JP2023505756A - ＥｐｈＡ２に特異的な二環式ペプチドリガンドおよびその使用 - Google Patents

ＥｐｈＡ２に特異的な二環式ペプチドリガンドおよびその使用 Download PDF

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Abstract

本発明は、二環式毒素コンジュゲート体BT5528またはその薬学的に許容できる塩、またはその医薬組成物、およびその使用に関する。

Description

(関連出願の相互参照)
本出願は、2019年11月27日出願の米国仮特許出願第62/940,966号の優先権を主張し、そのすべては引用により本明細書に包含される。
(発明の分野)
本発明は、二環式毒素コンジュゲート体またはその薬学的に許容できる塩、またはその医薬組成物に関する。また、本発明は、病的組織においてEphA2の過剰発現を特徴とする疾患、障害または状態を予防または処置するための、二環式毒素コンジュゲート体またはその薬学的に許容できる塩、またはその医薬組成物を提供する。
環状ペプチドは、高い親和性かつ標的特異性をもってタンパク質標的に結合することができ、したがって、治療法の開発にとって魅力的な分子クラスである。実際、いくつかの環状ペプチド、例えば抗菌ペプチドバンコマイシン、免疫抑制薬シクロスポリンまたは抗癌薬オクトレオチドは、既に臨床使用され、成功を収めている(Driggers et al. (2008), Nat Rev Drug Discov 7 (7), 608-24)。良好な結合特性は、ペプチドと標的との間に形成される比較的大きな相互作用の面と、低減されている環状構造の配座柔軟性に起因するものである。典型的には、大環状分子は、数百平方オングストロームの表面に結合し、例えば環状ペプチドCXCR4アンタゴニストCVX15(400 Å2; Wu et al. (2007), Science 330, 1066-71)、インテグリンαVb3に結合するArg-Gly-Aspモチーフの環状ペプチド(355 Å2)(Xiong et al. (2002), Science 296 (5565), 151-5)、またはウロキナーゼ型プラスミノーゲンアクティベーターに結合する環状ペプチド阻害剤upain-1(603 Å2; Zhao et al. (2007), J Struct Biol 160 (1), 1-10)である。
ペプチド大環状分子は、その環配置の理由で、直鎖状ペプチドよりも柔軟性が低く、標的への結合時のエントロピーの損失がより小さくなり、結果として結合親和性がより高くなる。また、柔軟性の低下により、標的特異的な配座が固定され、直鎖状ペプチドと比較して結合特異性が向上する。この効果は、マトリックスメタロプロテアーゼ8(MMP-8)の強力かつ選択的な阻害物質が実例であり、その環が開かれると他のMMPに対する選択性が失われる(Cherney et al. (1998), J Med Chem 41 (11), 1749-51)。大環状化によって達成される有利な結合特性は、例えばバンコマイシン、ナイシンおよびアクチノマイシンなどの、二つ以上のペプチド環を有する多環状ペプチドにおいて、さらに顕著である。
さまざまな研究チームがこれまで、システイン残基を有するポリペプチドを合成分子構造に連結している(Kemp and McNamara (1985), J. Org. Chem; Timmerman et al. (2005), ChemBioChem)。Meloenと共同研究者は、トリス(ブロモメチル)ベンゼンおよび関連分子を使用し、タンパク質表面の構造模倣のために複数のペプチドループを合成骨格（合成スキャフォード）上にて迅速かつ定量的に環化した(Timmerman et al. (2005), ChemBioChem)。候補医薬品化合物の生成方法では、該化合物は、システイン含有ポリペプチドを、例えばTATA(1,1',1''-(1,3,5-トリアジナン-1,3,5-トリイル)トリップロップ-2-エン-1-オン、Heinis et al. Angew Chem, Int Ed. 2014; 53:1602-1606)などの分子骨格に結合することにより生成される。
ファージディスプレイに基づくコンビナトリアルアプローチは、目的の標的に対する二環式ペプチドの大規模なライブラリーを生成しスクリーニングするために開発されている(Heinis et al. (2009), Nat Chem Biol 5 (7), 502-7 and WO 2009/098450)。簡単に言うと、3つのシステイン残基と6つの無作為アミノ酸の2つの領域(Cys-(Xaa)6-Cys-(Xaa)6-Cys)を含む直鎖状ペプチドのコンビナトリアルライブラリーをファージ上に表示し、システイン側鎖を低分子骨格に共有結合させることによって環化させたものである。
一態様によれば、本発明は、BT5528またはその薬学的に許容できる塩、ヒスチジン塩酸塩、スクロース、およびポリソルベート20を含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施態様において、BT5528またはその薬学的に許容できる塩、ヒスチジン塩酸塩、スクロース、およびポリソルベート20を含む医薬組成物は凍結乾燥粉末である。
別の態様において、本発明は、BT5528またはその薬学的に許容できる塩、ヒスチジン塩酸塩、スクロース、ポリソルベート20、およびデキストロースを含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施態様において、BT5528またはその薬学的に許容できる塩、ヒスチジン塩酸塩、スクロース、ポリソルベート20、およびデキストロースを含む医薬組成物は、水中医薬製剤である。
別の態様において、本発明は、患者においてEphA2発現に関連する進行性悪性腫瘍を処置する方法であって、本明細書に記載の医薬組成物を該対象に投与することを含む方法を提供する。いくつかの実施態様において、本発明は、患者においてEphA2発現に関連する進行性悪性腫瘍を処置する方法であって、BT5528またはその薬学的に許容できる塩、ヒスチジン、スクロース、ポリソルベート20、およびデキストロースを含む、水中医薬製剤を該患者にIV注入によって毎週投与することを含む方法を提供する。
特定の実施態様の詳細な説明
1.本発明の特定の実施態様の一般的な説明
BT5528について、投与のために再構成できる安定な凍結乾燥製剤が開発された。開発過程中、BT5528がバイアルの表面に吸着し、再構成が困難であったことが観察された。BT5528のバイアル表面への吸着の原因は、別々の凍結乾燥サイクルの間で調査された。
最終生成物中の高塩化ナトリウム濃度、再構成生成物のより塩基性のpH、シラン処理バイアル、およびペプチドの過剰乾燥など、潜在的な原因としていくつかの仮説が提示されていた。これらの仮説それぞれは、代替糖、界面活性剤、およびより低いBT5528濃度の製剤スクリーニングとともに評価され、これが再構成特性を改善したかどうかを検討された。凍結乾燥前のより低いpHで再構成時間の改善が得られたが、油滴がバイアルの表面に残っていた。塩化ナトリウム含有量の減少、シラン処理バイアルの使用、およびより低い二次乾燥温度(生成物の最終水分含有量を増加させるため)は、再構成特徴を改善しなかった。代替糖または界面活性剤は改善を引き起こさなかった。
驚くべきことに、BT5528の濃度を4mg/mLから2mg/mLに低下すると、再構成特徴を改善することに見出した。再構成時間は短縮され、再構成後のバイアル表面には油滴は観察されなかった。回収率対理論値は、4mg/mL製剤では常に目標値を下回っていたのに対し、2mg/mL製剤では目標値を達成した。
したがって、一態様において、本発明は、例えば、凍結乾燥により液体製剤から溶媒(複数可)を除去することによって調製される、BT5528またはその薬学的に許容できる塩を含む個体医薬組成物であって、BT5528またはその薬学的に許容できる塩の濃度は約2～4mg/mLである個体医薬組成物を提供する。
別の態様において、本発明は、EphA2-発現に関連する進行性固形癌悪性腫瘍を処置するための、本明細書に記載の医薬組成物の使用方法を提供する。
2.化合物および定義
本明細書で使用される用語「BT5528」は、下に示される構造を有する二環式毒素コンジュゲートであり、ここで、分子骨格は、1,1',1''-(1,3,5-トリアジナン-1,3,5-トリイル)トリップロップ-2-エン-1-オン(TATA)であり、そして、ペプチドリガンドは、アミノ酸配列:
(β-Ala)-Sar10-A(HArg)D-Ci(HyP)LVNPLCiiLHP(D-Asp)W(HArg)Ciii(配列番号:1)、を含み、ここで、Sarはサルコシンであり、HArgはホモアルギニンであり、そして、HyPはヒドロキシプロリンである。
本明細書で使用される場合、用語「薬学的に許容できる塩」とは、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応などを伴わずにヒトおよび下等動物の組織と接触して使用するのに適しており、妥当な利益/危険性の比に見合った塩を意味する。薬学的に許容できる塩は、当技術分野でよく知られている。例えば、S. M. Berge et al.は、J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66, 1-19(引用により本明細書に包含される)に、薬学的に許容できる塩を詳細に記載している。本発明の化合物の薬学的に許容できる塩には、適当な無機および有機の酸および塩基に由来するものが含まれる。薬学的に許容できる非毒性の酸付加塩の例は、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸および過塩素酸などの無機酸で、または酢酸、シュウ酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸もしくはマロン酸などの有機酸で、またはイオン交換などの当技術分野で用いられる他の方法を用いて形成されるアミノ基の塩である。その他の薬学的に許容できる塩には、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩(camphorate)、樟脳スルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩(glucoheptonate)、グリセロリン酸塩、グルコン酸塩、ヘミ硫酸塩(hemisulfate)、ヘプタン酸塩(heptanoate)、ヘキサン酸塩、ヨウ化水素酸塩、2-ヒドロキシ-エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、2-ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩(pectinate)、過硫酸塩(persulfate)、3-フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピバル酸塩(pivalate)、プロピオン酸塩(propionate)、ステアリン酸塩(stearate)、コハク酸塩(succinate)、硫酸塩(sulfate)、酒石酸塩(tartrate)、チオシアン酸塩(thiocyanate)、p-トルエンスルホン酸塩、ウンデシル酸塩(undecanoate)、吉草酸塩などが含まれる。
Figure 2023505756000001
適切な塩基から得られる塩には、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、アンモニウム塩、N+(C1-4アルキル)4塩が含まれる。代表的なアルカリ金属またはアルカリ土類金属塩には、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどが含まれる。さらなる薬学的に許容できる塩としては、適切な場合、ハロゲン化物、水酸化物、カルボン酸塩、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、低級アルキルスルホン酸塩およびアリールスルホン酸塩などの対イオンを用いて形成される非毒性アンモニウム、第4級アンモニウムおよびアミンカチオンがある。塩形態は本発明の範囲内であり、ペプチドリガンドへの言及は、当該リガンドの塩形態を含むことが理解される。
本発明の塩は、塩基性部分または酸性部分を含む親化合物から、Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P. Heinrich Stahl (Editor), Camille G. Wermuth (Editor), ISBN: 3-90639-026-8, Hardcover, 388 pages, August 2002に記載の方法などの従来の化学的方法によって合成することができる。一般的に、このような塩は、これらの化合物の遊離酸または塩基形を、水中または有機溶媒中、あるいは両者の混合物中で適切な塩基または酸と反応させることによって調製することができる。
本明細書で使用される場合、用語「約」は、特定の値または範囲の10％以内といった意味を有するものとする。いくつかの実施態様において、用語「約」とは、特定の値の10％以内、9％以内、8％以内、7％以内、6％以内、5％以内、4％以内、3％以内、2％以内、または1％以内を意味する。
特に断らない限り、本明細書に示される構造は、その構造のすべての異性体(例えば、エナンチオマー、ジアステレオマー、および幾何学的(または配座))形態；例えば、各不斉中心に対するRおよびSの配置、ZおよびE二重結合異性体、ならびにZおよびE配座異性体を含むことも意味する。したがって、本発明の化合物の単一の立体化学的異性体ならびにエナンチオマー、ジアステレオマーおよび幾何学的(または配座)混合物は、本発明の範囲内である。特に断らない限り、本発明の化合物のすべての互変異性形態は、本発明の範囲内にある。さらに、特に断らない限り、本明細書に示される構造は、1つまたはそれ以上の同位体濃縮原子(isotopically enriched atom)の存在においてのみ異なる化合物を含むことも意味する。例えば、重水素またはトリチウムによる水素の置換、または13C-もしくは14C-濃縮炭素による炭素の置換を含む本構造を有する化合物は、本発明の範囲内である。このような化合物は、例えば、分析ツールとして、生物学的アッセイにおけるプローブとして、または本発明による治療薬として有用である。
3.医薬組成物
一態様によれば、本発明は、BT5528またはその薬学的に許容できる塩、および薬学的に許容できる賦形剤または担体を含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施態様において、本発明の医薬組成物は、約21.2mgのBT5528またはその薬学的に許容できる塩を含む。
いくつかの実施態様において、本発明の医薬組成物は固体医薬組成物である。いくつかの実施態様において、本発明の固体医薬組成物は粉末である。いくつかの実施態様において、本発明の医薬組成物は凍結乾燥粉末である。いくつかの実施態様において、本発明の固体医薬組成物は顆粒である。
いくつかの実施態様において、本発明の医薬組成物は液体医薬組成物である。いくつかの実施態様において、本発明の液体医薬組成物は、許容できるビヒクルまたは溶媒中の医薬製剤である。いくつかの実施態様において、許容できるビヒクルまたは溶媒は、滅菌水、Ringer溶液、U.S.P.および生理食塩水から選択される。いくつかの実施態様において、許容できるビヒクルまたは溶媒は滅菌水である。いくつかの実施態様において、許容できるビヒクルまたは溶媒は、無菌の注射可能な媒体である。いくつかの実施態様において、本発明の液体医薬組成物は、約2～4mg/mLのBT5528またはその薬学的に許容できる塩を含む。
いくつかの実施態様において、薬学的に許容できる賦形剤または担体は、緩衝剤を含む。いくつかの実施態様において、緩衝剤は、リン酸塩、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸、水、塩または電解質の部分グリセリド混合物、例えば、硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイドシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン-ポリオキシプロピレン-ブロックポリマ、ポリエチレングリコールおよび羊毛脂などである。いくつかの実施態様において、緩衝剤は、ヒスチジン塩酸塩である。いくつかの実施態様において、緩衝剤は、水酸化ナトリウムである。いくつかの実施態様において、緩衝剤は塩酸である。
いくつかの実施態様において、緩衝剤は、本発明の医薬組成物のpHを約6～8に調整する量である。いくつかの実施態様において、緩衝剤は、BT5528またはその薬学的に許容できるもの1mgあたり約1～3mgの量である。いくつかの実施態様において、ヒスチジン塩酸塩は、BT5528またはその薬学的に許容できるもの1mgあたり約1.31または2.62mgの量である。いくつかの実施態様において、本発明の液体医薬組成物は、約5.24mg/mLの濃度のヒスチジン塩酸塩を含む。
いくつかの実施態様において、本発明の液体医薬組成物は、pHが約6～8である。いくつかの実施態様において、本発明の液体医薬組成物は、pHが約6.0、約6.1、約6.2、約6.3、約6.4、約6.5、約6.6、約6.7、約6.8、約6.9、約7.0、約7.1、約7.2、約7.3、約7.4、約7.5、約7.6、約7.7、約7.8、約7.9、または約8.0である。いくつかの実施態様において、本発明の液体医薬組成物は、pHが約6.5または7.0である。
いくつかの実施態様において、薬学的に許容できる賦形剤または担体は、不活性薬学的に許容できる賦形剤または担体を含む。いくつかの実施態様において、不活性薬学的に許容できる賦形剤または担体は、クエン酸ナトリウムまたはりん酸二カルシウムである。いくつかの実施態様において、不活性薬学的に許容できる賦形剤または担体は、充填剤または増量剤である。いくつかの実施態様において、充填剤または増量剤は、デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、またはケイ酸である。いくつかの実施態様において、不活性薬学的に許容できる賦形剤または担体は結合剤である。いくつかの実施態様において、結合剤は、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩(alginate)、ゼラチン、ポリビニルピロリジノン、スクロース、またはアカシアである。いくつかの実施態様において、不活性薬学的に許容できる賦形剤または担体は、スクロース、トレハロース、デキストロース、またはこれらの組み合わせから選択される。いくつかの実施態様において、不活性薬学的に許容できる賦形剤または担体はスクロースである。
いくつかの実施態様において、不活性薬学的に許容できる賦形剤または担体(例えば、スクロース)は、BT5528またはその薬学的に許容できるもの1mgあたり約10～35mgの量である。いくつかの実施態様において、不活性薬学的に許容できる賦形剤または担体(例えば、スクロース)は、BT5528またはその薬学的に許容できるもの1mgあたり約15mgまたは30mgの量である。いくつかの実施態様において、液体医薬組成物は、約60mg/mLの濃度の不活性薬学的に許容できる賦形剤または担体(例えば、スクロース)を含む。
いくつかの実施態様において、薬学的に許容できる賦形剤または担体は、界面活性剤を含む。いくつかの実施態様において、界面活性剤は、ポリソルベート(例えば、ポリソルベート-20、ポリソルベート-40、ポリソルベート-60、ポリソルベート-65、ポリソルベート-80、ポリソルベート-85、またはこれらの組み合わせ)である。いくつかの実施態様において、界面活性剤は、ポロクサマー(例えば、ポロクサマー188);TritonTM;ドデシル硫酸ナトリウム(SDS);ラウリル硫酸ナトリウム; ナトリウムオクチルグリコシド;ラウリル-スルホベタイン、ミリスチル-スルホベタイン、リノレイル-スルホベタイン、ステアリル-スルホベタイン、ラウリル-サルコシン、ミリスチル-サルコシン、リノレイル-サルコシン、ステアリル-サルコシン、リノレイル-ベタイン、ミリスチル-ベタイン、セチル-ベタイン、ラウロアミドプロピル-ベタイン、コカミドプロピル-ベタイン、リノレアミドプロピル-ベタイン、ミリスタミドプロピル-ベタイン、パルミドプロピル-ベタイン、イソステラミドプロピル-ベタイン(例えばラウロアミドプロピル)、ミリスタルニドプロピル(myristarnidopropyl)-ジメチルアミン、パルミドプロピル-ジメチルアミン、またはイソステラミドプロピル-ジメチルアミン;ナトリウムメチルココイル-タウレート(sodium methyl cocoyl- taurate)、または二ナトリウムメチルオフェイル-タウレート(disodium methyl ofeyl-taurate);およびMonaquatTM系列(Mona Industries, Inc., Paterson, N.J. )、ポリエチルグリコール、ポリプロピルグリコール、およびエチレンおよびプロピレングリコール(例えばプルロニック、PF68)のコポリマーから選択される。いくつかの実施態様において、界面活性剤はポリソルベート20である。
いくつかの実施態様において、界面活性剤(例えば、ポリソルベート20)は、BT5528またはその薬学的に許容できるもの1mgあたり約0.01～0.15mgの量である。いくつかの実施態様において、界面活性剤(例えば、ポリソルベート20)は、BT5528またはその薬学的に許容できるもの1mgあたり約0.025mg、0.05mg、または0.1mgである。いくつかの実施態様において、液体医薬組成物は、0.1または0.2mg/mLの濃度の界面活性剤(例えば、ポリソルベート20)を含む。
いくつかの実施態様において、薬学的に許容できる賦形剤または担体は、等張性調整剤を含む。いくつかの実施態様において、等張性調整剤は、塩化ナトリウム、デキストロース、塩化カルシウム、またはこれらの組み合わせである。いくつかの実施態様において、等張性調整剤はデキストロースである。いくつかの実施態様において、等張性調整剤は塩化ナトリウムである。いくつかの実施態様において、等張性調整剤は、塩化ナトリウムおよびデキストロースの組み合わせである。
いくつかの実施態様において、本発明は、BT5528またはその薬学的に許容できる塩、ヒスチジン塩酸塩、スクロース、およびポリソルベート20を含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施態様において、本発明の医薬組成物は、
BT5528またはその薬学的に許容できる塩;
BT5528またはその薬学的に許容できるもの1mgあたり約1.31～2.62mgのヒスチジン塩酸塩;
BT5528またはその薬学的に許容できるもの1mgあたり約15～30mgのスクロース;および
BT5528またはその薬学的に許容できるもの1mgあたり約0.05～0.1mgのポリソルベート20、を含む医薬組成物を提供する。
いくつかの実施態様において、本発明は、
約21.2mgのBT5528またはその薬学的に許容できる塩;
BT5528またはその薬学的に許容できるもの1mgあたり約55.5mgのヒスチジン塩酸塩;
BT5528またはその薬学的に許容できるもの1mgあたり約636mgのスクロース;および
BT5528またはその薬学的に許容できるもの1mgあたり約1.06～2.12mgのポリソルベート20、を含む、凍結乾燥粉末である個体医薬組成物を提供する。
いくつかの実施態様において、本発明は、
約21.2mgのBT5528またはその薬学的に許容できる塩;
BT5528またはその薬学的に許容できるもの1mgあたり約27.8mgのヒスチジン塩酸塩;
BT5528またはその薬学的に許容できるもの1mgあたり約318mgのスクロース;および
BT5528またはその薬学的に許容できるもの1mgあたり約1.06mgのポリソルベート20、を含む、凍結乾燥粉末である個体医薬組成物を提供する。
いくつかの実施態様において、本発明は、
約2～4mg/mLのBT5528またはその薬学的に許容できる塩;
約5.25mg/mLのヒスチジン塩酸塩;
約60mg/mLのスクロース;および
約0.1～0.2mg/mLのポリソルベート20、を含む液体医薬組成物を提供する。
いくつかの実施態様において、本発明は、本発明の個体医薬組成物を水に溶解することによって調製される液体医薬組成物を提供する。いくつかの実施態様において、本発明は、本発明の個体医薬組成物を注射可能な媒体(例えば、食塩水または5％デキストロース)に溶解することによって調製される液体医薬組成物を提供する。いくつかの実施態様において、本発明は、本発明の固体医薬組成物を水中で再構成し、続いて5％デキストロースで希釈することによって調製される液体医薬組成物を提供する。いくつかの実施態様において、液体医薬組成物は、IV投与のために5％デキストロースのIVバッグ中に希釈される。いくつかの実施態様において、5％デキストロースのIVバッグ中の液体医薬組成物は、IV投与前に最長約4時間室温(約20～25℃)下で保管される。いくつかの実施態様において、5％デキストロースのIVバッグ中の液体医薬組成物は、IV投与前に最長約20時間冷蔵(約2～8℃)条件下で保管される。いくつかの実施態様において、5％デキストロースのIVバッグ中の液体医薬組成物は、IV投与前に最長約20時間冷蔵(約2～8℃)条件下で保管され、続いて最長4時間室温(約20～25℃)下で保管される。
いくつかの実施態様において、本発明は、BT5528またはその薬学的に許容できる塩、ヒスチジン塩酸塩、スクロース、ポリソルベート20、およびデキストロースを含む固体医薬組成物を提供する。いくつかの実施態様において、本発明は、BT5528またはその薬学的に許容できる塩、ヒスチジン塩酸塩、スクロース、ポリソルベート20、デキストロース、および水を含む液体医薬組成物を提供する。いくつかの実施態様において、医薬組成物の成分は、上記の量、濃度、および比率である。
4.医薬組成物の使用
一態様において、本発明は、患者においてEphA2-発現に関連する進行性固形癌悪性腫瘍(advanced solid tumor malignancy)を処置する方法であって、本明細書に記載の医薬組成物を該患者に投与することを含む方法を提供する。いくつかの実施態様において、EphA2-発現に関連する進行性固形癌悪性腫瘍は、非小細胞肺癌(NSCLC)、卵巣癌、トリプルネガティブ乳癌(TNBC)、胃/上部消化器(GI)癌、膵臓癌および尿路上皮癌から選択される。いくつかの実施態様において、EphA2-発現に関連する進行性固形癌悪性腫瘍は、NSCLCの腺癌サブタイプ(腺-NSCLC)である。
いくつかの実施態様において、本発明の方法は、本明細書の医薬組成物を患者に静脈内投与することを含む。いくつかの実施態様において、本発明の医薬組成物は、IV注射により投与される。いくつかの実施態様において、本発明の医薬組成物は、IV注入により投与される。いくつかの実施態様において、本発明の医薬組成物のIV注入は、約5～30分持続する。いくつかの実施態様において、本発明の医薬組成物のIV注入は、約30～90分持続する。いくつかの実施態様において、本発明の医薬組成物のIV注入は、約30分、約35分、約40分、約45分、約50分、約55分、約60分、約65分、約70分、約75分、約80分、約85分、または約90分持続する。いくつかの実施態様において、本発明の医薬組成物のIV注入は、約60分持続する。いくつかの実施態様において、本発明の医薬組成物のIV注入は、約2時間、約2.5時間、約3時間、約3.5時間、または約4時間持続する。
いくつかの実施態様において、本発明の医薬組成物は、1日、2日、3日、4日、5日、6日、または7日ごとに一回患者に投与される。いくつかの実施態様において、本発明の医薬組成物は、毎週患者に投与される。いくつかの実施態様において、本発明の医薬組成物は、二週ごとに一回患者に投与される。
いくつかの実施態様において、本発明の医薬組成物は、約1～27mg/m2の用量で投与される。いくつかの実施態様において、本発明の医薬組成物は、約2～20mg/m2の用量で投与される。いくつかの実施態様において、本発明の医薬組成物は、約2～20mg/m2の用量で投与される。いくつかの実施態様において、本発明の医薬組成物は、約2.2mg/m2、約4.4mg/m2、約7.3mg/m2、約11mg/m2、約14.6mg/m2、または約19.4mg/m2の用量で投与される。いくつかの実施態様において、本発明の医薬組成物は、約1.5～3.5mg/m2、約3.5～5.5mg/m2、約6.5～8.5mg/m2、約10～12mg/m2、約13.5～15.5mg/m2、または約18.5～20.5mg/m2の用量で投与される。いくつかの実施態様において、本発明の医薬組成物は、約1～10mg/m2または約10～20mg/m2の用量で投与される。いくつかの実施態様において、本発明の医薬組成物は、約21mg/m2、約22mg/m2、約23mg/m2、約24mg/m2、約25mg/m2、約26mg/m2、または約27mg/m2の用量で投与される。
いくつかの実施態様において、本発明の医薬組成物は、少なくとも18歳の患者に投与される。
いくつかの実施態様において、本発明の医薬組成物は、0または1の米国東海岸癌臨床試験グループ(Eastern Cooperative Oncology Group, ECOG)パフォーマンスステータススコアを有する患者に投与される。0および1のECOGパフォーマンスステータススコアは、実施例1に記載されている
いくつかの実施態様において、本発明の医薬組成物は、Response Evaluation Criteria in Solid Tumors (RECIST) v1.1により測定可能な疾患を有する患者に投与される。
いくつかの実施態様において、本発明の医薬組成物は、容認できる臓器機能を有する患者に投与される。いくつかの実施態様において、容認できる臓器機能を有する患者は、以下から選択される実験室データを有する。
腎機能：Cockcroft-Gault式によるまたは24-時間採尿による測定としてのクレアチニンクリアランス≧50mL/min；
総ビリルビン≦1.5×ULN(正常上限)；
血清アルブミン≧2.5g/dL；
アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ(AST)≦2.5×ULN、または肝転移がある場合は≦5×ULN；
アラニンアミノトランスフェラーゼ(ALT)≦2.5×ULN、または肝転移がある場合は≦5×ULN；および
国際標準比(INR)＜1.3または≦施設ULN(抗凝血剤は不可)。
いくつかの実施態様において、本発明の医薬組成物は、容認できる血液学的機能を有する患者に投与される。いくつかの実施態様において、容認できる血液学的機能を有する患者は、以下から選択される実験室データを有する:
ヘモグロビン≧9g/dL;
好中球絶対数(ANC)≧1500細胞/mm3;および
血小板数≧75,000細胞/mm3。
いくつかの実施態様において、患者は、本発明の医薬組成物の最初の投与から4週間以内に赤血球もしくは血小板の輸血または成長因子の投与を受けていない。
いくつかの実施態様において、患者は、NSCLCの腺癌サブタイプ(腺-NSCLC)を有し、白金を用いた化学療法中での進行またはその後の進行を含む全ての標準処置の選択肢を使い果たし、および／または最も最近の治療ラインでのX線撮影の進行の証拠を有する少なくとも1つの前の治療ラインで失敗した者である。いくつかの実施態様において、患者は、EGFR、ALK、NTRK、ROS1、または他のゲノム腫瘍異常を有する。いくつかの実施態様において、患者は、ドライバー変異疾患に対する適切な処置を受けていない。いくつかの実施態様において、患者は、本発明の医薬組成物の初回投与の少なくとも28日前に、免疫療法を受けていない。
いくつかの実施態様において、患者は、本発明の医薬組成物の初回投与前14日以内に化学療法処置を受けていない。いくつかの実施態様において、患者は、本発明の医薬組成物の初回投与前28日以内または5半減期のいずれか短い期間内に抗癌処理を受けていない。いくつかの実施態様において、患者は、Common Terminology Criteria for Adverse Events (CTCAE)v5.0に従ってグレード1に解決された以前の毒性を有する(グレード2以下でなければならない脱毛症を除く)。
いくつかの実施態様において、患者は、本発明の医薬組成物の初回投与の4週間以内に実験的処置を受けていない。
いくつかの実施態様において、患者は、CYP3A4の強力な阻害物質もしくは誘導物質、またはハーブ系または食品系を含む、P-gpの強力な阻害物質による現在の処置を受けていない。
いくつかの実施態様において、患者は、本発明の医薬組成物の成分のいずれに対しても、またはモノメチルオーリスタチンE(MMAE)に対しても感受性を有しない。
いくつかの実施態様において、患者は、重大な医学的状態、生命に関わる病気、制御されていない活動性感染症または臓器系機能不全(腹水、凝固障害、脳症など)を有しない。
いくつかの実施態様において、患者は、本発明の医薬組成物の初回投与から4週間以内に、いかなる大手術(血管アクセスの配置を除く)を受けていない。
いくつかの実施態様において、患者は、本発明の医薬組成物の初回投与から30日以内に生ワクチンを受けていない。
いくつかの実施態様において、患者は、制御されていない、症状のある脳転移を有しない。いくつかの実施態様において、患者は、ステロイドを使用せずに、またはプレドニゾンまたは同等物の毎日10mg未満またはそれと同等の安定な用量または減少した用量で、少なくとも4週間局所療法後に安定した神経学的状態を有する。
いくつかの実施態様において、患者は、本発明の医薬組成物の初回投与前に、制御されていない高血圧(収縮期血圧［BP］≧139mmHg；拡張期BP≧89mmHg)を有しない。いくつかの実施態様において、患者は、本発明の薬学的組成物の初回投与前に少なくとも3ヶ月間安定に制御されている高血圧を有する。
いくつかの実施態様において、患者は、本発明の医薬組成物の初回投与前6ヶ月以内に記録された脳血管事象(卒中または一過性虚血発作)、不安定狭心症、心筋梗塞、うっ血性心不全またはニューヨーク心臓協会(New York Heart Association)クラスIII～IVの症状の履歴を有しない。
いくつかの実施態様において、患者は、本発明の医薬組成物の初回投与前6ヶ月以内に平均安静時補正QT間隔(mean resting corrected QT interval)(QTcF)＞470msecを有しない。
いくつかの実施態様において、患者は、本発明の医薬組成物の初回投与前6ヶ月以内に、QTc延長の危険性、または不整脈性事象の危険性を高めるいずれかの因子、例えば心不全、低カリウム血症、先天性QT延長症候群、QT延長症候群の家族歴もしくは40歳未満の原因不明の突然死などのQTc延長、またはQT間隔を延長することが知られているいずれかの併用薬物を有しない。
いくつかの実施態様において、患者は、本発明の医薬組成物の初回投与前6ヶ月以内に、安静時心電図(ECG)のリズム、伝導または形態における臨床的に重要な異常、例えば、完全左脚ブロック、第III度房室ブロック(third degree heart block)を有しない。
いくつかの実施態様において、患者は、ヒト免疫不全ウイルス(HIV)または後天性免疫不全症候群(AIDS)を有しない。
いくつかの実施態様において、患者は、陽性のB型肝炎表面抗原および／または抗B型肝炎コア抗体(anti-hepatitis B core antibody)を有しない。
いくつかの実施態様において、患者は、陰性のポリメラーゼ連鎖反応(PCR)アッセイを有し、適切な抗ウイルス療法を有する。
いくつかの実施態様において、患者は、C型肝炎ウイルス(HCV)抗体陽性の場合、陽性ウイルス量を有するC型肝炎の活動性感染症を有する。
いくつかの実施態様において、患者は、C型肝炎感染の処置を受けており、≧12週間の持続的なウイルス学的応答を有する。
いくつかの実施態様において、患者は、本発明の医薬組成物の初回投与前3ヶ月以内に血栓塞栓性事象および／または出血性障害(例えば、深部静脈血栓症［DVT］または肺塞栓症［PE］)を有しない。
いくつかの実施態様において、患者は、本発明の医薬組成物の初回投与前3年以内に別の悪性腫瘍を有しない。いくつかの実施態様において、患者は、以前に診断された悪性腫瘍(治癒の目的をもって十分に処置された基底細胞癌、皮膚の扁平上皮細胞、子宮頸部上皮内腫瘍/子宮頸部上皮内癌または表皮内黒色腫または非浸潤性乳管癌を除く)からのいかなる残存疾患を有しない。
いくつかの実施態様において、患者は、本発明の医薬組成物の初回投与前過去14日以内に、全身性抗感染性処置または発熱を有しない。
いくつかの実施態様において、本発明は、EphA2-発現に関連する進行性固形癌悪性腫瘍を処置するための、本発明の医薬組成物およびニボルマブの組み合わせ使用を提供する。ニボルマブは、https://www.opdivohcp.com/dosing/dosing-schedules(その内容は引用により全体として本明細書に包含される)に見出すラベルに記載されているとおりに投与され得る。いくつかの実施態様において、ニボルマブは、240mgを2週間ごとに投与される。いくつかの実施態様において、ニボルマブは、480mgを4週間ごとに投与される。いくつかの実施態様において、ニボルマブは、30分のIV注入として投与される。
組み合わせ使用のいくつかの実施態様において、患者は、免疫チェックポイント阻害剤に対して不耐性であることは以前に知られていない。組み合わせ使用のいくつかの実施態様において、患者は、チェックポイント阻害物質療法に対する過敏症であることが知られていない。組み合わせ使用のいくつかの実施態様において、患者は、臓器移植の前歴がない。組み合わせ使用のいくつかの実施態様において、患者は、臨床的に関連する免疫不全と以前に診断されていない。組み合わせ使用のいくつかの実施態様において、患者は、治療を必要とする活動性全身性感染症を有しない。組み合わせ使用のいくつかの実施態様において、患者は、毎日10mgを超えるプレドニゾン相当量または他の強力な免疫抑制剤を服用していない。組み合わせ使用のいくつかの実施態様において、患者は、脱毛症または白斑症を除く自己免疫疾患の病歴を有しない。組み合わせ使用のいくつかの実施態様において、患者は、間質性肺疾患の病歴を有しない。
例示
以下の実施例は、本発明を例示することを意図しており、それに対する制限であると解釈されるべきではない。特に明記しない限り、すべてのアミノ酸はL-配置で使用した。
実施例1.BT5528凍結乾燥医薬品の調製
最初に工程評価を行い、続いて候補製剤の熱評価を行った。安定性に関連する試験的な凍結乾燥を行い、続いて凍結乾燥サイクルの最適化、追加の製剤スクリーニングおよび濾過評価を行た。
1.BT5528の工程評価および凍結/解凍安定性
バルク溶液の外観、pH、密度、およびBT5528アッセイ／関連物質を記録した。追加の試料を3回の凍結(-20℃)/解凍サイクルにかけ、各サイクル後に外観、pH、UPLCおよび亜可視粒子(MFI)を評価した。
1.1.溶液の調製
14gのWFI(70％w/v)を秤量して小さなガラスビーカーに入れ、これに、秤量した104mgのヒスチジンHClをすすぎながら添加し、続いて溶解するまで攪拌した。溶解したら、1.2gのスクロースを秤量し、添加し、続いて溶解するまで磁気によって攪拌した。溶液のpHを測定し、目標(pH7.7～8.1)に調整した。初期pHは3.42 pHで、0.1M NaOH溶液を用いて8.07 pHに調整した。
0.5gのポリソルベート20を50mLのWFIに溶解することによって1％(w/v)ポリソルベート20溶液を調製した。この1％(w/v)ポリソルベート20溶液400μLをヒスチジン/スクロース溶液に攪拌しながら添加した。86.8mgのBT5528を秤量し、攪拌を続けながら溶液にゆっくりと添加した。APIの完全溶解には約90分かかった。
溶液のpHを測定し、目標値(pH6.8～7.2)に調整した。API添加後のpHは7.79であり、0.1M HCl溶液を用いてpHを7.19に調整した。この溶液を20mLメスフラスコに移し、WFIで最終容量にした。この溶液を単一の0.22μmPES膜シリンジフィルターで濾過した。最終溶液は、可視粒子を含まない無色透明の溶液であった。最終溶液の密度を測定したところ、1.025g/cm3であった。濾過前および濾過後の試料を分析部に渡し、HPLC分析を行った。残りのバルク溶液は、2mLガラスバイアルに2mLの用量を充填し、3回の凍結/解凍サイクルにかけた。
1.2.結果
1.2.1.外観およびpH
3回の凍結/解凍サイクルの過程にわたって、外観またはpHに有意な変化はなかった。
Figure 2023505756000002
1.2.2.アッセイおよび関連物質
結果は、濾過前および濾過後の間に、アッセイまたは関連物質に変化がなかったことを示している。凍結/解凍評価中、アッセイまたは関連物質にも変化はなかった。
Figure 2023505756000003
Figure 2023505756000004
1.3.考察および結論
濾過中のアッセイの損失はなく、これは、APIのPES膜への吸着がないことを示している。バイアルを3回の凍結/解凍サイクルにかけた後、アッセイおよび関連物質のデータは変化しなかった。これは、APIが凍結/解凍サイクル中に安定していることを示している。
2.段階3-熱評価
凍結乾燥顕微鏡(FDM)および示差走査熱量測定(DSC)によってBT5528製剤の熱特性を評価し、凍結乾燥サイクルの設計に影響を与える崩壊温度または熱事象を特定した。
製剤の詳細を表1-4に示す。活性製剤およびプラセボ製剤の熱特性を評価することにより、凍結乾燥サイクルのパラメータを決定することができた。
Figure 2023505756000005
2.1.凍結乾燥顕微鏡(FDM)
FDMは、製剤の崩壊温度を決定するのに使用した。FDMサイクル設定点パラメータを改良するために、いくつかの試料を分析した。各分析は、明視野透過光で10x対物レンズを用いて行った。行った各分析からの重要な観察を表1～5に示す。
Figure 2023505756000006
試料構造の微妙な変化、例えば、明確に定義されていない乾燥前線(drying front)は、試料崩壊の最初の兆候、その後の輝点の出現として注目された。これらの視覚的観察は崩壊の始まりとして解釈された。試料全体に広がるより大きな明るい領域が広がるにつれて、構造のさらなる損失が明らかになった。その後、これらの領域は裂け目を形成し、徹底的な崩壊に至った。相互接続された明るい領域/裂け目のこの進展は、製品の崩壊と見なした。
2.2.示差走査熱量測定(DSC)
FDMに加えて、表1-6に示すパラメータを用いてDSCにより製剤を分析した。重要な観察の要約は表1-7に示す。
Figure 2023505756000007
Figure 2023505756000008
DSCは、明確に定義された大きい凍結発熱および融解吸熱を示した。その他の目立つ熱現象は観察されなかった。
2.2.1.考察および結論
FDMおよびDSCによって生成されたデータは、凍結乾燥サイクルの設計を支援するのに使用した。これらの温度は、一次乾燥中の凍結温度および最高許容製品温度の指標を与えた。製剤の崩壊温度は約-30℃であり、この温度により、凍結乾燥サイクルの一次乾燥温度を決定する。
熱評価の結果に基づいて、凍結乾燥サイクルは、製品温度を一次乾燥中の崩壊温度より5～10℃低い温度(この場合、約-30℃)に維持することを目的とする。
3.段階5-試験的凍結乾燥
BT5528製剤の熱特性は、段階4-熱評価において決定した。段階4で得られた熱データでは、約-30℃の崩壊温度を示した。
このデータに基づいて、表1-8に詳述する試験的凍結乾燥サイクルは、製品温度を崩壊温度より5～10℃低く維持するように設計した。表1-9に詳述するような凍結乾燥製品の安定性試験、および再構成安定性評価を裏付けるのに十分なバイアルを調製した。4mg/mLの溶液を1mLの容量で、2mL透明I型ガラスバイアルに充填した。凍結乾燥製品を1mLのWFIで再構成して、4mg/mLの目標濃度を達成する。アクティブなバイアルのすぐ周囲の領域を、1mLの緩衝液を含むバイアルで埋め尽くし、完全なチャンバーの状態をより厳密に模倣した。
3.1.溶液の調製
約80mLのWFI(約70％w/vの最終容量)をガラスビーカーに添加し、そこに628.8mgのヒスチジンHClを添加し、溶解するまで磁気によって攪拌した。溶解したら、7.2gのスクロースを秤量し、WFI/ヒスチジン溶液に添加し、続いて溶解するまで攪拌した。溶液のpHを測定し、0.1M 水酸化ナトリウムで目標(pH7.7～8.1)に調整した。初期pHは3.93pHで、pH 7.74に調整した。
0.5gのポリソルベート20を50mLのWFIに溶解することによって、1％(w/v)ポリソルベート20溶液を調製した。1％(w/v)ポリソルベート20溶液2.4mLを攪拌しながらヒスチジン/スクロース溶液に添加した。615mgのBT5528を秤量し、攪拌を続けながら溶液にゆっくりと添加した。BT5528の完全溶解には約120分かかった。90分の攪拌後、APIはビーカーの底と側面の両方に付着しているように見えた。さらに30分攪拌した結果、可視粒子を含まない無色の溶液が得られた。
溶液のpHを測定し、0.1M 塩酸を用いて目標(pH 6.8～7.2)に調整した。API添加後のpHは7.83で、0.1M HCl溶液を用いてpH 7.10に調整した。この溶液を100mLおよび20mLのメスフラスコにどちらにも一杯にならない程度で移し、WFIで最終容量にし、その後元のビーカーに戻し、攪拌して混合した。
濾過前に溶液の試料を採取し、残りを単一の0.22μmPESシリンジフィルターで濾過し、濾過後の試料を採取し、分析した。濾液は、可視粒子を含まず、無色透明であった。
3.2.凍結乾燥
この溶液を2mLバイアルに1mLの容量で充填し、13mmの凍結乾燥ストッパーを用いて部分的にストッパーをかけた。中央および前部に位置する単一のバイアルをプローブし、サイクルを通じて製品温度をモニターした。バイアルの周囲に、1mLのプラセボ溶液を含む2mLバイアルを詰めた。バイアルは、表1-8のサイクルを用いて凍結乾燥させた。
サイクルの進行は、棚と製品の温度(熱電対プローブ)およびピラニ真空管およびキャパシタンスマノメータにより測定したチャンバー圧力に基づいてモニターした。
Figure 2023505756000009
凍結乾燥プラグは、白色で、崩壊の徴候がなく、よく形成されていた。充填高さからの収縮が観察されたが、これが凍結乾燥プラグの構造に影響を与えたといった兆候はなかった。
凍結乾燥製品を安定に置き、25℃/60％RHの加速保管で1ヶ月間(表1-9による)試験した。凍結乾燥製品は、外観、水分含量、およびUPLCによるアッセイおよび関連物質により評価した。再構成製品は、再構成時間、溶液の外観、pH、およびサブ可視粒子(T=0のみ)に基づいて評価した。
Figure 2023505756000010
3.3.結果
3.3.1.凍結乾燥物の外観
Figure 2023505756000011
Figure 2023505756000012
3.3.3.水分含有量
Figure 2023505756000013
3.3.4.サブ可視粒子
Figure 2023505756000014
3.3.5.凍結乾燥前(Pre-Lyo)のアッセイ
Figure 2023505756000015
3.3.6.凍結乾燥前の関連物質
Figure 2023505756000016
3.3.7.アッセイ(バイアル内容物)
Figure 2023505756000017
3.3.8.関連物質
Figure 2023505756000018
3.3.9.考察および結論
試験的凍結乾燥のサイクルパラメータは、リード製剤に適しており；凍結乾燥プラグは、わずかな収縮を伴う白色であった、ことに見出した。25℃/60％RHで4週間安定させる際に、凍結乾燥プラグの外観に変化はなかった。再構成溶液のpHは試験段階中、pH7.1を維持したが、再構成時間に変化があり、バイアル表面に油滴が認められた。再構成の工程および再構成製品の外観は、凍結乾燥サイクルの最適化においてさらに検討する。
アッセイ値は、4週間の安定性試験にわたって一貫したままであったが、濃度が理論値の93～95％であったことに留意すべきである。結果として濾過前も低かったので、これは、濾過の損失とは対照的に、配合中のガラス器具へのAPIの吸着を示唆している。
関連物質データは、T=0週間とT=4週間でそれぞれ3.19％と3.51％と同等であったが、関連物質データには2.47～3.51％のある程度の変化があった。
リード製剤は、25℃/60％RHで保管した場合に安定であることが示されたため、凍結乾燥サイクルの最適化に進行した。
4.段階6-凍結乾燥サイクルの最適化
試験凍結乾燥サイクルから生成された凍結乾燥製品の安定性データは、製品が25℃/60％RHでの保管中に安定であることを示した。最初の最適化サイクルの実行は、一次乾燥の期間を短縮する目的で、-20℃の一次乾燥棚温度を使用した。
凍結乾燥製品の試験および再構成安定性評価に十分なバイアル数を提供するために、少数のバイアルを充填した(18)。
4mg/mLの溶液を、10mL透明I型ガラスバイアルに5.3mLの容量で充填した。凍結乾燥品を5.3mLのWFIで再構成し、目標濃度である4mg/mLを達成させた。
疎水性コーティングの使用が、試験的な凍結乾燥安定性中に観察されるようなバイアル表面への製品の吸着を防止するかどうかを評価するために、2mL TopLyoTMバイアルも使用した。少数のバイアル(5)に0.5mLの容量を充填し、同じサイクルで凍結乾燥させた。
4.1.凍結乾燥最適化サイクル1
4.1.1.溶液の調製
150mLのバルク溶液を以下のように調製した。
約100mLのWFIを、磁気攪拌棒を含む200mLビーカーに加え、これに786.3mgのヒスチジンHClをすすぎながら添加し、溶解するまで撹拌し、これは5分かかった。
溶解したら、9.0004gのスクロースを秤量し、ビーカーにすすぎながら添加し、続いて溶解するまで磁気によって攪拌した。この溶液は、スクロースが完全に溶解するまで5分間撹拌した。
溶液のpHを測定し、1M 水酸化ナトリウムで目標pHであるpH7.7～8.1に調整してから、1％(w/v)ポリソルベート20 3mLを添加した。この溶液を均一になるまで5分間撹拌した。
651mgのBT5528を秤量し、配合容器にすすぎながらゆっくりと添加した。この溶液を90分間磁気によって撹拌したところ、少量のAPIがビーカーの表面に吸着したように見えた。これは、APIは溶解工程で、完全に溶解する前に最初は凝集しているように見えることに留意すべきである。
溶液のpHを測定し、0.1M HClでpH 7.03に調整した(目標pHはpH 6.8～7.2)。続いて、溶液を100mLと50mLのメスフラスコにどちらにも一杯にならない程度で移し、WFIで容量に調整した。この溶液を元のビーカーに戻し、攪拌して混合した。
この溶液を単一の0.22μm PESシリンジフィルターで濾過し、濾過前と濾過後の試料を採取して分析した。得られた濾液は、可視粒子を含まない無色透明の溶液であった。
4.1.2.凍結乾燥
溶液を10mL I型透明ガラスバイアルに5.3mLの容量で、また標準バイアルおよびTopLyoTM(シラン化バイアル)の両方に0.5mLの容量で充填し、疎水性表面の使用によりBT5528の表面への吸着が減少するかどうかを決定した。
トレイの中央に位置する単一のバイアルをプローブし、サイクルを通じて生成温度をモニターした。サイクルの進行は、温度(棚/製品プローブ)およびチャンバー圧力(キャパシタンスマノメータ/ピラニ真空管)に基づいてモニターし、一次乾燥および二次乾燥の終了点を決定した。
表1-18のサイクルを用いて、バイアルを棚から直接凍結乾燥させた。
Figure 2023505756000019
凍結乾燥プラグは、白色で、よく形成されており、わずかな収縮を有していた。収縮は、-25℃の一次乾燥温度での試験凍結乾燥サイクルでも観察されたため、製剤の固有の特徴であるように見える。TopLyoTMバイアル中の凍結乾燥プラグは徹底的な崩壊を示したため、製品を試験することはできなかった。この崩壊は、2mLバイアルへの0.5mLの充填と比較して、10mLバイアルへの5.3mLの充填の乾燥時間が長くなり、これは、製品温度が崩壊温度を超えて上昇することに至るためである可能性がある。
4.1.3.結果
バッチの詳細は、表1-19に示す。バッチ002/BCL/18は、最適化サイクル1において凍結乾燥させたものである。
Figure 2023505756000020
4.1.3.1.溶液の外観、pHおよび再構成時間
Figure 2023505756000021
Figure 2023505756000022
4.1.3.2.サブ可視粒子
Figure 2023505756000023
4.1.3.3.水分含有量
Figure 2023505756000024
4.1.3.4.アッセイ(バイアル内容物)
Figure 2023505756000025
4.1.3.5.純度/関連物質
Figure 2023505756000026
4.1.4.考察および結論
凍結乾燥プラグの外観は、-20℃の一次乾燥温度がリード製剤に適しており、一次乾燥の初期段階中、製品温度を崩壊温度未満に維持したことを示した。乾燥が完了に近づくにつれて、温度は一次乾燥の終わりに向かって崩壊温度を超えた。2回目の最適化サイクルでは、製品の崩壊の兆候がなかったため、一次乾燥温度をさらに-15℃に上げることをお薦める。
凍結乾燥製品の再構成は、試験凍結乾燥製品と同様に油滴が形成され、再構成のためにボルテックス混合が必要であった。ボルテックスの使用は、製剤中のポリソルベート20の存在に起因する製品の過度の発泡を引き起こした。再構成時間は約12分で、目標時間の10分を上回った。
アッセイ値は、配合中または濾過中のガラス器具への吸着によるAPIの損失がなかったことを示す目標にあった。純度/関連物質のデータは、凍結乾燥後と濾過前および濾過後と同様であった。
4.2.凍結乾燥最適化サイクル2
最初の最適化サイクルの実行は、一次乾燥の持続時間を短縮する-20℃の一次乾燥棚温度を使用した。凍結乾燥製品は白色であり、崩壊の兆候がなく、よく形成されていた。したがって、2回目の凍結乾燥サイクルでは、一次乾燥の時間をさらに短縮するために、棚の温度を-15℃に上げることをお薦めする。
少数のバイアル(18)を充填して、凍結乾燥製品の試験に十分なバイアル数を提供した。
4mg/mLの溶液を10mL透明I型ガラスバイアルに5.3mLの容量で充填した。凍結乾燥製品を5.3mLのWFIで再構成し、目標濃度である4mg/mLを達成させた。
試験凍結乾燥安定性中に観察されるように、疎水性コーティングの使用がバイアル表面への製品の吸着を防止したかどうかを評価するために、2mL TopLyoTMバイアルを使用した。少数のバイアル(5)を、0.5mLの容量で充填し、同じサイクルで凍結乾燥させた。サイクル最適化1において崩壊が観察されたことで、シランコーティングの影響を評価することができなかったため、TopLyoTMバイアルとの比較として、コーティングされていない少数の2mLバイアルも充填した。
4.2.1.溶液の調製
120mLのバルク溶液を以下のように調製した。
約80mLのWFIを、磁気攪拌棒を含む200mLビーカーに加え、これに628.8mgのヒスチジンHClをすすぎながら添加し、溶解するまで攪拌し、これに5分かかった。
溶解したら、7.2gのスクロースを秤量し、ビーカーにすすぎながら添加し、続いて溶解するまで磁気によって撹拌した。この溶液を、スクロースが完全に溶解するまで5分間攪拌した。
溶液のpHを測定し、1M 水酸化ナトリウムで目標pHのpH7.7～8.1に調整した後、1％(w/v)ポリソルベート20を2.4mL添加した。この溶液を均一になるまで5分間攪拌した。
615mgのBT5528を秤量し、配合容器にすすぎながらゆっくり添加した。溶液を120分間磁気によって攪拌したところ、90分後、APIはビーカーの底の表面および磁気攪拌棒にも吸着したように見えた。追加の攪拌時間により、粒子のない無色の溶液が得られた。
溶液のpHを測定し、pH7.1に調整した(目標pHはpH6.8～7.2である)。続いて、溶液を100mLと20mLのメスフラスコにどちらにも一杯にならない程度で移し、WFIで容量に調整した。この溶液を元のビーカーに戻し、攪拌して混合した。
この溶液を単一の0.22μm PESシリンジフィルターで濾過し、濾過前と濾過後の試料を採取して分析用にした。得られた濾液は、可視粒子を含まない、無色透明の溶液であった。
4.2.2.凍結乾燥
トレイの中央に位置する単一のバイアルをプローブし、サイクルを通じて生成温度をモニターした。サイクルの進行は、温度(棚／製品プローブ)および圧力(キャパシタンスマノメータ/ピラニ真空管)の差を基準にしてモニターし、一次乾燥および二次乾燥の終了点を決定した。
バイアルは、表1-26のサイクルを用いて棚から直接凍結乾燥させた。製品プローブの故障のため、温度データは、凍結乾燥サイクル中では得られなかった。ピラニ真空管およびキャパシタンスマノメータの収束は、一次乾燥および二次乾燥の完了を示すために使用した。
Figure 2023505756000027
4.2.3.結果
バッチの詳細を表1-28に示す。
Figure 2023505756000028
4.2.3.1.溶液の外観、pHおよび再構成時間
Figure 2023505756000029
Figure 2023505756000030
4.2.3.2.サブ可視粒子
Figure 2023505756000031
4.2.3.3.水分含有量
Figure 2023505756000032
4.2.3.4.アッセイ(バイアル内容物)
Figure 2023505756000033
4.2.3.5.純度/関連物質
Figure 2023505756000034
3.2.4.考察および結論
凍結乾燥プラグの外観は、-15℃の一次乾燥温度がリード製剤に適することを示し、一次乾燥の初期段階中、製品温度を崩壊温度未満に維持した。乾燥が完了に近づくにつれて、温度は一次乾燥の終わりに向かって崩壊温度を超えた。
凍結乾燥製品の再構成は、試験凍結乾燥製品と同様に油滴が形成され、再構成のためにボルテックス混合が必要であった。ボルテックスの使用により、製剤中のポリソルベート20の存在に起因する製品の過度の発泡を引き起こした。再構成時間は約11分であり、これは目標時間の10分を上回った。
TopLyoTMバイアル中での凍結乾燥プラグの再構成は、標準のI型透明ガラス2mLバイアルよりも長く、APIの表面への吸着がより大きいことが観察された。このことから、シラン処理バイアルの使用により、凍結乾燥製品の再構成またはアッセイ回収率は改善されないことが示された。
アッセイ値は、配合中または濾過中のガラス器具への吸着によるAPIの損失がなかったことを示す目標にあった。純度/関連物質のデータは、凍結乾燥後と濾過前および濾過後とが同様であったが、関連物質の合計は最適化サイクル1よりも有意に少なかったことに留意すべきである。
凍結乾燥最適化サイクル1(2.50％(w/w))と比較すると、このサイクルでは水分含有量値は2.13％(w/w)と同様であった。
10mLバイアル(21.2mg/バイアルBT5528)中の凍結乾燥製品の再構成の評価は、酸性溶液を用いて実施した。BT5528は塩基性タンパク質であるため、pHを調整すると再構成が改善される可能性がある。より低い緩衝液pHを達成するためのWFIではなく希酸での再構成は、再構成後の可溶化の速度を増加させると仮定された。酸性溶液による再構成の改善は、凍結乾燥前の製剤の目標pHがより低い値(例えば、現在のpH7.1と比較してpH6または6.5)に変化することを示し、WFIのみによる凍結乾燥製品の再構成を改善する。
凍結乾燥BT5528製品の単一バイアルを、5.3mLの0.01M HClまたは0.02M HClで再構成し、15分間にわたり外観を注意していた。再構成時間と再構成製品の外観は、油滴の形成に関して、0.02M HCl溶液で改善した。このことから、凍結乾燥製品のpHをより酸性にすることで、再構成特性が改善し得ることを示唆した。
引き起こされた再構成の課題に関する第二の仮説は、配合工程の結果として製剤中の塩濃度が高くなったことであった。水酸化ナトリウムを用いて、API溶解前にpHを約pH3.5からpH7.7～8.1に調整し、その後、塩酸を用いて目標pHの6.8～7.2にpH調整を行った。
5.ヒスチジン/pH評価
再構成に酸性溶液を使用すると、再構成時間と外観を改善させた。凍結乾燥前のより低いpHが再構成時間とアッセイ結果を改善したかどうかを調べるために、3つの溶液をpH6、pH6.5、およびpH7.0で調製し、表36のサイクルを用いて凍結乾燥し、続いて凍結乾燥後に評価した。
さらに、pH調整のための水酸化ナトリウムの使用、および最終製品中の塩化ナトリウム含有量を減少させるために、配合工程を修正した。BT5528を添加する前に調製した溶液のpHは調整せず、APIの溶解後にのみ調整した。
製剤を表1-34に示す。
Figure 2023505756000035
5.1.溶液の調製
調製した3つの製剤のそれぞれの溶液調製の詳細は以下の通りである。
製剤1-ヒスチジンHCl-pH6
約35mLのWFIを、磁気攪拌棒を含むビーカーに加えた。これに、262.1mgのヒスチジンHClをすすぎながら添加し、溶解するまで磁気によって攪拌した。溶解したら、3.0322gのスクロースを秤量し、すすぎながら添加し、溶解するまで攪拌した。1％(w/v)ポリソルベート20溶液1mLをヒスチジン/スクロース溶液にピペットし、完全な溶解を達成するまで攪拌した。溶液のpHを測定したところ、pH4.01であった。
258mgのBT5528を秤量し、ゆっくりと添加し、続いて完全に溶解するまで90分間攪拌した。溶液のpHを測定し、1M 水酸化ナトリウムでpH6.02に調整し、続いて50mLメスフラスコに移し、WFIで容量に調整した。この溶液を元のビーカーに戻し、攪拌して混合した。
この溶液を単一の0.22μm PESシリンジフィルターで濾過したところ、濾液は可視粒子を含まない無色透明の溶液であった。
製剤2-ヒスチジンHCl-pH6.5
約35mLのWFIを、磁気攪拌棒を含むビーカーに加えた。これに、262.2mgのヒスチジンHClをすすぎながら添加し、溶解するまで磁気によって攪拌した。溶解したら、3.0360gのスクロースを秤量し、すすぎながら添加し、続いて溶解するまで攪拌した。1％(w/v)ポリソルベート20溶液1mLをヒスチジン/スクロース溶液にピペッティングし、完全な溶解を達成するまで攪拌した。溶液のpHを測定したところ、pH4.01であった。
257mgのBT5528を秤量し、ゆっくりと添加し、完全に溶解するまで90分間攪拌した。溶液のpHを測定し、1M 水酸化ナトリウムでpH6.49に調整し、続いて50mLメスフラスコに移し、WFIで容量にした。この溶液を元のビーカーに戻し、攪拌して混合した。この溶液を単一の0.22μm PESシリンジフィルターで濾過したところ、濾過液は可視粒子を含まない無色透明の溶液となった。
製剤3-ヒスチジン-pH7
約35mLのWFIを、磁気攪拌棒を含むビーカーに加えた。これに、262.0mgのヒスチジンをすすぎながら添加し、溶解するまで磁気によって攪拌した。溶解したら、3.0439gのスクロースを秤量し、すすぎながら添加し、溶解するまで攪拌した。1％(w/v)ポリソルベート20溶液1mLをヒスチジン/スクロース溶液にピペッティングし、完全な溶解を達成するまで攪拌した。溶液のpHを測定したところ、pH7.73であった。
257mgのBT5528を秤量し、ゆっくりと添加し、続いて完全に溶解するまで90分間撹拌した。溶液のpHを測定し、1M 塩酸でpH6.97に調整し、続いて50mLメスフラスコに移し、WFIで容量にした。この溶液を元のビーカーに戻し、攪拌して混合した。
この溶液を単一の0.22μm PESシリンジフィルターで濾過したところ、濾液は可視粒子を含まない無色透明の溶液であった。
5.2.凍結乾燥
調製した3つの製剤をそれぞれ10mL I型透明ガラスバイアルに5.3mLで充填した。
バイアルを凍結乾燥トレイの中央に装填し、表1-35のサイクルを用いて棚から直接凍結乾燥させた。サイクルの進行は、温度(棚/製品プローブ)および圧力(キャパシタンスマノメータ/ピラニ真空管)の差を基準にしてモニターし、一次乾燥および二次乾燥の終了点を決定した。
Figure 2023505756000036
5.3.結果
5.3.1.溶液の外観、pHおよび再構成時間
再構成するために、激しい振盪が必要であった。記録した時間の後、大きな塊は残っていなかったが、バイアル壁への材料の付着はまだ見られ、製品がバイアルに付着していることを示唆していた。完全な溶解を得るためにボルテックスミキシングが必要であった。
Figure 2023505756000037
Figure 2023505756000038
5.3.2.アッセイ(バイアル内容物)
Figure 2023505756000039
5.3.3.純度/関連物質
Figure 2023505756000040
Figure 2023505756000041
Figure 2023505756000042
5.3.4.考察および結論
3つの製剤の凍結乾燥プラグの外観は類似しており、これは、製品の外観に対するpHまたは配合の影響はないことを示している。凍結乾燥プラグの外観は、試験凍結乾燥ならびに最適化サイクル1および2の場合と同じであった。
プラグの再構成時間は、pH6で3分4秒、pH7.0で8分38秒と、pHによって長くなった。このことから、再構成溶液のpHが再構成時間に影響を与えることを示した。さらに、修正した配合工程(水酸化ナトリウムの使用を減少)により、以前の>11分と比較して、3つの製剤で<9分の時間で再構成時間を改善したように見えた。しかし、再構成を達成するにはボルテックス混合が依然として必要であり、バイアル表面に油性の油滴が目に見えた。したがって、バイアルの表面へのAPIの吸着に関与する要因は、pHと塩の存在だけではない。
3つの製剤の純度/関連物質は同様であった(表1-39～表1-41)。アッセイデータは、濾過中のBT5528の吸着性損失を示さなかった(表1-38)。pH7と比較してpH6でより高いアッセイ(バイアル内容物)が観察され、これは、凍結乾燥前のより低いpHがBT5528の回収を改善したことを示した。
pH7と比較して、pH6でのより短い再構成時間および改善した回収率にもかかわらず、油滴は依然として目に見え、その結果、代替糖およびより低い二次乾燥温度を評価して、最終製品の水分含有量を増加させるさらなる研究が行った。BT5528は水への溶解度が良好であると報告されており、再構成時間が長く、油滴形成は、凍結乾燥工程中のペプチドの過剰乾燥に起因し得ると仮定されていた。これにより、水和シェルが損失し、凍結乾燥製品中のペプチドの構造が変化し得る。
6.糖製剤スクリーン
凍結乾燥前の製剤のpHの変更により、再構成中にバイアル表面に油滴が形成されることは防止できなかったが、再構成時間を改善した(pH6がpH7より短かった)。
最適化サイクル3中に凍結乾燥した製剤の吸着性質のために、様々な糖および代替界面活性剤を有する5つの製剤を評価する。製剤の組成を表1～42に示す。
セクション5.3.4で論じたように、製品が過剰乾燥されてペプチド水和シェルが除去され得ると仮定されたため、糖/界面活性剤スクリーンに加えてより低い(0℃)二次乾燥時間も検討した。
Figure 2023505756000043
6.1.溶液の調製
各製剤は、別々に詳述する製剤5を除いて、同じ方法で調製した。約35mLのWFIを、磁気攪拌棒を含むビーカーに添加した。これに、約262mgのヒスチジンをすすぎながら添加し、溶解するまで磁気によって攪拌した。溶解したら、約3gのスクロース/トレハロース/デキストロース(それぞれ製剤1～2、3および4)を秤量し、すすぎながら添加し、溶解するまで撹拌した。1％(w/v)ポリソルベート20溶液1mLを、製剤1、3および4のヒスチジン/スクロース溶液に、そして1％(w/v)ポリソルベート80溶液1mLを製剤2にピペットした。溶液は、完全溶解を達成するまで撹拌した。各溶液のpHを測定した。
製剤5を以下のように調製した：約70mLのWFIを、磁気撹拌棒を含むビーカーに添加した。これに、524.9mgのヒスチジンをすすぎながら添加し、溶解するまで磁気によって攪拌した。溶解したら、6.0031gのスクロースを秤量し、すすぎながら添加し、続いて溶解するまで攪拌した。1％(w/v)ポリソルベート20溶液2mLをヒスチジン/スクロース溶液にピペットし、完全な溶解を達成するまで攪拌した。溶液のpHを測定した。
5つの製剤それぞれに、約257mgのBT5528を秤量し、ゆっくりと添加し、続いて完全に溶解するまで90分間攪拌した。添加/溶解中、BT5528はビーカーの側面に付着し、外観はゲル状であったことに留意すべきである。BT5528はピペットを用いてビーカー側面から除去され、APIが溶液中に完全に溶解することになった。溶液のpHを測定し、1M 水酸化ナトリウムでpH6.5に調整し、続いて50mL(製剤1～4)または100mL(製剤5)メスフラスコに移し、WFIで容量を調整した。この溶液を元のビーカーに戻し、攪拌して混合した。
各溶液を単一の0.22μm PESシリンジフィルターで濾過し、濾液は目に可視粒子を含まない無色透明の溶液であった。
Figure 2023505756000044
6.2.凍結乾燥
充填した溶液の容量とバイアルの型を表1-44に示す。
Figure 2023505756000045
Figure 2023505756000046
製剤1からの凍結乾燥プラグは、白色で、よく形成され、均質であり、収縮または崩壊の徴候はなかった。製剤2、4および5の凍結乾燥プラグは、白色で均質であったが、収縮の徴候があった。
製剤3(トレハロース)は、プラグの徹底的な崩壊およびメルトバックを示した。
トレハロースおよびデキストロース製剤の熱特性は、溶液を凍結乾燥する前に決定されなかったが、保守的なサイクルパラメータを使用した。文献に報告されているトレハロースの崩壊温度は約-28℃であり、これはスクロース(-31℃)およびデキストロース(-41℃)の両方について報告されているよりも高く、従って-25℃の一次乾燥棚温度が適していると予想された。製品プローブデータは、一次乾燥の初期段階中に製品の温度は約-38℃であり、したがって崩壊することはないと予想される。
デキストロースを含む製剤4は崩壊しなかったので、観察された崩壊の原因を決定することはできなかった。
6.3.結果
6.3.1.溶液の外観、pHおよび再構成時間
Figure 2023505756000047
最適化サイクル分析中に、吸着は全ての製剤について認められた。製剤1～4は、製剤が上部のガラスバイアルと再構成溶液に吸着するといった有意な吸着性質を有していた。製剤5(2mg/mL BT5528)は、製剤が溶液のわずかに上に吸着し、溶液内に吸着が認められていない場合に最良の結果をもたらした。再構成時間の変化は、製剤1の試験を通じて、分析操作のから派生する。これは、製剤1の激しい吸着性質により引き起こしたものである。4mg/mL溶液では、再構成用培地の添加後すぐにかき混ぜ、これにより溶液の上に激しい吸着性の広がりが生じた。2mg/mLではかき混ぜ前の沈降期間を設けたことにより、吸着は依然として認められたものの、より良好な再構成性能が得られた。1.3mg/mL溶液では、必要とするかき混ぜを最小限にするため、5分間の沈降期間を設けた。このような満足な沈降時間でも、吸着は改善されなかった。製剤2では、溶解するまで2分間の沈降期間、1分間のかき混ぜ、および最終的に1分間の沈降期間を進行した。製剤5は、製剤の中で最も優れた性能を示し、サイクル4の最適化では、この製剤の典型的な再構成法(再構成用培地の添加直後のかきまぜ)を実施する。
Figure 2023505756000048
6.3.2.サブ可視粒子
Figure 2023505756000049
10μmでの結果では、すべての製剤で膨張しており、製剤2および4は、再構成時に発生する吸着によるものである。これは、技術バッチバイアルと同じ洗浄工程を経ない凍結乾燥最適化バイアルと相まって、膨張した結果を生じた。25μmレベルで不合格となった製剤4を除き、すべての結果は薬局方仕様(容器あたり<6000粒子、10μmおよび容器あたり<6000粒子)に合格した。これは、観察された再構成性能および吸着性質の低さに起因するものである。
6.3.3.含水量
Figure 2023505756000050
膨張した製剤3を除き、全ての製剤は<5％の最適な水レベルを生じた。製剤3は、乾燥メタノール中の溶解が不良であるため、活発な混合および超音波処理を必要とした。溶解不良およびこのバッチに必要な増加した混合および超音波処理は、この製剤が水分含量に対してうまく機能しないことを示唆し、他の製剤と比較して膨張した傾向外れの結果で強調している。
6.3.4.アッセイおよび純度の結果
6.3.4.1.濾過前および濾過後
0.22μm PES膜シリンジフィルターをもちいて試料を濾過した。VWD検出による分析前の濾過操作中に問題は観察されなかった。
Figure 2023505756000051
Figure 2023505756000052
Figure 2023505756000053
回収率は低く、製剤3の傾向から外れており、水分および再構成の詳細から、この製剤は他の製剤と比較して性能が低いことが再認識された。トレハロースはこの製剤にのみ存在し、これはこの糖が低い回収率および傾向から外れたデータの根本原因であることを示す。
6.3.4.2.バイアルの内容物
Figure 2023505756000054
平均的な関連物質を表1-54に報告する。
Figure 2023505756000055
6.3.4.3.純度/関連物質
製剤1を3つの別々の容量のWFI(5.3mL、10.6mLおよび15.9mL)で再構成し、それぞれ4mg/mL、2mg/mLおよび1.3mg/mLの濃度を与えた。製剤2、3および4は5.3mLのWFI中で再構成して4mg/mLの濃度を与え、製剤5は10.6mLのWFI中で再構成して2mg/mLの濃度を与えた。アッセイおよび純度を評価し、理論値と比較した。
Figure 2023505756000056
Figure 2023505756000057
Figure 2023505756000058
製剤１から５について得られたアッセイ値は可変であり、これは初期の再構成データから予想することができ、BT5528はガラスバイアルへの吸着性質を有していたと結論付けた。製剤1(1.3mg/mL)および製剤5はそれぞれ、最も最適な回収％(99.2％および103.0％)を達成した。その他の回収％は、再構成工程からの製剤(API)の損失に起因し得るものである。粒子はガラスバイアルに吸着し、完全に溶解することができず、さらに混合し、約1時間の静置期間を設けた。1時間の静置時間は非現実的な操作であり、サイクルの最適化4では、静置時間をより短い時間枠(約5分)に短縮して再構成を促進する。
6.4.考察および結論
全ての製剤は吸着性質を有することが示し、従って、最適化サイクル3の分析試験を通じて、製品の変動および損失が見られた。製剤5は、評価した残りの4つの製剤よりも良好な性能を示した。製剤5は、他のの製剤(4mg/mL)と比較して、より低いAPI濃度(2mg/mL)を有していた。最適化サイクル4では、より低い濃度のAPIを評価することがお薦めされた。これにより、再構成性能をさらに評価でき、技術バッチに移行するための一貫した工程を達成することができる。また、技術バッチを製造する前に、アッセイ回収率が一貫して目標に達していることも重要であった。
7.凍結乾燥サイクル4
製剤の吸着性質のため、凍結乾燥中に追加の製剤を評価した。糖製剤スクリーニング中に得られたデータから、製剤1および5を、追加の製剤、表1-58で再評価した。ペプチドの過乾燥と水和シェルの損失の可能性を検討するために、糖製剤スクリーニング中により低い(0℃)二次乾燥温度を評価した。凍結乾燥最適化サイクル4では、0℃では再構成特性が改善されなかったため、以前に使用した二次乾燥温度25℃に戻した。
糖製剤スクリーニングからのデータでは、2mg/mLという低いBT5528濃度で改善された再構成プロファイルを生じた。この提示では吸着が減少したため、製剤5は最適化サイクル4のままで、製剤6に低濃度のポリソルベート20を導入して、ポリソルベート対BT5528 APIの比率を元のリード製剤(製剤1)と一致させた。製剤の組成を表1-58に示す。
Figure 2023505756000059
7.1.溶液の調製
各製剤は、同じ方法で調製した。約35mLまたは70mLのWFIを、磁気攪拌棒を含むビーカーに加えた。これに、261.9mgのヒスチジンを製剤1(50mL)に、524.9mgを製剤5に、524.7mgを製剤6(100mL)に、すすぎながら添加し、溶解するまで磁気によって撹拌した。溶解したら、3.0011gのスクロースを製剤1に、6.0010gを製剤5に、6.0064gを製剤6に添加し、続いて溶解するまで攪拌した。1％(w/v)ポリソルベート20溶液1mLを製剤1および製剤6のヒスチジン/ショ糖溶液に、2mLを製剤5にピペッティングした。溶液は、完全に溶解するまで撹拌した。各溶液のpHを測定した。
3つの製剤それぞれに、約257mgのBT5528を秤量し、ゆっくりと添加し、続いて完全に溶解するまで90分攪拌した。添加/溶解中に、製剤1ではAPIがビーカーの側面に付着したが、これは製剤5および6ではそれほど顕著ではなかった(2mg/mLに対して4mg/mL)ことに留意すべきである。ピペットを用いてビーカーの側面からAPIを除去したところ、APIは溶液中に完全に溶解した。溶液のpHを測定し、1M 水酸化ナトリウムでpH6.5に調整し、続いて50mL(製剤1)または100mL(製剤5および6)メスフラスコに移し、WFIで容量に調整した。この溶液を元のビーカーに戻し、攪拌して混合した。
各溶液を単一の0.22μm PESシリンジフィルターで濾過し、濾液は可視粒子を含まない無色透明の溶液であった。
7.2.凍結乾燥
調製した溶液を、5.3mL(製剤1)または10.6mL(製剤5および製剤6)のいずれかの容量で20mL I型透明ガラスバイアルに充填し、20mm凍結乾燥ストッパーで部分的にストッパーし、表1-59のサイクルを用いて棚から直接凍結乾燥させた。
トレイの中央に位置する各製剤の単一バイアルをプローブして、サイクルを通じて製品温度をモニターした。サイクルは、温度(製品プローブ/棚)および圧力(キャパシタンスマノメータ/ピラニ真空管)の差を基準にしてモニターし、一次乾燥および二次乾燥の終了点を決定した。
Figure 2023505756000060
7.3.結果
7.3.1.溶液の外観、pHおよび再構成時間
Figure 2023505756000061
前回と同様に、4mg/mLのBT5528を有する製剤1を完全に再構成することはより困難であった。製剤5および6は、より低いBT5528濃度のために再構成するのがより容易であった。製剤1は、製剤5および6よりも高い吸着を生じ、これは、減少した2mg/mLのBT5528濃度がより良い再構成を生じ、その後、非常に小さな粒子のみが吸着してより少ない吸着を生じることを強調する。
Figure 2023505756000062
7.3.2.サブ可視粒子
Figure 2023505756000063
10μmでの結果では、すべての製剤でわずかに膨張している。凍結乾燥最適化バイアルは、技術バッチバイアルと同じ洗浄工程を経なく、膨張した結果を生じ得る。
全ての結果では、薬局方仕様-バイアルあたりの直径≧10μmの粒子数≦6000、バイアルあたりの直径≧25μmの粒子数≦600を合格した。
7.3.3.含水量
凍結乾燥プラグの水分含有量は、溶媒としてメタノールを用いてKarl Fisher分析により決定した。二重バイアルからの単一試料をバッチごとに分析した(表1-63)。乾燥メタノールの添加中に、再構成の問題は認められなかった。
Figure 2023505756000064
全ての製剤では、<5％の最適な水レベルを生じた。乾燥メタノールの添加中に認められた再構成の問題はない。
7.3.4.アッセイおよび純度の結果
7.3.4.1.濾過前
0.22μm PES膜シリンジフィルターで試料を濾過した。濾過工程中に問題は観察されなかった。エラーとして、濾過後試料は、凍結乾燥前に採取されなかったため、理論濃度に対して結果が報告されている。
Figure 2023505756000065
Figure 2023505756000066
製剤5および6は、理論的な2mg/mL濃度に対して95％を超える回収率を有する。製剤1の回収率値は91％とかなり低く、これは、2mg/mLの提示がより堅牢である可能性が高いことを示唆している。
関連物質データは、3つの製剤すべてで一貫している。
7.3.5.バイアルの内容物
Figure 2023505756000067
平均的な関連物質を表1-67に報告する。
Figure 2023505756000068
7.3.6.再構成溶液
製剤1を5.3mLのWFIで再構成し、4mg/mLの濃度を与えた。製剤5および6を10.6mLのWFIで再構成して、2mg/mLの濃度を与えた。アッセイと純度を評価し、理論値と比較した。
Figure 2023505756000069
平均的な関連物質の結果を表1-69に示す。
Figure 2023505756000070
関連物質データは、3つの製剤すべてで一貫している。
表1-69のアッセイデータは、3つの製剤すべてについて目標よりも低い。それは、約78％の回収率を有する製剤1について特に悪化している。製剤1は、4mg/mLと最も高いBT5528濃度を有し、それ故、BT5528 APIの性質により完全に再構成するのが最も困難であった。この結果は、より低い2mg/mLのBT5528濃度がより好ましい提示であり、非GMP技術バッチで検討されるべきであることを示している。
7.4.結論
凍結乾燥の外観は、評価した3つの製剤すべてにおいて同様であり、白色、均質で、わずかに収縮があった。BT5528の濃度を変更し、充填量を多くしても製品の外観に影響を与えなかった。
2mg/mLの溶液(製剤5および6)の再構成時間は、4mg/mL溶液(製剤1)より1分超速かった。ポリソルベート20の2つの濃度0.1および0.2mg/mL(それぞれ製剤5および6)の再構成時間には差はなく、これはポリソルベート20が再構成時間に影響を与えなかったことを示している。
製剤1の水分含有量は、製剤5および6よりも低く、これは充填容量が半分であることから予想されることである。
凍結乾燥前および凍結乾燥後の純度/関連物質、または評価した3つの製剤間に差はなかった。しかしながら、回収率対理論値の割合に差があった。製剤1のアッセイ値は、製剤5および6(1.86および1.18mg/mL)の91～93％に比較して、理論値の77.8％であり、これは、より低いBT5528濃度で凍結乾燥製品の再構成を改善することを示した。
8.濾過の評価
GMP製造中には、バルク溶液はフィルター滅菌する(孔径0.22μm)。フィルターとの適合性、およびフィルター膜とハウジングへの吸着による材料の損失の可能性を検討すべきである。また、関連物質もモニターする。
知られている容量の製剤(表1-71)を、蠕動ポンプおよび白金硬化シリコーンチューブによって、知られている表面積を有する独自の「P」(医薬)グレードのフィルターカプセルを介して、単一型の膜；PES(ポリエーテルスルホン)(ミニクリンパックカプセルフィルター、KA02EKVP2S、表面積220cm2)に対するフィルター表面積あたりの吸着性損失を評価した。
フィルターの上流への背圧として測定される濾過の容易さを評価した。フィルター前の溶液中、および濾液の5つの連続した初期試料中、および最終バルク濾液中の活性濃度および関連物質をUPLCによって決定した。フィルター前および濾液試料のpHも測定した。
活性材料のフィルター膜またはカプセル表面への吸着は、それが引きおこる場合、通常飽和できる現象である。特定の型のフィルターカプセルの飽和を与える溶液の容量を特定すること、これがその特定のカプセルの初期廃棄容量となる。社内の取り決めとして、フィルター容量(mL)対総フィルター表面積(cm2)の比率が≧5であることを確保することである。
Figure 2023505756000071
8.1.溶液の調製
表1-70に詳述した製剤を、200mLスケールで調製した。約140mLのWFIを、磁気攪拌棒を含むビーカーに添加した。これに、約1.05gのヒスチジンをすすぎながら添加し、溶解するまで磁気によって攪拌した。溶解したら、12gのスクロースを秤量し、すすぎながら添加し、続いて溶解するまで攪拌した。1％(w/v)ポリソルベート20溶液2mLをヒスチジン/スクロース溶液にピペットし、完全な溶解を達成するまで攪拌した。
この溶液に、約514mgのBT5528を秤量してゆっくりと添加し、続いて完全に溶解するまで90分攪拌した。溶液のpHを測定し、1M 水酸化ナトリウムでpH6.5に調整し、続いて200mLメスフラスコに移し、WFIで容量に調整した。この溶液を元のビーカーに戻し、攪拌して混合した。
8.2.濾過
溶液の試料を濾過前に保持し、UPLC分析に使用し、残りは白金硬化シリコーンチューブおよび蠕動ポンプを用いて単一の0.22μm PESカプセルフィルターで濾過した。
以下のように、濾過工程を介してアリコートを収集した：
・濾過前
・0～10mL
・10～20mL
・20～30mL
・30～40mL
・40～50mL
・バルク濾過液
溶液は容易に濾過され、背圧は低く、得られた濾液は可視粒子を含まない無色透明の溶液であった。
このアリコートをアッセイおよび関連物質についてUPLCにより分析し、フィルター膜上でのアッセイの損失または膜との不適合を示す抽出物/浸出物があるかどうかを判断した。
8.3.結果
Figure 2023505756000072
Figure 2023505756000073
アッセイの低下は、PESフィルターを通過した試料の最初の0～10mL中で認められた。これは予想外のことではなく、このフィルター型には少量の廃棄容量が必要であることを示している。0～10mLを濾過した後、許容できる回収率を達成し、総不純物に有意な変化はなかった。
従って、PESフィルターは、BT5528医薬品の調製に適切である。
8.4.考察および結論
この溶液を、低い背圧でPESカプセルフィルターで濾過し、これはこの膜がこの溶液の濾過に適していることを示している。
採取したアリコットまたはバルク溶液の純度/関連物質データに変化はなく、これは、抽出物/浸出物が存在しないことを示している。
アッセイデータは、収集した最初のアリコット(0～10mL)において、回収率対理論値が88.5％の、BT5528濃度の最初の減少を示したが、10～20mLを濾過した後、アッセイは目標に戻った。これは、非GMP技術バッチ中に、フィルターあたり10mLの廃棄容量を採用すべきであると示している。
9.結論
本報告書は、非GMP技術バッチに進行するための安定な凍結乾燥製剤の開発に成功したことを証明したものである。
凍結乾燥サイクルの最適化を行ったが、バイアルの表面へのBT5528の吸着に関する問題および再構成に関する課題のために、より保守的なサイクルが非GMP技術バッチに進行した。
行った濾過評価では、濾過中にBT5528濃度の初期減少を示し、10mL後に目標に戻った。非GMP技術バッチ中に、フィルターあたり10mLの廃棄容量を採用する。
バイアル表面へのBT5528の吸着の原因を、別々の凍結乾燥サイクル中に検討した。多くの仮説では潜在的原因として最終製品中の高い塩化ナトリウム濃度、再構成製品のより塩基性のpH、シラン処理バイアル、およびペプチドの過度乾燥が提示された。これらの仮説のそれぞれについて、代替糖、界面活性剤、および低濃度のBT5528を用いた製剤スクリーニングと共に評価して、再構成特性を改善したかどうかを検討した。凍結乾燥前のより低いpHで再構成時間の改善が得られたが、油滴がバイアルの表面に残っていた。
塩化ナトリウム含有量の低減、シラン処理バイアルの使用、および低い二次乾燥温度(製品の最終水分含量を増加させる)は、再構成特性を改善しなかった。代替の糖または界面活性剤は改善を生じなかったが、BT5528濃度を4mg/mLから2mg/mLに下げると再構成特性を改善することに見出した。再構成時間が短縮され、ポスト再構成のバイアル表面に油滴が観察されなくなった。回収率対理論値は、4mg/mL製剤では常に目標値未満であったのに対し、2mg/mL製剤では目標値を達成した。
BT5528の表面吸着に関する検討の結果に基づき、顧客との協議後、2mg/mLの濃度のBT5528を有するリード製剤を、非GMP技術バッチへの進行のために選択した。
実施例2．EphA2発現に関連する進行性悪性腫瘍患者におけるBT5528の安全性、薬物動態および予備的臨床活性の第I/II相試験
2.1 目的
主要目的
漸増の主要目的(パートA-1およびA-2)は、以下の通りである。
・EphA2発現に関連する進行性固形腫瘍悪性腫瘍患者におけるBT5528の安全性および忍容性を、単独療法(パートA-1)およびニボルマブとの組み合わせ(パートA-2)として評価すること。
・単剤療法(パートA-1)およびニボルマブとの組み合わせ(パートA-2)として、BT5528の最大耐量(MTD)を定義し、観察された場合には推奨第II相用量(RP2D)を決定すること。
拡張試験(パートB-1およびB-2)の主要目的は以下の通りである。
・選択された固形腫瘍兆候を有する患者におけるBT5528の臨床活性を、単剤療法(パートB-1)およびニボルマブとの組み合わせ(パートB-2)としてRECIST 1.1を用いて評価すること。
副次的目的
本試験の漸増(パートA-1およびA-2)の副次的目的は、以下の通りである。
・単剤療法(パートA-1)およびニボルマブとの組み合わせ(パートA-2)として、EphA2-発現に関連する進行固形腫瘍悪性腫瘍患者におけるBT5528投与で達成される抗腫瘍活性の予備的シグナルを評価すること。
・BT5528の薬物動態(PK)パラメータを決定すること
・抗薬物抗体(ADA)開発の頻度を測定すること。
拡張(パートB-1およびB-2)試験の副次的目的は、以下の通りである。
・選択された固形腫瘍兆候患者におけるBT5528の単独療法(パートB-1)およびニボルマブとの組み合わせ(パートB-2)としての安全性および忍容性を評価すること。
・BT5528の薬物動態(PK)パラメータを決定すること
・抗薬物抗体(ADA)開発の発生率を測定すること。
2.2.試験の設計
本試験は、BT5528の単剤(パートA-1およびパートB-1)およびニボルマブとの組み合わせ(パートA-2およびパートB-2)としての、第I/II相、ヒトでの最初の非盲検用量漸増試験である。本試験は2つのパートに分かれている：パートAは用量エスカレーション試験、パートBは用量拡大試験である。
2.3.試験薬、用量および投与方法
BT5528は、上昇用量で、1時間にわたる注入として静脈内投与した。ラベルに従ってニボルマブを投与した。
2.4.包含基準-すべての患者：
試験調査に参加するためには、患者は以下の基準を満たす必要がある：
1.研究特有の操作、サンプリング、または分析の実施前に、患者または法的後見人によって署名され、日付が記入された、ローカルガイドラインに従った書面によるインフォームド・コンセント。
患者が本試験の任意の要素(例えば、腫瘍生検)への参加を拒否した場合、患者にペナルティまたは利益喪失はなく、本試験の他の側面から除外されることはない。
2.インフォームド・コンセントに署名した時点で、少なくとも18歳であること。
3.Eastern Cooperative Oncology Group(ECOG)のパフォーマンス・ステータス・スコアが0または1であること。
Figure 2023505756000074
4.患者は、固形腫瘍の応答評価基準(RECIST)v1.1に従って測定可能な疾患を有する必要があり、
5.以下の実験室データによって証明される、容認できる臓器機能：
-腎機能は次のとおりである：Cockcroft-Gaultの式または24時間の採尿によって測定した場合のクレアチニンクリアランス≧50mL/min
-総ビリルビン≦1.5×ULN(通常の上限)
-血清アルブミン≧2.5g/dL
-肝転移の存在下でのアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ(AST)≦2.5×ULNまたは≦5×ULN
-肝転移の存在下でのアラニンアミノトランスフェラーゼ(ALT)≦2.5×ULNまたは≦5×ULN
-国際正常率(INR)<1.3または≦施設のULN(抗凝血剤は許可されていない)
6.許容できる血液学的機能(BT5528の初回投与の4週間以内に赤血球または血小板輸血または増殖因子は許可されていない)：
-ヘモグロビン≧9g/dL
-好中球絶対数(ANC)≧1500細胞/mm3
-血小板数≧75,000細胞/mm3
7.妊娠可能な女性(WOCBP)の妊娠検査陰性(スクリーニング時の血清検査陰性、およびBT5528の初回投与前3日以内の尿または血清検査陰性。妊娠可能な女性パートナーを持つ男性患者および妊娠可能な女性患者は、試験参加中および試験薬最終投与後6ヶ月間、少なくともClinical Trial Facilitation Group(CTFG)が推奨する失敗率1％未満(https://www.hma.eu/fileadmin/dateien/Human_Medicines/01-About_HMA/Working_Groups/CTFG/2014_09_HMA_CTFG_Contraception.pdf)の保存的な高い避妊法(経口およびホルモン避妊薬可)に従うことが要求される。また、男性患者は、試験参加中、試験薬最終投与後6ヶ月間は精子提供を控えなければならず、女性はその間、授乳または卵子提供をしてはならない。
妊娠の可能性のない女性とは、以下のように定義される：
・適切な臨床プロファイル(例えば、適切な年齢、血管運動症状の既往歴)を有する自然(自然発症)無月経が12ヶ月間続いた場合、女性は閉経後で妊娠の可能性がないものとみなされる。
・永久避妊手術を受けている女性(例えば、卵管閉塞、子宮摘出、両側卵管切除術、両側卵巣摘出術など)。
・45歳以上で、ホルモン補充療法を使用しておらず、少なくとも12か月間の月経の完全停止を経験し、または卵胞刺激ホルモン(FSH)値>40mIU/mL、かつエストラジオール値<40pg/ mL(140pmol/L)の女性。
・45歳以上で、ホルモン補充療法を使用しており、ホルモン補充療法開始前に少なくとも1年間月経の完全停止を経験し、またはFSH>40mIU/mLおよびエストラジオール<40に基づいて閉経の証拠を記録した女性。
8.BT5528の初回投与日の前の9か月以内のアーカイブされた腫瘍サンプルの入手可能性、またはスクリーニング中に新鮮な腫瘍生検を提供する意欲。
9.治験責任医師の判断によると、BT5528処置開始後≧12週間の平均余命。
10.プロトコルと試験手順を遵守する意思と能力があること。
追加包含基準-パートAのみ
1.EphA2の高発現で歴史的に知られている進行性組織学的に確認された悪性固形腫瘍の患者(非小細胞肺癌(NSCLC)、卵巣癌、三重陰性乳癌(TNBC)、胃/上部胃腸(GI)、膵臓癌および尿路上皮癌)、以前の治療後に再発し、承認されたまたは標準的な処置オプションがないため、第I相試験の候補である。他の腫瘍の患者は、BT5528の初回投与日の前の9か月以内に採取した腫瘍組織でEphA2の高発現の証拠を提供する場合に登録され得る。SRCは、特定の腫瘍型におけるバイオマーカー、安全性、またはPKの評価を強化する必要があると思われる場合、エスカレーション中の任意の時点で、包含3.1.1にリストされているものの中から特定の腫瘍型の登録を要求することを決定し得る。
追加包含基準-パートB-1およびパートB-2 NSCLC単剤療法および組み合わせコホート
1.組織学的にNSCLCの腺癌サブタイプ(腺NSCLC)であることが確認された転移再発性疾患患者を対象とし、白金を用いた化学療法での進行またはその後の進行を含むすべての標準処置オプションを使い果たし、直近の治療ラインでのX線撮影の進行が証明された少なくとも1つの先行治療ラインに失敗していなければならない。EGFR、ALK、NTRK、ROS1、またはその他のゲノム腫瘍異常がある場合、ドライバー変異疾患の候補でないこと、または該当する場合は適切な治療を受けたことがあることが必要である。前の免疫療法がある場合、最終投与はBT5528の初回投与前の少なくとも28日でなければならない。
2.コホートあたり少なくとも6人の患者は、生検に適した腫瘍病変を少なくとも1つ持っている必要があり、BT5528の初回投与前およびサイクル1の任意の投与後に生検を受ける意思がある必要がある。
2.5.除外基準-すべての患者
以下の基準のいずれかを満たす患者は、試験エントリーから除外する：
1.試験処置の最初の投与前の14日以内の化学療法処置、他の抗癌処置、28日以内の処置または5つの半減期のいずれか短いもの。以前の毒性は、有害事象の共通用語基準(CTCAE)v 5.0に従ってグレード1に解決されている必要がある(グレード2以下でなければならない脱毛症を除く)。
2.BT5528の初回投与の4週間以内の実験的処置。
3.CYP3A4の強力な阻害剤または誘導剤、またはハーブベースまたは食品ベースを含むP-gpの強力な阻害剤による現在の処置。
4.臨床試験用医薬品またはモノメチルオーリスタチンE(MMAE)の成分のいずれかに対する既知の感受性。
5.有意な病状、生命に関わる病気、活動性の制御されていない感染症または臓器系の機能不全(腹水症、凝血異常、脳症など)、または研究者の意見では、患者の安全を損なう可能性がある、または消化器、皮膚および肺の併存疾患の考慮を含み、臨床的に有意な併存症がないことを確保するための胸部CTのスクリーニングのレビューを含む、試験アウトカムの完全性。
6.BT5528の初回投与の4週間以内の大手術(血管アクセスの配置を除く)であり、試験療法を開始する前に十分に回復している必要がある。
7.試験処置の30日以内の生ワクチンの受領
8.制御されていない症候性脳転移(ステロイドを使用せずに、または1日10mg未満またはその同程度のプレドニゾンまたは同等物の安定または減少用量で局所療法後に少なくとも4週間、安定な神経学的状態を有する必要があり、神経学的機能不全がない必要があるそれは神経学的および他のAEの評価を混乱させるであろう。)
9.BT5528の初回投与前に制御されていない高血圧(収縮期血圧[BP]≧139mmHg;拡張期BP≧89mmHg)患者(少なくとも3か月間安定な制御下にある必要がある)
10.試験の結果を混乱させ得る、患者の参加を妨げる可能性のある、または患者の意見に参加するのに患者の最善の利益ではない可能性のある状態、治療または検査室の異常の履歴または現在の証拠(これらに限定されない)：
-BT5528の初回投与前6ヶ月以内に脳血管事象(脳卒中または一過性脳虚血発作)、不安定狭心症、心筋梗塞、うっ血性心不全、New York Heart Association Class III～IVの症状が記録されている患者、または：
i.平均安静時補正QT間隔(QTcF)＞470msec
ii.心不全、低カリウム血症、先天性QT延長症候群、QT延長症候群の家族歴、40歳未満の原因不明の突然死、またはQT間隔を延長させることが知られている薬との組み合わせなど、QTc延長の危険性または不整脈性事象の危険性を増加させる何らかの要因
iii.安静時心電図(ECG)のリズム、伝導、形態における臨床的に重要な異常(治験責任医師の評価による)、例えば、完全左脚ブロック、第3度心ブロック
11.既知のヒト免疫不全ウイルス(HIV)または後天性免疫不全症候群(AIDS)
12.B型肝炎表面抗原および/または抗B型肝炎コア抗体が陽性の患者。ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)アッセイが陰性の患者は、適切な抗ウイルス療法が許可される。
13.C型肝炎ウイルス(HCV)抗体が陽性の場合、ウイルス量が陽性のアクティブなC型肝炎感染(抗体が陰性の場合、ウイルス量は適用されない)。C型肝炎感染の処置を受けた患者は、≧12週間の持続的なウイルス学的応答が記録されている場合に含めることができる。
14.BT5528の初回投与前の3か月以内の血栓塞栓性事象および/または出血性障害(例えば深部静脈血栓症[DVT]または肺塞栓症[PE])。
15.BT5528の初回投与前の3年以内の別の悪性腫瘍の病歴、または以前に診断された悪性腫瘍からの残存病変の証拠(治癒目的の基底細胞癌、皮膚の扁平上皮細胞、子宮頸部上皮内腫瘍/子宮頸部上皮内癌または表皮内黒色腫または非浸潤性乳管癌を除く)上皮内癌または黒色腫上皮内癌または非浸潤性乳管癌)。
16.BT5528の初回投与前の過去14日以内の全身性抗感染処置または発熱。
17.プロトコルおよび/またはプロトコルで概説されているフォローアップ操作への準拠を許可しない心理的、家族的、社会学的、または地理的条件。
追加の除外基準パートA-2およびB-2ニボルマブ併用コホート
1.免疫チェックポイント阻害剤に対する以前の不耐性
2.チェックポイント阻害剤療法に対する知られている過敏症
3.以前の臓器移植(同種異系を含む)
4.臨床的に関連する免疫不全の診断
5.治療を必要とする活動性全身感染症
6.1日10mg超えるプレドニゾン同等物または他の強力な免疫抑制剤
7.脱毛症または白斑症を除く自己免疫疾患の病歴
8.間質性肺疾患の病歴
2.6 相関試験
すべての患者は、EphA2の発現レベルの評価および追加の分子遺伝学的特徴づけ(すなわち、特定の体細胞突然変異の評価など)のために、アーカイブ腫瘍材料または新鮮な腫瘍生検を提供することが要求される。この材料は、組織ブロックまたは10～15枚のパラフィン浸漬した未染色スライドとして提供されるべきである。
BT5528の腫瘍内PK/薬力学的効果を検討するために、投与前および投与後の腫瘍生検を採取する。投与前および投与後の腫瘍生検は、すべての患者に対して任意であるが、パートBの患者の一部(コホートあたり6人)に対しては必須である。投与後の生検は、BT5528投与後4～36時間以内であれば、サイクル1のいずれの投与後にも必要である。詳細については、評価スケジュール(SOA)を参照のこと。
投与前および投与後の血液試料もまた、循環腫瘍DNA(ctDNA)における体細胞変異、ADAおよび薬理ゲノミクス分析などの薬力学的、応答、および処理抵抗性バイオマーカーを評価するために採取する。
2.7.統計方法
用量漸増(A-1およびA-2に別々に適用される)：本試験で実際に検討される用量レベルの数は、用量制限毒性(DLT)に基づく非忍容用量の決定によって決定する。MTDはDLTに基づいて定義される(セクション5を参照のこと)。その他の安全性データ、試験実施中に観察されたPKプロファイル、抗腫瘍活性のいずれかの傾向は、MTDを超えないRP2Dを決定するために使用する。
最初の2つの用量レベルでは、3+3計画を使用する。各用量レベルにおいて少なくとも3名の評価可能な患者を登録し、28日間評価した後、次の用量レベルへの漸増を行う。容量レベル1での忍容性の確認後、容量レベル2への100％を超えない漸増が許可される。処置サイクルは、SOAに従って連続的に行う。1人の患者がDLTを経験した場合、追加で3人の患者を同じ用量で処置する。次の容量レベルに進行する前に、少なくとも3人の患者が1サイクル(28日間)の処置を完了していることを確認する必要がある。詳細はセクション5に記載されている。
最初の2つの用量レベルでの忍容性の証拠に続いて、その後の全ての用量間隔の漸増は、2パラメータベイズロジスティック回帰モデル(two-parameter Bayesian logistic regression model)(BLRM)および過剰投与制御による漸増(escalation with overdose control, EWOC)原則を用いた一種類の継続的な再評価方法であり、EWOC原則は、次の高く漸増される用量レベルが、目標間隔(20％,33％)において、安全でないと見出される(DLT率≧33％)可能性が≦25％であるといった過剰投与基準を満たす用量のうち、最も高い事後確率でDLTが発生する用量を含む。BLRMを累積DLT/安全性データに適用し、その結果はSRCに提供され、これらのデータを検討したら、SRCにより正確な用量漸増に関する推奨を行う。推定される漸増スキームはセクション5に、詳細についてはAppendix F: Details and Operating Characteristics of the Dose Escalation Designに記載されている。
パートBの各コホートは、p0=0.175およびp1=0.35、0.05の片側アルファ、および80％の電力であるサイモン2段階設計を採用し、ここで、p0およびp1は、全体の応答率(ORR)についてのヌルおよび対立仮説である。採用された最初の14人の患者(≧21％ ORR)の中で3人またはそれ以上の患者が客観的奏効(objective response)を示した場合、さらに26人の患者に投与し、そうでなければ、コホートは停止する。
したがって、試験に採用された患者の最大数は152人(パートA-1から48人、パートA-2から24人、パートBの2つのコホートからそれぞれ40人)である
である。

Claims (17)

  1. BT5528またはその薬学的に許容できる塩、ならびに緩衝剤、充填剤または増量剤または結合剤、および界面活性剤から選択される薬学的に許容できる賦形剤または担体を含む医薬組成物。
  2. 緩衝剤が、ヒスチジン塩酸塩である、請求項1に記載の医薬組成物。
  3. 充填剤または増量剤または結合剤が、スクロースである、請求項1または2に記載の医薬組成物。
  4. 界面活性剤が、ポリソルベート-20である、請求項1～3のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  5. 等張性調整剤をさらに含む、請求項1～4のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  6. 等張性調整剤が、デキストロースを含む、請求項5に記載の医薬組成物。
  7. 凍結乾燥粉末形態の固体医薬組成物である、請求項1～6のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  8. 水をさらに含む液体医薬組成物である、請求項1～6のいずれか一項に記載の医薬組成物
  9. BT5528またはその薬学的に許容できる塩;
    BT5528またはその薬学的に許容できるもの1mgあたり約1.31～2.62mgのヒスチジン塩酸塩;
    BT5528またはその薬学的に許容できるもの1mgあたり約15～30mgのスクロース;および
    BT5528またはその薬学的に許容できるもの1mgあたり約0.05～0.1mgのポリソルベート20、を含む、請求項1～8のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  10. 約21.2mgのBT5528またはその薬学的に許容できる塩;
    BT5528またはその薬学的に許容できるもの1mgあたり約55.5mgのヒスチジン塩酸塩;
    BT5528またはその薬学的に許容できるもの1mgあたり約636mgのスクロース;および
    BT5528またはその薬学的に許容できるもの1mgあたり約1.06～2.12mgのポリソルベート20、を含む、請求項9に記載の医薬組成物。
  11. 約2～4mg/mLのBT5528またはその薬学的に許容できる塩;
    約5.25mg/mLのヒスチジン塩酸塩;
    約60mg/mLのスクロース;および
    約0.1～0.2mg/mLのポリソルベート20、を含む、請求項8に記載の医薬組成物。
  12. 患者においてEphA2-発現に関連する進行性固形癌悪性腫瘍を処置する方法であって、請求項1～11のいずれか一項に記載の医薬組成物を該患者に静脈内投与することを含む方法。
  13. EphA2-発現に関連する進行性固形癌悪性腫瘍が、非小細胞肺癌(NSCLC)、卵巣癌、トリプルネガティブ乳癌(TNBC)、胃/上部消化器(GI)癌、膵臓癌および尿路上皮癌から選択される、請求項12に記載の方法。
  14. 医薬組成物が、7日に1回投与される、請求項12または13に記載の方法。
  15. 医薬組成物が、約2.2mg/m2、4.4mg/m2、7.3mg/m2、11mg/m2、14.6mg/m2、または19.4mg/m2の用量で投与される、請求項12～14のいずれか一項に記載の方法。
  16. 医薬組成物が、約60分のIV注入を介して投与される、請求項12～15のいずれか一項に記載の方法。
  17. ニボルマブを投与することをさらに含む、請求項12～15のいずれか一項に記載の方法。
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