JP2022546537A - Ｔ細胞療法のためのｔ細胞の調製方法 - Google Patents

Abstract

本明細書では、所定の細胞密度で、細胞集団をある濃度の抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスと接触させ、細胞を培養し、それにより少なくとも一つのＴ細胞サブタイプの割合の増加を含むＴ細胞集団を産生することを含む、Ｔ細胞療法のためのＴ細胞を調製する方法が提供される。一部の実施形態では、方法は、幹メモリーＴ細胞の割合を増加させる。【選択図】図１

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年９月３日に出願された米国仮特許出願第６２／８９５，３８１号の優先権の利益を主張するものであり、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
[技術分野]

本開示は、Ｔ細胞療法のために一つ以上のＴ細胞を調製する方法に関する。特に、本開示は、所定の細胞密度を有する細胞集団を、Ｔ細胞サブタイプの割合を増加させるように選択される、ある濃度の抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスと接触させることによって、細胞集団における少なくとも一つのＴ細胞サブタイプの割合を増加させる方法に関する。

ヒト癌は、その性質により、遺伝的または後成的変換を受けて異常な癌細胞となった正常な細胞から構成される。そうすることで、癌細胞は、正常な細胞によって発現されるものとは別個のタンパク質および他の抗原を発現し始める。これらの異常腫瘍抗原は、身体の自然免疫系が癌細胞を特異的に標的にし、死滅させるために使用され得る。しかしながら、癌細胞は様々な機序を利用して、Ｔリンパ球およびＢリンパ球などの免疫細胞が癌細胞を首尾よく標的にすることを妨げる。

ヒトＴ細胞療法は、エクスビボで濃縮または改変されたヒトＴ細胞に依存して、対象、例えば患者において、癌細胞を標的にし、死滅させる。腫瘍抗原を標的化することができる天然起源のＴ細胞、または既知の癌抗原を特異的に標的化する遺伝子改変Ｔ細胞の濃度を高くする様々な技術が開発されてきた。これらの療法は、腫瘍サイズおよび患者の生存に対して有望な効果を有することが実証されている。

Ｔ細胞の混合集団の移植は、Ｔ細胞療法が能力を最大限に発揮することを妨げ得る要因の一つである。従来的なＴ細胞療法では、ドナーＴ細胞が収集され、任意に改変されて特定の抗原（例えば、腫瘍細胞）を標的とするか、または抗腫瘍特性（例えば、腫瘍浸潤リンパ球）のために選択され、インビトロで増殖され、それを必要とする対象に投与される。典型的には、結果として得られるＴ細胞は、多分に成熟した細胞の混合集団を含み、その多くが高分化している。結果として、これらの細胞の予想されるインビボでの持続性は限定され得、最初に観察されたプラス効果は、移植されたＴ細胞の非存在下で腫瘍がリバウンドするにつれて経時的に取り消され得る。したがって、Ｔ細胞療法で使用するために、Ｔ細胞のインビボでの持続性を増加させる必要性が依然として存在する。

本開示は、１）ある体積比で、ある体積の抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスを、ある体積の開始細胞集団と接触させることであって、開始細胞集団が少なくとも約０．２ｘ１０⁶細胞／ｍｌ～約５．８ｘ１０⁶細胞／ｍｌの細胞密度であり、および体積比は、体積１７．４以下の開始細胞集団に対して体積１の抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスである、接触させること、ならびに２）培養培地中で細胞集団を培養することであって、結果として得られるＴ細胞集団は、第２のＴ細胞集団と比較して幹メモリーＴ細胞の割合の増加を含み、同じ細胞密度の第２の開始細胞集団を、体積１７．５以上の第２の開始細胞集団に対する体積１の抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスの比率で、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスと接触させる、培養すること、を含む、細胞集団における幹メモリーＴ細胞の割合を増加する方法を提供する。

本開示は、１）ある体積比で、ある体積の抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスを、ある体積の開始細胞集団と接触させることであって、開始細胞集団が少なくとも約０．２ｘ１０⁶細胞／ｍｌ～約５．８ｘ１０⁶細胞／ｍｌの細胞密度であり、および体積比は、体積１７．４以下の開始細胞集団に対して体積１の抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスである、接触させること、ならびに２）培養培地中で細胞集団を培養することであって、結果として得られるＴ細胞集団は、第２のＴ細胞集団と比較して幹メモリーＴ細胞の割合の増加を含み、同じ細胞密度の第２の開始細胞集団を、体積１７．５以上の第２の開始細胞集団に対する体積１の抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスの比率で、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスと接触させる、培養すること、を含む、細胞集団における幹メモリーＴ細胞の割合を増加する方法であって、開始細胞集団を抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスで培養する前、培養する間、または培養した後に、開始細胞集団を形質導入および／またはトランスフェクトすることをさらに含む、細胞集団における幹メモリーＴ細胞の割合を増加する方法を提供する。

本開示は、１）ある体積比で、ある体積の抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスを、ある体積の開始ＰＢＭＣ集団と接触させることであって、開始ＰＢＭＣ集団が少なくとも約０．５０ｘ１０⁶細胞／ｍｌ～約２．００ｘ１０⁶細胞／ｍｌの細胞密度であり、および体積比は、体積５または１０の開始細胞集団に対して体積１の抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスである、接触させること、ならびに２）培養培地中で１４～１８日間、ＰＢＭＣ集団を培養することであって、結果として得られるＰＢＭＣ集団は、第２のＰＢＭＣ集団と比較して幹メモリーＴ細胞の割合の増加を含み、同じ細胞密度の第２の開始ＰＢＭＣ集団を、体積２０または４０の第２の開始ＰＢＭＣ集団に対する体積１の抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスの比率で、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスと接触させて、同じ日数の間培養する、培養すること、を含む、ＰＢＭＣ集団における幹メモリーＴ細胞の割合を増加する方法を提供する。

本開示は、１）ある体積比で、ある体積の抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスを、ある体積の開始精製されたＴ細胞集団と接触させることであって、開始Ｔ細胞集団が少なくとも約０．８０ｘ１０⁶細胞／ｍｌ～約１．６０ｘ１０⁶細胞／ｍｌの細胞密度であり、および体積比は、体積１０または１５の開始細胞集団に対して体積１の抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスである、接触させること、ならびに２）培養培地中で１１～１８日間、精製されたＴ細胞集団を培養することであって、結果として得られる精製されたＴ細胞集団は、第２の精製されたＴ細胞集団と比較して幹メモリーＴ細胞の割合の増加を含み、同じ細胞密度の第２の開始精製されたＴ細胞集団を、体積２０、２５または５０の第２の開始Ｔ細胞集団に対する体積１の抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスの比率で、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスと接触させて、同じ日数の間培養する、培養すること、を含む、精製されたＴ細胞集団における幹メモリーＴ細胞の割合を増加する方法を提供する。

本開示はさらに、治療有効量の結果として得られるＴｓｃｍ濃縮Ｔ細胞集団を、それを必要とする対象に投与することを含む、治療方法を提供する。

図１は、細胞培養体積比に対して示されたＴｒａｎｓａｃｔ（商標）と関連する対照とで活性化された細胞について、１日目～１８日目の全体的な実際の細胞収率を示す棒グラフである。

図２は、細胞培養体積比に対して示されたＴｒａｎｓａｃｔ（商標）と関連する対照とで活性化された細胞について、Ｇ－Ｒｅｘ（登録商標）における細胞培養の前の１日目～８日目の実際の細胞収率を示す棒グラフである。

図３は、細胞培養体積比に対して示されたＴｒａｎｓａｃｔ（商標）と関連する対照とで活性化された細胞について、Ｇ－Ｒｅｘ（登録商標）における８日目～１８日目の実際の細胞収率を示す棒グラフである。

図４は、細胞培養体積比に対して示されたＴｒａｎｓａｃｔ（商標）と関連する対照とで活性化された細胞について、総細胞増殖倍率（ｔｏｔａｌ ｃｅｌｌ ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ｆｏｌｄｓ）を示す、プロセス中の日数に対する細胞増殖倍率をプロットしたグラフである。

図５は、細胞培養体積比に対して示されたＴｒａｎｓａｃｔ（商標）と関連する対照とで活性化された細胞について、０日目～１日目、１日目～４日目、４日目～６日目、６日目～８日目、および８日目～１８日目の増殖倍率を示す棒グラフおよび表である。

図６は、細胞培養体積比に対して示されたＴｒａｎｓａｃｔ（商標）と関連する対照とで活性化された細胞について、Ｇ－Ｒｅｘ（登録商標）における増殖前０日目～１日目、１日目～４日目、４日目～６日目、６日目～８日目の増殖倍率を示す棒グラフである。

図７は、細胞培養体積比に対して示されたＴｒａｎｓａｃｔ（商標）と関連する対照とで活性化された細胞について、プロセスの１８日目のＰＢＭＣ細胞サブセットの割合を示す棒グラフである。

図８は、細胞培養体積比に対して示されたＴｒａｎｓａｃｔ（商標）と関連する対照とで活性化された細胞について、プロセスの１８日目の（ＣＤ４５ＲＯおよびＣＤ６２Ｌマーカーを有する）ＣＤ５⁺Ｔ細胞メモリーサブセットの比率を示す棒グラフである。

図９は、細胞培養体積比に対して示されたＴｒａｎｓａｃｔ（商標）と関連する対照とで活性化された細胞について、プロセスの１８日目のＣＤ４⁺およびＣＤ８⁺細胞サブセットの割合を示す棒グラフである。

図１０Ａは、細胞培養体積比に対して示されたＴｒａｎｓａｃｔ（商標）と関連する対照とで活性化された細胞について、プロセスの１８日目のＣＤ４５ＲＡおよびＣＤ６２Ｌマーカーを使用した総ＣＤ５⁺Ｔ細胞サブセットのサブセットの割合を示す棒グラフである。

図１０Ｂ～１０Ｈは、垂直軸上にＣＤ６２Ｌ、水平軸上にＣＤ４５ＲＡを有する等高線プロットであり、細胞培養体積比に対して示されたＴｒａｎｓａｃｔ（商標）と関連する対照とで活性化された細胞について、ＣＤ５⁺Ｔ細胞サブセットの割合を示す。

図１１Ａは、細胞培養体積比に対して示されたＴｒａｎｓａｃｔ（商標）と関連する対照とで活性化された細胞について、プロセスの１８日目のＣＤ４５ＲＯおよびＣＤ６２Ｌマーカーを使用した総ＣＤ５⁺Ｔ細胞サブセットのサブセットの割合を示す棒グラフである。

図１１Ｂ～１１Ｈは、垂直軸上にＣＤ６２Ｌ、水平軸上にＣＤ４５ＲＡを有する等高線プロットであり、細胞培養体積比に対して示されたＴｒａｎｓａｃｔ（商標）と関連する対照とで活性化された細胞について、ＣＤ５⁺Ｔ細胞サブセットの割合を示す。

図１２は、細胞培養体積比に対して示されたＴｒａｎｓａｃｔ（商標）と関連する対照とで活性化された細胞について、１８日目のＣＡＲ⁺細胞およびＴＣＲα／β－細胞の割合を示す棒グラフである。

図１３Ａは、細胞培養体積比に対して示されたＴｒａｎｓａｃｔ（商標）と関連する対照とで活性化された細胞について、プロセスにおける日に対する細胞生存率割合をプロットしたグラフである。

図１３Ｂは、細胞培養体積比に対して示されたＴｒａｎｓａｃｔ（商標）と関連する対照とで活性化された細胞について、プロセスにおける日に対する細胞直径をプロットしたグラフである。

図１４Ａおよび１４Ｂは、１：１０および１：１５のＴｒａｎｓＡｃｔ（商標）希釈で達成された最適なＴ細胞増殖をプロットしたグラフである。二つの異なるドナーからのＦＭＣ６３－４１ＢＢ－ＣＤ３ζ 抗ＣＤ１９ Ｔ細胞、およびＵＴ対照Ｔ細胞を、Ｔ細胞活性化／増殖キットビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）、またはＴ細胞ＴｒａｎｓＡｃｔ（商標）ポリマーナノマトリックス（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）のいずれかを、それぞれ示されたビーズ：細胞または体積：体積比で用いて、刺激した。活性化（０日目）後９日目および１４日目に総Ｔ細胞数を数え、倍増殖を計算した。５６１＝ドナー数；６５８＝ドナー数；ＵＴ＝非形質導入Ｔ細胞；Ｍ＝Ｔ細胞活性化／増殖キット；Ｔ＝ＴｒａｎｓＡｃｔ（商標）；ＦＭＣ＝ＦＭＣ６３－４１ＢＢ－ＣＤ３ζ 抗ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞；Ｄ９＝９日目；Ｄ１４＝１４日目。

図１５Ａおよび１５Ｂは、製造プロセスの終了時に、ＴｒａｎｓＡｃｔ（商標）希釈がＣＡＲ⁺Ｔ細胞の割合を変化させないことを示す棒グラフである。 二つの異なるドナーからのＦＭＣ６３－４１ＢＢ－ＣＤ３ζ 抗ＣＤ１９ Ｔ細胞を、Ｔ細胞活性化／増殖キットビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）、またはＴ細胞ＴｒａｎｓＡｃｔ（商標）ポリマーナノマトリックス（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）のいずれかを、それぞれ示されたビーズ：細胞または体積：体積比で用いて、刺激した。１４日目のＣＡＲ⁺Ｔ細胞の割合を、フローサイトメトリーにより決定した。５６１＝ドナー数；６５８＝ドナー数；Ｍｉｌｔｅｎｙｉ＝Ｔ細胞活性化／増殖キット；Ｔ＝ＴｒａｎｓＡｃｔ（商標）；Ｄ１４＝１４日目；ＣＡＲ＝キメラ抗原受容体。

図１６Ａおよび１６Ｂは、低い濃度のＴｒａｎｓＡｃｔ（商標）が、最終産生物中のＣＤ４⁺ＣＡＲ Ｔ細胞の割合を増加させることを示す棒グラフである。二つの異なるドナーからのＦＭＣ６３－４１ＢＢ－ＣＤ３ζ 抗ＣＤ１９ Ｔ細胞、およびＵＴ対照Ｔ細胞を、Ｔ細胞活性化／増殖キットビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）、またはＴ細胞ＴｒａｎｓＡｃｔ（商標）ポリマーナノマトリックス（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）のいずれかを、それぞれ示されたビーズ：細胞または体積：体積比で用いて、刺激した。１４日目のＣＤ４⁺およびＣＤ８⁺Ｔ細胞の割合を、フローサイトメトリーによって決定した。５６１＝ドナー数；６５８＝ドナー数；ＵＴ＝非形質導入Ｔ細胞；Ｍ＝Ｔ細胞活性化／増殖キット；Ｔ＝ＴｒａｎｓＡｃｔ（商標）；ＦＭＣ＝ＦＭＣ６３－４１ＢＢ－ＣＤ３ζ 抗ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞；Ｄ１４＝１４日目。

図１７Ａ～１７Ｄは、１：１０および１：１５のＴｒａｎｓＡｃｔ（商標）希釈が、最終産生物中のＣＤ２５⁺ＣＡＲ Ｔ細胞の割合の低下をもたらすことを示す棒グラフである。二つの異なるドナーからのＦＭＣ６３－４１ＢＢ－ＣＤ３ζ 抗ＣＤ１９ Ｔ細胞、およびＵＴ対照Ｔ細胞を、Ｔ細胞活性化／増殖キットビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）、またはＴ細胞ＴｒａｎｓＡｃｔ（商標）ポリマーナノマトリックス（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）のいずれかを、それぞれ示されたビーズ：細胞または体積：体積比で用いて、刺激した。１４日目のＣＤ２５⁺および４－１ＢＢ⁺Ｔ細胞の割合を、フローサイトメトリーによって決定した。５６１＝ドナー数；６５８＝ドナー数；ＵＴ＝非形質導入Ｔ細胞；Ｍ＝Ｔ細胞活性化／増殖キット；Ｔ＝ＴｒａｎｓＡｃｔ（商標）；ＦＭＣ＝ＦＭＣ６３－４１ＢＢ－ＣＤ３ζ 抗ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞；Ｄ１４＝１４日目。

図１８Ａ～１８Ｄは、１：１０および１：１５のＴｒａｎｓＡｃｔ（商標）希釈が、ＣＤ４⁺およびＣＤ８⁺ ＣＡＲ Ｔ細胞の両方においてＴ_SCM 細胞を、ならびにＣＤ８⁺ ＣＡＲ Ｔ細胞においてＴ_CM細胞を保存することを示す棒グラフである。二つの異なるドナーからのＦＭＣ６３－４１ＢＢ－ＣＤ３ζ 抗ＣＤ１９ Ｔ細胞、およびＵＴ対照Ｔ細胞を、Ｔ細胞活性化／増殖キットビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）、またはＴ細胞ＴｒａｎｓＡｃｔ（商標）ポリマーナノマトリックス（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）のいずれかを、それぞれ示されたビーズ：細胞または体積：体積比で用いて、刺激した。１４日目のＴ_SCMおよびＴ_CM細胞の割合を、フローサイトメトリーによって決定した。５６１＝ドナー数；６５８＝ドナー数；ＵＴ＝非形質導入Ｔ細胞；Ｍ＝Ｔ細胞活性化／増殖キット；Ｔ＝ＴｒａｎｓＡｃｔ（商標）；ＦＭＣ＝ＦＭＣ６３－４１ＢＢ－ＣＤ３ζ 抗ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞；Ｄ１４＝１４日目；Ｔ_EFF＝エフェクターＴ細胞；Ｔ_EM＝エフェクターメモリーＴ細胞；Ｔ_CM＝中央メモリーＴ細胞；Ｔ_SCM＝幹細胞メモリーＴ細胞。

本開示は、Ｔ細胞療法で使用するためのＴ細胞を調製する方法に関する。特に、本開示は、Ｔ細胞集団における未成熟でより分化程度の低いＴ細胞（例えば、幹メモリーＴ細胞（以下、「Ｔ_SCM」））を含む特定のＴ細胞サブタイプの割合を高めることに関する。未成熟でより分化程度の低いＴ細胞のために濃縮することによって、いったん対象、例えば患者に投与されるとＴ細胞の潜在的な持続性は増加し得る。結果として、未成熟Ｔ細胞の濃縮された集団は、分化の混合段階でのＴ細胞の集団よりも持続的な抗腫瘍効果を生じる可能性が高い。

定義
本開示がより容易に理解され得るように、特定の用語がまず定義される。本出願で使用される場合、本明細書に別途明示的に定められている場合を除き、以下の各用語は、以下に記載する意味を有するものとする。追加的な定義は、本開示全体を通して記載される。

別段の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本開示が関係する当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。例えば、Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｊｕｏ， Ｐｅｉ－Ｓｈｏｗ， ２ｎｄ ｅｄ．，２００２，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ；Ｔｈｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， ３ｒｄ ｅｄ．， １９９９， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；およびＯｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｒｅｖｉｓｅｄ，２０００，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓは、本開示で使用される用語の多くに関する一般的な辞書を当業者に提供する。

単位、接頭辞、および記号は、国際単位系（Ｓｙｓｔｅｍｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｄｅ Ｕｎｉｔｅｓ）（ＳＩ）が認めた様式で示されている。数値範囲は、範囲を定義する数値を含む。本明細書に提供される見出しは、本明細書全体を参照することによって得ることができる本開示の様々な態様を限定するものではない。したがって、以下に定義される用語は、その全体が本明細書を参照することによってより完全に定義される。

本明細書で使用される場合、不定冠詞「ａ」または「ａｎ」は、任意の列挙されたまたは数え上げられた構成要素の「一つ以上」を指すと理解されるべきである。

用語「約」または「本質的に含む」は、当業者によって決定される特定の値または組成物に対する許容可能な誤差範囲内の値または組成物を指し、これは、値または組成物がどのように測定または決定されるか、すなわち測定システムの限界に、いくぶんか依存する。例えば、当分野の慣行によると、「約」または「本質的に含む」とは、１、または１を超える標準偏差以内を意味することができる。あるいは、「約」または「本質的に含む」は、最大１０％の範囲（すなわち、＋／－１０％）を意味することができる。例えば、「約３ｍｇ」は、２．７ｍｇ～３．３ｍｇの間の任意の数を含み得る（１０％について）。さらに、特に生物学的システムまたはプロセスに関して、当該用語は、値の最大１桁または最大５倍まで意味することができる。特定の値または組成物が本出願および特許請求の範囲に提供される場合、別段の記載がない限り、「約」または「本質的に含む」の意味は、その特定の値または組成物について許容可能な誤差範囲内であると想定されるべきである。

本明細書に記載されるように、別段の示唆がない限り、任意の濃度範囲、割合範囲、比の範囲、または整数範囲は、列挙された範囲内の任意の整数の値、および適切な場合、その分数（整数の１０分の１および１００分の１など）を含むと理解されるべきである。

本明細書で使用される場合、用語「および／または」は、他方を伴うまたは伴わない、二つの指定された特徴または構成要素各々の、具体的な開示として受け取られるべきである。したがって、本明細書の「Ａおよび／またはＢ」などの語句で使用される用語「および／または」は、「ＡおよびＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（単独）、ならびに「Ｂ」（単独）を含むことが意図される。同様に、「Ａ、Ｂ、および／またはＣ」などの語句で使用される用語「および／または」は、以下の態様の各々を包含することが意図されている。Ａ、Ｂ、およびＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；ＡおよびＣ；ＡおよびＢ；ＢおよびＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）。

本明細書に「含む」という用語で記載される態様がどこにあっても、「からなる」および／または「本質的にからなる」という観点から記載されるその他の点で類似した態様もまた提供されることが理解される。

用語「活性化」または「活性化された」は、検出可能な細胞増殖を誘導するために十分に刺激された免疫細胞、例えば、Ｔ細胞の状態を指す。活性化はまた、誘導されたサイトカイン産生および検出可能なエフェクター機能と関連し得る。「活性化されたＴ細胞」という用語は、とりわけ、細胞分裂をしているＴ細胞を指す。Ｔ細胞活性化は、限定されるものではないが、ＣＤ５７、ＰＤ１、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ２５、ＣＤ１３７、ＣＤ６９、および／またはＣＤ７１を含む、一つ以上のバイオマーカーのＴ細胞発現の増加によって特徴付けられ得る。

「投与する」とは、当業者に公知の様々な方法および送達システムのいずれかを使用して、対象に薬剤を物理的に導入することを指す。本明細書に開示される方法によって調製されるＴ細胞についての例示的な投与経路は、例えば注射もしくは点滴による、静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、脊椎、または、その他の非経口投与経路を含む。本明細書で使用される場合、「非経口投与」という語句は、通常は注射による、腸内および局所投与以外の投与様式を意味し、限定するものではないが、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、リンパ管内、病巣内、関節包内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、クモ膜下、脊髄内、硬膜外、および胸骨内注射および注入、ならびにインビボエレクトロポレーションを含む。投与はまた、例えば、１回、複数回、および／または一つ以上の長期間にわたって実施することができる。

「抗体」（Ａｂ）という用語は、限定されないが、抗原に特異的に結合する免疫グロブリンを含む。概して、抗体は、ジスルフィド結合によって相互接続された少なくとも二つの重（Ｈ）鎖および二つの軽（Ｌ）鎖を含み得る。各Ｈ鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＶＨと省略される）および重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は、三つまたは四つの定常ドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２ ＣＨ３、および／またはＣＨ４を含むことができる。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶＬと省略される）および軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は、一つの定常ドメイン、ＣＬを含み得る。ＶＨ領域およびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存された領域が散在する相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる、超可変性の領域にさらに細分され得る。各ＶＨおよびＶＬは、三つのＣＤＲおよび四つのＦＲを含み、アミノ末端からカルボキシ末端へ以下の順序で配置される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。

免疫グロブリンは、ＩｇＡ、分泌型ＩｇＡ、ＩｇＧ、およびＩｇＭを含むがこれに限定されない、一般的に知られているアイソタイプのいずれかに由来することができる。ＩｇＧサブクラスは、当該技術分野で公知であり、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含むがこれに限定されない。「アイソタイプ」は、重鎖定常領域遺伝子によってコードされるＡｂクラスまたはサブクラス（例えば、ＩｇＭまたはＩｇＧ１）を指す。「抗体」という用語は、例として、天然起源の、および天然起源でないＡｂの両方、モノクローナルおよびポリクローナルＡｂ、キメラおよびヒト化Ａｂ、ヒトまたは非ヒトＡｂ、完全合成Ａｂ、ならびに一本鎖Ａｂを含み、ラクダ抗体を含む。非ヒトＡｂは、ヒトにおけるその免疫原性を減少させるための組換え方法によってヒト化することができる。明示的に記載されていない場合、また文脈が別段の示唆を示さない限り、用語「抗体」はまた、前述の免疫グロブリンのいずれかの抗原結合断片または抗原結合部分を含み、一価および二価の断片または部分、ならびに一本鎖Ａｂを含む。

「抗原結合分子」または「抗体断片」は、抗体の全体未満である任意の部分を指す。抗原結合分子は、抗原性相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み得る。抗体断片の例としては、限定されるものではないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）₂、およびＦｖ断片、ｄＡｂ、線形抗体、ｓｃＦｖ抗体、ならびに抗原結合分子から形成される多重特異性抗体が挙げられる。

用語「自己」は、後で再導入されるのと同じ個体に由来する任意の材料を指す。例えば、操作された自己細胞療法（ｅＡＣＴ（商標））は、ドナー、例えば患者からのリンパ球の収集を伴い、次いで、それらは、例えばＣＡＲ構築物を発現するように操作され、その後、同じドナー、例えば患者へ再び投与される。

用語「同種異系型」は、後に同じ種の別の個体に導入される、ある個体に由来する任意の材料を指す、例えば同種異系Ｔ細胞移植または療法。

用語「抗ＣＤ３／２８ナノマトリックス」は、例えばＭｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ社（カリフォルニア州オーバーン）からＴｒａｎｓＡｃｔ ^TM Ｔ細胞試薬として提供される、ＣＤ３およびＣＤ２８に結合する抗体および／またはその断片を含むナノメートルスケールマトリックスを指す（例えば、カタログ番号２００－０７６－２０２ ＭＡＣＳ ＧＭＰ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｔｒａｎｓａｃｔ－ＣＲＲ、カタログ番号１７０－０７６－１５６ ＭＡＣＳ ＧＭＰ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｔｒａｎｓａｃｔ ｆｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｕｓｅを参照）。

「癌」は、体内における異常な細胞の制御不能な増殖によって特徴付けられる様々な疾患の広範な群を指す。未制御の細胞分裂および増殖は、隣接する組織に侵入し、さらにリンパ系または血流を介して身体の遠隔部分に転移する可能性もある悪性腫瘍の形成をもたらす。「癌」または「癌組織」は、様々なステージの腫瘍を含み得る。ある特定の実施形態では、癌または腫瘍はステージ０であり、例えば、癌または腫瘍が発生の非常に早期であり、転移していない。一部の実施形態では、癌または腫瘍はステージＩであり、例えば、癌または腫瘍が比較的小さなサイズであり、近くの組織に広がっておらず、転移していない。他の実施形態では、癌または腫瘍はステージＩＩ、またはステージＩＩＩであり、例えば、癌または腫瘍がステージ０またはステージＩよりも大きく、隣接する組織へと増殖したが、リンパ節に転移している可能性を除いて、転移していない。他の実施形態では、癌または腫瘍はステージＩＶであり、例えば、癌または腫瘍が転移している。ステージＩＶは、進行癌または転移癌とも呼ばれ得る。

本明細書で使用される場合、「抗腫瘍効果」は、腫瘍体積の減少、腫瘍成長の阻害、腫瘍細胞数の減少、腫瘍細胞増殖の減少、転移数の減少、全生存期間または無増悪生存期間の増加、平均余命の増加、または腫瘍に関連する様々な生理学的症状の改善として現れ得る生物学的効果を指す。抗腫瘍効果はまた、腫瘍の発生の予防、例えばワクチンを指すこともできる。

本明細書で使用される場合、ＰＦＳと省略され得る「無増悪生存期間」という用語は、治療日から、悪性リンパ腫に対するＩＷＧ応答基準の改訂版（ｔｈｅ ｒｅｖｉｓｅｄ ＩＷＧ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒ Ｍａｌｉｇｎａｎｔ Ｌｙｍｐｈｏｍａ）による疾患進行の、または任意の原因の死亡の日付までの時間を指す。

「疾患進行」は、放射線写真上の悪性病変の測定または他の方法によって評価される。

本明細書で使用される場合、ＤＯＲと省略され得る「奏効期間」は、対象の最初の客観的奏効から、悪性リンパ腫に対するＩＷＧ応答基準の改定版により疾患進行が確認された日、または死亡日までを指す。

ＯＳと省略され得る用語「全生存期間」は、治療日から死亡日までの時間として定義される。

本明細書で使用される場合、「サイトカイン」は、免疫反応を伝達するために、マクロファージ、Ｂ細胞、Ｔ細胞、および肥満細胞を含む免疫細胞によって放出され得る、非抗体タンパク質を指す。一部の実施形態では、一つ以上のサイトカインが、Ｔ細胞療法に応答して放出される。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞療法に応答して分泌されるそれらのサイトカインは、有効なＴ細胞療法の徴候であり得る。

本明細書で使用される場合、「治療有効量」、または「治療有効用量」は、本方法によって産生される、ならびに、単独でまたは別の治療剤と組み合わせて使用された場合、対象を疾患の発症から保護する、あるいは、疾患症状の重症度の減少、疾患の無症状期間の頻度および継続期間の増加、または疾患の罹患に起因する欠陥もしくは障害の予防によって証明される、疾患退縮を促進する、Ｔ細胞またはＤＣ細胞の量を指す。疾患退縮を促進するＴ細胞またはＤＣ細胞の能力は、例えば、臨床試験中のヒト対象において、ヒトにおける有効性を予測する動物モデル系において、またはインビトロアッセイにおける薬剤の活性をアッセイすることによって、熟練した施術者に公知の様々な方法を用いて評価することができる。

本明細書で使用される場合、用語「リンパ球」は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｔ細胞、またはＢ細胞を含み得る。ＮＫ細胞は、固有の免疫系の主要構成要素を表す細胞傷害性（細胞毒性）リンパ球の一種である。ＮＫ細胞は、腫瘍およびウイルスに感染した細胞を拒絶する。それはアポトーシスまたはプログラム細胞死のプロセスを通して作用する。細胞を死滅させるために活性化を必要としないため、それらは「ナチュラルキラー」と呼ばれた。Ｔ細胞は、細胞性免疫（抗体の関与なし）において主要な役割を果たす。そのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）は、他のリンパ球型から自身を差別化する。免疫系の専門器官である胸腺は、Ｔ細胞の成熟に対して主に関与する。

Ｔ細胞にはいくつかのタイプがあり、すなわち、ヘルパーＴ細胞（例えば、ＣＤ４⁺細胞、エフェクターＴ_EFF細胞）、細胞傷害性Ｔ細胞（ＴＣ、細胞傷害性Ｔリンパ球、ＣＴＬ、Ｔキラー細胞、細胞溶解性Ｔ細胞、ＣＤ８⁺Ｔ細胞、またはキラーＴ細胞としても知られる）、メモリーＴ細胞（（ｉ）幹メモリーＴ_SCM細胞は、ナイーブ細胞のように、ＣＤ４５ＲＯ^-、ＣＣＲ７⁺、ＣＤ４５ＲＡ⁺、ＣＤ６２Ｌ⁺（Ｌ－セレクチン）、ＣＤ２７⁺、ＣＤ２８⁺、およびＩＬ－７Ｒα⁺であるが、それらはまた大量のＣＤ９５、ＩＬ－２Ｒβ、ＣＸＣＲ３、およびＬＦＡ－１も発現し、メモリー細胞に特有の多数の機能的特性を示す）；（ｉｉ）中央メモリーＴ_CM細胞は、Ｌ－セレクチンを発現し、ＣＣＲ７⁺およびＣＤ４５ＲＯ⁺であり、それらはＩＬ－２を分泌するが、ＩＦＮβもＩＬ－４も分泌しない、ならびに（ｉｉｉ）エフェクターメモリーＴ_EM細胞はしかしながら、Ｌ－セレクチンもＣＣＲ７も発現しないが、ＣＤ４５ＲＯは発現し、ＩＦＮγおよびＩＬ－４のようなエフェクターサイトカインを産生する）、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ、サプレッサーＴ細胞、またはＣＤ４⁺ＣＤ２５⁺制御性Ｔ細胞）、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ）、およびガンマデルタＴ細胞である。腫瘍内に見出されるＴ細胞は、「腫瘍浸潤リンパ球」または「ＴＩＬ」と呼ばれる。

「ナイーブ」Ｔ細胞は、免疫学的に未分化のままである成熟Ｔ細胞を指す。胸腺における正および負選択に続いて、Ｔ細胞は、ＣＤ４⁺またはＣＤ８⁺ナイーブＴ細胞のいずれかとして現れる。それらのナイーブ状態では、Ｔ細胞はＬ－セレクチン（ＣＤ６２Ｌ⁺）、ＩＬ－７受容体－α（ＩＬ－７Ｒ－α）、およびＣＤ１３２を発現するが、ＣＤ２５、ＣＤ４４、ＣＤ６９、およびＣＤ４５ＲＯは発現しない。本明細書で使用される場合、「未成熟」も、ナイーブＴ細胞または未成熟Ｔ細胞のいずれかの表現型特性を示すＴ細胞、例えばＴ_SCM細胞またはＴ_CM細胞を指し得る。例えば、未成熟Ｔ細胞は、Ｌ－セレクチン（ＣＤ６２Ｌ⁺）、ＩＬ－７Ｒ－α、ＣＤ１３２、ＣＣＲ７、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ９５、ＣＸＣＲ３、およびＬＦＡ－１のうちの一つ以上を発現することができる。ナイーブまたは未成熟Ｔ細胞は、Ｔ_EM細胞およびＴ_EFF細胞などの、末端分化エフェクターＴ細胞と対比することができる。

本明細書で言及される場合、「Ｔ細胞機能」は、健康なＴ細胞の正常な特性を指す。一部の実施形態では、Ｔ細胞機能は、Ｔ細胞増殖を含む。一部の実施形態では、Ｔ細胞機能は、Ｔ細胞活性を含む。一部の実施形態では、Ｔ細胞機能は、細胞溶解活性を含む。

本明細書で使用される場合、「細胞増殖」は、Ｔ細胞の、細胞分裂を介して数において成長する能力を指す。増殖は、例えば、カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）で細胞を染色することによって測定することができる。細胞増殖は、インビトロで、例えばＴ細胞培養中、またはインビボで、例えばＴ細胞療法の投与後に、起こり得る。

本明細書で使用される場合、「Ｔ細胞活性」は、健康なＴ細胞に共通する任意の活性を指す。一部の実施形態では、Ｔ細胞機能は、サイトカイン産生を含む。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞活性は、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）、組織壊死因子アルファ（ＴＮＦα）、および両方から選択される一つ以上のサイトカインの産生を含む。

本明細書で使用される場合、「細胞溶解活性」または「細胞毒性」は、標的細胞を破壊するＴ細胞の能力を指す。一部の実施形態では、標的細胞は癌細胞、例えば腫瘍細胞である。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）またはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現し、標的細胞は、標的抗原を発現する。

用語「遺伝子操作された」、「遺伝子編集する」、または「操作された」は、限定されないが、コード領域もしくは非コード領域、またはその一部を欠失させること、あるいはコード領域またはその一部を挿入することを含む、細胞のゲノムを改変する方法を指す。一部の実施形態では、改変される細胞は、リンパ球、例えばＴ細胞であり、これは患者またはドナーのいずれかから取得することができる。細胞は、細胞のゲノムに組み込まれる外因性構築物、例えばキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）またはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）などを発現するように改変され得る。

「免疫反応」は、侵入病原体、病原体に感染した細胞もしくは組織、癌性もしくは他の異常細胞、または自己免疫もしくは病的炎症の場合における、正常なヒト細胞もしくは組織を、選択的に標的化すること、それらに結合すること、それらを損傷すること、それらを破壊すること、および／または脊椎動物の身体からそれらを排除することをもたらす、免疫系の細胞（例えば、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好酸球、肥満細胞、樹状細胞および好中球）、ならびにこれらの細胞または肝臓のいずれかによって産生される可溶性高分子（Ａｂ、サイトカイン、および補体を含む）の作用を指す。

用語「免疫療法」は、免疫反応を誘導、強化、抑制、または他の方法で改変することを含む方法による、疾患に罹患しているか、または罹患するもしくは再発するリスクがある対象の治療を指す。免疫療法の例としては、限定されるものではないが、Ｔ細胞療法が挙げられる。Ｔ細胞療法には、養子Ｔ細胞療法、腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）免疫療法、自己細胞療法、操作された自己細胞療法（ｅＡＣＴ（商標））、操作された同種異系細胞療法、および同種異系Ｔ細胞移植が含まれ得る。しかしながら、当業者は、本明細書に開示されるＴ細胞を調製する方法が、任意の移植されたＴ細胞療法の有効性を強化するであろうことを認識するであろう。Ｔ細胞療法の例は、米国特許公開第２０１４／０１５４２２８号および第２００２／０００６４０９号、ならびに国際公開第ＷＯ２００８／０８１０３５号に記載されている。

免疫療法のＴ細胞は、当該技術分野で公知の任意の供給源から得ることができる。例えば、Ｔ細胞は、造血幹細胞集団からインビトロで分化することができ、またはＴ細胞はドナーから取得することができる。ドナーは、対象、例えば抗癌治療を必要とする対象、または健康なドナーとすることができる。Ｔ細胞は、例えば、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位からの組織、腹水、胸水、脾臓組織、および腫瘍から取得することができる。加えて、Ｔ細胞は、当該技術分野で利用可能な一つ以上のＴ細胞株に由来し得る。Ｔ細胞はまた、ＦＩＣＯＬＬ（商標）分離および／またはアフェレーシスなどの、当業者に公知の任意の数の技術を使用して、対象から採取された血液単位から取得することができる。Ｔ細胞はまた、ヒト胸腺環境を複製して一次および再プログラムされた多能性幹細胞からの効率的なＴ細胞のエクスビボ分化を支持する、人工胸腺オルガノイド（ＡＴＯ）細胞培養系から取得することができる。Ｔ細胞療法のためのＴ細胞を単離する追加の方法は、米国特許公開第２０１３／０２８７７４８号に開示されており、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

養子細胞移植としても知られ、「ｅＡＣＴ（商標）」と省略され得る「操作された自己細胞療法」という用語は、患者自身のＴ細胞を収集し、その後遺伝子改変して、一つ以上の特定の腫瘍細胞または悪性腫瘍の細胞表面上に発現された一つ以上の抗原を認識し、標的にするプロセスである。Ｔ細胞は、例えば、一つ以上のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、または一つ以上のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、およびそれらの組み合わせを発現するように操作され得る。ＣＡＲ陽性（＋）Ｔ細胞は、共刺激ドメインおよび活性化ドメインを含む細胞内シグナル伝達部分に連結された、特定の腫瘍抗原に対する特異性を有する、細胞外単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を発現するように操作される。共刺激ドメインは、例えば、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ４、ＣＤ１６、ＯＸ－４０、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、プログラム死－１（ＰＤ－１）、プログラム死リガンド－１ （ＰＤ－Ｌ１）、誘導性Ｔ細胞共刺激体（ＩＣＯＳ）、ＩＣＯＳ－Ｌ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１ （ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ２４７、ＣＤ２７６（Ｂ７－Ｈ３）、ＬＩＧＨＴ（腫瘍壊死因子スーパーファミリーメンバー１４； ＴＮＦＳＦ１４）、ＮＫＧ２Ｃ、Ｉｇアルファ（ＣＤ７９ａ）、ＤＡＰ－１０、Ｆｃガンマ受容体、ＭＨＣクラス１分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、トールリガンド受容体、ＩＣＡＭ－１、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒアルファ、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１ （ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ－７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、またはそれらの任意の組み合わせに由来し得る；活性化ドメインは、例えば、ＣＤ３ゼータ、イプシロン、デルタ、ガンマなどのＣＤ３に由来し得る。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、二つ、三つ、四つ、またはそれ以上の共刺激ドメインを有するように設計される。ＣＡＲ ｓｃＦｖは、例えば、ＮＨＬ、ＣＬＬ、および非Ｔ細胞ＡＬＬを含むがこれに限定されない、全ての正常なＢ細胞、およびＢ細胞悪性腫瘍（Ｂ ｃｅｌｌ ｍａｌｉｇｎａｎｃｅｓ）を含む、Ｂ細胞系統の細胞によって発現される膜貫通タンパク質である、ＣＤ１９を標的とするように設計され得る。ＣＡＲ＋Ｔ細胞療法および構築物の例は、米国特許出願公開第２０１３／０２８７７４８号、２０１４／０２２７２３７号、２０１４／００９９３０９号、および２０１４／００５０７０８号に記載されており、これらの参照文献は、その全体が参照により組み込まれる。

本明細書で使用される場合、「患者」は、癌（例えば、リンパ腫または白血病）を含む疾患に罹患している任意のヒトを含む。用語「対象」および「患者」は、本明細書では互換的に使用される。用語「ドナー対象」は、本明細書において、その細胞がさらなるインビトロ操作のために取得されている対象を指す。ドナー対象は、本明細書に記載される方法によって作製された細胞の集団で治療されるがん患者であってもよく（すなわち、自己ドナー）、または本明細書に記載される方法によって作製された細胞の集団の作製時に、異なる個人または癌患者を治療するために使用されるであろうリンパ球サンプルを提供する個人であってもよい（すなわち、同種異系ドナー）。本方法によって調製された細胞を受ける対象を、「レシピエント対象」と呼んでもよい。

本明細書で使用される場合、「刺激」は、刺激分子とその同族リガンドとの結合によって誘発される一次応答を指し、結合はシグナル伝達イベントを媒介する。「刺激分子」は、抗原提示細胞（ａｎｔｉｇｅｎ ｐｒｅｓｅｎｔ ｃｅｌｌ）上に存在する同族刺激リガンドと特異的に結合する、Ｔ細胞上の分子、例えば、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）／ＣＤ３複合体である。「刺激リガンド」は、抗原提示細胞（例えば、人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）、樹状細胞、Ｂ細胞など）上に存在するとき、Ｔ細胞上の刺激分子と特異的に結合し、それによって、限定されるものではないが、活性化、免疫反応の開始、増殖などを含む、Ｔ細胞による一次応答を媒介し得るリガンドである。刺激リガンドには、ペプチドを負荷したＭＨＣクラスＩ分子、抗ＣＤ３抗体、スーパーアゴニスト抗ＣＤ２８抗体、およびスーパーアゴニスト抗ＣＤ２抗体が含まれるが、これらに限定されない。本明細書で使用される場合、「活性化された」または「活性」は、刺激されたＴ細胞を指す。活性Ｔ細胞は、ＣＤ１３７、ＣＤ２５、ＣＤ７１、ＣＤ２６、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ１５４、ＣＤ４０Ｌ、およびＣＤ１３４からなる群から選択される一つ以上のマーカーの発現によって特徴付けられ得る。

用語「外因性」は、外部供給源に由来する任意の物質を指す。

本明細書で使用される場合、用語「持続性」は、例えば、対象に投与された一つ以上の移植されたＴ細胞またはその後代（例えば、分化または成熟したＴ細胞）が、ある期間にわたって、検出可能なレベルで対象に残留する能力を指す。本明細書で使用される場合、一つ以上の移植されたＴ細胞またはその後代（例えば、分化または成熟したＴ細胞）の持続性を増加させることは、投与後の対象において移植されたＴ細胞が検出可能な時間を増加させることを指す。例えば 一つ以上の移植されたＴ細胞のインビボでの持続性は、少なくとも約１日、少なくとも約２日、少なくとも約３日、少なくとも約４日、少なくとも約５日、少なくとも約６日、少なくとも約７日、少なくとも約８日、少なくとも約９日、少なくとも約１０日、少なくとも約１１日、少なくとも約１２日、少なくとも約１３日、少なくとも約１４日、少なくとも約３週間、少なくとも約４週間、少なくとも約１か月、少なくとも約２か月、少なくとも約３か月、少なくとも約４か月、少なくとも約５か月、または少なくとも約６カ月増加され得る。また、一つ以上の移植されたＴ細胞のインビボでの持続性は、本明細書に開示される本方法によって調製されなかった一つ以上の移植されたＴ細胞と比較して、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約４．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、または少なくとも約１０倍増加され得る。

用語「低減する」および「減少する」は、本明細書では互換的に使用され、元の値よりも小さくなる任意の変化を示す。「低減する」および「減少する」は相対的な用語であり、測定前と測定後の比較を必要とする。「低減する」および「減少する」は、完全な枯渇を含む。一部の実施形態では、用語「低減する」および「減少する」は、本開示の方法（例えば、強力な活性化）によって調製されたＴ細胞 と、この調製を伴わないＴ細胞との間のＴ細胞効果の比較を含む。

本明細書で使用される場合、Ｔ細胞の成熟を「調節する」という用語は、本明細書に記載される任意の介入を使用して、一つ以上のＴ細胞の成熟、例えば分化、に影響を与えることを指す。一部の実施形態では、「調節する」は、Ｔ細胞の成熟を遅らせるか、または阻害することを指す。他の実施形態では、「調節する」とは、Ｔ細胞の成熟を加速または促進することを指す。特に、本明細書で使用される場合、「Ｔ細胞の成熟を遅らせるまたは阻害する」とは、一つ以上のＴ細胞を未成熟または未分化状態で維持することを指す。例えば、「Ｔ細胞の成熟を遅らせるまたは阻害する」とは、Ｔ _EMまたはＴ_EFF状態に進行するのとは対照的に、Ｔ細胞をナイーブまたはＴＣＭ状態に維持することを指し得る。また、「Ｔ細胞の成熟を遅らせるまたは阻害する」とは、Ｔ細胞の混合集団内で未成熟または未分化Ｔ細胞（例えば、ナイーブＴ細胞および／またはＴ _CM細胞）の全体的な割合を増加または濃縮することも指し得る。Ｔ細胞の状態（例えば、成熟または未成熟）は、例えば、様々な遺伝子の発現およびＴ細胞の表面上に発現される様々なタンパク質の存在をスクリーニングすることによって決定することができる。例えば、Ｌ－セレクチン（ＣＤ６２Ｌ⁺）、ＩＬ－７Ｒ－ａ、ＣＤ１３２、ＣＲ７、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ９５、ＩＬ－２Ｒβ、ＣＸＣＲ３、ＬＦＡ－１、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される一つ以上のマーカーの存在は、成熟度の低い未分化Ｔ細胞を示すことができる。

対象の治療」、または対象を「治療する」とは、疾患に関連する症状、合併症、もしくは状態、または生化学的徴候の発症、進行、発達、重症度、または再発を、逆転、緩和、改善、阻害、遅延、または予防する目的で、実施される任意のタイプの介入またはプロセス、あるいは本開示を使用して調製された一つ以上のＴ細胞の投与を指す。一実施形態では、「治療」または「治療する」は部分寛解を含む。別の実施形態では、「治療」または「治療する」は完全寛解を含む。

本開示の様々な態様が、以下のサブセクションにおいてさらに詳細に記載される。
免疫細胞の調製方法

本開示は、細胞療法で使用するための免疫細胞（例えば、リンパ球または樹状細胞）を調製する方法に関する。特定のインビトロで操作された細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞、Ｔ細胞、または樹状細胞）は、インビトロ操作後に患者に投与した場合、有効と言うほどでもない場合があることが見出される。いかなる特定の理論にも拘束されることを意図しないが、一つの理由は、患者に投与される前に、リンパ球がインビトロで時期尚早に分化され得ることであることに留意されたい。本開示は、ある特定の実施形態では、強力な活性化条件を使用することによって、Ｔ細胞集団における未成熟でより分化程度の低い細胞の数を増やす方法を明らかにするものである。

一実施形態では、本開示は、収集されたＴ細胞の集団における未成熟で、より分化程度の低い細胞（例えば、幹細胞メモリーＴ細胞；Ｔ_SCM）の割合を増加させる方法に関する。したがって、本明細書に記載の方法は、細胞療法（例えば、Ｔ細胞療法）において、移植されたＴ細胞またはＤＣ細胞またはそれらの後代のインビボでの持続性を増加させるために使用することができる。さらに、一部の実施形態では、本発明は、得られたＴ細胞がインビトロで増加した増殖を呈することを提供する。さらに、一部の実施形態では、本発明は、得られたＴ細胞がＣＤ８＋Ｔ細胞の増加した割合を呈することを提供する。

別の実施形態では、本発明は、一つ以上の細胞を、１７体積以下（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５または１６体積）のＴ細胞集団に対する１体積の抗ＣＤ３／２８ナノマトリックス、例えばＴ細胞Ｔｒａｎｓａｃｔ（商標）と接触させることによって、Ｔ細胞集団の未成熟でより分化程度の低い細胞の割合を高める方法を含み、ここで、Ｔ細胞集団は、約０．２ｘ１０⁶ 細胞／ｍｌ～約５．８ｘ１０⁶細胞／ｍｌの細胞密度を含む。Ｔ細胞のさらなる調製は、本明細書の他の場所で記述される。

本開示は、インビトロで一つ以上のＴ細胞を含む細胞集団を、より高い濃度の抗ＣＤ３／２８ナノマトリックスと接触させることが、サンプル中の未成熟でより分化程度の低いＴ細胞、例えばＴ _SCM 細胞の濃度を、より高分化したＴ細胞の濃度と比較して増加させ得ることを示す。したがって、別の実施形態では、本発明は、１体積の抗ＣＤ３／２８ナノマトリックス、例えばＴ細胞Ｔｒａｎｓａｃｔ（商標）対１７体積以下（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５または１６体積）のＴ細胞集団の比率を含む培地中で一つ以上のＴ細胞を培養することを含む、幹細胞様ＣＤ４⁺Ｔ細胞またはＣＤ８⁺Ｔ細胞を作製するための方法を提供し、ここで、Ｔ細胞集団は、約０．２ｘ１０⁶細胞／ｍｌ～約５．８ｘ１０⁶細胞／ｍｌの細胞密度を含む。他の実施形態では、本開示は、（ａ）一つ以上のＴ細胞を、１７体積以下（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５または１６体積）のＴ細胞集団に対する１体積の抗ＣＤ３／２８ナノマトリックス、例えばＴ細胞Ｔｒａｎｓａｃｔ（商標）と接触させることであって、ここで、Ｔ細胞集団は、約０．２ｘ１０⁶細胞／ｍｌ～約５．８ｘ１０⁶細胞／ｍｌの細胞密度を含む、接触させることと、（ｃ）一つ以上のＴ細胞を増殖させることと、を含む、サンプル中のＣＤ８⁺ＣＤ４５ＲＡ⁺／ＣＤ６２Ｌ⁺Ｔ細胞および／またはＣＤ８⁺ＣＤ４５ＲＯ^-／ＣＤ６２Ｌ⁺Ｔ細胞の集団を濃縮する方法を提供する。増加した濃度の未成熟および未分化Ｔ細胞またはＤＣ細胞を作製することは、細胞療法（例えば、Ｔ細胞療法またはＤＣ細胞療法）を必要とする対象への移植時の、細胞のインビボでの持続性を増加させることができる。したがって、別の実施形態では、本開示は、一つ以上のＴ細胞を、（ｉ）対象に投与する前に、１７体積以下（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５または１６体積）のＴ細胞集団に対する１体積の抗ＣＤ３／２８ナノマトリックス、例えばＴ細胞Ｔｒａｎｓａｃｔ（商標）と接触させることであって、ここで、Ｔ細胞集団は、約０．２ｘ１０⁶細胞／ｍｌ～約５．８ｘ１０⁶細胞／ｍｌの細胞密度を含む、接触させることを含む、養子細胞療法において一つ以上のＴ細胞のインビボでの持続性を延長するための方法を提供し；ここで、インビボでの持続性は、１５体積超（例えば、１６、１６．５、１７、１７．５、１８、１８．５、１９、１９．５、２０、２５、３０、または４０体積）のＴ細胞集団に対する１体積の抗ＣＤ３／２８ナノマトリックス、例えばＴ細胞Ｔｒａｎｓａｃｔ（商標）と接触される、一つ以上の移植されたＴ細胞と比較して、延長される。

本明細書に開示される方法は、インビトロで未成熟でより分化程度の低い細胞についてＴ細胞集団を調節する、例えば濃縮することを含む。一つ以上のＴ細胞またはＤＣ細胞の成熟または分化の遅延または阻害は、当技術分野で公知の任意の方法によって測定することができる。例えば、未成熟で、より分化程度の低いＴ細胞またはＤＣ細胞に対する細胞集団の濃縮は、一つ以上のバイオマーカーの存在を検出することによって測定することができる。一つ以上のバイオマーカーの存在は、免疫組織化学的検査および／または蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）を含むがこれらに限定されない、当技術分野で公知の任意の方法によって検出することができる。一部の実施形態では、一つ以上のバイオマーカーは、Ｌ－セレクチン（ＣＤ６２Ｌ⁺）、ＩＬ－７Ｒα、ＣＤ１３２、ＣＣＲ７、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ９５、ＩＬ－２Ｒβ、ＣＸＣＲ３、ＬＦＡ－１、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、未成熟でより分化程度の低いＴ細胞に対する細胞集団の濃縮は、Ｌ－セレクチン（ＣＤ６２Ｌ⁺）、ＣＤ４５ＲＡ、およびＣＤ４５ＲＯのうちの一つ以上の存在を検出することによって測定することができる。本方法は、収集された細胞の集団において未成熟および未分化Ｔ細胞またはＤＣ細胞の相対的比率を増加させることができるが、一部の成熟および分化細胞が依然として存在し得ることを、当業者であれば理解するであろう。その結果、未成熟でより分化程度の低いＴ細胞に対する細胞集団の濃縮は、一つ以上の細胞を、１７体積以下（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５または１６体積）のＴ細胞集団に対する１体積の抗ＣＤ３／２８ナノマトリックス、例えばＴ細胞Ｔｒａｎｓａｃｔ（商標）と接触させることであって、ここで、Ｔ細胞集団は、約０．２ｘ１０⁶ 細胞／ｍｌ～約５．８ｘ１０⁶細胞／ｍｌの細胞密度を含む、接触させることの前、および接触させることの後に、細胞集団中の未成熟および未分化細胞の総割合を計算することによって、測定することができる。本明細書に開示される方法は、Ｔ細胞集団における未成熟および未分化Ｔ細胞の割合を増加させる。ある特定の実施形態では、１７体積以下（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５または１６体積）のＴ細胞集団に対する１体積の抗ＣＤ３／２８ナノマトリックス、例えばＴ細胞Ｔｒａｎｓａｃｔ（商標）と接触させた一つ以上のＴ細胞は、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％の未成熟または未分化Ｔ細胞を含む。他の実施形態では、１７体積以下（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５または１６体積）のＴ細胞集団であって、ここでＴ細胞集団は約０．２ｘ１０⁶ 細胞／ｍｌ～約５．８ｘ１０⁶細胞／ｍｌの細胞密度を含む、Ｔ細胞集団に対する１体積の抗ＣＤ３／２８ナノマトリックス、例えばＴ細胞Ｔｒａｎｓａｃｔ（商標）と接触させた一つ以上のＴ細胞は、少なくとも約１０％～少なくとも約９０％、少なくとも約２０％～少なくとも約８０％、少なくとも約３０％～少なくとも約７０％、少なくとも約４０％～少なくとも約６０％、少なくとも約１０％～少なくとも約５０％、少なくとも約２０％、少なくとも約４０％、少なくとも約３５％～少なくとも約４５％、少なくとも約２０％～少なくとも約６０％、または少なくとも約５０％～少なくとも約９０％の未成熟または未分化Ｔ細胞を含む。ある特定の実施形態では、未成熟または未分化Ｔ細胞は、ナイーブＴ細胞および／または中心メモリーＴ_SCM細胞である。

別の実施形態では、未成熟で、より分化程度の低いＴ細胞またはＤＣ細胞に対する細胞集団の濃縮は、１７体積以下（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５または１６体積）のＴ細胞集団であって、ここでＴ細胞集団は約０．２ｘ１０⁶ 細胞／ｍｌ～約５．８ｘ１０⁶細胞／ｍｌの細胞密度を含む、Ｔ細胞集団に対する１体積の抗ＣＤ３／２８ナノマトリックス、例えばＴ細胞Ｔｒａｎｓａｃｔ（商標）と接触させた細胞集団中の未成熟および未分化細胞の総割合を計算することによって、および１７体積超のＴ細胞集団に対する１体積の抗ＣＤ３／２８ナノマトリックス、例えばＴ細胞Ｔｒａｎｓａｃｔ（商標）と接触させた参照細胞集団中の未成熟で、より分化程度の低いＴ細胞またはＤＣ細胞の割合と比較することであって、ここで参照Ｔ細胞集団は約０．２ｘ１０⁶ 細胞／ｍｌ～約５．８ｘ１０⁶細胞／ｍｌの細胞密度を含む、比較することによって、測定することができる。ある特定の実施形態では、１７体積以下（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５または１６体積）のＴ細胞集団に対する１体積の抗ＣＤ３／２８ナノマトリックス、例えばＴ細胞Ｔｒａｎｓａｃｔ（商標）と接触させた一つ以上のＴ細胞は、参照Ｔ細胞集団よりも、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約１００％のより未成熟または未分化のＴ細胞、例えばＴｓｃｍ細胞を含む。ある特定の実施形態では、１７体積以下（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５または１６体積）のＴ細胞集団に対する１体積の抗ＣＤ３／２８ナノマトリックス、例えばＴ細胞Ｔｒａｎｓａｃｔ（商標）と接触させた一つ以上のＴ細胞は、参照Ｔ細胞集団の、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍または１０倍より未熟または非未分化のＴ細胞、例えばＴ_SCM細胞を含む。

本開示は、一つ以上のＴ細胞を、１７体積以下（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５または１６体積）のＴ細胞集団に対する１体積の抗ＣＤ３／２８ナノマトリックス、例えばＴ細胞Ｔｒａｎｓａｃｔ（商標）と接触させることによって、Ｔ細胞集団の未成熟でより分化程度の低い細胞の割合を高める方法を提供し、ここで、Ｔ細胞集団は、約０．２ ｘ１０⁶ 細胞／ｍｌ～約５．８ｘ１０⁶細胞／ｍｌの細胞密度を含む。 一つ以上のＴ細胞またはＤＣ細胞は、当技術分野で公知の任意の手段を介して抗ＣＤ３／２８ナノマトリックスと接触させることができる。例えば、抗ＣＤ３／２８ナノマトリックスを、一つ以上のＴ細胞またはＤＣ細胞を培養するために使用される培養培地に添加することができる。

本開示の一つ以上のＴ細胞は、Ｔ細胞療法で使用するために、対象に投与することができる。したがって、一つ以上のＴ細胞は、Ｔ細胞療法を必要とする対象から、またはドナーから収集され得る。一旦収集されると、一つ以上のＴ細胞は、対象に投与される前に、任意の好適な期間にわたって処理され得る。この時間中、ドナーからのＴ細胞収集と対象への投与との間の任意の期間にわたり、一つ以上のＴ細胞は、１７体積以下（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５または１６体積）のＴ細胞集団に対する１体積の抗ＣＤ３／２８ナノマトリックス、例えばＴ細胞Ｔｒａｎｓａｃｔ（商標）と接触させることができ、ここで、Ｔ細胞集団は、約０．２ ｘ１０⁶ 細胞／ｍｌ～約５．８ｘ１０⁶細胞／ｍｌの細胞密度を含む。例えば、一つ以上のＴ細胞が、少なくとも約１日間、少なくとも約２日間、少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、少なくとも約１８日間、少なくとも約１９日間、または少なくとも約２０日間、１７体積以下（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５または１６体積）のＴ細胞集団に対する１体積の抗ＣＤ３／２８ナノマトリックス、例えばＴ細胞Ｔｒａｎｓａｃｔ（商標）に接触、例えばその存在下で培養され得る。一部の実施形態では、一つ以上のＴ細胞が、約１日～約１８日間、約１日～約１４日間、約１日～約１０日間、約１日～約７日間、約１日～約６日間、約１日～約５日間、約１日～約４日間、約１日～約３日間、約１日～約２日間、約２日～約３日間、約２日～約４日間、約２日～約５日間、または約２日～約６日間、１７体積以下（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５または１６体積）のＴ細胞集団に対する１体積の抗ＣＤ３／２８ナノマトリックス、例えばＴ細胞Ｔｒａｎｓａｃｔ（商標）に、接触（例えばその存在下で培養）される。ある特定の一実施形態では、一つ以上のＴ細胞は、Ｔ細胞が収集される日（例えば、０日目）からＴ細胞が対象に投与される日まで、１７体積以下（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５または１６体積）のＴ細胞集団に対する１体積の抗ＣＤ３／２８ナノマトリックス、例えばＴ細胞Ｔｒａｎｓａｃｔ（商標）に、接触、例えばその存在下で培養される。別の実施形態では、Ｔ細胞は、０日目から投与まで、１日目から投与まで、２日目から投与まで、３日目から投与まで、４日目から投与まで、５日目から投与まで、６日目から投与まで、１７体積以下（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５または１６体積）のＴ細胞集団に対する１体積の抗ＣＤ３／２８ナノマトリックス、例えばＴ細胞Ｔｒａｎｓａｃｔ（商標）に、接触、例えばその存在下で培養される。一部の実施形態では、一つ以上のＴ細胞は、投与前に洗浄されて抗ＣＤ３／２８ナノマトリックスを除去する。

本明細書に記載される方法は、ドナーから得られたリンパ球の集団を濃縮することをさらに含むことができる。リンパ球の集団、例えば、一つ以上のＴ細胞の濃縮は、以下に限定されないが、分離媒体（例えば、ＦＩＣＯＬＬ（登録商標）ＰＡＱＵＥ、ＲＯＳＥＴＴＥＳＥＰ（商標）ＨＬＡ総リンパ球濃縮カクテル、リンパ球分離培地（ＬＳＡ）（ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｃａｔ． 番号０８５０４９４Ｘ）、または類似のもの）の使用、濾過もしくは溶出による細胞サイズ、形状、または密度分離、免疫磁気分離（例えば、磁気活性化細胞選別システム、ＭＡＣＳ）、蛍光分離（例えば、蛍光活性化細胞選別システム、ＦＡＣＳ）、あるいはビーズベースのカラム分離を含む、任意の好適な分離方法によって達成され得る。さらに、汎Ｔアイソレーションキット、ヒト（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ社、カリフォルニア州オーバーン、＃１３０－０９６－５３５）、ＣＤ４／ＣＤ８選択キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ社、カリフォルニア州オーバーン、＃１３０－１２２－３５２ ＳｔｒａｉｇｈｔＦｒｏｍ（登録商標）Ｌｅｕｋｏｐａｋ（登録商標）ＣＤ４／ＣＤ８ マイクロビーズキット、＃１３０－０３０－４０１ ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ ＣＤ４ マイクロビーズ、および＃１３０－０３０－８０１ ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ ＣＤ８ マイクロビーズおよびＣＤ３ マイクロビーズキット）を使用して、Ｔ細胞の集団の濃縮を達成することができる。

本明細書に記載される方法は、リンパ球の集団を一つ以上のＴ細胞刺激剤で刺激して、好適な条件下で活性化されたＴ細胞の集団を産生することをさらに含み得る。リンパ球、例えば、Ｔ細胞またはＰＢＭＣは、新鮮または凍結であってもよく、それらは例えば、末梢血または臍帯血に由来し得る。一つ以上の好適なＴ細胞刺激剤の任意の組み合わせを使用して、以下に限定されるものではないが、Ｔ細胞刺激分子または共刺激分子を標的とする抗体またはその機能的断片（例えば、抗ＣＤ２抗体、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ２８抗体、またはその機能的断片）、または任意の他の好適なマイトジェン（例えば、テトラデカノイルホルボールアセテート（ＴＰＡ）、フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）、コンカナバリンＡ（ｃｏｎＡ）、リポ多糖（ＬＰＳ）、ポークウィードマイトジェン（ＰＷＭ））、またはＴ細胞刺激分子もしくは共刺激分子に対する天然リガンド、または抗ＣＤ３／２８ナノマトリックス、例えば、ＴｒａｎｓＡｃｔ （商標） Ｔ細胞試薬（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ社、カリフォルニア州オーバーン）を含む、活性化されたＴ細胞の集団を産生し得る。

本明細書に記載されるリンパ球の集団を刺激するための好適な条件は、ある温度、ある長さの時間、および／またはＣＯ₂のあるレベルの存在下であることを含み得る。ある特定の実施形態では、刺激のための温度は、約３４°Ｃ、約３５°Ｃ、約３６°Ｃ、約３７°Ｃ、または約３８°Ｃである。ある特定の実施形態では、刺激のための温度は、約３４～３８°Ｃである。ある特定の実施形態では、刺激のための温度は、約３５～３７°Ｃである。ある特定の実施形態では、刺激のための温度は、約３６～３８°Ｃである。ある特定の実施形態では、刺激のための温度は、約３６～３７°Ｃまたは約３７°Ｃである。

本明細書に記載されるリンパ球の集団を刺激するための別の条件は、刺激のための時間を含み得る。一部の実施形態では、刺激のための時間は、約０～７２時間である。一部の実施形態では、刺激のための時間は、約０～２４時間、約２４～７２時間、約２４～３６時間、約３０～４２時間、約３６～４８時間、約４０～５２時間、約４２～５４時間、約４４～５６時間、約４６～５８時間、約４８～６０時間、約５４～６６時間、または約６０～７２時間である。特定の一実施形態では、刺激のための時間は、約４８時間または少なくとも約４８時間である。他の実施形態では、刺激のための時間は、約４４～５２時間である。ある特定の実施形態では、刺激のための時間は、約４０～４４時間、約４０～４８時間、約４０～５２時間、または約４０～５６時間である。一実施形態では、刺激のための時間は、約０～２４時間であり、リンパ球の集団は新鮮である。

本明細書に記載されるリンパ球の集団を刺激するための他の条件は、あるＣＯ₂ レベルを含み得る。一部の実施形態では、刺激のためのＣＯ₂のレベルは、約１．０～１０％のＣＯ₂である。 一部の実施形態では、刺激のためのＣＯ₂のレベルは、約１．０％、約２．０％、約３．０％、約４．０％、約５．０％、約６．０％、約７．０％、約８．０％、約９．０％、または約１０．０％のＣＯ₂である。一実施形態では、刺激のためのＣＯ₂ のレベルは、約３～７％のＣＯ₂である。 他の実施形態では、刺激のためのＣＯ₂ のレベルは、約４～６％のＣＯ₂である。さらに他の実施形態では、刺激のためのＣＯ₂ のレベルは、約４．５～５．５％のＣＯ₂である。特定の一実施形態では、刺激のためのＣＯ₂ のレベルは、約５％のＣＯ₂である。

リンパ球の集団を刺激するための条件は、任意の組み合わせで、ある温度、刺激のためのある長さの時間、および／またはＣＯ₂のあるレベルの存在下であることを含み得る。例えば、リンパ球の集団を刺激する工程は、約３６～３８°Ｃの温度で、約４４～５２時間の間、約４．５～５．５％ＣＯ₂のＣＯ₂のレベルの存在下で、一つ以上のＴ細胞刺激剤でリンパ球の集団を刺激することを含み得る。

本明細書の方法に有用なリンパ球の濃度は、約０．５～１０．０×１０⁶細胞／ｍＬであり得る。ある特定の実施形態では、リンパ球の濃度は、約１．０～２．０×１０⁶細胞／ｍＬ、約１．０～３．０×１０⁶細胞／ｍＬ、約１．０～４．０×１０⁶細胞／ｍＬ、約１．０～５．０×１０⁶細胞／ｍＬ、約１．０～６．０×１０⁶細胞／ｍＬ、約１．０～７．０×１０⁶細胞／ｍＬ、約１．０～８．０×１０⁶細胞／ｍＬ、１．０～９．０ｘ１０⁶ 細胞／ｍＬ、または約１．０～１０．０×１０⁶ 細胞／ｍＬである。ある特定の実施形態では、リンパ球の濃度は、約１．０～２．０×１０⁶細胞／ｍＬまたは２．０～３．０ｘ１０⁶ 細胞／ｍＬである。ある特定の実施形態では、リンパ球の濃度は、約１．０～１．２×１０⁶細胞／ｍＬ、約１．０～１．４×１０⁶細胞／ｍＬ、約１．０～１．６×１０⁶細胞／ｍＬ、約１．０～１．８×１０⁶細胞／ｍＬ、または約１．０～２．０×１０⁶細胞／ｍＬである。ある特定の実施形態では、リンパ球の濃度は、約２．１～３．０ｘ１０⁶ 細胞／ｍＬ、約２．１～３．０ｘ１０⁶ 細胞／ｍＬ、約２．１～３．０ｘ１０⁶ 細胞／ｍＬ、約２．４～３ｘ１０⁶ 細胞／ｍＬ、約２．５～３．０ｘ１０⁶ 細胞／ｍＬ、約２．６～３．０ｘ１０⁶ 細胞／ｍＬ、約２．７～３．０ｘ１０⁶ 細胞／ｍＬ、２．８～３．０ｘ１０⁶ 細胞／ｍＬ、または２．８～３．０ｘ１０⁶ 細胞／ｍＬである。ある特定の実施形態では、リンパ球の濃度は、少なくとも約０．２×１０⁶細胞／ｍＬ、０．３×１０⁶細胞／ｍＬ、０．４×１０⁶細胞／ｍＬ、０．５×１０⁶ 細胞／ｍＬ、０．６×１０⁶ 細胞／ｍＬ、０．７×１０⁶ 細胞／ｍＬ、０．８×１０⁶細胞／ｍＬ、０．９×１０⁶細胞／ｍＬ、１．０×１０⁶細胞／ｍＬ、少なくとも約１．１×１０⁶ 細胞／ｍＬ、少なくとも約１．２×１０⁶ 細胞／ｍＬ、少なくとも約１．３×１０⁶ 細胞／ｍＬ、少なくとも約１．４×１０⁶ 細胞／ｍＬ、少なくとも約１．５×１０⁶ 細胞／ｍＬ、少なくとも約１．６。×１０⁶細胞／ｍＬ、少なくとも約１．７．×１０⁶細胞／ｍＬ、少なくとも約１．８×１０⁶細胞／ｍＬ、少なくとも約１．９．×１０⁶細胞／ｍＬ、少なくとも約２．０．×１０⁶細胞／ｍＬ、少なくとも約４．０×１０⁶細胞／ｍＬ、少なくとも約６．０×１０⁶細胞／ｍＬ、少なくとも約８．０×１０⁶、または少なくとも約１０．０×１０⁶細胞／ｍＬである。

抗ＣＤ３抗体（またはその機能的断片）、抗ＣＤ２８抗体（またはその機能的断片）、または抗ＣＤ３抗体と抗ＣＤ２８抗体の組み合わせを、リンパ球の集団を刺激する工程に従って使用することができる。任意の可溶性または固定化抗ＣＤ２、抗ＣＤ３、および／または抗ＣＤ２８抗体、またはその機能的断片を使用することができる（例えば、クローンＯＫＴ３（抗ＣＤ３）、クローン１４５－２Ｃ１１（抗ＣＤ３）、クローンＵＣＨＴ１（抗ＣＤ３）、クローンＬ２９３（抗ＣＤ２８）、クローン１５Ｅ８（抗ＣＤ２８））。一部の態様では、抗体は、限定されるものではないが、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ（例えば、ＴｒａｎｓＡｃｔ （商標）Ｔ細胞試薬 ラージスケール、＃１３０－１０９－１０４）、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（例えば、ＭＡＣＳ ＧＭＰ ＣＤ３ ｐｕｒｅ １ ｍｇ／ｍＬ、Ｐａｒｔ Ｎｏ． １７０－０７６－１１６）、およびｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ， Ｉｎｃ．を含む、当該技術分野で公知のベンダーから、商業的に購入することができる。さらに、当業者であれば、標準的な方法によって抗ＣＤ３および／または抗ＣＤ２８抗体を産生する方法を理解するであろう。一部の実施形態では、リンパ球の集団を刺激する工程に従って使用される一つ以上のＴ細胞刺激剤は、Ｔ細胞サイトカインの存在下でＴ細胞刺激または共刺激分子を標的とする抗体またはその機能的断片を含む。一態様では、一つ以上のＴ細胞刺激剤は、抗ＣＤ３抗体およびＩＬ－２を含む。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞刺激剤は、約２０ｎｇ／ｍＬ～１００ｎｇ／ｍＬの濃度の抗ＣＤ３抗体を含む。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ３抗体の濃度は、約２０ｎｇ／ｍＬ、約３０ｎｇ／ｍＬ、約４０ｎｇ／ｍＬ、約５０ｎｇ／ｍＬ、約６０ｎｇ／ｍＬ、約７０ｎｇ／ｍＬ、約８０ｎｇ／ｍＬ、約９０ｎｇ／ｍＬ、または約１００ｎｇ／ｍＬである。特定の一実施形態では、抗ＣＤ３抗体の濃度は約５０ｎｇ／ｍＬである。

本明細書に記載される方法は、形質導入されたＴ細胞の集団を産生するための単一サイクル形質導入を使用して、対象のタンパク質（例えば、ＣＡＲ）をコードする核酸分子を含むウイルスベクターで、活性化されたＴ細胞の集団を形質導入することをさらに含み得る。いくつかの組換えウイルスが、遺伝物質を細胞に送達するためのウイルスベクターとして使用されている。形質導入工程に従って使用され得るウイルスベクターは、以下に限定されないが、組換えレトロウイルスベクター、組換えレンチウイルスベクター、組換えアデノウイルスベクター、および組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む、任意のエコトロピックまたはアンホトロピックウイルスベクターであり得る。一部の実施形態では、方法は、一つ以上のＴ細胞をレトロウイルスで形質導入することをさらに含む。一実施形態では、活性化されたＴ細胞の集団を形質導入するために使用されるウイルスベクターは、ＭＳＧＶ１ガンマレトロウイルスベクターである。この実施形態の一態様によれば、ウイルスベクターは、本明細書で「ウイルスベクター接種材料」と呼ばれる、ウイルスベクター製造に特異的な培地中の懸濁培養液中で成長させる。ウイルスベクターを成長させるための任意の好適な成長培地および／またはサプリメントを、本明細書に提供される方法に従ってウイルスベクター接種材料に使用することができる。一部の態様によれば、ウイルスベクター接種材料は、形質導入工程中に培養培地に添加される。

一部の実施形態では、一つ以上のＴ細胞は、レンチウイルスで形質導入することができる。一実施形態では、レンチウイルスは、対象のタンパク質をコードする異種遺伝子を含む。特定の一実施形態では、対象のタンパク質は、標的細胞の表面、例えば腫瘍細胞の表面上に抗原を結合することができ、ＣＡＲとすることができる。

本明細書に記載される活性化されたＴ細胞の集団を形質導入するための条件は、特定の温度で、および／または特定のレベルのＣＯ₂の存在下で、特定の時間を含み得る。ある特定の実施形態では、形質導入のための温度は約３４°Ｃ、約３５°Ｃ、約３６ Ｃ、約３７°Ｃ、または約３８°Ｃである。一実施形態では、形質導入のための温度は、約３４～３８°Ｃである。別の実施形態では、形質導入のための温度は、約３５～３７°Ｃである。別の実施形態では、形質導入のための温度は、約３６～３８°Ｃである。さらに別の実施形態では、形質導入のための温度は、約３６～３７°Ｃである。特定の一実施形態では、形質導入のための温度は、約３７°Ｃである。

ある特定の実施形態では、形質導入のための時間は、活性化後約０～３６時間である。一部の実施形態では、形質導入のための時間は、約１２～１６時間、約１２～２０時間、約１２～２４時間、約１２～２８時間、または約１２～３２時間である。他の実施形態では、形質導入のための時間は、約２０時間または少なくとも約２０時間である。一実施形態では、形質導入のための時間は、約１６～２４時間である。他の実施形態では、形質導入のための時間は、少なくとも約１４時間、少なくとも約１６時間、少なくとも約１８時間、少なくとも約２０時間、少なくとも約２２時間、少なくとも約２４時間、または少なくとも約２６時間である。

ある特定の実施形態では、形質導入のための ＣＯ₂のレベルは、約１．０～１０％のＣＯ₂である。他の実施形態では、形質導入のためのＣＯ₂のレベルは、約１．０％、約２．０％、約３．０％、約４．０％、約５．０％、約６．０％、約７．０％、約８．０％、約９．０％、または約１０．０％のＣＯ₂である。一実施形態では、形質導入のためのＣＯ₂のレベルは、約３～７％のＣＯ₂である。別の実施形態では、形質導入のためのＣＯ₂のレベルは、約４～６％のＣＯ₂である。別の実施形態では、形質導入のためのＣＯ₂のレベルは、約４．５～５．５％のＣＯ₂である。特定の一実施形態では、形質導入のためのＣＯ₂のレベルは、約５％のＣＯ₂である。

一部の実施形態では、本明細書に記載される活性化されたＴ細胞の集団を形質導入することは、任意の組み合わせで、特定の時間、特定の温度で、および／または特定のレベルのＣＯ₂の存在下で：約３６～３８°Ｃの温度で、約１６～２４時間の間、および約４．５～５．５％のＣＯ₂のレベルのＣＯ₂ の存在下で、実施することができる。

本明細書に提供される方法は、操作されたＴ細胞の集団を産生するために、一つ以上の形質導入されたＴ細胞の集団を特定の時間にわたって増殖させることを含むことができる。所定の増殖時間は、（ｉ）患者に投与するための少なくとも一つの用量のための、操作されたＴ細胞の集団における十分な数の細胞、（ｉｉ）典型的なより長いプロセスと比較して、幼若細胞の好ましい比率を有する操作されたＴ細胞の集団、または（ｉｉｉ）（ｉ）および（ｉｉ）の両方、の産生を可能にする任意の好適な時間であり得る。この時間は、Ｔ細胞によって発現される対象のタンパク質、使用されるベクター、治療効果を有するために必要な用量、および他の変数に依存するであろう。したがって、一部の実施形態では、増殖のための所定の時間は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、または２１日超とすることができる。一部の態様では、増殖のための時間は、当技術分野で公知の増殖方法よりも短い。例えば、増殖のための所定の時間は、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％短く、または７５％超短くすることができる。一態様では、増殖のための時間は約３日であり、リンパ球の集団の濃縮から操作されたＴ細胞を産生するまでの時間は約６日である。

形質導入されたＴ細胞の集団を増殖するための条件は、温度、および／またはあるレベルのＣＯ₂の存在下であることを含み得る。ある特定の実施形態では、温度は約３４°Ｃ、約３５°Ｃ、約３６°Ｃ、約３７°Ｃ、または約３８°Ｃである。一実施形態では、温度は、約３４～３８°Ｃである。別の実施形態では、温度は、約３５～３７°Ｃである。別の実施形態では、温度は、約３６～３８°Ｃである。さらに別の実施形態では、温度は、約３６～３７°Ｃである。特定の一実施形態では、温度は、約３７°Ｃである。ある特定の実施形態では、ＣＯ₂のレベルは１．０～１０％のＣＯ₂である。他の実施形態では、ＣＯ₂ のレベルは、約１．０％、約２．０％、約３．０％、約４．０％、約５．０％、約６．０％、約７．０％、約８．０％、約９．０％、または約１０．０％のＣＯ₂ である。 一実施形態では、ＣＯ₂ のレベルは、約４．５～５．５％のＣＯ₂である。別の実施形態では、ＣＯ₂のレベルは、約５％のＣＯ₂である。他の実施形態では、ＣＯ₂のレベルは、約３．５％、約４．０％、約４．５％、約５．０％、約５．５％、または約６．５％のＣＯ₂である。一部の実施形態では、形質導入されたＴ細胞の集団を増殖するための条件は、任意の組み合わせで、温度、および／またはあるレベルのＣＯ₂の存在下であることを含み得る。例えば、形質導入されたＴ細胞の集団を増殖するための条件は、約３６～３８°Ｃの温度、および約４．５～５．５％のＣＯ₂のレベルのＣＯ₂の存在下であることを含む。

本明細書に提供される方法の各工程は、半閉鎖系または閉鎖系において実施することができる。ある特定の実施形態では、閉鎖系は、任意の好適な細胞培養バッグ（例えば、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ ＭＡＣＳ（登録商標）ＧＭＰ細胞分化バッグ、Ｏｒｉｇｅｎ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ ＰｅｒｍａＬｉｆｅ細胞培養バッグ）を含む、閉鎖バッグ培養系である。一部の実施形態では、閉鎖バッグ培養系で使用される細胞培養バッグは、形質導入工程中に組換えヒトフィブロネクチン断片で被覆される。組換えヒトフィブロネクチン断片は、三つの機能ドメイン：中央細胞結合ドメイン、ヘパリン結合ドメインＩＩ、およびＣＳ１配列を含み得る。組換えヒトフィブロネクチン断片を使用して、標的細胞およびウイルスベクターの共局在化を助けることによって、免疫細胞のレトロウイルス形質導入の遺伝子効率を増加させることができる。ある特定の実施形態では、組換えヒトフィブロネクチン断片は、ＲＥＴＲＯＮＥＣＴＩＮ（登録商標）（タカラバイオ、日本）である。ある特定の実施形態では、細胞培養バッグは、約１～６０μｇ／ｍＬまたは約１～４０μｇ／ｍＬの濃度の組換えヒトフィブロネクチン断片で被覆される。他の実施形態では、細胞培養バッグは、約１～２０μｇ／ｍＬ、２０～４０μｇ／ｍＬ、または４０～６０μｇ／ｍＬの濃度の組換えヒトフィブロネクチン断片で被覆される。一部の実施形態では、細胞培養バッグは、約１μｇ／ｍＬ、約２μｇ／ｍＬ、約３μｇ／ｍＬ、約４μｇ／ｍＬ、約５μｇ／ｍＬ、約６μｇ／ｍＬ、約７μｇ／ｍＬ、約８μｇ／ｍＬ、約９μｇ／ｍＬ、約１０μｇ／ｍＬ、約１１μｇ／ｍＬ、約１２μｇ／ｍＬ、約１３μｇ／ｍＬ、約１４μｇ／ｍＬ、約１５μｇ／ｍＬ、約１６μｇ／ｍＬ、約１７μｇ／ｍＬ、約１８μｇ／ｍＬ、約１９μｇ／ｍＬ、または約２０μｇ／ｍＬの組換えヒトフィブロネクチン断片で被覆される。他の実施形態では、細胞培養バッグは、約２～５μｇ／ｍＬ、約２～１０μｇ／ｍＬ、約２～２０μｇ／ｍＬ、約２～２５μｇ／ｍＬ、約２～３０μｇ／ｍＬ、約２～３５μｇ／ｍＬ、約２～４０μｇ／ｍＬ、約２～５０μｇ／ｍＬ、または約２～６０μｇ／ｍＬの組換えヒトフィブロネクチン断片で被覆される。ある特定の実施形態では、細胞培養バッグは、少なくとも約２μｇ／ｍＬ、少なくとも約５μｇ／ｍＬ、少なくとも約１０μｇ／ｍＬ、少なくとも約１５μｇ／ｍＬ、少なくとも約２０μｇ／ｍＬ、少なくとも約２５μｇ／ｍＬ、少なくとも約３０μｇ／ｍＬ、少なくとも約４０μｇ／ｍＬ、少なくとも約５０μｇ／ｍＬ、または少なくとも約６０μｇ／ｍＬの組換えヒトフィブロネクチン断片で被覆される。特定の一実施形態では、細胞培養バッグは、少なくとも約１０μｇ／ｍＬの組換えヒトフィブロネクチン断片で被覆される。閉鎖バッグ培養系で使用される細胞培養バッグは、任意選択で、形質導入工程中にヒトアルブミン血清（ＨＳＡ）で遮断することができる。代替的な実施形態では、細胞培養バッグは、形質導入工程中にＨＳＡで遮断されない。

他の態様では、ヒト血清を伴うまたは伴わない、Ｔ細胞培養培地を使用して、ａ）一つ以上のＴ細胞を、１７体積以下（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５または１６体積）のＴ細胞集団に対する１体積の抗ＣＤ３／２８ナノマトリックス、例えばＴ細胞Ｔｒａｎｓａｃｔ（商標）と接触させること、（ｂ）活性化されたＴ細胞の集団を形質導入すること、および（ｃ）形質導入されたＴ細胞の集団を増殖させること、のうちの少なくとも一つを実施する。一部の態様では、（ａ）～（ｃ）の各々は、血清を添加しないＴ細胞培養培地を使用して実施される。本明細書で言及されるように、用語「無血清培地」または「無血清培養培地」は、使用される成長培地が血清（例えば、ヒト血清またはウシ血清）で補充されないことを意味する。したがって、一部の実施形態では、培養細胞の生存率、活性化、および成長を支持する目的で、個別に分かれた別個の成分として培養培地に血清を添加しない。任意の好適な培養培地Ｔ細胞増殖培地を、本明細書に記載される方法に従って懸濁液中で細胞を培養するために使用することができる。例えば、Ｔ細胞増殖培地は、限定されるものではないが、好適な量の緩衝剤、マグネシウム、カルシウム、ピルビン酸ナトリウム、および重炭酸ナトリウムを含む滅菌低グルコース溶液を含み得る。一実施形態では、Ｔ細胞増殖培地は、ＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）である。操作されたＴ細胞を産生するための典型的な方法とは対照的に、本明細書に記載の方法は、血清（例えば、ヒトまたはウシ）で補充されていない培養培地を使用することができる。
抗ＣＤ３／２８ナノマトリックス

本開示の抗ＣＤ３／２８ナノマトリックスは、ＣＤ３およびＣＤ２８を結合する抗体および／またはその断片を含むナノメートルスケールマトリックスであり、ＴｒａｎｓＡｃｔ （商標）Ｔ細胞試薬（以下、「ＴｒａｎｓＡｃｔ（商標））として、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ社（カリフォルニア州オーバーン）によって提供される。ＴｒａｎｓＡｃｔ（商標）試薬は、全直径約１００ｎｍの生体適合性多糖マトリックスに埋め込まれたナノスケールの鉄酸化物結晶からなるコロイド試薬である。ＣＤ３（クローンＯＫＴ３）およびＣＤ２８（クローン１５Ｅ８）に対する抗体は、マトリックスに共有結合される。例えば、Ｃａｓａｔｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ ２０１３年１０月；６２（１０）：１５６３－７３、Ｃａｓａｔｉ ｅｔ ａｌ．，ＭＡＣＳ ＆ ｍｏｒｅ，Ｖｏｌ １５，２０１３年２月、およびＵＳ２０１４／００８７４６２を参照のこと。

Ｔ細胞
本明細書に記載される一つ以上のＴ細胞は、例えばヒトドナーを含む、任意の供給源から取得することができる。ドナーは、抗癌治療、例えば、本明細書に記載される方法によって作製された一つ以上のＴ細胞での治療、を必要とする対象であってもよく（すなわち、自己ドナー）、または本明細書に記載される方法によって作製された細胞の集団の作製時に、異なる個人または癌患者を治療するために使用されるであろうリンパ球サンプルを提供する個人であってもよい（すなわち、同種異系ドナー）。リンパ球の集団は、当技術分野で使用される任意の好適な方法によってドナーから取得することができる。

本明細書に記載の方法は、一つ以上の細胞を、１７体積以下（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５または１６体積）のＴ細胞集団に対する１体積の抗ＣＤ３／２８ナノマトリックス、例えばＴ細胞Ｔｒａｎｓａｃｔ（商標）と接触させることによって、Ｔ細胞集団において、より分化程度の低い未成熟な細胞（例えば、Ｔ_SCM細胞）の割合を増加させるために使用することができる。本明細書に記載されるように、驚くべきことに、一つ以上のＴ細胞の、抗ＣＤ３／２８ナノマトリックス、例えばＴ細胞Ｔｒａｎｓａｃｔ（商標）による強力な活性化は、インビトロでナイーブおよび未成熟Ｔ細胞の割合を増加させることが見出された。特に、活性化後、一つ以上のＴ細胞は、未分化または未成熟Ｔ細胞を示す一つ以上の遺伝子を発現することができる。未分化または未成熟Ｔ細胞を示す一つ以上の遺伝子は、群ＣＤ８、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ２８、ＣＤ９５、ＩＬ－７Ｒα、ＣＸＣＲ４、ＴＣＦ７、ＦＯＸＯ１、ＩＤ３、ＢＣＬ６、およびそれらの任意の組み合わせから選択することができる。例えば、一つ以上のＴ細胞を、１７体積以下（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５または１６体積）のＴ細胞集団に対する１体積の抗ＣＤ３／２８ナノマトリックス、例えばＴ細胞Ｔｒａｎｓａｃｔ（商標）と接触させることにより、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＯ、およびそれらの任意の組み合わせから選択される未分化または未成熟Ｔ細胞を示す、一つ以上の遺伝子を発現する細胞の割合が増加する。

他の実施形態では、一つ以上のＴ細胞を、１７体積以下（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５または１６体積）のＴ細胞集団に対する１体積の抗ＣＤ３／２８ナノマトリックス、例えばＴ細胞Ｔｒａｎｓａｃｔ（商標）と接触させた後に、一つ以上のＴ細胞は、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ４５ＲＡ、および／またはＣＤ４５ＲＯを発現する 特定の一実施形態では、抗ＣＤ３／２８ナノマトリックスと接触させた後は、接触させる前と比較して、より大きな割合の一つ以上のＴ細胞が、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ４５ＲＡ、および／またはＣＤ４５ＲＯを発現する。特定の一実施形態では、１７体積以下（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５または１６体積）のＴ細胞集団に対する１体積の抗ＣＤ３／２８ナノマトリックス、例えばＴ細胞Ｔｒａｎｓａｃｔ（商標）と接触させた一つ以上のＴ細胞のより大きな割合が、１７体積以上（例えば、１７．５、２０、３０、または４０体積）のＴ細胞集団に対する１体積の抗ＣＤ３／２８ナノマトリックス、例えばＴ細胞Ｔｒａｎｓａｃｔ（商標）と接触させたＴ細胞の集団よりも、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ４５ＲＡ、および／またはＣＤ４５ＲＯを発現する。

Ｔ細胞療法
本開示は、１７体積以上（例えば、１７．５、２０、３０、または４０体積）のＴ細胞集団に対する１体積の抗ＣＤ３／２８ナノマトリックス、例えばＴ細胞Ｔｒａｎｓａｃｔ（商標）の比で接触させたＴ細胞の集団と比較して、１７体積以下（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５または１６体積）のＴ細胞に対する１体積の抗ＣＤ３／２８ナノマトリックス、例えばＴ細胞Ｔｒａｎｓａｃｔ（商標）の比で一つ以上のＴ細胞を接触させることにより、集団中の未成熟で、より分化程度の低いＴ細胞の割合を増加させるための方法を提供する。一部の実施形態では、方法は、本明細書に提供される方法を使用して調製された一つ以上のＴ細胞を、それを必要とする対象に投与することをさらに含む。当業者であれば、本明細書に提供される方法によって産生される一つ以上のＴ細胞が、患者に一つ以上のＴ細胞を投与することを含む、患者の治療の任意の方法において使用され得ることを理解するであろう。

例えば、限定されるものではないが、本明細書に記載される方法は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）免疫療法、自己細胞療法、操作された自己細胞療法（ｅＡＣＴ（商標））、同種異系Ｔ細胞移植、操作された同種異系Ｔ細胞療法、非Ｔ細胞移植、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される養子Ｔ細胞療法であり得る、Ｔ細胞療法の有効性を強化することができる。養子Ｔ細胞療法は、腫瘍細胞を認識し、かつ腫瘍細胞を結合する能力を有する自己または同種異系Ｔ細胞を、選択すること、インビトロで濃縮すること、および患者へ投与することの任意の方法を広く含む。ＴＩＬ免疫療法は、腫瘍組織に浸潤することができるリンパ球が単離され、インビトロで濃縮され、患者に投与される、養子Ｔ細胞療法の一種である。ＴＩＬ細胞は、自己、または同種異系であり得る。自己細胞療法は、腫瘍細胞を標的化することができるＴ細胞を患者から単離し、インビトロでＴ細胞を濃縮し、同じ患者にＴ細胞を再び投与することを含む養子Ｔ細胞療法である。同種異系Ｔ細胞移植には、エクスビボで増殖された天然起源のＴ細胞、または遺伝子操作されたＴ細胞の移植が含まれ得る。非Ｔ細胞移植には、限定されないがナチュラルキラー（ＮＫ）細胞などの、非Ｔ細胞を用いた自己または同種異系療法が含まれ得る。

特定の一実施形態では、本開示のＴ細胞療法は、操作された同種異系Ｔ細胞療法である。この実施形態によると、方法は、ドナーから血液細胞を収集することを含み得る。次いで、単離された血液細胞（例えば、Ｔ細胞）は、少なくとも約０．２ｘ１０⁶ 細胞／ｍｌ～約５．８ｘ１０⁶細胞／ｍｌの細胞密度で、１７体積以下（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５または１６体積）のＴ細胞集団に対する１体積の抗ＣＤ３／２８ナノマトリックス、例えばＴ細胞Ｔｒａｎｓａｃｔ（商標）を接触させた、一つ以上の天然起源タンパク質（例えば、内因性ＴＣＲ）の発現を低減するように遺伝子操作され得る。Ｔ細胞は、キメラ抗原受容体（「操作されたＣＡＲ Ｔ細胞」）またはＴ細胞受容体（「操作されたＴＣＲ Ｔ細胞」）を発現するように操作され得る。特定の一実施形態では、１７体積以下（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５または１６体積）のＴ細胞集団に対する１体積の抗ＣＤ３／２８ナノマトリックス、例えばＴ細胞Ｔｒａｎｓａｃｔ（商標）と接触させた、操作された同種異系ＣＡＲ Ｔ細胞または操作されたＴＣＲ Ｔ細胞は、その後、対象に投与される。一部の実施形態では、操作されたＴ細胞は、対象中の固形または液状の腫瘍に向けられる。

一実施形態では、一つ以上のＴ細胞は、キメラ抗原受容体を発現するように操作され得る。キメラ抗原受容体は、腫瘍抗原への結合分子を含み得る。結合分子は、抗体またはその抗原結合分子であってもよい。例えば、抗原結合分子は、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆｖ、Ｆ（ａｂ’）₂、ラクダ類およびｄＡｂ、ならびに任意の断片またはそれらの組み合わせから選択することができる。

キメラ抗原受容体は、特定の腫瘍抗原を標的とするように操作され得る。一部の実施形態では、腫瘍抗原が、ＢＣＭＡ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、Ｆｌｔ－３、ＷＴ－１、ＣＤ２０、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ３８、ＣＤ７０、ＣＤ３３、ＣＤ１３３、ＭＨＣ－ＷＴ１、ＴＳＰＡＮ１０、ＭＨＣ－ＰＲＡＭＥ、Ｌｉｖ１、ＡＤＡＭ１０、ＣＨＲＮＡ２、ＬｅＹ、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＳ１、ＣＤ４４ｖ６、ＲＯＲ１、ＣＤ１９、クローディン（Ｃｌａｕｄｉｎ）１８．２（クローディン１８Ａ２またはクローディン１８アイソフォーム２）、ＤＬＬ３（デルタ様タンパク質３、ドロソフィラデルタ相同体３、デルタ３）、Ｍｕｃ１７（ムチン１７、Ｍｕｃ３、Ｍｕｃ３）、ＦＡＰアルファ（線維芽細胞活性化タンパク質アルファ）、Ｌｙ６Ｇ６Ｄ（リンパ球抗原６複合体座位タンパク質Ｇ６ｄ、ｃ６ｏｒｆ２３、Ｇ６Ｄ、ＭＥＧＴ１、ＮＧ２５）、ＲＮＦ４３（Ｅ３ユビキチン－タンパク質リガーゼＲＮＦ４３、ＲＩＮＧフィンガータンパク質４３）、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２／ｎｅｕ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、ＣＤ４０、ジシアロガングリオシドＧＤ２、ＧＤ３、Ｃ型レクチン様分子－１（ＣＬＬ－１）、管上皮ムチン、ｇｐ３６、ＴＡＧ－７２、グリコスフィンゴ脂質、神経膠腫関連抗原、βヒト絨毛性ゴナドトロピン、アルファフェトタンパク質（ＡＦＰ）、レクチン反応性ＡＦＰ、チログロブリン、ＲＡＧＥ－１、ＭＮ－ＣＡ ＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２（ＡＳ）、腸内カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２、Ｍ－ＣＳＦ、プロスターゼ、プロスターゼ特異的抗原（ＰＳＡ）、ＰＡＰ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＡ－ｌａ、ｐ５３、プロステイン、ＰＳＭＡ、サバイビンおよびテロメラーゼ、前立腺癌腫瘍抗原－１（ＰＣＴＡ－１）、ＭＡＧＥ、ＥＬＦ２Ｍ、好中球エラスターゼ、エフリンＢ２、ＣＤ２２、インスリン成長因子（ＩＧＦｌ）－ｌ、ＩＧＦ－ＩＩ、ＩＧＦＩ受容体、メソテリン、腫瘍特異的ペプチドエピトープを提示する主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子、５Ｔ４、Ｏ １、Ｎｋｐ３０、腫瘍間質抗原、フィブロネクチンのエクストラドメインＡ（ＥＤＡ）およびエクストラドメインＢ（ＥＤＢ）およびテネイシンＣのＡＩドメイン（ＴｎＣ ＡＩ）および線維芽細胞関連タンパク質（ｆａｐ）、ＬＲＰ６、黒色腫関連コンドロイチン硫酸プロテオグリカン（ＭＣＳＰ）、ＭＡＲＴＩ、ＭＵＣ１、ＬＭＰ２、イディオタイプ（Ｉｄｉｏｔｙｐｅ）、ＮＹ－ＥＳＯ－１、Ｒａｓ変異体、ｇｐ１００、プロテイナーゼ３、ｂｃｒ－ａｂｌ、チロシナーゼ、ｈＴＥＲＴ、ＥｐｈＡ２、ＭＬ－ＴＡＰ、ＥＲＧ、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、ＡＬＫ、アンドロゲン受容体、系統特異的または組織特異的抗原、例えば、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ３４、ＣＤ７９、ＣＤ１１６、ＣＤ１１７、ＣＤ１３５、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＴＬＡ－４、Ｂ７－１（ＣＤ８０）、Ｂ７－２（ＣＤ８６）、エンドグリン、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子、ＭＵＣ１６、ＰＳＣＡ、Ｔｒｏｐ２、ＣＤ１７１（Ｌ１ＣＡＭ）、ＣＡ９、ＳＴＥＡＰ１、ＶＥＧＦＲ２、およびそれらの任意の組み合わせから選択される。

本明細書に提供される方法は、一つ以上のＴ細胞の患者への移植を含むＴ細胞療法を含むことができる。Ｔ細胞は、治療有効量で投与することができる。Ｔ細胞、例えば操作されたＣＡＲ⁺Ｔ細胞または操作されたＴＣＲ⁺Ｔ細胞の治療有効量は、例えば、少なくとも約１０⁴細胞、少なくとも約１０細胞、少なくとも約１０⁶細胞、少なくとも約１０⁷細胞、少なくとも約１０⁸細胞、少なくとも約１０⁹、または少なくとも約１０¹⁰であってもよい。別の実施形態では、Ｔ細胞、例えば、操作されたＣＡＲ＋Ｔ細胞または操作されたＴＣＲ⁺Ｔ細胞の治療有効量は、約１０⁴細胞、約１０⁵細胞、約１０⁶細胞、約１０⁷細胞、または約１０⁸細胞である。特定の一実施形態では、Ｔ細胞、例えば操作されたＣＡＲ⁺Ｔ細胞または操作されたＴＣＲ⁺Ｔ細胞の治療有効量は、約２×１０⁶細胞／ｋｇ、約３×１０⁶細胞／ｋｇ、約４×１０⁶細胞／ｋｇ、約５×１０⁶細胞／ｋｇ、約６×１０⁶細胞／ｋｇ、約７×１０⁶細胞／ｋｇ、約８×１０⁶細胞／ｋｇ、約９×１０⁶細胞／ｋｇ、約１×１０⁷細胞／ｋｇ、約２×１０⁷細胞／ｋｇ、約３×１０⁷細胞／ｋｇ、約４×１０⁷細胞／ｋｇ、約５×１０⁷細胞／ｋｇ、約６×１０⁷細胞／ｋｇ、約７×１０⁷細胞／ｋｇ、約８×１０⁷細胞／ｋｇ、または約９×１０⁷細胞／ｋｇである。

一部の実施形態では、患者は、Ｔ細胞療法の投与前に事前調整される。患者は、一つ以上の化学療法剤および／または放射線療法を用いた治療を含むがこれに限定されない、当技術分野で公知の任意の方法に従って、事前調整され得る。一部の実施形態では、事前調整は、Ｔ細胞療法の前に、内因性リンパ球の数を低減する、サイトカインシンクを除去する、一つ以上の恒常性サイトカインまたは炎症促進因子の血清レベルを増加させる、調整後に投与されるＴ細胞のエフェクター機能を強化する、抗原提示細胞活性化および／または利用可能性を強化する、またはそれらの任意の組み合わせの、任意の治療を含むことができる。

癌治療
本開示の方法は、対象における癌を治療する、腫瘍のサイズを縮小する、腫瘍細胞を死滅させる、腫瘍細胞増殖を防止する、腫瘍の成長を防止する、患者から腫瘍を除去する、腫瘍の再発を防止する、腫瘍転移を防止する、患者における寛解を誘導する、またはそれらの任意の組み合わせ、に使用することができる。ある特定の実施形態では、方法は、完全奏効を誘導する。他の実施形態では、方法は部分奏効を誘導する。

一実施形態、本開示は、対象に一つ以上のＴ細胞を投与することを含むＴ細胞療法を必要とする対象において、腫瘍を治療する方法に向けられており、ここで一つ以上のＴ細胞は、少なくとも約０．２ｘ１０⁶細胞／ｍｌ～約５．８ｘ１０⁶細胞／ｍｌの細胞密度で、１７体積以下（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５または１６体積）のＴ細胞集団に対する１体積の抗ＣＤ３／２８ナノマトリックス、例えばＴ細胞Ｔｒａｎｓａｃｔ（商標）と接触させてある。別の実施形態では、本開示は、対象に一つ以上のＴ細胞を投与することを含むＴ細胞療法を必要とする対象において、腫瘍のサイズを低減する、もしくは減少させる、または腫瘍の成長を抑制する方法に向けられており、ここで一つ以上のＴ細胞は、少なくとも約０．２ｘ１０⁶細胞／ｍｌ～約５．８ｘ１０⁶細胞／ｍｌの細胞密度で、１７体積以下（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５または１６体積）のＴ細胞集団に対する１体積の抗ＣＤ３／２８ナノマトリックス、例えばＴ細胞Ｔｒａｎｓａｃｔ（商標）と接触させてある。

治療され得る癌としては、血管形成されていない腫瘍、まだ実質的に血管形成されていない腫瘍、または血管形成されている腫瘍を含み得る。癌はまた、固形腫瘍または非固形腫瘍を含み得る。ある特定の実施形態では、癌は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、腺様嚢胞癌、副腎皮質、癌、ＡＩＤＳ関連癌、肛門癌、虫垂癌、星状細胞腫、非定型奇形様／ラブドイド腫瘍、中枢神経系、Ｂ細胞白血病、リンパ腫またはＮＨＬなどの他のＢ細胞悪性腫瘍、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨肉腫および悪性線維性組織球腫、脳幹神経膠腫、脳腫瘍、乳癌、気管支腫瘍、バーキットリンパ腫、カルチノイド腫瘍、中枢神経系癌、子宮頸癌、脊索腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄増殖性疾患、結腸癌、大腸癌（結腸直腸癌）、頭蓋咽頭腫、皮膚ｔ細胞リンパ腫、胚芽腫、中枢神経系、子宮内膜癌、上衣芽腫、上衣腫、食道癌、鼻腔神経芽細胞腫、腫瘍のユーイング肉腫ファミリー、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、肝外胆管がん、眼癌骨の線維性組織球腫、悪性、および骨肉腫、胆嚢癌、胃（胃）癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、軟部組織肉腫、生殖細胞腫瘍、妊娠性絨毛腫瘍、グリオーマ、ヘアリー細胞白血病、頭頸部癌、心臓癌、肝細胞（肝臓）癌、組織球症、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、眼内黒色腫、膵島細胞腫瘍（膵内分泌部）、カポシ肉腫、腎臓癌、ランゲルハンス細胞組織球症、喉頭癌、白血病、口唇および口腔癌、肝癌（原発性）、上皮内小葉癌（ＬＣＩＳ）、肺癌、リンパ腫、マクログロブリン血症、男性乳がん、骨の悪性線維性組織球腫および骨肉腫、髄芽腫、髄上皮腫、黒色腫、メルケル細胞癌、中皮腫、ＮＵＴ遺伝子に関与する潜在性原発正中線路癌を有する転移性扁平上皮頸部癌（ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｎｅｃｋ ｃａｎｃｅｒ ｗｉｔｈ ｏｃｃｕｌｔ ｐｒｉｍａｒｙ ｍｉｄｌｉｎｅ ｔｒａｃｔ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ ＮＵＴ ｇｅｎｅ）、口癌（ｍｏｕｔｈ ｃａｎｃｅｒ）、多発性内分泌腫瘍症候群、多発性骨髄腫／形質細胞腫瘍、菌状息肉症、骨髄異形成症候群、骨髄異形成／骨髄増殖性腫瘍、骨髄性白血病、慢性（ＣＭＬ）、骨髄性白血病、急性（ＡＭＬ）、骨髄腫、複数、骨髄増殖性疾患、鼻腔および副鼻腔癌、上咽頭癌、神経芽腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺癌、口腔癌（ｏｒａｌ ｃａｎｃｅｒ）、口腔癌（ｏｒａｌ ｃａｖｉｔｙ ｃａｎｃｅｒ）、中咽頭癌、骨肉腫および骨の悪性線維性組織球腫、卵巣癌、膵癌、乳頭腫症、傍神経節腫、副鼻腔癌および鼻腔癌、副甲状腺癌、陰茎癌、咽頭癌、褐色細胞腫、中間型松果体実質腫瘍、松果体芽腫およびテント上原始神経外胚葉腫瘍、下垂体腫瘍、形質細胞腫瘍／多発性骨髄腫、胸膜肺芽腫、妊娠と乳癌、原発性中枢神経系（ＣＮＳ）リンパ腫、前立腺がん、直腸癌、腎細胞（腎臓）癌、腎盂および尿管、移行上皮がん、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、肉腫、セザリー症候群、小細胞肺癌、小腸癌、軟部組織肉腫、扁平上皮癌、頸部扁平上皮癌、胃（胃）癌、テント上原始神経外胚葉性腫瘍、ｔ細胞リンパ腫、皮膚、精巣癌、咽頭癌、胸腺腫および胸腺癌、甲状腺癌、腎盂と尿管の移行上皮癌、栄養膜腫瘍、尿管および腎盂癌、尿道癌、子宮癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、腎芽細胞腫、に由来する腫瘍から選択されてもよい。

一実施形態では、方法は、腫瘍を治療するために使用することができ、腫瘍はリンパ腫または白血病である。リンパ腫および白血病は、特にリンパ球に影響を及ぼす血液の癌である。血液中のすべての白血球は、骨髄中に存在する単一のタイプの多能性造血幹細胞に由来する。この幹細胞は、骨髄前駆細胞とリンパ球前駆細胞の両方を産生し、これが体内で見られる様々な種類の白血球を産生する。骨髄前駆細胞から生じる白血球には、Ｔリンパ球（Ｔ細胞）、Ｂリンパ球（Ｂ細胞）、ナチュラルキラー細胞、および形質細胞が含まれる。リンパ球前駆細胞から生じる白血球には、巨核球、肥満細胞、好塩基球、好中球、好酸球、単球、およびマクロファージが含まれる。リンパ腫および白血病は、患者におけるこれらの細胞タイプの一つ以上に影響を及ぼす可能性がある。

したがって、一部の実施形態では、方法は、リンパ腫または白血病を治療するために使用することができ、リンパ腫または白血病は、Ｂ細胞悪性腫瘍である。Ｂ細胞悪性腫瘍の例としては、以下に限定されないが、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ／ＣＬＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、ＦＬ、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、節外性（ＭＡＬＴリンパ腫）、節性（単球様Ｂ細胞リンパ腫）、脾臓の、びまん性大細胞型リンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病／リンパ腫、バーキットリンパ腫、およびリンパ芽球性リンパ腫が挙げられる。一部の実施形態では、リンパ腫または白血病は、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病／小細胞性リンパ腫、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫（例えば、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症）、脾臓辺縁帯リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、形質細胞腫瘍（例えば、形質細胞性骨髄腫（すなわち、多発性骨髄腫）、または形質細胞腫）、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（例えば、ＭＡＬＴリンパ腫）、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、形質転換濾胞性リンパ腫（ＴＦＬ）、原発性皮膚濾胞中心リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、エプスタイン－バーウイルス陽性ＤＬＢＣＬ、リンパ腫様肉芽腫症、縦隔（胸腺）原発大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣＬ）、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＡＬＫ＋大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、形質芽細胞リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、ＨＨＶ８関連多中心性キャッスルマン病で生じる大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫／白血病、Ｔ細胞性前リンパ球性白血病、Ｔ細胞大顆粒リンパ球性白血病、侵攻性ＮＫ細胞白血病、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、腸管症関連Ｔ細胞リンパ腫、肝脾Ｔ細胞リンパ腫、芽球性ＮＫ細胞リンパ腫、菌状息肉症／セザリー症候群、原発性皮膚未分化大細胞リンパ腫、リンパ腫様丘疹症、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、未分化大細胞型リンパ腫、Ｂリンパ芽球性白血病／リンパ腫、再発性遺伝子異常を伴うＢ型リンパ芽球性白血病／リンパ腫、Ｔリンパ芽球性白血病／リンパ腫、およびホジキンリンパ腫から選択される。一部の実施形態では、癌は、一つ以上の前治療に対して難治性であり、および／または癌は、一つ以上の前治療後に再発している。

ある特定の実施形態では、癌は、濾胞性リンパ腫、形質転換濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、および縦隔（胸腺）原発大細胞型Ｂ細胞リンパ腫から選択される。特定の一実施形態では、癌はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である。

一部の実施形態では、癌は、化学療法、放射線療法、免疫療法（Ｔ細胞療法および／または抗体もしくは抗体－薬剤コンジュゲートを用いた治療を含む）、自己幹細胞移植、またはそれらの任意の組み合わせのうちの一つ以上に対して耐性を有するか、またはそれらの後に再発している。特定の一実施形態では、癌は難治性のびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である。

一部の実施形態では、癌は、対象に一つ以上のＴ細胞を投与することによって治療され、ここで一つ以上のＴ細胞は、少なくとも約０．２ｘ１０⁶細胞／ｍｌ～約５．８ｘ１０⁶ 細胞／ｍｌの細胞密度で、１７体積以下（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５または１６体積）のＴ細胞集団に対する１体積の抗ＣＤ３／２８ナノマトリックス、例えばＴ細胞Ｔｒａｎｓａｃｔ（商標）と接触させてある。一部の実施形態では、一つ以上のＴ細胞は、操作されたＣＡＲ細胞または操作されたＴＣＲ細胞を含む。一実施形態では、操作されたＣＡＲ細胞または操作されたＴ細胞は、対象の腫瘍を治療する。

本発明は、さらなる限定として解釈されるべきではない以下の実施例によってさらに説明される。本出願全体を通して引用される全ての参考文献の内容は、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。

以下の実施例は、本開示の様々な実施形態を説明することを意図している。したがって、論じた特定の実施形態は、本開示の範囲に対する限定として解釈されるべきではない。例えば、以下の実施例は、抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）で形質導入されたＴ細胞を対象とするが、当業者であれば、本明細書に記載される方法は、任意のＣＡＲで形質導入されたＴ細胞に適用できることを理解するであろう。当業者には、様々な等価物、変更、および修正が、本開示の範囲から逸脱することなく行うことができることが明白であり、そのような同等の実施形態が本明細書に含まれることが理解される。さらに、本開示で引用されるすべての参考文献は、本明細書に完全に記載されているかのように、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

実施形態
Ｅ１． １）ある体積比で、ある体積の抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスを、ある体積の開始細胞集団と接触させることであって、開始細胞集団が少なくとも約０．２ｘ１０⁶ 細胞／ｍｌ～約５．８ｘ１０⁶細胞／ｍｌの細胞密度であり、および体積比は、体積１７．４以下の開始細胞集団に対して体積１の抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスである、接触させること、ならびに２）培養培地中で細胞集団を培養することであって、結果として得られるＴ細胞集団は、第２のＴ細胞集団と比較して幹メモリーＴ細胞の割合の増加を含み、同じ細胞密度の第２の開始細胞集団を、体積１７．５以上の第２の開始細胞集団に対する体積１の抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスの比率で、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスと接触させる、培養すること、を含む、細胞集団における幹メモリーＴ細胞の割合を増加する方法。

Ｅ２． ナノマトリックスが、Ｍａｃｓ（登録商標）ＧＭＰ Ｔ細胞 Ｔｒａｎｓａｃｔ（商標）ナノマトリックスである、Ｅ１に記載の方法。

Ｅ３． 開始細胞集団が、末梢血、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位からの組織、腹水、胸水脾臓組織、腫瘍、間葉組織、Ｔ細胞株、または人工胸腺オルガノイド（ＡＴＯ）細胞培養系から取得される、実施形態１および２のいずれかに記載の方法。

Ｅ４． 開始細胞集団が、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、ヘルパーＴ細胞、腫瘍浸潤性リンパ球、メモリーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、末梢血リンパ球、腫瘍浸潤性白血球、末梢血単核細胞、樹状細胞、臍帯血幹細胞、多能性幹細胞、および間葉系幹細胞からなる群から選択される、実施形態１～３のいずれかに記載の方法。

Ｅ５． 開始細胞集団が、末梢血単核細胞、正に選択されたＣＤ３、ＣＤ４、またはＣＤ８ Ｔ細胞、あるいは負に選択されたＣＤ３、ＣＤ４、またはＣＤ８ Ｔ細胞である、実施形態１～４のいずれかに記載の方法。

Ｅ６． 開始細胞集団が、末梢血単核細胞である、実施形態１～５のいずれかに記載の方法。

Ｅ７． 開始細胞集団が、精製されたＴ細胞集団である、実施形態１～４のいずれかに記載の方法。

Ｅ８． 開始細胞密度が、少なくとも約０．５０ｘ１０⁶～約６．００ｘ１０⁶、約０．５６ｘ１０⁶～約５．７２ｘ１０⁶、約０．８０ｘ１０⁶～約４．０ｘ１０⁶、約１．００ｘ１０⁶ ～約３．０ｘ１０⁶、約２．００ｘ１０⁶～約３．５ｘ１０⁶、または約２．５０ｘ⁶～約３．５ｘ１０⁶である、実施形態１～７のいずれかに記載の方法。

Ｅ９． 細胞密度が、約２．８６×１０⁶細胞／ｍＬである、実施形態１～８のいずれかに記載の方法。

Ｅ１０． 開始細胞密度が、約３．００×１０⁶細胞／ｍＬである、実施形態１～９のいずれかに記載の方法。

Ｅ１１． 開始細胞密度が、少なくとも約０．２８ｘ１０⁶～約２．８６ｘ１０⁶、０．２５ｘ１０⁶～約２．００ｘ１０⁶、約０．５ｘ１０⁶～約２ｘ１０⁶、約１．００ｘ１０⁶～約２．００ｘ１０⁶、約０．８０ｘ１０⁶～約１．５ｘ１０⁶、または約１．２０ｘ１０⁶ ～約１．５ｘ１０⁶細胞／ｍｌである、実施形態１～９のいずれかに記載の方法。

Ｅ１２． 細胞密度が、約１．４３ｘ１０⁶細胞／ｍＬである、実施形態１～８、または１１のいずれかに記載の方法。

Ｅ１３． 開始細胞密度が、約１．００ｘ１０⁶細胞／ｍＬである、実施形態１～８、または１１のいずれかに記載の方法。

Ｅ１４． 抗ＣＤ３／２８ナノマトリックスの体積対開始細胞集団の体積の体積比が、約１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１１、１．１２、１：１３、１：１４、１：１５、１：１６、または１：１７である、実施形態１～１３のいずれかに記載の方法。

Ｅ１５． 抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスで開始細胞集団を培養する前、培養中、または培養後に、開始細胞集団を形質導入することをさらに含む、実施形態１～１４のいずれかに記載の方法。

Ｅ１６． 開始細胞集団が、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、および／またはアデノウイルス関連ベクターで形質導入される、実施形態１５のいずれかに記載の方法。

Ｅ１７． 抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスで開始細胞集団を培養する前、培養中、または培養後に、開始細胞集団をトランスフェクトすることをさらに含む、実施形態１～１６のいずれかに記載の方法。

Ｅ１８． トランスフェクト工程が、ＴＡＬＥＮ（登録商標）ｍＲＮＡエレクトロポレーション（ＥＰ）および／またはＣＲＩＳＰＥＲ Ｃａｓ９エレクトロポレーションを含む、実施形態１７に記載の方法。

Ｅ１９． トランスフェクト工程が、ＴＣＲαβ遺伝子および／またはβ２Ｍ遺伝子を破壊することを含む、実施形態１８に記載の方法。

Ｅ２０． 開始細胞集団が、約８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０日間培養される、実施形態１～１９のいずれかに記載の方法。

Ｅ２１． 結果として得られるＴ細胞集団が、未分化または未成熟Ｔ細胞を示す一つ以上のマーカーを発現する、実施形態１～２０のいずれか一つに記載の方法。

Ｅ２２． 未分化または未成熟Ｔ細胞を示す一つ以上のマーカーが、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＯ、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、実施形態２１に記載の方法。

Ｅ２３． 結果として得られるＴ細胞集団が、第２の結果として得られるＴ細胞集団よりも、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約１００％多い幹メモリーＴ細胞を含む、実施形態１～２２のいずれかに記載の方法。

Ｅ２４． 開始細胞集団体積比が１：５であり、第２の開始細胞集団体積比が１：２０、１：２５、または１：５０である、実施形態１～２３のいずれかに記載の方法。

Ｅ２５． 開始細胞集団体積比が１：１０であり、第２の開始細胞集団体積比が１：２０、１：２５、または１：５０である、実施形態１～２４のいずれかに記載の方法。

Ｅ２６． 開始細胞集団体積比が１：１５であり、第２の開始細胞集団体積比が１：２０、１：２５、または１：５０である、実施形態１～２４のいずれかに記載の方法。

Ｅ２７． レンチウイルスが、細胞表面受容体をコードする異種遺伝子を含む、実施形態１６～２６のいずれかに記載の方法。

Ｅ２８． 細胞表面受容体が、標的細胞の表面上の抗原を結合することができる、実施形態２７に記載の方法。

Ｅ２９． 標的細胞が、腫瘍細胞である、実施形態２８に記載の方法。

Ｅ３０． 細胞表面受容体が、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、２８、または２９に記載の方法。

Ｅ３１． ＴＣＲまたはＣＡＲが、７０７－ＡＰ（７０７アラニンプロリン）、ＡＦＰ（アルファ（ａ）－フェトタンパク質）、ＡＲＴ－４（Ｔ４細胞によって認識される腺癌抗原）、ＢＡＧＥ（Ｂ抗原；ｂ－カテニン／ｍ、ｂ－カテニン／変異）、ＢＣＭＡ（Ｂ細胞成熟抗原）、Ｂｃｒ－ａｂｌ（ブレークポイントクラスター領域－アベルソン）、ＣＡＩＸ（炭酸脱水酵素ＩＸ）、ＣＤ１９（分化１９のクラスター）、ＣＤ２０（分化２０のクラスター）、ＣＤ２２（分化２２のクラスター）、ＣＤ３０（分化３０のクラスター）、ＣＤ３３（分化３３のクラスター）、ＣＤ４４ｖ７／８（分化４４のクラスター、エクソン７／８）、ＣＡＭＥＬ（メラノーマのＣＴＬ認識抗原）、ＣＡＰ－１（癌胎児性抗原ペプチド－１）、ＣＡＳＰ－８（カスパーゼ－８）、ＣＤＣ２７ｍ（細胞分裂サイクル２７変異）、ＣＤＫ４／ｍ（サイクリン依存性キナーゼ４変異）、ＣＥＡ（癌胎児性抗原）、ＣＴ（癌／精巣（抗原））、Ｃｙｐ－Ｂ（シクロフィリンＢ）、ＤＡＭ（分化抗原メラノーマ）、ＥＧＦＲ（上皮増殖因子受容体）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ（上皮増殖因子受容体、バリアントＩＩＩ）、ＥＧＰ－２（上皮糖タンパク質２）、ＥＧＰ－４０（上皮糖タンパク質４０）、Ｅｒｂｂ２、３、４（赤芽球性白血病ウイルス癌遺伝子ホモログ－２、－３、４）、ＥＬＦ２Ｍ（伸長因子２変異）、ＥＴＶ６－ＡＭＬ１（Ｅｔｓバリアント遺伝子６／急性骨髄性白血病１遺伝子ＥＴＳ）、ＦＢＰ（葉酸結合タンパク質）、ｆＡｃｈＲ（胎児型アセチルコリン受容体）、Ｇ２５０（糖タンパク質２５０）、ＧＡＧＥ（Ｇ抗原）、ＧＤ２（ジシアロガングリオシド２）、ＧＤ３（ジシアロガングリオシド３）、ＧｎＴ－Ｖ（Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶ）、Ｇｐ１００（糖タンパク質１００ｋＤ）、ＨＡＧＥ（ヘリカーゼ抗原）、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ（ヒト表皮受容体－２／神経学； ＥＧＦＲ２としても知られる）、ＨＬＡ－Ａ（ヒト白血球抗原－Ａ）ＨＰＶ（ヒトパピローマウイルス）、ＨＳＰ７０－２Ｍ（ヒートショックタンパク質７０－２変異）、ＨＳＴ－２（ヒトシグネット環腫瘍－２）、ｈＴＥＲＴまたはｈＴＲＴ（ヒトテロメラーゼ逆転写酵素）、ｉＣＥ（腸内カルボキシルエステラーゼ）、ＩＬ－１３Ｒ－ａ２（インターロイキン－１３受容体サブユニットアルファ－２）、ＫＩＡＡ０２０５、ＫＤＲ（キナーゼ挿入ドメイン受容体）、。カッパ軽鎖、ＬＡＧＥ（Ｌ抗原）、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ（低密度脂質受容体／ＧＤＰ－Ｌ－フコース： ｂ－Ｄ－ガラクトシダーゼ２－ａ－Ｌフコシルトランフエェラーゼ）、ＬｅＹ（ルイス－Ｙ抗体）、Ｌ１ＣＡＭ（Ｌ１細胞接着分子）、ＭＡＧＥ（メラノーマ抗原）、ＭＡＧＥ－Ａ１（メラノーマ関連抗原１）、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ６、メソテリン、マウスＣＭＶ感染細胞、ＭＡＲＴ－１／Ｍｅｌａｎ－Ａ（Ｔ細胞－１によって認識されるメラノーマ抗原／メラノーマ抗原Ａ）、ＭＣ１Ｒ（メラノコルチン１受容体）、ミオシン／ｍ（ミオシン変異）、ＭＵＣ１（ムチン１）、ＭＵＭ－１、－２、－３（黒色腫遍在性突然変異１、２、３）、ＮＡ８８－Ａ（患者Ｍ８８のＮＡ ｃＤＮＡクローン）、ＮＫＧ２Ｄ（ナチュラルキラーグループ２、メンバーＤ）リガンド、ＮＹ－ＢＲ－１（ニューヨーク乳房分化抗原１）、ＮＹ－ＥＳＯ－１（ニューヨーク食道扁平上皮癌－１）、腫瘍胎児抗原（ｈ５Ｔ４）、Ｐ１５（タンパク質１５）、ｐ１９０ ｍｉｎｏｒ ｂｃｒ－ａｂｌ（１９０ＫＤ ｂｃｒ－ａｂｌのタンパク質）、Ｐｍｌ／ＲＡＲａ（前骨髄球性白血病／レチノイン酸受容体ａ）、ＰＲＡＭＥ（メラノーマの優先的に発現される抗原）、ＰＳＡ（前立腺特異的抗原）、ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）、ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）、ＲＡＧＥ（腎抗原）、ＲＵ１またはＲＵ２（腎ユビキタス１または２）、ＳＡＧＥ（肉腫抗原）、ＳＡＲＴ－１またはＳＡＲＴ－３（腫瘍１または３を拒絶する扁平上皮抗原）、ＳＳＸ１、－２、－３、４（滑膜肉腫Ｘ１、－２、－３、－４）、ＴＡＡ（腫瘍関連抗原）、ＴＡＧ－７２（腫瘍関連糖タンパク質７２）、ＴＥＬ／ＡＭＬ１（転座性Ｅｔｓ－ファミリー白血病／急性骨髄性白血病１）、ＴＰＩ／ｍ（トリオースホスフェートイソメラーゼ変異型）、ＴＲＰ－１（チロシナーゼ関連タンパク質１、またはｇｐ７５）、ＴＲＰ－２（チロシナーゼ関連タンパク質２）、ＴＲＰ－２／ＩＮＴ２（ＴＲＰ－２／イントロン２）、ＶＥＧＦ－Ｒ２（血管内皮成長因子受容体２）、ＷＴ１（ウィルムス腫瘍遺伝子）、ＣＤ７０、ＦＬＴ３、ＤＬＬ３およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される抗原を結合する能力を有する、実施形態３０に記載の方法。

Ｅ３３． 治療有効量の結果として得られるＴ細胞を、それを必要とする対象に投与することをさらに含む、実施形態１～３２のいずれかに記載の方法。

Ｅ３４． Ｔ細胞療法を必要とする対象において腫瘍を治療する方法であって、実施形態実施形態１～３３のいずれかに記載される、結果として得られるＴ細胞のうちの一つ以上を対象に投与することを含む、方法。

Ｅ３５． Ｔ細胞療法を必要とする対象において、腫瘍のサイズを低減する、もしくは減少させる、または腫瘍の増殖を抑制する方法であって、実施形態１～３４のいずれかに記載される、結果として得られるＴ細胞のうちの一つ以上を対象に投与することを含む、方法。

Ｅ３６． 腫瘍が、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭や首の癌、皮膚または眼内悪性メラノーマ、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門部の癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸管癌、膣癌、外陰部癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、縦隔原発大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、形質転換濾胞性リンパ腫、多発性骨髄腫、脾臓辺縁帯リンパ腫（ＳＭＺＬ）、食道癌、小腸癌、内分泌系の癌、甲状腺の癌、副甲状腺の癌、副腎の癌、軟部組織肉腫、尿道の癌、陰茎の癌、慢性または急性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）（非Ｔ細胞ＡＬＬを含む）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小児の固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、腎臓または尿管の癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の腫瘍、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、アスベストによって誘発された癌を含む、環境的に誘発された癌、他のＢ細胞悪性腫瘍、およびそれらの任意の組み合わせから選択される癌である、実施形態２９～３５のいずれかに記載の方法。

Ｅ３７． １）ある体積比で、ある体積の抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスを、ある体積の開始ＰＢＭＣ集団と接触させることであって、開始ＰＢＭＣ集団が少なくとも約０．５ｘ１０⁶ 細胞／ｍｌ～約２．０ｘ１０⁶ 細胞／ｍｌの細胞密度であり、および体積比は、体積５または１０の開始細胞集団に対して体積１の抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスである、接触させること、ならびに２）培養培地中で１４～１８日間、ＰＢＭＣ集団を培養することであって、結果として得られるＰＢＭＣ集団は、第２のＰＢＭＣ集団と比較して幹メモリーＴ細胞の割合の増加を含み、同じ細胞密度の第２の開始ＰＢＭＣ集団を、体積２０の第２の開始ＰＢＭＣ集団に対する体積１の抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスの比率で、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスと接触させて、同じ日数の間培養する、培養すること、を含む、ＰＢＭＣ集団における幹メモリーＴ細胞の割合を増加する方法。

Ｅ３８． １）ある体積比で、ある体積の抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスを、ある体積の開始精製されたＴ細胞集団と接触させることであって、開始Ｔ細胞集団が少なくとも約０．８０ｘ１０⁶ 細胞／ｍｌ～約１．６０ｘ１０⁶ 細胞／ｍｌの細胞密度であり、および体積比は、体積１０または１５の開始細胞集団に対して体積１の抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスである、接触させること、ならびに２）培養培地中で１１～１８日間、ＰＢＭＣ集団を培養することであって、結果として得られる精製されたＴ細胞集団は、第２の精製されたＴ細胞集団と比較して幹メモリーＴ細胞の割合の増加を含み、同じ細胞密度の第２の開始精製されたＴ細胞集団を、体積２０、２５または５０の第２の開始Ｔ細胞集団に対する体積１の抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスの比率で、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスと接触させて、同じ日数の間培養する、培養すること、を含む、精製されたＴ細胞集団における幹メモリーＴ細胞の割合を増加する方法。

Ｅ３９． １）ある体積比で、ある体積の抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスを、ある体積の開始Ｔ細胞集団と接触させることであって、開始Ｔ細胞集団が少なくとも約０．８０ｘ１０⁶ 細胞／ｍｌ～約１．６０ｘ１０⁶ 細胞／ｍｌの細胞密度であり、および体積比は、体積１０または１５の開始細胞集団に対して体積１の抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスである、接触させること、ならびに２）培養培地中で１１～１８日間、Ｔ細胞集団を培養することであって、結果として得られるＴ細胞集団は、第２のＴ細胞集団と比較してＴ細胞の数の増加を含み、同じ細胞密度の第２の開始Ｔ細胞集団を、体積２０、２５または５０の第２の開始Ｔ細胞集団に対する体積１の抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスの比率で、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスと接触させて、同じ日数の間培養する、培養すること、を含む、Ｔ細胞集団におけるＴ細胞の総数を増加する方法。

実施例１
ＰＢＭＣ集団からのエクスビボ活性化された同種異系Ｔ細胞の調製
ドナー血液を収集し、アフェレーシスによりその成分部分に分離した。次いで、ＰＢＭＣを、Ｆｉｃｏｌｌ（登録商標）－ｈｙｐａｑｕｅステップ勾配で濃縮し、凍結保存した。０日目に、Ｆｉｃｏｌｌ（登録商標）で単離され凍結されたヒトＰＢＭＣを解凍し、１０％ヒト血清を含む培養培地で１回洗浄した。次いで細胞を５％ヒト血清で培地中で培養し、３７°Ｃおよび５％ ＣＯ₂で一晩インキュベートした。１日目に、得られたＰＢＭＣは、約３×１０⁶細胞／ｍＬ以下の細胞密度であり、試験画分に分割され、１．５×１０⁶細胞／ｍＬで以下のように活性化された：

対照、試験グループ１～２、については、細胞をｍＴｒａｎｓＡｃｔの存在下で培養された、それは、ｍＴｒａｎｓＡｃｔ ＣＤ３／ＣＤ２８キット（カタログ番号１３０－０２０－００８、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ社、カリフォルニア州オーバーン）において提供され、ｍＴｒａｎｓＡｃｔ ＣＤ３／ＣＤ２８キットでは、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体はそれぞれ、ＣＤ３およびＣＤ２８に対するマウスモノクローナル抗体である。

試験グループ３から５については、細胞をＴｒａｎｓａｃｔ（商標）（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ社、カリフォルニア州オーバーン）の存在下で培養した、ここでナノマトリックスを、指示された体積比で、ヒト化抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８抗体（以下、「ｈ ＴｒａｎｓＡｃｔ（商標）」 ）とコンジュゲートさせる。

すべての試験グループについて、表１に示されるように、細胞を、Ｔｒａｎｓａｃｔ（商標）によって細胞培養体積比に活性化した。細胞を活性化した培養培地は、Ｘ－ｖｉｖｏ１５（Ｌｏｎｚａ）、および１００ＩＵ／ｍｌの５％ヒト血清（Ｇｅｍｉｎｉ）＋ＩＬ－２から構成される（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ社）。

４日目に、表１に示されるように、活性化培養培地を新鮮な培養培地で希釈したか、または遠心分離により完全に除去した。試験グループ１および５については、細胞を、少なくとも１体積の新鮮な培養培地で、１体積の活性化培養培地に希釈した。残りの試験グループについては、５４０ｇで、室温で５分間遠心分離を実施した。次いで細胞を培養培地で１回洗浄した。

さらに４日目に、当技術分野で公知の方法により、ＣＡＲの導入のためのレンチウイルスベクター形質導入により、活性化された細胞を遺伝子改変することができる。簡潔に述べると、試験グループ１および５では、活性化培養培地の新鮮な細胞培養培地での希釈で、レンチウイルスベクター（ＬＶＶ ＃１８３１Ｐ、Ｌｅｎｔｉｇｅｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社、メリーランド州ゲイザースバーグ）を培養培地に加え、細胞を製造業者の指示に従って形質導入した。残りの試験グループについては、細胞を製造業者の指示に従って形質導入した。簡潔に述べると、細胞を採取し、１回洗浄し、レンチウイルスベクター（Ｌｅｎｔｉｇｅｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社、メリーランド州ゲイザースバーグ）を１～１０％ｖ／ｖのレンチウイルスベクターで細胞培養に添加された培養培地に再懸濁した。両方の方法で、形質導入の細胞密度は１×１０⁶細胞／ｍＬであった。

細胞を、４日目から６日目までＴフラスコ中で増殖させた。６日目に、ＴＡＬＥＮ（登録商標）ｍＲＮＡエレクトロポレーション（ＥＰ）によって、さらに細胞の遺伝子編集をして、ＴＣＲαβ遺伝子を破壊し、その遺伝子発現をノックアウトした。製造業者の指示に従って、ＴＡＬＥＮ（登録商標）ｍＲＮＡエレクトロポレーションを、ＡｇｉｌｅＰｕｌｓｅ（登録商標）エレクトロポレーションシステム（ハーバード・バイオサイエンス社、マサチューセッツ州ホリストン、の一部門であるＢＴＸ（登録商標）から入手可能）を使用して実施した。

遺伝子改変された同種異系ＣＡＲ－Ｔ細胞を含む同種異系Ｔ細胞は、製造業者の指示に従って、８日目から１８日目の間にＧ－Ｒｅｘ（登録商標）１０（Ｗｉｌｓｏｎ Ｗｏｌｆ社、ミネソタ州セントポール）で増殖された。

細胞増殖および収率
実際の細胞収率を、自動細胞カウンターＮｕｃｌｅｏＣｏｕｎｔｅｒ ＮＣ－２００（Ｃｈｅｍｏｍｅｔｅｃ、Ａｌｌｅｒｏｄ、デンマーク）を使用して、１、４、６、８および１８日目に測定した。１日目から１８日目までの結果を図１に示す。Ｇ－Ｒｅｘ（登録商標）における細胞増殖前の１、４、６、および８日目の結果を図２に示し、８日目から１８日目までのＧ－Ｒｅｘ（登録商標）における増殖の結果を図３に示す。

総細胞増殖倍率を決定し、図４に１日目～１８日目の結果を示す。図５は、各試験グループについて、各プロセス工程における増殖倍率を示し、試験グループ３～５が、８日目から１８日目まで、試験グループ６および７よりも高い増殖倍率を有する。図６は、０日目から６日目までの各試験グループについて、各プロセス工程における増殖倍率の結果を示す。

細胞表現型
細胞表現型は、１日目および１８日目に分析される。細胞は、製造業者の指示に従って、関連する標的に対する蛍光抗体で標識される。

次いで、蛍光標識された細胞を、製造業者の指示に従ってＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ（商標）サイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ニュージャージー州フランクリンレイクス）により分析し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアバージョン１０（ＦｌｏｗＪｏ社、オレゴン州アシュランド）を使用してデータを分析した。

ＰＢＭＣ細胞サブセットを、ＣＤ５（ＢＤ Ｈｏｒｉｚｏｎ）、ＣＤ１４（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＣＤ５６（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、およびＣＤ１９（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）に対する市販の抗体を使用して、１日目に試験グループおよび関連する対照の各々について決定した。

ＣＤ８ Ｔ細胞サブセットを、ＣＤ８ （ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＣＤ４５ＲＡ （Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、およびＣＤ６２Ｌ （ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に対する市販の抗体を使用して、１日目に試験グループおよび関連する対照の各々について決定した

ＣＤ４：ＣＤ８細胞比を、ＣＤ４（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、およびＣＤ８ （ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に対する市販の抗体を使用して、１日目に試験グループおよび関連する対照の各々について決定した。

ＣＤ４５ＲＡ⁺、ＣＤ６２Ｌ⁺である総ＣＤ５⁺細胞サブセットを、ＣＤ５（ＢＤ Ｈｏｒｉｚｏｎ）、ＣＤ４５ＲＡ （Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、およびＣＤ６２Ｌ （ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に対する市販の抗体を使用して、１８日目に試験グループおよび関連する対照の各々について決定した。

ＣＤ４５ＲＯ⁺、ＣＤ６２Ｌ⁺である総ＣＤ５⁺細胞サブセットを、ＣＤ５（ＢＤ Ｈｏｒｉｚｏｎ）、ＣＤ４５ＲＯ （Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、およびＣＤ６２Ｌ （ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に対する市販の抗体を使用して、１８日目に試験グループおよび関連する対照の各々について決定した。

試験グループおよび関連する対照の各々について、ＣＡＲ＋％、およびＴＣＲαβ－％細胞の割合を、蛍光色素にコンジュゲートされたＣＡＲ抗イディオタイプ抗体およびＴＣＲαβ （Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）に対する市販の抗体を使用して、１８日目に決定する。

製造業者の指示に従って、ＮｕｃｌｅｏＣｏｕｎｔｅｒ（登録商標） ＮＣ－２００（商標）（Ｃｈｅｍｏｍｅｔｅｃ、デンマーク、アレロド（Ａｌｌｅｒｏｄ））を使用して、試験グループおよび関連する対照の各々について０日目から１８日目まで細胞生存率を監視した。

製造業者の指示に従って、ＮｕｃｌｅｏＣｏｕｎｔｅｒ（登録商標） ＮＣ－２００（商標）（Ｃｈｅｍｏｍｅｔｅｃ、デンマーク、アレロド）を使用して、試験グループおよび関連する対照の各々について０日目から１８日目まで細胞直径を監視した。

実施例２
精製されたＴ細胞集団からのエクスビボ活性化された同種異系Ｔ細胞の調製
ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓが供給するプロトコルに従って、Ｆｉｃｏｌｌ（登録商標）－Ｐａｑｕｅ ＰＬＵＳ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）およびＳｅｐＭａｔｅ（商標）－５０チューブ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、匿名の血液ドナーからのバフィーコートから単離された。次いで、汎Ｔ細胞を、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃによって供給されたプロトコルに従って、汎Ｔ細胞アイソレーションキット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して、新たに調製されたＰＢＭＣから単離した。汎Ｔ細胞を、使用準備ができるまで液体窒素中に保存した。

初代ヒト汎Ｔ細胞（１０～３０×１０⁶）を、０日目に解凍し、Ｔ細胞形質導入培地－Ｘ－Ｖｉｖｏ（商標）１５（Ｌｏｎｚａ）＋１０％ ＨｙＣｌｏｎｅウシ胎児血清（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）－中で約２×１０⁶細胞／ｍＬで再懸濁し、加湿インキュベーター中で３７°Ｃ、５％ ＣＯ₂で３０分間インキュベートした。３０分間のインキュベーション後、Ｔ細胞を計数し、Ｔ細胞形質導入培地を使用して細胞密度を調整した。次いで、Ｔ細胞を、１：１のビーズ対Ｔ細胞比でのＴ細胞活性化／増殖キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）からのビーズか、または１：１０、１：１５、１：２０、１：２５、１：５０の体積希釈でのＴ細胞ＴｒａｎｓＡｃｔ（商標）ポリマーナノマトリックス（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）からのビーズのいずれかと混合した。組換えヒトＩＬ－２（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を、最終濃度１００Ｕ／ｍＬとなるまで加えた。次いで、Ｔ細胞を３７°Ｃのインキュベーターに戻した。

２日後（２日目）、Ｔ細胞を計数し、５×１０⁵細胞／ｍＬでＴ細胞形質導入培地中に再懸濁し、新鮮なＩＬ－２を添加した。次いで、Ｔ細胞を、ＦＭＣ６３－４１ＢＢ－ＣＤ３ζ 抗ＣＤ１９ ＣＡＲをコードするレンチウイルスベクターで形質導入し、３７°Ｃのインキュベーターに戻した。非形質導入（ＵＴ）対照を並行して作製した。５日目に、形質導入効率をフローサイトメトリーにより確認し、ＦＭＣ６３－４１ＢＢ－ＣＤ３ζ 抗ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞、およびＵＴ対照Ｔ細胞をＧ－Ｒｅｘ（登録商標）６ウェルプレート（Ｗｉｌｓｏｎ Ｗｏｌｆ）に移した。Ｔ細胞培養培地－Ｘ－Ｖｉｖｏ（商標）１５（Ｌｏｎｚａ）＋５％ヒト血清ＡＢ（クロットオフ）（Ｇｅｍｉｎｉ ＢｉｏＰｒｏｄｕｃｔｓ）および１００ ＩＵ／ｍＬの組換えヒトＩＬ－２（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）－を、最大３５ｍＬまで添加した。

ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ（商標）Ｘ－２０ Ｃｅｌｌ Ａｎａｌｙｚｅｒ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）を使用してフローサイトメトリーにより免疫表現型解析を行い、ＦｌｏｗＪｏ（登録商標）ｖ１０（ＦｌｏｗＪｏ社）ソフトウェアを使用してデータを分析した。以下の抗体を使用した：Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（ＡＦ）７００抗ヒトＣＤ２５抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ ＃３０２６２２）；ＢＵＶ３９５抗ヒトＣＤ６２Ｌ抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＃５６５２１９）；ＢＶ６０５抗ヒトＣＤ８ａ抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ ＃３０１０４０）；ＢＶ７８６抗ヒトＣＤ４抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＃５６３９１４）；ＰＥ抗ヒトＣＤ１３７（４－１ＢＢ）抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ ＃３０９８０４）；ペリジニンクロロフィル（ＰｅｒＣＰ）／Ｃｙ５．５抗ヒトＣＤ４５ＲＯ抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ ＃３０４２２２）。

Claims (23)

1. 細胞集団における幹メモリーＴ細胞の割合を増加させる方法であって、前記方法が、
   ａ）ある体積比で、ある体積の抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスを、ある体積の開始細胞集団と接触させることであって、
   ｉ）前記開始細胞集団が、少なくとも約０．２×１０⁶細胞／ｍｌ～約５．８×１０⁶細胞／ｍｌの細胞密度であり、
   ｉｉ）前記体積比が、体積１７．４以下の前記開始細胞集団に対して体積１の抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスである、接触させること、および、
   ｂ）前記細胞集団を培養培地中で培養すること、を含み、
   ここで、結果として得られるＴ細胞集団が、第２のＴ細胞集団と比較して幹メモリーＴ細胞の割合の増加を含み、同じ細胞密度の前記第２の開始細胞集団を、体積１７．５以上の前記第２の開始細胞集団に対する体積１の抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスの比で、前記抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスと接触させる、方法。
2. 前記開始細胞集団が、末梢血、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位からの組織、腹水、胸水脾臓組織、腫瘍、間葉組織、Ｔ細胞株、誘導多能性幹細胞（ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｌｕｒｉｏｐｏｔｅｎｔ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ）、または人工胸腺オルガノイド（ＡＴＯ）細胞培養系から取得される、請求項１に記載の方法。
3. 前記開始細胞集団が、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、ヘルパーＴ細胞、腫瘍浸潤性リンパ球、メモリーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、末梢血リンパ球、腫瘍浸潤性白血球、末梢血単核細胞、樹状細胞、臍帯血幹細胞、多能性幹細胞、および間葉系幹細胞からなる群から選択される、請求項１および２のいずれかに記載の方法。
4. 前記開始細胞集団が、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、正に選択されたＣＤ３、ＣＤ４、もしくはＣＤ８ Ｔ細胞、または負に選択されたＣＤ３、ＣＤ４、もしくはＣＤ８ Ｔ細胞、あるいはそれらの組み合わせである、請求項１～３のいずれかに記載の方法。
5. 前記開始細胞集団が、末梢血単核細胞である、請求項１～４のいずれかに記載の方法。
6. 前記開始細胞集団が、ＣＤ４⁺および／またはＣＤ８⁺Ｔ細胞を含む精製されたＴ細胞集団である、請求項１～４のいずれかに記載の方法。
7. 前記開始細胞密度が、少なくとも約０．５０ｘ１０⁶～約６．００ｘ１０⁶、約０．５６ｘ１０⁶～約５．７２ｘ１０⁶、約０．８０ｘ１０⁶～約４．０ｘ１０⁶、約１．００ｘ１０⁶～約３．０ｘ１０⁶、約２．００ｘ１０⁶～約３．５ｘ１０⁶、または約２．５０ｘ１０⁶～約３．５ｘ１０⁶である、請求項１～６のいずれかに記載の方法。
8. 前記細胞密度が、約２．８６×１０⁶細胞／ｍＬである、請求項１～７のいずれかに記載の方法。
9. 前記開始細胞密度が、約１．５０×１０⁶細胞／ｍＬである、請求項１～８のいずれかに記載の方法。
10. 前記開始細胞密度が、少なくとも約０．２８ｘ１０⁶～約２．８６ｘ１０⁶、０．２５ｘ１０⁶～約２．００ｘ１０⁶、約０．５ｘ１０⁶～約２．００ｘ１０⁶、約１．００ｘ１０⁶～約２．００ｘ１０⁶、約０．８０ｘ１０⁶～約１．５ｘ１０⁶、または約１．２０ｘ⁶～約１．５ｘ１０⁶細胞／ｍｌである、請求項１～８のいずれかに記載の方法。
11. 前記細胞密度が、約１．４３ｘ１０⁶細胞／ｍＬである、請求項１～７、または１０のいずれかに記載の方法。
12. 前記開始細胞密度が、約１．００ｘ１０⁶細胞／ｍＬである、請求項１～７、または１０のいずれかに記載の方法。
13. 抗ＣＤ３／２８ナノマトリックスの体積対開始細胞集団の体積の体積比が、約１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１１、１．１２、１：１３、１：１４、１：１５、１：１６、または１：１７である、請求項１～１２のいずれかに記載の方法。
14. 前記開始細胞集団が、約８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０日間培養される、請求項１～１３のいずれかに記載の方法。
15. １５．前記結果として得られるＴ細胞集団が、未分化または未成熟Ｔ細胞を示す一つ以上のマーカーを発現する、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。
16. 前記未分化または未成熟Ｔ細胞を示す一つ以上のマーカーが、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＯ、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１５に記載の方法。
17. 前記結果として得られるＴ細胞集団が、前記第２の結果として得られるＴ細胞集団よりも、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約１００％多い幹メモリーＴ細胞を含む、請求項１～１６のいずれかに記載の方法。
18. 開始細胞集団体積比が１：５であり、第２の開始細胞集団体積比が１：２０、１：２５、または１：５０である、請求項１～１７のいずれかに記載の方法。
19. 前記開始細胞集団体積比が１：１０であり、前記第２の開始細胞集団体積比が１：２０、１：２５、または１：５０である、請求項１～１８のいずれかに記載の方法。
20. 前記開始細胞集団体積比が１：１５であり、前記第２の開始細胞集団体積比が１：２０、１：２５、または１：５０である、請求項１～１９のいずれかに記載の方法。
21. ＰＢＭＣ集団における幹メモリーＴ細胞の割合を増加させる方法であって、前記方法が、
    ａ）ある体積比で、ある体積の抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスを、ある体積の開始ＰＢＭＣ集団と接触させることであって、
    ｉ）前記開始ＰＢＭＣ集団が、少なくとも約０．５０×１０⁶細胞／ｍｌ～約２．００×１０⁶細胞／ｍｌの細胞密度であり、
    ｉｉ）前記体積比が、体積５または１０の前記開始細胞集団に対して体積１の抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスである、接触させること、および、
    ｂ）前記ＰＢＭＣ集団を、培養培地中で１４～１８日間培養すること、を含み、
    ここで、結果として得られるＰＢＭＣ集団が、第２のＰＢＭＣ集団と比較して幹メモリーＴ細胞の割合の増加を含み、同じ細胞密度の前記第２の開始ＰＢＭＣ集団を、体積２０の前記第２の開始ＰＢＭＣ集団に対する体積１の抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスの比で、前記抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスと接触させ、同じ日数の間培養する、方法。
22. 精製されたＴ細胞集団における幹メモリーＴ細胞の割合を増加させる方法であって、前記方法が、
    ａ）ある体積比で、ある体積の抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスを、ある体積の開始精製されたＴ細胞集団と接触させることであって、
    ｉ）前記開始Ｔ細胞集団が、少なくとも約０．８０×１０⁶細胞／ｍｌ～約１．６０×１０⁶細胞／ｍｌの細胞密度であり、
    ｉｉ）前記体積比が、体積１０または１５の前記開始細胞集団に対して体積１の抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスである、接触させること、および、
    ｂ）前記開始精製されたＴ細胞集団を、培養培地中で１１～１８日間培養すること、を含み、
    ここで、結果として得られる精製されたＴ細胞集団が、第２の精製されたＴ細胞集団と比較して幹メモリーＴ細胞の割合の増加を含み、同じ細胞密度の前記第２の開始精製されたＴ細胞集団を、体積２０、２５、または５０の前記第２の開始Ｔ細胞集団に対する体積１の抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスの比で、前記抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスと接触させ、同じ日数の間培養する、方法。
23. Ｔ細胞集団におけるＴ細胞の総数を増加させる方法であって、前記方法が、
    ａ）ある体積比で、ある体積の抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスを、ある体積の開始Ｔ細胞集団と接触させることであって、
    ｉ．前記開始Ｔ細胞集団が、少なくとも約０．８０×１０⁶細胞／ｍｌ～約１．６０×１０⁶細胞／ｍｌの細胞密度であり、
    ｉｉ．前記体積比が、体積１０または１５の前記開始細胞集団に対して体積１の抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスである、接触させること、および、
    ｂ）前記Ｔ細胞集団を、培養培地中で１１～１８日間培養すること、を含み、
    ここで、結果として得られるＴ細胞集団が、第２のＴ細胞集団と比較してＴ細胞の数の増加を含み、同じ細胞密度の前記第２の開始Ｔ細胞集団を、体積２０、２５、または５０の前記第２の開始Ｔ細胞集団に対する体積１の抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスの比で、前記抗ＣＤ３／ＣＤ２８ナノマトリックスと接触させ、同じ日数の間培養する、方法。

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