JP2022545449A - トランス－シクロオクテン標識アンチセンスオリゴヌクレオチド、放射性標識テトラジン、及び方法 - Google Patents

Abstract

トランス－シクロオクテン及びテトラジン化合物が扱われる。また、対象における生体分子の体内分布及び／または濃度を評価するための方法も提供される。本願は、対象における生体分子（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド）の分布及び／または濃度を決定するための化合物、組成物、及び方法に関する。本開示は、対象におけるアンチセンスオリゴヌクレオチドの分布及び動態を評価する上で有用である化合物及び組成物を提供する。また、対象における所望の領域（例えば、脳、脊髄等）内のアンチセンスオリゴヌクレオチドの濃度を評価するための方法も扱われる。

Description

関連出願の相互参照
本願は、２０１９年８月２０日に出願された米国仮出願第６２／８８９，３９５号の優先権の利益を主張するものであり、同文献の内容は参照によりそれらの全体が本明細書に援用される。

本開示は、全般的に、対象におけるアンチセンスオリゴヌクレオチドの分布及び／または濃度を評価するための組成物及び方法に関する。

アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）等の生体分子は、それらの相補的ｍＲＮＡ配列に結合し、それにより異常な遺伝子の翻訳を低減または阻止することによって、ある特定の遺伝子疾患を処置する上で極めて効果的であることが判明している。それらの適切な分布及び動態を保証するために、ＡＳＯと適合性である撮像手段を開発することが必要である。直接放射標識されたＡＳＯは有効であることが判明しているが、ヒト対象におけるそれらの適用は、放射性トレーサーの髄腔内投与、及び放射性同位体の半減期によって課されるより長期にわたる撮像時点に対する制約に関連する課題によって限定されてきた。

本願は、対象における生体分子（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド）の分布及び／または濃度を決定するための化合物、組成物、及び方法に関する。本開示は、対象におけるアンチセンスオリゴヌクレオチドの分布及び動態を評価する上で有用である化合物及び組成物を提供する。また、対象における所望の領域（例えば、脳、脊髄等）内のアンチセンスオリゴヌクレオチドの濃度を評価するための方法も扱われる。

一態様では、本開示は、トランス－シクロオクテンに連結されたアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。

一部の事例では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＣＮＳ透過性ＡＳＯ（すなわち、血液脳関門を通過するＡＳＯ）である。一部の事例では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、脳及び／または脊髄の細胞内に見出される標的を標的とする。ある特定の事例では、トランス－シクロオクテンは、アンチセンスオリゴヌクレオチドに直接連結されている。他の事例では、トランス－シクロオクテンは、リンカーを介してアンチセンスオリゴヌクレオチドに連結されている。一部の実例では、リンカーは、アルキレンリンカーである。一部の事例では、トランス－シクロオクテンは、アンチセンスオリゴヌクレオチドの５’末端でアンチセンスオリゴヌクレオチドに連結されている。一部の事例では、トランス－シクロオクテンは、アンチセンスオリゴヌクレオチドの３’末端でアンチセンスオリゴヌクレオチドに連結されている。一部の事例では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ホスホロチオエート結合を介してリンカーに連結されている。一部の事例では、トランス－シクロオクテンに連結されたアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）は、式Ｉの構造、

またはその塩を有し、式中、Ｘ^１、Ｘ^２、Ｘ^３、Ｒ^ａ１、Ｒ^ａ２、Ｒ^ａ３、及びｍは、本明細書に記載される通りであり、５’－ＡＳＯ－３’は、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。

一部の事例では、トランス－シクロオクテンに連結されたアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）は、式Ｉ’の構造、

またはその塩を有し、式中、Ｘ^１、Ｘ^２、Ｘ^３、Ｒ^ａ１、Ｒ^ａ２、Ｒ^ａ３、及びｍは、本明細書に記載される通りであり、３’－ＡＳＯ－５’は、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。

別の態様では、本開示は、式ＩＩの化合物、

またはその塩を扱い、式中、Ｚ、Ｙ^１、Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｌ、Ｙ^５、Ｒ^ｂ１、Ｒ^ｂ２、Ｒ^ｂ３、Ｒ^ｂ４、Ｒ^ｂ５、及びｎは、本明細書で定義される通りである。

一部の事例では、本開示は、本明細書に開示される化合物の調製プロセスを提供する。一部の事例では、式Ｉの構造を有する、トランス－シクロオクテンに連結されたアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）の調製プロセスが本明細書に提供される。一部の事例では、式Ｉ’の構造を有する、トランス－シクロオクテンに連結されたアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）の調製プロセスが本明細書に提供される。一部の事例では、式ＩＩの化合物の調製プロセスが本明細書に提供される。

別の態様では、本開示は、対象における生体分子の分布の決定方法に関する。該方法は、トランス－シクロオクテンに連結された生体分子を対象に投与し、続いて放射性標識テトラジンを対象に投与することを伴う。該方法は、対象における生体分子の分布を撮像することをさらに含む。

別の態様では、本開示は、対象におけるアンチセンスオリゴヌクレオチドの分布の決定方法に関する。該方法は、トランス－シクロオクテンに連結されたアンチセンスオリゴヌクレオチドを対象に投与し、続いて放射性標識テトラジンを対象に投与することを伴う。該方法は、対象におけるアンチセンスオリゴヌクレオチドの分布を撮像することをさらに含む。

別の態様では、本開示は、対象の脳及び／または脊髄内のアンチセンスオリゴヌクレオチドの分布の決定方法を扱う。該方法は、トランス－シクロオクテンに連結されたアンチセンスオリゴヌクレオチドを対象に投与することを伴う。次に、対象は、中枢神経系透過性の放射性標識テトラジンを投与される。これに続いて、対象の脳及び／または脊髄内のアンチセンスオリゴヌクレオチドの分布が撮像される。

別の態様では、本開示は、対象における所望の箇所での生体分子の濃度の決定方法を扱う。該方法は、トランス－シクロオクテンに連結された生体分子を対象に投与することを伴う。次に、対象は、放射性標識テトラジンを投与される。次いで、対象の所望の箇所でのアンチセンスオリゴヌクレオチドの濃度が評価される。

別の態様では、本開示は、対象の脳及び／または脊髄内のアンチセンスオリゴヌクレオチドの濃度の決定方法を扱う。該方法は、トランス－シクロオクテンに連結されたアンチセンスオリゴヌクレオチドを対象に投与することを伴う。次に、対象は、中枢神経系透過性の放射性標識テトラジンを投与される。次いで、対象の脳及び／または脊髄内のアンチセンスオリゴヌクレオチドの濃度が決定される。

上記の方法の一部の事例では、テトラジンは、フッ素－１８、炭素－１１、及びガリウム－６８からなる群から選択される放射性標識で放射標識されている。１つの事例では、テトラジンは、フッ素－１８で放射標識されている。一部の事例では、テトラジンは、本明細書に開示される化合物である。一部の事例では、テトラジンは、化合物１である。ある特定の事例では、トランス－シクロオクテンに連結されたアンチセンスオリゴヌクレオチドは、本明細書に開示されるもののうちの１つである。一部の事例では、トランス－シクロオクテンに連結されたアンチセンスオリゴヌクレオチドは、髄腔内注射によって投与される。一部の事例では、放射性標識テトラジンは、静脈内注射によって投与される。ある特定の事例では、トランス－シクロオクテンに連結されたアンチセンスオリゴヌクレオチドは、髄腔内注射によって投与され、放射性標識テトラジンは、静脈内注射によって投与される。一部の実例では、放射性標識テトラジンは、トランス－シクロオクテンに連結されたアンチセンスオリゴヌクレオチドの投与から約２４時間後に投与される。一部の事例では、撮像は、ＰＥＴによって実施される。ある特定の事例では、撮像は、ＰＥＴ／ＣＴによって実施される。他の事例では、撮像は、ＳＰＥＣＴによって実施される。なおも他の事例では、撮像は、ＳＰＥＣＴ／ＣＴによって実施される。ある特定の事例では、対象は、ヒトである。

別の態様では、本開示は、本明細書に記載のＴＣＯに直接または間接的に連結された生体分子と、薬学的に許容される担体とを含む、薬学的組成物を提供する。一部の事例では、生体分子は、抗体（一価全抗体、二重特異性全抗体）、抗原結合断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）２、ｓｃＦｖ、ｓｃ（Ｆｖ）２、ダイアボディ、ナノボディ）、ペプチド、または核酸（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド）である。一部の事例では、薬学的に許容される担体は、リン酸緩衝生理食塩水である。一部の事例では、薬学的に許容される担体は、ａ－ＣＳＦである。一部の事例では、薬学的に許容される担体は、滅菌注射用水である。

別の態様では、本開示は、本明細書に記載の放射性標識テトラジン化合物と、薬学的に許容される担体とを含む、薬学的組成物を提供する。一部の事例では、テトラジン化合物は、フッ素－１８で標識されている。ある特定の実例では、テトラジン化合物は、ＣＮＳ透過性である（すなわち、それは血液脳関門を通過することができる）。ある特定の事例では、テトラジン化合物は、本明細書に開示されるテトラジン化合物のうちの１つである。一実例では、テトラジン化合物は、化合物１である。一部の事例では、薬学的に許容される担体は、リン酸緩衝生理食塩水である。一部の事例では、薬学的に許容される担体は、ａ－ＣＳＦである。一部の事例では、薬学的に許容される担体は、滅菌注射用水である。

別の態様では、本開示は、ＴＣＯに直接または間接的に連結された生体分子と、放射性標識テトラジン化合物とを含む、組成物を提供する。一部の事例では、テトラジン化合物は、フッ素－１８で標識されている。ある特定の実例では、テトラジン化合物は、ＣＮＳ透過性である（すなわち、それは血液脳関門を通過することができる）。ある特定の事例では、テトラジン化合物は、本明細書に開示されるテトラジン化合物のうちの１つである。一実例では、テトラジン化合物は、化合物１である。一部の事例では、生体分子は、抗体（一価全抗体、二重特異性全抗体）、抗原結合断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）_２、ｓｃＦｖ、ｓｃ（Ｆｖ）_２、ダイアボディ、ナノボディ）、ペプチド、または核酸（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド）である。一部の実例では、該組成物は、薬学的組成物である。

別の態様では、ＴＣＯに直接または間接的に連結された生体分子と、放射性標識テトラジン化合物とを含む、キットが提供される。一部の事例では、生体分子は、抗体（一価全抗体、二重特異性全抗体）、抗原結合断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）２、ｓｃＦｖ、ｓｃ（Ｆｖ）２、ダイアボディ、ナノボディ）、ペプチド、または核酸（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド）である。一実例では、生体分子は、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。一実例では、放射性標識テトラジン化合物は、化合物１である。一部の事例では、該組成物は、ＰＢＳ、ａ－ＣＳＦ、及び滅菌注射用水のうちの１つまたは複数をさらに含む。一部の実例では、キットは、注射デバイスを含む。一部の実例では、髄腔内投与用の注射デバイスが含まれる。一部の実例では、静脈内投与用の注射デバイスが含まれる。一部の実例では、髄腔内投与用の注射デバイス及び静脈内投与用の注射デバイスが含まれる。

別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解される意味と同じ意味を有する。本発明の実践または試験においては、本明細書に記載の方法及び材料と類似または同等の方法及び材料を使用することができるが、例となる方法及び材料が下記に記載される。本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献は、参照によりそれらの全体が援用される。矛盾がある場合、定義を含めて本明細書が優先される。これらの材料、方法、及び例は例示説明にすぎず、限定することは意図されない。

本発明の他の特徴及び利点は、以下の発明を実施するための形態及び特許請求の範囲から明らかとなろう。

インビボで放射性リガンドをＡＳＯに連結するために本明細書で利用される、１，２，４，５テトラジンとトランス－シクロオクテンとの間の逆電子要請型ディールス・アルダー［４＋２］（ＩＥＤＤＡ）環化付加クリックライゲーションを示す。これは非常に高速の反応であり（ｋ_２＞３０，０００Ｍ^－１ｓ^－１）、これはまた生体直交型でもある。 Ｍａｌａｔ１ ＡＳＯ、Ｍａｌａｔ１ ＡＳＯ－ＴＣＯ、またはＭａｌａｔ１ ＡＳＯ－ＰＥＧ４－ＴＣＯのいずれかと共に３７℃で２４時間インキュベートし、次いで固定し、透過処理し、テトラジン－Ｃｙ５を使用して染色したＨｅＬａ細胞の共焦点像を示す。 プレターゲッティング（ｐｒｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ）の例示的な例の概略図である。まず、ＡＳＯ－ＴＣＯを髄腔内注射することにより、それがＣＳＦにわたって分布し、脳実質及び脊椎内に内部移行する。次に、数時間または数日間の遅延期間に次いで、^１８Ｆ－５３７－Ｔｚ放射性トレーサーを静脈内注射することにより、それが全身に運搬され、血液脳関門を通って中枢神経系（ＣＮＳ）に進入する。トレーサーは、それが遭遇する任意のＡＳＯ－ＴＣＯに共有結合して、組織に局在化する一方で、未結合のトレーサーは排除される。ＰＥＴによる残りのシグナルは、したがって、放射性トレーサーと反応した組織中のＡＳＯ－ＴＣＯに帰すことができる。 ＡＳＯ－ＴＣＯで処置されたラットにおける脳及び脊髄内のトレーサーの特異的取り込みを示すＰＥＴ／ＣＴ画像である。Ｓｐｒａｇｕｅ－ＤａｗｌｅｙラットにＡＳＯ－ＴＣＯを髄腔内投与した（３０μＬ生理食塩水中２．５ｍＭ）。２４時間後（中央）または１６８時間後（右）のいずれかで、それらのラットに、次いで^１８Ｆ－５３７－Ｔｚ（２２～３０ＭＢｑ、１４８ＭＢｑ／μｍｏｌ、０．２ｎｍｏｌ）を静脈内注射した。放射性トレーサーの注射後７５～９０分で、ラットをＰＥＴ－ＣＴによって撮像した。対照ラット（左）には、生理食塩水のみを与えた。 ＰＥＴデータから描出された関心領域（ＲＯＩ）を示す棒グラフである。関心組織（脳及び脊椎）対参照領域（心臓）内の％ＩＤ／ｇの比を得た。ＡＳＯ－ＴＣＯを与えたラットと与えなかったラットとの間で比較して、有意差が観察された。左から右に図示される棒グラフのレーン：ＡＳＯ－ＴＣＯ（脳：心臓）、ナイーブ（脳：心臓）、ＡＳＯ－ＴＣＯ（脊椎：心臓）、及びナイーブ（脊椎：心臓）。 撮像に次いで切除した脳のオートラジオグラフィーの結果を提供し、脳内のＡＳＯの分布パターンに一致する特有の分布パターンを示す。 化合物１についての例となる分析ＨＰＬＣを示す。 化合物１と参照基準（化合物１’）との共注射（ｃｏ－ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）についての例となる分析ＨＰＬＣを示す。 同じラットにおけるベースライン（左）及び自己ブロック（右）を示す時間放射能曲線（ＴＡＣ）を図示する。ベースライングラフに関して、曲線は、上から下に（上及び下は最新の時点を指している）、視床下部、視床、小脳、皮質、線条体、脳、海馬、及び前頭皮質である。自己ブロックグラフに関して、曲線は、上から下に（上及び下は最新の時点を指している）、視床、視床下部、線条体、皮質、脳、海馬、小脳、及び前頭皮質である。 Ｍａｌａｔ１ ＡＳＯ－ＴＣＯ（下）で処置されたラットにおける、ベースライン（上）と比べて有意により高い取り込みを示す、代表的なＰＥＴ／ＣＴ画像（冠状断面）を提供する。 ベースライン（ｎ＝３）及びプレターゲット（ｎ＝３）コホートを比較するＴＡＣである。 脊髄及びＣＳＦのＲＯＩ描出を示す。 血漿中及び血中ＳＵＶ値の親化合物（ｐａｒｅｎｔ）割合の分析を図示する。血中のトレーサー挙動は、スキャン間で一貫していた。 ベースライン、ＡＳＯ投薬後２４時間及び１６８時間でのＰＥＴスキャンを示す。 ^１８Ｆ－５３７－Ｔｚの静脈内注射に次ぐ脳下位領域についてのベースライン時間放射能曲線を示す。 各スキャンについての全脳ＴＡＣ（左）、及びスキャン間のクリアランス速度の差異を示すそれらの最大値に正規化したスキャンＴＡＣ（右）を例示する。 脊髄にわたって描出されたＲＯＩを示す静的スキャン（左）、及びスキャンにおけるＳＵＶ対筋肉比（右）を図示する。

本開示は、部分的には、「プレターゲッティング」に有用である化合物及び組成物に関する。「プレターゲッティング」は、放射性標識化合物／放射性リガンドの送達を、修飾された生体分子もしくはベクター（例えば、ＡＡＶ、ナノ粒子）または標的化剤（例えば、ＡＳＯ）の送達から分離する。これらの化合物及び組成物は、例えば、対象における生体分子（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ））の分布及び／または濃度を評価するために、インビボで使用することができる。一部の実例では、本化合物及び組成物は、対象の脳及び／または脊髄内の生体分子（例えば、ＡＳＯ）の分布及び／または濃度を評価するために使用される。実施例では、脳内のプレターゲッティングのため、ならびにＡＳＯ分布の測定に向けたプレターゲット撮像のための、放射性標識化合物または放射性リガンド（例えば、放射性標識テトラジン）及び標的化剤（例えば、ＡＳＯ－ＴＣＯ）の、逆電子要請型ディールス・アルダー（ＩＥＤＤＡ）反応を介したインビボでの共有結合が記載される。現行のＡＳＯ撮像は、より長寿命の放射性同位体による直接標識に依存するため、本明細書に開示される化合物、組成物、及び方法は、患者に対する低い放射線被爆量を維持しながらインビボでの長期にわたる時間的分布を明らかにすることによって、ＡＳＯに基づく新たな療法の開発に顕著な影響を及ぼす。

プレターゲッティング
医学診断及び医学療法は、通例のように撮像剤を利用する。かかる薬剤は、例えば、治療剤がその意図される標的に到達したかどうかを決定するため、ならびに治療剤または診断剤の箇所及び／または濃度を決定するために有用であり得る。しかしながら、既存の方法は問題を含み得る。例えば、撮像に使用されるある特定の生体分子の薬物動態が比較的緩徐であると、結合させた放射性標識が数日にわたる半減期を有することが必要とされる。これは、生体分子の分布がより長期にわたる時点で評価されるべき場合、成功裏に撮像するのに十分な放射線が残っていなければならないためである。一部の事例では、これは非標的臓器内での高い放射能濃度及びそれに対する放射線量につながる。これらの問題を回避するために、「プレターゲッティング」と称される代替手法が現れており、これによると、放射性標識化合物または放射性リガンド（例えば、放射性標識テトラジン）と、修飾された生体分子もしくはベクター（例えば、ＡＡＶ、ナノ粒子）または標的化剤（例えば、ＡＳＯ－ＴＣＯ）とは、対象に別個に送達される。

プレターゲット法は一般に、以下のステップを伴う：第１に、関心標的に結合または局在化するが、同時に放射性リガンドに結合する能力も有する、修飾された生体分子もしくはベクター（例えば、ＡＡＶ、ナノ粒子）または標的化剤（例えば、ＡＳＯ）の、対象への注射；第２に、修飾された生体分子もしくはベクター（例えば、ＡＡＶ、ナノ粒子）または標的化剤（例えば、ＡＳＯ）の、標的の部位での緩徐な蓄積、及び修飾された生体分子もしくはベクター（例えば、ＡＡＶ、ナノ粒子）または標的化剤の、血液からの付随するクリアランス；第３に、放射性標識化合物または放射性リガンド（例えば、低分子放射性リガンド）の、血流への注射；ならびに第４に、放射性標識化合物または放射性リガンドの、修飾された生体分子もしくはベクター（例えば、ＡＡＶ、ナノ粒子）または標的化剤（例えば、ＡＳＯ）への結合、続いて過剰放射能の急速クリアランス。一部の事例では、放射性標識化合物または放射性リガンドの注射前に、追加のステップ、具体的には、残留する標的化剤の血流からの除去を加速させるように設計された排出剤（ｃｌｅａｒｉｎｇ ａｇｅｎｔ）の投与が追加される。別の態様では、放射性標識化合物または放射性リガンドの薬物動態は、非標的臓器へのバックグラウンド放射線量を低減するだけでなく、通常はかかる撮像と不適合性であろう短い半減期を有する放射性同位体の使用も容易にする。

プレターゲッティング手法は、それらの標的に結合した際に内部移行しない抗体及びペプチド等の標的化剤に使用されてきた。本開示は、これとは全く対照的に、ＡＳＯ等の内部移行した標的化剤にプレターゲッティングを適用する。さらに、本開示は、血液脳関門の透過に使用することができ、故に中枢神経系におけるプレターゲッティングに有用性を有する、化合物及び組成物を提供する。

中枢神経系におけるプレターゲッティングの適用の例示的な例が、図３に図示される。この例で見て取れるように、プレターゲッティングは、放射能の送達を標的化剤（例えば、ＡＳＯ）から分離する。標的化剤（例えば、ＡＳＯ）は、トランス－シクロオクテン（ＴＣＯ）で修飾されており、髄腔内注射される一方で、放射性リガンドは、１，２，４，５テトラジン（Ｔｚ）を含有し、静脈内注射される。Ｔｚ及びＴＣＯは、インビボで、放射性リガンドをＡＳＯに共有結合させる逆電子要請型ディールス・アルダー（ＩＥＤＤＡ）反応を経る（図１）。

アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）－トランス－シクロオクテン（ＴＣＯ）融合体（「ＡＳＯ－ＴＣＯ」）
トランス－シクロオクテンに連結されたアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）（「ＡＳＯ－ＴＣＯ」）が本明細書に提供される。トランス－シクロオクテンは、ＡＳＯに直接連結され得る。一部の事例では、トランス－シクロオクテンは、アルキレンリンカー等のリンカーを介してＡＳＯに連結されている。トランス－シクロオクテンは、直接または間接的にのいずれかで、ＡＳＯの５’末端でＡＳＯに連結され得る。トランス－シクロオクテンはまた、直接または間接的にのいずれかで、ＡＳＯの３’末端でＡＳＯに連結され得る。一部の事例では、ＡＳＯは、ホスホロチオエート結合を介してリンカー（本明細書で定義される通り）に連結されている。一部の実例では、トランス－シクロオクテンは、シクロプロパンとのシス－環縮合を有するトランス－シクロオクテンである（「ｓ－ＴＣＯ」）。一部の実例では、トランス－シクロオクテンは、ジオキソラン環と縮合したトランス－シクロオクテン（「ｄ－ＴＣＯ」）である。

一部の態様では、修飾された生体分子または標的化剤は、アンチセンスオリゴヌクレオチド（「ＡＳＯ」）である。本発明によれば、ＡＳＯは、当該技術分野で既知の任意のＡＳＯであり得る。ＡＳＯは、リボ核酸（ＲＮＡ）に結合し、それにより標的ＲＮＡの発現を変化させるかまたは低減する、核酸の合成一本鎖の連なりである。それらは、標的転写物の分解によってタンパク質の発現を低減することができるだけでなく、プレｍＲＮＡスプライシングの干渉によりタンパク質発現を復元したり、タンパク質を修飾したりすることもできる。本開示は、両方のタイプのＡＳＯを包含する。ある特定の事例では、本開示のＡＳＯは、「ギャップマー」である。かかるＡＳＯは主として、ＲＮａｓｅ Ｈ依存性機構を介して、相補的部位を有するｍＲＮＡを選択的に切断することによって作用する。それらは、親和性を増加させる及び／またはヌクレアーゼに対する感受性を低減する化学修飾された末端が隣接する、ＲＮａｓｅ Ｈ活性を支持する中心領域を有する。一部の事例では、本開示のＡＳＯは、スプライシング制御型オリゴヌクレオチド（ｓｐｌｉｃｅ ｓｗｉｔｃｈｉｎｇ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）（ＳＳＯ）（例えば、ヌシネルセン）である。ＳＳＯは、一般に、スプライシング中にＲＮａｓｅ Ｈ活性を消失させると共に核内プレｍＲＮＡとの相互作用を可能にするように完全に修飾されている。それらは、５’もしくは３’スプライスジャンクションに、またはエクソン内スプライシングエンハンサーもしくはサイレンサー部位に結合するように設計され得る。かかる部位に結合することによって、それらは、例えば、エクソンの選択的使用、エクソン除外、またはエクソン包含を促進することによって、スプライシングを修飾することができる。

本開示によって包含されるＡＳＯの非限定的な例が、下記に提供される。

一部の事例では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ギャップマーまたはスプライシング制御型アンチセンスオリゴヌクレオチドである。一部の実例では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１２～２０個のヌクレオシド（例えば、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個）からなる。一部の事例では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、血液脳関門を通過する必要があるものである。一部の事例では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、神経変性障害の処置に有用であるものである。一部の事例では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、脊髄性筋萎縮症；筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病（家族性または孤発性）、前頭側頭型認知症、筋強直性ジストロフィー１型、ハンチントン病、アンジェルマン症候群、クロイツフェルト・ヤコブ病、脊髄小脳失調症３型、及びメンケス病のうちのいずれか１つの処置に有用であるものである。

一部の事例では、トランス－シクロオクテンに連結されたアンチセンスオリゴヌクレオチドは、式Ｉの構造、

またはその塩を有し、式中、
Ｘ^１が、ＣＨ_２またはＯであり、
Ｘ^２が、（ＣＨ_２）_ｔであり、
Ｘ^３が、Ｏ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、またはＯＣ（Ｏ）ＮＲ^ａ１であり、
Ｒ^ａ１が、Ｈ、Ｃ_１－６アルキル、またはＣ_１－６ハロアルキルであり、
Ｒ^ａ２及びＲ^ａ３が、各々独立して、ＨまたはＣ_１－６アルキルであり、
ｔが、０または１であり、
ｍが、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
５’－ＡＳＯ－３’が、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。

一部の事例では、トランス－シクロオクテンに連結されたアンチセンスオリゴヌクレオチドは、式Ｉ’の構造、

またはその塩を有し、式中、
Ｘ^１が、ＣＨ_２またはＯであり、
Ｘ^２が、（ＣＨ_２）_ｔであり、
Ｘ^３が、Ｏ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、またはＯＣ（Ｏ）ＮＲ^ａ１であり、
Ｒ^ａ１が、Ｈ、Ｃ_１－６アルキル、またはＣ_１－６ハロアルキルであり、
Ｒ^ａ２及びＲ^ａ３が、各々独立して、ＨまたはＣ_１－６アルキルであり、
ｔが、０または１であり、
ｍが、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
３’－ＡＳＯ－５’が、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。

部分

は、図示されるようにアニオンとして存在してもよく、ここで、電荷は、Ｎａ^＋、Ｋ^＋等といった好適なカチオンによって均衡がとられる。一部の事例では、カチオンは、Ｎａ^＋である。ｐＨ環境に応じて、電荷は、プロトンによって均衡がとられてもよい。

本明細書に提供されるトランス－シクロオクテン化合物には、生体分子（例えば、ＡＳＯ）に連結されていない化合物、例えば、

が含まれ、これらは合成されても、または商業的供給源から購入されてもよく、波線は、ＡＳＯ等の生体分子にカップリングするのに好適である基への結合点を表す。市販のトランス－シクロオクテン化合物には、ＴＣＯ－ＰＮＢ（Ｃｌｉｃｋ Ｃｈｅｍ Ｔｏｏｌｓ：１１９２）及びＴＣＯ－ＮＨＳ（Ｃｌｉｃｋ Ｃｈｅｍ Ｔｏｏｌｓ：１０１６）が含まれる。

本明細書に記載のトランス－シクロオクテン化合物は、生体分子に直接または間接的に連結され得る。例となる生体分子には、アンチセンスオリゴヌクレオチド、抗体、抗原結合抗体断片、ペプチド、及び低分子が含まれる。

一部の事例では、トランス－シクロオクテンに連結されたアンチセンスオリゴヌクレオチドは、式Ｉａの構造、

またはその塩を有し、式中、Ｒ^ａ１、Ｒ^ａ２、Ｒ^ａ３、及びｍは、本明細書で定義される通りである。

一部の事例では、トランス－シクロオクテンに連結されたアンチセンスオリゴヌクレオチドは、式Ｉ’ａの構造、

またはその塩を有し、式中、Ｒ^ａ１、Ｒ^ａ２、Ｒ^ａ３、及びｍは、本明細書で定義される通りである。

一部の事例では、トランス－シクロオクテンに連結されたアンチセンスオリゴヌクレオチドは、式Ｉｂの構造、

またはその塩を有し、式中、Ｒ^ａ１、Ｒ^ａ２、Ｒ^ａ３、及びｍは、本明細書で定義される通りである。

一部の事例では、トランス－シクロオクテンに連結されたアンチセンスオリゴヌクレオチドは、式Ｉ’ｂの構造、

またはその塩を有し、式中、Ｒ^ａ１、Ｒ^ａ２、Ｒ^ａ３、及びｍは、本明細書で定義される通りである。

一部の事例では、トランス－シクロオクテンに連結されたアンチセンスオリゴヌクレオチドは、式Ｉｃの構造、

またはその塩を有し、式中、ｍは、本明細書で定義される通りである。

一部の事例では、トランス－シクロオクテンに連結されたアンチセンスオリゴヌクレオチドは、式Ｉ’ｃの構造、

またはその塩を有し、式中、ｍは、本明細書で定義される通りである。

一部の事例では、トランス－シクロオクテンに連結されたアンチセンスオリゴヌクレオチドは、式Ｉｄの構造、

またはその塩を有し、式中、ｍは、本明細書で定義される通りである。

一部の事例では、トランス－シクロオクテンに連結されたアンチセンスオリゴヌクレオチドは、式Ｉ’ｄの構造、

またはその塩を有し、式中、ｍは、本明細書で定義される通りである。

一部の事例では、Ｘ^１は、ＣＨ_２である。一部の事例では、Ｘ^１は、Ｏである。一部の事例では、ｔは、０である。一部の事例では、ｔは、１である。一部の事例では、Ｘ^３は、ＯＣ（Ｏ）ＮＨ等のＯＣ（Ｏ）ＮＲ^ａ１である。一部の事例では、Ｘ^３は、Ｃ（Ｏ）ＯまたはＯＣ（Ｏ）である。一部の事例では、Ｘ^３は、Ｏである。一部の事例では、Ｘ^３は、Ｃ（Ｏ）である。一部の事例では、Ｒ^ａ１は、Ｈである。一部の事例では、Ｒ^ａ１は、メチル、エチル、プロピル等といったＣ_１－６アルキルである。一部の事例では、Ｒ^ａ１は、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル等といったＣ_１－６ハロアルキルである。一部の事例では、Ｒ^ａ２は、Ｈである。一部の事例では、Ｒ^ａ２は、メチル、エチル、プロピル等といったＣ_１－６アルキルである。一部の事例では、Ｒ^ａ３は、Ｈである。一部の事例では、Ｒ^ａ３は、メチル、エチル、プロピル等といったＣ_１－６アルキルである。一部の事例では、Ｒ^ａ２及びＲ^ａ３は、Ｈである。一部の事例では、Ｒ^ａ２は、Ｈであり、Ｒ^ａ３は、Ｃ_１－６アルキルである。一部の事例では、ｍは、１、２、３、４、５、または６である。一部の事例では、ｍは、１である。一部の事例では、ｍは、２である。一部の事例では、ｍは、３である。一部の事例では、ｍは、４である。一部の事例では、ｍは、５である。一部の事例では、ｍは、６である。

一部の事例では、トランス－シクロオクテンに連結されたアンチセンスオリゴヌクレオチドは、以下の構造、

またはその塩を有する。

一部の事例では、トランス－シクロオクテンに連結されたアンチセンスオリゴヌクレオチドは、以下の構造、

またはその塩を有する。

本明細書に記載の修飾された生体分子もしくはベクターまたは標的化剤は、当該技術分野で既知の任意の好適な手段（例えば、髄腔内、静脈内、頭蓋内等）によって対象に投与されてもよい。本明細書に記載の修飾された生体分子もしくはベクターまたは標的化剤は、対象に髄腔内投与されてもよい。本明細書に記載の修飾された生体分子もしくはベクターまたは標的化剤は、対象に静脈内投与されてもよい。本明細書に記載の修飾された生体分子もしくはベクターまたは標的化剤は、対象に頭蓋内投与されてもよい。

テトラジン化合物
一部の態様では、放射性標識分子または放射性リガンドは、本明細書に記載されるような放射性標識テトラジン化合物である。本明細書に記載されるような修飾された生体分子／標的化ベクター（例えば、ＡＳＯ－ＴＣＯ）とのインビボでの逆電子要請型ディールス・アルダー反応に好適なテトラジン化合物が、本明細書に提供される。放射性標識分子／放射性リガンドの放射標識は、当該技術分野で既知の画像診断に好適な任意の放射性同位体（下記に記載される通り）であってもよい。一部の態様では、放射性同位体は、^１８Ｆ、^１１Ｃ、または^６８Ｇａである。一部の態様では、放射性同位体は、^１８Ｆである。一部の態様では、放射性同位体は、^１１Ｃである。一部の態様では、放射性同位体は、^６８Ｇａである。

一部の事例では、式ＩＩの化合物、

またはその塩が本明細書に提供され、式中、
Ｚが、^１８Ｆ、^１１Ｃ部分、またはキレート化^６８Ｇａであり、
Ｙ^１、Ｙ^２、Ｙ^３、及びＹ^４が、各々独立して、ＣＨまたはＮであり、
Ｌが、Ｃ（Ｏ）ＮＲ^ｂ４、ＮＲ^ｂ４Ｃ（Ｏ）、Ｏ、ＯＣＨ_２、ＮＲ^ｂ５、またはＮＲ^ｂ５ＣＨ_２であり、
Ｙ^５が、結合、５～６員のヘテロアリールまたはフェニルであり、
Ｒ^ｂ１が、Ｈ、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、ピリジニル、またはピリミジニルであり、
Ｒ^ｂ２、Ｒ^ｂ３、Ｒ^ｂ４、及びＲ^ｂ５が、各々独立して、ＨまたはＣ_１－６アルキルであり、
ｎが、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。

一部の事例では、式ＩＩａの化合物、

またはその塩が本明細書に提供され、式中、Ｚ、Ｒ^ｂ１、Ｒ^ｂ２、Ｒ^ｂ３、Ｌ、及びｎは、本明細書で定義される通りである。

一部の事例では、式ＩＩｂの化合物、

またはその塩が本明細書に提供され、式中、Ｚ、Ｒ^ｂ１、Ｒ^ｂ２、Ｒ^ｂ３、Ｌ、及びｎは、本明細書で定義される通りである。

一部の事例では、式ＩＩｃの化合物、

またはその塩が本明細書に提供され、式中、Ｚ、Ｒ^ｂ１、Ｒ^ｂ２、Ｒ^ｂ３、Ｌ、及びｎは、本明細書で定義される通りである。

一部の事例では、式ＩＩｄの化合物、

またはその塩が本明細書に提供され、式中、Ｚ、Ｒ^ｂ１、Ｒ^ｂ２、Ｒ^ｂ３、Ｒ^ｂ４、及びｎは、本明細書で定義される通りである。

一部の事例では、式ＩＩｅの化合物、

またはその塩が本明細書に提供され、式中、Ｚ、Ｒ^ｂ１、Ｒ^ｂ２、Ｒ^ｂ３、Ｒ^ｂ４、及びｎは、本明細書で定義される通りである。

一部の事例では、式ＩＩｆの化合物、

またはその塩が本明細書に提供され、式中、Ｚ、Ｒ^ｂ１、Ｒ^ｂ２、Ｒ^ｂ３、及びｎは、本明細書で定義される通りである。

一部の事例では、式ＩＩｇの化合物、

またはその塩が本明細書に提供され、式中、Ｚ、Ｒ^ｂ１、Ｒ^ｂ２、Ｒ^ｂ３、及びｎは、本明細書で定義される通りである。

一部の事例では、Ｚは、^１８Ｆである。一部の事例では、Ｚは、^１１Ｃ部分、例えば、^１１ＣＨ_３、^１１ＣＨ_２－ＣＨ_３、^１１ＣＨ_２－ＣＨ_２－ＣＨ_３等である。一部の事例では、Ｚは、キレート化^６８Ｇａである。

一部の事例では、Ｙ^５は、結合である。一部の事例では、Ｙ^５は、５～６員のヘテロアリールである。一部の事例では、Ｙ^５は、トリアゾリル、イミダゾリル、またはピラゾリル等の５員のヘテロアリールである。一部の事例では、Ｙ^５は、トリアゾリルである。一部の事例では、Ｙ^５は、フェニルである。

一部の事例では、Ｌは、Ｃ（Ｏ）ＮＨ及びＣ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ_３）等のＣ（Ｏ）ＮＲ^ｂ４である。一部の事例では、Ｌは、ＮＨ（ＣＯ）及びＮ（ＣＨ_３）Ｃ（Ｏ）等のＮＲ^ｂ４Ｃ（Ｏ）である。一部の事例では、Ｌは、Ｏである。一部の事例では、Ｌは、ＯＣＨ_２である。一部の事例では、Ｌは、ＮＨＣＨ_２及びＮ（ＣＨ_３）ＣＨ_２等のＮＲ^ｂ５ＣＨ_２である。

一部の事例では、Ｒ^ｂ１は、ＨまたはＣ_１－６アルキルである。一部の事例では、Ｒ^ｂ１は、Ｈである。一部の事例では、Ｒ^ｂ１は、メチル、エチル、プロピル等といったＣ_１－６アルキルである。一部の事例では、Ｒ^ｂ１は、トリフルオロメチル（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙ）、ジフルオロメチル等といったＣ_１－６ハロアルキルである。一部の事例では、Ｒ^ｂ１は、ピリジニルである。一部の事例では、Ｒ^ｂ１は、ピリミジニルである。

一部の事例では、Ｒ^ｂ２は、Ｈである。一部の事例では、Ｒ^ｂ２は、メチル、エチル、プロピル等といったＣ_１－６アルキルである。一部の事例では、Ｒ^ｂ３は、Ｈである。一部の事例では、Ｒ^ｂ３は、メチル、エチル、プロピル等といったＣ_１－６アルキルである。一部の事例では、Ｒ^ｂ２及びＲ^ｂ３は、Ｈである。一部の事例では、Ｒ^ｂ２は、Ｈであり、Ｒ^ｂ３は、メチル、エチル、プロピル等といったＣ_１－６アルキルである。

一部の事例では、Ｒ^ｂ４は、Ｈである。一部の事例では、Ｒ^ｂ４は、メチル、エチル、プロピル等といったＣ_１－６アルキルである。一部の事例では、Ｒ^ｂ５は、Ｈである。一部の事例では、Ｒ^ｂ５は、メチル、エチル、プロピル等といったＣ_１－６アルキルである。

一部の事例では、ｎは、０、１、２、３、または４である。一部の事例では、ｎは、０である。一部の事例では、ｎは、１である。一部の事例では、ｎは、２である。一部の事例では、ｎは、３である。一部の事例では、ｎは、４である。

一部の事例では、下記から選択される化合物、

またはそれらの塩が、本明細書に提供される。

一部の事例では、化合物１は、本開示で^１８Ｆ－５３７－Ｔｚとも称される。

本明細書に記載の放射性標識分子または放射性リガンドは、当該技術分野で既知の任意の好適な手段（例えば、髄腔内、静脈内、頭蓋内等）によって対象に投与されてもよい。本明細書に記載の放射性標識分子または放射性リガンドは、対象に髄腔内投与されてもよい。本明細書に記載の放射性標識分子または放射性リガンドは、対象に静脈内投与されてもよい。本明細書に記載の放射性標識分子または放射性リガンドは、対象に頭蓋内投与されてもよい。

対応する放射標識されていないテトラジン化合物及びその調製プロセスもまた本明細書に提供される。例えば、下記から選択される化合物、

またはそれらの塩が、本明細書に提供される。

本明細書に記載の化合物の合成において調製される中間化合物もまた本明細書に提供される。一部の事例では、中間化合物は、

またはそれらの塩から選択される。

化合物の調製方法
本明細書に提供される化合物及びそれらの塩は、既知の合成技法を使用して調製することができ、本明細書に記載される合成経路等の多数の可能な合成経路のうちのいずれかに従って合成することができる。

本明細書に提供される化合物を調製するための反応は、好適な溶媒中で実行することができる。好適な溶媒は、反応が実行される温度で出発物質（反応物）、中間体、または生成物と実質的に非反応性であり得る。所与の反応は、１つの溶媒または１つよりも多くの溶媒の混合物中で実行することができる。

本明細書に提供される化合物の調製は、種々の化学基の保護及び脱保護を伴い得る。保護基の化学は、例えば、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄ．Ｅｄ．，Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９９）に見出すことができ、同文献は参照によりその全体が本明細書に援用される。

反応は、当該技術分野で既知の任意の好適な方法に従って監視することができる。例えば、生成物の形成は、核磁気共鳴分光法（例えば、^１Ｈまたは^１３Ｃ）、質量分析法等の分光手段によって、または高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）もしくは薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）等のクロマトグラフィーによって監視することができる。

一部の事例では、本開示は、本明細書に開示される化合物の調製プロセスを提供する。一部の事例では、式ＩＩの化合物の調製プロセスが本明細書に提供される。式ＩＩの化合物は、スキームＡに従って調製することができる。例えば、好適な薬剤を使用して式Ｉ－１の化合物を式ＩＩのテトラジン化合物に変換することができる。かかる変換に好適な薬剤には、Ｚｎ（ＯＴｆ）_２及びＮｉ（ＯＴｆ）_２等の触媒、メタンイミドアミド酢酸塩、ならびにＮＨ_２ＮＨ_２が含まれる。式Ｉ－１の化合物から式ＩＩのテトラジン化合物への変換は、ＮａＮＯ_２及びＨＣｌをさらに含み得る。
スキームＡ

例えば、化合物１は、下記のスキームＢに従って調製することができる。
スキームＢ

化合物１は、
（１）

を^１８Ｆ^－及びＫ_２２２／Ｋ_２ＣＯ_３の存在下で変換して、

をもたらすことと、
（２）（化合物２ａ）を還元剤の存在下で還元して、

をもたらすことと、
（３）化合物３ａを、

と反応させて、化合物１をもたらすことと、を含むプロセスによって調製することができる。

一部の事例では、化合物１の調製プロセスが本明細書に提供され、該プロセスは、化合物３ａを化合物４ａと反応させることを含む。一部の事例では、化合物１の調製プロセスは、化合物２ａを還元剤の存在下で還元することを含むプロセスによって、化合物３ａを調製することを含む。一部の事例では、化合物１の調製プロセスはまた、化合物１ａを^１８Ｆ^－及びＫ_２２２／Ｋ_２ＣＯ_３の存在下で還元して、化合物２ａをもたらすことを含むプロセスによって、化合物２ａを調製することも含む。

化合物１ａを化合物２ａに変換するプロセスは、^１８Ｆ^－及びＫ_２２２／Ｋ_２ＣＯ_３の存在下で実行することができる。変換は、アセトニトリルのような有機溶媒等の溶媒中で実行することができる。変換は、約９０℃～約１２０℃、例えば、約１００℃、約１０５℃、及び約１１０℃の温度で実行することができる。

化合物２ａを化合物３ａに還元するプロセスは、還元剤の存在下で実行することができる。例えば、還元剤は、銅線である。化合物２ａの還元は、トリフルオロ酢酸水溶液等の酸の存在下で実行することができる。還元は、約６０℃～約１００℃、例えば、約７０℃、約８０℃、及び約９０℃の温度で実行することができる。

化合物３ａを化合物４ａと反応させて、化合物１をもたらすプロセスは、塩基の存在下で実行することができる。例えば、塩基は、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン等のアミン塩基である。反応は、ジメチルホルムアミド等の有機溶媒中で実行することができる。還元は、約２５℃～約５０℃、例えば、約３０℃、約３７℃、及び約４０℃の温度で実行することができる。

一部の事例では、本明細書に提供される化合物の調製は、ＧＥ Ｔｒａｃｅｒｌａｂを使用して実行することができる。一部の事例では、本明細書に提供される放射性標識化合物は、自動ラジオシンセサイザー（例えば、ＴＲＡＣＥＲｌａｂ ＦＸ２Ｎを含むがこれらに限定されない、当該技術分野で既知の手段によって作製することができる。

一部の事例では、トランス－シクロオクテン化合物は、生体分子（例えば、５’位でＡＳＯ）に結合させることができる。一部の事例では、式Ｉの構造を有する、トランス－シクロオクテンに連結されたアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）の調製プロセスが本明細書に提供される。例えば、５’－ヘキシルアミノオリゴヌクレオチド（例えば、ＡＳＯ）をホウ酸緩衝液中に溶解させることができ、ＴＣＯ－ＰＮＢまたはＴＣＯ－ＮＨＳを緩衝液に添加して、ＴＣＯ連結オリゴヌクレオチドを生成させることができる。

ＡＳＯ分布の評価方法
本開示は、対象（例えば、ヒト）におけるＡＳＯの分布の評価方法を扱う。一部の実例では、ＡＳＯの分布は、対象の脳及び／または脊髄内で評価される。該方法は、本明細書に記載のトランス－シクロオクテンに連結されたＡＳＯを対象に投与することを伴う。一部の実例では、トランス－シクロオクテンに連結されたＡＳＯは、静脈内投与される。ある特定の実例では、特にＡＳＯの分布が脳及び／または脊髄内で評価される場合、トランス－シクロオクテンに連結されたＡＳＯは、髄腔内投与される。ある特定の実例では、トランス－シクロオクテンに連結されたＡＳＯは、ＰＢＳまたはａ－ＣＳＦ中で製剤化される。一部の事例では、トランス－シクロオクテンに限定されるＡＳＯは、式Ｉ、Ｉａ、Ｉｂ、Ｉｃ、もしくはＩｄの化合物、または化合物ＡＳＯ－ＴＣＯ－１もしくはＭａｌａｔ１ ＡＳＯ－ＴＣＯである。該方法は、本明細書に開示される放射性標識テトラジン化合物を対象に投与することをさらに伴う。一部の事例では、テトラジンは、当該技術分野で既知の画像診断用の任意の放射性核種または放射性同位体（本明細書に記載される通り）で放射標識されている。一部の事例では、テトラジンは、陽電子放出を介してのみ、またはほぼ陽電子放出を介してのみ崩壊する、放射性核種で放射標識されている。一部の事例では、テトラジンは、短い半減期（１２時間未満）または中程度の半減期（約１２～１８時間）を有する放射性核種で放射標識されている。一部の事例では、テトラジンは、フッ素－１８、炭素－１１、またはガリウム－６８で放射標識されている。一部の事例では、テトラジンは、フッ素－１８で放射標識されている。一部の事例では、テトラジン化合物は、記載される化合物、例えば、式ＩＩ、ＩＩａ、ＩＩｂ、ＩＩｃ、ＩＩｄ、ＩＩｅ、ＩＩｆ、もしくはＩＩｇの化合物、または化合物１～７から選択される化合物である。一部の事例では、放射性核種または放射性同位体は、放射性標識化合物／放射性リガンドに共有結合している。一部の事例では、放射性核種または放射性同位体は、キレート部分を介して放射性標識化合物／放射性リガンドに結合している。キレート部分は、当該技術分野で既知の任意の好適なキレート剤（例えば、ＮＯＴＡ）であってもよい。一部の実例では、放射性標識テトラジンは、静脈内投与される。ある特定の実例では、放射性標識テトラジンは、ＰＢＳまたはａ－ＣＳＦ中で製剤化される。

放射性標識テトラジンを投与するタイミングは、ＡＳＯ及びＴＣＯの各々の半減期に左右される。一部の実例では、放射性標識テトラジンは、トランス－シクロオクテンに連結されたＡＳＯの投与から２４時間以内、１日（同日を含む）後まで、２日（同日を含む）後まで、３日（同日を含む）後まで、４日（同日を含む）後まで、５日（同日を含む）後まで、６日（同日を含む）後まで、７日（同日を含む）後まで、８日（同日を含む）後まで、９日（同日を含む）後まで、１０日（同日を含む）後まで、１１日（同日を含む）後まで、１２日（同日を含む）後まで、１３日（同日を含む）後まで、１４日（同日を含む）後まで、１５日（同日を含む）後まで、１６日（同日を含む）後まで、１７日（同日を含む）後まで、１８日（同日を含む）後まで、１９日（同日を含む）後まで、または２０日（同日を含む）後までに対象に投与される。ある特定の事例では、放射性標識テトラジンは、トランス－シクロオクテンに連結されたＡＳＯの投与から約１～約２日後、約１～約３日後、約１～約４日後、約１～約５日後、約１～約６日後、約１～約７日後、約１～約１０日後、約１～約１４日後、約１～約２０日後、約１～約２４日後、または約１～約３２日後に投与される。１つの事例では、放射性標識テトラジンは、トランス－シクロオクテンに連結されたＡＳＯの投与から約２４時間後に対象に投与される。一部の事例では、放射性標識テトラジンは、トランス－シクロオクテンに連結されたＡＳＯの投与から１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、もしくは３６時間後またはその前後に対象に投与される。

一部の事例では、放射性リガンドの注射前に、追加のステップ、具体的には、残留する標的化剤（すなわち、標的に結合していないあらゆる標的化剤）の血流からの除去を加速させるように設計された排出剤の投与が追加される。例えば、テトラジン標識デキストラン［Ｍｅｙｅｒ，Ｊ．－Ｐ．，ｅｔ ａｌ．（２０１８）．“Ｂｉｏｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ Ｍａｓｋｉｎｇ ｏｆ Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｙ－ＴＣＯ Ｇｒｏｕｐｓ Ｕｓｉｎｇ Ｔｅｔｒａｚｉｎｅ－Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄ Ｄｅｘｔｒａｎ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ．”Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２９（２）：５３８－５４５］、及びガラクトース－アルブミン－テトラジン［Ｒｏｓｓｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．，５４（１１）：１９８９－１９９５（２０１３）］を参照されたい。

ある特定の事例では、放射性標識テトラジンの投与後に、対象が撮像される。ある特定の事例では、放射性標識テトラジンの投与後に、放射性標識テトラジンのＰＫに基づいて対象が撮像される。一部の実例では、撮像は、放射性トレーサーの注射から約１５分後、約３０分後、約４５分後、約６０分後、約７５分後、約９０分後、約１０５分後、約１２０分後、約１３５分後、または約１５０分後に行われる。一部の実例では、撮像は、放射性トレーサーの注射から約３０分～約１時間後、約１時間～約１時間半後、約２時間後、約３時間後、約４時間後、または約５時間後に行われる。ある特定の実例では、撮像は、陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）、陽電子放射断層撮影－コンピュータ断層撮影（ＰＥＴ－ＣＴ）、単一光子放射コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、単一光子放射コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ－ＣＴ）、プラナーガンマカメラ、Ｘ線ＣＴ、プラナーＸ線、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、光学イメージャ、または他の画像診断技法を含むがこれらに限定されない、当該技術分野で既知の任意の好適な画像診断法によって実施される。

ある特定の事例では、対象には、任意のヒトまたは非ヒト哺乳動物が含まれる。ある特定の非限定的な実施形態では、対象は、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウサギ、ウマ、ウシ、または齧歯類である。

ある特定の事例では、対象は、ヒト対象である。ある特定の実例では、ヒト対象は、小児患者である。ある特定の実例では、ヒト対象は、乳児である。ある特定の事例では、ヒト対象は、成人患者（すなわち、１８歳以上）である。一部の実例では、ヒト対象は、ＣＮＳ障害を有する。ある特定の実例では、ＣＮＳ障害は、シヌクレイノパチーまたはタウオパチーである。一部の実例では、ＣＮＳ障害は、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、アンジェルマン症候群、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、クロイツフェルト・ヤコブ病、脊髄小脳失調症３型（ＳＣＡ３）、またはメンケス病である。

一部の事例では、アンチセンスオリゴヌクレオチドの分布は、ヒト対象のＣＮＳ（例えば、皮質、線条体、視床、黒質、小脳）内で評価される。

ＡＳＯ濃度の評価方法
また、対象（例えば、ヒト）の標的領域（例えば、脳及び／または脊髄）内の生体分子（例えば、ＡＳＯ）の濃度を決定するための方法も扱われる。該方法は、本明細書に記載のトランス－シクロオクテンに連結された生体分子（例えば、ＡＳＯ）を対象に投与することを伴う。一部の実例では、トランス－シクロオクテンに連結されたＡＳＯは、静脈内投与される。ある特定の実例では、特にＡＳＯの分布が脳及び／または脊髄内で評価される場合、トランス－シクロオクテンに連結されたＡＳＯは、髄腔内投与される。ある特定の実例では、トランス－シクロオクテンに連結されたＡＳＯは、ＰＢＳまたはａ－ＣＳＦ中で製剤化される。この投与に次いで、対象は、本明細書に開示される放射性標識テトラジンを投与される。一部の事例では、放射性標識テトラジンは、中枢神経系透過性化合物である。一部の事例では、テトラジンは、陽電子放出を介してのみ、またはほぼ陽電子放出を介してのみ崩壊する、放射性核種で放射標識されている。一部の事例では、テトラジンは、短い半減期（１２時間未満）または中程度の半減期（約１２～１８時間）を有する放射性核種で放射標識されている。一部の事例では、テトラジンは、フッ素－１８、炭素－１１、またはガリウム－６８で放射標識されている。一部の事例では、テトラジン化合物は、キレート剤を含まない。一部の実例では、放射性標識テトラジンは、静脈内投与される。ある特定の実例では、放射性標識テトラジンは、ＰＢＳまたはａ－ＣＳＦ中で製剤化される。一部の事例では、放射性リガンドの注射前に、追加のステップ、具体的には、残留する標的化剤の血流からの除去を加速させるように設計された排出剤の投与が追加される。該方法は、対象における生体分子の分布を撮像することと、対象（例えば、対象の脳及び／または脊髄）における生体分子（例えば、ＡＳＯ）の組織中濃度を導出することとをさらに伴う。

放射性標識テトラジンを投与するタイミングは、ＡＳＯ及びトランス－シクロオクテンの各々の半減期に左右される。一部の実例では、放射性標識テトラジンは、トランス－シクロオクテンに連結されたＡＳＯの投与から２４時間以内、１日（同日を含む）後まで、２日（同日を含む）後まで、３日（同日を含む）後まで、４日（同日を含む）後まで、５日（同日を含む）後まで、６日（同日を含む）後まで、７日（同日を含む）後まで、８日（同日を含む）後まで、９日（同日を含む）後まで、１０日（同日を含む）後まで、１１日（同日を含む）後まで、１２日（同日を含む）後まで、１３日（同日を含む）後まで、１４日（同日を含む）後まで、１５日（同日を含む）後まで、１６日（同日を含む）後まで、１７日（同日を含む）後まで、１８日（同日を含む）後まで、１９日（同日を含む）後まで、または２０日（同日を含む）後までに対象に投与される。ある特定の実施形態では、放射性標識テトラジンは、トランス－シクロオクテンに連結されたＡＳＯの投与から約１～約２日後、約１～約３日後、約１～約４日後、約１～約５日後、約１～約６日後、約１～約７日後、約１～約１０日後、約１～約１４日後、約１～約２０日後、約１～約２４日後、または約１～約３２日後に投与される。１つの事例では、放射性標識テトラジンは、トランス－シクロオクテンに連結されたＡＳＯの投与から約２４時間後に対象に投与される。一部の事例では、放射性標識テトラジンは、トランス－シクロオクテンに連結されたＡＳＯの投与から１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、もしくは３６時間後またはその前後に対象に投与される。

一部の実例では、撮像は、放射性トレーサーの注射から約１５分後、約３０分後、約４５分後、約６０分後、約７５分後、約９０分後、約１０５分後、約１２０分後、約１３５分後、または約１５０分後に行われる。一部の実例では、撮像は、放射性トレーサーの注射から約３０分～約１時間後、約１時間～約１時間半後、約２時間後、約３時間後、約４時間後、または約５時間後に行われる。ある特定の実例では、撮像は、陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）、陽電子放射断層撮影－コンピュータ断層撮影（ＰＥＴ－ＣＴ）、単一光子放射コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、単一光子放射コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ－ＣＴ）、プラナーガンマカメラ、Ｘ線ＣＴ、プラナーＸ線、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、光学イメージャ、または他の画像診断技法を含むがこれらに限定されない、当該技術分野で既知の任意の好適な画像診断法によって実施される。

撮像データから、各関心領域についての放射性標識テトラジンの取り込み値を算出することができる。次いで、この値を、等式または経験的に集められた参照探索表のいずれかに適用して、組織内の生体分子（例えば、ＡＳＯ）の対応する濃度を得ることができる。

一部の事例では、生体分子（例えば、ＡＳＯ）の濃度は、対象のＣＮＳ（例えば、皮質、線条体、視床、黒質、小脳）内で評価される。

ある特定の事例では、対象は、ヒト対象である。ある特定の実例では、ヒト対象は、小児患者である。ある特定の実例では、ヒト対象は、乳児である。ある特定の実例では、ヒト対象は、成人患者（すなわち、１８歳以上）である。一部の実例では、ヒト対象は、ＣＮＳ障害を有する。ある特定の実例では、ＣＮＳ障害は、シヌクレイノパチーまたはタウオパチーである。一部の実例では、ＣＮＳ障害は、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、アンジェルマン症候群、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、クロイツフェルト・ヤコブ病、脊髄小脳失調症３型（ＳＣＡ３）、またはメンケス病である。

組成物
本開示はまた、本明細書に記載のＡＳＯ－ＴＣＯ及び／または放射性標識テトラジン化合物を含む、薬学的組成物も提供する。ある特定の事例では、かかる薬学的組成物は、滅菌生理食塩液、ならびにＡＳＯ－ＴＣＯ及び／または放射性標識テトラジン化合物を含むか、またはそれからなる。一部の実例では、かかる薬学的組成物は、滅菌された緩衝等張液である。一部の実例では、薬学的組成物は、防腐剤不含である。

本明細書に記載のＡＳＯ－ＴＣＯ及び／または放射性標識テトラジン化合物は、薬学的組成物または製剤の調製のために薬学的に許容される活性及び／または不活性物質と混和されてもよい。薬学的組成物の製剤化のための組成物及び方法は、投与経路、疾患の程度、または投与されるべき用量を含むがこれらに限定されない、いくつかの基準に左右される。

アンチセンスオリゴヌクレオチド化合物またはその塩は、かかる化合物を薬学的に許容される好適な希釈剤または担体と組み合わせることによって、薬学的組成物において利用することができる。ある特定の事例では、薬学的に許容される希釈剤は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）である。ある特定の実施形態では、薬学的に許容される希釈剤は、人工脳脊髄液（ａＣＳＦ）である。

ある特定の実施形態では、ａＣＳＦ製剤は、７．２のｐＨを有する。組成物のｐＨは、必要であれば、調合中に塩酸または水酸化ナトリウムで調整することができる。

アンチセンス化合物を含む薬学的組成物は、その任意の薬学的に許容される塩、エステル、またはかかるエステルの塩、及び水和物を包含する。したがって、例えば、本開示はまた、アンチセンス化合物の薬学的に許容される塩、プロドラッグ、かかるプロドラッグの薬学的に許容される塩、及び他の生物学的同等物も対象とする。薬学的に許容される好適な塩には、ナトリウム塩及びカリウム塩が含まれるが、これらに限定されない。

一部の事例では、ＡＳＯ－ＴＣＯ及び／または放射性標識テトラジン化合物は、静脈内投与用に製剤化される。一部の事例では、ＡＳＯ－ＴＣＯ及び／または放射性標識テトラジン化合物は、髄腔内投与用に製剤化される。ある特定の実例では、ＡＳＯ－ＴＣＯ及び放射性標識テトラジン化合物は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中で製剤化される。他の実例では、ＡＳＯ－ＴＣＯ及び放射性標識テトラジン化合物は、人工脳脊髄液（ａＣＳＦ）中で製剤化される。なおも他の実例では、ＡＳＯ－ＴＣＯ及び放射性標識テトラジン化合物は、滅菌注射用水中で製剤化される。

キット
本開示はさらに、本明細書に開示される方法を実践するために使用することができるキットを提供する。例えば、キットは、少なくとも１つの標的化プローブ（例えば、本明細書に記載のＡＳＯ－ＴＣＯ）及び／または少なくとも１つの標識プローブ（例えば、本明細書に記載の放射性標識テトラジン）を含むことができる。ある特定の実施形態では、キットは、任意選択で、分子撮像のためのキットの使用説明書を含むことができる。ある特定の事例では、キットは、シリンジ及び／またはカテーテル及び／または導入器シース等の投与デバイスをさらに含むことができる。

本開示はさらに、標的化プローブ及び／または標識プローブを調製するためのキットを提供する。ある特定の事例では、本発明のキットは、生体材料への適用に向けた標的化プローブ（乾燥または液体形態にある）及び／または標識プローブ（乾燥または液体形態にある）を収容する。プローブが乾燥形態で提供される場合、キットは、溶液または組成物を調製するための適切な緩衝液または溶媒を収容し得る。

定義
量の関連における「約」という用語、例えば、約Ｘｍｇは、＋／－１０％を意味し、したがって、「約５０ｍｇ」は、４５ｍｇ～５５ｍｇを包含する。Ｘ日の関連における「約」という用語は、＋／－３日を意味し、したがって、「約１０日」は、７～１３日を包含する。Ｘヶ月の関連における「約」という用語は、＋／－１週間を意味し、したがって、「約４ヶ月」は、４ヶ月時点の前後１週間を包含する。Ｘ時間の関連における「約」という用語は、＋／－３時間を意味し、したがって、「約１０時間」は、７～１３時間を包含する。Ｘ分の関連における「約」という用語は、＋／－１０分を意味し、したがって、「約１００分」は、９０～１１０分を包含する。Ｘ温度の関連における「約」という用語は、＋／－３℃を意味する。

「アルキル」という用語は、直鎖状または分岐状であり得る飽和炭化水素基を指す。「Ｃ_ｎ－ｍアルキル」という用語、は、ｎ～ｍ個の炭素原子を有するアルキル基を指す。アルキル基は形式的に、アルカンにおいて１つのＣ－Ｈ結合が、当該化合物の残部へのアルキル基の結合点で置き換えられたものに相当する。アルキル基は、１～６個の炭素原子、１～４個の炭素原子、１～３個の炭素原子、または１～２個の炭素原子を含有し得る。アルキル部分の例としては、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル等といった化学基が挙げられるが、これらに限定されない。

「アルキレン」という用語は、二価アルキル連結基を指す。アルキレン基は形式的に、アルカンにおいて２つのＣ－Ｈ結合が、当該化合物の残部へのアルキレン基の結合点で置き換えられたものに相当する。アルキレン基の例としては、エタン－１，２－ジイル、エタン－１，１－ジイル、プロパン－１，３－ジイル、プロパン－１，２－ジイル、プロパン－１，１－ジイル、ブタン－１，４－ジイル、ブタン－１，３－ジイル、ブタン－１，２－ジイル、２－メチル－プロパン－１，３－ジイル等が挙げられる。

「ハロアルキル」という用語は、水素原子のうちの１個または複数がハロゲン原子で置き換えられたアルキル基を指す。「Ｃ_ｎ－ｍハロアルキル」という用語は、ｎ～ｍ個の炭素原子、及び少なくとも１個から最大｛２（ｎ～ｍ）＋１｝個のハロゲン原子（これらは同じであっても異なってもよい）を有する、Ｃ_ｎ－ｍアルキル基を指す。一部の実施形態では、ハロゲン原子は、フルオロ原子である。一部の実施形態では、ハロアルキル基は、１～６個または１～４個の炭素原子を有する。例となるハロアルキル基には、ＣＦ_３、Ｃ_２Ｆ_５、ＣＨＦ_２、ＣＨ_２Ｆ、ＣＣｌ_３、ＣＨＣｌ_２、Ｃ_２Ｃｌ_５等が含まれる。一部の実施形態では、ハロアルキル基は、ＣＦ_３、ＣＨＦ_２、またはＣＨ_２Ｆ等のフルオロアルキル基である。

「ヘテロアリール」という用語は、硫黄、酸素、及び窒素から選択される少なくとも１個のヘテロ原子環員を含む、単環式複素環を指す。ヘテロアリール環は、窒素、硫黄、及び酸素から独立して選択される１個、２個、３個、または４個のヘテロ原子環員を有し得る。ヘテロアリール部分における環を形成する任意のＮは、Ｎ－オキシドであり得る。ヘテロアリールは、５～６個の環原子、ならびに窒素、硫黄、及び酸素から独立して選択される１個または２個のヘテロ原子環員を有し得る。一部の事例では、ヘテロアリールは、５員または６員のヘテロアリール環である。例となるヘテロアリール基には、ピリジニル（ピリジル）、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、ピロリル、ピラゾリル、アゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、フラニル、チオフェニル等が含まれるが、これらに限定されない。

本開示はまた、薬学的に許容される塩を含めた、本明細書に記載の化合物の塩も含む。「薬学的に許容される塩」という用語は、既存の酸または塩基部分をその塩形態に変換することによって親化合物が修飾されている、開示される化合物の誘導体を指す。薬学的に許容される塩の例としては、アミン等の塩基性残基の鉱酸塩または有機酸塩、カルボン酸等の酸性残基のアルカリ塩または有機塩等が挙げられる。薬学的に許容される塩には、例えば、非毒性の無機酸または有機酸から形成される、親化合物の非毒性の塩が含まれ得る。薬学的に許容される塩は、従来の化学的方法によって、塩基性または酸性部分を含有する親化合物から合成することができる。好適な塩のリストは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈＥｄ．，（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，１９８５），ｐ．１４１８、Ｂｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，１９７７，６６（１），１－１９、及びＳｔａｈｌ ｅｔ ａｌ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｕｓｅ，（Ｗｉｌｅｙ，２００２）に見出される。

以下の実施例は、特許請求される本発明をより十分に例示するために提供されるものであり、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。具体的な材料に言及する限りにおいて、それは単に例示説明を目的とするものであり、本発明を限定することは意図されない。当業者は、発明能力を行使することなく、かつ本発明の範囲から逸脱することなく、同等の手段又は反応物を開発することができる。

実施例１：化合物１の合成
スキームＣ

化合物１をスキームＢの手順に従って調製した。化合物１の調製に使用した材料及び試薬は、以下の通りである。

ＨＰＬＣ方法は、以下の通りである。

化合物１の調製は、ラジオシンセサイザーＴＲＡＣＥＲｌａｂ ＦＸ２Ｎを使用して実施した。
合成前セットアップは、以下を含む。
１．アルゴンガスラインをバイアル２トップに設置する。
２．Ａｒガス流が約２０ｍＬ／分であることを確実にする（流量計によってＶＸ２からＡｌ_２Ｏ_３ １トップまで試験する）。
３．２”２１Ｇ針をＡｌ_２Ｏ_３ １トップに接続し、この針を、ＭｅＣＮ（０．１５ｍＬ）を含有する通気した（１”２１Ｇ針）０．３ｍＬ Ｖバイアルの底部に挿入する。
４．０．３ｍＬ Ｖバイアルを氷浴中に置く。

化合物２ａの調製

高収率酸素－１８水ターゲットを装備したサイクロトロンによる^１８Ｏ（ｐ，ｎ）^１８Ｆ核反応を介して生成された［^１８Ｆ］フッ化物（合成開始時に１２１５ｍＣｉ）を、ＰＥＴＮＥＴから購入した。約１ｍＬの［^１８Ｏ］Ｈ_２Ｏ中の［^１８Ｆ］フッ化物を、ＨＰＬＣグレード水（５ｍＬ）でプレコンディショニングしたＷａｔｅｒｓ ＱＭＡカートリッジに捕捉させて、［^１８Ｏ］Ｈ_２Ｏを除去した。Ｋ_２２２／Ｋ_２ＣＯ_３溶液（０．４ｍＬ／０．４ｍＬのＨＰＬＣグレードアセトニトリル／水中７．５ｍｇ／０．７５ｍｇ）をカートリッジに通過させることによって、［^１８Ｆ］フッ化物をリアクター１中に溶出させた。次いで、［^１８Ｆ］フッ化物を、完全真空下での熱（７０℃）及び窒素流によって５分間、続いて完全真空のみにより１００℃で５分間乾燥させた。乾燥後、無水ＭｅＣＮ（０．５ｍＬ）中のアジド前駆体（化合物１ａ、３μＬ）の溶液を添加し、得られた溶液を撹拌しながら１０５℃で５分間加熱した。次いで、反応混合物を３０℃に冷却し、続いてＭｅＣＮ（０．１５ｍＬ）を添加した。次いで、２－［^１８Ｆ］フルオロエチルアジド（［^１８Ｆ］ＦＥアジド、化合物２ａ）を、熱（１３０℃）及びアルゴン流（２０ｍＬ／分）により氷冷ＭｅＣＮ（０．１５ｍＬ）を含有する０．３ｍＬ Ｖバイアル中に蒸留した。蒸留したＭｅＣＮ（３２８μＬ）中の［^１８Ｆ］ＦＥアジド（化合物２ａ、１０：５７時点で３６０ｍＣｉ）をＨＰＬＣによって分析し、放射化学的純度（ＲＣＰ）は９９％である。

化合物３ａの調製

先のステップからの蒸留した［^１８Ｆ］ＦＥアジド（化合物２ａ、１５０μＬ；１０：５７時点で１６４．７ｍＣｉ）を、銅線プラグ（約１００ｍｇ）及び１０％ＴＦＡ水溶液（１５０μＬ）を含有する０．３ｍＬ Ｖバイアルに添加した。得られた混合物を８０℃で３０分間反応させて、［^１８Ｆ］ＦＥアミン（化合物３ａ）を得た。ＨＰＬＣにより、［１８Ｆ］ＦＥアジド（化合物２ａ）からの８６％の変換が示される。５０：５０＝ＭｅＣＮ：１０％ＴＦＡ水溶液中の［^１８Ｆ］ＦＥアミン（化合物３ａ）を、さらに精製することなく後続のカップリング反応に使用した。

化合物１の調製
３つのカップリング条件を試験し、全てを３７℃で１０分間反応させた。
（ａ）ＤＭＦ（０．３ｍＬ）＋ＤＩＰＥＡ（８０２μＬ）中の１５０μＬの［^１８Ｆ］ＦＥアミン（化合物３ａ）＋４ｍｇのＴｚ ＮＨＳエステル（化合物４ａ）
（ｂ）ＤＭＦ（０．３ｍＬ）＋ＤＩＰＥＡ（１００μＬ）中の３００μＬの［^１８Ｆ］ＦＥアミン（化合物３ａ）＋４ｍｇのＴｚ ＮＨＳエステル（化合物４ａ）
（ｃ）ＤＭＦ（０．３ｍＬ）＋ＤＩＰＥＡ（３０μＬ）中の乾燥［^１８Ｆ］ＦＥアミン（（化合物３ａ）真空及び窒素流下でＴＦＡ、水、及びＭｅＣＮを蒸発）＋４ｍｇのＴｚ ＮＨＳエステル（化合物４ａ）

反応混合物を、分析ＨＰＬＣを使用して分析した。結果は、条件（ａ）が最も良好なカップリング収率を提供したことを示唆する。条件（ａ）は４７．５％の収率を提供し、条件（ｂ）は２７．７％の収率を提供し、条件（ｃ）は２９．６％の収率を提供した。

条件（ａ）からの反応混合物を、４．５ｍＬの１０ｍＭ ＮＨ_４ＯＡｃ（最終混合物ｐＨ約１１）、または４ｍＬの１０ｍＭ ＮＨ_４ＯＡｃ＋０．３５ｍＬの１Ｎ ＨＣｌ（最終混合物ｐＨ約４）を添加することによって後処理した。後処理の後、反応混合物を分析ＨＰＬＣによって分析した。結果は、反応混合物が４ｍＬの１０ｍＭ ＮＨ_４ＯＡｃ＋０．３５ｍＬの１Ｎ ＨＣｌで後処理されるべきであることを示唆する。具体的には、４．５ｍＬの１０ｍＭ ＮＨ_４ＯＡｃ（最終混合物ｐＨ約１１）を添加することによって反応混合物を後処理した場合、ＨＰＬＣクロマトグラムにおいて化合物１は観察されなかった。４ｍＬの１０ｍＭ ＮＨ４ＯＡｃ＋０．３５ｍＬの１Ｎ ＨＣｌ（最終混合物ｐＨ約４）を添加することによって反応混合物を後処理した場合、ＨＰＬＣクロマトグラムにおいて４８％の化合物１が存在した。

ＦＸ－ＦＮでの化合物１合成

ＦＸ－ＦＮ上のリアクターに、ＤＭＦ（０．３ｍＬ）及びＤＩＰＥＡ（８０μＬ）中の［^１８Ｆ］ＦＥアミン（化合物３ａ、０．１５ｍＬ；１１：３２時点で６７ｍＣｉ）、４ｍｇのＴｚ ＮＨＳエステル（化合物４ａ）をロードし、得られた混合物を３７℃で１０分間反応させ、続いて４ｍＬの１０ｍＭ ＮＨ_４ＯＡｃ及び０．３５ｍＬの１Ｎ ＨＣｌで希釈した。希釈した混合物をループローディングバイアルに移し、続いて上述したような精製のために半分取ＨＰＬＣにロードした。

半分取におけるトレースは、生成物ピーク（Ｒｔ約２６分間）を示し、これをＨＰＬＣ希釈フラスコ中に収集し、ＨＰＬＣグレード水（４０ｍＬ）で希釈した。次いで、精製した化合物１を、エタノール（５ｍＬ）及び水（５ｍＬ）でプレコンディショニングしたＳｔｒａｔａ－Ｘ、逆相、３０ｍｇ／１ｍＬカートリッジ（ＰＮ ８Ｂ－Ｓ１００－ＴＡＬ）に捕捉させ、続いて水（５ｍＬ）で洗浄した。捕捉された化合物１をエタノール（０．５ｍＬ）で８ｍＬバイアル（ｖａｉｌ）中に溶出させ、エタノールをアルゴン流により３７℃で蒸発させた。化合物１を１ｍＬの１倍ＤＰＢＳで再構成し、品質管理試験に供した。

化学的及び放射化学的純度／同一性を、放射能検出器及び紫外線（ＵＶ）検出器を装備したＡｇｉｌｅｎｔ １１００ ＨＰＬＣを使用して分析する（図７及び図８を参照されたい）。この線量についての放射化学的純度は＞９９％であった。同一性は、放射性標識生成物の保持時間を、対応する未標識参照基準のそれと比較することによって確認する。［１８Ｆ］フッ化物からのＲＣＹ１．８％／

化合物１は、以下のインシリコ及びインビトロ特徴を有する。

実施例２：２－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル）－Ｎ－（２－フルオロエチル）アセトアミド（化合物１’）の合成
２－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル）酢酸の調製

４０ｍＬ封管に、Ｎ_２Ｈ_４・Ｈ_２Ｏ（１９．０ｇ、３７２ｍｍｏｌ、１８．５ｍＬ）中の２－（４－シアノフェニル）酢酸（２．００ｇ、１２．４ｍｍｏｌ、１．００当量）、メタンイミドアミド酢酸塩（６．４６ｇ、６２．１ｍｍｏｌ）、Ｎｉ（ＯＴｆ）_２（２２１ｍｇ、６２０ｕｍｏｌ）の溶液を投入した。混合物を３５℃で１２時間撹拌し、Ｈ_２Ｏ（１０ｍＬ）中のＮａＮＯ_２（１７．１ｇ、２４８ｍｍｏｌ、２０．０当量）の溶液を混合物中に５℃で添加し、続いて１Ｍ ＨＣｌをゆっくりと添加すると、この間に溶液の色が明るい赤色に変化し、ガスが放散した。ガス放散が止み、ｐＨ値が３となるまで１Ｍ ＨＣｌの添加を継続した。混合物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ×４）で抽出し、有機層をブライン（１００ｍＬ×２）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物を精製することなく次のステップで使用した。表題化合物（２．００ｇ）を赤色の固体として得た。ＬＣＭＳ： ｍ／ｚ ＝ ２１７．２ ［Ｍ＋Ｈ］^＋。^１ＨＮＭＲ： （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ １０．２３ （ｓ， １ Ｈ）， ８．６４ － ８．６０ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．５５ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ３．８０ （ｓ， ２ Ｈ）。

２－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル）－Ｎ－（２－フルオロエチル）アセトアミド（化合物１’）の調製

１００ｍＬ一口丸底フラスコに、ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の２－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル）酢酸（２．００ｇ、９．２５ｍｍｏｌ）、２－フルオロエタンアミン（１．０１ｇ、１０．２ｍｍｏｌ、ＨＣｌ）、ＨＡＴＵ（５．２８ｇ、１３．９ｍｍｏｌ）、及びＤＩＰＥＡ（３．５９ｇ、２７．８ｍｍｏｌ、４．８３ｍＬ）の溶液を投入し、混合物を２５℃で２時間撹拌した。混合物を氷水（１００ｍＬ）中に添加し、混合物をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ×３）で抽出し、有機層をブライン（３０ｍＬ×３）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０×４０ｍｍ×１５ｕｍ、移動相：［水（０．２２５％ＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：５％～３５％、９分）によって精製して、所望の化合物を得た。表題化合物を赤色の固体（２３０ｍｇ、収率９％）として得た。ＬＣＭＳ： ｍ／ｚ ＝ ２６２．２ ［Ｍ＋Ｈ］^＋。^１ＨＮＭＲ： （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ １０．２４ （ｓ， １ Ｈ）， ８．６４ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ７．５５ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ５．８７ （ｂｒ ｓ， １ Ｈ）， ４．５５ （ｔ， Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ４．４４ （ｔ， Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ３．７２ （ｓ， ２ Ｈ）， ３．６３ （ｑ， Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ３．５６ （ｑ， Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ， １ Ｈ）。

実施例３：３－（４－（（（１－（２－フルオロエチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル）メトキシ）メチル）フェニル）－１，２，４，５－テトラジン（化合物２’）の合成
４－（（（４－ブロモベンジル）オキシ）メチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾールの調製

ｔ－ＢｕＯＨ（３００ｍＬ）及びＨ_２Ｏ（３００ｍＬ）中の１－ブロモ－４－（（プロプ－２－イン－１－イルオキシ）メチル）ベンゼン（６０．０ｇ、２６６ｍｍｏｌ）の溶液に、アスコルビン酸ナトリウム（５８．７ｇ、２９６ｍｍｏｌ）及びＣｕＳＯ_４（１４．１ｇ、８８．８ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、ＮａＮ_３（１９．３ｇ、２９６ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を７０℃で１時間撹拌した。ジクロロメタン（１Ｌ）を混合物に添加し、懸濁液を濾過し、濾液をジクロロメタン（５００ｍＬ×３）で抽出し、有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を、ジクロロメタン：メタノール（１００：１～５０：１、５Ｌ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物（１６．０ｇ、収率２０％）を薄黄色の固体として得た。^１ＨＮＭＲ： （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ １２．６２ （ｂｒ ｓ， １ Ｈ）， ７．８０ － ７．６３ （ｍ， １ Ｈ）， ７．５３ － ７．４２ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．２４ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ４．７１ （ｓ， ２ Ｈ）， ４．５５ （ｓ， ２ Ｈ）。

ｔｅｒｔ－ブチル４－（（（４－ブロモベンジル）オキシ）メチル）－２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－カルボキシレートの調製

４０ｍＬ封管に、ＤＣＭ（１００ｍＬ）中の４－（（（４－ブロモベンジル）オキシ）メチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール（１０．０ｇ、３７．３ｍｍｏｌ）及び（Ｂｏｃ）_２Ｏ（９．７７ｇ、４４．７ｍｍｏｌ）の溶液を投入した。ＤＭＡＰ（４５５ｍｇ、３．７３ｍｍｏｌ）を混合物に添加し、その後、それを２０℃で１時間撹拌した。混合物をクエン酸（５０ｍＬ×４）、ブライン（５０ｍＬ×３）で洗浄し、有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物を精製することなく次のステップで使用した。表題化合物（１４．０ｇ）を黄色の油として得た。^１ＨＮＭＲ： （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ７．８７ （ｓ， １ Ｈ）， ７．５２ － ７．４５ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．２５ － ７．１８ （ｍ， ２ Ｈ）， ４．７１ （ｓ， ２ Ｈ）， ４．５８ － ４．５１ （ｍ， ２ Ｈ）， １．７２ － １．６６ （ｍ， ９ Ｈ）。

４－（（（１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル）メトキシ）メチル）ベンゾニトリルの調製

窒素雰囲気下でＤＭＦ（１３０ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル４－（（（４－ブロモベンジル）オキシ）メチル）－２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－２－カルボキシレート（１３．０ｇ、３５．３ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４（８．１６ｇ、７．０６ｍｍｏｌ）及びＺｎ（ＣＮ）_２（８．２９ｇ、７０．６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１００℃で１２時間撹拌した。混合物を酢酸エチル（１００ｍＬ）及びＨ_２Ｏ（５００ｍＬ）で希釈した。混合物をセライトで濾過し、有機層を分離させ、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（ＥＷ１８１１７－２７－Ｐ１Ｃ）（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ Ｍａｘ－ＲＰ ２５０×５０ｍｍ×１０ｕｍ；移動相：［水（０．２２５％ＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１５％～４０％、２０分）によって精製して、所望の化合物を得た。表題化合物（１．７ｇ、収率２２％）を黄色の固体として得た。ＬＣＭＳ： ｍ／ｚ ＝ ２１５．２ ［Ｍ＋Ｈ］^＋。^１ＨＮＭＲ： （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ７．７７ （ｓ， １ Ｈ）， ７．６８ － ７．６２ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．４６ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ４．７６ （ｓ， ２ Ｈ）， ４．６９ － ４．６１ （ｍ， ２ Ｈ）。

３－（４－（（（１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル）メトキシ）メチル）フェニル）－１，２，４，５－テトラジンの調製

１００ｍＬ一口丸底フラスコに、Ｎ_２Ｈ_４・Ｈ_２Ｏ（２０．３ｇ、３９６ｍｍｏｌ、１９．７ｍＬ）中の４－（（（１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル）メトキシ）メチル）ベンゾニトリル（１．７０ｇ、７．９４ｍｍｏｌ）、メタンイミドアミド酢酸塩（８．２６ｇ、７９．３ｍｍｏｌ）、Ｎｉ（ＯＴｆ）_２（１．４２ｇ、３．９７ｍｍｏｌ）の溶液を投入した。混合物を３５℃で１２時間撹拌し、Ｈ_２Ｏ（１７ｍＬ）中のＮａＮＯ_２（１０．９ｇ、１５８ｍｍｏｌ）の溶液を混合物中に５℃で添加し、続いて１Ｍ ＨＣｌをゆっくりと添加すると、この間に溶液の色が明るい赤色に変化し、ガスが放散した。ガス放散が止み、ｐＨ値が３となるまで１Ｍ ＨＣｌの添加を継続した。混合物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ×３）で抽出し、有機層をブライン（１００ｍＬ×２）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ Ｃ１８ １５０×２５×１０ｕｍ；移動相：［水（０．２２５％ＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：３８％～６８％、１０分）によって精製して、粗生成物を得、この粗生成物を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０×２５ｍｍ×１０ｕｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１６％～４６％、１０分）によって精製した。残渣をＭｅＯＨ（５ｍＬ）でトリチュレーションして、所望の化合物を得た。表題化合物（１０５ｍｇ、収率５％）を赤色の固体として得た。ＬＣＭＳ： ｍ／ｚ ＝ ２７０．２［Ｍ＋Ｈ］^＋。^１ＨＮＭＲ： （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １５．４５ － １４．７３ （ｍ， １ Ｈ）， １０．７３ － １０．４８ （ｍ， １ Ｈ）， ８．５０ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ８．２５ － ７．８０ （ｍ， １ Ｈ）， ７．６４ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ４．６９ （ｓ， ４ Ｈ）。

エチルフルオロ基をトリアゾール環に導入するのに好適である方法を使用して、３－（４－（（（１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル）メトキシ）メチル）フェニル）－１，２，４，５－テトラジンを使用することにより、化合物２’を調製することができる。

４－（（（４－ブロモベンジル）オキシ）メチル）－１－（２－フルオロエチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾールの調製

２５０ｍＬ一口丸底フラスコに、ｔ－ＢｕＯＨ（３０ｍＬ）及びＨ_２Ｏ（３０ｍＬ）中の１－ブロモ－４－（（プロプ－２－イン－１－イルオキシ）メチル）ベンゼン（５．００ｇ、２２．２ｍｍｏｌ）、１－アジド－２－フルオロエタン（２．１８ｇ、２４．４ｍｍｏｌ）、ＣｕＳＯ_４（１．４２ｇ、８．８９ｍｍｏｌ）、及びアスコルビン酸ナトリウム（４．８４ｇ、２４．４ｍｍｏｌ）の溶液を投入した。混合物を７０℃で１時間撹拌した。混合物を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）及び水（１００ｍＬ）を混合物中に添加し、懸濁液を濾過し、濾液をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ×２）で抽出し、有機層をブライン（１００ｍＬ×２）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を、石油エーテル：酢酸エチル（１０：１～１：２、３Ｌ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、所望の化合物を得た。表題化合物（５．００ｇ、収率７１％）を黄色の油として得た。^１ＨＮＭＲ： （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ７．６７ （ｓ， １ Ｈ）， ７．４６ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ７．２３ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ４．８５ （ｔ， Ｊ ＝ ４．４ Ｈｚ， １ Ｈ）， ４．７４ － ４．６７ （ｍ， ４ Ｈ）， ４．６６ － ４．６１ （ｍ， １ Ｈ）， ４．５５ （ｓ， ２ Ｈ）。

４－（（（１－（２－フルオロエチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル）メトキシ）メチル）ベンゾニトリルの調製

窒素雰囲気下でＤＭＦ（５０ｍＬ）中の４－（（（４－ブロモベンジル）オキシ）メチル）－１－（２－フルオロエチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール（５．００ｇ、１５．９ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４（３．６８ｇ、３．１８ｍｍｏｌ、０．２０当量）及びＺｎ（ＣＮ）_２（３．７４ｇ、３１．８ｍｍｏｌ、２．０２ｍＬ、２．００当量）を添加し、反応混合物を１００℃で１２時間撹拌した。混合物を酢酸エチル（５０ｍＬ）及びＨ_２Ｏ（５０ｍＬ）で希釈した。混合物をセライトで濾過した。有機層を分離させ、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（ＥＷ１８１１７－２４－Ｐ１Ａ）（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｌｕｎａ Ｃ１８ ２５０×５０ｍｍ×１０ｕｍ；移動相：［水（０．２２５％ＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：２０％～５０％、１５分）によって精製して、所望の化合物を得た。表題化合物（２．００ｇ、収率４８％）を黄色の固体として得た。ＬＣＭＳ： ｍ／ｚ ＝ ２６１．２ ［Ｍ＋Ｈ］^＋。^１ＨＮＭＲ： （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ７．７１ （ｓ， １ Ｈ）， ７．６３ （ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ７．４６ （ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ４．９１ － ４．８４ （ｍ， １ Ｈ）， ４．７７ － ４．７１ （ｍ， ４ Ｈ）， ４．６９ － ４．６３ （ｍ， ３ Ｈ）。

３－（４－（（（１－（２－フルオロエチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル）メトキシ）メチル）フェニル）－１，２，４，５－テトラジン（化合物２’）の調製

１００ｍＬ一口丸底フラスコに、Ｎ_２Ｈ_４・Ｈ_２Ｏ（１９．６ｇ、３８４ｍｍｏｌ、１９．０６ｍＬ）中の４－（（（１－（２－フルオロエチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル）メトキシ）メチル）ベンゾニトリル（２．００ｇ、７．６８ｍｍｏｌ）、メタンイミドアミド酢酸塩（８．００ｇ、７６．８ｍｍｏｌ）、Ｎｉ（ＯＴｆ）_２（１．３７ｇ、３．８４ｍｍｏｌ）の溶液を投入した。混合物を３５℃で１２時間撹拌し、Ｈ_２Ｏ（２０ｍＬ）中のＮａＮＯ_２（１０．６ｇ、１５４ｍｍｏｌ）の溶液を混合物中に５℃で添加し、続いて１Ｍ ＨＣｌをゆっくりと添加すると、この間に溶液の色が明るい赤色に変化し、ガスが放散した。ガス放散が止み、ｐＨ値が３となるまで１Ｍ ＨＣｌの添加を継続した。混合物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ×３）で抽出し、有機層をブライン（１００ｍＬ×２）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０×４０ｍｍ×１５ｕｍ；移動相：［水（０．２２５％ＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１５％～４５％、９分）によって精製して、粗化合物を得、この粗生成物を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０×２５ｍｍ×１０ｕｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：２２％～５２％、１０分）によって精製して、所望の化合物を得た。表題化合物（５２．０ｍｇ、収率２％）を赤色の固体として得た。ＬＣＭＳ： ｍ／ｚ ＝ ３３１．２ ［Ｍ＋Ｈ］^＋。^１ＨＮＭＲ： （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １０．６８ － １０．４０ （ｍ， １ Ｈ）， ８．５４ － ８．４６ （ｍ， ２ Ｈ）， ８．２３ （ｓ， １ Ｈ）， ７．６４ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ４．９３ － ４．８７ （ｍ， １ Ｈ）， ４．８０ － ４．７５ （ｍ， ２ Ｈ）， ４．７３ － ４．６９ （ｍ， ３ Ｈ）， ４．６８ （ｓ， ２ Ｈ）。

実施例４：３－（４－（（（２－（２－フルオロエチル）－２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル）メトキシ）メチル）フェニル）－１，２，４，５－テトラジン（化合物３’）の合成
４－（（（４－ブロモベンジル）オキシ）メチル）－２－（２－フルオロエチル）－２Ｈ－１，２，３－トリアゾールの調製

８ｍＬ封管に、ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の４－（（（４－ブロモベンジル）オキシ）メチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール（１．００ｇ、３．７３ｍｍｏｌ）及びＫ_２ＣＯ_３（７７３ｍｇ、５．５９ｍｍｏｌ）の溶液を投入し、２－フルオロエチル４－メチルベンゼンスルホネート（８９５ｍｇ、４．１０ｍｍｏｌ）を混合物中に添加し、これを２０℃で１２時間撹拌した。氷水（２０ｍＬ）を添加し、混合物をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２０ｍＬ×３）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を、酢酸エチル：石油エーテル（１０：１～３：１、１．５Ｌ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、所望の化合物を得た。表題化合物（７００ｍｇ、収率５８％）を黄色の油として得た。^１ＨＮＭＲ： （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ７．６６ （ｓ， １ Ｈ）， ７．５３ － ７．４４ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．２８ － ７．２１ （ｍ， ２ Ｈ）， ５．００ － ４．８２ （ｍ， ２ Ｈ）， ４．７９ － ４．６７ （ｍ， ２ Ｈ）， ４．６４ （ｓ， ２ Ｈ）， ４．５５ （ｓ， ２ Ｈ）。

４－（（（２－（２－フルオロエチル）－２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル）メトキシ）メチル）ベンゾニトリルの調製

窒素雰囲気下でＤＭＦ（１０ｍＬ）中の４－（（（４－ブロモベンジル）オキシ）メチル）－２－（２－フルオロエチル）－２Ｈ－１，２，３－トリアゾール（７００ｍｇ、２．２３ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４（５１４ｍｇ、４４５ｕｍｏｌ）及びＺｎ（ＣＮ）_２（５２３ｍｇ、４．４６ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を１００℃で１２時間撹拌した。混合物を酢酸エチル（５０ｍＬ）及びＨ_２Ｏ（５０ｍＬ）で希釈した。混合物をセライトで濾過し、有機層を分離させ、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０×４０ｍｍ×１５ｕｍ；移動相：［水（０．２２５％ＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：２０％～５０％、９分）によって精製して、所望の化合物を得た。生成物である化合物４Ｂ（３００ｍｇ、収率７％）を黄色の固体として得た。ＬＣＭＳ： ｍ／ｚ ＝ ２６１．１ ［Ｍ＋Ｈ］^＋。^１ＨＮＭＲ： （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ７．６６ （ｄ， Ｊ ＝ １．６ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．６１ － ７．５５ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．５０ （ｂｒ ｄ， Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ４．９８ （ｔ， Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ４．８６ （ｔ， Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ４．７６ （ｔ， Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ４．７２ － ４．６８ （ｍ， ２ Ｈ）， ４．７２ － ４．６８ （ｍ， １ Ｈ）， ４．６５ （ｓ， ２ Ｈ）。

３－（４－（（（２－（２－フルオロエチル）－２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル）メトキシ）メチル）フェニル）－１，２，４，５－テトラジン（化合物３’）の調製

４０ｍＬ封管に、Ｎ_２Ｈ_４・Ｈ_２Ｏ（２．９４ｇ、５７．６ｍｍｏｌ）中の４－（（（２－（２－フルオロエチル）－２Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル）メトキシ）メチル）ベンゾニトリル（３００ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ）、メタンイミドアミド酢酸塩（１．２０ｇ、１１．５ｍｍｏｌ）、Ｎｉ（ＯＴｆ）_２（２０５ｍｇ、５７６ｕｍｏｌ）の溶液を投入した。混合物を３５℃で１２時間撹拌した。Ｈ_２Ｏ（５ｍＬ）中のＮａＮＯ_２（１．５９ｇ、２３．０ｍｍｏｌ、２０．０当量）の溶液を混合物中に５℃で添加し、続いて１Ｍ ＨＣｌをゆっくりと添加すると、この間に溶液の色が明るい赤色に変化し、ガスが放散した。ガス放散が止み、ｐＨ値が３となるまで１Ｍ ＨＣｌの添加を継続した。混合物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ×３）で抽出し、有機層をブライン（１００ｍＬ×２）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ Ｃ１８ １５０×２５×１０ｕｍ；移動相：［水（０．２２５％ＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：３８％～６８％、１０分）によって精製して、所望の化合物を得た。表題化合物（１８．０ｍｇ、収率５％）を赤色の固体として得た。ＬＣＭＳ： ｍ／ｚ ＝ ３５６．２ ［Ｍ＋Ｈ］^＋。^１Ｈ ＮＭＲ： （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ １０．２３ （ｓ， １ Ｈ）， ８．６３ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ７．６９ （ｓ， １ Ｈ）， ７．６１ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ４．９８ （ｔ， Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ４．８８ － ４．８５ （ｍ， １ Ｈ）， ４．７８ － ４．７５ （ｍ， ２ Ｈ）， ４．７２ （ｓ， ２ Ｈ）， ４．７２ － ４．６８ （ｍ， ２ Ｈ）。

実施例５：Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－１－（４－フルオロフェニル）メタンアミン（化合物４’）の合成
ｔｅｒｔ－ブチル（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）（メチル）カルバメートの調製

ｔｅｒｔ－ブチル（４－シアノベンジル）（メチル）カルバメート（１．９０ｇ、７．７１ｍｍｏｌ）、メタンイミドアミド酢酸塩（８．０３ｇ、７７．１ｍｍｏｌ）、及びＤＭＦ（９．００ｍＬ）を一口フラスコに投入した。この溶液に、Ｚｎ（ＯＴｆ）_２・Ｈ_２Ｏ（１．４７ｇ、３．８６ｍｍｏｌ）及びＮＨ_２ＮＨ_２・Ｈ_２Ｏ（１９．３ｇ、３８６ｍｍｏｌ、１８．８ｍＬ）を添加した。混合物をＮ_２雰囲気下、３０℃で１２時間撹拌した。反応液を２０℃に冷却した。１００ｍＬの水中のＮａＮＯ_２（１０．７ｇ、１５４ｍｍｏｌ）を溶液に０℃でゆっくりと添加し、続いて１Ｍ ＨＣｌをゆっくりと添加すると、この間に溶液の色が明るい赤色に変化し、０℃でガスが放散した。ガス放散が止み、ｐＨ値が３となるまで１Ｍ ＨＣｌの添加を継続した。混合物をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）で抽出した。有機相をブライン（３００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝２０：１）によって精製して、紫色の固体を得た。固体を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０×４０ｍｍ×１５ｕｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：４８％～６８％、１０分）によって精製して、３００ｍｇの粗残渣を得、これを分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ Ｃ１８ ７５×３０ｍｍ×３ｕｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：５５％～６５％、７分）によってさらに精製し、溶出物を酢酸エチル（５０ｍＬ）で抽出し、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、表題化合物（２３０ｍｇ、収率１０％）を紫色の固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ： （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ １０．２２ （ｓ， １Ｈ）， ８．６１ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．４７ （ｂｒ ｄ， Ｊ ＝ ７．２０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．５５ （ｂｒ ｓ， ２Ｈ）， ３．０１ － ２．８２ （ｍ， ３Ｈ）， １．５０ （ｍ， ９Ｈ）。

１－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル）－Ｎ－メチルメタンアミンの調製

ｔｅｒｔ－ブチル（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）（メチル）カルバメート（２３０ｍｇ、７６３ｕｍｏｌ）及びジオキサン（５ｍＬ）を一口フラスコに投入した。この溶液に、ＨＣｌ／ジオキサン（４Ｍ、５ｍＬ）を添加した。反応を２０℃で１時間撹拌した。混合物を濃縮して、表題化合物（１００ｍｇ、収率５５％、ＨＣｌ）を赤色の固体として得た。^１ＨＮＭＲ： （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １０．６４ （ｓ， １Ｈ）， ９．１５ （ｂｒ ｓ， ２Ｈ）， ８．５６ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．８０ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．２７ （ｔ， Ｊ ＝ ５．６０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．６１ （ｔ， Ｊ ＝ ５．２０ Ｈｚ， ３Ｈ）。

１－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）フェニル）－Ｎ－メチルメタンアミンを使用して、フルオロフェニル基を有する化合物を調製することができる。

Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－１－（４－フルオロフェニル）メタンアミン（化合物４’）の調製

４－（（（４－フルオロベンジル）アミノ）メチル）ベンゾニトリル（３．００ｇ、１２．４９ｍｍｏｌ）、メタンイミドアミド酢酸塩（１３．０ｇ、１２５ｍｍｏｌ）、及びＤＭＦ（１５．０ｍＬ）を一口フラスコに投入した。この溶液に、Ｚｎ（ＯＴｆ）_２・Ｈ_２Ｏ（２．３８ｇ、６．２４ｍｍｏｌ）、及びＮＨ_２ＮＨ_２・Ｈ_２Ｏ（３１．３ｇ、６２４ｍｍｏｌ、３０．３ｍＬ）を添加した。混合物をＮ_２雰囲気下、３０℃で３６時間撹拌した。反応液を２０℃に冷却した。１００ｍＬの水中のＮａＮＯ_２（１７．２ｇ、２５０ｍｍｏｌ）を溶液に０℃でゆっくりと添加し、続いて１Ｍ ＨＣｌをゆっくりと添加すると、この間に溶液の色が明るい赤色に変化し、０℃でガスが放散した。ガス放散が止み、ｐＨ値が３となるまで１Ｍ ＨＣｌの添加を継続した。混合物をＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１、５００ｍＬ×３で抽出した。有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｌｕｎａ Ｃ１８ ２５０×８０ｍｍ×１０ｕｍ；移動相：［水（０．２２５％ＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１０ＡＣＮ％～４０ＡＣＮ％、１２分）によって精製して、表題化合物（５０ｍｇ、収率１％）を赤色の固体として得た。^１ＨＮＭＲ： （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １０．６４ （ｓ， １Ｈ）， ９．２９ （ｂｒ ｓ， ２Ｈ）， ８．５８ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．７９ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．６２ － ７．５３ （ｍ， ２Ｈ）， ７．３７ － ７．２８ （ｍ， ２Ｈ）， ４．３７ － ４．２４ （ｍ， ４Ｈ）。

実施例６：Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－１－（４－フルオロフェニル）－Ｎ－メチルメタンアミン（化合物５’）の合成

４－（（（４－フルオロベンジル）（メチル）アミノ）メチル）ベンゾニトリル（３．００ｇ、１１．８ｍｍｏｌ、１．００当量）、メタンイミドアミド酢酸塩（１２．３ｇ、１１８ｍｍｏｌ）、及びＤＭＦ（１５．０ｍＬ）を一口フラスコに投入した。この溶液に、Ｚｎ（ＯＴｆ）_２・Ｈ_２Ｏ（２．２５ｇ、５．９０ｍｍｏｌ）及びＮＨ_２ＮＨ_２・Ｈ_２Ｏ（２９．５ｇ、５９０ｍｍｏｌ、２８．７ｍＬ）を添加した。混合物をＮ_２雰囲気下、３０℃で２４時間撹拌した。反応液を室温に冷却した。１００ｍＬの水中のＮａＮＯ_２（１６．３ｇ、２３６ｍｍｏｌ）を溶液に０℃でゆっくりと添加し、続いて１Ｍ ＨＣｌをゆっくりと添加すると、この間に溶液の色が明るい赤色に変化し、０℃でガスが放散した。ガス放散が止み、ｐＨ値が３となるまで１Ｍ ＨＣｌの添加を継続した。混合物をＤＣＭ：ＭｅＯＨ（１０：１、５００ｍＬ×４）で抽出した。有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｌｕｎａ Ｃ１８（２５０×７０ｍｍ、１０ｕｍ）；移動相：［水（０．２２５％ＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１５％～４０％、２０分）によって精製して、粗物質５００ｍｇを得、これを分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０×２５ｍｍ×１０ｕｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１１％～４１％、１０分）によって精製して、深紅色の固体２００ｍｇを得た。次いで、固体を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ １５０×２５ｍｍ×５ｕｍ；移動相：［水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）－ＡＣＮ］；Ｂ％：５０％～８０％、１０分）によって精製し、溶出物を濃ＨＣｌでｐＨ＝３に酸性化し（ａｃｉｆｉｅｄ）、凍結乾燥させて、純化合物を得、これを分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ Ｃ１８ １５０×２５×１０ｕｍ；移動相：［水（０．０５％ＨＣｌ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１３％～４３％、１０分）によって精製した。表題化合物（５６ｍｇ、収率１％、ＨＣｌ）を赤色の固体として得た。^１ＨＮＭＲ： （４００ ＭＨｚ， メタノール－ｄ４） δ １０．４０ （ｓ， １Ｈ）， ８．７７ － ８．６９ （ｍ， ２Ｈ）， ７．８１ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．６５ － ７．５６ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２６ （ｔ， Ｊ ＝ ８．８０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．７９ （ｓ， ３Ｈ）。

実施例７．Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－４－フルオロベンズアミド（化合物６’）の合成

Ｎ－（４－シアノベンジル）－４－フルオロベンズアミド（３．００ｇ、１１．８ｍｍｏｌ）、メタンイミドアミド酢酸塩（１２．３ｇ、１１８ｍｍｏｌ）、及びＤＭＦ（１４．０ｍＬ）を一口フラスコに投入した。この溶液に、Ｚｎ（ＯＴｆ）_２・Ｈ_２Ｏ（２．２５ｇ、５．９０ｍｍｏｌ）及びＮＨ_２ＮＨ_２・Ｈ_２Ｏ（２９．５ｇ、５９０ｍｍｏｌ、２８．７ｍＬ）を添加した。混合物をＮ_２雰囲気下、３０℃で１２時間撹拌した。反応液を室温に冷却した。１００ｍＬの水中のＮａＮＯ_２（１６．３ｇ、２３６ｍｍｏｌ）を溶液に０℃でゆっくりと添加し、続いて１Ｍ ＨＣｌをゆっくりと添加すると、この間に溶液の色が明るい赤色に変化し、０℃でガスが放散した。ガス放散が止み、ｐＨ値が３となるまで１Ｍ ＨＣｌの添加を継続した。混合物をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）で抽出した。有機相をブライン（３００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝５：１～１：１）によって精製して、紫色の固体２．０ｇを得た。材料を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０×４０ｍｍ×１５ｕｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：３２％～５２％、１０分）によって精製して、紫色の固体を得、これを分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ Ｃ１８ １５０×２５×１０ｕｍ；移動相：［水（０．２２５％ＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：２７％～５７％、１０分）によって再び精製して、化合物２５０ｍｇを紫色の固体として得た。次いで、この化合物を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｓｈｉｍ－ｐａｃｋ Ｃ１８ １５０×２５×１０ｕｍ；移動相：［水（０．２２５％ＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：３３％～５７％、１１分）によって精製し、凍結乾燥させて、表題化合物（５０ｍｇ、収率１％）を紫色の固体として得た。^１ＨＮＭＲ： （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ １０．２３ （ｓ， １Ｈ）， ８．６３ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．９２ － ７．７９ （ｍ， ２Ｈ）， ７．６１ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．１５ （ｔ， Ｊ ＝ ８．４０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ６．５０ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ４．７９ （ｄ， Ｊ ＝ ６．００ Ｈｚ， ２Ｈ）。

実施例８：Ｎ－（４－（１，２，４，５－テトラジン－３－イル）ベンジル）－４－フルオロ－Ｎ－メチルベンズアミド（化合物７’）の合成

Ｎ－（４－シアノベンジル）－４－フルオロ－Ｎ－メチルベンズアミド（２．５０ｇ、９．３２ｍｍｏｌ）、メタンイミドアミド酢酸塩（９．７０ｇ、９３．２ｍｍｏｌ）、及びＤＭＦ（１１．０ｍＬ）を一口フラスコに投入した。この溶液に、Ｚｎ（ＯＴｆ）_２・Ｈ_２Ｏ（１．７８ｇ、４．６６ｍｍｏｌ、０．５０当量）及びＮＨ_２ＮＨ_２・Ｈ_２Ｏ（２３．３ｇ、４６６ｍｍｏｌ、２２．６ｍＬ）を添加した。混合物をＮ_２雰囲気下、３０℃で１２時間撹拌した。反応液を２０℃に冷却した。１００ｍＬの水中のＮａＮＯ_２（１２．９ｇ、１８６ｍｍｏｌ）を溶液に０℃でゆっくりと添加し、続いて１Ｍ ＨＣｌをゆっくりと添加すると、この間に溶液の色が明るい赤色に変化し、０℃でガスが放散した。ガス放散が止み、ｐＨ値が３となるまで１Ｍ ＨＣｌの添加を継続した。混合物をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）で抽出した。有機相をブライン（３００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０×４０ｍｍ×１５ｕｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：４０％～５０％、１０分）で精製して、紫色の固体３００ｍｇを得、これを分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ Ｃ１８ ７５×３０ｍｍ×３ｕｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：４０％～５０％、７分）によって再び精製して、表題化合物（５０ｍｇ、収率２％）を赤色の固体として得た。^１ＨＮＭＲ： （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ １０．２４ （ｓ， １Ｈ）， ８．６５ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．７２ － ７．３６ （ｍ， ４Ｈ）， ７．１２ （ｂｒ ｓ， ２Ｈ）， ４．９５ － ４．５８ （ｍ， ２Ｈ）， ３．１８ － ２．９２ （ｍ， ３Ｈ）。

実施例９：３－（４－（（２－フルオロエトキシ）メチル）フェニル）－１，２，４，５－テトラジン（化合物８’）の合成
４－（（２－フルオロエトキシ）メチル）ベンゾニトリルの調製

２－フルオロエタノール（７１８ｍｇ、１１．２ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（５．０ｍＬ）中のＮａＨ（８１６ｍｇ、２０．４ｍｍｏｌ、純度６０．０％）の懸濁液に０℃でゆっくりと添加し、次いで２５℃に温めた。水素放散が止んだ後、４－（ヒドロキシメチル）ベンゾニトリル（２．００ｇ、１０．２ｍｍｏｌ）を滴加した。反応混合物を２５℃で４時間撹拌した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、石油エーテル：酢酸エチル＝２０：１～１０：１）によって精製して、表題化合物（１．００ｇ、収率５５％）を白色の固体として得た。^１ＨＮＭＲ： （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ７．５６ （ｄ， Ｊ ＝ ８．２５ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．３９ （ｄ， Ｊ ＝ ８．００ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．５８ － ４．６２ （ｍ， １Ｈ）， ４．５８ （ｓ， ２Ｈ）， ４．４６ － ４．５０ （ｍ， １Ｈ）， ３．７１ － ３．７６ （ｍ， １Ｈ）， ３．６４ － ３．６８ （ｍ， １Ｈ）。

３－（４－（（２－フルオロエトキシ）メチル）フェニル）－１，２，４，５－テトラジン（化合物８’）の調製

４－（（２－フルオロエトキシ）メチル）ベンゾニトリル（０．５０ｇ、２．７９ｍｍｏｌ）、メタンイミドアミド酢酸塩（２．９０ｇ、２７．９ｍｍｏｌ）、Ｎ_２Ｈ_４・Ｈ_２Ｏ（７．１３ｇ、１３９ｍｍｏｌ、６．９２ｍＬ）、及びＮｉ（ＯＴｆ）_２（４９７ｍｇ、１．４０ｍｍｏｌ）の混合物を２５℃で１２時間撹拌した。Ｈ_２Ｏ（５．００ｍＬ）中のＮａＮＯ_２（３．８５ｇ、５５．８ｍｍｏｌ）を溶液にゆっくりと添加し、続いて１Ｍ ＨＣｌをゆっくりと添加すると、この間に溶液の色が明るい赤色に変化し、ガスが放散した。ガス放散が止み、ｐＨ値が３となるまで１Ｍ ＨＣｌの添加を継続した。生成物を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ Ｍａｘ－ＲＰ ２５０×５０ｍｍ×１０ｕｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１５％～５０％、２７ ＭＩＮ；３０％分）によって精製して、表題化合物（７０．０ｍｇ、収率１１％）を赤色の固体として得た。ＬＣＭＳ： （ＥＳＩ） ｍ／ｚ ＝ ２３５．０ ［Ｍ＋Ｈ］．^１ＨＮＭＲ： （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ １０．２３ （ｓ， １Ｈ）， ８．６４ （ｄ， Ｊ ＝ ８．３８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．６２ （ｄ， Ｊ ＝ ８．３８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．７４ （ｓ， ２Ｈ）， ４．７０ － ４．７３ （ｍ， １Ｈ）， ４．５７ － ４．６１ （ｍ， １Ｈ）， ３．８４ － ３．８８ （ｍ， １Ｈ）， ３．７７ － ３．８０ （ｍ， １Ｈ）。

実施例１０：Ｍａｌａｔ１ ＡＳＯ－ＴＣＯの合成

５’－ヘキシルアミノオリゴをホウ酸緩衝液（１００ｍＭ、ｐＨ＝８．５）に、５０～１００ｍｇ／ｍｌの濃度となるように溶解させた。この溶液に、等体積のＤＭＦに溶解させたＴＣＯ－ＰＮＢ（４当量、Ｃｌｉｃｋ Ｃｈｅｍ Ｔｏｏｌｓ：１１９２）を添加した（ＴＣＯ－ＮＨＳ（ＣＣＴ １０１６）をＴＣＯ－ＰＮＢの代用とすることができ、等体積のＤＭＦに溶解させた５～６当量（すなわち、最終溶液は１：１有機物：Ａｑである）を用いる）。混合物を室温で３０分間撹拌した。混合物を水（８ｍＬ）で希釈し、０．２ミクロンＰＴＦＥシリンジフィルターに通して濾過した。材料を、直線勾配（Ａ：１００ｍＭ ＮＨ_４ＯＡｃ／３０％ＭｅＣＮ、Ｂ：１００ｍＭ ＮＨ_４ＯＡｃ／１．５Ｍ ＮａＢｒ／３０％ＭｅＣＮ）を使用したＳＡＸ－ＨＰＬＣによって精製した。生成物画分をプールし、回転蒸発器（浴温＞２５℃）を使用してＭｅＣＮを除去した。水溶液を５ｇ Ｃ－１８ ＳＰＥカラムにロードし、その後、１ｍ ＮａＣｌ、続いて水で洗浄し、脱塩生成物を３０ｍｌの１：１ ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏで溶出した。得られた溶液を凍結乾燥によって濃縮して、白色の粉末を得た。

実施例１１：インビトロ特性評価
アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）プレターゲッティングのモデルとして、ホスホロチオエート骨格Ｍａｌａｔ－１ ＡＳＯを二官能性ＴＣＯ－リンカーによりその５’末端上にコンジュゲートした（ＡＳＯ－ＴＣＯ）。Ｍａｌａｔ－１ ＡＳＯは、

であり、ここで、太字の核酸塩基は２’－ＭＯＥであり、標準フォントの核酸塩基はＤＮＡであり（すなわち、糖２’位はＨである）、下線を引かれた残基は、ホスホジエステル結合を有し、その他のものは、ホスホロチオエート骨格を有する。次に、細胞内のＡＳＯ－ＴＣＯ取り込みを、テトラジン（Ｔｚ）－Ｃｙ５フルオロフォアとのインキュベーションにより、共焦点顕微鏡法によって可視化した。具体的には、ＨｅＬａ細胞をＭａｌａｔ１ ＡＳＯ、Ｍａｌａｔ１ ＡＳＯ－トランスシクロオクテン（ＴＣＯ）、またはＭａｌａｔ１ ＡＳＯ－ＰＥＧ_４－ＴＣＯのいずれかと共に３７℃で２４時間インキュベートした。次いで、細胞を４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）中に固定し、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中の０．１％Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標） Ｘ－１００で透過処理し、テトラジン－Ｃｙ５を使用して染色した。テトラジンは、ＡＳＯコンジュゲート上のＴＣＯと共有結合反応を示したが、ＡＳＯ単独の存在下では結合を示さなかった（図２）。これらのデータは、ＡＳＯ－ＴＣＯコンジュゲートがエンドソーム経路によって細胞に取り込まれ（データは図示されず）、テトラジン部分に対して反応性のままであることを示す。

プレターゲッティングは２成分系であるため、ｃｎｓＰＥＴ－ＭＰＯモデリング（Ｚｈａｎｇ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．（２０１８）Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ６１（８）：３２９６－３３０８）に基づいて、^１８Ｆ－ＴｚをＣＮＳ透過性となるように開発した。リガンドの非放射性類似体をインビトロで試験すると、これは有利な脳及び血漿中タンパク質結合を表し（それぞれ５１％及び６９％未結合）、透過性のＭＤＣＫ－Ｐ－ｇｐ（１．７１）及びＭＤＣＫ－ＢＣＲＰ（０．５１）細胞モデルにおける排出比（ｅｆｆｌｕｘ ｒａｔｉｏ）に基づいて脳透過性であると予測された。^１８Ｆ－Ｔｚリガンドの放射性合成は、高い放射化学的純度（ＲＣＰ）（＞９９％）及びモル放射能（４２００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）をもたらした。その後、ナイーブマウスにおいて動的ＰＥＴ／ＣＴによって放射性トレーサーを評価すると、ＣＮＳプレターゲット撮像剤としての効果的使用を示唆する、脳内取り込み（注射後（Ｐ．Ｉ．）１０分までに１．７±０．９％ＩＤ）及びクリアランスが示された。

実施例１２：インビボ撮像
次いで、プレターゲッティング戦略に向けた当該２つの成分をプレターゲット撮像研究のためにインビボで一緒に合わせた（図３）。

ラットに、Ｍａｌａｔ１ ＡＳＯ－ＴＣＯ髄腔内（Ｉ．Ｔ．）投与し、２４時間後、^１８Ｆ－Ｔｚを静脈内（Ｉ．Ｖ．）から与えた。次いで、それらをＰＥＴ／ＣＴによって注射後（ｐ．ｉ．）７５～９０で撮像した。画像は、ＡＳＯ－ＴＣＯで処置されたラットにおける脳及び脊髄内のトレーサーの特異的取り込みを示す（図４）。

同じ取り込みは、^１８Ｆ－Ｔｚ放射性トレーサーのみを与えたラットでは見られない。ＲＯＩから導出された脳対心臓及び脊椎対心臓比（中央）は、ＡＳＯ－ＴＣＯで処置されたラットにおいて、トレーサーのみを与えた対照ラットよりも有意に高かった（Ｐ＜０．００５）。

撮像直後に、脳を切除し、切片化し、蛍光体プレートに曝露した（図５）。オートラジオグラフィーにおいて、髄腔内投与されたＡＳＯに特有の分布パターンが示された一方で、対照脳ではそれは示されなかった（図６）。ＡＳＯ－ＴＣＯでインビボ処理された組織を使用したオートラジオグラフィー研究において、放射性トレーサーシグナルが過剰のコールドテトラジンリガンドにより遮断され得ることが示された。これは、観察されたＰＥＴシグナルが、ＴＣＯ標識ＡＳＯとＴｚ標識放射性リガンドとの間のインビボクリックライゲーションに起因することを示唆する。

現行のＡＳＯ撮像は、より長寿命の放射性同位体による直接標識に依存するため、本技法は、患者に対する低い放射線被爆量を維持しながらインビボでの長期にわたる時間的分布を明らかにすることによって、ＡＳＯに基づく新たな療法の開発を可能にする。

実施例１３：^１８Ｆ－５３７－Ｔｚを使用したＭａｌａｔ１ ＡＳＯ－ＴＣＯラットの動的スキャン
^１８Ｆ－５３７－Ｔｚを３ステップ放射性合成によって生成し、１０％ ＥｔＯＨ：９０％ ０．９％生理食塩液中で再製剤化した。典型的には、全体的合成手順は、ボンバードメント終了時（ｅｎｄ ｏｆ ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ）（ＥＯＢ）から１２０分内で遂行した。ＥＯＳに１４４±４２ＧＢｑ／μｍｏｌのモル放射能（Ａ_ｍ）及び高い放射化学的純度（＞９７％）を伴って、最大５００ＭＢｑの^１８Ｆ－５３７－Ｔｚが合成された。^１８Ｆ－５３７－Ｔｚ線量の同一性及び純度（化学的及び放射化学的）をＨＰＬＣ分析によって決定した。注入された^１８Ｆ－５３７－Ｔｚの平均放射能は１１．０９±２．３６ＭＢｑであり、注入された^１８Ｆ－５３７－Ｔｚの平均質量は０．０４±０．０２μｇであった。

ベースライン及びプレターゲットスキャンにおけるトレーサー^１８Ｆ－５３７－Ｔｚの親化合物割合を決定するために、動脈サンプリングを用いて動的ＰＥＴスキャンを実施した。トレーサーの注射の５分前に非放射性化合物を静脈内投与した単一のラットにおいて、１ｍｇ／ｋｇの非放射性化合物^１９Ｆ－５３７－Ｔｚを有する同種ブロックと比較したベースライン撮像を実施した。次に、ＡＳＯ－ＴＣＯ投与なしのベースラインにて３匹の追加のラットを撮像した。最後の３匹のラットにはプレターゲットスキャンを行い、３０μＬ生理食塩水中０．５６ｍｇのＭａｌａｔ１ ＡＳＯ－ＴＣＯを髄腔内投与し、続いて４０μＬ生理食塩水でフラッシュした。ＡＳＯの注射から２４時間後、^１８Ｆ－５３７－Ｔｚを静脈内注射し、動的ＰＥＴ撮像を実施した。

入力関数として代謝物で補正した血漿中放射能を使用して、トレーサー速度論モデリングを可能にするために代謝物分析法を開発した。全ての試料についての血漿中放射能抽出効率を決定し、これは１：１の血漿：ＡＣＮを使用して満足のいくものであった。注入した各血漿中抽出物について、注入した放射能のＨＰＬＣカラムからの回収率を決定した。各血漿中抽出物の注入について、注入した放射能のＨＰＬＣカラムからの良好な回収率が得られた。３つのベースラインスキャンについて、血漿中に見出された総放射能のうちの親化合物割合は、５分時点で８６～９０％であり、この割合は、^１８Ｆ－５３７－Ｔｚ注射後６０分時点で６６～７４％に減少した。親化合物割合は、１ｍｇ／ｋｇで^１８Ｆ－５３７－Ｔｚを投与されたラットにおいて若干低減された（トレーサー注射後５分時点で、血漿中に見出された総放射能のうちの親化合物割合は８２％であり、６０分時点で６２％に減少した）。親化合物割合はまた、ＡＳＯ－ＴＣＯを髄腔内投与されたラットと同等であった（トレーサー注射後５分時点で、血漿中に見出された総放射能のうちの親化合物割合は８８％～８９％であり、６０分時点で６６％～６９％に減少した）。

ラット２における、ベースライン時及び１ｍｇ／ｋｇの未標識^１８Ｆ－５３７－Ｔｚの静脈内投与に次ぐ^１８Ｆ－５３７－Ｔｚの脳下位領域分布を示す０～６０分の時間放射能曲線（ＴＡＣ）が、図９に例示される。ベースラインスキャン及び投与後スキャンの両方の脳内で放射能の取り込みが観察された。ＴＡＣにおいて、^１８Ｆ－５３７－Ｔｚが初期ピーク取り込み及び組織ウォッシュアウトを伴って脳に容易に進入することが示され、これは堅牢な速度論的パラメータ推定を促進すると思われる。４０～６０分のスキャンからの平均脳領域別ＳＵＶは、ベースライン及び同種ブロックスキャンにおいて類似していた（表１）

ベースライン時にスキャンした４匹のラット及びＡＳＯ－ＴＣＯの髄腔内投与から２４時間後にスキャンした３匹のラットにおける^１８Ｆ－５３７－Ｔｚの脳内分布を示す、０～６０分の放射能を合計したＰＥＴ／ＣＴ画像が、図１０に例示される。全てのＡＳＯ－ＴＣＯ投与ラットにおいて放射能の脳内取り込みの増加が観察された。ベースライン時にスキャンしたラットと比較して、ＡＳＯ－ＴＣＯで前処置されたラットの脳内においてＳＵＶ（３０～６０分）の約２５％の増加があった（表２及び３）。

ベースライン及び投与後群におけるラットの全脳ＲＯＩ内の取り込みに関するＴＡＣを、図１１において比較のために同じグラフ上にプロットした。

ラット上部脊椎内の^１８Ｆ－５３７－Ｔｚ取り込みに関する静的ＰＥＴ／ＣＴ画像が、図１２に例示される。脊椎ＲＯＩ及びＣＳＦ ＲＯＩは、３０～６０分時点でのＳＵＶ測定基準を生成するように定義した（脊椎ＲＯＩは、椎骨のセグメンテーション（ＣＳＦのセグメンテーションを補助するために使用される）であり、ＣＳＦ ＲＯＩは、脊椎内の全てであった）。ベースライン及びＡＳＯ－ＴＣＯ投与後のラットを比較したとき、脊椎及びＣＳＦ内で放射能取り込みの１０％及び１５％の増加があった（表４）。

結論
^１８Ｆ－５３７－Ｔｚは脳に容易に進入し、このうち取り込みは視床／視床下部内で最も高く、皮質領域内で最も低い。ＰＥＴスキャンの２４時間前のＡＳＯ－ＴＣＯの髄腔内投与は、ベースライン時にスキャンしたラットと比較して、ＡＳＯ－ＴＣＯで前処置されたラットの脳内においてＳＵＶ（３０～６０分）の約２５％をもたらした。

実施例１４：ＮＨＰにおけるプレターゲットＰＥＴ撮像
プレターゲッティングＰＥＴトレーサー^１８Ｆ－５３７－Ｔｚを、ベースラインスキャン及び同種ブロッキングスキャンを含めて、カニクイザルにおいて試験した。次いで、サルに、Ｍａｌａｔ１ ＡＳＯ－ＴＣＯを投与し、２４時間及び１６８時間で再びスキャンした。インビボでＡＳＯに結合しているトレーサーの形跡が脳及び脊髄内で見られた。

方法
非ヒト霊長類におけるトレーサーの有効性を評価するために、動脈入力関数を用いた動的ＰＥＴスキャン（０～１２０分間）を、^１８Ｆ－５３７－Ｔｚ（５．７±０．７ｍＣｉ、０．１４±０．１２μｇ）を使用して雌性カニクイザルにおいて実施した。動脈血漿中のトレーサーの親化合物割合を、アセトニトリルを使用してトレーサーを抽出し、ラジオＨＰＬＣによって分析することによって決定した。ベースラインスキャンを最初に実施して、脳内のトレーサー動態を測定した。次いで、Ｍａｌａｔ１ ＡＳＯ－ＴＣＯ（２．４ｍＬのａＣＳＦ中２０ｍｇ）を蛍光透視ガイド下で髄腔内注射し、イソフルラン麻酔下で^１８Ｆ－５３７－Ｔｚ ＰＥＴ／ＣＴ撮像を２４時間及び１６８時間で実施した。撮像データをカニクイザルの脳アトラスに共位置合わせし、関心下位領域内でのＴＡＣをそれらから導出した。各撮像セッションで、脊椎を捕捉するように視野（ＦＯＶ）を配向しながら静的ＰＥＴ／ＣＴスキャンを取得した。このスキャンは、トレーサーの注射後１３０～１６０分で行い、参照領域として筋肉を用いて、ＲＯＩを脊髄上に描出した。

結果
親化合物割合に関するデータは、トレーサーが撮像過程にわたって＞８０％インタクトであることを示す（図１３）。トレーサーについての血中動態は、３０分間にわたる取り込み及び急速クリアランスを示して、撮像に有利である。

ベースラインＰＥＴ／ＣＴスキャンは、脳内のトレーサーの良好な取り込みを示し、２時間のスキャンにわたって全ての領域内で比較的緩徐なクリアランスを伴った（図１４）。

サルにＭａｌａｔ１ ＡＳＯ－ＴＣＯを髄腔内注射した。２４時間の間隔をあけた後、^１８Ｆ－５３７－Ｔｚを静脈内投与し、ＰＥＴ／ＣＴによってスキャンした。次いで、ＡＳＯの注射から７日後、サルに^１８Ｆ－５３７－Ｔｚを再び投与し、ＰＥＴ／ＣＴによってスキャンした。ベースラインスキャンとＡＳＯ後スキャンとの間でＳＵＶ取り込みの有意差は何ら観察されない（ほとんどの下位領域で見られた傾向を表すために全脳ＲＯＩを提示する）（図１５）。しかしながら、ＴＡＣを正規化すると、ベースラインにおけるトレーサーがより迅速に消失する一方で、ＡＳＯ投薬後のスキャンがより緩徐に消失し、９０分までにプラトーに達するようであることが明らかとなる（図１６）。この挙動は、Ｔｚ－トレーサーが、ＴＣＯと反応するときに領域内に蓄積する一方で、未結合のトレーサーが消失することにより説明される。最終時点までに、脳内のベースラインスキャンとプレターゲットスキャンとの間でＳＵＶの約１０％の差異がある。

クリック反応を経て、組織内に蓄積しているトレーサーの形跡もまた脊椎内で見て取れる。脊髄内でのＳＵＶを筋肉内でのそれに正規化すると、ＡＳＯ後２４時間でのスキャンにおいて、脊椎は、ベースラインスキャンにおけるよりも約２５％高いシグナルを示す（図１７）。

結論
トレーサー^１８Ｆ－５３７－Ｔｚは、極めて良好な脳内取り込み、及び有利な血漿中クリアランス動態を示す。このトレーサーがインビボでＭａｌａｔ１ ＡＳＯ－ＴＣＯに結合することを示唆する、特定のシグナルの証拠が示される。

他の実施形態
本発明は、発明を実施するための形態に関連して説明されたが、上記の説明は例示説明を意図するものであり、添付の特許請求によって定義される本発明の範囲を限定することは意図されない。他の態様、利点、及び変更形態が、添付の特許請求の範囲内にある。

Claims (67)

1. トランス－シクロオクテンに連結されたアンチセンスオリゴヌクレオチド。
2. 前記トランス－シクロオクテンが、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドに直接連結されている、請求項１に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
3. 前記トランス－シクロオクテンが、リンカーを介して前記アンチセンスオリゴヌクレオチドに連結されている、請求項１に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
4. 前記リンカーが、アルキレンリンカーである、請求項３に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
5. 前記トランス－シクロオクテンが、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドの５’末端で前記アンチセンスオリゴヌクレオチドに連結されている、請求項１～４のいずれか１項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
6. 前記トランス－シクロオクテンが、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドの３’末端で前記アンチセンスオリゴヌクレオチドに連結されている、請求項１～４のいずれか１項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
7. 前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、ホスホロチオエート結合を介して前記リンカーに連結されている、請求項４～６のいずれか１項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
8. 前記トランス－シクロオクテンに連結された前記アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）が、式Ｉの構造、
   

   

   またはその塩を有し、式中、
   Ｘ^１が、ＣＨ_２またはＯであり、
   Ｘ^２が、（ＣＨ_２）_ｔであり、
   Ｘ^３が、Ｏ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、またはＯＣ（Ｏ）ＮＲ^ａ１であり、
   Ｒ^ａ１が、Ｈ、Ｃ_１－６アルキル、またはＣ_１－６ハロアルキルであり、
   Ｒ^ａ２及びＲ^ａ３が、各々独立して、ＨまたはＣ_１－６アルキルであり、
   ｔが、０または１であり、
   ｍが、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である、
   請求項１～５及び７のいずれか１項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
9. 前記トランス－シクロオクテンに連結された前記アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）が、式Ｉ’の構造、
   

   

   またはその塩を有し、式中、
   Ｘ^１が、ＣＨ_２またはＯであり、
   Ｘ^２が、（ＣＨ_２）_ｔであり、
   Ｘ^３が、Ｏ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、またはＯＣ（Ｏ）ＮＲ^ａ１であり、
   Ｒ^ａ１が、Ｈ、Ｃ_１－６アルキル、またはＣ_１－６ハロアルキルであり、
   Ｒ^ａ２及びＲ^ａ３が、各々独立して、ＨまたはＣ_１－６アルキルであり、
   ｔが、０または１であり、
   ｍが、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である、
   請求項１～４、６、及び７のいずれか１項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
10. Ｘ^１が、ＣＨ_２である、請求項８または９に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
11. Ｘ^１が、Ｏである、請求項８または９に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
12. ｔが、０である、請求項８～１１のいずれか１項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
13. ｔが、１である、請求項８～１１のいずれか１項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
14. Ｘ^３が、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ^ａ１である、請求項８～１３のいずれか１項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
15. 前記トランス－シクロオクテンに連結された前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、式Ｉａもしくは式Ｉｂの構造、
    

    

    またはその塩を有する、請求項８に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
16. 前記トランス－シクロオクテンに連結された前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、式Ｉ’ａもしくは式Ｉ’ｂの構造、
    

    

    またはその塩を有する、請求項９に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
17. Ｒ^ａ１が、Ｈである、請求項８～１６のいずれか１項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
18. Ｒ^ａ２が、Ｈである、請求項８～１７のいずれか１項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
19. Ｒ^ａ３が、Ｈである、請求項８～１７のいずれか１項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
20. Ｒ^ａ２及びＲ^ａ３が、Ｈである、請求項７～１７のいずれか１項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
21. 前記トランス－シクロオクテンに連結された前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、式Ｉｃもしくは式Ｉｄの構造、
    

    

    またはその塩を有する、請求項８に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
22. 前記トランス－シクロオクテンに連結された前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、式Ｉ’ｃもしくは式Ｉ’ｄの構造、
    

    

    またはその塩を有する、請求項９に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
23. ｍが、１、２、３、４、５、または６である、請求項８～２２のいずれか１項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
24. ｍが、６である、請求項８～２３のいずれか１項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
25. 前記トランス－シクロオクテンに連結された前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、以下の構造、
    

    

    またはその塩を有する、請求項８に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
26. 前記トランス－シクロオクテンに連結された前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、以下の構造、
    

    

    またはその塩を有する、請求項９に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
27. 式ＩＩの化合物、
    

    

    またはその塩であって、式中、
    Ｚが、^１８Ｆ、^１１Ｃ部分、またはキレート化^６８Ｇａであり、
    Ｙ^１、Ｙ^２、Ｙ^３、及びＹ^４が、各々独立して、ＣＨまたはＮであり、
    Ｌが、Ｃ（Ｏ）ＮＲ^ｂ４、ＮＲ^ｂ４Ｃ（Ｏ）、Ｏ、ＯＣＨ_２、ＮＲ^ｂ５、またはＮＲ^ｂ５ＣＨ_２であり、
    Ｙ^５が、結合、５～６員のヘテロアリールまたはフェニルであり、
    Ｒ^ｂ１が、Ｈ、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、ピリジニル、またはピリミジニルであり、
    Ｒ^ｂ２、Ｒ^ｂ３、Ｒ^ｂ４、及びＲ^ｂ５が、各々独立して、ＨまたはＣ_１－６アルキルであり、
    ｎが、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である、
    前記化合物、またはその塩。
28. Ｙ^５が、結合である、請求項２７に記載の化合物。
29. Ｙ^５が、５～６員のヘテロアリールである、請求項２７に記載の化合物。
30. Ｙ^５が、５員のヘテロアリールである、請求項２７に記載の化合物。
31. Ｙ^５が、フェニルである、請求項２７に記載の化合物。
32. 式ＩＩａ、式ＩＩｂ、もしくは式ＩＩｃ、
    

    

    を有する、請求項２７に記載の化合物、またはその塩。
33. Ｌが、Ｃ（Ｏ）ＮＲ^ｂ４である、請求項２７～３２のいずれか１項に記載の化合物。
34. Ｌが、ＮＲ^ｂ４Ｃ（Ｏ）である、請求項２７～３２のいずれか１項に記載の化合物。
35. Ｌが、Ｏである、請求項２７～３２のいずれか１項に記載の化合物。
36. Ｌが、ＯＣＨ_２である、請求項２７～３２のいずれか１項に記載の化合物。
37. Ｌが、ＮＲ^ｂ５ＣＨ_２である、請求項２７～３２のいずれか１項に記載の化合物。
38. 式ＩＩｄ、式ＩＩｅ、式ＩＩｆ、もしくは式ＩＩｇ、
    

    

    

    を有する、請求項２７に記載の化合物、またはその塩。
39. Ｒ^ｂ１が、ＨまたはＣ_１－６アルキルである、請求項２７～３８のいずれか１項に記載の化合物。
40. Ｒ^ｂ１が、Ｈである、請求項２７～３８のいずれか１項に記載の化合物。
41. Ｒ^ｂ２が、Ｈである、請求項２７～４０のいずれか１項に記載の化合物。
42. Ｒ^ｂ３が、Ｈである、請求項２７～４０のいずれか１項に記載の化合物。
43. Ｒ^ｂ２及びＲ^ｂ３が、Ｈである、請求項２７～４０のいずれか１項に記載の化合物。
44. Ｒ^ｂ４が、Ｈである、請求項２７～４３のいずれか１項に記載の化合物。
45. Ｒ^ｂ５が、Ｈである、請求項２７～４４のいずれか１項に記載の化合物。
46. Ｒ^ｂ５が、Ｃ_１－６アルキルである、請求項２７～４４のいずれか１項に記載の化合物。
47. ｎが、０、１、２、３、または４である、請求項２７～４６のいずれか１項に記載の化合物。
48. ｎが、２である、請求項２７～４６のいずれか１項に記載の化合物。
49. ｎが、０である、請求項２７～４６のいずれか１項に記載の化合物。
50. 前記化合物が、
    

    

    

    

    から選択される、請求項２７に記載の化合物、またはその塩。
51. 請求項１～２６のいずれか１項に記載のトランス－シクロオクテンに連結されたアンチセンスオリゴヌクレオチド、または請求項２７～５０のいずれか１項に記載の化合物を含む、薬学的組成物。
52. 請求項５０に記載の化合物１の調製プロセスであって、前記プロセスが、
    

    

    を、
    

    

    と反応させて、化合物１をもたらすことを含む、前記プロセス。
53. 化合物３ａが、
    

    

    を還元剤の存在下で還元して、化合物３ａをもたらすことを含むプロセスによって調製される、請求項５２に記載のプロセス。
54. 化合物２ａが、
    

    

    を^１８Ｆ^－及びＫ_２２２／Ｋ_２ＣＯ_３の存在下で変換することを含むプロセスによって調製される、請求項５３に記載のプロセス。
55. 対象におけるアンチセンスオリゴヌクレオチドの分布の決定方法であって、前記方法が、順番に、
    （ｉ）トランス－シクロオクテンに連結されたアンチセンスオリゴヌクレオチドを前記対象に投与することと、
    （ｉｉ）放射性標識テトラジンを前記対象に投与することと、
    （ｉｉｉ）前記対象における前記アンチセンスオリゴヌクレオチドの前記分布を撮像することと、
    を含む、前記方法。
56. 対象の脳及び／または脊髄内のアンチセンスオリゴヌクレオチドの分布の決定方法であって、前記方法が、順番に、
    （ｉ）トランス－シクロオクテンに連結されたアンチセンスオリゴヌクレオチドを前記対象に投与することと、
    （ｉｉ）中枢神経系透過性の放射性標識テトラジンを前記対象に投与することと、
    （ｉｉｉ）前記対象の前記脳及び／または前記脊髄内の前記アンチセンスオリゴヌクレオチドの前記分布を撮像することと、
    を含む、前記方法。
57. 前記対象の脳及び／または脊髄内のアンチセンスオリゴヌクレオチドの濃度の決定方法であって、前記方法が、順番に、
    （ｉ）トランス－シクロオクテンに連結されたアンチセンスオリゴヌクレオチドを前記対象に投与することと、
    （ｉｉ）中枢神経系透過性の放射性標識テトラジンを前記対象に投与することと、
    （ｉｉｉ）前記対象の前記脳及び／または前記脊髄内の前記アンチセンスオリゴヌクレオチドの前記濃度を評価することと、
    を含む、前記方法。
58. 前記テトラジンが、フッ素－１８、炭素－１１、及びガリウム－６８からなる群から選択される放射性標識で放射標識されている、請求項５５～５７のいずれか１項に記載の方法。
59. 前記テトラジンが、フッ素－１８で放射標識されている、請求項５５～５７のいずれか１項に記載の方法。
60. 前記テトラジンが、請求項２２～４５のいずれか１項に記載の化合物である、請求項５５～５９のいずれか１項に記載の方法。
61. トランス－シクロオクテンに連結された前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、請求項２～２１のいずれか１項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドである、請求項５５～６０のいずれか１項に記載の方法。
62. トランス－シクロオクテンに連結された前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、髄腔内注射によって投与される、請求項５５～６１のいずれか１項に記載の方法。
63. 前記放射性標識テトラジンが、静脈内注射によって投与される、請求項５５～６２のいずれか１項に記載の方法。
64. 前記放射性標識テトラジンが、トランス－シクロオクテンに連結された前記アンチセンスオリゴヌクレオチドの前記投与から約２４時間後に投与される、請求項５５～６３のいずれか１項に記載の方法。
65. 前記撮像が、ＰＥＴ／ＣＴによって実施される、請求項５５～６４のいずれか１項に記載の方法。
66. 前記撮像が、ＳＰＥＣＴによって実施される、請求項５５～６４のいずれか１項に記載の方法。
67. 前記対象が、ヒトである、請求項５５～６６のいずれか１項に記載の方法。

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