JP2023523006A - Ｌｇｒ５及びｅｇｆｒに結合する抗体によるがんの治療 - Google Patents

Abstract

本開示は、がんの治療における手段及び方法に関する。本開示は、特に、ＬＧＲ５及びＥＧＦＲに結合する抗体で個体におけるがんを治療する方法に関する。本発明は、さらに、かかる方法において使用するための組み合わせ、及び消化管がんの治療のための薬剤の製造において使用するための組み合わせに関する。かかる抗体は、特に、胃がん、食道がん、又は胃食道接合部がんの治療において有用である。

Description

本開示は、がんの治療における手段及び方法に関する。本開示は、特に、ＬＧＲ５及びＥＧＦＲに結合する抗体で個体におけるがんを治療する方法に関する。本発明は、さらに、かかる方法において使用するための組み合わせ、及び消化管がんの治療のための薬剤の製造において使用するための組み合わせに関する。かかる抗体は、特に、胃がん、食道がん、又は胃食道接合部がんの治療において有用である。

従来、ほとんどのがん薬の発見は、必須細胞機能を遮断し、化学療法を介して分裂細胞を死滅させる薬剤に焦点を当ててきた。しかしながら、化学療法は、完全な治癒をもたらすことはほとんどない。ほとんどの場合、患者における腫瘍は、増殖を停止させるか、又は一時的に縮小させる（寛解と称される）のみであり、再び、場合によっては、より迅速に（再発と称される）増殖を開始し、治療するのがますます困難になる。より最近では、がん薬の開発の焦点は、広範囲にわたる細胞傷害性化学療法から、毒性が低い標的細胞抑制療法へと移っている。シグナル伝達経路成分を特異的に阻害する標的療法による進行がんの治療は、白血病において臨床的に検証されている。しかしながら、大部分のがん腫では、標的アプローチは依然として無効であることが証明されている。

がんは、疾病の治療において遂げられた多くの進歩、及びがんにつながる分子的事象に関する知識の増加にもかかわらず、世界での依然として主要な死因である。胃がんは、例えば、世界的に５番目に一般診断が多いがんであり、かつ３番目に致命的である。２０１８年には、胃がんによる死者は推定で７８３，０００人にのぼった。食道がんは、９番目に多い一般的ながんであり、かつ６番目に多い一般的ながん死因である。上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）は、胃腺がん（ＧＡＣ）及び食道腺がん（ＥＡＣ）症例の３０％以上で過剰発現することが報告されている。しかしながら、６つの異なる研究の分析レビューでは、化学療法に抗ＥＧＦＲ剤を添加しても、進行性／転移性ＥＡＣ、ＧＡＣ、又は胃食道接合部腺がん（ＧＥＪＡＣ）を有する患者の全生存期間又は無増悪生存期間は改善しなかったと結論づけられた（Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．２０１７ Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ．２０１７ Ｎｏｖ １７；８（５８）：９９０３３－９９０４０）。したがって、がん治療、特に、胃がん及び食道がんに対する治療についての必要性が存在している。

本開示は、以下の好ましい実施形態を提供する。しかしながら、本発明は、これらの実施形態に限定されない。

いくつかの実施形態では、本開示は、対象におけるがんの治療において使用するための、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する可変ドメイン、及びＬＧＲ５の細胞外部分に結合する可変ドメインを含む、抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体を提供し、該使用は、対象に、１５００ｍｇの均一用量の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体を提供することを含む。本開示は、さらに、対象におけるがんを治療する方法を提供し、それを必要とする対象に、１５００ｍｇの均一用量の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体を提供することを含む。

いくつかの実施形態では、本開示は、対象における胃がん、食道がん、又は胃食道接合がんの治療において使用するための、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する可変ドメイン、及びＬＧＲ５の細胞外部分に結合する可変ドメインを含む抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体を提供する。本開示は、対象における胃がん、食道がん、又は胃食道接合部がんを治療する方法をさらに提供し、それを必要とする対象に、抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体を提供することを含む。好ましくは、該使用は、対象に、１５００ｍｇの均一用量の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体を提供することを含む。

いくつかの実施形態では、治療用化合物の投与は、毎週、隔週、又は毎月行われ得る。いくつかの実施形態では、治療用化合物は、２週間に１回投与される。

いくつかの実施形態では、本開示は、Ｈｅｒ２陰性対象における胃がん、食道がん、又は胃食道接合部がんの治療において使用するための、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する可変ドメイン、及びＬＧＲ５の細胞外部分に結合する可変ドメインを含む、抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体を提供する。本開示は、さらに、Ｈｅｒ２陰性対象における胃がん、食道がん、又は胃食道接合部がんを治療する方法を提供し、本方法は、それを必要とする対象に、抗体、又はその機能部分、誘導体及び／若しくは類似体を提供することを含む。好ましくは、該使用は、対象に、１５００ｍｇの均一用量の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体を提供することを含む。いくつかの実施形態では、治療用化合物のＨｅｒ２陰性対象への投与は、毎週、隔週、又は毎月行われてもよい。好ましくは、治療用化合物は、２週間に１回投与される。

好ましくは、抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体は、静脈内に提供される。

好ましくは、がんは、ＴＰ５３、ＭＬＨ１、ＰＩＫ３ＣＡ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＵＧＴ１Ａ、ＵＧＴ１Ａ８、ＢＲＡＦ、ＰＴＥＮ、及び、ＫＲＡＳから選択される１つ以上の遺伝子における変異を有し、好ましくは、がんは、ＴＰ５３、ＭＬＨ１、ＣＤＫＮ２Ａ、ＵＧＴ１Ａ、ＵＧＴ１Ａ８、ＢＲＡＦ、及びＰＴＥＮから選択される１つ以上の遺伝子における変異を有する。好ましくは、がんは、ＴＰ５３ Ｒ１９６Ｔ、ＴＰ５３ Ｒ３４２Ｔ、ＴＰ５３ Ｒ２４８Ｑ、ＭＬＨ１ Ｖ３８４Ｄ、ＰＩＫ３ＣＡ Ｈ１０４７Ｒ、ＣＤＫＮ２Ａ Ｗ１１０Ｔ、ＵＧＴ１Ａ１ Ｇ７１Ｒ、ＵＧＴ１Ａ８ Ｇ７１Ｒ、及びＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃから選択される１つ以上の変異を有する。

好ましくは、がんは、ＴＰ５３をコードする遺伝子における変異を有し、好ましくは、変異は、Ｒ１９６Ｔである。好ましくは、がんは、ＴＰ５３をコードする遺伝子の変異を有し、好ましくは、変異は、Ｒ３４２Ｔであり、がんは、ＭＬＨ１をコードする遺伝子の変異を有し、好ましくは、変異は、Ｖ３８４Ｄである。

好ましくは、がんは、ＴＰ５３をコードする遺伝子における変異を有し、好ましくは、変異は、Ｒ２４８Ｑであり、がんは、ＰＩＫ３ＣＡをコードする遺伝子における変異を有し、好ましくは、変異は、Ｈ１０４７Ｒであり、がんは、ＣＤＫＮ２Ａをコードする遺伝子における変異を有し、好ましくは、変異は、Ｗ１１０Ｔであり、がんは、ＵＧＴ１Ａ１をコードする遺伝子における変異を有し、好ましくは、Ｇ７１Ｒであり、がんは、ＵＧＴ１Ａ８をコードする遺伝子における変異を有し、好ましくは、変異は、Ｇ７１Ｒである。

好ましくは、がんは、食道がん、好ましくは、食道扁平上皮がん（ＥＳＣＣ）である。

好ましくは、がんは、ＢＲＡＦをコードする遺伝子における変異を有する。しかしながら、好ましくは、がんは、ＢＲＡＦにおける変異Ｖ６００Ｅを有せず、がんは、ＰＴＥＮをコードする遺伝子における変異を有する。しかしながら、好ましくは、がんはまた、ＰＴＥＮにおけるＲ１３０Ｔｅｒの変異を有しない。

好ましくは、がんは、ＫＲＡＳをコードする遺伝子の変異を有し、好ましくは、変異は、Ｇ１２Ｃであり、がんは、ＵＧＴ１Ａ１をコードする遺伝子の変異を有し、好ましくは、変異は、Ｇ７１Ｒであり、がんは、ＵＧＴ１Ａ８をコードする遺伝子の変異を有し、好ましくは、変異は、Ｇ７１Ｒである。

好ましくは、がんは、ＵＧＴ１Ａ１をコードする遺伝子の変異を有し、好ましくは、変異は、Ｇ７１Ｒであり、がんは、ＵＧＴ１Ａ８をコードする遺伝子の変異を有し、好ましくは、変異は、Ｇ７１Ｒである。好ましくは、がんは、さらに、ＰＩＫ３ＣＡにおける変異を有し、好ましくは、変異は、Ｅ５４５Ｋである。

好ましくは、がんは、胃がんである。

好ましくは、ＥＧＦＲに結合する可変ドメインのＶＨ鎖は、図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ３７５５のアミノ酸配列、又は該ＶＨに対する挿入、欠失、置換、又はそれらの組み合わせを含む、最大１５個、好ましくは、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、１個以下、好ましくは５個、４個、３個、２個、又は１個以下のアミノ酸修飾を有する図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ３７５５のアミノ酸配列を含み、ＬＧＲ５に結合する可変ドメインのＶＨ鎖は、図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ５８１６のアミノ酸配列、又は該ＶＨに対する挿入、欠失、置換、又はそれらの組み合わせを含む、最大１５個、好ましくは、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、１個以下、好ましくは５個、４個、３個、２個、又は１個以下のアミノ酸修飾を有する図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ５８１６のアミノ酸配列を含む。

好ましくは、ＬＧＲ５に結合する可変ドメインは、図１に示すヒトＬＧＲ５配列のアミノ酸残基２１～１１８内に位置するエピトープに結合する。好ましくは、ヒトＬＧＲ５の４３位、４４位、４６位、６７位、９０位、及び９１位のアミノ酸残基は、ＬＧＲ５結合可変ドメインのＬＧＲ５への結合に関与する。好ましくは、ＬＧＲ５結合可変ドメインは、４３Ａ、４４Ａ、４６Ａ、６７Ａ、９０Ａ、及び９１Ａから選択されるアミノ酸残基変異のうちの１つ以上を含むＬＧＲ５タンパク質に結合することが少ない。

好ましくは、ＥＧＦＲに結合する可変ドメインは、図２に示されるヒトＥＧＦＲ配列のアミノ酸残基４２０～４８０内に位置するエピトープに結合する。好ましくは、ヒトＥＧＦＲのＩ４６２位、Ｇ４６５位、Ｋ４８９位、Ｉ４９１位、Ｎ４９３位、及びＣ４９９位のアミノ酸残基は、ＥＧＦＲ結合可変ドメインのＥＧＦＲへの結合に関与する。好ましくは、ＥＧＦＲ結合可変ドメインは、Ｉ４６２Ａ、Ｇ４６５Ａ、Ｋ４８９Ａ、Ｉ４９１Ａ、Ｎ４９３Ａ、及びＣ４９９Ａから選択されるアミノ酸残基置換のうちの１つ以上を含むＥＧＦＲタンパク質に結合することが少ない。

好ましくは、抗体は、強化されたＡＤＣＣである。好ましくは、抗体は、脱フコシル化されている。

ヒトＬＧＲ５配列、配列番号：１。 ヒトＥＧＦＲ配列；配列番号：２。 （ａ）ヒトカッパ軽鎖ＩｇＶκ１３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１の可変領域などの共通の軽鎖可変領域とともに、ＬＧＲ５及びＥＧＦＲに結合する可変ドメインを形成する、重鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号３～１５）。ＣＤＲ及びフレームワーク領域を、図３ｂに示す。それぞれのＤＮＡ配列を、図３ｃに示す。 ａ）共通の軽鎖アミノ酸配列のアミノ酸配列。ｂ）共通の軽鎖可変領域ＤＮＡ配列及び翻訳（ＩＧＫＶ１－３９／ｊｋ１）。ｃ）軽鎖定常領域ＤＮＡ配列及び翻訳。ｄ）Ｖ領域ＩＧＫＶ１－３９Ａの、ｅ）ＩＭＧＴ番号付けによる共通の軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３。 二重特異性分子の生成のためのＩｇＧ重鎖。ａ）ＣＨ１領域ＤＮＡ配列及び翻訳。ｂ）ヒンジ領域ＤＮＡ配列及び翻訳。ｃ）ＣＨ２領域ＤＮＡ配列及び翻訳。ｄ）変異Ｌ３５１Ｋ及びＴ３６６Ｋ（ＫＫ）ＤＮＡ配列及び翻訳を含有するＣＨ３ドメイン。ｅ）変異Ｌ３５１Ｄ及びＬ３６８Ｅ（ＤＥ）ＤＮＡ配列及び翻訳を含有するＣＨ３ドメイン。残基位置は、ＥＵ番号付けによる。 データは、ａ）胃ＰＤＸモデル及びｂ）食道ＰＤＸモデルにおける平均腫瘍サイズを示しており、エラーバーはＳＥＭである。二元配置分散分析検定を、所与の時点で統計学的有意性を計算するために使用した。ＡＤＣ＝腺がん。ＳＣＣ＝扁平上皮がん。灰色の領域は、治療期間を表す。

本説明をより容易に理解することができるように、ある特定の用語が最初に定義される。追加の定義が発明を実施するための形態全体を通して記載される。別途記載されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語及び科学用語は、当業者によって一般的に理解される意味と同じ意味を有し、免疫学、タンパク質化学、生化学、組換えＤＮＡ技術、及び薬理学の従来の方法が用いられる。

本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、複数の指示物を含む。用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「有する（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含んだ（ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ）」、「有する（ｈａｓ）」、「有する（ｈａｖｅ）」、「有した（ｈａｄ）」、「有する（ｈａｖｅ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、及び「含んだ（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」などの「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、並びに他の語形の使用は、限定されない。

本明細書で使用される「抗体」という用語は、抗原上のエピトープに結合する１つ以上のドメインを含有する、タンパク質の免疫グロブリンクラスに属するタンパク質分子を意味し、かかるドメインは、抗体の可変領域を有する配列相同性に由来するか、又はその配列相同性を共有する。抗体は、典型的には、各々２つの重鎖及び２つの軽鎖を有する基本的な構造単位から構成される。本発明による抗体は、任意の特定の形式又はその産生方法に限定されない。

「二重特異性抗体」は、抗体の１つのドメインが第１の抗原に結合する一方で、抗体の第２のドメインが第２の抗原に結合し、該第１及び第２の抗原が同一ではないか、又は１つのドメインが抗原上の第１のエピトープに結合する一方で、第２のドメインが抗原上の第２のエピトープに結合する、本明細書に記載の抗体である。「二重特異性抗体」という用語はまた、１つの重鎖可変領域／軽鎖可変領域（ＶＨ／ＶＬ）の組み合わせが、抗原上の第１の抗原又がエピトープと、抗原上の第２の抗原又はエピトープに結合する第２のＶＨ／ＶＬの組み合わせとに結合する抗体を包含する。この用語は、ＶＨが第１の抗原を特異的に認識することができ、ＶＬが、免疫グロブリン可変ドメイン内のＶＨと対合して、第２の抗原を特異的に認識することができる、抗体をさらに含む。得られたＶＨ／ＶＬ対は、抗原１又は抗原２のいずれかに結合する。そのようないわゆる「ツーインワン抗体」は、例えば、ＷＯ２００８／０２７２３６、ＷＯ２０１０／１０８１２７、及びＳｃｈａｅｆｅｒ ｅｔ ａｌ（Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２０，４７２－４８６，Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０１１）に記載されている。本発明による二重特異性抗体は、任意の特定の二重特異性形式又はその産生の方法に限定されない。

本明細書で使用される「共通軽鎖」という用語は、二重特異性抗体における２つの軽鎖（又はそのＶＬ部分）を指す。２つの軽鎖（又はそのＶＬ部分）は、同一であり得るか、又はいくつかのアミノ酸配列差を有し得るが、全長抗体の結合特異性は影響を受けない。「再配列された」という用語の付加を伴うか否かにかかわらず、「共通軽鎖」、「共通ＶＬ」、「単一軽鎖」、「単一ＶＬ」という用語はすべて、本明細書で互換的に使用される。「共通」はまた、アミノ酸配列が同一ではない軽鎖の機能的等価物を指す。機能的結合領域の形成に実質的に影響を及ぼさない変異（欠失、置換、挿入及び／又は付加）が存在する当該軽鎖の多くの変異体が存在する。本発明の軽鎖はまた、０～１０個、好ましくは、０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加、又はそれらの組み合わせを有する、本明細書に記載の軽鎖であり得る。例えば、保存的アミノ酸変化、重鎖と対になったときに結合特異性に寄与しないか、又は部分的にしか寄与しない領域におけるアミノ酸の変化などを導入することにより試験することにより、同一ではないが依然として機能的に等価である可変の軽鎖を調製するか、又は見つけることは、例えば、本明細書で使用される共通軽鎖の定義の範囲内である。

本明細書で使用される場合、「含む」及びその語形変化は、その非限定的な意味で使用されて、単語に続く項目が含まれることを意味するが、特に言及されない項目は除外されない。加えて、動詞「～からなる」は、「～から本質的になる」に置き換えられてもよく、本明細書で定義される化合物又は補助化合物が、具体的に特定された構成要素以外の付加の構成要素を含んでもよく、該付加の構成要素は、本発明の固有の特徴を変化させないことを意味する。

本発明による「全長ＩｇＧ」又は「全長抗体」という用語は、本質的に完全なＩｇＧを含むと定義されるが、必ずしもインタクトなＩｇＧのすべての機能を有するわけではない。誤解を避けるために、全長ＩｇＧは、２つの重鎖及び２つの軽鎖を含む。各鎖は、定常（Ｃ）領域及び可変（Ｖ）領域を含有し、これらは、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＶＨ、及びＣＬ、ＶＬと指定されたドメインに分類され得る。ＩｇＧ抗体は、Ｆａｂ部分に含まれる可変領域ドメインを介して抗原に結合し、結合後、定常ドメインを介して、主にＦｃ部分を介して免疫系の分子及び細胞と相互作用することができる。本発明による全長抗体は、所望の特徴を提供する変異が存在し得るＩｇＧ分子を包含する。全長ＩｇＧは、いずれの領域の実質的な部分の欠失を有してはならない。しかしながら、結果として得られたＩｇＧ分子の結合特性を本質的に変化させることなく、１つ又はいくつかのアミノ酸残基が欠失したＩｇＧ分子は、「全長ＩｇＧ」という用語に包含される。例えば、かかるＩｇＧ分子は、好ましくは非ＣＤＲ領域内で、１～１０個のアミノ酸残基の欠失を有することができ、欠失したアミノ酸は、ＩｇＧの抗原結合特異性に必須ではない。

「抗体の誘導体」は、ＣＤＲ領域以外では、最大でも２０個のアミノ酸において天然抗体のアミノ酸配列から逸脱するタンパク質である。本明細書に開示される抗体の誘導体は、最大でも２０個のアミノ酸において当該アミノ酸配列から逸脱する抗体である。

本明細書における核酸配列又はアミノ酸配列に関する「同一性パーセント（％）」は、最適比較目的のために配列を整列させた後の、選択された配列内の残基と同一の候補配列内の残基のパーセンテージとして定義される。アミノ酸配列を比較する配列同一性の割合は、改変ＣｌｕｓｔａｌＷアルゴリズム（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｊ．Ｄ．，Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｄ．Ｇ．，ａｎｄ Ｇｉｂｓｏｎ Ｔ．Ｊ．，（１９９４）Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．２２（２２）：４６７３－４６８０）、ｓｗｇａｐｄｎａｍｔスコア行列、ギャップ開始ペナルティ１５、及びギャップ伸長ペナルティ６．６６を用いる初期設定を使用したＶｅｃｔｏｒ ＮＴＩ Ａｄｖａｎｃｅ（登録商標）１１．５．２ソフトウェアのＡｌｉｇｎＸアプリケーションを使用して決定される。アミノ酸配列は、改変ＣｌｕｓｔａｌＷアルゴリズム（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｊ．Ｄ．，Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｄ．Ｇ．，ａｎｄ Ｇｉｂｓｏｎ Ｔ．Ｊ．，（１９９４）Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．２２（２２）：４６７３－４６８０）、ｂｌｏｓｕｍ６２ｍｔ２スコア行列、ギャップ開始ペナルティ１０、及びギャップ伸長ペナルティ０．１を用いる初期設定を使用したＶｅｃｔｏｒ ＮＴＩ Ｐｒｏｇｒａｍ Ａｄｖａｎｃｅ（登録商標）１１．５．２ソフトウェアのＡｌｉｇｎＸアプリケーションを用いて整列される。

抗体は、通常、抗原のエピトープを認識し、そのようなエピトープは他の化合物にも存在し得るので、抗原、例えば、ＥＧＦＲ又はＬＧＲ５を「特異的に認識する」本発明による抗体は、そのような他の化合物が同じ種類のエピトープを含有する場合に、他の化合物も認識し得る。したがって、抗原と抗体との相互作用に関して「特異的に認識する」という用語は、同じ種類のエピトープを含有する他の化合物への抗体の結合を排除しない。

「エピトープ」又は「抗原決定基」は、免疫グロブリン又は抗体が特異的に結合する抗原上の部位を指す。エピトープは、タンパク質の三次フォールディング（いわゆる直鎖状エピトープ及び立体構造エピトープ）によって並置された隣接アミノ酸又は非隣接アミノ酸から形成され得る。隣接直鎖状アミノ酸から形成されたエピトープは、典型的には、変性溶媒への曝露時に保持されるが、三次フォールディングによって形成されたエピトープは、典型的には、変性溶媒での処理時に立体構造が失われる。エピトープは、典型的には、特有の空間的立体構造内に３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸を含み得る。

本明細書で使用される場合、「対象」及び「患者」という用語は、互換的に使用され、ヒト、マウス、ラット、ハムスター、テンジクネズミ、ウサギ、ネコ、イヌ、サル、ウシ、ウマ、ブタなどの哺乳動物（例えば、がんを有するヒト患者などの患者）を指す。

「治療する」、「治療すること」、及び「治療」という用語は、本明細書で使用される場合、疾患に関連する症状、合併症、状態又は生化学的兆候の進行、発生、重症化、又は再発を逆転させる、緩和する、改善する、阻害する、又は遅延させる若しくは予防する目的で、対象に活性薬剤又は活性薬剤の組み合わせを投与する任意の種類の介入又はプロセスを指す。

本明細書で使用される場合、「有効な治療」又は「肯定的な治療応答」とは、有益な効果、例えば、疾患又は障害、例えば、がんの少なくとも１つの症状の改善をもたらす治療を指す。有益な効果は、その方法に従って治療を開始する前に行われた測定又は観察を上回る改善を含む、ベースラインを上回る改善の形態をとることができる。例えば、有益な効果は、疾患の臨床症状若しくは診断症状、又はがんのマーカーの軽減又は排除によって証明される、任意の臨床病期において対象におけるがんの進行を遅延させる、安定させる、停止する、又は逆転させる形態をとることができる。有効な治療は、例えば、腫瘍サイズを減少させ得る、循環腫瘍細胞の存在を減少させ得る、腫瘍の転移を軽減若しくは予防し得る、腫瘍成長を遅延させ得る若しくは停止させ得る、及び／又は腫瘍再発（ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ）若しくは再発（ｒｅｌａｐｓｅ）を予防し得る若しくは遅延させ得る。

「有効量」又は「治療有効量」という用語は、所望の生物学的、治療的、及び／又は予防的結果を提供する薬剤又は薬剤の組み合わせの量を指す。その結果は、疾患の兆候、症状、若しくは原因のうちの１つ以上の軽減（ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ）、改善、寛解、軽減（ｌｅｓｓｅｎｉｎｇ）、遅延、及び／又は緩和、又は生物系の任意の他の所望の変化とすることができる。いくつかの実施形態では、有効量は、腫瘍発生を遅延させるのに十分な量である。いくつかの実施形態では、有効量は、腫瘍再発を予防する又は遅延させるのに十分な量である。有効量は、１回以上の投与で投与され得る。有効量の薬物又は組成物は、（ｉ）がん細胞の数を減少させ得る、（ｉｉ）腫瘍サイズを減少させ得る、（ｉｉｉ）がん細胞の末梢器官への浸潤を抑制し得る、遅延させ得る、ある程度遅延させ得る、かつ停止し得る、（ｉｖ）腫瘍転移を抑制し得る、（ｖ）腫瘍成長を阻害し得る、（ｖｉ）腫瘍の発生及び／若しくは再発を予防し得る若しくは遅延させ得る、並びに／あるいは（ｖｉｉ）がんに関連する症状のうちの１つ以上をある程度軽減し得る。一例では、「有効量」は、がんの減少（例えば、がん細胞の数の減少）に影響を及ぼす、がんの進行の遅延させる、又はがんの再成長若しくは再発を防止するＥＧＦＲ／ＬＧＲ５抗体の量である。

本開示は、がんの治療において使用するための、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する可変ドメイン及びＬＧＲ５の細胞外部分に結合する可変ドメインを含む抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体を提供する。がん及び腫瘍という単語は、特に明記しない限り、本明細書で使用され、通常は、両方ともがんを指す。

上皮増殖因子「ＥＧＦＲ」受容体（ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ１、又はＨＥＲ１）は、Ｈｅｒ－又はｃＥｒｂＢ－１、－２、－３及び－４という名称の４つの受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）のファミリーのメンバーである。ＥＧＦＲは様々な同義語で知られており、その最も一般的なものはＥＧＦＲである。ＥＧＦＲは、４つのサブドメインから構成される細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を有し、そのうちの２つはリガンド結合に関与し、そのうちの２つはホモ二量体化及びヘテロ二量体化に関与する。ＥＧＦＲは、様々なリガンドからの細胞外シグナルを統合し、多様な細胞内応答をもたらす。ＥＧＦＲによって活性化される主要なシグナル伝達経路は、Ｒａｓ－マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）分裂促進シグナル伝達カスケードから構成される。この経路の活性化は、Ｇｒｂ２のチロシンリン酸化ＥＧＦＲへの動員によって開始される。これにより、Ｇｒｂ２結合Ｒａｓ－グアニンヌクレオチド交換因子セブンレスの息子（Ｓｏｎ ｏｆ Ｓｅｖｅｎｌｅｓｓ）（ＳＯＳ）によるＲａｓの活性化がもたらされる。加えて、ＰＩ３－キナーゼ－Ａｋｔシグナル伝達経路はＥＧＦＲによっても活性化されるが、ＥｒｂＢ－３（ＨＥＲ３）の同時発現がある場合には、この活性化はよりかなり強い。ＥＧＦＲは、いくつかのヒト上皮悪性腫瘍、特に乳房、膀胱、非小細胞肺がん肺、結腸、卵巣、頭頸部、及び脳のがんに関与している。遺伝子における活性化変異、並びに受容体及びそのリガンドの過剰発現が見出され、自己分泌活性化ループを生じる。したがって、このＲＴＫは、がん療法の標的として広く使用されている。ＲＴＫを標的とする小分子阻害剤及び細胞外リガンド結合ドメインに指向されるモノクローナル抗体（ｍＡｂ）の両方が開発され、これまでにいくつかの臨床的成功が示されているが、ほとんどが選択された患者群に対してである。ヒトＥＧＦＲタンパク質及びそれをコードする遺伝子のデータベース受入番号は、ＧｅｎＢａｎｋ ＮＭ＿００５２２８．３である。受入番号は、主に、ＥＧＦＲタンパク質の標的としての特定化のさらなる方法を提供するために与えられ、抗体によって結合されたＥＧＦＲタンパク質の実際の配列は、例えば、いくつかのがんなどで生じる変異などのコード遺伝子における変異のために、変化し得る。

本明細書でＥＧＦＲについて言及される場合、別途記載されない限り、参照はヒトＥＧＦＲについて言及される。ＥＧＦＲに結合する可変ドメイン抗原結合部位は、ＥＧＦＲ及びその様々な変異体、例えば、いくつかのＥＧＦＲ陽性腫瘍上に発現される変異体に結合する。

「ＬＧＲ」という用語は、ロイシンリッチリピート含有Ｇタンパク質カップリング受容体として知られているタンパク質ファミリーを指す。このファミリーのいくつかのメンバーは、ＬＧＲ４、ＬＧＲ５及びＬＧＲ６に注目して、ＷＮＴシグナル伝達経路に関与することが知られている。

ＬＧＲ５は、Ｇタンパク質共役受容体５を含有するロイシンリッチリピートである。遺伝子又はタンパク質の代替名は、Ｇタンパク質共役受容体５を含有するロイシンリッチ反復、ロイシンリッチリピート含有Ｇタンパク質共役受容体５、Ｇタンパク質共役受容体ＨＧ３８、Ｇタンパク質共役受容体４９、Ｇタンパク質共役受容体６７、ＧＰＲ６７、ＧＰＲ４９、オーファンＧタンパク質共役受容体ＨＧ３８、Ｇタンパク質共役受容体４９、ＧＰＲ４９、ＨＧ３８及びＦＥＸである。ＬＧＲ５に結合する本発明のタンパク質又は抗体は、ヒトＬＧＲ５に結合する。ＬＧＲ５結合タンパク質又は抗体は、ヒトと他の哺乳類オーソログとの間の配列及び三次構造類似性に起因して、かかるオーソログにも結合し得るが、必ずしもそうではない。ヒトＬＧＲ５タンパク質及びそれをコードする遺伝子についてのデータベース受入番号は、（ＮＣ＿００００１２．１２、ＮＴ＿０２９４１９．１３、ＮＣ＿０１８９２３．２、ＮＰ＿００１２６４１５５．１、ＮＰ＿００１２６４１５６．１、ＮＰ＿００３６５８．１）である。受入番号は、主に、ＬＧＲ５の標的としてのさらなる特定化方法を提供するために与えられ、結合されたＬＧＲ５タンパク質の実際の配列は、例えば、いくつかのがんなどに生じる変異などのコード遺伝子の変異のため、変化し得る。ＬＧＲ５抗原結合部位は、ＬＧＲ５及びその様々な変異体、例えば、いくつかのＬＧＲ５陽性腫瘍細胞によって発現される変異体に結合する。

いくつかの実施形態では、がんは、大腸がんなどの消化管がんである。好ましくは、がんは、胃がん、食道がん、又は胃食道接合部がんである。胃（ｇａｓｔｒｉｃ）がん（胃（ｓｔｏｍａｃｈ）がんとも称される）は、胃の内壁、特に、その中に見られる粘液産生腺細胞から発症するがんである。このようながんは、胃の内層から発生するために、胃腺がん、又はこの場合には胃腺がんとも称される。好ましい実施形態では、したがって、がんは、本明細書で互換的に使用される胃の内層から発症する胃腺がん又はがんである。食道がんは、食道から発症するがんである。主な２つのサブタイプは、ＥＳＣＣ（食道扁平上皮がん）及びＥＡＣ（食道腺がん）である。胃食道接合部がん（胃食道接合部腺がんとしても知られる）は、胃食道接合部から生じる。

いくつかの実施形態では、がんは、ＬＧＲ５を発現する及び／又はＥＧＦＲを発現する。本明細書で使用される場合、がんがＬＧＲ５を発現する細胞を含む場合には、がんは、ＬＧＲ５を発現する。ＬＧＲ５を発現する細胞は、ＬＧＲ５をコードする検出可能なレベルのＲＮＡを含む。本明細書で使用される場合、がんがＥＧＦＲを発現する細胞を含む場合には、がんは、ＥＧＦＲを発現する。ＥＧＦＲを発現する細胞は、ＬＧＲ５をコードする検出可能なレベルのＲＮＡを含む。発現は、多くの場合、ＬＧＲ５又はＥＧＦＲに結合する抗体で細胞をインキュベートすることによっても検出され得る。しかしながら、いくつかの細胞は、そのような抗体試験については十分高いタンパク質を発現しない。そのような場合、ｍＲＮＡ又は他の形態の核酸配列検出が好ましい。

いくつかの実施形態では、本開示は、Ｈｅｒ２状態が、Ｈｅｒ２陽性、Ｈｅｒ２高、Ｈｅｒ２ ３＋、Ｈｅｒ２ ２＋、Ｈｅｒ２ １＋、Ｈｅｒ２ ０、又はＨｅｒ２陰性対象であることから選択される対象における胃がん、食道がん、又は胃食道接合がんの治療において使用するための、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する可変ドメイン及びＬＧＲ５の細胞外部分に結合する可変ドメインに結合する抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体を提供する。好ましくは、対象は、Ｈｅｒ２陰性である。本開示は、さらに、Ｈｅｒ２陰性対象における胃がん、食道がん、又は胃食道接合部がんを治療する方法を提供し、それを必要とする対象に、抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体を提供することを含む。好ましくは、該使用は、対象に、１５００ｍｇの均一用量の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体を提供することを含む。いくつかの実施形態では、治療用化合物のＨｅｒ２陰性対象への投与は、毎週、隔週、又は毎月行われてもよい。好ましくは、治療用化合物は、２週間に１回投与される。

対象のヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）の発現を決定する方法は、当該技術分野で周知である。例えば、Ｈｅｒ２の発現レベルは、免疫組織化学（ＩＨＣ）又は（蛍光）ｉｎ－ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）を使用して確立され得、これは、Ｈｅｒ２陰性対象の同定を含む、Ｈｅｒ２状態の同定を可能にする。ＩＨＣ又はＩＳＨは、ヒト対象におけるＨｅｒ２状態を確立するために日常的に使用される明確に定義された手順及び標準的な手順の両方である。本明細書では、例えば、Ｂａｒｔｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，（ＨＥＲ２ Ｔｅｓｔｉｎｇ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｄｅｃｉｓｉｏｎ Ｍａｋｉｎｇ ｉｎ Ｇａｓｔｒｏｅｓｏｐｈａｇｅａｌ Ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ａｒｃｈ Ｐａｔｈｏｌ Ｌａｂ Ｍｅｄ．２０１６；１４０：１３４５－１３６３）によるＡＳＣＯ／ＣＡＰガイドラインを参照する。例えば、抗Ｈｅｒ－２／ｎｅｕ抗体（クローン４Ｂ５）を使用することによって、ＩＨＣを使用したＦＦＰＥ胃がん／食道腺がん、胃がん、食道がん、又は胃食道接合部がんの切片におけるＨＥＲ－２抗原の半定量的な検出を可能にする。染色及びスコアリングは、このがんの種類のコンセンサスガイドラインに従って実行される。がん組織試料中の細胞の表面上のＨＥＲ２受容体タンパク質の量を測定するこのようなＩＨＣ試験は、通常は、０～３＋のスコアを与える。ＩＨＣスコアに基づいて、患者は、例えば、０又は１＋のスコアが測定されるときなどに、Ｈｅｒ２陰性であると分類され得る。ＨＥＲ２プローブ（１７ｑ１１．２－ｑ１２）及びセントロメア１７プローブ（Ｃｅｎ１７）を使用するなどして、ＩＳＨ試験を使用してＨｅｒ２発現を確立する場合に、診断は「陽性」又は「陰性」のいずれかであり、また時にはＨＥＲ２について「ゼロ」として報告されることもある。本開示の治療方法は、好ましくは、ＩＨＣ及び／又はＩＳＨによって確立されるＨｅｒ２陰性である対象である。

本明細書におけるＨｅｒ２陰性対象とは、がん、がん細胞、又は腫瘍を有する対象、すなわち、Ｈｅｒ２陰性である対象を意味する。ＨＥＲ２状態は、上述のＩＨＣ及び／又はＩＳＨに従って決定されてもよい。

好ましくは、いくつかの実施形態では、抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体での治療の前に、対象をＨｅｒ２状態について診断するステップが行われる。好ましくは、いくつかの実施形態では、Ｈｅｒ２陰性状態を有する対象が、治療のために選択される。好ましくは、いくつかの実施形態では、対象の治療の前に、Ｈｅｒ２陰性胃がん、食道がん、又は胃食道接合部がんを有する対象を診断するステップが行われる。本開示の方法によって治療されるかかるがんには、胃腺がん、及び扁平上皮がん組織診断を有する食道がんが含まれる。

当該Ｈｅｒ２陰性診断は、好ましくは、Ｈｅｒ２状態のＩＳＨ又はＩＨＣ試験を伴う。

好ましくは、いくつかの実施形態では、Ｈｅｒ２陰性対象の治療の前に、Ｈｅｒ２陰性胃がん、食道がん、又は胃食道接合部がんを有する対象をスクリーニングするステップが行われる。このようながんは、特に、腺がんである。当該スクリーニングは、好ましくは、Ｈｅｒ２状態のＩＳＨ又はＩＨＣ試験を伴う。

胃がん、食道がん、又は胃食道接合部がんなどのがんは、変異の存在に関連し得る。そのような変異には、ＰＩＫ３ＣＡ、ＫＲＡＳ、及びＢＲＡＦなどの既知のがん遺伝子における変異が含まれる。発がん性変異は、一般に、新たな機能をもたらす活性化変異又は変異として記載される。別の種類のがん変異は、ＴＰ５３、ＭＬＨ１、ＣＤＫＮ２Ａ、及びＰＴＥＮなどの腫瘍抑制遺伝子に関与する。腫瘍抑制遺伝子における変異は、一般に、不活性化である。

ＴＰ５３は、ストレス応答及び細胞増殖を含むいくつかの活性を調節する転写因子をコードする。ＴＰ５３における変異は様々ながんと関連しており、胃がん及び食道がんを含むヒトがんの５０％以上で発生すると推定されている。特に、ＴＰ５３ Ｒ２４８Ｑ変異は、胃がん及び食道がんを含むがんと関連することが示された（Ｐｉｔｏｌｌｉ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｓｃｉ．２０１９ ２０：６２４１）。位置Ｒ１９６及びＲ３４２におけるナンセンス変異は、乳房及び食道、並びに卵巣、前立腺、乳房、膵臓、胃、結腸／直腸、肺、食道、骨などのいくつかの腫瘍においてそれぞれ特定されている（Ｐｒｉｅｓｔｌｙ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ２０１９ ５７５：２１０－２１６）。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される治療用化合物は、ＴＰ５３変異、特に、ＴＰ５３発現、又は活性の低下をもたらす変異を有するがんを治療するのに有用である。

ＭＬＨ１（ＭｕｔＬホモログ１）は、ＤＮＡミスマッチ修復に関与するタンパク質をコードし、既知の腫瘍抑制遺伝子である。ＭＬＨ１における変異は、消化管がんを含む様々ながんと関連している。低レベルのＭＬＨ１はまた、食道がんの家族歴を有する食道がん患者に関連し（Ｃｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｏｎｃｏｌ Ｌｅｔｔ．２０１５ ９：４３０－４３６）、ＭＬＨ１は、悪性食道腫瘍患者の１．３９％で変異している（Ｔｈｅ ＡＡＣＲ Ｐｒｏｊｅｃｔ ＧＥＮＩＥ Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ．ＡＡＣＲ Ｐｒｏｊｅｃｔ ＧＥＮＩＥ：ｐｏｗｅｒｉｎｇ ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｔｈｒｏｕｇｈ ａｎ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ．Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ．２０１７；７（８）：８１８－８３１．Ｄａｔａｓｅｔ Ｖｅｒｓｉｏｎ ６）。特に、ＭＬＨ１ Ｖ３８４Ｄ変異は、がん、例えば、結腸直腸がんと関連することが示された（Ｏｈｓａｗａ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｒｅｐｏｒｔｓ ２００９ ２：８８７－８９１）。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される治療用化合物は、ＭＬＨ１変異、特に、ＭＬＨ１発現、又は活性の低下をもたらす変異を有するがんを治療するのに有用である。

ＰＩＫ３ＣＡ（ホスファチジルイノシトール－４，５－ビスリン酸３－キナーゼ触媒サブユニットアルファ）は、ＰＩ３ Ｋ（ホスファチジルイノシトール３－キナーゼ）の１１０ｋＤａ触媒サブユニットをコードする。ＰＩＫ３ＣＡの変異は、消化管がんを含む様々ながんと関連している。米国がん学会の報告によると、ＰＩＫ３ＣＡは悪性固形腫瘍患者の１２．７５％で変異している。具体的には、ＰＩＫ３ＣＡ Ｈ１０４７Ｒ変異は、全悪性固形腫瘍患者の２．９１％に存在し、ＰＩＫ３ＣＡ Ｅ５４５Ｋは、全悪性固形腫瘍患者の２．５５％に存在する（Ｔｈｅ ＡＡＣＲ Ｐｒｏｊｅｃｔ ＧＥＮＩＥ Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ．ＡＡＣＲ Ｐｒｏｊｅｃｔ ＧＥＮＩＥ：ｐｏｗｅｒｉｎｇ ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｔｈｒｏｕｇｈ ａｎ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ．Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ．２０１７；７（８）：８１８－８３１．Ｄａｔａｓｅｔ Ｖｅｒｓｉｏｎ ６．を参照されたい）。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される治療用化合物は、ＰＩＫ３ＣＡ変異、具体的には、ＰＩＫ２ＣＡにおける発がん性変異を有するがんを治療するのに有用である。

ＣＤＫＮ２Ａ（サイクリン依存性キナーゼ阻害剤２Ａ）は、ＣＤＫ４及びＡＲＦを阻害するタンパク質をコードする。米国がん学会の報告によると、ＣＤＫＮ２Ａは食道がん患者の２２．２１％、食道扁平上皮がん患者の２８．７％、及び胃腺がん患者の６．０８％で変異している。具体的には、ＣＤＫＮ２Ａ Ｗ１１０Ｔｅｒ変異は、約０ ．１１％のがん患者に存在する。（Ｔｈｅ ＡＡＣＲ Ｐｒｏｊｅｃｔ ＧＥＮＩＥ Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ．ＡＡＣＲ Ｐｒｏｊｅｃｔ ＧＥＮＩＥ： ｐｏｗｅｒｉｎｇ ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｔｈｒｏｕｇｈ ａｎ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ．Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ．２０１７；７（８）：８１８－８３１．Ｄａｔａｓｅｔ Ｖｅｒｓｉｏｎ ６）。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される治療用化合物は、ＣＤＫＮ２Ａ変異、特に、ＣＤＫＮ２Ａの発現又は活性の低下をもたらす変異を有するがんを治療するのに有用である。

ＰＴＥＮ（ホスファターゼ及びテンシンホモログ）は、ホスファチジルイノシトール３，４，５－トリスリン酸３－ホスファターゼをコードする。米国がん学会の報告によると、ＰＴＥＮはがん患者の６．２８％、胃腺がん患者の３．４１％、食道がん患者の２．３７％、食道腺がん患者の２．２２％で変異している。具体的には、ＰＴＥＮ Ｒ１３０Ｔｅｒ変異（Ｔｅｒは終止／停止コドンを指す）は、すべての大腸がん患者の０ ．２１％に存在する（Ｔｈｅ ＡＡＣＲ Ｐｒｏｔ Ｇｅｎｉｅ Ｃｏｎｓｏｎｔｉｕｍ．ＡＡＣＲ Ｐｒｏｊｅｃｔ ＧＥＮＩＥ：ｐｏｗｅｒｉｎｇ ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｔｈｒｏｕｇｈ ａｎ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ．Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ．２０１７；７（８）：８１８－８３１．Ｄａｔａｓｅｔ Ｖｅｒｓｉｏｎ ６）。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される治療用化合物は、ＰＴＥＮ変異、特に、ＰＴＥＮ発現又は活性の低下をもたらす変異を有するがんを治療するのに有用である。

ＢＲＡＦは、成長シグナル伝達に関与するセリン／トレオニン－タンパク質キナーゼＢ － Ｒａｆをコードする。米国がん学会の報告によると、ＢＲＡＦは胃がん患者の１．１９％、及び胃腺がん患者の１．９３％で変異している。具体的には、ＢＲＡＦ Ｖ６００Ｅ変異は、がん患者の２．７２％に存在する（Ｔｈｅ ＡＡＣＲ Ｐｒｏｊｅｃｔ ＧＥＮＩＥ Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ．ＡＡＣＲ Ｐｒｏｊｅｃｔ ＧＥＮＩＥ：ｐｏｗｅｒｉｎｇ ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｔｈｒｏｕｇｈ ａｎ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ．Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ．２０１７；７（８）：８１８－８３１．Ｄａｔａｓｅｔ Ｖｅｒｓｉｏｎ ６を参照されたい）。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される治療用化合物は、ＢＲＡＦ変異、具体的には、ＢＲＡＦにおける発がん性変異を有するがんを治療するのに有用である。しかしながら、いくつかの実施形態では、本明細書に開示される治療用化合物は、ＢＲＡＦ変異Ｖ６００Ｅを有しない胃がんの治療に有用である。

ＫＲＡＳ（Ｋｉｒｓｔｅｎ ＲＡｔ肉腫）は、ＲＡＳ／ＭＡＰＫ経路のパーティーであるタンパク質をコードする。米国がん学会の報告によると、ＫＲＡＳは、悪性固形腫瘍患者の２．２８％に存在するＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃを有する悪性固形腫瘍患者の１４．７％で変異している（Ｔｈｅ ＡＡＣＲ Ｐｒｏｊｅｃｔ ＧＥＮＩＥ Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ．ＡＡＣＲ Ｐｒｏｊｅｃｔ ＧＥＮＩＥ：ｐｏｗｅｒｉｎｇ ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｔｈｒｏｕｇｈ ａｎ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ．Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ．２０１７；７（８）：８１８－８３１．Ｄａｔａｓｅｔ Ｖｅｒｓｉｏｎ ６を参照されたい）。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される治療用化合物は、ＫＲＡＳ変異、具体的には、ＫＲＡＳにおける発がん性変異を有するがんを治療するのに有用である。

ＵＧＴ１Ａ１（ウリジンジホスファテグルクロノシルトランスフェラーゼ１Ａ１）及びＵＧＴ１Ａ８（ウリジンジホスファテグルクロノシルトランスフェラーゼ１Ａ８）は、グルクロニド化経路の酵素をコードする。酵素活性を低減させるいくつかの多型は、イリノテカンの代謝及び効果に影響を与えることが知られている。例えば、中国人、韓国人、及び日本人集団において約０．１３％の対立遺伝子頻度を有するＵＧＴ１Ａ１＊６対立遺伝子（Ｇ７１Ｒ多型）及びＵＧＴ１Ａ１＊２８対立遺伝子（プロモーター領域のＴＡＴＡ配列におけるジヌクレオチド反復多型）は、イリノテカン誘発性好中球減少症にとっての危険因子である。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される治療用化合物は、ＵＧＴ１Ａ１及び／又はＵＧＴ１Ａ８の変異、具体的には、ＵＧＴ１Ａ１及び／又はＵＧＴ１Ａ８の発現若しくは活性の低減をもたらす変異を有するがんを治療するのに有用である。

ＡＴＭ（Ａｔａｘｉａ Ｔｅｌａｎｇｉｅｃｔａｉｓａ Ｍｕｔａｔｅｄ）は、セリン－スレオニンキナーゼファミリーのメンバーであり、異なるＤＮＡ修復経路及びシグナル伝達経路の活性化を介してＤＮＡ損傷に対する細胞応答を調整する。ＡＴＭ生殖細胞系列変異は、毛細血管拡張性運動失調症と関連しており、ＡＴＭ体細胞変異は、子宮内膜、結腸、膵臓、乳がん、及び尿路上皮がんで共通に観察される。

好ましい実施形態では、本開示は、ＴＰ５３、ＭＬＨ１、ＰＩＫ３ＣＡ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＵＧＴ１Ａ、ＵＧＴ１Ａ８、ＢＲＡＦ、ＰＴＥＮ、及びＫＲＡＳをコードする遺伝子における変異を有するがんを治療するための方法を提供する。好ましくは、がんは、ＴＰ５３ Ｒ１９６Ｔ、ＴＰ５３ Ｒ３４２Ｔ、ＴＰ５３ Ｒ２４８Ｑ、ＭＬＨ１ Ｖ３８４Ｄ、ＰＩＫ３ＣＡ Ｈ１０４７Ｒ、ＰＩＫ３ＣＡ Ｅ５４５Ｋ、ＣＤＫＮ２Ａ Ｗ１１０Ｔ、ＵＧＴ１Ａ１ Ｇ７１Ｒ、ＵＧＴ１Ａ８ Ｇ７１Ｒ、及びＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃから選択される１つ以上の変異を有する。いくつかの実施形態では、がんは、ＫＲＡＳについての野生型である。あるいは、本開示は、ＡＴＭをコードする遺伝子における変異、特に、変異Ｗ５７Ｔを有するがんを治療するための方法を提供する。具体的には、本開示は、ＡＴＭをコードする遺伝子における変異、特に、変異Ｗ５７Ｔを有する食道がん、特に、ＥＳＣＣを治療するための方法を提供する。

いくつかの実施形態では、がんは、ＴＰ５３をコードする遺伝子における変異を有し、好ましくは、変異は、Ｒ３４２Ｔであり、がんは、ＭＬＨ１をコードする遺伝子における変異を有し、好ましくは、変異は、Ｖ３８４Ｄである。

いくつかの実施形態では、がんはＴＰ５３をコードする遺伝子における変異を有し、好ましくは、変異はＲ２４８Ｑであり、がんはＰＩＫ３ＣＡをコードする遺伝子における変異を有し、好ましくは、変異は、Ｈ１０４７Ｒであり、がんは、ＣＤＫＮ２Ａをコードする遺伝子における変異を有し、好ましくは、変異はＷ１１０Ｔであり、がんはＵＧＴ１Ａ１をコードする遺伝子における変異を有し、好ましくは、変異はＧ７１Ｒであり、がんはＵＧＴ１Ａ８をコードする遺伝子における変異を有し、好ましくは、変異はＧ７１Ｒである。好ましくは、がんは、食道がん、好ましくは、食道扁平上皮がん（ＥＳＣＣ）である。

いくつかの実施形態では、がんは、ＢＲＡＦをコードする遺伝子における変異を有する。しかしながら、がんは、好ましくは、ＢＲＡＦをコードする遺伝子における変異Ｖ６００Ｅを有せず、好ましくは、ＰＴＥＮをコードする遺伝子における変異Ｒ１３０Ｔｅｒを有しない。いくつかの実施形態では、がんはＫＲＡＳをコードする遺伝子における変異を有し、好ましくは、変異はＧ１２Ｃであり、がんは、ＵＧＴ１Ａ１をコードする遺伝子における変異を有し、好ましくは、変異はＧ７１Ｒであり、がんはＵＧＴ１Ａ８をコードする遺伝子における変異を有し、好ましくは、変異はＧ７１Ｒである。いくつかの実施形態では、がんは、ＵＧＴ１Ａ１をコードする遺伝子における変異を有し、好ましくは、変異はＧ７１Ｒであり、がんは、ＵＧＴ１Ａ８をコードする遺伝子における変異を有し、好ましくは、変異は、Ｇ７１Ｒである。いくつかの実施形態では、がんは、ＰＩＫ３ＣＡにおける変異を有し、好ましくは、変異は、Ｅ５４５Ｋである。好ましくは、がんは、胃がんである。

本明細書に記載される抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体は、上皮増殖因子（ＥＧＦ）受容体の細胞外部分に結合する可変ドメイン及びＬＧＲ５に結合する可変ドメインを含む。ＥＧＦＲは、好ましくは、ヒトＥＧＦＲである。ＬＧＲ５は、好ましくは、ヒトＬＧＲ５である。本明細書に記載される抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体は、ヒト表皮増殖因子（ＥＧＦ）受容体の細胞外部分に結合する可変ドメイン、及びヒトＬＧＲ５に結合する可変ドメインを含む。

好ましくは、本明細書に記載の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体は、上皮増殖因子（ＥＧＦ）受容体の細胞外部分に結合し、ＥＧＦの受容体への結合を妨げる可変ドメインと、ＬＧＲ５に結合する可変ドメインとを含み、抗体とＬＧＲ５発現細胞上のＬＧＲ５との相互作用は、ＬＧＲ５へのＲｓｐｏｎｄｉｎ（ＲＳＰＯ）の結合を遮断しない。抗体が、ＬＧＲ５へのＲｓｐｏｎｄｉｎの結合を遮断するか、又は遮断しないかを決定するための方法は、参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１７／０６９５２８に記載されている。

本明細書において、タンパク質／遺伝子の受入番号又は代替の名称が与えられ、それらは、主に、上述のタンパク質の標的としての特定のさらなる方法を提供するように与えられ、抗体によって結合された標的タンパク質の実際の配列は、例えば、いくつかのがんなどで生じる変異などのコード遺伝子における変異及び／又は代替のスプライシングのため、変化し得る。標的タンパク質は、エピトープがタンパク質内に存在し、かつエピトープが抗体にアクセス可能である限り、抗体によって結合される。

本明細書に記載の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体は、好ましくは、ＥＧＦＲのためのリガンドのＥＧＦＲへの結合を妨げる。本明細書で使用される「結合を妨害する」という用語は、抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体のＥＧＦＲへの結合が、ＥＧＦ受容体への結合についてリガンドと競合することを意味する。抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体は、リガンド結合を弱めてもよく、これがＥＧＦ受容体にすでに結合している場合、リガンドを移動させてもよく、あるいはこれは、例えば、立体障害を介して、リガンドがＥＧＦ受容体に結合し得ることを少なくとも部分的に防止してもよい。

本明細書に開示されるＥＧＦＲ抗体は、好ましくは、ＢｘＰＣ３細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１６８７）若しくはＢｘＰＣ３－ｌｕｃ２細胞（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ １２５０５８）のリガンド誘発性成長、又はＡ４３１細胞のリガンド誘発性細胞死（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５５５）として測定される、それぞれのＥＧＦＲリガンド誘発性シグナル伝達を阻害する。ＥＧＦＲは、いくつかのリガンドに結合し、かつ上述のＢｘＰＣ３細胞又はＢｘＰＣ３－Ｌｕｃ２細胞の増殖を刺激することができる。ＥＧＦＲリガンドの存在下で、ＢｘＰＣ３又はＢｘＰＣ３－Ｌｕｃ２細胞の増殖が刺激される。ＢｘＰＣ３細胞のＥＧＦＲリガンド誘導性増殖は、リガンドの不在下及び存在下にかかわらず、細胞の増殖を比較することによって測定され得る。ＢｘＰＣ３細胞又はＢｘＰＣ３－Ｌｕｃ２細胞のＥＧＦＲリガンド誘発性増殖を測定するための好ましいＥＧＦＲリガンドは、ＥＧＦである。リガンド誘発性増殖は、好ましくは、飽和量のリガンドを使用して測定される。好ましい実施形態では、ＥＧＦは、１００ｎｇ／ｍｌの量の培地で使用される。ＥＧＦは、好ましくは、ＥＧＦ Ｒ＆Ｄシステム、カタログ番号３９６－ＨＢ及び２３６－ＥＧである（ＷＯ２０１７／０６９６２８も参照されたく、これは参照により本明細書に組み込まれる）。

本明細書に開示されるＥＧＦＲ抗体は、好ましくは、ＢｘＰＣ３細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１６８７）又はＢｘＰＣ３－ｌｕｃ２細胞（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ １２５０５８）のＥＧＦＲリガンド誘発性増殖を阻害する。ＥＧＦＲは、いくつかのリガンドに結合し、かつ上述のＢｘＰＣ３細胞又はＢｘＰＣ３－Ｌｕｃ２細胞の増殖を刺激することができる。リガンドの存在下で、ＢｘＰＣ３又はＢｘＰＣ ３－Ｌｕｃ２細胞の増殖が刺激される。ＢｘＰＣ３細胞のＥＧＦＲリガンド誘導性増殖は、リガンドの不在下及び存在下にかかわらず、細胞の増殖を比較することによって測定され得る。ＢｘＰＣ３細胞又はＢｘＰＣ３－Ｌｕｃ２細胞のＥＧＦＲリガンド誘発性増殖を測定するための好ましいＥＧＦＲリガンドは、ＥＧＦである。リガンド誘発性増殖は、好ましくは、飽和量のリガンドを使用して測定される。好ましい実施形態では、ＥＧＦは、１００ｎｇ／ｍｌの量の培地で使用される。ＥＧＦは、好ましくは、Ｒ＆ＤシステムのＥＧＦ、カタログ番号３９６－ＨＢ及び２３６－ＥＧである（ＷＯ２０１７／０６９６２８も参照されたく、これは、参照により本明細書に組み込まれる）。

誤解を避けるために、本明細書で使用される細胞の増殖への言及は、細胞の数の変化を指す。増殖の阻害は、別様には得られたであろう細胞の数の低減を指す。増殖の増加は、別様には得られたであろう細胞の数の増加を指す。細胞の増殖（ｇｒｏｗｔｈ）は、通常は、細胞の増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）を指す。

本明細書に記載される抗体が、多重特異性フォーマットでのシグナル伝達を阻害するか、又は増殖を阻害するかは、好ましくは、抗体の単一特異性一価又は単一特異性二価バージョンを使用して、本明細書において上で記載される方法によって決定される。かかる抗体は、好ましくは、シグナル伝達が決定される受容体についての結合部位を有する。単一特異性一価抗体は、破傷風トキソイド特異性などの無関係な結合特異性を有する可変ドメインを有し得る。好ましい抗体は、抗原結合可変ドメインが、ＥＧＦ受容体ファミリーメンバーに結合する可変ドメインからなる、二価単一特異性抗体である。

そのＢｉｃｌｏｎｉｃｓ（登録商標）抗体プログラムにおいて、Ｍｅｒｕｓは、ＥＧＦＲ及びＬＧＲ５（Ｇタンパク質共役受容体を含有するロイシンリッチリピート）を標的とする多重特異性抗体が開発された。かかる多重特異性抗体の有効性は、患者由来のＣＲＣオルガノイド及びマウスＰＤＸモデルをそれぞれ使用して、インビトロ及びインビボで評価されている（例えば、ＷＯ２０１７／０６９６２８を参照されたく、これは参照により本明細書に組み込まれる）。ＥＧＦＲ及びＬＧＲ５を標的とする多重特異性抗体は、腫瘍増殖を阻害することが示された。かかる阻害性抗体の効力は、がん由来の細胞によるＬＧＲ５ ＲＮＡ発現のレベルと相関することが示された。ＷＯ２０１７／０６９６２８に記載のＥＧＦＲ及びＬＧＲ５を標的とする多重特異性抗体が特に好ましい。

本明細書に記載の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体は、ＬＧＲ５の細胞外部分に結合する可変ドメインを含む。ＬＧＲ５の細胞外部分に結合する可変ドメインは、好ましくは、アミノ酸残基Ｄ４３、Ｇ４４、Ｍ４６、Ｆ６７、Ｒ９０、及びＦ９１が抗体のエピトープへの結合に関与する、図１の配列のアミノ酸残基２１～１１８内に位置するエピトープに結合する。

ＬＧＲ５可変ドメインは、好ましくは、Ｄ４３Ａ、Ｇ４４Ａ、Ｍ４６Ａ、Ｆ６７Ａ、Ｒ９０Ａ、及びＦ９１ＡのＬＧＲ５におけるアミノ酸残基置換のうちの１つ以上が、可変ドメインのＬＧＲ５への結合を低減させる可変ドメインである。

ＬＧＲ５の細胞外部分上のエピトープは、好ましくは、図１の配列のアミノ酸残基２１～１１８内に位置する。好ましくは、それは、ＬＧＲ５可変ドメインのＬＧＲ５への結合が、ＬＧＲ５における以下のアミノ酸残基置換Ｄ４３Ａ、Ｇ４４Ａ、Ｍ４６Ａ、Ｆ６７Ａ、Ｒ９０Ａ、及びＦ９１Ａのうちの１つ以上によって低減されるエピトープである。

本開示は、さらに、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する可変ドメイン、及びＬＧＲ５の細胞外部分に結合する可変ドメインを有する抗体を提供し、ＬＧＲ５可変ドメインは、図１の配列のアミノ酸残基２１～１１８内に位置するＬＧＲ５上のエピトープに結合する。

ＬＧＲ５上のエピトープは、好ましくは、立体構造エピトープである。エピトープは、好ましくは、図１の配列のアミノ酸残基４０～９５内に位置する。抗体のＬＧＲ５への結合は、好ましくは、以下のアミノ酸残基置換Ｄ４３Ａ、Ｇ４４Ａ、Ｍ４６Ａ、Ｆ６７Ａ、Ｒ９０Ａ、及びＦ９１Ａのうちの１つ以上で低減される。

理論に拘束されるものではないが、図１に示されるＬＧＲ５のＭ４６、Ｆ６７、Ｒ９０、及びＦ９１は、本明細書において上で示される可変ドメイン、すなわち、ＬＧＲ５エピトープに結合する可変ドメインの抗原結合部位についての接触残基であると考えられる。アミノ酸残基置換Ｄ４３Ａ及びＧ４４Ａが抗体の結合を低減することは、これらが接触残基でもあることに起因し得るが、これらのアミノ酸残基置換が、他の接触残基のうちの１つ以上を有するＬＧＲ５の部分（すなわち、４６位、６７位、９０位又は９１位における）のコンフォメーションの（わずかな）修飾を誘導し、コンフォメーション変化が、抗体結合が低減されるようなものであることに起因する可能性もある。エピトープは、上述のアミノ酸置換によって特徴付けられる。抗体が同じエピトープに結合するかどうかは、様々な方法で決定され得る。例示的な方法では、ＣＨＯ細胞は、細胞膜上、又はアラニン置換変異体上で、好ましくは、置換Ｍ４６Ａ、Ｆ６７Ａ、Ｒ９０Ａ、又はＦ９１Ａのうちの１つ以上を含む変異体上でＬＧＲ５を発現する。試験抗体は、ＣＨＯ細胞と接触され、抗体の細胞への結合を比較される。試験抗体は、エピトープがＬＧＲ５に結合し、Ｍ４６Ａ、Ｆ６７Ａ、Ｒ９０Ａ、又はＦ９１Ａ置換によりＬＧＲ５に結合する程度が小さい場合に、エピトープに結合する。１つのアラニン残基置換を各々含む変異体のパネルとの結合を比較することが好ましい。このような結合試験は、当該技術分野で周知である。多くの場合、パネルは、実質的にすべてのアミノ酸残基をカバーする単一アラニン置換突然変異体を含む。ＬＧＲ５の場合、パネルは、細胞が使用されるときに、もちろん、タンパク質の細胞外部分、及び細胞膜との関連性を保証する部分のみをカバーする必要がある。特定の変異体の発現は損なわれ得るが、これは異なる領域に結合する１つ以上のＬＧＲ５抗体によって容易に検出される。これらの対照抗体についても発現が低減される場合、膜上のタンパク質のレベル又はフォールディングは、この特定の変異体について損なわれる。パネルへの試験抗体の結合特性によって、試験抗体がＭ４６Ａ、Ｆ６７Ａ、Ｒ９０Ａ、又はＦ９１Ａ置換を有する変異体への結合の低減を示すかどうか、したがって、試験抗体が本発明の抗体であるかどうかが容易に識別される。Ｍ４６Ａ、Ｆ６７Ａ、Ｒ９０Ａ、又はＦ９１Ａ置換を有する変異体への結合の低減によって、図１の配列のアミノ酸残基２１～１１８内に位置するエピトープも識別される。好ましい実施形態では、パネルは、Ｄ４３Ａ置換変異体、両方のＧ４４Ａ置換変異体を含む。ＭＦ５８１６のＶＨのＶＨ配列を有する抗体は、これらの置換変異体への結合の低減を示す。

いかなる理論にも拘束されないが、図２に示されるアミノ酸残基Ｉ４６２、Ｇ４６５、Ｋ４８９、Ｉ４９１、Ｎ４９３、及びＣ４９９は、本明細書において上で示される可変ドメインを含む抗体によるエピトープへの結合に関与していると考えられる。結合への関与は、好ましくは、Ｉ４６２Ａ、Ｇ４６５Ａ、Ｋ４８９Ａ、Ｉ４９１Ａ、Ｎ４９３Ａ、及びＣ４９９Ａから選択されるアミノ酸残基置換のうちの１つ以上を有するＥＧＦＲへの可変ドメインの結合の低減を観察することによって決定される。

一態様では、ヒトＥＧＦＲの細胞外部分上のエピトープに結合する可変ドメインは、図２に示される配列のアミノ酸残基４２０～４８０内に位置するエピトープに結合する可変ドメインである。好ましくは、可変ドメインのＥＧＦＲへの結合は、ＥＧＦＲにおける以下のアミノ酸残基置換Ｉ４６２Ａ、Ｇ４６５Ａ、Ｋ４８９Ａ、Ｉ４９１Ａ、Ｎ４９３Ａ、及びＣ４９９Ａのうちの１つ以上によって低減される。抗体のヒトＥＧＦＲへの結合は、好ましくは、ＥＧＦの受容体への結合を妨げる。ＥＧＦＲ上のエピトープは、好ましくは、立体構造エピトープである。一態様では、エピトープは、図２に示される配列のアミノ酸残基４２０～４８０内に、好ましくは、図２に示される配列の４３０～４８０内に、好ましくは、図２に示される配列の４３８～４６９内に位置する。

理論に拘束されることなく、エピトープの接触残基、すなわち、可変ドメインがヒトＥＧＦＲに接触する領域は、Ｉ４６２、Ｋ４８９、Ｉ４９１、及びＮ４９３である可能性が高いと考えられている。アミノ酸残基Ｇ４６５及びＣ４９９は、抗体のＥＧＦＲへの結合に間接的に関与している可能性が高い。

ヒトＥＧＦＲに結合する可変ドメインは、好ましくは、図３に示されるＭＦ３７５５のＶＨの少なくともＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域を有する可変ドメイン、又は図３に示されるＭＦ３７５５のＶＨのＣＤＲ３配列とは、最大３個、好ましくは最大２個、好ましくは１個以下のアミノ酸が異なるＣＤＲ３配列である。

ヒトＥＧＦＲに結合する可変ドメインは、好ましくは、図３に示されるＭＦ３７５５のＶＨの少なくともＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、又は最大３個、好ましくは、最大２個、好ましくは、最大１個のアミノ酸置換を有する、図３に示されるＭＦ３７５５のＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域を有する可変ドメインである。

ヒトＥＧＦＲに結合する可変ドメインは、好ましくは、図３に示されるＭＦ３７５５のＶＨ鎖の配列、又はＭＦ３７５５のＶＨ鎖に対して最大１５個、好ましくは、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個、好ましくは、１個、２個、３個、４個、若しくは５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、若しくはそれらの組み合わせを有する図３に示されるＭＦ３７５５のＶＨ鎖のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を有する可変ドメインである。

一実施形態では、本開示は、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する可変ドメイン、及びＬＧＲ５の細胞外部分に結合する可変ドメインを含む抗体を提供し、
該可変ドメインの重鎖可変領域は、図３に示されるＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、若しくはＭＦ４２８９からなる群から選択されるＥＧＦＲ特異的重鎖可変領域の少なくともＣＤＲ３配列を含むか、又は該可変ドメインの重鎖可変領域は、図３に示されるＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、若しくはＭＦ４２８９からなる群から選択されるＶＨのＣＤＲ３配列とは、最大３個、好ましくは、最大２個、好ましくは、１個以下のアミノ酸が異なる重鎖ＣＤＲ３配列を含む。当該可変ドメインは、好ましくは、図３に示される少なくともＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、又はＭＦ４２８９のＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域を含む。

当該可変ドメインは、好ましくは、図３に示されるＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、若しくはＭＦ４２８９からなる群から選択されるＥＧＦＲ特異的重鎖可変領域の少なくともＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、又は図３に示されるＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、若しくはＭＦ４２８９からなる群から選択されるＥＧＦＲ特異的重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列とは、最大３個、好ましくは、最大２個、好ましくは、最大１個のアミノ酸が異なる少なくともＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域を含む。当該可変ドメインは、好ましくは、図３に示されるＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、又はＭＦ４２８９の少なくともＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域を含む。好ましい重鎖可変領域は、ＭＦ３７５５である。別の好ましい重鎖可変領域は、ＭＦ４２８０である。

ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する可変ドメイン、及びＬＧＲ５の細胞外部分に結合する可変ドメインを含む抗体であって、本明細書において上で示されるＣＤＲ３、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに／又はＶＨ配列を有するＥＧＦＲ結合可変ドメインが、好ましくは、図３に示されるＭＦ５７９０、ＭＦ５８０３、ＭＦ５８０５、ＭＦ５８０８、ＭＦ５８０９、ＭＦ５８１４、ＭＦ５８１６、ＭＦ５８１７、若しくはＭＦ５８１８からなる群から選択されるＬＧＲ５特異的重鎖可変領域の少なくともＣＤＲ３配列、又は図３に示されるＭＦ５７９０、ＭＦ５８０３、ＭＦ５８０５、ＭＦ５８０８、ＭＦ５８０９、ＭＦ５８１４、ＭＦ５８１６、ＭＦ５８１７、若しくはＭＦ５８１８からなる群から選択されるＶＨのＣＤＲ３配列とは、最大３個、好ましくは、最大２個、好ましくは、１個以下のアミノ酸が異なる重鎖ＣＤＲ３配列を含むＬＧＲ５に結合する可変ドメインを有する、抗体。当該可変ドメインは、好ましくは、図３に示されるＭＦ５７９０、ＭＦ５８０３、ＭＦ５８０５、ＭＦ５８０８、ＭＦ５８０９、ＭＦ５８１４、ＭＦ５８１６、ＭＦ５８１７、又はＭＦ５８１８の少なくともＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域を含む。

ＬＧＲ５可変ドメインは、好ましくは、図３に示されるＭＦ５７９０、ＭＦ５８０３、ＭＦ５８０５、ＭＦ５８０８、ＭＦ５８０９、ＭＦ５８１４、ＭＦ５８１６、ＭＦ５８１７、若しくはＭＦ５８１８からなる群から選択されるＬＧＲ５特異的重鎖可変領域の少なくともＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、又は図３に示されるＭＦ５７９０、ＭＦ５８０３、ＭＦ５８０５、ＭＦ５８０８、ＭＦ５８０９、ＭＦ５８１４、ＭＦ５８１６、ＭＦ５８１７、若しくはＭＦ５８１８からなる群から選択されるＬＧＲ５特異的重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列とは、最大３個、好ましくは、最大２個、好ましくは、最大１個のアミノ酸が異なる重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域を含む。当該可変ドメインは、好ましくは、図３に示されるＭＦ５７９０、ＭＦ５８０３、ＭＦ５８０５、ＭＦ５８０８、ＭＦ５８０９、ＭＦ５８１４、ＭＦ５８１６、ＭＦ５８１７、又はＭＦ５８１８の少なくともＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域を含む。好ましい重鎖可変領域は、ＭＦ５７９０、ＭＦ５８０３、ＭＦ５８１４、ＭＦ５８１６、ＭＦ５８１７、又はＭＦ５８１８である。特に好ましい重鎖可変領域は、ＭＦ５７９０、ＭＦ５８１４、ＭＦ５８１６、及びＭＦ５８１８であり、好ましくは、ＭＦ５８１４、ＭＦ５８１８、及びＭＦ５８１６であり、重鎖可変領域ＭＦ５８１６が特に好ましい。別の好ましい重鎖可変領域は、ＭＦ５８１８である。

重鎖可変領域ＭＦ３７５５を有する１つ以上の可変ドメインを含む抗体又はそれらの１つ以上のＣＤＲは、ＥＧＦＲリガンド応答性がん又は細胞の増殖を阻害するために使用されるときに、より良い有効性を有することが示されている。二重特異性抗体又は多重特異性抗体の文脈において、重鎖可変領域ＭＦ３７５５を有する可変ドメインを含む抗体のアーム又はその１つ以上のＣＤＲは、重鎖可変領域ＭＦ５８１８を有する可変ドメインを含むアーム又はその１つ以上のＣＤＲと良好に結合する。

ＥＧＦＲ又はＬＧＲ５に結合する可変ドメインのＶＨ鎖は、図３に示される配列に対して１つ以上のアミノ酸置換を有することができる。ＶＨ鎖は、好ましくは、図３のＶＨ鎖配列に対して、最大１５個、好ましくは、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、又は１０個、好ましくは、１個、２個、３個、４個又は５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、又はそれらの組み合わせを有する、図３のＥＧＦＲ又はＬＧＲ５ ＶＨのアミノ酸配列を有する。

ＣＤＲ配列は、図中のＣＤＲ配列に関して１つ以上のアミノ酸残基置換を有することができる。かかる１つ以上の置換は、例えば、抗体の結合強度又は安定性を改善するために、好ましくは、最適化目的のために作製される。最適化は、例えば、結果として生じる抗体の安定性及び／又は結合親和性が好ましく試験され、かつ改善されたＥＧＦＲ特異的ＣＤＲ配列又はＬＧＲ５特異的ＣＤＲ配列が好ましく選択された後に、変異誘発手順によって実行される。当業者は、本発明による少なくとも１つの改変されたＣＤＲ配列を含む抗体変異形を生成することができる。例えば、保存的アミノ酸置換が適用され得る。保存的アミノ酸置換の例としては、１つの疎水性残基、例えば、イソロイシン、バリン、ロイシン、又はメチオニンを別の疎水性残基への置換、及び１つの極性残基の別の極性残基への置換、例えば、アルギニンのリジンへの置換、グルタミン酸のアスパラギン酸への置換、又はグルタミンのアスパラギンへの置換が挙げられる。

好ましくは、本明細書に指定されるＶＨ又はＶＬ内の、言及される最大１５個、好ましくは１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個又は１０個、好ましくは、１個、２個、３個、４個又は５個のアミノ酸置換は、好ましくは、保存的アミノ酸置換である。本明細書に指定されるＶＨ又はＶＬにおけるアミノ酸挿入、欠失、及び置換は、好ましくは、ＣＤＲ３領域内に存在しない。言及されるアミノ酸挿入、欠失、及び置換は、好ましくは、ＣＤＲ１及びＣＤＲ２領域内にも存在しない。言及されるアミノ酸挿入、欠失及び置換は、好ましくは、ＦＲ４領域内にも存在しない。

最大１５個、好ましくは、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個又は１０個、好ましくは、１個、２個、３個、４個又は５個のアミノ酸置換は、好ましくは、保存的アミノ酸置換であり、挿入、欠失、置換、又はそれらの組み合わせは、好ましくは、ＶＨ鎖のＣＤＲ３領域内に存在せず、好ましくは、ＶＨ鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２又はＣＤＲ３領域内に存在せず、好ましくは、ＦＲ４領域内に存在しない。

ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する可変ドメイン、及びＬＧＲ５の細胞外部分に結合する可変ドメインを含む抗体は、好ましくは、
－図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ３７５５のアミノ酸配列、又は
－該ＶＨに対して、最大１５個、好ましくは、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個若しくは１０個、好ましくは、１個、２個、３個、４個若しくは５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、若しくはそれらの組み合わせを有する、図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ３７５５のアミノ酸配列を含み、
ＬＧＲ５に結合する可変ドメインのＶＨ鎖は、
－図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ５７９０のアミノ酸配列、又は
－該ＶＨに対して、最大１５個、好ましくは１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個若しくは１０個、好ましくは、１個、２個、３個、４個若しくは５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、若しくはそれらの組み合わせを有する、図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ５７９０のアミノ酸配列を含む。

ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する可変ドメイン、及びＬＧＲ５の細胞外部分に結合する可変ドメインを含む抗体は、好ましくは、
－図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ３７５５のアミノ酸配列、又は
－該ＶＨに対して、最大１５個、好ましくは、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個若しくは１０個、好ましくは、１個、２個、３個、４個若しくは５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、若しくはそれらの組み合わせを有する、図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ３７５５のアミノ酸配列を含み、
ＬＧＲ５に結合する可変ドメインのＶＨ鎖は、
－図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ５８０３のアミノ酸配列、又は
－該ＶＨに対して、最大１５個、好ましくは、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個若しくは１０個、好ましくは、１個、２個、３個、４個若しくは５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、若しくはそれらの組み合わせを有する、図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ５８０３のアミノ酸配列を含む。

ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する可変ドメイン、及びＬＧＲ５の細胞外部分に結合する可変ドメインを含む抗体は、好ましくは、
－図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ３７５５のアミノ酸配列、又は
－該ＶＨに対して、最大１５個、好ましくは、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個若しくは１０個、好ましくは、１個、２個、３個、４個若しくは５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、若しくはそれらの組み合わせを有する、図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ３７５５のアミノ酸配列を含み、
ＬＧＲ５に結合する可変ドメインのＶＨ鎖は、
－図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ５８１４のアミノ酸配列、又は
－該ＶＨに対して、最大１５個、好ましくは、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個若しくは１０個、好ましくは、１個、２個、３個、４個若しくは５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、若しくはそれらの組み合わせを有する、図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ５８１４のアミノ酸配列を含む。

ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する可変ドメイン、及びＬＧＲ５の細胞外部分に結合する可変ドメインを含む抗体は、好ましくは、
－図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ３７５５のアミノ酸配列、又は
－該ＶＨに対して、最大１５個、好ましくは、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個若しくは１０個、好ましくは、１個、２個、３個、４個若しくは５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、若しくはそれらの組み合わせを有する、図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ３７５５のアミノ酸配列を含み、
ＬＧＲ５に結合する可変ドメインのＶＨ鎖は、
－図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ５８１６のアミノ酸配列、又は
－該ＶＨに対して、最大１５個、好ましくは、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個若しくは１０個、好ましくは、１個、２個、３個、４個若しくは５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、若しくはそれらの組み合わせを有する、図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ５８１６のアミノ酸配列を含む。

ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する可変ドメイン、及びＬＧＲ５の細胞外部分に結合する可変ドメインを含む抗体は、好ましくは、
－図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ３７５５のアミノ酸配列、又は
－該ＶＨに対して、最大１５個、好ましくは、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個若しくは１０個、好ましくは、１個、２個、３個、４個若しくは５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、若しくはそれらの組み合わせを有する、図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ３７５５のアミノ酸配列を含み、
ＬＧＲ５に結合する可変ドメインのＶＨ鎖は、
－図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ５８１７のアミノ酸配列、又は
－該ＶＨに対して、最大１５個、好ましくは、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個若しくは１０個、好ましくは、１個、２個、３個、４個若しくは５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、若しくはそれらの組み合わせを有する、図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ５８１７のアミノ酸配列を含む。

ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する可変ドメイン、及びＬＧＲ５の細胞外部分に結合する可変ドメインを含む抗体は、好ましくは、
－図３に示すＶＨ鎖ＭＦ３７５５のアミノ酸配列、又は
－該ＶＨに対して、最大１５個、好ましくは、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個若しくは１０個、好ましくは、１個、２個、３個、４個若しくは５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、若しくはそれらの組み合わせを有する、図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ３７５５のアミノ酸配列を含み、
ＬＧＲ５に結合する可変ドメインのＶＨ鎖は、
－図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ５８１８のアミノ酸配列、又は
－該ＶＨに対して、最大１５個、好ましくは、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個若しくは１０個、好ましくは、１個、２個、３個、４個若しくは５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、若しくはそれらの組み合わせを有する、図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ５８１８のアミノ酸配列を含む。

ＥＧＦＲ又はＬＧＲ５結合を保持する開示されたアミノ酸配列の付加のバリアントは、例えば、再配列されたヒトＩＧＫＶｌ－３９／ＩＧＫＪｌ ＶＬ領域（Ｄｅ Ｋｒｕｉｆ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ．２０１０（１０６）７４１－５０）を含有するファージディスプレイライブラリ、及び以前に記載されているように（例えば、ＷＯ２０１７／０６９６２８）、本明細書に開示されるＥＧＦＲ又はＬＧＲ５ ＶＨ領域のアミノ酸配列にアミノ酸置換を組み込んだＶＨ領域の収集から得ることができる。ＥＧＦＲ又はＬＧＲ５に結合するＦａｂ領域をコードするファージを選択し、フローサイトメトリーによって分析し、抗原結合を保持するアミノ酸置換、挿入、欠失又は付加を有するバリアントを識別するように配列決定することができる。

ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５抗体のＶＨ／ＶＬ ＥＧＦＲ及びＬＧＲ５可変ドメインの軽鎖可変領域は、同じであっても異なっていてもよい。いくつかの実施形態では、ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５抗体のＶＨ／ＶＬ ＥＧＦＲ可変ドメインのＶＬ領域は、ＶＨ／ＶＬ ＬＧＲ５可変ドメインのＶＬ領域と同様である。ある特定の実施形態では、第１及び第２のＶＨ／ＶＬ可変ドメインにおけるＶＬ領域は、同一である。

ある特定の実施形態では、ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５抗体のＶＨ／ＶＬ可変ドメインの一方又は両方の軽鎖可変領域は、共通の軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ／ＶＬ可変ドメインの一方又は両方の共通の軽鎖可変領域は、生殖系列ＩｇＶκ１－３９可変領域Ｖセグメントを含む。ある特定の実施形態において、ＶＨ／ＶＬ可変ドメインの一方又は両方の軽鎖可変領域は、カッパ軽鎖ＶセグメントＩｇＶκ１－３９＊０１を含む。ＩｇＶκ１－３９は、免疫グロブリン可変カッパ１－３９遺伝子の略である。この遺伝子は、免疫グロブリンカッパ可変１－３９、ＩＧＫＶ１３９、ＩＧＫＶ１－３９としても知られている。この遺伝子についての外部Ｉｄは、ＨＧＮＣ：５７４０、Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：２８９３０、Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００２４２３７１である。好適なＶ領域についてのアミノ酸配列が、図４に提供される。Ｖ領域は、５つのＪ領域のうちの１つと組み合わせることができる。好ましいＪ領域は、ｊｋ１及びｊｋ５であり、連結された配列は、ＩＧＫＶ１－３９／ｊｋ１及びＩＧＫＶ１－３９／ｊｋ５と示され、代替名は、ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１又はＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ５＊０１（ｉｍｇｔ．ｏｒｇにおけるＩＭＧＴデータベースワールドワイドウェブによる命名）である。ある特定の実施形態において、一方又は両方のＶＨ／ＶＬ可変ドメインの軽鎖可変領域は、カッパ軽鎖ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１又はＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０５（図４に記載）を含む。

いくつかの実施形態では、ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５二重特異性抗体の一方又は両方のＶＨ／ＶＬ可変ドメインの軽鎖可変領域は、アミノ酸配列ＱＳＩＳＳＹ（図４に記載）を含むＬＣＤＲ１と、アミノ酸配列ＡＡＳ（図４に記載）を含むＬＣＤＲ２と、アミノ酸配列ＱＱＳＹＳＴＰ（図４に記載）（すなわち、ＩＭＧＴによるＩＧＫＶ１－３９のＣＤＲ）を含むＬＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態では、ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５抗体の一方又は両方のＶＨ／ＶＬ可変ドメインの軽鎖可変領域は、アミノ酸配列ＱＳＩＳＳＹを含むＬＣＤＲ１（図４に記載）と、アミノ酸配列ＡＡＳＬＱＳを含むＬＣＤＲ２（図４に記載）と、アミノ酸配列ＱＱＳＹＳＴＰを含むＬＣＤＲ３（図４に記載）とを含む。

いくつかの実施形態では、ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５抗体のＶＨ／ＶＬ可変ドメインの一方又は両方は、図４に記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、好ましくは、少なくとも９５％、より好ましくは、少なくとも９７％、より好ましくは、少なくとも９８％、より好ましくは、少なくとも９９％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５抗体のＶＨ／ＶＬ可変ドメインの一方又は両方は、図４に記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、好ましくは、少なくとも９５％、より好ましくは、少なくとも９７％、より好ましくは、少なくとも９８％、より好ましくは、少なくとも９９％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

例えば、いくつかの実施形態では、ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５抗体のＶＨ／ＶＬ可変ドメインの一方又は両方の可変軽鎖は、図４における配列に関して０～１０個、好ましくは、０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有することができる。いくつかの実施形態では、ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５抗体の一方又は両方のＶＨ／ＶＬ可変ドメインの軽鎖可変領域は、示されるアミノ酸配列に関して、０～９個、０～８個、０～７個、０～６個、０～５個、０～４個、好ましくは、０～３個、好ましくは、０～２個、好ましくは、０～１個、好ましくは、０個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを含む。

他の実施形態では、ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５抗体の一方又は両方のＶＨ／ＶＬ可変ドメインの軽鎖可変領域は、図４に示される配列のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５抗体の両方のＶＨ／ＶＬ可変ドメインは、同一のＶＬ領域を含む。一実施形態では、ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５二重特異性抗体の両方のＶＨ／ＶＬ可変ドメインのＶＬは、図４に記載のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５二重特異性抗体の両方のＶＨ／ＶＬ可変ドメインのＶＬは、図４に記載のアミノ酸配列を含む。

本明細書に記載されるＥＧＦＲ／ＬＧＲ５抗体は、好ましくは、ＥＧＦＲに結合する１つ、及び本明細書に記載されるＬＧＲ５に結合する別のドメインである、２つの可変ドメインを有する二重特異性抗体である。本明細書に開示される方法に使用するためのＥＧＦＲ／ＬＧＲ５二重特異性抗体は、いくつかのフォーマットで提供され得る。多くの異なるフォーマットの二重特異性抗体が、当該技術分野で既知であり、Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ（Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙ，２０１５ Ｊｕｌ；２０（７）：８３８－４７、ＭＡｂｓ，２０１２ Ｍａｒ－Ａｐｒ；４（２）：１８２－９７）により及びＳｐｉｅｓｓ ｅｔ ａｌ．，（Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｆｏｒｍａｔｓ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１５）ｈｔｔｐ：／／ｄｘ．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｍｏｌｉｍｍ．２０１５．０１．００３）においてレビューされており、これらは各々、参照により本明細書に組み込まれる。例えば、２つのＶＨ／ＶＬの組み合わせを有する古典的な抗体ではない二重特異性抗体フォーマットは、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む少なくとも可変ドメインを有する。この可変ドメインは、単鎖Ｆｖ断片、単一体、ＶＨ及び第２の結合活性を提供するＦａｂ断片に連結されてもよい。

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法で使用されるＥＧＦＲ／ＬＧＲ５二重特異性抗体は、概して、ヒトＩｇＧサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）のものである。ある特定の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ１サブクラスのものである。全長ＩｇＧ抗体は、それらの好ましい半減期のため、かつ免疫原性が低い理由で、好ましい。したがって、ある特定の実施形態では、ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５二重特異性抗体は、全長ＩｇＧ分子である。一実施形態では、ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５二重特異性抗体は、全長ＩｇＧ１分子である。

したがって、ある特定の実施形態では、ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５二重特異性抗体は、結晶化可能な断片（Ｆｃ）を含む。ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５二重特異性抗体のＦｃは、好ましくは、ヒト定常領域からなる。ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５二重特異性抗体の定常領域又はＦｃは、天然に存在するヒト抗体の定常領域と１個以上、好ましくは、１０個以下、好ましくは、５個以下のアミノ酸差を含有してもよい。例えば、ある特定の実施形態では、二重特異性抗体の各Ｆａｂアームは、二重特異性抗体の形成を促進し、安定性及び／又は本明細書に記載される他の特徴を促進する修飾を含むＦｃ領域をさらに含んでもよい。

抗体は、典型的には、その抗体をコードする核酸を発現する細胞によって産生される。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に開示される二重特異性ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５抗体は、二重特異性ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５抗体の重鎖及び軽鎖可変領域並びに定常領域をコードする１つ以上の核酸を含む細胞を提供することによって産生される。この細胞は、好ましくは、動物細胞、より好ましくは、哺乳類細胞、より好ましくは、霊長類細胞、最も好ましくは、ヒト細胞である。好適な細胞は、ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５二重特異性抗体を含むことができ、好ましくは、それを産生することができる任意の細胞である。

抗体産生に好適な細胞は、当該技術分野で既知であり、ハイブリドーマ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＮＳ０細胞又はＰＥＲ－Ｃ６細胞を含む。様々な機関及び企業が、例えば、臨床使用のための抗体の大規模な産生のための細胞株を開発している。かかる細胞株の非限定的な例は、ＣＨＯ細胞、ＮＳ０細胞又はＰＥＲ．Ｃ６細胞である。特に好ましい実施形態では、当該細胞は、ヒト細胞である。好ましくは、細胞は、アデノウイルスＥ１領域又はその機能的等価物によって形質転換される。かかる細胞株の好ましい例は、ＰＥＲ．Ｃ６細胞株又はその等価物である。特に好ましい実施形態では、細胞は、ＣＨＯ細胞又はその変異体である。好ましくは、変異体は、抗体の発現のためにグルタミン合成酵素（ＧＳ）ベクター系を使用する。好ましい一実施形態では、細胞は、ＣＨＯ細胞である。

いくつかの実施形態では、細胞は、ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５二重特異性抗体を構成する異なる軽鎖及び重鎖を発現する。ある特定の実施形態では、細胞は、２つの異なる重鎖及び少なくとも１つの軽鎖を発現する。好ましい一実施形態では、細胞は、異なる抗体種の数（異なる重鎖及び軽鎖の組み合わせ）を低減させるために、本明細書に記載の「共通軽鎖」を発現する。例えば、それぞれのＶＨ領域は、再編成されたヒトＩＧＫＶ１３９／ＩＧＫＪ１（ｈｕＶκ１３９）軽鎖と併せて、二重特異性ＩｇＧの産生のための当該技術分野で既知の方法（ＷＯ２０１３／１５７９５４、参照により本明細書に組み込まれる）を使用して発現ベクターにクローニングされ、以前に、２つ以上の重鎖と対合し、それによって、多様な特異性を有する抗体をもたらすことができることが示され、これによって、二重特異性分子の産生が促進される（Ｄｅ Ｋｒｕｉｆ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２００９（３８７）５４８ ５８；ＷＯ２００９／１５７７７１）。

共通の軽鎖及び等量の２つの重鎖を発現する抗体産生細胞は、典型的には、５０％の二重特異性抗体及び２５％の単一特異性抗体（すなわち、同一の重鎖の組み合わせを有する）の各々を産生する。それぞれの単一特異性抗体の産生よりも二重特異性抗体の産生を有利にするために、いくつかの方法が発表されている。このようなことは、典型的には、重鎖の定常領域を、それらがホモ二量体化よりもヘテロ二量体化（すなわち、他の重鎖／軽鎖の組み合わせの重鎖との二量体化）を有利にするように修飾することによって達成される。好ましい実施形態では、本発明の二重特異性抗体は、適合性ヘテロ二量体化ドメインを有する２つの異なる免疫グロブリン重鎖を含む。様々な適合性ヘテロ二量体化ドメインが、当該技術分野において記載されている。適合性ヘテロ二量体化ドメインは、好ましくは、適合性免疫グロブリン重鎖ＣＨ３ヘテロ二量体化ドメインである。当該技術分野では、かかる重鎖のヘテロ二量体化を達成することができる様々な方法が記載されている。

ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５二重特異性抗体を産生するための好ましい一方法が、ＵＳ９，２４８，１８１及びＵＳ９，３５８，２８６号に開示されている。具体的には、本質的に二重特異性全長ＩｇＧ分子のみを産生する好ましい変異は、第１のＣＨ３ドメイン（「ＫＫ変異型」重鎖）におけるアミノ酸置換Ｌ３５１Ｋ及びＴ３６６Ｋ（ＥＵ番号付け）並びに第２のドメイン（「ＤＥ変異型」重鎖）におけるアミノ酸置換Ｌ３５１Ｄ及びＬ３６８Ｅ、又はその逆である。前述のように、ＤＥ変異体及びＫＫ変異体は、優先的に対合して、ヘテロ二量体（いわゆる「ＤＥＫＫ」二重特異性分子）を形成する。ＤＥ変異型重鎖（ＤＥＤＥホモ二量体）又はＫＫ変異型重鎖（ＫＫＫＫホモ二量体）のホモ二量体化は、同一の重鎖間のＣＨ３－ＣＨ３界面における荷電残基間の強い反発に起因してほとんど生じない。

したがって、一実施形態では、ＥＧＦＲに結合する可変ドメインを含む重鎖／軽鎖の組み合わせは、重鎖のＤＥ変異体を含む。本実施形態では、ＬＧＲ５に結合する可変ドメインを含む重鎖／軽鎖の組み合わせは、重鎖のＫＫ変異体を含む。

候補のＥＧＦＲ／ＬＧＲ５ ＩｇＧ二重特異性抗体は、任意の好適なアッセイを使用して結合することについて試験することができる。例えば、ＣＨＯ細胞上の膜発現ＥＧＦＲ又はＬＧＲ５への結合は、フローサイトメトリーによって（ＷＯ２０１７／０６９６２８に以前に記載されているＦＡＣＳ手順によって）評価することができる。一実施形態では、候補のＥＧＦＲ／ＬＧＲ５二重特異性抗体の、ＣＨＯ細胞上のＬＧＲ５への結合は、当該技術分野で既知の標準的な手順に従って実行されるフローサイトメトリーによって実証される。ＣＨＯ細胞への結合は、ＥＧＦＲ及び／又はＬＧＲ５の発現カセットでトランスフェクトされていないＣＨＯ細胞と比較される。候補の二重特異性ＩｇＧ１のＥＧＦＲへの結合は、ＥＧＦＲ発現構築物でトランスフェクトされたＣＨＯ細胞を使用して決定され、ＬＧＲ５単一特異性抗体及びＥＧＦＲ単一特異性抗体、並びに無関係なＩｇＧ１アイソタイプ対照ｍＡｂは、対照（例えば、ＬＧＲ５、及び破傷風毒素（ＴＴ）などの別の抗原に結合する抗体）としてアッセイに含まれる。

標的に対する候補のＥＧＦＲ／ＬＧＲ５二重特異性抗体のＬＧＲ５及びＥＧＦＲ Ｆａｂの親和性は、ＢＩＡｃｏｒｅ Ｔ１００を使用した表面プラズモン共鳴（ ＳＰＲ ）技術によって測定することができる。簡単に述べると、抗ヒトＩｇＧマウスモノクローナル抗体（Ｂｅｃｔｏｎ ａｎｄ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、カタログ番号５５５７８４）を、遊離アミン化学（ＮＨＳ／ＥＤＣ）を使用してＣＭ５センサーチップの表面上に結合させる。次に、ｂｓＡｂが、センサー表面上に捕捉される。続いて、組換え精製抗原ヒトＥＧＦＲ（ Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ、カタログ番号１１８９６－Ｈ０７Ｈ ）及びヒトＬＧＲ５タンパク質を、ある濃度範囲でセンサー表面上を走らせて、オン速度及びオフ速度を測定する。各サイクルの後、センサー表面はＨＣｌのパルスによって再生され、ｂｓＡｂは再び捕捉される。得られたセンサーグラムから、ヒトＬＧＲ５及びＥＧＦＲへの結合にためのオン速度及びオフ速度並びに親和性値が、ＵＳ２０１６／０３６８９８８においてＣＤ３について以前に記載されたＢＩＡｅｖａｌｔｉｏｎソフトウェアを使用して、決定される。

本明細書に開示される抗体は、典型的には、二重特異性全長抗体、好ましくは、ヒトＩｇＧサブクラス、好ましくは、ヒトＩｇＧ１サブクラスである。かかる抗体は、所望に応じて、当該技術分野で既知の技法によって増強することができ、ヒトへのインビボ投与時に好ましい半減期を有し、クローン細胞での共発現時にホモ二量体よりも優先的にヘテロ二量体を形成する修飾された重鎖を提供することができるＣＨ３工学的技術が存在する、優れたＡＤＣＣ特性を有する。

抗体のＡＤＣＣ活性は、抗体の定常領域を修飾することにより、抗体自体が低いＡＤＣＣ活性を有する場合に、改善され得る。抗体のＡＤＣＣ活性を改善する別の方法は、還元されたフコースをもたらすグリコシル化経路と酵素的に干渉することによるものである。ＡＤＣＣを誘発する際に抗体又はエフェクター細胞の有効性を決定するためのいくつかのインビトロ方法が存在する。それらの中には、クロム－５１［Ｃｒ５１］リリースアッセイ、ユウロピウム［Ｅｕ］リリースアッセイ、及び硫黄－３５［Ｓ３５］リリースアッセイが含まれる。通常、ある特定の表面が曝露された抗原を発現する標識標的細胞株は、その抗原に特異的な抗体とともにインキュベートされる。洗浄後、Ｆｃ受容体ＣＤ１６を発現するエフェクター細胞を、抗体標識標的細胞と共インキュベートする。続いて、標的細胞溶解を、シンチレーションカウンター又は分光光度法による細胞内標識のリリースによって測定する。

本明細書で開示される二重特異性抗体は、ＡＤＣＣで増強され得る。二重特異性抗体は、一実施形態では、アフコシル化され得る。二重特異性抗体は、好ましくは、正常なＣＨＯ細胞内で産生される同じ抗体と比較するときに、Ｆｃ領域内のＮ結合炭水化物構造のフコシル化の量の低減を含む。

ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する可変ドメイン、及びＬＧＲ５の細胞外部分に結合する可変ドメインを含む抗体は、１つ以上のさらなる標的に結合することができる１つ以上の付加の可変ドメインをさらに含み得る。さらなる標的は、好ましくは、タンパク質、好ましくは、細胞外部分を含む膜タンパク質である。本明細書で使用される膜タンパク質は、細胞の外膜にあるタンパク質などの細胞膜タンパク質であり、細胞を外界から分離する膜である。膜タンパク質は、細胞外部分を有する。膜タンパク質は、細胞の細胞膜内にある膜貫通領域を含有する場合に、少なくとも細胞上にある。

２つ以上の可変ドメインを有する抗体は、当該技術分野で既知である。例えば、付加の可変ドメインを抗体の定常部分に結合することが可能である。３つ以上の可変ドメインを有する抗体は、好ましくは、参照により本明細書に組み込まれるＰＣＴ／ＮＬ２０１９／０５０１９９に記載される多価多量体抗体である。

一実施形態では、抗体は２つの可変ドメインを含む二重特異性抗体であり、１つの可変ドメインがＥＧＦＲの細胞外部分に結合し、別の可変ドメインがＬＧＲ５の細胞外部分に結合する。可変ドメインは、好ましくは、本明細書に記載される可変ドメインである。

本明細書に記載される抗体の機能部分は、少なくとも、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する可変ドメイン、及び本明細書に記載されるＬＧＲ５の細胞外部分に結合する可変ドメインを含む。したがって、それは、本明細書に記載される抗体の抗原結合部分を含み、典型的には、抗体の可変ドメインを含有する。機能部分の可変ドメインは、単鎖Ｆｖ断片又はいわゆるシングルドメイン抗体断片であり得る。単一ドメイン抗体断片（ｓｄＡｂ）は、単一単量体可変抗体ドメインを有する抗体断片である。全抗体と同様に、この抗体は、特異的抗原に選択的に結合することができる。わずか１２～１５ｋＤａの分子量で、単一ドメイン抗体断片は、２つの重タンパク質鎖及び２つの軽鎖から構成される一般的な抗体（１５０～１６０ｋＤａ）よりもはるかに小さく、Ｆａｂ断片（約５０ｋＤａ、１つの軽鎖及び半分の重鎖）及び単鎖可変断片（約２５ｋＤａ、１つの軽鎖からの１つの可変ドメイン及び１つの重鎖からの１つの可変ドメイン）よりもさらに小さい。単一ドメイン抗体自体は、通常の抗体と比べてあまり小さいものではない（典型的には、９０～１００ｋＤａである）。単一ドメイン抗体断片は、主に、ラクダ科動物に見られる重鎖抗体から操作され得、これらはＶＨＨ断片（Ｎａｎｏｂｏｄｙ（登録商標））と呼ばれる。いくつかの魚も重鎖のみの抗体（ＩｇＮＡＲ、「免疫グロブリン新規抗原受容体」）を有し、これらからＶＮＡＲ断片と呼ばれる単一ドメイン抗体断片を得ることができる。代替アプローチは、ヒト又はマウス由来の一般的な免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）由来の二量体可変ドメインを単量体に分割することである。単一ドメイン抗体の研究のほとんどが、現在、重鎖可変ドメインに基づいているが、軽鎖に由来するナノボディが標的エピトープに特異的に結合することも示されている。抗体部分のかかる可変ドメインの非限定的な例は、ＶＨＨ、ヒトドメイン抗体（ｄＡｂ）、及びユニボディである。好ましい抗体部分又は誘導体は、抗体又はその等価物の少なくとも２つの可変ドメインを有する。かかる可変ドメイン又はその等価物の非限定的な例は、Ｆ（ａｂ）断片及び単鎖Ｆｖ断片である。二重特異性抗体の機能部分は、二重特異性抗体の抗原結合部分、又は結合部分の誘導体及び／若しくは類似体を含む。本明細書で上述されるように、抗体の結合部分は、可変ドメインに包含される。

本明細書に開示される抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体（すなわち、治療用化合物）並びに薬学的に許容される担体も提供される。かかる医薬組成物は、がんの治療において、特に、胃がん、食道がん、又は胃食道接合部がんの治療のために有用である。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される」という用語は、政府の規制機関によって承認されたか、又は米国薬局方若しくは動物、特にヒトでの使用のための別の一般的に認められた薬局方に記載されたものを意味し、生理学的に適合する任意の及びすべての溶媒、塩、分散媒、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤などを含む。「担体」という用語は、化合物が投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤、又はビヒクルを指す。かかる薬学的担体は、石油、動物、植物又は合成由来のもの、例えば、ピーナッツ油、大豆油、鉱物油、ゴマ油、リシノール酸グリセロールポリエチレングリコールリなどを含む、水及び油などの滅菌液体であり得る。水又は生理食塩水及びデキストロース水溶液及びグリセロール水溶液は、特に、注射可能な溶液のために担体として用いられてもよい。非経口投与用の液体組成物は、注射又は連続注入による投与のために製剤化され得る。注射又は注入による投与経路としては、膀胱内、腫瘍内、静脈内、腹腔内、筋肉内、くも膜下腔内、及び皮下が挙げられる。投与経路（例えば、静脈内、皮下、関節内など）に応じて、活性化合物をある材料でコーティングして、化合物を不活性化し得る酸の作用及び他の天然条件から化合物を保護してもよい。

ヒト患者への投与に好適な医薬組成物は、典型的には、非経口投与のために、例えば、液体担体中に、又は静脈内投与のための溶液若しくは懸濁液への再構成に好適に製剤化される。組成物は、投与の容易さ及び投薬量の均一性のために、投薬単位形態で製剤化され得る。また、使用直前に、経口又は非経口投与のいずれかのための液体調製物への変換が意図された固体調製物も含まれる。このような液体形態としては、溶液、懸濁液、及びエマルションが挙げられる。

開示される治療用化合物は、好適な用量、及び好適な経路（例えば、静脈内、腹腔内、筋肉内、くも膜下腔内又は皮下）に従って投与され得る。例えば、単一のボーラスが投与されてもよく、いくつかの分割された用量が経時的に投与されてもよく、又は用量が治療状況の緊急性によって示されるように比例的に低減又は増加されてもよい。一実施形態では、対象に、本明細書に開示される抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体の単回用量が投与される。いくつかの実施形態では、治療用化合物は、治療の経過にわたって繰り返し投与される。例えば、ある特定の実施形態では、複数（例えば、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、又はそれ以上）の用量の治療用化合物が、治療を必要とする対象に投与される。いくつかの実施形態では、治療用化合物の投与は、毎週、隔週、又は毎月行われてもよい。

臨床医は、治療されている患者の状態によって妥当とみなされる好ましい用量を利用してもよい。用量は、疾患の病期などを含むいくつかの因子に依存し得る。かかる因子のうちの１つ以上の存在に基づいて投与されるべき特定の用量を決定することは、当業者の技能の範囲内である。一般に、治療は、化合物の最適用量よりも少ないより小さな用量で開始される。その後、この状況下で最適な効果に達するまで、投薬量は、少量ずつ増加される。便宜上、１日当たりの総投薬量は、必要に応じて、１日中に分割して投与されてもよい。間欠療法（例えば、３週間のうちの１週間又は４週間のうちの３週間）がまた、使用されてもよい。

ある特定の実施形態では、治療用化合物は、０．１、０．３、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。別の実施形態では、治療用化合物は、０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。

好ましい実施形態では、治療用化合物（すなわち、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する可変ドメイン、及びＬＧＲ５の細胞外部分に結合する可変ドメインを含む、抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体）は、対象に１５００ｍｇの用量で提供される。均一な投与量は、準備時間を短縮し、かつ潜在的な用量計算ミスを低減するため、体表面又は体重投与よりもいくつかの利点を提供する。いくつかの実施形態では、治療用化合物は、少なくとも１１００ｍｇの投与量、好ましくは、１１００～２０００ｍｇの投与量、より好ましくは、１１００～１８００ｍｇの投与量で提供される。当業者に理解されるように、この投与量は経時的に投与されてもよい。例えば、投与量は、ＩＶによって、例えば、１～６時間の注入、好ましくは、２～４時間の注入で投与されてもよい。いくつかの実施形態では、治療用化合物は、２週間に１回投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される均一用量は、成人及び／又は少なくとも３５ｋｇの体重の対象における使用に好適である。好ましくは、対象は、胃がん、食道がん、又は胃食道接合部がんに罹患している。

いくつかの実施形態では、前投薬レジメンが使用されてもよい。かかるレジメンは、注入関連反応の可能性又は重症度を低減させるのに有用であり得る。一般に、デクスクロルフェニラミン、ジフェンヒドラミン、又はクロルフェニラミンなどのデキサメタゾン及び／又は抗ヒスタミン剤などのステロイドは、抗体治療の前に（例えば、経口、静脈内）投与される。

本明細書に記載される治療方法は、典型的には、患者のケアを監督する臨床医が、治療方法が有効である、すなわち、患者が治療に反応していると見なす限り、継続される。治療方法が有効であることを示す非限定的なパラメータには、腫瘍細胞の減少、腫瘍細胞増殖の阻害、腫瘍細胞の排除、無増悪生存期間、好適な腫瘍マーカーによる適切な応答（該当する場合）のうちの１つ以上が含まれてもよい。

治療用化合物の投与頻度に関して、当業者であれば、適切な頻度を決定することができるであろう。例えば、臨床医は、治療用化合物を比較的少ない頻度で（例えば、２週間に１回）投与することを決定し、患者によって許容される用量間の期間を徐々に短縮することができる。特許請求の範囲に記載の方法による療法の経過に関連する例示的な期間の例としては、約１週間、２週間、約３週間、約４週間、約５週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、約１１週間、約１２週間、約１３週間、約１４週間、約１５週間、約１６週間、約１７週間、約１８週間、約１９週間、約２０週間、約２１週間、約２２週間、約２２週間、約２３週間、約２４週間、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１３ヶ月、約１４ヶ月、約１５ヶ月、約１６ヶ月、約１７ヶ月、約１８ヶ月、約１９ヶ月、約２０ヶ月、約２１ヶ月、約２２ヶ月、約２３ヶ月、約２４ヶ月、約３０ヶ月、約３年、約４年、約５年、永続的（例えば、維持療法を継続する）が挙げられる。前述の持続時間は、治療の１つ以上のラウンド／サイクルに関連付けられてもよい。

本明細書で提供される治療方法の有効性は、任意の好適な手段を使用して評価され得る。一実施形態では、治療の臨床的有効性は、がん細胞数低減を客観的応答基準として使用して分析される。本明細書に開示される方法に従って治療される患者、例えば、ヒトは、好ましくは、がんの少なくとも１つの兆候における改善を経験する。いくつかの実施形態では、以下、がん細胞数を低減させることができること、がんの再発を予防又は遅延させること、がんに関連する症状のうちの１つ以上をある程度緩和することができることのうちの１つ以上が生じ得る。加えて、Ｔ細胞媒介性標的細胞溶解を決定するためのインビトロアッセイ。いくつかの実施形態では、腫瘍評価は、ＣＴスキャン及び／又はＭＲＩスキャンに基づいており、例えば、ＲＥＣＩＳＴ１．１ガイドライン（固形腫瘍における応答評価基準）（Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１９ Ｅｕｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ４５：２２８－２４７）を参照されたい。かかる評価は、一般に、処置後４～８週間ごとに行われる。

いくつかの実施形態では、腫瘍細胞は、本明細書に記載される治療後には検出されない。いくつかの実施形態では、対象は、部分寛解又は完全寛解である。ある特定の実施形態では、対象は、増加した全生存期間、生存期間中央値、及び／又は無増悪生存期間を有する。

治療用化合物（すなわち、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する可変ドメイン、及びＬＧＲ５の細胞外部分に結合する可変ドメインを含む抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体）は、治療されているがんに対するそれらの特定の有用性のために選択される他の周知の療法（例えば、化学療法又は放射線療法）と併せて使用されてもよい。

化学療法剤の安全かつ効果的な投与のための方法は、当業者に既知である。加えて、それらの投与は、標準的な文献に記載されている。例えば、多くの化学療法剤の投与は、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（ＰＤＲ），ｅ．ｇ．，１９９６ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｍｏｎｔｖａｌｅ，Ｎ．Ｊ．０７６４５－１７４２，ＵＳＡ）に記載されており、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。

化学療法剤及び／又は放射線療法の投与が、治療されている疾患、及びその疾患に対する化学療法剤及び／又は放射線療法の既知の効果に応じて、変化し得ることが、当業者には明らかであろう。また、当業者の知識に従って、治療プロトコル（例えば、投与量及び投与時間）は、患者に対する投与された治療剤の観察された効果を考慮して、及び投与された治療剤に対する疾患の観察された応答を考慮して変えられ得る。

本明細書に開示される化合物及び組成物は、療法として、及び治療処置において有用であり、したがって、薬剤として有用であり、薬剤の調製方法で使用され得る。

本明細書に記載されるＧｅｎｂａｎｋエントリ、特許、及び公開された特許出願、及びウェブサイトを含むすべての文書及び参照文献は、各々、本明細書に記載されたものの全部又は一部と同じ範囲で参照により本明細書に明示的に組み込まれる。

明確さ及び簡潔な説明の目的のために、特徴は、同じ又は別個の実施形態の一部として本明細書に記載されるが、本発明の範囲は、記載される特徴のすべて又はいくつかの組み合わせを有する実施形態を含み得ることが理解されるであろう。

ここで、本発明は、以下の実施例を参照して説明され、これらは例示に過ぎず、本発明を限定することを意図するものではない。本発明は、詳細に説明され、その特定の実施形態を参照しているが、その趣旨及び範囲から逸脱することなく、様々な変更及び修正を行うことができることが当業者には明らかであろう。

本明細書で使用される場合、Ｘが独立して数字０～９である「ＭＦＸＸＸＸ」は、可変ドメインを含むＦａｂを指し、ここで、ＶＨは、図３に示される４桁によって識別されるアミノ酸配列を有する。別段の指示がない限り、可変ドメインの軽鎖可変領域は、典型的には、図４ｂの配列を有する。実施例における軽鎖は、図４ａに示される配列を有する。「ＭＦＸＸＸＸ ＶＨ」は、４桁で識別されるＶＨのアミノ酸配列を指す。ＭＦは、さらに、軽鎖の定常領域と、通常、軽鎖の定常領域と相互作用する重鎖の定常領域と、を含む。重鎖のＶＨ／可変領域は異なり、典型的には、ＣＨ３領域も異なり、重鎖の一方はそのＣＨ３ドメインのＫＫ変異を有し、他方はそのＣＨ３ドメインの相補的ＤＥ変異を有する（参考ＰＣＴ／ＮＬ２０１３／０５０２９４（ＷＯ２０１３／１５７９５４として公開）、並びに図５ｄ及び５ｅを参照されたい）。実施例における二重特異性抗体は、図５に示されるＫＫ／ＤＥ ＣＨ３ヘテロ二量体化ドメイン、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ１ドメインを有するＦｃ尾部、図４ａに示される共通の軽鎖、及びＭＦ番号によって指定されるＶＨを有する。例えば、ＭＦ３７５５×ＭＦ５８１６によって示される二重特異性抗体は、上記の一般的な配列、ＭＦ３７５５の配列を有するＶＨを有する可変ドメイン、及びＭＦ５８１６の配列を有するＶＨを有する可変ドメインを有する。

様々な重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸及び核酸配列を、図３に示す。重鎖可変領域ＭＦ３７５５及びＭＦ５８１６並びに共通の軽鎖を含み、図３に示される他のＬＧＲ５とＥＧＦＲとの組み合わせのうち、アフコシル化からのＡＤＣＣの強化のための修飾を含む二重特異性抗体ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５、ＭＦ３７５５×ＭＦ５８１６が、ＷＯ２０１７／０６９６２８において有効であることが示されている。

二重特異性抗体の生成
二重特異性抗体は、効率的なヘテロ二量体化及び二重特異性抗体の形成を確実にする独自のＣＨ３工学技術を使用して、異なるＶＨドメインを有するＩｇＧをコードする２つのプラスミドの一過性コトランスフェクションによって生成された。共通の軽鎖はまた、同じプラスミド上又は別のプラスミド上のいずれかで同じ細胞内でコトランスフェクションされる。我々の出願（例えば、ＷＯ２０１３／１５７９５４及びＷＯ２０１３／１５７９５３、参照により本明細書に組み込まれる）では、単一細胞から二重特異性抗体を産生するための方法及び手段が開示されており、それにより、単一特異性抗体の形成よりも二重特異性抗体の形成を有利にする手段が提供される。これらの方法も、本発明で有利に用いることができる。具体的には、本質的に二重特異性全長ＩｇＧ分子のみを産生する好ましい変異は、第１のＣＨ３ドメイン（「ＫＫ変異体」重鎖）における３５１位及び３６６位のアミノ酸置換、例えば、Ｌ３５１Ｋ及びＴ３６６Ｋ（ＥＵナンバリングによる付番）、並びに第２のＣＨ３ドメイン（「ＤＥ変異体」重鎖）における３５１位及び３６８位のアミノ酸置換、例えば、Ｌ３５１Ｄ及びＬ３６８Ｅ、又はその逆である（図５ｄ及び５ｅを参照されたい）。負電荷を帯びたＤＥ変異体重鎖及び正電荷を帯びたＫＫ変異体重鎖が優先的に対合して、ヘテロ二量体（いわゆる「ＤＥＫＫ」二重特異性分子）を形成することが、前述の出願で実証された。ＤＥ変異体重鎖（ＤＥ－ＤＥホモ二量体）又はＫＫ変異体重鎖（ＫＫ－ＫＫホモ二量体）のホモ二量体化は、同一重鎖間のＣＨ３－ＣＨ３界面における荷電残基間の強い反発に起因してほとんど生じない。

上述のＬＧＲ５に結合する可変ドメインのＶＨ遺伝子を、正に荷電したＣＨ３ドメインをコードするベクターにクローニングした。ＷＯ２０１５／１３０１７２（参照により本明細書に組み込まれる）に開示されるものなどのＥＧＦＲに結合する可変ドメインのＶＨ遺伝子を、負に荷電したＣＨ３ドメインをコードするベクターにクローニングした。懸濁成長に適応した２９３Ｆフリースタイル細胞を、３．０×１０ｅ６細胞／ｍｌの密度になるまで、シェーカープラトー上のＴ１２５フラスコ内で培養した。細胞を、０．３～０．５×１０ｅ６生細胞／ｍｌの密度で、２４ディープウェルプレートの各ウェル内で播種した。細胞を、異なる抗体をコードする２つのプラスミドの混合物で一過的にトランスフェクトし、独自のベクター系にクローニングした。トランスフェクションから７日後に、細胞上清を回収し、０．２２μＭフィルター（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）を通して濾過した。滅菌した上清を、抗体を精製するまで、４℃で保管した。

ＩｇＧ精製及び定量化
精製を、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーを使用して、フィルタープレートでの滅菌条件下で行った。先ず、培地のｐＨをｐＨ８．０に調整し、続いて、ＩｇＧ含有上清を、プロテインＡセファロースＣＬ－４Ｂビーズ（５０％ｖ／ｖ）（Ｐｉｅｒｃｅ）とともに、振盪プラットフォーム上６００ｒｐｍで、２５℃で２時間インキュベートした。次に、ビーズを、濾過によって回収した。ビーズを、ＰＢＳ ｐＨ７．４で２回洗浄した。次いで、結合したＩｇＧを、０．１Ｍのクエン酸緩衝液でｐＨ３．０で溶出し、溶出液を、Ｔｒｉｓ ｐＨ８．０を使用して直ちに中和した。緩衝液交換を、マルチスクリーンＵｌｔｒａｃｅｌ １０マルチプレート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用した遠心分離によって実行した。試料を、ＰＢＳ ｐＨ７．４中で最終的に回収した。ＩｇＧ濃度を、Ｏｃｔｅｔを使用して測定した。タンパク質試料を、４℃で保管した。

精製したＩｇＧの量を決定するために、抗体の濃度を、標準として総ヒトＩｇＧ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｉ４５０６）を使用して、プロテインＡバイオセンサー（Ｆｏｒｔｅ－Ｂｉｏ、サプライヤーの推奨に従って）を使用したＯｃｔｅｔ分析の手段によって決定した。

以下の二重特異性抗体は、本実施例における使用及び本発明の方法における使用に好適である。ＭＦ３３７０×ＭＦ５７９０、ＭＦ３３７０×５８０３、ＭＦ３３７０×５８０５、ＭＦ３３７０×５８０８、ＭＦ３３７０×５８０９、ＭＦ３３７０×５８１４、ＭＦ３３７０×５８１６、ＭＦ３３７０×５８１７、ＭＦ３３７０×５８１８、ＭＦ３７５５×ＭＦ５７９０、ＭＦ３７５５×５８０３、ＭＦ３７５５×５８０５、ＭＦ３７５５×５８０８、ＭＦ３７５５×５８０９、ＭＦ３７５５×５８１４、ＭＦ３７５５×５８１６、ＭＦ３７５５×５８１７、ＭＦ３７５５×５８１８、ＭＦ４２８０×ＭＦ５７９０、ＭＦ４２８０×５８０３、ＭＦ４２８０×５８０５、ＭＦ４２８０×５８０８、ＭＦ４２８０×５８０９、ＭＦ４２８０×５８１４、ＭＦ４２８０×５８１６、ＭＦ４２８０×５８１７、ＭＦ４２８０×５８１８、ＭＦ４２８９×ＭＦ５７９０、ＭＦ４２８９×５８０３、ＭＦ４２８９×５８０５、ＭＦ４２８９×５８０８、ＭＦ４２８９×５８０９、ＭＦ４２８９×５８１４、ＭＦ４２８９×５８１６、ＭＦ４２８９×５８１７、及びＭＦ４２８９×５８１８。各二重特異性抗体は、それぞれＥＧＦＲ及びＬＧＲ５に結合することができるＭＦ番号によって指定される２つのＶＨを含み、さらに、それぞれ配列番号１３６（図５ｄ）及び配列番号１３８（図５ｅ）に示されるＫＫ／ＤＥ ＣＨ３ヘテロ二量体化ドメイン、配列番号１３４（図５ｃ）に示されるＣＨ２ドメイン、並びに配列番号１３１（図５ａ）に示されるＣＨ１ドメイン、配列番号１２１（図４）に示される共通の軽鎖を有するＦｃテイルを含む。

実施例１様々ながんに対する抗ＥＧＦＲ×抗ＬＧＲ５候補の評価：
マウスモデル選択
Ｃｒｏｗｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ．は、外科的に切除されたヒト原発腫瘍に由来する患者由来異種移植片（ＰＤＸ）モデルのコレクションを開発した（Ｃｒｏｗｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅデータベース、ｈｔｔｐ：／／ｈｕｂａｓｅ．ｃｒｏｗｎｂｉｏ．ｃｏｍ）。ＰＤＸモデルは、臨床的及び分子的に注釈付けされ、それぞれの腫瘍の臨床疫学を忠実に表す。これらのモデルは、免疫不全マウスの側腹部に皮下注射され得る。異なるがんモデルを、ＲＮＡシーケンシング（ＲＮＡｓｅｑ）によって分析されるＥＧＦＲ及びＬＧＲ５の発現について試験した（表１を参照されたい）。高いＥＧＦＲ及びＬＧＲ５発現レベルを示すことが分かった一連の食道がん及び胃がんＰＤＸモデルを選択して、ＭＦ３７５５×ＭＦ５８１６二重特異性抗体の有効性を試験した。食道がんについては、４つのＰＤＸモデルを選択し、胃がんについては、８つのＰＤＸモデルを選択した。がんサブタイプ、既知のドライバー変異、ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５発現、及びランダム化までの時間を含む、ＰＤＸモデルの詳細情報が、（表１）に記載されている。

方法
接種のための新鮮な腫瘍組織を、確立された原発性ヒト腫瘍を有するマウスから採取した。腫瘍断片（直径２～３ｍｍ）を、モデルに応じて、６～８週齢雌ＢＡＬＢ／ｃＮｕｄｅ又はＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスの右上背側側腹部に皮下接種した。腫瘍が１００～１５０ｍｍ^３のサイズに達したとき、マウスをランダム化した。モデル当たり合計６匹のマウス、３匹の対照マウス及び３匹のＭＦ３７５５×ＭＦ５８１６二重特異性抗体治療マウスを登録した。６週間、マウスは、それらの体重に関係なく、２００μｌの注射体積（約２５ｍｇ／ｋｇ／週）で、０．５ｍｇの二重特異性抗体／週を腹腔内に受けた。対照マウスに、ＰＢＳ（２００μＬ）を投与した。６週間の治療期間の後、腫瘍増殖を、さらに３週間監視した。マウスは、人道的ポイントに達した場合、６３日より前に屠殺された。

結果：
試験した８つの胃ＰＤＸモデルから、ＭＦ３７５５×ＭＦ５８１６二重特異性抗体の治療によって、６つのモデルにおいて腫瘍増幅を劇的に低下させた（図６ａ）。これらの８つのモデルから、３つのモデル（ＧＡ０４２９、ＧＡ６８３３及びＧＡ６８９１）は、治療の開始時よりも観察期間の終了時にに、より低い腫瘍体積を示し、胃がんにおける二重特異性抗体の強い腫瘍阻害を示唆した。モデルＧＡ２４３４は、一定の応答を示した。食道ＰＤＸモデルに関しては、試験した４つのモデルすべてが二重特異性抗体治療に応答し、モデルＥＳ２３５６の応答が最も強かった（図６ｂ）。この実施例のＭＦ３７５５×ＭＦ５８１６二重特異性抗体による治療の統計的に有意な（ｐ＜０．０００１）有効性を示す結果が、モデルＥＳ１１０６５で得られた。

実施例２：ＥＡＣ、ＧＡＣ及びＧＥＪＡＣを有する患者についての抗ＥＧＦＲ×抗ＬＧＲ５抗体の用量拡大、及び有効性：
進行固形腫瘍における第１相用量漸増試験
試験デザイン
初回用量漸増部分を用いて第１相非盲検多施設試験を実行して、開始用量を５ｍｇの均一用量としてｍＣＲＣ患者における固形腫瘍についての抗ＥＧＦＲ×抗ＬＧＲ５二重特異性抗体の推奨第２相用量（ＲＰ２Ｄ）を決定した。ＲＰ２Ｄが確立されると、抗体は、ＥＡＣ、ＧＡＣ及びＧＥＪＡＣと診断された患者を含む、試験の拡張部分においてさらに評価される。抗体の安全性、ＰＫ、免疫原性及び予備的抗腫瘍活性が、すべての患者において特徴付けられ、ＥＧＦＲ及びＬＧＲ５状態を含むバイオマーカー分析が実行される。

用量漸増
用量漸増部分では、オキサリプラチン、イリノテカン及びフルオロピリミジン（５－ＦＵ及び／又はカペシタビン）を含む標準的に承認された療法での転移性設定で以前に治療された転移性大腸がん（ｍＣＲＣ）腺がんを有する患者を、抗血管新生、並びにＫＲＡＳ及びＮＲＡＳ野生型ＲＡＳｗｔの抗ＥＧＦＲの有無にかかわらず、治療した。

ＰＫモデルを、予備試験及びＧＬＰカニクイザル毒性試験からの利用可能な二重特異性抗体血清濃度データに基づいて生成した。アロメトリックスケーリングに続いて、このモデルを使用して、ヒトにおける抗体曝露を予測した。抗体の開始用量は、２週間毎に、４週間のサイクルで５ｍｇ（均一用量）のＩＶである。最大１１の用量レベル、５、２０、５０、９０、１５０、２２５、３３５、５００、７５０、１１００及び１５００ｍｇ（均一用量）のレベルを調査する。各患者及び各コホートについての投与用量、用量増量、及び投薬頻度は、患者の安全性、ＰＫ及びＰＤデータに基づいて変化する可能性があるが、用量は、１サイクル当たり４５００ｍｇを超えない。

用量制限毒性（ＤＬＴ）
第１のサイクル（２８日）中に発生し、研究者が抗体治療に関連すると見なした以下の臨床毒性及び／又は臨床検査異常のいずれかは、ＤＬＴと見なされる。
●血液学的毒性：
－７日間以上のグレード４の好中球減少症（好中球絶対数［ＡＮＣ］＜０．５×１０９個／Ｌ）
－グレード３～の発熱性好中球減少症
－グレード４の血小板減少症
－出血エピソードに伴うグレード３の血小板減少症
－その他のグレード４の血液学的毒性
●以下を除くグレード３～４の非血液学的ＡＥ及び臨床検査毒性：
－グレード３～４の点滴関連反応
－最適な治療で２週間以内にグレード２以下に回復するグレード３の皮膚毒性
－最適な治療で３日以内にグレード１以下又はベースラインまで回復するグレード３の下痢、吐き気、及び／又は嘔吐
－４８時間以内に最適な治療で消失するグレード３の電解質異常
－４８時間以下のグレード３～４の肝臓異常
●Ｈｙの法則の定義を満たす任意の肝機能異常。
●次の２回の投与を防ぐ、１５日以上続く任意の薬物関連の毒性。

用量拡大
拡大部では、二重特異性抗体は、ＥＡＣ、ＧＡＣ又はＧＥＪＡＣを有する患者のＲＰ２Ｄで投与される。ＲＰ２Ｄが定義されると、追加の患者をこの用量及びスケジュールで治療して、抗体の安全性、忍容性、ＰＫ及び免疫原性をさらに特徴付け、かつ抗腫瘍活性及びバイオマーカー評価の予備的評価を実施する。治療された悪性腫瘍は、両方の標的（すなわち、ＬＧＲ５及びＥＧＦＲ）を共発現することが知られており、ＥＧＦＲ阻害に対する感受性の事前の指標を有し得る。

ＥＡＣ、ＧＡＣ又はＧＥＪＡＣを有する患者における抗体治療は、予備的な抗腫瘍活性の兆候を条件に、各適応症について１０～２０人の患者を対象に、最大４０人の患者まで拡大する可能性がある。ＲＰ２Ｄの安全性は、安全性モニタリング委員会によって試験の拡大部分中に継続的に評価される。ＤＬＴの発生率が任意のコホートについて所定の閾値３３％を超える場合、このコホートについての登録は一時停止され、安全性、ＰＫ、及びバイオマーカーの完全なレビューが、そのコホートで発生を継続することが安全であるかどうかを判断するために、ＳＭＣによって実行される。その時点で、薬物の全体的な安全性も尋問される。

治験療法及びレジメン
抗ＥＧＦＲ×抗ＬＧＲ５二重特異性抗体は、ＩＶ注入のための透明な液体溶液として製剤化される。ＩＶ注入は、５ｍｇの開始用量（均一用量）、及び１５００ｍｇの推奨される第２相用量（均一用量）で、標準的な注入手順を使用して、２週間ごとに実施される。ＲＰ２Ｄに到達した後、用量エスカレーションを停止した。注入は、サイクル１の間、最低４時間にわたって投与される必要がある。サイクル１後の続く注入は、治験責任医師の裁量により、及びＩＲＲの不在下で、２時間に短縮され得る。

サイクルは、４週間とみなされる。各患者について、最初の抗体注入の注入開始後６時間の観察期間、２回目の注入の４時間の期間、及び少なくとも注入期間に対応するすべての後続の投与の最低２時間の期間が実施された。抗体を、２週間ごとに、４週間サイクルで、２～４時間のＩＶ注入として投与した。その後のサイクルの１日目は、２９日目であったか、又は前のサイクルに関連する任意の有害な影響から回復した後であった。

治療期間
試験治療は、進行性疾患（ＲＥＣＩＳＴ１．による）、許容できない毒性、同意の撤回、患者の非コンプライアンス、治験責任医師の決定（例えば、臨床的悪化）、又は６週間以上連続した抗体中断が確認されるまで、投与される。患者は、最後の抗体注入後、及びすべての関連毒性の回復又は安定化までの少なくとも３０日間の安全性、並びに１２ヶ月間の疾患の進行及び生存状態について追跡される。

有効性評価
腫瘍評価は、治療開始後８週間毎に、ＲＥＣＩＳＴ１．１（Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００９ Ｅｕｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ４５：２２８－２４７）による造影剤を用いたＣＴ／ＭＲＩに基づく。客観的な奏効は、最初の観察から少なくとも４週間後に確認される必要がある。骨スキャンは、ベースライン時に骨転移を有するか、又は研究上の病変の疑いがある患者に対して臨床的に指示されるように実行される。がん胚抗原（ＣＥＡ）を含む循環血液腫瘍マーカーは、スクリーニング時及び各サイクルの１日目に評価される。

Claims (30)

1. 対象におけるがんの治療に使用するための、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する可変ドメイン、及びＬＧＲ５の細胞外部分に結合する可変ドメインを含む、抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体であって、前記使用が、対象に、１５００ｍｇの均一用量の前記抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体を提供することを含む、抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体。
2. 対象における胃がん、食道がん、又は胃食道接合部がんの治療に使用するための、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する可変ドメイン、及びＬＧＲ５の細胞外部分に結合する可変ドメインを含む、抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体。
3. Ｈｅｒ２陰性対象における胃がん、食道がん、又は胃食道接合部がんの治療に使用するための、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する可変ドメイン、及びＬＧＲ５の細胞外部分に結合する可変ドメインを含む、抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体。
4. 前記使用が、前記対象に、１５００ｍｇの均一用量の前記抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体を提供することを含む、請求項２又は３に記載の使用するための抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体。
5. 前記抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体が、静脈内に提供される、先行請求項のいずれか一項に記載の使用するための抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体。
6. 前記がんが、ＴＰ５３、ＭＬＨ１、ＰＩＫ３ＣＡ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＵＧＴ１Ａ、ＵＧＴ１Ａ８、ＢＲＡＦ、ＰＴＥＮ、及びＫＲＡＳから選択される１つ以上の遺伝子における変異を有し、好ましくは、ＴＰ５３、ＭＬＨ１、ＣＤＫＮ２Ａ、ＵＧＴ１Ａ、ＵＧＴ１Ａ８、ＢＲＡＦ、及びＰＴＥＮから選択される１つ以上の遺伝子における変異を有する、先行請求項のいずれか一項に記載の使用するための抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体。
7. 前記がんが、ＴＰ５３ Ｒ１９６Ｔ、ＴＰ５３ Ｒ３４２Ｔ、ＴＰ５３ Ｒ２４８Ｑ、ＭＬＨ１ Ｖ３８４Ｄ、ＰＩＫ３ＣＡ Ｈ１０４７Ｒ、ＣＤＫＮ２Ａ Ｗ１１０Ｔ、ＵＧＴ１Ａ１ Ｇ７１Ｒ、ＵＧＴ１Ａ８ Ｇ７１Ｒ、及びＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃから選択される１つ以上の変異を有する、請求項６に記載の使用するための抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体。
8. 前記抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体の投与が、毎週、隔週、又は毎月である、先行請求項のいずれか一項に記載の使用するための抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体。
9. 前記抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体の投与が、２週間に１回である、先行請求項のいずれか一項に記載の使用するための抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体。
10. 前記がんが、ＴＰ５３をコードする遺伝子における変異を有し、好ましくは、前記変異が、Ｒ１９６Ｔである、請求項６に記載の使用するための抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体。
11. 前記がんが、ＴＰ５３をコードする遺伝子における変異を有し、好ましくは、前記変異が、Ｒ３４２Ｔであり、前記がんが、ＭＬＨ１をコードする遺伝子における変異を有し、好ましくは、前記変異が、Ｖ３８４Ｄである、請求項６に記載の使用するための抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体。
12. 前記がんが、ＴＰ５３をコードする遺伝子における変異を有し、好ましくは、前記変異が、Ｒ２４８Ｑであり、前記がんが、ＰＩＫ３ＣＡをコードする遺伝子における変異を有し、好ましくは、前記変異が、Ｈ１０４７Ｒであり、前記がんが、ＣＤＫＮ２Ａをコードする遺伝子における変異を有し、好ましくは、前記変異が、Ｗ１１０Ｔであり、前記がんが、ＵＧＴ１Ａ１をコードする遺伝子における変異を有し、好ましくは、前記変異が、Ｇ７１Ｒであり、前記がんが、ＵＧＴ１Ａ８をコードする遺伝子における変異を有し、好ましくは、前記変異が、Ｇ７１Ｒである、請求項６に記載の使用するための抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体。
13. 前記がんが、食道がん、好ましくは、食道扁平上皮がん（ＥＳＣＣ）である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の使用するための抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体。
14. 前記がんが、ＵＧＴ１Ａ１、ＵＧＴ１Ａ８、及び／又はＰＩＫ３ＣＡから選択される遺伝子における変異を有する胃がんである、請求項６に記載の使用するための抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体。
15. 前記がんが、ＫＲＡＳをコードする遺伝子における変異を有し、好ましくは、前記変異が、Ｇ１２Ｃであり、前記がんが、ＵＧＴ１Ａ１をコードする遺伝子における変異を有し、好ましくは、前記変異が、Ｇ７１Ｒであり、前記がんが、ＵＧＴ１Ａ８をコードする遺伝子における変異を有し、好ましくは、前記変異が、Ｇ７１Ｒである、請求項６に記載の使用するための抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体。
16. 前記がんが、ＵＧＴ１Ａ１をコードする遺伝子における変異を有し、好ましくは、前記変異が、Ｇ７１Ｒであり、前記がんが、ＵＧＴ１Ａ８をコードする遺伝子における変異を有し、好ましくは、前記変異が、Ｇ７１Ｒである、請求項２に記載の使用するための抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体。
17. 前記がんが、さらに、ＰＩ３ＣＡにおける変異を有し、好ましくは、前記変異が、Ｅ４５Ｋである、請求項１０に記載の使用するための抗体、又はその機能部分、誘導体及び／若しくは類似体。
18. 前記がんが、胃がんである、請求項１～１７のいずれか一項に記載の使用するための抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体。
19. ＥＧＦＲに結合する前記可変ドメインのＶＨ鎖が、図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ３７５５のアミノ酸配列、又は前記ＶＨに対する挿入、欠失、置換、若しくはそれらの組み合わせを含む、最大１５個、好ましくは、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、１個以下、好ましくは、５個、４個、３個、２個、若しくは１個以下のアミノ酸修飾を有する図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ３７５５のアミノ酸配列を含み、ＬＧＲ５に結合する前記可変ドメインのＶＨ鎖が、図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ５８１６のアミノ酸配列、又は前記ＶＨに対する挿入、欠失、置換、若しくはそれらの組み合わせを含む、最大１５個、好ましくは、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、１個以下、好ましくは、５個、４個、３個、２個、若しくは１個以下のアミノ酸修飾を有する図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ５８１６のアミノ酸配列を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の使用するための抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体。
20. ＬＧＲ５に結合する前記可変ドメインが、図１に示されるヒトＬＧＲ５配列のアミノ酸残基２１～１１８内に位置するエピトープに結合する、先行請求項のいずれか一項に記載の使用するための抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体。
21. ヒトＬＧＲ５の４３、４４、４６、６７、９０、及び９１位のアミノ酸残基が、ＬＧＲ５結合可変ドメインのＬＧＲ５への結合に関与している、請求項２０に記載の使用するための抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体。
22. 前記ＬＧＲ５結合可変ドメインが、４３Ａ、４４Ａ、４６Ａ、６７Ａ、９０Ａ、及び９１Ａから選択されるアミノ酸残基変異のうちの１つ以上を含むＬＧＲ５タンパク質により少なく結合する、請求項２０又は２１に記載の使用するための抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体。
23. ＥＧＦＲに結合する前記可変ドメインが、図２に示されるヒトＥＧＦＲ配列のアミノ酸残基４２０～４８０内に位置するエピトープに結合する、先行請求項のいずれか一項に記載の使用するための抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体。
24. ヒトＥＧＦＲのＩ４６２、Ｇ４６５、Ｋ４８９、Ｉ４９１、Ｎ４９３、及びＣ４９９位のアミノ酸残基が、ＥＧＦＲ結合可変ドメインのＥＧＦＲへの結合に関与している、請求項２３に記載の使用するための抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体。
25. 前記ＥＧＦＲ結合可変ドメインが、Ｉ４６２Ａ、Ｇ４６５Ａ、Ｋ４８９Ａ、Ｉ４９１Ａ、Ｎ４９３Ａ、及びＣ４９９Ａから選択されるアミノ酸残基置換のうちの１つ以上を含むＥＧＦＲタンパク質により少なく結合する、請求項２３又は２４に記載の使用するための抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体。
26. 前記抗体が、ＡＤＣＣ増強型である、先行請求項のいずれか一項に記載の使用するための抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体。
27. 前記抗体が、脱フコシル化されている、先行請求項のいずれか一項に記載の使用するための抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体。
28. 胃、食道、又は胃食道接合部を治療する方法であって、それを必要とする対象に、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する可変ドメイン、及びＬＧＲ５の細胞外部分に結合する可変ドメインを含む、抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体を投与することを含む、方法。
29. 前記抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体での前記治療が、Ｈｅｒ２状態について前記対象を診断するステップに続いて行われる、先行請求項のいずれか一項に記載の使用するための抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体。
30. 診断が、Ｈｅｒ２状態についてのＩＳＨ又はＩＨＣ試験によるものである、請求項２９に記載の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体。

Images