JP2023507142A - 多重特異性ｔ細胞受容体 - Google Patents

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Abstract

本発明は、多重特異性Ｔ細胞受容体を含むＣＤ８＋Ｔ細胞およびそれを作製するための方法を提供する。【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる２０１９年１２月１６日に出願された米国仮特許出願第６２／９４８，６９１号の利益を主張する。
連邦政府支援研究開発に関する記述
本発明は、米国国立衛生研究所によって授与されたＰ０１ ＡＩ０９４４１７、Ｕ１９ ＡＩ１２８７４１、Ｒ０１ ＡＩ１１７８０２、およびＲ０１ ＡＩ１４０８８８での政府支援によりなされた。米国政府は、本発明において一定の権利を有する。
電子式に提出された配列表の参照
ＡＳＣＩＩテキストファイル内の電子的に提出された配列表の内容（名称：４１５３＿０１４ＰＣ０１＿Ｓｅｑｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５、サイズ：１２，５４８バイト、および作成日：２０２０年１１月３０日）は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
従来制限されていたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）は、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）クラスＩまたはクラスＩＩの特定の対立遺伝子によって提示される、所与のタンパク質内の特定のペプチドもしくはエピトープ、または抗原を認識する。例えば、マウスＴ細胞受容体ＯＴ－１は、抗原卵白アルブミンに由来するペプチドＳＩＩＮＦＥＫＬを提示するマウスＭＨＣ－Ｉ分子Ｋｂに特異的である。
従来制限されていたＴＣＲは、目下、がんおよび慢性感染性疾患を治療するために臨床開発中である。これは通常、共通のＭＨＣ対立遺伝子によって提示される所望の抗原に特異的なＴＣＲを最初にクローニングすることによって達成される。次に、ＴＣＲを自家Ｔ細胞（すなわち、所与の患者に由来するＴ細胞）に導入する。これらの細胞のインビトロでの拡大に際して、そのような「ＴＣＲ Ｔ細胞」は、治療のために患者に再導入される（キメラ抗原受容体、すなわちＣＡＲを発現するＴ細胞に類似する）。この方法にはいくつかの欠点がある：ａ）新規患者の治療のために、毎回新たに自家ＴＣＲ Ｔ細胞を生成する必要がある、ｂ）ＴＣＲは、正しいＭＨＣ対立遺伝子を発現するヒトでしか使用することができない、ｃ）ＴＣＲは所与のペプチドに対して高度に特異的であるため、ペプチド配列の変異により、ＴＣＲ認識からの脱却が生じる。ａ）に関して、産業界および学会では、「既製の」異種Ｔ細胞、すなわち、他の人に与えたときに拒絶されないＴ細胞株を生成するために多くの努力がなされている。しかしながら、ｂ）およびｃ）については現在のところ解決策がない。
単一のＴＣＲは、同じまたは異なるＭＨＣ分子によって提示される２つ以上のペプチドを認識することができることが時折観察されている。しかしながら、これまで、複数の（無関係な）特異性を有する単一のＴＣＲを特異的に生成することができる方法は存在しなかった。
本発明は、多重特異性ＴＣＲを含むＣＤ８＋Ｔ細胞を生成する方法であって、
（ａ）第１の異種抗原をコードする核酸配列を含む組換えサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）ベクターを、第１のＭＨＣ／異種抗原由来ペプチド複合体を認識するＣＤ８＋Ｔ細胞の第１のセットを生成するのに有効な量で、対象に投与することであって、ＣＭＶベクターが、活性ＵＬ１２８、ＵＬ１３０、ＵＬ１４６およびＵＬ１４７タンパク質またはそれらのオーソログを発現しない、投与することと、（ｂ）ＣＤ８＋Ｔ細胞の第１のセットから第１のＣＤ８＋ＴＣＲを特定することであって、第１のＣＤ８＋ＴＣＲが、第１のＭＨＣ／異種抗原由来ペプチド複合体を認識する、特定することと、（ｃ）第２の異種抗原を、第２のＭＨＣ／異種抗原由来ペプチド複合体を認識するＣＤ８＋Ｔ細胞の第２のセットを生成するのに有効な量で、対象に投与することと、（ｄ）ＣＤ８＋Ｔ細胞の第２のセットから１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞を単離することと、（ｅ）ＣＤ８＋Ｔ細胞の第２のセットから第２のＣＤ８＋ＴＣＲを特定することであって、第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、第１のＭＨＣ／異種抗原由来ペプチド複合体および第２のＭＨＣ／異種抗原由来ペプチド複合体を認識する、特定することと、（ｆ）ＣＤ８＋Ｔ細胞の第３のセットを発現ベクターでトランスフェクトすることであって、発現ベクターが、第３のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする核酸配列と、第３のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする核酸配列に作動可能に連結されたプロモーターと、を含み、第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、第２のＣＤ８＋ＴＣＲのＣＤＲ３αおよびＣＤＲ３βを含み、それによって、第１のＭＨＣ／異種抗原由来ペプチド複合体および第２のＭＨＣ／異種抗原由来ペプチド複合体を認識する１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞を生成する、トランスフェクトすることと、（ｇ）目的の特定のペプチドに対して最も高いアビディティを有する第３のＣＤ８＋ＴＣＲのうちの１つ以上を選択することと、を含む、方法に関する。
一実施形態において、組換えＣＭＶベクターは、活性ＵＬ１８を発現しない。一実施形態において、組換えＣＭＶベクターは、活性ＵＬ４０タンパク質またはそのオーソログ、および活性ＵＳ２８タンパク質またはそのオーソログを発現する。
一実施形態において、第１のＭＨＣ／異種抗原由来ペプチド複合体は、ＭＨＣ－ＩＩ／異種抗原由来ペプチド複合体、ＭＨＣ－Ｅ／異種抗原由来ペプチド複合体、またはＭＨＣ－Ｉ／異種抗原由来ペプチド複合体である。一実施形態において、第２のＭＨＣ／異種抗原由来ペプチド複合体は、ＭＨＣ－ＩＩ／異種抗原由来ペプチド複合体またはＭＨＣ－Ｅ／異種抗原由来ペプチド複合体である。
一実施形態において、対象は、ヒトまたは非ヒト霊長類である。一実施形態において、組換えＣＭＶベクターは、組換えヒトＣＭＶベクターまたは組換えアカゲザルＣＭＶベクターである。
一実施形態において、第１および／または第２の異種抗原は、腫瘍抗原、病原体特異的抗原、組織特異的抗原、または宿主自己抗原を含む。一実施形態において、腫瘍抗原は、前立腺がん、腎臓がん、肺がん、膵臓がん、中皮腫、乳がん、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ芽球性白血病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、悪性黒色腫、卵巣がん、結腸がん、腎細胞がん、および子宮頸がんからなる群から選択されるがんに関連する。一実施形態において、病原体特異的抗原は、ヒト免疫不全ウイルス、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、パピローマウイルス、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ寄生虫、エプスタイン・バールウイルス（ＥＢＶ）、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）、ヒトＴリンパ球向性ウイルス１型（ＨＴＬＶ１）、メルケルウイルス（ＭＣＶ）、サイトメガロウイルス、およびＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓからなる群から選択される病原体に関連する。
一実施形態において、第１のＣＤ８＋ＴＣＲは、特定のＭＨＣ－ＩＩサブトープ（ｓｕｂｔｏｐｅ）またはスーパートープ（ｓｕｐｅｒｔｏｐｅ）を認識する。一実施形態において、第１のＣＤ８＋ＴＣＲは、特定のＭＨＣ－Ｅサブトープまたはスーパートープを認識する。一実施形態において、第１のＣＤ８＋ＴＣＲは、特定のＭＨＣ－Ｉサブトープまたはスーパートープを認識する。
一実施形態において、第１のＣＤ８＋ＴＣＲは、ＤＮＡまたはＲＮＡ配列決定によって特定される。別の実施形態において、第１のＣＤ８＋ＴＣＲは、シングルセル配列決定によって特定される。
一実施形態において、第１の異種抗原および第２の異種抗原は、同じである。一実施形態において、第１の異種抗原および第２の異種抗原は、異なる。
一実施形態において、ＣＤ８＋Ｔ細胞の第２のセットからの１つ以上の単離されたＣＤ８＋Ｔ細胞は、ＣＤ６９およびＴＮＦαを発現する。
一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、１つ以上の特定のＭＨＣ－ＩＩスーパートープを認識する。一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、１つ以上の特定のＭＨＣ－Ｅスーパートープを認識する。一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、１つ以上の特定のＭＨＣ－Ｉスーパートープを認識する。
一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、ＭＨＣ－ＩＩスーパートープおよびＭＨＣ－Ｅスーパートープを認識する。一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、ＭＨＣ－ＩスーパートープおよびＭＨＣ－Ｅスーパートープを認識する。一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、ＭＨＣ－ＩスーパートープおよびＭＨＣ－ＩＩスーパートープを認識する。
一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、１つ以上の特定のＭＨＣ－ＩＩサブトープを認識する。一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、１つ以上の特定のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する。一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、１つ以上の特定のＭＨＣ－Ｉサブトープを認識する。
一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、ＭＨＣ－ＩＩサブトープおよびＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する。一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、ＭＨＣ－ＩＩサブトープおよびＭＨＣ－Ｉサブトープを認識する。一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、ＭＨＣ－ＥサブトープおよびＭＨＣ－Ｉサブトープを認識する。
一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、ＭＨＣ－ＩＩサブトープまたはスーパートープおよびＭＨＣ－Ｅサブトープまたはスーパートープを認識する。一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、ＭＨＣ－ＩＩサブトープまたはスーパートープおよびＭＨＣ－Ｉサブトープまたはスーパートープを認識する。一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、ＭＨＣ－ＥサブトープまたはスーパートープおよびＭＨＣ－Ｉサブトープまたはスーパートープを認識する。
一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、特定のＭＨＣ－ＩＩスーパートープおよびＭＨＣ－ＩＩサブトープを認識する。一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、特定のＭＨＣ－ＥスーパートープおよびＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する。一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、特定のＭＨＣ－ＩスーパートープおよびＭＨＣ－Ｉサブトープを認識する。
一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、同じ抗原からの２つ以上のＭＨＣ－ＩＩスーパートープを認識する。一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、同じ抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープを認識する。一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、同じ抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｉスーパートープを認識する。
一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、同じ抗原からの２つ以上のＭＨＣ－ＩＩサブトープを認識する。一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、同じ抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する。一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、同じ抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｉサブトープを認識する。
一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、同じ抗原からの１つ以上のＭＨＣ－ＩＩスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－ＩＩサブトープを認識する。一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、同じ抗原からの１つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する。一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、同じ抗原からの１つ以上のＭＨＣ－Ｉスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－Ｉサブトープを認識する。
一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、２つ以上の抗原からの２つ以上のＭＨＣ－ＩＩスーパートープを認識する。一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、２つ以上の抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープを認識する。一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、２つ以上の抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｉスーパートープを認識する。
一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、２つ以上の抗原からの２つ以上のＭＨＣ－ＩＩサブトープを認識する。一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、２つ以上の抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する。一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、２つ以上の抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｉサブトープを認識する。
一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、異なる抗原からの１つ以上のＭＨＣ－ＩＩスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－ＩＩサブトープを認識する。一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、異なる抗原からの１つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する。一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、異なる抗原からの１つ以上のＭＨＣ－Ｉスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－Ｉサブトープを認識する。
一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、１つ以上の特定のＭＨＣ－ＩＩスーパートープを認識する。一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、１つ以上の特定のＭＨＣ－Ｅスーパートープを認識する。一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、１つ以上の特定のＭＨＣ－Ｉスーパートープを認識する。
一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、１つ以上の特定のＭＨＣ－ＩＩサブトープを認識する。一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、１つ以上の特定のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する。一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、１つ以上の特定のＭＨＣ－Ｉサブトープを認識する。
一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、特定のＭＨＣ－ＩＩスーパートープおよびＭＨＣ－ＩＩサブトープを認識する。一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、特定のＭＨＣ－ＥスーパートープおよびＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する。一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、特定のＭＨＣ－ＩスーパートープおよびＭＨＣ－Ｉサブトープを認識する。
一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、１つの抗原からの２つ以上のＭＨＣ－ＩＩスーパートープを認識する。一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、１つの抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープを認識する。一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、１つの抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｉスーパートープを認識する。
一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、１つの抗原からの２つ以上のＭＨＣ－ＩＩサブトープを認識する。一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、１つの抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する。一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、１つの抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｉサブトープを認識する。
一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、１つの抗原からの１つ以上のＭＨＣ－ＩＩスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－ＩＩサブトープを認識する。一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、１つの抗原からの１つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する。一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、１つの抗原からの１つ以上のＭＨＣ－Ｉスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－Ｉサブトープを認識する。
一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、２つ以上の抗原からの２つ以上のＭＨＣ－ＩＩスーパートープを認識する。一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、２つ以上の抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープを認識する。一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、２つ以上の抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープを認識する。
一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、２つ以上の抗原からの２つ以上のＭＨＣ－ＩＩサブトープを認識する。一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、２つ以上の抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する。一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、２つ以上の抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｉサブトープを認識する。
一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、特定のＭＨＣ－ＥサブトープまたはスーパートープおよびＭＨＣ－ＩＩサブトープまたはスーパートープを認識する。一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、特定のＭＨＣ－ＥサブトープまたはスーパートープおよびＭＨＣ－Ｉサブトープまたはスーパートープを認識する。一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、特定のＭＨＣ－ＩＩサブトープまたはスーパートープおよびＭＨＣ－Ｉサブトープまたはスーパートープを認識する。
一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、同じ抗原からの２つ以上のＭＨＣ－ＩＩサブトープを認識する。一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、同じ抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する。一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、同じ抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｉサブトープを認識する。
一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、異なる抗原からの１つ以上のＭＨＣ－ＩＩスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－ＩＩサブトープを認識する。一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、異なる抗原からの１つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する。一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、異なる抗原からの１つ以上のＭＨＣ－Ｉスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－Ｉサブトープを認識する。
一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする核酸配列は、第２のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする核酸配列と同一である。
一実施形態において、１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞が第２の対象から単離され、選択された第３のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする核酸配列および第３のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする核酸配列に作動可能に連結されたプロモーターで、１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞をトランスフェクトし、それによって、第１のＭＨＣ／異種抗原由来ペプチド複合体および第２のＭＨＣ／異種抗原由来ペプチド複合体を認識する１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞を生成する。
一実施形態において、第１のＭＨＣ－異種抗原由来ペプチド複合体は、ＭＨＣ－ＩＩ／異種抗原由来ペプチド複合体、ＭＨＣ－Ｅ／異種抗原由来ペプチド複合体、またはＭＨＣ－Ｉ／異種抗原由来ペプチド複合体である。一実施形態において、第２のＭＨＣ－異種抗原由来ペプチド複合体は、ＭＨＣ－ＩＩ／異種抗原由来ペプチド複合体、ＭＨＣ－Ｅ／異種抗原由来ペプチド複合体、またはＭＨＣ－Ｉ／異種抗原由来ペプチド複合体である。
一実施形態において、トランスフェクトされたＣＤ８＋Ｔ細胞は、がんを治療または予防するために第２の対象に投与される。別の実施形態において、がんは、前立腺がん、腎臓がん、肺がん、膵臓がん、中皮腫、乳がん、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ芽球性白血病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、悪性黒色腫、卵巣がん、結腸がん、腎細胞がん、および子宮頸がんからなる群から選択される。
一実施形態において、トランスフェクトされたＣＤ８＋Ｔ細胞は、病原体感染症を治療するために第２の対象に投与される
別の実施形態において、病原体感染症は、ヒト免疫不全ウイルス、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、パピローマウイルス、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ寄生虫、エプスタイン・バールウイルス（ＥＢＶ）、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）、ヒトＴリンパ球向性ウイルス１型（ＨＴＬＶ１）、メルケルウイルス（ＭＣＶ）、サイトメガロウイルス、およびＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓからなる群から選択される。
一実施形態において、第１の対象は、非ヒト霊長類であり、第２の対象は、ヒトであり、トランスフェクトされたＣＤ８＋Ｔ細胞は、第２のＣＤ８＋ＴＣＲの非ヒト霊長類ＣＤＲ３αおよびＣＤＲ３βを含むキメラ非ヒト霊長類－ヒトＣＤ８＋ＴＣＲを含む。
一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、第２のＣＤ８＋ＴＣＲの非ヒト霊長類ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含む。一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、第２のＣＤ８＋ＴＣＲのＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含む。
一実施形態において、第１の対象は、非ヒト霊長類であり、第２の対象は、ヒトであり、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、第１のＣＤ８＋ＴＣＲの非ヒト霊長類ＣＤＲ３αおよびＣＤＲ３βを含むキメラ非ヒト霊長類－ヒトＣＤ８＋ＴＣＲである。
一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、キメラＣＤ８＋ＴＣＲである。
一実施形態において、組換えＣＭＶベクターを第１の対象に投与することは、静脈内、筋肉内、腹腔内、または経口投与を含む。
一実施形態において、多重特異性ＴＣＲを含むＣＤ８＋Ｔ細胞は、当該方法によって生成される。
一実施形態において、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、がんを治療または予防するために、それを必要とする対象に投与される。別の実施形態において、がんは、前立腺がん、腎臓がん、肺がん、膵臓がん、中皮腫、乳がん、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ芽球性白血病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、悪性黒色腫、卵巣がん、結腸がん、腎細胞がん、および子宮頸がんからなる群から選択される。
一実施形態において、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、病原性感染症を治療するために、それを必要とする対象に投与される。別の実施形態において、病原体感染症は、ヒト免疫不全ウイルス、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、パピローマウイルス、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ寄生虫、エプスタイン・バールウイルス（ＥＢＶ）、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）、ヒトＴリンパ球向性ウイルス１型（ＨＴＬＶ１）、メルケルウイルス（ＭＣＶ）、サイトメガロウイルス、およびＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓからなる群から選択される。
一実施形態において、第１の対象に対する組換えＣＭＶベクターは、静脈内、筋肉内、腹腔内、または経口投与を含む。
本発明は、多重特異性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を含むＣＤ８＋Ｔ細胞を生成する方法であって、（ａ）第１の異種抗原をコードする核酸配列を含む組換えサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）ベクターを、第１のＭＨＣ－Ｅ／異種抗原由来ペプチド複合体を認識するＣＤ８＋Ｔ細胞の第１のセットを生成するのに有効な量で、対象に投与することであって、ＣＭＶベクターが、活性ＵＬ１２８、ＵＬ１３０、ＵＬ１４６およびＵＬ１４７タンパク質またはそれらのオーソログを発現せず、組換えＣＭＶベクターが、マイクロＲＮＡ認識エレメント（ＭＲＥ）をさらに含む、投与することと、（ｂ）ＣＤ８＋Ｔ細胞の第１のセットから第１のＣＤ８＋ＴＣＲを特定することであって、第１のＣＤ８＋ＴＣＲが、第１のＭＨＣ－Ｅ／異種抗原由来ペプチド複合体を認識する、特定することと、（ｃ）第２の異種抗原を、第２のＭＨＣ－Ｅ／異種抗原由来ペプチド複合体を認識するＣＤ８＋Ｔ細胞の第２のセットを生成するのに有効な量で、対象に投与することと、（ｄ）ＣＤ８＋Ｔ細胞の第２のセットから１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞を単離することと、（ｅ）ＣＤ８＋Ｔ細胞の第２のセットから第２のＣＤ８＋ＴＣＲを特定することであって、第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、第１のＭＨＣ－Ｅ／異種抗原由来ペプチド複合体および第２のＭＨＣ－Ｅ／異種抗原由来ペプチド複合体を認識する、特定することと、（ｆ）ＣＤ８＋Ｔ細胞の第３のセットを発現ベクターでトランスフェクトすることであって、発現ベクターが、第３のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする核酸配列と、第３のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする核酸配列に作動可能に連結されたプロモーターと、を含み、第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、第２のＣＤ８＋ＴＣＲのＣＤＲ３αおよびＣＤＲ３βを含み、それによって、第１のＭＨＣ－Ｅ／異種抗原由来ペプチド複合体および第２のＭＨＣ－Ｅ／異種抗原由来ペプチド複合体を認識する１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞を生成する、トランスフェクトすることと、（ｇ）目的の特定のペプチドに対して最も高いアビディティを有する第３のＣＤ８＋ＴＣＲのうちの１つ以上を選択することと、を含む、方法に関する。
一実施形態において、対象は、ヒトまたは非ヒト霊長類である。一実施形態において、組換えＣＭＶベクターは、組換えヒトＣＭＶベクターまたは組換えアカゲザルＣＭＶベクターである。
一実施形態において、第１の異種抗原は、腫瘍抗原、病原体特異的抗原、組織特異的抗原、または宿主自己抗原を含む。一実施形態において、腫瘍抗原は、前立腺がん、腎臓がん、肺がん、膵臓がん、中皮腫、乳がん、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ芽球性白血病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、悪性黒色腫、卵巣がん、結腸がん、腎細胞がん、および子宮頸がんからなる群から選択されるがんに関連する。一実施形態において、病原体特異的抗原は、ヒト免疫不全ウイルス、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、パピローマウイルス、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ寄生虫、エプスタイン・バールウイルス（ＥＢＶ）、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）、ヒトＴリンパ球向性ウイルス１型（ＨＴＬＶ１）、メルケルウイルス（ＭＣＶ）、サイトメガロウイルス、およびＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓからなる群から選択される病原体に関連する。
一実施形態において、ＭＲＥは、内皮細胞で発現されたマイクロＲＮＡに対する標的部位を含む。別の実施形態において、ＭＲＥは、ｍｉＲ１２６、ｍｉＲ－１２６－３ｐ、ｍｉＲ－１３０ａ、ｍｉＲ－２１０、ｍｉＲ－２２１／２２２、ｍｉＲ－３７８、ｍｉＲ－２９６、およびｍｉＲ－３２８からなる群から選択されるｍｉＲＮＡに特異的である。
一実施形態において、第１のＣＤ８＋ＴＣＲは、特定のＭＨＣ－Ｅサブトープまたはスーパートープを認識する。
一実施形態において、第１のＣＤ８＋ＴＣＲは、ＤＮＡまたはＲＮＡ配列決定によって特定される。一実施形態において、第１のＣＤ８＋ＴＣＲは、シングルセル配列決定によって特定される。
一実施形態において、第２の異種抗原は、腫瘍抗原、病原体特異的抗原、組織特異的抗原、または宿主自己抗原を含む。一実施形態において、腫瘍抗原は、前立腺がん、腎臓がん、肺がん、膵臓がん、中皮腫、乳がん、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ芽球性白血病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、悪性黒色腫、卵巣がん、結腸がん、腎細胞がん、および子宮頸がんからなる群から選択されるがんに関連する。一実施形態において、病原体特異的抗原は、ヒト免疫不全ウイルス、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、パピローマウイルス、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ寄生虫、エプスタイン・バールウイルス（ＥＢＶ）、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）、ヒトＴリンパ球向性ウイルス１型（ＨＴＬＶ１）、メルケルウイルス（ＭＣＶ）、サイトメガロウイルス、およびＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓからなる群から選択される病原体に関連する。
一実施形態において、第１の異種抗原および第２の異種抗原は、同じである。一実施形態において、第１の異種抗原および第２の異種抗原は、異なる。
一実施形態において、ＣＤ８＋Ｔ細胞の第２のセットからの１つ以上の単離されたＣＤ８＋Ｔ細胞は、ＣＤ６９およびＴＮＦαを発現する。
一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、ＤＮＡまたはＲＮＡ配列決定によって特定される。一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、シングルセル配列決定によって特定される。
一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、１つ以上の特定のＭＨＣ－Ｅスーパートープを認識する。一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、１つ以上の特定のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する。一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、特定のＭＨＣ－ＥスーパートープおよびＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する。
一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、同じ抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープを認識する。一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、同じ抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する。
一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、同じ抗原からの１つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する。一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、２つ以上の抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープを認識する。一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、２つ以上の抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する。一実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、異なる抗原からの１つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する。
一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、１つ以上の特定のＭＨＣ－Ｅスーパートープを認識する。一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、１つ以上の特定のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する。一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、特定のＭＨＣ－ＥスーパートープおよびＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する。
一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、１つの抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープを認識する。一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、１つの抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する。
一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、１つの抗原からの１つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する。一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、２つ以上の抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープを認識する。
一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、２つ以上の抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する。一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、特定のＭＨＣ－ＥスーパートープおよびＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する。
一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、同じ抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する。一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、異なる抗原からの１つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する。
一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする核酸配列は、第２のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする核酸配列と同一である。
一実施形態において、１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞が第２の対象から単離され、選択された第３のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする核酸配列および第３のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする核酸配列に作動可能に連結されたプロモーターで、１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞をトランスフェクトし、それによって、第１のＭＨＣ－Ｅ／異種抗原由来ペプチド複合体および第２のＭＨＣ－Ｅ／異種抗原由来ペプチド複合体を認識する１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞を生成する。
一実施形態において、トランスフェクトされたＣＤ８＋Ｔ細胞は、がんを治療または予防するために第２の対象に投与される。別の実施形態において、がんは、前立腺がん、腎臓がん、肺がん、膵臓がん、中皮腫、乳がん、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ芽球性白血病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、悪性黒色腫、卵巣がん、結腸がん、腎細胞がん、および子宮頸がんからなる群から選択される。
一実施形態において、トランスフェクトされたＣＤ８＋Ｔ細胞は、病原体感染症を治療するために第２の対象に投与される。別の実施形態において、病原体感染症は、ヒト免疫不全ウイルス、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、パピローマウイルス、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ寄生虫、エプスタイン・バールウイルス（ＥＢＶ）、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）、ヒトＴリンパ球向性ウイルス１型（ＨＴＬＶ１）、メルケルウイルス（ＭＣＶ）、サイトメガロウイルス、およびＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓからなる群から選択される。
一実施形態において、第１の対象は、非ヒト霊長類であり、第２の対象は、ヒトであり、トランスフェクトされたＣＤ８＋Ｔ細胞は、第２のＣＤ８＋ＴＣＲの非ヒト霊長類ＣＤＲ３αおよびＣＤＲ３βを含むキメラ非ヒト霊長類－ヒトＣＤ８＋ＴＣＲを含む。
一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、第２のＣＤ８＋ＴＣＲの非ヒト霊長類ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含む。一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、第２のＣＤ８＋ＴＣＲのＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含む。
一実施形態において、第１の対象は、非ヒト霊長類であり、第２の対象は、ヒトであり、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、第１のＣＤ８＋ＴＣＲの非ヒト霊長類ＣＤＲ３αおよびＣＤＲ３βを含むキメラ非ヒト霊長類－ヒトＣＤ８＋ＴＣＲである。
一実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、キメラＣＤ８＋ＴＣＲである。
一実施形態において、組換えＣＭＶベクターを第１の対象に投与することは、静脈内、筋肉内、腹腔内、または経口投与を含む。
一実施形態において、多重特異性ＴＣＲを含むＣＤ８＋Ｔ細胞は、当該方法によって生成される。
一実施形態において、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、がんを治療または予防するために、それを必要とする対象に投与される。一実施形態において、がんは、前立腺がん、腎臓がん、肺がん、膵臓がん、中皮腫、乳がん、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ芽球性白血病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、悪性黒色腫、卵巣がん、結腸がん、腎細胞がん、および子宮頸がんからなる群から選択される。
一実施形態において、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、病原性感染症を治療するために、それを必要とする対象に投与される。一実施形態において、病原体感染症は、ヒト免疫不全ウイルス、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、パピローマウイルス、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ寄生虫、エプスタイン・バールウイルス（ＥＢＶ）、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）、ヒトＴリンパ球向性ウイルス１型（ＨＴＬＶ１）、メルケルウイルス（ＭＣＶ）、サイトメガロウイルス、およびＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓからなる群から選択される。
一実施形態において、組換えＣＭＶベクターを第１の対象に投与することは、静脈内、筋肉内、腹腔内、または経口投与を含む。
一次試験コホートの概要を示す。図１Ａは、本研究で使用されるワクチン接種日およびサンプリングウィンドウを示すタイムラインである。図１Ｂは、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）を使用して、アカゲザル（ＲＭ）によって認識される重複した１５のＳＩＶｇａｇペプチドを示し、差次的ブロッキング分析によって決定されるように、各Ｔ細胞標的ペプチド「ボックス」がＭＨＣ制限に基づいて着色されている。緑＝ＭＨＣ－Ｅ、赤＝ＭＨＣ－１ａ、青＝ＭＨＣ－ＩＩ、紫＝不定。ＭＨＣ－ＥおよびＭＨＣ－ＩＩ制限スーパートープを標識する。 ＭＨＣ－Ｅスーパートープ応答のＴＣＲクローン型階層を示す。図２Ａは、分泌阻害剤ブレフェルジンＡの存在下、ＥＫ９ペプチドで刺激されたＲｈＣＭＶ６８－１／ＳＩＶｇａｇワクチン接種ＲＭ（Ｒｈ－１）からの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を示し、細胞内サイトカイン（ＴＮＦ－α対ＩＦＮ－γ）分析（ＩＣＳ）を実行して、ＥＫ９特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を特定した（左）。並行して、同じＰＢＭＣを、ブレフェルジンＡの不在下であるが、ＴＮＦ－α切断阻害剤であるＴＡＰＩ－０の存在下、ＥＫ９で刺激した。応答細胞は、表面ＣＤ６９および表面捕捉されたＴＮＦ－αの活性化により誘導された上方調節によって特定された（ＳＴＴＳ分析、右）。図２Ｂは、ＣＤＲ３アルファおよび／またはベータ配列に基づく、各時点のクローン型階層を示す棒グラフである。多くの場合、所与のＴＣＲα／β対クローンは、ＥＫ９刺激およびＲＬ９刺激（アスタリスク）の両方の後の応答性画分内に見られた。図２Ｆは、これらの導入体を、ペプチドを使用しないで、陰性対照ペプチドで、Ｇａｇ ＲＬ９で、またはＧａｇ ＥＫ９でパルス化したＢＬＣＬで培養した代表的なＩＣＳ実験を示す。 ＴＣＲ導入体によるＳＩＶｇａｇ認識を示す。図３Ａは、精製したＳＥＢ／ＣＤ３活性化Ｒｈ－４ ＣＤ４＋Ｔ細胞にＳＩＶｍａｃ２３９を感染させるか、またはＲｈ－５（Ｍａｍｕ－Ａ＊０１＋）ＢＬＣＬを、表面マーカー（ＮＧＦＲ－Ｔ２Ａ－Ｇａｇ）を提供するＳＩＶ Ｇａｇおよび切断ＮＧＦＲの両方を発現するレトロウイルスで形質導入することによって生成された標的細胞を示すフローサイトメトリー実験の結果である。図３Ｂは、標的細胞および示されるＭＨＣ－Ｅ－ＴＣＲ ＣＤ８＋Ｔ細胞導入体を用いたＩＣＳアッセイである。Ｍａｍｕ－Ａ＊０１制限ＣＭ９特異的ＴＣＲを発現するＣＤ８＋Ｔ細胞導入体を、陽性対照として使用した。（無関係な）ＭＲ１制限ＴＣＲを発現する非形質導入ＣＤ８＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋Ｔ細胞導入体を、陰性対照として使用した。 ＳＩＶ感染認識のための完全なクローン型階層を示す円グラフを示す。 ＴＣＲ導入体を用いたエピトープ交差反応性の分析を示す。Ｒｈ－１ ＭＨＣ－Ｅ－ＴＣＲ４対ＴＣＲ６－１を発現するＣＤ８＋Ｔ細胞導入体を用いた代表的なＩＣＳ。これらの導入体を、示されているように、Ｒｈ－１に対するＳＩＶｇａｇ ＭＨＣ－Ｅ最適スーパートープおよびサブトープペプチドでパルス化したＲＭ ＢＬＣＬで培養した。応答は、ＩＦＮ－γおよびＴＮＦ－α染色を使用して測定した。 ＭＨＣ－Ｅが提示するＳＩＶｇａｇペプチド認識によりＴＣＲを発現するＣＤ８＋Ｔ細胞の、ＭＨＣ－ＩＩが提示するＳＩＶｇａｇペプチドに対する、および無関係なＴＢ抗原由来のペプチドに対する応答を示す。Ｒｈ－４からのＰＢＭＣを、ＭＨＣ－ＩＩスーパートープペプチドＧａｇ２１１～２２２（５３）もしくはＧａｇ２９０～３０１（７３）のいずれかで刺激する（図６Ａ）か、またはＴＢタンパク質Ａｇ８５Ｂからの重複する１５ｍｅｒペプチドのプールで刺激した（図６Ｂ）。活性化した細胞をｓＣＤ６９およびｓｔＴＮＦ－αに基づいて選別し、ＴＣＲをｓｃＲＮＡｓｅｑによって特徴付けた。 ＭＨＣ－Ｅ制限ＴＣＲと、ＭＨＣ－Ｉａが提示するＣＭＶ ＩＥペプチドとの交差反応を示す。図７Ａは、ＡＮ１０およびＶＹ９四量体に対する４匹のＲＭの応答を分析するフローサイトメトリー実験である。図７Ｂ～７Ｅは、各ＲＭにおける両方のアプローチによって特定された各ペプチド特異的応答のクローン型階層を示すグラフである（両方のアプローチによるＴＣＲ特定の一致に留意されたい）。各ＲＭからのＰＢＭＣを、示されているＣＭＶペプチド（ＡＮ１０またはＶＹ９）、続いてＳＴＴＳでパルス化するか、または反応性ＣＤ８＋Ｔ細胞をｓｃＲＮＡｓｅｑで選別し、分析して、ＡＮ１０またはＶＹ９四量体で染色した。図７Ｆは、示されるペプチドでパルス化した（Ｍａｍｕ－Ａ＊０２＋およびＭＨＣ－Ｅ＋）ＢＬＣＬで培養したＴＣＲ２（上）またはＴＣＲ４（下）を発現するＣＤ８＋導入体のＩＣＳ分析を示す。図７Ｇ～７Ｊは、ＴＣＲクローンがＡＮ１０／ＶＹ９と交差反応するかどうかに基づいて影が付けられていることを除いて、図４と同一である、ＳＩＶ感染細胞認識アッセイからのクローン型階層を示す円グラフである。 ＶＹ９ブロッキングによるＭＨＣ－Ｉａ制限の検証を示す。図８Ａは、ＴＣＲを発現するＣＤ８＋導入体を、示されるペプチド（上段）でパルス化したＭａｍｕ－Ａ＊０２＋およびＭＨＣ－Ｅ＋ＢＬＣＬで培養したことを示す。並行して、ＢＬＣＬを、エピトープペプチドでパルス化する前に、強力にＭＨＣ－Ｅ結合するＶＬ９ペプチドと予めインキュベートして、個々の応答のＭＨＣ－Ｅ制限を評価した（下段）。図８ｂは、Ｍａｍｕ－Ａ＊０２に対して様々な親和性を有するペプチド（ＣＭ９＝非Ａ＊０２結合剤、ＧＹ９＝弱いＡ＊０２結合剤、ＹＹ９＝強いＡ＊０２結合剤）で予めインキュベートしたＢＬＣＬからのＩＣＳアッセイを示す。ＡＮ１０ペプチドで予め処理した細胞をパルス化した後、次いで、これらのＢＬＣＬを、ＴＣＲ１４を発現するＣＤ８＋Ｔ細胞導入を用いたＩＣＳアッセイのＡＰＣとして使用した。 クローン型を発現する二重ＴＣＲの特異性分析を実証するＩＣＳを示す。 同じＴＣＲによって媒介されるＭＨＣ－ＩａおよびＭＨＣ－Ｅ制限応答の機能的アビディティ分析を示す。Ｍａｍｕ－Ａ１＊００２ＢＬＣＬを、１０倍希釈ＥＫ９またはＶＹ９ペプチド（２００μＭから開始）でパルス化した。ＢＬＣＬを、洗浄し、ＴＣＲ２ ＣＤ８＋Ｔ細胞導入体とともに３つの別々の実験でインキュベートした。図１０Ａは、１つの実験からの代表的なフローサイトメトリーデータを示す。図１０Ｂは、すべての実験からの結果を示すグラフである。 ＭＨＣ－Ｉａ－ＩＥエピトープ交差反応の有無にかかわらず、ＭＨＣ－Ｅ制限ＳＩＶｇａｇ反応性ＣＤ８＋Ｔ細胞の転写応答を示す。図１１Ａは、ＥＫ９およびＲＬ９でパルス化されたＢＬＣＬでインキュベートした精製ＣＤ８＋Ｔ細胞のｓｃＲＮＡ－ｓｅｑのｔＳＮＥプロットを示す。細胞を、転写プロファイルに基づいてクラスター化した。色は、監視されていないクラスタリングの結果を示す。点は、以前に特定されたＴＣＲ対を発現し、ＭＨＣ－Ｅ制限されたものとして以前に特定された細胞を示す（図４）。これらのＭＨＣ－Ｅ／ＳＩＶｇａｇ特異的クローンを有する細胞は、同じクラスター内で顕著に濃縮される（赤枠で示される）。図１１Ｂは、ｓｃＲＮＡ－ｓｅｑデータのヒートマップである。図１１Ｃは、ｔＳＮＥプロットにおける活性化スコアを示す。活性化スコアは、９つの正準マーカー遺伝子［ＩＦＮＧ、ＭＩＰ－１Ｂ（ＣＣＬ４）、ＴＮＦＲＳＦ９、ＮＦＫＢＩＤ、ＩＲＦ８、ＣＤ８３、ＣＤ８２、ＰＬＥＫおよびＲＧＣＣ］の組み合わせた発現に基づいて計算した。図１１Ｄは、全ＣＤ６９＋細胞のゲーティングを示す。図１１Ｅは、ＥＫ９およびＲＬ９でパルス化されたＢＬＣＬでインキュベートした精製ＣＤ８＋Ｔ細胞のｓｃＲＮＡ－ｓｅｑのｔＳＮＥプロットを示す。図１１Ｆは、ｔＳＮＥプロットにおける活性化スコアを示す。図１１Ｇは、各示された抗原刺激に対する各示されたＴＣＲを発現するＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化スコアを示すグラフである。点線の青い線は、細胞が活性化されたとみなされる閾値を示す。
Ｉ．用語
別段で明記しない限り、専門用語は、従来の用法に従って使用される。
本明細書に引用されるすべての刊行物、特許、特許出願、インターネットサイト、および受託番号／データベース配列（ポリヌクレオチドおよびポリペプチド配列の両方を含む）は、個々の刊行物、特許、特許出願、インターネットサイト、または受託番号／データベース配列の各々が、参照により組み込まれるように具体的かつ個別に示されているかのように、あらゆる目的のために、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本明細書に記載されるものと同様または同等の方法および材料が本開示の実施または試験において使用され得るが、好適な方法および材料を以下に記載する。さらに、材料、方法、および例は、例示されるだけであり、限定することを意図しない。本開示の様々な実施形態の検討を容易にするために、具体的な用語の説明を以下に提供する。
抗原：本明細書で使用する場合、「抗原」または「免疫原」という用語は、対象における免疫応答を誘導することができる物質、典型的にはタンパク質を指すために互換的に使用される。この用語はまた、対象に投与したときに（対象に、直接投与するか、またはタンパク質をコードするヌクレオチド配列もしくはベクターを投与することによって）、タンパク質が該タンパク質に対して指向される体液性および／または細胞性免疫応答を誘発することができるという意味で、免疫学的に活性であるタンパク質を指す。
抗原特異的Ｔ細胞：特定の抗原を認識するＣＤ８＋またはＣＤ４＋リンパ球。一般に、抗原特異的Ｔ細胞は、ＭＨＣ分子によって提示される特定の抗原に特異的に結合するが、同じＭＨＣによって提示される他の抗原には特異的に結合しない。
投与：本明細書で使用する場合、「投与」という用語は、任意の有効な経路により、有効量の外因性抗原を含むＣＭＶベクターを含む組成物などの薬剤を対象に付与または投与することを意味する。例示的な投与経路には、注射（例えば、皮下、筋肉内、皮内、腹腔内、および静脈内）、経口、舌下、直腸、経皮、経鼻、膣、および吸入経路が含まれるが、これらに限定されない。
アビディティ：本明細書で使用される場合、「アビディティ」という用語は、抗原－抗体相互作用などの個々の非共有結合相互作用の複数の親和性の強度を指す。したがって、アビディティは、抗原－抗体複合体の全体的な強度の尺度となる。
有効量：本明細書で使用する場合、「有効量」という用語は、状態もしくは疾患の徴候もしくは症状を低減もしくは無くす、または抗原に対する免疫応答を誘導するなどの所望の応答を生成するのに十分な薬剤の量、例えば、異種抗原を含むＣＭＶベクター、またはＭＨＣ－Ｅ／異種抗原由来ペプチド複合体、ＭＨＣ－ＩＩ／異種抗原由来ペプチド複合体、もしくはＭＨＣ－Ｉ／異種抗原由来ペプチド複合体を認識するトランスフェクトされたＣＤ８＋Ｔ細胞の量を指す。いくつかの例では、「有効量」は、障害または疾患のいずれかの１つ以上の症状および／または根本的な原因を治療する（予防を含む）ものである。有効量は、感染症またはがんに関連する１つ以上の徴候または症状などの特定の疾患または状態の１つ以上の徴候または症状が発症することを防止する量を含む、治療有効量であり得る。
エピトープ：本明細書で使用される場合、「エピトープ」という用語は、特定の結合パートナーを完全に構成し得るか、または本発明の結合ドメインもしくはＴ細胞受容体ドメインポリペプチドに対する特定の結合パートナーの一部であり得る分子構造を指す。化学的には、エピトープは、炭水化物、ペプチド、脂肪酸、有機物質、生化学的物質もしくは無機物質またはそれらの誘導体、およびそれらの任意の組み合わせのいずれから構成されてもよい。エピトープがポリペプチドである場合、エピトープは通常、ペプチド内に少なくとも３個のアミノ酸、好ましくは８～５０個のアミノ酸、およびより好ましくは約１０～２０個のアミノ酸を含む。ペプチドの長さの臨界上限はなく、ほぼ全長のポリペプチド配列を含むことができる。エピトープは、直鎖エピトープまたは立体配座エピトープのいずれかであり得る。直鎖エピトープは、ポリペプチド鎖の一次配列の単一セグメントで構成される。直鎖エピトープは、連続していても、重複していてもよい。立体配座エピトープは、ポリペプチドの折り畳みによってまとめられて三次構造を形成するアミノ酸から構成され、アミノ酸は、直鎖配列において必ずしも互いに隣接していない。具体的には、エピトープは、診断的に関連する分子の少なくとも一部であり、すなわち、試料中のエピトープの不在または存在は、疾患もしくは患者の健康状態のいずれか、または製造におけるプロセスステータスもしくは環境および食物ステータスに定性的または定量的に相関する。エピトープは、治療的に関連する分子、すなわち、疾患の経過を変化させる特異的結合ドメインによって標的化され得る分子の少なくとも一部であってもよい。
異種抗原：本明細書で使用する場合、「異種抗原」という用語は、ＣＭＶに由来しない任意のタンパク質またはその断片を指す。異種抗原は、病原体特異的抗原、腫瘍ウイルス抗原、腫瘍抗原、宿主自己抗原、または任意の他の抗原であり得る。
免疫原性ペプチド：ペプチドがＭＨＣ分子に結合して、細胞傷害性Ｔリンパ球（「ＣＴＬ」）応答または免疫原性ペプチドが由来する抗原に対するＢ細胞応答（例えば、抗体産生）を誘導するように、対立遺伝子特異的モチーフまたはＮ末端反復などの他の配列を含むペプチド。
一実施形態において、免疫原性ペプチドは、配列モチーフ、またはニューラルネットもしくは多項式決定などの当該技術分野で既知の他の方法を使用して特定される。典型的には、特定の親和性で結合する高い可能性を与えるスコアを有し、かつ、免疫原性であるペプチドを選択するためのペプチドの「結合閾値」を決定するために、アルゴリズムが使用される。アルゴリズムは、特定の位置での特定のアミノ酸のＭＨＣ結合に対する効果、特定の位置での特定のアミノ酸の抗体結合に対する効果、またはモチーフ含有ペプチド中の特定の置換の結合に対する効果のいずれかに基づく。免疫原性ペプチドの関連内で、「保存された残基」は、ランダム分布によって予想されるよりも有意に高い頻度で、ペプチド中の特定の位置に現れる残基である。一実施形態において、保存された残基は、ＭＨＣ構造が免疫原性ペプチドとの接触点を提供し得る残基である。
変異：本明細書で使用する場合、「変異」という用語は、正常な配列、コンセンサス配列、または「野生型」配列由来の核酸またはポリペプチド配列における任意の差異を指す。変異体は、変異を含む任意のタンパク質または核酸配列である。さらに、変異を有する細胞または生物は、変異体と称され得る。コード配列変異のいくつかの種類には、点変異（個々のヌクレオチドまたはアミノ酸の差異）、サイレント変異（アミノ酸変化をもたらさないヌクレオチドの差異）、欠失（１つ以上のヌクレオチドまたはアミノ酸を失う差異、最大で遺伝子のコード配列全体の欠失を含む）、フレームシフト変異（３によって割ることができない多くのヌクレオチドの欠失がアミノ酸配列の変化をもたらす差異）が含まれる。アミノ酸の差異をもたらす変異は、アミノ酸置換変異とも呼ばれ得る。アミノ酸置換変異は、アミノ酸配列中の特定の位置における野生型に対するアミノ酸変化によって説明され得る。
ヌクレオチド配列または核酸配列：「ヌクレオチド配列」および「核酸配列」という用語は、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、ＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッド、または合成核酸を含むがこれらに限定されない、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）またはリボ核酸（ＲＮＡ）配列を指す。核酸は、一本鎖、または部分的もしくは完全に二本鎖（二重鎖）であり得る。二重鎖核酸は、ホモ二重鎖またはヘテロ二重鎖であり得る。
作動可能に連結：「作動可能に連結された」という用語を本明細書で使用する場合、第１の核酸配列が第２の核酸配列に影響を及ぼすような様式で配置されるときに、第１の核酸配列は、第２の核酸配列と作動可能に連結される。作動可能に連結されたＤＮＡ配列は、連続であり得、または離れて作動し得る。
プロモーター：本明細書で使用する場合、「プロモーター」という用語は、核酸の転写を指示する多くの核酸制御配列のうちのいずれかを指し得る。典型的には、真核生物プロモーターは、ポリメラーゼＩＩ型プロモーターの場合などの転写の開始部位近くに必要な核酸配列、ＴＡＴＡエレメント、または１つ以上の転写因子によって認識される任意の他の特異的ＤＮＡ配列が含まれる。プロモーターによる発現は、エンハンサーまたはリプレッサーエレメントによってさらに調節され得る。プロモーターの多数の例が利用可能であり、当業者に周知である。特定のポリペプチドをコードする核酸配列と作動可能に連結されたプロモーターを含む核酸は、発現ベクターと称され得る。
組換え：本明細書で使用する場合、核酸またはポリペプチドに関して「組換え」という用語は、天然に存在しない配列を有するものか、または異種抗原を含むＣＭＶベクターなどの、分離された２つ以上の配列セグメントの人工的な組み合わせによって作製された配列を有するものを指す。この人工的な組み合わせは、多くの場合、化学合成によって達成され、またはより一般的には、単離された核酸セグメントの人工的な操作、例えば、遺伝子工学技術によって達成される。組換えポリペプチドは、ポリペプチドの天然供給源ではない宿主生物に転写される組換え核酸（例えば、異種抗原を含むＣＭＶベクターを形成するポリペプチドをコードする核酸）を含む組換え核酸を使用して作製されたポリペプチドも指し得る。
薬学的に許容される担体：本明細書で使用する場合、使用される「薬学的に許容される担体」は、従来のものである。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｂｙ Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１９ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９５は、本明細書に開示される組成物の薬学的送達に好適な組成物および製剤を記載している。一般に、担体の性質は、使用される特定の投与様式に依存する。例えば、非経口製剤は、通常、ビヒクルとして、水、生理食塩水、平衡塩溶液、水性デキストロース、グリセロールなどの薬学的および生理学的に許容される流体を含む、注射可能な流体を含む。固体組成物（散剤、丸剤、錠剤、またはカプセル形態など）のために、従来の非毒性固体担体は、例えば、医薬グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、またはステアリン酸マグネシウムを含み得る。生物学的に中性の担体に加えて、投与される医薬組成物は、少量の非毒性補助物質、例えば、湿潤剤または乳化剤、防腐剤、およびｐＨ緩衝剤など、例えば、酢酸ナトリウムまたはソルビタンモノラウレートを含み得る。
ポリヌクレオチド：本明細書で使用する場合、「ポリヌクレオチド」という用語は、リボ核酸（ＲＮＡ）またはデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）のポリマーを指す。ポリヌクレオチドは、アデニン、シトシン、グアニン、およびチミン／ウラシル（ウラシルはＲＮＡで使用される）の４つの塩基からなる。核酸由来のコード配列は、核酸によってコードされるタンパク質の配列を示す。
ポリペプチド：「タンパク質」、「ペプチド」、「ポリペプチド」、および「アミノ酸配列」という用語は、任意の長さのアミノ酸残基のポリマーを指すために本明細書で互換的に使用される。ポリマーは、直鎖状または分枝状であり得、修飾されたアミノ酸またはアミノ酸類似体を含み得、アミノ酸以外の化学部分によって中断され得る。この用語はまた、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または標識もしくは生物活性成分との結合などの任意の他の操作もしくは修飾などの、天然で修飾されたまたは介入によって修飾されたアミノ酸ポリマーを包含する。
タンパク質のオーソログは、典型的には、デフォルトパラメータに設定されたＡＬＩＧＮ を使用して、特定のタンパク質のアミノ酸配列との全長アラインメントにわたってカウントされる７５％超の配列同一性を有することによって特徴付けられる。参照配列とさらに大きな類似性を有するタンパク質は、この方法によって評価したときに、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性などの増加した同一性パーセンテージを示す。さらに、配列同一性は、本開示のペプチドの特定のドメインの完全長にわたって比較することができる。
配列同一性／類似性：本明細書で使用する場合、２つ以上の核酸配列間または２つ以上のアミノ酸配列間の同一性／類似性は、配列間の同一性または類似性に関して表される。配列同一性は、同一性パーセンテージに関して測定され得、パーセンテージが高いほど、配列はより同一である。配列類似性は、（保存的アミノ酸置換を考慮に入れた）同一性または類似性パーセンテージに関して測定され得、パーセンテージが高いほど、配列が類似している。有意な量の配列同一性を有し、かつ、互いに同じまたは類似した機能も発揮するポリペプチドまたはそのタンパク質ドメイン（例えば、異なる種において同じ機能を果たすタンパク質またはタンパク質の機能もしくはその大きさを変化させないタンパク質の変異形態）は、「ホモログ」と呼ばれ得る。
比較のための配列のアラインメント方法は、当該技術分野で周知である。様々なプログラムおよびアラインメントアルゴリズムが、Ｓｍｉｔｈ＆Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ Ａｐｐｌ Ｍａｔｈ ２，４８２（１９８１）、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ＆Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ４８，４４３（１９７０）、Ｐｅａｒｓｏｎ＆Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８５，２４４４（１９８８）、Ｈｉｇｇｉｎｓ＆Ｓｈａｒｐ，Ｇｅｎｅ ７３，２３７－２４４（１９８８）、Ｈｉｇｇｉｎｓ＆Ｓｈａｒｐ，ＣＡＢＩＯＳ ５，１５１－１５３（１９８９）、Ｃｏｒｐｅｔ ｅｔ ａｌ，Ｎｕｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ １６，１０８８１－１０８９０（１９８８）、Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ，Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｐｐ Ｂｉｏｓｃｉ ８，１５５－１６５（１９９２）、およびＰｅａｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ，Ｍｅｔｈ Ｍｏｌ Ｂｉｏ ２４，３０７－３３１（１９９４）に記載される。さらに、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２１５，４０３－４１０（１９９０）は、配列アラインメント方法および相同性計算の詳細な考察を提供する。
ＮＣＢＩ Ｂａｓｉｃ Ｌｏｃａｌアラインメント検索ツール（ＢＬＡＳＴ）（上記のＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ，（１９９０）は、配列分析プログラムｂｌａｓｔｐ、ｂｌａｓｔｎ、ｂｌａｓｔｘ、ｔｂｌａｓｔｎ、およびｔｂｌａｓｔｘに関連した使用のために、国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｌｉｂｒａｒｙ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、Ｂｕｉｌｄｉｎｇ ３８Ａ，Ｒｏｏｍ ８Ｎ８０５，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ ２０８９４）およびインターネットを含むいくつかの供給源から入手可能である。追加の情報は、ＮＣＢＩのウェブサイトで見出し得る。
ＢＬＡＳＴＮは、核酸配列を比較するために使用され、一方、ＢＬＡＳＴＰは、アミノ酸配列を比較するために使用される。比較した２つの配列が相同性を有する場合、指定された出力ファイルはそれらの相同性領域をアラインメントされた配列として提示する。２つの比較された配列が相同性を有しない場合、指定された出力ファイルはアラインメントされた配列を提示しない。
整列すると、一致の数は、同一のヌクレオチドまたはアミノ酸残基が両方の配列に提示されている位置の数をカウントすることによって決定される。配列同一性パーセントは、一致する数を、特定された配列中に示される配列の長さまたは連接した（ａｒｔｉｃｕｌａｔｅｄ）長さ（特定された配列中に示される配列由来の１００個の連続したヌクレオチドまたはアミノ酸残基など）のいずれかで割り、続いて、得られた値を１００倍することによって決定される。例えば、１１６６個の一致を有する核酸配列は、１１５４個のヌクレオチドを有する試験配列とアラインしたときに、試験配列と７５．０パーセント同一である（１１６６÷１５５４＊１００＝７５．０）。配列同一性パーセント値は、切り捨てを行って最も近い１０分の１とする。例えば、７５．１１、７５．１２、７５．１３、および７５．１４は切り捨てを行って７５．１となり、７５．１５、７５．１６、７５．１７、７５．１８、および７５．１９は切り捨てを行って７５．２となる。長さの値は常に整数である。別の例では、以下のように、特定された配列由来の２０個の連続したヌクレオチドとアラインする２０個のヌクレオチド領域を含む標的配列は、その特定された配列と７５パーセントの配列同一性を有する領域を含む（すなわち、１５÷２０×１００＝７５）。
アミノ酸が約３０より大きいアミノ酸配列の比較のために、Ｂｌａｓｔ２配列機能を使用し、デフォルトパラメータに設定されたデフォルトＢＬＯＳＵＭ６２マトリックス（ギャップ存在コスト（ｇａｐ ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ ｃｏｓｔ）１１および１残基当たりギャップコスト（ｐｅｒ ｒｅｓｉｄｕｅ ｇａｐ ｃｏｓｔ）１）を用いる。ホモログは、典型的には、ＮＣＢＩ Ｂａｓｉｃ Ｂｌａｓｔ２．０、ｎｒデータベース、ｓｗｉｓｓｐｒｏｔデータベース、および特許取得配列データベースなどのデータベースを用いたギャップド（ｇａｐｐｅｄ）ｂｌａｓｔｐを使用して、アミノ酸配列との全長アラインメントにわたってカウントされる少なくとも７０％の配列同一性を有することを特徴とする。ｂｌａｓｔｎプログラムで検索されたクエリは、ＤＵＳＴでフィルタリングされる（Ｈａｎｃｏｃｋ＆Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ，Ｃｏｍｐｕｔ Ａｐｐｌ Ｂｉｏｓｃｉ １０，６７－７０（１９９４））。他のプログラムはＳＥＧを使用する。さらに、手動アラインメントを行い得る。さらにより大きな類似性を有するタンパク質は、この方法によって評価したときに、タンパク質と少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％の配列同一性などの増加した同一性パーセンテージを示す。
短いペプチド（約３０アミノ酸未満）をアラインメントする場合、Ｂｌａｓｔ２配列機能を使用し、デフォルトパラメータ（オープンギャップ９、伸長ギャップ１ペナルティ）に設定されたＰＡＭ３０マトリックスを用いて、アラインメントを行う。参照配列とさらにより大きい類似性を有するタンパク質は、この方法によって評価したときに、タンパク質と少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％の配列同一性などの増加した同一性パーセンテージを示す。全配列未満を配列同一性について比較する場合、ホモログは、典型的には、１０～２０個のアミノ酸の短い窓にわたって少なくとも７５％の配列同一性を有し、参照配列との同一性に依存して少なくとも８５％、９０％、９５％、または９８％の配列同一性を有し得る。そのような短いウィンドウでの配列同一性を決定するための方法は、ＮＣＢＩウェブサイトに記載されている。
２つの核酸分子が密接に関連していることを示す１つの指標は、上記のように、２つの分子がストリンジェントな条件下で互いにハイブリダイズすることである。それにもかかわらず、高い程度の同一性を示さない核酸配列は、遺伝子コードの縮重により、同一または類似の（保存された）アミノ酸配列をコードし得る。すべてが実質的に同じタンパク質をコードする複数の核酸分子を生成するために、核酸配列における変化は、この変性を使用して行われ得る。そのような相同な核酸配列は、例えば、タンパク質をコードする核酸と少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、または９９％の配列同一性を有することができる。
特異的に結合する：本明細書で使用される場合、「特異的に結合する」または「特異的結合」という用語は、分子の不均一な集団における目的の同族配位子の決定的な結合反応を指す。したがって、指定された条件（例えば、免疫アッセイ条件）下で、特定のＴ細胞受容体ドメインポリペプチドは、その特定の「標的」に結合するが、試料中に存在する他の分子に有意な量では結合しない。
対象：本明細書で使用する場合、「対象」という用語は、ヒトおよび非ヒト哺乳動物の両方を含むカテゴリーである、生きている多細胞脊椎動物を指す。
サブトープ：本明細書で使用される場合、「サブトープ」という用語は、Ｔ細胞によって認識されるサブドミナントエピトープまたはペプチドを指す。
スーパートープ：本明細書で使用される場合、「スーパートープ」または「スーパートープペプチド」という用語は、ＭＨＣハプロタイプに関係なく、すなわち、所与のＭＨＣ－Ｉ、ＭＨＣ－ＩＩ、またはＭＨＣ－Ｅ対立遺伝子の存在の有無によらず、集団の約９０％超においてＴ細胞によって認識されるエピトープまたはペプチドを指す。
治療：本明細書で使用する場合、「治療」という用語は、疾患または病的状態の徴候または症状を改善する介入を指す。本明細書で使用する場合、疾患、病的状態または症状に関する「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、「治療する（ｔｒｅａｔ）」、および「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」という用語はまた、治療の任意の観察可能な有益な効果を指す。有益な効果は、例えば、罹患しやすい対象における疾患の臨床症状の発症の遅延、いくつかまたはすべての疾患臨床症状の重症度の低減、疾患の進行の遅延、疾患の再発数の低減、対象の全体的な健康または福祉の改善、または特定の疾患に特異的な当該技術分野で周知の他のパラメータによって証明付けされ得る。予防的治療は、病状を発症するリスクを低下させる目的で、疾患の兆候を示さない、または初期兆候のみを示す対象に施される治療である。療法的治療（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）は、疾患の兆候および症状が発現した後に対象に施される治療である。
ワクチン：疾患または他の病的状態に対する能動免疫などの免疫を付与するために、ヒトなどの哺乳動物に投与することができる免疫原性組成物。ワクチンは、予防的または治療的に使用することができる。したがって、ワクチンは、疾患（腫瘍もしくは病的感染症など）を発症する可能性を低減するか、または疾患もしくは状態の症状の重症度を低減するか、または疾患もしくは状態（腫瘍もしくは病的感染症など）の進行を制限するか、または疾患もしくは状態（腫瘍など）の再発を制限するために使用することができる。特定の実施形態において、ワクチンは、肺、前立腺、卵巣、乳房、結腸、子宮頸部、肝臓、腎臓、骨の腫瘍、または黒色腫に由来する腫瘍関連抗原などの異種抗原を発現する複製欠損ＣＭＶである。
ベクター：特定の配列の核酸分子をベクターに組み込むことができ、次いで該ベクターは宿主細胞に導入され、それによって、形質転換された宿主細胞が生成される。ベクターは、宿主細胞においてその複製を可能にする核酸配列、例えば、複製起点を含み得る。ベクターはまた、１つ以上の選択可能なマーカー遺伝子、および核酸発現を指示するプロモーターエレメントを含む当該技術分野で既知の他の遺伝子エレメントを含み得る。ベクターは、ＣＭＶベクターなどのウイルスベクターであり得る。ウイルスベクターは、野生型ウイルスまたは複製欠損ウイルスを含む減弱ウイルスから構築され得る。
Ｔ細胞受容体：本明細書で使用される場合、「Ｔ細胞受容体」という用語は、アルファポリペプチド鎖（アルファ鎖）およびベータポリペプチド鎖（ベータ鎖）を含むヘテロ二量体分子を指し、ヘテロ二量体受容体は、ＨＬＡ分子によって提示されるペプチド抗原に結合することができる。
多重特異性Ｔ細胞受容体：本明細書で使用される場合、「多重特異性Ｔ細胞受容体」という用語は、複数のペプチド抗原に結合可能なＴ細胞受容体を指す。ペプチド抗原は、同じまたは異なる抗原からのものであってもよい。ペプチド抗原は、同じまたは異なるＨＬＡ分子によって提示されてもよい。
ＩＩ．多重特異性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）
本発明は、無関係なペプチドに対する複数の特異性を有するＴＣＲを対象とする。これらのＴＣＲを有するＴ細胞は、患者の治療に使用することができる。
本発明はまた、多重特異性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を含むＣＤ８＋Ｔ細胞を生成する方法を対象とし、本方法は、第１の異種抗原をコードする核酸配列を含む組換えＣＭＶベクターを、第１のＭＨＣ／異種抗原由来ペプチド複合体を認識するＣＤ８＋Ｔ細胞の第１のセットを生成するのに有効な量で、対象に投与することであって、ＣＭＶベクターが、活性ＵＬ１２８、ＵＬ１３０、ＵＬ１４６およびＵＬ１４７タンパク質またはそれらのオーソログを発現しない、投与することと、ＣＤ８＋Ｔ細胞の第１のセットから第１のＣＤ８＋ＴＣＲを特定することであって、第１のＣＤ８＋ＴＣＲが、第１のＭＨＣ／異種抗原由来ペプチド複合体を認識する、特定することと、第２の異種抗原を、第２のＭＨＣ／異種抗原由来ペプチド複合体を認識するＣＤ８＋Ｔ細胞の第２のセットを生成するのに有効な量で、対象に投与することと、ＣＤ８＋Ｔ細胞の第２のセットから１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞を単離することと、ＣＤ８＋Ｔ細胞の第２のセットから第２のＣＤ８＋ＴＣＲを特定することであって、第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、第１のＭＨＣ／異種抗原由来ペプチド複合体および第２のＭＨＣ／異種抗原由来ペプチド複合体を認識する、特定することと、ＣＤ８＋Ｔ細胞の第３のセットを発現ベクターでトランスフェクトすることであって、発現ベクターが、第３のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする核酸配列と、第３のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする核酸配列に作動可能に連結されたプロモーターと、を含み、第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、第２のＣＤ８＋ＴＣＲのＣＤＲ３αおよびＣＤＲ３βを含み、それによって、第１のＭＨＣ／異種抗原由来ペプチド複合体および第２のＭＨＣ／異種抗原由来ペプチド複合体を認識する１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞を生成する、トランスフェクトすることと、目的の特定のペプチドに対して最も高いアビディティを有する第３のＣＤ８＋ＴＣＲのうちの１つ以上を選択することと、を含む。
ヒトＣＭＶ ＵＬ１２８、ＵＬ１３０、ＵＬ１４６およびＵＬ１４７のＲｈＣＭＶホモログの機能的発現を欠くアカゲザルサイトメガロウイルス（ＲｈＣＭＶ）ベクターは、ＵＬ４０およびＵＳ２８のホモログを発現しながら、アカゲザルにおいて広範に標的化されたＭａｍｕ Ｅ制限ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を、ＲｈＣＭＶタンパク質および外因性タンパク質インサート（後者は、細菌、ウイルス、および自己タンパク質を含む）の両方を含む、このベクターによって発現される事実上任意のタンパク質に効率的に誘発する。
いくつかの実施形態において、対象は、ヒトまたは非ヒト霊長類である。いくつかの実施形態において、組換えＣＭＶベクターは、組換えヒトＣＭＶベクターまたは組換えアカゲザルＣＭＶベクターである。いくつかの実施形態において、組換えＣＭＶは、ＵＬ１２８、ＵＬ１３０、ＵＬ１４６、およびＵＬ１４７をコードする核酸配列、またはそれらのホモログ、もしくはそれらのオーソログ（他の種に感染するＣＭＶの相同遺伝子）における変異の存在に起因して、活性ＵＬ１２８、ＵＬ１３０、ＵＬ１４６、およびＵＬ１４７タンパク質を発現しない。いくつかの実施形態において、組換えＣＭＶは、ＵＬ１２８、ＵＬ１３０、ＵＬ１４６、ＵＬ１４７、およびＵＬ１８をコードする核酸配列、またはそれらのホモログ、もしくはそれらのオーソログ（他の種に感染するＣＭＶの相同遺伝子）における変異の存在に起因して、活性ＵＬ１２８、ＵＬ１３０、ＵＬ１４６、ＵＬ１４７、およびＵＬ１８タンパク質を発現しない。変異は、活性ＵＬ１２８、ＵＬ１３０、ＵＬ１４６、ＵＬ１４７、またはＵＳ１８タンパク質の発現の欠如をもたらす任意の変異であり得る。そのような変異には、点変異、フレームシフト変異、タンパク質をコードする配列のすべて未満の欠失（切断変異）、もしくはタンパク質をコードする核酸配列のすべての欠失、または任意の他の変異が含まれ得る。例示的なベクターは、米国特許第９，７８３，８２３号および同第９，８６２，９７２号、ならびに米国出願公開第２０１８／０２９８４０４号（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。
いくつかの実施形態において、組換えＣＭＶベクターは、活性ＵＬ１２８、ＵＬ１３０、ＵＬ１４６、およびＵＬ１４７タンパク質、またはそれらのホモログ、もしくはそれらのオーソログを発現せず、活性ＵＬ４０およびＵＳ２８タンパク質、もしくはそれらのホモログ、もしくはそれらのオーソログを発現する。いくつかの実施形態において、組換えＣＭＶベクターは、活性ＵＬ１２８、ＵＬ１３０、ＵＬ１４６、ＵＬ１４７、およびＵＬ１８タンパク質、またはそれらのホモログ、もしくはそれらのオーソログを発現せず、活性ＵＬ４０およびＵＳ２８タンパク質、もしくはそれらのホモログ、もしくはそれらのオーソログを発現する。
いくつかの実施形態において、第１のＭＨＣ／異種抗原由来ペプチド複合体は、ＭＨＣ－ＩＩ／異種抗原由来ペプチド複合体、ＭＨＣ－Ｅ／異種抗原由来ペプチド複合体、またはＭＨＣ－Ｉ／異種抗原由来ペプチド複合体である。いくつかの実施形態において、第２のＭＨＣ／異種抗原由来ペプチド複合体は、ＭＨＣ－ＩＩ／異種抗原由来ペプチド複合体、ＭＨＣ－Ｅ／異種抗原由来ペプチド複合体、またはＭＨＣ－Ｉ／異種抗原由来ペプチド複合体である。
ヒトまたは動物ＣＭＶベクターは、発現ベクターとして使用される場合、ヒトなどの選択された対象において本質的に非病原性である。いくつかの実施形態において、ＣＭＶベクターは、選択された対象におけるそれらを非病原性（宿主から宿主への拡散の能力がない）にするように修飾されている。
異種抗原は、腫瘍抗原、病原体特異的抗原、モデル抗原（リゾチーム、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、もしくは卵白アルブミンなど）、組織特異的抗原、宿主自己抗原、または任意の他の抗原を含む、ＣＭＶに由来しない任意のタンパク質またはその断片であり得る。
病原体特異的抗原は、任意のヒトまたは動物の病原体に由来し得る。病原体は、ウイルス病原体であってもよく、抗原は、ウイルス病原体に由来するタンパク質であってもよい。ウイルスとしては、レトロウイルス、ポリオウイルス、アデノウイルス、コクサッキーウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、ポリオウイルス、ライノウイルス、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、水痘帯状疱疹ウイルス、エプスタイン・バールウイルス、カポジ肉腫ヘルペスウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、ヒトヘルペスウイルス８型、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、黄熱病ウイルス、デングウイルス、ウエストナイルウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器多核体ウイルス、ヒトメタニューモウイルス、ヒトパピローマウイルス、狂犬病ウイルス、風疹ウイルス、ヒトボカウイルス、ヒトＴリンパ球向性ウイルス（ＨＴＬＶ１）、メルケル細胞ポリオーマウイルス（ＭＣＶ）、サイトメガロウイルス、およびパルボウイルスＢ１９が挙げられるが、これらに限定されない。
病原体は、細菌性病原体であってもよく、抗原は、細菌性病原体に由来するタンパク質であってもよい。病原細菌としては、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ ａｂｏｒｔｕｓ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ ｃａｎｉｓ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ ｍｅｌｉｔｅｎｓｉｓ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ ｓｕｉｓ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ ｐｓｉｔｔａｃｉ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｉｎｔｅｒｒｏｇａｎｓ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｕｌｃｅｒａｎｓ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｒｉｃｋｅｔｔｓｉｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｓｏｎｎｅｉ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ、Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａ、およびＹｅｒｓｉｎｉａ ｐｅｓｔｉｓが挙げられるが、これらに限定されない。
病原体は、寄生虫であってもよく、抗原は、寄生虫病原体に由来するタンパク質であってもよい。寄生虫は、アカントアメーバ（Ａｃａｎｔｈａｍｏｅｂａ）、バベシア症、バランチジウム症、ブラストシスチス感染症（Ｂｌａｓｔｏｃｙｓｔｏｓｉｓ）、コクシジウム（Ｃｏｃｃｉｄｉａ）、二核アメーバ症、アメーバ症、ジアルジア症、イソスポラ症、リーシュマニア症、原発性アメーバ性髄膜脳炎（ＰＡＭ）、マラリア、リノスポリジウム症、トキソプラズマ症－寄生性肺炎、トリコモナス症、睡眠病、およびシャーガス病などであるが、これらに限定されない疾患を引き起こす原生動物または原生動物であり得る。寄生虫は、鉤虫症／鉤虫、アニサキス症、回虫－－寄生性肺炎、回虫－アライグマ回虫症（Ｂａｙｌｉｓａｓｃａｒｉａｓｉｓ）、条虫－－感染症、肝吸虫症、Ｄｉｏｃｔｏｐｈｙｍｅ ｒｅｎａｌｉｓ感染症、裂頭条虫症－－条虫、メジナ虫－－メジナ虫症、エキノコックス症－－条虫、蟯虫－－蟯虫症、肝吸虫－－肝蛭症、肥大吸虫症－－腸内吸虫、顎口虫症、膜様条虫症、Ｌｏａ糸状虫症、カラバール腫脹、マンソネラ症、フィラリア症、横川吸虫症－－腸内吸虫、河川盲目症、中国肝吸虫、肺吸虫症、肺吸虫、住血吸虫症（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍｉａｓｉｓ）－－ビルハルツ住血吸虫（ｂｉｌｈａｒｚｉａ）、ビルハルツ住血吸虫症（ｂｉｌｈａｒｚｉｏｓｉｓ）または住血吸虫症（ｓｎａｉｌ ｆｅｖｅｒ）（全種類）、腸住血吸虫症、尿路住血吸虫症、日本住血吸虫による住血吸虫症、アジア腸住血吸虫症、孤虫症、糞線虫症－－寄生性肺炎、無鉤条虫（Ｂｅｅｆ ｔａｐｅｗｏｒｍ）、有鉤条虫（Ｐｏｒｋ ｔａｐｅｗｏｒｍ）、トキソカラ症、旋毛虫症、セルカリア皮膚炎（Ｓｗｉｍｍｅｒ’ｓ ｉｔｃｈ）、鞭虫、および象皮病（リンパ系フィラリア症）などであるが、これらに限定されない、蠕虫生物もしくは虫、または蠕虫生物によって引き起こされる疾患であってもよい。寄生虫は、寄生虫（ｐａｒａｓｉｔｉｃ ｗｏｒｍ）、ハルザン症候群、蝿蛆症、砂蚤（Ｃｈｉｇｏｅ ｆｌｅａ）、ヒトヒツジバエ（Ｈｕｍａｎ Ｂｏｔｆｌｙ）およびカンディルなどであるが、これらに限定されない、生物または生物によって引き起こされる疾患であってもよい。寄生虫は、トコジラミ、アタマジラミ－－シラミ寄生症、コロモジラミ－－シラミ寄生症、ケジラミ－－シラミ寄生症、Ｄｅｍｏｄｅｘ－－毛包虫症、疥癬、ラセン虫（Ｓｃｒｅｗｗｏｒｍ）、およびＣｏｃｈｌｉｏｍｙｉａなどであるが、これらに限定されない、外部寄生虫または外部寄生虫によって引き起こされる疾患であってもよい。
抗原は、がんに由来するタンパク質であってもよい。腫瘍抗原は、腫瘍細胞に比較的限定され、免疫応答を誘導する任意のタンパク質であり得る。しかしながら、多くの腫瘍抗原は、宿主（自己）タンパク質であり、したがって、典型的には、宿主免疫系によって抗原性とみなされない。腫瘍抗原はまた、がん細胞によって異常発現され得る。腫瘍抗原はまた、がん細胞で発現される生殖細胞系列／精巣抗原、成人組織で発現されない細胞系統分化抗原、またはがん細胞で過剰発現される抗原であり得る。がんには、急性リンパ芽球性白血病；急性骨髄性白血病；副腎皮質がん；エイズ関連のがん；エイズ関連リンパ腫；肛門がん；虫垂がん；星状細胞腫、小児小脳または大脳；基底細胞がん；胆管がん、肝外；膀胱がん；骨のがん、骨肉腫／悪性線維性組織球腫；脳幹神経膠腫；脳腫瘍；脳腫瘍、小脳星状細胞腫；脳腫瘍、大脳星状細胞腫／悪性神経膠腫；脳腫瘍、上衣腫；脳腫瘍、髄芽腫；脳腫瘍、テント上原始神経外胚葉性腫瘍；脳腫瘍、視覚経路および視床下部神経膠腫；乳がん；気管支腺腫／カルチノイド；バーキットリンパ腫；カルチノイド腫瘍、小児；カルチノイド腫瘍、胃腸；原発不明がん；中枢神経系リンパ腫、原発性；小脳星状細胞腫、小児；大脳星状細胞腫／悪性神経膠腫、小児；子宮頸がん；小児がん；慢性リンパ性白血病；慢性骨髄性白血病；慢性骨髄増殖性疾患；結腸がん；皮膚Ｔ細胞リンパ腫；線維形成性小円形細胞腫瘍；子宮内膜がん；上衣腫；食道がん；ユーイング腫瘍ファミリーにおけるユーイング肉腫；頭蓋外胚細胞腫瘍、小児；性腺外胚細胞腫瘍；肝外胆管がん；眼のがん、眼内黒色腫；眼のがん、網膜芽細胞腫；胆嚢がん；胃（Ｇａｓｔｒｉｃ）（胃（Ｓｔｏｍａｃｈ））がん；消化管カルチノイド腫瘍；消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）；胚細胞腫瘍：頭蓋外、性腺外、または卵巣；妊娠性絨毛腫瘍；脳幹の神経膠腫；神経膠腫、小児大脳星状細胞腫；神経膠腫、小児視覚経路および視床下部；胃カルチノイド；有毛細胞白血病；頭頸部がん；心臓がん；肝細胞（肝臓）がん；ホジキンリンパ腫；下咽頭がん；視床下部および視覚経路神経膠腫、小児；眼内黒色腫；膵島細胞がん（内分泌膵臓）；カポジ肉腫；腎臓がん（腎細胞がん）；喉頭がん；白血病；白血病、急性リンパ芽球性（急性リンパ性白血病とも呼ばれる）；白血病、急性骨髄性（急性骨髄性白血病とも呼ばれる）；白血病、慢性リンパ性白血病（慢性リンパ性白血病とも呼ばれる）；白血病、慢性骨髄性（ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ）（慢性骨髄性（ｍｙｅｌｏｉｄ）白血病とも呼ばれる）；白血病、有毛細胞；唇および口腔がん；肝臓がん（原発性）；肺がん、非小細胞；肺がん、小細胞；リンパ腫；リンパ腫、エイズ関連；リンパ腫、バーキット；リンパ腫、皮膚Ｔ細胞；リンパ腫、ホジキン；リンパ腫、非ホジキン（ホジキンを除くすべてのリンパ腫の古い分類）；リンパ腫、原発性中枢神経系；マーカスホイットル、致死性疾患；マクログロブリン血症、ワルデンシュトレーム；骨の悪性線維性組織球腫／骨肉腫；髄芽腫、小児；黒色腫；黒色腫、眼内（眼）；メルケル細胞がん；中皮腫、成人悪性；中皮腫、小児；原発不明の転移性頸部扁平上皮がん；口腔がん；多発性内分泌腫瘍症候群、小児期；多発性骨髄腫／形質細胞新生物；菌状息肉腫；骨髄異形成症候群；骨髄異形成／骨髄増殖性疾患；骨髄性白血病、慢性；骨髄性白血病、成人急性；骨髄性白血病、小児急性；骨髄腫、多発性（骨髄のがん）；骨髄増殖性疾患、慢性；鼻腔および副鼻腔がん；鼻咽頭がん；神経芽腫；非ホジキンリンパ腫；非小細胞肺がん；口腔がん；中咽頭がん；骨肉腫／骨の悪性線維性組織球腫；卵巣がん；卵巣上皮がん（表層上皮性・間質腫瘍）；卵巣胚細胞腫瘍；卵巣低悪性度腫瘍；膵臓がん；膵臓がん、膵島細胞；副鼻腔および鼻腔がん；副甲状腺がん；陰茎がん；咽頭がん；褐色細胞腫；松果体星状細胞腫；松果体胚細胞腫；松果体芽腫およびテント上原始神経外胚葉性腫瘍、小児；下垂体腺腫；形質細胞新生物／多発性骨髄腫；胸膜肺芽腫；原発性中枢神経系リンパ腫；前立腺がん；直腸がん；腎細胞がん（腎臓がん）；腎盂および尿管、移行上皮がん；網膜芽腫；横紋筋肉腫、小児；唾液腺がん；肉腫、ユーイング腫瘍ファミリー；肉腫、カポジ；肉腫、軟部組織；肉腫、子宮；セザリー症候群；皮膚がん（非黒色腫）；皮膚がん（黒色腫）；皮膚がん、メルケル細胞；小細胞肺がん；小腸がん；軟部肉腫；扁平上皮がん－皮膚がん（非黒色腫）を参照されたい；原発不明の頸部扁平上皮がん、転移性；胃がん；テント上原始神経外胚葉性腫瘍、小児；Ｔ細胞リンパ腫、皮膚（菌状息肉腫およびセザリー症候群）；精巣がん；咽喉がん；胸腺腫、小児；胸腺腫および胸腺がん；甲状腺がん；甲状腺がん、小児；腎盂および尿管の移行上皮がん；絨毛性腫瘍、妊娠；原発部位不明のがん、成人；原発部位不明のがん、小児；尿管および腎盂、移行上皮がん；尿道がん；子宮がん、子宮内膜；子宮肉腫；膣がん；視覚経路および視床下部神経膠腫、小児；外陰がん；ワルデンシュトレームマクログロブリン血症；およびウィルムス腫瘍（腎臓がん）が含まれるが、これに限定されない。
いくつかの実施形態において、第１の異種抗原および第２の異種抗原は、同じである。いくつかの実施形態において、第１の異種抗原および第２の異種抗原は、異なる。
いくつかの実施形態において、第１のＣＤ８＋ＴＣＲは、特定のＭＨＣ－ＩＩ、ＭＨＣ－Ｅ、もしくはＭＨＣ－Ｉサブトープまたはスーパートープを認識する。いくつかの実施形態において、第１のＣＤ８＋ＴＣＲは、ＤＮＡまたはＲＮＡ配列決定によって特定される。いくつかの実施形態において、ＣＤ８＋ＴＣＲは、シングルセル配列決定によって特定される。
いくつかの実施形態において、ＣＤ８＋Ｔ細胞の第２のセットからの１つ以上の単離されたＣＤ８＋Ｔ細胞は、ＣＤ６９およびＴＮＦαを発現する。
いくつかの実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、１つ以上の特定のＭＨＣ－ＩＩスーパートープ、ＭＨＣ－Ｅスーパートープ、および／またはＭＨＣ－Ｉスーパートープを認識する。さらなる例において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、ＭＨＣ－ＩＩスーパートープおよびＭＨＣ－Ｅスーパートープ、ＭＨＣ－ＩＩスーパートープおよびＭＨＣ－Ｉスーパートープ、またはＭＨＣ－ＩスーパートープおよびＭＨＣ－Ｅスーパートープを認識する。
いくつかの実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、１つ以上の特定のＭＨＣ－ＩＩサブトープ、ＭＨＣ－Ｅサブトープ、および／またはＭＨＣ－Ｉサブトープを認識する。さらなる例において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、ＭＨＣ－ＩＩサブトープおよびＭＨＣ－Ｅサブトープ、ＭＨＣ－ＩＩサブトープおよびＭＨＣ－Ｉサブトープ、またはＭＨＣ－ＩサブトープおよびＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する。
いくつかの実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、ＭＨＣ－ＩＩサブトープもしくはスーパートープおよびＭＨＣ－Ｅサブトープもしくはスーパートープ、ＭＨＣ－ＩＩサブトープもしくはスーパートープおよびＭＨＣ－Ｉサブトープもしくはスーパートープ、またはＭＨＣ－ＩサブトープもしくはスーパートープおよびＭＨＣ－Ｅサブトープもしくはスーパートープを認識する。
いくつかの実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、特定のＭＨＣ－ＩＩスーパートープおよびＭＨＣ－ＩＩサブトープ、ＭＨＣ－ＥスーパートープおよびＭＨＣ－Ｅサブトープ、またはＭＨＣ－ＩスーパートープおよびＭＨＣ－Ｉサブトープを認識する。いくつかの実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、同じ抗原からの２つ以上のＭＨＣ－ＩＩスーパートープ、同じ抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープ、または同じ抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｉスーパートープを認識する。いくつかの実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、同じ抗原からの２つ以上のＭＨＣ－ＩＩサブトープ、同じ抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープ、または同じ抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｉサブトープを認識する。
いくつかの実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、同じ抗原からの１つ以上のＭＨＣ－ＩＩスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－ＩＩサブトープ、同じ抗原からの１つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープ、または同じ抗原からの１つ以上のＭＨＣ－Ｉスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－Ｉサブトープを認識する。いくつかの実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、２つ以上の抗原からの２つ以上のＭＨＣ－ＩＩスーパートープ、２つ以上の抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープ、または２つ以上の抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｉスーパートープを認識する。いくつかの実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、２つ以上の抗原からの２つ以上のＭＨＣ－ＩＩサブトープ、２つ以上の抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープ、または２つ以上の抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｉサブトープを認識する。
いくつかの実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、異なる抗原からの１つ以上のＭＨＣ－ＩＩスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－ＩＩサブトープ、異なる抗原からの１つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープ、または異なる抗原からの１つ以上のＭＨＣ－Ｉスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－Ｉサブトープを認識する。
いくつかの実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、１つ以上の特定のＭＨＣ－ＩＩスーパートープ、ＭＨＣ－Ｅスーパートープ、またはＭＨＣ－Ｉスーパートープを認識する。いくつかの実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、１つ以上の特定のＭＨＣ－ＩＩサブトープ、ＭＨＣ－Ｅサブトープ、またはＭＨＣ－Ｉサブトープを認識する。いくつかの実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、特定のＭＨＣ－ＩＩスーパートープおよびＭＨＣ－ＩＩサブトープ、特定のＭＨＣ－ＥスーパートープおよびＭＨＣ－Ｅサブトープ、または特定のＭＨＣ－ＩスーパートープおよびＭＨＣ－Ｉサブトープを認識する。
いくつかの実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、１つの抗原からの２つ以上のＭＨＣ－ＩＩスーパートープ、１つの抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープ、または１つの抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｉスーパートープを認識する。いくつかの実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、１つの抗原からの２つ以上のＭＨＣ－ＩＩサブトープ、１つの抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープ、または１つの抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｉサブトープを認識する。
いくつかの実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、１つの抗原からの１つ以上のＭＨＣ－ＩＩスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－ＩＩサブトープ、１つの抗原からの１つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープ、または１つの抗原からの１つ以上のＭＨＣ－Ｉスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－Ｉサブトープを認識する。いくつかの実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、特定のＭＨＣ－ＥサブトープもしくはスーパートープおよびＭＨＣ－ＩＩサブトープもしくはスーパートープ、特定のＭＨＣ－ＥサブトープもしくはスーパートープおよびＭＨＣ－Ｉサブトープもしくはスーパートープ、または特定のＭＨＣ－ＩＩサブトープもしくはスーパートープおよびＭＨＣ－Ｉサブトープもしくはスーパートープを認識する。
いくつかの実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、同じ抗原からの２つ以上のＭＨＣ－ＩＩサブトープを認識するか、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、同じ抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識するか、または第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、同じ抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｉサブトープを認識する。いくつかの実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、異なる抗原からの１つ以上のＭＨＣ－ＩＩスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－ＩＩサブトープ、異なる抗原からの１つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープ、または異なる抗原からの１つ以上のＭＨＣ－Ｉスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－Ｉサブトープを認識する。
いくつかの実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする核酸配列は、第２のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする核酸配列と同一である。
いくつかの実施形態において、本方法は、１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞を第２の対象から単離することと、選択された第３のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする核酸配列および第３のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする核酸配列に作動可能に連結されたプロモーターで、１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞をトランスフェクトし、それによって、第１のＭＨＣ／異種抗原由来ペプチド複合体および第２のＭＨＣ／異種抗原由来ペプチド複合体を認識する１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞を生成することと、を含む。
いくつかの実施形態において、第１のＭＨＣ－異種抗原由来ペプチド複合体は、ＭＨＣ－ＩＩ／異種抗原由来ペプチド複合体、ＭＨＣ－Ｅ／異種抗原由来ペプチド複合体、またはＭＨＣ－Ｉ／異種抗原由来ペプチド複合体である。いくつかの実施形態において、第２のＭＨＣ－異種抗原由来ペプチド複合体は、ＭＨＣ－ＩＩ／異種抗原由来ペプチド複合体、ＭＨＣ－Ｅ／異種抗原由来ペプチド複合体、またはＭＨＣ－Ｉ／異種抗原由来ペプチド複合体である。
ある特定の実施形態において、多重特異性ＴＣＲを含むＣＤ８＋Ｔ細胞を、疾患の予防または治療に使用することができる。Ｔ細胞集団の投与経路およびヒト患者に投与される量は、ヒト患者の状態および医師の知識に基づいて決定することができる。いくつかの実施形態において、投与経路は、静脈内、筋肉内、腹腔内、または経口投与である。一般に、投与は、静脈内である。
いくつかの実施形態において、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、がんを治療または予防するために投与される。さらなる例において、がんは、前立腺がん、腎臓がん、肺がん、膵臓がん、中皮腫、乳がん、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ芽球性白血病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、悪性黒色腫、卵巣がん、結腸がん、腎細胞がん、または子宮頸がんである。
いくつかの実施形態において、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、病原体感染症を治療または予防するために投与される。さらなる例において、病原体感染症は、ヒト免疫不全ウイルス、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、パピローマウイルス、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ寄生虫、エプスタイン・バールウイルス（ＥＢＶ）、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）、ヒトＴリンパ球向性ウイルス１型（ＨＴＬＶ１）、メルケルウイルス（ＭＣＶ）、サイトメガロウイルス、およびＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓである。
ある特定の実施形態において、投与することは、ＣＤ８＋Ｔ細胞の集団の注入によるものである。いくつかの実施形態において、注入は、ボーラス静脈内注入である。ある特定の実施形態において、投与することは、１週間当たり、１用量当たり、１ｋｇ当たり、ＣＤ８＋Ｔ細胞集団の少なくとも約１×１０５個のＴ細胞を、ヒト患者に投与することを含む。ある特定の実施形態において、投与することは、１週間当たり、１用量当たり、１ｋｇ当たり、ＣＤ８＋Ｔ細胞集団の少なくとも約１×１０６個のＴ細胞を、ヒト患者に投与することを含む。
ある特定の実施形態において、治療方法は、少なくとも２用量のＣＤ８＋Ｔ細胞集団をヒト患者に投与することを含む。特定の実施形態において、治療方法は、２、３、４、５、または６用量のＴ細胞集団をヒト患者に投与することを含む。
いくつかの実施形態において、第１の対象は、非ヒト霊長類であり、第２の対象は、ヒトであり、トランスフェクトされたＣＤ８＋Ｔ細胞は、第２のＣＤ８＋ＴＣＲの非ヒト霊長類ＣＤＲ３αおよびＣＤＲ３βを含むキメラ非ヒト霊長類－ヒトＣＤ８＋ＴＣＲを含む。いくつかの実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、第２のＣＤ８＋ＴＣＲの非ヒト霊長類ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含む。いくつかの実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、第２のＣＤ８＋ＴＣＲのＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含む。いくつかの実施形態において、第１の対象は、非ヒト霊長類であり、第２の対象は、ヒトであり、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、第１のＣＤ８＋ＴＣＲの非ヒト霊長類ＣＤＲ３αおよびＣＤＲ３βを含むキメラ非ヒト霊長類－ヒトＣＤ８＋ＴＣＲである。いくつかの実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、キメラＣＤ８＋ＴＣＲである。
また、多重特異性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を含むＣＤ８＋Ｔ細胞を生成する方法も開示され、本方法は、第１の異種抗原をコードする核酸配列を含む組換えＣＭＶベクターを、第１のＭＨＣ－Ｅ／異種抗原由来ペプチド複合体を認識するＣＤ８＋Ｔ細胞の第１のセットを生成するのに有効な量で、対象に投与することであって、ＣＭＶベクターが、活性ＵＬ１２８、ＵＬ１３０、ＵＬ１４６およびＵＬ１４７タンパク質またはそれらのオーソログを発現せず、組換えＣＭＶベクターが、マイクロＲＮＡ認識エレメント（ＭＲＥ）をさらに含む、投与することと、ＣＤ８＋Ｔ細胞の第１のセットから第１のＣＤ８＋ＴＣＲを特定することであって、第１のＣＤ８＋ＴＣＲが、第１のＭＨＣ－Ｅ／異種抗原由来ペプチド複合体を認識する、特定することと、第２の異種抗原を、第２のＭＨＣ－Ｅ／異種抗原由来ペプチド複合体を認識するＣＤ８＋Ｔ細胞の第２のセットを生成するのに有効な量で、対象に投与することと、ＣＤ８＋Ｔ細胞の第２のセットから１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞を単離することと、ＣＤ８＋Ｔ細胞の第２のセットから第２のＣＤ８＋ＴＣＲを特定することであって、第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、第１のＭＨＣ－Ｅ／異種抗原由来ペプチド複合体および第２のＭＨＣ－Ｅ／異種抗原由来ペプチド複合体を認識する、特定することと、ＣＤ８＋Ｔ細胞の第３のセットを発現ベクターでトランスフェクトすることであって、発現ベクターが、第３のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする核酸配列と、第３のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする核酸配列に作動可能に連結されたプロモーターと、を含み、第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、第２のＣＤ８＋ＴＣＲのＣＤＲ３αおよびＣＤＲ３βを含み、それによって、第１のＭＨＣ－Ｅ／異種抗原由来ペプチド複合体および第２のＭＨＣ－Ｅ／異種抗原由来ペプチド複合体を認識する１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞を生成する、トランスフェクトすることと、目的の特定のペプチドに対して最も高いアビディティを有する第３のＣＤ８＋ＴＣＲのうちの１つ以上を選択することと、を含む。
いくつかの実施形態において、第１の異種抗原および第２の異種抗原は、同じである。いくつかの実施形態において、第１の異種抗原および第２の異種抗原は、異なる。いくつかの実施形態において、対象は、ヒトまたは非ヒト霊長類である。いくつかの実施形態において、組換えＣＭＶベクターは、組換えヒトＣＭＶベクターまたは組換えアカゲザルＣＭＶベクターである。
いくつかの実施形態において、第１の異種抗原は、腫瘍抗原、病原体特異的抗原、組織特異的抗原、または宿主自己抗原を含む。いくつかの実施形態において、腫瘍抗原は、前立腺がん、腎臓がん、肺がん、膵臓がん、中皮腫、乳がん、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ芽球性白血病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、悪性黒色腫、卵巣がん、結腸がん、腎細胞がん、および子宮頸がんからなる群から選択されるがんに関連する。いくつかの実施形態において、病原体特異的抗原は、ヒト免疫不全ウイルス、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、パピローマウイルス、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ寄生虫、エプスタイン・バールウイルス（ＥＢＶ）、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）、ヒトＴリンパ球向性ウイルス１型（ＨＴＬＶ１）、メルケルウイルス（ＭＣＶ）、サイトメガロウイルス、およびＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓからなる群から選択される病原体に関連する。
いくつかの実施形態において、ＭＲＥは、内皮細胞で発現されたマイクロＲＮＡに対する標的部位を含む。さらなる実施形態において、ＭＲＥは、ｍｉＲ１２６、ｍｉＲ－１２６－３ｐ、ｍｉＲ－１３０ａ、ｍｉＲ－２１０、ｍｉＲ－２２１／２２２、ｍｉＲ－３７８、ｍｉＲ－２９６、およびｍｉＲ－３２８からなる群から選択されるｍｉＲＮＡに特異的である。
いくつかの実施形態において、第１のＣＤ８＋ＴＣＲは、特定のＭＨＣ－Ｅサブトープまたはスーパートープを認識する。いくつかの実施形態において、第１のＣＤ８＋ＴＣＲは、ＤＮＡまたはＲＮＡ配列決定によって特定される。いくつかの実施形態において、ＣＤ８＋ＴＣＲは、シングルセル配列決定によって特定される。
いくつかの実施形態において、ＣＤ８＋Ｔ細胞の第２のセットからの１つ以上の単離されたＣＤ８＋Ｔ細胞は、ＣＤ６９およびＴＮＦαを発現する。
いくつかの実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、１つ以上の特定のＭＨＣ－Ｅスーパートープを認識する。いくつかの実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、１つ以上の特定のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する。いくつかの実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、特定のＭＨＣ－ＥスーパートープおよびＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する。
いくつかの実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、同じ抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープを認識する。いくつかの実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、同じ抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する。
いくつかの実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、同じ抗原からの１つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する。いくつかの実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、２つ以上の抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する。
いくつかの実施形態において、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、異なる抗原からの１つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する。
いくつかの実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、１つ以上の特定のＭＨＣ－Ｅスーパートープを認識する。いくつかの実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、１つ以上の特定のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する。いくつかの実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、特定のＭＨＣ－ＥスーパートープおよびＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する。
いくつかの実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、１つの抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープを認識する。いくつかの実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、１つの抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する。
いくつかの実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、１つの抗原からの１つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する。
いくつかの実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、同じ抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する。いくつかの実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、異なる抗原からの１つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する。
いくつかの実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする核酸配列は、第２のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする核酸配列と同一である。
いくつかの実施形態において、本方法は、１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞を第２の対象から単離することと、選択された第３のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする核酸配列および第３のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする核酸配列に作動可能に連結されたプロモーターで、１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞をトランスフェクトし、それによって、第１のＭＨＣ－Ｅ／異種抗原由来ペプチド複合体および第２のＭＨＣ－Ｅ／異種抗原由来ペプチド複合体を認識する１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞を生成することと、を含む。
ある特定の実施形態において、多重特異性ＴＣＲを含むＣＤ８＋Ｔ細胞を、疾患の予防または治療に使用することができる。Ｔ細胞集団の投与経路およびヒト患者に投与される量は、ヒト患者の状態および医師の知識に基づいて決定することができる。いくつかの実施形態において、投与経路は、静脈内、筋肉内、腹腔内、または経口投与である。一般に、投与は、静脈内である。
いくつかの実施形態において、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、がんを治療または予防するために投与される。さらなる例において、がんは、前立腺がん、腎臓がん、肺がん、膵臓がん、中皮腫、乳がん、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ芽球性白血病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、悪性黒色腫、卵巣がん、結腸がん、腎細胞がん、または子宮頸がんである。
いくつかの実施形態において、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、病原体感染症を治療または予防するために投与される。さらなる例において、病原体感染症は、ヒト免疫不全ウイルス、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、パピローマウイルス、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ寄生虫、エプスタイン・バールウイルス（ＥＢＶ）、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）、ヒトＴリンパ球向性ウイルス１型（ＨＴＬＶ１）、メルケルウイルス（ＭＣＶ）、サイトメガロウイルス、およびＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓである。
ある特定の実施形態において、投与することは、ＣＤ８＋Ｔ細胞の集団の注入によるものである。いくつかの実施形態において、注入は、ボーラス静脈内注入である。ある特定の実施形態において、投与することは、１週間当たり、１用量当たり、１ｋｇ当たり、ＣＤ８＋Ｔ細胞集団の少なくとも約１×１０５個のＴ細胞を、ヒト患者に投与することを含む。ある特定の実施形態において、投与することは、１週間当たり、１用量当たり、１ｋｇ当たり、ＣＤ８＋Ｔ細胞集団の少なくとも約１×１０６個のＴ細胞を、ヒト患者に投与することを含む。
ある特定の実施形態において、治療方法は、少なくとも２用量のＣＤ８＋Ｔ細胞集団をヒト患者に投与することを含む。特定の実施形態において、治療方法は、２、３、４、５、または６用量のＴ細胞集団をヒト患者に投与することを含む。
いくつかの実施形態において、第１の対象は、非ヒト霊長類であり、第２の対象は、ヒトであり、トランスフェクトされたＣＤ８＋Ｔ細胞は、第２のＣＤ８＋ＴＣＲの非ヒト霊長類ＣＤＲ３αおよびＣＤＲ３βを含むキメラ非ヒト霊長類－ヒトＣＤ８＋ＴＣＲを含む。いくつかの実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、第２のＣＤ８＋ＴＣＲの非ヒト霊長類ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含む。いくつかの実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、第２のＣＤ８＋ＴＣＲのＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含む。いくつかの実施形態において、第１の対象は、非ヒト霊長類であり、第２の対象は、ヒトであり、第２のＣＤ８＋ＴＣＲは、第１のＣＤ８＋ＴＣＲの非ヒト霊長類ＣＤＲ３αおよびＣＤＲ３βを含むキメラ非ヒト霊長類－ヒトＣＤ８＋ＴＣＲである。いくつかの実施形態において、第３のＣＤ８＋ＴＣＲは、キメラＣＤ８＋ＴＣＲである。
本明細書に開示される多重特異性ＴＣＲは、多重特異性ＴＣＲと、薬学的に許容される担体または希釈剤と、を含むＣＤ８＋Ｔ細胞を含む組成物を対象に投与することを含む、対象における免疫応答を誘導する方法において使用され得る。本明細書の目的のために、「対象」という用語は、非ヒト霊長類およびヒトを含むすべての動物を含み、一方、「動物」は、ヒトを除くすべての脊椎動物種を含み、「脊椎動物」は、動物（本明細書で「動物（ａｎｉｍａｌ）」が使用される場合）およびヒトを含むすべての脊椎動物を含む。もちろん、「動物」のサブセットは「哺乳動物」であり、本明細書の目的のために、ヒトを除くすべての哺乳動物を含む。
ワクチンまたは免疫組成物での使用のための抗原に関して、Ｓｔｅｄｍａｎ’ｓ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ（第２４版、１９８２年、例えば、ワクチンの定義（ワクチン製剤で使用される抗原のリストについて）も参照されたい。関心のあるそのような抗原またはそれらの抗原由来のエピトープを使用し得る。腫瘍抗原に関して、当業者は、過度の実験なしに、ペプチドまたはポリペプチドのアミノ酸および対応するＤＮＡ配列の知識、ならびに特定のアミノ酸の性質（例えば、サイズ、電荷など）およびコドン辞書から、腫瘍抗原およびそのコードＤＮＡを選択し得る。
哺乳動物細胞（動物細胞）、植物細胞、細菌（例えば、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、昆虫細胞、および酵母（例えば、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）を含むが、これらに限定されない、本発明の多重特異性ＴＣＲを発現させるために、多種多様の適切な宿主細胞を使用してもよい。例えば、本発明での使用が見出され得る様々な細胞株が、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手可能なＡＴＣＣ細胞株カタログに記載されている。さらに、本発明に係るＴ細胞受容体の発現のための宿主として、植物および動物を用いてもよい。発現およびトランスフェクションベクターまたはカセットは、使用される宿主に従って選択され得る。
もちろん、非細胞または無細胞タンパク質発現系も使用され得る。十分な量のタンパク質を産生するインビトロ転写／翻訳タンパク質発現プラットフォームは、無細胞タンパク質発現の多くの利点を提供し、典型的には、細胞ベースの発現系に関連する手間のかかる上流および下流工程（例えば、宿主細胞の形質転換、培養、または溶解）の必要性を排除する。
腫瘍抗原に対する免疫応答は、一般に、以下のように生成される：タンパク質がより小さなペプチドに切断されて、別の細胞の表面に位置する「主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）」と呼ばれる複合体で提示される場合にのみ、Ｔ細胞はタンパク質を認識する。ＭＨＣ複合体には、クラスＩおよびクラスＩＩの２つのクラスがあり、各クラスは、多くの異なる対立遺伝子からなる。異なる種および個々の対象は、異なる種類のＭＨＣ複合体対立遺伝子を有する。それらは、異なるＭＨＣ種を有すると言う。ＭＨＣクラスＩ分子の１つの種類は、ＭＨＣ－Ｅ（ヒトではＨＬＡ－Ｅ、ＲＭではＭａｍｕ－Ｅ、マウスではＱａ－ｌｂ）と呼ばれる。他のＭＨＣ－Ｉ分子とは異なり、ＭＨＣ－Ｅは、哺乳動物種内および哺乳動物種間で高度に保存されている。
開示された多重特異性ＴＣＲを含む医薬組成物および他の組成物がさらに開示される。そのような医薬組成物および他の組成物は、当該技術分野で既知の任意の投与手順で使用されるように製剤化され得る。そのような医薬組成物は、非経口経路（皮内、筋肉内、皮下、静脈内、またはその他）を介し得る。投与はまた、経口、鼻、生殖器などの粘膜経路を介し得る。
本開示の医薬組成物は、医薬分野において当業者に周知の標準的な技術に従って調製され得る。そのような組成物は、特定の患者の種（ｂｒｅｅｄ）または種（ｓｐｅｃｉｅｓ）、年齢、性別、体重、および状態、ならびに投与経路などの要因を考慮して、医学分野の当業者に周知の投与量でおよび技術により投与され得る。組成物は、単独で投与され得るか、あるいは他のものとともに、他の免疫、抗原または治療組成物とともに、同時にまたは順次投与され得る。
本開示のＣＭＶベクターは、例えば、ＭＨＣ－Ｅ、ＭＨＣ－ＩＩ、またはＭＨＣ－Ｉ（またはそれらのホモログまたはオーソログ）によって拘束されるＣＤ８＋Ｔ細胞応答の割合が高いことを特徴とする免疫応答を含む、ＣＤ８＋免疫応答を含む免疫原応答を生じさせることを目的とする場合に、インビボで投与され得る。例えば、いくつかの例では、アカゲザルなどの実験動物において、ＲｈＣＭＶを使用した免疫原性組成物およびワクチンの前臨床試験のために、本開示のＣＭＶベクターを使用することが所望され得る。他の例では、臨床試験などのヒト対象において、ＨＣＭＶを使用する免疫原性組成物の実際の臨床使用のために、本開示のＣＭＶベクターを使用することが望ましい。
そのようなインビボ用途のために、本開示のＣＭＶベクターは、薬学的に許容される担体をさらに含む免疫原性組成物の構成要素として投与される。いくつかの実施形態において、本開示の免疫原性組成物は、腫瘍抗原、腫瘍ウイルス抗原、または宿主自己抗原を含む異種抗原に対する免疫応答を刺激するのに有用であり、がんの予防、改善、または治療のために、腫瘍抗原、腫瘍ウイルス抗原、または宿主自己抗原に対する予防または治療ワクチンの１つ以上の構成要素として使用されてもよい。本開示の核酸およびベクターは、遺伝子ワクチン、すなわち、本開示の抗原をコードする核酸をヒトなどの対象に送達し、それによって、次いで抗原が対象において発現され、免疫応答を誘発するためのワクチンを提供するために特に有用である。
免疫化スケジュール（またはレジメン）は、動物（ヒトを含む）について周知であり、特定の対象および免疫原性組成物について容易に決定され得る。したがって、免疫原は、対象に１回以上投与されてもよい。好ましくは、免疫原性組成物の別々の投与間における設定時間間隔が存在する。この間隔は、対象ごとで異なるが、典型的には、１０日から数週間の範囲であり、［多くの場合、２、４、６、または８週間である。ヒトの場合、間隔は、典型的には２～６週間である。本開示の特に有利な実施形態において、間隔は、より長く、有利には、約１０週間、１２週間、１４週間、１６週間、１８週間、２０週間、２２週間、２４週間、２６週間、２８週間、３０週間、３２週間、３４週間、３６週間、３８週間、４０週間、４２週間、４４週間、４６週間、４８週間、５０週間、５２週間、５４週間、５６週間、５８週間、６０週間、６２週間、６４週間、６６週間、６８週間、または７０週間である。免疫化レジームは、典型的には、免疫原性組成物の１～６回の投与を有するが、１回、２回、または４回と少なくてもよい。免疫応答を誘導する方法はまた、免疫原とともにアジュバントを投与することを含んでもよい。いくつかの場合では、毎年、年２回、または他の長い間隔（５～１０年）のブースター免疫化により、初期の免疫化プロトコルが補完されてもよい。本発明方法はまた、様々なプライム－ブーストレジメンを含む。これらの方法では、１つ以上のプライミング免疫化の後に、１つ以上のブースト免疫化が行われる。実際の免疫原性組成物は、各免疫化について同じでもまたは異なっていてもよく、免疫原性組成物（例えば、タンパク質または発現ベクターを含む）の種類、経路、および免疫原の製剤も変動してもよい。例えば、発現ベクターがプライミングおよびブースト工程に使用される場合、それは同じまたは異なる種類（例えば、ＤＮＡまたは細菌またはウイルス発現ベクター）のいずれかであってもよい。１つの有用なプライムブーストレジメンは、４週間離れた２つのプライミング免疫化、続いて最後のプライミング免疫化後の４週間目および８週目における２つのブースティング免疫化を提供する。本開示のＤＮＡ、細菌、およびウイルス発現ベクターを使用してプライミングおよびブースティングレジメンを提供するために、いくつかの置換および組み合わせが包含されることも当業者に容易に明らかでなければならない。異なる病原体に由来する異なる抗原を発現しながら、ＣＭＶベクターを繰り返し使用し得る。
実施例１：ＭＨＣ－Ｅスーパートープ応答のＴＣＲクローン型階層
平均して、ＵＬ４０およびＵＳ２８のホモログを発現しながら、ヒトＣＭＶ ＵＬ１２８、ＵＬ１３０、ＵＬ１４６およびＵＬ１４７のＲｈＣＭＶホモログの機能的発現を欠くＲｈＣＭＶベクターでのワクチン接種後、３０～４０個のアミノ酸のタンパク質長ごとに、約１個のＭａｍｕ Ｅ制限ＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープ（典型的には９ｍｅｒ）を特定することができる。これらのエピトープのいくつかに対する応答は、すべてのサルに共通であり、これらのエピトープはスーパートープと称される。例えば、抗原ＳＩＶｇａｇを発現する株６８－１ ＲｈＣＭＶを接種した４匹の動物は、ＭＨＣ－Ｅスーパートープｇａｇ６９およびｇａｇ１２０に対するＴ細胞応答を誘発する（図１Ａおよび１Ｂ）（上述の遺伝子組換えによって天然に獲得した株６８－１）。
過去１５年間にこれらの動物において６８－１ ＲｈＣＭＶ／ＳＩＶｇａｇワクチン接種によって誘発され維持された、長期にわたって十分に特徴付けられた非慣例的に制限されたＳＩＶｇａｇ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を発現した、これらの４匹の長期６８－１ ＲｈＣＭＶ／ＳＩＶｇａｇベクターをワクチン接種されたアカゲザル（ＲＭ）からのＳＩＶ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を担うＴＣＲの特徴付けを、図１Ａおよび１Ｂに示す。これらのＲＭは、ＲｈＣＭＶ／ＳＩＶｇａｇワクチン接種の約４年後に、ＥＳＡＴ－６およびＡｇ８５Ｂ ＴＢ抗原を発現する６８－１ ＲｈＣＭＶ／ＴＢベクターを試験するためにも使用した。
表面捕捉されたＴＮＦ染色（ＳＴＴＳ、図２Ａ）を使用して、生存（非固定）エピトープ応答性ＣＤ８＋Ｔ細胞を、すべての発現ＴＣＲ鎖の配列決定および各細胞のトランスクリプトームの全体的な分析を含む、シングルセル（ｓｃ）トランスクリプトーム分析に好適なこれらのＲＭから選別することができた。２つのＭＨＣ－Ｅ制限ＳＩＶｇａｇスーパートープ、Ｇａｇ２７６～２８４ＲＬ９（Ｇａｇ６９）およびＧａｇ４８２～４９９ＥＫ９（Ｇａｇ１２０）に対する６８－１ ＲｈＣＭＶ／ＳＩＶベクター誘発ＣＤ８＋Ｔ細胞応答のＴＣＲクローン型構造の特徴付けを、ＣＤ６９上方制御および表面捕捉ＴＮＦ発現の両方でこれらのエピトープに応答する選別されたＣＤ８＋Ｔ細胞の分析によって分析した（この二重陽性基準を最大特異性に使用した。ただし、注目すべきは、すべての応答するクローン型が検出可能なｓｔＴＮＦを発現するわけではないので、応答するクローン型＋細胞もＣＤ６９＋／ｓｔＴＮＦ－分画であり得る。図２Ａの並列ＩＣＳおよびＳＴＴＳアッセイの比較を参照されたい）。ＳＴＴＳを、３年間にわたって縦軸方向に使用して、各研究ＲＭについてＥＫ９およびＲＬ９特異的Ｔ細胞（ｓｔＴＮＦ＋／ｓＣＤ６９＋）を選別した。選別した細胞をバルクおよび／またはシングルセルＲＮＡｓｅｑによって分析し、それらの完全なＴＣＲα／β階層の特定を可能にした。顕著なことに、Ｇａｇスーパートープ応答ＣＤ８＋Ｔ細胞をＴＣＲ発現について分析したところ、４匹の研究ＲＭの各々は、Ｇａｇ２７６～２８４ＲＬ９およびＧａｇ４８２～４９９ＥＫ９の両方について安定した高度にオリゴクローナルなクローン型階層を示し、予想外に、多くのクローン型が、（２つのスーパートープ最適９ｍｅｒペプチドが本質的に配列相同性を有しないという事実にもかかわらず（図２Ｂ～２Ｅ））これらの２つのスーパートープ特異的応答にわたって共通していた。
実施例２：いくつかのＭＨＣ－Ｅ制限ＣＤ８＋ＴＣＲは、配列無関係なスーパートープおよび内因的に処理された抗原を認識する
４匹すべてのＲＭからの主要なＴＣＲアルファ／ベータ鎖対の各々を、一次対照（ＳＩＶ Ａｇナイーブ）ＲＭ ＣＤ８＋Ｔ細胞の形質導入を使用して特異性分析のためにクローニングした。図２Ｆに示されるように、各ｓｃＲＮＡｓｅｑで特定されたＴＣＲは、Ｇａｇ２７６～２８４ＲＬ９、Ｇａｇ４８２～４９９ＥＫ９、または両方に対する特異的応答を媒介した。これは、ｓｃＲＮＡｓｅｑによって明らかにされる特異性を確認し、個々のＴＣＲが、これらの２つのＭＨＣ－Ｅ制限スーパートープに対する二重特異性を有することができることを明確に実証した。
また、これらのＴＣＲが、ＳＩＶｇａｇでトランスフェクトされたＳＩＶｍａｃ２３９感染ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＢリンパ芽球細胞株（ＢＬＣＬ）を特異的に認識することができ（図３Ａ～３Ｂ）、これは、ＳＩＶｇａｇエピトープペプチドが、非ＲｈＣＭＶ感染細胞においてＭＨＣ－Ｅとの関連において効果的に処理され、表面発現され得ることを実証した。
実施例４：ＭＨＣ－Ｅ制限ＣＤ８＋Ｔ細胞応答の広範なエピトープ特異性は、少数のＴＣＲによって媒介される
図１Ａに示されるように、これらの４匹のＲＭにおいて維持されるＳＩＶｇａｇ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞は、少なくとも９～１６個の異なるＭＨＣ－Ｅ制限エピトープおよび２３～２７個のＭＨＣ－ＩＩ制限エピトープを認識する。ＳＩＶ感染細胞において天然に処理されたＳＩＶｇａｇを認識できるこれらのＲＭのＴＣＲクローン型の全範囲を特定するために、各研究ＲＭからのＣＤ８＋Ｔ細胞を、自家ＳＩＶ感染ＣＤ４＋Ｔ細胞で刺激し、ＳＴＴＳによって応答細胞を特定し、ｓＣＤ６９およびｓｔＴＮＦに基づいて応答細胞を選別し、次いで、ｓｃＲＮＡｓｅｑによって応答細胞を分析した（図２に示す）。
ＳＩＶ感染認識のためのクローン型階層を決定するために、各研究ＲＭからの精製されたＣＤ８＋Ｔ細胞を、自家ＳＩＶ感染ＣＤ４とともにインキュベートした。活性化された細胞を、ｓＣＤ６９およびｓ－ｔＴＮＦ－α染色に基づいて選別し、続いてシングルセルＲＮＡ－ｓｅｑを行った。円グラフは、各クローンの相対頻度を示す。加えて、クローンは、少なくとも２つの別個のスーパートープペプチド刺激において、応答細胞の５％超において特定されたが、本実験では５％未満に存在するクローンも命名される。クローン名、アルファ／ベータＣＤＲ３配列、およびＶ／Ｊセグメント使用量を表１～４に示す。
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注目すべきは、２つのアルファ鎖および１つのベータをコードするいくつかのクローン（ＴＣＲ１－１／２、ＴＣＲ６－１／２、およびＴＣＲ１３－１／２、灰色で強調表示）が特定されたことである。ＲＭ間で完全に共通するクローン型はないが、Ｒｈ－３とＲｈ－１との間で共通する１つのアルファ鎖が存在する（図４Ａおよび４Ｂ、ＴＣＲ１－１およびＴＣＲ４、赤色）。
顕著なことに、ＳＩＶ感染細胞に応答するＣＤ８＋Ｔ細胞のＴＣＲ階層は、高度にオリゴクローナルであり、ＭＨＣ－Ｅ制限スーパートープ応答性によって以前に特定されたＴＣＲによってほぼ完全に（９０％＋）構成されていた（図４Ａ～４Ｄ）。Ｒｈ－３とＲｈ－１との間で共通する１つのＴＣＲアルファ鎖を除いて、これらのＴＣＲは、各ＲＭにおいて別個のものであった。注目すべきは、Ｒｈ－３の２つのクローン型およびＲｈ－１の１つのクローン型が２つのＴＣＲアルファ鎖を発現し、これらの細胞が２つの別個のＴＣＲを発現する可能性をもたらしたことであり、その場合、ベータ鎖はいずれかのアルファ鎖と対合する。
実施例５：複数の無関係なペプチドを認識するＭＨＣ－Ｅ制限ＴＣＲ
これらのデータは、非スーパートープエピトープ（「サブトープ」と呼ばれる）を認識するＴＣＲが、これらのＳＩＶ感染細胞認識アッセイのどこにあるかという問題を提起し、これらのサブトープが処理されていないか、またはＳＩＶ感染細胞内でＭＨＣ－Ｅ提示されている（例えば、スーパートープのみが適切に処理／提示されていることを示唆する（かなり低い可能性））か、あるいは多くの場合スーパートープ間で交差反応性であることが既に示されているスーパートープ応答性ＴＣＲもまた、サブトープと交差反応することを示唆する。実際、図５に示すように、後者の可能性が当てはまる。
全体的な４つのＲＭ研究コホートからのＭＨＣ－Ｅ－ＴＣＲ ＣＤ８＋Ｔ細胞導入体を、図５に示すように、研究ＲＭのうちのいずれかにおいて認識されたＭＨＣ－Ｅ制限最適ペプチドのパネルに対して試験した。エピトープが陽性とみなされるためには、エピトープは、３つ以上の独立したアッセイにおいて、バックグラウンドを超える０．３％超の刺激応答を有する必要がある。各ＴＣＲの全体的な応答パターンを表５～８に示す（注：すべてのアッセイにおいて、すべての標的ＭＨＣ－Ｅ提示ペプチドがトリガーされるわけではない）。ＮＤ：データなし（分析保留中）。
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最も一般的なサブトープのうちの１０個に対する反応性について調べた１７個のスーパートープ反応性ＴＣＲのうち、これらのＴＣＲのうちの１２個は、これらのサブトープのうちの少なくとも１個および最大１０個すべてとの交差反応性を示した（他の５個のＴＣＲは、１つまたは両方のスーパートープのみに対する反応性を示すのみであるが、他の試験されていないサブトープとの交差反応性を除外することはできない）。これらのデータは、６８－１ ＲｈＣＭＶ／ＳＩＶｇａｇベクターによって誘発され維持されるＭＨＣ－Ｅ制限ＣＤ８＋Ｔ細胞応答が、多重特異性であるＴＣＲを主に使用していることを明確に実証しており、これらのＲＭにおけるワクチン誘発応答を含むＴＣＲクローン型の大部分が、ＳＩＶ感染標的細胞の表面上の複数の別個のＭＨＣ－Ｅ提示エピトープを認識する可能性を有することを示唆する。
実施例６：２つ以上の抗原を認識するＭＨＣ－Ｅ制限ＴＣＲの生成
図１Ａに示されるように、この研究コホートにおけるすべてのＲＭは、ＥＳＡＴ－６／Ａｇ８５Ｂポリタンパク質を発現する６８－１ ＲｈＣＭＶ／ＴＢベクターを予めワクチン接種した。Ａｇ８５Ｂペプチド混合物に対するＣＤ８＋Ｔ細胞応答のＳｃＲＮＡ分析により、ＳＩＶｇａｇ特異的（ＴＣＲ９）として以前に特徴付けられた少なくとも１つのＴＣＲもまた、この異種Ａｇ内のエピトープに応答することが明らかになる（図６Ａ、Ｒｈ３３０３４由来のＴＣＲ６も同様の交差反応性を有するようである）。それらのＭＨＣ－Ｅ制限ＳＩＶｇａｇ反応性によって以前に特定された５つのドミナントクローン型のうちの３つは、ＭＨＣ－ＩＩ制限ＳＩＶｇａｇスーパートープペプチドの一方または両方にも応答し、これらのＴＣＲ（ＴＣＲ９）のうちの一方は、ＴＢ Ａｇ８５Ｂエピトープにも応答する（図６Ｂ）。
したがって、まだ特徴付けられていない機序によって、６８－１ ＲｈＣＭＶベクターでワクチン接種されたＲＭは、高度に交差反応性のＴＣＲによってＡｇ標的化応答を発現し、交差反応性は、特定のＡｇインサート内のＭＨＣ－Ｅ提示エピトープのみならず、異なる時間に投与された６８－１ ＲｈＣＭＶベースのワクチンによって発現される異種インサート内のＭＨＣ－Ｅ制限エピトープも伴う。
実施例７：いくつかのＭＨＣ－Ｅ制限ＳＩＶｇａｇ特異的ＴＣＲは、ＭＨＣ－Ｉａ制限ＲｈＣＭＶ－ＩＥ１特異的ＴＣＲに由来する
研究ＲＭの４匹すべてを、生後１年目に自然にＲｈＣＭＶに感染させ、自然のＲｈＣＭＶ感染を有するすべてのＲＭと同様に、ＲｈＣＭＶ Ａｇに対する古典的にＭＨＣ－Ｉａ制限された応答を発現し、ほぼ確実に、ＲｈＣＭＶ即時初期－１（ＩＥ－１）タンパク質（Ｔ細胞によって頻繁に標的化される高発現ウイルスタンパク質）に対するかなりの応答を含む。４匹の研究ＲＭはすべて、典型的には２つの高度に免疫優性ＩＥ－１エピトープ：ＩＥ１３１３－３２３ＡＮ１０およびＩＥ１２９１－２９９ＶＹ９を制限するＭａｍｕ－Ａ＊０２対立遺伝子を発現し、Ｍａｍｕ－Ａ＊０２／ＡＮ１０およびＭａｍｕ－Ａ＊０２／ＶＹ９四量体を用いた分析により、４匹のＲＭがすべて、両方のエピトープに対する堅牢なＣＤ８＋Ｔ細胞応答を示すことが明らかになった（図７Ａ）。
これらの応答を構成するＣＤ８＋Ｔ細胞を、Ｍａｍｕ－Ａ＊０２／ＡＮ１０／Ｍａｍｕ－Ａ＊０２／ＶＹ９四量体結合ならびにＳＴＴＳによるペプチド刺激に応じたｓＣＤ６９およびｓｔＴＮＦ上方調節の両方に基づいて選別することにより単離し、上記のようにｓｃＲＮＡｓｅｑにより選別した細胞を分析した。顕著かつかなり驚くべきことに、この分析によって特定されたいくつかのＴＣＲは、ＭＨＣ－Ｅ制限ＳＩＶｇａｇスーパートープによって引き起こされることが以前に示されたのと同じＴＣＲであることが判明した（図７Ｂ～７Ｅ）。興味深いことに、従来のＭＨＣ－Ｉａ制限ＣＤ８＋Ｔ細胞応答で予想されるように、ＡＮ１０およびＶＹ９を認識するＴＣＲは別個であったが、両方とも非慣例的に制限されたＳＩＶｇａｇスーパートープ／サブトープで認識された。
ＴＣＲ導入体を用いた機能分析は、Ｍａｍｕ－Ａ＊０２制限エピトープのうちの両方一方、およびＭＨＣ－Ｅ制限ＳＩＶｇａｇスーパートープのうちの一方または両方による関連ＴＣＲの特異的トリガーを確認した（図７Ｆ）。
次に、ＶＹ９ブロッキングによりＭＨＣ－Ｉａ制限を検証した。なお、ＶＬ９プレインキュベーションは、ＳＩＶｇａｇＥＫ９スーパートープの結合およびＴＣＲ２媒介性認識をブロックするが、ＶＹ９結合／認識をブロックしない。これらの形質導入されたＣＤ８＋Ｔ細胞の二重反応性は、ブロッキング分析によってエピトープ提示に使用されるＭＨＣ分子に関して別個であることが確認された。ＴＣＲ導入体によるＳＩＶｇａｇスーパートープの認識は、強力にＭＨＣ－Ｅ結合するＶＬ９ペプチドとのプレインキュベーションによってブロックされたが、同じ導入体によるＭａｍｕ－Ａ＊０２制限ＩＥ－１エピトープの認識はブロックされなかった。逆に、Ｍａｍｕ－Ａ０２ ＩＥ－１エピトープのＴＣＲ導入体認識は、それらの結合強度に比例してＭａｍｕ－Ａ＊０２結合ペプチドによってブロックされ得た（図８Ａおよび８Ｂ）。顕著なことに、従来のＩＥ－１特異的および非慣例的なＳＩＶｇａｇ特異的反応性の両方を有するＴＣＲは、これらの４匹の６８－１ ＲｈＣＭＶ／ＳＩＶｇａｇワクチン接種ＲＭにおいて、ＳＩＶ感染細胞認識に関与するＴＣＲの大部分（ただしすべてではない）を占めた（図７Ｇ～７Ｊ）。
実施例８：ＣＤ８＋Ｔ細胞の二重ＭＨＣ特異性は、２つのＴＣＲサブユニットの発現から生じ得る
図４Ａ～４Ｄに示されるように、４匹の研究ＲＭの分析で特定されたＳＩＶｇａｇスーパートープ反応性Ｔ細胞クローンのうちの３つは、２つの別個のＴＣＲアルファ鎖および１つのＴＣＲベータ鎖を発現し、２つの別個のＴＣＲを形成する可能性がある。各対の特異性を調べるために、各対の導入体（ｔｒａｎｓｄｕｃａｎｔ）（ＴＣＲ６－１およびＴＣＲ６－２）を個別に生成した。ＴＣＲ６－１およびＴＣＲ６－２の配列を表９および１０に示す。
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興味深いことに、両方のＴＣＲは、Ｇａｇ４８２～４９９ＥＫ９を認識し、複数のＳＩＶｇａｇサブトープと広範に（同一ではないが）交差反応性である（図５）が、これらの対のうちの１つ（ＴＣＲ６．２）のみが、Ｍａｍｕ－Ａ＊０２エピトープ（ＶＹ９）を認識する（図９）。これらのデータは、従来のＶＹ９特異性が主にＴＣＲアルファ鎖依存性であるのに対し、ＭＨＣ－Ｅ ＳＩＶｇａｇ特異性が主にＴＣＲベータ鎖媒介性であり、これらの異常な交差反応性のうちのいくつかが生じ得る可能な機序に関する独自の洞察を示唆する。
実施例９：二重ＭＨＣ特異的ＴＣＲの機能的アビディティ
Ｍａｍｕ－Ａ＊０２エピトープおよびＭＨＣ－Ｅスーパートープ／サブトープ多重特異性を有する所与のＴＣＲを並列分析すると、Ｍａｍｕ－Ａ＊０２エピトープに対する応答は、最適なＭＨＣ－Ｅスーパートープ応答よりも大きく（より多くの応答細胞）かつ強い（より多くのサイトカイン産生）場合が多い（図７Ｂ～７Ｅ、８Ａを参照；図１０のＴＣＲ６．２応答、下部パネルは例外である）。これは、記憶区画におけるこれらのＴＣＲクローン型の初期の動員が、元の野生型ＲｈＣＭＶ感染の間にほぼ確実に発生したことを考えると、特に不思議ではないが、これらの機能的差異をより詳細に比較することが重要であった。
この目的への最初の工程として、ＴＣＲ２ ＣＤ８＋Ｔ細胞導入体による並列エピトープ希釈分析を実施した。ＴＣＲ２は、ＭＨＣ－Ｅスーパートープへの応答に関して最も一貫性のある強力なＴＣＲのうちの１つであり、またＩＥ－１ ＶＹ９エピトープを認識するために、選択された。ＭＨＣ－Ｅスーパートープによるトリガーが、ＭＨＣ－Ｅペプチド結合溝内のスーパートープペプチドの弱い／不安定な結合のいずれかによって、またはスーパートープ－ＭＨＣ－Ｅ複合体に対する低ＴＣＲアビディティによって損なわれた場合、スーパートープ媒介性トリガーは、高いエピトープ用量では、従来のＶＹ９エピトープによるトリガーと同様に始まる（または、おそらく、より効率的ではない）が、その後、従来のエピトープによる実証可能なトリガーが非従来的なエピトープよりもはるかに低いペプチド用量にまで及ぶように、エピトープ希釈により速く減少する（ｆａｌｌ ｏｆｆ）ことが予想されると仮定された。興味深いことに、これは観察されたものではなかった（図１０Ａおよび１０Ｂ）。最高ペプチド用量でも、ＭＨＣ－Ｅスーパートープへの応答は、従来のＶＹ９エピトープよりも少ないＴＣＲ２形質導入細胞を誘発したが、このより小さな集団の応答は、従来のエピトープによって誘発されたより大きな集団とほぼ同じ速度で減少した。この知見は、少なくともこのＴＣＲについて、形質導入細胞が「正しい」環境を有する場合、従来のエピトープと同様にＭＨＣ－Ｅスーパートープに応答することができるが、すべての形質導入細胞が応答する正しいエピジェネティックなランドスケープを有するわけではないことを示唆する。ＴＣＲ形質導入は、対照動物からの末梢血ＣＤ８＋Ｔ細胞上で実行され、形質導入に必要な活性化は、すべての導入体を記憶表現型に変換するが、これらの細胞の起源は多様であり、したがって、導入体のエピジェネティックなランドスケープに異質性がある可能性が高いことを覚えておくことが重要である。細胞がＭＨＣ－Ｅスーパートープによって誘発される能力を決定する要因は、プロジェクトのこの時点では、まだ決定されていない。加えて、ｓｃＲＮＡを使用して、ＭＨＣ－Ｅスーパートープ非応答導入体が実際に応答しているが、ＴＮＦ－αまたはγ－ＩＦＮ産生を含まない異なる活性化応答を有するかどうかを決定した。
実施例１０：ＴＣＲエクスビボの機能分析
これらのＴＣＲを天然に有する細胞による、従来的な認識と非従来的な認識との間のトリガー効率の差異を探索するために、ｓｃＲＮＡｓｅｑを使用して、研究ＲＭからエクスビボで採取した細胞を分析した。ここまでのｓｃＲＮＡｓｅｑの使用の焦点は、ＴＣＲ発現のシングルセル決定であったが、利用可能なデータは、全トランスクリプトームを含む。ｓｃＲＮＡｓｅｑ分析（ｓｔＴＮＦ＋／ｓＣＤ６９＋）の前に、Ａｇ活性化ＣＤ８＋Ｔ細胞を主に選別した。これは主に、コストを削減するべく目的のＡｇ応答性細胞を濃縮するために行われ、Ａｇ応答性細胞のトランスクリプトームがまたＴＣＲ媒介活性化の明確な証拠を提供するので、ｔＳＮＥプロット内の応答性細胞のクラスター化（関連するＴＣＲとともに）によって容易に認識可能であり（図１１Ａ）、かつ、正準ＴＣＲトリガー誘導遺伝子を含む、ｔＳＮＥプロット内で特定された他のクラスターからの推定上活性化された「クラスター」の差次的遺伝子発現によっても認識可能である（図１１Ｂ）。ＴＣＲ媒介活性化に関連する差次的に上方制御された遺伝子を使用して、所与のＡｇに対する細胞応答の定量的評価を提供する複合活性化スコアを作製した（図１１Ｃ）。単離された総ＣＤ６９＋細胞を研究して、概ね活性化された細胞を濃縮し（図１１Ｄ～１１Ｆ、左パネル）、次いで、このほとんど活性化されたサブセット内で、３つの異なる刺激：ｉ）ＩＥ－１ペプチドＶＹ９＋ＡＮ１０、ｉｉ）ＭＨＣ－Ｅ ＳＩＶｇａｇスーパートープペプチドＲＬ９＋ＥＫ９、およびｉｉｉ）ＳＩＶ感染細胞（図１１Ｄ～１１Ｇ）に対する、このＲＭ内の関連するＴＣＲを発現するＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化スコア（図４Ａ～４Ｄ、ＴＣＲ４、５、６および１２を参照）を決定した。
各アッセイについて、活性化された細胞について濃縮されるが、上記のように活性化のためのバックグラウンドおよびスコア化された細胞を含有する総ＣＤ６９＋細胞を選別した（図１１Ｄ）。再び、細胞は、交差反応性ＴＣＲクラスターを活性化して発現する（図１１Ｅおよび１１Ｆ）。各示されたＡｇ刺激に対する各示されたＴＣＲを発現するＣＤ８＋Ｔ細胞応答の活性化スコアを別々に評価した（図１１Ｇ）。ＴＣＲ４およびＴＣＲ６はＡＮ１０またはＶＹ９に応答するが、ＴＣＲ５およびＴＣＲ１２は応答しないことが示されている。なお、ＭＨＣ－Ｅ ＳＩＶｇａｇスーパートープおよびＭＨＣ－Ｉａエピトープと反応する２つのＴＣＲのうち、活性化分布は、少なくともＴＣＲ４については、ＳＩＶ感染細胞によって提示される複数のＭＨＣ－Ｅ ＳＩＶｇａｇエピトープによって補償される、ＭＨＣ－Ｉａエピトープによるより効率的な活性化（右方向シフト）を示唆する。
上述したように（図９）、ＴＣＲ６＋細胞は、共通のベータ鎖を共有する２つのＴＣＲを発現し、したがって、これらの細胞の応答は、両方のＴＣＲの複合体を反映する可能性が高い。ブロックの分析（図７Ａ～７Ｊ）から予想されるように、ＩＥ－１ ＶＹ９＋ＡＮ１０に応答するのはＴＣＲ４およびＴＣＲ６のみであり、一方でＴＣＲ５およびＴＣＲ１２は、ＣＤ６９＋ゲート内に全く存在しないか、または存在する場合、サブゼロ活性化スコアを示すかのいずれかである。対照的に、ＶＹ９／ＡＮ１０に対するＴＣＲ６応答は、このクローン型の２つのＴＣＲのうちの一方のみがこれらのペプチド（ＶＹ９）のうちの一方に応答するという事実にもかかわらず、堅牢かつユニモーダルである。スーパートープペプチドに対するＴＣＲ６応答およびＳＩＶ感染細胞に対するＴＣＲ６応答は、ＩＥ－１ ＶＹ９応答に対して全体的にわずかではあるが、識別可能に左シフトであり、完全に活性化されたいくつかの細胞および活性化遺伝子組の誘導がより少ない他の細胞を示唆するバイモーダルであるように見える。ＩＥペプチドに対するＴＣＲ４応答は、ＴＣＲ６応答よりもわずかに弱いが、このＴＣＲとの大きな違いは、ＭＨＣ－Ｅスーパートープに対するそのトリモーダル応答であり、トリモーダル応答としては、ＳＩＶ感染細胞に対する堅牢な応答を伴う、これらのペプチドに対する強い応答、弱い応答、および無応答が含まれる。注目すべきは、ＴＣＲ４は、４つのＭＨＣ－Ｅサブトープ（図５、スーパートープよりも強力であることが多い）を認識し、ＳＩＶ感染細胞は、これらの追加の標的エピトープを提示する可能性が高く、このほぼ確実に多価刺激に対するより強く、かつより均一な応答をもたらす。逆に、ＴＣＲ５は、スーパートープのみのＴＣＲのうちの１つであり（例えば、既知の認識されたサブトープは存在しない：図５）、このＴＣＲの天然細胞における最適なスーパートープペプチドへの応答は、明らかにＳＩＶ感染細胞よりも強い。ＴＣＲ１２は、サブトープ反応性についてまだ試験されていないが、このＴＣＲは、ＴＣＲ５と同じスーパートープ＞ＳＩＶ感染細胞トリガーパターンを示し、それもサブトープとの交差反応性がより低い可能性が示唆される。
全体的に、これらのデータは、それらの天然（ＲｈＣＭＶベクター誘発）ＣＤ８＋Ｔ細胞との関連において、ＭＨＣ－Ｅ ＳＩＶｇａｇ反応性ＴＣＲが、不均一であるが、明らかに、ＳＩＶｇａｇスーパートープペプチドもしくはＳＩＶ感染細胞を有するか、またはその両方を有する細胞の大部分において（ＭＨＣ－Ｉａエピトープによって引き起こされるものと同様の）「完全な」転写によって定義された活性化応答を誘導することができることを示唆し、ＣＤ８＋Ｔ細胞ＴＣＲ導入体とは対照的に、これらの天然（ＣＭＶ「飼育された」）ＣＤ８＋Ｔ細胞が、これらの非従来的なエピトープに十分に応答するために必要なエピジェネティックなランドスケープを有することを示唆する。

Claims (164)

  1. 多重特異性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を含むＣＤ８＋Ｔ細胞を生成する方法であって、
    （ａ）第１の異種抗原をコードする核酸配列を含む組換えサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）ベクターを、第１のＭＨＣ／異種抗原由来ペプチド複合体を認識するＣＤ８＋Ｔ細胞の第１のセットを生成するのに有効な量で、対象に投与することであって、前記ＣＭＶベクターが、活性ＵＬ１２８、ＵＬ１３０、ＵＬ１４６およびＵＬ１４７タンパク質またはそれらのオーソログを発現しない、投与することと、
    （ｂ）前記ＣＤ８＋Ｔ細胞の第１のセットから第１のＣＤ８＋ＴＣＲを特定することであって、前記第１のＣＤ８＋ＴＣＲが、前記第１のＭＨＣ／異種抗原由来ペプチド複合体を認識する、特定することと、
    （ｃ）第２の異種抗原を、第２のＭＨＣ／異種抗原由来ペプチド複合体を認識するＣＤ８＋Ｔ細胞の第２のセットを生成するのに有効な量で、前記対象に投与することと、
    （ｄ）前記ＣＤ８＋Ｔ細胞の第２のセットから１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞を単離することと、
    （ｅ）前記ＣＤ８＋Ｔ細胞の第２のセットから第２のＣＤ８＋ＴＣＲを特定することであって、前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、前記第１のＭＨＣ／異種抗原由来ペプチド複合体および前記第２のＭＨＣ／異種抗原由来ペプチド複合体を認識する、特定することと、
    （ｆ）ＣＤ８＋Ｔ細胞の第３のセットを発現ベクターでトランスフェクトすることであって、前記発現ベクターが、第３のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする核酸配列と、前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする前記核酸配列に作動可能に連結されたプロモーターと、を含み、前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲのＣＤＲ３αおよびＣＤＲ３βを含み、それによって、前記第１のＭＨＣ／異種抗原由来ペプチド複合体および前記第２のＭＨＣ／異種抗原由来ペプチド複合体を認識する１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞を生成する、トランスフェクトすることと、
    （ｇ）目的の特定のペプチドに対して最も高いアビディティを有する前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲのうちの１つ以上を選択することと、を含む、方法。
  2. 前記組換えＣＭＶベクターが、活性ＵＬ１８タンパク質を発現しない、請求項１に記載の方法。
  3. 前記組換えＣＭＶベクターが、活性ＵＬ４０タンパク質またはそのオーソログ、および活性ＵＳ２８タンパク質またはそのオーソログを発現する、請求項１または２に記載の方法。
  4. 前記第１のＭＨＣ／異種抗原由来ペプチド複合体が、ＭＨＣ－ＩＩ／異種抗原由来ペプチド複合体、ＭＨＣ－Ｅ／異種抗原由来ペプチド複合体、またはＭＨＣ－Ｉ／異種抗原由来ペプチド複合体である、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
  5. 前記第２のＭＨＣ／異種抗原由来ペプチド複合体が、ＭＨＣ－ＩＩ／異種抗原由来ペプチド複合体またはＭＨＣ－Ｅ／異種抗原由来ペプチド複合体である、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
  6. 前記対象が、ヒトまたは非ヒト霊長類である、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
  7. 前記組換えＣＭＶベクターが、組換えヒトＣＭＶベクターまたは組換えアカゲザルＣＭＶベクターである、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
  8. 前記第１および／または第２の異種抗原が、腫瘍抗原、病原体特異的抗原、組織特異的抗原、または宿主自己抗原を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。
  9. 前記腫瘍抗原が、前立腺がん、腎臓がん、肺がん、膵臓がん、中皮腫、乳がん、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ芽球性白血病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、悪性黒色腫、卵巣がん、結腸がん、腎細胞がん、および子宮頸がんからなる群から選択されるがんに関連する、請求項８に記載の方法。
  10. 前記病原体特異的抗原が、ヒト免疫不全ウイルス、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、パピローマウイルス、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ寄生虫、エプスタイン・バールウイルス（ＥＢＶ）、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）、ヒトＴリンパ球向性ウイルス１型（ＨＴＬＶ１）、メルケルウイルス（ＭＣＶ）、サイトメガロウイルス、およびＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓからなる群から選択される病原体に関連する、請求項８に記載の方法。
  11. 前記第１のＣＤ８＋ＴＣＲが、特定のＭＨＣ－ＩＩサブトープ（ｓｕｂｔｏｐｅ）またはスーパートープ（ｓｕｐｅｒｔｏｐｅ）を認識する、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。
  12. 前記第１のＣＤ８＋ＴＣＲが、特定のＭＨＣ－Ｅサブトープまたはスーパートープを認識する、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。
  13. 前記第１のＣＤ８＋ＴＣＲが、特定のＭＨＣ－Ｉサブトープまたはスーパートープを認識する、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。
  14. 前記第１のＣＤ８＋ＴＣＲが、ＤＮＡまたはＲＮＡ配列決定によって特定される、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。
  15. 前記第１のＣＤ８＋ＴＣＲが、シングルセル配列決定によって特定される、請求項１４に記載の方法。
  16. 前記第１の異種抗原および第２の異種抗原が、同じである、請求項１～１５のいずれか一項に記載の方法。
  17. 前記第１の異種抗原および第２の異種抗原が、異なる、請求項１～１５のいずれか一項に記載の方法。
  18. 前記ＣＤ８＋Ｔ細胞の第２のセットからの前記１つ以上の単離されたＣＤ８＋Ｔ細胞が、ＣＤ６９およびＴＮＦαを発現する、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法。
  19. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、１つ以上の特定のＭＨＣ－ＩＩスーパートープを認識する、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
  20. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、１つ以上の特定のＭＨＣ－Ｅスーパートープを認識する、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
  21. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、１つ以上の特定のＭＨＣ－Ｉスーパートープを認識する、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
  22. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、ＭＨＣ－ＩＩスーパートープおよびＭＨＣ－Ｅスーパートープを認識する、請求項１９または２０に記載の方法。
  23. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、ＭＨＣ－ＩスーパートープおよびＭＨＣ－Ｅスーパートープを認識する、請求項２０または２１に記載の方法。
  24. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、ＭＨＣ－ＩスーパートープおよびＭＨＣ－ＩＩスーパートープを認識する、請求項１９または２１に記載の方法。
  25. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、１つ以上の特定のＭＨＣ－ＩＩサブトープを認識する、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
  26. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、１つ以上の特定のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
  27. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、１つ以上の特定のＭＨＣ－Ｉサブトープを認識する、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
  28. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、ＭＨＣ－ＩＩサブトープおよびＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する、請求項２５または２６に記載の方法。
  29. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、ＭＨＣ－ＩＩサブトープおよびＭＨＣ－Ｉサブトープを認識する、請求項２６または２７に記載の方法。
  30. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、ＭＨＣ－ＥサブトープおよびＭＨＣ－Ｉサブトープを認識する、請求項２５または２７に記載の方法。
  31. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、ＭＨＣ－ＩＩサブトープまたはスーパートープ、およびＭＨＣ－Ｅサブトープまたはスーパートープを認識する、請求項１９～２０および２５～２６のいずれか一項に記載の方法。
  32. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、ＭＨＣ－ＩＩサブトープまたはスーパートープ、およびＭＨＣ－Ｉサブトープまたはスーパートープを認識する、請求項１９、２１、２５、および２７のいずれか一項に記載の方法。
  33. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、ＭＨＣ－Ｅサブトープまたはスーパートープ、およびＭＨＣ－Ｉサブトープまたはスーパートープを認識する、請求項２０～２１および２６～２７のいずれか一項に記載の方法。
  34. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、特定のＭＨＣ－ＩＩスーパートープおよびＭＨＣ－ＩＩサブトープを認識する、請求項１９または２５に記載の方法。
  35. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、特定のＭＨＣ－ＥスーパートープおよびＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する、請求項２０または２６に記載の方法。
  36. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、特定のＭＨＣ－ＩスーパートープおよびＭＨＣ－Ｉサブトープを認識する、請求項２１または２７に記載の方法。
  37. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、同じ抗原からの２つ以上のＭＨＣ－ＩＩスーパートープを認識する、請求項１９に記載の方法。
  38. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、同じ抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープを認識する、請求項２０に記載の方法。
  39. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、同じ抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｉスーパートープを認識する、請求項２１に記載の方法。
  40. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、同じ抗原からの２つ以上のＭＨＣ－ＩＩサブトープを認識する、請求項２５に記載の方法。
  41. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、同じ抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する、請求項２６に記載の方法。
  42. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、同じ抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｉサブトープを認識する、請求項２７に記載の方法。
  43. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、同じ抗原からの１つ以上のＭＨＣ－ＩＩスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－ＩＩサブトープを認識する、請求項１９または２５に記載の方法。
  44. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、同じ抗原からの１つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する、請求項２０または２６に記載の方法。
  45. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、同じ抗原からの１つ以上のＭＨＣ－Ｉスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－Ｉサブトープを認識する、請求項２１または２７に記載の方法。
  46. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、２つ以上の抗原からの２つ以上のＭＨＣ－ＩＩスーパートープを認識する、請求項１９に記載の方法。
  47. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、２つ以上の抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープを認識する、請求項２０に記載の方法。
  48. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、２つ以上の抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｉスーパートープを認識する、請求項２１に記載の方法。
  49. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、２つ以上の抗原からの２つ以上のＭＨＣ－ＩＩサブトープを認識する、請求項２５に記載の方法。
  50. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、２つ以上の抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する、請求項２６に記載の方法。
  51. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、２つ以上の抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｉサブトープを認識する、請求項２７に記載の方法。
  52. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、異なる抗原からの１つ以上のＭＨＣ－ＩＩスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－ＩＩサブトープを認識する、請求項１９または２５に記載の方法。
  53. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、異なる抗原からの１つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する、請求項２０または２６に記載の方法。
  54. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、異なる抗原からの１つ以上のＭＨＣ－Ｉスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－Ｉサブトープを認識する、請求項２１または２７に記載の方法。
  55. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、１つ以上の特定のＭＨＣ－ＩＩスーパートープを認識する、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
  56. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、１つ以上の特定のＭＨＣ－Ｅスーパートープを認識する、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
  57. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、１つ以上の特定のＭＨＣ－Ｉスーパートープを認識する、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
  58. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、１つ以上の特定のＭＨＣ－ＩＩサブトープを認識する、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
  59. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、１つ以上の特定のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
  60. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、１つ以上の特定のＭＨＣ－Ｉサブトープを認識する、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
  61. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、特定のＭＨＣ－ＩＩスーパートープおよびＭＨＣ－ＩＩサブトープを認識する、請求項５５または５８に記載の方法。
  62. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、特定のＭＨＣ－ＥスーパートープおよびＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する、請求項５６または５９に記載の方法。
  63. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、特定のＭＨＣ－ＩスーパートープおよびＭＨＣ－Ｉサブトープを認識する、請求項５７または６０に記載の方法。
  64. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、１つの抗原からの２つ以上のＭＨＣ－ＩＩスーパートープを認識する、請求項５５に記載の方法。
  65. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、１つの抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープを認識する、請求項５６に記載の方法。
  66. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、１つの抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｉスーパートープを認識する、請求項５７に記載の方法。
  67. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、１つの抗原からの２つ以上のＭＨＣ－ＩＩサブトープを認識する、請求項５８に記載の方法。
  68. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、１つの抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する、請求項５９に記載の方法。
  69. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、１つの抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｉサブトープを認識する、請求項６０に記載の方法。
  70. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、１つの抗原からの１つ以上のＭＨＣ－ＩＩスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－ＩＩサブトープを認識する、請求項５５または５８に記載の方法。
  71. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、１つの抗原からの１つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する、請求項５６または５９に記載の方法。
  72. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、１つの抗原からの１つ以上のＭＨＣ－Ｉスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－Ｉサブトープを認識する、請求項５７～６０のいずれか一項に記載の方法。
  73. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、２つ以上の抗原からの２つ以上のＭＨＣ－ＩＩスーパートープを認識する、請求項５５に記載の方法。
  74. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、２つ以上の抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープを認識する、請求項５６に記載の方法。
  75. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、２つ以上の抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｉスーパートープを認識する、請求項５７に記載の方法。
  76. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、２つ以上の抗原からの２つ以上のＭＨＣ－ＩＩサブトープを認識する、請求項５８に記載の方法。
  77. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、２つ以上の抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する、請求項５９に記載の方法。
  78. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、２つ以上の抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｉサブトープを認識する、請求項６０に記載の方法。
  79. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、特定のＭＨＣ－Ｅサブトープまたはスーパートープ、およびＭＨＣ－ＩＩサブトープまたはスーパートープを認識する、請求項５５～５６および５８～５９のいずれか一項に記載の方法。
  80. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、特定のＭＨＣ－Ｅサブトープまたはスーパートープ、およびＭＨＣ－Ｉサブトープまたはスーパートープを認識する、請求項５６～５７および５９～６０のいずれか一項に記載の方法。
  81. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、特定のＭＨＣ－ＩＩサブトープまたはスーパートープ、およびＭＨＣ－Ｉサブトープまたはスーパートープを認識する、請求項５５、５７～５８、および６０のいずれか一項に記載の方法。
  82. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、同じ抗原からの２つ以上のＭＨＣ－ＩＩサブトープを認識する、請求項５８に記載の方法。
  83. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、同じ抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する、請求項５９に記載の方法。
  84. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、同じ抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｉサブトープを認識する、請求項６０に記載の方法。
  85. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、異なる抗原からの１つ以上のＭＨＣ－ＩＩスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－ＩＩサブトープを認識する、請求項５５または５８に記載の方法。
  86. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、異なる抗原からの１つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する、請求項５６または５９に記載の方法。
  87. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、異なる抗原からの１つ以上のＭＨＣ－Ｉスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－Ｉサブトープを認識する、請求項５７または６０に記載の方法。
  88. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする前記核酸配列が、前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする前記核酸配列と同一である、請求項１～８７のいずれか一項に記載の方法。
  89. 第２の対象から１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞を単離することと、前記選択された第３のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする核酸配列および前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする前記核酸配列に作動可能に連結されたプロモーターで、前記１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞をトランスフェクトし、それによって、前記第１のＭＨＣ／異種抗原由来ペプチド複合体および前記第２のＭＨＣ／異種抗原由来ペプチド複合体を認識する１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞を生成することと、をさらに含む、請求項１～８８のいずれか一項に記載の方法。
  90. 前記第１のＭＨＣ－異種抗原由来ペプチド複合体が、ＭＨＣ－ＩＩ／異種抗原由来ペプチド複合体、ＭＨＣ－Ｅ／異種抗原由来ペプチド複合体、またはＭＨＣ－Ｉ／異種抗原由来ペプチド複合体である、請求項８９に記載の方法。
  91. 前記第２のＭＨＣ－異種抗原由来ペプチド複合体が、ＭＨＣ－ＩＩ／異種抗原由来ペプチド複合体、ＭＨＣ－Ｅ／異種抗原由来ペプチド複合体、またはＭＨＣ－Ｉ／異種抗原由来ペプチド複合体である、請求項８９または９０に記載の方法。
  92. 前記トランスフェクトされたＣＤ８＋Ｔ細胞を前記第２の対象に投与して、がんを治療または予防することをさらに含む、請求項８９～９１のいずれか一項に記載の方法。
  93. 前記がんが、前立腺がん、腎臓がん、肺がん、膵臓がん、中皮腫、乳がん、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ芽球性白血病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、悪性黒色腫、卵巣がん、結腸がん、腎細胞がん、および子宮頸がんからなる群から選択される、請求項９２に記載の方法。
  94. 前記トランスフェクトされたＣＤ８＋Ｔ細胞を前記第２の対象に投与して、病原体感染症を治療することをさらに含む、請求項８９～９１のいずれか一項に記載の方法。
  95. 前記病原体感染症が、ヒト免疫不全ウイルス、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、パピローマウイルス、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ寄生虫、エプスタイン・バールウイルス（ＥＢＶ）、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）、ヒトＴリンパ球向性ウイルス１型（ＨＴＬＶ１）、メルケルウイルス（ＭＣＶ）、サイトメガロウイルス、およびＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓからなる群から選択される、請求項９２に記載の方法。
  96. 前記第１の対象が、非ヒト霊長類であり、前記第２の対象が、ヒトであり、前記トランスフェクトされたＣＤ８＋Ｔ細胞が、前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲの前記非ヒト霊長類ＣＤＲ３αおよびＣＤＲ３βを含むキメラ非ヒト霊長類－ヒトＣＤ８＋ＴＣＲを含む、請求項８９～９５のいずれか一項に記載の方法。
  97. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲの前記非ヒト霊長類ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含む、請求項８９～９６のいずれか一項に記載の方法。
  98. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲの前記ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含む、請求項８９～９７のいずれか一項に記載の方法。
  99. 前記第１の対象が、非ヒト霊長類であり、前記第２の対象が、ヒトであり、前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、前記第１のＣＤ８＋ＴＣＲの前記非ヒト霊長類ＣＤＲ３αおよびＣＤＲ３βを含むキメラ非ヒト霊長類－ヒトＣＤ８＋ＴＣＲである、請求項８９～９８のいずれか一項に記載の方法。
  100. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、キメラＣＤ８＋ＴＣＲである、請求項１～９９のいずれか一項に記載の方法。
  101. 前記組換えＣＭＶベクターを前記第１の対象に投与することが、静脈内、筋肉内、腹腔内、または経口投与を含む、請求項１～１００のいずれか一項に記載の方法。
  102. 請求項１～１０１のいずれか一項に記載の方法によって生成された前記多重特性ＴＣＲを含む、ＣＤ８＋Ｔ細胞。
  103. がんの治療または予防を必要とする対象においてそれを行う方法であって、請求項１０２に記載のＣＤ８＋Ｔ細胞を前記対象に投与することを含む、方法。
  104. 前記がんが、前立腺がん、腎臓がん、肺がん、膵臓がん、中皮腫、乳がん、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ芽球性白血病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、悪性黒色腫、卵巣がん、結腸がん、腎細胞がん、および子宮頸がんからなる群から選択される、請求項１０３に記載の方法。
  105. 病原体感染症の治療を必要とする対象においてそれを行う方法であって、請求項１０２に記載のＣＤ８＋Ｔ細胞を前記対象に投与することを含む、方法。
  106. 前記病原体感染症が、ヒト免疫不全ウイルス、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、パピローマウイルス、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ寄生虫、エプスタイン・バールウイルス（ＥＢＶ）、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）、ヒトＴリンパ球向性ウイルス１型（ＨＴＬＶ１）、メルケルウイルス（ＭＣＶ）、サイトメガロウイルス、およびＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓからなる群から選択される、請求項１０５に記載の方法。
  107. 前記組換えＣＭＶベクターを前記第１の対象に投与することが、静脈内、筋肉内、腹腔内、または経口投与を含む、請求項１０２～１０６のいずれか一項に記載の方法。
  108. 多重特異性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を含むＣＤ８＋Ｔ細胞を生成する方法であって、
    （ａ）第１の異種抗原をコードする核酸配列を含む組換えサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）ベクターを、第１のＭＨＣ－Ｅ／異種抗原由来ペプチド複合体を認識するＣＤ８＋Ｔ細胞の第１のセットを生成するのに有効な量で、対象に投与することであって、前記ＣＭＶベクターが、活性ＵＬ１２８、ＵＬ１３０、ＵＬ１４６およびＵＬ１４７タンパク質またはそれらのオーソログを発現せず、前記組換えＣＭＶベクターが、マイクロＲＮＡ認識エレメント（ＭＲＥ）をさらに含む、投与することと、
    （ｂ）前記ＣＤ８＋Ｔ細胞の第１のセットから第１のＣＤ８＋ＴＣＲを特定することであって、前記第１のＣＤ８＋ＴＣＲが、前記第１のＭＨＣ－Ｅ／異種抗原由来ペプチド複合体を認識する、特定することと、
    （ｃ）第２の異種抗原を、第２のＭＨＣ－Ｅ／異種抗原由来ペプチド複合体を認識するＣＤ８＋Ｔ細胞の第２のセットを生成するのに有効な量で、前記対象に投与することと、
    （ｄ）前記ＣＤ８＋Ｔ細胞の第２のセットから１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞を単離することと、
    （ｅ）前記ＣＤ８＋Ｔ細胞の第２のセットから第２のＣＤ８＋ＴＣＲを特定することであって、前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、前記第１のＭＨＣ－Ｅ／異種抗原由来ペプチド複合体および前記第２のＭＨＣ－Ｅ／異種抗原由来ペプチド複合体を認識する、特定することと、
    （ｆ）ＣＤ８＋Ｔ細胞の第３のセットを発現ベクターでトランスフェクトすることであって、前記発現ベクターが、第３のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする核酸配列と、前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする前記核酸配列に作動可能に連結されたプロモーターと、を含み、前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲのＣＤＲ３αおよびＣＤＲ３βを含み、それによって、前記第１のＭＨＣ－Ｅ／異種抗原由来ペプチド複合体および前記第２のＭＨＣ－Ｅ／異種抗原由来ペプチド複合体を認識する１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞を生成する、トランスフェクトすることと、
    （ｇ）目的の特定のペプチドに対して最も高いアビディティを有する前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲのうちの１つ以上を選択することと、を含む、方法。
  109. 前記対象が、ヒトまたは非ヒト霊長類である、請求項１０８に記載の方法。
  110. 前記組換えＣＭＶベクターが、組換えヒトＣＭＶベクターまたは組換えアカゲザルＣＭＶベクターである、請求項１０８または１０９に記載の方法。
  111. 前記第１の異種抗原が、腫瘍抗原、病原体特異的抗原、組織特異的抗原、または宿主自己抗原を含む、請求項１０８～１１０のいずれか一項に記載の方法。
  112. 前記腫瘍抗原が、前立腺がん、腎臓がん、肺がん、膵臓がん、中皮腫、乳がん、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ芽球性白血病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、悪性黒色腫、卵巣がん、結腸がん、腎細胞がん、および子宮頸がんからなる群から選択されるがんに関連する、請求項１１１に記載の方法。
  113. 前記病原体特異的抗原が、ヒト免疫不全ウイルス、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、パピローマウイルス、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ寄生虫、エプスタイン・バールウイルス（ＥＢＶ）、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）、ヒトＴリンパ球向性ウイルス１型（ＨＴＬＶ１）、メルケルウイルス（ＭＣＶ）、サイトメガロウイルス、およびＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓからなる群から選択される病原体に関連する、請求項１１１に記載の方法。
  114. 前記ＭＲＥが、内皮細胞において発現されたマイクロＲＮＡに対する標的部位を含む、請求項１０８に記載の方法。
  115. 前記ＭＲＥが、ｍｉＲ１２６、ｍｉＲ－１２６－３ｐ、ｍｉＲ－１３０ａ、ｍｉＲ－２１０、ｍｉＲ－２２１／２２２、ｍｉＲ－３７８、ｍｉＲ－２９６、およびｍｉＲ－３２８からなる群から選択される前記ｍｉＲＮＡに特異的である、請求項１１４に記載の方法。
  116. 前記第１のＣＤ８＋ＴＣＲが、特定のＭＨＣ－Ｅサブトープまたはスーパートープを認識する、請求項１０８～１１５のいずれか一項に記載の方法。
  117. 前記第１のＣＤ８＋ＴＣＲが、ＤＮＡまたはＲＮＡ配列決定によって特定される、請求項１０８～１１６のいずれか一項に記載の方法。
  118. 前記第１のＣＤ８＋ＴＣＲが、シングルセル配列決定によって特定される、請求項１１７に記載の方法。
  119. 前記第２の異種抗原が、腫瘍抗原、病原体特異的抗原、組織特異的抗原、または宿主自己抗原を含む、請求項１０８～１１８のいずれか一項に記載の方法。
  120. 前記腫瘍抗原が、前立腺がん、腎臓がん、肺がん、膵臓がん、中皮腫、乳がん、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ芽球性白血病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、悪性黒色腫、卵巣がん、結腸がん、腎細胞がん、および子宮頸がんからなる群から選択されるがんに関連する、請求項１１９に記載の方法。
  121. 前記病原体特異的抗原が、ヒト免疫不全ウイルス、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、パピローマウイルス、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ寄生虫、エプスタイン・バールウイルス（ＥＢＶ）、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）、ヒトＴリンパ球向性ウイルス１型（ＨＴＬＶ１）、メルケルウイルス（ＭＣＶ）、サイトメガロウイルス、およびＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓからなる群から選択される病原体に関連する、請求項１１９に記載の方法。
  122. 前記第１の異種抗原および第２の異種抗原が、同じである、請求項１０８～１２１のいずれか一項に記載の方法。
  123. 前記第１の異種抗原および第２の異種抗原が、異なる、請求項１０８～１２１のいずれか一項に記載の方法。
  124. 前記ＣＤ８＋Ｔ細胞の第２のセットからの前記１つ以上の単離されたＣＤ８＋Ｔ細胞が、ＣＤ６９およびＴＮＦαを発現する、請求項１０８～１２３のいずれか一項に記載の方法。
  125. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、ＤＮＡまたはＲＮＡ配列決定によって特定される、請求項１０８～１２４のいずれか一項に記載の方法。
  126. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、シングルセル配列決定によって特定される、請求項１２５に記載の方法。
  127. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、１つ以上の特定のＭＨＣ－Ｅスーパートープを認識する、請求項１０８～１２６のいずれか一項に記載の方法。
  128. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、１つ以上の特定のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する、請求項１０８～１２６のいずれか一項に記載の方法。
  129. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、特定のＭＨＣ－ＥスーパートープおよびＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する、請求項１２７または１２８に記載の方法。
  130. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、同じ抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープを認識する、請求項１０８～１２７のいずれか一項に記載の方法。
  131. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、同じ抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する、請求項１０８～１２６および１２８のいずれか一項に記載の方法。
  132. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、同じ抗原からの１つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する、請求項１２９に記載の方法。
  133. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、２つ以上の抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープを認識する、請求項１０８～１２７のいずれか一項に記載の方法。
  134. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、２つ以上の抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する、請求項１０８～１２６および１２８のいずれか一項に記載の方法。
  135. 前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、異なる抗原からの１つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する、請求項１０８～１２８のいずれか一項に記載の方法。
  136. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、１つ以上の特定のＭＨＣ－Ｅスーパートープを認識する、請求項１０８～１２７のいずれか一項に記載の方法。
  137. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、１つ以上の特定のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する、請求項１０８～１２６および１２８のいずれか一項に記載の方法。
  138. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、特定のＭＨＣ－ＥスーパートープおよびＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する、請求項１３６または１３７に記載の方法。
  139. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、１つの抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープを認識する、請求項１３６に記載の方法。
  140. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、１つの抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する、請求項１３７に記載の方法。
  141. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、１つの抗原からの１つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する、請求項１３９または１４０に記載の方法。
  142. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、２つ以上の抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープを認識する、請求項１３６に記載の方法。
  143. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、２つ以上の抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する、請求項１３７に記載の方法。
  144. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、同じ抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープを認識する、請求項１３６に記載の方法。
  145. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、同じ抗原からの２つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する、請求項１３７に記載の方法。
  146. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、異なる抗原からの１つ以上のＭＨＣ－Ｅスーパートープおよび１つ以上のＭＨＣ－Ｅサブトープを認識する、請求項１４２または１４３に記載の方法。
  147. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする前記核酸配列が、前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする前記核酸配列と同一である、請求項１０８～１４６のいずれか一項に記載の方法。
  148. 第２の対象から１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞を単離することと、前記選択された第３のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする核酸配列および前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする前記核酸配列に作動可能に連結されたプロモーターで、前記１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞をトランスフェクトし、それによって、前記第１のＭＨＣ－Ｅ／異種抗原由来ペプチド複合体および前記第２のＭＨＣ－Ｅ／異種抗原由来ペプチド複合体を認識する１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞を生成することと、をさらに含む、請求項１０８～１４７のいずれか一項に記載の方法。
  149. 前記トランスフェクトされたＣＤ８＋Ｔ細胞を前記第２の対象に投与して、がんを治療または予防することをさらに含む、請求項１４８に記載の方法。
  150. 前記がんが、前立腺がん、腎臓がん、肺がん、膵臓がん、中皮腫、乳がん、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ芽球性白血病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、悪性黒色腫、卵巣がん、結腸がん、腎細胞がん、および子宮頸がんからなる群から選択される、請求項１４９に記載の方法。
  151. 前記トランスフェクトされたＣＤ８＋Ｔ細胞を前記第２の対象に投与して、病原体感染症を治療することをさらに含む、請求項１４８に記載の方法。
  152. 前記病原体感染症が、ヒト免疫不全ウイルス、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、パピローマウイルス、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ寄生虫、エプスタイン・バールウイルス（ＥＢＶ）、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）、ヒトＴリンパ球向性ウイルス１型（ＨＴＬＶ１）、メルケルウイルス（ＭＣＶ）、サイトメガロウイルス、およびＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓからなる群から選択される、請求項１４９に記載の方法。
  153. 前記第１の対象が、非ヒト霊長類であり、前記第２の対象が、ヒトであり、前記トランスフェクトされたＣＤ８＋Ｔ細胞が、前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲの前記非ヒト霊長類ＣＤＲ３αおよびＣＤＲ３βを含むキメラ非ヒト霊長類－ヒトＣＤ８＋ＴＣＲを含む、請求項１４８～１５２のいずれか一項に記載の方法。
  154. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲの前記非ヒト霊長類ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含む、請求項１４８～１５３のいずれか一項に記載の方法。
  155. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲの前記ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、およびＣＤＲ３βを含む、請求項１４８～１５４のいずれか一項に記載の方法。
  156. 前記第１の対象が、非ヒト霊長類であり、前記第２の対象が、ヒトであり、前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、前記第１のＣＤ８＋ＴＣＲの前記非ヒト霊長類ＣＤＲ３αおよびＣＤＲ３βを含むキメラ非ヒト霊長類－ヒトＣＤ８＋ＴＣＲである、請求項１４８～１５５のいずれか一項に記載の方法。
  157. 前記第３のＣＤ８＋ＴＣＲが、キメラＣＤ８＋ＴＣＲである、請求項１４８～１５６のいずれか一項に記載の方法。
  158. 前記組換えＣＭＶベクターを前記第１の対象に投与することが、静脈内、筋肉内、腹腔内、または経口投与を含む、請求項１０８～１５７のいずれか一項に記載の方法。
  159. 請求項１０８～１５８のいずれか一項に記載の方法によって生成された前記多重特性ＴＣＲを含む、ＣＤ８＋Ｔ細胞。
  160. がんの治療または予防を必要とする対象においてそれを行う方法であって、請求項１５９に記載のＣＤ８＋Ｔ細胞を前記対象に投与することを含む、方法。
  161. 前記がんが、前立腺がん、腎臓がん、肺がん、膵臓がん、中皮腫、乳がん、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ芽球性白血病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、悪性黒色腫、卵巣がん、結腸がん、腎細胞がん、および子宮頸がんからなる群から選択される、請求項１６０に記載の方法。
  162. 病原体感染症の治療を必要とする対象においてそれを行う方法であって、請求項１５９に記載のＣＤ８＋Ｔ細胞を前記対象に投与することを含む、方法。
  163. 前記病原体感染症が、ヒト免疫不全ウイルス、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、パピローマウイルス、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ寄生虫、エプスタイン・バールウイルス（ＥＢＶ）、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）、ヒトＴリンパ球向性ウイルス１型（ＨＴＬＶ１）、メルケルウイルス（ＭＣＶ）、サイトメガロウイルス、およびＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓからなる群から選択される、請求項１６０に記載の方法。
  164. 前記組換えＣＭＶベクターを前記第１の対象に投与することが、静脈内、筋肉内、腹腔内、または経口投与を含む、請求項１６０～１６３のいずれか一項に記載の方法。
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