JP2022542301A - リラキシン類似体およびその使用方法 - Google Patents

リラキシン類似体およびその使用方法 Download PDF

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Abstract

天然のヒトＲＬＮと比較して半減期を延長させる修飾、ＲＸＦＰ１受容体への選択性を維持する修飾、ならびにインビトロおよびインビボで安定性を提供して、創薬可能性を改善し、免疫原性を低下させる修飾を含む、リラキシン（ＲＬＮ）類似体が開示される。本明細書に記載のＲＬＮ類似体のうちの１つ以上を薬学的に許容される担体に含む薬学的組成物も開示される。特に心血管、肺、および／または腎臓の状態、疾患、または障害を治療するために、ＲＬＮ類似体を作製および使用する方法も開示される。

Description

本開示は、概して、生物学および医学に関するものであり、より具体的には、リラキシン（ＲＬＮ）類似体、特に、ＲＸＦＰ１受容体などのＲＬＮ／インスリン様ファミリーペプチド（ＲＸＦＰ）受容体に結合することでＲＸＦＰ受容体アゴニストとして機能することができる長時間作用型の一本鎖ＲＬＮ類似体に関する。本開示はさらに、それを含む組成物、ならびに心血管、肺、および／または腎臓の状態、疾患、または障害の治療におけるそれらの使用に関する。
リラキシン（ＲＬＮ）は、インスリンスーパーファミリーの一部であり、ヒトにおいては、構造類似性は高いが配列相同性が低い７つのペプチド、ＲＬＮ１（Ｈ１ＲＬＸ、ＲＬＸＨ１、またはＨ１）、ＲＬＮ２（Ｈ２ＲＬＸ、ＲＬＸＨ２、またはＨ２）、ＲＬＮ３（ＲＸＮ３、ＺＩＮＳ４、またはＨ３）、インスリン様（ＩＮＳＬ）ペプチド３（ＩＮＳＬ３）、ＩＮＳＬ４、ＩＮＳＬ５、およびＩＮＳＬ６を含む。ここで特に興味深いものはＲＬＮ２であり、これは、２つのジスルフィド結合により連結した、それぞれ２４個のアミノ酸および２９個のアミノ酸の２つのペプチド鎖（Ａ鎖およびＢ鎖）のヘテロ二量体であり、Ａ鎖はさらに、１個の分子内ジスルフィド結合を有する（Ｓｃｈｗａｂｅ＆ＭｃＤｏｎａｌｄ（１９７７）Ｓｃｉｅｎｃｅ １９７：９１４－９１５参照）。ＲＬＮ２は、その前駆体ホルモンであるプロリラキシンからＣペプチドを切断することにより、それから産生される。
生理学的には、ＲＬＮ２は、最初は妊娠ホルモンとされていたものの、血管拡張作用、抗線維化作用、血管新生作用など、心血管、肝臓、神経、膵臓、肺、および腎臓の適応を調節する多種多様な機能を呈する。ＲＬＮ２シグナル伝達は、２つの異なるクラスのＧタンパク質共役型受容体（ＧＰＣＲ）、つまり、現在ではそれぞれＲＸＦＰ１受容体およびＲＸＦＰ２受容体と称される、ロイシンリッチリピートを含むＧＰＣＲであるＬＧＲ７およびＬＧＲ８を介して発生する。このファミリーの他の２つの受容体には、ＲＸＦＰ３受容体およびＲＸＦＰ４受容体が含まれる。ＲＬＮ２は半減期（ｔ１／２）が短く、このことにより、ＲＬＮ２を治療剤として使用する場合に課題が提示される。実に、天然ＲＬＮ２のインビボでのｔ１／２は数分である。その結果、臨床医はＲＬＮ２を継続的な静脈内注入により投与することとなり、それにより、多くの場合、ＲＬＮ化合物を受ける個人に不便が生じ、有効性が短期となる。
ｔ１／２が改善されたＲＬＮ２類似体はある数存在する。例えば、国際特許出願公開第２０１８／１４８４１９号では、ｔ１／２を改善するために、リンカー、ポリマー、および／または薬物動態エンハンサーを結合させることができるパラアセチルフェニルアラニンなどの非天然アミノ酸残基を含む類似体が説明されている。国際特許出願公開第２０１８／１３８１７０号では、少なくとも１５アミノ酸のリンカーとｔ１／２を改善するための半減期延長部分とを有するＡ鎖とＢ鎖との融合物である類似体が説明されている。国際特許出願公開第２０１７／２０１３４０号では、ｔ１／２を改善するための可変軽鎖断片を有するＡ鎖とＢ鎖との融合物である類似体が説明されている。国際特許出願公開第２０１５／０６７７９１号では、ｔ１／２を改善するための担体連結プロドラッグである類似体、特にＰＥＧベースの担体が説明されている（追加のＰＥＧ連結類似体についてはＷＯ２０１２／０２４４５２も参照）。国際特許出願公開第２０１４／１０２１７９号では、ｔ１／２を改善するためのＩｇＧ２またはＩｇＧ４のＦｃ部分を有するＡ鎖とＢ鎖との融合物である類似体が説明されている。国際特許出願公開第２０１３／００４６０７号は、ｔ１／２を改善するための少なくとも５アミノ酸であるが１５アミノ酸未満のリンカーを有するＡ鎖とＢ鎖との融合物である類似体、またはｔ１／２を改善するための抗体のＦｃドメインを有するＡ鎖とＢ鎖との融合物である類似体が説明されている。
ＲＬＮの様々な生理学的役割の理解の深まりを考慮すると、ｔ１／２が改善された長時間作用型ＲＬＮ類似体が依然として必要とされている。
この必要性に対処するために、本開示はまず、ＲＸＦＰ１受容体において主要な活性を有する（すなわち、ＲＸＦＰ１受容体アゴニストとして作用する）一本鎖ＲＬＮ類似体を説明する。このようなＲＸＦＰ１受容体アゴニストには、アミノ末端（Ｎ末端）からカルボキシ末端（Ｃ末端）への基本構造
ＶＨＨ－Ｌ１－Ａ－Ｌ２－Ｂ、
ＶＨＨ－Ｌ１－Ｂ－Ｌ２－Ａ、
Ａ－Ｌ２－Ｂ－Ｌ１－ＶＨＨ、または
Ｂ－Ｌ２－Ａ－Ｌ１－ＶＨＨが含まれ、
ＶＨＨは、薬物動態エンハンサーとして作用することができる部分であり、ＡはＲＬＮ Ａ鎖であり、ＢはＲＬＮ Ｂ鎖であり、Ｌ１は第１のリンカーであり、Ｌ２は第２のリンカーである。
ある場合には、ＶＨＨ部分は、配列番号１０、１１、１２、または１３、特に、配列番号１０または１２のアミノ酸配列を有し得る。他の場合には、ＶＨＨ部分は、ＶＨＨ部分が配列番号１０、１１、１２、または１３のうちのいずれか１つに対して少なくとも約９０％～約９９％の配列相同性を有するアミノ酸配列を有するように（例えば、配列番号４５～６６を参照）、１つ以上の付加、欠失、挿入、または置換を有し得る。
ある場合には、Ａ鎖は、配列番号２、５、または８、特に、配列番号５のアミノ酸配列を有し得る。他の場合には、Ａ鎖は、Ａ鎖が配列番号２、５、または８のうちのいずれか１つに対して少なくとも約９０％～約９９％の配列相同性を有するアミノ酸配列を有するように、１つ以上の付加、欠失、挿入、または置換を有し得る。例えば、Ａ鎖は、配列番号５のｄｅｓ１～４であり得る。
ある場合には、Ｂ鎖は、配列番号３、６、または９、特に、配列番号６のアミノ酸配列を有し得る。他の場合には、Ｂ鎖は、Ｂ鎖が配列番号３、６、または９のうちのいずれか１つに対して少なくとも約９０％～約９９％の配列相同性を有するアミノ酸配列を有するように、１つ以上の付加、欠失、挿入、または置換を有し得る。例えば、Ｂ鎖は、配列番号６のｄｅｓ１であり得る。
ある場合には、Ｌ１は、（ＧＧＧＧＱ）ｎ（配列番号１４）、（ＧＧＧＱ）ｎ（配列番号１５）、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１６）、（ＰＧＰＱ）ｎ（配列番号１７）、または（ＰＧＰＡ）ｎ（配列番号１８）のアミノ酸配列を有することができ、ここで、ｎは、１～１０、特に、約５～約８である。他の場合には、Ｌ１は、配列番号１９、２０、または２１のアミノ酸配列を有し得る。さらに他の場合には、Ｌ１は、Ｌ１が配列番号１４～２１のうちのいずれか１つに対して少なくとも約９０％～約９９％の配列相同性を有するアミノ酸配列を有するように、１つ以上の付加、欠失、挿入、または置換を有し得る。
ある場合には、Ｌ２は、配列番号２２、２３、または６７のアミノ酸配列を有し得る。他の場合には、Ｌ２は、１つ以上の付加、欠失、挿入、または置換を有し得る。
ある特定の場合、本ＲＬＮ類似体は、配列番号１０、１１、１２、または１３のＶＨＨ、配列番号２、５、または８のＡ鎖、配列番号３、６、または９のＢ鎖、配列番号１９、２０、または２１のＬ１、配列番号２２、２３、または６７のＬ２を含むアミノ酸配列を有し得る。代替的に、本ＲＬＮ類似体は、配列番号１０、１１、１２、または１３のＶＨＨ、配列番号２、５、または８のＡ鎖、配列番号３、６、または９のＢ鎖、配列番号１９、２０、または２１のＬ１、配列番号２２、２３、または６７のＬ２を含むアミノ酸配列を含むアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列相同性を有するアミノ酸配列を有し得る。
特定の場合には、本ＲＬＮ類似体は、配列番号２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、または３９、特に、配列番号２６、２７、３０、３１、３４、または３５のアミノ酸配列を有し得る。代替的に、本ＲＬＮ類似体は、配列番号２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、または３９、特に、配列番号２６、２７、３０、３１、３４、または３５のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列相同性を有するアミノ酸配列を有し得る。
ある場合には、本ＲＬＮ類似体は、ＲＸＦＰ１受容体における結合親和性が、天然のヒトＲＬＮ２（配列番号５および６）の結合親和性に相当する。他の場合には、本ＲＬＮ類似体は、ＲＸＦＰ１受容体における結合親和性が、天然のヒトＲＬＮ２（配列番号５および６）の結合親和性よりも大きい。さらに他の場合には、本ＲＬＮ類似体は、ＲＸＦＰ１受容体における結合親和性が、天然のヒトＲＬＮ２（配列番号５および６）の結合親和性よりも小さい。
ある場合には、本ＲＬＮ類似体は、ｔ１／２が、天然のヒトＲＬＮ２（配列番号５および６）のｔ１／２よりも長く、これには、ヒトへの投与の場合、最大約２０日～約３０日長いことが含まれる。
上記の組成物は、代替的に、本明細書に記載のアミノ酸配列をコードする核酸配列、ならびに本明細書のＲＬＮ類似体を発現するための核酸配列を含むベクターおよび宿主細胞であり得る。
第二に、本明細書の少なくとも１つのＲＬＮ類似体またはその薬学的に許容される塩（例えば、トリフルオロ酢酸塩、酢酸塩、または塩酸塩）と、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物を説明する。ある場合には、薬学的に許容される担体は、例えば、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、クエン酸緩衝生理食塩水、またはヒスチジン緩衝生理食塩水などの緩衝液である。ある特定の場合には、緩衝液は、ヒスチジン、ヒスチジン緩衝液、またはヒスチジン緩衝生理食塩水である。他の場合には、本薬学的組成物は、担体、希釈剤、および／または賦形剤をさらに含み得る。
さらに、本薬学的組成物には、例えば、心血管、肺、および／または腎臓の状態、疾患、または障害における標準治療として使用される薬剤などの少なくとも１つの追加の治療薬が含まれ得る。ある場合には、少なくとも１つの追加の治療薬は、抗凝固剤、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）、ＡＲＢネプリライシン阻害剤（ＡＲＮＩ）、β遮断薬、利尿薬、ジギタリス、ジゴキシン、硝酸ヒドララジン／イソルビド（ｉｓｏｒｂｉｄｅ）、ミネラルコルチコイド受容体アンタゴニスト（ＭＲＡ、またはアルドステロンアンタゴニスト）、ナトリウム－グルコース共輸送体－２（ＳＧＬＴ２）阻害剤、スタチン、および／または抗血糖剤であり得る。
第三に、本明細書のＲＬＮ類似体を使用するための方法、特に、ＲＬＮ類似体を使用して、心血管、肺、および／または腎臓の状態、疾患、または障害を治療するための方法を説明する。本方法には、少なくとも、有効量の少なくとも１つの本明細書のＲＬＮ類似体またはその薬学的に許容される塩の投与を、それを必要とする個体に行うステップが含まれる。
ある場合には、本ＲＬＮ類似体は、例えば、筋肉内、静脈内、非経口、皮下、または経皮などの任意の標準的な投与経路を介して投与され得る。ある特定の場合、本ＲＬＮ類似体は、皮下（ＳＱ）、筋肉内（ＩＭ）、または静脈内（ＩＶ）投与される。特定の場合、本ＲＬＮ類似体は、個体にＳＱまたはＩＶで投与され得る。
同様に、ある場合には、本ＲＬＮ類似体は、毎日、隔日、週３回、週２回、週１回（すなわち、毎週）、隔週（すなわち、１週間おきに）、月１回（すなわち、毎月）、隔月（すなわち、１か月おきに）、またはさらには３か月おきに投与され得る。ある特定の場合、本ＲＬＮ類似体は、ＳＱで隔日に、ＳＱで週３回、ＳＱで週２回、ＳＱで週１回、ＳＱで１週間おきに、またはＳＱで月１回投与され得る。特定の場合、本ＲＬＮ類似体は、ＳＱで週１回（ＱＷ）投与される。
代替的に、本ＲＬＮ類似体は、個体にＩＶ投与され得る。上記のように、ＲＬＮ類似体は、毎日、隔日、週３回、週２回、週１回（すなわち、毎週）、隔週（すなわち、１週間おきに）、または毎月投与され得る。ある特定の場合、本ＲＬＮ類似体は、ＩＶで隔日に、ＩＶで週３回、ＩＶで週２回、ＩＶで週１回、ＩＶで１週間おきに、またはＩＶで月１回投与され得る。特定の場合、本ＲＬＮ類似体は、ＩＶで週１回投与される。
本方法には、本ＲＬＮ類似体を有効量の少なくとも１つの追加の治療薬と組み合わせて投与するステップも含まれ得る。端的には、本明細書の状態／疾患／障害の多くに対する標準治療には、抗凝固剤、ＡＣＥ阻害剤、ＡＲＢ、ＡＲＮＩ、β遮断薬、利尿薬、ジギタリス、ジゴキシン、硝酸ヒドララジン／イソルビド、ＭＲＡもしくは他のアルドステロンアンタゴニスト）、ＳＧＬＴ２阻害剤、スタチン、および／または抗血糖剤、ならびに高コレステロール、高血圧、心房細動、および糖尿病を含むがこれらに限定されない共存症を制御するための他の治療薬が含まれる。ある場合には、追加の治療薬は、本ＲＬＮ類似体と同時に、別々に、または連続して投与され得る。
例えば、追加の治療薬は、本ＲＬＮ類似体と同じ頻度で（すなわち、隔日、週２回、毎週、またはさらには毎月）投与され得る。他の場合には、追加の治療薬は、ＲＬＮ類似体とは異なる頻度で投与され得る。他の場合には、追加の治療薬は、ＳＱまたはＩＶで投与され得る。さらに他の場合には、本ＲＬＮ類似体はＳＱで投与され、追加の治療薬は経口またはＩＶで投与され得る。代替的に、本ＲＬＮ類似体はＩＶで投与され、追加の治療薬がＳＱで投与される。
ある場合には、必要としている個体は、腎機能障害および／または肥満を伴う糖尿病性高血圧症である。
本方法には、血圧を測定または取得すること、およびそのような取得された値を１つ以上のベースライン値または以前に取得された値と比較して治療／療法の有効性を評価することなどのステップも含まれ得る。
これらの方法はまた、食餌療法および運動と組み合わせてもよく、かつ／または上で考察したもの以外の追加の治療薬と組み合わせてもよい。
第四に、本明細書のＲＬＮ類似体のうちの少なくとも１つを含む使用を説明する。例えば、本明細書のＲＬＮ類似体は、療法、特に、心血管、肺、および／または腎臓の状態、疾患、または障害の治療で使用するために提供され得る。本ＲＬＮ類似体は、任意選択で、少なくとも１つの追加の治療薬と同時に、別々に、または連続して（すなわち、組み合わせて）投与され得る。同様に、本明細書のＲＬＮ類似体の使用は、心血管、肺、および／または腎臓の状態、疾患、または障害を治療するための医薬品を製造する際に提供され、この薬剤には、任意選択で、上述のような１つ以上の追加の治療薬がさらに含まれてもよい。
第五に、以下のアミノ酸配列を含む化合物が提供される：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１０）。ある場合には、本化合物は、配列番号１０に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列相同性を有するアミノ酸配列を有し得る。
代替的に、以下のアミノ酸配列を含む化合物が提供される：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＰ（配列番号１１）。ある場合には、本化合物は、配列番号１１に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列相同性を有するアミノ酸配列を有し得る。
代替的に、以下のアミノ酸配列を含む化合物が提供される：ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１２）。ある場合には、本化合物は、配列番号１２に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列相同性を有するアミノ酸配列を有し得る。
代替的に、以下のアミノ酸配列を含む化合物が提供される：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＰ（配列番号１３）。ある場合には、本化合物は、配列番号１３に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列相同性を有するアミノ酸配列を有し得る。
代替的に、以下のアミノ酸配列を含む化合物が提供される：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＶＳＳＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＳＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＶＲＰＧＲＰＬＩＴＳＲＤＡＮＬＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号４５）。ある場合には、本化合物は、配列番号４５に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列相同性を有するアミノ酸配列を有し得る。
代替的に、以下のアミノ酸配列を含む化合物が提供される：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＳＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＲＶＡＮＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号４６）。ある場合には、本化合物は、配列番号４６に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列相同性を有するアミノ酸配列を有し得る。
代替的に、以下のアミノ酸配列を含む化合物が提供される：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＹＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号４７）。ある場合には、本化合物は、配列番号４７に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列相同性を有するアミノ酸配列を有し得る。
代替的に、以下のアミノ酸配列を含む化合物が提供される：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＡＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号４８）。ある場合には、本化合物は、配列番号４８に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列相同性を有するアミノ酸配列を有し得る。
代替的に、以下のアミノ酸配列を含む化合物が提供される：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＥＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号４９）。ある場合には、本化合物は、配列番号４９に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列相同性を有するアミノ酸配列を有し得る。
代替的に、以下のアミノ酸配列を含む化合物が提供される：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＱＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５０）。ある場合には、本化合物は、配列番号５０に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列相同性を有するアミノ酸配列を有し得る。
代替的に、以下のアミノ酸配列を含む化合物が提供される：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＡＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５１）。ある場合には、本化合物は、配列番号５１に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列相同性を有するアミノ酸配列を有し得る。
代替的に、以下のアミノ酸配列を含む化合物が提供される：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＥＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５２）。ある場合には、本化合物は、配列番号５２に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列相同性を有するアミノ酸配列を有し得る。
代替的に、以下のアミノ酸配列を含む化合物が提供される：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＱＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５３）。ある場合には、本化合物は、配列番号５３に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列相同性を有するアミノ酸配列を有し得る。
代替的に、以下のアミノ酸配列を含む化合物が提供される：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＳＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５４）。ある場合には、本化合物は、配列番号５４に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列相同性を有するアミノ酸配列を有し得る。
代替的に、以下のアミノ酸配列を含む化合物が提供される：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＴＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５５）。ある場合には、本化合物は、配列番号５５に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列相同性を有するアミノ酸配列を有し得る。
代替的に、以下のアミノ酸配列を含む化合物が提供される：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＫＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５６）。ある場合には、本化合物は、配列番号５６に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列相同性を有するアミノ酸配列を有し得る。
代替的に、以下のアミノ酸配列を含む化合物が提供される：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＱＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５７）。ある場合には、本化合物は、配列番号５７に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列相同性を有するアミノ酸配列を有し得る。
代替的に、以下のアミノ酸配列を含む化合物が提供される：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＳＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５８）。ある場合には、本化合物は、配列番号５８に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列相同性を有するアミノ酸配列を有し得る。
代替的に、以下のアミノ酸配列を含む化合物が提供される：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＥＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５９）。ある場合には、本化合物は、配列番号５９に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列相同性を有するアミノ酸配列を有し得る。
代替的に、以下のアミノ酸配列を含む化合物が提供される：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＱＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６０）。ある場合には、本化合物は、配列番号６０に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列相同性を有するアミノ酸配列を有し得る。
代替的に、以下のアミノ酸配列を含む化合物が提供される：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＳＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６１）。ある場合には、本化合物は、配列番号６１に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列相同性を有するアミノ酸配列を有し得る。
代替的に、以下のアミノ酸配列を含む化合物が提供される：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＥＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６２）。ある場合には、本化合物は、配列番号６２に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列相同性を有するアミノ酸配列を有し得る。
代替的に、以下のアミノ酸配列を含む化合物が提供される：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＧＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６３）。ある場合には、本化合物は、配列番号６３に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列相同性を有するアミノ酸配列を有し得る。
代替的に、以下のアミノ酸配列を含む化合物が提供される：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＱＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６４）。ある場合には、本化合物は、配列番号６４に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列相同性を有するアミノ酸配列を有し得る。
代替的に、以下のアミノ酸配列を含む化合物が提供される：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＴＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６５）。ある場合には、本化合物は、配列番号６５に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列相同性を有するアミノ酸配列を有し得る。
代替的に、以下のアミノ酸配列を含む化合物が提供される：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＥＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６６）。ある場合には、本化合物は、配列番号６６に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列相同性を有するアミノ酸配列を有し得る。
本明細書のＲＬＮ類似体の利点は、それらを一本鎖ポリペプチド（すなわち、単量体）として化学的にまたは組換えにより合成することができるため、生物学的活性のために細胞内タンパク質分解処理を必要としないことである。しかしながら、ある場合には、ＶＨＨ部分は、一本鎖ＲＬＮだけでなく、二本鎖ＲＬＮ（例えば、天然）にも抱合させることができると考えられる。ＶＨＨ部分では、これは、Ｎ末端およびＣ末端だけでなく、ＶＨＨの任意の表面露出アミノ酸にも抱合し得る（ただし、そのような抱合によりアルブミン結合が完全に無効になるわけではない）。
本明細書のＲＬＮ類似体の利点は、ＶＨＨ部分が、天然のＡ鎖およびＢ鎖配列だけでなく、それらの修飾された配列でも使用できることである。さらに、ＶＨＨ部分は、他のペプチド／タンパク質融合物またはＶＨＨ部分に付着している小分子を介して、増強されたまたは追加の機能を有するようにさらに修飾されてもよい。
本明細書のＲＬＮ類似体の利点は、ＶＨＨ部分が、ヒトなどの哺乳動物において延長された作用期間を提供し、約２０日～約３０日のｔ１／２を有することができ、それにより、天然のヒトＲＬＮ、特に、天然のヒトＲＬＮ２（配列番号５および６）と比較した場合、少なくとも毎週または隔週の投与が可能となるため、コンプライアンスが改善され得ることである。
本明細書のＲＬＮ類似体の利点は、天然のヒトＲＬＮ２（配列番号５および６）と比較した場合、ＲＸＦＰ２受容体よりもＲＸＦＰ１に対して類似のまたはより良好な選択性、親和性、および／または効力を有することである。代替的な言い方をすれば、本明細書のＲＬＮ類似体により、ＲＸＦＰ１受容体での活性が十分となり、ＲＸＦＰ２、ＲＸＦＰ３、およびＲＸＦＰ４受容体のうちの１つ以上での活性が低下するかまたは不十分になる。
本明細書のＲＬＮ類似体の利点は、それらが、ＶＨＨ部分のアルブミン親和性を変化させることによって達成される調整可能な薬物動態を有することである。
本明細書のＲＬＮ類似体の利点は、天然のヒトＲＬＮ２（配列番号５および６）またはＦｃ融合を有するＲＬＮ類似体と比較した場合に、保存された製剤における安定性が改善することである。
さらに、ＶＨＨ部分の利点は、これらが、ヒト血清アルブミンだけでなく、イヌ、サル、マウス、ブタ、およびラットの血清アルブミンにも同等に結合するため、薬力学、薬物動態学、および毒物学の研究をこれらの種からヒトにより容易に変換できることである。
ＶＨＨ部分の利点は、これらを、天然のヒトＲＬＮ２（配列番号５および６）と比較した場合、本明細書のＲＬＮ類似体のｔ１／２を改善するために使用できるだけでなく、例えば、インスリン、成長分化因子１５（ＧＤＦ－１５）、またはグルコース依存性インスリン分泌促進ペプチド１（ＧＬＰ－１）などの他の生物学的に活性なペプチドおよびタンパク質のｔ１／２を改善するためにも使用できることである。
別段に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと類似または同等の任意の方法および材料を、ＲＬＮ類似体、薬学的組成物、および方法の実施または試験に使用することができるが、好ましい方法および材料は、本明細書に記載されている。
また、不定冠詞「ａ」または「ａｎ」による要素への言及は、文脈により要素が唯一であることが明確に求められない限り、１つ超の要素が存在する可能性を排除しない。よって、不定冠詞「ａ」または「ａｎ」は、通常「少なくとも１つ」を意味する。
定義
本明細書で使用される場合、「約」は、例えば、明記された濃度、長さ、分子量、ｐＨ、配列同一性、時間枠、温度、体積などの値（単数または複数）の統計学的に意味のある範囲内を意味する。このような値または範囲は、所与の値または範囲の典型的には２０％以内、より典型的には１０％以内、さらにより典型的には５％以内の大きさの範囲内であり得る。「約」によって包含される許容される変動は、研究下の特定のシステムに依存し、当業者によって容易に理解され得る。
本明細書で使用する場合、ＲＸＦＰ受容体のうちの１つ以上に関して、「活性」、「活性化する」、「活性化すること」などは、以下に記載されるインビトロアッセイなどの当該技術分野で既知であるアッセイを使用して測定して、本明細書のＲＬＮ類似体などの化合物がその受容体に結合し、そこで応答を誘導する能力を意味する。
本明細書で使用する場合、「アミノ酸」は、化学的観点から、１つ以上のアミン基および１つ以上のカルボン酸基の存在を特徴とし、他の官能基を含んでもよい分子を意味する。当該技術分野で既知であるように、標準アミノ酸として指定され、あらゆる生物によって産生されるペプチド／タンパク質の大部分の構成要素として使用され得る２０個のアミノ酸のセットが存在する。本開示のアミノ酸配列には、２０個の標準アミノ酸のための標準的な１文字または３文字のコードが含まれる。
本明細書で使用する場合、「類似体」は、標的受容体を活性化し、その受容体の天然アゴニストによって誘発される少なくとも１つのインビボまたはインビトロ効果を誘発する、合成ペプチドまたはポリペプチドなどの化合物を意味する。
本明細書で使用する場合、「保存的置換」は、参照分子と、そのアミノ酸配列に１つ以上の保存的アミノ酸置換を有することを除いて同一である、参照ペプチドまたはポリペプチドの変異体を意味する。一般に、保存的に修飾された変異体は、参照アミノ酸配列と、少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む。より具体的には、保存的置換は、特性（例えば、電荷、側鎖サイズ、疎水性／親水性、骨格構造、および剛性など）が類似しており、得られる置換されたペプチドまたはポリペプチドの生物学的活性への影響が最小限であるアミノ酸によるアミノ酸の置換を指す。機能的に類似したアミノ酸の保存的置換は当該技術分野で周知であるため、本明細書で徹底的に説明する必要はない。
本明細書で使用する場合、「有効量」は、本明細書の１つ以上のＲＬＮ類似体、またはその薬学的に許容される塩の量または用量であって、それを必要とする個体への単回または複数回投与時に、診断または治療中のそのような個体において所望の効果（すなわち、例えば、例えば、血管新生の増加、血管コンプライアンスの増加、心血流の増加、肝血流の増加、肺血流の増加、腎血液の増加、糸球体濾過率の増加、血圧の低下、炎症の減少（または予防）、および／または心臓、腎臓、肝臓、もしくは肺の線維症の減少（または予防）などの個体の状態における臨床的に測定可能な差異を生じさせ得るもの）を提供する、量または用量を意味する。有効量は、既知の技法の使用によって、および同様の状況下で得られた結果を観察することによって、当業者であれば容易に決定することができる。個体に対する有効量を決定する際には、哺乳動物の種、そのサイズ、年齢、および全般的な健康状態、関与する特定の疾患または障害、疾患または障害の程度またはその関与もしくは重症度、個体の応答、投与される特定のＲＬＮ類似体、投与の様式、投与される調製物の生物学的利用能の特性、選択される投薬レジメン、併用薬の使用、ならびに他の関連する状況を含むがこれらに限定されない、多数の因子が考慮される。
本明細書で使用する場合、「長期間の作用」は、本明細書のＲＬＮ類似体の結合親和性および活性が、天然のＲＬＮ、特に、天然のヒトＲＬＮ２（配列番号５および６）よりも長い期間継続し、このため、少なくとも、１日１回またはさらには週３回、週２回、もしくは週１回程度の頻度で投薬することが可能になることを意味する。ＲＬＮ類似体の時間作用プロファイルは、以下の実施例で利用するものなどの既知の薬物動態試験方法を使用して測定されてもよい。
本明細書で使用する場合、「半減期」または「ｔ１／２」は、天然のＲＬＮまたは本明細書のＲＬＮ類似体などの化合物の量の半分が、生物学的プロセスにより、個体の血清または血漿などの流体または他の生理学的空間から除去されるのにかかる時間を意味する。代替的に、ｔ１／２は、そのような化合物の量が、その薬理学的、生理学的、または放射線学的活性の半分を失うのにかかる時間を意味することもある。
本明細書で使用される場合、「半数効果濃度」または「ＥＣ５０」は、用量応答曲線（例えば、ｃＡＭＰ、ＰＩ３Ｋ－Ａｋｔ、ＮＦκβ、ＶＥＧＦ、および／または酸化窒素（ＮＯ）シグナル伝達経路）などのアッセイエンドポイントの５０％の活性化／刺激をもたらす化合物の濃度を意味する。
本明細書で使用する場合、「と組み合わせて」は、本明細書のＲＬＮ類似体のうちの少なくとも１つを、１つ以上の追加の治療薬と同時に、連続して、またはそれらとの単一の複合製剤で投与することを意味する。
本明細書で使用する場合、「それを必要とする個体」は、例えば、本明細書に列挙されるものを含む、治療または療法を必要とする状態、疾患、障害、または症状を有する、ヒトなどの哺乳動物を意味する。特に、治療される個体はヒトである。
本明細書で使用する場合、「長時間作用型」は、本明細書のＲＬＮ類似体の結合親和性および活性が、天然のヒトＲＬＮ２（配列番号５および６）よりも長い期間継続し、このため、少なくとも、１日１回またはさらには週３回、週２回、週１回、もしくは月１回程度の頻度で投薬することが可能になることを意味する。本ＲＬＮ類似体の時間作用プロファイルは、以下の実施例で説明するものなどの既知の薬物動態試験方法を使用して測定されてもよい。
本明細書で使用する場合、「非標準アミノ酸」は、細胞内で自然に発生し得るが、ペプチド合成には関与しないアミノ酸を意味する。非標準アミノ酸は、ペプチドの構成要素であってもよく、多くの場合、ペプチド内の標準アミノ酸の修飾によって（すなわち、翻訳後修飾を介して）生成される。非標準アミノ酸には、上記の標準アミノ酸とは反対の絶対キラリティーを有するＤ－アミノ酸が含まれ得る。
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される緩衝液」は、当業者に既知である標準的な薬学的緩衝液のうちのいずれかを意味する。
本明細書で使用する場合、「ＲＬＮ」は、哺乳動物種、特にヒトなどの任意の種から得られるかまたは誘導されるリラキシンを意味し、ここで、天然型は、２つのペプチド鎖（例えば、Ａ鎖およびＢ鎖）が２つのジスルフィド結合を介して接続しており、Ａ鎖が単一の分子内ジスルフィド結合をさらに有する、ヘテロ二量体ペプチドである。ＲＬＮには、天然ＲＬＮ（すなわち、全長）とその変形（すなわち、天然ＲＬＮの付加、欠失、挿入、および／または置換）との両方が含まれる。ヒトでは、ＲＬＮ１、ＲＬＮ２、およびＲＬＮ３の３つの天然ＲＬＮアイソフォームがある。ＲＬＮプロセシングはプレプロリラキシンから始まり、このプレプロリラキシンがプロリラキシン（Ａ鎖、Ｂ鎖、Ｃペプチドを含み、天然ＲＬＮはＢ－Ｃ－Ａの構造を有する）に処理される。天然のヒトｐｒｏＲＬＮ１の配列は配列番号１に示され（ＵｎｉＰｒｏｔ／ＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベース受託番号Ｐ０４８０８も参照）、天然のヒトｐｒｏＲＬＮ２の配列は配列番号４に示され（ＵｎｉＰｒｏｔ／ＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベース受託番号Ｐ０４０９０も参照）、天然のヒトｐｒｏＲＬＮ３の配列は配列番号７に示される（ＵｎｉＰｒｏｔ／ＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベース受託番号Ｑ８ＷＸＦ３も参照）。プロリラキシンは、さらなるプロセシングを受け、このプロセシングでは、Ｃペプチドが切断されてＲＬＮに到達する。天然のヒトＲＬＮ１、ＲＬＮ２、およびＲＬＮ３のＡ鎖の配列は、それぞれ、配列番号２、５、および８に示されている。同様に、天然のヒトＲＬＮ１、ＲＬＮ２、およびＲＬＮ３のＢ鎖の配列は、それぞれ、配列番号３、６、および９に示されている。
ヒトには、ＧＰＣＲとして作用する４つのＲＬＮ受容体、ＲＸＦＰ１（配列番号４０；ＵｎｉＰｒｏｔ／ＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベース受託番号Ｑ９ＨＢＸ９も参照）、ＲＸＦＰ２（配列番号４１；ＵｎｉＰｒｏｔ／ＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベース受託番号Ｑ８ＷＸＤ０も参照）、ＲＸＦＰ３（配列番号４２；ＵｎｉＰｒｏｔ／ＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベース受託番号Ｑ９ＮＳＤ７も参照）、およびＲＸＦＰ４（配列番号４３；ＵｎｉＰｒｏｔ／ＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベース受託番号Ｑ８ＴＤＵ９も参照）がある（Ｈａｌｌｓ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１５０：６７７－６９１参照）。ここで興味深いのは、ＲＸＦＰ１およびＲＸＦＰ２受容体であり、どちらもＲＬＮ１およびＲＬＮ２に結合することができる。ＲＸＦＰ１受容体は、脳、血球、骨、心臓、腎臓、肺、肝臓、および血管系に見出されている一方、ＲＸＦＰ２受容体は、はるかに制限されており、骨および導帯に見出されている。ＲＸＦＰ１受容体およびＲＸＦＰ２受容体の刺激により、アデニル酸シクラーゼ、プロテインキナーゼＡ、プロテインキナーゼＣ、ホスファチジルイノシトール ３－キナーゼ、および／または細胞外シグナル調節キナーゼ（Ｅｒｋ１／２）が関与するシグナル伝達ネットワークが活性化される。
本明細書で使用する場合、「ＲＬＮ類似体」などは、１つ以上のＲＸＦＰ受容体において天然ＲＬＮの１つ以上の効果を誘発するが、天然ＲＬＮと比較してアミノ酸配列に関して何らかの様式で異なる、ペプチドまたはポリペプチドなどの化合物を意味する。ＲＬＮ類似体はまた、これらの化合物の変異体を含むことができ、変異体は、ＲＬＮと機能的に同等であるが、断片であるか、または完全な配列ではあるが、付加、欠失、挿入、および／もしくは置換を有する配列を有する。本明細書に記載の修飾されていないまたは修飾されたＲＬＮにおけるアミノ酸位置へのすべての言及は、別様に明記しない限り、天然のヒトＲＬＮ２の配列番号５のＡ鎖または配列番号６のＢ鎖における対応する位置に基づく。ある場合には、本明細書のＲＬＮ類似体は、ＲＸＦＰに、より高いまたはより低い親和性で結合するが、天然のＲＬＮ、特に天然のヒトＲＬＮ２（配列番号５および６）と比較した場合、インビボまたはインビトロでより長いｔ１／２を示し得る。このように、本明細書のＲＬＮ類似体は、ＲＸＦＰ受容体アゴニストとして作用する合成化合物である。
本明細書で使用する場合、「配列相同性」は、例えば、２つ以上の配列の全長または比較ウィンドウにわたる一致など、生物学的化合物の２つ以上の核酸配列またはアミノ酸配列の定量的特性を意味する。配列相同性は、（１）同一性パーセントまたは（２）類似性パーセントにより測定され得る。同一性パーセントは、２つの生物学的化合物間で同一の残基のパーセンテージを最短配列の長さで割ったものを測定し、一方、類似性パーセントは、同一性を測定し、加えて、評価に配列ギャップおよび残基類似性を含む。配列相同性を決定するための方法およびアルゴリズムは当該技術分野で周知であるため、本明細書で徹底的に説明する必要はない。同一のヌクレオチドまたはアミノ酸位置の特定のパーセンテージは、少なくとも約７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上である。
本明細書で使用する場合、「一本鎖リラキシン」、「ｓｃＲＬＮ」などは、Ａ－Ｌ２－ＢまたはＢ－Ｌ２－Ａのように、Ａ鎖とＢ鎖とがリンカー（すなわち、Ｌ２）によって互いに接続しているＲＬＮポリペプチドを意味する。さらに、ｓｃＲＬＮは、正しい構造的折り畳みを維持するために、天然の鎖間および／または鎖内ジスルフィド結合のうちの少なくとも１つを含み得る。
本明細書で使用する場合、「二本鎖リラキシン」、「ｔｃＲＬＮ」などは、天然ＲＬＮなど、正しい構造的折り畳みを維持するために、Ａ鎖およびＢ鎖が、いずれのリンカーによってでもなく１つ以上の鎖間および／または鎖内ジスルフィド結合によって互いに接続しているＲＬＮポリペプチドを意味する。
本明細書で使用する場合、「治療すること（「ｔｒｅａｔｉｎｇ」または「ｔｏ ｔｒｅａｔ」）」は、状態、疾患、障害、または症状の進行またはその重症度を軽減する、抑制する、逆転させる、減速させる、または停止させる目的でＲＬＮ類似体投与が指示される状態、疾患、障害、または症状を有する個体を管理または看護することを意味する。治療することには、本明細書のＲＬＮ類似体または本明細書のＲＬＮ類似体を含む組成物を個体に投与して、症状もしくは合併症の発症を予防する、症状もしくは合併症を緩和する、または状態、疾患、障害、もしくは症状を排除することが含まれる。治療することには、ＲＬＮ類似体または本明細書のＲＬＮ類似体を含む組成物を個体に投与して、例えば、血管新生の増加、血管コンプライアンスの増加、心血流の増加、肝血流の増加、肺血流の増加、腎血液の増加、糸球体濾過率の増加、血圧の低下、炎症の減少（または予防）、および／または心臓、腎臓、肝臓、もしくは肺の線維症の減少（または予防）などを生じさせることが含まれる。治療される個体は、哺乳動物、特にヒトである。
本明細書で使用する場合、「個体」、「患者」、および「対象」は、同義に使用され、哺乳動物、特にヒトを意味する。ある特定の場合には、個体は、本明細書のＲＬＮ類似体を投与することから利益を得るであろう状態、疾患、障害、および／または症状をさらに特徴とする。
本明細書で使用する場合、「ＶＨＨ」または「ＶＨＨ部分」は、単一ドメイン抗体の形態、特に、サイズが約１５ｋＤａと非常に小さい、重鎖のみの抗体（ＨｃＡｂ）の単一の単量体可変領域の抗体断片を意味する。ＶＨＨ部分を薬物動態エンハンサーとして使用して、本明細書のＲＬＮ類似体の作用期間を延長し、かつ／またはｔ１／２を改善できることが、ここに見出された。本明細書のＶＨＨ部分は血清アルブミンに結合するが、このＶＨＨ部分は、ＩｇＧ（Ｆｃドメインを含む）、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）、または他の長期持続性血清タンパク質に結合するために使用することができる。本明細書のＶＨＨ部分は、ＲＬＮのｔ１／２を改善するために使用されるが、同様に、例えば、インスリン、ＧＤＦ－１５、またはＧＬＰ－１などの他の生物学的に活性なペプチド／タンパク質のｔ１／２を改善するために使用することができる。
ある特定の略語を次のように定義する。「ＡＣＲ」は尿中アルブミン／尿中クレアチニン比を指し、「ａｍｕ」は原子質量単位を指し、「ＡＵＣ」は曲線下面積を指し、「Ｂｏｃ」はｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルを指し、「ｃＡＭＰ」は環状アデノシン一リン酸を指し、「ＣＭＶ」はサイトメガロウイルスを指し、「ＣＶ」はカラム体積を指し、「ＤＮＡ」はデオキシリボ核酸を指し、「ＤＭＦ」はジメチルホルムアミドを指し、「ＤＭＳＯ」はジメチルスルホキシドを指し、「ＥＤＣ」は１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩を指し、「ＥＤＴＡ」はエチレンジアミン四酢酸を指し、「ＥＩＡ／ＲＩＡ」は酵素イムノアッセイ／ラジオイムノアッセイを指し、「ＥＴＡ」はエタノールアミンを指し、「ＧＳ」はグルタミンシンテターゼを指し、「ＨＩＣ」は疎水性相互作用クロマトグラフィーを指し、「ｈｒ」は時間（単数または複数）を指し、「ＨＴＲＦ」は均一時間分解蛍光を指し、「ＩＶ」は静脈内を指し、「ＩＰ」は腹腔内を指し、「ｋＤａ」はキロダルトンを指し、「ＬＣ／ＭＳ」は液体クロマトグラフィー質量分析を指し、「ｍｉｎ」は分（単数または複数）を指し、「ＭＳ」は質量分析を指し、「ＭＳＸ」はメチオニンスルホキシミンを指し、「ＮａＯＡｃ」は酢酸ナトリウムを指し、「ＮＨＳ」はＮ－ヒドロキシスクシンイミドを指し、「ＯｔＢｕ」はＯ－ｔｅｒｔ－ブチルを指し、「Ｐｂｆ」はＮＧ－２，２，４，６，７－ペンタメチルジヒドロベンゾフラン－５－スルホニルを指し、「ＰＥＩ」はポリエチレンイミンを指し、「ＲＰ－ＨＰＬＣ」は逆相高速液体クロマトグラフィーを指し、「ＲＵ」は共鳴単位を意味し、「ｓｅｃ」は秒（単数または複数）を指し、「ＳＰＲ」は表面プラズモン共鳴を指し、「ＳＱ」は皮下を指し、「ＳＥＣ」はサイズ排除クロマトグラフィーを指し、「ＳＥＭ」は平均の標準誤差を指し、「ＴＦＡ」はトリフルオロ酢酸を指し、「Ｔｒｔ」はトリチルを指す。
ＲＬＮ類似体
本明細書ＲＬＮ類似体は、天然のヒトＲＬＮと構造的に類似しているが、多くの構造的な差異がある。例えば、天然のヒトＲＬＮ２（配列番号５および６）と比較した場合、ＲＬＮ類似体は、天然のヒトＲＬＮ２に存在するアミノ酸のうちの１つ以上を欠き、Ａ鎖とＢ鎖との間のペプチドリンカーを含み、アルブミン結合ＶＨＨ部分を含む。本ＲＬＮ類似体により、ＲＸＦＰ１受容体での活性が十分となり、ＲＸＦＰ２、ＲＸＦＰ３、およびＲＸＦＰ４受容体のうちの１つ以上での活性が低下するかまたは不十分になる。同様に、ＲＬＮ類似体は、水溶液への溶解性の改善、化学的および物理的な製剤安定性の改善、薬物動態プロファイルの拡張（血清アルブミンへのＶＨＨ親和性に基づいて調整することができる）、および／または免疫原性の可能性の最小化を含む、治療的処置としてのそれらの開発可能性に関連する有益な属性を有する。
端的には、本明細書のＲＬＮ類似体は、以下の構造のうちの１つを有するＮ末端からＣ末端へのアミノ酸配列を含み、
ＶＨＨ－Ｌ１－Ａ－Ｌ２－Ｂ、
ＶＨＨ－Ｌ１－Ｂ－Ｌ２－Ａ、
Ａ－Ｌ２－Ｂ－Ｌ１－ＶＨＨ、または
Ｂ－Ｌ２－Ａ－Ｌ１－ＶＨＨ、
ＶＨＨは、薬物動態エンハンサーとして作用する部分であり、ＡはＲＬＮ Ａ鎖であり、ＢはＲＬＮ Ｂ鎖であり、Ｌ１は第１のペプチドリンカーであり、Ｌ２は第２のペプチドリンカーであり、ここで、Ｌ１とＬ２とは互いに異なる（すなわち、同じではないアミノ酸配列を各々が有する）。
Ａ鎖に関して、これは、天然のＲＬＮ Ａ鎖、例えば、天然のヒトＲＬＮ１ Ａ鎖（配列番号２）、天然のヒトＲＬＮ２ Ａ鎖（配列番号５）、または天然のヒトＲＬＮ３ Ａ鎖（配列番号８）であり得る。代替的に、Ａ鎖はその変異体であり得る。例えば、１つのＡ鎖変異体は、配列番号５の残基１～４を欠くアミノ酸配列（すなわち、ｄｅｓ１～４ヒトＲＬＮ２ Ａ鎖またはｄｅｓＡ１～４）を有し得る。
同様に、またＢ鎖に関して、これは、天然のＲＬＮ Ｂ鎖、例えば、天然のヒトＲＬＮ１ Ｂ鎖（配列番号３）、天然のヒトＲＬＮ２ Ｂ鎖（配列番号６）、または天然のヒトＲＬＮ３ Ｂ鎖（配列番号９）であり得る。代替的に、Ｂ鎖はその変異体であり得る。例えば、１つのＢ鎖変異体は、配列番号６の残基１を欠くアミノ酸配列（すなわち、ｄｅｓ１ヒトＲＬＮ２ Ｂ鎖またはｄｅｓＢ１）を有し得る。
ある場合には、Ａ鎖が天然のヒトＲＬＮ１ Ａ鎖（配列番号２）、Ｂ鎖が天然のヒトＲＬＮ１ Ｂ鎖（配列番号３）であり得るか、Ａ鎖が天然のヒトＲＬＮ２ Ａ鎖（配列番号５）、Ｂ鎖が天然のヒトＲＬＮ２ Ｂ鎖（配列番号６）であり得るか、Ａ鎖が天然のヒトＲＬＮ３ Ａ鎖（配列番号８）、Ｂ鎖が天然のヒトＲＬＮ３ Ｂ鎖（配列番号９）であり得るか、Ａ鎖が天然のヒトＲＬＮ１ Ａ鎖（配列番号２）、Ｂ鎖が天然のヒトＲＬＮ２ Ｂ鎖（配列番号６）であり得るか、Ａ鎖が天然のヒトＲＬＮ１ Ａ鎖（配列番号２）、Ｂ鎖が天然のヒトＲＬＮ３ Ｂ鎖（配列番号９）であり得るか、Ａ鎖が天然のヒトＲＬＮ２ Ａ鎖（配列番号５）、Ｂ鎖が天然のヒトＲＬＮ１ Ｂ鎖（配列番号３）であり得るか、Ａ鎖が天然のヒトＲＬＮ２ Ａ鎖（配列番号５）、Ｂ鎖が天然のヒトＲＬＮ３ Ｂ鎖（配列番号９）であり得るか、Ａ鎖が天然のヒトＲＬＮ３ Ａ鎖（配列番号８）、Ｂ鎖が天然のヒトＲＬＮ１ Ｂ鎖（配列番号３）であり得るか、またはＡ鎖は天然のヒトＲＬＮ３ Ａ鎖（配列番号８）、Ｂ鎖は天然のヒトＲＬＮ２ Ｂ鎖（配列番号６）であり得る。
ある場合には、Ａ鎖は残基１～４を欠くＲＬＮ２ Ａ鎖変異体（ｄｅｓＡ１～４）であってもよく、Ｂ鎖はいずれの天然のＢ鎖であってもよい。他の場合には、Ａ鎖はいずれの天然のＡ鎖であってもよく、Ｂ鎖は残基１を欠くＲＬＮ２ Ｂ鎖変異体（ｄｅｓＢ１）であってもよい。さらに他の場合には、Ａ鎖は、残基１～４を欠くＲＬＮ２ Ａ鎖変異体（ｄｅｓＡ１～４）であってもよく、Ｂ鎖は、残基１を欠くＲＬＮ２ Ｂ鎖変異体（ｄｅｓＢ１）であってもよい。ある特定の場合、Ａ鎖はｄｅｓＡ１～４変異体である。ある特定の場合、Ｂ鎖はｄｅｓＢ１変異体である。
本明細書のＲＬＮ類似体で使用することができる他のＡおよびＢ鎖は、例えば、国際特許出願公開第２０１８／１４８４１９号、同第２０１８／１３８１７０号、同第２０１７／２０１３４０号、同第２０１６／１４９５０１号、同第２０１５／１５７８２９号、同第２０１５／０６７７９１号、同第２０１５／０６７１１３号、同第２０１４／１０２１７９号、同第２０１３／１７７５２９号、同第２０１３／００７５６３号、同第２０１３／００４６０７号、同第２０１２／０３１３２６号、および同第２０１２／０２４４５２号、ならびに米国特許出願公開第２０１１／０２４３９４２号に記載されている。Ｃｈａｎ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８７：４１１５２－４１１６４、Ｃｌａａｓｚ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２６９：６２８７－６２９３、Ｈｏｓｓａｉｎ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．１３：１０８９５－１０８９０、Ｈｏｓｓａｉｎ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．７：３８０５－３８１９、Ｐａｒｋ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８３：３２０９９－３２１０９、およびＷｉｌｋｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（２００５）ＢＭＣ Ｅｖｏｌ．Ｂｉｏｌ．５：１４も参照されたい。
Ｌ１に関して、これは、約１アミノ酸～約５０アミノ酸のペプチドであり得る。代替的に、Ｌ１は、約１、約５、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約３５、約４０、約４５、または約５０アミノ酸であり得る。さらに代替的に、Ｌ１は、約５アミノ酸～約１０アミノ酸、約１０アミノ酸～約１５アミノ酸、約１５アミノ酸～約２０アミノ酸、約２０アミノ酸～約２５アミノ酸、約２５アミノ酸～約３０アミノ酸、約３０アミノ酸～約３５アミノ酸、約３５アミノ酸～約４０アミノ酸、約４０アミノ酸～約４５アミノ酸、または約４５アミノ酸～約５０アミノ酸であり得る。ある場合には、Ｌ１を除外して、Ａ鎖またはＢ鎖が直接ＶＨＨ部分に共役するようにしてもよい。ある場合には、Ｌ１は、（ＧＧＧＧＱ）ｎ（配列番号１４）の繰り返し配列を含むことができ、ここで、ｎは、約１～約１０、特に５（すなわち、（ＧＧＧＧＱ）５、配列番号１９）であり得る。他の場合には、Ｌ１は、（ＰＧＰＱ）ｎ（配列番号１７）の繰り返し配列を含むことができ、ここで、ｎは、約１～約１０、特に８（すなわち、（ＰＧＰＱ）８、配列番号２０）であり得る。さらに他の場合には、Ｌ１は、（ＰＧＰＡ）ｎ（配列番号１８）の繰り返し配列を含むことができ、ここで、ｎは、約１～約１０、特に８（すなわち、（ＰＧＰＡ）８、配列番号２１）であり得る。
Ｌ１としてＲＬＮ類似体で使用することができる他のリンカーには、（ＧＧＧＱ）ｎ（配列番号１５）または（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１６）が含まれるが、これらに限定されない。
Ｌ２に関して、これは、約１アミノ酸～約１５アミノ酸のペプチドであり得る。代替的に、Ｌ２は、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、または約１５アミノ酸であり得る。さらに代替的に、Ｌ２は、約１アミノ酸～約５アミノ酸、約５アミノ酸～約１０アミノ酸、約１０アミノ酸～約１５アミノ酸、特に１０アミノ酸～１５アミノ酸であり得る。ある場合には、Ｌ２は、Ａｌａ／Ａ残基、Ｇｌｎ／Ｑ残基、Ｇｌｙ／Ｇ残基、Ｐｒｏ／Ｐ残基、およびＳｅｒ／Ｓ残基の混合を含み得る。他の場合には、Ｌ２は、配列番号２２、２３、または６７であり得る。
ＶＨＨに関して、これは、血清アルブミンまたはｔ１／２が長い別の血清タンパク質に結合することができる、約５０アミノ酸～約２００アミノ酸、特に約１２５アミノ酸～約１５０アミノ酸のポリペプチドであり得る。ある場合には、ＶＨＨは、配列番号１０～１３のうちのいずれか１つであり得る。代替的に、ＶＨＨは、配列番号４５～６６のいずれか１つであり得る。これらのＶＨＨ部分の構造的特徴により、天然のＲＬＮ、特に天然のヒトＲＬＮ２（配列番号５および６）と比較した場合、ｔ１／２がより長いＲＬＮ類似体が得られる。本明細書のＶＨＨ部分が血清アルブミンを標的とすることを考えると、それを理由に、ＲＬＮ類似体のｔ１／２は、ＲＬＮ類似体が投与される種の血清アルブミンのｔ１／２と類似していると予想できる（標的媒介性薬物体内動態を考慮に入れる）。
本開示に記載の変更に加えて、本明細書のＲＬＮ類似体は、本ＲＬＮ類似体が変わらずＲＸＦＰ１受容体に結合し、これを活性化することができることを条件として、１つ以上の追加のアミノ酸修飾、特に保存的置換を含んでもよい。
まとめると、例示的なＲＬＮ類似体は次のとおりである。
ＶＨＨ部分（下線）、（Ｇ４Ｑ）５ Ｌ１（斜体）、ＲＬＮ２のＡ鎖、１０残基のＬ２（太字）、およびＲＬＮ２のＢ鎖（ｄｅｓＢ１）を含むＲＬＮ類似体１は、次のアミノ酸配列：
Figure 2022542301000001
 （配列番号２４）またはその薬学的に許容される塩を有し、
ＶＨＨ部分（下線）、（ＰＧＰＡ）８ Ｌ１（斜体）、ＲＬＮ２のＡ鎖、１０残基のＬ２（太字）、およびＲＬＮ２のＢ鎖（ｄｅｓＢ１）を含むＲＬＮ類似体２は、次のアミノ酸配列：
Figure 2022542301000002
 （配列番号２５）またはその薬学的に許容される塩を有し、
ＶＨＨ部分（下線）、（Ｇ４Ｑ）５ Ｌ１（斜体）、ＲＬＮ２のＢ鎖（ｄｅｓＢ１）、１０残基のＬ２（太字）、およびＲＬＮ２のＡ鎖を含むＲＬＮ類似体３は、次のアミノ酸配列：
Figure 2022542301000003
 （配列番号２６）またはその薬学的に許容される塩を有し、
ＶＨＨ部分（下線）、（ＰＧＰＱ）８ Ｌ１（斜体）、ＲＬＮ２のＢ鎖（ｄｅｓＢ１）、１０残基のＬ２（太字）、およびＲＬＮ２のＡ鎖を含むＲＬＮ類似体４は、次のアミノ酸配列：
Figure 2022542301000004
 （配列番号２７）またはその薬学的に許容される塩を有し、
ＲＬＮ２のＢ鎖（ｄｅｓＢ１）、１０残基のＬ２（太字）、ＲＬＮ２のＡ鎖、（Ｇ４Ｑ）５ Ｌ１（斜体）、およびＶＨＨ部分（下線）を含むＲＬＮ類似体５は、次のアミノ酸配列：
Figure 2022542301000005
 （配列番号２８）またはその薬学的に許容される塩を有し、
ＲＬＮ２のＢ鎖（ｄｅｓＢ１）、１０残基のＬ２（太字）、ＲＬＮ２のＡ鎖、（ＰＧＰＱ）８ Ｌ１（斜体）、およびＶＨＨ部分（下線）を含むＲＬＮ類似体６は、次のアミノ酸配列：
Figure 2022542301000006
 （配列番号２９）またはその薬学的に許容される塩を有し、
ＶＨＨ部分（下線）、（Ｇ４Ｑ）５ Ｌ１（斜体）、ＲＬＮ２のＢ鎖（ｄｅｓＢ１）、１０残基のＬ２（太字）、およびＲＬＮ２のＡ鎖を含むＲＬＮ類似体７は、次のアミノ酸配列：
Figure 2022542301000007
 （配列番号３０）またはその薬学的に許容される塩を有し、
ＶＨＨ部分（下線）、（ＰＧＰＱ）８－Ｌ１（斜体）、ＲＬＮ２のＢ鎖（ｄｅｓＢ１）、１０残基のＬ２（太字）、およびＲＬＮ２のＡ鎖を含むＲＬＮ類似体８は、次のアミノ酸配列：
Figure 2022542301000008
 （配列番号３１）またはその薬学的に許容される塩を有し、
ＲＬＮ２のＢ鎖（ｄｅｓＢ１）、１０残基のＬ２（太字）、ＲＬＮ２のＡ鎖、（Ｇ４Ｑ）５ Ｌ１（斜体）、およびＶＨＨ部分（下線）を含むＲＬＮ類似体９は、次のアミノ酸配列：
Figure 2022542301000009
 （配列番号３２）またはその薬学的に許容される塩を有し、
ＲＬＮ２のＢ鎖（ｄｅｓＢ１）、１０残基のＬ２（太字）、ＲＬＮ２のＡ鎖、（ＰＧＰＱ）８ Ｌ１（斜体）、およびＶＨＨ部分（下線）を含むＲＬＮ類似体１０は、次のアミノ酸配列：
Figure 2022542301000010
 （配列番号３３）またはその薬学的に許容される塩を有し、
ＶＨＨ部分（下線）、（Ｇ４Ｑ）５ Ｌ１（斜体）、ＲＬＮ２のＢ鎖（ｄｅｓＢ１）、１３残基のＬ２（太字）、およびＲＬＮ２のＡ鎖（ｄｅｓＡ１～４）を含むＲＬＮ類似体１１は、次のアミノ酸配列：
Figure 2022542301000011
 （配列番号３４）またはその薬学的に許容される塩を有し、
ＶＨＨ部分（下線）、（Ｇ４Ｑ）５ Ｌ１（斜体）、ＲＬＮ２のＢ鎖（ｄｅｓＢ１）、１３残基のＬ２（太字）、およびＲＬＮ２のＡ鎖（ｄｅｓＡ１～４）を含むＲＬＮ類似体１２は、次のアミノ酸配列：
Figure 2022542301000012
 （配列番号３５）またはその薬学的に許容される塩を有し、
ＶＨＨ部分（下線）、（Ｇ４Ｑ）５ Ｌ１（斜体）、ＲＬＮ２のＡ鎖（ｄｅｓＡ１～４）、１０残基のＬ２（太字）、およびＲＬＮ２のＢ鎖（ｄｅｓＢ１）を含むＲＬＮ類似体１３は、次のアミノ酸配列：
Figure 2022542301000013
 （配列番号３６）またはその薬学的に許容される塩を有し、
ＶＨＨ部分（下線）、（ＰＧＰＱ）８ Ｌ１（斜体）、ＲＬＮ２のＡ鎖（ｄｅｓＡ１～４）、１０残基のＬ２（太字）、およびＲＬＮ２のＢ鎖（ｄｅｓＢ１）を含むＲＬＮ類似体１４は、次のアミノ酸配列：
Figure 2022542301000014
 （配列番号３７）またはその薬学的に許容される塩を有し、
ＶＨＨ部分（下線）、（Ｇ４Ｑ）５ Ｌ１（斜体）、ＲＬＮ２のＢ鎖（天然）、１０残基のＬ２（太字）、およびＲＬＮ２のＡ鎖（天然）を含むＲＬＮ類似体１５は、次のアミノ酸配列：
Figure 2022542301000015
 （配列番号３８）またはその薬学的に許容される塩を有し、
ＶＨＨ部分（下線）、（ＰＧＰＡ）８ Ｌ１（斜体）、ＲＬＮ２のＢ鎖（天然）、１０残基のＬ２（太字）、およびＲＬＮ２のＡ鎖（天然）を含むＲＬＮ類似体１６は、次のアミノ酸配列：
Figure 2022542301000016
 （配列番号３９）またはその薬学的に許容される塩を有する。
本明細書のＲＬＮ類似体の半減期は、例えば、以下の実施例に記載する方法を含む、当該技術分野で既知の方法を使用して測定することができる。同様に、異なる種のアルブミンに対する本ＲＬＮ類似体の親和性は、結合親和性を測定するための当該技術分野で既知の方法、例えば、以下の実施例に記載する方法を使用して測定することができ、一般に平衡解離定数（ＫＤ）値として表される。さらに、ＲＸＦＰ受容体の各々での本明細書に記載されるＲＬＮ類似体の活性は、例えば、以下に記載するインビトロ活性アッセイを含む、当該技術分野で既知の方法を使用して測定することができ、一般にＥＣ５０値として表される。
上記の修飾の結果として、本明細書のＲＬＮ類似体は、哺乳動物、特にヒトに投与される場合、ｔ１／２が、天然のＲＬＮ、特に天然のヒトＲＬＮ２（配列番号５および６）のｔ１／２よりも長い。上述のように、本明細書のＶＨＨ部分は、血清アルバムを標的とするので、本明細書のＲＬＮ類似体のｔ１／２は、ＲＬＮ類似体が投与される種の血清アルブミンのｔ１／２と類似していると予想することができる。ある場合には、本ＲＬＮ類似体は、ｔ１／２が、約１日～約３１日、約５日～約２５日、約１０日～約２０日、またはさらには約１５日であり得る。他の場合には、本ＲＬＮ類似体は、ｔ１／２が、約１日～約５日、約６日～約１０日、約１１日～約１５日、約１６日～約２０日、約２１日～約２５日、またはさらには約２６日～約３１日であり得る。他の場合には、本ＲＬＮ類似体は、ｔ１／２が、約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約７日、約８日、約９日、約１０日、約１１日、約１２日、約１３日、約１４日、約１５日、約１６日、約１７日、約１８日、約１９日、約２０日、約２１日、約２２日、約２３日、約２４日、約２５日、約２６日、約２７日、約２８日、約２９日、約３０日、またはさらには約３１日であり得る。特定の場合、本ＲＬＮ類似体は、ヒトに投与される場合、ｔ１／２が、約２０日であり得る。
同様に、本明細書のＲＬＮ類似体は、ヒトに投与される場合、ＲＸＦＰ１受容体での効力が、例えば、天然のヒトＲＬＮ２（配列番号５および６）の約１０倍～約１００倍以内である。
薬学的組成物およびキット
本明細書に記載のＲＬＮ類似体は、非経口経路（例えば、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、または経皮）によって投与することができる薬学的組成物として製剤化することができる。そのような薬学的組成物およびそれを調製するための技法は、当該技術分野において周知である。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，「Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ」（Ｄ．Ｂ．Ｔｒｏｙ ｅｄ．，２１ｓｔ Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００６）を参照されたい。特定の場合、本ＲＬＮ類似体は、ＳＱまたはＩＶで投与される。しかしながら、代替的には、ＲＬＮ類似体は、例えば、錠剤または経口投与のための他の固形物、徐放性カプセル、およびクリーム、ローション、吸入剤などを含む現在使用されている任意の他の形態などの他の薬学的に許容される経路のための形態で製剤化され得る。
上述のように、それらのインビボ適合性および有効性を改善するため、本明細書のＲＬＮ類似体は、任意の数の無機および有機酸／塩基と反応して、薬学的に許容される酸／塩基付加塩を形成し得る。薬学的に許容される塩およびそれらを調製するための一般的な技法は、当該技術分野で周知である（例えば、Ｓｔａｈｌ ｅｔ ａｌ．，「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｕｓｅ」（２ｎｄ Ｒｅｖｉｓｅｄ Ｅｄ．Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ，２０１１））。本明細書における使用のための薬学的に許容される塩としては、ナトリウム塩、トリフルオロ酢酸塩、塩酸塩、および／または酢酸塩が挙げられる。
本明細書のＲＬＮ類似体は、医師によって投与されても、注射を使用して自己投与されてもよい。ゲージサイズおよび注入量は、当業者によって容易に決定され得ることが理解される。ただし、注入容量は、約２ｍＬ以下、またはさらには約１ｍＬ以下であり、ニードルゲージは、約２７Ｇ以上、またはさらには約２９Ｇ以上であり得る。
本開示はまた、本明細書に記載のＲＬＮ類似体またはその薬学的に許容される塩を合成するために有用である新規な中間体および方法を提供し、したがってこれらを包含する。本中間体およびＲＬＮ類似体は、当該技術分野で周知の様々な技法によって調製することができる。例えば、組換え合成を使用する方法を以下の実施例で例解する。記載される技法の各々についての具体的なステップは、本ＲＬＮ類似体を調製するための種々の方法において組み合わせることができる。試薬および出発材料は、当業者であれば容易に入手可能である。
本明細書のＲＬＮ類似体は、概して、広い投薬量範囲にわたって有効である。本ＲＬＮ類似体またはそれを含む薬学的組成物の例示的な用量は、個体１キログラム（ｋｇ）当たりのミリグラム（ｍｇ）またはマイクログラム（μｇ）、ナノグラム（ｎｇ）、またはピコグラム（ｐｇ）量であり得る。このようにして、１日用量は約１μｇ～約１００ｍｇとなり得る。
ここで、薬学的組成物中のＲＬＮ類似体の有効量は、約０．２５ｍｇ～約５．０ｍｇの用量であり得る。ただし、当業者であれば、ある場合には、有効量（すなわち、用量／投薬量）が前述の範囲の下限を下回っても十分すぎる可能性があること、一方で他の事例では、有効量がより多くの用量となってもよく、許容できる副作用を伴って用いられてもよいことを理解する。
本明細書のＲＬＮ類似体に加えて、本薬学的組成物は、少なくとも１つの追加の治療薬、特に、心血管、肺、および腎臓の状態、疾患、および障害における標準治療として典型的に使用される治療薬も含むことができる。
このように、本薬学的組成物は、有効量の少なくとも１つの本明細書のＲＬＮ類似体、薬学的に許容される担体、および任意選択で少なくとも１つの追加の治療薬を含むことができる。例えば、本薬学的組成物は、有効量の配列番号２４のＲＬＮ類似体および薬学的に許容される担体、有効量の配列番号２５のＲＬＮ類似体および薬学的に許容される担体、有効量の配列番号２６のＲＬＮ類似体および薬学的に許容される担体、有効量の配列番号２７のＲＬＮ類似体および薬学的に許容される担体、有効量の配列番号２８のＲＬＮ類似体および薬学的に許容される担体、有効量の配列番号２９のＲＬＮ類似体および薬学的に許容される担体、有効量の配列番号３０のＲＬＮ類似体および薬学的に許容される担体、有効量の配列番号３１のＲＬＮ類似体および薬学的に許容される担体、有効量の配列番号３２のＲＬＮ類似体および薬学的に許容される担体、有効量の配列番号３３のＲＬＮ類似体および薬学的に許容される担体、有効量の配列番号３４のＲＬＮ類似体および薬学的に許容される担体、有効量の配列番号３５のＲＬＮ類似体および薬学的に許容される担体、有効量の配列番号３６のＲＬＮ類似体および薬学的に許容される担体、有効量の配列番号３７のＲＬＮ類似体および薬学的に許容される担体、有効量の配列番号３８のＲＬＮ類似体および薬学的に許容される担体、または有効量の配列番号３９のＲＬＮ類似体および薬学的に許容される担体を含むことができる。
代替的に、本明細書のＲＬＮ類似体は、キットの一部として提供され得る。ある場合には、本キットには、少なくとも１つのＲＬＮ類似体（および任意選択で少なくとも１つの追加の治療薬）を個体に投与するためのデバイスが含まれる。ある特定の場合には、本キットには、少なくとも１つのＲＬＮ類似体（および任意選択で少なくとも１つの追加の治療薬）を投与するための注射器および針が含まれる。特定の場合には、ＲＬＮ類似体（および任意選択で少なくとも１つの追加の治療薬）は、注射器内の水溶液中に予め製剤化される。
ＲＬＮ類似体の作製および使用方法
本明細書のＲＬＮ類似体は、当該技術分野で既知の任意の数の標準的な組換えＤＮＡ法または標準的な化学ペプチド合成法を介して作製することができる。組換えＤＮＡ法に関しては、標準的な組換え技法を使用して、ＲＬＮ類似体のアミノ酸配列をコードする核酸配列を有するポリヌクレオチドを構築し、そのポリヌクレオチドを組換え発現ベクターに組み込み、ベクターを、細菌、酵母、および哺乳動物細胞などの宿主細胞に導入して、ＲＬＮ類似体を産生させることができる。例えば、Ｇｒｅｅｎ＆Ｓａｍｂｒｏｏｋ，「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，４ｔｈ ｅｄ．２０１２）を参照されたい。
組換えＤＮＡ法に関して、本明細書の化合物は、組換えＤＮＡ技術を使用してタンパク質または前駆体タンパク質分子を産生させることにより調製することができる。ｃＤＮＡおよび合成ＤＮＡを含むＤＮＡは、二本鎖であっても一本鎖であってもよく、本明細書の化合物をコードするその中のコード配列は、遺伝暗号の冗長性または縮退の結果として変化してもよい。端的には、本明細書の化合物をコードするＤＮＡ配列を宿主細胞に導入して、本化合物またはその前駆体を生成する。宿主細胞は、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉのＫ１２株またはＢ株などの細菌細胞、酵母細胞などの真菌細胞、またはチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞などの哺乳動物細胞であり得る。
本発明の化合物またはその前駆体を産生するために、適切な宿主細胞を、発現ベクターなどの発現系で一過性または安定にトランスフェクトまたは形質転換する。発現ベクターは、典型的には、エピソーム、または宿主染色体ＤＮＡの一体化した部分のいずれかとして、宿主生物中で複製可能である。一般に、発現ベクターは、所望のＤＮＡ配列で形質転換された細胞の検出を可能にするために、選択マーカー、例えば、テトラサイクリン、ネオマイシン、Ｇ４１８、およびジヒドロ葉酸レダクターゼを含有する。
本発明の化合物を調製するために、本明細書に記載されるステップの各々のための特定の生合成ステップまたは合成ステップを使用してもよいし、使用しなくてもよいし、または異なる方法で組み合わせてもよい。
化学ペプチド合成法に関しては、標準的な手動または自動の固相合成手順を使用することができる。例えば、自動ペプチド合成装置は、例えば、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）およびＰｒｏｔｅｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．（Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺ）から市販されている。固相合成用の試薬は、商用供給業者から容易に入手可能である。干渉基のブロック、反応中のアミノ酸の保護、カップリング、脱保護、および未反応のアミノ酸のキャッピングのために、固相合成装置を製造業者の指示に従って使用することができる。合成ＲＬＮの作製に関する追加の詳細は、米国特許第４，８３５，２５１号および同第５，１６６，１９１号に記載されている。
本明細書のＲＬＮ類似体の１つの使用は、心血管の状態、疾患、および／または障害を治療するためのものである。例示的な心血管の状態、疾患、および障害には、急性心不全、慢性心不全、アテローム性動脈硬化症、冠動脈疾患、糖尿病、脳卒中、高コレステロール血症、高血圧、虚血、血管収縮、および心室肥大が含まれるが、これらに限定されない。
本明細書のＲＬＮ類似体の別の使用は、肺の状態、疾患、および／または障害を治療するためのものである。例示的な肺の状態、疾患、および障害には、肺高血圧症および慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）が含まれるが、これらに限定されない。
本明細書のＲＬＮ類似体の別の使用は、腎の状態、疾患、および／または障害を治療するためのものである。例示的な腎の状態、疾患、および障害には、慢性腎疾患および糖尿病性腎症が含まれるが、これらに限定されない。
本方法には、本明細書に記載のステップが含まれてもよく、これらは、必ずではないが記載の順序で実行されてもよい。しかしながら、他の順序も考えられる。さらに、個々のまたは複数のステップは、時間的に並行しておよび／もしくは重複して、ならびに／または個別に、または複数回繰り返されるステップで実行されてもよい。さらに、本方法には、追加の不特定のステップが含まれてもよい。
したがって、そのような方法には、心血管の状態、疾患、もしくは障害を有するか、またはそれに罹患しやすい個人を選択することが含まれ得る。代替的に、本方法には、肺の状態、疾患、もしくは障害を有するか、またはそれに罹患しやすい個人を選択することが含まれ得る。代替的に、本方法には、腎の状態、疾患、もしくは障害を有するか、またはそれに罹患しやすい個人を選択することが含まれ得る。ある特定の場合、本方法には、糖尿病、腎機能障害を伴う高血圧、および／または肥満である個体を選択することが含まれ得る。
本方法にはまた、有効量の本明細書の少なくとも１つのＲＬＮ類似体を個体に投与することが含まれてもよく、本類似体は、同様に本明細書に記載されるような薬学的組成物の形態であってもよい。ある場合には、本ＲＬＮ類似体／薬学的組成物には、追加の治療薬、例えば、抗凝固剤、ＡＣＥ阻害剤、ＡＲＢ、ＡＲＮＩ、β遮断薬、利尿薬、ジギタリス、ジゴキシン、硝酸ヒドララジン／イソルビド、ＭＲＡもしくは他のアルドステロンアンタゴニスト）、ＳＧＬＴ２阻害剤、スタチン、および／または抗血糖剤、ならびに高コレステロール、高血圧、心房細動、および糖尿病を含むがこれらに限定されない共存症を制御するための他の治療薬が含まれる。
本ＲＬＮ類似体および任意選択の追加の治療薬の濃度／用量／投薬は、本明細書の他箇所で考察されている。
投与経路に関して、ＲＬＮ類似体またはそれを含む薬学的組成物は、例えば、経口、注射（すなわち、動脈内、静脈内、腹腔内、脳内、脳室内、筋肉内、眼内、門脈内、または病変内）、徐放性系、または埋め込みデバイスなどによる既知の方法に従って投与され得る。ある特定の場合には、ＲＬＮ類似体またはそれを含む薬学的組成物は、ボーラス注射によってまたは連続的にＳＱ投与され得る。
投薬頻度に関して、ＲＬＮ類似体またはそれを含む薬学的組成物は、毎日、隔日、週３回、週２回、週１回（すなわち、毎週）、隔週（すなわち、１週間おきに）、または毎月投与され得る。ある特定の場合には、ＲＬＮ類似体またはそれを含む薬学的組成物は、ＳＱで１日おきに、ＳＱで週３回、ＳＱで週２回、ＳＱで週１回、ＳＱで１週間おきに、またはＳＱで毎月投与される。特定の場合には、ＲＬＮ類似体またはそれを含む薬学的組成物は、週１回ＳＱ投与（ＱＷ）される。
本ＲＬＮ類似体またはそれを含む薬学的組成物が有効量の少なくとも１つの追加の治療薬と組み合わせて投与される場合に関して。追加の治療薬は、ＲＬＮ類似体またはそれを含む薬学的組成物と同時に、別々に、または連続して投与され得る。
さらに、追加の治療薬は、ＲＬＮ類似体またはそれを含む薬学的組成物と同じ頻度で（すなわち、隔日、週２回、またはさらには毎週）投与され得る。代替的に、追加の治療薬は、ＲＬＮ類似体またはそれを含む薬学的組成物とは異なる頻度で投与され得る。他の場合には、追加の治療薬は、ＳＱで投与され得る。他の場合には、追加の治療薬は、ＩＶで投与され得る。さらに他の場合には、追加の治療薬は、経口で投与され得る。
これらの方法は、食餌療法および運動と組み合わせてもよく、かつ／または上で考察したもの以外の追加の治療薬と組み合わせてもよいことがさらに企図される。
以下の非限定的な実施例は、限定ではなく例示の目的で提供される。
ポリペプチド発現
実施例１：ＲＬＮ類似体１の組換え発現
実施例１は、以下のアミノ酸配列を有するＲＬＮ類似体である。
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＱＬＹＳＡＬＡＮＫＣＣＨＶＧＣＴＫＲＳＬＡＲＦＣＧＧＧＳＧＧＳＧＧＧＳＷＭＥＥＶＩＫＬＣＧＲＥＬＶＲＡＱＩＡＩＣＧＭＳＴＷＳ
（配列番号２４）
ここでは、配列番号２４のＲＬＮ類似体を、ＣＨＯＫ１細胞誘導体を使用して哺乳動物細胞発現系において生成する。配列番号２４をコードするｃＤＮＡ配列を、ＧＳを含む発現プラスミド骨格（ｐＥＥ１２．４ベースのプラスミド）にサブクローニングする。ｃＤＮＡ配列を、シグナルペプチド配列ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧ（配列番号４４）のコード配列とインフレームで融合させて、組織培養培地へのＲＬＮ類似体の分泌を増強する。発現をウイルス性ＣＭＶプロモーターにより駆動する。
一過性トランスフェクションを介してＲＬＮ類似体を生成するために、ＰＥＩベースの方法を使用して、ＣＨＯＫ１細胞を組換え発現プラスミドでトランスフェクトする。端的には、密度４×１０６細胞／ｍＬの適切な体積のＣＨＯＫ１の懸濁細胞を振盪フラスコに移し、ＰＥＩおよび組換えプラスミドＤＮＡの両方を細胞に加える。細胞を浮遊培養において３２℃で６日間インキュベートする。インキュベーション期間の終了時、細胞を低速遠心分離により除去し、ＲＬＮ類似体タンパク質を馴化培地から精製する。
代替的に、またＲＬＮ類似体を安定なトランスフェクションを介して生成するために、ＣＨＯＫ１細胞を、エレクトロポレーションおよび適切な量の組換え発現プラスミドを使用して安定にトランスフェクトし、トランスフェクトされた細胞を適正な細胞密度で浮遊培養中に維持する。トランスフェクトされた細胞の選択を、２５μＭのＭＳＸ含有無血清培地中で増殖させることにより達成し、約３５℃～３７℃および約５～７％ＣＯ２でインキュベートする。
ＲＬＮ類似体をＣＨＯ細胞から培地に分泌させ、これを、タンパク質Ａ親和性クロマトグラフィーと、その後のイオン交換および疎水性相互作用クロマトグラフィーまたはサイズ排除クロマトグラフィーとにより精製する。具体的には、採取した培地からのＲＬＮ類似体を、Ｍａｂ Ｓｅｌｅｃｔタンパク質Ａ樹脂（ＧＥ）に捕捉する。次に、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、ｐＨ７．４）またはトリス含有緩衝液などの泳動用緩衝液で樹脂を簡単に洗浄して、非特異的に結合した物質を除去する。タンパク質を、１０ｍＭクエン酸ｐＨ３などの低ｐＨ溶液で樹脂から溶出させる。ＲＬＮ類似体を含む画分をプールし、潜在ウイルスを不活化するために低ｐＨに保持してもよい。ｐＨ８．０の０．１Ｍトリスなどの塩基を加えることで、ｐＨを中性化してもよい。ＲＬＮ類似体を、Ｐｏｒｏｓ ５０ ＨＳ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）などの樹脂を使用するイオン交換クロマトグラフィーによりさらに精製してもよい。１５カラム体積にわたるｐＨ５．０の２０ｍＭ ＮａＯＡｃ中での０ｍＭから５００ｍＭへのＮａＣｌ勾配を使用して、ＲＬＮ類似体をカラムから溶出させる。
ＲＬＮ類似体を、Ｃａｐｔｏ Ｐｈｅｎｙｌ ＩｍｐＲｅｓ ＨＩＣ Ｃｏｌｕｍｎ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用することで、疎水性相互作用クロマトグラフィーによりさらに精製してもよい。精製は、カラム充填溶液を約０．５Ｍ硫酸ナトリウムに調整し、ｐＨ８の２０ｍＭトリス溶液中の硫酸ナトリウム０．５Ｍから０Ｍへの１０ＣＶ勾配を使用して溶出させることにより行う。ＨＩＣの後、ＲＬＮ類似体を、ｐＨ７．４のＰＢＳ中またはｐＨ６．０の２０ｍＭヒスチジン、５０ｍＭ ＮａＣｌ中でのアイソクラティック溶出を用いて、濃縮されたＣａｐｔｏ Ｐｈｅｎｙｌ ＩｍｐＲｅｓプールをＳｕｐｅｒｄｅｘ２００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）にローディングして、ＳＥＣにより、なおさらに精製してもよい。
精製されたＲＬＮ類似体を、Ｐｌａｎｏｖａ ２０Ｎ（Ａｓａｈｉ Ｋａｓｅｉ Ｍｅｄｉｃａｌ）などのウイルス保持フィルターに通した後、再生セルロース膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）上の接線流限外濾過を使用して、ｐＨ６の２０ｍＭヒスチジン、２０ｍＭ ＮａＣｌに濃縮／透析濾過する。
したがって、ＲＬＮ類似体は、この様式で、または当業者によって容易に決定される類似の様式で、調製される。
実施例２：ＲＬＮ類似体２の組換え発現
実施例２は、以下のアミノ酸配列を有するＲＬＮ類似体である。
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＧＰＡＰＧＰＡＰＧＰＡＰＧＰＡＰＧＰＡＰＧＰＡＰＧＰＡＰＧＰＡＱＬＹＳＡＬＡＮＫＣＣＨＶＧＣＴＫＲＳＬＡＲＦＣＧＧＧＳＧＧＳＧＧＧＳＷＭＥＥＶＩＫＬＣＧＲＥＬＶＲＡＱＩＡＩＣＧＭＳＴＷＳ（配列番号２５）
ここでは、配列番号２５のＲＬＮ類似体を、配列番号２５をコードするｃＤＮＡ配列を発現プラスミド中で使用することを除いて本質的に実施例１について説明したように生成する。
実施例３：ＲＬＮ類似体３の組換え発現
実施例３は、以下のアミノ酸配列を有するＲＬＮ類似体である。
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＳＷＭＥＥＶＩＫＬＣＧＲＥＬＶＲＡＱＩＡＩＣＧＭＳＴＷＳＧＧＧＳＧＧＳＧＧＧＱＬＹＳＡＬＡＮＫＣＣＨＶＧＣＴＫＲＳＬＡＲＦＣ
（配列番号２６）
ここでは、配列番号２６のＲＬＮ類似体を、配列番号２６をコードするｃＤＮＡ配列を発現プラスミド中で使用することを除いて本質的に実施例１について説明したように生成する。
実施例４：ＲＬＮ類似体４の組換え発現
実施例４は、以下のアミノ酸配列を有するＲＬＮ類似体である。
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＳＷＭＥＥＶＩＫＬＣＧＲＥＬＶＲＡＱＩＡＩＣＧＭＳＴＷＳＧＧＧＳＧＧＳＧＧＧＱＬＹＳＡＬＡＮＫＣＣＨＶＧＣＴＫＲＳＬＡＲＦＣ（配列番号２７）
ここでは、配列番号２７のＲＬＮ類似体を、配列番号２７をコードするｃＤＮＡ配列を発現プラスミド中で使用することを除いて本質的に実施例１について説明したように生成する。
実施例５：ＲＬＮ類似体５の組換え発現
実施例５は、以下のアミノ酸配列を有するＲＬＮ類似体である。
ＳＷＭＥＥＶＩＫＬＣＧＲＥＬＶＲＡＱＩＡＩＣＧＭＳＴＷＳＧＧＧＳＧＧＳＧＧＧＱＬＹＳＡＬＡＮＫＣＣＨＶＧＣＴＫＲＳＬＡＲＦＣＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＰ（配列番号２８）
ここでは、配列番号２８のＲＬＮ類似体を、配列番号２８をコードするｃＤＮＡ配列を発現プラスミド中で使用することを除いて本質的に実施例１について説明したように生成する。
実施例６：ＲＬＮ類似体６の組換え発現
実施例６は、以下のアミノ酸配列を有するＲＬＮ類似体である。
ＳＷＭＥＥＶＩＫＬＣＧＲＥＬＶＲＡＱＩＡＩＣＧＭＳＴＷＳＧＧＧＳＧＧＳＧＧＧＱＬＹＳＡＬＡＮＫＣＣＨＶＧＣＴＫＲＳＬＡＲＦＣＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＰ（配列番号２９）
ここでは、配列番号２９のＲＬＮ類似体を、配列番号２９をコードするｃＤＮＡ配列を発現プラスミド中で使用することを除いて本質的に実施例１について説明したように生成する。
実施例７：ＲＬＮ類似体７の組換え発現
実施例７は、以下のアミノ酸配列を有するＲＬＮ類似体である。
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＳＷＭＥＥＶＩＫＬＣＧＲＥＬＶＲＡＱＩＡＩＣＧＭＳＴＷＳＧＧＧＳＧＧＳＧＧＧＱＬＹＳＡＬＡＮＫＣＣＨＶＧＣＴＫＲＳＬＡＲＦＣ
（配列番号３０）
ここでは、配列番号３０のＲＬＮ類似体を、配列番号３０をコードするｃＤＮＡ配列を発現プラスミド中で使用することを除いて本質的に実施例１について説明したように生成する。
実施例８：ＲＬＮ類似体８の組換え発現
実施例８は、以下のアミノ酸配列を有するＲＬＮ類似体である。
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＳＷＭＥＥＶＩＫＬＣＧＲＥＬＶＲＡＱＩＡＩＣＧＭＳＴＷＳＧＧＧＳＧＧＳＧＧＧＱＬＹＳＡＬＡＮＫＣＣＨＶＧＣＴＫＲＳＬＡＲＦＣ（配列番号３１）
ここでは、配列番号３１のＲＬＮ類似体を、配列番号３１をコードするｃＤＮＡ配列を発現プラスミド中で使用することを除いて本質的に実施例１について説明したように生成する。
実施例９：ＲＬＮ類似体９の組換え発現
実施例９は、以下のアミノ酸配列を有するＲＬＮ類似体である。
ＳＷＭＥＥＶＩＫＬＣＧＲＥＬＶＲＡＱＩＡＩＣＧＭＳＴＷＳＧＧＧＳＧＧＳＧＧＧＱＬＹＳＡＬＡＮＫＣＣＨＶＧＣＴＫＲＳＬＡＲＦＣＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＰ（配列番号３２）
ここでは、配列番号３２のＲＬＮ類似体を、配列番号３２をコードするｃＤＮＡ配列を発現プラスミド中で使用することを除いて本質的に実施例１について説明したように生成する。
実施例１０：ＲＬＮ類似体１０の組換え発現
実施例１０は、以下のアミノ酸配列を有するＲＬＮ類似体である。
ＳＷＭＥＥＶＩＫＬＣＧＲＥＬＶＲＡＱＩＡＩＣＧＭＳＴＷＳＧＧＧＳＧＧＳＧＧＧＱＬＹＳＡＬＡＮＫＣＣＨＶＧＣＴＫＲＳＬＡＲＦＣＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＰ（配列番号３３）
ここでは、配列番号３３のＲＬＮ類似体を、配列番号３３をコードするｃＤＮＡ配列を発現プラスミド中で使用することを除いて本質的に実施例１について説明したように生成する。
実施例１１：ＲＬＮ類似体１１の組換え発現
実施例１１は、以下のアミノ酸配列を有するＲＬＮ類似体である。
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＳＷＭＥＥＶＩＫＬＣＧＲＥＬＶＲＡＱＩＡＩＣＧＭＳＴＷＳＧＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＧＡＬＡＮＫＣＣＨＶＧＣＴＫＲＳＬＡＲＦＣ
（配列番号３４）
ここでは、配列番号３４のＲＬＮ類似体を、配列番号３４をコードするｃＤＮＡ配列を発現プラスミド中で使用することを除いて本質的に実施例１について説明したように生成する。
実施例１２：ＲＬＮ類似体１２の組換え発現
実施例１２は、以下のアミノ酸配列を有するＲＬＮ類似体である。
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＳＷＭＥＥＶＩＫＬＣＧＲＥＬＶＲＡＱＩＡＩＣＧＭＳＴＷＳＧＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＧＡＬＡＮＫＣＣＨＶＧＣＴＫＲＳＬＡＲＦＣ
（配列番号３５）
ここでは、配列番号３５のＲＬＮ類似体を、配列番号３５をコードするｃＤＮＡ配列を発現プラスミド中で使用することを除いて本質的に実施例１について説明したように生成する。
実施例１３：ＲＬＮ類似体１３の組換え発現
実施例１３は、以下のアミノ酸配列を有するＲＬＮ類似体である。
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＡＬＡＮＫＣＣＨＶＧＣＴＫＲＳＬＡＲＦＣＧＧＧＳＧＧＳＧＧＧＳＷＭＥＥＶＩＫＬＣＧＲＥＬＶＲＡＱＩＡＩＣＧＭＳＴＷＳ
（配列番号３６）
ここでは、配列番号３６のＲＬＮ類似体を、配列番号３６をコードするｃＤＮＡ配列を発現プラスミド中で使用することを除いて本質的に実施例１について説明したように生成する。
実施例１４：ＲＬＮ類似体１４の組換え発現
実施例１４は、以下のアミノ酸配列を有するＲＬＮ類似体である。
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＡＬＡＮＫＣＣＨＶＧＣＴＫＲＳＬＡＲＦＣＧＧＧＳＧＧＳＧＧＧＳＷＭＥＥＶＩＫＬＣＧＲＥＬＶＲＡＱＩＡＩＣＧＭＳＴＷＳ
（配列番号３７）
ここでは、配列番号３７のＲＬＮ類似体を、配列番号３７をコードするｃＤＮＡ配列を発現プラスミド中で使用することを除いて本質的に実施例１について説明したように生成する。
実施例１５：ＲＬＮ類似体１５の組換え発現
実施例１５は、以下のアミノ配列を有するＲＬＮ類似体である。
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＤＳＷＭＥＥＶＩＫＬＣＧＲＥＬＶＲＡＱＩＡＩＣＧＭＳＴＷＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＱＬＹＳＡＬＡＮＫＣＣＨＶＧＣＴＫＲＳＬＡＲＦＣ（配列番号３８）
ここでは、配列番号３８のＲＬＮ類似体を、配列番号３８をコードするｃＤＮＡ配列を発現プラスミド中で使用することを除いて本質的に実施例１について説明したように生成する。
実施例１６：ＲＬＮ類似体１６の組換え発現
実施例１６は、以下のアミノ配列を有するＲＬＮ類似体である。
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＧＰＡＰＧＰＡＰＧＰＡＰＧＰＡＰＧＰＡＰＧＰＡＰＧＰＡＰＧＰＡＤＳＷＭＥＥＶＩＫＬＣＧＲＥＬＶＲＡＱＩＡＩＣＧＭＳＴＷＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＱＬＹＳＡＬＡＮＫＣＣＨＶＧＣＴＫＲＳＬＡＲＦＣ（配列番号３９）
ここでは、配列番号３９のＲＬＮ類似体を、配列番号３９をコードするｃＤＮＡ配列を発現プラスミド中で使用することを除いて本質的に実施例１について説明したように生成する。
インビトロ機能
実施例１７：ＳＰＲを介したＲＬＮ類似体アルブミン結合
ＲＬＮ類似体のヒト、カニクイザル、マウス、ラット、ブタ、イヌ、ウシ、およびウサギの血清アルブミンへのインビトロ結合を、ＳＰＲにより決定する。特に、これらの種の血清アルブミンに対する実施例１～１４のＲＬＮ類似体の親和性を以下で表１～１４に要約する。
実施例１～１４のＲＬＮ類似体の様々な血清アルブミンへの結合を、Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ機器で行う。Ｓｅｒｉｅｓ Ｓ Ｓｅｎｓｏｒ Ｃｈｉｐ ＣＭ５表面への血清アルブミンの固定化を、製業者の指示（Ａｍｉｎｅ Ｃｏｕｐｌｉｎｇ Ｋｉｔ ＢＲ－１０００－５０）に従って実行する。端的には、センサチップ表面（フローセル１および２）のカルボキシル基を、７５ｍｇ／ｍＬのＥＤＣおよび１１．５ｍｇ／ｍＬのＮＨＳを含む混合物７０μＬを１０μＬ／分で注入することにより活性化する。ヒト、カニクイザル、マウス、ラット、ブタ、イヌ、ウシ、およびウサギの血清アルブミンを、ｐＨ４．０の１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ＢＲ－１００３－４９）で、０．５、０．５、２．２、０．６、０．６、０．８、０．６、および０．３μｇ／ｍＬに希釈し、次に活性化したチップ表面（フローセル２、チャネル１～８）に１０μＬ／分で１８０秒間注入した（ヒト、マウス、ラット、ブタ、およびウシの血清アルブミンは、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から入手し、カニクイザルの血清アルブミンはＨｏｌｚｅｌ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｋａ（Ｃｏｌｏｇｎｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）から入手し、イヌの血清アルブミンはＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓ（Ｎｏｖｉ，ＭＩ）から入手し、ウサギの血清アルブミンはＦｉｔｚｇｅｒａｌｄ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ Ｉｎｔｌ．（Ａｃｔｏｎ，ＭＡ）から入手する。様々な血清アルブミンを、約１００（６２～１４５）ＲＵの表面密度を目標にして、カルボキシメチルデキストランでコーティングしたセンサチップＣＭ５に遊離アミンを介して共有結合により固定化する。表面（フローセル１および２）の過剰な反応性基を、ｐＨ８．５の１Ｍ ＥＴＡ ＨＣｌ－ＮａＯＨを７０μＬ注入することにより不活性化する。
実施例１～１４のＲＬＮ類似体を、ＨＢＳ－ＥＰ＋緩衝液（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．６、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０５％ポリソルベート２０）で、１０００、３３３．３、１１１．１、３７．０４、１２．３５、４．１２、１．３７、０．４５７、０．１５２、０．０５１、および０．０１７ｎＭの濃度に希釈する。１５０μｌの試料を、チップの表面に固定化血清アルブミン全体に個々に順次注入し、２５℃、５０μＬ／分の流量で６００秒間解離させる。ｐＨ１．５の１０ｍＭグリシン－ＨＣｌ（ＢＲ－１００３－５４）を５０μＬ／分で１００秒間注入して、表面を再生する。得られたセンサグラムを、Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ Ｉｎｓｉｇｈｔ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（バージョン２．０．１５．１２９３３）の１：１結合反応速度モデルフィッティングを使用して分析し、結合速度パラメータの会合速度（ｋａ）、解離速度（ｋｄ）、および平衡解離定数（ＫＤ）を計算する。
Figure 2022542301000017
ＫＤは、実施例１のＲＬＮ類似体で、ヒト、カニクイザル、マウス、ラット、ブタ、イヌ、およびウシの血清アルブミン結合について、それぞれ、０．１、０．５、３．３、２．１、７．１、１．２、および３７ｎＭと決定する。
Figure 2022542301000018
ＫＤは、実施例２のＲＬＮ類似体で、ヒト、カニクイザル、マウス、ラット、ブタ、イヌ、およびウシの血清アルブミン結合について、それぞれ、０．１、０．４５、３．８、３．０、８．０、１．４、および５０ｎＭと決定する。
Figure 2022542301000019
ＫＤは、実施例３のＲＬＮ類似体で、ヒト、カニクイザル、マウス、ラット、ブタ、イヌ、およびウシの血清アルブミン結合について、それぞれ、０．０８、０．３６、２．４、１．６、４．８、０．７、および２６ｎＭと決定する。
Figure 2022542301000020
ＫＤは、実施例４のＲＬＮ類似体で、ヒト、カニクイザル、マウス、ラット、ブタ、イヌ、およびウシの血清アルブミン結合について、それぞれ、０．０９、０．４２、３．０、２．１、６．２、１．０、および３７ｎＭと決定する。
Figure 2022542301000021
ＫＤは、実施例５のＲＬＮ類似体で、ヒト、カニクイザル、マウス、ラット、ブタ、イヌ、およびウシの血清アルブミン結合について、それぞれ、０．４５、１．８、１４、１０、２３、４．７、および１２０ｎＭと決定する。
Figure 2022542301000022
ＫＤは、実施例６のＲＬＮ類似体で、ヒト、カニクイザル、マウス、ラット、ブタ、イヌ、およびウシの血清アルブミン結合について、それぞれ、０．５１、２．３、１２、９．７、２４、４．１、および１３０ｎＭと決定する。
Figure 2022542301000023
ＫＤは、実施例７のＲＬＮ類似体で、ヒト、カニクイザル、マウス、ラット、ブタ、イヌ、およびウシの血清アルブミン結合について、それぞれ、０．０６、０．２９、２．１、１．４、３．７、０．６９、および２５ｎＭと決定する。
Figure 2022542301000024
ＫＤは、実施例８のＲＬＮ類似体で、ヒト、カニクイザル、マウス、ラット、ブタ、イヌ、およびウシの血清アルブミン結合について、それぞれ、０．０８、０．３２、１．８、１．７、４．１、０．６６、および２１ｎＭと決定する。
Figure 2022542301000025
ＫＤは、実施例９のＲＬＮ類似体で、ヒト、カニクイザル、マウス、ラット、ブタ、イヌ、およびウシの血清アルブミン結合について、それぞれ、０．１９、０．８６、９．５、８．２、１４、３．８、および８４ｎＭと決定する。
Figure 2022542301000026
ＫＤは、実施例１０のＲＬＮ類似体で、ヒト、カニクイザル、マウス、ラット、ブタ、イヌ、およびウシの血清アルブミン結合について、それぞれ、０．３７、１．５、９．７、７．８、２０、３．４、および１００ｎＭと決定する。
Figure 2022542301000027
ＫＤは、実施例１１のＲＬＮ類似体で、ヒト、カニクイザル、マウス、ラット、ブタ、イヌ、およびウシの血清アルブミン結合について、それぞれ、０．１７、０．４８、３．６、１．３、７．３、１．３、および２７ｎＭと決定する。
Figure 2022542301000028
ＫＤは、実施例１２のＲＬＮ類似体で、ヒト、カニクイザル、マウス、ラット、ブタ、イヌ、およびウシの血清アルブミン結合について、それぞれ、０．１４、０．４７、２．６、１．７、４．２、０．７７、および３０ｎＭと決定する。
Figure 2022542301000029
ＫＤは、実施例１３のＲＬＮ類似体で、ヒト、カニクイザル、マウス、ラット、ブタ、イヌ、およびウシの血清アルブミン結合について、それぞれ、０．１４、０．４９、２．６、２．０、５．０、０．９２、および２９ｎＭと決定する。
Figure 2022542301000030
ＫＤは、実施例１４のＲＬＮ類似体で、ヒト、カニクイザル、マウス、ラット、ブタ、イヌ、およびウシの血清アルブミン結合について、それぞれ、０．１６、０．６１、３．１、２．２、６．０、１．１、および３４ｎＭと決定する。
実施例１８：ＲＸＦＰ１およびＲＸＦＰ２受容体におけるＲＬＮ類似体のインビトロ効力
ＣＨＯ－ＣＲＥ－Ｌｕｃ細胞株の生成：ＣＨＯ－Ｋ１細胞（ＡＴＣＣ）を、２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、４０μｇ／ｍＬ Ｌ－プロリン、１倍抗生物質を含む５％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ－Ｆ１２ ３：１中で培養し、ＴｒｙｐＬＥ（商標）Ｅｘｐｒｅｓｓ（Ｇｉｂｃｏ）で２～３日ごとに１：５で分割する。細胞を、製造業者の指示に従って、ｐＧＬ４．２９［ｌｕｃ２Ｐ／ＣＲＥ／Ｈｙｇｒｏ］（Ｐｒｏｍｅｇａ）およびＦｕｇｅｎｅ ＨＤ（Ｐｒｏｍｅｇａ）のプラスミドＤＮＡでトランスフェクトする。トランスフェクトした細胞を、３～４週間、ハイグロマイシンＢを１ｍｇ／ｍＬで用いて選択する。クローン株を、９６ウェルプレートへの限定希釈クローニングにより得て、Ｂｒｉｇｈｔ－Ｇｌｏ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いたルシフェラーゼアッセイにより、フォルスコリン応答で確認する。クローンを増殖させ、回収し、凍結培地に再懸濁し、クライオバイアルに分注し、長期保存のために液体窒素中で保持する。ヒトＲＸＦＰ１およびＲＸＦＰ２受容体を用いる後続のトランスフェクションのために、フォルスコリン応答が最良である（シグナル対バックグラウンド比）上位応答物のクローン株＃２Ｂ６を選択する。
ＣＨＯヒトＲＸＦＰ１およびヒトＲＸＦＰ２発現細胞株の生成：ＣＨＯ－ＣＲＥ－Ｌｕｃ株＃２Ｂ６細胞を、２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、４０μｇ／ｍＬ Ｌ－プロリン、１倍抗生物質、１ｍｇ／ｍＬハイグロマイシンＢを含む５％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ－Ｆ１２ ３：１中で培養し、ＴｒｙｐＬＥ（商標）Ｅｘｐｒｅｓｓ（Ｇｉｂｃｏ）で２～３日ごとに１：５で分割する。細胞を、製造業者の指示に従って、ヒトＲＸＦＰ１受容体またはヒトＲＸＦＰ２受容体およびＦｕｇｅｎｅ ＨＤ（Ｐｒｏｍｅｇａ）のプラスミドＤＮＡでトランスフェクトする。トランスフェクトした細胞を、３～４週間、ハイグロマイシンＢ（１ｍｇ／ｍＬ）およびピューロマイシン（６μｇ／ｍＬ）用いて選択する。クローン株を、９６ウェルプレートへの限定希釈クローニングにより得る。クローン株を、ヒトＲＬＮ２応答により確認する。クローンを増殖させ、回収し、凍結培地に再懸濁し、クライオバイアルに分注し、長期保存のために液体窒素下で凍結した状態で保持する。アッセイ検証のために、ヒトＲＬＮ２に対して応答が最良である（シグナル対バックグラウンド比）クローン株を選択する。
ヒトＲＸＦＰ１およびＲＸＦＰ２受容体ルシフェラーゼアッセイ：ヒトＲＸＦＰ１またはヒトＲＸＦＰ２を発現するＣＨＯ細胞株を、選択培地（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、４０μｇ／ｍＬ Ｌ－プロリン、１倍抗生物質、６μｇ／ｍＬピューロマイシン、１ｍｇ／ｍＬハイグロマイシンＢを含む５％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ－Ｆ１２ ３：１）で培養する。１日目（ｃＡＭＰ ＣＲＥルシフェラーゼレポーターアッセイの前日）に、細胞をＰＢＳで１回洗浄し、細胞解離溶液（酵素不含細胞解離溶液、ＧＩＢＣＯカタログ番号１３１５１－０１４：ＴｒｙｐＬＥ（商標）Ｅｘｐｒｅｓｓ＝３０：１）でフラスコから浮かせ、プレーティング培地（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１倍抗生物質、０．５％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ－Ｆ１２ ３：１）に再懸濁する。細胞を、９６ウェルプレート（Ｆａｌｃｏｎカタログ番号３５３２１９）に２０，０００細胞／０．１ｍＬ／ウェルでプレーティングする。細胞を、３７℃、５％ＣＯ２で一晩培養する。１日目（ｃＡＭＰ ＣＲＥルシフェラーゼレポーターアッセイの日）に、培地を除去し、９０μＬの無血清培地（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１倍抗生物質を含むＤＭＥＭ－Ｆ１２ ３：１）で交換する。プレートを３７℃で２時間インキュベートした後、１０μＬの１０倍リガンドを加える（ＲＬＮ２、最終１倍）。プレートを３７℃でさらに４時間インキュベ－トする。インキュベーション期間が完了した後、プレートを１５分かけて室温にする。次に、５０μＬのＢｒｉｇｈｔ－Ｇｌｏ（商標）を各ウェルに加え、プレートを、Ｇｅｎ５ソフトウェアを備えたＢｉｏｔｅｋ Ｎｅｏ２リーダーで読み取る。
データの統計分析：データを、Ｂｉｏｔｅｋ Ｎｅｏ２リーダーからＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（登録商標）ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，ＬＬＣ；Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ；バージョン７）にインポートする。ＥＣ５０値を、可変勾配－４パラメータ用量応答曲線により生成する。
Figure 2022542301000031
インビトロ機能
実施例１９：雄のＳｐｒａｇｕｅ ＤａｗｌｅｙラットにおけるＲＬＮ類似体の薬物動態
雄のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットに、Ｈｉｓ－ＮａＣｌ緩衝液（ｐＨ６．０）中のＲＬＮ類似体２００ｎｍｏｌ／ｋｇの単回ＳＱ用量を１．０ｍＬ／ｋｇの体積で投与する。薬物動態特性評価のため、投与後３、６、１２、２４、４８、７２、９６、１２０、１４４、１６８、および２４０時間で採血を行う。
ＲＬＮ類似体の血漿濃度を、Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙで認定されたＬＣ／ＭＳ法によって決定する。実施例の化合物および類似体の内部標準を、ヒトＲＬＮ抗体を使用して１００％ラット血漿から抽出し、続いてＱ－Ｅｘａｃｔｉｖｅ（商標）Ｏｒｂｉｔｒａｐ（登録商標）質量分析計を使用してＮ末端トリプシンペプチドを検出する。
実施例４および７のＲＬＮ類似体のデータを以下の表１６に提供する。
Figure 2022542301000032
注記：略称：ｔ１／２＝半減期、Ｔｍａｘ＝最大濃度までの時間、Ｃｍａｘ＝最大観察血漿濃度、ＡＵＣ０－ｉｎｆ＝０時間から無限大までの曲線下面積、ＣＬ／Ｆ＝クリアランス／生物学的利用率、Ｎ＝３動物／群／時点。
表１６に示すように、実施例４および７のＲＬＮ類似体は、Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットにおける拡張された薬物動態プロファイルを示している。
実施例２０：ＲＬＮ類似体が雄のＳｐｒａｇｕｅ ＤａｗｌｅｙラットにおけるＩＶ投与後の腎血流に与えるインビボ効果
雄の５週齢のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラット（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）を、実験開始前の１週間、通常の明暗サイクルで飼育室に収容する。その後、ラットを、ビヒクル（２０ｍＭ Ｈｉｓ／２０ｍＭ ＮａＣｌのｐＨ６．０の緩衝液）および体重に基づく実施例７のＲＬＮ類似体の治療群に無作為化する。ＲＬＮ類似体を、２．４４μｇ／ｋｇのＩＶボーラスと後続する０．３６μｇ／ｋｇ／時のＩＶ注入、８．１３μｇ／ｋｇのＩＶボーラスと後続する１．２μｇ／ｋｇ／時のＩＶ注入、２４．４μｇ／ｋｇのＩＶボーラスと後続する３．６μｇ／ｋｇ／時のＩＶ注入、および８１．３μｇ／ｋｇのＩＶボーラスと後続する１１．９μｇ／ｋｇ／時のＩＶ注入で投薬する。
ＲＬＮ類似体が腎血流に与える効果を測定するために、ラットをウレタン（１．２ｇ／ｋｇ、ＩＰ）で麻酔し、腹部／腎超音波画像検査および腎動脈パルス波ドップラー血流測定（ＶｉｓｕａｌＳｏｎｉｃｓ，Ｍｏｄｅｌ Ｖｅｖｏ ３１００超音波システム、Ｆｕｊｉｆｉｌｍ）のために準備する。慢性尾静脈カテーテルを、ＩＶボーラスおよび注入投与のために配置する。３０分の順応期間の後、ベースラインおよび投薬開始後３時間の腎血流量測定値を取得する。
Figure 2022542301000033
注記：結果は平均±ＳＤとして表す。†ベースラインとの有意な差異（ｐ＜０．００１ ＡＮＯＶＡ）、＊ビヒクルとの有意な差異（ｐ＜０．００１ ＡＮＯＶＡ）、治療群当たりＮ＝５。
表１７に見られるように、実施例７のＲＬＮ類似体により、８．１３μｇ／ｋｇのＩＶボーラスと後続する１．２μｇ／ｋｇ／時のＩＶ注入、２４．４μｇ／ｋｇのＩＶボーラスと後続する３．６μｇ／ｋｇ／時のＩＶ注入、および８１．３μｇ／ｋｇのＩＶボーラスと後続する１１．９μｇ／ｋｇ／時のＩＶ注入で治療した群の腎血流が、曝露の３時間後に、２６．６、４８．８、および６０．４％、有意に増加する。
実施例２１：ＲＬＮ類似体が雄のＳｐｒａｇｕｅ ＤａｗｌｅｙラットにおけるＳＱ投与後の腎血流に与えるインビボ効果
雄の５週齢のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラット（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）を、実験開始前の１週間、通常の明暗サイクルで飼育室に収容する。その後、ラットを、ビヒクル（２０ｍＭ Ｈｉｓ／２０ｍＭ ＮａＣｌのｐＨ６．０の緩衝液）および体重に基づく実施例７のＲＬＮ類似体の治療群に無作為化する。ＲＬＮ類似体を１８０μｇ／ｋｇでＳＱ投薬する。
ＲＬＮ類似体が腎血流に与える効果を測定するために、投薬から４８時間後にラットをウレタン（１．２ｇ／ｋｇ、ＩＰ）で麻酔し、腹部／腎超音波画像検査および腎動脈パルス波ドップラー血流測定（ＶｉｓｕａｌＳｏｎｉｃｓ，Ｍｏｄｅｌ Ｖｅｖｏ ３１００超音波システム、Ｆｕｊｉｆｉｌｍ）のために準備する。３０分の順応期間の後、腎血流量測定値を取得する。
Figure 2022542301000034
表１８に見られるように、実施例７のＲＬＮ類似体により、１８０μｇ／ｋｇのＳＱ用量に曝露した後４８時間の腎血流が有意に増加する。
配列
以下の核酸配列および／またはアミノ酸配列が本開示において言及され、参照のために以下に提供される。
配列番号１－ヒトｐｒｏ－ＲＬＮ１
ＭＰＲＬＦＬＦＨＬＬＥＦＣＬＬＬＮＱＦＳＲＡＶＡＡＫＷＫＤＤＶＩＫＬＣＧＲＥＬＶＲＡＱＩＡＩＣＧＭＳＴＷＳＫＲＳＬＳＱＥＤＡＰＱＴＰＲＰＶＡＥＩＶＰＳＦＩＮＫＤＴＥＴＩＩＩＭＬＥＦＩＡＮＬＰＰＥＬＫＡＡＬＳＥＲＱＰＳＬＰＥＬＱＱＹＶＰＡＬＫＤＳＮＬＳＦＥＥＦＫＫＬＩＲＮＲＱＳＥＡＡＤＳＮＰＳＥＬＫＹＬＧＬＤＴＨＳＱＫＫＲＲＰＹＶＡＬＦＥＫＣＣＬＩＧＣＴＫＲＳＬＡＫＹＣ
配列番号２－ヒトＲＬＮ１ Ａ鎖
ＰＹＶＡＬＦＥＫＣＣＬＩＧＣＴＫＲＳＬＡＫＹＣ
配列番号３－ヒトＲＬＮ１ Ｂ鎖
ＶＡＡＫＷＫＤＤＶＩＫＬＣＧＲＥＬＶＲＡＱＩＡＩＣＧＭＳＴＷＳ
配列番号４－ヒトｐｒｏ－ＲＬＮ２
ＭＰＲＬＦＦＦＨＬＬＧＶＣＬＬＬＮＱＦＳＲＡＶＡＤＳＷＭＥＥＶＩＫＬＣＧＲＥＬＶＲＡＱＩＡＩＣＧＭＳＴＷＳＫＲＳＬＳＱＥＤＡＰＱＴＰＲＰＶＡＥＩＶＰＳＦＩＮＫＤＴＥＴＩＮＭＭＳＥＦＶＡＮＬＰＱＥＬＫＬＴＬＳＥＭＱＰＡＬＰＱＬＱＱＨＶＰＶＬＫＤＳＳＬＬＦＥＥＦＫＫＬＩＲＮＲＱＳＥＡＡＤＳＳＰＳＥＬＫＹＬＧＬＤＴＨＳＲＫＫＲＱＬＹＳＡＬＡＮＫＣＣＨＶＧＣＴＫＲＳＬＡＲＦＣ
配列番号５－ヒトＲＬＮ２ Ａ鎖
ＱＬＹＳＡＬＡＮＫＣＣＨＶＧＣＴＫＲＳＬＡＲＦＣ
配列番号６－ヒトＲＬＮ２ Ｂ鎖
ＤＳＷＭＥＥＶＩＫＬＣＧＲＥＬＶＲＡＱＩＡＩＣＧＭＳＴＷＳ
配列番号７－ヒトｐｒｏ－ＲＬＮ３
ＭＡＲＹＭＬＬＬＬＬＡＶＷＶＬＴＧＥＬＷＰＧＡＥＡＲＡＡＰＹＧＶＲＬＣＧＲＥＦＩＲＡＶＩＦＴＣＧＧＳＲＷＲＲＳＤＩＬＡＨＥＡＭＧＤＴＦＰＤＡＤＡＤＥＤＳＬＡＧＥＬＤＥＡＭＧＳＳＥＷＬＡＬＴＫＳＰＱＡＦＹＲＧＲＰＳＷＱＧＴＰＧＶＬＲＧＳＲＤＶＬＡＧＬＳＳＳＣＣＫＷＧＣＳＫＳＥＩＳＳＬＣ
配列番号８－ヒトＲＬＮ３ Ａ鎖
ＤＶＬＡＧＬＳＳＳＣＣＫＷＧＣＳＫＳＥＩＳＳＬＣ
配列番号９－ヒトＲＬＮ３ Ｂ鎖
ＲＡＡＰＹＧＶＲＬＣＧＲＥＦＩＲＡＶＩＦＴＣＧＧＳＲＷ
配列番号１０－ＶＨＨ部分＃１（Ｃ２２）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号１１－ＶＨＨ部分＃２（Ｃ２２．４３）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＰ
配列番号１２－ＶＨＨ部分＃３（Ｃ８０）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号１３－ＶＨＨ部分＃４（Ｃ８０．４３）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＰ
配列番号１４－Ｌ１（（ＧＧＧＧＱ）ｎの塩基性配列）
ＧＧＧＧＱ
配列番号１５－Ｌ１（（ＧＧＧＱ）ｎの塩基性配列）
ＧＧＧＱ
配列番号１６－Ｌ１（（ＧＧＧＧＳ）ｎの塩基性配列）
ＧＧＧＧＳ
配列番号１７－Ｌ１（（ＰＧＰＱ）ｎの塩基性配列）
ＰＧＰＱ
配列番号１８－Ｌ１（（ＰＧＰＡ）ｎの塩基性配列）
ＰＧＰＡ
配列番号１９－Ｌ１＃１（（ＧＧＧＧＱ）５）
ＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱ
配列番号２０－Ｌ１＃２（（ＰＧＰＱ）８）
ＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱ
配列番号２１－Ｌ１＃３（ＰＧＰＡ）８
ＰＧＰＡＰＧＰＡＰＧＰＡＰＧＰＡＰＧＰＡＰＧＰＡＰＧＰＡＰＧＰＡ
配列番号２２－Ｌ２＃１
ＧＧＧＳＧＧＳＧＧＧ
配列番号２３－Ｌ２＃２
ＧＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＧ
配列番号２４－ＲＬＮ２類似体＃１（Ｃ２２－（Ｇ４Ｑ）５－Ａ１０Ｂ（ｄｅｓＢ１）ＲＬＮ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＱＬＹＳＡＬＡＮＫＣＣＨＶＧＣＴＫＲＳＬＡＲＦＣＧＧＧＳＧＧＳＧＧＧＳＷＭＥＥＶＩＫＬＣＧＲＥＬＶＲＡＱＩＡＩＣＧＭＳＴＷＳ
配列番号２５－ＲＬＮ２類似体＃２（Ｃ２２－（ＰＧＰＡ）８－Ａ１０Ｂ（ｄｅｓＢ１）ＲＬＮ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＧＰＡＰＧＰＡＰＧＰＡＰＧＰＡＰＧＰＡＰＧＰＡＰＧＰＡＰＧＰＡＱＬＹＳＡＬＡＮＫＣＣＨＶＧＣＴＫＲＳＬＡＲＦＣＧＧＧＳＧＧＳＧＧＧＳＷＭＥＥＶＩＫＬＣＧＲＥＬＶＲＡＱＩＡＩＣＧＭＳＴＷＳ
配列番号２６－ＲＬＮ２類似体＃３（Ｃ２２－（Ｇ４Ｑ）５－Ｂ１０Ａ（ｄｅｓＢ１）ＲＬＮ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＳＷＭＥＥＶＩＫＬＣＧＲＥＬＶＲＡＱＩＡＩＣＧＭＳＴＷＳＧＧＧＳＧＧＳＧＧＧＱＬＹＳＡＬＡＮＫＣＣＨＶＧＣＴＫＲＳＬＡＲＦＣ
配列番号２７－ＲＬＮ２類似体＃４（Ｃ２２－（ＰＧＰＱ）８－Ｂ１０Ａ（ｄｅｓＢ１）ＲＬＮ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＳＷＭＥＥＶＩＫＬＣＧＲＥＬＶＲＡＱＩＡＩＣＧＭＳＴＷＳＧＧＧＳＧＧＳＧＧＧＱＬＹＳＡＬＡＮＫＣＣＨＶＧＣＴＫＲＳＬＡＲＦＣ
配列番号２８－ＲＬＮ２類似体＃５（Ｂ１０Ａ（ｄｅｓＢ１）ＲＬＮ－（Ｇ４Ｑ）５－Ｃ２２．４３）
ＳＷＭＥＥＶＩＫＬＣＧＲＥＬＶＲＡＱＩＡＩＣＧＭＳＴＷＳＧＧＧＳＧＧＳＧＧＧＱＬＹＳＡＬＡＮＫＣＣＨＶＧＣＴＫＲＳＬＡＲＦＣＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＰ
配列番号２９－ＲＬＮ２類似体＃６（Ｂ１０Ａ（ｄｅｓＢ１）ＲＬＮ－（ＰＧＰＱ）８－Ｃ２２．４３）
ＳＷＭＥＥＶＩＫＬＣＧＲＥＬＶＲＡＱＩＡＩＣＧＭＳＴＷＳＧＧＧＳＧＧＳＧＧＧＱＬＹＳＡＬＡＮＫＣＣＨＶＧＣＴＫＲＳＬＡＲＦＣＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＰ
配列番号３０－ＲＬＮ２類似体＃７（Ｃ８０－（Ｇ４Ｑ）５－Ｂ１０Ａ（ｄｅｓＢ１）ＲＬＮ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＳＷＭＥＥＶＩＫＬＣＧＲＥＬＶＲＡＱＩＡＩＣＧＭＳＴＷＳＧＧＧＳＧＧＳＧＧＧＱＬＹＳＡＬＡＮＫＣＣＨＶＧＣＴＫＲＳＬＡＲＦＣ
配列番号３１－ＲＬＮ２類似体＃８（Ｃ８０－（ＰＧＰＱ）８－Ｂ１０Ａ（ｄｅｓＢ１）ＲＬＮ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＳＷＭＥＥＶＩＫＬＣＧＲＥＬＶＲＡＱＩＡＩＣＧＭＳＴＷＳＧＧＧＳＧＧＳＧＧＧＱＬＹＳＡＬＡＮＫＣＣＨＶＧＣＴＫＲＳＬＡＲＦＣ
配列番号３２－ＲＬＮ２類似体＃９（Ｂ１０Ａ（ｄｅｓＢ１）ＲＬＮ－（Ｇ４Ｑ）５－Ｃ８０．４３）
ＳＷＭＥＥＶＩＫＬＣＧＲＥＬＶＲＡＱＩＡＩＣＧＭＳＴＷＳＧＧＧＳＧＧＳＧＧＧＱＬＹＳＡＬＡＮＫＣＣＨＶＧＣＴＫＲＳＬＡＲＦＣＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＰ
配列番号３３－ＲＬＮ２類似体＃１０（Ｂ１０Ａ（ｄｅｓＢ１）ＲＬＮ－（ＰＧＰＱ）８－Ｃ８０．４３）
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配列番号３４－ＲＬＮ２類似体＃１１（Ｃ２２－（Ｇ４Ｑ）５－Ｂ１３Ａ（ｄｅｓＢ１、ｄｅｓＡ１～４）ＲＬＮ）
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配列番号３５－ＲＬＮ２類似体＃１２（Ｃ８０－（Ｇ４Ｑ）５－Ｂ１３Ａ（ｄｅｓＢ１、ｄｅｓＡ１～４）ＲＬＮ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＳＷＭＥＥＶＩＫＬＣＧＲＥＬＶＲＡＱＩＡＩＣＧＭＳＴＷＳＧＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＧＡＬＡＮＫＣＣＨＶＧＣＴＫＲＳＬＡＲＦＣ
配列番号３６－ＲＬＮ２類似体＃１３（Ｃ８０－（Ｇ４Ｑ）５－Ａ１０Ｂ（ｄｅｓＢ１、ｄｅｓＡ１～４）ＲＬＮ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＡＬＡＮＫＣＣＨＶＧＣＴＫＲＳＬＡＲＦＣＧＧＧＳＧＧＳＧＧＧＳＷＭＥＥＶＩＫＬＣＧＲＥＬＶＲＡＱＩＡＩＣＧＭＳＴＷＳ
配列番号３７－ＲＬＮ２類似体＃１４（Ｃ８０－（ＰＧＰＱ）８－Ａ１０Ｂ（ｄｅｓＢ１、ｄｅｓＡ１～４）ＲＬＮ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＡＬＡＮＫＣＣＨＶＧＣＴＫＲＳＬＡＲＦＣＧＧＧＳＧＧＳＧＧＧＳＷＭＥＥＶＩＫＬＣＧＲＥＬＶＲＡＱＩＡＩＣＧＭＳＴＷＳ
配列番号３８－ＲＬＮ２類似体＃１５（Ｃ２２－（Ｇ４Ｑ）５－Ｂ１０ＡＲＬＮ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＤＳＷＭＥＥＶＩＫＬＣＧＲＥＬＶＲＡＱＩＡＩＣＧＭＳＴＷＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＱＬＹＳＡＬＡＮＫＣＣＨＶＧＣＴＫＲＳＬＡＲＦＣ
配列番号３９－ＲＬＮ２類似体＃１６（Ｃ２２－（ＰＧＰＡ）８－Ｂ１０ＡＲＬＮ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＧＰＡＰＧＰＡＰＧＰＡＰＧＰＡＰＧＰＡＰＧＰＡＰＧＰＡＰＧＰＡＤＳＷＭＥＥＶＩＫＬＣＧＲＥＬＶＲＡＱＩＡＩＣＧＭＳＴＷＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＱＬＹＳＡＬＡＮＫＣＣＨＶＧＣＴＫＲＳＬＡＲＦＣ
配列番号４０－ヒトＲＸＦＰ１受容体
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配列番号４１－ヒトＲＸＦＰ２受容体
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配列番号４２－ヒトＲＸＦＰ３受容体
ＭＱＭＡＤＡＡＴＩＡＴＭＮＫＡＡＧＧＤＫＬＡＥＬＦＳＬＶＰＤＬＬＥＡＡＮＴＳＧＮＡＳＬＱＬＰＤＬＷＷＥＬＧＬＥＬＰＤＧＡＰＰＧＨＰＰＧＳＧＧＡＥＳＡＤＴＥＡＲＶＲＩＬＩＳＶＶＹＷＶＶＣＡＬＧＬＡＧＮＬＬＶＬＹＬＭＫＳＭＱＧＷＲＫＳＳＩＮＬＦＶＴＮＬＡＬＴＤＦＱＦＶＬＴＬＰＦＷＡＶＥＮＡＬＤＦＫＷＰＦＧＫＡＭＣＫＩＶＳＭＶＴＳＭＮＭＹＡＳＶＦＦＬＴＡＭＳＶＴＲＹＨＳＶＡＳＡＬＫＳＨＲＴＲＧＨＧＲＧＤＣＣＧＲＳＬＧＤＳＣＣＦＳＡＫＡＬＣＶＷＩＷＡＬＡＡＬＡＳＬＰＳＡＩＦＳＴＴＶＫＶＭＧＥＥＬＣＬＶＲＦＰＤＫＬＬＧＲＤＲＱＦＷＬＧＬＹＨＳＱＫＶＬＬＧＦＶＬＰＬＧＩＩＩＬＣＹＬＬＬＶＲＦＩＡＤＲＲＡＡＧＴＫＧＧＡＡＶＡＧＧＲＰＴＧＡＳＡＲＲＬＳＫＶＴＫＳＶＴＩＶＶＬＳＦＦＬＣＷＬＰＮＱＡＬＴＴＷＳＩＬＩＫＦＮＡＶＰＦＳＱＥＹＦＬＣＱＶＹＡＦＰＶＳＶＣＬＡＨＳＮＳＣＬＮＰＶＬＹＣＬＶＲＲＥＦＲＫＡＬＫＳＬＬＷＲＩＡＳＰＳＩＴＳＭＲＰＦＴＡＴＴＫＰＥＨＥＤＱＧＬＱＡＰＡＰＰＨＡＡＡＥＰＤＬＬＹＹＰＰＧＶＶＶＹＳＧＧＲＹＤＬＬＰＳＳＳＡＹ
配列番号４３－ヒトＲＸＦＰ４受容体
ＭＰＴＬＮＴＳＡＳＰＰＴＦＦＷＡＮＡＳＧＧＳＶＬＳＡＤＤＡＰＭＰＶＫＦＬＡＬＲＬＭＶＡＬＡＹＧＬＶＧＡＩＧＬＬＧＮＬＡＶＬＷＶＬＳＮＣＡＲＲＡＰＧＰＰＳＤＴＦＶＦＮＬＡＬＡＤＬＧＬＡＬＴＬＰＦＷＡＡＥＳＡＬＤＦＨＷＰＦＧＧＡＬＣＫＭＶＬＴＡＴＶＬＮＶＹＡＳＩＦＬＩＴＡＬＳＶＡＲＹＷＶＶＡＭＡＡＧＰＧＴＨＬＳＬＦＷＡＲＩＡＴＬＡＶＷＡＡＡＡＬＶＴＶＰＴＡＶＦＧＶＥＧＥＶＣＧＶＲＬＣＬＬＲＦＰＳＲＹＷＬＧＡＹＱＬＱＲＶＶＬＡＦＭＶＰＬＧＶＩＴＴＳＹＬＬＬＬＡＦＬＱＲＲＱＲＲＲＱＤＳＲＶＶＡＲＳＶＲＩＬＶＡＳＦＦＬＣＷＦＰＮＨＶＶＴＬＷＧＶＬＶＫＦＤＬＶＰＷＮＳＴＦＹＴＩＱＴＹＶＦＰＶＴＴＣＬＡＨＳＮＳＣＬＮＰＶＬＹＣＬＬＲＲＥＰＲＱＡＬＡＧＴＦＲＤＬＲＬＲＬＷＰＱＧＧＧＷＶＱＱＶＡＬＫＱＶＧＲＲＷＶＡＳＮＰＲＥＳＲＰＳＴＬＬＴＮＬＤＲＧＴＰＧ
配列番号４４－シグナルペプチド
ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧ
配列番号４５－ＶＨＨ部分＃５（ＭＣ６．１）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＶＳＳＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＳＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＶＲＰＧＲＰＬＩＴＳＲＤＡＮＬＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号４６－ＶＨＨ部分＃６（ＭＣ６．１Ｃ６）
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配列番号４７－ＶＨＨ部分＃７（Ｃ２２－Ｇ２６Ｙ）
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配列番号４８－ＶＨＨ部分＃８（Ｃ２２－Ｒ２７Ａ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＡＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号４９－ＶＨＨ部分＃９（Ｃ２２－Ｉ５７Ｅ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＥＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号５０－ＶＨＨ部分＃１０（Ｃ２２－Ｉ５７Ｑ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＱＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号５１－ＶＨＨ部分＃１１（Ｃ２２－Ｙ５９Ａ）
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配列番号５２－ＶＨＨ部分＃１２（Ｃ２２－Ｙ５９Ｅ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＥＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号５３－ＶＨＨ部分＃１３（Ｃ２２－Ｙ５９Ｑ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＱＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号５４－ＶＨＨ部分＃１４（Ｃ２２－Ｙ５９Ｓ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＳＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号５５－ＶＨＨ部分＃１５（Ｃ２２－Ｙ５９Ｔ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＴＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号５６－ＶＨＨ部分＃１６（Ｃ２２－Ｒ１０２Ｋ）
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配列番号５７－ＶＨＨ部分＃１７（Ｃ２２－Ｒ１０２Ｑ）
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配列番号５８－ＶＨＨ部分＃１８（Ｃ２２－Ｒ１０２Ｓ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＳＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号５９－ＶＨＨ部分＃１９（Ｃ２２－Ｐ１０３Ｅ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＥＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号６０－ＶＨＨ部分＃２０（Ｃ２２－Ｐ１０３Ｑ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＱＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号６１－ＶＨＨ部分＃２１（Ｃ２２－Ｐ１０３Ｓ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＳＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号６２－ＶＨＨ部分＃２２（Ｃ２２－Ｌ１０４Ｅ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＥＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号６３－ＶＨＨ部分＃２３（Ｃ２２－Ｌ１０４Ｇ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＧＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号６４－ＶＨＨ部分＃２４（Ｃ２２－Ｌ１０４Ｑ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＱＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号６５－ＶＨＨ部分＃２５（Ｃ２２－Ｌ１０４Ｔ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＴＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号６６－ＶＨＨ部分＃２６（Ｃ２２－Ｓ１０７Ｅ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＥＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号６７－Ｌ２＃３
ＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ

Claims (47)

  1. 以下の構造
    ＶＨＨ－Ｌ１－Ａ－Ｌ２－Ｂ、
    ＶＨＨ－Ｌ１－Ｂ－Ｌ２－Ａ、
    Ａ－Ｌ２－Ｂ－Ｌ１－ＶＨＨ、もしくは
    Ｂ－Ｌ２－Ａ－Ｌ１－ＶＨＨ、を含む化合物であって、
    ＶＨＨが、配列番号１０、１１、１２、および１３からなる群から選択されるアミノ酸配列、もしくはそれに対して少なくとも９０％の配列相同性を有する配列を含み、
    Ａが、配列番号２、５、および８からなる群から選択されるアミノ酸配列、もしくはそれに対して少なくとも９０％の配列相同性を有する配列を含む、リラキシンＡ鎖であり、
    Ｂが、配列番号３、６、および９からなる群から選択されるアミノ酸配列、もしくはそれに対して少なくとも９０％の配列相同性を有する配列を含む、リラキシンＢ鎖であり、
    Ｌ１が、（ＧＧＧＧＱ）ｎ（配列番号１４）、（ＰＧＰＱ）ｎ（配列番号１７）、および（ＰＧＰＡ）ｎ（配列番号１８）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む第１のリンカーであり、ｎが、１～１０であることができ、
    Ｌ２が、配列番号２２、２３、および６７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む第２のリンカーである、化合物、または
    その薬学的に許容される塩。
  2. Ａが配列番号２である、請求項１に記載の化合物。
  3. Ｂが配列番号３である、請求項１または２に記載の化合物。
  4. Ａが配列番号５である、請求項１に記載の化合物。
  5. Ｂが配列番号６である、請求項１または２に記載の化合物。
  6. Ａが、配列番号５であり、最初の４つのアミノ酸を欠く（ｄｅｓＡ１～４）、請求項１に記載の化合物。
  7. Ｂが、配列番号６であり、最初のアミノ酸を欠く（ｄｅｓＢ１）、請求項１に記載の化合物。
  8. Ａが、配列番号５であり、最初の４つのアミノ酸を欠き（ｄｅｓＡ１～４）、Ｂが、配列番号６であり、最初のアミノ酸を欠く（ｄｅｓＢ１）、請求項１に記載の化合物。
  9. Ａが配列番号８である、請求項１に記載の化合物。
  10. Ｂが配列番号９である、請求項１または２に記載の化合物。
  11. Ｌ１が配列番号１９である、請求項１～１０のいずれか一項に記載の化合物。
  12. Ｌ１が配列番号２０である、請求項１～１０のいずれか一項に記載の化合物。
  13. Ｌ１が配列番号２１である、請求項１～１０のいずれか一項に記載の化合物。
  14. 配列番号２４～３９からなる群から選択されるアミノ酸配列、もしくはそれに対して少なくとも９０％の配列相同性を有する配列を含む、化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  15. 配列番号２４～３９からなる群から選択されるアミノ酸配列、もしくはそれに対して少なくとも９０％の配列相同性を有する配列から本質的になる、化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  16. 配列番号２４～３９からなる群から選択されるアミノ酸配列、もしくはそれに対して少なくとも９０％の配列相同性を有する配列のみからなる、化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  17. 請求項１～１６のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩と、
    薬学的に許容される緩衝液と、を含む、薬学的組成物。
  18. 個体の心臓、肺、および／または腎臓の状態、疾患、および／または障害を治療する方法であって、
    前記個体に有効量の請求項１～１６のいずれか一項に記載の化合物または請求項１７に記載の薬学的組成物を投与するステップを含む、方法。
  19. 療法で使用するための、請求項１～１６のいずれか一項に記載の化合物。
  20. 心臓、肺、および／または腎臓の状態、疾患、および／または障害の治療に使用するための、請求項１～１６のいずれか一項に記載の化合物。
  21. 心臓、肺、および／または腎臓の状態、疾患、および／または障害の治療用の医薬品を製造するための、請求項１～１６のいずれか一項に記載の化合物の使用。
  22. ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１０）のアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも９０％の配列相同性を有する配列を含む、化合物。
  23. ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＰ（配列番号１１）のアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも９０％の配列相同性を有する配列を含む、化合物。
  24. ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１２）のアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも９０％の配列相同性を有する配列を含む、化合物。
  25. ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＰ（配列番号１３）のアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも９０％の配列相同性を有する配列を含む、化合物。
  26. ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＶＳＳＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＳＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＶＲＰＧＲＰＬＩＴＳＲＤＡＮＬＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号４５）のアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも９０％の配列相同性を有する配列を含む、化合物。
  27. ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＳＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＲＶＡＮＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号４６）のアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも９０％の配列相同性を有する配列を含む、化合物。
  28. ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＹＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号４７）のアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも９０％の配列相同性を有する配列を含む、化合物。
  29. ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＡＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号４８）のアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも９０％の配列相同性を有する配列を含む、化合物。
  30. ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＥＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号４９）のアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも９０％の配列相同性を有する配列を含む、化合物。
  31. ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＱＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５０）のアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも９０％の配列相同性を有する配列を含む、化合物。
  32. ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＡＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５１）のアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも９０％の配列相同性を有する配列を含む、化合物。
  33. ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＥＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５２）のアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも９０％の配列相同性を有する配列を含む、化合物。
  34. ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＱＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５３）のアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも９０％の配列相同性を有する配列を含む、化合物。
  35. ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＳＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５４）のアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも９０％の配列相同性を有する配列を含む、化合物。
  36. ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＴＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５５）のアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも９０％の配列相同性を有する配列を含む、化合物。
  37. ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＫＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５６）のアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも９０％の配列相同性を有する配列を含む、化合物。
  38. ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＱＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５７）のアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも９０％の配列相同性を有する配列を含む、化合物。
  39. ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＳＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５８）のアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも９０％の配列相同性を有する配列を含む、化合物。
  40. ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＥＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５９）のアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも９０％の配列相同性を有する配列を含む、化合物。
  41. ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＱＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６０）のアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも９０％の配列相同性を有する配列を含む、化合物。
  42. ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＳＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６１）のアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも９０％の配列相同性を有する配列を含む、化合物。
  43. ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＥＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６２）のアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも９０％の配列相同性を有する配列を含む、化合物。
  44. ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＧＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６３）のアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも９０％の配列相同性を有する配列を含む、化合物。
  45. ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＱＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６４）のアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも９０％の配列相同性を有する配列を含む、化合物。
  46. ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＴＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６５）のアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも９０％の配列相同性を有する配列を含む、化合物。
  47. ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＥＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６６）のアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも９０％の配列相同性を有する配列を含む、化合物。
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