JP2023016483A - 錠剤 - Google Patents

Abstract

【課題】本発明の課題は、キトサンと他の有用物質を含有する錠剤において、キトサン及び共に配合された他の有用物質の錠剤からの溶出が向上した錠剤を提供することを課題とする。【解決手段】上記課題を解決するために、（Ａ）有用物質と、（Ｂ）キトサンとを含有し、複数の層から形成される錠剤であって、前記（Ａ）成分と前記（Ｂ）成分とがそれぞれ別々の層に含有されることを特徴とする錠剤が提供される。本発明によれば、キトサンと他の有用物質を含有する錠剤において、キトサン及び共に配合された他の有用物質の錠剤からの溶出が向上した錠剤を提供することができる。【選択図】図１

Description

本発明は、キトサンと有用物質とを含有する錠剤に関するものである。より具体的には、キトサンと有用物質とを含有し、複数の層から形成される錠剤に関するものである。

キトサンは、カニ、エビなどの甲殻類の甲羅及びイカの甲などを形成するキチンをアルカリ処理することで得られる動物性の食物繊維である。キトサンはその生理作用として、脂肪吸収抑制作用、コレステロール上昇抑制作用及び血圧上昇抑制作用などの多種多様な機能を有することが報告されており、近年、医薬品分野及び健康食品分野などで広範囲に利用されている。

例えば、特許文献１には、キトサンにマメ科植物カワラケツメイより水又はアルコールなどの有機溶媒によって抽出した有効成分を含有する肥満及び生活習慣病の抑制剤が記載されている。

また、特許文献２には、消化酵素活性阻害作用を有する成分、キノコキトサン複合多糖体成分、及びミネラルバランスを整え、インスリンの産生及びインスリン受容体の活性化作用を有する成分を含有する健康食品用組成物が記載されている。

特開２００５－３４３８０８号公報 特開２００６－２０６０６号公報

上記に示した特許文献に見られるように、キトサンを製剤に配合する場合には、他の有用物質が共に配合されることが一般的である。しかし、本発明者らが行った実験の結果、キトサンと他の有用物質を含有する製剤を生体に投与した場合においては、共に配合された他の有用物質の生体内での吸収が抑制されるという問題が確認され、さらにその問題が、キトサンにより他の有用物質の溶出が抑制されることに起因することが確認された。また、キトサン自体の溶出も他の有用物質が共に配合されることにより抑制されることが確認された。

キトサンは胃内で速やかに溶出した場合は、粘度が出て、腸内の中性領域で緩いゲルを形成しその効果を発揮するが、胃内での溶出が不十分だとキトサンの持つ本来の効果を発揮できない事が知られている。
上記の従来の知見を参考にして、本発明者らは、キトサンによる脂質の吸収抑制効果についてラットに対する油脂添加による血中トリグリセライドの吸収性試験を実施することにより確認した。試験の結果、キトサンを含有する通常のハードカプセル剤に対して、胃内での溶出がない腸溶性ハードカプセル剤の方が脂質の吸収抑制効果は低くなるという結果が得られ、これによりキトサンの溶出性による脂質の吸収抑制効果へ影響が確認されている。

本発明は上記の知見に基づきなされたものであり、即ち、本発明の課題は、キトサンと他の有用物質を含有する錠剤において、キトサン及び共に配合された他の有用物質の錠剤からの溶出が向上した錠剤を提供することを課題とする。

本発明者は、上記課題について鋭意検討した結果、有用物質と、キトサンとを含有する錠剤において、錠剤を複数の層から形成される錠剤とし、有用物質とキトサンとをそれぞれ別々の層に含有させることにより、有用物質の錠剤からの溶出を向上し得るという知見を見出し、本発明を完成した。
さらに、キトサン自体の溶出性も向上することから、有用物質及びキトサンのバイオアベイラビリティも向上し得ることを見出した。

すなわち、本発明は、以下の［１］～［４］を提供する。
［１］（Ａ）有用物質と、（Ｂ）キトサンとを含有し、複数の層から形成される錠剤であって、
前記（Ａ）成分と前記（Ｂ）成分とがそれぞれ別々の層に含有されることを特徴とする錠剤。
本発明によれば、有用物質の錠剤からの溶出が向上した錠剤を得ることができる。
［２］前記（Ａ）有用物質が藤茶エキス、アンペロプシン、ポリメトキシフラボン、ピリドキシン塩酸塩、リボフラビン、及びケルセチン配糖体からなる群から選択される１種以上であることを特徴とする、［１］に記載の錠剤。
本特徴によれば、藤茶エキス、アンペロプシン、ポリメトキシフラボン、ピリドキシン塩酸塩、リボフラビン、ケルセチン配糖体の錠剤からの溶出が向上した錠剤を得ることができる。
［３］錠剤中の（Ａ）成分を含む層の質量に対する（Ｂ）成分を含む層の質量の比（Ｂ／Ａ）が０．１以上１．０以下であることを特徴とする、［１］又は［２］に記載の錠剤。
本特徴によれば、有用物質の錠剤からの溶出がより向上した錠剤を得ることができる。
［４］前記錠剤が積層錠剤であることを特徴とする、［１］～［３］のいずれかに記載の錠剤。
本特徴によれば、有用物質の錠剤からの溶出がさらに向上した錠剤を得ることができる。

本発明によれば、キトサンと他の有用物質を含有する錠剤において、キトサン及び共に配合された他の有用物質の錠剤からの溶出が向上した錠剤を提供することができる。

有用物質とキトサンを含有する普通錠剤において、キトサンの含有量に対しての有用物質の溶出を評価した結果を示す。 有用物質とキトサン若しくはゲル化剤とを含有する普通錠剤における有用物質の溶出を評価した結果を示す。 有用物質とキトサンとを含有する積層錠剤、普通錠剤、及びハードカプセルにおける有用物質の溶出を評価した結果を示す。 有用物質とキトサンとを含有する積層錠剤、普通錠剤、及びハードカプセルにおけるキトサンの溶出を評価した結果を示す。 有用物質とキトサンとを含有する製剤を生体に投与した際の、有用物質の薬物動態試験の結果を示す。 有用物質とキトサンとを含有する製剤を生体に投与した際の、有用物質の血中濃度を評価した結果を示す。 有用物質とキトサンとを含有する積層錠剤、普通錠剤、及びハードカプセルにおける、有用物質の溶出を５種類の有用物質を用いて評価した結果を示す。 有用物質とキトサンとを含有する積層錠剤において、層の比率の有用物質とキトサンの溶出に与える影響について評価した結果を示す。

［錠剤］
本発明の錠剤は、（Ａ）有用物質と、（Ｂ）キトサンとを含有し、複数の層から形成される錠剤であって、前記（Ａ）成分と前記（Ｂ）成分がそれぞれ別々の層に含有されることを特徴とする。

本発明の錠剤は有用物質とキトサンとを含有するが、キトサンと他の有用物質を含有する製剤を生体に投与した場合においては、共に配合された他の有用物質の生体内での吸収が抑制されるという問題があることが、さらにその問題が、キトサンにより他の有用物質の溶出が抑制されることに起因することが本発明者らにより確認されている。本発明においては、錠剤を複数の層から形成し、有用物質とキトサンとを別々の層に含有することにより、各々の粉末組成物から形成された層が、混合されることなく崩壊するため、有用物質とキトサンとの相互作用を抑制することができる。これにより、キトサンと共に配合された他の有用物質の溶出を向上することができ、生体内における吸収性を向上することができる。さらに、キトサン自体の溶出性も向上することから、有用物質及びキトサンのバイオアベイラビリティを向上することができる。

＜錠剤の形状＞
本発明の錠剤は、複数の層から形成される錠剤であり、（Ａ）有用物質と（Ｂ）キトサンとが別々の層に含有される。このような錠剤としては、特に制限されないが、有用物質を含有する第１層とキトサンを含有する第２層の２層を有する錠剤、又はさらにこれら２層以外の層を有する錠剤などが挙げられる。これら別々の層は、接触していてもよいし、間に中間層が設けられていてもよい。有用物質を含有する第１層は、（Ｂ）キトサンを実質的に含有しない。また、キトサンを含有する第２層は（Ａ）有用物質を実質的に含有しない。なお、実質的に含有しないとは、各層中の含有量が０．５質量％以下であることを示す。

複数の層から形成される錠剤の種類としては、特に制限されないが、積層錠剤、有核錠剤などが挙げられる。これらの複数の層から形成される錠剤においては、生体に投与された際に、各々の粉末組成物から形成された層が、混合されることなく崩壊するため、有用物質とキトサンとの相互作用を抑制することができる。このような効果は複数の層から形成される錠剤であれば得ることができるが、積層錠剤では各々の粉末組成物から形成された２以上の層が単純に積層されることにより錠剤が形成されており、互いの層が例えば一方が一方を包むなどの混合された構成でないため、より有用物質とキトサンとの相互作用を抑制することができ、顕著な効果を得ることができる。

積層錠剤の製造方法としては、医薬品、医薬部外品、獣医科製品、食品、サプリメント等の分野で従来用いられる方法を用いることができる。２層からなる積層錠剤の場合は、例えば、打錠機の臼に装填した下層材料を杵によって打錠して下層を形成し、次に当該臼内の下層の上に装填した上層材料を杵によって打錠して下層の上に上層を接着させて形成することにより、１台の打錠機の連続する打錠操作によって作製することができる。上記の製造方法は下層の充填後の打錠を省き、下層材料を充填後、上層材料を充填し打錠することにより行うこともできる。なお、上記の上層、下層は、有用物質を含有する第１層とキトサンを含有する第２層のいずれか一方を任意に用いることができる。

本発明の錠剤において、錠剤中の（Ａ）成分を含む層の質量に対する（Ｂ）成分を含む層の質量の比（Ｂ／Ａ）は、特に制限されないが、例えば、０．０５以上２．０以下である。下限値としては、好ましくは０．１以上であり、より好ましく０．２以上である。上限値としては、好ましくは１．０以下であり、より好ましくは０．６以下であり、さらに好ましくは０．４以下である。

錠剤の形状は、特に限定されるものではなく、例えば、円形錠、楕円形錠、花形錠などが挙げられる。また、錠剤は、必要に応じて２分割、４分割するための１本から２本の割線を設けることができる。

錠剤の大きさは、特に限定されるものではなく、好ましくは直径が３ｍｍ以上２５ｍｍ以下である。下限値としては、より好ましくは４ｍｍ以上であり、更に好ましくは５ｍｍ以上であり、特に好ましくは６ｍｍ以上である。一方、上限値としては、より好ましくは２０ｍｍ以下であり、更に好ましくは１５ｍｍ以下であり、特に好ましくは１０ｍｍ以下である。

錠剤の厚さは、特に限定されるものではなく、好ましくは１．０ｍｍ以上１０ｍｍ以下である。下限値としては、より好ましくは１．５ｍｍ以上であり、更に好ましくは２．０ｍｍ以上であり、特に好ましくは２．５ｍｍ以上である。一方、上限値としては、より好ましくは８ｍｍ以下であり、更に好ましくは６ｍｍ以下である。
錠剤の大きさ、厚さを上記範囲とすることにより、服用のしやすい製剤とすることができる。

＜（Ａ）有用物質＞
有用物質は、特に限定されるものではなく、例えば、医薬品、医薬部外品、ＯＴＣ医薬品、漢方薬、生薬、化粧品、健康食品、サプリメント、動物用医薬品などに用いられる医薬成分、機能性成分などが用いられる。
医薬成分、機能性成分の具体例としては、例えば、脂質調整剤、抗糖尿病剤、食欲抑制剤、降圧剤、血管拡張剤、βアドレナリン受容体遮断薬、強心イオンチャンネル剤、不整脈治療剤、抗凝血剤、止血剤、抗炎症剤、鎮痛剤、抗アレルギー剤、免疫抑制剤、コルチコステロイド、ステロイド、抗腫瘍剤、交感神経刺激剤、副交感神経刺激剤、抗ムスカリン様作動剤、ドーパミン作動剤、止痢剤、制吐剤、鎮静剤、収斂剤、精神安定剤、抗鬱剤、抗癲癇剤、抗不安剤、催眠剤、覚醒剤、気管支拡張剤、鎮咳剤、利尿薬、筋肉弛緩剤、ビスホスホネート、抗生物質、抗ウイルス剤、診断用剤、画像診断用剤、放射線薬剤、ラピジン、ノビレチン、スルフォラファン、アンペロプシン、ポリメトキシフラボン、ピリドキシン塩酸塩、リボフラビン、ケルセチン配糖体、クルクミン類、レスベラトロール類、ゲラニオール、オサジン、イソリキリチゲニン、ヒドロキシチロソール、２５－ヒドロキシコレカルシフェロール、コエンザイムＱ－１０、Ｓ－アデノシルメチオニン、アントシアニン、アスコルビン酸２－グルコシド、プロテオグリカン、Ｎ－アセチルグルコサミン、コラーゲン、藤茶エキス、ビルベリーエキス、ニンジン末、ゴカヒ、カンゾウ、シャクヤク、ケイヒ、ウイキョウ、シュクシャ、ビフィズス菌、乳酸菌、ビタミンＡやビタミンＢ、ビタミンＣなどのビタミン、カルシウムやマグネシウム、鉄などのミネラル、ポリデキストロースなどの食物繊維、ポリフェノール、タンパク質、アミノ酸、オリゴ糖、レシチン、カロテノイド、クロロフィルなどが挙げられる。これらの中でも藤茶エキス、アンペロプシン、ポリメトキシフラボン、ピリドキシン塩酸塩、リボフラビン、ケルセチン配糖体が好ましい。また、これらの医薬成分、機能性成分は、単独で配合してもよいし、二種以上を組み合わせて配合してもよい。

＜キトサン＞
本発明の錠剤はキトサンを含有する。キトサンは、種々の生理活性を有し、その生理活性を得ることを目的として配合される。生理活性としては、例えば、脂肪吸収抑制作用、コレステロール上昇抑制作用及び血圧上昇抑制作用などが挙げられる。

本発明でいうキトサンとは、β－１，４－ポリグルコサミン構造を基本単位とする多糖類である。キトサンは一般的に、１，４－ポリ－Ｎ－アセチルグルコサミン構造を基本単位とする多糖類であるキチンを脱アセチル化して得ることができる。

キトサンは、一般的には、カニ、エビ、オキアミ等の甲殻類の甲皮、昆虫類の甲皮、イカの骨等を脱カルシウム処理し、除タンパク質処理し、そして得られたキチンを脱アセチル化処理して得ることができる。また、キノコ類、微生物からも得ることができる。
本発明におけるキトサンは、いずれの原料から得られたキトサンをも用いることができるが、食品として摂取した場合の安全性が明らかであり、経済的にも優れていると考えられる点で、カニ、エビ等の甲殻類の甲皮を原料としたキトサンが好ましい。さらに、本発明の組成物に使用するキトサンは、ヒトが経口摂取した場合の安全性が明らかにされており、食品添加物等として実績があるものが好ましい。

本発明に用いられるキトサンの平均分子量は、キトサンの生理活性の観点から、１０万以上が好ましく、１００万以上がより好ましい。脱アセチル化度は、キトサンの生理活性の観点から、５０％以上が好ましく、６５％以上がより好ましく、８５％以上がさらに好ましい。

キトサンの分子量は、水系ＧＰＣカラムを用いたＧＰＣ法で測定することができる。ま
た、脱アセチル化度というときは、特に示さない限り、ポリビニル硫酸カリウム溶液によ
るコロイド滴定法により測定することができる。
本発明に用いるキトサンは、市販の食品添加物用として市販されているものであれば使
用可能である。このような製品としては、日本化薬フードテクノ株式会社製の食品用キト
サン（製品名：キトサミン 登録商標）を例示する。

錠剤中のキトサンの含有量は、キトサンの生理活性が得られる含有量であれば特に制限されないが、例えば、１質量％以上４０質量％以下である。下限値は、好ましく２質量％以上であり、より好ましくは５質量％以上である。上限値は、好ましくは３０質量％以下であり、より好ましくは２０質量％以下である。キトサンの含有量を上記範囲内とすることにより、キトサンの生理活性をより効果的に得ることができる。

＜その他の成分＞
固形製剤には、必要に応じて、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、保存剤、流動化剤、着色剤などの添加剤を配合してもよい。

賦形剤は、特に限定されるものではなく、例えば、微結晶セルロース、乳糖、白糖、マンニトール、グルコース、デンプン、リン酸カルシウム、硫酸カルシウムなどが挙げられる。また、これらの賦形剤は、単独で配合してもよいし、二種以上を組み合わせて配合してもよい。賦形剤を添加することにより、有用物質のかさを調節することができる。

結合剤は、特に限定されるものではなく、例えば、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、グルコース、白糖、乳糖、麦芽糖、デキストリン、ソルビトール、マンニトール、マクロゴール、パラフィン、アラビアゴム、ゼラチン、寒天、デンプン、プルランなどが挙げられる。また、これらの結合剤は、単独で配合してもよいし、二種以上を組み合わせて配合してもよい。結合剤を添加することにより、粉末成分に結合力を与え、安定な固形製剤を製造することができる。

崩壊剤は、特に限定されるものではなく、例えば、トウモロコシデンプン、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、微結晶セルロース、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、クロスポリビニルピロリドン、アルギン酸塩などが挙げられる。また、これらの崩壊剤は、単独で配合してもよいし、二種以上を組み合わせて配合してもよい。崩壊剤を添加することにより、固形製剤の崩壊を促進し、吸収性を向上させることができる。

滑沢剤は、特に限定されるものではなく、例えば、タルク、コロイダルシリカ、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、炭酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、パルミチン酸、ステアリルフマル酸ナトリウム、ワックス類、硬化植物油、脂肪、ポリエチレングリコールなどが挙げられる。また、これらの滑沢剤は、単独で配合してもよいし、二種以上を組み合わせて配合してもよい。滑沢剤を添加することにより、錠剤の製造時に、スティッキングなどの打錠障害の発生を抑制することができる。

以下、本発明の実施例について述べるが、本発明はこれらの実施例のみに限定されるものではなく、本発明の技術的思想内において様々な変形が可能である。

（１）試験１ 有用物質の錠剤からの溶出に対するキトサンの影響
有用物質とキトサンとを含有する錠剤におけるキトサン濃度の有用物質の溶出に与える影響について、表２に示す試験例１～６の普通錠剤を製造し、溶出試験により評価した。本試験では有用物質として、アンペロプシンを含有する藤茶エキスを用いた。なお、実施例で用いた原料を以下の表１に示す。

（普通錠剤の製造）
以下の手順で試験例１～６の普通錠剤を製造した。
表２の組成の粉末組成物を１０分間混合し、打錠用粉末とした。打錠用粉末を、単発打錠機（岡田精工社製）により杵サイズφ８ｍｍ、Ｒ１０、打錠圧１０００ｋｇｆで打錠することで、直径約８ｍｍ、重さ３００ｍｇの普通錠剤を得た。

（溶出試験）
製造した製剤について、ＮＴＲ－６４００Ａ（富山産業社製）を用いて日本薬局方一般試験法溶出試験法のパドル法による溶出試験を行った。
試験液（日本薬局方溶出試験１液（ｐＨ１．２））の液量は９００ｍＬとし、パドル回転数５０ｒｐｍにて、試験開始０分後、試験開始０分後、１０分後、２０分後、３０分後、４０分後、６０分後、９０分後、１２０分後に溶出試験液から２００μＬを採取した。
測定試料に含まれる錠剤から溶出した藤茶エキスに含まれるアンペロプシン（ＡＭＰ）の溶出濃度は、ＵＶ測定器ＵＶ－１８００（島津製作所社製）を用いて、２９０ｎｍの吸光度から算出した。

試験の結果、図１に示すように、キトサンは、特に２．８質量％以上の含有量のキトサンは、錠剤に共に配合した有用物質の溶出性を大きく低下させること確認された。

（２）試験２ キトサン以外のゲル化剤による有用物質の錠剤からの溶出に対する影響
キトサンとキトサン以外のゲル化剤の有用物質の溶出に与える影響について、表３に示す試験例７、８の普通錠剤を試験例１、５と同様の試験１に記載の方法で製造し、試験１と同様の溶出試験により評価した。

試験の結果、図２に示すように、他のゲル化物質と比較して、キトサンが特に共に配合した有用物質の溶出性を大きく低下させることが確認された。

（３）試験３ 剤型の溶出に与える影響
３種類の剤型（積層錠剤、普通錠剤、ハードカプセル）の製剤を用いて、有用物質の溶出に与える影響について、製剤を製造し、溶出試験により評価した。積層錠剤、ハードカプセルは以下の製法方法に従って製造した。

（ハードカプセルの製造）
以下の手順でハードカプセルを製造した。
表４（試験例９）の原料を量り取り、Ｖ型混合器（筒井理化学器械社製：ミクロ型透視式混合器）で１０分間混合した後、ステアリン酸カルシウムを加え、５分間混合し、カプセル充填用の粉末組成物を得た。次いで、カプセル充填機（ＰｒｏＦｉｌｌｅｒ １１００（カプスゲル社製））を使用し、１カプセル当り２５５ｍｇの粉末組成物を２号ＨＰＭＣカプセルに充填しハードカプセルを得た。

（積層錠剤の製造）
以下の手順で積層錠剤を製造した。
表５の組成の第１層用及び第２層用の粉末組成物を各々１０分間混合し、第１層用及び第２層用打錠用粉末とした。打錠は単発打錠機（岡田精工社製）、杵サイズφ８ｍｍ、Ｒ１０で行った。具体的には第一層用打錠用粉末を５０ｋｇｆの打錠圧で圧縮後、そこに第二層打錠用粉末を加えて１０００ｋｇｆの打錠圧で圧縮して作成し、直径約８ｍｍ、重さ３００ｍｇの積層錠剤を得た。

（溶出試験）
製造した製剤について、ＮＴＲ－６４００Ａ（富山産業社製）を用いて日本薬局方一般試験法溶出試験法のパドル法による溶出試験を行った。
試験液（日本薬局方溶出試験１液（ｐＨ１．２））の液量は９００ｍＬとし、パドル回転数５０ｒｐｍにて、試験開始０分後、試験開始０分後、１０分後、２０分後、３０分後、４０分後、６０分後、９０分後、１２０分後に溶出試験液から２００μＬを採取した。
測定試料に含まれる錠剤から溶出したアンペロプシンの溶出濃度は、ＵＶ測定器ＵＶ－１８００（島津製作所社製）を用いて、２９０ｎｍの吸光度から算出した。
測定試料に含まれる錠剤から溶出したキトサンの量は、キトサンアッセイキット（ＣＥＬＬ ＢＩＯＬＡＢＳ， ＩＮＣ．社製）を用いて製造者のマニュアルに従って測定した。

試験の結果、図３に示すように、積層錠剤である試験例１０においては、普通錠剤である試験例５、ハードカプセルである試験例９と比較して有用物質の高い溶出が確認された。
また、図４に示すように、積層錠剤である試験例１０においては、普通錠剤である試験例５、ハードカプセルである試験例９と比較してキトサンの高い溶出が得られることも確認された。このことは、積層錠剤とすることにより、有用物質及びキトサンのバイオアベイラビリティの高い製剤とすることができることを示している。

（４）試験４ 剤型の生体への投与時における効果
試験３で製造した試験例５、９、１０の製剤を下記の手順でヒトに投与して、投与後の有用物質の血中濃度の変化と薬物動態を評価する臨床試験を下記の手順で行った。試験の結果得られた薬物動態パラメーター（薬物血中濃度（ＡＵＣ）、最高血中濃度到達時間（Ｔｍａｘ）、最高血中濃度（Ｃｍａｘ））を表６に示す。積層錠剤のそれぞれの結果については分散分析（ＡＮＯＶＡ）を実施した後、有意差検定（Ｔｕｋｅｙ－ｋｒａｍｅｒ ｔｅｓｔ）を行った。

（臨床試験）
試験は非盲検無作為化３剤３期ラテン方格型クロスオーバー試験で行い９例（３例×３群）の被験者に対して行った。１０時間以上の空腹状態の被験者に対して製剤投与前の空腹時採血（０分）を行った後、各製剤４カプセルあるいは４錠（アンペロプシンとして１５４．６ｍｇ、キトサンとして１３３．６ｍｇ）を被験者に２００ｍＬの水とともに投与した。そして、製剤の投与後、３０分、６０分、１２０分、１８０分、２４０分に採血を行い被験者の血清サンプルを得た。

（血清サンプルの分析）
臨床試験で採取した血清サンプルを以下の手順で藤茶の有用成分であるアンペロプシン量を分析した。
先ず、血清の前処理として、血清１００ｕＬを溶解し、酵素液（Ｓｕｌｆａｔａｓｅ Ｔｙｐｅ Ｈ－１ ４ｍｇ／ｍＬ、０．１Ｍ 酢酸ナトリウム緩衝液）を１００ｕＬ添加し、３７℃で１時間インキュベートして脱グルクロン酸抱合処理を行った。次に、固層抽出プレート（９６ｗｅｌｌプレートＳＴＲＡＴＡ－Ｘ １０ｍｇ、島津ジーエルシー社製）を用いて製造者のマニュアルに従って徐蛋白処理を行い測定サンプルを得た。測定サンプルに対して以下の条件でＬＣ／ＭＳＭＳ分析を行った。
＜ＬＣ／ＭＳＭＳ分析条件＞
ＬＣ条件 （Ｍｅｔｈｏｄ：ＤＭＹ）
カラム：ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ ＨＳＳＴ３ １．８μｍ ２．１×１００ｍｍ
カラム温度：４０℃
移動相：Ａ液（０．１％ギ酸水溶液）：Ｂ液（０．１％ギ酸含アセトニトリル）＝８８：１２
流速：０．４ｍＬ／分
インジェクション量：２μＬ

試験の結果、図５、６及び表６に示すように、積層錠剤にすることで、ヒトに投与した場合における有用物質の薬物血中濃度（ＡＵＣ）が普通錠やハードカプセルと比較して有意に向上（ｖｓハードカプセル：Ｐ＝０．００５４、ｖｓ普通錠剤：Ｐ＝０．０３６）することが確認された。各採血時点における有用物質の血中濃度では、積層錠はハードカプセルに対しては、摂取後３０分、６０分、１２０分に、普通錠については摂取後１２０分に有用物質の血中濃度が有意に上昇していた（Ｐ＜０．０５）。最高血中濃度（Ｃｍａｘ）についても有意な上昇が確認された（ｖｓハードカプセル、ｖｓ普通錠剤：Ｐ＜０．０５）。

（５）試験５ 他の種類の有用物質を用いた場合のキトサンの影響と積層錠剤の効果
試験１～３で用いたアンペロプシンを含有する藤茶エキス以外の有用物質の５種類の有用物質、ポリメトキシフラボン、ピリドキシン塩酸塩、リボフラビン、ケルセチン配糖体、クルクミンを含有する表７、８の組成の製剤を試験３と同様に製造した、下記の溶出試験によりキトサンによる有用物質の溶出抑制、及び積層錠剤の効果について評価した。表中７、８中の有用物質はポリメトキシフラボン、ピリドキシン塩酸塩、リボフラビン、又はケルセチン配糖体、クルクミンのいずれかを示す。

（溶出試験）
製造した製剤について、ＮＴＲ－６４００Ａ（富山産業社製）を用いて日本薬局方一般試験法溶出試験法のパドル法による溶出試験を行った。
試験液（日本薬局方溶出試験１液（ｐＨ１．２））の液量は９００ｍＬとし、パドル回転数５０ｒｐｍにて、試験開始０分後、試験開始０分後、１０分後、２０分後、３０分後、４０分後、６０分後、９０分後、１２０分後に溶出試験液から２００μＬを採取した。
測定試料に含まれる錠剤から溶出した有用物質の濃度は、ＵＶ測定器ＵＶ－１８００（島津製作所社製）を用いて、各々の有用物質に設定した波長（ポリメトキシフラボン：２６０ｎｍ、リボフラビン：２６７ｎｍ、ピリドキシン塩酸塩：２９０ｎｍ、ケルセチン配糖体：３７０ｎｍ）の吸光度から算出した。

試験の結果、図７に示すように、試験した５種類の有用物質中、ポリメトキシフラボン、ピリドキシン塩酸塩、リボフラビン、ケルセチン配糖体においても、アンペロプシンと同様にキトサンによる溶出の抑制と積層錠剤とすることによる溶出の向上が観察された。

（６）試験６ 積層錠剤における層の比率の検討
有用物質とキトサンを含有する積層錠剤の適切な各々の層の比率を検討するために、有用物質を含有する第１層とキトサンを含有する第２層の比率を変化させた積層錠剤を製造し、有用物質の溶出への影響を評価した。

（積層錠剤の製造）
以下の手順で有用物質を含有する第１層に対するキトサンを含有する第２層の比率を１：１、２：１、４：１とした試験例１１～１３の積層錠剤を製造した。
表９の組成の第１層用及び第２層用の粉末組成物を各々１０分間混合し、第１層用及び第２層用打錠用粉末とした。打錠は単発打錠機（岡田精工社製）、杵サイズφ８ｍｍ、Ｒ１０で行った。具体的には第一層用打錠用粉末を５０ｋｇｆの打錠圧で圧縮後、そこに第二層打錠用粉末を加えて１０００ｋｇｆの打錠圧で圧縮して作成し、直径約８ｍｍ、重さ３００ｍｇの積層錠剤を得た。

（溶出試験）
製造した各々の製剤について、ＮＴＲ－６４００Ａ（富山産業社製）を用いて日本薬局方一般試験法溶出試験法のパドル法による溶出試験を行った。
試験液（日本薬局方溶出試験１液（ｐＨ１．２））の液量は９００ｍＬとし、パドル回転数５０ｒｐｍにて、試験開始６０分後に溶出試験液から２００μＬを採取した。
測定試料に含まれる錠剤から溶出したアンペロプシンの溶出濃度は、ＵＶ測定器ＵＶ－１８００（島津製作所社製）を用いて、２９０ｎｍの吸光度から算出した。
測定試料に含まれる錠剤から溶出したキトサンの量は、キトサンアッセイキット（ＣＥＬＬ ＢＩＯＬＡＢＳ， ＩＮＣ．社製）を用いて製造者のマニュアルに従って測定した。溶出量は積層錠剤（１：１）における溶出量を１００％として示した。

試験の結果、図８に示すように、有用物質を含有する第１層に対するキトサンを含有する第２層の比率を２：１とした試験例１２、４：１とした試験例１３の積層錠剤で１：１とした試験例１１と比較して有用物質の溶出の向上が確認された。特に４：１とした試験例１３で有用物質の溶出の大きな向上が確認された。

本発明によって、キトサンと他の有用物質を含有する錠剤において、キトサンと共に配合された他の有用物質の体内における吸収性が向上した錠剤を提供することができる。本発明は、医薬品、医薬部外品、獣医科製品、食品、サプリメント等さまざまな分野において活用できるものである。

Claims (4)

1. （Ａ）有用物質と、（Ｂ）キトサンとを含有し、複数の層から形成される錠剤であって、
   前記（Ａ）成分と前記（Ｂ）成分とがそれぞれ別々の層に含有されることを特徴とする錠剤。
2. 前記（Ａ）有用物質が藤茶エキス、アンペロプシン、ポリメトキシフラボン、ピリドキシン塩酸塩、リボフラビン、及びケルセチン配糖体からなる群から選択される１種以上であることを特徴とする、請求項１に記載の錠剤。
3. 錠剤中の（Ａ）成分を含む層の質量に対する（Ｂ）成分を含む層の質量の比（Ｂ／Ａ）が０．１以上１．０以下であることを特徴とする、請求項１又は２に記載の錠剤。
4. 前記錠剤が積層錠剤であることを特徴とする、請求項１～３のいずれかに記載の錠剤。
   
   

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