JP2023110035A - 免疫応答を誘導するためのペプチドベースのワクチン、それらの製造方法および使用 - Google Patents
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Abstract
【課題】免疫応答を誘導するためのペプチドベースのワクチン、それらの製造方法および使用の提供。【解決手段】本開示は、新規のペプチドベースのワクチン、新規のペプチドベースのワクチンを製造する方法、および免疫応答、特にT細胞応答を誘導するためにペプチド抗原を被験体に送達するためのそれらの使用に関する。本発明者らは、現行のペプチドベースのワクチンアプローチの制約の少なくとも1つを克服するペプチドベースのワクチンを製造する新規組成物および方法を開発した。本明細書で開示される新規のペプチドベースのワクチン組成物および製造方法は、ペプチド抗原の物理的および化学的性質の可変性を考慮し、したがって、任意のペプチド抗原に対して一般化可能である。【選択図】なし
Description
優先権書類
本出願は、2017年4月4日に出願された米国仮特許出願第62/481,432号および2018年1月15日に出願された米国仮特許出願第62/617,519号(ともに表題は、「PEPTIDE-BASED VACCINES,METHODS OF
MANUFACTURING,AND USES THEREOF FOR INDUCING AN IMMUNE RESPONSE」であり、両方の内容は、それらの全体が参考として本明細書に援用される)からの優先権を主張する。
本出願は、2017年4月4日に出願された米国仮特許出願第62/481,432号および2018年1月15日に出願された米国仮特許出願第62/617,519号(ともに表題は、「PEPTIDE-BASED VACCINES,METHODS OF
MANUFACTURING,AND USES THEREOF FOR INDUCING AN IMMUNE RESPONSE」であり、両方の内容は、それらの全体が参考として本明細書に援用される)からの優先権を主張する。
本発明は、米国保健福祉省、国立衛生研究所との共同研究開発契約を履行することで生じたものである。米国政府は、本発明に一定の権利を有する。
本開示は、新規のペプチドベースのワクチン、新規のペプチドベースのワクチンを製造する方法、および免疫応答、特に、被験体におけるT細胞応答を誘導するためのそれらの使用に関する。本開示のペプチドベースのワクチンの実施形態は、感染性疾患およびがんの予防または処置に使用することができ、ならびに自己免疫およびアレルギーを予防または処置するための寛容の誘導または免疫の調節に使用することができる。
抗原の免疫原性組成物を含むワクチンは、がんもしくは感染性疾患の処置もしくは予防のための免疫応答の誘導を含む、被験体における免疫応答の誘導に使用することができ、またはさらには自己免疫もしくはアレルギーの処置もしくは予防のための寛容および/もしくは免疫抑制の誘導に使用することができる。がんおよび感染性疾患の処置または予防のために免疫応答を誘導するためのワクチンの組成物は、ウイルス感染細胞またはがん性細胞の病原体排除または死滅を媒介する抗原と、その抗原に対する細胞傷害性T細胞応答および/または抗体を誘導する特定のタイプのアジュバントとを含有する。対照的に、免疫寛容原性または抑制性応答を誘導するワクチンの組成物は、抗原、およびビヒクル(例えば、粒子担体などの送達系)、および/または免疫抑制化合物、例えばmTOR阻害剤を含有しうるが、細胞傷害性T細胞を誘導する特異的アジュバントを欠くことになり、細胞傷害性T細胞を誘導するのではなく、応答の質的特性をダウンレギュレートするまたは調節する、T細胞寛容または調節性T細胞などの調節性細胞の活性化を誘導しうる。
患者の遺伝的バックグラウンド、特に、主要組織適合複合体(MHC)対立遺伝子の組成、および環境が、がん、感染性疾患、自己免疫およびアレルギーに対する彼らの感受性に影響を与えうることはもちろん、そのような状態を処置するために使用されるワクチンに対する彼らの応答にも影響を及ぼしうるという認識が増している。疾患の分子的基礎の理解をもたらす新たな診断およびインフォマティクス法の継続的開発により、患者特異的情報がますます入手しやすくなってきた。それ故、がん、感染性疾患、自己免疫およびアレルギーを処置または予防するためのワクチンを含む特定の免疫療法の選択を含む、個体が受ける医療を方向付けるために、個体の遺伝子、タンパク質および環境についての情報を使用することへの関心が高まってきている。
がん療法では、個体の腫瘍についての特定の情報を使用して、診断を助けること、処置を計画すること、治療の効果を調べること、または予後予測を行うことができる。例えば、個体の遺伝子、タンパク質および環境についての特定の情報を使用して、その情報に基づいてワクチンを開発することにより、がんの処置に合せて予防的アプローチを調整することができる。ある特定のがんの免疫学的処置または予防に使用されるワクチンは、腫瘍関連抗原に対する免疫応答を誘導しなくてはならない。1つの好ましい免疫応答は、腫瘍関連抗原を認識するCD8 T細胞応答および/またはCD4 T細胞応答である。
同様に、自己免疫またはアレルギーを処置するための個別化アプローチは、免疫が媒介する病態の原因である特異的な自己抗原または外来抗原の同定によって、それぞれ、可能である。公知であり、患者共通である自己抗原およびアレルゲンもあるが、患者特異的でありうる自己抗原およびアレルゲンもあり、したがって、これらの患者の処置は、これらの患者に合せて調整しなければならない。病態の原因として同定された抗原を、自己抗原(auto-antigen)(すなわち、自己抗原(self-antigen))に対する寛容を誘導することができるワクチンとして、ペプチドの形態で投与することができる。あるいは、アレルギーに対して生じる外来抗原に対する免疫応答は、病態をもたらす特定の免疫応答型のものであることもある。したがって、そのような外来抗原に対するワクチンを、ペプチドベースのワクチンとして提供して、免疫応答を、病態をもたらさない質的に明確に異なる免疫応答型にシフトさせることができる。
がんの処置または予防におけるT細胞の役割
養子T細胞療法および免疫チェックポイント阻害剤に基づく免疫療法を使用して示されているように、T細胞が腫瘍退縮を媒介し、患者の生存を改善することは公知である。ヒトにおけるいくつかの研究により、単一の腫瘍関連抗原を認識する大量の増殖CD8および/またはCD4 T細胞の静脈内注入は、腫瘍退縮を媒介し、生存を改善することができることが示されている(参照:E. Tranら、N Engl J Med 375巻:2255~2262頁、2016年;およびE. Tranら、Science 344巻:641~645頁、2014年)。加えて、CTLA-4、PD-1および/またはPD-L1を遮断するモノクローナル抗体(いわゆる「チェックポイント阻害剤」)などの、T細胞抑制を遮断するまたは逆転させる薬物での、ある特定のがんの処置は、腫瘍を退縮させ、全生存を改善する結果となる(参照:D. M. Pardoll、Nat Rev Cancer、12巻:252~264頁、2012年;F. S. Hodiら、N Engl J Med、363巻:711~723頁、2010年;およびM. Reckら、N Engl J Med、375巻:1823~1833頁、2016年;J. E. Rosenbergら、Lancet 387巻:1909~1920頁、2016年)。PD-1/PD-L1は、PD-1がT細胞上に発現され、PD-L1が腫瘍における細胞上に発現される、受容体-リガンドペアである。PD-1/PD-L1相互作用は、それがなければ、T細胞により認識された腫瘍関連抗原を発現する腫瘍細胞の成長の緩徐化または消失をもたらすことになるそれらのエフェクター機能をT細胞が実行するのを阻止する。PD-1/PD-L1相互作用をモノクローナル抗体で遮断すると、抑制シグナルが停止し、それによって、T細胞が解き放たれてエフェクター機能を実行し、その結果、腫瘍細胞成長が緩徐化されるかまたは腫瘍細胞が死滅することになる(D. M. Pardoll、Nat Rev Cancer、12巻:252~264頁、2012年)。
養子T細胞療法および免疫チェックポイント阻害剤に基づく免疫療法を使用して示されているように、T細胞が腫瘍退縮を媒介し、患者の生存を改善することは公知である。ヒトにおけるいくつかの研究により、単一の腫瘍関連抗原を認識する大量の増殖CD8および/またはCD4 T細胞の静脈内注入は、腫瘍退縮を媒介し、生存を改善することができることが示されている(参照:E. Tranら、N Engl J Med 375巻:2255~2262頁、2016年;およびE. Tranら、Science 344巻:641~645頁、2014年)。加えて、CTLA-4、PD-1および/またはPD-L1を遮断するモノクローナル抗体(いわゆる「チェックポイント阻害剤」)などの、T細胞抑制を遮断するまたは逆転させる薬物での、ある特定のがんの処置は、腫瘍を退縮させ、全生存を改善する結果となる(参照:D. M. Pardoll、Nat Rev Cancer、12巻:252~264頁、2012年;F. S. Hodiら、N Engl J Med、363巻:711~723頁、2010年;およびM. Reckら、N Engl J Med、375巻:1823~1833頁、2016年;J. E. Rosenbergら、Lancet 387巻:1909~1920頁、2016年)。PD-1/PD-L1は、PD-1がT細胞上に発現され、PD-L1が腫瘍における細胞上に発現される、受容体-リガンドペアである。PD-1/PD-L1相互作用は、それがなければ、T細胞により認識された腫瘍関連抗原を発現する腫瘍細胞の成長の緩徐化または消失をもたらすことになるそれらのエフェクター機能をT細胞が実行するのを阻止する。PD-1/PD-L1相互作用をモノクローナル抗体で遮断すると、抑制シグナルが停止し、それによって、T細胞が解き放たれてエフェクター機能を実行し、その結果、腫瘍細胞成長が緩徐化されるかまたは腫瘍細胞が死滅することになる(D. M. Pardoll、Nat Rev Cancer、12巻:252~264頁、2012年)。
患者において腫瘍排除を促進することにおけるT細胞の役割は、処置開始時に腫瘍生検試料中に存在するT細胞浸潤レベルが高い患者ほどチェックポイント阻害剤の有効性が高い(死亡率が低い)ことを示す、ヒトにおける研究によって裏付けられる(参照:J. E. Rosenbergら、Lancet 387巻:1909~1920頁、2016年)。さらに、腫瘍の変異レベルが高い患者ほど、チェックポイント阻害剤の有効性が高いことも示されており(参照:A. Snyderら、N Engl J Med 371巻、2189~2199頁2014年;およびN. A. Rizviら、Science、348巻:124~128頁、2015年)、恐らくこれは、変異数が増加すると、変異体タンパク質がより多くなり、その結果、T細胞が腫瘍細胞を認識してそれらを消失の標的とすることができる、より多数の潜在的標的が供給されるためである。
しかし、大きな課題は、蔓延している多くの腫瘍(例えば、前立腺がん、乳がんおよび膵がん)の変異荷重が低いこと(参照:T. N. Schumacher、R. D.
Schreiber、Science、348巻:69~74頁、2015年)、およびこれらのがんを有する患者が、チェックポイント阻害剤からの恩恵をほとんどまたは全く得られないことである。さらに、変異荷重が高い腫瘍の間ですら、被験体の大多数に、免疫療法が効果を媒介するために必要とされる必須の既存腫瘍特異的T細胞応答が欠如しているため、患者の小集団しかチェックポイント阻害剤治療からの恩恵を受けない。
Schreiber、Science、348巻:69~74頁、2015年)、およびこれらのがんを有する患者が、チェックポイント阻害剤からの恩恵をほとんどまたは全く得られないことである。さらに、変異荷重が高い腫瘍の間ですら、被験体の大多数に、免疫療法が効果を媒介するために必要とされる必須の既存腫瘍特異的T細胞応答が欠如しているため、患者の小集団しかチェックポイント阻害剤治療からの恩恵を受けない。
がんの処置または予防のための腫瘍関連抗原を標的とするワクチン
がんの処置または予防のために免疫応答、特にT細胞応答を生成するには、適する腫瘍関連抗原の同定が必要である。腫瘍関連抗原には、ある特定の健常細胞上に存在するが腫瘍細胞によって優先的に発現される、自己抗原;発癌性微生物病原体からの、病原体由来抗原;および/または腫瘍細胞に特異的であり、常にではないが多くの場合、個々の患者に特有である異常タンパク質であるネオ抗原が含まれる。
がんの処置または予防のために免疫応答、特にT細胞応答を生成するには、適する腫瘍関連抗原の同定が必要である。腫瘍関連抗原には、ある特定の健常細胞上に存在するが腫瘍細胞によって優先的に発現される、自己抗原;発癌性微生物病原体からの、病原体由来抗原;および/または腫瘍細胞に特異的であり、常にではないが多くの場合、個々の患者に特有である異常タンパク質であるネオ抗原が含まれる。
適する自己抗原は、出産後の被験体にはもはや発現されないタンパク質に由来する抗原でありうる。例えば、適する自己抗原としては、腫瘍細胞により優先的に発現される抗原、例えば、NY-ESO-1およびMAGE-A3を挙げることができる(参照:N. N. Hunderら、N Engl J Med、358巻:2698~2703頁、2008年)。あるいは、自己抗原としては、健常組織に発現される抗原であって、その健常組織に対するT細胞応答が、患者にとって過度に有害でない抗原、例えば、前立腺酸性ホスファターゼ(PAP)を挙げることができる(参照:P. W. Kantoffら、N Engl J Med 363巻:411~422頁、2010年)。
腫瘍関連抗原は、新生物性過程の基礎をなす駆動因子であるウイルスまたは他の病原体などの病原体由来抗原、例えば、ヒトパピローマウイルス(HPV)からのタンパク質でありうる(参照:G. G. Kenterら、N Engl J Med、361巻:1838~1847頁、2009年)。
ネオ抗原は、腫瘍細胞にのみ存在し、正常細胞には存在しない変異の結果である抗原である(参照:T. N. Schumacher、R. D. Schreiber、Science、348巻:69~74頁、2015年)。ネオ抗原は、非保存的アミノ酸変化をもたらすヌクレオチド多型によって作出されることがある。ネオ抗原は、挿入または欠失またはフレームシフト変異を含有するペプチド抗原を生じさせる原因となりうる挿入および/または欠失によって作出されることもある。ネオ抗原は、終止コドンの導入によって作出されることもあり、この終止コドンは、その新たな状況では終止コドン機構により認識されず、その結果、リボソームはそのコドンをスキップし、単一アミノ酸欠失を含有するペプチドを生成することになる。ネオ抗原は、誤ってスプライシングされたmRNA転写物を生じさせる結果となる、スプライシング部位での変異によって作出されることもある。ネオ抗原は、融合タンパク質を生じさせる結果となる、逆位および/または染色体転座によって作出されることもある。
最後に、腫瘍関連抗原は、変異していないペプチドまたは変異体ペプチドの新規翻訳後修飾であって、正常組織には存在しない翻訳後修飾を含有することもある。
まとめると、腫瘍関連抗原は、新生物性細胞により産生される任意の抗原であって、T細胞応答による標的化時に、理想的には、腫瘍成長の有意義な退縮をもたらすかまたは腫瘍形成を防止し、健常な非がん性細胞に対して制限された効果を有する抗原である。
ワクチン分野が直面している課題
ある特定のがんの処置に好ましい免疫応答は、腫瘍関連抗原を認識するCD8 T細胞応答(参照:E. Tranら、N Engl J Med 375巻:2255~2262頁、2016年)および/またはCD4 T細胞応答(ならびに参照: E. Tranら、Science 344巻:641~645頁、2014年;およびN. N.
Hunderら、N Engl J Med、358巻:2698~2703頁、2008年)であって、優先的に維持されうる、大規模でありうる、かつ高度に機能しうる(高品質)CD8 T細胞応答および/またはCD4 T細胞応答である(L. Gattinoniら、Nature Medicine、17巻:1290~1297頁、2011年)。
ある特定のがんの処置に好ましい免疫応答は、腫瘍関連抗原を認識するCD8 T細胞応答(参照:E. Tranら、N Engl J Med 375巻:2255~2262頁、2016年)および/またはCD4 T細胞応答(ならびに参照: E. Tranら、Science 344巻:641~645頁、2014年;およびN. N.
Hunderら、N Engl J Med、358巻:2698~2703頁、2008年)であって、優先的に維持されうる、大規模でありうる、かつ高度に機能しうる(高品質)CD8 T細胞応答および/またはCD4 T細胞応答である(L. Gattinoniら、Nature Medicine、17巻:1290~1297頁、2011年)。
被験体において抗原、例えば腫瘍関連抗原、に対するT細胞応答を誘導する1つの手段は、ワクチン接種による手段である。DNA/RNAベースの、ウイルスベクターベースの、およびペプチドベースのアプローチを含む、腫瘍関連抗原に対するCD8および/またはCD4 T細胞応答を誘導するための非常に多くのアプローチが、現在研究されている(例えば、参照:L. M. Kranzら、Nature 534巻、396~401頁、2016年;およびC. J. Melief、S. H. van der Burg、Nat Rev Cancer 8巻:351~360頁、2008年)。しかし、がんに対する有効なT細胞免疫を生じさせるための大きな課題は、ほとんどの現行のワクチンアプローチが、CD8 T細胞免疫を惹起するには弱い免疫原性、およびほとんどの予測ネオ抗原に対する応答の限定された抗原性の幅によって制約されることである(参照:S. Kreiterら、Nature 520巻、692~696頁、2015年)。
抗腫瘍T細胞免疫を誘導するための多くの努力が、異なる免疫刺激剤および/またはビヒクル(アジュバント)と単に混合された合成ペプチド抗原の使用(参照:C. J. Melief、S. H. van der Burg、Nat Rev Cancer
8巻:351~360頁、2008年;およびM. S. Bijkerら、Eur J Immunol 38巻、1033~1042頁、2008年)またはRNA(参照:Kranz LMら、Nature 534巻(7607号):396~401頁、2016年およびKreiter Sら、Nature 520巻(7549号):692~696頁、2015年)のどちらかに集中している。
8巻:351~360頁、2008年;およびM. S. Bijkerら、Eur J Immunol 38巻、1033~1042頁、2008年)またはRNA(参照:Kranz LMら、Nature 534巻(7607号):396~401頁、2016年およびKreiter Sら、Nature 520巻(7549号):692~696頁、2015年)のどちらかに集中している。
しかし、がんに対する有効なT細胞免疫を生じさせるための大きな課題は、ペプチド抗原またはRNAに基づくほとんどの現行のワクチンアプローチが、ネオ抗原を含む腫瘍関連抗原に対する応答の小さな規模および限定された抗原性の幅によって阻まれてきたことである。例えば、抗原性の幅に関しては、ペプチド抗原に基づく(例えば、25アミノ酸合成長鎖ペプチドをアジュバントポリIC:LCと混合する)またはRNAに基づく現行の標準ペプチドベースのワクチンアプローチは、予測ネオ抗原の10%未満に対してT細胞応答を誘導する(参照:S. Kreiterら、Nature 520巻、692~696頁、2015年)。それ故、向上したワクチンアプローチ、特に、ペプチドベースのワクチンアプローチが、必要である。
現代のワクチン技術によるT細胞応答の小さな規模および乏しい抗原性の幅についての十分な説明は、依然として不確定であり、それ故、継続している課題は、がんの処置および予防のために、ならびに感染性疾患の処置および予防を含む他の適用のために、T細胞免疫の確実なプライミングを確保するためのペプチド抗原の送達についての最適なパラメーターをめぐって目下一致した見解がないことである。同様に、抑制および寛容を誘導するためのペプチドベースのワクチンについての最適なパラメーターも、依然として不明である。
ペプチドベースのT細胞ワクチンをめぐる現行の課題
感染性疾患およびがんの処置または予防のためのワクチンの開発にとっての大きな課題は、ほとんどの抗原に対して大規模T細胞免疫を確実に惹起するためのペプチドベースのワクチンを構築するのに最良の方法に関して目下一致した見解がないことである。同様に、免疫寛容を誘導するための、または免疫応答を、アレルギーを誘導するものから無害な型の応答にシフトさせるための、ペプチドベースのワクチンを構築するのに最良な方法に関して、一致した見解がない。例えば、がんおよび感染性疾患の処置または予防のためにならびに自己免疫およびアレルギーの処置または予防のために最適なT細胞免疫を誘導するのに必要な、最適なペプチド抗原長、ペプチド抗原送達の物理的形式(例えば、可溶性対微粒子)および自然免疫刺激のタイプ(例えば、アジュバント選択)については、いまだに相当な議論が交わされている。実際、免疫応答に対する、CD4およびCD8 T細胞エピトープに隣接するアミノ酸、使用されるリンカー化学、電荷などの影響を含む、ペプチドベースのワクチンの多くのパラメーターの影響は、依然としてほとんど明らかになっていない。この問題は、個別化ワクチンアプローチを各患者に合せて独特に調整しなければならないことを考えると、特に顕著であり、それ故、免疫、特に、患者特異的抗原に対するT細胞免疫を確実に惹起するための普遍的なペプチドベースのワクチンアプローチが必要である。
感染性疾患およびがんの処置または予防のためのワクチンの開発にとっての大きな課題は、ほとんどの抗原に対して大規模T細胞免疫を確実に惹起するためのペプチドベースのワクチンを構築するのに最良の方法に関して目下一致した見解がないことである。同様に、免疫寛容を誘導するための、または免疫応答を、アレルギーを誘導するものから無害な型の応答にシフトさせるための、ペプチドベースのワクチンを構築するのに最良な方法に関して、一致した見解がない。例えば、がんおよび感染性疾患の処置または予防のためにならびに自己免疫およびアレルギーの処置または予防のために最適なT細胞免疫を誘導するのに必要な、最適なペプチド抗原長、ペプチド抗原送達の物理的形式(例えば、可溶性対微粒子)および自然免疫刺激のタイプ(例えば、アジュバント選択)については、いまだに相当な議論が交わされている。実際、免疫応答に対する、CD4およびCD8 T細胞エピトープに隣接するアミノ酸、使用されるリンカー化学、電荷などの影響を含む、ペプチドベースのワクチンの多くのパラメーターの影響は、依然としてほとんど明らかになっていない。この問題は、個別化ワクチンアプローチを各患者に合せて独特に調整しなければならないことを考えると、特に顕著であり、それ故、免疫、特に、患者特異的抗原に対するT細胞免疫を確実に惹起するための普遍的なペプチドベースのワクチンアプローチが必要である。
現行のペプチドベースのワクチンアプローチが直面しているもう1つの大きな課題は、それらのアプローチが、ペプチド抗原の可能性のある幅広い物理的および化学的特性を考慮しないことである。例えば、個人別がんワクチンアプローチには、各患者から、可能性のある幅広い物理的および化学的特性を有しうる特有のセットのペプチド抗原を生成することが必要となる。自己免疫に関しては、複数の異なる抗原が、病態の原因として同定されうる。したがって、寛容誘導ワクチンは、各患者に特有である1セットのペプチド抗原を含有しなければならない。問題は、ペプチド抗原組成の可変性が、25アミノ酸長のまたはそれより長いペプチドベースの抗原の約10~30%であると推定される、ネイティブペプチド抗原として製造することが困難または不可能である一部のペプチドベースの抗原をもたらしうることである。それ故、ネイティブペプチド抗原を効率的に生成することも、合成後に単離することもできないため、多くの抗原は、現行のワクチンアプローチによって標的化することができない。加えて、現行のペプチドベースのワクチンアプローチでは制御されない、電荷および溶解度に影響を及ぼすペプチド抗原組成の可変性は、ペプチドの物質負荷を含む、ワクチン製剤の様々な特質に影響を及ぼすことがあり、および/またはペプチド抗原と他のペプチド抗原もしくはワクチンの他の成分のどちらかとの有害な相互作用をもたらすこともある。
したがって、現行のペプチドベースのワクチンアプローチの制約を克服するために、(i)ワクチン製剤中ばかりでなく製造中のペプチド抗原の物理的および化学的性質の可変性も考慮する、ペプチドベースのワクチンを製造する新規組成物および方法であって、(ii)ほとんどの抗原に対する免疫応答、特に、被験体におけるT細胞応答を確実に誘導するためのペプチド抗原の最適な送達を確保するための新規組成物および方法が、必要とされている。ペプチド抗原可変性を考慮する、したがって、任意のペプチド抗原に対して一般化可能である、そのようなワクチンおよび方法は、個別化がんワクチンに使用されるペプチド抗原の特性が患者によって変わりうる個別化がん処置の分野において、特に有用であろう。しかし、任意のペプチド抗原に対するペプチドベースのワクチン組成物の適用可能性は、これらの組成物を、他の個別化された免疫学ベースの処置において、例えば、自己免疫およびアレルギーの処置のための寛容の誘導にまたはアレルゲンに対する免疫応答の調節に、それぞれ、使用することもできるということである。
したがって、現行のペプチドベースのワクチンアプローチの制約を克服するために、(i)ワクチン製剤中ばかりでなく製造中のペプチド抗原の物理的および化学的性質の可変性も考慮する、ペプチドベースのワクチンを製造する新規組成物および方法であって、(ii)ほとんどの抗原に対する免疫応答、特に、被験体におけるT細胞応答を確実に誘導するためのペプチド抗原の最適な送達を確保するための新規組成物および方法が、必要とされている。ペプチド抗原可変性を考慮する、したがって、任意のペプチド抗原に対して一般化可能である、そのようなワクチンおよび方法は、個別化がんワクチンに使用されるペプチド抗原の特性が患者によって変わりうる個別化がん処置の分野において、特に有用であろう。しかし、任意のペプチド抗原に対するペプチドベースのワクチン組成物の適用可能性は、これらの組成物を、他の個別化された免疫学ベースの処置において、例えば、自己免疫およびアレルギーの処置のための寛容の誘導にまたはアレルゲンに対する免疫応答の調節に、それぞれ、使用することもできるということである。
C.J.Melief、S.H.van der Burg、Nat Rev Cancer(2008年)8巻:351~360頁
M.S.Bijkerら、Eur J Immunol(2008年)38巻、1033~1042頁
Kranz LMら、Nature(2016年)534巻(7607号):396~401頁
Kreiter Sら、Nature(2015年)520巻(7549号):692~696頁
S.Kreiterら、Nature(2015年)520巻、692~696頁
本発明者らは、現行のペプチドベースのワクチンアプローチの制約の少なくとも1つを克服するペプチドベースのワクチンを製造する新規組成物および方法を開発した。本明細書で開示される新規のペプチドベースのワクチン組成物および製造方法は、ペプチド抗原の物理的および化学的性質の可変性を考慮し、したがって、任意のペプチド抗原に対して一般化可能である。さらに、本明細書で開示される新規のペプチドベースのワクチン組成物は、被験体において免疫応答を誘導するために様々な異なるペプチド抗原の最適な送達を確保する。
本明細書で開示される新規組成物は、ペプチド抗原コンジュゲートを含む免疫原性組成物に関する。ペプチド抗原コンジュゲートは、粒子を形成する疎水性分子(H)または予め形成された粒子(P)のどちらかに、直接、あるいは必要に応じたリンカー(L)および/またはペプチド抗原のNもしくはC末端のどちらかにそれぞれ連結されている必要に応じたNもしくはC末端伸長部(B1もしくはB2)によって間接的に、のどちらかで、連結されているペプチド抗原(A)を含む。
一部の実施形態では、ペプチド抗原コンジュゲートにより形成される粒子は、必要に応じた荷電分子(C)をさらに含む。一部の実施形態では、荷電分子は、水性条件で粒子を安定させるためにペプチド抗原コンジュゲートに連結される。他の実施形態では、荷電分子(C)は、別の分子上に備えられており、ペプチド抗原コンジュゲートにより形成される粒子に組み込まれる。
ある特定のN末端および/もしくはC末端伸長部(B1および/もしくはB2)ならびに/または荷電分子(C)の付加は、固相合成によるペプチドベースのワクチンの製造の予想外の向上をもたらし、ならびに有機溶媒溶解度向上によって精製の容易さの向上をもたらし、ならびにペプチド抗原コンジュゲートにより形成される粒子のサイズおよび安定性に対する制御の予想外の向上をもたらす。これらの組成物は、T細胞免疫および腫瘍排除の予想外の向上、特に、腫瘍関連抗原に対して生成されるT細胞の規模および幅についての予想外の向上を示す。
本開示の実施形態は、ペプチド抗原(A)、および疎水性分子(H)または粒子(P)のどちらかを含むペプチド抗原コンジュゲートであって、ペプチド抗原(A)が、疎水性分子(H)または粒子(P)のどちらかに、直接連結されているか、またはペプチド抗原(A)のN末端に連結されているN末端伸長部(B1)もしくはペプチド抗原(A)のC末端に連結されているC末端伸長部(B2)を介して間接的に連結されている、ペプチド抗原コンジュゲートを含む。本開示のさらなる実施形態は、ペプチド抗原コンジュゲートを含む免疫原性組成物を含む。本開示のなおさらなる実施形態は、疾患に罹患している患者を処置する方法であって、疾患に罹患している患者に、そのペプチド抗原コンジュゲート、または免疫原性組成物を投与することを含む方法を含む。
一部の実施形態では、がん処置に使用されるワクチンは、単独で使用することができ、または化学療法、チェックポイント阻害剤、放射線照射、およびがんと闘うために使用される任意の他の技術をこれらに限定されないが含む、他の免疫療法およびかん処置モダリティと組み合わせて使用することができる。
したがって、疾患に罹患している患者を処置する方法であって、疾患に罹患している患者に、本開示のペプチド抗原コンジュゲートまたは免疫原性組成物を投与することを含む方法も、本明細書で開示する。
さらに、疾患の処置のための医薬品の製造における本開示のペプチド抗原コンジュゲートまたは免疫原性組成物の使用を、本明細書で開示する。
本明細書で開示する予想外の発見は、以下に関係する:
(i)T細胞免疫の確実なプライミングを確保するためにがんワクチンにおいて使用されるペプチド抗原(A)の最適な長さ;
(ii)ペプチドベースのワクチンの製造を助長する、ペプチド抗原伸長配列、すなわちN末端もしくはC末端伸長部(B1および/もしくはB2)、ならびに/または必要に応じた荷電分子(C)の使用;
(iii)ペプチド抗原コンジュゲートを構成する疎水性分子(H)の特性が、製造性ならびに粒子のサイズおよび安定性に対してどのような影響を及ぼすのか、およびこれらのパラメーターが生物活性に対してどのような影響を及ぼすのか;
(iv)T細胞免疫の促進に最適なサイズの粒子を誘導するおよび安定させるために必要な、荷電分子(C)の組成およびペプチド抗原コンジュゲートの正味電荷;
(v)ペプチド抗原コンジュゲートの状況内において送達される最小エピトープの効率的プロセシングを促進する酵素分解性ペプチド配列の組成;および/または
(vi)ペプチド抗原コンジュゲートで送達される、アジュバント特性を有するリガンド(例えば、PRRアゴニスト)の作用強度および質的特性が、T細胞応答の幅、規模および質にどのような影響を及ぼすのか。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
(項目1)
a.ペプチド抗原(A)、
および
b.疎水性分子(H)または粒子(P)のどちらか
を含むペプチド抗原コンジュゲートであって、
前記ペプチド抗原(A)が、前記疎水性分子(H)または前記粒子(P)のどちらかに、直接連結されているか、または前記ペプチド抗原(A)のN末端に連結されている必要に応じたN末端伸長部(B1)または前記ペプチド抗原(A)のC末端に連結されている必要に応じたC末端伸長部(B2)を介して間接的に連結されており、必要に応じて、前記疎水性分子(H)または前記粒子(P)が、前記伸長部(B1またはB2)にリンカー(L)を介して間接的に連結されている、ペプチド抗原コンジュゲート。
(項目2)
荷電分子(C)をさらに含む、項目1に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目3)
約7.4のpHの水性緩衝液中で約+3より大きいかもしくは約+3に等しい、または約-3未満であるかもしくは約-3に等しい正味静電荷を有する、項目2に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目4)
前記荷電分子(C)、および前記疎水性分子(H)または前記粒子(P)のどちらかが、両方とも、前記ペプチド抗原(A)のN末端またはC末端のどちらかに、直接、または必要に応じた前記N末端伸長部(B1)もしくは必要に応じた前記C末端伸長部(B2)を介して、それぞれ結合されている、項目1~3のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目5)
前記荷電分子(C)、および前記疎水性分子(H)または前記粒子(P)のどちらかが、前記ペプチド抗原(A)の両端に結合されている、項目2および3のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目6)
(i)前記荷電分子(C)が、前記ペプチド抗原(A)のN末端に前記N末端伸長部(B1)によって結合されており、(ii)前記疎水性分子(H)または前記粒子(P)のどちらかが、前記ペプチド抗原(A)のC末端に前記C末端伸長部(B2)を介して結合されている、項目5に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目7)
前記N末端伸長部(B1)が、アミノ酸PN1を含む酵素分解性ペプチド配列を含み、PN1が、アルギニン、リシン、シトルリン、グルタミン、トレオニン、ロイシン、ノルロイシン、またはメチオニンから選択される、項目1~6のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目8)
前記アミノ酸PN1を含む前記酵素分解性ペプチド配列が、以下:
a.グリシン、バリン、ロイシンもしくはイソロイシンから選択されるアミノ酸PN2、
b.グリシン、セリン、プロリンもしくはロイシンから選択されるアミノ酸PN3、
c.アルギニン、リシン、グルタミン酸、アスパラギン酸、グリシンもしくはセリンから選択されるアミノ酸PN4、または
d.a~cの組み合わせのいずれか
のうちの少なくとも1つをさらに含む、項目7に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目9)
前記酵素分解性ペプチド配列が、以下:
a. Ser-Leu-Val-Cit;
b. Ser-Leu-Val-Leu(配列番号4);
c. Ser-Pro-Val-Cit;
d. Gly-Pro-Val-Cit;
e. Gly-Pro-Leu-Cit;
f. Glu-Leu-Val-Arg(配列番号5);
g. Ser-Pro-Val-Arg(配列番号6);
h. Ser-Pro-Leu-Arg(配列番号21);
i. Ser-Leu-Val-Arg(配列番号7);
j. Lys-Pro-Leu-Arg(配列番号8);
k. Glu-Leu-Val-Cit;
l. Glu-Leu-Val-Leu(配列番号10);
m. Glu-Pro-Val-Cit;または
n. Glu-Gly-Val-Cit
から選択されるテトラペプチドであって、GluがAspで置き換えられていてもよい、および/またはArgがLysで置き換えられていてもよい、テトラペプチドを含む、項目7または項目8のどちらかに記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目10)
前記C末端伸長部(B2)が、以下:
i.グリシン、セリン、アルギニン、リシン、シトルリン、グルタミン、トレオニン、ロイシン、ノルロイシンもしくはメチオニンから選択される単一アミノ酸PC1’;
ii.PC1’が、グリシンもしくはセリンから選択され、PC2’が、グリシン、セリン、プロリン、アルギニン、リシン、シトルリン、グルタミン、トレオニン、ロイシン、ノルロイシンもしくはメチオニンから選択される、ジペプチド;
iii.PC1’が、グリシンもしくはセリンから選択され、PC2’が、グリシン、セリンもしくはプロリンから選択され、PC3’が、グリシン、セリン、アルギニン、リシン、シトルリン、グルタミン、トレオニン、ロイシン、ノルロイシンもしくはメチオニンから選択される、トリペプチド;
iv.PC1’が、グリシンもしくはセリンから選択され、PC2’が、グリシン、セリン、プロリンもしくはロイシンから選択され、PC3’が、グリシン、バリン、ロイシンもしくはイソロイシンから選択され、PC4’が、アルギニン、リシン、シトルリン、グルタミン、トレオニン、ロイシン、ノルロイシンもしくはメチオニンから選択される、テトラペプチド;
v.PC1’が、グリシンもしくはセリンから選択され、PC2’が、グリシン、セリン、プロリン、アルギニン、リシン、グルタミン酸もしくはアスパラギン酸から選択され、PC3’が、グリシン、セリン、プロリンもしくはロイシンから選択され、PC4’が、グリシン、バリン、ロイシンもしくはイソロイシンから選択され、PC5’が、アルギニン、リシン、シトルリン、グルタミン、トレオニン、ロイシン、ノルロイシンもしくはメチオニンから選択される、ペンタペプチド;または
vi.PC1’が、グリシンもしくはセリンから選択され、PC2’が、グリシン、セリンもしくはプロリンから選択され、PC3’が、グリシン、セリン、プロリン、アルギニン、リシン、グルタミン酸もしくはアスパラギン酸から選択され、PC4’が、プロリンもしくはロイシンから選択され、PC5’が、グリシン、バリン、ロイシンもしくはイソロイシンから選択され、PC6’が、アルギニン、リシン、シトルリン、グルタミン、トレオニン、ロイシン、ノルロイシンもしくはメチオニンから選択される、ヘキサペプチド
を含む酵素分解性ペプチド配列を含む、項目1~9のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目11)
前記C末端伸長部(B2)が、
a.
i. Gly-Gly-Lys-Leu-Val-Arg(配列番号11);
ii. Gly-Gly-Ser-Leu-Val-Arg(配列番号13);
iii. Gly-Gly-Ser-Pro-Val-Arg(配列番号61);
iv. Gly-Gly-Ser-Leu-Val-Cit;
v. Gly-Gly-Ser-Pro-Val-Cit;
vi. Gly-Gly-Ser-Pro-Leu-Cit;
vii. Gly-Gly-Ser-Leu-Val-Leu(配列番号14);
viii. Gly-Gly-Glu-Leu-Val-Arg(配列番号15);
ix. Gly-Gly-Glu-Leu-Val-Leu(配列番号16);
x. Gly-Gly-Glu-Leu-Val-Cit
から選択されるヘキサペプチドであって、GluがAspで置き換えられていてもよい、および/もしくはArgがLysで置き換えられていてもよい、ヘキサペプチド;または
b.
i. Gly-Ser-Leu-Val-Arg(配列番号17);
ii. Gly-Ser-Pro-Val-Cit;
iii. Gly-Ser-Pro-Leu-Cit;
iv. Gly-Ser-Leu-Val-Cit;
v. Gly-Lys-Pro-Val-Cit;
vi. Gly-Lys-Pro-Val-Arg(配列番号18);
vii. Gly-Ser-Leu-Val-Leu(配列番号19);
viii. Gly-Glu-Leu-Val-Leu(配列番号20)
から選択されるペンタペプチドであって、GluがAspで置き換えられていてもよい、および/もしくはArgがLysで置き換えられていてもよい、ペンタペプチド;または
c.
i. Ser-Leu-Val-Cit;
ii. Ser-Leu-Val-Leu(配列番号4);
iii. Ser-Pro-Val-Cit;
iv. Ser-Pro-Leu-Cit;
v. Glu-Leu-Val-Arg(配列番号5);
vi. Ser-Pro-Val-Arg(配列番号6);
vii. Ser-Leu-Val-Arg(配列番号7);
viii. Lys-Pro-Leu-Arg(配列番号8);
ix. Glu-Leu-Val-Cit;
x. Glu-Leu-Val-Leu(配列番号10);
xi. Glu-Pro-Val-Cit;または
xii. Glu-Gly-Val-Cit
から選択されるテトラペプチドであって、GluがAspで置き換えられていてもよい、および/もしくはArgがLysで置き換えられていてもよい、テトラペプチド;または
d.
i. Gly-Ser-Gly;
ii. Gly-Ser-Arg;
iii. Gly-Ser-Leu;
iv. Gly-Ser-Cit;
v. Gly-Pro-Gly;
vi. Gly-Pro-Arg;
vii. Gly-Pro-Leu;
viii. Gly-Pro-Cit
から選択されるトリペプチド;または
e.
i. Gly-Ser;
ii. Gly-Pro;
iii. Gly-Arg;
iv. Gly-Cit
から選択されるジペプチド;または
f.Gly、Ser、Ala、Arg、Lys、Cit、Val、Leu、Met、Thr、GlnもしくはNleからなる群から選択される単一アミノ酸
を含む酵素分解性ペプチド配列を含む、項目10に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目12)
前記粒子(P)が、ポリスチレン、ポリ(乳酸-co-グリコール酸)(PLGA)、リポソーム、アルミニウムの無機塩、またはエマルジョンを含む、前記項目のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目13)
前記疎水性分子(H)が、約7.4のpHの水性緩衝液に、下は約0.1mg/mLに至るまで不溶性である、分岐した長鎖もしくは環式脂肪族分子、または脂肪酸、脂質もしくはステロール誘導体である、項目1~11のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目14)
前記疎水性分子が、アクリレート、アクリルアミド、メタ(アクリレート)、メタ(アクリルアミド)、スチリルモノマー、ビニルモノマー、ジオキソホスホラン、環式エステル、天然もしくは非天然アミノ酸から選択されるモノマー単位に基づくポリマー、およびジオールもしくはジアミンとジイソシアネートもしくはポリイソシアネートとの反応から生じるポリマーを含み、必要に応じて、アジュバントが、前記ポリマーを構成する1つまたは複数のモノマーに連結されている、項目1~11のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目15)
前記疎水性分子(H)が、式I:
のポリ(アミノ酸)であり、式中、R2は、水素、ヒドロキシルまたはアミンのうちの1つから選択され、xは、3~300の間であり、y3は、1~8であり、リガンドは、任意の適する手段によってリンカーXを介して結合されている、
項目14に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目16)
前記疎水性分子(H)が、式II:
に基づくポリ(アミノ酸)であり、式中、lは、3~300の間であり、oは、0~300の間であり、R3は、水素、ヒドロキシルまたはアミンのうちの1つから選択され、R4は、水素、低級アルキル、
のうちの1つから選択され、y11は、通常は1~8から選択され、FGは、アジュバント特性を有するリガンドに連結されている、カルボン酸、アルデヒド、ケトン、アミン、チオール、アジドまたはアルキンから選択される官能基であり、N末端は、アミド結合によって直接、またはリンカーによって間接的に、のどちらかで、前記ペプチド抗原に、直接、または前記伸長部(B1もしくはB2)および/またはリンカー(L)または荷電分子(C)によってのどちらかで連結されている、
項目14に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目17)
前記疎水性分子(H)が、ポリ(ロイシン)、ポリ(トリプトファン)、ポリ(γ-グルタミルジエチレングリコールモノメチルエーテル)、ポリ(γ-ベンジルグルタメート)、ポリ(N-イソプロピルアクリルアミド)(NIPAM)、ポリ[2(2-メトキシエトキシ)エチルメタクリレート](DEGMA)またはポリ[N-(2-ヒドロキシプロピル)メタクリルアミド](HPMA)からなるホモポリマーまたはコポリマーを含む、項目14に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目18)
式Iのポリ(アミノ酸)を含む前記疎水性分子(H)が、ポリ(ロイシン)、ポリ(トリプトファン)、ポリ(γ-グルタミルジエチレングリコールモノメチルエーテル)、ポリ(γ-ベンジルグルタメート)、ポリ(N-イソプロピルアクリルアミド)(NIPAM)、ポリ[2(2-メトキシエトキシ)エチルメタクリレート](DEGMA)またはポリ[N-(2-ヒドロキシプロピル)メタクリルアミド](HPMA)に基づく第2のポリマーに、グラフトされているか、または末端において連結されている、項目15に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目19)
式IIのポリ(アミノ酸)を含む前記疎水性分子(H)が、ポリ(ロイシン)、ポリ(トリプトファン)、ポリ(γ-グルタミルジエチレングリコールモノメチルエーテル)、ポリ(γ-ベンジルグルタメート)、ポリ(N-イソプロピルアクリルアミド)(NIPAM)、ポリ[2(2-メトキシエトキシ)エチルメタクリレート](DEGMA)またはポリ[N-(2-ヒドロキシプロピル)メタクリルアミド](HPMA)に基づく第2のポリマーに、グラフトされているか、または末端において連結されている、項目16に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目20)
前記第2のポリマーが、約30~500モノマー単位の複数のモノマー単位を含む、項目18または項目19のどちらかに記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目21)
1つまたは複数のアジュバントが、前記疎水性分子(H)を構成する前記ポリマーに、ペンダント側鎖として連結されている、項目14~20のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目22)
1つまたは複数のアジュバントが、前記ポリマー(セミテレケリック)の一端に連結されている、項目14~20のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目23)
前記アジュバントが、Toll様受容体アゴニストまたはSTINGアゴニストのどちらかである、項目21または項目22のどちらかに記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目24)
前記Toll様受容体アゴニストが、Toll様受容体-7および/または-8のアゴニストのどちらかである、項目23に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目25)
前記アジュバントが、式III:
のイミダゾキノリンであり、式中、R7は、水素、必要に応じて置換されている低級アルキル、または必要に応じて置換されている低級エーテルのうちの1つから選択され、R8は、必要に応じて置換されているアリールアミン、または必要に応じて置換されている低級アルキルアミンのうちの1つから選択される、
項目24に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目26)
式IIIの3つまたはそれより多くのイミダゾキノリン分子が、前記疎水性分子(H)を構成する前記ポリマーに連結されており、R8が、必要に応じて置換されている低級アルキルアミンの1つから選択される、項目25に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目27)
式IIIの3つまたはそれ未満のイミダゾキノリン分子が、前記疎水性分子(H)を構成する前記ポリマーに連結されており、R8が、必要に応じて置換されているアリールアミンの1つから選択される、項目26に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目28)
前記粒子(P)または前記疎水性分子(H)が、約7.4のpHで約20℃~40℃の間の温度の水性緩衝液に、下は0.1mg/mLに至るまで不溶性である、前記項目のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目29)
約7.4のpHの水性緩衝液中で集合して、2つまたはそれより多くのペプチド抗原コンジュゲートを含むミセルまたは他のタイプのナノもしくはマイクロサイズの超分子会合体から構成される、5nmより大きい直径の粒子を構築する、前記項目のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目30)
約7.4のpHの水性緩衝液中で集合して約5~200nmの間の直径のミセルを構築する、項目29に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目31)
約7.4のpHの水性緩衝液中で凝集体である、項目29に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目32)
リンカー前駆体X1が、前記ペプチド抗原(A)に、直接、またはC末端伸長部(B2)によってのどちらかで、連結されており、前記疎水性分子(H)上または前記粒子(P)上どちらかのリンカー前駆体X2とリンクを形成する、前記項目のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目33)
前記リンカー前駆体X1が、式:
を有し、式中、タグのN末端アミンは、ペプチド抗原(A)に、直接、または前記C末端伸長部B2によってのどちらかで、連結されており;R1は、水素、ヒドロキシルまたはアミンのうちの1つから選択され;y1は、1~8の整数であり;FGは、チオール、アミン、アジドまたはアルキン(もしくはDBCO)のうちの1つから選択される、
項目32に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目34)
前記FGが、アジドであり、y1が、4であり、さらに、前記アジドが、粒子(P)または疎水性分子(H)と連結されているDBCO分子に連結している、項目33に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目35)
リンカー前駆体X1が、前記N末端伸長部(B1)に連結されており、かつ式:
を有し、式中、タグのカルボニルは、ペプチド抗原(A)のN末端に、直接、またはB1伸長部を介してのどちらかで連結されており;y2は、1~8の整数であり;FGは、チオール、アミン、アジドまたはアルキン(もしくはDBCO)のうちの1つから選択される、
項目1~32のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目36)
前記ペプチド抗原(P)、必要に応じた前記N末端伸長部(B1)、必要に応じた前記C末端伸長部(B2)および必要に応じた前記荷電分子(C)および必要に応じた前記リンカー前駆体X1が、固相ペプチド合成により単一ペプチドとして合成され、前記C末端伸長部(B2)が、プロリン(または固相ペプチド合成中、配列が、ペプチドを合成するために使用される樹脂に結合されている間は、プソイドプロリン)を含有する、項目1~35のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目37)
前記荷電分子(C)が、第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン、第四級アミン、グアニジニウム、イミダゾリウム、アンモニウム、スルホニウム、ホスホニウム、カルボキシレート、スルフェート、ホスフェート、ホスホルアミデートまたはホスホネートから選択される1つまたは複数の官能基を含む、項目2~36のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目38)
前記荷電分子(C)が、負荷電官能基と正荷電官能基の両方を含む、項目37に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目39)
前記荷電分子(C)を構成する荷電官能基の数が、以下:
a.前記ペプチド抗原(A)が、約0.75より大きいかもしくは約0.75に等しい総平均ハイドロパシー値を有する場合、前記ペプチド抗原コンジュゲートの前記正味静電荷が、約+6より大きいかもしくは約+6に等しい正の値を含むように;
b.前記ペプチド抗原(A)が、約0.25より大きいかもしくは約0.25に等しく、かつ約0.75未満である総平均ハイドロパシー値を有する場合、前記ペプチド抗原コンジュゲートの前記正味静電荷が、約+5より大きいかもしくは約+5に等しい正の値を含むように;
c.前記ペプチド抗原(A)が、約0.25未満である総平均ハイドロパシー値を有する場合、前記ペプチド抗原コンジュゲートの前記正味静電荷が、約+4より大きいかもしくは約+4に等しい正の値を含むように;
d.前記ペプチド抗原(A)が、約0.75より大きいかもしくは約0.75に等しい総平均ハイドロパシー値を有する場合、前記ペプチド抗原コンジュゲートの前記正味静電荷が、約-6未満であるかもしくは約-6に等しい負の値を含むように;
e.前記ペプチド抗原(A)が、約0.25より大きいかもしくは約0.25に等しく、かつ約0.75未満である総平均ハイドロパシー値を有する場合、前記ペプチド抗原コンジュゲートの前記正味静電荷が、約-5未満であるかもしくは約-5に等しい負の値を含むように;または
f.前記ペプチド抗原(A)が、約0.25未満である総平均ハイドロパシー値を有する場合、前記ペプチド抗原コンジュゲートの前記正味静電荷が、約-4より大きいかもしくは約-4に等しい正の値を含むように、
調整される、項目2~38のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目40)
前記ペプチド抗原(A)、前記N末端伸長部(B1)、前記C末端伸長部(B2)、前記荷電分子(C)および前記リンカー前駆体X1が、約7.4のpHの水性緩衝液に最大約1.0mg/mLに至るまで可溶性である単一ペプチドとして生成される、項目39に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目41)
項目1~40のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲートを含む、粒子。
(項目42)
複数の異なるペプチド抗原コンジュゲートを含む、項目41に記載の粒子。
(項目43)
項目1~40のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲートまたは項目41~42に記載の粒子を含む、免疫原性組成物。
(項目44)
ワクチンアジュバントをさらに含む、項目43に記載の免疫原性組成物。
(項目45)
複数の異なるペプチド抗原コンジュゲートを含む、項目43または項目44のどちらかに記載の免疫原性組成物。
(項目46)
前記ペプチド抗原(A)が、腫瘍関連抗原を含む、項目1~40のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲート、項目41および42のいずれか一項に記載の粒子、または項目43~45のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
(項目47)
前記腫瘍関連抗原が、ネオ抗原である、項目46に記載のペプチド抗原コンジュゲート、項目46に記載の粒子、または項目46に記載の免疫原性組成物。
(項目48)
前記ペプチド抗原(A)が、最小CD4またはCD8 T細胞エピトープである、項目1~40および46~47のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲート、項目41~42および46~47のいずれか一項に記載の粒子、または項目43~47のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
(項目49)
最小CD4 T細胞エピトープ、CD8 T細胞エピトープ、または最小CD4およびCD8 T細胞エピトープ両方から選択されるペプチド抗原(A)から構成される10~50の異なるペプチド抗原コンジュゲートを含む、項目43~47のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
(項目50)
最小CD4 T細胞エピトープ、最小CD8 T細胞エピトープ、または最小CD4およびCD8 T細胞エピトープ両方と、CD8 T細胞エピトープおよび/またはCD4
T細胞エピトープを含む15~35アミノ酸合成長鎖ペプチドとの両方から選択されるペプチド抗原(A)から構成される10~50の異なるペプチド抗原コンジュゲートを含む、項目43~47のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
(項目51)
前記最小CD8 T細胞またはCD4 T細胞エピトープが、被験体に適合するMHC分子についてIEDBコンセンサスアルゴリズムにより0.5パーセンタイル未満であるかまたは0.5パーセンタイルに等しい予測結合親和性を有する、項目48に記載のペプチド抗原コンジュゲート、項目48に記載の粒子、または項目48~50のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
(項目52)
前記ペプチド抗原(A)が普遍的CD4 T細胞エピトープである、ペプチド抗原コンジュゲートをさらに含む、項目43~51のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
(項目53)
疾患に罹患している患者を処置する方法であって、前記疾患に罹患している前記患者に、前記項目のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲートまたは免疫原性組成物を投与することを含む、方法。
(項目54)
免疫チェックポイント阻害剤、例えば、抗PD1、抗PD-L1もしくは抗CTLA-4抗体;腫瘍浸潤リンパ球およびキメラ抗原受容体T細胞ベースの治療;二重特異性抗体;抗腫瘍抗体;または免疫抑制を克服するために設計された薬物を含む、追加の免疫治療モダリティを投与することをさらに含む、項目53に記載の方法。
(項目55)
前記項目のいずれかに記載の免疫原性組成物またはペプチド抗原コンジュゲートが、異種ワクチンとともにプライムまたはブーストのどちらかとして使用される、異種免疫化スキームを含む、項目53または項目54のどちらかに記載の方法。
(項目56)
処置が、放射線療法、化学療法または外科手術と組み合わせて使用される、項目53~55のいずれか一項に記載の方法。
(項目57)
疾患の処置のための医薬品の製造における、項目1~52のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲート、粒子または免疫原性組成物の使用。
(i)T細胞免疫の確実なプライミングを確保するためにがんワクチンにおいて使用されるペプチド抗原(A)の最適な長さ;
(ii)ペプチドベースのワクチンの製造を助長する、ペプチド抗原伸長配列、すなわちN末端もしくはC末端伸長部(B1および/もしくはB2)、ならびに/または必要に応じた荷電分子(C)の使用;
(iii)ペプチド抗原コンジュゲートを構成する疎水性分子(H)の特性が、製造性ならびに粒子のサイズおよび安定性に対してどのような影響を及ぼすのか、およびこれらのパラメーターが生物活性に対してどのような影響を及ぼすのか;
(iv)T細胞免疫の促進に最適なサイズの粒子を誘導するおよび安定させるために必要な、荷電分子(C)の組成およびペプチド抗原コンジュゲートの正味電荷;
(v)ペプチド抗原コンジュゲートの状況内において送達される最小エピトープの効率的プロセシングを促進する酵素分解性ペプチド配列の組成;および/または
(vi)ペプチド抗原コンジュゲートで送達される、アジュバント特性を有するリガンド(例えば、PRRアゴニスト)の作用強度および質的特性が、T細胞応答の幅、規模および質にどのような影響を及ぼすのか。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
(項目1)
a.ペプチド抗原(A)、
および
b.疎水性分子(H)または粒子(P)のどちらか
を含むペプチド抗原コンジュゲートであって、
前記ペプチド抗原(A)が、前記疎水性分子(H)または前記粒子(P)のどちらかに、直接連結されているか、または前記ペプチド抗原(A)のN末端に連結されている必要に応じたN末端伸長部(B1)または前記ペプチド抗原(A)のC末端に連結されている必要に応じたC末端伸長部(B2)を介して間接的に連結されており、必要に応じて、前記疎水性分子(H)または前記粒子(P)が、前記伸長部(B1またはB2)にリンカー(L)を介して間接的に連結されている、ペプチド抗原コンジュゲート。
(項目2)
荷電分子(C)をさらに含む、項目1に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目3)
約7.4のpHの水性緩衝液中で約+3より大きいかもしくは約+3に等しい、または約-3未満であるかもしくは約-3に等しい正味静電荷を有する、項目2に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目4)
前記荷電分子(C)、および前記疎水性分子(H)または前記粒子(P)のどちらかが、両方とも、前記ペプチド抗原(A)のN末端またはC末端のどちらかに、直接、または必要に応じた前記N末端伸長部(B1)もしくは必要に応じた前記C末端伸長部(B2)を介して、それぞれ結合されている、項目1~3のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目5)
前記荷電分子(C)、および前記疎水性分子(H)または前記粒子(P)のどちらかが、前記ペプチド抗原(A)の両端に結合されている、項目2および3のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目6)
(i)前記荷電分子(C)が、前記ペプチド抗原(A)のN末端に前記N末端伸長部(B1)によって結合されており、(ii)前記疎水性分子(H)または前記粒子(P)のどちらかが、前記ペプチド抗原(A)のC末端に前記C末端伸長部(B2)を介して結合されている、項目5に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目7)
前記N末端伸長部(B1)が、アミノ酸PN1を含む酵素分解性ペプチド配列を含み、PN1が、アルギニン、リシン、シトルリン、グルタミン、トレオニン、ロイシン、ノルロイシン、またはメチオニンから選択される、項目1~6のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目8)
前記アミノ酸PN1を含む前記酵素分解性ペプチド配列が、以下:
a.グリシン、バリン、ロイシンもしくはイソロイシンから選択されるアミノ酸PN2、
b.グリシン、セリン、プロリンもしくはロイシンから選択されるアミノ酸PN3、
c.アルギニン、リシン、グルタミン酸、アスパラギン酸、グリシンもしくはセリンから選択されるアミノ酸PN4、または
d.a~cの組み合わせのいずれか
のうちの少なくとも1つをさらに含む、項目7に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目9)
前記酵素分解性ペプチド配列が、以下:
a. Ser-Leu-Val-Cit;
b. Ser-Leu-Val-Leu(配列番号4);
c. Ser-Pro-Val-Cit;
d. Gly-Pro-Val-Cit;
e. Gly-Pro-Leu-Cit;
f. Glu-Leu-Val-Arg(配列番号5);
g. Ser-Pro-Val-Arg(配列番号6);
h. Ser-Pro-Leu-Arg(配列番号21);
i. Ser-Leu-Val-Arg(配列番号7);
j. Lys-Pro-Leu-Arg(配列番号8);
k. Glu-Leu-Val-Cit;
l. Glu-Leu-Val-Leu(配列番号10);
m. Glu-Pro-Val-Cit;または
n. Glu-Gly-Val-Cit
から選択されるテトラペプチドであって、GluがAspで置き換えられていてもよい、および/またはArgがLysで置き換えられていてもよい、テトラペプチドを含む、項目7または項目8のどちらかに記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目10)
前記C末端伸長部(B2)が、以下:
i.グリシン、セリン、アルギニン、リシン、シトルリン、グルタミン、トレオニン、ロイシン、ノルロイシンもしくはメチオニンから選択される単一アミノ酸PC1’;
ii.PC1’が、グリシンもしくはセリンから選択され、PC2’が、グリシン、セリン、プロリン、アルギニン、リシン、シトルリン、グルタミン、トレオニン、ロイシン、ノルロイシンもしくはメチオニンから選択される、ジペプチド;
iii.PC1’が、グリシンもしくはセリンから選択され、PC2’が、グリシン、セリンもしくはプロリンから選択され、PC3’が、グリシン、セリン、アルギニン、リシン、シトルリン、グルタミン、トレオニン、ロイシン、ノルロイシンもしくはメチオニンから選択される、トリペプチド;
iv.PC1’が、グリシンもしくはセリンから選択され、PC2’が、グリシン、セリン、プロリンもしくはロイシンから選択され、PC3’が、グリシン、バリン、ロイシンもしくはイソロイシンから選択され、PC4’が、アルギニン、リシン、シトルリン、グルタミン、トレオニン、ロイシン、ノルロイシンもしくはメチオニンから選択される、テトラペプチド;
v.PC1’が、グリシンもしくはセリンから選択され、PC2’が、グリシン、セリン、プロリン、アルギニン、リシン、グルタミン酸もしくはアスパラギン酸から選択され、PC3’が、グリシン、セリン、プロリンもしくはロイシンから選択され、PC4’が、グリシン、バリン、ロイシンもしくはイソロイシンから選択され、PC5’が、アルギニン、リシン、シトルリン、グルタミン、トレオニン、ロイシン、ノルロイシンもしくはメチオニンから選択される、ペンタペプチド;または
vi.PC1’が、グリシンもしくはセリンから選択され、PC2’が、グリシン、セリンもしくはプロリンから選択され、PC3’が、グリシン、セリン、プロリン、アルギニン、リシン、グルタミン酸もしくはアスパラギン酸から選択され、PC4’が、プロリンもしくはロイシンから選択され、PC5’が、グリシン、バリン、ロイシンもしくはイソロイシンから選択され、PC6’が、アルギニン、リシン、シトルリン、グルタミン、トレオニン、ロイシン、ノルロイシンもしくはメチオニンから選択される、ヘキサペプチド
を含む酵素分解性ペプチド配列を含む、項目1~9のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目11)
前記C末端伸長部(B2)が、
a.
i. Gly-Gly-Lys-Leu-Val-Arg(配列番号11);
ii. Gly-Gly-Ser-Leu-Val-Arg(配列番号13);
iii. Gly-Gly-Ser-Pro-Val-Arg(配列番号61);
iv. Gly-Gly-Ser-Leu-Val-Cit;
v. Gly-Gly-Ser-Pro-Val-Cit;
vi. Gly-Gly-Ser-Pro-Leu-Cit;
vii. Gly-Gly-Ser-Leu-Val-Leu(配列番号14);
viii. Gly-Gly-Glu-Leu-Val-Arg(配列番号15);
ix. Gly-Gly-Glu-Leu-Val-Leu(配列番号16);
x. Gly-Gly-Glu-Leu-Val-Cit
から選択されるヘキサペプチドであって、GluがAspで置き換えられていてもよい、および/もしくはArgがLysで置き換えられていてもよい、ヘキサペプチド;または
b.
i. Gly-Ser-Leu-Val-Arg(配列番号17);
ii. Gly-Ser-Pro-Val-Cit;
iii. Gly-Ser-Pro-Leu-Cit;
iv. Gly-Ser-Leu-Val-Cit;
v. Gly-Lys-Pro-Val-Cit;
vi. Gly-Lys-Pro-Val-Arg(配列番号18);
vii. Gly-Ser-Leu-Val-Leu(配列番号19);
viii. Gly-Glu-Leu-Val-Leu(配列番号20)
から選択されるペンタペプチドであって、GluがAspで置き換えられていてもよい、および/もしくはArgがLysで置き換えられていてもよい、ペンタペプチド;または
c.
i. Ser-Leu-Val-Cit;
ii. Ser-Leu-Val-Leu(配列番号4);
iii. Ser-Pro-Val-Cit;
iv. Ser-Pro-Leu-Cit;
v. Glu-Leu-Val-Arg(配列番号5);
vi. Ser-Pro-Val-Arg(配列番号6);
vii. Ser-Leu-Val-Arg(配列番号7);
viii. Lys-Pro-Leu-Arg(配列番号8);
ix. Glu-Leu-Val-Cit;
x. Glu-Leu-Val-Leu(配列番号10);
xi. Glu-Pro-Val-Cit;または
xii. Glu-Gly-Val-Cit
から選択されるテトラペプチドであって、GluがAspで置き換えられていてもよい、および/もしくはArgがLysで置き換えられていてもよい、テトラペプチド;または
d.
i. Gly-Ser-Gly;
ii. Gly-Ser-Arg;
iii. Gly-Ser-Leu;
iv. Gly-Ser-Cit;
v. Gly-Pro-Gly;
vi. Gly-Pro-Arg;
vii. Gly-Pro-Leu;
viii. Gly-Pro-Cit
から選択されるトリペプチド;または
e.
i. Gly-Ser;
ii. Gly-Pro;
iii. Gly-Arg;
iv. Gly-Cit
から選択されるジペプチド;または
f.Gly、Ser、Ala、Arg、Lys、Cit、Val、Leu、Met、Thr、GlnもしくはNleからなる群から選択される単一アミノ酸
を含む酵素分解性ペプチド配列を含む、項目10に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目12)
前記粒子(P)が、ポリスチレン、ポリ(乳酸-co-グリコール酸)(PLGA)、リポソーム、アルミニウムの無機塩、またはエマルジョンを含む、前記項目のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目13)
前記疎水性分子(H)が、約7.4のpHの水性緩衝液に、下は約0.1mg/mLに至るまで不溶性である、分岐した長鎖もしくは環式脂肪族分子、または脂肪酸、脂質もしくはステロール誘導体である、項目1~11のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目14)
前記疎水性分子が、アクリレート、アクリルアミド、メタ(アクリレート)、メタ(アクリルアミド)、スチリルモノマー、ビニルモノマー、ジオキソホスホラン、環式エステル、天然もしくは非天然アミノ酸から選択されるモノマー単位に基づくポリマー、およびジオールもしくはジアミンとジイソシアネートもしくはポリイソシアネートとの反応から生じるポリマーを含み、必要に応じて、アジュバントが、前記ポリマーを構成する1つまたは複数のモノマーに連結されている、項目1~11のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目15)
前記疎水性分子(H)が、式I:
のポリ(アミノ酸)であり、式中、R2は、水素、ヒドロキシルまたはアミンのうちの1つから選択され、xは、3~300の間であり、y3は、1~8であり、リガンドは、任意の適する手段によってリンカーXを介して結合されている、
項目14に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目16)
前記疎水性分子(H)が、式II:
に基づくポリ(アミノ酸)であり、式中、lは、3~300の間であり、oは、0~300の間であり、R3は、水素、ヒドロキシルまたはアミンのうちの1つから選択され、R4は、水素、低級アルキル、
のうちの1つから選択され、y11は、通常は1~8から選択され、FGは、アジュバント特性を有するリガンドに連結されている、カルボン酸、アルデヒド、ケトン、アミン、チオール、アジドまたはアルキンから選択される官能基であり、N末端は、アミド結合によって直接、またはリンカーによって間接的に、のどちらかで、前記ペプチド抗原に、直接、または前記伸長部(B1もしくはB2)および/またはリンカー(L)または荷電分子(C)によってのどちらかで連結されている、
項目14に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目17)
前記疎水性分子(H)が、ポリ(ロイシン)、ポリ(トリプトファン)、ポリ(γ-グルタミルジエチレングリコールモノメチルエーテル)、ポリ(γ-ベンジルグルタメート)、ポリ(N-イソプロピルアクリルアミド)(NIPAM)、ポリ[2(2-メトキシエトキシ)エチルメタクリレート](DEGMA)またはポリ[N-(2-ヒドロキシプロピル)メタクリルアミド](HPMA)からなるホモポリマーまたはコポリマーを含む、項目14に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目18)
式Iのポリ(アミノ酸)を含む前記疎水性分子(H)が、ポリ(ロイシン)、ポリ(トリプトファン)、ポリ(γ-グルタミルジエチレングリコールモノメチルエーテル)、ポリ(γ-ベンジルグルタメート)、ポリ(N-イソプロピルアクリルアミド)(NIPAM)、ポリ[2(2-メトキシエトキシ)エチルメタクリレート](DEGMA)またはポリ[N-(2-ヒドロキシプロピル)メタクリルアミド](HPMA)に基づく第2のポリマーに、グラフトされているか、または末端において連結されている、項目15に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目19)
式IIのポリ(アミノ酸)を含む前記疎水性分子(H)が、ポリ(ロイシン)、ポリ(トリプトファン)、ポリ(γ-グルタミルジエチレングリコールモノメチルエーテル)、ポリ(γ-ベンジルグルタメート)、ポリ(N-イソプロピルアクリルアミド)(NIPAM)、ポリ[2(2-メトキシエトキシ)エチルメタクリレート](DEGMA)またはポリ[N-(2-ヒドロキシプロピル)メタクリルアミド](HPMA)に基づく第2のポリマーに、グラフトされているか、または末端において連結されている、項目16に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目20)
前記第2のポリマーが、約30~500モノマー単位の複数のモノマー単位を含む、項目18または項目19のどちらかに記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目21)
1つまたは複数のアジュバントが、前記疎水性分子(H)を構成する前記ポリマーに、ペンダント側鎖として連結されている、項目14~20のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目22)
1つまたは複数のアジュバントが、前記ポリマー(セミテレケリック)の一端に連結されている、項目14~20のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目23)
前記アジュバントが、Toll様受容体アゴニストまたはSTINGアゴニストのどちらかである、項目21または項目22のどちらかに記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目24)
前記Toll様受容体アゴニストが、Toll様受容体-7および/または-8のアゴニストのどちらかである、項目23に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目25)
前記アジュバントが、式III:
のイミダゾキノリンであり、式中、R7は、水素、必要に応じて置換されている低級アルキル、または必要に応じて置換されている低級エーテルのうちの1つから選択され、R8は、必要に応じて置換されているアリールアミン、または必要に応じて置換されている低級アルキルアミンのうちの1つから選択される、
項目24に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目26)
式IIIの3つまたはそれより多くのイミダゾキノリン分子が、前記疎水性分子(H)を構成する前記ポリマーに連結されており、R8が、必要に応じて置換されている低級アルキルアミンの1つから選択される、項目25に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目27)
式IIIの3つまたはそれ未満のイミダゾキノリン分子が、前記疎水性分子(H)を構成する前記ポリマーに連結されており、R8が、必要に応じて置換されているアリールアミンの1つから選択される、項目26に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目28)
前記粒子(P)または前記疎水性分子(H)が、約7.4のpHで約20℃~40℃の間の温度の水性緩衝液に、下は0.1mg/mLに至るまで不溶性である、前記項目のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目29)
約7.4のpHの水性緩衝液中で集合して、2つまたはそれより多くのペプチド抗原コンジュゲートを含むミセルまたは他のタイプのナノもしくはマイクロサイズの超分子会合体から構成される、5nmより大きい直径の粒子を構築する、前記項目のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目30)
約7.4のpHの水性緩衝液中で集合して約5~200nmの間の直径のミセルを構築する、項目29に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目31)
約7.4のpHの水性緩衝液中で凝集体である、項目29に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目32)
リンカー前駆体X1が、前記ペプチド抗原(A)に、直接、またはC末端伸長部(B2)によってのどちらかで、連結されており、前記疎水性分子(H)上または前記粒子(P)上どちらかのリンカー前駆体X2とリンクを形成する、前記項目のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目33)
前記リンカー前駆体X1が、式:
を有し、式中、タグのN末端アミンは、ペプチド抗原(A)に、直接、または前記C末端伸長部B2によってのどちらかで、連結されており;R1は、水素、ヒドロキシルまたはアミンのうちの1つから選択され;y1は、1~8の整数であり;FGは、チオール、アミン、アジドまたはアルキン(もしくはDBCO)のうちの1つから選択される、
項目32に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目34)
前記FGが、アジドであり、y1が、4であり、さらに、前記アジドが、粒子(P)または疎水性分子(H)と連結されているDBCO分子に連結している、項目33に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目35)
リンカー前駆体X1が、前記N末端伸長部(B1)に連結されており、かつ式:
を有し、式中、タグのカルボニルは、ペプチド抗原(A)のN末端に、直接、またはB1伸長部を介してのどちらかで連結されており;y2は、1~8の整数であり;FGは、チオール、アミン、アジドまたはアルキン(もしくはDBCO)のうちの1つから選択される、
項目1~32のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目36)
前記ペプチド抗原(P)、必要に応じた前記N末端伸長部(B1)、必要に応じた前記C末端伸長部(B2)および必要に応じた前記荷電分子(C)および必要に応じた前記リンカー前駆体X1が、固相ペプチド合成により単一ペプチドとして合成され、前記C末端伸長部(B2)が、プロリン(または固相ペプチド合成中、配列が、ペプチドを合成するために使用される樹脂に結合されている間は、プソイドプロリン)を含有する、項目1~35のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目37)
前記荷電分子(C)が、第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン、第四級アミン、グアニジニウム、イミダゾリウム、アンモニウム、スルホニウム、ホスホニウム、カルボキシレート、スルフェート、ホスフェート、ホスホルアミデートまたはホスホネートから選択される1つまたは複数の官能基を含む、項目2~36のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目38)
前記荷電分子(C)が、負荷電官能基と正荷電官能基の両方を含む、項目37に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目39)
前記荷電分子(C)を構成する荷電官能基の数が、以下:
a.前記ペプチド抗原(A)が、約0.75より大きいかもしくは約0.75に等しい総平均ハイドロパシー値を有する場合、前記ペプチド抗原コンジュゲートの前記正味静電荷が、約+6より大きいかもしくは約+6に等しい正の値を含むように;
b.前記ペプチド抗原(A)が、約0.25より大きいかもしくは約0.25に等しく、かつ約0.75未満である総平均ハイドロパシー値を有する場合、前記ペプチド抗原コンジュゲートの前記正味静電荷が、約+5より大きいかもしくは約+5に等しい正の値を含むように;
c.前記ペプチド抗原(A)が、約0.25未満である総平均ハイドロパシー値を有する場合、前記ペプチド抗原コンジュゲートの前記正味静電荷が、約+4より大きいかもしくは約+4に等しい正の値を含むように;
d.前記ペプチド抗原(A)が、約0.75より大きいかもしくは約0.75に等しい総平均ハイドロパシー値を有する場合、前記ペプチド抗原コンジュゲートの前記正味静電荷が、約-6未満であるかもしくは約-6に等しい負の値を含むように;
e.前記ペプチド抗原(A)が、約0.25より大きいかもしくは約0.25に等しく、かつ約0.75未満である総平均ハイドロパシー値を有する場合、前記ペプチド抗原コンジュゲートの前記正味静電荷が、約-5未満であるかもしくは約-5に等しい負の値を含むように;または
f.前記ペプチド抗原(A)が、約0.25未満である総平均ハイドロパシー値を有する場合、前記ペプチド抗原コンジュゲートの前記正味静電荷が、約-4より大きいかもしくは約-4に等しい正の値を含むように、
調整される、項目2~38のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目40)
前記ペプチド抗原(A)、前記N末端伸長部(B1)、前記C末端伸長部(B2)、前記荷電分子(C)および前記リンカー前駆体X1が、約7.4のpHの水性緩衝液に最大約1.0mg/mLに至るまで可溶性である単一ペプチドとして生成される、項目39に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
(項目41)
項目1~40のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲートを含む、粒子。
(項目42)
複数の異なるペプチド抗原コンジュゲートを含む、項目41に記載の粒子。
(項目43)
項目1~40のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲートまたは項目41~42に記載の粒子を含む、免疫原性組成物。
(項目44)
ワクチンアジュバントをさらに含む、項目43に記載の免疫原性組成物。
(項目45)
複数の異なるペプチド抗原コンジュゲートを含む、項目43または項目44のどちらかに記載の免疫原性組成物。
(項目46)
前記ペプチド抗原(A)が、腫瘍関連抗原を含む、項目1~40のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲート、項目41および42のいずれか一項に記載の粒子、または項目43~45のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
(項目47)
前記腫瘍関連抗原が、ネオ抗原である、項目46に記載のペプチド抗原コンジュゲート、項目46に記載の粒子、または項目46に記載の免疫原性組成物。
(項目48)
前記ペプチド抗原(A)が、最小CD4またはCD8 T細胞エピトープである、項目1~40および46~47のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲート、項目41~42および46~47のいずれか一項に記載の粒子、または項目43~47のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
(項目49)
最小CD4 T細胞エピトープ、CD8 T細胞エピトープ、または最小CD4およびCD8 T細胞エピトープ両方から選択されるペプチド抗原(A)から構成される10~50の異なるペプチド抗原コンジュゲートを含む、項目43~47のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
(項目50)
最小CD4 T細胞エピトープ、最小CD8 T細胞エピトープ、または最小CD4およびCD8 T細胞エピトープ両方と、CD8 T細胞エピトープおよび/またはCD4
T細胞エピトープを含む15~35アミノ酸合成長鎖ペプチドとの両方から選択されるペプチド抗原(A)から構成される10~50の異なるペプチド抗原コンジュゲートを含む、項目43~47のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
(項目51)
前記最小CD8 T細胞またはCD4 T細胞エピトープが、被験体に適合するMHC分子についてIEDBコンセンサスアルゴリズムにより0.5パーセンタイル未満であるかまたは0.5パーセンタイルに等しい予測結合親和性を有する、項目48に記載のペプチド抗原コンジュゲート、項目48に記載の粒子、または項目48~50のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
(項目52)
前記ペプチド抗原(A)が普遍的CD4 T細胞エピトープである、ペプチド抗原コンジュゲートをさらに含む、項目43~51のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
(項目53)
疾患に罹患している患者を処置する方法であって、前記疾患に罹患している前記患者に、前記項目のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲートまたは免疫原性組成物を投与することを含む、方法。
(項目54)
免疫チェックポイント阻害剤、例えば、抗PD1、抗PD-L1もしくは抗CTLA-4抗体;腫瘍浸潤リンパ球およびキメラ抗原受容体T細胞ベースの治療;二重特異性抗体;抗腫瘍抗体;または免疫抑制を克服するために設計された薬物を含む、追加の免疫治療モダリティを投与することをさらに含む、項目53に記載の方法。
(項目55)
前記項目のいずれかに記載の免疫原性組成物またはペプチド抗原コンジュゲートが、異種ワクチンとともにプライムまたはブーストのどちらかとして使用される、異種免疫化スキームを含む、項目53または項目54のどちらかに記載の方法。
(項目56)
処置が、放射線療法、化学療法または外科手術と組み合わせて使用される、項目53~55のいずれか一項に記載の方法。
(項目57)
疾患の処置のための医薬品の製造における、項目1~52のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲート、粒子または免疫原性組成物の使用。
本開示の実施に当業者を導くことを目的として、化合物、組成物、方法、および被験体において免疫応答を誘導するためのそれらの使用に関してより明確にするために、用語および方法の詳細が、下に与えられる。本開示における専門用語は、特定の実施形態のよりよい説明を提供する目的で有用であると解され、本開示における専門用語を限定と見なすべきではない。
約:本開示に関して、「約」は、設定量からプラスまたはマイナス5%を意味する。例えば、「約10」は、9.5~10.5を指す。「約5:1」の比は、4.75:1~5.25:1の比を指す。
アジュバント:抗原の免疫原性を増強または改変するためにワクチンに添加される任意の材料。アジュバントは、抗原が、単に混合もしくは吸着されている、内部に組み込まれている、または共有結合性相互作用によって間接的にもしくは直接連結されている送達系、例えば、無機塩(例えば、水酸化アルミニウム、またはミョウバンと呼ばれるリン酸塩)に基づく粒子、油中水型もしくは水中油型エマルジョンまたはポリマー粒子(例えば、PLGA)でありうる。あるいは、アジュバントは、パターン認識受容体(PRR)アゴニスト、例えば、Toll様受容体(TLR)の合成もしくは天然に存在するアゴニスト、インターフェロン遺伝子の刺激因子(STING)、ヌクレオチド結合オリゴマー化ドメイン様受容体(NLR)、レチノイン酸誘導性遺伝子I様受容体(RLR)またはC型レクチン受容体(CLR)を含む、特定の受容体と結合して下流シグナル伝達経路を誘導する化学的に規定された分子、ならびに生体分子(「生物学的アジュバント」)、例えば、IL-2、RANTES、GM-CSF、TNF-α、IFN-γ、G-CSF、LFA-3、CD72、B7-1、B7-2、OX-40L、4-1BBLでありうる。Toll様受容体-7(TLR-7)およびTLR-7/8aとそれぞれ結合するヒドロキシアデニンおよびイミダゾキノリンなどの、ヌクレオチド塩基の小分子類似体、ならびにTLR-2/6、TLR-4、STINGおよびNODのアゴニストは、本開示において例示的PRRアゴニストとして使用される。当業者は、アジュバントを熟知している(参照:Perrieら、Int J Pharm 364巻:272~280頁、2008年およびBritoら、Journal of controlled release、190C巻:563~579頁、2014年)。一般に、本明細書に収載される任意のPRRアゴニストまたは生物学的アジュバントを、任意の適する手段によって、本開示のペプチド抗原コンジュゲートに結合させることができる。
投与:被験体に任意の有効な経路により薬剤、例えば、本明細書に記載のペプチド抗原コンジュゲートを含む免疫原性組成物を提供するまたは与えること。
例示的投与経路としては、経口、注射(例えば、皮下、筋肉内、皮内、腹腔内および静脈内)、経皮(例えば、局所)、鼻腔内、膣および吸入経路が挙げられるが、これらに限定されない。
化合物「の投与」および「を投与すること」は、本明細書に記載の化合物、化合物のプロドラッグ、または医薬組成物を提供することを意味すると解されたい。化合物または組成物は、別人により被験体に投与されることもあり、または被験体により自己投与されることもある。
抗原提示細胞(APC):単球、マクロファージ、樹状細胞、B細胞、T細胞およびランゲルハンス細胞を含むがこれらに限定されない、MHCクラスIまたはクラスII分子と結合した抗原をT細胞に提示する任意の細胞。
抗原:T細胞またはB細胞受容体と結合するエピトープを含有し、被験体における免疫応答、特に、B細胞応答および/またはT細胞応答を刺激することができる、任意の分子。エピトープは、特定のB細胞またはT細胞タンパク質の成分と相互作用することができるエピトープを含有する、ペプチド、糖ペプチド、脂質または任意の適する分子から構成されうる。そのような相互作用は、免疫細胞による応答を生成することができる。「エピトープ」は、Bおよび/またはT細胞タンパク質、すなわちB細胞受容体およびT細胞受容体、が相互作用する、ペプチド抗原の領域を指す。
本開示の実施形態で使用される抗原は、病原体、がん性細胞、自己抗原またはアレルゲンから選択することができる。一部の実施形態では、抗原は、病原体(例えば、ウイルス、細菌もしくは真菌)または目的の組織(例えば、がん性細胞)からのポリペプチドまたはタンパク質の領域を含みうる、ペプチドベースの抗原でありうる。他の実施形態では、抗原は、病原体に由来する全タンパク質もしくは糖タンパク質であることもあり、または前記タンパク質もしくは糖タンパク質のペプチドもしくは糖ペプチド断片であることもある。他の実施形態では、抗原は、腫瘍組織により主として発現される(しかし健常組織には発現されない)かつ腫瘍関連抗原である、タンパク質、またはタンパク質のペプチド断片でありうる。他の実施形態では、抗原は、自己免疫に関連する、タンパク質またはペプチドである。さらに他の実施形態では、抗原は、アレルギーに関連する、タンパク質または糖タンパク質である。
多くのそのような抗原を本発明の実施形態に従って使用することができ、多くのそのような抗原が、本明細書中でより詳細に論じられる。
芳香族:芳香族化合物は、環を形成する炭素または窒素原子間に非局在化している奇数のパイ軌道電子対を有する不飽和環式環である。芳香族アミノ酸は、フェニルアラニン、チロシンまたはトリプトファンなどの、芳香族基を含む側鎖を有するものを含む。3つの二重結合を含有する6炭素環であるベンゼンは、プロトタイプの芳香族化合物である。フェニルアラニン(Phe)およびトリプトファン(Trp)は、プロトタイプの芳香族アミノ酸である。アリールは、芳香族置換基を指すこともあり、アリール-アミンは、アミンを含む芳香族基を指すこともある。例示的芳香族アミンは、アニリンである。芳香族ヘテロ環は、炭素と、別の原子、例えば窒素、酸素または硫黄とを含む環式環構造を含む芳香族環を指す。ヌクレオチド塩基、例えば、アデニンおよびシトシンは、例示的芳香族ヘテロ環である。
生体適合性:材料は、体液、体細胞または体組織と接触しているときに破壊的効果も宿主応答効果もほとんど発揮しない場合、生体適合性と見なされる。
生体適合性基は、脂肪族、脂環式、ヘテロ脂肪族、ヘテロ脂環式、アリールまたはヘテロアリールクラスからのものを含む、化学部分を含有しうる。しかし、分子組成次第で、そのような部分は、必ずしも生体適合性とは限らない。
あるいは、用語「生体適合性」は、認識タンパク質と、および/もしくは生物系の他の成分(例えば、天然に存在する抗体、糖タンパク質を含む細胞タンパク質、もしくは細胞)とほとんど相互作用しないことを意味する、または相互作用の結果が実質的にネガティブでも破壊的でもないような、生物系の成分(例えば、薬物およびプロドラッグ)との相互作用を引き起こすことを特に目的とする物質および官能基を意味すると、考えられる。
CD4:他の細胞の表面に存在するMHCクラスII分子と相互作用する表面糖タンパク質である、表面抗原分類4。T細胞のサブセットは、CD4を発現し、これらの細胞は、一般に、ヘルパーT細胞と呼ばれる。
CD8:他の細胞の表面に存在するMHCクラスI分子と相互作用する表面糖タンパク質である、表面抗原分類8。T細胞のサブセットは、CD8を発現し、これらの細胞は、一般に、細胞傷害性T細胞またはキラーT細胞と呼ばれる。
電荷:他の原子および分子(溶質および溶媒を含む)とのその相互作用に影響を与える物質の物理的性質。荷電物質は、他のタイプの荷電物質からの、および極性分子などの完全電荷整数値を保持しない分子からの、静電力を受ける。同じ電荷の2つの荷電分子は、互いに反発し合うが、異なる電荷の2つの荷電分子は、互いに引き合う。電荷は、正または負の整数単位で記載されることが多い。
荷電分子(C):荷電分子(C)は、正にまたは負に荷電している1つまたは複数の官能基を有する任意の分子を指す。荷電分子を構成する官能基は、部分または完全電荷整数値であることがある。荷電分子は、単一の荷電官能基または複数の荷電官能基を有する分子であることがある。官能基は、永久荷電型であることもあり、または荷電分子を構成する官能基は、pHに依存して電荷を有することもある。荷電分子は、正荷電官能基から、負荷電官能基から、または正荷電官能基と負荷電官能基の両方から、構成されることがある。荷電分子の正味電荷は、正、負、または中性でありうる。分子の電荷は、当業者に公知である分子のルイス構造および容認されている方法に基づいて、容易に推定することができる。電荷は、誘起効果の結果として生じることもあり、例えば、電子親和性に差がある互いに結合している原子は、部分的に負に荷電した原子と部分的に正に荷電した原子とを生じさせる結果となる、極性共有結合をもたらすこともある。例えば、水素と結合している窒素は、結果的に、窒素上に負の部分電荷をもたらし、水素原子上に正の部分電荷をもたらす。あるいは、原子は、その原子に割り当てられた電子の数が、その原子の原子番号未満であるか、その原子番号に等しい場合、完全電荷整数値を有すると考えることができる。官能基の電荷は、その官能基を構成する各原子の電荷を合算することにより決定される。荷電分子(C)の正味電荷は、その分子を構成する各原子の電荷を合算することにより決定される。当業者は、分子または官能基中の各原子の形式電荷をそれぞれ合算することにより、分子または個々の官能基の電荷を推定する方法を熟知している。
荷電分子(C)は、負荷電官能基、例えば、生理的pHで酸の共役塩基として存在するもの(例えば、約6.5未満のpKaを有する官能基)、例えば、約7.4のpHで酸の共役塩基として存在するものを含みうる。これらは、カルボキシレート、スルフェート、ホスフェート、ホスホルアミデートおよびホスホネートを有する分子を含むが、これらに限定されない。荷電分子は、正荷電官能基、例えば、生理的pHで塩基の共役酸として存在するもの(例えば、塩基の共役酸のpKaが約8.5より高い官能基)を含みうる。これらは、第一級、第二級および第三級アミンを有する分子、ならびにアンモニウムを有する分子、グアニジニウムを有する分子を含むが、これらに限定されない。荷電分子は、第四級アンモニウム、ホスホニウムおよびスルホニウム官能基を含む、pH非依存性である電荷を有する官能基を含むこともある。一部の実施形態では、荷電分子は、負荷電アミノ酸、または正荷電アミノ酸、または負荷電アミノ酸と正荷電アミノ酸の両方から構成される、ポリ(アミノ酸)である。一部の実施形態では、負荷電アミノ酸は、グルタミン酸またはアスパラギン酸である。他の実施形態では、正荷電アミノ酸は、リシンまたはアルギニンである。当業者は、多くのそのような実施形態が可能であることを認知している。
クリックケミストリー反応:2つの化合物を、穏やかな条件下で、最小限の生体適合性および/または無害な副生成物を生成する高収率反応で、互いに結合させる、生体直交型反応を指しうる。本開示で使用される例示的クリックケミストリー反応は、歪みにより促進される[3+2]アジド-アルキン付加環化によってトリアゾールリンカー(L)を形成する、リンカー前駆体X1上に備えられているアジド基と、リンカー前駆体X2上に備えられているアルキンとの反応である。
有効量:所望の応答を誘導するために必要な量。例えば、免疫応答、例えばペプチド抗原コンジュゲートに対する免疫応答、を誘導するために必要な、単独か、または1つもしくは複数の追加の薬剤を伴うかのどちらかでの薬剤の量。
伸長部:伸長部という用語は、ペプチド抗原(A)のN末端またはC末端に連結される分子であって、アミノ酸、非天然アミノ酸、親水性エチレンオキシドモノマー(すなわちPEG)、疎水性アルカン鎖、またはこれらの組み合わせから構成され、ペプチド抗原(A)の分解速度を調節するように機能する分子を記述するために、本明細書では使用される。ペプチド抗原のN末端に連結される伸長部はB1と呼ばれ、ペプチド抗原のC末端に連結される伸長部はB2と呼ばれる。伸長部(B1およびB2)は、主として、ペプチド抗原の分解速度を制御するように機能するが、任意の1つまたは複数のさらなる機能を果たすこともある。一部の実施形態では、伸長部(B1および/またはB2)は、別の分子、例えば、荷電分子(C)または疎水性分子(H)と連結されることもあり、リンカーとして機能することもあり、ならびに他の分子からのペプチド抗原(A)の放出速度を制御することもある。さらなる実施形態では、伸長部(B1および/またはB2)は、任意の2つの異種分子間に距離、すなわち間隔、を設けるように機能する。他の実施形態では、伸長部(B1および/またはB2)は、ペプチド抗原コンジュゲートに疎水性または親水性を付与するように機能する。さらに他の実施形態では、リンカーとして使用される伸長部(B1および/またはB2)の組成は、ペプチド抗原(A)と異種分子間に剛性または可撓性を付与するように選択されうる。好ましい実施形態では、伸長部(B1および/またはB2)は、プロテアーゼなどの酵素による認識および加水分解のために選択されるペプチド配列である。B1およびB2伸長部が、それぞれ、B1およびB2リンカー、またはB1およびB2と呼ばれることもあることに留意されたい。本開示の実施に適しているであろう伸長部の具体的な組成は、至る所で説明される。
グラフトポリマー:ある組成のポリマーの異なる組成の第2のポリマーの側鎖への連結の結果として生じるポリマーと記述されうる。コモノマーによって第2のポリマーに連結されている第1のポリマーは、グラフトコポリマーである。末端基によって第2のポリマーに連結されている第1のポリマーは、ブロックポリマー(例えば、A-B型ジブロック)または末端グラフト型ポリマーと記述されることもある。
ハイドロパシー指数/GRAVY値:アミノ酸の疎水または親水特性を表す数である。ペプチドを構成するアミノ酸の相対的な疎水および親水特性を表すために使用することができる様々なスケールがある。本開示では、KyteおよびDoolittleのハイドロパシースケール(Kyte J、Doolittle RF、J. Mol.Biol
157巻:105~32頁、1983年)が、ペプチド抗原(A)とペプチドベースのN末端およびC末端の必要に応じた伸長部(B1およびB2)と必要に応じた荷電分子(C)とを含むペプチド抗原コンジュゲートを構成するアミノ酸の配列の、GRAVYスコアとも呼ばれることがある、総平均ハイドロパシー(GRAVY)値を計算するために使用される。ペプチドのGRAVY値は、ペプチドの長さ(すなわち、アミノ酸の数)で割った、ペプチドを構成する全アミノ酸のハイドロパシー値の合計である。GRAVY値は、相対値である。ペプチド配列は、GRAVY値が大きいほど疎水性が高いと見なされ、その一方で、ペプチド配列は、GRAVY値が低いほど親水性が高いと見なされる。
157巻:105~32頁、1983年)が、ペプチド抗原(A)とペプチドベースのN末端およびC末端の必要に応じた伸長部(B1およびB2)と必要に応じた荷電分子(C)とを含むペプチド抗原コンジュゲートを構成するアミノ酸の配列の、GRAVYスコアとも呼ばれることがある、総平均ハイドロパシー(GRAVY)値を計算するために使用される。ペプチドのGRAVY値は、ペプチドの長さ(すなわち、アミノ酸の数)で割った、ペプチドを構成する全アミノ酸のハイドロパシー値の合計である。GRAVY値は、相対値である。ペプチド配列は、GRAVY値が大きいほど疎水性が高いと見なされ、その一方で、ペプチド配列は、GRAVY値が低いほど親水性が高いと見なされる。
親水性:水性媒体に自由に分散する材料の傾向を指す。材料は、他の親水性材料と相互作用することを好み、疎水性材料と相互作用することを避ける場合、親水性と見なされる。一部の場合には、親水性は、相対的な用語として使用されることがあり、例えば、同じ分子が、比較されるもの次第で、親水性と記載されることもあり、記載されないこともある。親水性分子は、多くの場合、極性であり、および/または荷電しており、良好な水溶解度を有する、例えば、上は0.1mg/mLまたはそれより高い値に至るまで可溶性である。
疎水性:水との接触を避ける材料の傾向を指す。材料は、他の疎水性材料と相互作用することを好み、親水性材料と相互作用することを避ける場合、疎水性と見なされる。疎水性は、相対的な用語であり、同じ分子が、比較されるもの次第で、疎水性と記載されることもあり、記載されないこともある。疎水性分子は、多くの場合、非極性かつ非荷電であり、乏しい水溶解度を有する、例えば、下は0.1mg/mLまたはそれ未満に至るまで不溶性である。
疎水性リガンド:生物学的受容体と結合し、疎水特性を有する分子である。一部の実施形態では、疎水性リガンドは、ポリマーの主鎖に沿って配列され、それによって、そのリガンドが連結されるポリマーに疎水性を付与する。一部の実施形態では、疎水性リガンドは、制限された水溶解度しかなく、それ故、疎水性と記述されうる、パターン認識受容体アゴニストである。さらなる実施形態では、疎水性リガンドは、TLR-7またはTLR-7/8アゴニスト、例えば、イミダゾキノリンである。
疎水性分子(H):本開示では、用語「疎水性分子」(H)は、ペプチド抗原に連結されて、水性条件で粒子を形成するペプチド抗原コンジュゲートをもたらすことができる、制限された水溶解度しかないまたは両親媒特性を有する分子を記述するための、一般用語として使用される。この文脈での疎水性分子(H)は、水性条件で、ある特定の温度およびpH範囲にわたって、その乏しい溶解度に起因して粒子集合または集合して粒子を構築する傾向を促進する。
本明細書に記載の疎水性分子(H)は、超分子構造、例えば、ミセルまたは二重層形成ラメラもしくは多重ラメラ構造(例えば、リポソームもしくはポリマーソーム(polymersomes))を形成しうる両親媒性分子、ならびに完全不溶性であり、単独で凝集体を形成する化合物を含む。分子の疎水特性は、温度および/またはpH応答性であることもある。一部の実施形態では、疎水性分子(H)は、低温では水溶性であるが、例えば、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39または40℃などの、20℃より高い温度では、不溶性またはミセル形成性である、ポリマーである。他の実施形態では、疎水性分子(H)は、低pHでは、例えば6.5未満のpHでは、水溶性であるが、例えば6.5より高いpHでは、不溶性である、ポリマーである。疎水性分子(H)の例としては、脂肪酸、コレステロールおよびその誘導体、長鎖脂肪族、脂質、ならびに様々なポリマー、例えば、ポリスチレン、ポリ(乳酸-co-グリコール酸)(PLGA)、ならびに主として疎水性アミノ酸から構成されるポリ(アミノ酸)が挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、疎水性分子(H)は、複数の疎水性リガンドが結合している親水性ポリマーである。本開示の実施に有用な様々な疎水性分子が、本明細書で開示される。
免疫応答:直接的、または間接的(例えば、細胞もしくはサイトカインの仲介による)のどちらかでの刺激の結果としての、B細胞、T細胞または単球などの、免疫系の細胞の活性の変化。一実施形態では、応答は、特定の抗原に特異的(「抗原特異的応答」)である。一実施形態では、免疫応答は、T細胞応答、例えば、CD4 T細胞応答またはCD8 T細胞応答である。一実施形態では、免疫応答は、追加のT細胞子孫の産生をもたらす。一実施形態では、免疫応答は、T細胞が移動する結果となる。別の実施形態では、応答は、B細胞応答であり、特異的抗体の産生または追加のB細胞子孫の産生をもたらす。他の実施形態では、応答は、抗原提示細胞応答である。「免疫応答を増強すること」は、ペプチド抗原コンジュゲートの一部としての、アジュバントと、ペプチド抗原などの免疫原性薬剤との併用投与(co-administration)であって、アジュバントが、アジュバントの非存在下での被験体への免疫原性薬剤の投与と比較して免疫原性薬剤に対する所望の免疫応答を増大させる、併用投与を指す。一部の実施形態では、抗原は、ウイルス感染細胞またはがん性細胞を死滅させる細胞傷害性T細胞の活性化をもたらすように免疫応答を刺激するために使用される。一部の実施形態では、抗原は、寛容または免疫抑制を誘導するために使用される。免疫寛容原性応答は、抗原に対するT細胞またはB細胞の無応答性の結果として生じることがある。抑制性免疫応答は、免疫応答をダウンレギュレートする、すなわち、ひいては免疫、応答を減弱させる、調節性T細胞などの調節性細胞の活性化の結果として生じることもある。アジュバントの非存在下で患者に投与された抗原は、一般に、免疫寛容原性または抑制性であり、アジュバントとともに投与される抗原は、一般に刺激性であり、免疫細胞の動員、増殖および活性化をもたらす。
免疫原性組成物:抗原と、必要に応じて、抗原に対する測定可能な免疫応答を誘導するアジュバントとを含む材料の製剤。
リガンド:生物学的受容体と結合する任意の分子を記述するための一般用語である。パターン認識受容体アゴニストは、パターン認識受容体と結合する特定のタイプのリガンドであり、アジュバント、またはアジュバント特性を有するリガンドと呼ばれることもある。例えば、PRRアゴニストは、TLRなどのPRRと結合するリガンドである。PRRと結合するリガンド(またはPRRa)は、アジュバント、分子アジュバント、アジュバント分子、またはアジュバント特性を有するリガンドと呼ばれることもある。水中での制限された溶解度しか有さないリガンドは、疎水性リガンドと呼ばれることもあり、その一方で、水溶性であるリガンドは、親水性リガンドと呼ばれることもある。アジュバント特性を有する疎水性リガンドまたは親水性リガンドは、疎水性アジュバントまたは親水性アジュバントと、それぞれ呼ばれることもある。
連結された(される、されている)またはカップリングされた(される、されている):用語「連結された(される、されている)」または「カップリングされた(される、されている)」は、直接、または間接的に、のどちらかで、互いに結合された(される、されている)を意味する。第1の部分は、第2の部分に、共有結合で連結されることもあり、または非共有結合で連結されることもある。一部の実施形態では、第1の分子は、共有結合により、別の分子に連結される。一部の実施形態では、第1の分子は、静電引力により、別の分子に連結される。一部の実施形態では、第1の分子は、双極子間力(例えば、水素結合)により、別の分子に連結される。一部の実施形態では、第1の分子は、ファンデルワールス力(ロンドン力としても公知)により、別の分子に連結される。第1の分子は、そのようなカップリングの任意のおよびすべての組み合わせにより、別の分子に連結されることもある。
分子は、間接的に、例えば、リンカーを使用することにより、連結されることもある。分子は、両方の分子と独立して非共有結合する成分の介在により、間接的に、連結されることもある。
本明細書で使用される場合、「連結された(される、されている)」およびそのバリエーションは、分子を化学的または物理会合状態で維持することを指し、これは、免疫化後に少なくともそれらが細胞、特に免疫細胞、と接触するまで維持することを含む。
一部の実施形態では、連結されている成分は、それらの成分が免疫細胞などの細胞と少なくとも接触するまでは互いから自由に分散することができないように会合している。例えば、2つの成分は、別々に分散することも拡散することもできないように互いに共有結合で連結されていることもある。好ましい実施形態では、ペプチド抗原コンジュゲートは、疎水性分子(H)または粒子(P)に、直接、または間接的に伸長部(B1もしくはB2)を介してのどちらかで、共有結合で連結されているペプチド抗原(A)から構成される。疎水性分子(H)を含むペプチド抗原コンジュゲートは、水性条件で集合して粒子を構築し、この水性条件では、個々のペプチド抗原コンジュゲート、およびペプチド抗原コンジュゲートを構成する成分が、免疫細胞などの細胞と遭遇する前に分散することも拡散することもできない、安定したものを形成するように、2つまたはそれより多くのペプチド抗原コンジュゲートが会合する。
連結は、例えば、従来のワクチン、例えば、アジュバントと混合された水溶性ペプチド抗原を含有するワクチンに見受けられうるような、抗原とアジュバントとの単純混合物と、特に区別される。単純混合物の場合、成分は、ワクチン接種を受けた組織内で、およびそれを超えて、自由に、別個に分散することができる。
リンカー、リンカー前駆体およびリンカー(L):リンカーは、2つまたはそれより多くの部分を互いに連結またはカップリングまたは結合させる、分子または原子団である。本明細書で開示されるペプチド抗原コンジュゲートは、いずれの適する手段によって互いに連結または結合されていてもよい複数の異なる機能性成分(ペプチド抗原(A)、疎水性分子(H)または粒子(P)、必要に応じた伸長部(B1および/もしくはB2)、必要に応じた荷電分子(C)、必要に応じたリンカー(L)、または必要に応じたアジュバントなど)を含む、複合分子である。例えば、疎水性分子(H)に連結されているペプチド抗原(A)は、ペプチド抗原(A)と疎水性分子(H)の間にリンカーを使用することがある。ペプチド抗原(A)は、疎水性分子(H)または粒子(P)に、直接、または任意の適するリンカーを含む任意の適する手段によってリンカー(L)、伸長部(B1もしくはB2)もしくは荷電分子(C)によって間接的に、のどちらかで、連結されていることがある。一部の実施形態では、リンカーは、カップリングされる部分両方に共有結合されている。一部の実施形態では、リンカーは、二官能性であり、これは、2つの部位に官能基を有することを意味し、これらの官能基が、リンカーを2つの部分とカップリングさせるために使用される。2つの官能基は、同じであってもよく(ホモ二官能性リンカーと見なされることになる)、または異なっていてもよい(ヘテロ二官能性リンカーと見なされることになる)。例えば、一部の実施形態では、アルキンおよび酸をさらに含むヘテロ二官能性リンカーを構成するリンカー前駆体X2は、アミンを有する疎水性分子(H)と、アジドを有するリンカー前駆体X1に連結されているペプチド抗原(A)とを連結させるために使用され、リンカー前駆体X2の酸およびアルキンが、アミンおよびアジドとそれぞれ反応して、アミドおよびトリアゾール結合を形成し、かくして、2つの異種分子を連結させる。一部の実施形態では、ヘテロ二官能性リンカーを構成するリンカー前駆体X2は、酸に連結されているジベンゾシクロオクチン(DBCO)分子である。他の実施形態では、リンカー前駆体は、アミンとチオールを結合させるマレイミドにまたは2つのアミンを結合させるビス(カルボン酸)に連結されている酸である。さらに他の実施形態では、連結が同じであるまたは異なる、三官能性または多官能性リンカーが、使用されることもある。他の実施形態では、切断可能なN末端またはC末端ペプチド伸長部(B1またはB2)が、ペプチド抗原(A)を疎水性分子(H)に連結させるために使用される。一部の実施形態では、切断可能なペプチド伸長部(B1またはB2)は、ヘテロ二官能性であり、例えば、B2伸長部のN末端アミンは、ペプチド抗原(A)のC末端に連結され、B2伸長部のC末端カルボキシル基は、疎水性分子(H)に直接連結される。伸長部(B1またはB2)は、リンカーとして機能しうるが、すべてのリンカーが伸長部であるとは限らない。
リンカー(L)は、リンカー前駆体X1とリンカー前駆体X2の反応の結果として生じる、リンカーの特異的サブセットであって、ペプチド抗原(A)を疎水性分子(H)または粒子(P)に、直接、または間接的に、伸長部(B1もしくはB2)もしくは荷電分子(C)によってのどちらかで、結合させるように特異的に機能する、特異的サブセットである。リンカーは、ペプチド抗原(A)と疎水性分子(H)または粒子(P)を部位選択的にカップリング、すなわち、互いに結合または連結させる、特異的機能を果たす。リンカー前駆体X1を、ペプチド抗原に、直接、または間接的に、伸長部(B1もしくはB2)によって、通常は固相ペプチド合成中に、連結させることができる。ペプチド抗原(A)のN末端またはC末端に直接連結されるリンカー前駆体X1は、ペプチド抗原の分解速度を調節するように特異的に機能しないので、伸長部と見なされないことに、留意されたい。リンカー前駆体X1は、ペプチド抗原(A)の分解速度に対して何らかの影響を及ぼすこともあるが、リンカー前駆体X1は、ペプチド抗原(A)の分解速度を調節するためにも、他の分子からのその放出を調節するためにも選択されず、その代わり、ペプチド抗原(A)を疎水性分子(H)または粒子(P)に結合させるように特異的に機能する。
一部の実施形態では、リンカー前駆体X1を固相ペプチド合成中にペプチド抗原(A)に連結させることができ、連結は、直接的であることもあり、または分解性ペプチドリンカーを含む伸長部(B1もしくはB2)を介して間接的であることもある。典型的に、ペプチド抗原(A)に直接または間接的に連結されるリンカー前駆体X1は、疎水性分子(H)または粒子(P)上に備えられているリンカー前駆体X2との生体直交型反応を促進するように選択される。生体直交型反応は、ペプチド抗原(A)を構成するいずれのアミノ酸の修飾ももたらすことなく、疎水性分子(H)または粒子(P)へのペプチド抗原(A)の部位選択的連結を可能にする。生体直交型反応を可能にする好ましいリンカー前駆体X1としては、アジドまたはアルキンを有するものが挙げられる。抗原の組成に依存して、部位選択的反応性を可能にする追加のリンカー前駆体X1は、チオール、ヒドラジン、ケトンおよびアルデヒドを含む。いくつかの実施形態では、リンカー前駆体は、アジド官能基を有する。一部の実施形態では、リンカー前駆体X1は、アジドを有する非天然アミノ酸、例えば、アジド-リシンLys(N3)である。そのような実施形態では、アジド官能性を有するリンカー前駆体X1に連結されているペプチド抗原(A)は、疎水性分子(H)上に備えられているアルキン含有リンカー前駆体X2と反応することができ、その結果、ペプチド抗原(A)と疎水性分子(H)を結合させるトリアゾールリンカーが形成されることになる。様々なリンカー前駆体(X1およびX2)およびリンカーは、至る所で説明される。
本明細書では、リンカーおよびリンカー前駆体X1は、両方とも、Tag(T)と呼ばれることがあるが、Tag(T)の文脈は、Tag(T)が、リンカーであるのか、リンカー前駆体(X1)であるのかを識別するために使用される。ペプチド抗原(A)に、直接、または間接的に、必要に応じた伸長部(B1もしくはB2)もしくは必要に応じた荷電分子(C)によってのどちらかで、連結されるが、疎水性分子(H)にも粒子(P)にも連結されないTag(T)は、リンカー前駆体X1と呼ばれることもある。ペプチド抗原(A)を疎水性分子(H)または粒子(P)に連結させるTag(T)は、リンカー(L)と呼ばれることもある。リンカー前駆体X2は、リンカー前駆体X1と反応してリンカーを形成する。リンカー前駆体X1は、Tagと呼ばれることもありえ、リンカー前駆体X2は、Tagに対して特異的または反応性である官能基を含む、タグ反応性部分またはタグ反応性分子と呼ばれることがある。
正味電荷:分子または、明記されている場合には、分子のセクション、が帯びている静電荷の合計。
粒子:分子の集合体から構成されるナノサイズまたはマイクロサイズの超分子構造。本開示のペプチド抗原コンジュゲートは、集合してミセルまたは他の超分子構造を構築する、予め形成された粒子(P)または疎水性分子(H)に連結されているペプチド抗原(A)のどちらかを含む。ペプチド抗原コンジュゲートを含む粒子は、細胞(例えば、抗原提示細胞などの免疫細胞)に取り込まれうる。一部の実施形態では、ペプチド抗原コンジュゲートは、水溶液中で粒子を形成する。一部の実施形態では、ペプチド抗原コンジュゲートによる粒子の形成は、pHまたは温度依存性である。一部の実施形態では、ペプチド抗原コンジュゲートから構成されるナノ粒子は、5ナノメートル(nm)~500nmの間の直径平均を有する。一部の実施形態では、ペプチド抗原コンジュゲートから構成されるナノ粒子は、100nmより大きいこともある。一部の実施形態では、ペプチド抗原コンジュゲートから構成されるナノ粒子は、大き過ぎて免疫細胞により取り込まれることができない、より大きい粒子構造(例えば、約5000nmより大きい粒子)に含まれ、これらのより大きい粒子構造が、ペプチド抗原コンジュゲートを含むより小さいナノ粒子をゆっくり放出する。
一部の実施形態では、疎水性分子(H)を含むペプチド抗原コンジュゲートは、ナノ粒子を形成する。ナノ粒子は、疎水性相互作用によるペプチド抗原コンジュゲートの会合により形成され、したがって、超分子集合体と見なすことができる。一部の実施形態では、ナノ粒子は、ミセルである。好ましい実施形態では、ナノ粒子ミセルは、直径約5~50nmの間である。一部の実施形態では、ペプチド抗原コンジュゲートは、ミセルを形成し、ミセル形成は、温度依存性であるか、pH依存性であるか、または温度依存性かつpH依存性である。一部の実施形態では、開示されるナノ粒子は、アジュバント特性を有するリガンド、例えばPRRアゴニスト、に連結されているポリマーから構成される疎水性分子(H)に連結されているペプチド抗原(A)から構成されるペプチド抗原コンジュゲートを含み、ナノ粒子中でのPRRアゴニストとペプチド抗原の連結は、被験体への投与後にPRRアゴニストが自由に分散するのを防止し、それによって全身毒性が防止される。
粒子は、ペプチド抗原コンジュゲートを構成する個々の分子の集合により形成されることもあり、または予め形成された粒子(P)に連結されているペプチド抗原(A)から構成されるペプチド抗原コンジュゲートの場合には、粒子は、共有結合性もしくは非共有結合性相互作用によって架橋されていることもある。
式に記載の予め形成された粒子(P)/粒子(P):予め形成された粒子(P)または単に「粒子(Particle)」(P)は、ペプチド抗原(A)への連結前に既に形成されている粒子を表す。したがって、粒子(P)は、式に記載の粒子を記述するために使用され、疎水性分子(H)を含む2つまたはそれより多くのペプチド抗原コンジュゲートの集合により形成される粒子とは明確に異なる。明確にするために、ペプチド抗原コンジュゲートの集合により形成される粒子は、式に記載の予め形成された粒子(P)または粒子(P)とは明確に異なる。一部の実施形態では、ペプチド抗原(A)を粒子(P)に直接または間接的に連結させてペプチド抗原コンジュゲートを形成することができ、このペプチド抗原コンジュゲートは、水性条件で粒子になることができる。
ペプチド抗原コンジュゲートにより形成された粒子と予め形成された粒子(P)との違いを正確に記述するために、式に記載の予め形成された粒子または粒子(P)を指す場合、文字pは、「粒子(Particle)」では常に大文字であり、これにカッコでくくられた大文字(P)が続く、すなわち、「粒子(P)」である。一部の実施形態では、粒子(P)は、水性条件で形成され、そしてその後、ペプチド抗原(A)に連結されて、水性条件で粒子のままであるペプチド抗原コンジュゲートを形成する、PLGA粒子(P)であることもある。一部の実施形態では、粒子(P)は、水性条件で形成され、そしてその後、ペプチド抗原(A)に連結されて、水性条件で粒子のままであるペプチド抗原コンジュゲートを形成する、リポソーム粒子(P)などの、脂質から構成されることもある。
パターン認識受容体(PRR):病原体関連分子パターン(PAMP)および損傷関連分子パターン(DAMP)と呼ばれる、合成分子および天然に存在する分子の多様な群と結合する様々な細胞集団、特に自然免疫細胞、により発現される受容体。PAMPは、ある特定の微生物およびウイルス上に存在する保存分子モチーフである。DAMPは、細胞死または損傷中に放出または発現される細胞成分である。
パターン認識受容体のPAMPまたはDAMP活性化は、宿主細胞の生理の変更をもたらす細胞内シグナル伝達カスケードを誘導する。そのような生理的変化は、様々な炎症促進性および生存促進性遺伝子の発現を誘導するような細胞の転写プロファイルの変化を含みうる。これらの遺伝子の協調発現は、適応免疫を増強しうる。
PRRにはいくつかのクラスがある。PRRの非限定的な例としては、Toll様受容体(TLR)、RIG-I様受容体(RLR)、NOD様受容体(NLR)、インターフェロン遺伝子刺激因子(STING)受容体、およびC型レクチン受容体(CLR)が挙げられる。そのようなPRRのアゴニストを使用して、標的抗原に対する免疫応答を増強することができる。
PRRのアゴニストは、アジュバントであり、リガンド、またはアジュバント特性を有するリガンドと呼ばれることもある。本開示の一部の実施形態では、PRRアゴニストは、ペプチド抗原に対する免疫応答を増強するためのアジュバントとして使用される。
Toll様受容体(TLR)1~13は、多様なPAMPを認識する膜貫通型PRRである。TLRには次の2つの広いカテゴリーがある:細胞表面に局在するTLR、およびエンドソーム内腔に局在するTLR。細胞表面に存在するTLRは、典型的に細菌の認識に重要である。エンドソームの内腔に局在するTLR、例えば、TLR3、7、8および9は、核酸を認識するのに役立ち、それ故、典型的にウイルスの認識に重要であり、したがって、抗ウイルス免疫応答の促進に重要である。ポリイノシン・ポリシチジン酸は、TLR-3のリガンドである。TLR-7およびTLR-8は、1本鎖RNAならびにヌクレオチド塩基類似体およびイミダゾキノリンを認識する。TLR-9は、主として細菌に見られる、非メチル化デオキシシチジレート・ホスフェート・デオキシグアニレート(CpG)DNAを認識する。
NOD様受容体(NLR)およびRIG-I様受容体(RLR)は、細胞質に局在している。RLRの非限定的な例としては、RIG-I、MDA5およびLGP2が挙げられる。22のヒトNLRがあり、これらを5つの構造的に関連しているNLRファミリーA、B、C、PおよびXに細分することができる。すべてのNLRは、シグナル伝達に関与するN末端ドメイン、ヌクレオチド結合NODドメイン、およびリガンド認識に重要なC末端ロイシンリッチ領域(LRR)という、3つのドメインを有する。NLRの非限定的な例としては、NALP3およびNOD2が挙げられる。
パターン認識受容体に関するより多くの情報については、Walesら、Biochem Soc Trans.、35巻:1501~1503頁、2007年を参照されたい。
ペプチドまたはポリペプチド:アミド結合によって互いに結合されている2つまたはそれより多くの天然または非天然アミノ酸残基。アミノ酸残基は、翻訳後修飾(例えば、グリコシル化および/またはリン酸化)を有することもある。そのような修飾は、in vivoで自然に起こる翻訳後修飾を模倣することもあり、非天然であることもある。ペプチド抗原コンジュゲートの成分のいずれか1つまたは複数がペプチドから構成されうる。
ペプチドの長さの概念的上限はない。ペプチドの長さは、通常は、適用に依存して選択される。いくつかの実施形態では、疎水性分子(H)は、長さ3~1,000アミノ酸の間、通常は長さ300アミノ酸以下でありうる、ペプチドから構成される。一部の実施形態では、N末端および/またはC末端伸長部(B1および/またはB2)は、長さ約1~8アミノ酸のペプチドである。一部の実施形態では、荷電分子(C)は、正荷電アミノ酸、負荷電アミノ酸、または正荷電アミノ酸と負荷電アミノ酸の両方から構成されるペプチドであり、通常は、長さ16アミノ酸以下である。
好ましい実施形態では、ペプチド抗原(A)は、5~約50アミノ酸の間、通常は、約7~35アミノ酸、例えば、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35アミノ酸のペプチドである。他の実施形態では、ペプチド抗原(A)は、長さ約50アミノ酸であるか、またはそれより長い。したがって、一部の実施形態では、ペプチド抗原(A)は、タンパク質と見なすことができる。
ペプチド抗原(A)は、最小エピトープ(minもしくはMEと呼ばれることもある)であることもあり、または最小エピトープを含む長鎖ペプチド(LPもしくはSLPと呼ばれることもある)であることもあることに、留意されたい。したがって、最小エピトープまたは長鎖ペプチドが、ペプチド抗原コンジュゲートとして送達されると言われる場合には、最小エピトープまたは長鎖ペプチドが、別段の記述がない限り、ペプチド抗原(A)であることは、理解される。
一部の実施形態では、必要に応じた荷電分子(C)、抗原(A)、必要に応じた伸長部(B1およびB2)、およびリンカー前駆体X1は、アミノ酸であり、固相ペプチド合成により、「ペプチド抗原断片」と呼ばれることもある連続ペプチド配列として調製されうる。ペプチド抗原断片の正味電荷またはGRAVYの計算がリンカー前駆体X1を含まないことに留意されたい。
ペプチド抗原を指すペプチド配列は、「PA」と表記され、N末端伸長部(B1)を指すペプチド配列は、「PN」と表記され、C末端伸長部(B2)を指すペプチド配列は、「PC」と表記される。ペプチド抗原(A)を構成するアミノ酸の配列は、式PA1...PAn(式中、PAは、ペプチド抗原(A)を構成する任意のアミノ酸残基を表し、nは、整数値である)によって表される。例えば、8アミノ酸ペプチド抗原(A)は、PA1-PA2-PA3-PA4-PA5-PA6-PA7-PA8と表すことができる。N末端伸長部(B1)を構成するアミノ酸の配列は、式PN...PNn(式中、PNは、N末端伸長部を構成する任意のアミノ酸残基を表し、nは、整数値である)によって表される。C末端伸長部(B2)を構成するアミノ酸の配列は、式PC1...PCn(式中、PCは、C末端伸長部を構成する任意のアミノ酸残基を表し、nは、整数値である)によって表される。
ペプチド修飾:ペプチドは、下に示すようないくつかの修飾のうちの1つまたは複数を用いて、変更または別様に合成されることがある。加えて、これらのペプチドの類似体(非ペプチド有機分子)、誘導体(ペプチドから出発して得られる化学的に官能化されたペプチド分子)および改変体(ホモログ)を、本明細書に記載される方法において利用することができる。本明細書に記載されるペプチドは、Lバージョンおよび/またはDバージョンのどちらかでありうる、アミノ酸、類似体、誘導体および改変体の配列から構成される。そのようなペプチドは、天然に存在するおよびそうでないペプチド、類似体、誘導体および改変体を含有しうる。
様々な化学的手法によって、未修飾のペプチドと本質的に同じ活性を有し、必要に応じて他の望ましい性質を有する、誘導体を生成するように、ペプチドを修飾することができる。例えば、カルボキシル末端にあるのか側鎖にあるのかを問わず、ペプチドのカルボン酸基を、薬学的に許容されるカチオンの塩の形態で提供することができ、またはエステル化してCC1~CC16エステル(式中、CCは、炭素鎖を指す(したがって、CC1は、単一炭素を指し、CC16は、16個の炭素を指す))にすることができ、またはアミドに変換することができる。アミノ末端にあるのか側鎖にあるのかを問わず、ペプチドのアミノ基は、薬学的に許容される酸付加塩、例えば、HCl塩、HBr塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、トルエンスルホン酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩および他の有機塩の形態であることができ、または修飾され得るかまたはアミドに変換され得る。
アミノ酸が共有結合性連結によってPRRアゴニスト、例えばTLRアゴニスト、例えば、イミダゾキノリンベースのTLR-7またはTLR-7/8アゴニストを含有するように、アミノ酸を修飾することができる。
正電荷または負電荷または両方を含有する置換基を含有するように、ペプチドを修飾してもよい。正および/または負電荷は、ペプチドが存在するpHによる影響を受けうる。
ペプチド側鎖のヒドロキシル基を、十分に認知されている手法を使用してCC1~CC16アルコキシに、もしくはCC1~CC16エステルに変換してもよく、または負電荷を導入するようにヒドロキシル基を変換(例えば、硫酸化もしくはリン酸化)してもよい。ペプチド側鎖のフェニルおよびフェノール環を、1つもしくは複数のハロゲン原子、例えば、フッ素、塩素、臭素もしくはヨウ素で置換してもよく、またはCC1~CC16アルキル、CC1~CC16アルコキシ、カルボン酸およびそのエステル、もしくはそのようなカルボン酸のアミドで置換してもよい。ペプチド側鎖のメチレン基を延長して、同族CC2~CC4アルキレンにすることができる。チオールを使用してジスルフィド結合またはチオエーテルを、例えばマレイミドとの反応によって、形成することができる。チオールを、多数の十分に認知されている保護基のいずれか1つ、例えばアセトアミド基、で保護してもよい。当業者は、本発明のペプチドに環式構造を導入して、安定性増強をもたらすコンフォメーション上の制約を選択し、それを構造に備えさせるための方法も認知しているであろう。官能基に加えることができるさらなる修飾の詳細については、Greeneら、「Greene’s Protective Groups in Organic Synthesis」第4版、John Wiley & Sons, Inc、2006年を参照することができる。
ペプチド抗原(A)のペプチドミメティック(peptidomimetic)およびオルガノミメティック(organomimetic)実施形態であって、そのようなペプチドミメティックおよびオルガノミメティックの化学成分の三次元配置が、ペプチド主鎖および成分アミノ酸側鎖の三次元配置を模倣し、その結果、寛容もしくは免疫抑制を誘導する測定可能な能力、または刺激性免疫応答、例えば、細胞傷害性T細胞もしくは抗体応答を生成する能力増強を有する、免疫原性ペプチドのそのようなペプチドミメティックおよびオルガノミメティックが得られる、実施形態が、想定される。
薬学的に許容されるビヒクル:本開示において有用な薬学的に許容される担体(ビヒクル)は、従来のものである。E. W. MartinによるRemington’s Pharmaceutical Sciences、Mack Publishing Co.、Easton、PA、第15版(1975年)には、1つまたは複数の治療用がんワクチンおよびさらなる医薬剤などの、1つまたは複数の治療用組成物の薬学的送達に適している組成物および製剤が記載されている。
一般に、担体の性質は、利用される特定の投与方式に依存することになる。例えば、非経口製剤は、薬学的におよび生理学的に許容される流体、例えば、水、生理食塩水、平衡塩類溶液、デキストロース水溶液、グリセロール、またはこれらに類するものをビヒクルとして含む、注射可能な流体を通常は含む。固体組成物(例えば、粉末、丸剤、錠剤またはカプセル形態)のための従来の非毒性固体担体としては、例えば、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプンまたはステアリン酸マグネシウムを挙げることができる。生物学的に中性の担体に加えて、投与される医薬組成物は、少量の非毒性補助物質、例えば、湿潤または乳化剤、保存剤、およびpH緩衝剤、ならびにこれらに類するもの、例えば、酢酸ナトリウムまたはソルビタンモノラウレートを含有しうる。
極性:物質の性質の記述。極性は、相対的な用語であり、窒素と水素間の結合などの、分子中の互いに結合している原子間の電気陰性度の差から生じる部分電荷を有する、分子または、分子の一部分を記載することができる。極性分子は、他の極性分子と相互作用することを好み、通常は、非極性分子と会合しない。特定の、非限定的な場合、極性基は、ヒドロキシル基、またはアミノ基、またはカルボキシル基、または荷電基を含有することがある。特定の、非限定的な場合、極性基は、水などの極性溶媒と相互作用することを好むこともある。特定の、非限定的な場合、さらなる極性基の導入は、分子の一部分についての溶解度を上昇させることもある。
ポリマー:反復構造単位(モノマー)を含有する分子。本開示の至る所でより詳細で説明される通り、ポリマーは、ペプチド抗原コンジュゲートについての任意の数の成分に使用することができ、天然であってもよく、または合成であってもよい。好ましい実施形態では、疎水性または両親媒性ポリマーが、疎水性分子(H)として使用され、ペプチド抗原コンジュゲートの粒子集合を駆動する。一部の実施形態では、ペプチド抗原(A)は、アミノ酸を含むポリマーである。一部の実施形態では、伸長部(B1およびB2)は、例えば、PEG、ポリ(アミノ酸)またはこれらの組み合わせなどの、ポリマーを含む。開示される実施形態に含まれるポリマーは、有害な副作用を引き起こすことなく被験体に投与することができるポリマーナノ粒子を形成することができる。開示される実施形態に含まれるポリマーは、免疫応答を生じさせるために、または疾患を処置および/もしくは改善するために、被験体に投与することができる、ポリマーナノ粒子を形成することができる。開示される実施形態に含まれるポリマーは、例えば、免疫抑制または寛容を誘導するために使用されるアジュバントまたは分子、例えば、マクロライド、例えばラパマイシン、への連結を助長するために利用することができる、官能基を有する側鎖を含みうる。いくつかの実施形態では、ポリマーは、両親媒性ジブロックコポリマーなどのブロックコポリマーを作出するようにリンカーによって連結されている、2つまたはそれより多くのポリマーブロックを含有することができる。いくつかの実施形態では、ポリマーブロックは、性質的には主として疎水性でありうる。いくつかの実施形態では、ポリマーは、ペプチド、それらの類似体、誘導体および改変体からなる。本発明の実施に有用なポリマーの様々な組成は、他の箇所でより詳細に論じられる。
重合:触媒、熱または光を用いて通常は行われる化学反応であって、モノマーが結合して鎖状の、または架橋した、高分子(ポリマー)を形成する化学反応。適切な置換基および化学反応を使用するさらなる化学合成により、鎖をさらに結合させることができる。モノマーは、反応性物質を含有しうる。重合は、一般に、付加または縮合により起こる。付加重合は、開始剤、通常はフリーラジカル、がモノマーの二重結合と反応すると、起こる。フリーラジカルは、二重結合の一方の側に付加して、他方の側に自由電子を生じさせる。次いで、この自由電子が別のモノマーと反応し、鎖は、自己成長する、したがって、成長鎖の末端に一度に1モノマー単位ずつ付加させることになる。縮合重合は、水分子から開裂される結果となる、2つのモノマーの反応を含む。重合の他の形態では、モノマーは、活性化モノマーの段階的導入、例えば、固相ペプチド合成中の段階的導入によって、成長鎖に1度に1つずつ付加される。
精製された(される、されている):物質の質を落とすまたは物質に夾雑する不純物または物質が比較的含まない組成物を有すること。精製された(される、されている)という用語は、相対的な用語であり、絶対純度を必要としない。したがって、例えば、精製されたペプチド調製物は、ペプチドまたはタンパク質が、その天然環境、例えば、細胞内にあるペプチドまたはタンパク質より濃縮されているものである。一実施形態では、調製物は、ペプチド抗原コンジュゲートが、調製物の全内容物の少なくとも50%に相当するように精製される。実質的精製は、他のタンパク質または細胞成分からの精製を意味する。実質的に精製されたタンパク質は、少なくとも60%、70%、80%、90%、95%、98%または99%純粋である。したがって、1つの特定の、非限定的な例では、実質的に精製されたタンパク質は、他のタンパク質または細胞成分または夾雑ペプチドが90%含まない。
可溶性:溶媒に分子的にまたはイオン的に分散されて均一な溶液になることができる。ペプチドに言及するとき、可溶性ペプチドは、疎水性または他の非共有結合性相互作用によって集合して多量体または他の超分子構造を構築しない、溶液中の単一分子であると解される。可溶性分子は、単一分子として溶液に自由に分散されると解される。いくつかの実施形態では、ペプチド抗原は、リン酸緩衝食塩水、pH7.4に室温で最大少なくとも0.1mg/mlまで溶解する可溶性ペプチド抗原でありうる。他の実施形態では、ペプチド抗原コンジュゲートは、室温でジメチルスルホキシドおよび/または他の有機溶媒に可溶性であることができるが、室温で、pH7.4のリン酸緩衝食塩水などの水性溶媒に可溶性であることができない。本明細書に記載される疎水性分子は、下は約0.1mg/mLに至るまで不溶性である。溶解度は、目視検査により、濁度測定により、または動的光散乱により、決定することができる。
被験体:ヒトと非ヒト動物の両方を指し、非ヒト動物には、鳥類および非ヒト哺乳動物、例えば、齧歯類(例えば、マウスおよびラット)、非ヒト霊長類(例えば、アカゲザル)、伴侶動物(例えば、飼い慣らされたイヌおよびネコ)、家畜(例えば、ブタ、ヒツジ、ウシ、ラマおよびラクダ)、および飼い慣らされていない動物(例えば、大型のネコ科動物)が含まれる。
超分子の:非共有結合性相互作用によって会合している2つまたはそれより多くの分子を指す。一部の実施形態では、分子は、疎水性相互作用に起因して会合する。一部の実施形態では、分子は、静電相互作用に起因して会合する。会合は、超分子複合体に、成分分子のどちらによっても共有されなかった新たな性質、例えば、免疫系との材料の相互作用に影響を与えるサイズ増大、および異なる免疫応答、を付与する。例えば、ペプチド抗原コンジュゲートは、凝集して超分子複合体を形成することができる。
T細胞:免疫系の一部であり、免疫応答に関与しうる白血球の種類。T細胞は、CD4
T細胞およびCD8 T細胞を含むが、これらに限定されない。CD4 T細胞は、その表面にCD4糖タンパク質を提示し、これらの細胞は、ヘルパーT細胞と呼ばれることが多い。これらの細胞は、抗体応答および細胞傷害性T細胞応答を含む、免疫応答を調整することが多いが、CD4 T細胞は、免疫応答を抑制することもでき、CD4 T細胞は、細胞傷害性T細胞として作用することもある。CD8 T細胞は、その表面にCD8糖タンパク質を提示し、細胞傷害性またはキラーT細胞と呼ばれることが多いが、CD8
T細胞は、免疫応答を抑制することもできる。
T細胞およびCD8 T細胞を含むが、これらに限定されない。CD4 T細胞は、その表面にCD4糖タンパク質を提示し、これらの細胞は、ヘルパーT細胞と呼ばれることが多い。これらの細胞は、抗体応答および細胞傷害性T細胞応答を含む、免疫応答を調整することが多いが、CD4 T細胞は、免疫応答を抑制することもでき、CD4 T細胞は、細胞傷害性T細胞として作用することもある。CD8 T細胞は、その表面にCD8糖タンパク質を提示し、細胞傷害性またはキラーT細胞と呼ばれることが多いが、CD8
T細胞は、免疫応答を抑制することもできる。
テレケリック(telechelic):1つの反応性末端、または同じであってもよく異なっていてもよい2つの反応性末端を有する、ポリマーを記述するために使用される。この語は、末端および鉤爪をそれぞれ表すギリシャ語であるtelosおよびcheleに由来する。セミテレケリックポリマーは、重合などのさらなる反応を起こすことができる反応性官能基などの末端基を1つだけ有するポリマーを記載する。ヘテロテレケリックポリマーは、異なる反応特性を有する反応性官能基などの末端基を2つ有するポリマーを記載する。
本明細書では、疎水性分子(H)は、一方または両方の末端に反応性基を有するポリマーから構成されうる。一部の実施形態では、アジュバントをポリマーの一方の末端に配置し、ポリマーの他方の末端を、ペプチド抗原に直接または伸長部(B1もしくはB2)もしくはリンカー(L)によって間接的に連結されているリンカーと、反応させることができる。この例では、ポリマーは、アジュバントに対してセミテレケリックであり、これは、アジュバントが、疎水性分子(H)を含むポリマー鎖の一方の末端のみに結合されることを意味する。
疾患を処置すること、予防すること、または改善すること:「処置すること」は、疾患または病的状態の徴候または症状またはマーカーを、それが発生し始めた後に、低減させる介入を指す。例えば、疾患を処置することは、腫瘍負荷の低減をもたらすことがあり、腫瘍負荷の低減は、腫瘍および/もしくは転移の数もしくはサイズの減少を意味し、または疾患を処置することは、自己免疫に関連する系を低下させる免疫寛容をもたらすこともある。疾患を「予防すること」は、疾患の完全発生を阻害することを意味する。疾患は、全く発生しないように予防されることもある。疾患は、重症度または程度または種類が進展しないように予防されることもある。「改善すること」は、がんなどの疾患の徴候または症状またはマーカーの数または重症度の低減を指す。
疾患、または疾患に関連する病的状態の、徴候または症状またはマーカーを低減させることは、処置の任意の観察可能な有益効果、および/または症候性であるか否かを問わず、近位の代替エンドポイント、例えば腫瘍体積、に対する任意の観察可能な効果を指す。腫瘍またはウイルス感染に関連する徴候または症状を低減させることは、例えば、感受性被験体(例えば、まだ転移していない腫瘍を有する被験体、もしくはウイルス感染に曝露されうる被験体)における疾患の臨床症状の発症遅延によって、疾患の一部もしくはすべての臨床症状の重症度の低下によって、疾患のより緩徐な進行によって(例えば、腫瘍を有するもしくはウイルスに感染している被験体の寿命を延長することによって)、疾患の再燃数の低減によって、被験体の健康全般もしくは満足できる生活状態(well-being)の向上によって、または当技術分野において周知の他のパラメーター(例えば、特定の腫瘍もしくはウイルス感染に特異的なパラメーター)によって、証明することができる。「予防的」処置は、病態発生のリスクまたは重症度を低下させる目的で、疾患の徴候を示さないまたは初期徴候のみを示す被験体に投与される処置である。
一例では、所望される応答は、被験体における腫瘍のサイズ、体積、成長速度、または数(例えば転移)の低減につながる免疫応答を誘導することである。例えば、薬剤(単数または複数)は、腫瘍のサイズ、体積または数を、所望の量、例えば、薬剤の非存在下での応答と比較して少なくとも5%、少なくとも10%、少なくとも15%、少なくとも20%、少なくとも25%、少なくとも30%、少なくとも50%、少なくとも75%、少なくとも90%、または少なくとも95%、減少させる免疫応答を誘導することができる。
腫瘍またはがんまたは新生物性:良性であることもあり、または悪性であることもあるが、多くの場合、必ずしも臨床症状を生じさせるとは限らない、細胞の異常成長。「新生物性」細胞成長は、成長および阻害因子などの生理的合図に応答性でない細胞成長を指す。
「腫瘍」は、新生物性細胞の収集物である。ほとんどの場合、腫瘍は、固形塊を形成する新生物性細胞の収集物を指す。そのような腫瘍は、固形腫瘍と呼ばれることがある。一部の白血病に関する場合などの、一部の場合、新生物性細胞は、固形塊を形成しないこともある。そのような場合、新生物性細胞の収集物は、液性がんと呼ばれることがある。
がんは、固形または液性のどちらかである、新生物性細胞の悪性成長を指す。悪性と定義されるがんの特徴としては、転移、隣接細胞の正常機能への干渉、サイトカインまたは他の分泌産物の異常なレベルでの放出、および炎症性応答または免疫学的応答の抑制または悪化、周囲または遠隔組織または器官、例えばリンパ節への浸潤などが挙げられる。
実質的有害臨床症状を提示しない、および/または緩徐に成長している腫瘍は、「良性」と呼ばれる。
「悪性」は、有意な臨床症状を引き起こすこと、または将来引き起こす可能性が高いことを意味する。周囲組織に浸潤する、ならびに/または転移する、ならびに/または近隣もしくは遠隔身体系に対して影響を与える化学媒介因子の産生および分泌により実質的な臨床症状を生じさせる、腫瘍は、「悪性」と呼ばれる。
「転移性疾患」は、元の腫瘍部位から離れて身体の他の部分に、例えば、血流経由で、リンパ系経由で、または腹腔もしくは胸腔などの体腔経由で移動した、がん細胞を指す。
個体における腫瘍の量が、「腫瘍負荷」である。腫瘍負荷は、腫瘍の数、体積または質量として測定することができ、理学的検査、放射線イメージング、または病理学検査により評価されることが多い。
「確立」または「既存」腫瘍は、治療が開始される時点で存在する腫瘍である。多くの場合、確立腫瘍は、診断検査により識別することができる。一部の実施形態では、確立腫瘍を触診することができる。一部の実施形態では、確立腫瘍は、少なくとも約500mm3、例えば、少なくとも600mm3、少なくとも700mm3、または少なくとも800mm3のサイズである。他の実施形態では、腫瘍は、少なくとも1cm長である。固形腫瘍に関しては、確立腫瘍は、一般に、新たに確立したものであり、堅固な血液供給があり、調節性T細胞(Treg)および骨髄系由来サプレッサー細胞(MDSC)を誘導した可能性がある。
上記で提供された定義が、許されない置換パターン(例えば、5つの異なる基で置換されたメチル、およびこれに類するもの)を含むことを意図しないことは、当業者には認識されるであろう。そのような許されない置換パターンは、当業者には容易に認識される。本明細書で開示されるおよび/または上記で定義されたいずれの官能基も、本明細書中で別段の指示がない限り、置換されていてもよく、または非置換であってもよい。別段の解説がない限り、本明細書で使用されるすべての専門および科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般に理解されているのと同じ意味を有する。単数形の用語「a」、「an」および「the」は、文脈による別段の明確な指示がない限り、複数の指示被験体を含む。用語「含む(comprises)」は、「含む(includes)」を意味する。したがって、「A」または「B」を含むこと(comprising)は、Aを含むこと(including)、Bを含むこと(including)、またはAとBの両方を含むこと(including)を指す。核酸またはポリペプチドについて与えられる、すべての塩基サイズまたはアミノ酸サイズ、およびすべての分子量または分子質量値が、近似値であり、説明のために提供されることを、さらに理解されたい。本明細書に記載されるものと同様または同等の方法および材料を本開示の実施または試験の際に使用することができるが、適する方法および材料が本明細書に記載される。矛盾がある場合、用語の説明を含めて、本明細書が優先するものとする。加えて、材料、方法および例は、説明に役立つものに過ぎず、限定することを意図したものではない。
免疫原性組成物
粒子(P)または疎水性分子(H)に連結されているペプチド抗原(A)をさらに含むペプチド抗原コンジュゲートを含む粒子を含む新規免疫原性組成物が、本明細書に記載される。ペプチド抗原コンジュゲートは、ペプチド抗原(A)の粒子(P)または疎水性分子(H)への連結、例えば共有結合またはその他、の結果として得られる化合物を指す。疎水性分子(H)または粒子(P)は、集合して粒子を構築するようにペプチド抗原コンジュゲートを誘導し、これは、ペプチド抗原(A)に対する免疫応答の予想外の向上をもたらす。ペプチド抗原コンジュゲートは、ペプチド抗原(A)のN末端およびC末端にそれぞれ連結されている必要に応じたN末端伸長部(B1)および/またはC末端伸長部(B2)であって、製造および生物活性の予想外の向上をもたらす、必要に応じたN末端伸長部(B1)および/またはC末端伸長部(B2)と;ペプチド抗原コンジュゲートにより形成される粒子の安定性の予想外の向上をもたらし、それによって、製造向上および生物活性向上をもたらす、必要に応じた荷電分子(C)と;ペプチド抗原(A)に連結されているリンカー前駆体X1と、疎水性分子(H)または粒子(P)上に備えられているリンカー前駆体X2との反応、それによる、効率的過程でのペプチド抗原(A)と疎水性分子(H)と粒子(P)との結合の結果として生じる必要に応じたリンカー(L)であって、ペプチド抗原コンジュゲートの製造効率の予想外の向上をもたらす、必要に応じたリンカー(L)とを、さらに含むことができる。ペプチド抗原コンジュゲートを構成する成分は、任意の適する手段によって連結させることができ、至る所でより詳細に説明される。
粒子(P)または疎水性分子(H)に連結されているペプチド抗原(A)をさらに含むペプチド抗原コンジュゲートを含む粒子を含む新規免疫原性組成物が、本明細書に記載される。ペプチド抗原コンジュゲートは、ペプチド抗原(A)の粒子(P)または疎水性分子(H)への連結、例えば共有結合またはその他、の結果として得られる化合物を指す。疎水性分子(H)または粒子(P)は、集合して粒子を構築するようにペプチド抗原コンジュゲートを誘導し、これは、ペプチド抗原(A)に対する免疫応答の予想外の向上をもたらす。ペプチド抗原コンジュゲートは、ペプチド抗原(A)のN末端およびC末端にそれぞれ連結されている必要に応じたN末端伸長部(B1)および/またはC末端伸長部(B2)であって、製造および生物活性の予想外の向上をもたらす、必要に応じたN末端伸長部(B1)および/またはC末端伸長部(B2)と;ペプチド抗原コンジュゲートにより形成される粒子の安定性の予想外の向上をもたらし、それによって、製造向上および生物活性向上をもたらす、必要に応じた荷電分子(C)と;ペプチド抗原(A)に連結されているリンカー前駆体X1と、疎水性分子(H)または粒子(P)上に備えられているリンカー前駆体X2との反応、それによる、効率的過程でのペプチド抗原(A)と疎水性分子(H)と粒子(P)との結合の結果として生じる必要に応じたリンカー(L)であって、ペプチド抗原コンジュゲートの製造効率の予想外の向上をもたらす、必要に応じたリンカー(L)とを、さらに含むことができる。ペプチド抗原コンジュゲートを構成する成分は、任意の適する手段によって連結させることができ、至る所でより詳細に説明される。
一部の実施形態では、ペプチド抗原(A)は、疎水性分子(H)または粒子(P)に直接連結されて、式A-HまたはA-Pのペプチド抗原コンジュゲートを形成する。他の実施形態では、ペプチド抗原(A)は、疎水性分子(H)または粒子(P)に、リンカー(L)によって連結されて、式A-L-HまたはA-L-Pのペプチド抗原コンジュゲートを形成する。さらに他の実施形態では、ペプチド抗原(A)は、疎水性分子(H)または粒子(P)に、直接、またはリンカー(L)によってのどちらかで、連結されている伸長部(B1またはB2)に連結されて、式A-B2-H、A-B2-L-H、H-B1-A、H-L-B1-A、A-B2-P、A-B2-L-P、P-B1-AまたはP-L-B1-Pのいずれか1つのペプチド抗原コンジュゲートを形成する。一部の実施形態では、ペプチド抗原(A)は、リンカー前駆体X1に直接または伸長部(B1およびB2)によって連結されて、式A-X1、A-B2-X1、X1-AまたはX1-B1-Aのペプチド抗原断片を形成し、この断片が、疎水性分子(H)または粒子(P)上のリンカー前駆体X2、すなわち、X2-HまたはX2-P、と反応して、ペプチド抗原(A)を疎水性分子(H)または粒子(P)に結合させるリンカー(L)を形成し、その結果、式、すなわち、A-L-H、A-L-P、A-B2-L-H、A-B2-L-P、H-L-A、P-L-A、H-B1-A、またはP-B1-A、のいずれか1つのペプチド抗原コンジュゲートが得られる。本開示において、そのような実施形態は、被験体において免疫応答を誘導するのに有用であることが示される、粒子を水性条件で形成することが示される。
一部の実施形態では、ペプチド抗原(A)は、両方の伸長部(B1およびB2)に連結される。そのような実施形態は、式B1-A-B2-H、B1-A-B2-L-H、B1-A-B2-P、B1-A-B2-L-P、H-B1-A-B2、H-L-B1-A-B2、P-B1-A-B2、またはP-L-B1-A-B2のペプチド抗原コンジュゲートを含む。本開示において、そのような実施形態は、被験体における免疫応答を誘導するのに有用であることが実証される、粒子を水性条件で形成することが示される。
一部の実施形態では、静電荷を付与する官能基を含有する分子、すなわち、荷電分子(C)は、ペプチド抗原(A)に、直接、または間接的に、必要に応じた伸長部(B1および/もしくはB2)、必要に応じたリンカー(L)、または疎水性分子(H)もしくは粒子(P)によって、連結される。荷電分子によりペプチド抗原コンジュゲートに付与される電荷は、水性条件で形成される超分子構造を安定させる。荷電分子(C)を含むペプチド抗原コンジュゲートの非限定的な例としては、C-A-H、C-B1-A-H、C-A-B2-H、C-B1-A-B2-H、A-H(C)、A-B2-H(C)、B1-A-H(C)、B1-A-B2-H(C)、C1-A-H(C2)、C1-A-B2-H(C2)、C1-B1-A-H(C2)、C1-B1-A-B2-H(C2)、H-A-C、H-B1-A-C、H-A-B2-C、H-B1-A-B2-C、H(C)-A、H(C)-B1-A、H(C)-A-B2、H(C)-B1-A-B2、H(C1)-A-C2、H(C1)-B1-A-C2、H(C1)-A-B2-C2、H(C1)-B1-A-B2-C2、C-A-L-H、C-B1-A-L-H、C-A-B2-L-H、C-B1-A-B2-L-H、A-L-H(C)、A-B2-L-H(C)、B1-A-L-H(C)、B1-A-B2-L-H(C)、C1-A-L-H(C2)、C1-A-B2-L-H(C2)、C1-B1-A-L-H(C2)、C1-B1-A-B2-L-H(C2)、H-L-A-C、H-L-B1-A-C、H-L-A-B2-C、H-L-B1-A-B2-C、H(C)-L-A、H(C)-L-B1-A、H(C)-L-A-B2、H(C)-L-B1-A-B2、H(C1)-L-A-C2、H(C1)-L-B1-A-C2、H(C1)-L-A-B2-C2、H(C1)-L-B1-A-B2-C2、C-A-P、C-B1-A-P、C-A-B2-P、C-B1-A-B2-P、A-P(C)、A-B2-P(C)、B1-A-P(C)、B1-A-B2-P(C)、C1-A-P(C2)、C1-A-B2-P(C2)、C1-B1-A-P(C2)、C1-B1-A-B2-P(C2)、P-A-C、P-B1-A-C、P-A-B2-C、P-B1-A-B2-C、P(C)-A、P(C)-B1-A、P(C)-A-B2、P(C)-B1-A-B2、P(C1)-A-C2、P(C1)-B1-A-C2、P(C1)-A-B2-C2、P(C1)-B1-A-B2-C2、C-A-L-P、C-B1-A-L-P、C-A-B2-L-P、C-B1-A-B2-L-P、A-L-P(C)、A-B2-L-P(C)、B1-A-L-P(C)、B1-A-B2-L-P(C)、C1-A-L-P(C2)、C1-A-B2-L-P(C2)、C1-B1-A-L-P(C2)、C1-B1-A-B2-L-P(C2)、P-L-A-C、P-L-B1-A-C、P-L-A-B2-C、P-L-B1-A-B2-C、P(C)-L-A、P(C)-L-B1-A、P(C)-L-A-B2、P(C)-L-B1-A-B2、P(C1)-L-A-C2、P(C1)-L-B1-A-C2、P(C1)-L-A-B2-C2またはP(C1)-L-B1-A-B2-C2が挙げられる。
荷電分子(C)は、ペプチド抗原コンジュゲートにより形成される粒子を安定させる。荷電分子(C)をペプチド抗原コンジュゲートに直接連結させてもよい。あるいは、荷電分子(C)を、ペプチド抗原コンジュゲートにより形成される粒子と会合する別の分子上に備えさせてもよい。一部の実施形態では、荷電分子(C)は、疎水性分子(H)と連結されて、式C-H、またはC-A’-H(式中、A’は、保存抗原である)の荷電分子コンジュゲートを形成し、このコンジュゲートが、水性条件で、式[C]-[B1]-A-[B2]-[L]-H(式中、[ ]は、その基が必要に応じたものであることを示す)のペプチド抗原コンジュゲートと混合され、結果として生じる粒子は、C-H、またはC-A’-Hとペプチド抗原コンジュゲートとを含む。
疎水性分子(H)は、ペプチド抗原コンジュゲートを水性条件で集合して粒子を構築するように誘導する任意の適する分子を含みうる。一部の実施形態では、ペプチド抗原コンジュゲートを構成する疎水性分子(H)は、制限された水溶解度しか有さないポリマーである。一部の実施形態では、疎水性分子(H)は、特定の温度またはpH値で制限された水溶解度しか有さない、温度またはpH応答性ポリマーである。他の実施形態では、疎水性分子(H)は、脂質、脂肪酸またはコレステロールである。多くの疎水性分子(H)が、本開示に有用であり、至る所でより詳細に説明される。
本明細書で開示されるペプチド抗原コンジュゲートにより形成される粒子は、被験体において免疫応答を誘導するのに有用である。一部の実施形態では、腫瘍関連抗原を含むペプチド抗原コンジュゲートを含む粒子は、がんの処置または予防のために、T細胞応答、例えば、細胞傷害性CD4またはCD8 T細胞応答を誘導するために被験体に提供される。一部の実施形態では、感染性疾患抗原を含むペプチド抗原コンジュゲートを含む粒子は、感染性疾患の処置または予防のために、T細胞応答、例えば、細胞傷害性CD4もしくはCD8 T細胞応答または抗体応答を誘導するために被験体に提供される。一部の実施形態では、自己抗原を含むペプチド抗原コンジュゲートを含む粒子は、自己免疫疾患の処置のために、免疫寛容原性または抑制性T細胞応答を誘導するために被験体に提供される。
ペプチド抗原コンジュゲートは、ペプチド抗原(A)、必要に応じたN末端および/またはC末端伸長部(B1および/またはB2)、必要に応じたリンカー(L)、粒子(P)または疎水性分子(H)および必要に応じた荷電分子(C)を含む。これらの成分の各々は、下で、および至る所でより詳細に、説明される。
ペプチド抗原(A)
ペプチド抗原(A)は、被験体において免疫応答を誘導するのに有用であるいずれの抗原であってもよい。ペプチド抗原(A)は、その適用に求められる免疫応答の性質に依存して炎症促進性免疫応答または免疫寛容原性免疫応答のどちらかを誘導するために使用することができる。一部の実施形態では、ペプチド抗原(A)は、腫瘍関連抗原、例えば、自己抗原、ネオ抗原、または腫瘍関連ウイルス抗原(例えば、HPV E6/E7)である。他の実施形態では、ペプチド抗原(A)は、感染性疾患抗原、例えば、ウイルス、細菌、真菌または原生動物微生物病原体から単離されたタンパク質に由来するペプチドである。さらに他の実施形態では、ペプチド抗原(A)は、アレルギーまたは自己免疫を引き起こすことが公知であるかまたは引き起こすことが疑われる、アレルゲンまたは自己抗原に由来するペプチドである。
ペプチド抗原(A)は、被験体において免疫応答を誘導するのに有用であるいずれの抗原であってもよい。ペプチド抗原(A)は、その適用に求められる免疫応答の性質に依存して炎症促進性免疫応答または免疫寛容原性免疫応答のどちらかを誘導するために使用することができる。一部の実施形態では、ペプチド抗原(A)は、腫瘍関連抗原、例えば、自己抗原、ネオ抗原、または腫瘍関連ウイルス抗原(例えば、HPV E6/E7)である。他の実施形態では、ペプチド抗原(A)は、感染性疾患抗原、例えば、ウイルス、細菌、真菌または原生動物微生物病原体から単離されたタンパク質に由来するペプチドである。さらに他の実施形態では、ペプチド抗原(A)は、アレルギーまたは自己免疫を引き起こすことが公知であるかまたは引き起こすことが疑われる、アレルゲンまたは自己抗原に由来するペプチドである。
ペプチド抗原(A)は、被験体において免疫応答、例えばT細胞またはB細胞応答、を誘導することができる、アミノ酸またはペプチドミメティックの配列から構成される。一部の実施形態では、ペプチド抗原(A)は、アミノ酸、または翻訳後修飾を有するアミノ酸、非天然アミノ酸、またはペプチドミメティックを含む。ペプチド抗原は、抗原または予測される抗原、すなわち、T細胞もしくはB細胞エピトープを有する抗原を有する、天然、非天然もしくは翻訳後修飾アミノ酸、ペプチドミメティックまたはこれらの任意の組み合わせについてのいずれの配列であってもよい。
免疫原性組成物は、異なるペプチド抗原(A)組成を各々が有する、1つまたは複数の異なるペプチド抗原コンジュゲートを含みうる。一部の実施形態では、免疫原性組成物は、特有のペプチド抗原(A)組成を各々が有する最大50種の異なるペプチド抗原コンジュゲートを有する粒子を含む。一部の実施形態では、免疫原性組成物は、20の異なるペプチド抗原コンジュゲートを含むモザイク粒子を含む。他の実施形態では、免疫原性組成物は、5つの異なるペプチド抗原コンジュゲートを含むモザイク粒子を含む。一部の実施形態では、免疫原性組成物は、特有のペプチド抗原コンジュゲートから各々集合した20の異なる粒子組成物を含む(すなわち、各々の粒子が単一のペプチド抗原コンジュゲート組成物を含有する)。他の実施形態では、免疫原性組成物は、特有のペプチド抗原コンジュゲートから各々集合した5つの異なる粒子組成物を含む(すなわち、各々の粒子が単一のペプチド抗原コンジュゲート組成物を含有する)。さらに他の実施形態では、免疫原性組成物は、単一のペプチド抗原コンジュゲート組成物から構成される単一の粒子組成物を含む。
ペプチド抗原(A)の長さは、特定の適用に依存し、通常は約5~約50アミノ酸の間である。好ましい実施形態では、ペプチド抗原(A)は、約7~35アミノ酸の間、例えば、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34または35アミノ酸である。他の実施形態では、ペプチド抗原は、ポリペプチドの断片である。さらに他の場合には、ペプチド抗原は、完全長ポリペプチド、例えば、組換え発現されうるタンパク質抗原である。腫瘍関連抗原、感染性疾患抗原、アレルゲンまたは自己抗原に基づくペプチド抗原(A)を、好ましくは長さ50アミノ酸以下だが、完全長配列として送達することができる。好ましい実施形態では、ペプチド抗原(A)は、7~35アミノ酸、通常は約25である。したがって、長さ25アミノ酸より長い腫瘍関連抗原、感染性疾患抗原、アレルゲンまたは自己抗原、例えば100アミノ酸抗原については、抗原は、各々のペプチド抗原(A)が特有のアミノ酸組成を有する、7~35アミノ酸、例えば25アミノ酸、ペプチド抗原(A)に分割することができ;またはペプチド抗原(A)は、重複ペプチドプールである場合もあり、この場合、抗原は、重複配列を有する、設定数の7~35アミノ酸、例えば25アミノ酸、ペプチド抗原(A)に分割される。例えば、100アミノ酸抗原を含む重複ペプチドプールは、12個のアミノ酸によって各々が相殺される8つの25アミノ酸ペプチド抗原(A)に分割することができる(すなわち、100アミノ酸ペプチド配列を構成する、結果として得られる25アミノ酸ペプチド各々は、前のペプチドからの13番目のアミノ酸位置で開始する)。抗原からペプチドプールを生成するための多くの順列が存在することは、当業者には理解される。
一部の実施形態では、ペプチド抗原(A)は、MHC-IまたはMHC-II分子に結合することがin silicoで予測される(または実験により測定される)、腫瘍関連抗原、感染性疾患抗原、アレルゲンまたは自己抗原の一部分を含む、最小CD8またはCD4 T細胞エピトープである。腫瘍関連抗原については、MHC-IまたはMHC-II分子に結合することがin silicoで予測される(または実験により測定される)最小CD8またはCD4 T細胞エピトープであるペプチド抗原(A)は、腫瘍細胞に特有であるアミノ酸の配列であるべきでもある。MHC-IまたはMHC-IIへの結合を予測するためのアルゴリズムは、広く入手可能である(Lundegaardら、Nucleic Acids Res.、36巻:W509~W512頁、2008年およびhttp://www.cbs.dtu.dk/services/NetMHC/を参照されたい)。特定の被験体(例えば、患者)のための個別化治療の一部の実施形態では、ペプチド抗原コンジュゲートを構成するペプチド抗原(A)は、その被験体により発現される特定のMHC-I対立遺伝子に対して<1,000nMの結合親和性を有すると予測される、通常は7~13アミノ酸ペプチドである、腫瘍関連抗原、感染性疾患抗原、アレルゲンまたは自己抗原からの最小CD8 T細胞エピトープを含みうる。特定の被験体(例えば、患者)のための個別化治療の一部の実施形態では、ペプチド抗原(A)は、その被験体により発現される特定のMHC-II対立遺伝子に対して<1,000nMの結合親和性を有すると予測される、10~16アミノ酸ペプチドである、腫瘍関連抗原、感染性疾患抗原、アレルゲンまたは自己抗原からの最小CD4 T細胞エピトープを含みうる。好ましい実施形態では、最小CD8またはCD4 T細胞エピトープが、腫瘍関連抗原についても、感染性疾患抗原についても、アレルゲンについても、自己抗原についても同定することができない場合、または腫瘍関連抗原、感染性疾患抗原、アレルゲンもしくは自己抗原が、複数のCD8およびCD4 T細胞エピトープを含有する場合、ペプチド抗原(A)は、16~35アミノ酸の間であってもよく、可能性のあるすべてのCD8またはCD4 T細胞エピトープを含有しうるように、最大50アミノ酸、例えば、最大35アミノ酸、最大25アミノ酸、または最大20アミノ酸、または最大16アミノ酸であってもよい。
本開示の一部の実施形態では、ペプチド抗原(A)は、腫瘍関連抗原に由来する。腫瘍関連抗原は、健常細胞上に存在するが腫瘍細胞により優先的に発現される自己抗原、または腫瘍細胞に特異的であって個々の患者に特有のものである異常タンパク質であるネオ抗原、のどちらかでありうる。適する自己抗原としては、腫瘍細胞により優先的に発現される抗原、例えば、CLPP、サイクリン-A1、MAGE-A1、MAGE-C1、MAGE-C2、SSX2、XAgE1b/GAGED2a、Melan-A/MART-1、TRP-1、チロシナーゼ、CD45、グリピカン-3、IGF2B3、カリクレイン4、KIF20A、Lengsin、Meloe、MUC5AC、サバイビン(surviving)、前立腺酸性ホスファターゼ、NY-ESO-1およびMAGE-A3が挙げられる。ネオ抗原は、DNA、RNAスプライス改変体の変異および翻訳後修飾の変化(これらのすべてが、ネオ抗原と総称されるまたは予測ネオ抗原と呼ばれることもあるデノボタンパク質産物をもたらす可能性がある)につながりうる、がんの固有の遺伝的不安定性から生じる。DNA変異は、非同義ミスセンス変異、ナンセンス変異、挿入、欠失、染色体逆位および染色体転座(これらのすべてが、新規遺伝子産物、したがって、ネオ抗原をもたらす可能性がある)を含む、DNAに対する変化を含む。RNAスプライス部位の変化は、新規タンパク質産物をもたらすことがあり、ミスセンス変異は、抗原性でありうる翻訳後修飾(例えば、リン酸化)を許容するアミノ酸を導入することもある。さらに、腫瘍細胞の不安定性は、ある特定の転写因子の後成的変化および活性化をもたらすことがあり、その結果、健常な非がん性細胞により発現されないある特定の抗原が、腫瘍細胞により選択的に発現されることになることもある。
個別化がんワクチンに使用されるペプチド抗原コンジュゲートは、腫瘍細胞に特有である腫瘍関連抗原の一部分を含むペプチド抗原(A)を含むべきである。ミスセンス変異から生じるネオ抗原を含むペプチド抗原(A)は、1つまたは複数のヌクレオチド多型によりコードされるアミノ酸変化を包含するべきである。フレームシフト変異、スプライス部位改変体、挿入、逆位および欠失から生じるネオ抗原を含むペプチド抗原(A)は、新規ペプチド配列、および新規ペプチド配列の接合部を包含するべきである。新規翻訳後修飾を有するネオ抗原を含むペプチド抗原(A)は、翻訳後修飾を有するアミノ酸、例えば、リン酸塩またはグリカンを包含するべきである。好ましい実施形態では、ペプチド抗原(A)は、変異に起因して生じるアミノ酸変化または新規接合部が両側に隣接している、0~25個のアミノ酸を含む。一実施形態では、ペプチド抗原(A)は、単一ヌクレオチド多型から生じるアミノ酸変化が両側に隣接している12個のアミノ酸を含む、ネオ抗原配列、例えば、13番目のアミノ酸が単一ヌクレオチド多型の結果として生じるアミノ酸残基である、25アミノ酸ペプチドである。一部の実施形態では、ペプチド抗原(A)は、新規翻訳後修飾を有するアミノ酸が両側に隣接している12個のアミノ酸を含む、ネオ抗原配列、例えば、13番目のアミノ酸が新規翻訳後修飾部位の結果として生じるアミノ酸残基である、25アミノ酸ペプチドである。他の実施形態では、ペプチド抗原(A)は、挿入、欠失または逆位によって生じた新規接合部が両側に隣接している0~12個のアミノ酸を含む、ネオ抗原配列である。一部の場合には、新規配列の結果として生じるネオ抗原を含むペプチド抗原(A)は、同じく生じることがある新規接合部の両側に0~25個のアミノ酸を含む、新規配列全体を包含しうる。
本開示の免疫原性組成物のためのペプチド抗原(A)として適する腫瘍関連抗原は、当業者に周知の様々な手法によって同定することができる。腫瘍関連抗原は、健常細胞、すなわち、被験体からの非がん性細胞と比較して、腫瘍細胞のタンパク質発現を評価することにより、同定することができる。タンパク質発現の適する評価方法としては、免疫組織化学、免疫蛍光検査、ウェスタンブロット、クロマトグラフィー(すなわち、サイズ排除クロマトグラフィー)、ELISA、フローサイトメトリーおよび質量分析が挙げられるが、これらに限定されない。優先的に腫瘍細胞により発現されるが、健常細胞により発現されない、または制限された数の健常細胞によってしか発現されない(例えば、CD20)タンパク質は、適する腫瘍関連抗原である。RNAとして発現され、患者抗原提示細胞(APC)上のMHC-IまたはMHC-II対立遺伝子と結合すると予測されるペプチドを産生する、タンパク質コードDNAの変異を同定するための、患者腫瘍生検試料のDNAおよびRNAシークエンシング、続いてのバイオインフォマティクスもまた、本開示の免疫原性組成物のためのペプチド抗原(A)として適する腫瘍関連抗原を同定するために使用することができる。
好ましい実施形態では、免疫原性組成物のためのペプチド抗原(A)として適する腫瘍関連抗原は、質量分析を使用して同定される。適するペプチド抗原(A)は、患者腫瘍生検試料からのMHC分子、しかし同じ被験体からの健常組織からのものでないMHC分子からの溶出後に質量分析によって同定されたペプチドである(すなわち、ペプチド抗原は、同じ被験体の健常細胞ではなく腫瘍細胞上にのみ存在する)。質量分析を単独で使用してもよく、または腫瘍関連抗原を同定するための他の手法と組み合わせて使用してもよい。当業者は、本開示の発明の実施のためのペプチド抗原(A)として適しているネオ抗原などの腫瘍関連抗原を同定するための多くの方法(Yadavら、Nature、515巻:572~576頁、2014年を参照されたい)があることを認知している。
好ましい実施形態では、ペプチド抗原(A)として使用される腫瘍関連抗原は、新生物性細胞の集団内でクローナルまたはほぼクローナルであり、これらは、他の点では不均質と見なされうる。
個別化がんワクチン接種スキームにおけるペプチド抗原(A)としての使用に選択される腫瘍関連抗原は、ペプチド-MHC結合および/またはin silico予測MHC結合親和性ならびに腫瘍内のRNA発現レベルの質量分析による確認に基づいて、選択することができる。これらのデータは、腫瘍関連抗原が、腫瘍細胞により発現され、提示されるか否か、したがって、T細胞の適する標的であるか否かについての情報を提供する。そのような基準を使用して、個別化がんワクチンに使用するペプチド抗原(A)を選択することができる。
免疫原性組成物に基づく個別化がんワクチンは、特有のペプチド抗原(A)組成を各々が有する、1つまたは複数の異なるペプチド抗原コンジュゲートを含みうる。一部の実施形態では、個別化がんワクチンは、特有のペプチド抗原(A)を各々が有する10~50の異なるペプチド抗原コンジュゲート組成物を含有しうる。好ましい実施形態では、免疫原性組成物は、長さ7~35アミノ酸の間、例えば、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34または35アミノ酸、通常は50アミノ酸以下のペプチド抗原(A)を各々が含む、20の異なるペプチド抗原コンジュゲートを含む。非限定的な例では、長さ8アミノ酸のペプチド抗原(A)から構成される20の異なるペプチド抗原コンジュゲートから形成される粒子から構成される免疫原性組成物が、個別化がんワクチンとして使用される。別の非限定的な例では、長さ25アミノ酸のペプチド抗原(A)から構成される20の異なるペプチド抗原コンジュゲートから形成される粒子から構成される免疫原性組成物が、個別化がんワクチンとして使用される。
50より多くの腫瘍関連ネオ抗原を有する高度に変異した腫瘍を有する患者については、ダウンセレクションプロセスを使用して、ペプチド抗原コンジュゲートから構成される個別化がんワクチンにおける使用のためのペプチド抗原(A)を選択してもよい。一部の実施形態では、ダウンセレクションプロセスは、最も高いMHC結合親和性および腫瘍細胞内でのRNA発現レベルを有すると予測されるエピトープを含むペプチド抗原(A)を選択するために使用される。さらなる基準を、腫瘍に関連する自己抗原またはネオ抗原の選択に適用してもよい。例えば、自己免疫につながりうる、他の自己抗原と反応するT細胞をもたらすペプチド抗原(A)の予測される免疫原性または予測される能力は、考えられるさらなる基準である。例えば、腫瘍関連抗原を含むペプチド抗原(A)であって、免疫原性が高いと予測されるが、自己免疫につながる可能性は低いとも予測されるペプチド抗原(A)は、個別化がんワクチンにおける使用のための可能性のあるペプチド抗原(A)を選択するために使用される基準である。一部の実施形態では、健常細胞上に見られる自己抗原と反応するT細胞または抗体応答をもたらすと予想されるネオ抗原は、ペプチド抗原(A)としての使用に選択されない。予測されるネオ抗原がより少ない、例えば20~50である、患者については、ダウンセレクションプロセスは、重要な意味を持たないことがあり、そのため、20~50の予測ネオ抗原すべてが、個別化がんワクチンにおいてペプチド抗原(A)として使用されうる。
がんワクチンは、患者特異的である腫瘍関連抗原および/または患者間で共有される腫瘍関連抗原を含むペプチド抗原(A)を含みうる。例えば、腫瘍関連抗原は、保存された自己抗原、例えば、NY-ESO-1(精巣がん)もしくはgp100(メラノーマ)であることもあり、または抗原は、通常は健常細胞により発現されず、患者間で保存された、隠れたエピトープ、例えば、Na17(メラノーマ)であってもよい。本開示の免疫原性組成物は、偶然に予測されるより高い頻度で存在するある特定の遺伝子または遺伝子領域の高頻度変異である、いわゆるホットスポット変異から生じる、ペプチド抗原(A)を含みうる。ホットスポット変異の非限定的な例としては、メラノーマ、乳頭状甲状腺癌および結腸直腸癌に共通して見られる、BRAFタンパク質のV600E変異、または最もよく見られる変異の1種であるKRAS G12変異、例えばKRAS G12Cが挙げられる。多数の適する自己抗原、ならびにホットスポット変異から生じるネオ抗原が公知であり、参照により本明細書に組み込まれる:Changら、Nature Biotechnology、34巻:155~163頁、2016年;Vigneron, N.ら、Cancer Immunology、13巻:15~20頁、2013年を参照されたい。
一部の実施形態では、ペプチド抗原(A)は、血液腫瘍からのものであることもある。血液腫瘍の非限定的な例としては、急性白血病(例えば、11q23陽性急性白血病、急性リンパ性白血病、急性骨髄球性白血病、急性骨髄性白血病ならびに骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性および赤白血病)、慢性白血病(例えば、慢性骨髄球性(顆粒球性)白血病、慢性骨髄性白血病、および慢性リンパ性白血病)を含む白血病、真正赤血球増加症、リンパ腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫(低悪性度および高悪性度型)、多発性骨髄腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、重鎖病、骨髄異形成症候群、ヘアリー細胞白血病および脊髄形成異常が挙げられる。
一部の実施形態では、ペプチド抗原(A)は、固形腫瘍からのものであることもある。肉腫および癌腫などの、固形腫瘍の非限定的な例としては、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、および他の肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、リンパ系悪性疾患、膵がん、乳がん(基底乳癌、腺管癌および乳房小葉癌を含む)、肺がん、卵巣がん、前立腺がん、肝細胞癌、扁平上皮細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、甲状腺髄様癌、甲状腺乳頭状癌、褐色細胞腫、皮脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、ヘパトーマ、胆管癌、絨毛癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸がん、精巣腫瘍、精上皮腫、膀胱癌、およびCNS腫瘍(例えば、神経膠腫、星細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、脳室上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫瘍、乏突起神経膠腫、髄膜腫、メラノーマ、神経芽細胞腫および網膜芽細胞腫)が挙げられる。いくつかの例では、腫瘍は、メラノーマ、肺がん、リンパ腫、乳がんまたは結腸がんである。
一部の実施形態では、ペプチド抗原(A)は、腺管癌または小葉癌などの、乳がんからの腫瘍関連抗原である。一部の実施形態では、ペプチド抗原(A)は、前立腺がんからの腫瘍関連抗原である。一部の実施形態では、ペプチド抗原(A)は、基底細胞癌、扁平上皮細胞癌、カポジ肉腫またはメラノーマなどの、皮膚がんからの腫瘍関連抗原である。一部の実施形態では、ペプチド抗原(A)は、腺癌、気管支肺胞上皮癌(bronchiolaveolar carcinoma)、大細胞癌、または小細胞癌などの、肺がんからの腫瘍関連抗原である。一部の実施形態では、ペプチド抗原(A)は、膠芽腫または髄膜腫などの、脳がんからの腫瘍関連抗原である。一部の実施形態では、ペプチド抗原(A)は、結腸がんからの腫瘍関連抗原である。一部の実施形態では、ペプチド抗原(A)は、肝細胞癌などの、肝がんからの腫瘍関連抗原である。一部の実施形態では、ペプチド抗原(A)は、膵がんからの腫瘍関連抗原である。一部の実施形態では、ペプチド抗原(A)は、腎細胞癌などの、腎がんからの腫瘍関連抗原である。一部の実施形態では、ペプチド抗原(A)は、精巣がんからの腫瘍関連抗原である。
一部の実施形態では、ペプチド抗原(A)は、上皮内癌、または外陰上皮内新生物、子宮頸部上皮内新生物、または膣上皮内新生物の改変体などの、前悪性状態に由来する腫瘍関連抗原である。
一部の実施形態では、ペプチド抗原(A)は、ウイルス、細菌または真菌などの、感染性因子からの抗原である。さらなる実施形態では、ペプチド抗原(A)は、感染性因子に由来するペプチドまたは糖ペプチド、例えば、HIVエンベロープ融合ペプチド、またはHIVからのV3もしくはV1/V2糖ペプチドである。
一部の実施形態では、ペプチド抗原(A)は、自己抗原を表す。自己抗原は、患者自身のMHC-I分子に関連して提示される自己抗原に対する自己反応性について被験体自身のT細胞のスクリーニングに基づいて、同定および選択することができる。あるいは、ペプチド抗原は、(i)被験体自身のMHC-I分子に対する高い結合親和性が予測される、ならびに(ii)発現される、および/または被験体の自己免疫症候群の原因である病態に関連することが公知である、可能性のある自己抗原を予測するためのin silico法を使用して、選択することができる。他の実施形態では、ペプチド抗原は、アレルゲンに由来するCD4エピトープを表し、患者自身のMHC-II分子に対して高い結合親和性を有するペプチド抗原に基づいて選択される。
免疫応答をもたらし、疾患の予防または処置に有用である、任意のペプチド、タンパク質または翻訳後修飾タンパク質(例えば、糖タンパク質)を、本発明の免疫原性組成物において使用するためのペプチド抗原(A)としての使用に選択することができることは、当業者には認識される。
伸長部(B1およびB2):
必要に応じたN末端およびC末端伸長部(B1およびB2)は、ペプチド抗原(A)のN末端およびC末端にそれぞれ連結される分子を意味する。N末端およびC末端伸長部B1およびB2は、次のうちのいずれか1つまたは複数から構成されうる:非天然アミノ酸を含む、アミノ酸;親水性エチレンオキシドモノマー(例えば、PEG);疎水性アルカン鎖;もしくはこれらに類するもの;またはこれらの組み合わせ。N末端およびC末端伸長部B1およびB2は、任意の適する手段によって、例えば、安定したアミド結合によって、ペプチド抗原(A)に連結される。
必要に応じたN末端およびC末端伸長部(B1およびB2)は、ペプチド抗原(A)のN末端およびC末端にそれぞれ連結される分子を意味する。N末端およびC末端伸長部B1およびB2は、次のうちのいずれか1つまたは複数から構成されうる:非天然アミノ酸を含む、アミノ酸;親水性エチレンオキシドモノマー(例えば、PEG);疎水性アルカン鎖;もしくはこれらに類するもの;またはこれらの組み合わせ。N末端およびC末端伸長部B1およびB2は、任意の適する手段によって、例えば、安定したアミド結合によって、ペプチド抗原(A)に連結される。
一部の実施形態では、伸長部(B1およびB2)は、ペプチド抗原(A)の分解速度を制御するように機能するが、いずれか1つまたは複数のさらなる機能を果たすこともできる。一部の実施形態では、N末端またはC末端伸長部(B1またはB2)は、遊離しており(この場合、N末端またはC末端伸長部の一方の末端は、ペプチド抗原(A)に連結されており、他方の末端は、別の分子に連結されていない)、ペプチド抗原の分解を緩徐化するように機能することができる。例えば、B1ペプチドベースの伸長部をアミド結合によってペプチド抗原のN末端に連結させて分解を緩徐化することができる。他の実施形態では、N末端および/またはC末端伸長部(B1および/またはB2)を異種分子に連結させることができ、これらの伸長部は、リンカーとして機能し、ペプチド抗原(A)分解を調節することもできる。リンカー機能を提供するN末端および/またはC末端伸長部は、ペプチド抗原を、直接、またはリンカー(L)によって間接的に、のどちらかで、粒子(P)または疎水性分子(H)、および/または荷電分子(C)に連結させることができる。
一部の実施形態では、伸長部(B1および/またはB2)は、任意の2つの異種分子間に距離、すなわち間隔、を設けるように機能する。他の実施形態では、伸長部(B1および/またはB2)は、ペプチド抗原コンジュゲートに疎水性または親水性を付与するように機能する。さらに他の実施形態では、伸長部(B1および/またはB2)の組成は、剛性または可撓性を付与するように選択されうる。他の実施形態では、N末端および/またはC末端伸長部(B1および/またはB2)は、ペプチド抗原コンジュゲートにより形成される粒子を安定化するのに役立ちうる。
一部の実施形態では、伸長部(B1および/またはB2)は、生理的pHで静電荷を付与する荷電官能基、例えば、荷電アミノ酸残基(例えば、アルギニン、リシン)から構成される。伸長部に存在する荷電残基の数は、ペプチド抗原コンジュゲートの正味電荷を調節するために使用することができる。プロテアーゼにより認識され、特定の静電荷を付与する、ペプチドベースの伸長部(B1および/またはB2)であって、ペプチド抗原コンジュゲートにより形成される粒子を安定させるように機能する伸長部(B1および/またはB2)の選択についての系統的プロセスを説明するアルゴリズムが、本明細書で開示される。
加えて、一部の実施形態では、ペプチド抗原(A)に付加されるC末端伸長部(B2)は、βシート形成を妨げて固相ペプチド合成中の配列短縮を防止するアミノ酸配列をB2に組み込むことにより、[C]-[B1]-A-B2-[X1](式中、[ ]は、その基が必要に応じたものであることを示す)を含むペプチドの製造を助長するように、選択される。非限定的な例では、C末端ジペプチドリンカー(B2)であるGly-Serが、固相ペプチド合成中に、プソイドプロリンジペプチド(例えば、Gly-Ser(Psi(Me,Me)pro))として組み込まれる。さらなる実施形態では、プロリンは、カテプシン切断性C末端伸長部(B2)配列、例えば、Ser-Pro-Leu-Arg(配列番号21)に組み入れられ、それによって、プロリンが組み入れられて、製造の助長も、エンドソームプロテアーゼによる伸長部のプロセシングの促進もする。
一部の実施形態では、ペプチド抗原(A)は、そのC末端がB2伸長部に連結され、このB2伸長部が、直接、またはリンカー(L)によって間接的に、のどちらかで、疎水性分子(H)または粒子(P)に連結される。一部の実施形態では、B1伸長部は、ペプチド抗原のN末端に連結され、B2伸長部は、ペプチド抗原(A)のC末端に連結され、この場合、B1またはB2のどちらかが、粒子(P)または疎水性分子(H)に、直接、またはリンカー(L)を介してのどちらかで、連結される。他の実施形態では、ペプチド抗原(A)は、そのN末端がB2伸長部に連結され、このB2伸長部は、直接、またはリンカー(L)を介してのどちらかで、粒子または疎水性分子(H)に連結される。一部の実施形態では、荷電分子(C)は、ペプチド抗原(A)のN末端またはC末端にそれぞれ連結されるB1またはB2である伸長部に連結され、この場合、荷電分子(C)に連結されない伸長部は、疎水性分子(H)または粒子(P)に、直接、またはリンカー(L)を介してのどちらかで連結される。さらなる実施形態では、荷電分子(C)は、伸長部B1とB2の両方に連結され、これらの伸長部が、ペプチド抗原(A)のN末端およびC末端の両方にそれぞれ連結される。さらなる実施形態では、荷電分子(C)は、ペプチド抗原(A)のN末端に連結されるB1伸長部に連結されるが、ペプチド抗原(A)のC末端に結合されているB2伸長部であって、疎水性分子(H)または粒子(P)に直接、またはリンカー(L)によってのどちらかで、連結されうる、B2伸長部には連結されない。リンカー前駆体X1またはリンカー(L)を、伸長部のどちらか(B1またはB2)に、アミド結合などの任意の適する手段によって連結させることができる。好ましい実施形態では、伸長部(B1およびB2)は、プロテアーゼなどの酵素による認識および加水分解のために選択されるペプチド配列である。伸長部(B1およびB2)は、好ましくは、エンドソームプロテアーゼまたは免疫プロテアソームのどちらかまたは両方により認識されるアミノ酸を含む切断可能なペプチドである。
より詳細にここで説明する通り、分解可能なペプチドから構成される伸長部(B1およびB2)の組成は、その伸長部が、ペプチド抗原(A)のN末端に連結される(B1)か、またはC末端に連結される(B2)かに依存する。
一部の実施形態では、N末端伸長部(B1)は、長さ約1~8アミノ酸の間、例えば、1、2、3、4、5、6、7、または8アミノ酸、通常は、長さ10アミノ酸以下のペプチド配列であって、ペプチド抗原(A)に、例えば、伸長部(B1)のカルボキシル基とペプチド抗原(A)のN末端残基のアルファアミンとで形成されるアミド結合によって連結されるペプチド配列である。B1とペプチド抗原(A)間のアミド結合は、酵素により切断されうる。ダッシュ記号により示される切断部位(例えば、Pn’)に対してC末端側のアミノ酸位置に関して、切断部位の近位から遠位の順にアミノ酸位置に番号を付与するのが慣例となっていることは、理解される。例えば、オクタペプチド(PA1’-PA2’-PA3’-PA4’-PA5’-PA6’-PA7’-PA8’)であるペプチド抗原(A)のN末端に連結されているテトラペプチド伸長部(PN4-PN3-PN2-PN1)、例えば、PN4-PN3-PN2-PN1-PA1’-PA2’-PA3’-PA4’-PA5’-PA6’-PA7’-PA8’について、PN1-PA1’間のアミド結合は、酵素により認識され、加水分解される。
一部の実施形態では、N末端伸長部(B1)は、エンドソームプロテアーゼにより認識される酵素分解性テトラペプチドであって、テトラペプチド伸長部(例えば、PN4-PN3-PN2-PN1)のPN1位が、好ましくは、アルギニン、リシン、シトルリン、グルタミン、トレオニン、ロイシン、ノルロイシンまたはメチオニンから選択され、例えば、PN4-PN3-PN2-Argであり、PN2が、グリシン、バリン、ロイシンまたはイソロイシンから選択され、PN3が、グリシン、セリン、アラニン、プロリンまたはロイシンから選択され、PN4が、グリシン、セリン、アルギニン、リシン、アスパラギン酸またはグルタミン酸から選択される、酵素分解性テトラペプチドである。一部の実施形態では、N末端伸長部(B1)は、エンドソームプロテアーゼにより認識される酵素分解性トリペプチドであって、トリペプチド伸長部(例えば、PN3-PN2-PN1)のPN1位が、好ましくは、アルギニン、リシン、シトルリン、グルタミン、トレオニン、ロイシン、ノルロイシンまたはメチオニンから選択され、PN2が、グリシン、バリン、ロイシンまたはイソロイシンから選択され、PN3が、グリシン、セリン、アラニン、プロリンまたはロイシンから選択される、酵素分解性トリペプチドである。一部の実施形態では、N末端伸長部(B1)は、エンドソームプロテアーゼにより認識される酵素分解性ジペプチドであって、ジペプチド伸長部(例えば、PN2-PN1)のPN1位が、好ましくは、アルギニン、リシン、シトルリン、グルタミン、トレオニン、ロイシン、ノルロイシンまたはメチオニンから選択され、PN2が、グリシン、バリン、ロイシンまたはイソロイシンから選択される、酵素分解性ジペプチドである。なおさらなる実施形態では、N末端伸長部(B1)は、エンドソームプロテアーゼにより認識されるアミノ酸であって、PN1位が、好ましくは、アルギニン、リシン、シトルリン、グルタミン、トレオニン、ロイシン、ノルロイシンまたはメチオニンから選択される、アミノ酸である。
他の実施形態では、N末端伸長部(B1)は、免疫プロテアソームにより認識される酵素分解性ペプチドであって、テトラペプチド伸長部(PN4-PN3-PN2-PN1)のP1位が、好ましくは、イソロイシン、ロイシン、ノルロイシンまたはバリンから選択され、例えばPN4-PN3-PN2-Leuである、酵素分解性ペプチドである。
さらなる実施形態では、N末端伸長部(B1)は、エンドソームプロテアーゼと免疫プロテアソームの両方により認識される酵素分解性ペプチドであって、オクタペプチド伸長部(PN8-PN7-PN6-PN5-PN4-PN3-PN2-PN1)についてのPN5およびPN1位が、カテプシンにより認識されるPN5位についてはアルギニン、リシン、シトルリン、グルタミン、トレオニン、ロイシン、ノルロイシンまたはメチオニンから選択され、免疫プロテアソームにより認識されるPN1位についてはイソロイシン、ロイシン、ノルロイシンまたはバリンから選択され、例えば、PN8-PN7-PN6-Arg-PN4-PN3-PN2-Leuである、酵素分解性ペプチドである。カテプシンおよび免疫プロテアソームにより認識されるN末端伸長部(B1)の非限定的な例は、Lys-Pro-Leu-Arg-Tyr-Leu-Leu-Leu(配列番号3)である。
免疫プロテアソームにより認識されるテトラペプチドN末端伸長部(B1)の非限定的な例としては、Ser-Leu-Val-Cit、Ser-Leu-Val-Leu(配列番号4)、Ser-Pro-Val-Cit、Glu-Leu-Val-Arg(配列番号5)、Ser-Pro-Val-Arg(配列番号6)、Ser-Leu-Val-Arg(配列番号7)、Lys-Pro-Leu-Arg(配列番号8)、Lys-Pro-Val-Arg(配列番号9)、Glu-Leu-Val-Cit、Glu-Leu-Val-Leu(配列番号10)、Glu-Pro-Val-CitおよびLys-Pro-Val-Citが挙げられる。トリペプチドN末端伸長部(B1)の非限定的な例としては、Leu-Val-Cit、Leu-Val-Leu、Pro-Val-Cit、Leu-Val-Arg、Pro-Val-Arg、Pro-Leu-Arg、Gly-Val-Serが挙げられる。ジペプチドN末端伸長部(B1)の非限定的な例としては、Val-Cit、Val-Leu、Val-Arg、Leu-Argが挙げられる。単一アミノ酸N末端伸長部(B1)の非限定的な例としては、Cit、Arg、LeuまたはLysが挙げられる。上記の例では、ArgをLysで置き換えることができ、LysをArgで置き換えることができ、GluをAspで置き換えることができ、AspをGluで置き換えることができる。Cit=シトルリンであることに留意されたい。
一部の実施形態では、伸長部(B2)は、ペプチド抗原(A)のC末端残基に連結され、ある特定のプロテアーゼにより認識され加水分解されるアミノ酸配列から構成される分解性ペプチドである。一部の実施形態では、C末端伸長部(B2)は、長さ約1~8アミノ酸の間、例えば、1、2、3、4、5、6、7または8アミノ酸、通常は10アミノ酸以下の、ペプチド配列である。好ましい実施形態では、C末端伸長部(B2)は、ペプチド抗原(A)に、ペプチド抗原(A)のC末端カルボキシル基と伸長部(B2)のN末端残基のアルファアミンとで形成されるアミド結合によって連結される。B2とペプチド抗原(A)間のアミド結合は、酵素により切断されうる。ダッシュ記号により示される切断部位(例えば、Pn’)に対してC末端側のアミノ酸位置に関して、切断部位の近位から遠位の順にアミノ酸位置に番号を付与するのが慣例となっていることに留意されたい。例えば、オクタペプチド抗原(PA8-PA7-PA6-PA5-PA4-PA3-PA2-PA1)のC末端に連結されているテトラペプチド伸長部(PC1’-PC2’-PC3’-PC4’)、例えば、PA8-PA7-PA6-PA5-PA4-PA3-PA2-PA1-PC1’-PC2’-PC3’-PC4’について、PA1-PC1’間のアミド結合は、酵素により認識され、加水分解される。
好ましい実施形態では、C末端伸長部(B2)は、免疫プロテアソーム認識および切断ならびに必要に応じてエンドソームプロテアーゼ認識を促進するように選択される、アミノ酸配列である。ペプチド抗原(A)は、例えばペプチド抗原(A)のC末端残基に近位のアミド結合に対する、免疫プロテアソームによる加水分解を促進するC末端残基、例えばロイシン、を通常は含有するので、ペプチド抗原(A)のC末端に連結される伸長部を、ペプチド抗原(A)のC末端の近位のアミド結合に対する免疫プロテアソームによる認識および切断を促進するように選択するべきである。免疫プロテアソームは、ペプチド抗原(A)のC末端アミノ酸であるPA1に隣接するPC1’位、例えば、PA1-PC1’間のアミド結合における、小さい非荷電アミノ酸を好む。しかし、エンドソームプロテアーゼは、嵩高い疎水性アミノ酸(例えば、ロイシン、ノルロイシン、メチオニンまたはグルタミン)および塩基性アミノ酸(すなわち、アルギニンおよびリシン)を好む。したがって、C末端伸長部を、どちらかまたは両方のクラスのプロテアーゼによる認識を促進するように選択することができる。
一部の実施形態では、配列PA8-PA7-PA6-PA5-PA4-PA3-PA2-PA1を有するペプチド抗原(A)は、配列PC1’...PCn’(この配列中のnは、1~8の整数値である)を有するC末端ペプチド伸長部(B2)に連結され、例えば、PA8-PA7-PA6-PA4-PA3-PA2-PA1-PC1’...PCn’となる。C末端伸長部(B2)の組成は、使用される伸長配列の長さに依存する。一部の実施形態では、C末端伸長部であるB2は、Gly、Ala、Ser、Arg、Lys、Cit、Gln、Thr、Leu、NleまたはMetから選択される、単一アミノ酸PC1’である。さらなる実施形態では、C末端伸長部であるB2は、ジペプチドであるPC1’-PC2’(ここで、PC1’は、Gly、AlaまたはSerから選択され、PC2’は、Gly、Ala、Ser、Pro、Arg、Lys、Cit、Gln、Thr、Leu、NleまたはMetから選択される)である。さらなる実施形態では、C末端伸長部であるB2は、トリペプチドであるPC1’-PC2’-PC3’(ここで、P1’は、Gly、AlaまたはSerから選択され、PC2’は、Gly、Ala、SerまたはProから選択され、PC3’は、Gly、Ser、Arg、Lys、Cit、Gln、Thr、Leu、NleまたはMetから選択される)である。
さらなる実施形態では、C末端伸長部であるB2は、テトラペプチド伸長部であるPC1’-PC2’-PC3’-PC4’(ここで、PC1’は、グリシン、アラニンまたはセリンから選択され、PC2’は、グリシン、アラニン、セリン、プロリンまたはロイシンから選択され、PC3’は、グリシン、アラニン、セリン、バリン、ロイシンまたはイソロイシンから選択され、PC4’は、アルギニン、リシン、シトルリン、グルタミン、トレオニン、ロイシン、ノルロイシンまたはメチオニンから選択される)である。さらなる実施形態では、C末端伸長部であるB2は、ペンタペプチドであるPC1’-PC2’-PC3’-PC4’-PC5’(ここで、PC1’は、グリシン、アラニンまたはセリンから選択され、PC2’は、グリシン、アラニン、セリン、プロリン、アルギニン、リシン、グルタミン酸またはアスパラギン酸から選択され、PC3’は、グリシン、アラニン、セリン、プロリンまたはロイシンから選択され、PC4’は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシンまたはイソロイシンから選択され、PC5’は、アルギニン、リシン、シトルリン、グルタミン、トレオニン、ロイシン、ノルロイシンまたはメチオニンから選択される)である。さらなる実施形態では、C末端伸長部であるB2は、ヘキサペプチドであるPC1’-PC2’-PC3’-PC4’-PC5’-PC6’(ここで、PC1’は、グリシン、アラニンまたはセリンから選択され、PC2’は、グリシン、アラニン、セリンまたはプロリンから選択され、PC3’は、グリシン、セリン、プロリン、アルギニン、リシン、グルタミン酸またはアスパラギン酸から選択され、PC4’は、プロリンまたはロイシンから選択され、PC5’は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシンまたはイソロイシンから選択され、PC6’は、アルギニン、リシン、シトルリン、グルタミン、トレオニン、ロイシン、ノルロイシンまたはメチオニンから選択される)である。
ヘキサペプチドC末端伸長部(B2)の非限定的な例としては、Gly-Gly-Lys-Leu-Val-Arg(配列番号11)、Gly-Gly-Lys-Pro-Leu-Arg(配列番号12)、Gly-Gly-Ser-Leu-Val-Arg(配列番号13)、Gly-Gly-Ser-Leu-Val-Cit、Gly-Gly-Ser-Pro-Val-Cit、Gly-Gly-Ser-Leu-Val-Leu(配列番号14)、Gly-Gly-Glu-Leu-Val-Arg(配列番号15)、Gly-Gly-Glu-Leu-Val-Leu(配列番号16)が挙げられる。ペンタペプチドC末端伸長部(B2)の非限定的な例としては、Gly-Ser-Leu-Val-Arg(配列番号17)、Gly-Ser-Leu-Val-Cit、Gly-Lys-Pro-Val-Cit、Gly-Lys-Pro-Val-Arg(配列番号18)、Gly-Ser-Leu-Val-Leu(配列番号19)、Gly-Glu-Leu-Val-Leu(配列番号20)が挙げられる。テトラペプチドC末端伸長部(B2)の非限定的な例としては、Ser-Leu-Val-Cit、Ser-Leu-Val-Leu(配列番号4)、Ser-Pro-Val-Cit、Glu-Leu-Val-Arg(配列番号5)、Ser-Pro-Val-Arg(配列番号6)、Ser-Leu-Val-Arg(配列番号7)、Lys-Pro-Leu-Arg(配列番号8)、Glu-Leu-Val-Cit、Glu-Leu-Val-Leu(配列番号10)、Glu-Pro-Val-Cit、Glu-Gly-Val-Citが挙げられる。トリペプチドC末端伸長部(B2)の非限定的な例としては、Gly-Ser-Gly、Gly-Ser-Arg、Gly-Ser-Leu、Gly-Ser-Cit、Gly-Pro-Gly、Gly-Pro-Arg、Gly-Pro-Leu、Gly-Pro-Citが挙げられる。ジペプチドC末端伸長部(B2)の非限定的な例としては、Gly-Ser、Gly-Pro、Val-Cit、Gly-Arg、Gly-Citが挙げられる。単一アミノ酸C末端伸長部(B2)の非限定的な例としては、Gly、Ser、Ala、Arg、Lys、Cit、Val、Leu、Met、Thr、GlnまたはNleが挙げられる。上記の例では、ArgをLysで置き換えることができ、LysをArgで置き換えることができ、GluをAspで置き換えることができ、AspをGluで置き換えることができる。
ペプチド抗原(A)のC末端に連結されるC末端リンカー(B2)は、免疫プロテアソームとエンドソームプロテアーゼ両方による認識(すなわち、加水分解)のために選択することができる。非限定的な例では、配列PA8-PA7-PA6-PA5-PA4-PA3-PA2-PA1を有するペプチド抗原(A)は、配列PC1’-PC2’-PC3’-PC4’(ここで、PC1’は、グリシン、アラニンまたはセリンから選択され、PC4’は、アルギニン、リシン、シトルリン、グルタミン、トレオニン、ロイシン、ノルロイシンまたはメチオニンから選択される)を有するC末端テトラペプチド伸長部(B2)、例えばSer-P3-P2-Arg、のC末端に連結される。一部の実施形態では、配列PA8-PA7-PA6-PA5-PA4-PA3-PA2-PA1を有する抗原は、配列PC1’-PC2’-PC3’-PC4’-PC5’-PC6’(ここで、PC1’およびPC2’は、グリシン、アラニン、プロリンまたはセリンから選択され、PC6’は、アルギニン、リシン、シトルリン、グルタミン、トレオニン、ロイシン、ノルロイシンまたはメチオニンから選択される)を有するC末端ヘキサペプチド伸長部(B2)、例えばGly-Gly-PC3’-PC4’-PC5’-Arg、のC末端側に連結される。ペプチド抗原(A)のC末端に連結される、免疫プロテアソームとカテプシンの両方によるプロセシングを促進する、C末端伸長部(B2)の非限定的な例は、Gly-Gly-Lys-Pro-Leu-Arg(配列番号12)である。免疫プロテアソームおよびカテプシンによるプロセシングに有利に働く、ペプチド抗原(A)のC末端に連結されるC末端伸長部(B2)のさらなる非限定的な例は、Gly-Gly-Ser-Leu-Val-CitまたはGly-Gly-Ser-Pro-Val-Citである。
リンカー(L)およびリンカー前駆体(X1およびX2)
ペプチド抗原(A)と疎水性分子(H)または粒子(P)を部位選択的にカップリング、すなわち、互いに結合または連結させる、特異的機能を果たすリンカーのサブセットは、「リンカー(L)」と呼ばれる。リンカー(L)は、リンカー前駆体X1とリンカー前駆体X2との反応の結果として形成する。例えば、ペプチド抗原(A)に直接、または伸長部(B1もしくはB2)もしくは荷電分子(C)を介して間接的に連結されるリンカー前駆体X1は、疎水性分子(H)または粒子(P)に結合されているリンカー前駆体X2と反応して、ペプチド抗原(A)を疎水性分子(H)または粒子(P)に連結させるリンカー(L)を形成することができる。リンカー前駆体X1は、粒子(P)または疎水性分子(H)へのペプチド抗原(A)の部位選択的連結を可能にする。一部の実施形態では、直接または伸長部(B1もしくはB2)によってのどちらかで、リンカー前駆体X1に連結されているペプチド抗原(A)を生成し、単離し、次いで、ペプチド抗原(A)を粒子(P)または疎水性分子(H)に結合させるリンカー(L)を形成するように選択的に反応するリンカー前駆体X2を含有する粒子(P)または疎水性分子(H)に、別々に付加させることができる。
ペプチド抗原(A)と疎水性分子(H)または粒子(P)を部位選択的にカップリング、すなわち、互いに結合または連結させる、特異的機能を果たすリンカーのサブセットは、「リンカー(L)」と呼ばれる。リンカー(L)は、リンカー前駆体X1とリンカー前駆体X2との反応の結果として形成する。例えば、ペプチド抗原(A)に直接、または伸長部(B1もしくはB2)もしくは荷電分子(C)を介して間接的に連結されるリンカー前駆体X1は、疎水性分子(H)または粒子(P)に結合されているリンカー前駆体X2と反応して、ペプチド抗原(A)を疎水性分子(H)または粒子(P)に連結させるリンカー(L)を形成することができる。リンカー前駆体X1は、粒子(P)または疎水性分子(H)へのペプチド抗原(A)の部位選択的連結を可能にする。一部の実施形態では、直接または伸長部(B1もしくはB2)によってのどちらかで、リンカー前駆体X1に連結されているペプチド抗原(A)を生成し、単離し、次いで、ペプチド抗原(A)を粒子(P)または疎水性分子(H)に結合させるリンカー(L)を形成するように選択的に反応するリンカー前駆体X2を含有する粒子(P)または疎水性分子(H)に、別々に付加させることができる。
リンカー(L)またはリンカー前駆体X1を、ペプチド抗原(A)に、このペプチド抗原のN末端またはC末端のどちらかにおいて、直接、またはN末端伸長部(B1)もしくはC末端伸長部(B2)によって間接的に、のどちらかで、それぞれ連結させることができる。好ましい実施形態では、リンカー(L)またはリンカー前駆体X1は、ペプチド抗原(A)または伸長部(B1もしくはB2)にアミド結合によって連結される。ペプチド抗原のN末端またはC末端に直接連結されたリンカー(L)またはリンカー前駆体X1が伸長部と見なされないことに留意されたい。
適するリンカー前駆体X1は、粒子(P)または疎水性分子(H)上のリンカー前駆体X2と選択的に反応し、ペプチド抗原(A)または必要に応じた伸長部(B1および/もしくはB2)または必要に応じた荷電分子(C)のいずれの他の部位においても連結が生じないものである。この選択性は、ペプチド抗原(A)を修飾することなくペプチド抗原(A)と粒子(P)または疎水性分子(H)との連結を確実に形成できるようにするのに重要である。リンカー(L)は、ペプチド抗原(A)を粒子(P)または疎水性分子(H)に共有結合性および/または高親和性相互作用によって直接または伸長部(B1もしくはB2)によって間接的に連結させることができる。好ましい実施形態では、リンカー前駆体X1は、粒子または疎水性分子(H)上のリンカー前駆体X2と共有結合を形成する。
好ましい実施形態では、リンカー(L)は、リンカー前駆体X1とX2間の生体直交型「クリックケミストリー」反応の結果として形成される。一部の実施形態では、クリックケミストリー反応は、無触媒クリックケミストリー反応、例えば、銅の使用もいかなる触媒の使用も必要としない歪み促進型アジド-アルキン付加環化反応である。生体直交型反応を可能にするリンカー前駆体X1の非限定的な例としては、アジド、アルキン、テトラジンおよびトランスシクロオクテンから選択される官能基を含む分子が挙げられる。一部の実施形態では、アジドを含むリンカー前駆体X1は、リンカー前駆体X2と反応してトリアゾールリンカーを形成する。他の実施形態では、テトラジンを含むリンカー前駆体X1は、トランスシクロオクテン(transyclooctene)(TCO)を含むリンカー前駆体X2と反応して、逆要求型ディールス・アルダーライゲーション(inverse demand Diels-Alder ligation)産物を含むリンカーを形成する。好ましい実施形態では、リンカー前駆体X1は、1,3-双極性付加環化を受けて安定したトリアゾール環を形成する、存在するアルキンを含むリンカー前駆体X2と反応するアジド官能基を有する非天然アミノ酸である。好ましい実施形態では、粒子(P)または疎水性分子(H)に連結されるX2リンカー前駆体は、歪み促進型付加環化を受けるアルキン、例えば、ジベンゾシクロオクチン(DBCO)を含む。さらなる実施形態では、X1リンカー前駆体は、粒子(P)または疎水性分子(H)上に存在する、アジドを含むリンカー前駆体X2と反応するアルキンである。
他の実施形態では、ペプチド抗原(A)の組成に依存して部位選択的反応性を可能にするリンカー前駆体X1は、チオール、ヒドラジン、ケトンおよびアルデヒドを含む官能基を含みうる。一部の実施形態では、チオールを含むリンカー前駆体X1は、ピリジル-ジスルフィドまたはマレイミドを含むリンカー前駆体X2と反応して、それぞれ、ジスルフィドまたはチオエーテルリンカーを形成する。他の実施形態では、ヒドラジンを含むリンカー前駆体X1は、ケトンまたはアルデヒドを含むリンカー前駆体X2と反応して、ヒドラゾンリンカーを形成する。一部の実施形態では、リンカー前駆体X1は、マレイミドまたはピリジルジスルフィドなどのチオール反応性官能基を含むリンカー前駆体X2と反応する、システインなどのチオール官能基を有する天然または非天然アミノ酸残基である。
一部の実施形態では、リンカー前駆体X1は、粒子(P)または疎水性分子(H)上に備えられているリンカー前駆体X2を構成する別のペプチド配列にライゲーションされる、ペプチド配列である。他の実施形態では、リンカー前駆体X1は、粒子(P)または疎水性分子(H)上のリンカー前駆体X2を構成する相補的分子と、高親和性、非共有結合性、相互作用によって、例えば、コイルドコイル相互作用または静電相互作用によって、結合する。他の実施形態では、リンカー前駆体X1は、タンパク質、例えばストレプトアビジン、と高親和性相互作用を形成するタンパク質、例えばビオチン、と結合する。
リンカー前駆体X1およびX2に選択される官能基の適切なペア、または相補的分子が、X1とX2間で置き換え可能でありうることは、当業者には認識される。例えば、トリアゾールから構成されるリンカーを、アジドおよびアルキンをそれぞれ含むリンカー前駆体X1およびX2から形成してもよく、またはアルキンおよびアジドをそれぞれ含むリンカー前駆体X1およびX2から形成してもよい。したがって、リンカーを生じさせる結果となる任意の適する官能基ペアを、X1またはX2のどちらに配置してもよい。
本開示で提供される特定のリンカー前駆体(X1およびX2)およびリンカー(L)は、製造性の予想外の向上および生物活性の向上をもたらす。多くのそのようなリンカー前駆体(X1およびX2)およびリンカー(L)は、本発明の実施に適切でありえ、至る所でより詳細に説明される。
リンカー前駆体(X1)を、ペプチド抗原(A)のN末端またはC末端のどちらかに、直接、または伸長部(B1もしくはB2)もしくは荷電分子(C)によって間接的に、のどちらかで、結合させることができる。
一部の実施形態では、リンカー前駆体X1は、ペプチド抗原(A)のC末端に、直接、またはB2伸長部もしくは荷電分子(C)によって間接的に、のどちらかで、連結されるアミノ酸であり、式:
(式中、官能基(FG)は、リンカー前駆体X2上のFGと特異的に反応するように選択され、通常は、アミン、アジド、ヒドラジンまたはチオールから選択され;R1は、通常は、OHまたはNH2から選択され;y1は、任意の整数、例えば、1、2、3、4、5、6、7または8であり;このアミノ酸のアルファアミンは、通常は、伸長部B2のC末端アミノ酸に、またはB2伸長部がない場合はペプチド抗原(A)のC末端アミノ酸に、連結される)を有する。
他の実施形態では、リンカー前駆体X1は、ペプチド抗原(A)のN末端に、直接、または伸長部(B1もしくはB2)もしくは荷電分子(C)によって間接的に、のどちらかで、連結され、式:
(式中、官能基(FG)は、リンカー前駆体X2と反応するように選択され、通常は、アミン、アジド、ヒドラジンまたはチオールから選択され;y2は、任意の整数、通常は、1、2、3、4、5、6、7または8であり;カルボニルは、通常は、伸長部B1の、またはB1が存在しない場合はペプチド抗原(A)の、N末端アミノ酸のアルファアミンに、連結される)を有する。
疎水性分子(H)または粒子(P)上に備えられているリンカー前駆体X2は、リンカー(L)を形成するためのリンカー前駆体X1との選択的反応を可能にするように選択される官能基を含む。一部の実施形態では、X2を構成する官能基は、リンカー前駆体X1上に備えられているアミンまたはヒドラジンと反応して、アミドまたはヒドラゾンを含むリンカー(L)を形成する、カルボニル、例えば、活性化エステル/カルボン酸またはケトンを含む。他の実施形態では、X2を構成する官能基は、リンカー前駆体X1上に備えられているアルキンと反応してトリアゾールを形成する、アジドを含む。さらに他の実施形態では、X2を構成する官能基は、リンカー前駆体X1上に備えられているチオールと反応して、チオエーテルまたはジスルフィドを含むリンカー(L)を形成する、マレイミドまたはジスルフィドから選択される。リンカー前駆体X2を任意の適する手段によって疎水性分子(H)または粒子(P)に結合させることができる。一部の実施形態では、疎水性分子(H)はペプチドを含み、X2は、ペプチドベースの疎水性分子(H)のN末端に連結される。
リンカー(L)は、アジドおよびアルキンをそれぞれ含むリンカー前駆体X1およびX2間で形成されたトリアゾールを含みうる。一部の実施形態では、トリアゾールを含むリンカーは、アジド含有リンカー前駆体X1と、アルキン(例えば、シクロオクチン)含有リンカー前駆体X2の反応の結果として生じる。一部の実施形態では、アジド含有リンカー前駆体X1は、ペプチド抗原(A)もしくは伸長部(B1)のN末端にまたはペプチド抗原(A)もしくは伸長部(B2)のC末端に連結される、アジド官能基を有する非天然アミノ酸である。アジド官能基は、ペプチド抗原(A)に直接、またはN末端伸長部(B1)もしくはC末端伸長部(B2)を介して間接的に、のどちらかで、連結されている反応性ハンドル(reactive handle)であって、疎水性分子(H)または粒子(P)に連結されているアルキン(例えば、シクロオクチン)含有リンカー前駆体X2と選択的に反応することによって、ペプチド抗原(A)を疎水性分子(H)または粒子(P)に結合させるトリアゾールリンカー(L)を形成する、反応性ハンドルを提供する。
一部の実施形態では、リンカー前駆体X1は、ペプチド抗原(A)のC末端に、直接、またはB2伸長部もしくは荷電分子(C)によって間接的に、のどちらかで、連結されるアジドアミノ酸であり、式:
(式中、アミノ酸のアルファアミンは、B2の、またはB2伸長部がない場合にはペプチド抗原(A)の、C末端アミノ酸に連結され;R1は、OHまたはNH2から選択され;nは、任意の整数、例えば、1、2、3、4、5、6、7、8である)
を有する。アジド含有リンカー前駆体X1の非限定的な例は、5-アジド-2-アミノペンタン酸、4-アジド-2-アミノブタン酸および3-アジド-2-アミノプロパン酸である。
を有する。アジド含有リンカー前駆体X1の非限定的な例は、5-アジド-2-アミノペンタン酸、4-アジド-2-アミノブタン酸および3-アジド-2-アミノプロパン酸である。
他の実施形態では、アジド含有リンカー前駆体X1が、N末端伸長部(B1)に連結されるか、またはB1が存在しない場合にはペプチド抗原(A)のN末端に直接連結される場合、リンカー前駆体X1は、式:
(式中、カルボニルは、通常は、伸長部B1の、またはB1が存在しない場合にはペプチド抗原(A)の、N末端アミノ酸のアルファアミンに連結され;y2は、任意の整数、通常は、1、2、3、4、5、6、7または8である)
を有する。アジド含有リンカー前駆体の非限定的な例としては、6-アジド-ヘキサン酸、5-アジド-ペンタン酸、4-アジド-ブタン酸および3-アジド-プロパン酸が挙げられる。
を有する。アジド含有リンカー前駆体の非限定的な例としては、6-アジド-ヘキサン酸、5-アジド-ペンタン酸、4-アジド-ブタン酸および3-アジド-プロパン酸が挙げられる。
リンカー前駆体X1がアジドを含む、一部の実施形態では、リンカー前駆体X2は、アルキン部分を含む。アルキンの非限定的な例としては、脂肪族アルキン、シクロオクチン、例えばジベンジルシクロオクチン(DBCOまたはDIBO)、ジフルオロオクチン(DIFO)、およびビアリールアザシクロオクチノン(BARAC)が挙げられる。一部の特定の実施形態では、アルキン含有リンカー前駆体X2は、DBCO分子を含む。
一部の実施形態では、C末端伸長部(B2)は、ペプチド抗原(A)に、ペプチド抗原(A)のC末端においてアミド結合によって連結され、そしてまたそれがリンカー(L)を介して疎水性ブロック(H)に連結される。そのようなC末端連結ペプチド抗原コンジュゲートの例は、(A)7~35-B2-L-H(式中、(A)7~35は、7~35個のアミノ酸を含むペプチド抗原を表す)である。非限定的な例では、オクタペプチド配列PA8-PA7-PA6-PA5-PA4-PA3-PA2-PA1を有するペプチド抗原(A)は、そのC末端で、アジド含有リンカー前駆体(X1)アジド-リシン(6-アジド2-アミノヘキサン酸、Lys(N3))に連結されているテトラペプチド伸長部(B2)、例えば、Ser-Leu-Val-Arg(配列番号7)に連結され、そしてまたそれが、疎水性分子(H)と連結されているシクロオクチン含有リンカー前駆体(X2)のジベンゾシクロオクチン(DBCO)部分と反応して、PA8-PA7-PA6-PA5-PA4-PA3-PA2-PA1-Ser-Leu-Val-Arg-Lys(N3-DBCO-H)を生成する。
一部の代替実施形態では、ペプチド抗原(A)は、ペプチド抗原(A)のN末端においてN末端伸長部(B1)に連結され、そしてまたそれがリンカー(L)を介して疎水性ブロック(H)に連結される。非限定的な例では、配列PA1’-PA2’-PA3’-PA4’-PA5’-PA6’-PA7’-PA8’を有するペプチド抗原は、そのN末端で、アジド-ペンタン酸(Azp)に連結されているテトラペプチド伸長部(PN4-PN3-PN2-PN1)、例えばSer-Leu-Val-Arg(配列番号7)に連結され、そしてまたそれが、疎水性分子(H)に連結されているシクロオクチン含有リンカー前駆体(X2)のジベンゾシクロオクチン(DBCO)部分と反応する:H-DBCO-Azp-Ser-Leu-Val-Arg-PA1’-PA2’-PA3’-PA4’-PA5’-PA6’-PA7’-PA8’。
他のリンカーおよび連結
リンカーは、一般に、ペプチド抗原コンジュゲートの任意の2つまたはそれより多くの異種分子を互いに結合させる任意の分子を指し、I)水溶解度を増大もしくは減少させる機能;II)ペプチド抗原コンジュゲートの任意の2成分、すなわち異種分子、間の距離を増加させる機能、III)剛性もしくは可撓性を付与する機能;またはIV)任意の2つもしくはそれより多くの異種分子間の連結の分解/加水分解の速度を制御/調節する機能、のうちのいずれか1つまたは複数をさらに果たすことができる。本明細書で使用される特定のタイプのリンカーが、指名される。リンカー(L)は、ペプチド抗原(A)を粒子(P)または疎水性分子(H)に、直接、または伸長部(B1もしくはB2)によって間接的に、のどちらかで、部位特異的に連結させるために使用される特定のタイプのリンカー分子である。ペプチド抗原(A)のN末端およびC末端にそれぞれ配置されるN末端およびC末端伸長部であるB1およびB2を、異種分子、例えば、荷電分子(C)、Linkr(L)、粒子(P)もしくは疎水性分子(H)、または任意の異種分子に連結させることができ、したがって、B1およびB2は、リンカーとして機能することができることに、留意されたい。明確にするために、ペプチド抗原(A)のN末端またはC末端に配置されたいずれの分子も、N末端またはC末端伸長部(B1またはB2)であるが、伸長部は、それが別の分子、例えば荷電分子(C)、に連結される場合、リンカーとしての機能を果たすこともできる。したがって、本明細書中で定義される通り、抗原のN末端またはC末端にあるリンカーは、常に伸長部(B1またはB2)であるが、伸長部は、必ずしもリンカーであるとは限らない。
リンカーは、一般に、ペプチド抗原コンジュゲートの任意の2つまたはそれより多くの異種分子を互いに結合させる任意の分子を指し、I)水溶解度を増大もしくは減少させる機能;II)ペプチド抗原コンジュゲートの任意の2成分、すなわち異種分子、間の距離を増加させる機能、III)剛性もしくは可撓性を付与する機能;またはIV)任意の2つもしくはそれより多くの異種分子間の連結の分解/加水分解の速度を制御/調節する機能、のうちのいずれか1つまたは複数をさらに果たすことができる。本明細書で使用される特定のタイプのリンカーが、指名される。リンカー(L)は、ペプチド抗原(A)を粒子(P)または疎水性分子(H)に、直接、または伸長部(B1もしくはB2)によって間接的に、のどちらかで、部位特異的に連結させるために使用される特定のタイプのリンカー分子である。ペプチド抗原(A)のN末端およびC末端にそれぞれ配置されるN末端およびC末端伸長部であるB1およびB2を、異種分子、例えば、荷電分子(C)、Linkr(L)、粒子(P)もしくは疎水性分子(H)、または任意の異種分子に連結させることができ、したがって、B1およびB2は、リンカーとして機能することができることに、留意されたい。明確にするために、ペプチド抗原(A)のN末端またはC末端に配置されたいずれの分子も、N末端またはC末端伸長部(B1またはB2)であるが、伸長部は、それが別の分子、例えば荷電分子(C)、に連結される場合、リンカーとしての機能を果たすこともできる。したがって、本明細書中で定義される通り、抗原のN末端またはC末端にあるリンカーは、常に伸長部(B1またはB2)であるが、伸長部は、必ずしもリンカーであるとは限らない。
ペプチド抗原コンジュゲートの任意の2成分、例えば、伸長部(B1またはB2)によって間接的に疎水性分子(H)に連結されるペプチド抗原(A)、を結合させるために使用されるリンカーは、いずれの適する手段によるものであってもよい。リンカーは、任意の2つまたはそれより多くの成分、すなわち、異種分子、例えば、ペプチド抗原(A)と疎水性分子(H)を結合させるために、共有結合性手段を使用することもあり、または非共有結合性手段を使用することもある。
好ましい実施形態では、リンカーは、ペプチド抗原コンジュゲートの任意の2成分を共有結合によって結合させる、すなわち連結させる、ことができる。共有結合は、ペプチド抗原コンジュゲートの任意の2成分、すなわち異種分子、を結合させるために使用される好ましい連結であり、被験体への投与の直後に、成分が、他方の成分、例えば、ペプチド抗原および疎水性分子(H)、から分散できないことを確実にする。さらに、共有結合性連結は、通常は、非共有結合性連結より高い安定性を提供し、ペプチド抗原コンジュゲートの各成分が、投与された各成分の割合またはほぼその割合で、抗原提示細胞に共送達されることを確保するのに役立つ。
共有結合性連結の非限定的な例では、クリックケミストリー反応によって、ペプチド抗原コンジュゲートの任意の2成分を連結させる、すなわち、互いに結合させる、トリアゾールを得ることができる。いくつかの実施形態では、クリックケミストリー反応は、歪み促進型[3+2]アジド-アルキン付加環化反応である。アルキン基およびアジド基を、ペプチド抗原コンジュゲートを構成するそれぞれの分子上に備えさせて、「クリックケミストリー」により連結させることができる。一部の実施形態では、アジド官能基を有するリガンド、例えばTLRアゴニストは、アルキン、例えばジベンジルシクロオクチン(DBCO)、などの適切な反応性基を有する疎水性分子(H)とカップリングされる。さらなる実施形態では、チオール官能基を有するX1リンカー前駆体は、ペプチド抗原(A)に直接、またはN末端もしくはC末端伸長部(B1もしくはB2)によってのどちらかで、連結される。アルキン、アルケン、マレイミドなどの、適切な反応性基を有する疎水性分子(H)にチオールを連結させ、その結果、チオエーテル結合を生じさせることができ、またはチオールをピリジルジスルフィドと反応させて、例えば、その結果、ジスルフィド連結を生じさせてもよい。一部の実施形態では、アミンを1つの分子上に備えさせ、そのアミンを、カルボン酸、酸塩化物もしくは活性化エステル(例えば、NHSエステル)などの任意の適する求電子基と反応させ、その結果、アミド結合を形成することにより、別の分子に連結させてもよく、またはアミンを、アルケンと(マイケル付加によって)、アルデヒドと、およびケトンと(シッフ塩基によって)反応させてもよい。好ましい実施形態では、リンカー前駆体X1、必要に応じたN末端およびC末端伸長部(B1およびB2)、必要に応じた荷電分子(C)、およびペプチド抗原(A)は、固相ペプチド合成により生成される単一ペプチド配列のように、アミド結合によって互いに連結される。共有結合、すなわち連結、を生じさせる結果となる多数の適する反応を利用することができ、そのような反応は、当業者には周知であろう。
任意の2つまたはそれより多くの異種分子、すなわち、ペプチド抗原コンジュゲートの明確に異なる成分、を結合させるために使用されるリンカーのタイプは、特定の機能を果たすように、およびその適用の具体的な要件を満たすように、選択することができる。通常は、リンカーは、成分がペプチド抗原(A)、粒子(P)または疎水性分子(H)、必要に応じたN末端およびC末端伸長部(B1およびB2)、必要に応じたリンカー(L)、必要に応じた荷電分子(C)、必要に応じた第2のポリマー(疎水性分子(H)に連結されている)、ならびに必要に応じたリガンド、例えばPRRアゴニストである、ペプチド抗原コンジュゲートの2つまたはそれより多くの異種分子間に共有結合を形成することができる。
当業者に周知である、多くの適するリンカーがあり、そのようなリンカーとしては、直鎖または分岐鎖炭素リンカー、ヘテロ環式炭素リンカー、剛性芳香族リンカー、可撓性エチレンオキシドリンカー、ペプチドリンカー、またはこれらの組み合わせが挙げられるが、それらに限定されない。一部の実施形態では、炭素リンカーは、C1~C18アルカンリンカー、例えば、低級アルキルC4含むことができ、アルカンリンカーは、2つまたはそれより多くの異種分子間の間隔を増加させる働きをすることができる一方、より長鎖のアルカンリンカーを使用して、疎水特性を付与することができる。あるいは、エチレンオキシドリンカーなどの親水性リンカーを、任意の2つまたはそれより多くの異種分子間の間隔を増加させるために、および水溶解度を増加させるために、アルカンリンカーの代わりに使用してもよい。他の実施形態では、リンカーは、剛性を付与する芳香族化合物またはポリ(芳香族)化合物でありうる。リンカー分子は、親水性リンカーを含むこともあり、疎水性リンカーを含むこともある。いくつかの実施形態では、リンカーは、細胞内酵素(例えば、カテプシンまたは免疫プロテアソーム)により切断可能である分解性ペプチド配列を含む。
一部の実施形態では、リンカーは、ポリ(エチレンオキシド)(PEG)から構成されうる。リンカーの長さは、リンカーの目的に依存する。例えば、PEGリンカーなどのリンカーの長さを、免疫原性組成物の成分を隔てるために、例えば、立体障害を低減させるために、増加させることができ、または親水性PEGリンカーの場合には、水溶解度を向上させるために使用することができる。PEGなどのリンカーは、長さ少なくとも2モノマーでありうる、短いリンカーであってもよい。PEGなどのリンカーは、長さ約4~約24モノマーの間、例えば、長さ4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24モノマーであってもよく、またはそれより長くてもよい。一部の実施形態では、リガンドは、PEGリンカーによって疎水性分子(H)に連結される。
リンカーが炭素鎖を含む一部の実施形態では、リンカーは、長さ約1または2~約18炭素の間、例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18炭素の、またはそれより炭素数が多い、鎖を含みうる。リンカーが炭素鎖を含む一部の実施形態では、リンカーは、約12~約20炭素の間の鎖を含みうる。リンカーが炭素鎖を含む一部の実施形態では、リンカーは、18炭素以下の鎖を含みうる。一部の実施形態では、PRRアゴニストなどのリガンドは、低級アルキルによって疎水性分子(H)に連結される。
一部の実施形態では、リンカーは、細胞内条件下で切断可能であり、したがって、リンカーの切断により、リンカーに連結されている任意の成分、例えばペプチド抗原が放出される結果となる。
例えば、リンカーは、細胞内小胞中(例えば、リソソームもしくはエンドソームもしくはカベオラ内)に局在する酵素により、またはサイトゾル中の酵素、例えば、プロテアソームもしくは免疫プロテアソームにより、切断可能でありうる。リンカーは、例えば、細胞内小胞中に局在するプロテアーゼ、例えば、リソソームまたはエンドソーム区画内のカテプシンを含むがこれらに限定されない、プロテアーゼ酵素により切断される、ペプチドリンカーでありうる。ペプチドリンカーは、通常は、1~10アミノ酸、例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10アミノ酸長であるか、またそれより長く(例えば、最大20)、例えば、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20アミノ酸長であるか、またはそれより長い。ある特定のジペプチドが、カテプシン、例えばカテプシンBおよびD、ならびにプラスミンを含む、プロテアーゼにより加水分解されることは、公知である(例えば、DubowchikおよびWalker、1999年、Pharm. Therapeutics 83巻:67~123頁を参照されたい)。例えば、チオール依存性プロテアーゼカテプシン-Bにより切断可能であるペプチドリンカー(例えば、Phe-LeuまたはGly-Phe-Leu-Gly(配列番号23)リンカー)を使用することができる。そのようなリンカーの他の例は、例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第6,214,345号に記載されている。特定の実施形態では、細胞内プロテアーゼにより切断可能なペプチドリンカーは、Val-CitリンカーまたはPhe-Lysリンカーである(例えば、Val-Citリンカーを用いるドキソルビシンの合成が記載されている、米国特許第6,214,345号を参照されたい)。
リンカー内の切断可能なペプチドの特定の配列を使用して、細胞内取込み後の免疫細胞によるプロセシングを促進することができる。例えば、本明細書で開示される免疫原性組成物のいくつかの実施形態は、水性条件で粒子を形成し、これらの粒子は、抗原提示細胞(例えば、樹状細胞)などの免疫細胞に内在化される。切断可能なペプチドリンカーを、免疫細胞による細胞内取込み後のペプチドリンカーのプロセシング(すなわち、加水分解)を促進するように、選択することができる。切断可能なペプチドリンカーの配列を、細胞内小胞中のカテプシンまたはサイトゾル空間内のプロテアソームもしくは免疫プロテアソームなどの、細胞内プロテアーゼによるプロセシングを促進するように、選択することができる。
いくつかの実施形態では、式Pn...P4-P3-P2-P1(式中、P1は、アルギニン、リシン、シトルリン、グルタミン、トレオニン、ロイシン、ノルロイシンまたはメチオニンから選択され、P2は、グリシン、ロイシン、バリンまたはイソロイシンから選択され、P3は、グリシン、セリン、アラニン、プロリンまたはロイシンから選択され、P4は、グリシン、セリン、アルギニン、リシン、アスパラギン酸またはグルタミン酸から選択される)のペプチド配列から構成されるリンカーが、カテプシンによる認識を促進するために使用される。非限定的な例では、アミド結合によって異種分子に連結されている式P4-P3-P2-P1のテトラペプチドリンカーは、配列Lys-Pro-Leu-Arg(配列番号8)を有する。明確にするために、アミノ酸残基(Pn)は、P1残基のC末端側にある切断部位の近位から遠位へと番号が付与され、例えば、P1-P1’間のアミド結合が加水分解される。カテプシンなどの、エンドソームおよびリソソームプロテアーゼによる切断を促進する、適するペプチド配列は、文献に十分に記載されている(参照:Choeら、J. Biol.Chem.、281巻:12824~12832頁、2006年)。
いくつかの実施形態では、ペプチド配列から構成されるリンカーは、プロテアソームまたは免疫プロテアソームによる認識を促進するように選択される。式Pn...P4-P3-P2-P1のペプチド配列は、プロテアソームまたは免疫プロテアソームによる認識を促進するように選択され、式中、P1は、塩基性残基および疎水性分岐残基、例えば、アルギニン、リシン、ロイシン、イソロイシンおよびバリンから選択され、P2、P3およびP4は、必要に応じて、ロイシン、イソロイシン、バリン、リシンおよびチロシンから選択される。非限定的な例では、プロテアソームにより認識される式P4-P3-P2-P1の切断可能なリンカーは、P1においてアミド結合によって異種分子に連結され、配列Tyr-Leu-Leu-Leu(配列番号24)を有する。プロテアソームまたは免疫プロテアソームによる分解を促進する配列を、単独で使用してもよく、またはカテプシン切断性リンカーと組み合わせて使用してもよい。一部の実施形態では、免疫プロテアソームプロセシングを促進するアミノ酸は、エンドソームプロテアーゼによるプロセシングを促進するリンカーに連結される。免疫プロテアソームによる切断を促進するための多数の適する配列が、文献に十分に記載されている(参照:Kloetzelら、Nat.
Rev. Mol.Cell Biol.、2巻:179~187頁、2001年、Huberら、Cell、148巻:727~738頁、2012年、およびHarrisら、Chem.Biol.、8巻:1131~1141頁、2001年)。
Rev. Mol.Cell Biol.、2巻:179~187頁、2001年、Huberら、Cell、148巻:727~738頁、2012年、およびHarrisら、Chem.Biol.、8巻:1131~1141頁、2001年)。
好ましい実施形態では、ペプチド抗原(A)のN末端およびC末端にそれぞれ連結されるN末端およびC末端伸長部(B1およびB2)は、さらなる分子、例えば、荷電分子(C)および疎水性分子(H)にそれぞれ連結され、切断可能なペプチドから構成される。いくつかの実施形態では、切断可能なペプチド伸長部は、ペプチド抗原(A)のN末端および/またはC末端のどちらかまたは両方に配置される。ペプチド抗原(A)のN末端に配置される切断可能なペプチド伸長部は、N末端伸長部(B1)であるが、伸長部が、ペプチド抗原に加えて、別の分子、例えば荷電分子(C)、に連結されるとき、リンカーとしてさらに機能することができる。ペプチド抗原(A)のC末端に配置される伸長部は、C末端伸長部(B2)であるが、伸長部が、別の分子、例えば疎水性分子(H)、に連結されるとき、リンカーとしてさらに機能することができる。N末端またはC末端のどちらかにおけるリンカー(B1およびB2)を構成する切断可能なペプチドの好ましい配列は明確に異なり、至る所でより詳細に説明される。
他の実施形態では、ペプチド抗原コンジュゲートの任意の2つまたはそれより多くの成分を、酸性条件下で加水分解に感受性であるpH感受性リンカーによって互いに結合させることができる。多数のpH感受性連結が、当業者に周知であり、例えば、ヒドラゾン、セミカルバゾン、チオセミカルバゾン、シス-アコニットアミド、オルトエステル、アセタール、ケタール、またはこれらに類するものを含む(例えば、米国特許第5,122,368号、同第5,824,805号、同第5,622,929号;DubowchikおよびWalker、1999年、Pharm.Therapeutics 83巻:67~123頁;Nevilleら、1989年、Biol.Chem.264巻:14653~14661頁を参照されたい)。好ましい実施形態では、連結は、生理的pHで、例えば約7.4のpHで、安定しているが、リソソームのpHである約pH5~6.5では加水分解される。一部の実施形態では、TLR-7/8アゴニストなどのリガンドは、疎水性分子(H)にpH感受性結合を形成するFGによって、例えば、pH不安定性ヒドラゾン結合を形成するようにケトンとヒドラジンとが反応することによって、連結される。他の実施形態では、ペプチド抗原(A)は、ケトン基を有するリンカー前駆体X1に、直接、または伸長部(B1もしくはB2)によって間接的に、のどちらかで、連結され、このリンカー前駆体X1が、疎水性分子(H)上にヒドラジンを含むリンカー前駆体X2に連結される。ヒドラゾンなどのpH感受性連結は、結合が、生理的pHで、約pH7.4で、安定しているが細胞内小胞のpHなどのより低いpH値では加水分解されるという、利点をもたらす。
他の実施形態では、リンカーは、還元条件下で切断可能である連結、例えば、還元性ジスルフィド結合を含む。ジスルフィド連結を導入するために使用される多くの異なるリンカーが、当技術分野において公知である(例えば、Thorpeら、1987年、Cancer Res.47巻:5924~5931頁;Wawrzynczakら、In Immunoconjugates: Antibody Conjugates in Radioimagery and Therapy of Cancer (C. W. Vogel編、Oxford U. Press、1987年);Phillipsら、Cancer Res.68巻:92809290頁、2008年を参照されたい)。米国特許第4,880,935号も参照されたい。一部の実施形態では、ペプチド抗原(A)は、チオール官能基を有するリンカー前駆体X1に、直接、または伸長部(B1もしくはB2)によって間接的に、のどちらかで、連結され、このリンカー前駆体X1が、疎水性分子(H)に連結されているピリジルジスルフィドを含むX2リンカー前駆体と、ジスルフィド結合を形成する。
なおさらなる実施形態では、ペプチド抗原コンジュゲートの任意の2成分間の連結を、酵素的反応、例えば、発現されたタンパク質のライゲーションにより、またはソルターゼ(参照:Fiererら、Proc.Natl.Acad.Sci.、111巻:W1176~1181頁、2014年およびTheileら、Nat. Protoc.、8巻:1800~1807頁、2013年)、化学酵素的反応(Smithら、Bioconjug.Chem.、25巻:788~795頁、2014年)または非共有結合性高親和性相互作用、例えば、ビオチン-アビジンおよびコイルドコイル相互作用など(Pecharら、Biotechnol.Adv.、31巻:90~96頁、2013年)または当業者に公知である任意の適する手段(参照:Chalkerら、Acc. Chem.Res.、44巻:730~741頁、2011年、Dumasら、Agnew Chem.Int.Ed.Engl.52巻:3916~3921頁、2013年)により、形成することができる。
粒子(P)または疎水性分子(H)
本開示の免疫原性組成物は、予め形成された粒子(P)または疎水性分子(H)をさらに含むペプチド抗原コンジュゲートを含む。粒子(P)を含むペプチド抗原コンジュゲートは、水性条件で粒子として存在する。一部の実施形態では、疎水性分子(H)を含むペプチド抗原コンジュゲートは、有機溶媒(例えば、DMSO)中で単一可溶性分子として存在しうるが、水性条件では集合して粒子を構築しうる。他の実施形態では、疎水性分子(H)を含むペプチド抗原コンジュゲートは、有機溶媒(例えば、DMSO)中および水性条件で、ある特定の温度およびpH範囲にわたって単一可溶性分子として存在しうるが、水性条件で、ある特定の温度およびpH範囲にわたって、例えば、生理的温度およびpHでは、集合して粒子を構築しうる。
本開示の免疫原性組成物は、予め形成された粒子(P)または疎水性分子(H)をさらに含むペプチド抗原コンジュゲートを含む。粒子(P)を含むペプチド抗原コンジュゲートは、水性条件で粒子として存在する。一部の実施形態では、疎水性分子(H)を含むペプチド抗原コンジュゲートは、有機溶媒(例えば、DMSO)中で単一可溶性分子として存在しうるが、水性条件では集合して粒子を構築しうる。他の実施形態では、疎水性分子(H)を含むペプチド抗原コンジュゲートは、有機溶媒(例えば、DMSO)中および水性条件で、ある特定の温度およびpH範囲にわたって単一可溶性分子として存在しうるが、水性条件で、ある特定の温度およびpH範囲にわたって、例えば、生理的温度およびpHでは、集合して粒子を構築しうる。
粒子(P)または疎水性分子(H)の目的は、薬物動態を調節するためのおよび抗原提示細胞による取込みを促進するための手段として、ペプチド抗原コンジュゲートを微粒子形式にさせることである。ペプチド抗原コンジュゲートにより形成される粒子は、直径約10nm~10,000nmの間のサイズであるべきである。好ましい実施形態では、粒子は、細胞(例えば、免疫細胞)のエンドソーム系に取り込まれることができるサイズである、ナノ粒子である。ナノ粒子は、直径約10nm~約500nmの平均サイズ範囲のものでありうる。したがって、一部の実施形態では、ナノ粒子は、平均すると直径約10nm、約20nm、約30nm、約40nm、約50nm、約100nm、200nm、300nm、400nmまたは500nmになりうる。他の実施形態では、ナノ粒子は、平均すると、直径約10~50nm、または約10~100nm、または約10~200nmまたは約10~500nmになりうる。好ましい実施形態では、粒径は、直径約20~200nmの範囲である。組成物中の粒子は、様々なサイズでありうるが、一般には、本明細書に示すサイズ範囲内に入ることになる。例えば、組成物中の粒子の50%より多く、55%より多く、60%より多く、65%より多く、70%より多く、75%より多く、80%より多く、85%より多く、90%より多く、91%より多く、92%より多く、93%より多く、94%より多く、95%より多く、96%より多く、97%より多く、98%より多く、または99%より多くが、本明細書に示すサイズ範囲内に入ることになる。一部の実施形態では、ペプチド抗原(A)を、粒子(P)または疎水性分子(H)に直接、またはリンカー(L)を介して連結されている伸長部(B1またはB2)に連結させることができ、これにより、集合して、大き過ぎて免疫細胞により取り込まれることができない粒子(例えば、約5,000nmより大きい粒子)が構築され、注射部位に貯留部を形成する。
一部の実施形態では、ペプチド抗原(A)は、予め形成された粒子(P)に連結される。粒子(P)は、水性条件で構造を保持する疎水性材料、例えば、ポリマーまたは脂質、架橋親水性ポリマー、例えばヒドロゲル、または架橋疎水性ポリマー、例えば架橋ポリスチレンから構成されうる。粒子(P)の非限定的な例としては、ポリマー粒子、例えば、ポリ(乳酸-co-グリコール酸)(PLGA)、ポリマーソームまたはポロキサマー(polaxmer);脂質ベースのミセル、リポソーム、または多重ラメラ小胞;水中油型エマルジョン、例えば、水中鉱油型および鉱油中水型エマルジョン;ならびに無機塩粒子、例えば、リン酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウム塩粒子(すなわち、ミョウバン)が挙げられる。一部の実施形態では、粒子(P)は、リポソームナノ粒子である。他の実施形態では、粒子(P)は、鉄粒子である。さらに他の実施形態では、粒子(P)は、ポリマー粒子である。
予め形成された粒子(P)へのペプチド抗原(A)の連結効率は、ペプチド抗原の性質および使用される連結のタイプに依存する。例えば、ペプチド抗原(A)を粒子(P)の内部に吸着するまたは組み込むことができ、ペプチド抗原(A)の性質が吸着および組込みに影響を与えうるので、この工程の効率を、各ペプチド抗原(A)について実験により決定することができる。ペプチド抗原(A)を粒子(P)に高親和性相互作用(例えば、静電的)または共有結合によって連結させることができ、この場合、粒子(P)は、設定された数の反応部位を有し、この数が、粒子(P)に連結させることができるペプチド抗原(A)の数を決定づけることになる。複数の異なるペプチド抗原(A)、例えば20の異なるペプチド抗原(A)、を含む免疫原性組成物については、各タイプのペプチド抗原(A)の複数のコピーを別々の粒子(P)上に送達してもよく、または20タイプすべてのペプチド抗原(A)の複数のコピーを同じ粒子(P)上に送達してもよい。
予め形成された粒子(P)の制約は、抗原の粒子(P)に対する比を容易に制御することができないことである。あるいは、好ましい実施形態では、ペプチド抗原(A)は、水性条件で粒子集合を促進する疎水性分子(H)に、直接またはリンカー(L)を介してのどちらかで、連結される。疎水性分子(H)に、直接またはリンカー(L)を介してのどちらかで、連結されている伸長部(B1またはB2)によって必要に応じて連結されるペプチド抗原(A)から構成されるペプチド抗原コンジュゲートは、分子的に規定された実体であり、ペプチド抗原(A)の疎水性分子(H)に対する比を正確に制御することができる。好ましい実施形態では、比は、ペプチド抗原(A)対疎水性分子(H) 1:1である。さらなる非限定的な例では、比は、ペプチド抗原(A)対疎水性分子(H) 1:3~3:1でありうる。
予め形成された粒子とは対称的に、ペプチド抗原コンジュゲートは、ペプチド抗原(A)を、直接、または伸長部(B1もしくはB2)および/もしくはリンカー(L)によって間接的に疎水性ブロック(H)に連結させて化学的に規定された単一分子を生成することにより、形成することができる。疎水性分子(H)は、実質的に制限された水溶解度しか有さない分子であるかまたは性質の点で両親媒性であり、水性条件で集合して超分子構造、例えば、ミセル粒子、ナノ粒子または微小粒子を構築することができる。好ましい実施形態では、疎水性分子(H)は、水性条件で下は約0.1mg/mLまたは約0.01mg/mLに至るまで不溶性であり、またはミセルを形成する。
疎水性分子(H)は、水性条件で分子が集合して粒子を構築する結果となる、制限された水溶解度しか有さないおよび/または両親媒特性を有する、高級アルカン、環式芳香族、脂肪酸、テルペン/イソプレンに由来する化合物、またはポリマーを含む任意の分子から選択することができる。例示的高級アルカンとしては、オクタン、ノナン、デカン、ウンデカン、ドデカン、トリデカン、テトラデカン、ペンタデカン、ヘキサデカン、ヘプタデカンおよびオクタデカンが挙げられるが、これらに限定されない。例示的環式芳香族としては、ベンゼンおよび縮合ベンゼン環構造またはヘテロ環式芳香族分子が挙げられるが、これらに限定されない。例示的飽和および不飽和脂肪酸としては、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸またはオレイン酸が挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、疎水性分子(H)は、脂肪酸、例えば、ミリスチン酸である。他の実施形態では、疎水性分子(H)は、ジアシル脂質、例えば、1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミンまたは1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミンまたはリポペプチド、例えばPam2Cys、を含む。一部の実施形態では、脂肪酸または脂質ベースの疎水性分子(H)は、PEGをさらに含みうる。テルペン/イソプレンに由来する例示的化合物としては、ステロール誘導体、例えばコレステロール、およびスクアレンが挙げられる。一部の実施形態では、疎水性分子(H)は、コレステロールを含む。
好ましい実施形態では、疎水性分子(H)は、制限された水溶解度しか有さないポリマーであるか、または両親媒性であり、水性条件で集合して粒子、例えばミセル、を構築することができる。例示的ポリマーとしては、PLGA、疎水性ポリ(アミノ酸)、ポリ(ベンジルグルタメート)、ポリスチレン、エチレンオキシドプロピレンオキシドモノマーに基づくポロキサマー、および温度応答性ポリマー、例えば、ポリ(N,N’-ジエチルアクリルアミド)、ポリ(N-n-プロピルアクリルアミド)(poly(N-n-propylacrlyamide))、ポリ(N-イソプロピルアクリルアミド)、ポリ[ジ(エチレングリコール)メタクリル酸メチルエーテル]、およびある特定のPEG化ポリ(アミノ酸)、例えばポリ(γ-(2-メトキシエトキシ)エステリル-L-グルタメート)が挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、疎水性分子(H)は、疎水性アミノ酸から構成されるポリ(アミノ酸)である。好ましい実施形態では、ポリ(アミノ酸)を含む疎水性分子(H)は、芳香族環を含むアミノ酸から構成される。他の実施形態では、疎水性分子(H)は、PRRアゴニストなどのリガンドに連結されているポリ(アミノ酸)である。他の実施形態では、疎水性分子(H)は、A-B型ジブロックコポリマーである。一部の実施形態では、ジブロックコポリマーは、温度応答性であり、温度シフトに応答して集合して粒子を構築することができる。一部の実施形態では、A-B型ジブロックコポリマーを含む疎水性分子(H)は、ジブロックコポリマーの一方のブロックに連結されたリガンド、例えばPRRアゴニスト、をさらに含む。ペプチド抗原コンジュゲートのための疎水性分子(H)として有用なポリマーは、下でより詳細に説明される。
ポリマー
疎水性分子(H)または粒子(P)は、直鎖または分岐ポリマーを含みうる。ポリマーは、ホモポリマー、コポリマーまたはターポリマーでありうる。ポリマーは、1タイプまたは多くの異なるタイプのモノマー単位から構成されうる。ポリマーは、統計的コポリマー(statistical copolymer)または交互コポリマーであることもある。ポリマーは、A-B型などのブロックコポリマーであることもあり、またはポリマーは、2つのポリマーがポリマー類似反応によって連結される、グラフト型コポリマーから構成されることもある。
疎水性分子(H)または粒子(P)は、直鎖または分岐ポリマーを含みうる。ポリマーは、ホモポリマー、コポリマーまたはターポリマーでありうる。ポリマーは、1タイプまたは多くの異なるタイプのモノマー単位から構成されうる。ポリマーは、統計的コポリマー(statistical copolymer)または交互コポリマーであることもある。ポリマーは、A-B型などのブロックコポリマーであることもあり、またはポリマーは、2つのポリマーがポリマー類似反応によって連結される、グラフト型コポリマーから構成されることもある。
疎水性分子(H)または粒子(P)は、天然に存在するおよび/または非天然モノマーならびにこれらの組み合わせを含む、ポリマーを含みうる。天然バイオポリマーは、アミノ酸から構成されるペプチド(ポリ(アミノ酸)と呼ばれることもある)を含むことがあり、具体的な例は、ポリ(トリプトファン)である。天然バイオポリマーが化学的に修飾されることもある。例えば、グルタミン酸またはリシン残基から構成されるバイオポリマーは、それぞれ、ガンマカルボキシルまたはイプシロンアミノ基が、リガンドの結合のために、修飾されることがある。バイオポリマーは、多糖であることもあり、多糖としては、グリコーゲン、セルロースおよびデキストランを挙げることができるが、これらに限定されない。さらなる例としては、アルギン酸塩およびキトサンを含む、自然界に存在する多糖が挙げられる。ポリマーはまた、天然に存在する小分子、例えば乳酸もしくはグリコール酸から構成されていてもよく、またはこれら2つのコポリマー(すなわち、PLGA)であってもよい。
一部の実施形態では、疎水性分子(H)または粒子(P)は、アニオン性(例えばポリ(酸性))ポリマー、またはカチオン性(例えばポリ(塩基性))ポリマー、またはアニオン性ポリマーとカチオン性ポリマーの組み合わせから構成される。カチオン性ポリマーは、静電相互作用により負荷電ペプチドと結合することができ、またはDNAおよびRNAなどの負荷電核酸との複合体化に有用でありうる。一部の実施形態では、ポリマーは、pH7.4では水不溶性双性イオンであるが、約6未満のpHでは正味正電荷を帯び、水溶性である。一部の実施形態では、第1のポリマーを含む疎水性分子(H)は、第2のポリマー上の負または正電荷とそれぞれ相補的である正電荷または負電荷を帯びており、第1のポリマーと第2のポリマーは、電荷中和によって静電複合体を形成し、電荷中和がこの複合体を不溶性にする。一部の実施形態では、カチオン性ポリマーは、天然に存在するまたは合成のポリ(アミン)、例えば、ポリ(リシン)またはポリ(エチレンイミン)(PEI)でありうる。さらなる実施形態では、カチオン性ポリマーは、アミンとビス(アクリルアミド)またはビス(アクリルエステル)とのマイケル付加反応から生成されるポリ(アミドアミン)(PAA)またはポリ(ベータアミノエステル)(PBAE)でありうる。開示される実施形態において使用することができるカチオン性ポリマーの非限定的な例としては、ポリ(エチレンイミン)、ポリ(アリルアニオン塩酸塩;PAH)、プトレシン、カダベリン、ポリ(リシン)(PL)、ポリ(アルギニン)、ポリ(トリメチレンイミン)、ポリ(テトラメチレンイミン)、ポリ(プロピレンイミン)、アミノグリコシド-ポリアミン、ジデオキシ-ジアミノ-b-シクロデキストリン、スペルミン、スペルミジン、カダベリン、ポリ(2-ジメチルアミノ)エチルメタクリレート、ポリ(ヒスチジン)、カチオン化ゼラチン、デンドリマー、キトサン、およびこれらの任意の組み合わせが挙げられる。カチオン性ポリマーは、メチル化キトサン上に存在するものなどの、第四級アンモニウム基を含有しうる。あるいは、ポリマーは、アニオン性ポリマーであってもよい。一部の非限定的な例では、ポリアニオン性ポリマーは、ポリ(グルタミン酸)である。代替実施形態では、ポリアニオン性ポリマーは、ポリ(アスパラギン酸)である。ポリマーは、ポリホスホエステル系ポリマーであることもある。ポリマーは、(1-4)連結されたβ-D-マンヌロネートおよびグルロン酸から構成される、例えばアルギン酸を含む、天然アニオン性多糖を含むこともある。ポリマーは、ヌクレオチドを含むこともある。他のポリアニオン性ポリマーも同様に適しうる。
一部の実施形態では、疎水性分子(H)は、ある特定のpH範囲にわたって水溶性カチオン性ポリマーであるが、生理的pH7.4付近のpH範囲では、非荷電であり、水不溶性である。一部の実施形態では、疎水性分子(H)は、芳香族アミンを含むポリマーであって、芳香族アミンの共役酸のpKaが7.5未満である、ポリマーである。芳香族アミンのpKa未満のpHで、芳香族アミンは、プロトン化され、したがって、ポリマーに正電荷を付与する。芳香族アミンを含むポリマーから構成される疎水性分子(H)の非限定的な例は、ポリ(フェニルアラニンアミン)である。一部の実施形態では、疎水性分子(H)は、窒素ヘテロ環を含むポリマーであって、ヘテロ環を構成する窒素原子のpKaが7.5未満である、ポリマーである。ヘテロ環を構成する窒素原子のpKa未満のpHで、窒素は、プロトン化し、ポリマーに正電荷を付与する。プロトン化可能な(すなわち塩基性の)窒素原子を有するヘテロ環を含むポリマーから構成される疎水性分子(H)の非限定的な例は、ポリ(ヒスチジン)である。本明細書において、本発明者らは、プロトン化可能な窒素(例えば、芳香族アミン)を含むポリマーから構成される疎水性分子が、製造、粒子安定性および生物活性の予想外の向上をもたらすという予想外の発見を報告する。
一部の実施形態では、疎水性分子(H)は、ポリ(ジエチレングリコールメチルエーテルメタクリレート)-(DEGMA)系ポリマーでありうる。さらなる実施形態では、疎水性分子(H)は、(メタ)アクリレート、(メタ)アクリルアミド、スチリルおよびビニル部分のモノマーを含みうるポリマーである。(メタ)アクリレート、(メタ)アクリルアミド、ならびにスチリル系およびビニル系モノマーの具体的な例としては、N-2-ヒドロキシプロピル(メタクリルアミド)(HPMA)、ヒドロキシエチル(メタクリレート)(HEMA)、スチレンおよびビニルピロリドン(PVP)がそれぞれ挙げられる。ポリマーは、N-イソプロピルアクリルアミド(NIPAAm)、N-イソプロピルメタクリルアミド(NIPMAm)、N,N’-ジエチルアクリルアミド(DEAAm)、N-(L)-(1-ヒドロキシメチル)プロピルメタクリルアミド(HMPMAm)、N,N’-ジメチルエチルメタクリレート(DMEMA)、2-(2-メトキシエトキシ)エチルメタクリレート(DEGMA)のモノマーから構成される熱応答性ポリマーでありうる。一部の実施形態では、疎水性ポリマーは、HPMAモノマー、またはHPMA・DEGMAモノマーを含む、ポリマーである。一部の実施形態では、HPMAおよびDEGMAモノマーを含むポリマーは、A-B型ジブロックポリマーである。本明細書で報告される予想外の発見は、HPMA親水性ブロックを含むA-B型ジブロックコポリマーに連結されたペプチド抗原(A)が、集合して、ペプチド抗原(A)組成とは無関係に均一なサイズのナノ粒子ミセルを構築するということである。
疎水性分子(H)は、環式ウレタン、環式エーテル、環式アミド、環式エステル、環式無水物、環式スルフィドおよび環式アミンを含む環式モノマーに基づくポリマーも含みうる。
環式モノマーを含むポリマーに基づく疎水性分子(H)は、開環重合により生成することができ、ポリエステル、ポリエーテル、ポリアミン、ポリカーボネート、ポリアミド、ポリウレタンおよびポリホスフェートを含み、具体的な例としては、ポリカプロラクトンおよびポリ(エチレンイミン)(PEI)を挙げることができるが、これらに限定されない。適するポリマーは、縮合反応によって生成することもでき、ポリアミド、ポリアセタールおよびポリエステルを含む。
一部の実施形態では、疎水性分子(H)は、3~10,000モノマー単位を含むことができるポリマーである。好ましい実施形態では、ポリマーは、3~300モノマー単位、例えば、3~10モノマー単位、例えば3、4、5、6、7、8、9、10モノマー単位、または約10~100モノマー単位、例えば10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、または約100~200モノマー単位、または約200~300モノマー単位、通常は1,000以下のモノマー単位を含む。一部の実施形態では、ポリマーは、最大1,000~10,000モノマー単位を含みうる。通常は、ペプチド抗原コンジュゲートの粒子形成を促進するのに十分なサイズの疎水性分子(H)を形成するために少なくとも5モノマーが必要であるが、意外なことに、芳香族環を含むわずか3つのモノマーを有するポリマーから構成された疎水性分子(H)が、ペプチド抗原コンジュゲートの粒子集合を駆動するのに十分であった。3モノマーから5モノマーへ、そして5モノマーから10モノマーへポリマーの長さを増加させると、粒子形成を促進する力の強度が増し、より安定性の高い、よりサイズの大きい粒子がペプチド抗原コンジュゲートにより形成されることになる。好ましい実施形態では、ペプチド抗原コンジュゲートを構成する疎水性分子(H)は、5~100の間のモノマーから構成されるポリマーであり、その結果、水性条件で直径おおよそ10~300nmの粒子が形成されることになる。さらなる実施形態では、疎水性分子(H)を構成するポリマーは、約300モノマーから構成され、集合して約20~500nmの間、または約100~500nmの粒子を構築するペプチド抗原コンジュゲートをもたらす。
一部の実施形態では、疎水性分子(H)を構成するポリマーの平均分子量は、約1,000~1,000,000g/molの間でありうる。好ましい実施形態では、ポリマーの平均分子量は、約1,000~60,000g/molの間である。一部の実施形態では、ポリマー分子量は、約1,000~5,000の間、または約5,000~10,000の間、または約10,000~20,000の間、または約20,000~30,000の間、または約25,000~60,000の間である。一部の実施形態では、疎水性分子(H)は、約10,000g/mol~約60,000g/mol、例えば、約10,000g/mol、20,000g/mol、30,000g/mol、40,000g/mol、50,000g/molまたは60,000g/molの平均分子量を有する、A-B型ジブロックポリマーである。一部の実施形態では、ポリマーは、AブロックとBブロックの分子量の比が約1:5~約5:1である、A-B型ジブロックポリマーである。非限定的な例では、約60,000g/molの平均分子量を有するA-B型ジブロックポリマーは、約10,000g/molの平均分子量を有するAブロックおよび約50,000g/molの平均分子量を有するBブロック;約20,000g/molの平均分子量を有するAブロックおよび約40,000g/molの平均分子量を有するBブロック;約30,000g/molの平均分子量を有するAブロックおよび約30,000g/molの平均分子量を有するBブロック;約40,000g/molの平均分子量を有するAブロックおよび約20,000g/molの平均分子量を有するBブロック;約50,000g/molの平均分子量を有するAブロックおよび約10,000g/molの平均分子量を有するBブロックから構成される。
ポリマーの多分散性、Mw/Mnは、約1.0~約5.0の範囲でありうる。ポリマーは、様々な重合技術によって形成することができる。ペプチドおよびヌクレオチド系ポリマーは、固相合成により調製することができ、ポリマーを分子的に規定すると1.0の多分散性を有することになる。連鎖成長重合により形成されるポリマーは、多分散性>1.0を有することになる。ポリマーは、リビング重合技術または溶液フリーラジカル重合によって合成することができる。好ましい実施形態では、ペプチド系バイオポリマーは、固相ペプチド合成により合成される。芳香族環を有するアミノ酸、例えばトリプトファン、を含むペプチド(または「ポリ(アミノ酸)」)系ポリマーは、水性条件で疎水性にもかかわらず、芳香族環のないペプチド(または「ポリ(アミノ酸)」)と比較して、固相合成による製造の予想外の向上をもたらした。したがって、好ましい実施形態では、固相合成により生成されるペプチドに基づく疎水性分子(H)は、芳香族環を含むアミノ酸を含む。さらなる実施形態では、アクリルアミド系およびアクリレート系ポリマーが可逆的付加-開裂連鎖移動(RAFT)重合により合成される。さらなる実施形態では、ポリ(アミノ酸)およびポリ(ホスホエステル)が開環重合により合成される。
一部の実施形態では、疎水性分子(H)は、リガンド(単数または複数)、例えばPRRアゴニスト、をさらに含むポリマーを含みうる。一部の実施形態では、ポリマーベースの疎水性分子(H)は、リガンドとカップリングさせることができる少なくとも1つの官能基、またはリガンドとカップリングさせることができるリンカーとカップリングさせることができる少なくとも1つの官能基を含むモノマーを含みうる。他の実施形態では、ポリマーベースの疎水性分子(H)は、ポリマーの末端および/または側鎖に連結されているリガンドを含みうる。
がんおよび感染性疾患の処置または予防のための免疫原性組成物の好ましい実施形態では、疎水性分子(H)は、リガンドに連結されるポリマーである。一部の実施形態では、ポリマーベースの疎水性分子(H)に連結されるリガンドは、芳香族環構造を含む。一部の実施形態では、ポリマーに連結されるリガンドは疎水性であり、水性条件でペプチド抗原コンジュゲートにより形成される粒子の安定性の増大を促進する。他の実施形態では、ポリマーベースの疎水性分子(H)に連結されるリガンドは、ヘテロ環式芳香族環を含む。一部の実施形態では、ポリマーベースの疎水性分子(H)に連結されるリガンドは、アリールアミンをさらに含む芳香族環を含む。一部の実施形態では、疎水性分子(H)に結合されるリガンドは、ヘテロ環式芳香族環を含む疎水性リガンドであり、必要に応じて、この疎水性リガンドは、芳香族アミン(すなわち、Ar-NH2)をさらに含む。疎水性分子(H)が、芳香族基を含むリガンドであって、必要に応じてヘテロ環および/またはアリールアミンを含むリガンドを含む、実施形態では、本発明者らは、そのような疎水性分子(H)が、DMSOおよびエタノールなど、薬学的に許容される有機溶媒に高度に可溶性であるが、水性緩衝液に不溶性であるという、予想外の発見を報告する。
一部の実施形態では、ポリマーベースの疎水性分子(H)に連結されるリガンドは、パターン認識受容体アゴニスト(PRRa)、例えば、アジュバント特性を有するSTING、NOD受容体、またはTLRのアゴニストである。ポリマーに連結される、アジュバント特性を有するリガンドは、PRRアゴニストなどのいずれの適するアジュバント化合物であってもよく、またはいずれの適するアジュバント化合物に由来してもよい。アジュバント特性を有する、適するリガンドは、小有機分子、すなわち、約3,000ダルトン未満の分子量を有する分子、を含む化合物を含むが、一部の実施形態では、アジュバントは、約700ダルトン未満の分子量を有することもあり、一部の場合には、アジュバントは、約200ダルトン~約700ダルトンの分子量を有することもある。
がんまたは感染性疾患の処置または予防に使用される免疫原性組成物の好ましい実施形態における疎水性分子(H)は、アジュバント特性を有するリガンドに連結されているポリマーである。PRRアゴニストなどの、アジュバント特性を有するリガンドを、ポリマーの側鎖または末端基に、任意の適するリンカーによって連結させることができる。一部の実施形態では、ポリマーベースの疎水性分子(H)を構成するモノマーは、アジュバント特性を有するリガンドとカップリングさせることができる少なくとも1つの官能基、またはアジュバント特性を有するリガンドとカップリングさせることができるリンカーとカップリングさせることができる少なくとも1つの官能基を含む側鎖を含む。ポリマーベースの疎水性分子(H)が、アジュバント特性を有するリガンドを含む、一部の実施形態では、ポリマーのモノマーのすべてが、アジュバント特性を有するリガンドに連結されている。疎水性分子(H)が、アジュバント特性を有するリガンドを含む、他の実施形態では、ポリマーのモノマーのすべてが、アジュバントに連結されているとは限らない。
疎水性分子(H)が、ポリマーの主鎖に沿って分布しているモノマー単位によって、アジュバント特性を有するリガンドに連結されているポリマーを含む、一部の実施形態では、ポリマー上のリガンドの密度を増加させると、ペプチド抗原(H)に対する免疫応答の予想外の向上に至る。
ある特定の実施形態では、PRRアゴニストなどの、アジュバント特性を有するリガンドの、ポリマーのモノマーに対するモル比は、約1:100~1:1 mol/mol(または約1mol%~約100mol%)、例えば、1:2.5~1:1 mol/molから選択することができる。
ポリマーに連結されている、PRRアゴニストなどの、アジュバント特性を有するリガンドの密度は、特定の適用の必要に応じて変えることができる。PRRアゴニストなどの、アジュバント特性を有するリガンドを、ポリマーに、1~100mol%、例えば、1~10mol%または50~100mol%に連結させることができる。mol%は、PRRアゴニストなどの、アジュバント特性を有するリガンドに連結されているポリマーを構成するモノマーのパーセンテージを指す。例えば、10mol%リガンド(例えば、PRRアゴニスト)は、合計100モノマー単位からの、リガンドに連結されている10モノマー単位に等しい。残りの90はリガンドに連結されていない、高分子形成モノマー単位でありうる。
ポリマーベースの疎水性分子(H)に連結されている、アジュバント特性を有するリガンドなどの、リガンドの密度は、ペプチド抗原コンジュゲートが、(i)DMSOなどの薬学的に許容される有機溶媒に可溶性であること、(ii)水性条件で、生理的温度およびpHで、安定したナノ粒子を形成することができること、ならびに/または(iii)被験体において免疫応答、特にT細胞応答、を誘導することができることを確保するように、選択するべきである。
ポリマーに連結されている、PRRアゴニストなどの、リガンドの最適な密度は、リガンドの組成ばかりでなく、ポリマー組成、ポリマー長にも依存する。リガンドが、水溶解度が低い、疎水性/両親媒性分子、例えば、イミダゾキノリンベースのToll様受容体-7および-8アゴニスト(TLR-7/8a)であり、単独でのポリマーが、水溶性である(すなわち、リガンドに連結されていないポリマーが水溶性である)場合、リガンドは、通常は、ポリマーに、ポリマーが約5~30の間のモノマー単位から構成されるときには約20~100mol%の密度で、ポリマーが30~100の間のモノマー単位から構成されるときには10~50mol%の密度、またはポリマーが100~300の間のモノマー単位から構成されるときには5~20mol%の間の密度で、連結されている。一般に、アジュバント特性を有するリガンドのmol%は、ポリマーが短いほど高く、ポリマーが長いほど低い。
10,000g/molより多い親水性または温度応答性ポリマーであって、N-2-ヒドロキシプロピル(メタクリルアミド)(HPMA)、ヒドロキシエチル(メタクリレート)(HEMA)、スチレン、ビニルピロリドン(PVP)、N-イソプロピルアクリルアミド(NIPAAm)、N-イソプロピルメタクリルアミド(NIPMAm)、N,N’-ジエチルアクリルアミド(DEAAm)、N-(L)-(1-ヒドロキシメチル)プロピルメタクリルアミド(HMPMAm)、N,N’-ジメチルエチルメタクリレート(DMEMA)、2-(2-メトキシエトキシ)エチルメタクリレート(DEGMA)または置換ポリ(ホスホエステル)から選択されるコモノマーに基づくポリマーに結合されている、アジュバント特性を有するリガンド、例えばPRRa、の最適な密度は、1~25%であり、例えば、ポリマーに結合されているアジュバントの密度は、約1%、約2%、約3%、約4%、約5%、約6%、約7%、約8%、約9%、約10%、約11%、約12%、約13%、約14%、約15%、約16%、約17%、約18%、約19%、約20%、約21%、約22%、約23%、約24%または約25%でありうる。
一部の実施形態では、疎水性分子(H)は、一方のブロックが疎水性であり、他方のブロックが親水性である、両親媒性A-B型ジブロックコポリマーである。疎水性分子(H)が、両親媒性A-B型ジブロックコポリマーであり、リガンドが、疎水性、例えば、イミダゾキノリンTLR-7/8アゴニストである、一部の実施形態では、リガンドは、好ましくは、疎水性ブロックに約1~50mol%の間、通常は約1~20mol%の密度で、連結されている。疎水性分子(H)が、両親媒性A-B型ジブロックコポリマーであり、リガンドが親水性である、一部の実施形態では、リガンドは、好ましくは、親水性ブロックに約1~20mol%の間の密度で、または親水性ブロックの親水性末端に連結されており、したがって、A-B型ジブロックコポリマーは、リガンドに対してセミテレケリックである。非限定的な例では、疎水性分子(H)は、HPMAブロックとDEGMAブロックとを含む温度応答性A-B型ジブロックコポリマーを含み、イミダゾキノリンTLR-7/8アゴニストがDEGMAブロックに約1~5mol%の間の密度で連結されている。さらなる非限定的な例では、疎水性分子(H)は、HPMAコポリマー疎水性ブロックとHPMAホモポリマー親水性ブロックとを含むA-B型ジブロックポリマーを含み、イミダゾキノリンTLR-7/8アゴニストがHPMAコポリマー疎水性ブロックに約20mol%の密度で連結されている。一部の実施形態では、疎水性分子は、トリブロックコポリマー、例えばA-B-A、または他のマルチブロックコポリマー組成である。
本明細書で報告される予想外の発見は、アジュバント特性を有するリガンドに連結されているHPMA親水性ブロックを含むA-B型ジブロックコポリマーに連結されているペプチド抗原(A)が、集合して、ペプチド抗原(A)組成とは無関係に均一なサイズのナノ粒子ミセルを構築するということであり、ナノ粒子ミセル形成のこの確実性向上は、T細胞免疫の規模増加と関連付けられた。非限定的な例では、ペプチド抗原(A)は、HPMAコポリマー疎水性ブロック(すなわち、p[(HPMA)-co-(MA-b-Ala-2B)])およびHPMAホモポリマー親水性ブロック(すなわち、p(HPMA))から構成されるジブロックコポリマーに、トリアゾールリンカー(Lys(N3)-DBCO)によって連結されて、ペプチド抗原コンジュゲートp{[(HPMA)-co-(MA-b-Ala-2B)]-b-p(HPMA)}-DBCO-(Lys(N3))-A(ここで、2Bは、化合物1とも呼ばれるTLR-7/8aである)が形成される。さらなる実施形態では、ペプチド抗原(A)は、DEGMAコポリマー疎水性ブロック(すなわち、p[(DEGMA)-co-(MA-b-Ala-2B)])およびHPMAホモポリマー親水性ブロック(すなわち、p(HPMA))から構成されるジブロックコポリマーに、トリアゾールリンカー(Lys(N3)-DBCO)によって連結されて、ペプチド抗原コンジュゲートp{[(DEGMA)-co-(MA-b-Ala-2B)]-b-p(HPMA)}-DBCO-(Lys(N3))-A(ここで、2Bは、化合物1とも呼ばれるTLR-7/8aである)が形成される。他の実施形態では、ペプチド抗原(A)は、アジュバント特性を有するリガンドに連結されているDEGMAホモポリマー(すなわち、2BXy-p[(DEGMA))およびHPMAホモポリマー親水性ブロック(すなわち、p(HPMA))から構成されるジブロックコポリマーに、トリアゾールリンカー(Lys(N3)-DBCO)によって連結されて、ペプチド抗原コンジュゲート2BXy-p{[(DEGMA)-co-(MA-b-Ala-2B)]-b-p(HPMA)}-DBCO-(Lys(N3))-Aが形成され、この場合、ペプチド抗原(A)および2BXy(化合物2とも呼ばれるTLR-7/8a)が、ポリマーの両端の単一部位に連結されており、これがポリマーをヘテロテレケリックにする。
いくつかの実施形態では、疎水性分子(H)は、グルタミン酸またはアスパラギン酸ならびに芳香族および/または疎水性アミノ酸、例えば、フェニルアラニン、アミノフェニルアラニンアミン(または「フェニルアラニンアミン」)、トリプトファン、チロシン、ベンジルグルタメート、ヒスチジン、ロイシン、イソロイシン、ノルロイシンおよびバリンのコモノマーから構成される、ポリ(アミノ酸)系ポリマーであり、アジュバント特性を有する1つまたは複数のリガンド、例えばPRRa、が、グルタミン酸のガンマカルボン酸またはアスパラギン酸のベータカルボン酸によってこのポリマーに結合されている。好ましい実施形態では、疎水性分子(H)は、グルタミン酸およびトリプトファンのコモノマーから構成されるポリ(アミノ酸)系ポリマーであって、アジュバント特性を有する1つまたは複数のリガンド、例えばPRRa、が、ガンマカルボン酸によってグルタミン酸残基に連結されている、ポリ(アミノ酸)系ポリマーである。さらなる実施形態では、疎水性分子(H)は、リシンならびに芳香族および/または疎水性アミノ酸、例えば、フェニルアラニン、アミノフェニルアラニン、ヒスチジン、トリプトファン、チロシン、ベンジルグルタメート、ロイシン、イソロイシン、ノルロイシンおよびバリンのコモノマーから構成される、ポリ(アミノ酸)系ポリマーであって、アジュバント特性を有する1つまたは複数のリガンド、例えばPRRa、が、リシンのイプシロンアミンによってポリマーに結合されている、ポリ(アミノ酸)系ポリマーである。好ましい実施形態では、疎水性分子(H)は、リシンおよびトリプトファンのコモノマーから構成されるポリ(アミノ酸)系ポリマーであって、アジュバント特性を有する1つまたは複数のリガンド、例えばPRRa、が、イプシロンアミンによってリシンに連結されている、ポリ(アミノ酸)系ポリマーである。疎水性分子(H)が、アジュバント特性を有する1つまたは複数のリガンド、例えばPRRa、に連結されている、ポリ(アミノ酸)コポリマーである、好ましい実施形態では、ポリマーは、長さ5~30アミノ酸の間であり、アジュバントは、20~100mol%、例えば、30%、50%、60%、80%および100mol%の密度で結合されている。さらなる実施形態では、リガンドは、ポリ(アミノ酸)ポリマー、すなわちセミテレケリックポリマー、の一端のみに結合されている。本明細書において、本発明者らは、ポリ(アミノ酸)系コポリマーから構成され、このポリマーに連結されている芳香族基、例えば、芳香族アミノ酸(例えば、フェニルアラニン、アミノフェニルアラニン、ヒスチジン、トリプトファン、チロシン、ベンジルグルタメート)または芳香族リガンド(例えば、イミダゾキノリン)をさらに含む、疎水性分子(H)が、脂肪族アミノ酸または脂肪族リガンドから主として構成されるポリ(アミノ酸)と比較して、有機溶媒溶解度の向上ならびにペプチド抗原コンジュゲートの粒子安定性および生物活性の向上によって、製造性の予想外の向上をもたらすという、予想外の発見を報告する。したがって、好ましい実施形態では、ポリ(アミノ酸)または他のクラスのポリマーから構成される疎水性分子(H)は、1つまたは複数の芳香族アミノ酸、および/または芳香族基を含むリガンドを含む。
さらなる実施形態では、疎水性分子(H)は、カルボン酸を有する、グルタミン酸、アスパラギン酸または非天然アミノ酸残基から全面的に構成されるポリ(アミノ酸)系ポリマーであって、アジュバント特性を有するリガンドが、グルタミン酸、アスパラギン酸または非天然アミノ酸残基のすべてに連結されており、すなわち、アジュバント特性を有するリガンドが、100mol%の密度で結合されている、ポリ(アミノ酸)系ポリマーである。さらなる実施形態では、疎水性分子(H)は、遊離アミンを有するリシンまたは非天然アミノ酸から全面的に構成されるポリ(アミノ酸)系ポリマーであり、アジュバント特性を有するリガンドは、リシンまたは非天然アミノ酸残基のすべてに連結されており、すなわち、アジュバントは、100mol%の密度で結合されている。さらなる実施形態では、γ-(2-メトキシエトキシ)エステリル-L-グルタメート)などのPEG化コモノマーが、コポリマーに温度応答特性を付与するために組み入れられる。他の実施形態では、温度応答性ポリマーをポリ(アミノ酸)のペンダント側鎖にグラフトさせて、グラフトコポリマーを形成することができる。さらなる実施形態では、温度応答性ポリマーをポリ(アミノ酸)ポリマーの末端に連結させて、温度応答性ジブロックポリマーを形成することができる。なおさらなる実施形態では、疎水性である第2のポリマーを、アジュバント特性を有するリガンドに連結されているポリ(アミノ酸)ポリマーにペンダント側鎖(pendant side group)によって連結させてグラフトコポリマーを形成することができ、またはそのようなポリ(アミノ酸)の末端に連結させてジブロックコポリマーを形成することができる。
式I中、R2は、通常は、水素、ヒドロキシルまたはアミンのうちの1つから選択される。一部の実施形態では、R2は、リガンドまたは別のポリマーに、任意の適するリンカー分子によって連結される。メチレン単位であるy3の数は、通常は1~6、例えば、1、2、3、4、5または6である。式Iのポリ(アミノ酸)のN末端アミンは、通常はリンカー前駆体X2に連結され、またはペプチド抗原(A)に、直接または伸長部(B1もしくはB2)を介してのどちらかで、連結されうる。モノマーの繰り返し数は、kにより示され、通常は3~300の間である。任意の適するリンカーであるXが、アジュバント特性を有する疎水性リガンドなどのリガンドをポリ(アミノ酸)主鎖に連結させるために使用される。一部の実施形態では、リンカーXを、リガンドに連結されている第2のポリマーに連結させることができる。一部の実施形態では、モノマーkを2つまたはそれより多くの異なるリガンドに連結させることができる。
一部の実施形態では、式Iのポリ(アミノ酸)系ポリマーは、
(式中、y4は、任意の整数、例えば、0~6、例えば0、1、2、3、4、5または6である)
である。リガンドを官能基(FG)に任意の適する手段によって連結させることができ、FGは、直接またはリンカーを介してのどちらかでの、リガンドの結合、すなわち連結、のための、アミン、カルボン酸、チオール、ヒドロキシル、アジド、アルキン、ヒドラジン、アルデヒドまたはケトンを含む、任意の適する官能基である。
である。リガンドを官能基(FG)に任意の適する手段によって連結させることができ、FGは、直接またはリンカーを介してのどちらかでの、リガンドの結合、すなわち連結、のための、アミン、カルボン酸、チオール、ヒドロキシル、アジド、アルキン、ヒドラジン、アルデヒドまたはケトンを含む、任意の適する官能基である。
式Iのポリ(アミノ酸)のN末端を任意の適する手段によってリンカー(L)によってペプチド抗原(A)に連結させることができる。一部の実施形態では、式Iのポリ(アミノ酸)のN末端は、ペプチド抗原(A)のC末端にまたはB2伸長部のC末端にアミド結合によって直接連結される。他の実施形態では、式Iのポリ(アミノ酸)のN末端は、ペプチド抗原(A)に直接または伸長部(B1もしくはB2)によって連結されているリンカー前駆体(X1)と反応する、リンカー前駆体(X2)に連結される。一部の実施形態では、シクロオクチン(例えば、DBCO)含有リンカー前駆体(X2)が、式Iのポリ(アミノ酸)のN末端に結合され、アジド含有リンカー前駆体(X1)と反応してトリアゾール結合を形成する。
一部の実施形態では、ポリ(アミノ酸)ベースの疎水性分子(H)は、疎水性アミノ酸(例えば、芳香族アミノ酸)、またはリガンドに連結されている疎水性アミノ酸(例えば、芳香族アミノ酸)およびアミノ酸、好ましくは有機溶媒中での製造中に可溶性であるが水性条件で粒子を形成することができる材料を生成するために、疎水性分子(H)の物理的および化学的特性を補うのにまたは調節するのに有用である、さらなるアミノ酸、例えば荷電または親水性アミノ酸、を含みうる。したがって、一部の実施形態では、疎水性分子(H)は、式:
を有するポリ(アミノ酸)系ポリマーである。
式IIのポリ(アミノ酸)系ポリマーは、通常はモノマーであるlと、必要に応じたモノマーであるm、nおよびoとを含む。R3は、通常は、水素、ヒドロキシルまたはアミンのうちの1つから選択される。一部の実施形態では、R3は、任意の適するリンカー分子によって疎水性分子(H)に連結される、リガンド、例えば、アジュバント特性を有するリガンド、または別のポリマーである。メチレン単位の数は、y5、y6、y7およびy8により示され、通常は1~6、例えば、1、2、3、4、5または6である。式Iのポリ(アミノ酸)のN末端アミンは、通常はリンカー前駆体X2に連結され、またはペプチド抗原(A)に、直接または伸長部(B1もしくはB2)を介してのどちらかで、連結されうる。典型的な実施形態では、式IIのポリ(アミノ酸)系ポリマーは、任意の天然または非天然アミノ酸から選択されるモノマーであるlを含み、式中、R4は、低級アルキルまたは芳香族基から選択され、ポリマー主鎖に疎水性を付与する。一部の実施形態では、式IIに含まれるR4は、
から選択することができ、ここで、R4のXは、任意の適するリンカーである。
一部の実施形態では、式IIのポリ(アミノ酸)系ポリマーは、必要に応じたコモノマーであるmを含み、コモノマーmは、任意の天然もしくは非天然アミノ酸、例えば、PEGアミノ酸スペーサー(例えば、式IIのmは、-NH-(CH2-CH2-O)y9-(CH2)y10-(CO)-であり、ここで、y9は、通常は1~24の間の、整数であり、y10は、通常は1~3の間の、整数である)、または小さい置換基を有するアミノ酸から選択され、式中、例えばR5は、水素、低級アルキル、またはヒドロキシルを含む低級アルキルから選択され、ポリマー主鎖の間隔または可撓性を増すために備えられている。一部の実施形態では、式IIに含まれるR5は、
から選択することができる。
一部の実施形態では、式IIのポリ(アミノ酸)系ポリマーは、任意の天然または非天然アミノ酸から選択される必要に応じたコモノマーであるnを含み、式中、R6は、恒久的にまたは特定のpHで、のどちらかで、電荷を帯びる官能基を含む任意の基から選択される。一部の実施形態では、式IIに含まれるR6は、
から選択することができる。
一部の実施形態では、式IIのポリ(アミノ酸)系ポリマーは、任意の天然または非天然アミノ酸から選択される必要に応じたコモノマーであるoを含み、式中、リガンドは、任意の適するリンカーXによってこのモノマー、o、に連結されている。リガンドは、アジュバント特性を有するリガンドであってもよい。式IIのポリ(アミノ酸)に連結されているリガンドは、性質の点で、疎水性であってもよく、親水性であってもよく、両親媒性であってもよく、荷電していてもよく、または中性であってもよい。モノマーoを含む式IIのポリ(アミノ酸)系ポリマーは、モノマーoに結合されているリガンドの性質を補うモノマー単位であるl、mおよびnをさらに含むことができる。
式IIのポリ(アミノ酸)系ポリマーにおいて、モノマーの繰り返し数は、l、m、nおよびoにより示され、l、m、nおよびoの合計は、通常は、3~300の間の任意の整数である。異なるタイプのモノマーであるl、m、nまたはoの各々は、同じであってもよく、または異なっていてもよい。「l」により示されるモノマーは、式IIのポリ(アミノ酸)系ポリマーに疎水性を付与する、すなわち、ポリマーを水不溶性疎水性分子(H)にする。疎水性モノマーであるlは、同じであってもよく、または異なっていてもよく、通常は、芳香族環を含む。好ましい実施形態では、疎水性モノマーであるlは、ヘテロ環式および/またはアミン置換芳香族環を含む。「m」により示される必要に応じたコモノマーは、ポリマー主鎖を構成する異なるモノマーの可撓性または間隔を増加させるために使用することができる。「n」により示される必要に応じたコモノマーは、荷電官能基を含む。「o」により示される必要に応じたコモノマーは、PRRアゴニストなどのリガンドの結合に使用される。一部の実施形態では、モノマーであるoに任意の適するリンカーによって連結されているリガンドは、PRRアゴニストである。一部の実施形態では、モノマーであるoは、正または負電荷を帯びているリガンドに連結され、反対の電荷のモノマーであるnに隣接している。一部の実施形態では、荷電コモノマーであるnは、このコモノマーnを含む官能基の反対の電荷の官能基を含むコモノマーであるoに隣接して配置され、これらの反対の電荷の結果として正味電荷がゼロとなり、したがって、モノマーnは、モノマーoに結合されているリガンドが帯びている電荷を中和するように機能する。
式IIのポリ(アミノ酸)系ポリマーを構成するモノマーであるl、m、nおよびoのパーセンテージは、具体的な適用に依存する。一部の実施形態では、式IIのポリ(アミノ酸)系ポリマーは、全面的にモノマーlから構成される。他の実施形態では、式IIのポリ(アミノ酸)系ポリマーは、コモノマーであるlおよびo、例えば、5~95mol%の間のモノマーlおよび約95~5mol%のモノマーoから構成される。一部の実施形態では、式IIのポリ(アミノ酸)系ポリマーは、コモノマーであるlおよびmを含み、この場合、mは、疎水性モノマーであるlの間に間隔、すなわち距離を設け、ポリマーの剛性を低下させることができる。他の実施形態では、式IIのポリ(アミノ酸)系ポリマーは、モノマーであるl、mおよびoを含み、この場合、モノマーmは、モノマーlおよびoを構成する嵩高い置換基間に間隔を設ける。他の実施形態では、式IIのポリ(アミノ酸)系ポリマーは、モノマーであるlおよびo、ならびに必要に応じてモノマーmおよびnを含み、この場合、モノマーnは、ポリマー主鎖の電荷を調節するために使用される。ある特定の実施形態では、式IIのポリ(アミノ酸)系ポリマーは、モノマーmおよびoから全面的に構成される。他の実施形態では、式IIのポリ(アミノ酸)系ポリマーは、モノマーm、nおよびoから、またはnおよびoだけから、全面的に構成される。さらに他の実施形態では、式IIのポリ(アミノ酸)系ポリマーは、モノマーl、m、nおよびoを含む。
式IIのポリ(アミノ酸)系ポリマーがアジュバントを含む場合、任意の適するリンカーを介してアジュバントに連結されているモノマーであるoによって表される、ポリマーを構成するモノマーのパーセンテージは、通常は10~60%であり、例えば、長さ20アミノ酸であるポリマーの2~12の間のアミノ酸がモノマーoである。式IIのポリ(アミノ酸)ポリマーの一部の実施形態では、lが、主モノマー単位である。さらなる実施形態では、式IIのポリ(アミノ酸)系ポリマーは、lモノマーから全面的に構成され、すなわち、すべてのモノマーが、lモノマーであり、この場合、必要に応じて、アジュバントが、ポリ(アミノ酸)の末端に、直接、または第2のポリマーを介してもしくは任意の適するリンカー分子によって間接的に、のどちらかで、結合する。
式IIのポリマーが、oモノマーを含むコポリマーである場合、リガンドは、ここで示されるようなポリマー主鎖に沿って分布しているペンダント官能基(FG)に連結されていることもある:
(式中、y11は、メチレン単位の数を示し、任意の整数、例えば、0~6、例えば0、1、2、3、4、5または6である)。官能基(FG)は、直接またはリンカーを介してのどちらかでの、リガンドの結合、すなわち連結を可能にする、アミン、カルボン酸、チオール、ヒドロキシル、アジド、アルキン、ヒドラジン、アルデヒドまたはケトンを含む、任意の適する官能基である。
アジュバント特性を有するリガンドを、本開示の疎水性分子(H)のいずれに連結させてもよい。ある特定の実施形態では、アジュバント特性を有するリガンドは、式IIのポリマーに連結される。アジュバント特性を有するリガンドを、式IIのポリ(アミノ酸)系ポリマーにoモノマー上のペンダント官能基(FG)によって連結させてもよく、ポリマーの末端に連結させてもよく、またはペンダント官能基(FG)にグラフトされているもしくはポリマーの末端にある別の分子もしくはポリマーによって間接的に連結させてもよい。好ましい実施形態では、モノマーoの官能基(FG)は、アジュバント特性を有するリガンド、または他のリガンド分子を、ポリ(アミノ酸)主鎖に、共有結合によって連結させる。一部の実施形態では、式IIのモノマーoを構成するFGを第2のポリマーに連結させることができる。式IIに含まれているFGは、カルボン酸、アルデヒド、ケトン、アミン、ヒドラジン、チオール、アジドもしくはアルキン、またはポリマー主鎖にリガンドもしくは別のポリマーを連結させるために使用することができる任意の適する官能基から選択することができる。
好ましい実施形態では、式IIのポリ(アミノ酸)のN末端は、リンカー前駆体X1およびX2の反応によって、リンカー(L)によってペプチド抗原(A)に、直接または伸長部(B1もしくはB2)によってのどちらかで、連結される。一部の実施形態では、式IIのポリ(アミノ酸)のN末端は、ペプチド抗原(A)のC末端にまたはB2伸長部のC末端にアミド結合によって直接連結される(すなわち、リンカー(L)は存在しない)。他の実施形態では、式IIのポリ(アミノ酸)のN末端は、ペプチド抗原(A)に直接または伸長部(B1もしくはB2)によって連結されているアジド含有リンカー前駆体(X1)と反応するシクロオクチン(DBCO)含有リンカー前駆体(X2)に連結される。
式Iまたは式IIのポリ(アミノ酸)は、N末端アミン、C末端カルボン酸によって、または必要に応じた側鎖によって、例えば、コモノマーの官能基によって、いずれかで、直接、またはリンカー(L)もしくは伸長部(B1もしくはB2)によって間接的に、ペプチド抗原(A)に連結させることができる、疎水性分子(H)である。一部の実施形態では、式Iまたは式IIのポリ(アミノ酸)は、ペプチド抗原(A)に連結され、その結果、式[C]-[B1]-A-[B2]-[L]-H、または[B1]-A-[B2]-[L]-H(C)(式中、[ ]は、その基が必要に応じたものであることを示す)のペプチド抗原コンジュゲートとなる、疎水性分子(H)である。
好ましい実施形態では、式Iまたは式IIのポリ(アミノ酸)は、疎水性分子(H)であり、そのN末端がリンカー(L)に連結されており、このリンカー(L)は、C末端伸長部(B2)に連結されており、このC末端伸長部(B2)は、ペプチド抗原(A)のC末端に連結されており、このペプチド抗原(A)は、N末端が、N末端伸長部(B1)に連結されており、このN末端伸長部(B1)は、荷電分子(C)に連結されている。
例えば、C-B1-A-B2-T-H
さらなる実施形態では、荷電分子(C)を、式IもしくはIIのポリ(アミノ酸)から構成される疎水性分子(H)に直接連結させることができ、または伸長部を介してペプチド抗原(A)に連結されているリンカー(L)を介して連結させることができる。ここで、A-B2-L(C)-Hについて、カッコの表記は、LがCとHの両方に連結されていることを示すことが意図される。
例えば、A-B2-L(C)-HまたはA-B2-L-H(C)
さらなる実施形態では、式Iまたは式IIのポリ(アミノ酸)は、疎水性分子(H)であり、そのN末端がリンカー(L)に連結されており、このリンカー(L)は、必要に応じた荷電(C)分子にも、ペプチド抗原(A)のC末端に連結されているC末端伸長部(B2)にも、連結されている。
例えば、A-B2-(C-L)-H
好ましい実施形態では、疎水性ブロックは、ポリ(アミノ酸)を含み、アジュバント特性を有するリガンドが、このポリ(アミノ酸)の主鎖に沿って分布している側鎖に結合している。アジュバント特性を有するリガンドは、性質の点で、疎水性であってもよく、または親水性であってもよく、荷電していてもよく、または非荷電であってもよい。好ましい実施形態では、アジュバント特性を有するリガンドは、PRRアゴニストである。
いくつかの実施形態では、アジュバント特性を有するリガンドは、パターン認識受容体(PRR)アゴニストでありうる。パターン認識受容体(PRR)アゴニストの非限定的な例としては、TLR-1/2/6アゴニスト(例えば、リポペプチドおよび糖脂質、例えば、Pam2cysまたはPam3cysリポペプチド)、TLR-3アゴニスト(例えば、dsRNA、例えばポリI:C、およびヌクレオチド塩基類似体)、TLR-4アゴニスト(例えば、リポ多糖(LPS)誘導体、例えばモノホスホリルリピドA(MPL)、および小分子は、ピリミドインドールの誘導体または類似体である)、TLR5アゴニスト(例えば、フラジェリン)、TLR-7および-8アゴニスト(例えば、ssRNAおよびヌクレオチド塩基類似体(イミダゾキノリン、ヒドロキシ-アデニン、ベンゾナフチリジンおよびロキソリビンの誘導体を含む))ならびにTLR-9アゴニスト(例えば、非メチル化CpG)、インターフェロン遺伝子刺激因子(STING)アゴニスト(例えば、環状ジヌクレオチド、例えば、環状ジアデニル酸一リン酸(cyclic diadenylate monophosphate))、C型レクチン受容体(CLR)アゴニスト(例えば、直鎖状であってもよく、または分岐していてもよい、様々な単、二、三およびポリマー糖、例えば、マンノース、Lewis-X三糖など)、RIG-I様受容体(RLR)アゴニスト、ならびにNOD様受容体(NLR)アゴニスト(例えば、細菌からのペプチドグリカンおよび構造モチーフ、例えば、メソ-ジアミノピメリン酸およびムラミルジペプチド)、ならびにこれらの組み合わせが挙げられる。いくつかの実施形態では、パターン認識受容体アゴニストは、TLRアゴニスト、例えば、イミダゾキノリンベースのTLR-7/8アゴニストでありうる。例えば、アジュバント特性を有するリガンドは、ヒトへの使用がFDAにより承認されている、イミキモド(R837)またはレシキモド(R848)でありうる。
いくつかの実施形態では、アジュバント特性を有するリガンドは、TLR-7アゴニスト、TLR-8アゴニスト、および/またはTLR-7/8アゴニストでありうる。多くの異なるイミダゾキノリン化合物を含む、非常に多くのそのようなアゴニストが、公知である。
イミダゾキノリンは、本明細書で開示される方法において使用される。イミダゾキノリンは、抗原提示細胞(例えば、樹状細胞)上のToll様受容体7および8(TLR-7/TLR-8)に結合することにより作用する合成免疫調節薬であって、構造的には、これらの受容体の天然リガンドであるウイルス1本鎖RNAを模倣する、合成免疫調節薬である。イミダゾキノリンは、縮合キノリン-イミダゾール骨格を含むヘテロ環式化合物である。その誘導体、塩(水和物、溶媒和物およびN-オキシドを含む)およびプロドラッグも、本開示により企図される。特定のイミダゾキノリン化合物は、当技術分野において公知であり、例えば、米国特許第6,518,265号および米国特許第4,689,338号を参照されたい。一部の非限定的な実施形態では、イミダゾキノリン化合物は、イミキモドでなく、および/またはレシキモドでない。
一部の実施形態では、アジュバント特性を有するリガンドは、5員窒素含有ヘテロ環式環に縮合している2-アミノピリジンを有する小分子でありえ、そのような小分子は、これらに限定されないが、イミダゾキノリンアミンおよび置換イミダゾキノリンアミン、例えば、アミド置換イミダゾキノリンアミン、スルホンアミド置換イミダゾキノリンアミン、尿素置換イミダゾキノリンアミン、アリールエーテル置換イミダゾキノリンアミン、ヘテロ環式エーテル置換イミダゾキノリンアミン、アミドエーテル置換イミダゾキノリンアミン、スルホンアミドエーテル置換イミダゾキノリンアミン、尿素置換イミダゾキノリンエーテル、チオエーテル置換イミダゾキノリンアミン、ヒドロキシルアミン置換イミダゾキノリンアミン、オキシム置換イミダゾキノリンアミン、6-、7-、8-または9-アリール、ヘテロアリール、アリールオキシまたはアリールアルキレンオキシ置換イミダゾキノリンアミン、およびイミダゾキノリンジアミンなど;アミド置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、スルホンアミド置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、尿素置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、アリールエーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、ヘテロ環式エーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、アミドエーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、スルホンアミドエーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、尿素置換テトラヒドロイミダゾキノリンエーテル、チオエーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、ヒドロキシルアミン置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、オキシム置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、およびテトラヒドロイミダゾキノリンジアミンを、これらに限定されないが、含むテトラヒドロイミダゾキノリンアミン;アミド置換イミダゾピリジンアミン、スルホンアミド置換イミダゾピリジンアミン、尿素置換イミダゾピリジンアミン、アリールエーテル置換イミダゾピリジンアミン、ヘテロ環式エーテル置換イミダゾピリジンアミン、アミドエーテル置換イミダゾピリジンアミン、スルホンアミドエーテル置換イミダゾピリジンアミン、尿素置換イミダゾピリジンエーテル、およびチオエーテル置換イミダゾピリジンアミンを、これらに限定されないが、含むイミダゾピリジンアミン;1,2-架橋イミダゾキノリンアミン;6,7-縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン;イミダゾナフチリジンアミン;テトラヒドロイミダゾナフチリジンアミン;オキサゾロキノリンアミン;チアゾロキノリンアミン;オキサゾロピリジンアミン;チアゾロピリジンアミン;オキサゾロナフチリジンアミン;チアゾロナフチリジンアミン;ピラゾロピリジンアミン;ピラゾロキノリンアミン;テトラヒドロピラゾロキノリンアミン;ピラゾロナフチリジンアミン;テトラヒドロピラゾロナフチリジンアミン;ならびにピリジンアミン、キノリンアミン、テトラヒドロキノリンアミン、ナフチリジンアミンまたはテトラヒドロナフチリジンアミンと縮合している1H-イミダゾ二量体を含む。
式III中、R7は、水素、必要に応じて置換されている低級アルキル、または必要に応じて置換されている低級エーテルのうちの1つから選択され、R8は、必要に応じて置換されているアリールアミン、または必要に応じて置換されている低級アルキルアミンのうちの1つから選択される。R8を、ポリマーに連結するリンカーになるように、必要に応じて置換してもよい。予想外の発見は、R8が低級アルキルアミンから選択された一部の化合物では、化合物は、アリールアミンから選択されたR8より作用強度が弱かったが、応答の質は向上されたことであった。したがって、式IIIの中等度の作用強度のアジュバントが、より質の良い応答をもたらした。式IIIのアジュバントが、リガンドの1つのタイプであり、式IIIのアジュバント、またはアジュバント特性を有するリガンドと呼ばれることもあることに、留意されたい。
式IIIのアジュバントに連結されている式Iのポリ(アミノ酸)から構成される疎水性分子(H)の非限定的な例としては、
(式中、kは、3~300の間である)が挙げられる。例えば、k=5の場合、ペプチドは、式IIIのアジュバントに連結されている5個のアミノ酸から構成される。一部の実施形態では、式IIIのアジュバントに連結されている式Iのポリ(アミノ酸)から構成される疎水性分子(H)を、荷電分子(C)に任意の適する手段によって必要に応じて連結されているペプチド抗原(A)に、直接、またはリンカー(L)および/もしくは伸長部(B1もしくはB2)を介して間接的に、のどちらかで、連結させてペプチド抗原コンジュゲートを形成することができる。一部の実施形態では、式IIIのアジュバントに連結されている式Iのポリ(アミノ酸)のN末端は、ペプチド抗原(A)のC末端にまたはB2伸長部のC末端にアミド結合によって直接連結される。他の実施形態では、式IIIのアジュバントに連結されている式Iのポリ(アミノ酸)のN末端は、ペプチド抗原(A)に直接または伸長部(B1もしくはB2)によって連結されているリンカー前駆体(X2)と反応する、クリック可能なリンカー前駆体X2、例えばアルキンもしくはDBCO、またはチオール反応性リンカー前駆体X2、例えばマレイミド、に連結される。好ましい実施形態では、DBCOリンカー前駆体X1は、式IIIのアジュバントに連結されている式Iのポリ(アミノ酸)のN末端に結合し、ペプチド抗原(A)に直接または伸長部(B1もしくはB2)によってのどちらかで、連結されているアジド含有リンカー前駆体X2と反応するために使用される。
例えば、
(式中、コモノマーlは、通常は、3~300の間の整数であり、必要に応じたコモノマーoは、通常は、アミノ酸残基3~300の間の整数であり、lとoの合計は、通常は、約3~300の間である)。あるいは、oは、0であり、ポリマーは、全面的にlから構成され、すなわち、ポリマーは、アジュバントに連結されていないポリ(トリプトファン)ポリマーである。一部の実施形態では、式IIIのアジュバントに連結されている式IIのポリ(アミノ酸)のN末端は、ペプチド抗原(A)に、直接、またはリンカー(L)および/もしくは伸長部(B1もしくはB2)によって間接的に、のどちらかで、任意の適する手段によって、連結される。一部の実施形態では、式IIIのアジュバントに連結されている式IIのポリ(アミノ酸)のN末端は、ペプチド抗原(A)のC末端にまたはB2伸長部のC末端にアミド結合によって直接連結される。他の実施形態では、式IIIのアジュバントに連結されている式IIのポリ(アミノ酸)のN末端は、ペプチド抗原(A)に直接または伸長部(B1もしくはB2)によって連結されているリンカー前駆体X1と反応する、クリック可能なリンカー前駆体X2、例えばDBCO、またはチオール反応性リンカー前駆体X2、例えばマレイミド、に連結される。好ましい実施形態では、DBCOリンカー前駆体X2は、式IIIのアジュバントに連結されている式IIのポリ(アミノ酸)のN末端に結合され、アジド官能基を有するリンカー前駆体X1と反応するために使用される。
本明細書で開示される予想外の発見は、ペプチド抗原コンジュゲートの疎水性分子(H)を構成する式IIIのアジュバントに連結されている式Iまたは式IIのどちらかのポリ(アミノ酸)の長さ、すなわち、そのようなポリ(アミノ酸)のモノマー単位の数が、ペプチド抗原(A)に対して生成されるT細胞応答の規模に影響を及ぼす主要決定因子であるということである。したがって、5つまたはそれより多くのモノマー単位を有する式Iまたは式IIのポリ(アミノ酸)から構成される疎水性分子(H)から構成されるペプチド抗原コンジュゲートは、長さ5アミノ酸未満である同じ式のポリ(アミノ酸)と比較して高いT細胞応答の質および規模を促進することが判明した。さらなる発見は、式Iまたは式IIのポリ(アミノ酸)に連結されている式IIIのアジュバントの数が、生成される免疫応答の規模にも影響を及ぼし、式IIIのアジュバントを3つまたはそれより多く含む式IまたはIIの疎水性分子(H)を含むペプチド抗原コンジュゲートが、式IIIのアジュバントを3つ未満含む式IまたはIIの疎水性分子(H)を含むペプチド抗原コンジュゲートと比較して大規模なT細胞応答をもたらしたことであった。これらの発見の非限定的な説明は、式IIIのアジュバントに連結されている式Iまたは式IIの疎水性分子(H)の長さの増加により、たとえ親水性ペプチド抗原に連結された場合でも、ミセルまたは他の超分子構造が確実に形成されるということ、およびそのような粒子の形成が、ことによると、可溶性材料ではなく粒子に起因する薬物動態および細胞取込みの向上によって、免疫応答の向上をもたらすということである。さらなる非限定的な説明は、式IIIのアジュバントに連結されている式Iまたは式IIのポリ(アミノ酸)から構成される疎水性分子(H)の長さを増加させると、水性緩衝液中でペプチド抗原コンジュゲートにより形成される粒子の安定性、例えば、動力学的安定性が向上されることになり、粒子の安定性の向上が、粒子がインタクトなままであることを確実にし、それによって、粒子を構成するペプチド抗原コンジュゲートのクリアランス(腎クリアランスまたは肝クリアランスどちらかの)が遅延され、抗原提示細胞による取込みが促進されるということである。
本明細書で開示されるさらなる予想外の発見は、ペプチド抗原コンジュゲートの疎水性分子(H)を構成する式Iまたは式IIのポリ(アミノ酸)に連結されている式IIIのアジュバントの作用強度が、複数回の免疫化後にペプチド抗原に対して生成されるT細胞応答の規模および幅に逆に関係することが判明したことである。したがって、開示される本明細書において、本発明者らは、化合物1とも呼ばれる式IIIのアジュバント(式中、
R7=
およびR8=
)に連結されている式Iのポリ(アミノ酸)が、化合物2とも呼ばれる式IIIのアジュバント(式中、R7=
およびR8=
)に連結されている式Iのポリ(アミノ酸)と比較してT細胞応答のより大きな規模および広いT細胞応答の幅をもたらすことを示す。
R7=
非限定的な説明は、式IIIのアジュバント(式中、R7=
)のより低い作用強度が、式IIIのアジュバント(式中、R7=
)より少ない炎症をもたらすということ、およびより低い作用強度のアゴニストにより誘導される中等度の炎症が、より少ないT細胞応答疲弊につながり、それによって、全体としてT細胞応答のより大きな規模および広い幅が得られるということである。
開示される本明細書において、本発明者らは、化合物1である式IIIのアジュバント(式中、R7=
およびR8=
)に連結されている式IIのポリ(アミノ酸)に基づく疎水性分子(H)が、ポリ(アミノ酸)ポリマーが5~10の間のアミノ酸から構成され、コポリマーの60~100%の間が、式IIIのアジュバントに連結されているコモノマーoから構成される場合、T細胞応答の規模および質の有意な増加をもたらすという、予想外の発見を報告する。好ましい実施形態では、コモノマーoは、式IIのポリ(アミノ酸)のモノマー単位の20~60%の間、例えば60%、を構成する。
本明細書で開示される予想外のデータは、疎水性分子(H)を含むポリマーの長さ、ならびに結合されている、アジュバント特性を有するリガンド(すなわち、式IIIのTLR-7/8アゴニスト)の数および作用強度が、ペプチド抗原コンジュゲートとして送達されるペプチド抗原(A)に対して生成される免疫応答の規模および質の主要決定因子であることを明示する。これらのデータは、疎水性アミノ酸および/またはリガンドに連結されているアミノ酸から構成される、ポリ(アミノ酸)から構成される疎水性分子(H)が、粒子集合を駆動するポリ(アミノ酸)ベースの疎水性分子(H)の傾向を無効にする高親水性ペプチド抗原(A)を含む、いかなるペプチド抗原(A)に連結されたときにも、粒子形成を可能にするのに十分な長さであるべきであることを示唆する。不十分な長さ、例えば、長さ3アミノ酸未満のポリ(アミノ酸)は、ある特定のペプチド抗原、特に、高い電荷密度を有する親水性ペプチド抗原、に連結された場合、水性条件で粒子形成を促進するのに十分な疎水性表面積を提供することができない。したがって、本明細書で開示する通り、式Iまたは式IIのポリ(アミノ酸)は、3アミノ酸より長い長さ、好ましくは、長さ5~30アミノ酸の間、例えば、長さ5、6、7、8、9、10、20または30アミノ酸であるべきである。より長いポリ(アミノ酸)、例えば、30アミノ酸より長い、例えば、長さ約30、40または50アミノ酸のポリ(アミノ酸)は、例えば固相ペプチド合成により、生成されうる。固相ペプチド合成の代案として、溶液重合反応を使用して、疎水性モノマーから構成される長鎖ポリ(アミノ酸)を生成してもよい。
本明細書において、本発明者らは、108ナノモル濃度のin vitroで決定されたTLR-7活性(すなわち、EC50)についての作用強度を有する化合物1が、18.7ナノモル濃度のin vitroで決定されたTLR-7活性(すなわち、EC50)についての作用強度を有する、より作用強度の強いアゴニストである化合物2と比較して、反復免疫化後のT細胞応答の向上をもたらすという、さらなる予想外の発見を開示する。これらのデータは、免疫原性組成物に含まれるアジュバントの作用強度を、免疫応答を最適化するように調節することができること、およびアジュバントによる自然免疫活性化を、T細胞免疫を最適化するために必要とされる適切なレベルの刺激をもたらすように加減することができることを示唆する。ペプチド抗原コンジュゲートを用いて中等度の作用強度のアゴニスト(すなわち、EC50>100ナノモル濃度であるアゴニスト)を複数回、例えば3回もしくはそれより多く送達することにより、またはより作用強度の高いアゴニスト(すなわち、EC50<100ナノモル濃度であるアゴニスト)を3回未満送達することにより、自然免疫刺激レベルを加減することができる。
様々なTLR-7アゴニスト、TLR-8アゴニスト、および組み合わせTLR-7・TLR-8アゴニストの作用強度を、文献から容易に突き止めることができる。イミダゾキノリンベースのおよびアデニンベースのTLR-7およびTLR-7/8アゴニストは、記載されており(参照:Shuklaら、J. Med. Chem.、53巻:4450~4465頁、2010年およびGersterら、J. Med.Chem.、2005年、米国特許第6,069,149号、およびHirotaら、J. Med.Chem.、45巻:5419~5422頁、2002年、これらは参照により本明細書に組み込まれる)、式IIIのアジュバントのR2に選択される芳香族リンカー、例えばベンジルおよびキシリルリンカーが、式IIIのアジュバントのR2が低級アルキルから選択された化合物と比較して、TLR-7に対する作用強度が増した化合物をもたらすことを明らかにする。
本明細書に記載される予想外の発見に基づくと、式IIIのアジュバントに連結されている式Iまたは式IIのポリ(アミノ酸)から構成される疎水性分子(H)の好ましい実施形態は、式IIIのアジュバントに連結されているコモノマーの密度が20~100mol%の間である場合、通常は、長さ5~30アミノ酸の間である。必要に応じて、式IIIのアジュバントが、低級アルキルから選択されるR8を含む場合、例えば、化合物1の場合、化合物1に連結されているアミノ酸の密度は、40~100%の間、例えば60%であるべきである。必要に応じて、式IIIのアジュバントが、芳香族から選択されるR8を含む場合、例えば、化合物2の場合、化合物2に連結されているアミノ酸の密度は、20%未満、または各ポリマー上の送達される化合物2の1~2分子の間であるべきである。
好ましい実施形態では、約10,000g/mol未満の分子量を有するポリマーであって、N-2-ヒドロキシプロピル(メタクリルアミド)(HPMA)、ヒドロキシエチル(メタクリレート)(HEMA)、スチレン、ビニルピロリドン(PVP)、N-イソプロピルアクリルアミド(NIPAAm)、N-イソプロピルメタクリルアミド(NIPMAm)、N,N’-ジエチルアクリルアミド(DEAAm)、N-(L)-(1-ヒドロキシメチル)プロピルメタクリルアミド(HMPMAm)、N,N’-ジメチルエチルメタクリレート(DMEMA)、2-(2-メトキシエトキシ)エチルメタクリレート(DEGMA)または置換ポリ(ホスホエステル)から選択されるコモノマーに基づくポリマーに連結されている、式IIIのアジュバントの密度は、約5~100mol%であり、例えば、ポリマーに結合されているアジュバントの密度は、約5~6%、約6~7%、約8~9%、約9~10%、約10~11%、約11~12%、約12~13%、約13~14%、約15~16%、約17~18%、約18~20%、約25%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%、または約100%でありうる。
好ましい実施形態では、10,000g/molより高い分子量を有するポリマーであって、N-2-ヒドロキシプロピル(メタクリルアミド)(HPMA)、ヒドロキシエチル(メタクリレート)(HEMA)、スチレン、ビニルピロリドン(PVP)、N-イソプロピルアクリルアミド(NIPAAm)、N-イソプロピルメタクリルアミド(NIPMAm)、N,N’-ジエチルアクリルアミド(DEAAm)、N-(L)-(1-ヒドロキシメチル)プロピルメタクリルアミド(HMPMAm)、N,N’-ジメチルエチルメタクリレート(DMEMA)、2-(2-メトキシエトキシ)エチルメタクリレート(DEGMA)または置換ポリ(ホスホエステル)から選択されるコモノマーに基づくポリマーに連結されている、式IIIのアジュバントの密度は、約1~25mol%であり、例えば、ポリマーに結合されているアジュバントの密度は、約1~2%、約2~3%、約3~4%、約5~6%、約6~7%、約7~8%、約8~9%、約9~10%、約10~11%、約11~12%、約13~14%、約14~15%、約16~17%、約17~18%、約19~20%、約20%、約21%、約22%、約23%、約24%、または約25%でありうる。
さらなる実施形態では、疎水性および/または温度応答性モノマーから構成される第2のポリマーが、式IIIのアジュバントに連結されている式Iまたは式IIのポリ(アミノ酸)の末端または側鎖のどちらかに連結される。
式IIIのアジュバントに連結されている式Iのポリ(アミノ酸)にグラフトされた温度応答性DEGMA系ポリマーから構成される疎水性分子(H)の非限定的例が、明確にするために、ここに提供される:
(式中、コモノマーkは、通常は、3~300の間の整数であり、コモノマーk’は、通常は、アミノ酸残基3~300の間の整数であり、kとk’の合計は、通常は、約3~300の間である)。好ましい実施形態では、kは、約3~10の間であり、kは、約1~10の間である。リンカーであるXは、任意の適するリンカー分子でありえ、mは、通常は、約10~300モノマー単位である。ポリ(アミノ酸)のN末端が、任意の適する手段によって、ペプチド抗原(A)に、直接またはリンカー(L)および/もしくは伸長部(B1もしくはB2)によって間接的に、のどちらかで、連結されて、さらなる荷電分子(C)を含むこともあるペプチド抗原コンジュゲートが形成される。
式IIIのアジュバントに連結されている式Iのポリ(アミノ酸)の末端に連結されている温度応答性DEGMA系ポリマーから構成される疎水性分子(H)の非限定的例が、明確にするために、ここに提供される:
(式中、コモノマーkは、通常は、3~100モノマー単位の間の整数である)。リンカーであるXは、任意の適するリンカー分子でありうる。好ましい実施形態では、k’は、約3~10モノマー単位の間である。ポリ(アミノ酸)のN末端が、任意の適する手段によって、ペプチド抗原(A)に、直接またはリンカー(L)および/もしくは伸長部(B1もしくはB2)によって間接的に、のどちらかで、連結されて、さらなる荷電分子(C)を含むこともあるペプチド抗原コンジュゲートが形成される。
式IIIのアジュバントに連結されている式Iのポリ(アミノ酸)の末端に連結されているポリホスホエステル系ポリマーから構成される疎水性分子(H)の非限定的例が、明確にするために、ここに提供される:
(式中、コモノマーkは、通常は、3~100モノマー単位の間の整数である)。リンカーであるXは、任意の適するリンカー分子でありうる。好ましい実施形態では、kは、約5~10モノマー単位の間であり、mは、約10~300モノマー単位の間である。ポリ(アミノ酸)のN末端が、任意の適する手段によって、ペプチド抗原(A)に、直接またはリンカー(L)および/もしくは伸長部(B1もしくはB2)によって間接的に、のどちらかで、連結されて、さらなる荷電分子(C)を含むこともあるペプチド抗原コンジュゲートが形成される。
式IIIのアジュバントに連結されている式Iのポリ(アミノ酸)の末端に連結されているポリ(ベンジルグルタメート)系ポリマーから構成される疎水性分子(H)の非限定的例が、明確にするために、ここに提供される:
(式中、コモノマーkは、通常は、3~100モノマー単位の間の整数であり、mは、通常は、アミノ酸残基50~300の間の整数である)。リンカーは、任意の適するリンカー分子でありうる。好ましい実施形態では、xは、約5~10モノマー単位の間であり、mは、約10~300モノマー単位の間である。ポリ(アミノ酸)のN末端が、任意の適する手段によって、ペプチド抗原(A)に、直接またはリンカー(L)および/もしくは伸長部(B1もしくはB2)によって間接的に、のどちらかで、連結されて、さらなる荷電分子(C)を含むこともあるペプチド抗原コンジュゲートが形成される。
非限定的な例では、ペプチド抗原(A)は、粒子(P)または疎水性分子(H)に連結されており、式IVのペプチド抗原コンジュゲート(式中、[ ]は、その基が必要に応じたものであることを示す)を得るための、必要に応じた伸長部(B1および/またはB2)および必要に応じたリンカー(L)をさらに含みうる。
[B1]-A-[B2]-[L]-P、[B1]-A-[B2]-[L]-H、P-[L]-[B1]-A-[B2]またはH-[L]-[B1]-A-[B2]
式IV
[B1]-A-[B2]-[L]-P、[B1]-A-[B2]-[L]-H、P-[L]-[B1]-A-[B2]またはH-[L]-[B1]-A-[B2]
式IV
式IVのペプチド抗原(A)は、整数のアミノ酸数、nから構成され、nは、通常は、7~35の間、例えば、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34または35アミノ酸であり、疎水性分子(H)は、通常は、式IIIのアジュバントに連結されている式IまたはIIのポリ(アミノ酸)である。
カテプシン切断性テトラペプチド伸長部(B1=Lys-Pro-Leu-Arg 配列番号8)にN末端が、および式IIIのアジュバントに連結されている式Iのポリ(アミノ酸)から構成される疎水性分子(H)に連結されているトリアゾールリンカー(L)に連結されている組み合わせた免疫プロテアソーム・カテプシン切断性ヘキサペプチド伸長部(B2=Gly-Gly-Ser-Leu-Val-Arg 配列番号13)にC末端が、必要に応じて連結されている、ペプチド抗原(A)から構成される式IVのペプチド抗原コンジュゲートの非限定的な例が、一例としてここに示される:
必要に応じた荷電分子(C)
本明細書で開示されるペプチド抗原コンジュゲートは、粒子(P)または疎水性分子(H)に連結されているペプチド抗原(A)から構成され、必要に応じた伸長部(B1および/またはB2)、必要に応じたリンカー(L)、および必要に応じた荷電分子(C)をさらに含むことがあり、ここで、C=は、静電荷を付与する官能基を有する荷電分子を示す。粒子(P)にまたは水性条件で集合して粒子を構築する疎水性分子(H)に連結されているペプチド抗原を含む、本明細書で開示される免疫原性組成物は、粒子を安定させるのに十分な表面電荷がないと凝結しうる。したがって、荷電分子(C)を、必要に応じて、粒子を安定させて凝結を防止する手段としてペプチド抗原コンジュゲートに連結させてもよく、または、代替的に、荷電分子(C)を、粒子を安定させる手段として、ペプチド抗原コンジュゲートを含む粒子に組み込んでもよい。したがって、荷電分子(C)の目的は、ペプチド抗原コンジュゲートにより形成される粒子の安定性を促進する手段として、これらの粒子の正味電荷を制御することである。
本明細書で開示されるペプチド抗原コンジュゲートは、粒子(P)または疎水性分子(H)に連結されているペプチド抗原(A)から構成され、必要に応じた伸長部(B1および/またはB2)、必要に応じたリンカー(L)、および必要に応じた荷電分子(C)をさらに含むことがあり、ここで、C=は、静電荷を付与する官能基を有する荷電分子を示す。粒子(P)にまたは水性条件で集合して粒子を構築する疎水性分子(H)に連結されているペプチド抗原を含む、本明細書で開示される免疫原性組成物は、粒子を安定させるのに十分な表面電荷がないと凝結しうる。したがって、荷電分子(C)を、必要に応じて、粒子を安定させて凝結を防止する手段としてペプチド抗原コンジュゲートに連結させてもよく、または、代替的に、荷電分子(C)を、粒子を安定させる手段として、ペプチド抗原コンジュゲートを含む粒子に組み込んでもよい。したがって、荷電分子(C)の目的は、ペプチド抗原コンジュゲートにより形成される粒子の安定性を促進する手段として、これらの粒子の正味電荷を制御することである。
荷電分子(C)は、約7.4のpHの水性緩衝液中で正または負に荷電している1つまたは複数の官能基を有する任意の分子を指す。荷電分子(C)を構成する官能基は、部分または完全電荷整数値でありうる。荷電分子(C)は、単一の荷電官能基または複数の荷電官能基を有する分子であることがある。荷電分子(C)の正味電荷は、正、負または中性でありうる。荷電分子(C)を構成する官能基の電荷は、荷電分子(C)が分散される溶液のpHに依存することもあり、または依存しないこともあり、例えば、それぞれ、pH依存性およびpH非依存性である、第三級アミンおよび第四級アンモニウム化合物の場合がそうである。分子の電荷は、当業者に公知である分子のルイス構造および容認されている方法に基づいて、容易に推定することができる。電荷は、誘起効果の結果として生じることもあり、例えば、電子親和性に差がある互いに結合している原子は、部分的に負に荷電した原子と部分的に正に荷電した原子とを生じさせる結果となる、極性共有結合をもたらすこともある。例えば、水素と結合している窒素は、結果的に、窒素上に負の部分電荷をもたらし、水素原子上に正の部分電荷をもたらす。あるいは、分子中の原子は、その原子に割り当てられた電子の数が、その原子の原子番号未満であるか、またはその原子番号に等しい場合、完全電荷整数値を有すると考えることができる。分子の電荷は、その分子を構成する各原子の電荷を合算することにより決定される。当業者は、分子中の各原子の形式電荷を合算することにより、分子の電荷を推定する方法を熟知している。
荷電分子(C)は、正味負電荷、正味正または中性電荷のいずれかを帯びることができ、本明細書で開示される本発明の特定の適用に必要とされるペプチド抗原コンジュゲートの正味電荷に依存する。例えば、ほとんどの細胞表面が正味負電荷を帯びていることは公知である。したがって、正の正味電荷を有する粒子は、高い程度の特異性を持たずにすべての細胞表面と相互作用しうる。対照的に、負の正味電荷を有する粒子は、ほとんど細胞表面からの静電反発を受けることになるが、ある特定の抗原提示細胞集団による選択的取込みを促進することが証明されている。例えば、循環に静脈内送達された正荷電粒子は、肝臓および肺にはもちろん脾臓の抗原提示細胞内にも蓄積することが判明しており、その一方で、負荷電粒子は、静脈内投与後に脾臓の抗原提示細胞内に優先的に蓄積することが判明している。したがって、荷電分子(C)の正味電荷を、適用の特定の要求を満たすように調整することができる。
一部の実施形態では、荷電分子(C)は、正味負電荷を有し、生理的pHで、約7.4のpHで、負電荷を帯びる官能基から構成される。正味負電荷を帯びている、適する荷電分子(C)としては、生理的pHで、約7.4のpHで、酸の共役塩基として存在する官能基(例えば、約6.5未満のpKaを有する官能基)を有する分子が挙げられる。これらは、カルボキシレート、スルフェート、ホスフェート、ホスホルアミデートおよびホスホネートを有する分子を含むが、これらに限定されない。カルボキシレートを有する荷電分子(C)は、これらに限定されないが、グルタミン酸、アスパラギン酸、ピルビン酸、乳酸、グリコール酸、グルクロン酸、シトレート、イソシトレート、アルファ-ケト-グルタレート、スクシネート、フマレート、マレートおよびオキサロアセテートならびにこれらの誘導体でありうる。好ましい実施形態では、負荷電分子(C)は、1~20の間の負荷電官能基、例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20の負荷電官能基であるが、通常は16以下の負荷電官能基を有する分子から構成される。一部の実施形態では、荷電分子(C)は、2~6アミノ酸の間の長さのポリ(グルタミン酸)ペプチドである。1、2、3、4、5または6アミノ酸から構成されるポリ(グルタミン酸)配列は、pH7.4でそれぞれ-1、-2、-3、-4、-5および-6の負電荷を帯びていると予想される。さらなる実施形態では、荷電分子(C)は、ホスホセリンまたはスルホセリンである。
ある特定の実施形態では、荷電分子(C)は、正味負電荷を有し、1つまたは複数の負荷電アミノ酸から構成される。好ましい実施形態では、正味負電荷を有する荷電分子(C)は、1~20の間の負荷電アミノ酸、例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20の負荷電アミノ酸から構成される。非限定的な例では、荷電分子(C)は、16のアスパラギン酸モノマー、例えば、Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp(配列番号25)から構成され、-16の正味負電荷を有する荷電分子(C)を調製するために使用され;15のアスパラギン酸モノマー、例えば、Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp(配列番号26)、から構成される荷電分子(C)は、-15の正味負電荷を有する荷電分子(C)を調製するために使用され;14のアスパラギン酸モノマー、例えば、Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp(配列番号27)、から構成される荷電分子(C)は、-14の正味負電荷を有する荷電分子(C)を調製するために使用され;13のアスパラギン酸モノマー、例えば、Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp(配列番号28)、から構成される荷電分子(C)は、-13の正味負電荷を有する荷電分子(C)を調製するために使用され;12のアスパラギン酸モノマー、例えば、Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp(配列番号29)、から構成される荷電分子(C)は、-12の正味負電荷を有する荷電分子(C)を調製するために使用され;11のアスパラギン酸モノマー、例えば、Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp(配列番号30)、から構成される荷電分子(C)は、-11の正味負電荷を有する荷電分子(C)を調製するために使用され;10のアスパラギン酸モノマー、例えば、Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp(配列番号31)、から構成される荷電分子(C)は、-10の正味負電荷を有する荷電分子(C)を調製するために使用され;9つのアスパラギン酸モノマー、例えば、Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp(配列番号32)、から構成される荷電分子(C)は、-9の正味負電荷を有する荷電分子(C)を調製するために使用され;8つのアスパラギン酸モノマー、例えば、Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp(配列番号33)、から構成される荷電分子(C)は、-8の正味負電荷を有する荷電分子(C)を調製するために使用され;7つのアスパラギン酸モノマー、例えば、Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp(配列番号34)、から構成される荷電分子(C)は、-7の正味負電荷を有する荷電分子(C)を調製するために使用され;6つのアスパラギン酸モノマー、例えば、Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp(配列番号35)、から構成される荷電分子(C)は、-6の正味負電荷を有する荷電分子(C)を調製するために使用され;5つのアスパラギン酸モノマー、例えば、Asp-Asp-Asp-Asp-Asp(配列番号36)、から構成される荷電分子(C)は、-5の正味負電荷を有する荷電分子(C)を調製するために使用され;4つのアスパラギン酸モノマー、例えば、Asp-Asp-Asp-Asp(配列番号37)、から構成される荷電分子(C)は、-4の正味負電荷を有する荷電分子(C)を調製するために使用され;3つのアスパラギン酸モノマー、例えば、Asp-Asp-Asp、から構成される荷電分子(C)は、-3の正味負電荷を有する荷電分子(C)を調製するために使用され;2つのアスパラギン酸モノマー、例えば、Asp-Asp、から構成される荷電分子(C)は、-2の正味負電荷を有する荷電分子(C)を調製するために使用され;1つのアスパラギン酸モノマー、例えば、Asp、から構成される荷電分子(C)は、-1の正味負電荷を有する荷電分子(C)を調製するために使用される。上記の例におけるアスパラギン酸(Asp)を、グルタミン酸、スルホ-セリン、またはホスホル-セリン(phosphor-serine)を含むがこれらに限定されない任意の適する負荷電アミノ酸で置き換えることができ、その場合、負荷電アミノ酸は、同じであってもよく、または異なっていてもよい。
一部の実施形態では、荷電分子(C)は、正味正電荷を有し、正荷電官能基から構成される。適する正荷電分子(C)としては、塩基の共役酸のpKaが約8.5より大きい、弱塩基の共役酸などの、生理的pHで、約7.4のpHで、正電荷を帯びる官能基を有するものが挙げられる。適する正荷電分子(C)としては、第一級、第二級および第三級アミンならびに第四級アンモニウム、グアニジニウム、ホスホニウムおよびスルホニウム官能基を有する分子が挙げられるが、これらに限定されない。アンモニウム官能基を有する、適する分子としては、例えば、イミダゾリウム、およびテトラアルキルアンモニウム化合物が挙げられる。一部の実施形態では、荷電分子(C)は、pHに関係なく正の永久電荷を帯びている第四級アンモニウム化合物から構成される。
さらなる実施形態では、荷電分子(C)は、生理的pHで塩基の共役酸として存在する官能基、例えば、第一級、第二級および第三級アミンから構成される。好ましい実施形態では、正荷電分子(C)は、1~20の間の正荷電官能基、例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20の正荷電官能基であるが、通常は16以下の荷電官能基から構成される。一部の実施形態では、荷電分子(C)は、長さ1~6アミノ酸の間のポリ(リシン)ペプチドである。1、2、3、4、5または6アミノ酸から構成されるポリ(リシン)配列は、pH7.4でそれぞれ+1、+2、+3、+4、+5または+6の正電荷を帯びていると予想される。さらなる実施形態では、荷電分子(C)は、長さ2~6アミノ酸の間のポリ(アルギニン)ペプチドである。
ある特定の実施形態では、荷電分子(C)は、正味正電荷を有し、1つまたは複数の正荷電アミノ酸から構成される。好ましい実施形態では、正味正電荷を有する荷電分子(C)は、1~20の間の正荷電アミノ酸、例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20の正荷電アミノ酸から構成される。非限定的な例では、16のリシンモノマー、例えば、Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys(配列番号38)、から構成される荷電分子(C)は、+16の正味正電荷を有する荷電分子(C)を調製するために使用され;15のリシンモノマー、例えば、Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys(配列番号39)、から構成される荷電分子(C)は、+15の正味正電荷を有する荷電分子(C)を調製するために使用され;14のリシンモノマー、例えば、Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys(配列番号40)、から構成される荷電分子(C)は、+14の正味正電荷を有する荷電分子(C)を調製するために使用され;13のリシンモノマー、例えば、Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys(配列番号41)、から構成される荷電分子(C)は、+13の正味正電荷を有する荷電分子(C)を調製するために使用され;12のリシンモノマー、例えば、Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys(配列番号42)、から構成される荷電分子(C)は、+12の正味正電荷を有する荷電分子(C)を調製するために使用され;11のリシンモノマー、例えば、Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys(配列番号43)、から構成される荷電分子(C)は、+11の正味正電荷を有する荷電分子(C)を調製するために使用され;10のリシンモノマー、例えば、Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys(配列番号44)、から構成される荷電分子(C)は、+10の正味正電荷を有する荷電分子(C)を調製するために使用され;9つのリシンモノマー、例えば、Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys(配列番号45)、から構成される荷電分子(C)は、+9の正味正電荷を有する荷電分子(C)を調製するために使用され;8つのリシンモノマー、例えば、Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys(配列番号46)、から構成される荷電分子(C)は、+8の正味正電荷を有する荷電分子(C)を調製するために使用され;7つのリシンモノマー、例えば、Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys(配列番号47)、から構成される荷電分子(C)は、+7の正味正電荷を有する荷電分子(C)を調製するために使用され;6つのリシンモノマー、例えば、Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys(配列番号48)、から構成される荷電分子(C)は、+6の正味正電荷を有する荷電分子(C)を調製するために使用され;5つのリシンモノマー、例えば、Lys-Lys-Lys-Lys-Lys(配列番号49)、から構成される荷電分子(C)は、+5の正味正電荷を有する荷電分子(C)を調製するために使用され;4つのリシンモノマー、例えば、Lys-Lys-Lys-Lys(配列番号50)、から構成される荷電分子(C)は、+4の正味正電荷を有する荷電分子(C)を調製するために使用され;3つのリシンモノマー、例えば、Lys-Lys-Lys、から構成される荷電分子(C)は、+3の正味正電荷を有する荷電分子(C)を調製するために使用され;2つのリシンモノマー、例えば、Lys-Lys、から構成される荷電分子(C)は、+2の正味正電荷を有する荷電分子(C)を調製するために使用され;1つのリシン、例えば、Lys、から構成される荷電分子(C)は、+1の正味正電荷を有する荷電分子(C)を調製するために使用される。上記の例におけるリシン(Lys)を、トリメチル-リシンまたはアルギニンを含むがこれらに限定されない任意の適する正荷電アミノ酸で、置き換えることができ、その場合、正荷電アミノ酸は、同じであってもよく、または異なっていてもよい。
荷電分子(C)は、i)水溶解度を向上させるようにおよびii)不完全イオン化を防止するために荷電官能基間の距離を増すように機能する、小さい非荷電の、親水性アミノ酸、または親水性リンカー、例えばエチレンオキシドを、さらに含むことがある。例えば、ポリマー上の1つの官能基のイオン化が、局所効果によって隣接官能基のpKaに影響を及ぼすことがある。例えば、第2のアミンのすぐそばにあるアミンのプロトン化が、第2のアミンの共役酸のpKaを低下させることがある。隣接官能基のイオン化ポテンシャルに対する局所効果の影響を低減させるために、リンカー分子を使用して、荷電分子を構成する荷電官能基間の距離を増すことができる。リンカー分子は、1~5個の間の小さい非荷電親水性アミノ酸、例えば、1、2、3、4および5個のアミノ酸を含みうる。あるいは、リンカーは、1~4モノマー単位の間、例えば1、2、3または4のエチレンオキシドモノマーの長さのエチレンオキシド(すなわちPEG)リンカーを含みうる。好ましい実施形態では、1~2個の小さい非荷電親水性アミノ酸は、荷電分子(C)を構成する、隣接する荷電アミノ酸であって、アミド結合によって連結されているアミノ酸の間に配置される。ある特定の実施形態では、正味正電荷を有する荷電分子(C)を構成する各荷電アミノ酸間にセリンが配置される。好ましい実施形態では、荷電分子(C)は、リシンとセリンの反復ジペプチド、すなわち(Lys-Ser)n(式中、nは、通常は、1~20の間の任意の整数、例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20である)から構成される。他の例として、セリンは、+2の正味電荷を有するトリペプチド荷電分子(C)の各荷電アミノ酸間に配置され(例えば、Lys-Ser-Lys);セリンは、+3の正味電荷を有する5アミノ酸荷電分子(C)の各荷電アミノ酸間に配置され(例えばLys-Ser-Lys-Ser-Lys(配列番号51));セリンは、+4の正味電荷を有する7アミノ酸荷電分子(C)の各荷電アミノ酸間に配置される(例えばLys-Ser-Lys-Ser-Lys-Ser-Lys(配列番号52))。上記の例におけるリシン(Lys)を、トリメチル-リシンまたはアルギニンを含むがこれらに限定されない任意の適する正荷電アミノ酸で、置き換えることができ、その場合、正荷電アミノ酸は、同じであってもよく、もしくは異なっていてもよい。
ある特定の実施形態では、正味負電荷を有する荷電分子(C)を構成する各荷電アミノ酸間にセリンが配置される。好ましい実施形態では、荷電分子は、アスパラギン酸とセリンの反復ジペプチド、すなわち(Asp-Ser)n(式中、nは、通常は、1~20の間の任意の整数、例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20である)から構成される。例えば、セリンは、-2の正味電荷を有するトリペプチド荷電分子(C)の各荷電アミノ酸間に配置され(例えば、Asp-Ser-Asp);セリンは、-3の正味電荷を有する5アミノ酸荷電分子(C)の各荷電アミノ酸間に配置され(例えばAsp-Ser-Asp-Ser-Asp(配列番号53));セリンは、-4の正味電荷を有する7アミノ酸荷電分子(C)の各荷電アミノ酸間に配置される(例えばAsp-Ser-Asp-Ser-Asp-Ser-Asp(配列番号54))。上記の例におけるアスパラギン酸(Asp)を、グルタミン酸、スルホ-セリン、またはホスホ-セリンを含むがこれらに限定されない任意の適する負荷電アミノ酸で置き換えることができ、その場合、負荷電アミノ酸は、同じであってもよく、もしくは異なっていてもよい。
さらなる実施形態では、荷電分子(C)は、負荷電アミノ酸と正荷電アミノ酸の両方から構成される。反対の電荷のアミノ酸から構成されるジペプチド、例えばLys-Aspは、pH7.4で正味中性、0、電荷を有すると予測されるため、双性イオンジペプチドと呼ばれる。1つまたは複数の双性イオンジペプチドを、荷電分子(C)に、i)水溶解度を向上させるための手段およびii)ある特定のpH範囲にわたって優勢な電荷(例えば、正味負または正味正電荷)を提供する手段として、組み入れることができる。例えば、双性イオンジペプチドを使用して、pH7.4でのペプチド配列の電荷を増加または減少させることなく、ペプチド配列の親水性を増大させることができる。しかし、双性イオンを使用して、特定のpHで正味電荷を付与することができる。例えば、この例ではN末端アミンおよびC末端カルボン酸の寄与を除外して、双性イオンジペプチドであるLys-Aspは、pH7.4で0の正味電荷を有するが、pH<4では+1の正味電荷、pH>10では-1の正味電荷を有する。1つまたは複数の双性イオンジペプチド、例えば、1つのジペプチド、Lys-Asp;2つのジペプチド、Lys-Asp-Lys-Asp(配列番号55);3つのジペプチド、Lys-Asp-Lys-Asp-Lys-Asp(配列番号56)などを、荷電分子(C)の配列に付加させることができる。上記の例において、リシン(Lys)を、トリメチル-リシンまたはアルギニンを含むがこれらに限定されない任意の適する正荷電アミノ酸で置き換えることができ、アスパラギン酸(Asp)を、グルタミン酸、スルホ-セリンまたはホスホ-セリンを含むがこれらに限定されない任意の適する負荷電アミノ酸で置き換えることができ、その場合の正荷電または負荷電アミノ鎖は、同じであってもよく、もしくは異なっていてもよい。
荷電分子(C)の組成は、ペプチド抗原コンジュゲートの特定の適用に必要とされる正味電荷が得られるように選択される。本明細書で開示されるいくつかの実施形態では、荷電分子(C)は、リシンもしくはアルギニンから構成される、またはリシンもしくはアルギニンおよび非荷電アミノ酸から構成される、正荷電ポリ(アミノ酸)である。一部の実施形態では、荷電部分は、pH非依存性である正電荷を帯びるスルホニウムまたは第四級アンモニウム官能基を含んだ。本明細書で開示されるいくつかの実施形態では、荷電分子(C)は、グルタミン酸もしくはアスパラギン酸から構成される、またはグルタミン酸もしくはアスパラギン酸および非荷電アミノ酸から構成される、負荷電ポリ(アミノ酸)である。一部の実施形態では、荷電部分は、スルホセリンまたはホスホセリンなどの、リン酸基または硫酸基を含む。さらなる実施形態では、荷電分子は、リシンもしくはアルギニンおよびグルタミン酸もしくはアスパラギン酸から構成されるか、またはリシンもしくはアルギニンおよびグルタミン酸もしくはアスパラギン酸ならびに非荷電アミノ酸から構成される。正荷電官能基と負荷電官能基の両方が、同じ荷電分子(C)上に組み入れられていることもある。荷電分子(C)は、正であってもよく、負であってもよく、または中性であってもよいが、ペプチド抗原コンジュゲートの正味電荷は、ゼロであってはならず、例えば、+3より大きいまたは-3より小さい正味電荷が好ましく、特定の適用に依存する。
荷電分子(C)に関するさらなる考慮事項は、選択される対イオンである。正電荷を有する官能基を有する荷電分子(C)の非限定的な例としては、塩化物、臭化物およびヨウ化物アニオンを含む、ハロゲン化物;ならびにリン酸イオン、硫酸イオン、亜硫酸イオンを含む、酸の共役塩基;ならびにギ酸、コハク酸、酢酸およびトリフルオロ酢酸を含む、カルボン酸アニオンが挙げられるが、これらに限定されない。負電荷を有する官能基を有する荷電分子(C)の適する対イオンは、水素ならびにアルカリおよびアルカリ土類金属(例えば、ナトリウム、カリウム、マグネシウムおよびカルシウムを含む)、またはアンモニウム化合物などの弱塩基の共役酸を、これらに限定されないが、含む。
荷電分子(C)を、ペプチド抗原(A)に、直接、あるいは伸長部(B1もしくはB2)によって、リンカー(L)によって、リンカーおよび伸長部(B1もしくはB2)によって、またはペプチド抗原に直接またはリンカー(L)および/もしくは伸長部(B1もしくはB2)によって間接的に連結されている粒子(P)もしくは疎水性分子(H)によって、間接的に、のどちらかで、連結させることができる。
一部の実施形態では、荷電分子(C)が、必要に応じたN末端またはC末端伸長部(B1またはB2)に連結され、この必要に応じたN末端またはC末端伸長部が、ペプチド抗原(A)のN末端またはC末端のどちらかにそれぞれ連結され、このペプチド抗原(A)が、C末端またはN末端のどちらかにおいて、それぞれ、必要に応じた伸長部(B2)に連結され、この必要に応じた伸長部(B2)が、粒子(P)または疎水性分子(H)のどちらかに、直接、またはリンカー(L)を介してのどちらかで、連結されて、式Vのペプチド抗原コンジュゲート(式中、[ ]は、その基が必要に応じたものであることを示す)が得られる。
C-[B1]-A-[B2]-[L]-P、C-[B1]-A-[B2]-[L]-H、P-[L]-[B1]-A-[B2]-C、またはH-[L]-[B1]-A-[B2]-C
式V
C-[B1]-A-[B2]-[L]-P、C-[B1]-A-[B2]-[L]-H、P-[L]-[B1]-A-[B2]-C、またはH-[L]-[B1]-A-[B2]-C
式V
いくつかの実施形態では、荷電分子(C)は、式Vのペプチド抗原コンジュゲートのN末端に配置され、この場合、荷電分子(C)は、カテプシン切断性テトラペプチド伸長部から構成されるN末端伸長部(B1)(B1=PN4-PN3-PN2-PN1)に連結されており、このN末端伸長部(B1)は、ペプチド抗原(A)のN末端に連結されており、このペプチド抗原(A)は、C末端が、組み合わせた免疫プロテアソーム・カテプシン切断性ヘキサペプチド伸長部から構成されるC末端伸長部(B2)(B2=PC1’-PC2’-PC3’-PC4’-PC5’-PC6’)に連結されており、このC末端伸長部(B2)は、リンカー(L)に連結されており、このリンカー(L)は、疎水性分子(H)または粒子(P)に連結されている。式Vのペプチド抗原コンジュゲートのペプチド抗原(A)は、整数のアミノ酸数、nから構成され、nは、通常は、7~35アミノ酸の間であり、疎水性分子(H)は、通常は、式IIIのアジュバントに連結されている式IまたはIIのポリ(アミノ酸)である。
荷電分子(C=Lys-Lys)を含み、この荷電分子が、ペプチド抗原(A)のN末端におけるカテプシン切断性テトラペプチド伸長部(B1=Lys-Pro-Leu-Arg 配列番号8)に連結されており、このペプチド抗原(A)が、C末端においてカテプシン切断性ヘキサペプチド伸長部(B2=Gly-Gly-Ser-Leu-Val-Arg 配列番号13)に連結されており、このカテプシン切断性ヘキサペプチド伸長部が、トリアゾールリンカー(L)に連結されており、このトリアゾールリンカー(L)が、式IIIのアジュバントに連結されている式Iのポリ(アミノ酸)から構成される疎水性分子(H)に連結されている、式Vのペプチド抗原コンジュゲートの非限定的な例が、ここに提供される:
さらなる実施形態では、荷電分子(C;もしくは2つの荷電分子が存在する場合にはC1およびC2)を、疎水性分子(H)に直接連結させて、もしくは追加の必要に応じた荷電部分(C1)に必要に応じて連結されているN末端伸長部(B1)にN末端が必要に応じて連結されているペプチド抗原(A)のC末端に連結されているC末端伸長部(B2)に連結されているリンカー(L)に、直接連結させて、または荷電分子(C;もしくは2つの荷電分子が存在する場合にはC1およびC2)を、疎水性分子(H)に直接連結させて、もしくは追加の必要に応じた荷電部分(C2)に必要に応じて連結されているC末端伸長部(B2)にC末端が必要に応じて連結されているペプチド抗原(A)のN末端に連結されているN末端伸長部(B1)に連結されているリンカー(L)に、直接連結させて、式VIのペプチド抗原コンジュゲート(式中、[ ]は、その基が必要に応じたものであることを示す)を得ることができる。
[B1]-A-[B2]-L(C)-H、[B1]-A-[B2]-L-H(C)、[C1]-[B1]-A-[B2]-L(C2)-H、[C1]-[B1]-A-[B2]-L-H(C2)、H-L(C)-[B1]-A-[B2]、H(C)-[B1]-A-[B2]、H-L(C1)-[B1]-A-[B2]-C2またはH(C1)-[B1]-A-[B2]-C2
式VI
[B1]-A-[B2]-L(C)-H、[B1]-A-[B2]-L-H(C)、[C1]-[B1]-A-[B2]-L(C2)-H、[C1]-[B1]-A-[B2]-L-H(C2)、H-L(C)-[B1]-A-[B2]、H(C)-[B1]-A-[B2]、H-L(C1)-[B1]-A-[B2]-C2またはH(C1)-[B1]-A-[B2]-C2
式VI
いくつかの実施形態では、荷電分子(C)が式VIのペプチド抗原コンジュゲートのC末端に配置され、この場合、荷電分子(C)は、リンカー(L)に連結され、このリンカー(L)は、通常は1~6アミノ酸の間の長さの、免疫プロテアソーム切断性、カテプシン切断性、または組み合わせた免疫プロテアソーム・カテプシン切断性伸長部から構成される、C末端伸長部(B2)(B2=PC1’、PC1’-PC2’、PC1’-PC2’-PC3’、PC1’-PC2’-PC3’-PC4’、PC1’-PC2’-PC3’-PC4’-PC5’、またはPC1’-PC2’-PC3’-PC4’-PC5’-PC6’)に必要に応じて連結されており、このC末端伸長部(B2)は、ペプチド抗原(A)のC末端に連結されており、このペプチド抗原(A)は、N末端が、通常は1~4アミノ酸の間の長さのカテプシン切断性伸長部(B1=PN1、PN2-PN1、PN3-PN2-PN1またはPN4-PN3-PN2-PN1)に必要に応じて連結されており、このリンカー(L)は疎水性分子(H)にさらに連結されており、ここに示される:
式VIのペプチド抗原コンジュゲートのペプチド抗原(A)は、整数のアミノ酸数、nから構成され、nは、通常は、7~35アミノ酸の間、または最大50アミノ酸であり、疎水性分子は、通常は、式IIIのアジュバントに連結されている式IまたはIIのポリ(アミノ酸)である。
荷電分子(例えば、C=Lys-Lys)、この荷電分子がアミド結合を介してC末端に連結しているリンカー(L)、このリンカー(L)が連結している組み合わせた免疫プロテアソーム・カテプシン切断性ヘキサペプチドC末端伸長部(例えば、B2=Gly-Gly-Ser-Leu-Val-Arg 配列番号13)、このC末端伸長部がC末端に連結しているペプチド抗原(A)、このペプチド抗原(A)のN末端が連結しているカテプシン切断性テトラペプチドN末端伸長部(例えば、B1=Lys-Pro-Leu-Arg 配列番号8)から構成され、リンカー(L)が、式IIIのアジュバントに連結されている式Iのポリ(アミノ酸)から構成される疎水性分子(H)にさらに連結されている、式VIのペプチド抗原コンジュゲートの非限定的な例が、提供される:
式VIのペプチド抗原コンジュゲートのさらなる非限定的な例であるB1-A-B2-L-H(C)は、荷電部分(C=Lys-Lys-Lys-Lys-Lys 配列番号49)、この荷電部分がリンカーを介して連結している、式IIIのアジュバントに連結されている式Iのポリ(アミノ酸)から構成される疎水性分子(H)、この疎水性分子(H)が連結しているリンカー(L)、このリンカー(L)が連結している組み合わせた免疫プロテアソーム・カテプシン切断性ヘキサペプチドC末端伸長部(B2=Gly-Gly-Ser-Leu-Val-Arg 配列番号13)、このC末端伸長部がC末端に連結しているペプチド抗原(A)であり、このペプチド抗原(A)のN末端は、カテプシン切断性テトラペプチドN末端伸長部(B1=Lys-Pro-Leu-Arg 配列番号8)に連結されている:
式VIのペプチド抗原コンジュゲートの非限定的な例であるB1-(A)7~35-B2-L(-C)-Hでは、配列Ala-Lys-Phe-Val-Ala-Ala-Trp-Thr-Leu-Lys-Ala-Ala-Ala(配列番号22)を有するペプチド抗原(A)が、配列Ser-Leu-Val-Arg(配列番号7)を有するN末端伸長部(B1)と、配列Ser-Leu-Val-Arg(配列番号7)を有するC末端伸長部(B2)とに連結され、このC末端伸長部(B2)が、リンカー前駆体X1、例えばLys(N3)に連結され、このリンカー前駆体X1が、配列Glu-Lysを有するジペプチドから構成される荷電部分(C)と、DBCO分子を含むリンカー前駆体X2の両方に連結され、このリンカー前駆体X2が疎水性分子(H)に連結され、例えば、Ser-Leu-Val-Arg-Ala-Lys-Phe-Val-Ala-Ala-Trp-Thr-Leu-Lys-Ala-Ala-Ala-Ser-Leu-Val-Arg-Lys(N3-DBCO-H)-Glu-Lys(式中、Glu-Lys配列は、リンカー(L)(Lys(N3-DBCO))のC末端に連結されている)、その結果、pH7.4で+4の予測正味電荷を有するペプチド抗原コンジュゲートが得られる。ここでは、疎水性分子(H)は、ペプチド抗原コンジュゲートの電荷に無視できるほどしか寄与しないと仮定される。より詳細に下で説明されるように、ペプチド抗原コンジュゲートを構成するペプチド配列の所望の正味電荷およびハイドロパシーを提供する荷電残基の特定の数が得られるように荷電部分(C)および伸長配列(B1およびB2)の組成を選択することができることに、留意されたい。好ましい実施形態では、荷電部分(C)を構成する荷電官能基の数は、荷電部分(C)と、ペプチド抗原(A)と、必要に応じた伸長部(B1および/またはB2)と、リンカー(L)と、疎水性分子(H)とを含むペプチド抗原コンジュゲートの正味電荷が、約-3~-10の間、または+3~+10の間になるように、調節される。
荷電部分(C)が疎水性分子(H)に連結されている、式VIのペプチド抗原コンジュゲートは、個別化がんワクチンなどの個別化治療薬の迅速な生産に有利でありうる。荷電分子(C)とリンカー前駆体X2(例えば、シクロオクチンを含むX2)とに連結されている疎水性分子(H)をバルクで調製し、次いで、リンカー前駆体X1(例えば、アジドを含むX1)を有する任意のペプチド抗原(A)と容易に組み合わせて、式VIのペプチド抗原コンジュゲートである[C1]-[B1]-A-[B2]-L-H(C2)またはH(C)-L-[B1]-A-[B2]-[C2](式中、[ ]は、その基が必要に応じたものであることを示す)を形成することができる。
荷電部分(C)の機能は、水性条件でペプチド抗原コンジュゲートにより形成されるナノ粒子を安定させることである。疎水性分子(H)がペプチド抗原コンジュゲートの粒子形成を誘導する一方で、必要に応じた荷電分子(C)は、凝結を防止する、および一部の実施形態では荷電部分(C)により提供される表面電荷でペプチド抗原コンジュゲートが集合してナノ粒子ミセルを構築するように駆動する、相殺する力を提供する。
一部の実施形態では、ペプチド抗原コンジュゲート、例えば、[B1]-A-[B2]-[L]-H(式中、[ ]は、その基が必要に応じたものであることを示す)は、荷電分子を含まない。非限定的な例としては、A-H、A-L-H、A-B2-H、A-B2-L-H、B1-A-B2-L-Hが挙げられる。荷電分子(C)を含まないペプチド抗原コンジュゲートは、水性条件で凝集しうる。荷電部分(C)を含まないペプチド抗原コンジュゲートにより形成される粒子の安定性を向上させるために、荷電または両親媒性分子を加えることができる。一部の実施形態では、荷電部分(C)を含まない第1のペプチド抗原コンジュゲート(すなわち、[B1]-A-[B2]-[L]-H)が、DMSO溶液中で、荷電部分を含む第2のペプチド抗原コンジュゲート(例えば、C-[B1]-A-[B2]-[L]-H)と混合され、次いで、水性条件で再懸濁されて、安定したナノ粒子が形成される。他の実施形態では、荷電分子(C)を含まないペプチド抗原コンジュゲート(すなわち、[B1]-A-[B2]-[L]-H)が、DMSO溶液中で、荷電分子(C)に連結されている疎水性分子(H)、例えばC-H、と混合され、次いで、水性条件で再懸濁されて、安定したナノ粒子が形成される。
一部の実施形態では、荷電分子(C)を含まないペプチド抗原コンジュゲート、例えば、[B1]-A-[B2]-[L]-H(式中、[ ]は、その基が必要に応じたものであることを示す)は、両親媒性担体と組み合わされる、C-[B1]-[A’]-[B2]-[L]-H(式中、[ ]は、その基が必要に応じたものであることを示し、必要に応じたA’は、保存抗原である(すなわち、患者特異的でない))。一部の実施形態では、荷電分子(C)を含むペプチド抗原コンジュゲートは、両親媒性担体と組み合わされる。両親媒性担体は、ペプチド抗原コンジュゲートにより形成されるナノ粒子ミセルなどの、ナノ粒子を安定させるのに役立つ。
荷電分子および伸長部(B1およびB2)の選択
必要に応じた荷電分子(C)を伴う、ペプチド抗原(A)のN末端およびC末端にそれぞれ連結される必要に応じた伸長部B1およびB2の組成は、I)生理的温度および約7.4のpHの水性緩衝液中でペプチド抗原コンジュゲートにより形成される粒子を安定させるために必要とされる、適切な正味電荷および親水特性と疎水特性のバランスを達成するように、ならびにII)ペプチド抗原コンジュゲートの状況内において送達されるペプチド抗原(A)が、ペプチド抗原(A)上に備えられている最小CD4および/またはCD8 T細胞エピトープを放出し、その結果、エピトープがMHCクラスIおよびクラスII分子に関連して提示されうるように、確実にプロセシングされるように、選択されるべきである。以下の説明は、ペプチド抗原コンジュゲートにより形成される粒子のサイズおよび安定性に対する制御の予想外の向上をもたらす、ならびに/またはT細胞応答の有意な増強につながる、それらの粒子上にペプチド抗原(A)として提供されるCD4および/もしくはCD8 T細胞エピトープのプロセシングおよび提示の向上をもたらす、荷電分子(C)を伴うB1およびB2伸長部の特定の組成を開示するものである。
必要に応じた荷電分子(C)を伴う、ペプチド抗原(A)のN末端およびC末端にそれぞれ連結される必要に応じた伸長部B1およびB2の組成は、I)生理的温度および約7.4のpHの水性緩衝液中でペプチド抗原コンジュゲートにより形成される粒子を安定させるために必要とされる、適切な正味電荷および親水特性と疎水特性のバランスを達成するように、ならびにII)ペプチド抗原コンジュゲートの状況内において送達されるペプチド抗原(A)が、ペプチド抗原(A)上に備えられている最小CD4および/またはCD8 T細胞エピトープを放出し、その結果、エピトープがMHCクラスIおよびクラスII分子に関連して提示されうるように、確実にプロセシングされるように、選択されるべきである。以下の説明は、ペプチド抗原コンジュゲートにより形成される粒子のサイズおよび安定性に対する制御の予想外の向上をもたらす、ならびに/またはT細胞応答の有意な増強につながる、それらの粒子上にペプチド抗原(A)として提供されるCD4および/もしくはCD8 T細胞エピトープのプロセシングおよび提示の向上をもたらす、荷電分子(C)を伴うB1およびB2伸長部の特定の組成を開示するものである。
本明細書で開示される予想外の発見は、C末端酵素分解性伸長部(B2)が、C末端でペプチド抗原(A)と疎水性分子(H)の間に使用されたとき、および/またはN末端酵素分解性伸長部(B1)が、ペプチド抗原(A)のN末端と荷電分子(C)の間に使用されたとき、ペプチド抗原コンジュゲート、例えば式IV、VおよびVIのペプチド抗原コンジュゲート、として送達される最小CD8 T細胞エピトープを含有するペプチド抗原(A)が、in vitroで最も効率よくプロセシングされ、in vivoでより高いCD8 T細胞応答をもたらすことである。一部の実施形態では、荷電分子(C)とペプチド抗原(A)の間にカテプシン切断性部位を含むB1伸長部を組み入れること(例えば、C-B1-A-[B2]-[L]-H(式中、[ ]は、その基が必要に応じたものであることを示す))は、in vivoでのより大規模なT細胞応答に関連する、ペプチド抗原コンジュゲートからの最小T細胞エピトープのより効率的なプロセシングをもたらした。したがって、式VおよびVIの好ましい実施形態は、ペプチド抗原コンジュゲートを含む粒子として提供されるペプチド抗原(A)の効率的プロセシングおよび提示を可能にするために、カテプシン切断性配列をN末端(B1)およびC末端(B2)伸長部として使用するべきである。
さらなる予想外の発見は、ペプチド抗原コンジュゲートの一部の実施形態により形成される粒子を安定させるために必要とされる正味電荷の特定に関する。ペプチド抗原コンジュゲートとして送達される高度に疎水性のペプチド抗原(A)は、水性条件で凝集する傾向がある。この傾向を無効にするために、荷電分子(C)およびある特定の伸長部(B1またはB2)をペプチド抗原コンジュゲート、例えば式VおよびVI参照、への結合に選択することができ、または荷電分子を含むコンジュゲート(例えば、C-[A’]-[L]-H(式中、A’は、保存抗原であり、[ ]は、その基が必要に応じたものであることを示す)を、ペプチド抗原コンジュゲートを含む粒子に加えることができる。本明細書で開示される予想外の発見は、ペプチド抗原コンジュゲートの一部の実施形態、例えば、ポリ(アミノ酸)ベースの疎水性分子(H)を含む式VおよびVIのペプチド抗原コンジュゲート、により形成される粒子を安定させるために必要とされる電荷(すなわち、正味電荷)の量が、ペプチド抗原(A)と必要に応じた荷電分子(C)と必要に応じた伸長部(B1およびB2)とを含むペプチド抗原断片のハイドロパシー(すなわち、疎水性)に依存することである。本発明者らは、ペプチド抗原コンジュゲートのある特定の実施形態により形成される粒子を安定させるのに有用な正味電荷を、ペプチド抗原(A)またはペプチド抗原断片のハイドロパシーに基づいて決定することができるという、予想外の発見を報告する。したがって、好ましい実施形態では、ペプチド抗原コンジュゲートの正味電荷は、ペプチド抗原(A)の算出ハイドロパシーに基づいて選択され、荷電分子(C)および必要に応じて伸長部(B1および/またはB2)により調節される。他の実施形態では、ペプチド抗原コンジュゲートの正味電荷は、ペプチド抗原断片の算出ハイドロパシーに基づいて選択され、荷電分子(C)により調節される。明確にするために、リンカー前駆体(X1およびX2)、リンカー(L)および疎水性分子(H)または粒子(P)は、ペプチド抗原コンジュゲートの正味電荷を選択するために使用される、ペプチド抗原(A)のハイドロパシー値の決定にも、ペプチド抗原断片のハイドロパシー値の決定にも、考慮されない。したがって、ペプチド抗原コンジュゲートのハイドロパシーは、ペプチド抗原断片のハイドロパシーと等価である。
ペプチド抗原(A)、またはペプチド抗原(A)と必要に応じた荷電分子(C)と必要に応じた伸長部(B1および/またはB2)とを含む、ペプチド抗原断片のハイドロパシーは、ペプチドの疎水/親水特性の決定に利用可能な様々な方法のいずれか1つを使用して計算することができる。非限定的な例として、ペプチド抗原(A)またはペプチド抗原断片のハイドロパシーを決定する方法は、下で説明するようにKyteおよびDoolittleによる方法を使用する総平均ハイドロパシー(GRAVY)値の計算である。非天然アミノ酸(すなわち、シトルリン、スルホセリン、ホスホセリンおよびトリメチルリシン)について提供される推定値を伴う以下のハイドロパシー値は、KyteおよびDoolittleの方法に基づいたものであり、本明細書でのGRAVY値の計算に使用される:
ペプチド抗原(A)、またはペプチド抗原(A)と必要に応じた荷電分子(C)と必要に応じた伸長部(B1および/またはB2)とを含む、ペプチド抗原断片のハイドロパシーは、ペプチドの疎水/親水特性の決定に利用可能な様々な方法のいずれか1つを使用して計算することができる。非限定的な例として、ペプチド抗原(A)またはペプチド抗原断片のハイドロパシーを決定する方法は、下で説明するようにKyteおよびDoolittleによる方法を使用する総平均ハイドロパシー(GRAVY)値の計算である。非天然アミノ酸(すなわち、シトルリン、スルホセリン、ホスホセリンおよびトリメチルリシン)について提供される推定値を伴う以下のハイドロパシー値は、KyteおよびDoolittleの方法に基づいたものであり、本明細書でのGRAVY値の計算に使用される:
ペプチドのGRAVY値を決定する方法は、ペプチドを構成する個々のアミノ酸各々についてのハイドロパシー値を合計し、次いで、ペプチドの全長で割ることである。例えば、配列Val-Val-Ile-Ala-Ile-Phe-Ile-Ile-Leu(配列番号57)を有する9アミノ酸ペプチド抗原(A)は、3.86(例えば、(4.2+4.2+4.5+1.8+4.5+2.8+4.5+4.5+3.8)/9アミノ酸)のGRAVY値を有する。非限定的な例として、荷電分子(C=Lys-Ser-Lys-Gly-Gly 配列番号58)が、ペプチド抗原のN末端におけるN末端伸長部(B1=Lys-Pro-Leu-Arg 配列番号8)に、およびC末端におけるC末端伸長部(B2=Gly-Gly-Lys-Leu-Val-Arg 配列番号11)に連結され、このC末端伸長部がリンカー前駆体X1(ここで、X1は、Lys(N3)-NH2である)に連結される、固相ペプチド合成によりペプチド抗原断片として調製された、同じペプチド抗原(A)、すなわち、Val-Val-Ile-Ala-Ile-Phe-Ile-Ile-Leu(配列番号57)は、Ac-Lys-Ser-Lys-Gly-Gly-Lys-Pro-Leu-Arg-Val-Val-Ile-Ala-Ile-Phe-Ile-Ile-Leu-Gly-Gly-Lys-Leu-Val-Arg-Lys(N3)-NH2となり、0.75のGRAVY値および+6の正味電荷を有する。
ペプチド抗原断片またはペプチド(A)のGRAVY値の決定により、ペプチド配列の疎水/親水特性が説明される。一般に、ゼロ未満のGRAVY値は、ペプチドが主として親水性アミノ酸から構成されることを示し、これに対してゼロより大きいGRAVY値は、ペプチドが主として疎水性アミノ酸残基から構成されることを示す。本明細書で報告される予想外の発見は、ペプチド抗原(A)またはペプチド抗原断片のGRAVY値が増加するにつれて、ペプチド抗原(A)(またはペプチド抗原断片)を含むペプチド抗原コンジュゲートにより形成される粒子を安定させるために必要とされる正味電荷(正または負のどちらか)の大きさも増加することである。したがって、高いGRAVY値を有するペプチド抗原(A)またはペプチド抗原断片ほど、通常は、ペプチド抗原コンジュゲートにより形成される粒子の安定性を確保するために必要とする正味電荷が大きい。
ペプチド抗原(A)、必要に応じた荷電分子(C)および/または必要に応じた伸長部(B1および/もしくはB2)のアミノ酸組成に基づいて(ならびにリンカー前駆体(X1およびX2)、リンカー(L)および疎水性分子(H)または粒子(P)を構成しうる一切のアミノ酸の寄与を除外して)計算される、ペプチド抗原(A)またはペプチド抗原断片のGRAVY値を計算して、ペプチド抗原コンジュゲートの一部の実施形態による安定した粒子形成を確保するために必要とされる正味電荷を決定することができる。注記:ペプチド抗原コンジュゲートのGRAVYは、ペプチド抗原断片のGRAVYと等価であると見なされ、したがって、ペプチド抗原断片のGRAVY値は、ペプチド抗原コンジュゲートのGRAVY値も指すことができる。
一部の実施形態では、ペプチド抗原(A)のGRAVY値は、ペプチド抗原コンジュゲートにより形成される粒子を安定させるために必要とされる正味電荷を決定するために使用される。非限定的な例として、ペプチド抗原コンジュゲートは、ペプチド抗原(A)のGRAVY値が0.75より大きい場合、≧+6(+6より大きいか、もしくは+6に等しい)または≦-6(-6未満であるか、もしくは-6に等しい)の正味電荷を有するべきであり、正味電荷は、GRAVY値が0.25~0.75の間である場合、≧+5(+5より大きいか、もしくは+5に等しい)または≦-5(-5未満であるか、もしくは-5に等しい)であるべきであり、正味電荷は、GRAVY値が0.25未満である場合、≧+4(+4より大きいか、もしくは+4に等しい)または≦-4(-4未満であるか、もしくは-4に等しい)であるべきである。好ましい実施形態では、正味電荷は、正味正電荷が必要とされるのか、または正味負電荷が必要とされるのかに依存して、それぞれ、+4より大きいか、もしくは+4に等しく、または-4未満であるか、もしくは-4に等しい。一部の実施形態では、0.25未満のGRAVY値を有するペプチド抗原(A)は、約+4~+15、例えば、+4、+5、+6、+7、+8、+9、+10、+11、+12、+13、+14もしくは+15であるが、通常は約+4~+12の間の正味正電荷を有する、または約-4~-15、例えば、-4、-5、-6、-7、-8、-9、-10、-11、-12、-13、-14もしくは-15であるが、通常は約-4~-12の間の正味負電荷を有する、ペプチド抗原コンジュゲートとして合成される。一部の実施形態では、0.25~0.75の間のGRAVY値を有するペプチド抗原(A)は、約+5~+15、例えば、+5、+6、+7、+8、+9、+10、+11、+12、+13、+14、+15であるが、通常は約+5~+12の間の正味正電荷を有する、または約-5~-15、例えば、-5、-6、-7、-8、-9、-10、-11、-12、-13、-14もしくは-15であるが、通常は約-5~-15の間の正味負電荷を有する、ペプチド抗原コンジュゲートとして合成される。一部の実施形態では、0.75より大きいGRAVY値を有するペプチド抗原(A)は、約+6~+15、例えば、+6、+7、+8、+9、+10、+11、+12、+13、+14、+15であるが、通常は約+6~+12の間の正味正電荷を有する、または約-6~-15、例えば、-6、-7、-8、-9、-10、-11、-12、-13、-14もしくは-15であるが、通常は約-6~-12の間の正味負電荷を有する、ペプチド抗原コンジュゲートとして合成される。
所望の正味電荷のペプチド抗原コンジュゲートを生成するために荷電分子(C)および必要に応じた伸長部(B1および/またはB2)を選択する方法の一実施形態では、方法は、(i)ペプチド抗原(A)のGRAVYおよび電荷を決定するステップと、(ii)所望の正味電荷に達するために十分な数の荷電官能基を達成するために荷電分子(C)および必要に応じた伸長部(B1および/またはB2)を選択するステップとを含みうる。非限定的な例では、ペプチド抗原コンジュゲートに必要とされる正味電荷は、次の基準に従ってペプチド抗原(A)のハイドロパシーによって変わりうる:0.75より大きいGRAVY値を有する25~35アミノ酸ペプチド抗原(A)には+6より大きいか、または+6に等しい電荷が必要とされる;0.25~0.75の間のGRAVY値を有する25~35アミノ酸ペプチド抗原(A)には+5より大きいか、または+5に等しい電荷が必要とされる;および0.25未満のGRAVYを有する25~35アミノ酸ペプチド抗原(A)には+4より大きいか、または+4に等しい電荷が必要とされる。したがって、この非限定的な例では、+6のペプチド抗原コンジュゲートの正味電荷を達成するために、2.0のGRAVY値および+2の電荷を有する25アミノ酸ペプチド抗原(A)を、少なくとも+4の正味電荷を含む荷電分子(C)および必要に応じた伸長部(B1および/またはB2)と組み合わせるべきである。さらなる非限定的な例では、ペプチド抗原コンジュゲートに必要とされる正味電荷は、次の基準に従ってペプチド抗原(A)のハイドロパシーによって変わりうる:0.75より大きいGRAVY値を有する25~35アミノ酸ペプチド抗原(A)には-6未満のまたは-6に等しい電荷が必要とされる;0.25~0.75の間のGRAVY値を有する25~35アミノ酸ペプチド抗原(A)には-5未満のまたは-5に等しい電荷が必要とされる;および0.25未満のGRAVYを有する25~35アミノ酸ペプチド抗原(A)には-4未満のまたは-4に等しい電荷が必要とされる。したがって、この非限定的な例では、-6のペプチド抗原コンジュゲートの正味電荷を達成するために、2.0のGRAVY値および+2の電荷を有するペプチド抗原(A)を、-8の正味電荷を含む荷電分子(C)および必要に応じた伸長部(B1および/またはB2)と組み合わせるべきである。
一部の実施形態では、必要に応じた荷電分子(C)、必要に応じた伸長部(B1および/またはB2)およびペプチド抗原(A)を含む、ペプチド抗原断片についてのGRAVY値の決定は、ペプチド抗原コンジュゲートにより形成される粒子を安定させるために必要とされる正味電荷を決定するために使用される。非限定的な例として、ペプチド抗原コンジュゲートは、ペプチド抗原断片のGRAVY値が0.75より大きい場合、≧+6(+6より大きいか、もしくは+6に等しい)または≦-6(-6未満であるか、もしくは-6に等しい)の正味電荷を有するべきであり、正味電荷は、GRAVY値が0.25~0.75の間である場合、≧+5(+5より大きいか、もしくは+5に等しい)または≦-5(-5未満であるか、もしくは-5に等しい)であるべきであり、正味電荷は、GRAVY値が0.25未満である場合、≧+4(+4より大きいか、もしくは+4に等しい)または≦-4(-4未満であるか、もしくは-4に等しい)であるべきである。好ましい実施形態では、正味電荷は、正味正電荷が必要とされるのか、または正味負電荷が必要とされるのかに依存して、それぞれ、+4より大きいか、もしくは+4に等しく、または-4未満であるか、もしくは-4に等しい。一部の実施形態では、0.25未満のGRAVY値を有するペプチド抗原断片は、約+4~+15、例えば、+4、+5、+6、+7、+8、+9、+10、+11、+12、+13、+14もしくは+15であるが、通常は約+4~+12の間の正味正電荷、または約-4~-15、例えば、-4、-5、-6、-7、-8、-9、-10、-11、-12、-13、-14もしくは-15であるが、通常は約-4~-12の間の正味負電荷を有する。一部の実施形態では、0.25~0.75の間のGRAVY値を有するペプチド抗原断片は、約+5~+15、例えば、+5、+6、+7、+8、+9、+10、+11、+12、+13、+14、+15であるが、通常は約+5~+12の間の正味正電荷、または約-5~-15、例えば、-5、-6、-7、-8、-9、-10、-11、-12、-13、-14もしくは-15であるが、通常は約-5~-12の間の正味負電荷を有する。一部の実施形態では、0.75より大きいGRAVY値を有するペプチド抗原断片は、約+6~+15、例えば、+6、+7、+8、+9、+10、+11、+12、+13、+14、+15であるが、通常は約+6~+12の間の正味正電荷、または約-6~-15、例えば、-6、-7、-8、-9、-10、-11、-12、-13、-14もしくは-15であるが、通常は約-6~-12の間の正味負電荷を有する。
さらなる予想外の発見は、ペプチド抗原コンジュゲート、例えば式Vおよび式VIのペプチド抗原コンジュゲート、のある特定の実施形態により形成される粒子を安定させるために必要とされる正味電荷の大きさが、一般に、ペプチド抗原(A)の長さに伴って増大することである。一部の実施形態では、7~14アミノ酸ペプチド抗原(A)は、+6より大きいかもしくは+6に等しいまたは-6未満のもしくは-6に等しい正味電荷を有するペプチド抗原コンジュゲートとして合成され、15~24アミノ酸ペプチド抗原(A)は、+7より大きいかもしくは+7に等しいまたは-7未満のもしくは-7に等しい正味電荷を有するペプチド抗原コンジュゲートとして合成され、25~35アミノ酸ペプチド抗原(A)は、+8より大きいかもしくは+8に等しいまたは-8未満のもしくは-8に等しい正味電荷を有するペプチド抗原コンジュゲートとして合成される。
一部の特定の実施形態では、免疫原性組成物は、式[B1]-A-[B2]-[L]-Hのペプチド抗原コンジュゲートおよび式C-[A’]-[L]-Hの荷電分子(C)コンジュゲート(式中、[ ]は、その基が必要に応じたものであることを示し、A’は、必要に応じた保存抗原(すなわち、患者特異的でないもの)である)から構成される粒子を含み、加えて、この場合、[B1]-A-[B2]-[L]-HのC-[A’]-[L]-Hに対するモル比は、1:20~20:1の範囲、例えば、1:20、1:10、1:5、1:2、1:1、2:1、5:1、10:1および20:1から選択され、C-[A’]-[L]-Hの正味電荷は、負であり、-2~-20、例えば、-2、-3、-4、-5、-6、-7、-8、-9、-10、-11、-12、-13、-14、-15、-16、-17、-18、-19もしくは-20、通常は約-4~約-12から選択され、または正であり、+2~+20、例えば、+2、+3、+4、+5、+6、+7、+8、+9、+10、+11、+12、+13、+15、+16、+17、+18、+19もしくは+20、通常は約+4~+12から選択される。非限定的な例では、免疫原性組成物は、0の正味電荷を帯びている1モル当量のペプチド抗原コンジュゲート、Ala-Ser-Met-Thr-Asn-Met-Glu-Leu-Met-Ser-Ser-Lys(N3-DBCO-H)-NH2(このペプチド断片がC末端アミドを有することに留意されたい)と、+6の正味電荷を帯びている、(Lys)5-Lys(N3-DBCO-NH)-NH2から構成される、1モル当量の荷電分子(C)コンジュゲートとを含む粒子を含み、ペプチド抗原コンジュゲートの荷電分子コンジュゲートに対する比は、1:1であり、これら2分子の各セットの正味電荷は、+6である。したがって、粒子の正味電荷は、ペプチド抗原コンジュゲートの荷電分子(C)コンジュゲートに対する比を調節することにより、または荷電分子コンジュゲートの正味電荷を調節することにより、調整することができる。好ましい実施形態では、ペプチド抗原コンジュゲートの荷電分子に対する比は、約1:4~4:1であり、荷電分子の正味電荷は、粒子を構成する分子の平均正味電荷が、約+4~約+12、または約-4~約-12になるように、選択される。例えば、ペプチド抗原コンジュゲートが、0の正味電荷を有し、分子の平均正味電荷が、荷電分子(C)コンジュゲートの正味電荷が+8であるとき+4である、ペプチド抗原コンジュゲートの荷電分子コンジュゲート(C)に対するモル比1:1を含む粒子。
ある特定の適用には、正荷電ペプチド抗原コンジュゲートが有用でありうる。一部の実施形態では、ペプチド抗原コンジュゲートは、ペプチド抗原(A)と、正荷電官能基を含む荷電分子(C)と、疎水性分子(H)または粒子(P)と、必要に応じた伸長部(B1および/またはB2)と、必要に応じたリンカー(L)とを含みうる。荷電分子(C)および必要に応じた伸長部(B1および/またはB2)の組成は、ペプチド抗原コンジュゲートの粒子安定性および生物活性を最大にするように選択される。一部の実施形態では、正味正電荷を有する荷電分子(C)から構成される式Vのペプチド抗原コンジュゲートは、N末端ペプチド伸長部(B1)に連結され、この伸長部(B1)がペプチド抗原(A)に連結され、このペプチド抗原(A)が、C末端ペプチド伸長部(B2)に連結され、このC末端ペプチド伸長部(B2)が、疎水性分子(H)に直接またはリンカー(L)によってのどちらかで、連結され、結果として得られるペプチド抗原コンジュゲートは、正味正電荷を有する。この例では、ペプチド抗原(A)のC末端を介して連結された疎水性分子(H)は、粒子形成を誘導するように機能し、ペプチド抗原(A)のN末端を介して連結された荷電分子(C)は、それらの粒子の表面における高い正電荷密度によって粒子を安定させるように機能する。したがって、荷電分子(C)がペプチド抗原(A)のN末端を介して連結されている、式Vの正の正味電荷を有するペプチド抗原コンジュゲートの疎水性分子(H)の近位に配置される必要に応じたB2伸長部は、粒子形成を促進するのに役立つ非荷電の疎水性アミノ酸であって、通常は、単一アミノ酸、例えば、グリシン、セリン、シトルリン、ロイシン、ノルロイシンもしくはメチオニン;ジペプチド、例えば、Gly-Cit、Gly-SerもしくはGly-Leu;トリペプチド、例えば、Gly-Ser-Cit、Gly-Pro-Cit、もしくはGly-Pro-Gly;テトラペプチド、例えば、Ser-Pro-Val-CitもしくはGly-Pro-Gly-Cit;ペンタペプチド、例えば、Gly-Ser-Val-Leu-Cit、Gly-Pro-Val-Leu-Cit;またはヘキサペプチド、例えば、Gly-Gly-Ser-Leu-Val-Cit、もしくはGly-Gly-Ser-Pro-Val-Citから選択されるアミノ酸から好ましくは構成される。一部の実施形態では、単一荷電アミノ酸を含むC末端伸長部(B2)が使用され、通常は、単一アミノ酸、例えば、アルギニンもしくはリシン;ジペプチド、例えば、Gly-ArgもしくはGly-Lys;トリペプチド、例えば、Gly-Ser-ArgもしくはGly-Ser-Lys;テトラペプチド、例えば、Gly-Pro-Gly-Arg(配列番号59)、Gly-Ser-Val-Arg(配列番号60)もしくはSer-Leu-Val-Arg(配列番号7)(ここで、Argは、Lysで置き換えることができる);ペンタペプチド、例えば、Gly-Ser-Leu-Val-Arg(配列番号17)(ここで、Argは、Lysで置き換えることができる);およびヘキサペプチド、例えば、Gly-Gly-Ser-Leu-Val-Arg(配列番号13)もしくはGly-Gly-Ser-Pro-Val-Arg(配列番号61)(ここで、Argは、Lysで置き換えることができる)から選択される。荷電分子(C)がペプチド抗原(A)のN末端を介して連結されている、式Vの正荷電プチド抗原コンジュゲートの荷電分子(C)の近位に配置されるB1伸長部は、好ましくは、荷電アミノ酸、例えば、ArgまたはLysを含有し、通常は、ArgもしくはLysから選択される単一アミノ酸;Val-ArgもしくはLeu-Arg(ここで、Argは、Lysで置き換えることができる)から選択されるジペプチド;Pro-Val-ArgもしくはGly-Val-Arg(ここで、Argは、Lysで置き換えることができる)から選択されるトリペプチド;またはLys-Leu-Val-Arg(配列番号62)、Lys-Pro-Val-Arg(配列番号9)、Lys-Pro-Leu-Arg(配列番号8)、Ser-Leu-Val-Arg(配列番号7)およびSer-Pro-Val-Arg(配列番号6)(ここで、Argは、Lysで置き換えることができる)から選択されるテトラペプチドから選択される。異なる伸長部であるB1およびB2を、任意の荷電分子(C)、ペプチド抗原(A)、疎水性分子(H)または粒子(P)およびリンカー(L)と組み合わせて、所期の適用に必要とされるペプチド抗原コンジュゲートの総平均ハイドロパシー(GRAVY)値および正味電荷を達成することができる。
一部の実施形態では、正味正電荷を有する式Vのペプチド抗原コンジュゲートは、4~12の間の正荷電官能基、例えば(Lys)4~12、を通常は含む荷電分子(C)を含み、この荷電分子(C)は、ジペプチドN末端伸長部(B1)、例えばVal-Arg、に連結されており、このN末端伸長部(B1)は、7~35の間のアミノ酸を通常は含むペプチド抗原(A)に連結されており、このペプチド抗原(A)は、C末端伸長部(B2)、例えばSer-Pro-Val-Cit、に連結されており、このC末端伸長部(B2)は、リンカー(Lys(N3)-DBCO)に連結されており、このリンカーは、式IIIのアジュバントに連結されている式Iまたは式IIのポリ(アミノ酸)から構成される疎水性分子(H)に連結されている。
ある特定の適用には、負荷電ペプチド抗原コンジュゲートが必要とされる。一部の実施形態では、ペプチド抗原コンジュゲートは、ペプチド抗原(A)と、負荷電官能基を含む荷電分子(C)と、疎水性分子(H)または粒子(P)と、必要に応じた伸長部(B1および/またはB2)と、必要に応じたリンカー(L)とを含みうる。荷電分子(C)および必要に応じた伸長部(B1および/またはB2)の組成は、ペプチド抗原コンジュゲートの粒子安定性および生物活性を最大にするように選択される。一部の実施形態では、正味負電荷を有する荷電分子(C)から構成される式Vのペプチド抗原コンジュゲートは、N末端ペプチド伸長部(B1)に連結され、この伸長部(B1)がペプチド抗原(A)に連結され、このペプチド抗原(A)が、C末端ペプチド伸長部(B2)に連結され、この伸長部(B2)が、疎水性分子(H)に、直接またはリンカー(L)によってのどちらかで、連結され、結果として得られるペプチド抗原コンジュゲートは、正味負電荷を有する。したがって、荷電分子(C)がペプチド抗原(A)のN末端におけるB1伸長部によって連結されている、式Vの負の正味電荷を有するペプチド抗原コンジュゲートの疎水性分子(H)の近位に配置されるB2伸長部は、粒子形成を促進するのに役立つ非荷電の疎水性アミノ酸であって、通常は、単一アミノ酸、例えば、グリシン、セリン、シトルリン、ロイシン、ノルロイシンもしくはメチオニン;ジペプチド、例えば、Gly-Ser、Gly-CitもしくはGly-Leu;トリペプチド、例えば、Gly-Ser-Cit、Gly-Pro-Cit、もしくはGly-Pro-Gly;テトラペプチド、例えば、Ser-Pro-Val-Cit、Ser-Pro-Val-CitもしくはGly-Pro-Gly-Cit;ペンタペプチド、例えば、Gly-Ser-Val-Leu-Cit、Gly-Pro-Val-Leu-Cit;またはヘキサペプチド、例えば、Gly-Gly-Ser-Leu-Val-Cit、もしくはGly-Gly-Ser-Pro-Val-Cit、もしくはGly-Gly-Ser-Pro-Leu-Citから選択される、アミノ酸から好ましくは構成される。一部の実施形態では、単一荷電アミノ酸を含むC末端伸長部(B2)が使用され、通常は、単一アミノ酸、例えば、アルギニンまたはリシン;ジペプチド、Gly-Arg(ここで、Argは、Lysで置き換えることができる);トリペプチド、例えば、Gly-Ser-Arg(ここで、Argは、Lysで置き換えることができる);テトラペプチド、例えば、Gly-Pro-Gly-Arg(配列番号59)、Gly-Ser-Val-Arg(配列番号60)、Ser-Leu-Val-Arg(配列番号7)、Asp-Leu-Val-CitまたはAsp-Leu-Val-Leu(配列番号63)(ここで、Aspは、Gluで置き換えることができ、Argは、Lysで置き換えることができる);ペンタペプチド、例えば、Gly-Ser-Leu-Val-Arg(配列番号17)またはGly-Asp-Leu-Val-Leu(配列番号64)またはGly-Asp-Leu-Val-Arg(配列番号65);およびヘキサペプチド、例えば、Gly-Gly-Ser-Leu-Val-Arg(配列番号13)またはGly-Gly-Ser-Pro-Val-Arg(配列番号61)(ここで、Aspは、Gluで置き換えることができ、Argは、Lysで置き換えることができる)またはGly-Ser-Glu-Leu-Val-Arg(配列番号66)またはGly-Gly-Asp-Pro-Val-Arg(配列番号67)(ここで、Aspは、Gluで置き換えることができ、Argは、Lysで置き換えることができる)から選択される。荷電分子(C)が、B1伸長部を介してペプチド抗原のN末端を介して連結されている、式Vの負の正味電荷を有するペプチド抗原コンジュゲートの荷電分子(C)の近位に配置されるB1伸長部は、好ましくは、荷電アミノ酸、例えばAspまたはGlu、を含有し、典型的には、単一アミノ酸、例えば、Cit、Leu、ArgもしくはLys;Val-Cit、Leu-Cit、Val-ArgもしくはLeu-Arg(ここで、Argは、Lysで置き換えることができる)から選択されるジペプチド;Pro-Val-Arg、Pro-Val-Cit、Gly-Val-ArgもしくはGly-Val-Cit(ここで、Argは、Lysで置き換えることができる)から選択されるトリペプチド;またはSer-Leu-Val-Arg(配列番号7)、Ser-Pro-Val-Arg(配列番号6)、Ser-Pro-Leu-Cit、Ser-Leu-Val-Cit、Ser-Pro-Val-Cit、Asp-Leu-Val-Arg(配列番号68)、Asp-Pro-Val-Arg(配列番号69)、Asp-Leu-Val-Cit、Asp-Leu-Val-Leu(配列番号63)、Ser-Gly-Val-CitもしくはAsp-Pro-Val-Cit(ここで、Argは、Lysで置き換えることができ、Aspは、Gluで置き換えることができる)から選択されるテトラペプチドから、選択される。異なる伸長部であるB1およびB2を、任意の荷電分子(C)、ペプチド抗原(A)、および疎水性分子(H)または粒子(P)と組み合わせて、必要とされるペプチド抗原コンジュゲートの総平均ハイドロパシー(GRAVY)値および正味電荷を達成することができる。
一部の実施形態では、正味負電荷を有する式Vのペプチド抗原コンジュゲートは、6~14の間の負荷電官能基、例えば(Glu)6~14、を通常は含む荷電分子(C)を含み、この荷電分子(C)は、ジペプチドN末端伸長部(B1)、例えばVal-Cit、に連結されており、このN末端伸長部(B1)は、7~35の間のアミノ酸を通常は含むペプチド抗原(A)に連結されており、このペプチド抗原(A)は、C末端伸長部(B2)、例えばSer-Pro-Val-Cit、に連結されており、このC末端伸長部(B2)は、リンカー(Lys(N3)-DBCO)に連結されており、このリンカーは、式IIIのアジュバントに連結されている式Iまたは式IIのポリ(アミノ酸)から構成される疎水性分子(H)に連結されている。
いくつかの実施形態では、荷電分子(C)および/または伸長部(B1およびB2)の付加は、ペプチド抗原(A)を含むペプチド抗原断片のGRAVY値を低下させ、配列の正味電荷を増大させ、これは、ペプチド抗原断片の製造の予想外の向上を伴った。いくつかの実施形態では、1つまたは複数のリシン(Lys)またはアルギニン(Arg)アミノ酸残基を含む荷電分子(C)の付加は、別の方法ではネイティブペプチド抗原(すなわち、他の修飾がないネイティブペプチド抗原)として製造することができなかったペプチド抗原(A)を含むペプチド抗原断片の合成およびHPLC精製の成功につながった。いくつかの実施形態では、1つまたは複数のプロリン、プソイドプロリン(pseudo proline)(Pro)、アルギニン(Arg)またはリシン(Lys)アミノ酸から構成されるC末端伸長部(B2)に連結されたペプチド抗原(A)は、別の方法ではネイティブペプチド抗原(すなわち、他の修飾がないネイティブペプチド抗原)として製造することができなかったペプチド抗原(A)を含むペプチド抗原断片の合成の成功をもたらした。いくつかの実施形態では、全面的に固相ペプチド合成により生成されたペプチド抗原断片またはペプチド抗原コンジュゲートへの、1つまたは複数の芳香族アミン、例えばフェニルアラニンアミン、の付加は、別の方法ではネイティブペプチド抗原(すなわち、他の修飾がないネイティブペプチド抗原)として製造することができなかったペプチド抗原(A)を含むペプチド抗原断片またはペプチド抗原コンジュゲートの合成の成功につながった。
個別化がんワクチンにおける使用のためのペプチド抗原(A)の選択
一部の実施形態では、ペプチド抗原コンジュゲートを構成するペプチド抗原(A)は、個々の患者に特異的である。個々の患者に特異的であるペプチド抗原(A)を含むペプチド抗原コンジュゲートは、個別化がんワクチン、または自己免疫もしくはアレルギーを処置するために寛容もしくは抑制を誘導するための個別化ワクチンとしての使用などの、個別化治療のために使用することができる。
一部の実施形態では、ペプチド抗原コンジュゲートを構成するペプチド抗原(A)は、個々の患者に特異的である。個々の患者に特異的であるペプチド抗原(A)を含むペプチド抗原コンジュゲートは、個別化がんワクチン、または自己免疫もしくはアレルギーを処置するために寛容もしくは抑制を誘導するための個別化ワクチンとしての使用などの、個別化治療のために使用することができる。
個別化がんワクチンに組み入れるためのペプチド抗原(A)の選択は、一部のステップが必要でないこともあるマルチステッププロセスである。
第1のステップは、腫瘍に特異的である、または正常組織と比較して腫瘍により過剰発現される腫瘍関連抗原の同定を含む。したがって、腫瘍組織および正常組織を採取する。腫瘍組織および正常組織をホルマリンで固定し、パラフィンに包埋してもよく、または腫瘍組織および正常組織は、単離された新鮮組織であってもよい。正常組織は、白血球を含有する血液であってもよい。腫瘍組織および正常組織を処理してDNAを単離する。DNAをさらに処理し、シークエンシングして、腫瘍DNAと正常組織DNA間の差異を同定する。これらのDNAの差異は、非同義変異をもたらす、単一ヌクレオチドもしくはジヌクレオチドもしくはより高次のヌクレオチド変化であってもよく、フレームシフト変異をもたらす挿入および欠失であってもよく、選択的スプライス改変体をもたらすスプライス部位変異であってもよく、または単一アミノ酸欠失をもたらすリードスルーでありうる終止コドンであってもよい。さらなる変異が、染色体転座または逆位または重複によって起こりうることもある。DNAレベルでの変化が、異常な翻訳後修飾を有する異常ペプチド配列および/またはペプチド(これらは、腫瘍特異的であり、ネオ抗原もしくは予測ネオ抗原と呼ばれることもある)を生じさせうる、非常に多くの方法がある。
第2のステップは、ステップ1で同定された腫瘍関連抗原が、実際に腫瘍によって発現されるか否かの決定を含む。腫瘍RNAを単離し、処理し、シークエンシングして、ステップ1により同定された変異が、腫瘍細胞によってRNAとして発現されるかどうかを決定する。腫瘍および正常組織のDNAシークエンシングから同定された変異を含むペプチド抗原(A)を、RNA発現レベルに基づいて個別化がんワクチンへの組入れに選択することができる。加えて、腫瘍において非がん性組織と比較して高レベルのRNAを産生する、腫瘍に関連する自己抗原を、組入れのためのペプチド抗原(A)として選択することができる。RNA転写物が同定されない変異は、一般に、ワクチンへの組入れのためのペプチド抗原(A)として選択されない。変異もしくは腫瘍に関連する自己抗原を含むペプチド抗原(A)に、変異体ペプチド(すなわち、ネオ抗原)または腫瘍に関連する自己抗原のRNA発現レベルに基づいて、優先順位を付けることができ、例えば、より高度に発現される変異または腫瘍に関連する自己抗原に優先順位を付けることができる。複数の基準を、個別化がんワクチンへの組入れのためのペプチド抗原(A)の選択に、同時に使用することができる。例えば、変異体ペプチド(すなわち、ネオ抗原)または腫瘍に関連する自己抗原が含有するエピトープのRNA発現レベルおよび予測MHC結合親和性を共に使用して、個別化がんワクチンへの組入れのためのペプチド抗原(A)の最適なセットを選択することができる。そのようなシナリオでは、非常に高度に発現される中等度の結合親和性を有するT細胞エピトープを含有するペプチド抗原(A)に、より高い結合親和性を有するが腫瘍によって非常に低レベルで発現されるT細胞エピトープを含有する異なるペプチド抗原(A)より高い優先順位を付けることができる。
もう1つの考慮事項は、どの程度、変異または腫瘍に関連する自己抗原が、腫瘍を含む異なる腫瘍細胞にわたってクローン性であるか保存されているかである。変異のクローン性は、腫瘍から単離されたDNAにおける変異の頻度と野生型改変体の頻度を比較することにより評価する。腫瘍関連ネオ抗原または自己抗原を、それらが含む変異のクローン性またはクローン性に近いことに基づいて、ペプチド抗原コンジュゲートから構成される個別化がんワクチンへの組入れのためのペプチド抗原(A)としての使用に選択することができる。例えば、ペプチド抗原(A)が、腫瘍細胞の>50%、腫瘍細胞の>75%、腫瘍細胞の>85%、腫瘍細胞の>95%、または腫瘍細胞の>99%に存在すると予測された場合、それらを組み入れのために優先順位をつけることができる。
一部の実施形態では、in silico結合アルゴリズムにより決定されるような所与のMHCクラスIおよび/またはクラスII分子に対する抗原内に含有されるエピトープの予測結合に基づいて、ペプチド抗原コンジュゲートから構成される個別化がんワクチンへの組入れのためのペプチド抗原(A)に、さらに優先順位を付けることができる。非限定的な例では、各被験体のMHC型を、先ず、シークエンシングによって同定する。次いで、任意の適する手段(例えば、DNAシークエンシング、RNA発現または質量分析)により同定された各変異体ペプチド(すなわち、ネオ抗原)または腫瘍に関連する自己抗原を、被験体に存在する各MHC分子への予測結合について試験し、MHC分子は、ヒト患者の場合、例えば、最大6の特有のクラスI MHC対立遺伝子でありうる。netMHC人工ニューラルネットワーク、安定化行列法およびImmune Epitope
Database(IEDB)Analysis Resource Consensusアルゴリズムを含む、MHC結合を予測するために使用することができるアルゴリズムが、いくつか公開されている。公開されていないアルゴリズムを使用してもよい。予測結合親和性が高いエピトープを含有するペプチド抗原(A)は、予測結合親和性が低いエピトープを含有するペプチド抗原(A)より免疫応答を誘導する可能性が高い。本明細書で開示される予想外の発見は、IEDBコンセンサスアルゴリズムによる予測結合親和性が0.5パーセンタイル未満であるエピトープを有する、予測ネオ抗原を含む、ペプチド抗原(A)の50%より多くが、本明細書で記載されるペプチド抗原コンジュゲートを含む免疫原性組成物を使用して投与されたとき、T細胞応答(すなわち、CD8 T細胞応答)を生成することができることである。この予想外の発見に基づくと、IEDBコンセンサスアルゴリズムで結合親和性が0.5パーセンタイル未満であるエピトープを有する、予測ネオ抗原を含む、ペプチド抗原(A)を含む、ペプチド抗原(A)を、ペプチド抗原コンジュゲートを含む個別化がんワクチンにおける使用に選択することができる。
Database(IEDB)Analysis Resource Consensusアルゴリズムを含む、MHC結合を予測するために使用することができるアルゴリズムが、いくつか公開されている。公開されていないアルゴリズムを使用してもよい。予測結合親和性が高いエピトープを含有するペプチド抗原(A)は、予測結合親和性が低いエピトープを含有するペプチド抗原(A)より免疫応答を誘導する可能性が高い。本明細書で開示される予想外の発見は、IEDBコンセンサスアルゴリズムによる予測結合親和性が0.5パーセンタイル未満であるエピトープを有する、予測ネオ抗原を含む、ペプチド抗原(A)の50%より多くが、本明細書で記載されるペプチド抗原コンジュゲートを含む免疫原性組成物を使用して投与されたとき、T細胞応答(すなわち、CD8 T細胞応答)を生成することができることである。この予想外の発見に基づくと、IEDBコンセンサスアルゴリズムで結合親和性が0.5パーセンタイル未満であるエピトープを有する、予測ネオ抗原を含む、ペプチド抗原(A)を含む、ペプチド抗原(A)を、ペプチド抗原コンジュゲートを含む個別化がんワクチンにおける使用に選択することができる。
加えて、MHCへの抗原結合の質量分析による確認、またはMHCへの抗原の結合を質量分析で学習したアルゴリズムを使用して、個別化がんワクチンへの組入れのためのペプチド抗原(A)を選択することができる。このシナリオでは、MHC分子と結合しているペプチドを同定するために腫瘍組織を処理する。変異体ペプチド(すなわち、ネオ抗原)、プロテアソームスプライス改変体または腫瘍に関連する自己抗原でありうる、正常細胞ではなく腫瘍細胞の表面で同定されるペプチドを、個別化がんワクチンにおける組み入れのために優先順位をつけることができる。本明細書で開示される予想外の発見は、腫瘍細胞上のMHC-Iに対する、質量分析により確認された結合に基づいて個別化がんワクチンにおける使用に選択された予測ネオ抗原の高い割合(すなわち、7つのうちの7つ)が、ペプチド抗原コンジュゲートを含む免疫原性組成物中のペプチド抗原(A)として送達されたときに大規模なCD8 T細胞応答をもたらしたことであり、これは、質量分析、または質量分析に基づく予測アルゴリズムが、ペプチド抗原コンジュゲートから構成される個別化がんワクチンにおけるペプチド抗原(A)として使用するためのネオ抗原を選択するための信頼できるフィルターでありうることを示唆する。
ペプチド抗原(A)をT細胞認識アッセイに基づいて組入れのために選択することもできる。例えば、予測ネオ抗原または腫瘍に関連する自己抗原を含む合成ペプチド(またはin situでペプチドを産生する発現系)を被験体からの血液、腫瘍組織または他の組織に由来するT細胞のin vitro培養物に加える、アッセイを使用することができる。所与のペプチドのT細胞認識は、例えば、ELISpotアッセイにより、またはフローサイトメトリーにより、評価することができた。in vitro T細胞アッセイにおいて認識される抗原を、ペプチド抗原コンジュゲートから構成される個別化ワクチンへのペプチド抗原(A)として組み入れのために優先順位をつけることができる。
最後に、ペプチド抗原(A)を任意の数の予測アルゴリズムに基づいて選択することができる。大きいデータセットで学習した予測アルゴリズムに基づいて免疫原性または効果的であると予測されるペプチド抗原(A)を使用することができる。加えて、予測アルゴリズムを使用して、野生型エピトープではなく変異体エピトープに特異的であるT細胞応答、すなわち、自己抗原に対して交差反応性でないT細胞、をもたらすと予測されるペプチドネオ抗原を選択することができる。
上記方法の任意の組み合わせを、ペプチド抗原コンジュゲートから構成される個別化がんワクチンにおける使用のための、ネオ抗原または腫瘍に関連する自己抗原またはこれらに類するものを含むペプチド抗原(A)の同定および選択に、使用することができる。
個別化がんワクチンについてのペプチド抗原(A)の長さならびにCD8およびCD4
T細胞応答の誘導に対する効果
非同義的アミノ酸置換をもたらす単一ヌクレオチド多型は、通常は長さ8~13アミノ酸であるクラスI MHCと結合するペプチドエピトープ内のあらゆる位置に出現しうる。したがって、所与のクラスI MHCに結合することができる可能性のあるエピトープすべてを網羅するために、個別化がんワクチンにおける使用のためのネオ抗原を含むペプチド抗原(A)は、非同義変異の両側に12個のアミノ酸を含むことができ、そのため、中央(13番目)の残基として変異体アミノ酸を有する、長さ25アミノ酸のペプチドになる。あるいは、ペプチド抗原(A)は、クラスI MHCと結合すると予測される最小エピトープ(長さ8~13アミノ酸)のみを含むことができる。あるいは、個別化がんワクチンは、25アミノ酸ネオ抗原を含むペプチド抗原(A)と、ネオ抗原の予測最小エピトープのみを含むペプチド抗原(A)の両方を含有することができるであろう。
T細胞応答の誘導に対する効果
非同義的アミノ酸置換をもたらす単一ヌクレオチド多型は、通常は長さ8~13アミノ酸であるクラスI MHCと結合するペプチドエピトープ内のあらゆる位置に出現しうる。したがって、所与のクラスI MHCに結合することができる可能性のあるエピトープすべてを網羅するために、個別化がんワクチンにおける使用のためのネオ抗原を含むペプチド抗原(A)は、非同義変異の両側に12個のアミノ酸を含むことができ、そのため、中央(13番目)の残基として変異体アミノ酸を有する、長さ25アミノ酸のペプチドになる。あるいは、ペプチド抗原(A)は、クラスI MHCと結合すると予測される最小エピトープ(長さ8~13アミノ酸)のみを含むことができる。あるいは、個別化がんワクチンは、25アミノ酸ネオ抗原を含むペプチド抗原(A)と、ネオ抗原の予測最小エピトープのみを含むペプチド抗原(A)の両方を含有することができるであろう。
MHCクラスIIのペプチド結合ポケットは、通常は12~16アミノ酸のペプチドに結合し、一部は20またはそれを超えるほどの数のアミノ酸のペプチドに結合する。したがって、最小エピトープ(通常は、長さ8~13アミノ酸である)に結合する予測クラスIのみを含有するペプチド抗原(A)から構成される個別化がんワクチンは、CD4 T細胞応答を誘導する可能性が低い。しかし、25アミノ酸(または「25mer」)ペプチド抗原(A)を含有するがんワクチンは、所与の変異を標的とするCD4 T細胞応答を誘導しうるが、必ずしもそうではない。
がんワクチン中の25アミノ酸(または「25mer」)ペプチド抗原(A)は、的確な約7~12アミノ酸最小エピトープを含むペプチド抗原(A)と比較して低いレベルのCD8 T細胞応答を誘導することができ、これは、恐らく、異なる長さのペプチド抗原のプロセシングおよび提示効率の差に起因する。それ故、がんワクチンに組み入れられる25アミノ酸ペプチド抗原(A)は、最小エピトープを含むペプチド抗原(A)により誘導される規模と比較して小さな規模のCD8 T細胞応答を生じさせる結果となりうる。したがって、一部の実施形態では、ペプチド抗原コンジュゲートから構成されるがんワクチンに組み入れられる25アミノ酸ペプチド抗原(A)は、検出可能なCD8 T細胞応答を生じさせない結果となり、その一方で、的確な最小エピトープを含む7~12アミノ酸ペプチド抗原(A)は、検出可能なCD8 T細胞応答を生じさせる結果となる。さらなる実施形態では、ペプチド抗原コンジュゲートから構成されるがんワクチンに組み入れられる25アミノ酸ペプチド抗原(A)は、検出可能なCD4 T細胞応答を生じさせる結果となり、的確な最小エピトープを含む7~12アミノ酸ペプチド抗原(A)は、検出可能なCD4 T細胞応答を生じさせない結果となる。これらの予想外の発見に基づくと、一部の実施形態では、最小CD8 T細胞エピトープ(「Min」または最小エピトープ(ME)と呼ばれる)と25アミノ酸ペプチド(合成長鎖ペプチド(SLP)または長鎖ペプチドと呼ばれる)の両方である、同じエピトープを含む2つの長さのペプチド抗原(A)を、ペプチド抗原コンジュゲートから構成される個別化がんワクチンにペプチド抗原(A)として組み入れることができる。一部の実施形態では、最小CD4およびCD8
T細胞エピトープからなるペプチド抗原(A)は、ペプチド抗原コンジュゲートから構成される個別化がんワクチンに組み入れられる。さらなる実施形態では、最小CD8 T細胞からなるペプチド抗原(A)、および普遍的CD4 T細胞エピトープを含むペプチド抗原(A)、および必要に応じて、最小CD4 T細胞エピトープからなるペプチド抗原(A)は、ペプチド抗原コンジュゲートから構成される個別化がんワクチンに組み入れられる。好ましい実施形態では、ペプチド抗原コンジュゲートから構成される個別化ワクチンに組み入れられるペプチド抗原(A)は、7~35アミノ酸、通常は15~35アミノ酸、例えば25アミノ酸である。
T細胞エピトープからなるペプチド抗原(A)は、ペプチド抗原コンジュゲートから構成される個別化がんワクチンに組み入れられる。さらなる実施形態では、最小CD8 T細胞からなるペプチド抗原(A)、および普遍的CD4 T細胞エピトープを含むペプチド抗原(A)、および必要に応じて、最小CD4 T細胞エピトープからなるペプチド抗原(A)は、ペプチド抗原コンジュゲートから構成される個別化がんワクチンに組み入れられる。好ましい実施形態では、ペプチド抗原コンジュゲートから構成される個別化ワクチンに組み入れられるペプチド抗原(A)は、7~35アミノ酸、通常は15~35アミノ酸、例えば25アミノ酸である。
併用免疫療法
本明細書で開示されるペプチド抗原コンジュゲートは、腫瘍または感染性疾患を処置するための免疫原性組成物に使用することができる。ペプチド抗原コンジュゲートを単独で使用してもよく、または他の治療と組み合わせて使用してもよい。がんの処置のために、ペプチド抗原コンジュゲートから構成される免疫原性組成物を、外科手術、放射線療法または化学療法などの、任意の形態の処置の前、処置中または処置後に使用することができる。好ましい実施形態では、ペプチド抗原コンジュゲートを含む免疫原性組成物は、免疫調節物質、例えば、サイトカイン(例えば、IL-2)、抗腫瘍抗体、チェックポイント阻害剤(例えば、抗PD1)抗体、または免疫抑制を逆転させる、腫瘍細胞を直接死滅させる、もしくは腫瘍に対する免疫応答を増強する、他の小分子もしくは生物製剤と、組み合わせて使用される。好ましい実施形態では、ペプチド抗原コンジュゲートに基づくがんワクチンは、チェックポイント阻害剤(例えば、抗PD1、抗PDL1、抗CTLA4)と組み合わせて担腫瘍被験体に提供される。好ましい実施形態では、がんワクチン、例えば、個別化がんワクチンは、チェックポイント阻害剤の投与の前に被験体に提供される。本明細書で開示されるペプチド抗原コンジュゲートは、異種プライム・ブースト免疫化、例えば、ペプチド抗原コンジュゲートでのプライムまたはブースト、およびウイルスベクターなどの異種ワクチンでのプライムまたはブースト、にも使用することができる。
本明細書で開示されるペプチド抗原コンジュゲートは、腫瘍または感染性疾患を処置するための免疫原性組成物に使用することができる。ペプチド抗原コンジュゲートを単独で使用してもよく、または他の治療と組み合わせて使用してもよい。がんの処置のために、ペプチド抗原コンジュゲートから構成される免疫原性組成物を、外科手術、放射線療法または化学療法などの、任意の形態の処置の前、処置中または処置後に使用することができる。好ましい実施形態では、ペプチド抗原コンジュゲートを含む免疫原性組成物は、免疫調節物質、例えば、サイトカイン(例えば、IL-2)、抗腫瘍抗体、チェックポイント阻害剤(例えば、抗PD1)抗体、または免疫抑制を逆転させる、腫瘍細胞を直接死滅させる、もしくは腫瘍に対する免疫応答を増強する、他の小分子もしくは生物製剤と、組み合わせて使用される。好ましい実施形態では、ペプチド抗原コンジュゲートに基づくがんワクチンは、チェックポイント阻害剤(例えば、抗PD1、抗PDL1、抗CTLA4)と組み合わせて担腫瘍被験体に提供される。好ましい実施形態では、がんワクチン、例えば、個別化がんワクチンは、チェックポイント阻害剤の投与の前に被験体に提供される。本明細書で開示されるペプチド抗原コンジュゲートは、異種プライム・ブースト免疫化、例えば、ペプチド抗原コンジュゲートでのプライムまたはブースト、およびウイルスベクターなどの異種ワクチンでのプライムまたはブースト、にも使用することができる。
組成物の製剤化
本明細書で開示されるペプチド抗原コンジュゲートから構成される免疫原性組成物は、被験体への投与のために調製される医薬組成物であって、本明細書に記載の免疫原の1つまたは複数についての治療有効量を含む医薬組成物として、製剤化することができる。開示される化合物の治療有効量は、投与経路、被験体の種、および処置されることになる被験体の身体的特徴に依存することになる。考慮されうる具体的な因子としては、疾患重症度およびステージ、体重、食事、ならびに併用薬物が挙げられる。開示される化合物の治療有効量の決定に対するこれらの因子の関係は、当業者に理解されている。
本明細書で開示されるペプチド抗原コンジュゲートから構成される免疫原性組成物は、被験体への投与のために調製される医薬組成物であって、本明細書に記載の免疫原の1つまたは複数についての治療有効量を含む医薬組成物として、製剤化することができる。開示される化合物の治療有効量は、投与経路、被験体の種、および処置されることになる被験体の身体的特徴に依存することになる。考慮されうる具体的な因子としては、疾患重症度およびステージ、体重、食事、ならびに併用薬物が挙げられる。開示される化合物の治療有効量の決定に対するこれらの因子の関係は、当業者に理解されている。
被験体への投与のための免疫原性組成物は、医薬組成物であることができ、選ばれた分子に加えて、少なくとも1つのさらなる薬学的に許容される添加剤、例えば、担体、増粘剤、希釈剤、緩衝剤、保存剤、界面活性剤およびこれらに類するものを含むことができる。免疫原性組成物は、1つまたは複数の追加の活性成分、例えば、抗微生物剤、麻酔剤およびこれらに類するものも含むことができる。これらの製剤に有用な薬学的に許容される担体は、従来のものである。Remington’s Pharmaceutical Sciences、E. W. Martin著、Mack Publishing Co.、Easton、PA、19版(1995年)には、本明細書で開示される化合物の薬学的送達に適している組成物および製剤が記載されている。
一般に、担体の性質は、利用される特定の投与方式に依存することになる。例えば、非経口製剤は、薬学的におよび生理学的に許容される流体、例えば、水、生理食塩水、平衡塩類溶液、デキストロース水溶液、グリセロール、またはこれらに類するものをビヒクルとして含む、注射可能な流体を通常は含有する。生物学的に中性の担体に加えて、投与される医薬組成物は、少量の非毒性補助物質、例えば、湿潤または乳化剤、保存剤、およびpH緩衝剤、ならびにこれらに類するもの、例えば、酢酸ナトリウムまたはソルビタンモノラウレートを含有することができる。
免疫原性組成物を製剤化するために、開示されるナノ粒子成分、または開示されるナノ粒子成分を含有する溶液を、様々な薬学的に許容される添加剤、ならびにナノ粒子の分散のための基剤またはビヒクルと併せることができる。所望される添加剤としては、pH制御剤、例えば、アルギニン、水酸化ナトリウム、グリシン、塩酸、クエン酸およびこれらに類するものが挙げられるが、それらに限定されない。加えて、局所麻酔薬(例えば、ベンジルアルコール)、等張剤(isotonizing agent)(例えば、塩化ナトリウム、マンニトール、ソルビトール)、吸着阻害剤(例えば、Tween 80またはMiglyol 812)、溶解増強剤(例えば、シクロデキストリンおよびそれらの誘導体)、安定剤(例えば、血清アルブミン)、および還元剤(例えば、グルタチオン)を挙げることができる。当技術分野において周知である多くの他の適するアジュバントの中でも特に、水酸化アルミニウム(例えば、Amphogel、Wyeth Laboratories、Madison、NJ)、フロイントアジュバント、MPL(商標)(3-O-脱アシル化モノホスホリルリピドA;Corixa、Hamilton、IN)およびIL-12(Genetics Institute、Cambridge、MA)などのアジュバントを、組成物に組み入れることができる。組成物が液体である場合、単一のものと考えられる0.9%(w/v)生理食塩溶液の張度を基準にして測定される製剤の張度は、通常は、投与部位で実質的な不可逆的組織損傷を誘導しないであろう値に調整される。一般に、溶液の張度は、約0.3~約3.0、例えば、約0.5~約2.0、または約0.8~約1.7の値に調整される。
本開示の免疫原性組成物は、通常は、無菌であり、製造、保管および使用条件下で安定している。無菌溶液は、必要量の化合物を、必要に応じて、本明細書に列挙される成分の1つまたは組み合わせとともに、適切な溶媒に組み入れ、その後、濾過滅菌することにより調製することができる。一般に、分散物は、化合物および/または他の生物活性薬剤を、基礎分散媒と本明細書に列挙されるものからの他の必要成分とを含有する無菌ビヒクルに、組み入れることにより調製される。無菌粉末の場合、調製方法は、化合物と任意の追加の所望成分の粉末を、前もって滅菌濾過されたそれらの溶液から生じさせる、真空乾燥および凍結乾燥を含む。微生物の作用の防止は、様々な抗菌および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールおよびこれらに類するものによって果たすことができる。
本開示は、哺乳動物被験体における疾患および他の状態の予防および処置に使用するための、本明細書に記載の免疫原性組成物、活性成分、および/またはそれらを投与する手段を収容している、キット、パッケージおよび多容器ユニットも含む。一実施形態では、これらのキットは、本明細書に記載の免疫原性組成物の1つもしくは複数を収容している容器、または本明細書に記載の免疫原性組成物の1つもしくは複数を含有する製剤を含む。一例では、免疫原性組成物は、被験体への送達のための薬学的調製物に製剤化される。免疫原性組成物は、必要に応じて、バルク調剤容器に、または単位剤形もしくは複数単位剤形で、収容される。必要に応じた調剤手段、例えば、肺または鼻腔内スプレーアプリケーターを備えさせることができる。包装材料は、必要に応じて、処置の目的および/またはその包装材料で包装されている医薬剤を使用することができる方法を示す、ラベルまたは指示を含む。
免疫応答を誘導する方法
本明細書に記載のペプチド抗原(A)を含む免疫原性組成物は、被験体におけるペプチド抗原(A)に対する免疫応答を惹起するために使用することができる。開示される方法による恩恵を受けることができる被験体は、ヒトおよび獣医学的被験体を含む。
本明細書に記載のペプチド抗原(A)を含む免疫原性組成物は、被験体におけるペプチド抗原(A)に対する免疫応答を惹起するために使用することができる。開示される方法による恩恵を受けることができる被験体は、ヒトおよび獣医学的被験体を含む。
一部の実施形態では、例えば感染性因子への曝露または曝露の可能性のため、ペプチド抗原を含む感染性因子に感染している、またはそのような感染性因子による感染症を発症するリスクがある被験体が、処置に選択される。開示される免疫原性組成物の治療有効量の投与後、被験体を感染、感染に関連する症状、または両方についてモニターすることができる。
一部の実施形態では、悪性腫瘍などのがんを有するまたはがんを発症するリスクがある被験体が、処置に選択される。開示される免疫原の治療有効量の投与後、被験体を、がんの存在、腫瘍負荷の低減、がんの任意の適切な症状、またはこれらの組み合わせについてモニターすることができる。
本開示の治療薬および方法での処置が意図される典型的な被験体は、ヒトはもちろん、非ヒト霊長類および他の動物も含む。本開示の方法による予防または処置のための被験体を同定するために、許容されるスクリーニング方法が、標的とされるもしくは疑われる疾患もしくは状態に関連するリスク因子の決定に、または被験体における既存の疾患もしくは状態のステータスの決定に、利用される。これらのスクリーニング方法は、例えば、標的とされるまたは疑われる疾患または状態に関連する可能性がある、環境リスク因子、家族性リスク因子、職業リスク因子および他のそのようなリスク因子を決定するための従来の精密検査、ならびに疾患または状態を検出および/または特徴付けるための当技術分野において利用可能であり、周知である診断方法、例えば、様々なELISAおよび他の免疫アッセイ法を含む。これらのおよび他の慣例的方法により、臨床医は、本開示の方法および医薬組成物を使用して、治療を必要とする患者を選択することができる。これらの方法および原理に従って、本明細書における教示、または当業者に公知の他の従来の方法に従って、独立した予防もしくは処置プログラムとして、または他の処置に対する経過観察、補助的、もしくは協調的処置レジメンとして、組成物を投与することができる。
本明細書で開示のペプチド抗原を含む免疫原性組成物の治療有効量の投与は、予防目的である場合もあり、または治療目的であることもある。予防的に提供される場合、免疫原性組成物は、いずれかの症状より前に、例えば、感染症または腫瘍発症より前に、提供される。免疫原性組成物の予防的投与は、疾患または状態のその後の発症を予防または改善するのに役立つ。それ故、一部の実施形態では、方法は、感染症に罹患するまたは腫瘍を発症するリスクがある被験体を選択すること、および開示される免疫原性組成物の開示される治療有効量の治療有効量を投与することを含む。したがって、免疫原性組成物を、感染性因子への予想される曝露の前にまたは腫瘍発症前に提供して、感染症または腫瘍および/または任意の関連疾患症状の予想される重症度、継続期間または程度を減弱することができる。
治療的に提供される場合、開示される免疫原性組成物を、疾患もしくは状態の症状の発生時または発生後、例えば、感染症の症状の発症、または感染症の診断、または腫瘍の症状の発症、または腫瘍の診断の後に、提供することができる。感染症または腫瘍の処置は、被験体における感染症または腫瘍の徴候または症状を遅延および/または低減させることを含むことができる。一部の例では、本明細書で開示される方法を使用する処置は、被験体の生存期間を延長する。
免疫原性組成物を協調的免疫化プロトコールまたは組み合わせ製剤で使用することができる。
一部の実施形態では、開示される免疫原性組成物の治療有効量を被験体に投与して、被験体における感染性因子を処置または阻害することができる。感染性因子は、ウイルス、細菌および真菌を含むがこれらに限定されない、被験体を感染させることができる作用因子である。感染性因子に感染している、感染していることが疑われる、または感染性因子による感染症を発症するリスクがある被験体を、処置に選択することができる。一部の実施形態では、感染性因子は、上記の通りウイルス、細菌または真菌であり、ペプチド抗原は、特定のウイルス、細菌または真菌からの抗原を含む。
一部の実施形態では、開示される免疫原性組成物の治療有効量を被験体に投与して、被験体における腫瘍および/またはがんを処置または阻害することができる。腫瘍および/またはがんを有する、有することが疑われる、または発症するリスクがある被験体を、処置に選択することができる。一部の実施形態では、被験体における腫瘍および/またはがんの処置は、腫瘍の成長および/または増殖を減少させる。腫瘍は、目的の任意の腫瘍であってよく、良性であってもよく、または悪性であってもよい。
腫瘍の処置は、一般に、腫瘍の診断後にまたは前駆状態(例えば、異形成、もしくは良性腫瘍発症)の開始後に、開始される。処置をがんの早期に開始することができ、例えば、被験体が状態の症状を明示する前に、例えば、ステージI診断中に、または異形成が診断されたときに、開始することができる。しかし、処置を、疾患の任意のステージ、例えば、これらに限定されないが、ステージI、ステージII、ステージIIIおよびステージIVがん中に開始することができる。一部の例では、処置は、悪性腫瘍またはさらには転移性腫瘍に転換しうる良性腫瘍を有する被験体に投与される。
悪性がんなどの状態の発症後に開始された処置は、状態のうちの1つの症状の重症度を低下させる結果となることもあり、または症状を完全に除去する結果となることもあり、または転移、腫瘍体積もしくは腫瘍数を低減させる結果となることもある。一部の例では、腫瘍は、処置後に検出不能になる。本開示の一態様では、転移などの、腫瘍の形成が、遅延、予防または減少される。別の態様では、原発性腫瘍のサイズが、減少される。さらなる態様では、腫瘍の症状が、軽減される。さらに別の態様では、腫瘍体積が、減少される。
開示される治療を開始する前に、例えば、被験体が腫瘍を有するかどうかを決定するために、被験体をスクリーニングすることができる。腫瘍の存在は、当技術分野において公知の方法によって決定することができ、そのような方法には、通常は、細胞学的および形態学的評価が含まれる。腫瘍は、確立腫瘍である場合もある。細胞は、in vivoの細胞であってもよく、または生検から得られる細胞を含むex vivoの細胞であってもよい。腫瘍の存在は、本明細書で提供される方法を使用して腫瘍を処置することができることを示す。
治療有効量は、疾患の重症度、および患者の全身の健康状態に依存することになる。治療有効量は、症状の主観的軽減、または臨床医もしくは他の有資格観察者により認められるような客観的に同定可能な向上のどちらかをもたらす量である。一実施形態では、治療有効量は、腫瘍成長を阻害するのに必要な量、または腫瘍の徴候もしくは症状を低減させるのに有効な量である。別の実施形態では、治療有効量は、感染性因子による感染を阻害するのに必要な量、または感染の徴候もしくは症状を低減させるのに有効な量である。投与される薬剤の治療有効量は、所望の効果および処置される被験体に依存して変わりうる。一部の例では、治療量は、患者の腫瘍負荷を消失もしくは低減させる量、または転移性細胞の増殖を予防するまたは低減させる量、または被験体における感染性因子の負荷を低減させる量である。
免疫原性組成物の実際の投薬量は、被験体の疾患適応症および特定のステータス(例えば、被験体の年齢、サイズ、適応度、症状の程度、感受性因子およびこれらに類するもの)、投与の回数および経路、同時に投与される他の薬物または処置、ならびに被験体において所望の活性または生物学的応答を惹起するための化合物の具体的な薬理などの因子に従って変わることになる。投薬レジメンを、最適な予防または治療応答が得られるように調整することができる。治療有効量は、化合物および/または他の生物活性薬剤の任意の毒性または有害副作用より、治療有益効果のほうが臨床的観点で上回る量でもある。
担当臨床医は、標的部位(例えば、肺または体循環)において所望の濃度を維持するように、投薬量を変化させることができる。送達方式に基づいて、例えば、静脈内または皮下または筋肉内送達に対して、経皮、直腸、経口、肺、骨内または鼻腔内送達に基づいて、より高いまたはより低い濃度を選択することができる。投与される製剤の放出速度、例えば、粉末に対する肺内噴霧の放出速度、注射微粒子または経皮送達製剤に対する徐放性経口送達製剤の放出速度、などに基づいて、投薬量を調整することもできる。
局所および全身投与を含む任意の投与方式を、開示される治療剤に使用することができる。例えば、局所、経口、血管内、例えば静脈内、筋肉内、腹腔内、鼻腔内、皮内、髄腔内および皮下投与を使用することができる。特定の投与方式および投薬レジメンは、症例の詳細(例えば、被験体、疾患、罹患している病状、および処置が予防的であるかどうか)を考慮に入れて、担当臨床医により選択されることになる。1つより多くの薬剤または組成物が投与されることになる場合、1つまたは複数の投与経路が使用されることもある。
開示される治療剤を、正確な投薬量の個別投与に適している単位剤形で製剤化することができる。加えて、開示される治療剤を単回用量または複数回用量スケジュールで投与することができる。複数回用量スケジュールは、主要処置過程が、1つより多くの別個の用量、例えば、1~10用量、続いて、組成物の作用を維持または強化する必要に応じたその後の時間間隔で与えられる他の用量を用いるものである。処置は、数日から数ヶ月、またはさらには数年にわたっての、化合物の毎日用量または複数回毎日用量を含みうる。したがって、投薬レジメンはまた、少なくとも一部では、処置される被験体の特定の要求に基づいて決定されることになり、投与実施者の判断に依存することになる。
2Bと呼ばれる化合物1である1-(4-アミノブチル)-2-ブチル-1H-イミダゾ[4,5-c]キノリン-4-アミンは、図3に示すスキームに従って合成した。
1-c. 2,4-キノリンジオールから出発して、中間体である1-bを、以前に記載されたように調製した(Lynn GMら、Nat Biotechnol 33巻(11号):1201~1210頁、2015年)。210mLのトリエチルアミン(TEA)(10% w/w)中の21gの1-b(87.8mmol、1当量)に16.34g(87.8mmol、1当量)のN-boc-1,4-ブタンジアミンを激しく撹拌しながら添加した。反応混合物を70℃に加熱し、HPLCによりモニターし、2時間後に反応が完了したことを確認した。トリエチルアミンを真空下で除去し、得られた油を200mLのジクロロメタンに溶解し、次いで3×100mLのDI H2Oで洗浄した。有機層をNa2SO4で乾燥させ、次いで真空下で除去し、得られた油を1:1(v:v)ヘキサンおよびジエチルエーテルと研和して、30.7gの中間体1-cの黄色結晶を得た。MS(APCI)C18H23ClN4O4、m/zの計算値 394.1、実測値
394.9。
394.9。
1-d. 30.7g(76.4mmol)の中間体1-cを、Parr反応器容器内で300mLの酢酸エチルに溶解し、これをアルゴンでバブリングし、その後、3gの炭素担持10%白金を添加した。反応容器をアルゴン下に保ち、次いで排気し、H2(気体)で数回加圧した後、激しく振盪させながら加圧して55PSI H2(気体)にした。圧力が55PSIで安定化するまでH2(気体)を継続的に加え、55PSIになった時点で反応が完了したと決定した。次いで、Parr反応器から反応混合物をセライトに通して濾過し、蒸発乾固させて黄色油を得、これを1:1ヘキサン/エーテルと研和して白色結晶を得、これを濾過によって回収して、27.4gの1-dの分光学的に純粋な白色結晶を得た。MS(APCI)C18H25ClN4O2、m/zの計算値 364.2、実測値365.2。
1-e. 50mLのTHF中の10g(27.4mmol、1当量)の1-dに、7.7mLのトリエチルアミン(54.8mmol、2当量)を添加し、続いて、30mLのTHF中の3.6gの塩化バレロイル(30.1mmol、1.1当量)を激しく撹拌しながら滴下添加し、この間、反応混合物は氷上にあった。90分後、氷浴を取り外し、THFを真空下で除去して黄色油を得、これを100mLのジクロロメタン(DCM)に溶解し、これを3×50mLのpH5.5 100mM酢酸緩衝液で洗浄した。DCMを油中、真空下で除去し、これを酢酸エチルと研和して10.4gの白色固体を得、これを、1gのCaO(固体)を含有するメタノールに溶解し、これを100℃で5時間、激しく撹拌しながら加熱した。反応混合物を濾過し、乾燥させて、10.2gのオフホワイトの固体である中間体1-eを得た。MS(ESI)C23H31ClN4O2、m/zの計算値 430.21、実測値 431.2。
1-f. 10.2g(23.7mmol、1当量)の1-eに、30.4g(284mmol、12当量)の液体ベンジルアミンを添加し、これを、激しく撹拌しながら110℃に加熱した。反応は10時間後に完了し、反応混合物を200mLの酢酸エチルに添加し、4×100mLの1M HClで洗浄した。有機層をNa2SO4で乾燥させ、次いで真空下で除去し、得られた油を酢酸エチルから再結晶させて、10.8gの中間体1-fの分光学的に純粋な白色結晶を得た。MS(ESI)C30H39N5O2、m/zの計算値 501.31、実測値 502.3。
化合物1. 10.8g(21.5mmol)の1-fを54mLの濃(>98%)H2SO4に溶解し、反応混合物を、3時間、激しく撹拌した。3時間後、粘稠赤色反応混合物を、激しく撹拌しながら500mLの DI H2Oにゆっくりと添加した。反応混合物を30分間撹拌し、次いでセライトに通して濾過し、その後、溶液のpHが約pH10になるまで10M NaOHを添加した。次いで、水性層を6×200mLのDCMで抽出し、得られた有機層をNa2SO4で乾燥させ、真空下で減量させて、分光学的に純粋な白色固体を得た。1H NMR (400 MHZ, DMSO-d6) δ 8.03 (d, J = 8.1 HZ, 1H), 7.59 (d, J = 8.1Hz, 1H), 7.41 (t, J = 7.41Hz, 1H), 7.25 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 6.47 (s, 2H), 4.49 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.91 (t, J = 7.78 Hz, 2H), 2.57 (t, J = 6.64 Hz, 1H), 1.80 (m, 4H), 1.46 (sep, J= 7.75 Hz, 4H), 0.96 (t, J = 7.4 Hz, 3H)。MS(ESI)C18H25N5、m/zの計算値 311.21、実測値 312.3。
2BXyと呼ばれる化合物2である1-(4-(アミノメチル)ベンジル)-2-ブチル-1H-イミダゾ[4,5-c]キノリン-4-アミンは、以前に記載された(参照:Lynn GMら、In vivo characterization of the
physicochemical properties of polymer-linked TLR agonists that enhance vaccine immunogenicity. Nat Biotechnol 33巻(11号):1201~1210頁、2015年、およびShukla NMら、Syntheses
of fluorescent imidazoquinoline conjugates as probes of Toll-like receptor 7. Bioorg Med Chem Lett 20巻(22号):6384~6386頁、2010年)。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.77 (dd, J = 8.4, 1.4 Hz, 1H), 7.55 (dd, J =
8.4, 1.2 Hz, 1H), 7.35 - 7.28 (m, 1H), 7.25 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.06 - 6.98 (m, 1H), 6.94 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 6.50 (s, 2H), 5.81 (s, 2H), 3.64 (s, 2H), 2.92-2.84 (m, 2H), 2.15 (s, 2H), 1.71 (q, J =
7.5Hz, 2H), 1.36 (q, J = 7.4Hz, 2H), 0.85 (t, J = 7.4 Hz, 3H)。MS(APCI)C22H25N5、m/zの計算値 359.2、実測値 360.3。
physicochemical properties of polymer-linked TLR agonists that enhance vaccine immunogenicity. Nat Biotechnol 33巻(11号):1201~1210頁、2015年、およびShukla NMら、Syntheses
of fluorescent imidazoquinoline conjugates as probes of Toll-like receptor 7. Bioorg Med Chem Lett 20巻(22号):6384~6386頁、2010年)。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.77 (dd, J = 8.4, 1.4 Hz, 1H), 7.55 (dd, J =
8.4, 1.2 Hz, 1H), 7.35 - 7.28 (m, 1H), 7.25 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.06 - 6.98 (m, 1H), 6.94 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 6.50 (s, 2H), 5.81 (s, 2H), 3.64 (s, 2H), 2.92-2.84 (m, 2H), 2.15 (s, 2H), 1.71 (q, J =
7.5Hz, 2H), 1.36 (q, J = 7.4Hz, 2H), 0.85 (t, J = 7.4 Hz, 3H)。MS(APCI)C22H25N5、m/zの計算値 359.2、実測値 360.3。
DBCO-2BXy3、2BXy3またはDBCO-(Glu(2BXy)3)と呼ばれる、化合物3は、固相ペプチド合成により調製したFmoc-(Glu)3-NH2前駆体から出発して合成した。50mgのFmoc-(Glu)3-NH2(0.08mmol、1当量)、143mgの化合物2(0.40mmol、5当量)、84mgの2-クロロ-4,6-ジメトキシ-1,3,5-トリアジン(CDMT)(0.48mmol、6当量)および48.5mgの4-メチルモルホリン(NMM)(0.48mmol、6当量)を、3.25mLのDMSOに、激しく撹拌しながら、室温で、周囲空気下で添加した。反応の進行をHPLC(AUC 254nm)によりモニターした。追加の1当量の化合物2および追加の2当量のCDMTとNMMの両方を、30分後に添加した。2時間後、反応は完了し、反応混合物を50mLの1M HCl溶液に添加してFmoc保護中間体を沈殿させ、これを、4℃で10分間、3000gでその溶液を遠心分離することにより回収した。HCl溶液を廃棄し、Fmoc保護中間体を固体白色ペレットとして回収した。白色固体を50mLの1M HCl溶液に再懸濁させ、3000gで、4℃で5分間、回転させ、1M HCl溶液を廃棄し、生成物を固体ペレットとして回収した。この工程を反復し、その後、固体を回収し、真空下で乾燥させて、156.1mgのFmoc保護中間体を定量的収率で得た。次いで、Fmoc保護生成物を、DMF溶液中の20%ピペリジン 1.5mLに、30分にわたって室温で添加して脱保護生成物を得、次いで、これを50mLのエーテルから沈殿させ、4℃で30分間、3000gで遠心分離した。生成物を固体ペレットとして回収し、次いで、エーテルでさらに2回洗浄し、その後、真空下で乾燥させて126.4mgの中間体を得た。得られた中間体、NH2-(Glu-2BXy)3-NH2、のうちの60mg(0.042mmol、1当量)を、1mLのDMSO中の18.6mg(0.046mmol、1.1当量)のDBCO-NHSエステル(Scottsdale、Arizona、USA)および8.5μLのトリエチルアミン(0.084mmol、2当量)と、6時間、室温で反応させた。得られた生成物、化合物3を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep-C18カラム、50×100mm、5μmで、12分にわたって30~70%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。生成物が7.0分で溶出し、得られた画分を回収し、凍結させ、次いで、凍結乾燥させて、40.12mg(収率55.7%)の分光学的に純粋な(254nmで>95%AUC)白色粉末を得た。MS(ESI)C100H106N20O8 m/zの計算値 1714.85、実測値
858.9(M/2)+
858.9(M/2)+
DBCO-2BXy5、2BXy5またはDBCO-(Glu(2BXy)5)と呼ばれる、化合物4は、Fmoc-(Glu)5-NH2を化合物2のコンジュゲーションのための出発物質として使用したことを除き、化合物3について説明したのと同じ手順を使用して合成した。化合物4を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep-C18カラム、50x100mm、5μmで、12分にわたって38~48%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。生成物は8.0分で溶離し、得られた画分を回収し、凍結させ、次いで凍結乾燥させて、45.9mg(収率63.4%)の分光学的に純粋な(254nmで>95%AUC)白色粉末を得た。MS(ESI)C154H166N32O12 m/zの計算値 2655.34、実測値 886.6(M/3)+。
DBCO-2B5、2B5またはDBCO-(Glu(2B)5)と呼ばれる、化合物5は、Fmoc-(Glu)5-NH2を化合物1のコンジュゲーションのための出発物質として使用したことを除き、化合物3について説明したのと同じ手順を使用して合成した。化合物5を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep-C18カラム、50x100mm、5μmで、12分にわたって33~45%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。生成物は約10.0分で溶離し、得られた画分を回収し、凍結させ、次いで凍結乾燥させて、25.2mg(収率62.6%)の分光学的に純粋な(254nmで>95%AUC)白色粉末を得た。MS(ESI)C134H166N32O12 m/zの計算値 2415.34、実測値 1209.3(M/2)+。
DBCO-2B3W2、2B3W2またはDBCO-(Glu(2B)3(Trp)2)と呼ばれる、化合物6は、Fmoc-Glu-Trp-Glu-Trp-Glu-NH2を化合物1のコンジュゲーションのための出発物質として使用したことを除き、化合物3について説明したのと同じ手順を使用して合成した。化合物6を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep-C18カラム、50x100mm、5μmで、12分にわたって33~47%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。生成物は約8分で溶離し、得られた画分を回収し、凍結させ、次いで凍結乾燥させて、197mg(収率50.6%)の分光学的に純粋な(254nmで>95%AUC)白色粉末を得た。MS(ESI)C110H126N24O10 m/zの計算値 1943.01、実測値 973.0(M/2)+。
DBCO-2B2W3、2B2W3またはDBCO-(Glu(2B)2(Trp)3)と呼ばれる、化合物7は、Fmoc-Trp-Glu-Trp-Glu-Trp-NH2を化合物1のコンジュゲーションのための出発物質として使用したことを除き、化合物3について説明したのと同じ手順を使用して合成した。化合物7を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep-C18カラム、50x100 mm、5μmで、12分にわたって35~65%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。生成物は約9分で溶離し、得られた画分を回収し、凍結させ、次いで凍結乾燥させて、11.6mg(収率62.5%)の分光学的に純粋な(254nmで>95%AUC)白色粉末を得た。MS(ESI)C98H106N20O9 m/zの計算値 1706.85、実測値 854.9(M/2)+。
DBCO-2B2W8、2B2W8またはDBCO-(Glu(2B)2(Trp)8)と呼ばれる、化合物8は、Fmoc-Trp-Trp-Glu-Trp-Trp-Trp-Trp-Glu-Trp-Trp-NH2を化合物1のコンジュゲーションのための出発物質として使用したことを除き、化合物3について説明したのと同じ手順を使用して合成した。化合物8を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep-C18カラム、50x100mm、5μmで、12分にわたって35~85%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。生成物は約8.0分で溶離し、得られた画分を回収し、凍結させ、次いで凍結乾燥させて、3.3mg(収率16.3%)の分光学的に純粋な(254nmで>95%AUC)白色粉末を得た。MS(ESI)C153H156N30O14 m/zの計算値 2637.24、実測値
1320.2(M/2)+。
1320.2(M/2)+。
DBCO-2B1W4、2B1W4またはDBCO-(Glu(2B)1(Trp)4)と呼ばれる、化合物9は、Fmoc-Trp-Trp-Glu-Trp-Trp-NH2を化合物1のコンジュゲーションのための出発物質として使用したことを除き、化合物3について説明したのと同じ手順を使用して合成した。化合物9を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep-C18カラム、50x100mm、5μmで、12分にわたって50~55%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。生成物は8.9分で溶離し、得られた画分を回収し、凍結させ、次いで凍結乾燥させて、9.7mg(収率55.4%)の分光学的に純粋な(254nmで>95%AUC)白色粉末を得た。MS(ESI)C86H86N16O8 m/zの計算値 1470.68、実測値 736.6(M/2)+。
DBCO-W3、W3またはDBCO-(Trp)3と呼ばれる、化合物10は、固相ペプチド合成により調製した50.2mg(0.08mmol、1当量)のトリペプチド前駆体NH2-(Trp)3-NH2を、1.5mLのDMSO中で、35mgのDBCO-NHS(0.096mmol、1.1当量)および44mgのトリエチルアミン(0.44mmol、5当量)と反応させることにより合成した。化合物10を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep-C18カラム、50x100mm、5μmで、12分にわたって30~95%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。生成物は約9分で溶離し、得られた画分を回収し、凍結させ、次いで凍結乾燥させて、31.2mg(収率41.5%)の分光学的に純粋な(254nmで>95%AUC)ものを得た。
DBCO-W5、W5またはDBCO-(Trp)5と呼ばれる、化合物11は、NH2-(Trp)5-NH2(配列番号70)をペプチド前駆体としてDBCO-NHSとのコンジュゲーションに使用したことを除き、化合物10と同じ手順を使用して合成した。化合物11を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep-C18カラム、50x100mm、5μmで、12分にわたって30~95%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。生成物は約10分で溶離し、得られた画分を回収し、凍結させ、次いで凍結乾燥させて、28.7mg(収率44.1%)の分光学的に純粋な(254nmで>95%AUC)白色粉末を得た。MS(ESI)C74H66N12O7 m/zの計算値 1234.52、実測値 1235.6(M+H)+
DBCO-2BXy3W2、2BXy3W2またはDBCO-(Glu(2BXy)3(Trp)2)と呼ばれる、化合物12は、Fmoc-Glu-Trp-Glu-Trp-Glu-NH2および化合物2を出発物質として使用して調製した。500mgのFmoc-Glu-Trp-Glu-Trp-Glu-NH2(0.5mmol、1当量)、595.6mgのチアゾリン-2-チオール(TT)(5mmol、10当量)、および575.7mgの1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド(EDC)(3mmol、6当量)を、26mLのDCMに懸濁させた。18.3mgの4-(ジメチルアミノ)ピリジン(DMAP)(0.2mmol、0.3当量)を添加し、反応混合物を室温で撹拌した。反応の進行を分析HPLCによりモニターした。4時間後、追加の4当量のTTおよび2当量のEDCを添加した。終夜撹拌した後、2当量のTTおよび半当量のEDCを添加した。6時間後、反応が完了した。DCMを真空下で除去し、固体を6mLの乾燥DMSOに溶かした。539.3mgの化合物2(1.5mmol、3当量)を添加し、反応混合物を2時間、室温で撹拌した。次いで、コンジュゲートした中間体を300mLの1M HClから沈殿させ、3000gで、4℃で10分間、遠心分離した。ペレットを回収し、1M HClでさらに1回、そしてDI水で1回洗浄した。最終回収ペレットを凍結させ、真空下で乾燥させた。809.06mgのFmoc-2BXy3W2-NH2(0.4mmol、1当量)を、DMF中の20%ピペリジン 4mLに溶解した。反応混合物を室温で1時間撹拌した。次いで、脱保護された中間体を100mLのエーテルから沈殿させ、3000gで、4℃で10分間、遠心分離した。生成物を固体ペレットとして回収し、次いで、エーテルでさらに2回洗浄し、その後、真空下で乾燥させて中間体を得た。729mgのNH2-2BXy3W2-NH2(0.4mmol、1当量)を6mLの乾燥DMSOに溶解した。488.8mgのDBCO-NHS(1.2mmol、3当量)を添加し、反応混合物を室温で1時間撹拌した。得られた生成物を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep C-18カラム、50×100mm、5μmで、12分にわたって36~46%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。得られた画分を併せ、凍結させ、凍結乾燥させて、239mg(収率38.1%)の分光学的に純粋な白色粉末を得た。MS(ESI)C122H126N24O10 m/zの計算値 2087.65 実測値 697(m/3)+。
DBCO-2B6W4、2B6W4またはDBCO-(Glu(2B)6(Trp)4)と呼ばれる、化合物13は、Fmoc-(Glu-Trp-Glu-Trp-Glu)2-NH2を化合物1のコンジュゲーションのための出発物質として使用したことを除き、化合物3について説明したのと同じ手順を使用して合成した。化合物13を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep C-18カラム、30×100mm、5μmで、10分にわたって24~45%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。画分を回収し、凍結させ、次いで凍結乾燥させて、分光学的に純粋な(254nmで>95%AUC)白色粉末を得た。MS(ESI)C201H236N46O18 m/zの計算値 3582.4、実測値 717.7(M/5)+。
DBCO-2B4W6、2B4W6またはDBCO-(Glu(2B)4(Trp)6)と呼ばれる、化合物14は、Fmoc-(Trp-Glu-Trp-Glu-Trp)2-NH2を化合物1のコンジュゲーションのための出発物質として使用したことを除き、化合物3について説明したのと同じ手順を使用して合成した。化合物14を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep C-18カラム、30×100mm、5μmで、10分にわたって24~45%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。画分を回収し、凍結させ、次いで凍結乾燥させて、分光学的に純粋な(254nmで>95%AUC)白色粉末を得た。MS(ESI)C177H196N38O16 m/zの計算値 3111.7、実測値 777.5(M/4)+。
DBCO-2BXy1W4、2BXy1W4またはDBCO-(Glu(2BXy)1(Trp)4)と呼ばれる、化合物15は、Fmoc-Trp-Trp-Glu-Trp-Trp-NH2を出発物質として使用したことを除き、化合物3について説明したのと同じ手順を使用して調製した。化合物15を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep C-18カラム、30×100mm、5μmで、16分にわたって40~70%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。得られた画分を回収し、凍結させ、次いで凍結乾燥させて、3.4mg(収率73.3%)の分光学的に純粋な(254nmで>95%AUC)白色粉末を得た。MS(ESI)C90H85N15O9 m/zの計算値 1519.67、実測値 760.5(M/2)+。
DBCO-(GG2B)5、2B5G10またはDBCO-(Glu(2B)5(Gly)10)と呼ばれる、化合物16は、Fmoc-(Gly-Gly-Glu)5-NH2および化合物1を出発物質として使用したことを除き、化合物3について説明したのと同じ手順を使用して合成した。化合物16を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep C-18カラム、30×100mm、5μmで、12分にわたって22~42%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。生成物は7分で溶離し、得られた画分を回収し、凍結させ、次いで凍結乾燥させて、22.8mg(収率36.2%)の分光学的に純粋な(254nmで>95%AUC)白色粉末を得た。MS(ESI)C154H196N42O22 m/zの計算値 2985.51、実測値 598.5(M/5)+。
DBCO-(GG2BGGW)2GG2B、2B3W2G10またはDBCO-(Glu(2B)3(Trp)2(Gly)10)と呼ばれる、化合物17は、固相ペプチド合成により調製したFmoc-(Gly-Gly-Glu-Gly-Gly-Trp)2-Gly2-Glu-NH2前駆体、および化合物1から合成した。235.4mgのFmoc-(Gly-Gly-Glu-Gly-Gly-Trp)2-Gly2-Glu-NH2(0.15mmol、1当量)を、DMF中の20%ピペリジン 2mLに溶解した。30分後、反応が完了し、生成物を100mLのエーテルから沈殿させ、3000gで、4℃で10分間、遠心分離した。生成物を固体ペレットとして回収し、次いで、エーテルでさらに2回洗浄し、その後、真空下で乾燥させて、約200mgの脱保護中間体を得た。200mg(0.15mmol、1当量)のNH2-(Gly-Gly-Glu-Gly-Gly-Trp)2-Gly2-Glu-NH2を、2mLの乾燥DMSOに溶解し、89.73mgのDBCO-NHS(0.22mmol、1.5当量)を添加し、その後、TEA(0.22mmol、1.5当量)を添加した。反応混合物を室温で1時間撹拌した。得られたDBCO中間体を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent
Prep C-18カラム、50×100mm、5μmで、12分にわたって30~50%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。得られた画分を併せ、凍結させ、凍結乾燥させて、中間体を得た。25mgのDBCO-(Gly-Gly-Glu-Gly-Gly-Trp)2-Gly2-Glu-NH2(0.015mmol、1当量)および17.11mgの化合物1(0.055mmol、3.6当量)を、1.2mLの乾燥DMSOに溶解した。TEA(0.183mmol、12当量)を添加し、反応混合物を室温で5時間撹拌した。19.17mgのHATU(0.05mmol、3.3当量)を添加し、反応混合物を室温で撹拌した。反応の進行をLC-MSによりモニターした。追加の1.2当量の化合物1、および1.1当量のHATUを1時間後に添加した。2時間後、反応が完了した。得られた生成物を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep C-18カラム、30x100mm、5μmで、12分にわたって30~60%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。得られた画分を合わせて、凍結させ、次いで凍結乾燥させて、分光学的に純粋な白色粉末を得た。MS(ESI)C130H156N34O20 m/zの計算値 2515.96 実測値 839(m/3)+。
Prep C-18カラム、50×100mm、5μmで、12分にわたって30~50%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。得られた画分を併せ、凍結させ、凍結乾燥させて、中間体を得た。25mgのDBCO-(Gly-Gly-Glu-Gly-Gly-Trp)2-Gly2-Glu-NH2(0.015mmol、1当量)および17.11mgの化合物1(0.055mmol、3.6当量)を、1.2mLの乾燥DMSOに溶解した。TEA(0.183mmol、12当量)を添加し、反応混合物を室温で5時間撹拌した。19.17mgのHATU(0.05mmol、3.3当量)を添加し、反応混合物を室温で撹拌した。反応の進行をLC-MSによりモニターした。追加の1.2当量の化合物1、および1.1当量のHATUを1時間後に添加した。2時間後、反応が完了した。得られた生成物を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep C-18カラム、30x100mm、5μmで、12分にわたって30~60%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。得られた画分を合わせて、凍結させ、次いで凍結乾燥させて、分光学的に純粋な白色粉末を得た。MS(ESI)C130H156N34O20 m/zの計算値 2515.96 実測値 839(m/3)+。
Bis(TT)と呼ばれる化合物18は、スベリン酸および2-チアゾリン-2-チオール(TT)を出発物質として使用して合成した。簡単に述べると、500mgのスベリン酸(2.87mmol、1当量)、752.7mgのTT(6.31mmol、2.2当量)および1.431gのEDC(7.46mmol、2.6当量)を、17.5mLの乾燥DMSOに溶解した。70.15mgのDMAP(0.57mmol、0.2当量)を添加し、反応混合物を室温で1時間撹拌した。反応混合物をDCMで希釈し、1M HClで2回、そしてDI水で1回洗浄した。有機画分を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させて、黄色固体を定量的収率で得た。
2B-TTと呼ばれる化合物19は、化合物18および化合物1を出発物質として使用して合成した。簡単に述べると、50mg(0.16mmol、1当量)の化合物1を、0.6mLのメタノールに溶解し、1.93mLのDCM中の301.1mgの化合物18(0.8mmol、5当量)の激しく撹拌している溶液に滴下添加した。30分後、反応混合物をカラムに直接注入し、フラッシュクロマトグラフィーにより、2段階グラジエント:5カラム体積(CV)にわたってDCM中の5%メタノール、続いて、20CVにわたってDCM中5~50%メタノールのグラジエント、を使用して精製した。画分を併せ、溶媒を真空下で除去した。MS(ESI)C29H40N6O2S2 m/zの計算値 568.27 実測値 569.3 (m+H)+。
DBCO-(2BGWGWG)5、2B5W10G15またはDBCO-(Glu(2B)5(Trp)10(Gly)15)と呼ばれる、化合物20は、固相ペプチド合成により調製したFmoc-(Lys-Gly-Trp-Gly-Trp-Gly)5-NH2ペプチド前駆体、および化合物19から合成した。49.8mg(0.01mmol、1当量)のFmoc-(Lys-Gly-Trp-Gly-Trp-Gly)5-NH2を、0.5mLの乾燥DMSOに溶解した。この溶液に、0.492mLの化合物19(0.03mmol、2.5当量)を、乾燥DMSO中の40mg/mLのストック溶液として添加した。TEA(0.01mmol、1当量)を添加し、反応混合物を室温で4時間撹拌した。10分にわたって45~65%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用する分析HPLCは、五置換中間体への完全転化を示した。アミノ-2-プロパノール(0.03mmol、2.5当量)の添加により反応をクエンチし、次いで、DMF中の20%ピペリジン 0.5mLを添加し、反応混合物を室温で30分間撹拌した。反応混合物を50mLのエーテルに添加し、3000gで、4℃で10分間、遠心分離した。生成物を固体ペレットとして回収し、次いで、エーテルでさらに2回洗浄し、その後、真空下で乾燥させて、脱保護中間体を得た。73.4mgの脱保護中間体(0.0131mmol、1当量)を、0.5mLの乾燥DMSOに溶解し、その後、0.066mL(0.0196mmol、1.5当量)のDBCO-NHS(40mg/mL)およびTEA(0.0131mmol、1当量)を添加した。反応物を1時間、室温で撹拌し、次いで、アミノ-2-プロパノール(0.0196mmol、1.5当量)の添加によりクエンチした。次いで、生成物を50mLの1M HClから沈殿させ、3000gで、4℃で10分間、遠心分離した。生成物を固体ペレットとして回収し、次いで、1M HClでさらに1回、そしてDI水でさらに1回洗浄した。最終回収ペレットを真空下で乾燥させて、15.1mg(収率26%)の最終生成物を得た。MS(ESI)C319H396N72O42 m/zの計算値 5909.1 実測値 1183(m/5)+。
Mal-2B3W2またはMal-(Glu(2B)3(Trp)2)と呼ばれる、化合物21は、Fmoc-(Glu)3(Trp)2-NH2および化合物1から出発して合成した。100mgのFmoc-(Glu)3(Trp)2-NH2(0.1mmol
1当量)および112.1mgの化合物1(0.36mmol、3.6当量)を、8mLの乾燥DMFに溶解した。TEA(1.2mmol、12当量)を添加し、溶液を氷浴で撹拌しながら5分間冷却した。HATU(0.33mmol、3.3当量)を添加し、反応混合物を4℃で1時間撹拌した。次いで、反応混合物を50mLの1M HClに添加し、3000gで、4℃で10分間、遠心分離した。生成物を固体ペレットとして回収し、次いで、1M HClでさらに1回、そしてDI水でさらに1回洗浄して、コンジュゲートした中間体を得た。次いで、188mgのFmoc-2B3W2-NH2(0.1mmol、1当量)を、DMF溶液中の20%ピペリジン 2mLに溶解し、30分間、室温で撹拌した。脱保護された中間体を100mLのエーテルから沈殿させ、3000gで、4℃で30分間、遠心分離した。生成物を固体ペレットとして回収し、次いで、エーテルでさらに2回洗浄し、その後、真空下で乾燥させて、脱保護中間体を得た。30mgのNH2-2B3W2-NH2(0.018mmol、1当量)を0.3mLの乾燥DMSOに溶解し、その後、22mgのスクシンイミジル6-((ベータ-マレイミドプロピオンアミド)ヘキサノエート(succinimidyl 6-((beta-maleimideopropionamido)hexanoate)(SMPH)(0.058mmol、3.2当量)を添加した。反応混合物を1時間、室温で撹拌し、得られた生成物を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep C-18カラム、50×100mm、5μmで、12分にわたって30~50%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。生成物が4.75分で溶出し、得られた画分を併せ、凍結させ、凍結乾燥させて、23mg(収率66.7%)の分光学的に純粋な白色粉末を得た。MS(ESI)C104H129N25O12の計算値 1921.33、実測値 961(m/2)+。
1当量)および112.1mgの化合物1(0.36mmol、3.6当量)を、8mLの乾燥DMFに溶解した。TEA(1.2mmol、12当量)を添加し、溶液を氷浴で撹拌しながら5分間冷却した。HATU(0.33mmol、3.3当量)を添加し、反応混合物を4℃で1時間撹拌した。次いで、反応混合物を50mLの1M HClに添加し、3000gで、4℃で10分間、遠心分離した。生成物を固体ペレットとして回収し、次いで、1M HClでさらに1回、そしてDI水でさらに1回洗浄して、コンジュゲートした中間体を得た。次いで、188mgのFmoc-2B3W2-NH2(0.1mmol、1当量)を、DMF溶液中の20%ピペリジン 2mLに溶解し、30分間、室温で撹拌した。脱保護された中間体を100mLのエーテルから沈殿させ、3000gで、4℃で30分間、遠心分離した。生成物を固体ペレットとして回収し、次いで、エーテルでさらに2回洗浄し、その後、真空下で乾燥させて、脱保護中間体を得た。30mgのNH2-2B3W2-NH2(0.018mmol、1当量)を0.3mLの乾燥DMSOに溶解し、その後、22mgのスクシンイミジル6-((ベータ-マレイミドプロピオンアミド)ヘキサノエート(succinimidyl 6-((beta-maleimideopropionamido)hexanoate)(SMPH)(0.058mmol、3.2当量)を添加した。反応混合物を1時間、室温で撹拌し、得られた生成物を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep C-18カラム、50×100mm、5μmで、12分にわたって30~50%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。生成物が4.75分で溶出し、得られた画分を併せ、凍結させ、凍結乾燥させて、23mg(収率66.7%)の分光学的に純粋な白色粉末を得た。MS(ESI)C104H129N25O12の計算値 1921.33、実測値 961(m/2)+。
NHS-2B3W2と呼ばれる化合物22は、乾燥DMSO中で125μg(0.0004mmol、1当量)の3-アジドプロピオン酸スルホ-NHSエステル(Az-NHS、Click Chemistry Tools)を0.8mgの(0.0004mmol、1.0当量)化合物6と反応させることにより合成した。HPLCは、NHS活性化化合物への完全転化を示し、この化合物を、反応性アミンを有するコンジュゲーションペプチドのために直ちに使用した。MS(ESI)C117H133N28O17S m/zの計算値 2234 実測値 1119(m/2)+。
DBCO-2BXyと呼ばれる化合物23は、乾燥DMSO中で5.0mg(0.01mmol、1当量)のDBCO-NHSを4.91mg(0.011mmol、1.1当量)の化合物2と反応させることにより合成した。DMSO溶液を酢酸エチルに溶解し、次いで、1M HClで洗浄した。有機層を真空下で除去して、約3mgの分光学的に純粋な白色固体を得た。MS(ESI)C41H40N6O2の計算値 646.31、実測値 647.3(m/2)+。
DBCO-WWTTWWまたはW4TTと呼ばれる、化合物24は、固相ペプチド合成により調製したNH2-Trp-Trp-Glu-Trp-Trp-NH2を使用して調製した。32.8mgのNH2-Trp-Trp-Glu-Trp-Trp-NH2(0.04mmol、1当量)を0.5mLの乾燥DMSOに溶解し、15.5mg(0.04mmol、1当量)のDBCO-NHSを添加し、その後、TEA(0.04mmol、1当量)を添加した。反応混合物を室温で1時間撹拌した。得られたDBCO中間体を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep C-18カラム、30×100mm、5μmで、16分にわたって40~70%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。得られた画分を併せ、凍結させ、凍結乾燥させた。TTがDBCO-ペプチドを活性化するように、6.1mgのDBCO-Trp-Trp-Glu-Trp-Trp-NH2(0.005mmol、1当量)、0.68mgのTT(0.006mmol、1.1当量)および1.26mgのEDC(0.007mmol、1.3当量)を、DMSOとDCMの1:1溶液 0.2mLに溶解した。反応混合物に、0.06mgのDMAP(0.001mmol、0.1当量)を激しく撹拌しながら室温で添加した。2時間後、追加の3.3当量のTT、4.0当量のEDCおよび0.1当量のDMAPを添加し、反応は、合計3時間後に完了した。DBCO-WWTTWWを後続のステップで中間体として使用した。
DBCO-WWPIWW、WW(PI)WWまたはPIW4と呼ばれる、化合物25。ピリミド-インドール-Peg4-NH2(PI-NH2、TLR-4アゴニスト)を、以前に記載されたように調製した(Lynn GMら、In vivo characterization of the physicochemical properties of polymer-linked TLR agonists that enhance vaccine immunogenicity. Nat Biotechnol 33巻(11号):1201~1210頁、2015年)。3.6mgのPINH2(0.005mmol、2当量)に、DMSO中の3.31mgの化合物33(0.0026mmol、1当量)およびTEA(0.003mmol、1.1当量)を添加し、それを室温で終夜撹拌した。得られた生成物を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep C-18カラム、30×100mm、5μmで、16分にわたって45~75%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。得られた画分を併せ、凍結させ、凍結乾燥させた。MS(ESI)C103H107N17O15S m/zの計算値 1854.77 実測値 928.6(m/2)+。
TLR-2/6アゴニストである、Pam2Cys-TTまたはP2C-TTと呼ばれる、化合物26は、Fmoc-Pam2Cys-Acidを出発物質として使用したこと、および反応をTLC(DCM中1%メタノール)でモニターしたことを除き、化合物24と同じ手順を使用して合成した。この手順は、黄色固体を定量的収率で生成し、この黄色固体を後続の反応ステップで中間体として使用した。
DBCO-WWPam2CysWW、WW(P2C)WWまたはP2C(W)4と呼ばれる、化合物27は、化合物24、PEG2-ジアミン、および化合物26を出発物質として使用して調製した。先ず、1.15mgのPeg2-ジアミン(0.008mmol、3当量)を、3.31mgの化合物24(0.0026mmol、1当量)を含有する反応混合物に添加し、反応混合物を1時間、室温で撹拌した。反応混合物を15mLのDI水に添加し、遠心分離した。ペレットを回収し、さらにDI水で3回洗浄し、凍結乾燥させた。中間体(DBCO-WWPeg2NH2WW)を0.1mLの乾燥DMSOに溶かし、2.58mgの化合物26(0.0026mmol、1当量)を、DCM中の100mg/mLのストック溶液として添加した。反応混合物を1時間、室温で撹拌し、次いで、DCMを真空下で除去し、その後、DMF中の20%ピペリジン 0.2mLを添加した。反応混合物を30分間、室温で撹拌し、次いで、DCMで希釈し、DI水で3回洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させた。得られた油をDMSOに溶解し、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep C-18カラム、9.4×100mm、5μmで、16分にわたって70~100%イソプロパノール/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。得られた画分を併せ、蒸発させて、生成物、DBCO-WWPam2CysWWを得た。化合物27のペプチド抗原コンジュゲートについてMS(ESI+)に基づいて生成物の分子量を検証した。
NH2-GK(DBCO)GW5と呼ばれる化合物28は、固相ペプチド合成により調製したFmoc-Gly-Lys-Gly-(Trp)5-NH2、およびDBCO-NHSを出発物質として使用して合成した。50mgのFmoc-Gly-Lys-Gly-(Trp)5-NH2(0.04mmol、1当量)を、0.25mLの乾燥DMSOに溶解した。TEA(0.04mmol、1当量)を添加し、溶液を室温で5分間撹拌した。14.24mgのDBCO-NHS(0.04mmol、1当量)を添加し、反応混合物を1時間、室温で撹拌した。反応をアミノ-2-プロパノール(0.04mmol、1当量)でクエンチし、DMF中の20%ピペリジン 0.5mLを添加した。反応混合物を室温で30分間撹拌した。次いで、生成物を50mLのエーテルから沈殿させ、3000gで、4℃で10分間、遠心分離した。生成物を固体ペレットとして回収し、次いで、エーテルでさらに2回洗浄し、その後、真空下で乾燥させた。生成物を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep C-18カラム、30x100mm、5μmで、10分にわたって25~45%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。生成物は9.4分で溶離し、得られた画分を合わせて、凍結させ、凍結乾燥させて、分光学的に純粋なオフホワイトの固体末を得た。MS(ESI)C84H84N16O10 m/zの計算値 1477.64 、実測値 739.6(m/2)+。
TLR-7アゴニストである、CL264-アジド、ヒドロキシアデニン-アジドまたはTLR-7-アジドと呼ばれる、化合物29は、CL264(Invigogen、San Diego、CA、USA)およびアジド-プロピル-アミンを出発物質として使用して合成した。5mgのCL264(0.012mmol、1当量)および6.1mgのアジド-プロピル-アミン(0.061mmol、5当量)を、乾燥DMFに溶解した。TEA(0.073mmol、6当量)を添加し、溶液を氷浴を用いて0℃に冷却した。27.6mgのHATU(0.073mmol、6当量)を添加し、0℃で1時間、反応物を撹拌した。化合物29を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep C-18カラム、30×100mm、5μmで、10分にわたって20~40%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。生成物が5分で溶出し、得られた画分を併せ、凍結させ、凍結乾燥させた。MS(ESI)C22H29N11O3 m/zの計算値 495.25、実測値 496.3(m+H)+。
DBCO-GK(CL264)G-W5、Cl264-(W)5またはDBCO-Gly-Lys(DBCO-CL264)-Gly-(Trp)5-NH2と呼ばれる、化合物30は、化合物28および29を出発物質として使用して合成した。5mgの化合物28(0.0034mmol、1当量)を、0.25mLの乾燥DMSOに溶解し、1.68mgの化合物29(0.0034mmol、1当量)を添加し、反応混合物を2時間撹拌し、その後、1.5mgのDBCO-NHS(0.0037mmol、1.1当量)および0.5当量のTEAを添加した。反応混合物を終夜、室温で撹拌し、次いで、生成物を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep C-18カラム、30×100mm、5μmで、10分にわたって25~55%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。生成物が9.4分で溶出し、得られた画分を併せ、凍結させ、凍結乾燥させて、分光学的に純粋な白色固形を得た。MS(ESI)C125H128N28O15 m/zの計算値 2261.01、実測値 1132.2(m/2)+。
STINGアゴニストであるDMXAA-アジドと呼ばれる、化合物31は、DMXAA(Invivogen)を出発物質として使用したことを除き、化合物29と同じ手順を使用して合成した。化合物31を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep C-18カラム、30x100mm、5μmで、10分にわたって35~65%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。生成物は6分で溶離し、得られた画分を合わせて、凍結させ、次いで凍結乾燥させて、分光学的に純粋な白色粉末を得た。MS(ESI)C20H22N4O3 m/zの計算値 366.42、実測値 365.2
DBCO-GK(DMXAA)-G-W5、DMXAA-(W)5、DMXAA-W5またはDBCO-Gly-Lys(DBCO-DMXAA)-Gly-(Trp)5-NH2と呼ばれる、化合物32は、化合物31をアゴニストカーゴとして使用したことを除き、化合物30と同じ手順を使用して合成した。化合物32を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep C-18カラム、30×100mm、5μmで、10分にわたって45~85%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。MS(ESI)C123H121N21O15 m/zの計算値
2131.94、実測値 1067.6(m/2)+。
2131.94、実測値 1067.6(m/2)+。
NH2-GRK(DBCO)GW5、NH2-Gly-Arg-Lys(DBCO)-Gly-(Trp)5-NH2と呼ばれる、化合物33は、固相ペプチド合成により生成したFmoc-GRKGW5-NH2を出発物質として使用したことを除き、化合物28と同じ手順を使用して合成した。化合物33を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep C-18カラム、30×100mm、5μmで、10分にわたって25~55%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。生成物が7.5分で溶出し、得られた画分を併せ、凍結させ、凍結乾燥させた。MS(ESI)C90H96N20O11 m/zの計算値 1633.74、実測値 817.5(m/2)+。
NOD 2アゴニストである、ムラミルアジドと呼ばれる、化合物34は、ムラミルトリ-リシン(M-TriLys、Invivogen)およびアジドプロピオン酸スルホNHSを出発物質として使用して合成した。5mgのムラミルトリ-リシン(0.008mmol、1当量)を、TEA(0.02mmol、2.5当量)を含有する乾燥DMSO 0.5mLに溶解し、2.2mgのアジドプロピオン酸スルホNHS(0.008mmol、1当量)を添加した。反応混合物を室温で2時間撹拌した。反応混合物をアミノ-2-プロパノール(0.008mmol、1当量)でクエンチし、この中間体を直ちに反応に使用した。
DBCO-GRK(ムラミル)GW5、ムラミル-W5またはDBCO(ムラミル)W5と呼ばれる、化合物35は、化合物33および34を出発物質として使用したことを除き、化合物30と同じ手順を使用して合成した。化合物35を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep C-18カラム、30×100mm、5μmで、10分にわたって35~65%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。生成物が4.6分で溶出し、得られた画分を併せ、凍結させ、凍結乾燥させた。MS(ESI)C137H158N30O26 m/zの計算値 2639.2、実測値 1319.5(m/2)+。
NH2-GGRK(DBCO)RGGW5と呼ばれる、化合物36は、固相ペプチド合成により調製したFmoc-GGRKRGGW5-NH2を出発物質として使用したことを除き、化合物28と同じ手順を使用して合成した。化合物36を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep C-18カラム、30×100mm、5μmで、10分にわたって25~45%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。生成物は7.8分で溶離し、得られた画分を回収し、凍結させ、次いで凍結乾燥させて、分光学的に純粋な(254nmで>95%AUC)白色粉末を得た。MS(ESI)C100H114N26O14 m/zの計算値 1902.9、実測値 951.4 (m/2)+。
DBCO-GGRK(AMP)RGW5またはDBCO(AMP)W5と呼ばれる、化合物37は、化合物36と、アジド-プロピオン酸で置換されたアデノシン一リン酸8-(6-アミノヘキシル)アミノアデノシン5’一リン酸(Sigma-Aldrich)とを出発物質として使用したことを除き、化合物30と同じ手順を使用して合成した。化合物37を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep C-18カラム、30x100mm、5μmで、10分にわたって30~60%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。生成物は5.2分で溶離し、得られた画分を合わせて、凍結させ、次いで凍結乾燥させて、分光学的に純粋な白色粉末を得た。MS(ESI)C138H158N37O24Pの計算値 2748.2 実測値 917.5(m/3)+。
NH2-GRRK(DBCO)-RGW5と呼ばれる、化合物38は、Fmoc-GRRKRGW5-NH2を出発物質として使用したことを除き、化合物28と同じ手順を使用して合成した。化合物38を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep C-18カラム、30×100mm、5μmで、10分にわたって25~55%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。生成物は5.1分で溶離し、得られた画分を回収し、凍結させ、次いで凍結乾燥させて、分光学的に純粋な(254nmで>95%AUC)白色粉末を得た。MS(ESI)C102H120N28O13 m/zの計算値 1944.96、実測値 973.4(m/2)+。
NH2-GK(DBCO)[GGK(DBCO)]2GW5と呼ばれる化合物39は、Fmoc-GK(GGK)2GW5-NH2を出発物質として使用したこと、ならびに追加の3当量のTEAおよびDBCO-NHSを使用したことを除き、化合物28と同じ手順を使用して合成した。化合物39を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent
Prep C-18カラム、30×100mm、5μmで、10分にわたって45~85%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。得られた画分を回収し、凍結させ、次いで凍結乾燥させて、表題の化合物として分光学的に純粋な(254nmで>95%AUC)白色粉末を得た。MS(ESI)C142H146N26O20 m/zの計算値 2535.12、実測値 1269(m/2)+。
Prep C-18カラム、30×100mm、5μmで、10分にわたって45~85%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。得られた画分を回収し、凍結させ、次いで凍結乾燥させて、表題の化合物として分光学的に純粋な(254nmで>95%AUC)白色粉末を得た。MS(ESI)C142H146N26O20 m/zの計算値 2535.12、実測値 1269(m/2)+。
NH2-[GRK(DBCO)RG]3-W5と呼ばれる、化合物40は、NH2-[GRK(DBCO)RG]3-W5を出発物質として使用したことを除き、化合物39について説明したのと同じ手順を使用して合成した。化合物40を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep C-18カラム、30×100mm、5μmで、10分にわたって35~65%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。得られた画分を回収し、凍結させ、次いで凍結乾燥させて、分光学的に純粋な(254nmで>95%AUC)白色粉末を得た。MS(ESI)C178H218N50O26 m/zの計算値 3471.31、実測値 695.6(m/5)+。
E10-2B3W2と呼ばれる化合物41は、アジド-(Glu)10-NH2および化合物6を出発物質として使用して合成した。5mgのアジド-(Glu)10-NH2(0.0035mmol、1当量)を乾燥DMSOに溶解し、6.77mgの化合物6(0.0035mmol、1当量)を乾燥DMSO中の40mg/mL溶液として添加した。反応混合物を終夜、室温で撹拌した。化合物41を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep C-18カラム、30×100mm、5μmで、10分にわたって25~45%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。得られた画分を回収し、凍結させ、次いで凍結乾燥させて、定量的収量において11.8mgの分光学的に純粋な(254nmで>95%AUC)白色粉末を得た。MS(ESI)m/zの計算値 3377.31、実測値 1127(M/3)+。
K10-2B3W2と呼ばれる、化合物42は、アジド-(Lys)10-NH2を出発物質として使用したことを除き、化合物41と同じ手順を使用して合成した。化合物42を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep C-18カラム、30×100mm、5μmで、10分にわたって20~40%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。得られた画分を回収し、凍結させ、次いで凍結乾燥させて、定量的収量において分光学的に純粋な(254nmで>95%AUC)白色粉末を得た。MS(ESI)m/zの計算値 3367.58、実測値 482(M/7)+。
DBCO-G5-2B3W2-G5-D9またはDBCO-2B3W2(D)9と呼ばれる、化合物43は、NH2-(Gly)5-Lys(N3)-(Gly)5-(Asp)9-NH2、化合物6およびDBCO-NHSを出発物質として使用して合成した。5mgのNH2-(Gly)5-Lys(N3)-(Gly)5-(Asp)9-NH2(0.0028mmol、1当量)を、0.1mLの乾燥DMSOに溶解し、6.56mgの化合物6(0.0034mmol、1.2当量)を添加した。反応混合物を終夜、室温で撹拌した。3.55mgのDBCO-NHS(0.0084mmol、3当量)を添加し、その後、TEA(0.0028mmol、1当量)を添加した。反応混合物を2時間、室温で撹拌した。化合物43を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep C-18カラム、30×100mm、5μmで、12分にわたって30~40%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。得られた画分を回収し、凍結させ、次いで凍結乾燥させて、分光学的に純粋な(254nmで>95%AUC)白色粉末として3.8mg(収率33.7%)の表題の化合物を得た。MS(ESI)m/zの計算値 4008.31、実測値 1003.3(m/4)+。
DBCO-G5-2B3W2-G5-D8またはDBCO-2B3W2(D)8と呼ばれる、化合物44は、NH2-(Gly)5-Lys(N3)-(Gly)5-(Asp)8-NH2を出発物質として使用したことを除き、化合物43と同じ手順を使用して合成した。化合物44を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep C-18カラム、30×100mm、5μmで、12分にわたって30~40%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。得られた画分を回収し、凍結させ、次いで凍結乾燥させて、分光学的に純粋な(254nmで>95%AUC)白色粉末として表題の化合物を得た。MS(ESI)m/zの計算値 3894.52、実測値 974.6(m/4)+。
DBCO-G5-2B3W2-G5-D7またはDBCO-2B3W2(D)7と呼ばれる、化合物45は、NH2-(Gly)5-Lys(N3)-(Gly)5-(Asp)7-NH2を出発物質として使用したことを除き、化合物43と同じ手順を使用して合成した。化合物45を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep C-18カラム、30×100mm、5μmで、12分にわたって29~39%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。得られた画分を回収し、凍結させ、次いで凍結乾燥させて、分光学的に純粋な(254nmで>95%AUC)白色粉末として表題の化合物を得た。MS(ESI)m/zの計算値 3779.43、実測値 945.8(m/4)+。
DBCO-G5-2B3W2-G5-D6またはDBCO-2B3W2(D)6と呼ばれる、化合物46は、NH2-(Gly)5-Lys(N3)-(Gly)5-(Asp)6-NH2を出発物質として使用したことを除き、化合物43と同じ手順を使用して合成した。化合物46を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep C-18カラム、30×100mm、5μmで、12分にわたって29~39%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。得られた画分を回収し、凍結させ、次いで凍結乾燥させて、分光学的に純粋な(254nmで>95%AUC)白色粉末として表題の化合物を得た。MS(ESI)m/zの計算値 3664.35、実測値 917.1(m/4)+。
DBCO-G5-2B3W2-G5-D5またはDBCO-2B3W2(D)5と呼ばれる、化合物47は、NH2-(Gly)5-Lys(N3)-(Gly)5-(Asp)5-NH2を出発物質として使用したことを除き、化合物43と同じ手順を使用して合成した。化合物47を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep C-18カラム、30×100mm、5μmで、12分にわたって29~41%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。得られた画分を回収し、凍結させ、次いで凍結乾燥させて、分光学的に純粋な(254nmで>95%AUC)白色粉末として表題の化合物を得た。MS(ESI)m/zの計算値 3549.26、実測値 1184.1(m/3)+。
化合物48
DBCO-2B3W2-R6またはDBCO-2B3W2(R)6と呼ばれる、化合物48は、NH2-Lys(N3)-(Arg)6-NH2を出発物質として使用したことを除き、化合物43と同じ手順を使用して合成した。化合物48を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep C-18カラム、30×100mm、5μmで、12分にわたって26~36%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。得られた画分を回収し、凍結させ、次いで凍結乾燥させて、分光学的に純粋な(254nmで>95%AUC)白色粉末として17.8mg(収率51.8%)の表題の化合物を得た。MS(ESI)m/zの計算値 3338.19、実測値 478.1(m/7)+。
Myr-DBCOまたはC14-DBCOと呼ばれる化合物49は、塩化ミリストイルおよびDBCO-アミンから調製した。50mgのDBCO-アミン(0.18mmol、1当量)を0.5mLのDCMに溶解した。TEA(0.22mmol、1.2当量)を添加し、溶液を室温で5分間撹拌した。塩化ミリストイル(0.16mmol、0.9当量)を添加し、反応混合物を1時間、室温で撹拌した。TLC(DCM中2.5%メタノール)は、Myr-DBCOの、0.5のrfを有する新たなスポットを示した。反応混合物をフラッシュクロマトグラフィーカラムに注入し、12CVにわたってDCM中0~3%メタノールのグラジエントを使用して精製した。画分を回収し、乾燥させて、86mgのMyr-DBCOを定量的収率で得た。MS(ESI)C32H42N2O2 m/zの計算値 486.32、実測値 487.3(m+H)+。
Val-DBCOまたはC5-DBCOと呼ばれる、化合物50は、塩化バレロイルを出発物質として使用したことを除き、化合物49について説明した同じ手順を使用して調製した。Val-DBCOを、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep C-18カラム、30×100mm、5μmで、12分にわたって40~60%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。得られた画分を回収し、凍結させ、次いで凍結乾燥させて、定量的収量において80mgのVal-DBCOを得た。MS(ESI)C23H24N2O2 m/zの計算値 360.18、実測値 361.2(m+H)+。
Plm-DBCOまたはC16-DBCOと呼ばれる、化合物51は、塩化パルミトイルを出発物質として使用したことを除き、化合物49について説明したのと同じ手順を使用して調製した。化合物51を、フラッシュクロマトグラフィーにより、12CVにわたってDCM中0~3%メタノールのグラジエントを使用して、精製した。画分を回収し、乾燥させて、80mgのPlm-DBCOを定量的収率で得た。MS(ESI)C34H46N2O2 m/zの計算値 514.36、実測値 515.3(m+H)+。
Myr-Peg11-DBCOまたはC14-PEG11-DBCOと呼ばれる、化合物52は、塩化ミリストイル、Boc-Peg11-アミンおよびDBCO-NHSを出発物質として使用して合成した。116.06mgのBoc-Peg11-アミン(0.18mmol、1当量)を0.5mLのDCMに溶解した。TEA(0.22mmol、1.2当量)を添加し、反応混合物を室温で5分間撹拌した。塩化ミリストイルを添加し、反応物を室温で1時間撹拌した。反応混合物をDCMで希釈し、1M HClで2回、そしてDI水で1回洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させた。この中間体を0.35mLのDCMに溶解し、0.15mLのTFAを添加した。反応混合物を30分間、室温で撹拌し、次いで、空気を吹付けることにより乾燥させ、高真空下でさらに乾燥させた。122.5mgのその油(0.162mmol、1当量)を0.5mLのDCMに溶解した。TEA(0.49mmol、3当量)を添加し、溶液を5分間、室温で撹拌した。65.19mgのDBCO-NHS(0.162mmol、1当量)を添加し、反応混合物を1時間、室温で撹拌した。反応混合物をフラッシュクロマトグラフィーカラムに注入し、15CVにわたってDCM中0~15%メタノールのグラジエントを使用して精製した。画分を回収し、乾燥させて、Myr-Peg11-DBCOを得た。化合物52のペプチド抗原コンジュゲートについてMS(ESI+)に基づいて生成物の分子量を検証した。
Plm-Peg11-DBCOまたはC16-PEG11-DBCOと呼ばれる、化合物53は、塩化パルミトイルを出発物質として使用したことを除き、化合物52と同じ手順を使用して合成した。Plm-Peg11-DBCOを、
フラッシュクロマトグラフィーにより、15CVにわたってDCM中0~15%メタノールのグラジエントを使用して、精製した。画分を回収し、乾燥させて、Plm-Peg11-DBCOを得た。化合物53のペプチド抗原コンジュゲートについてMS(ESI+)に基づいて生成物の分子量を検証した。
NH2-Pam2Cys-DBCOと呼ばれる化合物54は、化合物26およびDBCO-アミンを出発物質として使用して合成した。30mgの化合物26(0.03mmol、1当量)を、DCM中の100mg/mLのストック溶液として調製した。このストック溶液に、8.34mgのDBCO-アミン(0.03mmol、1当量)も、DCM中の100mg/mLのストック溶液として添加した。反応混合物を1時間、室温で撹拌し、次いで、フラッシュクロマトグラフィーカラムに注入し、精製した。使用したグラジエントは、DCM中0~5%メタノールの段階的グラジエント(5CVは保持、1CVは、メタノール濃度を1%ずつ上昇させる)であった。画分を回収し、乾燥させて、DBCO中間体を得た。26mgのFmoc-Pam2Cys-DBCO(0.023mmol、1当量)を、DMF中の20%ピペリジン 1mLに溶解し、30分間、室温で撹拌した。反応混合物をDCMで希釈し、DI水で3回洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させた。固体を0.5mLのDCMに溶かし、フラッシュクロマトグラフィーカラムに注入し、精製した。使用したグラジエントは、DCM中0~5%メタノールの段階的グラジエントであった。画分を回収し、乾燥させて、NH2-Pam2Cys-DBCOを得た。化合物54のペプチド抗原コンジュゲートについてMS(ESI+)に基づいて生成物の分子量を検証した。
NH2-Pam2Cys-Peg11-DBCOと呼ばれる化合物55は、化合物26、Boc-Peg11-アミン、およびDBCO NHSを出発物質として使用して合成した。60mgの化合物26(0.06mmol、1当量)を0.6mLのDCMに溶解した。38.9mgのBoc-Peg11-アミン(0.06 mmol、1当量)を添加し、反応混合物を室温で30分間撹拌した。DCMを真空下で除去し、この油をDMSOに溶かし、DI水に添加した。この水を3000gで5分間、遠心分離し、ペレットを回収し、真空下で乾燥させた。このPEG化中間体を0.35mLのDCMに溶解し、0.15mLのTFAを添加した。反応混合物を室温で30分間撹拌し、次いで、空気でブロー乾燥させ、高真空下でさらに乾燥させた。71.76mgのこのBoc脱保護油(0.05mmol、1当量)を1mLのDMSOに溶解し、TEA(0.1mmol、2当量)を添加し、その後、20.3mgのDBCO-NHS(0.05mmol、1当量)を添加した。反応混合物を1時間、室温で撹拌した。DMF中の20%ピペリジン 0.5mLを添加し、反応混合物を30分間、室温で撹拌した。反応混合物をDCMで希釈し、pH9.5の炭酸水素ナトリウムで3回洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させた。固体を0.5mLのDCMに溶かし、フラッシュクロマトグラフィーカラムに注入し、精製した。使用したグラジエントは、30CVにわたってDCM中0~10%メタノールであった。これにより、全収率6.7%で生成物を得た。化合物55のペプチド抗原コンジュゲートについてMS(ESI+)に基づいて生成物の分子量を検証した。
Chol-TTと呼ばれる化合物56は、ヘミコハク酸コレステリルおよびTTを出発物質として使用して調製した。100mgのヘミコハク酸コレステリル(0.21mmol、1当量)、26.94mgのTT(0.23mmol、1.1当量)および51.20mgのEDC(0.27mmol、1.3当量)を、1mLのDCMに溶解した。2.51mgのDMAP(0.02mmol、0.1当量)を添加し、反応混合物を室温で撹拌した。1時間後、明黄色反応混合物をDCMで希釈し、1M HClで2回、そしてDI水で1回洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させて、120mgの黄色固体を定量的収率で得た。化合物56のペプチド抗原コンジュゲートについてMS(ESI+)に基づいて生成物の分子量を検証した。
Chol-DBCOと呼ばれる化合物57は、化合物56およびDBCO-アミンから調製した。106.28mgの化合物56(0.18mmol、1当量)および50mgのDBCO-アミン(0.18mmol、1当量)を、0.5mLのDCMに溶解し、室温で撹拌した。1時間の過程にわたり、溶液の明黄色が退色し、DCM中でのTLCは、化合物56の完全非存在を示した。反応混合物をフラッシュクロマトグラフィーカラムに注入し、12CVにわたってDCM中0~3%メタノールのグラジエントを使用して精製した。画分を回収し、乾燥させて、139mgのChol-DBCOを定量的収率で得た。化合物57のペプチド抗原コンジュゲートについてMS(ESI+)に基づいて生成物の分子量を検証した。
Chol-Peg11-DBCOと呼ばれる化合物58は、化合物56、Boc-Peg11-アミン、およびDBCO-NHSから調製した。50mgの化合物56(0.085mmol、1当量)を0.5mLのDCMに溶解した。60.38mgのBoc-Peg11-アミン(0.09mmol、1.1当量)を添加し、反応混合物を室温で撹拌した。1時間の過程にわたり、溶液の明黄色が退色し、DCM中でのTLCは、化合物56の完全非存在を示した。反応混合物に150μLのTFAを添加して、DCM中の30%溶液を製造した。反応混合物を30分間、室温で撹拌し、次いで、空気を吹付けることにより乾燥させ、高真空下でさらに乾燥させた。86.25mgのその油(0.085mmol、1当量)を0.5mLのDCMに溶解した。TEA(0.26mmol、3当量)を添加し、溶液を5分間、室温で撹拌した。34.26mgのDBCO-NHS(0.085mmol、1当量)を添加し、反応混合物を1時間、室温で撹拌した。反応混合物をフラッシュクロマトグラフィーカラムに注入し、15CVにわたってDCM中0~15%メタノールのグラジエントを使用して精製した。画分を回収し、乾燥させて、Chol-Peg11-DBCOを得た。
LA-TTと呼ばれる化合物59は、レブリン酸およびTTを出発物質として使用して合成した。500mgのレブリン酸(4.3mmol、1当量)、564.7mgのTT(4.7mmol、1.1当量)および1.032gのEDC(5.4mmol、1.3当量)を、10mLの乾燥DMSOに溶解した。52.6mgのDMAP(0.4mmol、0.1当量)を添加し、反応混合物を室温で2時間撹拌した。酢酸エチルでの希釈、1M HClで2回およびDI水で1回の洗浄により、化合物59を処理した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で除去した。固体を酢酸エチルから再結晶させた。MS(ESI)C8H11NO2S2、m/zの計算値 217.02、実測値 218(M+H)+。
LA-2BXyと呼ばれる化合物60は、化合物59および化合物2を出発物質として使用して合成した。50mgの化合物59(0.23mmol、1当量)および82.62mgの化合物2(0.23mmol、1当量)を、1mLのDMSOに溶解した。反応混合物を室温で1時間撹拌した。TLC(ヘキサン中の35%酢酸エチル)は、両方の出発物質の消失を示した。化合物60を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent
Prep-C18カラム、30×100mm、5μmで、10分にわたって15~30%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。MS(ESI)C27H31N5O2、m/zの計算値 457.25、実測値 458.3(M+H)+。
Prep-C18カラム、30×100mm、5μmで、10分にわたって15~30%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。MS(ESI)C27H31N5O2、m/zの計算値 457.25、実測値 458.3(M+H)+。
CTA-TTと呼ばれる化合物61は、4-シアノ-4-(チオベンゾイルチオ)ペンタン酸(CTA)を出発物質として使用したこと、およびDCMを溶媒として使用したことを除き、化合物59と同じ手順を使用して合成した。DCMでの希釈、1M HClで2回およびDI水で1回の洗浄により、化合物61を処理した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で除去した。固体を酢酸エチルから再結晶させた。MS(ESI)C16H16N2OS4、m/zの計算値 380.01、実測値 381.1(M+H)+。
CTA-DBCOと呼ばれる化合物62は、「CTA-NHS」(4-シアノ-4-(フェニルカルボノチオイルチオ)ペンタン酸N-スクシンイミジルエステル、Sigma-Aldrich)およびDBCO-アミン(Click Chemistry Tools)から合成した。210mgのCTA-NHS(0.56mmol、1当量)および167.8mgのDBCO-アミン(0.61mmol、1.1当量)を、2mLの乾燥DMSOに溶解し、室温で2時間撹拌した。反応混合物をDCMで希釈し、1M HClで2回、そしてDI水で1回洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させた。化合物62を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep-C18カラム、30×100mm、5μmで、10分にわたって50~70%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。MS(ESI)C31H27N3O2S2 m/zの計算値 537.7 実測値 538.2(M+H)+。
CTA-2BXYと呼ばれる化合物63は、化合物61および化合物2を出発物質として使用したことを除き、化合物60と同じ手順を使用して合成した。
化合物63を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep-C18 column、50x100mm、5μmで、12分にわたって40~50%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。MS(ESI)C35H36N6OS2 m/zの計算値 620.83、実測値 621.2(M+H)+。
化合物63を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep-C18 column、50x100mm、5μmで、12分にわたって40~50%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。MS(ESI)C35H36N6OS2 m/zの計算値 620.83、実測値 621.2(M+H)+。
ACVA-TTと呼ばれる化合物66は、4,4’-アゾビス(4-シアノ吉草酸)を出発物質として使用したこと、および活性部位の倍増を反映するようにTT、EDCおよびDMAPの当量を倍増させたことを除き、化合物59と同じ手順を使用して合成した。酢酸エチルでの希釈、1M HClで2回およびDI水で1回の洗浄により、化合物66を処理した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で除去した。固体をDCM:エーテルから再結晶させた。MS(ESI)C18H22N6O2S4、m/zの計算値 482.65、実測値 483.1(M+H)+。
ACVA-2BXyと呼ばれる化合物65は、化合物64を出発物質として使用したこと、および活性部位の倍増を反映するように化合物2の当量を倍増させたことを除き、化合物60と同じ手順を使用して合成した。化合物65を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep-C18カラム、50x100mm、5μmで、10分にわたって28~48%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。MS(ESI)C56H62N14O2 m/zの計算値 963.21、実測値 482.4(M/2)+。
ACVA-DBCOと呼ばれる化合物66は、化合物64およびDBCO-アミン(Click Chemistry Tools)を出発物質として使用したことを除き、化合物60と同じ手順を使用して合成した。化合物66を、フラッシュクロマトグラフィーにより、15CVにわたってDCM中0~3%メタノールのグラジエントを使用して、精製した。MS(ESI)C48H44N8O4 m/zの計算値 796.93、実測値
797.3(M+H)+。
797.3(M+H)+。
Azp-2BXYと呼ばれる化合物67は、5-アジド-ペンタン酸(Azp)および化合物2から合成した。16.2mgのAzp(0.114mmol、1.1当量)、12.3mgのTT(0.103mmol、1当量)および27.2mgのEDC(0.142mmol、1.3当量)を、0.5mLの乾燥DMSOに溶解した。1.4mgのDMAPを添加し、反応混合物を2時間、室温で撹拌した。37.09mgの化合物2(0.103mmol、1当量)を添加し、反応混合物を1時間、室温で撹拌した。化合物67を、分取HPLCシステムを用いて、Agilent Prep-C18カラム、30x100mm、5μmで、10分にわたって22~42%アセトニトリル/H2O(0.05%TFA)のグラジエントを使用して精製した。MS(ESI)C27H32N8O
m/zの計算値 484.27、実測値 485.3(M+H)+。
m/zの計算値 484.27、実測値 485.3(M+H)+。
(HPMA-2B)-b-(HPMA)-DBCOまたはp{[(HPMA)-co-(MA-b-Ala-2B)]-b-p(HPMA)}-DBCOとも呼ばれる、化合物68。以前に記載されたように調製した前駆体HPMAおよびMA-b-Ala-TT(参照:Lynn GMら、Nat Biotechnol 33巻(11号):1201~1210頁、2015年)、ならびに2-シアノ-2-プロピルベンゾジチオエート(「CTA-ABIN」、Sigma Aldrich)、アゾビスイソブチロニトリル(「AIBN」、Sigma Aldrich)、化合物1および化合物66を使用して、2合成ステップでのRAFT重合によって、ミセル形成性ジブロックコポリマー(A-B型)を生成した。CTA-AIBNを連鎖移動剤としておよびAIBNを開始剤として使用して、70℃で16時間、tert-ブチルアルコール/DMSO混合物中で、HPMAをMA-b-Ala-TTと共重合させることにより、疎水性ブロックAを調製した。その後、疎水性ブロックBを、AIBNの存在下、70℃でさらに16時間、RAFTメカニズムによりHPMAを付加させることによる連鎖延長重合に付した。A-Bジブロックコポリマー、p{[HPMA)-co-(MA-b-TT)]-b-p(HPMA)}-DTBを、沈殿により単離して、緑色の固体を得た。80℃で2時間、DMSO中での化合物66との反応、続いて化合物1の付加により、コポリマーの一端のDTB基を置き換えた。生成物を沈殿させ、次いで、LH-20により精製して化合物68を得、次いで、この化合物68をペプチド抗原との反応に使用して、異なるタイプのペプチド抗原コンジュゲート、例えば、下で十分に説明するp{[(HPMA)-co-(MA-b-Ala-2B)]-b-p(HPMA)}-DBCO-(ペプチド抗原)を得た。
(HPMA-NHNH-2BXy)-b-(HPMA)-DBCOまたはp{[(HPMA)-co-(MA-Acap-NHN=CH-2BXy)]-b-p(HPMA)}-DBCOとも呼ばれる、化合物69。以前に記載されたように調製した前駆体HPMAおよびMA-Acap-NHNH-Boc(参照:Lynn GMら、Nat Biotechnol 33巻(11号):1201~1210頁、2015年)、ならびに2-シアノ-2-プロピルベンゾジチオエート(「CTA-ABIN」、Sigma Aldrich)、アゾビスイソブチロニトリル(「AIBN」、Sigma Aldrich)、化合物60および化合物66を使用して、2合成ステップでのRAFT重合によって、ミセル形成性ジブロックコポリマー(A-B型)を生成した。CTA-AIBNを連鎖移動剤としておよびAIBNを開始剤として使用して、70℃で16時間、tert-ブチルアルコール/DMSO混合物中で、HPMAをMA-Acap-NHNH-Bocと共重合させることにより、疎水性ブロックAを調製した。その後、疎水性ブロックBを、AIBNの存在下、70℃でさらに16時間、RAFTメカニズムによりHPMAを付加させることによる連鎖延長重合に付した。A-Bジブロックコポリマー、p p{[(HPMA)-co-(MA-Acap-NHN=CH-2BXy)]-b-p(HPMA)}-DTBを、沈殿により単離し、次いで、30%トリフルオロ酢酸TFA/DCM中でBoc脱保護を行った。TFA/DCMを真空下で除去し、次いで、80℃で2時間、DMSO中での化合物66との反応、続いて化合物60の付加により、コポリマーの一端のDTB基を置き換えた。生成物を沈殿させ、次いで、LH-20により精製して化合物69を得、次いで、この化合物69をペプチド抗原との反応に使用して、異なるタイプのペプチド抗原コンジュゲート、例えば、下で十分に説明するp{[(HPMA)-co-(MA-b-Ala-2B)]-b-p(HPMA)}-DBCO-(ペプチド抗原)を得た。
(DEGMA-2B)-b-(HPMA)-DBCOまたはp{[(DEGMA)-co-(MA-b-Ala-2B)]-b-p(HPMA)}-DBCOとも呼ばれる、化合物70。以前に記載されたように調製した前駆体DEGMA、HPMAおよびMA-b-Ala-TT(参照:Lynn GMら、Nat Biotechnol 33巻(11号):1201~1210頁、2015年)、ならびに2-シアノ-2-プロピルベンゾジチオエート(「CTA-ABIN」、Sigma Aldrich)、アゾビスイソブチロニトリル(「AIBN」、Sigma Aldrich)、化合物1および化合物66を使用して、2合成ステップでのRAFT重合によって、温度応答性ミセル形成性ジブロックコポリマー(A-B型)を生成した。CTA-AIBNを連鎖移動剤としておよびAIBNを開始剤として使用して、70℃で16時間、tert-ブチルアルコール/DMSO混合物中で、DEGMAをMA-b-Ala-TTと共重合させることにより、温度応答性疎水性ブロックAを調製した。その後、疎水性ブロックBを、AIBNの存在下、70℃でさらに16時間、RAFTメカニズムによりHPMAを付加させることによる連鎖延長重合に付した。A-Bジブロックコポリマー、p{[DEGMA)-co-(MA-b-Ala-2B)]-b-p(HPMA)}-DTBを、沈殿により単離して緑色の固体を得た。80℃で2時間、DMSO中での化合物66との反応、続いて化合物1の付加により、コポリマーの一端のDTB基を置き換えた。生成物を沈殿させ、次いで、LH-20により精製して化合物70を得、次いで、この化合物70をペプチド抗原との反応に使用して、異なるタイプのペプチド抗原コンジュゲート、例えば、下で十分に説明するp{[(DEGMA)-co-(MA-b-Ala-2B)]-b-p(HPMA)}-DBCO-(ペプチド抗原)を得た。
(DEGMA-2BXy)-b-(HPMA)-DBCOまたはp{[(DEGMA)-co-(MA-b-Ala-2BXy)]-b-p(HPMA)}-DBCOとも呼ばれる、化合物71は、化合物2をリガンドとして使用したことを除き、化合物70と同じ手順を使用して調製した。生成物を沈殿させ、次いで、LH-20により精製して化合物69を得、次いで、この化合物68をペプチド抗原との反応に使用して、異なるタイプのペプチド抗原コンジュゲート、例えば、下で十分に説明するp{[(DEGMA)-co-(MA-b-Ala-2BXy)]-b-p(HPMA)}-DBCO-(ペプチド抗原)を得た。
2BXy-DEGMA-b-HPMA-DBCOとも呼ばれる化合物72。前駆体DEGMA、HPMA、化合物63、化合物65および化合物66を使用して2合成ステップでRAFT重合によりミセル形成性ジブロックコポリマー(A-B型)を生成した。化合物63を連鎖移動剤としておよび化合物65を開始剤として使用して、70℃で16時間、tert-ブチルアルコール/DMSO混合物中で、DEGMAを共重合させることにより、疎水性ブロックAを調製した。その後、疎水性ブロックBを、AIBNの存在下、70℃でさらに16時間、RAFTメカニズムによりHPMAを付加させることによる連鎖延長重合に付した。A-Bジブロックコポリマー、2BXy-[p(DEGMA)-b-p(HPMA)]-DTBを、沈殿により単離し、80℃で2時間、DMSO中での化合物66との反応により、コポリマーの一端のDTB基を置き換えた。生成物を沈殿させ、次いで、LH-20により精製して化合物72を得、次いで、この化合物72をペプチド抗原との反応に使用して、異なるタイプのペプチド抗原コンジュゲート、例えば、下で十分に説明する2BXy-p[(DEGMA)-b-p(HPMA)]-DBCO-(ペプチド抗原)を得た。
(実施例2:ペプチド抗原コンジュゲートを生成するためのペプチド抗原断片と疎水性分子(H)の反応)
ペプチド抗原(A)、必要に応じた荷電分子(C)、必要に応じた伸長部(B1および/またはB2)およびリンカー前駆体X1から構成されるペプチド抗原断片、例えば、[C]-[B1]-A-[B2]-X1(式中、[ ]は、この例では、その基が必要に応じたものであることを示す)を、疎水性分子(H)と連結されているX2、例えばX2-H、と反応させて、ペプチド抗原コンジュゲート、例えば、[C]-[B1]-A-[B2]-L-Hを得ることができる。ペプチド抗原断片が、アジド、例えば、K’と呼ばれることもあるアジド-リシン(Lys(N3))、を含むリンカー前駆体X1を含む場合、ペプチド抗原断片を、疎水性分子(H)に連結されている、DBCOなどのアルキンを含むリンカー前駆体X2と反応させて、トリアゾールリンカー(L)を形成することができる。非限定的な例として、化合物3~5は、式IIIのアジュバント(すなわち、TLR-7/8a)にさらに連結される、DBCOリンカー前駆体X2を有する式Iの疎水性分子(H)の例であり、化合物6~11は、式IIIのアジュバント(すなわち、TLR-7/8a)にさらに連結される、DBCOリンカー前駆体X2を有する式Iの疎水性分子(H)の例であり、化合物10~11は、DBCOリンカー前駆体X2を有する式IIの疎水性分子(H)の例であるが、アジュバント特性を有するリガンドを含有しない。
ペプチド抗原(A)、必要に応じた荷電分子(C)、必要に応じた伸長部(B1および/またはB2)およびリンカー前駆体X1から構成されるペプチド抗原断片、例えば、[C]-[B1]-A-[B2]-X1(式中、[ ]は、この例では、その基が必要に応じたものであることを示す)を、疎水性分子(H)と連結されているX2、例えばX2-H、と反応させて、ペプチド抗原コンジュゲート、例えば、[C]-[B1]-A-[B2]-L-Hを得ることができる。ペプチド抗原断片が、アジド、例えば、K’と呼ばれることもあるアジド-リシン(Lys(N3))、を含むリンカー前駆体X1を含む場合、ペプチド抗原断片を、疎水性分子(H)に連結されている、DBCOなどのアルキンを含むリンカー前駆体X2と反応させて、トリアゾールリンカー(L)を形成することができる。非限定的な例として、化合物3~5は、式IIIのアジュバント(すなわち、TLR-7/8a)にさらに連結される、DBCOリンカー前駆体X2を有する式Iの疎水性分子(H)の例であり、化合物6~11は、式IIIのアジュバント(すなわち、TLR-7/8a)にさらに連結される、DBCOリンカー前駆体X2を有する式Iの疎水性分子(H)の例であり、化合物10~11は、DBCOリンカー前駆体X2を有する式IIの疎水性分子(H)の例であるが、アジュバント特性を有するリガンドを含有しない。
図2に示す非限定的な例は、アジド含有リンカー前駆体X1を含むペプチド抗原断片と1.1対1のモル比で反応させる、DBCOを含むリンカー前駆体X2に連結されている疎水性分子(H)の反応である。HPLCクロマトグラムに示されているように、疎水性分子(H)上のDBCOは、アジドを含むリンカー前駆体X1と反応し、その結果、荷電分子(C)に連結されているB1伸長部に連結されているペプチド抗原(A)に連結しているB2伸長部に連結されるトリアゾールリンカー(L)が得られ、それによって、ペプチド抗原(A)と疎水性分子(H)を結合させて、ペプチド抗原コンジュゲートを得る。アジド含有ペプチド抗原断片とDBCO含有疎水性分子(H)の反応により形成される異なるペプチド抗原コンジュゲートの何百もの例を、至る所に記載する。アジドとDBCOの反応は、確実であり、生成されるペプチド抗原コンジュゲートの全てにわたって一貫しているので、コンジュゲートを形成するために使用する反応およびそれらの特徴付けについての完全な説明を提供しない。注記:付加環化から生じるペプチド抗原コンジュゲートの分子量は、出発物質の質量の合計である。
ペプチド抗原断片が、チオール、例えば、Cと呼ばれることもあるシステイン(Cys)、を含むリンカー前駆体X1を含む場合、ペプチド抗原断片を、マレイミドを含むリンカー前駆体X2を有する疎水性分子(H)、例えば化合物21、と反応させることができ、その結果、チオール-エーテルベースのリンカー(L)が得られる。ペプチド抗原断片が、アミン、例えば、Kと呼ばれることもあるリシン(Lys)、を含むリンカー前駆体X1を含む場合、ペプチド抗原断片を、NHSなどの活性化エステルを含むリンカー前駆体X2を有する疎水性分子(H)、例えば化合物22、と反応させ、その結果、アミド結合を形成することができる。
(実施例3:式IVのペプチド抗原コンジュゲートの合成および生物学的特徴付け)
以前の研究により、CD8 T細胞応答を誘導する手段としての、様々なワクチンアジュバントと組み合わせた約20~40アミノ酸合成「長鎖」ペプチド(SLPまたはLP)としてのT細胞エピトープの送達が報告されている。しかし、ペプチドの長さおよび流体力学的挙動の、ならびにペプチドと免疫刺激剤、例えばTLRa、の共送達の、免疫原性に対する影響は、適切に研究されていない。ペプチドベースの抗原の種々のパラメーターがT細胞免疫にどのような影響を及ぼすのかについてのより大きな洞察を与えるために、本発明者らは、本明細書に記載の式IVのペプチド抗原コンジュゲートの種々の性質がin vivoでCD4およびCD8 T細胞応答にどのような影響を及ぼすのかを系統的に評価した。
以前の研究により、CD8 T細胞応答を誘導する手段としての、様々なワクチンアジュバントと組み合わせた約20~40アミノ酸合成「長鎖」ペプチド(SLPまたはLP)としてのT細胞エピトープの送達が報告されている。しかし、ペプチドの長さおよび流体力学的挙動の、ならびにペプチドと免疫刺激剤、例えばTLRa、の共送達の、免疫原性に対する影響は、適切に研究されていない。ペプチドベースの抗原の種々のパラメーターがT細胞免疫にどのような影響を及ぼすのかについてのより大きな洞察を与えるために、本発明者らは、本明細書に記載の式IVのペプチド抗原コンジュゲートの種々の性質がin vivoでCD4およびCD8 T細胞応答にどのような影響を及ぼすのかを系統的に評価した。
CD8 T細胞応答に対するペプチド抗原の流体力学的挙動、ペプチド抗原(A)長およびTLR-7/8aの共送達の影響
本開示のペプチド抗原コンジュゲートとして送達されるペプチド抗原(A)の長さが、免疫原性、特に、生成されるCD8および/またはCD4 T細胞応答の規模および質にどのような影響を及ぼすのかは、事前には不明であった。
本開示のペプチド抗原コンジュゲートとして送達されるペプチド抗原(A)の長さが、免疫原性、特に、生成されるCD8および/またはCD4 T細胞応答の規模および質にどのような影響を及ぼすのかは、事前には不明であった。
ペプチド抗原(A)長が式IVのペプチド抗原コンジュゲートの免疫原性にどのような影響を及ぼすのかを系統的に調査するために、マウス腫瘍モデルであるMC38に由来する2つのモデルネオ抗原CD8 T細胞エピトープ、IrgqおよびCpne1、を、ペプチド抗原(A)が26アミノ酸合成長鎖ペプチド(SLPもしくは「LP」)または10アミノ酸最小エピトープ(MEもしくは「Min」)のどちらかである、ペプチド抗原コンジュゲートとして生成した(図4)。図4で概要を述べる式IVのペプチド抗原コンジュゲートを生成するために、SLPベースのペプチド抗原(A)は、そのC末端をリンカー前駆体X1であるアジド-リシン(K’)に連結させ、これをリンカー前駆体X2であるDBCOに連結させ、これを疎水性分子(H)のN末端に連結させた一方で、最小エピトープペプチド抗原(A)は、C末端伸長部(B2)に連結させ、これをリンカー前駆体X2であるDBCOに連結させ、これを疎水性分子(H)のN末端に連結させた。
ペプチド抗原コンジュゲートの合成についての一般スキームは、反応性アジドを有する1.0当量のペプチド抗原断片と、1.2当量のDBCO含有疎水性分子(H)とを、DMSO中、室温で反応させることであった。反応は、24時間後に完了し、さらなる精製を必要としなかった。
本発明者らは、先ず、ペプチド抗原(A)およびペプチド抗原コンジュゲートの流体力学的挙動を評価した(図4)。注目すべきこととして、IrgqとCpne1の両方の、最小エピトープ(Min)およびLPを含むペプチド抗原(A)は、最大0.1mg/mLに至るまで水溶性であることが判明したが、2つの疎水性分子(H)、W3または2BXy3、のどちらかへのペプチド抗原(A)の結合によって、結果として生じたペプチド抗原コンジュゲートは、W3に結合されているCpne1のLPを含むペプチド抗原(A)を送達するペプチド抗原コンジュゲートを除き、粒子を形成することになった。これらの結果は、式IVのペプチド抗原コンジュゲートが、水溶性ペプチドの粒子形成を誘導すること、および疎水性分子(H)の長さの増加、またはより疎水性の高いモノマー(例えば、トリプトファンに対してGlu(2BXy))の使用が、粒子形成の確実性を向上させることを示す。
したがって、式Iの疎水性分子(H)は、式IIIのアジュバントに連結されている5つまたはそれより多くのモノマー単位から構成された場合には、試験したペプチド抗原コンジュゲートの大部分が粒子を形成したが、5つ未満のモノマー単位、例えば、1つまたは3つのモノマー単位を有する式IまたはIIの疎水性分子(H)は、粒子形成を誘導する確実性が低いことが、予想外に判明した。これらのデータに基づいて、ペプチド抗原コンジュゲートに使用する疎水性分子(H)の好ましい実施形態は、高親水性および/または荷電ペプチド抗原(A)の粒子を確実に形成するために、5つまたはそれより多くのモノマー単位から構成される。しかし、一部の実施形態では、疎水性分子(H)は、3つまたはそれより多くのモノマー単位、例えば、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30またはそれより多くのモノマー単位、通常は、最大約300モノマー単位の長さでありうる。
本発明者らは、次に、ペプチド抗原コンジュゲートの流体力学的挙動、ならびにペプチド抗原(A)長、およびペプチド抗原コンジュゲートを構成するTLR-7/8aアジュバントの共送達が、in vivoで免疫原性にどのような影響を及ぼすのかを評価した。26アミノ酸長鎖ペプチド(LP)または10アミノ酸最小エピトープ(Min)から構成されるペプチド抗原(A)を送達するペプチド抗原コンジュゲートを、2BXyと呼ばれる化合物2である小分子TLR-7/8aと混合したか;疎水性分子(H)であるW3に連結させ、2BXyと混合したか;またはペプチド抗原(A)を、粒子を形成してTLR-7/8aアジュバントとともにペプチド抗原(A)を確実に共送達する疎水性分子(H)である2BXy3に、連結させた(図4~6を参照されたい)。疎水性分子(H)である2BXy3に連結された最小エピトープから構成されるペプチド抗原(A)を送達するペプチド抗原コンジュゲートを用いて免疫化したマウスは、単回免疫化後に最大規模のCD8 T細胞応答(全体に対して>1%IFNg+CD8 T細胞)を提供した。これは、粒子形式での最小エピトープとTLR-7/8aの共送達が、CD8 T細胞応答を惹起するための効率的アプローチであることを示す。注目すべきこととして、TLR-7/8aと混合した可溶性最小エピトープおよび可溶性LPは、未処置群と比較して統計的に有意でない最低のCD8 T細胞応答を誘導した。これは、可溶性形態のペプチド抗原(A)が、免疫原性が最低であることを示す(図5および6)。最後に、疎水性分子(H)である2BXy3に連結されたIrgqの最小エピトープまたはIrgqのLPどちらかから構成されるペプチド抗原(A)を送達するペプチド抗原コンジュゲートは、同等の規模のCD8 T細胞応答を提供したが、最小エピトープCpne1から構成されるペプチド抗原(A)を送達するペプチド抗原コンジュゲートは、LPとしてCpne1を送達するペプチド抗原コンジュゲートと比較してほぼ10倍高いCD8 T細胞応答を誘導した。
式IVのペプチド抗原コンジュゲートに対するCD4およびCD8 T細胞免疫を促進するための免疫原性に対するペプチド抗原(A)長の役割をさらに調査するために、マウス腫瘍モデルであるB16に由来する7つの予測最小CD8 T細胞エピトープ(すなわち、予測ネオ抗原)を、式IVのペプチド抗原コンジュゲートを構成するペプチド抗原(A)(図7を参照されたい)としての、27アミノ酸合成長鎖ペプチド(LP)または10アミノ酸最小エピトープ(MEもしくはMinと呼ばれる)のどちらかとして送達した。図7で概要を述べる式IVのペプチド抗原コンジュゲートを生成するために、LPベースのペプチド抗原(A)は、そのC末端を、リンカー前駆体X1であるアジド-リシン(K’)に直接連結させ、これをリンカー前駆体X2であるDBCOに連結させ、これを疎水性分子(H)のN末端に連結させた一方で、最小エピトープペプチド抗原(A)は、C末端伸長部(B2)に連結させ、これをリンカー前駆体X2であるDBCOに連結させ、これを疎水性分子(H)のN末端に連結させた。ペプチド抗原(A)を、2BXy5または2B5どちらかの疎水性分子(H)に連結させて、ペプチド抗原コンジュゲートを形成した。構造的に類似しているが、TLR-7に対する作用強度の点で異なる、2BXy5と2B5を比較することにより、炎症が免疫原性にどのような影響を及ぼすのかを評価することができた。最小エピトープ(Min)、LPのどちらか、または最小エピトープとLPの両方としてペプチド抗原(A)を送達するペプチド抗原コンジュゲートから構成される免疫原性組成物を用いて、マウスに免疫化した。CD4およびCD8 T細胞応答の規模を、2回の免疫化の2週間後に評価した(図8)。
顕著な予想外の発見は、最小エピトープ(「Min」)を含むペプチド抗原(A)を送達するペプチド抗原コンジュゲートを施したマウスが、最大規模のCD8 T細胞応答を誘導したのに対して、LPを含むペプチド抗原(A)を送達するペプチド抗原コンジュゲートは、より低レベルのCD8 T細胞応答を誘導したことである。この傾向は、疎水性分子(H)である2BXy5と2B5の両方について明らかであった。それ故、疎水性分子(H)である2BXy5に連結されたLPを含むペプチド抗原(A)を送達するペプチド抗原コンジュゲートについて、CD8 T細胞応答は、約0.35%であり、CD4 T細胞応答は、約0.25%であった(図8)。対照的に、疎水性分子である2BXy5に連結された最小エピトープを含むペプチド抗原(A)を送達するペプチド抗原コンジュゲートを施したマウス群については、CD8 T細胞応答は、約1.9%であり、CD4
T細胞応答は、約0.1%であり、LPを送達するペプチド抗原コンジュゲートに対してCD8 T細胞応答の約6倍増加を提供したが、CD4 T細胞応答は検出不能であった。最小エピトープとLPの両方(「LP+min」)を含むペプチド抗原(A)を送達するペプチド抗原コンジュゲートを施したマウス群では、CD8 T細胞応答は、約0.6%であり、CD4 T細胞応答は、約0.5%であり、CD4 T細胞とCD8 T細胞両方の均衡をもたらした(図8)。
T細胞応答は、約0.1%であり、LPを送達するペプチド抗原コンジュゲートに対してCD8 T細胞応答の約6倍増加を提供したが、CD4 T細胞応答は検出不能であった。最小エピトープとLPの両方(「LP+min」)を含むペプチド抗原(A)を送達するペプチド抗原コンジュゲートを施したマウス群では、CD8 T細胞応答は、約0.6%であり、CD4 T細胞応答は、約0.5%であり、CD4 T細胞とCD8 T細胞両方の均衡をもたらした(図8)。
同様の傾向が、2BXyを含む疎水性分子(H)である2BXy5と比較して作用強度の低いTLR-7/8アゴニストである2Bを含む2B5疎水性分子(H)を使用するペプチド抗原コンジュゲートについて、観察された。それ故、2B5疎水性分子(H)とLPを含むペプチド抗原(A)とを含むペプチド抗原コンジュゲートを施した群では、約1.0%にCD8 T細胞応答が検出され、約0.75%にCD4 T細胞応答が検出されたのに対して、Minを単独で含むペプチド抗原(A)を送達するペプチド抗原コンジュゲートを施した群では、約4.5%にCD8 T細胞応答および約0.1%にCD4 T細胞応答があり、CD8 T細胞応答においてほぼ4倍の増加があったが、CD4 T細胞応答は検出不能であった。疎水性分子(H)2B5に連結された最小エピトープおよびLPを含むペプチド抗原(A)を送達するペプチド抗原コンジュゲートを含むワクチンを施した群では、CD8 T細胞応答は、約2.2%であり、CD4 T細胞応答は、約0.95%であった(図8)。
まとめると、式IVのペプチド抗原コンジュゲートのペプチド抗原(A)としてのME(または「Min」)の使用は、LPを含むペプチド抗原(A)と比較してCD8 T細胞応答の予想外の著しい増加をもたらした。しかし、これは、CD4 T細胞応答の低減ももたらした。重要なこととして、マウスに投与した免疫原性組成物への、ペプチド抗原(A)としてLPおよびMinを送達するペプチド抗原コンジュゲートの組入れは、単独でのLPから構成されるペプチド抗原(A)を送達するペプチド抗原コンジュゲートと比較して、CD4 T細胞応答の回復および予想以上に高いCD8 T細胞応答をもたらした。もう1つの肝要な発見は、炎症の量が、免疫原性に著しい影響を及すことであった。2B5である疎水性分子(H)は、2BXy5である疎水性分子(H)を用いて送達される2BXyである化合物2の作用強度のほぼ10分の1である、化合物1であるTLR-7/8aを含有する。したがって、2B5である疎水性分子(H)を含むペプチド抗原コンジュゲートに対するCD4およびCD8 T細胞応答の、2BXy5を使用するものと比較して、ほぼ3倍~4倍の増加は、アジュバント作用強度の調節によって炎症の量を加減することが、本開示のペプチド抗原コンジュゲートの最適な免疫原性レベルを達成するために好ましい可能性があることを示唆する。実際、MC38マウス腫瘍細胞株に由来する40の異なるペプチドベースのネオ抗原の免疫原性のスクリーニングにおいて、2B5である疎水性分子(H)に連結された最小エピトープから構成されるペプチド抗原(A)を送達するペプチド抗原コンジュゲートに基づく個別化がんワクチンは、2BXy5である疎水性分子(H)に連結された最小エピトープから構成されるペプチド抗原コンジュゲートと比較して、達成されるCD8 T細胞応答の幅において6倍の向上をもたらした(図9)。
さらなる予想外の発見は、複数の異なるT細胞エピトープをペプチド抗原コンジュゲートとして投与する最適な手段の同定を模索する研究に関連した。以前の研究は、同じMHC分子に結合する複数のT細胞エピトープの同じ部位への投与が、APC上のMHC分子との結合について競合しうること、およびこのことが、結果として、T細胞への提示についての競合を生じさせることになる場合があり、それによって、一緒に送達されるエピトープに対するT細胞応答の規模が、免疫化部位ごとに単一のエピトープとして単独で送達されるエピトープと比較して低下することになることを示唆した。本発明者らは、単一エピトープを含むペプチド抗原コンジュゲートを含む免疫原性組成物のマウスへの投与が、1部位または4部位どちらかへの、すべてが同じMHC分子に結合する異なるエピトープを含む3つの異なるペプチド抗原コンジュゲートでの同じエピトープの併用投与と比較して、そのエピトープに対してより大規模なT細胞応答を生じさせる結果となったことを観察した(図10)が、予想外の発見は、同じ動物における4箇所の別個の部位へのこれら4つの同じエピトープ(すなわち、1部位あたりに1つの特有エピトープ)の送達が、4つのエピトープすべてを一緒に4部位へ送達することより低い応答をもたらしたことであった(図10)。これは、予想外であり、複数部位に複数のエピトープを一緒に送達するよりも、エピトープ間の競合を回避するために、複数のエピトープを異なる部位に投与することがよいことを示唆する現行のパラダイムと矛盾した。これらのデータは、各エピトープを投与する部位数の最大化に基づいて複数の異なるエピトープを送達するための新たなパラダイムを示唆する。それ故、免疫応答を誘導する好ましい方法では、免疫応答を最大にするために、複数の異なるペプチド抗原(A)を含む免疫原性組成物を複数の部位に投与する。
(実施例3:式Vのペプチド抗原コンジュゲート)
前のデータは、式IVのペプチド抗原コンジュゲートのパラメーターが免疫原性にどのような影響を及ぼすのかを実証する。これらのデータは、粒子でのペプチド抗原(A)とTLR-7/8aを確実に共送達するペプチド抗原コンジュゲートが、CD8 T細胞免疫を誘導するための好ましい実施形態であることを示す。式IVのペプチド抗原コンジュゲートの制約は、このアプローチにより形成される粒子が、疎水性分子(H)に連結されたペプチド抗原(A)の組成の可変性のためにサイズおよび安定性が変わりやすいことである。ペプチド抗原コンジュゲートにより形成される粒子を安定させる1つの可能な手段は、水性媒体中で粒子凝集を防止してペプチド抗原コンジュゲートにより形成される粒子を安定させる表面電荷を導入することによる手段である。
前のデータは、式IVのペプチド抗原コンジュゲートのパラメーターが免疫原性にどのような影響を及ぼすのかを実証する。これらのデータは、粒子でのペプチド抗原(A)とTLR-7/8aを確実に共送達するペプチド抗原コンジュゲートが、CD8 T細胞免疫を誘導するための好ましい実施形態であることを示す。式IVのペプチド抗原コンジュゲートの制約は、このアプローチにより形成される粒子が、疎水性分子(H)に連結されたペプチド抗原(A)の組成の可変性のためにサイズおよび安定性が変わりやすいことである。ペプチド抗原コンジュゲートにより形成される粒子を安定させる1つの可能な手段は、水性媒体中で粒子凝集を防止してペプチド抗原コンジュゲートにより形成される粒子を安定させる表面電荷を導入することによる手段である。
疎水性分子(H)に連結されているペプチド抗原(A)に荷電分子(C)を付加させることにより、式Vのペプチド抗原コンジュゲートによる規定のサイズの安定した粒子の形成が可能になる(図11)。しかし、ペプチド抗原(A)に直接隣接させて荷電分子(C)および/または疎水性分子(H)を直接コンジュゲーションさせることは、MHC-IおよびMHC-IIに関連して最小エピトープの提示を可能にするAPCのプロセシングおよび提示機序への干渉を引き起こしうる。したがって、式Vのペプチド抗原コンジュゲートを使用して送達される最小エピトープ(Min)またはLPに基づくペプチド抗原(A)の効率的プロセシングを確実にするために、本発明者らは、ペプチド抗原(A)のN末端およびC末端に荷電分子(C)および疎水性分子(H)をそれぞれ連結させる酵素分解性伸長部(B1およびB2)の使用を評価した(図11)。
式Vのペプチド抗原コンジュゲートからの最小CD8 T細胞エピトープのプロセシングに対する伸長部(B1およびB2)の影響を評価するために、本発明者らは、一連のペプチドを合成し、リンカー前駆体X1(Lys(N3))にC末端における必要に応じた伸長部(B2)に連結された最小エピトープ、Cpne1、のN末端における必要に応じた伸長部(B1)に荷電分子(C)を連結させ、荷電分子(C)および伸長部(B1および/またはB2)が、Cpne1特異的CD8 T細胞を活性化するためのペプチド抗原(A)のin vitro作用強度にどのような影響を及ぼすのかを評価した。図12に示すように、最小エピトープのN末端およびC末端のどちらかまたは両方(B1および/またはB)において、カテプシン切断性伸長部、または組み合わせたカテプシン切断性・免疫プロテアソーム伸長部を使用して、ペプチド配列を調製した。伸長部(B1および/またはB2)に連結されたこれらのペプチド抗原(A)配列を異なる濃度で脾細胞培養物に添加して、これらの異なる構築物が、最小エピトープであるCpne1のAPCによる取込みおよび提示を促進する効率を評価した。
予想通り、プロセシングを必要とせず、MHC-Iに関連して直接負荷され、APCに提示されうる、最小エピトープ(黒塗りの四角、図12)は、in vitroで、最も効率が高く、最高の作用強度(最低EC50)を提供した。しかし、分解性伸長部(B1)を使用しない最小エピトープ(黒塗りの菱形)のN末端に荷電分子(C)(Glu-Lys-Glu-Lys-Glu-Lys 配列番号71)を直接付加させると、単独で使用した最小エピトープと比較して、作用強度がほぼ10,000分の1に低下した。注目すべきこととして、最小エピトープの活性は、荷電分子(C)と最小エピトープの間に酵素分解性テトラペプチド伸長部(B1)(すなわち、Ser-Leu-Val-Arg 配列番号7)を単に配置することにより回復した(六角形、図12)。C末端への追加のカテプシン切断性伸長部(B2)(すなわち、Ser-Leu-Val-Arg 配列番号7)の配置、またはN末端(B1)(Ser-Leu-Val-Arg-Tyr-Leu-Leu-Leu 配列番号72)もしくはC末端(B2)(Gly-Gly-Ser-Leu-Val-Arg 配列番号13)における免疫プロテアソーム分解性配列とカテプシン切断性伸長部の併用が、作用強度に及ぼす追加の影響は、荷電分子(C)と最小エピトープペプチド抗原(A)間での単一テトラペプチド伸長部(B1)の使用と比較して最小限のものであった。
次の研究は、疎水性分子(H)が2BXy3である、式Vのペプチド抗原コンジュゲートを使用して、in vivoでの抗原交差提示の効率に対する酵素分解性伸長部(B1およびB2)の影響の評価を模索した。
式Vのペプチド抗原コンジュゲートの合成についての一般スキームは、反応性アジドを有する1.0当量のペプチド抗原と、1.2当量のDBCO含有疎水性分子(H)とを、DMSO中、室温で反応させることであった。反応は、24時間後に完了し、さらなる精製を必要としなかった。
図13に示すように、Cpne1である最小エピトープのN末端およびC末端(B1およびB2)において酵素切断性伸長部の異なる組み合わせを使用して、異なる荷電分子(C)(例えば、Lys-Ser-Lys-Ser-Lys-Ser 配列番号73、Glu-Ser-Glu-Ser-Glu-Ser 配列番号74およびGlu-Lys-Glu-Lys-Glu-Lys 配列番号71)を有するペプチド抗原コンジュゲートを合成した。図13で報告する異なる免疫原性組成物を0および14日目に用いてマウスにワクチン接種し、T細胞応答を10日目(図14A)および28日目(図14B)に全血から評価した。図12からのin vitroデータと一致して、B1伸長部を使用しない最小エピトープのN末端への3つの荷電分子(C)のいずれかの配置は、単回免疫化でプライミングした動物の全血における応答の評価後、CD8 T細胞応答の完全消失(全CD8+ T細胞に対して約0.1%IFN-γ+)をもたらした(図14)。しかし、荷電分子(C)と最小エピトープから構成されるペプチド抗原(A)のN末端との間へのカテプシン切断性伸長部(B1)の配置は、正荷電分子(C)(Lys-Ser-Lys-Ser-Lys-Ser 配列番号73)を使用してペプチド抗原コンジュゲートのCD8 T細胞応答においてほぼ10倍の増加、およびESおよびEK荷電分子(C)を用いてペプチド抗原コンジュゲートに対するCD8 T細胞応答の小規模な向上をもたらした(図14)。正荷電分子(C)(Lys-Ser-Lys-Ser-Lys-Ser 配列番号73)を含むペプチド抗原コンジュゲートを用いてワクチン接種した群の中で、N末端およびC末端カテプシン切断性伸長部(B1およびB2)両方の付加は、単回免疫化後に約3.5%のCD8 T細胞応答をもたらしたが、カテプシン切断性配列に加えてのB1および/またはB2への免疫プロテアソーム配列の付加は、CD8 T細胞応答の規模においてさらなる増加をほんのわずかしかもたらさなかった(図14)。3セットの荷電分子(C)すべてを使用するペプチド抗原コンジュゲートについての2回の免疫化後のデータの傾向は一致しており、荷電分子(C)と疎水性分子(H)の間へのN末端およびC末端カテプシン切断性伸長部(B1およびB2)それぞれの組入れは、一般に、最大規模の応答をもたらしたが、免疫プロテアソームリンカーの追加による応答の向上は、ほとんどまたは全くなかった。
これらのデータは、式Vのペプチド抗原コンジュゲートのペプチド抗原のN末端に配置されるカテプシン切断性ペプチド伸長部(B1)、例えば、Ser-Leu-Val-Arg(配列番号7)などが、in vitroでの抗原提示およびin vivoでのCD8 T細胞のクロスプライミングを促進するための好ましい実施形態であるという予想外の発見を例証する。カテプシン切断性ペプチド伸長部をN末端とC末端の両方に配置したとき、およびC末端におけるカテプシン切断性伸長部(B2)と、免疫プロテアソームプロセシングにさらに有利に働く配列(例えば、Gly-Gly-Ser-Leu-Val-Arg(配列番号13)のジペプチドGly-Gly)とを組み合わせたとき、CD8 T細胞応答の小規模な追加の向上が見られた。まとめると、ペプチド抗原コンジュゲートの好ましい実施形態は、ペプチド抗原(A)のN末端と任意の追加の成分、例えば荷電分子(C)、との間にカテプシン切断性伸長部(B1)を含み、必要に応じて、カテプシン分解性または組み合わせたカテプシン・免疫プロテアソーム分解性伸長部(B2)をC末端に含む。
これらの発見を拡大するために、本発明者らは、最小エピトープであるAdpgkのN末端およびC末端(B1およびB2)に異なる組み合わせおよび組成のカテプシン分解性伸長部を有するペプチド抗原コンジュゲートを合成した(図15)。図15に示す異なる組成のペプチドを異なる濃度で脾細胞培養物に添加して、これらの異なる構築物が、最小エピトープであるAdpgkのAPCによる取込みおよび提示を促進する効率を評価した。N末端およびC末端(B1およびB2)に異なる組み合わせおよび組成のカテプシン分解性伸長部を有するペプチド抗原、Adpgk、についてのin vitroで決定した作用強度(EC50)を図16に示す。in vitroでの発見を確認するために、図15に示す、式C-B1-A-B2-X1に基づく、配列のサブセットを、疎水性分子(H)である2B3W2に連結させ、次いで、マウスに投与した。CD8 T細胞応答を13日目に評価した(図17)。このCD8 T細胞応答は、in vitroでのスクリーニングからの結果と一致し、このことにより、ペプチド抗原(A)のN末端およびC末端を荷電分子(C)および疎水性分子(H)にそれぞれ連結させるカテプシン分解性伸長部が、in vitroでの抗原提示の向上はもちろん、in vivoでの抗原交差提示の効率の向上ももたらすことができることが確認される。
粒径に対する正味電荷および伸長配列(B1およびB2)の影響
粒子の表面電荷が溶液中でのそれらの安定性に影響することは理解されているが、ペプチド抗原コンジュゲートの電荷密度および正味電荷の、これらのペプチド抗原コンジュゲートの水溶液中での超分子集合体のサイズおよび安定性に対する影響は、あまり研究されてこなかった。
粒子の表面電荷が溶液中でのそれらの安定性に影響することは理解されているが、ペプチド抗原コンジュゲートの電荷密度および正味電荷の、これらのペプチド抗原コンジュゲートの水溶液中での超分子集合体のサイズおよび安定性に対する影響は、あまり研究されてこなかった。
両親媒性高分子の電荷密度および正味電荷が、自己集合粒子の流体力学的挙動にどのように影響を及ぼすのかについてのより深い理解を与えるために、本発明者らは、ペプチド抗原(A)、荷電分子(C)、伸長部(B1およびB2)および疎水性分子(H)の組成を変えて式Vの一連のペプチド抗原コンジュゲート(図18)を合成し、これらのパラメーターが、約7.4のpHの水溶液に懸濁させたペプチド抗原コンジュゲートにより形成される粒子のサイズおよび安定性にどのような影響を及ぼすのかを評価した(図18)。
本発明者らの最初の研究は、正味電荷を増加させることが、式Vのペプチド抗原コンジュゲートの粒径および安定性にどのような影響を及ぼすのかを調査した(図18および19)。本発明者らの結果は、広範な異なるペプチド抗原(A)(N=754)を送達する式Vのペプチド抗原コンジュゲートを用いて形成される粒子の電荷の大きさとサイズとの間の逆の関係性を示し、正味電荷(絶対値)>6である式Vのペプチド抗原コンジュゲートとして送達されたペプチド抗原(A)の約90%は、集合して約20~40nmナノ粒子ミセルを構築した。注目すべきこととして、ナノ粒子ミセル化を確実にするために必要な正味電荷の大きさは、ペプチド抗原(A)の長さおよびハイドロパシーに大いに依存し、LPベースのペプチド抗原(A)を送達するほとんどのペプチド抗原コンジュゲートは、ペプチド抗原コンジュゲートが+8もしくはそれより高いまたは-8もしくはそれ未満の正味電荷を有したとき、ミセルを形成したが、最も疎水性が高い抗原は、安定したナノ粒子ミセルを確実に形成するために、最大+10もしくはそれより高い、または-10もしくはそれ未満の正味電荷を必要とした。
ペプチドベースのPCVの大きな課題は、それらが、ヒトゲノムから得ることができる任意の可能性のあるペプチド抗原を使用して製剤一貫性を確保しなければならないことである。PCVとしてのSP-7/8aの一般化可能性を評価するために、本発明者らは、先ず、起こりうるすべてのミスセンス変異を含む基準転写物(72.6M 24mer)から得られる、可能性のあるすべての25アミノ酸ペプチド(11.3M 25mer)の電荷およびハイドロパシーの度数分布をコンピュータで計算した。意外なことに、本発明者らの結果は、25アミノ酸ペプチドベースのネオ抗原の98%より多くが、-6~+6の間の電荷(pH7.4で)および+2~-2の間の総平均ハイドロパシー(GRAVY)を有するであろうことを示唆する。これらの結果は、ここで使用したマウスネオ抗原の電荷およびハイドロパシー分布が、in silicoで予測されたヒトネオ抗原の特性を代表することを示す(図19CおよびD)。注目すべきこととして、正味電荷の約2~4整数単位の小規模な増加でさえ、式Vのペプチド抗原コンジュゲートにより形成される粒子の安定性を著しく向上させる結果となる。それ故、+6の正味電荷を有する式Vのペプチド抗原コンジュゲートとして送達されたLPネオ抗原の約25%またはそれより多くが凝集したが、+8より大きいかまたは+8に等しい正味電荷を有する式Vのペプチド抗原コンジュゲートとして送達された同じLPネオ抗原は、集合して安定したナノ粒子ミセルを構築した(図19E)。これらの結果は、+6および+8より大きいかまたは+6および+8に等しい(あるは-6および-8未満であるかまたは-6および-8に等しい)正味電荷をそれぞれ有する式Vのペプチド抗原コンジュゲートとして送達されるMinおよびLPペプチド抗原が、確実に集合してナノ粒子ミセルを構築することを示す。重要なこととして、これらの予想外の発見は、ペプチド抗原コンジュゲートが、可能性のある25アミノ酸ネオ抗原の98%に十分な正味電荷を与えられることを確実にするように、約-6~約+6の範囲の電荷を有する25アミノ酸ペプチド抗原(A)に対応しなければならず、したがって、少なくとも13の特有の、荷電分子(C)と必要に応じた伸長部(B1および/またはB2)の組み合わせが、ペプチド抗原コンジュゲートの必要正味電荷を達成するのに十分な量の電荷をペプチド抗原(A)に加えること(例えば、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13および14荷電官能基を持たせること)を確実にするために、必要であることを示唆する。
ペプチド抗原コンジュゲートの正味電荷と水性緩衝液中でペプチド抗原コンジュゲートにより形成される粒子のサイズおよび安定性との間の傾向をさらに入念に調べるために、本発明者らは、ペプチド抗原コンジュゲート(例えば、ペプチドベースの荷電分子(C)、ペプチド伸長部(B1およびB2)およびペプチド抗原(A)を含む、ペプチド抗原断片)を構成するペプチド配列の総平均ハイドロパシー(GRAVY)値と、形成される粒子のサイズおよび安定性との間の相互作用を調査した(図19F)。GRAVY値と正味電荷と粒径の間には、強い相互依存性があった。したがって、+4の正味電荷および0未満の総平均ハイドロパシー(GRAVY)値を有するペプチド抗原コンジュゲートの多くが、安定した粒子を形成した(図19F)。対照的に、+4の正味電荷および0より大きいGRAVY値を有するペプチド抗原コンジュゲートの約25%は、凝集体を形成したが、凝集体を形成した、+6の正味電荷および0より大きいGRAVY値を有するペプチド抗原コンジュゲートは、ほとんどなかった。これらのデータは、好ましい実施形態では、送達されるペプチド抗原(A)のGRAVY値を相殺するように正味電荷の大きさを選択するべきであることを示す。好ましい実施形態では、ペプチド抗原コンジュゲートにより形成される安定した粒子の形成を促進するために、+4より大きいかもしくは+4に等しい正味電荷または-4未満であるかもしくは-4に等しい電荷を有するペプチド抗原コンジュゲートが得られるように、荷電分子(C)および伸長部(B1およびB2)の組成を選択し、最も疎水性が高いペプチド抗原(A)であっても安定したナノ粒子が確実に形成されるように、+6より大きいかまたは-6未満の正味電荷を使用する(図19F)。実際、高度に疎水性のLPベースの抗原は、正味電荷のさらに大きい絶対値を必要としうる。しかるが故に、ペプチド抗原コンジュゲートは、0.25未満のGRAVY値を有するLPペプチド抗原(A)については、+8より大きいかもしくは+8に等しい、または-8未満であるかもしくは-8に等しい正味電荷、約0.25~0.75の間のGRAVY値を有するLPペプチド抗原(A)については、+9より大きいかもしくは+9に等しい、または-9未満であるかもしくは-9に等しい正味電荷、および0.75より大きいGRAVY値を有するLPペプチド抗原(A)については、+10より大きいかもしくは+10に等しい、または-10未満であるかもしくは-10に等しい正味電荷を有するべきであり、ここでのLPは、最小エピトープより長いペプチド抗原(A)、例えば、15アミノ酸より多い、通常は、20またはそれより多い、例えば25アミノ酸のペプチド抗原を指すために使用している。
本発明者らの分析が、電荷およびハイドロパシーに関して、極端な組成を有するペプチド抗原を含むことに、留意されたい。したがって、4つのマウス腫瘍細胞株から採取した合計1,377の予測ネオ抗原のうちの大部分の-すなわち、90パーセンタイルのまたはそれより高い-疎水性(Val-Val-Ile-Ala-Ile-Phe-Ile-Ile-Leu(配列番号57))、正荷電(Lys-Asn-His-Arg-Asn-Arg-Qln-Val-Ile 配列番号75)、および負荷電(Ser-Pro-Glu-Arg-Asn-Asp-Trp-Glu-Pro-Leu 配列番号76)-配列を代表する3つの特有のペプチド抗原、ならびに検証されたCD8 T細胞エピトープ(Ala-Ser-Met-Thr-Asn-Met-Glu-Leu-Met-Ser-Ser(配列番号2))を、評価に選択した。検証されたCD4 T細胞エピトープ(PADRE=Ala-Lys-Phe-Val-Ala-Ala-Trp-Thr-Leu-Lys-Ala-Ala-Ala 配列番号22)を含むペプチド抗原(A)も、公知の普遍的CD4 T細胞エピトープとして分析に含めた(図18)。
粒径に対する疎水性分子(H)の長さおよび組成の影響
ペプチド抗原コンジュゲートが持つ正味電荷は、形成される粒子の安定性を促進するのに非常に重要であることが判明したが、本発明者らは、次に、粒径に影響を及ぼすさらなる因子を調査した。前の研究は、ミセル、リポソームおよびポリマーソームを構成する高分子の長さを調節して、形成される粒子のサイズを変えることができることを示している。それ故、式Vのペプチド抗原コンジュゲートとして送達されるペプチド抗原(A)としてモデルCD8 T細胞エピトープを使用して、本発明者らは、疎水性分子(H)の長さおよび組成が粒径にどのような影響を及ぼすのかを評価した(図20)。前のデータと一致して、本発明者らは、ペプチド抗原コンジュゲートにより形成される粒子のサイズおよび安定性が、使用した様々な異なる疎水性分子(H)にわたってペプチド抗原コンジュゲートの正味電荷に大いに依存することを発見した(図20)。+4またはそれより高い正味電荷を使用すると、5トリプトファン単位から構成される最小の疎水性分子(H)であるW5は、約10nmの平均直径を有する最小粒子をもたらし、その一方で、この例で使用した最大の疎水性分子(H)である2B2W8は、直径30~100nmの間の粒子をもたらした(図20)。注目すべきこととして、中間サイズの疎水性分子(H)である2B5および2BXy5は、正味電荷が+4より大きいかまたは+4に等しい場合、直径約10~30nmサイズの粒子である中間サイズの粒子をもたらした。
ペプチド抗原コンジュゲートが持つ正味電荷は、形成される粒子の安定性を促進するのに非常に重要であることが判明したが、本発明者らは、次に、粒径に影響を及ぼすさらなる因子を調査した。前の研究は、ミセル、リポソームおよびポリマーソームを構成する高分子の長さを調節して、形成される粒子のサイズを変えることができることを示している。それ故、式Vのペプチド抗原コンジュゲートとして送達されるペプチド抗原(A)としてモデルCD8 T細胞エピトープを使用して、本発明者らは、疎水性分子(H)の長さおよび組成が粒径にどのような影響を及ぼすのかを評価した(図20)。前のデータと一致して、本発明者らは、ペプチド抗原コンジュゲートにより形成される粒子のサイズおよび安定性が、使用した様々な異なる疎水性分子(H)にわたってペプチド抗原コンジュゲートの正味電荷に大いに依存することを発見した(図20)。+4またはそれより高い正味電荷を使用すると、5トリプトファン単位から構成される最小の疎水性分子(H)であるW5は、約10nmの平均直径を有する最小粒子をもたらし、その一方で、この例で使用した最大の疎水性分子(H)である2B2W8は、直径30~100nmの間の粒子をもたらした(図20)。注目すべきこととして、中間サイズの疎水性分子(H)である2B5および2BXy5は、正味電荷が+4より大きいかまたは+4に等しい場合、直径約10~30nmサイズの粒子である中間サイズの粒子をもたらした。
まとめると、これらの結果は、荷電分子(C)および疎水性分子(H)の正確に規定された化学的パラメーターを使用して、ペプチド抗原コンジュゲートにより形成される粒子のサイズおよび安定性を調整する方法についての予想外の発見を提供する。
高度に疎水性のペプチド抗原(A)を送達するペプチド抗原コンジュゲートの粒径および安定性に対する正味電荷の影響
高度に疎水性であるペプチド抗原(A)を送達するための式Vのペプチド抗原コンジュゲートの忍容性を実証するために、本発明者らは、4つのマウス腫瘍系統からの1,377のペプチドネオ抗原のライブラリーの中で最も疎水性の高いLPネオ抗原を選択し、自己集合して、TLR-7/8a(SNP-7/8a)を共送達するナノ粒子を構築する、式Vのペプチド抗原コンジュゲートとして送達されるペプチド抗原をLPまたはMinのどちらかとして合成した(図21)。SNP-7/8aとして送達される疎水性Min(GRAVY=3.96)を安定させるために、8に等しいかまたは8より大きい正味電荷が必要であったが、SNP-7/8aとして送達される疎水性LP(GRAVY=2.0)を安定させるためには、10に等しいかまたは10より大きい正味電荷が必要であった(図21)。さらなる予想外の発見は、ネイティブLPおよびminを固相ペプチド合成により製造可能ではなかったが、固相ペプチド合成中の樹脂上のペプチド抗原(A)への荷電分子(C)および伸長部(B1およびB2)の付加が、配列短縮を防止することならびに水性および有機溶媒中での溶解度向上に起因してHPLC精製を可能にすることにより製造を向上させたことであった。
高度に疎水性であるペプチド抗原(A)を送達するための式Vのペプチド抗原コンジュゲートの忍容性を実証するために、本発明者らは、4つのマウス腫瘍系統からの1,377のペプチドネオ抗原のライブラリーの中で最も疎水性の高いLPネオ抗原を選択し、自己集合して、TLR-7/8a(SNP-7/8a)を共送達するナノ粒子を構築する、式Vのペプチド抗原コンジュゲートとして送達されるペプチド抗原をLPまたはMinのどちらかとして合成した(図21)。SNP-7/8aとして送達される疎水性Min(GRAVY=3.96)を安定させるために、8に等しいかまたは8より大きい正味電荷が必要であったが、SNP-7/8aとして送達される疎水性LP(GRAVY=2.0)を安定させるためには、10に等しいかまたは10より大きい正味電荷が必要であった(図21)。さらなる予想外の発見は、ネイティブLPおよびminを固相ペプチド合成により製造可能ではなかったが、固相ペプチド合成中の樹脂上のペプチド抗原(A)への荷電分子(C)および伸長部(B1およびB2)の付加が、配列短縮を防止することならびに水性および有機溶媒中での溶解度向上に起因してHPLC精製を可能にすることにより製造を向上させたことであった。
ペプチド抗原コンジュゲートの荷電分子(C)および疎水性分子(H)組成の免疫原性に対する影響
本発明者らの上記結果は、正味電荷が、ペプチド抗原コンジュゲートにより形成されるナノ粒子ミセルを安定させるのに非常に重要であることを示す。本発明者らは、次に、最小エピトープであるAdpgkを送達するペプチド抗原コンジュゲートの免疫原性に対する荷電分子(C)および疎水性分子(H)の組成の影響を調査した(図22~24)。アジュバントを伴わない式Vのペプチド抗原コンジュゲートは、CD8 T細胞応答を誘導しなかった(図22)が、TLR-7/8aに連結された他の組成のペプチド抗原コンジュゲートのすべてが、堅固なCD8 T細胞応答を誘導した(図22)。注目すべきこととして、荷電分子(C)を伴わない式IVのペプチド抗原コンジュゲート、およびリシン(すなわち、ポリ(K))またはアルギニン(すなわち、ポリ(R))ベースの荷電分子(C)を有する式Vのペプチド抗原コンジュゲートは、下は0.25nmolに至るまでの用量を投与したときでさえ、堅固なCD8 T細胞応答を誘導した一方で、アスパラギン酸(すなわち、ポリ(D))ベースの荷電分子(C)を有する式Vのペプチド抗原コンジュゲートとして投与された同じネオ抗原は、0.25nmolで投与したときも1nmolで投与したときも、CD8 T細胞応答を誘導しなかったが、4および16nmolで投与したときには大規模なCD8 T細胞応答を誘導した。注目すべきこととして、負荷電ペプチド抗原コンジュゲート(図22)は、複数回免疫化後、式IVのペプチド抗原コンジュゲートまたは式Vの正荷電ペプチド抗原コンジュゲートのどちらかにより誘導されたCD8 T細胞応答より約1.5~2倍高い最大規模のCD8 T細胞応答(全CD8 T細胞に対して約30%IFNg+)を誘導した。これらの結果は、自己集合して微小粒子(図22)または正荷電ナノ粒子(図22)を構築するペプチド抗原コンジュゲートが、負荷電ペプチド抗原コンジュゲートと比較してCD8 T細胞応答を誘導するのにより強力であるが、自己集合して、TLR-7/8a(SNP-7/8a)を共送達するナノ粒子を構築する、負荷電ペプチド抗原コンジュゲートは、ブースト可能性の高いCD8 T細胞応答を誘導することができ、複数回免疫化後、より大規模な応答をもたらすことを示唆する。
本発明者らの上記結果は、正味電荷が、ペプチド抗原コンジュゲートにより形成されるナノ粒子ミセルを安定させるのに非常に重要であることを示す。本発明者らは、次に、最小エピトープであるAdpgkを送達するペプチド抗原コンジュゲートの免疫原性に対する荷電分子(C)および疎水性分子(H)の組成の影響を調査した(図22~24)。アジュバントを伴わない式Vのペプチド抗原コンジュゲートは、CD8 T細胞応答を誘導しなかった(図22)が、TLR-7/8aに連結された他の組成のペプチド抗原コンジュゲートのすべてが、堅固なCD8 T細胞応答を誘導した(図22)。注目すべきこととして、荷電分子(C)を伴わない式IVのペプチド抗原コンジュゲート、およびリシン(すなわち、ポリ(K))またはアルギニン(すなわち、ポリ(R))ベースの荷電分子(C)を有する式Vのペプチド抗原コンジュゲートは、下は0.25nmolに至るまでの用量を投与したときでさえ、堅固なCD8 T細胞応答を誘導した一方で、アスパラギン酸(すなわち、ポリ(D))ベースの荷電分子(C)を有する式Vのペプチド抗原コンジュゲートとして投与された同じネオ抗原は、0.25nmolで投与したときも1nmolで投与したときも、CD8 T細胞応答を誘導しなかったが、4および16nmolで投与したときには大規模なCD8 T細胞応答を誘導した。注目すべきこととして、負荷電ペプチド抗原コンジュゲート(図22)は、複数回免疫化後、式IVのペプチド抗原コンジュゲートまたは式Vの正荷電ペプチド抗原コンジュゲートのどちらかにより誘導されたCD8 T細胞応答より約1.5~2倍高い最大規模のCD8 T細胞応答(全CD8 T細胞に対して約30%IFNg+)を誘導した。これらの結果は、自己集合して微小粒子(図22)または正荷電ナノ粒子(図22)を構築するペプチド抗原コンジュゲートが、負荷電ペプチド抗原コンジュゲートと比較してCD8 T細胞応答を誘導するのにより強力であるが、自己集合して、TLR-7/8a(SNP-7/8a)を共送達するナノ粒子を構築する、負荷電ペプチド抗原コンジュゲートは、ブースト可能性の高いCD8 T細胞応答を誘導することができ、複数回免疫化後、より大規模な応答をもたらすことを示唆する。
本発明者らの発見を拡大するために、本発明者らは、ペプチド抗原コンジュゲートの荷電分子(C)組成が、皮下経路の投与後にCD8 T細胞応答に対してどのような影響を及ぼすのかを評価した(図23)。注目すべきこととして、それぞれポリ(K)またはポリ(D)のどちらかである負荷電または正荷電ポリ(アミノ酸)ベースの荷電分子(C)のどちらかを有する、式Vのペプチド抗原コンジュゲートは、中性のPEGベースのB1伸長部を有する式Vのペプチド抗原コンジュゲートより大規模なCD8 T細胞応答を誘導した(図23)。
重要なこととして、自己集合して、TLR-7/8a(SNP-7/8a)を共送達するナノ粒子を構築する、式Vのペプチド抗原コンジュゲートは、一般的な経路(筋肉内(IM)、皮下(SC))のワクチン接種、ならびに静脈内経路の後に、CD8 T細胞応答を惹起するのに高度に免疫原性であることが判明した(図24)。
免疫原性に対するペプチド抗原コンジュゲートの粒径およびアジュバント作用強度および組成の影響
粒径ならびにTLRアゴニストの量および作用強度が、単回免疫化後または複数回(「ブースター」)免疫化後のT細胞応答にどのような影響を及ぼすのかは、以前は不明であった。従来技術は、免疫刺激剤の量および作用強度を増加させると、より高い、または少なくとも劣ってはいない、CD8 T細胞応答が得られることを示唆したであろうが、in vivoでのCD8 T細胞応答のプライミングおよびブースティングに対する免疫刺激剤、例えばTLRアゴニスト、量および作用強度の影響は、あまり研究されてこなかった。それ故、本発明者らの次の研究は、式Vのペプチド抗原コンジュゲートに関する粒径ならびにそれらを用いて送達されるアゴニストの量および作用強度が免疫原性にどのような影響を及ぼすのかの評価を模索した。
粒径ならびにTLRアゴニストの量および作用強度が、単回免疫化後または複数回(「ブースター」)免疫化後のT細胞応答にどのような影響を及ぼすのかは、以前は不明であった。従来技術は、免疫刺激剤の量および作用強度を増加させると、より高い、または少なくとも劣ってはいない、CD8 T細胞応答が得られることを示唆したであろうが、in vivoでのCD8 T細胞応答のプライミングおよびブースティングに対する免疫刺激剤、例えばTLRアゴニスト、量および作用強度の影響は、あまり研究されてこなかった。それ故、本発明者らの次の研究は、式Vのペプチド抗原コンジュゲートに関する粒径ならびにそれらを用いて送達されるアゴニストの量および作用強度が免疫原性にどのような影響を及ぼすのかの評価を模索した。
粒径およびアゴニスト組成が免疫原性にどのような影響を及ぼすのかを決定するために、一方が、最小CD8 T細胞エピトープを含むペプチド抗原(A)を送達し、他方が、最小CD4 T細胞エピトープを含むペプチド抗原(A)を送達する、2つのペプチド抗原コンジュゲートを含む免疫原性組成物を用いて、マウスにワクチン接種した(図25)。式Vのペプチド抗原コンジュゲートを、それらが、異なる量および作用強度のTLR-7/8アゴニストを送達する、小粒子(約20~100nm径ナノ粒子(NP))を形成するのか、または大粒子(約1,000nm径微小粒子(MP))を形成するのかに基づいて、区別した。小または大粒子の各セットの中のペプチド抗原コンジュゲートは、1、2、3もしくは5分子の化合物1である2B、または5分子のより作用強度の高いアゴニストである化合物2である2BXyのどちらかを含有する疎水性分子(H)を含んだ。所与の免疫原性組成物を用いてマウスに2回、ワクチン接種し、各ワクチン接種の1週間後に血液中のT細胞応答を測定した。
顕著な予想外の発見は、小粒子(20~100nm)についても、大粒子(約1000nm)についても、疎水性分子(H)に連結されたアゴニスト2Bの量を増加させると、CD4およびCD8 T細胞応答が増加されることになり、単一2B分子のみを含む疎水性分子(H)に連結されたペプチド抗原コンジュゲートが、最低のCD8およびCD4 T細胞応答をもたらしたことであった。CD4およびCD8 T細胞応答は、両方とも、2個の2B分子を追加することにより増加され、小規模な追加の増加が、疎水性分子(H)への3または5個の2B分子の追加後にあった。3分子またはそれより多い、作用強度がより高いアゴニストTLR-7/8aである2BXyを送達する疎水性分子(H)を含むペプチド抗原コンジュゲートが、3分子またはそれより多い、作用強度がより低いアゴニストである2Bを送達する疎水性分子(H)を含むペプチド抗原コンジュゲートと比較して、複数回免疫化後により低いCD8 T細胞応答をもたらしたことを示す、本発明者らの前の予想外のデータ(図6および7)と一致して、図25からの結果は、2BXy5が、中等度の作用強度のアゴニストである2B5を送達する疎水性分子(H)の使用と比較して、より低いCD8およびCD4 T細胞応答をもたらすことを示す。この予想外の発見、つまり、作用強度がより高いアゴニストが、より低い免疫応答をもたらすことは、文献の中の以前の発見に基づいて予測されなかったであろう。
まとめると、ペプチド抗原コンジュゲートに対してアゴニストである化合物1である2Bの数を増加させると、一般に、より高いCD8 T細胞応答が得られたが、これらの応答は、生来の刺激剤が作用強度のより高いアゴニストに変わると、規模が減少した。したがって、好ましい実施形態は、ペプチド抗原コンジュゲートを含む免疫原性組成物を使用して最適なCD4およびCD8 T細胞応答を誘導するために、高密度の中等度の作用強度のTLR-7/8aアゴニスト、または低密度の高い作用強度のTLR-7/8aのどちらかを使用する。
粒径
もう1つの顕著な予想外の発見は、約10~200nm径粒子である小粒子を形成するペプチド抗原コンジュゲートを含む免疫原性組成物が、より大きい粒子(直径>1,000nm)を形成するペプチド抗原コンジュゲートと比較して、より大規模なCD4およびCD8 T細胞応答をもたらしたことであった。例えば、疎水性分子(H)2B5に連結されたペプチド抗原コンジュゲートであって、小粒子を形成するペプチド抗原コンジュゲートを含む免疫原性組成物を施した群では、CD8 T細胞応答は、大粒子を形成する、疎水性分子(H)2B5に連結されたペプチド抗原コンジュゲートを含む免疫原性組成物を施した群についての、約0.5%と比較して、約2.5%であった(図25)。同様に、疎水性分子(H)2B3W2に連結されたペプチド抗原コンジュゲートを小粒子として含む免疫原性組成物を施した群におけるCD8 T細胞応答は、疎水性分子(H)2B3W2に連結されたペプチド抗原コンジュゲートを大粒子として含む免疫原性組成物を施した群と比べておおよそ10倍高かった。
もう1つの顕著な予想外の発見は、約10~200nm径粒子である小粒子を形成するペプチド抗原コンジュゲートを含む免疫原性組成物が、より大きい粒子(直径>1,000nm)を形成するペプチド抗原コンジュゲートと比較して、より大規模なCD4およびCD8 T細胞応答をもたらしたことであった。例えば、疎水性分子(H)2B5に連結されたペプチド抗原コンジュゲートであって、小粒子を形成するペプチド抗原コンジュゲートを含む免疫原性組成物を施した群では、CD8 T細胞応答は、大粒子を形成する、疎水性分子(H)2B5に連結されたペプチド抗原コンジュゲートを含む免疫原性組成物を施した群についての、約0.5%と比較して、約2.5%であった(図25)。同様に、疎水性分子(H)2B3W2に連結されたペプチド抗原コンジュゲートを小粒子として含む免疫原性組成物を施した群におけるCD8 T細胞応答は、疎水性分子(H)2B3W2に連結されたペプチド抗原コンジュゲートを大粒子として含む免疫原性組成物を施した群と比べておおよそ10倍高かった。
まとめると、これらのデータは、免疫原性組成物に使用したペプチド抗原コンジュゲートにより形成される粒子のサイズが、CD8 T細胞応答に対して大きくかつ予想外の影響を及ぼしたことを示す。したがって、20~100nmの粒子を形成するペプチド抗原コンジュゲートは、最適なT細胞免疫を惹起するための免疫原性組成物における使用に好ましい実施形態である。
つまるところ、これらの研究は、本開示のペプチド抗原コンジュゲートを使用してCD4およびCD8 T細胞応答を最大化するために最適である、正確な物理的および化学的パラメーターを解明するものである。
追加の予想外の発見は、ペプチド抗原コンジュゲートにより形成される粒子の流体力学的挙動および安定性が、ペプチド抗原コンジュゲートを構成するペプチド配列の、正味電荷と、Kyteと、Doolittleの方法(参照:Kyte J、Doolittle RF、A simple method for displaying the hydropathic character of a protein、J. Mol.Biol 157巻:105~32頁、1983年)を使用して決定されるような総平均ハイドロパシー(GRAVY)値の両方に依存したことであった。注記:GRAVY値および電荷決定は、リンカー(L)および疎水性分子(H)または粒子(P)の寄与を除外した。
したがって、GRAVY値>0.75である高度に疎水性のペプチド抗原(A)を送達するペプチド抗原コンジュゲートは、ペプチド抗原コンジュゲートの正味電荷が、≧+6である(+6より大きいか、もしくは+6に等しい)または≦-6である(-6未満であるか、もしくは-6に等しい)場合、約pH7.4のpHの水性緩衝液中で安定した粒子を確実に形成し、GRAVY値が0.25~0.75の間である中等度に疎水性のペプチド抗原(A)を送達するペプチド抗原コンジュゲートは、ペプチド抗原コンジュゲートの正味電荷が、≧+5である(+5より大きいか、もしくは+5に等しい)または≦-5である(-5未満であるか、もしくは-5に等しい)場合、約pH7.4のpHの水性緩衝液中で安定した粒子を確実に形成し、GRAVY値が0.25未満であるペプチド抗原(A)を送達するペプチド抗原コンジュゲートは、正味電荷が、≧+4である(+4より大きいか、もしくは+4に等しい)または≦-4である(-4未満であるか、もしくは-4に等しい)場合、約pH7.4のpHの水性緩衝液中で安定した粒子を確実に形成した。したがって、本発明者らの予想外の発見に基づくと、任意の組成のペプチド抗原(A)を送達するペプチド抗原コンジュゲートの安定した粒子形成を促進する手段として、荷電分子(C)および伸長配列(B1およびB2)の適切な組成を選択して、電荷を調節することができる。
免疫原性に対するペプチドネオ抗原の流体力学的挙動の影響
本発明者らは、次に、自己集合して、TLR-7/8a(SNP-7/8a)を共送達するナノ粒子を構築する、式Vのペプチド抗原コンジュゲート(図26)を使用する、より一貫した製剤が、電荷安定化を伴わず、結果として微小分子/凝集体(MP-7/8a)が生じることになる、疎水性ポリマー-TLR-7/8aへのLPネオ抗原の連結と比較して、またはLPネオ抗原と微粒子アジュバント(LP+ポリICLC)を混合する、より従来的なアプローチと比較して、CTL応答の免疫原性向上につながるかどうかを評価した(図27)。本発明者らは、Adpgk、Cpne1およびIrgqという3つのLPネオ抗原を評価に選択した。Adpgkは、集合して、ネイティブLPとして粒子を構築したが、Cpne1 LPおよびIrgq LPは、両方とも、水溶性であった(図27A)。
本発明者らは、次に、自己集合して、TLR-7/8a(SNP-7/8a)を共送達するナノ粒子を構築する、式Vのペプチド抗原コンジュゲート(図26)を使用する、より一貫した製剤が、電荷安定化を伴わず、結果として微小分子/凝集体(MP-7/8a)が生じることになる、疎水性ポリマー-TLR-7/8aへのLPネオ抗原の連結と比較して、またはLPネオ抗原と微粒子アジュバント(LP+ポリICLC)を混合する、より従来的なアプローチと比較して、CTL応答の免疫原性向上につながるかどうかを評価した(図27)。本発明者らは、Adpgk、Cpne1およびIrgqという3つのLPネオ抗原を評価に選択した。Adpgkは、集合して、ネイティブLPとして粒子を構築したが、Cpne1 LPおよびIrgq LPは、両方とも、水溶性であった(図27A)。
本発明者らの前の発見と一致して、粒子として送達されたネオ抗原LPのみが、in vivoでCD8 T細胞応答を誘導した(図27BおよびC)。したがって、pICLCと混合した可溶性LP Cpne1およびIrgqは、CD8 T細胞応答を誘導しなかったが、MP-7/8a(微小粒子/凝集体)またはSNP-7/8a(ナノ粒子)として送達された同じネオ抗原は、大規模CD8 T細胞免疫の発生をもたらした(図27B~E)。pICLCと混合した可溶性LPは、前に説明した通り、不活性であったが、粒子LPであるAdpgkは、バックグラウンドと比較してCD8 T細胞応答の有意な増加を誘導した。これは、アジュバント、すなわちpICLC、ではなく、ペプチドネオ抗原の物理的形態が、pICLCと混合したCpne1 LPおよびIrgq LPによる弱いT細胞応答の原因である可能性が高かったことを示す。
粒子形式でのネオ抗原を送達する製剤の中で、式Vのペプチド抗原コンジュゲートに基づくナノ粒子ミセル(SNP-7/8a)が、最大規模の応答をもたらし、次が、微小粒子(MP-7/8a)製剤であり、そして最後が、アジュバントと混合した単独のLPであった(図27B~E)。注目すべきこととして、単回免疫化後のナノ粒子ミセル(SNP-7/8a)による応答は、微小粒子製剤による応答より有意に(約5~10倍)高かったが、2回または3回の免疫化後の応答は、同等であった。これは、微小粒子と比較してより小さいナノ粒子ミセルが、より速いT細胞誘導動態を有することを示す。
観察された免疫原性の差を明らかにするための機構の研究により、安定したナノ粒子ミセルを形成するペプチド抗原コンジュゲートは、濃度が早期にピークに達し、1日目にリンパ節APCにより取り込まれて、最高量のネオ抗原が流入領域リンパ節に取り込まれる結果となった一方で、微小粒子は、濃度が7日目にピークに達して、より緩徐にリンパ節に取り込まれる(これは、微小粒子に起因するCD8 T細胞応答のより緩徐な動態が原因でありうる)ことを示すことが、明らかになった(図28)。対照的に、可溶性アジュバントまたは粒子アジュバントのどちらかと混合した可溶性ネオ抗原は、流入領域リンパ節へのネオ抗原の制限された取込みしか示さなかった。アジュバントの粒子製剤のすべてが、リンパ節において同等の自然免疫活性化の規模および動態を誘導するにもかかわらず、粒子形態の抗原のみが、CD8 T細胞応答をもたらした。リンパ節における可溶性ネオ抗原の制限された蓄積は、この可溶性ネオ抗原がCD8 T細胞応答を誘導することができないことの原因である可能性が高い。
免疫原性に対するペプチド長の影響
ペプチド長は、ペプチド抗原(A)免疫原性に影響を及ぼす大きな要因であると考えられる。それ故、本発明者らは、自己集合して、TLR-7/8a(「SNP-7/8a」)を共送達するナノ粒子を構築する、式Vのペプチド抗原コンジュゲートとして送達されるペプチドネオ抗原の長さが、in vivoで生成されるCD4およびCD8 T細胞応答の規模にどのような影響を及ぼすのかを調査した(図29)。MC38腫瘍細胞株に由来する7つのペプチドネオ抗原を、本明細書でSNP-7/8aと呼ばれる、式Vのペプチド抗原コンジュゲートとして送達される最小エピトープ(min)またはLPベースのペプチド抗原(A)のどちらかとして調製し、次いで、マウスに投与した。本発明者らの結果は、SNP-7/8aとして送達された、min形態とLP形態両方のネオ抗原が、バックグラウンドに比べて(非免疫原性であると以前に報告された4つのネオ抗原に対して、を含む)約10~100倍大きい、同等の規模のCD8 T細胞応答を惹起することを示す(図29A)。しかし、予想通り、LPは、minと比較して有意に高いCD4
T細胞応答を惹起した。これは、minが小さ過ぎてCD4エピトープをコードすることができないためである可能性が高い(図29B)。重要なこととして、これらの結果は、ペプチド長が、CD8 T細胞応答に対してほとんど影響を及ぼさないことを示し、粒子で適切に製剤化された場合の、製造効率がより高い、最小CD4またはCD8エピトープを含有する短鎖ペプチド(7~14アミノ酸)が、LP(>20アミノ酸)よりもワクチンにおける使用に好ましい場合があることを示唆する。実際、MHC-II予測アルゴリズムの向上によって、CD4 T細胞応答とCD8 T細胞応答の両方を惹起するための最小エピトープの使用が可能になり、その結果、LPを使用する必要がなくなるはずである。
従来のアプローチと比較したペプチド抗原コンジュゲートとして送達されるペプチドネオ抗原の免疫原性のベンチマーク評価(benchmarking)
本発明者らは、次に、自己集合して、TLR-7/8a(「SNP-7/8a」)を共送達するナノ粒子を構築する、式Vの本発明者らのペプチド抗原コンジュゲートの活性を、ネイティブLPを微粒子アジュバントポリICLCと混合する従来のペプチドベースのワクチンアプローチとともに、ベンチマーク評価を行った(図30)。Yadavらの発見(Yadav Mら、Nature 515巻(7528号):572~576頁(2014年))と一致して、質量分析により検証した7つの予測ネオ抗原のうちの2つのみ(Reps1およびAdpgk、これらは両方とも微粒子である)が、pICLCと併せた場合、免疫原性であったが、SNP-7/8aとしての、すなわち、式Vのペプチド抗原コンジュゲートとして送達されたペプチド抗原(A)としての、7つのLPネオ抗原すべてが、大規模CD8 T細胞応答を惹起した(図30)。注目すべきこととして、図30に示す7つのネオ抗原すべてが、質量分析により腫瘍MHC-Iに結合することが確認された。これは、質量分析が、ペプチド抗原(A)、例えばネオ抗原、の免疫原性を予測するための信頼できるフィルターであるという予想外の発見を提供する。
ペプチド長は、ペプチド抗原(A)免疫原性に影響を及ぼす大きな要因であると考えられる。それ故、本発明者らは、自己集合して、TLR-7/8a(「SNP-7/8a」)を共送達するナノ粒子を構築する、式Vのペプチド抗原コンジュゲートとして送達されるペプチドネオ抗原の長さが、in vivoで生成されるCD4およびCD8 T細胞応答の規模にどのような影響を及ぼすのかを調査した(図29)。MC38腫瘍細胞株に由来する7つのペプチドネオ抗原を、本明細書でSNP-7/8aと呼ばれる、式Vのペプチド抗原コンジュゲートとして送達される最小エピトープ(min)またはLPベースのペプチド抗原(A)のどちらかとして調製し、次いで、マウスに投与した。本発明者らの結果は、SNP-7/8aとして送達された、min形態とLP形態両方のネオ抗原が、バックグラウンドに比べて(非免疫原性であると以前に報告された4つのネオ抗原に対して、を含む)約10~100倍大きい、同等の規模のCD8 T細胞応答を惹起することを示す(図29A)。しかし、予想通り、LPは、minと比較して有意に高いCD4
T細胞応答を惹起した。これは、minが小さ過ぎてCD4エピトープをコードすることができないためである可能性が高い(図29B)。重要なこととして、これらの結果は、ペプチド長が、CD8 T細胞応答に対してほとんど影響を及ぼさないことを示し、粒子で適切に製剤化された場合の、製造効率がより高い、最小CD4またはCD8エピトープを含有する短鎖ペプチド(7~14アミノ酸)が、LP(>20アミノ酸)よりもワクチンにおける使用に好ましい場合があることを示唆する。実際、MHC-II予測アルゴリズムの向上によって、CD4 T細胞応答とCD8 T細胞応答の両方を惹起するための最小エピトープの使用が可能になり、その結果、LPを使用する必要がなくなるはずである。
従来のアプローチと比較したペプチド抗原コンジュゲートとして送達されるペプチドネオ抗原の免疫原性のベンチマーク評価(benchmarking)
本発明者らは、次に、自己集合して、TLR-7/8a(「SNP-7/8a」)を共送達するナノ粒子を構築する、式Vの本発明者らのペプチド抗原コンジュゲートの活性を、ネイティブLPを微粒子アジュバントポリICLCと混合する従来のペプチドベースのワクチンアプローチとともに、ベンチマーク評価を行った(図30)。Yadavらの発見(Yadav Mら、Nature 515巻(7528号):572~576頁(2014年))と一致して、質量分析により検証した7つの予測ネオ抗原のうちの2つのみ(Reps1およびAdpgk、これらは両方とも微粒子である)が、pICLCと併せた場合、免疫原性であったが、SNP-7/8aとしての、すなわち、式Vのペプチド抗原コンジュゲートとして送達されたペプチド抗原(A)としての、7つのLPネオ抗原すべてが、大規模CD8 T細胞応答を惹起した(図30)。注目すべきこととして、図30に示す7つのネオ抗原すべてが、質量分析により腫瘍MHC-Iに結合することが確認された。これは、質量分析が、ペプチド抗原(A)、例えばネオ抗原、の免疫原性を予測するための信頼できるフィルターであるという予想外の発見を提供する。
最小エピトープ予測結合親和性と免疫原性との関係
本発明者らの結果は、自己集合して、TLR-7/8a(「SNP-7/8a」)を共送達するナノ粒子を構築する、式Vのペプチド抗原コンジュゲートとして送達されたペプチドベースのネオ抗原が、CD4およびCD8 T細胞応答を惹起するための高度に効率的なアプローチであることを示す。ワクチンプラットフォームの効率の向上によって、免疫原性の予測アルゴリズムを洗練させることが可能でありうる。実際、本発明者らは、SNP-7/8aを伴う192の特有のCD8 T細胞エピトープをin vivoでスクリーニングした後に予測MHC-I結合と免疫原性との強い相関関係を観察し、高親和性エピトープ(IEDBコンセンサススコア<0.5パーセンタイル)のほぼ50%が、CD8 T細胞応答をもたらした。これは、公表されている応答と比較して、CD8 T細胞応答のプライミング効率のほぼ5倍の上昇である(図31)。これらの結果は、in silico予測結合親和性、特に、IEDBコンセンサススコアが、ペプチド抗原(A)免疫原性を高度に予測することを示す。
本発明者らの結果は、自己集合して、TLR-7/8a(「SNP-7/8a」)を共送達するナノ粒子を構築する、式Vのペプチド抗原コンジュゲートとして送達されたペプチドベースのネオ抗原が、CD4およびCD8 T細胞応答を惹起するための高度に効率的なアプローチであることを示す。ワクチンプラットフォームの効率の向上によって、免疫原性の予測アルゴリズムを洗練させることが可能でありうる。実際、本発明者らは、SNP-7/8aを伴う192の特有のCD8 T細胞エピトープをin vivoでスクリーニングした後に予測MHC-I結合と免疫原性との強い相関関係を観察し、高親和性エピトープ(IEDBコンセンサススコア<0.5パーセンタイル)のほぼ50%が、CD8 T細胞応答をもたらした。これは、公表されている応答と比較して、CD8 T細胞応答のプライミング効率のほぼ5倍の上昇である(図31)。これらの結果は、in silico予測結合親和性、特に、IEDBコンセンサススコアが、ペプチド抗原(A)免疫原性を高度に予測することを示す。
ペプチド抗原コンジュゲートは、in vivoで腫瘍排除を媒介する堅固な腫瘍関連(自己抗原、ネオ抗原およびウイルス抗原)特異的CD8およびCD4 T細胞応答を惹起する
本発明者らは、以前に報告された非免疫原性エピトープに対するCD8 T細胞応答が、確立腫瘍の排除の向上をもたらすことができるかどうかを調査した(図32~33)。本発明者らの結果は、非免疫原性であると以前に報告された2つの腫瘍モデルであるMC38およびB16.F10からのいくつかのネオ抗原が、自己集合して、TLR-7/8a(「SNP-7/8a」)を共送達するナノ粒子を構築する、式Vのペプチド抗原コンジュゲートとして送達されたとき、確立腫瘍の排除をもたらすことを示す。注目すべきこととして、Kreiterらは、ネオ抗原特異的CD4 T細胞応答が確立B16.F10腫瘍の排除を主として媒介することを以前に報告したが、本発明者らは、ワクチンの効率向上によって、ネオ抗原特異的CD4 T細胞応答とCD8 T細胞応答の両方がB16.F10の排除の媒介に動員されうることを観察した(図32および34)。重要なこととして、これらの発見は、ネオ抗原の使用に留まらなかった。なぜならSNP-7/8aとして送達されたウイルス抗原(HPV E6およびE7、図35)と自己抗原(Trp1、図32)の両方が、腫瘍排除向上に関連する大規模CD8 T細胞応答を惹起したからである。
本発明者らは、以前に報告された非免疫原性エピトープに対するCD8 T細胞応答が、確立腫瘍の排除の向上をもたらすことができるかどうかを調査した(図32~33)。本発明者らの結果は、非免疫原性であると以前に報告された2つの腫瘍モデルであるMC38およびB16.F10からのいくつかのネオ抗原が、自己集合して、TLR-7/8a(「SNP-7/8a」)を共送達するナノ粒子を構築する、式Vのペプチド抗原コンジュゲートとして送達されたとき、確立腫瘍の排除をもたらすことを示す。注目すべきこととして、Kreiterらは、ネオ抗原特異的CD4 T細胞応答が確立B16.F10腫瘍の排除を主として媒介することを以前に報告したが、本発明者らは、ワクチンの効率向上によって、ネオ抗原特異的CD4 T細胞応答とCD8 T細胞応答の両方がB16.F10の排除の媒介に動員されうることを観察した(図32および34)。重要なこととして、これらの発見は、ネオ抗原の使用に留まらなかった。なぜならSNP-7/8aとして送達されたウイルス抗原(HPV E6およびE7、図35)と自己抗原(Trp1、図32)の両方が、腫瘍排除向上に関連する大規模CD8 T細胞応答を惹起したからである。
複数の異なるペプチド抗原コンジュゲートを含む粒子は安定しており、均一な粒径を示す
PCVアプローチは、T細胞応答の幅を増加させるために患者への複数の異なるエピトープの投与を必要とする可能性が高い。それ故、本発明者らは、複数の異なるペプチド抗原コンジュゲートを含む多抗原粒子ワクチンにおける使用に対する、自己集合して、TLR-7/8a(SNP-7/8a)を共送達するナノ粒子を構築する、式Vのペプチド抗原コンジュゲートの、寛容を評価した(図36)。複数の異なるペプチド抗原コンジュゲートを含む粒子は、ネオ抗原LP組成に関係なく、20~40nmの間の一貫した粒径になった(図36)。
PCVアプローチは、T細胞応答の幅を増加させるために患者への複数の異なるエピトープの投与を必要とする可能性が高い。それ故、本発明者らは、複数の異なるペプチド抗原コンジュゲートを含む多抗原粒子ワクチンにおける使用に対する、自己集合して、TLR-7/8a(SNP-7/8a)を共送達するナノ粒子を構築する、式Vのペプチド抗原コンジュゲートの、寛容を評価した(図36)。複数の異なるペプチド抗原コンジュゲートを含む粒子は、ネオ抗原LP組成に関係なく、20~40nmの間の一貫した粒径になった(図36)。
腫瘍に関連する自己抗原または感染性疾患抗原を送達する式Vのペプチド抗原コンジュゲート
上記の本発明者らの発見を拡大するために、本発明者らは、T細胞免疫を誘導するための普遍的ワクチンプラットフォームとしてのペプチド抗原コンジュゲートの使用の一般化可能性を評価した。図37に示すように、癌遺伝子(Kras)と、ウイルス(HIV)に由来するペプチドと、外来抗原(すなわち、オボアルブミン)とを含むペプチド抗原(A)を送達する、式Vのペプチド抗原コンジュゲートは、すべてが安定したナノ粒子を形成し、in vivoで大規模T細胞応答を誘導した。
上記の本発明者らの発見を拡大するために、本発明者らは、T細胞免疫を誘導するための普遍的ワクチンプラットフォームとしてのペプチド抗原コンジュゲートの使用の一般化可能性を評価した。図37に示すように、癌遺伝子(Kras)と、ウイルス(HIV)に由来するペプチドと、外来抗原(すなわち、オボアルブミン)とを含むペプチド抗原(A)を送達する、式Vのペプチド抗原コンジュゲートは、すべてが安定したナノ粒子を形成し、in vivoで大規模T細胞応答を誘導した。
式IIIのアジュバントに連結された式IIのポリ(アミノ酸)に基づく、異なる荷電分子(C)または異なる疎水性分子(H)から構成される、式Vのペプチド抗原コンジュゲートの粒径および生物活性
上で実証したように、ペプチド抗原コンジュゲートワクチンは、成分、例えば、荷電分子(C)、伸長部(B1およびB2)、ペプチド抗原(A)、リンカー(L)および疎水性分子(H)、の各々についての広範な異なる組成を可能にしうるモジュラープラットフォームである。一部の実施形態では、これは、ほとんどの生理的に適切なpH範囲、例えばpH4.5~約pH8.5、にわたってpH非依存性である官能基を含む荷電分子(C)を組み入れるために重要でありうる。それ故、本発明者らは、ホスホセリンまたはトリメチル-リシン(pH非依存性第四級アンモニウム)アミノ酸をそれぞれ含む荷電分子(C)を使用して、正味負電荷または正味正電荷のどちらかを有するペプチド抗原コンジュゲートを合成した(図38)。本発明者らの結果は、ホスホセリンまたはトリメチル-リシンベースの荷電分子(C)を含むペプチド抗原コンジュゲートが、安定したナノ粒子を形成し、大規模T細胞応答を誘導するのに対して、荷電分子(C)を有さないペプチド抗原コンジュゲートが凝集体を形成することを示す。
上で実証したように、ペプチド抗原コンジュゲートワクチンは、成分、例えば、荷電分子(C)、伸長部(B1およびB2)、ペプチド抗原(A)、リンカー(L)および疎水性分子(H)、の各々についての広範な異なる組成を可能にしうるモジュラープラットフォームである。一部の実施形態では、これは、ほとんどの生理的に適切なpH範囲、例えばpH4.5~約pH8.5、にわたってpH非依存性である官能基を含む荷電分子(C)を組み入れるために重要でありうる。それ故、本発明者らは、ホスホセリンまたはトリメチル-リシン(pH非依存性第四級アンモニウム)アミノ酸をそれぞれ含む荷電分子(C)を使用して、正味負電荷または正味正電荷のどちらかを有するペプチド抗原コンジュゲートを合成した(図38)。本発明者らの結果は、ホスホセリンまたはトリメチル-リシンベースの荷電分子(C)を含むペプチド抗原コンジュゲートが、安定したナノ粒子を形成し、大規模T細胞応答を誘導するのに対して、荷電分子(C)を有さないペプチド抗原コンジュゲートが凝集体を形成することを示す。
これらの発見を拡大するために、本発明者らは、式IIIのアジュバントに連結された式IIのポリ(アミノ酸)に基づく、異なる長さ(30アミノ酸(2B5W10G10と呼ばれる化合物20)および15アミノ酸(2B5G10と呼ばれる化合物16))のDBCO含有疎水性分子(H)を有する、ペプチド抗原コンジュゲートを生成した。予想外の発見は、疎水性ブロック上のアミンおよび芳香族基の含有量を増加させると、芳香族基またはアミンがより少ない疎水性ブロックと比較して、有機溶媒溶解度が向上されることになり、したがって、製造が向上されることになったことであった。それ故、より長鎖にもかかわらず、2B5W10G10およびそのペプチド前駆体は、2B5G10およびその前駆体より製造効率が高かった。
2つの異なる疎水性分子(H)である2B5W10G10および2B5G10を、長鎖ペプチドベースのネオ抗原をペプチド抗原(A)として含むペプチド抗原断片に、トリアゾールリンカー(L)によって連結させて、式Vのペプチド抗原コンジュゲートを形成した。本発明者らの前の発見と一致して、安定したナノ粒子形成は、異なる疎水性分子(H)を含むペプチド抗原コンジュゲートの正味電荷に依存した(図38)。意外なことに、疎水性分子(H)上の高密度の疎水性基にもかかわらず、両方のペプチド抗原コンジュゲートは、in vivoで、安定したナノ粒子ミセルを形成し、大規模T細胞応答を誘導した(図38)。一部の実施形態では、より長鎖の疎水性分子(H)を使用して、ペプチド抗原コンジュゲートの動力学的安定性、例えば、静脈内経路により送達されるワクチンに必要とされうる動力学的安定性を向上させる。
異なるPRRアゴニストに連結された式IIのポリ(アミノ酸)に基づく異なる疎水性分子(H)から構成される式Vのペプチド抗原コンジュゲートの粒径および生物活性
免疫原性組成物の上記の例では、TLR-7/8a(例えば、式IIIのアジュバント)に連結された、またはリガンドに連結されていない、疎水性分子(H)から構成されるペプチド抗原コンジュゲートを主として使用したが、疎水性分子(H)を任意のリガンドに連結させることができる。一部の実施形態では、アジュバント特性を有するリガンドを疎水性分子(H)上に組み入れるが、他の実施形態では、アジュバント特性を有さないリガンドを疎水性分子に組み入れる。アジュバント特性を有する異なるリガンドを送達するペプチド抗原コンジュゲートの一般化可能性を実証するために、本発明者らは、TLR-4アゴニスト(すなわち、WW(PI)WW)、TLR-2/6アゴニスト(すなわち、WW(PI)WW)、TLR-7アゴニスト(すなわち、CL264-W5)、NODアゴニスト(ムラミル-W5)、およびSTINGのアゴニスト(すなわち、DMXAA-W5)を含む、異なるリガンドに連結された式IIの疎水性分子(H)から構成される式Vのペプチド抗原コンジュゲートを合成した。本発明者らの前の発見と一致して、安定したナノ粒子形成は、異なる疎水性分子を含むペプチド抗原コンジュゲートの正味電荷に依存し(図39)、アジュバント特性を有する異なるリガンドを含む疎水性分子(H)に基づく異なる免疫原性組成物のすべてが、測定可能なT細胞免疫を誘導した。注目すべきこととして、TLR-7アゴニストは、最大規模の応答を誘導した。それ故、TLR-7またはTLR-7/8アゴニストを、感染性疾患またはがんの予防または処置のどちらかのためにT細胞応答を誘導するためのペプチド抗原コンジュゲートの好ましい実施形態に使用する。
免疫原性組成物の上記の例では、TLR-7/8a(例えば、式IIIのアジュバント)に連結された、またはリガンドに連結されていない、疎水性分子(H)から構成されるペプチド抗原コンジュゲートを主として使用したが、疎水性分子(H)を任意のリガンドに連結させることができる。一部の実施形態では、アジュバント特性を有するリガンドを疎水性分子(H)上に組み入れるが、他の実施形態では、アジュバント特性を有さないリガンドを疎水性分子に組み入れる。アジュバント特性を有する異なるリガンドを送達するペプチド抗原コンジュゲートの一般化可能性を実証するために、本発明者らは、TLR-4アゴニスト(すなわち、WW(PI)WW)、TLR-2/6アゴニスト(すなわち、WW(PI)WW)、TLR-7アゴニスト(すなわち、CL264-W5)、NODアゴニスト(ムラミル-W5)、およびSTINGのアゴニスト(すなわち、DMXAA-W5)を含む、異なるリガンドに連結された式IIの疎水性分子(H)から構成される式Vのペプチド抗原コンジュゲートを合成した。本発明者らの前の発見と一致して、安定したナノ粒子形成は、異なる疎水性分子を含むペプチド抗原コンジュゲートの正味電荷に依存し(図39)、アジュバント特性を有する異なるリガンドを含む疎水性分子(H)に基づく異なる免疫原性組成物のすべてが、測定可能なT細胞免疫を誘導した。注目すべきこととして、TLR-7アゴニストは、最大規模の応答を誘導した。それ故、TLR-7またはTLR-7/8アゴニストを、感染性疾患またはがんの予防または処置のどちらかのためにT細胞応答を誘導するためのペプチド抗原コンジュゲートの好ましい実施形態に使用する。
異なるリンカー化学(アミドおよびチオ-エーテル)を使用する疎水性分子(H)へのペプチド抗原(A)の結合
ペプチド抗原コンジュゲートの好ましい実施形態は、クリックケミストリーを使用して、リンカー前駆体X1およびリンカー前駆体X2からリンカー(L)を形成するが、他のタイプのリンカー化学が適している。それ故、ペプチド抗原(A)のN末端またはC末端のどちらかによって連結された、アミドベースのリンカー(L)またはチオ-エーテルベースのリンカー(L)のどちらかを使用して、式Vのペプチド抗原コンジュゲートを疎水性分子(H)に連結させた。本発明者らの結果は、アミドまたはチオ-エーテルのいずれかを含むリンカー(L)に、ペプチド抗原のN末端またはC末端を介して(B1またはB2伸長部を介して)のどちらかで、連結されたペプチド抗原(A)は、in vivoで安定したナノ粒子を形成して大規模T細胞応答を誘導するペプチド抗原コンジュゲートをもたらした(図40)が、疎水性分子(B)にアミドリンカー(L)を介して連結されたペプチド抗原(A)が、チオエーテルリンカー(L)を使用して連結されたものと比較してより大規模な応答を誘導したことを示す。それ故、好ましい実施形態では、安定したアミドまたはトリアゾールリンカー(L)を使用して、ペプチド抗原(A)を、疎水性分子(H)に、直接、または伸長部(B1もしくはB2)を介してのどちらかで、連結させる。
ペプチド抗原コンジュゲートの好ましい実施形態は、クリックケミストリーを使用して、リンカー前駆体X1およびリンカー前駆体X2からリンカー(L)を形成するが、他のタイプのリンカー化学が適している。それ故、ペプチド抗原(A)のN末端またはC末端のどちらかによって連結された、アミドベースのリンカー(L)またはチオ-エーテルベースのリンカー(L)のどちらかを使用して、式Vのペプチド抗原コンジュゲートを疎水性分子(H)に連結させた。本発明者らの結果は、アミドまたはチオ-エーテルのいずれかを含むリンカー(L)に、ペプチド抗原のN末端またはC末端を介して(B1またはB2伸長部を介して)のどちらかで、連結されたペプチド抗原(A)は、in vivoで安定したナノ粒子を形成して大規模T細胞応答を誘導するペプチド抗原コンジュゲートをもたらした(図40)が、疎水性分子(B)にアミドリンカー(L)を介して連結されたペプチド抗原(A)が、チオエーテルリンカー(L)を使用して連結されたものと比較してより大規模な応答を誘導したことを示す。それ故、好ましい実施形態では、安定したアミドまたはトリアゾールリンカー(L)を使用して、ペプチド抗原(A)を、疎水性分子(H)に、直接、または伸長部(B1もしくはB2)を介してのどちらかで、連結させる。
脂肪酸、脂質およびコレステロールに基づく異なる疎水性分子(H)から構成される式Vのペプチド抗原コンジュゲートの粒径および生物活性
ペプチド抗原コンジュゲートの好ましい実施形態は、ポリマー、例えば、ポリ(アミノ酸)またはA-B型ジブロックコポリマー、から構成される疎水性分子(H)を使用するが、疎水性分子(H)は、脂肪酸、脂質およびコレステロールなどの、様々な他の疎水性分子に基づくこともある。したがって、式Vのペプチド抗原コンジュゲートを、ミリスチン酸(MyrまたはC14、化合物49および52)、パルミチン酸(PalmまたはC16、化合物51および53)、コレステロール(Chol、化合物57および58)およびジアシル脂質(Pam2Cys、化合物54および55)に基づく疎水性分子(H)に連結させた。本発明者らの前の発見と一致して、安定したナノ粒子形成は、異なる疎水性分子を含むペプチド抗原コンジュゲートの正味電荷に依存し(図41)、+6より大きいかまたは+6に等しい正味電荷は、安定したナノ粒子形成をもたらした。重要なこととして、脂肪酸、コレステロールおよび脂質ベースの疎水性分子(H)に基づくペプチド抗原コンジュゲートの免疫原性組成物は、in vivoで大規模T細胞応答を誘導した(図41)。脂肪酸、コレステロールおよび脂質ベースの粒子は、ペプチド抗原コンジュゲートとして粒子形成およびの生物活性に関して適切な性能を実証したが、1つの制約は、脂肪酸、コレステロールおよび脂質に基づく疎水性分子(H)が、例えば、ほとんどの有機溶媒(例えば、DMSO、メタノール、エタノール、アセトニトリルなど)に可溶性である、芳香族基を含むポリマーから構成される疎水性分子(H)と比較して、多くの溶媒へのこれらの材料の制限された溶解度(例えば、DMSO、DMFおよび多くのアルコールへの乏しい溶解度)に起因して製造がより困難であり、したがって、生物学的により過酷な塩素化溶媒(例えば、ジクロロメタンおよびクロロホルム)を必要とし、このことが、特に、個別化ワクチン戦略のための、特徴付けおよび精製をより困難にし、安全性リスクを高めることである。
ペプチド抗原コンジュゲートの好ましい実施形態は、ポリマー、例えば、ポリ(アミノ酸)またはA-B型ジブロックコポリマー、から構成される疎水性分子(H)を使用するが、疎水性分子(H)は、脂肪酸、脂質およびコレステロールなどの、様々な他の疎水性分子に基づくこともある。したがって、式Vのペプチド抗原コンジュゲートを、ミリスチン酸(MyrまたはC14、化合物49および52)、パルミチン酸(PalmまたはC16、化合物51および53)、コレステロール(Chol、化合物57および58)およびジアシル脂質(Pam2Cys、化合物54および55)に基づく疎水性分子(H)に連結させた。本発明者らの前の発見と一致して、安定したナノ粒子形成は、異なる疎水性分子を含むペプチド抗原コンジュゲートの正味電荷に依存し(図41)、+6より大きいかまたは+6に等しい正味電荷は、安定したナノ粒子形成をもたらした。重要なこととして、脂肪酸、コレステロールおよび脂質ベースの疎水性分子(H)に基づくペプチド抗原コンジュゲートの免疫原性組成物は、in vivoで大規模T細胞応答を誘導した(図41)。脂肪酸、コレステロールおよび脂質ベースの粒子は、ペプチド抗原コンジュゲートとして粒子形成およびの生物活性に関して適切な性能を実証したが、1つの制約は、脂肪酸、コレステロールおよび脂質に基づく疎水性分子(H)が、例えば、ほとんどの有機溶媒(例えば、DMSO、メタノール、エタノール、アセトニトリルなど)に可溶性である、芳香族基を含むポリマーから構成される疎水性分子(H)と比較して、多くの溶媒へのこれらの材料の制限された溶解度(例えば、DMSO、DMFおよび多くのアルコールへの乏しい溶解度)に起因して製造がより困難であり、したがって、生物学的により過酷な塩素化溶媒(例えば、ジクロロメタンおよびクロロホルム)を必要とし、このことが、特に、個別化ワクチン戦略のための、特徴付けおよび精製をより困難にし、安全性リスクを高めることである。
A-B型ジブロックコポリマーに基づく異なる疎水性分子(H)から構成される式IVおよびVのペプチド抗原コンジュゲートの粒径および生物活性
式IVおよび式Vのペプチド抗原コンジュゲートは、ペプチド抗原(A)をHPMA系ジブロックコポリマーに結合させることによって調製した(参照:化合物68~72)。予想外なことに、ミセル形成性ジブロックコポリマーは、ペプチド抗原断片の正味電荷に関係なく、非常に安定したナノ粒子ミセルを形成した(図42)。それ故、疎水性分子(H)がHPMAモノマーから構成されるジブロックコポリマーである一部の実施形態では、式IVのペプチド抗原コンジュゲートが好ましいこともある。ジブロックは、温度に関係なく、水性条件で粒子を形成することもあり、または粒子形成が、温度依存性であることもある。さらに、リガンドを、2つのブロックのどちらかに、ジブロックコポリマーの末端または側鎖のどちらかに、組み入れることができる。本発明者らの結果は、HPMAモノマーから構成されるA-B型ジブロックポリマーが、ペプチド抗原コンジュゲートを含む免疫原性組成物の疎水性分子(H)として組み入れられたとき、安定したナノ粒子を確実に形成し、大規模T細胞応答をもたらすことを示す(図42)。
式IVおよび式Vのペプチド抗原コンジュゲートは、ペプチド抗原(A)をHPMA系ジブロックコポリマーに結合させることによって調製した(参照:化合物68~72)。予想外なことに、ミセル形成性ジブロックコポリマーは、ペプチド抗原断片の正味電荷に関係なく、非常に安定したナノ粒子ミセルを形成した(図42)。それ故、疎水性分子(H)がHPMAモノマーから構成されるジブロックコポリマーである一部の実施形態では、式IVのペプチド抗原コンジュゲートが好ましいこともある。ジブロックは、温度に関係なく、水性条件で粒子を形成することもあり、または粒子形成が、温度依存性であることもある。さらに、リガンドを、2つのブロックのどちらかに、ジブロックコポリマーの末端または側鎖のどちらかに、組み入れることができる。本発明者らの結果は、HPMAモノマーから構成されるA-B型ジブロックポリマーが、ペプチド抗原コンジュゲートを含む免疫原性組成物の疎水性分子(H)として組み入れられたとき、安定したナノ粒子を確実に形成し、大規模T細胞応答をもたらすことを示す(図42)。
粒子に連結されたペプチド抗原(A)に基づく式Vのペプチド抗原コンジュゲートの粒径および安定性
好ましい実施形態では、ペプチド抗原コンジュゲートは、疎水性分子(H)を含むが、一部の実施形態では、ペプチド抗原コンジュゲートは、予め形成された粒子(P)を含む。リポソーム、ポリスチレン、シリカ(silic)および酸化鉄粒子に基づく予め形成された粒子(P)に異なる正味電荷を有するペプチド抗原断片(C-B1-A-B2-)を結合させることによって、粒子(P)を含む式Vのペプチド抗原コンジュゲートに基づく粒子の安定性へのペプチド抗原断片の電荷の依存性を、評価した。本発明者らの前の発見と一致して、安定したナノ粒子形成は、異なる疎水性分子を含むペプチド抗原コンジュゲートの正味電荷に依存した(図43)。
好ましい実施形態では、ペプチド抗原コンジュゲートは、疎水性分子(H)を含むが、一部の実施形態では、ペプチド抗原コンジュゲートは、予め形成された粒子(P)を含む。リポソーム、ポリスチレン、シリカ(silic)および酸化鉄粒子に基づく予め形成された粒子(P)に異なる正味電荷を有するペプチド抗原断片(C-B1-A-B2-)を結合させることによって、粒子(P)を含む式Vのペプチド抗原コンジュゲートに基づく粒子の安定性へのペプチド抗原断片の電荷の依存性を、評価した。本発明者らの前の発見と一致して、安定したナノ粒子形成は、異なる疎水性分子を含むペプチド抗原コンジュゲートの正味電荷に依存した(図43)。
寛容の誘導に使用される自己抗原を送達するペプチド抗原コンジュゲートの粒径および生物活性
ペプチド抗原コンジュゲートは、寛容または抑制性調節性T細胞を誘導するために使用することもできる。寛容および免疫抑制を誘導するための好ましい実施形態では、アジュバント特性を有するリガンドを通常は組み入れない。その代わりに、ペプチド抗原コンジュゲートは、ペプチド抗原(A)、疎水性分子(H)または粒子(P)ならびに必要に応じたリンカー(L)、荷電分子(C)および伸長部(B1および/またはB2)を含む粒子であって、アジュバント特性を有するリガンドを含まない粒子を含むべきである。寛容または抑制の誘導に使用するための、本明細書に記載のペプチド抗原コンジュゲートの一般化可能性を評価するために、関節炎を誘導するためのモデル自己抗原(すなわち、コラーゲンII)、およびMSに似ているCNS症候群を誘導するためのモデル自己抗原(すなわち、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質、「MOG」)を、式Vのペプチド抗原コンジュゲート上のペプチド抗原(A)として生成した。本発明者らの前の結果と一致して、式Vのペプチド抗原コンジュゲートで送達された自己抗原は、集合して安定したナノ粒子を構築し、低レベルの調節性T細胞応答を誘導した(図44)。
ペプチド抗原コンジュゲートは、寛容または抑制性調節性T細胞を誘導するために使用することもできる。寛容および免疫抑制を誘導するための好ましい実施形態では、アジュバント特性を有するリガンドを通常は組み入れない。その代わりに、ペプチド抗原コンジュゲートは、ペプチド抗原(A)、疎水性分子(H)または粒子(P)ならびに必要に応じたリンカー(L)、荷電分子(C)および伸長部(B1および/またはB2)を含む粒子であって、アジュバント特性を有するリガンドを含まない粒子を含むべきである。寛容または抑制の誘導に使用するための、本明細書に記載のペプチド抗原コンジュゲートの一般化可能性を評価するために、関節炎を誘導するためのモデル自己抗原(すなわち、コラーゲンII)、およびMSに似ているCNS症候群を誘導するためのモデル自己抗原(すなわち、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質、「MOG」)を、式Vのペプチド抗原コンジュゲート上のペプチド抗原(A)として生成した。本発明者らの前の結果と一致して、式Vのペプチド抗原コンジュゲートで送達された自己抗原は、集合して安定したナノ粒子を構築し、低レベルの調節性T細胞応答を誘導した(図44)。
A-H+C-HまたはA-H(C)(式VI)から構成される粒子の粒径および生物活性
一部の実施形態では、免疫原性組成物は、荷電分子コンジュゲート(例えば、C-[A’]-[L]-H)と混合した、荷電分子を有さないペプチド抗原コンジュゲート(例えば、A-[B2]-[L]-H)から構成される粒子を含む。例えば、LPネオ抗原(Adpgk)から構成されるペプチド抗原コンジュゲートを、トリアゾールリンカー(L)によって、疎水性分子2B3W2に連結させて、ペプチド抗原コンジュゲート(A-L-H)を形成し、これを、化合物42(K10-2B3W2)である荷電分子コンジュゲート(C-H)と混合して、大規模T細胞免疫を誘導する安定したナノ粒子を形成した(図45)。別の実施形態では、LPネオ抗原(Adpgk)から構成されるペプチド抗原コンジュゲートを、トリアゾールリンカー(L)によって、疎水性分子2B3W2に連結させて、ペプチド抗原コンジュゲート(A-L-H)を形成し、これを、保存抗原A’をさらに含む荷電分子コンジュゲート(すなわち、C-A’-H)と混合して、大規模T細胞免疫を誘導する安定したナノ粒子を形成した(図45)。
一部の実施形態では、免疫原性組成物は、荷電分子コンジュゲート(例えば、C-[A’]-[L]-H)と混合した、荷電分子を有さないペプチド抗原コンジュゲート(例えば、A-[B2]-[L]-H)から構成される粒子を含む。例えば、LPネオ抗原(Adpgk)から構成されるペプチド抗原コンジュゲートを、トリアゾールリンカー(L)によって、疎水性分子2B3W2に連結させて、ペプチド抗原コンジュゲート(A-L-H)を形成し、これを、化合物42(K10-2B3W2)である荷電分子コンジュゲート(C-H)と混合して、大規模T細胞免疫を誘導する安定したナノ粒子を形成した(図45)。別の実施形態では、LPネオ抗原(Adpgk)から構成されるペプチド抗原コンジュゲートを、トリアゾールリンカー(L)によって、疎水性分子2B3W2に連結させて、ペプチド抗原コンジュゲート(A-L-H)を形成し、これを、保存抗原A’をさらに含む荷電分子コンジュゲート(すなわち、C-A’-H)と混合して、大規模T細胞免疫を誘導する安定したナノ粒子を形成した(図45)。
あるいは、荷電分子(C)を、ペプチド抗原(A)に連結されている疎水性分子(H)に連結させて、式VIのペプチド抗原コンジュゲートを形成することができる。非限定的な例では、ペプチドネオ抗原(Adpgk)を、式A-[L]-H(C)のペプチド抗原コンジュゲート上のペプチド抗原(A)として送達する。結果として得られたコンジュゲートは、安定したナノ粒子および大規模T細胞免疫を形成することが判明した。したがって、粒子を含む免疫原性組成物の好ましい実施形態では、荷電分子(C)を、直接または間接的連結のどちらかによって、ペプチド抗原(A)に、またはペプチド抗原コンジュゲートにより形成される粒子と会合する別の分子上に、備えさせることができる。
重要なこととして、本開示は、腫瘍関連抗原(自己抗原、ネオ抗原およびウイルス抗原)、感染性疾患抗原および外来抗原を含む、ペプチド抗原(A)に対して生成されるT細胞の規模および幅の予想外の向上をもたらす、ペプチド抗原コンジュゲートと呼ばれる、新規ペプチドベースのワクチンアプローチを記載するものである。アジュバントを含まないペプチド抗原コンジュゲートを含む免疫原性組成物は、自己抗原に対して誘導する免疫寛容原性/抑制性応答レベルが低いことも判明し、これは、自己免疫および/またはアレルギーの処置に有用でありうる。
本開示において、本発明者らは、最小エピトープ(ME)を含むペプチド抗原(A)と合成長鎖ペプチド(SLP)として送達される同じMEの両方をペプチド抗原コンジュゲートから構成されるナノ粒子として送達することによって、両方を薬物動態について正規化したとき、最小エピトープ(ME)を含むペプチド抗原(A)が、合成長鎖ペプチド(SLP)として送達される同じMEより、大規模なCD8 T細胞応答をもたらすことができるという予想外の発見を実証する。加えて、本発明者らは、ペプチド抗原コンジュゲートとして送達されるSLP中のMEが、単回免疫化後にCD8 T応答をもたらさないが、ペプチド抗原コンジュゲートとして送達されるMEが、恐らく、MHC I分子との関連でのMEのAPCによる細胞表面提示が増加されることになる、より効率的なプロセシングによって、CD8 T細胞応答をもたらす例を、提供する。そのようなMEベースのワクチンは、T細胞応答の幅を拡大することが判明し、加えて、確立腫瘍の成長を低減させることに関連して機能的であることを示した。それ故、本発明者らの予想外の発見に基づき、免疫原性組成物の好ましい実施形態は、最小エピトープに基づくまたはMEとSLPの組み合わせに基づくペプチド抗原(A)を送達するペプチド抗原コンジュゲートを使用する。しかし、一部の実施形態では、ペプチド抗原(A)は、SLP(または「LP」)である。
さらに、様々な性質を有するペプチド抗原(A)を送達する粒子の物質負荷およびサイズおよび安定性に対する制御の向上をもたらすために、本発明者らは、水性緩衝液中で集合してミセルおよびナノサイズの超分子会合体を構築するペプチド抗原コンジュゲートとしてペプチド抗原(A)を送達するための新規アプローチを本明細書で開示する。重要なこととして、本発明者らは、必要に応じた粒子安定化荷電分子(C)と疎水性分子(H)と必要に応じた(リンカー)と必要に応じた伸長配列(B1およびB2)とを含むペプチド抗原コンジュゲートの組成を、可能性のあるいずれのペプチド抗原(A)についても規定のサイズの安定した粒子を確実に達成することができるように、最適化することができる方法を示す。本発明者らは、確実な粒子形成および安定性向上を、疎水性分子(H)の長さおよび疎水特性を調整することによって、ならびにペプチド抗原コンジュゲートにより形成される粒子の電荷を調節することによって、達成することができることを示す。
ペプチド抗原コンジュゲートを構成するT細胞エピトープのプロセシングを向上させるための手段として、本発明者らは、水性条件で安定しているが抗原提示細胞のエンドソーム内の酵素により優先的に加水分解され、それによって、抗原のプロセシングおよび提示をそのような細胞に限定し、APC内での最小CD8および/またはCD4 T細胞エピトープの効率的放出を促進する、N末端およびC末端伸長部(B1およびB2または「伸長部」)の使用の有用性を実証する。
最後に、本開示において、本発明者らは、T細胞免疫を促進するために必要なPRRアゴニストベースの免疫刺激剤の最適な組成、数および作用強度を系統的に評価した。本発明者らは、IL-12およびI型IFNの産生を誘導するTLRアゴニストの数および作用強度を漸増させると、最初はT細胞応答の規模が向上される結果となり、しかし、新規の予想外の発見では、さらに増加させると、結果として、抗原性の幅がより狭くなり、T細胞応答の規模がより小さくなるデータを提供する。したがって、本発明者らは、T細胞免疫の最適な規模、質および幅の提供に好ましい、疎水性分子(H)に結合させる免疫刺激剤(すなわち、PRRアゴニスト)の組成、数および作用強度を報告する。
まとめると、本明細書で開示する予想外の発見は、以下に関係する:
i.T細胞免疫の確実なプライミングを確保するためにがんワクチンにおいて使用されるペプチド抗原(A)の最適な長さ。
ii.ペプチドベースのワクチンの製造を助長し、粒子安定性を促進し、APCによる効率的提示を可能にするためのプロセシングを助長する、ペプチド抗原伸長配列、すなわち、N末端および/もしくはC末端伸長部(B1および/またはB2)の使用。
iii.T細胞免疫の促進に最適なサイズの粒子を誘導するおよび安定させるために必要な、荷電分子(C)の組成およびペプチド抗原コンジュゲートの正味電荷。
iv.疎水性分子(H)の長さおよび組成が、ペプチド抗原コンジュゲートにより形成される粒子のサイズおよび安定性、ならびにin vivoでのそれらの免疫原性に、どのように影響を及ぼすのか。
v.疎水性分子(H)上に組み入れるリガンド(例えばPRRアゴニスト)の作用強度および質的特性が、T細胞応答の幅、規模および質にどのように影響を及ぼすのか。
i.T細胞免疫の確実なプライミングを確保するためにがんワクチンにおいて使用されるペプチド抗原(A)の最適な長さ。
ii.ペプチドベースのワクチンの製造を助長し、粒子安定性を促進し、APCによる効率的提示を可能にするためのプロセシングを助長する、ペプチド抗原伸長配列、すなわち、N末端および/もしくはC末端伸長部(B1および/またはB2)の使用。
iii.T細胞免疫の促進に最適なサイズの粒子を誘導するおよび安定させるために必要な、荷電分子(C)の組成およびペプチド抗原コンジュゲートの正味電荷。
iv.疎水性分子(H)の長さおよび組成が、ペプチド抗原コンジュゲートにより形成される粒子のサイズおよび安定性、ならびにin vivoでのそれらの免疫原性に、どのように影響を及ぼすのか。
v.疎水性分子(H)上に組み入れるリガンド(例えばPRRアゴニスト)の作用強度および質的特性が、T細胞応答の幅、規模および質にどのように影響を及ぼすのか。
本明細書および後続の特許請求の範囲を通して、文脈による別段の要求がない限り、語「含む(comprise)」および「含む(include)」ならびに「含むこと(comprising)」および「含むこと(including)」などのバリエーションは、述べられている整数または整数群の包含を含意するが、いずれの他の整数および整数群の除外も含意しないと、または述べられている組成(物)(単数もしくは複数)の包含を含意するが、いずれの他の組成(物)(単数もしくは複数)の除外も含意しないと、解されるものとする。
本明細書におけるいずれの先行技術への言及も、そのような先行技術が、誰もが知っている一般知識の一部を形成するという何らかの形の提言の是認ではなく、かつ是認と解釈すべきでない。
本発明が、記載した特定の適用にその使用が限定されないことは、当業者には理解されるであろう。本発明は、本明細書において説明または図示する特定の要素および/または特徴に関するその好ましい実施形態にも限定されない。本発明が、開示する実施形態(単数または複数)に限定されず、後続の特許請求の範囲によって示され定義される本発明の範囲を逸脱することなく非常に多くの再構成、修飾および置換が可能であることは、理解されるであろう。
Claims (18)
- 式C-[B1]-A-[B2]-[L]-HまたはH-[L]-[B1]-A-[B2]-Cを有するペプチド抗原コンジュゲート
(式中、Aはペプチド抗原であり、Hは疎水性分子であって、前記疎水性分子は、約7.4の生理的pHで0.1mg/mlまで水不溶性であり、Cは、生理的pHで荷電する1つまたは複数の官能基を含む荷電分子であり、
B1はN末端伸長であり、B2はC末端伸長であり、Lはリンカーであり;[ ]は前記基が必要に応じたものであることを示し;
「-」は共有結合を示す)であって、
前記ペプチド抗原は、長さ5~50アミノ酸の配列を含む腫瘍関連抗原、感染性疾患抗原、アレルゲン、または自己抗原であり;
前記ペプチド抗原コンジュゲートは、約7.4のpHの水性緩衝液中で約+3より大きいかもしくは約+3に等しい、または約-3未満であるかもしくは約-3に等しい正味静電荷を有する、ペプチド抗原コンジュゲート。 - B1および/またはB2伸長の両方の一方が存在し、分解性ペプチド配列を含む、請求項1に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
- 前記B1伸長は存在し、アミノ酸PN1を含む酵素分解性ペプチド配列を含み、PN1は、アルギニン、リジン、シトルリン、グルタミン、トレオニン、ロイシン、ノルロイシン、およびメチオニンから選択され、必要に応じて、前記アミノ酸PN1を含む前記酵素分解性ペプチド配列は、以下:
a.グリシン、バリン、ロイシンおよびイソロイシンから選択されるアミノ酸PN2;
b.グリシン、セリン、プロリンおよびロイシンから選択されるアミノ酸PN3;
c.アルギニン、リシン、グルタミン酸、アスパラギン酸、グリシンおよびセリンから選択されるアミノ酸PN4;または
d.a~cの組み合わせのいずれか
の少なくとも1つをさらに含む、請求項1または2に記載のペプチド抗原コンジュゲート。 - 前記B2が、
i)グリシン、セリン、アルギニン、リシン、シトルリン、グルタミン、トレオニン、ロイシン、ノルロイシンおよびメチオニンから選択される単一アミノ酸PC1’;
ii)PC1’が、グリシンおよびセリンから選択され、PC2’が、グリシン、セリン、プロリン、アルギニン、リシン、シトルリン、グルタミン、トレオニン、ロイシン、ノルロイシンおよびメチオニンから選択される、ジペプチドPC1’-PC2’;
iii)PC1’が、グリシンおよびセリンから選択され、PC2’が、グリシン、セリンおよびプロリンから選択され、PC3’が、グリシン、セリン、アルギニン、リシン、シトルリン、グルタミン、トレオニン、ロイシン、ノルロイシンおよびメチオニンから選択される、トリペプチドPC1’-PC2’-PC3’;
iv)PC1’が、グリシンおよびセリンから選択され、PC2’が、グリシン、セリン、プロリンおよびロイシンから選択され、PC3’が、グリシン、バリン、ロイシンおよびイソロイシンから選択され、PC4’が、アルギニン、リシン、シトルリン、グルタミン、トレオニン、ロイシン、ノルロイシンおよびメチオニンから選択される、テトラペプチドPC1’-PC4’;
v)PC1’が、グリシンおよびセリンから選択され、PC2’が、グリシン、セリン、プロリン、アルギニン、リシン、グルタミン酸およびアスパラギン酸から選択され、PC3’が、グリシン、セリン、プロリンおよびロイシンから選択され、PC4’が、グリシン、バリン、ロイシンおよびイソロイシンから選択され、PC5’が、アルギニン、リシン、シトルリン、グルタミン、トレオニン、ロイシン、ノルロイシンおよびメチオニンから選択される、ペンタペプチドPC1’-PC5’;または
vi)PC1’が、グリシンおよびセリンから選択され、PC2’が、グリシン、セリンおよびプロリンから選択され、PC3’が、グリシン、セリン、プロリン、アルギニン、リシン、グルタミン酸およびアスパラギン酸から選択され、PC4’が、プロリンおよびロイシンから選択され、PC5’が、グリシン、バリン、ロイシンおよびイソロイシンから選択され、PC6’が、アルギニン、リシン、シトルリン、グルタミン、トレオニン、ロイシン、ノルロイシンおよびメチオニンから選択される、ヘキサペプチドPC1’-PC6’
を含む酵素分解性ペプチド配列を含む、請求項1~3に記載のペプチド抗原コンジュゲート。 - 前記荷電分子(C)が、第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン、第四級アミン、グアニジニウム、イミダゾリウム、アンモニウム、スルホニウム、ホスホニウム、カルボキシレート、スルフェート、ホスフェート、ホスホルアミデートおよびホスホネートから選択される1つまたは複数の官能基を含む、請求項1~4に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
- 前記疎水性分子(H)が、分岐した長鎖もしくは環式脂肪族分子、または脂肪酸、脂質もしくはステロール誘導体である、請求項1~5に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
- 前記疎水性分子(H)が、アクリレート、アクリルアミド、メタ(アクリレート)、メタ(アクリルアミド)、スチリルモノマー、ビニルモノマー、ジオキソホスホラン、環式エステル、天然もしくは非天然アミノ酸、乳酸、グリコール酸から選択されるモノマー単位を含むポリマー、およびジオールもしくはジアミンとジイソシアネートもしくはポリイソシアネートとの反応から生じるポリマーを含む、請求項1~5のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
- 前記疎水性分子はが、式:
のポリ(アミノ酸)であり、式中、
l、m、nおよびoの合計は3~30の整数であり;
R 3 は水素、ヒドロキシルまたはアミノであり;
各R 5 は独立して、-H、-CH 3 、または-(CH 2 ) b OHであり;
各R 6 は独立して、-(CH 2 ) d NH 2 、-(CH 2 ) d COOH、-(CH 2 ) d N(=NH)NH 2 、-(CH 2 ) d S + (R) 2 、-(CH 2 ) d N + (R) 3 、-(CH 2 ) d SO 2 OH、または-(CH 2 ) d OP(O)(OH) 2 であり;
各aは独立して1~6の整数であり;
bは1~6の整数であり;
各dは独立して1~6の整数であり;
各Rは独立して低級アルキルであり;
各R 4 は独立して
またはこれらの組み合わせから選択され;
リガンドは、Toll様受容体(TLR)-7、TLR-8、またはTLR-7およびTLR-8の両方(TLR-7/8)のアゴニストであり;
各Xは独立してリンカーである、
請求項7に記載のペプチド抗原コンジュゲート。 - m、nおよびoがそれぞれ0であるか、またはl、mおよびnがそれぞれ0であるか、またはmおよびnがそれぞれ0である、請求項8に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
- 各aが1である、請求項8に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
- 前記ポリ(アミノ酸)が、3~30個の芳香族アミノ酸モノマーを含む、請求項8に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
- 前記ポリ(アミノ酸)が3~10個の芳香族アミノ酸モノマーを含む、請求項12に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
- Lが存在し、アミド、チオエーテルまたはトリアゾールを含む、請求項1に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
- 前記ペプチド抗原(A)が約0.75より大きいかもしくは約0.75に等しいハイドロパシー値の総平均を有する場合、前記ペプチド抗原コンジュゲートは約+6より大きいかもしくは約+6に等しいまたは約-6より小さいかもしくは約-6に等しい正味静電荷を有する;前記ペプチド抗原(A)が約0.25より大きいかもしくは約0.25に等しく約0.75より小さいハイドロパシー値の総平均を有する場合、前記ペプチド抗原コンジュゲートは約+5より大きいかもしくは約+5に等しいまたは約-5より小さいかもしくは約-5に等しい正味静電荷を有する;または前記ペプチド抗原(A)が約0.25より小さいハイドロパシー値の総平均を有する場合、前記ペプチド抗原コンジュゲートは約+4より大きいかもしくは約+4に等しいまたは約-4より小さいかもしくは約-4に等しい正味静電荷を有する、請求項1~14に記載のペプチド抗原コンジュゲート。
- 請求項1~15に記載のペプチド抗原コンジュゲートを含む、免疫原性組成物。
- 前記組成物がワクチンアジュバントをさらに含むか、および/または前記組成物が複数の異なるペプチド抗原コンジュゲートを含む、請求項16に記載の免疫原性組成物。
- 疾患の処置のための医薬品としての使用のための、請求項1~15のいずれか一項に記載のペプチド抗原コンジュゲートを含む組成物、または請求項16もしくは17に記載の免疫原性組成物。
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US6069230A (en) * | 1994-11-10 | 2000-05-30 | Promega Corporation | High level expression and facile purification of proteins, peptides and conjugates for immunization, purification and detection applications |
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ID29082A (id) * | 1998-09-22 | 2001-07-26 | Molecular Express Inc | Komposisi liposom imunogenik |
US20040057958A1 (en) * | 2002-05-17 | 2004-03-25 | Waggoner David W. | Immunogenicity-enhancing carriers and compositions thereof and methods of using the same |
BR0312273A (pt) * | 2002-07-10 | 2005-04-26 | Akzo Nobel Nv | Composição imunogênica, vacina, método para a preparação da mesma, e, uso de uma composição imunogênica |
US7420037B2 (en) * | 2003-02-13 | 2008-09-02 | Antigenics Inc. | Heat shock protein-based vaccines and immunotherapies |
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AU2006210863A1 (en) * | 2005-02-01 | 2006-08-10 | Medivas, Llc. | Vaccine delivery compositions and methods of use |
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