JP2023510787A - 抗ａｎｇｐｔｌ３抗体及びその応用 - Google Patents

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Abstract

本開示は抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体及びその応用に関する。具体的に、本開示は抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体及びその抗原結合断片、又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒化合物、及びその薬剤としての使用、特に高脂血症を治療するための薬剤の調製における使用に関する。

Description

本開示は抗体薬物分野に関する。具体的に、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体薬物及びその応用を含む。
ここでの記載は、必ずしも従来技術を構成するものではなく、本発明に関連する背景情報のみを提供する。
アンジオポエチン様タンパク質３（ＡＮＧＰＴＬ３、ＡＮＧＰＴＬ－３）遺伝子は、Ｃｏｎｋｌｉｎらがシグナル配列及び両親媒性螺旋構造に基づいてＥＳＴデータベースにより同定された新たな遺伝子であり、ヒト胚性肝臓／膵臓ｃＤＮＡライブラリーからヒトＡＮＧＰＴＬ３の全長ｃＤＮＡが分離された（Ｃｏｎｋｌｉｎ ｅｔ ａｌ．， １９９９， Ｇｅｎｏｍｉｃｓ６２： ４７７－４８２）。４６０個のアミノ酸からなるヒトＡＮＧＰＴＬ３タンパク質（ｈＡＮＧＰＴＬ３）とマウスＡＮＧＰＴＬ３タンパク質は７６％のアミノ酸配列同一性を有し、アンジオポエチンの特徴的な構造を有し、１つのシグナルペプチド、コイルドコイル二量体又は三量体が形成される見込みの１つの延ばされた螺旋ドメイン、１つの短いリンカー、１つの球状フィブリノゲンホメオドメイン（ＦＤ）を含む（Ｃｏｎｋｌｉｎ ｅｔ ａｌ．， １９９９， Ｇｅｎｏｍｉｃｓ６２： ４７７－４８２）。ＡＮＧＰＴＬ３はアンジオポエチン（ＡＮＧｓ）と違って、Ｔｉｅ２に結合しないが、そのＣ－末端ＦＤによりインテグリンαｖβ３に結合し、血管新生を誘導できる（Ｃａｍｅｎｉｓｃｈ ｅｔ ａｌ．， ２００２， Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ２７７： １７２８１－１７２９０）。
また、ＡＮＧＰＴＬ３は脂肪代謝に影響を与える重要な因子であり、ＬＰＬの活性を抑制することで、トリグリセリド、低密度リポタンパク質のクリアランスを低下させることができるが、高トリグリセリド血症が一連の代謝系疾患の発症過程に関与している。血漿トリグリセリドレベルの向上は、血小板凝集の誘導やプラスミノゲンアクチベータインヒビター１（ＰＡＩ－１）の発生、並びに泡沫細胞の増加や血管平滑筋細胞増殖及び遊走の促進により、アテローム性動脈硬化の病理過程に関与している。抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体は、ＡＮＧＰＴＬ３に特異的に結合することで、ＡＮＧＰＴＬ３の活性を抑制又は阻害して、アテローム性動脈硬化及び高脂血症などの疾患を治療する。現在、ＷＯ２０１２１７４１７８Ａ１、ＷＯ２００８０７３３００Ａ２、ＣＮ１０７０８５１１２Ａなどの特許文献には複数種の抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体が開示された。
本開示は抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片を提供する。幾つかの実施形態において、本開示は、抗体重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、
i）前記重鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９配列に示される重鎖可変領域と同じ配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０配列に示される軽鎖可変領域と同じ配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、
ii）前記重鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１配列に示される重鎖可変領域と同じ配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２配列に示される軽鎖可変領域と同じ配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、或いは
iii）前記重鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３配列に示される重鎖可変領域と同じ配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４配列に示される軽鎖可変領域と同じ配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片を提供する。
幾つかの実施形態において、上記のような抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、
iv）前記重鎖可変領域は配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域は配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、
v）前記重鎖可変領域は配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域は配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、或いは
vi）前記重鎖可変領域は配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域は配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
幾つかの実施形態において、上記のような抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、
（Ａ）前記重鎖可変領域とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９配列は少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有し、及び／又は前記軽鎖可変領域とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０配列は少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有し、
（Ｂ）前記重鎖可変領域とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１配列は少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有し、及び／又は前記軽鎖可変領域とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２配列は少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有し、或いは
（Ｃ）前記重鎖可変領域とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３配列は少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有し、及び／又は前記軽鎖可変領域とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４配列は少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有する。
幾つかの実施形態において、上記のような抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片は、下記に示される重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、
（Ｄ）前記重鎖可変領域配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９に示され、及び前記軽鎖可変領域配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０に示され、
（Ｅ）前記重鎖可変領域配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１に示され、及び前記軽鎖可変領域配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２に示され、或いは
（Ｆ）前記重鎖可変領域配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３に示され、及び前記軽鎖可変領域配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４に示される。
幾つかの実施形態において、上記のような抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片は、前記抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体は重鎖定常領域と軽鎖定常領域とを更に含む。幾つかの実施形態において、前記重鎖定常領域はヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４定常領域から選ばれ、前記軽鎖定常領域はヒトκ及びλ鎖定常領域から選ばれる。幾つかの実施形態において、前記重鎖定常領域配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９に示され、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有し、及び／又は前記軽鎖定常領域配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０に示され、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有する。幾つかの実施形態において、上記のような抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片は、前記抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体は重鎖と軽鎖とを含み、
（Ｇ）前記重鎖とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１配列は少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有し、及び／又は前記軽鎖とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２配列は少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有し、
（Ｈ）前記重鎖とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３配列は少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有し、及び／又は前記軽鎖とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４配列は少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有し、或いは
（Ｉ）前記重鎖とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５配列は少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有し、及び／又は前記軽鎖とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６配列は少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有する。
幾つかの実施形態において、上記のような抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片は、前記抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体は重鎖と軽鎖とを含み、
（Ｊ）前記重鎖配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１に示され、及び軽鎖配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２に示され、
（Ｋ）前記重鎖配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３に示され、及び軽鎖配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４に示され、或いは
（Ｌ）前記重鎖配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５に示され、及び軽鎖配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６に示される。
幾つかの実施形態において、本開示は、上記抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片と競合してＡＮＧＰＴＬ３抗原に結合する、単離した抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片を提供する。幾つかの実施形態において、前記ＡＮＧＰＴＬ３抗原はヒトＡＮＧＰＴＬ３、マウスＡＮＧＰＴＬ３、サルＡＮＧＰＴＬ３、ラットＡＮＧＰＴＬ３である。
幾つかの実施形態において、本開示に係る抗体はヒト抗体又はヒト化抗体である。幾つかの実施形態において、本開示に係る抗原結合断片はＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆｄ、Ｆｖ、ｄｓＦｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ及び二重抗体から選ばれる。幾つかの実施形態において、本開示に係る抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片は下記ａ～ｄ特徴の少なくとも１種を有する。
ａ．ＡＮＧＰＴＬ３タンパク質に特異的に結合する。幾つかの実施形態において、前記抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片は１０ｎＭ未満（例えば、５ｎＭ以下、３ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．８ｎＭ以下、０．６ｎＭ以下、０．４ｎＭ以下、０．３ｎＭ以下、０．２ｎＭ以下）のＥＣ５０でヒトＡＮＧＰＴＬ３、マウスＡＮＧＰＴＬ３、カニクイザルＡＮＧＰＴＬ３及び／又はラットＡＮＧＰＴ３Ｌに結合する。幾つかの実施形態において、前記ＥＣ５０はＥＬＩＳＡ方法により測定され、例えば、本開示の試験例１に記載される通りである。幾つかの実施形態において、前記ＥＣ５０はＨＴＲＦ方法により測定され、例えば、本開示の試験例２に記載される通りである。
ｂ．高い親和力でＡＮＧＰＴＬ３タンパク質に結合する。幾つかの実施形態において、前記抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片は、１０Ｅ－１０ Ｍ未満（例えば、９Ｅ－１０ Ｍ以下、８Ｅ－１０ Ｍ以下、７Ｅ－１０ Ｍ以下、６Ｅ－１０ Ｍ以下、３Ｅ－１０ Ｍ以下、２Ｅ－１０ Ｍ以下、１Ｅ－１０ Ｍ以下、８Ｅ－１１ Ｍ以下、６Ｅ－１１ Ｍ以下、５Ｅ－１１ Ｍ以下）のＫＤ値でヒトＡＮＧＰＴＬ３、マウスＡＮＧＰＴＬ３、カニクイザルＡＮＧＰＴＬ３及び／又はラットＡＮＧＰＴＬ３抗原に結合する。幾つかの実施形態において、前記ＫＤ値はＢｉａｃｏｒｅ方法により測定され、例えば、本開示の試験例４に記載される通りである。
ｃ．ＡＮＧＰＴＬ３のＬＰＬ酵素に対する抑制効果を遮断する。幾つかの実施形態において、前記抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片は１７０ｎＭ未満（例えば、８０ ｎＭ以下、１３５ｎＭ以下、８０ｎＭ以下、５５ｎＭ以下）のＩＣ５０値でヒトＡＮＧＰＴＬ３、マウスＡＮＧＰＴＬ３、カニクイザルＡＮＧＰＴＬ３及び／又はラットＡＮＧＰＴＬ３のＬＰＬ酵素活性に対する抑制を遮断する。前記ＩＣ５０は酵素活性試験により測定され、例えば、本開示の試験例３に記載される通りである。及び／又は
ｄ．良好な血中脂質低下効果を有する。幾つかの実施形態において、本開示の抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片の血中脂質低下効果は試験例５、６及び／又は７に示される通りである。幾つかの実施形態において、本開示は上記抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片をコードする核酸分子を提供する。
幾つかの実施形態において、本開示は上記核酸分子を含むベクターを提供する。
幾つかの実施形態において、本開示は上記核酸分子を含む宿主細胞を提供する。幾つかの実施形態において、本開示は、前記担体の変換（又は伝達、トランスフェクション）により得られ、原核細胞及び真核細胞から選ばれ、好ましくは、真核細胞であり、更に好ましくは、哺乳動物細胞である、宿主細胞を提供する。幾つかの実施形態において、前記宿主細胞は、例えば、ヒト胚性幹細胞、受精卵、生殖細胞などの完全な個体に発育できるヒト細胞の何れかも含まない。幾つかの実施形態において、前記宿主細胞は真核細胞であり、更に好ましくは、哺乳動物細胞であり、前記哺乳動物細胞はＣＨＯ、２９３、ＮＳＯ、及び哺乳動物細胞でゲノム編集を行うことで、抗体又はその抗原結合断片のグリコシル化修飾を変えることができ、更に抗体又はその抗原結合断片のＡＤＣＣ機能を変えることができ、例えば、ＦＵＴ８又はＧｎＴ－IIIなどの遺伝子のノックアウトを行うことができる細胞を含むが、これらに限定されない。幾つかの実施形態において、前記哺乳動物細胞はヒト細胞を含まない。
幾つかの実施形態において、本開示は、治療有効量の上記抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片、又は上記核酸分子と、１種又は複数種の薬学的に許容されるベクター、希釈剤、緩衝剤又は賦形剤と、を含む医薬組成物を提供する。幾つかの実施形態において、単位用量の前記医薬組成物には、０．０１～９９重量％の上記抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片、又は上記核酸分子が含まれる。幾つかの実施形態において、単位用量の前記医薬組成物には、０．１～２０００ｍｇ、更に好ましくは１～１０００ｍｇの上記抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片、又は上記核酸分子が含まれる。
幾つかの実施形態において、本開示は、上記抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片を含む、ＡＮＧＰＴＬ３の免疫検出又は測定に利用される方法を提供する。別の態様において、本開示は、本開示に係る抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片を前記試料に接触させる工程を含む、被験者試料におけるＡＮＧＰＴＬ３発現レベルをインビボで検出する方法を提供する。幾つかの実施形態において、前記試料は被験者に由来する血漿、血清、全血試料である。幾つかの実施形態において、任意の当業者の周知方法によりＡＮＧＰＴＬ３の発現レベルを検出することができるが、このような方法はウェスタンｂｌｏｔ、ウエスタンブロット法、ＥＬＩＳＡ、質量分析法を含むが、これらに限定されない。
幾つかの実施形態において、本開示は、上記抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片を含む試薬キットを提供する。
幾つかの実施形態において、本開示は、上記のような抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片の調製方法を提供する。
幾つかの実施形態において、本開示は、上記のような抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片の、ＡＮＧＰＴＬ３の免疫検出に利用される試薬の調製における使用を提供する。
幾つかの実施形態において、本開示は、ＡＮＧＰＴＬ３の免疫検出又は測定に利用される上記のような抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片を提供する。
幾つかの実施形態において、本開示は、上記のような抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片を含む試薬キットを提供する。幾つかの実施形態において、本開示は、上記のような抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片を含む、ＡＮＧＰＴＬ３発現レベルを検出するための試薬キットを提供する。幾つかの実施形態において、前記試薬キットは本開示に係るＡＮＧＰＴＬ３発現レベルの検出方法に利用される。幾つかの実施形態において、前記検出方法は任意の当業者の周知方法であり、Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ、ウエスタンブロット法、ＥＬＩＳＡ、質量分析法を含むが、これらに限定されない。
幾つかの実施形態において、本開示は、被験者に治療有効量の上記のような抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片、又は核酸分子、又は医薬組成物を投与することを含む、疾患又は障害を治療するための方法を提供する。幾つかの実施形態において、前記疾患又は障害はＡＮＧＰＴＬ３に関する疾患又は障害である。幾つかの実施形態において、前記疾患又は障害は高コレステロール血症、高脂血症又はアテローム性動脈硬化症である。
幾つかの実施形態において、本開示は、上記のような抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片、又は核酸分子、又は医薬組成物の、疾患又は障害を治療するための薬剤の調製における使用を提供する。幾つかの実施形態において、前記疾患又は障害はＡＮＧＰＴＬ３に関する疾患又は障害である。幾つかの実施形態において、前記疾患又は障害は高コレステロール血症、高脂血症又はアテローム性動脈硬化症である。
幾つかの実施形態において、本開示は、薬剤とする上記のような抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片、又は核酸分子、又は医薬組成物を提供する。幾つかの実施形態において、前記薬剤はＡＮＧＰＴＬ３に関する疾患又は障害の治療に利用される。幾つかの実施形態において、前記疾患又は障害は高コレステロール血症、高脂血症又はアテローム性動脈硬化症である。
発明の詳細
用語（定義）
本開示が更に容易に理解されるように、以下、幾つかの技術・科学用語を具体的に定義する。本明細書で特に明らかに定義しない限り、本明細書に使用される他の技術・科学用語の全ては、当業者に通常理解されている意味を持っている。
本開示に用いられるアミノ酸の３文字コードと１文字コードは、Ｊ．ｂｉｏｌ．ｃｈｅｍ、２４３、ｐ３５５８（１９６８）に記載される通りである。
本開示に係る「抗体」は免疫グロブリンであり、天然完全抗体は２本の同じ重鎖と２本の同じ軽鎖が鎖間ジスルフィド結合により連結されてなるテトラペプチド鎖構造である。免疫グロブリンは、免疫グロブリン重鎖定常領域のアミノ酸組成と配列順序によって、５種類に分けられ、又はＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇＥという免疫グロブリンの５つのアイソタイプに分けられ、その対応する重鎖は、それぞれμ鎖、δ鎖、γ鎖、α鎖及びε鎖である。同一種類のＩｇは、そのヒンジ領域のアミノ酸組成及び重鎖ジスルフィド結合の数と位置の違いによって、異なるサブクラスにさらに分けることができ、例えば、ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４に分けられてもよい。軽鎖は、定常領域によって、κ鎖又はλ鎖に分けられる。５種類のＩｇにおけるそれぞれは、κ鎖又はλ鎖を有してもよい。
抗体重鎖及び軽鎖は、Ｎ末端に近い約１１０個のアミノ酸の配列の変化が大きくて、可変領域（Ｆｖ領域）となり、Ｃ末端に近い残りのアミノ酸配列が比較的に安定的で、定常領域となる。可変領域は、３つの高変領域（ＨＶＲ）と、４つの配列が比較的に保存的な骨格領域（ＦＲ）とを含む。３つの高変領域は、抗体の特異性を決定し、相補性決定領域（ＣＤＲ）とも称される。それぞれの軽鎖可変領域（ＶＬ）及び重鎖可変領域（ＶＨ）は、３つのＣＤＲ領域と、４つのＦＲ領域とからなり、アミノ基末端からカルボキシル基末端へ、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順に配列される。軽鎖の３つのＣＤＲ領域とは、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３であり、重鎖の３つのＣＤＲ領域とは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３である。
本開示の「抗体」は、全長抗体の他に、抗原に結合可能な抗原結合断片を含む。
本開示の抗体はヒト抗体を含む。
用語「マウス抗体」は本開示において本分野の知識と技術により調製されたヒトＡＮＧＰＴＬ３に対するモノクローナル抗体である。調製時に、ＡＮＧＰＴＬ３抗原を試験対象に注射した後、所望の配列又は機能特性を有する抗体を発現したハイブリドーマを分離する。本開示の好ましい一実施形態において、前記マウス抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片は、マウスκ、λ鎖若しくはその変異体の軽鎖定常領域を更に含み、又は、マウスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３若しくはその変異体の重鎖定常領域を更に含んでもよい。
用語「キメラ抗体（ｃｈｉｍｅｒｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」は、異種（例えば、マウス）抗体の可変領域を親抗体（例えば、ヒト抗体）の定常領域と融合してなる抗体であり、マウス抗体により誘発される免疫応答反応を低減することができる。例えば、ヒトマウスキメラ抗体を作成するには、まず、マウス特異的モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを作成し、そしてマウスハイブリドーマ細胞から可変領域遺伝子をクローンニングし、更に、必要に応じてヒト抗体の定常領域遺伝子をクローンニングし、マウス可変領域遺伝子とヒト定常領域遺伝子とをキメラ遺伝子になるように連結した後、発現ベクターに挿入し、最後に真核細胞系又は原核細胞系においてキメラ抗体分子を発現する。本開示の好ましい一実施形態において、前記抗ＡＮＧＰＴＬ３キメラ抗体の抗体軽鎖はヒトκ、λ鎖又はその変異体の軽鎖定常領域を更に含む。前記ＡＮＧＰＴＬ３キメラ抗体の抗体重鎖は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４若しくはその変異体の重鎖定常領域を更に含み、好ましくはヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２若しくはＩｇＧ４重鎖定常領域を含み、又はアミノ酸変異（例えばＬ２３４Ａ、及び／又は、Ｌ２３５Ａ変異、及び／又は、Ｓ２２８Ｐ変異）のＩｇＧ１、ＩｇＧ２若しくはＩｇＧ４変異体を使用する。
用語「ヒト化抗体（ｈｕｍａｎｉｚｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」は、ＣＤＲ移植抗体（ＣＤＲ－ｇｒａｆｔｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ）とも呼ばれ、マウスのＣＤＲ配列をヒトの抗体可変領域フレームワーク、即ち、異なる種類のヒト生殖細胞系の抗体フレームワーク配列に移植して発生された抗体を指す。キメラ抗体が大量のマウスタンパク質成分をもつことにより誘導された異種反応性を克服することができる。このようなフレームワーク配列は、生殖細胞系抗体遺伝子配列を含む共通ＤＮＡデータベース又は開示された参考文献から取得することができる。例えば、ヒト重鎖及び軽鎖可変領域遺伝子の生殖細胞系ＤＮＡ配列は、「ＶＢａｓｅ」ヒト生殖細胞系配列データベースにより取得し、及びＫａｂａｔ， Ｅ．Ａ． ｅｔ ａｌ．， １９９１ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， ５ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎにより発見することができる。免疫原性の低下に伴う活性の低下を回避するために、前記ヒト抗体可変領域フレームワーク配列に対して最も少ない逆変異又は復帰変異を行うことにより、活性を保つことができる。本開示のヒト化抗体は、更に酵母菌で提示される、ＣＤＲに対して親和性成熟変異を行ったヒト化抗体も含む。
用語「ヒト抗体」及び「ヒト化抗体」は互いに交換して使用してもよく、１つ又は複数の可変領域及び定常領域がヒト免疫グロブリン配列に由来するものである。好ましい一形態は、全ての可変領域及び定常領域がヒト免疫グロブリン配列に由来するものであり、即ち、「完全ヒト化抗体」又は「全ヒト抗体」である。これらの抗体は様々な方法により調製して得られるが、ファージディスプレイ法により、ヒトＰＢＭＣ、脾臓、リンパ節組織からＢ細胞を分離して、天然単鎖ファージヒト抗体ライブラリーを構築して、或いはヒト抗体軽重鎖を発現できる組換えマウスを免疫することで選別して得られた抗体を含む。本開示のヒト抗体は、ヒト抗体を基に１つ又は複数のアミノ酸変異により得られた依然として目標抗原に結合する抗体を更に含む。
本開示に係るヒト抗体の重鎖定常領域及びヒト抗体の軽鎖定常領域の「通常変異体」は、従来技術に開示された抗体可変領域の構造と機能を変更しないヒト由来の重鎖定常領域又は軽鎖定常領域の変異体であり、例示的な変異体は、重鎖定常領域に対して部位特異的に改造とアミノ酸置換を行ったＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４重鎖定常領域変異体を含み、具体的な置換は、例えば、従来技術における既知のＹＴＥ変異、Ｌ２３４Ａ、及び／又は、Ｌ２３５Ａ変異、Ｓ２２８Ｐ変異、及び／又は、ｋｎｏｂ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅ構造を得た変異（抗体重鎖にｋｎｏｂ－Ｆｃとｈｏｌｅ－Ｆｃの組合せを付与する）であり、これらの変異は、抗体可変領域の機能を変更せずに、抗体に新しい性能を付与することが確認された。
用語「全長抗体」、「完全抗体」、「完全な抗体」及び「全抗体」は本明細書で互いに交換して用いられてもよく、実質的に完全な形式の抗体を指し、以下定義される抗原結合断片と区別するものである。当該用語は、特に、軽鎖及び重鎖が定常領域を含む抗体を指す。本開示の「抗体」は、「全長抗体」及びその抗原結合断片を含む。
幾つかの実施形態において、本開示の全長抗体は、軽鎖可変領域と軽鎖定常領域が連結され、及び重鎖可変領域と重鎖定常領域が連結されてから形成される全長抗体を含む。当業者は、実際の必要に応じて、ヒト抗体由来の軽鎖定常領域と重鎖定常領域などの、異なる抗体由来の軽鎖定常領域、重鎖定常領域を選択することができる。
用語「抗原結合断片」又は「機能断片」は、抗原（例えば、ＡＮＧＰＴＬ３）に特異的に結合する能力が保たれた抗体の１つ又は複数の断片である。全長抗体の断片により抗体の抗原結合機能を果たすことができることが示されている。用語「抗原結合断片」に含まれる結合断片の実例は、（i）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなる１価断片であるＦａｂ断片と、（ii）ヒンジ領域におけるジスルフィド架橋により連結された２つのＦａｂ断片を含む２価断片であるＦ（ａｂ’）２断片と、（iii）ＶＨとＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片と、（iv）抗体の単アームのＶＨとＶＬドメインからなるＦｖ断片と、（v）ＶＨとＶＬにより鎖間ジスルフィド結合で形成された安定的な抗原結合断片であるｄｓＦｖと、（vi）ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆａｂなどの断片を含む二重抗体、二重特異性抗体及び多重特異性抗体と、を含む。また、Ｆｖ断片の２つのドメインであるＶＬ及びＶＨは、分離した遺伝子によりコードされるが、組換え法を利用して合成されたリンカーによりそれらを連結することで、その中のＶＬ及びＶＨ領域のためにペアリングして１価分子を形成する単一のタンパク質鎖（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）と呼ばれ、例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４２： ４２３－４２６、及びＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ ＵＳＡ８５： ５８７９－５８８３を参照）を生成することができる。このような単鎖抗体も、用語である抗体の「抗原結合断片」に含まれる。当業者に知られている通常の技術により、このような抗体断片が得られ、また、完全な抗体と同様に、機能性によって断片が選別される。抗原結合部分は、組換えＤＮＡ技術により、又は、完全な免疫グロブリンを酵素的又は化学的に切断することで生成することができる。抗体は、例えば、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４サブタイプ）、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ又はＩｇＭ抗体のような異なるアイソタイプの抗体であってもよい。
Ｆａｂは、プロテアーゼであるパパイン（Ｈ鎖を切断する２２４個のアミノ酸残基）でＩｇＧ抗体分子を処理することで得られた、分子量が約５０，０００であり、抗原結合活性を有する抗原結合断片であり、Ｈ鎖Ｎ末端側の約半分及び全てのＬ鎖はジスルフィド結合により結合される。
Ｆ（ａｂ’）２は、酵素であるペプシンでＩｇＧヒンジ領域における２つのジスルフィド結合の下方部分を消化することで得られた、分子量が約１００，０００であり、抗原結合活性を有し、且つヒンジ位置で連結される２つのＦａｂ領域を含む抗体断片である。
Ｆａｂ’は、上記Ｆ（ａｂ’）２のヒンジ領域のジスルフィド結合を切断することで得られた、分子量が約５０，０００であり、抗原結合活性を有する抗体断片である。本開示のＦａｂ’は、例えば、ジチオスレイトールなどの還元剤を利用して、本開示のＡＮＧＰＴＬ３を特異的に認識すると共に細胞外領域のアミノ酸配列又はその３次元構造に結合するＦ（ａｂ’）２を処理することで製造することができる。
また、抗体のＦａｂ’断片をコードするＤＮＡを原核生物発現ベクター又は真核生物発現ベクターに挿入してベクターを原核生物又は真核生物に導入することにより、Ｆａｂ’を発現して前記Ｆａｂ’を製造することができる。
用語「単鎖抗体」、「単鎖Ｆｖ」又は「ｓｃＦｖ」は、リンカーにより連結された抗体重鎖可変ドメイン（又は領域、ＶＨ）と抗体軽鎖可変ドメイン（又は領域、ＶＬ）を含む分子である。このようなｓｃＦｖ分子は、ＮＨ２－ＶＬ－リンカー－ＶＨ－ＣＯＯＨ又はＮＨ２－ＶＨ－リンカー－ＶＬ－ＣＯＯＨという一般的な構造を有してもよい。好適な従来技術のリンカーは、反復のＧＧＧＧＳアミノ酸配列又はその変異体からなり、例えば、１～４個の反復変異体（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９３）， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ９０： ６４４４－６４４８）が使用される。本開示に利用されるその他のリンカーは、Ａｌｆｔｈａｎ ｅｔ ａｌ．（１９９５）， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ． ８： ７２５－７３１、Ｃｈｏｉ ｅｔ ａｌ．（２００１）， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏ ｌ． ３１： ９４－１０６、Ｈｕ ｅｔ ａｌ．（１９９６）， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ５６： ３０５５－３０６１、Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ ｅｔ ａｌ．（１９９９）， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２９３： ４１－５６及びＲｏｏｖｅｒｓ ｅｔ ａｌ．（２００１）， Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．に記載されている。
二重抗体は、その中のｓｃＦｖ又はＦａｂが二量体化された抗体断片であり、二価抗原結合活性を有する抗体断片である。２価抗原結合活性では、２つの抗原が相同又は相異であってもよい。
二重特異性抗体及び多重特異性抗体は、２つ又は複数の抗原又は抗原決定基と同時に結合可能な抗体であり、ＡＮＧＰＴＬ３と結合可能なｓｃＦｖ又はＦａｂ断片を含む。
本開示の二重抗体は、本開示のヒトＡＮＧＰＴＬ３を特異的に認識すると共に細胞外領域のアミノ酸配列又はその３次元構造に結合するモノクローナル抗体のＶＨ及びＶＬのコードｃＤＮＡを取得し、ペプチドリンカーのアミノ酸配列の長さが８つ以下の残基になるようにｓｃＦｖをコードするＤＮＡを構築し、前記ＤＮＡを原核生物発現ベクター又は真核生物発現ベクターに挿入してから、前記発現ベクターを原核生物又は真核生物に導入して二重抗体を発現する工程により製造することができる。
ｄｓＦｖは、その中の各々のＶＨとＶＬにおける１つのアミノ酸残基がシステイン残基で置換されたポリペプチドを、システイン残基間のジスルフィド結合で接続することにより得られる。既知の方法（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， ７， ６９７（１９９４））により、抗体の３次元構造予測に基づき、システイン残基で置換されるアミノ酸残基を選択することができる。
本開示の全長抗体又は抗原結合断片は、本開示のヒトＡＮＧＰＴＬ３を特異的に認識すると共に細胞外領域のアミノ酸配列又はその３次元構造に結合する抗体のコードｃＤＮＡを取得し、ｄｓＦｖをコードするＤＮＡを構築し、前記ＤＮＡを原核生物発現ベクター又は真核生物発現ベクターに挿入してから、前記発現ベクターを原核生物又は真核生物に導入してｄｓＦｖを発現する工程により製造することができる。
用語「アミノ酸差異」又は「アミノ酸変異」とは、元のタンパク質又はポリペプチドを基にして発生された１つ、２つ、３つ又はそれ以上のアミノ酸の挿入、欠失又は置換を含む、元のタンパク質又はポリペプチドと比べて、変異体タンパク質又はポリペプチドにアミノ酸の変化又は変異があることである。
用語「抗体フレームワーク」又は「ＦＲ領域」は、可変ドメインの抗原結合環（ＣＤＲ）のステントとして利用される、可変ドメインＶＬ又はＶＨの一部である。本質的に、それは、ＣＤＲを有しない可変ドメインである。
用語「相補性決定領域」、「ＣＤＲ」又は「高変領域」とは、抗体の可変ドメインにおいて抗原結合を促進する主な６つ高変領域の１つである。通常、各重鎖可変領域には、３つのＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）があり、各軽鎖可変領域には、３つのＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）がある。「Ｋａｂａｔ」番号付け規則（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１）， 「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」， ５ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ， ＭＤを参照）、「Ｃｈｏｔｈｉａ」番号付け規則（Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．， （１９９７）ＪＭＢ ２７３： ９２７－９４８を参照）及びＩｍＭｕｎｏＧｅｎＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）番号付け規則（Ｌｅｆｒａｎｃ Ｍ．Ｐ．， Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ， ７， １３２－１３６（１９９９）； Ｌｅｆｒａｎｃ， Ｍ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．， Ｄｅｖ． Ｃｏｍｐ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２７， ５５－７７（２００３）などを含む様々な周知方法の何れか１つによって、ＣＤＲのアミノ酸配列境界を決定することができる。
用語「エピトープ」又は「抗原決定基」は、抗原における免疫グロブリン又は抗体に特異的に結合する部位（例えば、ＡＮＧＰＴＬ３分子における特定部位）である。エピトープは、通常、特別な空間配座で少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個の連続的又は非連続的アミノ酸を含む。例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂ ｉｏｌｏｇｙ， 第６６巻， Ｇ． Ｅ． Ｍｏｒｒｉｓ， Ｅｄ．（１９９６）を参照する。
用語「特異的結合」、「選択的結合」、「選択的に結合する」及び「特異的に結合する」、「特異的に結合できる」は、抗体の予め決定された抗原におけるエピトープに対する結合である。通常、抗体は、約１０－８Ｍ未満、例えば、約１０－９Ｍ未満、１０－１０Ｍ未満、１０－１１Ｍ未満、１０－１２Ｍ未満又はそれ以下の親和力（ＫＤ）で結合される。
用語「ＫＤ」は、特定の抗体‐抗原が互いに作用する解離平衡定数である。通常、本開示の抗体は、約１０－７Ｍ未満、例えば、約１０－８Ｍ未満又は１０－９Ｍ未満の解離平衡定数（ＫＤ）でＡＮＧＰＴＬ３に結合され、例えば、本開示において、抗体と細胞表面抗原の親和力は、ＦＡＣＳ法によりＫＤ値を測定する。別の実施形態において、抗体と抗原との親和力であるＫＤ値はＢｉａｃｏｒｅ法により測定される。別の実施形態において、抗体と抗原との結合は、ＥＬＩＳＡ法により測定される。
用語「競合」は、同じエピトープの抗原結合タンパク質の競合（例えば、抗原結合タンパク質の中和又は抗体の中和）に利用される場合に、抗原結合タンパク質間の競合であり、下記の測定法により測定される。前記測定法において、検出待ちの抗原結合タンパク質（例えば、抗体又はその免疫学的機能断片）により、参照抗原結合タンパク質（例えば、リガンド又は参照抗体）と共通抗原（例えば、ＡＮＧＰＴＬ３抗原又はその断片）との特異的結合を防止又は阻害（例えば、低減）する。様々な競合的結合測定は、１つの抗原結合タンパク質が別の抗原結合タンパク質と競合しているかを確定するために利用することができる。これらの測定は、例えば、固相直接又は間接放射免疫測定（ＲＩＡ）、固相直接又は間接酵素免疫測定（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合測定（例えば、Ｓｔａｈｌｉ ｅｔ ａｌ．， １９８３， Ｍｅｔｈｏｄｓｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ９： ２４２－２５３を参照）、固相直接ビオチンーアビジンＥＩＡ（例えば、Ｋｉｒｋｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．， １９８６， Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ． １３７： ３６１４－３６１９を参照）、固相直接標識測定、固相直接標識サンドイッチ測定（例えば、ＨａｒｌｏｗとＬａｎｅ， １９８８， Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ， Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（抗体、実習マニュアル）、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓを参照）、Ｉ－１２５マーカーを用いる固相直接標識ＲＩＡ（例えば、Ｍｏｒｅｌ ｅｔ ａｌ．， １９８８， Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２５： ７－１５を参照）、固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（例えば、Ｃｈｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．， １９９０， Ｖｉｒｏｌｏｇｙ１７６： ５４６－５５２を参照）、及び直接標識するＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．， １９９０， Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ． ３２： ７７－８２）である。通常、前記測定法は、未標識の検出抗原結合タンパク質及び標識した参照抗原結合タンパク質の何れか１つを担持した固相表面又は細胞に結合する精製した抗原を使用する必要がある。測定される抗原結合タンパク質の存在下で固相表面又は細胞に結合する標識量を測定することによって、競合的阻害を測定する。通常、測定される抗原結合タンパク質は過剰に存在する。競合的測定（競合的抗原結合タンパク質）により同定される抗原結合タンパク質は、参照抗原結合タンパク質と同一のエピトープに結合する抗原結合タンパク質と、参照抗原結合タンパク質の結合エピトープに十分に近い隣接エピトープに結合する抗原結合タンパク質とを含み、前記２つのエピトープは空間的に互いに干渉し合いながら結合を行う。本明細書の実施例には、競合的結合を測定するための方法の他の詳細な資料が提供される。通常、競合的抗原結合タンパク質が過剰に存在する場合に、参照抗原結合タンパク質と共通抗原との特異的結合は、少なくとも４０～４５％、４５～５０％、５０～５５％、５５～６０％、６０～６５％、６５～７０％、７０～７５％又は７５％以上阻害（例えば、低減）される。ある場合に、結合は、少なくとも８０～８５％、８５～９０％、９０～９５％、９５～９７％又は９７％以上阻害される。
本明細書に使用される用語「核酸分子」は、ＤＮＡ分子及びＲＮＡ分子を指す。核酸分子は、単鎖又は二重鎖であってもよく、好ましくは、二重鎖ＤＮＡ又は単鎖ｍＲＮＡ又は修飾されたｍＲＮＡである。核酸を別の核酸配列と共に機能的関係に置く場合に、核酸は「効果的に接続」である。例えば、プロモーター又はエンハンサーがコード配列の転写に影響を与えると、プロモーター又はエンハンサーは、前記コード配列に効果的に接続されている。
アミノ酸配列の「同一性」とは、配列同一性のパーセンテージが最も大きく達成されるように、アミノ酸配列のアラインメント及び必要な時にギャップを導入し、且つ、何れの保存的置換も配列同一性の一部とは見なされずに、第２配列中のアミノ酸残基と同様のアミノ酸残基に対する第１配列のパーセンテージである。アミノ酸の配列同一性のパーセンテージを測定するために、アラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、ＡＬＩＧＮ－２又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に取得可能なコンピュータソフトウェアなどの、本分野周知の複数の方式により実現することができる。当業者は、比較される配列の全長で最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメントの測定に適用されるパラメータを決定することができる。
用語「発現ベクター」とは、それに接続された別の核酸を輸送可能な核酸分子である。一実施形態において、ベクターは「プラスミド」であり、他のＤＮＡセグメントをそれに接続可能な環状二本鎖ＤＮＡ環を指す。別の実施形態において、ベクターは、他のＤＮＡセグメントをウイルスゲノムに接続可能なウイルスベクターである。本願に開示されたベクターは、それらを導入した宿主細胞において自己複製することができ（例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクター及びエピソーム性哺乳動物ベクター）、又は、宿主細胞に導入された後、宿主細胞のゲノムに整合されることで、宿主ゲノムと共に複製することができる（例えば、非エピソーム性哺乳動物ベクター）。
従来技術においてよく知られている抗体及び抗原結合断片を産生・精製する方法は、例えば、コールド・スプリング・ハーバー研究所（Ｔｈｅ Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）の抗体実験技術マニュアルの５～８章及び１５章の通りである。例えば、マウスはヒトＡＮＧＰＴＬ３又はその断片により免疫可能であり、得られた抗体は復元、精製されることができると共に、通常の方法によりアミノ酸シークエンシングを行うことができる。抗原結合断片は同様に、通常の方法により調製することができる。発明に記載の抗体又は抗原結合断片は、遺伝子工学的方法により、非ヒトのＣＤＲ領域に１つ又は複数のヒトＦＲ領域が加えられる。ヒトＦＲ生殖細胞系配列は、ＩＭＧＴヒト抗体可変領域生殖細胞系遺伝子データベースとＭＯＥソフトウエアをアライメントすることにより、ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）のホームページから取得し、或いは免疫グロブリン雑誌である２００１ＩＳＢＮ０１２４４１３５１から得ることができる。
用語「宿主細胞」とは、発現ベクターが既に導入された細胞である。宿主細胞は、細菌、微生物、植物又は動物の細胞を含んでもよい。形質転換しやすい細菌は、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）やサルモネラ菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）の菌株などの腸内細菌科（ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）のメンバー、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）などのバシラス科（Ｂａｃｉｌｌａｃｅａｅ）、肺炎球菌（Ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃｕｓ）、連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）及びインフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）を含む。好適な微生物は、出芽酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）及びピキア酵母（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）を含む。好適な動物宿主細胞系は、ＣＨＯ（中国ハムスター卵巣細胞系）、２９３細胞及びＮＳ０細胞を含む。
本開示の工学的な抗体又は抗原結合断片は、通常の方法により調製・精製することができる。例えば、重鎖及び軽鎖をコードするｃＤＮＡ配列は、クローンニングしてＧＳ発現ベクターに組換えることができる。組換えた免疫グロブリン発現ベクターは、ＣＨＯ細胞を安定してトランスフェクションすることができる。更に好ましい従来技術の一つとして、哺乳動物発現系は、特にＦｃ領域の高度に保存的なＮ末端部位において、抗体のグリコシル化を引き起こすことになる。ヒトＡＮＧＰＴＬ３に特異的に結合する抗体を発現することにより、安定的なクローンが得られる。陽性クローンは、バイオリアクターの無血清培地において培養を拡大することで、抗体を産生する。抗体を分泌した培養液は、通常の技術により精製することができる。例えば、調整された緩衝液を含むＡ又はＧ セファロース ＦＦカラムで精製を行う。非特異的に結合した成分を洗い流す。そして、ｐＨ勾配法により結合した抗体を溶離し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥで抗体断片を検出し、収集する。抗体は、通常の方法によりろ過濃縮することができる。可溶性の混合物及び多量体は、分子ふるい、イオン交換などの通常の方法により除去してもよい。得られた生成物は、直ちに例えば、－７０℃で冷凍し、又は凍結乾燥しなければならない。
「投与」、「与える」及び「処理」は動物、ヒト、被験者、細胞、組織、器官や生物流体に適用される場合に、外因性薬剤、治療剤、診断薬又は組成物の、動物、ヒト、被験者、細胞、組織、器官や生物流体との接触を意味する。「投与」、「与える」及び「処理」は例えば、治療、薬物動態、診断、研究と実験方法を意味してもよい。細胞の処理は、試薬の細胞との接触、及び試薬の流体との接触を含み、そのうち、前記流体は細胞と接触する。「投与」、「与える」及び「処理」は、また、試薬、診断、結合組成物により、又は別種の細胞を通じて、体外及びインビトロで例えば細胞を処理することを意味する。「処理」はヒト、獣医学又は研究対象に適用される場合に、治療的処理、予防又は予防的措置、研究と診断的応用を意味する。
「治療」は、例えば、本開示の何れか１つの結合化合物の組成物を含む経口又は外用治療剤を患者に投与することを意味し、前記患者は１種又は複数種の疾患症状を有するが、既知の前記治療剤は、これらの症状に対して治療効果を有する。通常、治療される患者又はグループには、１種又は複数種の疾患症状を効果的に緩和する量で治療剤を与えることにより、これらの症状の解消を誘導し、又は臨床的に測定可能な任意の程度まで進行しないようにこれらの症状を抑制する。任意の具体的な疾患症状を効果的に緩和する治療剤の量（「治療有効量」とも呼ばれる）は、患者の疾患状態、年齢と体重、及び薬剤の患者で必要な治療効果を発生させる能力などの複数の要因によって、変化することができる。医者や他のプロのヘルスケアプロバイダによる当該症状の重症度又は進行状況への評価によく用いられる何れの臨床的検出方法によっても、疾患症状が低減されたか否かを評価することができる。本開示の実施形態（例えば、治療方法又は製品）は、各目標疾患症状の緩和において無効である可能性があるが、本分野既知の任意の統計学的検定方法、例えばＳｔｕｄｅｎｔ ｔ検定、カイ二乗検定、Ｍａｎｎ及びＷｈｉｔｎｅｙによるＵ検定、Ｋｒｕｓｋａｌ－Ｗａｌｌｉｓ検定（Ｈ検定）、Ｊｏｎｃｋｈｅｅｒｅ－Ｔｅｒｐｓｔｒａ検定とＷｉｌｃオキソｎ検定により、統計学的に有意な数の患者において目標疾患症状を低減可能であることが確認された。
「保存的修飾」又は「保存的置換又は置換」は、類似の特徴（例えば、電荷、側鎖の大きさ、疎水性／親水性、主鎖の立体配座や剛性など）を有する他のアミノ酸でタンパク質中のアミノ酸を置換することで、タンパク質の生物学的活性を変えずに頻繁に変化可能にすることを意味する。当業者は、一般的に、ポリペプチドの非必須領域中の単一のアミノ酸置換が実質的に生物学的活性を変えないと分かる（例えば、Ｗａｔｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｎｅ， Ｔｈｅ Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ Ｐｕｂ．Ｃｏ．， ｐ２２４，（４ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ）を参照）。また、構造又は機能が類似したアミノ酸の置換は、生物学的活性を破壊する可能性が低い。例示的な保存的置換は、下表「例示的なアミノ酸保存的置換」に記載される。
Figure 2023510787000001
「有効量」又は「有効用量」は、何れか１種又は複数種の有益な又は必要な治療結果を得るために必要な薬剤、化合物又は医薬組成物の量である。予防使用として、有益又は必要な結果はリスクの解消や低減、重症度の低減又は病症の発作の遅延を含み、病症、その合併症と病症の進行中に現れる中間病理学的表現型の生化学・組織学的、及び／又は行動症状を含む。治療的応用として、有益又は必要な結果は、様々な本開示の標的抗原関連病症の罹患率の低減又は前記病症の１つ又は複数の症状の改善、病症の治療に必要なその他の薬剤の用量の低減、別の薬剤の治療効果の向上、及び／又は、患者の本開示の標的抗原関連病症の進行の遅延などの臨床的結果を含む。
「外因性」は、場合によって生物、細胞やヒトの体外で発生された物質を意味する。「内因性」は、場合によって細胞、生物やヒトの体内で発生された物質を意味する。
本明細書に利用される表現である「細胞」、「細胞系」及び「細胞培養物」は互いに交換して使用してもよく、これらの名称は何れも子孫を含む。従って、単語「形質転換体」及び「形質転換細胞」は、移転数を考慮せずに、初代被検細胞及びそれより誘導された培養物を含む。また、意図する又は意図しない変異のために、あらゆる子孫はＤＮＡ含有量で精確に同じであることがあり得ないと理解すべきである。最初の形質転換細胞から選別されたものと同様の機能又は生物学的活性を有する変異子孫が含まれる。異なる名称を指す場合は、文脈から明らかに分かる。
本明細書に使用される「ポリメラーゼ連鎖反応」又は「ＰＣＲ」は、微量の特定部分の核酸、ＲＮＡ及び／又はＤＮＡが、例えばアメリカ特許番号４，６８３，１９５に記載されるように増幅するプログラム又は技術である。一般的に、オリゴヌクレオチドプライマーの設計が可能になるように、目標領域末端からの配列情報又はそれ以外の配列情報を取得する必要があり、これらのプライマーは配列において、増幅すべきテンプレートの対応する鎖と同様又は類似である。２つのプライマーの５’末端ヌクレオチドは、増幅待ち材料の末端と一致してもよい。ＰＣＲは、特定のＲＮＡ配列、全ゲノムＤＮＡからの特定ＤＮＡ配列、及び全細胞ＲＮＡから転写されたｃＤＮＡ、ファージ又はプラスミド配列などの増幅に用いることができる。一般的に、Ｍｕｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｓｙｍｐ． Ｏｕａｎｔ． Ｂｉｏｌ． ５１：２６３； ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｅｒｌｉｃｈ， （１９８９）ＰＣＲ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ（Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ， Ｎ．Ｙ．）を参照する。本明細書に用いられるＰＣＲは、核酸試験試料を増幅するための核酸ポリメラーゼ反応法の一実例とされるが、唯一の実例ではなく、前記方法は、核酸の特定部分を増幅又は産生するために、プライマーとなる既知の核酸及び核酸ポリメラーゼを用いることを含む。
「単離した」とは、精製状態を指し、この場合、当該分子に、核酸、タンパク質、脂質、炭水化合物などの他の生物分子、又は、細胞破片や成長培地などの他の材料を実質的に含まないことを意味する。通常、用語「単離した」は、本明細書に記載の化合物の実験や治療用途を顕著に干渉する量で存在しない限り、これらの材料が全然存在しない、又は水、緩衝液や塩が存在しないことを意味する意図はない。
「選択的」又は「選択的に」は、その後記載されるイベントや環境が発生されてもよいが、必ずしもその必要がないことを意味し、この説明は、当該イベントや環境が発生され、又は発生されない場合を含む。
「医薬組成物」は、本明細書に記載される１種又は複数種の化合物又はその生理学的／薬学的に使用可能な塩又はプロドラッグと、生理学的／薬学的に使用可能なベクターや賦形剤などの他の化学成分とを含む混合物を示す。医薬組成物は、生体への投与を促進し、活性成分の吸収に寄与してさらに生物活性を発揮するためのものである。
用語「薬学的に許容されるベクター」とは、抗体又は抗原結合断片を送達するために製剤に適用される任意の不活性物質である。ベクターは、粘着防止剤、結合剤、コーティング、崩壊剤、充填剤や希釈剤、防腐剤（例えば、酸化防止剤、抗菌剤や抗真菌剤）、甘味剤、吸収遅延剤、湿潤剤、乳化剤、緩衝剤などであってもよい。好適な薬学的に許容されるベクターの例は、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）デキストロース、植物油（例えば、オリーブオイル）、塩水、緩衝液、緩衝塩水、及び糖、ポリオール、ソルビトールや塩化ナトリウムなどの等張剤を含む。
また、本開示は、目標抗原（例えば、ＡＮＧＰＴＬ３）陽性細胞に関連する疾患を治療するための、本開示の抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片を活性成分として含む薬剤を含む。
本開示において、ＡＮＧＰＴＬ３に関連する疾患は制限がなく、ＡＮＧＰＴＬ３に関連する疾患であればよく、例えば、本開示の分子により誘導される治療反応は、ヒトＡＮＧＰＴＬ３に結合することで、ＡＮＧＰＴＬ３とそのリガンドとの結合を阻害する。従って、本開示の分子は、治療的応用に適用される調製物及び製剤にある場合、高コレステロール血症、高脂血症又はアテローム性動脈硬化症などの疾患を罹患している患者にとって非常に有用である。
また、本開示は、目標抗原（例えば、ＡＮＧＰＴＬ３）の免疫検出又は測定に利用される方法、目標抗原（例えば、ＡＮＧＰＴＬ３）の免疫検出又は測定に利用される試薬、目標抗原（例えば、ＡＮＧＰＴＬ３）を発現した細胞の免疫検出又は測定に利用される方法、及び目標抗原（例えば、ＡＮＧＰＴＬ３）陽性細胞に関連する疾患の診断に利用される診断剤に関し、本開示の目標抗原（例えば、ヒトＡＮＧＰＴＬ３）を特異的に認識すると共に細胞外領域のアミノ酸配列又はその３次元構造に結合する抗体又は抗体断片を活性成分として含む。
本開示において、目標抗原（例えば、ＡＮＧＰＴＬ３）の量の検出又は測定に利用される方法は任意の既知方法であってもよい。例えば、免疫検出又は測定方法が含まれる。
免疫検出又は測定方法は、標識された抗原又は抗体を用いて抗体量又は抗原量を検出又は測定する方法である。免疫検出又は測定方法の実例としては、放射性物質で標識する免疫抗体方法（ＲＩＡ）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ又はＥＬＩＳＡ）、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）、発光免疫測定法、ウエスタンブロット法、物理化学的方法などが含まれる。
前記ＡＮＧＰＴＬ３陽性細胞に関連する疾患は、本開示の抗体又は抗体断片によりＡＮＧＰＴＬ３を発現した細胞を検出又は測定することで診断することができる。
ポリペプチドを発現した細胞を検出するために、既知の免疫検出方法、好ましくは、免疫沈降法、蛍光細胞染色法、免疫組織染色法などを利用することができる。更に、ＦＭＡＴ８１００ＨＴＳシステム（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ）による蛍光抗体染色法などを利用することができる。
本開示において、目標抗原（例えば、ＡＮＧＰＴＬ３）の検出又は測定に利用される生体試料は特に制限がなく、目標抗原（例えば、ＡＮＧＰＴＬ３）を発現した細胞を含む可能性があるものであればよく、例えば、組織球、血液、血漿、血清、膵液、尿液、糞便、組織液又は培養液である。
必要な診断方法に応じて、本開示のモノクローナル抗体又はその抗体断片を含む診断剤は、抗原－抗体反応を実行するための試薬又は反応を検出するための試薬を更に含んでもよい。抗原－抗体反応を実行するための試薬は、緩衝剤、塩などを含む。検出するための試薬は、前記モノクローナル抗体、その抗原結合断片又はその結合物の標識を認識する第２抗体と前記標識に対応する基質などの、一般的に免疫検出又は測定方法に利用される試薬を含む。
上記の明細書には、本開示の１つ又は複数種の実施形態の詳細が提出されている。本開示は、本願の記載と類似又は同様の任意の方法と材料により実施又は試験することができるが、以下、好ましい方法と材料を説明する。明細書と特許請求の範囲により、本開示のその他の特徴、目的及び利点は明らかになる。明細書と特許請求の範囲において、文脈で特に明記しない限り、単数形は複数の指示対象を含む。別途に定義の無い限り、本願に利用される技術と科学用語の全ては、当業者により理解されている一般的な意味をもっている。明細書に引用される特許と出版物の全ては、引用により組み込まれている。下記の実施例は、本開示の好ましい実施形態を更に全面的に説明するために提出されている。これらの実施例は、何れかの方式で本発明の範囲を限定するものと考えるべきではなく、本発明の範囲は、特許請求の範囲により限定される。
Ｐ８ＢＧ抗体のＳＤ（Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ、スプラーグドーリー）ラット血清トリグリセリドに対する影響を示す。 Ｐ３Ｇ抗体のＳＤラット血清トリグリセリドに対する影響を示す。 抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体のＨＦＤ（Ｈｉｇｈ－ｆａｔ－ｄｉｅｔ、高脂肪飼料）マウス血漿トリグリセリドに対する影響を示す。 抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体のＨＦＤマウス血漿低密度リポタンパク質コレステロール（Ｌｏｗ－Ｄｅｎｓｉｔｙ リポタンパク質 コレステロール、ＬＤＬ－Ｃ）に対する影響を示す。 抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体のＨＦＤマウス血漿総コレステロールに対する影響を示す。 抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体のＡＰＯＥマウス（アポリポタンパク質Ｅ（ａｐｏリポタンパク質 Ｅ、ＡｐｏＥ）遺伝子ノックアウトマウス）血漿トリグリセリドに対する影響を示す。 抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体のＡＰＯＥマウス血漿高密度リポタンパク質コレステロール（Ｈｉｇｈ ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｔｅｉｎ コレステロール、ＨＤＬ－Ｃ）に対する影響を示す。 抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体のマウス体内における薬物動態試験結果を示す。 抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体のカニクイザル体内における薬物動態試験結果を示す。
以下、実施例と合わせて本開示を更に説明するが、これらの実施例は本開示の範囲を限定するものではない。
本開示の実施例又は試験例における具体的な条件が明示されていない実験方法は、通常、一般的な条件、又は原料や商品メーカに勧められた条件に従う。Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，分子クローン、ラボマニュアル、コールド・スプリング・ハーバー研究所（Ｔｈｅ Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）、及び当代分子生物学方法、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．著作、Ｇｒｅｅｎｅ出版協会、Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、ＮＹを参照する。具体的な供給源が明示されていない試薬は、市販の一般的な試薬である。
実施例１、ＡＮＧＰＴＬ３抗原の設計及び発現
ヒトＡＮＧＰＴＬ３タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔ番号：Ｑ９Ｙ５Ｃ１）、マウスＡＮＧＰＴＬ３タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔ番号：Ｑ９Ｒ１８２）、カニクイザルＡＮＧＰＴＬ３タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔ番号：Ａ０Ａ２Ｋ５ＵＤＣ５）、ラットＡＮＧＰＴＬ３タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔ番号：Ｆ７ＦＨＰ０）を本開示に係るＡＮＧＰＴＬ３のモデルとして、本開示に係る抗原及び検出用タンパク質を設計し、ＡＮＧＰＴＬ３タンパク質を基に異なるラベルと融合し、それぞれｐＴＴ５ベクターにクローニングし（Ｂｉｏベクター、Ｃａｔ＃： １０２７６２）、２９３細胞において瞬時にトランスフェクションし、発現してから、精製して、本開示に係る抗原及び検出用タンパク質を得た。
１、ヒト全長ＡＮＧＰＴＬ３：ヒト－ＡＮＧＰＴＬ３（１７－４６０）－Ｈｉｓであり、免疫及び検出に利用することができ、そのアミノ酸配列が下記の通りである。
Figure 2023510787000002
 注記：一重下線部分はシグナルペプチド配列であり、イタリック体部分はＨｉｓ配列であり、ボールド体部分はヒトＡＮＧＰＴＬ３全長タンパク質の１７～４６０番目のアミノ酸である。
２、ヒトＡＮＧＰＴＬ３細胞外領域：ヒトＡＮＧＰＴＬ３（１７－１７０）－Ｆｌａｇ－Ｈｉｓであり、免疫及び検出に利用することができ、そのアミノ酸配列が下記の通りである。
Figure 2023510787000003
 注記：一重下線部分はシグナルペプチドであり、二重下線部分はリンカーであり、イタリック体部分はＦｌａｇ及びＨｉｓであり、ボールド体部分はヒトＡＮＧＰＴＬ３全長タンパク質の１７～１７０番目のアミノ酸である。
３、ヒトＡＮＧＰＴＬ３細胞外領域（ヒトＡＮＧＰＴＬ３（１７－１７０））とマウスＩｇＧ２ａＦｃセグメント（略語：ｍＦｃ）との融合タンパク質：ヒトＡＮＧＰＴＬ３（１７－１７０）－ｍＦｃであり、検出に利用することができ、そのアミノ酸配列が下記の通りである。
Figure 2023510787000004
 注記：下線部分はシグナルペプチドであり、イタリック体部分はマウスＩｇＧ２ａＦｃであり、ボールド体部分はヒトＡＮＧＰＴＬ３全長タンパク質の１７～１７０番目のアミノ酸である。
４、ヒトＡＮＧＰＴＬ３細胞外領域（ヒトＡＮＧＰＴＬ３（１７－２２０））とマウスＩｇＧ２ａＦｃセグメントとの融合タンパク質：ヒトＡＮＧＰＴＬ３（１７－２２０）－ｍＦｃであり、免疫及び検出に利用することができ、そのアミノ酸配列が下記の通りである。
Figure 2023510787000005
 注記：下線部分はシグナルペプチドであり、イタリック体部分はマウスＩｇＧ２ａＦｃであり、ボールド体部分はヒトＡＮＧＰＴＬ３全長タンパク質の１７～２２０番目のアミノ酸である。
５、マウス全長ＡＮＧＰＴＬ３：マウスＡＮＧＰＴＬ３（１７－４５５）－Ｈｉｓであり、免疫及び検出に利用することができ、そのアミノ酸配列が下記の通りである。
Figure 2023510787000006
 注記：下線部分はシグナルペプチドであり、イタリック体部分はＨｉｓ配列であり、ボールド体部分はマウスＡＮＧＰＴＬ３全長タンパク質の１７～４５５番目のアミノ酸である。
６、マウスＡＮＧＰＴＬ３細胞外領域（ｍｏｕｓｅ－ＡＮＧＰＴＬ３（１７－２２０））とマウスＩｇＧ２ａＦｃセグメントとの融合タンパク質：マウスＡＮＧＰＴＬ３（１７－２２０）－ｍＦｃであり、免疫に利用することができ、そのアミノ酸配列が下記の通りである。
Figure 2023510787000007
 注記：下線部分はシグナルペプチドであり、イタリック体部分はマウスＩｇＧ２ａＦｃであり、ボールド体部分はマウスＡＮＧＰＴＬ３全長タンパク質の１７～２２０番目のアミノ酸である。
７、カニクイザル全長ＡＮＧＰＴＬ３：カニクイザルＡＮＧＰＴＬ３（１７－４６０）－Ｈｉｓであり、検出に利用することができ、そのアミノ酸配列が下記の通りである。
Figure 2023510787000008
 注記：下線部分はシグナルペプチドであり、イタリック体部分はＨｉｓ配列であり、ボールド体部分はカニクイザルＡＮＧＰＴＬ３全長タンパク質の１７～４６０番目のアミノ酸である。
８、ラット全長ＡＮＧＰＴＬ３：ラットＡＮＧＰＴＬ３（１７－４５５）－Ｈｉｓであり、検出に利用することができ、そのアミノ酸配列が下記の通りである。
Figure 2023510787000009
 注記：下線部分はシグナルペプチドであり、イタリック体部分はＨｉｓ配列であり、ボールド体部分はラットＡＮＧＰＴＬ３全長タンパク質の１７～４５５番目のアミノ酸である。
実施例２、ＡＮＧＰＴＬ３抗原タンパク質、ハイブリドーマ抗体、組換え抗体の精製
一、Ｈｉｓラベル付きの組換えタンパク質又はＦｌａｇ－ｈｉｓラベル付きの組換えタンパク質の精製
細胞発現試料を高速で遠心分離して細胞及び不溶性不純物を除去し、上澄を収集して、最終濃度が５ｍＭとなるようにイミダゾールを加えた。５ｍＭのイミダゾールを含むＰＢＳ溶液によりニッケルカラムを平衡し、２～５倍のカラム体積で洗浄した。細胞上澄をカラムに導入した。Ａ２８０読取値が基線に低減されるまで、５ｍＭのイミダゾールを含むＰＢＳ溶液によりカラムを洗浄した。次に、ＰＢＳ＋１０ｍＭのイミダゾールでクロマトグラフィーカラムを洗浄し、非特異的結合のヘテロタンパク質を除去し、流出液を収集した。更に３００ｍＭのイミダゾールを含むＰＢＳ溶液で目的タンパク質を溶出し、溶出ピークを収集した。
収集された溶出液をＳｕｐｅｒｄｅｘゲル濾過カラムにより更に精製し、サブチューブで収集した。得られた試料をＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ペプチドマッピング、ＬＣ－ＭＳにより正確であると同定してから、分注して使用に備えた。Ｈｉｓラベル付きの組換えタンパク質又はＦｌａｇ－ｈｉｓラベル付きの組換えタンパク質を得た。
二、ハイブリドーマ抗体又はｍＦｃラベル付きの組換えタンパク質の精製
試料を高速で遠心分離して細胞及不溶性不純物を除去し、上澄を残した。１×ＰＢＳによりプロテインＡアフィニティーカラムを平衡し、２～５倍のカラム体積で洗浄した。遠心分離された細胞発現上澄試料をカラムに導入した。Ａ２８０読取値が基線に低減されるまで、１×ＰＢＳによりカラムを洗浄した。１×ＰＢＳによりカラムを洗浄した。０．１ Ｍの酢酸（ｐＨ ３．５～４．０）で目的タンパク質を溶出し、収集してから、すぐに１ ＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ ７．０）でタンパク質をｐＨ値が中性となるように調整して溶出し、最後に透析又は濃縮により液置換を行い、１×ＰＢＳ緩衝液に入れた。試料を収集し、電気泳動、ペプチドマッピング、ＬＣ－ＭＳにより正確であると同定してから、分注して使用に備えた。ｍＦｃラベル付きの組換えタンパク質又はハイブリドーマ抗体を得た。
三、抗体、Ｆｃラベル付きの組換えタンパク質の精製
試料を高速で遠心分離して細胞及不溶性不純物を除去し、上澄を残した。１×ＰＢＳによりタンパク質 Ｇアフィニティーカラムを平衡し、２～５倍カラム体積で洗浄した。遠心分離された細胞発現上澄試料をカラムに導入した。Ａ２８０読取値が基線に低減されるまで、１×ＰＢＳによりカラムを洗浄した。１×ＰＢＳによりカラムを洗浄した。酢酸（ｐＨ ３．０）で目的タンパク質を溶出し、収集してから、すぐに１ ＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ ７．０）でタンパク質をｐＨ値が中性となるように調整して溶出し、最後に透析又は濃縮により液置換を行い、１×ＰＢＳ緩衝液に入れた。試料を収集し、電気泳動、ペプチドマッピング、ＬＣ－ＭＳにより正確であると同定してから、分注して使用に備えた。抗体又はｈＦｃラベル付きの組換えタンパク質を得た。
実施例３、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体の調製
一、ファージライブラリーからの抗ＡＮＧＰＴＬ３ヒト化抗体の選別
ヒト化ファージ単鎖抗体ライブラリーに対して包装及び濃縮を行い、ファージライブラリー（１０１２～１０１３／ｐｆｕ）を１ｍＬの２％Ｍ ＰＢＳ（２％脱脂粉乳を含むＰＢＳ）に懸濁させ、１００μＬのＤｙｎａｂｅａｄｓ(登録商標) Ｍ－２８０ストレプトアビジン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃａｔ Ｎｏ．１１２０６Ｄ）を加え、ターンテーブルに置いて、繰返して反転し、室温で１時間封止した。チューブを磁気ラックに２分間置き、Ｄｙｎａｂｅａｄｓを除去し、ファージライブラリーを新しいチューブに移動した。封止されたファージライブラリーに２μｇ／ｍＬのビオチン標識を実施したヒトＡＮＧＰＴＬ３（１７－４６０）－Ｈｉｓを加え、ターンテーブルに置いて、１時間繰返して反転した。同時に１００μＬのＤｙｎａｂｅａｄｓを取り、１ｍＬの２％Ｍ ＰＢＳに懸濁させ、ターンテーブルに置いて、繰返して反転し、室温で１時間封止した。チューブを磁気ラックに２分間置き、封止液を吸い取った。封止されたＤｙｎａｂｅａｄｓをファージライブラリーとヒトＡＮＧＰＴＬ３（１７－４６０）－Ｈｉｓとの混合液に加え、ターンテーブルに置いて、１５分間繰返して反転した。チューブを磁気ラックに２分間置き、混合液を吸い取った。１ｍＬのＰＢＳＴ（０．１％ Ｔｗｅｅｎ－２０を含むＰＢＳ）でＤｙｎａｂｅａｄｓを１０回洗浄し、更に０．５ｍＬの１ｍｇ／ｍＬトリプシン（Ｓｉｇｍａ Ｃａｔ Ｎｏ．Ｔ１４２６－２５０ＭＧ）を加え、ターンテーブルに置いて、繰返して反転し、１５分間インキュベートして溶出し、溶出されたファージを大腸菌ＴＧ１に感染させてプレーティングし、ランダムで単クローンを選定し、ファージＥＬＩＳＡに利用した。
クローンを９６ウェルディープウェルプレート（Ｎｕｎｃ Ｃａｔ Ｎｏ．２６０２５１）に接種して、３７℃で１６～１８時間培養した。少量取り、ＯＤ６００が約０．５に達するまで、別の９６ウェルディープウェルプレートに接種して、Ｍ１３Ｋ０７ヘルパーファージ（ＮＥＢ Ｃａｔ Ｎｏ．Ｎ０３１５Ｓ）を加えて、包装を行った。４０００ ｇで１０分間遠心分離し、菌細胞を除去し、培養液を吸い取り、ＡＮＧＰＴＬ３結合のＥＬＩＳＡ検出を行った。陽性クローン菌種を種として凍結保存し、シークエンシング社に送ってシークエンシングした。ここで、測定された陽性クローンＰ３、Ｐ８の対応するアミノ酸配列は下記の通りである。
Figure 2023510787000010
 備考：配列における下線部分はＫａｂａｔ番号付けシステムによって決定されたＣＤＲ配列であり、イタリック体はＦＲ配列である。
二、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体の変異
Ｐ８抗体の３次元構造を基に、Ｐ８重鎖可変領域の５５番目のアミノ酸残基（自然順番号）をＤからＥに変異させ、Ｐ８軽鎖可変領域の３４番目のアミノ酸残基（自然順番号）をＧからＶに変異させ、新しい抗体分子Ｐ８Ｂを得た。Ｐ８Ｂのアミノ酸配列は下記の通りである。
Figure 2023510787000011
Figure 2023510787000012
 備考：配列における下線部分はＫａｂａｔ番号付けシステムによって決定されたＣＤＲ配列であり、イタリック体はＦＲ配列である。
Figure 2023510787000013
三、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体の構築及び発現
プライマーＰＣＲを設計し、抗体ＶＨ／ＶＫ遺伝子断片を組立て、更に発現ベクターｐＨｒ（シグナルペプチド及び定常領域付きの遺伝子（ＣＨ１－ＦＣ／ＣＬ）断片）と相同組換えを行い、抗体全長発現ベクターＶＨ－ＣＨ１－ＦＣ－ｐＨｒ／ＶＫ－ＣＬ－ｐＨｒを構築した。抗体の重鎖定常領域はヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ４及びその変異体の定常領域から選ばれてもよく、軽鎖定常領域はヒト化κ、λ鎖又はその変異体の軽鎖定常領域から選ばれてもよい。例示的に、抗体重鎖定常領域は配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９に示されるヒトＩｇＧ４－ＹＴＥ変異体から選ばれ、軽鎖定常領域は配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０に示されるヒトκ鎖の定常領域から選ばれる。
ヒトＩｇＧ４－ＹＴＥ変異体重鎖定常領域配列：
Figure 2023510787000014
 ヒトκ鎖軽鎖定常領域配列：
Figure 2023510787000015
例示的に、上記軽鎖／重鎖定常領域は上記Ｐ３、Ｐ８、Ｐ８Ｂの可変領域と組合せて、Ｐ３Ｇ、Ｐ８Ｇ、Ｐ８ＢＧの完全な抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体を形成した。抗体の軽鎖／重鎖配列は下記の通りである。
Figure 2023510787000016
Figure 2023510787000017
Figure 2023510787000018
以下、生化学試験方法により本開示の抗体の活性を検証した。
試験例１．抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体とＡＮＧＰＴＬ３タンパク質との結合のＥＬＩＳＡ実験
抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体は、ＡＮＧＰＴＬ３タンパク質に結合することで、ＡＮＧＰＴＬ３タンパク質の少なくとも１つの活性を抑制又は阻害した。ＥＬＩＳＡ実験により抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体とＡＮＧＰＴＬ３抗原との結合活性を検出した。ＡＮＧＰＴＬ３タンパク質（ヒトＡＮＧＰＴＬ３（１７－１７０）－ｍＦｃ）は、マイクロプレートにコーティングされたヒツジ抗マウスＩｇＧに結合することで、９６ウェルマイクロプレートに固定された。抗体を加えた後のシグナルの強弱によって抗体とＡＮＧＰＴＬ３との結合活性を判断した。同時にビオチン標識試薬キット（Ｄｏｊｉｎｄｏ、ＬＫ０３）により標識されたＨＩＳラベル付きのＡＮＧＰＴＬ３タンパク質（マウスＡＮＧＰＴＬ３（１７－４５５）－Ｈｉｓ、カニクイザルＡＮＧＰＴＬ３（１７－４６０）－Ｈｉｓ、ラットＡＮＧＰＴＬ３（１７－４５５）－Ｈｉｓ）は、マイクロプレートにコーティングされたストレプトアビジンに結合することで、９６ウェルマイクロプレートに固定された。抗体を加えた後のシグナルの強弱によって抗体とＡＮＧＰＴＬ３との結合活性を判断した。
ｐＨ７．４のＰＢＳ（ＢａｓａｌＭｅｄｉａ、Ｂ３２０）緩衝液でヒツジ抗マウスＩｇＧ（Ｓｉｇｍａ、Ｍ３５３４－１ＭＬ）を２μｇ／ｍＬ濃度まで希釈し、５０μＬ／ウェルの体積で９６ウェルマイクロプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＣＬＳ３５９０－１００ＥＡ）に加え、３７℃でインキュベータに３時間置き、又は４℃で一晩（１６～１８時間）置いた。液体を捨ててから、ＰＢＳで希釈された５％脱脂乳（ＢＤ、２３２１００）封止液を２５０ μＬ／ウェルで加え、３７℃でインキュベータに３時間インキュベートし、又は４℃で一晩（１６～１８時間）置いて封止した。封止完了後に、封止液を捨て、ＰＢＳＴ緩衝液（０．０５％ツィーン－２０を含むｐＨ７．４ＰＢＳ）でプレートを３回洗浄した後、試料希釈液（１％ＢＳＡを含むｐＨ７．４ＰＢＳ）で０．５μｇ／ｍＬまで希釈されたヒトＡＮＧＰＴＬ３（１７－１７０）－ｍＦｃ（配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に示される）を５０μＬ／ウェルで加え、３７℃でインキュベータに置いて２時間インキュベートした。インキュベート完了後、マイクロプレートの反応液を捨て、ＰＢＳＴでプレートを３回洗浄した後、試料希釈液で希釈された異なる濃度の検出待ち抗体を５０μＬ／ウェルで加え、３７℃でインキュベータに置いて２時間インキュベートした。インキュベート完了後、ＰＢＳＴでプレートを３回洗浄した後、試料希釈液で希釈されたヒツジ抗ヒト二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１０９－０３５－００３）を５０ μＬ／ウェルで加え、３７℃で１時間インキュベートした。ＰＢＳＴでプレートを３回洗浄した後、ＴＭＢ発色基質（ＫＰＬ、５２－００－０３）を５０ μＬ／ウェルで加え、室温で２～５分間（ｍｉｎ）インキュベートし、１ＭＨ２ＳＯ４を５０μＬ／ウェルで加えて反応を停止させ、ＶｅｒｓａＭａｘマイクロプレートリーダーで４５０ｎｍにおける吸収値を読み取り、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体のＡＮＧＰＴＬ３抗原タンパク質に対する結合のＥＣ５０値を算出した。実験結果は表３に示した。
ｐＨ７．４のＰＢＳ（ＢａｓａｌＭｅｄｉａ、Ｂ３２０）緩衝液でストレプトアビジン（Ｓｉｇｍａ、Ｓ４７６２－５ＭＧ）を３μｇ／ｍＬ濃度まで希釈し、５０μＬ／ウェルの体積で９６ウェルマイクロプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＣＬＳ３５９０－１００ＥＡ）に加え、３７℃でインキュベータに３時間置き、又は４℃で一晩（１６～１８時間）置いた。液体を捨ててから、ＰＢＳで希釈された５％脱脂乳（ＢＤ、２３２１００）封止液を２５０μＬ／ウェルで加え、３７℃でインキュベータに３時間インキュベートし、又は４℃で一晩（１６～１８時間）置いて封止した。封止完了後に、封止液を捨て、ＰＢＳＴ緩衝液（０．０５％ツィーン－２０を含むｐＨ７．４ＰＢＳ）でプレートを３回洗浄した後、試料希釈液（１％ＢＳＡを含むｐＨ７．４ＰＢＳ）で０．５μｇ／ｍＬまで希釈さえたビオチン標識を実施したマウスＡＮＧＰＴＬ３（１７－４５５）－Ｈｉｓ（配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に示される）、カニクイザルＡＮＧＰＴＬ３（１７－４６０）－Ｈｉｓ（配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７に示される）、ラットＡＮＧＰＴＬ３（１７－４５５）－Ｈｉｓ（配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８に示される）を５０μＬ／ウェルで加え、３７℃でインキュベータに置いて２時間インキュベートした。インキュベート完了後、マイクロプレートの反応液を捨て、ＰＢＳＴでプレートを３回洗浄した後、試料希釈液で希釈された異なる濃度の検出待ち抗体を５０μＬ／ウェルで加え、３７℃でインキュベータに置いて２時間インキュベートした。インキュベート完了後、ＰＢＳＴでプレートを３回洗浄した後、試料希釈液で希釈されたＨＲＰ標識を実施したヒツジ抗マウス二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１１５－０３５－００３）又はヒツジ抗ヒト二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１０９－０３５－００３）又はマウスＨＲＰ／抗Ｍ１３カップリングの二次抗体（Ｓｉｎｏ 生物学的、Ｃａｔ Ｎｏ。１１９７３－ＭＭ０５－１００、ファージ選別に利用される）を５０μＬ／ウェルで加え、３７℃で１時間インキュベートした。ＰＢＳＴでプレートを３回洗浄した後、ＴＭＢ発色基質（ＫＰＬ、５２－００－０３）を５０μＬ／ウェルで加え、室温で２～５分間（ｍｉｎ）インキュベートし、１ＭＨ２ＳＯ４を５０μＬ／ウェルで加えて反応を停止させ、ＶｅｒｓａＭａｘマイクロプレートリーダーで４５０ｎｍにおける吸収値を読み取り、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体のＡＮＧＰＴＬ３抗原タンパク質に対する結合のＥＣ５０値を算出した。実験結果は表３に示した。実験結果によれば、本開示の抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体は異なる種のＡＮＧＰＴＬ３タンパク質に結合できる。
Figure 2023510787000019
試験例２．抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体とＡＮＧＰＴＬ３抗原タンパク質とのＨＴＲＦ結合実験
ＨＴＲＦ実験は同様に抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体と抗原との結合活性の検出に利用される。ビオチン標識試薬キット（Ｄｏｊｉｎｄｏ、ＬＫ０３）により標識されたＨＩＳラベル付きのＡＮＧＰＴＬ３（ヒトＡＮＧＰＴＬ３（１７－４６０）－Ｈｉｓ、マウスＡＮＧＰＴＬ３（１７－４５５）－Ｈｉｓ、カニクイザルＡＮＧＰＴＬ３（１７－４６０）－Ｈｉｓ、ラットＡＮＧＰＴＬ３（１７－４５５）－Ｈｉｓ）がＨＴＲＦ試薬ストレプトアビジン－Ｔｂ ｃｒｙｐｔａｔａ（Ｃｉｓｂｉｏ、６１０ＳＡＴＬＡ）に結合し、抗体を加えた後、抗体がそれぞれＨＴＲＦ試薬Ｐａｂ抗マウスＩｇＧ－ＸＬ６６５（Ｃｉｓｂｉｏ、６１ＰＡＭＸＬＡ）及びアンジオポエチン様タンパク質３に結合し、シグナルの強弱が抗体とアンジオポエチン様タンパク質３との結合活性の判断に利用される。
希釈液（１％ＢＳＡを含むｐＨ７．４ＰＢＳ）でビオチン標識を実施したヒトＡＮＧＰＴＬ３（１７－４６０）－Ｈｉｓ（配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に示される）、マウスＡＮＧＰＴＬ３（１７－４５５）－Ｈｉｓ（配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に示される）、カニクイザルＡＮＧＰＴＬ３（１７－４６０）－Ｈｉｓ（配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７に示される）、ラットＡＮＧＰＴＬ３（１７－４５５）－Ｈｉｓ（配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８に示される）を４μｇ／ｍＬ調製し、５μＬ／ウェルで３８４ウェルプレート（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、ｏｐｔｉｐｌａｔｅ－３８４）に加えてから、ＨＴＲＦ試薬ストレプトアビジン－Ｔｂ ｃｒｙｐｔａｔａとＰａｂ抗マウスＩｇＧ－ＸＬ６６５との混合液を５μＬ／ウェルで加え、最後に試料希釈液で希釈された異なる濃度の検出待ち抗体を１０μＬ／ウェルで加え、２５℃で１時間インキュベートした。ＰＨＥＲＡｓｔａｒ ＦＳ（ＢＭＧ ＬａｂＴＥＣＨ）によりＨＴＲＦモジュールにおける数値を読み取り、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体のアンジオポエチン様タンパク質３に対する結合のＥＣ５０値を算出した。実験結果は表４に示された。実施結果によれば、本開示の抗体はヒト、マウス、カニクイザル、ラットなどの種のＡＮＧＰＴＬ３抗原に対して良好な結合活性を有する。
Figure 2023510787000020
試験例３． 抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体のＬＰＬ酵素活性抑制実験
ＬＰＬ酵素活性検出実験はＡＮＧＰＴＬ３タンパク質のＬＰＬ酵素に対する抑制効果の抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体による遮断活性の検出に利用される。
希釈緩衝液（ｐＨ７．４ＰＢＳ＋２ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡ）でウシＬＰＬ（Ｓｉｇｍａ， Ｌ２２５４－５ＫＵ）を１２．５単位となるように希釈し、２５μＬ／ウェルで９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ， ３６０３）に加えてから、試料希釈液で希釈された異なる濃度の検出待ち抗体を２５μＬ／ウェルで加え、濃度２７．６μｇ／ｍＬのＡＮＧＰＴＬ３タンパク質（ヒトＡＮＧＰＴＬ３（１７－１７０）－Ｆｌａｇ－Ｈｉｓ（配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に示される）、マウスＡＮＧＰＴＬ３（１７－４５５）－Ｈｉｓ（配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に示される）、カニクイザルＡＮＧＰＴＬ３（１７－４６０）－Ｈｉｓ（配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７に示される）、ラットＡＮＧＰＴＬ３（１７－４５５）－Ｈｉｓ（配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８に示される）を２５μＬ／ウェルで更に加え、振とう機により９６ウェルプレートを均一に振とうさせ、３７℃でインキュベータに置いて３０ｍｉｎインキュベートした。最後に希釈緩衝液で希釈された２０μＭ基質（Ｓｉｇｍａ， ３００５８－１０ＭＧ－Ｆ）を２５ μＬ／ウェルで加え、振とう機により９６ウェルプレートを均一に振とうさせ、３７℃でインキュベータに置いて３０ｍｉｎインキュベートした。Ｆｌｅｘｓｔａｔｉｏｎ３マイクロプレートリーダーによりＥｘ５３５／Ｅｍ６１２で数値を読取った。Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ５ソフトウエアにより濃度及び対応する蛍光値データを処理して、ＩＣ５０を算出した。実験結果は表５に示した。実施結果によれば、本開示の抗体は良好なＬＰＬ酵素抑制効果を有する。
Figure 2023510787000021
試験例４． 抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体とＡＮＧＰＴＬ３タンパク質とのＢｉａｃｏｒｅ検出実験
Ｂｉａｃｏｒｅにより検出待ちの抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体とヒト、サル、ラット及びマウスＡＮＧＰＴＬ３との親和力を測定した。方法は下記の通りである。
それぞれＰｒｏｔｅｉｎ Ａバイオセンサチップ（Ｃａｔ． ＃ ２９１２７５５６， ＧＥ）により所定量の検出待ち抗体を親和的に捕捉した後、チップの表面で所定濃度のヒト、サル、ラット及びマウスのＡＮＧＰＴＬ３抗原（ヒト－ＡＮＧＰＴＬ３（Ｒ＆Ｄ， ３８２９－ＡＮ）、マウスＡＮＧＰＴＬ３（１７－４５５）－Ｈｉｓ（配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に示される）、カニクイザルＡＮＧＰＴＬ３（１７－４６０）－Ｈｉｓ（配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７に示される）、ラットＡＮＧＰＴＬ３（１７－４５５）－Ｈｉｓ（配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８に示される））を流した。Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００機器により反応シグナルをリアルタイムで検出して、結合と解離曲線を得た。各サイクル解離が完了した後、ｐＨ１．５のグリシン－塩酸再生溶液（Ｃａｔ． ＃ ＢＲ－１００３－５４， ＧＥ）でバイオチップを洗浄して再生した。試験作動緩衝液が１×ＨＢＳ－ＥＰ緩衝溶液（Ｃａｔ． ＃ ＢＲ－１００１－８８， ＧＥ）である。試験により得られたデータをＧＥ Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウエア３．０バージョンにより（１：１）Ｌａｎｇｍｕｉｒモデルでフィッティングし、親和力数値を得た。実験結果は表６に示した。実験結果によれば、本開示の抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体は、ヒト、カニクイザル、ラット及びマウスのＡＮＧＰＴＬ３抗原に高親和力で結合できる。
Figure 2023510787000022
試験例５． 抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体のラット体内薬効評価
一、Ｐ８ＢＧ抗体のラット体内における脂質低下実験
実験用ＳＤラットに対してラボ環境で適応性飼養を１週間行い（４週齢ＳＤラット、ＳＰＦ、約１００ｇ、雄、上海ＳＬＡＣ実験動物有限責任公司より購入、合格証明書番号：２０１７０００５０１３０１７、ＳＣＸＫ（滬）２０１７－０００５）、１２／１２時間の明／暗周期で調節し、温度２３±１℃、湿度４０～５０％で動物に標準殺菌マウス飼料を投与し、水や餌を自由に摂取させた。実験を開始する７日間前に、動物を４ｈ断食させた後に、眼窩から採血し、３５００ ＲＰＭで１５ｍｉｎ遠心分離し、血清を取った。ＡＤＶＩＡ ２４００化学システム（Ｓｉｅｍｅｎｓ）により血清脂質濃度（トリグリセリド）を測定した。ラットをトリグリセリドレベルで６組（非相関ホモヒトＩｇＧタンパク質（ｈＩｇＧ、下記同様）を陰性対照組、Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂ（配列構造がＷＨＯ Ｄｒｕｇ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ， Ｖｏｌ． ２９， Ｎｏ． ３， ２０１５のＥｖｉｎａｃｕｍａｂ配列を参照）３．５ ｍｐｋ組、Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂ７ ｍｐｋ組、Ｐ８ＢＧ３．５ ｍｐｋ組、Ｐ８ＢＧ１．７５ ｍｐｋ組、Ｐ８ＢＧ７ ｍｐｋ組とする）に分け、１組にラット６匹、皮下注射により１回投与し、注射後１日目、５日目、９日目、１３日目、１６日目に各組のラットを４時間断食させた後に採血し、血清を分離して、ＡＤＶＩＡ ２４００化学システム（Ｓｉｅｍｅｎｓ）により血清脂質濃度（トリグリセリド）を測定した。実験データを平均値±標準偏差（Ｍｅａｎ±ＳＥＭ）で示し、Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ５ソフトウエアによりプロットし、ＴＴＥＳＴにより統計的分析を行った。
実験結果は図１及び表７に示した。陰性対照組と比較すれば、投与後１日目に、各治療組はトリグリセリドが全て低下した。Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂ３．５ ｍｐｋ組を除くその他の各組は全て統計学的に有意差がある。実験過程において、Ｐ８ＢＧ７ ｍｐｋ組はトリグリセリドが最大で８３．７％低下し、Ｐ８ＢＧ３．５ ｍｐｋ組はトリグリセリドが最大で８１．８％低下し、Ｐ８ＢＧ１．７５ ｍｐｋ組はトリグリセリドが最大で６８．７％低下した。投与後５日目に、Ｐ８ＢＧ３．５ ｍｐｋ組、Ｐ８ＢＧ１．７５ ｍｐｋ組、Ｐ８ＢＧ７ ｍｐｋ組はトリグリセリドの低下について依然として統計学的に有意差があるが、Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂ３．５ ｍｐｋ組、Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂ７ ｍｐｋ組は統計学的に有意差がない。投与後９日目に、Ｐ８ＢＧ７ ｍｐｋ組及びＰ８ＢＧ３．５ ｍｐｋ組は依然として統計学的に有意差がある。これにより、同じ用量では、Ｐ８ＢＧはＥｖｉｎａｃｕｍａｂよりもトリグリセリド低下效果がより良好で持続的である。実験過程において各組は動物体重が正常である。
Figure 2023510787000023
備考：Ｍａｘ Ｉｎｈ ％は陰性対照組ＴＧに対する最大脂質低下パーセンテージを示す。ｍｐｋはｍｇ／ｋｇを示す。
二、Ｐ３Ｇ抗体のラット体内における脂質低下実験
実験用ＳＤラットに対してラボ環境で適応性飼養を１週間行い（４週齢ＳＤラット、ＳＰＦ、雄、上海ＳＬＡＣ実験動物有限責任公司より購入、合格証明書番号：２０１７０００５０１３０１７、ＳＣＸＫ（滬）２０１７－０００５）、１２／１２時間の明／暗周期で調節し、温度２３±１℃、湿度４０～５０％で動物に標準殺菌マウス飼料を投与し、水や餌を自由に摂取させた。実験を開始する７日間前に、動物を４ｈ断食させた後に、眼窩から採血し、３５００ ＲＰＭで１５ｍｉｎ遠心分離し、血清を取った。ＡＤＶＩＡ ２４００化学システム（Ｓｉｅｍｅｎｓ）により血清脂質濃度（トリグリセリド）を測定した。ラットをトリグリセリドレベルで４組（ｈＩｇＧ陰性対照組、Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂ３．５ ｍｐｋ組、Ｐ３Ｇ３．５ ｍｐｋ組、Ｐ３Ｇ７ ｍｐｋ組）に分け、１組にラット６匹、皮下注射により１回投与し、注射後１日目、５日目、９日目、１３日目に各組のラットを４時間断食させた後に採血し、血清を分離して、ＡＤＶＩＡ ２４００化学システム（Ｓｉｅｍｅｎｓ）により血清脂質濃度（トリグリセリド）を測定した。実験データを平均値±標準偏差（Ｍｅａｎ±ＳＥＭ）で示し、Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ５ソフトウエアによりプロットし、ＴＴＥＳＴにより統計的分析を行った。
実験結果は図２に示した。ｈＩｇＧ陰性対照組と比較すれば、投与後１日目に、各組はトリグリセリドが全て低下した。且つＰ３Ｇ３．５ ｍｐｋ組、Ｐ３Ｇ７ ｍｐｋ組はＥｖｉｎａｃｕｍａｂ ３．５ ｍｐｋ組よりもトリグリセリド低下幅が大きい。投与後９日目に、Ｐ３Ｇ３．５ ｍｐｋ組及びＰ３Ｇ７ ｍｐｋ組は血清脂質濃度が依然として陽性対照組よりも低い。
試験例６． 高脂高コレステロールで飼養を行ったｃ５７ｂｌ／６マウスにおける抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体の血漿脂質濃度に対する体内効果の測定
ｃ５７ｂｌ／６マウスに対して５匹／檻で飼養を行い（４週齢ｃ５７ｂｌ／６マウス、ＳＰＦ、約１６～１８ｇ、雄、上海Ｃａｖｅｎｓ実験動物有限責任公司より購入、合格証明書番号：２０１９１３８１２、ＳＣＸＫ（蘇）２０１６－００１０）、ラボ環境で適応性飼養を４週間行い、１２／１２時間の明／暗周期で調節し、温度２３±１℃、湿度４０～５０％で動物に一般飼料を投与して飼養を行い、水や餌を自由に摂取させた。事前採血後５日目に、一般飼料を高脂高コレステロール飼料（Ｄ１２０７９Ｂ、江蘇省協同医薬生物工程有限責任公司より購入）に交換して、実験終了までマウスに対して飼養を行った。実験開始８日間前に動物を断食させ、４時間断食させた後に、眼窩から採血し、８０００ ＲＰＭで２ｍｉｎ遠心分離し、血漿を収集した。ＡＤＶＩＡ ２４００化学システム（Ｓｉｅｍｅｎｓ）により血漿脂質濃度を測定した。マウスをトリグリセリドレベルで４組（ｈＩｇＧ陰性対照組、Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂ２５ ｍｐｋ組、Ｐ８ＢＧ２５ ｍｐｋ組、Ｐ８ＢＧ５ ｍｐｋ組）に分け、１組に１１匹、１週間に皮下投与により１回注射し、計８回投与した。実験開始後２週目、３週目、５週目、７週目、９週目、１０週目、１１週目に、各組のマウスを４時間断食させた後に、眼窩から採血し、血漿を収集した。ＡＤＶＩＡ ２４００化学システム（Ｓｉｅｍｅｎｓ）により血漿脂質濃度（トリグリセリド（ＴＧ）、総コレステロール（ＴＣ）及びＬＤＬコレステロール（ＬＤＬ－Ｃ））を測定した。実験データを平均値±標準偏差（Ｍｅａｎ±ＳＥＭ）で示し、Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ５ソフトウエアによりプロットし、ＴＴＥＳＴにより統計的分析を行った。
実験結果は表８～表１０及び図３～５に示した。ｈＩｇＧ陰性対照組と比較すれば、実験２週目、３週目、５週目、７週目に、Ｐ８ＢＧ２５ ｍｐｋ組はＴＧ、ＴＣ及びＬＤＬ－Ｃが明らかに低下した。実験３週目、５週目、７週目に、Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂ２５ ｍｐｋ及びＰ８ＢＧ５ ｍｐｋ組はＴＧ、ＴＣ及びＬＤＬ－Ｃが低下した。ｈＩｇＧ陰性対照組と比較すれば、実験９週目に、Ｐ８ＢＧ２５ ｍｐｋ組及びＰ８ＢＧ５ ｍｐｋ組の２組だけはトリグリセリドが明らかに低下した。Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂ２５ ｍｐｋ組と比較すれば、実験２週目、３週目、９週目に、Ｐ８ＢＧ２５ ｍｐｋ組はトリグリセリド及び総コレステロールが明らかに低下した。Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂ２５ ｍｐｋ組と比較すれば、実験２週目、９週目に、Ｐ８ＢＧ２５ ｍｐｋ組はＬＤＬ－Ｃが明らかに低下した。１週目～１１週目の全実験周期に、Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂ２５ ｍｐｋ組はＴＧが最低で４０．５±２．３まで低下し、開始ＴＧよりも３２．６０％低下した。Ｐ８ＢＧ２５ ｍｐｋ組はＴＧが最低で２１．１±１．３まで低下し、開始ＴＧよりも６４．９０％低下した。これにより、Ｐ８ＢＧ抗体はＥｖｉｎａｃｕｍａｂよりも血中脂質低下効果がより有効で持続的である。
Figure 2023510787000024


備考：ｍａｘ Ｉｎｈ ％は開始ＴＧに対する最大脂質低下パーセンテージを示す。
Figure 2023510787000025
備考：Ｍａｘ Ｉｎｈ ％は陰性対照組ＬＤＬに対する最大脂質低下パーセンテージを示す。
Figure 2023510787000026
備考：Ｍａｘ Ｉｎｈ ％は陰性対照組ＴＣに対する最大脂質低下パーセンテージを示す。
試験例７． ＡＰＯＥマウスにおける抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体の血漿脂質濃度に対する体内効果の測定
ＡＰＯＥマウスに対して２匹／檻で飼養を行い（８週齢ＡＰＯＥマウス、ＳＰＦ、約２２ｇ、雄、上海Ｃａｖｅｎｓ実験動物有限責任公司より購入、合格証明書番号：２０１９１７２６０、ＳＣＸＫ（蘇）２０１６－００１０）、ラボ環境で適応性飼養を４週間行い、１２／１２時間の明／暗周期で調節し、温度２３±１℃、湿度４０～５０％で動物に高脂飼料（Ｄ１２１０８Ｃ）を投与して飼養を行い、水や餌を自由に摂取させた。実験開始７日間前に動物を断食させ、４時間（ｈ）断食させた後に、眼窩から採血し、８０００ＲＰＭで２分間（ｍｉｎ）遠心分離し、血漿を収集した。ＡＤＶＩＡ ２４００化学システム（Ｓｉｅｍｅｎｓ）により血漿脂質濃度を測定した。マウスをトリグリセリドレベルで５組（ｈＩｇＧ陰性対照組、Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂ１０ ｍｐｋ組、Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂ５ ｍｐｋ組、Ｐ８ＢＧ１０ ｍｐｋ組、Ｐ８ＢＧ５ ｍｐｋ組）に分け、１組に８匹、それぞれ皮下注射により１回投与し（各組の投与用量は表１１を参照）、投与後１日目（ｄ）、７日目、１１日目に各組のマウスをそれぞれ４時間断食させた後に、眼窩から採血し、血漿を収集し、ＡＤＶＩＡ ２４００化学システム（Ｓｉｅｍｅｎｓ）により血漿脂質濃度（トリグリセリド、ＨＤＬコレステロール）を測定した。実験データを平均値±標準偏差（Ｍｅａｎ±ＳＥＭ）で示し、Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ５ソフトウエアによりプロットし、ＴＴＥＳＴにより統計的分析を行った。
今回の実験結果は図６、７及び表１１に示した。ｈＩｇＧ陰性対照組と比較すれば、投与後１ ｄに、各治療組はトリグリセリドが低下した。Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂ（１０ｍｐｋ）組はトリグリセリドが最低で６５．６±５．４ｍｇ／ｄＬまで低下し、開始ＴＧ値よりも４６．２％低下し、Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂ（５ｍｐｋ）組はトリグリセリドが最低で７１．８±３．３ｍｇ／ｄＬまで低下し、開始ＴＧ値よりも４２．１％低下し、Ｐ８ＢＧ（１０ｍｐｋ）組はトリグリセリドが最低で３３．３±２．２ｍｇ／ｄＬまで低下し、開始ＴＧ値よりも７２．９％低下し、Ｐ８ＢＧ（５ｍｐｋ）組はトリグリセリドが最低で３７．０±１．７ｍｇ／ｄＬまで低下し、開始ＴＧ値よりも７０．２％低下した。また、実験結果によれば、投与後１日目に、Ｐ８ＢＧ１０ｍｐｋ組は血漿ＨＤＬ－Ｃが向上し、Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂ１０ ｍｐｋ組は血漿ＨＤＬ－Ｃが低下したが、脂質低下実験において、通常、脂質低下と同時にＨＤＬ－Ｃ低下が望まない。
Figure 2023510787000027
備考：ｍａｘ Ｉｎｈ ％は開始ＴＧに対する最大脂質低下パーセンテージを示す。
試験例８． 抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体の薬物動態評価
一、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体のマウス体内における薬物動態試験
体重１８～２４ｇのＣ５７ＢＬ／６マウス（浙江維通利華実験動物技術有限公司より購入）を使用した。ラボ環境で適応性飼養を３日間以上行い、１２／１２時間の明／暗周期で調節し、温度１６～２６℃、相対湿度４０～７０％で飼養期間内に餌や水を自由に摂取させた。実験開始１日間前に、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに番号を付けて、ランダムで組分けし、１組に３匹である。実験当日に、各組のマウスに静脈注射によりそれぞれ受検薬剤Ｐ８ＢＧ及びＥｖｉｎａｃｕｍａｂを投与し、投与用量が１０ｍｇ／ｋｇであり、注射体積が５ｍＬ／ｋｇである。
投与組に対して投与前及び投与後５ｍｉｎ、８ｈ、１ｄ、２ｄ、４ｄ、７ｄ、１０ｄ、１４ｄ、２１ｄ、２８ｄに全血０．１ｍＬを採集し、抗凝固薬を加えず、採血した後、４℃で３０ｍｉｎ置き、１０００ｇで１５ｍｉｎ遠心分離し、上澄（血清）を取り、ＥＰ管に置き、－８０℃で保存した。
ＥＬＩＳＡ方法により血清中の抗体濃度を検出し、Ｗｉｎｎｏｌｉｎソフトウエアにより受検薬剤の薬物動態パラメータを算出した。得られた主な薬物動態結果は表１２及び図８を参照する。実験結果によれば、本開示のＰ８ＢＧ抗体はマウス体内における半減期が陽性対照Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂよりも高い。
Figure 2023510787000028
備考：ＡＵＣ０－∞は薬物濃度時間曲線における面積である。ｔ１／２（ｈ）は半減期（時間を単位とする）である。ｔ１／２（ｄ）は半減期（日を単位とする）である。ｉ．ｖ．は静脈内注射である。
二、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体のカニクイザル体内における薬物動態評価
体重３～４ｋｇのカニクイザル（広東前沿生物科技有限公司より購入）を使用した。動物を実験に移す前に、少なくとも１４日間の検疫及び飼養を行う。動物をステンレス檻に飼養し、１組１檻に２匹以下である。動物部屋の室温を１８℃～２６℃に、相対湿度を４０％～７０％に制御し、明暗交互に１２時間光りを照らす。実験過程において、動物に水を自由に摂取させた。生化学指標によって６匹のカニクイザルをランダムで２組に分け、１組に動物３匹である。各組に皮下注射によりそれぞれ受検薬剤Ｐ８ＢＧ及びＥｖｉｎａｃｕｍａｂを投与し、投与用量が１０ｍｇ／ｋｇであり、注射体積が２ｍＬ／ｋｇである。
組分けした後に、動物を一晩断食させ、それぞれ投与前、投与開始後１時間（ｈ）、２ｈ、４ｈ、８ｈ、１２ｈ、１日間（ｄ）、３ｄ、５ｄ、７ｄ、１０ｄ、１４ｄ、２１ｄ、２８ｄ、３５ｄ、４２ｄ、４９ｄ、５６ｄに下肢静脈から約２ｍＬ採血し、分離ゲルを含む採血管に入れ、採血後室温で３０分間（ｍｉｎ）置き、１０００ｇで１５ｍｉｎ遠心分離し、上澄を取り、２つの清潔なＥＰ管に分注し、－７０℃以下で一時的に保存した（採血後２ｈ以内に完了させた）。ＥＬＩＳＡ方法により血清中の抗体濃度を検出し、Ｗｉｎｎｏｌｉｎソフトウエアにより受検薬剤の薬物動態パラメータを算出した。得られた主な薬物動態結果は表１４及び図９を参照する。実験結果によれば、本開示のＰ８ＢＧ抗体はカニクイザル体内における半減期が陽性対照Ｅｖｉｎａｃｕｍａｂよりも高い。
Figure 2023510787000029

備考：ＡＵＣ ０－∞は薬物濃度時間曲線における面積である。ｔ１／２（ｈ）は半減期（時間を単位とする）である。ｔ１／２（ｄ）は半減期（日を単位とする）である。ｓｃ．は皮下注射である。

Claims (14)

  1. 抗体重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片であって、
    i）前記重鎖可変領域とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３配列に示される重鎖可変領域は同じ配列のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を有し、前記軽鎖可変領域とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４配列に示される軽鎖可変領域は同じ配列のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を有し、
    ii）前記重鎖可変領域とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１配列に示される重鎖可変領域は同じ配列のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を有し、前記軽鎖可変領域とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２配列に示される軽鎖可変領域は同じ配列のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を有し、或いは
    iii）前記重鎖可変領域とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９配列に示される重鎖可変領域は同じ配列のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を有し、前記軽鎖可変領域とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０配列に示される軽鎖可変領域は同じ配列のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を有する、
    抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片。
  2. 重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片であって、
    iv）前記重鎖可変領域は配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域は配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、
    v）前記重鎖可変領域は配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域は配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、或いは
    vi）前記重鎖可変領域は配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域は配列がそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、
    請求項１に記載の抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片。
  3. 重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片であって、
    （Ａ）前記重鎖可変領域とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３は少なくとも９０％の配列同一性を有し、及び／又は前記軽鎖可変領域とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４は少なくとも９０％の配列同一性を有し、
    （Ｂ）前記重鎖可変領域とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１は少なくとも９０％の配列同一性を有し、及び／又は前記軽鎖可変領域とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２は少なくとも９０％の配列同一性を有し、或いは
    （Ｃ）前記重鎖可変領域とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９は少なくとも９０％の配列同一性を有し、及び／又は前記軽鎖可変領域とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０は少なくとも９０％の配列同一性を有する、
    請求項１又は２に記載の抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片。
  4. 下記に示される重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、即ち、
    （Ｄ）配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３に示される重鎖可変領域と、配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４に示される軽鎖可変領域と、
    （Ｅ）配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１に示される重鎖可変領域と、配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２に示される軽鎖可変領域と、或いは
    （Ｆ）配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９に示される重鎖可変領域と、配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０に示される軽鎖可変領域と、
    を含む、請求項３に記載の抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片。
  5. 前記抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体は重鎖定常領域と軽鎖定常領域とを更に含み、
    好ましくは、前記重鎖定常領域はヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４定常領域から選ばれ、前記軽鎖定常領域はヒトκとλ鎖定常領域から選ばれ、
    より好ましくは、前記重鎖定常領域はその配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９に示され、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９と少なくとも８５％の配列同一性を有し、及び／又は前記軽鎖定常領域はその配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０に示され、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０と少なくとも８５％の配列同一性を有する、
    請求項１～４の何れか１項に記載の抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片。
  6. 前記抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体は重鎖と軽鎖とを含み、
    （Ｇ）前記重鎖とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５は少なくとも８５％の配列同一性を有し、及び／又は前記軽鎖とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６は少なくとも８５％の配列同一性を有し、
    （Ｈ）前記重鎖とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３は少なくとも８５％の配列同一性を有し、及び／又は前記軽鎖とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４は少なくとも８５％の配列同一性を有し、或いは
    （Ｉ）前記重鎖とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１は少なくとも８５％の配列同一性を有し、及び／又は前記軽鎖とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２は少なくとも８５％の配列同一性を有する、
    請求項１～５の何れか１項に記載の抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片。
  7. 前記抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体は重鎖と軽鎖とを含み、
    （Ｊ）前記重鎖はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５に示され、及び前記軽鎖はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６に示され、
    （Ｋ）前記重鎖はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３に示され、及び前記軽鎖はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４に示され、或いは
    （Ｌ）前記重鎖はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１に示され、及び前記軽鎖はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２に示される、
    請求項１～６の何れか１項に記載の抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片。
  8. 請求項１～７の何れか１項に記載の抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片と競合してＡＮＧＰＴＬ３抗原に結合する、単離した抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片。
  9. 請求項１～８の何れか１項に記載の抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片をコードする、核酸分子。
  10. 請求項９に記載の核酸分子を含む、宿主細胞。
  11. （Ａ）治療有効量の請求項１～８の何れか１項に記載の抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片、又は請求項９に記載の核酸分子と、
    （Ｂ）１種又は複数種の薬学的に許容されるベクター、希釈剤、緩衝剤又は賦形剤と、
    を含む、医薬組成物。
  12. 請求項１～８の何れか１項に記載の抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片を使用する工程を含む、ＡＮＧＰＴＬ３の免疫検出又は測定に利用される方法。
  13. 請求項１～８の何れか１項に記載の抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片を含む、試薬キット。
  14. 被験者に治療有効量の請求項１～８の何れか１項に記載の抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体又はその抗原結合断片、又は請求項９に記載の核酸分子、又は請求項１１に記載の医薬組成物を投与することを含む、疾患又は障害を治療するための方法であって、好ましくは、前記疾患又は障害はＡＮＧＰＴＬ３に関する疾患又は障害であり、より好ましくは、前記疾患又は障害は高コレステロール血症、高脂血症又はアテローム性動脈硬化症である、方法。
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