JP2023517794A - 抗ｔｎｆｒ２抗体及びその使用 - Google Patents

抗ｔｎｆｒ２抗体及びその使用 Download PDF

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Abstract

本発明は、ＴＮＦＲ２に特異的なモノクローナル抗体及びその抗原結合断片、ならびにＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１免疫チェックポイントのアンタゴニストとの併用療法を含む、がんまたは自己免疫障害を治療するためにそれを使用する方法を提供する。【選択図】なし

Description

関連出願への参照
の出願は、２０２０年１月６日に出願された米国仮特許出願第６２／９５７，５４３号及び２０２０年６月１９日に出願された同第６３／０４１，２３４号の出願日の権益を主張し、いずれもの図面及び配列表を含めた、上記のそれぞれの出願の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１Ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ）及びＣＤ１２０ｂとしても知られる腫瘍壊死因子受容体２（ＴＮＦＲ２）は、４つのシステイン－リッチドメイン（ＣＲＤ１からＣＲＤ４）を有する細胞外ドメイン（ＥＣＤ、残基１～２５７）、膜貫通ドメイン（ＴＭ、残基２５８～２８７）、及びＴＲＡＦ２結合ドメインを有する細胞内ドメイン（ＩＣＤ、残基２８８～４６１）を含む７５ｋＤａのＩ型膜貫通タンパク質である。ＴＮＦＲ２は、他のＴＮＦα受容体である腫瘍壊死因子受容体１（ＴＮＦＲ１）と比較的低い配列同一性を共有しており、それらの細胞外ドメイン間の相同性はわずか２８％である。
ＴＮＦＲ２は３：３三量体化モードでＴＮＦαリガンドに結合する。ＴＮＦＲ２とＴＮＦαの共結晶構造が解明され、それぞれのＴＮＦＲ２分子が２つのＴＮＦαリガンドに結合することが示されている。さらに、ＴＮＦαは４２０ｐＭのＫｄでＴＮＦＲ２に結合する。これはＴＮＦＲ１への結合（Ｋｄ＝１９ｎＭ）よりも約２０倍弱い。当然、ＴＮＦαは他のすべてが等しいＴＮＦＲ１に優先的に結合する。
正常なＴ細胞では、ＴＮＦα－ＴＮＦＲ２の相互作用がＮＦｋＢシグナル伝達経路を介して細胞生存シグナルを引き起こす。しかしながら、自己免疫Ｔ細胞では、ＴＮＦα－ＴＮＦＲ２の相互作用がカスパーゼ経路を介してアポトーシスシグナルを引き起こす。
ヒトＴＮＦＲ２はマウスＴＮＦＲ２と６２％のアミノ酸配列相同性を示すが、アカゲザルＴＮＦＲ２と９７％同一である。
ＴＮＦＲ１は遍在的に発現するが、ＴＮＦＲ２の発現は主に免疫細胞に限定され、腫瘍浸潤性免疫抑制ＣＤ４＋ＦｏｘＰ３＋制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）によって主に高度に発現する。最近の研究では、ＴＮＦＲ２が、抗腫瘍免疫応答の主要なチェックポイントであるＴｒｅｇの活性化と増殖を刺激する上で重要な役割を果たしていることが示されている（Ｃｈｅｎ ａｎｄ Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍ，Ｓｃｉ Ｓｉｇｎａｌ １０：ｅａａｌ２３２８，２０１７）。リガンドＴＮＦαを介したＴＮＦＲ２の活性化は、ＮＦｋＢシグナル伝達の活性化とＴＮＦＲ２＋Ｔｒｅｇの拡大をもたらす。ＴＮＦＲ２は、骨髄細胞だけでなく、ＣＤ８及びＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ細胞でも発現している。特に、ＴＮＦＲ２は、臨床的に検証された免疫チェックポイントと同様に、疲弊したＣＤ８Ｔ細胞で発現する。
Ｔ制御性細胞（Ｔｒｅｇ）は、Ｔリンパ球の小さなサブセットであり、さまざまな臨床応用がある。一方で、ＴＮＦＲ２＋Ｔｒｅｇは免疫抑制性が高く、抑制性の高いＣＤ１０３＋Ｔｒｅｇよりも強力な抑制活性を有する（Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７９：１５４－１６１，２００７；Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １８０：６４６７－６４７１，２００８）。したがって、ＴＮＦＲ２＋Ｔｒｅｇは、移植、アレルギー、喘息、感染症、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、及び自己免疫など、Ｔｒｅｇの免疫抑制活性に依存する治療に使用できる。例えば、実験的なＧＶＨＤマウスモデルでは、ＣＤ４＋ＣＤ２５高Ｆｏｘｐ３＋胸腺由来のＴｒｅｇ枯渇がＧＶＨＤを強める可能性がある（Ｃｏｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，ＪＥＭ ２００２）。
ＴＮＦＲ２は、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、腎癌などの特定のがんでも発現しており（Ｆｒｏｎｔ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ９：１１７０，２０１８）、これらのがんの免疫寛容に関与している可能性がある。これらのがん細胞の生存と増殖は、ＴＮＦＲ２（ＴＮＦα）のリガンドによって促進される。ＴＮＦＲ２は、腫瘍細胞で異なるシグナル経路を使用することにより、腫瘍発生のさまざまなプロセスに関与することが示されている。例えば、核内因子－κＢ（ＮＦκＢ）は、上皮細胞のＴＮＦＲ２関連の悪性形質転換に関与している。ＡＫＴシグナル伝達は、発がん、腫瘍増殖、及び血管新生におけるＴＮＦＲ２の別のメディエーターであることが示されている。一方、ミオシン軽鎖キナーゼ（ＭＬＣＫ）と細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）も、上記のＴＮＦＲ２機能にとって重要である。したがって、ＴＮＦＲ２機能を阻害すると、がん免疫においてＴｒｅｇ機能が阻害され、抗腫瘍Ｔ細胞応答が増加し得る。
したがって、ＴＮＦＲ２＋Ｔｒｅｇ上のＴＮＦＲ２機能を刺激することによって自己免疫障害を治療するためにＴｒｅｇの免疫抑制機能を増強するか、またはがんなどの疾患を治療するためにＴＮＦＲ２活性化を阻害することを可能にする治療試薬を開発する必要性が存在する。
一態様では、本発明は、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片が、ヒトＴＮＦＲ２に特異的であり、前記モノクローナル抗体が：（１ａ）配列番号１のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号２のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号３のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と；（１ｂ）配列番号４のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号５のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号６のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；または（２ａ）配列番号１４のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号１５のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号１６のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と；（２ｂ）配列番号１７のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号１８のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号１９のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；または（３ａ）配列番号２６のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号２７のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号２８のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と；（３ｂ）配列番号２９のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号３０のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号３１のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；または（４ａ）配列番号３９のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号４０のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号４１のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と；（４ｂ）配列番号４２のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号４３のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号４４のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；または（５ａ）配列番号５１のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号５２のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号５３のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と；（５ｂ）配列番号５４のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号５５のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号５６のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；または（６ａ）配列番号６３のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号６４のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号６５のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と；（６ｂ）配列番号６６のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号６７のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号６８のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片を提供する。
特定の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片において、（１Ａ）ＨＣＶＲ配列は配列番号７であり；及び／または、（１Ｂ）ＬＣＶＲ配列は配列番号８であり、または（２Ａ）ＨＣＶＲ配列は配列番号２０であり；及び／または、（２Ｂ）ＬＣＶＲ配列は配列番号２１であり、または、（３Ａ） ＨＣＶＲ配列は配列番号３２であり；及び／または、（３Ｂ）ＬＣＶＲ配列は配列番号３３であり、または（４Ａ）ＨＣＶＲ配列は配列番号４５であり；及び／または、（４Ｂ）ＬＣＶＲ配列は配列番号４６であり、または（５Ａ）ＨＣＶＲ配列は配列番号５７であり；及び／または、（５Ｂ）ＬＣＶＲ配列は配列番号５８であり、または（６Ａ）ＨＣＶＲ配列は配列番号６９であり；及び／または（６Ｂ）ＬＣＶＲ配列は配列番号７０である。
特定の実施形態では、モノクローナル抗体は、：（１ａ）配列番号９の重鎖配列；及び／または、（１ｂ）配列番号１０の軽鎖配列、または（２ａ）配列番号２２の重鎖配列；及び／または、（２ｂ）配列番号２３の軽鎖配列、または（３ａ）配列番号３４の重鎖配列；及び／または、（３ｂ）配列番号３５の軽鎖配列、または（４ａ） 配列番号４７の重鎖配列；及び／または、（４ｂ）配列番号４８の軽鎖配列、または（５ａ）配列番号５９の重鎖配列；及び／または、（５ｂ）配列番号６０の軽鎖配列、または（６ａ）配列番号７１の重鎖配列；及び／または（６ｂ）配列番号７２の軽鎖配列を有する。
特定の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒトマウスキメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、ＣＤＲ移植抗体、または表面再構成抗体である。
特定の実施形態では、その抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、単鎖ＦｖまたはｓｃＦｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、Ｖ－ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）３、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、シングルドメイン抗体、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、（ｓｃＦｖ）２、またはｓｃＦｖ－Ｆｃである。
特定の実施形態では、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、アカゲザルＴＮＦＲ２と交差反応するが、マウスＴＮＦＲ２と実質的に交差反応しない。
特定の実施形態では、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、抗体の開発可能性を改善するように設計されたそのアミノ酸配列の１つ以上の点変異を含む。例えば、特定の実施形態では、１つ以上の点変異は、宿主細胞におけるその発現中、製造中のその精製、及び／または製剤化プロセス中、及び／または対象患者へのその投与中に抗体をより安定にする。特定の実施形態では、１つ以上の点変異は、製造及び／または製剤化プロセス中に抗体が凝集する可能性を低くする。
特定の実施形態では、本発明は、その配列中の１つ以上のアミノ酸（例えば、そのＣＤＲの１つ以上において）を置換することによって、疎水性の除去または低減及び／または電荷の最適化など、開発可能性の問題を最小化または低減した治療用抗体を提供する。
特定の実施形態では、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ＴＮＦＲ１と実質的に交差反応しない。
特定の実施形態では、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、約２５ｎＭ、２０ｎＭ、１５ｎＭ、１０ｎＭ、５ｎＭ、２ｎＭ、または１ｎＭ未満のＫｄでＴＮＦαに結合する。
特定の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ＴＮＦαとＴＮＦＲ２との間の結合を増強する；ＴＮＦαを介するかまたは共刺激されたＮＦκＢシグナル伝達を増強する（例えば、ＴＣＲ活性化ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ Ｔ細胞において）；及び／またはＴｒｅｇの存在下でＴＣＲ活性化エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ Ｔ細胞）の増殖を促進する。
特定の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、Ｔｒｅｇ上でのＴＮＦα媒介性ＣＤ２５発現を増強する。
特定の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１３のエピトープに結合する。
特定の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ＴＮＦＲ２へのＴＮＦαの結合を促進する；ＴＮＦαのＴＮＦＲ２への結合を阻害する；または、ＴＮＦＲ２へのＴＮＦαの結合に明らかな影響はない。
特定の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ＴＮＦＲ２へのＴＮＦαの結合を遮断、阻害、またはそうでなければ実質的に拮抗しない。
特定の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ＴＮＦＲ２のアゴニストであるか、またはＴＮＦＲ２シグナル伝達を刺激し（例えば、ＴＮＦαの存在下で）、アゴニスト機能は、好ましくはＦｃ非依存性である。
特定の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、インビトロで、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞、他のエフェクターＴ細胞、及び／またはＮＫ細胞を活性化する。
本発明の別の態様は、配列番号１３のエピトープへの結合について、対象抗体のいずれか１つの単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と競合する、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を提供する。
本発明の別の態様は、配列番号１３のエピトープに特異的に結合する、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を提供する。
特定の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ＴＮＦαとＴＮＦＲ２との間の結合を増強する；ＴＮＦαを介するかまたは共刺激されたＮＦκＢシグナル伝達を増強する（例えば、ＴＣＲ活性化ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ Ｔ細胞において）；及び／またはＴｒｅｇの存在下でＴＣＲ活性化エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ Ｔ細胞）の増殖を促進する。
特定の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ＴＮＦαとＴＮＦＲ２との間の結合を阻害する；ＴＮＦαを介するかまたは共刺激されたＮＦκＢシグナル伝達を阻害する（例えば、ＴＣＲ活性化ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ Ｔ細胞において）；及び／またはＴｒｅｇの存在下でＴＣＲ活性化エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ Ｔ細胞）の増殖を阻害する。
特定の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、Ｔｒｅｇ拡大を促進する。
本発明の別の態様は、同じエピトープへの結合について、本発明の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と競合する、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を提供する。
本発明の別の態様は、それを必要とする患者におけるがんまたは自己免疫障害（ＧＶＨＤ（移植片対宿主疾患）及び関節リウマチなどのＡＩＤ）を治療する方法であって、この方法は、患者に本発明の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片の有効量を投与することを含む方法を提供する。
特定の実施形態では、この方法は、ＡＩＤを治療するためのものであり、この方法は、慢性ＧＶＨＤを治療する際の低用量抗ＩＬ２剤、または関節リウマチ、慢性尋常性乾癬、クローン病、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、多関節若年性特発性関節炎、ＩＢＳ、ＥＡＥ、及び非感染性ブドウ膜炎を治療する際の抗ＴＮＦα剤（アダリムマブ、インフリキシマブ、エテネルセプト、ゴリムマブなど）などの第２の薬剤を投与することをさらに含む。
特定の実施形態では、この方法は、がんを治療するためのものであり、この方法は、免疫チェックポイントのアンタゴニストを投与することをさらに含む。
特定の実施形態では、免疫チェックポイントは、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１免疫チェックポイントである。
特定の実施形態では、免疫チェックポイントのアンタゴニストは、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に特異的な抗体またはその抗原結合断片である。
特定の実施形態では、抗体は、セミプリマブ、ニボルマブ、またはペムブロリズマブなどの抗ＰＤ－１抗体である。
特定の実施形態では、抗体は、アベルマブ、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、ＫＮ０３５、またはＣＫ－３０１などの抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。
特定の実施形態では、免疫チェックポイントのアンタゴニストは、ＡＵＮＰ１２などのＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の（非抗体）ペプチド阻害剤；ＣＡ－１７０などのＰＤ－Ｌ１の小分子阻害剤、またはＢＭＳ－９８６１８９などの大環状ペプチドである。
特定の実施形態では、がんは、乳癌、結腸癌、子宮頸癌、腎癌、肝臓癌（例えば、肝細胞癌）、肺癌（例えば、ＮＳＣＬＣ）、卵巣癌、黒色腫、皮膚癌（例えば、扁平上皮癌または基底細胞癌）、リンパ腫、または白血病である。いくつかの実施形態では、がんは、黒色腫である。
特定の実施形態では、この方法は、化学療法剤、抗血管新生剤、増殖阻害剤、腫瘍免疫療法薬、及び／または抗腫瘍性組成物を患者に投与することをさらに含む。
本発明の別の態様は、本発明の重鎖または軽鎖またはその抗原結合部分をコードするポリヌクレオチドを提供する。
特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、ヒト細胞における発現のためにコドン最適化されている。
別の態様では、本発明は、本発明のポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。
特定の実施形態では、ベクターは、発現ベクター（例えば、哺乳動物発現ベクター、酵母発現ベクター、昆虫発現ベクター、または細菌発現ベクター）である。
ヒト－マウスキメラモノクローナル抗体ＨＦＢ３－１、－３、－６、－１４、－１８、－１９、－２０、－２１、－２２、－２３、－２４、及びＨＦＢ３－２５のＶＨ及びＶＬ領域の配列アラインメント、ならびにそれらのコンセンサス配列を示す。 組換えヒトＴＮＦＲ２の細胞外ドメインに対して生じた選択されたヒト－マウスキメラモノクローナル抗体の結合親和性を示す。ヒトＴＮＦＲ２（ＣＨＯ．ｈＨＦＢ３）またはアカゲザルＴＮＦＲ２（ＣＨＯ．ｍｋＨＦＢ３）を発現するＣＨＯ細胞に対して、試験抗体及びアイソタイプが一致した陰性対照抗体のＥＣ５０及びＥｍａｘ値を測定した。 異なる抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体が、ＴＮＦＲ２へのＴＮＦαの結合を促進（ＨＦＢ３－１）または阻害（ＨＦＢ３－１８）、または結合に影響を及ぼさない（ＨＦＢ３－６）可能性を示す。 親のＣＨＯ細胞株に対してヒト－マウスキメラモノクローナル抗体が結合しないこと、及びマウスＴＮＦＲ２を発現するＣＨＯ細胞に対して結合しないこと（ＨＦＢ３－１８及びＨＦＢ３－１９抗体によるわずかな結合を除く）を示す。 ＴＮＦＲ１ではなくＴＮＦＲ２に対して特異的なヒト－マウスキメラ抗体の結合特異性を示す。 Ｈｉｓタグ付き組換えヒトＴＮＦＲ２に対するヒトマウスキメラ抗体、ＨＦＢ３－１、－１４及び－１８のＫｄ、ｋｏｎ、及びｋｏｆｆ値を示す。 腫瘍浸潤リンパ球、特に疲弊したＣＤ８ Ｔ細胞におけるＴ細胞サブタイプでのＴＮＦＲ２の発現を示す。 ＴＣＲ活性化（下のパネル）及び非ＴＣＲ活性化（上のパネル）の初代Ｔｒｅｇ、ＣＤ８、及びＣＤ４ Ｔｃｏｎｖに対する抗ＴＮＦＲ２キメラモノクローナル抗体の細胞結合を示す。ＣＤ３／ＣＤ２８共刺激（ＴＣＲ活性化）によって活性化された初代Ｔ細胞は、ＨＦＢ３抗体によって優先的に認識され得る。 ＴＣＲ活性化（下のパネル）及び非ＴＣＲ活性化（上のパネル）の初代Ｔｒｅｇ、ＣＤ８、及びＣＤ４ Ｔｃｏｎｖに対する抗ＴＮＦＲ２キメラモノクローナル抗体の細胞結合を示す。ＣＤ３／ＣＤ２８共刺激（ＴＣＲ活性化）によって活性化された初代Ｔ細胞は、ＨＦＢ３抗体によって優先的に認識され得る。 ＨＦＢ３－１、－１４、－１８、－２３、－２４、及び－２５を含む本発明の特定のＨＦＢ３抗体がＮＦκＢシグナル伝達を誘発し、その効果がＴＮＦαリガンドの存在下で増強され得ることを示す。 ＨＦＢ３－１、－１４、－１８、及び－２５を含む特定の対象モノクローナル抗体と、ＣＤ３／ＣＤ２８とによる共刺激が、用量依存的にＣＤ８及びＣＤ４ Ｔｃｏｎｖの増殖をもたらしたことを示す。 本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体（例えば、ＨＦＢ３－１のヒト化バージョンであるＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１ＡＡ）が、Ｔｒｅｇの存在下でエフェクターＴ細胞（ＣＤ８及びＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ）での細胞増殖を用量依存的に支持したことを示す。 本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体（例えば、ＨＦＢ３－１のヒト化バージョンであるＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１ＡＡ）が、Ｔｒｅｇの存在下でエフェクターＴ細胞（ＣＤ８及びＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ）での細胞増殖を用量依存的に支持したことを示す。 本発明の抗ＴＮＦＲ２抗体に対するＡＤＣＣ効果の欠如を示す。 ＴＮＦα結合部位を含む、ＴＮＦＲ２（ＨＦＢ２００３と呼ばれる）のＨｉｓタグ付き細胞外ドメイン（ＥＣＤ）のさまざまな特徴、ならびにモノクローナル抗体ＨＦＢ３－１及びＨＦＢ３－１４、ならびにＨＦＢ３－１８のエピトープマッピングの結果を示す。これらは、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を持つマウスキメラ抗体であるため、それぞれＨＦＢ３－１－ｈＧ１、ＨＦＢ３－１４－ｈＧ１、またはＨＦＢ３－１８－ｈＧ１とも呼ばれる。ＨＦＢ３－１抗体はＥＣＤのＣＲＤ２領域に結合し、ＨＦＢ３－１４はＥＣＤのＣＲＤ３領域に結合し、ＨＦＢ３－１８はＥＣＤのＣＲＤ１領域に結合する。 ＴＮＦα結合部位を含む、ＴＮＦＲ２（ＨＦＢ２００３と呼ばれる）のＨｉｓタグ付き細胞外ドメイン（ＥＣＤ）のさまざまな特徴、ならびにモノクローナル抗体ＨＦＢ３－１及びＨＦＢ３－１４、ならびにＨＦＢ３－６のエピトープマッピングの結果を示す。これらは、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を持つマウスキメラ抗体であるため、それぞれＨＦＢ３－１－ｈＧ１、ＨＦＢ３－１４－ｈＧ１、またはＨＦＢ３－６－ｈＧ１とも呼ばれる。ベンチマーク抗体ＳＢＴ－１及びＳＢＴ－４（ベンチマーク１及び２）のエピトープマッピングデータも含む。ＨＦＢ３－１抗体はＥＣＤのＣＲＤ２領域に結合し、ＨＦＢ３－１４とＨＦＢ３－６はＥＣＤのＣＲＤ３領域に結合する。 ＴＮＦＲ２－ＴＮＦα複合体上のＨＦＢ３－１、ＨＦＢ３－１４、ＨＦＢ３－６、ならびにＨＦＢ－３－１８の結合部位を示す３Ｄモデルを提供する。 キメラモノクローナル抗体ＨＦＢ３－１、－１４、及び－１８のヒト化バリアントの、ヒトＴＮＦＲ２を発現するＣＨＯ細胞（ＣＨＯ．ｈＴＮＦＲ２）への結合を示すが、親ＣＨＯ細胞への結合は示さない。 選択されたヒト化抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体の結合親和性を示す。ヒト化抗体及び親キメラ抗体のＥＣ５０値は、ヒトＴＮＦＲ２を発現するＣＨＯ細胞（ＣＨＯ．ｈＨＦＢ３）に対して測定された。 選択されたヒト化抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体の結合親和性を示す。ヒト化抗体及び親キメラ抗体のＥＣ５０値は、ヒトＴＮＦＲ２を発現するＣＨＯ細胞（ＣＨＯ．ｈＨＦＢ３）に対して測定された。 選択されたヒト化抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体の結合親和性を示す。ヒト化抗体及び親キメラ抗体のＥＣ５０値は、アカゲザルＴＮＦＲ２を発現するＣＨＯ細胞（ＣＨＯ．ｍｋＨＦＢ３）に対して測定された。 選択されたヒト化抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体の結合親和性を示す。ヒト化抗体及び親キメラ抗体のＥＣ５０値は、アカゲザルＴＮＦＲ２を発現するＣＨＯ細胞（ＣＨＯ．ｍｋＨＦＢ３）に対して測定された。 ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、組換えヒト及びカニクイザルＴＮＦＲ２へのヒト化抗ＴＮＦＲ２抗体の結合を示すが、組換えヒトＴＮＦＲ１への結合は示していない。 ＡＨＣ（抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ捕捉）バイオセンサー測定に基づく、ヒト化バリアントならびに親キメラモノクローナル抗体ＨＦＢ３－１及び－１４による組換えヒトＴＮＦＲ２に対する結合親和性の結果を示す。値は、２つの異なる日から得られた２つの実験の平均であった。 ＴＣＲ活性化ＣＤ８ Ｔ細胞へのヒト化抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体の細胞結合を示す。 ＴＣＲ活性化ＣＤ４ Ｔ細胞を増殖させるためのヒト化抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体の共刺激効果を示す。 ＴＣＲ活性化ＣＤ４ Ｔ細胞を増殖させるためのヒト化抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体の共刺激効果を示す。 特定のヒト化バリアント抗ＴＮＦＲ２抗体及びＴＮＦαを使用したＴｒｅｇの共刺激が、ＮＦκＢ下流シグナル伝達をもたらしたことを示す。 特定のヒト化バリアント抗ＴＮＦＲ２抗体及びＴＮＦαを使用したＴｒｅｇの共刺激が、ＮＦκＢ下流シグナル伝達をもたらしたことを示す。 本発明のヒト化バリアント抗ＴＮＦＲ２抗体が貯蔵において安定であることを示している。 共刺激初代Ｔ細胞に対する抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体ＨＦＢ３－１８（ＨＦＢ３－１及び－１４ではない）のＦｃγＲ架橋依存性を示す。 ＴＮＦαの存在下または非存在下のいずれかで、ＣＤ８ Ｔ細胞を増殖させるための選択されたヒト化抗ＴＮＦＲ２抗体の確認的共刺激効果を示す。 本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体が、ＣＤ３／ＣＤ２８媒介ＴＣＲ活性化及び２５ｎｇ／ｍＬＴＮＦαの存在下で、ヒト化ＴＮＦＲ２ノックインＣＤ８及びＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ細胞においてエクスビボで下流ＮＦκＢシグナル伝達を共刺激することを示す。 本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体が、ＣＤ３／ＣＤ２８媒介ＴＣＲ活性化及び２５ｎｇ／ｍＬＴＮＦαの存在下で、ヒト化ＴＮＦＲ２ノックインＣＤ８及びＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ細胞においてエクスビボで下流ＮＦκＢシグナル伝達を共刺激することを示す。 可溶性ＩＬ－２（１０ｎｇ／ｍＬ）及びＩＬ－１５（１０ｎｇ／ｍＬ）で刺激した後の、ヒト化ＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１抗体及び親ＨＦＢ３－１－ｈＧ１抗体による単離されたナチュラルキラー（ＮＫ）細胞のエクスビボ活性化を示す。実験のタイムラインは上部パネルに示される。ＣＤ１０７αとＴＮＦＲ２の発現はＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１とＨＦＢ３－１－ｈＧ１によって用量依存的に上方制御されたが、アイソタイプ対照と抗ＯＸ４０抗体（ＢＭＳ）は短期間のＮＫ活性化を引き起こすことができなかった。 プレート結合抗ＣＤ３（１μｇ／ｍＬ）及び可溶性抗ＣＤ２８（１μｇ／ｍＬ）で刺激した後のＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１及び親マウスＨＦＢ３－１－ｈＧ１による全末梢血単核細胞画分におけるナチュラルキラー（ＮＫ）細胞のエクスビボ活性化を示す。実験のタイムラインは上部パネルに示される。ＣＤ３－／ＣＤ５６＋細胞の中で、ＣＤ１０７αの発現はＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１及びＨＦＢ３－１－ｈＧ１によって用量依存的に上方制御されたが、対照抗ＯＸ４０抗体（ＭＢＳ）は短期間のＮＫ活性化を引き起こすことができない。 マウスＭＣ３８腫瘍モデルにおける薬力学的実験のタイムラインを示す。０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、及び１０ｍｇ／ｋｇの投与量のＨＦＢ３－１－ｈＧ１の２用量、または１０ｍｇ／ｋｇのアイソタイプが一致した対照抗体（ＴＴ）を３日間隔で腹腔内投与した。 ＭＣ３８腫瘍における総免疫細胞数に対する抗体投与のインビボ効果を示す。ＨＦＢ３－１－ｈＧ１を１０ｍｇ／ｋｇで投与すると、ＣＤ４５＋細胞の絶対細胞数が増加した。一元配置分散分析検定に基づくｐ値＜０．０５（＊）。 ＭＣ３８腫瘍における異なる免疫細胞の細胞数に対するインビボ効果を示す。ＨＦＢ３－１－ｈＧ１を１０ｍｇ／ｋｇで投与すると、腫瘍微小環境におけるＣＤ８＋、通常型のＣＤ４＋Ｔ及びＮＫ細胞の絶対細胞数が増加したが、Ｔ制御性細胞の数は変化しなかった。＊一元配置分散分析検定に基づくｐ値＜０．０５。 腫瘍浸潤性白血球において、注射された抗体、０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、及び１０ｍｇ／ｋｇの投与量のＨＦＢ３－１－ｈＧ１、または１０ｍｇ／ｋｇの対照抗体によって占められるＴＮＦＲ２受容体のパーセンテージを示す。１０ｍｇ／ｋｇの用量のＨＦＢ３－１－ｈＧ１のみが薬物受容体の占有をもたらした。一元配置分散分析検定に基づいて、ｐ値＜０．０５（＊）、０．０１（＊＊）、または０．００１（＊＊＊）。 選択された末梢血細胞において、注射された抗体、０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、及び１０ｍｇ／ｋｇ投与量のＨＦＢ３－１－ｈＧ１、または１０ｍｇ／ｋｇの対照抗体によって占められるＴＮＦＲ２受容体のパーセンテージを示す。１０ｍｇ／ｋｇ及び１ｍｇ／ｋｇの用量のＨＦＢ３－１－ｈＧ１が同等の薬物受容体の占有率をもたらした。一元配置分散分析検定に基づいて、ｐ値＜０．０５（＊）、０．０１（＊＊）、または０．００１（＊＊＊）。 図２４Ａの実験の４日目の血中の抗体濃度を示す。１０ｍｇ／ｋｇ及び１ｍｇ／ｋｇの用量のＨＦＢ３－１－ｈＧ１が血中に検出された。一元配置分散分析検定に基づく ｐ値＜０．００１（＊＊＊）または０．０００１（＊＊＊＊）。 図２４Ａの実験の４日目の血液中の可溶性ＴＮＦＲ２を示す。１０ｍｇ／ｋｇ及び１ｍｇ／ｋｇ用量のＨＦＢ３－１－ｈＧ１が、血中で検出可能なＴＮＦＲ２の量を増加させた。一元配置分散分析検定に基づくｐ値＜０．００１（＊＊＊）または０．０００１（＊＊＊＊）。 、ＨＦＢ３－１ｈｚ６及びＨＦＢ３－１８ｈｚ１などのヒト化モノクローナル抗体が、ラット抗ｍＰＤ－１モノクローナル抗体と比較して同様の治療効果を有することを示す。 、ＨＦＢ３－１ｈｚ６及びＨＦＢ３－１８ｈｚ１などのヒト化モノクローナル抗体が、ラット抗ｍＰＤ－１モノクローナル抗体と比較して同様の治療効果を有することを示す。 ヒト化ＨＦＢ３－１ｈｚ６モノクローナル抗体が、マウス抗ｍＰＤ－１モノクローナル抗体と同様に治療効果を有することを示す。 ヒト化ＨＦＢ３－１ｈｚ６モノクローナル抗体が、腫瘍増殖を阻害し、３ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇの２つの異なる用量で腫瘍を有するマウスの寿命を延ばすことを示し、ならびにＨＦＢ３－１ｈｚ６と抗ｍＰＤ－１抗体との併用治療が、抗ｍＰＤ－１単独での治療よりも生存期間を延長することを示す。 ヒト化ＨＦＢ３－１ｈｚ６モノクローナル抗体が時間の経過とともにカニクイザルの体から排除され、３ｍｇ／ｋｇ以下のＣＤ３×ＣＤ２０二重特異性ＩｇＧからの報告されたデータ（点線）と比較して、１５、５０、または１５０ｍｇ／ｋｇのＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１を注射した後、サイトカインの上昇が観察されなかったことを示す。 ヒト化ＨＦＢ３－１ｈｚ６モノクローナル抗体が時間の経過とともにカニクイザルの体から排除され、３ｍｇ／ｋｇ以下のＣＤ３×ＣＤ２０二重特異性ＩｇＧからの報告されたデータ（点線）と比較して、１５、５０、または１５０ｍｇ／ｋｇのＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１を注射した後、サイトカインの上昇が観察されなかったことを示す。 １５、５０、または１５０ｍｇ／ｋｇのＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１の注射後の細胞数分析を、正常なサルからの過去のデータ範囲と比較して示す（それぞれのパネルの左及び右の線）。 １５、５０、または１５０ｍｇ／ｋｇのＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１の注射後の細胞数分析を、正常なサルからの過去のデータ範囲と比較して示す（それぞれのパネルの左及び右の線）。
１． 概要
ＴＮＦＲ２は最近、腫瘍免疫療法の有望な治療標的として浮上している。腫瘍微小環境（ＴＭＥ）の制御性Ｔ細胞及びエフェクターＴ細胞でのＴＮＦＲ２発現は、Ｔ細胞の疲弊及び免疫チェックポイント阻害に対する耐性と関連している。本明細書に記載の本発明は、抗がん剤として使用することができるヒトＴＮＦＲ２に対する抗体を提供する。特定の理論に束縛されるものではないが、エフェクターＴ細胞と本発明の抗ＴＮＦＲ２抗体との共刺激は、エフェクターＴ細胞の抗腫瘍活性を増強すると考えられている。
本明細書に記載の本発明によれば、マウスをヒトＴＮＦＲ２（ｒｈＴＮＦＲ２）の組換え細胞外ドメイン（ＥＣＤ）で免疫して、結合、交差反応性、選択性、及び機能的活性について特徴づけられる一連の多様な抗体を産生した。抗体は、Ｔｒｅｇ細胞の存在下でＣＤ８＋エフェクターＴ細胞及びＣＤ４＋エフェクターＴ細胞の増殖を誘導する能力、及びＮＦｋＢシグナル伝達の増加について選択された。選択された抗体はまた、ｒｈＴＮＦＲ２のサルオルソログに対して交差反応性を示すことが望ましく、これは、動物におけるヒト治療薬の毒性研究にとって有益な特徴である。さらに望ましい特徴には、ヒト組換えＴＮＦαのＴＮＦＲ２への結合を増強する対象抗体の能力が含まれる。
ヒトＴＮＦＲ２に対してナノモル以下または１桁のナノモルの結合親和性を有する２つのマウス抗体、ＨＦＢ３－１及びＨＦＢ３－１４が、さらなる特性評価及びヒト化のために最初に選択された。エピトープマッピング実験は、これら２つの抗体がＴＮＦＲ２の異なるドメインを認識し、ＨＦＢ３－１がＣＲＤ２ドメイン内の領域に結合し、ＨＦＢ３－１４がＣＲＤ３領域内に結合することを示した。しかしながら、結合部位が異なるにもかかわらず、両方の抗体はＴＮＦＲ２に選択的であり、カニクイザル及びアカゲザルのオルソログと交差反応し、ヒト組換えＴＮＦαのＴＮＦＲ２への結合を増強し、ＣＤ８及び通常型ＣＤ４Ｔ細胞（Ｔｃｏｎｖ）を刺激する。
ＨＦＢ３－１ｈｚ６及びＨＦＢ３－１４ｈｚ１ｃを含む、これらのマウス抗体のいくつかのヒト化バリアントは、それぞれの親抗体の結合及び交差反応性プロファイルを保持していた。ヒト化抗体は、刺激されていないＴ細胞と比較してＴＣＲ活性化初代ＣＤ８ Ｔ細胞及びＣＤ４ Ｔ細胞に優先的に結合し、ＣＤ３／ＣＤ２８誘導性のＴ細胞の活性化及び増殖を増強する。この共刺激作用機序は架橋に依存せず、ＮＦκＢシグナル伝達を増強し、ＮＦκＢ下流標的遺伝子の上方制御を誘導する抗体の能力と一致している。
さらに、両方のヒト化抗体（ＨＦＢ３－１ｈｚ６及びＨＦＢ３－１４ｈｚ１ｃ）は、良好な開発可能性プロファイルを示し、高温、低ｐＨ条件下で、数回の凍結／解凍サイクル後に安定している。リード抗体の良好な血漿曝露もマウスモデルで観察された。マウス腫瘍モデルにおけるこれらの抗体のインビボ有効性評価及び初期毒性分析が実施されている。
第３のマウスモノクローナル抗体であるＨＦＢ３－１８も、結合親和性がわずかに低い（２桁のｎＭ）が、抗ｍＰＤ－１モノクローナル抗体よりも優れているとは言えないまでも同じであるインビボでの腫瘍増殖を阻害する能力が確認され、そのヒト化バージョンが生成される。
これらの抗体の機能プロファイルは、それらの好ましい開発可能性及び薬物動態プロファイルとともに、がん患者のための潜在的な新規免疫治療選択肢としてのそれらの開発をサポートする。
本発明の詳細な態様は、以下のさまざまなセクションでさらに個別に記載される。しかしながら、実施例または図面のみに記載された実施形態、及び以下の１つのセクションのみに記載された実施形態を含む本発明の任意の１つの実施形態は、本発明の任意の他の実施形態（複数可）と組み合わせることができることを理解されたい。
２． 定義
最も広い意味で、「抗体」という用語はモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、及び多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）を含むがこれらに限定されないさまざまな抗体構造を包含する。「抗体」という用語はまた、重鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、ならびに軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む分子であって、分子が抗原に結合することができる分子を広く指す。「抗体」という用語にはまた、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、及びマウス、ヒト、カニクイザルなどのさまざまな種の抗体も含まれるが、これらに限定されない。
しかしながら、より狭い意味で、「抗体」は、キメラモノクローナル抗体、ヒト化モノクローナル抗体、及びヒトモノクローナル抗体、特に本発明のヒト化モノクローナル抗体を含むさまざまなモノクローナル抗体を指す。
いくつかの実施形態では、抗体は、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）及び軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、重鎖可変領域及び重鎖定常領域の少なくとも一部を含む少なくとも１つの重鎖（ＨＣ）と、軽鎖可変領域及び軽鎖定常領域の少なくとも一部を含む少なくとも１つの軽鎖（ＬＣ）と、を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、それぞれの重鎖が重鎖可変領域及び重鎖定常領域の少なくとも一部を含む２つの重鎖と、それぞれの軽鎖が軽鎖可変領域及び軽鎖定常領域の少なくとも一部を含む２つの軽鎖と、を含む。
本明細書で使用される場合、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、または例えば、６つすべてのＣＤＲ（３つの重鎖ＣＤＲ及び３つの軽鎖ＣＤＲ）を含む単一のポリペプチド鎖を含む任意の他の抗体は、重鎖及び軽鎖を有するとみなされる。いくつかのそのような実施形態では、重鎖は、３つの重鎖ＣＤＲを含む抗体の領域であり、軽鎖は、３つの軽鎖ＣＤＲを含む抗体の領域である。
本明細書で使用される場合、「重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）」という用語は、少なくとも、重鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｈ１）、フレームワーク２（ＨＦＲ２）、ＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｈ２）、ＦＲ３（ＨＦＲ３）、及びＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含む領域を指す。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域はまた、ＣＤＲ－Ｈ１のＮ末端であるＦＲ１（ＨＦＲ１）の少なくとも一部（例えば、全体）、及び／またはＣＤＲ－Ｈ３のＣ末端であるＦＲ４（ＨＦＲ４）の少なくとも一部（例えば、全体）を包含する。
本明細書で使用される場合、「重鎖定常領域」という用語は、少なくとも３つの重鎖定常ドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含む領域を指す。非限定的な例示的な重鎖定常領域には、γ、δ、及びαが含まれる。非限定的な例示的な重鎖定常領域には、ε及びμも含まれる。それぞれの重鎖定常領域は、抗体アイソタイプに対応する。例えば、γ定常領域を含む抗体はＩｇＧ抗体であり、δ定常領域を含む抗体はＩｇＤ抗体であり、α定常領域を含む抗体はＩｇＡ抗体であり、ε定常領域を含む抗体はＩｇＥ抗体であり、μ定常領域を含む抗体は、ＩｇＭ抗体である。
特定のアイソタイプは、さらにサブクラスに分類できる。例えば、ＩｇＧ抗体には、ＩｇＧ１（γ１定常領域を含む）、ＩｇＧ２（γ２定常領域を含む）、ＩｇＧ３（γ３定常領域を含む）、及びＩｇＧ４（γ４定常領域を含む）抗体が含まれるが、これらに限定されない；ＩｇＡ抗体には、ＩｇＡｌ（α１定常領域を含む）及びＩｇＡ２（α２定常領域を含む）抗体が含まれるが、これらに限定されない；ＩｇＭ抗体には、ＩｇＭ１（μ１定常領域を含む）及びＩｇＭ２（μ２定常領域を含む）が含まれるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される場合、「重鎖」という用語は、リーダー配列を伴うまたは伴わない、少なくとも重鎖可変領域を含むポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、重鎖は、重鎖定常領域の少なくとも一部を含む。本明細書で使用される場合、「全長重鎖」という用語は、リーダー配列を伴うかまたは伴わない、及びＣ末端リジンを伴うかまたは伴わない、重鎖可変領域及び重鎖定常領域を含むポリペプチドを指す。
本明細書で使用される場合、「軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）」という用語は、軽鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｌ１）、フレームワーク（ＦＲ）２（ＬＦＲ２）、ＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｌ２）、ＦＲ３（ＬＦＲ３）、及びＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含む領域を指す。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域はまた、ＦＲ１（ＬＦＲ１）の少なくとも一部（例えば、全体）及び／またはＦＲ４（ＬＦＲ４）の少なくとも一部（例えば、全体）を含む。
本明細書で使用される場合、「軽鎖定常領域」という用語は、軽鎖定常ドメイン、ＣＬを含む領域を指す。非限定的な例示的な軽鎖定常領域には、λ及びκが含まれる。
本明細書で使用される場合、「軽鎖」という用語は、リーダー配列を伴うまたは伴わない、少なくとも軽鎖可変領域を含むポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、軽鎖は、軽鎖定常領域の少なくとも一部を含む。本明細書で使用される場合、「全長軽鎖」という用語は、リーダー配列を伴うかまたは伴わない、軽鎖可変領域及び軽鎖定常領域を含むポリペプチドを指す。
（抗体の）「抗体断片」または「抗原結合部分」という用語は、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及び（Ｆａｂ’）２などの抗原に結合することができる断片を含むが、これには限定されない。特定の実施形態では、抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、単鎖ＦｖまたはｓｃＦｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、Ｖ－ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）３、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、シングルドメイン抗体、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、（ｓｃＦｖ）２、またはｓｃＦｖ－Ｆｃを含む。
「Ｆａｂ」という用語は、約５０，０００ダルトンの分子量の抗体断片を指し、抗原に結合する活性を有する。それは、ジスルフィド架橋によって接続された重鎖のＮ末端側の約半分と軽鎖全体を含む。Ｆａｂは、特にプロテアーゼであるパパインによる免疫グロブリンの処理によって得ることができる。
「Ｆ（ａｂ’）２」という用語は、約１００，０００ダルトンの断片と抗原に結合する活性を示す。この断片は、ヒンジ領域のジスルフィド架橋を介して接続された２つのＦａｂ断片よりもわずかに大きい。これらの断片は、免疫グロブリンをプロテアーゼであるペプシンで処理することによって得ることができる。Ｆａｂ断片は、ヒンジ領域のジスルフィド架橋を切断することにより、Ｆ（ａｂ’）２断片から得ることができる。
単一のＦｖ鎖「ｓｃＦｖ」は、ＶＬ及びＶＨドメインをコードする遺伝子及びこれらのドメインに結合することを意図したペプチドをコードする配列を使用して合成されたＶＨ：ＶＬポリペプチドに対応する。本発明によるｓｃＦｖは、例えば、遺伝子組換え技術を使用して、適切な立体配座に維持されたＣＤＲを含む。
「ｓｃＦｖ」の二量体は、ペプチド結合によって互いに接続された２つのｓｃＦｖ分子に対応する。このＦｖ鎖は、しばしば、ペプチドをコードするリンカー配列によって接続されたＶＨ及びＶＬをコードする遺伝子を含む融合遺伝子の発現の結果である。ヒトｓｃＦｖ断片は、好ましくは遺伝子組換え技術の使用によって、適切な立体配座に維持されるＣＤＲ領域を含み得る。
「ｄｓＦｖ」断片は、ジスルフィド架橋によって安定化されたＶＨ－ＶＬヘテロダイマーであり、二価（ｄｓＦＶ２）であり得る。二価Ｓｃ（Ｆｖ）２または多価抗体の断片は、一価ｓｃＦｖの結合によって自発的に形成され得るか、ペプチド結合配列によってｓｃＦｖ断片を接続することによって生成され得る。
Ｆｃ断片は、抗体の生物学的特性、特に免疫エフェクターによって認識される能力、または補体を活性化する能力をサポートする。それは、ヒンジ領域を超えた重鎖の定常断片からなる。
「ダイアボディ」という用語は、２つの抗原固定部位を有する小さな抗体断片を意味する。これらの断片は、同じＶＨ－ＶＬポリペプチド鎖において、可変軽鎖ドメインＶＬに接続された可変重鎖ドメインＶＨを含む。同じ鎖の２つのドメインのマッチングを可能にするには短すぎる結合配列を使用すると、別の鎖の２つの相補的ドメインとのマッチングが必然的に発生し、２つの抗原固定部位が作成される。
参照抗体と「同じエピトープに結合する抗体」は、抗体競合アッセイによって決定することができる。それは、競合アッセイにおいて、参照抗体のその抗原への結合を５０％以上遮断し、逆に、参照抗体は、競合アッセイにおいて、抗体のその抗原への結合を５０％以上遮断する抗体を指す。同じエピトープについて競合する抗体の文脈で使用される場合の「競合する」という用語は、抗体間の競合が、試験される抗体が共通の抗原への参照抗体の特異的結合を防止または阻害するアッセイによって決定されることを意味する。
多数のタイプの競合結合アッセイを使用することができる。例えば、固相の直接または間接のラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相の直接または間接の酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（例えば、Ｓｔａｈｌｉ ｅｔ ａｌ．，１９８３，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ９：２４２－２５３を参照されたい）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（例えば、Ｋｉｒｋｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １３７：３６１４－３６１９）を参照されたい）；固相直接標識アッセイ；固相直接標識サンドイッチアッセイ（例えば、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，１９８８，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓを参照されたい）；Ｉ１２５標識を使用した固相直接標識ＲＩＡ（例えば、Ｍｏｒｅｌ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｍｏｌｅｃ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２５：７－１５を参照されたい）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（例えば、Ｃｈｅｕｎｇ，ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７６：５４６－５５２を参照されたい）；直接標識されたＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．,１９９０，Ｓｃａｎｄ．Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．）を使用することができる。
典型的には、そのようなアッセイは、固体表面に結合した精製抗原、またはこれらのいずれかを有する細胞、非標識試験抗原結合タンパク質、及び標識参照抗体の使用を含む。競合阻害は、試験抗体の存在下で固体表面または細胞に結合した標識の量を決定することによって測定される。通常、試験抗体は過剰に存在する。競合アッセイによって同定された抗体（競合抗体）には、参照抗体と同じエピトープに結合する抗体、及び立体障害が発生するために参照抗体によって結合されるエピトープに十分近位の隣接エピトープに結合する抗体が含まれる。いくつかの実施形態では、競合する抗体が過剰に存在する場合、それは、参照抗体の共通抗原への特異的結合を少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、または７５％阻害する。場合によっては、結合は少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、もしくは９７％、またはそれ以上阻害される。
「抗原」という用語は、抗体またはその免疫学的に機能的な断片などの選択的結合剤によって結合することができ、さらに哺乳動物においてその抗原に結合することができる抗体を産生するために使用することができる分子または分子の一部を指す。抗原は、抗体と相互作用することができる１つ以上のエピトープを有し得る。
「エピトープ」という用語は、抗体またはその断片などの選択的結合剤によって結合される抗原分子の一部である。この用語は、抗体に特異的に結合することができる任意の決定基を含む。エピトープは、隣接または非隣接であり得る（例えば、ポリペプチドにおいて、ポリペプチド配列において互いに隣接していないが、分子の文脈内で抗原結合タンパク質によって結合されるアミノ酸残基）。いくつかの実施形態では、エピトープは、抗体を生成するために使用されるエピトープに類似する三次元構造を含むが、抗体を生成するために使用されるそのエピトープに見られるアミノ酸残基を含まないか、または一部のみを含むという点で模倣的であり得る。エピトープ決定基は通常、アミノ酸または糖側鎖、ホスホリル基またはスルホニル基などの分子の化学的に活性な表面のグルーピングを含み得、特定の３次元構造特性、及び／または特定の電荷特性を有し得る。
いくつかの実施形態では、「エピトープ」は、それを決定するために使用される方法によって定義される。例えば、いくつかの実施形態では、抗体は、水素－重水素交換（ＨＤＸ）によって決定されるように、それらが抗原の同じ領域に結合する場合、参照抗体と同じエピトープに結合する。
特定の実施形態では、抗体は、Ｘ線結晶学によって決定されるように、それらが抗原の同じ領域に結合する場合、参照抗体と同じエピトープに結合する。
本明細書で使用される場合、「キメラ抗体」は、第１の種（マウス、ラット、カニクイザルなど）からの少なくとも１つの可変領域と、第２の種（ヒト、カニクイザル、ニワトリなど）からの少なくとも１つの定常領域と、を含む抗体を指す。いくつかの実施形態では、キメラ抗体は、少なくとも１つのマウス可変領域と、少なくとも１つのヒト定常領域と、を含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体のすべての可変領域は第１の種に由来し、キメラ抗体のすべての定常領域は第２の種に由来する。
本明細書で使用される場合、「ヒト化抗体」は、非ヒト可変領域（マウス、ラット、カニクイザル、ニワトリなど）のフレームワーク領域の少なくとも１つのアミノ酸が、ヒト可変領域からの対応するアミノ酸で置換された抗体を指す。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、少なくとも１つのヒト定常領域またはその断片を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体断片は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、（Ｆａｂ’）２などである。
本明細書で使用される場合、「ＣＤＲ移植抗体」は、第１の（非ヒト）種の１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）が第２の（ヒト）種のフレームワーク領域（ＦＲ）に移植されたヒト化抗体を指す。
本明細書で使用される場合、「ヒト抗体」は、ヒトで産生される抗体、ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）などのヒト免疫グロブリン遺伝子を含む非ヒト動物で産生される抗体、及び抗体レパートリーがヒト免疫グロブリン配列に基づいているファージディスプレイなどのインビトロ法を使用して選択される抗体を指す。
「宿主細胞」は、ベクターまたは単離されたポリヌクレオチドのレシピエントである可能性がある、またはレシピエントであった細胞を指す。宿主細胞は、原核細胞または真核細胞であり得る。例示的な真核細胞には、霊長類または非霊長類の動物細胞などの哺乳動物細胞；酵母などの真菌細胞；植物細胞；及び昆虫細胞が含まれる。非限定的な例示的な哺乳動物細胞としては、ＮＳＯ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞（Ｃｒｕｃｅｌｌ）、及び２９３及びＣＨＯ細胞、ならびにそれらの誘導体、例えば、それぞれ２９３－６Ｅ及びＤＧ４４細胞が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される場合、「単離された」という用語は、それが自然界に典型的に見出される成分の少なくともいくつかから分離されているか、またはそれが典型的に生成される成分の少なくともいくつかから分離されている分子を指す。例えば、ポリペプチドは、それが産生された細胞の成分の少なくともいくつかから分離される場合、「単離された」と呼ばれる。ポリペプチドが発現後に細胞によって分泌される場合、ポリペプチドを含む上清を、それを産生した細胞から物理的に分離することは、ポリペプチドを「単離する」とみなされる。同様に、ポリヌクレオチドは、それが自然界に典型的に見出されるより大きなポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡポリヌクレオチドの場合、ゲノムＤＮＡまたはミトコンドリアＤＮＡなど）の一部ではない場合、または、例えば、ＲＮＡポリヌクレオチドの場合、それが産生された細胞の成分の少なくともいくつかから分離されている場合、「単離された」と呼ばれる。したがって、宿主細胞内のベクターに含まれるＤＮＡポリヌクレオチドは、そのポリヌクレオチドが自然界でそのベクターに見出されない限り、「単離された」と呼ばれ得る。
「対象」及び「患者」という用語は、ヒトなどの哺乳動物を指すために、本明細書で交換可能に使用される。いくつかの実施形態では、げっ歯類、サル、ネコ、イヌ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、哺乳動物実験動物、哺乳動物家畜、哺乳動物スポーツ動物、哺乳類ペットを含むがこれらに限定されない他の非ヒト哺乳動物を治療する方法も提供される。場合によっては、「対象」または「患者」は、疾患または障害の治療を必要とする（ヒト）対象または患者を指す。
「試料」または「患者試料」という用語は、本明細書において用いられる場合、例えば、物理的、生化学的、化学的、及び／または生理学的特徴に基づいて特徴付けられる、及び／または識別される細胞の、及び／または他の分子の実体を含む、目的の対象から得られる、またはそれに由来する物質を指す。例えば、「疾患試料」という語句及びその変化形は、特徴付けられる細胞の、及び／または分子の実体を含むことが予期されるか、または含むことが既知である、目的の対象から得られた任意の試料を指す。
「組織試料または細胞試料」は、対象または患者の組織から得られる同様の細胞の集合を意味する。組織試料または細胞試料の供給源は、新鮮な冷凍及び／または保存された器官または組織試料もしくは検体もしくは吸引物からの固体組織；血液もしくは任意の血液成分；喀痰、脳脊髄液、羊水、腹水、間質液などの体液；対象の妊娠または発生における任意の時点からの細胞であってよい。組織試料は、初代細胞または培養された細胞または細胞株であってもよい。任意選択で、組織または細胞試料は、疾患組織／器官から得られる。組織試料は、防腐剤、抗凝固剤、緩衝剤、固定剤、栄養素、抗生物質などの自然界で組織と自然に混合されない化合物を含んでよい。
本明細書で使用される場合、「参照試料」、「参照細胞」、または「参照組織」は、本発明の方法または組成物を使用して同定する疾患または状態に罹患していないことが知られている、または考えられている供給源から得られた試料、細胞、または組織を指す。一実施形態では、参照試料、参照細胞、または参照組織は、疾患または状態が、本発明の組成物または方法を用いて同定される同一の対象または患者の身体の健常な部分から得られる。一実施形態では、参照試料、参照細胞、または参照組織は、疾患または状態が、本発明の組成物または方法を用いて同定される同一の対象または患者ではない少なくとも１つの個体の身体の健常な部分から得られる。いくつかの実施形態では、参照試料、参照細胞または参照組織は、疾患または状態を発症する前に、または疾患または状態のより早い段階で、患者から以前に得られた。
「障害」または「疾患」とは、本発明の１つ以上のＧａｌ－９アンタゴニストによる治療から恩恵を受ける任意の状態である。これには、哺乳動物を問題の障害にかかりやすくする病理学的状態を含む慢性及び急性の障害または疾患が挙げられる。本明細書で治療される障害の非限定的な例には、がんが含まれる。
「制御性Ｔリンパ球のサプレッサー活性に関連する疾患」とは、特に疾患の発症または持続を促進することにより、制御性Ｔリンパ球のサプレッサー活性が役割を果たすあらゆる疾患（自己免疫ではない）を意味する。特に、制御性Ｔリンパ球のサプレッサー活性が腫瘍の発症を促進することが実証されている。したがって、本発明は、より具体的には、Ｔリンパ球のサプレッサー活性が役割を果たすがんを対象としている。
「がん」という用語は、本明細書では、異常に高いレベルの増殖及び増殖を示す細胞の群を指すために使用される。がんは、良性（良性腫瘍とも呼ばれる）、前悪性、または悪性であり得る。がん細胞は、固形がん細胞（すなわち、固形腫瘍を形成する）または白血病性がん細胞であり得る。「がん増殖」という用語は、本明細書では、がんのサイズまたは程度の対応する増加をもたらすがんを構成する細胞または複数の細胞による増殖または増殖を指すために使用される。
がんの例としては、がん腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病が含まれるが、これらに限定されない。そのような癌のより具体的な非限定的な例としては、扁平上皮癌、小細胞肺癌、下垂体がん、食道癌、星状細胞腫、軟部肉腫、非小細胞肺癌、肺腺癌、肺の扁平上皮癌、腹膜癌、肝細胞癌、消化器癌、膵臓癌、神経膠腫、子宮頚癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝細胞腫、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜または子宮がん腫、唾液腺癌、腎臓癌（ｋｉｄｎｅｙ ｃａｎｃｅｒ）、腎臓癌（ｒｅｎａｌ ｃａｎｃｅｒ）、肝臓癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝癌、脳癌、子宮内膜癌、精巣癌、胆管癌、胆嚢癌、胃癌、黒色腫、及び種々の種類の頭頸部癌が挙げられる。
特定の実施形態では、本明細書で使用される場合、がんは、血液癌（ＡＭＬ及びＤＬＢＣＬなど）、または固形腫瘍（乳癌、頭頸部癌、肺癌、黒色腫（ブドウ膜黒色腫を含む）、結腸癌、腎癌など、卵巣癌、肝臓癌、及び前立腺癌など）を含む。
「化学療法剤」は、がんの治療に有用であり得る化合物である。化学療法剤の例としては、アルキル化剤、例えば、チオテパ及びＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標）シクロホスファミドなど；ブスルファン、インプロスルファン、及びピポスルファンなどのアルキルスルホネート；ベンゾドパ、カルボコン、メトレドパ、及びウレドパなどのアジリジン；アルレタミン、トリエチルレンメルアミン、トリエチレンリンアミド、トリエチレンチオリンアミド、及びトリメチルオロメルアミンを含むエチレンイミン及びメチルアメルアミン；アセトゲニン（特にブラタシン及びブラタシノン）；カンプトテシン（合成類似体トポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ－１０６５（アドゼレシン、カルゼレシン、ビゼレシン合成類似体を含む）；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体、ＫＷ－２１８９及びＣＢ１－ＴＭ１を含む）；エレウテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチン；スポンギスタチン；クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベムビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなどのナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、及びラニムスチンなどのニトロソ尿素；エンジイン抗生物質などの抗生物質（例えば、カリチアマイシン、特にカリチアマイシンガンマｌｌ及びカリチアマイシンオメガｌｌ（例えば、Ａｇｎｅｗ，Ｃｈｅｍ ｌｎｔｌ． Ｅｄ Ｅｎｇｌ． ３３：１８３－１８６（１９９４）を参照されたい）；ダイネマイシンＡを含むダイネマイシン；クロドロネートなどのビスホスホネート；エスペラマイシン；ならびにネオカルジノスタチン発色団及び関連するクロモタンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オートラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、アドリアマイシン（登録商標）ドキソルビシン（モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシン、及びデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣなどのマイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポチロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；メトトレキサート及び５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）などの代謝拮抗剤；デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサートなどの葉酸類似体；フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなどのプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジンなどのピリミジン類似体；カルステロン、ドロモスタロンプロピオネート、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなどのアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの抗副腎；フロリン酸などの葉酸補充剤；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキサート；デフォファミン；デメコルシン；ジアジコン；エルフォミチン；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン；メイタンシン及びアンサマイトシンなどのメイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール；ニトラリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖類複合体（ＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２”－トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特にＴ－２毒素、ベラクリンＡ、ロリジンＡ、及びアンギジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、タキソール（登録商標）パクリタキセル（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、アブラキサン（登録商標）クレモフォールフリー、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子製剤（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐａｒｔｎｅｒｓ，Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）、及びタキソテール（登録商標）ドキセタキセル（Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ，Ａｎｔｏｎｙ，Ｆｒａｎｃｅ）；クロランブシル；ジェムザール（登録商標）ゲムシタビン；６－チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチンなどの白金類似体；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ナベルビン（登録商標）；ビノレルビン；ノバントロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；イリノテカン（カンプトザール（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ）、ＣＰＴ－１１）（５－ＦＵ及びロイコボリンによるイリノテカンの治療レジメンを含む）；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ ２０００；ジフルオロメチルヒドロキシルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸などのレチノイド；カペシタビン；コンブレタスタチン；ロイコボリン（ＬＶ）；オキサリプラチン治療レジメン（ＦＯＬＦＯＸ）を含むオキサリプラチン；ＰＫＣ－アルファ、Ｒａｆ、Ｈ－Ｒａｓ、ＥＧＦＲ（例えば、エルロチニブ（タルセバ（登録商標）））及び細胞増殖を抑制するＶＥＧＦ－Ａ、ならびに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。
さらなる非限定的な例示的な化学療法薬としては、抗エストロゲン及び選択的エストロゲン受容体調節薬（ＳＥＲＭ）、例えば、タモキシフェン（ノルバデックス（登録商標）タモキシフェンを含む）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４－ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、及びフェアストン（登録商標）トレミフェンを含む、がんに対するホルモン作用を調節または阻害するように作用する抗ホルモン剤；副腎のエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤、例えば、４（５）－イミダゾール、アミノグルテチミド、ＭＥＧＡＳＥ（登録商標）酢酸メゲストロール、アロマシン（登録商標）エキセメスタン、ホルメスタイン、ファドロゾール、ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標）ボロゾール、フェマーラ（登録商標）レトロゾール、及びアリミデックス（登録商標）アナストロゾールなど；ならびに抗アンドロゲン、例えば、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、及びゴセレリン；ならびにトロキサシタビン（１，３－ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、具体的には、異常な細胞増殖に関与するシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害するもの、例えば、ＰＫＣ－アルファ、Ｒａｌｆ、及びＨ－Ｒａｓなど；リボザイム、例えば、ＶＥＧＦ発現阻害剤（例えば、アンジオザイム（登録商標）リボザイム）及びＨＥＲ２発現阻害剤；ワクチン、例えば、遺伝子治療ワクチン、例えば、アロベクチン（登録商標）ワクチン、ロイベクチン（登録商標）ワクチン、及びＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチン；プロロイキン（登録商標）ｒＩＬ－２；ラルトテカン（登録商標）トポイソメラーゼ１阻害剤；アバレリックス（登録商標）ｒｍＲＨ；ならびに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体が挙げられる。
「抗血管新生剤」または「血管新生阻害剤」は、血管新生、脈管形成、または望ましくない血管透過性を直接的または間接的に阻害する、低分子量物質、ポリヌクレオチド（例えば、阻害性ＲＮＡ（ＲＮＡｉもしくはｓｉＲＮＡ）を含む）、ポリペプチド、単離されたタンパク質、組換えタンパク質、抗体、またはそのコンジュゲートもしくは融合タンパク質を指す。抗血管新生剤には、血管新生因子またはその受容体の血管新生活性に結合して遮断する薬剤が含まれることを理解されたい。例えば、抗血管新生剤は、血管新生因子、例えば、ＶＥＧＦ－Ａ（例えば、ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））またはＶＥＧＦ－Ａ受容体（例えば、ＫＤＲ受容体またはＦｌｔ－１受容体）に対する抗体、グリベック（登録商標）（メシル酸イマチニブ）などの抗ＰＤＧＦＲ阻害剤、ＶＥＧＦ受容体シグナル伝達を遮断する小分子（例えば、ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２８４、ＳＵ６６６８、スーテント（登録商標）／ＳＵＬ１２４８（リンゴ酸スニチニブ）、ＡＭＧ７０６、または例えば、国際特許出願ＷＯ２００４／１１３３０４に記載されるもの）である。抗血管新生剤には、天然の血管新生阻害剤、例えば、アンギオスタチン、エンドスタチンなども含まれる。例えば、Ｋｌａｇｓｂｒｕｎ ａｎｄ Ｄ’Ａｍｏｒｅ（１９９１） Ａｎｎｕ． Ｒｅｖ． Ｐｈｙｓｉｏｌ． ５３：２１７－３９；Ｓｔｒｅｉｔ ａｎｄ Ｄｅｔｍａｒ（２００３） Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２２：３１７２－３１７９（例えば、悪性黒色腫における抗血管新生療法を列挙した表３）；Ｆｅｒｒａｒａ ＆ Ａｌｉｔａｌｏ（１９９９） Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ５（１２）：１３５９－１３６４；Ｔｏｎｉｎｉ ｅｔ ａｌ．（２００３） Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２２：６５４９－６５５６（例えば、既知の抗血管新生因子を列挙した表２）；及び、Ｓａｔｏ（２００３） Ｉｎｔ． Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｏｎｃｏｌ． ８：２００－２０６（例えば、臨床試験で使用された抗血管新生剤を列挙した表１）を参照されたい。
「増殖阻害剤」は、本明細書で使用される場合、インビトロまたはインビボのいずれかで細胞（例えば、ＶＥＧＦを発現する細胞）の増殖を阻害する化合物または組成物を指す。このため、増殖阻害剤は、Ｓ相における細胞（例えば、ＶＥＧＦを発現する細胞）のパーセンテージを著しく低減するものであってもよい。増殖阻害剤の例としては、細胞周期進行（Ｓ期以外の場所で）を遮断する薬剤、例えば、Ｇ１停止及びＭ期停止を誘導する薬剤が挙げられる。従来のＭ期遮断薬としては、ｖｉｎｃａｓ（ビンクリスチン及びビンブラスチン）、タキサン、ならびにドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシド、及びブレオマイシンなどのトポイソメラーゼＩＩ阻害剤が挙げられる。Ｇ１を停止する薬剤、例えば、タモキシフェン、プレドニゾン、ダカルバジン、メクロレタミン、シスプラチン、メトトレキサート、５－フルオロウラシル、及びａｒａ－ＣなどのＤＮＡアルキル化剤は、Ｓ期停止にも波及する。さらなる情報は、ＭｕｒａｋａｍｉらによるＭｅｎｄｅｌｓｏｈｎ ａｎｄ Ｉｓｒａｅｌ，ｅｄｓ．，Ｔｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ，Ｃｈａｐｔｅｒ １，ｅｎｔｉｔｌｅｄ “Ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ，ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ，ａｎｄ ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ ｄｒｕｇｓ” （Ｗ．Ｂ． Ｓａｕｎｄｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，１９９５）、例えば１３ページに見出すことができる。タキサン（パクリタキセル及びドセタキセル）は、いずれもイチイ由来の抗がん薬である。ヨーロッパイチイ由来のドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ）は、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）の半合成類似体である。パクリタキセル及びドセタキセルは、チューブリン二量体からの微小管の構築を促進し、脱重合を阻止することによって微小管を安定させ、細胞内の有糸分裂の阻害をもたらす。
「抗腫瘍性組成物」という用語は、少なくとも１つの活性治療剤を含むがん治療において有用な組成物を指す。治療剤（抗がん剤）の例としては、例えば、化学療法剤、増殖阻害剤、細胞傷害性剤、放射線療法で使用される薬剤、抗血管新生剤、がん免疫療法剤（腫瘍免疫療法薬とも呼ばれる）、アポトーシス剤、抗チューブリン剤、及びがんを治療するための他の薬剤、例えば、抗ＨＥＲ－２抗体、抗ＣＤ２０抗体、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）アンタゴニスト（例えば、チロシンキナーゼ阻害剤）、ＨＥＲ１／ＥＧＦＲ阻害剤（例えば、エルロチニブ（タルセバ（登録商標）、血小板由来増殖因子阻害剤（例えば、グリベック（登録商標）（メシル酸イマチニブ））、ＣＯＸ－２阻害剤（例えば、セレコキシブ）、インターフェロン、ＣＴＬＡ４阻害剤（例えば、抗ＣＴＬＡ抗体イピリムマブ（ヤーボイ（登録商標）））、ＰＤ－１阻害剤（例えば、抗ＰＤＩ抗体、ＢＭＳ－９３６５５８）、ＰＤＬ１阻害剤（例えば、抗ＰＤＬＩ抗体、ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、ＰＤＬ２阻害剤、（例えば、抗ＰＤＬ２抗体）、ＶＩＳＴＡ阻害剤（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）、サイトカイン、以下の標的ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＰＤＧＦＲ－β、ＢｌｙＳ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、ＰＤ－１、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＣＴＬＡ４、ＶＩＳＴＡ、またはＶＥＧＦ受容体（複数可）、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２のうちの１つ以上に結合するアンタゴニスト（例えば、中和抗体）、ならびに他の生物活性及び有機化学剤などが挙げられるが、これらに限定されない。これらの組み合わせも、本発明に含まれる。
「治療」は、例えば、目的が標的の病的状態または障害を減速（軽減）することであり、かつ、例えば、目的が状態または障害の再発を阻害することである治療的処置を指す。「治療」は、ヒトを含む哺乳動物における疾患（本明細書では「障害」または「状態」とも呼ばれる）の治療薬の投与または適用を包含し、疾患もしくは疾患の進行を阻害すること、疾患もしくはその進行を阻害する、もしくはそれを遅らせること、その発症を停止させること、疾患を部分的もしくは完全に軽減すること、疾患の１つ以上の症状を部分的もしくは完全に軽減すること、または失われた、欠けている、もしくは欠陥のある機能を回復または修復すること、または不十分なプロセスを刺激することを含む。「治療」という用語はまた、表現型の特徴の重症度を軽減すること、及び／またはその特徴の発生率、程度、または可能性を軽減することを含む。治療が必要なものとしては、障害を既に有するもの、ならびに障害を有する危険にさらされているもの、または障害の発症を予防するかもしくは遅らせる必要があるものを挙げることができる。
「有効量」または「治療有効量」という用語は、対象において疾患または障害を治療するのに有効な薬物の量を指す。いくつかの実施形態では、有効量は、所望の治療結果または予防結果を達成するために必要な投与量及び期間での有効な量を指す。本発明の抗体の治療有効量は、個体の病状、年齢、性別、及び体重、ならびに個体において所望の応答を誘発するアンタゴニストの能力などの因子に応じて変動し得る。治療有効量は、本発明の抗体の毒性または有害な効果よりも治療上有益な効果が上回る量を包含する。
「予防有効量」は、所望の予防結果を達成するために必要な用量及び期間で有効な量をいう。典型的であって必ずしもそうではないが、疾患の早期段階前または早期段階で予防用量が対象において用いられるため、予防有効量は、治療有効量よりも少ない。
「薬学的に許容される担体」は、対象への投与のための「医薬組成物」を一緒に含む治療薬と共に使用するための、毒性のない固体、半固体、または液体の充填剤、希釈剤、封入材料、製剤補助剤、または従来の担体を指す。薬学的に許容される担体は、使用される投与量及び濃度でレシピエントに対して無毒であり、製剤の他の成分と適合性がある。薬学的に許容される担体は、使用される製剤に適切である。例えば、治療薬が経口投与される場合、担体はゲルカプセルであり得る。治療薬を皮下投与する場合、担体は理想的には皮膚に刺激を与えず、注射部位反応を引き起こさない。
「製品」とは、少なくとも１つの試薬、例えば、疾患もしくは障害の治療のための医薬、または本明細書に記載のバイオマーカーを特異的に検出するためのプローブを含む、任意の製造物（例えば、パッケージもしくは容器）またはキットである。特定の実施形態では、製造物またはキットは、本明細書に記載の方法を実行するための単位として、推奨、流通、または販売される。
３． がんを治療する方法
本明細書に記載の本発明は、ヒト及び他の非ヒト哺乳動物を治療する方法で使用するための抗ＴＮＦＲ２抗体を提供する。
病理学的状況では、Ｔｒｅｇは不適切な免疫抑制を引き起こす可能性があり、これは、例えば、腫瘍の増殖を促進する可能性がある。Ｔｒｅｇは、特にエフェクターＴリンパ球の活性を不適切に阻害することによる抗腫瘍免疫応答の低下に関連しており、したがって、多数の種類のがんの発症を促進する。
いくつかの実施形態では、がんを治療または予防するための方法であって、そのような治療を必要とする対象に、有効量の本発明の抗ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合断片のいずれかを投与することを含む、方法が提供される。
いくつかの実施形態では、がんを治療する方法であって、方法は、がんを有する対象に、本発明の抗ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合断片のいずれかを、投与することを含む、方法が提供される。
本発明の方法／使用によって治療可能ながんには、比較的大量の制御性Ｔリンパ球が腫瘍組織または循環中に存在するがんなど、制御性Ｔリンパ球がそれらの抑制活性を発揮するがんが含まれる。制御性Ｔリンパ球の拡大（Ｔｒｅｇの頻度で測定可能）は、一般的にＴｒｅｇの活性化の増加と相関している。制御性Ｔリンパ球の頻度は、当該技術分野で知られている任意の方法によって、例えば、腫瘍内リンパ球もしくは循環リンパ球のフローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）分析によって、または腫瘍組織の免疫組織学的染色によって評価することができる。
がん腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病を含む、本発明の抗ＴＮＦＲ２抗体またはその抗原結合断片のいずれかで治療することができる非限定的な例示的ながんが本明細書で提供される。そのような癌のより具体的な非限定的な例としては、黒色腫、子宮頚癌、扁平上皮癌、小細胞肺癌、下垂体がん、食道癌、星状細胞腫、軟部肉腫、非小細胞肺癌、肺腺癌、肺の扁平上皮癌、腹膜癌、肝細胞癌、消化器癌、膵臓癌、神経膠腫、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝細胞腫、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜または子宮がん腫、唾液腺癌、腎臓癌（ｋｉｄｎｅｙ ｃａｎｃｅｒ）、腎臓癌（ｒｅｎａｌ ｃａｎｃｅｒ）、肝臓癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝癌、脳癌、子宮内膜癌、精巣癌、胆管癌、胆嚢癌、胃癌、黒色腫、及び種々の種類の頭頸部癌が挙げられる。
特定の実施形態では、がんは、黒色腫、乳癌、結腸癌、子宮頸癌、腎癌、肝臓癌（例えば、肝細胞癌）、肺癌（ＮＳＣＬＣ）、卵巣癌、皮膚癌（例えば、扁平上皮癌または基底細胞癌）、リンパ腫、または白血病である。
特定の実施形態では、がんは、（ａ）腫瘍試料中の総ＣＤ８ Ｔ細胞数×ＣＤ８ Ｔ細胞上のＴＮＦＲ２発現と、（ｂ）腫瘍試料中の総Ｔｒｅｇ細胞数×ＴｒｅｇでのＴＮＦＲ２発現と、の間の比として定義される、高いＴＮＦＲ２指数を有する。
特定の実施形態では、がんは、１を超える、例えば、１．５を超える、２を超える、３を超える、４を超える、または５を超えるＴＮＦＲ２指数を有する。例えば、特定のがんに対する代表的なＴＮＦＲ２指数は、黒色腫の場合は４．５７、乳がんの場合は１．６７、ＮＳＣＬＣの場合は１．０５、ＳＣＣの場合は１．０３、ＢＣＣの場合は０．７８、ＨＣＣの場合は０．４６を含む。
特定の実施形態では、がんは、約０．５～約１のＴＮＦＲ２指数を有する。
特定の実施形態では、がんは、腫瘍内のＴ細胞のうちの２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、またはそれ以上を超えるものがＣＤ８Ｔ細胞であるなど、高い割合のＣＤ８ ＴＩＬ（腫瘍浸潤リンパ球）を有する。
特定の実施形態では、がんは、腫瘍細胞上で低レベルのＴＮＦＲ２発現を有する。
特定の実施形態では、がんは、黒色腫、ＮＳＣＬＣ、腎細胞癌、胃癌、結腸直腸癌、尿路上皮癌、ＨＣＣ、頭頸部癌、及びホジキンリンパ腫などの免疫療法（例えば、炎症）に感受性であることが知られている。
特定の実施形態では、がんは、疲弊したＣＤ８ Ｔ細胞などの腫瘍内の疲弊したＴ細胞上で高レベルのＴＮＦＲ２発現を有する。そのようながんは、例えば、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体（例えば、本明細書に具体的に記載されるかまたは当該技術分野で知られているもののいずれか）のいずれかなどの、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路のアンタゴニストとの併用療法で治療することができる。
特定の実施形態では、本発明の方法／使用は、以下を含む、既知の高レベルの制御性Ｔリンパ腫が存在するがん、及び／またはがん／腫瘍が予後不良と明らかに関連しているがんを治療するために使用され得る：慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、結腸癌、黒色腫、子宮癌、乳癌、膵臓癌、胃癌、卵巣癌、中枢神経系の原発性リンパ腫、多発性骨髄腫、前立腺癌、ホジキンリンパ腫、または肝細胞癌。
いくつかの実施形態では、がんは、血液癌（ＡＭＬ及びＤＬＢＣＬなど）、または固形腫瘍（乳癌、頭頸部癌、肺癌、黒色腫（ブドウ膜黒色腫を含む）、結腸癌、腎癌など、卵巣癌、肝臓癌、及び前立腺癌など）である。
いくつかの実施形態では、がんは、ＢＣＣ、ＳＣＣ、黒色腫、結腸直腸癌、またはＮＳＣＬＣである。
特定の実施形態では、本発明の方法／使用は、Ｃ型肝炎に起因する線維症の再発を治療するために使用され得る。これは、制御性Ｔリンパ球の頻度の増加がそのような線維症の再発を予測する因子であることも実証されているためである。
いくつかの実施形態では、本発明の抗ＴＮＦＲ２抗体は、単独で使用され得るか、代替的に、疾患または適応症を治療することができることが知られている任意の他の適切な化合物と組み合わせて使用され得る。
したがって、本発明の特定の実施形態によれば、ＴＮＦＲ２に対するものであり、以前に定義された制御性Ｔリンパ球の抑制性活性を阻害する抗体が、制御性Ｔリンパ球の抑制性活性に関連する疾患を治療するための第２の治療薬、例えば、抗がん剤と組み合わせて使用される。
すなわち、使用ががんの治療である場合、抗体は、例えば、外科手術、放射線療法、化学療法、またはそれらの組み合わせなどのがんに対する既知の治療法と組み合わせて使用することができる。例えば、抗体は、腫瘍抗原、特にＥＢＶ抗原に対するエフェクターリンパ球の１回以上の注射からなる養子免疫療法と組み合わせて使用することができる。いくつかの態様によれば、がん治療のための本発明によるＴＮＦＲ２に対する抗体と組み合わせて使用される他の抗がん剤は、抗血管新生剤を含む。特定の態様によれば、抗体は、サイトカイン、例えば、抗腫瘍免疫応答を刺激するサイトカインと共投与することができる。
そのような併用療法において、本発明の抗体は、第２の治療薬の前、後、または同時に使用することができる。併用療法については、以下のセクションをさらに参照されたい。
４． 投与の経路及び担体
さまざまな実施形態では、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、皮下または静脈内に投与され得る。簡潔に、「本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体」は、本発明のマウス－ヒトキメラ抗ＴＮＦＲ２抗体及びそのヒト化バリアントを指す。
いくつかの実施形態では、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、経口、動脈内、非経口、鼻腔内、筋肉内、心臓内、脳室内、気管内、頬側、直腸、腹腔内、吸入、皮内、局所、経皮、及び髄腔内、またはその他の方法で、例えば、移植によって、を含むがこれらに限定されないさまざまな経路によって、インビボで投与され得る。
いくつかの実施形態では、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、ｉ．ｖ．またはｓ．ｃ．を介して投与され得る。
本発明の抗体組成物は、錠剤、カプセル、粉末、顆粒、軟膏、溶液、坐剤、浣腸、注射剤、吸入剤、及びエアロゾルを含むが、これらに限定されない、固体、半固体、液体、または気体の形態の製剤に製剤化することができる。
さまざまな実施形態では、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体を含む組成物は、多種多様な薬学的に許容される担体を含む製剤で提供される（例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ｗｉｔｈ Ｆａｃｔｓ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ：Ｄｒｕｇｆａｃｔｓ Ｐｌｕｓ，２０ｔｈ ｅｄ．（２００３）；Ａｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，７ｔｈ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｅｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００４）；Ｋｉｂｂｅ ｅｔ ａｌ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，３ｒｄ ｅｄ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ（２０００）を参照されたい）。ビヒクル、アジュバント、及び希釈剤を含む、さまざまな薬学的に許容される担体が利用可能である。さらに、ｐＨ調整剤及び緩衝剤、等張化剤、安定剤、湿潤剤などのさまざまな薬学的に許容される補助物質も利用可能である。非限定的な例示的な担体としては、生理食塩水、緩衝生理食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノール、及びそれらの組み合わせが挙げられる。
さまざまな実施形態では、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体を含む組成物は、植物または他の油、合成脂肪酸グリセリド、高級脂肪酸のエステルまたはプロピレングリコールなどの水性または非水性溶媒に溶解、懸濁、または乳化することにより；そして、必要に応じて、可溶化剤、等張剤、懸濁剤、乳化剤、安定剤、及び防腐剤などの従来の添加剤とともに、皮下投与を含む、注射用に製剤化することができる。
さまざまな実施形態では、組成物は、例えば、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素などの加圧された許容される噴射剤を使用して、吸入用に製剤化することができる。
組成物はまた、さまざまな実施形態では、生分解性または非生分解性のポリマーを含むような徐放性マイクロカプセルに製剤化することができる。非限定的な例示的な生分解性製剤としては、ポリ乳酸－グリコール酸（ＰＬＧＡ）ポリマーが挙げられる。非限定的な例示的な非生分解性製剤としては、ポリグリセリン脂肪酸エステルが挙げられる。そのような製剤を作製する特定の方法は、例えば、ＥＰ１１２５５８４Ａｌに記載されている。
それぞれが１つ以上の用量の本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体を含む１つ以上の容器を含む医薬投与パックも提供される。いくつかの実施形態では、単位用量が提供され、単位用量は、１つ以上の追加の薬剤を含むかまたは含まずに、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体を含む所定量の組成物を含む。いくつかの実施形態では、そのような単位投与量は、注射用の使い捨て充填済みシリンジで供給される。さまざまな実施形態では、単位投与量に含まれる組成物は、生理食塩水、スクロースなど；リン酸塩などの緩衝液を含み得；及び／または安定した有効なｐＨ範囲内で製剤化され得る。代替的に、いくつかの実施形態では、組成物は、適切な液体、例えば滅菌水を添加すると再構成され得る凍結乾燥粉末として提供され得る。いくつかの実施形態では、組成物は、スクロース及びアルギニンを含むがこれらに限定されない、タンパク質凝集を阻害する１つ以上の物質を含む。いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、ヘパリン及び／またはプロテオグリカンを含む。
医薬組成物は、特定の適応症の治療または予防についての有効量で投与される。治療有効量は、典型的には、治療される対象の体重、彼または彼女の身体的または健康状態、治療される状態の広範性、または治療される対象の年齢に依存する。
いくつかの実施形態では、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、用量あたり約５０μｇ／ｋｇ体重～約５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与され得る。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、用量あたり約１００μｇ／ｋｇ体重～約５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与され得る。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、用量あたり約１００μｇ／ｋｇ体重～約２０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与され得る。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、用量あたり約０．５ｍｇ／ｋｇ体重～約２０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与され得る。
いくつかの実施形態では、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、用量あたり約１０ｍｇ～約１，０００ｍｇの範囲の量で投与され得る。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、用量あたり約２０ｍｇ～約５００ｍｇの範囲の量で投与され得る。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、用量あたり約２０ｍｇ～約３００ｍｇの範囲の量で投与され得る。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、用量あたり約２０ｍｇ～約２００ｍｇの範囲の量で投与され得る。
本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体組成物は、必要に応じて対象に投与することができる。いくつかの実施形態では、有効用量の本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体が対象に１回以上投与される。さまざまな実施形態では、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体の有効用量は、例えば、２ヶ月ごと、３ヶ月ごと、または６ヶ月ごとなど、月に１回、月に１回未満、対象に投与される。他の実施形態では、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体の有効用量は、例えば、２週間ごと、毎週、週に２回、週に３回、毎日、または１日あたり複数回など、月に１回以上投与される。本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体の有効量が、対象に少なくとも１回投与される。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体の有効用量は、少なくとも１ヶ月、少なくとも６ヶ月、または少なくとも１年の期間を含む、複数回投与され得る。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、状態の１つ以上の症状を軽減するために必要に応じて対象に投与される。
５． 併用療法
その機能的断片を含む本発明の本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、他の生物学的に活性な物質または疾患の治療のための他の治療手順と組み合わせて、それを必要とする対象に投与され得る。例えば、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、単独で、または他の治療様式とともに投与され得る。それらは、放射線療法などの他の治療モードの前、実質的に同時、またはその後に提供され得る。
がんの治療のために、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、免疫チェックポイント阻害剤、化学療法剤、増殖阻害剤、抗血管新生剤、または抗腫瘍性組成物などの１つ以上の抗がん剤と組み合わせて投与され得る。
特定の実施形態では、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、ＴＮＦＲ２に特異的に結合し（「ＴＮＦＲ２結合アンタゴニスト」）、例えば、ＴＮＦＲ２アンタゴニスト抗体またはその抗原結合断片は、免疫チェックポイント阻害剤などの第２のアンタゴニスト（例えば、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１経路の阻害剤）とともに、免疫系の刺激が有益である疾患、例えば、がんまたは感染症を有する対象に投与される。２つのアンタゴニストは、例えば、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体と腫瘍免疫療法薬との組み合わせについて以下に記載されるように、同時にまたは連続して投与され得る。がんまたは自己免疫疾患を治療するために、１つ以上の追加の治療法、例えば、チェックポイント調節薬を本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体による治療に追加することができる。
特定の実施形態では、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、対象、例えば、がんを有する対象に、同時にまたは連続して、別の治療と共に投与される。例えば、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、放射線療法、外科手術、または化学療法、例えば、標的化された化学療法または免疫療法のうちの１つ以上と共に投与され得る。
特定の実施形態では、がんを有する対象の治療方法は、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体と、免疫チェックポイント阻害剤などの１つ以上の腫瘍免疫療法薬と、を対象に投与することを含む。
免疫療法、例えば、腫瘍免疫療法薬による療法は、対象の免疫応答を増強、刺激、及び／または上方制御するのに効果的である。一態様では、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体と腫瘍免疫療法薬（ＰＤ－１阻害剤など）の投与は、がんの治療、例えば腫瘍増殖の阻害において相乗効果を有する。
一態様では、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、腫瘍免疫療法薬の投与前に逐次的に投与される。一態様では、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、腫瘍免疫療法薬（ＰＤ－１阻害剤など）と同時に投与される。さらに一態様では、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、腫瘍免疫療法薬（ＰＤ－１阻害剤など）の投与後に逐次的に投与される。２つの薬剤の投与は、例えば、３０分、６０分、９０分、１２０分、３時間、６時間、１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、３日間、５日間、７日間、または１週間以上間隔を置いて、または第２の薬剤の投与は、第１の薬剤が投与されてから、例えば、３０分、６０分、９０分、１２０分、３時間、６時間、１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、３日後、５日後、７日後、または１週間以上後に開始することができる。
特定の局面において、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体及び腫瘍免疫療法薬（例えば、ＰＤ－１阻害剤）は、同時に投与され、例えば、同時に、例えば、３０分または６０分の期間にわたって患者に注入される。本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、腫瘍免疫療法薬（ＰＤ－１阻害剤など）と共製剤化され得る。
腫瘍免疫療法薬としては、例えば、小分子薬物、抗体またはその断片、あるいは他の生物学的または小分子が挙げられる。生物学的腫瘍免疫療法薬の例としては、抗体、抗体断片、ワクチン、及びサイトカインが挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。特定の態様では、モノクローナル抗体は、ヒト化抗体またはヒト抗体である。
一態様では、免疫腫瘍剤は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞上の、（ｉ）刺激性（共刺激性を含む）分子（例えば、受容体またはリガンド）のアゴニスト、または（ｉｉ）阻害性（共阻害性を含む）分子（例えば、受容体またはリガンド）のアンタゴニストであり、これらは両方とも、抗原特異的Ｔ細胞応答を増幅する結果となる。特定の態様では、腫瘍免疫療法薬は、自然免疫に関与する細胞、例えば、ＮＫ細胞上の、（ｉ）刺激性（共刺激性を含む）分子（例えば、受容体またはリガンド）のアゴニスト、または（ｉｉ）阻害性（共阻害性を含む）分子（例えば、受容体またはリガンド）のアンタゴニストであり、腫瘍免疫療法薬は、自然免疫を増強する。このような腫瘍免疫療法薬は、しばしば、免疫チェックポイント調節剤、例えば、免疫チェックポイント阻害剤または免疫チェックポイント刺激剤と呼ばれる。
特定の実施形態では、腫瘍免疫療法薬は、Ｂ７－１、Ｂ７－２、Ｂ７－Ｈ１（ＰＤ－Ｌ１）、Ｂ７－ＤＣ（ＰＤ－Ｌ２）、Ｂ７－Ｈ２（ＩＣＯＳ－Ｌ）、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、Ｂ７－Ｈ５、及びＢ７－Ｈ６、またはＢ７ファミリーのメンバーに特異的に結合する共刺激または共阻害受容体を含む、膜結合リガンドのＢ７ファミリーのメンバーを標的とする（または特異的に結合する）薬剤であり得る。腫瘍免疫療法薬は、膜結合リガンドのＴＮＦファミリーのメンバー、またはそれに特異的に結合する共刺激または共阻害受容体、例えば、ＴＮＦ受容体ファミリーメンバーを標的とする薬剤であり得る。腫瘍免疫療法薬の標的となり得る例示的なＴＮＦ及びＴＮＦＲファミリーメンバーとしては、ＣＤ４０及びＣＤ４０Ｌ、ＯＸ－４０、ＯＸ－４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ７０、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、４－１ＢＢＬ、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２－Ｌ、ＴＲＡＩＬＲ１／ＤＲ４、ＴＲＡＩＬＲ２／ＤＲ５、ＴＲＡＩＬＲ３、ＴＲＡＩＬＲ４、ＯＰＧ、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬ、ＴＷＥＡＫＲ／Ｆｎｌ４、ＴＷＥＡＫ、ＢＡＦＦＲ、ＥＤＡＲ、ＸＥＤＡＲ、ＴＡＣＩ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、ＬＴｆｉＲ、ＬＩＧＨＴ、ＤｃＲ３、ＨＶＥＭ、ＶＥＧＩ／ＴＬ１Ａ、ＴＲＡＭＰ／ＤＲ３、ＥＤＡＲ、ＥＤＡ１、ＸＥＤＡＲ、ＥＤＡ２、ＴＮＦＲ１、リンホトキシンα／ΤΝΡβ、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦａ、ＬＴｆｉＲ、リンホトキシンａ１β２、ＦＡＳ、ＦＡＳＬ、ＲＥＬＴ、ＤＲ６、ＴＲＯＹ及びＮＧＦＲが挙げられる。がんを治療するために本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体と組み合わせて使用することができる腫瘍免疫療法薬は、上記のような、Ｂ７ファミリーメンバー、Ｂ７受容体ファミリーメンバー、ＴＮＦファミリーメンバー、またはＴＮＦＲファミリーメンバーを標的とする薬剤、例えば、抗体であり得る。
一態様では、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、（ｉ）ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＢＴＬＡ、ＣＤ６９、ガレクチン－１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１３、ＧＰＲ５６、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、２Ｂ４、ＣＤ４８、ＧＡＲＰ、ＰＤＩＨ、ＬＡＩＲ１、ＴＩＭ－１、ＴＩＭ－４、及びＰＳＧＬ－１、などのＴ細胞活性化を阻害するタンパク質（例えば、免疫チェックポイント阻害剤）のアンタゴニスト、ならびに（ｉｉ）Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、４－１ＢＢＬ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ－Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ７０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＤＲ３、及びＣＤ２８ＨなどのＴ細胞活性化を刺激するタンパク質のアゴニストのうちの１つ以上とともに投与される。
一態様では、腫瘍免疫療法薬は、Ｔ細胞活性化を阻害するサイトカイン（例えば、ＩＬ－６、ＩＬ－１０、ＴＧＦ－β、ＶＥＧＦ、及び他の免疫抑制性サイトカイン）を阻害する薬剤（すなわち、そのアンタゴニスト）であるか、または、Ｔ細胞活性化を刺激し、免疫応答を刺激する、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、及びＩＦＮαなどのサイトカインのアゴニスト（例えば、サイトカイン自体）である。
免疫系を刺激するために、例えば、がん及び感染症の治療のために、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体と組み合わせることができる他の薬剤としては、ＮＫ細胞上の阻害性受容体のアンタゴニストまたはＮＫ細胞上の活性化受容体のアゴニストが挙げられる。例えば、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、ＫＩＲのアンタゴニストと組み合わせることができる。
併用療法のためのさらに他の薬剤としては、ＲＧ７１５５（ＷＯ１１／７００２４、ＷＯ１１／１０７５５３、ＷＯ１１／１３１４０７、Ｗ０１３／８７６９９、Ｗ０１３／１１９７１６、ＷＯ１３／１３２０４４）またはＦＰＡ００８（ＷＯｌ１／１４０２４９；Ｗ０１３１６９２６４；ＷＯ１４／０３６３５７）を含むＣＳＦ－ＩＲアンタゴニスト抗体などのＣＳＦ－ＩＲアンタゴニストが挙げられるがこれらに限定されない、マクロファージまたは単球を阻害または枯渇させる薬剤が挙げられる。
腫瘍免疫療法薬としては、ＴＧＦ－βシグナル伝達を阻害する薬剤も挙げられる。
本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体と組み合わせることができる追加の薬剤としては、腫瘍抗原提示を増強する薬剤、例えば、樹状細胞ワクチン、ＧＭ－ＣＳＦ分泌細胞ワクチン、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、及びイミキモド、または腫瘍細胞の免疫原性を増強する治療が挙げられる（例えば、アントラサイクリン）。
本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体と組み合わせることができるさらに他の治療法としては、Ｔｒｅｇ細胞を枯渇または遮断する治療法、例えば、ＣＤ２５に特異的に結合する薬剤が挙げられる。
本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体と組み合わせることができる別の治療法は、インドールアミンジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、ジオキシゲナーゼ、アルギナーゼ、または一酸化窒素シンテターゼなどの代謝酵素を阻害する治療法である。
使用することができる別のクラスの薬剤としては、アデノシンの形成を阻害するか、またはアデノシンＡ２Ａ受容体を阻害する薬剤が挙げられる。
がんを治療するために本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体と組み合わせることができる他の治療法としては、Ｔ細胞のアネルギーまたは疲弊を逆転／防止する治療法、及び腫瘍部位で自然免疫活性化及び／または炎症を引き起こす治療法が挙げられる。
本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、１つを超える腫瘍免疫療法薬（免疫チェックポイント阻害剤など）と組み合わせることができ、例えば、免疫経路の複数の要素を標的とする組み合わせアプローチ、例えば、次の：腫瘍抗原提示を増強する治療法（例えば、樹状細胞ワクチン、ＧＭ－ＣＳＦ分泌細胞ワクチン、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、イミキモド）；例えば、ＣＴＬＡ－４及び／またはＰＤ１／ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－Ｌ２経路を阻害すること、及び／またはＴｒｅｇまたは他の免疫抑制細胞を枯渇または遮断することによって負の免疫調節を阻害する治療法；例えば、ＣＤ－１３７、ＯＸ－４０及び／またはＧＩＴＲ経路を刺激する及び／またはＴ細胞エフェクター機能を刺激するアゴニストによって正の免疫調節を刺激する治療法；抗腫瘍Ｔ細胞の頻度を全身的に増加させる治療法；例えば、ＣＤ２５のアンタゴニスト（例えば、ダクリズマブ）を使用するか、エクスビボでの抗ＣＤ２５ビーズ枯渇によって腫瘍内のＴｒｅｇなどのＴｒｅｇを枯渇または阻害する治療法；腫瘍内のサプレッサー骨髄細胞の機能に影響を及ぼす治療法；腫瘍細胞の免疫原性を増強する治療法（例えば、アントラサイクリン）；遺伝的に改変された細胞、例えば、キメラ抗原受容体によって改変された細胞を含む養子Ｔ細胞または養子ＮＫ細胞移植（ＣＡＲ－Ｔ療法）；インドールアミンジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、ジオキシゲナーゼ、アルギナーゼ、一酸化窒素シンテターゼなどの代謝酵素を阻害する治療法；Ｔ細胞のアネルギーまたは疲弊を逆転／予防する治療法；腫瘍部位で自然免疫活性化及び／または炎症を引き起こす治療；免疫刺激性サイトカインの投与または免疫抑制性サイトカインの遮断のうちの１つ以上と組み合わせることができる。
例えば、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、正の共刺激受容体を連結する１つ以上のアゴニスト剤；腫瘍微小環境内の異なる免疫抑制経路を克服するアンタゴニストなど、阻害性受容体を介したシグナル伝達を減衰させる１つ以上のアンタゴニスト（ブロッキング剤）（例えば、ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ２相互作用を遮断する）；Ｔ細胞などの抗腫瘍免疫細胞の頻度を全身的に増加させ、Ｔｒｅｇを枯渇または阻害する（例えば、ＣＤ２５を阻害することによって）１つ以上の薬剤；ＩＤＯなどの代謝酵素を阻害する１つ以上の薬剤；Ｔ細胞のアネルギーまたは疲弊を逆転／予防する１つ以上の薬剤；ならびに腫瘍部位で自然免疫活性化及び／または炎症を引き起こす１つ以上の薬剤とともに使用することができる。
一実施形態では、免疫系の刺激から利益を得る可能性のある疾患、例えば、がんまたは感染性疾患を有する対象は、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体及び腫瘍免疫療法薬の対象への投与によって治療され、免疫腫瘍剤は、拮抗性ＣＴＬＡ－４抗体などのＣＴＬＡ－４アンタゴニストである。適切なＣＴＬＡ－４抗体としては、例えば、イーボイ（イピリムマブ）またはトレメリムマブが挙げられる。
一実施形態では、免疫系の刺激から利益を得る可能性のある疾患、例えば、がんまたは感染性疾患を有する対象は、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体及び腫瘍免疫療法薬の対象への投与によって治療され、免疫腫瘍剤は、拮抗性ＰＤ－１抗体などのＰＤ－１アンタゴニストである。適切なＰＤ－１抗体としては、例えば、オプジーボ（ニボルマブ）、キイトルーダ（ペムブロリズマブ）、またはＭＥＤＩ－０６８０（ＡＭＰ－５１４；ＷＯ２０１２／１４５４９３）が挙げられる。免疫腫瘍剤としては、ピジリズマブ（ＣＴ－０１１）も挙げられ得る。ＰＤ－１受容体を標的とする別のアプローチは、ＡＭＰ－２２４と呼ばれるＩｇＧ１のＦｃ部分に融合したＰＤ－Ｌ２（Ｂ７－ＤＣ）の細胞外ドメインで構成される組換えタンパク質である。
一実施形態では、免疫系の刺激から利益を得る可能性のある疾患、例えば、がんまたは感染性疾患を有する対象は、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体及び腫瘍免疫療法薬の対象への投与によって治療され、免疫腫瘍剤は、拮抗性ＰＤ－Ｌ１抗体などのＰＤ－Ｌ１アンタゴニストである。適切なＰＤ－Ｌ１抗体としては、例えば、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（ＲＧ７４４６；ＷＯ２０１０／０７７６３４）、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）、ＢＭＳ－９３６５５９（ＷＯ２００７／００５８７４）、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ（ＷＯ２０１３／７９１７４）またはｒＨｉｇＭ１２Ｂ７が挙げられる。
一実施形態では、免疫系の刺激から利益を得る可能性のある疾患、例えば、がんまたは感染性疾患を有する対象は、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体及び腫瘍免疫療法薬の対象への投与によって治療され、免疫腫瘍剤は、拮抗性ＬＡＧ－３抗体などのＬＡＧ－３アンタゴニストである。適切なＬＡＧ３抗体としては、例えば、ＢＭＳ－９８６０１６（ＷＯ１０／１９５７０、ＷＯ１４／０８２１８）、またはＩＭＰ－７３１またはＩＭＰ－３２１（ＷＯ０８／１３２６０１、ＷＯ０９／４４２７３）が挙げられる。
一実施形態では、免疫系の刺激から利益を得る可能性のある疾患、例えば、がんまたは感染性疾患を有する対象は、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体及び腫瘍免疫療法薬の対象への投与によって治療され、免疫腫瘍剤は、作動性ＣＤ１３７抗体などのＣＤ１３７（４－１ＢＢ）アゴニストである。適切なＣＤ１３７抗体としては、例えば、ウレルマブまたはＰＦ－０５０８２５６６（Ｗ０１２／３２４３３）が挙げられる。
一実施形態では、免疫系の刺激から利益を得る可能性のある疾患、例えば、がんまたは感染性疾患を有する対象は、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体及び腫瘍免疫療法薬の対象への投与によって治療され、免疫腫瘍剤は、作動性ＧＩＴＲ抗体などのＧＩＴＲアゴニストである。適切なＧＩＴＲ抗体としては、例えば、ＴＲＸ－５１８（ＷＯ０６／１０５０２１、ＷＯ０９／００９１１６）、ＭＫ－４１６６（ＷＯ１１／０２８６８３）、またはＷＯ２０１５／０３１６６７に開示されているＧＩＴＲ抗体が挙げられる。
一実施形態では、免疫系の刺激から利益を得る可能性のある疾患、例えば、がんまたは感染性疾患を有する対象は、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体及び腫瘍免疫療法薬の対象への投与によって治療され、免疫腫瘍剤は、作動性ＯＸ４０抗体などのＯＸ４０アゴニストである。適切なＯＸ４０抗体としては、例えば、ＭＥＤＩ－６３８３、ＭＥＤＩ－６４６９、またはＭＯＸＲ０９１６（ＲＧ７８８８；ＷＯ０６／０２９８７９）が挙げられる。
一実施形態では、免疫系の刺激から利益を得る可能性のある疾患、例えば、がんまたは感染性疾患を有する対象は、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体及び腫瘍免疫療法薬の対象への投与によって治療され、免疫腫瘍剤は、作動性ＣＤ４０抗体などのＣＤ４０アゴニストである。特定の実施形態では、腫瘍免疫療法薬は、拮抗的ＣＤ４０抗体などのＣＤ４０アンタゴニストである。適切なＣＤ４０抗体としては、例えば、ルカツムマブ（ＨＣＤ１２２）、ダセツズマブ（ＳＧＮ－４０）、ＣＰ－８７０，８９３、またはＣｈｉＬｏｂ７／４が挙げられる。
一実施形態では、免疫系の刺激から利益を得る可能性のある疾患、例えば、がんまたは感染性疾患を有する対象は、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体及び腫瘍免疫療法薬の対象への投与によって治療され、免疫腫瘍剤は、作動性ＣＤ２７抗体などのＣＤ２７アゴニストである。適切なＣＤ２７抗体としては、例えば、バルリルマブ（ＣＤＸ－１１２７）が挙げられる。
一実施形態では、免疫系の刺激から利益を得る可能性のある疾患、例えば、がんまたは感染性疾患を有する対象は、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体及び腫瘍免疫療法薬の対象への投与によって治療され、免疫腫瘍剤は、ＭＧＡ２７１（Ｂ７Ｈ３に対する）（ＷＯｌ１／１０９４００）である。
一実施形態では、免疫系の刺激から利益を得る可能性のある疾患、例えば、がんまたは感染性疾患を有する対象は、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体及び腫瘍免疫療法薬の対象への投与によって治療され、免疫腫瘍剤は、リリルマブなどのＫＩＲアンタゴニストである。
一実施形態では、免疫系の刺激から利益を得る可能性のある疾患、例えば、がんまたは感染性疾患を有する対象は、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体及び腫瘍免疫療法薬の対象への投与によって治療され、免疫腫瘍剤は、ＩＤＯアンタゴニストである。適切なＩＤＯアンタゴニストとしては、例えば、ＩＮＣＢ－０２４３６０（ＷＯ２００６／１２２１５０、ＷＯ０７／７５５９８、ＷＯ０８／３６６５３、ＷＯ０８／３６６４２）、インドキシモド、ＮＬＧ－９１９（ＷＯ０９／７３６２０、ＷＯ０９／１１５６６５２、ＷＯ１１／５６６５２、ＷＯ１２／１４２２３７）またはＦ００１２８７が挙げられる。
一実施形態では、免疫系の刺激から利益を得る可能性のある疾患、例えば、がんまたは感染症を有する対象は、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体と腫瘍免疫療法薬とを対象に投与することによって治療され、免疫腫瘍剤は、トール様受容体アゴニスト、例えば、ＴＬＲ２／４アゴニスト（例えば、カルメット－ゲラン桿菌）；ＴＬＲ７アゴニスト（例えば、ヒルトノールまたはイミキモド）；ＴＬＲ７／８アゴニスト（例、レシキモド）；またはＴＬＲ９アゴニスト（例えば、ＣｐＧ７９０９）である。
一実施形態では、免疫系の刺激から利益を得る可能性のある疾患、例えば、がんまたは感染性疾患を有する対象は、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体及び腫瘍免疫療法薬の対象への投与によって治療され、免疫腫瘍剤は、ＴＧＦ－β阻害剤、例えば、ＧＣ１００８、ＬＹ２１５７２９９、ＴＥＷ７１９７、またはＩＭＣ－ＴＲ１である。
６． 例示的な抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体
本明細書に記載の本発明は、ＴＮＦＲ２に特異的なモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を提供する。
したがって、本発明の一態様は、配列番号１３または３８のエピトープへの結合について、またはＨＦＢ３－１８が結合するエピトープへの結合について、本明細書に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片のいずれかと競合する、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を提供する。
本発明の関連する態様は、配列番号１３または３８のエピトープ、またはＨＦＢ３－１８によって結合されるエピトープに特異的に結合する、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を提供する。
本発明の別の関連する態様は、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を提供し、前記単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片はヒトＴＮＦＲ２に特異的であり、前記モノクローナル抗体は、以下を含む：（１ａ）配列番号１のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号２のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号３のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と；（１ｂ）配列番号４のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号５のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号６のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；または（２ａ）配列番号１４のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号１５のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、配列番号１６のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と；（２ｂ）配列番号１７のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号１８のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号１９のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；または（３ａ）配列番号２６のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号２７のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、配列番号２８のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と；（３ｂ）配列番号２９のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号３０のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号３１のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；または（４ａ）配列番号３９のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号４０のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、配列番号４１のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と；（４ｂ）配列番号４２のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号４３のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号４４のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；または（５ａ）配列番号５１のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号５２のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、配列番号５３のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と；（５ｂ）配列番号５４のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号５５のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号５６のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；または（６ａ）配列番号６３のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号６４のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、配列番号６５のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と；（６ｂ）配列番号６６のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号６７のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号６８のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）。
上記の本発明の態様のいずれかについて、いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片では、（１Ａ）ＨＣＶＲ配列は配列番号７であり；及び／または（１Ｂ）ＬＣＶＲ配列は配列番号８であり、または（２Ａ）ＨＣＶＲ配列は配列番号２０であり；及び／または（２Ｂ）ＬＣＶＲ配列は配列番号２１であり、または（３Ａ）ＨＣＶＲ配列は配列番号３２であり；及び／または（３Ｂ）ＬＣＶＲ配列は配列番号３３であり、または（４Ａ）ＨＣＶＲ配列は配列番号４５であり；及び／または（４Ｂ）ＬＣＶＲ配列は配列番号４６であり、または（５Ａ）ＨＣＶＲ配列は配列番号５７であり；及び／または（５Ｂ）ＬＣＶＲ配列は配列番号５８であり、または（６Ａ）ＨＣＶＲ配列は配列番号６９であり；及び／または（６Ｂ）ＬＣＶＲ配列は配列番号７０である。
いくつかの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、以下を有する：（１ａ）配列番号９の重鎖配列；及び／または（１ｂ）配列番号１０の軽鎖配列、または（２ａ）配列番号２２の重鎖配列；及び／または（２ｂ）配列番号２３の軽鎖配列、または（３ａ）配列番号３４の重鎖配列；及び／または（３ｂ）配列番号３５の軽鎖配列、または（４ａ）配列番号４７の重鎖配列；及び／または（４ｂ）配列番号４８の軽鎖配列、または（５ａ）配列番号５９の重鎖配列；及び／または（５ｂ）配列番号６０の軽鎖配列、または（６ａ）配列番号７１の重鎖配列；及び／または（６ｂ）配列番号７２の軽鎖配列。
本発明の抗体の配列のいくつかを以下に提供する。
ＨＦＢ３－１－ｈＧ１（マウスモノクローナル抗体）
ＣＤＲ－Ｈ１：ＳＹＳＦＴＤＹＮ（配列番号１）
ＣＤＲ－Ｈ２：ＩＦＰＫＹＧＴＴＳＹＮＱＫＦＫＧ（配列番号２）
ＣＤＲ－Ｈ３：ＡＴＤＧＧＴＷＹＦＤＶ（配列番号３）
ＣＤＲ－Ｌ１：ＳＳＶＴＹ（配列番号４）
ＣＤＲ－Ｌ２：ＬＴＳＮＬＡＳＧＶＰＡ（配列番号５）
ＣＤＲ－Ｌ３：ＱＱＷＳＳＮＰＰＴ（配列番号６）
ＨＣＶＲは配列番号７であり、ＬＣＶＲは配列番号８である。
ＨＣ： ＥＦＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＳＹＳＦＴＤＹＮＭＮＷＶＫＱＳＮＧＫＳＬＥＷＩＧＩＩＦＰＫＹＧＴＴＳＹＮＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＶＤＱＳＳＳＴＡＹＭＱＬＮＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＴＤＧＧＴＷＹＦＤＶＷＧＴＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号９）
ＬＣ：ＱＩＶＬＴＱＳＰＡＬＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＴＹＭＹＷＹＱＱＫＰＲＳＳＰＫＰＷＩＹＬＴＳＮＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＳＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＰＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１０）
ＧＡＡＴＴＴＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＣＣＣＣＧＡＧＣＴＧＧＴＴＡＡＧＣＣＴＧＧＣＧＣＣＴＣＴＧＴＧＡＡＧＡＴＣＡＧＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＡＧＣＡＧＣＴＡＣＡＧＣＴＴＣＡＣＣＧＡＣＴＡＣＡＡＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＡＡＧＣＡＧＡＧＣＡＡＣＧＧＣＡＡＧＡＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＣＧＧＣＡＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＴＡＡＧＴＡＣＧＧＣＡＣＣＡＣＣＡＧＣＴＡＣＡＡＣＣＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＡＡＧＣＣＡＣＡＣＴＧＡＣＣＧＴＧＧＡＣＣＡＧＡＧＣＡＧＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＧＣＴＣＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＡＧＧＡＣＡＧＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＣＴＡＣＡＧＡＴＧＧＣＧＧＣＡＣＣＴＧＧＴＡＣＴＴＣＧＡＴＧＴＧＴＧＧＧＧＣＡＣＴＧＧＣＡＣＣＡＣＣＧＴＧＡＣＡＧＴＴＡＧＴＴＣＴＧＣＧＴＣＧＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＴＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＣＣＣＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ（配列番号１１）
ＣＡＧＡＴＴＧＴＧＣＴＧＡＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＣＧＣＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＧＣＴＡＧＣＣＣＴＧＧＣＧＡＧＡＡＡＧＴＧＡＣＣＡＴＧＡＣＡＴＧＴＡＧＣＧＣＣＡＧＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＡＣＣＴＡＣＡＴＧＴＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＣＡＧＡＡＧＣＡＧＣＣＣＣＡＡＧＣＣＴＴＧＧＡＴＣＴＡＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＡＡＴＣＴＧＧＣＣＡＧＣＧＧＡＧＴＧＣＣＴＧＣＣＡＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＡＡＧＣＴＡＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＡＴＣＡＧＣＡＧＣＡＴＧＧＡＡＧＣＣＧＡＧＧＡＴＧＣＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＴＧＧＴＣＣＡＧＣＡＡＴＣＣＴＣＣＴＡＣＡＴＴＴＧＧＣＴＣＣＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧＣＧＴＡＣＧＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧ（配列番号１２）
ＳＣＥＤＳＴＹＴＱＬＷＮＷＶＰＥＣＬＳ（配列番号１３）
ＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１（ヒト化モノクローナル抗体）
ＣＤＲ－Ｈ１：ＳＹＳＦＴＤＹＮ（配列番号１４）
ＣＤＲ－Ｈ２：ＩＦＰＫＹＧＴＴＳＹＡＱＫＬＱＧ（配列番号１５）
ＣＤＲ－Ｈ３：ＡＴＤＧＧＴＷＹＦＤＶ（配列番号１６）
ＣＤＲ－Ｌ１：ＳＳＶＴＹ（配列番号１７）
ＣＤＲ－Ｌ２：ＬＴＳＮＬＡＳＧＶＰＳ（配列番号１８）
ＣＤＲ－Ｌ３：ＱＱＷＳＳＮＰＰＴ（配列番号１９）
ＨＣＶＲは配列番号２０であり、ＬＣＶＲは配列番号２１である。
ＨＣ：ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＳＹＳＦＴＤＹＮＭＮＷＶＲＱＡＰＧＱＳＬＥＷＭＧＩＩＦＰＫＹＧＴＴＳＹＡＱＫＬＱＧＲＶＴＬＴＴＤＴＳＴＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＴＤＧＧＴＷＹＦＤＶＷＧＴＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２２）
ＬＣ：ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＳＳＶＴＹＭＹＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＰＷＩＹＬＴＳＮＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＰＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２３）
ＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＴＧＧＴＴＣＡＧＴＣＴＧＧＣＧＣＣＧＡＧＣＴＧＡＡＡＡＡＡＣＣＴＧＧＣＧＣＣＴＣＴＧＴＧＡＡＧＧＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＡＧＣＡＧＣＴＡＣＡＧＣＴＴＣＡＣＣＧＡＣＴＡＣＡＡＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＣＣＡＧＴＣＴＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＣＡＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＴＡＡＧＴＡＣＧＧＣＡＣＣＡＣＣＡＧＣＴＡＣＧＣＣＣＡＧＡＡＡＣＴＧＣＡＧＧＧＡＡＧＡＧＴＧＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＣＣＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＣＡＡＧＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＡＣＴＧＣＧＧＡＧＣＣＴＧＡＧＡＴＣＣＧＡＴＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＣＣＡＣＡＧＡＴＧＧＣＧＧＣＡＣＣＴＧＧＴＡＣＴＴＣＧＡＴＧＴＧＴＧＧＧＧＣＡＣＴＧＧＣＡＣＣＡＣＣＧＴＧＡＣＡＧＴＣＴＣＴＴＣＴＧＣＧＴＣＧＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＴＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＣＣＣＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ（配列番号２４）
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＣＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＡＧＣＴＴＴＣＴＧＡＧＣＧＣＣＡＧＣＧＴＧＧＧＣＧＡＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＴＡＣＡＴＧＴＡＧＡＧＣＣＡＧＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＡＣＣＴＡＴＡＴＧＴＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＣＡＡＧＧＣＣＣＣＴＡＡＧＣＣＴＴＧＧＡＴＣＴＡＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＡＡＴＣＴＧＧＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＡＡＧＣＡＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＡＴＣＴＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＧＡＴＧＣＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＴＴＧＣＣＡＧＣＡＧＴＧＧＴＣＣＡＧＣＡＡＴＣＣＴＣＣＴＡＣＣＴＴＴＧＧＣＴＣＣＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧＣＧＴＡＣＧＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧ（配列番号２５）
ＨＦＢ３－１４－ｈＧ１（マウスモノクローナル抗体）
ＣＤＲ－Ｈ１：ＧＹＴＦＴＤＹＹ（配列番号２６）
ＣＤＲ－Ｈ２：ＩＮＰＮＤＧＧＴＴＹＳＱＫＦＫＧ（配列番号２７）
ＣＤＲ－Ｈ３：ＡＲＥＧＮＹＹＡＹＤＶＲＶＷＹＦＤＶ（配列番号２８）
ＣＤＲ－Ｌ１：ＱＤＩＩＴＹ（配列番号２９）
ＣＤＲ－Ｌ２：ＳＴＳＳＬＮＳＧＶＰＳ（配列番号３０）
ＣＤＲ－Ｌ３：ＱＱＹＳＥＬＰＹＴ（配列番号３１）
ＨＣＶＲは配列番号３２であり、ＬＣＶＲは配列番号３３である。
ＨＣ：ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＲＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮＷＶＫＱＳＨＧＫＳＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＤＧＧＴＴＹＳＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲＥＧＮＹＹＡＹＤＶＲＶＷＹＦＤＶＷＧＴＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３４）
ＬＣ：ＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＬＳＶＳＶＧＥＴＶＴＩＴＣＲＳＳＥＮＩＹＳＮＬＡＷＹＱＱＫＱＧＫＳＰＱＬＬＶＹＡＡＴＮＬＡＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＱＹＳＬＫＩＮＳＬＱＳＥＤＦＧＳＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号３５）
ＧＡＡＧＴＴＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＣＣＣＧＡＧＣＴＧＧＴＴＡＡＧＣＣＴＧＧＣＧＣＣＴＣＴＧＴＣＡＧＡＡＴＣＡＧＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＡＧＣＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＧＡＣＴＡＣＴＡＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＡＡＧＣＡＧＡＧＣＣＡＣＧＧＣＡＡＧＡＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＣＧＧＣＧＡＣＡＴＣＡＡＣＣＣＣＡＡＴＧＡＴＧＧＣＧＧＣＡＣＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＡＡＧＣＣＡＣＡＣＴＧＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＡＣＴＧＡＧＡＡＧＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＡＧＧＡＣＡＧＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＴＴＴＧＴＧＣＣＡＧＡＧＡＧＧＧＣＡＡＣＴＡＣＴＡＣＧＣＣＴＡＣＧＡＣＧＴＣＣＧＣＧＴＧＴＧＧＴＡＣＴＴＣＧＡＴＧＴＧＴＧＧＧＧＣＡＣＡＧＧＣＡＣＣＡＣＣＧＴＧＡＣＡＧＴＴＡＧＴＴＣＴＧＣＧＴＣＧＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＴＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＣＣＣＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ（配列番号３６）
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＣＣＡＧＣＣＴＧＴＣＣＧＴＧＴＣＴＧＴＧＧＧＡＧＡＧＡＣＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＴＣＧＧＡＧＣＡＧＣＧＡＧＡＡＣＡＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＣＣＴＧＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＧＣＴＧＧＴＧＴＡＣＧＣＣＧＣＣＡＣＣＡＡＴＣＴＴＧＣＴＧＡＴＧＧＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＧＡＴＴＴＴＣＣＧＧＣＴＣＴＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＣＡＣＡＧＴＡＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＣＡＡＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＧＣＡＧＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＣＴＴＴＴＧＧＧＧＣＡＣＣＣＣＴＴＧＧＡＣＡＴＴＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧＣＧＴＡＣＧＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧ（配列番号３７）
ＣＡＰＬＲＫＣＲＰＧＦＧＶＡＲＰＧＴＥＴＳＤ（配列番号３８）
ＨＦＢ３－１４ｈｚ１ｃ－ｈＧ１（ヒト化モノクローナル抗体）
ＣＤＲ－Ｈ１：ＧＹＴＦＴＤＹＹ（配列番号３９）
ＣＤＲ－Ｈ２：ＩＮＰＮＤＧＧＴＴＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４０）
ＣＤＲ－Ｈ３：ＡＲＥＧＮＹＹＡＹＤＶＲＶＷＹＦＤＶ（配列番号４１）
ＣＤＲ－Ｌ１：ＱＤＩＩＴＹ（配列番号４２）
ＣＤＲ－Ｌ２：ＳＴＳＳＬＮＳＧＶＰＳ（配列番号４３）
ＣＤＲ－Ｌ３：ＱＱＹＳＥＬＰＹＴ（配列番号４４）
ＨＣＶＲは配列番号４５であり、ＬＣＶＲは配列番号４６である。
ＨＣ：ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＤＩＮＰＮＤＧＧＴＴＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＦＣＡＲＥＧＮＹＹＡＹＤＶＲＶＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号４７）
ＬＣ：ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＧＡＳＱＤＩＩＴＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＶＫＬＬＩＹＳＴＳＳＬＮＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＳＥＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＬＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号４８）
ＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＴＧＧＴＴＣＡＧＴＣＴＧＧＣＧＣＣＧＡＡＧＴＧＡＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＡＡＧＧＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＡＧＣＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＴＡＣＣＧＡＣＴＡＣＴＡＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＡＣＴＴＧＡＡＴＧＧＡＴＧＧＧＣＧＡＣＡＴＣＡＡＣＣＣＣＡＡＣＧＡＣＧＧＣＧＧＣＡＣＡＡＣＡＴＡＣＧＣＣＣＡＧＡＡＡＴＴＣＣＡＧＧＧＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣＧＣＣＧＡＣＧＡＧＴＣＴＡＣＡＡＧＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＡＣＴＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＡＧＣＧＡＧＧＡＴＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＴＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡＧＡＧＧＧＣＡＡＣＴＡＣＴＡＣＧＣＣＴＡＣＧＡＣＧＴＣＣＧＣＧＴＧＴＧＧＴＡＣＴＴＣＧＡＴＧＴＴＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＣＣＧＴＧＡＣＡＧＴＣＴＣＴＴＣＴＧＣＧＴＣＧＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＴＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＣＣＣＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ（配列番号４９）
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＣＣＣＴＡＧＣＡＧＣＣＴＧＴＣＴＧＣＣＡＧＣＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＴＡＣＡＴＧＴＧＧＣＧＣＣＡＧＣＣＡＧＧＡＣＡＴＣＡＴＣＡＣＣＴＡＣＣＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＣＧＧＣＡＡＧＧＣＣＧＴＧＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＡＧＣＡＣＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＴＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＡＴＣＴＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＴＡＣＡＧＣＧＡＧＣＴＧＣＣＣＴＡＣＡＣＡＴＴＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＣＴＧＡＡＧＣＧＴＡＣＧＧＴＴＧＣＴＧＣＣＣＣＴＴＣＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣＴＴＣＣＧＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＴＧＧＣＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＣＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＴＣＧＧＧＡＡＧＣＣＡＡＧＧＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＴＧＣＣＣＴＧＣＡＧＴＣＣＧＧＣＡＡＣＴＣＣＣＡＡＧＡＧＴＣＴＧＴＧＡＣＣＧＡＧＣＡＧＧＡＣＴＣＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＧＴＣＣＴＣＣＡＣＡＣＴＧＡＣＣＣＴＧＴＣＣＡＡＧＧＣＣＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＧＣＡＣＡＡＧＧＴＧＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＧＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＴＣＴＡＧＣＣＣＴＧＴＧＡＣＣＡＡＧＴＣＴＴＴＣＡＡＣＣＧＧＧＧＣＧＡＧＴＧＴＴＡＧ（配列番号５０）
ＨＦＢ３－１８－ｈＧ１（マウスモノクローナル抗体）
ＣＤＲ－Ｈ１：ＧＦＴＦＳＤＡＷ（配列番号５１）
ＣＤＲ－Ｈ２：ＶＲＮＫＡＮＮＨＡＴＹＹＡＥＳＶＫＧ（配列番号５２）
ＣＤＲ－Ｈ３：ＴＲＳＶＧＧＹＧＴＴＹＷＹＦＤＶ（配列番号５３）
ＣＤＲ－Ｌ１：ＱＮＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹ（配列番号５４）
ＣＤＲ－Ｌ２：ＧＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤ（配列番号５５）
ＣＤＲ－Ｌ３：ＱＳＥＨＳＹＰＹＴ（配列番号５６）
ＨＣＶＲは配列番号５７であり、ＬＣＶＲは配列番号５８である。
ＨＣ：ＥＶＫＬＥＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＭＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＡＷＭＤＷＶＲＱＳＰＥＫＧＬＥＷＶＡＥＶＲＮＫＡＮＮＨＡＴＹＹＡＥＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＳＳＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＧＩＹＹＣＴＲＳＶＧＧＹＧＴＴＹＷＹＦＤＶＷＧＴＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号５９）
ＬＣ：ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＳＶＳＡＧＥＫＶＴＭＳＣＫＳＳＱＮＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＦＧＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＳＥＨＳＹＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号６０）
ＧＡＡＧＴＧＡＡＧＣＴＧＧＡＡＧＡＡＴＣＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡＣＴＧＧＴＴＣＡＧＣＣＴＧＧＣＧＧＡＴＣＴＡＴＧＡＡＧＣＴＧＡＧＣＴＧＴＧＣＣＧＣＣＡＧＣＧＧＣＴＴＣＡＣＣＴＴＴＴＣＴＧＡＣＧＣＣＴＧＧＡＴＧＧＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＡＣＡＧＴＣＴＣＣＴＧＡＧＡＡＡＧＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＧＴＴＧＣＣＧＡＡＧＴＧＣＧＧＡＡＣＡＡＧＧＣＣＡＡＣＡＡＣＣＡＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＧＣＣＧＡＧＴＣＴＧＴＧＡＡＧＧＧＣＡＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＣＧＧＧＡＣＧＡＣＡＧＣＡＡＧＡＧＣＡＧＣＧＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＧＣＡＴＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＡＣＡＡＧＡＡＧＣＧＴＴＧＧＣＧＧＣＴＡＣＧＧＣＡＣＣＡＣＣＴＡＣＴＧＧＴＡＣＴＴＴＧＡＴＧＴＧＴＧＧＧＧＣＡＣＣＧＧＣＡＣＣＡＣＡＧＴＧＡＣＣＧＴＴＡＧＴＴＣＴＧＣＧＴＣＧＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＴＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＣＣＣＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ（配列番号６１）
ＧＡＣＡＴＣＧＴＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＣＣＣＴＡＧＣＡＧＣＣＴＧＴＣＴＧＴＧＴＣＴＧＣＣＧＧＣＧＡＧＡＡＡＧＴＧＡＣＣＡＴＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＡＧＣＡＧＣＣＡＧＡＡＣＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＧＣＧＧＣＡＡＣＣＡＧＡＡＧＡＡＣＴＡＣＣＴＧＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＣＣＡＧＣＣＴＣＣＴＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＴＴＧＧＡＧＣＣＡＧＣＡＣＣＡＧＡＧＡＡＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＧＡＴＡＧＡＴＴＴＡＣＡＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＡＡＴＣＡＧＴＴＣＴＧＴＧＣＡＧＧＣＣＧＡＧＧＡＣＣＴＧＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＧＡＧＣＧＡＧＣＡＣＡＧＣＴＡＣＣＣＣＴＡＣＡＣＣＴＴＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡＡＣＡＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧＣＧＴＡＣＧＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧ（配列番号６２）
ＨＦＢ３－１８ｈｚ１－ｈＧ１ヒト化モノクローナル抗体）
ＣＤＲ－Ｈ１：ＧＦＴＦＳＤＡＷ（配列番号６３）
ＣＤＲ－Ｈ２：ＶＲＮＫＡＮＮＨＡＴＹＹＡＡＳＶＫＧ（配列番号６４）
ＣＤＲ－Ｈ３：ＴＲＳＶＧＧＹＧＴＴＹＷＹＦＤＶ（配列番号６５）
ＣＤＲ－Ｌ１：ＱＮＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹ（配列番号６６）
ＣＤＲ－Ｌ２：ＧＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤ（配列番号６７）
ＣＤＲ－Ｌ３：ＱＳＥＨＳＹＰＹＴ（配列番号６８）
ＨＣＶＲは配列番号６９であり、ＬＣＶＲは配列番号７０である。
ＨＣ：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＡＷＭＤＷＶＲＱＡＳＧＫＧＬＥＷＶＧＥＶＲＮＫＡＮＮＨＡＴＹＹＡＡＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲＳＶＧＧＹＧＴＴＹＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号７１）
ＬＣ：ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＳＱＮＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＦＧＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＳＥＨＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号７２）
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＴＧＡＡＴＣＴＧＧＣＧＧＡＧＧＡＣＴＧＧＴＴＣＡＧＣＣＴＧＧＣＧＧＡＴＣＴＣＴＧＡＡＧＣＴＧＴＣＴＴＧＴＧＣＣＧＣＣＡＧＣＧＧＣＴＴＣＡＣＣＴＴＴＴＣＣＧＡＣＧＣＴＴＧＧＡＴＧＧＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＡＣＡＧＧＣＣＴＣＴＧＧＣＡＡＡＧＧＣＣＴＴＧＡＧＴＧＧＧＴＴＧＧＡＧＡＡＧＴＧＣＧＧＡＡＣＡＡＧＧＣＣＡＡＣＡＡＣＣＡＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＴＧＣＣＧＣＣＴＣＴＧＴＧＡＡＧＧＧＣＡＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＣＧＧＧＡＣＧＡＣＡＧＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＡＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＡＣＣＡＧＡＴＣＴＧＴＴＧＧＣＧＧＣＴＡＣＧＧＣＡＣＣＡＣＣＴＡＣＴＧＧＴＡＣＴＴＴＧＡＴＧＴＧＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＣＣＧＴＧＡＣＡＧＴＴＴＣＴＴＣＴＧＣＧＴＣＧＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＴＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＣＣＣＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ（配列番号７３）
ＧＡＣＡＴＣＧＴＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＣＣＣＴＧＡＴＡＧＣＣＴＧＧＣＣＧＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＡＧＡＧＡＧＡＧＣＣＡＣＣＡＴＣＡＡＣＴＧＣＡＡＧＡＧＣＡＧＣＣＡＧＡＡＣＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＧＣＧＧＣＡＡＣＣＡＧＡＡＧＡＡＣＴＡＣＣＴＧＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＣＣＡＧＣＣＴＣＣＴＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＴＴＧＧＡＧＣＣＡＧＣＡＣＣＡＧＡＧＡＡＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＧＡＴＡＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＡＡＴＴＡＧＣＴＣＣＣＴＧＣＡＧＧＣＣＧＡＧＧＡＴＧＴＧＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＧＡＧＣＧＡＧＣＡＣＡＧＣＴＡＣＣＣＣＴＡＣＡＣＣＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧＣＧＴＡＣＧＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧ（配列番号７４）
ＲＰＧＷＹＣＡＬＳＫＱＥＧＣＲＬＣＡＰＬＲＫＣＲＰＧＦＧＶＡＲＰＧＴＥＴＳＤ（配列番号７５）
いくつかの実施形態では、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒト－マウスキメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、ＣＤＲ移植抗体、または表面再構成抗体である。
いくつかの実施形態では、その抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、単鎖ＦｖまたはｓｃＦｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、Ｖ－ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）３、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、シングルドメイン抗体、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、（ｓｃＦｖ）２、またはｓｃＦｖ－Ｆｃである。
いくつかの実施形態では、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、免疫エフェクター機能を無効にする改変されたＦｃ領域を有する。例えば、本発明の抗体の改変されたＦｃ領域は「ＬＡＬＡ」二重変異（Ｌｅｕ２３４ＡｌａとＬｅｕ２３５Ａｌａ）を有していてもよく、したがってエフェクター機能が低下していてもよい。そのような抗体は、ＩｇＧ１にＬＡＬＡ二重変異を有するためのＧ１ＡＡの指定を有し得る。
Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）及び補体タンパク質Ｃ１ｑへの結合を部分的または完全に欠いており、したがって免疫エフェクター機能が廃止されている他の組換えヒトＩｇＧ抗体（ｈＩｇＧ）は、当該技術分野で知られており、ＦｃγＲの活性化とＦｃを介した毒性を軽減するためにさまざまな治療用途に使用される。特定のそのようなＦｃ改変抗体／断片はこの目標を部分的に達成するが、他のものはＦｃγＲ活性化とＦｃ媒介毒性を完全に無効にする。特定の実施形態では、本発明の抗体／断片は、ｈＩｇＧ１－Ｐ３２９Ｇ ＬＡＬＡまたはｈＩｇＧ４－Ｐ３２９Ｇ ＳＰＬＥ（ＩｇＧ４のヒトＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ／Ｌ２３５Ｅバリアント）変異を含む改変されたｈＩｇＧ Ｆｃドメインを有し、ＦｃγＲ及びＣ１ｑ相互作用を完全に無効にし、影響を受けないＦｃＲｎ相互作用とＦｃ安定性を有する。Ｐ３２９Ｇ Ｆｃ変異は、ＦｃγＲとのプロリンサンドイッチモチーフの形成を破壊する。このモチーフはすべてのＩｇＧＦｃ／ＦｃγＲ複合体の界面に存在するため、その破壊をすべてのヒト及び他のほとんどの哺乳動物ＩｇＧサブクラスに適用して、エフェクターサイレントＩｇＧ分子を作成できる。したがって、特定の実施形態では、本発明の抗体／断片は、そのようなエフェクターサイレントＦｃ変異を有する任意の１つのＩｇＧサブクラスを有する。
特定の実施形態では、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＴＮＦＲ２に特異的であり、例えば、ＴＮＦＲ１と実質的に交差反応せず、及び／またはマウスＴＮＦＲ２と実質的に交差反応しない。特定の実施形態では、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、カニクイザルまたはアカゲザルのＴＮＦＲ２などのサルＴＮＦＲ２と交差反応する。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体、またはその抗原結合断片は、ｒｈＴＮＦＲ２に対して、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、２５ｎＭ以下、２０ｎＭ以下、１５ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、２ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ、または０．００１ｎＭ以下（例えば、１０－８Ｍ以下、例えば、１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、例えば、１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。
いくつかの実施形態では、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ＴＮＦＲ２のＣＲＤ２ドメイン内の領域に結合する。特定の実施形態では、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ＨＦＢ３－１によって結合されるエピトープに結合する。
いくつかの実施形態では、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ＴＮＦＲ２のＣＲＤ３ドメイン内の領域に結合する。特定の実施形態では、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ＨＦＢ３－１４によって結合されるエピトープに結合する。
特定の実施形態では、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ＨＦＢ３－１８によって結合されるエピトープに結合する。
特定の実施形態では、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１３または３８のエピトープに結合する。
いくつかの実施形態では、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒト組換えＴＮＦαのＴＮＦＲ２への結合を増強する。
いくつかの実施形態では、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒト組換えＴＮＦαのＴＮＦＲ２への結合を遮断する。
いくつかの実施形態では、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒト組換えＴＮＦαのＴＮＦＲ２への結合に実質的に影響を及ぼさない。
いくつかの実施形態では、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ＮＦκＢシグナル伝達などのＴＮＦα媒介性シグナル伝達を阻害し、及び／またはＮＦκＢ下流標的遺伝子の下方制御を誘導する。しかしながら、他の実施形態では、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ＮＦκＢシグナル伝達などのＴＮＦα媒介性シグナル伝達を促進し、及び／またはＮＦκＢ下流標的遺伝子の上方制御を誘導する。
いくつかの実施形態では、ＮＦκＢシグナル伝達は、ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ Ｔ細胞などのエフェクターＴ細胞において刺激される。いくつかの実施形態では、ＮＦκＢシグナル伝達は、ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ Ｔ細胞などのエフェクターＴ細胞において阻害される。
いくつかの実施形態では、ＮＦκＢシグナル伝達は、Ｔｒｅｇにおいて刺激される。他のいくつかの実施形態では、ＮＦκＢシグナル伝達は、Ｔｒｅｇにおいて阻害される。
いくつかの実施形態では、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、任意選択でＣＤ３／ＣＤ２８による共刺激を伴ってまたは伴わずに、及び／または任意選択でＴＮＦα共刺激を伴ってまたは伴わずに、ＣＤ８及び／または標準型のＣＤ４ Ｔ細胞増殖を刺激する。
いくつかの実施形態では、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、特にヒト化モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、刺激されていない初代ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔ細胞と比較して、（ＣＤ３／ＣＤ２８）ＴＣＲ活性化初代ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔ細胞に優先的に結合する。
いくつかの実施形態では、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、特にヒト化モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、Ｔｒｅｇの存在下での初代ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔ細胞の活性化及び／または増殖を含む、初代ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔ細胞のＣＤ３／ＣＤ２８誘導性活性化及び／または増殖などの、ＣＤ３／ＣＤ２８誘導性活性化及び／または増殖を増強する。
いくつかの実施形態では、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、特にヒト化モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、架橋非依存的に、初代ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔ細胞の活性化及び／または増殖を共刺激する。
いくつかの実施形態では、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、特にヒト化モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、架橋依存的に、初代ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔ細胞の活性化及び／または増殖を共刺激する。
いくつかの実施形態では、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ＴＮＦαとＴＮＦＲ２との間の結合を増強する；ＴＮＦαを介するかまたは共刺激されたＮＦκＢシグナル伝達を増強する（例えば、ＴＣＲ活性化ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ Ｔ細胞において）；及び／またはＴｒｅｇの存在下でＴＣＲ活性化エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ Ｔ細胞）の増殖を促進する。
いくつかの実施形態では、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、Ｔｒｅｇ上でのＴＮＦα媒介性ＣＤ２５発現を増強する。
いくつかの実施形態では、ヒト化モノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、高温（例えば、２５℃または４０℃）下、低ｐＨ条件（例えば、室温付近のｐＨ３．５）下、及び／または凍結／解凍サイクルの数ラウンド後で安定であることを含む、良好な開発可能性プロファイルを有する。
特定の実施形態では、ヒト化モノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、抗体の発達可能性を改善するように設計されたアミノ酸配列における１つ以上の点変異を含む。例えば、Ｒａｙｂｏｕｌｄら（Ｆｉｖｅ ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ ｄｅｖｅｌｏｐａｂｉｌｉｔｙ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ，ＰＮＡＳ１１６（１０）：４０２５－４０３０，２０１９）は、可変ドメイン配列のダウンロード可能な相同性モデルを構築し、５つの開発可能性ガイドラインに対してそれらを試験し、潜在的な配列の傾向と限界構造を報告する、計算ツールであるＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｆｉｌｅｒ（ＴＡＰ）について記載する。著者らはさらに、ｏｐｉｇ．ｓｔａｔｓ．ｏｘ．ａｃ．ｕｋ／ｗｅｂａｐｐｓ／ｓａｂｄａｂ－ｓａｂｐｒｅｄ／ＴＡＰ．ｐｈｐで無料で入手できるＴＡＰを提供している。
抗原に対する所望の親和性を達成することに加えて、治療用ｍＡｂの開発には多くの障壁がある。これらには、固有の免疫原性、化学的不安定性及び立体配座の不安定性、自己会合、高粘度、多重特異性、及び不十分な発現が含まれる。例えば、特に非常に可変的な相補性決定領域（ＣＤＲ）での高レベルの疎水性は、凝集、粘度、及び多重特異性に繰り返し関与している。重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインの正味電荷の非対称性はまた、高濃度での自己会合及び粘度とも相関している。ＣＤＲの正電荷と負電荷のパッチは、高いクリアランス率と低い発現レベルに関連している。生成品の不均一性（例えば、酸化、異性化、またはグリコシル化による）は、多くの場合、翻訳後または共翻訳修飾を受けやすい特定の配列モチーフに起因する。配列傾向の識別を容易にするための計算ツールが利用可能である。Ｗａｒｓｚａｗｓｋｉら（Ｏｐｔｉｍｉｚｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｆｆｉｎｉｔｙ ａｎｄ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｂｙ ｔｈｅ ａｕｔｏｍａｔｅｄ ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ｔｈｅ ｖａｒｉａｂｌｅ ｌｉｇｈｔ－ｈｅａｖｙ ｃｈａｉｎ ｉｎｔｅｒｆａｃｅｓ．ＰＬｏＳ Ｃｏｍｐｕｔ Ｂｉｏｌ １５（８）：ｅ１００７２０７． ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｃｂｉ．１００７２０７）はまた、可変軽鎖－重鎖界面の自動設計によって抗体の親和性と安定性を最適化する方法についても説明している。候補抗体の潜在的な開発可能性の問題を特定するために追加の方法が利用可能であり、本発明の好ましい実施形態では、最適化された本発明の治療用抗体をもたらすそのような問題に対処するために、従来の方法を介して１つ以上の点変異を候補抗体に導入することができる。
７． ヒト化抗体
いくつかの実施形態では、本発明の抗体はヒト化抗体である。ヒト化抗体が抗体治療に対する免疫応答をもたらし、治療効果の低下させる可能性がある非ヒト抗体に対するヒト免疫応答（ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答など）を低減または排除するため、ヒト化抗体は治療分子として有用である。
抗体は、任意の標準的な方法によってヒト化することができる。非限定的な例示的なヒト化の方法としては、例えば、米国特許第５，５３０，１０１号；同第５，５８５，０８９号；同第５，６９３，７６１号；同第５，６９３，７６２号；同第６，１８０，３７０号；Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４－３６（１９８８）；及び米国公開番号ＵＳ２００９／０１３６５００に記載されている方法が挙げられる。すべて参照することにより本明細書に組み込まれる。
ヒト化抗体は、非ヒト可変領域のフレームワーク領域内の少なくとも１つのアミノ酸が、ヒトフレームワーク領域内の対応する位置からのアミノ酸で置き換えられている抗体である。いくつかの実施形態では、非ヒト可変領域のフレームワーク領域の少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、少なくとも９つ、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１５個、または少なくとも２０個のアミノ酸が、１つ以上のヒトフレームワーク領域の１つ以上の対応する位置からのアミノ酸で置き換えられている。
いくつかの実施形態では、置換に使用される対応するヒトアミノ酸のいくつかは、異なるヒト免疫グロブリン遺伝子のフレームワーク領域に由来する。すなわち、いくつかのその ような実施形態では、１つ以上の非ヒトアミノ酸は、第１のヒト抗体のヒトフレームワーク領域からの、または第１のヒト免疫グロブリン遺伝子によってコードされる対応するアミノ酸で置き換えられ得、非ヒトアミノ酸の１つ以上は、第２のヒト抗体のヒトフレームワーク領域からの、または第２のヒト免疫グロブリン遺伝子によってコードされる対応するアミノ酸で置換され得、非ヒトアミノ酸の１つ以上は、第３のヒト抗体のヒトフレームワーク領域からの、または第３のヒト免疫グロブリン遺伝子によってコードされる対応するアミノ酸で置換され得る、などである。さらに、いくつかの実施形態では、単一のフレームワーク領域、例えば、ＦＲ２における置換に使用される対応するヒトアミノ酸のすべては、同じヒトフレームワークに由来する必要はない。しかしながら、いくつかの実施形態では、置換に使用される対応するヒトアミノ酸のすべては、同じヒト抗体に由来するか、または同じヒト免疫グロブリン遺伝子によってコードされる。
いくつかの実施形態では、抗体は、１つ以上のフレームワーク領域全体を対応するヒトフレームワーク領域で置き換えることによってヒト化される。いくつかの実施形態では、置換される非ヒトフレームワーク領域に対して最高レベルの相同性を有するヒトフレームワーク領域が選択される。いくつかの実施形態では、そのようなヒト化抗体はＣＤＲ移植抗体である。
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ移植に続いて、１つ以上のフレームワークアミノ酸が、マウスフレームワーク領域内の対応するアミノ酸に戻される。そのような「逆変異」は、いくつかの実施形態では、１つ以上のＣＤＲの構造に寄与すると思われる、及び／または抗原接触に関与し得る、及び／または抗体の全体的な構造的完全性に関与していると思われる、１つ以上のマウスフレームワークアミノ酸を保持するためになされる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲグラフト化後の抗体のフレームワーク領域に対して、１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下、１個、または０個の逆変異がなされる。
いくつかの実施形態では、ヒト化抗体はまた、ヒト重鎖定常領域及び／またはヒト軽鎖定常領域を含む。
８． ヒト抗体
いくつかの実施形態では、本発明の抗体はヒト抗体である。ヒト抗体は、任意の適切な方法で作製することができる。非限定的な例示的な方法は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を含むトランスジェニックマウスにおいてヒト抗体を作製することを含む。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９０：２５５１－５５（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ ３６２：２５５－８（１９９３）；ｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６－９（１９９４）；及び米国特許第５，５４５，８０７号；同第６，７１３，６１０号；同第６，６７３，９８６号；同第６，１６２，９６３号；同第５，５４５，８０７号；同第６，３００，１２９；号；同第６，２５５，４５８号；同第５，８７７，３９７号；同第５，８７４，２９９号；及び同第５，５４５，８０６号を参照されたい。
非限定的な例示的な方法はまた、ファージディスプレイライブラリーを使用してヒト抗体を作製することを含む。例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２２７：３８１－８（１９９２）；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ，Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２２２：５８１－９７（１９９１）；及びＰＣＴ公開番号ＷＯ９９／１０４９４を参照されたい。
抗体定常領域
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のヒト化、キメラ、またはヒト抗体は、１つ以上のヒト定常領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト重鎖定常領域は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、及びＩｇＤから選択されるアイソタイプのものである。いくつかの実施形態では、ヒト軽鎖定常領域は、Ｋ及びλから選択されるアイソタイプのものである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ヒトＩｇＧ定常領域、例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはＦｃ融合パートナーは、例えば、ＩｇＧ１定常領域においてＣ２３７Ｓ変異を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ヒトＩｇＧ２重鎖定常領域を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＩｇＧ２定常領域は、米国特許第６，９００，２９２号に記載されているように、Ｐ３３１Ｓ変異を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。いくつかのそのような実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域におけるＳ２４１Ｐ変異を含む。例えば、Ａｎｇａｌ ｅｔ ａｌ． Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ３０（１）：１０５－１０８（１９９３）を参照されたい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域及びヒトκ軽鎖を含む。
重鎖定常領域の選択は、抗体がインビボでエフェクター機能を有するか否かを決定することができる。そのようなエフェクター機能は、いくつかの実施形態では、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を含み、抗体が結合している細胞の殺傷をもたらし得る。典型的には、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３の重鎖を含む抗体はエフェクター機能を有する。
いくつかの実施形態では、エフェクター機能は望ましくない。例えば、いくつかの実施形態では、エフェクター機能は、炎症状態及び／または自己免疫障害の治療において望ましくない場合がある。いくつかのそのような実施形態では、ヒトＩｇＧ４またはＩｇＧ２の重鎖定常領域が選択または改変される。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４定常領域は、Ｓ２４１Ｐ変異を含む。
本明細書に記載の抗体のいずれも、任意の適切な方法によって精製することができる。そのような方法として、親和性マトリックスまたは疎水性相互作用クロマトグラフィーの使用が挙げられるが、これらに限定されない。適切な親和性リガンドとしては、抗体が結合する抗原及び／またはエピトープ、ならびに抗体定常領域に結合するリガンドが挙げられる。例えば、プロテインＡ、プロテインＧ、プロテインＡ／Ｇ、または抗体アフィニティーカラムを定常領域に結合するのに使用して、抗体を精製することができる。
いくつかの実施形態では、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）、例えば、ブチルまたはフェニルカラムもまた、いくつかのポリペプチドを精製するために使用される。ポリペプチドを精製する多くの方法が当該技術分野で公知である。
代替的に、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体は、無細胞系で産生される。非限定的な例示的な無細胞系は、例えば、Ｓｉｔａｒａｍａｎ ｅｔ ａｌ． ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ４９８：２２９－４４（２００９）；Ｓｐｉｒｉｎ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２２：５３８－４５（２００４）；Ｅｎｄｏ ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． Ａｄｖ． ２１ ：６９５－７１３（２００３）に記載されている。
９． 本発明の抗体をコードする核酸分子
本発明はまた、本明細書に記載の抗体の１つ以上の鎖をコードするポリヌクレオチドを含む核酸分子を提供する。いくつかの実施形態では、核酸分子は、本明細書に記載の抗体の重鎖または軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、核酸分子は、本明細書に記載の抗体の重鎖をコードするポリヌクレオチドと、軽鎖をコードするポリヌクレオチドとの両方を含む。いくつかの実施形態では、第１の核酸分子は、重鎖をコードする第１のポリヌクレオチドを含み、第２の核酸分子は、軽鎖をコードする第２のポリヌクレオチドを含む。
いくつかのそのような実施形態では、重鎖及び軽鎖は、２つの別個のポリペプチドとして、１つの核酸分子から、または２つの別個の核酸分子から発現される。抗体がｓｃＦｖである場合などのいくつかの実施形態では、単一のポリヌクレオチドは、一緒に連結された重鎖と軽鎖の両方を含む単一のポリペプチドをコードする。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体の重鎖または軽鎖をコードするポリヌクレオチドは、翻訳されると、重鎖または軽鎖のＮ末端に位置するリーダー配列をコードするヌクレオチド配列を含む。上記のように、リーダー配列は、天然の重鎖または軽鎖のリーダー配列であってもよく、または別の異種リーダー配列であってもよい。
核酸分子は、当該技術分野における従来の組換えＤＮＡ技術を使用して構築してもよい。いくつかの実施形態では、核酸分子は、哺乳動物細胞などの選択した宿主細胞での発現に適した発現ベクターである。
１０． ベクター
本明細書に記載の抗体の重鎖及び／または軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含むベクターが提供される。そのようなベクターとして、ＤＮＡベクター、ファージベクター、ウイルスベクター、レトロウイルスベクターなどが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ベクターは、重鎖をコードする第１のポリヌクレオチド配列と、軽鎖をコードする第２のポリヌクレオチド配列と、を含む。いくつかの実施形態では、重鎖及び軽鎖は、２つの別個のポリペプチドとしてベクターから発現される。いくつかの実施形態では、重鎖及び軽鎖は、例えば、抗体がｓｃＦｖである場合など、単一のポリペプチドの一部として発現される。
いくつかの実施形態では、第１のベクターは重鎖をコードするポリヌクレオチドを含み、第２のベクターは軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、第１のベクターと第２のベクターは、同様の量（同様のモル量または同様の質量量など）で宿主細胞にトランスフェクトされる。いくつかの実施形態では、第１のベクターと第２のベクターの５：１から１：５の間のモル比または質量比が、宿主細胞にトランスフェクトされる。いくつかの実施形態では、重鎖をコードするベクターと軽鎖をコードするベクターについて、１：１から１：５の間の質量比が使用される。いくつかの実施形態では、重鎖をコードするベクターと軽鎖をコードするベクターについて、１：２の質量比が使用される。
いくつかの実施形態では、ＣＨＯもしくはＣＨＯ由来細胞、またはＮＳＯ細胞におけるポリペプチドの発現のために最適化されたベクターを選択する。例示的なそのようなベクターは、例えば、Ｒｕｎｎｉｎｇ Ｄｅｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． Ｐｒｏｇ． ２０：８８０－８８９（２００４）に記載される。いくつかの実施形態では、ベクターは、ヒトを含む動物における本発明の抗体のインビボ発現のために選択される。いくつかのそのような実施形態では、ポリペプチドまたは複数のポリペプチドの発現は、組織特異的に機能するプロモーターまたは複数のプロモーターの制御下にある。例えば、肝臓特異的プロモーターは、例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２００６／０７６２８８に記載されている。
１１． 宿主細胞
さまざまな実施形態では、本明細書に記載の抗体の重鎖及び／または軽鎖を、細菌細胞などの原核細胞内で；または真菌細胞（酵母など）、植物細胞、昆虫細胞、哺乳動物細胞などの真核細胞内で発現させてもよい。そのような発現は、例えば、当該技術分野で公知の手順に従って実施してもよい。ポリペプチドを発現させるために使用してもよい例示的な真核細胞として、ＣＯＳ７細胞を含むＣＯＳ細胞；２９３－６Ｅ細胞を含む２９３細胞；ＣＨＯ－Ｓ及びＤＧ４４を含むＣＨＯ細胞；ＰＥＲＣ６（登録商標）細胞（Ｃｒｕｃｅｌｌ）；及びＮＳＯ細胞が挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体の重鎖及び／または軽鎖は、酵母において発現され得る。例えば、米国公開番号ＵＳ２００６／０２７００４５Ａｌを参照されたい。いくつかの実施形態では、特定の真核生物宿主細胞は、ＴＮＦＲ２抗体の重鎖及び／または軽鎖に所望の翻訳後修飾を行うその能力に基づいて選択される。例えば、いくつかの実施形態では、ＣＨＯ細胞は、２９３細胞で産生される同じポリペプチドよりも高レベルのシアリル化を有するポリペプチドを産生する。
所望の宿主細胞への１つ以上の核酸の導入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ－デキストラン媒介形質移入法、カチオン性脂質媒介トランスフェクション、エレクトロポレーション、形質導入、感染などを含むがこれらに限定されない任意の方法によって達成され得る。非限定的な例示的方法は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ ｅｄ． Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（２００１）に記載されている。核酸は、任意の適切な方法に従って、所望の宿主細胞に一時的または安定的にトランスフェクトしてもよい。
いくつかの実施形態では、１つ以上のポリペプチドは、任意の適切な方法に従って、ポリペプチドをコードする１つ以上の核酸分子で改変またはトランスフェクトされた動物においてインビボで産生され得る。
実施例１ ヒト及びサルのＴＮＦＲ２に特異的なモノクローナル抗体
サルオルソログＴＮＦＲ２と交差反応性のあるヒトＴＮＦＲ２に特異的なモノクローナル抗体を産生するために、標準的な手順を使用してヒトＴＮＦＲ２（ｒｈＴＮＦＲ２）の組換え細胞外ドメイン（ＥＣＤ）でマウスを免疫し、一連の多様なヒト－マウスキメラモノクローナル抗体を生成した。
図１に示すように、少なくとも２５個のそのようなモノクローナル抗体が生成され、選択された抗体のＶＨ及びＶＬの配列がアライメントされ、コンセンサス配列が得られた。Ｈ－ＣＤＲ３及びＬ－ＣＤＲ３領域は、ボックスで囲まれた配列でマークされている。
次いで、これらのモノクローナル抗体を、ＣＨＯ細胞（それぞれＣＨＯ．ｈＨＦＢ３及びＣＨＯ．ｍｋＨＦＢ３細胞）によって発現されるヒト及びサルのＴＮＦＲ２に結合する能力について試験した。簡潔に述べると、約４０，０００個のＣＨＯ．ｈＨＦＢ３またはＣＨＯ．ｍｋＨＦＢ３細胞を組織培養ウェルに播種し、約６６ｎＭの抗体の開始（最高）濃度のそれぞれの試験抗体の連続１：３希釈液をそれぞれの細胞型に添加し、約１時間インキュベートした。細胞に結合した抗体は、ＡＦ６４７（ＡＬＥＸＳＡ ＦＬＵＯＲ（登録商標）６４７蛍光色素）で標識された１７ｎＭの抗ヒトＦｃ抗体を使用して検出された。このアッセイでは、アイソタイプが一致した陰性対照抗体も使用した。それぞれの抗体のＥＣ５０値及びＥｍａｘを含むデータを図２Ａにまとめた。
１１個の試験抗体は、ＣＨＯ細胞で発現したｈＴＮＦＲ２に対して１桁以下または１桁のｎＭレベルの親和性（ＥＣ５０）を示した。これらの抗体はまた、ＣＨＯ細胞で発現したＴＮＦＲ２のアカゲザルオルソログに対して交差反応性を示し、ｈＴＮＦＲ２結合と比較して結合親和性の傾向は実質的に同じであった。図２Ａを参照されたい。
興味深いことに、一部の抗体（ＨＦＢ３－１及び－１４など）はＴＮＦＲ２へのＴＮＦαの結合を促進し、他の抗体（ＨＦＢ３－１８など）はＴＮＦＲ２へのＴＮＦαの結合を阻害し、さらに他の抗体（ＨＦＢ３－６など）はＴＮＦＲ２へのＴＮＦαの結合について明らかに効果がなかった。図２Ｂを参照されたい。具体的には、ＣＨＯ細胞をそれぞれの抗体と約１時間プレインキュベートした後、２５ｎｇ／ｍＬＴＮＦαのＣＨＯ．ｈＨＦＢ３細胞への結合を測定した。次いで、ＴＮＦα（ＨＦＢ２００３Ｌと表示）に結合した細胞のパーセンテージを、抗体の濃度の増加に対してプロットした。
同じ実験を設定して、マウスＴＮＦＲ２を発現するＣＨＯ細胞及び親ＣＨＯ細胞株（ハムスターＴＮＦＲ２を発現する場合と発現しない場合がある）に結合する試験抗体の能力を試験した。２つのモノクローナル抗体（ＨＦＢ３－１８及びＨＦＢ３－１９）は、マウスオルソログへの結合の限界レベルを示したが、他の抗体は、マウスＴＮＦＲ２への検出可能なレベルの結合を有していなかった。陽性対照として、マウスＴＮＦＲ２に特異的なＨＭ１０２モノクローナル抗体を使用して、マウスＴＮＦＲ２を発現するＣＨＯ細胞への陽性結合を示したが、アイソタイプが一致した対照抗体は結合しなかった（図３）。
親のＣＨＯ細胞株では結合は観察されなかった（図３）。
ヒトＴＮＦＲ２に対する結合特異性（対関連するＴＮＦＲ１受容体）も、組換えヒトＴＮＦＲ２及びＴＮＦＲ１タンパク質を使用して検証された。
簡潔に述べると、組織培養プレートを０．１μｇ／ｍＬのＨｉｓタグ付き組換えヒトＴＮＦＲ２またはＴＮＦＲ１で４℃で一晩コーティングした。次いで、コーティングされたプレートを、氷上で約１時間、約６６ｎＭ抗体の開始（最高）濃度のそれぞれの試験抗体の１：３段階希釈とともに、インキュベートした。細胞に結合した抗体は、１：５０００希釈のＨＲＰ標識抗ヒトＦｃ抗体とＴＭＢ基質を使用して検出された。このアッセイでは、アイソタイプが一致した陰性対照抗体Ｆ３、ｒｈＴＮＦＲ２に特異的なＭＲ２－１陽性対照抗体、及びｒｈＴＮＦＲ１に特異的な陽性対照抗体も使用した。それぞれの抗体のＥＣ５０値を含むデータを図４Ａにまとめた。
試験した１１の抗体のうちの６つ、つまりＨＦＢ３－１、－１４、－２１、－２３、－２４、及び－２５は、Ｈｉｓタグ付き単量体ｒｈＴＮＦＲ２に対して１桁以下のｎＭ親和性（ＥＣ５０）を示し、４つの追加抗体（ＨＦＢ－３、－６、－１９、及び－２２）は、同じ抗原に対して１桁のｎＭ親和性を示した。ＨＦＢ３－１８は、２桁のｎＭ親和性で単量体ｒｈＴＮＦＲ２への結合が比較的弱いことを示した。しかし、１１個の抗体はいずれも、Ｈｉｓタグ付きＴＮＦＲ１受容体に対して検出可能なレベルの結合をいっさい示さず、ＴＮＦＲ２に対する結合特異性を示している。
ヒト－マウスキメラ抗体ＨＦＢ３－１、１４及び１８の組換えヒトＴＮＦＲ２タンパク質への結合親和性は、抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ捕捉（ＡＨＣ）バイオセンサーを使用して検証された。ＡＨＣバイオセンサーは、ヒトＦｃ含有タンパク質（例えば、対象抗体）と標的分析物（例えば、組換えヒトＴＮＦＲ２）との間の高分子相互作用の速度論的特性評価を可能にする。ヒトＦｃ含有タンパク質の固定化は、工場で固定化された抗ヒトＦｃ特異的抗体によって達成される。この抗体は、ヒトＦｃドメインに対する高い親和性により、要求の厳しい反応速度アプリケーションに必要な安定したベースラインを提供する。この特定の実験では、試験抗体（ヒト化）をアッセイ緩衝液（ＰＢＳ、ｐＨ７．４、０．１％ＢＳＡ、０．１％Ｔｗｅｅｎ２０）に２０μｇ／ｍＬの濃度でロードした。分析物は、５００、１６７、または５５．７ｎＭのＨｉｓタグ付き組換えヒトＴＮＦＲ２であった。捕捉アッセイは２５℃で実施した。試験した抗体のＫｄはｎＭの範囲にある（図４Ｂを参照されたい）。
ＨＦＢ３－１－ｈＧ１、ＨＦＢ３－１４－ｈＧ１、ＨＦＢ３－６－ｈＧ１、及びＨＦＢ３－１８－ｈＧ１抗体のエピトープマッピング実験は、これらの抗体がＴＮＦＲ２の異なるドメインを認識することを示した。ＨＦＢ３－１－ｈＧ１はＣＲＤ２ドメイン内の領域に結合し、ＨＦＢ３－１８－ｈＧ１はＣＤＲ１内の立体配座エピトープに結合する。ＨＦＢ３－６－ｈＧ１はＣＲＤ３内の領域に結合し、ＨＦＢ３－１４－ｈＧ１はまた、ＨＦＢ３－６－ｈＧ１のエピトープよりも小さいＣＲＤ３領域内のエピトープにも結合する（図１１Ｂを参照されたい）。ＴＮＦＲ２－ＴＮＦα複合体の３Ｄモデル上のそれらのエピトープの位置は、図１１Ｃで視覚化することができる。
実施例２ Ｔ細胞サブタイプにおけるＴＮＦＲ２の発現
この実験は、ＴＮＦＲ２が主にＴｒｅｇだけでなく、さまざまながん種において、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋ Ｔ細胞にも発現していることを示している。
Ｔｒｅｇ及びＣＤ４＋及びＣＤ８＋ Ｔ細胞を含むＴ細胞サブタイプは、さまざまな腫瘍試料から単離され、腫瘍試料中のＴ細胞サブタイプの相対的なパーセンテージ、及びＴ細胞サブタイプでのＴＮＲＦ２の平均相対発現レベル（２～８のスケール）は、ＲＮＡ配列分析を使用して決定された。結果を図５にまとめた。
ＢＣＣまたは基底細胞癌、ＳＣＣまたは扁平上皮癌、黒色腫、ＮＳＣＬＣ、または非小細胞肺癌を含む分析されたそれぞれの腫瘍試料では、ＴＮＦＲ２は主に、最も頻繁にＴｒｅｇ、及びＣＤ４＋及びＣＤ８＋ Ｔ細胞で見られた。さらに、最高の相対的発現レベルもＴｒｅｇで見られた。図５、左パネルを参照されたい。データは、ＴＮＦＲ２ががん治療の魅力的な標的であることを示唆している。
ＳＣＣがん試料におけるＴＮＦＲ２の追加の発現分析も、ＰＤ－１、ＴＩＭ３、ＣＴＬＡ４、及び４－１ＢＢなどのいくつかの免疫チェックポイント遺伝子の発現と併せて実施された。疲弊したＣＤ８＋Ｔ細胞では、ＴＮＦＲ２の発現がこれらの免疫チェックポイント遺伝子の発現と一致していることがわかり（図５、右パネル）、抗ＴＮＦＲ２抗体とこれらの免疫チェックポイント遺伝子の阻害剤を使用した併用療法が治療上有益であることを示唆する。
実施例３ 初代Ｔｒｅｇ、ＣＤ８及びＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ細胞への抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体の結合
Ｔ細胞サブタイプでのＴＮＦＲ２の発現パターン（実施例２を参照）を考えると、この実験は、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体が初代Ｔ細胞サブタイプ、優先的に活性化Ｔ細胞に結合できることを実証する。
簡潔に述べると、平底の９６ウェルプレートを１０ｎＭの抗ＣＤ３抗体で４℃で一晩コーティングした。一方、Ｔｒｅｇ、ＣＤ８、またはＣＤ４標準型Ｔ細胞（Ｔｃｏｎｖ）を含むＴ細胞サブタイプは、ヒトＰＢＭＣから単離された。単離されたＴ細胞サブタイプは、６．６ｎＭの抗ＣＤ２８抗体の存在下で約５０，０００細胞／ウェルの密度で播種され、初代Ｔ細胞を約３日間共刺激した。次いで、刺激された初代Ｔ細胞を、氷上で１時間、最高濃度が６６ｎＭである本発明の抗ＴＮＦＲ２ヒト－マウスキメラモノクローナル抗体のさまざまな濃度の１：３段階希釈で処理した。結合したキメラ抗体は、ＡＦ６４７色素で標識した１７ｎＭの抗ｈＦｃ抗体を氷上で１時間インキュベートし、続いてＦＡＣＳ分析を行ってＡＦ６４７シグナルを検出することにより検出した。
図６、上のパネルは、ＣＤ４ Ｔｃｏｎｖが全ｈＰＢＭＣの約３０％で最も豊富なＴ細胞サブタイプであり、１０％ＣＤ８ Ｔ細胞と約１％Ｔｒｅｇがそれに続くことを示している。しかしながら、ＴＣＲで活性化されていない初代Ｔ細胞は、初代Ｔｒｅｇで比較的低レベルの結合が発生したことを除いて、本発明の抗ＴＮＦＲ２抗体に検出可能に結合しなかった。全体として、受容体占有率ＥｍａｘはＴｒｅｇで最も高く、続いてＣＤ８、ＣＤ４Ｔｃｏｎｖの順であった。ＣＤ８及びＣＤ４ Ｔｃｏｎｖと比較してＴｒｅｇの存在量が比較的少ないことを考えると、ＴｒｅｇでのＴＮＦＲ２の発現は、細胞あたりのＣＤ８及びＣＤ４Ｔ細胞での発現よりもはるかに高かった。
しかしながら、ＴＣＲ活性化Ｔ細胞では、一部の抗ＴＮＦＲ２抗体のＴｒｅｇで劇的な５～６倍の結合増加が観察され、ＣＤ８及びＣＤ４ Ｔｃｏｎｖでも実質的に高い結合が観察された（図６、下部パネル）。
試験した抗体の中で、ＨＦＢ３－１、－６、－２４、－２５及びＳＢＴ１（陽性対照）はｎＭ以下のレベルの高い親和性を示したが、ＨＦＢ３－１４及び－１９は１桁のｎＭ親和性を示した。ＨＦＢ３－１８、－２１、及び－２２は２桁のｎＭ親和性を有していた。
実施例４ 特定の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体の初代ＣＤ８及びＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ細胞への結合はＮＦκＢシグナル伝達を共刺激した
この実験は、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体が、ＮＦκＢシグナル伝達経路遺伝子のＱＰＣＲ定量化によって証明されるように、ＴＮＦα媒介性ＮＦκＢシグナル伝達を共刺激することを実証している。
簡潔に述べると、ＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ（ＣＤ４＋ＣＤ２５－）またはＣＤ８＋ Ｔ細胞は、標準的な手法と市販のキットを使用してｈＰＢＭＣから単離された。単離されたＴ細胞を、１０μｇ／ｍＬ（６６ｎＭ）の本発明のさまざまな試験モノクローナル抗体または適切な陽性対照もしくは陰性対照とともに、２５ｎｇ／ｍＬ（１．５ｎＭ）のＴＮＦαと共に約２４時間インキュベートした。次いで、刺激されたＴ細胞を回収し、それらのｍＲＮＡを単離して逆転写し、ＣＤ２５、Ｆｏｘｐ３、ＮＦκＢ２、ＲｅｌＢ、及びＬＴＡなどの選択したＮＦκＢシグナル伝達経路遺伝子のＱＰＣＲ分析を行った。本発明の抗体による共刺激の存在下及び非存在下でのこれらの遺伝子の発現レベルを、図７の棒グラフで比較した。結果は、刺激なしの対照（１倍）と比較した倍率変化として表された。
結果は、ＨＦＢ３－１、－１４、－２３、－２４、及び－２５を含む特定の本発明の抗体がＮＦκＢシグナル伝達を誘導することを示した。注目すべきことに、ＨＦＢ３－１及び－１４は、特にＮＦκＢ２、ＲｅｌＢ、及びＬＴＡにおいて、ＮＦκＢシグナル伝達を時々誘導したが、ＨＦＢ３－１８は誘導しなかった。
実施例５ 抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体の共刺激効果は、単離された初代ＣＤ８及びＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ細胞の増殖に関連している
この実験では、平底の９６ウェルプレートを１０ｎＭの抗ＣＤ３モノクローナル抗体、及び２０または１００ｎＭの本発明の抗ＴＮＦＲ２抗体で４℃で一晩コーティングした。一方、ＣＤ８及びＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ細胞は、記載されているようにｈＰＢＭＣから単離され、Ｔ細胞増殖を追跡するために２μＭのＣＴＶ（ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎのＣＥＬＬＴＲＡＣＥ（商標）バイオレット細胞増殖キット）で標識された。ＣＥＬＬＴＲＡＣＥ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ色素は細胞内に容易に拡散し、細胞内エステラーゼによって切断されて高蛍光化合物を生成する。この化合物は細胞内アミンに共有結合し、アルデヒド固定剤で固定できる安定した保持力のある蛍光染色をもたらす。過剰な非結合試薬は細胞外培地に受動的に拡散し、そこで完全培地でクエンチして洗い流すことができる。
次いで、標識されたＴ細胞を、約３日間の共刺激のために６．６ｎＭの抗ＣＤ２８抗体の存在下で、コーティングされた９６ウェルプレートに約５０，０００細胞／ウェルの密度で播種した。次いで、蛍光シグナルのＦＡＣＳ分析のために細胞を固定した。
図８のデータは、特定の本発明の抗ＴＮＦＲ２抗体が、より低い２０ｎＭ濃度でさえ、ＣＤ８及びＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ増殖を共刺激したことを示している。ベンチマーク陽性対照抗体ＳＢＴ－１及び－４も同じ条件下でＴ細胞増殖を共刺激したが、ＨＦＢ３－１、－１４、－１８、及び－２５ほどではなかった。
追加の実験は、初代Ｔ細胞増殖のそのような共刺激がＨＦＢ３－１８などの特定のモノクローナル抗体のＦｃγＲ架橋に依存する可能性がある一方で、ＨＦＢ３－１及び－１４などの他の抗体の識別可能な架橋依存性がないことを示した。
具体的には、ＣＤ８及びＣＤ４ ＴｃｏｎｖはドナーＫＰ５９０９５から単離され、単離された初代Ｔ細胞は、２５ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＴＮＦα（ｒｈＴＮＦα）の存在化または非存在下で、ＣＤ３／ＣＤ２８ ＴＣＲ活性化、及び本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体ＨＦＢ３－１、－１４、または－１８によって刺激された。抗ＴＮＦＲ２抗体は、プレート結合されたか、または結合混合物中に存在する可溶性抗体として供給された。
２５ｎｇ／ｍＬのｒｈＴＮＦαの存在下で、３つすべてのプレート結合抗ＴＮＦＲ２抗体（ＨＦＢ３－１、－１４、及び－１８）がＣＤ８ Ｔ細胞増殖を刺激した（図１９、左下隅のパネルを参照されたい）。しかしながら、可溶性ＨＦＢ３－１及びＨＦＢ３－１４（可溶性ＨＦＢ３－１８ではない）のみがＣＤ８ Ｔ細胞増殖を刺激することができ（図１９、右下隅のパネル）、ＦｃγＲ架橋がＨＦＢ３－１８を介したＣＤ８Ｔ細胞の増殖に必要である可能性があることを示唆しているが、ＨＦＢ３－１及びＨＦＢ３－１４を介したＣＤ８ Ｔ細胞の増殖には必要ない可能性がある（すなわち、架橋に依存しない）。
同様の条件下でのＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ増殖についても同様の結果が得られた（データ示さず）。
実施例６ 抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、Ｔｒｅｇの存在下でＴｅｆｆ細胞終末（ＣＤ８及びＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ）での細胞増殖を促進する
この実験は、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体が、Ｔｒｅｇの存在下で、ＣＤ３／ＣＤ２８を介したＴＣＲ活性化とともにＴｅｆｆ細胞（ＣＤ８及びＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ）の増殖を共刺激できることを示している。
簡潔に述べると、ＣＤ８及びＣＤ４ ＴｃｏｎｖエフェクターＴ細胞を含むＣＤ３＋Ｔ細胞、及びＴｒｅｇは、ヒトＰＢＭＣから単離され、ＣＤ３／ＣＤ２８を介したＴＣＲ活性化と本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体によって実質的に上記のように、約４日間共刺激された。Ｔｒｅｇの存在下での総ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（ＣＴＶ）の ＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ細胞増殖キットを使用して決定した。ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化は、それぞれのＴ細胞集団におけるＣＤ２５＋Ｔ細胞のパーセンテージを測定することによっても決定された。
図９に示される結果は、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体（例えば、ＨＦＢ３－１のヒト化バージョンであるＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１ＡＡ、下記を参照されたい）が、Ｔｒｅｇの存在下でさえエフェクターＴ細胞（ＣＤ８及びＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ）での細胞増殖を支持したことを示した。
実施例７ 抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体は、ＨＨリンパ腫細胞に対して無視できる程度のＡＤＣＣ効果を有していた
この実験は、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体がＴ細胞リンパ腫に対して無視できるＡＤＣＣ効果を有することを示しており、そのような抗体がＴ細胞共刺激剤としての使用に適していることを示唆している。
抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）は、細胞媒介性免疫防御のメカニズムであり、それにより、免疫系のエフェクター細胞が、膜表面抗原が特定の抗体によって結合されている標的細胞を能動的に溶解する。これは、体液性免疫応答の一部として、抗体が感染を制限及び封じ込めるために作用できるメカニズムの１つである。ＡＤＣＣには、典型的にＩｇＧ抗体と相互作用するナチュラルキラー（ＮＫ）細胞として古典的に知られているエフェクター細胞が必要である。
この実験では、Ｊｕｒｋａｔ．ＣＤ１６Ｖ／ＮＦＡＴ／ｌｕｃ細胞をエフェクター細胞として使用し、ＨＨリンパ腫細胞を標的細胞とした。エフェクターと標的細胞の比率は約６：１であった。共培養されたエフェクターと標的細胞は、０、０．００６６、０．６６、または６６ｎＭの濃度の、本発明の抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体（例えば、ＨＦＢ３－１、－１４、または－１８）、またはアイソタイプが一致した対照（ｈＩｇＧ１）の存在下で一晩インキュベートされた。モガヌリズマブ抗体をＡＤＣＣの陽性対照として使用した。
図１０の結果は、陽性対照抗体モガヌリズマブが、試験された抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体のいずれよりも、標的細胞に対して少なくとも１２０倍強いＡＤＣＣ効果を有することを示した。データは、本発明の抗ＴＮＦＲ２抗体が、Ｔ細胞に対するそれらの低い／存在しないＡＤＣＣ効果のために、Ｔ細胞共刺激剤としての使用に適していることを示した。
実施例８ ヒト化抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体のＴＮＦＲ２への結合
ＨＦＢ３－１、－１４、及び－１８に対する複数のヒト化モノクローナル抗体が生成された。これには、ＨＦＢ３－１に対して少なくとも２０、ＨＦＢ３－１４に対して１６、及びＨＦＢ３－１８に対して１つが含まれる（選択したヒト生殖細胞系列が親ＨＦＢ３－１８モノクローナル抗体コード配列と非常に類似しているため）。ＣＨＯ細胞上に発現されたヒトＴＮＦＲ２に結合するこれらのヒト化モノクローナル抗体の能力は、実質的に実施例１に記載されるように決定された。
図１２Ａは、ヒト化ＨＦＢ３－１ｈｚ６、ＨＦＢ３－１４ｈｚ１ｃ、及びＨＦＢ３－１８ｈｚ１がヒトＴＮＦＲ２（ＣＨＯ．ｈＴＮＦＲ）を発現するＣＨＯ細胞に結合したが、親ＣＨＯ細胞には結合しなかったことを示す。図１２Ｂは、少なくとも７つのヒト化ＨＦＢ３－１抗体、すなわちＨＦＢ３－１ｈｚ６、－１ｈｚ８、－１ｈｚ９、－１ｈｚ１０、－１ｈｚ１１、－１ｈｚ１２、及び－１ｈｚ１４、ならびに少なくとも８つのヒト化ＨＦＢ３－１４抗体、すなわちＨＦＢ３－１４ｈｚ１ｃ、－１４ｈｚ２ｃ、－１４ｈｚ３ｃ、－１４ｈｚ４ｃ、－１４ｈｚ６ｃ、－１４ｈｚ７ｃ、－１４ｈｚ１２ｃ、及び－１４ｈｚ１４ｃが、それぞれの親キメラ抗体によるＴＮＦＲ２を発現したＣＨＯ細胞（ＣＨＯ．ｈＨＦＢ３）に対する結合親和性とほぼ同じ（より良好ではない場合）レベルの結合親和性を保持していたことを示す。
代わりに、ＴＮＦＲ２のアカゲザルオルソログを発現するＣＨＯ細胞（ＣＨＯ．ｍｋＨＦＢ３）を使用して同様の実験を繰り返した。図１３は、サルＴＮＦＲ２を発現するＣＨＯ細胞への結合の一般的な傾向が、ＣＨＯ．ｈＴＮＦＲ２への結合と一致したことを示す。しかしながら、ＨＦＢ３－１４に基づくヒト化バリアントの２つ、すなわちＨＦＢ３－１４ｈｚ２ｃと－１４ｈｚ３ｃについて、やや不安定な結合が観察された。
ヒト化抗ＴＮＦＲ２抗体の結合はＴＮＦＲ２に特異的であり、ＴＮＦＲ１には特異的ではない。図１４ＡのＥＬＩＳＡアッセイは、ヒト化モノクローナル抗体ＨＦＢ３－１ｈｚ６、ＨＦＢ３－１４ｈｚ１ｃ、及びＨＦＢ３－１８ｈｚ１が、組換えヒトＴＮＦＲ１（ｈＴＮＦＲ１－Ｈｉｓ）を認識せずに、組換えのヒト及びカニクイザルのＴＮＦＲ２（それぞれ、ｈＴＮＦＲ２－Ｈｉｓ及びｃｙｎｏＴＮＦＲ２－Ｈｉｓ）に結合することを実証した。さらに、これらのヒト化抗ＴＮＦＲ２抗体の組換えのヒト及びカニクイザルのＴＮＦＲ２への結合ＥＣ５０は、１桁未満から１桁のｎＭの範囲であった。
ヒトＴＮＦＲ２に対するヒト化バリアントの結合親和性も、組換えヒトＴＮＦＲ２タンパク質及びＡＨＣバイオセンサーを使用して検証された。抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ捕捉（ＡＨＣ）バイオセンサーは、ヒトＦｃ含有タンパク質（例えば、対象抗体）と標的分析物（例えば、組換えヒトＴＮＦＲ２）との間の高分子相互作用の速度論的特性評価を可能にする。ヒトＦｃ含有タンパク質の固定化は、工場で固定化された抗ヒトＦｃ特異的抗体によって達成される。この抗体は、ヒトＦｃドメインに対する高い親和性により、要求の厳しい反応速度アプリケーションに必要な安定したベースラインを提供する。この特定の実験では、試験抗体（ヒト化対親キメラ抗体）をアッセイ緩衝液（ＰＢＳ、ｐＨ７．４、０．１％ＢＳＡ、０．１％Ｔｗｅｅｎ２０）に２０μｇ／ｍＬの濃度でロードした。分析物は、５００、１６７、または５５．７ｎＭのＨｉｓタグ付き組換えヒトＴＮＦＲ２であった。捕捉アッセイは２５℃で実施した。
図１４Ｂに示すように、組換えヒトＴＮＦＲ２に対する親和性に関して、ヒト化バリアントをそれらのそれぞれのキメラ親抗体から区別する大きな違いはなかった。
実施例３は、キメラ抗ＴＮＦＲ２抗体がＴＣＲ活性化Ｔ細胞に結合することを示している。ヒト化バリアントについて実質的に同じ実験を行った結果を図１５に示した。
具体的には、ＴＣＲ活性化ＣＤ８細胞への結合に関して、ＴＣＲ活性化ＣＤ８細胞に結合しないように見えた２つのバリアント（ＨＦＢ３－１ｈｚ５及び－１ｈｚ７）を除いて、ほとんどのヒト化ＨＦＢ３－１抗体はｎＭ以下のレベルの親和性を示した。一方、すべてのヒト化ＨＦＢ３－１４バリアントは、ＴＣＲ活性化ＣＤ８Ｔ細胞に対して１桁のｎＭ親和性を示した。異なるバリアントを区別する大きな違いはない。注目すべきことに、陽性対照抗体ＳＢＴ－２及び－３は初代ＣＤ８細胞への良好な結合剤ではなかった。
実施例９ ＴＣＲ活性化ＣＤ４及びＣＤ８ Ｔ細胞を増殖させるヒト化抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体の共刺激効果
実施例５は、キメラ抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体の共刺激効果が、単離されたヒト初代ＣＤ８及びＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ細胞を増殖させることを示した。この実験は、ＨＦＢ３－１及びＨＦＢ３－１４のヒト化バリアントを使用したＴＣＲ活性化ＣＤ４ Ｔ細胞でも同じことを実証している。
具体的には、図１６は、ヒト化バリアントＨＦＢ３－１ｈｚ５、－１ｈｚ６、－１ｈｚ８、－１ｈｚ１０、－１ｈｚ１１、及び－１ｈｚ１２が、ＣＴＶ増殖アッセイ（上記を参照）に基づいて、それぞれ親のＨＦＢ３－１キメラ抗体と比較して大幅に、ＴＣＲ活性化ＣＤ４ Ｔ細胞を強く刺激したことを示している。同じことがＨＦＢ３－１４ｈｚ１ｃ及び－１４ｈｚ３ｃバリアントについても繰り返された。
同様に、ＣＤ２５＋Ｔ細胞集団のパーセンテージに基づくＴ細胞の活性化も、上記のバリアントで確認された。
ＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１、－１４ｈｚ１ｃ－ｈＧ１、及び－１８ｈｚ１－ｈＧ１の確認的な共刺激データも取得され、これらのバリアントがＴＣＲ活性化ＣＤ８ Ｔ細胞（ＣＤ３／ＣＤ２８刺激によって活性化）を増殖させる共刺激効果を有したていたことを示した。具体的には、親キメラ抗体と選択されたヒト化バリアントの両方が、ＣＤ３／ＣＤ２８ＴＣＲ活性化によって刺激されたＣＤ８Ｔ細胞増殖を増強した。さらに、ＴＮＦαの協力（右パネル）は、抗ＴＮＦＲ２抗体を介したＣＤ８増殖をさらに増強した。図２０を参照されたい。
実施例１０ 特定のヒト化抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体はＴｒｅｇにおいてＮＦκＢシグナル伝達を誘導した
実施例４は、特定のキメラ抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体の初代ＣＤ８及びＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ細胞への結合がＮＦκＢシグナル伝達を共刺激したことを示した。ここでの同様の実験は、特定のヒト化バリアント抗ＴＮＦＲ２抗体がＴｒｅｇでＮＦκＢシグナル伝達を誘導したことを実証している。
特に、図１７は、特定のヒト化バリアント抗ＴＮＦＲ２抗体及びＴＮＦαを使用したＴｒｅｇの共刺激が、ＬＴＡ、ＴＮＦ、及びＴＮＦ ＡＩＰ３でのＮＦκＢ下流シグナル伝達をもたらしたことを示す。バリアントＨＦＢ３－１ｈｚ６、－１ｈｚ９、－１ｈｚ１０、及び－１ｈｚ１１は、親キメラ抗体ＨＦＢ３－１よりもＮＦκＢシグナル伝達を大幅に促進した。一方、バリアントＨＦＢ３－１４ｈｚ１ｃ、－１４ｈｚ２ｃ、－１４ｈｚ３ｃ、及び－１４ｈｚ４ｃ（特にＨＦＢ３－１４ｈｚ１ｃ及び－１４ｈｚ３ｃ）も、親キメラ抗体ＨＦＢ３－１４よりもＮＦκＢシグナル伝達を大幅に促進した。
実施例１１ 抗ＴＮＦＲ２抗体は安定している
本発明のヒト化抗ＴＮＦＲ２抗体が貯蔵において安定であり、したがって治療薬としてのさらなる開発に適していることを確認するために、選択されたヒト化抗体についてさまざまな開発可能性アッセイを実施した。
第１の実験では、選択した対象のヒト化抗体をＰＢＳ（ｐＨ７．４）中で２５または４０℃で保存し、さまざまな抗体の安定性を７日目と１４日目に決定した。図１８の結果は、１つのバリアントＨＦＢ３－１４ｈｚ４ｃ－ｈＧ１ＡＡを除いて、試験されたすべての抗体が試験された条件で安定していることを示した。
第２の実験では、同じ抗体を低ｐＨ条件下（１００ｍＭのＡｃＨ、ｐＨ３．５、２５℃）で０、３、及び６時間安定性について試験した。図１８の結果は、１つのバリアントＨＦＢ３－１４ｈｚ４ｃ－ｈＧ１ＡＡを除いて、試験されたすべての抗体が試験された条件で安定していることを再び示した。
第３の実験では、同じ抗体を１、２、または３回の凍結－解凍サイクルにかけた。図１８の結果は、２つのバリアント（ＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１ＡＡ及びＨＦＢ３－１ｈｚ１０－ｈＧ１ＡＡ）を除いて、試験されたすべての抗体が試験された条件で安定していることを再び示した。
ＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１、－１４ｈｚ１ｃ－ｈＧ１、及び－１８ｈｚ１－ｈＧ１についても同様の実験を繰り返した。ＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１と－１８ｈｚ１－ｈＧ１が１４日後に分解し始めたことを除いて、３つのバリアントはすべて上記の３つの試験で概ね安定していた。
まとめると、データは、これらの本発明のバリアントヒト化抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体には大きな開発可能性の問題がなく、治療用抗体としての使用に適していることを示唆している。
実施例１２ ヒト化ＴＮＦＲ２ノックイン（ＫＩ）マウスにおける抗ＴＮＦＲ２抗体及びそれらのＴ細胞に対する効果
本発明の抗ＴＮＦＲ２抗体の治療効果をよりよく実証するために、ヒト化ＴＮＦＲ２ノックイン（ＫＩ）マウスが、商業的サービス（Ｂｉｏｃｙｔｏｇｅｎ，Ｗａｋｅｆｉｅｌｄ，ＭＡ）を通じてＣ５７ＢＬ／６マウスバックグラウンドで生成された。
最初の一連の実験では、選択したヒト化抗ＴＮＦＲ２抗体とＫＩマウス由来のＣＤ３ Ｔ細胞（ＴＮＦＲ２ ＫＩ ＣＤ３ Ｔ細胞）とのエクスビボ結合を、１μｇ／ｍＬのＣＤ２８と０．２または１μｇ／ｍＬのＣＤ３のいずれかによる共刺激下で分析した。結果は、１μｇ／ｍＬのＣＤ３がＫＩマウス由来の脾臓細胞を０．２μｇ／ｍＬのＣＤ３よりもよく活性化することを示した。ヒトＴＮＦＲ２の発現はＫＩＣＤ３＋Ｔ細胞で検出でき、その発現／検出はＴＮＦα及び穏やかな（０．２μｇ／ｍＬ）ＣＤ３の刺激下で増強できる。さらに、６つの抗ＴＮＦＲ２抗体（すなわち、ＨＦＢ３－１、－１４、及び－１８、ならびにそれらのヒト化バリアント－１ｈｚ６、－１４ｈｚ１ｃ、及び－１８ｈｚ１）のそれぞれの２００ｎＭの単回投与はおそらく結合の飽和レベルが原因で、ＴＮＦＲ２結合に識別可能な違いは見られない。データ示さず。
同じエクスビボ結合実験を、ＴＮＦＲ２ＫＩマウスから単離したＣＤ８ Ｔ細胞についても繰り返した。ここで、ＴＮＦＲ２への抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体（そのキメラ及びヒト化バージョン）の結合は、強いＣＤ３（１μｇ／ｍＬ）刺激下で観察することができる。一方、ＴＮＦαは穏やかなＣＤ３（０．２μｇ／ｍＬ）刺激下でＴＮＦＲ２結合を増強した。データ示さず。
次に、ＣＤ３／ＣＤ２８を介したＴＣＲ活性化の存在下で、及びＴＮＦαの存在下で、本発明の抗ＴＮＦＲ２抗体（キメラ及びヒト化）の、エクスビボでＴＮＦＲ ＫＩ ＣＤ８及びＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ細胞の下流シグナル伝達を共刺激する能力を調べた。
ｈＴＮＦＲ２ノックイン（ＫＩ）マウスＴ細胞からのシグナル応答は、ヒトＴ細胞からのシグナル応答ほど有意ではなかったが、ＨＦＢ３－１－ｈＧ１及びそのヒト化バリアントＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１は、他の抗体と比較してより多くの応答を誘導した（図２１を参照されたい）。注目すべきは、ＨＦＢ３－１８シリーズからのシグナル誘導の欠如が予想されることである。
Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける本発明のヒト化抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体（ＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１、ＨＦＢ３－１４１ｃ－ｈＧ１、及びＨＦＢ３－１８ｈｚ１－ｈＧ１）の薬物動態（ＰＫ）プロファイルを調べた。３つのヒト化モノクローナル抗体はすべて、正常に機能する抗体への期待と一致するＴ１／２を示した。下記を参照されたい。
Figure 2023517794000001
実施例１３ ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞のエクスビボでの活性化に対するヒト化ＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１の効果
この実験は、本発明のヒト化ＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１抗体が、ＩＬ－２／ＩＬ－１５またはＣＤ３／ＣＤ２８を介したＮＫ細胞活性化の存在下でナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を共刺激することを実証している。
ある実験では、ＮＫ細胞分離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して、２人のヒト患者から提供された末梢血単核球（ＰＢＭＣ）からＮＫ細胞を単離した。ＮＫ細胞は最初に可溶性ＩＬ－２（１０ｎｇ／ｍＬ）及びＩＬ－１５（１０ｎｇ／ｍＬ）で２４時間刺激され、次いでアイソタイプ対照抗体であるマウスＨＦＢ３－１－ｈＧ１、ヒト化ＨＦＢ３－１－ｈｚ６－ｈＧ１、または抗ＯＸ４０対照抗体（ＢＭＳ）で、それぞれ２２ｎＭ、６６ｎＭ、または２００ｎＭで１６時間処理された。実験の最後に、ＮＫ細胞の脱顆粒と活性化を表すＮＫ細胞表面でのＣＤ１０７αの発現、及びＴＮＦＲ２の発現をＦＡＣＳで測定した。
マウスＨＦＢ３－１－ｈＧ１とヒト化ＨＦＢ３－１－ｈｚ６－ｈＧ１の両方が、用量依存的にＮＫ細胞の活性化を有意に増加させた。抗ＯＸ４０抗体は、おそらくＯＸ４０の発現が不十分なため、ＮＫのより短い（ＩＬ－２／ＩＬ－１５刺激から４０時間）活性化を促進することができなかった。
別の実験では、２人のヒト患者から提供されたＰＢＭＣ全体は、プレート結合抗ＣＤ３（１μｇ／ｍＬ）及び可溶性抗ＣＤ２８（１μｇ／ｍＬ）で４８時間共刺激され、次いで、アイソタイプ対照抗体、マウスＨＦＢ３－１－ｈＧ１、ヒト化ＨＦＢ３－１－ｈｚ６－ｈＧ１、または抗ＯＸ４０抗体（ＢＭＳ）で、それぞれ２２ｎＭ、６６ｎＭ、または２００ｎＭで１６時間処理された。ＣＤ１０７αの発現はＣＤ３陰性／ＣＤ５６陽性（すなわちＮＫ細胞）で決定された。図２３を参照されたい。
同様に、ＨＦＢ３－１－ｈＧ１及びＨＦＢ３－１－ｈｚ６－ｈＧ１は、用量依存的にＣＤ１０７αの発現を有意に増加させ、これらの抗体がＰＢＭＣ全体でＮＫ細胞の活性化を促進できることを示している。長期間の活性化（抗ＣＤ３／ＣＤ２８刺激から６４時間）下で、抗ＯＸ４０抗体はＮＫ細胞を活性化することができた。
これらのデータは、ヒト化ＨＦＢ３－１－ｈｚ６－ｈＧ１と親マウスＨＦＢ３－１－ｈＧ１の両方がＮＫ細胞の活性化を促進できることを示している。
実施例１４ ＭＣ３８腫瘍モデルにおけるヒト化ＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１の薬力学
ＨＦＢ－１－ｈＧ１の薬力学は、ヒト化ＴＮＦＲ２－ＫＩマウスでＭＣ３８結腸直腸癌腫瘍モデルを使用して調べられた（図２４Ａを参照されたい）。簡潔に述べると、８週齢のヒト化ＴＮＦＲ２ ＫＩマウスに、マウスあたり約５×１０５個のＭＣ３８腫瘍細胞を右前側腹部に接種した。マウスを無作為化し、７日後の０日目に、マウス（それぞれの群でｎ＝５）にＨＦＢ３－１－ｈＧ１を１０ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、または０．１ｍｇ／ｋｇで、または１ｍｇ／ｋｇのアイソタイプ対照抗体を腹腔内注射した。同じ治療がＤ３に再び投与された。４日目に、マウスを安楽死させ、腫瘍及び血液試料について薬力学の読み取りを行った。ＦＡＣＳは、腫瘍浸潤性白血球と末梢性白血球を分類するため、及び抗体による受容体占有率を決定するために使用された。
０日目及び３日目に２回の処置のみを行った後、治療間で腫瘍重量に有意差はまだなかった（図２４Ｂ、左上のパネル）。１０ｍｇ／ｋｇでのＨＦＢ３－１－ｈＧ１の投与は、腫瘍に存在するＣＤ４５＋細胞の絶対数を増加させたが（図２４Ｂ、左下のパネル）、腫瘍の生細胞中のＣＤ４５＋のパーセンテージは有意に上昇しなかった（図２４Ｂ、下右パネル）。１０ｍｇ／ｋｇでのＨＦＢ３－１－ｈＧ１の処置はまた、腫瘍微小環境におけるＣＤ８＋、標準型ＣＤ４＋ Ｔ細胞、及びＮＫ細胞の絶対細胞数を増加させたが、Ｔ制御性細胞の数を変化させなかった（図２４Ｃ）。他の低用量でのＨＦＢ３－１－ｈＧ１の投与は、観察可能な効果をいっさいもたらさなかった。
ＴＮＦＲ２受容体の占有率は、腫瘍及び末梢血のＣＤ８ Ｔ細胞、標準型ＣＤ４ Ｔ細胞、Ｔ制御性細胞、及びＮＫ細胞について決定された。腫瘍では、１０ｍｇ／ｋｇの用量のＨＦＢ３－１－ｈＧ１のみが、腫瘍のＴ細胞で薬物受容体の占有をもたらし、１及び０．１ｍｇ／ｋｇの用量では占有は観察されなかった（図２５Ａを参照）。しかしながら、１ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇでは、腫瘍ＮＫ細胞で受容体の占有率が観察された。末梢血では、１０ｍｇ／ｋｇ及び１ｍｇ／ｋｇの用量のＨＦＢ３－１－ｈＧ１は、同等の薬物受容体の占有率をもたらし、０．１ｍｇ／ｋｇの用量では有意な占有は観察されなかった。
ＨＦＢ３－１－ｈＧ１の薬物動態は、実験の終了時に決定された。１及び１０ｍｇ／ｋｇの用量でのＨＦＢ３－１－ｈＧ１投与は、４日目に血中で検出された。注目すべきことに、１０ｍｇ／ｋｇ用量のＨＦＢ３－１－ｈＧ１は、同じ用量のアイソタイプ対照よりもはるかに高いレベルで保持された（図２６Ａを参照されたい）。興味深いことに、ＨＦＢ３－１－ｈＧ１の１０ｍｇ／ｋｇ及び１ｍｇ／ｋｇの投与はまた、血中で検出可能なＴＮＦＲ２の量を増加させた（図２６Ｂを参照されたい）。血中のＴＮＦＲ２は、おそらく受容体の脱落が原因であった。
全体として、ＨＦＢ３－１－ｈＧ１によるマウスの短期処置に関するデータは、ＨＦＢ３－１－ｈＧ１が免疫細胞の活性化と増殖を刺激する能力を有し、免疫細胞上のＴＮＦＲ２受容体に効果的に結合し、インビボでの血液中での良好な保持を有することを強く示唆した。
実施例１５ 抗ＰＤ－１抗体との相乗的な抗腫瘍効果
本発明のヒト化抗ＴＮＦＲ２モノクローナル抗体に対する抗腫瘍効果は、ヒト化ＴＮＦＲ２ ＫＩマウスのバックグラウンドで広く使用されているマウス結腸直腸癌モデルで実証された。
具体的には、８週齢のヒト化ＴＮＦＲ２ ＫＩマウスに、マウスあたり約５×１０５個のＭＣ３８腫瘍細胞（Ｃ５７ＢＬ６マウス結腸腺癌に由来する）を接種した。約７日後の０日目に、マウスの平均腫瘍サイズは約８９ｍｍ３（７４～９８ｍｍ３）に達した。次いで、マウスを無作為化して５つの実験群（群あたりｎ＝８）に分け、次のうちのいずれか１つを投与した。（１）アイソタイプが一致した対照（ＴＴ－ｈＧ１ＡＡ）；（２）抗ｍＰＤ－１（ＲＭＰ－１－１４）；（３）ＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１；（４）ＨＦＢ３－１４ｈｚ１ｃ－ｈＧ１；及び（５）ＨＦＢ３－１８ｈｚ１－ｈＧ１。抗体は、０、３、６、９、１２、１５、及び１８日目に合計７回、約１０ｍｇ／ｋｇの用量で腹腔内（ｉｐ）に注射された（Ｑ３Ｄ、×７）。研究の過程で、実験群の腫瘍体積を測定した。２１日目またはその前後に、アイソタイプ対照群の平均腫瘍体積が＞２０００ｍｍ３に達し、実験は終了し、すべてのマウスを屠殺した。経時的な腫瘍体積を、さまざまな群について図２７Ａ及び図２７Ｂにプロットした。２１日目までに、腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）の統計的有意性は、ＨＦＢ３－１ｈｚ６、ＨＦＢ３－１８ｈｚ１、及び抗ＰＤ－１（ＲＭＰ－１４）を投与されたマウスの群において達成される（図２７Ｂ）。
結果は、ヒト化抗体ＨＦＢ３－１ｈｚ６と－ｈＧ１、及びＨＦＢ３－１８ｈｚ１－ｈＧ１が抗ｍＰＤ－１抗体と同じくらい強力に腫瘍増殖を阻害した一方で、他のヒト化抗体も、少し少ない程度ではあるが同様に効果的であることを示した。実験マウスの異なる群間で明らかな体重差は観察されなかった。
同様の結果は、抗ｍＰＤ－１及びＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１とアイソタイプ対照（群あたり４匹のマウス）、Ｑ３ｄ×３（３日に１回、合計３回の投与で１０ｍｇ／ｋｇ注射ｉｐ）のみを使用した別の実験でも得られた。６日目（抗体の最終投与）では、腫瘍体積はアイソタイプ対照群と抗ｍＰＤ－１群及びＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１群の間で統計的に有意に異なっていた（二元配置分散分析検定に基づく）。図２８を参照されたい。
さらに、ＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１と抗ＰＤ－１抗体は、ＭＣ３８腫瘍モデルにおいて、相乗的に腫瘍増殖を抑制し、マウスの寿命を延ばした。具体的には、ヒト化ＴＮＲＦ２ ＫＩマウスに７日目にＭＣ３８がん細胞を接種した。０日目から、マウスにアイソタイプ対照、ＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１、または抗ｍＰＤ－１抗体を単独でまたは組み合わせて３日ごとに腹腔内注射した（群あたりｎ＝８）。３日ごとに３及び１０ｍｇ／ｋｇ ＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１で合計７回の処置（Ｑ３ｄ×７）、３日ごとに１０ｍｇ／ｋｇ抗ＰＤ－１（ＲＭＰ－１４）で合計４回の処置（Ｑ３ｄ×４）は、アイソタイプ対照による治療と比較して、腫瘍増殖を有意に抑制し、マウスの寿命を延ばした。さらに、ＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１（１０ｍｇ／ｋｇ、Ｑ３ｄ×７）と抗ＰＤ－１抗体（１０ｍｇ／ｋｇ、Ｑ３ｄ×４）の両方の併用処置は、抗ＰＤ－１抗体単独による処置よりも良好な生存率をもたらした。図２９を参照されたい。データは、処置群をアイソタイプ対照と比較する分散分析を使用して分析された。
実施例１４ 非ヒト霊長類における抗ＴＮＦＲ２抗体の毒性学的評価
ヒト化抗ＴＮＦＲ２抗体の毒性学は、非ヒト霊長類モデルを使用して調べられた。群あたり２匹のカニクイザルに１５ｍｇ／ｋｇ（低）、５０ｍｇ／ｋｇ（中）、及び１５０ｍｇ／ｋｇ（高）のヒト化ＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１モノクローナル抗体の単回投与を注射し、その後血漿を３３６時間（１４日目）までのさまざまな時点で収集した。
ＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１の毒物動態分析は、抗体が時間の経過とともに排除されることを示した。３ｍｇ／ｋｇ以下のＣＤ３×ＣＤ２０二重特異性ＩｇＧから報告されたデータ（点線）と比較して、１５、５０、または１５０ｍｇ／ｋｇのＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１の注射後、サイトカインＩＬ－６、ＩＬ－２、ＩＦＮ－γ、及びＴＮＦ－αの上昇は観察されなかった（図３０）。
正常なサルの過去のデータ範囲と比較して、１５、５０、または１５０ｍｇ／ｋｇのＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１の注射後、白血球、赤血球、血小板、好中球、及びリンパ球の数に異常は見られなかった（図３１）。
これまでの毒性学的評価では、非ヒト霊長類の対象を１５０ｍｇ／ｋｇまでの用量のＨＦＢ３－１ｈｚ６－ｈＧ１で処置したことによる識別可能な毒性作用は示されていなかった。

Claims (31)

  1. 単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、前記単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片はヒトＴＮＦＲ２に特異的であり、前記モノクローナル抗体が：
    （１ａ） 配列番号１のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号２のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号３のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、
    （１ｂ） 配列番号４のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号５のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号６のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；または
    （２ａ） 配列番号１４のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号１５のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、配列番号１６のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、
    （２ｂ） 配列番号１７のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号１８のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号１９のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；または
    （３ａ） 配列番号２６のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号２７のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、配列番号２８のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、
    （３ｂ） 配列番号２９のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号３０のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号３１のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；または
    （４ａ） 配列番号３９のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号４０のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、配列番号４１のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、
    （４ｂ） 配列番号４２のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号４３のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号４４のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；
    （５ａ） 配列番号５１のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号５２のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、配列番号５３のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、
    （５ｂ） 配列番号５４のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号５５のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号５６のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；または
    （６ａ） 配列番号６３のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号６４のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、配列番号６５のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、
    （６ｂ） 配列番号６６のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号６７のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及び配列番号６８のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む、前記単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
  2. （１Ａ） ＨＣＶＲ配列が配列番号７であり；及び／または、
    （１Ｂ） ＬＣＶＲ配列が配列番号８であり、または、
    （２Ａ） ＨＣＶＲ配列が配列番号２０であり；及び／または、
    （２Ｂ） ＬＣＶＲ配列が配列番号２１であり、または
    （３Ａ） ＨＣＶＲ配列が配列番号３２であり；及び／または、
    （３Ｂ） ＬＣＶＲ配列が配列番号３３であり、または
    （４Ａ） ＨＣＶＲ配列が配列番号４５であり；及び／または、
    （４Ｂ） ＬＣＶＲ配列が配列番号４６であり、または
    （５Ａ） ＨＣＶＲ配列が配列番号５７であり；及び／または、
    （５Ｂ） ＬＣＶＲ配列が配列番号５８であり、または
    （６Ａ） ＨＣＶＲ配列が配列番号６９であり；及び／または、
    （６Ｂ） ＬＣＶＲ配列が配列番号７０である、請求項１の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
  3. 前記モノクローナル抗体が：
    （１ａ） 配列番号９の重鎖配列；及び／または、
    （１ｂ） 配列番号１０の軽鎖配列、または、
    （２ａ） 配列番号２２の重鎖配列；及び／または、
    （２ｂ） 配列番号２３の軽鎖配列、または、
    （３ａ） 配列番号３４の重鎖配列；及び／または、
    （３ｂ） 配列番号３５の軽鎖配列、または、
    （４ａ） 配列番号４７の重鎖配列；及び／または、
    （４ｂ） 配列番号４８の軽鎖配列、または、
    （５ａ） 配列番号５９の重鎖配列；及び／または、
    （５ｂ） 配列番号６０の軽鎖配列、または、
    （６ａ） 配列番号７１の重鎖配列；及び／または、
    （６ｂ） 配列番号７２の軽鎖配列 を有する、請求項１または２に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
  4. マウス抗体、ヒト－マウスキメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、ＣＤＲ移植抗体、または表面再構成抗体である、請求項１～３のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
  5. 前記その抗原結合断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、単鎖ＦｖまたはｓｃＦｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、Ｖ－ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）３、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、シングルドメイン抗体、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、（ｓｃＦｖ）２、またはｓｃＦｖ－Ｆｃである、請求項１～４のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
  6. 前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片が、アカゲザルＴＮＦＲ２と交差反応するが、マウスＴＮＦＲ２と実質的に交差反応しない、請求項１～５のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
  7. 前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片が、ＴＮＦＲ１と実質的に交差反応しない、請求項１～６のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
  8. 前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片が、約２５ｎＭ、２０ｎＭ、１５ｎＭ、１０ｎＭ、５ｎＭ、２ｎＭ、または１ｎＭ未満のＫｄでＴＮＦαに結合する、請求項１～７のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
  9. ＴＮＦαとＴＮＦＲ２との間の結合を増強する；ＴＮＦαを介するかまたは共刺激されたＮＦκＢシグナル伝達を増強する（例えば、ＴＣＲ活性化ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ Ｔ細胞において）；及び／またはＴｒｅｇの存在下でＴＣＲ活性化エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ Ｔ細胞）の増殖を促進する、請求項１～８のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
  10. Ｔｒｅｇ上でのＴＮＦα媒介性ＣＤ２５発現を増強する、請求項１～９のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
  11. 配列番号１３のエピトープに結合する、請求項１～１０のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
  12. 配列番号１３のエピトープへの結合について、請求項１～１１のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と競合する、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
  13. 配列番号１３のエピトープに特異的に結合する、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
  14. ＴＮＦαとＴＮＦＲ２との間の結合を増強する；ＴＮＦαを介するかまたは共刺激されたＮＦκＢシグナル伝達を増強する（例えば、ＴＣＲ活性化ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ Ｔ細胞において）；及び／またはＴｒｅｇの存在下でＴＣＲ活性化エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ Ｔ細胞）の増殖を促進する、請求項１３に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
  15. ＴＮＦαとＴＮＦＲ２との間の結合を阻害する；ＴＮＦαを介するかまたは共刺激されたＮＦκＢシグナル伝達を阻害する（例えば、ＴＣＲ活性化ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ Ｔ細胞において）；及び／またはＴｒｅｇの存在下でＴＣＲ活性化エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ８及び／またはＣＤ４ Ｔｃｏｎｖ Ｔ細胞）の増殖を阻害する、請求項１～８のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
  16. Ｔｒｅｇ拡大を促進する、請求項１～８のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
  17. ナチュラルキラー細胞の活性化を促進する、請求項１～８のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
  18. 同じエピトープへの結合について、請求項１～８及び１５～１６のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と競合する、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
  19. それを必要とする患者のがんまたは自己免疫障害を治療する方法であって、請求項１～１８のいずれか一項に記載の有効量の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を前記患者に投与することを含む、前記方法。
  20. がんを治療するためのものであり、前記方法が免疫チェックポイントのアンタゴニストを投与することをさらに含む、請求項１９に記載の方法。
  21. 前記免疫チェックポイントがＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１免疫チェックポイントである、請求項２０に記載の方法。
  22. 前記免疫チェックポイントの前記アンタゴニストが、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に特異的な抗体またはその抗原結合断片である、請求項２０または２１に記載の方法。
  23. 前記抗体が、セミプリマブ、ニボルマブ、またはペムブロリズマブなどの抗ＰＤ－１抗体である、請求項２２に記載の方法。
  24. 前記抗体が、アベルマブ、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、ＫＮ０３５、またはＣＫ－３０１などの抗ＰＤ－Ｌ１抗体である、請求項２２に記載の方法。
  25. 前記免疫チェックポイントの前記アンタゴニストが、ＡＵＮＰ１２などのＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の（非抗体）ペプチド阻害剤；ＣＡ－１７０などのＰＤ－Ｌ１の小分子阻害剤、またはＢＭＳ－９８６１８９などの大環状ペプチドである、請求項２０または２１に記載の方法。
  26. 前記がんが、黒色腫、乳癌、結腸癌、子宮頸癌、腎癌、肝臓癌（例えば、肝細胞癌）、肺癌（ＮＳＣＬＣ）、卵巣癌、皮膚癌（例えば、扁平上皮癌または基底細胞癌）、リンパ腫、または白血病である、請求項２０～２５のいずれか一項に記載の方法。
  27. 化学療法剤、抗血管新生剤、増殖阻害剤、腫瘍免疫療法薬、及び／または抗腫瘍性組成物を患者に投与することをさらに含む、請求項２０～２６のいずれか一項に記載の方法。
  28. 請求項１～１８のいずれか一項に記載の重鎖もしくは軽鎖またはその抗原結合部分をコードするポリヌクレオチド。
  29. ヒト細胞での発現のためにコドン最適化された、請求項２８に記載のポリヌクレオチド。
  30. 請求項２８または２９に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
  31. 発現ベクター（例えば、哺乳動物、酵母、昆虫、または細菌の発現ベクター）である、請求項３０に記載のベクター。
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