RU2784533C2

RU2784533C2 - Вакцина против вируса лейкоза кошачьих

Info

Publication number: RU2784533C2
Application number: RU2020118586A
Authority: RU
Inventors: Иан ТАРПИ
Original assignee: Интервет Интернэшнл Б.В.
Priority date: 2017-11-06
Filing date: 2018-11-05
Publication date: 2022-11-28

Abstract

Настоящее изобретение относится к ветеринарии. Предложена вакцина для способствования профилактике заболевания, вызванного FeLV, содержащая иммуногенную композицию, содержащую частицу РНК-репликона альфа-вируса, которая кодирует антиген вируса лейкоза кошачьих (FeLV). Предложен способ иммунизации кошачьего против патогенного FeLV, включающий введение кошачьему иммунологически эффективного количества вакцины. Вакцина защищает вакцинированных животных от истощающего болезненного состояния, вызванного инфекцией FeLV, так же эффективно, как и ее инактивированный аналог. Вакцина на основе цельного вируса защищала 100% кошек при введении в режиме с двумя дозами, т.е. прайм- и бустер-вакцинация. Вакцина RP-FeLV защищала 87% кошек при введении в виде однократной дозы. В противоположность этому, коммерчески доступная вакцина защищала только 57% кошек даже в режиме с двумя дозами. 2 н. и 13 з.п. ф-лы, 4 табл., 3 пр.

Description

Перекрестная ссылка на родственные заявки

По этой заявке испрашивается приоритет в соответствии с 35 U.S.C. § 119(e) временной заявки на патент США c серийным номером 62/582050, поданной 6 ноября 2017 г., временной заявки на патент США с серийным номером 62/596508, поданной 8 декабря 2017 г. и заявки на патент США с серийным номером 62/599401, поданной 15 декабря 2017 г., содержание которых в полном объеме включено здесь посредством ссылки.

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к новым вакцинам против вируса лейкоза кошачьих. Также изобретение относится к способам получения и применения вакцин индивидуально или в комбинации с другими защитными агентами.

Уровень техники

Вирус лейкоза кошачьих (FeLV) представляет собой ретровирус, который инфицирует домашних кошек, который приводит к высокому уровню заболеваемости и смертности этих животных во всем мире. Несмотря на то, что вирус преимущественно передается через слюну, имеются сообщения о том, что FeLV также распространяется через контакт с биологическими жидкостями [Pacitti et al., Vet. Rec., 118:381-384 (1986) doi:10.1136/vr.118.14.381; Levy et al., J. Feline Med. Surg., 10:300-316 (2008), doi:10.1016/j.jfms. 2008. 03.002]. Клинические признаки у кошек, наблюдаемые во время FeLV инфекций, включают: цитопролиферативные расстройства (лимфоидные или миелоидные опухоли), цитосупрессивные расстройства (инфекционные заболевания, связанные с иммуносупрессией, анемией, миелосупрессией), воспалительные расстройства, неврологические нарушения, аборты и энтерит [Hoover et al., J. Am. Vet. Med. Assoc., 199: 1287-1297 (1991); Levy and Crawford, Textbook of Veterinary Internal Medicine, 6th ed (Ettinger S.J., Feldman E.C., eds) WB Saunders, Philadelphia, PA. (2005)]. Частота антигенемии может варьировать в пределах 1-5% у здоровых кошек до 15-30% у инфицированных кошек [Hosie et al., Veterinary Records, 128: 293-297 (1989); Braley, Feline Practice, 22: 25-29 (1994); Malik et al., Australian Veterinary Journal, 75:323-327 (1997); Arjona et al., Journal of Clinical Microbiology, 38:3448-3449 (2000)]. FeLV часто является причиной развития хронической инфекции с сопутствующей персистирующей виремией, часто приводящей к гибели кошки-хозяина.

РНК-геном FeLV кодирует только три гена: (i) ген ENV, который кодирует гликопротеин оболочки, (ii) ген GAG, который кодирует главные структурные компоненты вируса, и (iii) ген POL, который кодирует РНК-полимеразу [Thomsen et al., Journal of General Virology, 73:1819-1824 (1992)]. Ген оболочки FeLV (ENV) кодирует белок-предшественник gp85, который протеолитически процессируется с участием одного или нескольких клеточных ферментов с образованием главного гликопротеина оболочки gp70 и связанного с ним трансмембранного белка p15E [DeNoronha, et al., Virology, 85: 617-621 (1978); Nunberg et al., PNAS, 81:3675-3679 (1983)]. Трансмембранный белок p15E содержит последовательность, консервативную среди гамма-ретровирусов с иммуносупрессивными свойствами [Mathes et al., Nature, 274: 687-689 (1978)]. Недавно Комитет Европейского агентства по лекарственным средствам ветеринарного назначения (CVMP) принял положительное решение в отношении вакцины, содержащей рекомбинантный антиген оболочки p45 FeLV, полученный из поверхностного гликопротеина gp70 подгруппы A FeLV, экспрессированного в Escherichia coli, в качестве активного вещества. Гликопротеин оболочки FeLV является мишенью для FeLV-специфических ответов цитотоксических T-клеток, а также нейтрализующих антител и, следовательно, представляет один из основных иммуногенов FeLV [Flynn et al., J. Virol., 76 (5):2306-2315 (2002)].

Различные факторы, такие как иммунный статус хозяина, возраст хозяина, инфицирующий штамм FeLV, вирусная нагрузка, а также путь воздействия FeLV могут оказывать влияние на конечный результат этого воздействия. В свое время ветеринарные врачи и исследователи классифицировали FeLV инфекции с учетом относительной персистенции сопутствующей антигенемии, которая в более легких случаях представляла кратковременную антигенемию и/или элиминацию инфекции. Анализы на антигенемию включают твердофазный иммуноферментный анализ p27 (ELISA), выделение вируса и иммунофлуоресценцию [Hoover et al., J. Am. Vet. Med. Assoc., 199: 1287-1297 (1991); Rojko and Kociba, J. Am. Vet. Med. Assoc., 199: 1305-1310 (1991)]. Такие тесты остаются полезными в клинических применениях, а также для определения того, является ли клиническое заболевание результатом активно циркулирующего вируса.

В настоящее время в США имеются четыре вакцины против FeLV, в том числе две адъювантные убитые вакцины на основе цельного вируса; двойная адъювантная, полиантигенная вакцина; и неадъювантная векторная вакцина на основе вируса оспы канареек. В частности, было показано, что разные вакцины обладают различной степенью эффективности [Sparkes, J. Small Anim. Pract., 38: 187-194 (1997) doi:10.1111/j.1748-5827.1997.tb03339.x.]. Результаты более ранних исследований показали эффективность адъювантных убитых вакцин на основе цельных вирусов после контрольного заражения, которые включали тестирование вакцинированных и невакцинированных кошек на вирусную РНК, провирусную ДНК, антитела к FeLV и антиген p27 [Hines et al., J. Am. Vet. Med. Assoc., 199:1428-1430 (1991); Pedersen, J. Vet. Intern. Med., 7:34-39 (1993) doi:10.1111/j.1939-1676.1993.tb03166.x.]; Torres et al., Vet. Immunol. Immunopathol., 134:122-131 (2010) doi:10.1016/j.vetimm.2009.10.017]. Имеются ограниченные данные по оценке эффективности неадъювантной рекомбинантной вакцины против FeLV, доступной для применения [Stuke et al., Vaccine, 32: 2599-2603 (2014) doi:10.1016/j.vaccine.2014.03.016].

Совсем недавно было проведено сравнительное исследование эффективности двух коммерчески доступных вакцин против лейкоза кошачьих, одной инактивированной вакцины на основе цельного вируса и другой векторной вакцины на основе вируса оспы канареек, после контрольного заражения вирулентным вирусом лейкоза кошачьих [Patel et al., Clinical and Vaccine Immunology, 22 (7):798-805 (2015)]. В этом исследовании вновь было установлено, что адъювантная убитая вакцина на основе цельного вируса обеспечивает превосходную защиту от инфекции FeLV. Однако применение адъювантных убитых вакцин против FeLV на основе цельного вируса считается одним из факторов, который приводит к образованию саркомы в месте инъекции у кошачьих [Kass et al., J. AM. Vet. Med. Assoc., 203 (3): 396-405 (1993)]. Несмотря на то, что в последующих исследованиях не была установлена прямая связь между убитыми адъювантными вакцинами и образованием сарком в месте инъекции у кошачьих, остается мнение, что неадъювантные вакцины являются безопаснее. Действительно, в Руководстве по вакцинации кошек Американской ассоциации практикующих врачей-фелинологов предлагается использовать неадъювантные вакцины против FeLV для снижения риска развития сарком в месте инъекции у кошачьих и для уменьшения местного воспаления [AAFP Feline Advisory Panel, 15: 785-808 (2013)].

В течение многих лет при создании вакцин в целях защиты от определенных патогенов применялся ряд векторных стратегий. Одна такая векторная стратегия включает применение частиц РНК-репликона альфа-вируса (RP) [Vander Veen et al., Anim Health Res Rev., 13 (1):1-9 (2012) doi:10.1017/S1466252312000011; Kamrud et al., J. Gen. Virol., 91(Pt7):1723-1727 (2010)], которые были разработаны на основе нескольких различных альфа-вирусов, включая вирус венесуэльского энцефаломиелита лошадей (VEE) [Pushko et al., Virology, 239:389-401 (1997)], вирус Синдбис (SIN) [Bredenbeek et al., Journal of Virology, 67:6439-6446 (1993)] и вирус леса Семлики (SFV) [Liljestrom and Garoff, Biotechnology (NY), 9:1356-1611 (1991)]. Вакцины на основе RP доставляют репликационно-дефектные РНК-репликоны альфа-вируса в клетки-хозяева и приводят к экспрессии желаемого антигенного трансгена(ов) in vivo [Pushko et al., Virology, 239(2):389-401 (1997)]. RP обладают привлекательным профилем безопасности и эффективности по сравнению с некоторыми обычными вакцинными композициями [Vander Veen et al., Anim. Health Res. Rev., 13 (1):1-9.(2012)]. Платформу RP использовали для кодирования патогенных антигенов, и она является основой для нескольких лицензированных USDA вакцин для свиней и птицы.

К сожалению, до сих пор владельцы домашних животных вынуждены делать выбор между (i) неадъювантными вакцинами против FeLV, которые считались более безопасными, но были значительно менее эффективными, чем убитые адъювантные вакцины [см. Stuke et al., Vaccine, 32:2599-2603 (2014); Patel et al., Clin. Vaccine Immunol., 22 (7):798-808 (2015)] и (ii) адъювантными вакцинами против FeLV, которые, хотя и считаются более эффективными, но некоторые из них приводят к образованию сарком в месте инъекции. Следовательно, по-прежнему существует потребность в усовершенствованной, безопасной неадъювантной вакцине против FeLV, которая, хотя и не индуцирует образования сарком в месте инъекции у кошачьих, но защищает вакцинированных животных от истощающего болезненного состояния, вызванного инфекцией FeLV, так же эффективно, как и ее инактивированный аналог, вакцина на основе цельного вируса.

Цитирование любой ссылки в настоящей заявке не должно быть истолковано как признание того, что такая ссылка доступна в качестве предшествующего уровня техники для настоящего изобретения.

Сущность изобретения

Следовательно, настоящее изобретение относится к векторам, которые кодируют один или более антигенов вируса лейкоза кошачьих (FeLV). Такие векторы можно использовать в иммуногенных композициях, содержащих эти векторы. Иммуногенные композиции по настоящему изобретению можно использовать в вакцинах. В одном аспекте настоящего изобретения вакцина защищает вакцинированного субъекта (например, млекопитающего) от FeLV. В конкретном варианте осуществления этого типа вакцинированный субъект является представителем семейства кошачьих. В более конкретном варианте осуществления вакцинированный субъект представляет домашнюю кошку. Настоящее изобретение также относится к комбинированным вакцинамдля индукции защитного иммунитета против FeLV и других заболеваний, например других инфекционных заболеваний у кошачьих. Также изобретение относится к способам получения и применения иммуногенных композиций и вакцин по настоящему изобретению.

В частных вариантах осуществления вектор представляет собой частицу РНК-репликона альфа-вируса, которая кодирует один или более антигенов, происходящих из кошачьего патогена. В конкретных вариантах осуществления кошачий патоген представляет FeLV. В более конкретных вариантах осуществления частицы РНК-репликона альфа-вируса кодируют гликопротеин (gp85). В близких вариантах осуществления частицы РНК-репликона альфа-вируса кодируют антигенный фрагмент gp85. В конкретном варианте осуществления этого типа антигенный фрагмент gp85 представляет гликопротеин FeLV gp85. В некоторых близких вариантах осуществления антигенный фрагмент gp85 представляет гликопротеин FeLV gp45. В еще более конкретных вариантах осуществления частица РНК-репликона альфа-вируса представляет частицу РНК-репликона альфа-вируса венесуэльского энцефаломиелита лошадей (VEE). В еще более конкретных вариантах осуществления частица РНК-репликона альфа-вируса VEE является частицей РНК-репликона альфа-вируса VEE ТС-83. В других вариантах осуществления частица РНК-репликона альфа-вируса является частицей РНК-репликона альфа-вируса Синдбис (SIN). В других вариантах осуществления частица РНК-репликона альфа-вируса представляет частицу РНК-репликона альфа-вируса леса Семлики (SFV). В альтернативном варианте осуществления вектор с «голой» ДНК содержит конструкт нуклеиновой кислоты, который кодирует один или более антигенов, происходящих из кошачьего патогена. В конкретных вариантах осуществления этого типа векторы с «голой» ДНК содержат конструкт нуклеиновой кислоты, который кодирует FeLV gp85 или его антигенный фрагмент.

В некоторых вариантах осуществления частица РНК-репликона альфа-вируса по настоящему изобретению кодирует один или более антигенов FeLV или их антигенных фрагментов. В конкретных вариантах осуществления этого типа частицы РНК-репликона альфа-вируса кодируют от двух до четырех антигенов FeLV или их антигенных фрагментов. В других вариантах осуществления иммуногенные композиции содержат частицы РНК-репликона альфа-вируса, которые кодируют один или более антигенов FeLV или их антигенных фрагментов. В близких вариантах осуществления иммуногенные композиции содержат частицы РНК-репликона альфа-вируса, которые кодируют от двух до четырех антигенов FeLV или их антигенных фрагментов. В конкретных вариантах осуществления этого типа частицы РНК-репликона альфа-вируса кодируют гликопротеин FeLV (gp85) или его антигенный фрагмент. В более конкретных вариантах осуществления этого типа антигенный фрагмент gp85 представляет гликопротеин FeLV gp70. В некоторых близких вариантах осуществления антигенный фрагмент gp85 представляет гликопротеин FeLV gp45. В более конкретных вариантах осуществления иммуногенная композиция содержит частицы РНК-репликона альфа-вируса, которые являются частицами РНК-репликона альфа-вируса венесуэльского энцефаломиелита лошадей (VEE). В еще более конкретных вариантах осуществления иммуногенные композиции содержат частицы РНК-репликона альфа-вируса VEE, которые являются частицами РНК-репликона альфа-вируса VEE ТС-83.

В других вариантах осуществления иммуногенная композиция содержит два или более наборов частиц РНК-репликона альфа-вируса. В конкретных вариантах осуществления этого типа один набор частиц РНК-репликона альфа-вируса кодирует первый антиген, в то время как другой набор частиц РНК-репликона альфа-вируса кодирует второй антиген. В определенном варианте осуществления этого типа первый набор частиц РНК-репликона альфа-вируса кодирует антиген FeLV или его антигенный фрагмент, и второй набор частиц РНК-репликона альфа-вируса кодирует антиген кошачьего калицивируса (FCV) или его антигенный фрагмент. В некоторых вариантах осуществления этого типа антиген FCV происходит из изолята вирулентного системного кошачьего калицивируса (VS-FCV). В других вариантах осуществления антиген FCV происходит из изолята классического (F9-подобного штамма) кошачьего калицивируса. В других вариантах осуществления второй набор частиц РНК-репликона альфа-вируса кодирует два антигена FCV, один из которых происходит из изолята вирулентного системного FCV, в то время как другой происходит из изолята классического (F9-подобного штамма) кошачьего калицивируса.

В других вариантах осуществления иммуногенная композиция содержит один набор частиц РНК-репликона альфа-вируса, которые кодируют первый антиген, другой набор частиц РНК-репликона альфа-вируса, которые кодируют второй антиген, и третий набор частиц РНК-репликона альфа-вируса, которые кодируют третий антиген. В конкретном варианте осуществления этого типа первый набор частиц РНК-репликона альфа-вируса кодирует антиген FeLV или его антигенный фрагмент, второй набор частиц РНК-репликона альфа-вируса кодирует антиген кошачьего калицивируса (FCV), который происходит из вирулентного системного кошачьего калицивируса, или его антигенный фрагмент, и третий набор частиц РНК-репликона альфа-вируса кодирует антиген кошачьего калицивируса (FCV), который происходит из классического (F9-подобного штамма) кошачьего калицивируса, или его антигенный фрагмент.

Следовательно, в конкретных вариантах осуществления, в которых иммуногенные композиции содержат много наборов (например, 2-10) частиц РНК-репликона альфа-вируса, где первый набор частиц РНК-репликона альфа-вируса кодирует антиген FeLV или его антигенный фрагмент, и один или более других наборов частиц РНК-репликона альфа-вируса кодируют один или более антигенов, отличных от FeLV. В некоторых вариантах осуществления этого типа антиген, отличный от FeLV, или его антигенный фрагмент представляет белковый антиген, который происходит из кошачьего герпесвируса (FHV). В других вариантах осуществления антиген, отличный от FeLV, представляет белковый антиген, происходящий из кошачьего пневмовируса (FPN). В других вариантах осуществления антиген, отличный от FeLV, представляет белковый антиген, который происходит из кошачьего парвовируса (FPV). В других вариантах осуществления антиген, отличный от FeLV, представляет белковый антиген, который происходит из вируса инфекционного перитонита кошачьих (FIPV). В других вариантах осуществления антиген, отличный от FeLV, представляет белковый антиген, который происходит из вируса иммунодефицита кошачьих. В других вариантах осуществления антиген, отличный от FeLV, представляет белковый антиген, который происходит из вируса болезни Борна (BDV). В других вариантах осуществления антиген, отличный от FeLV, представляет белковый антиген, который происходит из вируса гриппа кошачьих. В других вариантах осуществления антиген, отличный от FeLV, представляет белковый антиген, который происходит из вируса панлейкопении кошачьих (FPLV). В других вариантах осуществления антиген, отличный от FeLV, представляет белковый антиген, который происходит из кошачьего коронавируса (FCoV). В других вариантах осуществления антиген, отличный от FeLV, представляет белковый антиген, который происходит из вируса ринотрахеита кошачьих (FVR). В других вариантах осуществления антиген, отличный от FeLV, представляет белковый антиген, который происходит из Chlamydophila felis.

Настоящее изобретение также включает все конструкции нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению, включая синтетическую мессенджер-РНК, РНК-репликоны, а также все частицы РНК-репликона альфа-вируса по настоящему изобретению, векторы с «голой» ДНК, и иммуногенные композиции и/или вакцины, которые содержат конструкты нуклеиновой кислоты (например, синтетическую мессенджер-РНК, РНК-репликоны), частицы РНК-репликона альфа-вируса и/или векторы с «голой» ДНК по настоящему изобретению.

В конкретных вариантах осуществления конструкция нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению кодирует один или более антигенов FeLV или их антигенных фрагментов. В близких вариантах осуществления этого типа конструкция нуклеиновой кислоты кодирует от двух до четырех антигенов FeLV или их антигенных фрагментов. В других вариантах осуществления частицы РНК-репликона альфа-вируса содержат конструкцию нуклеиновой кислоты, которая кодирует один или более антигенов FeLV или их антигенных фрагментов. В конкретных вариантах осуществления частицы РНК-репликона альфа-вируса содержат конструкцию нуклеиновой кислоты, которая кодирует от двух до четырех антигенов FeLV или их антигенных фрагментов.

В других вариантах осуществления иммуногенные композиции содержат частицы РНК-репликона альфа-вируса, которые содержат конструкт нуклеиновой кислоты, который кодирует от двух до четырех антигенов FeLV или их антигенных фрагментов. В конкретных вариантах осуществления этого типа частицы РНК-репликона альфа-вируса содержат конструкцию нуклеиновой кислоты, кодирующую гликопротеин FeLV (gp85) или его антигенный фрагмент. В конкретных вариантах осуществления этого типа антигенный фрагмент gp85 представляет гликопротеин FeLV gp70. В еще одних близких вариантах осуществления антигенный фрагмент gp85 представляет гликопротеин FeLV gp45. В более конкретных вариантах осуществления иммуногенная композиция содержит частицы РНК-репликона альфа-вируса, которые являются частицами РНК-репликона альфа-вируса венесуэльского энцефаломиелита лошадей (VEE). В еще более конкретных вариантах осуществления частицы РНК-репликона альфа-вируса VEE являются частицами РНК-репликона альфа-вируса VEE ТС-83.

В других вариантах осуществления иммуногенная композиция содержит два или более наборов частиц РНК-репликона альфа-вируса. В конкретных вариантах осуществления этого типа один набор частиц РНК-репликона альфа-вируса содержит первую конструкцию нуклеиновой кислоты, в то время как другой набор частиц РНК-репликона альфа-вируса содержит вторую конструкцию нуклеиновой кислоты. В частном варианте осуществления этого типа первая конструкция нуклеиновой кислоты кодирует антиген FeLV или его антигенный фрагмент, и вторая конструкция нуклеиновой кислоты кодирует антиген кошачьего калицивируса (FCV) или его антигенный фрагмент. В некоторых вариантах осуществления этого типа антиген FCV происходит из изолята вирулентного системного кошачьего калицивируса (VS-FCV). В других вариантах осуществления антиген FCV происходит из изолята классического (F9-подобного штамма) кошачьего калицивируса. В других вариантах осуществления вторая конструкция нуклеиновой кислоты кодирует два антигена FCV, один из которых происходит из изолята вирулентного системного кошачьего калицивируса, в то время как другой происходит из изолята классического (F9-подобного штамма) кошачьего калицивируса.

В других вариантах осуществления иммуногенная композиция содержит один набор частиц РНК-репликона альфа-вируса, которые содержат первую конструкцию нуклеиновой кислоты, другой набор частиц РНК-репликона альфа-вируса, которые содержат вторую конструкцию нуклеиновой кислоты, и третий набор частиц РНК-репликона альфа-вируса, которые содержат третью конструкцию нуклеиновой кислоты. В конкретном варианте осуществления этого типа первая конструкция нуклеиновой кислоты кодирует антиген FeLV или его антигенный фрагмент, вторая конструкция нуклеиновой кислоты кодирует антиген кошачьего калицивируса (FCV), который происходит из вирулентного системного кошачьего калицивируса, или его антигенный фрагмент, и третья конструкция нуклеиновой кислоты кодирует антиген кошачьего калицивируса (FCV), который происходит из классического (F9-подобного штамма) кошачьего калицивируса, или его антигенный фрагмент.

В других вариантах осуществления иммуногенная композиция содержит один набор частиц РНК-репликона альфа-вируса, которые содержат первую конструкцию нуклеиновой кислоты, другой набор частиц РНК-репликона альфа-вируса, которые содержат вторую конструкцию нуклеиновой кислоты, третий набор частиц РНК-репликона альфа-вируса, которые содержат третью конструкцию нуклеиновой кислоты, и четвертый набор частиц РНК-репликона альфа-вируса, которые содержат четвертую конструкцию нуклеиновой кислоты. В других вариантах осуществления иммуногенная композиция содержит набор частиц РНК-репликона альфа-вируса, которые содержат первую конструкцию нуклеиновой кислоты, другой набор частиц РНК-репликона альфа-вируса, которые содержат вторую конструкцию нуклеиновой кислоты, третий набор частиц РНК-репликона альфа-вируса, которые содержат третью конструкцию нуклеиновой кислоты, четвертый набор частиц РНК-репликона альфа-вируса, которые содержат четвертую конструкцию нуклеиновой кислоты, и пятый набор частиц РНК-репликона альфа-вируса, которые содержат пятую конструкцию нуклеиновой кислоты. В таких вариантах осуществления нуклеотидные последовательности первой конструкции нуклеиновой кислоты, второй конструкции нуклеиновой кислоты, третьей конструкции нуклеиновой кислоты, четвертой конструкции нуклеиновой кислоты и пятой конструкции нуклеиновой кислоты являются разными.

Следовательно, иммуногенная композиция по настоящему изобретению может содержать частицы РНК-репликона альфа-вируса, которые содержат конструкцию нуклеиновой кислоты, которая кодирует по меньшей мере один антиген, отличный от FeLV, для индукции защитного иммунитета к патогену, отличному от FeLV. В конкретных вариантах осуществления этого типа антиген, отличный от FeLV, представляет собой белковый антиген, который происходит из кошачьего герпесвируса (FHV). В других вариантах осуществления антиген, отличный от FeLV, представляет белковый антиген, который происходит из кошачьего калицивируса (FCV). В других вариантах осуществления антиген, отличный от FeLV, представляет собой белковый антиген, происходящий из кошачьего пневмовируса (FPN). В других вариантах осуществления антиген, отличный от FeLV, представляет белковый антиген, который происходит из кошачьего парвовируса (FPV). В других вариантах осуществления антиген, отличный от FeLV, представляет собой белковый антиген, который происходит из вируса инфекционного перитонита кошачьих (FIPV). В других вариантах осуществления антиген, отличный от FeLV, представляет белковый антиген, который происходит из вируса иммунодефицита кошачьих. В других вариантах осуществления антиген, отличный от FeLV, представляет собой белковый антиген, который происходит из вируса болезни Борна (BDV). В других вариантах осуществления антиген, отличный от FeLV, представляет собобй белковый антиген, который происходит из вируса гриппа кошачьих. В других вариантах осуществления антиген, отличный от FeLV, представляет собой белковый антиген, который происходит из вируса панлейкопении кошачьих (FPLV). В других вариантах осуществления антиген, отличный от FeLV, представляет собой белковый антиген, который происходит из кошачьего коронавируса (FCoV). В других вариантах осуществления антиген, отличный от FeLV, представляет белковый антиген, который происходит из вируса ринотрахеита кошачьих (FVR). В других вариантах осуществления антиген, отличный от FeLV, представляет собой белковый антиген, происходящий из Chlamydophila felis.

Настоящее изобретение также относится к комбинированным иммуногенным композициям и/или вакцинам (поливалентным вакцинам), которые включают частицы РНК-репликона альфа-вируса, которые кодируют антиген или его антигенный фрагмент, происходящий из FeLV, вместе с одним или более модифицированными живыми (например, аттенуированными) или убитыми кошачьими патогенами. В конкретных вариантах осуществления иммуногенные композиции содержат модифицированный живой или убитый Chlamydophila felis в комбинации с частицами РНК-репликона альфа-вируса, которые кодируют антиген или его антигенный фрагмент, происходящий из FeLV. В других вариантах осуществления иммуногенные композиции дополнительно содержат модифицированный живой или убитый вирус ринотрахеита кошачьих (FVR) в комбинации с частицами РНК-репликона альфа-вируса, которые кодируют антиген или его антигенный фрагмент, происходящий из FeLV. В других вариантах осуществления иммуногенные композиции содержат модифицированный живой или убитый кошачий калицивирус (FCV) в комбинации с частицами РНК-репликона альфа-вируса, которые кодируют антиген или его антигенный фрагмент, происходящий из FeLV. В других вариантах осуществления иммуногенные композиции содержат модифицированный живой или убитый вирус панлейкопении кошачьих (FPL) в комбинации с частицами РНК-репликона альфа-вируса, которые кодируют антиген или его антигенный фрагмент, происходящий из FeLV. В других вариантах осуществления иммуногенные композиции содержат модифицированный живой или убитый Chlamydophila felis, модифицированный живой или убитый FVR, модифицированный живой или убитый FCV, модифицированный живой или убитый FPL, и частицы РНК-репликона альфа-вируса, которые кодируют антиген или его антигенный фрагмент, происходящий из FeLV. В конкретных вариантах осуществления этого типа кошачий антиген FeLV представляет вирусный гликопротеин FeLV (g85). В некоторых вариантах осуществления вакцины содержат иммунологически эффективное количество одной или более из этих иммуногенных композиций.

В конкретных вариантах осуществления антиген FeLV представляет собой гликопротеин FeLV (gp85). В определенных вариантах осуществления этого типа гликопротеин FeLV gp85 содержит аминокислотную последовательность, обладающую 95% или более идентичностью с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 2. В еще более конкретных вариантах осуществления этого типа гликопротеин FeLV (gp85) содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2. В еще более конкретных вариантах осуществления этого типа гликопротеин FeLV (gp85) кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 10. В близких вариантах осуществления гликопротеин FeLV gp70 содержит аминокислотную последовательность, обладающую 95% или более идентичностью с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 4. В более конкретных вариантах этого типа гликопротеин FeLV (gp85) содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO 4. В еще более конкретных вариантах этого типа гликопротеин FeLV (gp70) кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 3 или SEQ ID NO: 11.

Настоящее изобретение дополнительно включает вакцины, в том числе, поливалентные вакцины, содержащие иммуногенные композиции по настоящему изобретению. В конкретных вариантах осуществления вакцины представляют собой неадъювантные вакцины. В некоторых вариантах осуществления вакцина способствует профилактике заболевания, вызванного FeLV. В близких вариантах осуществления антитела индуцируются у субъекта из семейства кошачьих, когда субъект из семейства кошачьих иммунизирован вакциной.

Настоящее изобретение также относится к способам иммунизации представителя семейства кошачьих против патогена кошачьих, например FeLV, включающим введение кошачьему иммунологически эффективного количества вакцины или поливалентной вакцины по настоящему изобретению. В конкретных вариантах осуществления вакцину вводят внутримышечной инъекцией. В альтернативных вариантах осуществления вакцину вводят подкожной инъекцией. В других вариантах осуществления вакцину вводят внутривенной инъекцией. В других вариантах осуществления вакцину вводят внутрикожной инъекцией. В других вариантах осуществления вакцину вводят перорально. В других вариантах осуществления вакцину вводят интраназальным введением. В конкретных вариантах представитель семейства кошачьих представляет собой домашнюю кошку.

Вакцины и поливалентные вакцины по настоящему изобретению можно вводить в виде прайм-вакцины и/или в виде бустер-вакцины. В конкретных вариантах осуществления вакцину по настоящему изобретению вводят в виде вакцины однократного применения (одна доза) без необходимости в последующих введениях. В некоторых вариантах осуществления в случае введения как прайм-вакцины, так и бустер-вакцины, то прайм-вакцина и бустер-вакцина могут вводиться одинаковым путем. В некоторых вариантах осуществления этого типа прайм-вакцину и бустер-вакцину вводят подкожной инъекцией. В альтернативных вариантах осуществления в случае введения как прайм-вакцины, так и бустер-вакцины, введение прайм-вакцины может быть выполнено одним путем, и бустер-вакцины - другим путем. В некоторых вариантах осуществления этого типа прайм-вакцину вводят подкожной инъекцией, и бустер-вакцину вводят перорально.

Изобретение также относитсся к способу иммунизации представителя семейства кошачьих против FeLV, включающий инъекцию кошачьему иммунологически эффективного количества вышеописанных вакцин. В конкретных вариантах осуществления вакцины могут включать, например, примерно от 1×10⁴ до примерно 1×10¹⁰ RP или выше. В более конкретных вариантах осуществления вакцины могут включать примерно от 1×10⁵ до примерно 1×10⁹ RP. В еще более конкретных вариантах осуществления вакцины могут включать примерно от 1×10⁶ до примерно 1×10⁸ RP. В конкретных вариантах осуществления представитель семейства кошачьих представляет собой домашнюю кошку.

В конкретных вариантах осуществления вакцины по настоящему изобретению вводят в дозах от 0,05 до 3 мл. В более конкретных вариантах осуществления вводимая доза составляет от 0,1 до 2 мл. В еще более конкретных вариантах осуществления вводимая доза составляет от 0,2 мл до 1,5 мл. В других вариантах осуществления вводимая доза составляет от 0,3 до 1,0 мл. В других вариантах осуществления вводимая доза составляет от 0,4 до 0,8 мл. В еще более конкретных вариантах осуществления вводимая доза составляет от 0,5 до 1,5 мл.

Эти и другие аспекты настоящего изобретения станут более понятными при ссылке на следующее подробное описание.

Подробное описание изобретения

Настоящее изобретение относится к усовершенствованным безопасным неадъювантным вакцинам против FeLV. В одном аспекте вакцины по настоящему изобретению не вызывают образования сарком в месте инъекции у кошачьих, но помогают защитить вакцинированных животных от изнурительного заболевания, вызванного инфекцией FeLV, также эффективно как и инактивированные адъювантные вакцины на основе цельного вируса.

Следовательно, вакцинные композиции по настоящему изобретению включают иммунологически эффективное количество вектора, кодирующего антиген из одного или более штаммов вируса лейкоза кошачьих, которое обеспечивает индукцию защитного иммунитета у вакцинированного животного-реципиента. Кроме того, настоящее изобретение обеспечивает новые иммунологические композиции для повышения надежности вакцинации, с целью снижения уровня антигенемии у кошек, инфицированных FeLV, и тем самым вызвать более скоротечную антигенемию и/или привести к элиминации инфекции. В конкретном аспекте настоящего изобретения вакцины содержат частицу РНК-репликона альфа-вируса (RP), кодирующую гликопротеин вируса FeLV (gp85). В более конкретных вариантах осуществления вакцины содержат частицы РНК-репликона альфа-вируса (RP), которые содержат капсидный белок и гликопротеины вируса венесуэльского энцефаломиелита лошадей (VEE), и кодируют гликопротеин вируса FeLV (gp85) и/или его антигенный фрагмент (например, gp70 или gp45). В еще более конкретных вариантах осуществления вакцины содержат частицы РНК-репликона альфа-вируса (RP), которые содержат капсидный белок и гликопротеины авирулентного штамма TC-83 VEE и кодируют гликопротеин вируса FeLV (gp85) и/или его антигенный фрагмент (например, gp70 или gp45). В еще одном аспекте настоящего изобретения вакцины содержат векторы с «голой» ДНК, которые кодируют гликопротеин вируса FeLV (gp85) и/или его антигенный фрагмент (например, gp70 или gp45). Вакцины по настоящему изобретению можно вводить представителю семейства кошачьих в отсутствии адъюванта и все же эффективно способствовать защите вакцинированной кошки от FeLV.

Для того, чтобы можно было полнее понять изобретение, приводятся следующие определения.

Использование терминов в единственном числе для удобства описания никоим образом не подразумевает ограничение. Таким образом, например, ссылка на композицию, содержащую «полипептид», включает ссылку на один или более таких полипептидов. Кроме того, ссылка на «частицу РНК-репликона альфа-вируса» включает ссылку на множество таких частиц РНК-репликона альфа-вируса, если не указано иное.

В рамках изобретения, термин «примерно» применяется взаимозаменяемо с термином «приблизительно» и означает, что значение находится в пределах пятидесяти процентов от указанного значения, т. е. композиция, содержащая «примерно» 1×10⁸ частиц РНК-репликона альфа-вируса на мл, содержит от 0,5×10⁸ до 1,5×10⁸ частиц РНК-репликона альфа-вируса на мл.

В рамках изобретения, термин «представитель семейства кошачьих» относится к любому члену семейства Felidae. Домашние кошки, чистокровные и/или беспородные домашние кошки и дикие или бесхозные кошки - все являются представителями семейства кошачьих.

В рамках изобретения, термин «репликон» относится к модифицированному вирусному РНК-геному, в котором отсутствует один или более элементов (например, кодирующие последовательности структурных белков), которые, если бы они присутствовали, обеспечили бы успешное размножение исходного вируса в клеточных культурах или в организме животного-хозяина. В подходящих клеточных контекстах репликон сам амплифицируется и может продуцировать один или более видов субгеномной РНК.

В рамках изобретения, термин «частица РНК-репликона альфа-вируса», сокращенно «RP», представляет полученный из альфа-вируса РНК-репликон, упакованный в структурные белки, например, капсид и гликопротеины, которые также происходят из альфа-вируса, например, как описано Pushko et al., [Virology, 239 (2): 389-401 (1997)]. RP не может размножаться в клеточных культурах или в организме животных-хозяев (без хелперной плазмиды или аналогичного компонента), потому что репликон не кодирует структурные компоненты альфа-вируса (например, капсид и гликопротеины).

Термин «отличный от FeLV» используется для модификации терминов, таких как патоген и/или антиген (или иммуноген), для обозначения того, что соответствующий патоген и/или антиген (или иммуноген) не является ни патогеном FeLV, ни антигеном FeLV (или иммуногеном) и что белковый антиген (или иммуноген), отличный от FeLV, не происходит из FeLV.

Термины «происходят из», «происходит из» и «происхождение из» используются взаимозаменяемо по отношению к конкретному белковому антигену и патогену или штамму этого патогена, который его кодирует в природе, и как здесь используются, эти термины означают, что немодифицированная и/или усеченная аминокислотная последовательность конкретного белкового антигена кодируется этим патогеном или штаммом этого патогена. Кодирующая последовательность в конструкте нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению для белкового антигена, происходящего из патогена, могла быть генетически изменена таким образом, чтобы приводить к модификации и/или усечению аминокислотной последовательности экспрессированного белкового антигена относительно соответствующей последовательности этого белкового антигена в патогене или штамме патогена (включая природно аттенуированные штаммы), из которого он происходит.

В рамках изобретения, термины «защита» или «обеспечение защиты» или «индукция защитного иммунитета к», «обеспечивает профилактику заболевания» и «обеспечивает защиту» не требуют полной защиты от проявления каких-либо признаков инфекции. Например, «обеспечивает защиту» может означать, что защита является достаточной для того, чтобы после контрольного заражения симптомы основной инфекции, по меньшей мере, ослаблялись, и/или что одна или более лежащих в основе причин или механизмов, вызывающих симптомы, на клеточном, физиологическом или биохимическом уровне были ослаблены и/или элиминированы. Понятно, что термин «ослабленный», используемый в данном контексте, означает относительный статус инфекции, включая молекулярный статус инфекции, а не только физиологический статус инфекции.

В рамках изобретения, термин «вакцина» представляет композицию, которая подходит для применения на животных, например, кошачьих (включая, в некоторых вариантах осуществления, людей, в то время как в других вариантах осуществления конкретно не для людей), содержащую один или более антигенов, обычно в комбинации с фармацевтически приемлемый носителем, таким как жидкость, содержащая воду, которая при введении животному вызывает иммунный ответ, достаточно сильный для минимального обеспечения защиты от заболевания, возникшего в результате инфицирования микроорганизмом дикого типа, т.е. достаточно сильного для обеспечения профилактики заболевания и/или профилактики, ослабления или излечения заболевания.

В рамках изобретения, поливалентная вакцина представляет собой вакцину, которая содержит два или более различных антигена. В конкретном варианте осуществления этого типа поливалентная вакцина стимулирует иммунную систему реципиента против двух или более различных патогенов.

Термины «адъювант» и «иммуностимулятор» используются здесь взаимозаменяемо и определяются как одно или более соединений, которые вызывают стимуляцию иммунной системы. В данном контексте адъювант используется для усиления иммунного ответа на один или более вакцинных антигенов/изолятов. Соответственно, «адъюванты» представляют собой агенты, которые неспецифически усиливают иммунный ответ на конкретный антиген, тем самым уменьшая количество антигена, необходимого в любой данной вакцине, и/или частоту инъекций, необходимых для генерации адекватного иммунного ответа на представляющий интерес антиген. В данном контексте адъювант используется для усиления иммунного ответа на один или более вакцинных антигенов/изолятов. В Руководстве по вакцинации кошек Американской ассоциации практикующих врачей-фелинологов предлагается применять неадъювантные вакцины FeLV [AAFP Feline Advisory Panel, 15: 785-808 (2013)].

В рамках изобретения, термин «неадъювантная вакцина» представляет вакцину или поливалентную вакцину, которая не содержит адъюванта.

В рамках изобретения, термин «фармацевтически приемлемый» применяется в качестве прилагательного для обозначения того, что модифицированное существительное подходит для применения в фармацевтическом продукте. Когда термин используется, например, для описания эксципиента в фармацевтической вакцине, то он характеризует эксципиент как совместимый с другими ингредиентами композиции и не оказывающий неблагоприятного токсического влияния для предполагаемого животного-реципиента, например представителя семейства кошачьих.

«Парентеральное введение» включает подкожные инъекции, субмукозальные инъекции, внутривенные инъекции, внутримышечные инъекции, внутрикожные инъекции и инфузию.

В рамках изобретения, термин «антигенный фрагмент» по отношению к конкретному белку (например, белковому антигену) представляет собой фрагмент этого белка, который является антигенным, т. е. способен специфически взаимодействовать с антигенраспознающей молекулой иммунной системы, такой как иммуноглобулин (антитело) или Т-клеточный антигенный рецептор. Например, антигенный фрагмент гликопротеина вируса FeLV (gp85) представляет фрагмент белка gp85, который является антигенным. Предпочтительно антигенный фрагмент по настоящему изобретению является иммунодоминантным для распознавания антител и/или Т-клеточного рецептора. В конкретных вариантах осуществления антигенный фрагмент по отношению к данному белковому антигену представляет фрагмент этого белка, который сохраняет по меньшей мере 25% от антигенности полноразмерного белка. В предпочтительных вариантах осуществления антигенный фрагмент сохраняет, по меньшей мере, 50% от антигенности полноразмерного белка. В более предпочтительных вариантах осуществления антигенный фрагмент сохраняет по меньшей мере 75% от антигенности полноразмерного белка. Антигенные фрагменты могут быть небольшими и содержать всего 20 аминокислот или, с другой стороны, представлять собой крупные фрагменты, в которых отсутствует всего одна аминокислота из полноразмерного белка. В конкретных вариантах осуществления антигенный фрагмент содержит от 25 до 150 аминокислотных остатков. В других вариантах осуществления антигенный фрагмент содержит от 50 до 250 аминокислотных остатков. Гликопротеин FeLV gp45 и гликопротеин FeLV gp70 являются антигенными фрагментами гликопротеина FeLV gp85.

В рамках изобретения, одна аминокислотная последовательность на 100% «идентична» или обладает 100% «идентичностью» со второй аминокислотной последовательностью, когда аминокислотные остатки обеих последовательностей идентичны. Следовательно, аминокислотная последовательность на 50% «идентична» второй аминокислотной последовательности, когда 50% аминокислотных остатков двух аминокислотных последовательностей являются идентичными. Сравнение последовательностей проводят по непрерывному блоку аминокислотных остатков, составляющих данный белок, например белок или фрагмент сравниваемого полипептида. В конкретном варианте осуществления учитываются выбранные делеции или вставки, которые в противном случае могли бы изменить соответствие между двумя аминокислотными последовательностями.

В рамках изобретения, процентную идентичность нуклеотидной и аминокислотной последовательности можно определить с использованием алгоритма C, MacVector (MacVector, Inc. Cary, NC 27519), Vector NTI (Informax, Inc. MD), Oxford Molecular Group PLC (1996) и алгоритма Clustal W с параметрами по умолчанию для выравнивания и параметрами по умолчанию для идентичности. Эти коммерчески доступные программы также можно использовать для определения сходства последовательностей с использованием таких же или аналогичных параметров по умолчанию. В качестве альтернативы можно использовать поиск Advanced Blast в условиях фильтрации по умолчанию, например, с использованием pileup программы GCG (Genetics Computer Group, Program Manual for the GCG Package, version 7, Madison, Wisconsin), используя параметры по умолчанию.

В рамках изобретения, термин «инактивированный» микроорганизм используется взаимозаменяемо с термином «убитый» микроорганизм. Для целей этого изобретения «инактивированный» микроорганизм представляет собой микроорганизм, который способен индуцировать иммунный ответ у животного, но не способен инфицировать животное. Антиген по настоящему изобретению (например, инактивированный вирус панлейкопении кошачьих) может быть инактивирован агентом, выбранным из группы, состоящей из бинарного этиленимина, формалина, бета-пропиолактона, тимеросала или нагревания. В конкретном варианте осуществления изоляты инактивированного кошачьего калицивируса в комбинации с RP по настоящему изобретению инактивируются бинарным этиленимином.

Частицы РНК-репликона альфа-вируса по настоящему изобретению можно лиофилизировать и регидратировать стерильным водным разбавителем. С другой стороны, когда частицы РНК-репликона альфа-вируса хранятся отдельно, но предназначены для смешивания с другими компонентами вакцины перед введением, то частицы РНК-репликона альфа-вируса могут храниться в стабилизирующем растворе этих компонентов, например в растворе с высоким содержанием сахарозы.

Вакцину по настоящему изобретению можно легко вводить любым обычным путем, включая внутривенную, внутримышечную, подкожную, пероральную, интраназальную, внутрикожную и/или внутрибрюшинную вакцинацию. Специалист в данной области понимает, что вакцинную композицию предпочтительно формулируют соответственно для каждого вида животного-реципиента и пути введения.

Таким образом, настоящее изобретение также обеспечивает способы иммунизации кошачьих против FeLV и/или других патогенов кошачьих. Один такой способ включает инъекцию кошачьему иммунологически эффективного количества вакцины по настоящему изобретению, так что в результате у кошачьего продуцируются соответствующие антитела против FeLV.

Поливалентные вакцины:

Настоящее изобретение также относится к поливалентным вакцинам. Например, кодирующую последовательность белкового антигена или его антигенного фрагмента или комбинацию таких кодирующих последовательностей белковых антигенов, пригодных для применения в кошачьей вакцине, можно добавить к частице РНК-репликона альфа-вируса (RP) или объединить в той же RP, которая кодирует кошачий антиген FeLV [например, вирусный гликопротеин FeLV (gp85)] в вакцине. Соответственно, такие поливалентные вакцины включаются в настоящее изобретение.

Примеры патогенов, из которых могут происходить один или более таких белковых антигенов, включают вирус ринотрахеита кошачьих (FVR), вирус лейкоза кошачьих (FeLV), вирус панлейкопении кошачьих (FPL), кошачий герпесвирус (FHV), другие штаммы FeLV, кошачий парвовирус (FPV), вирус инфекционного перитонита кошачьих (FIPV), вирус иммунодефицита кошачьих, вирус болезни Борна (BDV), вирус бешенства, вирус кошачьего гриппа, вирус собачьего гриппа, вирус птичьего гриппа, собачий пневмовирус, кошачий пневмовирус, Chlamydophila felis (FKA Chlamydia psittela), Bartonella bronchiseptica и Bartonella spp. (например, B. henselae). В конкретных вариантах осуществления кодирующая последовательность капсидного белка или аналогичного белка из одного или более этих кошачьих или собачьих патогенов может быть вставлена в ту же RP, что и антиген FeLV. Альтернативно или в комбинации с этим кодирующая последовательность капсидного белка или аналогичного белка из одного или более этих кошачьих или собачьих патогенов может быть вставлена в одну или более других RP, которые можно объединить в вакцине на основе RP, которая кодирует антиген FeLV в вакцине.

Кроме того, частица РНК-репликона альфа-вируса (RP), которая кодирует кошачий антиген FeLV [например, вирусный гликопротеин FeLV (gp85)] может быть добавлена вместе с одним или более другими живыми аттенуированными вирусными изолятами, например, живым аттенуированным другим штаммом FCV и/или живым аттенуированным кошачьим герпесвирусом, и/или живым аттенуированным кошачьим парвовирусом, и/или живым аттенуированным вирусом лейкоза кошачьих, и/или живым аттенуированным вирусом инфекционного перитонита кошачьих, и/или живым аттенуированным вирусом иммунодефицита кошачьих, и/или живым аттенуированным вирусом болезни Бора, и/или живым аттенуированным вирусом бешенства, и/или живым аттенуированным вирусом кошачьего гриппа, и/или живым аттенуированным вирусом собачьего гриппа, и/или живым аттенуированным вирусом птичьего гриппа, и/или живым аттенуированным собачьим пневмовирусом и/или живым аттенуированным кошачьим пневмовирусом. Кроме того, живой аттенуированный Chlamydophila felis и/или живой аттенуированный Bordetella bronchiseptica и/или живой аттенуированный Bartonella spp. (например, B. henselae) также могут быть включены в такие поливалентные вакцины.

Кроме того, частица РНК-репликона альфа-вируса (RP), которая кодирует кошачий антиген FeLV [например, например, гликопротеин вируса FeLV (gp85)], может быть добавлена вместе с одним или более другими изолятами убитого вируса, такими как убитый штамм FCV, и/или убитый кошачий герпесвирус, и/или убитый кошачий парвовирус и/или убитый вирус лейкоза кошачьих, и/или убитый вирус инфекционного перитонита кошачьих, и/или убитый вирус иммунодефицита кошачьих, и/или убитый вирус болезни Борна, и/или убитый вирус бешенства, и/или убитый вирус кошачьего гриппа и/или убитый вирус собачьего гриппа и/или убитый вирус птичьего гриппа, и/или убитый собачий пневмовирус, и/или убитый кошачий пневмовирус. Кроме того, бактерины Chlamydophila felis и/или Bordetella bronchiseptica, и/или Bartonella spp. (например, B. henselae) также могут быть включены в такие поливалентные вакцины.

Также следует понимать, что настоящее изобретение не ограничивается конкретными конфигурациями, стадиями способа и материалами, раскрытыми здесь, поскольку такие конфигурации, стадии способа и материалы могут несколько отличаться.

Кроме того, следует понимать, что терминология, используемая здесь, применяется только для описания конкретных вариантов осуществления и не предназначена для ограничения, поскольку объем настоящего изобретения ограничивается только прилагаемой формулой изобретения и ее эквивалентами.

Таблица с последовательностями

SEQ ID NO:	Описание	Тип
1	Гликопротеин вируса FeLV (gp85)	нуклеиновая кислота ДНК
2	Гликопротеин вируса FeLV (gp85)	аминокислотная последовательность
3	Гликопротеин вируса FeLV (gp70)	нуклеиновая кислота ДНК
4	Гликопротеин вируса FeLV (gp70)	аминокислотная последовательность
5	Кошачий калицивирус (VS-FCV)	нуклеиновая кислота ДНК
6	Кошачий калицивирус (VS-FCV)	аминокислотная последовательность
7	Кошачий калицивирус (F9-подобный штамм)	нуклеиновая кислота ДНК
8	Кошачий калицивирус (VS-FCV)	аминокислотная последовательность
9	GGCGCGCCGCACC	нуклеиновая кислота
10	Гликопротеин вируса FeLV (gp85)	нуклеиновая кислота РНК
11	Гликопротеин вируса FeLV (gp70)	нуклеиновая кислота РНК
12	Кошачий калицивирус (VS-FCV)	нуклеиновая кислота РНК
13	Кошачий калицивирус (F9-подобный штамм)	нуклеиновая кислота РНК
14	TTAATTAA	нуклеиновая кислота РНК

Последовательности

Гликопротеин оболочки вируса лейкоза кошачьих (gp85) SEQ ID NO: 1

atggagtcaccaacacaccctaaaccttctaaagacaaaaccctctcgtggaatctcgccttccttgtgggcatcctgttcacaatcgacatcggcatggccaacccttcgccgcatcagatctacaatgtgacatgggtcattactaatgtgcagacaaacacccaggcaaatgctacttctatgcttggtactctgactgatgcttatccaaccctgcacgtcgacctttgcgatctcgtcggtgacacatgggagcccatcgtgctgaatccaactaatgtcaaacatggtgccaggtattcttctagcaaatacgggtgtaagaccactgatcggaagaaacagcaacaaacctacccattctacgtgtgcccgggtcacgcaccgtccctgggtccgaagggaacacattgtgggggagcccaagacggtttttgcgctgcttggggttgtgaaacaaccggagaagcctggtggaagcctacctcatcttgggactacattactgtgaaaagaggctctagccaggataacagctgcgaaggaaagtgtaatcccctggtgcttcaattcacccagaaaggccggcaggcatcatgggatggaccgaaaatgtggggacttagactctatcgcaccggatacgaccccatcgctctgtttactgtgtcacgccaagtctccaccattactccgccacaggccatggggccgaatctggtcctccccgatcagaagccaccctcacggcaaagtcaaaccggctcaaaagtggccacccaacggccccagacaaatgagtccgcacctaggtcagtggcacctacaacaatgggtccaaagcggatcggaaccggagacaggctcattaacctcgtgcaagggacttatctggcccttaacgctactgaccccaacaagaccaaggattgctggctctgccttgtgagcagacctccttactatgaggggatcgccattctcggaaactactcaaatcagaccaacccccctccgtcgtgtctgagcaccccccagcacaagcttactatttcagaagtcagtggacagggaatgtgcatcggaaccgtgccaaagactcatcaagccctttgcaacaaaactcaacaagggcacactggagctcattatctcgccgcacctaacgggacctactgggcttgcaatactggattgaccccgtgtatctctatggccgtgctgaattggacttccgacttctgcgtgcttattgagctttggcctagagtgacataccatcagcctgagtacgtctatacccatttcgccaaggcagtcagattccggcgggagcctatctccctgactgtggccttgatgctcggtggactgacagtgggaggaattgcagctggagtcggaactggaaccaaggccctgctcgaaactgctcagttccggcagctgcagatggccatgcacactgacatccaggctctggaggaatcaatttcagcccttgagaaaagcttgacctcgctgtctgaagtggtcctccaaaacaggcgcggtttggacatcctgttccttcaagagggtggtctgtgcgccgctctcaaggaggaatgctgtttctacgctgaccataccgggctggtgcgcgataacatggcaaagctgcgggaacgcttgaaacagaggcagcaactgttcgactctcagcagggatggttcgagggctggtttaacaagagcccatggtttaccactctgatctcttcaatcatgggtccactgctcatcctgcttctgattcttctcttcggaccgtgtattctcaacaggctggtgcagtttgtcaaggacagaatctcggtggtccaggccctgattcttactcagcagtatcagcagattaagcagtacgaccccgatcggccttga

Гликопротеин оболочки вируса лейкоза кошачьих (gp85) SEQ ID NO: 2

MESPTHPKPSKDKTLSWNLAFLVGILFTIDIGMANPSPHQIYNVTWVITNVQTNTQANAT

SMLGTLTDAYPTLHVDLCDLVGDTWEPIVLNPTNVKHGARYSSSKYGCKTTDRKKQQQTY

PFYVCPGHAPSLGPKGTHCGGAQDGFCAAWGCETTGEAWWKPTSSWDYITVKRGSSQDNS

CEGKCNPLVLQFTQKGRQASWDGPKMWGLRLYRTGYDPIALFTVSRQVSTITPPQAMGPN

LVLPDQKPPSRQSQTGSKVATQRPQTNESAPRSVAPTTMGPKRIGTGDRLINLVQGTYLA

LNATDPNKTKDCWLCLVSRPPYYEGIAILGNYSNQTNPPPSCLSTPQHKLTISEVSGQGM

CIGTVPKTHQALCNKTQQGHTGAHYLAAPNGTYWACNTGLTPCISMAVLNWTSDFCVLIE

LWPRVTYHQPEYVYTHFAKAVRFRREPISLTVALMLGGLTVGGIAAGVGTGTKALLETAQ

FRQLQMAMHTDIQALEESISALEKSLTSLSEVVLQNRRGLDILFLQEGGLCAALKEECCF

YADHTGLVRDNMAKLRERLKQRQQLFDSQQGWFEGWFNKSPWFTTLISSIMGPLLILLLI

LLFGPCILNRLVQFVKDRISVVQALILTQQYQQIKQYDPDRP*

Гликопротеин оболочки вируса лейкоза кошачьих (gp85) SEQ ID NO: 10

auggagucaccaacacacccuaaaccuucuaaagacaaaacccucucguggaaucucgccuuccuugugggcauccuguucacaaucgacaucggcauggccaacccuucgccgcaucagaucuacaaugugacaugggucauuacuaaugugcagacaaacacccaggcaaaugcuacuucuaugcuugguacucugacugaugcuuauccaacccugcacgucgaccuuugcgaucucgucggugacacaugggagcccaucgugcugaauccaacuaaugucaaacauggugccagguauucuucuagcaaauacggguguaagaccacugaucggaagaaacagcaacaaaccuacccauucuacgugugcccgggucacgcaccgucccuggguccgaagggaacacauugugggggagcccaagacgguuuuugcgcugcuugggguugugaaacaaccggagaagccugguggaagccuaccucaucuugggacuacauuacugugaaaagaggcucuagccaggauaacagcugcgaaggaaaguguaauccccuggugcuucaauucacccagaaaggccggcaggcaucaugggauggaccgaaaauguggggacuuagacucuaucgcaccggauacgaccccaucgcucuguuuacugugucacgccaagucuccaccauuacuccgccacaggccauggggccgaaucugguccuccccgaucagaagccacccucacggcaaagucaaaccggcucaaaaguggccacccaacggccccagacaaaugaguccgcaccuaggucaguggcaccuacaacaauggguccaaagcggaucggaaccggagacaggcucauuaaccucgugcaagggacuuaucuggcccuuaacgcuacugaccccaacaagaccaaggauugcuggcucugccuugugagcagaccuccuuacuaugaggggaucgccauucucggaaacuacucaaaucagaccaaccccccuccgucgugucugagcaccccccagcacaagcuuacuauuucagaagucaguggacagggaaugugcaucggaaccgugccaaagacucaucaagcccuuugcaacaaaacucaacaagggcacacuggagcucauuaucucgccgcaccuaacgggaccuacugggcuugcaauacuggauugaccccguguaucucuauggccgugcugaauuggacuuccgacuucugcgugcuuauugagcuuuggccuagagugacauaccaucagccugaguacgucuauacccauuucgccaaggcagucagauuccggcgggagccuaucucccugacuguggccuugaugcucgguggacugacagugggaggaauugcagcuggagucggaacuggaaccaaggcccugcucgaaacugcucaguuccggcagcugcagauggccaugcacacugacauccaggcucuggaggaaucaauuucagcccuugagaaaagcuugaccucgcugucugaagugguccuccaaaacaggcgcgguuuggacauccuguuccuucaagaggguggucugugcgccgcucucaaggaggaaugcuguuucuacgcugaccauaccgggcuggugcgcgauaacauggcaaagcugcgggaacgcuugaaacagaggcagcaacuguucgacucucagcagggaugguucgagggcugguuuaacaagagcccaugguuuaccacucugaucucuucaaucauggguccacugcucauccugcuucugauucuucucuucggaccguguauucucaacaggcuggugcaguuugucaaggacagaaucucggugguccaggcccugauucuuacucagcaguaucagcagauuaagcaguacgaccccgaucggccuuga

Гликопротеин оболочки вируса лейкоза кошачьих (gp70) SEQ ID NO: 3

aatcctagtccacaccaaatatataatgtaacttgggtaataaccaatgtacaaactaacacccaagctaacgccacctctatgttaggaaccttaaccgatgcctaccctaccctacatgttgacttatgtgacctagtgggagacacctgggaacctatagtcctaaacccaaccaatgtaaaacacggggcacgttactcctcctcaaaatatggatgtaaaactacagatagaaaaaaacagcaacagacataccccttttacgtctgccccggacatgccccctcgttggggccaaagggaacacattgtggaggggcacaagatgggttttgtgccgcatggggatgtgagaccaccggagaagcttggtggaagcccacctcctcatgggactatatcacagtaaaaagagggagtagtcaggacaatagctgtgagggaaaatgcaaccccctggttttgcagttcacccagaagggaagacaagcctcttgggacggacctaagatgtggggattgcgactataccgtacaggatatgaccctatcgctttattcacggtgtcccggcaggtatcaaccattacgccgcctcaggcaatgggaccaaacctagtcttacctgatcaaaaacccccatcccgacaatctcaaacagggtccaaagtggcgacccagaggccccaaacgaatgaaagcgccccaaggtctgttgcccccaccaccatgggtcccaaacggattgggaccggagataggttaataaatttagtacaagggacatacctagccttaaatgccaccgaccccaacaaaactaaagactgttggctctgcctggtttctcgaccaccctattacgaagggattgcaatcttaggtaactacagcaaccaaacaaacccccccccatcctgcctatctactccgcaacacaaactaactatatctgaagtatcagggcaaggaatgtgcatagggactgttcctaaaacccaccaggctttgtgcaataagacacaacagggacatacaggggcgcactatctagccgcccccaacggcacctattgggcctgtaacactggactcaccccatgcatttccatggcggtgctcaattggacctctgatttttgtgtcttaatcgaattatggcccagagtgacttaccatcaacccgaatatgtgtacacacattttgccaaagctgtcaggttccgaaga

Гликопротеин оболочки вируса лейкоза кошачьих (gp70) SEQ ID NO: 4

NPSPHQIYNVTWVITNVQTNTQANATSMLGTLTDAYPTLHVDLCDLVGDTWEPIVLNPTNVKHGARYSSSKYGCKTTDRKKQQQTYPFYVCPGHAPSLGPKGTHCGGAQDGFCAAWGCETTGEAWWKPTSSWDYITVKRGSSQDNSCEGKCNPLVLQFTQKGRQASWDGPKMWGLRLYRTGYDPIALFTVSRQVSTITPPQAMGPNLVLPDQKPPSRQSQTGSKVATQRPQTNESAPRSVAPTTMGPKRIGTGDRLINLVQGTYLALNATDPNKTKDCWLCLVSRPPYYEGIAILGNYSNQTNPPPSCLSTPQHKLTISEVSGQGMCIGTVPKTHQALCNKTQQGHTGAHYLAAPNGTYWACNTGLTPCISMAVLNWTSDFCVLIELWPRVTYHQPEYVYTHFAKAVRFRR

Гликопротеин оболочки вируса лейкоза кошачьих (gp70) SEQ ID NO: 11

aauccuaguccacaccaaauauauaauguaacuuggguaauaaccaauguacaaacuaacacccaagcuaacgccaccucuauguuaggaaccuuaaccgaugccuacccuacccuacauguugacuuaugugaccuagugggagacaccugggaaccuauaguccuaaacccaaccaauguaaaacacggggcacguuacuccuccucaaaauauggauguaaaacuacagauagaaaaaaacagcaacagacauaccccuuuuacgucugccccggacaugcccccucguuggggccaaagggaacacauuguggaggggcacaagauggguuuugugccgcauggggaugugagaccaccggagaagcuugguggaagcccaccuccucaugggacuauaucacaguaaaaagagggaguagucaggacaauagcugugagggaaaaugcaacccccugguuuugcaguucacccagaagggaagacaagccucuugggacggaccuaagauguggggauugcgacuauaccguacaggauaugacccuaucgcuuuauucacggugucccggcagguaucaaccauuacgccgccucaggcaaugggaccaaaccuagucuuaccugaucaaaaacccccaucccgacaaucucaaacaggguccaaaguggcgacccagaggccccaaacgaaugaaagcgccccaaggucuguugcccccaccaccaugggucccaaacggauugggaccggagauagguuaauaaauuuaguacaagggacauaccuagccuuaaaugccaccgaccccaacaaaacuaaagacuguuggcucugccugguuucucgaccacccuauuacgaagggauugcaaucuuagguaacuacagcaaccaaacaaacccccccccauccugccuaucuacuccgcaacacaaacuaacuauaucugaaguaucagggcaaggaaugugcauagggacuguuccuaaaacccaccaggcuuugugcaauaagacacaacagggacauacaggggcgcacuaucuagccgcccccaacggcaccuauugggccuguaacacuggacucaccccaugcauuuccauggcggugcucaauuggaccucugauuuuugugucuuaaucgaauuauggcccagagugacuuaccaucaacccgaauauguguacacacauuuugccaaagcugucagguuccgaaga

Капсид кошачьего калицивируса (VS-FCV) (SEQ ID NO: 5)

atggctgacgacggatctgtgaccaccccagaacaaggaacaatggtcggaggagtgattgccgaacccagcgctcagatgtcaactgcggcggacatggcctccggaaagtcggtggactccgagtgggaagccttcttctcgttccacacgtccgtgaactggagcacctccgaaacccaaggaaagatcctcttcaagcagtccctgggtcccctgctgaacccgtacctggagcacatcagcaagctgtacgtcgcttggagcgggtcgatcgaagtgcgattttccatctcgggaagcggcgtgttcggtggtaaactggccgccatcgtcgtgccgcctggtgtcgaccctgtccagtcaacctccatgctgcagtacccgcacgtcctgttcgacgcaagacaagtggagccagtgatcttctccatcccggacctccgcaacagcctgtatcacttgatgtccgataccgataccacttccctcgtgatcatggtgtacaacgatctgatcaacccgtacgccaatgactccaacagctcgggttgcatcgtgaccgtcgaaacgaagcctggcatcgatttcaagtttcatctgctgaaaccgcccggatccatgcttactcacgggtccatcccttccgatctgatccccaagagctcctccctgtggattgggaaccgccactggaccgatattaccgatttcgtgattcggcctttcgtgttccaagccaaccggcacttcgacttcaaccaggagactgccggctggtcaactccacggttccgcccattggccgtgactgtgtcgcagtcaaagggagccaagctcgggaacggcatcgccaccgactacattgtgcctggaatccccgacggatggcctgatactaccatccccaccaagctgacccctaccggagattacgccatcacctcctccgacggcaatgatattgaaaccaagctggaatacgagaacgcggacgtgattaagaacaacaccaacttccgctccatgtatatctgcggaagcctccagagggcttggggcgacaagaagatcagcaacaccgggttcatcactaccggagtgatttctgacaactccatcagcccttcgaacacaattgaccagtccaagatcgtggtgtaccaggacaaccatgtcaattcggaggtccagactagcgacatcactcttgccatcctgggctacaccggaattggagaagaggccataggcgccaaccgggactccgtcgtgagaatttccgtgcttccggaaactggagcaaggggcggaaatcaccccatcttctacaaaaattccatgaagctgggctacgtgatctcctccattgacgtgttcaactcccaaatcctccacacctcgcgccagctgtcactgaacaactacttgttgccccctgactccttcgcggtgtaccggattattgacagcaacggatcatggttcgacattgggattgacagcgatgggttttcattcgtgggcgtgtcgtcatttccaaagctggagtttccgctgtccgcctcatacatgggcatccagctcgcaaagatccggctggcgtccaacatccggtcatccatgactaagctgtga

Капсид кошачьего калицивируса (VS-FCV) (SEQ ID NO: 6)

MADDGSVTTPEQGTMVGGVIAEPSAQMSTAADMASGKSVDSEWEAFFSFHTSVNWSTSETQGKILFKQSLGPLLNPYLEHISKLYVAWSGSIEVRFSISGSGVFGGKLAAIVVPPGVDPVQSTSMLQYPHVLFDARQVEPVIFSIPDLRNSLYHLMSDTDTTSLVIMVYNDLINPYANDSNSSGCIVTVETKPGIDFKFHLLKPPGSMLTHGSIPSDLIPKSSSLWIGNRHWTDITDFVIRPFVFQANRHFDFNQETAGWSTPRFRPLAVTVSQSKGAKLGNGIATDYIVPGIPDGWPDTTIPTKLTPTGDYAITSSDGNDIETKLEYENADVIKNNTNFRSMYICGSLQRAWGDKKISNTGFITTGVISDNSISPSNTIDQSKIVVYQDNHVNSEVQTSDITLAILGYTGIGEEAIGANRDSVVRISVLPETGARGGNHPIFYKNSMKLGYVISSIDVFNSQILHTSRQLSLNNYLLPPDSFAVYRIIDSNGSWFDIGIDSDGFSFVGVSSFPKLEFPLSASYMGIQLAKIRLASNIRSSMTKL

Капсид кошачьего калицивируса (VS-FCV) (SEQ ID NO: 12)

auggcugacgacggaucugugaccaccccagaacaaggaacaauggucggaggagugaugccgaacccagcgcucagaugucaacugcggcggacauggccuccggaaagucgguggacuccgagugggaagccuucuucucguuccacacguccgugaacuggagcaccuccgaaacccaaggaaagauccucuucaagcagucccuggguccccugcugaacccguaccuggagcacaucagcaagcuguacgucgcuuggagcgggucgaucgaagugcgauuuuccaucucgggaagcggcguguucggugguaaacuggccgccaucgucgugccgccuggugucgacccuguccagucaaccuccaugcugcaguacccgcacguccuguucgacgcaagacaaguggagccagugaucuucuccaucccggaccuccgcaacagccuguaucacuugauguccgauaccgauaccacuucccucgugaucaugguguacaacgaucugaucaacccguacgccaaugacuccaacagcucggguugcaucgugaccgucgaaacgaagccuggcaucgauuucaaguuucaucugcugaaaccgcccggauccaugcuuacucacggguccaucccuuccgaucugauccccaagagcuccucccuguggauugggaaccgccacuggaccgauauuaccgauuucgugauucggccuuucguguuccaagccaaccggcacuucgacuucaaccaggagacugccggcuggucaacuccacgguuccgcccauuggccgugacugugucgcagucaaagggagccaagcucgggaacggcaucgccaccgacuacauugugccuggaauccccgacggauggccugauacuaccauccccaccaagcugaccccuaccggagauuacgccaucaccuccuccgacggcaaugauauugaaaccaagcuggaauacgagaacgcggacgugauuaagaacaacaccaacuuccgcuccauguauaucugcggaagccuccagagggcuuggggcgacaagaagaucagcaacaccggguucaucacuaccggagugauuucugacaacuccaucagcccuucgaacacaauugaccaguccaagaucgugguguaccaggacaaccaugucaauucggagguccagacuagcgacaucacucuugccauccugggcuacaccggaauuggagaagaggccauaggcgccaaccgggacuccgucgugagaauuuccgugcuuccggaaacuggagcaaggggcggaaaucaccccaucuucuacaaaaauuccaugaagcugggcuacgugaucuccuccauugacguguucaacucccaaauccuccacaccucgcgccagcugucacugaacaacuacuuguugcccccugacuccuucgcgguguaccggauuauugacagcaacggaucaugguucgacauugggauugacagcgauggguuuucauucgugggcgugucgucauuuccaaagcuggaguuuccgcuguccgccucauacaugggcauccagcucgcaaagauccggcuggcguccaacauccggucauccaugacuaagcuguga

Капсид кошачьего калицивируса (F9-подобного штамма) (SEQ ID NO: 7)

atgactgccccggaacaaggaacgatggtcggaggagtgattgcagaaccgtcagcacagatgtccaccgctgccgacatggccactggaaagagcgtggactccgaatgggaagccttcttctccttccacacttcggtcaactggtcgactagcgaaacccaggggaagattttgttcaagcaatccctcggccctctgctgaacccctacctggagcatctggccaagctgtacgtggcatggtcgggcagcatcgaagtgcgctttagcatttccggctccggagtgttcgggggaaagcttgctgccattgtcgtgccgccaggagtggacccggtgcagtccacttctatgctccaatacccgcatgtcctgttcgacgccagacaggtggagcctgtgatcttttgcctgccggatctcaggtccaccctgtatcacctcatgtccgacaccgacaccacctcgctcgtgatcatggtgtacaacgacctgatcaacccctacgctaacgacgccaacagctcaggttgcattgtgactgtcgaaaccaagccaggccctgacttcaagtttcatttgctgaagccgcccggttccatgctgacccacggctcgatcccatccgacctgatccccaagacgagctccctgtggatcggaaaccgctactggtccgatattaccgacttcgtgatcagaccattcgtgttccaagccaaccgccatttcgacttcaaccaggaaaccgcaggatggtcgacccctcgattccgcccgatttcagtgaccatcaccgaacagaacggcgcgaagctgggaattggcgtggcgaccgactacatcgtgccgggaatcccggatggatggcctgatacgaccattcccggggagctgatccctgccggggactacgccatcaccaacggtactggaaacgacatcaccactgccaccggttacgacaccgccgacatcataaagaacaacaccaacttcagaggaatgtacatttgcggctccctgcaacgcgcttggggtgacaaaaagatctcgaacactgccttcatcacaacagcgactctggacggcgataacaacaacaagatcaatccttgtaataccatcgaccagtccaaaatcgtggtgttccaggataaccacgtgggaaagaaggcgcagacctccgacgacactctggcgctgcttggctacaccgggatcggcgagcaggccattggaagcgatcgggatcgggtcgtgcggatctccaccctccccgagactggagcaaggggaggcaaccaccccatcttttacaaaaacagcattaagctcggatacgtcatccgctccatcgatgtgttcaactctcaaatcctgcacacttcgcggcagctgtccctgaaccactacctcttgccgcccgactccttcgccgtctaccggatcattgattcgaacgggagctggttcgacatcggcattgatagcgatggcttctcgtttgtgggcgtgtcgggcttcgggaagctggagttcccactgagcgcctcatacatgggtatccagctggccaagatcaggctggcctccaacatccgctcacctatgactaagctgtga

Капсид кошачьего калицивируса (F9-подобного штамма) (SEQ ID NO: 8)

MTAPEQGTMVGGVIAEPSAQMSTAADMATGKSVDSEWEAFFSFHTSVNWSTSETQGKILFKQSLGPLLNPYLEHLAKLYVAWSGSIEVRFSISGSGVFGGKLAAIVVPPGVDPVQSTSMLQYPHVLFDARQVEPVIFCLPDLRSTLYHLMSDTDTTSLVIMVYNDLINPYANDANSSGCIVTVETKPGPDFKFHLLKPPGSMLTHGSIPSDLIPKTSSLWIGNRYWSDITDFVIRPFVFQANRHFDFNQETAGWSTPRFRPISVTITEQNGAKLGIGVATDYIVPGIPDGWPDTTIPGELIPAGDYAITNGTGNDITTATGYDTADIIKNNTNFRGMYICGSLQRAWGDKKISNTAFITTATLDGDNNNKINPCNTIDQSKIVVFQDNHVGKKAQTSDDTLALLGYTGIGEQAIGSDRDRVVRISTLPETGARGGNHPIFYKNSIKLGYVIRSIDVFNSQILHTSRQLSLNHYLLPPDSFAVYRIIDSNGSWFDIGIDSDGFSFVGVSGFGKLEFPLSASYMGIQLAKIRLASNIRSPMTKL

Капсид кошачьего калицивируса (F9-подобного штамма) (SEQ ID NO: 13)

augacugccccggaacaaggaacgauggucggaggagugauugcagaaccgucagcacagauguccaccgcugccgacauggccacuggaaagagcguggacuccgaaugggaagccuucuucuccuuccacacuucggucaacuggucgacuagcgaaacccaggggaagauuuuguucaagcaaucccucggcccucugcugaaccccuaccuggagcaucuggccaagcuguacguggcauggucgggcagcaucgaagugcgcuuuagcauuuccggcuccggaguguucgggggaaagcuugcugccauugucgugccgccaggaguggacccggugcaguccacuucuaugcuccaauacccgcauguccuguucgacgccagacagguggagccugugaucuuuugccugccggaucucagguccacccuguaucaccucauguccgacaccgacaccaccucgcucgugaucaugguguacaacgaccugaucaaccccuacgcuaacgacgccaacagcucagguugcauugugacugucgaaaccaagccaggcccugacuucaaguuucauuugcugaagccgcccgguuccaugcugacccacggcucgaucccauccgaccugauccccaagacgagcucccuguggaucggaaaccgcuacugguccgauauuaccgacuucgugaucagaccauucguguuccaagccaaccgccauuucgacuucaaccaggaaaccgcaggauggucgaccccucgauuccgcccgauuucagugaccaucaccgaacagaacggcgcgaagcugggaauuggcguggcgaccgacuacaucgugccgggaaucccggauggauggccugauacgaccauucccggggagcugaucccugccggggacuacgccaucaccaacgguacuggaaacgacaucaccacugccaccgguuacgacaccgccgacaucauaaagaacaacaccaacuucagaggaauguacauuugcggcucccugcaacgcgcuuggggugacaaaaagaucucgaacacugccuucaucacaacagcgacucuggacggcgauaacaacaacaagaucaauccuuguaauaccaucgaccaguccaaaaucgugguguuccaggauaaccacgugggaaagaaggcgcagaccuccgacgacacucuggcgcugcuuggcuacaccgggaucggcgagcaggccauuggaagcgaucgggaucgggucgugcggaucuccacccuccccgagacuggagcaaggggaggcaaccaccccaucuuuuacaaaaacagcauuaagcucggauacgucauccgcuccaucgauguguucaacucucaaauccugcacacuucgcggcagcugucccugaaccacuaccucuugccgcccgacuccuucgccgucuaccggaucauugauucgaacgggagcugguucgacaucggcauugauagcgauggcuucucguuugugggcgugucgggcuucgggaagcuggaguucccacugagcgccucauacauggguauccagcuggccaagaucaggcuggccuccaacauccgcucaccuaugacuaagcuguga

Следующие примеры служат для дальнейшего понимания изобретения, но никоим образом не предназначены для ограничения действительного объема изобретения.

Примеры

Пример 1

Включение кодирующих последовательностей FeLV gp85 в частицы РНК-репликона альфа-вируса

Введение

РНК-вирусы использовали в качестве векторов-носителей для введения вакцинных антигенов, которые были генетически введены в их геномы. Однако их применение к настоящему времени ограничивалось преимущественно включением вирусных антигенов в РНК-вирус и затем введением вируса хозяину-реципиенту. Результатом является индукция ответной выработки защитных антител против включенных вирусных антигенов. Частицы РНК-репликона альфа-вируса использовали для кодирования патогенных антигенов. Такие платформы альфа-вирусных репликонов были разработаны на основе нескольких различных альфа-вирусов, включая вирус венесуэльского энцефаломиелита лошадей (VEE) [Pushko et al., Virology, 239: 389-401 (1997)], вирус Синдбис (SIN) [Bredenbeek et al., Journal of Virology, 67: 6439-6446 (1993), содержание указанных публикаций в полном объеме включено здесь посредством ссылки], и вирус леса Семлики (SFV) [Liljestrom and Garoff, Biotechnology (NY), 9: 1356-1611 (1991), содержание указанной публикации в полном объеме включено здесь посредством ссылки]. Кроме того, частицы РНК-репликона альфа-вируса являются основой для нескольких лицензированных USDA вакцин для свиней и птицы. К ним относятся: вакцина против эпидемической диареи свиней, частица РНК (код продукта 19U5.P1), вакцина против свиного гриппа, РНК (код продукта 19A5.D0), вакцина против птичьего гриппа, РНК (код продукта 19O5.D0) и рецептурный продукт, частица РНК (код продукта 9PP0.00).

Конструирование частиц РНК-реликона альфа-вируса

Аминокислотную последовательность FeLV gp85 использовали для получения кодон-оптимизированных (с использованием кошачьих кодонов) нуклеотидных последовательностей in silico. Оптимизированные последовательности получали в виде синтетической ДНК из коммерческого источника (ATUM, Newark, CA). Соответственно, синтетический ген конструировали на основе аминокислотной последовательности gp85. Конструкт (gp85_wt) представлял аминокислотную последовательность дикого типа [SEQ ID NO: 2], кодон-оптимизированную для кошачьих, с фланкирующей последовательностью, подходящей для клонирования в плазмидный альфа-вирусный репликон.

Векторы на основе репликона VEE, сконструированные для экспрессии FeLV gp85, конструировали, как описано ранее [см. заявка на патент США № 9441247 B2; содержание которой включено здесь посредством ссылки] со следующими модификациями. Полученный из TC-83 вектор, содержащий репликон, «pVEK» [раскрытый и описанный в заявке на патент США № 9441247 B2] расщепляли рестриктазами AscI и PacI. ДНК-плазмиду, содержащую кодон-оптимизированную нуклеотидную последовательность открытой рамки считывания генов FeLV gp85 с 5'-фланкирующей последовательностью (5’-GGCGCGCCGCACC-3’) [SEQ ID NO: 9] и 3'-фланкирующей последовательностью (5’-TTAATTAA-3’), аналогичным образом расщепляли рестриктазами AscI и PacI. Затем синтетическую генную кассету лигировали в расщепленный вектор pVEK, и полученный клон был переименован в «pVHV-FeLV gp85». Номенклатура векторов «pVHV» была выбрана для обозначения векторов на основе репликонов, полученных из pVEK, содержащих трансгенные кассеты, клонированные через сайты AscI и PacI в сайт множественного клонирования pVEK.

Получение частиц РНК-репликона ТС-83 (RP) проводили в соответствии с методами, описанными ранее [заявки на патент США № 9441247 B2 и № 8460913 B2; содержание которых в полном объеме включено здесь посредством ссылки]. Вкратце, плазмиды с ДНК репликоном вектора pVHV и ДНК хелпера линеаризовали рестриктазой NotI перед транскрипцией in vitro с использованием РНК-полимеразы MegaScript T7 и кэп-аналога (Promega, Madison, WI). Важно, что хелперные РНК, используемые в получении, не имеют последовательности субгеномного промотора VEE, как описано ранее [Kamrud et al., J. Gen. Virol., 91 (Pt 7): 1723-1727 (2010)]. Выделенную РНК для компонентов репликона и хелпера объединяли и смешивали с суспензией клеток Vero, подвергали электропорации в 4-мм кюветах и возвращали в культуральную клеточную среду OptiPro^® SFM (Thermo Fisher, Waltham MA). После инкубации в течение ночи частицы РНК-репликона альфа-вируса очищали от клеток и среды пропусканием суспензии через глубинный фильтр ZetaPlus BioCap (3M, Maplewood, MN), промыванием фосфатно-солевым буфером, содержащим 5% сахарозы (мас./об.), и, наконец, элюированием оставшейся RP 400 мМ NaCl-буфером. Элюированную RP формулировали в конце в 5% растворе сахарозы (мас./об.), пропускали через мембранный фильтр 0,22 мкм и распределяли на аликвотные порции для хранения. Титр функциональной RP определяли иммунофлуоресцентным анализом на монослоях инфицированных клеток Vero.

Пример 2

Сравнительная оценка эффективности и безопасности вакцин против FeLV у кошек

Вакцину, содержащую частицу РНК-репликона (RP), кодирующую капсидный белок и гликопротеины авирулентного штамма ТС-83 вируса венесуэльского энцефаломиелита лошадей (VEE) и кодирующую гликопротеин вируса FeLV (gp85) формулировали в 5% растворе сахарозы. Жидкую вакцину замораживали для хранения до использования. Данную вакцину сравнивали с коммерчески доступной вакциной, содержащей рекомбинантный вирус оспы канареек, кодирующий FeLV, как показано в таблице 1 ниже. Пять групп по 8 кошек в каждой вакцинировали одной дозой в возрасте 8-9 недель, или в «прайм/буст» режиме в возрасте 8-9 недель и затем через 21 день. Дозы для каждой опытной вакцинированной группы приведены в таблице 1 ниже.

Таблица 1 Протокол вакцинации
Группа обработки	Количество животных	Вакцина	RP/доза	Дни вакцинации
1	8	RP-FeLV	4,35×10⁸	0, 21
2	8	RP-FeLV	3,55×10⁷	0, 21
3	8	RP-FeLV	1,5×10⁸	21 (однократное применение)
4	8	PureVax^®#	Не применяли	0, 21
5	8	Плацебо	нет	0,21
^# Вакцина, содержащая рекомбинантный вирус оспы канареек, кодирующий FeLV, производства Merial^®

Всех кошек подкожно вакцинировали 1,0 мл вакцины по соответствующей схеме вакцинации. Кошки были в возрасте 8-9 недель на время первоначальной вакцинации (включая кошек в группе 3). Кошек группы 4 вакцинировали на время и в количестве, указанном на этикетке коммерческой вакцины. После вакцинации за кошками проводили наблюдение в отношении проявления побочных реакций на вакцины, оценивая общее состояние ежедневно, а также пальпируя место инъекции в течение двух дней после каждой вакцинации и дважды в неделю в течение двух недель после каждой вакцинации. Никаких побочных реакций не наблюдали ни для одной из вакцин.

Всех кошек подвергали контрольному заражению вирулентной культурой FeLV через четыре недели после бустер-вакцинации (через четыре недели после однократной вакцинации для кошек группы 3). Кошек заражали на четыре отдельных дня в течение одной недели (дни опыта 49, 52, 54 и 56) введением 1,0 мл вируса для контрольного заражения интраназально и перорально (0,3 мл в каждую ноздрю и 0,4 мл перорально). Через три недели после контрольного заражения отбирали образцы крови для приготовления сыворотки каждую неделю в течение десяти недель после контрольного заражения. Образцы сыворотки анализировали ELISA на наличие антигена FeLV p27. Животное считали зараженным FeLV, если у него определяли персистентную антигенемию. Антигенемия определяется как положительный результат ELISA на p27 в течение трех последовательных недель или в пяти или более случаях в течение восьминедельного периода тестирования. Вакцина против FeLV должна защищать 75% кошек, вакцинированных исследуемым продуктом для лицензирования USDA. Кроме того, для того, чтобы заражение считалось подтвержденным, у 80% контрольных кошек должна иметь место персистентная антигенемия [см. Shipley et al., JAVMA, Vol. 199, № 10 (Nov 15, 1991)]. Результаты контрольного заражения приведены в таблице 2 ниже.

Таблица 2 Вакцинация и контрольное заражение
Группа обработки	Вакцина	RP/доза	% кошек с антигенемией	% защищенных кошек
1	RP-FeLV	4,35×10⁸	0%	100%
2	RP-FeLV	3,55×10⁷	0%	100%
3	RP-FeLV	1,5×10⁸ (однократное применение)^*	13%	87%
4	PureVax^® ^#	Не применяли	43%	57%
5	Плацебо	Не применяли	88%	12%
# Вакцина, содержащая рекомбинантный вирус оспы канареек, кодирующий FeLV, производства Merial^® * Все остальные группы получали режим с двумя дозами, см. таблицу 1 выше

Как следует из таблицы 2, вакцины RP-FeLV защищали 100% кошек при введении в режиме с двумя дозами (т.е. прайм- и бустер-вакцинация) в обеих испытанных дозах. Кроме того, вакцина RP-FeLV защищала 87% кошек при введении в виде однократной дозы. В противоположность этому, коммерчески доступная вакцина защищала только 57% кошек даже в режиме с двумя дозами. Кроме того, контрольное заражение считали подтвержденным, поскольку у более чем 80% контрольных кошек определяли персистентную антигенемию [см. таблицу 2]. Наконец, было установлено, что все вакцинные композиции RP-FeLV были безопасными для кошек.

Пример 3

Определение дозозависимости для вакцины RP-FELV вакцинацией и контрольным заражением

Вакцину RP-FeLV из примера 2 формулировали в виде вакцинной композиции, которая включала ферментативно гидролизованный казеин (NZ-амин^®), желатин и сахарозу. Затем вакцину лиофилизировали. Четыре группы по десять кошек в каждой вакцинировали, как показано в таблице 3 ниже:

Таблица 3 Протокол вакцинации
Группа обработки	Количество животных	Вакцина	RP/доза	Дни вакцинации
1	10	RP-FeLV	1,1×10⁵	0, 21
2	10	RP-FeLV	2,1×10⁶	0, 21
3	10	RP-FeLV	6,5×10⁷	0, 21
4	10	Невакцинированные контроли	нет	неприменимо

Всех кошек вакцинировали подкожно 1,0 мл соответствующего исследуемого продукта. На момент прайм-вакцинации кошки были в возрасте 8-9 недель. После вакцинации за кошками проводили наблюдение в отношении проявления побочных реакций на вакцины, ежедневно оценивая их общее состояние, а также пальпируя место инъекции в течение двух дней после каждой вакцинации и дважды в неделю в течение двух недель после каждой вакцинации. Никаких побочных реакций ни на одну из вакцин не наблюдали.

Всех кошек подвергали контрольному заражению вирулентной культурой FeLV через три недели после бустер-вакцинации. Кошек заражали на четыре отдельных дня в течение одной недели (дни опыта 42, 45, 47 и 49) введением 1,0 мл вируса для контрольного заражения интраназально и перорально (0,3 мл в каждую ноздрю и 0,4 мл перорально). Через три недели после контрольного заражения отбирали образцы крови для приготовления сыворотки каждую неделю в течение двенадцати недель после контрольного заражения. Образцы сыворотки анализировали ELISA на наличие антигена FeLV p27. Животное считали зараженным FeLV, если у него определяли персистентную антигенемию. Антигенемия определяется как положительный результат ELISA на p27 в течение трех последовательных недель или в пяти или более случаях в течение восьминедельного периода тестирования. Для лицензирования USDA вакцина против FeLV должна защищать 75% кошек, вакцинированных исследуемым продуктом. Для того, чтобы заражение считалось подтвержденным, у 80% контрольных кошек должна быть персистентная антигенемия [Shipley et al., JAVMA, Vol. 199, № 10, Nov 15, 1991]. Результаты контрольного заражения приведены в таблице 4 ниже:

Таблица 4 Дозозависимость RP-FELV
Группа обработки	Вакцина	RP/доза	% кошек с антигенемией	% защищенных кошек
1	RP-FeLV	1,1×10⁵	10%	90%
2	RP-FeLV	2,1×10⁶	0%	100%
3	RP-FeLV	6,5×10⁷	0%	100%
4	Невакцинированные контроли	нет	90%	10%

В этом исследовании кратковременного иммунитета минимальная протективная доза вакцины RP-FeLV для 100% защиты кошек составляла примерно от 1,0×10⁵ до примерно 2,0×10⁶ RP, при введении по схеме с двумя дозами (прайм- и бустер-вакцинация). Контрольное заражение было подтвержденным, поскольку, по меньшей мере, у 80% контрольных кошек была персистентная антигенемия. Все тестированные вакцинные композиции RP-FeLV были безопасны для кошек.

Настоящее изобретение не должно ограничиваться в объеме конкретными вариантами осуществления, описанными здесь. Действительно, различные модификации изобретения в дополнение к тем, которые описаны здесь, станут очевидными для специалистов в данной области техники из вышеприведенного описания. Такие модификации предназначены для включения в объем прилагаемой формулы изобретения.

Кроме того, следует понимать, что все размеры последовательностей оснований или размеры последовательностей аминокислот и все молекулярные массы или значения молекулярной массы, приведенные для нуклеиновых кислот или полипептидов, являются примерными и представлены для описания.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> Intervet, Inc

Intervet International, BV

Tarpey, Ian

<120> ВАКЦИНА ПРОТИВ ВИРУСА ЛЕЙКОЗА КОШАЧЬИХ

<130> 24533

<150> 62/582,050

<151> 2017-11-06

<150> 62/596,508

<151> 2017-12-08

<150> 62/599,401

<151> 2017-12-15

<160> 13

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1929

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> кодон-оптимизированная для кошачьих

<400> 1

atggagtcac caacacaccc taaaccttct aaagacaaaa ccctctcgtg gaatctcgcc 60

ttccttgtgg gcatcctgtt cacaatcgac atcggcatgg ccaacccttc gccgcatcag 120

atctacaatg tgacatgggt cattactaat gtgcagacaa acacccaggc aaatgctact 180

tctatgcttg gtactctgac tgatgcttat ccaaccctgc acgtcgacct ttgcgatctc 240

gtcggtgaca catgggagcc catcgtgctg aatccaacta atgtcaaaca tggtgccagg 300

tattcttcta gcaaatacgg gtgtaagacc actgatcgga agaaacagca acaaacctac 360

ccattctacg tgtgcccggg tcacgcaccg tccctgggtc cgaagggaac acattgtggg 420

ggagcccaag acggtttttg cgctgcttgg ggttgtgaaa caaccggaga agcctggtgg 480

aagcctacct catcttggga ctacattact gtgaaaagag gctctagcca ggataacagc 540

tgcgaaggaa agtgtaatcc cctggtgctt caattcaccc agaaaggccg gcaggcatca 600

tgggatggac cgaaaatgtg gggacttaga ctctatcgca ccggatacga ccccatcgct 660

ctgtttactg tgtcacgcca agtctccacc attactccgc cacaggccat ggggccgaat 720

ctggtcctcc ccgatcagaa gccaccctca cggcaaagtc aaaccggctc aaaagtggcc 780

acccaacggc cccagacaaa tgagtccgca cctaggtcag tggcacctac aacaatgggt 840

ccaaagcgga tcggaaccgg agacaggctc attaacctcg tgcaagggac ttatctggcc 900

cttaacgcta ctgaccccaa caagaccaag gattgctggc tctgccttgt gagcagacct 960

ccttactatg aggggatcgc cattctcgga aactactcaa atcagaccaa cccccctccg 1020

tcgtgtctga gcacccccca gcacaagctt actatttcag aagtcagtgg acagggaatg 1080

tgcatcggaa ccgtgccaaa gactcatcaa gccctttgca acaaaactca acaagggcac 1140

actggagctc attatctcgc cgcacctaac gggacctact gggcttgcaa tactggattg 1200

accccgtgta tctctatggc cgtgctgaat tggacttccg acttctgcgt gcttattgag 1260

ctttggccta gagtgacata ccatcagcct gagtacgtct atacccattt cgccaaggca 1320

gtcagattcc ggcgggagcc tatctccctg actgtggcct tgatgctcgg tggactgaca 1380

gtgggaggaa ttgcagctgg agtcggaact ggaaccaagg ccctgctcga aactgctcag 1440

ttccggcagc tgcagatggc catgcacact gacatccagg ctctggagga atcaatttca 1500

gcccttgaga aaagcttgac ctcgctgtct gaagtggtcc tccaaaacag gcgcggtttg 1560

gacatcctgt tccttcaaga gggtggtctg tgcgccgctc tcaaggagga atgctgtttc 1620

tacgctgacc ataccgggct ggtgcgcgat aacatggcaa agctgcggga acgcttgaaa 1680

cagaggcagc aactgttcga ctctcagcag ggatggttcg agggctggtt taacaagagc 1740

ccatggttta ccactctgat ctcttcaatc atgggtccac tgctcatcct gcttctgatt 1800

cttctcttcg gaccgtgtat tctcaacagg ctggtgcagt ttgtcaagga cagaatctcg 1860

gtggtccagg ccctgattct tactcagcag tatcagcaga ttaagcagta cgaccccgat 1920

cggccttga 1929

<210> 2

<211> 642

<212> Белок

<213> Вирус лейкоза кошачьих

<400> 2

Met Glu Ser Pro Thr His Pro Lys Pro Ser Lys Asp Lys Thr Leu Ser

1 5 10 15

Trp Asn Leu Ala Phe Leu Val Gly Ile Leu Phe Thr Ile Asp Ile Gly

20 25 30

Met Ala Asn Pro Ser Pro His Gln Ile Tyr Asn Val Thr Trp Val Ile

35 40 45

Thr Asn Val Gln Thr Asn Thr Gln Ala Asn Ala Thr Ser Met Leu Gly

50 55 60

Thr Leu Thr Asp Ala Tyr Pro Thr Leu His Val Asp Leu Cys Asp Leu

65 70 75 80

Val Gly Asp Thr Trp Glu Pro Ile Val Leu Asn Pro Thr Asn Val Lys

85 90 95

His Gly Ala Arg Tyr Ser Ser Ser Lys Tyr Gly Cys Lys Thr Thr Asp

100 105 110

Arg Lys Lys Gln Gln Gln Thr Tyr Pro Phe Tyr Val Cys Pro Gly His

115 120 125

Ala Pro Ser Leu Gly Pro Lys Gly Thr His Cys Gly Gly Ala Gln Asp

130 135 140

Gly Phe Cys Ala Ala Trp Gly Cys Glu Thr Thr Gly Glu Ala Trp Trp

145 150 155 160

Lys Pro Thr Ser Ser Trp Asp Tyr Ile Thr Val Lys Arg Gly Ser Ser

165 170 175

Gln Asp Asn Ser Cys Glu Gly Lys Cys Asn Pro Leu Val Leu Gln Phe

180 185 190

Thr Gln Lys Gly Arg Gln Ala Ser Trp Asp Gly Pro Lys Met Trp Gly

195 200 205

Leu Arg Leu Tyr Arg Thr Gly Tyr Asp Pro Ile Ala Leu Phe Thr Val

210 215 220

Ser Arg Gln Val Ser Thr Ile Thr Pro Pro Gln Ala Met Gly Pro Asn

225 230 235 240

Leu Val Leu Pro Asp Gln Lys Pro Pro Ser Arg Gln Ser Gln Thr Gly

245 250 255

Ser Lys Val Ala Thr Gln Arg Pro Gln Thr Asn Glu Ser Ala Pro Arg

260 265 270

Ser Val Ala Pro Thr Thr Met Gly Pro Lys Arg Ile Gly Thr Gly Asp

275 280 285

Arg Leu Ile Asn Leu Val Gln Gly Thr Tyr Leu Ala Leu Asn Ala Thr

290 295 300

Asp Pro Asn Lys Thr Lys Asp Cys Trp Leu Cys Leu Val Ser Arg Pro

305 310 315 320

Pro Tyr Tyr Glu Gly Ile Ala Ile Leu Gly Asn Tyr Ser Asn Gln Thr

325 330 335

Asn Pro Pro Pro Ser Cys Leu Ser Thr Pro Gln His Lys Leu Thr Ile

340 345 350

Ser Glu Val Ser Gly Gln Gly Met Cys Ile Gly Thr Val Pro Lys Thr

355 360 365

His Gln Ala Leu Cys Asn Lys Thr Gln Gln Gly His Thr Gly Ala His

370 375 380

Tyr Leu Ala Ala Pro Asn Gly Thr Tyr Trp Ala Cys Asn Thr Gly Leu

385 390 395 400

Thr Pro Cys Ile Ser Met Ala Val Leu Asn Trp Thr Ser Asp Phe Cys

405 410 415

Val Leu Ile Glu Leu Trp Pro Arg Val Thr Tyr His Gln Pro Glu Tyr

420 425 430

Val Tyr Thr His Phe Ala Lys Ala Val Arg Phe Arg Arg Glu Pro Ile

435 440 445

Ser Leu Thr Val Ala Leu Met Leu Gly Gly Leu Thr Val Gly Gly Ile

450 455 460

Ala Ala Gly Val Gly Thr Gly Thr Lys Ala Leu Leu Glu Thr Ala Gln

465 470 475 480

Phe Arg Gln Leu Gln Met Ala Met His Thr Asp Ile Gln Ala Leu Glu

485 490 495

Glu Ser Ile Ser Ala Leu Glu Lys Ser Leu Thr Ser Leu Ser Glu Val

500 505 510

Val Leu Gln Asn Arg Arg Gly Leu Asp Ile Leu Phe Leu Gln Glu Gly

515 520 525

Gly Leu Cys Ala Ala Leu Lys Glu Glu Cys Cys Phe Tyr Ala Asp His

530 535 540

Thr Gly Leu Val Arg Asp Asn Met Ala Lys Leu Arg Glu Arg Leu Lys

545 550 555 560

Gln Arg Gln Gln Leu Phe Asp Ser Gln Gln Gly Trp Phe Glu Gly Trp

565 570 575

Phe Asn Lys Ser Pro Trp Phe Thr Thr Leu Ile Ser Ser Ile Met Gly

580 585 590

Pro Leu Leu Ile Leu Leu Leu Ile Leu Leu Phe Gly Pro Cys Ile Leu

595 600 605

Asn Arg Leu Val Gln Phe Val Lys Asp Arg Ile Ser Val Val Gln Ala

610 615 620

Leu Ile Leu Thr Gln Gln Tyr Gln Gln Ile Lys Gln Tyr Asp Pro Asp

625 630 635 640

Arg Pro

<210> 3

<211> 1233

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> кодон-оптимизированная для кошачьих

<400> 3

aatcctagtc cacaccaaat atataatgta acttgggtaa taaccaatgt acaaactaac 60

acccaagcta acgccacctc tatgttagga accttaaccg atgcctaccc taccctacat 120

gttgacttat gtgacctagt gggagacacc tgggaaccta tagtcctaaa cccaaccaat 180

gtaaaacacg gggcacgtta ctcctcctca aaatatggat gtaaaactac agatagaaaa 240

aaacagcaac agacataccc cttttacgtc tgccccggac atgccccctc gttggggcca 300

aagggaacac attgtggagg ggcacaagat gggttttgtg ccgcatgggg atgtgagacc 360

accggagaag cttggtggaa gcccacctcc tcatgggact atatcacagt aaaaagaggg 420

agtagtcagg acaatagctg tgagggaaaa tgcaaccccc tggttttgca gttcacccag 480

aagggaagac aagcctcttg ggacggacct aagatgtggg gattgcgact ataccgtaca 540

ggatatgacc ctatcgcttt attcacggtg tcccggcagg tatcaaccat tacgccgcct 600

caggcaatgg gaccaaacct agtcttacct gatcaaaaac ccccatcccg acaatctcaa 660

acagggtcca aagtggcgac ccagaggccc caaacgaatg aaagcgcccc aaggtctgtt 720

gcccccacca ccatgggtcc caaacggatt gggaccggag ataggttaat aaatttagta 780

caagggacat acctagcctt aaatgccacc gaccccaaca aaactaaaga ctgttggctc 840

tgcctggttt ctcgaccacc ctattacgaa gggattgcaa tcttaggtaa ctacagcaac 900

caaacaaacc cccccccatc ctgcctatct actccgcaac acaaactaac tatatctgaa 960

gtatcagggc aaggaatgtg catagggact gttcctaaaa cccaccaggc tttgtgcaat 1020

aagacacaac agggacatac aggggcgcac tatctagccg cccccaacgg cacctattgg 1080

gcctgtaaca ctggactcac cccatgcatt tccatggcgg tgctcaattg gacctctgat 1140

ttttgtgtct taatcgaatt atggcccaga gtgacttacc atcaacccga atatgtgtac 1200

acacattttg ccaaagctgt caggttccga aga 1233

<210> 4

<211> 411

<212> Белок

<213> Вирус лейкоза кошачьих

<400> 4

Asn Pro Ser Pro His Gln Ile Tyr Asn Val Thr Trp Val Ile Thr Asn

1 5 10 15

Val Gln Thr Asn Thr Gln Ala Asn Ala Thr Ser Met Leu Gly Thr Leu

20 25 30

Thr Asp Ala Tyr Pro Thr Leu His Val Asp Leu Cys Asp Leu Val Gly

35 40 45

Asp Thr Trp Glu Pro Ile Val Leu Asn Pro Thr Asn Val Lys His Gly

50 55 60

Ala Arg Tyr Ser Ser Ser Lys Tyr Gly Cys Lys Thr Thr Asp Arg Lys

65 70 75 80

Lys Gln Gln Gln Thr Tyr Pro Phe Tyr Val Cys Pro Gly His Ala Pro

85 90 95

Ser Leu Gly Pro Lys Gly Thr His Cys Gly Gly Ala Gln Asp Gly Phe

100 105 110

Cys Ala Ala Trp Gly Cys Glu Thr Thr Gly Glu Ala Trp Trp Lys Pro

115 120 125

Thr Ser Ser Trp Asp Tyr Ile Thr Val Lys Arg Gly Ser Ser Gln Asp

130 135 140

Asn Ser Cys Glu Gly Lys Cys Asn Pro Leu Val Leu Gln Phe Thr Gln

145 150 155 160

Lys Gly Arg Gln Ala Ser Trp Asp Gly Pro Lys Met Trp Gly Leu Arg

165 170 175

Leu Tyr Arg Thr Gly Tyr Asp Pro Ile Ala Leu Phe Thr Val Ser Arg

180 185 190

Gln Val Ser Thr Ile Thr Pro Pro Gln Ala Met Gly Pro Asn Leu Val

195 200 205

Leu Pro Asp Gln Lys Pro Pro Ser Arg Gln Ser Gln Thr Gly Ser Lys

210 215 220

Val Ala Thr Gln Arg Pro Gln Thr Asn Glu Ser Ala Pro Arg Ser Val

225 230 235 240

Ala Pro Thr Thr Met Gly Pro Lys Arg Ile Gly Thr Gly Asp Arg Leu

245 250 255

Ile Asn Leu Val Gln Gly Thr Tyr Leu Ala Leu Asn Ala Thr Asp Pro

260 265 270

Asn Lys Thr Lys Asp Cys Trp Leu Cys Leu Val Ser Arg Pro Pro Tyr

275 280 285

Tyr Glu Gly Ile Ala Ile Leu Gly Asn Tyr Ser Asn Gln Thr Asn Pro

290 295 300

Pro Pro Ser Cys Leu Ser Thr Pro Gln His Lys Leu Thr Ile Ser Glu

305 310 315 320

Val Ser Gly Gln Gly Met Cys Ile Gly Thr Val Pro Lys Thr His Gln

325 330 335

Ala Leu Cys Asn Lys Thr Gln Gln Gly His Thr Gly Ala His Tyr Leu

340 345 350

Ala Ala Pro Asn Gly Thr Tyr Trp Ala Cys Asn Thr Gly Leu Thr Pro

355 360 365

Cys Ile Ser Met Ala Val Leu Asn Trp Thr Ser Asp Phe Cys Val Leu

370 375 380

Ile Glu Leu Trp Pro Arg Val Thr Tyr His Gln Pro Glu Tyr Val Tyr

385 390 395 400

Thr His Phe Ala Lys Ala Val Arg Phe Arg Arg

405 410

<210> 5

<211> 1638

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> кодон-оптимизированная для кошачьих

<400> 5

atggctgacg acggatctgt gaccacccca gaacaaggaa caatggtcgg aggagtgatt 60

gccgaaccca gcgctcagat gtcaactgcg gcggacatgg cctccggaaa gtcggtggac 120

tccgagtggg aagccttctt ctcgttccac acgtccgtga actggagcac ctccgaaacc 180

caaggaaaga tcctcttcaa gcagtccctg ggtcccctgc tgaacccgta cctggagcac 240

atcagcaagc tgtacgtcgc ttggagcggg tcgatcgaag tgcgattttc catctcggga 300

agcggcgtgt tcggtggtaa actggccgcc atcgtcgtgc cgcctggtgt cgaccctgtc 360

cagtcaacct ccatgctgca gtacccgcac gtcctgttcg acgcaagaca agtggagcca 420

gtgatcttct ccatcccgga cctccgcaac agcctgtatc acttgatgtc cgataccgat 480

accacttccc tcgtgatcat ggtgtacaac gatctgatca acccgtacgc caatgactcc 540

aacagctcgg gttgcatcgt gaccgtcgaa acgaagcctg gcatcgattt caagtttcat 600

ctgctgaaac cgcccggatc catgcttact cacgggtcca tcccttccga tctgatcccc 660

aagagctcct ccctgtggat tgggaaccgc cactggaccg atattaccga tttcgtgatt 720

cggcctttcg tgttccaagc caaccggcac ttcgacttca accaggagac tgccggctgg 780

tcaactccac ggttccgccc attggccgtg actgtgtcgc agtcaaaggg agccaagctc 840

gggaacggca tcgccaccga ctacattgtg cctggaatcc ccgacggatg gcctgatact 900

accatcccca ccaagctgac ccctaccgga gattacgcca tcacctcctc cgacggcaat 960

gatattgaaa ccaagctgga atacgagaac gcggacgtga ttaagaacaa caccaacttc 1020

cgctccatgt atatctgcgg aagcctccag agggcttggg gcgacaagaa gatcagcaac 1080

accgggttca tcactaccgg agtgatttct gacaactcca tcagcccttc gaacacaatt 1140

gaccagtcca agatcgtggt gtaccaggac aaccatgtca attcggaggt ccagactagc 1200

gacatcactc ttgccatcct gggctacacc ggaattggag aagaggccat aggcgccaac 1260

cgggactccg tcgtgagaat ttccgtgctt ccggaaactg gagcaagggg cggaaatcac 1320

cccatcttct acaaaaattc catgaagctg ggctacgtga tctcctccat tgacgtgttc 1380

aactcccaaa tcctccacac ctcgcgccag ctgtcactga acaactactt gttgccccct 1440

gactccttcg cggtgtaccg gattattgac agcaacggat catggttcga cattgggatt 1500

gacagcgatg ggttttcatt cgtgggcgtg tcgtcatttc caaagctgga gtttccgctg 1560

tccgcctcat acatgggcat ccagctcgca aagatccggc tggcgtccaa catccggtca 1620

tccatgacta agctgtga 1638

<210> 6

<211> 545

<212> Белок

<213> Кошачий калицивирус

<400> 6

Met Ala Asp Asp Gly Ser Val Thr Thr Pro Glu Gln Gly Thr Met Val

1 5 10 15

Gly Gly Val Ile Ala Glu Pro Ser Ala Gln Met Ser Thr Ala Ala Asp

20 25 30

Met Ala Ser Gly Lys Ser Val Asp Ser Glu Trp Glu Ala Phe Phe Ser

35 40 45

Phe His Thr Ser Val Asn Trp Ser Thr Ser Glu Thr Gln Gly Lys Ile

50 55 60

Leu Phe Lys Gln Ser Leu Gly Pro Leu Leu Asn Pro Tyr Leu Glu His

65 70 75 80

Ile Ser Lys Leu Tyr Val Ala Trp Ser Gly Ser Ile Glu Val Arg Phe

85 90 95

Ser Ile Ser Gly Ser Gly Val Phe Gly Gly Lys Leu Ala Ala Ile Val

100 105 110

Val Pro Pro Gly Val Asp Pro Val Gln Ser Thr Ser Met Leu Gln Tyr

115 120 125

Pro His Val Leu Phe Asp Ala Arg Gln Val Glu Pro Val Ile Phe Ser

130 135 140

Ile Pro Asp Leu Arg Asn Ser Leu Tyr His Leu Met Ser Asp Thr Asp

145 150 155 160

Thr Thr Ser Leu Val Ile Met Val Tyr Asn Asp Leu Ile Asn Pro Tyr

165 170 175

Ala Asn Asp Ser Asn Ser Ser Gly Cys Ile Val Thr Val Glu Thr Lys

180 185 190

Pro Gly Ile Asp Phe Lys Phe His Leu Leu Lys Pro Pro Gly Ser Met

195 200 205

Leu Thr His Gly Ser Ile Pro Ser Asp Leu Ile Pro Lys Ser Ser Ser

210 215 220

Leu Trp Ile Gly Asn Arg His Trp Thr Asp Ile Thr Asp Phe Val Ile

225 230 235 240

Arg Pro Phe Val Phe Gln Ala Asn Arg His Phe Asp Phe Asn Gln Glu

245 250 255

Thr Ala Gly Trp Ser Thr Pro Arg Phe Arg Pro Leu Ala Val Thr Val

260 265 270

Ser Gln Ser Lys Gly Ala Lys Leu Gly Asn Gly Ile Ala Thr Asp Tyr

275 280 285

Ile Val Pro Gly Ile Pro Asp Gly Trp Pro Asp Thr Thr Ile Pro Thr

290 295 300

Lys Leu Thr Pro Thr Gly Asp Tyr Ala Ile Thr Ser Ser Asp Gly Asn

305 310 315 320

Asp Ile Glu Thr Lys Leu Glu Tyr Glu Asn Ala Asp Val Ile Lys Asn

325 330 335

Asn Thr Asn Phe Arg Ser Met Tyr Ile Cys Gly Ser Leu Gln Arg Ala

340 345 350

Trp Gly Asp Lys Lys Ile Ser Asn Thr Gly Phe Ile Thr Thr Gly Val

355 360 365

Ile Ser Asp Asn Ser Ile Ser Pro Ser Asn Thr Ile Asp Gln Ser Lys

370 375 380

Ile Val Val Tyr Gln Asp Asn His Val Asn Ser Glu Val Gln Thr Ser

385 390 395 400

Asp Ile Thr Leu Ala Ile Leu Gly Tyr Thr Gly Ile Gly Glu Glu Ala

405 410 415

Ile Gly Ala Asn Arg Asp Ser Val Val Arg Ile Ser Val Leu Pro Glu

420 425 430

Thr Gly Ala Arg Gly Gly Asn His Pro Ile Phe Tyr Lys Asn Ser Met

435 440 445

Lys Leu Gly Tyr Val Ile Ser Ser Ile Asp Val Phe Asn Ser Gln Ile

450 455 460

Leu His Thr Ser Arg Gln Leu Ser Leu Asn Asn Tyr Leu Leu Pro Pro

465 470 475 480

Asp Ser Phe Ala Val Tyr Arg Ile Ile Asp Ser Asn Gly Ser Trp Phe

485 490 495

Asp Ile Gly Ile Asp Ser Asp Gly Phe Ser Phe Val Gly Val Ser Ser

500 505 510

Phe Pro Lys Leu Glu Phe Pro Leu Ser Ala Ser Tyr Met Gly Ile Gln

515 520 525

Leu Ala Lys Ile Arg Leu Ala Ser Asn Ile Arg Ser Ser Met Thr Lys

530 535 540

Leu

545

<210> 7

<211> 1629

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> кодон-оптимизированная для кошачьих

<400> 7

atgactgccc cggaacaagg aacgatggtc ggaggagtga ttgcagaacc gtcagcacag 60

atgtccaccg ctgccgacat ggccactgga aagagcgtgg actccgaatg ggaagccttc 120

ttctccttcc acacttcggt caactggtcg actagcgaaa cccaggggaa gattttgttc 180

aagcaatccc tcggccctct gctgaacccc tacctggagc atctggccaa gctgtacgtg 240

gcatggtcgg gcagcatcga agtgcgcttt agcatttccg gctccggagt gttcggggga 300

aagcttgctg ccattgtcgt gccgccagga gtggacccgg tgcagtccac ttctatgctc 360

caatacccgc atgtcctgtt cgacgccaga caggtggagc ctgtgatctt ttgcctgccg 420

gatctcaggt ccaccctgta tcacctcatg tccgacaccg acaccacctc gctcgtgatc 480

atggtgtaca acgacctgat caacccctac gctaacgacg ccaacagctc aggttgcatt 540

gtgactgtcg aaaccaagcc aggccctgac ttcaagtttc atttgctgaa gccgcccggt 600

tccatgctga cccacggctc gatcccatcc gacctgatcc ccaagacgag ctccctgtgg 660

atcggaaacc gctactggtc cgatattacc gacttcgtga tcagaccatt cgtgttccaa 720

gccaaccgcc atttcgactt caaccaggaa accgcaggat ggtcgacccc tcgattccgc 780

ccgatttcag tgaccatcac cgaacagaac ggcgcgaagc tgggaattgg cgtggcgacc 840

gactacatcg tgccgggaat cccggatgga tggcctgata cgaccattcc cggggagctg 900

atccctgccg gggactacgc catcaccaac ggtactggaa acgacatcac cactgccacc 960

ggttacgaca ccgccgacat cataaagaac aacaccaact tcagaggaat gtacatttgc 1020

ggctccctgc aacgcgcttg gggtgacaaa aagatctcga acactgcctt catcacaaca 1080

gcgactctgg acggcgataa caacaacaag atcaatcctt gtaataccat cgaccagtcc 1140

aaaatcgtgg tgttccagga taaccacgtg ggaaagaagg cgcagacctc cgacgacact 1200

ctggcgctgc ttggctacac cgggatcggc gagcaggcca ttggaagcga tcgggatcgg 1260

gtcgtgcgga tctccaccct ccccgagact ggagcaaggg gaggcaacca ccccatcttt 1320

tacaaaaaca gcattaagct cggatacgtc atccgctcca tcgatgtgtt caactctcaa 1380

atcctgcaca cttcgcggca gctgtccctg aaccactacc tcttgccgcc cgactccttc 1440

gccgtctacc ggatcattga ttcgaacggg agctggttcg acatcggcat tgatagcgat 1500

ggcttctcgt ttgtgggcgt gtcgggcttc gggaagctgg agttcccact gagcgcctca 1560

tacatgggta tccagctggc caagatcagg ctggcctcca acatccgctc acctatgact 1620

aagctgtga 1629

<210> 8

<211> 542

<212> Белок

<213> Кошачий калицивирус

<400> 8

Met Thr Ala Pro Glu Gln Gly Thr Met Val Gly Gly Val Ile Ala Glu

1 5 10 15

Pro Ser Ala Gln Met Ser Thr Ala Ala Asp Met Ala Thr Gly Lys Ser

20 25 30

Val Asp Ser Glu Trp Glu Ala Phe Phe Ser Phe His Thr Ser Val Asn

35 40 45

Trp Ser Thr Ser Glu Thr Gln Gly Lys Ile Leu Phe Lys Gln Ser Leu

50 55 60

Gly Pro Leu Leu Asn Pro Tyr Leu Glu His Leu Ala Lys Leu Tyr Val

65 70 75 80

Ala Trp Ser Gly Ser Ile Glu Val Arg Phe Ser Ile Ser Gly Ser Gly

85 90 95

Val Phe Gly Gly Lys Leu Ala Ala Ile Val Val Pro Pro Gly Val Asp

100 105 110

Pro Val Gln Ser Thr Ser Met Leu Gln Tyr Pro His Val Leu Phe Asp

115 120 125

Ala Arg Gln Val Glu Pro Val Ile Phe Cys Leu Pro Asp Leu Arg Ser

130 135 140

Thr Leu Tyr His Leu Met Ser Asp Thr Asp Thr Thr Ser Leu Val Ile

145 150 155 160

Met Val Tyr Asn Asp Leu Ile Asn Pro Tyr Ala Asn Asp Ala Asn Ser

165 170 175

Ser Gly Cys Ile Val Thr Val Glu Thr Lys Pro Gly Pro Asp Phe Lys

180 185 190

Phe His Leu Leu Lys Pro Pro Gly Ser Met Leu Thr His Gly Ser Ile

195 200 205

Pro Ser Asp Leu Ile Pro Lys Thr Ser Ser Leu Trp Ile Gly Asn Arg

210 215 220

Tyr Trp Ser Asp Ile Thr Asp Phe Val Ile Arg Pro Phe Val Phe Gln

225 230 235 240

Ala Asn Arg His Phe Asp Phe Asn Gln Glu Thr Ala Gly Trp Ser Thr

245 250 255

Pro Arg Phe Arg Pro Ile Ser Val Thr Ile Thr Glu Gln Asn Gly Ala

260 265 270

Lys Leu Gly Ile Gly Val Ala Thr Asp Tyr Ile Val Pro Gly Ile Pro

275 280 285

Asp Gly Trp Pro Asp Thr Thr Ile Pro Gly Glu Leu Ile Pro Ala Gly

290 295 300

Asp Tyr Ala Ile Thr Asn Gly Thr Gly Asn Asp Ile Thr Thr Ala Thr

305 310 315 320

Gly Tyr Asp Thr Ala Asp Ile Ile Lys Asn Asn Thr Asn Phe Arg Gly

325 330 335

Met Tyr Ile Cys Gly Ser Leu Gln Arg Ala Trp Gly Asp Lys Lys Ile

340 345 350

Ser Asn Thr Ala Phe Ile Thr Thr Ala Thr Leu Asp Gly Asp Asn Asn

355 360 365

Asn Lys Ile Asn Pro Cys Asn Thr Ile Asp Gln Ser Lys Ile Val Val

370 375 380

Phe Gln Asp Asn His Val Gly Lys Lys Ala Gln Thr Ser Asp Asp Thr

385 390 395 400

Leu Ala Leu Leu Gly Tyr Thr Gly Ile Gly Glu Gln Ala Ile Gly Ser

405 410 415

Asp Arg Asp Arg Val Val Arg Ile Ser Thr Leu Pro Glu Thr Gly Ala

420 425 430

Arg Gly Gly Asn His Pro Ile Phe Tyr Lys Asn Ser Ile Lys Leu Gly

435 440 445

Tyr Val Ile Arg Ser Ile Asp Val Phe Asn Ser Gln Ile Leu His Thr

450 455 460

Ser Arg Gln Leu Ser Leu Asn His Tyr Leu Leu Pro Pro Asp Ser Phe

465 470 475 480

Ala Val Tyr Arg Ile Ile Asp Ser Asn Gly Ser Trp Phe Asp Ile Gly

485 490 495

Ile Asp Ser Asp Gly Phe Ser Phe Val Gly Val Ser Gly Phe Gly Lys

500 505 510

Leu Glu Phe Pro Leu Ser Ala Ser Tyr Met Gly Ile Gln Leu Ala Lys

515 520 525

Ile Arg Leu Ala Ser Asn Ile Arg Ser Pro Met Thr Lys Leu

530 535 540

<210> 9

<211> 13

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> 5' фланкирующая последовательность

<400> 9

ggcgcgccgc acc 13

<210> 10

<211> 1929

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> кодон-оптимизированная для кошачьих

<400> 10

auggagucac caacacaccc uaaaccuucu aaagacaaaa cccucucgug gaaucucgcc 60

uuccuugugg gcauccuguu cacaaucgac aucggcaugg ccaacccuuc gccgcaucag 120

aucuacaaug ugacaugggu cauuacuaau gugcagacaa acacccaggc aaaugcuacu 180

ucuaugcuug guacucugac ugaugcuuau ccaacccugc acgucgaccu uugcgaucuc 240

gucggugaca caugggagcc caucgugcug aauccaacua augucaaaca uggugccagg 300

uauucuucua gcaaauacgg guguaagacc acugaucgga agaaacagca acaaaccuac 360

ccauucuacg ugugcccggg ucacgcaccg ucccuggguc cgaagggaac acauuguggg 420

ggagcccaag acgguuuuug cgcugcuugg gguugugaaa caaccggaga agccuggugg 480

aagccuaccu caucuuggga cuacauuacu gugaaaagag gcucuagcca ggauaacagc 540

ugcgaaggaa aguguaaucc ccuggugcuu caauucaccc agaaaggccg gcaggcauca 600

ugggauggac cgaaaaugug gggacuuaga cucuaucgca ccggauacga ccccaucgcu 660

cuguuuacug ugucacgcca agucuccacc auuacuccgc cacaggccau ggggccgaau 720

cugguccucc ccgaucagaa gccacccuca cggcaaaguc aaaccggcuc aaaaguggcc 780

acccaacggc cccagacaaa ugaguccgca ccuaggucag uggcaccuac aacaaugggu 840

ccaaagcgga ucggaaccgg agacaggcuc auuaaccucg ugcaagggac uuaucuggcc 900

cuuaacgcua cugaccccaa caagaccaag gauugcuggc ucugccuugu gagcagaccu 960

ccuuacuaug aggggaucgc cauucucgga aacuacucaa aucagaccaa ccccccuccg 1020

ucgugucuga gcacccccca gcacaagcuu acuauuucag aagucagugg acagggaaug 1080

ugcaucggaa ccgugccaaa gacucaucaa gcccuuugca acaaaacuca acaagggcac 1140

acuggagcuc auuaucucgc cgcaccuaac gggaccuacu gggcuugcaa uacuggauug 1200

accccgugua ucucuauggc cgugcugaau uggacuuccg acuucugcgu gcuuauugag 1260

cuuuggccua gagugacaua ccaucagccu gaguacgucu auacccauuu cgccaaggca 1320

gucagauucc ggcgggagcc uaucucccug acuguggccu ugaugcucgg uggacugaca 1380

gugggaggaa uugcagcugg agucggaacu ggaaccaagg cccugcucga aacugcucag 1440

uuccggcagc ugcagauggc caugcacacu gacauccagg cucuggagga aucaauuuca 1500

gcccuugaga aaagcuugac cucgcugucu gaaguggucc uccaaaacag gcgcgguuug 1560

gacauccugu uccuucaaga ggguggucug ugcgccgcuc ucaaggagga augcuguuuc 1620

uacgcugacc auaccgggcu ggugcgcgau aacauggcaa agcugcggga acgcuugaaa 1680

cagaggcagc aacuguucga cucucagcag ggaugguucg agggcugguu uaacaagagc 1740

ccaugguuua ccacucugau cucuucaauc auggguccac ugcucauccu gcuucugauu 1800

cuucucuucg gaccguguau ucucaacagg cuggugcagu uugucaagga cagaaucucg 1860

gugguccagg cccugauucu uacucagcag uaucagcaga uuaagcagua cgaccccgau 1920

cggccuuga 1929

<210> 11

<211> 1233

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> кодон-оптимизированная для кошачьих

<400> 11

aauccuaguc cacaccaaau auauaaugua acuuggguaa uaaccaaugu acaaacuaac 60

acccaagcua acgccaccuc uauguuagga accuuaaccg augccuaccc uacccuacau 120

guugacuuau gugaccuagu gggagacacc ugggaaccua uaguccuaaa cccaaccaau 180

guaaaacacg gggcacguua cuccuccuca aaauauggau guaaaacuac agauagaaaa 240

aaacagcaac agacauaccc cuuuuacguc ugccccggac augcccccuc guuggggcca 300

aagggaacac auuguggagg ggcacaagau ggguuuugug ccgcaugggg augugagacc 360

accggagaag cuugguggaa gcccaccucc ucaugggacu auaucacagu aaaaagaggg 420

aguagucagg acaauagcug ugagggaaaa ugcaaccccc ugguuuugca guucacccag 480

aagggaagac aagccucuug ggacggaccu aagauguggg gauugcgacu auaccguaca 540

ggauaugacc cuaucgcuuu auucacggug ucccggcagg uaucaaccau uacgccgccu 600

caggcaaugg gaccaaaccu agucuuaccu gaucaaaaac ccccaucccg acaaucucaa 660

acagggucca aaguggcgac ccagaggccc caaacgaaug aaagcgcccc aaggucuguu 720

gcccccacca ccaugggucc caaacggauu gggaccggag auagguuaau aaauuuagua 780

caagggacau accuagccuu aaaugccacc gaccccaaca aaacuaaaga cuguuggcuc 840

ugccugguuu cucgaccacc cuauuacgaa gggauugcaa ucuuagguaa cuacagcaac 900

caaacaaacc cccccccauc cugccuaucu acuccgcaac acaaacuaac uauaucugaa 960

guaucagggc aaggaaugug cauagggacu guuccuaaaa cccaccaggc uuugugcaau 1020

aagacacaac agggacauac aggggcgcac uaucuagccg cccccaacgg caccuauugg 1080

gccuguaaca cuggacucac cccaugcauu uccauggcgg ugcucaauug gaccucugau 1140

uuuugugucu uaaucgaauu auggcccaga gugacuuacc aucaacccga auauguguac 1200

acacauuuug ccaaagcugu cagguuccga aga 1233

<210> 12

<211> 1638

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> кодон-оптимизированная для кошачьих

<400> 12

auggcugacg acggaucugu gaccacccca gaacaaggaa caauggucgg aggagugauu 60

gccgaaccca gcgcucagau gucaacugcg gcggacaugg ccuccggaaa gucgguggac 120

uccgaguggg aagccuucuu cucguuccac acguccguga acuggagcac cuccgaaacc 180

caaggaaaga uccucuucaa gcagucccug gguccccugc ugaacccgua ccuggagcac 240

aucagcaagc uguacgucgc uuggagcggg ucgaucgaag ugcgauuuuc caucucggga 300

agcggcgugu ucggugguaa acuggccgcc aucgucgugc cgccuggugu cgacccuguc 360

cagucaaccu ccaugcugca guacccgcac guccuguucg acgcaagaca aguggagcca 420

gugaucuucu ccaucccgga ccuccgcaac agccuguauc acuugauguc cgauaccgau 480

accacuuccc ucgugaucau gguguacaac gaucugauca acccguacgc caaugacucc 540

aacagcucgg guugcaucgu gaccgucgaa acgaagccug gcaucgauuu caaguuucau 600

cugcugaaac cgcccggauc caugcuuacu cacgggucca ucccuuccga ucugaucccc 660

aagagcuccu cccuguggau ugggaaccgc cacuggaccg auauuaccga uuucgugauu 720

cggccuuucg uguuccaagc caaccggcac uucgacuuca accaggagac ugccggcugg 780

ucaacuccac gguuccgccc auuggccgug acugugucgc agucaaaggg agccaagcuc 840

gggaacggca ucgccaccga cuacauugug ccuggaaucc ccgacggaug gccugauacu 900

accaucccca ccaagcugac cccuaccgga gauuacgcca ucaccuccuc cgacggcaau 960

gauauugaaa ccaagcugga auacgagaac gcggacguga uuaagaacaa caccaacuuc 1020

cgcuccaugu auaucugcgg aagccuccag agggcuuggg gcgacaagaa gaucagcaac 1080

accggguuca ucacuaccgg agugauuucu gacaacucca ucagcccuuc gaacacaauu 1140

gaccagucca agaucguggu guaccaggac aaccauguca auucggaggu ccagacuagc 1200

gacaucacuc uugccauccu gggcuacacc ggaauuggag aagaggccau aggcgccaac 1260

cgggacuccg ucgugagaau uuccgugcuu ccggaaacug gagcaagggg cggaaaucac 1320

cccaucuucu acaaaaauuc caugaagcug ggcuacguga ucuccuccau ugacguguuc 1380

aacucccaaa uccuccacac cucgcgccag cugucacuga acaacuacuu guugcccccu 1440

gacuccuucg cgguguaccg gauuauugac agcaacggau caugguucga cauugggauu 1500

gacagcgaug gguuuucauu cgugggcgug ucgucauuuc caaagcugga guuuccgcug 1560

uccgccucau acaugggcau ccagcucgca aagauccggc uggcguccaa cauccgguca 1620

uccaugacua agcuguga 1638

<210> 13

<211> 1629

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> кодон-оптимизированная для кошачьих

<400> 13

augacugccc cggaacaagg aacgaugguc ggaggaguga uugcagaacc gucagcacag 60

auguccaccg cugccgacau ggccacugga aagagcgugg acuccgaaug ggaagccuuc 120

uucuccuucc acacuucggu caacuggucg acuagcgaaa cccaggggaa gauuuuguuc 180

aagcaauccc ucggcccucu gcugaacccc uaccuggagc aucuggccaa gcuguacgug 240

gcauggucgg gcagcaucga agugcgcuuu agcauuuccg gcuccggagu guucggggga 300

aagcuugcug ccauugucgu gccgccagga guggacccgg ugcaguccac uucuaugcuc 360

caauacccgc auguccuguu cgacgccaga cagguggagc cugugaucuu uugccugccg 420

gaucucaggu ccacccugua ucaccucaug uccgacaccg acaccaccuc gcucgugauc 480

augguguaca acgaccugau caaccccuac gcuaacgacg ccaacagcuc agguugcauu 540

gugacugucg aaaccaagcc aggcccugac uucaaguuuc auuugcugaa gccgcccggu 600

uccaugcuga cccacggcuc gaucccaucc gaccugaucc ccaagacgag cucccugugg 660

aucggaaacc gcuacugguc cgauauuacc gacuucguga ucagaccauu cguguuccaa 720

gccaaccgcc auuucgacuu caaccaggaa accgcaggau ggucgacccc ucgauuccgc 780

ccgauuucag ugaccaucac cgaacagaac ggcgcgaagc ugggaauugg cguggcgacc 840

gacuacaucg ugccgggaau cccggaugga uggccugaua cgaccauucc cggggagcug 900

aucccugccg gggacuacgc caucaccaac gguacuggaa acgacaucac cacugccacc 960

gguuacgaca ccgccgacau cauaaagaac aacaccaacu ucagaggaau guacauuugc 1020

ggcucccugc aacgcgcuug gggugacaaa aagaucucga acacugccuu caucacaaca 1080

gcgacucugg acggcgauaa caacaacaag aucaauccuu guaauaccau cgaccagucc 1140

aaaaucgugg uguuccagga uaaccacgug ggaaagaagg cgcagaccuc cgacgacacu 1200

cuggcgcugc uuggcuacac cgggaucggc gagcaggcca uuggaagcga ucgggaucgg 1260

gucgugcgga ucuccacccu ccccgagacu ggagcaaggg gaggcaacca ccccaucuuu 1320

uacaaaaaca gcauuaagcu cggauacguc auccgcucca ucgauguguu caacucucaa 1380

auccugcaca cuucgcggca gcugucccug aaccacuacc ucuugccgcc cgacuccuuc 1440

gccgucuacc ggaucauuga uucgaacggg agcugguucg acaucggcau ugauagcgau 1500

ggcuucucgu uugugggcgu gucgggcuuc gggaagcugg aguucccacu gagcgccuca 1560

uacaugggua uccagcuggc caagaucagg cuggccucca acauccgcuc accuaugacu 1620

aagcuguga 1629

<---

Claims

1. Вакцина для способствования профилактике заболевания, вызванного FeLV, содержащая иммуногенную композицию, содержащую частицу РНК-репликона альфа-вируса, которая кодирует антиген вируса лейкоза кошачьих (FeLV).

2. Вакцина по п. 1, где частица РНК-репликона альфа-вируса является частицей РНК-репликона альфа-вируса венесуэльского энцефаломиелита лошадей (VEE).

3. Вакцина по п. 1 или 2, где антиген FeLV представляет гликопротеин FeLV (gp85) или антигенный фрагмент gp85; причем антигенный фрагмент гликопротеина FeLV (gp85) представляет собой FeLV gp70.

4. Вакцина по любому из пп. 1, 2 или 3, которая содержит одну или более дополнительных частиц РНК-репликона альфа-вируса, которые кодируют второй антиген FeLV, который происходит из другого штамма FeLV, чем тот, из которого происходит антиген FeLV.

5. Вакцина по п. 4, где второй антиген FeLV представляет собой гликопротеин FeLV (gp85) или антигенный фрагмент gp85; причем антигенный фрагмент гликопротеина FeLV (gp85) представляет собой FeLV gp70.

6. Вакцина по п. 4 или 5, где одна или более дополнительных частиц РНК-репликона альфа-вируса являются частицами РНК-репликона альфа-вируса VEE.

7. Вакцина по любому из пп. 1-5 или 6, где гликопротеин FeLV (gp85) содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95% идентичности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 2.

8. Вакцина по пп. 1-5 или 6, где гликопротеин FeLV gp70 содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95% идентичности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 4.

9. Вакцина по любому из пп. 1-7 или 8, где индуцируется антитело у кошачьего, когда указанное кошачье иммунизируют вакциной.

10. Вакцина по любому из пп. 1-8 или 9, которая дополнительно содержит по меньшей мере один антиген, отличный от FeLV, для индукции защитного иммунитета к кошачьему патогену, отличному от FeLV.

11. Вакцина по п. 10, где кошачий патоген, отличный от FeLV, выбран из группы, состоящей из кошачьего герпесвируса (FHV), кошачьего калицивируса (FCV), кошачьего пневмовируса (FPN), кошачьего парвовируса (FPV), вируса инфекционного перитонита кошачьих (FIPV), вируса иммунодефицита кошачьих, вируса болезни Борна (BDV), вируса кошачьего гриппа, вируса панлейкопении кошачьих (FPLV), кошачьего коронавируса (FCoV), вируса ринотрахеита кошачьих (FVR), Chlamydophila felis и любой их комбинации.

12. Вакцина по п. 11, которая содержит модифицированный живой кошачий калицивирус (FCV), модифицированный живой вирус панлейкопении кошачьих (FPLV), модифицированный живой вирус ринотрахеита кошачьих (FVR) и аттенуированный живой штамм Chlamydophila felis.

13. Вакцина по любому из пп. 9-11 или 12, которая дополнительно содержит частицу РНК-репликона альфа-вируса, содержащую нуклеотидную последовательность, кодирующую по меньшей мере один белковый антиген или его антигенный фрагмент, который происходит из антигена, отличного от FeLV.

14. Вакцина по любому из пп. 1-13, которая представляет собой неадъювантную вакцину.

15. Способ иммунизации кошачьего против патогенного FeLV, включающий введение кошачьему иммунологически эффективного количества вакцины по любому из пп. 1-14.