JP2023505218A

JP2023505218A - 二重特異性抗ｂｃｍａ×抗ｃｄ３抗体により多発性骨髄腫を治療する方法

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Publication number: JP2023505218A
Application number: JP2022533414A
Authority: JP
Inventors: イザレル・ロウィ; デーヴィッド・スターンバーグ; マニッシュ・シャーマ; リーヴ・アドリアンス
Original assignee: Regeneron Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Regeneron Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2019-12-06
Filing date: 2020-12-04
Publication date: 2023-02-08
Also published as: WO2021113701A1; CN114929343A; US20210206865A1; AU2020398167A1; EP4069373A1; MX2022006714A; US11919965B2; IL293288A; CA3160352A1; KR20220110510A

Abstract

Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）は、悪性形質細胞上に発現する。本発明は、ＢＣＭＡおよびＣＤ３の両方に結合し、ＢＣＭＡ発現腫瘍細胞の存在下でＣＤ３複合体を介してＴ細胞を活性化する二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）を使用して、多発性骨髄腫を治療する方法を提供する。ある特定の実施形態において、本発明の二重特異性抗原結合分子は、ＢＣＭＡを発現する腫瘍の成長を阻害することができる。【選択図】図１

Description

配列表の参照
本出願は、２０２０年１２月４日に作成され、８１，９５６バイトを含むファイル１０７０２ＷＯ０１－Ｓｅｑｕｅｎｃｅとしてコンピュータ可読形式で提出された配列表を参照することにより組み込む。

本発明は、ＢＣＭＡおよびＣＤ３に結合する二重特異性抗原結合分子（例えば、二重特異性抗体）、ならびにそれらの使用方法に関する。

ＴＮＦＲＳＦ１７またはＣＤ２６９としても知られているＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）は、シグナルペプチドを欠き、システインに富む細胞外ドメインを含むＩＩＩ型膜貫通タンパク質である。ＢＣＭＡは、密接に関連するタンパク質とともに、発達の異なる段階でＢ細胞の生存を促進する。ＢＣＭＡは、Ｂ細胞系列細胞、特に胚中心の濾胞間領域、ならびに形質芽細胞および分化した形質細胞でのみ発現する。ＢＣＭＡは、形質細胞の分化中に選択的に誘導され、骨髄中の長寿命の形質細胞の最適な生存に必要である。多発性骨髄腫では、ＢＣＭＡは、悪性形質細胞上に高レベルで広く発現しており、ＢＣＭＡの発現は、正常細胞から活動性多発性骨髄腫への進行とともに増加する。ＢＣＭＡはまた、ワルデンストレームマクログロブリン血症、バーキットリンパ腫、およびびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫を含む、他のＢ細胞悪性腫瘍でも発現する。非特許文献１。

ＣＤ３は、Ｔ細胞受容体複合体（ＴＣＲ）とともにＴ細胞上に発現されるホモ二量体またはヘテロ二量体抗原であり、Ｔ細胞活性化に必要とされる。機能的ＣＤ３は、４つの異なる鎖：イプシロン、ゼータ、デルタ、およびガンマのうちの２つの二量体会合から形成される。ＣＤ３の二量体配置は、ガンマ／イプシロン、デルタ／イプシロン、およびゼータ／ゼータを含む。ＣＤ３に対する抗体はＴ細胞上でＣＤ３をクラスター化し、それによってペプチド負荷ＭＨＣ分子によるＴＣＲの関与と同様の様式でＴ細胞活性化を引き起こすことが示されている。したがって、抗ＣＤ３抗体はＴ細胞の活性化を含む治療目的のために提案されている。さらに、ＣＤ３および標的抗原に結合することができる二重特異性抗体は、標的抗原を発現する組織および細胞に対するＴ細胞免疫応答を標的化することを含む治療的使用のために提案されている。

複数のクラスの治療に抵抗性のある多発性骨髄腫患者は、全生存率が低下している（三重および四重難治性：９．２か月、五重難治性：５．６か月）。非特許文献２。ＢＣＭＡおよびＣＤ３の両方に結合する二重特異性抗原結合分子を含む、ＢＣＭＡを標的化する抗原結合分子は、ＢＣＭＡを発現する細胞を特異的に標的化し、Ｔ細胞媒介的に死滅することが望まれる治療設定において有用であり得る。

Ｔａｉｅｔａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，７（１１）：１１８７－１１９９，２０１５ＧａｎｄｈｉＵ．ｅｔａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ３３：２２６６－２２７５，２０１３

一態様では、本発明は、（ａ）インビトロＦＡＣＳ結合アッセイによって測定されるように、約１００ｎＭ未満のＥＣ_５０を有する、標的腫瘍細胞上のヒトＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインと、（ｂ）インビトロＦＡＣＳ結合アッセイによって測定されるように、約１０^－６Ｍ未満のＥＣ_５０を有する、ヒトＣＤ３に特異的に結合する第２の抗原結合ドメイン（Ｄ２）と、を含む、単離された二重特異性抗原結合分子を提供する。

場合によっては、二重特異性抗原結合分子は、約１０^－９Ｍ未満のＥＣ_５０を有するインビトロでＴ細胞を活性化する。場合によっては、二重特異性抗原結合分子は、約１０^－９Ｍ未満のＥＣ_５０を有するＢＣＭＡを発現する腫瘍細胞株のインビトロＴ細胞死滅を媒介する。場合によっては、二重特異性抗原結合分子は、約１０^－８Ｍ未満のＥＣ_５０を有するＢＣＭＡを発現する原発性骨髄腫細胞のインビトロ自己Ｔ細胞死滅を媒介する。いくつかの実施形態において、二重特異性抗原結合分子は、配列番号１１５に記載のＢＣＭＡのアミノ酸残基１～４３と相互作用する。

場合によっては、標的腫瘍細胞は、形質細胞である。場合によっては、標的腫瘍細胞は、多発性骨髄腫を罹患している患者からのものであるか、またはＢＣＭＡを発現するＢ細胞を有することを部分的に特徴とする別のＢ細胞障害からのものである。場合によっては、二重特異性抗原結合分子は、約０．０４ｍｇ／ｋｇ～約４．０ｍｇ／ｋｇの用量で、ＢＣＭＡ発現腫瘍細胞の増殖を阻害する。場合によっては、用量は、０．０４ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、または４ｍｇ／ｋｇである。場合によっては、用量は約０．００１ｍｇ／ｋｇ、０．００２ｍｇ／ｋｇ、０．００３ｍｇ／ｋｇ、０．００４ｍｇ／ｋｇ、０．００５ｍｇ／ｋｇ、０．００６ｍｇ／ｋｇ、０．００７ｍｇ／ｋｇ、０．００８ｍｇ／ｋｇ、０．００９ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０２ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．０４ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０６ｍｇ／ｋｇ、０．０７ｍｇ／ｋｇ、０．０８ｍｇ／ｋｇ、０．０９ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１．１ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．３ｍｇ／ｋｇ、１．４ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．６ｍｇ／ｋｇ、１．７ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、１．９ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１３ｍｇ／ｋｇ、１４ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、１６ｍｇ／ｋｇ、１７ｍｇ／ｋｇ、１８ｍｇ／ｋｇ、１９ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態において、用量は、投与を必要とする患者に、少なくとも７回の用量に対して少なくとも１週間に２回投与される。いくつかの実施形態において、用量は、投与を必要とする患者に、少なくとも１週間に１回投与される。いくつかの実施形態において、用量は、少なくとも２週間ごとに患者に投与される。いくつかの実施形態において、用量は、少なくとも４週間ごとに患者に投与される。場合によっては、二重特異性抗原結合分子は、骨髄腫細胞、リンパ腫細胞、および白血病細胞からなる群から選択されるＢＣＭＡ＋腫瘍細胞の増殖を阻害する。場合によっては、二重特異性抗原結合分子は、Ｈ９２９細胞、ＭＯＬＰ－８細胞、およびＯＰＭ細胞からなる群から選択されるＢＣＭＡ＋腫瘍細胞の増殖を阻害する。

場合によっては、二重特異性抗原結合分子は、カニクイザルＢＣＭＡと交差反応する。場合によっては、二重特異性抗原結合分子は、カニクイザルＢＣＭＡと交差反応しない。

いくつかの実施形態において、単離された二重特異性抗原結合分子は、（ａ）配列番号６６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）内に含まれる３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）、および（ｂ）配列番号８２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）内に含まれる３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）、を含む、第１の抗原結合ドメインを含む。場合によっては、二重特異性抗原結合分子の第１の結合ドメインは、配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、を含む。場合によっては、二重特異性抗原結合分子の第１の結合ドメインは、配列番号８４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号８６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号８８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、を含む。場合によっては、第１の抗原結合ドメインは、配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ、および配列番号８２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ、を含む。

いくつかの実施形態において、単離された二重特異性抗原結合分子は、（ａ）配列番号９０または配列番号９８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）内に含まれる３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）、および（ｂ）配列番号８２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）内に含まれる３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）、を含む、第２の抗原結合ドメインを含む。場合によっては、第２の抗原結合ドメインは、（ａ）配列番号９２または配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号９４または配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、および（ｃ）配列番号９６または配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、を含む。場合によっては、第２の抗原結合ドメインは、配列番号８４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号８６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号８８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、を含む。場合によっては、第２の抗原結合ドメインは、（ａ）配列番号９２、９４、９６のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３ドメイン、および配列番号８４、８６、８８のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３ドメイン、または（ｂ）配列番号１００、１０２、１０４のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３ドメイン、および配列番号８４、８６、８８のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３ドメイン、を含む。場合によっては、第２の抗原結合ドメインは、（ａ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ、および配列番号８２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ、または（ｂ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ、および配列番号８２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ、を含む。

別の態様では、本発明は、単離された二重特異性抗原結合分子であって、（ａ）配列番号６８、７０、７２のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３ドメイン、および配列番号８４、８６、８８のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３ドメイン、を含む、第１の抗原結合ドメインを含む、単離された二重特異性抗原結合分子を提供する。

別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号６８、７０、７２のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３ドメイン、および配列番号８４、８６、８８のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３ドメイン、を含む、第１の抗原結合ドメイン、ならびに（ｂ）配列番号９２、９４、９６のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３ドメイン、および配列番号８４、８６、８８のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３ドメイン、を含む、第２の抗原結合ドメイン、を含む、単離された二重特異性抗原結合分子を提供する。場合によっては、単離された二重特異性抗原結合分子は、（ａ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ、および配列番号８２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ、を含む、第１の抗原結合ドメイン、ならびに（ｂ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ、および配列番号８２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ、を含む、第２の抗原結合ドメイン、を含む。

別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号６８、７０、７２のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３ドメイン、および配列番号８４、８６、８８のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３ドメイン、を含む、第１の抗原結合ドメイン、ならびに（ｂ）配列番号１００、１０２、１０４のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３ドメイン、および配列番号８４、８６、８８の配列をそれぞれ含む、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３ドメイン、を含む、第２の抗原結合ドメイン、を含む、単離された二重特異性抗原結合分子を提供する。場合によっては、単離された二重特異性抗原結合分子は、（ａ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ、および配列番号８２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ、を含む、第１の抗原結合ドメイン、ならびに（ｂ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ、および配列番号８２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ、を含む、第２の抗原結合ドメイン、を含む。

別の態様では、本発明は、（ａ）ヒトＢＣＭＡに特異的に結合し、かつ配列番号２、１８、３４、５０、６６、１２２、および１２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣＶＲのＣＤＲ、ならびに配列番号１０、２６、４２、５８、７４、８２、１２３、および１２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣＶＲのＣＤＲ、を含む、第１の抗原結合ドメイン、ならびに（ｂ）ヒトＣＤ３に特異的に結合する第２の抗原結合ドメイン、を含む、単離された二重特異性抗原結合分子を提供する。場合によっては、第１の抗原結合ドメインは、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、１２２／１２３、１２４／１２５、２／８２、１８／８２、３４／８２、５０／８２、６６／８２、１２２／８２、および１２４／８２からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対からのＣＤＲを含む。場合によっては、第１の抗原結合ドメインは、それぞれ、配列番号４－６－８－１２－１４－１６、２０－２２－２４－２８－３０－３２、３６－３８－４０－４４－４６－４８、５２－５４－５６－６０－６２－６４、６８－７０－７２－７６－７８－８０、４－６－８－８４－８６－８８、２０－２２－２４－８４－８６－８８、３６－３８－４０－８４－８６－８８、５２－５４－５６－８４－８６－８８、および６８－７０－７２－８４－８６－８８からなる群から選択されるＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３ドメインを含む。場合によっては、第１の抗原結合ドメインは、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、１２２／１２３、１２４／１２５、２／８２、１８／８２、３４／８２、５０／８２、６６／８２、１２２／８２、および１２４／８２からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む。場合によっては、第２の抗原結合ドメインは、配列番号９０／８２および９８／８２からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対のＣＤＲを含む。

別の態様では、本発明は、ＢＣＭＡへの結合を競合する、または参照抗体としてＢＣＭＡ上の同じエピトープに結合する、単離された二重特異性抗原結合分子であって、当該参照抗体は、配列番号６６／８２のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む第１の抗原結合ドメインと、配列番号９０／８２または配列番号９８／８２のいずれかのアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む第２の抗原結合ドメインと、を含む、単離された二重特異性抗原結合分子を提供する。

別の態様では、本発明は、ヒトＣＤ３への結合を競合する、または参照抗体としてヒトＣＤ３上の同じエピトープに結合する、単離された二重特異性抗原結合分子であって、当該参照抗体は、配列番号６６／８２のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む第１の抗原結合ドメインと、配列番号９０／８２または配列番号９８／８２のいずれかのアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む第２の抗原結合ドメインと、を含む、単離された二重特異性抗原結合分子を提供する。

上記または本明細書で論じられる二重特異性抗原結合分子のいずれも、二重特異性抗体であり得る。場合によっては、二重特異性抗体は、ヒトＩｇＧ重鎖定常領域を含む。場合によっては、ヒトＩｇＧ重鎖定常領域は、アイソタイプＩｇＧ１である。場合によっては、ヒトＩｇＧ重鎖定常領域は、アイソタイプＩｇＧ４である。様々な実施形態では、二重特異性抗体は、同じアイソタイプの野生型ヒンジと比較してＦｃγ受容体結合を減少させるキメラヒンジを含む。場合によっては、二重特異性抗体は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む定常領域を含む第１の重鎖を含む。場合によっては、二重特異性抗体は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含む定常領域を含む第２の重鎖を含む。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体は、配列番号１２６のアミノ酸配列を含む第１の重鎖、配列番号１２７または配列番号１２８のアミノ酸配列を含む第２の重鎖、および配列番号１２９のアミノ酸配列を含む共通の軽鎖、を含む。

別の態様では、本発明は、上記または本明細書で論じられる二重特異性抗原結合分子（例えば、二重特異性抗体）、および薬学的に許容される担体または希釈剤、を含む、薬学的組成物を提供する。

別の態様では、本発明は、上記または本明細書で論じられる二重特異性抗原結合分子（例えば、二重特異性抗体）をコードするヌクレオチド配列を含む、核酸分子を提供する。

別の態様では、本発明は、上記で論じられる核酸分子を含む、発現ベクターを提供する。

別の態様では、本発明は、上記で論じられる核酸分子または発現ベクターを含む、宿主細胞を提供する。

別の態様では、本発明は、対象における形質細胞腫瘍の成長を阻害する方法であって、対象に、上記または本明細書で論じられるように、単離された二重特異性抗原結合分子、または二重特異性抗原結合分子を含む薬学的組成物を投与することを含む、方法を提供する。場合によっては、形質細胞腫瘍は、多発性骨髄腫である。場合によっては、この方法は、第２の治療剤または治療レジメンを投与することをさらに含む。いくつかの実施形態において、第２の治療剤は、抗腫瘍剤（例えば、メルファラン、ビンクリスチン（オンコビン）、シクロホスファミド（シトキサン）、エトポシド（ＶＰ－１６）、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、リポソームドキソルビシン（ドキシル）、オベンダムスチン（Ｔｒｅａｎｄａ）を含む化学療法剤、または対象における形質細胞腫瘍の治療に有効であることが知られている任意の他のもの）を含む。いくつかの実施形態において、第２の治療剤は、ステロイドを含む。いくつかの実施形態において、第２の治療剤は、サリドマイド、レナリドミド、およびボルテゾミブを含む標的療法を含み、これらは、新たに診断された患者を治療するために承認された療法である。レナリドミド、ポマリドミド、ボルテゾミブ、カルフィルゾミブ、パノビノスタット、イキサゾミブ、エロツズマブ、およびダラツムマブは、再発性骨髄腫を治療するために有効な第２の治療剤の例である。ある特定の実施形態において、第２の治療剤は、放射線療法または幹細胞移植を含むレジメンである。ある特定の実施形態において、第２の治療剤は、免疫調節剤であり得る。ある特定の実施形態において、第２の治療剤は、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ）、カルフィルゾミブ（Ｋｙｐｒｏｌｉｓ）、イキサゾミブ（Ｎｉｎｌａｒｏ）を含むプロテアソーム阻害剤であり得る。ある特定の実施形態において、第２の治療剤は、パノビノスタット（Ｆａｒｙｄａｋ）などのヒストンデアセチラーゼ阻害剤であり得る。特定の実施形態では、第２の治療剤は、モノクローナル抗体、抗体薬物複合体、抗腫瘍剤に複合体化した二重特異性抗体、チェックポイント阻害剤、またはそれらの組み合わせであり得る。

別の態様では、本発明は、多発性骨髄腫または別のＢＣＭＡ発現Ｂ細胞悪性腫瘍に罹患している患者を治療する方法であって、対象に、上記または本明細書で論じられるように、単離された二重特異性抗原結合分子、または二重特異性抗原結合分子を含む薬学的組成物を投与することを含む、方法を提供する。場合によっては、ＢＣＭＡ発現Ｂ細胞悪性腫瘍は、ワルデンストレームマクログロブリン血症、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、およびホジキンリンパ腫からなる群から選択される。場合によっては、本方法は、第２の治療剤を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態において、第２の治療剤は、抗腫瘍剤（化学療法剤）、ＤＮＡアルキル化剤、免疫調節剤、プロテアソーム阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤放射線療法、幹細胞移植、免疫調節剤、腫瘍細胞表面上に発現された抗原と相互作用するモノクローナル抗体、形質細胞表面上の異なる抗原と相互作用し得る本明細書に記載のもの以外のモノクローナル抗体、腫瘍細胞表面上の抗原に結合する一方のアームおよびＴ細胞上の抗原に結合する他方のアームを有する二重特異性抗体、抗体薬物コンジュゲート、抗腫瘍剤にコンジュゲートした二重特異性抗体、チェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ－１またはＣＴＬＡ－４を標的化するもの、またはそれらの組み合わせを含む。ある特定の実施形態において、チェックポイント阻害剤は、ペンブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ）、ニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ）、またはセミプリマブ（ＲＥＧＮ２８１０）などのＰＤ－１阻害剤から選択され得る。特定の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、アテゾリズマブ（Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ）、アベルマブ（Ｂａｖｅｎｃｉｏ）、またはデュルバルマブ（Ｉｍｆｉｎｚｉ）などのＰＤ－Ｌ１阻害剤から選択され得る。特定の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、イピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ）などのＣＴＬＡ－４阻害剤から選択され得る。本発明の抗体と併用して使用することができる他の組み合わせは、上記に記載されている。

別の態様では、本発明は、ＢＣＭＡ発現腫瘍に罹患している患者を治療する方法であって、対象に、上記または本明細書で論じられるように、単離された二重特異性抗原結合分子、またはそれを含む薬学的組成物を、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合断片と組み合わせて投与することを含む、方法を提供する。場合によっては、抗ＰＤ－１抗体または抗原結合断片は、抗ＰＤ－１抗体である。いくつかの実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、セミプリマブ（ＲＥＧＮ２８１０）である。様々な実施形態において、抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗原結合分子（例えば、二重特異性抗体）および抗ＰＤ－１抗体または抗原結合断片（例えば、抗ＰＤ－１抗体）の組み合わせは、ＢＣＭＡ発現腫瘍の治療において相乗的な治療効果を生み出す。

別の態様では、本発明は、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患または障害の治療における、上記または本明細書で論じられる二重特異性抗原結合分子、または上記または本明細書で論じられる薬学的組成物の使用を提供する。場合によっては、疾患または障害は、がんである。いくつかの実施形態において、がんは、多発性骨髄腫である。場合によっては、疾患または障害は、キャッスルマン病である。場合によっては、抗原結合分子は、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合断片と組み合わせて使用するためのものであり、任意に、抗ＰＤ－１抗体は、セミプリマブ（ＲＥＧＮ２８１０）である。

本発明は、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患または障害を治療するための薬剤の製造における、上記または本明細書で論じられる二重特異性抗原結合分子の使用をさらに含む。場合によっては、疾患または障害は、がんである。いくつかの実施形態において、がんは、多発性骨髄腫である。本発明はさらに、対象におけるＢＣＭＡ＋がん（例えば、多発性骨髄腫）の治療に使用するための二重特異性抗原結合分子（例えば、二重特異性抗体）を含む。

別の態様では、本発明は、多発性骨髄腫の治療を必要とする対象において多発性骨髄腫を治療する方法を提供し、この方法は、ヒトＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインを含む、第１の重鎖および共通の軽鎖の対と、ヒトＣＤ３に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインを含む第２の重鎖および共通の軽鎖の対と、を含む、二重特異性抗体を対象に投与することを含み、第１の抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号６８、７０、７２、８４、８６、および８８のアミノ酸配列を含む、３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と３つの軽鎖ＣＤＲとを含み、第２の抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号９２、９４、９６、８４、８６、および８８のアミノ酸配列を含む、３つの重鎖ＣＤＲと３つの軽鎖ＣＤＲとを含み、二重特異性抗体が少なくとも１週間に１ｍｇの用量で対象に投与される。場合によっては、二重特異性抗体は、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに１ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに１．５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに２．０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに２．５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに３．０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに３．５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに４ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに６ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに７ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに８ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに９ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに１０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに１５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに２０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに２５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに３０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに３５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに４０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに４５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに５０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに５５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに６０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに６５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに７０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに７５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに８０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに８５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに９０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに９５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに１００ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに１５０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに２００ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに２５０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに３００ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに３５０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに４００ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに４５０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに５００ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに５５０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに６００ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに６５０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに７００ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに７５０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに８００ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに８５０ｍｇ、または少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに９００ｍｇの用量で、対象に投与される。

場合によっては、第１の重鎖は、配列番号６６のアミノ酸配列を含む第１の重鎖可変領域を含み、第２の重鎖は、配列番号９０のアミノ酸配列を含む第２の重鎖可変領域を含み、共通の軽鎖は、配列番号８２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。場合によっては、第１の重鎖は、配列番号１２６のアミノ酸配列を含み、第２の重鎖は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、共通の軽鎖は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含む。

別の態様では、本発明は、多発性骨髄腫の治療を必要とする対象において多発性骨髄腫を治療する方法を提供し、この方法は、ヒトＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインを含む、第１の重鎖および共通の軽鎖の対と、ヒトＣＤ３に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインを含む第２の重鎖および共通の軽鎖の対と、を含む、二重特異性抗体を対象に投与することを含み、第１の抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号６８、７０、７２、８４、８６、および８８のアミノ酸配列を含む、３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と３つの軽鎖ＣＤＲとを含み、第２の抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号１００、１０２、１０４、８４、８６、および８８のアミノ酸配列を含む、３つの重鎖ＣＤＲと３つの軽鎖ＣＤＲとを含み、二重特異性抗体が少なくとも１週間に１ｍｇの用量で対象に投与される。場合によっては、二重特異性抗体は、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに１ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに１．５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに２．０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに２．５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに３．０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに３．５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに４ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに６ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに７ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに８ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに９ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに１０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに１５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに２０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに２５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに３０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに３５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに４０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに４５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに５０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに５５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに６０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに６５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに７０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに７５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに８０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに８５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに９０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに９５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに１００ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに１５０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに２００ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに２５０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに３００ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに３５０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに４００ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに４５０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに５００ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに５５０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに６００ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに６５０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに７００ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに７５０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに８００ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに８５０ｍｇ、または少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに９００ｍｇの用量で、対象に投与される。

場合によっては、第１の重鎖は、配列番号６６のアミノ酸配列を含む第１の重鎖可変領域を含み、第２の重鎖は、配列番号９８のアミノ酸配列を含む第２の重鎖可変領域を含み、共通の軽鎖は、配列番号８２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。場合によっては、第１の重鎖は、配列番号１２６のアミノ酸配列を含み、第２の重鎖は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、共通の軽鎖は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含む。

上述または本明細書で論じられる方法のいずれかにおいて、二重特異性抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３抗体は、分割された一次用量を含む投与レジメンで投与され得る。いくつかの実施形態において、二重特異性抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３抗体は、少なくとも１週間に１ｍｇの用量で対象に投与される。いくつかの実施形態において、二重特異性抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３抗体の用量は、少なくとも１週間に３ｍｇ～９００ｍｇの用量で対象に投与される。場合によっては、二重特異性抗体は、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに１ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに１．５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに２．０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに２．５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに３．０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに３．５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに４ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに６ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに７ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに８ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに９ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに１０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに１５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに２０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに２５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに３０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに３５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに４０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに４５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに５０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに５５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに６０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに６５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに７０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに７５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに８０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに８５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに９０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに９５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに１００ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに１５０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに２００ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに２５０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに３００ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに３５０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに４００ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに４５０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに５００ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに５５０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに６００ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに６５０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに７００ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに７５０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに８００ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに８５０ｍｇ、または少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに９００ｍｇの用量で、対象に投与される。

上述または本明細書で論じられる方法のいずれにおいても、ＢＣＭＡ＋がんは多発性骨髄腫であり得、抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗体を投与されている対象は以前に治療されている。

上述または本明細書で論じられる方法のいずれにおいても、ＢＣＭＡ＋がんは多発性骨髄腫であり得、抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗体を投与されている対象は以前に抗ＣＤ３８抗体療法で治療されている。場合によっては、抗ＣＤ３８抗体はダラツムマブまたはイサツキシマブである。

上述または本明細書で論じられる方法のいずれにおいても、ＢＣＭＡ＋がんは多発性骨髄腫であり得、抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗体を投与されている対象は以前にプロテアソーム阻害剤または免疫調節薬で治療されている。場合によっては、プロテアソーム阻害剤はボルテゾミブ、カルフィルゾミブ、またはイキサゾミブである。場合によっては、免疫調節薬はレナリドミドまたはポマリドミドである。

上述または本明細書で論じられている方法のいずれにおいても、対象は再発性または難治性の多発性骨髄腫を有している可能性がある。場合によっては、対象は、上述または本明細書で論じられている治療のうちのいずれか１つ以上を含む、１つ以上（例えば、２つ以上、３つ以上、４つ以上、または５つ以上）の全身治療後に再発または難治性の多発性骨髄腫を患っている。

上述または本明細書で論じられる方法のいずれにおいても、対象は、免疫グロブリンＧ、免疫グロブリンＡ、ラムダ軽鎖、またはカッパ軽鎖から選択される多発性骨髄腫免疫サブタイプを有する患者であり得る。

上述または本明細書で論じられている方法のいずれにおいても、対象は髄外性形質細胞腫を有し得る。

上述または本明細書で論じられた方法のいずれにおいても、対象は、以前の治療に対して少なくとも三重難治性である（すなわち、少なくとも３つの以前の治療ラインの後に進行した）。場合によっては、対象は以前の治療に対して四重難治性である。場合によっては、対象は以前の治療に対して五重難治性ある。

別の態様では、本発明は、多発性骨髄腫の治療を必要とする対象において多発性骨髄腫を治療するための方法で使用するための投与レジメンを提供し、投与レジメンは、投与レジメンの第１週中の一次用量で、投与レジメンの第２週中の二次用量で、および投与レジメンの第３週中での三次用量での対象への二重特異性抗体の投与を含み、三次用量は二次用量と等しいかそれより多く、二次用量は一次用量と等しいかそれより多く、二重特異性抗体は、（ａ）ヒトＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインを含む、第１の重鎖および共通の軽鎖の対と、ヒトＣＤ３に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインを含む第２の重鎖および共通の軽鎖の対と、を含み、第１の抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号６８、７０、７２、８４、８６、および８８のアミノ酸配列を含む、３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と３つの軽鎖ＣＤＲとを含み、第２の抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号９２、９４、９６、８４、８６、および８８のアミノ酸配列を含む、３つの重鎖ＣＤＲと３つの軽鎖ＣＤＲとを含むか、あるいは二重特異性抗体は、（ｂ）ヒトＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインを含む、第１の重鎖および共通の軽鎖の対と、ヒトＣＤ３に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインを含む第２の重鎖および共通の軽鎖の対と、を含み、第１の抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号６８、７０、７２、８４、８６、および８８のアミノ酸配列を含む、３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と３つの軽鎖ＣＤＲとを含み、第２の抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号１００、１０２、１０４、８４、８６、および８８のアミノ酸配列を含む、３つの重鎖ＣＤＲと３つの軽鎖ＣＤＲとを含む。

投与レジメンのいくつかの実施形態において、二重特異性抗体は、ヒトＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインを含む、第１の重鎖および共通の軽鎖の対と、ヒトＣＤ３に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインを含む第２の重鎖および共通の軽鎖の対と、を含み、第１の抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号６８、７０、７２、８４、８６、および８８のアミノ酸配列を含む、３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と３つの軽鎖ＣＤＲとを含み、第２の抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号９２、９４、９６、８４、８６、および８８のアミノ酸配列を含む、３つの重鎖ＣＤＲと３つの軽鎖ＣＤＲとを含む。場合によっては、第１の重鎖は、配列番号６６のアミノ酸配列を含む第１の重鎖可変領域を含み、第２の重鎖は、配列番号９０のアミノ酸配列を含む第２の重鎖可変領域を含み、共通の軽鎖は、配列番号８２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。場合によっては、第１の重鎖は、配列番号１２６のアミノ酸配列を含み、第２の重鎖は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、共通の軽鎖は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含む。

投与レジメンのいくつかの実施形態において、二重特異性抗体は、ヒトＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインを含む、第１の重鎖および共通の軽鎖の対と、ヒトＣＤ３に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインを含む第２の重鎖および共通の軽鎖の対と、を含み、第１の抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号６８、７０、７２、８４、８６、および８８のアミノ酸配列を含む、３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と３つの軽鎖ＣＤＲとを含み、第２の抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号１００、１０２、１０４、８４、８６、および８８のアミノ酸配列を含む、３つの重鎖ＣＤＲと３つの軽鎖ＣＤＲとを含む。場合によっては、第１の重鎖は、配列番号６６のアミノ酸配列を含む第１の重鎖可変領域を含み、第２の重鎖は、配列番号９８のアミノ酸配列を含む第２の重鎖可変領域を含み、共通の軽鎖は、配列番号８２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。場合によっては、第１の重鎖は、配列番号１２６のアミノ酸配列を含み、第２の重鎖は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、共通の軽鎖は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含む。

投与レジメンの様々な実施形態のいずれにおいても、一次用量は１ｍｇ～５ｍｇである。投与レジメンの様々な実施形態のいずれにおいても、二次用量は３ｍｇ～４００ｍｇである。投与レジメンの様々な実施形態のいずれにおいても、三次用量は３ｍｇ～８００ｍｇである。いくつかの実施形態において、一次用量は５ｍｇであり、二次用量は２５ｍｇであり、三次用量は５０ｍｇ～８００ｍｇである。場合によっては、投与レジメンは、投与レジメンの１週間に１回の投与期間中、少なくとも１２週間（例えば、１２週間、１３週間、１４週間、１５週間、１６週間、１７週間、１８週間、１９週間、２０週間、またはそれ以上）、１週間に１回の三次用量の投与を含む。場合によっては、投与レジメンは、投与レジメンの１週間に１回の期間に続く投与レジメンの隔週の投与期間中に、２週間に１回の三次用量の投与をさらに含む。場合によっては、投与レジメンはさらに、３週間に１回、または４週間に１回の三次用量の投与を含む。様々な実施形態において、用量は、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに１ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに１．５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに２．０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに２．５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに３．０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに３．５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに４ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに６ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに７ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに８ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに９ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに１０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに１５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに２０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに２５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに３０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに３５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに４０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに４５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに５０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに５５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに６０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに６５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに７０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに７５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに８０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに８５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに９０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに９５ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに１００ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに１５０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに２００ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに２５０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに３００ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに３５０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに４００ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに４５０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに５００ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに５５０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに６００ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに６５０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに７００ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに７５０ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに８００ｍｇ、少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに８５０ｍｇ、または少なくとも１週間にもしくは２週間ごとに９００ｍｇであり得る。

投与レジメンの様々な実施形態のいずれにおいても、対象は、以前に、抗ＣＤ３８抗体療法、プロテアソーム阻害剤、または免疫調節薬で治療されている。場合によっては、抗ＣＤ３８抗体はダラツムマブまたはイサツキシマブである。場合によっては、プロテアソーム阻害剤はボルテゾミブ、カルフィルゾミブ、またはイキサゾミブである。場合によっては、免疫調節薬はレナリドミドまたはポマリドミドである。

投与レジメンの様々な実施形態のいずれにおいても、多発性骨髄腫は再発性または難治性の多発性骨髄腫である。

投与レジメンの様々な実施形態のいずれにおいても、対象は、以前の治療に対して少なくとも三重難治性である。場合によっては、対象は以前の治療に対して四重難治性または五重難治性である。

様々な実施形態では、上記または本明細書で論じられる実施形態の特徴または構成要素のうちのいずれかは組み合わせられ得、そのような組み合わせは本開示の範囲内に包含される。上記または本明細書で論じられるいずれの特定の値も、上記または本明細書で論じられる別の関連値と組み合わせられて、それらの値が範囲の上限および下限を表す範囲を列挙することができ、かかる範囲は本開示の範囲内に包含される。

他の実施形態は、後述の発明を実施するための形態の精査から明らかとなるであろう。

抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗体ＲＥＧＮ５４５８およびＲＥＧＮ５４５９による、インビボでのＢＣＭＡ発現ＮＣＩ－Ｈ９２９ヒト多発性骨髄腫腫瘍細胞の予防的用量依存性腫瘍阻害をそれぞれ示す。ＮＣＩ－Ｈ９２９細胞は、高レベルのＢＣＭＡを発現する。抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗体ＲＥＧＮ５４５８およびＲＥＧＮ５４５９による、インビボでのＢＣＭＡ発現ＮＣＩ－Ｈ９２９ヒト多発性骨髄腫腫瘍細胞の予防的用量依存性腫瘍阻害をそれぞれ示す。ＮＣＩ－Ｈ９２９細胞は、高レベルのＢＣＭＡを発現する。抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗体ＲＥＧＮ５４５８およびＲＥＧＮ５４５９による、インビボでの確立されたＢＣＭＡ発現ＮＣＩ－Ｈ９２９ヒト多発性骨髄腫腫瘍細胞の治療的用量依存性腫瘍阻害をそれぞれ示す。ＮＣＩ－Ｈ９２９細胞は、高レベルのＢＣＭＡを発現する。抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗体ＲＥＧＮ５４５８およびＲＥＧＮ５４５９による、インビボでの確立されたＢＣＭＡ発現ＮＣＩ－Ｈ９２９ヒト多発性骨髄腫腫瘍細胞の治療的用量依存性腫瘍阻害をそれぞれ示す。ＮＣＩ－Ｈ９２９細胞は、高レベルのＢＣＭＡを発現する。抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗体ＲＥＧＮ５４５８およびＲＥＧＮ５４５９による、インビボでのＢＣＭＡ発現ＭＯＬＰ－８ヒト多発性骨髄腫腫瘍細胞の予防的用量依存的腫瘍阻害をそれぞれ示す。ＭＯＬＰ－８細胞は、中程度のレベルのＢＣＭＡを発現する。抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗体ＲＥＧＮ５４５８およびＲＥＧＮ５４５９による、インビボでのＢＣＭＡ発現ＭＯＬＰ－８ヒト多発性骨髄腫腫瘍細胞の予防的用量依存的腫瘍阻害をそれぞれ示す。ＭＯＬＰ－８細胞は、中程度のレベルのＢＣＭＡを発現する。対照と比較して、抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗体ＲＥＧＮ５４５８およびＲＥＧＮ５４５９による、インビボでのＢＣＭＡ発現ＯＰＭ－２ヒト多発性骨髄腫腫瘍細胞の確立された腫瘍負荷の治療的減少を示す。ＯＰＭ－２細胞は、低レベルのＢＣＭＡを発現する。

本発明が記載される前に、記載される特定の方法および実験条件が異なり得るため、本発明がかかる方法および条件に限定されないことを、理解されたい。本明細書で使用される用語は、特定の実施形態のみを記載する目的のためであり、本発明の範囲が添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるため、限定するようには意図されていないことも、理解されたい。

別段定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術および科学用語は、本発明が属する当業者によって一般に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書で使用される場合、「約」という用語は、特定の列挙された数値に関して使用されるとき、その値が列挙された値から１％以下だけ変動し得ることを意味する。例えば、本明細書で使用される場合、「約１００」という表現は、９９および１０１ならびにそれらの間のすべての値（例えば、９９．１、９９．２、９９．３、９９．４など）を含む。

本明細書に記載されるものと同様または同等のいずれの方法および材料も本発明の実施または試験に使用され得るが、好ましい方法および材料をこれから説明する。本明細書において言及されるすべての特許、出願および非特許刊行物は、それらの全体の参照により本明細書に組み込まれる。

定義
本明細書で用いられる「ＣＤ３」という表現は、多分子Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の一部としてＴ細胞上に発現され、４つの受容体鎖すなわちＣＤ３－イプシロン、ＣＤ３－デルタ、ＣＤ３－ゼータ、ＣＤ３－ガンマのうち２つの会合から形成されるホモ二量体またはヘテロ二量体からなる抗原を指す。ヒトＣＤ３－イプシロンは、配列番号１１６に記載のアミノ酸配列を含み、ヒトＣＤ３－デルタは、配列番号１１７に記載のアミノ酸配列を含み、ヒトＣＤ３－ゼータは、配列番号１１８に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤ３－ガンマは、配列番号１１９に記載のアミノ酸配列を含む。本明細書におけるタンパク質、ポリペプチド、およびタンパク質断片についてのすべての言及は、非ヒト種由来であることが明確に特定されない限り、それぞれのタンパク質、ポリペプチド、またはタンパク質断片のヒト型を指すことを意図している。したがって、「ＣＤ３」という表現は、非ヒト種、例えば、「マウスＣＤ３」、「サルＣＤ３」など由来であると特定されない限り、ヒトＣＤ３を意味する。

本明細書で使用される場合、「ＣＤ３に結合する抗体」または「抗ＣＤ３抗体」は、単一のＣＤ３サブユニット（例えば、イプシロン、デルタ、ガンマ、またはゼータ）を特異的に認識する抗体およびその抗原結合フラグメント、ならびに２つのＣＤ３サブユニットの二量体複合体（例えば、ガンマ／イプシロン、デルタ／イプシロン、およびゼータ／ゼータＣＤ３二量体）を特異的に認識する抗体およびその抗原結合フラグメントを含む。本発明の抗体および抗原結合断片は、可溶性ＣＤ３および／または細胞表面発現ＣＤ３に結合することができる。可溶性ＣＤ３には、天然ＣＤ３タンパク質、ならびに膜貫通ドメインを欠くか、または細胞膜と会合していない組換えＣＤ３タンパク質バリアント、例えば、単量体および二量体ＣＤ３構築物などが含まれる。

本明細書で使用される場合、「細胞表面発現ＣＤ３」という表現は、インビトロまたはインビボで細胞表面上に発現される１つ以上のＣＤ３タンパク質を意味し、ＣＤ３タンパク質の少なくとも一部は細胞膜の細胞外側面に露出され、抗体の抗原結合部分に接近可能である。「細胞表面発現ＣＤ３」としては、細胞膜内の機能的Ｔ細胞受容体の中に含まれるＣＤ３タンパク質が挙げられる。「細胞表面発現ＣＤ３」という表現は、細胞の表面上のホモ二量体またはヘテロ二量体の一部として発現されるＣＤ３タンパク質（例えば、ガンマ／イプシロン、デルタ／イプシロン、およびゼータ／ゼータＣＤ３二量体）を含む。「細胞表面発現ＣＤ３」という表現はまた、他のＣＤ３鎖型なしで、細胞の表面上にそれ自体で発現するＣＤ３鎖（例えば、ＣＤ３－イプシロン、ＣＤ３－デルタ、またはＣＤ３－ガンマ）も含む。あるいは、「細胞表面発現ＣＤ３」は、通常ＣＤ３タンパク質を発現する細胞の表面上に発現されるＣＤ３タンパク質を含むかまたはそれからなることができる。あるいは、「細胞表面発現ＣＤ３」は、通常その表面にヒトＣＤ３を発現しないがその表面にＣＤ３を発現するように人工的に操作されている細胞の表面上に発現されるＣＤ３タンパク質を含むかまたはそれからなることができる。

本明細書で使用される「ＢＣＭＡ」という表現は、Ｂ細胞成熟抗原を指す。ＢＣＭＡ（ＴＮＦＲＳＦ１７およびＣＤ２６９としても知られている）は、悪性形質細胞上に発現する細胞表面タンパク質であり、Ｂ細胞の成熟および免疫グロブリン産生形質細胞への分化の調節において中心的な役割を果たす。ヒトＢＣＭＡのアミノ酸配列は、配列番号１１５に示され、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００１１８３．２にも見出され得る。

本明細書で使用される場合、「ＢＣＭＡに結合する抗体」または「抗ＢＣＭＡ抗体」は、ＢＣＭＡを特異的に認識する抗体およびその抗原結合断片を含む。

「抗原結合分子」という用語は、例えば、二重特異性抗体を含む、抗体および抗体の抗原結合フラグメントを含む。

本発明で使用する場合、「抗体」という用語は、特定の抗原（例えばＢＣＭＡまたはＣＤ３）に特異的に結合するかまたはそれと相互作用する少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、任意の抗原結合分子または分子複合体を意味する。「抗体」という用語は、ジスルフィド結合によって相互連結された４本のポリペプチド鎖、２本の重（Ｈ）鎖および２本の軽（Ｌ）鎖を含む免疫グロブリン分子、ならびにそれらの多量体（例えば、ＩｇＭ）を含む。「抗体」という用語は、ジスルフィド結合によって相互連結された４本のポリペプチド鎖、２本の重（Ｈ）鎖および２本の軽（Ｌ）鎖からなる免疫グロブリン分子も含む。重鎖は各々、重鎖可変領域（本明細書でＨＣＶＲまたはＶ_Ｈと略される）および重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は、３つのドメイン、Ｃ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２、およびＣ_Ｈ３を含む。軽鎖は各々、軽鎖可変領域（本明細書でＬＣＶＲまたはＶ_Ｌと略される）および軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は、１つのドメイン（Ｃ_Ｌ１）を含む。Ｖ_Ｈ領域およびＶ_Ｌ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域が点在する相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域にさらに細分され得る。各Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌは、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順でアミノ末端からカルボキシ末端へと配置された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲからなる。本発明の異なる実施形態において、抗ＢＣＭＡ抗体または抗ＣＤ３抗体（またはその抗原結合部分）のＦＲは、ヒト生殖系列配列と同一であってもよく、または天然にもしくは人工的に修飾されていてもよい。アミノ酸コンセンサス配列は、２つ以上のＣＤＲの並列分析に基づいて定義され得る。

本明細書で使用される「抗体」という用語はまた、完全抗体分子の抗原結合フラグメントを含む。抗体の「抗原結合部分」、抗体の「抗原結合フラグメント」および同様の用語は、本明細書で使用される場合、天然の、酵素処理で入手可能な、合成の、または遺伝子操作された、抗原を特異的に結合して複合体を形成するポリペプチドまたは糖タンパク質を含む。抗体の抗体結合フラグメントは、例えば、抗体可変ドメインおよび任意に定常ドメインをコードするＤＮＡの操作および発現に関連するタンパク質消化技術または組換え遺伝子操作技術などの任意の好適な標準的技法を使用して、完全抗体分子から誘導され得る。かかるＤＮＡは既知であり、かつ／または例えば、商業的供給源、ＤＮＡライブラリ（例えば、ファージ抗体ライブラリを含む）から容易に入手可能であるか、または合成され得る。ＤＮＡは、化学的に、または分子生物学技法を使用することによって配列決定および操作されて、例えば、１つ以上の可変ドメインおよび／もしくは定常ドメインを好適な立体配置に配置するか、またはコドンを導入し、システイン残基を作製し、アミノ酸を修飾、付加、もしくは欠失などすることができる。

抗体結合フラグメントの非限定例としては、（ｉ）Ｆａｂフラグメント、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、（ｉｉｉ）Ｆｄフラグメント、（ｉｖ）Ｆｖフラグメント、（ｖ）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子、（ｖｉ）ｄＡｂフラグメント、および（ｖｉｉ）抗体の超可変領域（例えば、ＣＤＲ３ペプチドなどの単離された相補性決定領域（ＣＤＲ））を模倣するアミノ酸残基、または拘束ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４ペプチドからなる最小認識単位が挙げられる。ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン欠失抗体、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、ナノボディ（例えば、一価ナノボディ、二価ナノボディなど）、小型モジュール型免疫医薬品（ＳＭＩＰ）、およびサメ可変ＩｇＮＡＲドメインなどの他の操作された分子も、本明細書で使用する「抗原結合フラグメント」という表現に包含される。

抗体の抗原結合フラグメントは、典型的には、少なくとも１つの可変ドメインを含む。可変ドメインは、任意のサイズまたはアミノ酸組成のものであり得、一般に、１つ以上のフレームワーク配列に隣接しているか、またはそれとインフレームである少なくとも１つのＣＤＲを含む。Ｖ_ＨドメインがＶ_Ｌドメインに会合した抗原結合フラグメントでは、Ｖ_ＨドメインおよびＶ_Ｌドメインは、任意の好適な配置で互いに対して位置付けられてもよい。例えば、可変領域は二量体であり、Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｈ、Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌ、またはＶ_Ｌ－Ｖ_Ｌ二量体を含んでもよい。あるいは、抗体の抗原結合フラグメントは、単量体のＶ_ＨドメインまたはＶ_Ｌドメインを含んでもよい。

特定の実施形態では、抗体の抗原結合フラグメントは、少なくとも１つの定常ドメインに共有結合された少なくとも１つの可変ドメインを含んでもよい。本発明の抗体の抗原結合フラグメント内に見られ得る可変ドメインおよび定常ドメインの非限定的な例示的な立体配置には、（ｉ）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１、（ｉｉ）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ２、（ｉｉｉ）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ３、（ｉｖ）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２、（ｖ）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３、（ｖｉ）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３、（ｖｉｉ）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｌ、（ｖｉｉｉ）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｈ１、（ｉｘ）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｈ２、（ｘ）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｈ３、（ｘｉ）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２、（ｘｉｉ）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３、（ｘｉｉｉ）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３、および（ｘｉｖ）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌが挙げられる。上に列記される例示的な立体配置のうちのいずれかを含む、可変ドメインおよび定常ドメインのいずれの立体配置でも、可変ドメインおよび定常ドメインは、互いに直接連結されているか、または完全もしくは部分的ヒンジ領域もしくはリンカー領域によって連結されているかのいずれかであり得る。ヒンジ領域は、単一のポリペプチド分子において隣接する可変ドメインおよび／または定常ドメイン間の可動性または半可動性連結をもたらす少なくとも２つの（例えば、５、１０、１５、２０、４０、６０、またはそれ以上の）アミノ酸からなり得る。さらに、本発明の抗体の抗原結合フラグメントは、互いとのおよび／または１つ以上の単量体Ｖ_ＨもしくはＶ_Ｌドメインとの（例えば、ジスルフィド結合による）非共有結合において、上に列記される可変ドメイン立体配置および定常ドメイン立体配置のうちのいずれかのホモ二量体またはヘテロ二量体（または他の多量体）を含み得る。

完全抗体分子と同様に、抗体結合フラグメントは、単一特異性または多重特異性（例えば、二重特異性）であり得る。抗体の多重特異性抗原結合フラグメントは、典型的には、少なくとも２つの異なる可変ドメインを含み、各可変ドメインは、別個の抗原に、または同じ抗原上の異なるエピトープに特異的に結合することができる。本明細書に開示される例示的な二重特異性抗体フォーマットを含む任意の多重特異性抗体フォーマットは、当該技術分野で利用可能な通例の技術を使用して、本発明の抗体の抗原結合フラグメントとの関連で使用に適合し得る。

本発明の抗体は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）または抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を介して機能してもよい。「補体依存性細胞傷害」（ＣＤＣ）とは、補体の存在下での本発明の抗体による抗原発現細胞の溶解を指す。「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」（ＡＤＣＣ）とは、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する非特異的細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、およびマクロファージ）が標的細胞上の結合した抗体を認識し、それにより、標的細胞の溶解をもたらす、細胞媒介性反応を指す。ＣＤＣおよびＡＤＣＣは、当該技術分野で周知であり、かつ利用可能なアッセイを使用して測定され得る。（例えば、米国特許第５，５００，３６２号および同第５，８２１，３３７号、ならびにＣｌｙｎｅｓｅｔａｌ．（１９９８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）９５：６５２－６５６を参照されたい）。抗体の定常領域は、補体を固定して細胞依存性細胞傷害性を媒介する抗体の能力に重要である。したがって、抗体のアイソタイプは、その抗体が細胞傷害性を媒介することが望ましいかに基づいて選択され得る。

ある特定の実施形態において、本発明の抗ＢＣＭＡ単一特異性抗体または抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗体は、ヒト抗体である。「ヒト抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する抗体を含むことが企図される。本発明のヒト抗体は、例えば、ＣＤＲ、特にＣＤＲ３における、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列（例えば、インビトロでのランダムもしくは部位特異的変異誘発によってまたはインビボでの体細胞突然変異によって導入された変異）によってコードされないアミノ酸残基を含み得る。しかしながら、本明細書で使用される「ヒト抗体」という用語は、別の哺乳動物種（例えば、マウス）の生殖系列に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列へと移植された抗体を含むことを意図するものではない。

本発明の抗体は、いくつかの実施形態において、組換えヒト抗体であり得る。「組換えヒト抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、宿主細胞にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを用いて発現される抗体など組換え手段によって調製、発現、作成、または単離されるすべてのヒト抗体（後述）、組換え型コンビナトリアルヒト抗体ライブラリから単離された抗体（後述）、ヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックである動物（例えばマウス）から単離された抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒｅｔａｌ．（１９９２）Ｎｕｃｌ．ＡｃｉｄｓＲｅｓ．２０：６２８７－６２９５）、またはヒト免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを含む任意の他の手段によって調製、発現、作製、または単離される抗体を含むことを意図する。そのような組換えヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変および定常領域を有する。しかしながら、特定の実施形態では、そのような組換えヒト抗体は、インビトロ変異誘発（または、ヒトＩｇ配列に対してトランスジェニックな動物が使用される際の、インビボ体細胞変異誘発）に供され、したがって、組換え抗体のＶ_ＨおよびＶ_Ｌ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌ配列に由来しそれらに関連しているが、インビボでヒト抗体生殖系列レパートリー内に天然に存在し得ない配列である。

ヒト抗体は、ヒンジの不均一性に関連する２つの形態で存在することができる。第１の形態では、免疫グロブリン分子は、二量体が鎖間重鎖ジスルフィド結合によって一緒に保持されているおよそ１５０～１６０ｋＤａの安定した四本鎖構築体を含む。第２の形態では、二量体は鎖間ジスルフィド結合によって連結されておらず、共有結合した軽鎖および重鎖からなる約７５～８０ｋＤａの分子が形成される（半抗体）。これらの形態は、親和性精製後でさえも分離することが極めて困難とされている。

様々な無傷のＩｇＧアイソタイプにおける第２の形態の出現頻度は、抗体のヒンジ領域アイソタイプに関連する構造上の相違によるが、それに限定されない。ヒトＩｇＧ４ヒンジのヒンジ領域における単一アミノ酸置換は、ヒトＩｇＧ１ヒンジを使用して典型的に観察されるレベルまで第２の形態の出現を著しく減少させることができる（Ａｎｇａｌｅｔａｌ．（１９９３）ＭｏｌｅｃｕｌａｒＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ３０：１０５）。本発明は、ヒンジ領域、Ｃ_Ｈ２領域、またはＣ_Ｈ３領域に１つ以上の変異を有する抗体を包含し、例えば、産生において、所望の抗体形態の収率を改善する（ｉｍｐｒｏｖｅ）のに望ましくあり得る。

本発明の抗体は、単離された抗体であってもよい。「単離された抗体」は、本明細書で使用される場合、その天然環境の少なくとも１つの成分から同定され、分離および／または回収された抗体を意味する。例えば、生物の少なくとも１つの成分から、または抗体が天然に存在するかもしくは天然に産生される組織または細胞から分離または除去された抗体は、本発明の目的のための「単離された抗体」である。単離された抗体は、組換え細胞内の原位置の抗体も含む。単離された抗体は、少なくとも１つの精製または単離ステップに供された抗体である。特定の実施形態によると、単離された抗体は、他の細胞性物質および／または化学物質を実質的に含まない場合がある。

本発明はまた、ＢＣＭＡに結合するワンアーム抗体も含む。本明細書中で使用される場合、「ワンアーム抗体」とは、単一の抗体重鎖および単一の抗体軽鎖を含む抗原結合分子を意味する。本発明のワンアーム抗体は、表１に記載のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲまたはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかを含み得る。

本明細書に開示される抗ＢＣＭＡまたは抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３抗体は、抗体が由来した対応する生殖系列配列と比較して、重鎖および軽鎖可変ドメインのフレームワーク領域および／またはＣＤＲ領域において１つ以上のアミノ酸置換、挿入、および／または欠失を含み得る。このような変異は、本明細書に開示されるアミノ酸配列を、例えば、公共の抗体配列データベースから入手可能な生殖系列配列と比較することによって容易に確認することができる。本発明は、本明細書に開示されるアミノ酸配列のうちのいずれかに由来する抗体およびその抗原結合断片を含み、１つ以上のフレームワーク領域および／またはＣＤＲ領域内の１つ以上のアミノ酸は、抗体が由来した生殖系列配列の対応する残基に変異するか、または別のヒト生殖系列配列の対応する残基に変異するか、または対応する生殖系列残基の保存的アミノ酸置換に変異する（かかる配列変化は、本明細書で集合的に「生殖系列変異」と称される）。当業者は、本明細書に開示される重鎖および軽鎖可変領域配列から出発して、１つ以上の個々の生殖系列変異またはそれらの組み合わせを含む多くの抗体および抗体結合フラグメントを容易に産生することができる。特定の実施形態において、Ｖ_Ｈおよび／またはＶ_Ｌドメイン内のフレームワークおよび／またはＣＤＲ残基のうちのすべてが、抗体が由来した元の生殖系列配列において見出される残基へと再び変異する。他の実施形態において、特定の残基のみが元の生殖系列配列へと変異し戻され、例えば、変異した残基はＦＲ１の最初の８個のアミノ酸内に、もしくは変異した残基はＦＲ４の最後の８個のアミノ酸内に認められるか、または変異した残基は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２もしくはＣＤＲ３内にのみ認められる。他の実施形態では、フレームワークおよび／またはＣＤＲ残基のうちの１つ以上は、異なる生殖系列配列（すなわち、抗体が本来由来した生殖系列配列とは異なる生殖系列配列）の対応する残基に変異する。さらに、本発明の抗体は、フレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内に２つ以上の生殖系列変異の任意の組み合わせを含んでもよく、例えば、ある特定の個々の残基が、特定の生殖系列配列の対応する残基に変異する一方で、元の生殖系列配列とは異なるある特定の他の残基は、維持されるか、または異なる生殖系列配列の対応する残基に変異する。いったん得られれば、１つ以上の生殖系列変異を含有する抗体および抗体結合断片は、結合特異性の改善、結合親和性の増加、アンタゴニストまたはアゴニストの生物学的特性の改善または増強（場合によって）、免疫原性の低下などの１つ以上の所望の特性について容易に試験することができる。この一般的な方法で得られる抗体および抗体結合断片は、本発明の範囲内に包含される。

本発明はまた、１つ以上の保存的置換を有する本明細書に開示されるＨＣＶＲアミノ酸配列、ＬＣＶＲアミノ酸配列、および／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかの変異体を含む、抗ＢＣＭＡまたは抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３抗体を含む。例えば、本発明は、本明細書の表１および３に記載のＨＣＶＲアミノ酸配列、ＬＣＶＲアミノ酸配列、および／またはＣＤＲアミノ酸配列のうちのいずれかに対して、例えば１０個以下、８個以下、６個以下、または４個以下などの保存的アミノ酸置換を有するＨＣＶＲアミノ酸配列、ＬＣＶＲアミノ酸配列、および／またはＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡまたは抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３抗体、あるいはＷＯ２０１４／０４７２３１またはＷＯ２０１７／０５３８５６（これらの各々は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示される抗ＣＤ３抗体を含む。

「エピトープ」という用語は、パラトープとして既知の抗体分子の可変領域における特異的抗原結合部位と相互作用する抗原決定基を指す。単一の抗原は、２つ以上のエピトープを有してもよい。したがって、異なる抗体は抗原上の異なる領域に結合し得、異なる生物学的効果を有し得る。エピトープは、立体配座または直鎖状のいずれかであり得る。立体配座エピトープは、直鎖状ポリペプチド鎖の異なるセグメント由来の空間的に並置されたアミノ酸によって産生される。直鎖状エピトープは、ポリペプチド鎖内の隣接するアミノ酸残基によって産生されたものである。特定の状況では、エピトープは、抗原上のサッカリド、ホスホリル基、またはスルホニル基の部分を含み得る。

「実質的な同一性」または「実質的に同一である」という用語は、核酸またはそのフラグメントを指す場合、別の核酸（またはその相補鎖）との適切なヌクレオチド挿入または欠失と最適に整列した場合、以下に論じられるように、ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴまたはＧａｐなど、配列同一性の任意の周知のアルゴリズムによって測定される場合に、ヌクレオチド塩基の少なくとも約９５％、より好ましくは少なくとも約９６％、９７％、９８％、または９９％のヌクレオチド配列同一性があることを示す。参照核酸分子と実質的な同一性を有する核酸分子は、特定の場合では、参照核酸分子によってコードされるポリペプチドと同じまたは実質的に類似のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードすることができる。

ポリペプチドへ適用される場合、「実質的な類似性」または「実質的に類似の」という用語は、２つのペプチド配列が、既定のギャップ重みを使用してプログラムＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴなどによって最適に整列した場合、少なくとも９５％の配列同一性、さらにより好ましくは少なくとも９８％または９９％の配列同一性を共有する。好ましくは、同一ではない残基位置は、保存的アミノ酸置換が異なる。「保存的アミノ酸置換」とは、アミノ酸残基が、類似の化学的特性（例えば、電荷または疎水性）を備えた側鎖（Ｒ基）を有する別のアミノ酸残基によって置換されたものである。概して、保存的アミノ酸置換は、タンパク質の機能的特性を実質的に変化させない。２つ以上のアミノ酸配列の保存的置換が互いに異なる場合、配列同一性パーセントまたは類似性の程度は、置換の保存的性質を補正するために上向きに調整され得る。この調整を行うための手段は、当業者に周知である。例えば、参照により本明細書に組み込まれるＰｅａｒｓｏｎ（１９９４）ＭｅｔｈｏｄｓＭｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４：３０７－３３１を参照されたい。類似の化学的特性を備えた側鎖を有するアミノ酸の基の例としては、（１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシン、（２）脂肪族－ヒドロキシル側鎖：セリンおよびトレオニン、（３）アミド含有側鎖：アスパラギンおよびグルタミン、（４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファン、（５）塩基性側鎖：リジン、アルギニン、およびヒスチジン、（６）酸性側鎖：アスパラギン酸およびグルタミン酸、ならびに（７）含硫側鎖：システインおよびメチオニンが挙げられる。好ましい保存的アミノ酸置換基は、バリン－ロイシン－イソロイシン、フェニルアラニン－チロシン、リジン－アルギニン、アラニン－バリン、グルタミン酸－アスパラギン酸、およびアスパラギン－グルタミンである。あるいは、保存的置換とは、参照により本明細書に組み込まれるＧｏｎｎｅｔｅｔａｌ．（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ２５６：１４４３－１４４５に開示されるＰＡＭ２５０対数尤度行列において正値を有する任意の変化である。「適度に保存的な」置換とは、ＰＡＭ２５０対数尤度マトリックスにおいて負以外の値を有する任意の変化である。

ポリペプチドに対する配列類似性は、配列同一性とも呼ばれ、典型的には配列分析ソフトウェアを使用して測定される。タンパク質分析ソフトウェアは、保存的アミノ酸置換を含む様々な置換、欠失、および他の修飾に割り当てられた類似性の測定値を使用して類似の配列を一致させる。例えば、ＧＣＧソフトウェアは、異なる種の生物由来の相同ポリペプチドなどの密接に関連するポリペプチド間または野生型タンパク質とその変異タンパク質との間の配列相同性または配列同一性を決定するための既定パラメータとともに使用され得るＧａｐおよびＢｅｓｔｆｉｔなどのプログラムを含む。例えば、ＧＣＧバージョン６．１を参照されたい。ポリペプチド配列は、ＧＣＧバージョン６．１のプログラムである既定パラメータまたは推奨パラメータを用いたＦＡＳＴＡを使用して比較することもできる。ＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２およびＦＡＳＴＡ３）は、問い合わせ配列と検索配列との間の最良重複領域の整列および配列同一性パーセントを提供する（Ｐｅａｒｓｏｎ（２０００）（上記参照））。本発明の配列を、異なる生物由来の多数の配列を含むデータベースと比較する際の別の好ましいアルゴリズムは、既定パラメータを使用したコンピュータプログラムＢＬＡＳＴ、特にＢＬＡＳＴＰまたはＴＢＬＡＳＴＮである。例えば、各々参照により本明細書に組み込まれる、Ａｌｔｓｃｈｕｌｅｔａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０およびＡｌｔｓｃｈｕｌｅｔａｌ．（１９９７）ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．２５：３３８９－４０２を参照されたい。

生殖系列変異
本明細書に開示する抗ＣＤ３抗体は、対応する生殖系列配列と比較して、重鎖可変ドメインのフレームワーク領域および／またはＣＤＲ領域に１つ以上のアミノ酸置換、挿入および／または欠失を含む。

本発明はまた、本明細書に開示するアミノ酸配列のいずれかに由来する抗体およびその抗原結合断片を含み、１つ以上のフレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内の１つ以上のアミノ酸は、抗体が由来した生殖系列配列の対応する残基へ、または別のヒト生殖系列配列の対応する残基へ、または対応する生殖系列残基の保存的アミノ酸置換へ変異し（このような配列変化はまとめて、「生殖系列変異」と本明細書で呼ばれる）、ＣＤ３抗原への検出可能な結合が弱いまたはない。

さらに、本発明の抗体は、フレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内に２つ以上の生殖系列変異の任意の組み合わせを含んでもよく、例えば、ある特定の個々の残基が、特定の生殖系列配列の対応する残基に変異する一方で、元の生殖系列配列とは異なるある特定の他の残基は、維持されるか、または異なる生殖系列配列の対応する残基に変異する。いったん得られれば、１つ以上の生殖系列変異を含む抗体および抗体結合断片を、結合特異性の向上、結合親和性の弱さまたは低下、薬物動態学的特性の向上または増強、免疫原性の低下などの１つ以上の所望の特性に関して試験することができる。本開示の指針を考慮してこの一般的な様式で得られた抗体および抗原結合断片は、本発明の範囲内に包含される。

本発明はまた、本明細書に開示されるＨＣＶＲおよび／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかと実質的に同一であるＨＣＶＲおよび／またはＣＤＲアミノ酸配列を有する抗原結合ドメインを含む抗原結合分子を含むが、ＣＤ３抗原への所望の弱い親和性を維持または改善する。アミノ酸配列意味する場合、「実質的な同一性」または「実質的に同一の」という用語は、２つのアミノ酸配列が、既定のギャップ重みを使用してプログラムＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴなどによって最適に整列した場合、少なくとも９５％の配列同一性、さらにより好ましくは少なくとも９８％、または９９％の配列同一性を共有する。好ましくは、同一ではない残基位置は、保存的アミノ酸置換が異なる。２つ以上のアミノ酸配列の保存的置換が互いに異なる場合、配列同一性パーセントまたは類似性の程度は、置換の保存的性質を補正するために上向きに調整され得る。この調整を行うための手段は、当業者に周知である。例えば、Ｐｅａｒｓｏｎ（１９９４）ＭｅｔｈｏｄｓＭｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４：３０７－３３１を参照されたい。

ポリペプチドに対する配列類似性は、配列同一性とも呼ばれ、典型的には配列分析ソフトウェアを使用して測定される。タンパク質分析ソフトウェアは、保存的アミノ酸置換を含む様々な置換、欠失、および他の修飾に割り当てられた類似性の測定値を使用して類似の配列を一致させる。例えば、ＧＣＧソフトウェアは、異なる種の生物由来の相同ポリペプチドなどの密接に関連するポリペプチド間または野生型タンパク質とその変異タンパク質との間の配列相同性または配列同一性を決定するための既定パラメータとともに使用され得るＧａｐおよびＢｅｓｔｆｉｔなどのプログラムを含む。例えば、ＧＣＧバージョン６．１を参照されたい。ポリペプチド配列は、ＧＣＧバージョン６．１のプログラムである既定パラメータまたは推奨パラメータを用いたＦＡＳＴＡを使用して比較することもできる。ＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２およびＦＡＳＴＡ３）は、問い合わせ配列と検索配列との間の最良重複領域の整列および配列同一性パーセントを提供する（Ｐｅａｒｓｏｎ（２０００）（上記参照））。本発明の配列を、異なる生物由来の多数の配列を含有するデータベースと比較する場合の別の好ましいアルゴリズムは、既定パラメータを使用するコンピュータプログラムＢＬＡＳＴ、特にＢＬＡＳＴＰまたはＴＢＬＡＳＴＮである。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌｅｔａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０およびＡｌｔｓｃｈｕｌｅｔａｌ．（１９９７）ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．２５：３３８９－４０２を参照されたい。

抗体の結合特性
本明細書で使用される場合、抗体、免疫グロブリン、抗体結合断片、またはＦｃ含有タンパク質のいずれかが、例えば、細胞表面タンパク質またはその断片などの所定の抗原へ結合する文脈における用語「結合」は、典型的には、最低２つの実体または抗体－抗原相互作用などの分子構造間の相互作用または会合を指す。

例えば、結合親和性は、リガンドとして抗原および、分析物（または抗リガンド）として抗体、Ｉｇ、抗体結合断片、またはＦｃ含有タンパク質を使用して、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ３０００機器における表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術により決定される場合、典型的には約１０^－７Ｍ以下、例えば約１０^－８Ｍ以下、例えば約１０^－９Ｍ以下のＫ_Ｄ値に対応する。蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）結合アッセイなどの細胞ベースの結合戦略もまた、日常的に使用されており、ＦＡＣＳデータは、放射性リガンド競合結合およびＳＰＲなどの他の方法とよく相関する（Ｂｅｎｅｄｉｃｔ，ＣＡ，ＪＩｍｍｕｎｏｌＭｅｔｈｏｄｓ．１９９７，２０１（２）：２２３－３１、Ｇｅｕｉｊｅｎ，ＣＡ，ｅｔａｌ．ＪＩｍｍｕｎｏｌＭｅｔｈｏｄｓ．２００５，３０２（１－２）：６８－７７）。

したがって、本発明の抗体または抗原結合タンパク質は、非特異的抗原（例えば、ＢＳＡ、カゼイン）へ結合するその親和性よりも少なくとも１０倍低いＫ_Ｄ値に対応する親和性を有する所定の抗原または細胞表面分子（受容体）に結合する。本発明によれば、非特異的抗原よりも１０倍以下の低いＫ_Ｄ値に対応する抗体の親和性は、検出不可能な結合とみなすことができるが、そのような抗体は、本発明の二重特異性抗体を産生するための第２の抗原結合アームと対をなすことができる。

「Ｋ_Ｄ」（Ｍ）という用語は、特定の抗体－抗原相互作用の解離平衡定数、または抗原に結合する抗体もしくは抗体結合断片の解離平衡定数を指す。Ｋ_Ｄと結合親和性との間には逆の関係があり、したがって、Ｋ_Ｄ値が小さいほど、親和性は高い、すなわちより強い。したがって、「より高い親和性」または「より強い親和性」という用語は、相互作用を形成するより高い能力、つまりより小さいＫ_Ｄ値に関し、逆に「より低い親和性」または「より弱い親和性」という用語は、相互作用を形成するより低い能力、つまりより大きなＫ_Ｄ値に関する。状況によっては、他の相互作用パートナー分子（例えば抗原Ｙ）に対する分子（例えば抗体）の結合親和性と比較して、その相互作用パートナー分子（例えば抗原Ｘ）に対する特定の分子（例えば抗体）のより高い結合親和性（またはＫ_Ｄ）は、より大きなＫ_Ｄ値（より低い、またはより弱い、親和性）をより小さなＫ_Ｄ（より高い、またはより強い、親和性）で割ることによって決定される結合比として表され、例えば、場合によって５倍または１０倍高い結合親和性として表される。

「ｋ_ｄ」（秒－１または１／秒）という用語は、特定の抗体－抗原相互作用の解離速度定数、または抗体もしくは抗体結合断片の解離速度定数を指す。その値はｋ_ｏｆｆ値とも呼ばれる。

「ｋ_ａ」（Ｍ－１×秒－１または１／Ｍ）という用語は、特定の抗体－抗原相互作用の会合速度定数、または抗体もしくは抗体結合断片の会合速度定数を指す。

「Ｋ_Ａ」（Ｍ－１または１／Ｍ）という用語は、特定の抗体－抗原相互作用の会合平衡定数、または抗体もしくは抗体結合断片の会合平衡定数を指す。会合平衡定数は、ｋ_ａをｋ_ｄで割ることによって得られる。

「ＥＣ５０」または「ＥＣ_５０」という用語は、半数効果濃度（ｈａｌｆｍａｘｉｍａｌｅｆｆｅｃｔｉｖｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）を指し、特定の曝露時間後にベースラインと最大値との間の中間で反応（ｒｅｓｐｏｎｓｅ）を誘導する抗体の濃度を含む。ＥＣ_５０は本質的に、その最大効果の５０％が観察される抗体の濃度を表す。ある特定の実施形態において、ＥＣ_５０値は、例えばＦＡＣＳ結合アッセイによって決定された場合に、ＣＤ３または腫瘍関連抗原（例えばＢＣＭＡ）を発現する細胞に最大半量の結合を与える本発明の抗体の濃度に等しい。したがって、低減したまたは弱い結合は、ＥＣ_５０の増加、または最大半量の有効濃度で観察される。

一実施形態では、結合の低下は、最大半量の標的細胞への結合を可能にするＥＣ_５０抗体濃度の増加として定義することができる。

別の実施形態では、ＥＣ_５０値は、Ｔ細胞の細胞傷害活性による標的細胞の最大半量の枯渇を誘発する本発明の抗体の濃度を表す。したがって、細胞毒性活性の増加（例えば、Ｔ細胞媒介性腫瘍細胞殺滅）は、ＥＣ_５０または最大半量の有効濃度値の低下で観察される。

二重特異性抗原結合分子
本発明の抗体は、単一特異性、二重特異性、または多重特異性であってもよい。多重特異性抗体は、１つの標的ポリペプチドの異なるエピトープに特異的であり得るか、または２つ以上の標的ポリペプチドに特異的な抗原結合ドメインを含有し得る。例えば、Ｔｕｔｔｅｔａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０－６９、Ｋｕｆｅｒｅｔａｌ．，２００４，ＴｒｅｎｄｓＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２：２３８－２４４を参照されたい。本発明の抗ＢＣＭＡ単一特異性抗体または抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗体は、別の機能性分子、例えば、別のペプチドまたはタンパク質に連結するか、またはそれと同時発現させることができる。例えば、抗体またはその断片は、別の抗体または抗体断片などの１つ以上の他の分子実体に（例えば、化学的結合、遺伝的融合、非共有結合的会合、または別様により）機能的に連結されて、第２のまたは追加の結合特異性を有する二重特異性または多重特異性抗体を産生することができる。

本明細書の「抗ＣＤ３抗体」または「抗ＢＣＭＡ抗体」という表現の使用は、単一特異性の抗ＣＤ３抗体または抗ＢＣＭＡ抗体、ならびにＣＤ３結合アームおよびＢＣＭＡ結合アームを含む二重特異性抗体の両方を含むことを意図する。したがって、本発明は、免疫グロブリンの一方のアームがヒトＣＤ３に結合し、免疫グロブリンの他方のアームがヒトＢＣＭＡに特異的である二重特異性抗体を含む。ＣＤ３結合アームは、本明細書の表３に記載のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲまたはＣＤＲアミノ酸配列のうちのいずれか、あるいはＷＯ２０１４／０４７２３１またはＷＯ２０１７／０５３８５６に開示される抗ＣＤ３抗体を含み得る。

ある特定の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、ヒトＣＤ３に結合し、ヒトＴ細胞活性化を誘導する。ある特定の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、ヒトＣＤ３に弱く結合し、ヒトＴ細胞活性化を誘導する。他の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、ヒトＣＤ３に弱く結合し、二重特異性抗体または多重特異性抗体との関連で腫瘍関連抗原発現細胞死滅を誘導する。他の実施形態において、ＣＤ３結合アームは、ヒトおよびカニクイザル（サル）ＣＤ３と弱く結合または会合するが、それでも結合相互作用は当該技術分野で既知のインビトロアッセイでは検出できない。ＢＣＭＡ結合アームは、本明細書の表１に記載のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲまたはＣＤＲアミノ酸配列のうちのいずれかを含み得る。

ある特定の例示的な実施形態によると、本発明は、ＣＤ３およびＢＣＭＡに特異的に結合する二重特異性抗原結合分子を含む。そのような分子は、本明細書において、例えば、「抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３」または「抗ＣＤ３／抗ＢＣＭＡ」、または「抗ＣＤ３×ＢＣＭＡ」または「ＣＤ３×ＢＣＭＡ」二重特異性分子、または他の同様の用語（例えば、抗ＢＣＭＡ／抗ＣＤ３）と称することができる。

本明細書で使用される「ＢＣＭＡ」という用語は、非ヒト種（例えば、「マウスＢＣＭＡ」、「サルＢＣＭＡ」など）に由来するものとして指定されない限り、ヒトＢＣＭＡタンパク質を指す。ヒトＢＣＭＡタンパク質は、配列番号１１５に示されるアミノ酸配列を有する。

ＣＤ３およびＢＣＭＡに特異的に結合する前述の二重特異性抗原結合分子は、インビトロ親和性結合アッセイで測定した場合に、約４０ｎＭ超のＫ_Ｄを示す弱い結合親和性を有するＣＤ３に結合する、抗ＣＤ３抗原結合分子を含むことができる。

本明細書で使用される場合、「抗原結合分子」という表現は、単独で、または特定の抗原に特異的に結合する、１つ以上のさらなるＣＤＲおよび／またはフレームワーク領域（ＦＲ）と組み合わせて少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むまたはそれからなるタンパク質、ポリペプチド、または分子複合体を意味する。ある特定の実施形態では、抗原結合分子は、それらの用語が本明細書の他所で定義されているように、抗体または抗体のフラグメントである。

本明細書で使用される場合、「二重特異性抗原結合分子」という表現は、少なくとも第１の抗原結合ドメインおよび第２の抗原結合ドメインを含むタンパク質、ポリペプチド、または分子複合体を意味する。二重特異性抗原結合分子内の各抗原結合ドメインは、単独で、または１つ以上の追加のＣＤＲおよび／またはＦＲと組み合わせて、特定の抗原に特異的に結合する少なくとも１つのＣＤＲを含む。本発明の文脈において、第１の抗原結合ドメインは、第１の抗原（例えばＢＣＭＡ）に特異的に結合し、第２の抗原結合ドメインは、第２の異なる抗原（例えばＣＤ３）に特異的に結合する。

本発明のある特定の例示的な実施形態では、二重特異性抗原結合分子は、二重特異性抗体である。二重特異性抗体の各抗原結合ドメインは、重鎖可変ドメイン（ＨＣＶＲ）および軽鎖可変ドメイン（ＬＣＶＲ）を含む。第１および第２の抗原結合ドメインを含む二重特異性抗原結合分子（例えば、二重特異性抗体）の文脈において、第１の抗原結合ドメインのＣＤＲは、接頭辞「Ｄ１」を付けて指定され、第２の抗原結合ドメインのＣＤＲは、接頭辞「Ｄ２」を付けて指定され得る。したがって、第１の抗原結合ドメインのＣＤＲは、本明細書においてＤ１－ＨＣＤＲ１、Ｄ１－ＨＣＤＲ２、およびＤ１－ＨＣＤＲ３と称されてもよく、第２の抗原結合ドメインのＣＤＲは、本明細書においてＤ２－ＨＣＤＲ１、Ｄ２－ＨＣＤＲ２、およびＤ２－ＨＣＤＲ３と称されてもよい。

ある特定の例示的な実施形態において、単離された二重特異性抗原結合分子は、（ａ）配列番号６６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）内に含まれる３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）、および（ｂ）配列番号８２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）内に含まれる３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）、を含む、第１の抗原結合ドメインを含む。場合によっては、単離された二重特異性抗原結合分子は、配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、を含む。場合によっては、単離された二重特異性抗原結合分子は、配列番号８４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号８６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号８８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、を含む。場合によっては、第１の抗原結合ドメインは、配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ、および配列番号８２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ、を含む。

ある特定の例示的な実施形態において、単離された二重特異性抗原結合分子は、（ａ）配列番号９０または配列番号９８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）内に含まれる３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）、および（ｂ）配列番号８２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）内に含まれる３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）、を含む、第２の抗原結合ドメインを含む。場合によっては、第２の抗原結合ドメインは、（ａ）配列番号９２または配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号９４または配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、および（ｃ）配列番号９６または配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、を含む。場合によっては、第２の抗原結合ドメインは、配列番号８４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号８６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号８８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、を含む。場合によっては、第２の抗原結合ドメインは、（ａ）配列番号９２、９４、９６のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３ドメイン、および配列番号８４、８６、８８のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３ドメイン、または（ｂ）配列番号１００、１０２、１０４のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３ドメイン、および配列番号８４、８６、８８のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３ドメイン、を含む。場合によっては、第２の抗原結合ドメインは、（ａ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ、および配列番号８２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ、または（ｂ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ、および配列番号８２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ、を含む。

ある特定の例示的な実施形態において、単離された二重特異性抗原結合分子は、（ａ）配列番号６８、７０、７２のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３ドメイン、および配列番号８４、８６、８８のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３ドメイン、を含む、第１の抗原結合ドメイン、ならびに（ｂ）配列番号９２、９４、９６のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３ドメイン、および配列番号８４、８６、８８のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３ドメイン、を含む、第２の抗原結合ドメイン、を含む。場合によっては、単離された二重特異性抗原結合分子は、（ａ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ、および配列番号８２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ、を含む、第１の抗原結合ドメイン、ならびに（ｂ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ、および配列番号８２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ、を含む、第２の抗原結合ドメイン、を含む。

ある特定の例示的な実施形態において、単離された二重特異性抗原結合分子は、（ａ）配列番号６８、７０、７２のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３ドメイン、および配列番号８４、８６、８８のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３ドメイン、を含む、第１の抗原結合ドメイン、ならびに（ｂ）配列番号１００、１０２、１０４のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３ドメイン、および配列番号８４、８６、８８のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３ドメイン、を含む、第２の抗原結合ドメイン、を含む。場合によっては、単離された二重特異性抗原結合分子は、（ａ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ、および配列番号８２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ、を含む、第１の抗原結合ドメイン、ならびに（ｂ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ、および配列番号８２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ、を含む、第２の抗原結合ドメイン、を含む。

ある特定の例示的な実施形態において、単離された二重特異性抗原結合分子は、（ａ）ヒトＢＣＭＡに特異的に結合し、かつ配列番号２、１８、３４、５０、６６、１２２、および１２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣＶＲのＣＤＲ、ならびに配列番号１０、２６、４２、５８、７４、８２、１２３、および１２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣＶＲのＣＤＲ、を含む、第１の抗原結合ドメイン、ならびに（ｂ）ヒトＣＤ３に特異的に結合する第２の抗原結合ドメイン、を含む。場合によっては、第１の抗原結合ドメインは、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、１２２／１２３、１２４／１２５、２／８２、１８／８２、３４／８２、５０／８２、６６／８２、１２２／８２、および１２４／８２からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対からのＣＤＲを含む。場合によっては、第１の抗原結合ドメインは、それぞれ、配列番号４－６－８－１２－１４－１６、２０－２２－２４－２８－３０－３２、３６－３８－４０－４４－４６－４８、５２－５４－５６－６０－６２－６４、６８－７０－７２－７６－７８－８０、４－６－８－８４－８６－８８、２０－２２－２４－８４－８６－８８、３６－３８－４０－８４－８６－８８、５２－５４－５６－８４－８６－８８、および６８－７０－７２－８４－８６－８８からなる群から選択されるＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３ドメインを含む。場合によっては、第１の抗原結合ドメインは、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、１２２／１２３、１２４／１２５、２／８２、１８／８２、３４／８２、５０／８２、６６／８２、１２２／８２、および１２４／８２からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む。場合によっては、第２の抗原結合ドメインは、配列番号９０／８２および９８／８２からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対のＣＤＲを含む。

ある特定の例示的な実施形態において、単離された二重特異性抗原結合分子は、ＢＣＭＡへの結合を競合する、または参照抗体としてＢＣＭＡ上の同じエピトープに結合し、参照抗体は、配列番号６６／８２のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む第１の抗原結合ドメインと、配列番号９０／８２または配列番号９８／８２のいずれかのアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む第２の抗原結合ドメインと、を含む。

ある特定の例示的な実施形態において、単離された二重特異性抗原結合分子は、ヒトＣＤ３への結合を競合する、または参照抗体としてヒトＣＤ３上の同じエピトープに結合し、参照抗体は、配列番号６６／８２のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む第１の抗原結合ドメインと、配列番号９０／８２または配列番号９８／８２のいずれかのアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む第２の抗原結合ドメインと、を含む。

上記または本明細書で論じられる二重特異性抗原結合分子は、二重特異性抗体であり得る。場合によっては、二重特異性抗体は、ヒトＩｇＧ重鎖定常領域を含む。場合によっては、ヒトＩｇＧ重鎖定常領域は、アイソタイプＩｇＧ１である。場合によっては、ヒトＩｇＧ重鎖定常領域は、アイソタイプＩｇＧ４である。様々な実施形態では、二重特異性抗体は、同じアイソタイプの野生型ヒンジと比較してＦｃγ受容体結合を減少させるキメラヒンジを含む。

第１の抗原結合ドメインおよび第２の抗原結合ドメインは、互いに直接的または間接的に結合して、本発明の二重特異性抗原結合分子を形成してもよい。あるいは、第１の抗原結合ドメインおよび第２の抗原結合ドメインは各々、別個の多量体化ドメインに連結され得る。１つの多量体化ドメインと別の多量体化ドメインとの会合は、２つの抗原結合ドメイン間の会合を促進し、それによって二重特異性抗原結合分子を形成する。本明細書で使用される場合、「多量体化ドメイン」は、同一または類似の構造または構成の第２の多量体化ドメインと会合する能力を有する任意の高分子、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、またはアミノ酸である。例えば、多量体化ドメインは、免疫グロブリンＣ_Ｈ３ドメインを含むポリペプチドであってもよい。多量体化成分の非限定的な例は、免疫グロブリンのＦｃ部分（Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３ドメインを含む）、例えばアイソタイプＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４から選択されるＩｇＧのＦｃドメイン、ならびに各アイソタイプ群内の任意のアロタイプである。

本発明の二重特異性抗原結合分子は、典型的には２つの多量体化ドメイン、例えば、それぞれ別々の抗体重鎖の一部である２つのＦｃドメインを含む。第１および第２の多量体化ドメインは、例えば、ＩｇＧ１／ＩｇＧ１、ＩｇＧ２／ＩｇＧ２、ＩｇＧ４／ＩｇＧ４などの同じＩｇＧアイソタイプのものであり得る。あるいは、第１および第２の多量体化ドメインは、例えば、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２、ＩｇＧ１／ＩｇＧ４、ＩｇＧ２／ＩｇＧ４などの異なるＩｇＧアイソタイプのものであり得る。

特定の実施形態では、多量体化ドメインは、Ｆｃフラグメントまたは少なくとも１つのシステイン残基を含む１～約２００アミノ酸長のアミノ酸配列である。他の実施形態では、多量体化ドメインは、システイン残基、または短いシステイン含有ペプチドである。他の多量体化ドメインには、ロイシンジッパー、ヘリックスループモチーフ、またはコイルドコイルモチーフを含むか、またはそれからなるペプチドまたはポリペプチドが含まれる。

任意の二重特異性抗体フォーマットまたは技術を使用して、本発明の二重特異性抗原結合分子を作製することができる。例えば、第１の抗原結合特異性を有する抗体またはその断片は、第２の抗原結合特異性を有する別の抗体または抗体断片などの１つ以上の他の分子実体に（例えば、化学的結合、遺伝的融合、非共有結合、または別様により）機能的に連結されて、二重特異性抗原結合分子を生成することができる。本発明との関連で使用され得る特定の例示的な二重特異性フォーマットには、例えば、ｓｃＦｖベースのフォーマットまたはダイアボディ二重特異性フォーマット、ＩｇＧ－ｓｃＦｖ融合物、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）－Ｉｇ、Ｑｕａｄｒｏｍａ、ノブ・イントゥ・ホール、共通の軽鎖（例えば、ノブ・イントゥ・ホールを備えた共通の軽鎖など）、ＣｒｏｓｓＭａｂ、ＣｒｏｓｓＦａｂ、（ＳＥＥＤ）ボディ、ロイシンジッパー、デュオボディ、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２、二重作用型Ｆａｂ（ＤＡＦ）－ＩｇＧ、およびＭａｂ^２二重特異性フォーマットが含まれるが、これらに限定されない（上述のフォーマットの総説については、例えば、Ｋｌｅｉｎｅｔａｌ．２０１２，ｍＡｂｓ４：６，１－１１、およびそこに引用されている参考文献を参照されたい）。

本発明の二重特異性抗原結合分子との関連で、多量体化ドメイン、例えば、Ｆｃドメインは、野生型の、天然に存在するＦｃドメインと比較して、１つ以上のアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失、または置換）を含んでもよい。例えば、本発明は、ＦｃとＦｃＲｎとの間の修飾された結合相互作用（例えば、強化または減少）を有する修飾Ｆｃドメインをもたらす、Ｆｃドメイン中の１つ以上の修飾を含む二重特異性抗原結合分子を含む。一実施形態では、二重特異性抗原結合分子は、Ｃ_Ｈ２またはＣ_Ｈ３領域に修飾を含み、この修飾により、酸性環境（例えば、ｐＨ範囲約５．５～約６．０のエンドソーム内）においてＦｃＲｎに対するＦｃドメインの親和性が増加する。かかるＦｃ修飾の非限定的な例には、例えば、２５０位（例えば、ＥまたはＱ）、２５０位および４２８位（例えば、ＬまたはＦ）、２５２位（例えば、Ｌ／Ｙ／Ｆ／ＷまたはＴ）、２５４位（例えば、ＳまたはＴ）、および２５６位（例えば、Ｓ／Ｒ／Ｑ／Ｅ／ＤまたはＴ）での修飾、または４２８位および／もしくは４３３位（例えば、Ｌ／Ｒ／Ｓ／Ｐ／ＱまたはＫ）および／または４３４位（例えば、Ｈ／ＦまたはＹ）での修飾、または２５０位および／もしくは４２８位での修飾、または３０７位もしくは３０８位（例えば、３０８Ｆ、Ｖ３０８Ｆ）および４３４位での修飾が挙げられる。一実施形態では、修飾は４２８Ｌ（例えばＭ４２８Ｌ）および４３４Ｓ（例えばＮ４３４Ｓ）の修飾、４２８Ｌ、２５９Ｉ（例えば、Ｖ２５９Ｉ）、および３０８Ｆ（例えば、Ｖ３０８Ｆ）の修飾、４３３Ｋ（例えば、Ｈ４３３Ｋ）および４３４（例えば、４３４Ｙ）の修飾、２５２、２５４、および２５６（例えば、２５２Ｙ、２５４Ｔ、および２５６Ｅ）の修飾、２５０Ｑおよび４２８Ｌの修飾（例えば、Ｔ２５０ＱおよびＭ４２８Ｌ）、３０７および／または３０８の修飾（例えば、３０８Ｆまたは３０８Ｐ）を含む。

本発明は、第１のＣ_Ｈ３ドメインおよび第２のＩｇＣ_Ｈ３ドメインを含む二重特異性抗原結合分子も含み、第１および第２のＩｇＣ_Ｈ３ドメインは、少なくとも１つのアミノ酸が互いに異なり、少なくとも１つのアミノ酸の差により、そのアミノ酸の差を欠く二重特異性抗体と比較して、プロテインＡへの二重特異性抗体の結合が減少する。一実施形態では、第１のＩｇＣ_Ｈ３ドメインは、プロテインＡに結合し、第２のＩｇＣ_Ｈ３ドメインは、Ｈ９５Ｒ修飾（ＩＭＧＴエクソン番号付けによるもの、ＥＵ番号付けによるＨ４３５Ｒ）などのプロテインＡ結合を減少または消失させる突然変異を含む。第２のＣ_Ｈ３は、Ｙ９６Ｆ修飾（ＩＭＧＴによるもの、ＥＵによるＹ４３６Ｆ）をさらに含み得る。例えば、米国特許第８，５８６，７１３号を参照されたい。第２のＣ_Ｈ３内に見られ得るさらなる修飾には、ＩｇＧ１抗体の場合、Ｄ１６Ｅ、Ｌ１８Ｍ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、およびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによるもの、ＥＵによるＤ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、およびＶ４２２Ｉ）、ＩｇＧ２抗体の場合、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、およびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによるもの、ＥＵによるＮ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、およびＶ４２２Ｉ）、ならびにＩｇＧ４抗体の場合、Ｑ１５Ｒ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、Ｒ６９Ｋ、Ｅ７９Ｑ、およびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによるもの、ＥＵによるＱ３５５Ｒ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、Ｒ４０９Ｋ、Ｅ４１９Ｑ、およびＶ４２２Ｉ）が含まれる。

ある特定の実施形態では、Ｆｃドメインは、２つ以上の免疫グロブリンアイソタイプに由来するＦｃ配列を組み合わせたキメラであってもよい。例えば、キメラＦｃドメインは、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、またはヒトＩｇＧ４Ｃ_Ｈ２領域に由来するＣ_Ｈ２配列の一部または全部、およびヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、またはヒトＩｇＧ４に由来するＣ_Ｈ３配列の一部または全部を含み得る。キメラＦｃドメインは、キメラヒンジ領域も含み得る。例えば、キメラヒンジは、ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域、ヒトＩｇＧ２ヒンジ領域、またはヒトＩｇＧ４ヒンジ領域に由来する「下部ヒンジ」配列と組み合わせられた、ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域、ヒトＩｇＧ２ヒンジ領域、またはヒトＩｇＧ４ヒンジ領域に由来する「上部ヒンジ」配列を含み得る。本明細書に記載の抗原結合分子のうちのいずれかに含まれ得るキメラＦｃドメインの具体的な例は、Ｎ末端からＣ末端に、［ＩｇＧ４Ｃ_Ｈ１］－［ＩｇＧ４上部ヒンジ］－［ＩｇＧ２下部ヒンジ］－［ＩｇＧ４ＣＨ２］－［ＩｇＧ４ＣＨ３］を含む。本明細書に記載の抗原結合分子のうちのいずれかに含まれ得るキメラＦｃドメインの別の例は、Ｎ末端からＣ末端に、［ＩｇＧ１Ｃ_Ｈ１］－［ＩｇＧ１上部ヒンジ］－［ＩｇＧ２下部ヒンジ］－［ＩｇＧ４ＣＨ２］－［ＩｇＧ１ＣＨ３］を含む。本発明の抗原結合分子のうちのいずれかに含まれ得るキメラＦｃドメインのこれらおよび他の例は、全体が本明細書に組み込まれる、２０１４年８月２８日に公開された米国公開第２０１４／０２４３５０４号に記載されている。これらの一般的な構造配置を有するキメラＦｃドメインおよびそのバリアントは、改変されたＦｃ受容体結合を有し得、次いで、Ｆｃエフェクター機能に影響を及ぼす。

配列変異体
本明細書の抗体および二重特異性抗原結合分子は、個々の抗原結合ドメインが由来した対応する生殖系列配列と比較して、重鎖および軽鎖可変ドメインのフレームワークおよび／またはＣＤＲ領域に１つ以上のアミノ酸置換、挿入および／または欠失を含み得る。かかる変異は、本明細書に開示されるアミノ酸配列を、例えば、公共の抗体配列データベースから入手可能な生殖系列配列と比較することによって、容易に確認され得る。本発明の抗原結合分子は、本明細書に開示される例示的なアミノ酸配列のいずれかに由来する抗原結合ドメインを含んでもよく、１つ以上のフレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内の１つ以上のアミノ酸は、その抗体が由来した生殖系列配列の対応する残基に変異するか、または別のヒト生殖系列配列の対応する残基に変異するか、または対応する生殖系列残基の保存的アミノ酸置換に変異する（かかる配列変化は本明細書で集合的に「生殖系列変異」と呼ばれる）。当業者は、本明細書に開示される重鎖および軽鎖可変領域配列から出発して、１つ以上の個々の生殖系列変異またはそれらの組み合わせを含む多くの抗体および抗体結合フラグメントを容易に産生することができる。ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｈおよび／またはＶ_Ｌドメイン内のフレームワークおよび／またはＣＤＲ残基はすべて、抗原結合ドメインが本来由来した元の生殖系列配列において見出される残基へと再び突然変異する。他の実施形態において、ある特定の残基のみが、元の生殖系列配列へと再び変異し、例えば、変異した残基のみが、ＦＲ１の最初の８個のアミノ酸内に、もしくはＦＲ４の最後の８個のアミノ酸内に認められるか、または変異した残基のみが、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３内に見出される。他の実施形態において、フレームワークおよび／またはＣＤＲ残基の１つ以上は、異なる生殖系列配列（すなわち、抗原結合ドメインが本来由来した生殖系列配列とは異なる生殖系列配列）の対応する残基へ変異する。さらに、抗原結合ドメインは、フレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内に２つ以上の生殖系列変異の任意の組み合わせを含んでもよく、例えば、特定の個々の残基が、特定の生殖系列配列の対応する残基へ変異するのに対し、元の生殖系列配列とは異なるある特定の他の残基は維持されるか、または異なる生殖系列配列の対応する残基に変異する。いったん得られれば、１つ以上の生殖系列突然変異を含有する抗原結合ドメインは、結合特異性の改善、結合親和性の増大、アンタゴニストまたはアゴニストの生物学的特性の改善または強化（場合によって）、免疫原性の低下などの１つ以上の所望の特性について容易に試験することができる。この一般的な方法で得られた１つ以上の抗原結合ドメインを含む二重特異性抗原結合分子は、本発明の範囲内に包含される。

ｐＨ依存的結合
本発明は、ｐＨ依存性の結合特性を有する、抗ＢＣＭＡ抗体、および抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗原結合分子を含む。例えば、本発明の抗ＢＣＭＡ抗体は、中性ｐＨと比較して、酸性ｐＨでＢＣＭＡへの結合の低下を示し得る。あるいは、本発明の抗ＢＣＭＡ抗体は、中性ｐＨと比較して、酸性ｐＨでＢＣＭＡへの増強された結合を示し得る。「酸性ｐＨ」という表現は、約６．２未満、例えば、約６．０、５．９５、５、９、５．８５、５．８、５．７５、５．７、５．６５、５．６、５．５５、５．５、５．４５、５．４、５．３５、５．３、５．２５、５．２、５．１５、５．１、５．０５、５．０以下のｐＨ値を含む。本明細書で使用される場合、「中性ｐＨ」という表現は、約７．０～約７．４のｐＨを意味する。「中性ｐＨ」という表現は、約７．０、７．０５、７．１、７．１５、７．２、７．２５、７．３、７．３５、および７．４のｐＨ値を含む。

場合によっては、「中性ｐＨと比較して、酸性ｐＨで．．．結合の低減」は、中性ｐＨでその抗原に結合する抗体のＫ_Ｄ値に対する酸性ｐＨでその抗原に結合する抗体のＫ_Ｄ値の比に関して、表される。（またはその逆）。例えば、抗体またはその抗原結合断片が、約３．０以上の酸性／中性Ｋ_Ｄ比を示す場合、本発明の目的のために、抗体またはその抗原結合断片は、「中性ｐＨと比較して、酸性ｐＨではＢＣＭＡへの結合の低下」を示すとみなされ得る。ある特定の例示的実施形態では、本発明の抗体または抗原結合フラグメントの酸性／中性Ｋ_Ｄ比は、約３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、９．５、１０．０、１０．５、１１．０、１１．５、１２．０、１２．５、１３．０、１３．５、１４．０、１４．５、１５．０、２０．０、２５．０、３０．０、４０．０、５０．０、６０．０、７０．０、１００．０以上であり得る。

ｐＨ依存性結合特性を有する抗体は、例えば、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨで特定の抗原への結合の低減（または強化）について抗体の集団をスクリーニングすることによって得ることができる。さらに、アミノ酸レベルでの抗原結合ドメインの修飾は、ｐＨ依存的特徴を有する抗体を産生し得る。例えば、抗原結合ドメイン（例えばＣＤＲ内）の１つ以上のアミノ酸をヒスチジン残基で置換することにより、中性ｐＨに対して酸性ｐＨで抗原結合が低減した抗体を得ることができる。

Ｆｃ変異体を含む抗体
本発明のある特定の実施形態によると、例えば、中性ｐＨと比較して、酸性ｐＨで、ＦｃＲｎ受容体への抗体結合を増強または減少させる１つ以上の変異を含むＦｃドメインを含む、抗ＢＣＭＡ抗体、および抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗原結合分子が、提供される。例えば、本発明は、ＦｃドメインのＣ_Ｈ２またはＣ_Ｈ３領域に変異を含む抗体を含み、変異は、酸性環境においてＦｃＲｎに対するＦｃドメインの親和性を増加させる（例えば、ｐＨが約５．５～約６．０の範囲のエンドソームにおいて）。そのような変異は、動物に投与したときに抗体の血清半減期の増加をもたらし得る。そのようなＦｃ修飾の非限定的な例には、例えば、２５０位（例えば、ＥまたはＱ）での、２５０位および４２８位（例えば、ＬまたはＦ）での、２５２位（例えば、Ｌ／Ｙ／Ｆ／ＷまたはＴ）、２５４位（例えば、ＳまたはＴ）、および２５６位（例えば、Ｓ／Ｒ／Ｑ／Ｅ／ＤまたはＴ）での修飾、あるいは４２８位および／または４３３位（例えばＨ／Ｌ／Ｒ／Ｓ／Ｐ／ＱまたはＫ）および／または４３４位（例えばＨ／ＦまたはＹ）での修飾、あるいは２５０位および／または４２８位での修飾、あるいは３０７位もしくは３０８位（例えば、３０８Ｆ、Ｖ３０８Ｆ）、および４３４位での修飾が含まれる。一実施形態では、修飾は４２８Ｌ（例えばＭ４２８Ｌ）および４３４Ｓ（例えばＮ４３４Ｓ）の修飾、４２８Ｌ、２５９Ｉ（例えば、Ｖ２５９Ｉ）、および３０８Ｆ（例えば、Ｖ３０８Ｆ）の修飾、４３３Ｋ（例えば、Ｈ４３３Ｋ）および４３４（例えば、４３４Ｙ）の修飾、２５２、２５４、および２５６（例えば、２５２Ｙ、２５４Ｔ、および２５６Ｅ）の修飾、２５０Ｑおよび４２８Ｌの修飾（例えば、Ｔ２５０ＱおよびＭ４２８Ｌ）、３０７および／または３０８の修飾（例えば、３０８Ｆまたは３０８Ｐ）を含む。すべての位置はＥＵナンバリングで示されている。

例えば、本発明は、２５０Ｑおよび２４８Ｌ（例えば、Ｔ２５０ＱおよびＭ２４８Ｌ）、２５２Ｙ、２５４Ｔおよび２５６Ｅ（例えば、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４ＴおよびＴ２５６Ｅ）、４２８Ｌおよび４３４Ｓ（例えば、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ）、ならびに４３３Ｋおよび４３４Ｆ（例えば、Ｈ４３３ＫおよびＮ４３４Ｆ）からなる群から選択される、１つ以上の変異対または変異群を含むＦｃドメインを含む、抗ＢＣＭＡ抗体、および抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗原結合分子を含む。前述のＦｃドメイン突然変異、および本明細書に開示される抗体可変ドメイン内の他の突然変異のすべての可能な組み合わせが、本発明の範囲内で熟慮される。

抗体および二重特異性抗原結合分子の生物学的特性
本発明は、高い親和性（例えば、ナノモル以下のＫ_Ｄ値）を有するヒトＢＣＭＡに結合する抗体およびその抗原結合断片を含む。

ある特定の実施形態によると、本発明は、表面プラズモン共鳴、例えば、本明細書の実施例４で定義するアッセイフォーマットを使用して測定した場合に、約５ｎＭ未満のＫ_Ｄを有するヒトＢＣＭＡ（例えば２５℃で）に結合する抗体および抗体の抗原結合断片を含む。ある特定の実施形態において、表面プラズモン共鳴、例えば、本明細書の実施例４で定義するアッセイフォーマットを使用して、または実質的に類似のアッセイで測定した場合に、本発明の抗体または抗原結合断片は、約２０ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約８ｎＭ未満、約７ｎＭ未満、約６ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、約４ｎＭ未満、約３ｎＭ未満、約２ｎＭ未満、約１ｎＭ未満、約８００ｐＭ未満、約７００ｐＭ未満、約５００ｐＭ未満、約４００ｐＭ未満、約３００ｐＭ未満、約２００ｐＭ未満、約１００ｐＭ未満、約５０ｐＭ未満、または約２５ｐＭ未満のＫ_Ｄを有するＢＣＭＡに結合する。本発明は、二重特異性抗原結合分子（例えば、表面プラズモン共鳴、例えば、本明細書の実施例４で定義するアッセイフォーマットを使用して、または実質的に類似のアッセイで測定した場合に、約２５ｐＭ未満のＫ_Ｄを有するヒトＢＣＭＡに結合し、約１７０ｐＭ未満のＫ_Ｄを有するサルＢＣＭＡに結合する二重特異性抗体を含む。

本発明はまた、２５℃での表面プラズモン共鳴、例えば、本明細書の実施例４に定義されるアッセイフォーマットを使用して、または実質的に類似のアッセイで測定した場合に、約１０分超または約１２５分超の解離半減期（ｔ１／２）を有するＢＣＭＡに結合する抗体およびその抗原結合断片を含む。ある特定の実施形態において、２５℃での表面プラズモン共鳴、例えば、本明細書の実施例４で定義するアッセイフォーマットを使用して、または実質的に類似のアッセイで測定した場合に、本発明の抗体または抗原結合断片は、約３分超、約４分超、約１０分超、約２０分超、約３０分超、約４０分超、約５０分超、約６０分超、約７０分超、約８０分超、約９０分超、約１００分超、約１１０分超、または約１２０分超のｔ１／２を有するＢＣＭＡに結合する。本発明は、二重特異性抗原結合分子（例えば、２５℃の表面プラズモン共鳴、例えば、本明細書の実施例４において定義されたアッセイフォーマットを使用して、または実質的に類似のアッセイで測定した場合に、約１０分超でＢＣＭＡに結合する二重特異性抗体を含む。

本発明はまた、実施例６に記載のＦＡＣＳ結合アッセイまたは実質的に類似のアッセイによって決定された場合に、内因性ＢＣＭＡ（例えば、ＮＣＩ－Ｈ９２９、ＭＯＬＰ－８、またはＯＭＰ－２）を発現するヒト細胞株に特異的に結合する抗体およびその抗原結合断片も含む。

本発明はまた、（ａ）ヒト多発性骨髄腫異種移植片を保有する免疫不全マウスにおける腫瘍成長を阻害すること、（ｂ）ヒト多発性骨髄腫異種移植片を保有する免疫不全マウスにおける確立された腫瘍の腫瘍成長を抑制すること（例えば、実施例１０～１５を参照されたい）、ならびに（ｃ）ヒトＣＤ３を発現する免疫応答性マウスにおけるヒトＢＣＭＡを発現するように操作された同系メラノーマ（ｓｙｎｇｅｎｉｃｍｅｌａｎｏｍａ）および結腸がん細胞の腫瘍成長を抑制すること、からなる群から選択される１つ以上の特徴を示す抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗原結合分子を含む。

本発明は、高い親和性を有するヒトＣＤ３に結合する抗体およびその抗原結合断片を含む。本発明はまた、治療状況および所望される特定の標的化特性に応じて、中程度または低い親和性を有するヒトＣＤ３に結合する抗体およびその抗原結合断片を含む。場合によっては、低親和性には、３００ｎＭ超、５００ｎＭ超、または１μＭ超のＫ_ＤまたはＥＣ_５０（例えば、表面プラズモン共鳴アッセイで測定した場合）を有するＣＤ３に結合する抗体が含まれる。本発明はまた、検出不可能な親和性を有するヒトＣＤ３に結合する抗体およびその抗原結合断片を含む。例えば、一方のアームがＣＤ３に結合し、別のアームが標的抗原（例えば、ＢＣＭＡ）に結合する二重特異性抗原結合分子の状況下では、標的抗原結合アームが高い親和性を有する標的抗原に結合することが望ましいが、抗ＣＤ３アームは中程度または低い親和性を有するまたは親和性を有しないＣＤ３に結合する。この様式において、標的抗原を発現する細胞への抗原結合分子の優先的標的化は、一般的／非標的化ＣＤ３結合およびそれに付随する結果として生じる有害な副作用を回避しながら達成され得る。

本発明は、ヒトＣＤ３およびヒトＢＣＭＡに同時に結合することができる二重特異性抗原結合分子（例えば、二重特異性抗体）を含む。ＣＤ３を発現する細胞と相互作用する結合アームは、適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、弱から検出不可能な結合を有し得る。二重特異性抗原結合分子がＣＤ３および／またはＢＣＭＡを発現する細胞と結合する程度は、本明細書の実施例５および６に示すように、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）によって評価することができる。

例えば、本発明は、ＣＤ３を発現するヒト細胞株に特異的に結合するが、ＢＣＭＡ（例えば、Ｊｕｒｋａｔ）および／またはＢＣＭＡ発現細胞を発現しない抗体、抗体結合断片、およびその二重特異性抗体を含む。

本発明は、弱い（すなわち低い）親和性またはさらに検出不可能な親和性を有するヒトＣＤ３に結合する抗体、その抗体結合断片、およびその二重特異性抗体を含む。

本発明は、弱い（すなわち低い）親和性またはさらに検出不可能な親和性を有するサル（すなわちカニクイザル）ＣＤ３に結合する抗体、その抗体結合断片、およびその二重特異性抗体を含む。

本発明は、ヒトＣＤ３に結合してＴ細胞活性化を誘導する抗体、その抗体結合断片、およびその二重特異性抗体を含む。

本発明は、対象における腫瘍抗原発現細胞を枯渇または減少させることができる抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗原結合分子を含む（例えば、実施例８～１６、または実質的に同様のアッセイを参照されたい）。例えば、ある特定の実施形態によると、抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗原結合分子が提供され、対象への０．０４ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、または４ｍｇ／ｋｇの二重特異性抗原結合分子の単回投与または複数回投与が対象におけるＢＣＭＡ発現細胞数の減少を引き起こす（例えば、対象における腫瘍成長が抑制または阻害される）。

エピトープマッピングおよび関連技法
本発明の抗原結合分子が結合するＣＤ３および／またはＢＣＭＡ上のエピトープは、ＣＤ３またはＢＣＭＡタンパク質の３つ以上（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、またはそれ以上）のアミノ酸の単一連続配列からなってもよい。あるいは、エピトープは、ＣＤ３またはＢＣＭＡの複数の非連続アミノ酸（またはアミノ酸配列）からなってもよい。本発明の抗体は、単一のＣＤ３鎖内に含まれるアミノ酸（例えば、ＣＤ３－イプシロン、ＣＤ３－デルタ、またはＣＤ３－ガンマ）と相互作用し得るか、または２つ以上の異なるＣＤ３鎖上のアミノ酸と相互作用し得る。本発明で使用する場合、「エピトープ」という用語は、パラトープとして既知の抗体分子の可変領域における特異的抗原結合部位と相互作用する抗原決定基を指す。単一の抗原は２つ以上のエピトープを有してもよい。したがって、異なる抗体は抗原上の異なる領域に結合し得、異なる生物学的効果を有し得る。エピトープは、立体配座または直鎖状のいずれかであり得る。立体配座エピトープは、直鎖状ポリペプチド鎖の異なるセグメント由来の空間的に並置されたアミノ酸によって産生される。直鎖状エピトープは、ポリペプチド鎖中の隣接するアミノ酸残基によって産生されるものである。ある特定の状況において、エピトープは、抗原上の糖類、ホスホリル基、またはスルホニル基の部分を含み得る。

当業者に既知の種々の技法を用いて、抗体の抗原結合ドメインがポリペプチドまたはタンパク質内にある「１つ以上のアミノ酸と相互作用する」かどうかを判定することができる。例示的な技術としては、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ＨａｒｌｏｗａｎｄＬａｎｅ（ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｒｅｓｓ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂ．，ＮＹ）に記載されている日常的なクロス遮断アッセイ、アラニンスキャニング突然変異分析、ペプチドブロット分析（Ｒｅｉｎｅｋｅ，２００４，ＭｅｔｈｏｄｓＭｏｌＢｉｏｌ２４８：４４３－４６３）、およびペプチド切断分析が挙げられる。加えて、エピトープ切除、エピトープ抽出、および抗原の化学修飾などの方法を採用することができる（Ｔｏｍｅｒ（２０００）ＰｒｏｔｅｉｎＳｃｉｅｎｃｅ９：４８７－４９６）。抗体の抗原結合ドメインが相互作用するポリペプチド内のアミノ酸を同定するために用いることができる別の方法は、質量分析によって検出される水素／重水素交換である。一般的にいえば、水素／重水素交換法は、関心対象のタンパク質を重水素標識した後、抗体を重水素標識タンパク質へ結合させることを包含する。次に、タンパク質／抗体複合体を水に移して、抗体によって保護されている残基（重水素標識されたままである）を除くすべての残基で水素－重水素交換を生じさせる。抗体の解離後、標的タンパク質をプロテアーゼ切断および質量分析へ供し、それにより、抗体が相互作用する特異的アミノ酸に対応する重水素標識残基を明らかにする。例えば、Ｅｈｒｉｎｇ（１９９９）ＡｎａｌｙｔｉｃａｌＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２６７（２）：２５２－２５９、ＥｎｇｅｎａｎｄＳｍｉｔｈ（２００１）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．７３：２５６Ａ－２６５Ａを参照されたい。抗原／抗体複合体のＸ線結晶解析もまた、エピトープマッピング目的に使用してもよい。

本発明はさらに、本明細書に記載の特定の例示的な抗体のうちのいずれかと同じエピトープに結合する抗ＢＣＭＡ抗体（例えば、本明細書の表１に記載のアミノ酸配列のうちのいずれかを含む抗体）を含む。同様に、本発明はまた、ＢＣＭＡへの結合について本明細書に記載の特定の例示的な抗体のいずれかと競合する抗ＢＣＭＡ抗体（例えば、本明細書の表１に記載のアミノ酸配列のうちのいずれかを含む抗体）を含む。

本発明はまた、低いまたは検出不可能な結合親和性を有するヒトＣＤ３および／またはカニクイザルＣＤ３に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインと、ヒトＢＣＭＡに特異的に結合する第２の抗原結合ドメインと、を含む二重特異性抗原結合分子を含み、第２の抗原結合ドメインは、本明細書に記載の特定の例示的なＣＤ３特異的抗原結合ドメインのうちのいずれかと同じＣＤ３上のエピトープに結合し、および／または第２の抗原結合ドメインは、本明細書に記載の特定の例示的なＢＣＭＡ特異的抗原結合ドメインのうちのいずれかと同じＢＣＭＡ上のエピトープに結合する。

同様に、本発明はまた、ヒトＢＣＭＡに特異的に結合する第１の抗原結合ドメインと、ヒトＣＤ３に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインと、を含む二重特異性抗原結合分子を含み、第１の抗原結合ドメインは、ＢＣＭＡへの結合について、本明細書に記載の特定の例示的なＢＣＭＡ特異的抗原結合ドメインのうちのいずれかと競合し、かつ／または第２の抗原結合ドメインは、ＣＤ３への結合について、本明細書に記載の特定の例示的なＣＤ３特異的抗原結合ドメインのうちのいずれかと競合する。

特定の抗原結合分子（例えば、抗体）またはその抗原結合ドメインが、本発明の参照抗原結合分子と同じエピトープに結合するか、または結合について本発明の参照抗原結合分子と競合するかどうかは、当該技術分野で既知の常法を用いて容易に判定できる。例えば、試験抗体が本発明の参照二重特異性抗原結合分子と同じＢＣＭＡ（またはＣＤ３）上のエピトープに結合するかどうかを決定するために、参照二重特異性分子は、最初にＢＣＭＡタンパク質（またはＣＤ３タンパク質）に結合させる。次に、ＢＣＭＡ（またはＣＤ３）分子に結合する試験抗体の能力を評価する。試験抗体が参照二重特異性抗原結合分子と飽和結合後にＢＣＭＡ（またはＣＤ３）に結合することができる場合、試験抗体は参照二重特異性抗原とは異なるＢＣＭＡ（またはＣＤ３）のエピトープに結合すると結論付けることができる。その一方で、試験抗体が、参照二重特異性抗原結合分子に飽和結合後にＢＣＭＡ（またはＣＤ３）分子に結合することができない場合、試験抗体は、本発明の参照二重特異性抗原結合分子によって結合したエピトープと同じＢＣＭＡ（またはＣＤ３）のエピトープに結合してもよい。次に、試験抗体の結合の観察された欠失が、実際に、参照二重特異性抗原結合分子と同じエピトープへの結合によるものであるか、それとも立体遮断（または別の現象）が、観察された結合の欠失の原因であるのかを確認するために、さらなる通例の実験（例えば、ペプチド変異および結合分析）を実施することができる。この種の実験は、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、Ｂｉａｃｏｒｅ、フローサイトメトリー、または当該技術分野で利用可能な任意の他の定量的もしくは定性的な抗体結合アッセイを使用して実施することができる。本発明の特定の実施形態によると、例えば、１倍、５倍、１０倍、２０倍、または１００倍過剰量の一方の抗原結合タンパク質が、競合結合アッセイでの測定で少なくとも５０％、しかし、好ましくは７５％、９０％、またはさらに９９％他方の結合を阻害する場合、２つの抗原結合タンパク質は、同一（または重複）エピトープに結合する（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓｅｔａｌ．，ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．１９９０：５０：１４９５－１５０２を参照されたい）。あるいは、一方の抗原結合タンパク質の結合を低減または排除する抗原における本質的にすべてのアミノ酸変異が、もう一方の結合を低減または排除する場合、２つの抗原結合タンパク質は同じエピトープと結合するとみなされる。一方の抗原結合タンパク質の結合を減少または排除するアミノ酸変異のサブセットのみが他方の結合を減少または排除する場合、２つの抗原結合タンパク質は「重複エピトープ」を有するとみなされる。

抗体またはその抗原結合ドメインが、結合について、参照抗原結合分子と競合するかどうかを決定するために、上述の結合方法を２つの方向性で実施する。第１の方向性おいて、参照抗原結合分子を飽和条件下でＢＣＭＡタンパク質（またはＣＤ３タンパク質）に結合させた後、ＢＣＭＡ（またはＣＤ３）分子への試験抗体の結合を評価する。第２の方向性において、試験抗体を飽和条件下でＢＣＭＡ（またはＣＤ３）分子に結合させた後、参照抗原結合分子のＢＣＭＡ（またはＣＤ３）分子への結合を評価する。両方向において、第１の（飽和）抗原結合分子のみがＢＣＭＡ（またはＣＤ３）分子に結合することができる場合、試験抗体および参照抗原結合分子は、ＢＣＭＡ（またはＣＤ３）への結合について競合すると結論付けられる。当業者によって認識されるように、参照抗原結合分子との結合について競合する抗体は、必ずしも参照抗体と同一のエピトープへ結合するわけではないが、重複しているまたは隣接しているエピトープに結合することによって、参照抗体の結合を立体的に遮断し得る。

抗原結合ドメインの調製および二重特異性分子の構築
特定の抗原に特異的な抗原結合ドメインは、当該技術分野で既知の任意の抗体産生技術によって調製することができる。いったん得られれば、２つの異なる抗原（例えば、ＣＤ３およびＢＣＭＡ）に特異的な２つの異なる抗原結合ドメインを互いに適切に配置して、常法を使用して本発明の二重特異性抗原結合分子を産生することができる。（本発明の二重特異性抗原結合分子を構築するために使用できる例示的な二重特異性抗体フォーマットの考察は、本明細書の他所に提供される）。ある特定の実施形態では、本発明の多重特異性抗原結合分子の１つ以上の個々の構成要素（例えば、重鎖および軽鎖）は、キメラ抗体、ヒト化抗体または完全ヒト抗体に由来する。そのような抗体を作製するための方法は当該技術分野において周知である。例えば、本発明の二重特異性抗原結合分子の１つ以上の重鎖および／または軽鎖は、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（商標）技術を使用して調製することができる。ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（商標）技術（または任意の他のヒト抗体生成技術）を使用して、特定の抗原（例えば、ＣＤ３またはＢＣＭＡ）に対する高親和性キメラ抗体が、ヒト可変領域およびマウス定常領域を有して最初に単離される。抗体を、親和性、選択性、エピトープなどを含む望ましい特徴について特徴付けし、選択する。マウス定常領域は、所望のヒト定常領域と置換されて、本発明の二重特異性抗原結合分子に組み込まれ得る完全ヒト型重鎖および／または軽鎖を生成する。

遺伝子操作された動物は、ヒト二重特異性抗原結合分子を作製するために使用され得る。例えば、内在性マウス免疫グロブリン軽鎖可変配列を再編成および発現することができない、遺伝子改変マウスを使うことができ、マウスは、内在性マウスカッパ遺伝子座のマウスカッパ定常遺伝子に作動可能に連結されているヒト免疫グロブリン配列によってコードされる１つまたは２つのヒト軽鎖可変ドメインのみを発現する。そのような遺伝子改変マウスを使用して、２つの異なるヒト軽鎖可変領域遺伝子セグメントのうちの１つに由来する可変ドメインを含む同一の軽鎖と会合する２つの異なる重鎖を含む完全ヒト二重特異性抗原結合分子を産生することできる。（例えば、ＵＳ２０１１／０１９５４５４を参照されたい）。完全ヒトとは、抗体またはその抗原結合フラグメントもしくは免疫グロブリンドメインの各ポリペプチドの全長にわたるヒト配列に由来するＤＮＡによってコードされるアミノ酸配列を含む、抗体、またはその抗原結合フラグメントもしくは免疫グロブリンドメインを指す。いくつかの例において、完全ヒト配列は、ヒトの内在性タンパク質に由来する。他の例において、完全ヒトタンパク質またはタンパク質配列は、各成分配列がヒト配列に由来するキメラ配列を含む。いずれの理論にも縛られないが、キメラタンパク質またはキメラ配列は、一般に、例えば任意の野生型ヒト免疫グロブリン領域またはドメインと比較して、成分配列の接合部における免疫原性エピトープの作製を最小にするように設計される。

生物学的等価物
本発明は、本明細書に開示される例示的な分子のものとは異なるが、ＣＤ３および／またはＢＣＭＡに結合する能力を保持するアミノ酸配列を有する抗原結合分子を包含する。このような変異体抗体は、親配列と比較してアミノ酸の１つ以上の付加、欠失、または置換を含むが、説明された二重特異性抗原結合分子の生物学的活性とは本質的に等価である生物学的活性を示す。

本発明は、本明細書に記載の例示的な抗原結合分子のいずれかと生物学的に等価な抗原結合分子を含む。２つの抗原結合タンパク質または抗体は、例えば、それらが類似の実験条件下で単回用量または複数回用量のいずれかで同じモル用量で投与された場合に、吸収速度および吸収の程度が有意差を示さない医薬的等価物または医薬的選択肢である場合、生物学的等価物とみなされる。これらの吸収の程度は等価であるが吸収速度は等価ではなく、吸収速度におけるこのような差が意図的で、かつ標識に反映されており、例えば長期使用に及ぼす有効な身体薬剤濃度の達成に必須ではなく、試験した特定の薬剤製品にとって医学的に有意ではないとみなされるため、生物学的に等価とみなされ得る場合、いくつかの抗原結合タンパク質は、等価物または薬学的選択肢とみなされるであろう。

一実施形態では、２つの抗原結合タンパク質は、これらの安全性、純度、または有効性において臨床的に有意性のある差がない場合、生物学的に等価である。

一実施形態では、２つの抗原結合タンパク質は、免疫原性の臨床的に有意な変化または有効性の減退を含む有害作用のリスクの期待される上昇なしで参照生成物と生物学的生成物との間での切り替えなしで持続される療法と比較して、患者が１回以上切り替えられることができる場合、生物学的に等価である。

一実施形態では、２つの抗原結合タンパク質は、これらが両方とも、条件または使用条件についての共通の機序または作用機序によって、このような機序が既知である程度まで作用する場合、生物学的に等価である。

生物学的等価性は、インビボおよびインビトロの方法によって実証され得る。生物学的等価性測定は、例えば、（ａ）抗体またはその代謝産物の濃度が血液、血漿、血清または他の生物学的流体中で時間の関数として測定される、ヒトまたは他の哺乳動物におけるインビボ試験、（ｂ）ヒトインビボ生物学的利用能データと相関しており、かつそれらを合理的に予測しているインビトロ試験、（ｃ）抗体（またはその標的）の適切な急性薬理学的効果が時間の関数として測定される、ヒトまたは他の哺乳動物におけるインビボ試験、および（ｄ）抗原結合タンパク質の安全性、効能、または生物学的利用能もしくは生物学的等価性を確立する、十分に管理された臨床試験、を含む。

本明細書に示す例示的な二重特異性抗原結合分子の生物学的に等価な変異体は、例えば、残基もしくは配列の種々の置換を生じること、または生物活性に必要とされない末端もしくは内部の残基もしくは配列を欠失することによって構築され得る。例えば、生物学的活性にとって必須ではないシステイン残基は、再生の際の不必要または不正確な分子内ジスルフィド架橋の形成を防止するために、欠失または他のアミノ酸で置換することができる。他の文脈において、生物学的等価な抗原結合タンパク質は、分子のグリコシル化特性を修飾するアミノ酸変化、例えばグリコシル化を排除または除去する変異を含む、本明細書に記載の例示的な二重特異性抗原結合分子の変異体を含み得る。

種の選択性および種の交差反応性
本発明の特定の実施形態によると、ヒトＣＤ３に結合するが他の種由来のＣＤ３には結合しない抗原結合分子が提供される。ヒトＢＣＭＡに結合するが、他種由来のＢＣＭＡには結合しない抗原結合分子もまた、提供される。本発明はまた、ヒトＣＤ３および１つ以上の非ヒト種由来のＣＤ３に結合する抗原結合分子、ならびに／またはヒトＢＣＭＡおよび１つ以上の非ヒト種由来のＢＣＭＡに結合する抗原結合分子を含む。

本発明のある特定の例示的な実施形態によると、ヒトＣＤ３および／またはヒトＢＣＭＡに結合し、場合によっては、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、スナネズミ、ブタ、ネコ、イヌ、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、ウシ、ウマ、ラクダ、カニクイザル、マーモセット、アカゲザルもしくはチンパンジーＣＤ３および／またはＢＣＭＡのうちの１つ以上に結合し得るか、または結合し得ない抗原結合分子が提供される。例えば、本発明の特定の例示的な実施形態において、ヒトＢＣＭＡおよびカニクイザルＢＣＭＡに結合する第１の抗原結合ドメインと、ヒトＣＤ３に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインと、を含む二重特異性抗原結合分子、またはヒトＢＣＭＡおよびカニクイザルＢＣＭＡに結合する第１の抗原結合ドメインと、ヒトＣＤ３に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインと、を含む二重特異性抗原結合分子が提供される。

治療製剤および投与
本発明は、本発明の抗原結合分子を含む薬学的組成物を提供する。本発明の薬学的組成物は、適切な担体、賦形剤、および改善された移動、送達、耐性などをもたらす他の薬剤とともに製剤化される。多くの適切な製剤は、薬剤師全員に既知の処方集：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡにおいて認めることができる。これらの製剤には、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、油、脂質、ベシクル（ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標）、ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡなど）を含む脂質（カチオン性またはアニオン性）、ＤＮＡ複合体、無水吸収ペースト、水中油エマルションおよび油中水エマルション、エマルションカーボワックス（様々な分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、ならびにカーボワックスを含む半固体混合物が含まれる。Ｐｏｗｅｌｌｅｔａｌ．”Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍｏｆｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓｆｏｒｐａｒｅｎｔｅｒａｌｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ”ＰＤＡ（１９９８）ＪＰｈａｒｍＳｃｉＴｅｃｈｎｏｌ５２：２３８－３１１も参照されたい。

患者に投与される抗原結合分子の用量は、患者の年齢および大きさ、標的疾患、病態、投与経路などに応じて変動し得る。好ましい用量は、典型的には体重または体表面積に従って計算される。本発明の二重特異性抗原結合分子が成人患者の治療目的に使用される場合、本発明の二重特異性抗原結合分子を通常約０．０１～約２０ｍｇ／ｋｇ体重の単回投与で、より好ましくは約０．０２～約７、約０．０３～約５、または約０．０５～約３ｍｇ／ｋｇ体重の単回投与で静脈内投与することが有利であり得る。容態の重症度に応じて、治療の頻度および期間を調整することができる。二重特異性抗原結合分子を投与するための有効投与量およびスケジュールは経験的に決定され、例えば、患者の経過を定期的な評価によって監視し、それに応じて用量を調整することができる。さらに、投与量の種間スケーリングは、当該技術分野において周知の方法を用いて実施することができる（例えば、Ｍｏｒｄｅｎｔｉｅｔａｌ．，１９９１，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．Ｒｅｓ．８：１３５１）。

様々な送達系は既知であり、本発明の薬学的組成物を投与するために使用することができ、例えば、リポソーム、微粒子、マイクロカプセルにおける封入、変異ウイルスを発現することのできる組換え細胞、受容体媒介性エンドサイトーシスである（例えば、Ｗｕｅｔａｌ．，１９８７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９－４４３２を参照されたい）。導入方法には、皮内経路、筋肉内経路、腹腔内経路、静脈内経路、皮下経路、鼻腔内経路、硬膜外経路および経口経路が含まれるが、これらに限定されない。組成物は、例えば、注入もしくはボーラス注射による、上皮または粘膜皮膚の内層（ｌｉｎｉｎｇ）（例えば、口腔粘膜、直腸および腸粘膜など）を介した吸収による任意の好都合な経路によって投与することができ、他の生物学的に活性な薬剤と一緒に投与することができる。投与は全身または局所であり得る。

本発明の薬学的組成物は、標準的な針および注射器を用いて皮下にまたは静脈内に送達することができる。加えて、皮下送達に関して、ペン型送達デバイスは、本発明の薬学的組成物を送達する際の適用を容易にする。このようなペン型送達デバイスは、再利用可能または使い捨て可能であり得る。再利用可能なペン型送達デバイスは、概して、薬学的組成物を含む交換可能なカートリッジを利用する。一度、カートリッジ内の薬学的組成物がすべて投与され、カートリッジが空になると、この空のカートリッジは容易に廃棄することができ、薬学的組成物を含む新しいカートリッジと容易に交換することができる。次に、ペン型送達デバイスは再利用することができる。使い捨てのペン型送達デバイスにおいて、交換可能なカートリッジは存在しない。むしろ、使い捨てペン型送達デバイスは、このデバイス内の貯蔵器の中に保持された薬学的組成物が事前に充填されている。貯蔵器から薬学的組成物が空になると、デバイス全体が廃棄される。

数多くの再利用可能なペン型送達デバイスおよび自動注射送達デバイスは、本発明の薬学的組成物の皮下送達の用途を有する。例としては、ＡＵＴＯＰＥＮ（商標）（ＯｗｅｎＭｕｍｆｏｒｄ，Ｉｎｃ．、Ｗｏｏｄｓｔｏｃｋ，ＵＫ）、ＤＩＳＥＴＲＯＮＩＣ（商標）ｐｅｎ（ＤｉｓｅｔｒｏｎｉｃＭｅｄｉｃａｌＳｙｓｔｅｍｓ、Ｂｅｒｇｄｏｒｆ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ＨＵＭＡＬＯＧＭＩＸ７５／２５（商標）ｐｅｎ、ＨＵＭＡＬＯＧ（商標）ｐｅｎ、ＨＵＭＡＬＩＮ７０／３０（商標）ｐｅｎ（ＥｌｉＬｉｌｌｙａｎｄＣｏ．、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）、ＮＯＶＯＰＥＮ（商標）Ｉ，ＩＩおよびＩＩＩ（ＮｏｖｏＮｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ，Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＮＯＶＯＰＥＮＪＵＮＩＯＲ（商標）（ＮｏｖｏＮｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ，Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＢＤ（商標）ｐｅｎ（ＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎ、ＦｒａｎｋｌｉｎＬａｋｅｓ，ＮＪ）、ＯＰＴＩＰＥＮ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮＰＲＯ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮＳＴＡＲＬＥＴ（商標）、およびＯＰＴＩＣＬＩＫ（商標）（ｓａｎｏｆｉ－ａｖｅｎｔｉｓ、Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）が挙げられるが、これらに限定されず、ほんの数種類しか挙げていない。本発明の薬学的組成物の皮下送達での用途を有する使い捨てペン送達装置の例としては、ＳＯＬＯＳＴＡＲ（商標）ペン（Ｓａｎｏｆｉ－Ａｖｅｎｔｉｓ）、ＦＬＥＸＰＥＮ（商標）（ＮｏｖｏＮｏｒｄｉｓｋ）、およびＫＷＩＫＰＥＮ（商標）（ＥｌｉＬｉｌｌｙ）、ＳＵＲＥＣＬＩＣＫ（商標）自動注射器（Ａｍｇｅｎ、ＴｈｏｕｓａｎｄＯａｋｓ，ＣＡ）、ＰＥＮＬＥＴ（商標）（Ｈａｓｅｌｍｅｉｅｒ、Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＥＰＩＰＥＮ（Ｄｅｙ，Ｌ．Ｐ．）およびＨＵＭＩＲＡ（商標）ペン（ＡｂｂｏｔｔＬａｂｓ、ＡｂｂｏｔｔＰａｒｋＩＬ）が挙げられるが、これらに限定されない。

ある特定の状況において、薬学的組成物は、徐放系で送達することができる。一実施形態では、ポンプを使用することができる（Ｌａｎｇｅｒ，上記、Ｓｅｆｔｏｎ，１９８７，ＣＲＣＣｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１を参照）。別の実施形態では、ポリマー材料を使用することができる。ＭｅｄｉｃａｌＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｏｆＣｏｎｔｒｏｌｌｅｄＲｅｌｅａｓｅ，ＬａｎｇｅｒａｎｄＷｉｓｅ（ｅｄｓ．），１９７４，ＣＲＣＰｒｅｓ．，ＢｏｃａＲａｔｏｎ，Ｆｌｏｒｉｄａを参照されたい。さらに別の実施形態では、徐放系を組成物の標的の近傍に配置することができ、それによって全身用量のほんの一部のみが必要となる（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，１９８４，ＭｅｄｉｃａｌＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｏｆＣｏｎｔｒｏｌｌｅｄＲｅｌｅａｓｅ，上記，ｖｏｌ．２，ｐｐ．１１５－１３８を参照されたい）。他の徐放系は、Ｌａｎｇｅｒ，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ２４９：１５２７－１５３３による総説で考察されている。

注射可能な調製物には、静脈内注射、皮下注射、皮内注射、および筋肉内注射、点滴注入などのための剤形が含まれてもよい。これらの注射可能な調製物は、公に知られている方法によって調製され得る。例えば、注射可能な調製物は、例えば、注射用に従来通り使用される滅菌水性媒体または油性媒体中に上述の抗体またはその塩を溶解、懸濁または乳化させることによって調製されてもよい。注射用水性媒体としては、例えば、生理食塩水、グルコース含有等張液、および他の補助剤などがあり、これらは、アルコール（例えば、エタノール）、ポリアルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤［例えば、ポリソルベート８０、ＨＣＯ－５０（水素化ヒマシ油のポリオキシエチレン（５０ｍｏｌ）付加物）］などの適切な可溶化剤と組み合わせて使用してもよい。油性媒体として、例えば、ゴマ油、ダイズ油などが使用され、安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどの可溶化剤と組み合わせて使用してもよい。このように調製された注射は、好ましくは適切なアンプルに充填される。

有益なことに、上記に記載される経口または非経口での使用のための薬学的組成物は、有効成分の用量に適合するために好適な単位用量の剤形へと調製される。このような単位用量の剤形には、例えば、錠剤、ピル、カプセル、注射（アンプル）、坐薬などが含まれる。前述の含有される抗体の量は概して、単位用量の剤形当たり約５～約５００ｍｇであり、特に注射の形態では、前述の抗体は、約５～約１００ｍｇで、他の剤形については約１０～約２５０ｍｇで含有されることが好ましい。

抗原結合分子の治療的使用
本発明は、抗ＢＣＭＡ抗体もしくはその抗原結合断片、またはＣＤ３およびＢＣＭＡに特異的に結合する二重特異性抗原結合分子を含む治療用組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法を含む。治療用組成物は、本明細書に開示される抗体または二重特異性抗原結合分子のいずれかと薬学的に許容される担体または希釈剤とを含み得る。本明細書で使用される場合、「それを必要とする対象」という表現は、がんの１つ以上の症状または徴候を示すヒトまたは非ヒト動物（例えば、腫瘍を発現する対象または本明細書で後述されるがんのうちのいずれかに罹患している対象）、あるいは、そうでなければＢＣＭＡ活性の阻害もしくは減少またはＢＣＭＡ＋細胞（例えば、多発性骨髄腫細胞）の枯渇から利益を得る者を意味する。

本発明の抗体および二重特異性抗原結合分子（およびそれを含む治療用組成物）は、とりわけ、免疫応答の刺激、活性化、および／または標的化が有益である任意の疾患または障害の治療に有用である。特に、本発明の抗ＢＣＭＡ抗体または抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗原結合分子は、ＢＣＭＡ発現もしくは活性またはＢＣＭＡ＋細胞の増殖に関連するかまたはそれによって媒介される任意の疾患または障害の治療、予防、および／または改善に使用され得る。本発明の治療方法が達成される作用機序は、エフェクター細胞の存在下で、例えば、ＣＤＣ、アポトーシス、ＡＤＣＣ、食作用、またはこれらの機序のうちの２つ以上の組み合わせによるＢＣＭＡを発現する細胞の死滅を含む。本発明の二重特異性抗原結合分子を使用して阻害または死滅させることができるＢＣＭＡを発現する細胞には、例えば、多発性骨髄腫細胞が含まれる。

本発明の抗原結合分子は、例えば、多発性骨髄腫を含むがんまたは他のＢ細胞もしくは形質細胞がん、例えば、ワルデンストレームマクログロブリン血症、バーキットリンパ腫、およびびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、およびホジキンリンパ腫を含む、ＢＣＭＡ発現と関連する疾患または障害を治療するために使用され得る。本発明のある特定の実施形態によると、抗ＢＣＭＡ抗体または抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗体は、多発性骨髄腫に罹患している患者を治療するのに有用である。本発明の他の関連実施形態によると、本明細書に開示される抗ＢＣＭＡ抗体または抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗原結合分子を、多発性骨髄腫に罹患している患者に投与することを含む方法が提供される。腫瘍スキャニングなどの当該技術分野において既知の分析的／診断的方法を使用して、患者が多発性骨髄腫または別のＢ細胞系統がんを抱えているかどうかを確かめることができる。

本発明はまた、対象における残存がんを治療するための方法も含む。本明細書で使用される場合、「残存がん」という用語は、抗がん療法による治療後の対象における１つ以上のがん性細胞の存在または持続を意味する。

ある特定の態様によると、本発明は、対象が多発性骨髄腫であると決定された後、本明細書の他所に記載の抗ＢＣＭＡまたは二重特異性抗原結合分子のうちの１つ以上を対象に投与することを含む、ＢＣＭＡ発現に関連する疾患または障害（例えば、多発性骨髄腫）を治療するための方法を提供する。例えば、本発明は、対象が他の免疫療法または化学療法を受けてから１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、または４週間、２か月、４か月、６か月、８か月、１年、またはそれ以上後に、抗ＢＣＭＡ抗体または抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗原結合分子を患者に投与することを含む、多発性骨髄腫を治療するための方法を含む。

併用療法および製剤
本発明は、本明細書に記載の例示的な抗体および二重特異性抗原結合分子のいずれかを含む薬学的組成物を１つ以上の追加の治療剤と組み合わせて投与することを含む方法を提供する。本発明の抗原結合分子と組み合わせて、または組み合わせて投与することができる例示的な追加の治療剤は、例えば、抗腫瘍剤（例えば、メルファラン、ビンクリスチン（オンコビン）、シクロホスファミド（シトキサン）、エトポシド（ＶＰ－１６）、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、リポソームドキソルビシン（ドキシル）、オベンダムスチン（Ｔｒｅａｎｄａ）を含む化学療法剤、または対象における形質細胞腫瘍の治療に有効であることが知られている任意の他のもの）を含む。いくつかの実施形態において、第２の治療剤は、ステロイドを含む。いくつかの実施形態において、第２の治療剤は、サリドマイド、レナリドミド、およびボルテゾミブを含む標的療法を含み、これらは、新たに診断された患者を治療するために承認された療法である。レナリドミド、ポマリドミド、ボルテゾミブ、カルフィルゾミブ、パノビノスタット、イキサゾミブ、エロツズマブ、およびダラツムマブは、再発性骨髄腫を治療するために有効な第２の治療剤の例である。ある特定の実施形態において、第２の治療剤は、放射線療法または幹細胞移植を含むレジメンである。ある特定の実施形態において、第２の治療剤は、免疫調節剤であり得る。ある特定の実施形態において、第２の治療剤は、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ）、カルフィルゾミブ（Ｋｙｐｒｏｌｉｓ）、イキサゾミブ（Ｎｉｎｌａｒｏ）を含むプロテアソーム阻害剤であり得る。ある特定の実施形態において、第２の治療剤は、パノビノスタット（Ｆａｒｙｄａｋ）などのヒストンデアセチラーゼ阻害剤であり得る。ある特定の実施形態において、第２の治療剤は、モノクローナル抗体、抗体薬物コンジュゲート、抗腫瘍剤にコンジュゲートした二重特異性抗体、チェックポイント阻害剤、またはそれらの組み合わせであり得る。本発明の抗原結合分子と組み合わせて有益に投与され得る他の薬剤には、小分子サイトカイン阻害剤およびＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８などのサイトカインに結合する抗体、またはそれらのそれぞれの受容体を含むサイトカイン阻害剤が含まれる。本発明の薬学的組成物（例えば、本明細書に開示される、抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗原結合分子を含む薬学的組成物）はまた、形質細胞表面上の異なる抗原と相互作用し得る本明細書に記載の抗体以外のモノクローナル抗体、腫瘍細胞表面上の抗原に結合する一方のアームおよびＴ細胞上の抗原に結合する他方のアームを有する二重特異性抗体、抗体薬物コンジュゲート、抗腫瘍剤にコンジュゲートした二重特異性抗体、チェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ－１またはＣＴＬＡ－４を標的化するもの、またはそれらの組み合わせ、から選択される１つ以上の治療的組み合わせを含む治療レジメンの一部として投与され得る。ある特定の実施形態において、チェックポイント阻害剤は、ペンブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ）、ニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ）、またはセミプリマブ（ＲＥＧＮ２８１０）などのＰＤ－１阻害剤から選択され得る。特定の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、アテゾリズマブ（Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ）、アベルマブ（Ｂａｖｅｎｃｉｏ）、またはデュルバルマブ（Ｉｍｆｉｎｚｉ）などのＰＤ－Ｌ１阻害剤から選択され得る。特定の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、イピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ）などのＣＴＬＡ－４阻害剤から選択され得る。本発明の抗体と併用して使用することができる他の組み合わせは、上記に記載されている。

本発明はまた、本明細書に記載の抗原結合分子のいずれか、およびＶＥＧＦ、Ａｎｇ２、ＤＬＬ４、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ｃＭｅｔ、ＩＧＦ１Ｒ、Ｂ－ｒａｆ、ＰＤＧＦＲ－α、ＰＤＧＦＲ－β、ＦＯＬＨ１（ＰＳＭＡ）、ＰＲＬＲ、ＳＴＥＡＰ１、ＳＴＥＡＰ２、ＴＭＰＲＳＳ２、ＭＳＬＮ、ＣＡ９、ウロプラキンのうちの１つ以上の阻害剤、または前述のサイトカインのいずれかを含む治療組み合わせを含み、その阻害剤は、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ｓｉＲＮＡ、ペプチボディ、ナノボディもしくは抗体断片（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、またはダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、および最小認識ユニット）である。本発明の抗原結合分子は、抗ウイルス薬、抗生物質、鎮痛薬、コルチコステロイドおよび／またはＮＳＡＩＤと組み合わせて投与および／または同時製剤することもできる。本発明の抗原結合分子はまた、放射線治療および／または従来の化学療法も含む治療レジメンの一部として投与してもよい。

追加の治療活性成分は、本発明の抗原結合分子の投与の直前、同時に、または直後に投与してもよい。（本開示の目的のために、このような投与レジメンは、追加の治療活性成分と「組み合わせて」抗原結合分子を投与することとみなされる。

本発明には、本発明の抗原結合分子が、本明細書の他所に記載の追加の治療活性成分の１つ以上と同時処方された薬学的組成物が含まれる。

投与レジメン
本発明のある特定の実施形態によると、複数回用量の抗原結合分子（例えば、ＢＣＭＡおよびＣＤ３に特異的に結合する抗ＢＣＭＡ抗体または二重特異性抗原結合分子）を、所定の期間にわたって対象に投与することができる。本発明のこの態様による方法は、本発明の抗原結合分子の複数回用量を対象へ連続的に投与することを含む。本明細書で使用される場合、「連続的に投与すること」は、抗原結合分子の各用量が、異なる時点、例えば、所定の間隔（例えば、数時間、数日間、数週間または数か月間）によって分けられた異なる日に対象へ投与されることを意味する。本発明には、抗原結合分子の単回の一次用量と、それに続く抗原結合分子の１回以上の二次用量、次いで任意に抗原結合分子の１回以上の三次用量を患者へ連続的に投与することを含む方法が含まれる。

「一次用量」、「二次用量」、および「三次用量」という用語は、本発明の抗原結合分子の投与の時系列を指す。したがって、「一次用量」とは、治療レジメンの開始時に投与される用量（「ベースライン用量」とも呼ばれる）であり、「二次用量」とは、一次用量後に投与される用量であり、「三次用量」とは、二次用量後に投与される用量である。一次用量、二次用量、および三次用量はすべて、同じ量の抗原結合分子を含有し得るが、概して、投与頻度に関して互いに異なり得る。しかしながら、特定の実施形態では、一次用量、二次用量、および／または三次用量に含有される抗原結合分子の量は、治療経過の間、互いに異なる（例えば、適宜上下に調整される）。特定の実施形態では、２回以上（例えば、２回、３回、４回、または５回）の用量が治療レジメンの開始時において「負荷用量（ｌｏａｄｉｎｇｄｏｓｅ）」として投与され、続いてより低い頻度に基づいて投与される後続用量（例えば、「維持用量」）が投与される。実施形態のいずれにおいても、一次用量（例えば、第１の週１回の用量）は、３日以内の間隔の別個の日（例えば、連続日）に投与される２つの用量に分割され得る。実施形態のいずれにおいても、第１の名目用量（すなわち、二次用量）は、３日以内の間隔の別個の日（例えば、連続日）に投与される２つの用量に分割され得る。例えば、一次用量または二次用量が６ｍｇである場合、用量は、例えば、連続日、または３日以内の間隔の別個の日に投与される２つの３ｍｇ用量に分割され得る。様々な実施形態において、用量（例えば、週１回、単回用量として、または用量の２つの分割分画として投与される用量）は、１ｍｇ、２ｍｇ、３ｍｇ、４ｍｇ、５、ｍｇ、６ｍｇ、７ｍｇ、８ｍｇ、９ｍｇ、１０ｍｇ、１１ｍｇ、１２ｍｇ、１３ｍｇ、１４ｍｇ、１５ｍｇ、１６ｍｇ、１７ｍｇ、１８ｍｇ、１９ｍｇ、２０ｍｇ、２１ｍｇ、２２ｍｇ、２３ｍｇ、２４ｍｇ、２５ｍｇ、２６ｍｇ、２７ｍｇ、２８ｍｇ、２９ｍｇ、３０ｍｇ、３１ｍｇ、３２ｍｇ、３３ｍｇ、３４ｍｇ、３５ｍｇ、３６ｍｇ、３７ｍｇ、３８ｍｇ、３９ｍｇ、４０ｍｇ、４１ｍｇ、４２ｍｇ、４３ｍｇ、４４ｍｇ、４５ｍｇ、４６ｍｇ、４７ｍｇ、４８ｍｇ、４９ｍｇ、５０ｍｇ、５１ｍｇ、５２ｍｇ、５３ｍｇ、５４ｍｇ、５５ｍｇ、５６ｍｇ、５７ｍｇ、５８ｍｇ、５９ｍｇ、６０ｍｇ、６１ｍｇ、６２ｍｇ、６３ｍｇ、６４ｍｇ、６５ｍｇ、６６ｍｇ、６７ｍｇ、６８ｍｇ、６９ｍｇ、７０ｍｇ、７１ｍｇ、７２ｍｇ、７３ｍｇ、７４ｍｇ、７５ｍｇ、７６ｍｇ、７７ｍｇ、７８ｍｇ、７９ｍｇ、８０ｍｇ、８１ｍｇ、８２ｍｇ、８３ｍｇ、８４ｍｇ、８５ｍｇ、８６ｍｇ、８７ｍｇ、８８ｍｇ、８９ｍｇ、９０ｍｇ、９１ｍｇ、９２ｍｇ、９３ｍｇ、９４ｍｇ、９５ｍｇ、９６ｍｇ、９７ｍｇ、９８ｍｇ、９９ｍｇ、１００ｍｇ、１０５ｍｇ、１１０ｍｇ、１１５ｍｇ、１２０ｍｇ、１２５ｍｇ、１３０ｍｇ、１３５ｍｇ、１４０ｍｇ、１４５ｍｇ、１５０ｍｇ、１５５ｍｇ、１６０ｍｇ、１６５ｍｇ、１７０ｍｇ、１７５ｍｇ、１８０ｍｇ、１８５ｍｇ、１９０ｍｇ、１９５ｍｇ、２００ｍｇ、２０５ｍｇ、２１０ｍｇ、２１５ｍｇ、２２０ｍｇ、２２５ｍｇ、２３０ｍｇ、２３５ｍｇ、２４０ｍｇ、２４５ｍｇ、２５０ｍｇ、２５５ｍｇ、２６０ｍｇ、２６５ｍｇ、２７０ｍｇ、２７５ｍｇ、２８０ｍｇ、２８５ｍｇ、２９０ｍｇ、２９５ｍｇ、３００ｍｇ、３０５ｍｇ、３１０ｍｇ、３１５ｍｇ、３２０ｍｇ、３２５ｍｇ、３３０ｍｇ、３３５ｍｇ、３４０ｍｇ、３４５ｍｇ、３５０ｍｇ、３５５ｍｇ、３６０ｍｇ、３６５ｍｇ、３７０ｍｇ、３７５ｍｇ、３８０ｍｇ、３８５ｍｇ、３９０ｍｇ、３９５ｍｇ、４００ｍｇ、４０５ｍｇ、４１０ｍｇ、４１５ｍｇ、４２０ｍｇ、４２５ｍｇ、４３０ｍｇ、４３５ｍｇ、４４０ｍｇ、４４５ｍｇ、４５０ｍｇ、４５５ｍｇ、４６０ｍｇ、４６５ｍｇ、４７０ｍｇ、４７５ｍｇ、４８０ｍｇ、４８５ｍｇ、４９０ｍｇ、４９５ｍｇ、５００ｍｇ、５１０ｍｇ、５２０ｍｇ、５３０ｍｇ、５４０ｍｇ、５５０ｍｇ、５６０ｍｇ、５７０ｍｇ、５８０ｍｇ、５９０ｍｒ、６００ｍｇ、６１０ｍｇ、６２０ｍｇ、６３０ｍｇ、６４０ｍｇ、６５０ｍｇ、６６０ｍｇ、６７０ｍｇ、６８０ｍｇ、６９０ｍｇ、７００ｍｇ、７１０ｍｇ、７２０ｍｇ、７３０ｍｇ、７４０ｍｇ、７５０ｍｇ、７６０ｍｇ、７７０ｍｇ、７８０ｍｇ、７９０ｍｇ、８００ｍｇ、８１０ｍｇ、８２０ｍｇ、８３０ｍｇ、８４０ｍｇ、８５０ｍｇ、８６０ｍｇ、８７０ｍｇ、８８０ｍｇ、８９０ｍｇ、９００ｍｇ、９１０ｍｇ、９２０ｍｇ、９３０ｍｇ、９４０ｍｇ、９５０ｍｇ、９６０ｍｇ、９７０ｍｇ、９８０ｍｇ、９９０ｍｇ、１０００ｍｇ、１．５ｇ、２ｇ、２．５ｇ、３ｇ、３．５ｇ、４ｇ、４．５ｇ、５ｇ、５．５ｇ、６ｇ、６．５ｇ、７ｇ、７．５ｇ、８ｇ、８．５ｇ、９ｇ、９．５ｇ、１０ｇ、もしくはそれ以上であるか、または少なくとも１ｍｇ、２ｍｇ、３ｍｇ、４ｍｇ、５、ｍｇ、６ｍｇ、７ｍｇ、８ｍｇ、９ｍｇ、１０ｍｇ、１１ｍｇ、１２ｍｇ、１３ｍｇ、１４ｍｇ、１５ｍｇ、１６ｍｇ、１７ｍｇ、１８ｍｇ、１９ｍｇ、２０ｍｇ、２１ｍｇ、２２ｍｇ、２３ｍｇ、２４ｍｇ、２５ｍｇ、２６ｍｇ、２７ｍｇ、２８ｍｇ、２９ｍｇ、３０ｍｇ、３１ｍｇ、３２ｍｇ、３３ｍｇ、３４ｍｇ、３５ｍｇ、３６ｍｇ、３７ｍｇ、３８ｍｇ、３９ｍｇ、４０ｍｇ、４１ｍｇ、４２ｍｇ、４３ｍｇ、４４ｍｇ、４５ｍｇ、４６ｍｇ、４７ｍｇ、４８ｍｇ、４９ｍｇ、５０ｍｇ、５１ｍｇ、５２ｍｇ、５３ｍｇ、５４ｍｇ、５５ｍｇ、５６ｍｇ、５７ｍｇ、５８ｍｇ、５９ｍｇ、６０ｍｇ、６１ｍｇ、６２ｍｇ、６３ｍｇ、６４ｍｇ、６５ｍｇ、６６ｍｇ、６７ｍｇ、６８ｍｇ、６９ｍｇ、７０ｍｇ、７１ｍｇ、７２ｍｇ、７３ｍｇ、７４ｍｇ、７５ｍｇ、７６ｍｇ、７７ｍｇ、７８ｍｇ、７９ｍｇ、８０ｍｇ、８１ｍｇ、８２ｍｇ、８３ｍｇ、８４ｍｇ、８５ｍｇ、８６ｍｇ、８７ｍｇ、８８ｍｇ、８９ｍｇ、９０ｍｇ、９１ｍｇ、９２ｍｇ、９３ｍｇ、９４ｍｇ、９５ｍｇ、９６ｍｇ、９７ｍｇ、９８ｍｇ、９９ｍｇ、１００ｍｇ、１０５ｍｇ、１１０ｍｇ、１１５ｍｇ、１２０ｍｇ、１２５ｍｇ、１３０ｍｇ、１３５ｍｇ、１４０ｍｇ、１４５ｍｇ、１５０ｍｇ、１５５ｍｇ、１６０ｍｇ、１６５ｍｇ、１７０ｍｇ、１７５ｍｇ、１８０ｍｇ、１８５ｍｇ、１９０ｍｇ、１９５ｍｇ、２００ｍｇ、２０５ｍｇ、２１０ｍｇ、２１５ｍｇ、２２０ｍｇ、２２５ｍｇ、２３０ｍｇ、２３５ｍｇ、２４０ｍｇ、２４５ｍｇ、２５０ｍｇ、２５５ｍｇ、２６０ｍｇ、２６５ｍｇ、２７０ｍｇ、２７５ｍｇ、２８０ｍｇ、２８５ｍｇ、２９０ｍｇ、２９５ｍｇ、３００ｍｇ、３０５ｍｇ、３１０ｍｇ、３１５ｍｇ、３２０ｍｇ、３２５ｍｇ、３３０ｍｇ、３３５ｍｇ、３４０ｍｇ、３４５ｍｇ、３５０ｍｇ、３５５ｍｇ、３６０ｍｇ、３６５ｍｇ、３７０ｍｇ、３７５ｍｇ、３８０ｍｇ、３８５ｍｇ、３９０ｍｇ、３９５ｍｇ、４００ｍｇ、４０５ｍｇ、４１０ｍｇ、４１５ｍｇ、４２０ｍｇ、４２５ｍｇ、４３０ｍｇ、４３５ｍｇ、４４０ｍｇ、４４５ｍｇ、４５０ｍｇ、４５５ｍｇ、４６０ｍｇ、４６５ｍｇ、４７０ｍｇ、４７５ｍｇ、４８０ｍｇ、４８５ｍｇ、４９０ｍｇ、４９５ｍｇ、５００ｍｇ、５１０ｍｇ、５２０ｍｇ、５３０ｍｇ、５４０ｍｇ、５５０ｍｇ、５６０ｍｇ、５７０ｍｇ、５８０ｍｇ、５９０ｍｒ、６００ｍｇ、６１０ｍｇ、６２０ｍｇ、６３０ｍｇ、６４０ｍｇ、６５０ｍｇ、６６０ｍｇ、６７０ｍｇ、６８０ｍｇ、６９０ｍｇ、７００ｍｇ、７１０ｍｇ、７２０ｍｇ、７３０ｍｇ、７４０ｍｇ、７５０ｍｇ、７６０ｍｇ、７７０ｍｇ、７８０ｍｇ、７９０ｍｇ、８００ｍｇ、８１０ｍｇ、８２０ｍｇ、８３０ｍｇ、８４０ｍｇ、８５０ｍｇ、８６０ｍｇ、８７０ｍｇ、８８０ｍｇ、８９０ｍｇ、９００ｍｇ、９１０ｍｇ、９２０ｍｇ、９３０ｍｇ、９４０ｍｇ、９５０ｍｇ、９６０ｍｇ、９７０ｍｇ、９８０ｍｇ、９９０ｍｇ、１０００ｍｇ、１．５ｇ、２ｇ、２．５ｇ、３ｇ、３．５ｇ、４ｇ、４．５ｇ、５ｇ、５．５ｇ、６ｇ、６．５ｇ、７ｇ、７．５ｇ、８ｇ、８．５ｇ、９ｇ、９．５ｇ、１０ｇ、もしくはそれ以上である。これらの量のいずれかを使用して、本明細書で論じられる一次、二次または三次用量の範囲を定義することができ、それは本開示の範囲内に含まれる。いくつかの実施形態において、すべての用量は、投与レジメンの第１週および第２週に投与される用量を含む、単回用量（例えば、単回注入）として投与される。例えば、１ｍｇ～５ｍｇの一次用量を第１週に単回投与として投与し得、３ｍｇ～４００ｍｇの二次用量を第２週に単回投与として投与し得、５０ｍｇ～８００ｍｇの三次用量を第３週に単回投与として投与し得、その後、投与レジメンの１週間に１回の投与部分の間に投与され得る。別の例では、５ｍｇの一次用量を第１週に単回投与として投与し得、２５ｍｇの二次用量を第２週に単回投与として投与し得、５０ｍｇ～８００ｍｇの三次用量を第３週に単回投与として投与し得、その後、投与レジメンの１週間に１回の投与部分の間に投与され得る。場合によっては、投与スケジュールは、その後（例えば、１２から１６週間後）、２週間ごと、３週間ごと、月に１回などの投与を含み得る。

本発明のある例示的な実施形態では、各二次用量および／または三次用量は、直前の用量の１～２６（例えば、１、１と１／２、２、２と１／２、３、３と１／２、４、４と１／２、５、５と１／２、６、６と１／２、７、７と１／２、８、８と１／２、９、９と１／２、１０、１０と１／２、１１、１１と１／２、１２、１２と１／２、１３、１３と１／２、１４、１４と１／２、１５、１５と１／２、１６、１６と１／２、１７、１７と１／２、１８、１８と１／２、１９、１９と１／２、２０、２０と１／２、２１、２１と１／２、２２、２２と１／２、２３、２３と１／２、２４、２４と１／２、２５、２５と１／２、２６、２６と１／２、またはそれ以上）週間後に投与される。「直前の用量」という句は、本明細書で使用される場合、一連の複数回投与において、抗原結合分子の用量を意味し、これは、介入用量のない直後の用量の投与の前に患者へ投与される。

本発明のこの態様による方法は、抗原結合分子（例えば、ＢＣＭＡおよびＣＤ３に特異的に結合する抗ＢＣＭＡ抗体または二重特異性抗原結合分子）の二次用量および／または三次用量の任意の回数を患者に投与することを含んでよい。例えば、ある特定の実施形態において、単回の二次用量のみが患者に投与される。他の実施形態では、２回以上（例えば、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回またはそれ以上）の二次用量が患者に投与される。同様に、特定の実施形態では、単回の三次用量のみが患者に投与される。他の実施形態では、２回以上（例えば、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回またはそれ以上）の三次用量が患者に投与される。

複数回の二次用量を伴う実施形態では、各二次用量は、他の二次用量と同じ頻度で投与され得る。例えば、各二次用量は、直前の用量の１～２週間後に患者に投与されてもよい。同様に、複数の三次用量を伴う実施形態では、各三次用量は、他の三次用量と同じ頻度で投与されてもよい。例えば、各三次用量は、直前の用量の２～４週間後に患者に投与されてもよい。あるいは、二次用量および／または三次用量が患者へ投与される頻度は、治療レジメンの経過にわたって変動し得る。投与頻度はまた、臨床検査後の個々の患者の必要性に応じて、医師によって治療経過の間に調整され得る。

抗体の診断的使用
本発明の抗ＢＣＭＡ抗体はまた、例えば診断目的のために、サンプル中のＢＣＭＡ、またはＢＣＭＡ発現細胞を検出および／または測定するために使用してもよい。例えば、抗ＢＣＭＡ抗体またはその断片を使用して、ＢＣＭＡの異常な発現（例えば、過剰発現、過少発現、発現欠如など）を特徴とする病態または疾患を診断してよい。ＢＣＭＡについての例示的な診断アッセイは、例えば、患者から得られたサンプルを本発明の抗ＢＣＭＡ抗体と接触させることを含んでよく、抗ＢＣＭＡ抗体は検出可能な標識またはレポーター分子で標識されている。あるいは、標識されていない抗ＢＣＭＡ抗体は、それ自体が検出可能に標識された二次抗体と組み合わせて診断用途において使用することができる。検出可能な標識またはレポーター分子は、^３Ｈ、^１４Ｃ、^３２Ｐ、^３５Ｓもしくは^１２５Ｉなどの放射性同位体、フルオレセインイソチオシアナートもしくはローダミンなどの蛍光部分もしくは化学発光部分、またはアルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、もしくはルシフェラーゼなどの酵素であり得る。本発明の抗ＢＣＭＡ抗体の別の例示的な診断用途は、^８９Ｚｒ－デスフェリオキサミン標識などの、対象において腫瘍細胞の非侵襲的識別および追跡の目的のための^８９Ｚｒ－標識抗体（例えば、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）イメージング）を含む。（例えば、Ｔａｖａｒｅ，Ｒ．ｅｔａｌ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．２０１６Ｊａｎ１；７６（１）：７３－８２、およびＡｚａｄ，ＢＢ．ｅｔａｌ．Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ．２０１６Ｍａｒ１５；７（１１）：１２３４４－５８を参照されたい。）サンプル中のＢＣＭＡを検出または測定するために使用することができる特定の例示的アッセイには、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、および蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）が含まれる。

本発明によるＢＣＭＡ診断アッセイにおいて使用することができるサンプルには、正常条件または病理学的条件下で、検出可能な量のＢＣＭＡタンパク質またはその断片を含有する、患者から得ることのできる任意の組織または体液サンプルが含まれる。一般に、健常な患者（例えば、異常なＢＣＭＡレベルまたは活性と関連した疾患または病態に罹患していない患者）から得られた特定のサンプル中のＢＣＭＡのレベルは、ＢＣＭＡのベースラインレベルまたは標準レベルをまず確立するために測定されるであろう。次いで、このＢＣＭＡのベースラインレベルを、ＢＣＭＡに関連する疾患（例えば、ＢＣＭＡ発現細胞を含む腫瘍）または病態を有することが疑われる個体から得られたサンプルにおいて測定されたＢＣＭＡのレベルと比較することができる。

以下の実施例は、本発明の方法および組成物をどのように作製および使用するかに関する完全な開示および説明を当業者に提供するために提示されており、本発明者らが本発明とみなすことの範囲を限定することを企図するものではない。使用される数値（例えば、量、温度など）に関して正確性を確保するための努力はしてきたが、いくつかの実験上の誤差および偏差が考慮されるべきである。別段示されない限り、部は重量部であり、分子量は平均分子量であり、温度は摂氏度であり、圧力は大気圧またはそれに近い圧力である。

実施例１：抗ＢＣＭＡ抗体の生成
抗ＢＣＭＡ抗体は、遺伝子改変マウスをヒトＢＣＭＡ抗原（例えば、ｈＢＣＭＡ、配列番号１１５）で免疫することによって、またはヒト免疫グロブリン重鎖およびカッパ軽鎖可変領域をコードするＤＮＡを含む遺伝子操作マウスをヒトＢＣＭＡ抗原で免疫することによって得られた。

免疫後、各マウスから脾細胞を採取して、（１）マウス骨髄腫細胞と融合してそれらの生存率を維持し、ハイブリドーマ細胞を形成してＢＣＭＡ特異性についてスクリーニングし、または（２）反応性抗体（抗原陽性Ｂ細胞）に結合して同定する選別試薬としてヒトＢＣＭＡ断片を使用して、Ｂ細胞を選別した（ＵＳ２００７／０２８０９４５Ａ１に記載のとおり）。

ヒト可変領域およびマウス定常領域を有するＢＣＭＡに対するキメラ抗体が最初に単離された。抗体を、親和性、選択性などを含む望ましい特徴について特徴付けし選択する。必要ならば、マウス定常領域を所望のヒト定常領域、例えば野生型または改変ＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常領域と置き換えて、完全ヒト型抗ＢＣＭＡ抗体を生成した。選択される定常領域は特異的用途に応じて変化し得るが、高親和性抗原結合特徴および標的特異性特徴は、可変領域に存在する。

抗ＢＣＭＡ抗体の重鎖および軽鎖可変領域のアミノ酸および核酸配列：表１は、本発明の選択された抗ＢＣＭＡ抗体の重鎖および軽鎖可変領域ならびにＣＤＲのアミノ酸配列識別子を示す。対応する核酸配列識別子を表２に記載する。

実施例２：抗ＣＤ３抗体の生成
抗ＣＤ３抗体は、参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１７／０５３８５６に記載されているように生成された。２つのそのような抗ＣＤ３抗体は、本発明による二重特異性抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３抗体の産生から選択された。表３は、選択された抗ＣＤ３抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域ならびにＣＤＲのアミノ酸配列識別子を示す。対応する核酸配列識別子を表４に示す。本発明による二重特異性抗体の調製に使用するための他の抗ＣＤ３抗体は、例えば、ＷＯ２０１４／０４７２３１に見出すことができる。

実施例３：ＢＣＭＡおよびＣＤ３に結合する二重特異性抗体の生成
本発明は、ＣＤ３およびＢＣＭＡに結合する二重特異性抗原結合分子を提供し、そのような二重特異性抗原結合分子はまた、本明細書において「抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３または抗ＣＤ３×ＢＣＭＡまたは抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性分子」とも称される。抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性分子の抗ＢＣＭＡ部分は、ＢＣＭＡ（ＣＤ２６９としても知られている）を発現する腫瘍細胞を標的化するのに有用であり、二重特異性分子の抗ＣＤ３部分は、Ｔ細胞を活性化するのに有用である。腫瘍細胞上のＢＣＭＡおよびＴ細胞上のＣＤ３の同時結合は、活性化Ｔ細胞によって標的腫瘍細胞の直接死滅（細胞溶解）を促進する。

抗ＢＣＭＡ特異的結合ドメインおよび抗ＣＤ３特異的結合ドメインを含む二重特異性抗体を、標準的な方法を使用して構築し、抗ＢＣＭＡ抗原結合ドメインおよび抗ＣＤ３抗原結合ドメインが、各々、共通のＬＣＶＲと対をなす異なる別個のＨＣＶＲを含む。例示された二重特異性抗体では、これらの分子は、抗ＣＤ３抗体からの重鎖、抗ＢＣＭＡ抗体からの重鎖、および抗ＣＤ３抗体（例えば、配列番号８２）からの共通の軽鎖を利用して構築された。他の例では、二重特異性抗体は、抗ＣＤ３抗体からの重鎖、抗ＢＣＭＡ抗体からの重鎖、および乱雑であって、または様々な重鎖アームと効果的に対をなすことが知られている抗体軽鎖を利用して構築され得る。

表６は、本明細書に例示される二重特異性抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３抗体のアミノ酸配列識別子を示す。

表６で識別されたｂｓＡｂ２５４４１Ｄ二重特異性抗体（ＲＥＧＮ４５４８）は、配列番号１２６のアミノ酸配列を含む第１の重鎖（第１の抗原結合ドメインを含む）、配列番号１２７のアミノ酸配列を含む第２の重鎖（第２の抗原結合ドメインを含む）、および配列番号１２９のアミノ酸配列を含む共通の軽鎖、を含む。ｂｓＡｂ２５４４１Ｄ二重特異性抗体（ＲＥＧＮ５４５８）の第１の重鎖は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む定常領域を含む。ｂｓＡｂ２５４４１Ｄ二重特異性抗体（ＲＥＧＮ５４５８）の第２の重鎖は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含む定常領域を含む。ｂｓＡｂ２５４４１Ｄ二重特異性抗体（ＲＥＧＮ５４５８）の共通の軽鎖は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含む定常領域を含む。

表６で識別されたｂｓＡｂ２５４４２Ｄ二重特異性抗体（ＲＥＧＮ５４５９）は、配列番号１２６のアミノ酸配列を含む第１の重鎖（第１の抗原結合ドメインを含む）、配列番号１２８のアミノ酸配列を含む第２の重鎖（第２の抗原結合ドメインを含む）、および配列番号１２９のアミノ酸配列を含む共通の軽鎖、を含む。ｂｓＡｂ２５４４２Ｄ二重特異性抗体（ＲＥＧＮ５４５９）の第１の重鎖は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む定常領域を含む。ｂｓＡｂ２５４４２Ｄ二重特異性抗体（ＲＥＧＮ５４５９）の第２の重鎖は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含む定常領域を含む。ｂｓＡｂ２５４４２Ｄ二重特異性抗体（ＲＥＧＮ５４５９）の共通の軽鎖は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含む定常領域を含む。

実施例４：抗ＢＣＭＡ抗体および抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗体の表面プラズモン共鳴由来の結合親和性および動態定数
精製された抗ＢＣＭＡｍＡｂおよび抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性ｍＡｂに結合するｈＢＣＭＡ．ｍｍｈ（配列番号１０６）の平衡解離定数（Ｋ_Ｄ値）は、Ｂｉａｃｏｒｅ４０００装置を使用するリアルタイム表面プラズモン共鳴バイオセンサーを使用して決定された。ＣＭ５Ｂｉａｃｏｒｅセンサー表面を、モノクローナルマウス抗ヒトＦｃ抗体（ＧＥ、＃ＢＲ－１００８－３９）とのアミンカップリングによって誘導体化して、精製された抗ＢＣＭＡｍＡｂおよび抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性ｍＡｂを捕捉した。すべてのＢｉａｃｏｒｅ結合試験は、０．０１ＭＨＥＰＥＳｐＨ７．４、０．１５ＭＮａＣｌ、３ｍＭＥＤＴＡ、０．０５体積／体積％界面活性剤Ｐ２０（ＨＢＳ－ＥＴランニング緩衝液）で構成される緩衝液中で実施した。単量体親和性については、Ｃ末端ｍｙｃ－ｍｙｃ－ヘキサヒスチジンタグ（ヒトＢＣＭＡ－ＭＭＨ；配列番号１０６）で発現されたヒトＢＣＭＡまたはＣ末端ｍｙｃ－ｍｙｃ－ヘキサヒスチジンタグ（サルＢＣＭＡ－ＭＭＨ；配列番号１１０）で発現されたサルＢＣＭＡの異なる濃度の細胞外ドメインを、ＨＢＳ－ＥＴランニング緩衝液（９０～１．１１ｎＭ、３倍希釈）中で調製した。二量体親和性については、Ｃ末端ｍＦｃタグ（ヒトＢＣＭＡ－ＭＦＣ；配列番号１０８）で発現されたヒトＢＣＭＡまたはＣ末端ｍＦｃタグ（サルＢＣＭＡ－ＭＦＣ；配列番号１１２）で発現されたサルＢＣＭＡの異なる濃度の細胞外ドメインを、ＨＢＳ－ＥＴランニング緩衝液（３０～０．３７ｎＭ、３倍希釈）中で調製したか、またはＣ末端ｍＦｃタグ（マウスＢＣＭＡ－ＭＦＣ；配列番号１１４）で発現された３０ｎＭのＢＣＭＡを、調製した。次いで、抗原サンプルを、３０μＬ／分の流量で表面に捕捉された抗ＢＣＭＡおよび抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性ｍＡｂにわたって注入した。ＨＢＳ－ＥＴランニング緩衝液中での解離を１０分間モニタリングしながら、抗体－試薬結合物を５分間モニタリングした。すべての結合速度論実験を、２５℃で実施した。Ｓｃｒｕｂｂｅｒ２．０ｃ曲線適合ソフトウェアを用いてリアルタイムセンサーグラムを１：１結合モデルへあてはめることによって、動的結合（ｋ_ａ）速度定数および動的解離（ｋ_ｄ）速度定数を測定した。結合解離平衡定数（Ｋ_Ｄ）および解離半減期（ｔ１／２）を、動的速度定数から以下のように計算した：

表７に示すように、２５℃で、本発明のすべての抗ＢＣＭＡ抗体は、１．０６ｎＭ～３．５６ｎＭの範囲のＫ_Ｄ値を有するヒトＢＣＭＡ－ＭＭＨに結合した。表８に示すように、２５℃で、本発明のすべての抗ＢＣＭＡ抗体は、２２．３ｐＭ～１０３ｐＭの範囲のＫ_Ｄ値を有するヒトＢＣＭＡ－ＭＦＣに結合した。表９に示すように、２５℃で、本発明の２つの抗ＢＣＭＡ抗体は、３８．８ｎＭ～４９．９２ｎＭの範囲のＫ_Ｄ値を有するサルＢＣＭＡ－ＭＭＨに結合した。表１０に示すように、２５℃で、本発明の４つの抗ＢＣＭＡ抗体は、１４８ｐＭ～１４．７ｎＭの範囲のＫ_Ｄ値を有するサルＢＣＭＡ－ＭＦＣに結合した。表１１に示すように、２５℃で、本発明の４つの抗ＢＣＭＡ抗体は、６７７ｐＭ～１８．８ｎＭの範囲のＫ_Ｄ値を有するマウスＢＣＭＡ－ＭＦＣに結合した。

実施例５：ヒトおよびカニクイザルＣＤ３発現細胞への抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗体のＦＡＣＳ結合
フローサイトメトリー分析を利用して、ヒトおよびカニクイザルＣＤ３（Ｊｕｒｋａｔ細胞、ｍｆＣＤ３操作Ｊｕｒｋａｔ細胞、一次ヒトＣＤ８＋およびカニクイザルＣＤ８＋Ｔ細胞）へのＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体の結合を決定した。簡言すれば、１ｅ０５細胞／ウェルを、ＢＣＭＡ×ＣＤ３および対照抗体の連続希釈法を伴うブロック（ＰＢＳ＋１％濾過ＦＢＳ＋５％マウス血清）を用いたＦＡＣＳ洗浄の存在下で氷上で３０分間インキュベートした。インキュベーション後、細胞を冷ＦＡＣＳ洗浄（ＰＢＳ＋１％濾過ＦＢＳ）で２回洗浄し、氷上でさらに３０分間、Ａｌｅｘａ６４７でコンジュゲートした抗ヒト二次抗体でインキュベートすることによって、結合抗体を検出した。抗体なしまたは二次抗体のみを含有するウェルを対照として使用した。サルおよびヒトＴ細胞を検出するために、ＣＤ４、ＣＤ８、およびＣＤ１６に対するヒトおよびカニクイザルの交差反応性抗体のカクテルを抗ヒト二次抗体に添加した。インキュベーション後、細胞を洗浄し、１％濾過ＦＢＳを含有する２００μＬの冷ＰＢＳに再懸濁し、ＢＤＦＡＣＳＣａｎｔｏＩＩでフローサイトメトリーによって分析した。細胞を、ＦＳＣ－ＨによってＦＳＣ－Ａによってゲーティングし、シングレットイベントを選択し、続いて側面散乱および前方散乱がライブイベントを選択した。サルＴ細胞については、ＣＤ８＋／ＣＤ１６－細胞で追加のゲーティングを実施した。

ＦＡＣＳ結合のＥＣ５０値は、Ｐｒｉｓｍソフトウェアの４パラメータ非線形回帰分析を使用して計算した。

Ｊｕｒｋａｔ細胞は、Ｔ細胞リンパ芽球性細胞株を発現するヒトＣＤ３である。ＲＥＧＮ５４５８は、中央値のＥＣ５０が、それぞれ、１．５０×１０^－８Ｍおよび３．２０×１０^－８Ｍを有するＪｕｒｋａｔ細胞および一次ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞上のヒトＣＤ３に結合した。ＲＥＧＮ５４５９の結合は、ヒトＣＤ３で弱く、中央値ＥＣ５０が、Ｊｕｒｋａｔ細胞では５．５８×１０^－７Ｍであり、一次ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞では４．７１×１０^－６であった。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９技術を利用して、Ｊｕｒｋａｔ細胞株は、ヒトバージョンの代わりにカニクイザルＣＤ３εおよびＣＤ３δ鎖を発現するように操作された。ｍｆＣＤ３を操作したＪｕｒｋａｔ細胞株へのＲＥＧＮ５４５８の結合の中央値ＥＣ５０は、１．５１ｘ１０^－８Ｍであり、一次カニクイザルＣＤ８＋Ｔ細胞へのその結合の中央値ＥＣ５０は、４．６６×１０^－８Ｍであった。ＲＥＧＮ５４５９は、ｍｆＣＤ３発現細胞には結合しなかった。

ｍＡｂ１５２６０と呼ばれる陰性アイソタイプ対照抗体のいかなる細胞株においても結合は観察されなかった。

実施例６：細胞表面抗原結合能を評価するためのＦＡＣＳ結合アッセイ
抗ＢＣＭＡ×ＣＤ３抗体、ｍＡｂ２５４４２Ｄが、ＢＣＭＡ陽性多発性骨髄腫（ＮＣＩ－Ｈ９２９、ＭＭ．１Ｓ、ＯＰＭ－２、およびＲＰＭＩ－８２２６）、ＢＣＭＡ陽性リンパ腫（ＲａｊｉおよびＤａｕｄｉ）、ならびにＢＣＭＡ陰性（ＨＥＫ２９３）細胞の表面に結合する能力を、フローサイトメトリーで決定した。細胞解離緩衝液（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、カタログ番号Ｓ－００４－Ｃ）を使用してフラスコから細胞を回収し、染色緩衝液（ＰＢＳ、カルシウムおよびマグネシウムを含まない（Ｉｒｖｉｎｇ９２４０）＋２％ＦＢＳ（ＡＴＣＣ３０－２０２０）中に９６ウェルＶ字底プレートのウェル当たり５００，０００個の細胞の密度で播種した。細胞を、４℃で３０分間、Ａｌｅｘａ６４７コンジュゲート抗ＢＣＭＡ×ＣＤ３抗体（ｍＡｂ２５４４２Ｄ－Ａ６４７）または無関連腫瘍標的アーム（アイソタイプ－Ａ６４７）と対となる同じＣＤ３結合アームを有するＡｌｅｘａ６４７コンジュゲートアイソタイプ対照の２倍段階希釈で、４℃で３０分間染色した。細胞を、染色緩衝液で２回洗浄し、製造業者の取扱説明書に従ってＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（商標）ＦｉｘａｂｌｅＧｒｅｅｎ死細胞染色キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｌ３４９７０）で標識して、生細胞と死細胞を区別した。次いで、細胞を洗浄し、ＰＢＳで希釈したＢＤＣｙｔｏｆｉｘ（ＢＤ、カタログ番号５５４６５５）の５０％溶液を使用して、４℃で２５分間固定した。サンプルは、ＡｃｃｕｒｉＣ６フローサイトメーター（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で実行され、Ｆｌｏｗｊｏ１０．２（ＴｒｅｅＳｔａｒ）で分析された。生細胞および単一細胞についてゲーティングした後、平均蛍光強度（ＭＦＩ）を決定し、ＭＦＩ値は、ＥＣ_５０を計算するために１０ポイントの応答曲線上に４パラメータロジスティック方程式を使用して、ＧｒａｐｈｐａｄＰｒｉｓｍにプロットした。各用量反応曲線のゼロ条件も、２倍連続希釈の継続として分析に含まれ、最低用量として表される。信号対雑音比（Ｓ／Ｎ）は、ｍＡｂ２５４４２Ｄ－Ａ６４７ＭＦＩとＩｓｏｔｙｐｅ－Ａ６４７ＭＦＩの比率をとることによって決定される。（表１３）。ｍＡｂ２５４４２Ｄ－Ａ６４７のＳ／Ｎは、２～４７０の範囲であり、ＥＣ_５０値は、２７～８３ｎＭの範囲であった。ＨＥＫ２９３細胞では、検出可能な結合は観察されなかった。

実施例７：ＢＣＭＡ発現細胞の存在下での二重特異性抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３抗体を介したＴ細胞活性化
抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗体の活性は、ＢＣＭＡ表面発現のレベルが異なるいくつかの細胞株を利用したＪｕｒｋａｔ／ＮＦＡＴＬｕｃレポーターバイオアッセイで評価された。Ｊｕｒｋａｔ細胞は、ＮＦＡＴ－ルシフェラーゼレポーター（Ｊｕｒｋａｔ／ＮＦＡＴＬｕｃ．３Ｃ７）を発現するように設計され、５０，０００個のＪｕｒｋａｔレポーター細胞が、５０ｕｌのアッセイ培地（１０％ＦＢＳおよび１％Ｐ／Ｓ／Ｇを含むＲＰＭＩ培地）中の、５０，０００個のＢＣＭＡ陽性（Ｄａｕｄｉ、ＭＭ１－Ｓ、ＮＣＩ－Ｈ９２９、ＯＰＭ－２、ＲＰＭＩ－８２２６、ＭＯＬＰ－８、もしくはＲａｊｉ）またはＴｈｅｒｍｏＮｕｎｃｌｏｎデルタ９６ウェル白色マイクロウェルプレート（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１３６１０２）中のＢＣＭＡ陰性（ＨＥＫ２９３）細胞と混合した。ＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体（ｍＡｂ２５４４１ＤもしくはｍＡｂ２５４４２Ｄ）または二価抗ＢＣＭＡ抗体（ｍＡｂ２１５８１）の３倍連続希釈液を、５０ｕＬのアッセイ緩衝液中に直ちに添加した。プレートを穏やかに撹拌し、３７℃、５％ＣＯ_２インキュベーター中で４～６時間インキュベートした。ＮＦＡＴ－ルシフェラーゼ活性は、ＰｒｏｍｅｇａＯｎｅ－Ｇｌｏ（カタログ番号Ｅ６１３０）およびＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＥｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーを使用して決定した。ＲＬＵは、ＥＣ_５０値を計算するために、１２ポイントの応答曲線上で４パラメータロジスティック方程式を使用して、ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍにプロットした。各用量応答曲線の抗体を用いない治療条件も、３倍連続希釈の継続として分析に含まれ、最低用量として表される。信号対雑音比（Ｓ：Ｎ）は、曲線上の最高のＲＬＵと最低のＲＬＵの比率をとることによって決定される。

ｍＡｂ２５４４１Ｄは、ＥＣ５０が０．６１ｎＭ～２．１ｎＭの範囲で、Ｓ：Ｎが８～１２３の範囲のＢＣＭＡ発現細胞の存在下でＪｕｒｋａｔ／ＮＦＡＴＬｕｃ細胞を活性化した。ｍＡｂ２５４４２Ｄは、ＥＣ５０が２．６ｎＭ～１１ｎＭの範囲で、Ｓ：Ｎが７～１２０の範囲のＢＣＭＡ発現細胞の存在下でＪｕｒｋａｔ／ＮＦＡＴＬｕｃ細胞を活性化した。親和性の高いＣＤ３結合アームを備えたＢＣＭＡ×ＣＤ３ｂｉｓｐｅｃｍＡｂ２５４４１Ｄは、親和性の低いＣＤ３結合アームを備えたｍＡｂ２５４４２Ｄよりも一貫して強力であり、一方、Ｓ：Ｎは、２つの二重特異性で類似していた。どちらの抗体も、ＨＥＫ２９３細胞の存在下でＪｕｒｋａｔ／ＮＦＡＴＬｕｃ細胞を活性化せず、対照の二重特異性抗体は、試験した細胞株のいずれにおいてもＪｕｒｋａｔレポーター活性を有意に増加させなかった。結果を、以下の表１４Ａおよび１４Ｂに示す。

実施例８：抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗体の存在下でのＢＣＭＡ発現多発性骨髄腫細胞のＴ細胞媒介性死滅を評価するためのＦＡＣＳベースの細胞毒性アッセイ。
市販の抗ヒトＢＣＭＡ抗体（クローン１９Ｆ２）の抗体結合能（ＡＢＣ）は、ＱｕａｎｔｕｍＳｉｍｐｌｙＣｅｌｌｕｌａｒ抗ヒトＩｇＧキットを使用し、製造業者の取扱説明書（ＢａｎｇｓＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）に従って、多発性骨髄腫細胞株のパネル上で決定した。

簡言すれば、多発性骨髄腫（ＭＭ）細胞株（Ｈ９２９、ＭＭ１Ｓ、Ｕ２６６、ＭＯＬＰ８、およびＲＰＭＩ８２２６）ならびにＱｕａｎｔｕｍＳｉｍｐｌｙＣｅｌｌｕｌａｒビーズを、ＡＰＣコンジュゲートした抗ｈＢＣＭＡ－１９Ｆ２抗体の滴定によって４℃で３０分間インキュベートした。インキュベーション後、細胞およびビーズを３回洗浄し、１％濾過ＦＢＳを含有する２００μＬの冷ＰＢＳに再懸濁し、フローサイトメトリーによって分析した。ＱｕｉｃｋＣａｌ（登録商標）テンプレート（ＢａｎｇｓＬａｂｓ）を使用して、各細胞株の抗ＢＣＭＡ１９Ｆ２のＡＢＣの飽和レベルを、飽和時のビーズ集団のチャネル強度によって生成された標準曲線から補間した。

ヒトまたはカニクイザルのＴ細胞を休止させることによるＢＣＭＡ発現標的細胞の死滅は、フローサイトメトリーによって決定された。簡言すれば、ヒトまたはカニクイザルの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、１×１０^６細胞／ｍＬで補充ＲＰＭＩ（ヒト）またはＸ－Ｖｉｖｏ（カニクイザル）培地に播種し、付着マクロファージ、樹状細胞、およびいくつかの単球を枯渇させることによってリンパ球を濃縮するために３７℃で一晩インキュベートした。翌日、ＢＣＭＡ発現標的細胞を、１ｕＭのＶｉｏｌｅｔＣｅｌｌＴｒａｃｅで標識し、付着細胞枯渇ＰＢＭＣ（エフェクター／標的細胞４：１比）およびＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性の連続希釈液または対照抗体と３７℃で共培養した。４８～７２時間後、細胞を、細胞培養プレートから取り出し、カクテル表現型抗体および生／死細胞生存率色素で染色し、ＦＡＣＳにより分析した。ウェル中に存在する生標的細胞の数を定量化するために、２０μｌのＣｏｕｎｔＢｒｉｇｈｔ絶対カウントビーズを、取得直前にウェルに添加した。死滅の特異性を評価するために、細胞を、バイオレット細胞追跡標識集団にゲーティングした。標的細胞の生存率は、次のように計算された：標的生存率＝（Ｒ_１／Ｒ_２）＊１００（式中、Ｒ_１＝エフェクター細胞および抗体の存在下での生標的細胞の絶対数、Ｒ_２＝生標的細胞のみの数（エフェクター細胞または試験抗体なしで培養））。

ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞を、ＣＤ４５＋／ＣＤ１４－／ＣＤ４－／ＣＤ８＋としてゲーティングした。カニクイザルＣＤ８＋Ｔ細胞を、ＣＤ４５＋／ＣＤ２０－／ＣＤ１４－／ＣＤ４－／ＣＤ８＋としてゲーティングし、Ｔ細胞活性化を、ＣＤ８＋Ｔ細胞全体のうちのＣＤ２５＋またはＣＤ６９＋Ｔ細胞の割合として報告した。

標的細胞の生存およびＴ細胞活性化のＥＣ５０値は、Ｐｒｉｓｍソフトウェアの４パラメータ非線形回帰分析を使用して計算した。

抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗体を、休止状態のヒトおよびカニクイザルＴ細胞を活性化して、表面ＢＣＭＡレベルが異なるＢＣＭＡ発現細胞のパネルを死滅させる能力について試験した。エフェクター細胞としてヒトＴ細胞を休止して、ＲＥＧＮ５４５８は、５つの異なるＢＣＭＡ細胞株を媒介し、ＥＣ_５０値は、７．０７×１０^－１０Ｍ～３．４５×１０^－１１Ｍの範囲であった。ＲＥＧＮ５４５９は、同じ５つの細胞株の死滅を示し、ＥＣ５０値が１．６６×１０^－９Ｍ～１．０６×１０^－１０Ｍの範囲であった。ＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＣＤ２５の上方調節によって測定されるように、Ｔ細胞活性化のためにＥＣ_５０は、死滅するＥＣ_５０と同様であった。中程度のＴ細胞活性化は、１アームＣＤ３アイソタイプ対照ｍＡｂ１７６６４Ｄの存在下で観察されたが、Ｕ２６６細胞株でのみ観察された。試験したアイソタイプ対照では、細胞毒性は観察されなかった。

カニクイザルＴ細胞によるＢＣＭＡ×ＣＤ３を媒介した死滅は、ＭＭ細胞株Ｈ９２９でのみ試験された。ＲＥＧＮ５４５８およびＲＥＧＮ５４５９によって媒介された細胞毒性のＥＣ_５０は、それぞれ、２．３４×１０^－１１および６．９２×１０^－１１であった。ヒトまたはカニクイザルエフェクター細胞を用いたアイソタイプ対照抗体ｍＡｂ１５２６０では、細胞毒性またはＴ細胞活性化は観察されなかった。結果を、以下の表１５Ａ、１５Ｂ、および１６に示す。

実施例９：抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗体の存在下での一次多発性骨髄腫芽球細胞の自己Ｔ細胞媒介性死滅に対するＦＡＣＳ細胞毒性アッセイ
フローサイトメトリーによって多発性骨髄腫細胞の特異的死滅をモニタリングするために、多発性骨髄腫患者からの骨髄単核細胞（ＢＭＭＣ）をヒト間質細胞（ＨＳ５）に播種し、３７℃で一晩休ませた。別に、適合した患者の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、解凍し、付着細胞を枯渇させることによってリンパ球を濃縮するために、１×１０^６細胞／ｍＬで補充ＲＰＭＩ培地中で３７℃で一晩培養した。翌日、ＢＭＭＣは、間質細胞（ＨＳ５）上の付着細胞枯渇ナイーブＰＢＭＣおよびＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性または１アームＣＤ３アイソタイプ対照（開始濃度６６．７ｎＭ）の連続１０倍希釈液を用いて３７℃で共培養した。３、４、または７日目に、細胞を細胞培養プレートから取り出し、ＦＡＣＳにより分析した。死滅の特異性を評価するために、多発性骨髄腫細胞を、単一、生、ＣＤ９０陰性（間質細胞を除く）、ＣＤ２陰性、ＣＤ５６陽性としてゲーティングした。ＣＤ４５は、ＭＭ４５５を除くほとんどのサンプルで多発性骨髄腫細胞において低かった。調整された生存率の計算のために、生標的細胞の割合を、以下のように報告した：調整された生存率＝（Ｒ１／Ｒ２）＊１００（式中、Ｒ１＝抗体の存在下での生標的細胞の割合（％）、およびＲ２＝試験抗体の不在下での生標的細胞の割合（％）。

Ｔ細胞を、ＣＤ２陽性、ＣＤ５６陰性、およびＣＤ４陽性またはＣＤ８陽性としてゲーティングした。Ｔ細胞の活性化を、ＣＤ４またはＣＤ８Ｔ細胞全体のうちのＣＤ２５＋ＣＤ４またはＣＤ８Ｔ細胞の割合として報告した。

ＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体を、自家ドナーＰＢＭＣによる一次多発性骨髄腫芽球の死滅を再指向する能力について試験した。一次ＭＭ芽球の最大のＢＣＭＡ×ＣＤ３媒介性細胞毒性は、５２～９６％の範囲であり、ＲＥＧＮ５４５８については、ＥＣ５０が９．８９×１０^－１１Ｍ～３．６７×１０^－９Ｍの範囲であり、ＲＥＧＮ５４５９については、４．９６×１０^－１０Ｍ～７．９４×１０^－８Ｍの範囲であった。Ｔ細胞活性化は、ＣＤ８＋Ｔ細胞上のＣＤ２５の上方調節を評価することによって測定された。Ｔ細胞活性化のＥＣ５０は、３．２３×１０^－９～１．６９×１０^－１０であった。中程度の細胞毒性およびＴ細胞活性化が、１アームＣＤ３（標的結合なし）アイソタイプ対照で観察された。結果を、以下の表１７Ａおよび１７Ｂに示す。

実施例１０：抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗体は、異種腫瘍モデルにおいてインビボでＢＣＭＡ発現腫瘍（ＮＣＩ－Ｈ９２９）の成長を防止する
ＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体（Ａｂ）のインビボでの有効性を決定するために、異種腫瘍研究を実施した。免疫不全ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃ^ｓｃｉｄＩｌ２ｒｇ^{ｔｍ１Ｗｊｌ}／ＳｚＪ（ＮＳＧ）マウスに、１０×１０^６個のＢＣＭＡ発現ＮＣＩ－Ｈ９２９多発性骨髄腫細胞と正常ドナーから単離された０．５×１０^６個のヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）との混合物を皮下に移植した。マウス（群当たりｎ＝７）に、ＰＢＳビヒクル対照、無関連抗ＦｅｌＤ１二価アイソタイプ対照Ａｂ（ＲＥＧＮ２７５９）、ＣＤ３結合対照二重特異性Ａｂ（ｍＡｂ１７６６４Ｄ）、ＢＣＭＡ×ＣＤ３（Ｇ；ＲＥＧＮ５４５８）二重特異性Ａｂ、またはＢＣＭＡ×ＣＤ３（Ｇ２０；ＲＥＧＮ５４５９）二重特異性抗体を４ｍｇ／ｋｇの用量で直ちに投与した。マウスに、Ａｂを週に２回、合計３週間投与し、腫瘍の成長を４０日間にわたって評価した。ＢＣＭＡ^＋腫瘍は、ビヒクル、アイソタイプ対照、およびＣＤ３結合対照治療マウスで同様に成長したが、試験されたＢＣＭＡ×ＣＤ３Ａｂは両方とも、インビボでの腫瘍の成長を防止した。

同系腫瘍の移植および測定：ＮＳＧマウスに、１０×１０^６個のＢＣＭＡ発現ＮＣＩ－Ｈ９２９多発性骨髄腫細胞と正常ドナーに由来する０．５×１０^６個のＰＢＭＣとの混合物を皮下に移植した。マウス（群当たりｎ＝７）に、ＰＢＳビヒクル対照、無関連抗ＦｅｌＤ１二価アイソタイプ対照Ａｂ（ＲＥＧＮ２７５９）、ＣＤ３結合対照二重特異性Ａｂ（ｍＡｂ１７６６４Ｄ）、ＢＣＭＡ×ＣＤ３（Ｇ；ＲＥＧＮ５４５８）二重特異性Ａｂ、またはＢＣＭＡ×ＣＤ３（Ｇ２０；ＲＥＧＮ５４５９）二重特異性抗体を４ｍｇ／ｋｇの用量で直ちに投与した。マウスに、Ａｂを週に２回、合計３週間投与した。腫瘍成長を、実験の期間中、キャリパーを用いて週に２回測定した。腫瘍移植後、４０日目にマウスを殺処分した。

同系腫瘍成長および阻害の計算：外部キャリパーで腫瘍体積を決定するために、最大長径（長さｍｍ）および最大横径（幅ｍｍ）を決定した。キャリパー測定値に基づいて、腫瘍体積を、式：体積（ｍｍ^３）＝（長さ×幅^２）／２により計算した。

ＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ａｂは、異種腫瘍モデルにおいてインビボでＢＣＭＡ^＋ＮＣＩ－Ｈ９２９腫瘍の成長を防止した。結果を、以下の表１８に示す。

実施例１１：抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗体は、異種のインビボ腫瘍モデルにおいて用量依存的様式でＢＣＭＡ発現腫瘍（ＮＣＩ－Ｈ９２９）の成長を防止する
抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗体（Ａｂ）のインビボでの有効性を決定するために、異種腫瘍研究を実施した。免疫不全ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃ^ｓｃｉｄＩｌ２ｒｇ^{ｔｍ１Ｗｊｌ}／ＳｚＪ（ＮＳＧ）マウスに、１０×１０^６個のＢＣＭＡ発現ＮＣＩ－Ｈ９２９ヒト多発性骨髄腫細胞と正常な健常ドナーから単離された０．５×１０^６個のヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）との混合物を皮下に移植した。次いで、マウス（群当たりｎ＝７）に、ＰＢＳビヒクル対照、ＣＤ３結合対照二重特異性Ａｂ（Ｇ；ｍＡｂ１７６６４Ｄ）を４ｍｇ／ｋｇの用量で、ＣＤ３結合対照二重特異性Ａｂ（Ｇ２０；ＲＥＧＮ４４６０）を４ｍｇ／ｋｇの用量で、ＢＣＭＡ×ＣＤ３（Ｇ；ＲＥＧＮ５４５８）二重特異性Ａｂを４ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、もしくは０．０４ｍｇ／ｋｇのいずれかの用量で、またはＢＣＭＡ×ＣＤ３（Ｇ２０；ＲＥＧＮ５４５９）二重特異性Ａｂを４ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、もしくは０．０４ｍｇ／ｋｇのいずれかの用量で直ちに投与した。マウスに、これらのＡｂを週に２回、合計７回の用量を投与し、腫瘍の成長を６０日間にわたって評価した。ＢＣＭＡ^＋ＮＣＩ－Ｈ９２９腫瘍は、ビヒクルおよびＣＤ３結合対照で治療されたマウスで同様に成長したが、試験された抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３Ａｂは両方とも、インビボでの用量依存的様式で腫瘍の成長を防止した。

異種腫瘍の移植および測定：ＮＳＧマウスに、１０×１０^６個のＢＣＭＡ発現ＮＣＩ－Ｈ９２９多発性骨髄腫細胞と正常な健常ドナーに由来する０．５×１０^６個のＰＢＭＣとの混合物を皮下に移植した。マウス（群当たりｎ＝７）に、ＰＢＳビヒクル対照、ＣＤ３結合対照二重特異性Ａｂ（Ｇ；ｍＡｂ１７６６４Ｄ）、ＣＤ３結合対照二重特異性Ａｂ（Ｇ２０；ＲＥＧＮ４４６０）、ＢＣＭＡ×ＣＤ３（Ｇ；ＲＥＧＮ５４５８）二重特異性Ａｂ、またはＢＣＭＡ×ＣＤ３（Ｇ２０；ＲＥＧＮ５４５９）二重特異性Ａｂを直ちに投与した。ｍＡｂ１７６６４ＤおよびＲＥＧＮ４４６０を、４ｍｇ／ｋｇで投与したが、ＲＥＧＮ５４５８およびＲＥＧＮ５４５９は、４ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、または０．０４ｍｇ／ｋｇのいずれかで投与した。マウスに、Ａｂを週に２回、合計７回の用量で投与した。腫瘍成長を、実験の期間中、キャリパーを用いて週に２回測定した。

異種腫瘍成長および阻害の計算：外部キャリパーで腫瘍体積を決定するために、最大長径（長さｍｍ）および最大横径（幅ｍｍ）を決定した。キャリパー測定値に基づいて、腫瘍体積を、式：体積（ｍｍ^３）＝（長さ×幅^２）／２により計算した。

ＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ａｂは、この異種のインビボ腫瘍モデルにおいて、用量依存的様式でＢＣＭＡ^＋ＮＣＩ－Ｈ９２９腫瘍の成長を防止した。結果を、以下の表１９に示し、図１および２に示す。

実施例１２：抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗体は、異種のインビボ腫瘍モデルにおいて用量依存的様式で確立されたＢＣＭＡ発現腫瘍（ＮＣＩ－Ｈ９２９）のサイズを縮小し、その成長を防止する
抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗体（Ａｂ）のインビボでの有効性を決定するために、異種腫瘍研究を実施した。免疫不全ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃ^ｓｃｉｄＩｌ２ｒｇ^{ｔｍ１Ｗｊｌ}／ＳｚＪ（ＮＳＧ）マウスに、１０×１０^６個のＢＣＭＡ発現ＮＣＩ－Ｈ９２９ヒト多発性骨髄腫細胞と正常な健常ドナーから単離された０．５×１０^６個のヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）との混合物を皮下に移植した。腫瘍は、サイズが約７０ｍｍ^３になるまで、５日間成長および確立した。次いで、５日目に、マウス（群当たりｎ＝７～８）に、ＰＢＳビヒクル対照、ＣＤ３結合対照二重特異性Ａｂ（Ｇ；ｍＡｂ１７６６４Ｄ）を４ｍｇ／ｋｇの用量で、ＣＤ３結合対照二重特異性Ａｂ（Ｇ２０；ＲＥＧＮ４４６０）を４ｍｇ／ｋｇの用量で、ＢＣＭＡ×ＣＤ３（Ｇ；ＲＥＧＮ５４５８）二重特異性Ａｂを４ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、もしくは０．０４ｍｇ／ｋｇのいずれかの用量で、またはＢＣＭＡ×ＣＤ３（Ｇ２０；ＲＥＧＮ５４５９）二重特異性Ａｂを４ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、もしくは０．０４ｍｇ／ｋｇのいずれかの用量で投与した。マウスに、これらのＡｂを週に２回、合計７回の用量を投与し、腫瘍の成長を５５日間にわたって評価した。ＢＣＭＡ^＋ＮＣＩ－Ｈ９２９腫瘍は、ビヒクルおよびＣＤ３結合対照で治療されたマウスで同様に成長したが、試験されたＢＣＭＡ×ＣＤ３Ａｂは両方とも、インビボでの用量依存的様式で確立した腫瘍を縮小し、腫瘍の成長を防止した。

異種腫瘍の移植および測定：ＮＳＧマウスに、１０×１０^６個のＢＣＭＡ発現ＮＣＩ－Ｈ９２９多発性骨髄腫細胞と正常な健常ドナーに由来する０．５×１０^６個のＰＢＭＣとの混合物を皮下に移植した。腫瘍は、サイズが約７０ｍｍ^３になるまで、５日間成長および確立した。次いで、５日目に、マウス（群当たりｎ＝７～８）に、ＰＢＳビヒクル対照、ＣＤ３結合対照二重特異性Ａｂ（Ｇ；ｍＡｂ１７６６４Ｄ）、ＣＤ３結合対照二重特異性Ａｂ（Ｇ２０；ＲＥＧＮ４４６０）、ＢＣＭＡ×ＣＤ３（Ｇ；ＲＥＧＮ５４５８）二重特異性Ａｂ、またはＢＣＭＡ×ＣＤ３（Ｇ２０；ＲＥＧＮ５４５９）二重特異性Ａｂを直ちに投与した。ｍＡｂ１７６６４ＤおよびＲＥＧＮ４４６０を、４ｍｇ／ｋｇで投与したが、ＲＥＧＮ５４５８およびＲＥＧＮ５４５９は、４ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、または０．０４ｍｇ／ｋｇのいずれかで投与した。マウスに、Ａｂを週に２回、合計７回の用量で投与した。腫瘍成長を、実験の期間中、キャリパーを用いて週に２回測定した。

抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗体は、この異種のインビボ腫瘍モデルにおいて用量依存的様式で確立されたＢＣＭＡ^＋ＮＣＩ－Ｈ９２９腫瘍のサイズを縮小し、その成長を防止した。結果を、以下の表２０に示し、図３および４に示す。

実施例１３：抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗体は、異種のインビボ腫瘍モデルにおいて用量依存的様式でＢＣＭＡ発現腫瘍（ＭＯＬＰ－８）の成長を防止する
抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗体（Ａｂ）のインビボでの有効性を決定するために、異種腫瘍研究を実施した。免疫不全ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃ^ｓｃｉｄＩｌ２ｒｇ^{ｔｍ１Ｗｊｌ}／ＳｚＪ（ＮＳＧ）マウスに、５×１０^６個のＢＣＭＡ発現ＭＯＬＰ－８ヒト多発性骨髄腫細胞と正常な健常ドナーから単離された１×１０^６個のヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）との混合物を皮下に移植した。次いで、マウス（群当たりｎ＝７）に、ＰＢＳビヒクル対照、ＣＤ３結合対照二重特異性Ａｂ（Ｇ；ｍＡｂ１７６６４Ｄ）を４ｍｇ／ｋｇの用量で、ＣＤ３結合対照二重特異性Ａｂ（Ｇ２０；ＲＥＧＮ４４６０）を４ｍｇ／ｋｇの用量で、ＢＣＭＡ×ＣＤ３（Ｇ；ＲＥＧＮ５４５８）二重特異性Ａｂを４ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、もしくは０．０４ｍｇ／ｋｇのいずれかの用量で、またはＢＣＭＡ×ＣＤ３（Ｇ２０；ＲＥＧＮ５４５９）二重特異性Ａｂを４ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、もしくは０．０４ｍｇ／ｋｇのいずれかの用量で直ちに投与した。マウスに、これらのＡｂを週に２回、合計７回の用量を投与し、腫瘍の成長を５６日間にわたって評価した。ＢＣＭＡ^＋ＭＯＬＰ－８腫瘍は、ビヒクルおよびＣＤ３結合対照で治療されたマウスで同様に成長したが、試験されたＢＣＭＡ×ＣＤ３Ａｂは両方とも、インビボでの用量依存的様式で腫瘍の成長を防止した。

異種腫瘍の移植および測定：ＮＳＧマウスに、５×１０^６個のＢＣＭＡ発現ＭＯＬＰ－８多発性骨髄腫細胞と正常な健常ドナーに由来する１×１０^６個のＰＢＭＣとの混合物を皮下に移植した。マウス（群当たりｎ＝７）に、ＰＢＳビヒクル対照、ＣＤ３結合対照二重特異性Ａｂ（Ｇ；ｍＡｂ１７６６４Ｄ）、ＣＤ３結合対照二重特異性Ａｂ（Ｇ２０；ＲＥＧＮ４４６０）、ＢＣＭＡ×ＣＤ３（Ｇ；ＲＥＧＮ５４５８）二重特異性Ａｂ、またはＢＣＭＡ×ＣＤ３（Ｇ２０；ＲＥＧＮ５４５９）二重特異性Ａｂを直ちに投与した。ｍＡｂ１７６６４ＤおよびＲＥＧＮ４４６０を、４ｍｇ／ｋｇで投与したが、ＲＥＧＮ５４５８およびＲＥＧＮ５４５９は、４ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、または０．０４ｍｇ／ｋｇのいずれかで投与した。マウスに、Ａｂを週に２回、合計７回の用量で投与した。腫瘍成長を、実験の期間中、キャリパーによって週に２回測定した。

抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗体は、この異種のインビボ腫瘍モデルにおいて用量依存的様式でＢＣＭＡ^＋ＭＯＬＰ－８腫瘍の成長を防止した。結果を、以下の表２１に示し、図５および６に示す。

実施例１４：抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗体は、異種（Ｘｅｎｏｇｒａｐｈｉｃ）インビボ腫瘍モデルにおいてＢＣＭＡ発現腫瘍（ＭＯＬＰ－８）の成長を遅らせる。
抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗体（Ａｂ）のインビボでの有効性を決定するために、異種腫瘍研究を実施した。１１日目に、免疫不全ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃ^ｓｃｉｄＩｌ２ｒｇ^{ｔｍ１Ｗｊｌ}／ＳｚＪ（ＮＳＧ）マウスに、正常な健常ドナーからの４×１０^６個のヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を腹腔内に注射した。０日目に、マウスに、ホタルルシフェラーゼ（ＭＯＬＰ－８－ルシフェラーゼ細胞）も発現するように操作された２×１０^６個のＢＣＭＡ^＋ＭＯＬＰ－８ヒト多発性骨髄腫腫瘍細胞を静脈内投与した。次いで、マウス（群当たりｎ＝５）に、ＣＤ３結合対照二重特異性Ａｂ（Ｇ；ｍＡｂ１７６６４Ｄ）を４ｍｇ／ｋｇの用量で、またはＢＣＭＡ×ＣＤ３（Ｇ；ＲＥＧＮ５４５８）二重特異性Ａｂを４ｍｇ／ｋｇの用量で直ちに投与した。マウスに、これらのＡｂを３および７日目にもう２回、合計３回の用量で投与した。麻酔した動物の腫瘍生物発光（ＢＬＩ）を測定することによって、４８日間にわたって腫瘍の成長を評価した。陽性対照として、マウス群（ｎ＝５）には、ＭＯＬＰ－８－ルシフェラーゼ細胞のみを投与し、ＰＢＭＣまたは抗体は投与しなかった。バックグラウンドＢＬＩレベルを測定するために、マウス群（ｎ＝５）は治療せず、腫瘍、ＰＢＭＣ、または抗体を投与しなかった。ＢＣＭＡ^＋ＭＯＬＰ－８－ルシフェラーゼ腫瘍は、ＣＤ３結合対照治療マウスで進行的に成長したが、ＲＥＧＮ５４５８によるＢＣＭＡ×ＣＤ３Ａｂ治療は、インビボで腫瘍の成長を遅らせた。

異種腫瘍の移植および測定：１１日目に、免疫不全ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃ^ｓｃｉｄＩｌ２ｒｇ^{ｔｍ１Ｗｊｌ}／ＳｚＪ（ＮＳＧ）マウスに、腹腔内に、正常な健常ドナーからの５×１０^６個のヒトＰＢＭＣを注射した。０日目に、マウスに、２×１０^６個のＢＣＭＡ^＋ＭＯＬＰ－８－ルシフェラーゼ細胞を静脈内投与した。次いで、マウス（群当たりｎ＝５）に、ＣＤ３結合対照二重特異性Ａｂ（Ｇ；ｍＡｂ１７６６４Ｄ）を４ｍｇ／ｋｇの用量で、またはＢＣＭＡ×ＣＤ３（Ｇ；ＲＥＧＮ５４５８）二重特異性Ａｂを４ｍｇ／ｋｇの用量で直ちに投与した。マウスに、これらのＡｂを３および７日目にもう２回、合計３回の用量で投与した。麻酔した動物の腫瘍ＢＬＩを測定することによって、４８日間にわたって腫瘍の成長を評価した。陽性対照として、マウス群（ｎ＝５）には、ＭＯＬＰ－８－ルシフェラーゼ細胞のみを投与し、ＰＢＭＣまたは抗体は投与しなかった。バックグラウンドＢＬＩレベルを測定するために、マウス群（ｎ＝５）は治療せず、腫瘍、ＰＢＭＣ、または抗体を投与しなかった。

異種腫瘍成長の測定：ＢＬＩイメージングを使用して腫瘍負荷を測定した。マウスに、ＰＢＳ中に懸濁したルシフェラーゼ基質のＤ－ルシフェリン１５０ｍｇ／ｋｇをＩＰ注射した。この注射から５分後、マウスのＢＬＩイメージングを、ＸｅｎｏｇｅｎＩＶＩＳシステムを使用してイソフルラン麻酔下で実施した。Ｄでの視野、１．５ｃｍの被写体の高さ、およびＬｉｖｉｎｇＩｍａｇｅソフトウェアによって決定される自動露光時間の中程度のビニングレベルで、画像収集を行った。ＬｉｖｉｎｇＩｍａｇｅソフトウェアを使用してＢＬＩシグナルを抽出した：目的の領域を各細胞量の周囲に描き、光子強度をｐ／ｓ／ｃｍ２／ｓｒとして記録した。

抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗体ＲＥＧＮ５４５８は、この異種のインビボ腫瘍モデルにおいてＢＣＭＡ^＋ＭＯＬＰ－８－ルシフェラーゼ腫瘍の成長を遅らせた。結果を、以下の表２２に示す。

実施例１５：抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗体は、腫瘍（ＯＰＭ－２）の負荷をインビボでバックグラウンドレベルに低減する
抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗体（Ａｂ）のインビボでの有効性を決定するために、異種腫瘍研究を実施した。０日目に、免疫不全ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃ^ｓｃｉｄＩｌ２ｒｇ^{ｔｍ１Ｗｊｌ}／ＳｚＪ（ＮＳＧ）マウスに、ホタルルシフェラーゼ（ＯＰＭ－２－ルシフェラーゼ細胞）も発現するように設計された２×１０^６個のＢＣＭＡ^＋ＯＰＭ－２ヒト多発性骨髄腫腫瘍細胞を静脈内投与した。１０日目に、マウスに、正常な健常ドナーからの４×１０^６個のヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を腹腔内に注射した。２１日目に、マウス（群当たりｎ＝５）に、ＣＤ３結合対照二重特異性Ａｂ（Ｇ；ｍＡｂ１７６６４Ｄ）を０．４ｍｇ／ｋｇの用量で、ＢＣＭＡ×ＣＤ３（Ｇ；ＲＥＧＮ５４５８）二重特異性Ａｂを０．４ｍｇ／ｋｇで、またはＢＣＭＡ×ＣＤ３（Ｇ２０；ＲＥＧＮ５４５９）二重特異性Ａｂを０．４ｍｇ／ｋｇで投与した。マウスに、これらのＡｂを２５および２８日目にもう２回、合計３回の用量で投与した。麻酔した動物の腫瘍生物発光（ＢＬＩ）を測定することによって、６１日間にわたって腫瘍の成長を評価した。陽性対照として、マウス群（ｎ＝５）には、ＯＰＭ－２－ルシフェラーゼ細胞のみを投与し、ＰＢＭＣまたは抗体は投与しなかった。バックグラウンドＢＬＩレベルを測定するために、マウス群（ｎ＝５）は治療せず、腫瘍、ＰＢＭＣ、または抗体を投与しなかった。ＢＣＭＡ^＋ＯＰＭ－２－ルシフェラーゼ腫瘍は、ＣＤ３結合対照で治療されたマウスで徐々に成長したが、ＲＥＧＮ５４５８およびＲＥＧＮ５４５９によるＢＣＭＡ×ＣＤ３Ａｂ治療は、動物の大多数で腫瘍負荷をバックグラウンドレベルまで減少させた。

異種腫瘍の移植および測定：０日目に、免疫不全ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃ^ｓｃｉｄＩｌ２ｒｇ^{ｔｍ１Ｗｊｌ}／ＳｚＪ（ＮＳＧ）マウスに、ホタルルシフェラーゼ（ＯＰＭ－２－ルシフェラーゼ細胞）も発現するように設計された２×１０^６個のＢＣＭＡ^＋ＯＰＭ－２ヒト多発性骨髄腫腫瘍細胞を静脈内投与した。１０日目に、マウスに、正常な健常ドナーからの４×１０^６個のヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を腹腔内に注射した。２１日目に、マウス（群当たりｎ＝５）に、ＣＤ３結合対照二重特異性Ａｂ（Ｇ；ｍＡｂ１７６６４Ｄ）を０．４ｍｇ／ｋｇの用量で、ＢＣＭＡ×ＣＤ３（Ｇ；ＲＥＧＮ５４５８）二重特異性Ａｂを０．４ｍｇ／ｋｇで、またはＢＣＭＡ×ＣＤ３（Ｇ２０；ＲＥＧＮ５４５９）二重特異性Ａｂを０．４ｍｇ／ｋｇで投与した。マウスに、これらのＡｂを２５および２８日目にもう２回、合計３回の用量で投与した。麻酔した動物の腫瘍生物発光（ＢＬＩ）を測定することによって、６１日間にわたって腫瘍の成長を評価した。陽性対照として、マウス群（ｎ＝５）には、ＯＰＭ－２－ルシフェラーゼ細胞のみを投与し、ＰＢＭＣまたは抗体は投与しなかった。バックグラウンドＢＬＩレベルを測定するために、マウス群（ｎ＝５）は治療せず、腫瘍、ＰＢＭＣ、または抗体を投与しなかった。

ＢＣＭＡ^＋ＯＰＭ－２－ルシフェラーゼ腫瘍は、ＣＤ３結合対照で治療されたマウスで徐々に成長したが、ＲＥＧＮ５４５８およびＲＥＧＮ５４５９によるＢＣＭＡ×ＣＤ３Ａｂ治療は、動物の大多数で腫瘍負荷をバックグラウンドレベルまで減少させた。結果を、以下の表２３に示し、図７に示す。

実施例１６：ＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体は、用量依存的様式でインビボで同系腫瘍の成長を抑制する
抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗体（Ａｂ）のインビボでの有効性を決定するために、ヒトＣＤ３を発現するマウスにおいて同系腫瘍研究を実施した。マウスＣＤ３ｄｅｇ（ＣＤ３－ヒト化マウス）の代わりにヒトＣＤ３ｄｅｇを発現するＣ５７ＢＬ／６マウスに、完全長ヒトＢＣＭＡ（Ｂ１６／ＢＣＭＡ細胞）を発現するように操作された０．５×１０^６個のＢ１６メラノーマ細胞または完全長ヒトＢＣＭＡ（ＭＣ３８／ＢＣＭＡ）を発現するように操作された１×１０^６個のＭＣ３８結腸がん細胞のいずれかを皮下に移植した。次いで、マウス（群当たりｎ＝７）に、ＣＤ３結合対照二重特異性Ａｂ（Ｇ；ｍＡｂ１７６６４Ｄ）を０．４ｍｇ／ｋｇの用量で、またはＢＣＭＡ×ＣＤ３（Ｇ；ＲＥＧＮ５４５８）二重特異性Ａｂを０．４ｍｇ／ｋｇもしくは０．０４ｍｇ／ｋｇの用量で直ちに投与した。マウスに、これらのＡｂを４および７日目にもう２回、合計３回の用量で投与し、腫瘍成長を、実験を通して評価した。Ｂ１６／ＢＣＭＡ腫瘍およびＭＣ３８／ＢＣＭＡ腫瘍は、ＣＤ３結合対照治療マウスで成長したが、ＢＣＭＡ×ＣＤ３ＲＥＧＮ５４５８は、インビボで用量依存的様式で両方の腫瘍株の成長を抑制することができた。

同系腫瘍の移植および測定：マウスＣＤ３ｄｅｇ（ＣＤ３－ヒト化マウス）の代わりにヒトＣＤ３ｄｅｇを発現するＣ５７ＢＬ／６マウスに、完全長ヒトＢＣＭＡ（Ｂ１６ヒト／ＢＣＭＡ細胞）を発現するように操作されている０．５×１０^６個のＢ１６Ｆ１０メラノーマ細胞または完全長ヒトＢＣＭＡ（ＭＣ３８／ＢＣＭＡ）を発現するように操作されている１×１０^６個のＭＣ３８結腸がん細胞のいずれかを皮下に移植した。次いで、マウス（群当たりｎ＝７）に、ＣＤ３結合対照二重特異性Ａｂ（Ｇ；ｍＡｂ１７６６４Ｄ）を０．４ｍｇ／ｋｇの用量で、またはＢＣＭＡ×ＣＤ３（Ｇ；ＲＥＧＮ５４５８）二重特異性Ａｂを０．４ｍｇ／ｋｇもしくは０．０４ｍｇ／ｋｇの用量で直ちに投与した。マウスに、これらのＡｂを４および７日目にもう２回、合計３回の用量で投与し、腫瘍成長を、実験を通して評価した。

同系（ｓｙｎｇｅｎｉｃ）腫瘍成長および阻害の計算：外部キャリパーによって腫瘍体積を決定するために、最大長径（長さｍｍ）および最大横径（幅ｍｍ）を決定した。キャリパー測定値に基づいて、腫瘍体積を、式：体積（ｍｍ^３）＝（長さ×幅^２）／２により計算した。

Ｂ１６／ＢＣＭＡ腫瘍およびＭＣ３８／ＢＣＭＡ腫瘍は、ＣＤ３結合対照治療マウスで成長したが、ＢＣＭＡ×ＣＤ３ＲＥＧＮ５４５８は、インビボで用量依存的様式で両方の腫瘍株の成長を抑制することができた。結果を、以下の表２４に示す。

実施例１７：水素重水素交換によるＢＣＭＡへのＲＥＧＮ５４５８結合のエピトープマッピング
質量分析（ＨＤＸ－ＭＳ）によるＨ／Ｄ交換エピトープマッピングを実施して、ＲＥＧＮ５４５８（ＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体）と相互作用するＢＣＭＡ（組換えヒトＢＣＭＡ、配列番号１１５のアミノ酸配列）のアミノ酸残基を決定した。Ｈ／Ｄ交換法の一般的な説明は、例えば、Ｅｈｒｉｎｇ（１９９９）ＡｎａｌｙｔｉｃａｌＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２６７（２）：２５２－２５９、およびＥｎｇｅｎａｎｄＳｍｉｔｈ（２００１）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．７３：２５６Ａ－２６５Ａを参照されたい。

ＨＤＸ－ＭＳ実験は、統合型ＨＤＸ／ＭＳプラットフォーム上で行われ、これは重水素標識およびクエンチングのためのＬｅａｐｔｅｃＨＤＸＰＡＬシステム、サンプル消化および充填のためのＷａｔｅｒｓＡｃｑｕｉｔｙＭ－Ｃｌａｓｓ（補助溶媒マネジャー）、分析勾配のためのＷａｔｅｒｓＡｃｑｕｉｔｙＭ－Ｃｌａｓｓ（μＢｉｎａｒｙ溶媒マネジャー）、およびペプチド質量測定のためのＴｈｅｒｍｏＱＥｘａｃｔｉｖｅＨＦ質量分析計からなる。

標識溶液は、ｐＤ７．０でＤ_２Ｏ中のＰＢＳバッファーとして調製した（１０ｍＭのリン酸バッファー、１４０ｍＭのＮａＣｌ、および３ｍＭのＫＣｌ、２５℃でｐＨ７．４と等価）。重水素標識のために、１０μＬのｈＢＣＭＡ．ｈＦｃ（ＲＥＧＮ２７４６、５４．５μＭ；配列番号１２０または１：２のモル比でＲＥＧＮ５４５８と予め混合したｈＢＣＭＡ．ｈＦｃ（Ａｇ－Ａｂ複合体））を、複製中の様々な時点（例えば、非重水素化制御＝０秒、５分間および１０分間重水素化標識化された）で、２０℃で９０μＬのＤ_２Ｏ標識溶液を用いてインキュベートした。重水素化反応は、１００μＬの事前に冷却したクエンチ緩衝液（０．５ＭのＴＣＥＰ－ＨＣｌ、８Ｍの尿素および１％ギ酸）を各サンプルに添加して、２０℃で５分間インキュベートすることによりクエンチした。次に、クエンチしたサンプルをオンライン（ｏｎｌｉｎｅ）のペプシン／プロテアーゼＸＩＩＩ消化のためにＷａｔｅｒｓＨＤＸＭａｎａｇｅｒに注入した。消化されたペプチドは、１０％から３２％Ｂ（移動相Ａ：水中０．５％ギ酸、移動相Ｂ：アセトニトリル中０．１％ギ酸）から１３分の勾配でＣ８カラム（１．０ｍｍ×５０ｍｍ、ＮｏｖａＢｉｏａｓｓａｙｓ）によって分離した。溶出したペプチドを、ＱＥｘａｃｔｉｖｅＨＦ質量分析によってＬＣ－ＭＳ／ＭＳまたはＬＣ－ＭＳモードで分析した。

重水素化されていないＢＣＭＡサンプルのＬＣ－ＭＳ／ＭＳデータは、Ｂｙｏｎｉｃ検索エンジン（ＰｒｏｔｅｉｎＭｅｔｒｉｃｓ）を使用して、ＢＣＭＡおよびそのランダム化された配列を含むデータベースに対して検索された。検索パラメータ（ＥＬＮ）は、一般的な変数の変更として非特異的な酵素消化およびヒトのグリコシル化を使用してデフォルトとして設定された。次いで、同定されたペプチドのリストを、ＨＤＸＷｏｒｋｂｅｎｃｈソフトウェア（バージョン３．３）にインポートして、すべての重水素化サンプルからＬＣ－ＭＳによって検出された各ペプチドの重水素取り込みを計算した。所与のペプチドについて、各時点での重心質量（強度加重平均質量）を使用して、重水素取り込み（Ｄ）および重水素取り込みの割合（Ｄ（％））を計算した。

ｈＢＣＭＡ．ｈＦｃからの合計８つのペプチドが、ｈＢＣＭＡ．ｈＦｃのみ、およびＲＥＧＮ５４５８サンプルと複合体を形成したｈＢＣＭＡ．ｈＦｃの両方から同定され、ｈＢＣＭＡの１００％の配列カバレッジを表す。すべてのペプチドの平均標準偏差（ＳＤ）は、１．４％と評価された（詳細な計算はＥＬＮおよびＰａｓｃａｌ，ＢＤｅｔａｌ（２０１２）ＪｏｕｒｎａｌｏｆｔｈｅＡｍｅｒｉｃａｎＳｏｃｉｅｔｙｆｏｒＭａｓｓＳｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ２３（９）：１５１２－１５２１で定義された）。したがって、４．２％（平均ＳＤの３倍）を超えるＤ取り込み値の異なる割合を示した任意のペプチドは、有意に保護されていると定義された。ｈＢＣＭＡ．ｈＦｃの場合、配列番号１０６のアミノ酸１～４３に対応するペプチド（ＭＬＱＭＡＧＱＣＳＱＮＥＹＦＤＳＬＬＨＡＣＩＰＣＱＬＲＣＳＳＮＴＰＰＬＴＣＱＲＹＣＮＡ；配列番号１２１）は、ＲＥＧＮ５４５８によって有意に保護された。ＲＥＧＮ５４５８によるこれらの残基の保護は、ｈＢＣＭＡ．ｍｍＨ（ＲＥＧＮ２７４４、配列番号１０６のアミノ酸配列）を使用して確認された。

実施例１８：抗ＢＣＭＡ抗体との一晩のインキュベーション後の多発性骨髄腫細胞株に対するＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体および追加のＢＣＭＡ抗体のＦＡＣＳ結合アッセイ
フローサイトメトリー分析を利用して、多発性骨髄腫細胞株と抗ＢＣＭＡ抗体との一晩のインキュベーションが表面ＢＣＭＡのレベルに及ぼす影響を決定した。ＭＭ細胞株（Ｈ９２９、Ｍｏｌｐ８、Ｕ２６６、およびＭＭ１．Ｓ）を２回洗浄し、６６．７または６６７ｎＭの抗ＢＣＭＡ抗体を含むＲ１０培地（ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ＋ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ／ｇｌｕｔ）、ＤＡＰＴ（ガンマセクレターゼ阻害剤）、または培地のみで３７℃で培養した。１８時間後、ウェルを、冷ＦＡＣＳ洗浄（ＰＢＳ＋１％濾過ＦＢＳ）で洗浄し、氷上で３０分間、冷染色緩衝液（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ１３０－０９１－２２１）中の６６７ｎＭの同じ抗ＢＣＭＡ抗体に再懸濁した。インキュベーション後、細胞を、冷ＦＡＣＳ洗浄（ＰＢＳ＋１％濾過ＦＢＳ）で２回洗浄し、氷上で適切な抗ヒト二次抗体（抗ｈＩｇＧまたは抗ＨＩＳ）とさらに３０～４５分間インキュベートすることによって、結合した抗体を検出した。インキュベーション後、細胞を洗浄し、１％濾過ＦＢＳを含有する２００μＬの冷ＰＢＳに再懸濁し、ＢＤＦＡＣＳＣａｎｔｏＩＩでフローサイトメトリーによって分析した。染色の倍増は、ＢＣＭＡａｂまたはＤＡＰＴでこれまでに一晩インキュベートした染色細胞のＭＦＩを、培地のみで一晩インキュベートした染色細胞のＭＦＩで割ることによって計算された。

ＢＣＭＡは、酵素ガンマ－セクレターゼによって細胞の表面から急速に切断される。ＤＡＰＴなどのガンマ－セクレターゼ阻害剤で一晩インキュベートすると、ＢＣＭＡの切断が防止され、細胞表面上のＢＣＭＡレベルが上昇する。表２６～２９は、培地のみでインキュベートした細胞と比較した、抗ＢＣＭＡ抗体またはＤＡＰＴで一晩インキュベートした細胞でのＢＣＭＡの蛍光強度中央値（ＭＦＩ）の倍増を報告する。ＤＡＰＴでの一晩のインキュベーションにより、Ｈ９２９、Ｍｏｌｐ８、Ｕ２６６、およびＭＭ．１Ｓで抗ＢＣＭＡ抗体（ＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ｒ５４５８、親ＢＣＭＡ抗体ｍＡｂ１５２８１、およびその他の社内ＢＣＭＡ抗体）によって検出されるＢＣＭＡレベルが、それぞれ、２．３～４倍、２．４～８．６倍、５．３～９．０倍、および１１．９倍増加することが観察された。

注目すべきことに、ＭＭ細胞株を６６．７または６６７ｎＭのＲＥＧＮ５４５８または親の二価抗ＢＣＭＡ抗体ｍＡｂ２１５８１で一晩インキュベートすると、同様にＦＡＣＳによって検出される表面ＢＣＭＡのレベルが増加することが観察され、抗ＢＣＭＡ抗体の結合がガンマセクレターゼによるＢＣＭＡの切断を防止することが示唆された。抗体が細胞株によって異なる表面ＢＣＭＡの増加を誘導し、Ｈ９２９またはＵ２６６と比較してＭｏｌｐ８およびＭＭ１Ｓ細胞では倍率がさらに増加した。この現象は、他の社内ＢＣＭＡ抗体でも観察されたため、ＲＥＧＮ５４５８に限定されなかった。

実施例１９：ＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体の存在下でのヒトおよびカニクイザル形質細胞の自己Ｔ細胞媒介性死滅
刺激されていない自己Ｔ細胞による濃縮ＣＤ１３８^＋ヒトまたはカニクイザル形質細胞の特異的死滅は、フローサイトメトリーによって評価された。ヒトまたはカニクイザルの骨髄穿刺液および血液は、採取から２４時間以内に提供された。ＣＤ１３８^＋形質細胞は、製造業者の取扱説明書に従って、ＥａｓｙＳｅｐＨｕｍａｎＣＤ１３８^＋陽性選択キットを使用した陽性選択によって、骨髄から濃縮された。全血からのＰＢＭＣは、密度分離によって分離された。ＰＢＭＣは、１μＭのＶｙｂｒａｎｔＣＦＤＡ－ＳＥ蛍光追跡色素で標識された。標識後、１×１０^４個の富化ＣＤ１３８^＋形質細胞は、１０：１のＥ：Ｔ比で丸底９６ウェルプレートにＶｙｂｒａｎｔＣＦＤＡ－ＳＥ標識ＰＢＭＣ、およびＲＥＧＮ５４５８、ＣＤ３結合対照ｂｓＡｂ、またはＢＣＭＡ結合対照ｍＡｂの連続希釈で、完全培地中で３７℃で７２時間播種した。培養の最後に、生存しているＣＤ１３８^＋形質細胞を、固定可能なＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ色素および形質細胞特異的細胞表面マーカーを利用してフローサイトメトリーによって分析した。生存率は、対照条件（ＰＢＭＣのみの存在下の形質細胞）に対して正規化された。Ｔ細胞の活性化は、フローサイトメトリーによって評価された。活性化は、ＣＤ２５を発現するＣＤ２^＋／ＣＤ４^＋またはＣＤ２^＋／ＣＤ８^＋／ＣＤ１６^－Ｔ細胞の割合として報告される。Ｔ細胞活性化の割合は、対照条件（ＰＢＭＣのみの存在下の形質細胞）に対して正規化された。

インビトロ研究は、一次ヒトおよびカニクイザルのＴ細胞活性化および自己形質細胞の細胞毒性に対するＲＥＧＮ５４５８または陰性対照（ＢＣＭＡ結合対照ｍＡｂまたはＣＤ３結合対照ｂｓＡｂ）の効果を評価した。各ドナーに対する細胞毒性およびＴ細胞活性化の割合におけるＥＣ_５０値を、表３０に要約する。

ＲＥＧＮ５４５８は、自己Ｔ細胞の存在下でドナー１および２の一次ヒト形質細胞の細胞毒性を濃度依存的様式で媒介し、ＥＣ_５０値は、それぞれ、４２．８ｐＭおよび１９１ｐＭであり、細胞毒性の最大割合は、それぞれ、９１％および８９％であった。並行して、ＲＥＧＮ５４５８は、ドナー１および２からのヒト形質細胞の存在下で、濃度依存的様式でＴ細胞活性化を媒介し、ＣＤ８^＋Ｔ細胞活性化におけるＥＣ_５０値は、それぞれ、２１４ｐＭおよび８６０ｐＭであり、ＣＤ８^＋Ｔ細胞活性化の最大割合は、それぞれ、２％および３６％であった。両方のドナーにおける形質細胞の細胞毒性およびドナー２のみにおけるＣＤ８^＋Ｔ細胞活性化の増加は、ＣＤ３結合対照のナノモル濃度で観察された。いずれかのドナーで試験された濃度のいずれにおいても、ＢＣＭＡ結合対照では細胞毒性またはＴ細胞活性化への影響は観察されなかった。

ＲＥＧＮ５４５８は、両方のドナーにおける濃度依存的様式で一次カニクイザル形質細胞の細胞毒性を媒介し、１．３１ｎＭのＥＣ_５０が、ドナー１について計算されたが、ドナー２についてＥＣ_５０は、決定することができなかった。両方のドナーにおいて、ＲＥＧＮ５４５８での治療により、形質細胞の細胞毒性が増加した（ドナー１および２における細胞毒性の最大割合は、それぞれ、９４％および９１％であった）。並行して、ＲＥＧＮ５４５８は、ドナー１および２からのカニクイザル形質細胞の存在下で濃度依存的様式でＴ細胞活性化を媒介し、ＣＤ４^＋Ｔ細胞活性化についてＥＣ_５０値は、それぞれ、２８．１ｎＭおよび１８．１ｎＭであり、ＣＤ８^＋Ｔ細胞活性化についてＥＣ_５０値は、２２．４ｎＭおよび７６．７ｎＭであった。結果として得られたＴ細胞活性化の最大割合は、ドナー１および２における、ＣＤ４^＋Ｔ細胞においては、それぞれ、９％および１６％であり、ＣＤ８^＋Ｔ細胞においては、それぞれ、１２％および１７％であった。

評価された細胞株のいずれかで試験したいかなる濃度でも、ＢＣＭＡ結合対照では標的細胞の死滅は観察されなかった。ドナー２からの形質細胞の存在下でのいくつかの標的細胞の死滅およびＴ細胞活性化が、ナノモル濃度のＣＤ３結合対照で観察された。

実施例２０：抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗体は、抗ＰＤ－１抗体と相乗的に作用して、インビボで抗腫瘍効果を増強する
ＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体（Ａｂ）がＰＤ－１遮断と相乗作用して、インビボで優れた抗腫瘍効果を提供するかどうかを決定するために、ヒトＣＤ３を発現するマウスにおいて同系腫瘍研究を実施した。結果は、ＲＥＧＮ５４５８とＰＤ－１遮断の組み合わせが、ＲＥＧＮ５４５８またはＰＤ－１遮断単独よりも優れた抗腫瘍効果を提供することを示す。

同系腫瘍の移植および測定：マウスＣＤ３ｄｅｇ（ＣＤ３－ヒト化マウス）の代わりにヒトＣＤ３ｄｅｇを発現するＣ５７ＢＬ／６マウスに、完全長ヒトＢＣＭＡ（ＭＣ３８／ＢＣＭＡ）を発現するように操作されている１×１０^６個のＭＣ３８結腸がん細胞を皮下に移植した。腫瘍を、３日間確立させ、その時点でマウス（群当たりｎ＝６または７）に、４ｍｇ／ｋｇの代理抗マウスＰＤ－１抗体（クローンＲＰＭ１－１４）、または４ｍｇ／ｋｇのアイソタイプ対照Ａｂ（クローン２Ａ３）のいずれかとともに、ＣＤ３結合対照二重特異性Ａｂ（Ｇ；Ｈ４ｓＨ１７６６４Ｄ）を０．４ｍｇ／ｋｇの用量で、ＢＣＭＡ×ＣＤ３（Ｇ；ＲＥＧＮ５４５８）を０．０４ｍｇ／ｋｇまたは０．２４ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。具体的な治療群を、以下の表３１に示す。

マウスに、これらのＡｂを７および１１日目にもう２回、合計３回の用量で投与し、腫瘍成長を、実験を通して評価した。

結果は、ＲＥＧＮ５４５８とＰＤ－１遮断の組み合わせが、ＲＥＧＮ５４５８またはＰＤ－１遮断単独よりも優れた抗腫瘍効果を提供することを示す。特に、結果は、２４日目（すべての治療群のデータが収集された最後の日）に、ＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体と抗ＰＤ－１抗体との組み合わせが腫瘍成長の阻害において統計的に有意な相乗的治療効果をもたらしたことを示した（表３２、０．０４ｍｇ／ｋｇのＢＣＭＡ×ＣＤ３および４ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ－１）。２４日目に、２元配置分散分析を使用すると、（ｉ）ＲＥＧＮ５４５８（０．０４ｍｇ／ｋｇ）＋アイソタイプとＲＥＧＮ５４５８（０．０４ｍｇ／ｋｇ）＋抗ＰＤ－１抗体の組み合わせ（群３対群４）、（ｉｉ）ＲＥＧＮ５４５８（０．２４ｍｇ／ｋｇ）＋アイソタイプとＲＥＧＮ５４５８（０．２４ｍｇ／ｋｇ）＋抗ＰＤ－１抗体の組み合わせ（群５対群６）、（ｉｉｉ）抗ＰＤ－１とＲＥＧＮ５４５８（０．０４ｍｇ／ｋｇ）＋抗ＰＤ－１抗体の組み合わせ（群２対群６）、との間でｐ＜０．０００１であった。２４日目に、２元配置分散分析を使用すると、抗ＰＤ－１とＲＥＧＮ５４５８（０．０４ｍｇ／ｋｇ）＋抗ＰＤ－１抗体の組み合わせ（群２対群４）との間でｐ＝０．０００５であった。ＰＤ－１遮断と組み合わせてＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体（０．２４ｍｇ／ｋｇ）の用量を増やすと、この実験において、低用量の二重特異性抗体およびＰＤ－１遮断に匹敵する腫瘍阻害が得られた。低用量の二重特異性抗体との実証された相乗効果は、低用量の使用が有害な副作用のリスクを低減するため、有利である。同様に、ＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体と抗ＰＤ－１抗体との組み合わせは、表３３に示すように、実験の終了時（２８日目）に、腫瘍のないマウスの数において、二重特異性抗体の両方の用量（０．０４ｍｇ／ｋｇおよび０．２４ｍｇ／ｋｇ）で相乗的な治療効果を示した。

実施例２１：抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗体は、抗ＰＤ－１抗体と相乗的に作用して、インビボで抗腫瘍効果を増強する
群当たりのマウスの数が１０であり、ＢＣＭＡ×ＣＤ３ＲＥＧＮ５４５８の高用量が０．４ｍｇ／ｋｇであったことを除いて、実施例２０において上記で論じられたものと同一である、類似の結果が、第２の実験で得られた。第２の実験における特定の治療群を、以下の表３４に示す。

結果は、ＲＥＧＮ５４５８とＰＤ－１遮断の組み合わせが、ＲＥＧＮ５４５８またはＰＤ－１遮断単独よりも優れた抗腫瘍効果を提供することを示す。特に、結果は、２１日目（すべての治療群のデータが収集された最後の日）に、ＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体と抗ＰＤ－１抗体との組み合わせが腫瘍成長の阻害において相乗的治療効果をもたらしたことを示した（表３５、０．０４ｍｇ／ｋｇのＢＣＭＡ×ＣＤ３および４ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ－１）。２１日目に、２元配置分散分析を使用すると、（ｉ）ＲＥＧＮ５４５８（０．０４ｍｇ／ｋｇ）＋アイソタイプとＲＥＧＮ５４５８（０．０４ｍｇ／ｋｇ）＋抗ＰＤ－１抗体の組み合わせ（群３対群４）、（ｉｉ）抗ＰＤ－１とＲＥＧＮ５４５８（０．０４ｍｇ／ｋｇ）＋抗ＰＤ－１抗体の組み合わせ（群２対群４）、（ｉｉｉ）抗ＰＤ－１とＲＥＧＮ５４５８（０．４ｍｇ／ｋｇ）＋抗ＰＤ－１抗体の組み合わせ（群２対群６）、との間でｐ＜０．０００１であった。実施例２０において上記で論じられたように、ＰＤ－１遮断と組み合わせてＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体（０．４ｍｇ／ｋｇ）の用量を増やすと、この実験において、ＰＤ－１遮断と組み合わせた低用量の二重特異性抗体に匹敵する腫瘍阻害が得られた。低用量の二重特異性抗体との実証された相乗効果は、低用量の使用が有害な副作用のリスクを低減するため、有利である。同様に、ＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体と抗ＰＤ－１抗体との組み合わせは、表３６に示すように、実験の終了時（２５日目）に、腫瘍のないマウスの数において、二重特異性抗体の両方の用量（０．０４ｍｇ／ｋｇおよび０．４ｍｇ／ｋｇ）で相乗的治療効果を示した。

実施例２２：抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗体により多発性骨髄腫を治療する方法
プロテアソーム阻害剤、免疫調節薬、および抗ＣＤ３８抗体治療を含む、すべての治療選択肢を使い果たした再発または難治性の多発性骨髄腫患者を対象において、ＲＥＧＮ５４５８（抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３二重特異性抗体）の安全性、忍容性、予備的抗腫瘍活性、および薬物動態（ＰＫ）のフェーズ１／２試験が実施され、有意義な臨床的利益を示している。

髄外（骨髄外）および非分泌性（検出可能なバイオマーカーを分泌しない）のがん性形質細胞を含む、治療が困難で進行した多発性骨髄腫の患者は、ＲＥＧＮ５４５８プログラムの一部として研究されている。

多発性骨髄腫の臨床試験では、治療評価は骨髄腫タンパク質レベルの低下と骨髄腫細胞の根絶に基づいている。骨髄腫タンパク質の応答の評価は、患者の尿および血液に含まれ、骨髄腫疾患の程度を判断するために使用されるバイオマーカーであるモノクローナル（Ｍ）タンパク質のレベルの低下に基づいている。部分寛解（ＰＲ）は、血清／尿Ｍタンパク質の５０％以上の減少、または関与する遊離軽鎖（ＦＬＣ）レベルと関与しない遊離軽鎖（ＦＬＣ）レベルの差の５０％以上の減少、および軟部組織形質細胞腫の５０％以上の減少として定義される。非常に良好な部分寛解（ＶＧＰＲ）は、血清／尿Ｍタンパク質の９０％以上の減少、または関与するＦＬＣレベルと関与しないＦＬＣレベルの差の９０％以上の減少、軟部組織形質細胞腫の９０％以上の減少、および電気泳動ではなく免疫固定によるＭタンパク質の検出として定義される。完全寛解（ＣＲ）は、血清および尿中の免疫固定によるＭタンパク質の陰性検出、軟部組織形質細胞腫の完全な消失、および骨髄吸引液中の５％未満の形質細胞として定義される。厳密な完全寛解は、完全寛解（上述のとおり）と通常のＦＬＣ比（_Ｋ／λ比≦４：１または_Ｋおよびλ患者の場合は≧１：２）として定義される。骨髄腫細胞の根絶を反映する微小残存病変（ＭＲＤ）は、Ｍタンパク質とは別に測定され、ＭＲＤ陰性は、１００，０００個の骨髄細胞内にがん形質細胞が存在しないこととして定義される。

目的：主要評価項目および副次評価項目の両方が調査される。

この研究の主要な目的は次のとおりである。
（１）研究のフェーズ１部分：安全性、忍容性、および用量制限毒性（ＤＬＴ）を評価し、有意義な臨床的利益をもたらすと期待されるすべての治療選択肢を使い果たした再発または難治性の多発性骨髄腫（ＭＭ）患者における単剤療法としてのＲＥＧＮ５４５８の推奨されるフェーズ２用量レジメン（ＲＰ２ＤＲ）（最大耐用量レジメン［ＭＴＤＲ］または生物学的に有効な用量レジメン［ＢＥＤＲ］）を決定すること。ＲＰ２ＤＲの決定は、安全性、薬物動態（ＰＫ）、ＰＫ／ＰＤ（薬物動態／薬力学）の関係、および有効性に関するデータを含む、非臨床およびすべての臨床データのレビューに基づく。
（２）研究のフェーズ２の部分：客観的応答率（ＯＲＲ）によって測定されるＲＥＧＮ５４５８の予備的な抗腫瘍活性を評価すること。

研究の第２の目的は、次のとおりである（フェーズ１およびフェーズ２の部分）。
（１）応答期間（ＤＯＲ）、無増悪生存期間（ＰＦＳ）、微小残存病変（ＭＲＤ）状態、および全生存期間（ＯＳ）によって測定される、ＲＥＧＮ５４５８の予備的な抗腫瘍活性を評価すること、
（２）ＲＥＧＮ５４５８の（ＰＫ）特性を評価すること、
（３）ＲＥＧＮ５４５８の免疫原性を特徴付けること、
（４）フェーズ１の部分のみ：ＯＲＲによって測定されるＲＥＧＮ５４５８の予備的な抗腫瘍活性を評価すること、ならびに
（５）フェーズ２の部分のみ：ＲＥＧＮ５４５８の安全性および忍容性を評価すること。

研究設計：フェーズ１の部分は、ＲＥＧＮ５４５８の安全性を評価し、単剤療法としてのＲＥＧＮ５４５８のＲＰ２ＤＲ（ＭＴＤＲまたはＢＥＤＲとして定義）を選択するために、２８日間のＤＬＴ観察期間を伴う標準的な４＋３用量漸増設計に従う。

フェーズ２の部分は、ＲＥＧＮ５４５８単剤療法で治療された患者の予備的な抗腫瘍活性、安全性および忍容性、ＰＫ特性、ならびにバイオマーカー応答をさらに評価するためにＲＰ２ＤＲが決定された時点で開始される。

それぞれの患者は、割り当てられた投与レジメンに従って、ＲＥＧＮ５４５８の１６週間（ＱＷ）注入を受け、その後、２週間ごと（Ｑ２Ｗ）にＲＥＧＮ５４５８で１２回の追加投与を受ける。

それぞれの患者は、ＲＥＧＮ５４５８の一次用量を受け、その後、一次用量が十分に許容される場合は名目用量を受ける。ＲＥＧＮ５４５８の一次用量は、割り当てられた用量で分割（ｄｉｖｉｄｅｄ）（分割（ｓｐｌｉｔ））注入（好ましくは２連続日、ただし３日以内の間隔）で投与される。この一次用量が適切に許容される場合、患者は、割り当てられた用量での分割注入として２週目（好ましくは連続日、ただし３日以内）により高い名目用量を受け、３週目以降、名目用量が単回注入として投与される。

用量漸増スキーマは、以前に評価された用量コホートの名目用量と比較して、それぞれの連続する用量コホートの名目用量の約３倍の増加を提供する。同様に、それは、それぞれの連続投与コホートにおいて、第１週の一次用量の約３倍の増加を提供する。しかしながら、用量制限毒性（ＤＬＴ）観察期間において、１人の患者にＤＬＴが発生した場合、または用量コホートの２人以上の患者でグレード２以上の有害事象が発生した場合（治験薬とは明らかに無関係なグレード２以上のＡＥを除く）、それでも用量レジメンは許容できると判断された場合、一次用量と名目用量の漸増は、以前に評価された用量コホートのそれぞれの一次用量および名目用量の２倍（すなわち、１００％増加）以下になる。例えば、ＤＬ２（３ｍｇの一次用量および１０ｍｇの名目用量）の６人または７人の患者で１つのＤＬＴが観察され、用量レジメンが許容できると判断された場合、次の用量コホート（すなわち、ＤＬ３）で一次用量は６ｍｇとなり、名目用量は２０ｍｇとなり、連続用量コホートでのその後の用量漸増は、前の用量コホートの２倍以下となる。

研究期間：それぞれの患者の研究の計画期間は、スクリーニング期間（最大２８日）、治療期間（４０週間）、およびコア追跡期間（約２４週間）を含めて、最大約２４か月になり、その後、永続的な臨床活動と安全性を決定するために、約３６週間の延長された追跡期間が続く（合計で約６０週間の追跡期間）。

研究対象集団：
フェーズ１の部分：４＋３の設計に従って、それぞれの用量コホートに最大７人のＤＬＴ評価可能な患者を登録できる。指定された用量レベル（ＤＬ）の投与レジメンが許容可能であると判断され、最大耐用量（ＭＴＤ）を超えていない場合、それぞれのＤＬに最大３人の患者の追加登録を開始できる（それぞれのＤＬにおいて合計で最大１０人の患者）。これらの用量漸増コホートの実際のサンプルサイズは、ＤＬＴが記録されている観察された患者の数、実施されたＤＬの数、および脱落した患者の数によって異なる。

フェーズ２の部分：安全性および有効性について評価可能な約１０～１４人の患者。これらの患者の分析は、フェーズ１の部分でＲＰ２ＤＲで治療された６～１０人の患者の分析と組み合わされ、ＲＰ２ＤＲで治療された合計２０人の患者が得られる。この研究では、疾患の再発、治療抵抗性疾患、または治療の不耐性もしくは拒否のいずれかを通じて、有意義な臨床的利益をもたらすと期待されるすべての治療選択肢を使い果たしたＭＭ患者を登録する。さらに、それぞれの患者は、抗ＣＤ３８抗体、プロテアソーム阻害剤、および免疫調節薬（ＩＭｉＤ）を含む、少なくとも３つの前治療ラインの後に進行している必要がある。患者が以前に抗ＣＤ３８抗体で治療されており、ＩＭｉＤおよびプロテアソーム阻害剤の両方に難治性であることが示された場合、３つ未満の以前の治療ラインが投与されたとしても、患者は研究の対象となる可能性がある。難治性疾患は、最後の治療から６０日以内のＭＭの応答の欠如または再発として定義される。

選択基準－患者は、治験に含まれるのに適格であるために以下の基準を満たさなければならない。
１．１８歳以上
２．米国東海岸がん臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）パフォーマンスステータス≦１
効果的な治療の結果としてＥＣＯＧステータスが改善すると予想される、ＥＣＯＧの２パフォーマンスステータスの患者の個々の症例は、潜在的な登録について医療モニターと議論できる。
３．国際骨髄腫ワーキンググループ（ＩＭＷＧ）の診断基準による活動性ＭＭの診断の確認。
４．患者は、骨髄腫関連の臓器損傷または組織機能障害（高カルシウム血症、腎不全、骨溶解性病変、または貧血など）を伴う症候性骨髄腫を試験開始時に有している必要がある。
５．患者は、モノクローナル成分の血清もしくは尿の評価、または血清の分析（ＦＬＣ）のいずれかによって測定可能な骨髄腫を有している必要がある
測定可能な疾患は、以下のうちの１つ以上として定義される。
ａ．血清Ｍタンパク質≧１ｇ／ｄＬ、
ｂ．尿中Ｍタンパク質≧２００ｍｇ／２４時間、および／または
ｃ．血清ＦＬＣ比が異常である、含まれるＦＬＣレベルが１０ｍｇ／ｄＬ以上のＦＬＣアッセイ
－免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）骨髄腫を患っているが、測定可能なＭタンパク質を有しない患者は、定量的ＩｇＡレベルが上昇し、長期的に追跡できる場合に登録される可能性がある
－非分泌性ＭＭの患者は、ＩＭＷＧガイドラインに従った応答評価の計画の実現可能性を含め、治験依頼者と話し合った後、登録を検討される場合がある。
６．ＩＭＷＧ基準に基づく疾患の進行
７．疾患の再発、治療難治性疾患、または治療の不耐性もしくは拒否のいずれかを通じて、有意義な臨床的利益をもたらすと期待されるすべての治療選択肢を使い果たし、以下のいずれかを含むＭＭ患者：
ａ．少なくとも３系統の進行中もしくはその後の進行、またはプロテアソーム阻害剤、ＩＭｉＤ、および抗ＣＤ３８抗体を含む治療の不耐性、あるいは
ｂ．抗ＣＤ３８抗体において進行中もしくはその後に進行し、かつプロテアソーム阻害剤およびＩＭｉＤに対して「二重難治性」、または治療不耐性である疾患を有する。抗ＣＤ３８抗体は、単独で、またはプロテアソーム阻害剤などの別の薬剤と組み合わせて投与された可能性がある。難治性疾患は、最後の治療から６０日以内の応答の欠如または再発として定義される。
８．以下によって測定される適切な血液学的機能：
ａ．血小板数＞５０×１０^９／Ｌ。この血小板適格性要件を満たすために、患者は７日以内に血小板輸血を受けていない可能性がある。
ｂ．ＡＮＣ＞１．０×１０^９／Ｌ患者は、この好中球絶対数の適格性要件を満たすために、２日以内に顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）を投与されていない可能性がある。
ｃ．ヘモグロビン＞８．０ｇ／ｄＬ
９．次のように定義される適切な肝機能：
ａ．総ビリルビン≦１．５×ＵＬＮ
ｂ．トランスアミナーゼ（ＡＬＴ、ＡＳＴ）≦２．５×ＵＬＮ
ｃ．アルカリホスファターゼ≦２．５×ＵＬＮ
－ジルベール症候群の患者は、総ビリルビンがベースライン値から変化しない限り、この総ビリルビン要件を満たす必要はない。
１０．Ｃｏｃｋｃｒｏｆｔ－Ｇａｕｌｔによる血清クレアチニンクリアランス＞３０ｍＬ／分
－測定されたクレアチニンクリアランス（２４時間の採尿または他の信頼できる方法に基づく）が＞３０ｍＬ／分の場合、適格基準を満たさないＣｏｃｋｃｒｏｆｔ－Ｇａｕｌｔによるクレアチニンクリアランスのある患者が登録の対象となる可能性がある。
１１．以前にＣＡＲＴ療法または遺伝子治療製品で治療された場合、患者はこの療法の毒性から回復している必要がある
１２．少なくとも６か月の平均余命
１３．プロトコールスケジュールに従った骨髄の連続評価を含む、診療所への来院および研究関連の手順を進んで遵守する能力
－骨髄穿刺および生検、または悪性形質細胞が浸潤した他の組織は、悪性細胞のＢＣＭＡレベルの評価のためのスクリーニングで提供されなければならないが、登録前にＢＣＭＡレベルの実証は必要ない。
１４．研究患者によって署名されたインフォームドコンセントを提供する
１５．研究関連のアンケートを理解し、すべての項目を埋める能力。

除外基準－以下の基準のいずれかを満たす患者は治験から除外される。
１．形質細胞白血病、ワルデンストレームマクログロブリン血症（リンパ形質細胞性リンパ腫）、またはＰＯＥＭＳ症候群（多発性神経障害、臓器腫大、内分泌障害、モノクローナルタンパク質、および皮膚の変化）の存在
２．既知のＭＭ脳病変またはＭＭを伴う髄膜障害のある患者（中枢神経系（ＣＮＳ）骨髄腫が疑われる場合は、必要に応じて、Ｘ線画像および／または腰椎穿刺によって除外する必要がある）
３．神経変性状態またはＣＮＳ運動障害の病歴
４．心エコー図またはマルチゲート収集（ＭＵＧＡ）スキャンによる心臓駆出率＜４０％。
５．治験薬の開始から７２時間以内に、１日当たり１０ｍｇを超えるプレドニゾンまたは抗炎症同等物による継続的な全身性コルチコステロイド治療
６．複製の可能性があるベクターによる、最初の治験薬物投与の前の２８日以内のワクチン接種
７．５半減期内または治験薬の最初の投与前２８日以内のいずれか短い方の全身の、標準または治験中の抗骨髄腫療法による治療
８．抗ＢＣＭＡ抗体（抗体薬物コンジュゲートまたは二重特異性抗体を含む）またはＢＣＭＡ指向のＣＡＲＴ療法による前治療
９．治験薬の最初の投与から２週間以内に入院またはＩＶ抗感染薬による治療を必要とする感染症
１０．ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）もしくはＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染による制御不能の感染；または他の制御不能の感染
ａ．感染を制御しているＨＩＶ（自発的にまたは安定した抗ウイルスレジメンで検出不能なウイルス負荷および３５０細胞／マイクロリットルを超えるＣＤ４カウント）を有する患者は許可される。
ｂ．感染を制御（検出限界未満である血清ＨＢＶＤＮＡポリメラーゼ連鎖反応［ＰＣＲ］、かつＢ型肝炎の抗ウイルス療法を受けている）しているＢ型肝炎（Ｂ型肝炎表面抗原検査陽性［ＨｅｐＢｓＡｇ＋］）の患者は許可される。
ｃ．ＨＣＶ抗体陽性（ＨＣＶＡｂ＋）であり、制御された感染（自発的に、または抗ＨＣＶ療法の成功した以前の経過に応じてＰＣＲによって検出不能なＨＣＶＲＮＡ）を有する患者は許可される。
１１．以前の抗体治療に起因する重症のアレルギー反応または急性過敏反応の記録された病歴
－重度のアレルギー反応は、この目的のために、ＣＴＣＡＥｖ５．０グレード３またはグレード４の重症度の基準を満たしているものとして（すなわち、気管支痙攣を特徴とする；または生命を脅かす結果；またはＩＶ介入、他の緊急介入を必要とする、または臨床的後遺症のための入院）、あるいは緊急治療室への訪問が必要であるとして定義される。
１２．テトラサイクリン抗生物質群のいずれかの化合物に対する過敏症の病歴（治験薬材料に微量成分が存在する可能性があるための注意）
１３．アロプリノールおよびラスブリカーゼの両方に対する過敏症が確認されている
１４．いずれかの時間の同種幹細胞移植の病歴、または試験治療開始から１２週間以内の自家幹細胞移植の病歴
１５．治験依頼者による事前の承認がない限り、臨床現場治験チームのメンバーまたはその近親者
１６．血清ベータヒト絨毛性ゴナドトロピン（β－ｈＣＧ）妊娠検査が陽性の出産の可能性（ＷＯＣＢＰ）のある女性は、この研究には不適格である。
１７．司法当局または行政当局のいずれかによって発行された命令によって施設に献身している患者
１８．妊娠中または授乳中の女性
１９．最初の投与前／最初の治療の開始前、治験中、および最後の投与後少なくとも６か月間、非常に効果的な避妊法を実践することを望まない、出産の可能性がある女性＊または男性＊＊。
＊女性のための非常に効果的な避妊法は次を含む：
ａ．スクリーニング前の２回以上の月経周期の排卵阻害に関連する組み合わされた（エストロゲンおよびプロゲストゲン含有）ホルモン避妊（経口、膣内、経皮）またはプロゲストゲンのみのホルモン避妊（経口、注射、埋め込み）の安定した使用、
ｂ．子宮内デバイス（ＩＵＤ）、子宮内ホルモン放出システム（ＩＵＳ）
ｃ．両側卵管結紮
ｄ．精管切除されたパートナー（男性の精管切除されたパートナーが研究参加者の唯一の性的パートナーであり、パートナーが手術の外科的成功の医学的評価を得ている場合）
ｅ．および／または性的禁欲†、‡。
出産の可能性のある女性は、恒久的に不妊でない限り、初潮後、閉経後になるまで出生力のある女性と定義される。永久避妊法としては、子宮摘出術、両側卵管切除術、両側卵巣摘出術などが挙げられる。
閉経後の状態は、代替の医学的原因なしに１２か月間月経がないことと定義される。閉経後の範囲の高い卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）レベルは、ホルモン避妊薬またはホルモン補充療法を使用していない女性の閉経後の状態を確認するために使用できる。しかしながら、１２か月の無月経がない場合、閉経後の状態の発生を判断するには、１回のＦＳＨ測定では不十分である。
＊＊精管切除（外科的成功について医学的に評価されている）を除いて、男性に対する非常に効果的な避妊手段には、コンドームまたは性的禁欲が含まれる†、‡。
†性的禁欲は、試験治療に関連するリスクの全期間中に異性間性交を控えると定義される場合のみ、非常に効果的な方法とみなされる。性的禁欲の信頼性は、臨床試験の期間と患者の好ましい通常のライフスタイルに関連して評価する必要がある。
‡定期禁欲（カレンダー、徴候体温法、排卵後法）、抜去（膣外射精）、殺精子剤のみ、および授乳性無月経法（ＬＡＭ）は、許容される避妊法ではない。女性用コンドームおよび男性用コンドームは一緒に使用されるべきではない。

治療：ＩＶ注入用のＲＥＧＮ５４５８は、治験依頼者から無菌の使い捨てバイアルに入った液体として提供される。それぞれのバイアルには、１０ｍｇ／ｍＬの濃度でＲＥＧＮ５４５８が含まれる。

薬剤師またはその他の資格のある個人がそれぞれのサイトで特定され、ＲＥＧＮ５４５８の投与準備が行われる。

一次用量と第１の名目用量については、治療は２回の別々の４時間注入として、できれば２連続日、ただし３日以内の間隔（例えば、１週目１日目と１週目２日目）で投与される。単回注入として投与される第１の名目用量は、４時間にわたって投与される。この注入がどのグレードのＣＲＳまたはＩＲＲイベントなしでも十分に認容される場合、その後のＲＥＧＮ５４５８注入は、研究者の臨床判断に従って２時間に短縮される可能性がある。この２時間のＲＥＧＮ５４５８注入が、どのグレードのＣＲＳまたはＩＲＲイベントなしでも十分に認容される場合、その後のＲＥＧＮ５４５８注入は、研究者の臨床判断に従って１時間に短縮される可能性がある。その後、ＲＥＧＮ５４５８のそれぞれの用量は、ＣＲＳまたはＩＲＲイベントの非存在に関連するＩＶ注入期間で投与することができる。

患者が一次用量および最初の名目用量を受けた後の治療は、単回注入として投与され得る。治験責任医師は、用量を２日間にわたって２回の別々の注入に分割することを選択できる（好ましくは連続的であるが、３日以内の間隔で）。

それぞれの患者が受けるＲＥＧＮ５４５８の用量は、ＤＬコホートの割り当てに従う。それぞれのＤＬで投与される用量は固定用量であり、患者の体重または体表面積（ＢＳＡ）に依存しない。

評価項目の調査：
フェーズ１の部分では、調査の主要評価項目は次のとおりである。
（１）最初の投与からＤＬＴ観察期間の終了までのＤＬＴの発生率、ならびに
（２）ＲＥＧＮ５４５８治療期間中および最後の投与から１４か月後までの、治療に起因する有害事象（ＴＥＡＥ）および特に注目すべき有害事象（ＡＥＳＩ）の発生率と重症度。

フェーズ２の部分では、研究の主要評価項目は、最後の投与から１４か月後までの国際骨髄腫ワーキンググループ（ＩＭＷＧ）基準を使用して測定されたＯＲＲである。

副次評価項目は次のとおりである（フェーズ１およびフェーズ２の部分）。
（１）経時的な血清中のＲＥＧＮ５４５８の濃度、
（２）ＲＥＧＮ５４５８に対する治療に起因する抗薬物抗体（ＡＤＡ）の経時的な発生率、
（３）最後の投与から１４か月後までのＩＭＷＧ基準を使用したＤＯＲ、
（４）最後の投与から１４か月後までＩＭＷＧ基準を使用して測定されたＰＦＳ、
（５）最後の投与から１４か月後までのＩＭＷＧ基準を使用したＭＲＤ陰性状態の割合、
（６）最後の投与から１４か月後までのＯＳ
（７）フェーズ１部分のみ－最後の投与から１４か月後までＩＭＷＧ基準を使用して測定されたＯＲＲ、ならびに
（８）フェーズ２の部分のみ－最後の投与から１４か月後までのＲＥＧＮ５４５８治療期間中のＴＥＡＥおよびＡＥＳＩの発生率と重症度。

手順および査定：
スクリーニングのみ：人口統計、完全な身体検査、身長、医学および腫瘍学の病歴、改訂された国際病期分類システム（ＩＳＳ）ステージ（染色体異常およびβ２－ミクログロブリンを含む）、脳磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、心エコー図またはマルチゲート取得スキャン（ＭＵＧＡ）、ＨＩＶ／ＨＢＶ／ＨＣＶ検査、プロトロンビン時間（ＰＴ）（国際標準比［ＩＮＲ］）、およびａＰＴＴ／ＰＴＴ。

安全性：バイタルサイン、限定された身体検査、体重、心電図、ＥＣＯＧステータス、検査室評価、有害事象（ＡＥ）、併用薬（ＣＭ）。

有効性：血清タンパク質電気泳動（ＳＰＥＰ）、尿タンパク質電気泳動（ＵＰＥＰ）、２４時間尿サンプル、血清および尿免疫固定、無血清軽鎖（ＦＬＣ）検査、骨髄吸引／生検、免疫グロブリン定量（免疫グロブリンＡ［ＩｇＡ］、免疫グロブリンＭ［ＩｇＭ］、免疫グロブリンＧ［ＩｇＧ］、免疫グロブリンＤ［ＩｇＤ］、免疫グロブリンＥ［ＩｇＥ］）、髄外性形質細胞腫評価（該当する場合、臨床検査による測定、および／または放射線検査［バイオプシーは任意選択］）、骨格評価。

血清中の薬物濃度分析およびＡＤＡ評価のための血液サンプルが収集される。

統計計画：
フェーズ１の部分：４＋３の設計に従って、それぞれの用量コホートに最大７人のＤＬＴ評価可能な患者を登録できる。指定されたＤＬの投与レジメンが許容可能であると判断され、ＭＴＤを超えていない場合、それぞれのＤＬに最大３人の患者の追加登録を開始できる（それぞれのＤＬにおいて合計で最大１０人の患者）。これらの用量漸増コホートの実際のサンプルサイズは、ＤＬＴが記録されている観察された患者の数、実施されたＤＬの数、および脱落した患者の数によって異なる。

フェーズ２の部分：２０人の患者のサンプルサイズは、ＲＰ２ＤＲで治療された患者におけるＲＥＧＮ５４５８の安全性と予備的な抗腫瘍活性をさらに調査するための臨床的考察に基づいて決定される。フェーズ１では、ＲＰ２ＤＲで６～１０人の患者が治験薬を投与され、これらは分析用の２０人の患者の合計サンプルサイズに貢献する。安全性および有効性について評価可能な残りの１０～１４人の患者は、フェーズ２の部分に登録される。

登録の一時停止と安全性レビューのフェーズ２条件：ＲＰ２ＤＲでの忍容性をさらに評価するために、フェーズ１とフェーズ２の部分からＲＰ２ＤＲで治療された患者で許容できない毒性（ｃＵＴ）を経験する患者の累積数の割合を推定する。停止限界は、片側８０％信頼区間（ＣＩ）の下限を利用する頻度主義区間に基づいて含まれる。推定ｃＵＴの片側８０％ＣＩの下限が２０％を除外した場合、フェーズ２部分への登録は一時停止される。

この評価は、フェーズ１およびフェーズ２の部分でＲＰ２ＤＲで治療された最初の１２人の患者に対して実行される。評価は、フェーズ１とフェーズ２の部分で、ＲＰ２ＤＲで治療された最初の１６人の患者（すなわち、４人の追加の患者が登録されたとき）に対して繰り返される。ｃＵＴの割合が２０％を除外する場合（すなわち、ＲＰ２ＤＲで治療された最初の１２人の患者のうち４人以上の患者が許容できない毒性を有しているか、最初の１６人の患者のうち５人以上の患者が許容できない毒性を有している）、フェーズ２部分へのさらなる登録が一時停止される。１２人の患者を登録する前に４人の患者が許容できない毒性を有していることが観察された場合、または１６人の患者を登録する前に５人の患者が許容できない毒性を有していることが観察された場合、フェーズ２部分へのさらなる登録も一時停止される。

予備的結果：全身療法の５つの以前の系統の中央値（範囲、２～１７；３３人の患者（６７．３％）を有していた４９人の患者（年齢中央値６４；３１％が７０歳以上）は以前に自家幹細胞移植を受けた。試験開始時の多発性骨髄腫免疫サブタイプには、免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｇ（２１患者、４２．９％）、ＩｇＡ（１１患者、２２．４％）、ラムダ軽鎖（１１患者、２４．４％）、およびカッパ軽鎖（６患者、１２．２％）が含まれていた。すべての患者は抗ＣＤ３８抗体に難治性であり、すべての％は少なくとも三重難治性であり、３０．６％は四重難治性であり、５７．１％は五重難治性であった。患者の８０％はカルフィルゾミブに難治性であり、９２％はポマリドミドに難治性であった。患者は、６つの用量レベルで３ｍｇ～９６ｍｇのＲＥＧＮ５４５８を投与されたコホートで治療された。追跡期間の中央値は２．６３（範囲０．５～１３．４）か月であった。大多数（６３％）は、ＩＩの改訂された国際病期分類システム（ＩＳＳ）ステージを有していた。

最も一般的な有害事象（ＡＥ）は、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ；３８．８％）、貧血（３６．７％）、倦怠感（３４．７％）、悪心（３１％）、発熱（３１％）、および腰痛（２７％）であった。グレード３以上のＡＥは患者の４３％で発生し、最も一般的なのは貧血（２２．４％）、好中球減少症（１４．３％）、およびリンパ球減少症（１２．２％）であった。最も一般的な重篤な有害事象は、感染症（２０．４％）およびＣＲＳ（１２．２％）によるものであった。グレード３以上のＣＲＳを経験した患者はなく、患者の４０％未満がＣＲＳを経験した。ＣＲＳは主に治療の最初の週に発生し、患者の３３％でグレード１、患者の６％でグレード２であった。ＣＲＳと用量レベルの間に相関関係は観察されなかった。グレード３以上の神経毒性を経験した患者はいなかった。

客観的奏功率（ＯＲＲ）はすべての用量レベルで３８．８％（用量レベル１～３で２９．２％、用量レベル４および５で４１．２％、用量レベル６で６２．５％）であり、応答者の９５％が少なくとも非常に良好な部分奏功（ＶＧＰＲ）を達成し、４２．１％が完全奏功（ＣＲ）または厳密なＣＲを有した。７人中４人（５７％）の評価可能な患者は、１０^－５の感度で最小残存病変（ＭＲＤ）陰性状態を達成した。免疫組織化学によって評価されるとき、腫瘍反応はコア生検におけるＢＣＭＡ発現によって影響を受けなかった。応答者の合計６３．２％が４か月以上の応答期間（ＤＯＲ）を有し、応答者の５２．６％が６か月以上のＤＯＲを有し、応答者の３６．８％が８か月以上のＤＯＲを有していた。観察された奏効期間の中央値は６．０１か月であった。応答は早期に発生し（ほとんどは４週目まで）、時間とともに深まった。６か月以上の追跡を行った応答患者のうち、８３％（１０／１２）が最大１３か月間継続的な応答を示した。現在までに、応答者の７４％が継続的な治療を受けている。髄外性形質細胞腫（ＥＭＰ）のある患者のＯＲＲは１４．３％であったが、ＥＭＰのない患者のＯＲＲは４５％で、２０％の完全奏効または厳密な完全奏効、および２２．５％の非常に良好な部分奏効を含んだ。骨髄性形質細胞症が５０％未満の患者のＯＲＲは７１．４％であったが、骨髄性形質細胞症が５０％以上の患者のＯＲＲは９．１％であった。骨髄性形質細胞症が５０％未満の患者のうち、３５．７％が厳密な完全奏効を達成し、３５．７％が非常に良好な部分奏効を達成した。全体的な健康状態／生活の質の有意義な改善が４週目に観察され、２４週目（現在まで）まで維持された。免疫組織化学によって評価されるとき、腫瘍応答はＢＣＭＡ発現と相関していなかった。観察された応答の要約を以下の表３７に示す。

したがって、本明細書に記載の二重特異性抗体は、多発性骨髄腫などのＢＣＭＡ発現がんに苦しむヒト対象、特に以前の治療に抵抗性である（例えば、三重、四重、または五重抵抗性）か、または以前の治療後に再発した対象を治療するために、分割された用量（例えば、１週目と２週目）または単回注入（例えば、３週目以降）のいずれかとして１週間に１回投与される少なくとも３ｍｇの用量で、使用できると考えられる。

本発明は、本明細書に記載される具体的な実施形態によって範囲が限定されるべきではない。実際、本明細書に記載されるものに加えて本発明の様々な変更が前述の記載から当業者には明らかとなるであろう。そのような変更は、添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図されている。

Claims

ＢＣＭＡ＋がんの治療を必要とする対象においてＢＣＭＡ＋がんを治療する方法であって、標的腫瘍細胞上のヒトＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインと、ヒトＣＤ３に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインと、を含む二重特異性抗体を前記対象に投与することを含み、前記二重特異性抗体が、少なくとも１週間に１ｍｇの用量で前記対象に投与される、方法。
前記ＢＣＭＡ＋がんが、多発性骨髄腫である、請求項１に記載の方法。
前記第１の抗原結合ドメインが、
（ａ）配列番号６６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）内に含まれる３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）、および
（ｂ）配列番号８２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）内に含まれる３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）、を含む、請求項１または２に記載の方法。
前記第１の抗原結合ドメインが、配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、を含む、請求項３に記載の方法。
前記第１の抗原結合ドメインが、配列番号８４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号８６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号８８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、を含む、請求項３または４に記載の方法。
前記第１の抗原結合ドメインが、配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ、および配列番号８２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ、を含む、請求項３に記載の方法。
前記第２の抗原結合ドメインが、
（ａ）配列番号９０または配列番号９８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）内に含まれる３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）、および
（ｂ）配列番号８２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）内に含まれる３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）、を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
前記第２の抗原結合ドメインが、
（ａ）配列番号９２または配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号９４または配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、および
（ｃ）配列番号９６または配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、を含む、請求項７に記載の方法。
前記第２の抗原結合ドメインが、配列番号８４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号８６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号８８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、を含む、請求項７または８に記載の方法。
前記第２の抗原結合ドメインが、
（ａ）配列番号９２、９４、９６のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３ドメイン、および配列番号８４、８６、８８のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３ドメイン、または
（ｂ）配列番号１００、１０２、１０４のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３ドメイン、および配列番号８４、８６、８８のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３ドメイン、を含む、請求項９に記載の方法。
前記第２の抗原結合ドメインが、
（ａ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ、および配列番号８２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ、または
（ｂ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ、および配列番号８２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ、を含む、請求項１０に記載の方法。
前記抗体が、
（ａ）配列番号６８、７０、７２のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３ドメイン、および配列番号８４、８６、８８のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３ドメイン、を含む、第１の抗原結合ドメイン、ならびに
（ｂ）配列番号９２、９４、９６のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３ドメイン、および配列番号８４、８６、８８のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３ドメイン、を含む、第２の抗原結合ドメイン、を含む、請求項１に記載の方法。
前記抗体が、
（ａ）配列番号６８、７０、７２のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３ドメイン、および配列番号８４、８６、８８のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３ドメイン、を含む、第１の抗原結合ドメイン、ならびに
（ｂ）配列番号１００、１０２、１０４のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３ドメイン、および配列番号８４、８６、８８のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３ドメイン、を含む、第２の抗原結合ドメイン、を含む、請求項１に記載の方法。
前記抗体が、
（ａ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ、および配列番号８２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ、を含む、第１の抗原結合ドメイン、ならびに
（ｂ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ、および配列番号８２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ、を含む、第２の抗原結合ドメイン、を含む、請求項１２に記載の方法。
前記抗体が、
（ａ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ、および配列番号８２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ、を含む、第１の抗原結合ドメイン、ならびに
（ｂ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ、および配列番号８２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ、を含む、第２の抗原結合ドメイン、を含む、請求項１３に記載の方法。
前記抗体が、
（ａ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、１２２、および１２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣＶＲのＣＤＲ、ならびに配列番号１０、２６、４２、５８、７４、８２、１２３、および１２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣＶＲのＣＤＲ、を含む、第１の抗原結合ドメイン、ならびに
（ｂ）ヒトＣＤ３に特異的に結合する第２の抗原結合ドメイン、を含む、請求項１に記載の方法。
前記第１の抗原結合ドメインが、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、１２２／１２３、１２４／１２５、２／８２、１８／８２、３４／８２、５０／８２、６６／８２、１２２／８２、および１２４／８２からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列の対からのＣＤＲを含む、請求項１６に記載の方法。
前記第１の抗原結合ドメインが、それぞれ、配列番号４－６－８－１２－１４－１６、２０－２２－２４－２８－３０－３２、３６－３８－４０－４４－４６－４８、５２－５４－５６－６０－６２－６４、６８－７０－７２－７６－７８－８０、４－６－８－８４－８６－８８、２０－２２－２４－８４－８６－８８、３６－３８－４０－８４－８６－８８、５２－５４－５６－８４－８６－８８、および６８－７０－７２－８４－８６－８８からなる群から選択されるＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３ドメインを含む、請求項１７に記載の方法。
前記第１の抗原結合ドメインが、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、１２２／１２３、１２４／１２５、２／８２、１８／８２、３４／８２、５０／８２、６６／８２、１２２／８２、および１２４／８２からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列の対を含む、請求項１８に記載の方法。
前記第２の抗原結合ドメインが、配列番号９０／８２および９８／８２からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列の対のＣＤＲを含む、請求項１６～１９のいずれか一項に記載の方法。
前記二重特異性抗体が、ヒトＩｇＧ重鎖定常領域を含む、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法。
前記二重特異性抗体が、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む定常領域を含む第１の重鎖を含む、請求項２１に記載の方法。
前記二重特異性抗体が、配列番号１３１のアミノ酸配列を含む定常領域を含む第２の重鎖を含む、請求項２１または２２に記載の方法。
前記二重特異性抗体が、配列番号１２６のアミノ酸配列を含む第１の重鎖、配列番号１２７または配列番号１２８のアミノ酸配列を含む第２の重鎖、および配列番号１２９のアミノ酸配列を含む共通の軽鎖、を含む、請求項１～２３のいずれか一項に記載の方法。
前記ヒトＩｇＧ重鎖定常領域が、アイソタイプＩｇＧ１である、請求項２１に記載の方法。
前記ヒトＩｇＧ重鎖定常領域が、アイソタイプＩｇＧ４である、請求項２１に記載の方法。
前記二重特異性抗体が、同じアイソタイプの野生型ヒンジと比較してＦｃγ受容体結合を減少させるキメラヒンジを含む、請求項２５または２６に記載の方法。
多発性骨髄腫の治療を必要とする対象において多発性骨髄腫を治療する方法であって、前記方法は、ヒトＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインを含む、第１の重鎖および共通の軽鎖の対と、ヒトＣＤ３に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインを含む第２の重鎖および共通の軽鎖の対と、を含む、二重特異性抗体を前記対象に投与することを含み、前記第１の抗原結合ドメインが、それぞれ配列番号６８、７０、７２、８４、８６、および８８のアミノ酸配列を含む、３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と３つの軽鎖ＣＤＲとを含み、前記第２の抗原結合ドメインが、それぞれ配列番号９２、９４、９６、８４、８６、および８８のアミノ酸配列を含む、３つの重鎖ＣＤＲと３つの軽鎖ＣＤＲとを含み、前記二重特異性抗体が少なくとも１週間に１ｍｇの用量で前記対象に投与される、方法。
前記第１の重鎖が、配列番号６６のアミノ酸配列を含む第１の重鎖可変領域を含み、前記第２の重鎖は、配列番号９０のアミノ酸配列を含む第２の重鎖可変領域を含み、前記共通の軽鎖は、配列番号８２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項２８に記載の方法。
前記第１の重鎖が、配列番号１２６のアミノ酸配列を含み、前記第２の重鎖は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、前記共通の軽鎖は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含む、請求項２９に記載の方法。
多発性骨髄腫の治療を必要とする対象において多発性骨髄腫を治療する方法であって、前記方法は、ヒトＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインを含む、第１の重鎖および共通の軽鎖の対と、ヒトＣＤ３に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインを含む、第２の重鎖および共通の軽鎖の対と、を含む、二重特異性抗体を前記対象に投与することを含み、前記第１の抗原結合ドメインが、それぞれ配列番号６８、７０、７２、８４、８６、および８８のアミノ酸配列を含む、３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と３つの軽鎖ＣＤＲとを含み、前記第２の抗原結合ドメインが、それぞれ配列番号１００、１０２、１０４、８４、８６、および８８のアミノ酸配列を含む、３つの重鎖ＣＤＲと３つの軽鎖ＣＤＲとを含み、前記二重特異性抗体が少なくとも１週間に１ｍｇの用量で前記対象に投与される、方法。
前記第１の重鎖が、配列番号６６のアミノ酸配列を含む第１の重鎖可変領域を含み、前記第２の重鎖は、配列番号９８のアミノ酸配列を含む第２の重鎖可変領域を含み、前記共通の軽鎖は、配列番号８２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項２８に記載の方法。
前記第１の重鎖が、配列番号１２６のアミノ酸配列を含み、前記第２の重鎖は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、前記共通の軽鎖は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含む、請求項２９に記載の方法。
第２の治療剤または治療レジメンを投与することをさらに含む、請求項１～３３のいずれか一項に記載の方法。
前記第２の治療剤または治療レジメンが、化学療法薬、ＤＮＡアルキル化剤、免疫調節剤、プロテアソーム阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、放射線療法、幹細胞移植、異なる腫瘍細胞表面抗原およびＴ細胞または免疫細胞抗原と相互作用する異なる二重特異性抗体、抗体薬物コンジュゲート、抗腫瘍剤にコンジュゲートした二重特異性抗体、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、もしくはＣＴＬＡ－４チェックポイント阻害剤、またはそれらの組み合わせを含む、請求項３４に記載の方法。
前記二重特異性抗体が、分割された一次用量を含む投与レジメンで投与される、請求項１～３５のいずれか一項に記載の方法。
前記二重特異性抗体の用量が、１週間に３ｍｇ～９００ｍｇの用量で前記対象に投与される、請求項１～３６のいずれか一項に記載の方法。
前記ＢＣＭＡ＋がんが多発性骨髄腫であり、前記対象が以前に抗ＣＤ３８抗体療法で治療されている、請求項１～３７のいずれか一項に記載の方法。
前記抗ＣＤ３８抗体が、ダラツムマブまたはイサツキシマブである、請求項３８に記載の方法。
前記ＢＣＭＡ＋がんが多発性骨髄腫であり、前記対象が以前にプロテアソーム阻害剤または免疫調節薬で治療されている、請求項１～３７のいずれか一項に記載の方法。
前記プロテアソーム阻害剤が、ボルテゾミブ、カルフィルゾミブ、またはイキサゾミブである、請求項４０に記載の方法。
前記免疫調節薬が、レナリドミドまたはポマリドミドである、請求項４０に記載の方法。
前記対象が、免疫グロブリンＧ、免疫グロブリンＡ、ラムダ軽鎖、またはカッパ軽鎖から選択される多発性骨髄腫免疫サブタイプと診断されている、請求項１～４２のいずれか一項に記載の方法。
前記対象が、髄外性形質細胞腫を有する、請求項１～４２のいずれか一項に記載の方法。
前記ＢＣＭＡ＋がんが、再発または難治性の多発性骨髄腫である、請求項１～４４のいずれか一項に記載の方法。
前記対象が、以前の治療に対して少なくとも三重難治性である、請求項１～４５のいずれか一項に記載の方法。
前記対象が、以前の治療に対して四重難治性または五重難治性ある、請求項４６に記載の方法。
多発性骨髄腫の治療を必要とする対象において多発性骨髄腫を治療する方法で使用するための投与レジメンであって、前記投与レジメンは、前記投与レジメンの第１週中の一次用量で、前記投与レジメンの第２週中の二次用量で、および前記投与レジメンの第３週中の三次用量での、前記対象への二重特異性抗体の投与を含み、前記三次用量が前記二次用量と等しいかそれより多く、前記二次用量が前記一次用量よりも多く、
前記二重特異性抗体が、
（ａ）ヒトＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインを含む第１の重鎖および共通の軽鎖の対と、ヒトＣＤ３に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインを含む第２の重鎖および共通の軽鎖の対とを含み、前記第１の抗原結合ドメインが、それぞれ配列番号６８、７０、７２、８４、８６、および８８のアミノ酸配列を含む、３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と３つの軽鎖ＣＤＲとを含み、前記第２の抗原結合ドメインが、それぞれ配列番号９２、９４、９６、８４、８６、および８８のアミノ酸配列を含む、３つの重鎖ＣＤＲと３つの軽鎖ＣＤＲとを含むか、または、
（ｂ）ヒトＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインを含む第１の重鎖および共通の軽鎖の対と、ヒトＣＤ３に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインを含む第２の重鎖および共通の軽鎖の対とを含み、前記第１の抗原結合ドメインが、それぞれ配列番号６８、７０、７２、８４、８６、および８８のアミノ酸配列を含む、３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と３つの軽鎖ＣＤＲとを含み、前記第２の抗原結合ドメインが、それぞれ配列番号１００、１０２、１０４、８４、８６、および８８のアミノ酸配列を含む、３つの重鎖ＣＤＲと３つの軽鎖ＣＤＲとを含む、投与レジメン。
前記二重特異性抗体が、ヒトＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインを含む、第１の重鎖および共通の軽鎖の対と、ヒトＣＤ３に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインを含む第２の重鎖および共通の軽鎖の対と、を含み、前記第１の抗原結合ドメインが、それぞれ配列番号６８、７０、７２、８４、８６、および８８のアミノ酸配列を含む、３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と３つの軽鎖ＣＤＲとを含み、前記第２の抗原結合ドメインが、それぞれ配列番号９２、９４、９６、８４、８６、および８８のアミノ酸配列を含む、３つの重鎖ＣＤＲと３つの軽鎖ＣＤＲとを含む、請求項４８に記載の投与レジメン。
前記二重特異性抗体が、ヒトＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインを含む、第１の重鎖および共通の軽鎖の対と、ヒトＣＤ３に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインを含む第２の重鎖および共通の軽鎖の対と、を含み、前記第１の抗原結合ドメインが、それぞれ配列番号６８、７０、７２、８４、８６、および８８のアミノ酸配列を含む、３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と３つの軽鎖ＣＤＲとを含み、前記第２の抗原結合ドメインが、それぞれ配列番号１００、１０２、１０４、８４、８６、および８８のアミノ酸配列を含む、３つの重鎖ＣＤＲと３つの軽鎖ＣＤＲとを含む、請求項４８に記載の投与レジメン。
前記第１の重鎖が、配列番号６６のアミノ酸配列を含む第１の重鎖可変領域を含み、前記第２の重鎖は、配列番号９０のアミノ酸配列を含む第２の重鎖可変領域を含み、前記共通の軽鎖は、配列番号８２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項４９に記載の投与レジメン。
前記第１の重鎖が、配列番号１２６のアミノ酸配列を含み、前記第２の重鎖は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、前記共通の軽鎖は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含む、請求項５１に記載の投与レジメン。
前記第１の重鎖が、配列番号６６のアミノ酸配列を含む第１の重鎖可変領域を含み、前記第２の重鎖は、配列番号９８のアミノ酸配列を含む第２の重鎖可変領域を含み、前記共通の軽鎖は、配列番号８２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項５０に記載の投与レジメン。
前記第１の重鎖が、配列番号１２６のアミノ酸配列を含み、前記第２の重鎖は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、前記共通の軽鎖は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含む、請求項５３に記載の投与レジメン。
前記一次用量が、１～５ｍｇである、請求項４８～５４のいずれか一項に記載の投与レジメン。
前記二次用量が、３ｍｇ～４００ｍｇである、請求項４８～５５のいずれか一項に記載の投与レジメン。
前記三次用量が、３ｍｇ～８００ｍｇである、請求項４８～５６のいずれか一項に記載の投与レジメン。
前記一次用量が、５ｍｇである、請求項４８～５７のいずれか一項に記載の投与レジメン。
前記二次用量が、２５ｍｇである、請求項４８～５８のいずれか一項に記載の投与レジメン。
前記三次用量が、５０ｍｇ～８００ｍｇである、請求項４８～５９のいずれか一項に記載の投与レジメン。
前記投与レジメンの１週間に１回の投与期間中、少なくとも１２週間、１週間に１回の三次用量の投与を含む、請求項４８～６０のいずれか一項に記載の投与レジメン。
前記投与レジメンの前記１週間に１回の投与期間に続く前記投与レジメンの隔週の投与期間中に、２週間に１回の三次用量の投与をさらに含む、請求項６１に記載の投与レジメン。
前記対象が、以前に、抗ＣＤ３８抗体療法、プロテアソーム阻害剤、または免疫調節薬で治療されている、請求項４８～６２のいずれか一項に記載の投与レジメン。
前記抗ＣＤ３８抗体が、ダラツムマブまたはイサツキシマブである、請求項６３に記載の投与レジメン。
前記プロテアソーム阻害剤が、ボルテゾミブ、カルフィルゾミブ、またはイキサゾミブである、請求項６３に記載の投与レジメン。
前記免疫調節薬が、レナリドミドまたはポマリドミドである、請求項６３に記載の投与レジメン。
前記多発性骨髄腫が、再発または難治性の多発性骨髄腫である、請求項４８～６２のいずれか一項に記載の投与レジメン。
前記対象が、以前の治療に対して少なくとも三重難治性である、請求項４８～６７のいずれか一項に記載の投与レジメン。
前記対象が、以前の治療に対して四重難治性または五重難治性である、請求項６８に記載の投与レジメン。