CN116421616A - 一种核酸干扰药物组合物及用于治疗结直肠癌、胃癌、前列腺癌的药物 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种核酸干扰药物组合物及用于治疗结直肠癌、胃癌和前列腺癌的药物。本发明针对结直肠癌、胃癌和前列腺癌肿瘤微环境和肿瘤转移相关的2个靶点(TGF‑β1和MyD88)，设计并筛选出双靶点MyD88/TGF‑β1核酸干扰药物组合物(组合物编号STP500)，其包括活性成分和药学上可接受的载体，所述的活性成分包括能够抑制和沉默MyD88基因表达的第一活性成分和能够抑制和沉默TGF‑β1基因表达的第二活性成分。体内外实验显示本发明的双靶点MyD88/TGF‑β1核酸干扰药物组合物能够有效抑制结直肠癌、胃癌和前列腺癌肿瘤细胞的生长，在治疗结直肠癌、胃癌和前列腺癌方面具有潜在的应用前景。

Description

一种核酸干扰药物组合物及用于治疗结直肠癌、胃癌、前列腺 癌的药物
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种核酸干扰药物组合物及用于治疗结直肠癌、胃癌和前列腺癌的药物。
背景技术
根据世界卫生组织(World Health Organization,WHO)数据统计(https://gco.iarc.fr/)，2020年全球癌症新发病率前五名分别是乳腺癌(11.7％)、肺癌(11.4％)、结直肠癌Colorectum(10％)、前列腺癌(7.3％)和胃癌Stomach(5.6％)；死亡率前五名分别是肺癌(18％)、结直肠癌(9.4％)、肝癌(8.3％)、胃癌(7.7％)和乳腺癌(6.9％)。
结直肠癌在我国的发病率比较高，在全球各种恶性肿瘤的发病率中位居第三位，而导致患者发生死亡的主要原因就是癌变发生侵袭和转移。由于缺乏早期诊断与高效的筛查方法，大多数患者确诊时已发展至晚期或局部晚期，预后较差。肿瘤转移的步骤比较多，而且也是多阶段性的，牵扯的基因也比较多，其过程比较复杂，例如肿瘤在原发部位发生了脱离，和周围的基质相互融合，肿瘤细胞进入循环系统以及淋巴系统，在内皮细胞壁处粘附，逐渐外延至血管或者更大的面积，发生了血管增生的现象，最终导致了新的转移灶的形成。胃肠道系统拥有人体内最大且最复杂的微生态系统，而胃肠道肿瘤(Gastrointestinalcancer)发病率和死亡率均占据所有癌症的前五名，此类癌症治疗过程中，一方面要维持胃肠道高度复杂和动态的微生物平衡，另一方面又要消灭癌细胞，因此极具挑战性。最近一篇研究表明，胃肠道癌的恶病质患者在至少诊断前6个月就开始有明显的体重减轻现象；而且无论诊断前体重变化和疾病分期如何，大多数胃肠道癌症患者在确诊后，都会转变为恶病质综合征。目前针对胃肠道肿瘤的治疗手段比较局限，根据2021年中国临床肿瘤学会(CSCO)发布的结直肠癌临床诊疗指南2021，目前针对结直肠癌的治疗，仍是以比较传统的手术治疗为主，并行辅助化疗，单抗治疗(如西妥昔单抗(靶向EGFR)，贝伐珠单抗(靶向VEGF))等，而针对术后复发型病人只能采用奥沙利铂等化疗或姑息治疗。而胃癌目前主要的治疗策略也是以外科切除为主的综合治疗，虽然目前手术和化疗方案有所改善，但胃癌患者的预后仍然很差，有些免疫检测点药物或靶向药物虽然在进行临床试验，如PD-1/PD-L1、HER2、EGFR、CLDN18.2等，但仍存在很多不确定因素。目前尚无较好的双靶点联合靶向治疗手段，因此急需新的治疗手段填补空白。
前列腺癌是泌尿男性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一，2020年全球发病率仅次于乳腺癌、肺癌和结直肠癌，位居第四。而我国国家癌症中心2019年公布的2015年恶性肿瘤发病率和死亡率情况，其中前列腺癌发病率和死亡率分别为第六位和第十位。其病因涉及多种因素，如遗传、年龄、外源性酒精摄入过量等。目前为止，尚无明确的药物干预或饮食方法来预防前列腺癌。常见的前列腺癌病理类型包括腺癌、导管内癌、导管腺癌、尿路上皮癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌等，其中前列腺腺癌占主要部分，我们常说的前列腺癌也是指前列腺腺癌。目前主要的治疗手段也大都局限于根治性手术切除、根治性外放射治疗、手术去势或药物去势、联合化疗或其他联合手段治疗、去势联合新型内分泌药物等，无有效一线靶向药物、免疫治疗类药物或新型核酸类药物。
小核酸药物相对于小分子药物和抗体药物具有一些先天的优势，有望对很多传统的小分子和抗体类药物无法治疗的疾病实施治疗。目前有5个上市核酸干扰药物，包括来自美国Alnylam公司的Onpattro(Patisiran)、Givlaari(Givosiran)、Oxlumo(Lumasiran)、Amvuttra(Vutrisiran)和来自瑞士Novartis(诺华)公司的Leqvio(Inclisiran)。Onpattro(Patisiran)是全球第一个siRNA的小核酸药物，于2018年8月获得美国和欧盟批准，用于遗传性ATTR(hATTR)淀粉样变性成人患者第1阶段或第2阶段多发性神经病(Polyneuropathy)的治疗；2023年2月21，Alnylam宣布，FDA已受理Patisiran的新适应症上市申请，用于治疗转甲状腺素介导的淀粉样变性心肌病；Givlaari(Givosiran)于2019年11月获批，用于治疗年龄在12岁及以上的急性肝卟啉症(AHP)青少年和成人患者；Oxlumo(Lumasiran)于2020年11月获得FDA批准，用于治疗所有年龄段的原发性高草酸尿症I型(PH1)患者；Leqvio(Inclisiran)于2020年12月获得欧盟委员会批准，用于治疗成人高胆固醇血症及混合性血脂异常。2022年9月，欧盟委员会批准Amvuttra(Vutrisiran)上市，每3个月皮下注射一次，治疗遗传性转甲状腺素蛋白(hATTR)介导淀粉样变性成人患者的1、2期多发性神经病。虽然小核酸在药物开发中具有广阔的应用前景，但是受限于一些本身特性和技术瓶颈，其开发及应用过程也不是一帆风顺，比如易降解、干扰素反应、脱靶效应、本身穿透能力弱、没有合适的药物递送系统等，导致目前尚无一款针对癌症的核酸干扰药物问世，而上述难题一旦被一一突破，核酸药物领域将迎来极大的机遇和广阔的市场。
针对高发病率癌症，开发能够治疗其中一种或多种癌症的核酸药物是目前的研究重点，具有巨大的潜在应用前景。
发明内容
本发明的目的是提供一种能够抑制结直肠癌肿瘤细胞、胃癌细胞以及前列腺癌细胞中至少一种癌细胞生长的核酸干扰药物组合物。
本发明的另一目的是提供一种用于治疗结直肠癌和/或胃癌和/或前列腺癌的药物。
为达到上述目的，本发明采用的技术方案是：
一种核酸干扰药物组合物，其包括活性成分和药学上可接受的载体，所述的活性成分包括能够抑制和沉默MyD88基因表达的第一活性成分和能够抑制和沉默TGF-β1基因表达的第二活性成分。
具体地，所述的第一活性成分为能够结合编码MyD88蛋白的mRNA并抑制其表达的siRNA分子、miRNA分子或反义寡核苷酸分子中的一种或多种。
具体地，所述的第二活性成分为能够结合编码TGF-β1蛋白的mRNA并抑制其表达的siRNA分子、miRNA分子或反义寡核苷酸分子中的一种或多种。
优选地，本发明提供一种TGF-β1/MyD88双靶点核酸干扰药物组合物，其包括活性成分和药学上可接受的载体，所述的活性成分由能够抑制和沉默MyD88基因表达的第一活性成分和能够抑制和沉默TGF-β1基因表达的第二活性成分组成。
进一步地，所述的活性成分由靶向MyD88基因的siRNA分子和靶向TGF-β1基因的siRNA分子组成。
优选地，所述的靶向MyD88基因的siRNA分子为链长为17～28个碱基对的寡聚核苷酸。例如siRNA分子链长为17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个或28个碱基对。
优选地，所述的靶向TGF-β1基因的siRNA分子为链长为17～28个碱基对的寡聚核苷酸。例如siRNA分子链长为17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个或28个碱基对。
根据一些实施方式，所述的第一活性成分为靶向MyD88基因的siRNA分子，其包括下列寡聚核苷酸中的一组或多组：
正义链：CGUUGUAGGAGGAAUCUGUdTdT，
反义链：ACAGAUUCCUCCUACAACGdTdT；
正义链：GAGGAAUCUGUGCUCUACUdTdT，
反义链：AGUAGAGCACAGAUUCCUCdTdT；
正义链：GGAAUCUGUGCUCUACUUAdTdT，
反义链：UAAGUAGAGCACAGAUUCCdTdT；
正义链：GCUCUACUUACCUCUCAAUdTdT，
反义链：AUUGAGAGGUAAGUAGAGCdTdT；
正义链：GCAUACACACGUUUUUCUAdTdT，
反义链：UAGAAAAACGUGUGUAUGCdTdT；
正义链：CCCAAUGUACCAGUAUUUAdTdT，
反义链：UAAAUACUGGUACAUUGGGdTdT；
正义链：GCUUAAACUCACACAACAAdTdT，
反义链：UUGUUGUGUGAGUUUAAGCdTdT；
正义链：GACCCUAAAUCCAAUAGAAdTdT，
反义链：UUCUAUUGGAUUUAGGGUCdTdT；
正义链：CUUGUUGAGGCAUUUAGCUdTdT，
反义链：AGCUAAAUGCCUCAACAAGdTdT；
正义链：GGCAUCUUCUACAUGUUUUdTdT，
反义链：AAAACAUGUAGAAGAUGCCdTdT；
正义链：CUGAGAAAAGCCGAUAUUUdTdT，
反义链：AAAUAUCGGCUUUUCUCAGdTdT；
正义链：GAGAAGCCUUUACAGGUGGdTdT，
反义链：CCACCUGUAAAGGCUUCUCdTdT；
正义链：AGGAGAUGAUCCGGCAACUdTdT，
反义链：AGUUGCCGGAUCAUCUCCUdTdT；
正义链：CAGAGCAAGGAAUGUGACUdTdT，
反义链：AGUCACAUUCCUUGCUCUGdTdT；
正义链：GCAAGGAAUGUGACUUCCAdTdT，
反义链：UGGAAGUCACAUUCCUUGCdTdT；
正义链：GAAUGUGACUUCCAGACCAdTdT，
反义链：UGGUCUGGAAGUCACAUUCdTdT；
和/或，
所述的第二活性成分为靶向TGF-β1基因的siRNA分子，其包括下列寡聚核苷酸中的一组或多组：
正义链：CCCAAGGGCUACCAUGCCAACUUCU，
反义链：AGAAGUUGGCAUGGUAGCCCUUGGG；
正义链：AACUAUUGCUUCAGCUCCAdTdT，
反义链：UGGAGCUGAAGCAAUAGUUdTdT；
正义链：GCAGAGUACACACAGCAUAdTdT，
反义链：UAUGCUGUGUGUACUCUGCdTdT。
优选地，所述的载体为聚阳离子结合剂、阳离子脂质体、阳离子胶团、阳离子多肽、阳离子聚缩醛、接枝状亲水聚合物、多糖分子、多囊泡体、抗体、多肽分子或核酸适配体中的一种或多种。
根据一些实施方式，所述的载体为药学上可接受的组氨酸-赖氨酸聚合物。
进一步优选地，所述的载体为H3K4b类组氨酸-赖氨酸聚合物。
根据一些实施方式，所述的载体为HKP或HKP(+H)。
本发明还提供所述的核酸干扰药物组合物在制备用于预防和治疗结直肠癌和/或胃癌和/或前列腺癌的药物中的应用。
本发明还提供一种用于治疗结直肠癌和/或胃癌和/或前列腺癌的药物，其包括所述的核酸干扰药物组合物。
优选地，所述的第一活性成分和所述的第二活性成分的投料质量比为1:0.8～1.2，例如1:0.8、1:0.9、1:1、1:1.1、1:1.2。
根据一些实施方式，所述的靶向MyD88基因的siRNA分子和所述的靶向TGF-β1基因的siRNA分子的投料质量比为1:0.8～1.2。
优选地，所述的载体和所述的活性成分的N/P为2/1～6/1，例如2/1、3/1、4/1、5/1、6/1。
优选地，所述的结直肠癌包括腺癌、腺鳞癌和未分化癌。
优选地，所述的胃癌包括腺癌、印戒细胞癌、腺鳞癌、髓样癌、类癌和未分化细胞癌。
优选地，所述的前列腺癌包括腺癌、导管内癌、导管腺癌、尿路上皮癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌。
优选地，所述的药物为纳米颗粒。
进一步地，所述的纳米颗粒的尺寸为50～200nm，例如50nm、55nm、60nm、65nm、70nm、75nm、80nm、85nm、90nm、95nm、100nm、105nm、110nm、115nm、120nm、125nm、130nm、135nm、140nm、145nm、150nm、155nm、160nm、165nm、170nm、175nm、180nm、185nm、190nm、195nm、200nm。
根据具体实施方式，所述的药物为STP500，其中靶向MyD88基因的siRNA分子为：
正义链：GAAUGUGACUUCCAGACCAdTdT；
反义链：UGGUCUGGAAGUCACAUUCdTdT，
靶向TGF-β1基因的siRNA分子为：
正义链：CCCAAGGGCUACCAUGCCAACUUCU；
反义链：AGAAGUUGGCAUGGUAGCCCUUGGG，
载体为HKP(+H)。
优选地，所述的药物通过皮下注射和/或静脉注射的方式给药。
优选地，所述的药物的给药对象为哺乳动物。
由于运用上述技术方案，本发明与现有技术相比具有下列优点：
本发明针对结直肠癌、胃癌或前列腺癌肿瘤微环境和肿瘤转移相关的2个靶点(TGF-β1和MyD88)，设计并筛选出双靶点MyD88/TGF-β1联合核酸干扰药物组合物，体内实验显示能够有效抑制结直肠癌、胃癌或前列腺癌细胞的生长，在治疗结直肠癌、胃癌或前列腺癌方面具有极大的应用前景。
附图说明
图1为MyD88-Toll样受体信号通路示意图；
图2为MyD88基因在细胞系中的表达；
图3为MyD88 siRNA对靶基因MyD88 mRNA表达水平的敲低效果；
图4为候选MyD88 siRNA的EC50数据(半数有效敲低效果的siRNA作用浓度)；
图5为候选MyD88 siRNA及联合TGF-β1siRNA对细胞系中靶基因蛋白水平的敲低效果；
图6为候选MyD88 siRNA的体外细胞划痕实验；
图7为候选siRNA在细胞水平影响细胞因子IL-6分泌的效果；
图8为候选MyD88 siRNA及联合TGF-β1siRNA制剂的制备；
图9为候选MyD88 siRNA及联合TGF-β1siRNA对小鼠结直肠癌细胞(MC38)皮下移植瘤生长的抑制情况(A：MC38细胞皮下移植瘤模型各组肿瘤生长曲线，B：MC38细胞皮下移植瘤模型各组瘤重统计，C：MC38细胞皮下移植瘤模型各组肿瘤照片，D：MC38细胞皮下移植瘤模型各组瘤重统计)；
图10为候选药物STP500对人胃癌细胞(MKN45)皮下异种移植瘤生长的抑制情况(A：MKN45细胞皮下异种移植瘤模型各组肿瘤生长曲线，B：MKN45细胞皮下异种移植瘤模型各组小鼠体重变化曲线，C：MKN45细胞皮下异种移植瘤模型各组肿瘤照片，D：MKN45细胞皮下异种移植瘤模型各组瘤重统计)；
图11为候选药物STP500对小鼠前列腺癌细胞(RM-1)皮下移植瘤生长的抑制情况；(A：RM-1细胞皮下移植瘤模型各组肿瘤生长曲线，B：RM-1细胞皮下移植瘤模型各组小鼠体重变化曲线，C：RM-1细胞皮下移植瘤模型各组肿瘤照片，D：RM-1细胞皮下移植瘤模型各组瘤重统计)；
图12为候选药物STP500对小鼠结直肠癌细胞(MC38)皮下移植瘤生长的抑制情况，及转录组分析数据比对(A：MC38细胞皮下移植瘤模型各组肿瘤生长曲线，B：MC38细胞皮下移植瘤模型各组小鼠生存率曲线，C：MC38细胞皮下移植瘤模型转录组数据，给药组(STP500)对比对照组(NC)上调/下调基因(火山图)，D：MC38细胞皮下移植瘤模型转录组数据，给药组(STP500)对比对照组(NC)上调/下调基因(热图))。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步描述。但本发明并不限于以下实施例。实施例中采用的实施条件可以根据具体使用的不同要求做进一步调整，未注明的实施条件为本行业中的常规条件。本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
髓样分化因子88(Myeloid Differentiation Factor 88,MyD88)，是Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)信号通路中的一个关键接头分子，除TLR3以外，在所有的TLR的信号通路中起作用。MyD88在传递上游信息和疾病发生发展，以及介导先天免疫反应中起着重要作用。TLR家族是目前研究最多的模式识别受体(Pattern recognition receptor,PRR)，通过特异性识别病源相关分子模式(Pathogen-associated molecular patterns,PAMP)将信号传导入细胞内，调节下游信号级联反应。MyD88位于3号染色体短臂，多项研究发现，最常发生的点突变是265位点的亮氨酸(Leu)被脯氨酸(Pro)替代，即为我们熟知的MYD88 L265P突变，该突变会导致下游NF-κB等信号通路异常激活。除了NF-κB途径，MyD88还通过TLR家族调控下游多种关键分子调控免疫细胞、细胞因子(如IL-6，TNF-α，IL-1β等)及趋化因子，进而影响肿瘤微环境，如丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-active proteinkinase,MAPK)，Janus激酶和转录因子3(Jak-Stat3)等(图1，图片来源：https://doi.org/10.1007/s11523-018-0589-7)。
目前，Zhang J.等在小鼠模型中的研究表明，肌成纤维细胞中的MyD88促进骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)的分泌并促进巨噬细胞的M2极化，从而导致STAT3/PPARγ信号通路激活和结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)发展。另一项研究表明，直接利用MyD88抑制剂TJ-M2010-5可通过损伤骨髓来源的抑制细胞(Myeloid-derived suppressor cells,MDSC)来预防结肠炎相关的结直肠癌的发展，此研究也表明了MyD88信号通路参与了MDSC免疫抑制功能的调节。同时，也有许多学者认为，MyD88在结直肠癌的发生与发展过程中扮演着双重角色：a，通过增强癌症炎症和肠道菌群失衡，诱导肿瘤侵袭和肿瘤细胞自我更新，进而产生肿瘤促进作用；b，维持宿主-微生物群稳态，以诱导肿瘤细胞周期停滞和针对癌细胞的免疫反应，从而产生抗肿瘤作用。TLR/IL-1R信号也被证明通过维持结肠上皮的微生物耐受性在肠道稳态、肠道炎症和结肠炎相关的肿瘤发生中发挥关键作用。而MyD88蛋白在TLR/IL-1R炎症和Ras信号通路之间起着桥梁作用，MyD88/TLR/IL-1R信号通路的激活导致Ras/ERK的激活，并促进肿瘤细胞增殖。基于此，发明人进行了一系列前期实验验证，确定MyD88是治疗结直肠癌的潜在靶点。
转化生长因子-β(Transforming Growth Factor-β,TGF-β)信号通路通过其介导的一系列信号传递的过程，在细胞和组织的生长、发育、分化中起关键作用，对细胞的增殖、细胞间质产生、分化、调亡，胚胎发育，器官的形成，免疫功能，炎性反应，创伤修复等都有重要的调节作用。目前，已知在人类中共存在33个TGF-β家族蛋白，包括3个TGF-β(TGF-β1/2/3)、10个骨形态发生蛋白(Bone Morphogenetic Protein,BMP)和11个生长分化因子(Growth and Differentiation Factor,GDF)，以及激活素(Activin)、节点(Nodal)、抑制素(Inhibin)等。在癌细胞中，TGF-β信号通路参与调节多种细胞功能，包括细胞周期进程、细胞凋亡、粘附和细胞分化等。在肿瘤发展的晚期，TGF-β在肿瘤微环境中促进细胞增殖、诱导血管生成和抑制免疫应答。作为免疫抑制细胞因子，TGF-β抑制免疫细胞的发育、增殖和活化，包括T细胞(CD4+效应T细胞和CD8+细胞毒性T细胞)、NK细胞和巨噬细胞。此外，TGF-β诱导调节性T细胞增殖(Regulatory T cells，Treg)，继而抑制效应T细胞、NK细胞和巨噬细胞的激活。可见，TGF-β通过抑制先天和适应性免疫系统创造免疫耐受微环境，有利于肿瘤发展，并增强癌细胞迁移和侵入邻近组织的能力，促进肿瘤转移。
综上所述，TGF-β1信号通路在肿瘤发生与转移等均有复杂的联系，而MyD88蛋白则是连接上游TLR家族等炎性信号通路及癌症RAS通路等的关键分子。而目前尚无关于这两种通路联合治疗胃肠道癌症及前列腺癌症的研究，本发明人认为若能够开发能够同时有效靶向TGF-β1和MyD88的双靶点药物，将在治疗结直肠癌、胃癌和前列腺癌方面具有极大的应用前景。
故此，发明人经过大量的研究和实验验证，发现TGF-β1靶点和MyD88靶点联用对抑制结直肠癌细胞、胃癌细胞和前列腺癌细胞生长相比MyD88靶点单独使用或MyD88靶点与其他靶点联用均具有积极作用，进而提出一种能够同时靶向肿瘤微环境靶点(MyD88)和肿瘤转化转移相关靶点(TGF-β1)的双靶点核酸干扰药物组合物，经大量体内实验验证，该双靶点核酸干扰药物组合物在治疗直肠癌、胃癌和前列腺癌方面表现出色且安全性更高，具有极大的应用前景。
具体地，本发明提供的核酸干扰药物组合物包括活性成分和药学上可接受的载体，所述的活性成分包括能够抑制和沉默MyD88基因表达的第一活性成分和能够抑制和沉默TGF-β1基因表达的第二活性成分。
其中，所述的第一活性成分为能够结合编码MyD88蛋白的mRNA并抑制其表达的siRNA分子、miRNA分子或反义寡核苷酸分子中的一种或多种。
所述的第二活性成分为能够结合编码TGF-β1蛋白的mRNA并抑制其表达的siRNA分子、miRNA分子或反义寡核苷酸分子中的一种或多种。
RNA干扰(RNA interference，RNAi)是生物界普遍存在的一种有效的基因沉默过程，广泛存在于植物、动物等真核生物细胞内。RNAi是指将双链RNA(Double Strand RNA，dsRNA)导入细胞内后，使mRNA降解，从而导致具有序列同源性的基因产生特异性基因沉默(Gene Silencing)的现象。外源性基因如转座子、人工转入基因、病毒基因等，随机整合到宿主细胞基因组内，并利用宿主细胞进行转录时，常产生一些dsRNA，dsRNA通常大于30个碱基对。宿主细胞对这些dsRNA迅即产生反应，内源性或外源性dsRNA可被体内特定的核糖核酸酶(Dicer)切割成长度为21～23个碱基对的小双链片段，这些小的双链片段称为小干扰RNA(Small Interfering RNA，siRNA)。siRNA双链可与RNA诱导的基因沉默复合物(RNA-induced Silencing Complex，RISC)连接在一起，并在与RISC结合后，靶向切割特定mRNA从而中断特定mRNA的翻译过程，抑制和沉默目的基因的表达。
与siRNA不同，成熟的微核苷酸(micro RNA，miRNA)是单链RNA，在生物体内由Pri-miRNA(primary miRNA)在细胞核内被加工成产生pre-miRNA(precursor miRNA)，之后由Exportin-5蛋白从核里运输到细胞质，在细胞质中，pre-miRNA被RNaseⅢenzyme Dicer加工，成为成熟的miRNA。在生物体内降解靶标基因mRNA，调节其转录水平，但是不影响mRNA稳定性，其结合mRNA的特异性较siRNA低。
反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide，ASO)是单链DNA分子，通过碱基互补原则结合于靶基因mRNA，继而通过空间位阻阻断蛋白质翻译，或通过RNase H切割导致mRNA降解，或通过干扰顺式剪切元件改变pre-mRNA剪切，最终封闭靶基因的表达。
根据实施例，所述的活性成分包括靶向MyD88基因的siRNA分子和靶向TGF-β1基因的siRNA分子。
其中，靶向MyD88基因的siRNA序列，理论上是可以通过RNAi机制结合并降解靶细胞中的MyD88 mRNA，从而阻断其蛋白的翻译水平，进而起到抑制MyD88的蛋白表达情况。
靶向TGF-β1基因的siRNA序列，理论上是可以通过RNAi机制结合并降解靶细胞中的TGF-β1mRNA，从而阻断蛋白的翻译水平，进而起到抑制TGF-β1的蛋白表达情况。
本发明采用一种内含若干参数条件的特定算法和编程，针对靶基因TGF-β1和MyD88，设计了一系列的siRNA序列，所述的靶向MyD88基因的siRNA分子和靶向TGF-β1基因的siRNA分子分别为长度为19～25个碱基对的寡核苷酸序列。
优选地，所述的靶向MyD88基因的siRNA分子和靶向TGF-β1基因的siRNA分子的长度分别为21～25个碱基对。
核酸干扰药物进入临床应用的主要限制是需要一种有效的转运载体(称为导入/递送系统)，该递送系统必须能够有效保护和转运其所载物，在到达靶标细胞外后，还必须能够穿过细胞质膜，最后进入细胞质，使核酸干扰药物的活性成分发挥作用。目前已有多种递送系统用于靶向或增强小核酸药物递送，如聚阳离子结合剂、阳离子脂质体、阳离子胶团、阳离子多肽、阳离子聚缩醛、接枝状亲水聚合物、多糖分子(与RNA分子形成多糖-RNA单缀合物)、多囊泡体、抗体、多肽分子(自组装形成多肽纳米颗粒载体导入系统)、核酸适配体等。
根据实施例，本发明使用的是申请人拥有自主知识产权的多肽纳米颗粒载体导入系统，一种富含组氨酸-赖氨酸的多肽导入系统，详见专利：用于核酸治疗的可控偶联多肽纳米颗粒导入系统的组合物及方法(专利号：CN 112703196 A)。
具体地，所述的递送载体为HKP或HKP(+H)。
具体地，通过多肽纳米颗粒(Peptide Nanoparticle,PNP)技术，将靶向MyD88基因的siRNA分子和靶向TGF-β1基因的siRNA分子包裹进HKP或HKP+H(组氨酸-赖氨酸多聚物)载体，制成纳米颗粒制剂。
具体地，所述的靶向MyD88基因的siRNA分子和所述的靶向TGF-β1基因的siRNA分子的投料质量比为1:0.8～1.2，载体和活性成分的N/P为2/1～4/1。
本发明采用PNP技术包裹并导入联合靶向MyD88(MD8)和TGF-β1(TF1)的siRNA联合用药能够显著抑制结直肠癌、胃癌和前列腺癌生长，在治疗结直肠癌、胃癌和前列腺癌方面显示出潜在的应用前景。
以下通过实施例具体阐述本发明的技术方案和技术效果。
实施例1：
针对两个靶点(MyD88和TGF-β1)设计siRNA序列
我们采用一种内含若干参数条件的特定算法和编程，针对靶基因TGF-β1和MyD88，设计了一系列的siRNA序列，包括25个碱基对和21个碱基对长度的寡核苷酸序列。表1列出了针对TGF-β1和MyD88两个靶标的siRNA序列。这些序列的特征包括但不限于：针对基因编码序列、合理的热力学稳定性、较低的预期毒副作用等。
其中，靶向MyD88基因的siRNA序列，理论上是可以通过RNAi机制结合并降解靶细胞中的MyD88 mRNA，进而起到下调MyD88的蛋白表达情况。
其中，靶向TGF-β1基因的siRNA序列，理论上是可以通过RNAi机制结合并降解靶细胞中的TGF-β1mRNA，进而起到下调TGF-β1的蛋白表达情况。
表1.相关实验候选MyD88 siRNA，及联合TGF-β1siRNA序列和其他对照组siRNA序列
Figure SMS_1
Figure SMS_2
实施例2：
体外筛选细胞系中MyD88的基因表达
利用RT-PCR方法对多种人源和鼠源细胞系进行MyD88基因表达进行鉴定，MyD88基因在细胞系中的表达结果见图2，选用的细胞系包括人源(Homo)：U87-MG，T98G，MKN-45，BxPC3，RKO，DLD-1，SW480，HCT116，MDA-MB-231；鼠源(Mus)：L1210，Raw264.7，PANC02，MC38，4T1，RM-1，Renca。
根据图2数据，取Ct值在20～25的候选细胞系用于进行后续体外筛选(细胞水平)，包括乳腺癌细胞系(MDA-MB-231)、神经胶质瘤细胞系(U87-MG)、人脑胶质瘤细胞系(T98G)、人结直肠癌上皮细胞系(DLD-1)和人结肠癌细胞系(RKO)。
实施例3：
体外筛选靶向MyD88基因的siRNA序列(细胞水平)
使用商业化的细胞转染试剂(Lipo2000)运载表1所示的siRNA序列并将其转染细胞，转染后的细胞继续培养24h后，通过体外细胞水平的一系列实验方法(包含QRT-PCR，细胞增殖活性以及WB等蛋白表达水平的检测)，针对实施例2中筛选出的siRNA序列进行细胞水平的筛选工作，大概流程包括：(1)siRNA序列的初筛；(2)EC50(具有半数有效靶基因敲低的浓度)的检测，最终确认可以用于体内药效学研究的候选siRNA序列。选用实施例2筛选出的候选细胞系进行siRNA的体外筛选工作，包括乳腺癌细胞系(MDA-MB-231)、神经胶质瘤细胞系(U87-MG)、人脑胶质瘤细胞系(T98G)、人结直肠癌上皮细胞系(DLD-1)和人结肠癌细胞系(RKO)。序列的初筛和EC50的检测均采用RT-PCR技术检测靶基因的mRNA表达水平。
RT-PCR技术检测MyD88 siRNA对靶基因MyD88 mRNA表达水平的敲低，结果见图3。根据检测结果，筛选得到的候选序列编号为：MD8-21-hm3#，MD8-21-hm4#，MD8-21-hm5#和MD8-21-h5#。考虑后续体内动物实验使用，后续选用人鼠同源(hm)序列MD8-21-hm3#(KD＝88％)，MD8-21-hm4#(KD＝86％)，MD8-21-hm5#(KD＝86％)。
之后，针对这3条候选siRNA序列，设定多浓度梯度进行细胞转染，获取其EC50值，结果(图4)显示这3条候选序列中的MD8-21-hm5#在小鼠前列腺癌(RM-1)细胞和结直肠癌(MC38)细胞中的EC50均小于10nM，分别为5.59nM和7.41nM，可做为候选序列进行体内试验。
实施例4：
体外筛选靶向TGF-β1基因的siRNA序列(细胞水平)
针对TGF-β1靶基因，因该基因的表达比较广泛，仅挑选了几种肿瘤细胞系进行体外细胞水平的筛选工作，其中包含胆管癌，乳腺癌，肺癌，胰腺癌，结直肠癌以及胶质瘤细胞等。所用实验方法与MyD88相同，表1中所示的TGF-β1siRNA序列为筛选后获得的候选序列。
实施例5：
体外细胞系中候选siRNA序列对靶基因蛋白水平的敲低效果检测
通过Western Blot检测，我们完成了分别针对靶点TGF-β1和MyD88在细胞水平的siRNA序列敲低靶基因的检测。具体方法如下：实验操作前一天，细胞以每孔106细胞量接种于6孔板中，过夜培养。第二天，siMD8与siTF1分别以100nM和10nM剂量转染至细胞内。转染48h后，收集细胞至离心管中，每管加入RIPA裂解液萃取细胞总蛋白，然后利用BCA蛋白定量法对细胞总蛋白浓度进行定量。接着对所有蛋白样品进行Western Blot检测，其中所用抗体有：MyD88一抗(ab219413，1:1000)，TGF-β1一抗(ab215715，1:1000)，山羊抗兔IgG H&L(HRP)(ab205718，1:10000)。实验结束，用化学发光成像系统(ChemiDocTM MP ImagingSystem，BIO-RAD)对结果进行拍照采集。
Western Blot法检测3种细胞系中候选MyD88 siRNA(MD8-21-hm5#)联合TGF-β1siRNA(TF1-21-h1#)在体外人乳腺癌细胞系(MDA-MB-231)、人结肠癌细胞系(RKO)和小鼠前列腺癌(RM-1)细胞中的蛋白表达量。图5显示候选MyD88 siRNA(MD8-21-hm5#)在3种细胞系中均具有明显的敲低效果；TGF-β1siRNA(TF1-21-h1#)在RKO细胞系中具有明显的敲低效果；候选MyD88 siRNA(MD8-21-hm5#)联合TGF-β1siRNA(TF1-21-h1#)在3种细胞系中对相应目的蛋白均具有明显的敲低效果。
实施例6：
体外检测候选siRNA对人结直肠癌上皮细胞系DLD-1细胞迁移能力的影响
实验操作前一天，取12孔板，将伤口愈合2孔插件(ibidi，80209)放置培养皿中央，以每孔104细胞量接种于2孔插件中，过夜培养。第二天，siMD8以100nM和10nM剂量转染至细胞内，完成转染实验，转染24后，用镊子轻轻移除伤口愈合2孔插件(避免细胞脱落)，12孔板中加入含1％血清的培养基继续培养细胞，同时在显微镜下拍照作为0h细胞迁移数据。继续培养24h和96h，显微镜下拍照记录细胞迁移情况。通过对初始划线(0h)和后期观察点(24h和96h)的伤口距离对比来判断细胞迁移情况。实验结果显示(图6)，候选MyD88siRNA单药(MD8-21-hm5#)在96h对DLD-1细胞体外迁移能力具有明显抑制效果，且具有剂量依赖效应。
实施例7：
体外检测候选siRNA对小鼠前列腺癌细胞系RM1细胞分泌IL-6细胞因子的影响
实验操作前一天，将细胞以每孔1×105细胞量接种于24孔板中，过夜培养。第二天，siMD8与siTF1分别以100nM和10nM剂量转染至细胞内，转染48h后，取细胞培养上清液进行Elisa检测。细胞培养上清液300×g离心10min去除沉淀物(一般无沉淀物)，即刻检测或分装，-20℃保存。参考Mouse IL-6ELISA Kit(联科生物，EK206/3-96)进行检测，标准品设置2个复孔，实验组设置3个复孔。实验完成后，使用ELISACalc软件绘制标曲，并计算实验组浓度。结果显示(图7)，在RM-1细胞中，转染48h后高浓度单药组和联合双药组的IL-6有显著的降低。该结果表明，siMD8及siTF1均可抑制下游IL-6的表达，且具有剂量依赖效应。
实施例8：
纳米药物制剂的制备与鉴定
通过体外筛选工作，我们完成了针对靶点TGF-β1和MyD88在细胞水平的siRNA序列筛选工作，然后我们使用两个靶点的候选siRNA序列制备纳米药物制剂，本实施例中选用MD8-21-hm5#和TF1-25-hm5#按照质量比1:1混合后，与多肽载体(HKP或HKP(+H))形成稳定的纳米颗粒制剂(参照专利CN 112703196 A)，制备的纳米药物制剂标记为STP500，用于体内的药效学验证。本实施例中，有关原辅料信息及制剂参数参考表2和表3。成品见图8，上层图片为冻干制剂(左图为MyD88 siRNA制剂，右图为MyD88 siRNA+TGF-β1siRNA制剂)，下层图片为复溶制剂(左图为MyD88 siRNA制剂，右图为MyD88 siRNA+TGF-β1siRNA制剂)。
表2.本专利相关实验候选MyD88 siRNA，以及MyD88 siRNA联合TGF-β1siRNA制剂(STP500)制备。
Figure SMS_3
表中N/P为多肽载体和siRNA原料的N/P。
表3.本专利相关实验候选MyD88 siRNA，以及MyD88 siRNA联合TGF-β1siRNA制剂参数。
Figure SMS_4
Figure SMS_5
实施例9：
体内药效学验证工作(结直肠癌MC38细胞小鼠皮下移植瘤模型)
根据前期体外相关实验数据，我们将两条siRNA(本实施例中选用MD8-21-hm5#和TF1-25-hm5#)以质量比为1/1进行混合，通过专利PNP技术，包裹进HKP(+H)(组氨酸-赖氨酸多聚物)载体，制成纳米颗粒制剂(实施例8中制备的纳米药物制剂STP500)，并通过小鼠移植瘤模型(结直肠癌细胞MC38)来验证候选siRNA序列的抑制肿瘤生长活性。
C57BL/6小鼠，每只小鼠皮下接种1×106个MC38细胞，在肿瘤平均体积达到约100mm3时，进行随机分组，给药信息如下：STP500，2mg/kg，尾静脉给药i.v.，每2天给药一次(Q2D)；小核酸单药MD8(MyD88 siRNA，也记作siMyD88)，1mg/kg，尾静脉给药i.v.，每2天给药一次(Q2D)；阳性对照组(Sorafenib，索拉非尼)，30mg/kg，灌胃给药p.o.，每天给药一次(QD)。第一次给药后，每2天记录小鼠体重及肿瘤体积，肿瘤体积计算公式为：V＝0.5×(Dmax×Dmin2)，实验结束后绘制肿瘤体积曲线图，安乐牺牲小鼠并取出肿瘤，称量肿瘤重量。瘤重变化率TGItw(肿瘤重量变化)计算公式：
Figure SMS_6
Mean TW treat:给药组小鼠终点处理时肿瘤重量的平均值；
Mean TW vehicle:Vehicle组小鼠终点处理时肿瘤重量的平均值。
实验结果见图9，结果显示，与对照组相比，8次给药后，MyD88和TGF-β1联合用药组(MD8+TF1)纳米颗粒药物可以明显抑制小鼠结直肠癌移植瘤(MC38细胞系)的生长，且效果优于其他组(MyD88 siRNA单独组(MD8))及阳性对照组(Sorafenib)；且相对于模型组组(Vehicle)，联合给药组肿瘤体积减少且具有统计学差异(*P＜0.05)(图9A)；联合给药组瘤重减少且具有显著统计学差异(**P＜0.01)(图9B)。候选联合用药组(STP500)肿瘤相对于对照组(Vehicle)具有62％的抑瘤率(图9C，图9D，表4)，瘤重差异具有统计学意义(*P<0.05)。
表4.siMD8单药及STP500在结直肠癌(MC38)移植瘤模型中的抑瘤率
Figure SMS_7
实施例10：
体内药效学验证工作(胃癌MKN45细胞小鼠皮下异种移植瘤模型)
接下来，我们建立另外一种移植瘤模型，进一步验证候选药物对人胃癌MKN45细胞小鼠异种移植瘤生长的药效学评价。纳米药物制剂方法如前。MKN45皮下荷瘤鼠建模如下：BALB/c-Nude小鼠，每只小鼠皮下接种5×106个MKN45细胞。在肿瘤平均体积达到100～120mm3左右时，进行随机分组。给药信息如下：STP500，3mg/kg，尾静脉给药i.v.，每2天给药一次(Q2D)；阳性对照组(Oxaliplatin，奥沙利铂)，7.5mg/kg，腹腔给药i.p.，每天给药一次(QD)。第一次给药后，每2天记录小鼠体重及肿瘤体积，肿瘤体积计算公式为：V＝0.5×(Dmax×Dmin2)，实验结束后绘制肿瘤体积曲线图，安乐牺牲小鼠并取出肿瘤，称量肿瘤重量。瘤重变化率TGItw(肿瘤重量变化)计算公式：
Figure SMS_8
Mean TW treat:给药组小鼠终点处理时肿瘤重量的平均值；
Mean TW vehicle:Vehicle组小鼠终点处理时肿瘤重量的平均值。
实验结果见图10，结果显示，与对照组相比，7次给药后，MyD88和TGF-β1联合用药组(STP500)纳米颗粒药物可以明显抑制人胃癌移植瘤(MKN45细胞系)的生长(图10A)，且该剂量下，siRNA纳米颗粒药物对小鼠的体重无明显影响；相较之下，阳性药物Oxaliplatin虽然抑瘤效果更好，实验终点只取到一个肿瘤样本，但是也显示出了一定的毒性，组内小鼠体重有所下降(图10B)。候选联合用药组(STP500)肿瘤相对于对照组(Vehicle)具有50％的抑瘤率(图10C，图10D，表5)，瘤重差异具有统计学意义(*P<0.05)。
表5.STP500在胃癌(MKN45)异种移植瘤模型中的抑瘤率。
Figure SMS_9
实施例11：
体内药效学验证工作(前列腺癌RM-1细胞小鼠皮下移植瘤模型)
紧接着，我们建立另外一种移植瘤模型，进一步验证候选药物对小鼠前列腺癌RM-1细胞小鼠移植瘤生长的药效学评价。纳米药物制剂方法如前。RM-1皮下荷瘤鼠建模如下：C57BL/6J小鼠，每只小鼠皮下接种5×106个细胞。在肿瘤平均体积达到100～120mm3左右时，进行分组，分组采用随机数分组。给药信息如下：STP500，3mg/kg，尾静脉给药i.v.，每2天给药一次(Q2D)；阳性对照组(Docetaxel，多西他赛)，15mg/kg，腹腔给药i.p.，每周给药一次(QW)。第一次给药后，每2天记录小鼠体重及肿瘤体积，肿瘤体积计算公式为：V＝0.5×(Dmax×Dmin2)，实验结束后绘制肿瘤体积曲线图，安乐牺牲小鼠并取出肿瘤，称量肿瘤重量。瘤重变化率TGItw(肿瘤重量变化)计算公式：
Figure SMS_10
Mean TW treat:给药组小鼠终点处理时肿瘤重量的平均值；
Mean TW vehicle:Vehicle组小鼠终点处理时肿瘤重量的平均值。
实验结果见图11，结果显示，与对照组相比，8次给药后，MyD88和TGF-β1联合用药组(STP500)纳米颗粒药物可以明显抑制鼠源前列腺癌(RM-1细胞系)的生长(图11A)，在首次给药后第12天，STP500给药组和Vehicle组对比，肿瘤体积有明显减小，且具有统计学意义(*P<0.05)；在首次给药后第14天，STP500给药组和Vehicle组对比，肿瘤体积有明显减小，且具有显著统计学意义(**P<0.01)；且该剂量下(3mg/kg,Q2D)，siRNA纳米颗粒药物对小鼠的体重无明显影响；相较之下，常用化疗药物Docetaxel在本次实验中未表现出杀伤肿瘤作用，显示出一定临床局限性。组内小鼠体重变化无明显差异(图11B)。候选联合用药组(STP500)肿瘤相对于对照组(Vehicle)具有45％的抑瘤率(图11C，图11D，表6)，瘤重差异具有显著统计学意义(**P<0.01)。
表6.STP500在前列腺癌(RM-1)移植瘤模型中的抑瘤率。
Figure SMS_11
实施例12：
体内药效学验证工作(结直肠癌MC38细胞小鼠皮下移植瘤模型-独立平行试验)
同时，在另一组独立平行试验中，我们重复测试了候选药物STP500在结直肠癌细胞系MC38皮下移植瘤的药效学评价试验，并对给药组(STP500)和siRNA药物阴性对照组(NC)组的转录组测序数据进行了对比分析。纳米药物制剂方法如前。MC38皮下荷瘤鼠建模如下：C57BL/6小鼠，每只小鼠皮下接种1×106个MC38细胞，在肿瘤平均体积达到约100mm3时，进行随机分组，给药信息如下：STP500，2mg/kg，尾静脉给药i.v.，每3天给药一次(Q3D)；阳性对照组(mPD-L1，PD-L1抗体)，5mg/kg，腹腔给药i.p.，每3天给药一次(Q3D)。第一次给药后，每2天记录小鼠体重及肿瘤体积，肿瘤体积计算公式为：V＝0.5×(Dmax×Dmin2)，实验结束后绘制肿瘤体积曲线图，安乐牺牲小鼠并取出肿瘤，称量肿瘤重量。
实验结果见图12，结果显示，与对照组相比，7次给药后，MyD88和TGF-β1联合用药组(STP500)纳米颗粒药物可以明显抑制鼠源结直肠癌(MC38细胞系)的生长(图12A)，和我们之前结论相互印证。在首次给药后第14天，STP500给药组和Vehicle组对比，肿瘤体积有明显减小，且具有统计学意义(*P<0.05)；组内小鼠生存曲线也表明了相对应的结论(图12B)。
我们于实验终点(首次给药后第18天)随机选取STP500给药组和小核酸药物阴性对照组(NC)小鼠各3只，进行肿瘤样本的转录组测序，测序工作由苏州金唯智生物科技有限公司完成。之后我们对测序数据进行处理分析，利用Hisat2(v2.0.1)对基因组序列进行索引参考；最后，通过软件Hisat2(v2.0.1)将干净数据与参考基因组进行比对。fasta格式的文本从已知的gff注释文件转换并正确索引。然后，HTSeq(v0.6.1)将该文件作为参考基因文件，从配对端清洁数据中估计基因和亚型表达水平。差异表达分析使用DESeq2Bioconductor包，一个基于负二项分布的模型。离散度和对数倍变化的估计采用数据驱动的先验分布，|log2(FoldChange)|>1和p-value<0.05被认为是差异表达基因。利用STRING数据库(https://string-db.org/)构建差异表达基因的蛋白质互作网络，InteractionScore>0.4作为阈值。将结果导入Cytoscape软件(v3.9.1)。使用Cytoscape的插件CytoNCA对中间中心性进行分析并作图。R包clusterProfiler(v4.4.4)用于对差异表达的基因分别进行GO(Gene Ontology)功能富集分析和KEGG(京都基因和基因组百科全书)分析，使用R包ggplot2(v3.3.6)对结果进行绘制。
数据统计结果见图12(C&D)，相对于NC组基因表达，我们在STP500给药组样本中检测到101个上调基因和207个下调基因(图12C)，如部分肿瘤相关基因(Claudin-5，Vtn，Ambp，Col1a1等)的表达下调，而免疫激活相关基因(如CD28等)的表达增加，两组样本上调和下调基因表达情况如热图所示(图12D)。表7列出部分候选基因，及其相关生物学功能。转录组数据为后续靶点基因相关通路研究及该靶点和其他靶点相互作用研究提供了一定的支持，为未来开发其他相关小核酸药物或联合用药策略提供了数据支撑。
表7.转录组分析数据-代表性候选靶点相关基因。
Figure SMS_12
Figure SMS_13
CytoNCA:用于蛋白质相互作用网络中心性分析和评估的细胞景观插件；
clusterProfiler:用于比较基因簇间的生物学主题的R包。
综合以上实施例的实验数据可以看出，采用PNP技术包裹并导入联合靶向MyD88(MD8)和TGF-β1(TF1)的siRNA联合药物(STP500)在治疗结直肠癌、胃癌等消化系统类癌症和前列腺癌方面具有潜在的应用前景。
上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种核酸干扰药物组合物，其特征在于，所述的核酸干扰药物组合物包括活性成分和药学上可接受的载体，所述的活性成分包括能够抑制和沉默MyD88基因表达的第一活性成分和能够抑制和沉默TGF-β1基因表达的第二活性成分。
2.根据权利要求1所述的核酸干扰药物组合物，其特征在于，所述的第一活性成分为能够结合编码MyD88蛋白的mRNA并抑制其表达的siRNA分子、miRNA分子或反义寡核苷酸分子中的一种或多种；和/或，所述的第二活性成分为能够结合编码TGF-β1蛋白的mRNA并抑制其表达的siRNA分子、miRNA分子或反义寡核苷酸分子中的一种或多种。
3.根据权利要求2所述的核酸干扰药物组合物，其特征在于，所述的第一活性成分为靶向MyD88基因的siRNA分子，其包括下列寡聚核苷酸中的一组或多组：
正义链：CGUUGUAGGAGGAAUCUGUdTdT，
反义链：ACAGAUUCCUCCUACAACGdTdT；
正义链：GAGGAAUCUGUGCUCUACUdTdT，
反义链：AGUAGAGCACAGAUUCCUCdTdT；
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和/或，
所述的第二活性成分为靶向TGF-β1基因的siRNA分子，其包括下列寡聚核苷酸中的一组或多组：
正义链：CCCAAGGGCUACCAUGCCAACUUCU，
反义链：AGAAGUUGGCAUGGUAGCCCUUGGG；
正义链：AACUAUUGCUUCAGCUCCAdTdT，
反义链：UGGAGCUGAAGCAAUAGUUdTdT；
正义链：GCAGAGUACACACAGCAUAdTdT，
反义链：UAUGCUGUGUGUACUCUGCdTdT。
4.根据权利要求1所述的核酸干扰药物组合物，其特征在于，所述的载体为聚阳离子结合剂、阳离子脂质体、阳离子胶团、阳离子多肽、阳离子聚缩醛、接枝状亲水聚合物、多糖分子、多囊泡体、抗体、多肽分子或核酸适配体中的一种或多种。
5.根据权利要求4所述的核酸干扰药物组合物，其特征在于，所述的载体为组氨酸-赖氨酸聚合物。
6.根据权利要求5所述的核酸干扰药物组合物，其特征在于，所述的载体为H3K4b类组氨酸-赖氨酸聚合物。
7.根据权利要求5所述的核酸干扰药物组合物，其特征在于，所述的载体为HKP或HKP(+H)。
8.一种如权利要求1至7中任一项所述的核酸干扰药物组合物在制备用于治疗结直肠癌、胃癌、前列腺癌的药物中的应用。
9.一种用于治疗结直肠癌、胃癌、前列腺癌的药物，其特征在于，所述的药物包括权利要求1至7中任一项所述的核酸干扰药物组合物。
10.根据权利要求9所述的药物，其特征在于，所述的第一活性成分和所述的第二活性成分的投料质量比为1:0.8～1.2；
和/或，所述的载体和所述的活性成分的N/P为2/1～6/1；
和/或，所述的药物为纳米颗粒；
和/或，所述的药物通过皮下注射和/或静脉注射的方式给药；
和/或，所述的药物的给药对象为哺乳动物。
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