺに記載の方法。
項ＢＣ．後天性溶血性貧血は、感染症、薬物治療、血液悪性腫瘍、自己免疫疾患、脾機能亢進症、機械弁、及び輸血に続発するものからなる群から選択される、ＡＺに記載の方法。
項ＢＤ．鎌状赤血球症及び鎌状赤血球貧血は、鎌状赤血球クリーゼ、血管閉塞性クリーゼ、及び／又は脾臓血球貯留に関連する、項ＢＡに記載の方法。
項ＢＥ．対象は、赤血球数の増加、網状赤血球数の低下、及び赤血球分布幅の低下を示す、項ＡＷ～ＢＤのいずれか一項に記載の方法。
項ＢＦ．血栓形成傾向障害の治療及び／又は予防を必要とする対象において血栓形成傾向障害を治療する、及び／又は予防する方法であって、方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ヒドロキシエイコサペンタエン酸（１５－ＨＥＰＥ）を含む組成物を対象に投与することを含む、方法。
項ＢＧ．血栓形成傾向の治療及び／又は予防を必要とする対象において血栓形成傾向を治療する、及び／又は予防する方法であって、方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含み、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂質の少なくとも約９０重量％に相当する、方法。
項ＢＨ．血栓形成傾向の治療及び／又は予防を必要とする対象において血栓形成傾向を治療する、及び／又は予防する方法であって、方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含み、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂質の少なくとも約９０重量％に相当し、対象は、
（ａ）プロトロンビン時間の延長、
（ｂ）活性化部分トロンボプラスチン時間の延長、及び／又は
（ｃ）フィブリノゲン濃度の低下、のうちの１つ以上を示す、方法。
項ＢＩ．静脈血栓塞栓症の治療及び／又は予防を必要とする対象において静脈血栓塞栓症を治療する、及び／又は予防する方法であって、方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含み、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂質の少なくとも約９０重量％に相当する、方法。
項ＢＪ．動脈血栓症の治療及び／又は予防を必要とする対象において動脈血栓症を治療する、及び／又は予防する方法であって、方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含み、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂質の少なくとも約９０重量％に相当する、方法。
項ＢＫ．塞栓症の予防を必要とする対象において塞栓症を予防する方法であって、方法は、最大約８ｇの１５－ヒドロキシエイコサペンタエン酸（１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含み、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂質の少なくとも約９０重量％に相当する、方法。
項ＢＬ．第１の段階が血栓の形成である、項ＢＩ～ＢＫのいずれか一項に記載の方法。
項ＢＭ．対象は、プロトロンビン時間の延長、活性化部分トロンボプラスチン時間の延長、及びフィブリノゲン濃度の低下を示す、項ＢＦ～ＢＧ又は項ＢＩ～ＢＬのいずれか一項に記載の方法。
項ＢＮ．１５－ＨＥＰＥは経口投与される、項ＹＹ～ＢＭのいずれか一項に記載の方法。
項ＢＯ．組成物は、１日当たり１～８個のカプセルで投与される、項ＹＹ～ＢＮのいずれか一項に記載の方法。
項ＢＰ．１５－ＨＥＰＥは、遊離酸形態、エステル化形態、又は塩形態である、項ＹＹ～ＢＯのいずれか一項に記載の方法。
項ＢＱ．組成物は、約１ｇ～約２ｇの１５－ＨＥＰＥを含む、項ＹＹ～ＢＰのいずれか一項に記載の方法。
項ＢＲ．組成物は、約２ｇ以上の１５－ＨＥＰＥを含む、項ＹＹ～ＢＱのいずれか一項に記載の方法。
項ＢＳ．組成物は、約５ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約２５０ｍｇ／ｋｇ、又は約５００ｍｇ／ｋｇの１５－ＨＥＰＥを含む、項ＹＹ～ＢＲのいずれか一項に記載の方法。
項ＢＳ．組成物は、約５ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約２５０ｍｇ／ｋｇ、又は約５００ｍｇ／ｋｇの１５－ＨＥＰＥを含む、項ＹＹ～ＢＲのいずれか一項に記載の方法。
本件出願は、以下の態様の発明を提供する。
（態様１）
血液障害の治療及び／又は予防を必要とする対象において血液障害を治療する、及び／又は予防する方法であって、前記方法は、１５－ヒドロキシエイコサペンタエン酸（１５－ＨＥＰＥ）又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
（態様２）
ヘモグロビン異常の治療及び／又は予防を必要とする対象においてヘモグロビン異常を治療する、及び／又は予防する方法であって、前記方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
（態様３）
赤血球障害の治療及び／又は予防を必要とする対象において赤血球障害を治療する、及び／又は予防する方法であって、前記方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
（態様４）
溶血性貧血の治療及び／又は予防を必要とする対象において溶血性貧血を治療する、及び／又は予防する方法であって、前記方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
（態様５）
前記血液障害は、貧血、血液がん、及び凝固障害からなる群から選択される、態様１に記載の方法。
（態様６）
前記貧血は、栄養性貧血、非栄養性貧血、又はそれらの組み合わせである、態様５に記載の方法。
（態様７）
前記血液がんは、リンパ腫、白血病、及び骨髄腫からなる群から選択される、態様５に記載の方法。
（態様８）
前記凝固障害は、血栓形成傾向、血友病、フォン・ヴィレブランド病、及び血小板減少症からなる群から選択される、態様５に記載の方法。
（態様９）
前記対象は、前記１５－ＨＥＰＥ又は前記組成物を投与されていない対照対象と比較して、赤血球数の増加、赤血球分布幅の低下、及び／又は網状赤血球数の低下を有する、態様１～８のいずれか一項に記載の方法。
（態様１０）
前記対象は、前記１５－ＨＥＰＥ又は前記組成物を投与されていない対照対象と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、又は少なくとも３０％の赤血球数の増加を有する、態様１～９のいずれか一項に記載の方法。
（態様１１）
前記対象は、前記１５－ＨＥＰＥ又は前記組成物を投与されていない対照対象と比較して、約１５％～約２０％、約２０％～約２５％、約２５％～約３０％、約３０％～約３５％、又は約３５％～約４０％の赤血球分布幅の低下を有する、態様１～１０のいずれか一項に記載の方法。
（態様１２）
前記対照対象は、１５％超の赤血球分布幅を有する、態様９～１１のいずれか一項に記載の方法。
（態様１３）
前記対象は、前記１５－ＨＥＰＥ又は前記組成物を投与されていない対照対象と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、又は少なくとも約２０％の網状赤血球数の低下を有する、態様１～１２のいずれか一項に記載の方法。
（態様１４）
前記対照対象は、総赤血球数の５％超の網状赤血球数を有する、態様９～１３のいずれか一項に記載の方法。
（態様１５）
前記ヘモグロビン異常及び／又は前記赤血球障害は、遺伝性溶血性貧血、後天性溶血性貧血、ファンコニ貧血、鉄欠乏性貧血、葉酸欠乏症、Ｂ１２欠乏症、及び骨髄異形成症候群からなる群から選択される、態様２～１４のいずれか一項に記載の方法。
（態様１６）
前記遺伝性溶血性貧血は、鎌状赤血球症、鎌状赤血球貧血、β－サラセミア、及び遺伝性球状赤血球症からなる群から選択される、態様１５に記載の方法。
（態様１７）
前記後天性溶血性貧血は、一次感染、薬物治療、血液悪性腫瘍、自己免疫疾患、脾機能亢進症、機械心臓弁の配置、及び輸血に付随して発生する疾患からなる群から選択される障害又は疾患に由来する、態様１５に記載の方法。
（態様１８）
前記鎌状赤血球症及び前記鎌状赤血球貧血は、鎌状赤血球クリーゼ、血管閉塞性クリーゼ、及び／又は脾臓血球貯留に関連する、態様１６に記載の方法。
（態様１９）
血栓形成傾向障害の治療及び／又は予防を必要とする対象において血栓形成傾向障害を治療する、及び／又は予防する方法であって、前記方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
（態様２０）
血栓形成傾向の治療及び／又は予防を必要とする対象において血栓形成傾向を治療する、及び／又は予防する方法であって、前記方法は、１５－ＨＥＰＥ又は最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
（態様２１）
静脈血栓塞栓症の治療及び／又は予防を必要とする対象において静脈血栓塞栓症を治療する、及び／又は予防する方法であって、前記方法は、１５－ＨＥＰＥ又は最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
（態様２２）
動脈血栓症の治療及び／又は予防を必要とする対象において動脈血栓症を治療する、及び／又は予防する方法であって、前記方法は、１５－ＨＥＰＥ又は最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
（態様２３）
塞栓症の予防を必要とする対象において塞栓症を予防する方法であって、前記方法は、１５－ＨＥＰＥ又は最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
（態様２４）
前記対象は、前記組成物を投与されていない対照対象と比較して、プロトロンビン時間の延長、活性化部分トロンボプラスチン時間の延長、及び／又はフィブリノゲン濃度の低下を有する、態様１９～２３のいずれか一項に記載の方法。
（態様２５）
前記１５－ＨＥＰＥは、遊離酸形態、エステル化形態、コンジュケート形態、又は塩形態である、態様１～２４のいずれか一項に記載の方法。
（態様２６）
前記１５－ＨＥＰＥは、前記組成物中の全ての脂肪酸の少なくとも約９０重量％に相当する、態様１～２５のいずれか一項に記載の方法。
（態様２７）
前記組成物は、最大約２ｇの１５－ＨＥＰＥを含む、態様１～２６のいずれか一項に記載の方法。
（態様２８）
前記組成物は、１日当たり１～８個のカプセルで投与される、態様１～２７のいずれか一項に記載の方法。
（態様２９）
前記組成物は、少なくとも２ｇの１５－ＨＥＰＥを含む、態様１～２８のいずれか一項に記載の方法。
（態様３０）
前記組成物は、体重１ｋｇ当たり約５ｍｇ（ｍｇ／ｋｇ）、約５０ｍｇ／ｋｇ、約２５０ｍｇ／ｋｇ、又は約５００ｍｇ／ｋｇの１５－ＨＥＰＥを前記対象に提供するように製剤化される、態様１～２９のいずれか一項に記載の方法。
（態様３１）
前記１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む前記組成物は経口投与される、態様１～３０のいずれか一項に記載の方法。
（態様３２）
前記１５－ＨＥＰＥは、遊離酸形態、エステル化形態、コンジュケート形態、又は塩形態である、態様１～３１のいずれか一項に記載の方法。
（態様３３）
１５－ＨＥＰＥの前記エステル化形態は、メチルエステル、エチルエステル、又はそれらの組み合わせである、態様１～３２のいずれか一項に記載の方法。
いくつかの実施形態では、溶血性貧血は、遺伝性溶血性貧血又は後天性溶血性貧血である。別の実施形態では、後天性溶血性貧血は、感染症に付随して発生し、薬物治療から、血液悪性腫瘍から、自己免疫疾患から、脾機能亢進症から、機械心臓弁の配置、輸血、又はそれらの組み合わせの後にもたらされる。更に別の実施形態では、鎌状赤血球症及び鎌状赤血球貧血は、鎌状赤血球クリーゼ、血管閉塞性クリーゼ、脾臓血球貯留、又はそれらの組み合わせに関連する。
実施例１に記載の研究による、屠殺日の動物の腎臓重量を示す。 実施例１に記載の研究による、屠殺日の動物の腎臓重量対体重比を示す。 実施例１に記載の研究による、屠殺日の動物の腎臓重量を示す。 実施例１に記載の研究による、屠殺日の動物の腎臓重量対体重比を示す。
実施例１に記載の研究による、動物のα－ＳＭＡについての遺伝子発現分析を示す。 実施例１に記載の研究による、動物のＴＩＭＰ－１についての遺伝子発現分析を示す。 実施例１に記載の研究による、動物のＴＧＦ－βについての遺伝子発現分析を示す。 実施例１に記載の研究による、動物の１型コラーゲンについての遺伝子発現分析を示す。
実施例２に記載の研究による、屠殺日の動物の肝臓重量をそれぞれ示す。 実施例２に記載の研究による、屠殺日の動物の肝臓重量対体重比をそれぞれ示す。
実施例２に記載の研究による、動物のα－ＳＭＡについての遺伝子発現分析をそれぞれ示す。 実施例２に記載の研究による、動物のＴＩＭＰ－１についての遺伝子発現分析をそれぞれ示す。 実施例２に記載の研究による、動物のＴＧＦ－βについての遺伝子発現分析をそれぞれ示す。 実施例２に記載の研究による、動物の１型コラーゲンについての遺伝子発現分析をそれぞれ示す。
Ｅｐｅｌｅｕｔｏｎ（１５－ＨＥＰＥ）及びプラセボを投与された患者におけるインスリンのレベルの変化をそれぞれ示すプロットである。 Ｅｐｅｌｅｕｔｏｎ（１５－ＨＥＰＥ）及びプラセボを投与された患者におけるグルコースのレベルの変化をそれぞれ示すプロットである。 Ｅｐｅｌｅｕｔｏｎ（１５－ＨＥＰＥ）及びプラセボを投与された患者における遊離脂肪酸のレベルの変化をそれぞれ示すプロットである。
Ｅｐｅｌｅｕｔｏｎ及びプラセボを投与された患者におけるＨＯＭＡ－ＩＲのレベルの変化をそれぞれ示すプロットである。 Ｅｐｅｌｅｕｔｏｎ及びプラセボを投与された患者におけるａｐｉｄｏ－ＩＲのレベルの変化をそれぞれ示すプロットである。
患者における平均ＨｂＡ１Ｃレベルの変化をそれぞれ示すプロットである。 １６週目に≧６．５％のＨｂＡ１Ｃレベルを有する患者の割合をそれぞれ示すプロットである。
Ｅｐｅｌｅｕｔｏｎ及びプラセボを投与された患者の脂質プロファイルの平均変化をそれぞれ示すプロットである。 Ｅｐｅｌｅｕｔｏｎ及びプラセボを投与された患者の脂質プロファイルの中央値（％）変化をそれぞれ示すプロットである。
Ｅｐｅｌｅｕｔｏｎ及びプラセボを投与された患者におけるコレステロールのレベルの変化をそれぞれ示すプロットである。 Ｅｐｅｌｅｕｔｏｎ及びプラセボを投与された患者におけるトリグリセリドのレベルの変化をそれぞれ示すプロットである。 Ｅｐｅｌｅｕｔｏｎ及びプラセボを投与された患者におけるＶＬＤＬ－Ｃのレベルの変化をそれぞれ示すプロットである。
１５（Ｓ）－ＨＥＰＥ ＥＥ及びプラセボを投与されたラットにおける赤血球数の平均変化及び標準偏差をそれぞれ示す棒グラフである。 １５（Ｓ）－ＨＥＰＥ ＥＥ及びプラセボを投与されたラットにおける赤血球分布幅の平均変化及び標準偏差をそれぞれ示す棒グラフである。 １５（Ｓ）－ＨＥＰＥ ＥＥ及びプラセボを投与されたラットにおける網状赤血球数の平均変化及び標準偏差をそれぞれ示す棒グラフである。
１５（Ｓ）－ＨＥＰＥ ＥＥ及びプラセボを投与されたラットにおけるプロトロンビン時間の平均変化及び標準偏差をそれぞれ示す棒グラフである。 １５（Ｓ）－ＨＥＰＥ ＥＥ及びプラセボを投与されたラットにおける活性化部分トロンボプラスチン時間の平均変化及び標準偏差をそれぞれ示す棒グラフである。 １５（Ｓ）－ＨＥＰＥ ＥＥ及びプラセボを投与されたラットにおけるフィブリノゲン濃度の平均変化及び標準偏差をそれぞれ示す棒グラフである。
本明細書に開示する組成物及び製剤は、血液障害、ヘモグロビン異常、及び／又は赤血球障害の治療及び／又は予防に使用され得る。血液障害は、血液及び血液形成器官に影響を及ぼす疾患の一分類を指す。ヘモグロビン異常及び赤血球障害は血液障害に類似しているが、ヘモグロビン異常及び赤血球障害の両方は、疾患のより狭い分類を定義する。具体的には、ヘモグロビン異常は、ヘモグロビン、赤血球中の酸素輸送タンパク質の欠陥を指す。赤血球障害は、赤血球自体の欠陥を指す。血液障害、ヘモグロビン異常、及び赤血球障害のリスク因子の非限定的な例としては、赤血球数の低下、赤血球分布幅の増加、及び網状赤血球数の増加が挙げられる。血液障害、ヘモグロビン異常、及び赤血球障害の非限定的な例としては、貧血（栄養性貧血及び非栄養性貧血、鎌状赤血球症、鎌状赤血球貧血、β－サラセミア、及び遺伝性球状赤血球症など遺伝性溶血性貧血、感染症、薬物治療、血液悪性腫瘍、自己免疫疾患、脾機能亢進症、機械心臓弁、及び輸血などに付随して発生する後天性溶血性貧血、ファンコニ貧血、鉄欠乏性貧血）、血液がん（リンパ腫、白血病、及び骨髄腫）、凝固障害（血栓形成傾向、血友病、フォン・ヴィレブランド病、及び血小板減少症）、葉酸欠乏症、Ｂ１２欠乏症、及び骨髄異形成症候群が挙げられる。いくつかの実施形態では、鎌状赤血球症及び鎌状赤血球貧血は、鎌状赤血球クリーゼ、血管閉塞性クリーゼ、及び／又は脾臓血球貯留に関連する。
いくつかの実施形態では、本開示は、溶血性貧血の治療及び／又は予防を必要とする対象において溶血性貧血を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂肪酸の少なくとも約９０重量％に相当する。いくつかの実施形態では、溶血性貧血は、遺伝性溶血性貧血又は後天性溶血性貧血である。別の実施形態では、遺伝性溶血性貧血は、鎌状赤血球症、鎌状赤血球貧血、β－サラセミア、及び遺伝性球状赤血球症からなる群から選択される。更に別の実施形態では、後天性溶血性貧血は、感染症、薬物治療、血液悪性腫瘍、自己免疫疾患、脾機能亢進症、機械心臓弁、及び輸血に付随して発生するものからなる群から選択される。様々な実施形態では、鎌状赤血球症及び鎌状赤血球貧血は、鎌状赤血球クリーゼ、血管閉塞性クリーゼ、及び／又は脾臓血球貯留に関連する。いくつかの実施形態では、対象は、投与後に赤血球数の増加、赤血球分布幅の低下、及び網状赤血球数の低下を示す。
いくつかの実施形態では、本開示は、溶血性貧血の治療及び／又は予防を必要とする対象において溶血性貧血を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂肪酸の少なくとも約９０重量％に相当する。いくつかの実施形態では、溶血性貧血は、遺伝性溶血性貧血又は後天性溶血性貧血である。別の実施形態では、遺伝性溶血性貧血は、鎌状赤血球症、鎌状赤血球貧血、β－サラセミア、及び遺伝性球状赤血球症からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物の投与前に、対象が遺伝性溶血性貧血又は後天性溶血性貧血の少なくとも１つのリスク因子を有すると判定すること、を更に含む。更に別の実施形態では、後天性溶血性貧血は、感染症、薬物治療、血液悪性腫瘍、自己免疫疾患、脾機能亢進症、機械心臓弁、及び輸血に付随して発生するものからなる群から選択される。様々な実施形態では、鎌状赤血球症及び鎌状赤血球貧血は、鎌状赤血球クリーゼ、血管閉塞性クリーゼ、及び／又は脾臓血球貯留に関連する。いくつかの実施形態では、方法は、１５－ＨＥＰＥの投与前に、対象のベースラインの赤血球数、赤血球分布幅、及び／又は網状赤血球数を測定することを更に含む。一実施形態では、対象は、赤血球数の増加、赤血球分布幅の低下、及び／又は網状赤血球数の低下を示す。
いくつかの態様では、本開示は、対象において内皮機能不全を治療する、及び／又は予防する方法を提供し、方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。別の実施形態では、方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を対象に投与することを含む。更に別の実施形態では、１５－ＨＥＰＥは、組成物中の全ての脂肪酸の少なくとも約９０重量％に相当する。
図１２Ａ及び図１２Ｂ並びに表１１は、屠殺日の動物の肝臓重量及び肝臓重量対体重比を示す。ビヒクル群は、偽対照群と比較して平均肝臓重量の有意な増加を示した。ＤＳ１０２高群の平均肝臓重量は、ビヒクル群と比較して低減する傾向にあった。ビヒクル群と他の治療群との間では、平均肝臓重量に有意な差はなかった。ビヒクル群は、偽対照群と比較して平均肝臓重量対体重比の有意な増加を示した。ＤＳ１０２高群の平均肝臓重量対体重比は、ビヒクル群と比較して低減する傾向にあった。ビヒクル群と他の治療群との間では、平均肝臓重量対体重比に有意な差はなかった。
１．２ 結果
ＴＧＦ－β誘導性シグナル伝達及び細胞応答に対する１５－ＨＥＰＥの効果を決定した。ＴＧＦ－β誘導性シグナル伝達に対する１５－ＨＥＰＥの効果を試験するために、ＴＧＦ－β刺激性Ｓｍａｄ２のリン酸化及び核移行を調節する１５－ＨＥＰＥの活性を試験した。それらの両方は、ＴＧＦ－β誘導性細胞応答につながる重要なシグナル伝達事象である。ＴＧＦ－βの重要な生物学的活性の１つは、上皮間葉転換（ＥＭＴ）の原因となる遺伝子の転写活性化であり、これは、創傷治癒、組織線維症、及びがんの進行における重要な事象である。ＨｅｐＧ２及びＬＸＲ細胞におけるＴＧＦβ誘導性上皮間葉転換関連タンパク質（フィブロネクチン、ＰＡＩ－１、Ｎ－カドヘリンなど）の発現に対する１５－ＨＥＰＥの効果を評価した。ＨｅｐＧ２細胞（ヒト肝がん細胞株）を、０．１％のＦＢＳを含むＤＭＥＭ中で１５－ＨＥＰＥステージＩＩの用量を増やして１時間処理し、引き続き２００ピコモル濃度（ｐＭ）のＴＧＦ－βで又はそれ無しに４８時間刺激した。
１５－ＨＥＰＥは、図１８Ａ及び図１８Ｂに示すように、ＴＧＦ－βシグナル伝達を直接阻害した。具体的には、図１８Ａは、１５－ＨＥＰＥがＩＩ型ＴＧＦ－β受容体の分解を誘導し、ＴＧＦ－βによって誘導される上皮間葉転換（ＥＭＴ）（すなわち、線維化促進）タンパク質の産生を遮断したことを示す。ＨｅｐＧ２細胞（ヒト肝がん細胞株）を、０．１％のＦＢＳを含むＤＭＥＭ中で１５－ＨＥＰＥステージＩＩの用量を増やして１時間処理し、引き続き２００ピコモル濃度（ｐＭ）のＴＧＦ－βで又はそれ無しに４８時間刺激した。図１８Ａに示す２つのパネルは、同じ実験条件下で実行された２つの別々の実験である。これらの別々の実験からの結果は、１５－ＨＥＰＥがＴＧＦ－βによって誘導されるＥＭＴタンパク質の産生を遮断し、ＩＩ型ＴＧＦ－β受容体の分解を誘導したことを示す。図１８Ａは、ＴＧＦ－βによって誘導され、心血管リスクの増加に関連するタンパク質であるプラスミノーゲンアクチベーター阻害剤－１（ＰＡ－１）に対する１５－ＨＥＰＥの効果も示す。図１８Ｂは、１５－ＨＥＰＥが肝星細胞におけるＴＧＦ－β刺激性細胞内シグナル伝達（例えば、ＳＭＡＤ２／３のリン酸化）を阻害することを示す。図１８Ｂで実施した実験には、ＬＸ２細胞（ヒト肝星細胞）を０μＭ～１００μＭに増加させた濃度のＤＳ１０２で２４時間前処理した後、３０分間のＴＧＦ－β刺激を行うことが含まれた。実験の結果は、１５－ＨＥＰＥがＴＧＦ－β刺激を阻害することを示した。
分析セットは、登録セット、完全分析セット（ＦＡＳ）、プロトコル遵守セット（ＰＰＳ）、安全性分析セット（ＳＡＳ）、及び薬物動態（ＰＫ）セットを含んだ。各分析セットの詳細な説明を以下に提供する。
一次変数：一次有効性変数は、１６週目（訪問１０）の血清ＡＬＴのベースラインからの変化であった。共分散分析（ＡＮＣＯＶＡ）モデルを用いて、対応するベースライン値を共変量として含め、活性治療群をプラセボに対して比較した。プラセボに対する比較は、ダネットの多重検定手順に従って行った。欠落している１６週目の値については、使用可能な最後の値を補充した（ＬＯＣＦ）。同様の方法を肝硬度に適用した。ＡＬＴについては、縦方向のモデリングを追加で考慮した。
図２１Ａ～図２１Ｃは、プラセボと比較した、１日当たり１ｇ又は２ｇのいずれかのＤＳ１０２を投与した患者におけるベースライン～１６週のインスリン、グルコース、及び遊離脂肪酸のレベルの変化を示す。グルコース、炭水化物、及び遊離脂肪酸を含む代謝基質がＮＡＳＨの病因を促進するため、ＤＳ１０２の投与によるインスリン、グルコース、及び遊離脂肪酸のレベルの低減は、臨床的に有意である。
図２２Ａ及び図２２Ｂは、プラセボと比較した、１日当たり１ｇ又は２ｇのいずれかのＤＳ１０２を投与した患者におけるベースライン～１６週のＨＯＭＡ－ＩＲ及びａｄｉｐｏ－ＩＲのレベルの変化を示す。患者は、２ｇのＤＳ１０２を投与された患者について観察したプロトコル遵守セット（ＰＰＳ）の有意な改善とともに、１６週目に両方のインスリン抵抗性指数の改善（例えば、ＨＯＭＡ－ＩＲ及びａｄｉｐｏ－ＩＲのレベルの低減）を示した。
１．１ 研究設計
試験物品及び対照物品を、１日１回の強制経口投与によって週７日、最低２６週間にわたって適切な動物に投与した。動物ごとの容量は、直近の体重測定に基づいた。用量は、強制経口投与カニューレを取り付けたシリンジを使用して与えた。投与の初日を１日目として指定した。投与製剤を冷蔵庫から取り出し、投与前に少なくとも３０分間撹拌した。投与中にも投与製剤を連続的に撹拌した。
Figure 2023528562000120
 ａ猫背の姿勢、毛の逆立ち及び異常歩行、並びに体重の減少など、臨床徴候の発症により、動物への投与は、４８日目から休止した。動物への投与は、６４日目からより低い用量レベル（３０００ｍｇ／ｋｇ／日）で開始することになる。
ｂバッチ２５４０Ｍ－１８０１及び２５４０Ｍ－１８０２の調整済み濃度。
ｃバッチ２５４０Ｍ／１９０１及び２５４０Ｍ／１９０２の調整済み濃度。
Figure 2023528562000121
 予備の動物は、４００１Ｍ、４００２Ｍ、及び４５０１Ｆ、４５０２Ｆと番号付けされることになる。
１．２ 生前の手順、観察、及び測定
全ての主要研究動物及び回復動物に対して、生前の手順、観察、及び測定を行った。毒物動態動物を秤量し、主要研究動物と同時点において臨床観察を記録した。
試料採取：剖検の直前に回復不能なイソフルラン麻酔下で眼窩静脈叢から採血する場合ではない限りは、尾静脈から採血した。安楽死の順序に従った剖検前に試料を採取しない限り、昇順で動物から採血した。許容サンプリング頻度及び血液量を超えなかった場合、追加の血液試料を得た（例えば、非血清試料の凝固のため）。採取後、試料を適切な研究室に移動して、処理した。試料は、以下の表に従って採取した。
Figure 2023528562000122
 Ｘ＝採取する試料。－＝該当せず。
ａ試料は、投与前に採取する
ｂ動物３７０２Ｆでは１日目の試料を収集したが、４４日目に、人道的理由でこの動物を安楽死させた。追加試料は、２６週目に動物３７０７Ｆ（０時間ａ採取）及び動物３７０４Ｆ（４時間採取）から採取して、動物３７０２Ｆの欠落した時点へ補充した。
生体分析試料分析：有効な分析手順を使用して、非エステル化ＨＥＰＥ及び総ＨＥＰＥの濃度について血漿試料を分析した。以下を決定した。
ａ） 非エステル化（遊離脂肪酸として血漿中で生じた、又は血漿アルブミンに結合したＨＥＰＥ）。
ｂ） 各試料時間における総（非エステル化ＨＥＰＥ及びエステル化ＨＥＰＥ（例えば、トリグリセリド、コレステロールエステルなど）を定量化する）濃度。
生物分析実験室の適切な標準操作手順に従って、この研究のために、非エステル化ＨＥＰＥについて実試料の再分析（ＩＳＲ）を実施した。ラット血漿試料中の総ＨＥＰＥの測定についてのＩＳＲは、上記で参照した分析手順を使用して、試験施設研究番号５２７９４３中に成功裏に行った。この研究で繰り返す必要はない。
１．５ 用量処方及び分析
対照物品：この研究の対照物品は、Ｍｉｌｌｉ－Ｑ水中の０．５％のＨＰＭＣであった。必要に応じて対照物品を調製し、使用しないときは、４℃を維持するように設定された冷蔵庫に保管した。調製した対照物品を冷蔵庫から取り出し、投与前に少なくとも３０分間撹拌した。投与中にも対照物品を連続的に撹拌した。
試験物品：この研究の試験物品は、ＤＳ１０２又は１５（Ｓ）－ＨＥＰＥＥＥであった。試験物品の投与製剤は、投与量レベル要件を満たす適切な濃度で、試験施設において規定された方法に基づいて調製した。投与製剤は毎週調製し、４℃を維持するように設定された冷蔵庫に保管し、毎日投薬した。投与製剤を冷蔵庫から取り出し、投与前に少なくとも３０分間撹拌した。投与中にも投与製剤を連続的に撹拌した。
安定性分析：試験施設研究番号４３９４１４と併せて以前に実施した安定性分析は、試験物品が、本研究で使用する濃度を挟む複数の濃度で、同一条件下で調製し、保存したときにビヒクル中で安定であることを実証した。Ｒｏｇｅｒｓ，Ｅ（２０１８）．Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ Ｕｌｔｒａ Ｈｉｇｈ－Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ Ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ １５（Ｓ）ＨＥＰＥ ＥＥ ｉｎ ｏｒａｌ（Ｇａｖａｇｅ）Ｄｏｓｉｎｇ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ．Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｓｔｕｄｙ Ｎｏ．４３９４１４を参照されたい。安定性データは、同試験施設研究番号４３９４１４の研究記録に保持された。
環境条件：動物部屋環境の標的条件は、以下のとおりであった：温度１９～２３℃；湿度４０～７０％；１時間当たり最低１０回の換気回数；１２時間の明及び１２時間の暗の光サイクル。光、温度、及び湿度の制御は自動的に制御され、連続的に監視され、記録された。
組織病理学：組織病理学的評価は、有資格の獣医病理学者又は実験動物病理学分野で訓練を受け、経験を有する獣医病理学者が行った。顕微鏡による検査は、主要研究対照及び高用量動物、予定外の死亡及び肉眼的病変（主要研究低用量群及び回復動物を含む）からの組織について実施した。主要研究高用量群で治療効果が存在した場合、主要研究低用量群及び回復動物からの標的組織の顕微鏡による検査は、治験依頼者と研究責任者との治験実施計画書の改訂による合意後に行った。
１．９ コンピュータ化システム
コンピュータ化システム：下記表のコンピュータ化システムが、研究で使用するために利用可能であった。
Figure 2023528562000123
構成変数：体重変化は、予定した各間隔間で計算した。臓器重量対体重は、予定した間隔の終了時体重に対して計算した。臓器重量対脳重量は、予定した間隔の脳重量に対して計算した。
項Ｃ．メタボリックシンドローム及び／又は心血管代謝性疾患の治療及び／又は予防を必要とする対象においてメタボリックシンドローム及び／又は心血管代謝性疾患を治療する、及び／又は予防する方法であって、方法は、対象に最大約８ｇの、１５－ＨＥＰＥ及び／又は１５－ＨＥＴｒＥを含む組成物を投与することを含み、１５－ＨＥＰＥ及び／又は１５－ＨＥＴｒＥは、組成物中の全ての脂肪酸の少なくとも約９０重量％に相当する、方法。
項Ｊ．対象は、α－平滑筋アクション(action)（α－ＳＭＡ）、メタロペプチダーゼ阻害剤－１（ＴＩＭＰ－１）、トランスフォーミング増殖因子ベータ－β（ＴＧＦ－β）、及び／又は１型コラーゲンのレベルのうちの１つ以上の低減を示す、項Ａ～Ｉのいずれか一項に記載の方法。
項Ｙ．胆汁うっ滞性肝疾患は、薬物誘導性肝傷害、完全非経口栄養（ＴＰＮ）、ウイルス性及びアルコール性肝炎、全身性疾患に付随して発生する胆汁うっ滞、移植片機能不全、肝移植後胆汁うっ滞、膵炎、総胆管結石、ミリッツィ症候群、遺伝性疾患、悪性腫瘍、又はそれらの組み合わせによって引き起こされる、項Ｗ又はＸに記載の方法。
項ＡＩ．対象は、組成物を投与されていない対照対象と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、又は少なくとも３０％の赤血球数の増加を有する、項ＡＨに記載の方法。
項ＡＪ．対照対象は、約４×１０１２の赤血球／Ｌの赤血球数を有する、項ＡＩに記載の方法。
項ＡＫ．対象は、組成物を投与されていない対照対象と比較して、少なくとも約１５～２０％、少なくとも約２０～２５％、少なくとも約２５～３０％、少なくとも約３０～３５％、又は少なくとも約３５～４０％、の赤血球分布幅の低下を有する、項ＡＨに記載の方法。
項ＡＬ．対照対象は、１５％超の赤血球分布幅を有する、項ＡＫに記載の方法。
項ＡＭ．対象は、組成物を投与されていない対照対象と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、又は少なくとも約２０％の網状赤血球数の低下を有する、項ＡＨに記載の方法。
項ＡＮ．対照対象は、総赤血球数の５％超の網状赤血球数を有する、項ＡＭに記載の方法。
項ＡＲ．後天性溶血性貧血は、感染症、薬物治療、血液悪性腫瘍、自己免疫疾患、脾機能亢進症、機械心臓弁、及び輸血に付随して発生するものからなる群から選択される、項ＡＰに記載の方法。
項ＢＣ．後天性溶血性貧血は、感染症、薬物治療、血液悪性腫瘍、自己免疫疾患、脾機能亢進症、機械心臓弁、及び輸血に付随して発生するものからなる群から選択される、ＡＺに記載の方法。

Claims (33)

  1. 血液障害の治療及び／又は予防を必要とする対象において血液障害を治療する、及び／又は予防する方法であって、前記方法は、１５－ヒドロキシエイコサペンタエン酸（１５－ＨＥＰＥ）又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
  2. ヘモグロビン異常の治療及び／又は予防を必要とする対象においてヘモグロビン異常を治療する、及び／又は予防する方法であって、前記方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
  3. 赤血球障害の治療及び／又は予防を必要とする対象において赤血球障害を治療する、及び／又は予防する方法であって、前記方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
  4. 溶血性貧血の治療及び／又は予防を必要とする対象において溶血性貧血を治療する、及び／又は予防する方法であって、前記方法は、最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
  5. 前記血液障害は、貧血、血液がん、及び凝固障害からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
  6. 前記貧血は、栄養性貧血、非栄養性貧血、又はそれらの組み合わせである、請求項５に記載の方法。
  7. 前記血液がんは、リンパ腫、白血病、及び骨髄腫からなる群から選択される、請求項５に記載の方法。
  8. 前記凝固障害は、血栓形成傾向、血友病、フォン・ヴィレブランド病、及び血小板減少症からなる群から選択される、請求項５に記載の方法。
  9. 前記対象は、前記１５－ＨＥＰＥ又は前記組成物を投与されていない対照群と比較して、赤血球数の増加、赤血球分布幅の低下、及び／又は網状赤血球数の低下を有する、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
  10. 前記対象は、前記１５－ＨＥＰＥ又は前記組成物を投与されていない対照群と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、又は少なくとも３０％の赤血球数の増加を有する、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。
  11. 前記対象は、前記１５－ＨＥＰＥ又は前記組成物を投与されていない対照群と比較して、約１５％～約２０％、約２０％～約２５％、約２５％～約３０％、約３０％～約３５％、又は約３５％～約４０％の赤血球分布幅の低下を有する、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。
  12. 前記対照群は、１５％超の赤血球分布幅を有する、請求項９～１１のいずれか一項に記載の方法。
  13. 前記対象は、前記１５－ＨＥＰＥ又は前記組成物を投与されていない対照群と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、又は少なくとも約２０％の網状赤血球数の低下を有する、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
  14. 前記対照群は、総赤血球数の５％超の網状赤血球数を有する、請求項９～１３のいずれか一項に記載の方法。
  15. 前記ヘモグロビン異常及び／又は前記赤血球障害は、遺伝性溶血性貧血、後天性溶血性貧血、ファンコニ貧血、鉄欠乏性貧血、葉酸欠乏症、Ｂ１２欠乏症、及び骨髄異形成症候群からなる群から選択される、請求項２～１４のいずれか一項に記載の方法。
  16. 前記遺伝性溶血性貧血は、鎌状赤血球症、鎌状赤血球貧血、β－サラセミア、及び遺伝性球状赤血球症からなる群から選択される、請求項１５に記載の方法。
  17. 前記後天性溶血性貧血は、一次感染、薬物治療、血液悪性腫瘍、自己免疫疾患、脾機能亢進症、機械弁の配置、及び輸血に続発する疾患からなる群から選択される障害又は疾患に由来する、請求項１５に記載の方法。
  18. 前記鎌状赤血球症及び前記鎌状赤血球貧血は、鎌状赤血球クリーゼ、血管閉塞性クリーゼ、及び／又は脾臓血球貯留に関連する、請求項１６に記載の方法。
  19. 血栓形成傾向障害の治療及び／又は予防を必要とする対象において血栓形成傾向障害を治療する、及び／又は予防する方法であって、前記方法は、１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
  20. 血栓形成傾向の治療及び／又は予防を必要とする対象において血栓形成傾向を治療する、及び／又は予防する方法であって、前記方法は、１５－ＨＥＰＥ又は最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
  21. 静脈血栓塞栓症の治療及び／又は予防を必要とする対象において静脈血栓塞栓症を治療する、及び／又は予防する方法であって、前記方法は、１５－ＨＥＰＥ又は最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
  22. 動脈血栓症の治療及び／又は予防を必要とする対象において動脈血栓症を治療する、及び／又は予防する方法であって、前記方法は、１５－ＨＥＰＥ又は最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
  23. 塞栓症の予防を必要とする対象において塞栓症を予防する方法であって、前記方法は、１５－ＨＥＰＥ又は最大約８ｇの１５－ＨＥＰＥを含む組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
  24. 前記対象は、前記組成物を投与されていない対照群と比較して、プロトロンビン時間の延長、活性化部分トロンボプラスチン時間の延長、及び／又はフィブリノゲン濃度の低下を有する、請求項１９～２３のいずれか一項に記載の方法。
  25. 前記１５－ＨＥＰＥは、遊離酸形態、エステル化形態、コンジュケート形態、又は塩形態である、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法。
  26. 前記１５－ＨＥＰＥは、前記組成物中の全ての脂肪酸の少なくとも約９０重量％に相当する、請求項１～２５のいずれか一項に記載の方法。
  27. 前記組成物は、最大約２ｇの１５－ＨＥＰＥを含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。
  28. 前記組成物は、１日当たり１～８個のカプセルで投与される、請求項１～２７のいずれか一項に記載の方法。
  29. 前記組成物は、少なくとも２ｇの１５－ＨＥＰＥを含む、請求項１～２８のいずれか一項に記載の方法。
  30. 前記組成物は、体重１ｋｇ当たり約５ｍｇ（ｍｇ／ｋｇ）、約５０ｍｇ／ｋｇ、約２５０ｍｇ／ｋｇ、又は約５００ｍｇ／ｋｇの１５－ＨＥＰＥを前記対象に提供するように製剤化される、請求項１～２９のいずれか一項に記載の方法。
  31. 前記１５－ＨＥＰＥ又は１５－ＨＥＰＥを含む前記組成物は経口投与される、請求項１～３０のいずれか一項に記載の方法。
  32. 前記１５－ＨＥＰＥは、遊離酸形態、エステル化形態、コンジュケート形態、又は塩形態である、請求項１～３１のいずれか一項に記載の方法。
  33. １５－ＨＥＰＥの前記エステル化形態は、メチルエステル、エチルエステル、又はそれらの組み合わせである、請求項１～３２のいずれか一項に記載の方法。
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