JP2023075831A - 炭酸ガス製剤の有効性を検出する方法 - Google Patents

Abstract

【課題】個々人における鱗屑又は角層水分量の改善に対する炭酸ガス製剤の有効性を検出するためのマーカー、並びに当該マーカーを用いた被験者における炭酸ガス製剤の有効性を検出する方法の提供。【解決手段】被験者から採取された皮膚表上脂質について、以下の遺伝子：ＰＳＭＡ７、ＳＮＯＲＡ５Ａ、ＶＰＳ３７Ｃ、Ｃ２２ｏｒｆ２８、ＲＡＰＧＥＦ２、ＮＴ５Ｃ２、ＨＳＰＡ４及びＳＮＯＲＤ９４、並びに当該遺伝子の発現産物からなる群より選択される少なくとも１種の発現レベルを測定する工程を含む、当該被験者における鱗屑の改善に対する炭酸ガス製剤の有効性を検出する方法の提供。【選択図】なし

Description

本発明は、個々人における鱗屑又は角層水分量の改善に対する炭酸ガス製剤の有効性を検出するためのマーカー、並びに当該マーカーを用いた被験者における炭酸ガス製剤の有効性を検出する方法に関する。

皮膚は生体の最外層に存在する臓器であり、気温、湿度、紫外線、細菌等の様々な外部環境の影響を受ける。皮膚の重要な機能は、これら外部環境から身体を保護するための物理的バリアである。皮膚のバリアを担うのは、表皮の最外層にある角質層（角層）である。角層は、乾燥性の外部環境で経皮蒸発水分損失を遅らせる透過性バリアとしての役割を有する。角層は平坦な無核角質細胞からなる多層組織であり、セラミド、遊離脂肪酸及びコレステロールで構成される高度に秩序化された脂質ラメラに埋め込まれた角質細胞で構成されている。角層の細胞外ドメイン内におけるこれら高度疎水性の脂質の局在化は、水の外側への移動を抑制する。さらに、角層内には天然保湿因子が存在する。表皮分化及び脂質組成の変化に伴う角層の異常は、アトピー性皮膚炎における環境アレルゲンの侵入、免疫反応及び炎症に繋がるような皮膚バリア機能の破綻をもたらす。
皮膚バリア機能の破綻により肌荒れした皮膚表面では、きめが乱れ、更には鱗屑が発生し、滑らかさに欠けた肌触りになる。鱗屑では、角層が皮膚表面で剥がれてめくれあがったような外観となる。このような状態はドライスキンとも呼ばれ、角層の水分保持能(保湿能)の低下として捕らえられる。

皮膚の状態を評価する方法としては、角層水分量（Ｃａｐａｃｉｔａｎｃｅ値、Ｃｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ値）や経皮水分蒸散量（Ｔｒａｎｓ Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｗａｔｅｒ Ｌｏｓｓ；ＴＥＷＬ値）について客観的数値を取得する方法がある。また、専用のカメラ付きプローブを用いて皮膚表面形状を数値化したもの（例えば、Ｓｕｒｆａｃｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌｉｖｉｎｇ Ｓｋｉｎ；ＳＥＬＳ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ）を取得する方法、印象材を用いて皮膚表面のレプリカを作製し、光学装置を用いてシワや表面粗さを数値化する方法、事前に定めた指標に基づいて専門パネリストが皮膚乾燥の程度や肌荒れの状態を目視評価する方法等がある。

さらに、所見や自覚等に現れる表現型（フェノタイプ）を機器や目視で指標化するだけでなく、生体試料中の核酸やタンパク質発現の指標に基づいて皮膚の状態を評価する方法が報告されており（特許文献１及び非特許文献１）、分子機序に基づいた皮膚状態の評価と保湿技術の提供を高精度かつ効率的に行うことにつながると考えられている。

従来、皮膚の保湿・肌荒れ改善に、ローション、軟膏、クリーム等の皮膚外用製剤の塗布がされている。近年では、炭酸ガスあるいは炭酸ガス発生物を配合した炭酸ガス製剤について水分保持能及び鱗屑の改善効果が知られ、これを活用すべく種々の開発がなされている（例えば、特許文献２）。
しかしながら、皮膚は個人差が生じやすい臓器であると考えられ、皮膚外用製剤の皮膚に対する作用も個々によってその有効性に差が生じ得る。必ずしも全ての者において、一様に、皮膚外用剤の効果が最大限発揮されるわけではない。
そのため、予め皮膚外用製剤についてその有効性を簡便に評価でき、個々にとって適切な製剤を選択し、使用できれば、早期の皮膚健常化又は肌荒れ改善に資することになる。

近年、生体試料中のＤＮＡやＲＮＡ等の核酸の解析によりヒトの生体内の現在さらには将来の生理状態を調べる技術が開発されている。生体由来の核酸は、血液等の体液、分泌物、組織等から抽出することができる。さらに最近、皮膚表上脂質（ｓｋｉｎ ｓｕｒｆａｃｅ ｌｉｐｉｄｓ；ＳＳＬ）に含まれるＲＮＡを生体の解析用の試料として利用可能であることが報告されている（特許文献３）。

特開２０１５－２２７８６５号公報 特開２０１４－１２９３０６号公報 国際公開公報第２０１８／００８３１９号

Delattre et al. Exp Dermatol. 21:205-210, 2012.

本発明は、個々人における鱗屑又は角層水分量の改善に対する炭酸ガス製剤の有効性を検出するためのマーカー、並びに当該マーカーを用いた被験者における炭酸ガス製剤の有効性を検出する方法を提供することに関する。

本発明者は、炭酸ガスを含有する製剤の塗布によって鱗屑の改善及び角層水分量の増加が見られる者と見られない者の皮膚からＳＳＬを採取し、ＳＳＬ中に含まれるＲＮＡの発現状態をシーケンス情報として網羅的に解析した。その結果、炭酸ガス製剤に対する被験者の感受性が、当該炭酸ガス製剤の塗布前の皮膚における特定の遺伝子の発現レベルに反映されており、当該遺伝子の発現レベルを指標として被験者における鱗屑又は角層水分量の改善に対する炭酸ガス製剤の有効性を検出できることを見出した。

すなわち、本発明は、以下の１）～５）に係るものである。
１）被験者から採取された皮膚表上脂質について、以下の遺伝子：ＰＳＭＡ７、ＳＮＯＲＡ５Ａ、ＶＰＳ３７Ｃ、Ｃ２２ｏｒｆ２８、ＲＡＰＧＥＦ２、ＮＴ５Ｃ２、ＨＳＰＡ４及びＳＮＯＲＤ９４、並びに当該遺伝子の発現産物からなる群より選択される少なくとも１種の発現レベルを測定する工程を含む、当該被験者における鱗屑の改善に対する炭酸ガス製剤の有効性を検出する方法。
２）被験者から採取された皮膚表上脂質について、以下の遺伝子：ＨＥＲＣ３、ＢＳＧ及びＫＨＮＹＮ、並びに当該遺伝子の発現産物からなる群より選択される少なくとも１種の発現レベルを測定する工程を含む、当該被験者における角層水分量の改善に対する炭酸ガス製剤の有効性を検出する方法。
３）以下の遺伝子：ＰＳＭＡ７、ＳＮＯＲＡ５Ａ、ＶＰＳ３７Ｃ、Ｃ２２ｏｒｆ２８、ＲＡＰＧＥＦ２、ＮＴ５Ｃ２、ＨＳＰＡ４及びＳＮＯＲＤ９４、並びに当該遺伝子の発現産物からなる群より選択される少なくとも１種を含む、鱗屑の改善に対する炭酸ガス製剤の有効性を検出するためのマーカー。
４）以下の遺伝子：ＨＥＲＣ３、ＢＳＧ及びＫＨＮＹＮ、並びに当該遺伝子の発現産物からなる群より選択される少なくとも１種を含む、角層水分量の改善に対する炭酸ガス製剤の有効性を検出するためのマーカー。
５）前記マーカーである核酸と特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチド、又は前記マーカーであるタンパク質を認識する抗体を含有する、１）の方法に用いられる被験者における鱗屑の改善に対する炭酸ガス製剤の有効性を検出するためのキット、又は２）の方法に用いられる被験者における角層水分量の改善に対する炭酸ガス製剤の有効性を検出するためのキット。

本発明によれば、個々人における鱗屑又は角層水分量の改善に対する炭酸ガス製剤の有効性を、当該炭酸ガス製剤を実際に用いることなく容易に検出することができる。従って、当該個々人は、予め自身の鱗屑又は角層水分量に対して炭酸ガス製剤が有効かどうかを把握することができる。

ｎｏｎＲｅｓｐｏｎｄｅｒ群及びＲｅｓｐｏｎｄｅｒ群の（ａ）鱗屑指標であるＳＥｓｃ値の変化量、（ｂ）角質水分量の指標であるＣｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ値の変化量を示すグラフ。図中、「Placebo」はプラセボ製剤塗布側、「Active」は炭酸ガス製剤塗布側を表す。 ＳＳＬ中の標的遺伝子のＲＮＡ発現量と鱗屑指標であるＳＥｓｃ値との関係を示すグラフ。 ＳＳＬ中の標的遺伝子のＲＮＡ発現量と角質水分量の指標であるＣｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ値との関係を示すグラフ。

本明細書中で引用された全ての特許文献、非特許文献、及びその他の刊行物は、その全体が本明細書中において参考として援用される。

本発明において、「核酸」又は「ポリヌクレオチド」と云う用語は、ＤＮＡ又はＲＮＡを意味する。ＤＮＡには、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、及び合成ＤＮＡのいずれもが含まれ、「ＲＮＡ」には、ｔｏｔａｌ ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｎｏｎ－ｃｏｄｉｎｇ ＲＮＡ及び合成のＲＮＡのいずれもが含まれる。

本発明において「遺伝子」とは、ヒトゲノムＤＮＡを含む２本鎖ＤＮＡの他、ｃＤＮＡを含む１本鎖ＤＮＡ（正鎖）、当該正鎖と相補的な配列を有する１本鎖ＤＮＡ（相補鎖）、及びこれらの断片を包含するものであって、ＤＮＡを構成する塩基の配列情報の中に、何らかの生物学的情報が含まれているものを意味する。
また、本発明における「遺伝子」には、特定の塩基配列で表される「遺伝子」だけではなく、その同族体（すなわち、ホモログもしくはオーソログ）、遺伝子多型等の変異体、及び誘導体が包含される。
ここで、本明細書中に開示される遺伝子の名称は、ＮＣＢＩ（[www.ncbi.nlm.nih.gov/]）に記載のあるＯｆｆｉｃｉａｌ Ｓｙｍｂｏｌに従う。

本発明において、遺伝子の「発現産物」とは、遺伝子の転写産物及び翻訳産物を包含する概念である。「転写産物」とは、遺伝子（ＤＮＡ）から転写されて生じるＲＮＡであり、「翻訳産物」とは、ＲＮＡに基づき翻訳合成される、遺伝子にコードされたタンパク質を意味する。

本発明において、「皮膚表上脂質（ＳＳＬ）」とは、皮膚の表上に存在する脂溶性画分をいい、皮脂と呼ばれることもある。一般に、ＳＳＬは、皮膚にある皮脂腺等の外分泌腺から分泌された分泌物を主に含み、皮膚表面を覆う薄い層の形で皮膚表上に存在している。ＳＳＬは、皮膚細胞で発現したＲＮＡを含む（前記特許文献３参照）。
また本発明において、「皮膚」とは、特に限定しない限り、角層、表皮、真皮、毛包、並びに汗腺、皮脂腺及びその他の腺等の組織を含む領域の総称である。本発明において、「皮膚」は、好ましくはヒトの皮膚である。

本発明において、「鱗屑」は、表皮の乾燥や角化不全などにより、角層が皮膚表面で剥がれてめくれた状態を指す。「鱗屑の改善」は、鱗屑の症状又は状態の好転、悪化の防止、抑制もしくは遅延、あるいは鱗屑の症状又は状態の進行の逆転、防止、抑制もしくは遅延をいう。
鱗屑の程度は、皮膚表面における剥がれてめくれた角層の占める面積の割合を指標として表すことができる。例えば２次元皮膚表面キメ解析装置（Ｖｉｓｉｏｓｃａｎ ＶＣ９８、Ｃｏｕｒａｇｅ ＋ Ｋｈａｚａｋａ Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ ＧｍｂＨ）により取得した画像より、ＳＥＬＳ（Ｓｕｒｆａｃｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｌｉｖｉｎｇ Ｓｋｉｎ）プログラムを用いて算出されるＳｋｉｎ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｃａｌｉｎｅｓｓ値（ＳＥｓｃ値）で表すことができる。本発明において、鱗屑の改善効果は、皮膚表面における剥がれてめくれた角層の占める面積の低下、好ましくは当該ＳＥｓｃ値の低下に対応する鱗屑の改善効果である。

本発明において、「角層水分量」は、角層に含まれる水分量である。角層水分量の増加は、角層に含まれる水分量が増加することをいい、角層中に水分を補うことによる水分量の増加、角層の水分の蒸散を抑制することによる水分量の増加を含む。
角層水分量は、例えば、Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ（Ｃｏｕｒａｇｅ＋Ｋｈａｚａｈａ社）により測定されるＣａｐａｃｉｔａｎｃｅ値、ＳＫＩＣＯＮ ２００－ＥＸ（ＩＢＳ株式会社）により測定される皮膚表面の電気伝導度（Ｃｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ）値で表すことができる。本発明において、角層水分量の増加効果は、好ましくは当該Ｃｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ値の増加に対応する角層水分量の増加効果である。

本発明において、「炭酸ガス製剤」は、炭酸ガスを皮膚角層に供給できる製剤である。炭酸ガスの供給手段は特に限定されるものではなく、例えば、噴射剤として炭酸ガスを封入したエアゾール化粧料のような皮膚外用剤（特開２０１４－１２９３０６号公報、特開２０１７－１２５００３号公報等）、水分と反応して炭酸ガスを発生する炭酸ガス発生剤を含有する発泡性の皮膚外用剤、不織布シート（特開２０１５－１０５４５１号公報）、入浴剤（特開平９－２９４２号公報、特開２０００－１９１４２９号公報等）、パッド（特開２００６－２４９０２５号公報等）が挙げられる。

炭酸ガスを皮膚外用剤に噴射剤として封入する場合、噴射剤の総量を基準として、炭酸ガスを９０質量％以上含むことが好ましく、９５質量％以上含むことがより好ましく、９８質量％以上含むことがさらに好ましく、１００質量％含むことがさらに好ましい。

炭酸ガスを噴射剤として封入したエアゾール製剤を調製する場合における、皮膚外用剤（原液）と炭酸ガスを含む噴射剤の質量割合は、９４：６～９９．５：０．５が好ましく、９５：５～９９：１がより好ましく、９６．５：３．５～９８．５：１．５がさらに好ましい。エアゾール製剤の噴射の形態としては、噴射剤として配合した炭酸ガスを皮膚上に持続的に滞留させる観点から、皮膚外用剤が泡状に吐出されるフォームタイプとするのが好ましい。

原液として用いる皮膚外用剤には、化粧料、医薬部外品、医薬品等の皮膚外用剤に通常使用される各種の成分を配合することができる。具体的には、皮膚外用剤を泡状に吐出させ、皮膚における泡ののびを良好とし、使用感に優れ、泡を持続させ炭酸ガスの効果を高める観点から、粉体、油剤、界面活性剤、水溶性増粘剤、水等の成分を含有させることが好ましい。

粉体としては、平均粒子径０．０１～３０μｍを有する酸化ケイ素、酸化チタン、（メタ）アクリル酸又はその塩／（メタ）アクリル酸アルキルクロスポリマー及びシリコーンラストマーから選ばれる１種以上の粉体が挙げられる。
（メタ）アクリル酸若しくはその塩／（メタ）アクリル酸アルキルクロスポリマーは、（メタ）アクリル酸若しくはその塩から選ばれる少なくとも１種の単量体と（メタ）アクリル酸アルキルエステルから選ばれる少なくとも１種の単量体とを、共重合してなる架橋（メタ）アクリル酸エステル系樹脂粉体である。なお、（メタ）アクリル酸とは、アクリル酸とメタクリル酸との総称であり、（メタ）アクリル酸アルキルとは、アクリル酸アルキルとメタクリル酸アルキルとの総称をいう。具体的には、メタクリル酸ラウリル・ジメタクリル酸エチレングリコール・メタクリル酸ナトリウム共重合体が挙げられる。
シリコーンエラストマーは、モノマーの重合によって得られた架橋構造を有するシリコーン及びその誘導体の総称であり。例えば、ジメチコン、ビニルジメチコン、フェニルビニルジメチコン、ラウリルジメチコン及びラウリルポリジメチルシロキシエチルジメチコン等から選ばれるモノマーを重合又は共重合させて得られるシリコーン及びその誘導体が好ましく、（ジメチコン／ビニルジメチコン）クロスポリマー、（ジメチコン／フェニルビニルジメチコン）クロスポリマー、（ビニルジメチコン／ラウリルジメチコン）クロスポリマー、（ビニルジメチコン／メチコンシルセスキオキサン）クロスポリマー、（ＰＥＧ－１５／ラウリルジメチコン）クロスポリマーがより好ましく、（ジメチコン／ビニルジメチコン）クロスポリマー、（ビニルジメチコン／ラウリルジメチコン）クロスポリマー、（ＰＥＧ－１５／ラウリルジメチコン）クロスポリマーがさらに好ましく、（ジメチコン／ビニルジメチコン）クロスポリマーがよりさらに好ましい。
（ジメチコン／ビニルジメチコン）クロスポリマーとしては、固体状のもとして、トレフィルＥ－５０６Ｓ（有効分１００質量％）（東レ・ダウコーニング社製）等が挙げられ、液状油と混合したものとしては、デカメチルシクロペンタシロキサン（ＫＦ－９９５）との混合物であるＫＳＧ－１５（有効分７質量％）、低粘度ジメチルポリシロキサン（ＫＦ－９６Ａ－６ｃｓ）との混合物であるＫＳＧ－１６（有効分２５質量％）（以上、信越化学工業社製）、ジメチコンとの混合物であるトレフィルＥ－５０８（有効分７０質量％）等が挙げられ、水と混合したものとしては、ＢＹ２９－１１９（有効分６３質量％）、ＢＹ２９－１２９（有効分６３質量％）等の市販品を用いることができる。（ジメチコン／フェニルビニルジメチコン）クロスポリマーとしては、液状油と混合したものとして、ジフェニルシロキシフェニルトリメチコン（ＫＦ－５６Ａ）との混合物であるＫＳＧ－１８Ａ（有効分１５質量％）（信越化学工業社製）等の市販品を用いることができる。
原液における粉体の含有量は、炭酸ガスを含有する泡の皮膚への均一な塗布性及び炭酸ガスの皮膚への浸透性を向上させる観点から、本発明における原液中に０．１質量％以上が好ましく、０．５質量％以上がより好ましく、０．８質量％以上がさらに好ましく、また２．５質量％以下が好ましく、２．０質量％以下がより好ましく、１．５質量％以下さらに好ましい。具体的な含有量の範囲は、０．１～２．５質量％が好ましく、０．５～２．０質量％がより好ましく、０．８～１．５質量％がさらに好ましい。

油剤としては、通常の化粧料に用いられるものであれば制限されず、例えば、炭化水素油、シリコーン油、エステル油、エーテル油、フッ素油等が挙げられる。より具体的には、例えば、軽質イソパラフィン、流動パラフィン、流動イソパラフィン、スクワラン、スクワレン等の直鎖又は分岐の炭化水素油；ジメチルポリシロキサン、シクロメチコン、ジメチコン、トリシロキサンメチルトリメチコン、エチルトリシロキサン、ジメチルシクロポリシロキサン、メチルフェニルポリシロキサン、メチルハイドロジェンポリシロキサン、高級アルコール変性オルガノポリシロキサン等のシリコーン油；イソノナン酸イソノニル、イソノナン酸イソトリデシル、安息香酸と炭素数１２～１５の脂肪族アルコールとのエステルである安息香酸アルキル（Ｃ１２－１５）等のモノエステル油、ジカプリン酸ネオペンチルグリコール等のジエステル油、トリ（カプリル／カプリン酸）グリセリル、２-エチルヘキサン酸トリグリセリル等のトリエステル油；アルキル－１，３－ジメチルブチルエーテル、ジカプリリルエーテル、ジカプリリルエーテル等のエーテル油；フルオロポリエーテル、パーフルオロアルキルエーテルシリコーン等のフッ素油等が挙げられ、泡の伸びを向上させる観点から、炭化水素油、エステル油及びシリコーン油から選ばれる１種又は２種以上が好ましく、炭化水素油、モノエステル油、トリエステル油、シリコーン油がより好ましく、モノエステル油、シリコーン油が好ましい。
油剤の粘度としては、炭酸ガスの皮膚への浸透性を向上させる観点から、１ｍＰａ・ｓ以上であり、２ｍＰａ・ｓ以上が好ましく、３ｍＰａ・ｓ以上がより好ましく、４ｍＰａ・ｓ以上がさらに好ましく、１００ｍＰａ・ｓ以下であり、５０ｍＰａ・ｓ以下が好ましく、３０ｍＰａ・ｓ以下がより好ましく、２０ｍＰａ・ｓ以下がよりさらに好ましい。また、油剤は、１～１００ｍＰａ・ｓのものであり、２～５０ｍＰａ・ｓのものが好ましく、３～３０ｍＰａ・ｓのものがより好ましく、４～２０ｍＰａ・ｓのものがさらに好ましい。
ここで、粘度は、２５℃で、ＢＭ粘度計（東機産業社製）（ローターＮｏ.１、６０ｒｐｍ、１分）により測定される。

油剤は、１種又は２種以上を用いることができ、炭酸ガスの皮膚への浸透性、塗布後の皮膚の皮膜感を向上させる観点から、その含有量は、原液中に１質量％以上であり、２質量％以上が好ましく、４質量％以上がより好ましく、２５質量％以下であり、１５質量％以下が好ましく、１２質量％以下がより好ましい。また、油剤の含有量は、原液中に１～２５質量％であり、２～１５質量％が好ましく、４～１２質量％がさらに好ましい。

界面活性剤としては、非イオン界面活性剤、アニオン界面活性剤、カチオン界面活性剤、両性界面活性剤等が挙げられるが、本発明では、炭酸ガスの原液への溶解量、溶解性促進と塗布時の泡立ち性の観点から非イオン界面活性剤が好ましく用いられる。本発明で使用される非イオン界面活性剤は、ＨＬＢ３～２０の非イオン界面活性剤であり、非イオン界面活性剤のＨＬＢは、泡の皮膚への浸透感、組成物の保存安定性を向上させる観点から、７以上が好ましく、９以上がより好ましく、１１以上がさらに好ましく、塗布後の皮膚の皮膜感を向上させる観点から、１８以下が好ましく、１６以下がより好ましく、１５以下がさらに好ましい。また、非イオン界面活性剤のＨＬＢは、７～１８が好ましく、９～１６がより好ましく、１１～１５がさらに好ましい。
ここで、ＨＬＢ（親水性－親油性のバランス〈Hydrophilic-Lypophilic Balance〉）とは、界面活性剤の全分子量に占める親水基部分の分子量を示すものであり、グリフィン（Griffin）の式により求められるものである。２種以上の非イオン界面活性剤から構成される混合界面活性剤のＨＬＢは、各非イオン界面活性剤のＨＬＢ値をその配合比率に基づいて相加算平均することにより求められる。

具体的な非イオン界面活性剤としてしては、ソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油等が挙げられ、ソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油が好ましく、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油がより好ましく、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油がさらに好ましい。
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油は、炭酸ガスの皮膚への浸透性、泡の安定性を向上させる観点から、エチレンオキサイドの平均付加モル数が、２０～９０であるのが好ましく、３０～８０がより好ましく、５０～７０がさらに好ましい。

非イオン界面活性剤は、１種又は２種以上を組合わせて用いることができ、その含有量は、泡ののび、炭酸ガスの皮膚への浸透性、塗布後の皮膚の皮膜感を向上させる観点から、原液中に０．０５質量％以上であり、０．１質量％以上が好ましく、０．３質量％以上がより好ましく、６質量％以下であり、２質量％以下が好ましく、１質量％以下がより好ましい。また、非イオン界面活性剤の含有量は、原液中に０．０５～６質量％であり、０．１～２質量％が好ましく、０．３～１質量％がより好ましい。

水溶性増粘剤としては、通常の化粧料に用いられるものであれば良く、例えば、カラギーナン、デキストリン、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、カルボキシビニルポリマー、アクリル酸・メタクリル酸アルキル共重合体、キサンタンガム、カルボキシメチルキチン、キトサン等が挙げられる。これらは、原液の粘度を高め、急激な泡の発生を抑制し、安定性を向上させる効果を有する。さらに炭酸ガスの皮膚への浸透性、塗布後の皮膚の皮膜感を向上させる観点から、カルボキシビニルポリマー、アクリル酸・メタクリル酸アルキル共重合体が好ましく、アクリル酸・メタクリル酸アルキル共重合体がより好ましい。ここで、アクリル酸・メタクリル酸アルキル共重合体とは、Ｃ１０－３０アルキルアクリル酸とアクリル酸、メタクリル酸又はこれらの低級アルキルエステルとの共重合体であって、ショ糖のアリルエーテル又はペンタエリスリトールのアリルエーテルで架橋したものであり、ペムレンＴＲ－１、ペムレンＴＲ－２、カーボポールＥＴＤ２０２０、カーボポール１３４２、カーボポール１３８２（以上、Lubrizol Advanced Materials 社）等の市販品を用いることができる。

水溶性増粘剤は、上記から選ばれる１種又は２種以上を組合わせて用いることができ、その含有量は、原液中に０．１質量％以上であり、０．１５質量％以上が好ましく、０．２質量％以上がより好ましく、１質量％以下であり、０．８質量％以下が好ましく、０．５質量％以下がより好ましい。また、水溶性増粘剤の含有量は、原液中に０．１～１質量％であり、０．１５～０．８質量％が好ましく、０．２～０．５質量％がより好ましい。

水は、溶媒として働き、原液中に、５５質量％以上が好ましく、６５質量％以上がより好ましく、７５質量％以上がさらに好ましく、９５質量％以下が好ましく、９３質量％以下がより好ましく、９０質量％以下がさらに好ましい。また、水の含有量は、原液中に、５５～９５質量％が好ましく、６５～９３質量％がより好ましく、７５～９０質量％がさら好ましい。

原液は、安定性、泡の吐出性、炭酸ガスの皮膚への浸透性を向上させる観点から、２５℃における粘度が、５００ｍＰａ・ｓ以上であるのが好ましく、１０００ｍＰａ・ｓ以上がより好ましく、１５００ｍＰａ・ｓ以上がさらに好ましく、２００００ｍＰａ・ｓ以下が好ましく、１００００ｍＰａ・ｓ以下がより好ましく、７０００ｍＰａ・ｓ以下がさらに好ましい。原液は、２５℃における粘度が、５００～２００００ｍＰａ・ｓであるのが好ましく、１０００～１００００ｍＰａ・ｓがより好ましく、１５００～７０００ｍＰａ・ｓがさらに好ましい。
ここで、粘度は、２５℃で、ＢＭ粘度計（東機産業社製）を用いて、ローターＮｏ．３、１２ｒｐｍ、１分で測定し、粘度が１００００ｍＰａ・ｓを超えた場合は、ローターＮｏ．３、６ｒｐｍ、１分で測定した値である。

発泡性皮膚外用剤において用いられる炭酸ガス発生剤としては、通常、炭酸ガス発生物質と酸性物質からなり、水と接触することにより両者が反応し、炭酸ガスを発生する製剤が挙げられる。
ここで、酸性物質としては、無機酸、有機酸のいずれでもよく、これらの１種又は２種以上が用いられる。有機酸としては、例えば、コハク酸、フマル酸、リンゴ酸、アジピン酸、酒石酸、安息香酸、クエン酸、ピロリドンカルボン酸及びサリチル酸から選ばれる１種又は２種以上が挙げられる。また、無機酸としては、具体的には、例えば、リン酸、ホウ酸、メタケイ酸及び無水ケイ酸から選ばれる１種又は２種以上が挙げられる。なかでも、炭酸ガス発生量を確保する観点から、有機酸が好ましく、クエン酸、リンゴ酸、フマル酸、コハク酸及び酒石酸から選ばれる１種又は２種以上であることがより好ましく、クエン酸、リンゴ酸及びフマル酸から選ばれる１種又は２種以上であることがさらに好ましい。

炭酸ガス発生物質としては、炭酸塩が挙げられ、具体的には、例えば、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸水素カリウム、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム及びセスキ炭酸ナトリウムから選ばれる１種又は２種以上が挙げられる。なかでも、炭酸塩としては、炭酸ガス発生量を確保する観点から、炭酸ナトリウム及び炭酸水素ナトリウムから選ばれる１種又は２種以上であることが好ましい。

斯かる炭酸ガス発生剤は、酸性物質、炭酸ガス発生物質を同一剤に含んでいてもよく、また複数の剤に分けて含有していてもよい。

発泡性皮膚外用剤の剤形は、固形状、液体状、ジェル状等いずれでもよい。固形状の場合、顆粒状、細粒状、粉末状であり得る。当該皮膚外用剤は、化粧料、医薬部外品、医薬品のいずれの形態でもよいが、化粧品又は医薬部外品として用いることが好ましい。具体的には、化粧水、乳液、美容ジェル、パック料、育毛料、洗顔料、クレンジング料、シャンプー、コンディショナー等、様々な形態を挙げることができ、また発泡性皮膚外用剤をシート状素材に担持させた形態としても良い。使用に際しては、手のひらの上、容器内あるいはシート状素材内で含水物質と混合し、発泡させて使用する態様が好ましい。

シート状素材としては、粉体である炭酸ガス発生剤（酸性物質及び炭酸ガス発生物質）を担持することができ、皮膚に適用する前又は皮膚に貼付した後、該シートに水や湯をかけるのみで、シート内において十分な量の炭酸ガスを発生させることができる素材であれば特に限定されないが、好ましくは不織布シートが挙げられる。
具体的には、（Ａ）有機酸及び無機酸から選ばれる粉体、（Ｂ）炭酸塩である粉体、（Ｃ）融点が５０℃以上１１０℃以下であり、かつ２５℃で固体である物質（例えば、ポリエチレングリコール等のポリエーテルやヒドロキシエチルセルロース等のセルロース誘導体のような高分子化合物；ミリスチン酸、パルミチン酸等の高級脂肪酸；セチルアルコール、ヘキサデシルアルコール、セテアリルアルコール、ステアリルアルコール等の高級アルコール；グルコース、マルトース等の糖類）、及び（Ｄ）繊維を含有する不織布シートが挙げられる。

入浴剤としては、（ａ）界面活性剤を１０質量％以上及び炭酸塩を該界面活性剤の２質量倍以上含む固体状賦形物、（ｂ）炭酸塩又は炭酸水素塩、（ｃ）有機酸を含有し、成分（ａ）の含有量が入浴剤中３～２０質量％である発泡性錠剤型入浴剤（特開平９－２９４２号公報）や、（Ａ）常温で固体の酸又は水に溶解したときに酸性を示す無機物、（Ｂ）炭酸塩、（Ｃ）冷感剤又は温感剤を含有する発泡性化粧料（特開２０００－１９１４２９号公報）が挙げられる。

パッドとしては、吸水性を有する基底層と、該基底層を被覆するように設けられたガスバリア性を有する保護層と、該保護層と前記基底層の間に封入された、炭酸ガス発生剤を含んでなり、保護層の周縁部分で皮膚に貼着できるようにされたパッド（特開２００６－２４９０２５号公報）等が挙げられる。

本発明において、炭酸ガス製剤の有効性の「検出」は、検査、測定判定又は評価等の用語で言い換えることもできる。本明細書における炭酸ガス製剤の有効性の「検出」、「検査」、「測定」、「判定」又は「評価」という用語は、医師による診断を含むものではない。

（１．マーカー）
後述する実施例に示すように、本発明者は、炭酸ガスを含む炭酸ガス製剤と、炭酸ガスを含まないプラセボ製剤を試験品とし、被験者の顔全面の左右半顔いずれか一方ずつに経皮的に塗布した後、塗布部位の皮膚について、鱗屑指標であるＳＥｓｃ値の変化量（塗布後のＳＥｓｃ値から塗布前のＳＥｓｃ値を減じた値：ΔＳＥｓｃ値）と、角質水分量の指標であるＣｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ値の変化量（塗布後のＣｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ値から塗布前のＣｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ値を減じた値：ΔＣｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ値）を調べた。この時、ＳＥｓｃ値の変化量及びＣｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ値の変化量を指標に、プラセボ製剤塗布と比較して、炭酸ガス製剤塗布において相対的に鱗屑が改善、若しくは角層水分量が増加した被験者をＲｅｓｐｏｎｄｅｒ群と定義し、他方、鱗屑の改善及び角層水分量の増加が見られなかった被験者をｎｏｎＲｅｓｐｏｎｄｅｒ群と定義した。
また、試験品塗布前に、塗布部位の皮膚からＳＳＬを採取し、ＳＳＬ中に含まれるＲＮＡの発現状態をシーケンス情報として網羅的に解析した。
その結果、Ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ群とｎｏｎＲｅｓｐｏｎｄｅｒ群との間で、炭酸ガス製剤塗布前において、下記表１に示す１７５種の遺伝子の発現パターンが有意に異なっていた。

そして、表１に示す１７５種の遺伝子を用いた判別式（Ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ群かｎｏｎＲｅｓｐｏｎｄｅｒ群かを判別する予測モデル）で推定誤答率を算出したところ１５％、すなわち正答率が８５％と高く、被験者の鱗屑又は角層水分量に対する炭酸ガス製剤の有効性の予測が可能であることが示された。表１に示す遺伝子は、その発現に炭酸ガス製剤への被験者の感受性が反映されていると考えられる。
したがって、炭酸ガス製剤を実際に用いずとも、表１に示された遺伝子群より選択される遺伝子又はその発現産物を評価マーカーとし、その発現レベルに基づいて、被験者の鱗屑又は角層水分量に対する炭酸ガス製剤の有効性を検出することができる。また、その検出結果に基づき、炭酸ガス製剤の使用により鱗屑又は角層水分量が改善する被験者（Ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ）を選択することができる。

当該１７５種の遺伝子のうち、表１Ａに示す１０４種の遺伝子は、Ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ群において発現レベルが高いポジティブマーカーである。他方、表１Ｂに示す７１種の遺伝子は、Ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ群において発現レベルが低いネガティブマーカーである。

さらに、後述する実施例に示すように、表１に示す１７５種のＲＮＡについて、炭酸ガス製剤塗布前の発現量と、炭酸ガス製剤塗布部位のΔＳＥｓｃ値及びΔＣｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ値とのピアソン相関解析を行った。その結果、ＰＳＭＡ７、ＳＮＯＲＡ５Ａ、ＶＰＳ３７Ｃ、Ｃ２２ｏｒｆ２８、ＲＡＰＧＥＦ２、ＮＴ５Ｃ２、ＨＳＰＡ４及びＳＮＯＲＤ９４の８種の遺伝子は、炭酸ガス製剤塗布部位のΔＳＥｓｃ値と有意に正の相関又は負の相関を示すことが見出された。当該８種の遺伝子は、これまでに鱗屑との関係が報告されていない遺伝子である。
また、ＨＥＲＣ３、ＢＳＧ及びＫＨＮＹＮの３種の遺伝子は、炭酸ガス製剤塗布部位のΔＣｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ値と有意に正の相関又は負の相関を示すことが見出された。当該３種の遺伝子は、これまでに角層水分量との関係が報告されていない遺伝子である。
そして、ＰＳＭＡ７、ＳＮＯＲＡ５Ａ、ＶＰＳ３７Ｃ、Ｃ２２ｏｒｆ２８、ＲＡＰＧＥＦ２、ＮＴ５Ｃ２、ＨＳＰＡ４及びＳＮＯＲＤ９４の８種と、ＨＥＲＣ３、ＢＳＧ及びＫＨＮＹＮの３種の計１１種の遺伝子を用いた判別式（Ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ群か否かを判別する予測モデル）で推定誤答率を算出したところ１５％、すなわち正答率が８５％と高く、被験者の鱗屑又は角層水分量に対する炭酸ガス製剤の有効性の予測が可能であることが示された。
したがって、これら１１種の遺伝子群より選択される遺伝子又はその発現産物を評価マーカーとし、その発現レベルに基づいて、被験者の鱗屑又は角層水分量に対する炭酸ガス製剤の有効性を検出することができる。また、その検出結果に基づき、炭酸ガス製剤の使用により鱗屑又は角層水分量が改善する被験者（Ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ）を選択することができる。

さらに、ＰＳＭＡ７、ＳＮＯＲＡ５Ａ、ＶＰＳ３７Ｃ、Ｃ２２ｏｒｆ２８、ＲＡＰＧＥＦ２、ＮＴ５Ｃ２、ＨＳＰＡ４及びＳＮＯＲＤ９４の８種の遺伝子群より選択される遺伝子又はその発現産物を評価マーカーとし、その発現レベルに基づいて、被験者に対する炭酸ガス製剤の有効性のうち、特に鱗屑に対する有効性をより高精度に検出することができる。また、その検出結果に基づき、炭酸ガス製剤に対するレスポンダーのうち特に鱗屑の改善についてのレスポンダーを選択することができる。
またさらに、ＨＥＲＣ３、ＢＳＧ及びＫＨＮＹＮの３種の遺伝子群より選択される遺伝子又はその発現産物を評価マーカーとし、その発現レベルに基づいて、被験者に対する炭酸ガス製剤の有効性のうち、特に角層水分量に対する有効性をより高精度に検出することができる。また、その検出結果に基づき、炭酸ガス製剤に対するレスポンダーのうち特に角層水分量の改善についてのレスポンダーを選択することができる。

表１に示す遺伝子より、ＰＳＭＡ７、ＳＮＯＲＡ５Ａ、ＶＰＳ３７Ｃ、Ｃ２２ｏｒｆ２８、ＲＡＰＧＥＦ２、ＮＴ５Ｃ２、ＨＳＰＡ４及びＳＮＯＲＤ９４の８種と、ＨＥＲＣ３、ＢＳＧ及びＫＨＮＹＮの３種を除いた１６４種の遺伝子を下記表２に示す。

本発明では、ＰＳＭＡ７、ＳＮＯＲＡ５Ａ、ＶＰＳ３７Ｃ、Ｃ２２ｏｒｆ２８、ＲＡＰＧＥＦ２、ＮＴ５Ｃ２、ＨＳＰＡ４及びＳＮＯＲＤ９４の８種の遺伝子、並びにＨＥＲＣ３、ＢＳＧ及びＫＨＮＹＮの３種の遺伝子の計１１種の遺伝子又はその遺伝子の発現産物からなる群より選択される少なくとも１種をマーカーとし、その発現レベルに基づいて、鱗屑又は角層水分量に対する炭酸ガス製剤の有効性を検出する。また、その検出結果に基づき、炭酸ガス製剤の使用により鱗屑又は角層水分量が改善する被験者（Ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ）を選択することができる。
さらに当該１１種の遺伝子又はその遺伝子の発現産物からなる群より選択される少なくとも１種と共に、表２に示す１６４種の遺伝子又はその遺伝子の発現産物からなる群より選択される少なくとも１種をマーカーとし、その発現レベルに基づいて被験者の鱗屑又は角層水分量に対する炭酸ガス製剤の有効性を検出することが可能である。また、その検出結果に基づき、炭酸ガス製剤に対するＲｅｓｐｏｎｄｅｒを選択することが可能である。

本発明において、ＰＳＭＡ７、ＳＮＯＲＡ５Ａ、ＶＰＳ３７Ｃ、Ｃ２２ｏｒｆ２８、ＲＡＰＧＥＦ２、ＮＴ５Ｃ２、ＨＳＰＡ４及びＳＮＯＲＤ９４の８種の遺伝子、並びにＨＥＲＣ３、ＢＳＧ及びＫＨＮＹＮの３種の遺伝子の計１１種の遺伝子は、それぞれ単独で被験者の鱗屑又は角層水分量に対する炭酸ガス製剤の有効性を評価するためのマーカーとなり得るが、精度向上の観点から、このうち、好ましくは２種以上、より好ましくは３種以上、さらに好ましくは５種以上、よりさらに好ましくは１１種全ての組み合わせを用いる。

また本発明では、ＰＳＭＡ７、ＳＮＯＲＡ５Ａ、ＶＰＳ３７Ｃ、Ｃ２２ｏｒｆ２８、ＲＡＰＧＥＦ２、ＮＴ５Ｃ２、ＨＳＰＡ４及びＳＮＯＲＤ９４の８種の遺伝子又はその遺伝子の発現産物からなる群より選択される少なくとも１種をマーカーとし、その発現レベルに基づいて、被験者に対する炭酸ガス製剤の有効性のうち、特に鱗屑に対する有効性をより高精度に検出する。また、その検出結果に基づき、炭酸ガス製剤に対するレスポンダーのうち特に鱗屑の改善についてのレスポンダーを選択する。
さらに当該８種の遺伝子又はその遺伝子の発現産物からなる群より選択される少なくとも１種と共に、ＨＥＲＣ３、ＢＳＧ及びＫＨＮＹＮの３種、並びに表２に示す１６４種の遺伝子又はその遺伝子の発現産物からなる群より選択される少なくとも１種をマーカーとし、その発現レベルに基づいて被験者に対する炭酸ガス製剤の有効性のうち、特に鱗屑の改善に対する有効性を検出することが可能である。また、その検出結果に基づき、炭酸ガス製剤に対するレスポンダーのうち特に鱗屑の改善についてのレスポンダーを選択することが可能である。

本発明において、ＰＳＭＡ７、ＳＮＯＲＡ５Ａ、ＶＰＳ３７Ｃ、Ｃ２２ｏｒｆ２８、ＲＡＰＧＥＦ２、ＮＴ５Ｃ２、ＨＳＰＡ４及びＳＮＯＲＤ９４の８種の遺伝子は、それぞれ単独で被験者に対する炭酸ガス製剤の有効性、特に鱗屑に対する有効性を評価するためのマーカーとなり得るが、精度向上の観点から、このうち、好ましくは２種以上、より好ましくは３種以上、さらに好ましくは８種全ての組み合わせを用いる。

また本発明では、ＨＥＲＣ３、ＢＳＧ及びＫＨＮＹＮの３種の遺伝子又はその遺伝子の発現産物からなる群より選択される少なくとも１種をマーカーとし、その発現レベルに基づいて、被験者に対する炭酸ガス製剤の有効性のうち、特に角層水分量に対する有効性をより高精度に検出する。また、その検出結果に基づき、炭酸ガス製剤に対するレスポンダーのうち特に角層水分量の改善についてのレスポンダーを選択する。
さらに当該３種の遺伝子又はその遺伝子の発現産物からなる群より選択される少なくとも１種と共に、ＰＳＭＡ７、ＳＮＯＲＡ５Ａ、ＶＰＳ３７Ｃ、Ｃ２２ｏｒｆ２８、ＲＡＰＧＥＦ２、ＮＴ５Ｃ２、ＨＳＰＡ４及びＳＮＯＲＤ９４の８種、並びに表２に示す１６４種の遺伝子又はその遺伝子の発現産物からなる群より選択される少なくとも１種をマーカーとし、その発現レベルに基づいて被験者に対する炭酸ガス製剤の有効性のうち、特に角層水分量に対する有効性を検出することが可能である。また、その検出結果に基づき、炭酸ガス製剤に対するレスポンダーのうち特に角層水分量の改善についてのレスポンダーを選択することが可能である。

本発明において、ＨＥＲＣ３、ＢＳＧ及びＫＨＮＹＮの３種の遺伝子は、それぞれ単独で被験者に対する炭酸ガス製剤の有効性、特に角層水分量に対する有効性を評価するためのマーカーとなり得るが、精度向上の観点から、このうち、好ましくは２種以上、より好ましくは３種全ての組み合わせを用いる。

一実施形態において、本発明のマーカーは、表１に示す遺伝子のＤＮＡ、その転写産物であるＲＮＡ等の核酸マーカーである。別の一実施形態において、本発明のマーカーは、当該遺伝子の翻訳産物であるタンパク質マーカーである。本発明のマーカーは、好ましくは核酸マーカーである。

前記の被験者の鱗屑又は角層水分量に対する炭酸ガス製剤の有効性を検出するためのマーカーとなり得る遺伝子（以下、「標的遺伝子」とも称す）には、被験者の鱗屑又は角層水分量に対する炭酸ガス製剤の有効性を検出するためのバイオマーカーとなり得る限り、当該遺伝子を構成するＤＮＡの塩基配列と実質的に同一の塩基配列を有する遺伝子も包含される。ここで、実質的に同一の塩基配列とは、例えば、相同性計算アルゴリズムＮＣＢＩ ＢＬＡＳＴを用い、期待値＝１０；ギャップを許す；フィルタリング＝ＯＮ；マッチスコア＝１；ミスマッチスコア＝－３の条件にて検索をした場合、当該遺伝子を構成するＤＮＡの塩基配列と９０％以上、好ましくは９５％以上、より好ましく９８％以上、さらに好ましくは９９％以上の同一性があることを意味する。

本発明のマーカーは、皮膚から採取したＳＳＬから常法にしたがって調製することができる。例えば、ＳＳＬからの核酸又はタンパク質の調製には、市販のキットを使用することができる。好ましくは、本発明のマーカーは、被験者のＳＳＬから調製される核酸又はタンパク質、より好ましくは核酸、さらに好ましくはＲＮＡ、よりさらに好ましくはｍＲＮＡである。
ＳＳＬが採取される皮膚は、ＳＳＬを採取し得る動物の皮膚であればよく、ヒトの皮膚が好ましく、健常なヒトの皮膚がより好ましい。ＳＳＬが採取される皮膚の部位としては、頭、顔、首、体幹、手足等の身体の任意の部位の皮膚が挙げられ、皮脂の分泌が多い部位、例えば、顔の皮膚が好ましい。

皮膚からのＳＳＬの採取には、皮膚からのＳＳＬの回収又は除去に用いられているあらゆる手段を採用することができる。好ましくは、後述するＳＳＬ吸収性素材、ＳＳＬ接着性素材、又は皮膚からＳＳＬをこすり落とす器具を使用することができる。
ＳＳＬ吸収性素材又はＳＳＬ接着性素材としては、ＳＳＬに親和性を有する素材であれば特に限定されず、例えば、ポリプロピレン、パルプ等が挙げられる。皮膚からのＳＳＬの採取手順のより詳細な例としては、あぶら取り紙、あぶら取りフィルム等のシート状素材へＳＳＬを吸収させる方法、ガラス板、テープ等へＳＳＬを接着させる方法、スパーテル、スクレイパー等によりＳＳＬをこすり落として回収する方法、等が挙げられる。ＳＳＬの吸着性を向上させるため、脂溶性の高い溶媒を予め含ませたＳＳＬ吸収性素材を用いてもよい。一方、ＳＳＬ吸収性素材は、水溶性の高い溶媒や水分を含んでいるとＳＳＬの吸着が阻害されるため、水溶性の高い溶媒や水分の含有量が少ないことが好ましい。ＳＳＬ吸収性素材は、乾燥した状態で用いることが好ましい。

採取されたＳＳＬは一定期間保存されてもよい。採取されたＳＳＬは、含有するＲＮＡの分解を極力抑えるために、採取後できるだけ速やかに低温条件で保存することが好ましい。本発明における当該ＲＮＡ含有ＳＳＬの保存の温度条件は、０℃以下であればよく、好ましくは－２０±２０℃～－８０±２０℃、より好ましくは－２０±１０℃～－８０±１０℃、さらに好ましくは－２０±２０℃～－４０±２０℃、さらに好ましくは－２０±１０℃～－４０±１０℃、さらに好ましくは－２０±１０℃、さらに好ましくは－２０±５℃である。当該ＲＮＡ含有ＳＳＬの当該低温条件での保存の期間は、特に限定されないが、好ましくは１２か月以下、例えば６時間以上１２ヶ月以下、より好ましくは６ヶ月以下、例えば１日間以上６ヶ月以下、さらに好ましくは３ヶ月以下、例えば３日間以上３ヶ月以下である。

ＳＳＬからの核酸又はタンパク質の抽出には、生体試料からの核酸又はタンパク質の抽出又は精製に通常使用される方法を使用することができる。核酸の抽出又は精製方法の例としては、フェノール/クロロホルム法、ＡＧＰＣ（ａｃｉｄ ｇｕａｎｉｄｉｎｉｕｍ ｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ－ｐｈｅｎｏｌ－ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ）法、又はＴＲＩｚｏｌ（登録商標）、ＲＮｅａｓｙ（登録商標）、ＱＩＡｚｏｌ（登録商標）等のカラムを用いた方法、シリカをコーティングした特殊な磁性体粒子を用いる方法、Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ磁性体粒子を用いる方法、ＩＳＯＧＥＮ等の市販のＲＮＡ抽出試薬による抽出、等が挙げられる。タンパク質の抽出又は精製には、ＱＩＡｚｏｌ Ｌｙｓｉｓ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｑｉａｇｅｎ）等の市販のタンパク質抽出試薬を用いることができる。

（２．評価方法）
別の一態様において、本発明は、前記１．で説明した本発明のマーカーを用いた、被験者の鱗屑又は角層水分量に対する炭酸ガス製剤の有効性を評価する方法を提供する。
本発明の被験者の鱗屑又は角層水分量に対する炭酸ガス製剤の有効性を評価する方法（以下、「本発明の方法」とも称す）では、被験者から採取されたＳＳＬについて、本発明のマーカーの発現レベルを測定し、さらにその発現レベルに基づいて、当該被験者の鱗屑又は角層水分量に対する炭酸ガス製剤の有効性を評価する。

本発明における被験者は、例えばヒト又は非ヒト哺乳動物であって、鱗屑及び／又は角層水分量の低下が見られ、鱗屑の改善及び／又は角層水分量の増加を所望するか又は必要とする者が挙げられる。被験者は、好ましくはヒトである。

一実施形態において、本発明の方法は、被験者からＳＳＬを採取する工程をさらに含んでいてもよい。ＳＳＬの採取手順、及びＳＳＬからのマーカーの抽出手順は、上述したとおりである。

（２．１ マーカー発現の解析）
本発明のマーカーの発現レベルは、当該分野で通常用いられる核酸又はタンパク質の定量法にしたがって、測定することができる。測定されるマーカーの発現レベルは、ＳＳＬ中の当該マーカーの絶対量に基づく発現レベルであっても、他の標準物質や、全核酸又は全タンパク質の発現レベルに対する相対発現レベルであってもよい。

例えば、核酸マーカーの発現レベルは、当該分野で通常用いられる遺伝子発現解析の手順にしたがって測定すればよい。遺伝子発現解析の手法の例としては、ＰＣＲ、マルチプレックスＰＣＲ、リアルタイムＰＣＲ、ハイブリダイゼーション（ＤＮＡチップ、ＤＮＡマイクロアレイ、ドットブロットハイブリダイゼーション、スロットブロットハイブリダイゼーション、ノーザンブロットハイブリダイゼーション等）、シーケンシング、クロマトグラフィー等の核酸又はその増幅産物を定量する方法が挙げられる。核酸がＲＮＡの場合は、ＲＮＡを逆転写によりｃＤＮＡに変換した後、前記方法で定量することが好ましい。

タンパク質マーカーの発現レベルは、当該分野で通常用いられるタンパク質定量法、例えば免疫測定法（例えば、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、免疫染色等）、蛍光法、電気泳動、プロテインチップ、クロマトグラフィー、質量分析（例えば、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ／ＭＳ）、１－ハイブリッド法（PNAS 100, 12271-12276(2003)）、２－ハイブリッド法（Biol. Reprod. 58, 302-311 (1998)）等を用いて測定することができる。あるいは、本発明のマーカーである核酸又はタンパク質と相互作用する分子を測定することで、本発明のマーカーの発現レベルを測定してもよい。本発明のマーカーと相互作用する分子としては、ＤＮＡ、ＲＮＡ、タンパク質、多糖、オリゴ糖、単糖、脂質、脂肪酸、及びこれらのリン酸化物、アルキル化物、糖付加物等、及び前記いずれかの複合体が挙げられる。

好ましくは、本発明の方法で使用されるマーカーは、ＳＳＬ由来ｍＲＮＡである。この場合には、ＳＳＬに含まれるｍＲＮＡの発現レベルが測定される。好ましくは、ＳＳＬから抽出したｍＲＮＡを逆転写によりｃＤＮＡに変換した後、当該ｃＤＮＡ又はその増幅産物を前記の手法で定量することで、当該ＳＳＬ由来ｍＲＮＡの発現レベルが測定される。

ｍＲＮＡの逆転写には、解析したい特定のＲＮＡを標的としたプライマーを用いてもよいが、より包括的な核酸の保存及び解析のためにはランダムプライマーを用いることが好ましい。この逆転写には、一般的な逆転写酵素又は逆転写試薬キットを使用することができる。好適には、正確性及び効率性の高い逆転写酵素又は逆転写試薬キットが用いられ、その例としては、Ｍ－ＭＬＶ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ及びその改変体、あるいは市販の逆転写酵素又は逆転写試薬キット、例えばＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ（登録商標）Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅシリーズ（タカラバイオ社）、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ（登録商標）Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅシリーズ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）等が挙げられる。ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ（登録商標）III Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ（登録商標）ＶＩＬＯ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｋｉｔ（いずれもＴｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）等が挙げられる。
逆転写における伸長反応では、温度を好ましくは４２℃±１℃、より好ましくは４２℃±０．５℃、さらに好ましくは４２℃±０．２５℃に調整し、一方、反応時間を好ましくは６０分間以上、より好ましくは８０～１２０分間に調整することが好ましい。

ＰＣＲを用いて核酸マーカーの発現レベルを測定する場合、必要に応じてＳＳＬ由来のｍＲＮＡをｃＤＮＡに逆転写した後、プライマーペアを用いて当該ＳＳＬ由来のｍＤＮＡを増幅する。ＰＣＲでは、解析したい特定のＤＮＡを標的としたプライマーペアを用いて当該特定の１種のＤＮＡのみを増幅してもよいが、複数のプライマーペアを用いて同時に複数の特定のＤＮＡを増幅してもよい。好ましくは、当該ＰＣＲはマルチプレックスＰＣＲである。マルチプレックスＰＣＲは、ＰＣＲ反応系に複数のプライマー対を同時に使用することで、複数の遺伝子領域を同時に増幅する方法である。マルチプレックスＰＣＲは、市販のキット（例えば、Ｉｏｎ ＡｍｐｌｉＳｅｑＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｋｉｔ；ライフテクノロジーズジャパン株式会社等）を用いて実施することができる。
当該ＰＣＲにおけるアニーリング及び伸長反応の温度は、使用するプライマーに依存するため一概には言えないが、前記のマルチプレックスＰＣＲキットを用いる場合、好ましくは６２℃±１℃、より好ましくは６２℃±０．５℃、さらに好ましくは６２℃±０．２５℃である。したがって、当該ＰＣＲでは、好ましくはアニーリング及び伸長反応が１ステップで行われる。当該アニーリング及び伸長反応のステップの時間は、増幅すべきＤＮＡのサイズ等に依存して調整され得るが、好ましくは１４～１８分間である。当該ＰＣＲにおける変性反応の条件は、増幅すべきＤＮＡに依存して調整され得るが、好ましくは９５～９９℃で１０～６０秒間である。前記のような温度及び時間での逆転写及びＰＣＲは、一般的にＰＣＲに使用されるサーマルサイクラーを用いて実行することができる。

前記ＰＣＲで得られた反応産物の精製は、反応産物のサイズ分離によって行われることが好ましい。サイズ分離により、目的のＰＣＲ反応産物を、ＰＣＲ反応液中に含まれるプライマーやその他の不純物から分離することができる。ＤＮＡのサイズ分離は、例えば、サイズ分離カラムや、サイズ分離チップ、サイズ分離に利用可能な磁気ビーズ等によって行うことができる。サイズ分離に利用可能な磁気ビーズの好ましい例としては、Ａｍｐｕｒｅ ＸＰ等のＳｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ（ＳＰＲＩ）磁性ビーズが挙げられる。

精製したＰＣＲ反応産物に対して、その後の定量解析を行うために必要なさらなる処理を施してもよい。例えば、ＤＮＡのシーケンシングのために、精製したＰＣＲ反応産物を、適切なバッファー溶液へと調製したり、ＰＣＲ増幅されたＤＮＡに含まれるＰＣＲプライマー領域を切断したり、増幅されたＤＮＡにアダプター配列をさらに付加したりしてもよい。例えば、精製したＰＣＲ反応産物をバッファー溶液へと調製し、増幅ＤＮＡに対してＰＣＲプライマー配列の除去及びアダプターライゲーションを行い、得られた反応産物を、必要に応じて増幅して、定量解析のためのライブラリーを調製することができる。これらの操作は、例えば、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ（登録商標）ＶＩＬＯ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｋｉｔ（ライフテクノロジーズジャパン株式会社）に付属している５×ＶＩＬＯ ＲＴ Ｒｅａｃｔｉｏｎ Ｍｉｘ、及びＩｏｎ ＡｍｐｌｉＳｅｑ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｋｉｔ（ライフテクノロジーズジャパン株式会社）に付属している５×Ｉｏｎ ＡｍｐｌｉＳｅｑ ＨｉＦｉ Ｍｉｘ、及びＩｏｎ ＡｍｐｌｉＳｅｑ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｃｏｒｅ Ｐａｎｅｌを用いて、各キット付属のプロトコルにしたがって行うことができる。

リアルタイムＰＣＲを用いて核酸マーカーの発現レベルを測定する場合、必要に応じてＳＳＬ由来のＲＮＡをｃＤＮＡに逆転写した後、予め放射性同位元素（ＲＩ）、蛍光物質等で標識しておいたプライマーを用いてＰＣＲを行い、産生される標識二本鎖ＤＮＡを検出、定量する。

ノーザンブロットハイブリダイゼーションを用いて核酸マーカーの発現レベルを測定する場合、例えば、常法にしたがってメンブレン上にＳＳＬ由来のＲＮＡをトランスファーし、次いでＲＩ、蛍光物質等で標識したプローブＤＮＡを当該ＲＮＡにハイブリダイズさせる。形成された標識プローブＤＮＡとＲＮＡとの二重鎖から当該標識に由来するシグナルを検出することにより、核酸マーカーの発現レベルを測定することができる。

ＤＮＡマイクロアレイを用いて核酸マーカーの発現レベルを測定する場合、例えば、支持体上に標的の核酸マーカーに特異的にハイブリダイズする核酸（ｃＤＮＡ又はＤＮＡ）を固定化したマイクロアレイを用いる。ＳＳＬから調製した核酸（ｃＤＮＡ又はｃＲＮＡ）を標識後、マイクロアレイ上に結合させ、マイクロアレイ上の標識を検出することによって、ＳＳＬ中の核酸マーカーの発現レベルを測定することができる。
前記マイクロアレイに固定化される核酸としては、ストリンジェントな条件下に標的の核酸マーカーに特異的（すなわち、実質的に標的の核酸マーカーのみに）にハイブリダイズする核酸であればよく、本発明の核酸マーカーの全配列を有する核酸であっても、部分配列からなる核酸であってもよい。当該「部分配列」としては、少なくとも１５～２５塩基からなる核酸が挙げられる。ここでストリンジェントな条件としては、通常「１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、３７℃」程度の洗浄条件、好ましくは「０．５×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、４２℃」程度の条件、さらに好ましくは「０．１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、６５℃」程度の条件を挙げることができる。ストリンジェントなハイブリダイズ条件は、例えばJ. Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Third Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press (2001)に記載されている。

シーケンシングを用いて核酸マーカーの発現レベルを測定する場合、好ましくは次世代シーケンサー（例えばＩｏｎ Ｓ５／ＸＬシステム、ライフテクノロジーズジャパン株式会社）を用いることができる。シーケンシングで作成されたリードの数（リードカウント）に基づいて、ＤＮＡ又はＲＮＡの発現レベルを測定することができる。

シーケンシングにより複数の核酸マーカーの発現レベルを測定する場合は、前記したリードカウントを発現レベルのデータとして用いることができる。あるいは、当該リードカウントにおけるサンプル間の総リード数の違いを補正した、当該リードカウントのＲＰＭ（Ｒｅａｄｓ ｐｅｒ ｍｉｌｌｉｏｎ ｍａｐｐｅｄ ｒｅａｄｓ）値、当該ＲＰＭ値の対数値（Ｌｏｇ₂ＲＰＭ値、又はＬｏｇ₂（ＲＰＭ＋１）値）、ＤＥＳｅｑ２（Ｌｏｖｅ ＭＩ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｅ Ｂｉｏｌ，２０１４）を用いて補正されたカウント値（Ｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ ｃｏｕｎｔ値）又はその対数値（Ｌｏｇ₂（Ｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ ｃｏｕｎｔ＋１）値）、等を発現レベルのデータとして用いることができる。あるいは、発現レベルのデータとして、ＲＮＡ－ｓｅｑの定量値として一般的な、Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ ｐｅｒ ｋｉｌｏｂａｓｅ ｏｆ ｅｘｏｎ ｐｅｒ ｍｉｌｌｉｏｎ ｒｅａｄｓ ｍａｐｐｅｄ （ＦＰＫＭ）、ｒｅａｄｓ ｐｅｒ ｋｉｌｏｂａｓｅ ｏｆ ｅｘｏｎ ｐｅｒ ｍｉｌｌｉｏｎ ｒｅａｄｓ ｍａｐｐｅｄ （ＲＰＫＭ）、ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ ｐｅｒ ｍｉｌｌｉｏｎ （ＴＰＭ）等を用いることができる。

核酸マーカーの測定に用いられるプローブ又はプライマーは、例えば、本発明の核酸マーカーを特異的に増幅するためのプライマー、又は当該核酸マーカーを特異的に検出するためのプローブであり得る。ここで「特異的」とは、例えばノーザンブロット法において、実質的に本発明のマーカーのみが検出されること、又はＰＣＲにおいて、実質的に本発明のマーカーのみが増幅されること等、実質的に本発明のマーカーに由来する生成物又は検出物が生成するように核酸を認識又は検出できることを意味する。これらのプローブ又はプライマーは、当該核酸マーカーのヌクレオチド配列に基づいて設計することができる。
プローブ又はプライマーの具体的な例としては、本発明の核酸マーカーの全配列又は部分配列からなるオリゴヌクレオチド又はその相補鎖を利用することができる。前記「相補鎖」とは、標的マーカーを特異的に認識する限り、完全に相補的な配列に限られず、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上の配列同一性を有する配列であればよい。配列の同一性は、上述したＮＣＢＩ ＢＬＡＳＴ等のアルゴリズムにより決定することができる。
前記核酸マーカーの測定に用いられるプライマーの例としては、標的の核酸マーカーに対して特異的なアニーリング及び鎖伸長ができるものであって、好ましくは１０塩基以上、より好ましくは１５塩基以上、さらに好ましくは２０塩基以上、かつ好ましくは１００塩基以下、より好ましくは５０塩基以下、さらに好ましくは３５塩基以下の鎖長を有するものが挙げられる。
前記核酸マーカーの測定に用いられるプローブの例としては、標的の核酸マーカーに対して特異的なハイブリダイゼーションができるものであって、好ましくは１０塩基以上、より好ましくは１５塩基以上、かつ好ましくは１００塩基以下、より好ましくは５０塩基以下、さらに好ましくは２５塩基以下の鎖長を有するものが挙げられる。
前記プローブ又はプライマーは、ＤＮＡあるいはＲＮＡであることができ、合成されたものでも天然のものでもよい。ハイブリダイゼーションに用いるプローブは、通常、標識したものが用いられる。

免疫測定法を用いてタンパク質マーカーの発現レベルを測定する場合、例えば、当該タンパク質マーカーに対する抗体を生体試料と接触させ、当該抗体に結合したタンパク質マーカーを定量すればよい。例えば、ウェスタンブロットでは、当該タンパク質マーカーに対する一次抗体を用いた後、ＲＩ、蛍光物質、酵素等で標識した二次抗体を用いて当該一次抗体を標識し、次いで当該標識由来のシグナルを測定することで当該タンパク質マーカーの発現レベルを測定することができる。当該タンパク質マーカーに対する抗体は、ポリクローナル抗体であってもモノクローナル抗体であってもよい。これらの抗体は、公知の方法にしたがって製造することができる。

（２．２ マーカーの発現レベルに基づく検出方法）
本発明の一実施形態においては、本発明のマーカーの発現レベルについてのデータを用いて構築した予測モデルに基づいて、被験者の鱗屑又は角層水分量に対する炭酸ガス製剤の有効性を検出する。
例えば、予め十分な母数を有する任意の集団において炭酸ガス製剤を塗布し、塗布前における本発明の標的遺伝子又はその発現産物の発現レベルを説明変数とし、当該集団から得た塗布前後における鱗屑指標であるＳＥｓｃ値の変化量（炭酸ガス製剤塗布後のＳＥｓｃ値から塗布前のＳＥｓｃ値を減じた値：ΔＳＥｓｃ値）や角質水分量の指標であるＣｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ値の変化量（炭酸ガス製剤塗布後のＣｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ値から塗布前のＣｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ値を減じた値：ΔＣｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ値）を元にラベル付けした炭酸ガス製剤が有効な被験者（Ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ群）か否か（ｎｏｎＲｅｓｐｏｎｄｅｒ群）を目的変数とする機械学習を行うことにより、当該発現レベルから被験者の鱗屑又は角層水分量に対する炭酸ガス製剤の有効性を検出するための最適な予測モデルを構築する。ここでＲｅｓｐｏｎｄｅｒ群かｎｏｎＲｅｓｐｏｎｄｅｒ群のラベル付けは、炭酸ガス製剤塗布前後のΔＳＥｓｃ値やΔＣｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ値に元に行われるが、好ましくは炭酸ガス製剤塗布と並行して炭酸ガス成分を含まないプラセボ製剤の塗布を行い、参照値としてプラセボ製剤塗布前後におけるΔＳＥｓｃ値やΔＣｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ値を算出し、炭酸ガス製剤塗布とプラセボ製剤塗布との対比からＲｅｓｐｏｎｄｅｒ群かｎｏｎＲｅｓｐｏｎｄｅｒ群のラベル付けを行う。
次いで、構築された予測モデルに基づいて、炭酸ガス製剤の有効性を検出対象である被験者における標的遺伝子又はその発現産物の発現レベルから、当該被験者の鱗屑又は角層水分量に対する炭酸ガス製剤の有効性を検出することができる。
予測モデルの構築に用いられる集団としては、対象となる被験者の属性（性別、人種、年代等）が一致した集団であることが好ましい。
発現レベルとしては、上記したように、発現量のデータであるリードカウント値、当該リードカウント値をサンプル間の総リード数の違いを補正したＲＰＭ値、当該ＲＰＭ値を底２の対数値に変換した値（Ｌｏｇ₂ＲＰＭ値）又は整数１を加算した底２の対数値（ｌｏｇ₂（ＲＰＭ＋１）値）、あるいはＤＥＳｅｑ２（Ｌｏｖｅ ＭＩ ｅｔ ａｌ．Ｇｅｎｏｍｅ Ｂｉｏｌ．２０１４）を用いて補正されたカウント値（Ｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ ｃｏｕｎｔ値）又は整数１を加算した底２の対数値（ｌｏｇ₂（Ｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ ｃｏｕｎｔ＋１）値）を指標として用いるのが好ましい。また、ＲＮＡ－ｓｅｑの定量値として一般的な、ｆｒａｇｍｅｎｔｓ ｐｅｒ ｋｉｌｏｂａｓｅ ｏｆ ｅｘｏｎ ｐｅｒ ｍｉｌｌｉｏｎ ｒｅａｄｓ ｍａｐｐｅｄ （ＦＰＫＭ）、ｒｅａｄｓ ｐｅｒ ｋｉｌｏｂａｓｅ ｏｆ ｅｘｏｎ ｐｅｒ ｍｉｌｌｉｏｎ ｒｅａｄｓ ｍａｐｐｅｄ （ＲＰＫＭ）、ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ ｐｅｒ ｍｉｌｌｉｏｎ （ＴＰＭ）等によって算出される値であってもよい。また、マイクロアレイ法によって得られるシグナル値、及びその補正値であってもよい。また、ＲＴ－ＰＣＲ等により特定の標的遺伝子のみの解析を行う場合には、対象遺伝子の発現量をハウスキーピング遺伝子の発現量を基準とする相対的な発現量に変換して解析する方法、又は標的遺伝子の領域を含むプラスミドを用いて絶対的なコピー数を定量（絶対定量）して解析する方法が好ましい。デジタルＰＣＲ法によって得られるコピー数であってもよい。
一方、ΔＳＥｓｃ値及びΔＣｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ値としては、例えば実測値に整数１を加算した自然対数値（ｌｎ（測定値＋１）値）を用いることができる。

予測モデルの構築に用いるアルゴリズムとしては、機械学習に用いるアルゴリズム等の公知のものを利用することができる。機械学習アルゴリズムの例としては、ランダムフォレスト（Ｒａｎｄｏｍ ｆｏｒｅｓｔ）、線形カーネルのサポートベクターマシン（ＳＶＭ ｌｉｎｅａｒ）、ｒｂｆカーネルのサポートベクターマシン（ＳＶＭ ｒｂｆ）、ニューラルネットワーク（Ｎｅｒｕｒａｌ ｎｅｔ）、一般線形モデル（Ｇｅｎｅｒａｌｉｚｅｄ ｌｉｎｅａｒ ｍｏｄｅｌ）、正則化線形判別分析（Ｒｅｇｕｌａｒｉｚｅｄ ｌｉｎｅａｒ ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｎｔ ａｎａｌｙｓｉｓ）、正則化ロジスティック回帰（Ｒｅｇｕｌａｒｉｚｅｄ ｌｏｇｉｓｔｉｃ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ）、ラッソ（Ｌｅａｓｔ Ａｂｓｏｌｕｔｅ Ｓｈｒｉｎｋａｇｅ ａｎｄ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ Ｏｐｅｒａｔｏｒ）回帰等が挙げられる。構築した予測モデルに検証用のデータを入力して予測値を算出し、当該予測値が実測値と最も適合するモデル、例えば正解率（Ａｃｃｕｒａｃｙ）が最も大きいモデルを最適な予測モデルとして選抜することができる。また、予測値と実測値から検出率（Ｒｅｃａｌｌ）、精度（Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ）、及びそれらの調和平均であるＦ値を計算し、そのＦ値が最も大きいモデルを最適な予測モデルとして選抜することができる。また、予測値と実測値の二乗平均平方根誤差（ＲＭＳＥ）を予測モデルの精度評価指標として用い、そのＲＭＳＥの最も小さいモデルを最適な予測モデルとして選抜することができる。

本発明の方法の別の一実施形態においては、被験者から採取されたＳＳＬについて本発明のマーカーの発現レベルを測定し、測定したマーカーの発現レベルを、予め設定した基準値と比較することによって、当該被験者の鱗屑又は角層水分量に対する炭酸ガス製剤の有効性を評価することができる。
一例において、当該基準値は、鱗屑指標であるＳＥｓｃ値や、角質水分量の指標であるＣｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ値と、本発明の標的遺伝子又はその発現産物の発現レベルの関係に基づき、予め決定することができる。例えば、ある集団に対し炭酸ガス製剤を塗布し、塗布前後におけるＳＥｓｃ値の変化量（炭酸ガス製剤塗布後のＳＥｓｃ値から塗布前のＳＥｓｃ値を減じた値：ΔＳＥｓｃ値）とＣｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ値の変化量（炭酸ガス製剤塗布後のＣｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ値から塗布前のＣｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ値を減じた値：ΔＣｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ値）基づき、該集団を、Ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ群、ｎｏｎＲｅｓｐｏｎｄｅｒ群の群に分ける。ここでＲｅｓｐｏｎｄｅｒ群かｎｏｎＲｅｓｐｏｎｄｅｒ群かの群分けは、炭酸ガス製剤塗布前後のΔＳＥｓｃ値やΔＣｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ値に元に行われるが、好ましくは炭酸ガス製剤塗布と並行して炭酸ガス成分を含まないプラセボ製剤の塗布を行い、参照値としてプラセボ製剤塗布前後におけるΔＳＥｓｃ値やΔＣｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ値を算出し、炭酸ガス製剤塗布とプラセボ製剤塗布との対比からＲｅｓｐｏｎｄｅｒ群かｎｏｎＲｅｓｐｏｎｄｅｒ群かの群分けを行う。
そして、それぞれの群における標的遺伝子又はその発現産物の発現レベルの平均値や標準偏差等の統計値を参考に決定した値を、それぞれの群への属否を判別する基準値として決定することができる。
標的遺伝子として複数種の遺伝子を用いる場合は、それぞれ各々の遺伝子又はその発現産物について基準値を求めることが好ましい。
集団としては、対象となる被験者の属性（性別、人種、年代等）が一致した集団であることが好ましい。
基準値の決定方法は特に制限されず、公知の手法に従って決定することができる。例えば、判別式（予測モデル）を使用して作成されたＲＯＣ（Ｒｅｃｅｉｖｅｒ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ Ｃｕｒｖｅ）曲線より求めることができる。ＲＯＣ曲線では、縦軸にＲｅｓｐｏｎｄｅｒ群において炭酸ガス製剤が有効であるとの結果がでる確率（感度）と、横軸にｎｏｎＲｅｓｐｏｎｄｅｒ群において炭酸ガス製剤が有効ではないとの結果がでる確率（特異度）を１から減算した値（偽陽性率）がプロットされる。ＲＯＣ曲線に示される「真陽性（感度）」及び「偽陽性（１－特異度）」に関し、「真陽性（感度）」－「偽陽性（１－特異度）」が最大となる値（Ｙｏｕｄｅｎ ｉｎｄｅｘ）を基準値とすることができる。

本実施形態において、本発明のマーカーがポジティブマーカーである場合、被験者に由来する測定したマーカーの発現レベルがＲｅｓｐｏｎｄｅｒ群と同等又はそれよりも高い場合は、当該被験者は、鱗屑及び／又は角層水分量に対して炭酸ガス製剤が有効に作用する者、言い換えれば、炭酸ガス製剤は、当該被験者の鱗屑及び／又は角層水分量に対して有効（鱗屑改善効果有り、角層水分量増加効果有り）と評価される。あるいは、被験者に由来する測定したマーカーの発現レベルがｎｏｎＲｅｓｐｏｎｄｅｒ群より高い場合は、当該被験者は、同様に、鱗屑及び／又は角層水分量に対して炭酸ガス製剤が有効に作用する者と評価される。
一方、被験者に由来する測定したマーカーの発現レベルがｎｏｎＲｅｓｐｏｎｄｅｒ群と同等又はそれよりも低い場合や、Ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ群よりも低い場合は、当該被験者は、鱗屑及び／又は角層水分量に対して炭酸ガス製剤が有効に作用する者とは評価されない。言い換えれば、炭酸ガス製剤は、当該被験者の鱗屑及び／又は角層水分量に対して有効でない（鱗屑改善効果なし、角層水分量増加効果なし）と評価される。

本実施形態において、本発明のマーカーがネガティブマーカーである場合、被験者に由来する測定したマーカーの発現レベルがＲｅｓｐｏｎｄｅｒ群と同等又はそれよりも低い場合は、当該被験者は、鱗屑及び／又は角層水分量に対して炭酸ガス製剤が有効に作用する者、言い換えれば、炭酸ガス製剤は、当該被験者の鱗屑及び／又は角層水分量に対して有効（鱗屑改善効果有り、角層水分量増加効果有り）と評価される。あるいは、被験者に由来する測定したマーカーの発現レベルがｎｏｎＲｅｓｐｏｎｄｅｒ群より低い場合は、当該被験者は、同様に、鱗屑及び／又は角層水分量に対して炭酸ガス製剤が有効に作用する者と評価される。
一方、被験者に由来する測定したマーカーの発現レベルがｎｏｎＲｅｓｐｏｎｄｅｒ群と同等又はそれよりも高い場合や、Ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ群よりも高い場合は、当該被験者は、鱗屑及び／又は角層水分量に対して炭酸ガス製剤が有効に作用する者とは評価されない。言い換えれば、炭酸ガス製剤は、当該被験者の鱗屑及び／又は角層水分量に対して有効でない（鱗屑改善効果なし、角層水分量増加効果なし）と評価される。

本発明に方法によって、炭酸ガス製剤は、被験者の鱗屑又は角層水分量に対して有効（鱗屑改善効果有り、角層水分量増加効果有り）と評価されれば、当該被験者を炭酸ガス製剤の適用に適した被験者として選択することができる。反対に、炭酸ガス製剤は、被験者の鱗屑又は角層水分量に対して有効でない（鱗屑改善効果なし、角層水分量増加効果なし）と評価されれば、当該被験者を炭酸ガス製剤の適用から除外することができる。

本発明の方法の一実施形態においては、本発明のマーカーの発現レベルが、基準値に対して好ましくは９１％以下、より好ましくは８３％以下、さらに好ましくは７７％以下であれば、当該マーカーの発現レベルは基準値より低いと判断され得、本発明のマーカーの発現レベルが、基準値に対して好ましくは１１０％以上、より好ましくは１２０％以上、さらに好ましくは１３０％以上であれば、当該マーカーの発現レベルは基準値より高いと判断され得る。あるいは、被験者由来のマーカーの発現レベルと基準値との差異は、例えば両者が統計学的に有意に異なるか否かによって判断することができる。
標的遺伝子として複数種の遺伝子を用いる場合は、一定割合、例えば５０％以上、好ましくは７０％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは１００％の遺伝子又はその発現産物の発現レベルが基準値を満たすか否かに基づいて、被験者の鱗屑又は角層水分量に対する炭酸ガス製剤の有効性を評価することができる。

（３．評価キット）
さらなる一態様において、本発明は、前記２．で説明した本発明の方法にしたがって被験者の鱗屑又は角層水分量に対する炭酸ガス製剤の有効性を評価するためのキットを提供する。
一実施形態において、本発明のキットは、上述した本発明のマーカーの発現レベルを測定するための試薬又は器具を備える。例えば、本発明のキットは、本発明の核酸マーカーを増幅又は定量するための試薬（例えば、逆転写酵素、ＰＣＲ用試薬、プライマー、プローブ、シーケンシング用アダプター配列等）、又は本発明のタンパク質マーカーを定量するための試薬（例えば、免疫学的測定のための試薬、抗体等）を備え得る。好ましくは、本発明のキットは、本発明の核酸マーカーと特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチド（例えば、ＰＣＲ用のプライマー、又はプローブ）、あるいは、本発明のタンパク質マーカーを認識する抗体を含有する。好ましくは、本発明のキットは、本発明のマーカーの発現レベルを評価するための指標又はガイダンスを備える。例えば、本発明のキットは、被験者の鱗屑又は角層水分量に対する炭酸ガス製剤の有効性を評価するために各マーカーの発現レベルの基準値を説明するガイダンス等を備え得る。また、本発明のキットは、生体試料採取デバイス（例えば、前記のＳＳＬ吸収性素材又はＳＳＬ接着性素材）、生体試料から本発明のマーカーを抽出するための試薬（例えば核酸精製用試薬）、生体試料採取後の試料採取デバイスの保存剤や保存用容器等をさらに備えていてもよい。

実施例１
１）試験品
表３に示す処方成分のうち、成分（１）、（２）及び（１５）を６０℃で撹拌し、さらに（１０）を混合して撹拌した。その後、残りの成分を加え、撹拌して均一にし、２５℃まで冷却して、原液を得、これを「プラセボクリーム」（プラセボ製剤）とした。得られた原液を耐圧容器に充填し、密封後、炭酸ガスを充填して「炭酸ガス含有クリーム」（炭酸ガス製剤）とした。これら両製剤を試験品として、以下のヒト試験を実施した。

２）ヒト試験
本試験は、ヘルシンキ宣言に基づく倫理的原則を遵守して実施した。
試験参加者候補として２５～５０歳の健常男性５０名を対象に、左右頬部の皮膚表面を観察し、左右両頬に鱗屑を認めた２０名を被験者として選定した。選定した被験者に、プラセボクリーム（プラセボ製剤）及び炭酸ガス含有クリーム（炭酸ガス製剤）を顔全面の左右半顔のいずれか一方ずつに、１日２回（朝と夜の洗顔後）、連続１週間塗布させた。１回の塗布量について、予め被験者には、プラセボクリームは３プッシュ分、炭酸ガス含有クリームは１００円玉大と説明し、塗布量がいずれも０．５ｇとなるよう規定した。使用前及び使用１週後に物性値測定、皮膚表面画像取得を行った。尚、使用１週後の測定日は、測定２時間前に試験品を塗布させた。

３）物性値測定とｎｏｎＲｅｓｐｏｎｄｅｒ群及びＲｅｓｐｏｎｄｅｒ群の選別
試験品使用前及び使用１週後において、全顔を洗顔した後、環境可変室（温度２０℃±２℃・湿度４０±５％）にて、１５分間以上の馴化を行った。その後、左右頬部について、ＳＫＩＣＯＮ ２００－ＥＸ（ＩＢＳ）を用いて角層水分量の指標となるＣｏｎｄｕｃｔａｎｃｅを測定し、Ｖｉｓｉｏｓｃａｎ ＶＣ９８（Ｃｏｕｒａｇｅ ＋ Ｋｈａｚａｋａ Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ ＧｍｂＨ）を用いて皮膚表面拡大画像を取得した。更に取得した皮膚表面拡大画像から、ＳＥＬＳ （Ｓｕｒｆａｃｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｌｉｖｉｎｇ Ｓｋｉｎ）プログラムを用いて鱗屑の指標となるＳＥｓｃ値を算出した。
得られたＣｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ及びＳＥｓｃの値について、プラセボクリーム（プラセボ製剤）及び炭酸ガス含有クリーム（炭酸ガス製剤）塗布前後の変化量をそれぞれ算出した。この時、プラセボクリームと比較して炭酸ガス含有クリーム塗布時にＣｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ又はＳＥｓｃの各変化量の少なくとも一方がより改善していた被験者をＲｅｓｐｏｎｄｅｒ群（１２名）、どちらも改善が認められない群をｎｏｎＲｅｓｐｏｎｄｅｒ群（８名）と定義した。
ｎｏｎＲｅｓｐｏｎｄｅｒ群及びＲｅｓｐｏｎｄｅｒ群の（ａ）鱗屑指標であるＳＥｓｃ値の変化量、（ｂ）角質水分量の指標であるＣｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ値の変化量を図１に示す。

４）ＳＳＬ採取、ＲＮＡ抽出、前処理、シーケンシング
試験品使用前において、前記物性値測定における洗顔の前に、左右の顔半面よりあぶら取りフィルム（５．０ｃｍ×８．０ｃｍ、白元アース）により皮脂（ＳＳＬ）を採取した。採取されたＳＳＬを含む脂取りフィルムを適当な大きさに裁断した後、ＱＩＡｚｏｌ Ｌｙｓｉｓ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて、付属のプロトコルに準じてＲＮＡを水層に移行させた。該水層から、ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）のＲＮＡ抽出用スピンカラムを用いて、付属のプロトコルに従いＲＮＡを抽出した。抽出されたＲＮＡを、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ＶＩＬＯ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｋｉｔ（ライフテクノロジーズジャパン株式会社）を用いて４２℃、９０分間逆転写し、ｃＤＮＡを合成した。逆転写反応のプライマーには、キットに付属しているランダムプライマーを使用した。得られたｃＤＮＡから、マルチプレックスＰＣＲにより２０８０２遺伝子に由来するＤＮＡを含むライブラリーを調製した。マルチプレックスＰＣＲは、Ｉｏｎ ＡｍｐｌｉＳｅｑＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｋｉｔ（ライフテクノロジーズジャパン株式会社）を用いて、［９９℃、２分→（９９℃、１５秒→６２℃、１６分）×２０サイクル→４℃、Ｈｏｌｄ］の条件で行った。得られたＰＣＲ産物は、Ａｍｐｕｒｅ ＸＰ（ベックマン・コールター株式会社）で精製した後に、バッファーの再構成、プライマー配列の消化、アダプターライゲーションと精製、及び増幅を行い、ライブラリーを調製した。調製したライブラリーをＩｏｎ ５４０ Ｃｈｉｐにローディングし、Ｉｏｎ Ｓ５／ＸＬシステム（ライフテクノロジーズジャパン株式会社）を用いてシーケンシングした。シーケンシングで得られた各リード配列をヒトゲノムのリファレンス配列であるｈｇ１９ ＡｍｐｌｉＳｅｑ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ ＥＲＣＣ ｖ１を用いて遺伝子マッピングすることで各リード配列の由来する遺伝子を決定した。

５）データ解析
得られた各被験者の試験品塗布前のＳＳＬ由来のＲＮＡの発現量のデータ（リードカウント値）において、ＤＥＳｅｑ２という手法を用いて補正した。但し、全被験者の発現量データのうち９０％以上の被験者で欠損値ではない発現量データが得られている遺伝子のみ以下の解析に使用した。解析には、ＤＥＳｅｑ２法を用いて補正されたカウント値（Ｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ ｃｏｕｎｔ値）を用いた。

６）ＲＮＡ発現解析
取得された各被験者のＳＳＬ由来のＲＮＡ発現量（Ｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ ｃｏｕｎｔ値）を基に、試験品塗布前のＲｅｓｐｏｎｄｅｒ群及びｎｏｎＲｅｓｐｏｎｄｅｒ群においてＳｔｕｄｅｎｔ’ｓ ｔ ｔｅｓｔの結果、ｐ＜０．０５を満たすＲＮＡ（発現変動遺伝子）として、前記表１Ａ、Ｂの１７５遺伝子抽出した。

７）相関解析
ＲＮＡ発現解析によって同定された１７５遺伝子について、発現量と、炭酸ガス製剤塗布部位におけるＣｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ値及びＳＥｓｃ値の変化量（ΔＣｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ値及びΔＳＥｓｃ値）とのピアソン相関解析を行った。その結果、ｐ＜０．０５を満たす、ΔＣｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ値又はΔＳＥｓｃ値と相関性の高いＲＮＡが抽出された。
該抽出されたΔＣｏｎｄｕｃｔａｎｃｅと相関する遺伝子を表４に、ΔＳＥｓｃ値と相関する遺伝子を表５に示す。また、図２及び図３に、各相関する遺伝子発現量と、ΔＣｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ又はΔＳＥｓｃ値との相関を表した散布図を示す。

表４及び図２に示すとおり、ＰＳＭＡ７、ＳＮＯＲＡ５Ａ、ＶＰＳ３７Ｃ、Ｃ２２ｏｒｆ２８、ＲＡＰＧＥＦ２、ＮＴ５Ｃ２、ＨＳＰＡ４及びＳＮＯＲＤ９４の８種の遺伝子は、炭酸ガス製剤塗布部位のΔＳＥｓｃ値と有意に正の相関又は負の相関を示すことが見出された。
また、表５及び図３に示すとおり、ＨＥＲＣ３、ＢＳＧ及びＫＨＮＹＮの３種の遺伝子は、炭酸ガス製剤塗布部位のΔＣｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ値と有意に正の相関又は負の相関を示すことが見出された。

８）予測モデル構築
試験品塗布前にＲｅｓｐｏｎｄｅｒ群とｎｏｎＲｅｓｐｏｎｄｅｒ群との間で発現変動が確認された１７５遺伝子の発現量データを、負の二項分布に従うＲＰＭ値から正規分布に近似するため、整数１を加算した底２の対数値（Ｌｏｇ₂（ＲＰＭ＋１）値）に変換した。得られた発現量データのＬｏｇ₂（ＲＰＭ＋１）値を説明変数とし、Ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ群かｎｏｎＲｅｓｐｏｎｄｅｒ群かを目的変数として判別する予測モデルを構築した。Ｒ言語の“ｃａｒｅｔ”パッケージにおいてランダムフォレストのアルゴリズムをメソッドとして指定し、１回の決定木の構築に用いる変数の数（ｍｔｒｙ値）の最適値をチューニングした。チューニングによって決定したｍｔｒｙ値を用いて、ランダムフォレストのアルゴリズムを実行し、推定誤答率（ＯＯＢ ｅｒｒｏｒ ｒａｔｅ）を算出した。

結果を表６に示す。表６のとおり、推定誤答率１５％（正答率８５％）であり、上記１７５遺伝子の発現量データに基き、炭酸ガス製剤の有効性をその塗布前に予測可能であることが確認された。

また、１７５遺伝子の中でも物性値の変化量と相関が認められた上記１１遺伝子を用いて、同様の方法でＲｅｓｐｏｎｄｅｒ群かｎｏｎＲｅｓｐｏｎｄｅｒ群かを判別する予測モデルを構築し、推定誤答率（ＯＯＢ ｅｒｒｏｒ ｒａｔｅ）を算出した。

結果を表７に示す。表７のとおり、推定誤答率１５％（正答率８５％）であり、上記１１種の遺伝子の発現量データに基き、炭酸ガス製剤の有効性をその塗布前に予測可能であることが確認された。

Claims (14)

1. 被験者から採取された皮膚表上脂質について、以下の遺伝子：ＰＳＭＡ７、ＳＮＯＲＡ５Ａ、ＶＰＳ３７Ｃ、Ｃ２２ｏｒｆ２８、ＲＡＰＧＥＦ２、ＮＴ５Ｃ２、ＨＳＰＡ４及びＳＮＯＲＤ９４、並びに当該遺伝子の発現産物からなる群より選択される少なくとも１種の発現レベルを測定する工程を含む、当該被験者における鱗屑の改善に対する炭酸ガス製剤の有効性を検出する方法。
2. さらに、ＨＥＲＣ３、ＢＳＧ及びＫＨＮＹＮの３種、並びに下記表１に示す１６４種の遺伝子又はその遺伝子の発現産物からなる群より選択される少なくとも１種の発現レベルを測定する工程を含む、請求項１記載の方法。
   

   

   
3. 前記遺伝子又はその発現産物の発現レベルに基づいて前記被験者における鱗屑の改善に対する炭酸ガス製剤の有効性を検出することを含む請求項１又は２記載の方法。
4. 請求項１～３のいずれか１項記載の方法により有効性ありと検出された被験者を、炭酸ガス製剤の使用により鱗屑が改善する被験者として選択する方法。
5. 被験者から採取された皮膚表上脂質について、以下の遺伝子：ＨＥＲＣ３、ＢＳＧ及びＫＨＮＹＮ、並びに当該遺伝子の発現産物からなる群より選択される少なくとも１種の発現レベルを測定する工程を含む、当該被験者における角層水分量の改善に対する炭酸ガス製剤の有効性を検出する方法。
6. さらに、ＰＳＭＡ７、ＳＮＯＲＡ５Ａ、ＶＰＳ３７Ｃ、Ｃ２２ｏｒｆ２８、ＲＡＰＧＥＦ２、ＮＴ５Ｃ２、ＨＳＰＡ４及びＳＮＯＲＤ９４の８種、並びに上記表１に示す１６４種の遺伝子又はその遺伝子の発現産物からなる群より選択される少なくとも１種の発現レベルを測定する工程を含む、請求項５記載の方法。
7. 前記遺伝子又はその発現産物の発現レベルに基づいて前記被験者における角層水分量の改善に対する炭酸ガス製剤の有効性を検出することを含む請求項５又は６記載の方法。
8. 請求項５～７のいずれか１項記載の方法により有効性ありと検出された被験者を、炭酸ガス製剤の使用により角層水分量が改善する被験者として選択する方法。
9. 前記遺伝子又はその発現産物の発現レベルがｍＲＮＡの発現量である請求項１～８のいずれか１項記載の方法。
10. 以下の遺伝子：ＰＳＭＡ７、ＳＮＯＲＡ５Ａ、ＶＰＳ３７Ｃ、Ｃ２２ｏｒｆ２８、ＲＡＰＧＥＦ２、ＮＴ５Ｃ２、ＨＳＰＡ４及びＳＮＯＲＤ９４、並びに当該遺伝子の発現産物からなる群より選択される少なくとも１種を含む、鱗屑の改善に対する炭酸ガス製剤の有効性を検出するためのマーカー。
11. さらに、ＨＥＲＣ３、ＢＳＧ及びＫＨＮＹＮの３種、並びに上記表１に示す１６４種の遺伝子又はその遺伝子の発現産物からなる群より選択される少なくとも１種を含む、請求項１０記載のマーカー。
12. 以下の遺伝子：ＨＥＲＣ３、ＢＳＧ及びＫＨＮＹＮ、並びに当該遺伝子の発現産物からなる群より選択される少なくとも１種を含む、角層水分量の改善に対する炭酸ガス製剤の有効性を検出するためのマーカー。
13. さらに、ＰＳＭＡ７、ＳＮＯＲＡ５Ａ、ＶＰＳ３７Ｃ、Ｃ２２ｏｒｆ２８、ＲＡＰＧＥＦ２、ＮＴ５Ｃ２、ＨＳＰＡ４及びＳＮＯＲＤ９４の８種、並びに上記表１に示す１６４種の遺伝子又はその遺伝子の発現産物からなる群より選択される少なくとも１種を含む、請求項１２記載のマーカー。
14. 請求項１０～１３のいずれか１項記載のマーカーである核酸と特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチド、又は請求項１０～１３のいずれか１項記載のマーカーであるタンパク質を認識する抗体を含有する、請求項１～９のいずれか１項記載の方法に用いられるキット。

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