JP2023159327A - ネコ白血病ウイルスワクチン - Google Patents
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Abstract
【課題】ネコ白血病ウイルスのための新しいワクチンを提供する。【解決手段】ネコ白血病ウイルス（ＦｅＬＶ）抗原をコードするアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子を含む免疫原性組成物である。前記アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子がベネズエラウマ脳炎（ＶＥＥ）アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子であることが好ましい。【選択図】なし
Description
関連出願の相互参照
本出願は、米国特許法第１１９条（ｅ）の下で、２０１７年１１月６日に出願された米
国仮特許出願第６２／５８２，０５０号、２０１７年１２月８日に出願された米国仮特許
出願第６２／５９６，５０８号および２０１７年１２月１５日に出願された米国仮特許出
願第６２／５９９，４０１号の優先権を主張し、それらすべての内容全体を参照により本
明細書に組み入れる。
本出願は、米国特許法第１１９条（ｅ）の下で、２０１７年１１月６日に出願された米
国仮特許出願第６２／５８２，０５０号、２０１７年１２月８日に出願された米国仮特許
出願第６２／５９６，５０８号および２０１７年１２月１５日に出願された米国仮特許出
願第６２／５９９，４０１号の優先権を主張し、それらすべての内容全体を参照により本
明細書に組み入れる。
本発明は、ネコ白血病ウイルスのための新しいワクチンに関する。ワクチンを単独でま
たは他の保護剤と組み合わせて製造および使用する方法も提供される。
たは他の保護剤と組み合わせて製造および使用する方法も提供される。
ネコ白血病ウイルス（ＦｅＬＶ）は、イエネコに感染するレトロウイルスであり、世界
中で顕著な罹患率および死亡率をもたらしている。ＦｅＬＶは主に唾液を介して伝染する
が、体液との接触により伝染することも報告されている［Ｐａｃｉｔｔｉ ｅｔ ａｌ．
， Ｖｅｔ Ｒｅｃ １１８：３８１－３８４（１９８６）ｄｏｉ：１０．１１３６／ｖ
ｒ．１１８．１４．３８１；Ｌｅｖｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｆｅｌｉｎｅ Ｍｅｄ Ｓｕ
ｒｇ １０：３００－３１６（２００８）ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｊｆｍｓ２００
８．０３．００２］。ＦｅＬＶ感染中に観察されるネコの臨床徴候には、細胞増殖性障害
（リンパ系腫瘍または骨髄性腫瘍）、細胞抑制性障害（ｃｙｔｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ
ｄｉｓｏｒｄｅｒ）（免疫抑制、貧血、骨髄抑制に関連する感染性疾患）、炎症性障害
、神経障害、流産および腸炎が含まれる［Ｈｏｏｖｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ａｍ Ｖｅ
ｔ Ｍｅｄ Ａｓｓｏｃ １９９：１２８７－１２９７（１９９１）； Ｌｅｖｙ ａｎ
ｄ Ｃｒａｗｆｏｒｄ， Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｉｎｔｅｒ
ｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，６ｔｈ ｅｄ（Ｅｔｔｉｎｇｅｒ ＳＪ，Ｆｅｌｄｍａｎ
ＥＣ．，ｅｄｓ．）ＷＢ Ｓａｕｎｄｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ（２００
５）］。抗原血症の有病率は、健康なネコの１～５％から罹患したネコの１５～３０％ま
で様々であり得る［Ｈｏｓｉｅ ｅｔ ａｌ．Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｒｅｃｏｒｄｓ，
１２８：２９３－２９７（１９８９）；Ｂｒａｌｅｙ，Ｆｅｌｉｎｅ Ｐｒａｃｔｉｃｅ
２２：２５－２９（１９９４）；Ｍａｌｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ
Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｊｏｕｒｎａｌ ７５：３２３－３２７（１９９７）；Ａｒｊｏ
ｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏ
ｇｙ ３８：３４４８－３４４９（２０００）］。ＦｅＬＶは、多くの場合、持続性ウイ
ルス血症を伴う持続的な感染を確立し、宿主ネコの死につながることが多い。
中で顕著な罹患率および死亡率をもたらしている。ＦｅＬＶは主に唾液を介して伝染する
が、体液との接触により伝染することも報告されている［Ｐａｃｉｔｔｉ ｅｔ ａｌ．
， Ｖｅｔ Ｒｅｃ １１８：３８１－３８４（１９８６）ｄｏｉ：１０．１１３６／ｖ
ｒ．１１８．１４．３８１；Ｌｅｖｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｆｅｌｉｎｅ Ｍｅｄ Ｓｕ
ｒｇ １０：３００－３１６（２００８）ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｊｆｍｓ２００
８．０３．００２］。ＦｅＬＶ感染中に観察されるネコの臨床徴候には、細胞増殖性障害
（リンパ系腫瘍または骨髄性腫瘍）、細胞抑制性障害（ｃｙｔｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ
ｄｉｓｏｒｄｅｒ）（免疫抑制、貧血、骨髄抑制に関連する感染性疾患）、炎症性障害
、神経障害、流産および腸炎が含まれる［Ｈｏｏｖｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ａｍ Ｖｅ
ｔ Ｍｅｄ Ａｓｓｏｃ １９９：１２８７－１２９７（１９９１）； Ｌｅｖｙ ａｎ
ｄ Ｃｒａｗｆｏｒｄ， Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｉｎｔｅｒ
ｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，６ｔｈ ｅｄ（Ｅｔｔｉｎｇｅｒ ＳＪ，Ｆｅｌｄｍａｎ
ＥＣ．，ｅｄｓ．）ＷＢ Ｓａｕｎｄｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ（２００
５）］。抗原血症の有病率は、健康なネコの１～５％から罹患したネコの１５～３０％ま
で様々であり得る［Ｈｏｓｉｅ ｅｔ ａｌ．Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｒｅｃｏｒｄｓ，
１２８：２９３－２９７（１９８９）；Ｂｒａｌｅｙ，Ｆｅｌｉｎｅ Ｐｒａｃｔｉｃｅ
２２：２５－２９（１９９４）；Ｍａｌｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ
Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｊｏｕｒｎａｌ ７５：３２３－３２７（１９９７）；Ａｒｊｏ
ｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏ
ｇｙ ３８：３４４８－３４４９（２０００）］。ＦｅＬＶは、多くの場合、持続性ウイ
ルス血症を伴う持続的な感染を確立し、宿主ネコの死につながることが多い。
ＦｅＬＶのＲＮＡゲノムは、３つの遺伝子、すなわち、（ｉ）エンベロープ糖タンパク
質をコードするＥＮＶ遺伝子、（ｉｉ）ウイルスの主要な構造成分をコードするＧＡＧ遺
伝子および（ｉｉｉ）ＲＮＡポリメラーゼをコードするＰＯＬ遺伝子のみをコードする［
Ｔｈｏｍｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｖｉｒｏｌｏ
ｇｙ ７３：１８１９－１８２４（１９９２）］。ＦｅＬＶエンベロープ（ＥＮＶ）遺伝
子は、１つ以上の細胞酵素によってタンパク質分解処理されて主要エンベロープ糖タンパ
ク質ｇｐ７０および関連する膜貫通タンパク質ｐ１５Ｅを生成するｇｐ８５前駆タンパク
質をコードする［ＤｅＮｏｒｏｎｈａ，ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ８５：６１７
－６２１（１９７８）；Ｎｕｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ８１：３６７５－３
６７９（１９８３）］。膜貫通タンパク質ｐ１５Ｅは、免疫抑制特性を有するガンマレト
ロウイルス間で保存された配列を含む［Ｍａｔｈｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ２
７４：６８７－６８９（１９７８）］。近年、欧州医薬品庁の動物用医薬品委員会（ＣＶ
ＭＰ）は、エシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）中で活性物質とし
て発現される、ＦｅＬＶサブグループＡのｇｐ７０表面糖タンパク質に由来する組換えｐ
４５ ＦｅＬＶエンベロープ抗原を含むワクチンに対して肯定的な見解を採択した。Ｆｅ
ＬＶエンベロープ糖タンパク質は、ＦｅＬＶ特異的細胞傷害性Ｔ細胞応答の標的であると
ともに中和抗体であり、したがって、ＦｅＬＶの主要な免疫原の１つである［Ｆｌｙｎｎ
ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｖｉｒｏｌ ７６（５）：２３０６－２３１５（２００２）］。
質をコードするＥＮＶ遺伝子、（ｉｉ）ウイルスの主要な構造成分をコードするＧＡＧ遺
伝子および（ｉｉｉ）ＲＮＡポリメラーゼをコードするＰＯＬ遺伝子のみをコードする［
Ｔｈｏｍｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｖｉｒｏｌｏ
ｇｙ ７３：１８１９－１８２４（１９９２）］。ＦｅＬＶエンベロープ（ＥＮＶ）遺伝
子は、１つ以上の細胞酵素によってタンパク質分解処理されて主要エンベロープ糖タンパ
ク質ｇｐ７０および関連する膜貫通タンパク質ｐ１５Ｅを生成するｇｐ８５前駆タンパク
質をコードする［ＤｅＮｏｒｏｎｈａ，ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ８５：６１７
－６２１（１９７８）；Ｎｕｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ８１：３６７５－３
６７９（１９８３）］。膜貫通タンパク質ｐ１５Ｅは、免疫抑制特性を有するガンマレト
ロウイルス間で保存された配列を含む［Ｍａｔｈｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ２
７４：６８７－６８９（１９７８）］。近年、欧州医薬品庁の動物用医薬品委員会（ＣＶ
ＭＰ）は、エシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）中で活性物質とし
て発現される、ＦｅＬＶサブグループＡのｇｐ７０表面糖タンパク質に由来する組換えｐ
４５ ＦｅＬＶエンベロープ抗原を含むワクチンに対して肯定的な見解を採択した。Ｆｅ
ＬＶエンベロープ糖タンパク質は、ＦｅＬＶ特異的細胞傷害性Ｔ細胞応答の標的であると
ともに中和抗体であり、したがって、ＦｅＬＶの主要な免疫原の１つである［Ｆｌｙｎｎ
ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｖｉｒｏｌ ７６（５）：２３０６－２３１５（２００２）］。
宿主の免疫状態、宿主の年齢、感染しているＦｅＬＶ株、ウイルス量、およびＦｅＬＶ
の曝露経路などの様々な因子はいずれも、その曝露の最終的な結果に影響を及ぼす可能性
がある。かつて獣医師および研究者は、比較的幸運な例では一過性の抗原血症および／ま
たは感染の消失であった、付随する抗原血症の相対的持続性に関連してＦｅＬＶ感染を分
類した。抗原血症のアッセイには、ｐ２７酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、ウイ
ルス分離および免疫蛍光アッセイが含まれる［Ｈｏｏｖｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ａｍ
Ｖｅｔ Ｍｅｄ Ａｓｓｏｃ １９９：１２８７－１２９７（１９９１）；Ｒｏｊｋｏ
ａｎｄ Ｋｏｃｉｂａ，Ｊ Ａｍ Ｖｅｔ Ｍｅｄ Ａｓｓｏｃ １９９：１３０５－１
３１０（１９９１）］。このような検査は、臨床応用だけでなく、臨床疾患が活発に循環
するウイルスの結果であるかどうかを決定するのに依然として有用である。
の曝露経路などの様々な因子はいずれも、その曝露の最終的な結果に影響を及ぼす可能性
がある。かつて獣医師および研究者は、比較的幸運な例では一過性の抗原血症および／ま
たは感染の消失であった、付随する抗原血症の相対的持続性に関連してＦｅＬＶ感染を分
類した。抗原血症のアッセイには、ｐ２７酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、ウイ
ルス分離および免疫蛍光アッセイが含まれる［Ｈｏｏｖｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ａｍ
Ｖｅｔ Ｍｅｄ Ａｓｓｏｃ １９９：１２８７－１２９７（１９９１）；Ｒｏｊｋｏ
ａｎｄ Ｋｏｃｉｂａ，Ｊ Ａｍ Ｖｅｔ Ｍｅｄ Ａｓｓｏｃ １９９：１３０５－１
３１０（１９９１）］。このような検査は、臨床応用だけでなく、臨床疾患が活発に循環
するウイルスの結果であるかどうかを決定するのに依然として有用である。
現在、米国ではＦｅＬＶ用の４つのワクチンが利用可能であり、これには２つの全ウイ
ルスアジュバント不活化ワクチン（ｗｈｏｌｅ－ｖｉｒｕｓ ａｄｊｕｖａｎｔｅｄ ｋ
ｉｌｌｅｄ ｖａｃｃｉｎｅ）、二重アジュバント多抗原ワクチン（ｄｕａｌ－ａｄｊｕ
ｖａｎｔｅｄ，ｍｕｌｔｉｐｌｅ－ａｎｔｉｇｅｎ ｖａｃｃｉｎｅ）と、非アジュバン
トカナリア痘ウイルスベクターワクチン（ｎｏｎａｄｊｕｖａｎｔｅｄ，ｃａｎａｒｙｐ
ｏｘ ｖｉｒｕｓ－ｖｅｃｔｏｒｅｄ ｖａｃｃｉｎｅ）とが含まれる。特に、様々なワ
クチンが様々な程度の効力を有することが示されている［Ｓｐａｒｋｅｓ，Ｊ Ｓｍａｌ
ｌ Ａｎｉｍ Ｐｒａｃｔ ３８：１８７－１９４（１９９７）ｄｏｉ：１０．１１１１
／ｊ．１７４８－５８２７．１９９７．ｔｂ０３３３９．ｘ．］。以前の試験では、ウイ
ルスＲＮＡ、プロウイルスＤＮＡ、ＦｅＬＶ抗体およびｐ２７抗原についてワクチン接種
されたネコおよびワクチン接種されていないネコを試験することを含め、惹起後の全ウイ
ルスアジュバント不活化ワクチンの有効性が示された［Ｈｉｎｅｓ ｅｔ ａｌ．， Ｊ
Ａｍ Ｖｅｔ Ｍｅｄ Ａｓｓｏｃ １９９：１４２８－１４３０（１９９１）；Ｐｅ
ｄｅｒｓｅｎ， Ｊ Ｖｅｔ Ｉｎｔｅｒｎ Ｍｅｄ ７：３４－３９（１９９３）ｄｏ
ｉ：１０．１１１１／ｊ．１９３９－１６７６．１９９３．ｔｂ０３１６６．ｘ．］；Ｔ
ｏｒｒｅｓ ｅｔ ａｌ．， Ｖｅｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ １
３４：１２２－１３１（２０１０）ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｖｅｔｉｍｍ．２００
９．１０．０１７］。使用可能な非アジュバント組換えＦｅＬＶワクチンの有効性を評価
するデータは限られている［Ｓｔｕｋｅ ｅｔ ａｌ．， Ｖａｃｃｉｎｅ ３２：２５
９９－２６０３（２０１４）ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｖａｃｃｉｎｅ．２０１４．
０３．０１６］。
ルスアジュバント不活化ワクチン（ｗｈｏｌｅ－ｖｉｒｕｓ ａｄｊｕｖａｎｔｅｄ ｋ
ｉｌｌｅｄ ｖａｃｃｉｎｅ）、二重アジュバント多抗原ワクチン（ｄｕａｌ－ａｄｊｕ
ｖａｎｔｅｄ，ｍｕｌｔｉｐｌｅ－ａｎｔｉｇｅｎ ｖａｃｃｉｎｅ）と、非アジュバン
トカナリア痘ウイルスベクターワクチン（ｎｏｎａｄｊｕｖａｎｔｅｄ，ｃａｎａｒｙｐ
ｏｘ ｖｉｒｕｓ－ｖｅｃｔｏｒｅｄ ｖａｃｃｉｎｅ）とが含まれる。特に、様々なワ
クチンが様々な程度の効力を有することが示されている［Ｓｐａｒｋｅｓ，Ｊ Ｓｍａｌ
ｌ Ａｎｉｍ Ｐｒａｃｔ ３８：１８７－１９４（１９９７）ｄｏｉ：１０．１１１１
／ｊ．１７４８－５８２７．１９９７．ｔｂ０３３３９．ｘ．］。以前の試験では、ウイ
ルスＲＮＡ、プロウイルスＤＮＡ、ＦｅＬＶ抗体およびｐ２７抗原についてワクチン接種
されたネコおよびワクチン接種されていないネコを試験することを含め、惹起後の全ウイ
ルスアジュバント不活化ワクチンの有効性が示された［Ｈｉｎｅｓ ｅｔ ａｌ．， Ｊ
Ａｍ Ｖｅｔ Ｍｅｄ Ａｓｓｏｃ １９９：１４２８－１４３０（１９９１）；Ｐｅ
ｄｅｒｓｅｎ， Ｊ Ｖｅｔ Ｉｎｔｅｒｎ Ｍｅｄ ７：３４－３９（１９９３）ｄｏ
ｉ：１０．１１１１／ｊ．１９３９－１６７６．１９９３．ｔｂ０３１６６．ｘ．］；Ｔ
ｏｒｒｅｓ ｅｔ ａｌ．， Ｖｅｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ １
３４：１２２－１３１（２０１０）ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｖｅｔｉｍｍ．２００
９．１０．０１７］。使用可能な非アジュバント組換えＦｅＬＶワクチンの有効性を評価
するデータは限られている［Ｓｔｕｋｅ ｅｔ ａｌ．， Ｖａｃｃｉｎｅ ３２：２５
９９－２６０３（２０１４）ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｖａｃｃｉｎｅ．２０１４．
０３．０１６］。
さらに最近では、２つの市販のネコ白血病ワクチン、１つは不活化全ウイルスワクチン
、もう１つは生カナリア痘ウイルスベクターワクチンの有効性が、強毒ネコ白血病ウイル
スによる惹起後に比較された［Ｐａｔｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ
Ｖａｃｃｉｎｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２２（７）：７９８－８０５（２０１５）］。
この試験では、全ウイルスアジュバント不活化ワクチンが、ＦｅＬＶ感染に対する優れた
保護を提供することが再度見出された。しかし、全ウイルス不活化アジュバントＦｅＬＶ
ワクチンの使用は、ネコ注射部位肉腫の発症につながる１つの因子として関与している［
Ｋａｓｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．ＡＭ Ｖｅｔ Ｍｅｄ Ａｓｓｏｃ ２０３（３）：３９
６－４０５（１９９３）］。その後の試験では、不活化アジュバントワクチンとネコ注射
部位肉腫との間の直接的な関連を確立することはできなかったが、非アジュバントワクチ
ンの方が安全であるという認識は残っている。実際、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａ
ｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｅｌｉｎｅ Ｐｒａｃｔｉｔｉｏｎｅｒｓ Ｆｅｌｉｎｅ Ｖａｃｃ
ｉｎａｔｉｏｎ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓは、ネコ注射部位肉腫のリスクを低下させ、局所
炎症を減少させるため、非アジュバントＦｅＬＶワクチンを使用することを提案している
［ＡＡＦＰ Ｆｅｌｉｎｅ Ａｄｖｉｓｏｒｙ Ｐａｎｅｌ，１５：７８５－８０８（２
０１３）］。
、もう１つは生カナリア痘ウイルスベクターワクチンの有効性が、強毒ネコ白血病ウイル
スによる惹起後に比較された［Ｐａｔｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ
Ｖａｃｃｉｎｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２２（７）：７９８－８０５（２０１５）］。
この試験では、全ウイルスアジュバント不活化ワクチンが、ＦｅＬＶ感染に対する優れた
保護を提供することが再度見出された。しかし、全ウイルス不活化アジュバントＦｅＬＶ
ワクチンの使用は、ネコ注射部位肉腫の発症につながる１つの因子として関与している［
Ｋａｓｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．ＡＭ Ｖｅｔ Ｍｅｄ Ａｓｓｏｃ ２０３（３）：３９
６－４０５（１９９３）］。その後の試験では、不活化アジュバントワクチンとネコ注射
部位肉腫との間の直接的な関連を確立することはできなかったが、非アジュバントワクチ
ンの方が安全であるという認識は残っている。実際、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａ
ｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｅｌｉｎｅ Ｐｒａｃｔｉｔｉｏｎｅｒｓ Ｆｅｌｉｎｅ Ｖａｃｃ
ｉｎａｔｉｏｎ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓは、ネコ注射部位肉腫のリスクを低下させ、局所
炎症を減少させるため、非アジュバントＦｅＬＶワクチンを使用することを提案している
［ＡＡＦＰ Ｆｅｌｉｎｅ Ａｄｖｉｓｏｒｙ Ｐａｎｅｌ，１５：７８５－８０８（２
０１３）］。
ある種の病原体から保護するために、いくつかのベクター戦略が長年にわたってワクチ
ンに採用されてきた。そのようなベクター戦略の１つには、ベネズエラウマ脳炎ウイルス
（ＶＥＥ）［Ｐｕｓｈｋｏ ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ２３９：３８９－４０１（
１９９７）］、シンドビス（ＳＩＮ）［Ｂｒｅｄｅｎｂｅｅｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒ
ｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ６７：６４３９－６４４６（１９９３）］およびセム
リキ森林ウイルス（ＳＦＶ）［Ｌｉｌｊｅｓｔｒｏｍ ａｎｄ Ｇａｒｏｆｆ，Ｂｉｏｔ
ｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＮＹ）９：１３５６－１３６１（１９９１）］を含むいくつかの異
なるアルファウイルスから開発されたアルファウイルス由来レプリコンＲＮＡ粒子（ＲＰ
）［Ｖａｎｄｅｒ Ｖｅｅｎ，ｅｔ ａｌ．Ａｎｉｍ Ｈｅａｌｔｈ Ｒｅｓ Ｒｅｖ．
１３（１）：１－９（２０１２）ｄｏｉ：１０．１０１７／Ｓ１４６６２５２３１２００
００１１；Ｋａｍｒｕｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ ９１（Ｐｔ ７）：
１７２３－１７２７（２０１０）］の使用が含まれる。ＲＰワクチンは、増殖欠損アルフ
ァウイルスＲＮＡレプリコンを宿主細胞に送達し、インビボで所望の（１または複数の）
抗原導入遺伝子の発現をもたらす［Ｐｕｓｈｋｏ ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２
３９（２）：３８９－４０１（１９９７）］。ＲＰは、いくつかの従来のワクチン製剤と
比較した場合、魅力的な安全性および有効性プロファイルを有する［Ｖａｎｄｅｒ Ｖｅ
ｅｎ，ｅｔ ａｌ．Ａｎｉｍ Ｈｅａｌｔｈ Ｒｅｓ Ｒｅｖ．１３（１）：１－９（２
０１２）］。ＲＰプラットフォームは、病原抗原をコードするために使用されており、ブ
タおよび家禽用のいくつかの米国農務省認可ワクチンの基礎となっている。
ンに採用されてきた。そのようなベクター戦略の１つには、ベネズエラウマ脳炎ウイルス
（ＶＥＥ）［Ｐｕｓｈｋｏ ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ２３９：３８９－４０１（
１９９７）］、シンドビス（ＳＩＮ）［Ｂｒｅｄｅｎｂｅｅｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒ
ｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ６７：６４３９－６４４６（１９９３）］およびセム
リキ森林ウイルス（ＳＦＶ）［Ｌｉｌｊｅｓｔｒｏｍ ａｎｄ Ｇａｒｏｆｆ，Ｂｉｏｔ
ｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＮＹ）９：１３５６－１３６１（１９９１）］を含むいくつかの異
なるアルファウイルスから開発されたアルファウイルス由来レプリコンＲＮＡ粒子（ＲＰ
）［Ｖａｎｄｅｒ Ｖｅｅｎ，ｅｔ ａｌ．Ａｎｉｍ Ｈｅａｌｔｈ Ｒｅｓ Ｒｅｖ．
１３（１）：１－９（２０１２）ｄｏｉ：１０．１０１７／Ｓ１４６６２５２３１２００
００１１；Ｋａｍｒｕｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ ９１（Ｐｔ ７）：
１７２３－１７２７（２０１０）］の使用が含まれる。ＲＰワクチンは、増殖欠損アルフ
ァウイルスＲＮＡレプリコンを宿主細胞に送達し、インビボで所望の（１または複数の）
抗原導入遺伝子の発現をもたらす［Ｐｕｓｈｋｏ ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２
３９（２）：３８９－４０１（１９９７）］。ＲＰは、いくつかの従来のワクチン製剤と
比較した場合、魅力的な安全性および有効性プロファイルを有する［Ｖａｎｄｅｒ Ｖｅ
ｅｎ，ｅｔ ａｌ．Ａｎｉｍ Ｈｅａｌｔｈ Ｒｅｓ Ｒｅｖ．１３（１）：１－９（２
０１２）］。ＲＰプラットフォームは、病原抗原をコードするために使用されており、ブ
タおよび家禽用のいくつかの米国農務省認可ワクチンの基礎となっている。
残念ながら、これまで、ペット所有者は、（ｉ）安全性は高いと考えられているが、不
活化アジュバントワクチンよりも顕著に効果が低いことが分かった非アジュバントＦｅＬ
Ｖワクチン［Ｓｔｕｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｖａｃｃｉｎｅ ３２：２５９９－２６０３（
２０１４）；Ｐａｔｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｉｍｍｕｎｏｌ
２２（７）：７９８－８０８（２０１５）を参照］、および（ｉｉ）効果は高いが、注射
部位肉腫をもたらすと一部で認識されているアジュバントＦｅＬＶワクチンのいずれかを
選択せざるを得なかった。したがって、ネコ注射部位肉腫を誘発しないが、依然として、
ＦｅＬＶ感染によって引き起こされる衰弱性の疾患状態から、その不活化全ウイルスアジ
ュバントワクチン対応物と同様に効果的にワクチン接種対象を保護する改良された安全な
非アジュバントＦｅＬＶワクチンが現在も必要とされている。
活化アジュバントワクチンよりも顕著に効果が低いことが分かった非アジュバントＦｅＬ
Ｖワクチン［Ｓｔｕｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｖａｃｃｉｎｅ ３２：２５９９－２６０３（
２０１４）；Ｐａｔｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｉｍｍｕｎｏｌ
２２（７）：７９８－８０８（２０１５）を参照］、および（ｉｉ）効果は高いが、注射
部位肉腫をもたらすと一部で認識されているアジュバントＦｅＬＶワクチンのいずれかを
選択せざるを得なかった。したがって、ネコ注射部位肉腫を誘発しないが、依然として、
ＦｅＬＶ感染によって引き起こされる衰弱性の疾患状態から、その不活化全ウイルスアジ
ュバントワクチン対応物と同様に効果的にワクチン接種対象を保護する改良された安全な
非アジュバントＦｅＬＶワクチンが現在も必要とされている。
本明細書におけるいかなる参考文献の引用も、そのような参考文献が本出願に対する「
先行技術」として利用可能であることの承認として解釈されないものとする。
先行技術」として利用可能であることの承認として解釈されないものとする。
Ｐａｃｉｔｔｉ ｅｔ ａｌ．， Ｖｅｔ Ｒｅｃ １１８：３８１－３８４（１９８６）ｄｏｉ：１０．１１３６／ｖｒ．１１８．１４．３８１
Ｌｅｖｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｆｅｌｉｎｅ Ｍｅｄ Ｓｕｒｇ １０：３００－３１６（２００８）ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｊｆｍｓ２００８．０３．００２
Ｈｏｏｖｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ａｍ Ｖｅｔ Ｍｅｄ Ａｓｓｏｃ １９９：１２８７－１２９７（１９９１）
Ｌｅｖｙ ａｎｄ Ｃｒａｗｆｏｒｄ， Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，６ｔｈ ｅｄ（Ｅｔｔｉｎｇｅｒ ＳＪ，Ｆｅｌｄｍａｎ ＥＣ．，ｅｄｓ．）ＷＢ Ｓａｕｎｄｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ（２００５）
Ｈｏｓｉｅ ｅｔ ａｌ．Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｒｅｃｏｒｄｓ，１２８：２９３－２９７（１９８９）
Ｂｒａｌｅｙ，Ｆｅｌｉｎｅ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ２２：２５－２９（１９９４）
Ｍａｌｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｊｏｕｒｎａｌ ７５：３２３－３２７（１９９７）
Ａｒｊｏｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ３８：３４４８－３４４９（２０００）
Ｔｈｏｍｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７３：１８１９－１８２４（１９９２）
ＤｅＮｏｒｏｎｈａ，ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ８５：６１７－６２１（１９７８）
Ｎｕｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ８１：３６７５－３６７９（１９８３）
Ｍａｔｈｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ２７４：６８７－６８９（１９７８）
Ｆｌｙｎｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｖｉｒｏｌ ７６（５）：２３０６－２３１５（２００２）
Ｒｏｊｋｏ ａｎｄ Ｋｏｃｉｂａ， Ｊ Ａｍ Ｖｅｔ Ｍｅｄ Ａｓｓｏｃ １９９：１３０５－１３１０（１９９１）
Ｓｐａｒｋｅｓ，Ｊ Ｓｍａｌｌ Ａｎｉｍ Ｐｒａｃｔ ３８：１８７－１９４（１９９７）ｄｏｉ：１０．１１１１／ｊ．１７４８－５８２７．１９９７．ｔｂ０３３３９．ｘ．
Ｈｉｎｅｓ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ａｍ Ｖｅｔ Ｍｅｄ Ａｓｓｏｃ １９９：１４２８－１４３０（１９９１）
Ｐｅｄｅｒｓｅｎ， Ｊ Ｖｅｔ Ｉｎｔｅｒｎ Ｍｅｄ ７：３４－３９（１９９３）ｄｏｉ：１０．１１１１／ｊ．１９３９－１６７６．１９９３．ｔｂ０３１６６．ｘ．
Ｔｏｒｒｅｓ ｅｔ ａｌ．， Ｖｅｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ １３４：１２２－１３１（２０１０）ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｖｅｔｉｍｍ．２００９．１０．０１７
Ｓｔｕｋｅ ｅｔ ａｌ．， Ｖａｃｃｉｎｅ ３２：２５９９－２６０３（２０１４）ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｖａｃｃｉｎｅ．２０１４．０３．０１６
Ｐａｔｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２２（７）：７９８－８０５（２０１５）
Ｋａｓｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．ＡＭ Ｖｅｔ Ｍｅｄ Ａｓｓｏｃ ２０３（３）：３９６－４０５（１９９３）
ＡＡＦＰ Ｆｅｌｉｎｅ Ａｄｖｉｓｏｒｙ Ｐａｎｅｌ，１５：７８５－８０８（２０１３）
Ｐｕｓｈｋｏ ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２３９：３８９－４０１（１９９７）
Ｂｒｅｄｅｎｂｅｅｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ６７：６４３９－６４４６（１９９３）
Ｌｉｌｊｅｓｔｒｏｍ ａｎｄ Ｇａｒｏｆｆ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＮＹ）９：１３５６－１３６１（１９９１）
Ｖａｎｄｅｒ Ｖｅｅｎ，ｅｔ ａｌ．Ａｎｉｍ Ｈｅａｌｔｈ Ｒｅｓ Ｒｅｖ．１３（１）：１－９（２０１２）ｄｏｉ：１０．１０１７／Ｓ１４６６２５２３１２００００１１
Ｋａｍｒｕｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ ９１（Ｐｔ ７）：１７２３－１７２７（２０１０）
Ｐｕｓｈｋｏ ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２３９（２）：３８９－４０１（１９９７）
Ｓｔｕｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｖａｃｃｉｎｅ ３２：２５９９－２６０３（２０１４）
Ｐａｔｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２２（７）：７９８－８０８（２０１５）
したがって、本発明は、１つ以上のネコ白血病ウイルス（ＦｅＬＶ）抗原をコードする
ベクターを提供する。そのようなベクターは、これらのベクターを含む免疫原性組成物に
使用することができる。本発明の免疫原性組成物は、ワクチンに使用され得る。本発明の
一態様では、ワクチンは、ワクチン接種された対象（例えば、哺乳動物）をＦｅＬＶから
保護する。この種の特定の実施形態では、ワクチン接種された対象はネコである。さらに
特定の実施形態では、ワクチン接種された対象はイエネコである。本発明はさらに、Ｆｅ
ＬＶおよび他の疾患、例えば他のネコ感染性疾患に対する防御免疫を誘発するための混合
ワクチンを提供する。本発明の免疫原性組成物およびワクチンを製造および使用する方法
も提供される。
ベクターを提供する。そのようなベクターは、これらのベクターを含む免疫原性組成物に
使用することができる。本発明の免疫原性組成物は、ワクチンに使用され得る。本発明の
一態様では、ワクチンは、ワクチン接種された対象（例えば、哺乳動物）をＦｅＬＶから
保護する。この種の特定の実施形態では、ワクチン接種された対象はネコである。さらに
特定の実施形態では、ワクチン接種された対象はイエネコである。本発明はさらに、Ｆｅ
ＬＶおよび他の疾患、例えば他のネコ感染性疾患に対する防御免疫を誘発するための混合
ワクチンを提供する。本発明の免疫原性組成物およびワクチンを製造および使用する方法
も提供される。
具体的な実施形態では、ベクターは、ネコ病原体に由来する１つ以上の抗原をコードす
るアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子である。特定の実施形態では、ネコ病原体はＦ
ｅＬＶである。さらに特定の実施形態では、アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子は、
ＦｅＬＶ糖タンパク質（ｇｐ８５）をコードする。関連する実施形態では、アルファウイ
ルスＲＮＡレプリコン粒子は、ｇｐ８５の抗原性フラグメントをコードする。この種の特
定の実施形態では、ｇｐ８５の抗原性フラグメントはＦｅＬＶ糖タンパク質ｇｐ７０であ
る。特定の関連する実施形態では、ｇｐ８５の抗原性フラグメントはＦｅＬＶ糖タンパク
質ｇｐ４５である。なお一層特定の実施形態では、アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒
子は、ベネズエラウマ脳炎（ＶＥＥ）アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子である。さ
らに一層具体的な実施形態では、ＶＥＥアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子は、ＴＣ
－８３ ＶＥＥアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子である。他の実施形態では、アル
ファウイルスＲＮＡレプリコン粒子は、シンドビス（ＳＩＮ）アルファウイルスＲＮＡレ
プリコン粒子である。なお他の実施形態では、アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子は
、セムリキ森林ウイルス（ＳＦＶ）アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子である。代替
の実施形態では、裸のＤＮＡベクターは、ネコ病原体に由来する１つ以上の抗原をコード
する核酸構築物を含む。この種の特定の実施形態では、裸のＤＮＡベクターは、ＦｅＬＶ
ｇｐ８５またはその抗原性フラグメントをコードする核酸構築物を含む。
るアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子である。特定の実施形態では、ネコ病原体はＦ
ｅＬＶである。さらに特定の実施形態では、アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子は、
ＦｅＬＶ糖タンパク質（ｇｐ８５）をコードする。関連する実施形態では、アルファウイ
ルスＲＮＡレプリコン粒子は、ｇｐ８５の抗原性フラグメントをコードする。この種の特
定の実施形態では、ｇｐ８５の抗原性フラグメントはＦｅＬＶ糖タンパク質ｇｐ７０であ
る。特定の関連する実施形態では、ｇｐ８５の抗原性フラグメントはＦｅＬＶ糖タンパク
質ｇｐ４５である。なお一層特定の実施形態では、アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒
子は、ベネズエラウマ脳炎（ＶＥＥ）アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子である。さ
らに一層具体的な実施形態では、ＶＥＥアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子は、ＴＣ
－８３ ＶＥＥアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子である。他の実施形態では、アル
ファウイルスＲＮＡレプリコン粒子は、シンドビス（ＳＩＮ）アルファウイルスＲＮＡレ
プリコン粒子である。なお他の実施形態では、アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子は
、セムリキ森林ウイルス（ＳＦＶ）アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子である。代替
の実施形態では、裸のＤＮＡベクターは、ネコ病原体に由来する１つ以上の抗原をコード
する核酸構築物を含む。この種の特定の実施形態では、裸のＤＮＡベクターは、ＦｅＬＶ
ｇｐ８５またはその抗原性フラグメントをコードする核酸構築物を含む。
特定の実施形態では、本発明のアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子は、１つ以上の
ＦｅＬＶ抗原またはその抗原性フラグメントをコードする。この種の特定の実施形態では
、アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子は、２～４個のＦｅＬＶ抗原またはその抗原性
フラグメントをコードする。他の実施形態では、免疫原性組成物は、１つ以上のＦｅＬＶ
抗原またはその抗原性フラグメントをコードするアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子
を含む。関連する実施形態では、免疫原性組成物は、２～４個のＦｅＬＶ抗原またはその
抗原性フラグメントをコードするアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子を含む。この種
の特定の実施形態では、アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子は、ＦｅＬＶ糖タンパク
質（ｇｐ８５）またはその抗原性フラグメントをコードする。この種のさらに特定の実施
形態では、ｇｐ８５の抗原性フラグメントはＦｅＬＶ糖タンパク質ｇｐ７０である。特定
の関連する実施形態では、ｇｐ８５の抗原性フラグメントはＦｅＬＶ糖タンパク質ｇｐ４
５である。さらに特定の実施形態では、免疫原性組成物は、ベネズエラウマ脳炎（ＶＥＥ
）アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子であるアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子
を含む。さらに一層具体的な実施形態では、ＶＥＥアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒
子は、ＴＣ－８３ ＶＥＥアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子である。
ＦｅＬＶ抗原またはその抗原性フラグメントをコードする。この種の特定の実施形態では
、アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子は、２～４個のＦｅＬＶ抗原またはその抗原性
フラグメントをコードする。他の実施形態では、免疫原性組成物は、１つ以上のＦｅＬＶ
抗原またはその抗原性フラグメントをコードするアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子
を含む。関連する実施形態では、免疫原性組成物は、２～４個のＦｅＬＶ抗原またはその
抗原性フラグメントをコードするアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子を含む。この種
の特定の実施形態では、アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子は、ＦｅＬＶ糖タンパク
質（ｇｐ８５）またはその抗原性フラグメントをコードする。この種のさらに特定の実施
形態では、ｇｐ８５の抗原性フラグメントはＦｅＬＶ糖タンパク質ｇｐ７０である。特定
の関連する実施形態では、ｇｐ８５の抗原性フラグメントはＦｅＬＶ糖タンパク質ｇｐ４
５である。さらに特定の実施形態では、免疫原性組成物は、ベネズエラウマ脳炎（ＶＥＥ
）アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子であるアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子
を含む。さらに一層具体的な実施形態では、ＶＥＥアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒
子は、ＴＣ－８３ ＶＥＥアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子である。
なお他の実施形態では、免疫原性組成物は、アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子の
２つ以上のセットを含む。この種の特定の実施形態では、アルファウイルスＲＮＡレプリ
コン粒子の一方のセットは特定の抗原をコードし、アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒
子の他方のセットは第２の抗原をコードする。この種の具体的な実施形態では、アルファ
ウイルスＲＮＡレプリコン粒子の第１のセットは、ＦｅＬＶ抗原またはその抗原性フラグ
メントをコードし、アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子の第２のセットは、ネコカリ
シウイルス（ＦＣＶ）抗原またはその抗原性フラグメントをコードする。この種の特定の
実施形態では、ＦＣＶ抗原は、強毒全身性ネコカリシウイルス（ＶＳ－ＦＣＶ）分離株に
由来する。他の実施形態では、ＦＣＶ抗原は、古典的（Ｆ９様）ネコカリシウイルス分離
株に由来する。さらに他の実施形態では、アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子の第２
のセットは、一方は強毒全身性ネコカリシウイルス分離株に由来し、他方は古典的（Ｆ９
様）ネコカリシウイルス分離株に由来する２つのＦＣＶ抗原をコードする。
２つ以上のセットを含む。この種の特定の実施形態では、アルファウイルスＲＮＡレプリ
コン粒子の一方のセットは特定の抗原をコードし、アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒
子の他方のセットは第２の抗原をコードする。この種の具体的な実施形態では、アルファ
ウイルスＲＮＡレプリコン粒子の第１のセットは、ＦｅＬＶ抗原またはその抗原性フラグ
メントをコードし、アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子の第２のセットは、ネコカリ
シウイルス（ＦＣＶ）抗原またはその抗原性フラグメントをコードする。この種の特定の
実施形態では、ＦＣＶ抗原は、強毒全身性ネコカリシウイルス（ＶＳ－ＦＣＶ）分離株に
由来する。他の実施形態では、ＦＣＶ抗原は、古典的（Ｆ９様）ネコカリシウイルス分離
株に由来する。さらに他の実施形態では、アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子の第２
のセットは、一方は強毒全身性ネコカリシウイルス分離株に由来し、他方は古典的（Ｆ９
様）ネコカリシウイルス分離株に由来する２つのＦＣＶ抗原をコードする。
さらに他の実施形態では、免疫原性組成物は、第１の抗原をコードするアルファウイル
スＲＮＡレプリコン粒子の１つのセットと、第２の抗原をコードするアルファウイルスＲ
ＮＡレプリコン粒子の別のセットと、第３の抗原をコードするアルファウイルスＲＮＡレ
プリコン粒子の第３のセットとを含む。この種の特定の実施形態では、アルファウイルス
ＲＮＡレプリコン粒子の第１のセットはＦｅＬＶ抗原またはその抗原性フラグメントをコ
ードし、アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子の第２のセットは、強毒全身性ネコカリ
シウイルスに由来するネコカリシウイルス（ＦＣＶ）抗原またはその抗原性フラグメント
をコードし、アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子の第３のセットは、古典的（Ｆ９様
）ネコカリシウイルスに由来するネコカリシウイルス（ＦＣＶ）抗原またはその抗原性フ
ラグメントをコードする。
スＲＮＡレプリコン粒子の１つのセットと、第２の抗原をコードするアルファウイルスＲ
ＮＡレプリコン粒子の別のセットと、第３の抗原をコードするアルファウイルスＲＮＡレ
プリコン粒子の第３のセットとを含む。この種の特定の実施形態では、アルファウイルス
ＲＮＡレプリコン粒子の第１のセットはＦｅＬＶ抗原またはその抗原性フラグメントをコ
ードし、アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子の第２のセットは、強毒全身性ネコカリ
シウイルスに由来するネコカリシウイルス（ＦＣＶ）抗原またはその抗原性フラグメント
をコードし、アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子の第３のセットは、古典的（Ｆ９様
）ネコカリシウイルスに由来するネコカリシウイルス（ＦＣＶ）抗原またはその抗原性フ
ラグメントをコードする。
したがって、免疫原性組成物がアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子の複数のセット
（例えば、２～１０個）を含む特定の実施形態では、アルファウイルスＲＮＡレプリコン
粒子の第１のセットはＦｅＬＶ抗原またはその抗原性フラグメントをコードし、アルファ
ウイルスＲＮＡレプリコン粒子の１つ以上の他のセットは１つ以上の非ＦｅＬＶ抗原をコ
ードすることができる。この種の特定の実施形態では、非ＦｅＬＶ抗原は、ネコヘルペス
ウイルス（ＦＨＶ）に由来するタンパク質抗原である。他の実施形態では、非ＦｅＬＶ抗
原は、ネコカリシウイルス（ＦＣＶ）に由来するタンパク質抗原である。さらに他の実施
形態では、非ＦｅＬＶ抗原は、ネコニューモウイルス（ＦＰＮ）に由来するタンパク質抗
原である。なお他の実施形態では、非ＦｅＬＶ抗原は、ネコパルボウイルス（ＦＰＶ）に
由来するタンパク質抗原である。さらに他の実施形態では、非ＦｅＬＶ抗原は、ネコ伝染
性腹膜炎ウイルス（ＦＩＰＶ）に由来するタンパク質抗原である。なお他の実施形態では
、非ＦｅＬＶ抗原は、ネコ免疫不全ウイルスに由来するタンパク質抗原である。なお他の
実施形態では、非ＦｅＬＶ抗原は、ボルナ病ウイルス（ＢＤＶ）に由来するタンパク質抗
原である。さらに他の実施形態では、非ＦｅＬＶ抗原は、ネコインフルエンザウイルスに
由来するタンパク質抗原である。なお他の実施形態では、非ＦｅＬＶ抗原は、ネコ汎血球
減少症ウイルス（ＦＰＬＶ）に由来するタンパク質抗原である。さらに他の実施形態では
、非ＦｅＬＶ抗原は、ネココロナウイルス（ＦＣｏＶ）に由来するタンパク質抗原である
。なお他の実施形態では、非ＦｅＬＶ抗原は、ネコ鼻腔気管炎ウイルス（ＦＶＲ）に由来
するタンパク質抗原である。さらに他の実施形態では、非ＦｅＬＶ抗原は、クラミドフィ
ラ・フェリス（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ ｆｅｌｉｓ）に由来するタンパク質抗原で
ある。
（例えば、２～１０個）を含む特定の実施形態では、アルファウイルスＲＮＡレプリコン
粒子の第１のセットはＦｅＬＶ抗原またはその抗原性フラグメントをコードし、アルファ
ウイルスＲＮＡレプリコン粒子の１つ以上の他のセットは１つ以上の非ＦｅＬＶ抗原をコ
ードすることができる。この種の特定の実施形態では、非ＦｅＬＶ抗原は、ネコヘルペス
ウイルス（ＦＨＶ）に由来するタンパク質抗原である。他の実施形態では、非ＦｅＬＶ抗
原は、ネコカリシウイルス（ＦＣＶ）に由来するタンパク質抗原である。さらに他の実施
形態では、非ＦｅＬＶ抗原は、ネコニューモウイルス（ＦＰＮ）に由来するタンパク質抗
原である。なお他の実施形態では、非ＦｅＬＶ抗原は、ネコパルボウイルス（ＦＰＶ）に
由来するタンパク質抗原である。さらに他の実施形態では、非ＦｅＬＶ抗原は、ネコ伝染
性腹膜炎ウイルス（ＦＩＰＶ）に由来するタンパク質抗原である。なお他の実施形態では
、非ＦｅＬＶ抗原は、ネコ免疫不全ウイルスに由来するタンパク質抗原である。なお他の
実施形態では、非ＦｅＬＶ抗原は、ボルナ病ウイルス（ＢＤＶ）に由来するタンパク質抗
原である。さらに他の実施形態では、非ＦｅＬＶ抗原は、ネコインフルエンザウイルスに
由来するタンパク質抗原である。なお他の実施形態では、非ＦｅＬＶ抗原は、ネコ汎血球
減少症ウイルス（ＦＰＬＶ）に由来するタンパク質抗原である。さらに他の実施形態では
、非ＦｅＬＶ抗原は、ネココロナウイルス（ＦＣｏＶ）に由来するタンパク質抗原である
。なお他の実施形態では、非ＦｅＬＶ抗原は、ネコ鼻腔気管炎ウイルス（ＦＶＲ）に由来
するタンパク質抗原である。さらに他の実施形態では、非ＦｅＬＶ抗原は、クラミドフィ
ラ・フェリス（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ ｆｅｌｉｓ）に由来するタンパク質抗原で
ある。
本発明はまた、合成メッセンジャーＲＮＡ、ＲＮＡレプリコンを含む本発明の核酸構築
物をいずれも、ならびに本発明のアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子、裸のＤＮＡベ
クター、および本発明の核酸構築物（例えば、合成メッセンジャーＲＮＡ、ＲＮＡレプリ
コン）、アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子および／または裸のＤＮＡベクターを含
む免疫原性組成物および／またはワクチンをいずれも含む。
物をいずれも、ならびに本発明のアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子、裸のＤＮＡベ
クター、および本発明の核酸構築物（例えば、合成メッセンジャーＲＮＡ、ＲＮＡレプリ
コン）、アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子および／または裸のＤＮＡベクターを含
む免疫原性組成物および／またはワクチンをいずれも含む。
特定の実施形態では、本発明の核酸構築物は、１つ以上のＦｅＬＶ抗原またはその抗原
性フラグメントをコードする。この種の関連する実施形態では、核酸構築物は、２～４個
のＦｅＬＶ抗原またはその抗原性フラグメントをコードする。他の実施形態では、アルフ
ァウイルスＲＮＡレプリコン粒子は、１つ以上のＦｅＬＶ抗原またはその抗原性フラグメ
ントをコードする核酸構築物を含む。特定の実施形態では、アルファウイルスＲＮＡレプ
リコン粒子は、２～４個のＦｅＬＶ抗原またはその抗原性フラグメントをコードする核酸
構築物を含む。
性フラグメントをコードする。この種の関連する実施形態では、核酸構築物は、２～４個
のＦｅＬＶ抗原またはその抗原性フラグメントをコードする。他の実施形態では、アルフ
ァウイルスＲＮＡレプリコン粒子は、１つ以上のＦｅＬＶ抗原またはその抗原性フラグメ
ントをコードする核酸構築物を含む。特定の実施形態では、アルファウイルスＲＮＡレプ
リコン粒子は、２～４個のＦｅＬＶ抗原またはその抗原性フラグメントをコードする核酸
構築物を含む。
なお他の実施形態では、免疫原性組成物は、２～４個のＦｅＬＶ抗原またはその抗原性
フラグメントをコードする核酸構築物を含むアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子を含
む。この種の特定の実施形態では、アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子は、ＦｅＬＶ
糖タンパク質（ｇｐ８５）またはその抗原性フラグメントをコードする核酸構築物を含む
。この種の特定の実施形態では、ｇｐ８５の抗原性フラグメントはＦｅＬＶ糖タンパク質
ｇｐ７０である。他の関連する実施形態では、ｇｐ８５の抗原性フラグメントはＦｅＬＶ
糖タンパク質ｇｐ４５である。さらに特定の実施形態では、免疫原性組成物は、ベネズエ
ラウマ脳炎（ＶＥＥ）アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子であるアルファウイルスＲ
ＮＡレプリコン粒子を含む。さらに一層具体的な実施形態では、ＶＥＥアルファウイルス
ＲＮＡレプリコン粒子は、ＴＣ－８３ ＶＥＥアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子で
ある。
フラグメントをコードする核酸構築物を含むアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子を含
む。この種の特定の実施形態では、アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子は、ＦｅＬＶ
糖タンパク質（ｇｐ８５）またはその抗原性フラグメントをコードする核酸構築物を含む
。この種の特定の実施形態では、ｇｐ８５の抗原性フラグメントはＦｅＬＶ糖タンパク質
ｇｐ７０である。他の関連する実施形態では、ｇｐ８５の抗原性フラグメントはＦｅＬＶ
糖タンパク質ｇｐ４５である。さらに特定の実施形態では、免疫原性組成物は、ベネズエ
ラウマ脳炎（ＶＥＥ）アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子であるアルファウイルスＲ
ＮＡレプリコン粒子を含む。さらに一層具体的な実施形態では、ＶＥＥアルファウイルス
ＲＮＡレプリコン粒子は、ＴＣ－８３ ＶＥＥアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子で
ある。
さらに他の実施形態では、免疫原性組成物は、アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子
の２つ以上のセットを含む。この種の特定の実施形態では、アルファウイルスＲＮＡレプ
リコン粒子の一方のセットは第１の核酸構築物を含み、アルファウイルスＲＮＡレプリコ
ン粒子の他方のセットは第２の核酸構築物を含む。この種の具体的な実施形態では、第１
の核酸構築物はＦｅＬＶ抗原またはその抗原性フラグメントをコードし、第２の核酸構築
物はネコカリシウイルス（ＦＣＶ）抗原またはその抗原性フラグメントをコードする。こ
の種の特定の実施形態では、ＦＣＶ抗原は、強毒全身性ネコカリシウイルス（ＶＳ－ＦＣ
Ｖ）分離株に由来する。他の実施形態では、ＦＣＶ抗原は、古典的（Ｆ９様）ネコカリシ
ウイルス分離株に由来する。さらに他の実施形態では、第２の核酸構築物は、一方は強毒
全身性ネコカリシウイルス分離株に由来し、他方は古典的（Ｆ９様）ネコカリシウイルス
分離株に由来する２つのＦＣＶ抗原をコードする。
の２つ以上のセットを含む。この種の特定の実施形態では、アルファウイルスＲＮＡレプ
リコン粒子の一方のセットは第１の核酸構築物を含み、アルファウイルスＲＮＡレプリコ
ン粒子の他方のセットは第２の核酸構築物を含む。この種の具体的な実施形態では、第１
の核酸構築物はＦｅＬＶ抗原またはその抗原性フラグメントをコードし、第２の核酸構築
物はネコカリシウイルス（ＦＣＶ）抗原またはその抗原性フラグメントをコードする。こ
の種の特定の実施形態では、ＦＣＶ抗原は、強毒全身性ネコカリシウイルス（ＶＳ－ＦＣ
Ｖ）分離株に由来する。他の実施形態では、ＦＣＶ抗原は、古典的（Ｆ９様）ネコカリシ
ウイルス分離株に由来する。さらに他の実施形態では、第２の核酸構築物は、一方は強毒
全身性ネコカリシウイルス分離株に由来し、他方は古典的（Ｆ９様）ネコカリシウイルス
分離株に由来する２つのＦＣＶ抗原をコードする。
なお他の実施形態では、免疫原性組成物は、第１の核酸構築物を含むアルファウイルス
ＲＮＡレプリコン粒子の１つのセットと、第２の核酸構築物を含むアルファウイルスＲＮ
Ａレプリコン粒子の別のセットと、第３の核酸構築物を含むアルファウイルスＲＮＡレプ
リコン粒子の第３のセットとを含む。この種の特定の実施形態では、第１の核酸構築物は
ＦｅＬＶ抗原またはその抗原性フラグメントをコードし、第２の核酸構築物は、強毒全身
性ネコカリシウイルスに由来するネコカリシウイルス（ＦＣＶ）抗原またはその抗原性フ
ラグメントをコードし、第３の核酸構築物は、古典的（Ｆ９様）ネコカリシウイルスに由
来するネコカリシウイルス（ＦＣＶ）抗原またはその抗原性フラグメントをコードする。
ＲＮＡレプリコン粒子の１つのセットと、第２の核酸構築物を含むアルファウイルスＲＮ
Ａレプリコン粒子の別のセットと、第３の核酸構築物を含むアルファウイルスＲＮＡレプ
リコン粒子の第３のセットとを含む。この種の特定の実施形態では、第１の核酸構築物は
ＦｅＬＶ抗原またはその抗原性フラグメントをコードし、第２の核酸構築物は、強毒全身
性ネコカリシウイルスに由来するネコカリシウイルス（ＦＣＶ）抗原またはその抗原性フ
ラグメントをコードし、第３の核酸構築物は、古典的（Ｆ９様）ネコカリシウイルスに由
来するネコカリシウイルス（ＦＣＶ）抗原またはその抗原性フラグメントをコードする。
さらに他の実施形態では、免疫原性組成物は、第１の核酸構築物を含むアルファウイル
スＲＮＡレプリコン粒子の１つのセットと、第２の核酸構築物を含むアルファウイルスＲ
ＮＡレプリコン粒子の別のセットと、第３の核酸構築物を含むアルファウイルスＲＮＡレ
プリコン粒子の第３のセットと、第４の核酸構築物を含むアルファウイルスＲＮＡレプリ
コン粒子の第４のセットとを含む。さらに他の実施形態では、免疫原性組成物は、第１の
核酸構築物を含むアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子のセットと、第２の核酸構築物
を含むアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子の別のセットと、第３の核酸構築物を含む
アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子の第３のセットと、第４の核酸構築物を含むアル
ファウイルスＲＮＡレプリコン粒子の第４のセットと、第５の核酸構築物を含むアルファ
ウイルスＲＮＡレプリコン粒子の第５のセットとを含む。そのような実施形態では、第１
の核酸構築物、第２の核酸構築物、第３の核酸構築物、第４の核酸構築物および第５の核
酸構築物のヌクレオチド配列はいずれも異なる。
スＲＮＡレプリコン粒子の１つのセットと、第２の核酸構築物を含むアルファウイルスＲ
ＮＡレプリコン粒子の別のセットと、第３の核酸構築物を含むアルファウイルスＲＮＡレ
プリコン粒子の第３のセットと、第４の核酸構築物を含むアルファウイルスＲＮＡレプリ
コン粒子の第４のセットとを含む。さらに他の実施形態では、免疫原性組成物は、第１の
核酸構築物を含むアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子のセットと、第２の核酸構築物
を含むアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子の別のセットと、第３の核酸構築物を含む
アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子の第３のセットと、第４の核酸構築物を含むアル
ファウイルスＲＮＡレプリコン粒子の第４のセットと、第５の核酸構築物を含むアルファ
ウイルスＲＮＡレプリコン粒子の第５のセットとを含む。そのような実施形態では、第１
の核酸構築物、第２の核酸構築物、第３の核酸構築物、第４の核酸構築物および第５の核
酸構築物のヌクレオチド配列はいずれも異なる。
したがって、本発明の免疫原性組成物は、非ＦｅＬＶ病原体に対する防御免疫を誘発す
るための少なくとも１つの非ＦｅＬＶ抗原をコードする核酸構築物を含むアルファウイル
スＲＮＡレプリコン粒子を含有することができる。この種の特定の実施形態では、非Ｆｅ
ＬＶ抗原は、ネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）に由来するタンパク質抗原である。他の実
施形態では、非ＦｅＬＶ抗原は、ネコカリシウイルス（ＦＣＶ）に由来するタンパク質抗
原である。さらに他の実施形態では、非ＦｅＬＶ抗原は、ネコニューモウイルス（ＦＰＮ
）に由来するタンパク質抗原である。なお他の実施形態では、非ＦｅＬＶ抗原は、ネコパ
ルボウイルス（ＦＰＶ）に由来するタンパク質抗原である。さらに他の実施形態では、非
ＦｅＬＶ抗原は、ネコ伝染性腹膜炎ウイルス（ＦＩＰＶ）に由来するタンパク質抗原であ
る。なお他の実施形態では、非ＦｅＬＶ抗原は、ネコ免疫不全ウイルスに由来するタンパ
ク質抗原である。なお他の実施形態では、非ＦｅＬＶ抗原は、ボルナ病ウイルス（ＢＤＶ
）に由来するタンパク質抗原である。さらに他の実施形態では、非ＦｅＬＶ抗原は、ネコ
インフルエンザウイルスに由来するタンパク質抗原である。なお他の実施形態では、非Ｆ
ｅＬＶ抗原は、ネコ汎血球減少症ウイルス（ＦＰＬＶ）に由来するタンパク質抗原である
。さらに他の実施形態では、非ＦｅＬＶ抗原は、ネココロナウイルス（ＦＣｏＶ）に由来
するタンパク質抗原である。なお他の実施形態では、非ＦｅＬＶ抗原は、ネコ鼻腔気管炎
ウイルス（ＦＶＲ）に由来するタンパク質抗原である。なお他の実施形態では、非ＦｅＬ
Ｖ抗原は、クラミドフィラ・フェリスに由来するタンパク質抗原である。
るための少なくとも１つの非ＦｅＬＶ抗原をコードする核酸構築物を含むアルファウイル
スＲＮＡレプリコン粒子を含有することができる。この種の特定の実施形態では、非Ｆｅ
ＬＶ抗原は、ネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）に由来するタンパク質抗原である。他の実
施形態では、非ＦｅＬＶ抗原は、ネコカリシウイルス（ＦＣＶ）に由来するタンパク質抗
原である。さらに他の実施形態では、非ＦｅＬＶ抗原は、ネコニューモウイルス（ＦＰＮ
）に由来するタンパク質抗原である。なお他の実施形態では、非ＦｅＬＶ抗原は、ネコパ
ルボウイルス（ＦＰＶ）に由来するタンパク質抗原である。さらに他の実施形態では、非
ＦｅＬＶ抗原は、ネコ伝染性腹膜炎ウイルス（ＦＩＰＶ）に由来するタンパク質抗原であ
る。なお他の実施形態では、非ＦｅＬＶ抗原は、ネコ免疫不全ウイルスに由来するタンパ
ク質抗原である。なお他の実施形態では、非ＦｅＬＶ抗原は、ボルナ病ウイルス（ＢＤＶ
）に由来するタンパク質抗原である。さらに他の実施形態では、非ＦｅＬＶ抗原は、ネコ
インフルエンザウイルスに由来するタンパク質抗原である。なお他の実施形態では、非Ｆ
ｅＬＶ抗原は、ネコ汎血球減少症ウイルス（ＦＰＬＶ）に由来するタンパク質抗原である
。さらに他の実施形態では、非ＦｅＬＶ抗原は、ネココロナウイルス（ＦＣｏＶ）に由来
するタンパク質抗原である。なお他の実施形態では、非ＦｅＬＶ抗原は、ネコ鼻腔気管炎
ウイルス（ＦＶＲ）に由来するタンパク質抗原である。なお他の実施形態では、非ＦｅＬ
Ｖ抗原は、クラミドフィラ・フェリスに由来するタンパク質抗原である。
本発明はさらに、１つ以上の改変された生きた（例えば、弱毒化された）または死んだ
ネコ病原体とともに、ＦｅＬＶに由来する抗原またはその抗原性フラグメントをコードす
るアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子を含む組合せ免疫原性組成物および／またはワ
クチン（多価ワクチン）を提供する。特定の実施形態では、免疫原性組成物は、ＦｅＬＶ
に由来する抗原またはその抗原性フラグメントをコードするアルファウイルスＲＮＡレプ
リコン粒子と組み合わされた改変された生きたまたは死んだクラミドフィラ・フェリスを
含む。他の実施形態では、免疫原性組成物は、ＦｅＬＶに由来する抗原またはその抗原性
フラグメントをコードするアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子と組み合わされた改変
された生きたまたは死んだネコ鼻腔気管炎ウイルス（ＦＶＲ）を含む。なお他の実施形態
では、免疫原性組成物は、ＦｅＬＶに由来する抗原またはその抗原性フラグメントをコー
ドするアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子と組み合わされた改変された生きたまたは
死んだネコカリシウイルス（ＦＣＶ）を含む。さらに他の実施形態では、免疫原性組成物
は、ＦｅＬＶに由来する抗原またはその抗原性フラグメントをコードするアルファウイル
スＲＮＡレプリコン粒子と組み合わされた改変された生きたまたは死んだネコ汎血球減少
症ウイルス（ＦＰＬ）を含む。なお他の実施形態では、免疫原性組成物は、改変された生
きたまたは死んだクラミドフィラ・フェリスと、改変された生きたまたは死んだＦＶＲと
、改変された生きたまたは死んだＦＣＶと、改変された生きたまたは死んだＦＰＬと、Ｆ
ｅＬＶに由来する抗原またはその抗原性フラグメントをコードするアルファウイルスＲＮ
Ａレプリコン粒子とを含む。この種の特定の実施形態では、ＦｅＬＶのネコ抗原はＦｅＬ
Ｖウイルス糖タンパク質（ｇｐ８５）である。特定の実施形態では、ワクチンは、これら
の免疫原性組成物のうちの１つ以上の免疫学的有効量を含む。
ネコ病原体とともに、ＦｅＬＶに由来する抗原またはその抗原性フラグメントをコードす
るアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子を含む組合せ免疫原性組成物および／またはワ
クチン（多価ワクチン）を提供する。特定の実施形態では、免疫原性組成物は、ＦｅＬＶ
に由来する抗原またはその抗原性フラグメントをコードするアルファウイルスＲＮＡレプ
リコン粒子と組み合わされた改変された生きたまたは死んだクラミドフィラ・フェリスを
含む。他の実施形態では、免疫原性組成物は、ＦｅＬＶに由来する抗原またはその抗原性
フラグメントをコードするアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子と組み合わされた改変
された生きたまたは死んだネコ鼻腔気管炎ウイルス（ＦＶＲ）を含む。なお他の実施形態
では、免疫原性組成物は、ＦｅＬＶに由来する抗原またはその抗原性フラグメントをコー
ドするアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子と組み合わされた改変された生きたまたは
死んだネコカリシウイルス（ＦＣＶ）を含む。さらに他の実施形態では、免疫原性組成物
は、ＦｅＬＶに由来する抗原またはその抗原性フラグメントをコードするアルファウイル
スＲＮＡレプリコン粒子と組み合わされた改変された生きたまたは死んだネコ汎血球減少
症ウイルス（ＦＰＬ）を含む。なお他の実施形態では、免疫原性組成物は、改変された生
きたまたは死んだクラミドフィラ・フェリスと、改変された生きたまたは死んだＦＶＲと
、改変された生きたまたは死んだＦＣＶと、改変された生きたまたは死んだＦＰＬと、Ｆ
ｅＬＶに由来する抗原またはその抗原性フラグメントをコードするアルファウイルスＲＮ
Ａレプリコン粒子とを含む。この種の特定の実施形態では、ＦｅＬＶのネコ抗原はＦｅＬ
Ｖウイルス糖タンパク質（ｇｐ８５）である。特定の実施形態では、ワクチンは、これら
の免疫原性組成物のうちの１つ以上の免疫学的有効量を含む。
特定の実施形態では、ＦｅＬＶ抗原はＦｅＬＶ糖タンパク質（ｇｐ８５）である。この
種の具体的な実施形態では、ＦｅＬＶ糖タンパク質ｇｐ８５は、配列番号２のアミノ酸配
列と９５％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含む。この種のさらに具体的な実施形態
では、ＦｅＬＶ糖タンパク質（ｇｐ８５）は、配列番号２のアミノ酸配列を含む。この種
のさらになお具体的な実施形態では、ＦｅＬＶ糖タンパク質（ｇｐ８５）は、配列番号１
または配列番号１０のヌクレオチド配列によってコードされる。関連する実施形態では、
ＦｅＬＶ糖タンパク質ｇｐ７０は、配列番号４のアミノ酸配列と９５％以上の同一性を有
するアミノ酸配列を含む。この種のさらに具体的な実施形態では、ＦｅＬＶ糖タンパク質
（ｇｐ８５）は、配列番号４のアミノ酸配列を含む。この種のさらになお具体的な実施形
態では、ＦｅＬＶ糖タンパク質（ｇｐ７０）は、配列番号３または配列番号１１のヌクレ
オチド配列によってコードされる。
種の具体的な実施形態では、ＦｅＬＶ糖タンパク質ｇｐ８５は、配列番号２のアミノ酸配
列と９５％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含む。この種のさらに具体的な実施形態
では、ＦｅＬＶ糖タンパク質（ｇｐ８５）は、配列番号２のアミノ酸配列を含む。この種
のさらになお具体的な実施形態では、ＦｅＬＶ糖タンパク質（ｇｐ８５）は、配列番号１
または配列番号１０のヌクレオチド配列によってコードされる。関連する実施形態では、
ＦｅＬＶ糖タンパク質ｇｐ７０は、配列番号４のアミノ酸配列と９５％以上の同一性を有
するアミノ酸配列を含む。この種のさらに具体的な実施形態では、ＦｅＬＶ糖タンパク質
（ｇｐ８５）は、配列番号４のアミノ酸配列を含む。この種のさらになお具体的な実施形
態では、ＦｅＬＶ糖タンパク質（ｇｐ７０）は、配列番号３または配列番号１１のヌクレ
オチド配列によってコードされる。
本発明はさらに、本発明の免疫原性組成物を含むワクチンおよび多価ワクチンを含む。
特定の実施形態では、ワクチンは非アジュバントワクチンである。特定の実施形態では、
ワクチンは、ＦｅＬＶに起因する疾患の予防に役立つ。関連する実施形態では、ネコがワ
クチンにより免疫されると、ネコ対象に抗体が誘導される。
特定の実施形態では、ワクチンは非アジュバントワクチンである。特定の実施形態では、
ワクチンは、ＦｅＬＶに起因する疾患の予防に役立つ。関連する実施形態では、ネコがワ
クチンにより免疫されると、ネコ対象に抗体が誘導される。
本発明はまた、ネコ病原体、例えばＦｅＬＶに対してネコを免疫する方法であって、本
発明のワクチンまたは多価の免疫学的有効量をネコに投与することを含む方法を提供する
。特定の実施形態では、ワクチンは筋肉内注射を介して投与される。代替の実施形態では
、ワクチンは皮下注射を介して投与される。他の実施形態では、ワクチンは静脈内注射を
介して投与される。なお他の実施形態では、ワクチンは皮内注射を介して投与される。さ
らに他の実施形態では、ワクチンは経口投与を介して投与される。なお他の実施形態では
、ワクチンは鼻腔内投与を介して投与される。具体的な実施形態では、ネコはイエネコで
ある。
発明のワクチンまたは多価の免疫学的有効量をネコに投与することを含む方法を提供する
。特定の実施形態では、ワクチンは筋肉内注射を介して投与される。代替の実施形態では
、ワクチンは皮下注射を介して投与される。他の実施形態では、ワクチンは静脈内注射を
介して投与される。なお他の実施形態では、ワクチンは皮内注射を介して投与される。さ
らに他の実施形態では、ワクチンは経口投与を介して投与される。なお他の実施形態では
、ワクチンは鼻腔内投与を介して投与される。具体的な実施形態では、ネコはイエネコで
ある。
本発明のワクチンおよび多価ワクチンは、プライマーワクチンおよび／またはブースタ
ーワクチンとして投与することができる。具体的な実施形態では、本発明のワクチンは、
その後の投与を必要とせずに、単回接種ワクチン（１回用量）として投与される。特定の
実施形態では、プライマーワクチンおよびブースターワクチンの両方の投与の場合、プラ
イマーワクチンおよびブースターワクチンは、同一の経路によって投与することができる
。この種の特定の実施形態では、プライマーワクチンおよびブースターワクチンはともに
皮下注射によって投与される。代替の実施形態では、プライマーワクチンおよびブースタ
ーワクチンの両方の投与の場合、プライマーワクチンの投与は１つの経路によって行い、
ブースターワクチンの投与は別の経路によって行うことができる。この種の特定の実施形
態では、プライマーワクチンは皮下注射によって投与することができ、ブースターワクチ
ンは経口投与することができる。
ーワクチンとして投与することができる。具体的な実施形態では、本発明のワクチンは、
その後の投与を必要とせずに、単回接種ワクチン（１回用量）として投与される。特定の
実施形態では、プライマーワクチンおよびブースターワクチンの両方の投与の場合、プラ
イマーワクチンおよびブースターワクチンは、同一の経路によって投与することができる
。この種の特定の実施形態では、プライマーワクチンおよびブースターワクチンはともに
皮下注射によって投与される。代替の実施形態では、プライマーワクチンおよびブースタ
ーワクチンの両方の投与の場合、プライマーワクチンの投与は１つの経路によって行い、
ブースターワクチンの投与は別の経路によって行うことができる。この種の特定の実施形
態では、プライマーワクチンは皮下注射によって投与することができ、ブースターワクチ
ンは経口投与することができる。
本発明はさらに、ＦｅＬＶに対してネコを免疫する方法であって、上記の本発明のワク
チンの免疫学的有効量をネコに注射することを含む方法を提供する。特定の実施形態では
、ワクチンは、例えば、約１×１０４～約１×１０１０以上のＲＰを含むことができる。
さらに特定の実施形態では、ワクチンは、約１×１０５～約１×１０９のＲＰを含むこと
ができる。さらになお特定の実施形態では、ワクチンは、約１×１０６～約１×１０８の
ＲＰを含むことができる。特定の実施形態では、ネコはイエネコである。
チンの免疫学的有効量をネコに注射することを含む方法を提供する。特定の実施形態では
、ワクチンは、例えば、約１×１０４～約１×１０１０以上のＲＰを含むことができる。
さらに特定の実施形態では、ワクチンは、約１×１０５～約１×１０９のＲＰを含むこと
ができる。さらになお特定の実施形態では、ワクチンは、約１×１０６～約１×１０８の
ＲＰを含むことができる。特定の実施形態では、ネコはイエネコである。
特定の実施形態では、本発明のワクチンは、０．０５ｍＬ～３ｍＬの用量で投与される
。さらに特定の実施形態では、投与される用量は、０．１ｍＬ～２ｍＬである。なお一層
特定の実施形態では、投与される用量は、０．２ｍＬ～１．５ｍＬである。さらになお特
定の実施形態では、投与される用量は、０．３～１．０ｍＬである。なお一層特定の実施
形態では、投与される用量は、０．４ｍＬ～０．８ｍＬである。さらに一層特定の実施形
態では、投与される用量は、０．５ｍＬ～１．５ｍＬである。
。さらに特定の実施形態では、投与される用量は、０．１ｍＬ～２ｍＬである。なお一層
特定の実施形態では、投与される用量は、０．２ｍＬ～１．５ｍＬである。さらになお特
定の実施形態では、投与される用量は、０．３～１．０ｍＬである。なお一層特定の実施
形態では、投与される用量は、０．４ｍＬ～０．８ｍＬである。さらに一層特定の実施形
態では、投与される用量は、０．５ｍＬ～１．５ｍＬである。
本発明のこれらおよび他の態様は、以下の詳細な説明を参照することによってさらによ
く理解されるであろう。
く理解されるであろう。
本発明は、改良された安全な非アジュバントＦｅＬＶワクチンを提供する。一態様では
、本発明のワクチンは、ネコ注射部位肉腫を誘発しないが、それでもなお、ＦｅＬＶ感染
によって引き起こされる衰弱性の疾患状態から、不活化全ウイルスアジュバントワクチン
と同様に効果的にワクチン接種対象を保護する。
、本発明のワクチンは、ネコ注射部位肉腫を誘発しないが、それでもなお、ＦｅＬＶ感染
によって引き起こされる衰弱性の疾患状態から、不活化全ウイルスアジュバントワクチン
と同様に効果的にワクチン接種対象を保護する。
したがって、本発明のワクチン組成物は、レシピエントワクチン接種動物の防御免疫の
誘発に役立つ、ネコ白血病ウイルスの１つ以上の株由来の抗原をコードする免疫学的有効
量のベクターを含む。さらに、本発明は、ワクチン接種の信頼性を改善して、ＦｅＬＶに
感染したネコの抗原血症の減少に役立ち、それにより、抗原血症を一過性のものとし、お
よび／または感染の消失をもたらす新しい免疫学的組成物を提供する。本発明の特定の態
様では、ワクチンは、ＦｅＬＶウイルス糖タンパク質（ｇｐ８５）をコードするアルファ
ウイルスＲＮＡレプリコン粒子（ＲＰ）を含む。さらに具体的な実施形態では、ワクチン
は、ベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＶＥＥ）のキャプシドタンパク質および糖タンパク質
を含み、ＦｅＬＶウイルス糖タンパク質（ｇｐ８５）および／またはその抗原性フラグメ
ント（例えば、ｇｐ７０またはｇｐ４５）をコードするアルファウイルスＲＮＡレプリコ
ン粒子（ＲＰ）を含む。さらになお具体的な実施形態では、ワクチンは、ＶＥＥの無毒性
ＴＣ－８３株のキャプシドタンパク質および糖タンパク質を含み、ＦｅＬＶウイルス糖タ
ンパク質（ｇｐ８５）および／またはその抗原性フラグメント（例えば、ｇｐ７０または
ｇｐ４５）をコードするアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子（ＲＰ）を含む。
誘発に役立つ、ネコ白血病ウイルスの１つ以上の株由来の抗原をコードする免疫学的有効
量のベクターを含む。さらに、本発明は、ワクチン接種の信頼性を改善して、ＦｅＬＶに
感染したネコの抗原血症の減少に役立ち、それにより、抗原血症を一過性のものとし、お
よび／または感染の消失をもたらす新しい免疫学的組成物を提供する。本発明の特定の態
様では、ワクチンは、ＦｅＬＶウイルス糖タンパク質（ｇｐ８５）をコードするアルファ
ウイルスＲＮＡレプリコン粒子（ＲＰ）を含む。さらに具体的な実施形態では、ワクチン
は、ベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＶＥＥ）のキャプシドタンパク質および糖タンパク質
を含み、ＦｅＬＶウイルス糖タンパク質（ｇｐ８５）および／またはその抗原性フラグメ
ント（例えば、ｇｐ７０またはｇｐ４５）をコードするアルファウイルスＲＮＡレプリコ
ン粒子（ＲＰ）を含む。さらになお具体的な実施形態では、ワクチンは、ＶＥＥの無毒性
ＴＣ－８３株のキャプシドタンパク質および糖タンパク質を含み、ＦｅＬＶウイルス糖タ
ンパク質（ｇｐ８５）および／またはその抗原性フラグメント（例えば、ｇｐ７０または
ｇｐ４５）をコードするアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子（ＲＰ）を含む。
本発明の別の態様では、ワクチンは、ＦｅＬＶウイルス糖タンパク質（ｇｐ８５）およ
び／またはその抗原性フラグメント（例えば、ｇｐ７０またはｇｐ４５）をコードする裸
のＤＮＡベクターを含む。本発明のワクチンは、アジュバントの非存在下でネコに投与し
、ワクチン接種されたネコをＦｅＬＶに対して保護するのに依然として効果的に役立つこ
とができる。
び／またはその抗原性フラグメント（例えば、ｇｐ７０またはｇｐ４５）をコードする裸
のＤＮＡベクターを含む。本発明のワクチンは、アジュバントの非存在下でネコに投与し
、ワクチン接種されたネコをＦｅＬＶに対して保護するのに依然として効果的に役立つこ
とができる。
本発明をさらに完全に理解するために、以下の定義が提供される。
説明の便宜のための単数形の用語の使用は、決してそのように限定することを意図する
ものではない。したがって、例えば、「ポリペプチド」を含む組成物への言及は、そのよ
うなポリペプチドのうちの１つ以上への言及を含む。さらに、「アルファウイルスＲＮＡ
レプリコン粒子」への言及は、特に指示しない限り、複数のそのようなアルファウイルス
ＲＮＡレプリコン粒子への言及を含む。
ものではない。したがって、例えば、「ポリペプチド」を含む組成物への言及は、そのよ
うなポリペプチドのうちの１つ以上への言及を含む。さらに、「アルファウイルスＲＮＡ
レプリコン粒子」への言及は、特に指示しない限り、複数のそのようなアルファウイルス
ＲＮＡレプリコン粒子への言及を含む。
本明細書で使用される場合、用語「およそ」は、用語「約」と区別なく使用され、ある
値が示された値の５０％以内であること、すなわち、１ミリリットル当たり「およそ」１
×１０８のアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子を含有する組成物が、１ミリリットル
当たり０．５×１０８～１．５×１０８のアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子を含有
することを意味する。
値が示された値の５０％以内であること、すなわち、１ミリリットル当たり「およそ」１
×１０８のアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子を含有する組成物が、１ミリリットル
当たり０．５×１０８～１．５×１０８のアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子を含有
することを意味する。
本明細書で使用される場合、用語「ネコ」は、ネコ科の任意の一員を指す。イエネコ、
純血種および／または雑種のペット用ネコ、および野生のネコはいずれもネコである。
純血種および／または雑種のペット用ネコ、および野生のネコはいずれもネコである。
本明細書で使用される場合、用語「レプリコン」は、それらが存在するならば、細胞培
養物または動物宿主に対して親ウイルスの増殖を成功させることができるであろう１つ以
上の要素（例えば、構造タンパク質のコード配列）を欠く改変されたＲＮＡウイルスゲノ
ムを指す。好適な細胞の状況では、レプリコンはそれ自体を増幅し、１つ以上のサブゲノ
ムＲＮＡ種を生成し得る。
養物または動物宿主に対して親ウイルスの増殖を成功させることができるであろう１つ以
上の要素（例えば、構造タンパク質のコード配列）を欠く改変されたＲＮＡウイルスゲノ
ムを指す。好適な細胞の状況では、レプリコンはそれ自体を増幅し、１つ以上のサブゲノ
ムＲＮＡ種を生成し得る。
本明細書で使用される場合、「ＲＰ」と略される用語「アルファウイルスＲＮＡレプリ
コン粒子」は、例えば、Ｐｕｓｈｋｏら［Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２３９（２）：３８９－４
０１（１９９７）］によって記載されるように、構造タンパク質、例えば、同じくアルフ
ァウイルスに由来するキャプシドおよび糖タンパク質に包み込まれたアルファウイルス由
来ＲＮＡレプリコンである。レプリコンはアルファウイルスの構造成分（例えば、キャプ
シドおよび糖タンパク質）をコードしないため、ＲＰは細胞培養物または動物宿主では（
ヘルパープラスミドまたは類似の成分を用いることなく）増殖することができない。
コン粒子」は、例えば、Ｐｕｓｈｋｏら［Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２３９（２）：３８９－４
０１（１９９７）］によって記載されるように、構造タンパク質、例えば、同じくアルフ
ァウイルスに由来するキャプシドおよび糖タンパク質に包み込まれたアルファウイルス由
来ＲＮＡレプリコンである。レプリコンはアルファウイルスの構造成分（例えば、キャプ
シドおよび糖タンパク質）をコードしないため、ＲＰは細胞培養物または動物宿主では（
ヘルパープラスミドまたは類似の成分を用いることなく）増殖することができない。
用語「非ＦｅＬＶ」は、それぞれの病原体および／または抗原（または免疫原）がＦｅ
ＬＶ病原体およびＦｅＬＶ抗原（または免疫原）のいずれでもなく、非ＦｅＬＶタンパク
質抗原（または免疫原）がＦｅＬＶに由来しないことを意味するように、病原体および／
または抗原（または免疫原）などの用語を修飾するために使用される。
ＬＶ病原体およびＦｅＬＶ抗原（または免疫原）のいずれでもなく、非ＦｅＬＶタンパク
質抗原（または免疫原）がＦｅＬＶに由来しないことを意味するように、病原体および／
または抗原（または免疫原）などの用語を修飾するために使用される。
用語「由来する（ｏｒｉｇｉｎａｔｅ ｆｒｏｍ）」、「由来する（ｏｒｉｇｉｎａｔ
ｅｓ ｆｒｏｍ）」および「由来する（ｏｒｉｇｉｎａｔｉｎｇ ｆｒｏｍ）」は、所与
のタンパク質抗原およびそれを自然にコードする病原体またはその病原体の株に関して区
別なく使用され、本明細書で使用される場合、その所与のタンパク質抗原の未改変および
／または切断アミノ酸配列が、その病原体またはその病原体の株によってコードされてい
ることを意味する。本発明の核酸構築物内では、病原体に由来するタンパク質抗原のコー
ド配列は、それが由来する病原体または病原体の株（自然弱毒株を含む）におけるそのタ
ンパク質抗原の対応する配列に対して、発現されたタンパク質抗原のアミノ酸配列の改変
および／または切断をもたらすように遺伝的に操作され得る。
ｅｓ ｆｒｏｍ）」および「由来する（ｏｒｉｇｉｎａｔｉｎｇ ｆｒｏｍ）」は、所与
のタンパク質抗原およびそれを自然にコードする病原体またはその病原体の株に関して区
別なく使用され、本明細書で使用される場合、その所与のタンパク質抗原の未改変および
／または切断アミノ酸配列が、その病原体またはその病原体の株によってコードされてい
ることを意味する。本発明の核酸構築物内では、病原体に由来するタンパク質抗原のコー
ド配列は、それが由来する病原体または病原体の株（自然弱毒株を含む）におけるそのタ
ンパク質抗原の対応する配列に対して、発現されたタンパク質抗原のアミノ酸配列の改変
および／または切断をもたらすように遺伝的に操作され得る。
本明細書で使用される場合、用語「保護する」、または「保護を提供する」、または「
防御免疫を誘発する」、「疾患の予防に役立つ」、および「保護に役立つ」は、感染の何
らかの兆候からの完全な保護を必要としない。例えば、「保護に役立つ」は、惹起後に、
根底にある感染の症状が少なくとも減少し、および／または症状を引き起こす、根底にあ
る細胞性、生理学的または生化学的な原因または機構のうちの１つ以上が減少および／ま
たは排除されるように、保護が十分であることを意味し得る。これに関連して使用される
場合、「減少した」は、感染の生理学的状態だけでなく、感染の分子状態を含め、感染の
状態に関連することを意味すると理解されたい。
防御免疫を誘発する」、「疾患の予防に役立つ」、および「保護に役立つ」は、感染の何
らかの兆候からの完全な保護を必要としない。例えば、「保護に役立つ」は、惹起後に、
根底にある感染の症状が少なくとも減少し、および／または症状を引き起こす、根底にあ
る細胞性、生理学的または生化学的な原因または機構のうちの１つ以上が減少および／ま
たは排除されるように、保護が十分であることを意味し得る。これに関連して使用される
場合、「減少した」は、感染の生理学的状態だけでなく、感染の分子状態を含め、感染の
状態に関連することを意味すると理解されたい。
本明細書で使用される場合、「ワクチン」は、ネコ（特定の実施形態ではヒトを含むが
、他の実施形態ではヒトに特異的ではない）などの動物に適用するのに適した、水を含有
する液体などの薬学的に許容される担体と典型的に組み合わせられた１つ以上の抗原を含
む組成物であり、動物に投与すると、野生型微生物による感染から生じる疾患からの保護
に最小限に役立つのに十分に強力な、すなわち、疾患の予防、および／または疾患の予防
、改善または治癒に役立つのに十分な強力な免疫応答を誘導する。
、他の実施形態ではヒトに特異的ではない）などの動物に適用するのに適した、水を含有
する液体などの薬学的に許容される担体と典型的に組み合わせられた１つ以上の抗原を含
む組成物であり、動物に投与すると、野生型微生物による感染から生じる疾患からの保護
に最小限に役立つのに十分に強力な、すなわち、疾患の予防、および／または疾患の予防
、改善または治癒に役立つのに十分な強力な免疫応答を誘導する。
本明細書で使用される場合、多価ワクチンとは、２つ以上の異なる抗原を含むワクチン
である。この種の特定の実施形態では、多価ワクチンは、２つ以上の異なる病原体に対し
てレシピエントの免疫系を刺激する。
である。この種の特定の実施形態では、多価ワクチンは、２つ以上の異なる病原体に対し
てレシピエントの免疫系を刺激する。
用語「アジュバント」および「免疫刺激剤」は、本明細書では区別なく使用され、免疫
系の刺激を引き起こす１つ以上の物質として定義される。これに関連して、アジュバント
は、１つ以上のワクチン抗原／分離株に対する免疫応答を増強するために使用される。し
たがって、「アジュバント」は、特定の抗原に対する免疫応答を非特異的に増加させ、ひ
いては、任意の所与のワクチンに必要な抗原の量、および／または目的の抗原に対する適
切な免疫応答をもたらすために必要な注射の頻度を減少させる薬剤である。これに関連し
て、アジュバントは、１つ以上のワクチン抗原／分離株に対する免疫応答を増強するため
に使用される。Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｅｌｉｎｅ Ｐｒ
ａｃｔｉｔｉｏｎｅｒｓ Ｆｅｌｉｎｅ Ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ
ｓは、非アジュバントＦｅＬＶワクチンの使用を提案している［ＡＡＦＰ Ｆｅｌｉｎｅ
Ａｄｖｉｓｏｒｙ Ｐａｎｅｌ，１５：７８５－８０８（２０１３）］。
系の刺激を引き起こす１つ以上の物質として定義される。これに関連して、アジュバント
は、１つ以上のワクチン抗原／分離株に対する免疫応答を増強するために使用される。し
たがって、「アジュバント」は、特定の抗原に対する免疫応答を非特異的に増加させ、ひ
いては、任意の所与のワクチンに必要な抗原の量、および／または目的の抗原に対する適
切な免疫応答をもたらすために必要な注射の頻度を減少させる薬剤である。これに関連し
て、アジュバントは、１つ以上のワクチン抗原／分離株に対する免疫応答を増強するため
に使用される。Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｅｌｉｎｅ Ｐｒ
ａｃｔｉｔｉｏｎｅｒｓ Ｆｅｌｉｎｅ Ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ
ｓは、非アジュバントＦｅＬＶワクチンの使用を提案している［ＡＡＦＰ Ｆｅｌｉｎｅ
Ａｄｖｉｓｏｒｙ Ｐａｎｅｌ，１５：７８５－８０８（２０１３）］。
本明細書で使用される場合、「非アジュバントワクチン」は、アジュバントを含有しな
いワクチンまたは多価ワクチンである。
いワクチンまたは多価ワクチンである。
本明細書で使用される場合、用語「薬学的に許容される」は、その修飾された名詞が医
薬品に使用するのに適切であることを意味するように形容詞的に使用される。用語「薬学
的に許容される」は、例えば、医薬品ワクチン中の賦形剤を説明するために使用される場
合、組成物の他の成分と適合し、意図されるレシピエント動物、例えばネコに不都合なほ
どに有害ではないとして賦形剤を特徴付ける。
薬品に使用するのに適切であることを意味するように形容詞的に使用される。用語「薬学
的に許容される」は、例えば、医薬品ワクチン中の賦形剤を説明するために使用される場
合、組成物の他の成分と適合し、意図されるレシピエント動物、例えばネコに不都合なほ
どに有害ではないとして賦形剤を特徴付ける。
非経口投与」には、皮下注射、粘膜下注射、静脈内注射、筋肉内注射、皮内注射および
注入が含まれる。
注入が含まれる。
本明細書で使用される場合、特定のタンパク質（例えば、タンパク質抗原）に関する用
語「抗原性フラグメント」は、抗原性である、すなわち免疫系の抗原認識分子、例えば、
免疫グロブリン（抗体）またはＴ細胞抗原受容体と特異的に相互作用することができる、
そのタンパク質のフラグメントである。例えば、ＦｅＬＶウイルス糖タンパク質（ｇｐ８
５）の抗原性フラグメントは、抗原性であるｇｐ８５タンパク質のフラグメントである。
好ましくは、本発明の抗原性フラグメントは、抗体および／またはＴ細胞受容体認識に対
して免疫優性である。特定の実施形態では、所与のタンパク質抗原に関する抗原性フラグ
メントは、全長タンパク質の抗原性の少なくとも２５％を保持する、そのタンパク質のフ
ラグメントである。好ましい実施形態では、抗原性フラグメントは、全長タンパク質の抗
原性の少なくとも５０％を保持する。さらに好ましい実施形態では、抗原性フラグメント
は、全長タンパク質の抗原性の少なくとも７５％を保持する。抗原性フラグメントは、２
０アミノ酸程度の小さなものである場合もあれば、極端な場合、全長タンパク質から１つ
のアミノ酸だけが失われている大きなフラグメントである場合もある。特定の実施形態で
は、抗原性フラグメントは、２５～１５０のアミノ酸残基を含む。他の実施形態では、抗
原性フラグメントは、５０～２５０のアミノ酸残基を含む。ｇｐ４５糖タンパク質および
ｇｐ７０糖タンパク質は、ｇｐ８５糖タンパク質の抗原性フラグメントである。
語「抗原性フラグメント」は、抗原性である、すなわち免疫系の抗原認識分子、例えば、
免疫グロブリン（抗体）またはＴ細胞抗原受容体と特異的に相互作用することができる、
そのタンパク質のフラグメントである。例えば、ＦｅＬＶウイルス糖タンパク質（ｇｐ８
５）の抗原性フラグメントは、抗原性であるｇｐ８５タンパク質のフラグメントである。
好ましくは、本発明の抗原性フラグメントは、抗体および／またはＴ細胞受容体認識に対
して免疫優性である。特定の実施形態では、所与のタンパク質抗原に関する抗原性フラグ
メントは、全長タンパク質の抗原性の少なくとも２５％を保持する、そのタンパク質のフ
ラグメントである。好ましい実施形態では、抗原性フラグメントは、全長タンパク質の抗
原性の少なくとも５０％を保持する。さらに好ましい実施形態では、抗原性フラグメント
は、全長タンパク質の抗原性の少なくとも７５％を保持する。抗原性フラグメントは、２
０アミノ酸程度の小さなものである場合もあれば、極端な場合、全長タンパク質から１つ
のアミノ酸だけが失われている大きなフラグメントである場合もある。特定の実施形態で
は、抗原性フラグメントは、２５～１５０のアミノ酸残基を含む。他の実施形態では、抗
原性フラグメントは、５０～２５０のアミノ酸残基を含む。ｇｐ４５糖タンパク質および
ｇｐ７０糖タンパク質は、ｇｐ８５糖タンパク質の抗原性フラグメントである。
本明細書で使用される場合、両配列のアミノ酸残基が同一である場合、１つのアミノ酸
配列は、第２のアミノ酸配列に対して１００％「同一」であるか、１００％の「同一性」
を有する。したがって、２つのアミノ酸配列のアミノ酸残基の５０％が同一である場合、
アミノ酸配列は、第２のアミノ酸配列と５０％「同一」である。配列比較は、所与のタン
パク質、例えば、比較されるタンパク質、またはポリペプチドの一部に含まれるアミノ酸
残基の連続したブロックに対して行われる。特定の実施形態では、普通なら２つのアミノ
酸配列間の対応を変更する可能性がある選択された欠失または挿入が考慮に入れられる。
配列は、第２のアミノ酸配列に対して１００％「同一」であるか、１００％の「同一性」
を有する。したがって、２つのアミノ酸配列のアミノ酸残基の５０％が同一である場合、
アミノ酸配列は、第２のアミノ酸配列と５０％「同一」である。配列比較は、所与のタン
パク質、例えば、比較されるタンパク質、またはポリペプチドの一部に含まれるアミノ酸
残基の連続したブロックに対して行われる。特定の実施形態では、普通なら２つのアミノ
酸配列間の対応を変更する可能性がある選択された欠失または挿入が考慮に入れられる。
本明細書で使用される場合、ヌクレオチドおよびアミノ酸配列のパーセント同一性は、
アライメントのデフォルトパラメーター、および同一性のためのデフォルトパラメーター
とともに、Ｃ，ＭａｃＶｅｃｔｏｒ（ＭａｃＶｅｃｔｏｒ，Ｉｎｃ．Ｃａｒｙ，ＮＣ ２
７５１９），Ｖｅｃｔｏｒ ＮＴＩ（Ｉｎｆｏｒｍａｘ，Ｉｎｃ ＭＤ），Ｏｘｆｏｒｄ
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｒｏｕｐ ＰＬＣ（１９９６）およびＣｌｕｓｔａｌ Ｗアル
ゴリズムを使用して決定することができる。これらの市販のプログラムは、同じまたは類
似のデフォルトパラメーターを使用して配列類似性を決定するために使用することもでき
る。あるいは、例えば、デフォルトパラメーターを使用するＧＣＧ（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ
Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｐｒｏｇｒａｍ Ｍａｎｕａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ＧＣ
Ｇ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ７，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）のパ
イルアッププログラムを使用して、デフォルトのフィルター条件下でＡｄｖａｎｃｅｄ
Ｂｌａｓｔ検索を使用することができる。
アライメントのデフォルトパラメーター、および同一性のためのデフォルトパラメーター
とともに、Ｃ，ＭａｃＶｅｃｔｏｒ（ＭａｃＶｅｃｔｏｒ，Ｉｎｃ．Ｃａｒｙ，ＮＣ ２
７５１９），Ｖｅｃｔｏｒ ＮＴＩ（Ｉｎｆｏｒｍａｘ，Ｉｎｃ ＭＤ），Ｏｘｆｏｒｄ
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｒｏｕｐ ＰＬＣ（１９９６）およびＣｌｕｓｔａｌ Ｗアル
ゴリズムを使用して決定することができる。これらの市販のプログラムは、同じまたは類
似のデフォルトパラメーターを使用して配列類似性を決定するために使用することもでき
る。あるいは、例えば、デフォルトパラメーターを使用するＧＣＧ（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ
Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｐｒｏｇｒａｍ Ｍａｎｕａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ＧＣ
Ｇ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ７，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）のパ
イルアッププログラムを使用して、デフォルトのフィルター条件下でＡｄｖａｎｃｅｄ
Ｂｌａｓｔ検索を使用することができる。
本明細書で使用される場合、用語「不活化」微生物は、用語「死んだ」微生物と区別な
く使用される。本発明の目的では、「不活化」微生物とは、動物に免疫応答を誘導するこ
とができるが、動物に感染することができない生物である。本発明の抗原（例えば、不活
化ネコ汎血球減少症ウイルス）は、バイナリーエチレンイミン、ホルマリン、ベータプロ
ピオラクトン、チメロサールからなる群から選択される薬剤、または熱によって不活化さ
れてもよい。特定の実施形態では、本発明のＲＰと組み合わされた不活化ネコカリシウイ
ルス分離株は、バイナリーエチレンイミンによって不活化される。
く使用される。本発明の目的では、「不活化」微生物とは、動物に免疫応答を誘導するこ
とができるが、動物に感染することができない生物である。本発明の抗原（例えば、不活
化ネコ汎血球減少症ウイルス）は、バイナリーエチレンイミン、ホルマリン、ベータプロ
ピオラクトン、チメロサールからなる群から選択される薬剤、または熱によって不活化さ
れてもよい。特定の実施形態では、本発明のＲＰと組み合わされた不活化ネコカリシウイ
ルス分離株は、バイナリーエチレンイミンによって不活化される。
本発明のアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子は、凍結乾燥され、滅菌水希釈剤によ
って再水和されてもよい。一方、アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子を別個に保存す
るが、投与前に他のワクチン成分と混合することを意図する場合、アルファウイルスＲＮ
Ａレプリコン粒子は、これらの成分の安定化溶液、例えば高スクロース溶液中で保存する
ことができる。
って再水和されてもよい。一方、アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子を別個に保存す
るが、投与前に他のワクチン成分と混合することを意図する場合、アルファウイルスＲＮ
Ａレプリコン粒子は、これらの成分の安定化溶液、例えば高スクロース溶液中で保存する
ことができる。
本発明のワクチンは、静脈内、筋肉内、皮下、経口、鼻腔内、皮内および／または腹腔
内ワクチン接種を含む任意の標準的な経路によって容易に投与することができる。当業者
であれば、ワクチン組成物が好ましくは各種のレシピエント動物および投与経路に対して
適切に製剤化されることを理解するであろう。
内ワクチン接種を含む任意の標準的な経路によって容易に投与することができる。当業者
であれば、ワクチン組成物が好ましくは各種のレシピエント動物および投与経路に対して
適切に製剤化されることを理解するであろう。
したがって、本発明はまた、ＦｅＬＶおよび／または他のネコ病原体に対してネコを免
疫する方法を提供する。そのような方法の１つは、本発明のワクチンの免疫学的有効量を
ネコに注射することを含み、その結果、ネコは適切なＦｅＬＶ抗体を産生する。
疫する方法を提供する。そのような方法の１つは、本発明のワクチンの免疫学的有効量を
ネコに注射することを含み、その結果、ネコは適切なＦｅＬＶ抗体を産生する。
多価ワクチン
本発明はまた、多価ワクチンを提供する。例えば、ネコ用ワクチンに有用なタンパク質
抗原もしくはその抗原性フラグメントのコード配列、またはタンパク質抗原のそのような
コード配列の組合せは、ワクチン中のＦｅＬＶ［例えば、ＦｅＬＶウイルス糖タンパク質
（ｇｐ８５）］のネコ抗原をコードするものとして、アルファウイルスＲＮＡレプリコン
粒子（ＲＰ）に付加するか、同じＲＰ中で組み合わせることができる。したがって、その
ような多価ワクチンは本発明に含まれる。
本発明はまた、多価ワクチンを提供する。例えば、ネコ用ワクチンに有用なタンパク質
抗原もしくはその抗原性フラグメントのコード配列、またはタンパク質抗原のそのような
コード配列の組合せは、ワクチン中のＦｅＬＶ［例えば、ＦｅＬＶウイルス糖タンパク質
（ｇｐ８５）］のネコ抗原をコードするものとして、アルファウイルスＲＮＡレプリコン
粒子（ＲＰ）に付加するか、同じＲＰ中で組み合わせることができる。したがって、その
ような多価ワクチンは本発明に含まれる。
そのようなタンパク質抗原のうちの１つ以上が由来し得る病原体の例には、ネコ鼻腔気
管炎ウイルス（ＦＶＲ）、ネコカリシウイルス（ＦＣＶ）、ネコ汎血球減少症ウイルス（
ＦＰＬ）ネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）、他のＦｅＬＶ株、ネコパルボウイルス（ＦＰ
Ｖ）、ネコ伝染性腹膜炎ウイルス（ＦＩＰＶ）、ネコ免疫不全ウイルス、ボルナ病ウイル
ス（ＢＤＶ）、狂犬病ウイルス、ネコインフルエンザウイルス、イヌインフルエンザウイ
ルス、トリインフルエンザ、イヌニューモウイルス、ネコニューモウイルス、クラミドフ
ィラ・フェリス（ＦＫＡクラミジア・シタッシ（ＦＫＡ Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｓｉｔ
ｔａｃｉ））、ボルデテラ・ブロンキセプチカ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉ
ｓｅｐｔｉｃａ）およびバルトネラ（Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａ）属（例えば、Ｂ．ヘンセラ
（Ｂ．ｈｅｎｓｅｌａｅ））が挙げられる。特定の実施形態では、これらのネコ病原体ま
たはイヌ病原体のうちの１つ以上に由来するキャプシドタンパク質または類似タンパク質
のコード配列をＦｅＬＶ抗原と同じＲＰに挿入することができる。あるいは、またはそれ
と組み合わせて、これらのネコ病原体またはイヌ病原体のうちの１つ以上に由来するキャ
プシドタンパク質または類似タンパク質のコード配列を１つ以上の他のＲＰに挿入するこ
とができ、これをワクチン中で、ＦｅＬＶ抗原をコードするＲＰと組み合わせることがで
きる。
管炎ウイルス（ＦＶＲ）、ネコカリシウイルス（ＦＣＶ）、ネコ汎血球減少症ウイルス（
ＦＰＬ）ネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）、他のＦｅＬＶ株、ネコパルボウイルス（ＦＰ
Ｖ）、ネコ伝染性腹膜炎ウイルス（ＦＩＰＶ）、ネコ免疫不全ウイルス、ボルナ病ウイル
ス（ＢＤＶ）、狂犬病ウイルス、ネコインフルエンザウイルス、イヌインフルエンザウイ
ルス、トリインフルエンザ、イヌニューモウイルス、ネコニューモウイルス、クラミドフ
ィラ・フェリス（ＦＫＡクラミジア・シタッシ（ＦＫＡ Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｓｉｔ
ｔａｃｉ））、ボルデテラ・ブロンキセプチカ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉ
ｓｅｐｔｉｃａ）およびバルトネラ（Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａ）属（例えば、Ｂ．ヘンセラ
（Ｂ．ｈｅｎｓｅｌａｅ））が挙げられる。特定の実施形態では、これらのネコ病原体ま
たはイヌ病原体のうちの１つ以上に由来するキャプシドタンパク質または類似タンパク質
のコード配列をＦｅＬＶ抗原と同じＲＰに挿入することができる。あるいは、またはそれ
と組み合わせて、これらのネコ病原体またはイヌ病原体のうちの１つ以上に由来するキャ
プシドタンパク質または類似タンパク質のコード配列を１つ以上の他のＲＰに挿入するこ
とができ、これをワクチン中で、ＦｅＬＶ抗原をコードするＲＰと組み合わせることがで
きる。
さらに、１つ以上の他の生きた弱毒ウイルス分離株、例えば、他の生きた弱毒ＦＣＶ株
、生きた弱毒ネコヘルペスウイルスおよび／または生きた弱毒ネコパルボウイルスおよび
／または生きた弱毒ネコ白血病ウイルスおよび／または生きた弱毒ネコ伝染性腹膜炎ウイ
ルスおよび／または生きた弱毒ネコ免疫不全ウイルスおよび／または生きた弱毒ボルナ病
ウイルスおよび／または生きた弱毒狂犬病ウイルスおよび／または生きた弱毒ネコインフ
ルエンザウイルスおよび／または生きた弱毒イヌインフルエンザウイルスおよび／または
生きた弱毒トリインフルエンザおよび／または生きた弱毒イヌニューモウイルスおよび／
または生きた弱毒ネコニューモウイルスとともに、ＦｅＬＶのネコ抗原［例えば、ＦｅＬ
Ｖウイルス糖タンパク質（ｇｐ８５）］をコードするアルファウイルスＲＮＡレプリコン
粒子（ＲＰ）を加えることができる。さらに、生きた弱毒クラミドフィラ・フェリスおよ
び／または生きた弱毒ボルデテラ・ブロンキセプチカおよび／または生きた弱毒バルトネ
ラ属（例えば、Ｂ．ヘンセラ）もそのような多価ワクチンに含めることができる。
、生きた弱毒ネコヘルペスウイルスおよび／または生きた弱毒ネコパルボウイルスおよび
／または生きた弱毒ネコ白血病ウイルスおよび／または生きた弱毒ネコ伝染性腹膜炎ウイ
ルスおよび／または生きた弱毒ネコ免疫不全ウイルスおよび／または生きた弱毒ボルナ病
ウイルスおよび／または生きた弱毒狂犬病ウイルスおよび／または生きた弱毒ネコインフ
ルエンザウイルスおよび／または生きた弱毒イヌインフルエンザウイルスおよび／または
生きた弱毒トリインフルエンザおよび／または生きた弱毒イヌニューモウイルスおよび／
または生きた弱毒ネコニューモウイルスとともに、ＦｅＬＶのネコ抗原［例えば、ＦｅＬ
Ｖウイルス糖タンパク質（ｇｐ８５）］をコードするアルファウイルスＲＮＡレプリコン
粒子（ＲＰ）を加えることができる。さらに、生きた弱毒クラミドフィラ・フェリスおよ
び／または生きた弱毒ボルデテラ・ブロンキセプチカおよび／または生きた弱毒バルトネ
ラ属（例えば、Ｂ．ヘンセラ）もそのような多価ワクチンに含めることができる。
さらに、１つ以上の他の死んだウイルス分離株、例えば、死んだＦＣＶ株および／また
は死んだネコヘルペスウイルスおよび／または死んだネコパルボウイルスおよび／または
死んだネコ白血病ウイルスおよび／または死んだネコ伝染性腹膜炎ウイルスおよび／また
は死んだネコ免疫不全ウイルスおよび／または死んだボルナ病ウイルスおよび／または死
んだ狂犬病ウイルスおよび／または死んだネコインフルエンザウイルスおよび／または死
んだイヌインフルエンザウイルスおよび／または死んだトリインフルエンザウイルスおよ
び／または死んだイヌニューモウイルスおよび／または死んだネコニューモウイルスとと
もに、ＦｅＬＶのネコ抗原［例えば、ＦｅＬＶウイルス糖タンパク質（ｇｐ８５）］をコ
ードするアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子（ＲＰ）を加えることができる。さらに
、クラミドフィラ・フェリスおよび／またはボルデテラ・ブロンキセプチカおよび／また
はバルトネラ属（例えば、Ｂ．ヘンセラ）のバクテリンもそのような多価ワクチンに含め
ることができる。
は死んだネコヘルペスウイルスおよび／または死んだネコパルボウイルスおよび／または
死んだネコ白血病ウイルスおよび／または死んだネコ伝染性腹膜炎ウイルスおよび／また
は死んだネコ免疫不全ウイルスおよび／または死んだボルナ病ウイルスおよび／または死
んだ狂犬病ウイルスおよび／または死んだネコインフルエンザウイルスおよび／または死
んだイヌインフルエンザウイルスおよび／または死んだトリインフルエンザウイルスおよ
び／または死んだイヌニューモウイルスおよび／または死んだネコニューモウイルスとと
もに、ＦｅＬＶのネコ抗原［例えば、ＦｅＬＶウイルス糖タンパク質（ｇｐ８５）］をコ
ードするアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子（ＲＰ）を加えることができる。さらに
、クラミドフィラ・フェリスおよび／またはボルデテラ・ブロンキセプチカおよび／また
はバルトネラ属（例えば、Ｂ．ヘンセラ）のバクテリンもそのような多価ワクチンに含め
ることができる。
また、本発明は、本明細書に開示される特定の構成、プロセス工程および材料に限定さ
れず、したがって、構成、プロセス工程および材料はいくらか変動し得ることを理解され
たい。
れず、したがって、構成、プロセス工程および材料はいくらか変動し得ることを理解され
たい。
本発明の範囲は添付の特許請求の範囲およびその均等物によってのみ限定されるため、
本明細書で使用される用語は特定の実施形態を説明する目的のみのために使用され、限定
することを意図しないことも理解されたい。
本明細書で使用される用語は特定の実施形態を説明する目的のみのために使用され、限定
することを意図しないことも理解されたい。
配列
ネコ白血病ウイルスエンベロープ糖タンパク質（ｇｐ８５）配列番号１
ａｔｇｇａｇｔｃａｃｃａａｃａｃａｃｃｃｔａａａｃｃｔｔｃｔａａａｇａｃａａａ
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ネコ白血病ウイルスエンベロープ糖タンパク質（ｇｐ８５）配列番号２
ＭＥＳＰＴＨＰＫＰＳＫＤＫＴＬＳＷＮＬＡＦＬＶＧＩＬＦＴＩＤＩＧＭＡＮＰＳＰＨ
ＱＩＹＮＶＴＷＶＩＴＮＶＱＴＮＴＱＡＮＡＴ
ＳＭＬＧＴＬＴＤＡＹＰＴＬＨＶＤＬＣＤＬＶＧＤＴＷＥＰＩＶＬＮＰＴＮＶＫＨＧＡ
ＲＹＳＳＳＫＹＧＣＫＴＴＤＲＫＫＱＱＱＴＹ
ＰＦＹＶＣＰＧＨＡＰＳＬＧＰＫＧＴＨＣＧＧＡＱＤＧＦＣＡＡＷＧＣＥＴＴＧＥＡＷ
ＷＫＰＴＳＳＷＤＹＩＴＶＫＲＧＳＳＱＤＮＳ
ＣＥＧＫＣＮＰＬＶＬＱＦＴＱＫＧＲＱＡＳＷＤＧＰＫＭＷＧＬＲＬＹＲＴＧＹＤＰＩ
ＡＬＦＴＶＳＲＱＶＳＴＩＴＰＰＱＡＭＧＰＮ
ＬＶＬＰＤＱＫＰＰＳＲＱＳＱＴＧＳＫＶＡＴＱＲＰＱＴＮＥＳＡＰＲＳＶＡＰＴＴＭ
ＧＰＫＲＩＧＴＧＤＲＬＩＮＬＶＱＧＴＹＬＡ
ＬＮＡＴＤＰＮＫＴＫＤＣＷＬＣＬＶＳＲＰＰＹＹＥＧＩＡＩＬＧＮＹＳＮＱＴＮＰＰ
ＰＳＣＬＳＴＰＱＨＫＬＴＩＳＥＶＳＧＱＧＭ
ＣＩＧＴＶＰＫＴＨＱＡＬＣＮＫＴＱＱＧＨＴＧＡＨＹＬＡＡＰＮＧＴＹＷＡＣＮＴＧ
ＬＴＰＣＩＳＭＡＶＬＮＷＴＳＤＦＣＶＬＩＥ
ＬＷＰＲＶＴＹＨＱＰＥＹＶＹＴＨＦＡＫＡＶＲＦＲＲＥＰＩＳＬＴＶＡＬＭＬＧＧＬ
ＴＶＧＧＩＡＡＧＶＧＴＧＴＫＡＬＬＥＴＡＱ
ＦＲＱＬＱＭＡＭＨＴＤＩＱＡＬＥＥＳＩＳＡＬＥＫＳＬＴＳＬＳＥＶＶＬＱＮＲＲＧ
ＬＤＩＬＦＬＱＥＧＧＬＣＡＡＬＫＥＥＣＣＦ
ＹＡＤＨＴＧＬＶＲＤＮＭＡＫＬＲＥＲＬＫＱＲＱＱＬＦＤＳＱＱＧＷＦＥＧＷＦＮＫ
ＳＰＷＦＴＴＬＩＳＳＩＭＧＰＬＬＩＬＬＬＩ
ＬＬＦＧＰＣＩＬＮＲＬＶＱＦＶＫＤＲＩＳＶＶＱＡＬＩＬＴＱＱＹＱＱＩＫＱＹＤＰ
ＤＲＰ＊
ネコ白血病ウイルスエンベロープ糖タンパク質（ｇｐ８５）配列番号１０
ａｕｇｇａｇｕｃａｃｃａａｃａｃａｃｃｃｕａａａｃｃｕｕｃｕａａａｇａｃａａａ
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ｇｕｇｇａａｇｃｃｕａｃｃｕｃａｕｃｕｕｇｇｇａｃｕａｃａｕｕａｃｕｇｕｇａａ
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ｕｃｇｕｇｕｃｕｇａｇｃａｃｃｃｃｃｃａｇｃａｃａａｇｃｕｕａｃｕａｕｕｕｃａ
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ｕｃａａｃａａｇｇｇｃａｃａｃｕｇｇａｇｃｕｃａｕｕａｕｃ
ｕｃｇｃｃｇｃａｃｃｕａａｃｇｇｇａｃｃｕａｃｕｇｇｇｃｕｕｇｃａａｕａｃｕｇ
ｇａｕｕｇａｃｃｃｃｇｕｇｕａｕｃｕｃｕａｕｇｇｃｃｇｕｇ
ｃｕｇａａｕｕｇｇａｃｕｕｃｃｇａｃｕｕｃｕｇｃｇｕｇｃｕｕａｕｕｇａｇｃｕｕ
ｕｇｇｃｃｕａｇａｇｕｇａｃａｕａｃｃａｕｃａｇｃｃｕｇａ
ｇｕａｃｇｕｃｕａｕａｃｃｃａｕｕｕｃｇｃｃａａｇｇｃａｇｕｃａｇａｕｕｃｃｇ
ｇｃｇｇｇａｇｃｃｕａｕｃｕｃｃｃｕｇａｃｕｇｕｇｇｃｃｕ
ｕｇａｕｇｃｕｃｇｇｕｇｇａｃｕｇａｃａｇｕｇｇｇａｇｇａａｕｕｇｃａｇｃｕｇ
ｇａｇｕｃｇｇａａｃｕｇｇａａｃｃａａｇｇｃｃｃｕｇｃｕｃ
ｇａａａｃｕｇｃｕｃａｇｕｕｃｃｇｇｃａｇｃｕｇｃａｇａｕｇｇｃｃａｕｇｃａｃ
ａｃｕｇａｃａｕｃｃａｇｇｃｕｃｕｇｇａｇｇａａｕｃａａｕ
ｕｕｃａｇｃｃｃｕｕｇａｇａａａａｇｃｕｕｇａｃｃｕｃｇｃｕｇｕｃｕｇａａｇｕ
ｇｇｕｃｃｕｃｃａａａａｃａｇｇｃｇｃｇｇｕｕｕｇｇａｃａ
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ｃｕｃｕｃａｇｃａｇｇｇａｕｇｇｕｕｃｇａｇｇｇｃｕｇｇｕｕｕａａｃａａｇａｇ
ｃｃｃａｕｇｇｕｕｕａｃｃａｃｕｃｕｇａｕｃｕｃｕｕｃａａ
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ｕｃｇｇａｃｃｇｕｇｕａｕｕｃｕｃａａｃａｇｇｃｕｇｇｕｇ
ｃａｇｕｕｕｇｕｃａａｇｇａｃａｇａａｕｃｕｃｇｇｕｇｇｕｃｃａｇｇｃｃｃｕｇ
ａｕｕｃｕｕａｃｕｃａｇｃａｇｕａｕｃａｇｃａｇａｕｕａａ
ｇｃａｇｕａｃｇａｃｃｃｃｇａｕｃｇｇｃｃｕｕｇａ
ネコ白血病ウイルスエンベロープ糖タンパク質（ｇｐ７０）配列番号３
ａａｔｃｃｔａｇｔｃｃａｃａｃｃａａａｔａｔａｔａａｔｇｔａａｃｔｔｇｇｇｔａ
ａｔａａｃｃａａｔｇｔａｃａａａｃｔａａｃａｃｃ
ｃａａｇｃｔａａｃｇｃｃａｃｃｔｃｔａｔｇｔｔａｇｇａａｃｃｔｔａａｃｃｇａｔ
ｇｃｃｔａｃｃｃｔａｃｃｃｔａｃａｔｇｔｔｇａｃ
ｔｔａｔｇｔｇａｃｃｔａｇｔｇｇｇａｇａｃａｃｃｔｇｇｇａａｃｃｔａｔａｇｔｃ
ｃｔａａａｃｃｃａａｃｃａａｔｇｔａａａａｃａｃ
ｇｇｇｇｃａｃｇｔｔａｃｔｃｃｔｃｃｔｃａａａａｔａｔｇｇａｔｇｔａａａａｃｔ
ａｃａｇａｔａｇａａａａａａａｃａｇｃａａｃａｇ
ａｃａｔａｃｃｃｃｔｔｔｔａｃｇｔｃｔｇｃｃｃｃｇｇａｃａｔｇｃｃｃｃｃｔｃｇ
ｔｔｇｇｇｇｃｃａａａｇｇｇａａｃａｃａｔｔｇｔ
ｇｇａｇｇｇｇｃａｃａａｇａｔｇｇｇｔｔｔｔｇｔｇｃｃｇｃａｔｇｇｇｇａｔｇｔ
ｇａｇａｃｃａｃｃｇｇａｇａａｇｃｔｔｇｇｔｇｇ
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ｇｇｇａｇｔａｇｔｃａｇｇａｃａａｔａｇｃｔｇｔ
ｇａｇｇｇａａａａｔｇｃａａｃｃｃｃｃｔｇｇｔｔｔｔｇｃａｇｔｔｃａｃｃｃａｇ
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ｇｇａｃｃｔａａｇａｔｇｔｇｇｇｇａｔｔｇｃｇａｃｔａｔａｃｃｇｔａｃａｇｇａ
ｔａｔｇａｃｃｃｔａｔｃｇｃｔｔｔａｔｔｃａｃｇ
ｇｔｇｔｃｃｃｇｇｃａｇｇｔａｔｃａａｃｃａｔｔａｃｇｃｃｇｃｃｔｃａｇｇｃａ
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ａｃｇａａｔｇａａａｇｃｇｃｃｃｃａａｇｇｔｃｔｇｔｔｇｃｃｃｃｃａｃｃａｃｃ
ａｔｇｇｇｔｃｃｃａａａｃｇｇａｔｔｇｇｇａｃｃ
ｇｇａｇａｔａｇｇｔｔａａｔａａａｔｔｔａｇｔａｃａａｇｇｇａｃａｔａｃｃｔａ
ｇｃｃｔｔａａａｔｇｃｃａｃｃｇａｃｃｃｃａａｃ
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ｔｔａｇｇｔａａｃｔａｃａｇｃａａｃｃａａａｃａａａｃｃｃｃｃｃｃｃｃａｔｃｃ
ｔｇｃｃｔａｔｃｔａｃｔｃｃｇｃａａｃａｃａａａ
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ネコ白血病ウイルスエンベロープ糖タンパク質（ｇｐ７０）配列番号４
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ネコ白血病ウイルスエンベロープ糖タンパク質（ｇｐ７０）配列番号１１
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ネコカリシウイルス（ＶＳ－ＦＣＶ）キャプシド（配列番号５）
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ネコカリシウイルス（ＶＳ－ＦＣＶ）キャプシド（配列番号６）
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ネコカリシウイルス（ＶＳ－ＦＣＶ）キャプシド（配列番号１２）
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ネコカリシウイルス（Ｆ９様）キャプシド（配列番号７）
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ネコカリシウイルス（Ｆ９様）キャプシド（配列番号８）
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ネコカリシウイルス（Ｆ９様）キャプシド（配列番号１３）
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以下の実施例は、本発明のさらなる認識を提供するのに役立つが、本発明の有効な範囲
を制限することを決して意味するものではない。
ネコ白血病ウイルスエンベロープ糖タンパク質（ｇｐ８５）配列番号１
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ネコ白血病ウイルスエンベロープ糖タンパク質（ｇｐ８５）配列番号２
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ＦＲＱＬＱＭＡＭＨＴＤＩＱＡＬＥＥＳＩＳＡＬＥＫＳＬＴＳＬＳＥＶＶＬＱＮＲＲＧ
ＬＤＩＬＦＬＱＥＧＧＬＣＡＡＬＫＥＥＣＣＦ
ＹＡＤＨＴＧＬＶＲＤＮＭＡＫＬＲＥＲＬＫＱＲＱＱＬＦＤＳＱＱＧＷＦＥＧＷＦＮＫ
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ＬＬＦＧＰＣＩＬＮＲＬＶＱＦＶＫＤＲＩＳＶＶＱＡＬＩＬＴＱＱＹＱＱＩＫＱＹＤＰ
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ネコ白血病ウイルスエンベロープ糖タンパク質（ｇｐ８５）配列番号１０
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ネコ白血病ウイルスエンベロープ糖タンパク質（ｇｐ７０）配列番号３
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ネコ白血病ウイルスエンベロープ糖タンパク質（ｇｐ７０）配列番号４
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ネコ白血病ウイルスエンベロープ糖タンパク質（ｇｐ７０）配列番号１１
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ネコカリシウイルス（ＶＳ－ＦＣＶ）キャプシド（配列番号５）
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ネコカリシウイルス（ＶＳ－ＦＣＶ）キャプシド（配列番号６）
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ＤＳＦＡＶＹＲＩＩＤＳＮＧＳＷＦＤＩＧＩＤＳＤＧＦＳＦＶＧＶＳＳＦＰＫＬＥＦＰ
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ネコカリシウイルス（ＶＳ－ＦＣＶ）キャプシド（配列番号１２）
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ネコカリシウイルス（Ｆ９様）キャプシド（配列番号７）
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ネコカリシウイルス（Ｆ９様）キャプシド（配列番号８）
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ネコカリシウイルス（Ｆ９様）キャプシド（配列番号１３）
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以下の実施例は、本発明のさらなる認識を提供するのに役立つが、本発明の有効な範囲
を制限することを決して意味するものではない。
［実施例］
［実施例１］
アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子へのＦＥＬＶ ＧＰ８５のコード配列の組込み
緒言
ＲＮＡウイルスは、ゲノムに遺伝子操作されたワクチン抗原を導入するためのベクター
ビヒクルとして使用されてきた。しかし、現在までのそれらの使用は、ＲＮＡウイルスに
ウイルス抗原を組み込み、次いでレシピエント宿主にウイルスを導入することに主に限定
されてきた。その結果、組み込まれたウイルス抗原に対する防御抗体が誘導される。アル
ファウイルスＲＮＡレプリコン粒子は、病原抗原をコードするために使用されている。そ
のようなアルファウイルスレプリコンプラットフォームは、ベネズエラウマ脳炎ウイルス
（ＶＥＥ）［Ｐｕｓｈｋｏ ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２３９：３８９－４０１
（１９９７）］、シンドビス（ＳＩＮ）［これによりその内容全体が本明細書に組み込ま
れるＢｒｅｄｅｎｂｅｅｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ
６７：６４３９－６４４６（１９９３）］およびセムリキ森林ウイルス（ＳＦＶ）［これ
によりその内容全体が本明細書に組み込まれるＬｉｌｊｅｓｔｒｏｍ ａｎｄ Ｇａｒｏ
ｆｆ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＮＹ）９：１３５６－１３６１（１９９１）］を含
むいくつかの異なるアルファウイルスから開発されている。さらに、アルファウイルスＲ
ＮＡレプリコン粒子は、ブタおよび家禽用のいくつかの米国農務省認可ワクチンの基礎と
なっている。これらには、ブタ流行性下痢ワクチン（ＲＮＡ粒子）（製品コード１９Ｕ５
．Ｐ１）、ブタインフルエンザワクチン（ＲＮＡ）（製品コード１９Ａ５．Ｄ０）、トリ
インフルエンザワクチン（ＲＮＡ）（製品コード１９Ｏ５．Ｄ０）および処方品（ＲＮＡ
粒子）（製品コード９ＰＰ０．００）が含まれる。
［実施例１］
アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子へのＦＥＬＶ ＧＰ８５のコード配列の組込み
緒言
ＲＮＡウイルスは、ゲノムに遺伝子操作されたワクチン抗原を導入するためのベクター
ビヒクルとして使用されてきた。しかし、現在までのそれらの使用は、ＲＮＡウイルスに
ウイルス抗原を組み込み、次いでレシピエント宿主にウイルスを導入することに主に限定
されてきた。その結果、組み込まれたウイルス抗原に対する防御抗体が誘導される。アル
ファウイルスＲＮＡレプリコン粒子は、病原抗原をコードするために使用されている。そ
のようなアルファウイルスレプリコンプラットフォームは、ベネズエラウマ脳炎ウイルス
（ＶＥＥ）［Ｐｕｓｈｋｏ ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２３９：３８９－４０１
（１９９７）］、シンドビス（ＳＩＮ）［これによりその内容全体が本明細書に組み込ま
れるＢｒｅｄｅｎｂｅｅｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ
６７：６４３９－６４４６（１９９３）］およびセムリキ森林ウイルス（ＳＦＶ）［これ
によりその内容全体が本明細書に組み込まれるＬｉｌｊｅｓｔｒｏｍ ａｎｄ Ｇａｒｏ
ｆｆ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＮＹ）９：１３５６－１３６１（１９９１）］を含
むいくつかの異なるアルファウイルスから開発されている。さらに、アルファウイルスＲ
ＮＡレプリコン粒子は、ブタおよび家禽用のいくつかの米国農務省認可ワクチンの基礎と
なっている。これらには、ブタ流行性下痢ワクチン（ＲＮＡ粒子）（製品コード１９Ｕ５
．Ｐ１）、ブタインフルエンザワクチン（ＲＮＡ）（製品コード１９Ａ５．Ｄ０）、トリ
インフルエンザワクチン（ＲＮＡ）（製品コード１９Ｏ５．Ｄ０）および処方品（ＲＮＡ
粒子）（製品コード９ＰＰ０．００）が含まれる。
アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子の構築
ＦｅＬＶ ｇｐ８５のアミノ酸配列を使用して、インシリコでコドン最適化（ネココド
ン使用）ヌクレオチド配列を生成した。最適化された配列は、商用業者（ＡＴＵＭ，Ｎｅ
ｗａｒｋ，ＣＡ）によって合成ＤＮＡとして調製された。したがって、ｇｐ８５のアミノ
酸配列に基づいて合成遺伝子を設計した。構築物（ｇｐ８５＿ｗｔ）は野生型アミノ酸配
列［配列番号２］であり、アルファウイルスレプリコンプラスミドへのクローニングに適
切なフランキング配列を有するようにネコ用にコドン最適化した。
ＦｅＬＶ ｇｐ８５のアミノ酸配列を使用して、インシリコでコドン最適化（ネココド
ン使用）ヌクレオチド配列を生成した。最適化された配列は、商用業者（ＡＴＵＭ，Ｎｅ
ｗａｒｋ，ＣＡ）によって合成ＤＮＡとして調製された。したがって、ｇｐ８５のアミノ
酸配列に基づいて合成遺伝子を設計した。構築物（ｇｐ８５＿ｗｔ）は野生型アミノ酸配
列［配列番号２］であり、アルファウイルスレプリコンプラスミドへのクローニングに適
切なフランキング配列を有するようにネコ用にコドン最適化した。
以前に記載されたように［米国特許第９，４４１，２４７号を参照；その内容全体は参
照により本明細書に組み込まれる］、以下の改変を加えて、ＦｅＬＶ ｇｐ８５を発現す
るように設計されたＶＥＥレプリコンベクターを構築した。制限酵素ＡｓｃＩおよびＰａ
ｃＩを用いて、ＴＣ－８３由来レプリコンベクター「ｐＶＥＫ」［米国特許第９，４４１
，２４７号に開示され記載されている］を消化した。制限酵素ＡｓｃＩおよびＰａｃＩを
用いて、ＦｅＬＶ ｇｐ８５遺伝子のコドン最適化オープンリーディングフレームヌクレ
オチド配列を含み、５’フランキング配列（５’－ＧＧＣＧＣＧＣＣＧＣＡＣＣ－３’）
［配列番号９］および３’フランキング配列（５’－ＴＴＡＡＴＴＡＡ－３’）を有する
ＤＮＡプラスミドを同様に消化した。次いで、消化されたｐＶＥＫベクターに合成遺伝子
カセットをライゲーションし、得られたクローンを「ｐＶＨＶ－ＦｅＬＶ ｇｐ８５」と
再命名した。「ｐＶＨＶ」ベクターの命名は、ｐＶＥＫの多重クローニング部位中のＡｓ
ｃＩ部位およびＰａｃＩ部位を介してクローニングされた導入遺伝子カセットを含むｐＶ
ＥＫ由来レプリコンベクターを指すように選択した。
照により本明細書に組み込まれる］、以下の改変を加えて、ＦｅＬＶ ｇｐ８５を発現す
るように設計されたＶＥＥレプリコンベクターを構築した。制限酵素ＡｓｃＩおよびＰａ
ｃＩを用いて、ＴＣ－８３由来レプリコンベクター「ｐＶＥＫ」［米国特許第９，４４１
，２４７号に開示され記載されている］を消化した。制限酵素ＡｓｃＩおよびＰａｃＩを
用いて、ＦｅＬＶ ｇｐ８５遺伝子のコドン最適化オープンリーディングフレームヌクレ
オチド配列を含み、５’フランキング配列（５’－ＧＧＣＧＣＧＣＣＧＣＡＣＣ－３’）
［配列番号９］および３’フランキング配列（５’－ＴＴＡＡＴＴＡＡ－３’）を有する
ＤＮＡプラスミドを同様に消化した。次いで、消化されたｐＶＥＫベクターに合成遺伝子
カセットをライゲーションし、得られたクローンを「ｐＶＨＶ－ＦｅＬＶ ｇｐ８５」と
再命名した。「ｐＶＨＶ」ベクターの命名は、ｐＶＥＫの多重クローニング部位中のＡｓ
ｃＩ部位およびＰａｃＩ部位を介してクローニングされた導入遺伝子カセットを含むｐＶ
ＥＫ由来レプリコンベクターを指すように選択した。
ＴＣ－８３ ＲＮＡレプリコン粒子（ＲＰ）の作製は、以前に記載された方法［米国特
許第９，４４１，２４７号および米国特許第８，４６０，９１３号；その内容は参照によ
り本明細書に組み込まれる］に従って行った。要約すると、ｐＶＨＶレプリコンベクター
ＤＮＡおよびヘルパーＤＮＡプラスミドを、ＮｏｔＩ制限酵素を用いて線形化した後、Ｍ
ｅｇａＳｃｒｉｐｔ Ｔ７ ＲＮＡポリメラーゼおよびキャップ類似体（Ｐｒｏｍｅｇａ
，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を使用してインビトロ転写を行った。重要なことに、この作製
に使用されるヘルパーＲＮＡは、以前に記載されているように、ＶＥＥサブゲノムプロモ
ーター配列を欠いている［Ｋａｍｒｕｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ ９１
（Ｐｔ ７）：１７２３－１７２７（２０１０）］。レプリコンおよびヘルパー成分の精
製ＲＮＡを組み合わせ、Ｖｅｒｏ細胞の懸濁液と混合し、４ｍｍキュベットで電気穿孔し
、ＯｐｔｉＰｒｏ（登録商標）ＳＦＭ細胞培養培地（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ，Ｗａ
ｌｔｈａｍ ＭＡ）に戻した。一晩インキュベーションした後、ＺｅｔａＰｌｕｓ Ｂｉ
ｏＣａｐデプスフィルター（３Ｍ，Ｍａｐｌｅｗｏｏｄ，ＭＮ）に懸濁液を通し、５％ス
クロース（ｗ／ｖ）を含有するリン酸緩衝生理食塩水で洗浄し、最後に４００ｍＭ Ｎａ
Ｃｌ緩衝液を用いて、保持されたＲＰを溶出することによって、細胞および培地からアル
ファウイルスＲＮＡレプリコン粒子を精製した。溶出したＲＰを、最終的な５％スクロー
ス（ｗ／ｖ）に配合し、０．２２ミクロンのメンブレンフィルターに通し、保存のために
アリコートに分注した。感染Ｖｅｒｏ細胞単層に対する免疫蛍光アッセイにより機能性Ｒ
Ｐの力価を決定した。
許第９，４４１，２４７号および米国特許第８，４６０，９１３号；その内容は参照によ
り本明細書に組み込まれる］に従って行った。要約すると、ｐＶＨＶレプリコンベクター
ＤＮＡおよびヘルパーＤＮＡプラスミドを、ＮｏｔＩ制限酵素を用いて線形化した後、Ｍ
ｅｇａＳｃｒｉｐｔ Ｔ７ ＲＮＡポリメラーゼおよびキャップ類似体（Ｐｒｏｍｅｇａ
，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を使用してインビトロ転写を行った。重要なことに、この作製
に使用されるヘルパーＲＮＡは、以前に記載されているように、ＶＥＥサブゲノムプロモ
ーター配列を欠いている［Ｋａｍｒｕｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ ９１
（Ｐｔ ７）：１７２３－１７２７（２０１０）］。レプリコンおよびヘルパー成分の精
製ＲＮＡを組み合わせ、Ｖｅｒｏ細胞の懸濁液と混合し、４ｍｍキュベットで電気穿孔し
、ＯｐｔｉＰｒｏ（登録商標）ＳＦＭ細胞培養培地（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ，Ｗａ
ｌｔｈａｍ ＭＡ）に戻した。一晩インキュベーションした後、ＺｅｔａＰｌｕｓ Ｂｉ
ｏＣａｐデプスフィルター（３Ｍ，Ｍａｐｌｅｗｏｏｄ，ＭＮ）に懸濁液を通し、５％ス
クロース（ｗ／ｖ）を含有するリン酸緩衝生理食塩水で洗浄し、最後に４００ｍＭ Ｎａ
Ｃｌ緩衝液を用いて、保持されたＲＰを溶出することによって、細胞および培地からアル
ファウイルスＲＮＡレプリコン粒子を精製した。溶出したＲＰを、最終的な５％スクロー
ス（ｗ／ｖ）に配合し、０．２２ミクロンのメンブレンフィルターに通し、保存のために
アリコートに分注した。感染Ｖｅｒｏ細胞単層に対する免疫蛍光アッセイにより機能性Ｒ
Ｐの力価を決定した。
［実施例２］
ネコを対象としたＦＥＬＶワクチンの有効性および安全性の比較
ベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＶＥＥ）の無毒性ＴＣ－８３株のキャプシドタンパク質
および糖タンパク質を含み、ＦｅＬＶウイルス糖タンパク質（ｇｐ８５）をコードするア
ルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子（ＲＰ）を含むワクチンを５％スクロースに配合し
た。液体ワクチンは使用前に保存のために凍結した。以下の表１に示すように、このワク
チンと、ＦｅＬＶをコードする組換えカナリア痘を含む市販のワクチンとを比較した。８
～９週齢の時点での単回用量、または８～９週齢および次いで２１日後のプライム／ブー
ストレジメンのいずれかにより、ネコ対象８匹の５群にワクチン接種した。各実験的ワク
チン接種群に対する用量を以下の表１に示す。
ネコを対象としたＦＥＬＶワクチンの有効性および安全性の比較
ベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＶＥＥ）の無毒性ＴＣ－８３株のキャプシドタンパク質
および糖タンパク質を含み、ＦｅＬＶウイルス糖タンパク質（ｇｐ８５）をコードするア
ルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子（ＲＰ）を含むワクチンを５％スクロースに配合し
た。液体ワクチンは使用前に保存のために凍結した。以下の表１に示すように、このワク
チンと、ＦｅＬＶをコードする組換えカナリア痘を含む市販のワクチンとを比較した。８
～９週齢の時点での単回用量、または８～９週齢および次いで２１日後のプライム／ブー
ストレジメンのいずれかにより、ネコ対象８匹の５群にワクチン接種した。各実験的ワク
チン接種群に対する用量を以下の表１に示す。
全ネコに、１．０ｍＬのそれぞれのワクチンレジメンを皮下接種した。ネコは、初回ワ
クチン接種の時点で８～９週齢であった（第３群のネコを含む）。第４群のネコには、市
販のワクチンのラベル上に指示された量のワクチンが提供された時点でワクチン接種した
。ワクチン接種後、一般的な健康状態を連日観察するとともに、各ワクチン接種後２日間
にわたり、および各ワクチン接種後２週間にわたり週に２回、注射部位を触診することに
より、ワクチンに対する有害反応についてネコを観察した。いずれのワクチンについても
有害反応は観察されなかった。
クチン接種の時点で８～９週齢であった（第３群のネコを含む）。第４群のネコには、市
販のワクチンのラベル上に指示された量のワクチンが提供された時点でワクチン接種した
。ワクチン接種後、一般的な健康状態を連日観察するとともに、各ワクチン接種後２日間
にわたり、および各ワクチン接種後２週間にわたり週に２回、注射部位を触診することに
より、ワクチンに対する有害反応についてネコを観察した。いずれのワクチンについても
有害反応は観察されなかった。
ブースターワクチン接種の４週間後（第３群のネコには単回ワクチン接種の４週間後）
、ＦｅＬＶの強毒培養物を用いて全ネコを惹起した。口腔鼻経路（各鼻孔に０．３ｍＬ、
および０．４ｍＬを経口投与）により１．０ｍＬの惹起ウイルスを投与することによって
、１週間にわたり別個の４日間（試験４９日目、５２日目、５４日目および５６日目）に
ネコを惹起した。惹起の３週間後、惹起後１０週間にわたり毎週血清試料を採取した。Ｆ
ｅＬＶ ｐ２７抗原の存在について、ＥＬＩＳＡにより血清試料を試験した。動物が持続
的に抗原血症を呈すれば、ＦｅＬＶに感染していると考えられる。抗原血症は、３週間連
続して、または８週間の試験期間中に５回以上、ｐ２７ ＥＬＩＳＡの結果が陽性である
ことと定義される。ＦｅＬＶワクチンは、ＵＳＤＡ認可のためには、試験製品をワクチン
接種されたネコの７５％を保護しなければならない。さらに、惹起が有効であると考えら
れるためには、対照ネコの８０％が持続的に抗原血症を呈さなければならない［Ｓｈｉｐ
ｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，ＪＡＶＭＡ，Ｖｏｌ．１９９，Ｎｏ．１０（Ｎｏｖ １５，１９
９１）を参照］。惹起の結果を以下の表２に要約する。
、ＦｅＬＶの強毒培養物を用いて全ネコを惹起した。口腔鼻経路（各鼻孔に０．３ｍＬ、
および０．４ｍＬを経口投与）により１．０ｍＬの惹起ウイルスを投与することによって
、１週間にわたり別個の４日間（試験４９日目、５２日目、５４日目および５６日目）に
ネコを惹起した。惹起の３週間後、惹起後１０週間にわたり毎週血清試料を採取した。Ｆ
ｅＬＶ ｐ２７抗原の存在について、ＥＬＩＳＡにより血清試料を試験した。動物が持続
的に抗原血症を呈すれば、ＦｅＬＶに感染していると考えられる。抗原血症は、３週間連
続して、または８週間の試験期間中に５回以上、ｐ２７ ＥＬＩＳＡの結果が陽性である
ことと定義される。ＦｅＬＶワクチンは、ＵＳＤＡ認可のためには、試験製品をワクチン
接種されたネコの７５％を保護しなければならない。さらに、惹起が有効であると考えら
れるためには、対照ネコの８０％が持続的に抗原血症を呈さなければならない［Ｓｈｉｐ
ｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，ＪＡＶＭＡ，Ｖｏｌ．１９９，Ｎｏ．１０（Ｎｏｖ １５，１９
９１）を参照］。惹起の結果を以下の表２に要約する。
表２に示すように、ＲＰ－ＦｅＬＶワクチンは、２回用量レジメン（すなわち、初回お
よびブースターワクチン接種）で投与された場合、試験された両用量で１００％のネコを
保護した。さらに、ＲＰ－ＦｅＬＶワクチンは、単回用量で投与された場合、ネコの８７
％を保護した。これとは対照的に、市販のワクチンは、２回用量レジメンでもネコの５７
％を保護するにとどまった。さらに、対照ネコの８０％超が持続的に抗原血症を呈したた
め、惹起は有効であると考えられる［表２を参照］。最後に、ＲＰ－ＦｅＬＶワクチン製
剤はいずれもネコに対して安全であることが分かった。
よびブースターワクチン接種）で投与された場合、試験された両用量で１００％のネコを
保護した。さらに、ＲＰ－ＦｅＬＶワクチンは、単回用量で投与された場合、ネコの８７
％を保護した。これとは対照的に、市販のワクチンは、２回用量レジメンでもネコの５７
％を保護するにとどまった。さらに、対照ネコの８０％超が持続的に抗原血症を呈したた
め、惹起は有効であると考えられる［表２を参照］。最後に、ＲＰ－ＦｅＬＶワクチン製
剤はいずれもネコに対して安全であることが分かった。
［実施例３］
ワクチン接種および惹起によるＲＰ－ＦＥＬＶワクチンの用量依存性の決定
酵素的に加水分解されたカゼイン（ＮＺ－アミン（登録商標））、ゼラチンおよびスク
ロースを含めたワクチン製剤に、実施例２のＲＰ－ＦｅＬＶワクチンを配合した。次いで
、ワクチンを凍結乾燥した。以下の表３に要約するように、各ネコ１０匹の４群にワクチ
ン接種した。
ワクチン接種および惹起によるＲＰ－ＦＥＬＶワクチンの用量依存性の決定
酵素的に加水分解されたカゼイン（ＮＺ－アミン（登録商標））、ゼラチンおよびスク
ロースを含めたワクチン製剤に、実施例２のＲＰ－ＦｅＬＶワクチンを配合した。次いで
、ワクチンを凍結乾燥した。以下の表３に要約するように、各ネコ１０匹の４群にワクチ
ン接種した。
全ネコに、１．０ｍＬのそれぞれの試験製品を皮下投与によりワクチン接種した。ネコ
は、初回ワクチン接種の時点で８～９週齢であった。
は、初回ワクチン接種の時点で８～９週齢であった。
ワクチン接種後、一般的な毎日の健康状態を観察するとともに、各ワクチン接種後２日
間にわたり、および各ワクチン接種後２週間にわたり週に２回、注射部位を触診すること
により、ワクチンに対する有害反応についてネコを観察した。いずれのワクチンに対して
も有害反応は観察されなかった。
間にわたり、および各ワクチン接種後２週間にわたり週に２回、注射部位を触診すること
により、ワクチンに対する有害反応についてネコを観察した。いずれのワクチンに対して
も有害反応は観察されなかった。
ブースターワクチン接種の３週間後、ＦｅＬＶの強毒培養物を用いて全ネコを惹起した
。口腔鼻経路（各鼻孔に０．３ｍＬ、および０．４ｍＬを経口投与）により１．０ｍＬの
惹起ウイルスを投与することによって、１週間にわたり別個の４日間（試験４２日目、４
５日目、４７日目および４９日目）にネコを惹起した。惹起の３週間後、惹起後１２週間
にわたり毎週血清試料を採取した。ＦｅＬＶ ｐ２７抗原の存在について、ＥＬＩＳＡに
より血清試料を試験した。動物が持続的に抗原血症を呈することが認められた場合、Ｆｅ
ＬＶに感染していると考えられる。抗原血症は、３週間連続して、または８週間の試験期
間中に５回以上、ｐ２７ ＥＬＩＳＡの結果が陽性であることと定義される。ＦｅＬＶワ
クチンは、ＵＳＤＡ認可のためには、試験製品をワクチン接種されたネコの７５％を保護
しなければならない。惹起が有効であると考えられるためには、対照ネコの８０％が持続
的に抗原血症を呈さなければならない［Ｓｈｉｐｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，ＪＡＶＭＡ，Ｖ
ｏｌ．１９９，Ｎｏ．１０，Ｎｏｖ １５，１９９１］。惹起の結果を以下の表４に要約
する。
。口腔鼻経路（各鼻孔に０．３ｍＬ、および０．４ｍＬを経口投与）により１．０ｍＬの
惹起ウイルスを投与することによって、１週間にわたり別個の４日間（試験４２日目、４
５日目、４７日目および４９日目）にネコを惹起した。惹起の３週間後、惹起後１２週間
にわたり毎週血清試料を採取した。ＦｅＬＶ ｐ２７抗原の存在について、ＥＬＩＳＡに
より血清試料を試験した。動物が持続的に抗原血症を呈することが認められた場合、Ｆｅ
ＬＶに感染していると考えられる。抗原血症は、３週間連続して、または８週間の試験期
間中に５回以上、ｐ２７ ＥＬＩＳＡの結果が陽性であることと定義される。ＦｅＬＶワ
クチンは、ＵＳＤＡ認可のためには、試験製品をワクチン接種されたネコの７５％を保護
しなければならない。惹起が有効であると考えられるためには、対照ネコの８０％が持続
的に抗原血症を呈さなければならない［Ｓｈｉｐｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，ＪＡＶＭＡ，Ｖ
ｏｌ．１９９，Ｎｏ．１０，Ｎｏｖ １５，１９９１］。惹起の結果を以下の表４に要約
する。
この短期免疫の試験では、ネコの１００％保護のためのＲＰ－ＦｅＬＶワクチンの最小
保護用量は、２回用量（初回およびブースターワクチン接種）レジメンで投与した場合、
約１．０×１０５～約２．０×１０６のＲＰであった。対照ネコの少なくとも８０％が持
続的に抗原血症を呈したため、惹起は有効であった。試験されたＲＰ－ＦｅＬＶワクチン
製剤はいずれもネコに対して安全であった。
保護用量は、２回用量（初回およびブースターワクチン接種）レジメンで投与した場合、
約１．０×１０５～約２．０×１０６のＲＰであった。対照ネコの少なくとも８０％が持
続的に抗原血症を呈したため、惹起は有効であった。試験されたＲＰ－ＦｅＬＶワクチン
製剤はいずれもネコに対して安全であった。
本発明は、本明細書に記載される具体的な実施形態によって範囲が限定されるべきでは
ない。実際、本明細書に記載されているものに加えて、本発明の様々な変更が、前述の説
明から当業者には明らかになるであろう。このような変更は、添付の特許請求の範囲内に
あることが意図されている。
ない。実際、本明細書に記載されているものに加えて、本発明の様々な変更が、前述の説
明から当業者には明らかになるであろう。このような変更は、添付の特許請求の範囲内に
あることが意図されている。
さらに、核酸またはポリペプチドに与えられるすべての塩基サイズまたはアミノ酸サイ
ズ、およびすべての分子量または分子量値は近似値であり、説明のために提供されている
ことを理解されたい。
ズ、およびすべての分子量または分子量値は近似値であり、説明のために提供されている
ことを理解されたい。
Claims (19)
- ネコ白血病ウイルス（ＦｅＬＶ）抗原をコードするアルファウイルスＲＮＡレプリコン
粒子を含む免疫原性組成物。 - 前記アルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子がベネズエラウマ脳炎（ＶＥＥ）アルファ
ウイルスＲＮＡレプリコン粒子である、請求項１に記載の免疫原性組成物。 - 前記ＦｅＬＶ抗原が、ＦｅＬＶ糖タンパク質（ｇｐ８５）またはその抗原性フラグメン
トである、請求項１または２に記載の免疫原性組成物。 - 前記ＦｅＬＶ抗原が由来するものとは異なるＦｅＬＶ株に由来する第２のＦｅＬＶ抗原
をコードする１つ以上の追加のアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子を含む、請求項１
、２または３に記載の免疫原性組成物。 - 前記第２のＦｅＬＶ抗原が、ＦｅＬＶ糖タンパク質（ｇｐ８５）またはその抗原性フラ
グメントである、請求項４に記載の免疫原性組成物。 - 前記１つ以上の追加のアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子が、ＶＥＥアルファウイ
ルスＲＮＡレプリコン粒子である、請求項４または５に記載の免疫原性組成物。 - 前記ＦｅＬＶ糖タンパク質（ｇｐ８５）が、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９
５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１、２、３、４、５または６に記載の
免疫原性組成物。 - 前記ＦｅＬＶ糖タンパク質（ｇｐ８５）の前記抗原性フラグメントがＦｅＬＶ ｇｐ７
０である、請求項１、２、３、４、５または６に記載の免疫原性組成物。 - 前記ＦｅＬＶ ｇｐ７０が、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を
有するアミノ酸配列を含む、請求項８に記載の免疫原性組成物。 - 請求項１、２、３、４、５、６、７、８または９に記載の免疫原性組成物と、薬学的に
許容される担体とを含む、ＦｅＬＶに起因する疾患の予防に役立つワクチン。 - ネコが前記ワクチンにより免疫されると、前記ネコに抗体が誘導される、請求項１０に
記載のワクチン。 - 非ＦｅＬＶネコ病原体に対する防御免疫を誘発するための少なくとも１つの非ＦｅＬＶ
抗原をさらに含む、請求項１０または１１に記載のワクチン組成物。 - 前記非ＦｅＬＶネコ病原体が、ネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）、ネコカリシウイルス
（ＦＣＶ）、ネコニューモウイルス（ＦＰＮ）、ネコパルボウイルス（ＦＰＶ）、ネコ伝
染性腹膜炎ウイルス（ＦＩＰＶ）、ネコ免疫不全ウイルス、ボルナ病ウイルス（ＢＤＶ）
、ネコインフルエンザウイルス、ネコ汎血球減少症ウイルス（ＦＰＬＶ）、ネココロナウ
イルス（ＦＣｏＶ）、ネコ鼻腔気管炎ウイルス（ＦＶＲ）、クラミドフィラ・フェリス（
Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ ｆｅｌｉｓ）およびそれらの任意の組合せからなる群から
選択される、請求項１２に記載のワクチン。 - 前記非ＦｅＬＶ抗原が、ネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）、ネコカリシウイルス（ＦＣ
Ｖ）、ネコニューモウイルス（ＦＰＮ）、ネコパルボウイルス（ＦＰＶ）、ネコ伝染性腹
膜炎ウイルス（ＦＩＰＶ）、ネコ免疫不全ウイルス、ボルナ病ウイルス（ＢＤＶ）、ネコ
インフルエンザウイルス、ネコ汎血球減少症ウイルス（ＦＰＬＶ）、ネココロナウイルス
（ＦＣｏＶ）、ネコ鼻腔気管炎ウイルス（ＦＶＲ）、クラミドフィラ・フェリスおよびそ
れらの任意の組合せからなる、死んだまたは弱毒化された非ＦｅＬＶ抗原の群から選択さ
れる死んだまたは弱毒化された非ＦｅＬＶ抗原である、請求項１３に記載のワクチン。 - 前記弱毒化された非ＦｅＬＶ抗原が、改変された生きたクラミドフィラ・フェリス、改
変された生きたネコ鼻腔気管炎ウイルス（ＦＶＲ）、改変された生きたネコカリシウイル
ス（ＦＣＶ）、改変された生きたネコ汎血球減少症ウイルス（ＦＰＬ）、改変された生き
たネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）、改変された生きたネコニューモウイルス（ＦＰＮ）
、改変された生きたネコパルボウイルス（ＦＰＶ）、改変された生きたネコ伝染性腹膜炎
ウイルス（ＦＩＰＶ）、改変された生きたネコ免疫不全ウイルス、改変された生きたボル
ナ病ウイルス（ＢＤＶ）、改変された生きたネココロナウイルス（ＦＣｏＶ）および改変
された生きたネコインフルエンザウイルスからなる群から選択される改変された生きたネ
コ病原体である、請求項１４に記載のワクチン。 - 非ＦｅＬＶ抗原に由来する少なくとも１つのタンパク質抗原またはその抗原性フラグメ
ントをコードするヌクレオチド配列を含むアルファウイルスＲＮＡレプリコン粒子をさら
に含む、請求項１０、１１、１２、１３、１４または１５に記載のワクチン組成物。 - 非ＦｅＬＶネコ病原体に由来する前記タンパク質抗原またはその抗原性フラグメントが
、ネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）、ネコカリシウイルス（ＦＣＶ）、ネコニューモウイ
ルス（ＦＰＮ）、ネコパルボウイルス（ＦＰＶ）、ネコ伝染性腹膜炎ウイルス（ＦＩＰＶ
）、ネコ免疫不全ウイルス、ボルナ病ウイルス（ＢＤＶ）、ネコインフルエンザウイルス
、ネコ汎血球減少症ウイルス（ＦＰＬＶ）、ネココロナウイルス（ＦＣｏＶ）、ネコ鼻腔
気管炎ウイルス（ＦＶＲ）、クラミドフィラ・フェリスおよびそれらの任意の組合せから
なる群から選択される、請求項１６に記載のワクチン。 - 非アジュバントワクチンである、請求項１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６ま
たは１７に記載のワクチン組成物。 - 病原性ＦｅＬＶに対してネコを免疫する方法であって、請求項１０、１１、１２、１３
、１４、１５、１６、１７または１８に記載のワクチンの免疫学的有効量を前記ネコに投
与することを含む方法。
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|---|---|---|---|
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|---|---|
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