JP2022538425A - ４－１ｂｂ共刺激性ドメインを有するキメラ抗原受容体 - Google Patents

４－１ｂｂ共刺激性ドメインを有するキメラ抗原受容体 Download PDF

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Abstract

（ｉ）抗原結合ドメインを含む細胞外ドメインと、（ｉｉ）膜貫通ドメインと、（ｉｉｉ）共刺激性エンドドメインを含む細胞内ドメインとを含むＣＡＲを対象とするＣＡＲ－Ｔ組成物であって、共刺激性エンドドメインが、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７由来の細胞内シグナル伝達ドメイン、及び５つの追加アミノ酸を含む、ＣＡＲ－Ｔ組成物を提供する。また、本開示は、抗原結合分子とＣＡＲを含む操作された免疫細胞とを用いる、ベクター、組成物、及び治療方法も提供する。本明細書で提供するＣＡＲ組成物は、ある特定のがんの治療に使用することができる。【選択図】図１

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年６月２７日に出願された米国特許出願６２／８６７，５０３号、２０１９年８月１２日に出願された国際特許出願ＰＣＴ／ＫＲ２０１９／０１０２４４号、２０１９年１２月１６日に出願された米国特許出願１６／７１５，４６２号、２０２０年３月１８日に出願された米国特許出願６２／９９１，４９３号、２０２０年４月３日に出願された米国特許出願６３／００４，８２７号、２０２０年６月２４日に出願された米国特許出願６３／０４３，２３７号の優先権及び利益を主張するＰＣＴ出願であり、各出願の開示内容はその全体が参照により本明細書に援用される。
背景
がんは、依然として世界における主要な死因の１つである。最近の統計では、世界人口の１３％ががんで死亡していることが報告されている。国際がん研究機関（ＩＡＲＣ）の推定によると、２０１２年の全世界における新規がん患者は１，４１０万人、がんによる死亡者は８２０万人となっている。人口の増加及び高齢化、ならびに喫煙、不健康的な食事、及び運動不足などのリスク要因にさらされることにより、２０３０年までに世界の新規がん患者数は２，１７０万人、がんによる死亡者数は１，３００万人に増加することが予想されている。さらに、がん治療の痛み及び医療費は、がん患者及びその家族のクオリティーオブライフを低下させる原因となる。
キメラ抗原受容体を用いて操作されたＴ細胞（ＣＡＲ－Ｔ）は、がんなどの疾患の治療における大きな治療可能性を有する。ＣＡＲ－Ｔ治療薬は、Ｔ細胞に強力な標的親和性及びシグナル伝達機能を付与する。しかし、ＣＡＲ－Ｔ療法の目覚ましい有効性は、しばしば重篤な副作用（例えば、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ））を伴う。したがって、副作用を軽減したＣＡＲ－Ｔ治療薬及び戦略の開発に対するアンメットニーズが依然として存在する。
概要
本明細書では、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む免疫細胞であって、当該ＣＡＲが、（ａ）抗原結合ドメインを含む細胞外ドメインと、（ｂ）膜貫通ドメインと、（ｃ）共刺激性エンドドメインを含む細胞内ドメインであって、当該共刺激性エンドドメインが、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７由来の細胞内シグナル伝達ドメイン、及び５つの追加アミノ酸を含む、細胞内ドメインとを含む、免疫細胞を提供する。
いくつかの実施形態において、キメラ抗原受容体は単一のポリペプチドである。いくつかの実施形態において、キメラ抗原受容体は２つのポリペプチドから構成される。
いくつかの実施形態において、共刺激性エンドドメインは、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７由来の細胞内シグナル伝達ドメイン、及び５つの追加アミノ酸を含み、ここで、５つの追加アミノ酸は配列番号１によってコードされる。いくつかの実施形態において、共刺激性エンドドメインは配列番号２を含む。
いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインはヒト化型である。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインはヒト型である。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは疾患に関連する抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは腫瘍抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、グリピカン３（ＧＰＣ３）、悪性腫瘍バリアント受容体（ＭＶＲ）、及びＣＤ１９からなる群より選択される抗原に特異的に結合する。
いくつかの実施形態において、膜貫通ドメインは、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、活性化ＮＫ細胞受容体、免疫グロブリンタンパク質、Ｂ７－Ｈ３、ＢＡＦＦＲ、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＢＴＬＡ、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ１９ａ、ＣＤ２、ＣＤ２４７、ＣＤ２７、ＣＤ２７６（Ｂ７－Ｈ３）、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ３０、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ６９、ＣＤ７、ＣＤ８４、ＣＤ８、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ ＡＭ、サイトカイン受容体、ＤＡＰ－１０、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、Ｆｃガンマ受容体、ＧＡＤＳ、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＩＡ４、ＩＣＡＭ－１、Ｉｇアルファ（ＣＤ７９ａ）、ＩＬ－２Ｒベータ、ＩＬ－２Ｒガンマ、ＩＬ－７Ｒアルファ、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）、インテグリン、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＩＴＧＢ１、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＴ、ＬＦＡ－１、ＣＤ８３に特異的に結合するリガンド、ＬＩＧＨＴ、ＬＴＢＲ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＭＨＣクラス１分子、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＯＸ－４０、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、プログラム死－１（ＰＤ－１）、ＰＳＧＬ１、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ）、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ－７６、ＴＮＦ受容体タンパク質、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦＳＦ１４、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＶＬＡ１、及びＶＬＡ－６からなる群より選択されるタンパク質から選択される膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態において、膜貫通ドメインはＣＤ８α由来の膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態において、細胞内ドメインはさらにＣＤ３ζ由来の細胞内ドメインを含む。
いくつかの実施形態において、キメラ抗原受容体はさらにシグナルペプチドまたはリーダー配列を含む。いくつかの実施形態において、キメラ抗原受容体はさらにヒンジ領域を含む。いくつかの実施形態において、ヒンジ領域はＣＤ８αヒンジである。いくつかの実施形態において、キメラ抗原受容体はさらに追加の抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態において、追加の抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。
いくつかの実施形態において、免疫細胞はヒト免疫細胞である。いくつかの実施形態において、ヒト免疫細胞は自己由来ヒト免疫細胞である。いくつかの実施形態において、ヒト免疫細胞は同種異系ヒト免疫細胞である。いくつかの実施形態において、免疫細胞はＴ細胞である。いくつかの実施形態において、免疫細胞はＮＫ細胞である。
本明細書では、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸であって、当該キメラ抗原受容体が、（ａ）抗原結合ドメインを含む細胞外ドメインと、（ｂ）膜貫通ドメインと、（ｃ）共刺激性エンドドメインを含む細胞内ドメインであって、当該共刺激性エンドドメインが、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７由来の細胞内シグナル伝達ドメイン、及び５つの追加アミノ酸を含む、細胞内ドメインとを含む、核酸を提供する。
いくつかの実施形態において、キメラ抗原受容体は単一のポリペプチドである。いくつかの実施形態において、キメラ抗原受容体は２つのポリペプチドから構成される。
いくつかの実施形態において、共刺激性エンドドメインは、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７由来の細胞内シグナル伝達ドメイン、及び５つの追加アミノ酸を含み、ここで、５つの追加アミノ酸は配列番号１のヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態において、共刺激性エンドドメインは配列番号２を含む。
いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインはヒト化型である。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインはヒト型である。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは疾患に関連する抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは腫瘍抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、グリカン３（ＧＰＣ３）、悪性腫瘍バリアント受容体（ＭＶＲ）、及びＣＤ１９からなる群より選択される抗原に特異的に結合する。
いくつかの実施形態において、膜貫通ドメインは、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、活性化ＮＫ細胞受容体、免疫グロブリンタンパク質、Ｂ７－Ｈ３、ＢＡＦＦＲ、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＢＴＬＡ、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ１９ａ、ＣＤ２、ＣＤ２４７、ＣＤ２７、ＣＤ２７６（Ｂ７－Ｈ３）、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ３０、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ６９、ＣＤ７、ＣＤ８４、ＣＤ８、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ ＡＭ、サイトカイン受容体、ＤＡＰ－１０、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、Ｆｃガンマ受容体、ＧＡＤＳ、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＩＡ４、ＩＣＡＭ－１、Ｉｇアルファ（ＣＤ７９ａ）、ＩＬ－２Ｒベータ、ＩＬ－２Ｒガンマ、ＩＬ－７Ｒアルファ、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）、インテグリン、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＩＴＧＢ１、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＴ、ＬＦＡ－１、ＣＤ８３に特異的に結合するリガンド、ＬＩＧＨＴ、ＬＴＢＲ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＭＨＣクラス１分子、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＯＸ－４０、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、プログラム死－１（ＰＤ－１）、ＰＳＧＬ１、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ）、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ－７６、ＴＮＦ受容体タンパク質、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦＳＦ１４、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＶＬＡ１、及びＶＬＡ－６からなる群より選択されるタンパク質から選択される膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態において、膜貫通ドメインはＣＤ８アルファ由来の膜貫通ドメインである。
いくつかの実施形態において、細胞内ドメインはさらにＣＤ３ζ由来の細胞内ドメインを含む。いくつかの実施形態において、キメラ抗原受容体はさらにシグナルペプチドまたはリーダー配列を含む。いくつかの実施形態において、キメラ抗原受容体はさらにヒンジ領域を含む。いくつかの実施形態において、ヒンジ領域はＣＤ８αヒンジである。
本明細書では、本明細書に記載の核酸のいずれか１つを含むベクターを提供する。いくつかの実施形態において、ベクターはさらに、核酸に動作可能に結合したプロモーターを含む。いくつかの実施形態において、プロモーターは構成的プロモーターである。いくつかの実施形態において、プロモーターは誘導性プロモーターである。いくつかの実施形態において、ベクターはウイルスベクターである。いくつかの実施形態において、ウイルスベクターはレンチウイルスベクターである。
本明細書では、操作された免疫細胞を産生する方法であって、本明細書に記載の核酸のいずれか１つ、または本明細書に記載のベクターのいずれか１つを免疫細胞に導入し、それによって、操作された免疫細胞を産生することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態において、当該方法はさらに、導入するステップの後に、操作された免疫細胞を培養することを含む。いくつかの実施形態において、免疫細胞はＴ細胞である。いくつかの実施形態において、免疫細胞はＮＫ細胞である。
いくつかの実施形態において、当該方法はさらに、導入するステップの前に、対象から免疫細胞を入手することを含む。いくつかの実施形態において、当該方法はさらに、対象に操作された免疫細胞を投与することを含む。いくつかの実施形態において、対象は、がんを有すると診断または同定されている。
本明細書では、本明細書に記載のいずれか１つの方法によって産生された操作された免疫細胞を提供する。
本明細書では、本明細書に記載のいずれか１つの操作された免疫細胞と、医薬的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。
本明細書では、対象におけるがんを治療する方法であって、本明細書に記載のいずれか１つの操作された免疫細胞、または本明細書に記載のいずれか１つの医薬組成物を対象に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態において、がんは、抗グリピカン３関連がん、抗ＣＤ１９関連がん、または抗ＭＶＲ関連がんである。いくつかの実施形態において、がんは、がん腫、リンパ腫（例えば、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫）、芽腫、肉腫、白血病、扁平上皮がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺腺がん、肺の扁平上皮がん、腹膜がん、肝細胞がん、胃がん、膵臓がん、神経膠腫、子宮頸がん、卵巣がん、肝がん、膀胱がん、乳がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜または子宮がん、唾液腺がん、腎臓がん、前立腺がん、外陰がん、甲状腺がん、肝臓がん、他のリンパ増殖性障害、及び様々なタイプの頭頸部がんである。いくつかの実施形態において、対象は、１つ以上の追加の抗がん治療を以前に実施されたことがあり、抗がん治療が、電離放射線、化学療法剤、治療用抗体、及びチェックポイント阻害物質からなる群より選択される。いくつかの実施形態において、対象は、がんを有すると同定または診断されている。
例示的なＭＶＲ ＣＡＲコンストラクトの模式図を示している。 ＭＶＲＬ２Ｈ２－４－１ＢＢクローニング後の例示的な酵素マッピングの結果を示している。 ｈｕＧＣ３３（ＶＨ－ＶＬ）－ｅｕＢＢｚの制限酵素消化の結果を示しており、ＤＮＡラダー上に予想サイズが記され、結果がゲル電気泳動画像で示されている。 ｈｕＧＣ３３（ＶＨ－ＶＬ）－ＢＢｚの制限酵素消化の結果を示しており、ＤＮＡラダー上に予想サイズが記され、結果がゲル電気泳動画像で示されている。 図５Ａは、インビトロでの１１日間にわたるＣＡＲ－Ｔ細胞の総増殖倍率を示すグラフである。図５Ｂは、インビトロでのＣＡＲ－Ｔ細胞の増殖倍率を比較するグラフである。図５Ｃは、インビトロでのＣＡＲ－Ｔ細胞の細胞生存率を示すグラフである。 ｈｕＧＣ３３（ＶＨ－ＶＬ）－ｅｕＢＢｚ及びｈｕＧＣ３３（ＶＨ－ＶＬ）－ＢＢｚを形質導入したＴ細胞のＣＡＲ発現に関する解析を示している。 図７Ａは、Ｈｕｈ－７細胞株由来の標的細胞を用いたＬＤＨベース細胞毒性アッセイを示すグラフである。図７Ｂは、ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞株由来の標的細胞を用いたＬＤＨベース細胞毒性アッセイを示すグラフである。 ｈｕＧＣ３３（ＶＨ－ＶＬ）－ｅｕＢＢｚ及びｈｕＧＣ３３（ＶＨ－ＶＬ）－ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ細胞のインビボ有効性を比較するグラフのセットである。 図９Ａは、ｈｕＧＣ３３（ＶＨ－ＶＬ）－ｅｕＢＢｚ及びｈｕＧＣ３３（ＶＨ－ＶＬ）－ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ細胞の注入から５週間後のマウスモデルからのＣＡＲ－Ｔ細胞数を示すグラフである。図９Ｂは、ｈｕＧＣ３３（ＶＨ－ＶＬ）－ｅｕＢＢｚ及びｈｕＧＣ３３（ＶＨ－ＶＬ）－ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ細胞の注入から５週間後のマウスモデルからのＣＡＲ－Ｔ細胞数を比較するグラフのセットである。 ｈｕＧＣ３３（ＶＨ－ＶＬ）－ｅｕＢＢｚ及びｈｕＧＣ３３（ＶＨ－ＶＬ）－ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ細胞の注入から５週間後のマウスにおける血液、骨髄、脾臓、及び肝臓中のＣＡＲ－Ｔ細胞のＦＡＣＳ染色を用いた解析を示している。 図１１Ａは、ＣＤ１９－ＢＢｚ及びＣＤ１９－ｅｕＢＢｚを形質導入したＴ細胞におけるＣＡＲの発現を示している。図１１Ｂは、ＣＤ１９－ＢＢｚ及びＣＤ１９－ｅｕＢＢｚを形質導入したＴ細胞における殺傷活性を示すルシフェラーゼベース細胞毒性アッセイのグラフである。 動物モデルを用いて、ＣＤ１９－ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びＣＤ１９－ｅｕＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ細胞の効果をＩＶＩＳイメージングした結果を示している。 ＣＤ１９－ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びＣＤ１９－ｅｕＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ細胞を注入した後の動物モデルにおけるがん細胞のフォトン値を示すグラフである。 図１４Ａは、ＦＡＣＳを用いて、３～４日間隔でマウスの眼窩採血を行った後の血液中に存在する総ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞のパーセンテージを示すグラフのセットである。図１４Ｂは、ＦＡＣＳを用いて、３～４日間隔でマウスの眼窩採血を行った後の血液中に存在するＣＤ４／ＣＤ８ ＣＡＲ－Ｔ細胞のパーセンテージを示すグラフのセットである。図１４Ｃは、ＦＡＣＳを用いて、３～４日間隔でマウスに眼窩採血を行った後の血液中に存在する総ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔの数を示すグラフである。 図１５Ａは、例示的なＧＰＣ３ ＣＡＲコンストラクトの模式図を示している。図１５Ｂは、例示的なＧＰＣ３ ＣＡＲコンストラクトの模式図を示している。
詳細な説明
本開示は、４－１ＢＢ共刺激性エンドドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、ならびにその作製方法及び使用方法について説明する。
定義
約：「約」という用語は、本明細書で値に関して使用する場合、言及された値と文脈上類似する値を指す。概して、文脈に精通する当業者であれば、その文脈における「約」が包含する適切な程度の変動を理解するであろう。例えば、いくつかの実施形態において、「約」という用語は、言及された値の２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、またはそれ以下の範囲内の一連の値を包含し得る。
投与：本明細書で使用する場合、「投与」という用語は、典型的には、対象またはシステムに、組成物を、その組成物そのものである薬剤またはその組成物に含まれる薬剤の送達を達成するために投与することを指す。当業者であれば、妥当な状況において、対象、例えばヒトへの投与に利用され得る様々な経路を認識するであろう。例えば、いくつかの実施形態において、投与は、経眼、経口、非経口、局所などとすることができる。いくつかの特定の実施形態において、投与は、気管支（例えば、気管支点滴注入）、頬側、経皮（例えば、真皮に対する局所、皮内、皮間、経皮などのうちの１つ以上であるか、またはこれらを含むことができる）、経腸、動脈内、皮内、胃内、髄内、筋肉内、鼻腔内、腹腔内、髄腔内、静脈内、脳室内、特定の臓器内（例えば、肝臓内）、粘膜、鼻腔内、経口、経直腸、皮下、舌下、局所、気管（例えば、気管内点滴注入）、経膣、硝子体などであり得る。いくつかの実施形態において、投与は、単回用量、多回用量、または固定回数の用量を伴い得る。いくつかの実施形態において、投与は、断続的（例えば、時間で隔てられた複数の用量）及び／または定期的（例えば、共通の時間期間で隔てられた個々の用量）な投薬である投薬を伴い得る。いくつかの実施形態において、投与は、少なくとも選択された時間期間の間の持続的投薬（例えば、灌流）を伴い得る。
親和性：当技術分野で知られているように、「親和性」とは、特定のリガンドがそのパートナーと結合する強さの尺度である。親和性は、種々の方法で測定することができる。いくつかの実施形態において、親和性は定量的アッセイによって測定される。いくつかの実施形態において、結合パートナー濃度は、生理的条件を模倣できるようにリガンド濃度を超過して固定され得る。代替的または追加的に、いくつかの実施形態において、結合パートナー濃度及び／またはリガンド濃度は変化させることができる。このようないくつかの実施形態において、親和性は、同等の条件（例えば、濃度）下の基準と比較することができる。
抗体薬剤：本明細書で使用する場合、「抗体薬剤」という用語は、特定の抗原に特異的に結合する薬剤を指すことができる。いくつかの実施形態において、当該用語は、特異的結合を付与するのに十分な免疫グロブリン構造的要素を含む任意のポリペプチドまたはポリペプチド複合体を包含する。例示的な抗体薬剤としては、限定されるものではないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、及びこれらのフラグメントが挙げられる。いくつかの実施形態において、抗体薬剤は、当技術分野で知られているように、ヒト化、霊長類化、キメラ化などがなされた１つ以上の配列要素を含むことができる。多くの実施形態において、「抗体薬剤」という用語は、代替的提示における抗体の構造的及び機能的特徴を利用するための、当技術分野で知られているまたは開発されたコンストラクトまたは形式のうちの１つ以上を指すように使用される。例えば、いくつかの実施形態において、本発明に従って利用される抗体薬剤は、限定されるものではないが、インタクトなＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、またはＩｇＭ抗体；二重または多重特異的抗体（例えば、Ｚｙｂｏｄｉｅｓ（登録商標）など）；抗体フラグメント、例えば、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｄ’フラグメント、Ｆｄフラグメント、及び単離されたＣＤＲまたはそのセット；単鎖Ｆｖ；ポリペプチド－Ｆｃ融合体；単一ドメイン抗体（例えば、ＩｇＮＡＲまたはそのフラグメントなどのサメ単一ドメイン抗体）；ラクダ様（ｃａｍｅｌｏｉｄ）抗体；マスク抗体（例えば、Ｐｒｏｂｏｄｉｅｓ（登録商標））；Ｓｍａｌｌ Ｍｏｄｕｌａｒ ＩｍｍｕｎｏＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（「ＳＭＩＰ（商標）」）；単鎖またはタンデムダイアボディ（ＴａｎｄＡｂ（登録商標））；ＶＨＨ；Ａｎｔｉｃａｌｉｎｓ（登録商標）；Ｎａｎｏｂｏｄｉｅｓ（登録商標）ミニボディ；ＢｉＴＥ（登録商標）；アンキリンリピートタンパク質またはＤＡＲＰＩＮ（登録商標）；Ａｖｉｍｅｒｓ（登録商標）；ＤＡＲＴ；ＴＣＲ様抗体；Ａｄｎｅｃｔｉｎｓ（登録商標）；Ａｆｆｉｌｉｎｓ（登録商標）、Ｔｒａｎｓ－ｂｏｄｉｅｓ（登録商標）；Ａｆｆｉｂｏｄｉｅｓ（登録商標）；ＴｒｉｍｅｒＸ（登録商標）；ＭｉｃｒｏＰｒｏｔｅｉｎｓ；Ｆｙｎｏｍｅｒｓ（登録商標）、Ｃｅｎｔｙｒｉｎｓ（登録商標）；及びＫＡＬＢＩＴＯＲ（登録商標）から選択される形式をとる。いくつかの実施形態において、抗体薬剤は、天然産生された場合に有するであろう共有結合的修飾（例えば、グリカンの付着）が欠如していることがある。いくつかの実施形態において、抗体薬剤は、共有結合修飾（例えば、グリカンの付着）、ペイロード［例えば、検出可能部分、治療部分、触媒部分など］、または他のペンダント基［例えば、ポリ－エチレングリコールなど］を含み得る。いくつかの実施形態において、抗体薬剤は、当業者によって相補性決定領域（ＣＤＲ）として認識される１つ以上の構造的要素を含むアミノ酸配列を有するポリペプチドであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態において、抗体薬剤は、アミノ酸配列が基準抗体に見られるものと実質的に同一である少なくとも１つのＣＤＲ（例えば、少なくとも１つの重鎖ＣＤＲ及び／または少なくとも１つの軽鎖ＣＤＲ）を含むポリペプチドであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態において、含まれるＣＤＲは、配列が同一である点において、または基準ＣＤＲと比較して１～５つのアミノ酸置換を含むという点において、基準ＣＤＲと実質的に同一である。いくつかの実施形態において、含まれるＣＤＲは、基準ＣＤＲに対し少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を示すという点において、基準ＣＤＲと実質的に同一である。いくつかの実施形態において、含まれるＣＤＲは、基準ＣＤＲに対し少なくとも９６％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を示すという点において、基準ＣＤＲと実質的に同一である。いくつかの実施形態において、含まれるＣＤＲ内の少なくとも１つのアミノ酸は基準ＣＤＲと比較して欠失、付加、または置換されているが、それ以外では、含まれるＣＤＲは基準ＣＤＲのアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を有するという点において、含まれるＣＤＲは基準ＣＤＲと実質的に同一である。いくつかの実施形態において、含まれるＣＤＲ内の１～５つのアミノ酸は基準ＣＤＲと比較して欠失、付加、または置換されているが、それ以外では、含まれるＣＤＲは基準ＣＤＲと同一のアミノ酸配列を有するという点において、含まれるＣＤＲは基準ＣＤＲと実質的に同一である。いくつかの実施形態において、含まれるＣＤＲ内の少なくとも１つのアミノ酸は基準ＣＤＲと比較して置換されているが、それ以外では、含まれるＣＤＲは基準ＣＤＲのアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を有するという点において、含まれるＣＤＲは基準ＣＤＲと実質的に同一である。いくつかの実施形態において、含まれるＣＤＲ内の１～５つのアミノ酸は基準ＣＤＲと比較して欠失、付加、または置換されているが、それ以外では、含まれるＣＤＲは基準ＣＤＲと同一のアミノ酸配列を有するという点において、含まれるＣＤＲは基準ＣＤＲと実質的に同一である。いくつかの実施形態において、抗体薬剤は、当業者により免疫グロブリン可変ドメインと認識される構造的要素を含むアミノ酸配列を有するポリペプチドであるか、またはこのようなポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体薬剤は、免疫グロブリン結合ドメインと相同であるまたは大部分が相同である結合ドメインを有するポリペプチドタンパク質である。いくつかの実施形態において、抗体薬剤は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の少なくとも一部であるか、またはそれを含む。
抗原：本明細書で使用する場合、「抗原」という用語は、抗体薬剤に結合する薬剤を指すことができる。いくつかの実施形態において、抗原は抗体薬剤に結合し、生物における特定の生理的応答を誘導する場合もあれば誘導しない場合もある。概して、抗原は、任意の化学的実体（例えば、小分子、核酸、ポリペプチド、炭水化物、脂質、ポリマー（生物学的ポリマー（例えば、核酸及び／またはアミノ酸ポリマー）ならびに生物学的ポリマー以外のポリマー（例えば、核酸またはアミノ酸ポリマー以外のポリマー）を含む）などであるか、またはそれを含むことができる。いくつかの実施形態において、抗原はポリペプチドであるか、またはそれを含むことができる。いくつかの実施形態において、抗原はグリカンであるか、またはそれを含む。当業者であれば、概して、抗原は単離された形態または純粋な形態で得る場合もあれば、代替的に粗形態（例えば、他の材料（例えば、細胞抽出物などの抽出物または抗原を含む供給源の比較的粗い調製物）と共に）で得る場合もあることを理解するであろう。いくつかのある特定の実施形態において、抗原は細胞の文脈で存在する（例えば、抗原が細胞の表面または細胞内に発現する）。いくつかの実施形態において、抗原は組換え抗原である。
抗原結合ドメイン：本明細書で使用する場合、「抗原結合ドメイン」という用語は、標的部位または実体に特異的に結合する抗体薬剤またはその一部を指す。典型的には、抗原結合ドメインとその標的との間の相互作用は、非共有結合である。いくつかの実施形態において、標的部位または実体は、例えば、炭水化物、脂質、核酸、金属、ポリペプチド、または小分子を含めた任意の化学クラスであり得る。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、ポリペプチド（またはその複合体）であるか、またはそれを含むことができる。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは融合ポリペプチドの一部である。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の一部である。
～に関連する：２つの事象または実体が互いに「関連する」というように本明細書で用語が使用されるのは、一方の事象または実体の存在、レベル、及び／または形態が他方と相互関係を有する場合である。例えば、特定の実体（例えば、ポリペプチド、遺伝子シグネチャー、代謝産物、微生物など）が特定の疾患、障害、または状態に関連すると考えられるのは、その存在、レベル、及び／または形態が（例えば、関係する集団全体における）当該疾患、障害、または状態の発生率及び／または感受性と相互関係を有する場合である。いくつかの実施形態において、２つ以上の実体が互いに物理的に「関連」するのは、これらの実体が直接的または間接的に相互作用して、互いに物理的に近接している及び／またはその状態を保っている場合である。いくつかの実施形態において、互いに物理的に関連する２つ以上の実体は互いに共有結合している。いくつかの実施形態において、互いに物理的に関連する２つ以上の実体は、互いに共有結合しているのではなく、例えば、水素結合、ファンデルワールス相互作用、疎水性相互作用、磁気、及びこれらの組合せにより、非共有結合している。
結合：本明細書で使用する場合、「結合」という用語は、典型的には、２つ以上の実体間のまたはそれらの中での非共有結合的な会合を指すことが理解されよう。「直接的な」結合は、実体または部分間の物理的な接触を伴う。間接的な結合は、１つ以上の中間実体との物理的な接触による物理的な相互作用を伴う。２つ以上の実体間の結合は、典型的には様々な任意の文脈で（相互作用する実体または部分が、単独でまたはより複雑なシステムの文脈で研究される場合（例えば、共有結合的にもしくは他の形で担体実体と関連しながら、かつ／または生物学的システムまたは細胞において）を含む）評価され得る。
がん：「がん」、「悪性腫瘍」、「新生物」、「腫瘍」、及び「がん腫」という用語は、本明細書では、比較的異常で制御されず、かつ／または自律的な成長を示し、その結果、顕著な細胞増殖制御喪失を特徴とする異常成長表現型を示す細胞を指すように使用する。いくつかの実施形態において、腫瘍は、前がん性（例えば、良性）、悪性、前転移性、転移性、及び／または非転移性である細胞であるか、またはそれを含むことができる。本開示は、教示が特に適切であり得るある特定のがんを明確に同定する。いくつかの実施形態において、適切ながんは固形腫瘍を特徴とし得る。いくつかの実施形態において、適切ながんは血液腫瘍を特徴とし得る。概して、当技術分野で知られている種々のタイプのがんとしては、例えば、白血病を含めた造血性がん、リンパ腫（ホジキン及び非ホジキン）、骨髄腫及び骨髄増殖性障害、肉腫、黒色腫、腺腫、固形組織のがん、口腔、咽喉、咽頭、及び肺の扁平上皮がん、肝がん、泌尿生殖器がん（例えば、前立腺、子宮頸部、膀胱、子宮、及び子宮内膜がん）、ならびに腎細胞がん、骨がん、膵臓がん、皮膚がん、皮膚及び眼球内黒色腫、内分泌系がん、甲状腺がん、副甲状腺がん、頭頸部がん、乳がん、胃腸がん、ならびに神経系がん、良性病変（例えば、乳頭腫）などが挙げられる。
ＣＤＲ：本明細書で使用する場合、「ＣＤＲ」とは抗体薬剤の可変領域内の相補性決定領域を指すことができる。重鎖及び軽鎖の各可変領域には３つのＣＤＲが存在し、各々の可変領域はＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３と呼ばれている。「ＣＤＲのセット」または「ＣＤＲセット」とは、抗原に結合可能な単一の可変領域または抗原に結合可能な同種の重鎖及び軽鎖可変領域のＣＤＲのいずれかに存在する３つまたは６つのＣＤＲの群を指す。当技術分野では、ＣＤＲ境界を定義するためのある特定のシステム（例えば、Ｒａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａなど）が確立されている。当業者はこれらのシステム間の相違点を認識しており、特許請求される本発明を理解及び実施するために必要な程度においてＣＤＲ境界を理解可能である。
化学療法剤：本明細書で使用する場合、「化学療法剤」という用語は技術分野で理解された意味を有し、１つ以上のアポトーシス促進剤、細胞安定剤、及び／または細胞毒性剤を指し、例えば、具体的には、望ましくない細胞増殖に関連する１つ以上の疾患、障害、状態の治療で使用するために利用または推奨される薬剤が含まれる。多くの実施形態において、化学療法剤はがんの治療に有用である。いくつかの実施形態において、化学療法剤は、１つ以上のアルキル化剤、１つ以上のアントラサイクリン、１つ以上の細胞骨格破壊物質（例えば、微小管標的剤（例えば、タキサン、マイタンシン、及びこれらのアナログ））、１つ以上のエポチロン、１つ以上のヒストンデアセチラーゼ阻害物質ＨＤＡＣ、１つ以上のトポイソメラーゼ阻害物質（例えば、トポイソメラーゼＩ及び／もしくはトポイソメラーゼＩＩの阻害物質）、１つ以上のキナーゼ阻害物質、１つ以上のヌクレオチドアナログもしくはヌクレオチド前駆体アナログ、１つ以上のペプチド抗生物質、１つ以上の白金系薬剤、１つ以上のレチノイド、１つ以上のビンカアルカロイド、ならびに／または以下のうちの１つ以上のアナログ（すなわち、関連する抗増殖活性を共有するもの）であるか、またはこれらを含むことができる。いくつかの特定の実施形態において、化学療法剤は、アクチノマイシン、オールトランスレチノイン酸、アウリスタチン（Ａｕｉｒｉｓｔａｔｉｎ）、アザシチジン、アザチオプリン、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、カルボプラチン、カペシタビン、シスプラチン、クロラムブシル、シクロフォスファミド、クルクミン、シタラビン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、エピルビシン、エポチロン、エトポシド、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、イダルビシン、イマチニブ、イリノテカン、マイタンシン及び／またはそのアナログ（例えば、ＤＭ１）、メクロレタミン、メルカプトプリン、メトトレキサート、ミトキサントロン、マイタンシノイド、オキサリプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、テニポシド、チオグアニン、トポテカン、バルビシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、及びこれらの組合せのうちの１つ以上であるか、またはこれらを含むことができる。いくつかの実施形態において、化学療法剤は抗体－薬物結合体の文脈で利用することができる。いくつかの実施形態において、化学療法剤は、ｈＬＬ１－ドキソルビシン、ｈＲＳ７－ＳＮ－３８、ｈＭＮ－１４－ＳＮ－３８、ｈＬＬ２－ＳＮ－３８、ｈＡ２０－ＳＮ－３８、ｈＰＡＭ４－ＳＮ－３８、ｈＬＬ１－ＳＮ－３８、ｈＲＳ７－Ｐｒｏ－２－Ｐ－Ｄｏｘ、ｈＭＮ－１４－Ｐｒｏ－２－Ｐ－Ｄｏｘ、ｈＬＬ２－Ｐｒｏ－２－Ｐ－Ｄｏｘ、ｈＡ２０－Ｐｒｏ－２－Ｐ－Ｄｏｘ、ｈＰＡＭ４－Ｐｒｏ－２－Ｐ－Ｄｏｘ、ｈＬＬ１－Ｐｒｏ－２－Ｐ－Ｄｏｘ、Ｐ４／Ｄ１０－ドキソルビシン、ゲムツズマブオゾガマイシン、ブレンツキシマブベドチン、トラスツズマブエムタンシン、イノツズマブオゾガマイシン、グレンバツムマブベドチン、ＳＡＲ３４１９、ＳＡＲ５６６６５８、ＢＩＩＢ０１５、ＢＴ０６２、ＳＧＮ－７５、ＳＧＮ－ＣＤ１９Ａ、ＡＭＧ－１７２、ＡＭＧ－５９５、ＢＡＹ－９４－９３４３、ＡＳＧ－５ＭＥ、ＡＳＧ－２２ＭＥ、ＡＳＧ－１６Ｍ８Ｆ、ＭＤＸ－１２０３、ＭＬＮ－０２６４、抗ＰＳＭＡ ＡＤＣ、ＲＧ－７４５０、ＲＧ－７４５８、ＲＧ－７５９３、ＲＧ－７５９６、ＲＧ－７５９８、ＲＧ－７５９９、ＲＧ－７６００、ＲＧ－７６３６、ＡＢＴ－４１４、ＩＭＧＮ－８５３、ＩＭＧＮ－５２９、ボルセツズマブマフォドチン、及びロルボツズマブメルタンシンからなる群より選択される抗体－薬物結合体に見出される化学療法剤である。
操作された（ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ）：概して「操作された」という用語は、人の手によって処理された（ｍａｎｉｐｕｌａｔｅｄ）という態様を指すことができる。例えば、ポリペプチド配列が人の手によって処理されたものである場合、このポリペプチドは「操作された」ものと考えられる。例えば、本発明のいくつかの実施形態において、操作されたポリペプチドは、人の手によって基準ポリペプチド配列に導入された１つ以上のアミノ酸変異、欠失、及び／または挿入を含む配列を含む。いくつかの実施形態において、操作されたポリペプチドは、人の手によって１つ以上の追加のポリペプチドと融合（すなわち、共有結合）して、インビボでは天然に存在しない融合ポリペプチドを形成するポリペプチドを含む。同様に、細胞または生物は、その遺伝情報が改変するように処理された場合、「操作された」（例えば、形質転換、交配、体細胞ハイブリダイゼーション、形質移入、形質導入、またはその他の機構により、それまで存在しなかった新たな遺伝子材料が導入された、あるいは置換もしくは欠失変異、または交配プロトコルにより、それまで存在していた遺伝子材料が改変または除去されている）とみなされる。これは慣例であり、当業者は理解していることであるが、操作されたポリペプチドまたは細胞の誘導体または後代は、実際の処理が先の実体に実施されたものであっても、典型的には依然として「操作された」と称される。
宿主細胞：本明細書で使用する場合、「宿主細胞」という用語は、細胞による材料の産生、例えば、細胞による遺伝子、ＤＮＡまたはＲＮＡ配列、タンパク質または酵素の発現のために、任意の方法で選択、修飾、形質転換、成長、使用、または処理された生物の細胞を指すことができる。宿主細胞としては、限定されるものではないが、リンパ球（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、及びＮＫ細胞）、好中球、ならびに単球／マクロファージを含めた免疫細胞が挙げられる。
インビトロ：本明細書で使用する場合、「インビトロ」という用語は、多細胞生物内ではなく、人工的な環境、例えば、試験管または反応容器、細胞培養物などで生じる事象を指す。
インビボ：本明細書で使用する場合、「インビボ」という用語は、多細胞生物（例えば、ヒト及び非ヒト動物）で生じる事象を指す。細胞ベースシステムの文脈では、当該用語は、生細胞内で生じる事象を指すように（例えばインビトロシステムの対語として）使用され得る。
単離された：本明細書で使用する場合、「単離された」という用語は、（１）最初に生成された際に（自然界であるか及び／もしくは実験的環境であるかにかかわらず）会合した構成成分の少なくとも一部から分離した物質及び／もしくは実体、ならびに／または（２）人の手によって設計、産生、調製、及び／もしくは製造された物質及び／もしくは実体を指すことができる。単離された物質及び／または実体は、それらが最初に会合した他の構成成分の約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超から分離され得る。いくつかの実施形態において、単離された薬剤は、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超純粋である。本明細書で使用する場合、物質は、他の構成成分を実質的に含まない場合に「純粋」である。いくつかの実施形態において、当業者であれば理解できるように、ある物質は、例えば１つ以上の担体や賦形剤（緩衝剤、溶媒、水など）などの他の成分と結合した後でも、依然として「単離された」または「純粋」とすらみなすことができ、このような実施形態では、物質の単離パーセントまたは純度を、このような単体または賦形剤を含めずに計算する。ほんの一例を挙げると、いくつかの実施形態において、生物学的ポリマー（例えば、天然に存在するポリペプチドやポリヌクレオチド）が「単離」されているとみなされるのは、以下の場合である：ａ）その起源または供給源のために、自然界のネイティブな状態でそれに付随する成分の一部または全てと関連しない場合、ｂ）自然界でそれを産生する種からの同じ種の他のポリペプチドまたは核酸を実質的に含まない場合、ｃ）自然界でそれを産生する種ではない細胞もしくは他の発現システムからの成分によって発現するか、またはその成分と他の形で関連する場合。したがって、例えばいくつかの実施形態において、化学的に合成されたポリペプチド、または自然界でそれを産生する細胞システムとは異なる細胞システムで合成されたポリペプチドは、「単離された」ポリペプチドとみなされる。代替的または追加的に、１つ以上の精製技法に供されたポリペプチドは、ａ）自然界で関連している他の成分、及び／またはｂ）最初に産生されたときに関連していた他の成分から分離されている程度において、「単離された」ポリペプチドであるとみなされてもよい。
機能的に結合した：本明細書で使用する場合、「機能的に結合した」という用語は、説明されている成分が、意図された方法で機能することを可能にする関係にある並列を指すことができる。機能的要素に「機能的に結合した」制御要素は、制御要素に適合した条件下で機能的要素の発現及び／または活性化が達成されるような方法で関連している。いくつかの実施形態において、「機能的に結合した」制御要素は、目的コード要素と連続して（例えば、共有結合して）いる。いくつかの実施形態において、制御要素は、目的機能的要素に対しトランスでまたは別の方法で作用する。
医薬組成物：本明細書で使用する場合、「医薬組成物」という用語は、活性剤が１つ以上の医薬的に許容される担体と共に製剤化された組成物を指す。いくつかの実施形態において、組成物は、ヒトまたは動物の対象への投与に適している。いくつかの実施形態において、活性薬剤は、適切な集団に投与したときに所定の治療効果を達成する統計的に有意な可能性を示す治療レジメンにおいて、投与に適切な単位用量で存在する。
ポリペプチド：本明細書で使用する場合、「ポリペプチド」という用語は、概して当技術分野で認識されている意味を有し、少なくとも３つのアミノ酸のポリマーを指す。当業者であれば、「ポリペプチド」という用語が十分に一般的であり、本明細書に記載の完全な配列を有するポリペプチドだけでなく、このような完全なポリペプチドの機能的なフラグメント（すなわち、少なくとも１つの活性を保持するフラグメント）に相当するポリペプチドも包含するように意図されていることを理解するであろう。さらに、当業者であれば、タンパク質配列が、活性を破壊することなく、概してある程度の置換を許容することを理解している。このように、活性を保持し、少なくとも３０～４０％の全体的な配列同一性、しばしば約５０％、６０％、７０％、または８０％超の配列同一性を同じクラスの別のポリペプチドと共有し、さらに通常は１つの高度に保存された領域（通常は少なくとも３～４個、しばしば２０個以上のアミノ酸を包含する領域）内に同一性がはるかに高い、しばしば９０％超、またはさらに９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の少なくとも１つの領域を含むポリペプチドは、本明細書で使用する場合、「ポリペプチド」という関連用語に包含される。ポリペプチドは、Ｌ－アミノ酸、Ｄ－アミノ酸、またはその両方を含み、当技術分野で知られている任意の様々なアミノ酸修飾またはアナログを含むことができる。有用な修飾としては、例えば、末端アセチル化、アミド化、メチル化などが挙げられる。いくつかの実施形態において、タンパク質は、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、合成アミノ酸、及びこれらの組合せを含むことができる。「ペプチド」という用語は、概して、長さが約１００アミノ酸未満、約５０アミノ酸未満、２０アミノ酸未満、または１０アミノ酸未満のポリペプチドを指すために使用する。いくつかの実施形態において、タンパク質は、抗体薬剤、抗体フラグメント、その生物学的活性部分、及び／またはその特徴的な部分である。
防止するまたは防止：本明細書で使用する場合、「予防」または「防止」という用語は、疾患、障害、及び／または状態の発生に関連して使用される場合、疾患、障害、及び／または状態を発症するリスクの低減、及び／または疾患、障害、及び状態の１つ以上の特性または症状の発症及び／または重症化の遅延を指すことができる。いくつかの実施形態において、防止は集団に基づき評価し、ある薬剤が特定の疾患、障害、または症状を「防止」するとみなされるのは、疾患、障害、または症状に罹患しやすい集団において、疾患、障害、または症状の１つ以上の症状の発生、頻度、及び／または強度が統計的に有意に減少した場合とする。
組換え体：本明細書で使用する場合、「組換え体」という用語は、組換え手段によって設計、操作、調製、作出、製造、及び／または単離されるポリペプチド、例えば、宿主細胞に形質移入した組換え発現ベクターを用いて発現するポリペプチド；組換えコンビナトリアルヒトポリペプチドライブラリーから単離したポリペプチド；ポリペプチドまたはその１つ以上の成分、一部、要素、もしくはドメインをコード及び／または直接発現する遺伝子（単数もしくは複数）または遺伝子成分にトランスジェニックである動物（例えば、マウス、ウサギ、ヒツジ、魚など）から単離された、または他の方法で操作されたポリペプチド；ならびに／あるいは選択された核酸配列要素を互いにスプライシングまたはライゲーションすること、選択された配列要素を化学合成すること、ならびに／あるいは他の方法でポリペプチドまたはその１つ以上の成分、一部、要素、もしくはドメインをコードする及び／またはその発現を指示する核酸を生成することを伴う任意の他の手段によって調製、発現、作出、または単離されたポリペプチドを指すことができる。いくつかの実施形態において、このような選択された配列要素のうちの１つ以上は自然界で見られる。いくつかの実施形態において、このような選択された配列要素のうちの１つ以上はｉｎ ｓｉｌｉｃｏで設計する。いくつかの実施形態において、１つ以上のこのような選択された配列要素は、天然または合成供給源（例えば、目的の供給源生物（例えば、ヒト、マウスなど）の生殖系列）に由来する既知の配列要素の変異誘発（例えば、インビボまたはインビトロで）から生じる。
特異的結合：本明細書で使用する場合、「特異的結合」という用語は、結合が生じ得る環境内で見込みのある結合パートナーを識別する能力を指すことができる。他の潜在的標的が存在するときに１つの特定の標的と相互作用する結合物質は、相互作用する標的に「特異的に結合する」とされる。いくつかの実施形態において、特異的結合は、結合物質とそのパートナーとの間の会合の程度を検出または測定することによって評価される。いくつかの実施形態において、特異的結合は、結合物質－パートナー複合体の解離の程度を検出または測定することによって評価される。いくつかの実施形態において、特異的結合は、結合物質がそのパートナーと別の実体との間の代替的な相互作用に競合する能力を検出または測定することによって評価される。いくつかの実施形態において、特異的結合は、このような検出または測定をある濃度範囲にわたって実施することにより、評価される。
対象：本明細書で使用する場合、「対象」という用語は、生物、典型的には哺乳類（例えば、ヒト、いくつかの実施形態では出生前のヒト形態を含む）を指す。いくつかの実施形態において、対象は、関連する疾患、障害、または状態を患っている。いくつかの実施形態において、対象は、疾患、障害、または状態に感受性を有する。いくつかの実施形態において、対象は、疾患、障害、状態の１つ以上の症状または特徴を示す。いくつかの実施形態において、対象は、疾患、障害、または状態のいかなる症状も特徴も示さない。いくつかの実施形態において、対象は、疾患、障害、または状態に対する感受性またはリスクに特有の１つ以上の特徴を有する者である。いくつかの実施形態において、対象は患者である。いくつかの実施形態において、対象は、診断及び／または治療が管理されている及び／または管理されてきた個体である。
治療剤：本明細書で使用する場合、「治療剤」という言葉は、概して、生物に投与したときに所望の薬理学的効果を誘発する任意の薬剤を指す。いくつかの実施形態において、薬剤が適切な集団全体において統計的に有意な効果を示す場合、その薬剤は治療剤とみなされる。いくつかの実施形態において、適切な集団はモデル生物の集団であり得る。いくつかの実施形態において、適切な集団は、様々な基準（例えば、ある特定の年齢層、ジェンダー、遺伝的背景、既存の臨床的状態など）によって定義することができる。いくつかの実施形態において、治療剤は、疾患、障害、及び／または状態の１つ以上の症状または特徴の緩和、改善、軽減、抑制、防止、発症遅延、重症度低減、及び／または発症率低減のために使用することができる物質である。いくつかの実施形態において、「治療剤」は、ヒトへの投与用に市販する前に政府機関によって承認された、または承認を要する薬剤である。いくつかの実施形態において、「治療剤」は、ヒトに投与するのに医学的処方箋を要する薬剤である。
治療有効量：本明細書で使用する場合、「治療有効量」という用語は、疾患、障害、及び／または状態を患うまたはそれに感受性を有する集団に投与される際に、疾患、障害、及び／または状態の治療に十分である量を意味する。いくつかの実施形態において、治療有効量は、疾患、障害、及び／または状態の１つ以上の症状に対し、その発生率及び／または重症度を低減する量、その１つ以上の特徴を安定化する量、及び／またはその発症を遅延させる量である。当業者であれば、「治療有効量」という用語が、実際には、特定の個体における好結果の治療が達成されることを要するわけではないことを理解するであろう。むしろ、治療有効量は、このような治療を必要とする患者に投与したときに、意義のある数の対象に特定の所望の薬理学的応答をもたらす量であると考えられる。例えば、いくつかの実施形態において、「治療有効量」という用語は、本発明の治療の文脈において、それを必要とする個体に投与したときに、前述の個体に生じるがん支持プロセスをブロック、安定化、減弱、もしくは反転する量、または前述の個体のがん抑制プロセスを強化もしくは増大させる量を指す。がん治療の文脈において、「治療有効量」は、がんと診断された個体に投与された場合に、その個体におけるがんのさらなる発生を防止、安定化、抑制、または低減する量である。本明細書に記載の組成物における特に好ましい「治療有効量」は、膵臓がんなどの悪性腫瘍の発生を（療法的治療で）反転させるか、または悪性腫瘍の寛解の達成もしくは延長の一助となる。がんを治療するために個体に投与する治療有効量は、寛解の促進または転移の抑制のために投与する治療有効量と同じ場合もあれば異なる場合もある。ほとんどのがん治療と同様に、本明細書に記載の治療方法は、がんの「治癒」として解釈されたり、それに制限されたり、他の形で限定されたりするものではなく、当該治療方法は、記載された組成物を使用してがんを「治療」すること、すなわち、がんを有する個体の健康に望ましいまたは有益な変化をもたらすことに指向されるものである。このような利点は、腫瘍学分野の熟練した医療提供者によって認識されており、限定されるものではないが、患者の状態の安定化、腫瘍サイズの縮小（腫瘍退縮）、生活機能の改善（例えば、がん性の組織または臓器の機能改善）、さらなる転移の減少または抑制、日和見感染の減少、生存率の増加、痛みの減少、運動機能の改善、認知機能の改善、気力（活力）の改善（倦怠感の減少）、幸福感の改善、正常な食欲の回復、健康的な体重増加の回復、及びこれらの組合せが挙げられる。加えて、個体における特定の腫瘍の（例えば、本明細書に記載の治療の結果としての）退縮は、（例えば、治療過程にわたって）膵臓腺がんなどの腫瘍の部位からがん細胞の試料を採取し、代謝マーカー及びシグナル伝達マーカーのレベルについてがん細胞を検査してがん細胞の状態を監視し、がん細胞がより悪性度の低い表現型に退行したことを分子レベルで確認することによっても評価することができる。例えば、本発明の方法を用いることによって誘導される腫瘍の退縮は、上記で論じられた任意の血管新生マーカーの減少、本明細書に記載の抗血管新生マーカーの増加、がんと診断された個体で異常活性を示す代謝経路、細胞間シグナル伝達経路、または細胞内シグナル伝達経路の正常化（すなわち、がんを患っていない正常な個体に認められる状態へと変化すること）を見出すことにより、示される。当業者であれば、いくつかの実施形態では、治療有効量を単回用量で製剤化及び／または投与することができることを理解するであろう。いくつかの実施形態において、治療的有効量は、例えば、投与レジメンの一部として、複数の用量で製剤化及び／または投与することができる。
形質移入：本明細書で使用する場合、「形質移入」という用語は、組換えＤＮＡ技術を用いて外来の核酸を細胞内に導入することを指すことができる。本明細書で使用する場合、「形質転換」という用語は、外来の遺伝子、ＤＮＡ、またはＲＮＡの配列を宿主細胞に導入することを指すことができ、これにより、宿主細胞は導入された遺伝子または配列を発現して、コードされたタンパク質または酵素を産生する。
形質導入。本明細書で使用する場合、「形質導入」とは、ウイルスベクターを用いて外来の核酸を細胞内に導入することを指すことができる。
バリアント：本明細書において分子（例えば、核酸、タンパク質、小分子）の文脈で使用する場合、「バリアント」という用語は、基準分子との重要な構造的な同一性を示すが、基準分子とは構造的に異なる、例えば、１つ以上の化学的部分のありもしくはなしまたはレベルが基準実体とは異なる分子を指すことができる。いくつかの実施形態において、バリアントはその基準分子と機能的にも異なる。概して、特定の分子が基準分子の「バリアント」であると適切に考えられるかどうかは、基準分子との構造的同一性の程度に基づく。当業者であれば理解するであろうが、生物学的または化学的な基準分子は、ある特定の特徴的な構造的要素を有する。バリアントは、定義によれば、１つ以上の特徴的な構造的要素を共有しながらも、基準分子とは少なくとも１つの点で異なる別個の分子である。例えば、ほんのいくつかの例を示すと、ポリペプチドは、線形的もしくは三次元的空間内で互いに対する位置が指定された、かつ／または特定の構造的モチーフ及び／もしくは生物学的機能に寄与する、複数のアミノ酸から構成された特徴的な配列要素を有し得、核酸は、線形的または三次元的空間内で互いに対する位置が指定された複数のヌクレオチド残基から構成された特徴的な配列要素を有し得る。いくつかの実施形態において、バリアントポリペプチドまたは核酸は、アミノ酸配列またはヌクレオチド配列の１つ以上が異なる結果として基準ポリペプチドまたは核酸と異なり得る。いくつかの実施形態において、バリアントポリペプチドまたは核酸は、基準ポリペプチドまたは核酸に対し少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、または９９％の全体的な配列同一性を示す。いくつかの実施形態において、バリアントポリペプチドまたは核酸は、少なくとも１つの特徴的な配列要素を基準ポリペプチドまたは核酸と共有しない。いくつかの実施形態において、基準ポリペプチドまたは核酸は、１つ以上の生物学的活性を有する。いくつかの実施形態において、バリアントポリペプチドまたは核酸は、基準ポリペプチドまたは核酸の生物学的活性のうちの１つ以上を共有する。
ベクター：本明細書で使用する場合、「ベクター」という用語は、結合している別の核酸を輸送可能な核酸分子を指すことができる。ベクターは、インビトロ、エキソビボ、またはインビボで細胞に核酸を導入するための非ウイルスキャリア及びウイルスキャリアの両方を包含し得る。
ベクターは、別のＤＮＡフラグメントを増幅するように当該フラグメントが付着しているレプリコンであり得る。「レプリコン」という用語は、インビボのＤＮＡ複製の自律的な単位として作用することができる任意の遺伝子要素（例えば、プラスミド、ファージ、コスミド、染色体、またはウイルス）を指す。当技術分野で知られている多くのベクターを使用して、核酸を操作することや、応答要素及びプロモーターを遺伝子に組み込むことなどができる。好ましいベクターとしては、限定されるものではないが、プラスミド（例えば、ＰＢＲ３２２もしくはｐＵＣプラスミド誘導体）、修飾ウイルス（例えば、アデノウイルス、レトロウイルス、アデノ随伴ウイルス、もしくはヘルペスウイルス）、またはＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔベクターが挙げられる。例えば、反応要素及びプロモーターに対応するＤＮＡフラグメントは、相補的な粘着性末端を有する選択されたベクターと組み合わせることにより、適切なベクターに挿入することができる。いくつかの実施形態において、ＤＮＡ分子の末端を酵素的に修飾する場合もあれば、ヌクレオチド配列をリンカー経由でＤＮＡ末端に結合することによって任意の部位を生成する場合もある。いくつかの実施形態において、ベクターは、マーカーを細胞ゲノム内に組み込んだ細胞をスクリーニングするための選択マーカー遺伝子を含むように操作することができる。このようなマーカーは、そのマーカーによってコードされたタンパク質を発現する宿主細胞の同定及び／またはスクリーニングを可能にする。
ベクターの１つのタイプである「プラスミド」は、追加のＤＮＡセグメントをライゲーションすることができる環状二重鎖ＤＮＡループを指す。別のタイプのベクターであるウイルスベクターは、追加のＤＮＡセグメントをウイルスゲノムにライゲーションすることができる。ある特定のベクターは、導入される宿主細胞内で自己複製可能である（例えば、細菌起源の複製を有する細菌ベクター及びエピソーム性哺乳類ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム性哺乳類ベクター）は、宿主細胞に導入すると宿主細胞のゲノムに統合されて宿主ゲノムと連動して複製することができる。さらに、ある特定のベクターは、機能的に結合している遺伝子の発現を指示可能である。このようなベクターは、本明細書では「発現ベクター」と称される。本明細書に記載のキメラ抗原受容体を送達するために使用することができる発現ベクター及びパッケージングコンストラクトの非限定的な例としては、レトロウイルスベクター（例えば、ＳＦＧ、ｐＭＸ、ｐＳＡＭＥＮ、ｐＭＰ７１、ｐＬＸＳＮ、ｐＭＳＣＶ、ｐＭＳＧＶ）、レンチウイルスベクター（例えば、ｅｐＨＩＶ７、ｐＬｅｎＯ、ｐＳＩＮ、ｐＳＩＥＷ、ｐＥＬＰＳ、ｐＥＬＮＳ、ｐＨＲ）、パッケージングコンストラクト（ｐｓＰＡＸ２、ｐＲＤＦ、ｐＥＱ－ＰＡＭ３（－Ｅ）、ｐＶＳＶｇ、ｐＣＬ、ｐＭＥＶＳＶｇ、ｐＭＤ２Ｇ、ｐＭＤＬｇ／ｐ．ＲＲＥ、ｐＲＳＶ．ＲＥＶ、ｐＴＳＶ．ｒｅｖ、ｐＣＨＧＰ、ｐＣＭＶ－ｇ、ｐＣＭＶ－Ｒｅｖ２、ｐＣＭＶｄＲ８．９１、ｐＧＡＬＶ）が挙げられる。
いくつかの実施形態において、ベクターは、適切な宿主細胞における融合タンパク質の発現を調節するために必要な調節配列（例えば、転写及び翻訳要素）を提供する。調節配列は、プロモーター領域、エンハンサー領域、転写終結部位、リボソーム結合部位、開始コドン、スプライスシグナル、イントロン、ポリアデニル化シグナル、Ｓｈｉｎｅ／Ｄａｌｇａｒｎｏ翻訳配列、及びＫｏｚａｋコンセンサス配列を含み得る。調節配列は、融合タンパク質が産生される宿主細胞を考慮して選択する。いくつかの実施形態において、好適な細菌プロモーターとしては、限定されるものではないが、バクテリオファージλｐＬまたはｐＲ、Ｔ６、Ｔ７、Ｔ７／ｌａｃＯ、ｌａｃ、ｒｅｃＡ、ｇａｌ、ｔｒｐ、ａｒａ、ｈｕｔ、及びｔｒｐ－ｌａｃが挙げられる。いくつかの実施形態において、適切な真核生物プロモーターとしては、限定されるものではないが、ＰＲＢＩ、ＧＡＰＤＨ、メタロチオネイン、チミジンキナーゼ、ウイルスＬＴＲ、サイトメガロウイルス、ＳＶ４０、または組織特異的もしくは腫瘍特異的プロモーター（例えば、α－胎児タンパク質、アミラーゼ、カテプシンＥ、Ｍ１ムスカリン受容体、γ－グルタミルトランスフェラーゼが挙げられる。
いくつかの実施形態において、追加のベクターには、リポプレックス（カチオン性リポソーム－ＤＮＡ複合体）、ポリプレックス（カチオン性ポリマー－ＤＮＡ複合体）、及びタンパク質－ＤＮＡ複合体が含まれる。核酸に加えて、ベクターは、核酸送達の結果（例えば、ある特定の組織への送達、または発現の持続時間）を選択、測定、及びモニタリングするのに有用な１つ以上の調節領域及び／または選択マーカーも含み得る。
ベクターは、当技術分野で知られている方法、例えば、注射、形質移入、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、形質導入、細胞融合、リポフェクション、リン酸カルシウム沈殿（Ｇｒａｈａｍ，Ｆ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，５２：４５６（１９７３）；Ｃｈｅｎ ａｎｄ Ｏｋａｙａｍａ，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．７：２７４５－２７５２（１９８７））、リポソーム媒介ｔｅｘｔｕｒｅｄ ｓａｌｔ法（Ｗｏｎｇ，Ｔ．Ｋ．ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ，１０：８７（１９８０）；Ｎｉｃｏｌａｕ ａｎｄ Ｓｅｎｅ，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ， ７２１：１８５－１９０（１９８２）；Ｎｉｃｏｌａｕ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．，１４９：１５７－１７６（１９８７））、ＤＥＡＥ－デキストラン処理（Ｇｏｐａｌ，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．，５：１１８８－１１９０（１９８５））、遺伝子ボンバードメント（Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，８７：９５６８－９５７２（１９９０））、遺伝子種またはＤＮＡベクタートランスポーターの使用（Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：９６３（１９９２）；Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６３：１４６２１（１９８８）；Ｈａｒｔｍｕｔ ｅｔ ａｌ．，カナダ特許出願第２，０１２，３１１号）により、所望の宿主細胞に導入することができる。
いくつかの実施形態において、ウイルスベクターは、細胞及び生きている動物対象における広範囲の遺伝子移入用途で使用されている。使用され得るウイルスベクターとしては、限定されるものではないが、アデノウイルス、レトロウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス、アデノ随伴ウイルス、単純ヘルペスウイルス、レンチウイルス、バキュロウイルス、センダイウイルス、麻疹ウイルス、シミアンウイルス４０、エプスタインバーウイルスベクターが挙げられる。非ウイルスベクターとしては、プラスミド、リポプレックス（カチオン性リポソーム－ＤＮＡ複合体）、ポリプレックス（カチオン性ポリマー－ＤＮＡ複合体）、タンパク質－ＤＮＡ複合体が挙げられる。核酸に加えて、ベクターは、核酸送達の結果（例えば、組織への送達、または発現の持続性）をスクリーニング、測定、及びモニタリングするのに有用な１つ以上の調節領域及び／または選択マーカーも含み得る。
いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、リポフェクションにより、インビボで導入することができる。核酸をインビトロでカプセル化し形質移入するためにリポソームを使用することが増えている。いくつかの実施形態において、リポソーム媒介形質移入で遭遇する困難及びリスクを限定するように設計された合成カチオン性脂質を使用して、遺伝子のインビボ形質移入用のリポソームを調製することができる（Ｆｅｉｇｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８４：７４１３（１９８７）；Ｍａｃｋｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：８０２７（１９８８）；Ｕｌｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５９：１７４５（１９９３））。いくつかの実施形態において、カチオン性脂質の使用は、負に帯電した核酸のカプセル化を促進し得、また、負に帯電した細胞膜との融合も促進し得る（Ｆｅｉｇｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３７：３８７（１９８９））。核酸の送達に特に有用な脂質化合物及び組成物は、ＷＯ９５／１８８６３、ＷＯ９６／１７８２３、及び米国５，４５９，１２７に記載されており、これらは参照によりその全体が本明細書に援用される。いくつかの実施形態において、特定の細胞タイプへの直接的形質移入は、明らかに、細胞の不均一性を伴う組織（例えば、膵臓、肝臓、腎臓、及び脳）においてとりわけ望ましい。いくつかの実施形態において、脂質は標的化のために他の分子に化学的に結合することができる（Ｍａｃｋｅｙ ｅｔ ａｌ．，１９８８）。いくつかの実施形態において、ホルモンもしくは神経伝達物質などの標的化されたペプチドや、抗体などのタンパク質、または非ペプチド分子をリポソームに化学的に結合させることができる。
組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、ならびに組織培養及び形質転換については、標準的な技法を使用することができる（例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション）。酵素反応及び精製の技法は、製造業者の仕様に従って、または当技術分野で一般的に遂行されているように、または本明細書に記載のように実施することができる。以上の技法及び手順は、概して、当技術分野で周知されている従来的な方法に従って、また本明細書全体で引用され論じられている様々な全般的及びより具体的な参考文献に記載のように、実施することができる。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ２ｎｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））（あらゆる目的のために参照により本明細書に援用される）を参照。
操作された免疫細胞
本明細書で使用する場合、「免疫細胞」とは、リンパ球（Ｔ細胞、Ｂ細胞、及びＮＫ細胞）、好中球、及び単球／マクロファージに分類される免疫システムの細胞を指す。いくつかの実施形態において、免疫細胞はＴ細胞である。いくつかの実施形態において、免疫細胞はＮＫ細胞である。いくつかの実施形態において、免疫細胞はマクロファージである。いくつかの実施形態において、免疫細胞は操作された免疫細胞であり、これは非天然タンパク質（例えば、キメラ抗原受容体）を発現するように、または外来性核酸を含むように遺伝子修飾されていることを意味する。
免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）は、１つの方法または２つ以上の方法で修飾することができる。免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）は、１つ以上のタイプの細胞の表面に存在する抗原の受容体である少なくとも１つの非天然分子を発現することができる。いくつかの実施形態において、免疫細胞は、自然界に見出されない少なくとも１つの合成分子を含むまたは発現するように設計されているため、自然界で見られない免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を含む。特定の実施形態において、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）は、少なくとも１つのキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように設計され、ＣＡＲには、特定の腫瘍抗原（例えば、グリピカン３（ＧＰＣ３）、悪性腫瘍バリアント受容体（ＭＶＲ）、ＨＬＡ－ＤＲ（ヒト白血球抗原Ｄ関連）、またはＣＤ１９）を標的化するＣＡＲが含まれる。特定の実施形態において、免疫細胞は、Ｔ細胞、例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、Ｔｒｅｇ細胞、Ｔｈｌ Ｔ細胞、Ｔｈ２ Ｔ細胞、Ｔｈｌ７ Ｔ細胞、非特異的Ｔ細胞、または前述のいずれかの組合せを含むＴ細胞の集団であり得る。キメラ抗原受容体を用いて操作された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）は、がんの治療に大きな潜在可能性を有する。ＣＡＲにおいては、受容体が抗原を認識し、この抗原が結合したときに、免疫細胞を活性化して抗原を発現する細胞を殺滅するようにプログラムすることができる。そのため、腫瘍細胞上に発現する抗原に対するＣＡＲを発現する免疫細胞は、腫瘍細胞を標的化して殺滅することができる。例えば、血液悪性腫瘍に対するＣＤ１９標的化ＣＡＲ形質導入Ｔ細胞（ＣＤ１９－ＣＡＲ Ｔ細胞）の最近の臨床試験では、ＣＡＲ Ｔ技術の強力な効果が示された（Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ，Ｊ．Ｎ．ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｂｌｏｏｄ １１６：４０９９－４１０２；Ｐｏｒｔｅｒ，Ｄ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６５：７２５－７３３；Ｇｒｕｐｐ，Ｓ．Ａ．ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６８：１５０９－１５１８；Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ，Ｊ．Ｎ．ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．３３：５４０－５４９；Ｂｒｏｗｎ，Ｃ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ａ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３７５：２５６１－２５６９）。ＣＡＲ Ｔの臨床的成功は、少なくとも部分的には、高親和性の抗原結合ドメインを複数のシグナル伝達ドメインと人工的に組み合わせて作製されたＣＡＲの融合構造によるものである（Ｍａｕｓ，Ｍ．Ｖ．ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｂｌｏｏｄ １２３：２６２５－２６３５；ｖａｎ ｄｅｒ Ｓｔｅｇｅｎ，Ｓ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ．１４：４９９－５０９）。
ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインとを含む。いくつかの実施形態において、細胞外抗原結合ドメインは、腫瘍関連抗原を認識可能な単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含み、膜貫通ドメインは、ＣＤ８及びＣＤ２８などの分子由来の膜貫通ドメインを用い、細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（例えば、ＣＤ３ζ）及び共刺激性シグナル分子（例えば、ＣＤ２８及びＣＤ１３７（４－１ＢＢ））の細胞内シグナル伝達ドメインを用いる。
本明細書で使用する場合、「単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）」とは、リンカーによって接続した重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む組換えタンパク質として定義される抗体のフラグメントを指し、このリンカーによって２つのドメインが結合して抗原結合部位が形成される。
いくつかの実施形態において、膜貫通ドメインは、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、活性化ＮＫ細胞受容体、免疫グロブリンタンパク質、Ｂ７－Ｈ３、ＢＡＦＦＲ、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＢＴＬＡ、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ１９ａ、ＣＤ２、ＣＤ２４７、ＣＤ２７、ＣＤ２７６（Ｂ７－Ｈ３）、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ３０、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ６９、ＣＤ７、ＣＤ８４、ＣＤ８、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ ＡＭ、サイトカイン受容体、ＤＡＰ－１０、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、Ｆｃガンマ受容体、ＧＡＤＳ、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＩＡ４、ＩＣＡＭ－１、Ｉｇアルファ（ＣＤ７９ａ）、ＩＬ－２Ｒベータ、ＩＬ－２Ｒガンマ、ＩＬ－７Ｒアルファ、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）、インテグリン、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＩＴＧＢ１、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＴ、ＬＦＡ－１、ＣＤ８３に特異的に結合するリガンド、ＬＩＧＨＴ、ＬＴＢＲ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＭＨＣクラス１分子、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＯＸ－４０、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、プログラム死－１（ＰＤ－１）、ＰＳＧＬ１、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ）、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ－７６、ＴＮＦ受容体タンパク質、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦＳＦ１４、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＶＬＡ１、及びＶＬＡ－６から選択されるタンパク質由来の膜貫通ドメインである。
いくつかの実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、活性化ＮＫ細胞受容体、免疫グロブリンタンパク質、Ｂ７－Ｈ３、ＢＡＦＦＲ、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＢＴＬＡ、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ１９ａ、ＣＤ２、ＣＤ２４７、ＣＤ２７、ＣＤ２７６（Ｂ７－Ｈ３）、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ３０、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ６９、ＣＤ７、ＣＤ８４、ＣＤ８、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ ＡＭ、サイトカイン受容体、ＤＡＰ－１０、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、Ｆｃガンマ受容体、ＧＡＤＳ、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＩＡ４、ＩＣＡＭ－１、Ｉｇアルファ（ＣＤ７９ａ）、ＩＬ－２Ｒベータ、ＩＬ－２Ｒガンマ、ＩＬ－７Ｒアルファ、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）、インテグリン、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＩＴＧＢ１、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＴ、ＣＤ８３に特異的に結合するリガンド、ＬＩＧＨＴ、ＬＴＢＲ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、Ｌｙｌ０８リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＭＨＣクラス１分子、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＯＸ－４０、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、プログラム死－１（ＰＤ－１）、ＰＳＧＬ１、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ）、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ－７６、ＴＮＦ受容体タンパク質、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦＳＦ１４、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＶＬＡ１、及びＶＬＡ－６、またはこれらの任意の組合せから選択されるタンパク質由来の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
いくつかの実施形態において、キメラ抗原受容体はさらに追加の抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態において、キメラ抗原受容体は二重特異性ＣＡＲである（すなわち、２つの抗原結合ドメインを標的化する）。いくつかの実施形態において、キメラ抗原受容体は多価である（すなわち、複数の抗原結合ドメインを標的化する）。いくつかの実施形態において、追加の抗原結合ドメインはｓｃＦｖである。
免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）は、当技術分野で知られている任意の供給源から得ることができる。例えば、免疫（例えば、Ｔ）細胞は造血幹細胞集団からインビトロで分化させることができ、または免疫（例えば、Ｔ）細胞は対象から入手することができる。Ｔ細胞は、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位からの組織、腹水、胸水、脾臓組織、または腫瘍から入手することができる。加えて、免疫（例えば、Ｔ）細胞などは、当技術分野で利用可能な１つ以上の免疫細胞株から誘導することができる。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、当業者に知られているあらゆる技法（例えば、ＦＩＣＯＬＬ（商標）分離及び／またはアフェレーシス）を用いて対象から採取した血液から入手することができる。Ｔ細胞療法のためにＴ細胞を単離するさらなる方法は、米国特許公開第２０１３／０２８７７４８号に開示されている。他の非限定的な例は、国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０１４５２０号（ＷＯ２０１５／１２００９６として公開）及び国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０５７９８３号（ＷＯ２０１７／０７０３９５として公開）に見出すことができ、これらの各々は、その全体が参照により本明細書に援用される。
いくつかの実施形態において、免疫細胞は自己Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、免疫細胞は、患者ではない対象から入手する。いくつかの実施形態において、治療方法で使用するＴ細胞はシンジェニック（ドナーとレシピエントは異なるが一卵性双生児）である。いくつかの実施形態において、治療方法で使用するＴ細胞は、レシピエント対象と同種異系（同じ種だが異なるドナー）である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は自己由来幹細胞である（自己幹細胞療法、すなわちＡＳＣＴの場合）。いくつかの実施形態において、免疫細胞は非自己由来Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、免疫細胞は健康なドナーから入手する。いくつかの実施形態において、免疫細胞は、がんまたは腫瘍に罹患した患者から入手する。
Ｔ細胞は、例えばキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作することができる。いくつかの実施形態において、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、細胞外単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を発現するように操作することができる。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、共刺激性ドメインが別々のポリペプチド鎖として発現するように操作する。例示的なＣＡＲ－Ｔ細胞療法及びコンストラクトは、米国特許公開第２０１３／０２８７７４８号、同第２０１４／０２２７２３７号、同第２０１４／００９９３０９号、及び同第２０１４／００５０７０８号に記載されており、これらはその全体が参照により本明細書に援用される。
ＣＡＲコンストラクト
本開示は、少なくとも部分的にはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ポリペプチドを提供する。本明細書で使用する場合、「キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）」とは、自然界に存在しない受容体を指し、特定の抗原に対する特異性を免疫エフェクター細胞に提供可能である。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、モノクローナル抗体薬剤の特異性をＴ細胞に送達するために使用される受容体を指す。概して、ＣＡＲは、細胞外結合ドメイン（エクトドメイン）と、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメイン（エンドドメイン）とを含む。
いくつかの実施形態において、ロバストな免疫（例えば、ＣＡＲ－Ｔ）細胞の増殖、機能、持続性、及び抗腫瘍活性を達成するため、共刺激性シグナルは、免疫（例えば、Ｔ細胞）細胞の共刺激性分子からの細胞内シグナルドメインをＣＡＲコンストラクトに組み込むことにより、提供することができる。いくつかの実施形態において、ＣＡＲコンストラクト内の共刺激性ドメインの選択及び配置は、免疫（例えばＣＡＲ－Ｔ）細胞機能及び細胞運命に影響を及ぼし、免疫（例えばＣＡＲ－Ｔ）細胞の動態、細胞毒性機能、及び潜在的には安全性プロファイルに異なる影響を有し得る。共刺激性分子の非限定的な例としては、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、０Ｘ４０、ＣＤ４０Ｌが挙げられる。
本明細書で使用する場合、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７は、休止ＣＤ８＋ Ｔ細胞のサブセットに発現する活性化誘導性のＴ細胞共刺激性分子であり、活性化後はＣＤ４＋及びＣＤ８＋両方のＴ細胞上で上方調節される。いくつかの実施形態において、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７ドメインを組み込むＣＡＲを発現するＴ細胞は、グランザイムＢ、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α、ＧＭ－ＣＳＦ、及び抗アポトーシスタンパク質Ｂｃｌ－ＸＬを発現することができ（Ｚｈｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．２０１０；１８：４１３－４２０）、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７共刺激性ドメインを組み込むＣＡＲは、より長いＣＡＲ－Ｔ細胞持続性を示すことができる（Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２０１５；２８：４１５－４２８）。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のキメラ型受容体の細胞内ドメインは、４－１ＢＢシグナル伝達ドメインの後に５つのアミノ酸配列を含み、これはさらに、キメラ型受容体の文脈で有用な他の任意の所望の細胞外、膜貫通、及び／または細胞内ドメインと組み合わせることができる。
いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、（ａ）抗原結合ドメインを含む細胞外ドメインと、（ｂ）膜貫通ドメインと、（ｃ）共刺激性エンドドメインを含む細胞内ドメインであって、共刺激性エンドドメインが、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７由来の細胞内シグナル伝達ドメイン、及び５つの追加アミノ酸を含む、細胞内ドメインとを含む。ここで企図されるように、ＣＡＲコンストラクトは、任意の所望の抗原結合ドメインを対象とする細胞外ドメインを含むことができる。いくつかの実施形態において、共刺激性エンドドメインは、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７由来の細胞内シグナル伝達ドメイン、及び５つの追加アミノ酸を含み、ここで、５つの追加アミノ酸は配列番号１によってコードされる。いくつかの実施形態において、共刺激性エンドドメインは配列番号２を含む。いくつかの実施形態において、共刺激性エンドドメインは、配列番号２または４に対し少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である配列を含む。
配列番号１ － ５つの追加アミノ酸（ＤＮＡ配列）
ＣＧＴＴＴＣＴＣＴＧＴＴＧＴＴ
配列番号２ － ４－１ＢＢ共刺激性ドメイン及び５つの追加アミノ酸（ＤＮＡ配列）
Figure 2022538425000002
配列番号３ － ５つの追加アミノ酸（アミノ酸配列）
ＲＦＳＶＶ
配列番号４ － ４－４－１ＢＢ共刺激性ドメイン及び５つの追加アミノ酸（アミノ酸配列）
Figure 2022538425000003
いくつかの実施形態において、ＣＡＲの細胞外結合ドメインは抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは疾患に関連する抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは腫瘍抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、表面抗原、細胞質または核抗原を含めた任意の数の標的に特異的に結合する。例えば、抗原結合ドメインは、ＢＣＭＡ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ５２、ＣＤ７０、ＣＤ９９、ＣＤ１３８、ＣＤ１２３、ＣＤ２７４、ＴＩＭ－３、上皮成長因子受容体ファミリーのメンバー（ｅｒｂｌ、ｅｒｂ２、ｅｒｂ３、ｅｒｂ４、及びこれらの変異体）、エフリン受容体ファミリーのメンバー（ＥｐｈＡ１－１０、ＥｐｈＢ１－６）、前立腺特異的抗原（例えば、前立腺幹細胞抗原ＰＳＣＡ、前立腺特異的膜抗原ＰＳＭＡ）、胚性抗原（例えば、がん胎児性抗原ＣＥＡ、胎児アセチルコリン受容体）、血管内皮成長因子ファミリーのメンバー（ＶＥＧＦＲ１～３）、上皮細胞接着分子ＥｐＣＡＭ、アルファフェトプロテインＡＦＰ、ムチンタンパク質ファミリーのメンバー（例えば、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６）、卵胞刺激ホルモン受容体（ＦＳＨＲ）、ヒト高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷ－ＭＡＡ）、葉酸結合タンパク質ＦＢＰ、ａ－葉酸受容体、ＮＫＧ２Ｄ受容体のリガンド、上皮糖タンパク質ファミリーのメンバー（例えば、ＥＧＰ－２、ＥＧＰ－４）、ジアシアロガングリオシド（例えば、ＧＤ２、ＧＤ３）、炭酸脱水酵素ファミリーのメンバー（例えば、ＣＡＩＸ）、ならびに炭水化物抗原ファミリーのメンバー（例えば、Ｌｅｙ）（挙げられたタンパク質及びタンパク質ファミリーの変異体を含む）に結合することができる。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、Ｌａ／ＳＳＢ抗原、ＧＴＰアーゼのＲｈｏファミリーのメンバー、高移動度群タンパク質のメンバーなどのような細胞質または核抗原に結合する抗体またはそのフラグメントに結合することができる。同様に、抗原結合ドメインは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）のアルファ及びベータ鎖またはガンマ及びデルタ鎖、またはこれらのフラグメントに結合することができる。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、ヒト白血球抗原クラス（ＨＬＡ）Ｉ及びＩＩタンパク質複合体によって提示されるペプチドに結合することができる。例としては、限定されるものではないが、ＥＧＦＲファミリー、サバイビン、ｓｒｙ様高移動度群ボックス（ＳＯＸ）タンパク質ファミリー、黒色腫関連抗原（例えば、自己免疫性がん／精巣抗原ＮＹ－ＥＳＯ－１、黒色腫抗原ファミリーＡのメンバーＭＡＧＥＡ、黒色腫で優先的に発現する抗原ＰＲＡＭＥ、ｇｐ１００、ＭＡＲＴ－１）、及び白血病関連抗原（例えば、ＡＭＬｌ－ＥＴＯ、ＤＥＫ－ＣＡＮ、ＰＭＬ－ＲＡＲアルファ、Ｆｌｔ３－ＩＴＤ、ＮＰＭ１、ＡｕｒＡ、Ｂｃｌ－２、Ｂｌ－１、ＢＭＩ１、ＢＲＡＰ、ＣＭＬ２８、ＣＭＬ６６、サイクリンＡ、サイクリンＢ１、サイクリンＥ、ＣＹＰ１Ｂ１、ＥＴＯ／ＭＴＧ８、Ｇ２５０／ＣＡＩＸ、ＨＯＸＡ９、ｈＴＥＲＴ、Ｍｃｌ－１、ＭＡＧＥ、メソテリン、ｍＨＡｇ、ミエロペルオキシダーゼ、ＭＰＰ１１、ＭＵＣ１、ＮｕＳＡＰｌ、ＯＦＡ／ｉＬＲＰ、ＰＡＳＤ１、ＰＲＡＭＥ、プロテイナーゼ３、ＲＡＧＥ－１、ＲＧＳ５、ＲＨＡＭＭ、ＳＳＸ２ＩＰ、サバイビン、ウィルムス腫瘍遺伝子１（ＷＴ１））がある。抗原結合ドメインは、サイトカイン受容体（例えば、ＩＬ－１３受容体、ＩＬ－２２受容体）、ＮＫＧ２Ｄ受容体（例えば、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２）、ＥＧＦＲファミリーメンバー、または自己反応性ＴＣＲに結合することができる。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、腫瘍抗原に特異的に結合する。例としては、限定されるものではないが、グリピカン３（ＧＰＣ）、ＭＶＲ（悪性腫瘍バリアント受容体）、ＨＬＡ－ＤＲ（ヒト白血球抗原Ｄ関連）、ＡＦＰ、ＣＥＡ、ＣＡ－１２５、ＭＵＣ－１、ＥＴＡ、チロシナーゼ、ＭＡＧＥ、未成熟ラミニン受容体、ＴＡＧ－７２、ＨＰＶ Ｅ６、ＨＰＶ Ｅ７、ＢＩＮＧ－４、カルシウム活性化クロライドチャネル２、サイクリンＢ１、９Ｄ７、Ｅｐ－ＣＡＭ、ＥｐｈＡ３、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、テロメラーゼ、メソセリン、ＳＡＰ－１、サバイビン、ＮＹ－ＥＳＯ－１／ＬＡＧＥ－１、ＰＲＡＭＥ、ＳＳＸ－２、ＢＲＣＡ１／２、ＣＤＫ４、ＣＭＬ６６、またはＣＤ１９がある。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは抗体薬剤であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、ＧＰＣ３、ＭＶＲ、ＨＬＡ－ＤＲ、またはＣＤ１９に特異的に結合する抗体薬剤であるか、またはそれを含む。
いくつかの実施形態において、膜貫通ドメインは、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、活性化ＮＫ細胞受容体、免疫グロブリンタンパク質、Ｂ７－Ｈ３、ＢＡＦＦＲ、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＢＴＬＡ、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ１９ａ、ＣＤ２、ＣＤ２４７、ＣＤ２７、ＣＤ２７６（Ｂ７－Ｈ３）、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ３０、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ６９、ＣＤ７、ＣＤ８４、ＣＤ８、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ ＡＭ、サイトカイン受容体、ＤＡＰ－１０、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、Ｆｃガンマ受容体、ＧＡＤＳ、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＩＡ４、ＩＣＡＭ－１、Ｉｇアルファ（ＣＤ７９ａ）、ＩＬ－２Ｒベータ、ＩＬ－２Ｒガンマ、ＩＬ－７Ｒアルファ、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）、インテグリン、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＩＴＧＢ１、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＴ、ＬＦＡ－１、ＣＤ８３に特異的に結合するリガンド、ＬＩＧＨＴ、ＬＴＢＲ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＭＨＣクラス１分子、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＯＸ－４０、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、プログラム死－１（ＰＤ－１）、ＰＳＧＬ１、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ）、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ－７６、ＴＮＦ受容体タンパク質、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦＳＦ１４、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＶＬＡ１、及びＶＬＡ－６から選択されるタンパク質由来の膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態において、膜貫通ドメインはＣＤ８α由来の膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態において、膜貫通ドメインは配列番号５を含む。いくつかの実施形態において、膜貫通ドメインは、配列番号５に対し少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である配列を含む。
配列番号５ － ＣＤ８／ヒンジ／膜貫通
Figure 2022538425000004
いくつかの実施形態において、細胞内ドメインはさらにＣＤ３ζ由来の細胞内ドメインを含む。いくつかの実施形態において、細胞内ドメインは配列番号６を含む。いくつかの実施形態において、細胞内ドメインは、配列番号６に対し少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である配列を含む。
配列番号６ － ＣＤ3ζ
Figure 2022538425000005
いくつかの実施形態において、ＣＡＲはさらにＴ２Ａ自己切断ペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲはさらにシグナルペプチドまたはリーダー配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲはさらにＣＤ８αリーダー配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲはさらに、ｆｌａｇタグ配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲはさらにヒンジ領域を含む。いくつかの実施形態において、ヒンジ領域はＣＤ８αヒンジである。いくつかの実施形態において、ＣＡＲはさらに配列番号７を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲはさらに配列番号８を含む。いくつかの実施形態において、細胞外ドメインは、配列番号７または８に対し少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である配列を含む。
配列番号７ － ＣＤ８αリーダー配列
Figure 2022538425000006
配列番号８ － Ｆｌａｇ－タグ配列
Figure 2022538425000007
ＧＰＣ３ ＣＡＲ
グリピカン３（ＧＰＣ３）は、ヒトＧＰＣ３遺伝子によってコードされる細胞表面タンパク質であり、腫瘍性肝細胞に高頻度で再発現する腫瘍胎児性抗原である（Ｖｉｄａｌｉ，ｅｔ ａｌ，２００８，Ｊ ｈｅｐａｔｏｌ ４８：３９９－４０６）。ＧＰＣ３は、胎児の肝臓で高発現し、正常な成人の肝臓組織では発現しない。しかし、肝細胞がんでは発現が再活性化され、肝がんの発生と密接に関連しており、肝がんの初期段階ではＧＰＣ３発現の検出率が比較的高く、肝がんの発達に伴って増加する。さらに、ＧＰＣ３は、黒色腫、卵巣明細胞がん、卵黄嚢腫瘍、神経芽腫などの腫瘍にも発現する。ＧＰＣ３は、肝細胞がん、黒色腫、及び他の腫瘍で特異的に高発現することを考慮し、有用な免疫組織化学的診断検査（Ａｎａｔｅｌｌｉ，ｅｔ ａｌ．，２００８，Ａｍ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐａｔｈ １３０：２１９－２２３）及び有力なバイオマーカーとして浮上している（Ａｂｕｒａｔａｎｉ，２００５，Ｊ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ ４０．ＳＩ ６：１－６）。
ＧＰＣ３はプロテオグリカンファミリーのメンバーであり、器官形成における細胞接着の細胞外マトリックスとして、または細胞成長因子の受容体として機能する。ＧＰＣ３のプロテインコアは２つのサブユニット、すなわちＮ末端サブユニット及びＣ末端サブユニットを含む。ＧＰＣ３のカルボキシル（Ｃ）末端側に位置する位置５６０のセリンには、グリコシルフォスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカーが付加されている。ＧＰＩアンカーは、細胞膜脂質との共有結合によってＧＰＣ３を細胞表面上で局在化させる役割を果たしている。また、ＧＰＣ３の位置４９５のセリン及び位置５０９のセリンはヘパラン硫酸鎖（ＨＳ鎖）で修飾されており、このＨＳ鎖はＷｎｔシグナル、ＦＧＦシグナル、ＢＭＰシグナルなどの複数の成長シグナル伝達経路を調節することが知られている。関与する成長シグナル伝達経路は、がんのタイプによって異なることが知られている。例えば、肝細胞がん（ＨＣＣ）の場合、細胞はＷｎｔシグナル経路の刺激によって成長する。
本開示は、少なくとも部分的にはＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチドを提供する。いくつかの実施形態において、ＧＰＣ３ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは抗体薬剤であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインはＧＰＣ３に特異的に結合する抗体薬剤であるか、またはそれを含む。
いくつかの実施形態において、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ポリペプチドは、ｉ）配列番号９を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１０を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン、ならびに配列番号１２を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１３を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１４を含む重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメインを含む、細胞外抗原結合ドメインと、ｉｉ）膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）抗原が抗体薬剤に結合したときにＴ細胞を活性化する細胞内シグナル伝達ドメインとを含む。
Figure 2022538425000008
いくつかの実施形態において、ＣＡＲポリペプチドは、ｉ）配列番号１５に対し少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一の配列を含む軽鎖可変ドメイン及び配列番号１６に対し少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一の配列を含む重鎖可変ドメインを含む細胞外抗原結合ドメインと、ｉｉ）膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）抗原が抗体薬剤に結合したときにＴ細胞を活性化する細胞内シグナル伝達ドメインとを含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲポリペプチドは、ｉ）配列番号１７に対し少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一の配列を含む軽鎖可変ドメイン及び配列番号１８に対し少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一の配列を含む重鎖可変ドメインを含む細胞外抗原結合ドメインと、ｉｉ）膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）抗原が抗体薬剤に結合したときにＴ細胞を活性化する細胞内シグナル伝達ドメインとを含む。
いくつかの実施形態において、ＣＡＲポリペプチドは、ｉ）配列番号１５を含む軽鎖可変ドメイン及び配列番号１６を含む重鎖可変ドメインを含む細胞外抗原結合ドメインと、ｉｉ）膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）抗原が抗体薬剤に結合したときにＴ細胞を活性化する細胞内シグナル伝達ドメインとを含む。
配列番号１５ － ヒトＧＣ３３軽鎖可変領域（アミノ酸配列）
Figure 2022538425000009
配列番号１６ － ヒトＧＣ３３重鎖可変領域（アミノ酸配列）
Figure 2022538425000010
配列番号１７ － ヒトＧＣ３３軽鎖可変領域（ＤＮＡ配列）
Figure 2022538425000011
配列番号１８ － ヒトＧＣ３３重鎖可変領域（ＤＮＡ配列）
Figure 2022538425000012
ＭＹＲ ＣＡＲ
ヒト白血球抗原－ＤＲ（ＨＬＡ－ＤＲ）は、古典的な主要組織適合複合体ＩＩ分子である（Ｓｈａｃｋｅｌｆｏｒｄ，Ｄ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，１９８２ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６６：１３３－１８７）。ＨＬＡ－ＤＲ及びそのリガンド、長さ９アミノ酸以上のペプチドは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）のリガンドを構成する。ＨＬＡ－ＤＲ分子はシグナルに応答して上方調節される。感染症の場合、ペプチド（例えば、ブドウ球菌エンテロトキシンＩペプチド）はＤＲ分子に結合し、Ｔヘルパー細胞に見られるＴ細胞受容体に提示される。次にこれらの細胞はＢ細胞の表面上の抗原と結合して、Ｂ細胞増殖を刺激する。
ＨＬＡ－ＤＲの主な機能は、外来起源の可能性があるペプチド抗原を免疫システムに提示してＴ（ヘルパー）細胞の応答を誘発または抑制し、最終的には同じペプチド抗原に対する抗体を産生させることである。ＨＬＡ－ＤＲはαβヘテロ二量体、細胞表面の受容体であり、各サブユニットは２つの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞質尾部を含む。α鎖及びβ鎖はいずれも膜に固定されている。成熟タンパク質のＮ末端ドメインは、結合溝の露出部分を構成するアルファヘリックスを形成し、Ｃ末端の細胞質領域は、結合溝の下で他の鎖と相互作用して細胞膜にまたがるβシートを形成する。ペプチドの接触位置の大部分は、各鎖の最初の８０残基にある。
ＨＬＡ－ＤＲは、抗原提示細胞（例えば、樹状細胞、マクロファージ、単球、Ｂ細胞）上で限定的に発現する。細胞表面上でのＨＬＡ－ＤＲ「抗原」の存在量は、しばしば刺激に応答して増加するため、ＨＬＡ－ＤＲは免疫刺激のマーカーでもある。Ｂ細胞悪性腫瘍ではＨＬＡ－ＤＲの発現レベルが高く、正常細胞では発現スペクトルが限定されているため、ＨＬＡ－ＤＲに対する抗体が開発され、前臨床試験及び臨床試験においてＢ細胞悪性腫瘍の試験が行われている（Ｎａｇｙ，Ｚ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．８：８０１－８０７；ＤｅＮａｒｄｏ，Ｇ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１１：７０７５ｓ－７０７９ｓ；Ｉｖａｎｏｖ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１９：２１４３－２１５９；Ｌｉｎ， Ｔ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｌｅｕｋ．Ｌｙｍｐｈｏｍａ ５０：１９５８－１９６３）。第Ｉ／ＩＩ相試験では、毒性は重篤ではなかったものの、有効性が限定されていたため、さらなる試験は中止された（Ｌｉｎ，Ｔ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｌｅｕｋ．Ｌｙｍｐｈｏｍａ ５０：１９５８－１９６３）。
本明細書で使用する場合、悪性腫瘍バリアント受容体（ＭＶＲ）抗体薬剤は、ＨＬＡ－ＤＲの多型領域を認識する（米国特許出願公開第ＵＳ２０１６－０２５７７６２号に記載（その全体が参照により本明細書に援用される））。本開示は、少なくとも部分的にはＭＶＲ ＣＡＲポリペプチドを提供する。本開示に従う例示的なＭＶＲ ＣＡＲコンストラクトの模式図を図１に示す。いくつかの実施形態において、ＣＡＲの細胞外ドメインは抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは抗体薬剤であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、ＨＬＡ－ＤＲに特異的に結合する抗体薬剤であるか、またはそれを含む。
いくつかの実施形態において、ＣＡＲポリペプチドは、抗ＭＶＲ抗体薬剤の一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）形態を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲポリペプチドは配列番号１９を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号１９に対し少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である配列を含む。
いくつかの実施形態において、ＣＡＲポリペプチドは、抗ＭＶＲ抗体薬剤の一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）形態を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲポリペプチドは配列番号２０を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号２０に対し少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である配列を含む。
配列番号１９ － ＭＶＲＬ２Ｈ２（アミノ酸配列）
Figure 2022538425000013
配列番号２０ － ＭＶＲＬ２Ｈ２（ＤＮＡ配列）
Figure 2022538425000014
ＣＤ１９ ＣＡＲ
ＣＤ１９は、正常Ｂ細胞、新生物性Ｂ細胞、及び濾胞樹状細胞のバイオマーカーである。ＣＤ１９は、Ｂ細胞受容体依存的シグナル及び非依存的シグナルの両方を調節することを通じて、Ｂ細胞の内在的シグナル伝達閾値の確立において決定的に関与する。さらに、ＣＤ１９は、補体受容体ＣＤ２１、テトラスパニン膜タンパク質ＣＤ８１（ＴＡＰＡ－１）、及びＣＤ２２５と共に、成熟Ｂ細胞の表面上の多分子複合体の主要なシグナル伝達成分として機能しており、また、ＣＤ１９は体液性抗原誘導性応答と寛容誘導とのバランスを維持する上でも不可欠な役割を果たしている。
本開示は、少なくとも部分的にはＣＤ１９ ＣＡＲポリペプチドを提供する。いくつかの実施形態において、ＣＡＲの細胞外ドメインは抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは抗体薬剤であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインはＣＤ１９に特異的に結合する抗体薬剤であるか、またはそれを含む。
いくつかの実施形態において、ＣＡＲポリペプチドは、抗ＣＤ１９抗体薬剤の一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）形態を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲポリペプチドは配列番号２１を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号２１に対し少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である配列を含む。
いくつかの実施形態において、ＣＡＲポリペプチドは、抗ＣＤ１９抗体薬剤の一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）形態を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲポリペプチドは配列番号２２を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号２２に対し少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である配列を含む。
配列番号２１ － ＣＤ１９（アミノ酸配列）
Figure 2022538425000015
配列番号２２ － ＣＤ１９（ＤＮＡ配列）
Figure 2022538425000016
核酸
本明細書で使用する場合、「核酸」は、ポリヌクレオチドを含む任意の化合物及び／または物質を含むために使用する。例示的な核酸またはポリヌクレオチドとしては、限定されるものではないが、リボ核酸（ＲＮＡ）及び／またはデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）が挙げられる。
いくつかの実施形態において、核酸コンストラクトは、ＣＡＲをコードする領域を含み、ここでＣＡＲは、（ａ）抗原結合ドメインを含む細胞外ドメインと、（ｂ）膜貫通ドメインと、（ｃ）４－１ＢＢ／ＣＤ１３７由来の細胞内シグナル伝達ドメイン、及び５つの追加アミノ酸を含む細胞内ドメインとを含む。いくつかの実施形態において、核酸コンストラクトは、当技術分野で知られている方法で発現ベクターまたはウイルスベクターに挿入することができ、核酸分子は、発現制御配列に機能的に結合することができる。発現ベクターの非限定的な例としては、プラスミドベクター、トランスポゾンベクター、コスミドベクター、及びウイルス由来ベクター（例えば、任意のアデノウイルス由来ベクター（ＡＶ）、サイトメガロウイルス由来ベクター（ＣＭＶ）、シミアンウイルス由来ベクター（ＳＶ４０）、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、レンチウイルスベクター、及びレトロウイルスベクター）が挙げられる。いくつかの実施形態において、発現ベクターはウイルスベクターである。いくつかの実施形態において、ウイルスベクターはレンチウイルスベクターである。
いくつかの実施形態において、発現ベクターはさらに、核酸に動作可能に結合したプロモーターを含む。いくつかの実施形態において、プロモーターは構成的プロモーターである。いくつかの実施形態において、プロモーターは誘導性プロモーターである。いくつかの実施形態において、発現ベクターは、配列番号２３、２４、２５、２６、２７、及び／または２８を含む。いくつかの実施形態において、発現ベクターは、配列番号２３、２４、２５、２６、２７、及び／または２８に対し少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である配列を含む。
配列番号２３ － ＥＦ１αプロモーター
Figure 2022538425000017
配列番号２４ － Ｕ５リピート
Figure 2022538425000018
配列番号２５ － Ｇａｇ／Ｐｏｌ
Figure 2022538425000019
配列番号２６ － ｃＰＰＴ
Figure 2022538425000020
配列番号２７ － ウッドチャック／ＰＲＥ
Figure 2022538425000021
配列番号２８ － Ｒ／領域
Figure 2022538425000022
レンチウイルスベクターはレンチウイルスに由来する。レンチウイルスベクターは、レトロウイルスのサブクラスである一本鎖ＲＮＡレンチウイルスに基づいている。このベクターは、中程度のクローニング能力及び安定した遺伝子発現という利点を兼ね備えており、神経細胞を含めた分裂細胞及び非分裂細胞に形質導入することができる。レンチウイルスのゲノムは、感染すると導入遺伝子を宿主のゲノムに統合させ、長期的な遺伝子発現を促進する。ＨＩＶベースベクターなどのレンチウイルスベクターは、遺伝子送達に使用されるレトロウイルスベクターの例である。他のレトロウイルスとは異なり、ＨＩＶベースベクターは、そのパッセンジャー遺伝子を非分裂細胞に組み込むことが知られており、そのため持続的形態の疾患の治療に使用することができる。
このようなクローニング配列及び／または発現配列に追加の配列を加えて、クローニング及び／または発現の機能を最適化したり、ポリヌクレオチドの単離を助けたり、細胞へのポリヌクレオチドの導入を改善したりすることができる。クローニングベクター、発現ベクター、アダプター、及びリンカーの使用は、当技術分野で周知されている。
いくつかの実施形態において、核酸分子は、操作された免疫細胞に導入する際に本開示のＣＡＲを発現することができるベクターに挿入する。いくつかの実施形態において、操作された免疫細胞はＴ細胞である。
ＣＡＲ－Ｔ細胞の産生
本明細書では、ＣＡＲを含む免疫細胞を産生するための方法を提供する。いくつかの実施形態において、ＣＡＲが導入された免疫細胞はヒト免疫細胞である。いくつかの実施形態において、免疫細胞は自己由来ヒト免疫細胞である。いくつかの実施形態において、免疫細胞は同種異系ヒト免疫細胞である。いくつかの実施形態において、免疫細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞（ヘルパーＴ細胞、ＴＨ細胞）、ＣＤ８＋Ｔ細胞（細胞毒性Ｔ細胞、ＣＴＬ）、メモリーＴ細胞、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ細胞）、アポトーシスＴ細胞であるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、免疫細胞はＮＫ細胞である。
いくつかの実施形態において、免疫細胞のウイルス感染は、宿主細胞（例えば、２９３Ｔ細胞、ＰＢＭＣ、Ｐｌａｔ－ＧＰ細胞、またはＰＡ３１７）にＣＡＲ発現ベクター及びパッケージングプラスミドを形質移入して組換えウイルスを調製することと、組換えウイルスを免疫細胞に感染させることとを含み得る。ウイルス感染法は、当技術分野で知られている任意の方法によって実施することができる。いくつかの実施形態において、免疫細胞へのＣＡＲ発現ベクターの移入は、フローサイトメトリー、ノーザンブロッティング、サザンブロッティング、ＰＣＲ（例えば、ＲＴ－ＰＣＲ）、ＥＬＩＳＡ、もしくはウェスタンブロッティングによってＣＡＲの発現を調べることにより、またはベクターに挿入されたマーカー遺伝子の発現を調べることにより、確認することができる。
いくつかの実施形態において、本開示は、操作された免疫細胞を産生する方法であって、免疫細胞に、（ｉ）ＣＡＲをコードする核酸であって、当該ＣＡＲが、（ａ）抗原結合ドメインを含む細胞外ドメインと、（ｂ）膜貫通ドメインと、（ｃ）共刺激性エンドドメインを含む細胞内ドメインであって、共刺激性エンドドメインが、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７由来の細胞内シグナル伝達ドメイン、及び５つの追加アミノ酸を含む、細胞内ドメインとを含む、核酸、または、（ｉｉ）ＣＡＲをコードする核酸を含むベクターであって、当該ＣＡＲが、（ａ）抗原結合ドメインを含む細胞外ドメインと、（ｂ）膜貫通ドメインと、（ｃ）共刺激性エンドドメインを含む細胞内ドメインであって、共刺激性エンドドメインが、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７由来の細胞内シグナル伝達ドメイン、及び５つの追加アミノ酸を含む、細胞内ドメインとを含む、ベクターを導入することを含む、方法を提供する。
いくつかの実施形態において、細胞質シグナルドメイン４－１ＢＢにおける免疫学的有効性を高めるため、ＣＡＲを共刺激性シグナル因子として産生する際に使用する４－１ＢＢ細胞質ドメインに、５つのアミノ酸を付加する。いくつかの実施形態において、完成したコンストラクトは、ｓｃＦｖである抗原結合ドメインと、ＥＦＬ－αプロモーターと、ヒトＣＤ８のヒンジ領域及び膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインとを含む。詳細には、細胞内シグナル伝達ドメインは、刺激性ドメイン及び共刺激性シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態において、膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、もしくはゼータ鎖、またはＣＤ２８、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、もしくはＣＤ１５４のうちの１つ以上を含み得るが、これに限定されない。いくつかの実施形態において、膜貫通ドメインはＣＤ８を含む。いくつかの実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＩＣＡＭ－１、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、及び４－１ＢＢ／ＣＤ１３７から選択される、ＣＤ３ゼータ一次シグナル伝達ドメイン内の共刺激性シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態において、共刺激性ドメインは、５つの連続するアミノ酸が付加された４－１ＢＢを含む。いくつかの実施形態において、共刺激性ドメインはＣＤ３ゼータに結合している。
いくつかの実施形態において、本開示の操作された免疫細胞を産生する方法はさらに、少なくとも３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、または１２日間、インビトロで操作された免疫細胞を培養することを含む。
いくつかの実施形態において、操作された免疫細胞を産生する方法はさらに、導入するステップの後に、操作された免疫細胞を培養することを含む。いくつかの実施形態において、操作された免疫細胞を産生する方法はさらに、導入するステップの前に、対象から免疫細胞を入手することを含む。
当技術分野で知られている、免疫細胞内でＣＡＲを発現させる方法はいずれも、本開示の文脈で使用することができる。例えば、様々な発現用核酸ベクター、例えば、直鎖状ポリヌクレオチド、イオン性化合物もしくは両親媒性化合物が結合したポリヌクレオチド、プラスミド、またはウイルスベクターが当技術分野で知られているが、本開示はこれらに限定されない。いくつかの実施形態において、免疫細胞でＣＡＲを発現させるためのベクターは、自己複製プラスミドもしくはウイルス、またはその誘導体であるか、またはこれらを含むことができる。ウイルスベクターとしては、限定されるものではないが、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクターなどを挙げることができる。いくつかの実施形態において、レトロウイルスベクターであるレンチウイルスベクターを使用することができる。いくつかの実施形態において、ベクターは非プラスミドであり非ウイルス化合物（例えば、リポソーム）である。
本開示は、本明細書に記載の方法によって生成されたＣＡＲ－Ｔ細胞が（例えば、がんの治療に）治療的に有用であるという認識を包含する。
治療用途
本明細書では、がんまたは他の悪性腫瘍を有する対象を治療する方法であって、ＣＡＲを含む免疫細胞を含むまたは送達する組成物を対象に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態において、がんは抗グリピカン３関連がんである。いくつかの実施形態において、がんは抗ＣＤ１９関連がんである。いくつかの実施形態において、がんは抗ＭＶＲ関連がんである。
がんとは、体内で異常な細胞が無秩序に増殖することを特徴とする広範な疾患群を指すことができる。調節されていない細胞の分裂及び成長によって悪性腫瘍が形成され、悪性腫瘍は隣接組織に侵入し、さらにリンパ系または血流を介し身体の離れた部位に転移する恐れもある。がんまたはがん組織は腫瘍を含み得る。
「抗グリピカン３関連がん」は、がん細胞の表面にグリピカン３が存在することを特徴とするがんである。膜結合ヘパラン硫酸プロテオグリカンであるＧＰＣ３は、肝細胞がんの約７０～８０％で過剰発現するが、健康組織では一般的には発現しない。加えて、ＧＰＣ３過剰発現はいくつかの腫瘍（例えば、限定されるものではないが、肝細胞がん、肝芽腫、生殖細胞腫瘍（例えば、卵黄嚢腫瘍、絨毛性腫瘍）、ウィルムス腫瘍、胃がん、非小細胞肺がん（ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）、及び甲状腺がん）に認められる。
「抗ＣＤ１９関連がん」はＣＤ１９発現を特徴とするがんであり、ＣＤ１９はＢ細胞の発生及び成熟に必須の役割を示している。ＣＤ１９発現は、ほとんどのＢ細胞腫瘍で高度に保存されている。これは、ほとんどの急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、Ｂ細胞リンパ腫で発現する。
「抗ＭＶＲ関連がん」は、対象の非がん細胞に比べてＨＬＡ－ＤＲ抗原の発現が増加したがん細胞を特徴とする。いくつかの実施形態において、ＨＬＡ－ＤＲ抗原が高発現のがんは、限定されるものではないが、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、結腸がん、子宮内膜がん、食道がん、卵管がん、胆嚢がん、胃腸がん、頭頸部がん、血液がん、喉頭がん、肝がん、肺がん、リンパ腫、黒色腫、中皮腫、卵巣がん、原発性腹膜がん、唾液腺がん、肉腫、胃がん、甲状腺がん、膵臓がん、及び前立腺がんが挙げられる。いくつかの実施形態において、ＨＬＡ－ＤＲ発現に関連する疾患には、限定されるものではないが、ＨＬＡ－ＤＲを発現する非定型及び／もしくは非古典的がん、悪性腫瘍、前がん状態、または増殖性疾患、あるいはこれらの組合せが挙げられる。
いくつかの実施形態において、本開示の方法に従う治療対象のがんは限定されるものではないが、がん腫、リンパ腫（例えば、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫）、芽腫、肉腫、ならびに白血病が挙げられる。いくつかの実施形態において、がんには、扁平上皮がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺腺がん、肺の扁平上皮がん、腹膜がん、肝細胞がん、胃がん、膵臓がん、神経膠腫、子宮頸がん、卵巣がん、肝がん、膀胱がん、肝細胞がん、乳がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜または子宮がん、唾液腺がん、腎臓がん、前立腺がん、外陰がん、甲状腺がん、肝臓がん、白血病及び他のリンパ増殖性障害、ならびに様々なタイプの頭頸部がんが含まれ得る。
いくつかの実施形態において、本開示の方法に従う治療に適したがんは血液がんである。いくつかの実施形態において、血液がんは白血病である。いくつかの実施形態において、がんは、１つ以上の急性白血病（限定されるものではないが、Ｂ細胞性急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、Ｔ細胞性急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）を含む）；１つ以上の慢性白血病（限定されるものではないが、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）を含む）；さらなる血液がんまたは血液状態（限定されるものではないが、Ｂ細胞リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、有毛細胞白血病、小細胞または大細胞濾胞性リンパ腫、悪性リンパ増殖性状態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、ワルデンシュトレーム・マクログロブリン血症、及び「前白血病」（骨髄系血液細胞の産生不全（または異形成）によって合わされた多様な血液状態の集合）を含む）からなる群より選択される。
いくつかの実施形態において、本開示の方法により治療対象となるがんは、Ｂ細胞リンパ腫（すなわち、Ｂ細胞起源の悪性リンパ腫）である。Ｂ細胞リンパ腫としては、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫（ＭＡＬＴ）、慢性リンパ性白血病、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、バーキットリンパ腫、縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ワルデンシュトレーム・マクログロブリン血症、結節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＮＭＺＬ）、脾臓辺縁帯リンパ腫（ＳＭＺＬ）、血管内大Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、ＡＩＤＳ関連リンパ腫が挙げられるが、Ｂ細胞由来のリンパ腫であれば特にこれらに限定されない。
免疫細胞（例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞）は、それを必要とする患者に治療有効量で投与することができる。例えば、免疫細胞（例えばＣＡＲ－Ｔ細胞）の治療有効量は、少なくとも約１０４細胞、少なくとも約１０５細胞、少なくとも約１０６細胞、少なくとも約１０７細胞、少なくとも約１０８細胞、少なくとも約１０９細胞、または少なくとも約１０１０細胞とすることができる。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞の治療有効量は、約１０４細胞、約１０５細胞、約１０６細胞、約１０７細胞、または約１０８細胞である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞の治療有効量は約０．４×１０８～約２×１０８Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞の治療有効量は、約０．４×１０８、約０．５×１０８、約０．６×１０８、約０．７×１０８、約０．８×１０８、約０．９×１０８、約１．０×１０８、約１．１×１０８、約１．２×１０８、約１．３×１０８、約１．４×１０８、約１．５×１０８、約１．６×１０８、約１．７×１０８、約１．８×１０８、約１．９×１０８、または約２．０×１０８Ｔ細胞である。
いくつかの実施形態において、ＣＡＲ Ｔ細胞の治療有効量は、約２×１０６細胞／ｋｇ、約３×１０６細胞／ｋｇ、約４×１０６細胞／ｋｇ、約５×１０６細胞／ｋｇ、約６×１０６細胞／ｋｇ、約７×１０６細胞／ｋｇ、約８×１０６細胞／ｋｇ、約９×１０６細胞／ｋｇ、約１×１０７細胞／ｋｇ、約２×１０７細胞／ｋｇ、約３×１０７細胞／ｋｇ、約４×１０７細胞／ｋｇ、約５×１０７細胞／ｋｇ、約６×１０７細胞／ｋｇ、約７×１０７細胞／ｋｇ、約８×１０７細胞／ｋｇ、または約９×１０７細胞／ｋｇである。いくつかの実施形態において、免疫細胞（例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞）の治療有効量は、体重１ｋｇ当たり約１×１０６～約２×１０６Ｔ細胞であり、最大用量は約１×１０８Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞の治療有効量は、体重１ｋｇ当たり約１×１０６または約２×１０６Ｔ細胞であり、最大用量は約１×１０８Ｔ細胞である。
細胞の数は、組成物が意図される最終的使用に依存し、また組成物に含まれる細胞のタイプにも依存する。例えば、いくつかの実施形態において、ＣＡＲを含むＴ細胞の集団は、１０％超、１５％超、２０％超、２５％超、３０％超、または３５％超のこのような細胞を含むことになる。いくつかの実施形態において、ＣＡＲを含むＴ細胞の集団は、１０％～５０％、１５％～４５％、２０％～４０％、２５％～３５％、または２０％～３０％のこのようなＴ細胞を含むことになる。いくつかの実施形態において、投与用のＴ細胞集団は１リットル以下の体積である。いくつかの実施形態において、投与用のＴ細胞は、５００ｍｌ未満、２５０ｍｌ未満、または１００ｍｌ未満の体積である。いくつかの実施形態において、所望のＴ細胞の密度は、典型的には１０６細胞／ｍｌ超、概して１０７細胞／ｍｌ超、概して１０８細胞／ｍｌ以上である。臨床的に適切な数の免疫細胞は、累積的に１０７細胞、１０８細胞、１０９細胞、１０１０細胞、１０１１細胞、または１０１２細胞に等しいまたはこれらを超える複数の点滴に配分することができる。
いくつかの実施形態において、組成物は患者に非経口投与することができる。いくつかの実施形態において、ＣＡＲを含むＴ細胞を含むまたは送達する組成物は、１回または複数回投与で患者に非経口投与することができる。いくつかの実施形態において、ＣＡＲを含むＴ細胞を含むまたは送達する組成物は、１日１回、２～７日に１回、１週間に１回、２週間に１回、１ヵ月に１回、３ヵ月に１回、または６ヵ月に１回、患者に非経口投与することができる。
いくつかの実施形態において、本開示は、それを必要とする対象におけるがんを治療する方法であって、ＣＡＲを含む操作された免疫細胞を対象に投与することを含み、当該ＣＡＲが、（ａ）抗原結合ドメインを含む細胞外ドメインと、（ｂ）膜貫通ドメインと、（ｃ）共刺激性エンドドメインを含む細胞内ドメインであって、共刺激性エンドドメインが、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７由来の細胞内シグナル伝達ドメイン、及び５つの追加アミノ酸を含む、細胞内ドメインとを含む、方法を提供する。
いくつかの実施形態において、対象は、１つ以上の追加の抗がん治療を以前に投与されたことがあり、抗がん治療が、電離放射線、化学療法剤、治療用抗体、及びチェックポイント阻害物質からなる群より選択される。いくつかの実施形態において、対象は、がんを有すると同定または診断されている。
医薬組成物
いくつかの実施形態において、本開示は、ＣＡＲを含むＴ細胞を含む医薬組成物であって、当該ＣＡＲが、（ａ）抗原結合ドメインを含む細胞外ドメインと、（ｂ）膜貫通ドメインと、（ｃ）共刺激性エンドドメインを含む細胞内ドメインであって、共刺激性エンドドメインが、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７由来の細胞内シグナル伝達ドメイン、及び５つの追加アミノ酸を含む、細胞内ドメインとを含む、医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態において、ＣＡＲを含むＴ細胞は自己由来Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、緩衝液、希釈剤、可溶化剤、乳化剤、保存剤、アジュバント、賦形剤、またはこれらの任意の組合せを含むことができる。いくつかの実施形態において、所望の場合、組成物は１つ以上の追加の治療活性物質も含むことができる。
いくつかの実施形態において、本開示のＴ細胞は、最初にその培養液から採取し、次に投与に適した培地及び容器システム（「医薬的に許容される」担体）で、治療有効量の細胞を洗浄及び濃縮することによって製剤化する。好適な注入媒体は、任意の等張媒体製剤、典型的には、生理食塩水、Ｎｏｒｍｏｓｏｌ Ｒ（Ａｂｂｏｔｔ）またはＰｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ（Ｂａｘｔｅｒ）とすることができるが、水中５％ブドウ糖または乳酸リンゲル液も利用することができる。注入媒体には、ヒト血清アルブミンを追加してもよい。
いくつかの実施形態において、組成物は非経口投与用に製剤化する。例えば、本明細書で提供する医薬組成物は、滅菌された注射用形態（例えば、皮下注射または静脈内注入に適した形態）で提供することができる。例えば、いくつかの実施形態において、医薬組成物は、注射に適した液体剤形で提供する。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、任意選択で真空下で、粉末（例えば、凍結乾燥及び／または滅菌された粉末）として提供され、これは、注射の前に水性希釈剤（例えば、水、緩衝剤、塩溶液など）で再構成することができる。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、水、塩化ナトリウム溶液、酢酸ナトリウム溶液、ベンジルアルコール溶液、リン酸緩衝生理食塩水などで希釈及び／または再構成される。いくつかの実施形態において、粉末を水性希釈剤と穏やかに混合する（例えば、振とうしない）ものとする。
いくつかの実施形態において、本開示のＣＡＲ及び／またはＣＡＲをコードする核酸を含むＴ細胞は、医薬的に許容される非経口用ビヒクルと共に製剤化する。このようなビヒクルの例としては、水、生理食塩水、リンゲル液、ブドウ糖液、１～１０％ヒト血清アルブミンがある。また、リポソーム及び非水性ビヒクル（例えば、不揮発性油）も使用することができる。ビヒクルまたは凍結乾燥粉末は、等張性を維持する添加物（例えば、塩化ナトリウム、マンニトール）及び化学的安定性を維持する添加物（例えば、緩衝液及び防腐剤）を維持する添加物を含むことができる。いくつかの実施形態において、製剤は、既知のまたは好適な技法によって滅菌する。医薬組成物は医薬的に許容される添加剤さらに含んでもよく、本明細書で使用される場合、このような添加剤には、特定の所望の剤形に適した任意及び全ての溶媒、分散媒体、希釈剤、もしくは他の液体ビヒクル、分散体もしくは懸濁助剤、界面活性剤、等張剤、増粘剤もしくは乳化剤、保存料、固体結合剤、滑沢剤などが含まれる。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ，２００６）は、医薬組成物の製剤化に使用される様々な添加剤及びその調製のための既知の技法を開示している。任意の従来的な添加媒体が、例えば任意の所望でない生物学的影響をもたらすか、または有害な様式で任意の他の医薬組成物の成分と相互作用することにより、物質またはその誘導体に不適合である場合を除き、その用途は本開示の範囲内であるように考慮されている。
いくつかの実施形態において、本開示のＣＡＲ及び／またはＣＡＲをコードする核酸を含むＴ細胞集団を含む組成物は、安定的に製剤化される。いくつかの実施形態において、本開示のＣＡＲ及び／またはＣＡＲをコードする核酸を含むＴ細胞集団の安定した製剤は、生理食塩水または選択された塩を含むリン酸緩衝液、ならびに保存液及び保存剤を含む製剤、ならびに医薬使用または獣医学的使用に適した多目的保存製剤を含むことができる。保存製剤は、少なくとも１つの既知の保存剤を含むか、または任意選択で、水性希釈液中の少なくとも１つのフェノール、ｍ－クレゾール、ｐ－クレゾール、ｏ－クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、硝酸フェニル水銀、フェノキシエタノール、ホルムアルデヒド、クロロブタノール、塩化マグネシウム（例えば、六水和物）、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチルなど）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、チメロサール、またはこれらの混合物から選択される。当技術分野で知られているように、任意の好適な濃度または混合物を使用することができ、例えば、０．００１～５％またはこの中の任意の範囲もしくは値、例えば、限定されるものではないが、０．００１、０．００３、０．００５、０．００９、０．０１、０．０２、０．０３、０．０５、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．３、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、またはこの中の任意の範囲もしくは値で使用することができる。非限定的な例としては、防腐剤なし、０．１～２％のｍ－クレゾール（例えば、０．２、０．３、０．４、０．５、０．９、１．０％）、０．１～３％のベンジルアルコール（例えば、０．５、０．９、１．１、１．５、１．９、２．０、２．５％）、０．００１～０．５％のチメロサール（例えば、０．００５、０．０１）、０．００１～２．０％のフェノール（例えば、０、０．０５、０．２５、０．２８、０．５、０．９、１．０％）、０．０００５～１．０％のアルキルパラベン（例えば、０．０００７５、０．０００９、０．００１、０．００２、０．００５、０．００７５、０．００９、０．０１、０．０２、０．０５、０．０７５、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．５、０．７５、０．９、１．０％）などが挙げられる。
いくつかの実施形態において、医薬組成物は、冷蔵及び／または冷凍することができる形態で提供される。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、冷蔵及び／または冷凍することができない形態で提供される。いくつかの実施形態において、再構成された溶液及び／または液体剤形は、再構成後にある特定の期間（例えば、２時間、１２時間、２４時間、２日、５日、７日、１０日、２週間、１ヵ月、２ヵ月、またはそれ以上）保存することができる。いくつかの実施形態において、抗体薬剤を含む組成物を指定された時間よりも長く保存すると、抗体薬剤の劣化が生じる。液体剤形及び／または再構成された溶液は、投与前に粒子状物質及び／または変色を含み得る。いくつかの実施形態において、変色もしくは曇りがある場合、及び／または濾過後に粒子状物質が残存する場合は、溶液を使用してはならない。医薬薬剤の製剤化及び／または製造に関する一般的検討事項は、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ２１ｓｔ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００５に見出すことができる。
いくつかの実施形態において、本開示のＣＡＲ及び／またはＣＡＲをコードする核酸を含むＴ細胞を含む医薬組成物は、保存または投与用の容器、例えば、バイアル、シリンジ（例えば、ＩＶシリンジ）、またはバッグ（例えば、ＩＶバッグ）の中に含まれ得る。本開示に従う医薬組成物は、単回単位用量として、及び／または複数の単回単位用量として、大量に調製し、パッケージングし、かつ／または販売することができる。本明細書で使用する場合、「単位用量」は、所定量の活性成分を含む医薬組成物の個別的な量である。活性成分の量は、対象に投与されると考えられる活性成分の投薬量及び／またはこのような投薬量の好都合な画分（例えば、このような投薬量の半分または１／３）に概ね等しい。
キット
本開示はさらに、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＡＲ及び／またはＣＡＲをコードする核酸が充填された１つ以上の容器を含むキットを提供する。キットは、治療法、診断法、細胞増殖及び／または分離法などを含めた任意の適用可能な方法で使用することができる。任意選択で、このような容器には、医薬品または生物学的製剤の製造、使用、販売を規制する政府機関が定めた形式の通知を伴い得る。この通知には、（ａ）ヒトへの投与を目的とした製造、使用、販売に対する政府機関の承認、（ｂ）使用の指示、またはこの両方が反映されている。
いくつかの実施形態において、キットは、検出（例えば、ＣＡＲ及び／またはＣＡＲをコードする核酸の検出）のための１つ以上の試薬を含むことができる。いくつかの実施形態において、キットは、検出可能な形態の（例えば、検出可能な部分または実体と共有結合した）ＣＡＲ及び／またはＣＡＲをコードする核酸を含むことができる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する１つ以上のＣＡＲ及び／またはＣＡＲをコードする核酸は、対象の治療に使用するキットに含むことができる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供するＣＡＲ及び／またはＣＡＲをコードする核酸は、ＣＡＲを発現する自己由来Ｔ細胞の調製に使用するキットに含むことができる。
いくつかの実施形態において、キットは、各々がＣＡＲコンストラクトにクローニングするのに適している１つ、２つ、３つ、４つまたはそれ以上の抗原特異的な抗体薬剤を提供することができる。いくつかの実施形態において、キットは、抗体薬剤及び／またはＣＡＲ及び／またはＣＡＲ Ｔ細胞と、対象から同定または単離されたＴ細胞との結合親和性を測定するための他の試薬を提供することができる。いくつかの実施形態において、キットは、抗体薬剤及び／またはＣＡＲ及び／またはＣＡＲ Ｔ細胞の、対象のＴ細胞に対する機能的アビディティーをアッセイするための他の試薬を提供することができる。
以下の実施例で本開示についてさらに説明するが、この実施例は、特許請求の範囲に記載される本開示の範囲を限定するものではない。
実施例１：ＧＰＣ３レンチウイルス移入プラスミド
当技術分野で知られている標準的なＤＮＡクローニング技術を用いて、ＶＨ領域及びＶＬ領域を接続することにより、ヒト化抗ＧＣ３３抗体薬剤の一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）形態（図２）をコードするＤＮＡコンストラクトを生成した。本明細書で使用したレンチウイルス移入プラスミドを表１に示す。
Figure 2022538425000023
ｈｕＧＣ３３ ＶＨ－ＶＬ－ｓｃＦｖをレンチウイルスベクターｐＥＬＰＳ４－ＭＶＲＬ２Ｈ２－ｅｕＢＢｚにクローニングした。ｐＥＬＰＳ４－ＭＶＲＬ２Ｈ２－ｅｕＢＢｚは、共刺激性ドメイン４－１ＢＢを５つの追加アミノ酸と共に含むレンチウイルスベクターである。レンチウイルスベクターコンストラクトｐＥＬＰＳ４－ｈｕＧＣ３３ ＶＨ－ＶＬを制限酵素で消化した。制限酵素消化の結果を図３に示す。
４－１ＢＢ共刺激性ドメインに５つの追加アミノ酸が含まれないＣＡＲコンストラクトを作出するため、ｈｕＧＣ３３ ＶＨ－ＶＬ－ｓｃＦｖをレンチウイルスベクターｐＥＬＰＳ２－ＣＤ１９－ＢＢｚにクローニングした。ｐＥＬＰＳ２－ＣＤ１９－ＢＢｚは、共刺激性ドメイン４－１ＢＢを５つの追加アミノ酸なしで含むレンチウイルスベクターである。レンチウイルスベクターコンストラクトｈｕＧＣ３３（ＶＨ－ＶＬ）－ＢＢｚを制限酵素で消化した。制限酵素消化の結果を図４に示す。
実施例２：ＧＰＣ３ ＣＡＲ－Ｔ細胞の医薬組成物
ＰＢＭＣクライオバイアル（５×１０７細胞／１ｍＬ／バイアル）を水浴中に２～３分間置くことによってＰＢＭＣを融解し活性化した。１０ｍＬのＣＡＲ－Ｔ細胞培養基及び１ｍＬのＰＢＭＣを５０ｍＬのコニカルチューブに入れ、１５００ｒｐｍで５分間遠心分離した。上清を除去し、５ｍＬの新鮮な培地にＣＡＲ－Ｔ細胞を再懸濁してから細胞をカウントした。新鮮な細胞培地を加えて細胞密度が１×１０６細胞／ｍＬになるように調整した。Ｔ細胞活性化ビーズを１×１０６細胞ごとに１０μＬ加え、培地にＩＬ－２を補充した。細胞培養基をＴ７５フラスコに入れ、インキュベーター内でＣＯ２ ５％、３７℃で培養した。
次に、ＣＡＲをコードするレンチウイルスで活性化Ｔ細胞のスピノキュレーションを行うことにより、ＣＡＲ－Ｔ細胞を生成した。細胞培養物から活性化ＰＢＭＣをカウントし、レンチウイルスを含む５００μＬの細胞培地の存在下で２４ウェルプレートに細胞を播種した。スピノキュレーション形質導入後、ＩＬ－２を補充した細胞培養液で１ウェルからの形質導入細胞を培養した。
培養したＣＡＲ－Ｔ細胞を２～３日ごとにカウントし、各カウント後に新鮮な培養液及びＩＬ－２を加えた（図５）。１２日目に、培養したＣＡＲ－Ｔ細胞を採取し、凍結容器に入れて－８０℃で保存した。
培養１２日目にＣＡＲ発現を解析した結果、対照群では発現が示されなかったのに対し、ＣＡＲ－Ｔ細胞群では５４～６６％のＣＡＲ発現が示された（図６）。
標的細胞（ＧＰＣ３陽性細胞株）を採取し、９６ウェルのＵ底プレートに播種した。次に、エフェクター細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）を、エフェクター細胞：標的細胞の比率が１０：１、３：１、１：１、０．３：１になるようにウェルに加え、３７℃で２４時間培養した。インキュベート後、各ウェルにＣｙｔｏＴｏｘ９６試薬を加え、４９０ｎｍにおける吸光度を測定することによって細胞毒性を定量化した（図７）。
実施例３：インビボでのｈｕＧＣ３３（ＶＨ－ＶＬ）－ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びｈｕＧＣ３３（ＶＨ－ＶＬ）－ｅｕＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ細胞
ｈｕＧＣ３３（ＶＨ－ＶＬ）－ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びｈｕＧＣ３３（ＶＨ－ＶＬ）－ｅｕＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ細胞の有効性を検証及び比較するため、ＮＳＧマウス（６～８週齢、雄）にＨｕｈ－７＿Ｌｕｆ－ＧＦＰ細胞（２×１０６細胞／２００μＬ／頭）を注入し、注入から３５日後、腫瘍サイズが約２００ｍｍ３になったマウスを４頭ずつ５群に分けた。対照群には５％のＨＳＡを注射し、他の群にはＣＡＲ－Ｔ細胞を注射した。週に２回、ＴＭ９００を用いて腫瘍の大きさを測定することにより、腫瘍の成長を観察した（図８）。
ＣＡＲ－Ｔ細胞投与後、週に１回マウスから眼窩採血を実施し、１００μＬの各血液試料を１２，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離して、ＣＡＲ－Ｔ細胞の割合及び細胞数を確認した。１００μＬの血液をＦＡＣＳチューブに入れ、Ｚｏｍｂｉｅ ＮＩＲ（商標）Ｆｉｘａｂｌｅ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｋｉｔを用いて生細胞／死細胞染色を実施した。０．１μＬ／１００μ ＤＰＢＳ／チューブの濃度に達した後、室温で１０分間染色を実施した。カウントビーズ２５μＬ、ＣＤ４５ ０．５μＬ、ＣＤ８ ０．５μＬ、ＣＤ４５ＲＯ １．０μＬ、ＣＤ６２Ｌ １．０μＬ、ＰＤ－１ １．０μＬ、Ｔｉｍ－３ １．０μＬ、ＣＤ４ ０．５μＬ、ＣＤ６９ ０．５μＬ、Ｆｌａｇ ０．０１２５μＬをＦＡＣＳ緩衝液１００μＬに加え、室温で３０分間染色した。３０分後、１Ｘ ＲＢＣ溶解緩衝液を加え、室温で５分間反応させた。２，０００ｒｐｍで４分間遠心分離した後、全ての上清を廃棄した。チューブに２ｍＬのＦＡＣＳ緩衝液を加え、遠心分離を２，０００ｒｐｍで４分間実施し、ＦＡＣＳＣｅｌｅｓｔａを用いて解析を実施した（図９）。
ＣＡＲ－Ｔ注射から６週間後、マウスの脾臓、肝臓、及び骨髄を採取して、ｈｕＧＣ３３（ＶＨ－ＶＬ）－ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びｈｕＧＣ３３（ＶＨ－ＶＬ）－ｅｕＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ細胞の比率を評価した。組織試料を処理し、４０ｐｍのセルストレーナーで濾過し、次に２，０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、全ての上清を廃棄した。５μＬの１Ｘ ＡＣＫ緩衝液を加え、１０分間反応させた。次に、１０ｍＬのＤＰＢＳを加え、２，０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。ＦＡＣＳ染色を上記のように実施した（図１０）。
実施例４：ＣＤ１９－ｅｕＢＢｚ ＣＡＲの構築
細胞質シグナルドメイン４－１ＢＢの免疫学的有効性を高めるため、ＣＡＲ－Ｔで使用する４－１ＢＢ細胞質シグナルドメインに５つのアミノ酸を共刺激性シグナル因子として付加して、新たにＣＡＲ発現ベクター（ＣＤ１９－ｅｕＢＢｚ ＣＡＲ）を構築した。完成したコンストラクトは、ＥＦ１アルファプロモーターを含むｓｃＦｖである抗ＣＤ１９と、ヒトＣＤ８のヒンジ領域及び膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインとを含む。詳細には、細胞内シグナル伝達ドメインは、刺激性ドメイン及び共刺激性シグナル伝達ドメインからなる。細胞内シグナル伝達ドメインは、５つの連続したアミノ酸が付加され、ＣＤ３ゼータが結合している共刺激性シグナルドメイン４－１ＢＢである。最終的に産生したＣＡＲ遺伝子フラグメントを、ＢａｍＨ Ｉ及びＳａｌ Ｉで切断したＥＬＰＳレンチウイルス発現ベクターと結合した。加えて、ＢａｒｎＨ Ｉ／Ｎｈｅ Ｉ制限酵素を用いてｓｃＦｖ部分のみを置換し、クローニングを実施した。
実施例５：ＣＤ１９－ｅｕＢＢｚ及びＣＤ１９－ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ細胞
組換えレンチウイルスの産生に使用した２９３Ｔ細胞培養物は、高グルコースＤＭＥＭ（Ｗｅｌｇｅｎｅ、ＬＭ００１－０５）中に１０％のＦＢＳ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ＴＭＳ－０１３－ＢＫＲ）及び１×Ｐ／Ｓ（Ｇｉｂｃｏ、１５１４０－１２２）を含む培地を含む。２９３Ｔ細胞を、１０％のＦＢＳを含むＤＭＥＭ培地中で２４時間インキュベートした後、３７℃ ５％ ＣＯ２インキュベーター内で形質導入した。翌日、形質移入については、形質移入試薬及びレンチウイルスプラスミドを適切な割合で混合し、４８時間インキュベートした。次にレンチウイルスを含む上清を収集し、４００ｘｇで１０分間遠心分離した。加えて、５０ｍＬのシリンジを用いて０．４５μｍシリンジフィルターで上清を濾過した。得られた上清をレンチウイルス濃縮キット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、６３１２３１）を用いて３：１で混合し、４℃で２４～４８時間反応させた。この後に４℃及び４，０００ｒｐｍで２時間遠心分離してウイルスを得、ＦＢＳを含まない０．５ｍＬのＲＰＭＩ（Ｗｅｌｇｅｎｅ、ＬＭ００１－０１）にウイルスを再懸濁してレンチウイルスを産生した。
哺乳類細胞の形質導入効率を判定するため、Ｊｕｒｋａｔ細胞を用いて実際に形質導入可能なレンチウイルスの粒子数を解析することによって形質転換単位（ＴＵ／ｍＬ）を測定した。ＣＡＲ発現は、ＦＡＣＳによってアッセイすることができる。１日目に、Ｊｕｒｋａｔ細胞をウェル当たり１×１０５細胞／１００μＬで９６ウェルプレートに播種した。２日目に、９６ウェルプレートにおいてレンチウイルスを１／３に段階希釈し、既に播種したＪｕｒｋａｔ細胞にレンチウイルス形質導入を実施した。このとき、ＲＰＭＩ培地（１０％のＦＢＳ及び１×Ｐ／Ｓ）にポリブレン（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を導入することにより、レンチウイルスの形質導入をさらに増加させた。１２００ｘｇ、３２℃で２時間遠心分離した後、３７℃ ５％ ＣＯ２インキュベーターで３時間インキュベートし、ウェル当たり１００μＬのＲＰＭＩのみを加えた。５日目に、細胞に感染させたレンチウイルスのｆｌａｇを抗Ｆｌａｇ－ＤＹＫＤＤＤＤＫ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号６３７３１０）で染色して、フローサイトメーターで形質導入細胞のパーセンテージを解析した。これを用いて、Ｆｏｌｌｅｎｚｉ ａｎｄ Ｎａｌｄｉｎｉ，２００２（Ｆｏｌｌｅｎｚｉ ａｎｄ Ｎａｌｄｉｎｉ，２００２）に記載のようにして力価を計算した。
ＦＡＣＳ染色を実施して、１４日間インキュベートした後における２つの種のＣＡＲ－Ｔ細胞の産生割合を確認した。各ＣＡＲ－Ｔ細胞タイプごとに２×１０５細胞をＦＡＣＳチューブ（ＦＡＬＣＯＮ、カタログ番号３５２０５２）に収集し、次に２ｍＬのＦＡＣＳ緩衝液を加え、遠心分離機（Ｔｈｅｒｍｏ、ＳＴ１６）を用いて２，０００ｒｐｍで５分間遠心分離を実施した。上清を廃棄した後、０．５μＬ／チューブの抗ＣＤ８ ＡＰＣ（ＳＫＩ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３４４７２２））、０．５μＬ／チューブの抗ＣＤ４ ＢＶ６５０（ＲＰＡ－Ｔ４（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３００５３６））、及び０．１２５μＬ／チューブの抗ｆｌａｇ ＰＥ（Ｌ５（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号６３７３１０））を加え、室温で３０分間染色を実施した。２ｍＬのＦＡＣＳ緩衝液を加え、２，０００ｒｐｍで５分間遠心分離した後、このプロセスをもう１回繰り返した。生存細胞／死細胞の染色については、１μＬ／チューブの７－ＡＡＤ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号４２０４０４）を加え室温で５分間放置し、次にＦＡＣＳ（ＢＤ、ＦＡＣＳＣｅｌｅｓｔａ）を用いて解析した。
ＦＡＣＳ染色を用いて産生したＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞の割合を確認したところ、改良版コンストラクトＣＤ１９－ｅｕＢＢＺ ＣＡＲ－Ｔ細胞の場合はＣＤ４＋／ＣＡＲ＋が２９．４％、ＣＤ８＋／ＣＡＲ＋が５０．８％、総ＣＡＲ－Ｔが８０．２％であった。非改良型コンストラクトＣＤ１９－ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ細胞の場合、細胞比率は、ＣＤ４＋／ＣＡＲ＋が４２．７％、ＣＤ８＋／ＣＡＲ＋が２９．３％、総ＣＡＲ－Ｔが７２．０％であることが確認された。したがって、ＣＤ１９－ｅｕＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＣＤ１９－ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ細胞に比べてＣＡＲの発現が８．２％高く、ＣＤ８＋／ＣＡＲ＋細胞は２１．５％と約２倍であることが確認された（図１１Ａ）。
実施例６：産生したＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞の細胞毒性の確認
１４日間培養した２つのＣＡＲ－Ｔ細胞の細胞毒性を判定するため、ＣＡＲ－Ｔ（Ｅ）：ＬＣＬ（Ｔ）の比率を３０：１、１０：１、３：１、１：１とし、９６ウェル白プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、カタログ番号３９１７）に入れた。最初に、ＣＡＲ－Ｔ細胞をそれぞれ６×１０５細胞／５０μＬ、２×１０５細胞／５０μＬ、９×１０４細胞／５０μＬ、及び２×１０４細胞／５０μＬでウェルに入れた。次に、標的細胞株、すなわちＣＢＫ ＬＣＬ－Ｌｕｃ細胞株を３７℃ ＣＯ２インキュベーター（Ｍａｍｍｅｒｔ、ＩＮＣ０１５３ｍｅｄ）内で２×１０４細胞／５０μＬとなるように加え、４時間反応させた。４時間後、各ウェルに１００μＬのＢｒｉｇｈｔ－Ｇｌｏ（商標）（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｅ２６２０）を加え、５分後にＬｕｍｉｎｏｍｅｔｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ、Ｆｌｕｏｒｏｓｋａｎ ＦＬ）を用いて相対光単位（ＲＬＵ）値を測定した。
従来の４－１ＢＢを導入したＣＡＲ－Ｔ細胞と、４－１ＢＢドメインに５つのアミノ酸を付加したｅｕＢＢｚを導入したＣＡＲ－Ｔ細胞との間では、細胞毒性に相違がないことが分かった。
結果からは、２つのＣＡＲ－Ｔ細胞及びＣＢＫ ＬＣＬ－Ｌｕｃ細胞株を３０：１の割合で共にインキュベートした場合の４時間後の細胞毒性は約８０％、１０：１の割合でインキュベートした場合の細胞毒性は約５０％であることが示された。がん細胞と共にインキュベートしたＣＡＲ－Ｔ細胞のそれぞれの数が３分の１に減少すると、細胞毒性も約３分の１に減少した。さらに、インビトロで４－１ＢＢドメインに５つのアミノ酸を付加した場合、これはインビトロの細胞毒性に影響を及ぼさないことが確認された（図１１Ｂ）。
実施例７：自動ノギス及びＩＶＩＳイメージングによる皮下投与動物モデルの誘導及びＣＡＲ－Ｔの検証
実験動物についてはＮＳＧ（ＮＯＤ－ｓｃｉｄ ＩＬ２ｒγμＬ１）マウス（Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）を使用し、動物飼育場で一定条件下で管理した。温度は２３±２℃、そして１２時間の明暗周期、湿度５０±１０％とし、飼料及び飲料は自由に与えた。４－１ＢＢドメインに５つのアミノ酸を付加したＣＤ１９－ｅｕＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔを用いた有効性実験では、ＣＢＫ ＬＣＬ－Ｌｕｃ細胞株を２×１０６細胞／１００μＬ ＤＰＢＳ／頭に調製し、６週齢の雌マウスに皮下注射して皮下投与動物モデルを誘導した。自動ノギス（Ｙｏｕｎｇｂｉｏ、ＴＭ９００）を用いて測定したがんのサイズが５０～１００ｍｍ３に達したら、ＣＤ１９－ｅｕＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びＣＤ１９－ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ細胞を２×１０６細胞／１００μＬ ＤＰＢＳ／頭（用量１）及び６×１０６細胞／１００μＬ ＤＰＢＳ／頭（用量２）を尾静脈から１回投与して有効性を確認した。全ての動物実験において、がんのサイズ及び生存率を定期的に確認した。
より具体的には、ＣＡＲ－Ｔ投与後３日及び４日の間隔で、自動ノギス及びＩＶＩＳイメージング装置（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｌｕｎａ ＩＩＩ）を用いてがんのサイズ及びフォトン値を測定した（図１２、１３）。ＴＭ９００を使用する場合は、がんの部位に機器を置いてからがんのサイズを決定した。ＩＶＩＳイメージングデバイスを用いてイメージング及びフォトン値を確認する際は、最初に１５０ｍｇ／ｋｇのＸｅｎｏＬｉｇｈｔ（商標）Ｄ－ルシフェリン（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、カタログ番号１２２７９９）をマウスに腹腔内投与した。１５分後、イソフルランを用いて吸入麻酔を誘導し、５分後にＩＶＩＳを使用してがん細胞の存在をイメージングした。イメージング後、正規化を実施し、次にルシフェラーゼ値（フォトン値）を確認し、グラフ化した。ＣＢＫ ＬＣＬ－Ｌｕｃ細胞株を用いて皮下投与動物モデルを構築した後、ＣＤ１９－ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びＣＤ１９－ｅｕＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ細胞の効果をＩＶＩＳイメージングを用いて比較した。図１２に示すように、２つの種のＣＡＲ－Ｔ細胞を投与してから１週間以内に効果を確認することができた。
ＣＤ１９－ｅｕＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ細胞を２×１０６細胞／１００μＬ ＤＰＢＳ／頭及び６×１０６細胞／１００μＬ ＤＰＢＳ／頭で投与した実験群の場合、投与から１週間後にＩＶＩＳイメージングでがん細胞が観察された。加えて、ＣＤ１９－ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔで処置した群の場合、６×１０６細胞／１００μＬ ＤＰＢＳ／頭を投与したところ、投与から１週間以内はイメージングではがん細胞がほとんど観察されなかった。ただし、１週間後にはＣＤ１９－ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔを投与した実験群でがん細胞が同定された。
ＣＡＲ－Ｔ投与から１週間後、イメージングで示すように、各対象でイメージングしたルシフェラーゼ値を測定したところ、ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔを２×１０６細胞／１００μＬ ＤＰＢＳ／頭で投与した群でのみルシフェラーゼ値が確認された。その後３週間以上観察したところ、ＣＡＲ－Ｔ細胞を投与していないマウスでは腫瘍が継続的に成長し、最初にがん細胞が消失した３つの実験群ではがん細胞が同定されなかった。しかし、１０日後、ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔを２×１０６細胞／１００μＬ ＤＰＢＳ／頭投与した群ではルシフェラーゼレベルは低下したものの、３週間後、がん細胞は完全には消失しなかった。ＣＤ１９－ｅｕＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔを２×１０６細胞／１００μＬ ＤＰＢＳ／頭投与した場合の有効性は、ＣＤ１９－ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔを６×１０６細胞／１００μＬ ＤＰＢＳ／頭で処置した群と同様であることが、がん細胞の実験的イメージングによって分かった。結果からは、インビトロではＣＤ１９－ｅｕＢＢｚ ＣＡＲ－ＴとＣＤ１９－ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔの細胞毒性に差は認められなかったものの、動物モデルではＣＤ１９－ｅｕＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔの方が有効性が５倍高いことが確認された。（図１２）
実施例８：インビボ動物モデルにおけるＣＤ１９－ｅｕＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔの割合の確認
皮下投与動物モデルにおいてＣＡＲ－Ｔ細胞を投与して改良型コンストラクトＣＡＲ－Ｔ細胞の効力を検証した後、マウスの血液からＣＡＲ－Ｔの存在を確認した。より具体的には、ＣＡＲ－Ｔ投与後３日及び４日の間隔で、マウスから眼窩採血を実施した。各採血時に７０μＬの血液を収集し、血液の６０μＬをＣＡＲ－Ｔ細胞の割合及び細胞数の確認に使用した。６０μＬの血液を５ｍＬのＦＡＣＳチューブに入れ、Ｚｏｍｂｉｅ Ａｑｕａ ＢＶ５１０（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号４２３１０１）を用いて生細胞／死細胞染色を実施した。０．１μＬ／１００μＬ ＤＰＢＳ／チューブの濃度に達した後、室温で１０分間染色を実施した。カウンティングビーズ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｐｒｏｂｅｓ、カタログ番号Ｃ３６９５０）、抗ＣＤ４５ ＦＩＴＣ（ＨＩ３０（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３０４００６））、抗ＣＤ８ ＢＶ７８６（ＳＫ－１（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３４４７４０））、抗ＣＤ４ ＢＶ６５０、及び抗ｆｌａｇ ＰＥを加え、室温で３０分間染色した。各抗体を０．５μＬ／１００μＬのＦＡＣＳ緩衝液／チューブ中で混合し、これに２５μＬのカウンティングビーズを加えた。３０分後、２ｍＬの１×ＲＢＣ溶解緩衝液（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号４２２４０１）を加え、室温で５分間反応させた。遠心分離機を用いて２，０００ｒｐｍで５分間遠心分離した後、全ての上清を廃棄した。このチューブに２ｍＬのＦＡＣＳ洗浄緩衝液を加え、遠心分離を２，０００ｒｐｍで５分間実施した。このプロセスをもう１回繰り返した後、５０μＬのＦＡＣＳ緩衝液を加え、ＦＡＣＳを用いて解析した。
ＣＡＲ－Ｔ細胞投与から１週間後、ＣＤ１９－ｅｕＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ投与群では、２×１０６細胞／１００μＬ ＤＰＢＳ／頭群及び６×１０６細胞／１００μＬ ＤＰＢＳ／頭群の両群で血中におよそ２０％のＣＤ１９－ｅｕＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ細胞が確認されたが、ＣＤ１９－ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ投与群では、６×１０６細胞／１００μＬ ＤＰＢＳ／頭を投与した場合、わずか５％のＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔが確認されるにとどまった。３日後、マウス体内のＣＡＲ－Ｔ細胞の数及び割合は最大値に達し、そして減少した。１週間以内に、ＣＡＲ－Ｔ細胞が確認された３つの実験群（ＣＤ１９－ｅｕＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ；２×１０６細胞／１００μＬ ＤＰＢＳ／頭及び６×１０６細胞／１００μＬ ＤＰＢＳ／頭、ＣＤ１９－ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔ；６×１０６細胞／１００μＬ ＤＰＢＳ／頭）では、がん細胞がマウス体内で増殖する前に比較的多くのＣＡＲ－Ｔ細胞に接触することができたため、がん細胞は迅速に死滅した。しかし、ＣＤ１９－ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔを２×１０６細胞／１００μＬ ＤＰＢＳ／頭で投与した実験群では、ＣＡＲ－Ｔ細胞の割合及び数が２週間後に最大値に達し、ＣＡＲ－Ｔの割合は約２５％であり、がん細胞が比較的十分に増殖した。ＣＤ１９－ｅｕＢＢｚ ＣＡＲ－ＴはＣＤ１９－ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔよりも量的に安定しており、ＣＡＲ－Ｔの割合は最初に増加し、その後減少した。しかし、ＣＤ１９－ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔの場合は、ＣＡＲ－Ｔ細胞の割合がより遅いタイミングで増加及び減少し、結果的にはマウス体内で腫瘍が消失するのにより長く時間がかかった。結果として、この実験結果と同様に、ＣＤ１９－ｅｕＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔを２×１０６細胞／１００μＬ ＤＰＢＳ／頭で投与した群は、ＣＤ１９－ＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔを６×１０６細胞／１００μＬ ＤＰＢＳ／頭で投与した群と同様のＣＡＲ－Ｔレベル及び効果をマウスにおいて示し、ＣＤ１９－ｅｕＢＢｚ ＣＡＲ－Ｔが優れた効果を有することが示された（図１４）。

Claims (61)

  1. キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む免疫細胞であって、前記ＣＡＲが、
    （ａ）抗原結合ドメインを含む細胞外ドメインと、
    （ｂ）膜貫通ドメインと、
    （ｃ）共刺激性エンドドメインを含む細胞内ドメインであって、前記共刺激性エンドドメインが、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７由来の細胞内シグナル伝達ドメイン、及び５つの追加アミノ酸を含む、前記細胞内ドメインと
    を含む、前記免疫細胞。
  2. 前記キメラ抗原受容体が単一のポリペプチドである、請求項１に記載の免疫細胞。
  3. 前記キメラ抗原受容体が２つのポリペプチドから構成される、請求項１に記載の免疫細胞。
  4. 前記共刺激性エンドドメインが、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７由来の細胞内シグナル伝達ドメイン、及び５つの追加アミノ酸を含み、ここで、前記５つの追加アミノ酸が配列番号１によってコードされる、請求項１～３のいずれか１項に記載の免疫細胞。
  5. 前記共刺激性エンドドメインが配列番号２を含む、請求項４に記載の免疫細胞。
  6. 前記抗原結合ドメインがヒト化型である、請求項１～５のいずれか１項に記載の免疫細胞。
  7. 前記抗原結合ドメインがヒト型である、請求項１～６のいずれか１項に記載の免疫細胞。
  8. 前記抗原結合ドメインがｓｃＦｖである、請求項１～７のいずれか１項に記載の免疫細胞。
  9. 前記抗原結合ドメインが、疾患に関連する抗原に特異的に結合する、請求項１～８のいずれか１項に記載の免疫細胞。
  10. 前記抗原結合ドメインが腫瘍抗原に特異的に結合する、請求項１～９のいずれか１項に記載の免疫細胞。
  11. 前記抗原結合ドメインが、グリピカン３（ＧＰＣ３）、悪性腫瘍バリアント受容体（ＭＶＲ）、及びＣＤ１９からなる群より選択される抗原に特異的に結合する、請求項１～１０のいずれか１項に記載の免疫細胞。
  12. 前記膜貫通ドメインが、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、活性化ＮＫ細胞受容体、免疫グロブリンタンパク質、Ｂ７－Ｈ３、ＢＡＦＦＲ、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＢＴＬＡ、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ１９ａ、ＣＤ２、ＣＤ２４７、ＣＤ２７、ＣＤ２７６（Ｂ７－Ｈ３）、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ３０、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ６９、ＣＤ７、ＣＤ８４、ＣＤ８、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ ＡＭ、サイトカイン受容体、ＤＡＰ－１０、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、Ｆｃガンマ受容体、ＧＡＤＳ、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＩＡ４、ＩＣＡＭ－１、Ｉｇアルファ（ＣＤ７９ａ）、ＩＬ－２Ｒベータ、ＩＬ－２Ｒガンマ、ＩＬ－７Ｒアルファ、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）、インテグリン、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＩＴＧＢ１、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＴ、ＬＦＡ－１、ＣＤ８３に特異的に結合するリガンド、ＬＩＧＨＴ、ＬＴＢＲ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＭＨＣクラス１分子、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＯＸ－４０、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、プログラム死－１（ＰＤ－１）、ＰＳＧＬ１、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ）、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ－７６、ＴＮＦ受容体タンパク質、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦＳＦ１４、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＶＬＡ１、及びＶＬＡ－６からなる群より選択されるタンパク質から選択される膜貫通ドメインである、請求項１～１１のいずれか１項に記載の免疫細胞。
  13. 前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８α由来の膜貫通ドメインである、請求項１～１２のいずれか１項に記載の免疫細胞。
  14. 前記細胞内ドメインが、ＣＤ３ζ由来の細胞内ドメインをさらに含む、請求項１～１３のいずれか１項に記載の免疫細胞。
  15. 前記キメラ抗原受容体がシグナルペプチドまたはリーダー配列をさらに含む、請求項１～１４のいずれか１項に記載の免疫細胞。
  16. 前記キメラ抗原受容体がヒンジ領域をさらに含む、請求項１～１５のいずれか１項に記載の免疫細胞。
  17. 前記ヒンジ領域がＣＤ８αヒンジである、請求項１６に記載の免疫細胞。
  18. 前記キメラ抗原受容体が追加の抗原結合ドメインをさらに含む、請求項１～１７のいずれか１項に記載の免疫細胞。
  19. 前記追加の抗原結合ドメインがｓｃＦｖである、請求項１８に記載の免疫細胞。
  20. 前記免疫細胞がヒト免疫細胞である、請求項１～１９のいずれか１項に記載の免疫細胞。
  21. 前記ヒト免疫細胞が自己由来ヒト免疫細胞である、請求項２０に記載の免疫細胞。
  22. 前記ヒト免疫細胞が同種異系ヒト免疫細胞である、請求項２０に記載の免疫細胞。
  23. 前記免疫細胞がＴ細胞である、請求項１～２２のいずれか１項に記載の免疫細胞。
  24. 前記免疫細胞がＮＫ細胞である、請求項１～２３のいずれか１項に記載の免疫細胞。
  25. キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸であって、前記キメラ抗原受容体が、
    （ａ）抗原結合ドメインを含む細胞外ドメインと、
    （ｂ）膜貫通ドメインと、
    （ｃ）共刺激性エンドドメインを含む細胞内ドメインであって、前記共刺激性エンドドメインが、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７由来の細胞内シグナル伝達ドメイン、及び５つの追加アミノ酸を含む、前記細胞内ドメインと
    を含む、前記核酸。
  26. 前記キメラ抗原受容体が単一のポリペプチドである、請求項２５に記載の核酸。
  27. 前記キメラ抗原受容体が２つのポリペプチドから構成される、請求項２５に記載の核酸。
  28. 前記共刺激性エンドドメインが、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７由来の細胞内シグナル伝達ドメイン、及び５つの追加アミノ酸を含み、ここで、前記５つの追加アミノ酸が配列番号１のヌクレオチド配列によってコードされる、請求項２５～２７のいずれか１項に記載の核酸。
  29. 前記共刺激性エンドドメインが配列番号２を含む、請求項２８に記載の核酸。
  30. 前記抗原結合ドメインがヒト化型である、請求項２５～２９のいずれか１項に記載の核酸。
  31. 前記抗原結合ドメインがヒト型である、請求項２５～３０のいずれか１項に記載の核酸。
  32. 前記抗原結合ドメインがｓｃＦｖである、請求項２５～３１のいずれか１項に記載の核酸。
  33. 前記抗原結合ドメインが、疾患に関連する抗原に特異的に結合する、請求項２５～３２のいずれか１項に記載の核酸。
  34. 前記抗原結合ドメインが腫瘍抗原に特異的に結合する、請求項２５～３３のいずれか１項に記載の核酸。
  35. 前記抗原結合ドメインが、グリカン３（ＧＰＣ３）、悪性腫瘍バリアント受容体（ＭＶＲ）、及びＣＤ１９からなる群より選択される抗原に特異的に結合する、請求項２５～３４のいずれか１項に記載の核酸。
  36. 前記膜貫通ドメインが、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、活性化ＮＫ細胞受容体、免疫グロブリンタンパク質、Ｂ７－Ｈ３、ＢＡＦＦＲ、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＢＴＬＡ、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ１９ａ、ＣＤ２、ＣＤ２４７、ＣＤ２７、ＣＤ２７６（Ｂ７－Ｈ３）、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ３０、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ６９、ＣＤ７、ＣＤ８４、ＣＤ８、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ ＡＭ、サイトカイン受容体、ＤＡＰ－１０、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、Ｆｃガンマ受容体、ＧＡＤＳ、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＩＡ４、ＩＣＡＭ－１、Ｉｇアルファ（ＣＤ７９ａ）、ＩＬ－２Ｒベータ、ＩＬ－２Ｒガンマ、ＩＬ－７Ｒアルファ、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）、インテグリン、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＩＴＧＢ１、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＴ、ＬＦＡ－１、ＣＤ８３に特異的に結合するリガンド、ＬＩＧＨＴ、ＬＴＢＲ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＭＨＣクラス１分子、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＯＸ－４０、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、プログラム死－１（ＰＤ－１）、ＰＳＧＬ１、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ）、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ－７６、ＴＮＦ受容体タンパク質、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦＳＦ１４、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＶＬＡ１、及びＶＬＡ－６からなる群より選択されるタンパク質から選択される膜貫通ドメインである、請求項２５～３５のいずれか１項に記載の核酸。
  37. 前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８α由来の膜貫通ドメインである、請求項２５～３６のいずれか１項に記載の核酸。
  38. 前記細胞内ドメインが、ＣＤ３ζ由来の細胞内ドメインをさらに含む、請求項２５～３７のいずれか１項に記載の核酸。
  39. 前記キメラ抗原受容体がシグナルペプチドまたはリーダー配列をさらに含む、請求項２５～３８のいずれか１項に記載の核酸。
  40. 前記キメラ抗原受容体がヒンジ領域をさらに含む、請求項２５～３９のいずれか１項に記載の核酸。
  41. 前記ヒンジ領域がＣＤ８αヒンジである、請求項４０に記載の核酸。
  42. 請求項２５～４１のいずれか１項に記載の核酸を含む、ベクター。
  43. 前記核酸に動作可能に結合したプロモーターをさらに含む、請求項４２に記載のベクター。
  44. 前記プロモーターが構成的プロモーターである、請求項４３に記載のベクター。
  45. 前記プロモーターが誘導性プロモーターである、請求項４３に記載のベクター。
  46. ウイルスベクターである、請求項４２～４５のいずれか１項に記載のベクター。
  47. 前記ウイルスベクターがレンチウイルスベクターである、請求項４６に記載のベクター。
  48. 操作された免疫細胞を産生する方法であって、請求項２５～４１のいずれか１項に記載の核酸または請求項４２～４７のいずれか１項に記載のベクターを免疫細胞に導入し、それによって、前記操作された免疫細胞を産生することを含む、前記方法。
  49. 導入するステップの後に、前記操作された免疫細胞を培養することをさらに含む、請求項４８に記載の方法。
  50. 前記免疫細胞がＴ細胞である、請求項４８～４９のいずれか１項に記載の方法。
  51. 前記免疫細胞がＮＫ細胞である、請求項４８～５０のいずれか１項に記載の方法。
  52. 導入するステップの前に、対象から前記免疫細胞を入手することをさらに含む、請求項４８～５１のいずれか１項に記載の方法。
  53. 前記操作された免疫細胞を前記対象に投与することをさらに含む、請求項５２に記載の方法。
  54. 前記対象ががんを有すると診断または同定されている、請求項５２または５３に記載の方法。
  55. 請求項４８～５４のいずれか１項に記載の方法によって産生される、操作された免疫細胞。
  56. 請求項５５に記載の操作された免疫細胞と、医薬的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
  57. 対象におけるがんを治療する方法であって、請求項５５に記載の操作された免疫細胞または請求項５６に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
  58. 前記がんが、抗グリピカン３関連がん、抗ＣＤ１９関連がん、または抗ＭＶＲ関連がんである、請求項５７に記載の方法。
  59. 前記がんが、がん腫、リンパ腫（例えば、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫）、芽腫、肉腫、白血病、扁平上皮がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺腺がん、肺の扁平上皮がん、腹膜がん、肝細胞がん、胃がん、膵臓がん、神経膠腫、子宮頸がん、卵巣がん、肝がん、膀胱がん、乳がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜または子宮がん、唾液腺がん、腎臓がん、前立腺がん、外陰がん、甲状腺がん、肝臓がん、他のリンパ増殖性障害、及び様々なタイプの頭頸部がんである、請求項５７に記載の方法。
  60. 前記対象が、１つ以上の追加の抗がん治療を以前に投与されたことがあり、前記抗がん治療が、電離放射線、化学療法剤、治療用抗体、及びチェックポイント阻害物質からなる群より選択される、請求項５７～５９のいずれかに記載の方法。
  61. 前記対象が前記がんを有すると同定または診断されている、請求項５７～６０のいずれか１項に記載の方法。
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