JP2023519620A

JP2023519620A - Ｃｄ４７に結合する抗原結合ポリペプチド及び用途

Info

Publication number: JP2023519620A
Application number: JP2022560185A
Authority: JP
Inventors: チウグイ; ホォンヂウ; リィァンリィァンワン; シヤオユインチャン; シヤオファンゾウ; ハァンチャオシェン; ホンジャンシュイ; リンヤン
Original assignee: Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Group Co Ltd
Current assignee: Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Group Co Ltd
Priority date: 2020-04-02
Filing date: 2021-04-01
Publication date: 2023-05-11
Also published as: IL296829A; WO2021197401A1; AU2021250200A1; CN115190887A; WO2021197401A8; TW202144407A; BR112022019795A2; CA3177519A1; EP4130042A1; KR20220163991A

Abstract

ＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分、及び、ポリペプチドをコードする核酸、ベクター、細胞、医薬組成物が提供され、当該ポリペプチドは腫瘍を低減し又は腫瘍細胞の増殖を阻害し、がんを治療し、マクロファージの食作用などを促進することができる。

Description

本発明は、抗原結合ポリペプチドに関し、特に、ＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチド及びその抗原結合部分に関し、さらに、このような抗原結合ポリペプチド及びその抗原結合部分の使用方法に関する。

ＣＤ４７はインテグリン関連タンパク質とも呼ばれ、免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーであり、多くの生物種や組織において幅広く発現される膜貫通型糖タンパク質である。ＣＤ４７は約５０ｋＤで、１つの細胞外Ｉｇ様可変ドメインと、５つの高疎水性の伸長する膜貫通フラグメントと、１つの選択的にスプライシングされた短いカルボキシ末端細胞質尾部とを含む。

阻害性受容体シグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰα）はＣＤ４７のリガンドの１つで、ＳＩＲＰαのＮＨ２末端ＩｇＶ様ドメインにＣＤ４７が結合される。ＳＩＲＰαは、主に、造血幹細胞を含め、マクロファージ、顆粒球、ＤＣ細胞、肥満細胞及びそれらの前駆細胞などの骨髄由来細胞に発現される。例えば、ＣＤ４７はマクロファージの表面のＳＩＲＰαタンパク質に結合することによって、マクロファージの食作用を阻害することができる。関連の研究では、ＣＤ４７によって媒介される食細胞上のＳＩＲＰαとの結合をブロックすることやＣＤ４７ノックアウトマウスにおける発現の喪失により、生細胞と老化していない赤血球の枯渇が起こることが示される。また、貪食準備シグナルが存在する細胞にとっては、ＳＩＲＰαをブロックすると一般には貪食されない標的の取り込みが許される。

プログラム細胞死（ＰＣＤ）と食細胞の枯渇は、損傷した前がん性又は感染細胞を除去するために生物がよく起こす応答である。そのために、このような応答を起こしても生き残る細胞（がん性細胞、慢性感染細胞など）にはＰＣＤと食細胞枯渇を回避する機構がある。ＣＤ４７は様々な問題のある細胞、がん細胞や感染細胞において構成的にアップレギュレートされ、これらの細胞の食作用に対する回避が可能になる。特定の細胞（がん性細胞、慢性感染細胞など）上のＣＤ４７と別の細胞（食細胞）上のＳＩＲＰαとの相互作用をブロックする抗ＣＤ４７化合物は、ＣＤ４７の発現増加を解消して、がん細胞及び／又は感染細胞への食作用を促進することができる。

ＣＤ４７の発現及び／又は活性は多くの疾患と障害に関連している。多くの研究から、ほぼ全ての腫瘍細胞と腫瘍組織にＣＤ４７が高発現されることが判明した。腫瘍細胞の表面に高発現されるＣＤ４７はマクロファージの表面のＳＩＲＰαに結合することにより、「私を食べないでください（ｄｏｎ’ｔｅａｔｍｅ）」シグナルを放出し、腫瘍組織浸潤領域のマクロファージが腫瘍細胞と調和して生存するだけでなく、腫瘍内の血管増殖を促進して、エフェクターＴ細胞の機能遂行を阻害し、腫瘍細胞の増殖と成長を促進する。したがって、ＣＤ４７を標的とする治療が必要である。

本発明では、ＣＤ４７を標的とする治療の解決策として、新規なＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチド及びその抗原結合部分が提供される。

本発明の一態様では、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分が提供され、前記抗原結合ポリペプチドは、
配列番号１、２、３、４、５から選ばれるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、
配列番号６、７、８、９、１０から選ばれるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、
配列番号１１、１２、１３、１４、１５から選ばれるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３と、
配列番号１６、１７、１８、１９、２０から選ばれるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、
配列番号２１、２２、２３、２４、２５から選ばれるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、
配列番号２６、２７、２８、３０、３２から選ばれるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを相補性決定領域として含む。

ここで、配列番号３２に示される配列はＱＱＦＳＸ_２ＳＴＷＴであり、Ｘ_２はＤ又はＥである。

本発明の別の態様では、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分が提供され、前記抗原結合ポリペプチドは、
配列番号１、２、３、４、５又はその保存的に修飾された形態から選ばれるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、
配列番号６、７、８、９、１０又はその保存的に修飾された形態から選ばれるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、
配列番号１１、１２、１３、１４、１５又はその保存的に修飾された形態から選ばれるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３と、
配列番号１６、１７、１８、１９、２０又はその保存的に修飾された形態から選ばれるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、
配列番号２１、２２、２３、２４、２５又はその保存的に修飾された形態から選ばれるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、
配列番号２６、２７、２８、３０、３２又はその保存的に修飾された形態から選ばれるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを相補性決定領域として含む。

本発明の別の態様では、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分が提供され、前記抗原結合ポリペプチドは重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域は配列番号３３、３５、３７、３９、４１、８３、８５、８７から選ばれるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は配列番号３４、３６、３８、４０、４２、８４、８６、８８から選ばれるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

配列番号８３に示される配列は、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＳＲＹＷＩＥＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＥＦＩＰＧＳＤＴＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＸ_３Ｘ_４ＳＴＸ_５ＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＧＬＲＲＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳであり、ここで、Ｘ_３はＤ又はＥであり、Ｘ_４はＩ又はＥであり、Ｘ_５はＳ又はＮである。
配列番号８４に示される配列は、
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＳＳＶＳＳＴＹＬＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＸ_６ＩＹＴＴＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＸ_７Ｘ_８ＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＦＳＸ_２ＳＴＷＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫであり、ここで、Ｘ_６はＬ又はＷであり、Ｘ_７はＤ又はＳであり、Ｘ_８はＦ又はＹであり、Ｘ_２はＤ又はＥである。
配列番号８５に示される配列は、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＸ_９ＷＭＧＷＩＮＴＮＴＧＥＰＴＹＡＱＸ_１０ＬＱＧＲＶＴＭＴＸ_１１ＤＴＳＴＸ_１２ＴＡＹＭＥＬＲＳＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＸ_１３ＲＦＳＨＬＲＧＰＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳであり、ここで、Ｘ_９はＥ又はＫであり、Ｘ_１０はＫ又はＥであり、Ｘ_１１はＬ又はＴであり、Ｘ_１２はＲ又はＳであり、Ｘ_１３はＡ又はＴである。
配列番号８６に示される配列は、
ＤＸ_１４ＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＳＳＱＳＬＶＨＳＮＧＹＴＹＬＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＳＱＳＴＨＶＰＰＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫであり、ここで、Ｘ_１４はＩ又はＡである。
配列番号８７に示される配列は、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＸ_１５ＳＧＦＮＩＥＤＤＹＩＥＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＲＩＤＰＡＮＤＫＴＫＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＸ_１６ＤＴＳＴＸ_１７ＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＸ_１８ＲＰＧＬＲＲＹＹＳＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳであり、ここで、Ｘ_１５はＡ又はＶであり、Ｘ_１６はＲ又はＧであり、Ｘ_１７はＳ又はＮであり、Ｘ_１８はＡ又はＴである。
配列番号８８に示される配列は、
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＥＮＶＶＳＹＶＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＧＡＳＮＲＹＴＧＶＰＳＲＦＸ_１９ＧＳＧＳＸ_２０ＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＧＱＳＹＳＹＰＬＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫであり、ここで、Ｘ_１９はＳ又はＩであり、Ｘ_２０はＳ又はＧである。

本発明の別の態様では、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分が提供され、前記抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分は、
（ａ）１．８９Ｅ－０８又はそれ未満（例えば、１．５３Ｅ－０８又はそれ未満）のＫ_Ｄ値でＣＤ４７に結合すること、
（ｂ）ＣＤ４７とＳＩＲＰαの結合をブロックすること、
（ｃ）マクロファージによって媒介されるＣＤ４７発現細胞への食作用を促進すること、
（ｄ）明らかなＣＤ４＋Ｔ細胞のアポトーシスを誘発しないこと、
（ｅ）実質的な赤血球減少、貧血又は赤血球凝集を引き起こさないこと、
（ｆ）融解温度がＴ≧６２℃で、凝集温度がＴａｇｇ≧６１℃であること、
前記特性の１つ又は複数の組み合わせを示している。

本発明の別の態様では、分離された抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分が提供され、前記抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分と本明細書に係る任意の例示的な抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分はＣＤ４７上の同じエピトープに結合する。

本発明の別の態様では、分離された抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分が提供され、前記抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分は本明細書に係る任意の例示的な抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分と競合してＣＤ４７に結合し、前記競合はＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリー又は表面プラズモン共鳴解析によって測定される。

本明細書において、前記抗原結合部分は、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｄフラグメント、Ｆｖフラグメント、ｄＡｂフラグメント、分離された相補性決定領域、ナノボディから選ばれてもよいが、これらに限定されない。

本発明の別の態様では、本明細書に記載のＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分と、前記抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分に接続又は結合される治療剤とを含む免疫複合体が提供される。

本明細書において、前記抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分はリンカーによって前記治療剤に接続され得る。リンカーは切断可能なものでもよいし又は切断不可能なものでもよい。

本明細書において、前記治療剤は細胞毒性薬、放射性同位体、免疫調節剤から選ばれてもよく、例えば、化学療法剤、免疫抑制剤、免疫刺激剤、代謝拮抗剤、アルキル化剤、抗生物質、抗血管新生剤、抗有糸分裂剤、毒素、アポトーシス剤などである。

本発明の別の態様では、成分Ａと薬学的に許容される担体とを含む組成物が提供され、成分Ａは本明細書に記載のＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチド若しくはその抗原結合部分、又は本明細書に記載の免疫複合体である。

本発明の別の態様では、２Ｂ２、２Ｈ８、３Ｆ１０、１６Ｅ５、１４Ａ９からなる群から選ばれる、分離されたハイブリドーマ細胞株が提供される。

本発明の別の態様では、本明細書に記載のＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分をコードする、分離された核酸が提供される。

本発明の別の態様では、本明細書に記載の分離された核酸を含むベクターが提供される。

本発明の別の態様では、本明細書に記載のベクターを含み又はゲノムに本明細書に記載の分離された核酸が組み込まれている宿主細胞が提供される。好ましくは、前記ベクターは発現ベクターである。

本発明の更なる態様では、本明細書に記載のＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分をコードする核酸の発現に適する条件において本明細書に記載の宿主細胞を培養し、発現された前記抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分を分離することを含む、ＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分の製造方法が提供される。

本発明の更なる態様では、治療有効量の本明細書に記載のＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチド若しくはその抗原結合部分、本明細書に記載の免疫複合体、又は前記組成物を対象者に投与することを含む、対象者において腫瘍を低減し又は腫瘍細胞の増殖を阻害する方法が提供される。

本発明の更なる態様では、治療有効量の本明細書に記載のＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチド若しくはその抗原結合部分、本明細書に記載の免疫複合体、又は前記組成物を対象者に投与することを含む、しかるべき対象者においてがんを治療する方法が提供される。

本発明の更なる態様では、有効量の本明細書に記載のＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチド若しくはその抗原結合部分、本明細書に記載の免疫複合体、又は前記組成物を対象者に投与することを含む、対象者におけるマクロファージの食作用を促進する方法が提供される。

図１は抗ＣＤ４７キメラ抗体の赤血球凝集に対する影響である。同じ行のサンプル（抗体又は対照）では種類が同じで濃度は異なり、同じ列のサンプルでは濃度が同じで種類は異なる。左の方から、各列のサンプルの濃度は順に１００００ｎｇ／ｍＬ、３３３３．３３ｎｇ／ｍＬ、１１１１．１１ｎｇ／ｍＬ、３７０．３７ｎｇ／ｍＬ、１２３．４６ｎｇ／ｍＬ、４１．１５ｎｇ／ｍＬ、１３．７２ｎｇ／ｍＬ、４．５７ｎｇ／ｍＬである。上のほうから、各行のサンプルは順にＸｉ２Ｂ２、Ｘｉ２Ｈ８、Ｘｉ３Ｆ１０、Ｘｉ１６Ｅ５、Ｘｉ１４Ａ９、Ｘｉ１６Ｅ５－２（Ｘｉ１６Ｅ５のコピー）、Ｈｕ５Ｆ９、ＩｇＧ４、ＰＢＳである。図２はいくつかの抗ＣＤ４７ヒト化抗体の赤血球凝集に対する影響である。同じ列では抗体の種類が同じで濃度は異なり、同じ行では抗体の濃度が同じで種類は異なる。上のほうから、各行の抗体の濃度は順に１００００ｎｇ／ｍＬ、３３３３．３３ｎｇ／ｍＬ、１１１１．１１ｎｇ／ｍＬ、３７０．３７ｎｇ／ｍＬ、１２３．４６ｎｇ／ｍＬ、４１．１５ｎｇ／ｍＬ、１３．７２ｎｇ／ｍＬ、４．５７ｎｇ／ｍＬである。左の方から、１～１２列の抗体は順にｈｚ３Ｆ１０－１．１、ｈｚ３Ｆ１０－２．１、ｈｚ３Ｆ１０－３．１、ｈｚ３Ｆ１０－４．１、ｈｚ３Ｆ１０－５．１、ｈｚ３Ｆ１０－６．１、ｈｚ３Ｆ１０－１．２、ｈｚ３Ｆ１０－２．２、ｈｚ３Ｆ１０－３．２、ｈｚ３Ｆ１０－４．２、ｈｚ３Ｆ１０－５．２、ｈｚ３Ｆ１０－６．２である。図３はいくつかの抗ＣＤ４７ヒト化抗体の赤血球凝集に対する影響である。同じ列では抗体の種類が同じで濃度は異なり、同じ行では抗体の濃度が同じで種類は異なる。上のほうから、各行の抗体の濃度は順に１００００ｎｇ／ｍＬ、３３３３．３３ｎｇ／ｍＬ、１１１１．１１ｎｇ／ｍＬ、３７０．３７ｎｇ／ｍＬ、１２３．４６ｎｇ／ｍＬ、４１．１５ｎｇ／ｍＬ、１３．７２ｎｇ／ｍＬ、４．５７ｎｇ／ｍＬである。左の方から、１～８列の抗体は順にｈｚ１６Ｅ５－１．１、ｈｚ１６Ｅ５－３．１、ｈｚ１６Ｅ５－１．２、ｈｚ１６Ｅ５－３．２、ｈｚ１６Ｅ５－１．３、ｈｚ１６Ｅ５－３．３、ｈｚ１４Ａ９－２．３、ｈｚ１４Ａ９－２．４である。図４は抗ＣＤ４７抗体のマウスの生存率に対する影響である。図５は抗ＣＤ４７抗体の単回投与後におけるマウスの体重の経時的変化である。図６は抗ＣＤ４７抗体の単回投与後における異なる時点でのマウスの体重変化率である。図７は抗ＣＤ４７抗体の単回投与後におけるマウスのＲＢＣの経時的変化である。図８は抗ＣＤ４７抗体の単回投与後における異なる時点でのマウスのＲＢＣの変化率である。図９は抗ＣＤ４７抗体の単回投与後におけるマウスのＨＧＢの含有量の経時的変化である。図１０は抗ＣＤ４７抗体の単回投与後における異なる時点でのマウスのＨＧＢの変化率である。図１１はヒト急性骨髄性白血病細胞ＭＯＬＭ－１６細胞マウスモデルにおける抗ＣＤ４７抗体投与後の平均腫瘍体積の経時的変化である。

以下、本願の例示的な実施形態を説明する。ただし当業者は、本願の保護範囲がこれに限定されず、本願の趣旨と構成に基づいて様々修飾、修正又は変更を実施できることを理解でき、これらの修飾、修正又は変更した内容は依然として本願の範囲に含まれる。

「用語」
本明細書で使用される用語「抗原結合ポリペプチド」とは少なくとも１つの抗原結合ドメインを有するポリペプチド及びタンパク質を指し、抗原結合ポリペプチドの例はモノクローナル抗体、多重特異性抗体、融合タンパク質を含むが、それらに限定されない。本明細書で使用される用語、抗原結合ポリペプチドの「抗原結合部分」とは、抗原（例えば、ＣＤ４７タンパク質）に特異的に結合する能力を保っている抗原結合ポリペプチドの１つ又は複数のフラグメントを指す。抗原結合ポリペプチドの抗原結合機能がそのフラグメントによって実現できることが判明している。抗原結合ポリペプチドの「抗原結合部分」には、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなる一価フラグメントであるＦａｂフラグメント、（ｉｉ）重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端には、抗体ヒンジ領域に由来する１つ又は複数のシステインを含むいくつかの残基が追加されていることでＦａｂフラグメントと違う「Ｆａｂ’フラグメント」、（ｉｉｉ）ヒンジ領域のジスルフィド架橋によって接続される２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメントであるＦ（ａｂ’）２フラグメント、（ｉｖ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント、（ｖ）抗体シングルアームのＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖフラグメント、（ｖｉ）ＶＨドメインからなるｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄｅｔａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ３４１：５４４～５４６）、（ｖｉｉ）分離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、（ｖｉｉｉ）単一の可変ドメインの重鎖可変領域と２つの定常ドメインとを含むナノボディが含まれる。また、Ｆｖフラグメントの２つのドメインであるＶＬ、ＶＨは異なる遺伝子によってコードされるが、組換えを利用して合成リンカーによってそれらを接続することにより、単一のタンパク質鎖を得ることができ、ここで、ＶＬ及びＶＨ領域がペアして一価分子が形成される（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）という。例えば、Ｂｉｒｄｅｔａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４２：４２３～４２６、Ｈｕｓｔｏｎｅｔａｌ．，（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＵＳＡ８５：５８７９～５８８３を参照する）。このような単鎖抗体も用語「抗原結合ポリペプチド」には含まれる。本明細書に係る抗原結合部分は完全な抗原結合ポリペプチドと同じようにフラグメントをスクリーニングするなど、当業者に知られる従来の技術で得ることができる。

用語「アイソタイプ」とは重鎖定常領域遺伝子によってコードされる抗体種を指す。本発明のＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチド及びその抗原結合部分は、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類（例えば、チンパンジー、カニクイザル、クモザル、マカク）、ラマ、ヒトを含むが、それらに限定されない任意の生物種から誘導されてもよい。ＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチド及びその抗原結合部分はキメラ抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体であってもよい。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチドはマウスに由来するハイブリドーマ細胞株から産生される抗体である。したがって、いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチドはネズミ抗体である。またいくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチドはキメラ抗体である。いくつかの実施形態において、キメラ抗体はマウス－ヒトキメラ抗体である。またいくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチドはヒト化抗体である。またいくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチドはネズミ抗体から誘導され且つヒト化したものである。

用語「キメラ抗体」は、特定の生物種から誘導された重鎖可変領域の少なくとも一部及び軽鎖可変領域の少なくとも一部と、別の生物種から誘導された定常領域の少なくとも一部とを有する抗体である。例えば、いくつかの実施形態において、キメラ抗体はネズミ可変領域とヒト定常領域とを含む。

「ヒト化抗体」とは、非ヒト抗体から誘導された相補性決定領域（ＣＤＲ）と、ヒト抗体から誘導されたフレームワーク領域と、定常領域とを含む抗体である。例えば、本明細書に係るＣＤ４７に結合するヒト化抗体は１つ又は複数のネズミ抗体から誘導されたＣＤＲと、ヒトフレームワーク領域と、定常領域とを含む。したがって、いくつかの実施形態において、本明細書に係るヒト化抗体と前記抗体のＣＤＲの誘導先であるネズミ抗体はＣＤ４７の同じエピトープに結合する。本明細書は例示的なヒト化抗体を提供する。本明細書に係る重鎖ＣＤＲと軽鎖ＣＤＲとを含む他のＣＤ４７に結合するヒト化抗体又はそのバリアントは任意のヒトフレームワーク配列を用いて産生することができ、その方も本発明に含まれる。いくつかの実施形態において、本発明での使用に適するフレームワーク配列は構造的に本明細書に係るフレームワーク配列に類似するフレームワーク配列を含む。フレームワーク領域において他の修飾を行って本明細書に係る抗体の特性を改良することができる。このようなフレームワークの他の修飾は化学的修飾、免疫原性を低減させ又はＴ細胞エピトープを除去する点突然変異、元の生殖細胞系列配列中の残基への逆突然変異を含む。いくつかの実施形態において、このような修飾は本明細書の例示的な突然変異に対応する修飾を含み、生殖細胞系列配列への逆突然変異を含む。例えば、いくつかの実施形態において、本明細書に係るヒト化抗体のＶＨ及び／又はＶＬのヒトフレームワーク領域で１つ又は複数のアミノ酸が親のネズミ抗体における対応のアミノ酸に逆突然変異される。例えば、ヒト化３Ｆ１０、１４Ａ９及び１６Ｅ５のＶＨとＶＬの場合、前記テンプレートなるヒト抗体のフレームワークアミノ酸のいくつかの位置がマウス３Ｆ１０、１４Ａ９及び１６Ｅ５抗体の対応するアミノ酸配列に逆突然変異される。いくつかの実施形態において、軽鎖可変領域の位置２及び／又は３３及び／又は４８及び／又は６３及び／又は６８及び／又は７１及び／又は７２及び／又は９４のアミノ酸がマウス３Ｆ１０、１４Ａ９又は１６Ｅ５軽鎖可変領域における前記位置で発現された対応のアミノ酸に逆突然変異される。またいくつかの実施形態において、重鎖可変領域の位置２４及び／又は４６及び／又は６３及び／又は７２及び／又は７３及び／又は７４及び／又は７７及び／又は９７のアミノ酸がマウス３Ｆ１０、１４Ａ９又は１６Ｅ５重鎖可変領域における前記位置で発現された対応のアミノ酸に逆突然変異される。いくつかの実施形態において、ヒト化３Ｆ１０抗体は、位置７３のアミノ酸のＡｓｐ（Ｄ）からＧｌｕ（Ｅ）への突然変異、位置７４のアミノ酸のＧｌｕ（Ｅ）からＩｌｅ（Ｉ）への突然変異、位置７７のアミノ酸のＳｅｒ（Ｓ）からＡｓｎ（Ｎ）への突然変異から選ばれる１つ又は複数の部位の突然変異を有する重鎖可変領域を含み、且つヒト化３Ｆ１０抗体は、位置４８のアミノ酸のＬｅｕ（Ｌ）からＴｒｐ（Ｗ）への突然変異、位置７１のアミノ酸のＡｓｐ（Ｄ）からＳｅｒ（Ｓ）への突然変異、位置７２のアミノ酸のＰｈｅ（Ｆ）からＴｙｒ（Ｙ）への突然変異、位置９４のアミノ酸のＡｓｐ（Ｄ）からＧｌｕ（Ｅ）への突然変異から選ばれる１つ又は複数の部位の突然変異を有する軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、ヒト化１４Ａ９抗体は、位置２４のアミノ酸のＡｌａ（Ａ）からＶａｌ（Ｖ）への突然変異、位置７２のアミノ酸のＡｒｇ（Ｒ）からＧｌｙ（Ｇ）への突然変異、位置７７のアミノ酸のＳｅｒ（Ｓ）からＡｓｎ（Ｎ）への突然変異、位置９７のアミノ酸のＡｌａ（Ａ）からＴｈｒ（Ｔ）への突然変異から選ばれる１つ又は複数の部位の突然変異を有する重鎖可変領域を含み、且つヒト化１４Ａ９は、位置６３のアミノ酸のＳｅｒ（Ｓ）からＩｌｅ（Ｉ）への突然変異、位置６８のアミノ酸のＧｌｙ（Ｇ）からＳｅｒ（Ｓ）への突然変異から選ばれる１つ又は複数の部位の突然変異を有する軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、ヒト化１６Ｅ５抗体は、位置４６のアミノ酸のＧｌｕ（Ｅ）からＬｙｓ（Ｋ）への突然変異、位置６３のアミノ酸のＬｙｓ（Ｋ）からＧｌｕ（Ｅ）への突然変異、位置７２のアミノ酸のＴｈｒ（Ｔ）からＬｅｕ（Ｌ）への突然変異、位置７７のアミノ酸のＳｅｒ（Ｓ）からＡｒｇ（Ｒ）への突然変異、位置９７のアミノ酸のＡｌａ（Ａ）からＴｈｒ（Ｔ）への突然変異から選ばれる１つ又は複数の部位の突然変異を有する重鎖可変領域を含み、ヒト化１６Ｅ５抗体は、位置２のアミノ酸のＩｌｅ（Ｉ）からＡｌａ（Ａ）への突然変異、位置３３のアミノ酸のＡｓｎ（Ｎ）からＧｌｎ（Ｑ）への突然変異から選ばれる１つ又は複数の部位の突然変異を有する軽鎖可変領域を含む。特段の説明がない限り、本明細書で突然変異部位の番号は可変領域の最初のアミノ酸から順に数える。本明細書に係るヒト化抗体のフレームワーク領域には抗体の特性改良のために追加の又は任意選択の逆突然変異が行われてもよい。本発明は、ＣＤ４７に結合し且つ本明細書に記載の任意の適切なフレームワーク配列の例示的な修飾に対応するフレームワーク修飾と、他の方式による抗体の特性改良のための他のフレームワーク修飾を有するヒト化抗体をさらに含む。

本明細書で使用される用語「誘導された」は、参照抗体又は他の結合タンパク質に対する分子又はポリペプチドをいう場合に、参照抗体又は他の結合タンパク質と同じエピトープに特異的に結合できる分子又はポリペプチドである。

用語「分離された」とは既に自然環境から分離されている目的化合物（例えば、抗体又は核酸）を指す。

本明細書で使用される用語「ＥＣ_５０」とは、抗体の５０％最大応答の有効濃度である。本明細書で使用される用語「ＩＣ_５０」とは、抗体の５０％最大応答の阻害濃度である。ＥＣ_５０とＩＣ_５０はいずれもＥＬＩＳＡ、ＦＡＣＳ解析又は本分野周知の任意の他の方法で測定することができる。

本明細書で使用される用語「Ｋ_Ｄ」はモル濃度（Ｍ）で示す解離定数である。抗体のＫ_Ｄ値は本分野周知の方法で測定できる。抗体のＫ_Ｄの測定方法として好ましくは表面プラズモン共鳴（ｓｕｒｆａｃｅｐｌａｓｍｏｎｒｅｓｏｎａｎｃｅ）であり、より好ましくはバイオセンサーシステムであり、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅシステムである。

用語「治療」とは統計学的に有意な方法で疾患（例えば、障害）、疾患の症状を治療、治癒、軽減、緩和、変更、修復、改善、改良し若しくは影響を与え、又は症状、合併症、生化学的指標の発生を予防し若しくは遅延させ、又は他の方法で疾患、障害若しくは症状の進行を遅延させ若しくは阻害するために利用する手段を指す。

本明細書で使用される用語「治療有効量」とは対象者に治療的及び／又は予防的な利点を得るために必要な化合物又は組成物の量を指す。

本明細書で使用される用語「対象者」には任意の人間又は非ヒト動物が含まれる。用語「非ヒト動物」は、哺乳動物及び非哺乳動物を含め、全ての脊椎動物を含み、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ニワトリ、両生類、爬虫類などである。好ましくは、本発明にいう対象者はヒトである。特段の説明がない限り、用語「患者」と「対象者」は入れ替えて使用される。

本明細書で使用される「約」は、特定の値に対し当業者が判定した誤差を含む許容可能範囲であり、部分的には当該値の測定方法、即ち測定システムの限界から決定される。例えば、本分野の常識によれば「約」が１倍又は１倍を超える標準偏差以内を表す。又は、「約」は最大±５％の範囲を表し、例えば、示される数値範囲±２％の範囲以内、±１％の範囲以内又は±０．５％の範囲以内で変動する。本明細書又は特許請求の範囲で特定の値が示される場合に、特に説明のない限り、「約」の意味は当該特定の値に許容される誤差範囲以内にあると理解される。本明細書において、特に説明のない限り、ステップパラメータ又は条件で示される値には「約」がつくと見なされる。

用語「同一性（ｉｄｅｎｔｉｔｙ）」は一致性と言い換える。２つの配列のパーセント同一性は配列に共有される同一の位置の数の関数であり（即ち、％同一性＝同一の位置の数／位置の総数×１００％）、なお２つの配列の最適なアラインメントを得るように導入すべきギャップの数と各ギャップの長さを考慮すべきである。次の非限定的な実施例で示されるように、数学的アルゴリズムを利用して配列の比較と２つの配列のパーセント同一性の決定を行うことができる。Ｅ．Ｍｅｙｅｒｓ、Ｗ．Ｍｉｌｌｅｒによるアルゴリズム（Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．，４：１１～１７（１９８８））を利用して２つのアミノ酸配列のパーセント同一性を決定することができ、当該アルゴリズムにはＰＡＭ１２０重み残基表が用いられ、ギャップ長さペナルティが１２で、ギャップペナルティは４であり、既にＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれている。また、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ、Ｗｕｎｓｃｈによるアルゴリズム（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８４～４５３（１９７０））で２つのアミノ酸配列のパーセント同一性を決定することができ、当該アルゴリズムには、Ｂｌｏｓｓｕｍ６２行列又はＰＡＭ２５０行列が用いられ、ギャップの重みが１６、１４、１２、１０、８、６又は４で、長さの重みは１、２、３、４、５又は６であり、既にＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍより利用可能）のＧＡＰプログラムに組み込まれている。

用語「Ｘｎ」と「Ｘａａ」は同等で、不特定のアミノ酸（ＵｎｓｐｅｃｉｆｉｅｄＡｍｉｎｏＡｃｉｄ）を指す。これを使う表現ではその範囲を具体的に定義する。

用語「含む」及び類する表現は「…を含むが、それらに限定されない」と理解され、列挙されている要素、成分又はステップの他に、明記していない要素、成分又はステップを含んでもよいことを意味する。

本明細書において、特に明確な規定のない限り、単数形の用語は複数の指示対象の場合をカバーし、逆の場合も同様である。

本明細書では説明と開示のために、特許、特許出願又は既存の刊行物が援用により全体として組み込まれる。これらの刊行物は本願の出願日前に発表されているため提供できる。これらの書類の開示日に関する声明又はその内容の記載は出願人が知り得た情報に基づくもので、これらの書類の開示日又はその内容が正しいと承諾するものではない。しかも全ての対象国において、本明細書へのこれらの刊行物の援用で、当該刊行物が本分野の周知の常識になると認めるものではない。本発明の各態様を次の部分で詳細に説明する。

「ＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチド及びその抗原結合部分」
本明細書では、用語「ＣＤ４７」「インテグリン関連タンパク質、ＩＡＰ（Ｉｎｔｅｇｒｉｎ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ）」「ＯＡ３」「ＭＥＲ６」が互いに入れ替えて使用される。用語「ヒトＣＤ４７」「ｈＣＤ４７」などは本明細書でヒトＣＤ４７、及びヒトＣＤ４７のバリアント又はアイソタイプを指すように入れ替えて使用される。本明細書で「ＣＤ４７に結合する抗体」「抗ＣＤ４７抗体」は互いに入れ替えて使用される。

本発明では、ＣＤ４７を標的とする治療の新たな解決策として、ＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分が提供される。ヒトＣＤ４７又は／及びカニクイザルＣＤ４７に結合することに加え、本明細書に係る抗原結合ポリペプチドは他にも標的治療で望ましい多くの特徴を示している。具体的には、これらの望ましい特徴は、例えば、１．５３Ｅ－０８又はそれ未満のＫ_Ｄ値でＣＤ４７に結合すること、ＣＤ４７とＳＩＲＰαの結合をブロックすること、マクロファージによって媒介されるＣＤ４７発現細胞への食作用を促進すること、明らかなＣＤ４＋Ｔ細胞のアポトーシスを誘発しないこと、実質的な赤血球減少、貧血又は赤血球凝集を引き起こさないこと、前記抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分の融解温度がＴ≧６２℃で、凝集温度がＴａｇｇ≧６１℃であることなどの少なくとも１つである。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチドはより良い治療効果を示している。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチドは低減された副作用を示している。

本発明の一態様では、特定の配列を含むＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチド及びその抗原結合部分が提供される。

本明細書のいくつかの実施形態において、配列番号１～３２からなる群から選ばれる１つ又は複数のＣＤＲを含むＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分が提供される。

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分は重鎖ＣＤＲ１を含み、前記重鎖ＣＤＲ１は配列番号１、２、３、４、５から選ばれるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８１％の同一性、少なくとも８２％の同一性、少なくとも８３％の同一性、少なくとも８４％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも８６％の同一性、少なくとも８７％の同一性、少なくとも８８％の同一性、少なくとも８９％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分は重鎖ＣＤＲ２を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は配列番号６、７、８、９、１０から選ばれるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８１％の同一性、少なくとも８２％の同一性、少なくとも８３％の同一性、少なくとも８４％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも８６％の同一性、少なくとも８７％の同一性、少なくとも８８％の同一性、少なくとも８９％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分は重鎖ＣＤＲ３を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は配列番号１１、１２、１３、１４、１５から選ばれるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８１％の同一性、少なくとも８２％の同一性、少なくとも８３％の同一性、少なくとも８４％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも８６％の同一性、少なくとも８７％の同一性、少なくとも８８％の同一性、少なくとも８９％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分は軽鎖ＣＤＲ１を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は配列番号１６、１７、１８、１９、２０から選ばれるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８１％の同一性、少なくとも８２％の同一性、少なくとも８３％の同一性、少なくとも８４％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも８６％の同一性、少なくとも８７％の同一性、少なくとも８８％の同一性、少なくとも８９％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分は軽鎖ＣＤＲ２を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は配列番号２１、２２、２３、２４、２５から選ばれるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８１％の同一性、少なくとも８２％の同一性、少なくとも８３％の同一性、少なくとも８４％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも８６％の同一性、少なくとも８７％の同一性、少なくとも８８％の同一性、少なくとも８９％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分は軽鎖ＣＤＲ３を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は配列番号２６、２７、２８、３０、３２から選ばれるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８１％の同一性、少なくとも８２％の同一性、少なくとも８３％の同一性、少なくとも８４％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも８６％の同一性、少なくとも８７％の同一性、少なくとも８８％の同一性、少なくとも８９％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

当業者が理解しているように、本明細書に係る抗原結合ポリペプチドの重鎖ＣＤＲと軽鎖ＣＤＲを独立して選択し又は混合して適合させることにより、本明細書に係る抗原結合ポリペプチドに由来する任意の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３と、任意の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３とを含む抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分を得ることができる。したがって、本発明のいくつかの実施形態において、３つの重鎖ＣＤＲ（重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３）と、３つの軽鎖ＣＤＲ（軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、軽鎖ＣＤＲ３）とを含むＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドが提供される。
重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１、２、３、４、５から選ばれるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８１％の同一性、少なくとも８２％の同一性、少なくとも８３％の同一性、少なくとも８４％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも８６％の同一性、少なくとも８７％の同一性、少なくとも８８％の同一性、少なくとも８９％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
重鎖ＣＤＲ２は、配列番号６、７、８、９、１０から選ばれるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８１％の同一性、少なくとも８２％の同一性、少なくとも８３％の同一性、少なくとも８４％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも８６％の同一性、少なくとも８７％の同一性、少なくとも８８％の同一性、少なくとも８９％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１１、１２、１３、１４、１５から選ばれるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８１％の同一性、少なくとも８２％の同一性、少なくとも８３％の同一性、少なくとも８４％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも８６％の同一性、少なくとも８７％の同一性、少なくとも８８％の同一性、少なくとも８９％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号１６、１７、１８、１９、２０から選ばれるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８１％の同一性、少なくとも８２％の同一性、少なくとも８３％の同一性、少なくとも８４％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも８６％の同一性、少なくとも８７％の同一性、少なくとも８８％の同一性、少なくとも８９％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号２１、２２、２３、２４、２５から選ばれるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８１％の同一性、少なくとも８２％の同一性、少なくとも８３％の同一性、少なくとも８４％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも８６％の同一性、少なくとも８７％の同一性、少なくとも８８％の同一性、少なくとも８９％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号２６、２７、２８、３０、３２から選ばれるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８１％の同一性、少なくとも８２％の同一性、少なくとも８３％の同一性、少なくとも８４％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも８６％の同一性、少なくとも８７％の同一性、少なくとも８８％の同一性、少なくとも８９％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは、配列番号１、２、３、４、５から選ばれるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号６、７、８、９、１０から選ばれるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号１１、１２、１３、１４、１５から選ばれるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３と、配列番号１６、１７、１８、１９、２０から選ばれるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号２１、２２、２３、２４、２５から選ばれるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号２６、２７、２８、３０、３２から選ばれるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを相補性決定領域として含む。

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは重鎖ＣＤＲ１と、重鎖ＣＤＲ２と、重鎖ＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１と、軽鎖ＣＤＲ２と、軽鎖ＣＤＲ３とを含み、前記重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３はそれぞれ配列番号１、６、１１に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８１％の同一性、少なくとも８２％の同一性、少なくとも８３％の同一性、少なくとも８４％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも８６％の同一性、少なくとも８７％の同一性、少なくとも８８％の同一性、少なくとも８９％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、軽鎖ＣＤＲ３はそれぞれ配列番号１６、２１、２６に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８１％の同一性、少なくとも８２％の同一性、少なくとも８３％の同一性、少なくとも８４％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも８６％の同一性、少なくとも８７％の同一性、少なくとも８８％の同一性、少なくとも８９％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３と、配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを相補性決定領域として含む。

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは重鎖ＣＤＲ１と、重鎖ＣＤＲ２と、重鎖ＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１と、軽鎖ＣＤＲ２と、軽鎖ＣＤＲ３とを含み、前記重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３はそれぞれ配列番号２、７、１２に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８１％の同一性、少なくとも８２％の同一性、少なくとも８３％の同一性、少なくとも８４％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも８６％の同一性、少なくとも８７％の同一性、少なくとも８８％の同一性、少なくとも８９％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、軽鎖ＣＤＲ３はそれぞれ配列番号１７、２２、２７に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８１％の同一性、少なくとも８２％の同一性、少なくとも８３％の同一性、少なくとも８４％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも８６％の同一性、少なくとも８７％の同一性、少なくとも８８％の同一性、少なくとも８９％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号１２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３と、配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを相補性決定領域として含む。

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは重鎖ＣＤＲ１と、重鎖ＣＤＲ２と、重鎖ＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１と、軽鎖ＣＤＲ２と、軽鎖ＣＤＲ３とを含み、前記重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３はそれぞれ配列番号３、８、１３に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８１％の同一性、少なくとも８２％の同一性、少なくとも８３％の同一性、少なくとも８４％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも８６％の同一性、少なくとも８７％の同一性、少なくとも８８％の同一性、少なくとも８９％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、軽鎖ＣＤＲ３はそれぞれ配列番号１８、２３、２８に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８１％の同一性、少なくとも８２％の同一性、少なくとも８３％の同一性、少なくとも８４％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも８６％の同一性、少なくとも８７％の同一性、少なくとも８８％の同一性、少なくとも８９％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３と、配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号２３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号２８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを相補性決定領域として含む。

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは重鎖ＣＤＲ１と、重鎖ＣＤＲ２と、重鎖ＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１と、軽鎖ＣＤＲ２と、軽鎖ＣＤＲ３とを含み、前記重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３はそれぞれ配列番号４、９、１４に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８１％の同一性、少なくとも８２％の同一性、少なくとも８３％の同一性、少なくとも８４％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも８６％の同一性、少なくとも８７％の同一性、少なくとも８８％の同一性、少なくとも８９％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、軽鎖ＣＤＲ３はそれぞれ配列番号１９、２４、３２に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８１％の同一性、少なくとも８２％の同一性、少なくとも８３％の同一性、少なくとも８４％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも８６％の同一性、少なくとも８７％の同一性、少なくとも８８％の同一性、少なくとも８９％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３と、配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号２４のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号３２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを相補性決定領域として含む。

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは重鎖ＣＤＲ１と、重鎖ＣＤＲ２と、重鎖ＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１と、軽鎖ＣＤＲ２と、軽鎖ＣＤＲ３とを含み、前記重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３はそれぞれ配列番号５、１０、１５に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８１％の同一性、少なくとも８２％の同一性、少なくとも８３％の同一性、少なくとも８４％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも８６％の同一性、少なくとも８７％の同一性、少なくとも８８％の同一性、少なくとも８９％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、軽鎖ＣＤＲ３はそれぞれ配列番号２０、２５、３０に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８１％の同一性、少なくとも８２％の同一性、少なくとも８３％の同一性、少なくとも８４％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも８６％の同一性、少なくとも８７％の同一性、少なくとも８８％の同一性、少なくとも８９％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは、配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３と、配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号３０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを相補性決定領域として含む。

本発明では、さらに、保存的に修飾された形態の抗原結合ポリペプチド及びその抗原結合部分が提供される。当業者が理解しているように、保存的なアミノ酸置換は類似の構造又は化学的特性（例えば、類似の側鎖）を有する別のアミノ酸で対象アミノ酸を置換するものである。本分野では、保存的な置換の例として、Ｗａｔｓｏｎｅｔａｌ．，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙｏｆｔｈｅＧｅｎｅ，ＴｈｅＢｅｎｇａｍｉｎ／ＣｕｍｍｉｎｇｓＰｕｂｌｉｃａｔｉｏｎＣｏｍｐａｎｙ，４ｔｈｅｄｉｔｉｏｎ（１９８７）において説明されている。

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは、配列番号１、２、３、４、５又はその保存的に修飾された形態から選ばれるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号６、７、８、９、１０又はその保存的に修飾された形態から選ばれるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号１１、１２、１３、１４、１５又はその保存的に修飾された形態から選ばれるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３と、配列番号１６、１７、１８、１９、２０又はその保存的に修飾された形態から選ばれるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号２１、２２、２３、２４、２５又はその保存的に修飾された形態から選ばれるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号２６、２７、２８、３０、３２又はその保存的に修飾された形態から選ばれるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを含む。保存的な修飾は任意の１つ又は複数の軽鎖ＣＤＲ又は重鎖ＣＤＲに存在する。

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは、配列番号３、４、５から選ばれるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号８、９、１０から選ばれるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号１３、１４、１５から選ばれるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３と、配列番号１８、１９、２０から選ばれるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号２３、２４、２５から選ばれるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号２８、３０、３２から選ばれるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを含む。

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは重鎖ＣＤＲ１と、重鎖ＣＤＲ２と、重鎖ＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１と、軽鎖ＣＤＲ２と、軽鎖ＣＤＲ３とを含み、前記重鎖ＣＤＲ１は配列番号１又はその保存的に修飾された形態のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は配列番号６又はその保存的に修飾された形態のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は配列番号１１又はその保存的に修飾された形態のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は配列番号１６又はその保存的に修飾された形態のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は配列番号２１又はその保存的に修飾された形態のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は配列番号２６又はその保存的に修飾された形態のアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは重鎖ＣＤＲ１と、重鎖ＣＤＲ２と、重鎖ＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１と、軽鎖ＣＤＲ２と、軽鎖ＣＤＲ３とを含み、前記重鎖ＣＤＲ１は配列番号２又はその保存的に修飾された形態のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は配列番号７又はその保存的に修飾された形態のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は配列番号１２又はその保存的に修飾された形態のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は配列番号１７又はその保存的に修飾された形態のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は配列番号２２又はその保存的に修飾された形態のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は配列番号２７又はその保存的に修飾された形態のアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは重鎖ＣＤＲ１と、重鎖ＣＤＲ２と、重鎖ＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１と、軽鎖ＣＤＲ２と、軽鎖ＣＤＲ３とを含み、前記重鎖ＣＤＲ１は配列番号３又はその保存的に修飾された形態のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は配列番号８又はその保存的に修飾された形態のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は配列番号１３又はその保存的に修飾された形態のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は配列番号１８又はその保存的に修飾された形態のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は配列番号２３又はその保存的に修飾された形態のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は配列番号２８又はその保存的に修飾された形態のアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは重鎖ＣＤＲ１と、重鎖ＣＤＲ２と、重鎖ＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１と、軽鎖ＣＤＲ２と、軽鎖ＣＤＲ３とを含み、前記重鎖ＣＤＲ１は配列番号４又はその保存的に修飾された形態のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は配列番号９又はその保存的に修飾された形態のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は配列番号１４又はその保存的に修飾された形態のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は配列番号１９又はその保存的に修飾された形態のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は配列番号２４又はその保存的に修飾された形態のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は配列番号３２又はその保存的に修飾された形態のアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは重鎖ＣＤＲ１と、重鎖ＣＤＲ２と、重鎖ＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１と、軽鎖ＣＤＲ２と、軽鎖ＣＤＲ３とを含み、前記重鎖ＣＤＲ１は配列番号５又はその保存的に修飾された形態のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は配列番号１０又はその保存的に修飾された形態のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は配列番号１５又はその保存的に修飾された形態のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は配列番号２０又はその保存的に修飾された形態のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は配列番号２５又はその保存的に修飾された形態のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は配列番号３０又はその保存的に修飾された形態のアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、本明細書に係るＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖及び軽鎖の可変領域はＣＤＲ領域とフレームワーク領域ＦＲ（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４を含む）とを含み、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４の順に可変領域配列を形成している。

そこで、本発明の別の態様では、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分が提供され、前記抗原結合ポリペプチドは重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域は配列番号３３、３５、３７、３９、４１、８３、８５、８７から選ばれるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも８６％の同一性、少なくとも８７％の同一性、少なくとも８８％の同一性、少なくとも８９％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は配列番号３４、３６、３８、４０、４２、８４、８６、８８から選ばれるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも８６％の同一性、少なくとも８７％の同一性、少なくとも８８％の同一性、少なくとも８９％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

配列番号８３に示される配列は、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＳＲＹＷＩＥＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＥＦＩＰＧＳＤＴＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＸ_３Ｘ_４ＳＴＸ_５ＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＧＬＲＲＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳであり、ここで、Ｘ_３はＤ又はＥであり、Ｘ_４はＩ又はＥであり、Ｘ_５はＳ又はＮである。
配列番号８４に示される配列は、
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＳＳＶＳＳＴＹＬＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＸ_６ＩＹＴＴＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＸ_７Ｘ_８ＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＦＳＸ _２ＳＴＷＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫであり、ここで、Ｘ_６はＬ又はＷであり、Ｘ_７はＤ又はＳであり、Ｘ_８はＦ又はＹであり、Ｘ_２はＤ又はＥである。
配列番号８５に示される配列は、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＸ_９ＷＭＧＷＩＮＴＮＴＧＥＰＴＹＡＱＸ_１０ＬＱＧＲＶＴＭＴＸ_１１ＤＴＳＴＸ_１２ＴＡＹＭＥＬＲＳＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＸ_１３ＲＦＳＨＬＲＧＰＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳであり、ここで、Ｘ_９はＥ又はＫであり、Ｘ_１０はＫ又はＥであり、Ｘ_１１はＬ又はＴであり、Ｘ_１２はＲ又はＳであり、Ｘ_１３はＡ又はＴである。
配列番号８６に示される配列は、
ＤＸ_１４ＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＳＳＱＳＬＶＨＳＮＧＹＴＹＬＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＳＱＳＴＨＶＰＰＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫであり、ここで、Ｘ_１４はＩ又はＡである。
配列番号８７に示される配列は、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＸ_１５ＳＧＦＮＩＥＤＤＹＩＥＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＲＩＤＰＡＮＤＫＴＫＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＸ_１６ＤＴＳＴＸ_１７ＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＸ_１８ＲＰＧＬＲＲＹＹＳＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳであり、ここで、Ｘ_１５はＡ又はＶであり、Ｘ_１６はＲ又はＧであり、Ｘ_１７はＳ又はＮであり、Ｘ_１８はＡ又はＴである。
配列番号８８に示される配列は、
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＥＮＶＶＳＹＶＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＧＡＳＮＲＹＴＧＶＰＳＲＦＸ_１９ＧＳＧＳＸ_２０ＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＧＱＳＹＳＹＰＬＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫであり、ここで、Ｘ_１９はＳ又はＩであり、Ｘ_２０はＳ又はＧである。

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域は、配列番号３３、３５、３７、３９、４１、８３、８５、８７から選ばれるアミノ酸配列を含み又は前記配列からなり、前記軽鎖可変領域は、配列番号３４、３６、３８、４０、４２、８４、８６、８８から選ばれるアミノ酸配列を含み又は前記配列からなる。

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域は、配列番号３５、３９、４１、８３、８５、８７から選ばれるアミノ酸配列を含み又は前記配列からなり、前記軽鎖可変領域は、配列番号３６、４０、４２、８４、８６、８８から選ばれるアミノ酸配列を含み又は前記配列からなる。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域は、配列番号７９のアミノ酸配列を含み又は配列番号７９のアミノ酸配列からなり、前記軽鎖可変領域は、配列番号８０のアミノ酸配列を含み又は配列番号８０のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域は、配列番号８１のアミノ酸配列を含み又は配列番号８１のアミノ酸配列からなり、前記軽鎖可変領域は、配列番号８２のアミノ酸配列を含み又は配列番号８２のアミノ酸配列からなる。

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域は、配列番号３３のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも８６％の同一性、少なくとも８７％の同一性、少なくとも８８％の同一性、少なくとも８９％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号３４のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも８６％の同一性、少なくとも８７％の同一性、少なくとも８８％の同一性、少なくとも８９％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、前記ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域は配列番号３３のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は配列番号３４のアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域は、配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも８６％の同一性、少なくとも８７％の同一性、少なくとも８８％の同一性、少なくとも８９％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号３６のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも８６％の同一性、少なくとも８７％の同一性、少なくとも８８％の同一性、少なくとも８９％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、前記ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域は配列番号３５のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は配列番号３６のアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域は、配列番号３７のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも８６％の同一性、少なくとも８７％の同一性、少なくとも８８％の同一性、少なくとも８９％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号３８のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも８６％の同一性、少なくとも８７％の同一性、少なくとも８８％の同一性、少なくとも８９％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本明細書に係るＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域は配列番号３７のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は配列番号３８のアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域は、配列番号３９のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも８６％の同一性、少なくとも８７％の同一性、少なくとも８８％の同一性、少なくとも８９％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号４０のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも８６％の同一性、少なくとも８７％の同一性、少なくとも８８％の同一性、少なくとも８９％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本明細書に係るＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域は配列番号３９のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は配列番号４０のアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域は、配列番号４１のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも８６％の同一性、少なくとも８７％の同一性、少なくとも８８％の同一性、少なくとも８９％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号４２のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも８６％の同一性、少なくとも８７％の同一性、少なくとも８８％の同一性、少なくとも８９％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本明細書に係るＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドで、前記重鎖可変領域は配列番号４１のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は配列番号４２のアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域は、配列番号８３のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも８６％の同一性、少なくとも８７％の同一性、少なくとも８８％の同一性、少なくとも８９％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号８４のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも８６％の同一性、少なくとも８７％の同一性、少なくとも８８％の同一性、少なくとも８９％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域は配列番号８３のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は配列番号８４のアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域は、配列番号８５のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも８６％の同一性、少なくとも８７％の同一性、少なくとも８８％の同一性、少なくとも８９％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号８６のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも８６％の同一性、少なくとも８７％の同一性、少なくとも８８％の同一性、少なくとも８９％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域は配列番号８５のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は配列番号８６のアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域は、配列番号８７のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも８６％の同一性、少なくとも８７％の同一性、少なくとも８８％の同一性、少なくとも８９％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号８８のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも８６％の同一性、少なくとも８７％の同一性、少なくとも８８％の同一性、少なくとも８９％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域は配列番号８７のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は配列番号８８のアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、本明細書に記載の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域には、本明細書に記載の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３の配列特徴が含まれる。

いくつかの実施形態において、本明細書に係るＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは重鎖と軽鎖とを含み、重鎖及び軽鎖は本明細書に記載の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、さらに定常領域を含む。いくつかの実施形態において、定常領域はヒト化したものである。いくつかの実施形態において、定常領域及び可変領域のフレームワーク領域ＦＲは全てヒト化したものである。キメラ抗体（例えば、ヒト化の定常領域及び非ヒト可変領域）又はヒト化抗体（例えば、ヒト化の定常領域及びＦＲ領域）を構築することにより免疫原性を低減させる。

いくつかの実施形態において、抗原結合ポリペプチドの軽鎖定常領域はヒトκ鎖定常領域である。いくつかの実施形態において、抗原結合ポリペプチドの軽鎖定常領域はヒトλ鎖定常領域である。

抗原結合ポリペプチドの重鎖定常領域は任意のタイプの定常領域であってもよく、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、ＩｇＥであり、且つ任意のアイソタイプであってもよく、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４である。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドはＩｇＧ１アイソタイプである。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドはＩｇＧ４アイソタイプである。

いくつかの実施形態において、抗原結合ポリペプチドは修飾された定常領域を含む。いくつかの実施形態において、鎖交換を回避し又は減少させるためにヒトＩｇＧ４定常領域内のヒンジ領域を修飾し、例えば、ＩｇＧ４型抗体はＥＵ番号で特定したＳｅｒ２２８Ｐｒｏ（Ｓ２２８Ｐ）突然変異を有する。

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含むキメラ抗体であり、前記重鎖可変領域は、配列番号３３、３５、３７、３９、４１から選ばれるアミノ酸配列を含み又は前記配列からなり、前記軽鎖可変領域は、配列番号３４、３６、３８、４０、４２から選ばれるアミノ酸配列を含み又は前記配列からなる。

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは重鎖と軽鎖とを含むキメラ抗体であり、前記重鎖は、配列番号８９、９３、９７、１０１、１０５から選ばれるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、前記軽鎖は、配列番号９１、９５、９９、１０３又は１０７から選ばれるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。一実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドはキメラ抗体であり、配列番号８９に示される重鎖と配列番号９１に示される軽鎖とを含む。一実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドはキメラ抗体であり、配列番号９３に示される重鎖と配列番号９５に示される軽鎖とを含む。一実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドはキメラ抗体であり、配列番号９７に示される重鎖と配列番号９９に示される軽鎖とを含む。一実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドはキメラ抗体であり、配列番号１０１に示される重鎖と配列番号１０３に示される軽鎖とを含む。一実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドはキメラ抗体であり、配列番号１０５に示される重鎖と配列番号１０７に示される軽鎖とを含む。

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含むヒト化抗体であり、前記重鎖可変領域は、配列番号８３、８５、８７から選ばれるアミノ酸配列を含み又は前記配列からなり、前記軽鎖可変領域は、配列番号８４、８６、８８から選ばれるアミノ酸配列を含み又は前記配列からなる。

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドはヒト化抗体であり、前記重鎖は、配列番号１０９、１１３、１１７、１２１、１２５、１２９、１３３、１３７、１４１、１４５、１４９、１５３、１５７、１６１、１６５、１６９、１７３、１７７、１８１、１８５から選ばれるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、前記軽鎖は、配列番号１１１、１１５、１１９、１２３、１２７、１３１、１３５、１３９、１４３、１４７、１５１、１５５、１５９、１６３、１６７、１７１、１７５、１７９、１８３、１８７から選ばれるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。一実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは、配列番号１０９に示される重鎖と配列番号１１１に示される軽鎖とを含むヒト化抗体である。一実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは、配列番号１１３に示される重鎖と配列番号１１５に示される軽鎖とを含むヒト化抗体である。一実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは、配列番号１１７に示される重鎖と配列番号１１９に示される軽鎖とを含むヒト化抗体である。一実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは、配列番号１２１に示される重鎖と配列番号１２３に示される軽鎖とを含むヒト化抗体である。一実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは、配列番号１２５に示される重鎖と配列番号１２７に示される軽鎖とを含むヒト化抗体である。一実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは、配列番号１２９に示される重鎖と配列番号１３１に示される軽鎖とを含むヒト化抗体である。一実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは、配列番号１３３に示される重鎖と配列番号１３５に示される軽鎖とを含むヒト化抗体である。一実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは、配列番号１３７に示される重鎖と配列番号１３９に示される軽鎖とを含むヒト化抗体である。一実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは、配列番号１４１に示される重鎖と配列番号１４３に示される軽鎖とを含むヒト化抗体である。一実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは、配列番号１４５に示される重鎖と配列番号１４７に示される軽鎖とを含むヒト化抗体である。一実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは、配列番号１４９に示される重鎖と配列番号１５１に示される軽鎖とを含むヒト化抗体である。一実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは、配列番号１５３に示される重鎖と配列番号１５５に示される軽鎖とを含むヒト化抗体である。一実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは、配列番号１５７に示される重鎖と配列番号１５９に示される軽鎖とを含むヒト化抗体である。一実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは、配列番号１６１に示される重鎖と配列番号１６３に示される軽鎖とを含むヒト化抗体である。一実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは、配列番号１６５に示される重鎖と配列番号１６７に示される軽鎖とを含むヒト化抗体である。一実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは、配列番号１６９に示される重鎖と配列番号１７１に示される軽鎖とを含むヒト化抗体である。一実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは、配列番号１７３に示される重鎖と配列番号１７５に示される軽鎖とを含むヒト化抗体である。一実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは、配列番号１７７に示される重鎖と配列番号１７９に示される軽鎖とを含むヒト化抗体である。一実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは、配列番号１８１に示される重鎖と配列番号１８３に示される軽鎖とを含むヒト化抗体である。一実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは、配列番号１８５に示される重鎖と配列番号１８７に示される軽鎖とを含むヒト化抗体である。

一実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドは重鎖と軽鎖とを含み、前記重鎖は、配列番号９３、１０１、１０５、１０９、１１３、１１７、１２１、１２５、１２９、１３３、１３７、１４１、１４５、１４９、１５３、１５７、１６１、１６５、１６９、１７３、１７７、１８１、１８５から選ばれるアミノ酸配列を含み又は前記配列からなり、前記軽鎖は、配列番号９５、１０３、１０７、１１１、１１５、１１９、１２３、１２７、１３１、１３５、１３９、１４３、１４７、１５１、１５５、１５９、１６３、１６７、１７１、１７５、１７９、１８３、１８７から選ばれるアミノ酸配列を含み又は前記配列からなる。

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチド又は／及びその抗原結合部分は１．５３Ｅ－０８Ｍ又はそれ未満のＫ_Ｄ値でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、前記抗原結合ポリペプチド又は／及びその抗原結合部分はヒトＣＤ４７に結合する。またいくつかの実施形態において、前記抗原結合ポリペプチド又は／及びその抗原結合部分はカニクイザルＣＤ４７に結合する。またいくつかの実施形態において、前記抗原結合ポリペプチド又は／及びその抗原結合部分はヒトＣＤ４７及びカニクイザルＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、前記抗原結合ポリペプチド又は／及びその抗原結合部分は、ヒトＣＤ４７に対し、約１Ｅ－１２Ｍ～約１Ｅ－０５Ｍ、約１Ｅ－１２Ｍ～約１．８９Ｅ－０６Ｍ、約１Ｅ－１２Ｍ～約１．８９Ｅ－０７Ｍ、約１Ｅ－１１Ｍ～約１．８９Ｅ－０７Ｍ、約９．４６Ｅ－１０Ｍ～約１．８９Ｅ－０７Ｍ、約９．４６Ｅ－１０Ｍ～約１．８９Ｅ－０８Ｍ、約２．０４Ｅ－１０Ｍ～約１．５３Ｅ－０７Ｍ、又は約２．０４Ｅ－１０Ｍ～約１．８９Ｅ－０８Ｍの範囲内の結合親和性（Ｋ_Ｄ）を有する。いくつかの実施形態において、前記抗原結合ポリペプチド又は／及びその抗原結合部分は、ヒトＣＤ４７に対し、約１Ｅ－０５Ｍ若しくはそれ未満、約１．８９Ｅ－０６Ｍ若しくはそれ未満、約１．８９Ｅ－０７Ｍ若しくはそれ未満、約１．８９Ｅ－０８Ｍ若しくはそれ未満、約１．５３Ｅ－０８Ｍ若しくはそれ未満、約９．３１Ｅ－０８Ｍ若しくはそれ未満、約９．３１Ｅ－０９Ｍ若しくはそれ未満、約８．５５Ｅ－０９Ｍ若しくはそれ未満、約２．３５Ｅ－０９Ｍ若しくはそれ未満、又は約２．０４Ｅ－０１０Ｍ若しくはそれ未満の結合親和性（Ｋ_Ｄ）を有する。いくつかの実施形態において、前記抗原結合ポリペプチド又は／及びその抗原結合部分は、ヒトＣＤ４７に対し、約７．４８Ｅ－０９Ｍ、約３．５０Ｅ－１０Ｍ、約７．６７Ｅ－１０Ｍ、約９．０６Ｅ－０９Ｍ、約２．３５Ｅ－０９Ｍ、約９．４６Ｅ－１０Ｍ、約８．３６Ｅ－１０Ｍ、約１．５３Ｅ－０９Ｍ、約１．４２Ｅ－０９Ｍ、約９．６０Ｅ－１０Ｍ、約５．９２Ｅ－１０Ｍ、約９．０４Ｅ－１０Ｍ、約７．７９Ｅ－１０Ｍ、約１．１５Ｅ－０９Ｍ、約１．３４Ｅ－０９Ｍ、約８．９６Ｅ－１０Ｍ、約７．６５Ｅ－１０Ｍ、約１．８９Ｅ－０８Ｍ、約６．２８Ｅ－０９Ｍ、約９．３１Ｅ－０９Ｍ、約１．７１Ｅ－０８Ｍ、約１．５３Ｅ－０８Ｍ、約７．１３Ｅ－０９Ｍ、約２．０４Ｅ－１０Ｍ、又は約８．５５Ｅ－０９Ｍの結合親和性（Ｋ_Ｄ）を有する。いくつかの実施形態において、Ｂｉａｃｏｒｅにより本明細書に係るＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチド及びその抗原結合部分の結合親和性Ｋ_Ｄを測定する。

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチド又は／及びその抗原結合部分は、ヒトＣＤ４７に対し、約１ｎｇ／ｍＬ～約２０００ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１５００ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１１０６ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約６９９ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約３４０ｎｇ／ｍＬ、約３０ｎｇ／ｍＬ～約３４０ｎｇ／ｍＬ、約５０ｎｇ／ｍＬ～約３４０ｎｇ／ｍＬ、又は約１００ｎｇ／ｍＬ～約３４０ｎｇ／ｍＬの結合ＥＣ_５０を有する。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチド又は／及びその抗原結合部分は、ヒトＣＤ４７に対し、約２０００ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、約１５００ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、約１１０６ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、約６９９ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、又は約３４０ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満の結合ＥＣ_５０を有する。いくつかの実施形態において、ＥＬＩＳＡ又はＦＡＣＳにより本明細書に係るＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチド及びその抗原結合部分のＥＣ_５０を測定する。

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチド又は／及びその抗原結合部分はＣＤ４７とＳＩＲＰαの結合をブロックする。シグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰα）はＣＤ４７に結合するリガンドの１つで、ＳＩＲＰαがマクロファージ、樹状細胞などの造血細胞において発現される。ＣＤ４７とマクロファージ上のＳＩＲＰαの相互作用により、「私を食べないでください」シグナルがマクロファージに送信され、治療に利用する場合に、ＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分でＳＩＲＰαとＣＤ４７の相互作用をブロックすると宿主免疫系ががん細胞を取り込んで除去することが促進される。したがって、ＣＤ４７とＳＩＲＰαの相互作用をブロックしてマクロファージにＣＤ４７発現腫瘍細胞を貪食させるのはいくつかのＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチドの重要な機能的特徴である。いくつかの実施形態において、Ｊｕｒｋａｔ細胞とフローサイトメトリーを用いて測定したところ、前記抗原結合ポリペプチド（例えば、キメラ抗体Ｘｉ２Ｂ２、Ｘｉ２Ｈ８、Ｘｉ３Ｆ１０、Ｘｉ１６Ｅ５、Ｘｉ１４Ａ９）又は／及びその抗原結合部分によるブロックを示すＩＣ_５０は約３５８．５ｎｇ／ｍＬ～約２６９６６ｎｇ／ｍＬ、約３５８．５ｎｇ／ｍＬ～約４８６１ｎｇ／ｍＬ、約３５８．５ｎｇ／ｍＬ～約６３１．２ｎｇ／ｍＬ、又は約３５８．５ｎｇ／ｍＬ～約１２８３ｎｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態において、前記抗原結合ポリペプチド又は／及びその抗原結合部分によるブロックを示すＩＣ_５０は約２６９６６ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、約１５０００ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、約１００００ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、約８０００ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、約６０００ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、約４８６１ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、約３０００ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、約２５００ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、約２０００ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、約１５００ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、約１２８３ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、約１０００ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、約８００ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、約５００ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、又は約３５８．５ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満である。

いくつかの実施形態において、ＥＬＩＳＡ法で解析したところ、ＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチド（例えば、キメラ抗体Ｘｉ２Ｂ２、Ｘｉ２Ｈ８、Ｘｉ３Ｆ１０又はそのヒト化抗体、Ｘｉ１６Ｅ５又はそのヒト化抗体、Ｘｉ１４Ａ９又はそのヒト化抗体など）又は／及びその抗原結合部分によるブロックを示すＩＣ_５０は約４．６８２ｎｇ／ｍＬ～約１５２４６ｎｇ／ｍＬ、約６２１．１ｎｇ／ｍＬ～約１５２４６ｎｇ／ｍＬ、約６２１．１ｎｇ／ｍＬ～約７９１０ｎｇ／ｍＬ、約６２１．１ｎｇ／ｍＬ～約２９３９ｎｇ／ｍＬ、約６２１．１ｎｇ／ｍＬ～約２５００ｎｇ／ｍＬ、約６２１．１ｎｇ／ｍＬ～約２０５１ｎｇ／ｍＬ、約６２１．１ｎｇ／ｍＬ～約１７３８ｎｇ／ｍＬ、約６２１．１ｎｇ／ｍＬ～約１５００ｎｇ／ｍＬ、約６２１．１ｎｇ／ｍＬ～約１４００ｎｇ／ｍＬ、約６２１．１ｎｇ／ｍＬ～約１３００ｎｇ／ｍＬ、約６２１．１ｎｇ／ｍＬ～約１２００ｎｇ／ｍＬ、約６２１．１ｎｇ／ｍＬ～約１１００ｎｇ／ｍＬ、約６２１．１ｎｇ／ｍＬ～約１０００ｎｇ／ｍＬ、約６２１．１ｎｇ／ｍＬ～約９００ｎｇ／ｍＬ、約６２１．１ｎｇ／ｍＬ～約８００ｎｇ／ｍＬ、又は約６２１．１ｎｇ／ｍＬ～約７０３．２ｎｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態において、ＥＬＩＳＡ法で解析したところ、前記抗原結合ポリペプチド又は／及びその抗原結合部分によるブロックを示すＩＣ_５０は約１５２４６ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、約７９１０ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、約２９３９ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、約２５００ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、約２０５１ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、約１７３８ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、約１５００ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、約１４００ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、約１３００ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、約１２００ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、約１１００ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、約１０００ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、約９００ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、約８００ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、約７０３．２ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、約６２１．１ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、約４５０ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、約３５０ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、約２５０ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、約１５０ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、約１００ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、約５０ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、約４０ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、約３０ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、約２０ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、約１０ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満、又は約４．６８２ｎｇ／ｍＬ若しくはそれ未満である。

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチド又は／及びその抗原結合部分はマクロファージによって媒介されるＣＤ４７発現細胞への食作用を促進する。前述したとおり、ＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチドがＳＩＲＰαとＣＤ４７の結合をブロックすることによりマクロファージのがん細胞（例えば、ＨＬ６０細胞など）などのＣＤ４７発現細胞に対する食作用を促進する。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチドの濃度が約１μｇ／ｍＬ～約１０μｇ／ｍＬである場合に、マクロファージの貪食率は約３．５％～約６５．７％、約１１．５％～約６５．７％、約２８．８％～約６５．７％、又は約４４．６７％～約６５．７％である。いくつかの実施形態において、抗原結合ポリペプチドの濃度が約１μｇ／ｍＬ～約１０μｇ／ｍＬである場合に、マクロファージの貪食率は約１．３４％～約８１．６６％、約２％～約８１．６６％、約１１．９５％～約８１．６６％、約２４．１９％～約８１．６６％、又は約７１．４８％～約８１．６６％である。

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチド又は／及びその抗原結合部分は明らかなＣＤ４＋Ｔ細胞のアポトーシスを誘発しない。いくつかの実施形態において、フローサイトメトリーを用いてアポトーシスを測定する。本明細書で明らかなアポトーシスというのは許容範囲内（例えば、対象者に影響のない又はコントロール可能な範囲内）にあり又は陰性対照と比べて統計的に有意な差がない（Ｐ≦０．０５）ことを指し、例えば、いくつかの実施形態において、陰性対照ＩｇＧと比べて有意差がない。

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチド又は／及びその抗原結合部分は、約６２℃若しくはそれ以上、約６３℃若しくはそれ以上、約６４℃若しくはそれ以上、約６５℃若しくはそれ以上、約６６℃若しくはそれ以上、約６７℃若しくはそれ以上、約６８℃若しくはそれ以上、約６９℃若しくはそれ以上、又は約７０℃若しくはそれ以上のＴｍ（融解温度）を有する。いくつかの実施形態において、前記抗体又は／及びそのフラグメントは、約６１℃若しくはそれ以上、約６２℃若しくはそれ以上、約６３℃若しくはそれ以上、約６４℃若しくはそれ以上、約６５℃若しくはそれ以上、約６６℃若しくはそれ以上、約６７℃若しくはそれ以上、約６８℃若しくはそれ以上、約６９℃若しくはそれ以上、約７０℃若しくはそれ以上、約７１℃若しくはそれ以上、約７２℃若しくはそれ以上、又は約７３℃若しくはそれ以上のＴａｇｇ（凝集温度）を有する。いくつかの実施形態において、前記抗原結合ポリペプチド又は／及びその抗原結合部分のＴｍは、約６２℃～約７５℃、約６３℃～約７０．６℃、約６４℃～約７０．６℃、約６５℃～約７０．６℃、約６７℃～約７０．６℃、又は約６８℃～約７０．６℃である。いくつかの実施形態において、前記抗体又は／及びそのフラグメントのＴａｇｇは、約６０℃～約７３．８１℃、約６１℃～約７３．８１℃、約６２℃～約７３．８１℃、約６３℃～約７３．８１℃、約６４℃～約７３．８１℃、約６５℃～約７３．８１℃、約６７℃～約７３．８１℃、又は約６８℃～約７３．８１℃である。いくつかの実施形態において、Ｔｍ、ＴａｇｇはｎａｎｏＤＳＦで測定される。

いくつかの好ましい実施形態において、ＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチド又は／及びその抗原結合部分は、実質的な赤血球減少、貧血又は赤血球凝集を引き起こさない。用語「凝集」とは細胞が塊を作ることである。赤血球もＣＤ４７を発現するため、一部のＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチドが赤血球に結合して、凝集が生じる。したがって、ＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチドの赤血球へのダメージを回避し又は低減させるのは、治療の副作用の軽減につながると考えられる。

そこで、本発明の別の態様では、
（ａ）１．８９Ｅ－０８（例えば、１．５３Ｅ－０８）又はそれ未満のＫ_Ｄ値でＣＤ４７に結合すること、
（ｂ）ＣＤ４７とＳＩＲＰαの結合をブロックすること、
（ｃ）マクロファージによって媒介されるＣＤ４７発現細胞への食作用を促進すること、
（ｄ）明らかなＣＤ４＋Ｔ細胞のアポトーシスを誘発しないこと、
（ｅ）実質的な赤血球減少、貧血又は赤血球凝集を引き起こさないこと、
（ｆ）融解温度がＴ≧６２℃で、凝集温度がＴａｇｇ≧６１℃であること、
前記特性の１つ又は複数の組み合わせを示すＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチド及びその抗原結合部分が提供される。

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチド又は／及びその抗原結合部分は前記特性（ａ）～（ｆ）の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つを有する。いくつかの実施形態において、前記抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分は前記特性（ａ）、（ｂ）、（ｃ）を有する。いくつかの実施形態において、前記抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分は前記特性（ａ）、（ｂ）、（ｅ）を有する。いくつかの実施形態において、前記抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分は前記特性（ａ）、（ｃ）、（ｅ）を有する。いくつかの実施形態において、前記抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分は前記特性（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）を有する。いくつかの実施形態において、前記抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分は前記特性（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）を有する。いくつかの実施形態において、前記抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分は前記特性（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｆ）を有する。いくつかの実施形態において、前記抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分は前記特性（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）を有する。いくつかの実施形態において、前記抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分は前記特性（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）を有する。

いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチド及びその抗原結合部分は抗ＣＤ４７抗体又はその抗原結合部分である。

いくつかの実施形態において、本明細書に係るＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドはモノクローナル抗体である。

いくつかの実施形態において、本明細書に係るＣＤ４７に結合する分離された抗体は単特異性抗体である。

いくつかの実施形態において、本明細書に係るＣＤ４７に結合する分離された抗体は多重特異性抗体である。例えば、二重特異性抗体又は三重特異性抗体などである。

本発明のいくつかの実施形態において、本明細書に係る任意の例示的な抗体とＣＤ４７上の同じエピトープに結合するＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分が提供され、例えば、１６Ｅ５のキメラ抗体又はヒト化抗体と同じエピトープに結合し、例えば、３Ｆ１０のキメラ抗体又はヒト化抗体と同じエピトープに結合し、例えば、１４Ａ９のキメラ抗体又はヒト化抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分は本明細書に係るＣＤ４７に結合する任意の例示的な抗体と競合的であり、例えば、１６Ｅ５のキメラ抗体又はヒト化抗体と競合的にＣＤ４７に結合し、例えば、３Ｆ１０のキメラ抗体又はヒト化抗体と競合的にＣＤ４７に結合し、例えば、１４Ａ９のキメラ抗体又はヒト化抗体と競合的にＣＤ４７に結合する。ＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリー、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）解析又は本分野で知られる他の任意の方法でＣＤ４７との結合を測定することができる。

本発明では、２Ｂ２、２Ｈ８、３Ｆ１０、１６Ｅ５及び１４Ａ９抗体のキメラ形態（Ｘｉ２Ｂ２、Ｘｉ２Ｈ８、Ｘｉ３Ｆ１０、Ｘｉ１６Ｅ５及びＸｉ１４Ａ９）並びに３Ｆ１０、１６Ｅ５、１４Ａ９のヒト化バリアントを含め、いくつかの例示的なＣＤ４７に結合するモノクローナル抗体が提供される。本明細書に係る例示的なＣＤ４７に結合する抗体の重鎖ＣＤＲ（重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３）のアミノ酸配列は次の表Ｓ１に示され、軽鎖ＣＤＲ（軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、軽鎖ＣＤＲ３）のアミノ酸配列は次の表Ｓ２に示され、可変領域及び全長重鎖、軽鎖のアミノ酸配列は次の表Ｓ３、表Ｓ４に示される。

「免疫複合体」
本発明のいくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分の免疫複合体が提供される。ＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分に接続又は結合可能な治療剤は細胞毒性薬、放射性同位体、免疫調節剤又は抗体を含むが、それらに限定されない。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分は治療剤に直接結合される。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分はリンカーによって治療剤に結合される。

「組成物」
本発明では、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチド若しくはその抗原結合部分、又は前記抗体若しくはフラグメントをコードする核酸、又は本明細書に記載の免疫複合体を含み、さらに、薬学的に許容される担体を１つ又は複数含む医薬組成物が提供される。いくつかの実施形態において、組成物は２Ｂ２、２Ｈ８、３Ｆ１０、１６Ｅ５及び１４Ａ９抗体のキメラ抗体とヒト化抗体のいずれかのモノクローナル抗体、並びに薬学的に許容される担体を含む。薬学的に許容される担体は、例えば、賦形剤、希釈剤、カプセル化材料、充填剤、緩衝剤、又は他の試薬である。

「ハイブリドーマ」
本発明では、２Ｂ２、２Ｈ８、３Ｆ１０、１６Ｅ５、１４Ａ９からなる群から選ばれる分離されたハイブリドーマ細胞株が提供される。ハイブリドーマ細胞株２Ｂ２、２Ｈ８、３Ｆ１０、１６Ｅ５及び１４Ａ９はＣＤ４７に結合するモノクローナル抗体を分泌する。

「分離された核酸」
本発明では、本明細書に記載のＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分をコードする配列を含む分離された核酸が提供される。いくつかの実施形態において、前記核酸は、本明細書に記載の抗原結合ポリペプチドの重鎖可変領域又は／及び軽鎖可変領域を含むアミノ酸配列をコードすることができる。またいくつかの実施形態において、前記核酸は、本明細書に記載の抗原結合ポリペプチドの重鎖又は／及び抗原結合ポリペプチドの軽鎖を含むアミノ酸配列をコードすることができる。配列表には例示的に可変領域、抗原結合ポリペプチドの重鎖及び軽鎖のヌクレオチド配列がいくつか挙げられる。

「ベクター」
本発明では、前記分離された核酸を含むベクターが提供される。いくつかの実施形態において、前記ベクターはクローニングベクターである。またいくつかの実施形態において、前記ベクターは発現ベクターである。

任意選択で、前記発現ベクターは本明細書に記載の抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分を発現できる任意の発現ベクターである。

「宿主細胞」
本発明のいくつかの実施形態において、前記ベクターを含む宿主細胞が提供される。宿主細胞はＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分をクローニング又はコードするための適切な宿主細胞である。いくつかの実施形態において、宿主細胞は原核細胞である。またいくつかの実施形態において、宿主細胞は真核細胞である。いくつかの実施形態において、宿主細胞は酵母細胞、哺乳動物細胞、又は抗原結合ポリペプチド若しくはその抗原結合部分の製造に適する他の細胞から選ばれる。哺乳動物細胞は、例えば、チャイニーズハムスター（ＣＨＯ）卵巣細胞である。

「ＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチドの製造方法」
本発明のいくつかの実施形態において、当該抗原結合ポリペプチドの発現に適する条件において、前記抗原結合ポリペプチドをコードする核酸を含む宿主細胞を培養し、前記宿主細胞又は宿主細胞培地から前記抗原結合ポリペプチドを回収することを含む、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチドの製造方法が提供される。ＣＤ４７に結合する抗原結合ポリペプチドを産生させるために、前記抗体をコードする核酸を分離し、かつ、宿主細胞においてクローニング又は／及び発現するために１つ又は複数のベクターを挿入する。前記核酸は、遺伝子クローニング、遺伝子スプライシング、化学的合成など本分野で知られる様々な方法で得ることができる。

「用途」
本発明では、ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分の用途が提供される。いくつかの実施形態において、治療有効量の本明細書のＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分を対象者に投与すると、腫瘍細胞の増殖を減少又は阻害することができる。いくつかの実施形態において、治療有効量の本明細書のＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分を対象者に投与すると、がんを治療できる。治療を必要とする対象者には、既に疾患又はその状態になっている対象者、及び、疾患若しくは状態になる可能性があり疾患又はその状態を予防、遅延又は軽減することを目的とする対象者が含まれる。本明細書で使用される「がん」とは哺乳動物における一般には制御不能な細胞増殖を特徴とする生理学的状態を指す。がんの例は、白血病、リンパ腫、卵巣がん、乳がん、子宮内膜がん、結腸がん、直腸がん、膀胱がん、尿路上皮がん、肺がん、気管支がん、骨がん、前立腺がん、膵臓がん、胃がん、肝細胞がん、胆嚢がん、胆管がん、食道がん、腎細胞がん、甲状腺がん、頭頸部がん、精巣がん、内分泌腺がん、副腎がん、脳下垂体がん、皮膚がん、軟部組織がん、血管がん、脳腫瘍、神経内分泌腫瘍、眼腫瘍、髄膜がん腫症、中咽頭がん、下咽頭がん、子宮頸がん、及び子宮がん、膠芽腫、髄芽腫、星細胞腫、神経膠腫、髄膜腫、ガストリノーマ、神経芽腫、黒色腫、急性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、肉腫を含むが、それらに限定されない。

いくつかの実施形態において、有効量の本明細書ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分を前記対象者に投与して、対象者におけるマクロファージの食作用を促進する。

理解しやすいように、例を挙げ実施例を用いて本発明を詳細に説明するが、当業者は、本発明の教示に基づいて、特許請求の範囲の趣旨と範囲を逸脱することなく本発明にいくつかの変更と修正を行えるのが自明である。下記の実施例は、限定を加えるためではなく、説明として提供される。当業者は様々な重要なパラメータを特定することができ、前記パラメータを変更又は修正しても同様の結果は得られる。本明細書では特定の実施例で使用する陽性対照Ｈｕ５Ｆ９は、配列が米国特許ＵＳ２０１５／０１８３８７４Ａ１に記載の抗体「５Ｆ９」の配列と同じで、ヒト化抗体である。

本発明では、特に明記しない限り、次に説明される本分野で周知される通常の分子生物学、細胞生物学、生化学、免疫学技術を用いる。例えば、ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，ＨｕｍａｎａＰｒｅｓｓ、ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，２ｎｄｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋｅｔａｌ．，１９８９）、ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎｅｔａｌ．，１９９１）、Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．Ｊａｎｅｗａｙ，Ｐ．Ｔｒａｖｅｒｓ，１９９７）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ，１９９７）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａｐｒａｃｔｉｃａｌａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ，ＩＲＬＰｒｅｓｓ，１９８８～１９８９）、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａｐｒａｃｔｉｃａｌａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．Ｓｈｅｐｈｅｒｄ，Ｃ．Ｄｅａｎ，ＯｘｆｏｒｄＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＰｒｅｓｓ，２０００）、Ｐｈａｇｅｄｉｓｐｌａｙ：ａｌａｂｏｒａｔｏｒｙｍａｎｕａｌ（Ｃ．ＢａｒｂａｓＩＩＩ，ｅｔａｌ．，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ，２００１）、Ｕｓｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａｌａｂｏｒａｔｏｒｙｍａｎｕａｌ（Ｅ．ＨａｒｌｏｗａｎｄＤ．Ｌａｎｅ（ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ，１９９９）などである。

実施例１：抗ＣＤ４７モノクローナル抗体の産生
ＣＤ４７タンパク質を使用するマウスの免疫化：
ＣＤ４７に対する抗体を産生させるために、等量の完全フロイントアジュバント（初回免疫）又は不完全フロイントアジュバント（追加免疫）で乳化した組換え体ｈＣＤ４７－ＨｉｓＴａｇタンパク質（ＡＣＲＯｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社、カタログ番号ＣＤ７－Ｈ５２２７）（５０μｇ／マウスＢａｌｂ／ｃ）又はｈＣＤ４７－ｍＦｃ（ＡＣＲＯｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社、カタログ番号ＣＤ７－Ｈ５２Ａ５）を使用して２週間ごと皮下注射でＢａｌｂ／ｃマウスを免疫し、６週間にわたり３回免疫した。４回目の免疫ではｈＣＤ４７－ｍＦｃ（ＡＣＲＯｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社、カタログ番号ＣＤ７－Ｈ５２Ａ５）タンパク質を、２０μｇ／匹マウスで筋肉内注射した（水性アジュバント）。細胞融合の最初の３日間に、アジュバントを含まない抗原を静脈内注射してマウスを追加免疫した。ポリエチレングリコール１５００（ＰｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅＧｌｙｃｏｌ１５００、Ｒｏｃｈｅ社、カタログ番号１０７８３６４１００１）を使用して免疫マウスからの脾細胞（１×１０８）とＳＰ２／０骨髄腫細胞（１．５×１０７）を融合させた。融合後に、細胞を０．１ｍＬ／ウェルで９６ウェルプレートに分注し、且つ３７℃×５％ＣＯ２のインキュベーターにおいてインキュベートした。初日に、各ウェルには血清を含み２×メトトレキサートを補充した０．１ｍＬのＨＡＴ培地を追加して細胞を培養した。３日目と７日目に、直前に調製した０．１ｍＬのＨＡＴ培地で各ウェルからの０．１ｍＬの培地を置き換えた。一般には９～１４日でスクリーニングし、ＥＬＩＳＡ法を利用してｈＣＤ４７－ＨｉｓＴａｇ（ＡＣＲＯｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社、カタログ番号ＣＤ７－Ｈ５２２７）と反応する抗体に関して培養上清を測定し、陽性ウェルをスクリーニングした。

限界希釈法でハイブリドーマ細胞をクローニングした。選別した陽性混合クローンを限界希釈し、１つの陽性混合クローンを、２つの９６ウェルプレート（１００細胞／プレート、２００細胞／プレート）にプレーティングし、１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ１６４０（Ｈｙｃｌｏｎｅ社、カタログ番号ＳＨ３０８０９．０１）においてハイブリドーマ細胞を培養した。１０日後に、限界希釈済みのサブクローンは同じくＥＬＩＳＡ法で培養上清を測定して、陽性サブクローンをピッキングした。ｃＤＮＡの抽出に備え、クローニングしたハイブリドーマ細胞を維持させた。

抗ヒトＣＤ４７抗体からのｃＤＮＡ抽出と可変領域配列の取得：
ＲＮＡ抽出キット（タカラバイオ株式会社、カタログ番号９７６７）を利用して、スクリーニングしたｈＣＤ４７抗体を産生するハイブリドーマ細胞株からトータルＲＮＡを分離して、トータルＲＮＡをテンプレートとして、メーカーの取扱明細書に従い、逆転写キット（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ社、カタログ番号Ｋ１６５２）でファーストストランドｃＤＮＡを合成した。その後、合成ｃＤＮＡに対し、縮重マウスＩｇＧプライマーを用いて、ＰＣＲ反応により抗体関連配列をインビトロで増幅させた。

１％アガロース／トリス－アセテートゲルにおいてＰＣＲ増幅産物を電気泳動によって分離させた。ゲルから所定のサイズ（重鎖と軽鎖は約４５０ｂｐ）を有するＤＮＡフラグメントを切り落として精製した。３μＬの精製ＰＣＲ産物をｐＭＤ－１９Ｔベクター（タカラバイオ株式会社、カタログ番号６０１３）にクローニングして、形質転換でＤＨ５α大腸菌コンピテントセル（タカラバイオ株式会社、カタログ番号９０５７）に導入した。各ライゲーション反応では、ランダムに１０の陽性クローンを選択して、Ｍ１３フォワードプライマーを使用してＤＮＡ塩基配列決定を行った。

対応のハイブリドーマクローン（２Ｂ２、２Ｈ８、３Ｆ１０、１６Ｅ５、１４Ａ９）から増幅させて、塩基配列決定により５つのネズミモノクローナル抗体（２Ｂ２、２Ｈ８、３Ｆ１０、１６Ｅ５、１４Ａ９抗体）の重鎖可変領域（ＶＨ）配列及び軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を得た。配列情報は次のとおりである。

キメラ抗体の構築と発現：
マウス抗体可変領域の遺伝子を化学的に合成することにより、各マウス抗体のＶＬ領域をそれぞれヒトκ鎖定常領域に接続させてキメラ軽鎖を構築し、マウスＶＨ領域をヒトＩｇＧ４（ＥＵ番号Ｓ２２８Ｐ）定常領域に接続させてキメラ重鎖を構築した。通常の遺伝子工学的手法でキメラ軽鎖の発現プラスミド及びキメラ重鎖の発現プラスミドをそれぞれ構築し、ＣＨＯ細胞（反応系２００ｍＬ、１０^６の細胞／ｍＬ）を各キメラ重鎖発現プラスミドとキメラ軽鎖発現プラスミド１００μｇでトランスフェクトして６日間培養した。その後、プロテインＡカラムで上清のキメラ抗体を精製した。

構築と発現を経て５つのキメラ抗体を得、キメラ重鎖とキメラ軽鎖の全長配列及びそれをコードする核酸は次のとおりである。Ｘｉ２Ｈ８（キメラ重鎖及びそれをコードする核酸は配列番号８９、９０、キメラ軽鎖及びそれをコードする核酸は配列番号９１、９２）、Ｘｉ２Ｂ２（キメラ重鎖及びそれをコードする核酸は配列番号９７、９８、キメラ軽鎖及びそれをコードする核酸は配列番号９９、１００）、Ｘｉ３Ｆ１０（キメラ重鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１０１、１０２、キメラ軽鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１０３、１０４）、Ｘｉ１６Ｅ５（キメラ重鎖及びそれをコードする核酸は配列番号９３、９４、キメラ軽鎖及びそれをコードする核酸は配列番号９５、９６）、Ｘｉ１４Ａ９（キメラ重鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１０５、１０６、キメラ軽鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１０７、１０８）。

抗体のヒト化設計：
３Ｆ１０、１４Ａ９及び１６Ｅ５のヒト－ネズミキメラ抗体をＣＤＲグラフト法でヒト化した（例えば、米国特許第５２２５５３９号参照）。ＭＯＥ（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＯｐｅｒａｔｉｎｇＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ）によりネズミ抗体３Ｆ１０、１４Ａ９及び１６Ｅ５をホモロジーモデリングして、Ｆｖドメインのタンパク質構造モデルを得た。ネズミ３Ｆ１０、１４Ａ９及び１６Ｅ５抗体のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列をそれぞれＩＭＧＴ（ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎＳｙｓｔｅｍ）の関連ツールウェブサイト（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／３Ｄｓｔｒｕｃｔｕｒｅ－ＤＢ／ｃｇｉ／ＤｏｍａｉｎＧａｐＡｌｉｇｎ．ｃｇｉ）に入力して、マウス３Ｆ１０、１４Ａ９及び１６Ｅ５抗体の可変領域と高い相同性を有するヒト生殖細胞系列抗体配列をスクリーニングした。ネズミ３Ｆ１０、１４Ａ９及び１６Ｅ５抗体のＶＨ及びＶＬの相補性決定領域（ＣＤＲ）にテンプレートなるヒト抗体をグラフトした。３Ｆ１０ではテンプレートなるヒトＶＨとしてＩＧＨＶ１－６９＊０１とＩＧＨＪ４＊０１の組み合わせが選択され、テンプレートなるヒトＶＬとしてＩＧＫＶ１－３９＊０１とＩＧＫＪ２＊０１の組み合わせが選択された。１４Ａ９では、テンプレートなるヒトＶＨとしてＩＧＨＶ１－４６＊０１とＩＧＨＪ４＊０１の組み合わせが選択され、テンプレートなるヒトＶＬとしてＩＧＫＶ１－３９＊０１とＩＧＫＪ２＊０１の組み合わせが選択された。１６Ｅ５では、テンプレートなるヒトＶＨとしてＩＧＨＶ１－１８＊０１とＩＧＨＪ４＊０１の組み合わせが選択され、テンプレートなるヒトＶＬとしてＩＧＫＶ１－３９＊０１とＩＧＫＪ２＊０１の組み合わせが選択された。

前記テンプレートなるヒト抗体はＣＤＲアミノ酸配列がハイブリドーマ（マウス）３Ｆ１０、１４Ａ９及び１６Ｅ５抗体のＣＤＲに置き換えられている。マウス３Ｆ１０、１４Ａ９及び１６Ｅ５抗体からのＶＨとＶＬの必須アミノ酸配列を前記テンプレートなるヒト生殖細胞系列抗体ＶＨ及びＶＬフレームワークにグラフトして、機能的なヒト化抗体を得た。３Ｆ１０、１４Ａ９及び１６Ｅ５抗体のＶＨ及びＶＬでは、前記テンプレートなるヒト抗体のフレームワークアミノ酸のいくつかの位置がマウス３Ｆ１０、１４Ａ９及び１６Ｅ５抗体の対応するアミノ酸配列に逆突然変異される。ごく少数のＣＤＲ領域が突然変異を含んでいる。

ヒト化３Ｆ１０抗体の重鎖可変領域では、位置７３のアミノ酸のＡｓｐ（Ｄ）からＧｌｕ（Ｅ）への突然変異、位置７４のアミノ酸のＧｌｕ（Ｅ）からＩｌｅ（Ｉ）への突然変異、位置７７のアミノ酸のＳｅｒ（Ｓ）からＡｓｎ（Ｎ）への突然変異から突然変異の選択と組み合わせが決定され、且つヒト化３Ｆ１０抗体の軽鎖可変領域では、位置４８のアミノ酸のＬｅｕ（Ｌ）からＴｒｐ（Ｗ）への突然変異、位置７１のアミノ酸のＡｓｐ（Ｄ）からＳｅｒ（Ｓ）への突然変異、位置７２のアミノ酸のＰｈｅ（Ｆ）からＴｙｒ（Ｙ）への突然変異、位置９４のアミノ酸のＡｓｐ（Ｄ）からＧｌｕ（Ｅ）への突然変異から突然変異の選択と組み合わせが決定される。ヒト化１４Ａ９の重鎖可変領域では、位置２４のアミノ酸のＡｌａ（Ａ）からＶａｌ（Ｖ）への突然変異、位置７２のアミノ酸のＡｒｇ（Ｒ）からＧｌｙ（Ｇ）への突然変異、位置７７のアミノ酸のＳｅｒ（Ｓ）からＡｓｎ（Ｎ）への突然変異、位置９７のアミノ酸のＡｌａ（Ａ）からＴｈｒ（Ｔ）への突然変異から突然変異の選択と組み合わせが決定され、且つヒト化１４Ａ９の軽鎖可変領域では、位置６３のアミノ酸のＳｅｒ（Ｓ）からＩｌｅ（Ｉ）への突然変異、位置６８のアミノ酸のＧｌｙ（Ｇ）からＳｅｒ（Ｓ）への突然変異から突然変異の選択と組み合わせが決定される。ヒト化１６Ｅ５抗体の重鎖可変領域では、位置４６のアミノ酸のＧｌｕ（Ｅ）からＬｙｓ（Ｋ）への突然変異、位置６３のアミノ酸のＬｙｓ（Ｋ）からＧｌｕ（Ｅ）への突然変異、位置７２のアミノ酸のＴｈｒ（Ｔ）からＬｅｕ（Ｌ）への突然変異、位置７７のアミノ酸のＳｅｒ（Ｓ）からＡｒｇ（Ｒ）への突然変異、位置９７のアミノ酸のＡｌａ（Ａ）からＴｈｒ（Ｔ）への突然変異から突然変異の選択と組み合わせが決定され、且つヒト化１６Ｅ５抗体の軽鎖可変領域では、位置２のアミノ酸のＩｌｅ（Ｉ）からＡｌａ（Ａ）への突然変異、位置３３のアミノ酸のＡｓｎ（Ｎ）からＧｌｎ（Ｑ）への突然変異から突然変異の選択と組み合わせが決定される。ここで、突然変異部位の番号は可変領域の最初のアミノ酸から順に数える。

ヒト化３Ｆ１０、１４Ａ９及び１６Ｅ５抗体の配列及びそれらをコードする核酸は次のとおりである。ｈｚ３Ｆ１０－１．１（重鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１０９、１１０、軽鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１１１、１１２）、ｈｚ３Ｆ１０－２．１（重鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１１３、１１４、軽鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１１５、１１６）、ｈｚ３Ｆ１０－３．１（重鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１１７、１１８、軽鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１１９、１２０）、ｈｚ３Ｆ１０－４．１（重鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１２１、１２２、軽鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１２３、１２４）、ｈｚ３Ｆ１０－５．１（重鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１２５、１２６、軽鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１２７、１２８）、ｈｚ３Ｆ１０－６．１（重鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１２９、１３０、軽鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１３１、１３２）、ｈｚ３Ｆ１０－１．２（重鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１３３、１３４、軽鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１３５、１３６）、ｈｚ３Ｆ１０－２．２（重鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１３７、１３８、軽鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１３９、１４０）、ｈｚ３Ｆ１０－３．２（重鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１４１、１４２、軽鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１４３、１４４）、ｈｚ３Ｆ１０－４．２（重鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１４５、１４６、軽鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１４７、１４８）、ｈｚ３Ｆ１０－５．２（重鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１４９、１５０、軽鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１５１、１５２）、ｈｚ３Ｆ１０－６．２（重鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１５３、１５４、軽鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１５５、１５６）、ｈｚ１６Ｅ５－１．１（重鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１５７、１５８、軽鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１５９、１６０）、ｈｚ１６Ｅ５－１．３（重鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１６１、１６２、軽鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１６３、１６４）、ｈｚ１６Ｅ５－１．２（重鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１６５、１６６、軽鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１６７、１６８）、ｈｚ１６Ｅ５－３．２（重鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１６９、１７０、軽鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１７１、１７２）、ｈｚ１６Ｅ５－３．１（重鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１７３、１７４、軽鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１７５、１７６）、ｈｚ１６Ｅ５－３．３（重鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１７７、１７８、軽鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１７９、１８０）、ｈｚ１４Ａ９－２．３（重鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１８１、１８２、軽鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１８３、１８４）、ｈｚ１４Ａ９－２．４（重鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１８５、１８６、軽鎖及びそれをコードする核酸は配列番号１８７、１８８）。

ヒト化３Ｆ１０、１４Ａ９及び１６Ｅ５抗体の構築と発現：
ヒト化３Ｆ１０、１４Ａ９及び１６Ｅ５抗体の全長軽鎖及び全長重鎖をコードするＤＮＡを合成し前記ＤＮＡを発現ベクター（例えば、ＣＮ１０７００１４６３Ａで開示されたｐｃＤＮＡ３．１ベクター、ＣＮ１０９４２２８１１Ａで開示されたｐＣＨＯ１．０ベクターなど）にクローニングした。ＣＨＯ細胞（反応系２００ｍＬ、１０^６の細胞／ｍＬ）を各ヒト化抗体重鎖発現プラスミドと軽鎖発現プラスミド１００μｇでトランスフェクトしてＥｘｐｉＣＨＯ培地（Ｇｉｂｃｏ社、カタログ番号Ａ２９１００－０１）で３７℃×５％ＣＯ２のインキュベーターで６日間培養した。遠心分離して上清を得、その後、プロテインＡカラムで上清のヒト化抗体を精製した。

実施例２：Ｂｉａｃｏｒｅを用いる抗ＣＤ４７抗体の親和性解析
Ｂｉａｃｏｒｅを用いて、ヒトＣＤ４７タンパク質（ＨｕｍａｎＣＤ４７Ｐｒｏｔｅｉｎ，ＨｉｓＴａｇ、ＡＣＲＯｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社、カタログ番号ＣＤ７－Ｈ５２２７）とカニクイザルＣＤ４７タンパク質（Ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ／ＲｈｅｓｕｓｍａｃａｑｕｅＣＤ４７Ｐｒｏｔｅｉｎ，ＨｉｓＴａｇ、ＡＣＲＯｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社、カタログ番号ＣＤ７－Ｃ５２Ｈ１）の抗ＣＤ４７抗体（キメラ又はヒト化）との結合の薬物動態をそれぞれ測定して、平衡解離定数Ｋ_Ｄ（単位Ｍ）を得た。前記Ｂｉａｃｏｒｅ解析は２５℃下で実施し１Ｈｚの収集速度でデータを記録した。

ポリクローナルウサギ抗マウスＩｇＧ（ＧＥ社、ＢＲ－１００８－３８）を１０ｍＭでｐＨ５．０の酢酸ナトリウムで希釈し、アミンカップリングキット（ＧＥ社、ＢＲ１００５０）を使用してＣＭ５バイオセンサーチップのリファレンスフローセル及び実験用フローセルに固定して約１５０００ＲΜとした。各サイクルでは、最初には、希釈した被験抗体（１．５μｇ／ｍＬ）を実験用フローセルに注射して、捕捉のため１分間持続させた。Ｂｉａｃｏｒｅで測定したこれらのデータは、抗ＣＤ４７抗体（キメラ及びヒト化）がＣＤ４７に結合することを示した。

実施例３：ＥＬＩＳＡを用いる抗ＣＤ４７抗体の結合解析
ヒトＣＤ４７タンパク質及び抗ＣＤ４７キメラ抗体又は抗ＣＤ４７ヒト化抗体に対し、ＥＬＩＳＡを利用して結合を解析した。９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ社、カタログ番号９０１８）に対し、４℃下、１００μＬ／ウェルで２μｇ／ｍＬＣＤ４７－Ｈｉｓ（ＨｕｍａｎＣＤ４７Ｐｒｏｔｅｉｎ，ＨｉｓＴａｇ、ＡＣＲＯｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社、カタログ番号ＣＤ７－Ｈ５２２７）コーティングバッファーＰＢＳで一晩コーティングした。ウェルを吸引して、１００μＬ／ウェルでブロッキング溶液（１％（Ｗ／Ｖ）ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ、Ｓｉｇｍａ社、カタログ番号Ｂ２０６４－１００Ｇ）を有するＰＢＳ）を加え、３７℃下で１時間インキュベートして非特異的結合部位をブロッキングした。洗浄バッファー（０．０１％（Ｗ／Ｖ）ポリソルベート２０（Ｓｉｇｍａ社、カタログ番号Ｐ９４１６－１００ＭＬ）を有するＰＢＳ）で９６ウェルプレートを３回洗浄した後、１００μＬ／ウェルでブロッキング溶液における抗ＣＤ４７抗体（キメラ抗体については表３を参照、ヒト化抗体については表４を参照）の１：４段階希釈液（３０μｇ／ｍＬより）を加え、室温下で２時間インキュベートした。９６ウェルプレートを洗浄し、その後、二次抗体ＨＲＰ抗ヒトＩｇＧ（ＨＲＰ－ａｎｔｉ－ＨｕｍａｎＩｇＧ）（ＢＤ社、カタログ番号５５５７８８）で遮光下２０分間インキュベートした。９６ウェルプレートを洗浄し、その後、１００μＬ／ウェルで基質溶液ＴＭＢ（ＴＩＡＮＧＥＮ社、カタログ番号ＰＡ１０７－０１）を加え、前記９６ウェルプレートを室温下で１０分間インキュベートした。１００μＬ／ウェルで停止溶液（１ＭＨ２ＳＯ４）を加えて反応を停止させた。比色信号が生じたら、マルチモードプレートリーダー（メーカー：ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社、シリーズＥｎＶｉｓｉｏｎ）を用いて４５０ｎｍの前記比色信号を読み取った。ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ５でデータを解析して、ＥＣ_５０を計算した。ＥＬＩＳＡで測定したこれらのデータは、抗ＣＤ４７抗体がＣＤ４７に結合し、ヒト化抗体は良好な特性を有することを示した。

実施例４：細胞における抗ＣＤ４７抗体の結合解析
ＣＤ４７を安定的に発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞株との結合により、細胞において抗ＣＤ４７抗体（キメラ又はヒト化）の結合を解析した。ＣＨＯ－Ｋ１－ＣＤ４７細胞（ヒトＣＤ４７タンパク質を発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞）を９６ウェルプレート（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ社、カタログ番号Ｃ０３０７３０．１１９）の各ウェルに１．２×１０^４個加え、抗ＣＤ４７抗体（２０μｇ／ｍＬ、１：４希釈、希釈バッファーはＰＢＳ）と室温下で１～２時間インキュベートした。その後、細胞をＰＢＳバッファーで３回洗浄した後、二次抗体ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ（ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｃ、カタログ番号１０９－５４５－０８８）を１：２００でＰＢＳ希釈したものを１００μＬ／ウェルで細胞に加え、室温下で３０分間インキュベートした。細胞をＰＢＳバッファーで３回洗浄し、核色素Ｈｏｅｃｈｓｔ（Ｓｉｇｍａ社、カタログ番号Ｂ２２６１）をＰＢＳバッファーで希釈比１：５００に希釈した後、１００μＬ／ウェルで各ウェルに加えて１０分間染色し、ＰＢＳで３回洗浄してからハイコンテントスクリーニングシステム（ＨｉｇｈｃｏｎｔｅｎｔＳｃｒｅｅｎｉｎｇＳｙｓｔｅｍ、メーカー：ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社、シリーズＯｐｅｒｅｔｔａ）で解析し、結果を表５、表６に示す。細胞における結合解析でこれらのデータは、抗ＣＤ４７抗体がＣＤ４７に結合することを示した。

実施例５：細胞における抗ＣＤ４７キメラ抗体の抗体ブロック解析
フローサイトメトリーでの測定により、抗ＣＤ４７キメラ抗体のＣＤ４７とＳＩＲＰαの結合に対するブロック効果を評価した。

９６ウェルＵ底プレートにＪｕｒｋａｔ細胞（中国科学院細胞バンク、カタログ番号ＴＣＨＵ１２３）を加え、各ウェルは５×１０^５の細胞とし、各ウェルには濃度１μｇ／ｍＬのＣＤ４７リガンドＨｕｍａｎ－ＳＩＲＰα－ｍＦＣ（ＨｕｍａｎＳＩＲＰａｌｐｈａ／ＣＤ１７２ａＰｒｏｔｅｉｎ、ＭｏｕｓｅＩｇＧ１ＦｃＴａｇ、ＡＣＲＯｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社、カタログ番号ＳＩＡ－Ｈ５２Ａ８）のＰＢＳバッファー希釈液を１００μＬ加え、室温下で１時間インキュベートした。ＰＢＳバッファーで２回洗浄した後、各ウェルに１００μＬの抗ＣＤ４７キメラ抗体（表７）を加え、開始濃度は２０μｇ／ｍＬとし、ＰＢＳバッファーで８つの勾配に４倍希釈し、室温下で１～２時間インキュベートし、ＰＢＳバッファーで３回洗浄した後、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８標識ヤギ抗マウスＩｇＧ（ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８－ＧｏａｔａｎｔｉｍｏｕｓｅＩｇＧ、ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｃ．、カタログ番号１１５－５４５－０６２）を検出二次抗体として、各ウェルにＰＢＳバッファーで希釈比１：２００に希釈した検出二次抗体１００μＬを加え、室温下で１時間維持し、ＰＢＳバッファーで３回洗浄し、フローサイトメトリー（ＢＤ社、シリーズＣ６）で抗ＣＤ４７キメラ抗体のＣＤ４７とＳＩＲＰαの結合に対するブロック効果を検出した。表７の結果に示されるとおり、抗ＣＤ４７キメラ抗体はＣＤ４７とＳＩＲＰαの結合をブロックすることができ、なお、Ｘｉ３Ｆ１０、Ｘｉ１６Ｅ５、Ｘｉ１４Ａ９はより良いブロック効果を有している。

実施例６：ＥＬＩＳＡ法を用いる抗ＣＤ４７抗体の抗体ブロック解析
ＥＬＩＳＡ法での測定により、抗ＣＤ４７抗体のＣＤ４７とＳＩＲＰαの結合に対するブロック効果を評価した。

９６ウェルマイクロプレート（Ｃｏｓｔａｒ社、カタログ番号９０１８）において、ＣＤ４７－Ｈｉｓ（ＨｕｍａｎＣＤ４７Ｐｒｏｔｅｉｎ，ＨｉｓＴａｇ、ＡＣＲＯｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社、カタログ番号ＣＤ７－Ｈ５２２７）を捕捉抗原として、各ウェルには前記捕捉抗原を有する２μｇ／ｍＬのコーティングバッファーＰＢＳを１００μＬ加え、２～８℃下で一晩保持させ、ウェルを吸引して前記コーティングバッファーを除去し、１００μＬ／ウェルのブロッキング溶液（１％（Ｗ／Ｖ）ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ、Ｓｉｇｍａ社、カタログ番号Ｂ２０６４－１００Ｇ）を有するＰＢＳ）を使用して３７℃下で１時間インキュベートしてブロッキングした。洗浄バッファー（０．０１％（Ｗ／Ｖ）ポリソルベート２０（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｐ９４１６－１００ＭＬ）を有するＰＢＳ）で９６ウェルプレートを洗浄した。その後、１００μＬ／ウェルで１μｇ／ｍＬＣＤ４７リガンドＨｕｍａｎ－ＳＩＲＰα－ｍＦＣ（ＨｕｍａｎＳＩＲＰａｌｐｈａ／ＣＤ１７２ａＰｒｏｔｅｉｎ、ＭｏｕｓｅＩｇＧ１ＦｃＴａｇ、ＡＣＲＯｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社、カタログ番号ＳＩＡ－Ｈ５２Ａ８）を加えて、２５±２℃下で１．５時間インキュベートし、ＰＢＳ洗浄バッファーで９６ウェルプレートを洗浄した後、抗ＣＤ４７キメラ抗体又は抗ＣＤ４７ヒト化抗体（キメラ抗体については表８を参照、ヒト化抗体については表９を参照）を加え、開始濃度は２０μｇ／ｍＬとし、１００μＬ／ウェルで、ＰＢＳバッファーで８つの勾配に４倍希釈し、室温下で１．５時間インキュベートした。ＰＢＳバッファーで洗浄した後に１００μＬ／ウェルでＰＢＳバッファーを１：２０００に希釈したＨＲＰ標識ヤギ抗マウスＩｇＧ（ＨＲＰＧｏａｔａｎｔｉｍｏｕｓｅＩｇＧ、ＢＤ社、カタログ番号５５４００２）を加えて、２５±２℃下で１時間インキュベートし、ＰＢＳバッファーで９６ウェルプレートを洗浄してから１００μＬ／ウェルで基質溶液ＴＭＢ（ＴＩＡＮＧＥＮ社、カタログ番号ＰＡ１０７－０１）を加えて室温下でインキュベートして１０分間発色させ、１００μＬ／ウェルで１ＭＨ２ＳＯ４を加えて反応を停止させた。比色信号が生じたら、マルチモードプレートリーダー（メーカー：ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社、シリーズＥｎＶｉｓｉｏｎ）を用いて４５０ｎｍの前記比色信号を読み取った。ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ５でデータを解析して、ＥＣ_５０を計算した。結果を表８、表９に示す。ＥＬＩＳＡ法で測定したところ、１４Ａ９、１６Ｅ５、３Ｆ１０のキメラ抗体（Ｘｉ３Ｆ１０、Ｘｉ１６Ｅ５、Ｘｉ１４Ａ９）及びヒト化抗体は良好なブロック効果を有している。

実施例７：抗ＣＤ４７抗体のマクロファージへの食作用促進の解析
フローサイトメトリーを利用して、抗ＣＤ４７抗体の細胞表面のＳＩＲＰαを含むマクロファージの腫瘍細胞貪食を促進する能力を測定した。

単球分離キット（ＳＴＥＭＣＥＬＬ、カタログ番号１９０５８）を利用して、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ、上海賽笠生物、カタログ番号１９００５６）から単球を分離し、２４ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒｂｉｏ－ｏｎｅ、カタログ番号６６２－１６０）にプレーティングし、各ウェルは５×１０^５の細胞とし、１００ｎｇ／ｍＬマクロファージコロニー刺激因子Ｍ－ＣＳＦ（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ社、カタログ番号２１６－ＭＣ－０１０）において７日間誘導することにより、マクロファージを得た。１×１０^６の標的細胞ＨＬ６０（上海生化細胞所、カタログ番号ＴＣＨｕ２３）を５μｍｏｌ／ＬＣＦＳＥ（ＢＤ社、カタログ番号５６５０８２）蛍光染料（ＰＢＳバッファーで蛍光染料を所定の濃度に希釈）に懸濁させ、３７℃ウォーターバスにおいて遮光下で１５分間インキュベートし、ＰＢＳバッファーで細胞を洗浄して、ＣＦＳＥ標識ＨＬ６０細胞を得た。ＣＦＳＥ標識ＨＬ６０細胞をそれぞれ１０μｇ／ｍＬ、１μｇ／ｍＬ抗ＣＤ４７抗体（キメラ抗体については表１０を参照、ヒト化抗体については表１１を参照）と３７℃×５％ＣＯ２インキュベーターにおいて１～２時間インキュベートした。インキュベート後のＨＬ６０細胞をＰＢＳバッファーで３回洗浄して、マクロファージに加え、３７℃×５％ＣＯ２インキュベーターにおいて２～４時間機能させ、ＰＢＳバッファーで３回洗浄した後、各ウェルには２６０μＬのＰＢＳと２０μＬの抗ＡＰＣ－ＣＤ１４（ＡＰＣＭｏｕｓｅＡｎｔｉ－ＨｕｍａｎＣＤ１４、ＢＤ社、カタログ番号５５５３９９）と２０μＬのＰＥ－ＣＤ１１ｂ（ＰＥＭｏｕｓｅＡｎｔｉ－ＨｕｍａｎＣＤ１１ｂ／Ｍａｃ－１、ＢＤ社、カタログ番号５５５３８８）抗体の混合物を加え、４℃遮光下で３０分間インキュベートして、ＰＢＳバッファーで３回洗浄し、トリプシン（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１２６０４－０１３）で消化してフローサイトメトリー（ＢＤ社、シリーズＣ６）でマクロファージの貪食率（％）を測定した。

抗ＣＤ４７キメラ抗体及び抗ＣＤ４７ヒト化抗体のマクロファージの食作用に対する影響については表１０、表１１を参照し、キメラ抗体Ｘｉ３Ｆ１０、Ｘｉ１６Ｅ５、Ｘｉ１４Ａ９及び抗ＣＤ４７ヒト化抗体は効果的に食作用を促進しており、ヒト化抗体ｈｚ１４Ａ９－２．３、ｈｚ１４Ａ９－２．４の方がより優れた結果を示している。

実施例８：抗ＣＤ４７抗体のＣＤ４＋Ｔ細胞に対する影響
フローサイトメトリーでの測定により、抗ＣＤ４７抗体のＣＤ４＋Ｔ細胞に対する影響を測定した。

Ｔ細胞分離キット（ＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号１３０－０９４－１３１）を利用してヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ、上海賽笠生物、カタログ番号１９００５６）からＣＤ４＋Ｔ細胞を分離し、２４ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒｂｉｏ－ｏｎｅ、カタログ番号６６２１０６）にプレーティングし、各ウェルは５×１０^５の細胞とし、同時にそれぞれ抗ＣＤ４７抗体（キメラ抗体については表１２を参照、ヒト化抗体については表１３を参照）を加えて最終濃度をそれぞれ１０μｇ／ｍＬ、１μｇ／ｍＬとし、１６４０完全培地を加え、３７℃×５％ＣＯ２インキュベーターにおいて２０時間培養し、アポトーシスキット（ＳＴＥＭＣＥＬＬ、カタログ番号５５６５４７）を使用して室温下で１５分間染色し、フローサイトメーター（ＢＤ社、シリーズＣ６）でアポトーシス率（％）を測定し、アポトーシス率は初期アポトーシスと後期アポトーシスの合計とした。結果は、抗ＣＤ４７抗体（キメラ抗体については表１２を参照、ヒト化抗体については表１３を参照）がＴ細胞のアポトーシスに明らかな影響はないことを示した。

実施例９：ｎａｎｏＤＳＦを用いる抗ＣＤ４７抗体の熱安定性の研究
ハイスループットタンパク質安定性アナライザーＰｒｏｍｅｔｈｅｕｓＮＴ．４８はタンパク質の分子構造安定性、凝集安定性、コロイド分散安定性などの様々なデータを得るための装置である。当該装置を利用して抗ＣＤ４７キメラ抗体及び抗ＣＤ４７ヒト化抗体の融解温度（Ｔｍ）及び凝集温度（Ｔａｇｇ）を測定し、結果を表１４、表１５に示す。抗ＣＤ４７抗体は良好な熱安定性を有することが示された。

実施例１０：抗ＣＤ４７抗体の赤血球凝集に対する影響
いくつかの研究では、赤血球の表面が一定の量のＣＤ４７タンパク質を含んでいることが判明した。特定の抗ＣＤ４７抗体を加えると赤血球に結合するため、赤血球凝集が生じる。これにより、抗ＣＤ４７抗体の赤血球凝集に対する影響を測定した。

抗凝固処理血に等量の生理食塩水を加えて、均一に混合し、２０００ｒｐｍ／ｍｉｎで５分間遠心分離して、上清を除去した。カルシウムイオン又はマグネシウムイオンを含まないＨａｎｋ’ｓ平衡塩溶液（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、カタログ番号１４１７５－０９５）で赤血球を３回洗浄し、１回目と２回目は２０００ｒｐｍ／ｍｉｎで５分間遠心分離し、最終回は２０００ｒｐｍ／ｍｉｎで１０分間遠心分離し、上清を除去した。ＰＢＳバッファーで赤血球を１０倍希釈して、１０％赤血球懸濁液を調製し、１００μＬ／ウェルで９６ウェルＵ底プレート（ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ社、カタログ番号００３０７３１１９）に加えた。１００μＬ／ウェルで異なる濃度の抗ＣＤ４７抗体を加え、前記抗体の開始濃度は１０μｇ／ｍＬとし、ＰＢＳバッファーで８つの濃度勾配に３倍希釈し、３７℃下で２～６時間インキュベートした。観察しながら撮影し、赤血球が全てに凝集した。底部に沈んでおり網のように見える場合は凝集していることであり、ウェルの底部に沈んでおり点のように見える場合は赤血球が凝集していないことである。

抗ＣＤ４７キメラ抗体の赤血球凝集に対する影響については図１を参照する。抗ＣＤ４７ヒト化抗体の赤血球凝集に対する影響につついては図２、図３を参照し、キメラ抗体Ｘｉ３Ｆ１０、Ｘｉ１６Ｅ５及びＨｕ５Ｆ９ではいずれも凝固が生じており、そのうちＸｉ３Ｆ１０は１１１１．１ｎｇ／ｍＬより凝固を認め、Ｘｉ１６Ｅ５、Ｈｕ５Ｆ９は１２３．４６ｎｇ／ｍＬより凝固を認め、キメラ抗体Ｘｉ２Ｂ２、Ｘｉ２Ｈ８、Ｘｉ１４Ａ９は全ての測定濃度下で凝固を認めない。ヒト化抗体ｈｚ３Ｆ１０－３．１、ｈｚ３Ｆ１０－４．１、ｈｚ３Ｆ１０－３．２、ｈｚ３Ｆ１０－４．２は３．３μｇ／ｍＬより凝固を認め、ｈｚ１６Ｅ５－１．１、ｈｚ１６Ｅ５－３．１、ｈｚ１６Ｅ５－１．２、ｈｚ１６Ｅ５－３．２、ｈｚ１６Ｅ５－１．３、ｈｚ１６Ｅ５－３．３は３．３μｇ／ｍＬより凝固を認め、他のヒト化抗体は全ての測定濃度下でいずれも凝固を認めなかった。

実施例１１：抗ＣＤ４７抗体と赤血球の結合の解析
赤血球の表面が一定の量のＣＤ４７を含んでいるため、特定の抗ＣＤ４７抗体に結合する可能性があることから、抗ＣＤ４７抗体と赤血球の結合を検討する。

抗凝固処理血に等量の生理食塩水を加え、均一に混合し、２０００ｒｐｍ／ｍｉｎで５分間遠心分離して、上清を除去した。カルシウムイオン又はマグネシウムイオンを含まないＨａｎｋ’ｓ平衡塩溶液（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、カタログ番号１４１７５－０９５）で赤血球を３回洗浄し、１回目と２回目は２０００ｒｐｍ／ｍｉｎで５分間遠心分離し、最終回は２０００ｒｐｍ／ｍｉｎで１０分間遠心分離し、上清を除去した。分離後の赤血球を４％パラホルムアルデヒド（生工生物工程上海公司、カタログ番号Ｅ６７２００２－０５００）で一晩固定させ、翌日には１０μｇ／ｍＬ又は１μｇ／ｍＬの抗ＣＤ４７抗体と室温下で１～２時間インキュベートし、ＰＢＳバッファーで洗浄した後、ＰＢＳバッファーで１：２００希釈した二次抗体ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ（ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｃ、カタログ番号１０９－５４５－０８８）で室温下１時間インキュベートし、ＰＢＳバッファーで洗浄した後にフローサイトメトリー（ＢＤ社、シリーズＣ６）で測定し、平均蛍光強度（ＭＦＩ）で赤血球と抗ＣＤ４７キメラ抗体（表１６参照）又はヒト化抗体（表１７参照）の結合を表す。

実施例１２：リンパ腫Ｒａｊｉ細胞マウス血液腫瘍モデルにおける抗ＣＤ４７抗体の薬力学的活性
血液腫瘍Ｒａｊｉ細胞を用いてマウス血液腫瘍モデルを確立し、当該モデルにおいて抗ＣＤ４７抗体を使用して、当該抗体の薬力学的活性を評価した。

ＰＢＳバッファーで濃度５×１０^６／ｍＬのＲａｊｉ細胞懸濁液を調製し、０．１ｍＬ／匹で雌ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスに尾静脈注射した。７日後にランダムに４群に分け、各群は１０匹とした。群１はＩｇＧ４群、群２はＨｕ５Ｆ９群、群３はｈｚ３Ｆ１０－６．１、群４はｈｚ１４Ａ９－２．３で、腹腔内注射投与とした。投与用量は１０ｍｇ／ｋｇで、連続２１日で投与した。動物の生存期間を観察した。

図４に示すように、Ｒａｊｉ血液腫瘍モデルにおいて、抗ＣＤ４７抗体ｈｚ１４Ａ９－２．３及びｈｚ３Ｆ１０－６．１は抗腫瘍活性を有している。マウスの生存率データによると、ＩｇＧ４群では１７日目に全ての動物が死亡し、生存期間の中央値が１３．５日であった。Ｈｕ５Ｆ９群では３０日目に全ての動物が死亡し、生存期間の中央値が１８．５日であった。ｈｚ１４Ａ９－２．３群では３４日目に全ての動物が死亡し、生存期間の中央値が２８．５日であった。ｈｚ３Ｆ１０－６．１群では２１日目に全ての動物が死亡し、生存期間の中央値が１７．５日であった。これらのデータは、動物の生存期間の延長にかけて抗体ｈｚ１４Ａ９－２．３が他より優れており、抗体ｈｚ３Ｆ１０－６．１とＨｕ５Ｆ９は効果がほぼ同等であった。

実施例１３：抗ＣＤ４７抗体単回投与の毒性検出
ＣＤ４７は赤血球において発現され、老化した赤血球を除去する機能があるため、Ｂ－ｈＣＤ４７マウスにおいて抗ＣＤ４７抗体の毒性効果を比較した。

Ｂ－ｈＣＤ４７マウスを、Ｈｕ５Ｆ９群３匹、ｈｚ１４Ａ９－２．３群４匹、ｈｚ３Ｆ１０－６．１群３匹とランダムに３群に分けた。単回尾静脈注射ではＢ－ｈＣＤ４７マウスにＨｕ５Ｆ９抗体、ｈｚ１４Ａ９－２．３抗体又はｈｚ３Ｆ１０－６．１抗体を一定の用量で投与し、投与用量は１０ｍｇ／ｋｇであった。投与後２日、４日、７日、１０日、１４日で赤血球計数（ＲＢＣ）、ヘモグロビン（ＨＧＢ）量及び体重の変化を測定した。

表１８、図５、図６に示されるように、体重が持続的に増加したのはｈｚ１４Ａ９－２．３群のマウスだけで、Ｈｕ５Ｆ９とｈｚ３Ｆ１０－６．１の２群のマウスは投与後に体重が減少した後、増加した。ｈｚ３Ｆ１０－６．１群の減少幅はＨｕ５Ｆ９群より高かった。表１９、表２０、図７～図１０に示されるように、投与後に３群の動物はいずれもＲＢＣとＨＧＢが減少しており、投与後４日で最小となった後、増加に転じた。ｈｚ１４Ａ９－２．３群は投与後７日でＲＢＣとＨＧＢがほぼ正常に戻り、他２群は少なくとも投与後１０日でほぼ正常に戻った。投与後４日のＲＢＣとＨＧＢの減少幅は、ｈｚ３Ｆ１０－６．１、Ｈｕ５Ｆ９、ｈｚ１４Ａ９－２．３の順に低くなった。これで、抗体ｈｚ１４Ａ９－２．３は、陽性抗体Ｈｕ５Ｆ９より優れており、明らかな毒性がないことが分かった。

実施例１４：
ヒト急性骨髄性白血病細胞ＭＯＬＭ－１６細胞マウスモデルを用いて抗体の抗腫瘍活性を測定した。各ＮＯＤ－ＳＣＩＤマウスにはＭＯＬＭ－１６細胞を皮下接種し、腫瘍が８０～１５０ｍｍ^３になると、動物を（１）モデル群（陰性対照群、ヒトＩｇＧ４５ｍｇ／ｋｇ投与、ｎ＝１０匹）、（２）ｈｚ１４Ａ９－２．３０．５ｍｇ／ｋｇ群（ｎ＝６匹）、（３）ｈｚ１４Ａ９－２．３１．５ｍｇ／ｋｇ群（ｎ＝６匹）、（４）ｈｚ１４Ａ９－２．３５ｍｇ／ｋｇ群（ｎ＝６匹）、（５）Ｈｕ５Ｆ９５ｍｇ／ｋｇ群（ｎ＝６匹）とランダムに５群に分けた。０日目（Ｄ０）で群分けをし、静脈注射で投与し、３日ごとに１回投与し、合計２回の投与とし、週２回で腫瘍の直径を測定し、腫瘍体積から効果を判定した。

腫瘍体積（Ｖ）の計算式は、Ｖ＝（ａ×ｂ^２）／２であり、ここで、ａ、ｂはそれぞれ長さ、幅である。

Ｔ／Ｃ（％）＝（Ｔ－Ｔ_０）／（Ｃ－Ｃ_０）×１００であり、ここで、Ｔ、Ｃはそれぞれ治療群と陰性対照群の実験終了時の平均腫瘍体積である。Ｔ_０とＣ_０はそれぞれ治療群と陰性対照群の実験開始時の平均腫瘍体積である。

腫瘍抑制率（ＴＧＩ）（％）＝１００％－Ｔ／Ｃ（％）。

結果を表２１、表１１に示す。抗体ｈｚ１４Ａ９－２．３は用量１．５ｍｇ／ｋｇにおいて効果的に腫瘍の増殖を阻害することができ、１７日目（Ｄ１７）に腫瘍増殖抑制率（又は腫瘍抑制率）が９３％に達していた。用量５ｍｇ／ｋｇでは、抗体ｈｚ１４Ａ９－２．３の腫瘍増殖抑制率は１２５％に達していた。

Claims

ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分であって、
前記抗原結合ポリペプチドは、
配列番号１、２、３、４、または５から選ばれるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、
配列番号６、７、８、９、または１０から選ばれるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、
配列番号１１、１２、１３、１４、または１５から選ばれるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３と、
配列番号１６、１７、１８、１９、または２０から選ばれるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、
配列番号２１、２２、２３、２４、または２５から選ばれるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、
配列番号２６、２７、２８、３０、または３２から選ばれるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを相補性決定領域として含む前記ＣＤ４７に結合する分離された抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分。
前記抗原結合ポリペプチドは、
配列番号１、２、３、４、または５から選ばれるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、
配列番号６、７、８、９、または１０から選ばれるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、
配列番号１１、１２、１３、１４、または１５から選ばれるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３と、
配列番号１６、１７、１８、１９、または２０から選ばれるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、
配列番号２１、２２、２３、２４、または２５から選ばれるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、
配列番号２６、２７、２８、３０、または３２から選ばれるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを相補性決定領域として含む請求項１に記載の抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分。
前記抗原結合ポリペプチドは、
（ａ）重鎖ＣＤＲ１と、重鎖ＣＤＲ２と、重鎖ＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１と、軽鎖ＣＤＲ２と、軽鎖ＣＤＲ３とを含み、前記重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、及び重鎖ＣＤＲ３はそれぞれ配列番号１、６、及び１１に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、及び軽鎖ＣＤＲ３はそれぞれ配列番号１６、２１、及び２６に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む抗原結合ポリペプチドと、
（ｂ）重鎖ＣＤＲ１と、重鎖ＣＤＲ２と、重鎖ＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１と、軽鎖ＣＤＲ２と、軽鎖ＣＤＲ３とを含み、前記重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、及び重鎖ＣＤＲ３はそれぞれ配列番号２、７、及び１２に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、及び軽鎖ＣＤＲ３はそれぞれ配列番号１７、２２、及び２７に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む抗原結合ポリペプチドと、
（ｃ）重鎖ＣＤＲ１と、重鎖ＣＤＲ２と、重鎖ＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１と、軽鎖ＣＤＲ２と、軽鎖ＣＤＲ３とを含み、前記重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、及び重鎖ＣＤＲ３はそれぞれ配列番号３、８、及び１３に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、及び軽鎖ＣＤＲ３はそれぞれ配列番号１８、２３、及び２８に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む抗原結合ポリペプチドと、
（ｄ）重鎖ＣＤＲ１と、重鎖ＣＤＲ２と、重鎖ＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１と、軽鎖ＣＤＲ２と、軽鎖ＣＤＲ３とを含み、前記重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、及び重鎖ＣＤＲ３はそれぞれ配列番号４、９、及び１４に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、及び軽鎖ＣＤＲ２、軽鎖ＣＤＲ３はそれぞれ配列番号１９、２４、及び３２に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む抗原結合ポリペプチドと、
（ｅ）重鎖ＣＤＲ１と、重鎖ＣＤＲ２と、重鎖ＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１と、軽鎖ＣＤＲ２と、軽鎖ＣＤＲ３とを含み、前記重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、及び重鎖ＣＤＲ３はそれぞれ配列番号５、１０、及び１５に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、及び軽鎖ＣＤＲ３はそれぞれ配列番号２０、２５、及び３０に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む抗原結合ポリペプチドとからなる群から選ばれる請求項１又は２に記載の抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分。
前記抗原結合ポリペプチドは、
（１）
配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、
配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、
配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、
配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び
配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
（２）
配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、
配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、
配列番号１２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、
配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び
配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
（３）
配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、
配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、
配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、
配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号２３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び
配列番号２８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
（４）
配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、
配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、
配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号２４のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び
配列番号３２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
または、
（５）
配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、
配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、
配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、
配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、
配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び
配列番号３０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
のいずれかを相補性決定領域として含む請求項１～３のいずれか１項に記載の抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分。
前記抗原結合ポリペプチドは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域は配列番号３３、３５、３７、３９、４１、８３、８５、または８７から選ばれるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は配列番号３４、３６、３８、４０、４２、８４、８６、または８８から選ばれるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む請求項１に記載の抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分。
前記抗原結合ポリペプチドは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域は、配列番号３３、３５、３７、３９、４１、８３、８５、または８７から選ばれるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号３４、３６、３８、４０、４２、８４、８６、または８８から選ばれるアミノ酸配列を含む請求項５に記載の抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分。
前記抗原結合ポリペプチドは、
（ａ）重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域は、配列番号３３のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号３４のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む抗原結合ポリペプチドと、
（ｂ）重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域は、配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号３６のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む抗原結合ポリペプチドと、
（ｃ）重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域は、配列番号３７のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号３８のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む抗原結合ポリペプチドと、
（ｄ）重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域は、配列番号３９のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号４０のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む抗原結合ポリペプチドと、
（ｅ）重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域は、配列番号４１のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号４２のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む抗原結合ポリペプチドと、
（ｆ）重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域は、配列番号８３のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号８４のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む抗原結合ポリペプチドと、
（ｇ）重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域は、配列番号８５のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号８６のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む抗原結合ポリペプチドと、
（ｈ）重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域は、配列番号８７のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号８８のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む抗原結合ポリペプチドとからなる群から選ばれる請求項５に記載の抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分。
前記抗原結合ポリペプチドは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域は配列番号３３のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は配列番号３４のアミノ酸配列を含み、
前記重鎖可変領域は配列番号３５のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は配列番号３６のアミノ酸配列を含み、
前記重鎖可変領域は配列番号３７のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は配列番号３８のアミノ酸配列を含み、
前記重鎖可変領域は配列番号３９のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は配列番号４０のアミノ酸配列を含み、
前記重鎖可変領域は配列番号４１のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は配列番号４２のアミノ酸配列を含み、
前記重鎖可変領域は配列番号８３のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は配列番号８４のアミノ酸配列を含み、
前記重鎖可変領域は配列番号８５のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は配列番号８６のアミノ酸配列を含み、
前記重鎖可変領域は配列番号８７のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は配列番号８８のアミノ酸配列を含み、
前記重鎖可変領域は配列番号８１のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は配列番号８２のアミノ酸配列を含み、又は、
前記重鎖可変領域は配列番号７９のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は配列番号８０のアミノ酸配列を含む請求項５～７のいずれか１項に記載の抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分。
前記抗原結合ポリペプチドは、重鎖と軽鎖とを含み、前記重鎖は、配列番号８９、９３、９７、１０１、１０５、１０９、１１３、１１７、１２１、１２５、１２９、１３３、１３７、１４１、１４５、１４９、１５３、１５７、１６１、１６５、１６９、１７３、１７７、１８１又は１８５から選ばれるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、前記軽鎖は、配列番号９１、９５、９９、１０３、１０７、１１１、１１５、１１９、１２３、１２７、１３１、１３５、１３９、１４３、１４７、１５１、１５５、１５９、１６３、１６７、１７１、１７５、１７９、１８３、又は１８７から選ばれるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を有する請求項１～８のいずれか１項に記載の抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分。
前記抗原結合ポリペプチドは、
配列番号８９に示される重鎖と配列番号９１に示される軽鎖とを含み、
配列番号９３に示される重鎖と配列番号９５に示される軽鎖とを含み、
配列番号９７に示される重鎖と配列番号９９に示される軽鎖とを含み、
配列番号１０１に示される重鎖と配列番号１０３に示される軽鎖とを含み、
配列番号１０５に示される重鎖と配列番号１０７に示される軽鎖とを含み、
配列番号１０９に示される重鎖と配列番号１１１に示される軽鎖とを含み、
配列番号１１３に示される重鎖と配列番号１１５に示される軽鎖とを含み、
配列番号１１７に示される重鎖と配列番号１１９に示される軽鎖とを含み、
配列番号１２１に示される重鎖と配列番号１２３に示される軽鎖とを含み、
配列番号１２５に示される重鎖と配列番号１２７に示される軽鎖とを含み、
配列番号１２９に示される重鎖と配列番号１３１に示される軽鎖とを含み、
配列番号１３３に示される重鎖と配列番号１３５に示される軽鎖とを含み、
配列番号１３７に示される重鎖と配列番号１３９に示される軽鎖とを含み、
配列番号１４１に示される重鎖と配列番号１４３に示される軽鎖とを含み、
配列番号１４５に示される重鎖と配列番号１４７に示される軽鎖とを含み、
配列番号１４９に示される重鎖と配列番号１５１に示される軽鎖とを含み、
配列番号１５３に示される重鎖と配列番号１５５に示される軽鎖とを含み、
配列番号１５７に示される重鎖と配列番号１５９に示される軽鎖とを含み、
配列番号１６１に示される重鎖と配列番号１６３に示される軽鎖とを含み、
配列番号１６５に示される重鎖と配列番号１６７に示される軽鎖とを含み、
配列番号１６９に示される重鎖と配列番号１７１に示される軽鎖とを含み、
配列番号１７３に示される重鎖と配列番号１７５に示される軽鎖とを含み、
配列番号１７７に示される重鎖と配列番号１７９に示される軽鎖とを含み、
配列番号１８１に示される重鎖と配列番号１８３に示される軽鎖とを含み、又は
配列番号１８５に示される重鎖と配列番号１８７に示される軽鎖とを含む請求項１～９のいずれか１項に記載の抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分。
前記抗原結合ポリペプチドは、キメラ形態、ヒト化したもの又は完全ヒトしたものである請求項１～１０のいずれか１項に記載の抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分。
前記抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分は、モノクローナル抗体、融合タンパク質、多重特異性抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｄフラグメント、Ｆｖフラグメント、ｄＡｂフラグメント、分離されたＣＤＲ領域、及びｓｃＦｖからなる群から選ばれる、請求項１～１１のいずれか１項に記載の抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分。
前記抗原結合ポリペプチドは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４型である請求項１～１２のいずれか１項に記載の抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分。
ＩｇＧ４型の抗原結合ポリペプチドはＥＵ番号で特定したＳ２２８Ｐ突然変異を有する請求項１３に記載の抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分。
前記抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分は、
（ａ）１．８９Ｅ－０８又はそれ未満のＫ_Ｄ値でＣＤ４７に結合する特性、
（ｂ）ＣＤ４７とＳＩＲＰαの結合をブロックする特性、
（ｃ）マクロファージによって媒介されるＣＤ４７発現細胞への食作用を促進する特性、
（ｄ）明らかなＣＤ４＋Ｔ細胞のアポトーシスを誘発しない特性、
（ｅ）実質的な赤血球減少、貧血又は赤血球凝集を引き起こさない特性、及び
（ｆ）融解温度Ｔ≧６２℃で、凝集温度Ｔａｇｇ≧６１℃である特性、
の１つ又は複数の組み合わせを示している、請求項１～１４のいずれか１項に記載の抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分。
請求項１～１５のいずれか１項に記載の抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分と、前記抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分に接続又は結合される治療剤とを含む免疫複合体。
前記治療剤は、細胞毒性薬、放射性同位体、免疫調節剤又は抗体である請求項１６に記載の免疫複合体。
成分Ａと薬学的に許容される担体とを含み、成分Ａは請求項１～１５のいずれか１項に記載の抗原結合ポリペプチド若しくはその抗原結合部分、又は請求項１６若しくは１７に記載の免疫複合体である組成物。
請求項１～１５のいずれか１項に記載の抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分をコードする分離された核酸。
請求項１９に記載の分離された核酸を含むベクター。
請求項２０に記載のベクターを含み、又はゲノムに請求項１９に記載の分離された核酸が組み込まれている宿主細胞。
請求項１～１５のいずれか１項の抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分をコードする核酸の発現に適する条件において請求項２１に記載の宿主細胞を培養し、発現された前記抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分を分離することを含む請求項１～１５のいずれか１項に記載の抗原結合ポリペプチド又はその抗原結合部分の製造方法。
治療有効量の請求項１～１５のいずれか１項に記載の分離された抗原結合ポリペプチド若しくはその抗原結合部分、請求項１６若しくは１７に記載の免疫複合体、又は請求項１８に記載の組成物を対象者に投与することを含む対象者において腫瘍を低減し又は腫瘍細胞の増殖を阻害する方法。
治療有効量の請求項１～１５のいずれか１項に記載の抗原結合ポリペプチド若しくはその抗原結合部分、請求項１６若しくは１７に記載の免疫複合体、又は請求項１８に記載の組成物を対象者に投与することを含むしかるべき対象者においてがんを治療する方法。
前記がんは、白血病、リンパ腫、卵巣がん、乳がん、子宮内膜がん、結腸がん、直腸がん、膀胱がん、尿路上皮がん、肺がん、気管支がん、骨がん、前立腺がん、膵臓がん、胃がん、肝細胞がん、胆嚢がん、胆管がん、食道がん、腎細胞がん、甲状腺がん、頭頸部がん、精巣がん、内分泌腺がん、副腎がん、脳下垂体がん、皮膚がん、軟部組織がん、血管がん、脳腫瘍、神経内分泌がん、眼がん、髄膜がん腫症、中咽頭がん、下咽頭がん、子宮頸がん、子宮がん、膠芽腫、髄芽腫、星細胞腫、神経膠腫、髄膜腫、ガストリノーマ、神経芽腫、黒色腫、急性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、及び肉腫からなる群から選ばれることを特徴とする請求項２４に記載の方法。
有効量の請求項１～１５のいずれか１項に記載の抗原結合ポリペプチド若しくはその抗原結合部分、請求項１６若しくは１７に記載の免疫複合体、又は請求項１８に記載の組成物を対象者に投与することを含む対象者におけるマクロファージの食作用を促進する方法。