JP2022548085A - がんを治療するためのＴＧＦ－β ｓｉＲＮＡ及びＰＤＬ１ ｓｉＲＮＡの共送達 - Google Patents

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Abstract

抗ＴＧＦ－β ｓｉＲＮＡ分子及び抗ＰＤＬ１ ｓｉＲＮＡ分子を含有する組成物が提供される。がんを治療するためにこれらの組成物を使用する方法も提供される。抗ＴＧＦ－β ｓｉＲＮＡ分子は、抗ＴＧＦ－β１ ｓｉＲＮＡ分子を含有し得る。一方又は両方の分子は、長さ１９塩基対～２５塩基対のオリゴヌクレオチドを含んでいてもよく、一方又は両方は、それらの安定性を上昇させるために化学修飾されていてもよい。【選択図】図１

Description

関連出願への相互参照
本出願は、米国特許法第１１９条（ｅ）の下で２０２０年９月１２日出願の米国仮特許出願第６２／８９９，５３５号の優先権を主張するものであり、その全内容は、参照により本明細書中に組み込まれる。
技術分野
抗ＴＧＦ－β ｓｉＲＮＡ分子及び抗ＰＤＬ１ ｓｉＲＮＡ分子の組成物が、がんを治療するために組成物を使用するための方法と共に提供される。
がんの増殖及び進行は、生物体の免疫系の抑制を伴う。悪性細胞は、種々の機構を通して免疫監視を回避する。
増殖している腫瘍の存在下においては、腫瘍部位の周辺に、腫瘍増殖に対する炎症性応答によって誘導される、ＴＧＦ－βレベルの上方制御がしばしば生じる。増加したＴＧＦ－βは、腫瘍近くの組織及び腫瘍それ自体へのＴ細胞の浸透に対する障壁として作用する（Ｔａｕｒｉｅｌｌｏら、Ｎａｔｕｒｅ ５５４：５３８～５４３（２０１８）；Ｍａｒｉａｔｈａｓａｎら、Ｎａｔｕｒｅ ５５４：５４４～５４８（２０１８）を参照のこと）。結果として、Ｔ細胞は、抗原によって予備刺激して、腫瘍細胞を認識させそれらを死滅させることができない。
腫瘍細胞はまた、抗腫瘍免疫応答を抑制する免疫チェックポイント経路を活性化させる。このような経路の一例は、ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ１軸である。ＰＤ１受容体は、Ｔ細胞の表面上に存在し、ＰＤ－Ｌ１タンパク質は、多くの腫瘍細胞の表面上に存在する。ＰＤ１によるＰＤ－Ｌ１の結合は、腫瘍細胞を分解し、それを死滅させる酵素（グランザイムＢ及びその他）を放出するためのＴ細胞の活性化を防止する。これらの酵素による腫瘍細胞の消化によって、腫瘍に対するＴ細胞媒介性免疫を促進し得る他のいくつかの腫瘍抗原が放出される。
免疫チェックポイント阻害剤は、チェックポイント経路において標的をブロックする。（Ｄａｒｖｉｎら、Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ＆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ５０：１６５（２０１８）を参照のこと）。例えば、ＰＤＬ１又はＰＤ１のいずれかに結合し、ＰＤＬ１とＰＤ１との間の結合をブロックする抗体は、いくつかの腫瘍学的適応症、例えばホジキンリンパ腫及びメラノーマにおいて、がんを有する患者における転帰の改善が示されている。しかしながら、このような抗体の肝臓がんにおいて効果を有する能力は非常に低くなっている。
ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、相同性配列を含有する任意の遺伝子をノックダウン又はサイレンシングする方法を提供する配列特異的なＲＮＡ分解プロセスである。天然に存在するＲＮＡｉにおいて、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）は、ＲＮａｓｅ ＩＩＩ／ヘリカーゼタンパク質であるＤｉｃｅｒによって、３’末端に２ｎｔのオーバーハングを有する１９～２７ヌクレオチド（ｎｔ）のｄｓＲＮＡである低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）分子に切断される。その後、ｓｉＲＮＡは、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）と呼ばれる多成分リボヌクレアーゼに取り込まれる。ｓｉＲＮＡの一本の鎖はＲＩＳＣと結合したままであり、ＲＩＳＣにおいてガイド因子であるｓｓ－ｓｉＲＮＡに配列相補性を有する同族ＲＮＡの方へ複合体をガイドする。このｓｉＲＮＡ配向エンドヌクレアーゼが、ＲＮＡを消化し、標的ＲＮＡのトランケーション及び不活性化がもたらされる。近年の研究により、哺乳動物細胞においてＲＮＡｉ効果を示す化学合成された２１～２７ｎｔ ｓｉＲＮＡの有用性が明らかになり、（末端又は中央における）ｓｉＲＮＡハイブリダイゼーションの熱力学的安定性が、分子の機能を決定するのに中心的な役割を果たすことが示されている。
重要なことに、現在では、遺伝子のｍＲＮＡ配列を標的とする可能性がある、多数の可能な候補ｓｉＲＮＡ配列の中で、どれが実際に有効なＲＮＡｉ活性を示すかを高い信頼性で予測することが可能ではない。その代わり、個々に特異的な候補ｓｉＲＮＡポリヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド配列を生成し、哺乳動物細胞培養物において試験して、標的遺伝子の発現への意図する干渉が生じているかどうかを決定しなければならない。
ＴＧＦ βに対するｓｉＲＮＡ分子及びＰＤＬ１に対するｓｉＲＮＡ分子を含有する、ｓｉＲＮＡ分子の組合せが、これらの組合せを使用して、がん細胞によるヒト又は他の哺乳動物における免疫抑制を低減させる方法と共に提供される。
抗ＴＧＦ－β ｓｉＲＮＡ分子及び抗ＰＤＬ１ ｓｉＲＮＡ分子を含有する組成物が提供される。抗ＴＧＦ－β ｓｉＲＮＡ分子は、抗ＴＧＦ－β１ ｓｉＲＮＡ分子を含有し得る。一方又は両方の分子が、長さ１９塩基対～２５塩基対のオリゴヌクレオチドを含んでいてもよく、一方又は両方が、それらの安定性を上昇させるために化学修飾されていてもよい。
抗ＴＧＦ－β１ ｓｉＲＮＡ分子は、約０．１ｎＭと１０ｎＭとの間のＩＣ５０値を有してもよく、及び／又は、表１において特定されるｓｉＲＮＡ分子から選択されてもよい。抗ＴＧＦ－β１ ｓｉＲＮＡ分子は、２５ｍｅｒの平滑末端末端（blunt-end-ended）分子を含んでいてもよい。抗ＴＧＦ－β１ ｓｉＲＮＡ分子は、表１において特定されるｓｉＲＮＡ分子の最初の７つの位置の６つにおいて同一であってもよく、残りの位置において少なくとも９０％又は９５％同一であってもよい。
抗ＰＤＬ１ ｓｉＲＮＡ分子は、約０．１ｎＭと１０ｎＭとの間のＩＣ５０値を有してもよく、及び／又は、表２において特定されるｓｉＲＮＡ分子から選択されてもよい。抗ＰＤＬ１ ｓｉＲＮＡ分子は、３’末端に２塩基のｄＴｄＴオーバーハングを有する１９ｍｅｒの分子又は２５ｍｅｒの平滑末端分子を含有してもよい。抗ＰＤＬ１ ｓｉＲＮＡ分子は、表２において特定されるｓｉＲＮＡ分子の最初の７つの位置の６つにおいて同一であってもよく、残りの位置において少なくとも９０％又は９５％同一であってもよい。
抗ＴＧＦ－β１ ｓｉＲＮＡ分子は、５’－ｒ（ＣＣＣＡＡＧＧＧＣＵＡＣＣＡＵＧＣＣＡＡＣＵＵＣＵ）－３’を含有してもよく、抗ＰＤＬ１ ｓｉＲＮＡ分子は、５’－ＣＵＡＵＵＵＡＵＵＵＵＧＡＧＵＣＵＧＵ－３’（ＰＤＬ１ ｓｉＲＮＡセンス鎖配列）を含有してもよい。
また、２つ以上の非同一抗ＴＧＦ－β１ ｓｉＲＮＡ分子及び２つ以上の非同一抗ＰＤＬ１ ｓｉＲＮＡ分子を含有し、含む組成物も提供される。
組成物は、薬学的に許容される担体をさらに含有し得る。担体は、可溶型送達剤又はナノ粒子形成剤を含有し得、担体は、例えば、食塩水溶液、糖溶液、ポリマー、ペプチド、ポリペプチド、脂質、クリーム、ゲル、ミセル材料、シリカナノ粒子、金属ナノ粒子、プラスミド及びウイルスベクターからなる群から選択される１つ又は複数の成分を含有し得る。薬学的に許容される担体はまた、グルコース溶液、ポリカチオン性結合剤、カチオン性脂質、カチオン性ミセル、カチオン性ポリペプチド、親水性ポリマーグラフト化ポリマー、非天然カチオン性ポリマー、カチオン性ポリアセタール、親水性ポリマーグラフト化ポリアセタール、リガンド官能化カチオン性ポリマー、リガンド官能化親水性ポリマーグラフト化ポリマー及びリガンド官能化リポソームからなる群から選択され得る。他の実施形態において、担体は、生分解性ヒスチジン－リジンポリマー、生分解性ポリエステル、例えばポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）及び乳酸－グリコール酸共重合体（ＰＬＧＡ）、ポリアミドアミン（ＰＡＭＡＭ）デンドリマー、カチオン性脂質、例えばＤＯＴＡＰ、ＤＯＰＥ、ＤＣ－Ｃｈｏｌ／ＤＯＰＥ、ＤＯＴＭＡ及びＤＯＴＭＡ／ＤＯＰＥ又はＰＥＧ化ＰＥＩからなる群から選択される１つ又は複数の成分を含有し得る。薬学的に許容される担体は、ヒスチジン－リジン共重合体（ＨＫＰ）を含むのが好都合である。
ＨＫＰは、構造（Ｒ）Ｋ（Ｒ）－Ｋ（Ｒ）－（Ｒ）Ｋ（Ｘ）［式中、Ｒ＝ＫＨＨＨＫＨＨＨＫＨＨＨＫＨＨＨＫ、Ｋ＝リジン及びＨ＝ヒスチジンである。］を含有してもよい。担体はまた、分岐状ヒスチジン－リジン共重合体であってもよい。例えば、分岐状ヒスチジン－リジンポリマーは、式（Ｒ）Ｋ（Ｒ）－Ｋ（Ｒ）－（Ｒ）Ｋ（Ｘ）［式中、Ｒ＝ＫＨＨＨＫＨＨＨＫＨＨＨＫＨＨＨＫ、Ｒ＝ＫＨＨＨＫＨＨＨＫＨＨＨＨＫＨＨＨＫ又はＲ＝ＫＨＨＨＫＨＨＨＮＨＨＨＮＨＨＨＮ、Ｘ＝Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、Ｋ＝リジン、Ｈ＝ヒスチジン及びＮ＝アスパラギンである。］を有してもよい。
さらなる実施形態において、薬学的に許容される担体は、スペルミン－脂質コンジュゲート（ＳＬｉＣ）及びコレステロールを含むリポソームを含有し得る。
薬学的に許容される担体は、式Ｋｐ｛［（Ｈ）ｎ（Ｋ）ｍ］｝ｙ若しくはＫｐ｛［（Ｈ）ｎ（Ｋ）ｍ］｝ｙ－Ｃ－ｘ－Ｚ、又は式Ｋｐ｛［（Ｈ）ａ（Ｋ）ｍ（Ｈ）ｂ（Ｋ）ｍ（Ｈ）ｃ（Ｋ）ｍ（Ｈ）ｄ（Ｋ）ｍ］｝ｙ若しくはＫｐ｛［（Ｈ）ａ（Ｋ）ｍ（Ｈ）ｂ（Ｋ）ｍ（Ｈ）ｃ（Ｋ）ｍ（Ｈ）ｄ（Ｋ）ｍ］｝ｙ－Ｃ－ｘ－Ｚ［式中、Ｋはリジンであり、Ｈはヒスチジンであり、Ｃはシステインであり、ｘはリンカーであり、Ｚは哺乳動物細胞標的化リガンドであり、ｐは０又は１であり、ｎは１～５の整数であり、ｍは０～３の整数であり、ａ、ｂ、ｃ及びｄは３又は４のいずれかであり、ｙは３～１０の整数である。］のペプチドを含有してもよい。薬学的に許容される担体は、切断可能な結合を介して架橋したこれらのペプチドの少なくとも２つを含むポリペプチドを含有し得る。
組成物は、ナノ粒子を含有してもよく、ナノ粒子は、例えば直径約４０ｎｍ～約１５０ｎｍの間であってもよく、約２５ｍＶと約４５ｍＶとの間のゼータ電位を有してもよい。
他の実施形態において、抗ＴＧＦ－β ｓｉＲＮＡ分子と、ＰＤＬ１の低分子阻害剤又はＰＤＬ１のアンチセンスオリゴヌクレオチド阻害剤のいずれかとを含有する組成物が提供される。抗ＴＧＦ－β ｓｉＲＮＡ分子は、上述のような抗ＴＧＦ－β ｓｉＲＮＡ分子又は抗ＴＧＦ－β１ ｓｉＲＮＡ分子を含有し得る。これらの組成物は、薬学的に許容される担体、例えば上述の担体を含有し得る。
なおさらなる実施形態において、抗ＰＤＬ１ ｓｉＲＮＡ分子と、ＴＧＦ－β若しくはＴＧＦ－β１の低分子阻害剤、又はＴＧＦ－β若しくはＴＧＦ－β１のアンチセンスオリゴヌクレオチド阻害剤のいずれかとを含有する組成物が提供される。抗ＰＤＬ１ ｓｉＲＮＡ分子は、上述の抗ＰＤＬ１ ｓｉＲＮＡ分子を含有し得る。これらの組成物は、薬学的に許容される担体、例えば上述の担体を含有し得る。
また、哺乳動物において、がん細胞を死滅させるための方法であって、治療的有効量の上述の組成物を哺乳動物に投与することを含む方法が提供される。
哺乳動物において、がん細胞を含有する腫瘍へのＴ細胞の浸透を増強するための方法であって、治療的有効量の上述の組成物を哺乳動物に投与することを含む方法も提供される。
哺乳動物において、Ｔ細胞を抗原によって予備刺激して、がん細胞を認識及び死滅させるための方法であって、治療的有効量の上述の組成物を哺乳動物に投与することを含む方法。
哺乳動物において、がんに対するＴ細胞媒介性免疫を促進するための方法であって、治療的有効量の上述の組成物を哺乳動物に投与することを含む方法も提供される。
これらの方法において、がん細胞の周辺の微小環境におけるＴＧＦ－β１のレベルは上昇しており、組成物が、上昇したＴＧＦ－β１のレベルを低下させる。
これらの方法のいずれかにおいて、がん細胞の周辺の微小環境におけるＴＧＦ－β１のレベルは上昇していてもよく、抗ＴＧＦ－β１ ｓｉＲＮＡ分子が、上昇したＴＧＦ－β１のレベルを低下させる。
これらの方法において、がんは、例えば、肝臓がん、結腸がん、膵臓がん又は尿路上皮癌であり得る。肝臓がんは、肝細胞癌、転移性結腸がん又は転移性膵臓がんであり得る。
これらの方法のいずれかにおいて、哺乳動物は、実験動物であってもよく、又は好都合にはヒトである。
これらの方法において、上述の組成物は、がん細胞を含む腫瘍に直接注入されても、独立して又は同時に送達されてもよい。
ＳＫ－Ｈｅｐ１細胞において試験した種々のｓｉＲＮＡ配列によるＰＤＬ１サイレンシングを示すグラフである。 Ｈｅｐａ１－６肝臓がん細胞におけるＰＤＬ１に対するｓｉＲＮＡへの曝露時間の、ＰＤＬ１サイレンシングに対する効果を示すグラフである。 ＳＫ－Ｈｅｐ１細胞におけるＰＤＬ１ ｓｉＲＮＡスクリーニングを示すグラフである。
表１は、ＴＧＦβ１に対するｓｉＲＮＡのリストについてのｓｉＲＮＡ配列を示す。
表２は、ＰＤＬ１に対して試験したｓｉＲＮＡのリストについてのｓｉＲＮＡ配列を示す。
詳細な説明
抗ＴＧＦ－β ｓｉＲＮＡ分子及び抗ＰＤＬ１ ｓｉＲＮＡ分子を含む組成物が提供される。ヒト及び他の哺乳動物において、がん細胞を死滅させるために組成物を使用する方法もまた提供される。一実施形態において、組成物は、薬学的に許容される担体、例えばヒスチジン－リジン共重合体をさらに含む。抗ＴＧＦ－β ｓｉＲＮＡ分子の具体例を表１に示す。抗ＰＤＬ１ ｓｉＲＮＡ分子の具体例を表２に示す。
本明細書に記載する、抗ＴＧＦ－β ｓｉＲＮＡ分子及び抗ＰＤＬ１ ｓｉＲＮＡ分子を含む組成物は、ヒト又は他の哺乳動物においてがん細胞を死滅させ、それにより、がんを治療するのに有用である。治療的有効量の組成物が、がんに罹患しているヒト又は他の哺乳動物に投与される。このようながんとしては、肝臓がん、結腸がん及び膵臓がんが挙げられる。
定義
抗ＴＧＦ－β ｓｉＲＮＡ又はＴＧＦ－β ｓｉＲＮＡ：哺乳動物細胞におけるＴＧＦ－βタンパク質の合成をコードする遺伝子の発現を低下させるか又は防止するｓｉＲＮＡ分子。
抗ＴＧＦ－β１ ｓｉＲＮＡ又はＴＧＦ－β１ ｓｉＲＮＡ：哺乳動物細胞におけるＴＧＦ－β１タンパク質の合成をコードする遺伝子の発現を低下させるか又は防止するｓｉＲＮＡ分子。
抗－ＰＤＬ１ ｓｉＲＮＡ又はＰＤＬ１ ｓｉＲＮＡ：哺乳動物細胞におけるＰＤＬ１タンパク質の合成をコードする遺伝子の発現を低下させるか又は防止するｓｉＲＮＡ分子。
ｓｉＲＮＡ分子：分子が細胞に導入された後に、細胞において遺伝子の発現に干渉する、短い二本鎖ポリヌクレオチドである二重鎖オリゴヌクレオチド。これは例えば、一本鎖標的ＲＮＡ分子中の相補的なヌクレオチド配列を標的とし、結合する。ｓｉＲＮＡ分子は化学合成されるか、又は当業者に公知の技術によって他の方法で構築される。このような技術は、米国特許第５，８９８，０３１号、同第６，１０７，０９４号、同第６，５０６，５５９号、同第７，０５６，７０４号、米国再発行特許出願第４６，８７３号及び同第９，６４２，８７３（Ｂ２）号並びに欧州特許第１２１４９４５号及び欧州特許第１２３０３７５号に記載されており、これらは全て参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。当技術分野の慣例によって、ｓｉＲＮＡ分子が特定のヌクレオチド配列によって特定される場合、配列は二重鎖分子のセンス鎖を指す。分子を含む１つ又は複数のリボヌクレオチドは、当技術分野において公知の技術によって化学修飾され得る。その個々のヌクレオチドの１つ又は複数のレベルにおいて修飾されることに加えて、オリゴヌクレオチドの骨格が修飾され得る。例えば、ｓｉＲＮＡは、当技術分野において周知の方法を使用して、例えば２’－ＯＭｅ及び／又は２’－Ｆ及び／又はホスホロチオエート修飾の使用による、化学修飾によって、ヌクレアーゼ分解に対して安定化されていてもよい。さらなる修飾としては、低分子（例えば糖分子）、アミノ酸、ペプチド、コレステロール及びｓｉＲＮＡ分子上へのコンジュゲーションのための他の巨大分子の使用が挙げられる。
がんは、任意の悪性腫瘍である。
悪性腫瘍は、腫瘍性細胞の集団である。
肝臓がん：肝臓内の任意の原発がん、すなわち肝臓内で開始するがん；又は肝臓内の任意の二次がん、すなわち哺乳動物の身体の別の組織から肝臓に転移するがんである。原発肝臓がんの例は肝細胞癌である。二次肝臓がんの例は結腸がんである。
処置すること／処置：がん細胞の一部又は全てを死滅させること、がんのサイズを低下させること、がんの増殖を阻害すること、又はがんの増殖速度を低下させること。
ヒスチジン－リジン共重合体：ヒスチジン及びリジンアミノ酸からなるペプチド又はポリペプチド。このような共重合体は、米国特許第７，０７０，８０７（Ｂ２）号、同第７，１６３，６９５（Ｂ２）号及び同第７，７７２，２０１（Ｂ２）号に記載されており、その開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
免疫チェックポイント阻害剤：いくつかの種類の免疫系細胞、例えばＴ細胞及びいくつかのがん細胞によって生成される特定のタンパク質をブロックする低分子薬物又は抗体。これらのチェックポイントタンパク質は、免疫応答の抑制を補助し、Ｔ細胞にがん細胞を死滅させないようにすることができる。これらのチェックポイントタンパク質がブロックされる場合、免疫系の「ブレーキ」が開放され、Ｔ細胞はよりよくがん細胞を死滅させることができる。Ｔ細胞／がん細胞上で見出されるチェックポイントタンパク質の例としては、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１が（それぞれ）挙げられる。
抗腫瘍有効性の増強：腫瘍細胞の増殖速度のより大幅な低下、腫瘍細胞の死滅及び／又は腫瘍体積の低下においてより大きい効果をもたらすこと、並びに最終的に腫瘍を有する患者の寿命を延長することによってより良い治療的効果をもたらすことを意味する。このような効果は、最初の処置後であっても腫瘍細胞を認識する能力の上昇の有無にかかわらず、腫瘍細胞それ自体に対する直接的な作用、又はＴ細胞の活性の増強、又はＴ細胞の腫瘍細胞へのより良いアクセスがもたらされる、及び／若しくは活性化されて腫瘍に対するより強い免疫応答が促進される機構によって媒介され得る。
Ｔ細胞の腫瘍への浸透の増強：多数のＴ細胞が腫瘍集団中で観察される観察を意味する。典型的には、浸透は周囲組織から離れて腫瘍の中心へと向かう。正常組織から離れた任意の深さにおいて、その深さにおいて観察される具体的なＴ細胞の数は、未処置の試料と比較して増加する。
ＴＧＦ－βの低分子阻害剤：典型的には、１０００ダルトン未満の分子量を有する、ＴＧＦ－βに結合する、及び／又は他の方法で、最も可能性が高くは、ＴＧＦ－βのその受容体のいずれかへの結合を阻害することによって、又はＴＧＦ－βの標的受容体への結合によって誘導される下流の酵素活性若しくはシグナル伝達を阻害することによって、その機能の阻害をもたらすことができる化学化合物。このような阻害剤は当技術分野において公知である。例えば、Ｈｕｙｎｈら、Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ９：７４３（２０１９）を参照のこと。
ＴＧＦ－β１の低分子阻害剤：典型的には、１０００ダルトン未満の分子量を有する、ＴＧＦ－β１に結合する、及び／又は他の方法で、最も可能性が高くは、ＴＧＦ－β１のその受容体への結合を阻害することによって、又はＴＧＦβ１のその標的受容体への結合によって誘導される下流の酵素活性若しくはシグナル伝達を阻害することによって、その機能の阻害をもたらすことができる化学化合物。
ＴＧＦ－βのアンチセンスオリゴヌクレオチド阻害剤：哺乳動物細胞内のＴＧＦ－βの発現を低下させることができるオリゴヌクレオチド（典型的には１１～２７塩基）の一本鎖。
ＴＧＦ－β１のアンチセンスオリゴヌクレオチド阻害剤：哺乳動物細胞内のＴＧＦ－β１の発現を低下させることができるオリゴヌクレオチド（典型的には１１～２７塩基）の一本鎖。
ＰＤＬ１の低分子阻害剤：典型的には、１０００ダルトン未満の分子量を有する、ＰＤＬ１に結合する、及び／又は他の方法で、最も可能性が高くは、ＰＤＬ１のＴ細胞上のその受容体（ＰＤ１）への結合を阻害することによって、又はＰＤＬ１のその標的受容体（ＰＤ１）への結合によって誘導される下流の酵素活性若しくはシグナル伝達を阻害することによって、その機能の阻害をもたらすことができる化学化合物。
ＰＤＬ１のアンチセンスオリゴヌクレオチド阻害剤：哺乳動物細胞内のＰＤＬ１の発現を低下させることができるオリゴヌクレオチド（典型的には１１～２７塩基）の一本鎖。
担体組成物
組成物は、薬学的に許容される担体を含有するのが好都合である。適切な担体は当技術分野で公知であり、可溶型送達剤又はナノ粒子形成剤を含有し得る。担体は例えば、１つ又は複数の成分、例えば、食塩水溶液、糖溶液、ポリマー、ペプチド、ポリペプチド、脂質、クリーム、ゲル、ミセル材料、シリカナノ粒子、金属ナノ粒子、プラスミド又はウイルスベクターを含有し得る。薬学的に許容される担体はまた、例えば、グルコース溶液、ポリカチオン性結合剤、カチオン性脂質、カチオン性ミセル、カチオン性ポリペプチド、親水性ポリマーグラフト化ポリマー、非天然カチオン性ポリマー、カチオン性ポリアセタール、親水性ポリマーグラフト化ポリアセタール、リガンド官能化カチオン性ポリマー、リガンド官能化－親水性ポリマーグラフト化ポリマー、又はリガンド官能化リポソームでもあり得る。他の実施形態において、担体は、生分解性ヒスチジン－リジンポリマー、生分解性ポリエステル、例えばポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）、及び乳酸－グリコール酸共重合体（ＰＬＧＡ）、ポリアミドアミン（ＰＡＭＡＭ）デンドリマー、カチオン性脂質、例えばＤＯＴＡＰ、ＤＯＰＥ、ＤＣ－Ｃｈｏｌ／ＤＯＰＥ、ＤＯＴＭＡ、及びＤＯＴＭＡ／ＤＯＰＥ、又はＰＥＧ化ＰＥＩからなる群から選択される１つ又は複数の成分を含有し得る。
薬学的に許容される担体は、ヒスチジン－リジン共重合体（ＨＫＰ）を含有するのが好都合である。ＨＫＰは、構造（Ｒ）Ｋ（Ｒ）－Ｋ（Ｒ）－（Ｒ）Ｋ（Ｘ）］［式中、Ｒ＝ＫＨＨＨＫＨＨＨＫＨＨＨＫＨＨＨＫ、Ｋ＝リジン、及びＨ＝ヒスチジンである。］を含有してもよい。担体はまた、分岐状ヒスチジン－リジン共重合体であってもよい。例えば、分岐状ヒスチジン－リジンポリマーは、式（Ｒ）Ｋ（Ｒ）－Ｋ（Ｒ）－（Ｒ）Ｋ（Ｘ）［式中、Ｒ＝ＫＨＨＨＫＨＨＨＫＨＨＨＫＨＨＨＫ、Ｒ＝ＫＨＨＨＫＨＨＨＫＨＨＨＨＫＨＨＨＫ、又はＲ＝ＫＨＨＨＫＨＨＨＮＨＨＨＮＨＨＨＮ、Ｘ＝Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、Ｋ＝リジン、Ｈ＝ヒスチジン、及びＮ＝アスパラギンである。］を有してもよい。
薬学的に許容される担体はまた、例えば、スペルミン－脂質コンジュゲート（ＳＬｉＣ）及びコレステロールを含むリポソームを含有し得る。
代替的に、又は加えて、薬学的に許容される担体は、例えば、式Ｋｐ｛［（Ｈ）ｎ（Ｋ）ｍ］｝ｙ若しくはＫｐ｛［（Ｈ）ｎ（Ｋ）ｍ］｝ｙ－Ｃ－ｘ－Ｚ、又は式Ｋｐ｛［（Ｈ）ａ（Ｋ）ｍ（Ｈ）ｂ（Ｋ）ｍ（Ｈ）ｃ（Ｋ）ｍ（Ｈ）ｄ（Ｋ）ｍ］｝ｙ若しくはＫｐ｛［（Ｈ）ａ（Ｋ）ｍ（Ｈ）ｂ（Ｋ）ｍ（Ｈ）ｃ（Ｋ）ｍ（Ｈ）ｄ（Ｋ）ｍ］｝ｙ－Ｃ－ｘ－Ｚ］［式中、Ｋはリジンであり、Ｈはヒスチジンであり、Ｃはシステインであり、ｘはリンカーであり、Ｚは哺乳動物細胞標的化リガンドであり、ｐは０又は１であり、ｎは１～５の整数であり、ｍは０～３の整数であり、ａ、ｂ、ｃ及びｄは３又は４のいずれかであり、ｙは３～１０の整数である。］を有するペプチドを含有してもよい。薬学的に許容される担体は、切断可能な結合を介して架橋したこれらのペプチドの少なくとも２つを含むポリペプチドを含有し得る。
組成物は、ナノ粒子を含有してもよく、ナノ粒子は、例えば直径約４０ｎｍと約１５０ｎｍとの間であってもよく、約２５ｍＶと約４５ｍＶとの間のゼータ電位を有してもよい。このようなナノ粒子のサイズ及びゼータ電位を測定するための方法は当技術分野において公知である。
以下の実施例は、本発明の特定の態様を例示するものであり、本発明の範囲を限定するものと解されるべきではない。
ＴＧＦ－βを標的とする１つのｓｉＲＮＡ及びＰＤＬ１（腫瘍細胞上に存在）を標的とする１つのｓｉＲＮＡの２つのｓｉＲＮＡのナノ粒子送達される組合せが提供される。この方法において、腫瘍部位及びその周辺の細胞による材料の取り込みによって、ＴＧＦ－β（Ｔ細胞の浸透を防止している）の低下がもたらされ、ＰＤ－Ｌ１は腫瘍細胞表面上においてサイレンシングされ、免疫チェックポイントの損失及びそれによるＴ細胞による腫瘍細胞の死滅がもたらされる。
ＴＧＦ－β１をサイレンシングするために使用され得る多数のｓｉＲＮＡ配列を特定した。例としては以下が挙げられる：
表1：抗TGF-β1 siRNA配列

hmTF-25-1：センス 5’-r(GGAUCCACGAGCCCAAGGGCUACCA)-3’
アンチセンス 5’-r(UGGUAGCCCUUGGGCUCGUGGAUCC)-3’

hmTF-25-2：センス 5’-r(CCCAAGGGCUACCAUGCCAACUUCU)-3’
アンチセンス 5’-r(AGAAGUUGGCAUGGUAGCCCUUGGG)-3’

hmTF-25-3：センス 5’-r(GAGCCCAAGGGCUACCAUGCCAACU)-3’
アンチセンス 5’-r(AGUUGGCAUGGUAGCCCUUGGGCUC)-3’

hmTF25-4：センス, 5’-r(GAUCCACGAGCCCAAGGGCUACCAU)-3’
アンチセンス, 5’-r(AUGGUAGCCCUUGGGCUCGUGGAUC)-3’

hmTF25-5：センス, 5’-r(CACGAGCCCAAGGGCUACCAUGCCA)-3’
アンチセンス, 5’-r(UGGCAUGGUAGCCCUUGGGCUCGUG)-3’

hmTF25-6：センス, 5’-r(GAGGUCACCCGCGUGCUAAUGGUGG)-3’
アンチセンス, 5’-r(CCACCAUUAGCACGCGGGUGACCUC)-3’

hmTF25-7：センス, 5’-r(GUACAACAGCACCCGCGACCGGGUG)-3’
アンチセンス, 5’-r(CACCCGGUCGCGGGUGCUGUUGUAC)-3’

hmTF25-8：センス, 5’-r(GUGGAUCCACGAGCCCAAGGGCUAC)-3’
アンチセンス, 5’-r(GUAGCCCUUGGGCUCGUGGAUCCAC)-3’
ＰＤＬ１をサイレンシングするために使用され得る多数のｓｉＲＮＡ配列が特定されたが、培養中の細胞の標的遺伝子のサイレンシングの力価に基づいて以下の配列を選択した：
表2-抗PDL1 siRNA配列

1) センス 5’-GGAUCCAGUCACCUCUGAACAUGAA-3’
アンチセンス 5’ - UUCAUGUUCAGAGGUGACUGGAUCC - 3’

2) センス 5’ - GGUGUUGGAUUUGTAAGGCACUUUA-3’
アンチセンス 5’ - UAAAGUGCCUUACAAAUCCAACACC-3’

3) センス 5’ - GGAUUUGUAAGGCACUUUAUCCCUU-3’
アンチセンス 5’ -AAGGGAUAAAGUGCCUUACAAAUCC-3’

4) センス 5’-GGUGCACUGAGUCAAUCUAGUCCUA-3’
アンチセンス 5’-UAGGACUAGAUUGACUCAGUGCACC-3’

5) センス 5’ -CCUCCUUGUGGUGUUGGAUUUGTAA-3’
アンチセンス 5’- UUACAAAUCCAACACCACAAGGAGG-3’

6) センス 5’- CCUCAUUCGUUGUGCUUGAACCCUU-3’
アンチセンス 5’ -UUUCAUUUGGAGGAUGUGCCAGAGG-3’

7) センス 5’-CCTCATTCGTTGTGCTTGAACCCTT-3’
アンチセンス 5’- AAGGGUUCAAGCACAACGAAUGAGG-3’

8) センス 5’-CCUUUGUCUCAUGUUUCAUCGUAA-3’
アンチセンス 5’-CCUUUUGUCUCAUGUUUCAUCGUAA-3’

9) センス 5’-GCACUGACAUUCAUCUUCCGUUUAA-3’
アンチセンス 5’-UUAAACGGAAGAUGAAUGUCAGUGC-3’

10) センス 5’- CCAAGGACCUAUAUGUGGUAGAGUA-3’
アンチセンス 5’- UACUCUACCACAUAUAGGUCCUUGG-3’

11) センス 5’-CUAUUUAUUUUGAGUCUGU dTdT-3’
アンチセンス 5’-ACAGACUCAAAAUAAAUAG dTdT-3’

12) センス 5’-UGAAAGUCAAUGCCCCAUA dTdT-3’
アンチセンス 5’-UAUGGGGCAUUGACUUUCA dTdT-3’

13) センス 5’-GAAAGUCAAUGCCCCAUAC dTdT-3’
アンチセンス 5’-GUAUGGGGCAUUGACUUUC dTdT-3’

14) センス 5’-CAAAAUCAACCAAAGAAUU dTdT-3’
アンチセンス5’-AAUUCUUUGGUUGAUUUUG dTdT-3’

15) センス 5’-GCAAUUCUUUUAUUCAAAAdTdT-3’
アンチセンス 5’-UUUUGAAUAAAAGAAUUGCdTdT-3’
ヒト肝臓腺癌ＳＫ－Ｈｅｐ１細胞を１０％ ＦＢＳを補充したＡＴＣＣ－製剤化Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｉｎｉｍｕｍ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ（カタログ番号３０－２００３）中で培養した。トランスフェクションの前日に、細胞を１２ウェルプレートに、１ｘ１０５細胞／ウェルの密度で播種した。ｓｉＲＮＡｓは、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＲＮＡｉＭＡＸトランスフェクション試薬（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉ．、カタログ番号１３７７８０７５）を製造者のプロトコールにしたがって使用して細胞にトランスフェクトした。トランスフェクション複合混合物を５０ｎＭのｓｉＲＮＡ濃度で細胞に添加した。
トランスフェクションの４８時間後、総ＲＮＡをＱＩＡＧＥＮ ＲＮｅａｓｙ Ｐｌｕｓ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（カタログ番号７４１３４）を使用して単離した。ｃＤＮＡを、Ｍａｘｉｍａ Ｆｉｒｓｔ Ｓｔｒａｎｄ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｋｉｔ ｆｏｒ ＲＴ－ ｑＰＣＲ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉ．、カタログ番号Ｋ１６４１）を使用して合成し、ＰＤＬ１ ｍＲＮＡのレベルを、ＴａｑＭａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ＰＣＲ ｍａｓｔｅｒ ｍｉｘ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉ．、カタログ番号４３０４４３７）を用いたｑＰＣＲによって評価した。
ヒトＰＤＬ１についてのプライマー及びプローブの配列は以下の通りであった：
５’－ＧＧＡＧＡＴＴＡＧＡＴＣＣＴＧＡＧＧＡＡＡＡＣＣＡ－３’（フォワード）、
５’－ＡＡＣＧＧＡＡＧＡＴＧＡＡＴＧＴＣＡＧＴＧＣＴＡ－３’（リバース）、及び
ＰＤＬ１ ＦＡＭプローブ － ＡＧＡＴＧＧＣＴＣＣＣＡＧＡＡＴＴＡＣＣＡＡＧＴＧＡＧＴＣＣ。
ヒトＧＡＰＤＨについてのプライマー及びプローブの配列は：
５’－ＡＣＡＴＣＧＣＴＣＡＧＡＣＡＣＣＡＴＧ－３’（フォワード）、
５’－ＴＧＴＡＧＴＴＧＡＧＧＴＣＡＡＴＧＡＡＧＧＧ－３’（リバース）
及びＧＡＰＤＨ ＦＡＭプローブの場合は － ＡＡＧＧＴＣＧＧＡＧＴＣＡＡＣＧＧＡＴＴＴＧＧＴＣであった。
ｑＲＴ－ＰＣＲは、ＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏ３（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を使用して行った。増幅条件は、５０℃で５分間、９５℃で２０秒間に設定し、９５℃で１５秒間及び６０℃で１分間の４０サイクルを含んでいた。標的遺伝子のＲＮＡレベルは、２－ΔΔＣｔ法にしたがって決定した。ＧＡＰＤＨ遺伝子を試料基準化のために使用した。ＰＤＬ１発現を非サイレンシングｓｉＲＮＡで処置した細胞と比較した。
特定した配列のうち、表２の配列１１は、ＰＤＬ１遺伝子のマウス及びヒトバージョンの両方と同一性を有し、遺伝子サイレンシングにおいて約１ｎＭのＩＣ５０を示す。配列８、９及び１０）は、ＰＤＬ１のヒト配列に対して独占的であり、ヒト遺伝子のサイレンシングにおいては非常に高い力価（＜＝１ｎＭ）を有するが、マウスＰＤＬ１配列に対しては同一性が全くない（及び結果としてマウス配列に対する活性を有さない）。配列１４は、マウス及びヒトのＰＤＬ１配列間で９５％の同一性を示す。結果として、これらの配列はいずれもヒト由来のがんにおいてＰＤＬ１をサイレンシングするために使用され得る。
マウス及びヒトのＰＤＬ１に対して同一性を有するＰＤＬ１配列を選択した。この配列は平滑末端の１９ｍｅｒ又は安定性のために末端にｄＴｄＴを付加した２１ｍｅｒであり得る。この配列によって、ｉｎ ｖｉｖｏの腫瘍増殖の停止における産物の有効性を評価するために、同系（マウス）同所性ＨＣＣモデルを使用することが可能になる。この配列の、ＰＤＬ１をサイレンシングする能力は、Ｈｅｐａ１－６（マウスＨＣＣ）細胞において、２４時間で約１ｎＭのＩＣ５０であることが示された。この配列の利点は、有効性及び毒性試験に必要な、マウスモデルとヒトモデルの間の移動の際に配列を変更する必要がないことである。
ｉｎ ｖｉｔｒｏ試験
上述の２つのｓｉＲＮＡは、分岐状ポリペプチド－ヒスチジンリジン共重合体（ＨＫＰ）を用いて、ＨＫＰを２つのｓｉＲＮＡの等モルの混合物と、３：１の比率で、各ｓｉＲＮＡ濃度が最終的に０．５ｍｇｓ／ｍｌになるように急速に混合することによって製剤化した。この材料を次いで凍結乾燥させて、粉末を形成した。粉末をＤ５Ｗ（水中グルコース５％）に再溶解し、８０μｌの注入体積が４０μｇを保持しているようにした（濃度は０．５ｍｇ／ｍｌであった）。各バイアルを周囲室温まで上昇させた。スズの蓋カバーを７０％エタノールによって洗浄した。使い捨てシリンジを使用して、注射用５％グルコース溶液（又は注射用蒸留水）を、凍結乾燥させた粉末を含有する各バイアルに添加した。５～１０秒間短時間ボルテックスにかけた後、材料をベンチに室温で１０分間静置し、次いで薬物を使用前は氷上に保持し、その時点において所望の濃度に希釈した。
参照文献
追加参照文献：２０１９年５月２３日出願のＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０３３８２９号、Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌａｂｌｅ Ｃｏ－Ｃｏｕｐｌｉｎｇ Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、参照によりその全体が本明細書中に組み込まれる。
交付済み特許及び公開された特許出願を含む本明細書中で特定する全ての出版物並びにｕｒｌアドレス又は寄託番号によって特定される全てのデータベースエントリは、参照によってその全体が本明細書中に組み込まれる。
本発明は、その特定の実施形態に関連して記載されており、多くの詳細が例示目的のために記載されているが、本発明がさらなる実施形態の影響を受けやすいこと、並びに本明細書に記載する特定の詳細は、本発明の基本原理から逸脱することなく変更され得ることは当業者には明らかであろう。

Claims (63)

  1. 抗ＴＧＦ－β ｓｉＲＮＡ分子及び抗ＰＤＬ１ ｓｉＲＮＡ分子を含む組成物。
  2. 抗ＴＧＦ－β ｓｉＲＮＡ分子が、抗ＴＧＦ－β１ ｓｉＲＮＡ分子を含む、請求項１に記載の組成物。
  3. 一方又は両方の分子が、長さ１９塩基対～２５塩基対のオリゴヌクレオチドを含む、請求項１又は請求項２に記載の組成物。
  4. ｓｉＲＮＡ分子の一方又は両方が、それらの安定性を上昇させるために化学修飾されている、請求項１から３のいずれか一項に記載の組成物。
  5. 抗ＴＧＦ－β１ ｓｉＲＮＡ分子が、約０．１ｎＭと１０ｎＭとの間のＩＣ５０値を有する、請求項２から４のいずれか一項に記載の組成物。
  6. 抗ＴＧＦ－β１ ｓｉＲＮＡ分子が、表１において特定されるｓｉＲＮＡ分子から選択される、請求項２に記載の組成物。
  7. 抗ＴＧＦ－β１ ｓｉＲＮＡ分子が、２５ｍｅｒの平滑末端分子を含む、請求項２に記載の組成物。
  8. 抗ＴＧＦ－β１ ｓｉＲＮＡ分子が、表１において特定されるｓｉＲＮＡ分子の最初の７つの位置の６つにおいて同一であり、残りの位置において少なくとも９０％同一である、請求項２に記載の組成物。
  9. 抗ＴＧＦ－β１ ｓｉＲＮＡ分子が、表１において特定されるｓｉＲＮＡ分子の最初の７つの位置の６つにおいて同一であり、残りの位置において少なくとも９５％同一である、請求項２に記載の組成物。
  10. 抗ＰＤＬ１ ｓｉＲＮＡ分子が、約０．１ｎＭと１０ｎＭとの間のＩＣ５０値を有する、請求項２から４のいずれか一項に記載の組成物。
  11. 抗ＰＤＬ１ １ ｓｉＲＮＡ分子が、表２において特定されるｓｉＲＮＡ分子から選択される、請求項１又は請求項２に記載の組成物。
  12. 抗ＰＤＬ１ ｓｉＲＮＡ分子が、３’末端に２塩基のｄＴｄＴオーバーハングを有する１９ｍｅｒの分子又は２５ｍｅｒの平滑末端分子を含む、請求項１又は請求項２に記載の組成物。
  13. 抗ＰＤＬ１ ｓｉＲＮＡ分子が、表２において特定されるｓｉＲＮＡ分子の最初の７つの位置の６つにおいて同一であり、残りの位置において少なくとも９０％同一である、請求項１又は請求項２に記載の組成物。
  14. 抗ＰＤＬ１ ｓｉＲＮＡ分子が、表２において特定されるｓｉＲＮＡ分子の最初の７つの位置の６つにおいて同一であり、残りの位置において少なくとも９５％同一である、請求項１又は請求項２に記載の組成物。
  15. 抗ＴＧＦ－β１ ｓｉＲＮＡ分子が５’－ｒ（ＣＣＣＡＡＧＧＧＣＵＡＣＣＡＵＧＣＣＡＡＣＵＵＣＵ）－３’を含み、抗ＰＤＬ１ ｓｉＲＮＡ分子が５’－ＣＵＡＵＵＵＡＵＵＵＵＧＡＧＵＣＵＧＵ－３’（ＰＤＬ１ ｓｉＲＮＡセンス鎖配列）を含む、請求項２に記載の組成物。
  16. ２つ以上の非同一抗ＴＧＦ－β１ ｓｉＲＮＡ分子及び２つ以上の非同一抗ＰＤＬ１ ｓｉＲＮＡ分子を含む組成物。
  17. 薬学的に許容される担体をさらに含む、請求項１から１６のいずれか一項に記載の組成物。
  18. 薬学的に許容される担体が、可溶型送達剤又はナノ粒子形成剤を含む、請求項１７に記載の組成物。
  19. 薬学的に許容される担体が、食塩水溶液、糖溶液、ポリマー、ペプチド、ポリペプチド、脂質、クリーム、ゲル、ミセル材料、シリカナノ粒子、金属ナノ粒子、プラスミド及びウイルスベクターからなる群から選択される１つ又は複数の成分を含む、請求項１７に記載の組成物。
  20. 薬学的に許容される担体が、グルコース溶液、ポリカチオン性結合剤、カチオン性脂質、カチオン性ミセル、カチオン性ポリペプチド、親水性ポリマーグラフト化ポリマー、非天然カチオン性ポリマー、カチオン性ポリアセタール、親水性ポリマーグラフト化ポリアセタール、リガンド官能化カチオン性ポリマー、リガンド官能化－親水性ポリマーグラフト化ポリマー及びリガンド官能化リポソームからなる群から選択される１つ又は複数の成分を含む、請求項１７に記載の組成物。
  21. 薬学的に許容される担体が、生分解性ヒスチジン－リジンポリマー、生分解性ポリエステル、例えばポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）及び乳酸－グリコール酸共重合体（ＰＬＧＡ）、ポリアミドアミン（ＰＡＭＡＭ）デンドリマー、カチオン性脂質、例えば、ＤＯＴＡＰ、ＤＯＰＥ、ＤＣ－Ｃｈｏｌ／ＤＯＰＥ、ＤＯＴＭＡ、及びＤＯＴＭＡ／ＤＯＰＥ又はＰＥＧ化ＰＥＩからなる群から選択される１つ又は複数の成分を含む、請求項１７に記載の組成物。
  22. 薬学的に許容される担体が、ヒスチジン－リジン共重合体（ＨＫＰ）を含む、請求項１７に記載の組成物。
  23. ＨＫＰが、構造（Ｒ）Ｋ（Ｒ）－Ｋ（Ｒ）－（Ｒ）Ｋ（Ｘ）［式中、Ｒ＝ＫＨＨＨＫＨＨＨＫＨＨＨＫＨＨＨＫ、Ｋ＝リジン及びＨ＝ヒスチジンである。］を含む、請求項２２に記載の組成物。
  24. 薬学的に許容される担体が、分岐状ヒスチジン－リジン共重合体を含む、請求項１７に記載の組成物。
  25. 分岐状ヒスチジン－リジンポリマーが、式（Ｒ）Ｋ（Ｒ）－Ｋ（Ｒ）－（Ｒ）Ｋ（Ｘ）［式中、Ｒ＝ＫＨＨＨＫＨＨＨＫＨＨＨＫＨＨＨＫ、Ｒ＝ＫＨＨＨＫＨＨＨＫＨＨＨＨＫＨＨＨＫ又はＲ＝ＫＨＨＨＫＨＨＨＮＨＨＨＮＨＨＨＮ、Ｘ＝Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、Ｋ＝リジン、Ｈ＝ヒスチジン及びＮ＝アスパラギンである。］を有する、請求項２４に記載の組成物。
  26. 薬学的に許容される担体が、スペルミン－脂質コンジュゲート（ＳＬｉＣ）及びコレステロールを含むリポソームを含む、請求項１７に記載の組成物。
  27. 薬学的に許容される担体が、式Ｋｐ｛［（Ｈ）ｎ（Ｋ）ｍ］｝ｙ若しくはＫｐ｛［（Ｈ）ｎ（Ｋ）ｍ］｝ｙ－Ｃ－ｘ－Ｚ、又は式Ｋｐ｛［（Ｈ）ａ（Ｋ）ｍ（Ｈ）ｂ（Ｋ）ｍ（Ｈ）ｃ（Ｋ）ｍ（Ｈ）ｄ（Ｋ）ｍ］｝ｙ若しくはＫｐ｛［（Ｈ）ａ（Ｋ）ｍ（Ｈ）ｂ（Ｋ）ｍ（Ｈ）ｃ（Ｋ）ｍ（Ｈ）ｄ（Ｋ）ｍ］｝ｙ－Ｃ－ｘ－Ｚ［式中、Ｋはリジンであり、Ｈはヒスチジンであり、Ｃはシステインであり、ｘはリンカーであり、Ｚは哺乳動物細胞標的化リガンドであり、ｐは０又は１であり、ｎは１～５の整数であり、ｍは０～３の整数であり、ａ、ｂ、ｃ及びｄは３又は４のいずれかであり、ｙは３～１０の整数である。］を有するペプチドを含む、請求項１７に記載の組成物。
  28. 薬学的に許容される担体が、切断可能な結合を介して架橋した請求項２７に記載のペプチドの少なくとも２つを含むポリペプチドを含む、請求項２７に記載の組成物。
  29. 組成物がナノ粒子を含む、請求項２０から２８のいずれか一項に記載の組成物。
  30. ナノ粒子が、直径約４０ｎｍと約１５０ｎｍとの間であり、約２５ｍＶと約４５ｍＶとの間のゼータ電位を有する、請求項２９に記載の組成物。
  31. 哺乳動物において、がん細胞を死滅させるための方法であって、治療的有効量の請求項１から３０のいずれか一項に記載の組成物を哺乳動物に投与することを含む方法。
  32. 哺乳動物において、がん細胞を含む腫瘍へのＴ細胞の浸透を増強するための方法であって、治療的有効量の請求項１から３０のいずれか一項に記載の組成物を哺乳動物に投与することを含む方法。
  33. 哺乳動物において、Ｔ細胞を抗原によって予備刺激して、がん細胞を認識及び死滅させるための方法であって、治療的有効量の請求項１から３０のいずれか一項に記載の組成物を哺乳動物に投与することを含む方法。
  34. 哺乳動物において、がんに対するＴ細胞媒介性免疫を促進するための方法であって、治療的有効量の請求項１から３０のいずれか一項に記載の組成物を哺乳動物に投与することを含む方法。
  35. がん細胞の周辺の微小環境におけるＴＧＦ－β１のレベルが上昇している、請求項３１から３４のいずれか一項に記載の方法。
  36. 抗ＴＧＦ－β１ ｓｉＲＮＡ分子が、上昇したＴＧＦ－β１のレベルを低下させる、請求項３５に記載の方法。
  37. がんが、肝臓がん、結腸がん、膵臓がん及び尿路上皮癌からなる群から選択される、請求項３１から３６のいずれか一項に記載の方法。
  38. 肝臓がんが、肝細胞癌、転移性結腸がん又は転移性膵臓がんを含む、請求項３７に記載の方法。
  39. 哺乳動物が実験動物である、請求項３１から３８のいずれか一項に記載の方法。
  40. 哺乳動物がヒトである、請求項３１から３８のいずれか一項に記載の方法。
  41. 組成物が、がん細胞を含む腫瘍に直接注入される、請求項３１から４０のいずれか一項に記載の方法。
  42. 組成物が、がん細胞に独立して送達される、請求項３１から４１のいずれか一項に記載の方法。
  43. 組成物が、がん細胞に同時に送達される、請求項３１から４１のいずれか一項に記載の方法。
  44. 抗ＴＧＦ－β ｓｉＲＮＡ分子と、ＰＤＬ１の低分子阻害剤又はＰＤＬ１のアンチセンスオリゴヌクレオチド阻害剤のいずれかとを含む組成物。
  45. 抗ＴＧＦ－β ｓｉＲＮＡ分子が、請求項２から９のいずれか一項に記載の抗ＴＧＦ－β ｓｉＲＮＡ分子又は抗ＴＧＦ－β１ ｓｉＲＮＡ分子を含む、請求項４４に記載の組成物。
  46. 抗ＰＤＬ１ ｓｉＲＮＡ分子と、ＴＧＦ－βの低分子阻害剤又はＴＧＦ－βのアンチセンスオリゴヌクレオチド阻害剤のいずれかとを含む組成物。
  47. 抗ＰＤＬ１ ｓｉＲＮＡ分子と、ＴＧＦ－β１の低分子阻害剤又はＴＧＦ－β１のアンチセンスオリゴヌクレオチド阻害剤のいずれかとを含む組成物。
  48. 抗ＰＤＬ１ ｓｉＲＮＡ分子が、請求項１０から１５のいずれか一項に記載の抗ＰＤＬ１ ｓｉＲＮＡ分子を含む、請求項４６又は請求項４７に記載の組成物。
  49. 薬学的に許容される担体をさらに含む、請求項４４から４８のいずれか一項に記載の組成物。
  50. 薬学的に許容される担体が、請求項１８から２８のいずれか一項において特定される薬学的に許容される担体のいずれか１つを含む、請求項４９に記載の組成物。
  51. 哺乳動物において、がん細胞を死滅させるための方法であって、治療的有効量の請求項４４から５０のいずれか一項に記載の組成物を哺乳動物に投与することを含む方法。
  52. 哺乳動物において、がん細胞を含む腫瘍へのＴ細胞の浸透を増強するための方法であって、治療的有効量の請求項４４から５０のいずれか一項に記載の組成物を哺乳動物に投与することを含む方法。
  53. 哺乳動物において、Ｔ細胞を抗原によって予備刺激して、がん細胞を認識及び死滅させるための方法であって、治療的有効量の請求項４４から５０のいずれか一項に記載の組成物を哺乳動物に投与することを含む方法。
  54. 哺乳動物において、がんに対するＴ細胞媒介性免疫を促進するための方法であって、治療的有効量の請求項４４から５０のいずれか一項に記載の組成物を哺乳動物に投与することを含む方法。
  55. がん細胞の周辺の微小環境におけるＴＧＦ－β１のレベルが上昇している、請求項５１から５４のいずれか一項に記載の方法。
  56. 組成物が、上昇したＴＧＦ－β１のレベルを低下させる、請求項５５に記載の方法。
  57. がんが、肝臓がん、結腸がん、膵臓がん及び尿路上皮癌からなる群から選択される、請求項５１から５６のいずれか一項に記載の方法。
  58. 肝臓がんが、肝細胞癌、転移性結腸がん又は転移性膵臓がんを含む、請求項５７に記載の方法。
  59. 哺乳動物が実験動物である、請求項５１から５８のいずれか一項に記載の方法。
  60. 哺乳動物がヒトである、請求項５１から５８のいずれか一項に記載の方法。
  61. 組成物が、がん細胞を含む腫瘍に直接注入される、請求項５１から６０のいずれか一項に記載の方法。
  62. 組成物が、がん細胞に独立して送達される、請求項５１から６１のいずれか一項に記載の方法。
  63. 組成物が、がん細胞に同時に送達される、請求項５１から６１のいずれか一項に記載の方法。
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