JP2023179541A - Ｃｄ３結合分子 - Google Patents

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Abstract

【課題】本発明が解決しようとする課題は、腫瘍の治療のための抗体、好ましくは二重特異性抗体又は多重特異性抗体を提供することである。【解決手段】本発明は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質であって、重鎖可変領域が、下記のアミノ酸配列：ＣＤＲ１：ＳＦＧＩＳＣＤＲ２：ＧＦＩＰＶＬＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧＣＤＲ３：ＲＧＮＷＮＰＦＤＰ、又はアミノ酸配列：ＣＤＲ１：ＳＸ１ＴＦＴＩＳ、ＣＤＲ２：ＧＩＩＰＸ２ＦＧＴＩＴＹＡＱＫＦＱＧ、ＣＤＲ３：ＲＧＮＷＮＰＦＤＰ、（配列中、Ｘ１＝Ｋ又はＲであり、Ｘ２＝Ｌ又はＩである）を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む、抗原結合タンパク質に関する。【選択図】なし

Description

本発明は、抗体の分野、特に療法用抗体の分野に関する。抗体はヒトの治療に使用することができる。より具体的には、本発明は、腫瘍の治療のための抗体、好ましくは二重特異性抗体又は多重特異性抗体に関する。
ヒトＣＤ３に結合するモノクローナル抗体は、ヒトにおける治療的使用のために開発された最初の抗体のうちの１つであった。モノクローナルＣＤ３結合抗体は、典型的には、それらの免疫抑制の性質のために、例えば移植拒絶反応に使用される。Ｔ細胞上のＣＤ３に対して、及び癌細胞上の表面標的抗原に対して二重特異性である抗体は、Ｔ細胞受容体特異性、補刺激、又はペプチド抗原提示とは無関係に、任意の種類のＴ細胞を癌細胞に連結させることができる。このような二重特異性Ｔ細胞係合抗体は、様々な癌及び腫瘍の増殖の治療において大きな期待を示す。
本発明の目的は、Ｔ細胞及びエフェクター細胞の係合のための免疫腫瘍学用途に適している、より高い細胞傷害性を伴い、比較的低い親和性を有する、改善された特性を有する、必ずしも完全ではないが本質的にＣＤ３結合特性を有する新しい抗体と、反対に、Ｔ細胞及びエフェクター細胞のダウンレギュレーションのための自己免疫用途に適している、より低い細胞傷害性を伴い、比較的高い親和性を有するＣＤ３結合性を有する新しい抗体と、を提供することである。本発明の更なる目的は、少なくとも１つの更なる膜結合性分子に結合する、上記特性を有するＴ細胞係合ＣＤ３結合タンパク質及び抗体を提供することである。
本発明は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質、好ましくは抗体を提供し、重鎖可変領域は、下記のアミノ酸配列：
ＣＤＲ１：ＳＦＧＩＳ
ＣＤＲ２：ＧＦＩＰＶＬＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧ
ＣＤＲ３：ＲＧＮＷＮＰＦＤＰ、又は
アミノ酸配列：
ＣＤＲ１：ＳＸ１ＴＦＴＩＳ、
ＣＤＲ２：ＧＩＩＰＸ２ＦＧＴＩＴＹＡＱＫＦＱＧ、
ＣＤＲ３：ＲＧＮＷＮＰＦＤＰ、
（配列中、
Ｘ１＝Ｋ又はＲであり、
Ｘ２＝Ｌ又はＩである）を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む。
好ましい実施形態では、Ｘ１＝Ｋであり、かつＸ２＝Ｌである。
好ましい実施形態では、Ｘ１＝Ｒであり、かつＸ２＝Ｉである。
好ましい実施形態では、本発明は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質、好ましくは抗体を提供し、重鎖可変領域は、下記のアミノ酸配列：
ＣＤＲ１：ＳＫＴＬＴＩＳ、
ＣＤＲ２：ＧＩＩＰＩＦＧＳＩＴＹＡＱＫＦＱＤ、
ＣＤＲ３：ＲＧＮＷＮＰＦＤＰ、又は
アミノ酸配列：
ＣＤＲ１：ＧＳＧＩＳ、
ＣＤＲ２：ＧＦＩＰＦＦＧＳＡＮＹＡＱＫＦＲＤ、
ＣＤＲ３：ＲＧＮＷＮＰＸ１３ＤＰ
（配列中、
Ｘ１３＝Ｌ又はＦである）を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む。
本発明は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質、好ましくは抗体を更に提供し、重鎖可変領域は、アミノ酸配列
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＲＳＦＧＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＦＩＰＶＬＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＩＡＤＫＳＴＮＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＧＮＷＮＰＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＤＡＦＫＳＫＴＦＴＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＬＧＧＩＩＰＬＦＧＴＩＴＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＮＴＡＦＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＭＹＹＣＴＲＲＧＮＷＮＰＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、
ＥＶＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＶＴＦＮＳＲＴＦＴＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＬＧＳＩＩＰＩＦＧＴＩＴＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＦＭＥＬＴＳＬＲＳＥＤＴＡＩＹＹＣＴＲＲＧＮＷＮＰＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＲＧＳＧＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＶＧＧＦＩＰＦＦＧＳＡＮＹＡＱＫＦＲＤＲＶＴＩＴＡＤＫＳＡＴＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＩＹＹＣＡＫＲＧＮＷＮＰＬＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＶＴＦＫＳＫＴＬＴＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＬＧＧＩＩＰＩＦＧＳＩＴＹＡＱＫＦＱＤＲＶＳＩＴＡＤＫＳＴＮＴＡＹＬＥＬＮＳＬＲＳＥＤＴＡＩＹＹＣＡＲＲＧＮＷＮＰＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、又は
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＲＧＳＧＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＶＧＧＦＩＰＦＦＧＳＡＮＹＡＱＫＦＲＤＲＶＴＩＴＡＤＫＳＡＴＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＩＹＹＣＡＫＲＧＮＷＮＰＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳを含み、
ＣＤＲ以外の１つ以上の位置において、０～１０個、好ましくは０～５個のアミノ酸の変異、挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを有する。
重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質、好ましくは抗体が更に提供され、重鎖可変領域は、下記のアミノ酸配列：
ＣＤＲ１：ＲＸ３ＷＩＧ、
ＣＤＲ２：ＩＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧ、
ＣＤＲ３：Ｘ４ＩＲＹＦＸ５ＷＳＥＤＹＨＹＹＸ６ＤＶ
（配列中、
Ｘ３＝Ｆ又はＹであり、
Ｘ４＝Ｈ又はＮであり、
Ｘ５＝Ｄ又はＶであり、
Ｘ６＝Ｌ又はＭである）を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、Ｘ３＝Ｆであり、Ｘ４＝Ｈであり、Ｘ５＝Ｄであり、かつＸ６＝Ｌである。別の実施形態では、Ｘ３＝Ｙであり、Ｘ４＝Ｎであり、Ｘ５＝Ｖであり、かつＸ６＝Ｍである。
本発明は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質、好ましくは抗体を更に提供し、重鎖可変領域は、アミノ酸配列
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＴＲＦＷＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＴＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＧＭＹＹＣＶＲＨＩＲＹＦＤＷＳＥＤＹＨＹＹＬＤＶＷＧＫＧＴＴＶＴＶＳＳ、又は
ＥＶＱＬＶＥＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＴＲＹＷＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＶＲＮＩＲＹＦＶＷＳＥＤＹＨＹＹＭＤＶＷＧＫＧＴＴＶＴＶＳＳを含み、
ＣＤＲ以外の１つ以上の位置において、０～１０個、好ましくは０～５個のアミノ酸の変異、挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを有する。
重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質、好ましくは抗体が更に提供され、重鎖可変領域は、下記のアミノ酸配列：
ＣＤＲ１：ＳＹＡＬＳ、
ＣＤＲ２：ＧＩＳＧＳＧＲＴＴＷＹＡＤＳＶＫＧ、
ＣＤＲ３：ＤＧＧＹＳＹＧＰＹＷＹＦＤＬ、を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む。
重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質、好ましくは抗体が更に提供され、重鎖可変領域は、下記のアミノ酸配列：
ＣＤＲ１：ＳＹＡＬＳ、
ＣＤＲ２：ＡＩＳＧＳＧＲＴＴＷＹＡＤＳＶＫＧ、
ＣＤＲ３：ＤＧＧＹＴＹＧＰＹＷＹＦＤＬ、を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む。
重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質、好ましくは抗体が更に提供され、重鎖可変領域は、アミノ酸配列
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＴＳＧＦＫＦＳＳＹＡＬＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＳＧＳＧＲＴＴＷＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＧＧＹＳＹＧＰＹＷＹＦＤＬＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳ、又は
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＴＳＧＦＴＦＩＳＹＡＬＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＲＴＴＷＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＦＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＧＧＹＴＹＧＰＹＷＹＦＤＬＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳを含み、
ＣＤＲ以外の１つ以上の位置において、０～１０個、好ましくは０～５個のアミノ酸の変異、挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを有する。
重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質、好ましくは抗体もまた提供され、重鎖可変領域は、下記のアミノ酸配列：
ＣＤＲ１：ＤＹＴＭＨ、
ＣＤＲ２：ＤＩＳＷＳＳＧＳＩＧＹＡＤＳＶＫＧ、
ＣＤＲ３：ＤＨＲＧＹＧＤＹＥＧＧＧＦＤＹ、を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む。
重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質、好ましくは抗体もまた提供され、重鎖可変領域は、下記のアミノ酸配列：
ＣＤＲ１：ＤＹＴＭＨ、
ＣＤＲ２：ＤＩＳＷＳＸ７ＧＸ８Ｘ９Ｘ１０ＹＡＤＳＶＫＧ、
ＣＤＲ３：ＤＨＸ１１ＧＹＧＤＹＥＧＧＧＦＤＸ１２
（配列中、
Ｘ７＝Ｓ又はＧであり、
Ｘ８＝Ｓ又はＴであり、
Ｘ９＝Ｉ又はＴであり、
Ｘ１０＝Ｇ又はＹであり、
Ｘ１１＝Ｒ又はＭであり、
Ｘ１２＝Ｈ又はＹである）を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、Ｘ７、Ｘ８、Ｘ９及びＸ１０は、Ｓ、Ｓ、Ｉ及びＧであり、かつＸ１１及びＸ１２は、Ｒ及びＨである。別の実施形態では、Ｘ７、Ｘ８、Ｘ９及びＸ１０は、Ｇ、Ｓ、Ｉ及びＹであり、かつＸ１１及びＸ１２は、Ｒ及びＹである。別の実施形態では、Ｘ７、Ｘ８、Ｘ９及びＸ１０は、Ｓ、Ｔ、Ｔ及びＧであり、かつＸ１１及びＸ１２は、Ｍ及びＹである。
重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質、好ましくは抗体が更に提供され、重鎖可変領域は、アミノ酸配列
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＴＳＧＦＮＦＤＤＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＤＩＳＷＳＳＧＳＩＧＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＷＬＱＭＮＳＬＲＴＥＤＴＡＬＹＦＣＡＫＤＨＲＧＹＧＤＹＥＧＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、又は
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＴＳＧＦＴＦＤＤＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＤＩＳＷＳＳＧＳＩＧＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＬＹＦＣＡＫＤＨＲＧＹＧＤＹＥＧＧＧＦＤＨＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、又は
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＶＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＤＩＳＷＳＧＧＳＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＴＥＤＴＡＬＹＹＣＡＫＤＨＲＧＹＧＤＹＥＧＧＧＦＤＹＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳ、又は
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＶＴＳＧＦＴＦＤＤＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＤＩＳＷＳＳＧＴＴＧＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＤＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＴＥＤＴＡＬＹＹＣＡＫＤＨＭＧＹＧＤＹＥＧＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳを含み、
ＣＤＲ以外の１つ以上の位置において、０～１０個、好ましくは０～５個のアミノ酸の変異、挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを有する。
本発明の抗原結合タンパク質、好ましくは抗体中の軽鎖可変領域は、共通軽鎖可変領域を含むことが好ましい。共通軽鎖可変領域は、好ましくは、ＩｇＶκ１－３９軽鎖可変領域を含む。当該軽鎖可変領域は、好ましくは、生殖系列ＩｇＶκ１－３９＊０１可変領域である。軽鎖可変領域は、カッパ軽鎖ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１又はＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ５＊０１を含むことが好ましい。一実施形態では、軽鎖可変領域は、ヒト生殖系列カッパ軽鎖ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１又はＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ５＊０１を含む。当該軽鎖可変領域は、好ましくはアミノ酸配列
ＤＩＱＭＴ ＱＳＰＳＳ ＬＳＡＳＶ ＧＤＲＶＴ ＩＴＣＲＡ ＳＱＳＩＳ ＳＹＬＮＷ ＹＱＱＫＰ ＧＫＡＰＫ ＬＬＩＹＡ ＡＳＳＬＱ ＳＧＶＰＳ ＲＦＳＧＳ ＧＳＧＴＤ ＦＴＬＴＩ ＳＳＬＱＰ ＥＤＦＡＴ ＹＹＣＱＱ ＳＹＳＴＰ ＰＴＦＧＱ ＧＴＫＶＥ ＩＫ又はＤＩＱＭＴ ＱＳＰＳＳ ＬＳＡＳＶ ＧＤＲＶＴ ＩＴＣＲＡ ＳＱＳＩＳ ＳＹＬＮＷ ＹＱＱＫＰ ＧＫＡＰＫ ＬＬＩＹＡ ＡＳＳＬＱ ＳＧＶＰＳ ＲＦＳＧＳ ＧＳＧＴＤ ＦＴＬＴＩ ＳＳＬＱＰ ＥＤＦＡＴ ＹＹＣＱＱ ＳＹＳＴＰ ＰＩＴＦＧ ＱＧＴＲＬ ＥＩＫを含み、
０～５個のアミノ酸の変異、挿入、欠失、置換、付加又はこれらの組み合わせを有する。
抗原結合タンパク質は、好ましくは抗体、好ましくは二重特異性又は多重特異性抗体である。
当該抗体は、好ましくは、本明細書に示されるヒトＣＤ３に結合するＨ／Ｌ鎖の組み合わせと、腫瘍抗原に結合するＨ／Ｌ鎖の組み合わせとを含む。腫瘍抗原に結合する当該Ｈ／Ｌ鎖の組み合わせは、好ましくはヒトＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＥＡ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＣＳ－１、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＰＣＡＭ、ＤＬＬ３、ＬＧＲ５、ＭＳＬＮ、ＦＯＬＲ１、ＦＯＬＲ３、ＨＥＲ２、ＨＭ１．２４、ＭＣＳＰ、ＰＤ－Ｌ１、ＰＳＭＡタンパク質又はこれらの変異体に結合し、好ましい実施形態では、ＥＧＦＲ、ＰＤ－Ｌ１又はＣＬＥＣ１２Ａに結合する。
本発明の抗体、二重特異性抗体又は多重特異性抗体は、好ましくは、ヒト抗体又はヒト化抗体である。
二重特異性又は多重特異性抗体は、好ましくは、適合性ヘテロ二量体化ドメインを有する２つの異なる免疫グロブリン重鎖を含む。当該適合性ヘテロ二量体化ドメインは、好ましくは、適合性免疫グロブリン重鎖ＣＨ３ヘテロ二量体化ドメインである。
二重特異性抗体又は多重特異性抗体は、二重特異性又は多重特異性ＩｇＧ抗体とＦｃガンマ受容体との相互作用が低減されるように、変異したＣＨ２及び／又は下部ヒンジドメインを有するＩｇＧ抗体である。変異したＣＨ２及び／又は下部ヒンジドメインは、好ましくは、２３５位及び／又は２３６位（ＥＵ番号付けによる）でのアミノ酸置換、好ましくはＬ２３５Ｇ置換及び／又はＧ２３６Ｒ置換を含む。
二重特異性抗体又は多重特異性抗体は、好ましくは、共通軽鎖を含む。
本発明は、それを必要とする対象の治療に使用するための、本明細書に示される抗原結合タンパク質又は抗体を更に提供する。対象は、好ましくは癌を有するか、又は癌に対して治療されている。ＭＦ８０５７、ＭＦ８０５８、ＭＦ８０７８、又はＭＦ８５０８のＣＤＲ及び／又はＶＨ配列、又は０～１０個のアミノ酸の置換、変異、挿入、付加、若しくは欠失を有するその変異体を有する抗原結合タンパク質若しくは抗体は、治療に、特に抗原結合タンパク質若しくは抗体の局所投与及び／又は局所放出を含む治療に好ましい。ＭＦ９２４９、ＭＦ９２６７、ＭＦ８３９７のＣＤＲ及び／又はＶＨ配列、又は０～１０個のアミノ酸の置換、変異、挿入、付加、若しくは欠失を有するその変異体を有する抗原結合タンパク質若しくは抗体は、自己免疫疾患などの過剰活性免疫系を有する対象の治療に好ましい。
本発明の抗体は、特に具体的に指定されない限り、好ましくは二重特異性抗体である。二重特異性抗体は、好ましくは、少なくともヒトＣＤ３に結合する。加えて、二重特異性抗体は、好ましくは、ヒト腫瘍細胞上で優先的に発現される少なくとも表面分子に結合する。好ましい実施形態では、二重特異性抗体は、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＥＡ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＣＳ－１、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＰＣＡＭ、ＤＬＬ３、ＬＧＲ５、ＭＳＬＮ、ＰＤ－Ｌ１、ＦＯＬＲ１、ＦＯＬＲ３、ＨＥＲ２、ＨＭ１．２４、ＭＣＳＰ、又はＰＳＭＡに結合する。より好ましい実施形態では、二重特異性抗体は、ＥＧＦＲ又はＣＬＥＣ１２Ａに結合する。より好ましい実施形態では、多重特異性抗体は、ＥＧＦＲ及びＰＤ－Ｌ１に結合する。
本発明は、本発明による抗体を含む医薬組成物を更に提供する。
ラベル、好ましくはインビボ撮像用のラベルを更に含む、本発明による抗体が更に提供される。
本発明はまた、腫瘍を有するか、又は腫瘍を有するリスクのある対象の治療方法を提供し、この方法は、本発明による二重特異性抗体又は多重特異性抗体を対象に投与することを含む。また、腫瘍を有するか、又は腫瘍を有するリスクのある対象の治療に使用するための、本発明による二重特異性抗体又は多重特異性抗体も提供される。腫瘍を有するか、又は腫瘍を有するリスクのある対象の治療のための薬剤の調製のための本発明の抗体の使用が更に提供される。好ましい実施形態では、腫瘍は、ＥＧＦＲ若しくはＣＬＥＣ１２Ａ陽性腫瘍又はＥＧＦＲ及びＰＤ－Ｌ１陽性腫瘍である。
「抗体」は、抗原上のエピトープに結合する１つ以上のドメインを含有するタンパク質の免疫グロブリンクラスに属するタンパク質性分子であり、このようなドメインは、抗体の可変領域に由来するか又はそれとの配列相同性を共有する。
抗体結合は、特異性及び親和性を含む異なる性質を有する。特異性は、どの抗原又はそのエピトープが結合ドメインによって特異的に結合されるかを決める。親和性は、特定の抗原又はエピトープへの結合の強度についての尺度である。本明細書では、抗体の「特異性」は、特定の抗原に対するその選択性を指し、「親和性」は、抗体の抗原結合部位とそれが結合するエピトープとの間の相互作用の強度を指すことに注意しておくとよい。抗体は、典型的には、基本的な構造単位で構成されており－それぞれに２つの重鎖及び２つの軽鎖を有する。治療用の抗体は、好ましくは、可能な限り治療される対象の天然抗体（例えば、ヒト対象の場合のヒト抗体）に近いものである。本発明による抗体は、いかなる特定のフォーマット又はそれを調製する方法にも限定されない。
したがって、本明細書で使用する場合、「結合特異性」は、抗原決定基と反応する個々の抗体結合部位の能力を指す。典型的には、本発明の抗体の結合部位は、可変ドメインを含むＦａｂ部分における可変ドメインに位置し、重鎖及び軽鎖の超可変領域から構築される。
本発明の抗体は、好ましくはＩｇＧ抗体、好ましくはＩｇＧ１抗体である。完全長ＩｇＧ抗体は、それらの好ましい半減期、及び免疫原性の理由から完全な自家（ヒト）分子に近い状態に維持したいという要望のために好ましい場合がある。ＩｇＧ１は、ヒトにおけるその長い循環半減期に基づいて優勢である。ヒトにおける免疫原性を予防又は回避するために、本発明による二重特異性完全長ＩｇＧ抗体は、ヒトＩｇＧ１であることが好ましい。
「二重特異性抗体」は、抗体の１つの可変ドメインが第１の抗原に結合する一方で、抗体の第２の可変ドメインが第２の抗原に結合し、当該第１及び第２の抗原が同一ではない、本明細書に記載の抗体である。用語「二重特異性抗体」はまた、バイパラトピック抗体を包含し、抗体の１つの可変ドメインは、抗原上の第１のエピトープに結合する一方で、抗体の第２の可変ドメインは、その抗原上の第２のエピトープに結合する。この用語は更に、少なくとも１つのＶＨが、第１の抗原を特異的に認識することができ、免疫グロブリン可変ドメインにおいて少なくとも１つのＶＨと対合しているＶＬが、第２の抗原を特異的に認識することができる抗体を含む。得られたＶＨ／ＶＬ対は、抗原１又は抗原２のいずれかに結合し、「ツーインワン抗体（ｔｗｏ－ｉｎ－ｏｎｅ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」と称され、例えば、国際公開第２００８／０２７２３６号、同第２０１０／１０８１２７号及びＳｃｈａｅｆｅｒら（Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２０，４７２－４８６，Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０１１）に記載されている。本発明による二重特異性抗体は、いかなる特定の二重特異性フォーマット又はそれを調製する方法にも限定されない。二重特異性抗体は、多重特異性抗体である。
本明細書で言及される多重特異性多量体又は抗体は、抗原上のエピトープに結合する２つ以上のドメインを含有するタンパク質の免疫グロブリンクラスに属するタンパク質性分子を包含し、このようなドメインは、抗体の可変領域に由来するか又はそれとの配列相同性を共有し、国際公開第２０１９／１９０３２７号に記載されているような、当該技術分野において既知の３つ以上の抗原に結合するタンパク質性分子を含む。
「抗原」は、宿主生物において（抗体を産生するために）免疫応答を誘導することができる、及び／又は抗体によって標的化されることができる分子である。分子レベルにおいて、抗原は、抗体の抗原結合部位によって結合される能力を特徴とする。また、抗原の混合物は「抗原」とみなすことができ、すなわち、当業者であれば、時には腫瘍細胞の溶解物、又はウイルス粒子が「抗原」として示されてもよく、その一方で、かかる腫瘍細胞溶解物又はウイルス粒子の製剤には、多くの抗原決定基が存在することを認識するであろう。抗原は、少なくとも１つ、但し多くの場合、より多くのエピトープを含む。本明細書に開示される結合タンパク質及び抗体の場合、抗原は、典型的には細胞膜に結合し、細胞膜の細胞外部分上に存在する。
「エピトープ」又は「抗原決定基」は、免疫グロブリン又は抗体が特異的に結合する抗原上の部位である。エピトープは、連続アミノ酸又はタンパク質の３次フォールディングによって並置された非連続アミノ酸から形成することができる（それぞれ、いわゆる直鎖及び立体構造エピトープ）。連続的な直鎖アミノ酸から形成されるエピトープは、典型的には、変性溶媒に曝露されて保持される一方で、３次フォールディングにより形成されるエピトープは、立体構造が、典型的には、変性溶媒による処理で失われる。エピトープは、典型的には、固有の空間的立体構造において３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個のアミノ酸を含んでもよい。
用語「重鎖」又は「免疫グロブリン重鎖」は、任意の生物からの免疫グロブリン重鎖定常領域配列を含み、特に明記されない限り、重鎖可変ドメインを含む。重鎖可変ドメインという用語は、特に明記されない限り、３つの重鎖ＣＤＲ及び４つのＦＲ領域を含む。重鎖の断片としては、ＣＤＲ、ＣＤＲ及びＦＲ、並びにこれらの組み合わせが挙げられる。典型的な重鎖は、可変ドメイン（Ｎ末端からＣ末端へ）に続いて、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインを有する。重鎖の機能的断片は、抗原を特異的に認識することが可能な、少なくとも１つのＣＤＲを含む断片を含む。
用語「軽鎖」は、任意の生物からの免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン、又はＶＬ（又はそれらの機能的断片、及び免疫グロブリン定常ドメイン、若しくはＣＬ、又はそれらの機能的断片の配列を含む。特に明記されない限り、用語「軽鎖」は、ヒトのカッパ、ラムダ、及びこれらの組み合わせから選択される軽鎖を含み得る。軽鎖可変（ＶＬ）ドメインは、典型的には、特に明記されない限り、３つの軽鎖ＣＤＲ及び４つのフレームワーク（ＦＲ）領域を含む。概して、完全長軽鎖は、Ｎ末端からＣ末端まで、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４を含むＶＬドメイン、及び軽鎖定常ドメインを含む。本発明で使用することができる軽鎖としては、例えば、重鎖によって選択的に結合したエピトープに選択的に結合しないものが挙げられる。
本発明の抗体で使用するのに好適な軽鎖には、既存の抗体ライブラリー（ウェットライブラリー又はｉｎ ｓｉｌｉｃｏ）で、最も一般的に使用される軽鎖をスクリーニングすることにより同定できるものなどの共通軽鎖（ｃＬＣ）が含まれ、該軽鎖は、重鎖のエピトープ結合ドメインの親和性及び／又は選択性を実質的に阻害しないが、一連の重鎖と対合するのにも適している。例えば、好適な軽鎖は、そのゲノムに組み込まれた共通軽鎖を有するＭｅＭｏ（登録商標）などのトランスジェニック動物由来のものを含み、これは、重鎖に多様性を有し、当該抗原への曝露時に抗原に特異的に結合することができる共通軽鎖抗体の大きなパネルを生成するために使用することができる。
本発明による用語「共通軽鎖」は、同一であり得る、又はいくつかのアミノ酸配列の違いを有し得る軽鎖を指し、本発明の抗体の結合特異性は影響を受けない、すなわち、その違いは機能的結合領域の形成に実質的に影響を与えない。
例えば、本明細書において使用される共通鎖の定義の範囲内で、同一ではないがなお機能的に同等である可変鎖を調製又は発見することが可能である（例えば、保存的アミノ酸変化、同族鎖と対合する場合に結合特異性に寄与しないか、又は部分的にのみ寄与する領域におけるアミノ酸の変化を導入及び試験することなどにより）。したがって、このような変異体は、異なる同族鎖を結合し、機能的抗原結合ドメインを形成することも可能である。したがって、本明細書において使用する場合、用語「共通軽鎖」は、重鎖との対合後に得られる抗体の結合特異性を保持しながら、同一であり得る又はいくつかのアミノ酸配列の差異を有し得る軽鎖を指す。特定の共通軽鎖とこのような機能的に同等である変異体との組み合わせは、用語「共通軽鎖」に包含される。共通軽鎖の使用についての詳細に説明は、国際公開第２００４／００９６１８号及び同第２００９／１５７７７１号を参照されたい。
「Ｆａｂ」は、可変領域を含む結合ドメイン、典型的には、対合する重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む結合ドメインを意味する。Ｆａｂは、定常軽ドメイン（ＣＬ）及びＶＬドメインと対合するＣＨ１及びＶＨドメインを含む、定常領域ドメインを含み得る。かかる対合は、例えば、ＣＨ１ドメイン及びＣＬドメインでのジスルフィド架橋を介した共有結合として生じ得る。
「単鎖可変断片」（ｓｃＦｖ）は、リンカー、例えばペプチドリンカー、例えば長さが約１０～約２５のアミノ酸を介して接続されるＶＨドメイン及びＶＬドメインを含む結合ドメインを意味する。
本発明による「完全長ＩｇＧ」又は「完全長抗体」という用語は、本質的に完全なＩｇＧを含むものとして定義されるが、必ずしも完全なＩｇＧの全ての機能を有するわけではない。誤解を避けるために、完全長ＩｇＧは、２つの重鎖及び２つの軽鎖を含む。各鎖は、定常（Ｃ）領域及び可変（Ｖ）領域を含有し、これはＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＶＨ及びＣＬ、ＶＬと表示されるドメインに分解することができる。ＩｇＧ抗体は、Ｆａｂ部分に含まれる可変領域ドメインを介して抗原に結合し、結合後、定常ドメイン、主にＦｃ部分を介して免疫系の分子及び細胞と相互作用することができる。本発明による完全長抗体は、所望の特性を提供する変異が存在し得るＩｇＧ分子を包含する。完全長ＩｇＧは、領域のうちのいずれの実質的な部分の欠失も有さない必要がある。しかしながら、得られるＩｇＧ分子の結合特性を本質的に変えることなく、１つ又はいくつかのアミノ酸残基が欠失しているＩｇＧ分子は、用語「完全長ＩｇＧ」に含まれる。例えば、かかるＩｇＧ分子は、好ましくは非ＣＤＲ領域において、１～１０アミノ酸残基の欠失を有することができ、該欠失されたアミノ酸は、ＩｇＧの結合特異性にとっては必須ではない。
本明細書において、核酸又はアミノ酸配列について言及する場合、「パーセント（％）同一性」は、最適な比較目的のために配列をアラインメントした後、選択された配列中の残基と同一である候補配列中の残基の百分率として定義される。２つの配列間のアラインメントを最適化するために、比較される２つの配列のいずれかにギャップが導入され得る。かかるアラインメントは、比較される配列の全長にわたって実施することができる。あるいは、アラインメントは、より短い長さ、例えば約２０、約５０、約１００以上の核酸／ベース又はアミノ酸にわたって実施されてもよい。配列同一性は、報告されたアラインメント領域にわたる２つの配列間における同一一致の割合である。
配列の比較、及び２つの配列間の配列同一性の割合の測定は、数学的アルゴリズムを使用して達成することができる。当業者であれば、２つの配列をアラインメントさせ、２つの配列間の同一性を測定するために、いくつかの異なるコンピュータプログラムが利用可能であるという事実を認識するであろう（Ｋｒｕｓｋａｌ，Ｊ．Ｂ．（１９８３）Ａｎ ｏｖｅｒｖｉｅｗ ｏｆ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ Ｉｎ Ｄ．Ｓａｎｋｏｆｆ ａｎｄ Ｊ．Ｂ．Ｋｒｕｓｋａｌ，（ｅｄ．），Ｔｉｍｅ ｗａｒｐｓ，ｓｔｒｉｎｇ ｅｄｉｔｓ ａｎｄ ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ：ｔｈｅ ｔｈｅｏｒｙ ａｎｄ ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ，ｐｐ．１－４４ Ａｄｄｉｓｏｎ Ｗｅｓｌｅｙ）。
本発明の目的及び本明細書に記載された配列について、２つの核酸配列間のパーセント配列同一性は、デフォルト設定を使用してＶｅｃｔｏｒ ＮＴＩ Ｐｒｏｇｒａｍ Ａｄｖａｎｃｅ １０．５．２ソフトウェアのＡｌｉｇｎＸアプリケーションを使用して求めることができ、この設定には、変更されたＣｌｕｓｔａｌＷアルゴリズム（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｊ．Ｄ．，Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｄ．Ｇ．，ａｎｄ Ｇｉｂｓｏｎ Ｔ．Ｊ．（１９９４）Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．２２：４６７３～４６８０）、ｓｗｇａｐｄｎａｒｎｔスコアマトリックス、１５のギャップオープンペナルティ、及び６．６６のギャップエクステンションペナルティを用いる。アミノ酸配列は、デフォルト設定を使用して、Ｖｅｃｔｏｒ ＮＴＩ Ｐｒｏｇｒａｍ Ａｄｖａｎｃｅ １１．５．２ソフトウェアのＡｌｉｇｎＸアプリケーションを使用してアラインメントすることができ、この設定には、変更されたＣｌｕｓｔａｌＷアルゴリズム（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｊ．Ｄ．，Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｄ．Ｇ．，ａｎｄ Ｇｉｂｓｏｎ Ｔ．Ｊ．，１９９４）、ｂｌｏｓｕｍ６２ｍｔ２スコアマトリックス、１０のギャップオープニングペナルティ、及び０．１のギャップエクステンションペナルティを用いる。
用語「スーパー－クラスター」又は「スーパークラスター」は、本明細書では、クローンの群、並びに同じＶＨ Ｖ遺伝子セグメントの使用、及びＨＣＤＲ３において少なくとも７０％の配列同一性かつ同じＨＣＤＲ３長を有することに基づいて、クローンの群が産生することができる結合ドメインを指す。
したがって、好ましい実施形態では、本発明によって、クローンの群、並びに同じＶＨ Ｖ遺伝子セグメントの使用、及びＨＣＤＲ３において少なくとも７０％の配列同一性かつ同じＨＣＤＲ３長を有することに基づいて、クローンの群が産生することができる結合ドメインを含む「スーパー－クラスター」又は「スーパークラスター」が提供される。好ましい実施形態では、当該配列同一性は、８０％であり、より好ましくは９０％、最も好ましくは９５％の配列同一性であり、但し、ＨＣＤＲ３配列
ＤＧＧＹＳＹＧＰＹＷＹＦＤＬ及びＤＨＲＧＹＧＤＹＥＧＧＧＦＤＹをコードする核酸を含むクローン、ＨＣＤＲ２配列ＧＦＩＰＶＬＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧ、ＧＩＩＰＬＦＧＴＩＴＹＡＱＫＦＱＧ、及びＳＩＩＰＩＦＧＴＩＴＹＡＱＫＦＱＧをコードする核酸配列を含むクローンは除外されることを条件とし、あるいはＶＨ配列
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＴＳＧＦＫＦＳＳＹＡＬＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＳＧＳＧＲＴＴＷＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＧＧＹＳＹＧＰＹＷＹＦＤＬＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳ、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＴＳＧＦＮＦＤＤＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＤＩＳＷＳＳＧＳＩＧＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＷＬＱＭＮＳＬＲＴＥＤＴＡＬＹＦＣＡＫＤＨＲＧＹＧＤＹＥＧＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＲＳＦＧＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＦＩＰＶＬＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＩＡＤＫＳＴＮＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＧＮＷＮＰＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＤＡＦＫＳＫＴＦＴＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＬＧＧＩＩＰＬＦＧＴＩＴＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＮＴＡＦＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＭＹＹＣＴＲＲＧＮＷＮＰＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、及び
ＥＶＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＶＴＦＮＳＲＴＦＴＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＬＧＳＩＩＰＩＦＧＴＩＴＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＦＭＥＬＴＳＬＲＳＥＤＴＡＩＹＹＣＴＲＲＧＮＷＮＰＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳをコードする核酸配列を含むクローンは、
除外されることを条件とし、あるいは当該群からのクローンは、二重特異性抗体によって構成されるか、又は二重特異性抗体で構成されるように設計されたＨＣＤＲ３をコードする核酸を含むことを条件とする。
用語「スーパー－クラスター１」又は「スーパークラスター１」は、本明細書では、クローンの群、並びに同じＶＨ Ｖ遺伝子セグメントの使用（ＶＨ１－６９）、及びＨＣＤＲ３において少なくとも７０％の配列同一性かつそのスーパークラスターのメンバーと同じＨＣＤＲ３長を有することに基づいて、クローンの群が産生することができる結合ドメインを指す。例えば、ＭＦ８０４８、ＭＦ８０５６、ＭＦ８０５７、ＭＦ８０５８、ＭＦ８０７８、及びＭＦ８１０１が含まれる。別の好ましい実施形態では、本明細書における抗ＣＤ３抗体は、ＶＨ１－６９の同じＶＨ Ｖ遺伝子セグメントの使用、及び／又はＨＣＤＲ３における少なくとも８０％の同一性、より好ましくはＨＣＤＲ３において９０％、最も好ましくは９５％の同一性かつ同じＨＣＤＲ３長を有することに基づく。別の好ましい実施形態では、本明細書における抗ＣＤ３抗体は、ＶＨ１－６９の同じＶＨ Ｖ遺伝子セグメントの使用に基づき、及び／又はＨＣＤＲ３における少なくとも８０％の同一性かつコードされたＣＤＲ３セグメントＲＧＮＷＮＰＦＤＰと比べて同じＨＣＤＲ３長を有し、好ましくはＨＣＤＲ３における少なくとも９０％の配列同一性かつ同じＨＣＤＲ３長を有し、より好ましくは９５％又は最も好ましくは９８％の同一性かつ同じＨＣＤＲ３長を有するが、但し、ＨＣＤＲ２配列
ＧＦＩＰＶＬＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧ、ＧＩＩＰＬＦＧＴＩＴＹＡＱＫＦＱＧ及びＳＩＩＰＩＦＧＴＩＴＹＡＱＫＦＱＧをコードする核酸を含むクローンは除外されることを条件とし、あるいはＶＨ配列
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＲＳＦＧＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＦＩＰＶＬＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＩＡＤＫＳＴＮＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＧＮＷＮＰＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＤＡＦＫＳＫＴＦＴＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＬＧＧＩＩＰＬＦＧＴＩＴＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＮＴＡＦＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＭＹＹＣＴＲＲＧＮＷＮＰＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、
ＥＶＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＶＴＦＮＳＲＴＦＴＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＬＧＳＩＩＰＩＦＧＴＩＴＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＦＭＥＬＴＳＬＲＳＥＤＴＡＩＹＹＣＴＲＲＧＮＷＮＰＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳをコードする核酸を含むクローンは、
除外されることを条件とし、あるいは当該群からのクローンは、二重特異性抗体によって構成されるか、又は二重特異性抗体で構成されるように設計されたＨＣＤＲ３をコードする核酸を含むことを条件とする。用語「スーパー－クラスター３」又は「スーパークラスター３」は、本明細書では、クローンの群、並びに同じＶＨ Ｖ遺伝子セグメントの使用（ＶＨ３－２３）、及びＨＣＤＲ３において少なくとも７０％の配列同一性かつそのスーパークラスターのメンバーと同じＨＣＤＲ３長を有することに基づいて、クローンの群が産生することができる結合ドメインを指す。例えば、ＭＦ８３９７、及びＭＦ８５６２が含まれる。別の好ましい実施形態では、本明細書における抗ＣＤ３抗体は、ＶＨ３－２３の同じＶＨ Ｖ遺伝子セグメントの使用、及び／又はＨＣＤＲ３における少なくとも８０％の同一性、より好ましくはＨＣＤＲ３における９０％、最も好ましくは９５％の同一性かつ同じＨＣＤＲ３長を有することに基づく。別の好ましい実施形態では、本明細書における抗ＣＤ３抗体は、ＶＨ３－２３の同じＶＨ Ｖ遺伝子セグメントの使用、及び／又はＨＣＤＲ３における少なくとも８０％の同一性かつコードされたＣＤＲ３セグメントＤＧＧＹＳＹＧＰＹＷＹＦＤＬと比べて同じＨＣＤＲ３長を有することに基づき、好ましくはＨＣＤＲ３における少なくとも９０％の配列同一性かつ同じＨＣＤＲ３長を有し、より好ましくは９５％又は最も好ましくは９８％の同一性かつ同じＨＣＤＲ３長を有するが、但し、ＨＣＤＲ３配列ＤＧＧＹＳＹＧＰＹＷＹＦＤＬをコードする核酸を含むクローンは除外されることを条件とし、あるいはＶＨ配列
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＴＳＧＦＫＦＳＳＹＡＬＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＳＧＳＧＲＴＴＷＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＧＧＹＳＹＧＰＹＷＹＦＤＬＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳをコードする核酸を含むクローンは、
除外されることを条件とし、あるいは当該群からのクローンは、二重特異性抗体によって構成されるか、又は二重特異性抗体で構成されるように設計されたＨＣＤＲ３をコードする核酸を含むことを条件とする。
用語「スーパー－クラスター４」又は「スーパークラスター４」は、本明細書では、クローンの群、並びに同じＶＨ Ｖ遺伝子セグメントの使用（ＶＨ３－９）、及びＨＣＤＲ３において少なくとも７０％の配列同一性かつそのスーパークラスターのメンバーと同じＨＣＤＲ３長を有することに基づいて、クローンの群が産生することができる結合ドメインを指す。例えば、ＭＦ８５０８、ＭＦ８９９８、ＭＦ１０４０１、及びＭＦ１０４２８が含まれる。別の好ましい実施形態では、本明細書における抗ＣＤ３抗体は、ＶＨ３－９の同じＶＨ Ｖ遺伝子セグメントの使用、及び／又はＨＣＤＲ３における少なくとも８０％の同一性、より好ましくはＨＣＤＲ３における９０％、最も好ましくは９５％の同一性かつ同じＨＣＤＲ３長を有することに基づく。別の好ましい実施形態では、本明細書における抗ＣＤ３抗体は、ＶＨ３－９の同じＶＨ Ｖ遺伝子セグメントの使用、及び／又はＨＣＤＲ３における少なくとも８０％の同一性かつコードされたＣＤＲ３セグメントＤＨＲＧＹＧＤＹＥＧＧＧＦＤＹと比べて同じＨＣＤＲ３長を有することに基づき、好ましくはＨＣＤＲ３における少なくとも９０％の配列同一性かつ同じＨＣＤＲ３長を有し、より好ましくは９５％又は最も好ましくは９８％の同一性かつ同じＨＣＤＲ３長を有するが、但し、ＨＣＤＲ３配列ＤＨＲＧＹＧＤＹＥＧＧＧＦＤＹをコードする核酸を含むクローンは除外されることを条件とし、あるいはＶＨ配列
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＴＳＧＦＮＦＤＤＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＤＩＳＷＳＳＧＳＩＧＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＷＬＱＭＮＳＬＲＴＥＤＴＡＬＹＦＣＡＫＤＨＲＧＹＧＤＹＥＧＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳをコードする核酸を含むクローンは、
除外されることを条件とし、あるいは当該群からのクローンは、二重特異性抗体によって構成されるか、又は二重特異性抗体で構成されるように設計されたＨＣＤＲ３をコードする核酸を含むことを条件とする。
用語「スーパー－クラスター７」又は「スーパークラスター７」は、本明細書では、クローンの群、並びに同じＶＨ Ｖ遺伝子セグメントの使用（ＶＨ５－５１）、及びＨＣＤＲ３において少なくとも７０％の配列同一性かつそのスーパークラスターのメンバーと同じＨＣＤＲ３長を有することに基づいて、クローンの群が産生することができる結合ドメインを指す。例えば、ＭＦ９２４９及びＭＦ９２６７が含まれる。別の好ましい実施形態では、本明細書における抗ＣＤ３抗体は、ＶＨ５－５１の同じＶＨ Ｖ遺伝子セグメントの使用、及び／又はＨＣＤＲ３における少なくとも８０％の同一性、より好ましくはＨＣＤＲ３における９０％、最も好ましくは９５％の同一性かつ同じＨＣＤＲ３長を有することに基づく。別の好ましい実施形態では、本明細書における抗ＣＤ３抗体は、ＶＨ５－５１の同じＶＨ Ｖ遺伝子セグメントの使用、及び／又はＨＣＤＲ３における少なくとも８０％の同一性かつコードされたＣＤＲ３セグメントＨＩＲＹＦＤＷＳＥＤＹＨＹＹＬＤＶと比べて同じＨＣＤＲ３長を有することに基づき、好ましくはＨＣＤＲ３における少なくとも９０％の配列同一性かつ同じＨＣＤＲ３長を有し、より好ましくは９５％又は最も好ましくは９８％の同一性かつ同じＨＣＤＲ３長を有する。
本発明は、
Ｖ遺伝子セグメントＶＨ１－６９、又は
当該Ｖ遺伝子セグメントの配列に対して、少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、及びより好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を含むＶ遺伝子セグメントＶＨ１－６９の変異体によってコードされたＶＨを有する可変ドメインを含む二重特異性抗体を更に提供し、
このＶＨは、
ＭＦ８０４８、ＭＦ８０５６、ＭＦ８０５７、ＭＦ８０５８、ＭＦ８０７８又はＭＦ８１０１のＨＣＤＲ３、
又は当該ＨＣＤＲ３と少なくとも７０％の配列同一性及び当該ＨＣＤＲ３の同じ長さを含む、当該ＨＣＤＲ３の変異体を更に含む。
好ましい実施形態では、該ＨＣＤＲ３の該変異体は、該ＨＣＤＲ３と同じ長さ、及び該ＨＣＤＲ３と少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは、該ＨＣＤＲ３の配列に対して少なくとも９０％、及びより好ましくは、少なくとも９５％の配列同一性を含む。
いくつかの実施形態では、該二重特異性抗体は、Ｖ遺伝子セグメントＶＨ１－６９によりコードされるＶＨ、あるいは、ＨＣＤＲ２配列ＧＦＩＰＶＬＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧ、又はＧＩＩＰＬＦＧＴＩＴＹＡＱＫＦＱＧ又はＳＩＩＰＩＦＧＴＩＴＹＡＱＫＦＱＧを有するＶ遺伝子セグメントＶＨ１－６９の変異体によりコードされるＶＨを有さない。
いくつかの実施形態では、該二重特異性抗体は、Ｖ遺伝子セグメントＶＨ１－６９によりコードされるＶＨ、あるいは、ＶＨ配列ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＲＳＦＧＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＦＩＰＶＬＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＩＡＤＫＳＴＮＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＧＮＷＮＰＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、又は
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＤＡＦＫＳＫＴＦＴＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＬＧＧＩＩＰＬＦＧＴＩＴＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＮＴＡＦＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＭＹＹＣＴＲＲＧＮＷＮＰＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、又は
ＥＶＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＶＴＦＮＳＲＴＦＴＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＬＧＳＩＩＰＩＦＧＴＩＴＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＦＭＥＬＴＳＬＲＳＥＤＴＡＩＹＹＣＴＲＲＧＮＷＮＰＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳを有するＶ遺伝子セグメントＶＨ１－６９の変異体によりコードされるＶＨを有さない。
本発明は、
Ｖ遺伝子セグメントＶＨ３－２３、又は
当該Ｖ遺伝子セグメントの配列に対して、少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、及びより好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を含むＶ遺伝子セグメントＶＨ２－２３の変異体によってコードされたＶＨを有する可変ドメインを含む二重特異性抗体を更に提供し、
このＶＨが、
ＭＦ８３９７、又はＭＦ８５６２のＨＣＤＲ３、
又は当該ＨＣＤＲ３と少なくとも７０％の配列同一性及び当該ＨＣＤＲ３の同じ長さを含む、当該ＨＣＤＲ３の変異体を更に含む。
好ましい実施形態では、該ＨＣＤＲ３の該変異体は、当該ＨＣＤＲ３と同じ長さ、及び当該ＨＣＤＲ３と少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは、当該ＨＣＤＲ３の配列に対して少なくとも９０％、より好ましくは、少なくとも９３％、及びより好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を含む。
いくつかの実施形態では、当該二重特異性抗体は、Ｖ遺伝子セグメントＶＨ３－２３によりコードされるＶＨ、あるいはＨＣＤＲ３配列ＤＧＧＹＳＹＧＰＹＷＹＦＤＬを有するＶ遺伝子セグメントＶＨ３－２３の変異体によってコードされるＶＨを有さない。
いくつかの実施形態では、当該二重特異性抗体は、Ｖ遺伝子セグメントＶＨ３－２３によりコードされるＶＨ、あるいは、ＶＨ配列ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＴＳＧＦＫＦＳＳＹＡＬＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＳＧＳＧＲＴＴＷＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＧＧＹＳＹＧＰＹＷＹＦＤＬＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳを有するＶ遺伝子セグメントＶＨ３－２３の変異体によりコードされるＶＨを有さない。
本発明は、
Ｖ遺伝子セグメントＶＨ３－９、又は
当該Ｖ遺伝子セグメントの配列に対して、少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、及びより好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を含むＶ遺伝子セグメントＶＨ３－９の変異体によってコードされたＶＨを有する可変ドメインを含む二重特異性抗体を更に提供し、
このＶＨは、
ＭＦ８５０８、ＭＦ８９９８、ＭＦ１０４１、又はＭＦ１０４２８のＨＣＤＲ３、
又は当該ＨＣＤＲ３と少なくとも７０％の配列同一性及び当該ＨＣＤＲ３の同じ長さを含む、当該ＨＣＤＲ３の変異体を更に含む。
好ましい実施形態では、該ＨＣＤＲ３の該変異体は、該ＨＣＤＲ３と同じ長さ、及び該ＨＣＤＲ３と少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは、該ＨＣＤＲ３の配列に対して少なくとも９０％、及びより好ましくは、少なくとも９５％の配列同一性を有する。
いくつかの実施形態では、当該二重特異性抗体は、Ｖ遺伝子セグメントＶＨ３－９によりコードされるＶＨ、あるいはＨＣＤＲ３配列ＤＨＲＧＹＧＤＹＥＧＧＧＦＤＹを有するＶ遺伝子セグメントＶＨ３－９の変異体の変異体によりコードされたＶＨを有さない。
いくつかの実施形態では、当該二重特異性抗体は、Ｖ遺伝子セグメントＶＨ３－９によりコードされるＶＨ、あるいは、ＶＨ配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＴＳＧＦＮＦＤＤＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＤＩＳＷＳＳＧＳＩＧＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＷＬＱＭＮＳＬＲＴＥＤＴＡＬＹＦＣＡＫＤＨＲＧＹＧＤＹＥＧＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳを有するＶ遺伝子セグメントＶＨ３－９の変異体によりコードされたＶＨを有さない。
本発明は、
Ｖ遺伝子セグメントＶＨ５－５１、又は
当該Ｖ遺伝子セグメントの配列に対して、少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、及びより好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を含むＶ遺伝子セグメントＶＨ５－５１の変異体によってコードされたＶＨを有する可変ドメインを含む二重特異性抗体を更に提供し、
このＶＨは、
ＭＦ９２４９又はＭＦ９２６７のＨＣＤＲ３、
又は当該ＨＣＤＲ３と少なくとも７０％の配列同一性及び当該ＨＣＤＲ３の同じ長さを含む、当該ＨＣＤＲ３の変異体を更に含む。
好ましい実施形態では、該ＨＣＤＲ３の該変異体は、該ＨＣＤＲ３と同じ長さ、及び該ＨＣＤＲ３と少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは、該ＨＣＤＲ３の配列に対して少なくとも９０％、及びより好ましくは、少なくとも９５％の配列同一性を含む。
本明細書で定義される本発明によって提供される二重特異性抗体は、好ましくは、ＰＣＴ／ＮＬ２０１９／０５０１９９に定義されるＣＤ３結合可変ドメインを含む二重特異性抗体ではない。
本発明は、
Ｖ遺伝子セグメントＶＨ１－６９、又は
当該Ｖ遺伝子セグメントの配列に対して、少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、及びより好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を含むＶ遺伝子セグメントＶＨ１－６９の変異体によってコードされたＶＨを更に提供し、
このＶＨは、
ＭＦ８０４８、ＭＦ８０５６、ＭＦ８０５７、ＭＦ８０５８、ＭＦ８０７８又はＭＦ８１０１のＨＣＤＲ３、
又は当該ＨＣＤＲ３と少なくとも７０％の配列同一性及び当該ＨＣＤＲ３の同じ長さを含む、当該ＨＣＤＲ３の変異体を更に含む。
好ましい実施形態では、該ＨＣＤＲ３の該変異体は、該ＨＣＤＲ３と同じ長さ、及び該ＨＣＤＲ３と少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは、該ＨＣＤＲ３の配列に対して少なくとも９０％、及びより好ましくは、少なくとも９５％の配列同一性を含む。
いくつかの実施形態では、当該ＶＨは、Ｖ遺伝子セグメントＶＨ１－６９によってコードされるＶＨではなく、あるいは、ＨＣＤＲ２配列ＧＦＩＰＶＬＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧ、又はＧＩＩＰＬＦＧＴＩＴＹＡＱＫＦＱＧ又はＳＩＩＰＩＦＧＴＩＴＹＡＱＫＦＱＧを有するＶ遺伝子セグメントＶＨ１－６９の変異体によりコードされるＶＨではない。
いくつかの実施形態では、当該ＶＨは、Ｖ遺伝子セグメントＶＨ１－６９によってコードされるＶＨではなく、あるいは、ＶＨ配列
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＲＳＦＧＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＦＩＰＶＬＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＩＡＤＫＳＴＮＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＧＮＷＮＰＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、又は
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＤＡＦＫＳＫＴＦＴＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＬＧＧＩＩＰＬＦＧＴＩＴＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＮＴＡＦＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＭＹＹＣＴＲＲＧＮＷＮＰＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、又は
ＥＶＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＶＴＦＮＳＲＴＦＴＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＬＧＳＩＩＰＩＦＧＴＩＴＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＦＭＥＬＴＳＬＲＳＥＤＴＡＩＹＹＣＴＲＲＧＮＷＮＰＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳを有するＶ遺伝子セグメントＶＨ１－６９の変異体によりコードされるＶＨではない。
本発明は、
Ｖ遺伝子セグメントＶＨ３－２３、又は
当該Ｖ遺伝子セグメントの配列に対して、少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、及びより好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を含むＶ遺伝子セグメントＶＨ２－２３の変異体によってコードされたＶＨを更に提供し、
このＶＨは、
ＭＦ８３９７、又はＭＦ８５６２のＨＣＤＲ３、
又は当該ＨＣＤＲ３と少なくとも７０％の配列同一性及び当該ＨＣＤＲ３の同じ長さを含む、当該ＨＣＤＲ３の変異体を更に含む。
好ましい実施形態では、該ＨＣＤＲ３の該変異体は、当該ＨＣＤＲ３と同じ長さ、及び当該ＨＣＤＲ３と少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは、当該ＨＣＤＲ３の配列に対して少なくとも９０％、より好ましくは、少なくとも９３％、及びより好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を含む。
いくつかの実施形態では、当該ＶＨは、Ｖ遺伝子セグメントＶＨ３－２３によりコードされるＶＨではなく、あるいはＨＣＤＲ３配列ＤＧＧＹＳＹＧＰＹＷＹＦＤＬを有するＶ遺伝子セグメントＶＨ３－２３の変異体によってコードされるＶＨではない。
いくつかの実施形態では、当該ＶＨは、Ｖ遺伝子セグメントＶＨ３－２３によりコードされるＶＨではなく、あるいは、ＶＨ配列ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＴＳＧＦＫＦＳＳＹＡＬＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＳＧＳＧＲＴＴＷＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＧＧＹＳＹＧＰＹＷＹＦＤＬＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳを有するＶ遺伝子セグメントＶＨ３－２３の変異体によりコードされるＶＨではない。
本発明は、
Ｖ遺伝子セグメントＶＨ３－９、又は
当該Ｖ遺伝子セグメントの配列に対して、少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、及びより好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を含むＶ遺伝子セグメントＶＨ３－９の変異体によってコードされたＶＨを更に提供し、
このＶＨは、
ＭＦ８５０８、ＭＦ８９９８、ＭＦ１０４０１、又はＭＦ１０４２８のＨＣＤＲ３、
又は当該ＨＣＤＲ３と少なくとも７０％の配列同一性及び当該ＨＣＤＲ３の同じ長さを含む、当該ＨＣＤＲ３の変異体を更に含む。
好ましい実施形態では、該ＨＣＤＲ３の該変異体は、該ＨＣＤＲ３と同じ長さ、及び該ＨＣＤＲ３と少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは、該ＨＣＤＲ３の配列に対して少なくとも９０％、及びより好ましくは、少なくとも９５％の配列同一性を含む。
いくつかの実施形態では、当該ＶＨは、Ｖ遺伝子セグメントＶＨ３－９によってコードされるＶＨではなく、あるいはＨＣＤＲ３配列ＤＨＲＧＹＧＤＹＥＧＧＧＦＤＹを有するＶ遺伝子セグメントＶＨ３－９の変異体によりコードされたＶＨではない。
いくつかの実施形態では、当該ＶＨは、Ｖ遺伝子セグメントＶＨ３－９によってコードされるＶＨではなく、あるいは、ＶＨ配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＴＳＧＦＮＦＤＤＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＤＩＳＷＳＳＧＳＩＧＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＷＬＱＭＮＳＬＲＴＥＤＴＡＬＹＦＣＡＫＤＨＲＧＹＧＤＹＥＧＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳを有するＶ遺伝子セグメントＶＨ３－９によりコードされたＶＨではない。
本発明は、
Ｖ遺伝子セグメントＶＨ５－５１、又は
当該Ｖ遺伝子セグメントの配列に対して、少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、及びより好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を含むＶ遺伝子セグメントＶＨ５－５１の変異体によってコードされたＶＨを更に提供し、
このＶＨは、
ＭＦ９２４９又はＭＦ９２６７のＨＣＤＲ３、
又は当該ＨＣＤＲ３と少なくとも７０％の配列同一性及び当該ＨＣＤＲ３の同じ長さを含む、当該ＨＣＤＲ３の変異体を更に含む。
好ましい実施形態では、該ＨＣＤＲ３の該変異体は、該ＨＣＤＲ３と同じ長さ、及び該ＨＣＤＲ３と少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは、該ＨＣＤＲ３の配列に対して少なくとも９０％、及びより好ましくは、少なくとも９５％の配列同一性を含む。
本明細書で定義される本発明によって提供されるＶＨは、好ましくは、ＰＣＴ／ＮＬ２０１９／０５０１９９に定義されるＣＤ３結合可変ドメインのＶＨではない。
また、抗原結合タンパク質又は抗体、好ましくは二重特異性抗体が提供され、ＣＤＲは、特許請求されるＣＤＲに対して７０％、好ましくは８０％、より好ましくは９０％の同一性を有する。好ましい実施形態では、抗原結合タンパク質又は抗体は、特許請求されるＣＤＲに対して、最大で２、好ましくは最大で１個、及びより好ましくは最大で０個のアミノ酸残基の変異、挿入、置換、欠失、又は付加を有するＣＤＲを含む二重特異性抗体である。
抗体による抗原結合は、典型的には、抗体の相補性領域と抗原及び可変ドメインとの両方の特定の三次元構造を介して介在され、これらの２つの構造が、抗体のランダムで非特異的な粘着とは対照的に、正確に一緒に結合する（ロックとキーとに類似した相互作用）ことを可能にする。抗体は、典型的には、抗原のエピトープを認識し、このようなエピトープは他のタンパク質中に同様に存在してもよく、ＣＤ３又はＣＬＥＣ１２Ａに結合する本発明による抗体は、このような他のタンパク質が同じエピトープを含有する場合にも、他のタンパク質も同様に認識し得る。したがって、用語「結合」は、同じエピトープを含有する別の１つ又は複数のタンパク質に対する抗体の結合を排除するものではない。本発明の抗体中のＣＤ３に結合する重鎖／軽鎖の組み合わせは、生後、好ましくは成人ヒトにおいて、細胞の膜上の他のタンパク質に結合しない。ＣＬＥＣ１２Ａ、ＥＧＦＲ、ＰＤ－Ｌ１又は本発明の腫瘍細胞抗原に結合する重鎖／軽鎖の組み合わせは、生後、好ましくは成人ヒトにおいて、細胞の膜上の他のタンパク質に結合しない。好適な腫瘍抗原特異的アームは、ＰＣＴ／ＮＬ２０１９／０５０１９９に開示されている。
「複数」とは、２つ以上を意味する。
本明細書に記載の抗体の「変異体」は、抗体の機能的部分、誘導体及び／又は類似体を含み得る。これには、抗体模倣体、モノボディ、アプタマーが含まれる。
変異体は、典型的には、抗体の結合特異性、例えば二重特異性抗体の特異性を維持する。変異体は、本明細書に記載されるような結合ドメイン、多量体又は抗体の機能的部分又は誘導体であり得る。
本明細書に記載の結合ドメイン、多量体又は抗体の機能的部分は、かかる結合ドメイン、多量体又は抗体と同じ標的に結合する可変ドメインを含む部分である。
本明細書に記載の抗体の機能的誘導体は、連結領域によって連結された、１つの標的に結合する可変ドメインと、もう１つの標的に結合する可変ドメインとを含むタンパク質である。可変ドメインは、かかる可変ドメイン、又はＦａｂ断片若しくはリンカーを介して一緒に連結されたＶＨ及びＶＬを含む単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片などの可変ドメイン様分子であってもよい。抗体可変ドメイン又は抗体可変ドメイン様分子は、異なる方法で互いに連結することができる。１つ、２つ、又はそれ以上の可変ドメインに結合することができる様々なリンカー及びキャリア構造が記載されている。本明細書に記載される抗原結合タンパク質は、このような可変ドメインのうちの少なくとも１つを含むタンパク質である。二重特異性又は多重特異性抗原結合タンパク質の場合、このようなタンパク質は、少なくとも２つが異なる標的に結合する２つ以上の可変ドメインを含む。可変ドメインは、連結部分を介して互いに連結される。これは、典型的には、０～１５個、好ましくは３～１２個、より好ましくは約５～８個のアミノ酸残基のストレッチである。可変ドメイン様分子の他の例は、いわゆる単一ドメイン抗体断片である。単一ドメイン抗体断片（ｓｉｎｇｌｅ－ｄｏｍａｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｒａｇｍｅｎｔ、ｓｄＡｂ）は、単一の単量体可変抗体領域を有する抗体断片である。抗体全体と同様に、これは特定の抗原に選択的に結合することができる。わずか１２～１５ｋＤａの分子量しか有さない場合、単一ドメイン抗体断片は、２つの重鎖タンパク質及び２つの軽鎖で構成される一般的な抗体（１５０～１６０ｋＤａ）よりもはるかに小さく、更にはＦａｂ断片（約５０ｋＤａ、１つの軽鎖と半分の重鎖）及び単鎖可変断片（約２５ｋＤａ、２つの可変領域、１つは軽鎖から、１つは重鎖から）よりも小さい。単一ドメイン抗体自体は、正常な抗体よりもはるかに小さいことはない（典型的には、９０～１００ｋＤａである）。単一ドメイン抗体断片は、ラクダに見られる重鎖抗体から遺伝子操作することができ、これらはＶＨＨ断片（ナノボディ（登録商標））と呼ばれる。一部の魚類もまた、ＶＮＡＲ断片と呼ばれる単一ドメイン抗体断片を得ることができる重鎖のみの抗体（ＩｇＮＡＲ、「免疫グロブリン新抗原受容体」）を有する。代替のアプローチは、ヒト又はマウスからの共通免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）からの二量体可変ドメインを単量体に分割することである。単一ドメイン抗体へのほとんどの研究は、現在、重鎖可変ドメインに基づくが、軽鎖に由来するナノボディも、標的エピトープに結合することができることが示されている。可変ドメイン様分子の他の非限定的な例は、ＶＨＨ、ヒトドメイン抗体（Ｄｏｍａｉｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ、ｄＡｂ）及びユニボディである。好ましい機能的部分は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む可変ドメインを含む部分である。このような可変ドメインの非限定的な例は、Ｆ（ａｂ）－断片及び単鎖Ｆｖ断片である。可変ドメイン（様）結合の二重特異性フォーマットは、例えば、２つの異なるｓｃＦｖに結合されたヒト血清アルブミン（Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｕｍ Ａｌｂｕｍｉｎ、ＨＳＡ）；二量体化モチーフを介して一緒に結合された２つの異なるｓｃＦｖ、又はｓｃＦｖ断片の二量体化をもたらすために、螺旋束又はコイルドコイルなどの自己会合二次構造を含む二重特異性ミニ抗体（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ（２００７）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２５：１２３３－３４）である。ｓｃＦｖをリンカーに結合するための好適なＨＳＡリンカー及び方法の例は、国際公開第２００９／１２６９２０号に記載されている。
機能的誘導体は、抗体模倣体、ポリペプチド、アプタマー、又はこれらの組み合わせであり得る。これらのタンパク質又はアプタマーは、典型的には、１つの標的に結合する。本発明のタンパク質は、２つ以上の標的に結合する。これらの抗体、抗体模倣体、ポリペプチド及びアプタマーの任意の組み合わせは、当該技術分野において既知の方法によって一緒に連結され得ることを理解されたい。例えば、いくつかの実施形態では、本発明の結合分子は、コンジュゲート又は融合タンパク質である。
抗体模倣体は、抗体と同様に、抗原に特異的に結合することができるが、抗体に構造的に関連しないポリペプチドである。抗体模倣体は、通常、約３～２０ｋＤａのモル質量を有する人工ペプチド又はタンパク質である。抗体模倣体の非限定的な例は、アフィボディ分子（典型的には、プロテインＡのＺドメインに基づく）、アフィリン（典型的には、ガンマ－Ｂ結晶質又はユビキチンに基づく）、アフィマー（典型的には、シスタチンに基づく）、アフィチン（典型的には、スルホロブス・アシドカルダリス（Ｓｕｌｆｏｌｏｂｕｓ ａｃｉｄｏｃａｌｄａｒｉｕｓ）からのＳａｃ７ｄに基づく）、アルファボディ（典型的には、三重螺旋コイルドコイルに基づく）、アンチカリン（典型的には、リポカリンに基づく）、アビマー（典型的には、様々な膜受容体のＡドメインに基づく）、ＤＡＲＰｉｎ（典型的にはアンキリン反復モチーフに基づく）、フィノマー（典型的にはＦｙｎ７のＳＨ３ドメインに基づく）、ｋｕｎｉｔｚドメインペプチド（典型的には、様々なプロテアーゼ阻害剤のＫｕｎｉｔｚドメインに基づく）、及びモノボディ（典型的にはフィブロネクチンのＩＩＩ型ドメインに基づく）である。
モノボディは、分子スカフォールドとしてフィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン（ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ ｔｙｐｅ ＩＩＩ ｄｏｍａｉｎ、ＦＮ３）を使用して構築される合成結合タンパク質である。モノボディは、標的結合タンパク質を作製するための抗体の代替物である。
モノボディ及び他の抗体模倣体は、典型的には、スキャフォールドの部分が、分子ディスプレイ及びファージディスプレイ、ｍＲＮＡディスプレイ、及び酵母表面ディスプレイなどの指向進化技術を使用して多様化されるコンビナトリアルライブラリーから生成される。
アプタマーは、特定の標的分子に結合するオリゴヌクレオチド又はペプチド分子である。アプタマーは、通常、大きなランダム配列プールから選択することによって作製されるが、天然アプタマーもリボスイッチ中に存在する。アプタマーは、巨大分子として基本研究及び臨床目的の両方に使用することができる。
本明細書及び添付の特許請求の範囲を通して、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、及び「有する（ｈａｖｉｎｇ）」という単語、並びに「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、及び「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」などの変形は、包括的に解釈されるべきである。すなわち、これらの単語は、文脈によって許される場合、具体的に列挙されていない他の要素又は整数の可能な包含を伝えることを意図している。
冠詞「ａ」及び「ａｎ」は、本明細書では、その冠詞の文法的目的語の１つ又は２つ以上（すなわち、１つ又は少なくとも１つ）を指すために使用される。一例として、「要素」は、１つの要素又は２つ以上の要素を意味し得る。
本発明の抗体は、好ましくは二重特異性抗体又は多重特異性抗体である。二重特異性抗体又は多重特異性抗体は、好ましくは、少なくともヒトＣＤ３に結合する。
本発明の抗原結合タンパク質又は抗体は、好ましくは、二重特異性若しくは多重特異性抗原結合タンパク質又は抗体である。二重特異性若しくは多重特異性抗原結合タンパク質又は抗体は、好ましくは少なくともヒトＣＤ３に結合し、更に好ましくは少なくとも、ヒト腫瘍細胞上で発現される表面分子に結合する。好ましい実施形態では、二重特異性若しくは多重特異性抗原結合タンパク質又は抗体は、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＥＡ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＣＳ－１、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＰＣＡＭ、ＤＬＬ３、ＬＧＲ５、ＭＳＬＮ、ＰＤ－Ｌ１、ＦＯＬＲ１、ＦＯＬＲ３、ＨＥＲ２、ＨＭ１．２４、ＭＣＳＰ、又はＰＳＭＡに結合する。特に好ましい実施形態では、二重特異性抗体は、ＣＬＥＣ１２Ａに結合する。特に好ましい実施形態では、多重特異性抗体は、ＣＤ３、ＰＤ－Ｌ１及びＥＧＦＲに結合する。
本明細書で使用される場合、用語「ＣＬＥＣ１２Ａ」は、Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡを指す。ＣＬＥＣ１２Ａは、Ｃ型レクチンタンパク質ＣＬＬ－１；ＭＩＣＬ；樹状細胞関連レクチン２；Ｃ型レクチンスーパーファミリー；骨髄阻害性Ｃ型レクチン様受容体；Ｃ型レクチン様分子－１；ＤＣＡＬ２；ＣＬＬ１；Ｃ型レクチン様分子１；ＤＣＡＬ－２；キラー細胞レクチン様受容体サブファミリーＬ、メンバー１（Ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌ ｌｅｃｔｉｎ ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｕｂｆａｍｉｌｙ Ｌ，ｍｅｍｂｅｒ １、ＫＬＲＬ１）；ＣＤ３７１（分化群３７１）（Ｂａｋｋｅｒ Ａ．ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００４，６４．ｐ８８４３ ５０；ＧｅｎＢａｎｋ（商標）アクセス番号：ＡＹ５４７２９６；Ｚｈａｎｇ Ｗ．ｅｔ ａｌ．ＧｅｎＢａｎｋ（商標）アクセス番号：ＡＦ２４７７８８；Ａ．Ｓ．Ｍａｒｓｈａｌｌ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２００４，２７９．ｐ１４７９２－８０２；ＧｅｎＢａｎｋ（商標）アクセス番号：ＡＹ４９８５５０；Ｙ．Ｈａｎ ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ ２００４，１０４、ｐ２８５８ ６６；Ｈ．Ｆｌｏｙｄ，ｅｔ ａｌ．ＧｅｎＢａｎｋＴＭアクセス番号：ＡＹ４２６７５９；Ｃ．Ｈ．Ｃｈｅｎ，ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ ２００６，１０７，ｐ１４５９ ６７）と称される。Ｉｄ；ＨＧＮＣ：３１７１３；Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：１６０３６４；Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００１７２３２２；ＯＭＩＭ：６１２０８８；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｑ５ＱＧＺ９、とも称される。
ＣＬＥＣ１２Ａは、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）における、白血病芽球細胞及び白血病幹細胞、例えば、ＣＤ３４陰性又はＣＤ３４低発現白血病幹細胞（側集団）に発現する抗原であり（Ａ．Ｂ．Ｂａｋｋｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２００４，６４，ｐ８４４３ ５０；Ｖａｎ Ｒｈｅｎｅｎ ｅｔ ａｌ．２００７ Ｂｌｏｏｄ １１０：２６５９；Ｍｏｓｈａｖｅｒ ｅｔ ａｌ．２００８ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ ２６：３０５９）、並びに骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）において発現する抗原である（上記Ｂａｋｋｅｒ ｅｔ ａｌ．２００４及びＴｏｆｆ－Ｐｅｔｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．１７５（３）：３９３－４０１，２０１６）。ＣＬＥＣ１２Ａの発現は、その他の点では、造血系列の細胞に、特に末梢血及び骨髄中の骨髄系列、すなわち顆粒球、単球、及び樹状細胞前駆体に制限されると考えられている。より重要なことに、ＣＬＥＣ１２Ａは、正常な造血幹細胞には存在しない。本明細書において、ＣＬＥＣ１２Ａについて言及される場合、特に明記しない限りヒトＣＬＥＣ１２Ａ（配列番号１；図１９）を指す。
「ＣＬＥＣ１２Ａ」という用語は、例えば、Ｂａｋｋｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２００４，６４，ｐ８４４３－５０及びＭａｒｓｈａｌｌ ２００４－Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７９（１５）、ｐ１４７９２－８０２に記載されているように、骨髄発現プロファイル（表面発現レベル及びｍＲＮＡレベルの両方）を保持する本明細書で言及される全ての変異体（スプライス及び突然変異などの）及びそのアイソフォームを意味する。受託番号は主に、更なる同定方法として提供されるが、タンパク質の実際の配列は、例えば、いくつかの癌などで発生するものなどのコード遺伝子の変異のために変化する可能性がある。
用語「ＣＤ３」（分化群３）は、ＣＤ３γ鎖（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ Ｐ０９６９３）、ＣＤ３δ鎖（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ Ｐ０４２３４）、ＣＤ３ε鎖（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ Ｐ０７７６６）、及びＣＤ３ζ鎖ホモ二量体（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ Ｐ２０９６３）から構成されるタンパク質複合体を指す。ＣＤ３εは、様々な別名の下で既知であり、そのうちのいくつかは、「ＣＤ３ｅ分子、イプシロン（ＣＤ３－ＴＣＲ複合体）」；「ＣＤ３ｅ抗原、イプシロンポリペプチド（ＴｉＴ３複合体）」；Ｔ細胞表面抗原Ｔ３／Ｌｅｕ－４イプシロン鎖；Ｔ３Ｅ；Ｔ細胞抗原受容体複合体、Ｔ３のイプシロンサブユニット；ＣＤ３ｅ抗原；ＣＤ３－イプシロン３；ＩＭＤ１８；ＴＣＲＥである。ＣＤ３Ｅ遺伝子についてのＩｄは、ＨＧＮＣ：１６７４；Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：９１６：Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００１９８８５１；ＯＭＩＭ：１８６８３０、及びＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ０７７６６である。これらの鎖は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）及びζ鎖と会合して、ＴＣＲ複合体を形成し、分裂促進シグナル伝達によって、Ｔリンパ球において活性化シグナルを生成することができる。ＣＤ３は、Ｔ細胞及びＮＫ Ｔ細胞上で発現される。本明細書において、ＣＤ３について言及される場合、特に明記しない限りヒトＣＤ３（配列番号２～５；図２０）を指す。
ＢＣＭＡは、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー、メンバー１７（ＴＮＦＲＳＦ１７）；ＴＮＦＲＳＦ１３Ａ２；Ｂ細胞成熟抗原；ＢＣＭ；Ｂ細胞成熟因子；Ｂ細胞成熟タンパク質；ＣＤ２６９又はＣＤ２６９抗原とも称される。Ｉｄ：ＨＧＮＣ：１１９１３；Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：６０８；Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ００００００４８４６２；ＯＭＩＭ：１０９５４５；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｑ０２２２３である。
ＣＤ１９は、ＣＤ１９分子；Ｔ細胞表面抗原Ｌｅｕ－１２；ＣＤ１９抗原；ＣＶＩＤ３分化抗原ＣＤ１９；Ｂ４；Ｂリンパ球表面抗原Ｂ４；Ｂリンパ球抗原ＣＤ１９とも称される。Ｉｄ；ＨＧＮＣ：１６３３；Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：９３０；Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００１７７４５５；ＯＭＩＭ：１０７２６５；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ１５３９１である。
ＣＤ２０は、膜貫通４－ドメインサブファミリーＡメンバー１（ＭＳ４Ａ１）；ＭＳ４Ａ２；ＣＤ２０；Ｓ７；白血球表面抗原Ｌｅｕ－１６；Ｂリンパ球抗原ＣＤ２０；Ｂｐ３５；Ｂリンパ球細胞表面抗原Ｂ１；ＣＤ２０抗原；ＣＤ２０受容体；ＣＶＩＤ５；Ｂリンパ球表面抗原Ｂ１；Ｂ１；膜貫通４－ドメインサブファミリーＡメンバー１；ＬＥＵ－１６とも称される。Ｉｄ；ＨＧＮＣ：７３１５；Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：９３１；Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００１５６７３８；ＯＭＩＭ：１１２２１０；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ１１８３６である。
ＣＤ３０は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー、メンバー８（ＴＮＦＲＳＦ８）とも呼ばれ；Ｋｉ－１抗原；ＣＤ３０：Ｋｉ－１；Ｄ１Ｓ１６６Ｅ；サイトカイン受容体ＣＤ３０；リンパ球活性化抗原ＣＤ３０；腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー８、ＣＤ３０Ｌ受容体；ＣＤ３０抗原とも称される。Ｉｄ；ＨＧＮＣ：１１９２３；Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：９４３：Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００１２０９４９；ＯＭＩＭ：１５３２４３；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ２８９０８である。
ＣＤ３３は、ＣＤ３３分子；ＳＩＧＬＥＣ－３；ＣＤ３３抗原（Ｇｐ６７）；骨髄表面抗原ＣＤ３３；シアル酸結合Ｉｇ様レクチン３；Ｓｉｇｌｅｃ－３；ＳＩＧＬＥＣ３；ＣＤ３３抗原及びｇｐ６７とも称される。Ｉｄ；ＨＧＮＣ：１６５９；Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：９４５；Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００１０５３８３；ＯＭＩＭ：１５９５９０；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ２０１３８である。
ＣＤ３８は、ＣＤ３８分子；Ｔ１０；ＣＤ３８抗原（Ｐ４５）；ＣＡＤＰｒヒドロラーゼ１；ＡＤＰ－リボシルシクラーゼ１；ＡＤＰ－リボシルシクラーゼ／環状ＡＤＰリボースヒドロラーゼ；ＮＡＤ（＋）ヌクレオシダーゼ；ＥＣ３．２．２．５；環状ＡＤＰリボースヒドロラーゼ１；ＣＤ３８抗原とも称される。Ｉｄ；ＨＧＮＣ：１６６７；Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：９５２；Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００００４４６８；ＯＭＩＭ：１０７２７０；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ２８９０７である。
ＣＤ４４は、ＣＤ４４分子（Ｉｎｄｉａｎ式血液型）；ＩＮ；ＭＤＵ２；ＣＤ４４抗原（ホーミング機能及びＩｎｄｉａｎ式血液型系）；ＭＤＵ３；ＣＤＷ４４；ＭＩＣ４；ＣＳＰＧ８；コンドロイチン硫酸プロテオグリカン８；ＨＣＥＬＬ；造血細胞Ｅ及びＬ－選択性リガンド；ＭＣ５６；細胞外マトリックス受容体ＩＩＩ；Ｐｇｐ１；ヘパラン硫酸プロテオグリカン；細胞表面糖タンパク質ＣＤ４４；ヒアルロン酸受容体；エピカン；食細胞糖タンパク質１；ホーミング機能及びＩｎｄｉａｎ式血液型系；ＥＣＭＲ－ＩＩＩ；ＣＤｗ４４；ＨＵＴＣＨ－Ｉ；エピカン；ＬＨＲ；ＰＧＰ－１；ＣＤ４４抗原；ＰＧＰ－Ｉ；ＣＰ９０リンパ球ホーミング／接着受容体；食細胞糖タンパク質Ｉ；Ｈｅｒｍｅｓ抗原とも称される。Ｉｄ；ＨＧＮＣ：１６８１；Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：９６０；Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ００００００２６５０８；ＯＭＩＭ：１０７２６９；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ１６０７０である。
ＣＤ１２３は、細胞分裂周期１２３；細胞分裂周期１２３ホモログ；Ｃ１０ｏｒｆ７；細胞分裂周期タンパク質１２３ホモログ；Ｄ１２３；タンパク質Ｄ１２３；ＨＴ－１０８０；ＣＣＥＰ１２３；ＰＺ３２；ＣＥＰ８９；細胞分裂周期１２３ホモログ（出芽酵母（Ｓ．Ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ））；ＦＬＪ１４６４０；染色体１０オープンリーディングフレーム７とも称される。Ｉｄ；ＨＧＮＣ：１６８２７；Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：８８７２：Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００１５１４６５；ＯＭＩＭ：６１５４７０；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｏ７５７９４である。
ＣＤ１３８は、シンデカン１（ＳＣＤ１）；ＣＤ１３８；ＳＤＣ；ヘパラン硫酸プロテオグリカン繊維芽球増殖因子受容体；シンデカンプロテオグリカン１；シンデカン；ＳＹＮＤ１；シンデカン－１；ＣＤ１３８抗原とも称される。Ｉｄ；ＨＧＮＣ：１０６５８；Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：６３８２；Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００１１５８８４；ＯＭＩＭ：１８６３５５；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ１８８２７である。
ＣＥＡは、癌胎児性抗原関連細胞接着分子５（ＣＥＡＣＡＭ５）；胎児便抗原１００；ＣＤ６６ｅ；癌胎児性抗原；ＣＤ６６ｅ抗原とも称される。Ｉｄ；ＨＧＮＣ：１８１７；Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：１０４８；Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００１０５３８８；ＯＭＩＭ：１１４８９０；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ０６７３１である。
ＥＧＦＲはまた、表皮増殖因子受容体；赤芽球性白血病ウイルス（Ｖ－Ｅｒｂ－Ｂ）癌遺伝子ホモログ（鳥類）；ＥＲＢＢ１；ＰＩＧ６１；プロト癌遺伝子Ｃ－ＥｒｂＢ－１；鳥類赤芽球性白血病ウイルス（Ｖ－Ｅｒｂ－Ｂ）癌遺伝子ホモログ；受容体チロシンタンパク質キナーゼＥｒｂＢ－１；細胞増殖阻害タンパク質４０；細胞増殖誘導タンパク質６１；ＨＥＲ１；ｍＥＮＡ；ＥＣ２．７．１０．１；ＥＣ２．７．１０；上皮増殖因子受容体（鳥類赤芽球性白血病ウイルス（Ｖ－Ｅｒｂ－Ｂ）癌遺伝子ホモログ）とも称される。Ｉｄ；ＨＧＮＣ：３２３６；Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：１９５６；Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００１４６６４８；ＯＭＩＭ：１３１５５０；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ００５３３である。
ＥＧＦＲｖＩＩＩは、ＥＧＦＲの共通変異体である（Ｏｎｃｏｇｅｎｅ．２０１３ Ｍａｙ ２３；３２（２１）：２６７０－８１．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｏｎｃ．２０１２．２８０．Ｅｐｕｂ ２０１２ Ｊｕｌ １６）。
デルタ様３（ＤＬＬ３）は、デルタ様３）；ショウジョウバエデルタホモログ３；デルタ３；デルタ（ショウジョウバエ）様３；ＳＣＤＯ１とも称される。ＤＬＬ３についてのＩｄは、ＨＧＮＣ：２９０９；Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：１０６８３；Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ００００００９０９３２；ＯＭＩＭ：６０２７６８、及びＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｑ９ＮＹＪ７である。
ＬＧＲ５は、ロイシンリッチリピート含有Ｇタンパク質共役受容体５である。この遺伝子又はタンパク質の代替名は、ロイシンリッチリピート含有Ｇタンパク質共役受容体５、ロイシンリッチリピート含有Ｇタンパク質共役受容体５；Ｇタンパク質共役受容体ＨＧ３８；Ｇタンパク質共役受容体４９；Ｇタンパク質共役受容体６７；ＧＰＲ６７；ＧＰＲ４９；オーファンＧタンパク質共役受容体ＨＧ３８、Ｇタンパク質共役受容体４９；ＧＰＲ４９；Ｈｇ３８、及びＦＥＸである。ＬＧＲ５に結合する本発明のタンパク質又は抗体は、ヒトＬＧＲ５に結合する。本発明のＬＧＲ５結合タンパク質又は抗体は、ヒトと他の哺乳類のオルソログとの間の配列及び三次構造類似性に起因して、このようなオルソログにも結合するが、必ずしもそうではなくてもよい。ヒトＬＧＲ５タンパク質及びそれをコードする遺伝子に対するデータベース受託番号は、（ＮＣ＿００００１２．１２；ＮＴ＿０２９４１９．１３；ＮＣ＿０１８９２３．２；ＮＰ＿００１２６４１５５．１；ＮＰ＿００１２６４１５６．１；ＮＰ＿００３６５８．１）である。
ＭＳＬＮ又はメソセリンは、メトセリン；プレ－プロ巨核球増強因子；ＣＡＫ１抗原；ＭＰＦ；可溶性ＭＰＦメソセリン関連タンパク質；巨核細胞増殖因子及びＳＭＲＰとも称される。ＭＳＬＮについてのＩｄは、ＨＧＮＣ：７３７１；Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：１０２３２；Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００１０２８５４；ＯＭＩＭ：６０１０５１；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｑ１３４２１である。
葉酸受容体１は、ＦＯＬＲ１；葉酸受容体１；卵巣腫瘍関連抗原ＭＯｖ１８；成人葉酸結合タンパク質；葉酸受容体、成人；ＫＢ細胞ＦＢＰ；ＦＲ－アルファ；ＦＯＬＲ；ＦＢＰ：葉酸結合タンパク質、及び葉酸受容体１とも称される。ＦＯＬＲ１についてのＩｄは、ＨＧＮＣ：３７９１；Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：２３４８；Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００１１０１９５；ＯＭＩＭ：１３６４３０；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ１５３２８である。
葉酸受容体３は、ＦＯＬＲ３；葉酸受容体３（ガンマ）；ＦＲ－ガンマ；葉酸受容体３；ガンマ－ＨＦＲ；及びＦＲ－Ｇとも称される。ＦＯＬＲ３についてのＩｄは、ＨＧＮＣ：３７９５；Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：２３５２；Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００１１０２０３；ＯＭＩＭ：６０２４６９、及びＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ４１４３９である。
ＥＰＣＡＭは、上皮細胞接着分子；ＥＧＰ４０；Ｍ４Ｓ１；ＥＳＡ；ＭＩＣ１８；ＫＳ１／４；腫瘍関連カルシウムシグナルトランスデューサ１；ＭＫ－１；ＴＡＣＳＴＤ１；ヒト上皮糖タンパク質－２；ＴＲＯＰ１；膜成分、第４染色体、表面マーカー（３５ｋＤ糖タンパク質）；腺癌関連抗原；ＥＧＰ；細胞表面糖タンパク質Ｔｒｏｐ－１；Ｅｐ－ＣＡＭ；上皮糖タンパク質３１４；ＧＡ７３３－２；主要胃腸腫瘍関連タンパク質ＧＡ７３３－２；Ｍ１Ｓ２；ＥＧＰ３１４；ＣＤ３２６抗原；ＫＳＡ；上皮細胞表面抗原；ＤＩＡＲ５；上皮糖タンパク質；ＨＮＰＣＣ８；ｈＥＧＰ３１４；モノクローナル抗体ＡＵＡ１により特定された抗原；ＫＳ １／４抗原；ＥＧＰ－２；ＡＣＳＴＤ１とも称される。Ｉｄ；ＨＧＮＣ：１１５２９；Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：４０７２、Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００１１９８８８；ＯＭＩＭ：１８５５３５；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ１６４２２。
ＨＥＲ２は、Ｖ－Ｅｒｂ－Ｂ２トリ赤芽球性白血病ウイルス癌遺伝子ホモログ２；ＥＲＢＢ２；ＣＤ３４０；ＮＧＬ、ＨＥＲ－２；ＨＥＲ－２／ｎｅｕ２ＮＥＵ２；ＴＫＲ１；神経／膠芽腫由来癌遺伝子ホモログ；Ｃ－Ｅｒｂ Ｂ２／Ｎｅｕタンパク質；転移リンパ節遺伝子１９タンパク質；ハースタチン；前立腺癌遺伝子Ｃ－ＥｒｂＢ－２；神経芽腫／膠芽腫由来癌遺伝子ホモログ；前立腺癌遺伝子Ｎｅｕ；受容体チロシンタンパク質キナーゼＥｒｂＢ－２；チロシンキナーゼ型細胞表面受容体ＨＥＲ２；Ｖ－Ｅｒｂ－Ｂ２赤芽球性白血病ウイルス癌遺伝子ホモログ２、神経／膠芽腫由来癌遺伝子ホモログ；ＭＬＮ １９；ＭＬＮ １９；ｐ１８５ｅｒｂＢ２；ＣＤ３４０抗原；ＥＣ２．７．１０．１；ＥＣ２．７．１０；Ｖ－Ｅｒｂ－Ｂ２トリ赤芽球性白血病ウイルス癌遺伝子ホモログ２（神経／膠芽腫由来癌遺伝子ホモログ）とも称される。Ｉｄ：
ＨＧＮＣ：３４３０；Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：２０６４；Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００１４１７３６；ＯＭＩＭ：１６４８７０；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ０４６２６。
ＨＭ１．２４は、ＢＳＴ２；骨髄間質細胞抗原２；ＴＥＴＨＥＲＩＮ；ＢＳＴ－２；骨髄間質細胞抗原２；ＨＭ１．２４抗原；Ｔｅｔｈｅｒｉｎ；ＣＤ３１７；ＣＤ３１７抗原；ＮＰＣ－Ａ－７とも称される。Ｉｄ；ＨＧＮＣ：１１１９；Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：６８４；Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００１３０３０３；ＯＭＩＭ：６００５３４；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｑ１０５８９。
ＭＣＳＰは、精巣ミトコンドリア関連システインリッチタンパク質（ＳＭＣＰ）；ＭＣＳＰ；ＭＣＳ；ミトコンドリア鞘セレノタンパク質；ＨＳＭＣＳＧＥＮ１；精巣ミトコンドリア関連システインリッチタンパク質とも称される。Ｉｄ；ＨＧＮＣ：６９６２；Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：４１８４、Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００１６３２０６；ＯＭＩＭ：６０１１４８；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ４９９０１。
ＰＤ－Ｌ１は、妊娠、組織同種移植、自己免疫疾患、及び肝炎などの他の疾患状態などの特定の事象中に免疫応答を抑制する役割を果たす、１型膜貫通タンパク質である。ＰＤＬ１のＰＤ－１又はＢ７．１（ＣＤ８０）への結合は、抑制性シグナルを伝達し、これは、Ｔ細胞を発現するＰＤ－１の増殖を低減する。ＰＤ－１は、アポトーシスを介した外来抗原特異的Ｔ細胞の蓄積を制御することができると考えられている。ＰＤ－Ｌ１は、様々な癌細胞によって発現され、その発現は、癌細胞に対して免疫応答を弱めることに少なくとも部分的に関与すると考えられている。ＰＤ－Ｌ１は、Ｂ７ファミリーのタンパク質のメンバーであり、様々な他の名称で知られており、例えば、ＣＤ２７４分子；ＣＤ２７４抗原；Ｂ７ホモログ１；ＰＤＣＤ１リガンド１；ＰＤＣＤ１ＬＧ１；ＰＤＣＤ１Ｌ１；Ｂ７Ｈ１；ＰＤＬ１；プログラム細胞死１リガンド１；プログラム細胞死リガンド１；Ｂ７－Ｈ１、及びＢ７－Ｈであり、ＣＤ２７４についての外部Ｉｄｓは、ＨＧＮＣ：１７６３５；Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：２９１２６；Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００１２０２１７；ＯＭＩＭ：６０５４０２；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｑ９ＮＺＱ７。
ＰＳＭＡは、葉酸ヒドロラーゼ（前立腺特異的膜抗原）１；ＦＯＬＨ１；ＮＡＡＬＡＤ１；ＦＯＬＨ；ｍＧＣＰ；グルタミン酸カルボキシペプチダーゼＩＩ；Ｎ－アセチル化－アルファ結合酸性ジペプチダーゼＩ；ＰＳＭ；ＮＡＡＬＡＤａｓｅＩ；ＰＳＭＡ；ＥＣ３．４．１７．２１；グルタミン酸カルボキシラーゼＩＩ；ＧＣＰ２；細胞増殖阻害遺伝子２７タンパク質；ＮＡＡＬＡｄａｓｅ；ホリルポリ－ガンマ－グルタミン酸カルボキシペプチダーゼ；グルタミン酸カルボキシペプチダーゼ２；膜グルタミン酸カルボキシペプチダーゼ；Ｎ－アセチル化－アルファ結合酸性ジペプチダーゼ１；プテロイルポリ－ガンマ－グルタミン酸カルボキシペプチダーゼ；前立腺特異的膜抗原変異体Ｆ；ＦＧＣＰ；葉酸ヒドロラーゼ１；ＧＣＰＩＩ；前立腺特異性膜抗原とも称される。Ｉｄ；ＨＧＮＣ：３７８８；Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：２３４６、Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ００００００８６２０５；ＯＭＩＭ：６００９３４；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｑ０４６０９。
ＰＳＭＡは、別名ＰＳＭＡ１でも知られている、プロテアソーム（プロソーム、マクロパイン）サブユニット、アルファ型、１と混同されるべきではない。
受託番号は、主に、標的を特定する更なる方法を提供するために与えられ、結合されたタンパク質の実際の配列は、例えば、いくつかの癌などで生じるものなどのコード遺伝子における変異のために変化し得る。抗原結合部位は、いくつかの抗原陽性免疫又は腫瘍細胞によって発現されるものなどの様々なその変異体に結合する。
本明細書において、遺伝子、タンパク質を参照する場合、この参照は、好ましくは、遺伝子又はタンパク質のヒト型を指す。本明細書において、遺伝子又はタンパク質を参照する場合、天然遺伝子又はタンパク質、並びに腫瘍、癌などで検出され得る遺伝子又はタンパク質の変異型、好ましくはヒト腫瘍、癌などで検出され得る遺伝子又はタンパク質の変異型が参照される。
本発明の二重特異性又は多重特異性抗体は、好ましくは、ヒトＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＥＡ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＣＳ－１、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＰＣＡＭ、ＤＬＬ３、ＬＧＲ５、ＭＳＬＮ、ＦＯＬＲ１、ＦＯＬＲ３、ＨＥＲ２、ＨＭ１．２４、ＭＣＳＰ、ＰＤ－Ｌ１、ＰＳＭＡタンパク質又はこれらの変異体に結合する。抗原結合重鎖／軽鎖の組み合わせは、好ましくは、抗原の細胞外部分に結合する。本発明による二重特異性抗体は、ヒトＣＬＥＣ１２Ａ又はその変異体に結合することが好ましい。本発明による好ましい二重特異性抗体は、ヒトＣＤ３及びヒトＣＬＥＣ１２Ａ又はそれらの変異体に結合する。好ましい実施形態では、多重特異性抗体は、ＣＤ３、ＰＤ－Ｌ１及びＥＧＦＲに結合する。
ＨＧＮＣは、ＨＵＧＯヒトゲノム命名法委員会（ＨＵＧＯ Ｇｅｎｅ ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）を表す。略称の後の数字は、遺伝子上の情報及び遺伝子によりコードされるタンパク質がＨＧＮＣデータベースから検索され得る受託番号である。Ｅｎｔｒｅｚ遺伝子は、遺伝子又は遺伝子によってコードされるタンパク質に関する情報をＮＣＢＩ（アメリカ国立生物工学情報センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ））データベースから検索することができる、受託番号又は遺伝子ＩＤを提供する。Ｅｎｓｅｍｂｌｅは、遺伝子又は遺伝子によりコードされるタンパク質に関する情報を、Ｅｎｓｅｍｂｌｅデータベースから得ることができる受託番号を提供する。Ｅｎｓｅｍｂｌｅは、ＥＭＢＬ－ＥＢＩＩとＷｅｌｌｃｏｍｅ Ｔｒｕｓｔ Ｓａｎｇｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅとの間の共同プロジェクトであり、選択された真核生物ゲノム上の自動アノテーションを生成及び維持するソフトウェアシステムを開発する。
本発明は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質、好ましくは抗体を提供し、重鎖可変領域は、下記の、
アミノ酸配列：
ＣＤＲ１：ＳＦＧＩＳ；ＣＤＲ２：ＧＦＩＰＶＬＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧ；ＣＤＲ３：ＲＧＮＷＮＰＦＤＰ
又は
アミノ酸配列：
ＣＤＲ１：ＳＸ１ＴＦＴＩＳ、
ＣＤＲ２：ＧＩＩＰＸ２ＦＧＴＩＴＹＡＱＫＦＱＧ、
ＣＤＲ３：ＲＧＮＷＮＰＦＤＰ、
（配列中、
Ｘ１＝Ｋ又はＲであり、Ｘ２＝Ｌ又はＩである）を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む。
好ましい実施形態では、Ｘ１＝Ｋであり、Ｘ２＝Ｌである。別の好ましい実施形態では、Ｘ１＝Ｒであり、Ｘ２＝Ｉである。
本発明は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質、好ましくは抗体を提供し、重鎖可変領域は、下記のアミノ酸配列：
ＣＤＲ１：ＳＫＴＬＴＩＳ；ＣＤＲ２：ＧＩＩＰＩＦＧＳＩＴＹＡＱＫＦＱＤ；ＣＤＲ３：ＲＧＮＷＮＰＦＤＰ；又は
アミノ酸配列：
ＣＤＲ１：ＧＳＧＩＳ；ＣＤＲ２：ＧＦＩＰＦＦＧＳＡＮＹＡＱＫＦＲＤ；ＣＤＲ３：ＲＧＮＷＮＰＸ１３ＤＰ；
（配列中、
Ｘ１３＝又はＬ又はＦである）を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む。
本発明は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質、好ましくは抗体を更に提供し、重鎖可変領域は、下記のアミノ酸配列：
ＣＤＲ１：ＲＸ３ＷＩＧ；ＣＤＲ２：ＩＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧ；ＣＤＲ３：Ｘ４ＩＲＹＦＸ５ＷＳＥＤＹＨＹＹＸ６ＤＶ；
（配列中、
Ｘ３＝Ｆ又はＹであり、Ｘ４＝Ｈ又はＮであり、Ｘ５＝Ｄ又はＶであり、かつＸ６＝Ｌ又はＭである）を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む。
好ましい実施形態では、Ｘ３＝Ｆであり；Ｘ４＝Ｈであり、Ｘ５＝Ｄであり、かつＸ６＝Ｌであるか、又はＸ３＝Ｙであり、Ｘ４＝Ｎであり、Ｘ５＝Ｖであり、かつＸ６＝Ｍである。
本発明は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質、好ましくは抗体を更に提供し、重鎖可変領域は、下記のアミノ酸配列：
ＣＤＲ１：ＳＹＡＬＳ；ＣＤＲ２：ＧＩＳＧＳＧＲＴＴＷＹＡＤＳＶＫＧ、ＣＤＲ３：ＤＧＧＹＳＹＧＰＹＷＹＦＤＬ、を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む。
本発明は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質、好ましくは抗体を更に提供し、重鎖可変領域は、下記のアミノ酸配列：
ＣＤＲ１：ＳＹＡＬＳ；ＣＤＲ２：ＡＩＳＧＳＧＲＴＴＷＹＡＤＳＶＫＧ、ＣＤＲ３：ＤＧＧＹＴＹＧＰＹＷＹＦＤＬ、を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む。
本発明は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質、好ましくは抗体を更に提供し、重鎖可変領域は、下記のアミノ酸配列：
ＣＤＲ１：ＤＹＴＭＨ；ＣＤＲ２：ＤＩＳＷＳＳＧＳＩＧＹＡＤＳＶＫＧ、ＣＤＲ３：ＤＨＲＧＹＧＤＹＥＧＧＧＦＤＹ、を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む。
本発明は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質、好ましくは抗体を更に提供し、重鎖可変領域は、下記のアミノ酸配列：
ＣＤＲ１：ＤＹＴＭＨ、
ＣＤＲ２：ＤＩＳＷＳＸ７ＧＸ８Ｘ９Ｘ１０ＹＡＤＳＶＫＧ、
ＣＤＲ３：ＤＨＸ１１ＧＹＧＤＹＥＧＧＧＦＤＸ１２
（配列中、
Ｘ７＝Ｓ又はＧであり、
Ｘ８＝Ｓ又はＴであり、
Ｘ９＝Ｉ又はＴであり、
Ｘ１０＝Ｇ又はＹであり、
Ｘ１１＝Ｒ又はＭであり、
Ｘ１２＝Ｈ又はＹであり、
好ましくは、Ｘ７、Ｘ８、Ｘ９及びＸ１０は、Ｓ、Ｓ、Ｉ及びＧであり、又はＧ、Ｓ、Ｉ及びＹであり、又はＳ、Ｔ、Ｔ及びＧであり、好ましくは、Ｘ１１及びＸ１２は、Ｒ及びＨ、又はＲ及びＹ、又はＭ及びＹであり、より好ましくは、Ｘ７、Ｘ８、Ｘ９、Ｘ１０、Ｘ１１及びＸ１２は、Ｓ、Ｓ、Ｉ、Ｇ、Ｒ及びＨであり、又はＧ、Ｓ、Ｉ、Ｙ、Ｒ及びＹであり、又はＳ、Ｔ、Ｔ、Ｇ、Ｍ及びＹであり、あるいは、他の言い方をすれば、好ましくは、Ｘ７、Ｘ８、Ｘ９及びＸ１０は、Ｓ、Ｓ、Ｉ及びＧであり、かつＸ１１及びＸ１２は、Ｒ及びＨであり、あるいは、Ｘ７、Ｘ８、Ｘ９及びＸ１０は、Ｇ、Ｓ、Ｉ及びＹであり、かつＸ１１及びＸ１２は、Ｒ及びＹであり、あるいは、Ｘ７、Ｘ８、Ｘ９及びＸ１０は、Ｓ、Ｔ、Ｔ及びＧであり、かつＸ１１及びＸ１２は、Ｍ及びＹである）を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む。
好ましい実施形態では、軽鎖可変領域は、０～１０個の、好ましくは０～５個のアミノ酸の変異、挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを有する、図１１Ａに示されるようなＩｇＶκ１－３９＊０１遺伝子セグメントのアミノ酸配列を含む。ＩｇＶκ１－３９＊０１のアミノ酸配列を図１１Ａに示す。ＩｇＶκ１－３９は、免疫グロブリン可変カッパ１－３９遺伝子についての短縮形である。この遺伝子はまた、免疫グロブリンカッパ可変１－３９、ＩＧＫＶ１３９、ＩＧＫＶ１－３９としても知られている。この遺伝子についての外部Ｉｄｓは、ＨＧＮＣ：５７４０、Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：２８９３０、Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００２４２３７１である。ＩｇＶκ１－３９の好ましいアミノ酸配列を図１１Ａに示す。これはＶ領域の配列を列挙している。Ｖ領域は、５つのＪ領域のうちの１つと組み合わせることができる。図１１Ｂ及び１１Ｃは、Ｊ領域と組み合わせたＩｇＶκ１－３９についての２つの好ましい配列を記載している。接合された配列は、ＩＧＫＶ１－３９／ｊｋ１及びＩＧＫＶ１－３９／ｊｋ５として示され、代替名は、ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１又はＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ５＊０１である（ワールドワイドウェブのｉｍｇｔ．ｏｒｇにあるＩＭＧＴデータベースによる命名法）。
軽鎖可変領域を含むＩｇＶκ１－３９＊０１は生殖細胞系列配列であることが好ましい。軽鎖可変領域を含むＩＧＪκ＊０１又は／ＩＧＪκ５＊０１は、生殖細胞系列配列であることが更に好ましい。好ましい実施形態では、ＩＧＫＶ１－３９／ｊｋ１又はＩＧＫＶ１－３９／ｊｋ５軽鎖可変領域は、生殖細胞系列配列である。
好ましい実施形態では、軽鎖可変領域は、生殖系列ＩｇＶκ１－３９＊０１を含む。好ましい実施形態では、軽鎖可変領域は、カッパ軽鎖ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１又はＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ５＊０１を含む。好ましい実施形態では、ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１である。軽鎖可変領域は、好ましくは、生殖系列カッパ軽鎖ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１又は生殖系列カッパ軽鎖ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ５＊０１、好ましくは生殖系列ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１を含む。
軽鎖を有する抗体を産生する成熟Ｂ細胞は、多くの場合、生殖細胞系列配列に対して１つ以上の突然変異を受けた軽鎖、すなわち、生物の非リンパ系細胞における正常な配列を産生する。これらの変異に関与するプロセスは、体細胞（超）変異と呼ばれることが多い。得られた軽鎖は、親和性成熟した軽鎖と呼ばれる。このような軽鎖は、生殖系列ＩｇＶκ１－３９＊０１配列に由来するとき、ＩｇＶκ１－３９＊０１由来の軽鎖である。本明細書では、語句「ＩｇＶκ１－３９＊０１」は、ＩｇＶκ１－３９＊０１に由来する軽鎖を含むことになり、体細胞の高変異により導入される突然変異はまた、研究室において人工的に導入され得る。研究室では、必ずしも完全にではないが本質的に軽鎖の特性に影響を及ぼすことなく、他の突然変異又は変異も軽鎖に導入することができる。軽鎖は、これが０～１０個の、好ましくは０～５個のアミノ酸の変異、挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを有する図１１Ａ、図１１Ｄ又は図１１Ｅに示された配列を含む場合、少なくともＩｇＶκ１－３９＊０１軽鎖である。好ましい実施形態では、ＩｇＶκ１－３９＊０１軽鎖は、０～９個、０～８個、０～７個、０～６個、０～５個、０～４個のアミノ酸の変異、挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを有する図１１Ａ、図１１Ｂ又は図１１Ｃに示された配列を含む軽鎖である。好ましい実施形態では、ＩｇＶκ１－３９＊０１軽鎖は、０～５個、好ましくは０～４個、より好ましくは０～３個のアミノ酸の変異、挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを有する図１１Ａ、図１１Ｂ又は図１１Ｃに示された配列を含む軽鎖である。好ましい実施形態では、ＩｇＶκ１－３９＊０１軽鎖は、０～２個、より好ましくは０～１個、最も好ましくは０個のアミノ酸の変異、挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを有する図１１Ａ、図１１Ｂ、又は図１１Ｃに示された配列を含む軽鎖である。好ましい実施形態では、ＩｇＶκ１－３９＊０１軽鎖は、前述のアミノ酸の変異、挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを有する図１１Ａ又は図１１Ｂに示された配列を含む軽鎖である。好ましい実施形態では、軽鎖は、図１１Ｂの配列を含む。
軽鎖は、好ましくは、共通軽鎖可変領域を含む。当該共通軽鎖可変領域は、好ましくは、ＩｇＶκ１－３９軽鎖可変領域を含む。当該軽鎖可変領域は、好ましくは、生殖系列ＩｇＶκ１－３９＊０１可変領域である。当該軽鎖可変領域は、カッパ軽鎖ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１又はＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ５＊０１を含むことが好ましい。軽鎖可変領域は、生殖系列カッパ軽鎖ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１又はＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ５＊０１を含むことが好ましい。当該軽鎖可変領域は、好ましくは、０～５個のアミノ酸の変異、挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを有する、アミノ酸配列ＤＩＱＭＴ ＱＳＰＳＳ ＬＳＡＳＶ ＧＤＲＶＴ ＩＴＣＲＡ ＳＱＳＩＳ ＳＹＬＮＷ ＹＱＱＫＰ ＧＫＡＰＫ ＬＬＩＹＡ ＡＳＳＬＱ ＳＧＶＰＳ ＲＦＳＧＳ ＧＳＧＴＤ ＦＴＬＴＩ ＳＳＬＱＰ ＥＤＦＡＴ ＹＹＣＱＱ ＳＹＳＴＰ ＰＴＦＧＱ ＧＴＫＶＥ ＩＫ又はＤＩＱＭＴ ＱＳＰＳＳ ＬＳＡＳＶ ＧＤＲＶＴ ＩＴＣＲＡ ＳＱＳＩＳ ＳＹＬＮＷ ＹＱＱＫＰ ＧＫＡＰＫ ＬＬＩＹＡ ＡＳＳＬＱ ＳＧＶＰＳ ＲＦＳＧＳ ＧＳＧＴＤ ＦＴＬＴＩ ＳＳＬＱＰ ＥＤＦＡＴ ＹＹＣＱＱ ＳＹＳＴＰ ＰＩＴＦＧ ＱＧＴＲＬ ＥＩＫを含む。
軽鎖可変領域は、好ましくは、アミノ酸配列ＣＤＲ１－ＱＳＩＳＳＹ、ＣＤＲ２－ＡＡＳ、ＣＤＲ３－ＱＱＳＹＳＴＰ、すなわちＩＧＫＶ１－３９（ＩＭＧＴによる）のＣＤＲを含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３領域を含む。アミノ酸の変異、挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせは、好ましくは軽鎖可変領域のＣＤＲ３領域にはなく、好ましくは軽鎖可変領域のＣＤＲ１又はＣＤＲ２領域にはない。好ましい実施形態では、軽鎖可変領域は、示される配列に対する欠失、付加、変異又は挿入を含まない。この実施形態では、軽鎖可変領域は、示されるアミノ酸配列に対して０～５個のアミノ酸置換を有することができる。アミノ酸置換は、好ましくは、保存的アミノ酸置換である。本発明の抗体の軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３は、好ましくは、それぞれ、アミノ酸配列ＣＤＲ１－ＱＳＩＳＳＹ、ＣＤＲ２－ＡＡＳ、ＣＤＲ３－ＱＱＳＹＳＴＰ、すなわち、ＩＧＫＶ１－３９（ＩＭＧＴによる）のＣＤＲを含む。
抗原結合タンパク質は、好ましくは抗体、好ましくは二重特異性又は多重特異性抗体である。抗体は、好ましくは、本明細書で定義される共通軽鎖可変領域と、本明細書で定義される軽鎖定常領域と、を含む、共通軽鎖を含む。
本発明の抗体は、上述のように、好ましくは二重特異性抗体である。「二重特異性抗体」は、抗体の１つのドメインが第１の抗原に結合する一方で、抗体の第２のドメインが第２の抗原に結合し、当該第１及び第２の抗原が同一ではない、本明細書に記載の抗体である。用語「二重特異性抗体」はまた、１つの重鎖可変領域／軽鎖可変領域（ＶＨ／ＶＬ）の組み合わせが抗原上の第１のエピトープに結合し、第２のＶＨ／ＶＬの組み合わせが第２のエピトープに結合する抗体を包含する。この用語は更に、ＶＨが、第１の抗原を特異的に認識することができ、免疫グロブリン可変領域においてＶＨと対合しているＶＬが、第２の抗原を特異的に認識することができる抗体を含む。得られたＶＨ／ＶＬ対は、抗原１又は抗原２のいずれかに結合する。このようないわゆる「ツーインワン抗体」は、例えば、国際公開第２００８／０２７２３６号、同第２０１０／１０８１２７号、及びＳｃｈａｅｆｅｒ ｅｔ ａｌ（ｃａｎｓｅｒ Ｃｅｌｌ ２０，４７２－４８６、Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０１１）に記載されている。本発明による二重特異性抗体は、いかなる特定の二重特異性フォーマット又はそれを調製する方法にも限定されない。
二重特異性抗体は、好ましくは、ＣＤ３に結合する１つの重鎖可変領域／軽鎖可変領域（ＶＨ／ＶＬ）の組み合わせ、及びＣＤ３上の抗原以外の抗原に結合する第２のＶＨ／ＶＬの組み合わせを有する。好ましい実施形態では、抗原は腫瘍抗原である。好ましい実施形態では、第１のＶＨ／ＶＬの組み合わせにおけるＶＬは、第２のＶＨ／ＶＬの組み合わせにおけるＶＬと類似している。より好ましい実施形態では、第１及び第２のＶＨ／ＶＬの組み合わせにおけるＶＬは同一である。好ましい実施形態では、二重特異性抗体は、ＣＤ３に結合する１つの重鎖／軽鎖（Ｈ／Ｌ）鎖の組み合わせ、及び別の抗原、好ましくは腫瘍抗原に結合する１つのＨ／Ｌ鎖の組み合わせを有する完全長抗体である。好ましい実施形態では、第１のＨ／Ｌ鎖の組み合わせにおける軽鎖は、第２のＨ／Ｌ鎖の組み合わせにおける軽鎖と類似している。より好ましい実施形態では、第１及び第２のＨ／Ｌ鎖の組み合わせにおける軽鎖は同一であり、すなわち、類似又は同一のヒト軽鎖は、異なる重鎖と結合して機能性抗原結合ドメインを有する抗体を形成することができる軽鎖である、いわゆる「共通軽鎖」である。好ましい実施形態では、当該第１のＨ／Ｌ鎖の組み合わせにおける軽鎖は、当該第２のＨ／Ｌ鎖の組み合わせにおける軽鎖可変領域と類似している軽鎖可変領域を含む。より好ましい実施形態では、第１及び第２のＨ／Ｌ鎖の組み合わせにおける軽鎖可変領域（ｌｉｇｈｔ ｃｈａｉｎ ｖａｒｉａｂｌｙ ｒｅｇｉｏｎｓ）は同一であり、すなわち、類似又は同一のヒト軽鎖可変領域は、異なる重鎖可変領域と結合して機能性抗原結合ドメインを有する抗体を形成することができる軽鎖可変領域である、いわゆる「共通軽鎖可変領域」である。共通軽鎖可変領域を含む軽鎖は、共通軽鎖であることが好ましい。
二重特異性抗体の共通軽鎖は、好ましくは、本明細書で上記に示されるようなＩｇＶκ１－３９軽鎖である。
本発明はまた、Ｓｐｉｅｓｓ，Ｃ．ら（Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｆｏｒｍａｔｓ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１５）ｈｔｔｐ：／／ｄｘ．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｍｏｌｉｍｍ．２０１５．０１．００３）に記載されているものなどの代替二重特異性フォーマットも提供する。２つのＨ／Ｌの組み合わせを有する従来の抗体ではない二重特異性抗体フォーマットは、少なくとも、本発明の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む可変ドメインを有する。この可変ドメインは、２番目の結合活性を提供する単鎖Ｆｖ断片、モノボディ、ＶＨ、及びＦａｂ断片に連結されている場合がある。
本発明の二重特異性抗体では、ＣＤ３結合Ｈ／Ｌ鎖の組み合わせにおける軽鎖は、好ましくは、ＣＤ３以外の抗原、好ましくは腫瘍抗原に結合し得るＨ／Ｌ鎖の組み合わせにおける軽鎖と同様である。より好ましい実施形態では、Ｈ／Ｌ鎖の組み合わせにおける軽鎖は同一であり、すなわち、当該ヒト軽鎖は、異なる重鎖と結合して機能性抗原結合ドメインを有する抗体を形成することができる軽鎖である、いわゆる「共通軽鎖」である。好ましくは、共通軽鎖は、生殖細胞系列配列を有する。好ましい生殖細胞系列配列は、ヒトレパートリーで頻繁に使用され、良好な熱力学的安定性、収率、及び溶解度を有する軽鎖可変領域である。好ましい生殖細胞系列軽鎖はＩｇＶκ１－３９であり、好ましくは、再構成された生殖系列ヒトκ軽鎖ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１、又はそれらの断片若しくは機能的等価物（すなわち、同じＩｇＶκ１－３９遺伝子断片であるが、異なるＩＧＪκ遺伝子断片）である（ワールドワイドウェブのｉｍｇｔ．ｏｒｇにあるＩＭＧＴデータベースによる命名法）である。
本明細書で使用される「異常細胞」という用語は、腫瘍細胞、より具体的には、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）を引き起こす細胞などの前白血病細胞、及び急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）腫瘍細胞又は慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞などの白血病細胞はじめとする血液学的起源の腫瘍細胞を含む。
本明細書において使用する場合、用語「免疫エフェクター細胞」又は「エフェクター細胞」は、標的細胞の生存力に影響を及ぼすように活性化され得る、哺乳類免疫系内の細胞の自然なレパートリー内の細胞を指す。免疫エフェクター細胞は、リンパ系細胞、例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、細胞傷害性Ｔ細胞を含むＴ細胞、又はＢ細胞を含み、かつ骨髄系列細胞、例えば、単球又はマクロファージ、樹状細胞、及び好中球顆粒球を含む。したがって、該エフェクター細胞は、好ましくは、ＮＫ細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球、マクロファージ、樹状細胞、又は好中球顆粒球である。エフェクター細胞の異常細胞への動員とは、免疫エフェクター細胞を異常標的細胞に近接させ、エフェクター細胞により、異常細胞の直接的な死滅又は間接的な死滅を開始できることを意味する。
本明細書で使用される場合、「対象」及び「患者」という用語は、同義で用いられ、ヒト、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ウサギ、ネコ、イヌ、サル、ウシ、ウマ、ブタなどの哺乳動物（例えば、ヒトの患者など、癌を患っている患者）を指す。
本明細書で使用するとき、用語「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、及び「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という用語は、疾患に関連する症状、合併症、病状又は生化学的兆候の進行、発達、重症度又は再発を、逆転、緩和、回復、阻害、又は減速若しくは予防することを目的とする、実施される任意の種類の介入若しくは処理、又は活性剤若しくは活性剤の組み合わせを対象に投与することを指す。
本明細書で使用される場合、「有効治療」又は「陽性治療反応」は、有益な効果、例えば、癌などの疾患又は障害の少なくとも１つの症状の回復をもたらす治療を指す。有益な効果により、本方法による療法の開始前に行われた測定又は観察を超える改善などの、ベースラインを超える改善された状態を得ることができる。例えば、疾患の臨床的若しくは診断的症状の減少若しくは排除、又は癌のマーカーの減少若しくは排除によって証明されるように、有益な効果により、任意の臨床段階での対象における癌の進行を減速、安定化、停止、又は逆転させる状態を得ることができる。有効治療により、例えば、腫瘍サイズを減少、循環腫瘍細胞の存在を減少、腫瘍の転移を低減若しくは防止、腫瘍成長を減速若しくは阻止、及び／又は腫瘍の再発若しくは再燃を防止若しくは遅延させることができる。
「治療量」という用語は、所望の生物学的、治療的、及び／又は予防的結果を提供する薬剤又は薬剤の組み合わせの量を指す。その結果は、疾患の１つ以上の徴候、症状、又は原因の低減、回復、緩解、減少、遅延、及び／又は緩和、あるいは生態系における他の所望の変化であり得る。いくつかの実施形態では、治療量は、腫瘍の発達を遅延させるのに十分な量である。いくつかの実施形態において、治療量は、腫瘍の再発を防止又は遅延させるのに十分な量である。治療量は、１回以上の投与で投与することができる。薬物又は組成物の治療量は、（ｉ）癌細胞の数を低減する；（ｉｉ）腫瘍のサイズを低減する；（ｉｉｉ）末梢器官への癌細胞浸潤を、ある程度阻害、阻止、減速し、停止させ得る；（ｉｖ）腫瘍転移を阻害する；（ｖ）腫瘍成長を阻害する；（ｖｉ）腫瘍の発生及び／又は再発を防止又は遅延させる；及び／又は（ｖｉｉ）癌に関連する１つ以上の症状をある程度和らげることができる。一例では、「治療量」は、癌の減少（例えば、癌細胞数の減少）、又は急性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、若しくは慢性骨髄性白血病などの癌の進行の減速をもたらすＣＬＥＣ１２Ａ／ＣＤ３二重特異性抗体の量である。
本発明はまた、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質、好ましくは抗体を提供し、重鎖可変領域は、アミノ酸配列
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＲＳＦＧＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＦＩＰＶＬＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＩＡＤＫＳＴＮＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＧＮＷＮＰＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＤＡＦＫＳＫＴＦＴＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＬＧＧＩＩＰＬＦＧＴＩＴＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＮＴＡＦＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＭＹＹＣＴＲＲＧＮＷＮＰＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、
ＥＶＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＶＴＦＮＳＲＴＦＴＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＬＧＳＩＩＰＩＦＧＴＩＴＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＦＭＥＬＴＳＬＲＳＥＤＴＡＩＹＹＣＴＲＲＧＮＷＮＰＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＲＧＳＧＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＶＧＧＦＩＰＦＦＧＳＡＮＹＡＱＫＦＲＤＲＶＴＩＴＡＤＫＳＡＴＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＩＹＹＣＡＫＲＧＮＷＮＰＬＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＶＴＦＫＳＫＴＬＴＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＬＧＧＩＩＰＩＦＧＳＩＴＹＡＱＫＦＱＤＲＶＳＩＴＡＤＫＳＴＮＴＡＹＬＥＬＮＳＬＲＳＥＤＴＡＩＹＹＣＡＲＲＧＮＷＮＰＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、又は
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ＣＤＲ以外の１つ以上の位置において、０～１０個、好ましくは０～５個のアミノ酸の変異、挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを有する。
重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質、好ましくは抗体が更に提供され、重鎖可変領域は、アミノ酸配列
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＴＲＦＷＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＴＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＧＭＹＹＣＶＲＨＩＲＹＦＤＷＳＥＤＹＨＹＹＬＤＶＷＧＫＧＴＴＶＴＶＳＳ、又は
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ＣＤＲ以外の１つ以上の位置において、０～１０個、好ましくは０～５個のアミノ酸の変異、挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを有する。
重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質、好ましくは抗体もまた提供され、重鎖可変領域は、アミノ酸配列
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＴＳＧＦＫＦＳＳＹＡＬＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＳＧＳＧＲＴＴＷＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＧＧＹＳＹＧＰＹＷＹＦＤＬＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳ、又は
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ＣＤＲ以外の１つ以上の位置において、０～１０個、好ましくは０～５個のアミノ酸の変異、挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを有する。
本発明は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質、好ましくは抗体を更に提供し、重鎖可変領域は、アミノ酸配列
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＴＳＧＦＮＦＤＤＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＤＩＳＷＳＳＧＳＩＧＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＷＬＱＭＮＳＬＲＴＥＤＴＡＬＹＦＣＡＫＤＨＲＧＹＧＤＹＥＧＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、
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ＣＤＲ以外の１つ以上の位置において、０～１０個、好ましくは０～５個のアミノ酸の変異、挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを有する。
アミノ酸の変異、挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせは、好ましくは重鎖可変領域のＣＤＲ３領域にはなく、好ましくは重鎖可変領域のＣＤＲ１及び／又はＣＤＲ２領域にはない。好ましい実施形態では、重鎖可変領域は、示される配列に対する欠失、付加又は変異、挿入を含まない。一実施形態では、重鎖可変領域は、示されるアミノ酸配列に対して０～１０個、好ましくは０～５個のアミノ酸置換を有することができる。好ましい実施形態では、重鎖可変領域は、ＣＤＲ以外の位置に、示されるアミノ酸配列に対して０～９個、０～８個、０～７個、０～６個、０～５個、０～４個、好ましくは０～３個、好ましくは０～２個、好ましくは０～１個、及び好ましくは０個のアミノ酸の変異、挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを含む。挿入、付加、欠失、又は置換の組み合わせは、アラインメントされた配列が１０超の位置で異ならない（好ましくは５以下）場合、特許請求される組み合わせである。アラインメントされた配列のうちの一方にあるギャップは、他の配列でスキップされたのと同じアミノ酸の数に値する。アミノ酸置換は、もしあれば、好ましくは保存的アミノ酸置換である。
本発明は更に、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質、好ましくは抗体を更に提供し、重鎖可変領域は、図１３に示されるようなＭＦ８０５７、ＭＦ８０５８又はＭＦ８０７８のアミノ酸配列を含む。
本発明は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質、好ましくは抗体を更に提供し、重鎖可変領域は、図１３に示されるようなＭＦ８３９７のアミノ酸配列を含む。
本発明は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質、好ましくは抗体を更に提供し、重鎖可変領域は、図１３に示されるようなＭＦ８５０８のアミノ酸配列を含む。
本発明は更に、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質、好ましくは抗体を更に提供し、重鎖可変領域は、図１３に示されるようなＭＦ９２４９又はＭＦ９２６７のアミノ酸配列を含む。
軽鎖は、好ましくは、本明細書の他の箇所に定義されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３領域を含む。それは、好ましくは、本明細書の他の箇所に定義される共通軽鎖可変領域、及び好ましくは共通軽鎖を含む。二重特異性抗体は、好ましくは、別の抗原、好ましくは腫瘍抗原に結合する重鎖及び軽鎖の組み合わせを更に含む。別の抗原に結合する重鎖及び軽鎖の組み合わせの軽鎖は、好ましくは、本明細書の他の箇所に定義される共通軽鎖である。別の抗原に結合する重鎖及び軽鎖の組み合わせの重鎖は、好ましくは、アミノ酸配列：ＭＦ８２３３（ＥＧＦＲ）
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本明細書で定義される重鎖可変領域及び共通軽鎖領域を有するＣＬＥＣ１２Ａに結合する可変ドメインは、中でも国際公開第２０１４／０５１４３３号及び国際公開第２０１７／０１０８７４号に記載されており、これらは本明細書の目的のために具体的に言及され、参照により本明細書に組み込まれる。ヒトＥＧＦＲ又はＣＬＥＣ１２Ａに結合する重鎖／軽鎖の組み合わせの重鎖可変領域は、示されるアミノ酸配列に対して０～１０個、好ましくは０～５個のアミノ酸の変異、挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを有することができる。好ましい実施形態では、重鎖可変領域は、示されるアミノ酸配列に対して０～９個、０～８個、０～７個、０～６個、０～５個、０～４個、好ましくは０～３個、好ましくは０～２個、好ましくは０～１個、好ましくは０個のアミノ酸の挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを含む。挿入、付加、欠失、又は置換の組み合わせは、アラインメントされた配列が５超の位置で異ならない場合、特許請求される組み合わせである。アラインメントされた配列のうちの一方にあるギャップは、他の配列でスキップされたのと同じアミノ酸の数に値する。
アミノ酸の変異、挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせは、重鎖及び軽鎖の結合界面において行われない／存在しないことが好ましい。
Ｈ／Ｌ鎖相互作用の界面でアミノ酸が変化する場合、他の鎖中の対応するアミノ酸が、変化に対応するために変化することが好ましい。アミノ酸の挿入又は付加は、好ましくはプロリンの挿入又は付加を伴うものではない。
アミノ酸の付加は、原則として、挿入と同じであると見なすことができる。ポリペプチド鎖の末端のうちの１つにアミノ酸を付加することは、場合によっては、挿入とは見なされず、厳密な付加（延長）として見なされる。本発明では、鎖内での付加又は末端のうちの一方への付加はいずれも、挿入であると見なされる。
アミノ酸の変異、挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせは、好ましくは重鎖可変領域のＣＤＲ３領域にはなく、好ましくは重鎖可変領域のＣＤＲ１又はＣＤＲ２領域にはない。好ましい実施形態では、重鎖可変領域は、示される配列に対する欠失、付加又は変異、挿入を含まない。この実施形態では、重鎖可変領域は、示されるアミノ酸配列に対して０～５個のアミノ酸置換を有することができる。アミノ酸置換は、好ましくは、保存的アミノ酸置換である。本発明のＣＤ３結合ＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３は、好ましくは、図１３に示されるＣＤ３結合ＶＨのＣＤＲ１、ＣＤ２、及びＣＤＲ３の組み合わせ、好ましくは、ＭＦ８０５７、ＭＦ８０５８、ＭＦ８０７８、ＭＦ８３９７、ＭＦ８５０８、ＭＦ９２４９又はＭＦ９２６７のうちの１つのＶＨのＣＤＲ１、ＣＤ２、及びＣＤＲ３の組み合わせを含む。
二重特異性又は多重特異性抗体を含む本発明の抗体の定常領域は、好ましくはヒト定常領域である。この定常領域は、１つ以上の、好ましくは１０個以下の、好ましくは５個以下の、天然に存在するヒト抗体の定常領域とは異なるアミノ酸を含有することができる。本明細書で調製される様々な抗体の可変ドメインは、ヒト抗体可変ドメインライブラリに由来する。したがって、これらの可変ドメインはヒトである。独自のＣＤＲ領域は、ヒトに由来してもよく、合成であってもよく、又は別の生物に由来してもよい。本発明の抗体又は二重特異性抗体は、好ましくはヒト又はヒト化抗体である。好適な重鎖定常領域を、非限定的に表１２に例示する。
当該技術分野では、抗体を産生するための様々な方法が存在する。二重特異性抗体は、典型的には、抗体をコードする核酸を発現する細胞によって産生される。抗体産生に好適な細胞は、ハイブリドーマ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＮＳ０細胞、又はＰＥＲ－Ｃ６細胞である。特に好ましい実施形態では、該細胞は、ＣＨＯ細胞である。
様々な機関及び企業は、例えば、臨床使用のために、抗体の大規模生産のための細胞株を開発してきた。かかる細胞株の非限定的な例は、ＣＨＯ細胞、ＮＳ０細胞、又はＰＥＲ．Ｃ６細胞である。これらの細胞はまた、タンパク質の産生などの他の目的にも使用される。タンパク質及び抗体の工業規模生産のために開発された細胞株は、本明細書では産業細胞株と更に称される。好ましい実施形態では、本発明は、本発明の抗体を産生する工業用細胞株を提供する。
一実施形態では、本発明は、本発明による抗体及び／又は本発明による核酸を含む細胞を提供する。当該細胞は、好ましくは動物細胞、より好ましくは哺乳動物細胞、より好ましくは霊長類細胞、最も好ましくはヒト細胞である。本発明の目的のために、好適な細胞は、本発明による抗体及び／又は本発明による核酸を含むことができ、好ましくは産生することができる任意の細胞である。
本発明は、本発明による抗体を含む細胞を更に提供する。好ましくは、該細胞（典型的にはｉｎ ｖｉｔｒｏ、単離、又は組換え細胞）は、該抗体を産生する。好ましい実施形態では、該細胞は、ハイブリドーマ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＮＳ０細胞、又はＰＥＲ．Ｃ６細胞である。特に好ましい実施形態では、該細胞は、ＣＨＯ細胞である。本発明による細胞を含む細胞培養物が更に提供される。様々な機関及び企業は、例えば、臨床使用のために、抗体の大規模生産のための細胞株を開発してきた。かかる細胞株の非限定的な例は、ＣＨＯ細胞、ＮＳ０細胞、又はＰＥＲ．Ｃ６細胞である。これらの細胞はまた、タンパク質の産生などの他の目的にも使用される。タンパク質及び抗体の工業規模生産のために開発された細胞株は、本明細書では産業細胞株と更に称される。したがって、好ましい実施形態では、本発明は、本発明の抗体の産生のための抗体の大規模生産のために開発された細胞株の使用を提供する。本発明は、特許請求される抗体のＶＨ、ＶＬ、及び／又は重鎖並びに軽鎖をコードする核酸分子を含む、抗体を産生するための細胞を更に提供する。好ましくは、当該核酸分子は、図１３で特定されるＶＨをコードし、数字４３２７によって特定されるか、又は数字８２３３によって特定されるか、又はこれらの組み合わせによって特定されるＶＨをコードする核酸分子である。
本発明は、本発明の細胞を培養することと、培養物から抗体を採取することとを含む、抗体を製造するための方法を更に提供する。好ましくは、当該細胞は、無血清培地中で培養される。好ましくは、当該細胞は懸濁増殖に適合される。更に、本発明による抗体を製造するための方法によって得ることができる抗体が提供される。抗体は、好ましくは、培養培地から精製される。好ましくは、抗体は、親和性精製される。
本発明の細胞は、例えば、ハイブリドーマ細胞株、ＣＨＯ細胞、２９３Ｆ細胞、ＮＳ０細胞、又は臨床目的のための抗体の産生に関して、その適性が既知の任意の他の細胞型である。特に好ましい実施形態では、該細胞は、ヒト細胞である。好ましくは、アデノウイルスＥ１領域又はその機能的均等物によって形質転換される細胞。このような細胞株の好ましい例は、ＰＥＲ．Ｃ６細胞株又はその均等物である。特に好ましい実施形態では、当該細胞は、ＣＨＯ細胞又はその変異体である。好ましくは、抗体の発現のためにグルタミンシンテターゼ（ＧＳ）ベクター系を利用する変異体。
本発明は、本発明の細胞を培養することと、培養物から抗体を採取することとを含む、抗体を製造するための方法を更に提供する。好ましくは、当該細胞は、無血清培地中で培養される。好ましくは、当該細胞は懸濁増殖に適合される。更に、本発明による抗体を製造するための方法によって得ることができる抗体が提供される。抗体は、好ましくは、培養培地から精製される。好ましくは、抗体は、親和性精製される。
二重特異性抗体は、典型的には、抗体をコードする核酸を発現する細胞によっても産生される。この場合、細胞は、二重特異性抗体を構成する異なる軽鎖及び重鎖を発現する。この目的を達成するために、細胞は、２つの異なる重鎖及び少なくとも１つの軽鎖を発現する。非修飾重鎖は、互いに対を成して二量体を形成することができることから、かかる細胞は、典型的には、二重特異性抗体（ヘテロ二量体）に加えて、２つの単一特異性抗体（ホモ二量体）を産生する。この原理はまた、１つの重鎖可変領域を有する第１の重鎖と、少なくとも２つの重鎖可変領域を有する第２の重鎖とを含む非修飾重鎖にも適用され、これにより、これらの２つの重鎖を発現する細胞が、単一特異性抗体（２つの第１の重鎖のペアリングのホモ二量体）、四価抗体（２つの第２重鎖のペアリングのホモ二量体）及び三重特異性抗体（第１及び第２の重鎖のヘテロ二量体）を産生する。産生された抗体における可能な重鎖／軽鎖の組み合わせの数は、細胞が２つ以上の軽鎖を発現するときに増加する。産生される異なる抗体種（異なる重鎖及び軽鎖の組み合わせ）の数を減らすために、前述の「共通軽鎖」が好ましい。
共通軽鎖及び等量の２つの重鎖を発現する抗体産生細胞は、典型的には、５０％の二重特異性抗体と、各々２５％の単一特異性抗体を産生する（すなわち、同一の重軽鎖の組み合わせを有する）。あるいは上記では、１つの可変領域を有する第１の重鎖及び２つの可変領域を有する第２の重鎖に関する例では、２つの重鎖は、典型的には、５０％の三重特異性、２５％の単一特異性及び２５％の四重特異性を生成する。
二重特異性抗体の産生を有利にするか、又はその逆に、単一特異性抗体の産生を有利にするためのいくつかの方法が公開されており、これらの方法は、多重特異性抗体産生を有利にするために更に使用することができる。本発明において、細胞が、対応の単一特異性抗体の産生よりも、二重特異性抗体の産生を好むことが好ましい。このようなものは、典型的には、重鎖の定常領域を、これらがホモ二量体化よりもヘテロ二量体化（すなわち、他の重鎖／軽鎖の組み合わせの重鎖と二量体化）に有利になるように修飾することによって達成される。好ましい実施形態では、本発明の二重特異性抗体は、適合性ヘテロ二量体化ドメインを有する２つの異なる免疫グロブリン重鎖を含む。様々な適合性ヘテロ二量体化ドメインが、当該技術分野において記載されている。この適合性ヘテロ二量体化ドメインは、好ましくは、適合性免疫グロブリン重鎖ＣＨ３ヘテロ二量体化ドメインである。当該技術分野では、「ノブ・イントゥ・ホール」二重特異性抗体に使用することを含む、重鎖のこのようなヘテロ二量体化が達成され得る様々な方法を記載している。
米国特許出願第１３／８６６，７４７号（現在、米国特許第９，２４８，１８１号として発行）、米国特許出願第１４／０８１，８４８号（現在、米国特許第９，３５８，２８６号として発行）、及びＰＣＴ／ＮＬ２０１３／０５０２９４（国際公開第２０１３／１５７９５４号として公開）；参照により本明細書に組み込まれる）において、適合性ヘテロ二量体化ドメインを使用して二重特異性抗体を産生するための方法及び手段が開示されている。本発明では、これらの手段及び方法を有利に採用することができる。具体的には、本質的に二重特異性完全長ＩｇＧ分子のみを産生するための好ましい変異は、第１のＣＨ３ドメイン中のアミノ酸置換Ｌ３５１Ｋ及びＴ３６６Ｋ（ＥＵ番号付けによる）（「ＫＫ－変異体」重鎖）、及び第２のドメイン中のアミノ酸置換Ｌ３５１Ｄ及びＬ３６８Ｅ（「ＤＥ－変異体」重鎖）、又はその逆である。ＤＥ－変異体及びＫＫ－変異体が優先的に対合して、ヘテロ二量体（いわゆる「ＤＥＫＫ」二重特異性分子）を形成することが、本発明者らの米国特許第９，２４８，１８１号及び同第９，３５８，２８６号の特許、並びに国際公開第２０１３／１５７９５４号で以前に実証されている。ＤＥ－変異体重鎖のホモ二量体化（ＤＥＤＥホモ二量体）又はＫＫ－変異体重鎖のホモ二量体化（ＫＫＫＫホモ二量体）は、同一の重鎖間のＣＨ３－ＣＨ３界面における荷電残基間の強い反発力のために、ほとんど発生しない。一実施形態では、ＣＤ３に結合する可変ドメインを含む重鎖／軽鎖の組み合わせは、重鎖のＫＫ変異体を含む。この実施形態では、ＣＤ３以外の抗原に結合する可変ドメインを含む重鎖／軽鎖の組み合わせは、重鎖のＤＥ変異体を含む。好ましい実施形態では、ＣＤ３以外の抗原は、ＣＬＥＣ１２Ａである。好ましい実施形態では、ＣＬＥＣ１２Ａに結合する可変ドメインのＶＨは、図１３に示すようにＭＦ４３２７である。
いくつかの抗体は、例えば、Ｆｃ受容体相互作用を低減するために、又はＣ１ｑ結合を低減するために、ＣＨ２／下部ヒンジ領域において修飾される。いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、二重特異性ＩｇＧ抗体とＦｃガンマ受容体との相互作用が低減されるように、変異したＣＨ２及び／又は下部ヒンジドメインを有するＩｇＧ抗体である。このような変異したＣＨ２及び／又は下部ヒンジドメインは、好ましくは、２３５位及び／又は２３６位（ＥＵ番号付けによる）でのアミノ酸置換、好ましくはＬ２３５Ｇ置換及び／又はＧ２３６Ｒ置換を含む。
あるいは、いくつかの抗体は、例えば、Ｆｃ受容体相互作用を強化するか、又はＣ１ｑ結合を強化するように修飾される。自己免疫適応を対象とする実施形態では、このような修飾が好ましい場合がある。
本発明は、本発明の抗原結合タンパク質、好ましくは本発明の抗体を、それを必要とする対象に投与することを含む、対象を治療する方法を更に提供する。本発明は、それ必要とする対象の治療に使用するための、本発明の抗原結合タンパク質、好ましくは本発明の抗体を更に提供する。対象は、好ましくは、身体から除去される細胞を有する。細胞は、自己免疫応答を誘導する異常な免疫細胞又は癌細胞などであり得る。この目的に適した可変ドメインは、とりわけ、共通軽鎖及びＭＦ９２４９及びＭＦ８３９７のＶＨを有するものである。これらは、好適に低親和性及び低細胞殺傷活性を有するが、自己免疫応答条件下で機能的である。この目的に適した可変ドメインは、とりわけ、共通軽鎖及びＭＦ９２６７、ＭＦ８０５７、ＭＦ８０５８、ＭＦ８０７８並びにＭＦ８５０８のＶＨを有するものである。これらの可変ドメインは、抗癌目的のために好適な親和性及び好適な細胞殺傷活性を有する。
更に、本明細書に記載の発明は、結合ドメインＭＦ８０７８を含む、局所的に投与され得るか、又は局所的に発現され得る、高細胞殺傷活性を有する高親和性可変ドメインを有する抗原結合タンパク質又は抗体を含む。本発明は、本発明の抗原結合タンパク質、好ましくは本発明の抗体を、例えば、腫瘍溶解ウイルス、黒色腫又は脳などの別の区画の他の癌のための局所治療を含む、当業者に既知であるような局所的投与手段を通して、それを必要とする対象に投与することを含む、対象を治療する方法を更に提供する。
本発明は、それを必要とする対象の治療で使用するための、本発明の抗原結合タンパク質、好ましくは、本発明の抗体を更に提供し、この抗原結合タンパク質又は抗体は、本明細書に記載されるものなどの中程度から高程度の親和性及び相対的に高い細胞傷害性を有する。この目的に適した可変ドメインは、とりわけ、共通軽鎖及びＭＦ８０５７、ＭＦ８０５８、ＭＦ９２６７、ＭＦ８５０８並びにＭＦ８０７８のＶＨを有するものである。
本発明は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質、好ましくは抗体を、それを必要とする対象に投与することを含む、対象における癌又は癌のリスクを治療する方法を更に提供し、重鎖可変領域は、下記のアミノ酸配列：
ＣＤＲ１：ＳＦＧＩＳ
ＣＤＲ２：ＧＦＩＰＶＬＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧ
ＣＤＲ３：ＲＧＮＷＮＰＦＤＰ、又は
アミノ酸配列：
ＣＤＲ１：ＳＸ１ＴＦＴＩＳ、
ＣＤＲ２：ＧＩＩＰＸ２ＦＧＴＩＴＹＡＱＫＦＱＧ、
ＣＤＲ３：ＲＧＮＷＮＰＦＤＰ、
（配列中、
Ｘ１＝Ｋ又はＲであり、
Ｘ２＝Ｌ又はＩである）を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む。
好ましい実施形態では、Ｘ１＝Ｋであり、Ｘ２＝Ｌである。別の好ましい実施形態では、Ｘ１＝Ｒであり、Ｘ２＝Ｉである。
本発明は、それを必要とする対象の治療で使用するための、本発明の抗原結合タンパク質、好ましくは、本発明の抗体を更に提供し、この抗原結合タンパク質又は抗体は、本明細書に記載されるものなどの中程度から高程度の親和性及び相対的に高い細胞傷害性を有する。この目的に適した可変ドメインは、とりわけ、共通軽鎖及びＭＦ８０４８、ＭＦ８０５６及びＭＦ８１０１のＶＨを有するものである。
本発明は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質、好ましくは抗体を、それを必要とする対象に投与することを含む、対象における癌又は癌のリスクを治療する方法を更に提供し、重鎖可変領域は、下記のアミノ酸配列：
ＣＤＲ１：ＳＫＴＬＴＩＳ、
ＣＤＲ２：ＧＩＩＰＩＦＧＳＩＴＹＡＱＫＦＱＤ、
ＣＤＲ３：ＲＧＮＷＮＰＦＤＰ、又は
アミノ酸配列：
ＣＤＲ１：ＧＳＧＩＳ、
ＣＤＲ２：ＧＦＩＰＦＦＧＳＡＮＹＡＱＫＦＲＤ、
ＣＤＲ３：ＲＧＮＷＮＰＸ１３ＤＰ
（配列中、
Ｘ１３＝又はＬ又はＦである）を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３（ａａ ＣＤＲ１，ＣＤＲ２ ａｎｄ ＣＤＲ３）を含む。
本発明は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質、好ましくは抗体を、それを必要とする対象に投与することを含む、対象における癌又は癌のリスクを治療する方法を更に提供し、重鎖可変領域は、下記のアミノ酸配列
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＲＳＦＧＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＦＩＰＶＬＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＩＡＤＫＳＴＮＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＧＮＷＮＰＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＤＡＦＫＳＫＴＦＴＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＬＧＧＩＩＰＬＦＧＴＩＴＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＮＴＡＦＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＭＹＹＣＴＲＲＧＮＷＮＰＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、
ＥＶＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＶＴＦＮＳＲＴＦＴＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＬＧＳＩＩＰＩＦＧＴＩＴＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＦＭＥＬＴＳＬＲＳＥＤＴＡＩＹＹＣＴＲＲＧＮＷＮＰＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＲＧＳＧＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＶＧＧＦＩＰＦＦＧＳＡＮＹＡＱＫＦＲＤＲＶＴＩＴＡＤＫＳＡＴＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＩＹＹＣＡＫＲＧＮＷＮＰＬＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＶＴＦＫＳＫＴＬＴＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＬＧＧＩＩＰＩＦＧＳＩＴＹＡＱＫＦＱＤＲＶＳＩＴＡＤＫＳＴＮＴＡＹＬＥＬＮＳＬＲＳＥＤＴＡＩＹＹＣＡＲＲＧＮＷＮＰＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、又は
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＲＧＳＧＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＶＧＧＦＩＰＦＦＧＳＡＮＹＡＱＫＦＲＤＲＶＴＩＴＡＤＫＳＡＴＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＩＹＹＣＡＫＲＧＮＷＮＰＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳを含み、
ＣＤＲ以外の１つ以上の位置において、０～１０個、好ましくは０～５個のアミノ酸の変異、挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを有する。
本発明は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質、好ましくは抗体を、それを必要とする対象に投与することを含む、対象における癌又は癌のリスクを治療する方法を更に提供し、重鎖可変領域は、下記のアミノ酸配列：
ＣＤＲ１：ＲＸ３ＷＩＧ、
ＣＤＲ２：ＩＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧ、
ＣＤＲ３：Ｘ４ＩＲＹＦＸ５ＷＳＥＤＹＨＹＹＸ６ＤＶ
（配列中、
Ｘ３＝Ｆ又はＹであり、
Ｘ４＝Ｈ又はＮであり、
Ｘ５＝Ｄ又はＶであり、
Ｘ６＝Ｌ又はＭである）を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、Ｘ３＝Ｆであり、Ｘ４＝Ｈであり、Ｘ５＝Ｄであり、かつＸ６＝Ｌである。更なる実施形態では、Ｘ３＝Ｙであり、Ｘ４＝Ｎであり、Ｘ５＝Ｖであり、かつＸ６＝Ｍである）。
本発明は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質、好ましくは抗体を、それを必要とする対象に投与することを含む、対象における癌又は癌のリスクを治療する方法を更に提供し、重鎖可変領域は、下記のアミノ酸配列
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＴＲＦＷＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＴＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＧＭＹＹＣＶＲＨＩＲＹＦＤＷＳＥＤＹＨＹＹＬＤＶＷＧＫＧＴＴＶＴＶＳＳ、又は
ＥＶＱＬＶＥＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＴＲＹＷＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＶＲＮＩＲＹＦＶＷＳＥＤＹＨＹＹＭＤＶＷＧＫＧＴＴＶＴＶＳＳを含み、
ＣＤＲ以外の１つ以上の位置において、０～１０個、好ましくは０～５個のアミノ酸の変異、挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを有する。
本発明は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質、好ましくは抗体を、それを必要とする対象に投与することを含む、対象における癌又は癌のリスクを治療する方法を更に提供し、重鎖可変領域は、下記のアミノ酸配列：
ＣＤＲ１：ＳＹＡＬＳ、
ＣＤＲ２：ＧＩＳＧＳＧＲＴＴＷＹＡＤＳＶＫＧ、
ＣＤＲ３：ＤＧＧＹＳＹＧＰＹＷＹＦＤＬ、を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む。
本発明は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質、好ましくは抗体を、それを必要とする対象に投与することを含む、対象における癌又は癌のリスクを治療する方法を更に提供し、重鎖可変領域は、下記のアミノ酸配列：
ＣＤＲ１：ＳＹＡＬＳ、
ＣＤＲ２：ＡＩＳＧＳＧＲＴＴＷＹＡＤＳＶＫＧ、
ＣＤＲ３：ＤＧＧＹＴＹＧＰＹＷＹＦＤＬ、を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む。
本発明は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質、好ましくは抗体を、それを必要とする対象に投与することを含む、対象における癌又は癌のリスクを治療する方法を更に提供し、重鎖可変領域は、下記のアミノ酸配列
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＴＳＧＦＫＦＳＳＹＡＬＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＳＧＳＧＲＴＴＷＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＧＧＹＳＹＧＰＹＷＹＦＤＬＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳ、又は
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＴＳＧＦＴＦＩＳＹＡＬＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＲＴＴＷＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＦＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＧＧＹＴＹＧＰＹＷＹＦＤＬＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳを含み、ＣＤＲ以外の１つ以上の位置において、０～１０個、好ましくは０～５個のアミノ酸の変異、挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを有する。
本発明は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質、好ましくは抗体を、それを必要とする対象に投与することを含む、対象における癌又は癌のリスクを治療する方法を更に提供し、重鎖可変領域は、下記のアミノ酸配列：
ＣＤＲ１：ＤＹＴＭＨ、
ＣＤＲ２：ＤＩＳＷＳＳＧＳＩＧＹＡＤＳＶＫＧ、
ＣＤＲ３：ＤＨＲＧＹＧＤＹＥＧＧＧＦＤＹ、を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む。
本発明は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質、好ましくは抗体を、それを必要とする対象に投与することを含む、対象における癌又は癌のリスクを治療する方法を更に提供し、重鎖可変領域は、下記のアミノ酸配列：
ＣＤＲ１：ＤＹＴＭＨ、
ＣＤＲ２：ＤＩＳＷＳＸ７ＧＸ８Ｘ９Ｘ１０ＹＡＤＳＶＫＧ、
ＣＤＲ３：ＤＨＸ１１ＧＹＧＤＹＥＧＧＧＦＤＸ１２
（配列中、
Ｘ７＝Ｓ又はＧであり、
Ｘ８＝Ｓ又はＴであり、
Ｘ９＝Ｉ又はＴであり、
Ｘ１０＝Ｇ又はＹであり、
Ｘ１１＝Ｒ又はＭであり、
Ｘ１２＝Ｈ又はＹであり、
好ましくは、Ｘ７、Ｘ８、Ｘ９及びＸ１０は、Ｓ、Ｓ、Ｉ及びＧであり、又はＧ、Ｓ、Ｉ及びＹであり、又はＳ、Ｔ、Ｔ及びＧであり、好ましくは、Ｘ１１及びＸ１２は、Ｒ及びＨ、又はＲ及びＹ、又はＭ及びＹであり、より好ましくは、Ｘ７、Ｘ８、Ｘ９、Ｘ１０、Ｘ１１及びＸ１２は、Ｓ、Ｓ、Ｉ、Ｇ、Ｒ及びＨであり、又はＧ、Ｓ、Ｉ、Ｙ、Ｒ及びＹであり、又はＳ、Ｔ、Ｔ、Ｇ、Ｍ及びＹであり、あるいは、他の言い方をすれば、好ましくは、Ｘ７、Ｘ８、Ｘ９及びＸ１０は、Ｓ、Ｓ、Ｉ及びＧであり、かつＸ１１及びＸ１２は、Ｒ及びＨであり、あるいは、Ｘ７、Ｘ８、Ｘ９及びＸ１０は、Ｇ、Ｓ、Ｉ及びＹであり、かつＸ１１及びＸ１２は、Ｒ及びＹであり、あるいは、Ｘ７、Ｘ８、Ｘ９及びＸ１０は、Ｓ、Ｔ、Ｔ及びＧであり、かつＸ１１及びＸ１２は、Ｍ及びＹである）を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む。
本発明は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質、好ましくは抗体を、それを必要とする対象に投与することを含む、対象における癌又は癌のリスクを治療する方法を更に提供し、重鎖可変領域は、下記のアミノ酸配列
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＴＳＧＦＮＦＤＤＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＤＩＳＷＳＳＧＳＩＧＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＷＬＱＭＮＳＬＲＴＥＤＴＡＬＹＦＣＡＫＤＨＲＧＹＧＤＹＥＧＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＴＳＧＦＴＦＤＤＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＤＩＳＷＳＳＧＳＩＧＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＬＹＦＣＡＫＤＨＲＧＹＧＤＹＥＧＧＧＦＤＨＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＶＴＳＧＦＴＦＤＤＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＤＩＳＷＳＳＧＴＴＧＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＤＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＴＥＤＴＡＬＹＹＣＡＫＤＨＭＧＹＧＤＹＥＧＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、又は
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＶＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＤＩＳＷＳＧＧＳＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＴＥＤＴＡＬＹＹＣＡＫＤＨＲＧＹＧＤＹＥＧＧＧＦＤＹＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳを含み、
ＣＤＲ以外の１つ以上の位置において、０～１０個、好ましくは０～５個のアミノ酸の変異、挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを有する。
本明細書で上記に示される治療における抗原結合タンパク質、好ましくは抗体は、腫瘍抗原に結合する重鎖－軽鎖（Ｈ／Ｌ）の組み合わせを含むことが好ましい。
抗体は、好ましくはヒト又はヒト化抗体である。好ましくは、抗体は、適合性ヘテロ二量体化ドメインを有する２つの異なる免疫グロブリン重鎖を含む。当該適合性ヘテロ二量体化ドメインは、好ましくは、適合性免疫グロブリン重鎖ＣＨ３ヘテロ二量体化ドメインである。当該二重特異性抗体は、二重特異性又は多重特異性ＩｇＧ抗体とＦｃガンマ受容体との相互作用が低減される癌免疫療法用途のために、変異したＣＨ２及び／又は下部ヒンジドメインを有するＩｇＧ抗体である。変異したＣＨ２及び／又は下部ヒンジドメインは、好ましくは、２３５位及び／又は２３６位（ＥＵ番号付けによる）でのアミノ酸置換、好ましくはＬ２３５Ｇ置換及び／又はＧ２３６Ｒ置換を含む。あるいは、自己免疫用途の場合、二重特異性又は多重特異性のＦｃガンマ受容体への相互作用が強化されるか、又はＡＤＣＣ及びＣＤＣが、ＣＨ２ドメイン及び／又はＣＨ３ドメインへの修飾によって増強される。例えば、より高い選択性を有する活性化受容体に結合するＦｃ領域を（アミノ酸置換を導入することにより）操作することによって、抗癌Ｍａｂ又は自己免疫関連の疾患の治療のためのＣＤ３標的化結合アームによって所望される細胞傷害性活性を媒介するより大きな能力を有する抗体を作製することができる。例えば、抗体のＡＤＣＣを増強するための報告された技術は、アフコシル化である。（Ｊｕｎｔｔｉｌａ，Ｔ．Ｔ．，Ｋ．Ｐａｒｓｏｎｓ，ｅｔ ａｌ．（２０１０）．「Ｓｕｐｅｒｉｏｒ Ｉｎ ｖｉｖｏ Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ Ａｆｕｃｏｓｙｌａｔｅｄ Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ＨＥＲ２－Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ．」Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ７０（１１）：４４８１－４４８９を参照されたい）。したがって、本発明による二重特異性抗体が更に提供され、この抗体は、アフコシル化されている。代替的に、又は追加的に、例えば、グリコエンジニアリング（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ／Ｂｉｏｗａ，ＧｌｙｃＡｒｔ（Ｒｏｃｈｅ）ａｎｄ Ｅｕｒｅｋａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）及び突然変異誘発（Ｘｅｎｃｏｒ及びＭａｃｒｏｇｅｎｉｃｓ）を含む、複数の他の戦略が、ＡＤＣＣ増強を達成するために使用されることが報告され、これらの全ては、低親和性活性化ＦｃγＲＩＩＩａに対するＦｃ結合を改善し、かつ／又は低親和性阻害剤ＦｃγＲＩＩｂへの結合を低減することを求めている。
抗体は、好ましくは、共通軽鎖を含む。
本発明は、二重特異性抗原結合タンパク質、好ましくは二重特異性抗体を更に提供し、これは、腫瘍抗原に結合する可変ドメインと、ヒトＣＤ３に結合する可変ドメインとを含み、可変ドメインはそれぞれ、異なる重鎖可変領域及び共通軽鎖可変領域を含み、ヒトＣＤ３に結合する可変ドメインの重鎖可変領域は、アミノ酸配列：
ＣＤＲ１：ＳＦＧＩＳ
ＣＤＲ２：ＧＦＩＰＶＬＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧ
ＣＤＲ３：ＲＧＮＷＮＰＦＤＰ、又は
アミノ酸配列：
ＣＤＲ１：ＳＸ１ＴＦＴＩＳ、
ＣＤＲ２：ＧＩＩＰＸ２ＦＧＴＩＴＹＡＱＫＦＱＧ、
ＣＤＲ３：ＲＧＮＷＮＰＦＤＰ、
（配列中、
Ｘ１＝Ｋ又はＲであり、
Ｘ２＝Ｌ又はＩである）を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む。
好ましい実施形態では、Ｘ１＝Ｋであり、Ｘ２＝Ｌである。別の好ましい実施形態では、Ｘ１＝Ｒであり、Ｘ２＝Ｉである。
本発明は、二重特異性抗原結合タンパク質、好ましくは二重特異性抗体を更に提供し、これは、腫瘍抗原に結合する可変ドメインと、ヒトＣＤ３に結合する可変ドメインとを含み、可変ドメインはそれぞれ、異なる重鎖可変領域及び共通軽鎖可変領域を含み、ヒトＣＤ３に結合する可変ドメインの重鎖可変領域は、アミノ酸配列：
ＣＤＲ１：ＳＫＴＬＴＩＳ、
ＣＤＲ２：ＧＩＩＰＩＦＧＳＩＴＹＡＱＫＦＱＤ、
ＣＤＲ３：ＲＧＮＷＮＰＦＤＰ、又は
アミノ酸配列：
ＣＤＲ１：ＧＳＧＩＳ、
ＣＤＲ２：ＧＦＩＰＦＦＧＳＡＮＹＡＱＫＦＲＤ、
ＣＤＲ３：ＲＧＮＷＮＰＸ１３ＤＰ
（配列中、
Ｘ１３＝又はＬ又はＦである）を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む。
本発明は、二重特異性抗原結合タンパク質、好ましくは二重特異性抗体を更に提供し、これは、腫瘍抗原に結合する可変ドメインと、ヒトＣＤ３に結合する可変ドメインとを含み、可変ドメインはそれぞれ、異なる重鎖可変領域及び共通軽鎖可変領域を含み、ヒトＣＤ３に結合する可変ドメインの重鎖可変領域は、アミノ酸配列
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＲＳＦＧＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＦＩＰＶＬＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＩＡＤＫＳＴＮＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＧＮＷＮＰＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＤＡＦＫＳＫＴＦＴＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＬＧＧＩＩＰＬＦＧＴＩＴＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＮＴＡＦＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＭＹＹＣＴＲＲＧＮＷＮＰＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、
ＥＶＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＶＴＦＮＳＲＴＦＴＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＬＧＳＩＩＰＩＦＧＴＩＴＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＦＭＥＬＴＳＬＲＳＥＤＴＡＩＹＹＣＴＲＲＧＮＷＮＰＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＲＧＳＧＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＶＧＧＦＩＰＦＦＧＳＡＮＹＡＱＫＦＲＤＲＶＴＩＴＡＤＫＳＡＴＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＩＹＹＣＡＫＲＧＮＷＮＰＬＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＶＴＦＫＳＫＴＬＴＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＬＧＧＩＩＰＩＦＧＳＩＴＹＡＱＫＦＱＤＲＶＳＩＴＡＤＫＳＴＮＴＡＹＬＥＬＮＳＬＲＳＥＤＴＡＩＹＹＣＡＲＲＧＮＷＮＰＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、又は
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＲＧＳＧＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＶＧＧＦＩＰＦＦＧＳＡＮＹＡＱＫＦＲＤＲＶＴＩＴＡＤＫＳＡＴＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＩＹＹＣＡＫＲＧＮＷＮＰＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳを含み、
ＣＤＲ以外の１つ以上の位置において、０～１０個、好ましくは０～５個のアミノ酸の変異、挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを有する。
本発明は、二重特異性抗原結合タンパク質、好ましくは二重特異性抗体を更に提供し、これは、腫瘍抗原に結合する可変ドメインと、ヒトＣＤ３に結合する可変ドメインとを含み、可変ドメインはそれぞれ、異なる重鎖可変領域及び共通軽鎖可変領域を含み、ヒトＣＤ３に結合する可変ドメインの重鎖可変領域は、アミノ酸配列：
ＣＤＲ１：ＲＸ３ＷＩＧ、
ＣＤＲ２：ＩＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧ、
ＣＤＲ３：Ｘ４ＩＲＹＦＸ５ＷＳＥＤＹＨＹＹＸ６ＤＶ
（配列中、
Ｘ３＝Ｆ又はＹであり、
Ｘ４＝Ｈ又はＮであり、
Ｘ５＝Ｄ又はＶであり、
Ｘ６＝Ｌ又はＭである）を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、Ｘ３＝Ｆであり、Ｘ４＝Ｈであり、Ｘ５＝Ｄであり、かつＸ６＝Ｌである。更なる実施形態では、Ｘ３＝Ｙであり、Ｘ４＝Ｎであり、Ｘ５＝Ｖであり、かつＸ６＝Ｍである。
本発明は、二重特異性抗原結合タンパク質、好ましくは二重特異性抗体を更に提供し、これは、腫瘍抗原に結合する可変ドメインと、ヒトＣＤ３に結合する可変ドメインとを含み、可変ドメインはそれぞれ、異なる重鎖可変領域及び共通軽鎖可変領域を含み、ヒトＣＤ３に結合する可変ドメインの重鎖可変領域は、アミノ酸配列
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＴＲＦＷＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＴＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＧＭＹＹＣＶＲＨＩＲＹＦＤＷＳＥＤＹＨＹＹＬＤＶＷＧＫＧＴＴＶＴＶＳＳ、又は
ＥＶＱＬＶＥＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＴＲＹＷＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＶＲＮＩＲＹＦＶＷＳＥＤＹＨＹＹＭＤＶＷＧＫＧＴＴＶＴＶＳＳを含み、
ＣＤＲ以外の１つ以上の位置において、０～１０個、好ましくは０～５個のアミノ酸の変異、挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを有する。
本発明は、二重特異性抗原結合タンパク質、好ましくは二重特異性抗体を更に提供し、これは、腫瘍抗原に結合する可変ドメインと、ヒトＣＤ３に結合する可変ドメインとを含み、可変ドメインはそれぞれ、異なる重鎖可変領域及び共通軽鎖可変領域を含み、ヒトＣＤ３に結合する可変ドメインの重鎖可変領域は、アミノ酸配列：
ＣＤＲ１：ＳＹＡＬＳ、
ＣＤＲ２：ＧＩＳＧＳＧＲＴＴＷＹＡＤＳＶＫＧ、
ＣＤＲ３：ＤＧＧＹＳＹＧＰＹＷＹＦＤＬ、を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。
本発明は、二重特異性抗原結合タンパク質、好ましくは二重特異性抗体を更に提供し、これは、腫瘍抗原に結合する可変ドメインと、ヒトＣＤ３に結合する可変ドメインとを含み、抗体可変ドメインは、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、アミノ酸配列：
ＣＤＲ１：ＳＹＡＬＳ、
ＣＤＲ２：ＡＩＳＧＳＧＲＴＴＷＹＡＤＳＶＫＧ、
ＣＤＲ３：ＤＧＧＹＴＹＧＰＹＷＹＦＤＬ、を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む。
本発明は、二重特異性抗原結合タンパク質、好ましくは二重特異性抗体を更に提供し、これは、腫瘍抗原に結合する可変ドメインと、ヒトＣＤ３に結合する可変ドメインとを含み、可変ドメインはそれぞれ、異なる重鎖可変領域及び共通軽鎖可変領域を含み、ヒトＣＤ３に結合する可変ドメインの重鎖可変領域は、アミノ酸配列
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＴＳＧＦＫＦＳＳＹＡＬＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＳＧＳＧＲＴＴＷＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＧＧＹＳＹＧＰＹＷＹＦＤＬＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳ、又は
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＴＳＧＦＴＦＩＳＹＡＬＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＲＴＴＷＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＦＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＧＧＹＴＹＧＰＹＷＹＦＤＬＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳを含み、
ＣＤＲ以外の１つ以上の位置において、０～１０個、好ましくは０～５個のアミノ酸の変異、挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを有する。
本発明は、二重特異性抗原結合タンパク質、好ましくは二重特異性抗体を更に提供し、これは、腫瘍抗原に結合する可変ドメインと、ヒトＣＤ３に結合する可変ドメインとを含み、可変ドメインはそれぞれ、異なる重鎖可変領域及び共通軽鎖可変領域を含み、ヒトＣＤ３に結合する可変ドメインの重鎖可変領域は、アミノ酸配列：
ＣＤＲ１：ＤＹＴＭＨ、
ＣＤＲ２：ＤＩＳＷＳＳＧＳＩＧＹＡＤＳＶＫＧ、
ＣＤＲ３：ＤＨＲＧＹＧＤＹＥＧＧＧＦＤＹ、を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む。
本発明は、二重特異性抗原結合タンパク質、好ましくは二重特異性抗体を更に提供し、これは、腫瘍抗原に結合する可変ドメインと、ヒトＣＤ３に結合する可変ドメインとを含み、抗体可変ドメインは、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、アミノ酸配列：
ＣＤＲ１：ＤＹＴＭＨ、
ＣＤＲ２：ＤＩＳＷＳＸ７ＧＸ８Ｘ９Ｘ１０ＹＡＤＳＶＫＧ、
ＣＤＲ３：ＤＨＸ１１ＧＹＧＤＹＥＧＧＧＦＤＸ１２
（配列中、
Ｘ７＝Ｓ又はＧであり、
Ｘ８＝Ｓ又はＴであり、
Ｘ９＝Ｉ又はＴであり、
Ｘ１０＝Ｇ又はＹであり、
Ｘ１１＝Ｒ又はＭであり、
Ｘ１２＝Ｈ又はＹであり、
好ましくは、Ｘ７、Ｘ８、Ｘ９及びＸ１０は、Ｓ、Ｓ、Ｉ及びＧであり、又はＧ、Ｓ、Ｉ及びＹであり、又はＳ、Ｔ、Ｔ及びＧであり、好ましくは、Ｘ１１及びＸ１２は、Ｒ及びＨ、又はＲ及びＹ、又はＭ及びＹであり、より好ましくは、Ｘ７、Ｘ８、Ｘ９、Ｘ１０、Ｘ１１及びＸ１２は、Ｓ、Ｓ、Ｉ、Ｇ、Ｒ及びＨであり、又はＧ、Ｓ、Ｉ、Ｙ、Ｒ及びＹであり、又はＳ、Ｔ、Ｔ、Ｇ、Ｍ及びＹであり、あるいは、他の言い方をすれば、好ましくは、Ｘ７、Ｘ８、Ｘ９及びＸ１０は、Ｓ、Ｓ、Ｉ及びＧであり、かつＸ１１及びＸ１２は、Ｒ及びＨであり、あるいは、Ｘ７、Ｘ８、Ｘ９及びＸ１０は、Ｇ、Ｓ、Ｉ及びＹであり、かつＸ１１及びＸ１２は、Ｒ及びＹであり、あるいは、Ｘ７、Ｘ８、Ｘ９及びＸ１０は、Ｓ、Ｔ、Ｔ及びＧであり、かつＸ１１及びＸ１２は、Ｍ及びＹである）を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む。
本発明は、二重特異性抗原結合タンパク質、好ましくは二重特異性抗体を更に提供し、これは、腫瘍抗原に結合する可変ドメインと、ヒトＣＤ３に結合する可変ドメインとを含み、可変ドメインはそれぞれ、異なる重鎖可変領域及び共通軽鎖可変領域を含み、ヒトＣＤ３に結合する可変ドメインの重鎖可変領域は、アミノ酸配列
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＴＳＧＦＮＦＤＤＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＤＩＳＷＳＳＧＳＩＧＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＷＬＱＭＮＳＬＲＴＥＤＴＡＬＹＦＣＡＫＤＨＲＧＹＧＤＹＥＧＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＴＳＧＦＴＦＤＤＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＤＩＳＷＳＳＧＳＩＧＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＬＹＦＣＡＫＤＨＲＧＹＧＤＹＥＧＧＧＦＤＨＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＶＴＳＧＦＴＦＤＤＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＤＩＳＷＳＳＧＴＴＧＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＤＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＴＥＤＴＡＬＹＹＣＡＫＤＨＭＧＹＧＤＹＥＧＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、又は
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＶＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＤＩＳＷＳＧＧＳＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＴＥＤＴＡＬＹＹＣＡＫＤＨＲＧＹＧＤＹＥＧＧＧＦＤＹＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳを含み、
ＣＤＲ以外の１つ以上の位置において、０～１０個、好ましくは０～５個のアミノ酸の変異、挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを有する。
一実施形態では、腫瘍抗原に結合する可変ドメインの重鎖可変領域は、好ましくは、ＭＦ８２３３（ＥＧＦＲ）ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＧＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＳＡＹＮＡＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧＲＶＴＭＴＴＤＴＳＴＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＫＤＲＨＷＨＷＷＬＤＡＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳのアミノ酸配列を含み、
ＣＤＲ以外の１つ以上の位置において、０～１０個、好ましくは０～５個のアミノ酸の変異、挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを有する。
別の実施形態では、腫瘍抗原に結合する可変ドメインの重鎖可変領域は、好ましくは、
ＭＦ４３２７（ＣＬＥＣ１２Ａ）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＩＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧＲＶＰＯＳＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＧＴＴＧＤＷＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳのアミノ酸配列を含み、
ＣＤＲ以外の１つ以上の位置において、０～１０個、好ましくは０～５個のアミノ酸の変異、挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを有する。
本発明は、それを必要とする対象の治療に使用するための、本発明の抗体若しくはその誘導体、又は本発明の医薬組成物を更に提供する。腫瘍を有する、又はそのリスクがある対象の治療のために、抗体が本発明の二重特異性抗体であることが好ましい。好ましくは、ＣＤ３結合抗体は、腫瘍抗原に結合する重鎖／軽鎖の組み合わせを含む。
固形腫瘍又は血液腫瘍の治療に使用するための、ＣＤ３／腫瘍抗原二重特異性抗体及びこのような二重特異性抗体を含む医薬組成物が提供される。好ましい固形腫瘍は、上皮由来であり、卵巣腫瘍及び子宮内膜腫瘍などの婦人科癌、前立腺癌、脳癌、又は任意の他の固体腫瘍である。
骨髄起源の様々な白血病及び前白血病疾患の治療、またＢ細胞リンパ腫の治療で使用するための、本発明のＣＤ３／腫瘍抗原二重特異性抗体若しくはその誘導体、又はこのような二重特異性抗体若しくはその誘導体を含む医薬組成物が提供される。本発明に従って治療することができる疾患としては、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）及び慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、及びホジキンリンパ腫並びに大部分の非ホジキンリンパ腫などの骨髄性白血病又は前白血病疾患が挙げられる。また、Ｂ－ＡＬＬ、Ｔ－ＡＬＬ、マントル細胞リンパ腫もまた、本発明の抗体で治療するための標的である。したがって、本発明は、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、又は好ましくは急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の治療における医薬品として使用するための、本発明による二重特異性完全長ＩｇＧ抗体を提供する。ＭＤＳ、ＣＭＬ、ＭＭ又は好ましくはＡＭＬの治療又は予防のための薬剤の調製における、本発明による二重特異性ＩｇＧ抗体の使用も提供される。
患者に投与されるべき本発明による抗体の量は、典型的には、治療用ウィンドウ内にあり、これは、治療効果を得るために十分な量が使用されるが、その量は、許容不可能な程度の副作用をもたらす閾値を超えないことを意味する。所望の治療効果を得るために必要とされる抗体の量が少なくなるほど、治療用ウィンドウは典型的にはより大きくなるであろう。したがって、低薬用量で十分な治療効果を発揮する本発明による抗体が好ましい。
毎年約３０，０００人の患者が、ヨーロッパ及び米国においてＡＭＬと診断されている。これらの患者の大部分は、６０歳以上である。高齢は、ＡＭＬにおける予後の主たる負の決定因子であり、集中的に治療された高齢のＡＭＬ患者の長期生存率（５年）は、およそ１０％である。誘導化学療法の際に寛解を達成したほとんど全ての患者において、疾患の進行が３年以内に観察される。現在の寛解後治療は、ＡＭＬを有する高齢の患者では、あるとしても、限定された価値しか示されていない。したがって、残留する抵抗性白血病の有意な負荷が残っており、薬物耐性白血病細胞の生存するサブ集団は、再発を迅速に発生させる。完全な寛解を誘導し、維持するための取り組みにおいて、これらの化学療法非応答性ＡＭＬ腫瘍細胞を標的とするための全く異なる作用様式を有する新規な種類の薬物が必要とされる。完全寛解（ＣＲ）は、いくつかの集中的な化学療法の組み合わせで、高齢のＡＭＬ患者の５０％超及び若年患者の場合は約８０％で達成することができるが、応答率又は生存率の上昇は、依然として主要な治験的課題のである。ＡＭＬを有する高齢の患者における６５の無作為化臨床試験（１５，１１０人の患者）の最近公開されたネットワークメタ分析では、補正された治験誘導レジメンの大部分が、ダウノルビシン及びシタラビンを用いる従来の３＋７誘導レジメンと比較して、同等か、又は更に悪い有効性プロファイルを有する。ＡＭＬのこの標準的な治療は、高い罹患率及び更に死亡率に関連する。ＣＲにある患者の大部分が、化学療法後の残りの白血病性幹細胞に起因して再発する。更なる用量増強は、許容できない毒性のために制限される。したがって、好ましくは毒性が少ない新しい治療様式の緊急の必要性は、特に、ＡＭＬを有する高齢患者において現れている。
化学療法に応答しないＡＭＬの治療は、Ｔ細胞を患者自身の免疫系からＡＭＬ腫瘍細胞に再指向し、その後、二重特異性抗体を使用してＴ細胞の腫瘍標的特異的活性化を行うことによって達成され得る。このプロセスは、いわゆる「Ｔ細胞係合アプローチ」としても知られている。このようにして、患者の免疫系は強化され、ＡＭＬ腫瘍細胞を攻撃及び根絶するように再標的化される。例えば、ＣＤ３ｘＣＬＥＣ１２Ａ二重特異性ＩｇＧ抗体は、Ｔ細胞をＡＭＬ腫瘍細胞に向けて効率的に再指向させ、それによってＡＭＬ腫瘍細胞の溶解を誘導する。
機能活性の評価：ＥＧＦＲ×ＣＤ３二重特異性抗体による治療の際のＢｘＰＣ３標的細胞を用いたＴ細胞の細胞傷害性アッセイである。各二重特異性抗体は、ＭＦ番号によって指定される重鎖可変領域を含むＣＤ３結合ドメイン、及び重鎖可変領域ＭＦ８２３３を含むＥＧＦＲ結合ドメインを含む。これらの可変領域を共通軽鎖と対形成して、ＥＧＦＲ×ＣＤ３二重特異性抗体を形成する。ＢｘＰＣ３溶解に対する親和性（ＨＰＢ－ＡＬＬ結合）である。本発明の特定の抗体は、抗体のＣＤ３結合ドメインが比較的低い親和性でヒトＣＤ３に結合することを示す、相対的に低いレベルのＨＰＢ－ＡＬＬ細胞への結合を示す。相対的に低い親和性は、ＢｘＰＣ３細胞（ＢｘＰＣ３溶解、縦軸）の腫瘍抗原媒介性Ｔ細胞の細胞傷害性を必ずしも阻害しないことは明らかである。二重特異性抗体ＭＦ８２３３×ＭＦ８５０８及びＭＦ８２３３×ＭＦ８０５７は、ＢｘＰＣ３細胞を効率的に溶解させることができるのに対し、二重特異性抗体ＭＦ８２３３×ＭＦ８３９７及びＭＦ８２３３×ＭＦ９２４９は、同様の結合を有するが効率的には行われない。更に、二重特異性抗体の比較では、二重抗体ＭＦ８２３３×ＭＦ６９５５は、より高い親和性でＨＰＢ－ＡＬＬ（すなわち、ヒトＣＤ３）に結合するが、比較的程度は低いがＣＤ３に結合する二重特異性抗体ＭＦ８２３３×ＭＦ８５０８及びＭＦ８２３３×ＭＦ８０５７よりも効率的にＢｘＰＣ３を溶解しない。ＭＦ６９５５は、共通軽鎖と組み合わされ、比較基準配列として使用される重鎖可変領域であり、米国特許出願公開第２０１４／００８８２９５（Ａ１）号において、Ｈ１Ｈ７２３２Ｂ（１１２９）ＶＨに対応する。ＭＦ６９５５及び同じＥＧＦＲ結合ドメインを別個に有する比較基準二重特異性抗体は、ＭＦ９２６７よりもヒトＣＤ３に対して高い親和性を有し、ＭＦ９２６７よりも効率的な殺傷を示す。対照的に、ＭＦ８０５８などの本発明のＣＤ３結合ドメインを組み込んだ他の抗体は、ＭＦ６９５５とほぼ同じ結合活性を有するが、ＭＦ８２３３×ＭＦ８０５８などで、ＢｘＰＣ３細胞のより効率的な殺傷を実証する。ＣＤ３に結合できる本発明の結合ドメインを含む他の二重特異性抗体は、本明細書に記載される特定の用途に有用であるＭＦ８２３３×ＭＦ８０７８などの、相対的に高い結合及びより効率的な殺傷を示す。それに対して、ＣＤ３に結合できる本発明の結合ドメインを含む他の二重特異性抗体は、ＭＦ８２３３×ＭＦ９２４９及びＭＦ８２３３×ＭＦ８３９７など、相対的に低い親和性及び低い殺傷を示すが、これらは、本明細書に記載される代替用途に有用である。 抗体対照のない場合と比較して、ＢｘＰＣ３標的細胞のＴ細胞媒介殺傷％を誘導する能力を示す抗体滴定曲線である。抗体ＭＦ８２３３×ＭＦ８０７８、ＭＦ８２３３×ＭＦ８３９７、及びＭＦ８２３３×ＭＦ８５０８の曲線が示されている。 ＢｘＰＣ３標的細胞によるＴ細胞の細胞傷害性における様々な二重特異性抗体の滴定曲線データの要約である。ＣＤ３ Ｆａｂの欄は、ＣＤ３結合アームのＭＦ番号を示す。ＥＧＦＲアームは、示されたＭＦ８２３３番号を有する。この欄は、同じＶＨ遺伝子セグメントに基づいて変異体を設定するためのスーパークラスター数を示す。ＣＤ３結合を示す欄は、ＨＢＰ－ＡＬＬ結合実験の結果を反映している。 ＢｘＰＣ３標的細胞のＴ細胞媒介性溶解を誘導する能力を決定するための２つの独立した細胞傷害性アッセイの結果を示す。 発現によるＣＤ８＋Ｔ細胞上のＢｘＰＣ３標的細胞でのＴ細胞の細胞傷害性アッセイにおけるＴ細胞活性化である。ＣＤ３結合ドメインの変異体を提示する、様々なスーパークラスター数の抗体滴定曲線である。二重特異性抗体の他のアームは、ＭＦ８２３３の重鎖結合ドメインを有する。比較のために、二重特異性抗体ＭＦ８２３３×ＭＦ６９５５及びＭＦ８２３３×ＭＦ６９６４も同様に試験し、ＭＦ６９５５及びＭＦ６９６４は、共通軽鎖と組み合わされ、比較基準配列として使用される重鎖可変領域であり、米国特許出願公開第２０１４／００８８２９５（Ａ１）号におけるＨ１Ｈ７２３２Ｂ（１１２９）ＶＨ及びＨＨ７２４１Ｂ（１１４５）にそれぞれに対応する。 ＢｘＰＣ３標的細胞によるＴ細胞活性化Ｔ細胞の細胞傷害性アッセイにおける様々な抗体の滴定曲線データの要約である。ＭＦ ｎｒ．の欄は、ＣＤ３結合ドメインのＭＦ番号を示す。ＥＧＦＲ結合ドメインは、示されたＭＦ８２３３番号を有する。様々なＣＤ３結合ドメイン配列のスーパークラスター情報は、欄「スーパークラスター」で示されている。ＣＤ３親和性を示す欄は、ＨＢＰ－ＡＬＬ結合実験の結果を反映している。 ＣＤ４＋及びＣＤ８＋細胞の結果は、マーカーＣＤ６９及びＣＤ２５について示される。示された二重特異性抗体は、二重特異性抗体のより大きなプールからの例である。 機能活性の評価：ＢｘＰＣ３標的細胞を用いたＴ細胞の細胞傷害性アッセイである。ＣＤ６９発現により測定した親和性（ＨＰＢ－ＡＬＬ結合）対ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化である。本発明の特定の抗体は、抗体のＣＤ３結合ドメインが相対的に低い親和性でヒトＣＤ３に結合することを示す、相対的に低いレベルのＨＰＢ－ＡＬＬ細胞への結合を示す。このような親和性は、ＣＤ８陽性ＣＤ６９活性化分析の結果によって例示されるように、腫瘍抗原媒介性Ｔ細胞活性化を必ずしも阻害しない。二重特異性抗体ＭＦ８２３３×ＭＦ８５０８及びＭＦ８２３３×ＭＦ８０５７は、Ｔ細胞を効率的に活性化させることができるのに対し、二重特異性抗体ＭＦ８２３３×ＭＦ８３９７及びＭＦ８２３３×ＭＦ９２４９は、そのように効率的には行われない。これらの細胞に効率的に結合しない特定のＣＤ３結合ドメインもＴ細胞を活性化しない（左下コーナーを参照）。他のＣＤ３結合ドメインＭＦ８５０８及びＭＦ８０５７は、比較基準ＣＤ３結合ドメインＭＦ６９５５よりもＨＰＢ－ＡＬＬ細胞にそれ程結合せず、例えば、Ｔ細胞を同様の程度に活性化する。ＣＤ３に結合できる本発明の結合ドメインを含む他の二重特異性抗体は、本明細書に記載される特定の用途で使用するＭＦ８０７８などの、相対的に高い結合及び高レベルの活性化を示す。それに対して、ＣＤ３に結合できる本発明の結合ドメインを含む他の二重特異性抗体は、ＭＦ９２４９及びＭＦ８３９７など、相対的に低い親和性及び低い活性化を示すが、これらは、本明細書に記載される代替用途に有用である。 機能性の評価：ＨＣＴ１１６標的細胞を用いたＴ細胞の細胞傷害性アッセイである。ＨＣＴ－１１６溶解に対する親和性（ＨＰＢ－ＡＬＬ結合）である。 本発明の特定の二重特異性抗体は、抗体のＣＤ３結合ドメインが比較的低い親和性でヒトＣＤ３に結合することを示す、低いレベルのＨＰＢ－ＡＬＬ細胞への結合を示す。低い親和性は、ＨＣＴ－１１６細胞（縦軸）の腫瘍抗原媒介性細胞溶解を必ずしも阻害しないことは明らかである。二重特異性抗体ＭＦ８２３３×ＭＦ８５０８及びＭＦ８２３３×ＭＦ８０５７は、ＨＣＴ－１１６細胞を効率的に溶解することができるのに対し、二重特異性抗体ＭＦ８２３３×ＭＦ８３９７及びＭＦ８２３３×ＭＦ９２４９は、そのように効率的には行われない。比較のために、二重特異性抗体ＭＦ８２３３×ＭＦ６９５５及びＭＦ８２３３×ＭＦ６９６４は、例えば、ＭＦ８２３３×ＭＦ８５０８、ＭＦ８２３３×ＭＦ８０５７、及びＭＦ８２３３×ＭＦ９２６７よりも高い親和性で、ＨＰＢ－ＡＬＬ（すなわち、ヒトＣＤ３）に結合するが、本明細書に提示されるような試験において、ＭＦ８２３３×ＭＦ８５０８又はＭＦ８２３３×ＭＦ９２６７よりも効率的にＨＣＴ－１１６細胞を溶解しないか、又は結合の差に対してＭＦ８２３３×ＭＦ８０５７を著しく超える。ＣＤ３に結合できる本発明の結合ドメインを含む別の二重特異性抗体は、本明細書に記載される特定の用途で使用するＭＦ８０７８などの、相対的に高い結合及び高レベルの殺傷を示す。それに対して、ＣＤ３に結合できる本発明の結合ドメインを含む他の二重特異性抗体は、ＭＦ９２４９及びＭＦ８３９７など、相対的に低い親和性及び低い殺傷を示すが、これらは、本明細書に記載される代替用途に有用である。 抗体がない対照と比較したＨＣＴ－１１６細胞の殺傷％を示すＨＣＴ－１１６標的細胞を用いたＴ細胞の細胞傷害性アッセイにおける抗体滴定曲線である。様々な二重特異性抗体についての曲線を示す。 ＨＣＴ－１１６標的細胞によるＴ細胞の細胞傷害性アッセイにおける様々な抗体の滴定曲線データの要約である。ＣＤ３ Ｆａｂの欄は、ＣＤ３結合ドメインのＭＦ番号を示す。ＥＧＦＲ結合ドメインは、示されたＭＦ８２３３番号を有する。この欄は、同じＶＨ遺伝子セグメントに基づいて変異体を設定するためのスーパークラスター数を示す。ＣＤ３結合を示す欄は、ＨＢＰ－ＡＬＬ結合実験の結果を反映している。 ＨＣＴ－１１６細胞の溶解率及び溶解のためのＥＣ５０値（ｎｇ／ｍＬ）を次の欄に示す。示された二重特異性抗体は、二重特異性抗体のより大きなプールからの例である。 図１０Ａ及び１０Ｂは、ＭＶ１６２４発現ベクター及びＭＶ１６２５発現ベクターの概略図を提示する。 単一特異性及び二重特異性ＩｇＧで使用される共通軽鎖である。共通軽鎖アミノ酸配列である。 単一特異性及び二重特異性ＩｇＧで使用される共通軽鎖である。共通軽鎖可変ドメインのＤＮＡ配列及び翻訳したものである（ＩＧＫＶ１－３９／ｊｋ１）。 単一特異性及び二重特異性ＩｇＧで使用される共通軽鎖である。共通軽鎖定常領域のＤＮＡ配列及び翻訳したものである。 単一特異性及び二重特異性ＩｇＧで使用される共通軽鎖である。ＩＧＫＶ１－３９／ｊｋ５共通軽鎖可変ドメインの翻訳したものである。 単一特異性及び二重特異性ＩｇＧで使用される共通軽鎖である。Ｖ領域ＩＧＫＶ１－３９Ａである。 単一特異性及び二重特異性ＩｇＧで使用される共通軽鎖である。共通軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３である。 二重特異性分子の生成のためのＩｇＧ重鎖である。ＣＨ１領域である。 二重特異性分子の生成のためのＩｇＧ重鎖である。ヒンジ領域である。 二重特異性分子の生成のためのＩｇＧ重鎖である。ＣＨ２領域である。 二重特異性分子の生成のためのＩｇＧ重鎖である。Ｌ２３５Ｇ及びＧ２３６Ｒサイレンシング置換を含有するＣＨ２である。 二重特異性分子の生成のためのＩｇＧ重鎖である。置換Ｌ３５１Ｋ及びＴ３６６Ｋ（ＫＫ）を含有するＣＨ３ドメインである。 二重特異性分子の生成のためのＩｇＧ重鎖である。置換Ｌ３５１Ｄ及びＬ３６８Ｅ（ＤＥ）を含有するＣＨ３ドメインである。 本明細書に記載される重鎖可変領域及びその部分の、様々なＤＮＡコード配列及びアミノ酸配列である。 本明細書に記載される重鎖可変領域及びその部分の、様々なＤＮＡコード配列及びアミノ酸配列である。 本明細書に記載される重鎖可変領域及びその部分の、様々なＤＮＡコード配列及びアミノ酸配列である。 本明細書に記載される重鎖可変領域及びその部分の、様々なＤＮＡコード配列及びアミノ酸配列である。 本明細書に記載される重鎖可変領域及びその部分の、様々なＤＮＡコード配列及びアミノ酸配列である。 本明細書に記載される重鎖可変領域及びその部分の、様々なＤＮＡコード配列及びアミノ酸配列である。 本明細書に記載される重鎖可変領域及びその部分の、様々なＤＮＡコード配列及びアミノ酸配列である。 本明細書に記載される重鎖可変領域及びその部分の、様々なＤＮＡコード配列及びアミノ酸配列である。 本明細書に記載される重鎖可変領域及びその部分の、様々なＤＮＡコード配列及びアミノ酸配列である。 本明細書に記載される重鎖可変領域及びその部分の、様々なＤＮＡコード配列及びアミノ酸配列である。 本明細書に記載される重鎖可変領域及びその部分の、様々なＤＮＡコード配列及びアミノ酸配列である。 本明細書に記載される重鎖可変領域及びその部分の、様々なＤＮＡコード配列及びアミノ酸配列である。 本明細書に記載される重鎖可変領域及びその部分の、様々なＤＮＡコード配列及びアミノ酸配列である。 本明細書に記載される重鎖可変領域及びその部分の、様々なＤＮＡコード配列及びアミノ酸配列である。 本明細書に記載される重鎖可変領域及びその部分の、様々なＤＮＡコード配列及びアミノ酸配列である。 本明細書に記載される重鎖可変領域及びその部分の、様々なＤＮＡコード配列及びアミノ酸配列である。 本明細書に記載される重鎖可変領域及びその部分の、様々なＤＮＡコード配列及びアミノ酸配列である。 本明細書に記載される重鎖可変領域及びその部分の、様々なＤＮＡコード配列及びアミノ酸配列である。 本明細書に記載される重鎖可変領域及びその部分の、様々なＤＮＡコード配列及びアミノ酸配列である。 本明細書に記載される重鎖可変領域及びその部分の、様々なＤＮＡコード配列及びアミノ酸配列である。 本明細書に記載される重鎖可変領域及びその部分の、様々なＤＮＡコード配列及びアミノ酸配列である。 本明細書に記載される重鎖可変領域及びその部分の、様々なＤＮＡコード配列及びアミノ酸配列である。 本明細書に記載される重鎖可変領域及びその部分の、様々なＤＮＡコード配列及びアミノ酸配列である。 本明細書に記載される重鎖可変領域及びその部分の、様々なＤＮＡコード配列及びアミノ酸配列である。 クローンＭＦ８０５７及びＭＦ８０５８と比較して、スーパークラスター１からの更なるクローンの特性評価である。ＦＡＣＳアッセイにおいてヒトＣＤ３－ＴＣＲ複合体を発現しているＨＰＢ－ＡＬＬヒト細胞との選択されたＭＦクローンの結合である。 クローンＭＦ８０５７及びＭＦ８０５８と比較して、スーパークラスター１からの更なるクローンの特性評価である。ＨＣＴ－１１６細胞の殺傷％を示すＨＣＴ－１１６細胞によるＴ細胞の細胞傷害性アッセイである。 クローンＭＦ８０５７及びＭＦ８０５８と比較して、スーパークラスター１からの更なるクローンの特性評価である。Ｔ細胞活性化を示すＦＡＣＳにおける活性化マーカーＣＤ２５及びＣＤ６９の定量化である。 クローンＭＦ８０５７及びＭＦ８０５８と比較して、スーパークラスター１からの更なるクローンの特性評価である。Ｔ細胞活性化を示すＦＡＣＳにおける活性化マーカーＣＤ２５及びＣＤ６９の定量化である。 クローンＭＦ８０５７及びＭＦ８０５８と比較して、スーパークラスター１からの更なるクローンの特性評価である。Ｔ細胞活性化を示すＦＡＣＳにおける活性化マーカーＣＤ２５及びＣＤ６９の定量化である。 クローンＭＦ８０５７及びＭＦ８０５８と比較して、スーパークラスター１からの更なるクローンの特性評価である。細胞傷害性アッセイからの上清中のサイトカイン産生である。 クローンＭＦ８０５７及びＭＦ８０５８と比較して、スーパークラスター１からの更なるクローンの特性評価である。細胞傷害性アッセイからの上清中のサイトカイン産生である。 スーパークラスター４からのクローンの特性評価である。選択されたＭＦクローンのＨＰＢ－ＡＬＬヒト細胞への結合である。 スーパークラスター４からのクローンの特性評価である。ＢＸＰ３細胞の殺傷％を示すＢｘＰＣ３細胞によるＴ細胞の細胞傷害性アッセイである。 スーパークラスター４からのクローンの特性評価である。細胞傷害性アッセイからの上清中のサイトカイン産生である。 スーパークラスター４からのクローンの特性評価である。細胞傷害性アッセイからの上清中のサイトカイン産生である。 スーパークラスター４からのクローンの特性評価である。細胞傷害性アッセイからの上清中のサイトカイン産生である。 ＣＤ３機能活性の評価である。スーパークラスター１（ＭＦ８０４８、ＭＦ８１０１、ＭＦ８０５６）、スーパークラスター３（ＭＦ８５６２）及びスーパークラスター４（ＭＦ８９９８）からの更なるクローンのためのＹ軸上のＨＣＴ－１１６溶解に対するＸ軸上の親和性（ＨＰＢ－ＡＬＬ）である。 ＣＤ３機能活性の評価である。細胞傷害性アッセイ及び異なる結合親和性において同様の活性を示すスーパークラスター１及びスーパークラスター４に属する抗体である。 ＣＤ３機能活性の評価である。類似の結合親和性及び差次的溶解活性を示すスーパークラスター１及びスーパークラスター３に属する抗体である。 二重特異性ＣＤ３×ＥＧＦＲフォーマットにおけるＣＤ３ ＦａｂのＭＦ８９９８及びＭＦ８０５８の活性である。 ＣＤ３に特異的なＩｇＧの大パネルのＦＡＣＳ結合データである。抗体ＭＦ５１９６、ＭＦ６９５５、及びＭＦ６９６４については、ＣＤ３δε－Ｆｃ抗原に対するＢＩＡｃｏｒｅ（商標）によって結合を決定したが、一方、ＨＰＢ－ＡＬＬ細胞に対するＦＡＣＳ結合データは、クローンの残りの部分について示されている。 ヒトＣＬＥＣ１２Ａのヌクレオチド配列である。 ヒトＣＬＥＣ１２Ａのヌクレオチド配列である。 ヒトＣＬＥＣ１２Ａのヌクレオチド配列である。 ヒトＣＬＥＣ１２Ａのヌクレオチド配列である。 ヒトＣＬＥＣ１２Ａのヌクレオチド配列である。 ヒトＣＬＥＣ１２Ａのヌクレオチド配列である。 ヒトＣＬＥＣ１２Ａのヌクレオチド配列である。 ヒトＣＬＥＣ１２Ａのヌクレオチド配列である。 ヒトＣＬＥＣ１２Ａのヌクレオチド配列である。 ヒトＣＬＥＣ１２Ａのヌクレオチド配列である。 ヒトＣＬＥＣ１２Ａのヌクレオチド配列である。 ヒトＣＬＥＣ１２Ａのヌクレオチド配列である。 ヒトＣＤ３γ－、δ－、ε－、及びζ－鎖のアミノ酸配列である。
以下の実施例は、本発明を例示する。
細胞株
ＢｘＰＣ３は、ヒト膵臓癌細胞株である。
ＨＣＴ－１１６は、ヒト結腸癌細胞株である。
ＣＤ３によるＭｅｍｏ（登録商標）マウスの免疫化
ＣＤ３に結合するヒト抗体の生成のために、ヒト共通軽鎖及びヒト重鎖（ＨＣ）ミニ遺伝子座（選択したヒトＶ遺伝子セグメント、全てのヒトＤ及び全てのヒトＪを含む）（参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２００９／１５７７７１号を参照）のトランスジェニックマウスを、ＴＣＲ／ＣＤ３含有リポ粒子（Ｉｎｔｅｒｇｒａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ）で免疫化した。これらのマウスは、「ＭｅＭｏ（登録商標）」マウスと称される。本明細書に開示される配列を有する特定の重鎖可変領域、又は三価多量体については、これらは、当業者に既知の任意の手段によって調製することができる。
ＭｅＭｏ（登録商標）マウスは、リポ粒子を含有するＨｅｋ２９３Ｔ由来のヒト５Ｄ５Ｍ ＴＣＲ／ＣＤ３で免疫化し、続いて抗ＴＣＲ／ＣＤＲ３免疫応答の生成及び抗ＴＣＲ／ＣＤ３抗体パネル生成のためにヒトＴ細胞で免疫化した。
リポ粒子は、構造的にインタクトな膜タンパク質を細胞表面から直接濃縮し、これらの複雑なタンパク質を、抗体の免疫化及びスクリーニングのための可溶性の高濃度タンパク質として操作できるようにする。
本研究において免疫化に使用されるリポ粒子は、５Ｄ５Ｍ ＴＣＲαβの組み合わせを含む。５Ｄ５Ｍ ＴＣＲαβの組み合わせを含むベクターを合成、クローニングし、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞（Ｉｎｔｅｒｇｒａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ）への一過性トランスフェクションにより、このＴＣＲ／ＣＤ３の組み合わせを含むリポ粒子を生成するために使用した。
５Ｄ５Ｍ ＴＣＲα
ＭＷＧＶＦＬＬＹＶＳＭＫＭＧＧＴＴＧＱＮＩＤＱＰＴＥＭＴＡＴＥＧＡＩＶＱＩＮＣＴＹＱＴＳＧＦＮＧＬＦＷＹＱＱＨＡＧＥＡＰＴＦＬＳＹＮＶＬＤＧＬＥＥＫＧＲＦＳＳＦＬＳＲＳＫＧＹＳＹＬＬＬＫＥＬＱＭＫＤＳＡＳＹＬＣＡＶＭＤＳＮＹＱＬＩＷＧＡＧＴＫＬＩＩＫＰＤＩＱＮＰＤＰＡＶＹＱＬＲＤＳＫＳＳＤＫＳＶＣＬＦＴＤＦＤＳＱＴＮＶＳＱＳＫＤＳＤＶＹＩＴＤＫＴＶＬＤＭＲＳＭＤＦＫＳＮＳＡＶＡＷＳＮＫＳＤＦＡＣＡＮＡＦＮＮＳＩＩＰＥＤＴＦＦＰＳＰＥＳＳＣＤＶＫＬＶＥＫＳＦＥＴＤＴＮＬＮＦＱＮＬＳＶＩＧＦＲＩＬＬＬＫＶＡＧＦＮＬＬＭＴＬＲＬＷＳＳ
５Ｄ５Ｍ ＴＣＲβ
ＭＲＩＲＬＬＣＣＶＡＦＳＬＬＷＡＧＰＶＩＡＧＩＴＱＡＰＴＳＱＩＬＡＡＧＲＲＭＴＬＲＣＴＱＤＭＲＨＮＡＭＹＷＹＲＱＤＬＧＬＧＬＲＬＩＨＹＳＮＴＡＧＴＴＧＫＧＥＶＰＤＧＹＳＶＳＲＡＮＴＤＤＦＰＬＴＬＡＳＡＶＰＳＱＴＳＶＹＦＣＡＳＳＥＡＧＧＮＴＧＥＬＦＦＧＥＧＳＲＬＴＶＬＥＤＬＮＫＶＦＰＰＥＶＡＶＦＥＰＳＥＡＥＩＳＨＴＱＫＡＴＬＶＣＬＡＴＧＦＦＰＤＨＶＥＬＳＷＷＶＮＧＫＥＶＨＳＧＶＳＴＤＰＱＰＬＫＥＱＰＡＬＮＤＳＲＹＣＬＳＳＲＬＲＶＳＡＴＦＷＱＮＰＲＮＨＦＲＣＱＶＱＦＹＧＬＳＥＮＤＥＷＴＱＤＲＡＫＰＶＴＱＩＶＳＡＥＡＷＧＲＡＤＣＧＦＴＳＶＳＹＱＱＧＶＬＳＡＴＩＬＹＥＩＬＬＧＫＡＴＬＹＡＶＬＶＳＡＬＶＬＭＡＭＶＫＲＫＤＦ
ＭｅＭｏ（登録商標）マウスを、ＴＣＲ／ＣＤ３リポ粒子及び初代ヒトＴ細胞を使用して免疫化に使用した。
免疫化スケジュールは、３５、５６、７７、及び９８日目の時点を含み、抗原特異的Ｉｇ血清力価は、抗マウスＩｇＧ検出を使用して、ＱＴＧ由来の３ＳＤＸ ＴＣＲ／ＣＤ３陽性及び陰性リポ粒子を使用したＥＬＩＳＡによって、そして陽性対照としてＣＤ３ｃ５Ｅ－Ｆｃ融合タンパク質を使用したＥＬＩＳＡによって求めた。３５日目に採取された血清において反応性が観察され、どのマウスが関連する抗ＴＣＲ／ＣＤ３応答を発現したかが判定される。
全ての免疫化マウスについて、抗体発見のためのリンパ系材料を回収し、以下のように保存した：
力価は、ヒトＴＣＲ／ＣＤ３において１／３００であるか（リポ粒子を使用するＥＬＩＳＡにおいて）、又は、
力価は、ヒトＴＣＲ／ＣＤ３において１／３００未満及び１／１００超であり、最後のブースター免疫化の間に増加しなかった。
リポ粒子を使用した初回免疫（Ｐｒｉｍｉｎｇ ｉｍｍｕｎｉｓａｔｉｏｎ）
ＴＣＲ／ＣＤ３についてＭｅＭｏ（登録商標）マウスにおける体液性免疫応答をプライミングするために、ヒト５Ｄ５Ｍ ＴＣＲαβの組み合わせを含むリポ粒子を免疫化のために使用した。リポ粒子を、第１及び第２の注射用のＧｅｒｂｕアジュバントと共に使用した。
ポリクローナルＴ細胞を用いたブースター免疫化
マウスを、細胞懸濁液の皮下注射によって免疫した。第１のブースター免疫化（２８日目）は、ＰＢＳ中の細胞とアジュバントとの混合物を含み、後続の注射全ては、ＰＢＳ中の細胞からのみ構成される。３５日目に、ヒトＴＣＲ／ＣＤ３に対する１／３００の血清ｌｇＧ力価（リポ粒子を使用したＥＬＩＳＡにより測定）を発現したマウスは、４２、４３、及び４４日目に細胞を追加注射された。これらの基準を満たすことができなかったマウスは、細胞によるブースター免疫を受ける（４２日目及び４９日目）。全ての後続の免疫化は、ＰＢＳ中の細胞の皮下注射として与えられる。最終免疫化後、マウスを屠殺し、血清及び脾臓及び左鼠径リンパ節を回収する。
ＥＬＩＳＡ中の免疫化されたマウスからの血清のスクリーニング
暫定血清ＩｇＧ力価を、ＴＣＲ／ＣＤ３含有リポ粒子と「ヌル」リポ粒子を使用したＥＬＩＳＡによりスクリーニングした。抗マウスｌｇＧ染色を使用して、血清ｌｇＧ力価を測定したが、なぜなら、この染色が最も敏感であることが示されたからである。
ＶＨ遺伝子のＲＴ－ＰＣＲクローニングによる「免疫」ファージ抗体レパートリーの生成
成功裏に免疫化されたマウスからの鼠径リンパ節を、「免疫」ファージ抗体レパートリーの構築に使用した。Ｔｒｉｚｏｌ ＬＳを用いてリンパ組織からＲＮＡを抽出し、ＩｇＧ－ＣＨ１特異的プライマーを用いたＲＴ反応で１μｇの全ＲＮＡを使用した。次いで、得られたｃＤＮＡを使用して、基本的にＭａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．（Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．１９９１ Ｄｅｃ ５；２２２（３）：５８１－９７）に記載されているように、自社開発ＶＨ特異的プライマーを使用して、ＶＨコードｃＤＮＡのポリクローナルプールを増幅した。ファージ上にＦａｂ断片を提示するために、次いで、得られたＰＣＲ産物のクローニングを、ファージミドベクターで、ｄｅ Ｈａａｒｄ ｅｔ ａｌ．（Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．１９９９ Ｊｕｎ ２５；２７４（２６）：１８２１８－３０）に記載されるように行ったが、但し、軽鎖が全ての抗体に対して同じであり、ベクターによってコードされたことは除く。ライゲーション後、ファージミドを使用してＥ．ｃｏｌｉ ＴＧ１細菌を形質転換し、形質転換細菌をアンピシリン及びグルコースを含有するＬＢ－寒天プレート上に播種した。全てのファージライブラリーは、＞１０ｅ６個の形質転換体を含有し、＞８０％のインサート頻度を有した。一晩増殖後に細菌を採集し、確立されたプロトコル（ｄｅ Ｈａａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．１９９９ Ｊｕｎ ２５；２７４（２６）：１８２１８－３０）に従ってファージを調製するために使用した。
ヒトＣＤ３に特異的に結合するＦａｂ断片を保有するファージの選択。
標準化された手順に従ってファージライブラリーをレスキューし（Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，１９９１ Ｄｅｃ ５；２２２（３）：５８１－９７；Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．１９９９ Ｊｕｎ ２５；２７４（２６）：１８２１８－３０）、及びファージを、免疫ファージ抗体レパートリーの選択の１つ以上のラウンドで選択した。第１ラウンドでは、組換えＣＤ３タンパク質をｍａｘｉｓｏｒｐ（商標）ＥＬＩＳＡプレートのウェル又はＮＵＮＣ免疫チューブにコーティングしたが、第２ラウンドでは、組換えＣＤ３タンパク質、又はヒトＣＤ３タンパク質を過剰発現する細胞のいずれかを使用した。ｍａｘｉｓｏｒｐ（商標）ＥＬＩＳＡプレート又は免疫チューブを４％のＥＬＫでブロックした。ファージ抗体ライブラリーもまた、４％のＥＬＫでブロックし、ファージライブラリーをコーティングされた抗原に添加する前に、Ｆｃ領域結合剤を枯渇させるために、ヒトＩｇＧを過剰に使用した。
ファージライブラリーとコーティングされたタンパク質とのインキュベーションを、振盪条件下で室温にて２時間実施した。次いで、プレート又はチューブを、ＰＢＳ中０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０で洗浄し、続いてＰＢＳで５～１０回洗浄した。結合したファージを５０ｍＭのグリシン（ｐＨ２．２）を使用して溶出させ、大腸菌ＴＧ－１に添加し、ファージ感染のために３７℃でインキュベートした。
続いて、感染した細菌をアンピシリン及びグルコースを含有する寒天プレート上に播種し、３７℃で一晩インキュベートした。選択の第１のラウンドの後、コロニーをプレートから掻き取り、組み合わせ、その後、レスキュー及び増幅して、合成レパートリーのための富化された第１のラウンドのファージプールを調製した。「免疫」レパートリーに関して、ファージ選択の第１のラウンド後に、標的結合について単一のクローンをスクリーニングした。
抗体クローニング及び産生
本明細書で使用される二重特異性抗体は、典型的には、可変ドメインのうちの１つ又は両方の重鎖可変領域の特定のアミノ酸配列においてのみ、互いに異なる。重鎖可変領域を、重鎖及び軽鎖の発現のために発現ベクターにクローニングすることによって作製した。二重特異性抗体の産生方法は、当該技術分野において既知である。
簡潔に述べると、ＣＤ３標的化可変ドメインの重鎖可変領域をコードするＤＮＡを、ＩｇＧ重鎖ヘテロ二量体の生成のためのＣＨ３領域中のＫＫ残基（Ｌ３５１Ｋ、Ｔ３６６Ｋ）をコードするＭＶ１６２４ベクター（図１０Ａを参照）にクローニングした（国際公開第２０１３／１５７９５４号及び同第２０１３／１５７９５３号）。Ｆｃ定常領域は、Ｆｃエフェクター機能をサイレンシングするためのＣＨ２における突然変異を含有する。重鎖可変領域をコードするＤＮＡは、構築物内のスタッファー領域に置き換わる。可変領域の前には、コードされたＨＣシグナルペプチド（図示せず）がある。ＥＧＦＲ標的化可変ドメインの重鎖可変領域をコードするＤＮＡを、Ｌ３５１Ｄ－Ｌ３６８Ｅ変異をＣＨ３領域に有する二重特異性抗体のベース抗体部分の第二重鎖を発現するベクターＭＶ１６２５（図１０Ｂ）にクローニングした（国際公開第２０１３／１５７９５４号及び国際公開第２０１３／１５７９５３号）。重鎖可変領域をコードするＤＮＡは、構築物内のスタッファー領域に置き換わる。可変領域の前には、コードされたＨＣシグナルペプチド（図示せず）がある。両方の構築物はまた、ＩＧＫＶ１－３９／ｊｋ１軽鎖の発現のための発現カセットも含む。上述した軽鎖と共に２つの重鎖を発現することは、二重特異性抗体の産生をもたらす。
２９３－Ｆ細胞を、２４ウェルプレートフォーマットでの設計された抗体の発現に使用した。トランスフェクションの２日前に、２９３－Ｆ細胞ストックを１：１の比で２９３－Ｆ培養培地で分割し、１５５ｒｐｍの軌道振盪速度で３７℃及び８％のＣＯ２で一晩インキュベートした。細胞を、トランスフェクションの前日に、５×１０５細胞／ｍＬの密度に希釈した。４ｍＬの懸濁細胞を、通気性シールで覆われた２４ディープウェルプレートに播種し、２８５ｒｐｍの軌道振盪速度で３７℃及び８％のＣＯ２で一晩インキュベートした。トランスフェクション当日に、４．８ｍＬの２９３－Ｆ培養培地を、２４０μｇのポリエチレンイミン（ＰＥＩ）直鎖（ＭＷ２５,０００）と混合した。産生される各ＩｇＧについて、２００μＬの２９３Ｆ培養培地－ＰＥＩ混合物を８μＬのＤＮＡ（ＩｇＧヘテロ二量体の場合、各重鎖をコードする４μＬのＤＮＡ）に添加した。混合物を、細胞に穏やかに添加する前に、室温で２０分間インキュベートした。トランスフェクションの翌日、５００μＬの２９３Ｆ培地で希釈したペニシリン－ストレプトマイシン（Ｐｅｎ Ｓｔｒｅｐ）を各ウェルに添加した。プレートを、トランスフェクションの７日後に回収するまで、２８５ｒｐｍの軌道振盪速度で３７℃及び８％のＣＯ２でインキュベートした。ＩｇＧを含有する５００ｇの上清において５分間プレートを遠心分離し、１０～１２μｍのメルトブローポリプロピレンフィルタープレートを用いてろ過し、精製前に－２０℃で保管した。
培養上清からの抗体の精製
抗体を含有する培地を回収し、遠心分離して細胞残屑を除去する。続いて、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａセファロースビーズを培地に添加する。培地及びＰｒｏｔｅｉｎ Ａセファロースビーズを抗体とインキュベートして結合させる。
インキュベーション後、ビーズを培地から単離し、真空フィルターによって洗浄する。溶出緩衝液とのインキュベーションによって、抗体をビーズから溶出させる。
任意に、精製ＩｇＧの緩衝液を交換／脱塩する。
緩衝液交換
精製された抗体を脱塩するために、フィルタープレート又はフィルターカラムを使用して抗体画分を遠心分離する。プレート又はカラムを遠心分離して、抗体画分の体積を減少させる。続いて、ＰＢＳ又は必要な緩衝液を画分に添加して、緩衝液を低塩緩衝液と置き換える。任意に、抗体の保存緩衝液を更に脱塩するために、この遠心分離ステップに続いて緩衝液を追加することを繰り返す。
抗体腫瘍抗原特異的Ｔ細胞活性化及びＢｘＰＣ３細胞の溶解又はＨＴＣ－１１６細胞の溶解。
細胞傷害性アッセイにおいて、腫瘍抗原特異的Ｔ細胞活性化及び腫瘍抗原陽性標的細胞の溶解を誘導するための特定のＣＤ３×腫瘍抗原二重特異性ＩｇＧの組み合わせの能力を試験した。エフェクター細胞は健康なドナー由来の休止Ｔ細胞であり、標的細胞はＢｘＰＣ３細胞又はＨＴＣ－１１６細胞であった。
Ｆｉｃｏｌｌ及びＥａｓｙＳｅｐヒトＴ細胞分離キットを標準的な手法に従って使用し、健康なドナーの全血から静止Ｔ細胞を分離し、フローサイトメトリー分析を使用して抗ＣＤ３抗体で９５％超のＴ細胞純度を確認し、その後凍結保存した。細胞傷害アッセイでは、凍結保存されたＴ細胞を解凍し、標準のトリパンブルー染色で測定した解凍時の生存率が９０％を超える場合に使用した。細胞傷害アッセイは、短く言えば、解凍した静止Ｔ細胞及びＢｘＰＣ３又はＨＣＴ１１６標的細胞を、５：１のＥ：Ｔ比にて４８時間共培養した。抗体を、希釈範囲で試験した。ＣＤ３単一特異性抗体及びＥＧＦＲ単一特異性抗体、並びに無関係なＩｇＧ１アイソタイプ対照ｍＡｂは、対照としてアッセイに含まれる（例えば、ＣＤ３及び破傷風毒素（ＴＴ）などの別の抗原に結合する抗体）。Ｔ細胞活性化を、フローサイトメトリーを使用して定量化した；ＣＤ８ Ｔ細胞をＣＤ８発現に基づいてゲーティングし、続いて、Ｔ細胞上でＣＤ６９発現を測定することによって、それらの活性化状態について分析した。標的細胞溶解は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）によって評価されたＡＴＰレベルを測定することによって、生存細胞の割合を測定することによって求めた。Ｅｎｖｉｓｉｏｎマイクロプレートリーダーでの発光によって測定されたＡＴＰレベルは、相対発光量（ＲＬＵ）値をもたらし、これをＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを用いて分析した。
各試料の標的細胞溶解度を以下のように計算した：
％殺傷率＝（１００－（ＲＬＵ試料／ＲＬＵ ＩｇＧなし）×１００）。
このアッセイでは、二重特異性抗体は、２つの結合ドメインを有する。結合ドメインのうちの１つは、ＥＧＦＲに対して標的化され、他方はＣＤ３へと標的化される。両方の結合ドメインは、同じ（共通）軽鎖可変領域（ＶＬ）及び異なる重鎖可変領域（ＶＨ）を有する。ＥＧＦＲ標的化結合ドメインは、ＭＦ８２３３のアミノ酸配列を有するＶＨを有する。ＣＤ３標的化結合ドメインは、ＣＤ３に対して示されるＭＦのうちの１つのアミノ酸配列を有するＶＨを有する。二重特異性抗体は、Ｆｃエフェクター機能をサイレンシングするために、ＣＨ２内に突然変異を含有する。
抗体ＭＦ８２３３×ＭＦ８３９７は、５：１のＥ±Ｔ比で４８時間の共培養後に決定される、ＣＤ４及びＣＤ８ Ｔ細胞に対するＣＤ６９（図４～６）及びＣＤ２５（図４～６）の上方調節を誘導した。Ｔ細胞媒介性溶解を、４８時間後に測定した。
ＣＤ３二重特異性抗体の特性評価
候補ＥＧＦＲ／ＣＤ３ ＩｇＧ二重特異性抗体は、任意の好適なアッセイを使用して結合について試験することができる。例えば、ＨＰＢ－ＡＬＬ細胞（ＤＳＭＺ、ＡＣＣ４８３）上の膜発現ＣＤ３への結合は、フローサイトメトリーによって（国際公開第２０１４／０５１４３３号に以前に記載されたＦＡＣＳ手順に従って）評価することができる。一実施形態では、ＨＰＢ ＡＬＬ細胞上のＣＤ３への候補ＥＧＦＲ／ＣＤ３二重特異性抗体の結合は、当技術分野で知られている標準的な手順に従って実施されるフローサイトメトリーによって実証される。細胞発現ＣＤ３への結合は、ＣＤ３δ／ε又はＣＤ３γ／εでトランスフェクトされたＣＨＯ細胞を使用して確認され得る。候補二重特異性ＩｇＧ１のＥＧＦＲへの結合は、ＢｘＰＣ３及びＨＣＴ－１１６、並びにＥＧＦＲ発現構築物でトランスフェクトされたＣＨＯ細胞を使用して決定することができ、ＣＤ３単一特異性抗体及びＥＧＦＲ単一特異性抗体、並びに無関係なＩｇＧ１アイソタイプ対照ｍＡｂは、対照としてアッセイに含まれる（例えば、ＣＤ３及び破傷風毒素（ＴＴ）などの別の抗原に結合する抗体）。
スーパークラスター１，３及び４からの更なるクローンの生成
免疫ファージライブラリスクリーニングから（「ヒトＣＤ３に特異的に結合するＦａｂ断片を保有するファージの選択」のセクションに記載されるように）、追加のクローンは、ヒトＣＤ３に特異的に結合するＦａｂ断片を保有することを特徴とした。スーパークラスター１から、ＭＦ８０４８、ＭＦ８１０１、及びＭＦ８０５６を含む更なるクローンを特定した。追加のクローンは、スーパークラスター３のＭＦ８５６２及びスーパークラスター４のＭＦ８９９８を含むスーパークラスター３及びスーパークラスター４から特定した。
スーパークラスター４から、次世代シーケンシング（ＮＧＳ）解析を使用して、更なる新たなクローンを特定した。抗ＣＤ３パネルを生成するために使用されたＭｅＭｏ（登録商標）マウスから存在するＶＨ遺伝子プールに対してＮＧＳを行った。この目的のために、異なるマウスから得られた配列データセットを、スーパークラスター４のＭＦに属するＭＦ配列と比較した。これにより、スーパークラスター４に属する配列変異体クローンＭＦ１０４０１及びＭＦ１０４２８の特定を導いた。異なる配列については、ＨＣＤＲ１及びＨＣＤＲ２において、いくつかの異なる変異が見出された。
スーパークラスター１、３及び４からの全ての追加クローンのＶＨ配列をＭＶ１６２４（ＤＭ－ＫＫ）ベクターにクローニングし、上記のセクション「抗体クローニング及び産生」に記載されるように、更なる特性評価のためにＣＤ３×ＥＧＦＲ二重特異性フォーマットとして発現させた。
スーパークラスター１及び４からの更なるクローンの特性評価
スーパークラスター１からの更なるクローンを、二重特異性フォーマットにおけるそれらの機能活性に関して特性評価した。二重特異性ＣＤ３×ＥＧＦＲ抗体のＥＧＦＲ結合ドメインは、ＭＦ８２３３によりコードされるアミノ酸配列を有する。対照として、これらのＣＤ３クローンはまた、ＭＦ１３３７によりコードされるアミノ酸配列を有する別の抗原（例えば、破傷風毒素）で試験した。スーパークラスター１（ＭＦ８０５７及びＭＦ８０５８）からの参照ＭＦは、上述の「抗体腫瘍抗原特異的Ｔ細胞活性化及びＢｘＰＣ３細胞の溶解、又はＨＴＣ－１１６細胞の溶解」及び「ＣＤ３二重特異性抗体の特性評価」に従って、スーパークラスター１からの既に特性評価されたＭＦクローンの親和性と、配列変異体の親和性を直接比較するために含めた。フローサイトメトリーを用いたヒトＣＤ３－ＴＣＲ複合体を発現するＨＰＢ－Ａｌｌ細胞に対する結合親和性（図１４Ａ及び図１８）、並びに細胞傷害性アッセイにおけるＴ細胞活性化及び腫瘍抗原陽性標的細胞（ＨＣＴ－１１６）の溶解（図１４Ｂ～Ｅ）についてのアッセイを行った。ＭＦ１３３７対照アームを有する二重特異性抗体では、標的細胞の溶解は観察されなかった。試験した異なるＣＤ３クローンについて、標的細胞溶解を用量依存的な方法で観察した。低標的細胞溶解が、ＭＦ８０４８について観察された。ＣＤ４及びＣＤ８ Ｔ細胞上の活性化マーカーＣＤ６９及びＣＤ２５の発現レベルを、Ｔ細胞活性化の評価のためにＦＡＣＳ染色で測定した。全てのクローンについて用量依存性Ｔ細胞活性化が観察され、陰性対照ではＴ細胞活性化は観察されなかった。最後に、標準的な製造業者の指示書に従い、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）アッセイ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（商標））を使用して、４８時間後にＨＣＴ－１１６細胞を用いたＥＧＦＲ×ＣＤ３細胞傷害性アッセイに由来する上清中で、ＩＦＮ－γ及びＴＮＦ－αのサイトカイン産生を測定した（図１４Ｆ～Ｇ）。
スーパークラスター４に属する更なるクローンの特性評価のために、ＦＡＣＳにおいてＨＰＢ－ＡＬＬ細胞に対する結合親和性を決定した（図１５）。ＰＧ１３３７、破傷風毒素に特異的な２つの同一のＭＦ１３３７アームを有する一価抗体を陰性対照として使用した。細胞傷害性アッセイのために、標的細胞としてＨＣＴ－１１６細胞及びＢｘＰＣ３細胞を使用して、ＭＦ８９９８の活性を試験し、ＢｘＰＣ３標的細胞を使用して、ＭＦ１０４０１及びＭＦ１０４２８の活性を試験した。既知の高活性を有するＣＤ３×ＴＡＡ二重特異性抗体を陽性対照として含めた。細胞生存率測定を用いて、標的細胞溶解を定量化した。細胞傷害性アッセイからの上清を使用して、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）アッセイを用いてＩＬ－６、ＩＦＮ－γ、及びＴＮＦ－αのサイトカインレベルを測定した。
したがって、試験した３つのスーパークラスター４クローンは、異なる結合を示すが、同様の溶解活性を示すことが見出された。これらのクローンの溶解活性は同様であったが、サイトカイン産生の低減が観察された。
細胞傷害性アッセイによって評価されるように、全ての更なる特定されたＭＦが機能性であることが観察された。次に、Ｙ軸上の溶解とＸ軸上の結合親和性（図１６Ａ）との間でグラフをプロットして、溶解と親和性との間のスーパークラスター内及び全体にわたる関係を理解した。全体として、複数のスーパークラスターからなる多様な抗ＣＤ３ Ｆａｂのパネルを生成し、様々な親和性を網羅した。興味深いことに、同様の活性を示すが、異なるＣＤ３結合を示すクローンをスーパークラスター１及び４において特定した（図１６Ｂ）。スーパークラスター１及び３の比較により、同様のＣＤ３結合及び差異的な活性を示すクローンが明らかになった（図１６Ｃ）。
ＣＤ３抗原の特性評価
上述のように、スーパークラスター１及びスーパークラスター４からの２つのクローン、すなわち、それぞれＭＦ８０５８及びＭＦ８９９８は、腫瘍細胞抗原としてのＥＧＦＲに結合するＦａｂアーム結合としてのクローンＭＦ８２３３との二重特異性フォーマットで、類似の溶解活性を有することが見出された（図１７）。この実験では、ＨＣＴ－１１６細胞に対する溶解活性を、本明細書で上述したように測定した。陽性対照としてＭＦ９２５７×ＭＦ８２３３を使用し、ＭＦ９２５７×ＭＦ１３３７を陰性対照とした。図１７及び表５から分かるように、複数の試験二重特異性抗体について用量依存性の高い殺傷率が観察された。
結合親和性
セクション「ＣＤ３二重特異性抗体の特性評価」に記載されているように、追加のＣＤ３クローンの結合親和性を、ヒトＣＤ３を発現するＨＰＢ－ＡＬＬ細胞上でＦＡＣＳで分析した。ＣＤ３に対するＭＦ６９５５及びＭＦ６９６４の親和性を、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）Ｔ１００を使用して表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術によって測定した。抗ヒトＩｇＧマウスモノクローナル抗体（Ｂｅｃｔｏｎ ａｎｄ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，ｃａｔ．Ｎｒ．５５５７８４）を、遊離アミン化学（ＮＨＳ／ＥＤＣ）を使用して、ＣＭ５センサーチップの表面に結合した。次いで、ＣＤ３×ＴＡＡ二重特異性抗体をこのセンサー表面上に捕捉した。その後、組換え精製抗原のヒトＣＤ３δε－Ｆｃを、オン及びオフレートを測定するための濃度範囲でセンサー表面上に流した。各サイクルの後、センサー表面をＨＣｌのパルスによって再生し、ＣＤ３×ＴＡＡ二重特異性抗体を再び捕捉した。得られたセンサーグラムから、オン及びオフレートをＢＩＡ評価ソフトウェアを使用して決定した。図１８は、生成されたＣＤ３パネルの結合親和性範囲を説明する。

Claims (33)

  1. 重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質であって、前記重鎖可変領域が、下記のアミノ酸配列：
    ＣＤＲ１：ＳＦＧＩＳ
    ＣＤＲ２：ＧＦＩＰＶＬＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧ
    ＣＤＲ３：ＲＧＮＷＮＰＦＤＰ、
    又は
    アミノ酸配列：
    ＣＤＲ１：ＳＸ１ＴＦＴＩＳ、
    ＣＤＲ２：ＧＩＩＰＸ２ＦＧＴＩＴＹＡＱＫＦＱＧ、
    ＣＤＲ３：ＲＧＮＷＮＰＦＤＰ
    （配列中、
    Ｘ１＝Ｋ又はＲであり、
    Ｘ２＝Ｌ又はＩである）を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む、抗原結合タンパク質。
  2. Ｘ１＝Ｋであり、かつＸ２＝Ｌであるか、又はＸ１＝Ｒであり、かつＸ２＝Ｉである、請求項１に記載の抗原結合タンパク質。
  3. 重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質であって、前記重鎖可変領域が、下記のアミノ酸配列：
    ＣＤＲ１：ＳＫＴＬＴＩＳ、
    ＣＤＲ２：ＧＩＩＰＩＦＧＳＩＴＹＡＱＫＦＱＤ、
    ＣＤＲ３：ＲＧＮＷＮＰＦＤＰ、
    又はアミノ酸配列：
    ＣＤＲ１：ＧＳＧＩＳ、
    ＣＤＲ２：ＧＦＩＰＦＦＧＳＡＮＹＡＱＫＦＲＤ、
    ＣＤＲ３：ＲＧＮＷＮＰＸ１３ＤＰ
    （配列中、
    Ｘ１３＝Ｌ又はＦである）を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む、抗原結合タンパク質。
  4. 重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質であって、前記重鎖可変領域が、アミノ酸配列
    ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＲＳＦＧＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＦＩＰＶＬＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＩＡＤＫＳＴＮＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＧＮＷＮＰＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、
    ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＤＡＦＫＳＫＴＦＴＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＬＧＧＩＩＰＬＦＧＴＩＴＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＮＴＡＦＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＭＹＹＣＴＲＲＧＮＷＮＰＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、又は
    ＥＶＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＶＴＦＮＳＲＴＦＴＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＬＧＳＩＩＰＩＦＧＴＩＴＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＦＭＥＬＴＳＬＲＳＥＤＴＡＩＹＹＣＴＲＲＧＮＷＮＰＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、又は
    ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＲＧＳＧＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＶＧＧＦＩＰＦＦＧＳＡＮＹＡＱＫＦＲＤＲＶＴＩＴＡＤＫＳＡＴＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＩＹＹＣＡＫＲＧＮＷＮＰＬＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、又は
    ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＶＴＦＫＳＫＴＬＴＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＬＧＧＩＩＰＩＦＧＳＩＴＹＡＱＫＦＱＤＲＶＳＩＴＡＤＫＳＴＮＴＡＹＬＥＬＮＳＬＲＳＥＤＴＡＩＹＹＣＡＲＲＧＮＷＮＰＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、又は
    ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＲＧＳＧＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＶＧＧＦＩＰＦＦＧＳＡＮＹＡＱＫＦＲＤＲＶＴＩＴＡＤＫＳＡＴＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＩＹＹＣＡＫＲＧＮＷＮＰＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳを含み、
    ＣＤＲ以外の１つ以上の位置において、０～１０個、好ましくは０～５個のアミノ酸の変異、挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを有する、抗原結合タンパク質。
  5. 重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質であって、前記重鎖可変領域が、アミノ酸配列：
    ＣＤＲ１：ＲＸ３ＷＩＧ、
    ＣＤＲ２：ＩＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧ、
    ＣＤＲ３：Ｘ４ＩＲＹＦＸ５ＷＳＥＤＹＨＹＹＸ６ＤＶ
    （配列中、
    Ｘ３＝Ｆ又はＹであり、
    Ｘ４＝Ｈ又はＮであり、
    Ｘ５＝Ｄ又はＶであり、
    Ｘ６＝Ｌ又はＭである）を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、抗原結合タンパク質。
  6. Ｘ３＝Ｆであり、Ｘ４＝Ｈであり、Ｘ５＝Ｄであり、かつＸ６＝Ｌであるか、又はＸ３＝Ｙであり、Ｘ４＝Ｎであり、Ｘ５＝Ｖであり、かつＸ６＝Ｍである、請求項５に記載の抗原結合タンパク質。
  7. 重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質であって、前記重鎖可変領域が、アミノ酸配列
    ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＴＲＦＷＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＴＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＧＭＹＹＣＶＲＨＩＲＹＦＤＷＳＥＤＹＨＹＹＬＤＶＷＧＫＧＴＴＶＴＶＳＳ、又は
    ＥＶＱＬＶＥＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＴＲＹＷＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＶＲＮＩＲＹＦＶＷＳＥＤＹＨＹＹＭＤＶＷＧＫＧＴＴＶＴＶＳＳを含み、
    ＣＤＲ以外の１つ以上の位置において、０～１０個、好ましくは０～５個のアミノ酸の変異、挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを有する、抗原結合タンパク質。
  8. 重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質であって、前記重鎖可変領域が、アミノ酸配列：
    ＣＤＲ１：ＳＹＡＬＳ、
    ＣＤＲ２：ＧＩＳＧＳＧＲＴＴＷＹＡＤＳＶＫＧ、
    ＣＤＲ３：ＤＧＧＹＳＹＧＰＹＷＹＦＤＬ、を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、抗原結合タンパク質。
  9. 重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質であって、前記重鎖可変領域が、アミノ酸配列：
    ＣＤＲ１：ＳＹＡＬＳ、
    ＣＤＲ２：ＡＩＳＧＳＧＲＴＴＷＹＡＤＳＶＫＧ、
    ＣＤＲ３：ＤＧＧＹＴＹＧＰＹＷＹＦＤＬ、を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、抗原結合タンパク質。
  10. 重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質であって、重鎖可変領域が、アミノ酸配列
    ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＴＳＧＦＫＦＳＳＹＡＬＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＳＧＳＧＲＴＴＷＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＧＧＹＳＹＧＰＹＷＹＦＤＬＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳ、又は
    ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＴＳＧＦＴＦＩＳＹＡＬＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＲＴＴＷＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＦＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＧＧＹＴＹＧＰＹＷＹＦＤＬＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳを含み、
    ＣＤＲ以外の１つ以上の位置において、０～１０個、好ましくは０～５個のアミノ酸の変異、挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを有する、抗原結合タンパク質。
  11. 重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質であって、前記重鎖可変領域が、アミノ酸配列：
    ＣＤＲ１：ＤＹＴＭＨ、
    ＣＤＲ２：ＤＩＳＷＳＳＧＳＩＧＹＡＤＳＶＫＧ、
    ＣＤＲ３：ＤＨＲＧＹＧＤＹＥＧＧＧＦＤＹ、を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、抗原結合タンパク質。
  12. 重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質であって、前記重鎖可変領域が、アミノ酸配列
    ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＴＳＧＦＮＦＤＤＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＤＩＳＷＳＳＧＳＩＧＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＷＬＱＭＮＳＬＲＴＥＤＴＡＬＹＦＣＡＫＤＨＲＧＹＧＤＹＥＧＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、
    ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＴＳＧＦＴＦＤＤＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＤＩＳＷＳＳＧＳＩＧＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＬＹＦＣＡＫＤＨＲＧＹＧＤＹＥＧＧＧＦＤＨＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、
    ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＶＴＳＧＦＴＦＤＤＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＤＩＳＷＳＳＧＴＴＧＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＤＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＴＥＤＴＡＬＹＹＣＡＫＤＨＭＧＹＧＤＹＥＧＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ、又は
    ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＶＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＤＩＳＷＳＧＧＳＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＴＥＤＴＡＬＹＹＣＡＫＤＨＲＧＹＧＤＹＥＧＧＧＦＤＹＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳを含み、
    ＣＤＲ以外の１つ以上の位置において、０～１０個、好ましくは０～５個のアミノ酸の変異、挿入、欠失、置換、付加、又はこれらの組み合わせを有する、抗原結合タンパク質。
  13. 重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体可変ドメインを含む、ヒトＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質であって、前記重鎖可変領域が、アミノ酸配列：
    ＣＤＲ１：ＤＹＴＭＨ、
    ＣＤＲ２：ＤＩＳＷＳＸ７ＧＸ８Ｘ９Ｘ１０ＹＡＤＳＶＫＧ、
    ＣＤＲ３：ＤＨＸ１１ＧＹＧＤＹＥＧＧＧＦＤＸ１２
    （配列中、
    Ｘ７＝Ｓ又はＧであり、
    Ｘ８＝Ｓ又はＴであり、
    Ｘ９＝Ｉ又はＴであり、
    Ｘ１０＝Ｇ又はＹであり、
    Ｘ１１＝Ｒ又はＭであり、
    Ｘ１２＝Ｈ又はＹである）を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、
    好ましくは、
    Ｘ７、Ｘ８、Ｘ９及びＸ１０が、Ｓ、Ｓ、Ｉ及びＧであり、かつＸ１１及びＸ１２が、Ｒ及びＨであるか、又は好ましくは、Ｘ７、Ｘ８、Ｘ９及びＸ１０が、Ｇ、Ｓ、Ｉ及びＹであり、かつＸ１１及びＸ１２が、Ｒ及びＹであるか、又は好ましくは、Ｘ７、Ｘ８、Ｘ９及びＸ１０が、Ｓ、Ｔ、Ｔ及びＧであり、かつＸ１１及びＸ１２が、Ｍ及びＹである、抗原結合タンパク質。
  14. 前記軽鎖可変領域が、共通軽鎖可変領域を含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質。
  15. 前記共通軽鎖可変領域が、ＩｇＶκ１－３９軽鎖可変領域を含む、請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質。
  16. 前記軽鎖可変領域が、生殖系列ＩｇＶκ１－３９＊０１可変領域である、請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質。
  17. 前記軽鎖可変領域が、カッパ軽鎖ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１又はＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ５＊０１を含む、請求項１～１６のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質。
  18. 前記軽鎖可変領域が、生殖系列カッパ軽鎖ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１又はＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ５＊０１を含む、請求項１～１７のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質。
  19. 前記軽鎖可変領域が、アミノ酸配列
    ＤＩＱＭＴ ＱＳＰＳＳ ＬＳＡＳＶ ＧＤＲＶＴ ＩＴＣＲＡ ＳＱＳＩＳ ＳＹＬＮＷ ＹＱＱＫＰ ＧＫＡＰＫ ＬＬＩＹＡ ＡＳＳＬＱ ＳＧＶＰＳ ＲＦＳＧＳ ＧＳＧＴＤ ＦＴＬＴＩ ＳＳＬＱＰ ＥＤＦＡＴ ＹＹＣＱＱ ＳＹＳＴＰ ＰＴＦＧＱ ＧＴＫＶＥ ＩＫ又はＤＩＱＭＴ ＱＳＰＳＳ ＬＳＡＳＶ ＧＤＲＶＴ ＩＴＣＲＡ ＳＱＳＩＳ ＳＹＬＮＷ ＹＱＱＫＰ ＧＫＡＰＫ ＬＬＩＹＡ ＡＳＳＬＱ ＳＧＶＰＳ ＲＦＳＧＳ ＧＳＧＴＤ ＦＴＬＴＩ ＳＳＬＱＰ ＥＤＦＡＴ ＹＹＣＱＱ ＳＹＳＴＰ ＰＩＴＦＧ ＱＧＴＲＬ ＥＩＫを含み、０～５個のアミノ酸の変異、挿入、欠失、置換、付加又はこれらの組み合わせを有する、請求項１～１８のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質。
  20. 抗体、好ましくは二重特異性抗体である、請求項１～１９のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質。
  21. 請求項１～１９のいずれか一項に記載のＨ／Ｌ鎖の組み合わせと、腫瘍抗原に結合するＨ／Ｌ鎖の組み合わせとを含む、請求項２０に記載の二重特異性抗体。
  22. 腫瘍抗原に結合する前記Ｈ／Ｌ鎖の組み合わせが、ヒトＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＥＡ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＣＳ－１、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＰＣＡＭ、ＤＬＬ３、ＬＧＲ５、ＭＳＬＮ、ＦＯＬＲ１、ＦＯＬＲ３、ＨＥＲ２、ＨＭ１．２４、ＭＣＳＰ、ＰＤ－Ｌ１、ＰＳＭＡタンパク質又はこれらの変異体に結合する、請求項２１に記載の二重特異性抗体。
  23. ヒト又はヒト化抗体である、請求項２０～２２のいずれか一項に記載の抗体又は二重特異性抗体。
  24. 適合性ヘテロ二量体化ドメインを有する２つの異なる免疫グロブリン重鎖を含む、請求項２０～２３のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
  25. 前記適合性ヘテロ二量体化ドメインが、適合性免疫グロブリン重鎖ＣＨ３ヘテロ二量体化ドメインである、請求項２４に記載の二重特異性抗体。
  26. 前記二重特異性抗体が、前記二重特異性ＩｇＧ抗体とＦｃガンマ受容体との相互作用が低減されるように、変異したＣＨ２及び／又は下部ヒンジドメインを有するＩｇＧ抗体である、請求項２０～２５のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
  27. 前記変異したＣＨ２及び／又は下部ヒンジドメインが、２３５位及び／又は２３６位（ＥＵ番号付けによる）でのアミノ酸置換、好ましくはＬ２３５Ｇ置換及び／又はＧ２３６Ｒ置換を含む、請求項２６に記載の二重特異性抗体。
  28. 共通軽鎖を含む、請求項２０～２７のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
  29. それを必要とする対象の治療に使用するための、請求項１～２８のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質又は抗体。
  30. 前記対象が癌を有するか、又は癌に対して治療されている、請求項２９に記載の使用のための抗原結合タンパク質又は抗体。
  31. 前記治療が、請求項１～３、１１～１３のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質又は抗体の局所投与及び／又は局所放出を含む、請求項２９又は請求項３０に記載の使用のための抗原結合タンパク質又は抗体。
  32. 前記治療が、請求項４～１０のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質又は抗体を、過剰活性免疫系を有する対象に投与することを含む、請求項２９に記載の使用のための抗原結合タンパク質又は抗体。
  33. 前記対象が自己免疫疾患を有する、請求項３２に記載の使用のための抗原結合タンパク質又は抗体。
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