JP2023516005A - 肺上皮細胞の損傷及び/又は血管内皮細胞の損傷によって媒介される疾患の治療における低分子化合物の用途 - Google Patents
肺上皮細胞の損傷及び/又は血管内皮細胞の損傷によって媒介される疾患の治療における低分子化合物の用途 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2023516005A JP2023516005A JP2022551743A JP2022551743A JP2023516005A JP 2023516005 A JP2023516005 A JP 2023516005A JP 2022551743 A JP2022551743 A JP 2022551743A JP 2022551743 A JP2022551743 A JP 2022551743A JP 2023516005 A JP2023516005 A JP 2023516005A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- pulmonary
- damage
- lung
- cells
- vascular endothelial
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 108
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 title claims abstract description 75
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 title claims abstract description 75
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 title claims abstract description 74
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title claims abstract description 73
- 201000010099 disease Diseases 0.000 title claims abstract description 68
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 title claims abstract description 68
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 61
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title abstract description 57
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 title 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 58
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 56
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 35
- 102100022629 Fructose-2,6-bisphosphatase Human genes 0.000 claims abstract description 27
- 101000823463 Homo sapiens Fructose-2,6-bisphosphatase Proteins 0.000 claims abstract description 25
- 208000019693 Lung disease Diseases 0.000 claims abstract description 14
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 6
- 230000006378 damage Effects 0.000 claims description 131
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 claims description 102
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 claims description 79
- 208000014674 injury Diseases 0.000 claims description 68
- 206010069351 acute lung injury Diseases 0.000 claims description 66
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 claims description 57
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 claims description 57
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 claims description 56
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 claims description 56
- 206010001052 Acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 claims description 46
- 208000013616 Respiratory Distress Syndrome Diseases 0.000 claims description 44
- 201000000028 adult respiratory distress syndrome Diseases 0.000 claims description 44
- 208000004852 Lung Injury Diseases 0.000 claims description 38
- 206010069363 Traumatic lung injury Diseases 0.000 claims description 37
- 231100000515 lung injury Toxicity 0.000 claims description 37
- 208000002815 pulmonary hypertension Diseases 0.000 claims description 30
- 208000026106 cerebrovascular disease Diseases 0.000 claims description 28
- 206010037423 Pulmonary oedema Diseases 0.000 claims description 27
- 208000005333 pulmonary edema Diseases 0.000 claims description 26
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 25
- 208000005069 pulmonary fibrosis Diseases 0.000 claims description 22
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 claims description 20
- 206010072731 White matter lesion Diseases 0.000 claims description 19
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 17
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 claims description 17
- 230000000222 hyperoxic effect Effects 0.000 claims description 16
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 claims description 14
- 208000006545 Chronic Obstructive Pulmonary Disease Diseases 0.000 claims description 14
- 201000009794 Idiopathic Pulmonary Fibrosis Diseases 0.000 claims description 14
- 208000036971 interstitial lung disease 2 Diseases 0.000 claims description 14
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims description 14
- 241001678559 COVID-19 virus Species 0.000 claims description 13
- 206010058490 Hyperoxia Diseases 0.000 claims description 13
- 206010063837 Reperfusion injury Diseases 0.000 claims description 13
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 claims description 13
- 206010000891 acute myocardial infarction Diseases 0.000 claims description 13
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 claims description 13
- 208000012947 ischemia reperfusion injury Diseases 0.000 claims description 13
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 claims description 13
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 claims description 12
- 206010033645 Pancreatitis Diseases 0.000 claims description 12
- 206010033647 Pancreatitis acute Diseases 0.000 claims description 12
- 201000003229 acute pancreatitis Diseases 0.000 claims description 12
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 claims description 12
- 201000009101 diabetic angiopathy Diseases 0.000 claims description 12
- 230000035939 shock Effects 0.000 claims description 12
- 230000008733 trauma Effects 0.000 claims description 12
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 claims description 11
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 claims description 11
- 208000010378 Pulmonary Embolism Diseases 0.000 claims description 9
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 claims description 9
- 230000035987 intoxication Effects 0.000 claims description 9
- 231100000566 intoxication Toxicity 0.000 claims description 9
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 claims description 8
- 206010035653 pneumoconiosis Diseases 0.000 claims description 8
- 201000000317 pneumocystosis Diseases 0.000 claims description 8
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 8
- 125000000008 (C1-C10) alkyl group Chemical group 0.000 claims description 7
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 claims description 7
- 208000005384 Pneumocystis Pneumonia Diseases 0.000 claims description 7
- 206010073755 Pneumocystis jirovecii pneumonia Diseases 0.000 claims description 7
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 claims description 7
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 7
- 125000000027 (C1-C10) alkoxy group Chemical class 0.000 claims description 6
- 206010002383 Angina Pectoris Diseases 0.000 claims description 6
- 206010048962 Brain oedema Diseases 0.000 claims description 6
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 claims description 6
- 208000006752 brain edema Diseases 0.000 claims description 6
- 208000010877 cognitive disease Diseases 0.000 claims description 6
- 208000031225 myocardial ischemia Diseases 0.000 claims description 6
- 230000002028 premature Effects 0.000 claims description 6
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 claims description 6
- 208000028698 Cognitive impairment Diseases 0.000 claims description 5
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 claims description 5
- 208000007342 Diabetic Nephropathies Diseases 0.000 claims description 5
- 206010012689 Diabetic retinopathy Diseases 0.000 claims description 5
- 206010017577 Gait disturbance Diseases 0.000 claims description 5
- 241000712079 Measles morbillivirus Species 0.000 claims description 5
- 208000002606 Paramyxoviridae Infections Diseases 0.000 claims description 5
- 241000725643 Respiratory syncytial virus Species 0.000 claims description 5
- 206010046543 Urinary incontinence Diseases 0.000 claims description 5
- 238000013130 cardiovascular surgery Methods 0.000 claims description 5
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 claims description 5
- 208000033679 diabetic kidney disease Diseases 0.000 claims description 5
- 230000036651 mood Effects 0.000 claims description 5
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 claims description 5
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims description 5
- 208000029812 Cerebral Small Vessel disease Diseases 0.000 claims description 4
- 231100000572 poisoning Toxicity 0.000 claims description 4
- 230000000607 poisoning effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 claims description 4
- 125000006376 (C3-C10) cycloalkyl group Chemical class 0.000 claims description 3
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N Fluorine Chemical compound FF PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 claims description 3
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 claims description 3
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 claims description 3
- 206010067466 Cerebral microangiopathy Diseases 0.000 claims 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 claims 1
- 210000002821 alveolar epithelial cell Anatomy 0.000 abstract description 45
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 abstract description 38
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 abstract description 19
- 230000008719 thickening Effects 0.000 abstract description 18
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 abstract description 16
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 abstract description 11
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 abstract description 8
- 230000008382 alveolar damage Effects 0.000 abstract description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 116
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 100
- 102100022673 Nuclear receptor subfamily 4 group A member 3 Human genes 0.000 description 65
- 101001109689 Homo sapiens Nuclear receptor subfamily 4 group A member 3 Proteins 0.000 description 63
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 60
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 47
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 45
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 43
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 40
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 37
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 36
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 36
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 36
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 35
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 35
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 29
- XLIJUKVKOIMPKW-BTVCFUMJSA-N [O].OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O Chemical compound [O].OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O XLIJUKVKOIMPKW-BTVCFUMJSA-N 0.000 description 28
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 28
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 28
- 238000000034 method Methods 0.000 description 27
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 27
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 26
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 26
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 25
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 25
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 25
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 24
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 24
- YPHMISFOHDHNIV-FSZOTQKASA-N cycloheximide Chemical compound C1[C@@H](C)C[C@H](C)C(=O)[C@@H]1[C@H](O)CC1CC(=O)NC(=O)C1 YPHMISFOHDHNIV-FSZOTQKASA-N 0.000 description 23
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 21
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 21
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 21
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 20
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 19
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 19
- 238000011161 development Methods 0.000 description 18
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 18
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 18
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 18
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 17
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 17
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 17
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 16
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 16
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 16
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 15
- 230000001146 hypoxic effect Effects 0.000 description 15
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 15
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 15
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 15
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 15
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 14
- 210000004276 hyalin Anatomy 0.000 description 14
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 14
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 14
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 13
- 208000000059 Dyspnea Diseases 0.000 description 12
- 206010013975 Dyspnoeas Diseases 0.000 description 12
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 12
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 12
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 12
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 11
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 11
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 11
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 11
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 11
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 10
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 10
- 230000034512 ubiquitination Effects 0.000 description 10
- 238000010798 ubiquitination Methods 0.000 description 10
- WHTVZRBIWZFKQO-AWEZNQCLSA-N (S)-chloroquine Chemical compound ClC1=CC=C2C(N[C@@H](C)CCCN(CC)CC)=CC=NC2=C1 WHTVZRBIWZFKQO-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 9
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 9
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 9
- 210000001736 capillary Anatomy 0.000 description 9
- 229960003677 chloroquine Drugs 0.000 description 9
- WHTVZRBIWZFKQO-UHFFFAOYSA-N chloroquine Natural products ClC1=CC=C2C(NC(C)CCCN(CC)CC)=CC=NC2=C1 WHTVZRBIWZFKQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 9
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 9
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 9
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 9
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 9
- 206010048554 Endothelial dysfunction Diseases 0.000 description 8
- TZYWCYJVHRLUCT-VABKMULXSA-N N-benzyloxycarbonyl-L-leucyl-L-leucyl-L-leucinal Chemical compound CC(C)C[C@@H](C=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)OCC1=CC=CC=C1 TZYWCYJVHRLUCT-VABKMULXSA-N 0.000 description 8
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 8
- 230000008694 endothelial dysfunction Effects 0.000 description 8
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 8
- 230000007959 normoxia Effects 0.000 description 8
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 8
- 208000025721 COVID-19 Diseases 0.000 description 7
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 7
- 230000035508 accumulation Effects 0.000 description 7
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 7
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 7
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 7
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 7
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 7
- 230000006870 function Effects 0.000 description 7
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 7
- 208000018875 hypoxemia Diseases 0.000 description 7
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 7
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 7
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 7
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 7
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 7
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 7
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 7
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 7
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 7
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 6
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 6
- 206010060902 Diffuse alveolar damage Diseases 0.000 description 6
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 6
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 6
- 210000002358 circulating endothelial cell Anatomy 0.000 description 6
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 6
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 6
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 6
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 6
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 6
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 6
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 6
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 6
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 6
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 6
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 6
- -1 small molecule compounds Chemical class 0.000 description 6
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 description 6
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 6
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 5
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 5
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 5
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 5
- 108010022678 Phosphofructokinase-2 Proteins 0.000 description 5
- 241000142787 Pneumocystis jirovecii Species 0.000 description 5
- 239000006180 TBST buffer Substances 0.000 description 5
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 5
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 5
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 5
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 5
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 5
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 5
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 5
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 5
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 5
- 230000034659 glycolysis Effects 0.000 description 5
- 230000002414 glycolytic effect Effects 0.000 description 5
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 5
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 5
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 5
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 5
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 5
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 5
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 5
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 5
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- ODLHGICHYURWBS-LKONHMLTSA-N trappsol cyclo Chemical compound CC(O)COC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](COCC(C)O)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](COCC(C)O)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](COCC(C)O)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](COCC(C)O)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)COCC(O)C)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1COCC(C)O ODLHGICHYURWBS-LKONHMLTSA-N 0.000 description 5
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 5
- PRDFBSVERLRRMY-UHFFFAOYSA-N 2'-(4-ethoxyphenyl)-5-(4-methylpiperazin-1-yl)-2,5'-bibenzimidazole Chemical compound C1=CC(OCC)=CC=C1C1=NC2=CC=C(C=3NC4=CC(=CC=C4N=3)N3CCN(C)CC3)C=C2N1 PRDFBSVERLRRMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- UPXRTVAIJMUAQR-UHFFFAOYSA-N 4-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-1-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound C1C(C(O)=O)N(C(=O)OC(C)(C)C)CC1NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 UPXRTVAIJMUAQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- TYJOQICPGZGYDT-UHFFFAOYSA-N 4-methylsulfonylbenzenesulfonyl chloride Chemical compound CS(=O)(=O)C1=CC=C(S(Cl)(=O)=O)C=C1 TYJOQICPGZGYDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 4
- 206010015719 Exsanguination Diseases 0.000 description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100024616 Platelet endothelial cell adhesion molecule Human genes 0.000 description 4
- 241000316887 Saissetia oleae Species 0.000 description 4
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 4
- 210000001601 blood-air barrier Anatomy 0.000 description 4
- 210000001715 carotid artery Anatomy 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 4
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 4
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 4
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 4
- 230000008497 endothelial barrier function Effects 0.000 description 4
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 4
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 4
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 4
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 4
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 4
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 4
- 229960004184 ketamine hydrochloride Drugs 0.000 description 4
- 239000012160 loading buffer Substances 0.000 description 4
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 4
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 239000003580 lung surfactant Substances 0.000 description 4
- 208000037841 lung tumor Diseases 0.000 description 4
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 4
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 4
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 4
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 4
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 210000001147 pulmonary artery Anatomy 0.000 description 4
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 4
- 229960004175 xylazine hydrochloride Drugs 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100022900 Actin, cytoplasmic 1 Human genes 0.000 description 3
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 3
- 102000051819 Baculoviral IAP Repeat-Containing 3 Human genes 0.000 description 3
- 101710177962 Baculoviral IAP repeat-containing protein 3 Proteins 0.000 description 3
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 3
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 3
- 208000028399 Critical Illness Diseases 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 3
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 3
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 3
- 229940122907 Phosphatase inhibitor Drugs 0.000 description 3
- 102000012434 Phosphofructokinase-2 Human genes 0.000 description 3
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010037394 Pulmonary haemorrhage Diseases 0.000 description 3
- 208000004756 Respiratory Insufficiency Diseases 0.000 description 3
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 3
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 3
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 3
- 210000002588 alveolar type II cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 3
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 3
- 210000002469 basement membrane Anatomy 0.000 description 3
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 3
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 3
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 3
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 3
- 230000000254 damaging effect Effects 0.000 description 3
- 230000034994 death Effects 0.000 description 3
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 3
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 210000003989 endothelium vascular Anatomy 0.000 description 3
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 3
- CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M ethanesulfonate Chemical compound CCS([O-])(=O)=O CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000003328 fibroblastic effect Effects 0.000 description 3
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 3
- 239000012458 free base Substances 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 3
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 3
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 3
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 3
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 3
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 3
- 239000012120 mounting media Substances 0.000 description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 3
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 3
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 3
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 3
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 3
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 3
- 230000009726 pulmonary vascular congestion Effects 0.000 description 3
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 3
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 3
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 3
- 201000004193 respiratory failure Diseases 0.000 description 3
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 3
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 3
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 3
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 3
- 210000003606 umbilical vein Anatomy 0.000 description 3
- 210000004509 vascular smooth muscle cell Anatomy 0.000 description 3
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 2
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NFLLKCVHYJRNRH-UHFFFAOYSA-N 8-chloro-1,3-dimethyl-7H-purine-2,6-dione 2-(diphenylmethyl)oxy-N,N-dimethylethanamine Chemical compound O=C1N(C)C(=O)N(C)C2=C1NC(Cl)=N2.C=1C=CC=CC=1C(OCCN(C)C)C1=CC=CC=C1 NFLLKCVHYJRNRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IGAZHQIYONOHQN-UHFFFAOYSA-N Alexa Fluor 555 Chemical compound C=12C=CC(=N)C(S(O)(=O)=O)=C2OC2=C(S(O)(=O)=O)C(N)=CC=C2C=1C1=CC=C(C(O)=O)C=C1C(O)=O IGAZHQIYONOHQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100035765 Angiotensin-converting enzyme 2 Human genes 0.000 description 2
- 108090000975 Angiotensin-converting enzyme 2 Proteins 0.000 description 2
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 206010008111 Cerebral haemorrhage Diseases 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 2
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 2
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 2
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 2
- 206010015866 Extravasation Diseases 0.000 description 2
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 2
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Chemical compound OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101001046870 Homo sapiens Hypoxia-inducible factor 1-alpha Proteins 0.000 description 2
- 102100022875 Hypoxia-inducible factor 1-alpha Human genes 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010093163 Member 3 Group A Nuclear Receptor Subfamily 4 Proteins 0.000 description 2
- YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N Morpholine Chemical compound C1COCCN1 YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000034388 Mountain sickness acute Diseases 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N N-Vinyl-2-pyrrolidone Chemical compound C=CN1CCCC1=O WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 2
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GLUUGHFHXGJENI-UHFFFAOYSA-N Piperazine Chemical compound C1CNCCN1 GLUUGHFHXGJENI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 208000007123 Pulmonary Atelectasis Diseases 0.000 description 2
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N Pyruvic acid Chemical compound CC(=O)C(O)=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 2
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 208000018315 acute mountain sickness Diseases 0.000 description 2
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 2
- 230000006536 aerobic glycolysis Effects 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 2
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002383 alveolar type I cell Anatomy 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- ROOXNKNUYICQNP-UHFFFAOYSA-N ammonium persulfate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[O-]S(=O)(=O)OOS([O-])(=O)=O ROOXNKNUYICQNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 2
- 230000006538 anaerobic glycolysis Effects 0.000 description 2
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000010100 anticoagulation Effects 0.000 description 2
- 210000002565 arteriole Anatomy 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 239000002585 base Substances 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010006475 bronchopulmonary dysplasia Diseases 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 2
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 2
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 2
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 2
- 230000001149 cognitive effect Effects 0.000 description 2
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 2
- HCAJEUSONLESMK-UHFFFAOYSA-N cyclohexylsulfamic acid Chemical compound OS(=O)(=O)NC1CCCCC1 HCAJEUSONLESMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 230000010339 dilation Effects 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- QLTXKCWMEZIHBJ-PJGJYSAQSA-N dizocilpine maleate Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O.C12=CC=CC=C2[C@]2(C)C3=CC=CC=C3C[C@H]1N2 QLTXKCWMEZIHBJ-PJGJYSAQSA-N 0.000 description 2
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 2
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 2
- 230000002497 edematous effect Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- SEACYXSIPDVVMV-UHFFFAOYSA-L eosin Y Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C([O-])=C(Br)C=C21 SEACYXSIPDVVMV-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 208000037888 epithelial cell injury Diseases 0.000 description 2
- 230000007705 epithelial mesenchymal transition Effects 0.000 description 2
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 2
- 230000036251 extravasation Effects 0.000 description 2
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 2
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 230000000004 hemodynamic effect Effects 0.000 description 2
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 2
- 230000001631 hypertensive effect Effects 0.000 description 2
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 2
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 description 2
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 150000007529 inorganic bases Chemical class 0.000 description 2
- 230000007154 intracellular accumulation Effects 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 2
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 2
- 231100000516 lung damage Toxicity 0.000 description 2
- 230000005980 lung dysfunction Effects 0.000 description 2
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 2
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000002595 magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 239000003703 n methyl dextro aspartic acid receptor blocking agent Substances 0.000 description 2
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 2
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 2
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 2
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 2
- 238000006213 oxygenation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 2
- 230000001991 pathophysiological effect Effects 0.000 description 2
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 2
- 201000003144 pneumothorax Diseases 0.000 description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 2
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 2
- 210000003456 pulmonary alveoli Anatomy 0.000 description 2
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 2
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 2
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 2
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N salicylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 2
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 2
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 150000003512 tertiary amines Chemical class 0.000 description 2
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 2
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 2
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 2
- 210000003437 trachea Anatomy 0.000 description 2
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- 210000004026 tunica intima Anatomy 0.000 description 2
- 210000003934 vacuole Anatomy 0.000 description 2
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 2
- 210000000264 venule Anatomy 0.000 description 2
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 2
- QBYIENPQHBMVBV-HFEGYEGKSA-N (2R)-2-hydroxy-2-phenylacetic acid Chemical compound O[C@@H](C(O)=O)c1ccccc1.O[C@@H](C(O)=O)c1ccccc1 QBYIENPQHBMVBV-HFEGYEGKSA-N 0.000 description 1
- AAWZDTNXLSGCEK-LNVDRNJUSA-N (3r,5r)-1,3,4,5-tetrahydroxycyclohexane-1-carboxylic acid Chemical compound O[C@@H]1CC(O)(C(O)=O)C[C@@H](O)C1O AAWZDTNXLSGCEK-LNVDRNJUSA-N 0.000 description 1
- WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-M .beta-Phenylacrylic acid Natural products [O-]C(=O)\C=C\C1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-M 0.000 description 1
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HZLCGUXUOFWCCN-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxynonadecane-1,2,3-tricarboxylic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCC(C(O)=O)C(O)(C(O)=O)CC(O)=O HZLCGUXUOFWCCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 3-azaniumyl-2-hydroxypropanoate Chemical compound NCC(O)C(O)=O BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKICWELGRMTQCR-UHFFFAOYSA-N 4-[(7-chloroquinolin-4-yl)azaniumyl]pentyl-diethylazanium;dihydrogen phosphate Chemical compound OP(O)(O)=O.OP(O)(O)=O.ClC1=CC=C2C(NC(C)CCCN(CC)CC)=CC=NC2=C1 QKICWELGRMTQCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YIUIVFFUEVPRIU-UHFFFAOYSA-N 8-chlorotheophylline Chemical class O=C1N(C)C(=O)N(C)C2=NC(Cl)=N[C]21 YIUIVFFUEVPRIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 239000012103 Alexa Fluor 488 Substances 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010059245 Angiopathy Diseases 0.000 description 1
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 1
- 208000031504 Asymptomatic Infections Diseases 0.000 description 1
- 206010003591 Ataxia Diseases 0.000 description 1
- 241000219307 Atriplex rosea Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 201000001178 Bacterial Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N Busulfan Chemical compound CS(=O)(=O)OCCCCOS(C)(=O)=O COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003900 Calpain-2 Human genes 0.000 description 1
- 108090000232 Calpain-2 Proteins 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- WBYWAXJHAXSJNI-SREVYHEPSA-N Cinnamic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-SREVYHEPSA-N 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000006306 Cor pulmonale Diseases 0.000 description 1
- AAWZDTNXLSGCEK-UHFFFAOYSA-N Cordycepinsaeure Natural products OC1CC(O)(C(O)=O)CC(O)C1O AAWZDTNXLSGCEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 208000001528 Coronaviridae Infections Diseases 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N Cytarabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 230000007064 DNA hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 206010011906 Death Diseases 0.000 description 1
- 108010049207 Death Domain Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000009058 Death Domain Receptors Human genes 0.000 description 1
- 208000016192 Demyelinating disease Diseases 0.000 description 1
- 206010012305 Demyelination Diseases 0.000 description 1
- YZCKVEUIGOORGS-OUBTZVSYSA-N Deuterium Chemical compound [2H] YZCKVEUIGOORGS-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 1
- 206010014561 Emphysema Diseases 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N Ethyl urethane Chemical compound CCOC(N)=O JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 101001090713 Homo sapiens L-lactate dehydrogenase A chain Proteins 0.000 description 1
- 208000000203 Hyaline Membrane Disease Diseases 0.000 description 1
- 206010020880 Hypertrophy Diseases 0.000 description 1
- 208000032571 Infant acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010022489 Insulin Resistance Diseases 0.000 description 1
- 208000029523 Interstitial Lung disease Diseases 0.000 description 1
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 1
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 102100034671 L-lactate dehydrogenase A chain Human genes 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N L-lactic acid Chemical compound C[C@H](O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 102000019149 MAP kinase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040008097 MAP kinase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000019022 Mood disease Diseases 0.000 description 1
- 208000034486 Multi-organ failure Diseases 0.000 description 1
- 208000010718 Multiple Organ Failure Diseases 0.000 description 1
- KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N N,N,N',N'-tetramethylethylenediamine Chemical compound CN(C)CCN(C)C KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MBBZMMPHUWSWHV-BDVNFPICSA-N N-methylglucamine Chemical compound CNC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBBZMMPHUWSWHV-BDVNFPICSA-N 0.000 description 1
- 206010028974 Neonatal respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000031481 Pathologic Constriction Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 241000233870 Pneumocystis Species 0.000 description 1
- 206010035737 Pneumonia viral Diseases 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 229940079156 Proteasome inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 241000669298 Pseudaulacaspis pentagona Species 0.000 description 1
- 206010051739 Pulmonary sepsis Diseases 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- AAWZDTNXLSGCEK-ZHQZDSKASA-N Quinic acid Natural products O[C@H]1CC(O)(C(O)=O)C[C@H](O)C1O AAWZDTNXLSGCEK-ZHQZDSKASA-N 0.000 description 1
- IWYDHOAUDWTVEP-UHFFFAOYSA-N R-2-phenyl-2-hydroxyacetic acid Natural products OC(=O)C(O)C1=CC=CC=C1 IWYDHOAUDWTVEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 206010038687 Respiratory distress Diseases 0.000 description 1
- 208000017442 Retinal disease Diseases 0.000 description 1
- 206010038923 Retinopathy Diseases 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 241000669326 Selenaspidus articulatus Species 0.000 description 1
- 241000973497 Siphonognathus argyrophanes Species 0.000 description 1
- 240000006394 Sorghum bicolor Species 0.000 description 1
- 206010042276 Subacute endocarditis Diseases 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010017842 Telomerase Proteins 0.000 description 1
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 description 1
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 description 1
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 108090000848 Ubiquitin Proteins 0.000 description 1
- 102000044159 Ubiquitin Human genes 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000032594 Vascular Remodeling Diseases 0.000 description 1
- 208000024248 Vascular System injury Diseases 0.000 description 1
- 208000035868 Vascular inflammations Diseases 0.000 description 1
- 208000012339 Vascular injury Diseases 0.000 description 1
- 208000009470 Ventilator-Associated Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 206010071362 Viral sepsis Diseases 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 230000001594 aberrant effect Effects 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 1
- 229940040563 agaric acid Drugs 0.000 description 1
- IAJILQKETJEXLJ-RSJOWCBRSA-N aldehydo-D-galacturonic acid Chemical compound O=C[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-RSJOWCBRSA-N 0.000 description 1
- IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N aldehydo-D-glucuronic acid Chemical compound O=C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000008044 alkali metal hydroxides Chemical class 0.000 description 1
- 150000003973 alkyl amines Chemical class 0.000 description 1
- 229940061720 alpha hydroxy acid Drugs 0.000 description 1
- 150000001280 alpha hydroxy acids Chemical class 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000008381 alveolar epithelial damage Effects 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 229910001870 ammonium persulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000003484 anatomy Anatomy 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 210000000702 aorta abdominal Anatomy 0.000 description 1
- 206010002906 aortic stenosis Diseases 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 159000000032 aromatic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 210000001130 astrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 230000010455 autoregulation Effects 0.000 description 1
- 230000003376 axonal effect Effects 0.000 description 1
- 229960002536 benzathine benzylpenicillin Drugs 0.000 description 1
- 229940077388 benzenesulfonate Drugs 0.000 description 1
- SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-M benzenesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-N benzenesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940092714 benzenesulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 1
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 description 1
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 description 1
- 238000010876 biochemical test Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000036770 blood supply Effects 0.000 description 1
- 230000003925 brain function Effects 0.000 description 1
- 201000008247 brain infarction Diseases 0.000 description 1
- 210000003123 bronchiole Anatomy 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 210000001043 capillary endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004856 capillary permeability Effects 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 230000007211 cardiovascular event Effects 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000006652 catabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 108010015046 cell aggregation factors Proteins 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000006727 cell loss Effects 0.000 description 1
- 239000002771 cell marker Substances 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 210000001638 cerebellum Anatomy 0.000 description 1
- 230000003727 cerebral blood flow Effects 0.000 description 1
- 206010008118 cerebral infarction Diseases 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 231100000481 chemical toxicant Toxicity 0.000 description 1
- VDANGULDQQJODZ-UHFFFAOYSA-N chloroprocaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1Cl VDANGULDQQJODZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002023 chloroprocaine Drugs 0.000 description 1
- OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N choline Chemical compound C[N+](C)(C)CCO OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001231 choline Drugs 0.000 description 1
- 235000019504 cigarettes Nutrition 0.000 description 1
- 229930016911 cinnamic acid Natural products 0.000 description 1
- 235000013985 cinnamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000001447 compensatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 125000000017 cortisol group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001351 cycling effect Effects 0.000 description 1
- 229960000684 cytarabine Drugs 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000006837 decompression Effects 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 125000002704 decyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 229910052805 deuterium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000010454 developmental mechanism Effects 0.000 description 1
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N diethanolamine Chemical compound OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940043237 diethanolamine Drugs 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 229960004993 dimenhydrinate Drugs 0.000 description 1
- 238000002224 dissection Methods 0.000 description 1
- 238000012137 double-staining Methods 0.000 description 1
- 230000002222 downregulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 1
- 239000013583 drug formulation Substances 0.000 description 1
- 208000017574 dry cough Diseases 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 238000013535 dynamic contrast enhanced MRI Methods 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 230000008753 endothelial function Effects 0.000 description 1
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 1
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 1
- 230000008378 epithelial damage Effects 0.000 description 1
- XBRDBODLCHKXHI-UHFFFAOYSA-N epolamine Chemical compound OCCN1CCCC1 XBRDBODLCHKXHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940031098 ethanolamine Drugs 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 229940012017 ethylenediamine Drugs 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 230000003492 excitotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000063 excitotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000002169 extracardiac Effects 0.000 description 1
- 210000001723 extracellular space Anatomy 0.000 description 1
- 230000019305 fibroblast migration Effects 0.000 description 1
- 230000003176 fibrotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 238000007667 floating Methods 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 239000003517 fume Substances 0.000 description 1
- 230000008717 functional decline Effects 0.000 description 1
- IECPWNUMDGFDKC-MZJAQBGESA-N fusidic acid Chemical class O[C@@H]([C@@H]12)C[C@H]3\C(=C(/CCC=C(C)C)C(O)=O)[C@@H](OC(C)=O)C[C@]3(C)[C@@]2(C)CC[C@@H]2[C@]1(C)CC[C@@H](O)[C@H]2C IECPWNUMDGFDKC-MZJAQBGESA-N 0.000 description 1
- 102000034356 gene-regulatory proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091006104 gene-regulatory proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000009395 genetic defect Effects 0.000 description 1
- 229940097043 glucuronic acid Drugs 0.000 description 1
- 229960004275 glycolic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000006692 glycolytic flux Effects 0.000 description 1
- 210000004884 grey matter Anatomy 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N hydroxypropyl methyl cellulose Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 1
- QWPPOHNGKGFGJK-UHFFFAOYSA-N hypochlorous acid Chemical compound ClO QWPPOHNGKGFGJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 230000003914 insulin secretion Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000008611 intercellular interaction Effects 0.000 description 1
- 230000037427 ion transport Effects 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000000155 isotopic effect Effects 0.000 description 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 229940116871 l-lactate Drugs 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 230000000512 lipotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 208000018773 low birth weight Diseases 0.000 description 1
- 231100000533 low birth weight Toxicity 0.000 description 1
- 230000011360 lung alveolus development Effects 0.000 description 1
- 230000004199 lung function Effects 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 230000006674 lysosomal degradation Effects 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 1
- 229960002510 mandelic acid Drugs 0.000 description 1
- WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L manganese(2+);methyl n-[[2-(methoxycarbonylcarbamothioylamino)phenyl]carbamothioyl]carbamate;n-[2-(sulfidocarbothioylamino)ethyl]carbamodithioate Chemical compound [Mn+2].[S-]C(=S)NCCNC([S-])=S.COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000005399 mechanical ventilation Methods 0.000 description 1
- 229960003194 meglumine Drugs 0.000 description 1
- 239000000155 melt Substances 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 210000002418 meninge Anatomy 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 229910000000 metal hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000004692 metal hydroxides Chemical class 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- WBYWAXJHAXSJNI-UHFFFAOYSA-N methyl p-hydroxycinnamate Natural products OC(=O)C=CC1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 210000004925 microvascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000002715 modification method Methods 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 208000029744 multiple organ dysfunction syndrome Diseases 0.000 description 1
- 210000000651 myofibroblast Anatomy 0.000 description 1
- WIDKTXGNSOORHA-CJHXQPGBSA-N n,n'-dibenzylethane-1,2-diamine;(2s,5r,6r)-3,3-dimethyl-7-oxo-6-[(2-phenylacetyl)amino]-4-thia-1-azabicyclo[3.2.0]heptane-2-carboxylic acid;tetrahydrate Chemical compound O.O.O.O.C=1C=CC=CC=1CNCCNCC1=CC=CC=C1.N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1.N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 WIDKTXGNSOORHA-CJHXQPGBSA-N 0.000 description 1
- 239000007922 nasal spray Substances 0.000 description 1
- 239000006218 nasal suppository Substances 0.000 description 1
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 1
- 230000003961 neuronal insult Effects 0.000 description 1
- 230000007171 neuropathology Effects 0.000 description 1
- 201000002652 newborn respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 210000004248 oligodendroglia Anatomy 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000006186 oral dosage form Substances 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 229940116315 oxalic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000004792 oxidative damage Effects 0.000 description 1
- 238000002640 oxygen therapy Methods 0.000 description 1
- 229940094443 oxytocics prostaglandins Drugs 0.000 description 1
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N papa-hydroxy-benzoic acid Natural products OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000010827 pathological analysis Methods 0.000 description 1
- 230000008289 pathophysiological mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 235000019371 penicillin G benzathine Nutrition 0.000 description 1
- 125000001147 pentyl group Chemical group C(CCCC)* 0.000 description 1
- 210000003668 pericyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 238000001050 pharmacotherapy Methods 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000010118 platelet activation Effects 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 description 1
- 229920001592 potato starch Polymers 0.000 description 1
- 229940069328 povidone Drugs 0.000 description 1
- 238000012257 pre-denaturation Methods 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 208000037920 primary disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002206 pro-fibrotic effect Effects 0.000 description 1
- MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N procaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004919 procaine Drugs 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 1
- 239000003207 proteasome inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 210000004879 pulmonary tissue Anatomy 0.000 description 1
- 229940107700 pyruvic acid Drugs 0.000 description 1
- ZHNFLHYOFXQIOW-LPYZJUEESA-N quinine sulfate dihydrate Chemical compound [H+].[H+].O.O.[O-]S([O-])(=O)=O.C([C@H]([C@H](C1)C=C)C2)C[N@@]1[C@@H]2[C@H](O)C1=CC=NC2=CC=C(OC)C=C21.C([C@H]([C@H](C1)C=C)C2)C[N@@]1[C@@H]2[C@H](O)C1=CC=NC2=CC=C(OC)C=C21 ZHNFLHYOFXQIOW-LPYZJUEESA-N 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000015909 regulation of biological process Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000008844 regulatory mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000010410 reperfusion Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- 229960004889 salicylic acid Drugs 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000004911 serous fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000004088 simulation Methods 0.000 description 1
- 239000000779 smoke Substances 0.000 description 1
- 230000000391 smoking effect Effects 0.000 description 1
- 230000027849 smooth muscle hyperplasia Effects 0.000 description 1
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 1
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 1
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000012439 solid excipient Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 230000036262 stenosis Effects 0.000 description 1
- 208000037804 stenosis Diseases 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- WPLOVIFNBMNBPD-ATHMIXSHSA-N subtilin Chemical compound CC1SCC(NC2=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(C)CC)C(=O)NC(=C)C(=O)NC(CCCCN)C(O)=O)CSC(C)C2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C1NC(=O)C(=C/C)/NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(NC(=O)C2NC(=O)CNC(=O)C3CCCN3C(=O)C(NC(=O)C3NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(=C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(N)CC=4C5=CC=CC=C5NC=4)CSC3)C(C)SC2)C(C)C)C(C)SC1)CC1=CC=CC=C1 WPLOVIFNBMNBPD-ATHMIXSHSA-N 0.000 description 1
- IIACRCGMVDHOTQ-UHFFFAOYSA-M sulfamate Chemical compound NS([O-])(=O)=O IIACRCGMVDHOTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 150000003460 sulfonic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003319 supportive effect Effects 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 238000002636 symptomatic treatment Methods 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- YBRBMKDOPFTVDT-UHFFFAOYSA-N tert-butylamine Chemical compound CC(C)(C)N YBRBMKDOPFTVDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 1
- 230000009092 tissue dysfunction Effects 0.000 description 1
- 208000037816 tissue injury Diseases 0.000 description 1
- 230000007838 tissue remodeling Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 230000006453 vascular barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000009723 vascular congestion Effects 0.000 description 1
- 230000003845 vascular endothelial function Effects 0.000 description 1
- 231100000216 vascular lesion Toxicity 0.000 description 1
- 230000008728 vascular permeability Effects 0.000 description 1
- 238000007631 vascular surgery Methods 0.000 description 1
- 230000002227 vasoactive effect Effects 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 1
- 230000003519 ventilatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011329 viral nucleic acid test Methods 0.000 description 1
- 208000009421 viral pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
- 229940100445 wheat starch Drugs 0.000 description 1
- 210000004885 white matter Anatomy 0.000 description 1
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
- A61K31/565—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, estradiol
- A61K31/568—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, estradiol substituted in positions 10 and 13 by a chain having at least one carbon atom, e.g. androstanes, e.g. testosterone
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/24—Antidepressants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/10—Antioedematous agents; Diuretics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/12—Antihypertensives
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Virology (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Obesity (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
Description
式中、R1は、H、-CN、フッ素、塩素、C1~10アルキル基、フッ素又は塩素置換C1~10アルキル基、C1~10アルコキシ基、フッ素又は塩素置換C1~10アルコキシ基及びC3~10シクロアルキル基から選ばれる。一部の実施形態では、前記R1は、H、-CHCH2CH3、-CH(CH3)2、-CH(CH2)3CH3又は-CH(CH3)(CH2)3CH(CH3)2である。好ましい実施形態では、前記R1は、Hである。
本発明の方法又は用途に適用される化合物は、式Iの化合物、その重水素化物又は薬学的に許容されるその塩を含み、
式中、R1は、H、-CN、フッ素、塩素、C1~10アルキル基、フッ素又は塩素置換C1~10アルキル基、C1~10アルコキシ基、フッ素又は塩素置換C1~10アルコキシ基及びC3~10シクロアルキル基から選ばれる。式Iの化合物、その重水素化物又は薬学的に許容されるその塩は、本明細書で「本発明の化合物」又は「前記化合物」とも呼ばれる。
本発明の別の態様において、有効量の式Iの化合物、その重水素化物又は薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。
本発明の一態様において、肺上皮細胞及び/又は血管内皮細胞の損傷によって媒介される疾患を予防又は治療するための薬物の製造における前記いずれかの化合物、その重水素化物又は薬学的に許容される塩の使用を提供する。一部の実施形態では、前記肺上皮細胞及び/又は血管内皮細胞の損傷によって媒介される疾患は、急性肺損傷、急性呼吸窮迫症候群、肺高血圧症、肺水腫、肺線維症、早産児慢性肺疾患、慢性閉塞性肺疾患、ニューモシスチス肺炎及び肺塞栓症から1つ又は複数選ばれる。一部の実施形態では、前記急性肺損傷、急性呼吸窮迫症候群、肺高血圧症又は肺水腫は、高酸素、ウイルス感染、細菌感染、外傷、ショック、虚血再灌流障害、急性膵炎、吸入傷害、びまん性肺胞損傷及び/又は中毒によって引き起こされる。一部の実施形態では、前記急性肺損傷、急性呼吸窮迫症候群、肺高血圧症又は肺水腫は、高酸素、ウイルス感染、細菌感染、外傷、ショック、虚血再灌流障害、急性膵炎、吸入傷害、びまん性肺胞損傷及び/又は中毒によって引き起こされ、ただし低酸素によって引き起こされるのではない。一部の実施形態では、前記ウイルスは、コロナウイルス(例えば、新型コロナウイルスSARS-CoV-2)、インフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、アデノウイルス、パラインフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、サイトメガロウイルス又はそれらの組み合わせである。一部の実施形態では、前記ウイルスは、コロナウイルス(例えば、新型コロナウイルスSARS-CoV-2)である。一部の実施形態では、前記急性肺損傷は、手術によって引き起こされる肺損傷であり、前記手術は、例えば、縮小手術、肺葉切除術又は肺全摘術などの肺切除術、肺腫瘍切除術又は肺移植術である。一部の実施形態では、前記肺線維症は、特発性肺線維症又はじん肺である。好ましい実施形態では、前記肺上皮細胞及び/又は血管内皮細胞の損傷によって媒介される疾患は、肺損傷である。好ましい実施形態では、前記肺上皮細胞及び/又は血管内皮細胞の損傷によって媒介される疾患は、急性肺損傷である。好ましい実施形態では、前記肺上皮細胞及び/又は血管内皮細胞の損傷によって媒介される疾患は、急性呼吸窮迫症候群である。好ましい実施形態では、前記肺上皮細胞及び/又は血管内皮細胞の損傷によって媒介される疾患は、肺高血圧症である。
「急性肺損傷/急性呼吸窮迫症候群(ALI/ARDS)」
急性肺損傷(ALI)は、肺の炎症と肺微小血管の透過性亢進による急性又は進行性の低酸素性呼吸不全であり、その最終的な段階は急性呼吸窮迫症候群(ARDS)である。急性肺損傷を引き起こす要因は様々であり、高酸素、ウイルス感染、細菌感染、外傷、ショック、虚血再灌流障害、急性膵炎、吸入傷害、びまん性肺胞損傷、中毒などを含むが、それらに限定されない。例えば、感染性肺炎(例えば、細菌性肺炎又はウイルス性肺炎)における又はそれによって引き起こされる急性肺損傷/急性呼吸窮迫症候群である。例えば、新型コロナウイルス感染による肺炎(Corona Virus Disease 2019、COVID-19)の病態生理学的特徴として次のものが挙げられる。新型コロナウイルスは主に患者の肺を攻撃して、細胞性線維粘液性浸出液を伴うびまん性肺胞損傷を患者に引き起こすとともに、肺細胞の脱落とヒアリン膜の形成が見られる。これによって肺の通気/換気機能に深刻な影響を与え、急性呼吸窮迫症候群に発展している。臨床研究で、一部の患者はウイルス核酸検査が陰性になった後も、肺損傷が依然として長期的に存在し、ひいては一層悪化する場合もあるということを発見した。
特発性肺線維症(IPF)は、肺胞上皮細胞の損傷と組織の異常な過形成によって引き起こされる肺疾患である。発生機序は様々な要因が肺胞上皮細胞の損傷を引き起こし、最終的に線維芽細胞の増殖と筋線維芽細胞の凝集を引き起こして、線維芽細胞病巣を形成させることであるということは、研究に裏付けられた。上皮細胞のアポトーシスは早期IPFの進行の重要な要因である可能性がある。炎症反応、細胞内張力、テロメラーゼ活性などの要因が肺胞上皮細胞のアポトーシスに関与しており、肺線維症の発生の初期段階で重要な役割を果たす。IPFの大きな病理学的特徴は、線維芽細胞の活発な増殖で形成している繊維性病巣である。線維芽細胞病巣は上皮細胞が損傷及び修復される部位で、上皮細胞損傷後に線維芽細胞の移動、増殖、分化を促す様々なメディエーターを分泌して、肺胞内の広範な繊維化を引き起こし、最終的に進行性呼吸困難が起こる。IPFの発生機序としては肺胞上皮細胞の損傷後の異常な再上皮化と線維芽細胞の異常な増殖が考えられる。IPFにおける細胞の死亡は上皮細胞損傷後のアポトーシスとして現れ、疾患の発生で重要な役割を果たす。肺上皮細胞のアポトーシスを誘発するのは肺組織の繊維化を引き起こすことが研究に裏付けられた。肺胞上皮細胞の損傷は肺線維症の発生の最初の要因として現在学者に最も受け入れられている理論的な仮説であり、肺胞上皮細胞のアポトーシスを標的として低下させる薬物はIPFの防止のため新しい治療法を提供できるのだろう。肺組織における好気性解糖が肺線維症に密接に関係していることが研究で明らかになっている。Hu et al.(2020)では、PFKFB3阻害剤3POが、LPS誘発性肺線維症マウスモデルにおいてPFKFB3発現の有意な上方調節と好気性解糖の増加を逆転できることを発見した。
じん肺は、生産粉塵の長期吸入によって引き起こされる、肺組織の不可逆的な繊維化を主とする全身疾患である。現在、じん肺に対する効果的な治療法はまだなく、粉塵が肺線維症を引き起こす病理学的な過程で、一部の肺胞上皮細胞が異常に活性化し、損傷とアポトーシスも見られ、上皮細胞の修復障害、線維化促進因子放出及び上皮間葉転換(EMT)などの過程が、線維芽細胞病巣と筋線維芽細胞病巣の形成及び細胞外マトリックスの大量生成を促進し、最終的に肺胞構造の破壊と肺線維症を引き起こす。
高酸素肺損傷は、びまん性肺細胞損傷による、速やかにガス交換に影響を与える炎症性肺疾患である。高酸素肺損傷は、常圧下体積分率が21%より高い高分圧酸素又は1絶対気圧より高い高圧酸素を吸い込むことで発生した、肺酸素中毒をはじめとする急性及び慢性の肺損傷の総称である。新生児、特に早産児では、抗酸化酵素系と肺サーファクタントが完全に発達していないため、高酸素が肺に入った後、酸素フリーラジカルが発生し、細胞損傷、アポトーシス、ネクローシスを引き起こすと同時に、炎症メディエーター、炎症細胞浸潤が発生し、肺炎症反応、組織損傷と異常な修復を引き起こす。高酸素は肺胞上皮細胞の酸化的損傷を引き起こし、肺胞化の進行を阻害し、広範な肺胞上皮細胞の損傷と損傷修復能力の低下で血液空気関門の透過性が明らかに向上して肺水腫が起こり、ALIの発生を促進する。
早産児慢性肺疾患(chronic lung disease、CLD)は、早産児における高濃度酸素の長期吸入又は人工呼吸器治療又は感染後の最も一般的で深刻な合併症である。早産児CLDは、気管支肺異形成症(bronchopulmonary dysplasia、BPD)とも呼ばれ、早産児ヒアリン膜疾患の治療の合併症として1967年にNorthwayによって最初に説明された。酸素療法は、心肺疾患を有する早産児に最も用いられる治療手段の1つである。これは患児の低酸素血症を改善し、患児の命を救うことができるが、高濃度酸素の長期吸入が、異なる程度の肺損傷を引き起こす可能性があり、深刻な場合にCLDにも発展している。人工呼吸器の広範な開発、早産児管理技術が日ごとに高度化し肺サーファクタントが一般的に用いられることにより、早産児、特に極低出生体重児(extremely low birth weight、ELBW、出生体重が1000g未満の産児)の生存率が明らかな改善されているが、早産児慢性肺疾患の発生率が高まり、海外では30~40%に達しており、国内でも上昇する傾向にある。効果的な監視及び予防と治療手段が欠如しているため、CLD患児の10~15%が深刻な肺機能障害により呼吸不全で死亡し、生存している者でも酸素又は人工呼吸器での治療に長期的に依存している。初期の肺胞上皮細胞(alveolar epithelial cell、AEC)損傷と晩期の肺線維症は、CLDの主な病理学的特徴である。現在、AEC損傷の程度を軽減させ又は肺組織におけるコラーゲンの沈着を減少することによってCLDの効果的な防止の目的を達成するために多くの試みが行われている。
慢性閉塞性肺疾患(chronic obstructive pulmonary disease、COPD)は、世界中の呼吸器疾患の中でも発生率と死亡率が上位に来る疾患であり、その発生がさらに拡大している。喫煙はCOPDの主な原因であることが知られており、タバコ煙(cigarette smoke、CS)は酸化剤成分を豊富に含む複雑な混合物であり、肺を構成する様々な細胞種のうち、肺胞上皮細胞がCS中の酸化剤の損傷を受ける主な部位である。COPD患者の肺胞上皮細胞のアポトーシス指数が肺血管内皮細胞のアポトーシス指数より明らかに高く、しかも両者が正の相関にあることが研究で示されている。内皮細胞の損傷とアポトーシスが最初に肺胞構造の完全性を破壊し、後には肺胞上皮細胞の損傷又はアポトーシスが出現する可能性がある。内皮細胞が損傷又はアポトーシスした後、直接的な細胞間相互作用と間接的な特定のメカニズムによって、他の細胞、特に肺胞上皮細胞のアポトーシスを開始及び誘発させることによって、COPDと肺気腫が発生する可能性がある。さらに、COPD患者は血管内皮機能障害を有しており、疾患の重症度とも相関性がある。血管内皮細胞の機能異常はCOPDの発生、進行とも密接な関係がある。炎症、血管損傷、血行動態の変化、低酸素、酸化ストレス、アポトーシスなどが血管内皮細胞機能障害を促進できる。COPD早期でも、あるいは肺機能が正常な健康な喫煙者においても、血管内皮細胞機能が既に変化していることが研究で示されている。血管内皮細胞機能の異常な変化は、COPDの発生、進行及び関連する心血管イベントの高発生率に重要な役割を果たすという可能性がある。
ニューモシスチス肺炎は、ニューモシスチス・イロベチイによって引き起こされる間質性肺炎(ニューモシスチス肺炎、PCP)であり、主な臨床症状は発熱、空咳、進行性呼吸困難などである。酸素吸入だけでは緩和できず、対症療法で速やかに回復し、免疫機能が低下する者に多発し、AIDS患者で発生率が70~80%に達している。ニューモシスチス・イロベチイの病原性が弱く、健常者の場合は不顕性感染が多く、宿主の免疫機能が低下する時にだけ、潜伏しているニューモシスチス・イロベチイが大量に増殖し、PCPが発生する。下気道に吸入されるニューモシスチス・イロベチイは直接I型肺胞上皮細胞の損傷とネクローシスを引き起こし、肺胞毛細血管の透過性亢進が起こり、肺胞がニューモシスチス・イロベチイと泡状好酸性物質に満たされることで、肺サーファクタントが減少し、ガス交換に影響を与え、低酸素血症(PCP患者の最も重要な特徴)が発生する。II型肺胞上皮細胞の代償性肥大、肺胞中隔の上皮細胞過形成、肥厚、部分的脱落が起こると同時に、間質内にマクロファージと形質細胞が過形成され、間質が線維化することで、深刻な肺機能障害が起こる。
肺塞栓症は、脱落した血栓又は他の物質が肺動脈又はその分岐を塞ぐ病理学的過程であり、発生率と死亡率が高い一般的な疾患である。血管内皮細胞の損傷は、肺塞栓症を引き起こす一番の要因である。内皮細胞は微粒子、組織因子などの生体分子によって血小板と好中球に働きかけることで、血栓形成に関与する。血管内皮細胞の損傷と修復は肺塞栓症において重要な役割を有するため、肺塞栓症の発生、進行のメカニズムに関する研究が、内皮細胞の損傷と修復に関する分子的、細胞学的、病理学的検討に重きが置かれるようになる。
血管内皮細胞の損傷は、多くの心血管疾患の発生と進行に関連しており、血管内皮損傷によって誘発される血栓形成は多くの心血管疾患の病理学的根拠である。最初には亜急性心内膜炎患者の末梢血から脱落した血管内皮細胞が発見され、研究が深まるにつれて、多くの心血管疾患では程度の差があるがいずれも循環内皮細胞の変化が発見された。急性心筋梗塞(AMI)と狭心症患者では、循環内皮細胞の明らかな増加が数日間持続する。冠状動脈性心疾患の急性発作と悪化の原因は内皮細胞が損傷した後に機能が変化することであり、血管内皮細胞の損傷の程度は疾患の重症度に一致している。国内の研究で、虚血性心疾患でAMIが46時間発生しているところ、健常者より循環内皮細胞が明らかに増加することが24時間も持続していることを発見した。再灌流時の損傷も循環内皮細胞の増加を引き起こす。冠状動脈性心疾患が心不全(CHF)などの他の危険因子を合併したとき、循環内皮細胞が明らかに増加する。CHFが重いほど、血管内皮損傷が明らかであり、血管内皮損傷が疾患を悪化させることも研究で判明した。さらに、内皮細胞損傷によって引き起こされる機能障害が高血圧に密接に関係しており、血管内皮機能障害は高血圧の発生と進行で重要な役割を果たし、また、高血圧自体が血管内皮機能障害を悪化させることで、悪循環を生み出すということも多くの研究で明らかになっている。高血圧ラットの内皮細胞は損傷した臓器の血液で明らかに増加し、高血圧患者では循環内皮細胞が健常者より明らかなより高く、増加している部分が冠状動脈性心疾患の患者を上回っている。心血管インターベンションの場合、主に血管内皮を机械的に刺激することで、損傷をもたらす。術式によって血管内皮への損傷の程度が異なる。血管内皮細胞が損傷する時に内皮機能障害が起こり、血行動態が変化し、これによって多くの重合誘発物質と血管作動性物質を損傷血管の局所に蓄積させて、血小板が活性化することが、心血管インターベンション術による血栓形成の主な病態生理学的メカニズムである。
慢性高血糖か急性高血糖を問わず、いずれもヒトと動物の内皮機能に損傷をきたすことが研究に裏付けられた。血管内皮機能障害は糖尿病性血管合併症(特に網膜症、腎疾患、創傷治癒障害)の発生の重要な原因であり、血管内皮機能の変化が糖尿病の他の発生機序の重要な要因でもあり、その表現は主にインスリン抵抗性、脂肪毒性、インスリン分泌障害である。現在、血管内皮機能損傷は糖尿病血管病変の発生の開始要因と主な病態生理学的基礎であると考えられ、慢性血管合併症が現れてもいない糖尿病患者には既に内皮機能の明らかな低下が出現している。
脳小血管とは、脳内の小さな穿通動脈、小動脈(直径40~200μm)、毛細血管及び小静脈を指し、それらが脳組織への血液供給の基本単位を構成し、脳機能の維持に重要な役割を果たす。脳内の大血管と小血管が共に脳血管樹(vascular tree)を構成し、それが構造的に連続しているため、共に血行力学的な影響を受け、共に危険因子にさらされる。したがって、理論的には、脳内の大血管と小血管の病変は重症度において相関性があると考えられる。しかし、臨床では両者が一致しないものがよく見られ、例えば、深刻な脳小血管病変はあるが脳大動脈狭窄を合併しない患者が多く見られ、逆の場合も同様である。
ホスホフルクトキナーゼ-2/フルクトース-2,6-ビスホスファターゼ3(phosphofructokinase-2/fructose-2,6-bisphosphatase 3、PFKFB3)の発現上昇とその下流産物である乳酸の蓄積が、急性肺損傷、肺高血圧症などの様々な肺疾患で病理学的損傷という役割を果たすことが研究で明らかになっている。急性肺損傷、肺高血圧症などの疾患の発生と進行で病理学的損傷という重要な役割を果たす。肺損傷にとって重要な分子であるPFKFB3タンパク質レベルに対するYC-6の影響を分析したところ、YC-6がPFKFB3タンパク質の発現の上方調節と乳酸の蓄積を迅速に阻害するという予期せぬ結果が得られ、これはYC-6による肺保護に関する独特なメカニズムであるかもしれないということを示唆している。
SD P7-8新生児マウスから細胞を採取して、小脳を取り出し、さらにマイクロピンセットを使って髄膜と血管を除去した。分離させた小脳組織を解剖液の入った別のシャーレに移した。メイヨー剪刀を使って最大限に組織をせん断した。次のとおりに消化を行った。スポイトを使ってせん断した組織を7mLの0.25%トリプシン消化液に入れ、37℃で15分間消化した。細胞スーパークリーンベンチの作業台を整えて器具を洗浄した。5分間ごとに数回ひっくり返して組織と消化液をより充分に接触させた。次のとおりに消化を停止させた。消化が終了すると、細胞の破砕によりDNAが放出することで組織がくっついて液体に懸濁しているのが見えた。デオキシリボヌクレアーゼ含有10%FBS DMEM培地を3mL加えて消化を停止させ、数回ひっくり返すとDNAの加水分解で残りの組織が分散していることが観察された。1000rpmで5分間遠心分離した。慎重に上清を取り除いた。次のとおりに単一細胞懸濁液を回収した。スポイトを使ってデオキシリボヌクレアーゼ含有10%FBS DMEM培地を7mL吸い上げ、組織ペレットを軽くピペッティングした。急速遠心分離にかけて回転数が1500rpmになったら停止させ、単一細胞懸濁液を新しい15mL遠心管に回収した。次のとおり細胞を播種した。1000rpmで5分間遠心分離して、細胞ペレットを回収し、10%FBS含有DMEMで細胞を再懸濁させた。ハンディ型セルカウンターでカウントし、播種密度は4.0~5.0×105個/mLであった。35mmシャーレへの播種量は2mLであり、48ウェルプレートへの播種量は300μLであった。次のとおりに細胞を播種及び培養した。播種24時間後、膠細胞の成長を阻害するためにシタラビン(最終濃度10μM)を補足した。7日目に栄養を維持するためにグルコース(5mM)を補足し、8日目に使用した。グルタミン酸誘発性初代小脳顆粒ニューロン損傷モデル及び薬物で処理した。
6ウェルプレートに播種した初代小脳顆粒ニューロンの培地を2mLのクレブス緩衝液(kreb’s buffer)に交換し、これを正常対照群とした。最終濃度が200μMのグルタミン酸を加えて所定の時間即ち5分間及び15分間処理し、これをモデル群とした。前もって10μM YC-6又はNMDA受容体遮断薬MK-801を20分間プレインキュベートし、次に前記濃度のグルタミン酸を加え所定の時間で処理して、薬物処理群とした。薬物処理群と等量の溶媒HP-β-CDを加えて溶媒対照群とし、そのプレインキュベート時間は薬物処理群と同じであった。
体積分率が12%のSDS-ポリアクリルアミドゲルを調製し、1ウェル当たりロードするタンパク質の総量が20μgでサンプルを注入し、100V定電圧下で電気泳動により分離させた。後に湿式転写法によりPVDF膜に移した。5%脱脂粉乳で室温下1時間ブロックした。希釈後の一次抗体(抗体希釈液は3%BSA、抗体希釈比は1:1000)を加え、4℃で一晩インキュベートした。TBSTで3回洗浄し、1回当たり5分とし、対応する二次抗体(抗体希釈液は3%BSA、抗体希釈比は1:5000)を加えて、室温下で1時間インキュベートして、TBSTで3回洗浄し、1回当たり5分とした。化学発光法により発色させ、露光して撮影した。
図1に示されるとおり、正常対照群と比べ、グルタミン酸の刺激が細胞内のPFKFB3発現の急速な上方調節を引き起こし、YC-6処理はそのような急速な上昇を有意に阻害した。
乳酸は嫌気性解糖産物であり、PFKFB3によって調節される代謝経路の下流であり、肺上皮細胞に直接的な損傷を与える。Gong Yらの研究では、インビトロでLPSがヒト肺胞上皮A549細胞のアポトーシス、炎症性サイトカインの生成、解糖フラックスの強化と活性酸素種(ROS)の増加を引き起こし、これらの変化がPFKFB3阻害剤3POによって逆転されることが判明した。さらに重要なのは、乳酸は肺損傷をきたす重要な代謝産物でもあり、乳酸でA549細胞を処理するとアポトーシスとROSの増加をきたす。これらの結果は、嫌気性解糖が敗血症関連ALIで肺上皮細胞のアポトーシス損傷の重要な要因であるかもしれないということを示している。YC-6がPFKFB3の発現を阻害することを踏まえ、YC-6がその下流にあり肺上皮細胞に損傷効果を有する乳酸レベルに与える影響を検討した。結果は、YC-6は解糖のための重要な酵素PFKFB3を阻害すると同時に、乳酸の蓄積を有意に阻害することを示している。乳酸の蓄積への軽減はYC-6が肺上皮細胞の損傷を軽減させるメカニズムの1つであるかもしれない。
次のとおりに前処理を行った。細胞内乳酸含有量の測定で使用する細胞量は(1~2)×106であった。細胞前処理の実験ステップは具体的には次のことを含む。予冷したクレブス緩衝液(Kreb’s buffer)で細胞を3回洗浄した。220μLの細胞溶解液を加えて細胞を充分に溶解させた。次に、溶解液を1.5mL EP管に回収した。4℃×16000gの条件で5分間遠心分離し、160μLの上清を新しいEP管に回収し、残りの上清はBCAタンパク質定量に使った。56μLの4mM HClO4を加えて、ひっくり返して充分かつ均一に混合させ、氷の上で5分間反応させてサンプル自体に存在しているLDHを除去することで、内因性干渉を防止し、当該ステップでは管の底部に白いタンパク質の沈殿が観察されるはずである。4℃×16000gで5分間遠心分離した。160μLの上清を回収して、新しいEP管に入れた。68μLの2mM KOHを加えてひっくり返して充分かつ均一に混合させ、氷の上で5分間反応させた。4℃×16000gの条件で15分間遠心分離し、160μLの上清を新しいEP管に回収し、上清に白いフロックがあれば、再度15分間遠心分離した。希釈倍率600~800で上清を細胞溶解液で希釈して、当該希釈液を被検サンプル液として保持した。
初代小脳顆粒ニューロン細胞を200μM グルタミン酸に入れて15分間刺激した後に細胞溶解液を回収して解糖産物である乳酸に対するYC-6処理の影響を研究し(図2)、グルタミン酸で15分間刺激した後にニューロン細胞内乳酸含有量が有意に増加し、YC-6処理はそのような増加を阻害した。上記の実験結果が、YC-6は解糖のための重要な酵素PFKFB3を阻害すると同時に、乳酸の蓄積を有意に阻害することを示している。
肺血管内皮細胞は血管系内膜の単層を形成させており、その生理学的位置が細菌性エンドトキシン、LPS、炎症性因子(例えば、TNF-α)、有毒化学物質、酸化ストレスなどの直接的な刺激にさらされているため、内皮細胞の損傷とアポトーシスをきたす。肺血管内皮細胞が損傷されると毛細血管の透過性亢進を引き起こして肺水分量を増加させることで、肺水腫、呼吸困難が発生する。同時に肺血管内皮細胞が様々な炎症性メディエーター、サイトカインを分泌及び放出することによって、炎症誘発性メディエーターと抗炎症性メディエーター、凝固系と抗凝固系のバランスが崩れ、肺微小循環障害と肺高血圧症が引き起こされると、間質性肺浮腫、肺出血、進行性呼吸困難が促進され、患者には進行性低酸素血症と呼吸困難が現れる可能性がある。YC-6が血管内皮細胞の損傷に保護効果があるかどうかを評価するために、酸素-グルコース欠乏/再酸素化(oxygen-glucose deprivation and restoration、OGD-R)損傷モデルを用いて、細胞からのLDH放出の検出によって予防的及び治療的投与後の細胞損傷状況を評価した。結果は、YC-6が用量依存的に血管内皮細胞の損傷を有意に軽減し、様々な病理学的要因によって引き起こされる血管内皮細胞関連の肺損傷の過程でYC-6は効果的な保護効果を発揮できることを示唆している。
10%ウシ胎児血清含有改良型DMEM培地でHUVEC細胞を培養し、細胞が約80%コンフルエントに成長した時に、0.25%トリプシンで細胞を消化し、次に10%ウシ胎児血清含有改良型DMEM培地で均一にピペッティングし、細胞濃度を1×105個/mLに調整して、400μL/ウェルで24ウェルプレートに播種し、細胞が約70%コンフルエントに成長した時に実験を行った。10%ウシ胎児血清含有高グルコースDMEM培地でRAOEC細胞を培養し、播種条件はHUVECと一致した。
低酸素ワークステーションの酸素濃度を1%(1%O2、5%CO2、94%N2)に、温度を37℃に、湿度を85%に設定した。グルコース不含DMEM培地を低酸素ワークステーションに入れて予め3時間低酸素にさらした。培養プレートから培地を吸い取って、予熱したグルコース不含DMEM培地で2回洗浄し、次に1ウェル当たり100μLのグルコース不含DMEM培地を加えて、培養プレートを低酸素ワークステーションに置き、さらに1ウェル当たり300μLの予め低酸素にさらしたグルコース不含DMEM培地を加え、次に、培養プレートを低酸素ワークステーションに置いて引き続き4時間低酸素にさらした。次に再酸素化処理を行い、培養プレートを取り出し、グルコース不含DMEM培地を400μLの10%ウシ胎児血清含有通常培地に交換し、次に37℃×5%CO2セルインキュベータに置いて引き続き24時間培養した。正常群の細胞は培地を400μLの新しい10%ウシ胎児血清含有通常培地に交換しただけであった。
次のとおりに予防的投与を行った。細胞に酸素-グルコース欠乏処理を行う前に、溶媒又は薬物(最終濃度1μM、3μM、10μM)を1時間プレコートし、次に酸素-グルコース欠乏処理の時に、グルコース不含DMEM培地に対応する溶媒又は薬物を加え、再酸素化処理の時に、通常培地に対応する溶媒又は薬物を加え、実験が終了するまで継続した。モデル対照群には何ら薬物処理も行わず、各処理群を3ウェルで繰り返した。
実験終了時に、ウェルごとに50μLの培地を96ウェルプレートに移し、次にLDH検出キットの取扱説明に従って細胞毒性を検出し、次のとおりに結果を計算した。
パーセント細胞毒性(Percent cytotoxicity)=100×([実験的LDH放出(Experimental LDH Release)](OD490)/[最大LDH放出(Maximum LDH Release)](OD490))
図3の結果から分かるように、OGD-R処理がヒト臍帯静脈内皮細胞(HUVEC)及びラット血管内皮細胞(RAOEC)のLDH放出増加を引き起こすのは、OGD-R損傷処理がHUVEC細胞及びRAOEC細胞の損傷と死亡をきたすことを示している。損傷処理前の1時間の予防的投与であれ再酸素化処理時の治療的投与であれ、YC-6は用量依存的にOGD-Rによって引き起こされるLDHの放出増加を有意に軽減し、細胞の損傷を軽減させた。YC-6が用量依存的に血管内皮細胞の損傷を有意に軽減するのは、様々な病理学的要因によって引き起こされる血管内皮細胞関連の肺損傷の過程でYC-6は効果的な保護効果を発揮できることを示唆している。
肺胞上皮細胞及び毛細血管内皮細胞は様々な炎症、毒性物質吸入、ウイルス感染及び敗血症などの有害な病原性因子が直接攻撃をかける目標であり、損傷後の透過性亢進、アポトーシスにより、びまん性肺間質及び肺胞水腫を引き起こし、進行性低酸素血症と呼吸困難をきたす。新型コロナウイルスによる肺炎が発生する過程では、肺上皮細胞がウイルスによる攻撃の主な目標である。新型コロナウイルス(SARS-CoV-2、以下CoVと略称する)は長さが約27~32kbの一本鎖プラス鎖RNAウイルスであり、ウイルスゲノムは主にレプリカーゼコード領域と構造タンパク質コード領域の2つの部分によって構成される。NIHの研究チームの報告などでは、2019-nCoVがヒト体細胞に入る時の受容体はACE2であると判定した。CoVがアンジオテンシン変換酵素2受容体ACE2を豊かに発現するヒト体細胞、特に気道上皮細胞及び肺胞細胞を特異的に認識及び侵入するため、下気道に感染しそして拡散して、肺炎を誘発しやすい。しかし臨床ではウイルスが陰性になった後も、肺炎が依然として存在し、あるいは悪化することが見られ、抗ウイルス治療だけでは数多くの重症及び重篤な患者の命を救うことができない。肺上皮細胞(HPAEpiC)はI型及びIIの2種の肺胞上皮細胞を含み、YC-6が直接肺上皮細胞(HPAEpiC)に保護効果を有するかどうかを評価するために、本例ではリポ多糖LPSと低酸素損傷モデルを用いて、細胞のLDH放出の検出により肺上皮細胞に対するYC-6の保護効果を評価し、新型コロナウイルスを含め様々な要因によって引き起こされるARDSに対するYC-6での治療について実験的証拠を提供する。実験結果が、YC-6は用量依存的に低酸素とLPSによって引き起こされる肺胞上皮細胞の損傷を有意に軽減させることを示している。
肺胞上皮細胞培地でHPAEpiC細胞を培養し、細胞が約80%コンフルエントに成長した時に、0.25%トリプシンで細胞を消化し、次に肺胞上皮細胞培地で均一にピペッティングして、細胞濃度を2×105個/mLに調整して、400μL/ウェルで24ウェルプレートに播種し、細胞が約70%コンフルエントに成長した時に実験を行った。
低酸素ワークステーションの酸素濃度を1%(1%O2、5%CO2、94%N2)に、温度を37℃に、湿度を85%に設定した。低酸素ワークステーションの状態が安定した後、1mg/mLのLPSを直接細胞に加えて、LPSの最終濃度を20μg/mLとし、次に細胞を低酸素ワークステーションに入れて24時間培養した。
細胞のモデリングを行う前に、薬物群は最初に溶媒(20%ヒドロキシプロピルシクロデキストリン溶液)又は薬物(YC-6の最終濃度は1μM、5μM、10μM)を1時間プレインキュベートし、次にLPSを加えて低酸素ワークステーションに置いてモデリングし、実験が終了するまで継続した。モデル対照群は何ら薬物処理も行わず、正常群はセルインキュベータに置いて通常培養を行った。10μM デキサメタゾンを薬物対照とした。各処理群を3ウェルで繰り返した。
図4の実験結果から分かるように、低酸素とLPS刺激はヒト肺胞上皮細胞のLDHの放出増加を引き起こすことが、低酸素とLPS処理はヒト肺胞上皮細胞の損傷を引き起こすことを示しており、YC-6は用量依存的に低酸素とLPS刺激によって引き起こされる肺胞上皮細胞の損傷を軽減できる。10μM デキサメタゾンもそのような損傷を有意に軽減し、10μM YC-6の保護効果がデキサメタゾンより有意に優れている。上記の結果が、YC-6は用量依存的に低酸素とLPS刺激によって引き起こされる肺胞上皮細胞の損傷を有意に軽減できることを示している。
動物の群分けと投与:
次のとおりに動物の群分けを行った。検疫に合格し体重が均一であった60匹のラットを選択して実験に組み入れ、1群当たり10匹で体重によってランダムに6群に分け、動物の群分けと各群の薬物処理の用量は次のとおりであった。
ラットの体重を測定して、イソフルラン誘導でラットを麻酔した後、仰臥位で固定し、頚部の皮膚を除毛して、75%エタノールで滅菌し、真中から頚部の皮膚を切開して、皮下組織を鈍的に分離し、上部の気管を露出させた。注射器を使ってそれぞれ気管から8mg/mLのLPS溶液を注射し、0.2mL/匹とし、各ラットの体重が250mgで計算して、用量は6.4mg/kgであった。注射後に直ちにラットを直立させ、振とう及び回転させて、LPS溶液を肺に均一に分布させた。皮膚を縫合して、ヨードフォアで滅菌した。
LPS注射で24時間モデリングした後、6mL/kg体重の量で20%カルバミン酸エチル溶液を腹腔内注射して動物を麻酔し、腹部大動脈からの瀉血で死亡させた後、胸腔を露出させて、肺組織を取り出した。左肺を10%パラホルムアルデヒド溶液に入れて48時間固定した後、左肺を冠状面に横切して同じ厚さの上半分と下半分を得て、さらに左肺の下半分を冠状面に横切して同じ厚さの2つの部分を得て、次に左肺の上半分の矢状面及び2つの左肺の下半分の冠状面をパラフィンブロックで包埋し、切片してヘマトキシリン-エオシン(HE)染色を行った。
次のとおりに組織脱水とパラフィン包埋を行った。組織を固定液から取り出し、順に50%エタノール(30分)-70%エタノール(一晩)-80%エタノール(30分)-90%エタノール(30分)-95%エタノール(30分)-無水エタノール(2回、1回当たり30分)-キシレン(2回、1回当たり5~10分、サンプルが完全に透明になるまでとした)-62℃パラフィン(3回、1回当たり1時間)に浸し、次に組織包埋を行った。次のとおりに組織パラフィン切片を取り扱った。厚さが3μmの切片を専用の乾燥器で水分を乾かしてから37℃オーブンで焼いて一晩乾燥させ、次にHE染色に用いた。次のとおりにHE染色を行った。室温で保存していたパラフィン切片を取り出し、65℃のオーブンに置いて30分間焼き、次に直ちに切片をキシレンに浸して3回脱パラフィンし、それぞれ5分、2分、2分とした。次のとおりに再水和を行った。3回目にキシレンに浸した後、切片を順に100%エタノール-100%エタノール-95%エタノール-90%エタノール-80%エタノール-70%エタノール-50%エタノール-蒸留水に浸して再水和させ、1回当たり1分とした。切片を取り出して少し乾かし、次に、切片をウェットボックスに置いて、ヘマトキシリン染色液を組織に滴加し、染色液が組織を完全に覆うことを保証し、室温下で5分間インキュベートした。蒸留水で切片を軽く洗い流して、余分なヘマトキシリンを洗い落とし、次に切片をウェットボックスに戻して、エオシン染色液を組織に滴加し、室温下で2分間インキュベートした。蒸留水で切片を軽く洗い流した。切片を順に90%エタノール(1分)-95%エタノール(1分)-100%エタノール(1分)-100%エタノール(1分)-キシレン(5分)-キシレン(5分)に浸して脱水して透明化させ、次に中性樹脂(適量のキシレンで希釈、約50%キシレン)で封止した。
次のとおりに肺組織の病理形態学的観察を行った。Nikon Eclipse Ti-U倒立蛍光光学顕微鏡下において肺組織の病理学的変化を観察した。炎症細胞浸潤、肺胞出血、肺胞壁の肥厚、肺胞拡張及び気管支上皮脱落の変化の等級に基づいて分析した。肺損傷の評点はSmith氏による評点システムで実施し、実験群分けと投与情報を知らない2名の実験者が、炎症細胞浸潤、肺胞出血、肺胞壁の肥厚、肺胞拡張及び気管支上皮脱落の6つの指標についてそれぞれ肺損傷の重症度を評点した。0点は、正常である。1点は、軽度の病変で、病変範囲が全視野領域の25%より小さい。2点は、中等度の病変で、病変範囲が全視野領域の25~50%である。3点は、重度の病変で、病変範囲が全視野領域の50~75%である。4点は、非常に重度の病変で、病変範囲が全視野領域の75%より大きい。肺損傷の病理学的トータルスコアは前記各項目のスコアの合計であった。
図5の病理顕微鏡下の観察結果に示されるように、正常対照群(図5A)はラットの肺組織の構造が明確であり、肺胞構造が多角形又は円形の薄壁空胞で、肺胞腔がきれいで、境界がはっきりしており、肺胞壁の肥厚はなく、肺胞の間質に炎症性浸潤がなかった。気管支壁は構造が明確であり、上皮細胞の脱落が見られず、血管が正常であった。LPSモデル群(図5B)ではラットの肺組織に大量の炎症細胞浸潤が見られ(黄色い矢印)、肺胞腔と間質性肺が浮腫しており、深刻な線維性浸出(赤い矢印)、肺胞壁の肥厚、肺胞拡張と虚脱があった。気管支粘膜上皮脱落(緑の矢印)があった。肺胞うっ血があり、肺胞内に多くの赤血球(オレンジ色の矢印)が見られた。肺血管の周りの組織が緩んでおり、明らかな浸出(青い矢印)があったのは、LPSが肺血管透過性亢進を引き起こすことを示している。異なる用量のYC-6投与群(図5C~図5E)とLPSモデル群を比べると、炎症細胞浸潤が減少し、肺胞損傷が軽減され、血管バリアの透過性亢進が軽減された。病理学的結果が、YC-6はLPSによって引き起こされる急性肺損傷を有意に改善できることを示している。
非ヒト霊長類動物は系統発生、解剖学的構造などがヒトに近いため、種差による薬効評価のズレを軽減することができ、また非ヒト霊長類において得られた薬理学的用量、毒性学及び薬効の研究データは、その後の臨床試験により信頼性のある証拠を提供できる。我々は非ヒト霊長類動物であるカニクイザルと高原環境をシミュレートする減圧チャンバーで急性低圧低酸素によるカニクイザル肺損傷モデルを確立した。HE染色などの病態生化学的検査を用いて、YC-6は急性低圧低酸素によって引き起こされる肺損傷を軽減できるかどうかを評価した。
24匹の健常な雄のカニクイザル(Macaca fascicularis)であり、6から6.5歳で、体重は6.5~7.5kgであった。広東省高要市康達実験動物センターより購入した。17匹の雄のカニクイザルを次のとおりに3群に分けた。
動物飼育室で飼育したカニクイザルから1回当たりランダムに3匹選択し、各10mL採血した後に10mLのグルコース生理食塩水を静脈内ボーラスで注入し、マークを付けた。次に、動物を低圧チャンバーに入れて実験環境に順応するように1日飼育した。急性低圧低酸素群は3メートル/秒の速度で海抜が3000メートルに上昇することをシミュレートした。低圧チャンバー内で動物が高度3000メートルに30分間滞在していることをシミュレートした後、各実験サルから10mL採血し、次に急性低圧低酸素群は10mLのグルコース生理食塩水を静脈内ボーラス注入した。3メートル/秒の速度で海抜が4500メートルに上昇することをシミュレートした。低圧チャンバー内で動物が高度4500メートルに30分間滞在していることをシミュレートした後、各実験サルから10mL採血して、急性低圧低酸素群は10mLのグルコース生理食塩水を静脈内ボーラス注入した。3メートル/秒の速度で海抜が6000メートルに上昇することをシミュレートした。低圧チャンバー内で動物が高度6000メートルに30分間滞在していることをシミュレートした後に、各実験サルから10mL採血して10mLのグルコース生理食塩水を静脈内ボーラス注入した。2メートル/秒の速度で海抜が7500メートルに上昇することをシミュレートした。低圧チャンバー内で動物が高度7500メートルに24時間滞在していることをシミュレートした後、3メートル/秒の速度で海抜が6000メートルに下降し、各実験サルから10mL採血して10mLのグルコース生理食塩水を静脈内ボーラス注入した。2メートル/秒の速度で海抜が7500メートルに上昇することをシミュレートした。7500メートルで48時間滞在した後、3メートル/秒の速度で海抜が6000メートルに下降し、実験動物を麻酔し(ケタミン塩酸塩注射液0.06mL/kg、キシラジン塩酸塩注射液0.02mL/kg)、頸動脈からの瀉血で動物を死亡させ、解剖し、サンプルを採取して、固定した。常圧正常酸素対照群ではカニクイザルを平原(海抜352メートル)で麻酔した(ケタミン塩酸塩注射液0.06mL/kg、キシラジン塩酸塩注射液0.02mL/kg)後、頸動脈からの瀉血で動物を死亡させ、解剖し、サンプルを採取して、固定した。
薬物処理群では動物に上昇をシミュレートする前に、YC-6注射液を10mg/kgの用量でグルコース生理食塩水によって10mLに希釈し、YC-6処理群は一度に静脈内ボーラス注入した。急性低圧低酸素群は10mLのグルコース生理食塩水だけを静脈内ボーラス注入した。薬物処理群では低圧チャンバー内で動物が高度3000メートルに30分間滞在していることをシミュレートした後、YC-6注射液を10mg/kgの用量でグルコース生理食塩水によって10mLに希釈し、YC-6処理群は静脈内ボーラス注入を1回行った。急性低圧低酸素群は10mLのグルコース生理食塩水だけを静脈内ボーラス注入した。薬物処理群では低圧チャンバー内で動物が高度4500メートルに30分間滞在していることをシミュレートした後、YC-6注射液を10mg/kgの用量でグルコース生理食塩水によって10mLに希釈し、YC-6処理群は静脈内ボーラス注入を1回行った。急性低圧低酸素群は10mLのグルコース生理食塩水だけを静脈内ボーラス注入した。薬物処理群では動物が低圧チャンバー内で高度6000メートルに30分間滞在していることをシミュレートした後、YC-6徐放製剤を30mg/kgの用量で5箇所の骨格筋に筋肉内注射した。急性低圧低酸素群は10mLのグルコース生理食塩水だけを静脈内ボーラス注入した。薬物処理群では低圧チャンバー内で動物が高度7500メートルに24時間滞在していることをシミュレートした後、YC-6注射液を10mg/kgの用量でグルコース生理食塩水によって10mLに希釈し、YC-6処理群は静脈内ボーラス注入を1回行い、且つYC-6徐放製剤を30mg/kgの用量で5箇所の骨格筋に筋肉内注射した。急性低圧低酸素群は10mLのグルコース生理食塩水だけを静脈内ボーラス注入した。7500メートルで48時間滞在した後、3メートル/秒の速度で海抜が6000メートルに下降し、実験動物を麻酔し(ケタミン塩酸塩注射液0.06mL/kg、キシラジン塩酸塩注射液0.02mL/kg)、頸動脈からの瀉血で動物を死亡させ、解剖し、サンプルを採取して、固定した。常圧正常酸素群ではカニクイザルを平原(海抜320メートル)で麻酔した(ケタミン塩酸塩注射液0.06mL/kg、キシラジン塩酸塩注射液0.02mL/kg)後、頸動脈からの瀉血で動物を死亡させ、解剖し、サンプルを採取して、固定した。
次のとおりに組織のパラフィン包埋・固定を行った。肺組織サンプルを採取した後、肺組織を整えて厚さが1cmを超えない組織塊を得て、10倍量のパラホルムアルデヒドに入れて固定し、固定時はコットンで浮かんでいた肺組織を液面以下に押えて組織を充分に固定させた。48時間後に固定液を1回交換して引き続き48時間固定し、その後、パラフィン包埋に用いることができる。組織を固定液から取り出し、順に50%エタノール(30分)-70%エタノール(一晩)-80%エタノール(30分)-90%エタノール(30分)-95%エタノール(30分)-無水エタノール(2回、1回当たり30分)-キシレン(2回、1回当たり5~10分、サンプルが完全に透明になるまでとした)-62℃パラフィン(3回、1回当たり1時間)に浸し、次に組織包埋を行った。次のとおりに組織パラフィン切片を取り扱った。厚さが3mmの切片を専用の乾燥器で水分を乾かしてから37℃オーブンで焼いて一晩乾燥させ、次にHE染色に用いた。次のとおりにヘマトキシリン-エオシン(HE)染色を行った。室温で保存していたパラフィン切片を取り出し、65℃のオーブンに置いて30分間焼き、次に直ちに切片をキシレンに浸して3回脱パラフィンし、それぞれ5分、2分、2分とした。次のとおりに再水和を行った。3回目にキシレンに浸した後、切片を順に100%エタノール-100%エタノール-95%エタノール-90%エタノール-80%エタノール-70%エタノール-50%エタノール-蒸留水に浸して再水和させ、1回当たり1分とした。切片を取り出して少し乾かし、次に、切片をウェットボックスに置いて、ヘマトキシリン染色液を組織に滴加し、染色液が組織を完全に覆うことを保証し、室温下で5分間インキュベートした。蒸留水で切片を軽く洗い流して、余分なヘマトキシリンを洗い落とし、次に切片をウェットボックスに戻して、エオシン染色液を組織に滴加し、室温下で2分間インキュベートした。蒸留水で切片を軽く洗い流し、余分なエオシン染色液を洗い落とし、次にキットに備え付けた発色増強液で2回軽く洗い流し、次に蒸留水で少し洗い流した。切片を順に90%エタノール(1分)-95%エタノール(1分)-100%エタノール(1分)-100%エタノール(1分)-キシレン(5分)-キシレン(5分)に浸して脱水して透明化させ、次に中性樹脂(適量のキシレンで希釈、約50%キシレン)で封止した。
図7のように確立したモデルでは、海抜が上昇するにつれて、カニクイザルには、例えば、呼吸窮迫、嘔吐、運動失調、意識混濁などの顕著な急性高山病の症状が現れていたため、非ヒト霊長類カニクイザル急性高山病モデルの複製が成功したことを示している。ALI/ARDS早期の病理学的特徴は肺胞壁毛細血管の拡張、肺胞中隔の拡大であり、肺胞腔内漿液、好中球及びマクロファージの浸出もあり、さらに肺のびまん性うっ血と浮腫、肺胞内ヒアリン膜の形成及び限局性肺虚脱に発展する。本研究ではHE染色を利用してYC-6は急性低圧低酸素によって引き起こされる肺損傷を軽減できるかどうかを観察した。
ヒト急性肺損傷の特徴的な病理学的変化の1つはびまん性肺胞損傷(diffuse alveolar damage、DAD)であることを述べた報告があり、びまん性肺胞損傷の1つの重要な特徴は肺胞の透過性変化により血液のタンパク質が肺胞に入り、タンパク質が沈着してヒアリン膜を形成したことである[8]。また、ヒアリン膜の形成はARDSの病理学的特徴の1つでもあり、新型コロナウイルスによる肺炎患者に対する病理検査で発見された[1]。ヒアリン膜は呼吸細気管支、肺胞管、肺胞の表面に形成された赤く染色された均一な膜状物であり、浸出した血漿タンパク質、セルロース及び崩壊した肺胞上皮細胞の破片によって構成される。ヒアリン膜の形成、肺胞の間質の線維性過形成が肺胞中隔を増厚させて、肺胞膜の透過性を低下させることで、血液ガス交換機能障害を引き起こす。図10に示されるとおり、急性低圧低酸素が肺胞中隔の線維性過形成(黒い矢印)を引き起こすと同時に、一部の肺胞腔内でタンパク質ヒアリン膜の形成を引き起こした(赤い矢印)のは、急性低圧低酸素がびまん性肺胞損傷を引き起こすことを示している。急性低圧低酸素はまた赤血球が漏出して肺胞腔に入る(青い矢印)ことを引き起こし、急性低圧低酸素が血液空気関門の破壊を引き起こしたことを示している。YC-6薬物群でそのような明らかな変化が観察されていないのは、YC-6が肺胞上皮細胞と血管内皮細胞に保護効果を有することを示唆している。上記の結果が、YC-6は肺胞上皮細胞及び血管内皮細胞を保護することによって、急性低圧低酸素によって引き起こされる血液空気関門の透過性亢進を軽減させ、正常な構造と機能を維持しているという可能性を示唆している。
ALI/ARDSは原発性疾患に関係している他に、炎症細胞浸潤と肺胞上皮損傷も重要な病理学的要因である。肺胞毛細血管壁のびまん性損傷と透過性亢進で、肺水腫とセルロース浸出が発生した。II型肺胞上皮細胞の損傷、肺サーファクタントの減少又は消失が、ヒアリン膜の形成と肺虚脱を引き起こす。前記変化はいずれも肺胞内の酸素拡散障害、換気血流比の不均衡を引き起こして、低酸素血症と呼吸困難をきたす。図11に示されるとおり、正常群と比べて、急性低圧低酸素が炎症細胞の肺組織浸潤を引き起こし、肺胞間質(黒い矢印)と肺胞腔(赤い矢印)では大量の炎症細胞が見られ、一部の肺胞腔では脱落した損傷肺上皮細胞(青い矢印)が見られたのに対し、YC-6処理群では明らかな炎症性浸潤と損傷した肺上皮細胞の脱落が観察されなかった。上記の結果が、YC-6は血管透過性を軽減させ、肺組織の炎症性浸潤及び肺上皮細胞の損傷を効果的に軽減できることを示している。
インビボ急性低圧低酸素誘発性カニクイザル肺損傷モデルを用いて、病理学的検出により、YC-6は肺血管のうっ血して腫れた状態と肺胞中隔の肥厚を有意に阻害し、肺の血液空気関門の損傷を軽減させることが発見されたため、YC-6は顕著な肺保護効果を有する。
核内受容体サブファミリー4グループAのメンバー3(Nuclear Receptor Subfamily 4 Group A Member 3、NR4A3)は、ニューロン由来オーファン受容体1(Neuron-derived Orphan Receptor-1、NOR1)とも呼ばれる。NR4A3は転写因子として、代謝、炎症、細胞増殖、アポトーシス、分化などの生理学的及び病理学的過程の調節に関与している。NR4A3のノックダウンにより血管内皮細胞の毛細血管変換能力を有意に阻害するのは、NR4A3が血管内皮細胞で重要な生理機能を有することを示している。これまでの研究では、NR4A3の上方調節が細胞の異なる病理学的損傷下での生存を促進できることが明らかになっている。例えば、血管内皮細胞でNR4A3の発現を増加させると細胞性アポトーシス抑制タンパク質2(cellular inhibitor of apoptosis 2、cIAP2)の上方調節によりアポトーシスを阻害して、低酸素下の血管内皮細胞の生存を延長させることができる。ニューロンでNR4A3の発現を増加させると酸化ストレスとグルタミン酸が誘発する興奮毒性によるニューロン損傷を減少することができる。
細胞株:
広州賽庫生物技術有限公司よりヒト臍帯静脈内皮細胞(HUVEC)を購入し、10%ウシ胎児血清含有改良型DMEM培地(CellCook、CM2007)で培養した。広州吉▲ニ▼欧生物科技有限公司よりラット血管内皮細胞(RAOEC)を購入し、10%ウシ胎児血清含有DMEM培地(Coring、10-013-CV)で培養した。
カニクイザルの肺組織パラフィン切片であって、3つの正常対照群(normobaric normoxia、NN)、5つの急性低圧低酸素処理群(hypobaric hypoxia、HH)、5つの急性低圧低酸素+YC-6処理群(HH+YC-6)を含む。
高グルコースDMEM培地(corning、10-03-CV)
改良型DMEM培地(CellCook、CM2007)
オーストラリア産ウシ胎児血清(Gibco、10099141)
0.25%トリプシン(Gibco、25200072)
グルコース不含DMEM培地(Gibco、A1443001)
LDH検出キット(Promega、G1780)
20%ヒドロキシプロピルシクロデキストリン溶液(Hydroxypropyl-β-Cyclodextrin、HP-β-CD)(広州市賽普特医薬科技股▲フン▼有限公司、アンプル瓶、ロット番号180502、仕様5mL:1g、濃度0.2g/mL)
YC-6注射液(広州市賽普特医薬科技股▲フン▼有限公司、アンプル瓶、ロット番号20010201、仕様5mL:50mg、濃度10mg/mL、20%ヒドロキシプロピルシクロデキストリン溶液に溶解)
シクロヘキシミド(cycloheximide、MCE、HY-12320)
クロロキン(chloroquine、MCE、HY-17589)
MG132(Selleck、S2619)
NAC(Selleck、S1623)
PBS(Gibco、C10010500BT)
プロテアーゼ阻害剤(Targetmol、C0001)
ホスファターゼ阻害剤(Targetmol、0004)
細胞溶解液(Thermofisher Scientific、78501)
BCAタンパク質定量キット(Thermofisher Scientific、23225)
5×タンパク質ロード緩衝液(Beyotime、P0015L)
SDS-PAGE分離ゲル緩衝液(Bio-rad、161-0798)
SDS-PAGE濃縮ゲル緩衝液(Bio-rad、161-0799)
10%SDS溶液(Bio-rad、161-0416)
30%Acr-ビスアクリルアミド(MIK、DB240)
過硫酸アンモニウム(MPbio、193858)
TEMED(Macklin、T6023-100mL)
PVDF膜(Roche、3010040001)
脱脂粉乳(Wako、190-12865)
TBS(Boster、AR0031)
抗NR4A3抗体(Anti-NR4A3 antibody、Santa cruz、sc-393902)
抗アクチン抗体(Anti-actin antibody、Arigo、arg62346)
抗CD31抗体(Anti-CD31 antibody、Abcam、ab28364)
ヤギ抗マウスIgG抗体(Goat anti-mouse IgG antibody)(HRP)二次抗体(Arigo、arg65350)
ロバ抗マウスIgG(H+L)高交差吸着二次抗体(Donkey anti-Mouse IgG(H+L)Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody)、Alexa Fluor 488蛍光二次抗体(Invitrogen、A-21202)
ロバ抗ウサギIgG(H+L)高交差吸着二次抗体(Donkey anti-Rabbit IgG(H+L)Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody)、Alexa Fluor 555蛍光二次抗体(Invitrogen、A-31572)
Hoechst33342(Sigma-Aldrich、14533、使用濃度5μg/mL)
水溶性封入剤(Boster、AR1018)
化学発光液(Merck Millipore、WBKLS0500)
10×EDTA抗原賦活化液(Boster、AR0023)
DAKO抗体希釈液(Dako、S-3022)
キシレン(広州化学試剤厂、33535)
無水エタノール(広州化学試剤厂、32061)
マイヤー(Mayer)・ヘマトキシリン染色液(MIK、BL003)
エオシンY(威佳科技、17372-87-1)
トリゾール(Trizol、Invitrogen、15596)
逆転写酵素(Thermofisher Scientific、EP0442)
dNTPs(Sigma-Aldrich、D7295)
SuperReal PreMix SYBR Green qPCRキット(Tiangen、FP205)
IP溶解液(Beyotime、P0013)
IP磁気ビーズ(Bimake、B23202)。
スーパークリーンベンチ、セルインキュベータ、低酸素ワークステーション、マイクロプレートリーダ、化学発光イメージャ、レーザー共焦点顕微鏡、低温高速遠心機、リアルタイム蛍光定量PCRシステム。
細胞培養、酸素-グルコース欠乏-再酸素化(oxygen-glucose deprivation and restoration、OGD-R)損傷モデル及び薬物処理とした。
10%ウシ胎児血清含有改良型DMEM培地でHUVEC細胞を培養し、細胞が約80%コンフルエントに成長した時に、0.25%トリプシンで細胞を消化し、次に10%ウシ胎児血清含有改良型DMEM培地で均一にピペッティングし、細胞濃度を1×105個/mLに調整して、400μL/ウェルで24ウェルプレートに播種し、細胞が約70%コンフルエントに成長した時に実験を行った。10%ウシ胎児血清含有高グルコースDMEM培地でRAOEC細胞を培養し、播種条件はHUVECと一致した。OGD-R損傷処理を行う時に、低酸素ワークステーションの酸素濃度を1%(1%O2、5%CO2、94%N2)に、温度を37℃に、湿度を85%に設定した。グルコース不含DMEM培地を低酸素ワークステーションに入れて予め3時間低酸素にさらした。培養プレートから培地を吸い取って、予熱したグルコース不含DMEM培地で2回洗浄し、次に1ウェル当たり100μLのグルコース不含DMEM培地を加えて、培養プレートを低酸素ワークステーションに置き、さらに1ウェル当たり300μLの予め低酸素にさらしたグルコース不含DMEM培地を加え、次に、培養プレートを低酸素ワークステーションに置いて引き続き4時間低酸素にさらした。次に再酸素化処理を行い、培養プレートを取り出し、グルコース不含DMEM培地を400μLの10%ウシ胎児血清含有通常培地に交換し、次に37℃×5%CO2セルインキュベータに置いて引き続き24時間又は所定の時間培養した。正常群の細胞は培地を400μLの新しい10%ウシ胎児血清含有通常培地に交換しただけであった。薬物処理群の細胞は、細胞に酸素-グルコース欠乏処理を行った後に、再酸素化処理と同時に、所定の最終濃度の薬物(YC-6の最終濃度は1μM、3μM又は10μM)を与え、溶媒対照では対応する20%ヒドロキシプロピルシクロデキストリンを与え、シクロヘキシミド(cycloheximide、CHX)の最終濃度は100μMであり、クロロキン(chloroquine、CQ)の最終濃度は10μM、30μM又は100μMであり、MG132の最終濃度は10nM、30nM又は100nMであり、実験が終了するまで継続した。モデル対照群は何ら薬物処理も行わなかった。
予冷したPBSで細胞を2回洗浄し、次にセルスクレーパーで細胞をこすり落として1.5mL遠心管に移し、4℃×1000gで5分間遠心分離して、上清を捨て、細胞ペレットに適量のプロテアーゼ阻害剤及びホスファターゼ阻害剤を含む細胞溶解液を加え、細胞を充分に再懸濁して氷の上に5分間静置して細胞を充分に溶解させた。次に4℃×12000gで10分間遠心分離して、上清を分離し、上清は抽出した細胞タンパク質であった。次にBCAタンパク質定量キットで各タンパク質サンプルを定量した。タンパク質を定量した後、タンパク質溶解液で各サンプルのタンパク質濃度を最低濃度のタンパク質サンプルに一致するように調整し、次にそれぞれ各タンパク質サンプルを5×タンパク質ロード緩衝液と4:1の比率で充分かつ均一に混合して、沸騰水浴に5分間浸し、次にボルテックスにて均一に混合して、短時間遠心分離してサンプルを管の底部に回収し、氷の上に置いて保持し又は-80℃で冷凍保存した。タンパク質サンプルに対し10%SDS-PAGE電気泳動を行い、次に分離したタンパク質をPVDF膜に移した。5%脱脂乳を用いて室温下でPVDF膜を2時間ブロックした。ブロックが終了した後、TBST(1‰ポリソルベート20を含むTBS)で膜を3回洗浄し、1回当たり5分とした。次に5%BSAで対応する抗体を希釈し、PVDF膜を対応する希釈抗体の中に入れ、4℃で一晩インキュベートした。インキュベートが終了した後、TBSTで膜を3回洗浄し、1回当たり5分とした。5%BSAで対応する二次抗体を希釈し、PVDF膜を対応する希釈二次抗体の中に入れ、室温下で1時間インキュベートした。インキュベートが終了した後、TBSTで膜を3回洗浄し、1回当たり5分とし、PVDF膜を化学発光液の中に入れて、化学発光イメージャで撮影した。
パラフィン切片を65℃オーブンに30分間置き、次に直ちに100%キシレンに移して脱パラフィンし、通常のプロセス(100%キシレン、5分-100%キシレン、2分-100%キシレン、2分-100%エタノール、1分-100%エタノール、1分-95%エタノール、1分-90%エタノール、1分-80%エタノール、1分-70%エタノール、1分-50%エタノール、1分-蒸留水、1分×3)で再水和させ、次にEDTA抗原賦活化液(マイクロ波加熱)で抗原を修復した。修復終了後、室温に自然冷却し、次にPBSで3回洗浄し、1回当たり5分とした。組織切片に残っていたPBSを振りほどいて、免疫組織化学染色ペンを使って組織の外側に円を描き、次にDAKO抗体希釈液で希釈した対応する一次抗体を組織に滴加して、組織を完全に覆わせた。組織切片を4℃のウェットボックスに置いて一晩インキュベートした。次にPBSで3回洗浄し、1回当たり5分とした。次に、組織に対応する希釈蛍光二次抗体を滴加し、ウェットボックスの中で暗所室温下1時間インキュベートした。次にPBSで3回洗浄し、1回当たり5分とした。Hoechst33342で核染色し、ウェットボックスの中で暗所室温下5分間インキュベートした。次にPBSで3回洗浄し、1回当たり5分とし、水溶性封入剤で封止し、次にレーザー共焦点顕微鏡で画像を撮影した。
上述したとおりにパラフィン切片を再水和させた。次に切片をヘマトキシリン染色液に浸し、室温で10分間染色した。流水で切片を軽く洗い流して、余分なヘマトキシリンを洗い落とし、次に1%塩酸エタノールで10秒間分化させた。流水で切片を5分間軽く洗い流し、次に1%水酸化アンモニウムで10秒間青色に戻し又は流水で30分間洗い流した。流水で切片を5分間軽く洗い流し、次に1%エオシンに浸して、室温で5分間染色した。流水で切片を軽く洗い流して、余分なエオシン染色液を洗い落とした。切片を順に70%エタノール(1分)-80%エタノール(1分)-90%エタノール(1分)-95%エタノール(1分)-100%エタノール(1分)-100%エタノール(1分)-キシレン(5分)-キシレン(5分)に浸して脱水して透明化させ、次に中性樹脂(適量のキシレンで希釈、約50%キシレン)で封止した。切片をドラフトチャンバーに入れて、封入剤が完全に乾いたら、Nikon Eclipse Ti-U倒立蛍光顕微鏡で明視野撮影を行い、対象ごとにランダムな視野で撮影し、後の病理学的分析に供した。
実験終了時、PBSで速やかに細胞を2回洗浄し、次に4%パラホルムアルデヒドを加え、室温で15分間静置した。次に0.2%TritonX-100含有PBSで室温下15分間インキュベートして細胞膜を破壊した。PBSで細胞を3回洗浄し、次に対応するDAKO抗体希釈液で希釈した一次抗体を加え、4℃で一晩インキュベートした。一次抗体を吸い取って、PBSで細胞を3回洗浄し、次に希釈蛍光二次抗体を加え、室温で暗所1時間インキュベートした。二次抗体を吸い取って、PBSで細胞を3回洗浄し、次にhoechst33342を加えて細胞核を染色し、室温で暗所5分間インキュベートした。hoechst33342を吸い取って、PBSで3回洗浄し、200μLのPBSを加え、次にレーザー共焦点顕微鏡で画像を撮影した。
実験終了時に、細胞培地を捨て、次に直接適量のトリゾール(Trizol)試薬を加え、氷の上で細胞を充分に溶解した後、トリゾール(Trizol)溶解物をリボヌクレアーゼを含まない1.5mL遠心管に移し、次にトリゾール(Trizol)の用量の20%のクロロホルムを加えて、15秒間激しく振とうし、氷の上に10分間静置して、4℃×12000gで15分間遠心分離し、次に上層の液体を新しい1.5mL遠心管に移し(中層と下層に触れない)、上層の液体の量の5分の4のイソプロパノールを加え、上下をひっくり返して複数回均一に混合して、氷の上に10分間静置した。次に4℃×12000gで15分間遠心分離して、慎重にイソプロパノールを捨て、管の底部の沈殿に1mLの予冷した75%エタノールを加え(DEPC水で無水エタノールを75%に希釈した)、上下をひっくり返して遠心管の底部の沈殿を浮き上がらせた。次に4℃×12000gで15分間遠心分離して、75%エタノールを捨て、新しい予冷した75%エタノールでもう1回洗浄した。4℃×12000gで15分間遠心分離して、75%エタノールを捨て、次に短時間遠心分離して、ピペットで残りのエタノールを吸い取った。遠心管をスーパークリーンベンチに置いて、管口が開いたまま5~10分間静置して、エタノールを完全に揮発させた。適量のDEPC水を加えてRNAを溶解し、Nanodrop超微量紫外可視分光光度計でOD値を測定して定量し、OD260/280が1.8~2.0の範囲にあればRNAの品質が高いことを示す。次の方法でRNAの逆転写とリアルタイム蛍光定量PCRを行った。
1)前変性:トータルRNA(Total RNA) 2μgとOligo dT 1μLにDEPC・H2Oを加え13μLに補足して均一に混合し、65℃下5分間で終了した後に直ちに氷の上に置いた。
2)逆転写:5×反応緩衝液(Reaction Buffer) 4μL、dNT mix 2μL、逆転写酵素(Reverse Transcriptase)1μLを均一に混合し、42℃で60分間、70℃で10分間、そして最後まで4℃とした。
3)リアルタイム(Real-time)PCR(ABI 7500 高速リアルタイムPCRシステム(fast real-time PCR system))
プライマー原液である100nmol/μL(プライマー凍結乾燥粉末+ナノモル(nmoles)×10μL RNase不含(RNase-free)ddH2O)、プライマー作業溶液2nmol/μL(4μL FP+4μL RP+192μL RNase不含(RNase-free)ddH2O)及びSYBR Green Mix/ROX=1.25mL/50μLを、SYBR Green/ROX 5μL、cDNA 1μL、プライマー(Primer) 2μL、DEPC・H2O 2μLと均一に混合して、PCR反応を行い、サイクルパラメータ保持段階(Holding stage)は、95℃、15分間であり、サイクル段階(Cycling stage)(40サイクル(cycles))は、95℃、10秒→56℃、20秒→72℃、30秒であり、融解曲線段階(Melt Curve stage)(連続(continuous))は、95℃、15秒→65℃、60秒→95℃、15秒→65℃、15秒であり、相対発現量の計算では比較(Comparative)ΔΔCt法(RQ=2-ΔΔCt)を用いてデータを解析した。プライマー配列は、β-アクチン(ヒト)(β-actin(human))フォワード(forward):5’-GATTCCTATGTGGGCGACGA-3’、リバース(reverse):5’-AGGTCTCAAACATGATCTGGGT-3’、NR4A3(ヒト(human))フォワード(forward):5’-AGCGGCGGCATCCTC-3’、リバース(reverse):5’-CTAAGGGTCCAGGCTCAGG-3’、β-アクチン(ラット)(β-actin(rat))フォワード(forward):5’-CGCGAGTACAACCTTCTTGC-3’、リバース(reverse):5’-CGTCATCCATGGCGAACTGG-3’、NR4A3(ラット)(NR4A3(rat))フォワード(forward):5’-GGAAACGTGGCGACATCCT-3’、リバース(reverse):5’-CAGTGGGCTTTGGGTTCTGTG-3’を含む。
予冷したPBSで細胞を2回洗浄し、次にセルスクレーパーで細胞をこすり落として1.5mL遠心管に移し、4℃×1000gで5分間遠心分離して、上清を捨て、細胞ペレットにプロテアーゼ阻害剤及びホスファターゼ阻害剤を含む適量のIP溶解液を加え、細胞を充分に再懸濁して氷の上に5分間静置して細胞を充分に溶解させた。次に4℃×12000gで10分間遠心分離して、上清を分離し、上清は抽出した細胞タンパク質であった。次にBCAタンパク質定量キットで各タンパク質サンプルを定量した。タンパク質を定量した後、IP溶解液で各サンプルのタンパク質濃度を1mg/mLに調整し、各サンプルを等量で採取して新しい遠心管に入れ(インプット(input)として各サンプルを少し残した)、抗体取扱説明書に従って対応する量の抗体を加え、4℃でゆっくりと上下をひっくり返して一晩均一に混合した。次に、IP溶解液でIP磁気ビーズを2回洗浄し、各サンプルにそれぞれ等量のIP磁気ビーズを加え、引き続き4℃でゆっくりと上下をひっくり返して2時間均一に混合した。次に磁気ビーズを分離して、IP溶解液でIP磁気ビーズを5回洗浄し、各回では4℃で上下をひっくり返して5分間均一に混合した。最終回で磁気ビーズを分離した後、各サンプルに等量の1×タンパク質ロード緩衝液(IP溶解液と5×タンパク質ロード緩衝液を4:1の比率で均一に混合したもの)を加え、短時間遠心分離した後、沸騰水浴に5分間浸し、次に短時間遠心分離してサンプルを管の底部に回収し、沸騰水浴を経たサンプルを新しい遠心管に移して、磁気ビーズを捨て、サンプルを氷の上に置いて保持し又は-80℃で冷凍保存することができる。タンパク質サンプルに対し10%SDS-PAGE電気泳動を行い、その後の手順はウエスタンブロットの部分と同じであった。
統計結果は平均±標準偏差で示す。一元配置分散分析(ONE-WAY ANOVA)を採用して統計分析を行い、テューキーの多重比較法を併用し、P<0.05を統計的に有意な差があると見なす。
酸素-グルコース欠乏-再酸素化/低酸素刺激下でYC-6は血管内皮細胞のNR4A3タンパク質の発現を向上させ、細胞損傷を軽減させる。
血管内皮細胞は低酸素刺激下ではNR4A3の上方調節により下流のcIAP2の発現を促進させることによってアポトーシスを低減させることが、低酸素関連刺激下のNR4A3の発現が血管内皮細胞の生存を向上させる上で重要な役割を有することを示しているということは、報告で述べられていた。4時間の酸素-グルコース欠乏がHUVEC及びRAOECのNR4A3タンパク質の発現上昇を引き起こすが、24時間の再酸素化はNR4A3タンパク質レベルの下方制御を引き起こす(図12a)と同時に、細胞のLDH放出増加(図3)を引き起こすことが、酸素-グルコース欠乏-再酸素化はNR4A3の発現への下方制御により細胞損傷を促進させるという可能性を示唆していることを実験の結果が示している。再酸素化損傷と同時にYC-6を与えると用量依存的にNR4A3タンパク質の発現を向上させる(図12a)とともに、用量依存的に酸素-グルコース欠乏-再酸素化によって引き起こされる細胞損傷を低減させる(図3)ことができ、これはYC-6がNR4A3の発現への上方調節により血管内皮細胞を保護する役割を発揮できることを示している。免疫蛍光細胞染色法でNR4A3の発現を分析したところ、ウエスタンブロットの結果と一致しており、再酸素化損傷と同時にYC-6を与えると用量依存的にNR4A3タンパク質の発現を向上させることができる(図12のbとc)。
これまでの研究では、NR4A3タンパク質の発現は主に転写レベルによって調節され、HIF-1αは低酸素刺激下でNR4A3の発現を調節する上流の転写因子であることが明らかになっている。したがって、我々は、YC-6はNR4A3の転写レベルを促進することでそのタンパク質の発現を促進するかどうかを検討した。結果(図13)は、酸素-グルコース欠乏はNR4A3転写レベルの有意な上昇を引き起こすことを示しており、酸素-グルコース欠乏はHIF-1αの転写を促進することでNR4A3の発現を促進するのは、血管内皮細胞の低酸素関連損傷に対抗する1種の自己保護メカニズムなのかもしれないということを示している。再酸素化はNR4A3転写レベルの下降を引き起こし、YC-6を与えるとNR4A3の転写レベルを有意に上方調節していないのは、YC-6はNR4A3の転写を促進することによってそのタンパク質の発現を増加させるのではないことを示している。したがって、我々は、さらに、YC-6がNR4A3の分解を阻害することの可能性を検討した。HUVEC及びRAOECに酸素-グルコース欠乏処理を行い、再酸素化と同時にシクロヘキシミド(CHX)を与えてタンパク質の合成を阻害した。結果は、タンパク質の合成を阻害するとNR4A3タンパク質がほぼ完全に枯渇していることを示していることから、NR4A3タンパク質は再酸素化損傷の中で急速に分解することを示している。さらにNR4A3の分解経路を検討するために、再酸素化損傷とCHXを与える同時に、それぞれ異なる濃度のユビキチン・プロテアソーム阻害剤MG132及びリソソーム分解阻害剤クロロキンCQを与えて、異なる方式のタンパク質分解を遮断した。結果は、再酸素化損傷と同時にCHX及びMG132を与えるのは、NR4A3の分解を阻害できるが、CHX及びCQを与えてもNR4A3の分解を明らかに阻害していないを示していることから、再酸素化損傷の過程でNR4A3の分解は主にユビキチン・プロテアソーム系によるものだということを示している。
呉二斌,李莉華,郭子健.PFKFB3在肝癌中的表達及其臨床意義(肝がんにおけるPFKFB3の発現とその臨床的意味)[J].臨床腫瘤学雑志,2014(6):508-511.
宋旭華.TUM2-PK、PFKFB3和TKTL1在喉癌中的表達及其臨床意義(喉頭がんにおけるTUM2-PK、PFKFB3及びTKTL1の発現とその臨床的意味)[D].
章密密,何躍君.PFKFB3在結腸癌患者中的表達及其臨床意義(結腸がん患者におけるPFKFB3の発現とその臨床的意味)[J].中国臨床医学,2017,024(004):587-590.
魏莱.6-▲リン▼酸果糖-2-激▲バイ▼在結直腸癌中的表達、臨床意義及作用(結腸がん・直腸がんにおける6-ホスホフルクト-2-キナーゼの発現、臨床的意味と役割)[D].2017.
崔瑩,張艶紅,尹秀艶ら.PFKFB3対宮頸癌細胞影響機制探討(子宮頸がん細胞に対するPFKFB3の影響のメカニズムに関する検討)[J].中華腫瘤防治雑志,2018,25(24):7-13.
薛小英.▲ハ▼向PFKFB3調控CD4~+T細胞分化緩解実験性自己免疫性脳脊髄炎的機制研究(PFKFB3を標的にしてCD4~+T細胞の分化を調節して実験的自己免疫性脳脊髓炎を緩和するメカニズムに関する研究)[D].2018.
陳向栄,杜菊梅,呉宗濤.PFKFB3在膠質瘤組織中的表達及其対H4細胞悪性生物学行為的影響(神経膠腫組織におけるPFKFB3の発現とH4細胞の悪性生物学的挙動に対するその影響)[J].中国腫瘤生物治療雑志,2018,025(004):363-369.
陳永誠,羅志斎,盧冠銘.甲状腺乳頭状癌組織PFKFB3表達及其意義(甲状腺乳頭がん組織におけるPFKFB3の発現とその意味)[J].中華腫瘤防治雑志,2018,025(004):250-257.
胡智慧,段亜男,韓魯軍.PFKFB3基因増強阿▲パク▼替尼対胃癌凋亡的影響及機制(アパチニブによる胃がんのアポトーシスへの増強に関するPFKFB3遺伝子の影響とメカニズム)[J].中国中西医結合消化雑志,2019.
王春▲キ▼.PFKFB3拮抗剤PFK15抑制横紋肌肉瘤細胞的自噬和増殖的作用研究(PFKFB3拮抗薬・PFK15の横紋筋肉腫細胞のオートファジーと増殖を阻害する役割に関する研究)[D].2018.
趙佳佳,唐清明,于然ら.利用PFKFB3的生物節律性有効抑制舌癌進程的調控機制(PFKFB3のバイオリズムを利用して舌がんの進行を効果的に阻害する調節メカニズム)[C]//中華口腔医学会全科口腔医学専業委員会第六次学術会議及広東省口腔医学会全科口腔医学専委会2015年年会論文集.2015.
李継佳,汪偉明.PFKFB3介導CD163+腫瘤相関巨噬細胞浸潤調控口腔癌血管生成(CD163+腫瘍関連マクロファージ浸潤に対するPFKFB3の媒介による口腔がんにおける血管生成の調節)[C]//中華口腔医学会第九次全科口腔医学学術会議論文彙編.2018.
呉▲キ▼.糖酵解対膀胱腫瘤PD-L1/PD-1分子表達的影響及機制研究(膀胱腫瘍におけるPD-L1/PD-1分子の発現に対する解糖の影響とメカニズムに関する研究)[D].2019.
秦鵬鈞.舒尼替尼誘導腎癌細胞自噬的機理研究(スニチニブによる腎がん細胞のオートファジー誘発に関するメカニズムの研究)[D].2015.
侯云雷,張▲ユウ▼,夏娟娟ら.6-▲リン▼酸果糖-2-激▲バイ▼3抑制剤的研究進展(6-ホスホフルクト-2-キナーゼ3阻害剤の研究進展)[J].中国薬物化学雑志,2016(1):65-70.
Atsumi T,Chesney J,Metz C,et al.High expression of inducible 6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-bisphosphatase(iPFK-2;PFKFB3)in human cancers[J].Cancer Res.2002,62(20):5881-7.
Yang JG,Wang WM,Xia HF,et al.Lymphotoxin-α promotes tumor angiogenesis in HNSCC by modulating glycolysis in a PFKFB3-dependent manner[J].Int J Cancer.2019,145(5):1358-1370.
Zheng W D,Zhou F L,Lin N .MicroRNA-26b inhibits osteosarcoma cell migration and invasion by down-regulating PFKFB3 expression[J].Genetics and Molecular Research,2015,14(4):16872-16879.
Zhu Y,Lu L,Qiao C,et al.Targeting PFKFB3 sensitizes chronic myelogenous leukemia cells to tyrosine kinase inhibitor[J].Oncogene,2018.
Hu X,Xu Q,Wan H,et al.PI3K-Akt-mTOR/PFKFB3 pathway mediated lung fibroblast aerobic glycolysis and collagen synthesis in lipopolysaccharide-induced pulmonary fibrosis[J].Lab Invest.2020.
Lypova N,Telang S,Chesney J,et al.Increased 6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-bisphosphatase-3 activity in response to EGFR signaling contributes to non-small cell lung cancer cell survival[J].Journal of Biological Chemistry,2019,294.
Laszlo Kovacs,Yapeng Cao,Weihong,et al.HanPFKFB3 in Smooth Muscle Promotes Vascular Remodeling in Pulmonary Arterial Hypertension[J].American journal of respiratory and critical care medicine,2019.
Lina Wang,Yapeng Cao,B.Gorshkov,et al.Ablation of endothelial Pfkfb3 protects mice from acute lung injury in LPS-induced endotoxemia[J].Pharmacological Research,2019.
Li X,Liu J,Qian L,et al.Expression of PFKFB3 and Ki67 in lung adenocarcinomas and targeting PFKFB3 as a therapeutic strategy.Mol Cell Biochem.2018,445(1-2):123-134.
CLME B,TELANG S,CLEM A,et al.Small-molecule inhibition of 6-phosphofructo-2-kinase activity suppresses glycolytic flux and tumor growth[J].Mol Cancer Ther,2008,7( 1):110-120.
BANDO H,ATSUMI T,NISHIO T,et al.Phosphorylation of the 6-phosphofructo-2-kinase /fructose 2,6-bisphosphatase/PFKFB3 family of glycolytic regulators in human cancer[J].Clin Cancer Res,2005,11(16):5784-5792.
Butt Y,Kurdowska A,Allen TC.Acute Lung Injury:A Clinical and Molecular Review.Arch Pathol Lab Med.2016;140(4):345-50.
Clem B,et al.Small-molecule inhibition of 6-phosphofructo-2-kinase activity suppresses glycolytic flux and tumor growth.Mol Cancer Ther.2008 Jan;7(1):110-20.
Gong Y,Lan H,Yu Z,Wang M,Wang S,Chen Y,Rao H,Li J,Sheng Z,Shao J.Blockage of glycolysis by targeting PFKFB3 alleviates sepsis-related acute lung injury via suppressing inflammation and apoptosis of alveolar epithelial cells.Biochem Biophys Res Commun.2017 Sep 16;491(2):522-529.
Cao Y,Zhang X,Wang L,Yang Q,Ma Q,Xu J,Wang J,Kovacs L,Ayon RJ,Liu Z,Zhang M,Zhou Y,Zeng X,Xu Y,Wang Y,Fulton DJ,Weintraub NL,Lucas R,Dong Z,Yuan JX,Sullivan JC,Meadows L,Barman SA,Wu C,Quan J,Hong M,Su Y,Huo Y.PFKFB3-mediated endothelial glycolysis promotes pulmonary hypertension.Proc Natl Acad Sci U S A.2019 Jul 2;116(27):13394-13403.
Kovacs L,Cao Y,Han W,Meadows L,Kovacs-Kasa A,Kondrikov D,Verin AD,Barman SA,Dong Z,Huo Y,Su Y.PFKFB3 in Smooth Muscle Promotes Vascular Remodeling in Pulmonary Arterial Hypertension.Am J Respir Crit Care Med.2019 Sep 1;200(5):617-627.
Shi L,Pan H,Liu Z,Xie J,Han W.Roles of PFKFB3 in cancer.Signal Transduct Target Ther.2017 Nov 24;2:17044.
Klarer AC,O’Neal J,Imbert-Fernandez Y,Clem A,Ellis SR,Clark J,Clem B,Chesney J,Telang S.Inhibition of 6-phosphofructo-2-kinase(PFKFB3)induces autophagy as a survival mechanism.Cancer Metab.2014 Jan 23;2(1):2.
Teuwen LA,Draoui N,Dubois C,Carmeliet P.Endothelial cell metabolism:an update,2017.Curr Opin Hematol.2017 May;24(3):240-247.
Cantelmo AR,Brajic A,Carmeliet P.Endothelial Metabolism Driving Angiogenesis:Emerging Concepts and Principles.Cancer J.2015 Jul-Aug;21(4):244-9.
Smith KM,Mrozek JD,Simonton SC,et al.Prolonged partial liquid ventilation using conventional and high-frequency ventilatory techniques:gas exchange and lung pathology in an animal model of respiratory distress syndrome.Crit Care Med.1997;25(11):1888-97.
Wu F,Zhao S,Yu B,Chen Y-M,Wang W,Song Z-G,Hu Y,Tao Z-W,Tian J-H,Pei Y-Y et al:A new coronavirus associated with human respiratory disease in China.Nature 2020.
Huang C,Wang Y,Li X,Ren L,Zhao J,Hu Y,Zhang L,Fan G,Xu J,Gu X et al:Clinical features of patients infected with 2019 novel coronavirus in Wuhan,China.The Lancet 2020,395(10223):497-506.
Xu Z,Shi L,Wang Y,Zhang J,Huang L,Zhang C,Liu S,Zhao P,Liu H,Zhu L et al:Pathological findings of COVID-19 associated with acute respiratory distress syndrome.The Lancet Respiratory Medicine.2020
Gong Y,Lan H,Yu Z,Wang M,Wang S,Chen Y,Rao H,Li J,Sheng Z,Shao J:Blockage of glycolysis by targeting PFKFB3 alleviates sepsis-related acute lung injury via suppressing inflammation and apoptosis of alveolar epithelial cells.Biochem Biophys Res Commun 2017,491(2):522-529.
Wang L,Cao Y,Gorshkov B,Zhou Y,Yang Q,Xu J,Ma Q,Zhang X,Wang J,Mao X et al:Ablation of endothelial Pfkfb3 protects mice from acute lung injury in LPS-induced endotoxemia.Pharmacol Res 2019,146:104292.
Cao Y,Zhang X,Wang L,Yang Q,Ma Q,Xu J,Wang J,Kovacs L,Ayon RJ,Liu Z et al:PFKFB3-mediated endothelial glycolysis promotes pulmonary hypertension.Proc Natl Acad Sci U S A 2019,116(27):13394-13403.
Claims (23)
- 前記R1は、H、-CHCH2CH3、-CH(CH3)2、-CH(CH2)3CH3又は-CH(CH3)(CH2)3CH(CH3)2である、請求項1に記載の使用。
- 前記R1は、Hである、請求項1に記載の使用。
- 前記肺上皮細胞及び/又は血管内皮細胞の損傷によって媒介される疾患は、急性肺損傷、急性呼吸窮迫症候群、肺高血圧症、肺水腫、肺線維症、早産児慢性肺疾患、慢性閉塞性肺疾患、ニューモシスチス肺炎及び肺塞栓症から1つ又は複数選ばれる、請求項1~3のいずれか1項に記載の使用。
- 前記急性肺損傷、急性呼吸窮迫症候群、肺高血圧症又は肺水腫は、高酸素、ウイルス感染、細菌感染、外傷、ショック、虚血再灌流障害、急性膵炎、吸入傷害、びまん性肺胞損傷又は中毒によって引き起こされる、請求項4に記載の使用。
- 前記急性肺損傷、急性呼吸窮迫症候群、肺高血圧症又は肺水腫は、高酸素、ウイルス感染、細菌感染、外傷、ショック、虚血再灌流障害、急性膵炎、吸入傷害、びまん性肺胞損傷及び/又は中毒によって引き起こされ、ただし低酸素によって引き起こされるのではない、請求項4に記載の使用。
- 前記ウイルスは、コロナウイルス、インフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、アデノウイルス、パラインフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、サイトメガロウイルス又はそれらの組み合わせである、請求項5又は6に記載の使用。
- 前記ウイルスは、コロナウイルスである、請求項7に記載の使用。
- 前記コロナウイルスは、新型コロナウイルスSARS-CoV-2である、請求項8に記載の使用。
- 前記急性肺損傷は、手術によって引き起こされる肺損傷である、請求項4に記載の使用。
- 前記手術は、肺切除術、肺腫瘍切除術又は肺移植術である、請求項10に記載の使用。
- 前記肺切除術は、縮小手術、肺葉切除術又は肺全摘術である、請求項11に記載の使用。
- 前記肺線維症は、特発性肺線維症又はじん肺である、請求項4に記載の使用。
- 前記血管内皮細胞の損傷によって媒介される疾患は、血液脳関門の破壊によって媒介される脳小血管病を含み、ただし微小脳出血、脳卒中、脳浮腫を含まない、請求項1~3のいずれか1項に記載の使用。
- 前記血液脳関門の破壊は、血液脳関門の透過性亢進として現われる、請求項14に記載の使用。
- 前記血液脳関門の破壊は、血液脳関門の血管内皮細胞の損傷として現われる、請求項14又は15に記載の使用。
- 血液脳関門の破壊によって媒介される脳小血管病の臨床症状は、認知障害、歩行障害、気分障害、尿失禁及び/又はうつ病である、請求項14に記載の使用。
- 血液脳関門の破壊によって媒介される脳小血管病の画像所見は、脳白質病変を含む、請求項14に記載の使用。
- 血液脳関門の破壊によって媒介される脳小血管病の画像所見は、脳白質病変だけである、請求項14に記載の使用。
- 前記血管内皮細胞の損傷によって媒介される疾患は、心血管疾患又は糖尿病性血管合併症を含む、請求項1~3のいずれか1項に記載の使用。
- 前記心血管疾患は、急性心筋梗塞(AMI)、狭心症、冠状動脈性心疾患、虚血性心疾患、心不全、高血圧、心血管インターベンション術による血栓形成から1つ又は複数選ばれる、請求項20に記載の使用。
- 前記糖尿病性血管合併症は、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、糖尿病性創傷治癒遅延の1つ又は複数である、請求項20に記載の使用。
- 肺上皮細胞及び/又は血管内皮細胞の損傷によって媒介される疾患は、PFKFB3タンパク質の過剰発現として現われる、請求項1~3のいずれか1項に記載の使用。
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202010128617.7 | 2020-02-28 | ||
CN202010128617 | 2020-02-28 | ||
CN202011069298.3A CN113318114B (zh) | 2020-02-28 | 2020-09-30 | 小分子化合物在治疗肺上皮细胞损伤和/或血管内皮细胞损伤介导的疾病中的用途 |
CN202011069298.3 | 2020-09-30 | ||
PCT/CN2021/078061 WO2021170073A1 (zh) | 2020-02-28 | 2021-02-26 | 小分子化合物在治疗肺上皮细胞损伤和/或血管内皮细胞损伤介导的疾病中的用途 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2023516005A true JP2023516005A (ja) | 2023-04-17 |
JP7464737B2 JP7464737B2 (ja) | 2024-04-09 |
Family
ID=77413178
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2022551743A Active JP7464737B2 (ja) | 2020-02-28 | 2021-02-26 | 肺上皮細胞の損傷及び/又は血管内皮細胞の損傷によって媒介される疾患の治療における低分子化合物の用途 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20230089123A1 (ja) |
EP (1) | EP4129299A4 (ja) |
JP (1) | JP7464737B2 (ja) |
CN (1) | CN113318114B (ja) |
TW (1) | TWI830003B (ja) |
WO (1) | WO2021170073A1 (ja) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2024048479A1 (ja) * | 2022-08-30 | 2024-03-07 | 国立大学法人東北大学 | 虚血再灌流傷害抑制 |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20040138187A1 (en) * | 2002-08-28 | 2004-07-15 | Reading Christopher L. | Therapeutic treatment methods |
WO2006002907A1 (en) * | 2004-06-29 | 2006-01-12 | Jadolabs Gmbh | Use of steroid-derived pharmaceutical compositions for treating disorders relating to pathological processes in lipid rafts |
WO2007064691A1 (en) * | 2005-12-02 | 2007-06-07 | Nabil Habib Lab | Treatment of cancer and other diseases |
DK2012773T3 (da) | 2006-04-22 | 2012-09-24 | Harbor Biosciences Inc | Lægemidler og anvendelser deraf |
CA2774197A1 (en) * | 2006-04-22 | 2008-04-03 | Harbor Biosciences, Inc. | Drugs and uses to modulate inflammation, metabolic disorders and other conditions |
MX2015006710A (es) * | 2012-11-28 | 2016-01-15 | Intercept Pharmaceuticals Inc | Tratamiento de las enfermedades pulmonares. |
CN108125965B (zh) * | 2014-04-25 | 2020-04-10 | 广州市赛普特医药科技股份有限公司 | 5α-雄甾-3β,5,6β-三醇及其类似物在高原病中的应用 |
CN109985049B (zh) * | 2017-12-29 | 2022-02-22 | 广州市赛普特医药科技股份有限公司 | 5α-雄甾-3β,5,6β-三醇在制备治疗脑小血管病的药物中的应用 |
CN109985046B (zh) * | 2017-12-29 | 2021-07-27 | 广州市赛普特医药科技股份有限公司 | 5α-雄甾-3β,5,6β-三醇用于炎症介导的视神经病变的治疗 |
-
2020
- 2020-09-30 CN CN202011069298.3A patent/CN113318114B/zh active Active
-
2021
- 2021-02-26 TW TW110107001A patent/TWI830003B/zh active
- 2021-02-26 US US17/802,870 patent/US20230089123A1/en active Pending
- 2021-02-26 WO PCT/CN2021/078061 patent/WO2021170073A1/zh unknown
- 2021-02-26 EP EP21760885.0A patent/EP4129299A4/en active Pending
- 2021-02-26 JP JP2022551743A patent/JP7464737B2/ja active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN113318114B (zh) | 2023-02-17 |
US20230089123A1 (en) | 2023-03-23 |
TW202143975A (zh) | 2021-12-01 |
JP7464737B2 (ja) | 2024-04-09 |
EP4129299A4 (en) | 2024-04-03 |
TWI830003B (zh) | 2024-01-21 |
CN113318114A (zh) | 2021-08-31 |
EP4129299A1 (en) | 2023-02-08 |
WO2021170073A1 (zh) | 2021-09-02 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Ye et al. | ACE2 exhibits protective effects against LPS-induced acute lung injury in mice by inhibiting the LPS-TLR4 pathway | |
Qiu et al. | Pharmacological and clinical application of heparin progress: An essential drug for modern medicine | |
De Luca et al. | Pharmacological therapies for pediatric and neonatal ALI/ARDS: an evidence-based review | |
CN106075455A (zh) | 鉴定发展成器官功能衰竭的风险提高的危重患者的方法及用于其治疗的化合物 | |
EA034163B1 (ru) | Конструкция нуклеиновой кислоты, содержащая промотор, специфичный для эндотелиальных клеток, и их противоопухолевое применение | |
WO2021191108A1 (en) | Treatment or prevention of acute organ damage induced by viral infection with a nk1 inhibitor and/or a gabapentinoid | |
da Matta Abreu et al. | Methylene blue attenuates ischemia–reperfusion injury in lung transplantation | |
Wang et al. | Intravenous release of NO from lipidic microbubbles accelerates deep vein thrombosis resolution in a rat model | |
JP7464737B2 (ja) | 肺上皮細胞の損傷及び/又は血管内皮細胞の損傷によって媒介される疾患の治療における低分子化合物の用途 | |
BR112021005387A2 (pt) | aplicação de chiglitazar e compostos relacionados aos mesmos | |
JP2010509247A (ja) | Acat阻害剤及び線維症の予防又は治療におけるその使用 | |
Li et al. | Cabozantinib ameliorates lipopolysaccharide-induced lung inflammation and bleomycin--induced early pulmonary fibrosis in mice | |
CN109843330A (zh) | 用于治疗脓毒症的西司他丁 | |
Wang et al. | Dual delivery of an NF-κB inhibitor and IL-10 through supramolecular hydrogels polarizes macrophages and promotes cardiac repair after myocardial infarction | |
EP4117659A1 (en) | Methods of treating respiratory disease with deupirfenidone | |
US20210369665A1 (en) | Methods of treating viral infection using protease inhibitors | |
Hernández et al. | Hypoxic pulmonary arterial hypertension in the chicken model | |
Lu et al. | Olmesartan medoxomil reverses glomerulosclerosis in renal tissue induced by myocardial infarction without changes in renal function | |
WO2019129179A1 (zh) | 化合物在制备治疗脑小血管病的药物中的应用 | |
WO2019006155A1 (en) | PROMOTION OF PULMONARY GROWTH | |
Pu et al. | The pathogenic role of Succinate-SUCNR1: A critical function that induces renal fibrosis via infiltration of M2 macrophage | |
Luyu et al. | Dual-Route Administration of Umbilical Cord MSC-Exosomes Mitigates LPS-Induced Acute Respiratory Distress Syndrome in Mice | |
WO2022132777A1 (en) | Methods and compositions for hyperinflammatory syndrome and thrombophilia associated with covid-19 | |
JP2017537142A (ja) | ギンコライドBと第Xa因子阻害剤とを含有する薬物組成物及びその製造方法と用途 | |
WO2018137701A1 (zh) | 靶向cxcr7的药物组合物和方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20221024 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20221024 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20231003 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20231222 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20240305 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20240328 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7464737 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |