EA046145B1 - Фармацевтические композиции, содержащие конъюгат, содержащий токсин и бициклический пептид, и способы их применения - Google Patents
Фармацевтические композиции, содержащие конъюгат, содержащий токсин и бициклический пептид, и способы их применения Download PDFInfo
- Publication number
- EA046145B1 EA046145B1 EA202291583 EA046145B1 EA 046145 B1 EA046145 B1 EA 046145B1 EA 202291583 EA202291583 EA 202291583 EA 046145 B1 EA046145 B1 EA 046145B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- approximately
- pharmaceutical composition
- composition
- solution
- pharmaceutically acceptable
- Prior art date
Links
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims description 73
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 29
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title description 22
- 239000003053 toxin Substances 0.000 title description 3
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 title description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 61
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 60
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 60
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 58
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 57
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims description 54
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims description 54
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims description 54
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 claims description 54
- QZNNVYOVQUKYSC-JEDNCBNOSA-N (2s)-2-amino-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoic acid;hydron;chloride Chemical compound Cl.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 QZNNVYOVQUKYSC-JEDNCBNOSA-N 0.000 claims description 39
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 27
- 108010055196 EphA2 Receptor Proteins 0.000 claims description 16
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 16
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 15
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 15
- 229960003301 nivolumab Drugs 0.000 claims description 14
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 13
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 claims description 10
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 claims description 9
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 claims description 9
- 238000001802 infusion Methods 0.000 claims description 8
- 208000003721 Triple Negative Breast Neoplasms Diseases 0.000 claims description 6
- 208000037844 advanced solid tumor Diseases 0.000 claims description 6
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 claims description 6
- 208000022679 triple-negative breast carcinoma Diseases 0.000 claims description 6
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 206010044412 transitional cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 102000051096 EphA2 Receptor Human genes 0.000 claims 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 269
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 176
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 95
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 94
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 91
- 239000000047 product Substances 0.000 description 74
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 65
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 61
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 50
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 49
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 42
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 39
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 39
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 37
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 31
- 230000008859 change Effects 0.000 description 29
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 28
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 25
- 239000012905 visible particle Substances 0.000 description 24
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 23
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 18
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 18
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 18
- 239000004695 Polyether sulfone Substances 0.000 description 17
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 17
- 229920006393 polyether sulfone Polymers 0.000 description 17
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 17
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 17
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 15
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 15
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 15
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 15
- 102100030340 Ephrin type-A receptor 2 Human genes 0.000 description 14
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 14
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 14
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 13
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 13
- 239000012906 subvisible particle Substances 0.000 description 13
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 12
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 12
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 11
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 11
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 11
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 9
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 9
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 9
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 9
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 9
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 8
- 229940126534 drug product Drugs 0.000 description 8
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 8
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 8
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 description 8
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 7
- 239000002585 base Substances 0.000 description 7
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 7
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 7
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 7
- 231100000371 dose-limiting toxicity Toxicity 0.000 description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 6
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 6
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 238000000113 differential scanning calorimetry Methods 0.000 description 6
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 6
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 6
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 6
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 description 5
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 5
- -1 digluconate Chemical compound 0.000 description 5
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 5
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 4
- 238000013461 design Methods 0.000 description 4
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 4
- 231100000682 maximum tolerated dose Toxicity 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N Arginine Chemical compound OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000012673 Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 description 3
- 108010079345 Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 description 3
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 3
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 238000012042 bayesian logistic regression model Methods 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 125000002619 bicyclic group Chemical group 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 229940028334 follicle stimulating hormone Drugs 0.000 description 3
- 238000002657 hormone replacement therapy Methods 0.000 description 3
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 3
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 3
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 125000000185 sucrose group Chemical group 0.000 description 3
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 17β-estradiol Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 0.000 description 2
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 2
- 206010069754 Acquired gene mutation Diseases 0.000 description 2
- 102100036475 Alanine aminotransferase 1 Human genes 0.000 description 2
- 108010082126 Alanine transaminase Proteins 0.000 description 2
- 201000004384 Alopecia Diseases 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 108010003415 Aspartate Aminotransferases Proteins 0.000 description 2
- 102000004625 Aspartate Aminotransferases Human genes 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010051055 Deep vein thrombosis Diseases 0.000 description 2
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 2
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 2
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 2
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 2
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- 229940076838 Immune checkpoint inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 238000003109 Karl Fischer titration Methods 0.000 description 2
- 206010027457 Metastases to liver Diseases 0.000 description 2
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 2
- 102000056189 Neutrophil collagenases Human genes 0.000 description 2
- 108030001564 Neutrophil collagenases Proteins 0.000 description 2
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000010378 Pulmonary Embolism Diseases 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010059993 Vancomycin Proteins 0.000 description 2
- 206010047249 Venous thrombosis Diseases 0.000 description 2
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 2
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 description 2
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 2
- 231100000360 alopecia Toxicity 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 2
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 2
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 2
- MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N dodecyl hydrogen sulfate Chemical compound CCCCCCCCCCCCOS(O)(=O)=O MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940043264 dodecyl sulfate Drugs 0.000 description 2
- 229960005309 estradiol Drugs 0.000 description 2
- 229930182833 estradiol Natural products 0.000 description 2
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 2
- 239000012632 extractable Substances 0.000 description 2
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 2
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 2
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 2
- 230000005661 hydrophobic surface Effects 0.000 description 2
- 239000012274 immune-checkpoint protein inhibitor Substances 0.000 description 2
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 239000012633 leachable Substances 0.000 description 2
- 238000012792 lyophilization process Methods 0.000 description 2
- 150000002678 macrocyclic compounds Chemical class 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 2
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 230000005906 menstruation Effects 0.000 description 2
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 2
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 2
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 2
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical compound OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 2
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 2
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 2
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 2
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 2
- XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N prednisone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 2
- 229960004618 prednisone Drugs 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 231100000279 safety data Toxicity 0.000 description 2
- FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N sarcosine Chemical group C[NH2+]CC([O-])=O FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 230000037439 somatic mutation Effects 0.000 description 2
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 2
- 238000011272 standard treatment Methods 0.000 description 2
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 2
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N succinic acid Chemical compound OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N vancomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC)[C@H]1C[C@](C)(N)[C@H](O)[C@H](C)O1 MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N 0.000 description 2
- 229960003165 vancomycin Drugs 0.000 description 2
- MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N vancomycin Natural products O1C(C(=C2)Cl)=CC=C2C(O)C(C(NC(C2=CC(O)=CC(O)=C2C=2C(O)=CC=C3C=2)C(O)=O)=O)NC(=O)C3NC(=O)C2NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(C)C)NC)C(O)C(C=C3Cl)=CC=C3OC3=CC2=CC1=C3OC1OC(CO)C(O)C(O)C1OC1CC(C)(N)C(O)C(C)O1 MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 2
- LSPHULWDVZXLIL-UHFFFAOYSA-N (+/-)-Camphoric acid Chemical compound CC1(C)C(C(O)=O)CCC1(C)C(O)=O LSPHULWDVZXLIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DEQANNDTNATYII-OULOTJBUSA-N (4r,7s,10s,13r,16s,19r)-10-(4-aminobutyl)-19-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-16-benzyl-n-[(2r,3r)-1,3-dihydroxybutan-2-yl]-7-[(1r)-1-hydroxyethyl]-13-(1h-indol-3-ylmethyl)-6,9,12,15,18-pentaoxo-1,2-dithia-5,8,11,14,17-pentazacycloicosane-4-carboxa Chemical compound C([C@@H](N)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H](NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC1=O)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 DEQANNDTNATYII-OULOTJBUSA-N 0.000 description 1
- FABVRSFEBCDJLC-UHFFFAOYSA-N 1,2,3-tris(bromomethyl)benzene Chemical compound BrCC1=CC=CC(CBr)=C1CBr FABVRSFEBCDJLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940080296 2-naphthalenesulfonate Drugs 0.000 description 1
- BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 3-azaniumyl-2-hydroxypropanoate Chemical compound NCC(O)C(O)=O BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XMIIGOLPHOKFCH-UHFFFAOYSA-M 3-phenylpropionate Chemical compound [O-]C(=O)CCC1=CC=CC=C1 XMIIGOLPHOKFCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000000736 Amenorrhea Diseases 0.000 description 1
- 206010001928 Amenorrhoea Diseases 0.000 description 1
- 206010002383 Angina Pectoris Diseases 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 206010003671 Atrioventricular Block Diseases 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 206010004146 Basal cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000014644 Brain disease Diseases 0.000 description 1
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M Butyrate Chemical compound CCCC([O-])=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Natural products CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 206010007559 Cardiac failure congestive Diseases 0.000 description 1
- 206010008263 Cervical dysplasia Diseases 0.000 description 1
- 241000282994 Cervidae Species 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 1
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 1
- 208000000130 Cytochrome P-450 CYP3A Inducers Diseases 0.000 description 1
- 208000009011 Cytochrome P-450 CYP3A Inhibitors Diseases 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N D-OH-Asp Natural products OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N D-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M D-gluconate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M 0.000 description 1
- 108010092160 Dactinomycin Proteins 0.000 description 1
- YZCKVEUIGOORGS-OUBTZVSYSA-N Deuterium Chemical compound [2H] YZCKVEUIGOORGS-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 1
- 208000005189 Embolism Diseases 0.000 description 1
- 208000032274 Encephalopathy Diseases 0.000 description 1
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M Formate Chemical compound [O-]C=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 1
- SCCPDJAQCXWPTF-VKHMYHEASA-N Gly-Asp Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O SCCPDJAQCXWPTF-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 208000010271 Heart Block Diseases 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 208000037319 Hepatitis infectious Diseases 0.000 description 1
- 101000686031 Homo sapiens Proto-oncogene tyrosine-protein kinase ROS Proteins 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 208000019025 Hypokalemia Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 102000037984 Inhibitory immune checkpoint proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091008026 Inhibitory immune checkpoint proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000029523 Interstitial Lung disease Diseases 0.000 description 1
- QUOGESRFPZDMMT-UHFFFAOYSA-N L-Homoarginine Natural products OC(=O)C(N)CCCCNC(N)=N QUOGESRFPZDMMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- QUOGESRFPZDMMT-YFKPBYRVSA-N L-homoarginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCCNC(N)=N QUOGESRFPZDMMT-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010025652 Malignant melanoma in situ Diseases 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-L Malonate Chemical compound [O-]C(=O)CC([O-])=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102000002274 Matrix Metalloproteinases Human genes 0.000 description 1
- 108010000684 Matrix Metalloproteinases Proteins 0.000 description 1
- 206010059282 Metastases to central nervous system Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010053775 Nisin Proteins 0.000 description 1
- NVNLLIYOARQCIX-MSHCCFNRSA-N Nisin Chemical compound N1C(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)C(=C)NC(=O)[C@@H]([C@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](NC(=O)C(=C/C)/NC(=O)[C@H](N)[C@H](C)CC)CSC[C@@H]1C(=O)N[C@@H]1C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]2C(NCC(=O)N[C@H](C)C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@H](CS[C@@H]2C)C(=O)N[C@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](CCSC)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]2C(N[C@H](C)C(=O)N[C@@H]3C(=O)N[C@@H](C(N[C@H](CC=4NC=NC=4)C(=O)N[C@H](CS[C@@H]3C)C(=O)N[C@H](CO)C(=O)N[C@H]([C@H](C)CC)C(=O)N[C@H](CC=3NC=NC=3)C(=O)N[C@H](C(C)C)C(=O)NC(=C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(O)=O)=O)CS[C@@H]2C)=O)=O)CS[C@@H]1C NVNLLIYOARQCIX-MSHCCFNRSA-N 0.000 description 1
- 108010016076 Octreotide Proteins 0.000 description 1
- 229920012266 Poly(ether sulfone) PES Polymers 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M Propionate Chemical compound CCC([O-])=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102100023347 Proto-oncogene tyrosine-protein kinase ROS Human genes 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 108010077895 Sarcosine Proteins 0.000 description 1
- 229940124639 Selective inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010042434 Sudden death Diseases 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-M Thiocyanate anion Chemical compound [S-]C#N ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000008050 Total Bilirubin Reagent Methods 0.000 description 1
- 208000032109 Transient ischaemic attack Diseases 0.000 description 1
- YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N Tritium Chemical compound [3H] YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 102000003990 Urokinase-type plasminogen activator Human genes 0.000 description 1
- 108090000435 Urokinase-type plasminogen activator Proteins 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010047642 Vitiligo Diseases 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 229930183665 actinomycin Natural products 0.000 description 1
- WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-L adipate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCCCC([O-])=O WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 238000005054 agglomeration Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 description 1
- 150000001342 alkaline earth metals Chemical class 0.000 description 1
- 150000008055 alkyl aryl sulfonates Chemical class 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000008052 alkyl sulfonates Chemical class 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N alpha-glycerophosphate Natural products OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000540 amenorrhea Toxicity 0.000 description 1
- 238000012863 analytical testing Methods 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 229940124650 anti-cancer therapies Drugs 0.000 description 1
- 230000002924 anti-infective effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 238000011319 anticancer therapy Methods 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 206010003119 arrhythmia Diseases 0.000 description 1
- 230000006793 arrhythmia Effects 0.000 description 1
- 229940072107 ascorbate Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- XMIIGOLPHOKFCH-UHFFFAOYSA-N beta-phenylpropanoic acid Natural products OC(=O)CCC1=CC=CC=C1 XMIIGOLPHOKFCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 208000015294 blood coagulation disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- FATUQANACHZLRT-KMRXSBRUSA-L calcium glucoheptonate Chemical compound [Ca+2].OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)C([O-])=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)C([O-])=O FATUQANACHZLRT-KMRXSBRUSA-L 0.000 description 1
- MIOPJNTWMNEORI-UHFFFAOYSA-N camphorsulfonic acid Chemical compound C1CC2(CS(O)(=O)=O)C(=O)CC1C2(C)C MIOPJNTWMNEORI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007942 carboxylates Chemical class 0.000 description 1
- 208000026106 cerebrovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000007951 cervical intraepithelial neoplasia Diseases 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000002576 chemokine receptor CXCR4 antagonist Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 210000000038 chest Anatomy 0.000 description 1
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 238000002591 computed tomography Methods 0.000 description 1
- 229940124558 contraceptive agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003433 contraceptive agent Substances 0.000 description 1
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 description 1
- 229940121384 cxc chemokine receptor type 4 (cxcr4) antagonist Drugs 0.000 description 1
- BALGDZWGNCXXES-UHFFFAOYSA-N cyclopentane;propanoic acid Chemical compound CCC(O)=O.C1CCCC1 BALGDZWGNCXXES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182912 cyclosporin Natural products 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 229910052805 deuterium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000003205 diastolic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001938 differential scanning calorimetry curve Methods 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-M dodecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCC([O-])=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000037437 driver mutation Effects 0.000 description 1
- 208000028715 ductal breast carcinoma in situ Diseases 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M ethanesulfonate Chemical compound CCS([O-])(=O)=O CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000005496 eutectics Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 208000015700 familial long QT syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000010419 fine particle Substances 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000012458 free base Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009477 glass transition Effects 0.000 description 1
- 229940050410 gluconate Drugs 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 208000031169 hemorrhagic disease Diseases 0.000 description 1
- 208000005252 hepatitis A Diseases 0.000 description 1
- 208000010710 hepatitis C virus infection Diseases 0.000 description 1
- MNWFXJYAOYHMED-UHFFFAOYSA-N heptanoic acid Chemical compound CCCCCCC(O)=O MNWFXJYAOYHMED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-M hexadecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N hexanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical compound I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-N hydrogen thiocyanate Natural products SC#N ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-M hydrogensulfate Chemical compound OS([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000009802 hysterectomy Methods 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001861 immunosuppressant effect Effects 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 1
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- SUMDYPCJJOFFON-UHFFFAOYSA-N isethionic acid Chemical compound OCCS(O)(=O)=O SUMDYPCJJOFFON-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 229940001447 lactate Drugs 0.000 description 1
- 229940099584 lactobionate Drugs 0.000 description 1
- JYTUSYBCFIZPBE-AMTLMPIISA-N lactobionic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O JYTUSYBCFIZPBE-AMTLMPIISA-N 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 229940070765 laurate Drugs 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000004731 long QT syndrome Diseases 0.000 description 1
- 239000012931 lyophilized formulation Substances 0.000 description 1
- 238000005710 macrocyclization reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229940049920 malate Drugs 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 230000007257 malfunction Effects 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N malic acid Chemical compound OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- 230000009245 menopause Effects 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KVBGVZZKJNLNJU-UHFFFAOYSA-M naphthalene-2-sulfonate Chemical compound C1=CC=CC2=CC(S(=O)(=O)[O-])=CC=C21 KVBGVZZKJNLNJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000009251 neurologic dysfunction Effects 0.000 description 1
- 208000015015 neurological dysfunction Diseases 0.000 description 1
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 1
- 239000004309 nisin Substances 0.000 description 1
- 235000010297 nisin Nutrition 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002700 octreotide Drugs 0.000 description 1
- 229940049964 oleate Drugs 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 238000009806 oophorectomy Methods 0.000 description 1
- 210000004789 organ system Anatomy 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 description 1
- 239000006174 pH buffer Substances 0.000 description 1
- JRKICGRDRMAZLK-UHFFFAOYSA-L peroxydisulfate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)OOS([O-])(=O)=O JRKICGRDRMAZLK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 230000002974 pharmacogenomic effect Effects 0.000 description 1
- 229950010765 pivalate Drugs 0.000 description 1
- IUGYQRQAERSCNH-UHFFFAOYSA-N pivalic acid Chemical compound CC(C)(C)C(O)=O IUGYQRQAERSCNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011518 platinum-based chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000003910 polypeptide antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 208000024896 potassium deficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000009597 pregnancy test Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 238000010926 purge Methods 0.000 description 1
- 125000001453 quaternary ammonium group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 239000013074 reference sample Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000033764 rhythmic process Effects 0.000 description 1
- 238000007142 ring opening reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 229940043230 sarcosine Drugs 0.000 description 1
- 230000000276 sedentary effect Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 1
- AWUCVROLDVIAJX-GSVOUGTGSA-N sn-glycerol 3-phosphate Chemical compound OC[C@@H](O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 1
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000012430 stability testing Methods 0.000 description 1
- 238000012066 statistical methodology Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001384 succinic acid Substances 0.000 description 1
- 125000002653 sulfanylmethyl group Chemical group [H]SC([H])([H])[*] 0.000 description 1
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 230000035488 systolic blood pressure Effects 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000010875 transient cerebral ischemia Diseases 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 229910052722 tritium Inorganic materials 0.000 description 1
- ZDPHROOEEOARMN-UHFFFAOYSA-N undecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCC(O)=O ZDPHROOEEOARMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229940070710 valerate Drugs 0.000 description 1
- NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N valeric acid Chemical compound CCCCC(O)=O NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 230000001457 vasomotor Effects 0.000 description 1
- 230000009265 virologic response Effects 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 230000002747 voluntary effect Effects 0.000 description 1
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 description 1
Description
Перекрестная ссылка на родственные заявки
Изобретение претендует на приоритет предварительной заявки на патент США, серийный номер 62/940966, поданной 27 ноября 2019 г., содержание которой в полном объеме включено в настоящее описание в качестве ссылки.
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим конъюгат, содержащий токсин и бициклический пептид (Bicycle) или его фармацевтически приемлемые соли. Настоящее изобретение также относится к применению этих фармацевтических композиций для предупреждения или лечения заболевания, нарушения или состояния, характеризующегося сверхэкспрессией EphA2 в пораженной ткани.
Предпосылки создания изобретения
Циклические пептиды обладают способностью связываться с высокой аффинностью и требуемой специфичностью с белками-мишенями, и поэтому, они являются привлекательным классом молекул для разработки терапевтических препаратов. Фактически, несколько циклических пептидов уже с успехом используются в клинических условиях, например, антибактериальный пептид ванкомицин, иммунодепрессантное лекарственное средство циклоспорин или противораковое лекарственное средство октреотид (Driggers et al., Nat Rev Drug Discov 7 (7), 2008, 608-624). Высокая способность к связыванию является результатом относительно большой поверхности взаимодействия, которая образуется между пептидом и мишенью, а также уменьшенной конформационной гибкостью циклических структур. Как правило, макроциклы связываются с поверхностями в несколько сотен квадратных ангстремов, как например, циклический пептид CVX15, являющийся антагонистом CXCR4 (400 A2) (Wu et al., Science 330, 2007, 1066-1071), циклический пептид с мотивом Arg-Gly-Asp, который связывается с интегрином aVb3 (355 A2) (Xiong et al., Science 296 (5565), 2002, 151-155), или циклический пептидный ингибитор упаин-1, который связывается с активатором плазминогена урокиназного типа (603 A2) (Zhao et al., J Struct Biol 160 (1), 2007, 1-10).
Благодаря своей циклической конфигурации, пептидные макроциклы являются менее гибкими чем линейные пептиды, что приводит к меньшей потери энтропии при связывании с мишенями, и в результате, к более высокой аффинности связывания. Пониженная гибкость приводит также к фиксации специфичных для мишени конформаций, повышая специфичность связывания по сравнению с линейными пептидами. Это явление продемонстрировано на примере эффективного и селективного ингибитора матриксной металлопротеиназы 8, (ММР-8), который утрачивал свою селективность по сравнению с другими ММР после размыкания его кольца (Cherney et al., J Med Chem 41 (11), 1998, 1749-1751). Благоприятные связующие свойства, достигаемые за счет макроциклизации, являются еще более выраженными у мультициклических пептидов, имеющих более одного пептидного кольца, например, у ванкомицина, низина и актиномицина.
Различные группы исследователей ранее осуществляли связывание полипептидов с помощью остатков цистеина с синтетической молекулярной структурой (Kemp and McNamara J. Org. Chem, 1985; Timmerman et al., ChemBioChem, 2005). Meloen с соавторами применяли трис(бромметил)бензол и родственные молекулы для быстрой и количественной циклизации множества пептидных петель на синтетических каркасах для структурной имитации белковой поверхности (Timmerman et al., ChemBioChem, 2005). Описаны методы получения лекарственных соединений-кандидатов, с помощью которых создавали указанные соединения, связывая содержащие цистеин полипептиды с молекулярным каркасом, таким как, например ТАТА (1,1',1-(1,3,5-триазинан-1,3,5-триил)трипроп-2-ен-1-он), (Heinis et al., Angew Chem, Int Ed. 53, 2014, 1602-1606).
Разработаны комбинаторные подходы, основанные на применении фагового дисплея, для создания и скрининга больших библиотек бициклических пептидов для представляющих интерес целей (Heinis et al., Nat Chem Biol 5 (7), 2009, 502-507 и WO 2009/098450). В целом, метод состоял в следующем: комбинаторные библиотеки линейных пептидов, содержащих три остатка цистеина и две области из шести произвольных аминокислот (Cys-(Xaa)6-Cys-(Xaa)6-Cys), экспонировали на фаге и осуществляли циклизацию посредством ковалентного связывания боковых цепей цистеина с низкомолекулярным каркасом.
Краткое изложение сущности изобретения
Одним из объектов настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая ВТ5528 или его фармацевтически приемлемую соль, гидрохлорид гистидина, сахарозу и полисорбат-20. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, фармацевтическая композиция, содержащая ВТ5528 или его фармацевтически приемлемую соль, гидрохлорид гистидина, сахарозу и полисорбат-20, представляет собой лиофилизированный порошок.
Другим объектом настоящего изобретения является способ лечения распостраненных (запущенных) форм злокачественных новообразований, ассоциированных с экспрессией EphA2 у пациента, который включает введение пациенту фармацевтической композиции, как здесь описано. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, предложен способ лечения распостраненных форм злокачественных новообразований, ассоциированных с экспрессией EphA2 у пациента, который включает введение пациенту еженедельно с помощью IV-инфузии фармацевтического препарата, содержащего ВТ5528
- 1 046145 или его фармацевтически приемлемую соль, гистидин, сахарозу, полисорбат-20 и воду.
Подробное описание некоторых вариантов осуществления настоящего изобретения
1. Общее описание некоторых вариантов осуществления настоящего изобретения.
Были разработаны стабильные лиофилизированные препараты для ВТ5528, которые могут быть восстановлены для введения. В процессе разработки было установлено, что ВТ5528 адсорбировался на поверхности флаконов, и что восстановление оказалось сложной задачей. Причину адсорбции ВТ5528 на поверхности флаконов исследовали во время осуществления отдельных циклов лиофилизации.
В качестве возможных причин рассматривали ряд гипотез, таких как концентрация хлорида натрия в конечном продукте, более щелочное значение рН восстановленного продукта, применение силанизированных флаконов и пересушивание пептида. Каждую из этих гипотез оценивали наряду со скринингом составов, содержащих альтернативные сахара, поверхностно-активное вещество и ВТ5528 в более низких концентрациях, для выяснения того, улучшало ли это характеристики восстановления. Улучшение времени восстановления было достигнуто при более низком значении рН до лиофилизации, однако на поверхности флакона оставались маслянистые капли. Снижение содержания хлорида натрия, применение силанизированных флаконов и снижение температуры вторичной сушки (для увеличения конечного содержания влаги в продукте) не улучшали характеристики восстановления. Применение альтернативных Сахаров или поверхностно-активного вещества не приводили к улучшению характеристик.
При создании изобретения неожиданно было установлено, что снижение концентрации ВТ5528 с 4 до 2 мг/мл улучшало характеристики восстановления. Время восстановления снижалось и после восстановления не было обнаружено никаких маслянистых капель на поверхности флаконов. Извлечение по сравнению с теоретическим было на уровне заданного показателя в составе с концентрацией 2 мг/мл по сравнению с составами с концентрацией 4 мг/мл, для которых оно стабильно было ниже заданного показателя.
Таким образом, одним из объектов настоящего изобретения является твердая фармацевтическая композиция, содержащая ВТ5528 или его фармацевтически приемлемую соль, полученная путем удаления растворителя(ей), например, с помощью лиофилизации, из жидкого состава, в котором концентрация ВТ5528 или его фармацевтически приемлемой соли составляет примерно 2-4 мг/мл.
Другим объектом настоящего изобретения являются способы применения фармацевтической композиции, как здесь описано, для лечения распостраненной солидной злокачественной опухоли, ассоциированной с экспрессией EphA2.
2. Соединения и определения.
В контексте настоящего изобретения понятие ВТ5528 обозначает конъюгат, содержащий токсин и бициклический пептид (Bicycle), который имеет представленную ниже структуру, в которой молекулярный каркас представляет собой 1,1',1-(1,3,5-триазинан-1,3,5-триил)трипроп-2-ен-1-он (ТАТА), а пептидый лиганд содержит аминокислотную последовательность: (e-Ala)-Sar10-A(HArg)DCi(HyP)LVNPLCiiLHP(D-Asp)W(HArg)Ciii (SEQ ID NO: 1), в которой Sar обозначает саркозин, HArg обозначает гомоаргинин и НуР обозначает гидроксипролин.
В контексте настоящего изобретения понятие фармацевтически приемлемая соль относится к таким солям, которые в рамках принятой медицинской практики пригодны для использования в контакте с тканями людей и низших животных без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергической реакции и т.п. и характеризуются приемлемым соотношением пользы/риска. Фармацевтически приемлемые соли хорошо известны в данной области. Например, S.M. Berge с соавторами подробно описали фармацевтически приемлемые соли в J. Pharmaceutical Sciences, 66, 1977, 1-19, публикация которой включена в настоящее описание в качестве ссылки. Фармацевтически приемлемые соли соединений настоящего изобретения включают соли, полученные из приемлемых неорганических и органических кислот и оснований. Примерами фармацевтически приемлемых нетоксичных кислотно-аддитивных солей являются соли аминогруппы, образованные с неорганическими кислотами, такими как соляная кислота, бромистоводородная кислота, фосфорная кислота, серная кислота и перхлорная кислота, или с органическими кислотами, такими как уксусная кислота, щавелевая кислота, малеиновая кислота, винная кислота, лимонная кислота, янтарная кислота или малоновая кислота, или с использованием других методов, известных в данной области, таких как ионный обмен. Другие фармацевтически приемлемые соли включают такие соли, как адипат, альгинат, аскорбат, аспартат, сульфонат, бензоат, бисульфат, борат, бутират, камфорат, камфорсульфонат, цитрат, циклопентанпропионат, диглюконат, додецилсульфат, этансульфонат, формиат, фумарат, глюкогептонат, глицерофосфат, глюконат, гемисульфат, гептаноат, гексаноат, гидриодид, 2гидроксиэтансульфонат, лактобионат, лактат, лаурат, лаурилсульфат, малат, малеат, малонат, метансульфонат, 2-нафталинсульфонат, никотинат, нитрат, олеат, оксалат, пальмитат, памоат, пектинат, персульфат, 3-фенилпропионат, фосфат, пивалат, пропионат, стеарат, сукцинат, сульфат, тартрат, тиоцианат, п-толуолсульфонат, ундеканоат, валерат и т.п.
- 2 046145
BT5528
Соли, полученные из соответствующих оснований, включают соли щелочных металлов, щелочноземельных металлов, аммония и N+(C1-4алкила)4. Репрезентативные соли щелочных или щелочноземельных металлов включат соли натрия, лития, калия, кальция, магния и т.п. Кроме того, фармацевтически приемлемые соли включают, при необходимости, нетоксичные катионы аммония, четвертичного аммония и амина, образованные с использованием противоионов, таких как галогенид, гидроксид, карбоксилат, сульфат, фосфат, нитрат, (низш.)алкилсульфонат и арилсульфонат. Следует понимать, что формы в виде соли подпадают под объем настоящего изобретения, и ссылки на пептидные лиганды включают формы в виде соли указанных лигандов.
Соли соглсно настоящему изобретению можно синтезировать из родительского соединения, которое содержит основный или кислотный остаток, общепринятыми химическими методами, такими как методы, описанные в Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P. Heinrich Stahl (Editor), Camille G. Wermuth (Editor), ISBN: 3-90639-026-8, Hardcover, 388 pages, August 2002. Как правило, указанные соли можно получать путем взаимодействия форм в виде свободной кислоты или свободного основания указанных соединений с соответствующим основанием или соответствующей кислотой в воде или в органическом растворителе или в смеси этих двух растворителей.
В контексте настоящего изобретения понятие примерно должно означать нахождение в пределах 10% от заданной величины или заданного диапазона. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, понятие примерно относится к значению, находящемуся в пределах 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1% от данной величины.
Если не указано иное, то подразумевается также, что структуры, представленные в описании, включают все изомерные (например, энантиомерные, диастереомерные и геометрические (или конформационные)) формы структуры; например, конфигурации R и S для каждого асимметричного центра, изомеры двойной связи Z и Е и конформационные изомеры Z и Е. Таким образом, одиночные стереохимические изомеры, а также энантиомерные, диастереомерные и геометрические (или конформационные) смеси соединений, представленных в настоящем описании, подпадают под объем изобретения. Если не указано иное, то все таутомерные формы соединений, предлагаемых в изобретении, подпадают под объем изобретения. Кроме того, если не указано иное, то подразумевается также, что структуры, представленные в описании, включают соединения, которые отличаются только присутствием одного или нескольких изотопно обогащенных атомов. Например, соединения, имеющие представленные в настоящем описании структуры, включающие замену водорода дейтерием или тритием, или замену углерода 13С- или 14Собогащенным углеродом, подпадают под объем настоящего изобретения. Такие соединения можно применять согласно настоящему изобретению, например, в качестве аналитических инструментов, в качестве зондов в биологических анализах или в качестве терапевтических агентов.
3. Фармацевтические композиции.
Одним из объектов настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая ВТ5528 или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый эксципиент или носитель. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, фармацевтическая композиция содержит примерно 21,2 мг ВТ5528 или его фармацевтически приемлемой соли.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, фармацевтическая композиция представляет собой твердую фармацевтическую композицию. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, твердая фармацевтическая композиция представляет собой порошок. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, фармацевтическая композиция представляет собой лиофилизированный порошок. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, твердая фармацевтическая композиция представляет собой гранулы.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, фармацевтическая композиция представляет собой жидкую фармацевтическую композицию. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, жидкая фармацевтическая композиция представляет собой фармацевтический препарат (состав) в приемлемом наполнителе или растворителе. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, приемлемый наполнитель или растворитель выбирают из стерильной воды,
- 3 046145 раствора Рингера, U.S.P. и изотонического раствора хлорида натрия. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, приемлемый носитель или растворитель представляет собой стерильную воду. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, приемлемый наполнитель или растворитель представляет собой стерильную среду для инъекций. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, жидкая фармацевтическая композиция содержит примерно 2-4 мг/мл ВТ5528 или его фармацевтически приемлемой соли.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, фармацевтически приемлемый эксципиент или носитель содержит буферный агент, где буферный агент представляет собой гидрохлорид гистидина.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, буферный агент находится в количестве, позволяющем регулировать рН фармацевтической композиции на уровне примерно 6-8. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, буферный агент представляет собой гидрохлорид гистидина в количестве примерно 1,31-2,62 мг на 1 мг ВТ5528 или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, гидрохлорид гистидина присутствует в количестве примерно 1,31 или 2,62 мг на 1 мг ВТ5528 или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, жидкая фармацевтическая композиция содержит гидрохлорид гистидина в концентрации примерно 5,24 мг/мл.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, жидкая фармацевтическая композиция имеет значение рН примерно 6-8. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, жидкая фармацевтическая композиция имеет значение рН примерно 6,0, 6,1, 6,2, 6,3, 6,4, 6,5, 6,6, 6,7, 6,8, 6,9, 7,0, 7,1, 7,2, 7,3, 7,4, 7,5, 7,6, 7,7, 7,8, 7,9 или 8,0. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения жидкая фармацевтическая композиция имеет значение рН примерно 6,5 или 7,0.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, фармацевтически приемлемый эксципиент или носитель представляет собой инертный фармацевтически приемлемый эксципиент или носитель. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, инертный фармацевтически приемлемый эксципиент или носитель содержит наполнитель или сухой разбавитель. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, наполнитель или сухой разбавитель представляет собой сахарозу. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, инертный фармацевтически приемлемый эксципиент или носитель представляет собой связующее вещество. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, связующее вещество представляет собой сахарозуВ некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, инертный фармацевтически приемлемый эксципиент или носитель представляет собой сахарозу.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, инертный фармацевтически приемлемый эксципиент или носитель (например, сахароза) присутствует в количестве примерно 10-35 мг на 1 мг ВТ5528 или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, инертный фармацевтически приемлемый эксципиент или носитель (например, сахароза) присутствует в количестве примерно 15 или 30 мг на 1 мг ВТ5528 или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, жидкая фармацевтическая композиция содержит инертный фармацевтически приемлемый эксципиент или носитель (например, сахарозу) в концентрации примерно 60 мг/мл.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, фармацевтически приемлемый эксципиент или носитель содержит поверхностно-активное вещество. Поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат-20. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, поверхностно-активное вещество (например, полисорбат-20) присутствует в количестве примерно 0,01-0,15 мг на 1 мг ВТ5528 или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, поверхностно-активное вещество (например, полисорбат-20) присутствует в количестве примерно 0,05 или 0,1 мг на 1 мг ВТ5528 или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, жидкая фармацевтическая композиция содержит поверхностно-активное вещество (например, полисорбат-20) в концентрации примерно 0,1 или 0,2 мг/мл.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, фармацевтически приемлемый эксципиент или носитель содержит агент регулирующий изотоничность.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, предложена фармацевтическая композиция, содержащая ВТ5528 или его фармацевтически приемлемую соль, гидрохлорид гистидина, сахарозу и полисорбат-20. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, фармацевтическая композиция содержит:
ВТ5528 или его фармацевтически приемлемую соль;
примерно 1,31-2,62 мг гидрохлорида гистидина на 1 мг ВТ5528 или его фармацевтически приемлемой соли;
примерно 15-30 мг сахарозы на 1 мг ВТ5528 или его фармацевтически приемлемой соли; и примерно 0,05-0,1 мг полисорбат-20 на 1 мг ВТ5528 или его фармацевтически приемлемой соли.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, предложена твердая фармацевти
- 4 046145 ческая композиция, которая представляет собой лиофилизированный порошок, содержащий:
примерно 21,2 мг ВТ5528 или его фармацевтически приемлемой соли;
примерно 55,5 мг гидрохлорида гистидина на 1 мг ВТ5528 или его фармацевтически приемлемой соли;
примерно 636 мг сахарозы на 1 мг ВТ5528 или его фармацевтически приемлемой соли; и примерно 1,06-2,12 мг полисорбат-20 на 1 мг ВТ5528 или его фармацевтически приемлемой соли.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, предложена твердая фармацевтическая композиция, которая представляет собой лиофилизированный порошок, содержащий:
примерно 21,2 мг ВТ5528 или его фармацевтически приемлемой соли;
примерно 27,8 мг гидрохлорида гистидина на 1 мг ВТ5528 или его фармацевтически приемлемой соли;
примерно 318 мг сахарозы на 1 мг ВТ5528 или его фармацевтически приемлемой соли; и примерно 1,06 мг полисорбат-20 на 1 мг ВТ5528 или его фармацевтически приемлемой соли.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, предложена жидкая фармацевтическая композиция, содержащая:
примерно 2-4 мг/мл ВТ5528 или его фармацевтически приемлемой соли;
примерно 5,25 мг/мл гидрохлорида гистидина;
примерно 60 мг/мл сахарозы; и примерно 0,1-0,2 мг/мл полисорбат-20.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, предложена жидкая фармацевтическая композиция, которую получают путем растворения твердой фармацевтической композиции в воде. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, предложена жидкая фармацевтическая композиция, которую получают путем восстановления твердой фармацевтической композиции в воде с последующим растворением с использованием 5%-ной декстрозы. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, жидкую фармацевтическую композицию разводят в IV-пакете с 5% декстрозы для IV-введения. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, предложена твердая фармацевтическая композиция, содержащая ВТ5528 или его фармацевтически приемлемую соль, гидрохлорид гистидина, сахарозу, полисорбат-20. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, предложена жидкая фармацевтическая композиция, содержащая ВТ5528 или его фармацевтически приемлемую соль, гидрохлорид гистидина, сахарозу, полисорбат-20, и воду. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, компоненты фармацевтических композиций присутствуют в указанных выше количествах, концентрациях и соотношениях.
4. Применение фармацевтических композиций.
Одним из объектов настоящего изобретения является способ или применение для лечения распостраненной солидной злокачественной опухоли, ассоциированной с экспрессией EphA2 у пациента, включающий/включающее введение пациенту фармацевтической композиции, как здесь описано. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, распостраненную солидную злокачественную опухоль, ассоциированную с экспрессией EphA2, выбирают из немелкоклеточного рака легкого (NSCLC), рака яичников, трижды негативного рака молочной железы (TNBC), рака желудка/верхних отделов желудочно-кишечного тракта (GI), рака поджелудочной железы и уротелиального рака. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, распостраненная солидная злокачественная опухоль, ассоциированная с экспрессией EphA2, представляет собой характерный для аденокарциномы подтип NSCLC (адено-NSCLC).
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения, способ включает введение пациенту внутривенно фармацевтической композиции, как здесь описано. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, фармацевтическую композицию вводят путем IV-инъекции. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, фармацевтическую композицию вводят путем IVинфузии. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, продолжительность IVинфузии фармацевтической композиции составляет примерно 30-90 мин. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, продолжительность IV-инфузии фармацевтической композиции составляет примерно 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85 или 90 мин. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, продолжительность IV-инфузии фармацевтической композиции составляет примерно 60 мин.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, фармацевтическую композицию вводят пациенту один раз каждые 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дней. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, фармацевтическую композицию вводят пациенту еженедельно.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, фармацевтическую композицию вводят в дозе примерно 1-27 мг/м2. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, фармацевтическую композицию вводят в дозе примерно 2-20 мг/м2. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, фармацевтическую композицию вводят в дозе примерно 2,2, 4,4, 7,3, 11, 14,6 или 19,4 мг/м2. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, фармацевтическую композицию вводят в дозе примерно 1,5-3,5, 3,5-5,5, 6,5-8,5, 10-12, 13,5-15,5 или 18,5-20,5 мг/м2. В неко
- 5 046145 торых вариантах осуществления настоящего изобретения, фармацевтическую композицию вводят в дозе примерно 1-10 или 10-20 мг/м2. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, фармацевтическую композицию вводят в дозе примерно 21, 22, 23, 24, 25, 26 или 27 мг/м2.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, предложено совместное применение фармацевтической композиции, предлагаемой в настоящем изобретении, и ниволумаба для лечения распостраненной солидной злокачественной опухоли, ассоциированной с экспрессией EphA2. Ниволумаб можно применять в соответствии с инструкцией, с которой можно ознакомиться на сайте https://www. opdivohcp.com/dosing/dosing-schedules, содержание которой в полном объеме включено в настоящее описание в качестве ссылки. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, ниволумаб вводят в количестве 240 мг каждые 2 недели. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, ниволумаб вводят в количестве 480 мг каждые 4 недели. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, ниволумаб вводят в виде 30-минутной IV-инфузии.
Примеры
Приведенные ниже Примеры предназначены для иллюстрации настоящего изобретения и не должны рассматриваться как ограничивающие его объем. Если не указано иное, то все аминокислоты использовали в L-конфигурациях.
Пример 1. Получение лиофилизированного лекарственного продукта ВТ5528.
Сначала проводили оценку процесса, а затем тепловую оценку состава-кандидата. Проводили оценку лиофилизации с изучением связанной с ней стабильности, после чего осуществляли оптимизацию цикла лиофилизации, дополнительный скрининг состава и оценку фильтрации.
1. Оценка процесса получения ВТ5528 и стабильности после замораживания/оттаивания.
Регистрировала внешний вид, рН, плотность основного раствора и осуществляли анализ ВТ5528 /сопутствующих субстанций. Дополнительные образцы подвергали трем циклам замораживания (20°С)/оттаивания, оценивали внешний вид, рН, UPLC (сверхэффективная жидкостная хроматография) и определяли количество субвидимых частиц (MFI, микротоковая визуализация) после каждого цикла.
1.1 Приготовление раствора.
Отвешивали 14 г WFI (вода для инъекций) (70% мас./об.) в небольшой стеклянный стакан, отвешивали и добавляли в него с отмывкой 104 мг гистидина-HCl, затем перемешивали до растворения. После растворения отвешивали 1,2 г сахарозы, после чего добавляли с перемешиванием с помощью магнитной мешалки до растворения. Измеряли рН раствора и доводили до требуемого значения (рН 7,7-8,1). Начальное значение рН составляло 3,42, и его доводили до рН 8,07 с использованием 0,1 М раствора NaOH.
Приготавливали 1% (мас./об.) раствор полисорбата-20 путем растворения 0,5 г полисорбата-20 в 50 мл WFI. Добавляли при перемешивании 400 мкл 1% (мас./об.) раствора полисорбата-20 к раствору гистидина/сахарозы. Отвешивали 86,8 мг ВТ5528 и медленно добавляли к раствору с постоянным перемешиванием. Полное растворение API (активный фармацевтический ингредиент) происходило примерно через 90 мин.
Измеряли рН раствора и доводили до заданного значения (рН 6,8-7,2). После добавления API рН составляло 7,79, и его доводили до рН 7,19 с помощью 0,1 М раствора HCl. Раствор переносили в 20миллилитровую мерную колбу и доводили до конечного объема с помощью WFI. Раствор фильтровали через один шприцевой фильтр с мембраной из полиэфирсульфона (PES) с размером пор 0,22 мкм. Конечный раствор представлял собой прозрачный бесцветный раствор, не содержащий никаких видимых частиц. Измеренная плотность конечного раствора составляла 1,025 г/см3. Образец до и после фильтрации передавали для аналитического анализа с помощью ЖХВР. Оставшуюся часть основного раствора вносили по 2 мл в стеклянные флаконы вместимость 2 мл и подвергали трем циклам замораживания/оттаивания.
1.2. Результаты.
1.2.1. Внешний вид и рН.
Не обнаружено существенного изменения внешнего вида или рН в процессе трех циклов замораживания/оттаивания.
Таблица 1-1
Внешний вид раствора и рН
| Момент времени/хранение | Внешний вид | pH |
| До фильтрации | Прозрачный бесцветный раствор без видимых частиц | 7,2 |
| После фильтрации | Прозрачный бесцветный раствор без видимых частиц | N/A |
| Цикл 1 замораживанияоттаивания | Прозрачный бесцветный раствор без видимых частиц | 7,3 |
| Цикл 2 замораживанияоттаивания | Прозрачный бесцветный раствор без видимых частиц | 7,3 |
| Цикл 3 замораживанияоттаивания | Прозрачный бесцветный раствор без видимых частиц | 7,3 |
1.2.2. Анализ (действующего вещества) и сопутствующих субстанций.
- 6 046145
Результаты продемонстрировали отсутствие изменений при анализе действующего вещества или сопутствующих субстанций до и после фильтрации.
Не обнаружено также изменения при анализе действующего вещества или сопутствующих субстанций при оценке при замораживании/оттаивании.
Таблица 1-2
Анализ действующего вещества
| Момент времени/хранение | Содержание во флаконе 1 (мг/мл) | Содержание во флаконе 2 (мг/мл) | Среднее содержание (мг/мл) | Извлеч./теор.1 (%) | Извлеч./до фильтрации2(%) |
| До фильтрации | 3.8259 | 3.8287 | 3.83 | 95.68 | - |
| После фильтрации | 3.8249 | 3.8305 | 3.83 | 95.69 | 100.01 |
| Цикл 1 замор./оттаив. | 3.8189 | 3.8102 | 3.81 | 95.36 | 99.67 |
| Цикл 2 замор./оттаив. | 3.8021 | 3.8316 | 3.82 | 95.42 | 99.73 |
| Цикл 3 замор./оттаив._ | 3.8297 | 3.8241 | 3.83 | 95.67 | 99.99 |
% от теоретического значения 4 мг/мл 2В % от результата до фильтрации
Таблица 1-3
Сопутствующие субстанции
| RRT | Образец и количество (% площади) | ||||
| До фильтрации | После фильтрации | Цикл замор./отгаив. 1 | Цикл замор./оттаив. 2 | Цикл замор./оттаив. 3 | |
| 0.97 | 0.12 | 0.13 | 0.11 | 0.11 | 0.11 |
| 0.99 | 2.20 | 2.18 | 2.18 | 2.19 | 2.16 |
| 1.03 | 0.98 | 0.97 | 0.97 | 0.94 | 1.00 |
| 1.05 | 0.21 | 0.22 | 0.17 | 0.16 | 0.20 |
| 1.12 | 0.10 | <LOQ | <LOQ | 0.10 | <LOQ |
| 1.15 | 0.12 | 0.12 | 0.14 | 0.13 | 0.13 |
| Всего1 | 3.73 | 3.62 | 3.57 | 3.63 | 3.60 |
Суммарное содержание сопутствующих субстанций >0,10%
1.3. Обсуждение и заключение.
Отсутствие снижения количества действующего вещества в процессе фильтрации свидетельствует об отсутствии адсорбции API на PES-мембране. Данные анализа действующего вещества и сопутствующих субстанций свидетельствуют об отсутствии изменения после того, как флаконы подвергали трем циклам замораживания/оттаивания, это демонстрирует, что API является стабильным при осуществлении циклов замораживания/оттаивания.
2. Стадия 3 - оценка тепловых характеристик.
Тепловые характеристики композиции ВТ5528 оценивали с помощью микроскопии сублимационной сушки (FDM) и дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC) для идентификации температуры коллапса или любых тепловых явлений, которые могут влиять на разработку цикла лиофилизации.
В табл. 1-4 дано подробное описание композиции. Путем оценки тепловых характеристик композиций действующего вещества и плацебо можно определять параметры цикла сублимационной сушки.
Таблица 1-4
Состав композиции
| Компонент | Концентрация (мг/мл) |
| ВТ5528 | 4,0 |
| Гистидин-НС1 | 5,24 |
| Сахароза | 60,0 |
| Полисорбат-20 | 0,2 |
| Гидроксид натрия | q.s. до заданного pH |
| WFI | q.s. до 1 мл |
2.1. Микроскопия сублимационной сушки (FDM)
Для определения температуры коллапса композиции применяли FDM. Для уточнения установочных параметров цикла FDM анализировали несколько образцов. Каждый анализ осуществляли с использованием 10-кратных объективных линз со светлым полем в проходящем свете. Основные данные, полученные в каждом проведенном анализе, приведены в табл. 1-5.
Таблица 1-5
Данные о тепловых характеристиках, полученные с помощью FDM
| Анализ | Замерзание (°C) | Начало коллапса (°C) | Коллапс (°C) |
| 1 | -29,5 | -32,7 | -30,2 |
| 2 | -28,2 | -32,5 | -29,3 |
| 3 | -28,2 | -31,7 | -30,2 |
| 4 | -28,2 | -31,9 | -30,4 |
В качестве первых признаков коллапса образца были отмечены тонкие изменения в структуре образца, т.е. слабо выраженный фронт высыхания, после чего следовало появление ярких пятен. Эти визуальные наблюдения интерпретировали как начало коллапса. Дальнейшее нарушение структуры проявля
- 7 046145 лось в виде развития более крупных ярких областей, которые распространялись по образцу. Затем эти области образовывали разрыв, что приводило к общему коллапсу. Такое развитие взаимосвязанных ярких областей/разрывов интерпретировали как коллапс продукта.
2.2. Дифференциальная сканирующая калориметрия (DSC).
Помимо FDM, композицию анализировали с помощью DSC, используя параметры, указанные в табл. 1-6. В табл. 1-7 представлено обобщение основных исследуемых параметров.
Таблица 1-6
Заданные параметры для DSC без отжига
| Параметр | Заданные значения |
| Цикл | С 25°С до -50°С со скоростью 1°С/мин, выдерживание при -50°С в течение 10 мин, с -50°С до 25°С со скоростью 1°С/мин |
| Тигель | Герметически закрытый алюминиевый, 100 мкл |
| Эталонный образец | Пустой тигель |
| Параметр | Заданные значения |
| Продувочный газ | N2, 60 мл/мин |
| Осушенный газ | N2, 170 мл/мин |
Таблица 1-7
Основные параметры, исследуемые на основе DSC-термограмм
| Исследуемый параметр | Температура (°C) | |
| Начало замерзания | -9,69 | -18,74 |
| Стеклование/эвтектический расплав | Не обнаружено | Не обнаружено |
| Начало плавления | -13,21 | -10,72 |
С помощью DSC обнаружены крупные, четко определенные экзотермы замерзания и эндотермы плавления. Не выявлено других заметных тепловых явлений.
2.2.1. Обсуждение и заключение.
Данные, полученные с помощью FDM и DSC, применяли для разработки цикла лиофилизации. Эти температуры представляли собой температуру замерзания и максимально допустимую температуру продукта во время первичной сушки. Температура коллапса композиции составляла примерно -30°С, эта температура должна определять температуру первичной сушки в цикле лиофилизации.
На основе результатов тепловой оценки сделан вывод о том, что в цикле лиофилизации требуется поддержание температуры продукта на 5-10°С ниже температуры коллапса во время первичной сушки, которая в данном случае составляла приблизительно -30°С.
3. Стадия 5 - пробная (тестовая) лиофилизация.
Тепловые характеристики композиции ВТ5528 определяли на стадии 4, обозначенной как Оценка тепловых характеристик. Полученные на стадии 4 данные о тепловых характеристиках, свидетельствуют о том, что температура коллапса составляла примерно -30°С.
На основе этих данных был разработан пробный цикл лиофилизации, подробно описанный в таблице 1-8, для поддержания температуры продукта на 5-10°С ниже температуры коллапса. Подготавливали достаточное количество флаконов для проведения исследования стабильности лиофилизированного продукта, подробно описанного в табл. 1-9, и оценки стабильности при восстановлении. Для заполнения 2-миллилитровых прозрачных стеклянных флаконов типа I использовали 1 мл раствора с концентрацией 4 мг/мл. Лиофилизированный продукт следует восстанавливать с помощью 1 мл WFI для достижения заданной концентрации 4 мг/мл. Область, непосредственно окружающую флаконы с действующим веществом, заполняли флаконами, содержащими 1 мл буферного раствора, для более точной имитации условий полностью заполненной камеры.
3.1. Приготовление раствора.
Добавляли ~80 мл WFI (конечный объем ~70% (мас./об.)) в стеклянный стакан, в который добавляли 628,8 мг гистидина-HCl и перемешивали с помощью магнитной мешалки до растворения. После растворения отвешивали 7,2 г сахарозы и добавляли при перемешивании в раствор, содержащий WFI/гистидин, до растворения. Измеряли рН раствора и доводили до заданного значения (рН 7,7-8,1) с помощью 0,1М гидроксида натрия. Начальное значение рН составляло 3,93, и его доводили до рН 7,74.
Приготавливали 1% (мас./об.) раствор полисорбата-20 путем растворения 0,5 г полисорбата-20 в 50 мл WFI. 2,4 мл 1%-ного (мас./об.) раствора полисорбата-20 добавляли при перемешивании к раствору гистидина/сахарозы. Отвешивали 615 мг ВТ5528 и медленно добавляли к раствору при постоянном перемешивании. Полное растворение ВТ5528 происходило примерно через 120 мин. После перемешивания в течение 90 мин обнаружено прилипание API и ко дну, и к стенкам стакана. После перемешивания в течение еще 30 мин получали бесцветный раствор без видимых частиц.
Измеряли рН раствора и доводили до заданного значения (рН 6,8-7,2) с помощью 0,1 М соляной кислоты. Значение рН составляло 7,83 после добавления API и его доводили до рН 7,10 с помощью 0,1М раствора HCl. Раствор переносили в 100-миллилитровую и 20-миллилитровую мерную колбу, никогда не заполняя полностью, и доводили до конечного объема с помощью WFI, после чего возвращали в исходный стакан и перемешивали с получением смеси.
Образец раствора отбирали перед фильтрацией, в остальную часть фильтровали через шприцевой
- 8 046145 фильтр с PES-мембраной с размером пор 0,22 мкм, после фильтрации образец отбирали для анализа. Фильтрат представлял собой прозрачный бесцветный раствор без видимых частиц.
3.2. Лиофилизация.
Раствором объемом 1 мл заполняли 2-миллилитровые флаконы и неплотно закупоривали с помощью 13-милиметровых пробок, применяемых при сублимационной сушки. Один флакон, расположенный в центре и спереди, отбирали для мониторинга температуры продукта на протяжении всего цикла. Область вокруг флаконов заполняли флаконами объемом по 2 мл, содержащими 1 мл раствора плацебо. Флаконы лиофилизировали, используя цикл, указанный в табл. 1-8.
Мониторинг хода цикла осуществляли на основе определения температуры на полке и температуры продукта (датчики термопары) и давления в камере, измеренного манометром Пирани и емкостным манометром.
Таблица 1-8
Цикл лиофилизации
| Стадия | Стадия цикла | Температура (°C) | Давление (мТорр) | Время (мин) | Скорость изменения температуры (°С/мин) |
| 1 | Загрузка | 5 | N/A | N/A | N/A |
| 2 | Выдерживание | 5 | N/A | 30 | N/A |
| 3 | Изменение температуры | -40 | N/A | 180 | 0,25 |
| 4 | Замораживание | -40 | N/A | 180 | N/A |
| 5 | Дополнительное замораживание | -40 | 100 | 30 | N/A |
| 6 | Изменение температуры | -25 | 100 | 75 | 0,20 |
| 7 | Первичная сушка | -25 | 100 | 3701 | N/A |
| 8 | Изменение температуры | 25 | 20 | 250 | 0,20 |
| 9 | Вторичная сушка | 25 | 20 | 866 | N/A |
| 10 | Завершение | Флаконы запечатывали при 722,00 мТорр в атмосфере (чистого)азота | |||
| Общая продолжительность цикла —89 ч (—3,7 дня) |
Лиофилизированная спрессованная масса имела белый цвет, она оказалась хорошо сформированной, без признаков коллапса. Наблюдалась усадка относительно высоты заполнения, однако не было никаких признаков того, что это повлияло на структуру лиофилизированной спрессованной массы.
Лиофилизированный продукт помещали на хранение для изучения стабильности и тестировали в течение 1 месяца (согласно табл. 1-9) при ускоренном хранении при 25°С/относительной влажности (RH) 60%. У лиофилизированного продукта оценивали внешний вид, содержание влаги, а также анализировали содержание действующего вещества и сопутствующих субстанций с помощью UPLC. Восстановленный продукт оценивали на основе времени восстановления, внешнего вида раствора, рН и субвидимых частиц (только при Т = 0).
Таблица 1-9
Оценка высушенного продукта
| Тест | Т=0 (недели) | Т=1 (недели) | Т=2 (недели) | Т=4 (недели) |
| UPLC перед лиофилизацией (рге-1уо) | V | и.а. | и.а. | и.а. |
| Титрование по Карлу Фишеру | V | - | V | V |
| UPLC | V | V | V | |
| Время восстановления1 | V | - | V | V |
| pH восстановленного продукта1 | V | - | V | V |
| Субвидимые частицы | V | - | - | - |
'Восстановление с использованием 1 мл WFI
3.3. Результаты.
3.3.1. Внешний вид лиофилизата.
Данные о внешнем виде лиофилизата в процессе исследования стабильности представлены в табл. 1-10.
- 9 046145
Таблица 1-10
Внешний вид лиофилизата, 001/BCL/18
| Момент времени/хранение | Внешний вид | |
| Начальный (Т=0) | Белая лиофилизированная лепешка с признаками легкой усадки | |
| 25°С/60% RH | Т=1 неделя | |
| Т=2 недели | Белая лиофилизированная лепешка с признаками усадки | |
| Т=4 недели | Белая лиофилизированная лепешка с признаками усадки |
Таблица 1-11
Внешний вид, время восстановления и рН, 001/BCL/18
| Момент времени/хранение | Время восстан. (с) | Внешний вид | pH | |
| Начальный (Т=0) | 108' | Прозрачный бесцветный раствор без видимых частиц | 7,1 | |
| 25°С/60% RH | Т=1 неделя | - | - | - |
| Т=2 недели | 5292 | Прозрачный бесцветный раствор без видимых частиц | 7,1 | |
| Т=4 недели | 386 409 | Прозрачный бесцветный раствор, на дне флакона обнаружены крапинки | 7,1 |
'При восстановлении на дне флакона была видна густая белая пена. Это необходимо отслеживать в последующие моменты времени.
2При восстановлении флакон вращали в течение нескольких минут перед его помещением на полку на оставшийся период времени. На дне флакона были обнаружены небольшие маслянистые пятна, не обнаружено твердое вещество белого цвета.
3При восстановлении флакон вращали в течение нескольких минут перед его помещением на полку на оставшийся период времени. На дне флакона все еще были обнаружены прилипшие крапинки потенциального продукта. Затем использовали другой флакон для осуществления эксперимента по восстановлению. Этот флакон выдерживали в течение 30 мин, однако крапинки все еще присутствовали. В процессе анализа восстановления осуществляли фотографирование на каждой стадии вращения и осаждения, однако оказалось затруднительным продемонстрировать присутствие крапинок из-за малого объема содержимого.
3.3.3. Содержание влаги.
Содержание влаги, 001BCL/18
Таблица 1-12
| Момент времени/хранение | Влажность (%) | |
| Начальный (Т=0) | 1,94' | |
| 25°С/60% RH | Т=1 неделя | - |
| Т=2 недели | 1,44 | |
| Т=4 недели | 2,11' |
'В моменты времени Т=0 и Т=4 недели обнаружена значительная вариабельность в содержании влаги. По этому поводу в момент времени Т=0 вступали в контакт с заказчиками. Вариации могли быть обусловлены различиями в положении флакона в сублимационной сушилке и различиями в объемах при заполнении вручную.
3.3.3. 4. Субвидимые частицы.
Субвидимые частицы, 001/BCL/18
Таблица 1-13
| Момент времени/хранение | Количество/флакон' | Соответствует/не соответствует2 | ||
| >10 мкм | >25 мкм | |||
| Начальный (Т=0) | 45 | 1 | Соответствует | |
| 25°С/60% RH | Т=1 неделя | - | - | - |
| Т=2 недели | - | - | - | |
| Т=4 недели | - | - | - |
'при объеме заполнения 1 мл количество частиц с диаметром >10 мкм на флакон <6000 обозначено понятием «соответствует» и количество частиц с диаметром >25 мкм на флакон <600 обозначено понятием «соответствует»
3.3.5. Анализ до лиофилизации (Pre-Lyo-анализ).
Таблица 1-14
Анализ до и после фильтрации основного раствора, 001/BCL/18
| Момент времени/хранение | Содержание (мг/мл) | Извлечение/теор.1 (%) | Извлечение/до фильтрации2 (%) |
| До фильтрации | 3,79 | 94,8 | - |
| После фильтрации | 3,65 | 91,3 | 96,3 |
'В процентах от теоретического значения 4 мг/мл 2В процентах от результата до фильтрации
3.3.6. Сопутствующие субстанции до лиофилизации
- 10 046145
Таблица 1-15
Сопутствующие субстанции до и после лиофилизации
| RRT | Образец и количество (% площади) | |
| До фильтрации | После фильтрации | |
| 0.96 | 0.36 | 0.26 |
| 0.96 | 1.65 | 1.61 |
| 1.07 | 0.58 | 0.51 |
| 1.08 | 0.38 | 0.36 |
| 1.20 | 0.11 | 0.14 |
| 1.27 | 0.16 | 0.11 |
| 1.29 | 0.13 | 0.11 |
| Всего1 | 3.37 | 3.10 |
’сумма сопутствующих субстанций >0,10%
3.3.7. Анализ содержимого флаконов
Таблица 1-16
Анализ, 001/BCL/18
| Момент времени/хранение | Флакон 1 (мг/мл) | Флакон 2 (мг/мл) | Средн, содержание (мг/флакон) | Извлеч./теор.1 (%) | Извлеч./Т2 (%) | |
| Начальный (Т=0) | 3.7302 | 3.7607 | 3.75 | 93.6 | - | |
| 25°C/60%RH | Т=1 неделя | 3.7816 | 3.7132 | 3.75 | 93.7 | 99.9 |
| Т=2 недели | 3.8873 | 3.7879 | 3.84 | 95.9 | 102.3 | |
| Т=4 недели | 3.8077 | 3.8044 | 3.81 | 95.2 | 101.5 |
’в процентах от теоретического значения 5 мг/мл 2в процентах от начального (Т=0) результата
3.3.8. Сопутствующие субстанции
Таблица 1-17
Чистота/сопутствующие субстанции (% площади), 25°C/60%RH
| RRT | Момент времени и количество (%) | |||
| Начальный (Т=0) | 1 неделя | 2 недели | 4 недели | |
| 0.96 | 0.31 | 0.10 | <LOQ | 0.28 |
| 0.98 | 1.65 | 1.30 | 1.46 | 1.59 |
| 1.07 | 0.58 | 0.69 | ND | 0.49 |
| 1.08 | 0.39 | 0.53 | 0.66 | 0.75 |
| 1.14 | ND | ND | 0.14 | ND |
| 1.27 | 0.14 | ND | ND | 0.13 |
| 1.28 | 0.12 | 0.21 | 0.21 | 0.16 |
| 1.43 | ND | ND | ND | 0.11 |
| Всего1 | 3.19 | 2.83 | 2.47 | 3.51 |
’сумма сопутствующих субстанций >0,10%
3.3.9. Обсуждение и заключение.
Установлено, что параметры цикла, применявшиеся при осуществлении пробной лиофилизации, пригодны для основного состава; лиофилизированная спрессованная масса во флаконе имела белый цвет и небольшую усадку. Не обнаружены изменения внешнего вида лиофилизированной спрессованной массы во флаконе при изучении стабильности в течение 4 недель при 25°C/60%RH. Значение рН восстановленного раствора сохранялось на уровне рН 7,1 в процессе всего исследования, однако обнаружена вариабельность во времени восстановления и отмечено появление маслянистых пятен на поверхности флаконов. Процедура восстановления и оценка внешнего вида восстановленного продукта нуждается в дополнительной оценке в процессе оптимизации цикла лиофилизации.
Величины, установленные при анализе содержимого флаконов, оставались неизменными в течение 4-недельного исследования стабильности, но следует отметить, что концентрация составляла 93-95% от теоретической. Поскольку результат, полученный до фильтрации, также оказался низким, можно предположить наличие адсорбции API на стеклянной посуде во время приготовления, в отличие от потерь при фильтрации.
Данные о количестве сопутствующих субстанций оказались сопоставимыми в моменты времени Т = 0 и Т = 4 недель и составляли 3,19% и 3,51% соответственно, однако для данных о сопутствующих субстанциях характерна некоторая вариабельность - от 2,47 до 3,51%.
Установлено, что основной состав обладал стабильностью при хранении при 25°С/60% RH, и поэтому использовался далее для оптимизации цикла лиофилизации.
4. Стадия 6 - оптимизация цикла лиофилизации.
Данные о стабильности лиофилизированного продукта, полученные при осуществлении пробного цикла лиофилизации, продемонстрировали, что продукт обладал стабильностью при хранении при 25°С/60% RH. В первом цикле оптимизации использовали температуру на полке для первичной сушки, составляющую -20°С, с целью сокращения продолжительности первичной сушки.
Заполняли небольшое количество флаконов (18) для получения количества флаконов, достаточного для тестирования лиофилизированного продукта и оценки стабильности после восстановления.
Раствором с концентрацией 4 мг/мл, используя объем 5,3 мл, заполняли 10-миллилитровые про
- 11 046145 зрачные стеклянные флаконы типа I. Лиофилизированный продукт восстанавливали с помощью 5,3 мл WFI для достижения заданной концентрации 4 мг/мл.
Для решения вопроса о том, может ли применение гидрофобного покрытия предупреждать адсорбцию продукта на поверхности флакона, обнаруженную при изучении стабильности при лиофилизации, применяли также 2-миллилитровые флаконы TopLyo™ Небольшое количество флаконов (5 штук) заполняли объемом 0,5 мл и осуществляли лиофилизации в этом же цикле.
4.1. Первый цикл оптимизации лиофилизации.
4.1.1. Приготовление раствора.
Приготавливали 150 мл основного раствора следующим образом.
Добавляли примерно 100 мл WFI в 200-миллилитровый стакан, содержащий стержень магнитной мешалки, в него добавляли с отмывкой 786,3 мг гистидина-HCl и перемешивали до растворения, происходящего в течение 5 мин.
После растворения отвешивали 9,0004 г сахарозы и добавляли с отмывкой в стакан при перемешивании с помощью магнитной мешалки до растворения. Раствор перемешивали в течение 5 мин вплоть до полного растворения сахарозы.
Измеряли рН раствора и доводили до заданного значения рН 7,7-8,1 с помощью 1М гидроксида натрия перед добавлением 3 мл 1% (мас./об.) полисорбата-20. Раствор перемешивали в течение 5 мин до гомогенного состояния.
Отвешивали 651 мг ВТ5528 и медленно добавляли с отмывкой в сосуд для получения готового продукта. Раствор перемешивали с помощью магнитной мешалки в течение 90 мин, при этом обнаружены небольшие количества API, адсорбированные на поверхности стакана. Следует отметить, что, повидимому, агломерация API происходит первоначально во время процесса растворения перед полным растворением.
Измеряли рН раствора и доводили до рН 7,03 с помощью 0,1М HCl (заданное значение рН 6,8-7,2). Затем раствор переносили в 100-миллилитровую и 50-миллилитровую мерную колбу, никогда не заполняя полностью, и доводили до требуемого объема с помощью WFI. Раствор возвращали в исходный стакан и перемешивали с получением смеси.
Раствор фильтровали через шприцевой фильтр с PES-мембраной с размером пор 0,22 мкм, до и после фильтрации образцы отбирали для анализа. Полученный фильтрат представлял собой прозрачный бесцветный раствор без видимых частиц.
4.1.2. Лиофилизация.
Раствором, взятом в объеме 5,3 мл, заполняли 10-миллилитровые прозрачные стеклянные флаконы типа I, кроме того, раствором, взятом в объеме 0,5 мл, заполняли как стандартные флаконы, так и TopLyo™ (силанизированные флаконы) для решения вопроса о том, может ли применение гидрофобной поверхности снижать адсорбцию ВТ5528 на поверхности флакона.
Один флакон, расположенный в центре лотка, отбирали для мониторинга температуры продукта на протяжении всего цикла. Ход цикла контролировали на основе температуры (датчик полки/продукта) и давления в камере (емкостный манометр/манометр Пирани) для определения конечной точки первичной и вторичной сушки.
Флаконы лиофилизировали непосредственно на полке, используя цикл, описанный в табл. 1-18.
Таблица 1-18
Цикл лиофилизации
| Стадия | Стадия цикла | Температура (°C) | Давление (мТорр) | Время (мин) | Скорость изменения температуры (°С/мин) |
| 1 | Загрузка | 5 | N/A | N/A | N/A |
| 2 | Выдерживание | 5 | N/A | 30 | N/A |
| 3 | Изменение температуры | -40 | N/A | 180 | 0,25 |
| 4 | Замораживание | -40 | N/A | 180 | N/A |
| 5 | Дополнительное замораживание | -40 | 100 | 30 | N/A |
| 6 | Изменение температуры | -20 | 100 | 100 | 0,20 |
| 7 | Первичная сушка | -20 | 100 | 4658 | N/A |
| 8 | Изменение температуры | 25 | 20 | 225 | 0,20 |
| 9 | Вторичная сушка | 25 | 20 | 368 | N/A |
| 10 | Завершение | Флаконы запечатывали при 722,00 мТорр в атмосфере (чистого)азота | |||
| Общая продолжительность цикла —96,2 ч (—4 дня) |
Лиофилизированная спрессованная масса имела белый цвет, оказалась хорошо сформированной и имела небольшую усадку. Усадка, по-видимому, являлась неотъемлемой особенностью состава, поскольку это также имело место в цикле пробной лиофилизации при температуре первичной сушки -25°С.
- 12 046145
Лиофилизированная спрессованная масса во флаконах TopLyo™ характеризовалась общим коллапсом и поэтому не представлялось возможным протестировать продукт. Коллапс, по-видимому, связан с увеличенным временем высыхания при объеме заполнения 5,3 мл флакона объемом 10 мл по сравнению с объемом заполнения 0,5 мл флакона объемом 2 мл, что приводило к повышению температуры продукта выше температуры коллапса.
4.1.3. Результаты.
Подробное описание партии продукта представлены в табл. 1-19. Партию 002/BCL/18 лиофилизи ровали с использованием первого цикла оптимизации.
Таблица 1-19
Композиция продукта, представляющего собой лекарственное средство (номер партии и подробное описание состава)
| 002/BCL/18 | 4 мг/мл ВТ5528, 5,24 мг/мл гистидина-HCL, 60 мг/мл сахарозы, 0,2 мг/мл полисорбата-20 (объем заполнения 5,3 мл - 21,2 мг/флакон) |
4.1.3.1. Внешний вид раствора, рН и время восстановления.
Таблица 1-20
Внешний вид раствора, рН и время восстановления
| Образец | Внешний вид | pH | Время восстановления (мин) |
| 002/BCL/18 | Прозрачный бесцветный раствор без видимых частиц | 7,1 | 12,03' |
'для восстановления требовалось интенсивное встряхивание. После указанного периода времени не оставалось крупных сгустков, однако все еще обнаруживались маслянистые отложения материала, что позволяет предположить наличие прилипания продукта флакону, см. фиг. 1. Для достижения полного растворения требовалось вихревое перемешивание.
Таблица 1-21
Внешний вид лиофилизированной спрессованной массы
| Образец | Внешний вид |
| 002/BCL/18 | Гомогенная лиофилизированная лепешка белого цвета с заметной усадкой |
4.1.3.2. Субвидимые частицы.
Таблица 1-22
Субвидимые частицы
| Образец | 10 мкм (количество/флакон) | 25 мкм (количество/флакон)1 | Соответствует/не соответствует2 |
| 002/BCL/18 | 173 | 4 | Соответствует |
'При объеме заполнения 5,3 мл количество частиц с диаметром >10 мкм на флакон < 6000 обозначают понятием «соответствует» и количество частиц с диаметром >25 мкм на флакон < 600 обозначают понятием «соответствует»
4.1.3.3. Содержание влаги.
Таблица 1-23
Содержание воды
| Образец | Среднее содержание воды (мас.%) |
| 002/BCL/18 | 2,50 |
4.1.3.4. Анализ содержимого флакона.
Таблица 1-24
Анализ
| Образец | Анализ до фильтрации (мг/мл) | Анализ после фильтрации (мг/мл) | Извлечение после фильтр./ теор.' (%) | Анализ (мг/мл) | Извлечение/ теор.' | Извлечение/ после фильтрации2 (%) | |
| 002/BCL/18 | Флакон 1 | 4,2092 | 4,0521 | 96,27 | 4,2369 | 105,92 | 104,56 |
| Флакон 2 | 4,1854 | 104,63 | 103,29 |
'В процентах от теоретического значения 4 мг/мл 2В процентах от результата после фильтрации
4.1.3.5. Чистота/сопутствующие субстанции.
- 13 046145
Таблица 1-25
Чистота/сопутствующие субстанции
| RRT | Образец и количество (% площади/площадь) | ||
| До фильтрации | После фильтрации | 002/ВС1718 | |
| 0.97 | 0.92 | 0.90 | 0.86 |
| 0.98 | 1.78 | 1.40 | 1.75 |
| ВТ5528 | 96.07 | 96.40 | 96.17 |
| 1.09 | 0.76 | 0.85 | 0.78 |
| 1.16 | 0.13 | 0.14 | 0.11 |
| 1.27 | 0.11 | 0.10 | 0.12 |
| 1.30 | 0.16 | 0.15 | 0.15 |
| Всего1 | 3.86 | 3.54 | 3.77 |
1 Сумма сопутствующих субстанций >0,10%
4.1.4. Обсуждение и заключение.
Внешний вид лиофилизированной спрессованной массы свидетельствовал о том, что температура первичной сушки -20°С являлась пригодной для основного состава, что поддерживало температуру продукта на уровне ниже температуры коллапса на начальных стадиях первичной сушки. Температура превышала температуру коллапса к концу первичной сушки по мере того, как сушка приближалась к завершению. Можно рекомендовать во втором цикле оптимизации дополнительно повышать температуру первичной сушки до -15°С, для того, чтобы не было никаких признаков коллапса продукта.
Восстановление лиофилизированного продукта оказалось таким же, как и при пробной лиофилизации продукта, с образованием маслянистых капель и с необходимостью в вихревом перемешивании для восстановления. Применение вихря приводило к чрезмерному вспениванию продукта из-за присутствия в составе полисорбата 0. Время восстановления составляло примерно 12 мин, что превышало заданное время, составляющее 10 мин.
Результаты анализа действующего вещества находились на заданном уровне, что свидетельствует об отсутствии потери API из-за адсорбции на стеклянной посуде во время приготовления или в процессе фильтрации. Данные о чистоте /сопутствующих субстанциях после лиофилизации оказались сходными с полученными до и после фильтрации.
4.2. Второй цикл оптимизации лиофилизации.
В первом цикле оптимизации использовали температуру на полке для первичной сушки -20°С, что сокращало продолжительность первичной сушки. Лиофилизированный продукт имел белый цвет, оказался хорошо сформированным без признаков коллапса. Поэтому для второго цикла лиофилизация было рекомендовано повышать температуру на полке до -15°С, для дополнительного сокращения продолжительности первичной сушки.
Заполняли небольшое количество флаконов (18) для обеспечения достаточного количества флаконов для тестирования.
Раствором с концентрацией 4 мг/мл, взятом в объеме 5,3 мл, заполняли 10-миллилитровые прозрачные стеклянные флаконы типа I. Лиофилизированный продукт восстанавливали с помощью 5,3 мл WFI до достижений заданной концентрации 4 мг/мл.
Для решения вопроса о том, может ли применение гидрофобной поверхности снижать адсорбцию продукта на поверхности флакона, что обнаружено при изучении стабильности при пробной лиофилизации, применяли 2-миллилитровые флаконы TopLyo™ Небольшое количество флаконов (5), заполняли раствором, используя объем 0,5 мл, и лиофилизировали в этом же цикле. Заполняли также небольшое количество 2-миллилитровых флаконов без покрытия для сравнения с флаконами TopLyo™, поскольку при осуществлении первого цикла оптимизации обнаружен коллапс продукта, поэтому осуществить оценку воздействия силанизированного покрытия оказалось невозможным.
4.2.1. Приготовление раствора.
120 мл основного раствора приготавливали следующим образом:
добавляли примерно 80 мл WFI в 200-миллилитровый стакан, содержащий стержень магнитной мешалки, в него добавляли с отмывкой 628,8 мг гистидина-HCl и перемешивали до растворения, происходящего в течение 5 мин.
После растворения отвешивали 7,2 г сахарозы и добавляли с отмывкой в стакан при перемешивании с помощью магнитной мешалки до растворения. Раствор перемешивали в течение 5 мин вплоть до полного растворения сахарозы.
Измеряли рН раствора и доводили до заданного значения рН 7,7-8,1 с помощью 1М гидроксида натрия перед добавлением 2,4 мл 1% (мас./об.) полисорбата-20. Раствор перемешивали в течение 5 мин до гомогенного состояния.
Отвешивали 651 мг ВТ5528 и медленно добавляли с отмывкой в сосуд для получения готового продукта. Раствор перемешивали с помощью магнитной мешалки в течение 120 мин, после перемешивания в течение 90 мин обнаружены небольшие количества API, адсорбированные на поверхности дна стакана, а также на стержне магнитной мешалки. После перемешивания в течение дополнительного промежутка времени получали бесцветный раствор без частиц.
- 14 046145
Измеряли рН раствора и доводили до рН 7,1 (заданное значение рН 6,8-7,2). Затем раствор переносили в 100-миллилитровую и 20-миллилитровую мерную колбу, никогда не заполняя полностью, и доводили до требуемого объема с помощью WFI. Раствор возвращали в исходный стакан и перемешивали с получением смеси.
Раствор фильтровали через шприцевой фильтр с PES-мембраной с размером пор 0,22 мкм, до и после фильтрации отбирали образцы для анализа. Полученный фильтрат представлял собой прозрачный бесцветный раствор без видимых частиц.
4.2.2. Лиофилизация.
Один флакон, расположенный в центре лотка, отбирали для мониторинга температуры продукта на протяжении всего цикла. Ход цикла контролировали на основе температуры (датчик полки/продукта) и перепадов давления в камере (емкостный манометр/манометр Пирани) для определения конечной точки первичной и вторичной сушки.
Флаконы лиофилизировали непосредственно на полке, используя цикл, описанный в табл. 1-26. Изза неисправности датчика продукта данные о температуре не были получены во время цикла лиофилизации. Сходимость данных, полученных с использованием манометра Пирани и емкостного манометра, использовалась для определения завершения первичной и вторичной сушки.
Таблица 1-26
Цикл лиофилизации
| Стадия | Стадия цикла | Температура (°C) | Давление (мТорр) | Время (мин) | Скорость изменения температуры (°С/мин) |
| 1 | Загрузка | 5 | N/A | N/A | N/A |
| 2 | Выдерживание | 5 | N/A | 30 | N/A |
| 3 | Изменение температуры | -40 | N/A | 180 | 0,25 |
| 4 | Замораживание | -40 | N/A | 180 | N/A |
| 5 | Дополнительное замораживание | -40 | 100 | 30 | N/A |
| 6 | Изменение температуры | -15 | 100 | 125 | 0,20 |
| 7 | Первичная сушка | -15 | 100 | 300 | N/A |
| 8 | Изменение | 25 | 20 | 250 | 0,20 |
| температуры | |||||
| 9 | Вторичная сушка | 25 | 20 | 866 | N/A |
| 10 | Завершение | Флаконы запечатывали при 722,00 мТорр в атмосфере (чистого)азота | |||
| Общая продолжительность цикла —89 ч (—3,7 дня) |
4.2.3. Результаты.
Подробное описание партии продукта представлено в табл. 1-28.
Таблица 1-27 Композиция продукта, представляющего собой лекарственное средство (номер партии и подробное описание состава)
003/BCL/18 мг/мл ВТ5528, 5,24 мг/мл гистидина-HCL, 60 мг/мл сахарозы, 0,2 мг/мл полисорбата-20 (объем заполнения 5,3 мл - 21,2 мг/флакон)
4.2.3.1. Внешний вид раствора, рН и время восстановления.
Таблица 1-28
Внешний вид раствора, рН и время восстановления
| Образец | Внешний вид | рн | Время восстановления (мин) |
| 003/BCL/18 | Прозрачный бесцветный раствор без видимых частиц | 6,7 | 11,14’ |
’Для восстановления требовалось интенсивное встряхивание. После указанного периода времени не оставалось крупных сгустков, однако все еще были обнаружены маслянистые отложения материала, что позволяет предположить наличие прилипания продукта к флакону. Для достижения полного растворения требовалось вихревое перемешивание.
Таблица 1-29 Внешний вид лиофилизированной спрессованной массы
| Образец | Внешний вид |
| 003/BCL/18 | Гомогенная лиофилизированная лепешка белого цвета с заметной усадкой |
4.2.3.2. Субвидимые частицы.
- 15 046145
Таблица 1-30
Субвидимые частицы
| Образец | 10 мкм (количество/флакон)1 | 25 мкм (количество/флакон)1 | Соответствует/не соответствует2 |
| 003/BCL/18 | 209 | 4 | Соответствует |
'При объеме заполнения 5,3 мл 2Количество частиц с диаметром >10 мкм на флакон < 6000 обозначают понятием «соответствует» и количество частиц с диаметром >25 мкм на флакон < 600 обозначают понятием «соответствует»
4.2.3.3. Содержание влаги.
Таблица 1-31
Содержание воды
| Образец | Среднее содержание воды (мас.%) |
| 003/BCL/18 | 2,13 |
4.2.3.4. Анализ содержимого флакона.
Таблица 1-32
Анализ (действующего вещества)
| Образец | Анализ до фильтрации (мг/мл) | Анализ после фильтрации (мг/мл) | Извлечение после фильтрации/ теор.1 (%) | Анализ (мг/мл) | Извлечение/ теор.1 | Извлечение/ после фильтрации2 (%) | |
| 003/BCL/18 | Флакон 1 | 3,9008 | 3,9849 | 98,57 | 102,16 | 21,4138 | 4,0403 |
| Флакон 2 | 22,6418 | 4,2720 |
'В процентах от теоретического значения 4 мг/мл 2В процентах от результата после фильтрации
4.2.3.5. Чистота/сопутствующие субстанции.
Таблица 1-33 __________ Чистота/сопутствующие субстанции, партия 003/BCL/18___________
| RRT | Количество (%площади/площадь) | ||
| До фильтрации | После фильтрации | 003/BCL/18 | |
| 0.96 | 0.19 | 0.19 | 0.18 |
| ВТ5528 | 98.89 | 98.85 | 98.83 |
| 1.12 | 0.72 | 0.81 | 0.77 |
| Всего1 | 0.91 | 1.00 | 1.05 |
'Сумма сопутствующих субстанций >0,10%
4.1.4. Обсуждение и заключение.
Внешний вид лиофилизированной спрессованной массы свидетельствовал о том, что температура первичной сушки -15°С является пригодной для основного состава и температура продукта поддерживалась на уровне ниже температуры коллапса на начальных стадиях первичной сушки. Температура превышала температуру коллапса к концу первичной сушки по мере того, как сушка приближалась к завершению.
Восстановление лиофилизированного продукта оказалось таким же как и при пробной лиофилизации продукта с образованием маслянистых капель и с необходимостью в вихревом перемешивании для восстановления. Применение вихря приводило к чрезмерному вспениванию продукта из-за присутствия полисорбата -20 в составе. Время восстановления составляло примерно 11 мин, что превышало заданное время, составляющее 10 мин.
Восстановление лиофилизированной спрессованной массы во флаконах TopLyo™ оказалось более длительным по сравнению с восстановлением в стандартных 2-миллилитровых прозрачных стеклянных флаконах типа I, и при этом была обнаружена более выраженная адсорбция API на поверхности. Это свидетельствует о том, что использование силанизированных флаконов не улучшало восстановление или показатели извлечения лиофилизированного продукта.
Результаты анализа действующего вещества находились на заданном уровне, что свидетельствует об отсутствии потери API из-за адсорбции на стеклянной посуде во время приготовления или в процессе фильтрации. Данные о чистоте/сопутствующих субстанциях после лиофилизации оказались сходными с данными, полученными до и после фильтрации, однако следует отметить, что общее количество сопутствующих субстанций было значительно меньше, чем в первом цикле оптимизации.
Данные о содержании влаги в этом цикле оказались сходными (2,13 мас.%) с данными, полученными в первом цикле оптимизации лиофилизации (2,50 мас.%).
Оценку восстановления лиофилизированного продукта в 10-миллилитровых флаконах (21,2 мг ВТ5528/флакон) осуществляли с использованием кислого раствора. Поскольку ВТ5528 представляет собой щелочной белок, то, вероятно, регулирование рН должно улучшать восстановление. Высказана гипотеза о том, что восстановление не с помощью WFI, а с помощью разбавленной кислоты для достижения более низкого значения рН буфера должно повышать скорость солюбилизации после восстановления. Улучшенное восстановление при использовании кислого раствора может свидетельствовать о том, что
- 16 046145 изменение заданного значения рН состава перед лиофилизацией до более низкого значения (например, до рН 6 или 6,5 по сравнению с имеющимся рН 7,1) улучшает восстановление лиофилизированного продукта по сравнению с восстановлением при использовании только WFI.
Отдельные флаконы с лиофилизированным ВТ5528-продуктом восстанавливали с использованием 5,3 мл либо 0,01 М HCl, либо 0,02 М HCl и внешний вид оценивали в течение 15 мин. Время восстановления и внешний вид восстановленного продукта касательно образования маслянистых капель улучшались при использовании 0,02М раствора HCl. Это позволяет предположить, что более кислое значение рН лиофилизированного продукта может улучшать характеристики восстановления.
Вторая гипотеза заключалась в том, что проблемы при восстановлении связаны с высокой концентрацией соли в составе в результате процесса приготовления продукта. Для регулирования рН с ~рН 3,5 до рН 7,7-8,1 перед растворением API применяли гидроксид натрия с последующим применением соляной кислоты для регулирования рН до заданного значения рН 6,8-7,2.
5. Оценка влияния гистидина/рН.
Применение кислого раствора для восстановления улучшало время восстановления и внешний вид. Для изучения вопроса о том, может ли более низкое значение рН до лиофилизации улучшать время восстановления и результаты анализа, приготавливали три раствора с рН 6, рН 6,5 и рН 7,0, лиофилизировали их с использованием цикла, указанного в таблице 36, затем анализировали после лиофилизации.
Кроме того, изменяли процесс получения продукта для снижения использования гидроксида натрия для регулирования рН и содержания хлорида натрия в конечном продукте. рН растворов, полученных перед добавлением ВТ5528, не регулировали и их регулировали только после растворения API.
Составы представлены в таблице 1-34.
Таблица 1-34
Составы содержащих гистидин композиций/рН (номер партии и подробное описание состава)
| Состав 1 | 4 мг/мл ВТ5528, 5,24 мг/мл гистидина-HCL, 60 мг/мл сахарозы, 0,2 мг/мл полисорбата-20, pH 6 |
| Состав 2 | 2 мг/мл ВТ5528, 5,24 мг/мл гистидина-HCL, 60 мг/мл сахарозы, 0,2 мг/мл полисорбата-20, pH 6,5 |
| Состав 3 | 2 мг/мл ВТ5528, 5,24 мг/мл гистидина, 60 мг/мл сахарозы, 0,1 мг/мл полисорбата-20, pH 7 |
5.1. Приготовление раствора.
Ниже представлены подробности приготовления раствора каждого из составов.
Состав 1 - Гистидин-HCl - рН 6.
Добавляли примерно 35 мл WFI в стакан, содержащий стержень магнитной мешалки. В него добавляли с отмывкой 262,1 мг гистидина-HCl и перемешивали с помощью магнитной мешалки до растворения. После растворения отвешивали 3,0322 г сахарозы и добавляли с отмывкой, затем перемешивании до растворения. С помощью пипетки добавляли 1 мл 1% (мас./об.) раствора полисорбата -20 в раствор гистидина/сахарозы и перемешивали вплоть до полного растворения. Измеренное значение рН раствора составляло 4,01.
Отвешивали 258 мг ВТ5528 и медленно добавляли, затем перемешивали в течение 90 мин до полного растворения. Измеряли рН раствора и доводили до рН 6,02 с помощью 1М гидроксида натрия, после чего переносили в 50-миллилитровую мерную колбу и доводили до требуемого объема с помощью WFI. Раствор возвращали в исходный стакан и перемешивали с получением смеси.
Раствор фильтровали через шприцевой фильтр с PES-мембраной с размером пор 0,22 мкм, фильтрат представлял собой прозрачный бесцветный раствор без видимых частиц.
Состав 2 - гистидин-HCl - рН 6,5.
Добавляли примерно 35 мл WFI в стакан, содержащий стержень магнитной мешалки. В него добавляли с отмывкой 262,2 мг гистидина-HCl и перемешивали с помощью магнитной мешалки до растворения. После растворения отвешивали 3,0360 г сахарозы и добавляли с отмывкой, затем перемешивании до растворения. С помощью пипетки добавляли 1 мл 1% (мас./об.) раствора полисорбата -20 в раствор гистидина/сахарозы и перемешивали вплоть до полного растворения. Измеренное значение рН раствора составляло 4,01.
Отвешивали 257 мг ВТ5528 и медленно добавляли, затем перемешивали в течение 90 мин до полного растворения. Измеряли рН раствора и доводили до рН 6,49 с помощью 1М гидроксида натрия, после чего переносили в 50-миллилитровую мерную колбу и доводили до требуемого объема с помощью WFI. Раствор возвращали в исходный стакан и перемешивали с получением смеси. Раствор фильтровали через шприцевой фильтр с PES-мембраной с размером пор 0,22 мкм, фильтрат представлял собой прозрачный бесцветный раствор без видимых частиц.
Состав 3 - гистидин-HCl - рН 7.
Добавляли примерно 35 мл WFI в стакан, содержащий стержень магнитной мешалки. В него добавляли с отмывкой 262,0 мг гистидина и перемешивали с помощью магнитной мешалки до растворения. После растворения отвешивали 3,0439 г сахарозы и добавляли с отмывкой, затем перемешивании до растворения. С помощью пипетки добавляли 1 мл 1% (мас./об.) раствора полисорбата -20 в раствор гисти
- 17 046145 дина/сахарозы и перемешивали вплоть до полного растворения. Измеренное значение рН раствора составляло 7,73.
Отвешивали 257 мг ВТ5528 и медленно добавляли, затем перемешивали в течение 90 мин до полного растворения. Измеряли рН раствора и доводили до рН 6,97 с помощью 1М соляной кислоты, после чего переносили в 50-миллилитровую мерную колбу и доводили до требуемого объема с помощью WFI. Раствор возвращали в исходный стакан и перемешивали с получением смеси. Раствор фильтровали через шприцевой фильтр с PES-мембраной с размером пор 0,22 мкм, фильтрат представлял собой прозрачный бесцветный раствор без видимых частиц.
5.2. Лиофилизация.
Каждый из трех полученных составов вносили в 10-миллилитровые прозрачные стеклянные флаконы типа I, используя объем заполнения 5,3 мл.
Флаконы помещали в центр лотка сублимационной сушилки и лиофилизировали непосредственно на полке с использованием цикла, описанного в табл. 1-35. Ход цикла контролировали на основе температуры (датчик полки/продукта) и перепадов давления в камере (емкостный манометр/манометр Пирани) для определения конечной точки первичной и вторичной сушки.
Таблица 1-35
Цикл лиофилизации
| Стадия | Стадия цикла | Температура (°C) | Давление (мТорр) | Время (мин) | Скорость изменения температуры (°С/мин) |
| 1 | Загрузка | 5 | N/A | N/A | N/A |
| 2 | Выдерживание | 5 | N/A | 30 | N/A |
| 3 | Изменение температуры | -40 | N/A | 180 | 0,25 |
| 4 | Замораживание | -40 | N/A | 180 | N/A |
| 5 | Дополнительное замораживание1 | -40 | 100 | 30 | N/A |
| 6 | Изменение температуры | -15 | 100 | 125 | 0,20 |
| 7 | Первичная сушка | -15 | 100 | 3739 | N/A |
| 8 | Изменение температуры | 25 | 20 | 200 | 0,20 |
| 9 | Вторичная сушка | 25 | 20 | 904 | N/A |
| 10 | Завершение | Флаконы запечатывали при 722,00 мТорр в атмосфере (чистого)азота | |||
| Общая продолжительность цикла ~90 ч (~3,7 дня) |
5.3. Результаты.
5.3.1. Внешний вид раствора, рН и время восстановления.
Для восстановления потребовалось энергичное встряхивание. По истечении указанного времени больших комков не оставалось, однако прилипание материала к стенкам флакона все еще можно было обнаружить, что позволяло предположить налипание продукта на флакон. Для получения полного растворения требовалось вихревое перемешивание.
Таблица 1-36
Внешний вид раствора, рН и время восстановления
| Образец | Внешний вид | pH | Время восстановления (мин) |
| Гистидин-НС1 pH 6,0 | Прозрачный бесцветный раствор без видимых частиц | 6,0 | 3 мин 04 с |
| Гистидин-НС1 pH 6,5 | Прозрачный бесцветный раствор без видимых частиц | 6,5 | 6 мин 04 с |
| Гистидин pH 7,0 | Прозрачный бесцветный раствор без видимых частиц | 7,0 | 8 мин 38 с |
Таблица 1-37
Внешний вид лиофилизированной спрессованной массы
| Образец | Внешний вид |
| Гистидин-НС1 pH 6,0 | Гомогенная лиофилизированная лепешка белого цвета с заметной усадкой |
| Гистидин-НС1 pH 6,5 | Гомогенная лиофилизированная лепешка белого цвета с заметной усадкой |
| Гистидин pH 7,0 | Гомогенная лиофилизированная лепешка белого цвета с заметной усадкой |
5.3.2. Анализ (содержимое флакона).
- 18 046145
Таблица 1-38
Анализ
| Образец | Анализ до фильтрации (мг/мл) | Анализ после фильтрации (мг/мл) | После извлечения/ те ор1 (%) | После извлечения/до фильтрации (%) | Анализ (мг/флакон) | Извлечение/ теор1 (%) | Извлеч./ после фильтрации2 (мг/мл) | |
| pH 6 0 | Флакон 1 | 4.3353 | 4.3047 | 107.62 | 99.29 | 3 8921 | 97.30 | 90.42 |
| Флакон 2 | 3 9510 | 98.78 | 91.78 | |||||
| pH 6.5 | Флакон 1 | 4.2583 | 4.2805 | 107.01 | 100 52 | 3 8813 | 97.03 | 90.67 |
| Флакон 2 | 3.9095 | 97.74 | 91.33 | |||||
| pH 7 0 | Флакон 1 | 4.0259 | 4.0095 | 100.24 | 99.59 | 3 5649 | 89.12 | 88.91 |
| Флакон 2 | 3 6056 | 90.14 | 89.92 |
'В процентах от теоретического значения 4 мг/мл 2В процентах от результата после фильтрации
5.3.3. Чистота/сопутствующие субстанции.
Таблица 1-39
Чистота/сопутствующие субстанции, гистидин-HCl, рН 6,0
| RRT | Количество (% площади/площадь) | ||
| До фильтрации | После фильтрации | Гистидин НС1, pH 6,0 | |
| 0.96 | 0.29 | 0.25 | 0.33 |
| ВТ5528 | 98.50 | 98.57 | 98.47 |
| 1.12 | 0.75 | 0.80 | 0.69 |
| 1.16 | 0.12 | <LClQ | 0.12 |
| 1.33 | 0.11 | 0.13 | 0.10 |
| Всего1 | 1.27 | 1.18 | 1.24 |
'Сумма сопутствующих субстанций >0,10%
Таблица 1-40
Чистота/сопутствующие субстанции, гистидин-HCl, рН 6,5
| RRT | Количество (% площади/площадь) | ||
| До фильтрации | После фильтрации | Гистидин НС1, pH 6,5 | |
| 0.96 | 0.22 | 0.17 | 0.28 |
| ВТ5528 | 99.66 | 98.80 | 98.24 |
| 1.10 | ND | 0.44 | 0.48 |
| 1.12 | 0.76 | 0.44 | 0.58 |
| 1.29 | 0.10 | <LOQ | 0.12 |
| 1.33 | <LOQ | <LOQ | 0.10 |
| Всего1 | 1.08 | 1 05 | 1.56 |
хСумма сопутствующих субстанций >0,10%
Таблица 1-41
Чистота/сопутствующие субстанции, гистидин-HCl, рН 7,0
| RRT | Количество (% площади/площадь) | ||
| До фильтрации | После фильтрации | Гистидин НС1, pH 7,0 | |
| 0.94 | <LOQ | ND | 0.11 |
| 0.96 | 0.30 | 0 29 | 0.34 |
| ВТ5528 | 98.37 | 98.41 | 98 62 |
| 1.10 | 0.45 | 0 52 | ND |
| 1.12 | 0.65 | 0 56 | 0.69 |
| 1.33 | <LOQ | 0 15 | 0.12 |
| Всего1 | 1.40 | 1 52 | 1.26 |
хСумма сопутствующих субстанций >0,10%
5.3.4. Обсуждение и заключение.
Внешний вид лиофилизированной спрессованной массы трех составов оказался сходным, что свидетельствовало об отсутствии влияния рН или процесса приготовления продукта на внешний вид продукта. Внешний вид лиофилизированной спрессованной массы оказался таким же, как и при осуществлении пробной лиофилизации и первого и второго циклов оптимизации.
Время восстановления спрессованной массы возрастало с увеличением значения рН от 3 мин и 4 с для рН 6 до 8 мин 38 с для рН 7,0. Это свидетельствует о том, что рН восстановленного раствора влияло на время восстановления. Кроме того, измененный процесс приготовления (уменьшение применения гидроксида натрия), по-видимому, приводил к улучшению времени восстановления до <9 мин для трех составов по сравнению со временем восстановления, составлявшим >11 мин для полученных ранее продуктов. Однако для достижения восстановления все еще требовалось вихревое перемешивание, и на поверхности флакона были обнаружены маслянистые капли. Таким образом, значение рН и присутствие соли не являются единственными факторами, участвующими в адсорбции API на поверхности флаконов.
Чистота/сопутствующие субстанции для трех составов оказались сходными (табл. 1-39 - табл. 1-41). Данные анализа продемонстрировали отсутствие связанных с адсорбцией потерь ВТ5528 во время фильтрации. Результаты анализа, свидетельствующие о более высоком содержании действующего вещества
- 19 046145 (содержимое флакона) при рН 6 по сравнению с рН 7, демонстрируют, что более низкое значение рН до лиофилизации повышает уровень извлечения ВТ5528.
Маслянистые капли все еще были обнаружены, несмотря на более короткое время восстановления и повышенный уровень извлечения при рН 6 по сравнению с рН 7, и поэтому осуществляли дополнительное исследование для оценки альтернативных Сахаров и более низкой температуры вторичной сушки для увеличения содержания влаги в конечном продукте. Известно, что ВТ5528 обладает хорошей растворимостью в воде, и было выдвинуто предположение, что длительное время восстановление и образование маслянистых капель могут являться результатом пересушивания пептида в процессе лиофилизации. Это могло приводить к утрате гидратационной оболочки и изменению конформации пептида в лиофилизированном продукте.
6. Скрининг содержащих сахара составов.
Изменение рН состава до лиофилизации не предотвращало образование маслянистых капель на поверхности флаконов в процессе восстановления, но улучшало время восстановления (при рН 6 оно было короче, чем при рН 7).
Из-за особенностей адсорбции составов, лиофилизированных с использованием третьего цикла оптимизации, осуществляли оценку 5 составов с разными сахарами и альтернативным поверхностноактивным веществом. Состав композиций представлен в табл. 1-42.
Как уже обсуждалось в разделе 5.3.4, была высказана гипотеза о том, что продукт, возможно, был пересушен, что приводило к удалению гидратационной оболочки пептида, поэтому изучали также применение более короткой (при 0°С) продолжительности вторичной сушки помимо скрининга сахаров/поверхностно-активных веществ.
Таблица 1-42
Композиция продукта, представляющего собой лекарственное средство (номер партии и подробное описание состава)
| Состав 1 | 4 мг/мл ВТ5528, 5,24 мг/мл гистидина-HCL, 60 мг/мл сахарозы, 0,2 мг/мл полисорбата-20 (объем заполнения 5,3 мл - 21,2 мг/флакон), флакон 20 мл |
| Состав 2 | 4 мг/мл ВТ5528, 5,24 мг/мл гистидина-HCL, 60 мг/мл сахарозы, 0,2 мг/мл полисорбата-80 (объем заполнения 5,3 мл - 21,2 мг/флакон), флакон 10 мл |
| Состав 3 | 4 мг/мл ВТ5528, 5,24 мг/мл гистидина-HCL, 60 мг/мл трегалозы, 0,2 мг/мл полисорбата-20 (объем заполнения 5,3 мл - 21,2 мг/флакон), флакон 10 мл |
| Состав 4 | 4 мг/мл ВТ5528, 5,24 мг/мл гистидина-HCL, 60 мг/мл декстрозы, 0,2 мг/мл полисорбата-20 (объем заполнения 5,3 мл - 21,2 мг/флакон), флакон 10 мл |
| Состав 5 | 2 мг/мл ВТ5528, 5,24 мг/мл гистидина-HCL, 60 мг/мл сахарозы, 0,2 мг/мл полисорбата-20 (объем заполнения 10,6 мл - 21,2 мг/флакон), флакон 20 мл |
6.1. Приготовление раствора.
Каждый из составов приготавливали одинаковым образом, за исключением состава 5, подробное описание приготовления которого приведено отдельно. Добавляли примерно 35 мл WFI в стакан, содержащий стержень магнитной мешалки. В него добавляли с отмывкой ~ 262 мг гистидина и перемешивали с помощью магнитной мешалки до растворения. После растворения отвешивали ~3 г сахарозы/трегалозы/декстрозы (составы 1-2, 3 и 4 соответственно) и добавляли с отмывкой, затем перемешивали до растворения. С помощью пипетки добавляли 1 мл 1% (мас./об.) раствора полисорбата-20 в раствор гистидина/сахарозы при приготовлении составов 1, 3 и 4 и 1 мл 1% (мас./об.) раствора полисорбата -80 при приготовлении состава 2. Растворы перемешивали вплоть до полного растворения. Измеряли рН каждого раствора.
Состав 5 приготавливали следующим образом: добавляли примерно 70 мл WFI в стакан, содержащий стержень магнитной мешалки. В него добавляли с отмывкой 524,9 мг гистидина и перемешивали с помощью магнитной мешалки до растворения. После растворения отвешивали 6,0031 г сахарозы и добавляли с отмывкой, затем перемешивали до растворения. С помощью пипетки добавляли 2 мл 1% (мас./об.) раствора полисорбата -20 в раствор гистидина/сахарозы и перемешивали вплоть до полного растворения. Измеряли рН раствора.
Для приготовления каждого из пяти составов отвешивали ~ 257 мг ВТ5528 и медленно добавляли, затем перемешивали в течение 90 мин до полного растворения. Следует отметить, что во время добавления/растворения ВТ5528 прилипал к стенкам стаканов и имел гелеобразный внешний вид. ВТ5528 удаляли со стенок стакана с помощью пипетки, что приводило к полному растворению API в растворе. Измеряли рН растворов и доводили до рН 6,5 с помощью 1М гидроксида натрия, после чего переносили в 50-миллилитровую (составы 1-4) или 100-миллилитровую (состав 5) мерную колбу и доводили до требуемого объема с помощью WFI. Растворы возвращали в исходный стакан и перемешивали с получением смеси.
Каждый из растворов фильтровали через один шприцевой фильтр с PES-мембраной с размером пор 0,22 мкм, фильтрат представлял собой прозрачный бесцветный раствор без видимых частиц.
- 20 046145
Таблица 1-43
Значение рН раствора (номер партии, рН буфера и конечное pH)
| Состав 1 | 7,74 | 6,51 |
| Состав 2 | 7,75 | 6,52 |
| Состав 3 | 7,65 | 6,52 |
| Состав 4 | 7,76 | 6,51 |
| Состав 5 | 7,75 | 6,52 |
6.2. Лиофилизация.
Данные об объеме заполнения растворами и типе флаконов представлены в табл. 1-44.
Таблица 1-44
Тип флакона и объем заполнения (номер партии, флакон (мл) и объем заполнения (мл))
| Состав 1 | 20 | 5,3 |
| Состав 2 | 10 | 5,3 |
| Состав 3 | 10 | 5,3 |
| Состав 4 | 10 | 5,3 |
| Состав 5 | 20 | 10,6 |
Таблица 1-45
Параметры цикла лиофилизации
| Стадия | Стадия цикла | Температура (°C) | Давление (мТорр) | Время (мин) | Скорость изменения температуры (°С/мин) |
| 1 | Загрузка | 5 | N/A | N/A | N/A |
| 2 | Выдерживание | 5 | N/A | 30 | N/A |
| 3 | Изменение температуры | -40 | N/A | 180 | 0,25 |
| 4 | Замораживание | -40 | N/A | 180 | N/A |
| 5 | Дополнительное замораживание | -40 | 100 | 30 | N/A |
| 6 | Изменение температуры | -25 | 100 | 75 | 0,20 |
| 7 | Первичная сушка | -25 | 100 | 6450 | N/A |
| 8 | Изменение температуры | 0 | 20 | 125 | 0,20 |
| 9 | Вторичная сушка | 0 | 20 | 1009 | N/A |
| 10 | Завершение | Флаконы запечатывали при 722,00 мТорр в атмосфере (чистого)азота | |||
| Общая продолжительность цикла —135 ч (—5,6 дня) |
Лиофилизированная спрессованная масса состава 1 имела белый цвет, была хорошо сформированной и гомогенной без признаков усадки или коллапса. Лиофилизированная спрессованная масса составов 2, 4 и 5 имела белый цвет, была гомогенной, но имела признаки усадки.
У состава 3 (с трегалозой) обнаружен общий коллапс и возврат спрессованной массы в расплавленное состояние.
Тепловые характеристики составов, включающих трегалозу и декстрозу, не определяли перед лиофилизацией растворов, однако применяли консервативные параметры цикла. Из литературы известно, что температура коллапса трегалозы составляла примерно -28°С, т.е. выше известной и для сахарозы (31 °С), и для декстрозы (-41 °С), и поэтому можно ожидать, что температура на полке при первичной сушке, составляющая -25°С, должна являться приемлемой. Данные, полученные при исследовании продукта, продемонстрировали, что температура продукта должна составлять приблизительно -38°С на начальных стадиях первичной сушки, и поэтому не ожидался коллапс продукта.
Для состава 4, содержащего декстрозу, коллапс не был обнаружен, и, таким образом, оказалось невозможным определить причину возможного коллапса.
6.3. Результаты.
6.3.1. Внешний вид раствора, рН и время восстановления.
- 21 046145
Таблица 1-46
Внешний вид раствора, рН и время восстановления
| Образец | Внешний вид1 | pH | Время восстановления (мин) |
| Состав 1, 4 мг/мл | Прозрачный бесцветный раствор, на боковых стенках видны следы адсорбции | 6,4 | 1 мин 35 с |
| Состав 1, 2 мг/мл | Прозрачный бесцветный раствор, на боковых стенках обнаружена адсорбция | 6,5 | 3 мин 17 с |
| Состав 1, 1,3 мг/мл | Прозрачный бесцветный раствор, на боковых стенках обнаружена адсорбция | 6,5 | 7 мин 27 с |
| Состав 2 | Прозрачный бесцветный раствор, на боковых стенках обнаружена адсорбция | 6,5 | 5 мин 40 с |
| Состав 3 | Прозрачный бесцветный раствор, лепешка не растворялась | 6,5 | 16 мин 00 с |
| Состав 4 | Прозрачный бесцветный раствор, на боковых стенках видны следы адсорбции | 6,5 | 6 мин 40 с |
| Состав 5 | Прозрачный бесцветный раствор, на боковых стенках обнаружена слабая адсорбция2 | 6,5 | 4 мин 03 с |
Анализ в процессе цикла оптимизации продемонстрировал наличие адсорбции во всех составах. Составы 1-4 обладали значительными адсорбционными свойствами, при этом продукт, представляющий собой лекарственное средство, адсорбировался на стеклянном флаконе над восстановленным раствором и в нем. Наилучший результат получен для состава 5 (2 мг/мл ВТ5528), для которого обнаружено лишь небольшая адсорбция продукта, представляющего собой лекарственное средство, над раствором и отсутствие адсорбции внутри раствора. Вариабельность времени восстановления зависела от аналитической процедуры, отличающейся на протяжении всего испытания состава 1. Это было связано с сильными адсорбционными свойствами состава 1. Для раствора с концентрацией 4 мг/мл перемешивание раствора осуществляли сразу после добавления восстанавливающей среды, создавая сильное адсорбционное распределение над раствором. Период отстаивания перед перемешиванием, который применяли для раствора с концентрацией 2 мг/мл, обеспечивал лучшие характеристики восстановления, хотя адсорбция все еще имела место. Для раствора с концентрацией 1,3 мг/мл использовали период отстаивания, составляющий 5 мин, для того, чтобы минимизировать требуемое перемешивание. Адсорбция не улучшалась при таком увеличенном периоде отстаивания. Для состава 2 и остальных изученных составов период отстаивания составлял 2 мин, перемешивания 1 мин и заключительный период отстаивания 1 мин до перемешивания, выполняемого вплоть до растворения. Для состава 5 установлены наилучшие результаты по сравнению со всеми составами, и для четвертого цикла оптимизации для этого состава предложено применять обычный метод восстановления (перемешивание сразу после добавления восстанавливающей среды).
Таблица 1-47
Внешний вид лиофилизированной спрессованной массы
| Образец | Внешний вид1 |
| Состав 1 | Гомогенная лиофилизированная лепешка белого цвета |
| Состав 2 | Гомогенная лиофилизированная лепешка белого цвета с видимыми признаками усадки |
| Состав 3 | Белый диск в центре флакона с видимыми признаками общего коллапса |
| Состав 4 | Гомогенная лиофилизированная лепешка белого цвета с видимыми признаками усадки |
| Состав 5 | Гомогенная лиофилизированная лепешка белого цвета с видимыми признаками усадки |
Ссылка на фотографии лиофилизированной лепешки, представленные в приложениях
6.3.2. Субвидимые частицы.
Таблица 1-48
Субвидимые частицы
| Образец | 10 мкм (количество/флакон) | 25 мкм (количество/флакон) | Соответствует / не сооответствует |
| Состав I1 | 855 | 71 | Соответствует |
| Состав 21 | 3127 | 473 | Соответствует |
| Состав З1 | 1866 | 46 | Соответствует |
| Состав 41 | 5752 | 1304 | Соответствует |
| Состав 52 | 3074 | 21 | Соответствует |
'При объеме заполнения 5,3 мл 2При объеме заполнения 10,6 мл
Следует отметить, что флаконы не автоклавировали/депирогенировали, это может приводить к завышенным значениям количества твердых частиц.
- 22 046145
Результаты для частиц диаметром 10 мкм оказались завышенными для всех составов, для составов 2 и 4 это обусловлено адсорбцией, происходящей при восстановлении. Это в сочетании с применяемыми для оптимизации лиофилизации флаконами, которые не подвергали той же процедуре очистки, что и флаконы из технической партии, привело к завышенным результатам. Все результаты соответствовали фармакопейным спецификациям (<6000 частиц с диаметром 10 мкм на контейнер и <600 частиц с диаметром 25 мкм на контейнер), за исключением состава 4, который не соответствовал по уровню частиц с диаметром 25 мкм. Это может быть связано с низкой эффективностью восстановления и обнаруженными особенностями адсорбции.
3.3.3. Содержание воды.
Таблица 1-49
Содержание воды
| Образец | Среднее содержание воды (мас.%) |
| Состав 1 | 2,60 |
| Состав 2 | 2,87 |
| Состав 3 | 11,08 |
| Состав 4 | 1,69 |
| Состав 5 | 3,84 |
Все полученные составы содержали оптимальные уровни воды <5% за исключением состава 3, в котором уровень был завышен. Для состава 3 требовалось интенсивное перемешивание и обработки ультразвуком из-за слабого растворения в безводном метаноле. Слабое растворение и усиленное перемешивание и обработка ультразвуком, необходимые для этой партии, свидетельствуют о том, что для этого состава существует проблема, связанная с содержанием влаги, и это подтверждается завышенным результатом по сравнению с другими составами.
6.3.4. Анализ и результаты, касающиеся чистоты.
6.3.4.1. До и после фильтрации.
Образцы фильтровали через шприцевой фильтр с PES-мембраной с размером пор 0,22 мкм. Никаких проблем не возникало во время процесса фильтрации перед анализом с помощью детектора с переменной длиной волны (VWD).
Таблица 1-50
До и после фильтрации
| Образец | До фильтрации [ВТ5528] (мг/мл) | После фильтрации [ВТ5528] (%) | % извлечения1 |
| Состав 1 | 3,92 | 3,94 | 100,5 |
| Состав 2 | 3,71 | 3,76 | 101,5 |
| Состав 3 | 3,70 | 3,54 | 95,8 |
| Состав 4 | 3,66 | 3,82 | 104,4 |
| Состав 5 | 1,96 | 2,02 | 103,5 |
'% извлечения относительно результата до фильтрации
Таблица 1-51
Чистота/сопутствующие субстанции до фильтрации
| RRT | Состав и количество (площадь, %) | ||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | |
| ВТ5528 | 98,41 | 99,01 | 99,25 | 99,25 | 99,20 |
| 1,10 | 1,51 | 0,98 | 0,26 | 0,75 | 0,72 |
| 1,П | N.D. | N.D. | 0,49 | N.D. | N.D. |
| Всего1 | 1,5 | 1,0 | 0,8 | 0,8 | 0,7 |
1 Сумма сопутствующих субстанций >0,10%
Таблица 1-52
Чистота/сопутствующие субстанции после фильтрации
| RRT | Состав и количество (площадь, %) | ||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | |
| ВТ5528 | 99,24 | 99,38 | 99,11 | 99,13 | 99,30 |
| 1,10 | 0,76 | 0,52 | 0,89 | 0,87 | 0,63 |
| Всего1 | 0,8 | 0,5 | 0,9 | 0,9 | 0,6 |
’Сумма сопутствующих субстанций >0,10%
Для состава 3 уровень извлечения был ниже и не соответствовал тенденции, что, с учетом проблемы, связанной с влажностью и процедурой восстановления, подтверждает плохие характеристики этого состава по сравнению с другими составами. Трегалоза присутствовала только в указанном составе, это свидетельствует о том, что этот сахар является основной причиной низких показателей извлечения и несоответствия данным характеризующим основную тенденцию.
6.3.4.2. Содержимое флакона.
- 23 046145
Таблица 1-53
Лиофилизированное содержимое флакона
| Образец | Флакон 1 [ВТ5528] (мг/флакон) | Флакон 2 [ВТ5528] (мг/флакон) | Среднее содержание [ВТ5528] (мг/флакон) | % извлечения1 |
| Состав 1 | 21,30 | 21,38 | 21,34 | 100,7 |
| Состав 2 | 20,16 | 20,19 | 20,17 | 95,1 |
| Состав 3 | 19,71 | 19,68 | 19,70 | 92,9 |
| Состав 4 | 20,31 | 20,34 | 20,33 | 95,9 |
| Состав 5 | 21,07 | 21,39 | 21,23 | 100,1 |
Ί% извлечения относительно теоретического содержания ВТ5528, составляющего 21,2 мг/флакон
Данные о среднем содержании сопутствующих субстанций представлены в табл. 1-54.
Таблица 1-54
Чистота/сопутствующие субстанции
| RRT | Состав и количество (площадь, %) | ||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | |
| ВТ5528 | 99,30 | 99,13 | 99,24 | 99,30 | 99,22 |
| 1,10 | 0,70 | 0,87 | 0,76 | 0,70 | 0,79 |
| Всего1 | 0,7 | 0,9 | 0,8 | 0,7 | 0,8 |
’Сумма сопутствующих субстанций >0,10%
6.3.4.3. Чистота/сопутствующие субстанции.
Состав 1 восстанавливали с использованием трех различных объемов WFI (5,3 мл, 10,6 мл и 15,9 мл) с получением концентраций 4 мг/мл, 2 мг/мл и 1,3 мг/мл соответственно. Составы 2, 3 и 4 восстанавливали с использованием 5,3 мл WFI с получением концентрации 4 мг/мл, а состав 5 восстанавливали с использованием 10,6 мл WFI с получением концентрации 2 мг/мл. Осуществляли анализ действующего вещества и чистоты и сравнивали с теоретическим значением.
Таблица 1-55
Восстановленное содержимое флакона
| Образец | Анализ (мг/мл) | Извлечения/теория1 % |
| Состав 1 (объем для восст. 5,3 мл) | 3,52 | 88,1 |
| Состав 1 (объем для восст. 10,6 мл) | 1,02 | 50,9 |
| Состав 1 (объем для восст. 15,9 мл) | 1,32 | 99,2 |
| Состав 2 | 3,55 | 88,8 |
| Состав 3 | 2,51 | 62,8 |
| Состав 4 | 3,42 | 85,5 |
| Состав 5 | 2,06 | 103,0 |
’% извлечения относительно теоретического содержания ВТ5528, составляющего 4 мг/мл, 2 мг/мл и 1,33 мг/мл
Таблица 1-56
Чистота/сопутствующие субстанции в составе 1 - три объема для восстановления
| RRT | Объем для восстановления и количество (% площади) | ||
| 5,3 мл | 10,6 мл | 15,9 мл | |
| 0,98 | 0,12 | <LOQ | <LOQ |
| ВТ5528 | 99,08 | 98,69 | 98,95 |
| 1,10 | 0,32 | 0,54 | 0,25 |
| 1,11 | 0,44 | 0,21 | 0,26 |
| 1,12 | <LOQ | 0,53 | 0,58 |
| Всего1 | 0,9 | 1,3 | 1,1 |
Таблица 1-57
Чистота/сопутствующие субстанции в составах 2-5 - три объема для восстановления
| RRT | Объем для восстановления и количество (% площади) | |||
| 2 | 3 | 4 | 5 | |
| 0,98 | ND. | <LOQ | <LOQ | 0,24 |
| ВТ5528 | 98,74 | 98,80 | 98,38 | 98,69 |
| 1,10 | 0,46 | 0,50 | 0,52 | 0,26 |
| 1,11 | 0,58 | 0,59 | 0,66 | 0,33 |
| 1,12 | 0,41 | <LOQ | 0,41 | 0,53 |
| Всего1 | 1,5 | 1,1 | 1,6 | 1,4 |
Результаты анализа, полученные для составов 1 -5, варьировались, что являлось ожидаемым, учитывая исходные данные о восстановлении, это позволяет сделать заключение о том, ВТ5528 обладает способностью адсорбироваться на стеклянном флаконе. Состав 1 (1,3 мг/мл) и состав 5 обеспечивали наибо
- 24 046145 лее оптимальный процент извлечения (99,2% и 103,0%) соответственно. Другие данные о % извлечения связаны с потерей лекарственного продукта (API) в процессе восстановления. Частицы адсорбировались на стеклянном флаконе и не могли быть полностью растворены при дальнейшем перемешивании и выдерживании в течение примерно 1 ч. Период выдерживания, составляющий 1 ч, рассматривался как нереалистичный, и в четвертом цикле оптимизации период выдерживания должен быть сокращен (~ 5 мин), для облегчения восстановления.
6.4. Обсуждение и заключение.
Установлено, что все составы обладали способностью к адсорбции, и поэтому изменчивость и потеря продукта обнаружены на протяжении всего аналитического тестирования в третьем цикле оптимизации. Для состава 5 установлены лучшие результаты по сравнению с остальными четырьмя изученными составами. Концентрация API (2 мг/мл) в составе 5 была ниже по сравнению с другими составами (4 мг/мл). В четвертом цикле оптимизации рекомендовано изучение более низкой концентрации API. Это могло бы позволять дополнительно оценить эффективность восстановления и обеспечивать согласованный процесс перехода к технической партии. Также важно, чтобы процент извлечения при анализе постоянно находился на заданном уровне до изготовления технической партии.
7. Четвертый цикл лиофилизации.
Из-за особенностей адсорбции составов в процессе лиофилизации оценивали дополнительные составы. С учетом данных, полученных в процессе скрининга содержащих сахара составов, составы 1-5 повторно анализировали в сочетании с дополнительным составом, см. табл. 1-58. В процессе скрининга содержащих сахара составов изучали более низкую (0°С) температуру вторичной сушки для исследования потенциального пересыхания пептида и потери гидратационной оболочки. При осуществлении четвертого цикла оптимизации лиофилизации осуществляли возврат к применяемой ранее температуре вторичной сушки, равной 25 °С, поскольку осуществление сушки при 0°С не улучшало характеристики восстановления.
Данные, полученные в процессе скрининга содержащих сахара составов, продемонстрировали улучшенный профиль восстановления при более низкой концентрации ВТ5528, составлявшей 2 мг/мл. Из-за снижения абсорбции, установленной для этого варианта, состав 5 оставляли для изучения в четвертом цикле оптимизации, в который вводили состав 6 с более низкой концентрацией полисорбата -20 для сохранения такого же соотношения между полисорбатом и API BT5528, что и в исходном основном составе (состав 1). Составы композиций представлены в табл. 1-58.
Таблица 1-58
Композиция продукта, представляющего собой лекарственное средство (номер партии и подробное описание состава)
| Состав 1 | 4 мг/мл ВТ5528, 5,25 мг/мл гистидина, 60 мг/мл сахарозы, 0,2 мг/мл полисорбата-20 (объем заполнения 5,3 мл - 21,2 мг/флакон), флакон 20 мл |
| Состав 5 | 2 мг/мл ВТ5528, 5,25 мг/мл гистидина, 60 мг/мл сахарозы, 0,2 мг/мл полисорбата-20 (объем заполнения 10,6 мл - 21,2 мг/флакон), флакон 20 мл |
| Состав 6 | 2 мг/мл ВТ5528, 5,24 мг/мл гистидина, 60 мг/мл сахарозы, 0,1 мг/мл полисорбата-20 (объем заполнения 10,6 мл - 21,2 мг/флакон), флакон 20 мл |
7.1. Приготовление раствора.
Каждый из составов приготавливали одинаковым образом. Добавляли примерно 35 мл или 70 мл WFI в стакан, содержащий стержень магнитной мешалки. В него добавляли с отмывкой 261,9 мг гистидина для состава 1 (50 мл), 524,9 мг для состава 5 и 524,7 мг для состава 6 (100 мл) и перемешивали с помощью магнитной мешалки до растворения. После растворения добавляли 3,0011 г сахарозы в состав 1, 6,0010 г в состав 5 и 6,0064 г в состав 6, затем перемешивали до растворения. С помощью пипетки добавляли 1 мл 1% (мас./об.) раствора полисорбата -20 в раствор гистидина/сахарозы для состава 1 и состава 6 и 2 мл для состава 5. Растворы перемешивали вплоть до полного растворения. Измеряли рН каждого раствора.
Для приготовления каждого из трех составов отвешивали ~ 257 мг ВТ5528 и медленно добавляли, затем перемешивали в течение 90 мин до полного растворения. Следует отметить, что во время добавления/растворения состава 1 ВТ5528 прилипал к стенкам стакана, что было менее заметно для составов 5 и 6 (4 мг/мл по сравнению с 2 мг/мл). API удаляли со стенок стакана с помощью пипетки, что приводило к полному растворению API в растворе. Измеряли рН растворов и доводили до рН 6,5 с помощью 1М гидроксида натрия, после чего переносили в 50-миллилитровую (состав 1) или 100-миллилитровую (составы 5 и 6) мерную колбу и доводили до требуемого объема с помощью WFI. Растворы возвращали в исходные стаканы и перемешивали с получением смеси.
Каждый из растворов фильтровали через один шприцевой фильтр с PES-мембраной с размером пор 0,22 мкм, фильтрат представлял собой прозрачный бесцветный раствор без видимых частиц.
7.2. Лиофилизация.
Полученные растворы вносили в 20-миллилитровые прозрачные стеклянные флаконы типа I, используя объем заполнения 5,3 мл (состав 1) или 10,6 мл (состав 5 и состав 6), неплотно закупоривали с помощью 20-миллиметровых пробок, применяемых при сублимационной сушки, и лиофилизировали
- 25 046145 непосредственно на полке, используя цикл, описанный в табл. 1-59.
Один флакон каждого из составов, расположенный в центре лотка, отбирали для мониторинга температуры продукта на протяжении всего цикла. Ход цикла контролировали на основе температуры (датчик полки/продукта) и перепадов давления в камере (емкостный манометр/манометр Пирани) для определения конечной точки первичной и вторичной сушки.
Таблица 1-59
Четвертый цикл оптимизации лиофилизации
| Стадия | Стадия цикла | Температура (°C) | Давление (мТорр) | Время (мин) | Скорость изменения температуры (°С/мин) |
| 1 | Загрузка | 5 | N/A | N/A | N/A |
| 2 | Выдерживание | 5 | N/A | 30 | N/A |
| 3 | Изменение температуры | -40 | N/A | 180 | 0,25 |
| 4 | Замораживание | -40 | N/A | 180 | N/A |
| 5 | Дополнительное замораживание | -40 | 100 | 30 | N/A |
| 6 | Изменение температуры | -25 | 100 | 75 | 0,20 |
| 7 | Первичная сушка | -25 | 100 | 6386 | N/A |
| 8 | Изменение температуры | 25 | 20 | 250 | 0,20 |
| 9 | Вторичная сушка | 25 | 20 | 1102 | N/A |
| 10 | Завершение | Флаконы запечатывали при 722,00 мТорр в атмосфере (чистого)азота | |||
| Общая продолжительность цикла—137 ч (—5,7 дня) |
7.3. Результаты.
7.3.1. Вешний вид раствора, рН и время восстановления.
Таблица 1-60
Внешний вид раствора, рН и время восстановления
| Образец | Внешний вид1 | pH | Время восстановления (мин) |
| Состав 1 | Прозрачный бесцветный раствор, на | 6,6 | 1 мин 52 с |
| боковых стенках обнаружена умеренная адсорбция | |||
| Состав 5 | Прозрачный бесцветный раствор, на боковых стенках обнаружена слабая адсорбция2 | 6,6 | 39 с |
| Состав 6 | Прозрачный бесцветный раствор, на боковых стенках обнаружена слабая адсорбция2 | 6,6 | 40 с |
’Во всех составах присутствовали видимые частицы. См. фотографии восстановленного раствора, представленные на фиг. 32.
Как описано ранее, наибольшие трудности возникали с восстановлением состава 1, содержащего 4 мг/мл ВТ5528. Составы 5 и 6 было проще восстанавливать из-за более низкой концентрации ВТ5528. Для состава 1 характерна более высокая степень адсорбции, чем для составов 5 и 6, это подтверждает, что снижение концентрации ВТ5528 до 2 мг/мл обеспечивало лучшее восстановление и, поэтому меньшую степень адсорбции, при этом происходила адсорбция только очень мелких частиц.
Таблица 1-61
Внешний вид лиофилизированной спрессованной массы
| Образец | Внешний вид |
| Состав 1 | Гомогенная лиофилизированная лепешка белого цвета с заметной усадкой |
| Состав 5 | Гомогенная лиофилизированная лепешка белого цвета с заметной усадкой |
| Состав 6 | Гомогенная лиофилизированная лепешка белого цвета с заметной усадкой |
7.3.2. Субвидимые частицы.
- 26 046145
Таблица 1-62
Субвидимые частицы
| Образец | 10 мкм (количество/флакон)1 | 25 мкм (количество/флакон) | Соответствует/не соответствует3 |
| Состав 1' | 191 | 18 | Соответствует |
| Состав 52 | 445 | 92 | Соответствует |
| Состав 62 | 247 | 35 | Соответствует |
'При объеме заполнения 5,3 мл 2При объеме заполнения 10,6 мл 3Количество частиц с диаметром >10 мкм на флакон < 6000 обозначают понятием «соответствует» и количество частиц с диаметром >25 мкм на флакон < 600 обозначают понятием «соответствует»
Результаты для частиц диаметром 10 мкм оказались слегка завышенными для всех составов. Флаконы, применяемые для оптимизации лиофилизации, не подвергали той же процедуре очистки, что и флаконы серии tech, и это могло приводить к завышенным результатам.
Все результаты соответствовали фармакопейным спецификациям (частиц с диаметром >10 мкм на флакон <6000 и количество частиц с диаметром >25 мкм на флакон <600).
7.3.3. Содержание воды.
Содержание влаги в лиофилизированной спрессованной массе определяли с помощью анализа Карла Фишера с использованием метанола в качестве растворителя. Для каждой партии анализировали отдельные образцы из дубликатов флаконов, см. табл. 1-63. При добавлении безводного метанола не обнаружено никаких проблем с восстановлением.
Таблица 1-63
Содержание воды
| Образец | Среднее содержание воды (мас.%) |
| Состав 1 | 0,71 |
| Состав 5 | 1,51 |
| Состав 6 | 1,47 |
Все полученные составы содержали оптимальные уровни воды <5%. При добавлении безводного метанола не обнаружено никаких проблем с восстановлением.
7.3.4. Анализ и результаты, касающиеся чистоты
7.3.4.1. До и после фильтрации
Образцы фильтровали через шприцевой фильтр с PES-мембраной с размером пор 0,22 мкм. Никаких проблем не возникало во время процесса фильтрации. По ошибке образцы после фильтрации не были собраны до лиофилизации, поэтому результаты представлены относительно теоретической концен трации.
Таблица 1-64
До и после фильтрации
| Образец | До фильтрации [ВТ5528] (мг/мл) | % извлечения1 |
| Состав 1 | 3,64 | 91,0 |
| Состав 5 | 1,97 | 98,5 |
| Состав 6 | 1,91 | 95,5 |
'% извлечения относительно теоретической концентрации, составляющей 4 мг/мл для состава 1 и 2 мг/мл для составов 5 и 6
Таблица 1-65
Чистота/сопутствующие субстанции до фильтрации
| RRT | Состав и количество (площадь, %) | ||
| 1 | 5 | 6 | |
| 0.51 | 0.22 | 0 18 | 0.22 |
| 0.53 | 0.22 | 0.21 | 0.27 |
| 0.97 | 0.13 | 0 13 | 0.11 |
| ВТ5528 | 9835 | 98.63 | 98.61 |
| 1.10 | 0.55 | 0.61 | 0.51 |
| 1.30 | 0.11 | 0 11 | 0.14 |
| Всего1 | 1.5 | 1.2 | 1.3 |
'Сумма сопутствующих субстанций >0,10%
Для составов 5 и 6 извлечение превышало 95%, относительно теоретической концентрации 2 мг/мл. Уровень извлечения для состава 1 оказался существенно ниже и составлял 91%, что позволяет предположить, что применение действующего вещества в концентрации 2 мг/мл является более надежным.
Данные о сопутствующих веществах согласуются для всех трех составов.
7.3.5. Содержимое флаконов.
- 27 046145
Таблица 1-66
Лиофилизированное содержимое флакона
| Образец | Флакон 1 [ВТ5528] (мг/флакон) | Флакон 2 [ВТ5528] (мг/флакон) | Среднее содержание [ВТ5528] (флакон) | % извлечения1 |
| Состав 1 | 19,75 | 19,65 | 19,70 | 92,9 |
| Состав 5 | 21,53 | 21,74 | 21,63 | 102,0 |
| Состав 6 | 21,11 | 20,92 | 21,01 | 99,1 |
'% извлечения относительно теоретического содержания ВТ5528, составляющего 21,2 мг/флакон
Данные о среднем содержании сопутствующих субстанций представлены в табл. 1-67.
Таблица 1-67
Чистота/сопутствующие субстанции
| RRT | Состав и количество (площадь, %) | ||
| 1 | 5 | 6 | |
| 6.51 | 0.19 | 0.18 | 0.17 |
| 0.53 | 0.26 | 0.24 | 0.23 |
| 0.97 | 0.15 | 0 15 | 0.14 |
| ВТ5528 | 98.34 | 98.26 | 98.44 |
| 1.10 | 0.70 | 0.79 | 0.65 |
| 1.30 | 0.10 | 0.11 | 0.12 |
| Всего1 | 1.4 | 1.5 | 1.3 |
'Сумма сопутствующих субстанций >0,10%
7.3.6. Восстановленный раствор
Состав 1 восстанавливали с использованием 5,3 мл WFI с получением концентрации 4 мг/мл. Составы 5 и 6 восстанавливали с использованием 10,6 мл WFI до концентрации 2 мг/мл. Осуществляли анализ (действующего вещества) и оценивали чистоту и сравнивали с теоретическим значением.
Таблица 1-68
Восстановленное содержимое флакона
| Образец | Флакон 1 [ВТ5528] (мг/мл) | Флакон 2 [ВТ5528] (мг/мл) | Среднее содержание [ВТ5528] (мг/мл) | % извлечения1 |
| Состав 1 | 2,98 | 3,25 | 3,11 | 77,8 |
| Состав 5 | 1,84 | 1,88 | 1,86 | 93,0 |
| Состав 6 | 1,79 | 1,84 | 1,81 | 90,5 |
'% извлечения относительно теоретической концентрации ВТ5528, составляющей 4 мг/мл и 2 мг/мл
Данные о среднем содержании сопутствующих субстанций представлены в табл. 1-69.
Таблица 1-69
Чистота/сопутствующие субстанции составов 1,5 и 6
| RRT | Состав и количество (площадь, %) | ||
| 1 | 5 | 6 | |
| 0.51 | 0.28 | 0.23 | 0.20 |
| 0.53 | 0.31 | 0.29 | 0.27 |
| 0.97 | 0.15 | 0.14 | 0.12 |
| ВТ5528 | 98.42 | 98.58 | 98 53 |
| 1.10 | 0.58 | 0.53 | 0.48 |
| 1.30 | 0.12 | 0.11 | 0.15 |
| Всего1 | 1.4 | 1.3 | 1.2 |
Данные о сопутствующих веществах согласуются для всех трех составов. Представленные в табл. 1-69 результаты анализов свидетельствуют о более низких значениях относительно заданных для всех трех составов. Наихудший показатель установлен для состава 1, уровень извлечения для которого составлял примерно 78%. В составе 1 присутствовала самая высокая концентрация ВТ5528 (4 мг/мл) и поэтому его труднее всего было полностью восстанавливать из-за природы API BT5528. Результаты свидетельствуют о том, что концентрация ВТ5528 ниже 2 мг/мл является более благоприятной из изученных, и ее можно рассматривать для технической партии, не соответствующей требованиям GMP.
7.4. Заключение.
Внешний вид лиофилизата оказался сходным для всех трех изученных составов - он представлял собой белый гомогенный продукт с небольшой усадкой. Изменение концентрации ВТ5528 и больший объем заполнения не влияли на внешний вид продукта.
Время восстановления растворов с концентраций 2 мг/мл (составы 5 и 6) оказалось на 1 мин быстрее по сравнению с раствором с концентрацией 4 мг/мл (состав 1). Не обнаружено различий во времени восстановления при использовании двух концентраций полисорбата-20, т.е. 0,1 и 0,2 мг/мл (составы 5 и 6 соответственно), что свидетельствует об отсутствии воздействия полисорбата-20 на время восстановле
- 28 046145 ния.
Содержание влаги в составе 1 было ниже, чем в составах 5 и 6, что является ожидаемым, поскольку объем заполнения составлял половину.
Не обнаружено различия в чистоте/сопутствующих субстанциях до и после лиофилизации или между тремя изученными составами. Однако обнаружено различие в проценте извлечения относительно теоретического значения. Анализируемое значение для состава 1 составляло 77,8% от теоретического (3,11 мг/мл) по сравнению с 91-93% для составов 5 и 6 (1,86 и 1,18 мг/мл), что свидетельствует об улучшенном восстановлении лиофилизированного продукта с более низкой концентрацией ВТ5528.
8. Оценка фильтрации
При производстве в соответствии требованиями GMP основной раствор должен быть стерилизован фильтрацией (размер пор 0,22 мкм). Должны быть изучены совместимость с фильтром и возможные потери материала в результате адсорбции на мембране и корпусе фильтра. Также должен быть осуществлен мониторинг сопутствующих субстанций.
Известный объем состава (табл. 1-71) пропускали с помощью перистальтического насоса и силиконовой трубки, отвержденной платиной, через запатентованную фильтрующую (фармацевтически) чистую капсулу Р с известной площадью поверхности для оценки адсорбционных потерь на 1 см2 площади поверхности фильтра на мембране одного типа; PES (полиэфирсульфон) (мини-капсульный фильтр Kleenpak, KA02EKVP2S, площадь поверхности 220 см2).
Оценивали легкость фильтрации, измеряемую как противодавление в восходящем потоке фильтра. Концентрацию действующего вещества и сопутствующих субстанций в растворе до фильтрации и в пяти последовательных ранних образцах фильтрата и в конечном объеме фильтрата определяли с помощью UPLC. Определяли также рН образцов до фильтрации и образцов фильтрата.
Адсорбция действующего вещества на фильтрующей мембране или поверхности капсулы, если это имеет место, обычно связана с явлением насыщения. После определения объема раствора, обеспечивающего насыщение фильтрующей капсулы определенного типа, он становится отбрасываемым начальным объемом для этой конкретной капсулы. Для лаборатории заявителя важно обеспечить меры, гарантирующие, что отношение отфильтрованного объема (мл) к общей поверхности фильтра (см2) составляло >5.
Таблица 1-70
Состав композиции для оценки фильтрации (номер партии и подробное описание состава)
| Оценка фильтрации | 2 мг/мл ВТ5528, 5,24 мг/мл гистидина, 60 мг/мл сахарозы, 0,1 мг/мл полисорбата-20 (объем заполнения 10,6 мл - 21,2 мг/флакон), флакон 20 мл |
8.1. Приготовление раствора
Состав, подробно описанный в табл. 1-70, приготавливали в 200-миллилитровом масштабе. Добавляли примерно 140 мл WFI в стакан, содержащий стержень магнитной мешалки. В него добавляли с отмывкой ~1,05 г гистидина и перемешивали с помощью магнитной мешалки до растворения. После растворения отвешивали 12 г сахарозы и добавляли с отмывкой, затем перемешивали до растворения. С помощью пипетки добавляли 2 мл 1% (мас./об.) раствора полисорбата-20 в раствор гистидина/сахарозы и перемешивали вплоть до полного растворения.
Отвешивали ~514 мг ВТ5528 и медленно добавляли в раствор, затем перемешивали в течение 90 мин до полного растворения. Измеряли рН раствора и доводили до рН 6,5 с помощью 1М гидроксида натрия, после чего переносили в 200-миллилитровую мерную колбу и доводили до требуемого объема с помощью WFI. Растворы возвращали в исходный стакан и перемешивали с получением смеси.
8.2. Фильтрация.
Образец раствора предварительно фильтровали для анализа с помощью UPLC, а оставшуюся часть фильтровали через один капсульный фильтр PES, 0,22 мкм с использованием силиконовой трубки, отвержденной платиной, и перистальтического насоса.
В процессе фильтрации собирали следующие аликвоты:
до фильтрации
0-10 мл,
10-20 мл,
20-30 мл,
30-40 мл,
40-50 мл, фильтрат основной части раствора.
Раствор легко фильтровался, а противодавление было низким, полученный в результате фильтрат представлял собой прозрачный бесцветный раствор, не содержащий видимых частиц.
Аликвоты анализировали с помощью UPLC, осуществляя определение действующего вещества и сопутствующих субстанций, для решения вопроса о том, была ли потеря действующего вещества на фильтрующей мембране, или для анализа экстрагируемых/выщелачиваемых веществ, указывающих на несовместимость с мембраной.
- 29 046145
8.3. Результаты.
Таблица 1-71
Содержимое флаконов образцов для фильтрации
| Образец | Анализ (мг/мл) | Извлечение/теор.1 (%) | Извлечение/до фильтрации2 (%) |
| До фильтрации | 2.03 | 101 5 | - |
| Первые несколько мл | 1.77 | 88.5 | 87.2 |
| 10-20 мл | 1.97 | 98.5 | 97.0 |
| 20-30 мл | 1.98 | 99.0 | 97 5 |
| 30-40 мл | 2.02 | 101 0 | 99.5 |
| 40-50 мл | 2.06 | 103 0 | 101.5 |
| Основная часть раствора | 2.04 | 102 0 | 100.5 |
1о/о извлечения относительно теоретической концентрации, составляющей 2 мг/мл ВТ5528 2% извлечения относительно результата до фильтрации
Таблица 1-72
Оценка чистоты/сопутствующих субстанций при фильтрации
| RRT | Объем и количество (% площади) | ||||||
| До фильтрации | Первые несколько мл | 10-20 мл | 20-30 мл | 30-40 мл | 40-50 мл | Основная часть | |
| 0.51 | 0.18 | 0.21 | 0.19 | 0.18 | 0.18 | 0.19 | 0.18 |
| 0.53 | 0.22 | 0.26 | 0.21 | 0.23 | 0.20 | 0.21 | 0.21 |
| 0.96 | 0.14 | 0.11 | 0.12 | 0.13 | 0.13 | 0.15 | 0.14 |
| 0.97 | 0.56 | 0.65 | 0.60 | 0.59 | 0 61 | 0.59 | 0.55 |
| ВТ5528 | 97.94 | 98 18 | 98.28 | 98 17 | 98 16 | 98.11 | 98.27 |
| 1.10 | 0.61 | 0.47 | 0.57 | 0.64 | 0.65 | 0.67 | 0.46 |
| Всего1 | 1.8 | 1.7 | 1.7 | 1.8 | 1.8 | 1.8 | 1.5 |
В первых 0-10 мл образца, пропущенного через PES-фильтр, обнаружено снижение содержания действующего вещества. Это не является неожиданным и указывает на то, что для данного типа фильтров необходим небольшой отбрасываемый объем. Приемлемые уровни извлечения достигались после фильтрации 0-10 мл, и не обнаружено значительного изменения общего количества примесей. Таким образом, PES-фильтры являются пригодными для приготовления лекарственного продукта на основе ВТ5528.
8.4. Обсуждение и заключение.
Данные о фильтрации раствора через капсульный PES-фильтр с низким противодавлением, свидетельствуют о том, что данную мембрану можно применять для фильтрации этого раствора.
Не обнаружено изменения в чистоте/сопутствующих субстанциях в собранных аликвотах или в основном растворе, что указывает на отсутствие экстрагируемых/выщелачиваемых веществ.
Данные, полученные при анализе, свидетельствуют о начальном снижении концентрации ВТ5528 в первой собранной аликвоте (0-10 мл), в которой извлечение составляло 88,5% относительно теоретического, однако результаты анализа возвращались к заданному показателю после фильтрации 10-20 мл. Это указывает на то, что при изготовлении технической партии, не соответствующей требованиям GMP, следует использовать отбрасываемый объем 10 мл на фильтр.
9. Заключение.
В настоящем изобретении продемонстрирована успешная разработка стабильного лиофилизированного состава для последующего создания технической партии, не соответствующей требованиям GMP.
Осуществляли оптимизацию циклов лиофилизации, однако из-за проблем с адсорбцией ВТ5528 на поверхности флаконов и проблем с восстановлением для создания технической партии, не соответствующей требованиям GMP, предложен более консервативный цикл.
Была проведена оценка фильтрации, которая продемонстрировала первоначальное снижение концентрации ВТ5528 во время фильтрации, которое вернулось к заданному значению после фильтрации 10 мл. Для создания технической партии, не соответствующей требованиям GMP, предложено использовать отбрасываемый объем 10 мл на фильтр.
Причину адсорбции ВТ5528 на поверхности флаконов изучали при осуществлении отдельных циклов лиофилизации. В качестве возможных причин рассматривали ряд гипотез: высокая концентрация хлорида натрия в конечном продукте, более щелочное значение рН восстановленного продукта, силанизированные флаконы и пересушивание пептида. Каждую гипотезу оценивали в сочетании со скринингом составов, включающих альтернативные сахара, поверхностно-активные вещества и более низкую концентрацию ВТ5528, для того, чтобы выяснить, улучшало ли это характеристики восстановления. Улучшенное время восстановления получали при использовании более низкого рН перед лиофилизацией, однако маслянистые капли сохранялись на поверхности флакона.
Снижение содержания хлорида натрия, применение силанизированных флаконов и снижение температуры вторичной сушки (для увеличения конечного содержания влаги продукта) не улучшали характеристики восстановления. Применение альтернативных Сахаров или поверхностно-активных веществ
- 30 046145 не приводило к улучшению, однако установлено, что снижение концентрации ВТ5528 с 4 мг/мл до 2 мг/мл улучшало характеристики восстановления. Время восстановления снижалось и никаких маслянистых капель не обнаружено на поверхности флаконов после восстановления. Извлечение относительно теоретического находилось на заданном уровне в составе с концентраций 2 мг/мл по сравнению со стабильно более низким по сравнению с заданным показателем для составов с концентрацией 4 мг/мл.
На основе результатов исследований адсорбции ВТ5528 на поверхности и после обсуждения с заказчиком для создания технической партии, не соответствующей требованиям GMP, в качестве лидирующего состава был выбран состав с концентрацией ВТ5528 2 мг/мл.
Пример 2. Фаза I/II исследования безопасности, фармакокинетических характеристик и предварительной клинической активности ВТ5528 на пациентах с запущенными (распостраненными) формами злокачественных новообразований, ассоциированных с экспрессией EphA2.
2.1 Цели.
Основные цели.
Основными целями исследования с эскалацией дозы (части А-1 и А-2) являлись:
оценка безопасности и переносимости ВТ5528 на пациентах с распостраненными солидными злокачественными опухолями, ассоциированными с экспрессией EphA2, при применении в качестве монотерапии (часть А-1) и в комбинации с ниволумабом (часть А-2), определение максимальной переносимой дозы (MTD) BT5528, если это возможно, и определение рекомендованной на фазе II дозы (RP2D) при применении в качестве монотерапии (часть А-1) и в комбинации с ниволумабом (часть А-2).
Основными целями расширений исследования (части В-1 и В-2) являлись:
оценка клинической активности ВТ5528 на пациентах, имеющих солидные опухоли с выбранными показаниями, при его применении в качестве монотерапии (часть В-1) и в комбинации с ниволумабом (часть В-2) на основе критериев RECIST 1.1.
Дополнительные (вторичные) цели.
Дополнительными целями эскалации дозы (части А-1 и А-2) в данном исследовании являлись:
оценка предварительных проявлений противоопухолевой активности, достигаемых при введении ВТ5528 у пациентов с распостраненными солидными злокачественными опухолями, ассоциированными с экспрессией EphA2, при его применении в качестве монотерапии (часть А-1) и в комбинации с ниволумабом (часть А-2), определение фармакокинетических (ФК) параметров ВТ5528, определение частоты возникновения антител к лекарственному средству (ADA).
Дополнительными целями расширений исследования (части В-1 и В-2) являлись:
оценка безопасности и переносимости ВТ5528 на имеющих солидные опухоли пациентах с выбранными показаниями при применении в качестве монотерапии (часть В-1) и в комбинации с ниволумабом (часть В-2), определение фармакокинетических (ФК) параметров ВТ5528, определение частоты возникновения антител к лекарственному средству (ADA).
2.2. Дизайн исследования.
Настоящее исследование представляло собой фазу I/II проводимого впервые на людях открытого исследования с эскалацией дозы ВТ5528, при его применении в качестве единственного агента (Части А1 и В-1) и в комбинации с ниволумабом (части А-2 и В-2). Настоящее исследование состояло из двух частей: часть А, эскалация дозы и часть В, расширение дозы.
2.3. Исследуемые лекарственные средства, дозы и формы введения ВТ5528 в возрастающих дозах вводили внутривенно посредством инфузии в течении 1 ч. Ниволумаб вводили согласно инструкции.
2.4. Критерии включения - все пациенты.
Для включения в исследование пациенты должны удовлетворять следующим критериям:
1. Наличие письменного информированного согласия в соответствии с местными руководящими требованиями, подписанного и датированного пациентом или законным опекуном до проведения любых специфичных для исследования процедур, взятия проб или анализов. Если пациент отказывается участвовать в каком-либо добровольном компоненте исследования (например, биопсия опухоли), то пациент не будет оштрафован или лишен выгоды, и он/она не будет исключен/исключена из других аспектов исследования.
2. Возраст должен составлять не менее 18 лет на момент подписания формы информированного согласия.
3. Общее состояние здоровья согласно шкале оценки Восточной кооперативной онкологической группы (ECOG) должно соответствовать баллу 0 или 1.
- 31 046145
| Шкала оценки общего состояния здоровья ECOG | Шкала Карновского оценки общего состояния здоровья | ||
| Балл | Описание | Процент | Описание |
| 0 | Нормальная активность. Полностью активен, способен выполнять без ограничений всю работу, которую выполнял до заболевания | 100 | Нормальное состояние, жалобы отсутствуют, нет проявлений заболевания |
| 90 | Способен осуществлять нормальную активность; слабые признаки или симптомы заболевания | ||
| 1 | Симптомы, не требующие нахождения в стационаре (амбулаторные). Ограничен в требующей физических усилий деятельности, но амбулаторно, и способен выполнять легкую или сидячую работу (например, легкая домашняя работа, офисная работа) | 80 | Нормальная активность с усилиями; некоторые признаки или симптомы заболевания |
| 70 | Способен заботиться о себе, неспособен осуществлять нормальную активность или выполнять активную работу |
4. Пациенты должны иметь поддающееся определению заболевание согласно критериям оценки ответа солидных опухолей (RECIST) v1.1.
5. Приемлемая функция органов, характеризующаяся следующими данными лабораторных анализов:
почечная функция: клиренс креатинина >50 мл/мин по уравнению Кокрофта-Голта или по результатам 24-часового сбора мочи;
общий билирубин <1,5 х ULN (верхняя граница нормы);
сывороточный альбумин >2,5 г/дл;
аспартатаминотранфераза (AST) <2,5 х ULN или <5 х ULN при наличии метастазов в печени;
аланинаминотрансфераза (ALT) <2,5 х ULN или <5 х ULN при наличии метастазов в печени;
международное нормализованное отношение (INR) <1,3 или < институциональной (ведомственной) ULN (антикоагулянты не разрешены).
6. Приемлемая гематологическая функция (пациенту не разрешено осуществлять трансфузию эритроцитов или тромбоцитов или вводить факторы роста в течение 4 недель после обработки первой дозой ВТ5528):
гемоглобин >9 г/дл;
абсолютное количество нейтрофилов (ANC) >1500 клеток/мм3; и количество тромбоцитов >75000 клеток/мм3.
7. Отрицательный результат теста на беременность для женщин с детородным потенциалом (WOCBP) (отрицательный результат теста сыворотки при скрининге и отрицательный результат теста мочи или сыворотки в течение 3 дней до введения первой дозы ВТ5528). Пациентам мужского пола с партнершами женского пола с детородным потенциалом и пациенткам женского пола с детородным потенциалом необходимо соблюдать высокоэффективную контрацепцию (разрешены оральные и гормональные контрацептивы) по крайней мере столь же надежную, что и рекомендуемая Группой содействия клиническим испытаниям (CTFG) при частоте неудач менее 1%. (https://www.hma.eu/fileadmin/dateien/Human_Medicines/01About_HMA/Workmg_Groups/CTFG/2014_09_HMA_CTFG_Contraception.pdf), во время их участия в исследовании и в течение 6 месяцев после введения последней дозы исследуемого лекарственного средства. Пациенты мужского пола также должны воздерживаться от сдачи спермы во время их участия в исследовании в течение 6 месяцев после введения последней дозы исследуемого лекарственного средства, а женщины не должны кормить грудью в течение этого времени или сдавать яйцеклетки.
Женщины, не обладающие детородным потенциалом, определяются следующим образом:
женщины считаются находящимися в постменопаузе и не способными к деторождению, если у них имела место естественная (спонтанная) аменорея в течение 12 месяцев с соответствующим клиническим профилем (например, соответствующий возраст, наличие вазомоторных симптомов в анамнезе), женщины, подвергшиеся постоянной форме стерилизации (например, окклюзия маточных труб, гистерэктомия, двусторонняя сальпингэктомия, двусторонняя овариэктомия), женщины в возрасте >45 лет, не использующие гормонозаместительную терапию и у которых наблюдалось полное прекращение менструаций в течение по крайней мере 12 месяцев ИЛИ имеющих уровень фолликулостимулирующего гормона (FSH) >40 мМЕ/мл и уровень эстрадиола <40 пг/мл (140 пмолей/л), женщины в возрасте >45 лет, использующие гормонозаместительную терапию и у которых наблюдалось полное прекращение менструаций в течение по крайней мере 1 года ИЛИ у которых были документально подтвержденные признаки менопаузы, основанные на уровне FSH >40 мМЕ/мл и уровне эстрадиола <40 пг/мл до начала гормонозаместительной терапии.
8. Наличие архивных образцов опухоли в течение 9 месяцев до даты введения первой дозы ВТ5528 или готовность предоставить свежую биопсию опухоли во время скрининга.
9. Ожидаемая продолжительность жизни >12 недель после начала лечения ВТ5528 в соответствии с
- 32 046145 заключением исследователя.
10. Наличие готовности и способности соблюдать протокол и процедуры исследования.
Дополнительные критерии включения - только для части А 1. Пациенты с запущенными формами гистологически подтвержденных злокачественных солидных опухолей, в отношении которых известно, что они характеризуются высокой экспрессией EphA2 (немелкоклеточный рак легкого (NSCLC), рак яичников, трижды негативный рак молочной железы (TNBC), рак желудка/верхних отделов желудочнокишечного тракта (GI), рак поджелудочной железы и уротелиальный рак), с рецидивом после предыдущей терапии и которые являются кандидатами на участии в исследование фазы I из-за отсутствия утвержденных или стандартных вариантов лечения. Пациенты с другими опухолями могут быть включены в исследование, если у них имеются доказательства высокой экспрессии EphA2 в опухолевой ткани, собранной в течение 9 месяцев до даты введения первой дозы ВТ5528. SRC (научно-исследовательский совет) может принять решение о необходимости включения определенных типов опухолей в число тех, которые перечислены в разделе 3.1.1, в любой момент при исследовании эскалации, если сочтет необходимым дополнить оценку биомаркеров, безопасности или ФК для конкретного типа опухоли.
Дополнительные критерии включения - части В-1 и В-2 - когорты с NSCLC, участвующие в монотерапии и комбинированной терапии.
1. Могут быть включены пациенты с метастатическим рецидивирующим заболеванием, гистологически подтвержденным как подтип аденокарциномы NSCLC (адено-NSCLC), для которых должны быть исчерпаны все стандартные варианты лечения, имеет место прогрессирование на фоне или после химиотерапии на основе платины, и/или лечение которых по меньшей мере с использованием одной предыдущей линии терапии оказалось неудачным, которые имеют признаки прогрессирования по данным радиографического исследования при использовании самой современной линии терапии. При характерных для опухолей геномных нарушениях EGFR, ALK, NTRK, ROS1 или других факторов они не должны быть кандидатами или должны получать надлежащее лечение заболевания, связанного с драйверными мутациями, если это может быть осуществлено. Если они ранее подвергались иммунотерапии, то последняя доза должна быть введена по меньшей мере за 28 дней до первой дозы ВТ5528.
2. По крайней мере 6 пациентов в когорте должны иметь по крайней мере 1 опухолевое поражение, поддающееся биопсии, и они должны быть готовы пройти биопсию до введения первой дозы ВТ5528 и после любой дозы в цикле 1.
2.5. Критерии исключения - все пациенты.
Пациенты, удовлетворяющие любому из перечисленных ниже критериев, должны быть исключены из участия в исследовании.
1. Химиотерапевтическое лечение в течение 14 дней до введения первой дозы исследуемого лекарственного средства, другие противораковые терапии в течение 28 дней или 5 периодов полувыведения, в зависимости от того, что короче. Обнаруженные ранее виды токсичности у пациента должны быть снижены до 1 степени в соответствии с Общепринятыми терминологическими критериями нежелательных явлений (СТСАЕ), v 5.0 (за исключением алопеции, которая должна не превышать 2 степень).
2. Экспериментальное лечение в течение 4 недель до введения первой дозы ВТ5528.
3. Текущее лечение сильными ингибиторами или индукторами CYP3A4 или сильными ингибиторами P-gp, в том числе на растительной или пищевой основе.
4. Известная чувствительность к любому из ингредиентов исследуемого продукта или к монометилауростатину Е (ММАЕ).
5. Серьезное медицинское состояние, угрожающее жизни заболевание, активная неконтролируемая инфекция или дисфункция системы органов (например, асцит, коагулопатия, энцефалопатия), или другие причины, которые по мнению исследователя могут поставить под угрозу безопасность пациента или помешать или поставить под угрозу целостность результатов исследования, включая учет сопутствующих заболеваний желудочно-кишечного тракта, кожи и легких, а также обзор скрининговой компьютерной томографии грудной клетки, проводимый для того, чтобы убедиться в отсутствии клинически значимых сопутствующих заболеваний.
6. Серьезная операция (за исключением размещения сосудистого доступа) в течение 4 недель до введения первой дозы ВТ5528 и необходимость адекватного восстановления до начала исследуемого терапевтического лечения.
7. Получение живой вакцины в течение 30 дней до исследуемой обработки.
8. Неконтролируемые симптоматические метастазы в головной мозг (пациент должен иметь стабильный неврологический статус после местной терапии в течение по меньшей мере 4 недель без применения стероидов или принимать стабильную или пониженную дозу, которая была ниже или эквивалента суточной дозе 10 мг преднизона или его эквивалента, и у него должны отсутствовать неврологические дисфункции, которые могли бы затруднить оценку неврологических и других НЯ).
9. Пациенты с неконтролируемой гипертензией (систолическое кровяное давление [ВР] >139 MMHg; диастолическое ВР >89 MMHg) до введения первой дозы ВТ5528 (должны находиться под стабильным контролем не менее 3 месяцев).
- 33 046145
10. История болезни или текущие данные о каком-либо состоянии, терапии или лабораторных отклонениях, которые могут повлиять на результаты исследования, помешать участию пациента или не отвечают наилучшим интересам пациента участвовать (в исследовании) по мнению исследователя, включая (но не ограничиваясь только ими):
наличие в анамнезе пациентов сосудистых заболеваний головного мозга (инсульт или транзиторная ишемическая атака), стенокардии, инфаркта миокарда, застойной сердечной недостаточности или симптомов III-IV класса согласно классификации Нью-Йоркской кардиологической ассоциации, задокументированных в течение 6 месяцев до введения первой дозы ВТ5528, или i - средний скорректированный интервал QT в покое (QTcF) >470 мс, ii - любые факторы, которые повышают риск удлинения интервала QT или риск нарушений ритма, такие как сердечная недостаточность, гипокалиемия, врожденный синдром удлинения интервала QT, семейный анамнез синдрома удлинения интервала QT или необъяснимой внезапной смерти в возрасте до 40 лет, или применение любых сопутствующих медикаментозных средств, для которых известно, что они удлиняют интервал QT;
iii - любые клинически значимые (по мнению исследователя) нарушения ритма, проводимости или морфологии электрокардиограмм в состоянии покоя (ЭКГ), например, полная блокада левой ножки пучка Гиса, блокада сердца третьей степени.
11. Установленное заражение вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ) или наличие синдрома приобретенного иммунодефицита (СПИД).
12. Положительная реакция на поверхностный антиген вируса гепатита В и/или антитело к ядерному антигену вируса гепатита В. Пациентам с отрицательным результатом анализа методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) разрешается участвовать при проведении соответствующей противовирусной терапии.
13. Активная форма инфекционного гепатита С с положительной вирусной нагрузкой, если реакция на антитела к вирусу гепатита С (HCV) положительная (если реакция на антитела отрицательная, то тест на вирусную нагрузку не применим). Пациенты, проходившие лечение от инфекции, вызываемой вирусом гепатита С, могут быть включены, если у них имеется документальное подтверждение устойчивого вирусологического ответа продолжительностью >12 недель.
14. Тромбоэмболические осложнения и/или нарушения свертываемости крови в течение 3 месяцев (например, тромбоз глубоких вен [DVT] или тромбоэмболия легочной артерии [РЕ]) до введения первой дозы ВТ5528.
15. Наличие в анамнезе другого злокачественного заболевания в течение 3 лет до введения первой дозы ВТ5528 или наличие любых остаточных признаков ранее диагностированного злокачественного новообразования (за исключением адекватно пролеченной с целью исцеления базально-клеточной карциномы, плоскоклеточного рака кожи, интраэпителиальной неоплазии шейки матки/рака шейки матки in situ или меланомы in situ или протоковой карциномы in situ молочной железы).
16. Системное противоинфекционное лечение или наличие лихорадки в течение последних 14 дней до введения первой дозы ВТ5528.
17. Психологические, семейные, социологические или географические условия, которые не позволяют выполнять требования протокола и/или последующие процедуры, описанные в протоколе.
Дополнительные критерии исключения - части А-2 и В-2, когорты для комбинированного лечения с применением ниволумаба
1. Установленная ранее непереносимость ингибитора иммунных контрольных точек.
2. Установленная гиперчувствительность к терапии, основанной на применении ингибитора контрольных точек.
3. Имевшая место ранее трансплантация органа (включая аллогенную).
4. Диагноз клинически значимого иммунодефицита.
5. Активная системная инфекция, требующая терапии.
6. Ежедневный прием более 10 мг эквивалента преднизона или другого сильного иммунодепрессанта.
7. Наличие в анамнезе аутоиммунного заболевания за исключением алопеции или витилиго.
8. Наличие в анамнезе интерстициального заболевания легких.
2. 6 Корреляционное тестирование.
Все пациенты должны предоставить архивный материал опухоли или свежую биопсию опухоли для оценки уровней экспрессии EphA2 и дополнительной молекулярно-генетической характеризации (т.е. оценки специфических соматических мутаций и т.д.). Этот материал следует предоставить в виде блока ткани или 10-15 неокрашенных предметных стекол, залитых в парафин.
Для исследования внутриопухолевых ФК/фармакодинамических эффектов ВТ5528 должны быть взяты биопсии опухоли до и после введения дозы. Биопсия опухоли до и после введения дозы является необязательной для всех пациентов, но должна быть обязательной для подгруппы пациентов, участвующих в части В (6 на когорту). Биопсию после введения дозы в цикле 1 требуется осуществлять после любой дозы, поскольку она проводится в течение 4-36 ч после введения дозы ВТ5528. Более подробная ин
- 34 046145 формация представлена в графике оценок (SOA).
Также должны быть взяты образцы крови до и после введения дозы для оценки фармакодинамики, ответа и биомаркеров резистентности к лечению, таких как соматические мутации в циркулирующей опухолевой ДНК (ЛДНК), ADA, и для фармакогеномного анализа.
2.7 . Статистическая методология.
Эскалация дозы (применяется отдельно для А-1 и А-2): Фактическое количество уровней дозы, которые должны быть изучены в этом исследовании, должно зависеть от определения непереносимой дозы на основе ограничивающей дозу токсичности (DLT). MTD должна быть определена на основе DLT (см. раздел 5). Для определения RP2D (рекомендуемая доза фазы II), которая не должна превышать MTD, следует применять и другие данные о безопасности, а также профили ФК, наблюдаемые во время проведения исследования, и любые тенденции противоопухолевой активности.
Для первых двух уровней дозы должна использоваться схема 3+3. При каждом уровне дозы в исследовании должны участвовать по крайней мере 3 пациента, пригодных для оценки, и их следует оценивать в течение 28 дней перед повышением дозы до следующего уровня. После подтверждения переносимости на первом уровне дозы можно повышать дозу не более чем на 100% до второго уровня дозы. Циклы обработки должны выполняться последовательно в соответствии с SOA. Если у одного пациента обнаружена DLT, то еще 3 пациента должны получить ту же дозу. Перед переходом к следующему уровню дозы требуется оценка когорты, состоящей по меньшей мере из 3 пациентов, завершивших цикл 1 лечения (28 дней). Дополнительные сведения приведены в разделе 5.
После подтверждения переносимости первых двух уровней дозы все последующие увеличения интервала доз будут основываться на типе метода непрерывной переоценки (CRM) с использованием двухпараметрической байесовской модели логистической регрессии (BLRM) и принципа увеличения с контролем передозировки (EWOC), согласно которому следующий более высокий уровень увеличенной дозы должен иметь самую высокую апостериорную вероятность возникновения DLT в заданном интервале (20%, 33%) среди доз, удовлетворяющих критерию передозировки, состоящему в том, что существует <25% вероятность того, что уровень дозы будет признан небезопасным (частота встречаемости DLT >33%). BLRM должна быть применена к совокупным данным DLT/безопасности, и результаты должны быть предоставлены SRC, и после рассмотрения этих данных SRC должен вынести рекомендацию относительно точного увеличения дозы. Расчетная схема увеличения дозы приведена в разделе 5, а полная информация приведена в Приложении F: Details and Operating Characteristics of the Dose Escalation Desighn (Подробное описание и рабочие характеристики схемы увеличения дозы).
Для каждой когорты, участвующей в Части В, должна использоваться 2-этапная схема Саймона, где р0 = 0,175 и p1 = 0,35 с односторонним альфа-критерием 0,05 и мощностью 80%, где р0 и p1 являются нулевой и альтернативной гипотезами для общей частоты ответов (ORR). Если у 3 или большего количества пациентов из числа первых 14 набранных пациентов выявлен объективный ответ (ORR >21%), то дозу следует ввести еще 26 пациентам; в противном случае исследование когорты должно быть прекращено.
Таким образом, максимальное число пациентов, включенных в исследование, составляет 152; 48 в Части А-1, 24 в Части А-2 и 40 в каждой из двух когорт Части В.
Claims (16)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Фармацевтическая композиция, содержащая:ВТ5528 или его фармацевтически приемлемую соль;примерно 1,31-2,62 мг гидрохлорида гистидина на 1 мг ВТ5528 или его фармацевтически приемлемой соли;примерно 15-30 мг сахарозы на 1 мг ВТ5528 или его фармацевтически приемлемой соли; и примерно 0,05-0,1 мг полисорбата-20 на 1 мг ВТ5528 или его фармацевтически приемлемой соли.
- 2. Фармацевтическая композиция по п.1, которая представляет собой твердую фармацевтическую композицию в форме лиофилизированного порошка.
- 3. Фармацевтическая композиция по п.1, которая представляет собой жидкую фармацевтическую композицию, дополнительно содержащую воду.
- 4. Фармацевтическая композиция по п.1, содержащая:примерно 21,2 мг ВТ5528 или его фармацевтически приемлемой соли;примерно 55,5 мг гидрохлорида гистидина;примерно 636 мг сахарозы; и примерно 1,06-2,12 мг полисорбата-20.
- 5. Фармацевтическая композиция по п.1, содержащая:примерно 21,2 мг ВТ5528 или его фармацевтически приемлемой соли;примерно 27,8 мг гидрохлорида гистидина;примерно 318 мг сахарозы; и примерно 1,06 мг полисорбата-20.- 35 046145
- 6. Фармацевтическая композиция по п.3, содержащая:примерно 2-4 мг/мл ВТ5528 или его фармацевтически приемлемой соли;примерно 5,25 мг/мл гидрохлорида гистидина;примерно 60 мг/мл сахарозы; и примерно 0,1-0,2 мг/мл полисорбата-20.
- 7. Фармацевтическая композиция по п.3, содержащая:примерно 2 мг/мл ВТ5528 или его фармацевтически приемлемой соли;примерно 5,24 мг/мл гидрохлорида гистидина;примерно 60 мг/мл сахарозы; и примерно 0,1 мг/мл полисорбата-20.
- 8. Фармацевтическая композиция по п.3, содержащая:примерно 2 мг/мл ВТ5528 или его фармацевтически приемлемой соли;примерно 5,24 мг/мл гидрохлорида гистидина;примерно 60 мг/мл сахарозы; и примерно 0,2 мг/мл полисорбата-20.
- 9. Фармацевтическая композиция по п.3, содержащая:примерно 4 мг/мл ВТ5528 или его фармацевтически приемлемой соли;примерно 5,24 мг/мл гидрохлорида гистидина;примерно 60 мг/мл сахарозы; и примерно 0,2 мг/мл полисорбата-20.
- 10. Твердая фармацевтическая композиция, которая представляет собой лиофилизированный порошок, содержащая:примерно 21,2 мг ВТ5528 или его фармацевтически приемлемой соли;примерно 27,8 мг гидрохлорида гистидина;примерно 318 мг сахарозы;примерно 1,06 мг полисорбата-20.
- 11. Способ лечения распространенной солидной злокачественной опухоли, ассоциированной с экспрессией EphA2 у пациента, включающий внутривенное введение пациенту фармацевтической композиции по любому из пп.1-10.
- 12. Способ по п.11, в котором распространенную солидную злокачественную опухоль, ассоциированную с экспрессией EphA2, выбирают из немелкоклеточного рака легкого (NSCLC), рака яичников, трижды негативного рака молочной железы (TNBC), рака желудка/верхних отделов желудочнокишечного тракта (GI), рака поджелудочной железы и уротелиального рака.
- 13. Способ по п.11 или 12, в котором фармацевтическую композицию вводят один раз каждые 7 дней.
- 14. Способ по любому из пп.11-13, в котором фармацевтическую композицию вводят в дозе примерно 2,2, 4,4, 7,3, 11, 14,6 или 19,4 мг/м2
- 15. Способ по любому из пп.11-14, в котором фармацевтическую композицию вводят путем IVинфузии в течение примерно 60 мин.
- 16. Способ по любому из пп.11-14, дополнительно включающий введение ниволумаба.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US62/940,966 | 2019-11-27 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA046145B1 true EA046145B1 (ru) | 2024-02-09 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20230025916A1 (en) | BICYCLIC PEPTIDE LIGANDS SPECIFIC FOR EphA2 AND USES THEREOF | |
| Braña et al. | Cardiotoxicity | |
| KR20180064529A (ko) | 악성종양을 치료하기 위한 조합 요법 | |
| TW201422235A (zh) | 抗－泌乳素受器抗體配方 | |
| KR101074430B1 (ko) | 항암 용도를 위한 독소루비신 제형 | |
| KR20190075938A (ko) | Sstr-표적화된 접합체 및 이의 입자 및 제형 | |
| AU2019400978A1 (en) | Extended low dose regimens for MDM2 inhibitors | |
| WO2021234391A1 (en) | Bicyclic peptide ligands specific for nectin-4 and uses thereof | |
| UA125971C2 (uk) | Фармацевтична композиція, яка містить протеїновий комплекс il-15, та її застосування | |
| EA046145B1 (ru) | Фармацевтические композиции, содержащие конъюгат, содержащий токсин и бициклический пептид, и способы их применения | |
| KR20220113355A (ko) | 항-코넥신 항체 제제 | |
| AU2022390670A1 (en) | Methods for treating cancer | |
| JP7282045B2 (ja) | Ｂ型肝炎ウイルス感染を特徴とする肝細胞癌の治療 | |
| US20230135136A1 (en) | Fgfr tyrosine kinase inhibitors and anti-pdi agents for the treatment of urothelial carcinoma | |
| WO2024076633A1 (en) | Methods of treating estrogen receptor-mediated disorders | |
| WO2024076626A1 (en) | Methods of treating estrogen receptor-mediated disorders | |
| EA043796B1 (ru) | Лечение гепатоцеллюлярной карциномы, которая характеризуется вирусной инфекцией гепатита b | |
| JP2023153362A (ja) | トレオスルファンの凍結乾燥物 | |
| AU2021270745A1 (en) | IL-2 fusion polypeptide compositions and methods of making and using the same | |
| TW202203928A (zh) | 硫代胺基甲酸酯衍生物ａ２ａ抑制劑的施用方法及調配物 | |
| NZ760205B2 (en) | Treatment of hepatocellular carcinoma characterized by hepatitis b virus infection |