JP2022530141A - シチジン誘導体およびシチジン誘導体の製造方法 - Google Patents

Abstract

ヌクレオシド誘導体、シチジン誘導体およびゲムシタビン誘導体ならびにヌクレオシド誘導体、シチジン誘導体およびゲムシタビン誘導体の製造方法を、本明細書において開示する。

Description

本開示は、有機化合物、例えば、ヌクレオシド誘導体に関する。本開示は、有機化合物、例えば、ヌクレオシド誘導体の製造方法にも関する。いくつかの態様では、ヌクレオシド誘導体は、シチジン誘導体である。いくつかの態様では、本開示は、有機化合物、例えば、ゲムシタビン（２’，２’－ジフルオロ－２’－デオキシシチジン）またはその立体異性体のいずれかの誘導体に関する。いくつかの態様では、本開示は、ゲムシタビン（２’，２’－ジフルオロ－２’－デオキシシチジン）またはその立体異性体のいずれかの誘導体の製造方法に関する。

ゲムシタビン（２’，２’－ジフルオロ－２’－デオキシシチジン）は、とりわけいくつかの異なる種類のがん治療に使用される化学療法薬である。これらのがんとしては、乳がん、卵巣がん、非小細胞肺がん、膵がんおよび膀胱がんが挙げられる。ゲムシタビンは、代謝拮抗薬の分類に属し、シチジンのヌクレオシド誘導体である。

ゲムシタビンは比較的高細胞傷害性を有するが、その治療プロファイルを限定する多くの因子がある。主な限定因子は、シチジンデアミナーゼ（ＣＤＡ）酵素による４－（Ｎ）位におけるその不活性ウリジン代謝物であるジフルオロデオキシウリジン（ｄＦｄＵ）への代謝脱アミノ化およびがんと正常細胞との選択性不足である。これらの障害を克服するため、標準的臨床投与中、ゲムシタビンを比較的高用量で投与し、結果として、重度の副作用がある。

ゲムシタビンのプロドラッグは、分子の４－（Ｎ）部位を脱アミノ化から「保護」するように合成され、これらのうち２つは臨床治験に達成した：経口投与可能なゲムシタビンのバルプロ酸エステルであるＬＹ２３３４７３７と、スクワレン（コレステロール合成の中間体）が４－（Ｎ）位に結合しているＳｑ－ゲムシタビン（ＳＱｄＦｄＣ）である。

ゲムシタビンの４－（Ｎ）位が選択基により化学修飾されているプロドラッグの合成は、低収率であり、多量の排水および高コストである多段階反応（米国特許出願公開第２０１７／０１０７２４５（Ａ１）号および国際公開第２００４／０４１２０３（Ａ２）号に示されているように通常４段階、これらの内容は参照により本明細書に組み入れられる）を必要とする。

４－（Ｎ）位（任意に、４－（Ｎ）位のみ）が保護および／または誘導化されているシチジン誘導体、例えば、ゲムシタビン誘導体を製造する必要性がある。４－（Ｎ）位（任意に、４－（Ｎ）位のみ）が保護および／または誘導化されているシチジン誘導体、例えば、ゲムシタビン誘導体のより効率的製造方法を提供する必要性がある。

本発明の代表的特徴は以下の条項に記載されており、これらの条項は単独で、または本明細書の文章および／または図面に開示されている１つ以上の特徴と任意の組合せで組み合わせてもよい。

１．式（ＩＢ）の化合物の４－（Ｎ）保護誘導体、またはその薬剤的に許容可能な塩の製造方法であって、前記方法は：
式（ＩＢ）の化合物と：

式（ＩＩ）の塩化アシルとを反応させて、：

式（ＩＩＩＢ）の化合物を製造することを含み、：

前記式中、
Ｒ_１は：置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６ハロアルキル、例えば、クロロアルキル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ベンジル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルケニル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルキニル、１つ以上の置換もしくは非置換ベンジル基で置換されているＣ_１～Ｃ
_２６アルキル、１つ以上の置換もしくは非置換トリアゾール基で置換されているＣ_１～Ｃ_２６アルキルからなる群から選択され；
Ｒ_２Ｂは：５個の炭素原子を有する置換もしくは非置換芳香環、６個の炭素原子を有する置換もしくは非置換芳香環、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、置換もしくは非置換αピラノースサッカリド、置換もしくは非置換βピラノースサッカリド、置換もしくは非置換αフラノースサッカリド、または置換もしくは非置換βフラノースサッカリドからなる群から選択され；
Ｒ_３Ｂは：水素、５個の原子を有する一置換芳香族環、６個の原子を有する一置換芳香族環、５個の原子を有する二置換芳香族環、６個の原子を有する二置換芳香族環、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換アルコキシアルカン、カルボニル、ハロゲン、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、アジド、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルキニル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルケニル、ヒドロキシル、アミノ、または硫黄からなる群から選択され；および
Ｒ_４Ｂは：水素、５個の原子を有する一置換芳香族環、６個の原子を有する一置換芳香族環、５個の原子を有する二置換芳香族環、６個の原子を有する二置換芳香族環、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換アルコキシアルカン、カルボニル、ハロゲン、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、アジド、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルキニル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルケニル、ヒドロキシル、アミノ、または硫黄からなる群から選択される、方法。

２．式（ＩＢ）の化合物の４－（Ｎ）保護誘導体、またはその薬剤的に許容可能な塩の製造方法であって、前記方法は：
式（ＩＢ）の化合物と：

式（ＩＩＰ）の塩化ホスホリルとを反応させて：

式（ＩＩＩＢＰ）の化合物を製造することを含み、：

前記式中、
Ｒ_３およびＲ_４は、共にＨであるか；Ｒ_３はＨであり、Ｒ_４は置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキルであるか；またはＲ_３およびＲ_４は各々独立して置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキルであり；
Ｘは、ＯまたはＳ、特にＯであり；
各Ｙは独立してＯまたはＳであり、特に各ＹはＯであり；
Ｒ_２Ｂは：５個の炭素原子を有する置換もしくは非置換芳香環、６個の炭素原子を有する置換もしくは非置換芳香環、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、置換もしくは非置換αピラノースサッカリド、置換もしくは非置換βピラノースサッカリド、置換もしくは非置換αフラノースサッカリド、または置換もしくは非置換βフラノースサッカリドからなる群から選択され；
Ｒ_３Ｂは：水素、５個の原子を有する一置換芳香族環、６個の原子を有する一置換芳香族環、５個の原子を有する二置換芳香族環、６個の原子を有する二置換芳香族環、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換アルコキシアルカン、カルボニル、ハロゲン、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、アジド、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルキニル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルケニル、ヒドロキシル、アミノ、または硫黄からなる群から選択され；および
Ｒ_４Ｂは：水素、５個の原子を有する一置換芳香族環、６個の原子を有する一置換芳香族環、５個の原子を有する二置換芳香族環、６個の原子を有する二置換芳香族環、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換アルコキシアルカン、カルボニル、ハロゲン、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、アジド、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルキニル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルケニル、ヒドロキシル、アミノ、または硫黄からなる群から選択される、方法。

３．Ｒ_２Ｂは以下の群から選択され、：

前記式中、
波線は、それぞれ、Ｒ_２Ｂの結合点を示し；
Ｒ_７は：アルコキシアルカン、カルボニル、ハロゲン、水素、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、アジド、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキニル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルケニル、ヒドロキシル、アミノ、硫黄、または置換もしくは非置換アリールからなる群から選択され；
Ｒ_８は：アルコキシアルカン、カルボニル、ハロゲン、水素、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、アジド、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキニル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルケニル、ヒドロキシル、アミノ、硫黄、または置換もしくは非置換アリールからなる群から選択され；
Ｒ_９は：アルコキシアルカン、カルボニル、ハロゲン、水素、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、アジド、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキニル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルケニル、ヒドロキシル、アミノ、硫黄、または置換もしくは非置換アリールからなる群から選択され；
Ｒ_１０は：アルコキシアルカン、カルボニル、ハロゲン、水素、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、アジド、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキニル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルケニル、ヒドロキシル、アミノ、硫黄、または置換もしくは非置換アリールからなる群から選択され；
Ｒ_１１は：アルコキシアルカン、カルボニル、ハロゲン、水素、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、アジド、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキニル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルケニル、ヒドロキシル、アミノ、硫黄、または置換もしくは非置換アリールからなる群から選択され；
Ｒ_１２は：アルコキシアルカン、カルボニル、ハロゲン、水素、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、アジド、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキニル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルケニル、ヒドロキシル、アミノ、硫黄、または置換もしくは非置換アリールからなる群から選択され；
Ｒ_１３は：アルコキシアルカン、カルボニル、ハロゲン、水素、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、アジド、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキニル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルケニル、ヒドロキシル、アミノ、硫黄、または置換もしくは非置換アリールからなる群から選択され；
Ｒ_１４は：アルコキシアルカン、カルボニル、ハロゲン、水素、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、アジド、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキニル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルケニル、ヒドロキシル、アミノ、硫黄、または置換もしくは非置換アリールからなる群から選択され；
Ｘは、独立してハロゲンであり；
Ｙは、独立して水素、ヒドロキシル、アミノまたは硫黄であり；
Ｚは、独立してヒドロキシル、アミノまたは硫黄である、
条項１または２に記載の方法。

４．Ｒ_３ＢおよびＲ_４Ｂは、共に水素である、条項１～３のいずれか一項に記載の方法。

５．それぞれのハロゲンは、独立してＦ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである、条項１～４のいずれか一項に記載の方法。

６．Ｒ_３Ｂは水素であり、Ｒ_４Ｂは水素であり、Ｒ_２Ｂは、

である、条項１～５のいずれか一項に記載の方法。

７．Ｙは水素であり、Ｒ_１１はハロゲンであり、Ｒ_１２はハロゲンであり、Ｒ_９は水素
であり、Ｒ_１３はヒドロキシル（－ＯＨ）であり、Ｒ_１０は水素であり、Ｒ_７は水素であり、Ｒ_８は水素であり、Ｒ_１４はヒドロキシル（－ＯＨ）である、条項６に記載の方法。

８．ゲムシタビンの４－（Ｎ）保護誘導体、もしくはその薬剤的に許容可能な塩の製造方法、または条項１もしくは３～７のいずれか一項に記載の方法であって、前記方法は：
ゲムシタビン（Ｉ）を、：

式（ＩＩ）の塩化アシルと反応させて、：

式（ＩＩＩ）の化合物を製造することを含み、：

前記式中、
Ｒ_１は：置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６ハロアルキル、例えば、クロロアルキル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルケニル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ベンジル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルキニル、１つ以上の置換もしくは非置換ベンジル基で置換されているＣ_１～Ｃ
_２６アルキル、１つ以上の置換もしくは非置換トリアゾール基で置換されているＣ_１～Ｃ_２６アルキルからなる群から選択される、方法。

９．Ｒ_３Ｂはハロゲンであり、Ｒ_４Ｂは水素であり、Ｒ_１は－（ＣＨ_２）_４ＣＨ_３であり、Ｒ_２Ｂは

である、条項１～５のいずれか一項に記載の方法。

１０．Ｒ_３Ｂは、Ｆである、条項９に記載の方法。

１１．Ｙは水素であり、Ｒ_１１は水素であり、Ｒ_１２はヒドロキシル（－ＯＨ）であり、Ｒ_９は水素であり、Ｒ_１３はヒドロキシル（－ＯＨ）であり、Ｒ_１０は水素であり、Ｒ_７は水素であり、Ｒ_８は水素であり、Ｒ_１４は水素である、条項９または１０に記載の方法。

１２．ゲムシタビンの４－（Ｎ）保護誘導体、もしくはその薬剤的に許容可能な塩の製造方法、または条項２～７もしくは９～１１のいずれか一項に記載の方法であって、前記方法は：
ゲムシタビン（Ｉ）を、：

式（ＩＩＰ）の塩化ホスホリルと反応させて、：

式（ＩＩＩＰ）の化合物を製造することを含み、：

前記式中、
Ｒ_３およびＲ_４は、共にＨであるか；Ｒ_３はＨであり、Ｒ_４は置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキルであるか；またはＲ_３およびＲ_４は各々独立して置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキルであり；
Ｘは、ＯまたはＳ、特にＯであり；
各Ｙは独立してＯまたはＳであり、特に各ＹはＯである、方法。

１３．前記方法をワンポットで行う；任意に、前記方法を、中間体を単離しないで一段階で行う、条項１～１２のいずれか一項に記載の方法。

１４．前記式（ＩＩ）の塩化アシルまたは前記式（ＩＩＰ）の塩化ホスホリルは、前記方法において、０．３～０．７当量（モル基準）で存在する、条項１～１３のいずれか一項に記載の方法。

１５．前記式（ＩＩ）の塩化アシルまたは前記式（ＩＩＰ）の塩化ホスホリルは、前記方法において、０．５当量（モル基準）で存在する、条項１～１４のいずれか一項に記載の方法。

１６．式（ＩＢ）の化合物、任意にゲムシタビン（Ｉ）と前記式（ＩＩ）の塩化アシルまたは前記式（ＩＩＰ）の塩化ホスホリルとの反応を、酢酸エチル、シアン化アセチルまたは酢酸エチルとシアン化アセチルとの混合物の溶媒中で行う、条項１～１５のいずれか一項に記載の方法。

１７．式（ＩＢ）の化合物、任意にゲムシタビン（Ｉ）と前記式（ＩＩ）の塩化アシルまたは前記式（ＩＩＰ）の塩化ホスホリルとの反応を、１～４時間；任意に３時間還流条件下で行い；任意に還流条件は７０℃～９０℃、または８０℃で起こる、条項１～１６のいずれか一項に記載の方法。

１８．Ｒ_１は：
ｉ．－ＣＨ_２ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_２ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_３ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_４ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_５ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_６ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－（ＣＨ_２）_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－（ＣＨ_２）_３ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－（ＣＨ_２）_４ＣＨ（ＣＨ_３）_２；
ｉｉ．－ＣＨ_２Ｃｌ、－（ＣＨ_２）_２Ｃｌ、－（ＣＨ_２）_３Ｃｌ、－（ＣＨ_２）_４Ｃｌ、－（ＣＨ_２）_５Ｃｌ、－（ＣＨ_２）_６Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－（ＣＨ_２）_２Ｂｒ、－（ＣＨ_２）_３Ｂｒ、－（ＣＨ_２）_４Ｂｒ、－（ＣＨ_２）_５Ｂｒ、－（ＣＨ_２）_６Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｉ、－（ＣＨ_２）_２Ｉ、－（ＣＨ_２）_３Ｉ、－（ＣＨ_２）_４Ｉ、－（ＣＨ_２）_５Ｉ、－（ＣＨ_２）_６Ｉ；
ｉｉｉ．－ＣＨ_２ＣＣＨ、－（ＣＨ_２）_２ＣＣＨ、－（ＣＨ_２）_３ＣＣＨ、－（ＣＨ_２）_４ＣＣＨ、－（ＣＨ_２）_５ＣＣＨ、－（ＣＨ_２）_６ＣＣＨ、
ｉｖ．－ＣＨ_２Ｎ_３、－（ＣＨ_２）_２Ｎ_３、－（ＣＨ_２）_３Ｎ_３、－（ＣＨ_２）_４Ｎ_３、－（ＣＨ_２）_５Ｎ_３、－（ＣＨ_２）_６Ｎ_３、
ｖ．－ＣＨ_２ＳＨ、－（ＣＨ_２）_２ＳＨ、－（ＣＨ_２）_３ＳＨ、－（ＣＨ_２）_４ＳＨ、－（ＣＨ_２）_５ＳＨ、－（ＣＨ_２）_６ＳＨ、
ｖｉ．－ＣＨ_２ＣＯＯＨ、－（ＣＨ_２）_２ＣＯＯＨ、－（ＣＨ_２）_３ＣＯＯＨ、－（ＣＨ_２）_４ＣＯＯＨ、－（ＣＨ_２）_５ＣＯＯＨ、－（ＣＨ_２）_６ＣＯＯＨ、－ＣＨ_２ＣＯＯＲ_２、－（ＣＨ_２）_２ＣＯＯＲ_２、－（ＣＨ_２）_３ＣＯＯＲ_２、－（ＣＨ_２）_４ＣＯＯＲ_２、－（ＣＨ_２）_５ＣＯＯＲ_２、－（ＣＨ_２）_６ＣＯＯＲ_２；
ｖｉｉ．－ＣＨ_２Ａｒ、－（ＣＨ_２）_２Ａｒ、－（ＣＨ_２）_３Ａｒ、－（ＣＨ_２）_４Ａｒ、－（ＣＨ_２）_５Ａｒ、－（ＣＨ_２）_６Ａｒ、－ＣＨ_２ＣＨＡｒＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨＡｒＣＨ_２ＣＨ_３；
ｖｉｉｉ．－ＣＨ_２Ｔｒ、－（ＣＨ_２）_２Ｔｒ、－（ＣＨ_２）_３Ｔｒ、－（ＣＨ_２）_４Ｔｒ、－（ＣＨ_２）_５Ｔｒ、－（ＣＨ_２）_６Ｔｒ、－ＣＨ_２ＣＨＴｒＣＨ_３または－ＣＨ_２ＣＨＴｒＣＨ_２ＣＨ_３；
からなる群から選択され、
Ｒ_２は、置換または非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキルであり、
Ａｒは、

であり；
式中、
Ａ_１、Ａ_２、Ａ_３、Ａ_４およびＡ_５は、各々独立して、Ｈ、ＮＯ_２、ＯＨ、Ｏ－アルキルもしくはＯ－メチルであり；任意に、Ａ_１はＮＯ_２であり、Ａ_２、Ａ_３、Ａ_４およびＡ_５はＨであり；またはＡ_１はＮＯ_２であり、Ａ_３およびＡ_４はＯ－メチルであり、Ａ_２およびＡ_５はＨであり；ならびに／または
Ｔｒは、

であり、
Ｂは、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ハロアルキル、例えば、クロロアルキル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ベンジル、置換もしくは非置換アルケニル、置換もしくは非置換アルキニル、１つ以上のベンジルもしくは置換ベンジル基で置換されているアルキルまたは

であり、
任意に、Ｒ_１は、条項１８．ｉ．、１８．ｉｉ．、１８．ｉｉｉ．、１８．ｉｖ．、１８．ｖ．、１８．ｖｉ．、１８．ｖｉｉ．、または１８．ｖｉｉｉ．のうちのいずれか１つ以上に挙げられている通りではない、
条項１～１７のいずれか一項に記載の方法。

１９．Ｒ_１は、４－（Ｎ）においてＨ原子と反応する置換基を含み、例えば、Ｒ_１は、クロロアルキルであり、前記方法は、式（ＩＩＩ）の化合物を、：

適切な条件、例えば、還流条件下、溶媒、例えば、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン中、反応させて、式（ＩＶ）の化合物を生成する工程をさらに含み、：

前記式中、ｎは、０、１または２である、
条項１～１８のいずれか一項に記載の方法。

２０．前記方法は、前記式（ＩＩＩ）または（ＩＩＩＰ）の化合物を、ＯＨ反応性誘導体化剤と反応させて、化合物式（ＩＩＩ）または（ＩＩＩＰ）の３’－および／もしくは５’－置換誘導体を生成する工程をさらに含み、
任意に、前記方法は、式（ＩＩＩ）の化合物を無水酢酸と反応させて、式（Ｖ）：

または、式（ＶＰ）の化合物を生成する工程をさらに含み、：

前記式中、Ａｃは－ＣＯＣＨ_３である、
条項１～１９のいずれか一項に記載の方法。

２１．条項１～２０のいずれか一項に記載の方法により得られる、または得られた化合物。

２２．式（ＩＩＩ）の化合物、：

またはその３’－および／もしくは５’－置換誘導体であって、例えば、式（ＶＡ）の化合物：

式中、
Ｒ_２０およびＲ_２１の少なくとも１つは、Ｈではなく、
Ｒ_２０はＨまたは－ＣＯＲ_２０１であり、Ｒ_２０１は、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６ハロアルキル、例えば、クロロアルキル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ベンジル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルケニル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルキニル、１つ以上の置換もしくは非置換ベンジル基で置換されているＣ_１～Ｃ_２６アルキル、１つ以上の置換もしくは非置換トリアゾール基で置換されているＣ_１～Ｃ_２６アルキルからなる群から選択され；
Ｒ_２１はＨまたは－ＣＯＲ_２０２であり、Ｒ_２０２は、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６ハロアルキル、例えば、クロロアルキル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ベンジル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルケニル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルキニル、１つ以上の置換もしくは非置換ベンジル基で置換されているＣ_１～Ｃ_２６アルキル、１つ以上の置換もしくは
非置換トリアゾール基で置換されているＣ_１～Ｃ_２６アルキルからなる群から選択される；
もしくは式（Ｖ）の化合物：

式中、
Ａｃは－ＣＯＣＨ_３であり；
Ｒ_１は：置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６ハロアルキル、例えば、クロロアルキル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ベンジル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルケニル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルキニル、１つ以上の置換もしくは非置換ベンジル基で置換されているＣ_１～Ｃ_２６アルキル、１つ以上の置換もしくは非置換トリアゾール基で置換されているＣ_１～Ｃ_２６アルキルからなる群から選択される、
化合物、もしくはその薬剤的に許容可能な塩。

２３．Ｒ_１は、－ＣＨ_２ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_２ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_３ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_４ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_５ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_６ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－（ＣＨ_２）_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－（ＣＨ_２）_３ＣＨ（ＣＨ_３）_２または－（ＣＨ_２）_４ＣＨ（ＣＨ_３）_２からなる群から選択される、条項２２に記載の化合物。

２４．Ｒ_１は、－ＣＨ_２Ｃｌ、－（ＣＨ_２）_２Ｃｌ、－（ＣＨ_２）_３Ｃｌ、－（ＣＨ_２）_４Ｃｌ、－（ＣＨ_２）_５Ｃｌ、－（ＣＨ_２）_６Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－（ＣＨ_２）_２Ｂｒ、－（ＣＨ_２）_３Ｂｒ、－（ＣＨ_２）_４Ｂｒ、－（ＣＨ_２）_５Ｂｒ、－（ＣＨ_２）_６Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｉ、－（ＣＨ_２）_２Ｉ、－（ＣＨ_２）_３Ｉ、－（ＣＨ_２）_４Ｉ、－（ＣＨ_２）_５Ｉまたは－（ＣＨ_２）_６Ｉからなる群から選択される、条項２２に記載の化合物。

２５．Ｒ_１は、－ＣＨ_２ＣＣＨ、－（ＣＨ_２）_２ＣＣＨ、－（ＣＨ_２）_３ＣＣＨ、－（ＣＨ_２）_４ＣＣＨ、－（ＣＨ_２）_５ＣＣＨまたは－（ＣＨ_２）_６ＣＣＨからなる群から選択される、条項２２に記載の化合物。

２６．Ｒ_１は、－ＣＨ_２Ｎ_３、－（ＣＨ_２）_２Ｎ_３、－（ＣＨ_２）_３Ｎ_３、－（ＣＨ_２）_４Ｎ_３、－（ＣＨ_２）_５Ｎ_３または－（ＣＨ_２）_６Ｎ_３からなる群から選択される、条項２２に記載の化合物。

２７．Ｒ_１は、－ＣＨ_２ＳＨ、－（ＣＨ_２）_２ＳＨ、－（ＣＨ_２）_３ＳＨ、－（ＣＨ_２
）_４ＳＨ、－（ＣＨ_２）_５ＳＨまたは－（ＣＨ_２）_６ＳＨからなる群から選択される、条項２２に記載の化合物。

２８．Ｒ_１は、－ＣＨ_２ＣＯＯＨ、－（ＣＨ_２）_２ＣＯＯＨ、－（ＣＨ_２）_３ＣＯＯＨ、－（ＣＨ_２）_４ＣＯＯＨ、－（ＣＨ_２）_５ＣＯＯＨ、－（ＣＨ_２）_６ＣＯＯＨ、－ＣＨ_２ＣＯＯＲ_２、－（ＣＨ_２）_２ＣＯＯＲ_２、－（ＣＨ_２）_３ＣＯＯＲ_２、－（ＣＨ_２）_４ＣＯＯＲ_２、－（ＣＨ_２）_５ＣＯＯＲ_２または－（ＣＨ_２）_６ＣＯＯＲ_２からなる群から選択され；
Ｒ_２は、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキルである、
条項２２に記載の化合物。

２９．Ｒ_１は、－ＣＨ_２Ａｒ、－（ＣＨ_２）_２Ａｒ、－（ＣＨ_２）_３Ａｒ、－（ＣＨ_２）_４Ａｒ、－（ＣＨ_２）_５Ａｒ、－（ＣＨ_２）_６Ａｒ、－ＣＨ_２ＣＨＡｒＣＨ_３または－ＣＨ_２ＣＨＡｒＣＨ_２ＣＨ_３からなる群から選択され；
Ａｒは、

であり；
Ａ_１、Ａ_２、Ａ_３、Ａ_４およびＡ_５は、各々独立して、Ｈ、ＮＯ_２、ＯＨ、Ｏ－アルキルもしくはＯ－メチルであり；任意に、Ａ_１はＮＯ_２であり、Ａ_２、Ａ_３、Ａ_４およびＡ_５はＨであり；またはＡ_１はＮＯ_２であり、Ａ_３およびＡ_４はＯ－メチルであり、Ａ_２およびＡ_５はＨである、
条項２２に記載の化合物。

３０．Ｒ_１は、－ＣＨ_２Ｔｒ、－（ＣＨ_２）_２Ｔｒ、－（ＣＨ_２）_３Ｔｒ、－（ＣＨ_２）_４Ｔｒ、－（ＣＨ_２）_５Ｔｒ、－（ＣＨ_２）_６Ｔｒ、－ＣＨ_２ＣＨＴｒＣＨ_３または－ＣＨ_２ＣＨＴｒＣＨ_２ＣＨ_３からなる群から選択され；
Ｔｒは、

であり、
Ｂは：置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６ハロアルキル、例えば、クロロアルキル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ベンジル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルケニル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルキニル、１つ以上のベンジル基もしくは置換ベンジル基で置換されているＣ_１～Ｃ_２６アルキル、または

からなる群から選択され、
任意に、Ｒ_１は、条項２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０のうちのいずれか１つ以上に挙げられている通りではない、
条項２２に記載の化合物。

３１．前記化合物は：

からなる群から選択される、条項２２～３０のいずれか一項に記載の化合物。

３２．前記化合物は：

からなる群から選択されない、条項２２～３０のいずれか一項に記載の化合物。

３３．式（ＩＩＩＰ）の化合物であって、：

前記式中、
Ｒ_３およびＲ_４は、共にＨであるか；Ｒ_３はＨであり、Ｒ_４は置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキルであるか；またはＲ_３およびＲ_４は各々独立して置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキルであり；
Ｘは、ＯまたはＳ、特にＯであり；
各Ｙは独立してＯまたはＳであり、特に各ＹはＯである、
化合物、もしくはその薬剤的に許容可能な塩またはその３’－および／もしくは５’－置換誘導体。

３４．式（ＶＩ）の化合物であって、：

式中、
Ｒ_３およびＲ_４は、共にＨであり；
Ｒ_３はＨであり、Ｒ_４は置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキルであり；または
Ｒ_３およびＲ_４は、各々独立して置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキルである、条項３３に記載の化合物、もしくはその薬剤的に許容可能な塩またはその３’－および／もしくは５’－置換誘導体。

３５．Ｒ_３およびＲ_４の一方または両方は、－ＣＨ_２ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_２ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_３ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_４ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_５ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_６ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－（ＣＨ_２）_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－（ＣＨ_２）_３ＣＨ（ＣＨ_３）_２または－（ＣＨ_２）_４ＣＨ（ＣＨ_３）_２からなる群から選択される、条項３３または３４に記載の化合物。

３６．式（ＩＶ）の化合物であって、：

前記式中、ｎは、０、１または２である、化合物またはその薬剤的に許容可能な塩。

３７．条項２１～３６のいずれか一項に記載の化合物および薬剤的に許容可能な担体を含む医薬組成物。

３８．治療において使用するための、条項２１～３６のいずれか一項に記載の化合物、または条項３７に記載の医薬組成物。

３９．がん治療において使用するための、条項２１～３６のいずれか一項に記載の化合物、または条項３７に記載の医薬組成物。

４０．条項３９に記載の使用のための化合物または医薬組成物であって、前記がんは、乳がん、卵巣がん、非小細胞肺がん、膵がんおよび膀胱がんからなる群から選択される、化合物または医薬組成物。

４１．がん患者、任意に、がんに罹患しているヒト患者の治療方法であって、前記方法は、条項２１～３６のいずれか一項に記載の化合物、または条項３７に記載の医薬組成物の有効量を前記患者に投与することを含む、方法。

４２．前記がんは、乳がん、卵巣がん、非小細胞肺がん、膵がんおよび膀胱がんからなる群から選択される、条項４１に記載の方法。

本発明のいくつかのさらなる態様は以下の条項（「Ａ」条項）に記載されており、これらの条項は単独で、または本明細書の文章および／または図面に開示されている１つ以上の特徴と任意で組合せで組み合わせてもよい。

１Ａ．ゲムシタビンの４－（Ｎ）保護誘導体、またはその薬剤的に許容可能な塩の製造方法であって、前記方法は：
ゲムシタビン（Ｉ）を、：

式（ＩＩ）の塩化アシルと反応させて、：

式（ＩＩＩ）：の化合物を製造することを含み、

前記式中、Ｒ_１は：置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６クロロアルキル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ベンジル、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキニル、１つ以上の置換もしくは非置換ベンジル基で置換されているＣ_１～Ｃ_２６アルキル、１つ以上の置換もしくは非置換トリアゾール基で置換されているＣ_１～Ｃ_２６アルキルからなる群から選択される、方法。

２Ａ．前記方法を、ワンポットで行う、条項１Ａに記載の方法。

３Ａ．前記式（ＩＩ）の塩化アシルは、：

前記方法において、０．３～０．７当量（モル基準）で存在する、条項１Ａまたは２Ａに記載の方法。

４Ａ．前記式（ＩＩ）の塩化アシルは、：

前記方法において、０．５当量（モル基準）で存在する、
条項１Ａ～３Ａのいずれか一項に記載の方法。

５Ａ．ゲムシタビン（Ｉ）と前記式（ＩＩ）の塩化アシルとの反応を、酢酸エチル、シアン化アセチルまたは酢酸エチルとシアン化アセチルとの混合物の溶媒中で行う、条項１Ａ～４Ａのいずれか一項に記載の方法。

６Ａ．ゲムシタビン（Ｉ）と前記式（ＩＩ）の塩化アシルとの反応を、１～４時間；任意に３時間還流条件下で行い；任意に還流条件は７０℃～９０℃、または８０℃で起こる、条項１Ａ～５Ａのいずれか一項に記載の方法。

７Ａ．Ｒ_１は、－ＣＨ_２ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_２ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_３ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_４ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_５ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_６ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－（ＣＨ_２）_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－（ＣＨ_２）_３ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－（ＣＨ_２）_４ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－（ＣＨ_２）_２Ｃｌ、－（ＣＨ_２）_３Ｃｌ、－（ＣＨ_２）_４Ｃｌ、－（ＣＨ_２）_５Ｃｌ、－（ＣＨ_２）_６Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－（ＣＨ_２）_２Ｂｒ、－（ＣＨ_２）_３Ｂｒ、－（ＣＨ_２）_４Ｂｒ、－（ＣＨ_２）_５Ｂｒ、－（ＣＨ_２）_６Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｉ、－（ＣＨ_２）_２Ｉ、－（ＣＨ_２）_３Ｉ、－（ＣＨ_２）_４Ｉ、－（ＣＨ_２）_５Ｉ、－（ＣＨ_２）_６Ｉ、－ＣＨ_２ＣＣＨ、－（ＣＨ_２）_２ＣＣＨ、－（ＣＨ_２）_３ＣＣＨ、－（ＣＨ_２）_４ＣＣＨ、－（ＣＨ_２）_５ＣＣＨ、－（ＣＨ_２）_６ＣＣＨ、－ＣＨ_２Ｎ_３、－（ＣＨ_２）_２Ｎ_３、－（ＣＨ_２）_３Ｎ_３、－（ＣＨ_２）_４Ｎ_３、－（ＣＨ_２）_５Ｎ_３、－（ＣＨ_２）_６Ｎ_３、－ＣＨ_２ＳＨ、－（ＣＨ_２）_２ＳＨ、－（ＣＨ_２）_３ＳＨ、－（ＣＨ_２）_４ＳＨ、－（ＣＨ_２）_５ＳＨ、－（ＣＨ_２）_６ＳＨ、－ＣＨ_２ＣＯＯＨ、－（ＣＨ_２）_２ＣＯＯＨ、－（ＣＨ_２）_３ＣＯＯＨ、－（ＣＨ_２）_４ＣＯＯＨ、－（ＣＨ_２）_５ＣＯＯＨ、－（ＣＨ_２）_６ＣＯＯＨ、－ＣＨ_２ＣＯＯＲ_２、－（ＣＨ_２）_２ＣＯＯＲ_２、－（ＣＨ_２）_３ＣＯＯＲ_２、－（ＣＨ_２）_４ＣＯＯＲ_２、－（ＣＨ_２）_５ＣＯＯＲ_２、－（ＣＨ_２）_６ＣＯＯＲ_２、－ＣＨ_２Ａｒ、－（ＣＨ_２）_２Ａｒ、－（ＣＨ_２）_３Ａｒ、－（ＣＨ_２）_４Ａｒ、－（ＣＨ_２）_５Ａｒ、－（ＣＨ_２）_６Ａｒ、－ＣＨ_２ＣＨＡｒＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨＡｒＣＨ_２ＣＨ_３、－ＣＨ_２Ｔｒ、－（ＣＨ_２）_２Ｔｒ、－
（ＣＨ_２）_３Ｔｒ、－（ＣＨ_２）_４Ｔｒ、－（ＣＨ_２）_５Ｔｒ、－（ＣＨ_２）_６Ｔｒ、－ＣＨ_２ＣＨＴｒＣＨ_３または－ＣＨ_２ＣＨＴｒＣＨ_２ＣＨ_３からなる群から選択され；
Ｒ_２は、置換または非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキルであり；
Ａｒは、

であり；
Ａ_１、Ａ_２、Ａ_３、Ａ_４およびＡ_５は、各々独立して、Ｈ、ＮＯ_２、ＯＨ、Ｏ－アルキルもしくはＯ－メチルであり；任意に、Ａ_１はＮＯ_２であり、Ａ_２、Ａ_３、Ａ_４およびＡ_５はＨであり；またはＡ_１はＮＯ_２であり、Ａ_３およびＡ_４はＯＭｅであり、Ａ_２およびＡ_５はＨであり；または、
Ｔｒは、

であり；
Ｂは、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換クロロアルキル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ベンジル、置換もしくは非置換アルキニル、１つ以上のベンジルもしくは置換ベンジル基で置換されているアルキルまたは

である、
条項１Ａ～６Ａのいずれか一項に記載の方法。

８Ａ．Ｒ_１はクロロアルキルであり、前記方法は、式（ＩＩＩ）の化合物を、：

還流条件下、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン中で反応させて、式（ＩＶ）の化合物を生成する工程をさらに含み：

前記式中、ｎは、０、１または２である、条項１Ａ～４Ａのいずれか一項に記載の方法。

９Ａ．前記方法は、式（ＩＩＩ）の化合物を：

無水酢酸と反応させて、式（Ｖ）の化合物を生成する工程をさらに含み：

前記式中、Ａｃは－ＣＯＣＨ_３である、条項１Ａ～８Ａのいずれか一項に記載の方法。

１０Ａ．条項１Ａ～９Ａのいずれか一項に記載の方法により得られる、またはから得られた化合物。

１１Ａ．式（ＩＩＩ）または式（Ｖ）の化合物であって、：

前記式中、
Ａｃは－ＣＯＣＨ_３であり；
Ｒ_１は：置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６クロロアルキル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ベンジル、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキニル、１つ以上の置換もしくは非置換ベンジル基で置換されているＣ_１～Ｃ_２６アルキル、１つ以上の置換もしくは非置換トリアゾール基で置換されているＣ_１～Ｃ_２６アルキルからなる群から選択される、
化合物またはその薬剤的に許容可能な塩。

１２Ａ．Ｒ_１は、－ＣＨ_２ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_２ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_３ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_４ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_５ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_６ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－（ＣＨ_２）_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－（ＣＨ_２）_３ＣＨ（ＣＨ_３）_２または－（ＣＨ_２）_４ＣＨ（ＣＨ_３）_２からなる群から選択される、条項１１Ａに記載の化合物。

１３Ａ．Ｒ_１は、－ＣＨ_２Ｃｌ、－（ＣＨ_２）_２Ｃｌ、－（ＣＨ_２）_３Ｃｌ、－（ＣＨ_２）_４Ｃｌ、－（ＣＨ_２）_５Ｃｌ、－（ＣＨ_２）_６Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－（ＣＨ_２）_２Ｂｒ、－（ＣＨ_２）_３Ｂｒ、－（ＣＨ_２）_４Ｂｒ、－（ＣＨ_２）_５Ｂｒ、－（ＣＨ_２）_６Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｉ、－（ＣＨ_２）_２Ｉ、－（ＣＨ_２）_３Ｉ、－（ＣＨ_２）_４Ｉ、－（ＣＨ_２）_５Ｉまたは－（ＣＨ_２）_６Ｉからなる群から選択される、条項１１Ａに記載の化合物。

１４Ａ．Ｒ_１は、－ＣＨ_２ＣＣＨ、－（ＣＨ_２）_２ＣＣＨ、－（ＣＨ_２）_３ＣＣＨ、－（ＣＨ_２）_４ＣＣＨ、－（ＣＨ_２）_５ＣＣＨまたは－（ＣＨ_２）_６ＣＣＨからなる群から選択される、条項１１Ａに記載の化合物。

１５Ａ．Ｒ_１は、－ＣＨ_２Ｎ_３、－（ＣＨ_２）_２Ｎ_３、－（ＣＨ_２）_３Ｎ_３、－（ＣＨ_２）_４Ｎ_３、－（ＣＨ_２）_５Ｎ_３または－（ＣＨ_２）_６Ｎ_３からなる群から選択される、条項１１Ａに記載の化合物。

１６Ａ．Ｒ_１は、－ＣＨ_２ＳＨ、－（ＣＨ_２）_２ＳＨ、－（ＣＨ_２）_３ＳＨ、－（ＣＨ_２）_４ＳＨ、－（ＣＨ_２）_５ＳＨまたは－（ＣＨ_２）_６ＳＨからなる群から選択される、条項１１Ａに記載の化合物。

１７Ａ．Ｒ_１は、－ＣＨ_２ＣＯＯＨ、－（ＣＨ_２）_２ＣＯＯＨ、－（ＣＨ_２）_３ＣＯＯＨ、－（ＣＨ_２）_４ＣＯＯＨ、－（ＣＨ_２）_５ＣＯＯＨ、－（ＣＨ_２）_６ＣＯＯＨ、－ＣＨ_２ＣＯＯＲ_２、－（ＣＨ_２）_２ＣＯＯＲ_２、－（ＣＨ_２）_３ＣＯＯＲ_２、－（ＣＨ_２）_４ＣＯＯＲ_２、－（ＣＨ_２）_５ＣＯＯＲ_２または－（ＣＨ_２）_６ＣＯＯＲ_２からなる群から選択され、
Ｒ_２は、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキルである、
請求項１１Ａに記載の化合物。

１８Ａ．Ｒ_１は、－ＣＨ_２Ａｒ、－（ＣＨ_２）_２Ａｒ、－（ＣＨ_２）_３Ａｒ、－（ＣＨ_２）_４Ａｒ、－（ＣＨ_２）_５Ａｒ、－（ＣＨ_２）_６Ａｒ、－ＣＨ_２ＣＨＡｒＣＨ_３または－ＣＨ_２ＣＨＡｒＣＨ_２ＣＨ_３からなる群から選択され；
Ａｒは、

であり；
Ａ_１、Ａ_２、Ａ_３、Ａ_４およびＡ_５は、各々独立して、Ｈ、ＮＯ_２、ＯＨ、Ｏ－アルキルもしくはＯ－メチルであり；任意に、Ａ_１はＮＯ_２であり、Ａ_２、Ａ_３、Ａ_４およびＡ_５はＨであり；またはＡ_１はＮＯ_２であり、Ａ_３およびＡ_４はＯＭｅであり、Ａ_２およびＡ_５はＨである、
条項１１Ａに記載の化合物。

１９Ａ．Ｒ_１は、－ＣＨ_２Ｔｒ、－（ＣＨ_２）_２Ｔｒ、－（ＣＨ_２）_３Ｔｒ、－（ＣＨ_２）_４Ｔｒ、－（ＣＨ_２）_５Ｔｒ、－（ＣＨ_２）_６Ｔｒ、－ＣＨ_２ＣＨＴｒＣＨ_３または－ＣＨ_２ＣＨＴｒＣＨ_２ＣＨ_３からなる群から選択され；
Ｔｒは、

であり；
Ｂは、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６クロロアルキル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ベンジル、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキニル、１つ以上のベンジル基もしくは置換ベンジル基で置換されているＣ_１～Ｃ_２６アルキル、または

であり；
任意に、Ｒ_１は、条項１２Ａ、１３Ａ、１４Ａ、１５Ａ、１６Ａ、１７Ａ、１８Ａまたは１９Ａのうちのいずれか１つ以上に挙げられている通りではない、
条項１１Ａに記載の化合物。

２０Ａ．前記化合物は：

からなる群から選択される、条項１１Ａ～１９Ａのいずれか一項に記載の化合物。

２１Ａ．前記化合物は：

からなる群から選択されない、条項１１Ａ～１９Ａのいずれか一項に記載の化合物。

２２Ａ．式（ＶＩ）の化合物であって、：

前記式中、
Ｒ_３およびＲ_４は、共にＨであり；
Ｒ_３はＨであり、Ｒ_４は置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキルであり；または
Ｒ_３およびＲ_４は、各々独立して置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキルである、
化合物、またはその薬剤的に許容可能な塩。

２３Ａ．Ｒ_３およびＲ_４の１つまたは両方は、－ＣＨ_２ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_２ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_３ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_４ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_５ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_６ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－（ＣＨ_２）_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－（ＣＨ_２）_３ＣＨ（ＣＨ_３）_２または－（ＣＨ_２）_４ＣＨ（ＣＨ_３）_２からなる群から選択される、条項２２Ａに記載の化合物。

２４Ａ．式（ＩＶ）の化合物であって、：

前記式中、ｎは、０、１または２である、化合物、またはその薬剤的に許容可能な塩。

２５Ａ．条項１１Ａ～２４Ａのいずれか一項に記載の化合物および薬剤的に許容可能な担体を含む医薬組成物。

２６Ａ．治療において使用するための、条項１１Ａ～２４Ａのいずれか一項に記載の化合物、または条項２５Ａに記載の医薬組成物。

２７Ａ．がん治療において使用するための、条項１１Ａ～２４Ａのいずれか一項に記載の化合物、または条項２５Ａに記載の医薬組成物。

２８Ａ．条項２７Ａに記載の使用のための化合物または医薬組成物であって、前記がんは、乳がん、卵巣がん、非小細胞肺がん、膵がんおよび膀胱がんからなる群から選択される、化合物または医薬組成物。

２９Ａ．がん患者、任意に、がんに罹患しているヒト患者の治療方法であって、前記方法は、条項１１Ａ～２４Ａのいずれか一項に記載の化合物、または条項２５Ａに記載の医薬組成物の有効量を前記患者に投与することを含む、方法。

３０Ａ．前記がんは、乳がん、卵巣がん、非小細胞肺がん、膵がんおよび膀胱がんからなる群から選択される、条項２９Ａに記載の方法。

ゲムシタビンは、小細胞肺がん、膀胱がん、膵がんおよび乳がんなどの広範囲の固形腫瘍に対して作用する第一選択の化学療法薬である。ゲムシタビンは、ヌクレオシド輸送体（ＮＴ）による細胞膜の通過を促進する化合物を「偽装する」ヌクレオチド様構造体を有する。ＮＴは、細胞膜を通過してヌクレオシドを輸送する膜タンパク質の群である。ゲムシタビンが細胞に入ると、一連のリン酸化を受け活性化し；ゲムシタビンは、デオキシシチジンキナーゼ（ｄＣＫ）によりリン酸化されてその一リン酸化物（ｄＦｄＣＭＰ）を産生し、次いで、ピリミジンキナーゼによりその活性二リン酸および三リン酸誘導体であるｄＦｄＣＤＰおよびｄＦｄＣＴＰに再度リン酸化される。

ゲムシタビンがその細胞傷害性を発現する１つの経路は、デオキシシチジン三リン酸（ｄＣＴＰ）のＤＮＡへの組込みを競合的に阻害することによってその二リン酸体（ｄＦｄＣＤＦ）を介するものであり、その結果、ＤＮＡ合成が妨害され、その後、細胞アポトーシスに至る（図１、経路Ｂ）。ゲムシタビンがその細胞傷害性を発現するもう１つの経路は、その活性型であるｄＦｄＣＤＰであり、ヌクレオシド三リン酸の生成を可能とするＤＮＡ合成の酵素であるリボヌクレオシド二リン酸還元酵素を阻害する。これは、細胞ｄＣＴＰの著しい減少およびｄＣＴＰ／ｄＦｄＣＴＰ比においてｄＦｄＣＴＰが多い方向への変化をもたらす。あるいは、ゲムシタビン不活性化はＣＤＡにより触媒され、ゲムシタビンは、ゲムシタビンの４－（Ｎ）位の脱アミノ化によりその不活性代謝物ｄＦｄＵに転換される（図１、経路Ａ）。

図１．ゲムシタビンが脱アミノ化した場合（Ａ）と、ＤＮＡに取り込まれた場合（Ｂ）の経路。

ＣＤＡによるその脱アミノ化が原因によるゲムシタビンの不活性化を克服し、細胞傷害性を増大するために、本発明者らは、革新的なアプローチを開発した。より詳細には、主目的は、ゲムシタビンの４－（Ｎ）基をアルキル化またはアシル化から保護し、これをカルバメートもしくはカルボネート結合またはアミドもしくはホスホロアミド酸結合に転換することであった。ゲムシタビンのこれらのプロドラッグは、腫瘍細胞酸性ｐＨ条件下で加水分解され、結果として天然ゲムシタビンが放出される。したがって、本発明者らのストラテジーは、ゲムシタビン特性を保存し、カルバメート結合またはアミドもしくはホスホロアミド酸結合が正常細胞に対する細胞傷害性を低下させるので高用量の必要性を軽減することである。加えて、ｄＦｄＵ変換の割合を減少させることである。カルバメート結合およびホスホロアミド酸結合はｐＨ不安定であり痕跡を残さず、さらに、これらはアミ
ド結合より容易に加水分解されてＣＯ_２を放出する。

一連の４－（Ｎ）－ゲムシタビンカルバメートまたはリン酸誘導体は、クロロホルメートストラテジーに従った新規合成方法に基づいて開発された。新規合成方法はワンポットで行うことができ；これは迅速的、かつ、ゲムシタビンの４－（Ｎ）位に選択的である。新規合成方法は、中間体を単離しないで一段階で行うことができる。加えて、ゲムシタビンプロドラッグ合成のための定量的かつ定性的方法であり、低コストおよび精製の必要がなく容易である。ワンポット合成方法は高収率であり、多くの応用と共に環境に優しい化学反応でもある。例えば、ワンポット合成方法は、ゲムシタビン分子の他の領域を保護する必要なくさらに誘導体化することができるいくつかの誘導体へのアクセスを提供する。

本明細書に記載されている新規合成方法により、遊離３’－および／もしくは５’－ＯＨ基を有するか、または置換３’－および／もしくは５’－ＯＨ基を有する新規４－（Ｎ）置換ゲムシタビン誘導体を提供する。３’－および／または５’－ＯＨ基の典型的置換基は、アシル基、例えば、アセチル基などのＣ_２～２６アシル基である。遊離３’－および／または５’－ＯＨ基は、公知の手順、例えば、ＯＨ反応性誘導体化剤、例えば、アシル酸無水物もしくはアシルハロゲン化物または置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６ハロアルキル、例えば、クロロアルキル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ベンジル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルケニル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルキニル、１つ以上の置換もしくは非置換ベンジル基で置換されているＣ_１～Ｃ_２６アルキル、１つ以上の置換もしくは非置換トリアゾール基で置換されているＣ_１～Ｃ_２６アルキルまたはその薬剤的に許容可能な塩のいずれかとの反応による置換基に転換され得る。

本開示の特定の態様では、新規４－（Ｎ）置換ゲムシタビン誘導体は、４（Ｎ）位におけるＨ原子と反応することができる反応性基を有する４－（Ｎ）位の置換基を有する。例えば、反応性基は、クロロ、ブロモまたはヨード基であってよい。この手段によって、分子内反応が起こり得、４－（Ｎ）位において環式置換基を得る。

本開示の特定の態様では、新規４－（Ｎ）置換ゲムシタビン誘導体は、相補的クリック反応性基とクリック反応することができる反応性基を有する４－（Ｎ）位の置換基を有する。例えば、反応性基は、相補的アルキン基、ホスフィン（ｐｈｏｓｐｉｎｅ）またはホスフィットと反応することができるアジド（Ｎ_３）基であってもよく（シュタウディンガーライゲーション）、反応性基は、相補的アジド基またはチオールと反応することができるアルキン基であってもよい（チオリン化学）。

本開示の特定の態様では、新規４－（Ｎ）置換ゲムシタビン誘導体は、アルキンおよびアジド基間のクリック反応により生成されたトリアゾール環を含む４－（Ｎ）位の置換基を有する。

本発明の実施形態を、附属の図面を参照して説明する：

ゲムシタビンが脱アミノ化した場合（Ａ）と、ＤＮＡに取り込まれた場合（Ｂ）の経路。 光開裂性ゲムシタビン誘導体の応用。 リン酸化ゲムシタビン誘導体の想定し得る作用機序。 アルキンおよびクマリンアジドを有するゲムシタビン誘導体間のクリック反応。 合成化合物の蛍光スペクトル。 照射中の誘導体７の吸収スペクトルの時間経過。下向き矢印は誘導体７に属するピークを示し、上向き矢印は光分解中に生じたピークを示す。 メタノール中のゲムシタビンＵＶスペクトル。 ＨｅＬａ細胞内の誘導体１１の共焦点顕微鏡実験の結果。 ＨｅＬａ細胞内の誘導体１２の共焦点顕微鏡実験の結果。 ４つの異なる細胞株における４－（Ｎ）－アシル誘導体のＩＣ_５０値。 ４つの異なる細胞株における、ジピリダモールの存在下の４－（Ｎ）－アシル誘導体のＩＣ_５０の比率（ジピリダモールの非存在下対比）。 ４つの異なる細胞株におけるアセチル化４－（Ｎ）－アシル誘導体のＩＣ_５０値。 ４つの異なる細胞株における、ジピリダモールの存在下のアセチル化４－（Ｎ）－アシル誘導体のＩＣ_５０の比率（ジピリダモールの非存在下対比）。 １００μＭゲムシタビン誘導体で処理したＴ－２４細胞（５０００細胞／ウェル）の２４時間培養後の細胞生存率（％）をＭＴＴアッセイで測定したプロット。 １００μＭゲムシタビン誘導体で処理したＴ－２４細胞（５０００細胞／ウェル）の４８時間培養後の細胞生存率（％）をＭＴＴアッセイで測定したプロット。 １００μＭゲムシタビン誘導体で処理したＴ－２４細胞（１００００細胞／ウェル）の４８時間培養後の細胞生存率（％）をＭＴＴアッセイで測定したプロット。 Ｔ－２４細胞株における異なる濃度での最も効果的なゲムシタビン誘導体の細胞傷害性。 ３７℃のヒト血漿中における２４時間インキュベーション後のエチル－（４－Ｎ－ゲムシタビン）カルバメート（誘導体１）のｉｎ ｖｉｔｒｏ安定性。 エチル－（４－Ｎ－ゲムシタビン）カルバメート（誘導体１）の検量線。

以下の説明および実施例は、本開示の様々な実施形態を詳細に例証する。当業者は、その範囲により包含される本開示の多くの変化形および修正があると認識するだろう。したがって、開示された実施形態の説明は本開示の範囲を限定するものと見做されるべきでない。

定義
特に定義されない限り、本明細書で使用されている全ての技術用語および科学用語は当業者が共通に理解するのと同じ意味を有する。本明細書で参照されている全ての特許、出願、公開された出願および他の出版物は、特に指定されない限り、それらの全文を参照することにより本明細書に組み入れられるものとする。本明細書中の用語に対する複数の定義がある場合、特に指定されない限り、本章のものが優先する。

「ゲムシタビン」は、式Ｉを有する化合物２’，２’－ジフルオロ－２’－デオキシシチジンを表す。

本明細書において、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２、Ｒ_１３、Ｒ_１４、Ｒ_２０、Ｒ_２１、Ｒ_２０１およびＲ_２０２などの任意の「Ｒ」基は、特に限定されないが、指定された原子と結合することができる置換基である。Ｒ基は、置換されていてもよく、非置換であってもよい。２つの「Ｒ」基が「一緒になって」と記載されている場合、Ｒ基およびこれらが結合する原子はシクロアルキル、シクロアルキニル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリールまたは複素環を形成することができる。例えば、限定されないが、ＮＲ^ａＲ^ｂ基のＲ^ａおよびＲ^ｂが「一緒になって」と示されている場合、これらは相互に共有結合して環：

を形成することを意味する。
加えて、別の形式として、２つの「Ｒ」基が，これらが結合する原子と「一緒になって」環を形成すると記載されている場合、Ｒ基は、前に定義されている変数または置換基に限定されない。

本明細書において、「アルキル」は、全飽和（二重結合も三重結合もない）炭化水素基を含む直鎖または分岐鎖炭化水素を表す。アルキル基は、１～２６個の炭素原子を有し得る（本明細書では常に、「１～２６」などの数値の範囲は所与の範囲の各整数を表す；例えば、「１～２６個の炭素原子」は、アルキル基が１個の炭素原子、２個の炭素原子、３個の炭素原子、４個の炭素原子、５個の炭素原子、６個の炭素原子、７個の炭素原子、８個の炭素原子、９個の炭素原子、１０個の炭素原子、１１個の炭素原子、１２個の炭素原子、１３個の炭素原子、１４個の炭素原子、１５個の炭素原子、１６個の炭素原子、１７個の炭素原子、１８個の炭素原子、１９個の炭素原子、２０個の炭素原子、２１個の炭素原子、２２個の炭素原子、２３個の炭素原子、２４個の炭素原子、２５個の炭素原子または２６個の炭素原子からなり得ることを意味する）。アルキル基は、１～１０個の炭素原子を有する中程度の大きさのアルキルであってもよい。アルキル基は、１～６個の炭素原子を有する低級アルキルであってもよい。化合物のアルキル基は、「Ｃ_１～Ｃ_６アルキル」または同様の呼称で呼んでもよい。一例として、「Ｃ_１～Ｃ_６アルキル」は、アルキル鎖中に１～６個の炭素原子があることを示し、すなわち、アルキル鎖は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、およびｔ－ブチル、ペンチル（直鎖および分岐鎖）ならびにヘキシル（直鎖および分岐鎖）から選択される。典型的なアルキル基としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、
イソブチル、第三級ブチル、ペンチル（直鎖および分岐鎖）およびヘキシル（直鎖および分岐鎖）が挙げられるが、これらに限定されない。アルキル基は、一置換もしくは多置換または非置換であってよい。典型的置換基は、－ＯＨ、－Ｏ－Ｃ_１～６（任意に、ハロ、例えば、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒまたは－Ｉ）アルキル、－ＳＨ、－Ｓ－Ｃ_１～６アルキル、－Ｎ_３、－ＮＯ_２、－ハロ（例えば、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒまたは－Ｉ）、－ＣＯＯＨ、および／または－ＣＯＯＲ_２（式中、Ｒ_２は置換または非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル）から選択され得る。

本明細書において、「ハロアルキル」、例えば、「クロロアルキル」は、全飽和（二重結合も三重結合もない）炭化水素基および少なくとも１個のハロゲン原子、例えば、「クロロアルキル」の場合、塩素原子（任意に、１個、２個、３個、４個、５個もしくは６個、またはそれ以上のハロ原子、例えば、塩素原子）を含む直鎖または分岐鎖炭化水素鎖を表す。用語「ハロアルキル」は、フルオロアルキル、クロロアルキル、ブロモアルキルおよびヨードアルキルを包含する。ハロアルキル基、例えば、クロロアルキルは、１～２６個の炭素原子を有し得る（本明細書では常に、「１～２６」などの数値の範囲は所与の範囲の各整数を表す；例えば、「１～２６個の炭素原子」は、アルキル基が１個の炭素原子、２個の炭素原子、３個の炭素原子、４個の炭素原子、５個の炭素原子、６個の炭素原子、７個の炭素原子、８個の炭素原子、９個の炭素原子、１０個の炭素原子、１１個の炭素原子、１２個の炭素原子、１３個の炭素原子、１４個の炭素原子、１５個の炭素原子、１６個の炭素原子、１７個の炭素原子、１８個の炭素原子、１９個の炭素原子、２０個の炭素原子、２１個の炭素原子、２２個の炭素原子、２３個の炭素原子、２４個の炭素原子、２５個の炭素原子または２６個の炭素原子からなり得ることを意味する）。クロロアルキル基は、１～１０個の炭素原子を有する中程度の大きさのクロロアルキルであってもよい。クロロアルキル基は、１～６個の炭素原子を有する低級クロロアルキルであってもよい。化合物のクロロアルキル基は、「Ｃ_１～Ｃ_６クロロアルキル」または同様の呼称で呼んでもよい。一例として、「Ｃ_１～Ｃ_６クロロアルキル」は、アルキル鎖中に１～６個の炭素原子があることを示し、すなわち、アルキル鎖は、少なくとも１つの塩素原子を有する、クロロメチル、クロロエチル、クロロプロピル、クロロイソプロピル、クロロ－ｎ－ブチル、クロロイソブチル、クロロ－ｓｅｃ－ブチル、およびクロロ－ｔ－ブチル、クロロペンチル（直鎖および分岐鎖）ならびにクロロヘキシル（直鎖および分岐鎖）から選択される。典型的なクロロアルキル基としては、クロロメチル、クロロエチル、クロロプロピル、クロロイソプロピル、クロロブチル、クロロイソブチル、クロロ第三級ブチル、クロロペンチル（直鎖および分岐鎖）およびクロロヘキシル（直鎖および分岐鎖）が挙げられるが、これらに限定されない。同様に、それぞれのフルオロアルキル、クロロアルキル、ブロモアルキルまたはヨードアルキル基は、ハロアルキルのこの定義内に含まれる。ハロアルキル基、例えば、クロロアルキルは、一置換もしくは多置換または非置換であってよい。典型的置換基は、－ＯＨ、－Ｏ－Ｃ_１～６（任意に、ハロ、例えば、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒまたは－Ｉ）アルキル、－ＳＨ、－Ｓ－Ｃ_１～６アルキル、－Ｎ_３、－ＮＯ_２、－ハロ（例えば、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒまたは－Ｉ）、－ＣＯＯＨ、および／または－ＣＯＯＲ_２（式中、Ｒ_２は置換または非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル）から選択され得る。

本明細書において、「シクロアルキル」は、完全飽和（二重結合も三重結合もない）単環式または多環式炭化水素環系を表す。２つ以上の環からなる場合、環は、縮合様式に結合してもよい。シクロアルキル基は、環中に３～１０個の原子または環中に３～８個の原子を含むことができる。シクロアルキル基は、非置換であってもよく、置換されていてもよい。典型的シクロアルキル基としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルおよびシクロオクチルが挙げられるが、これらに限定されない。典型的置換基は、－ＯＨ、－Ｏ－Ｃ_１～６（任意に、ハロ、例えば、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒまたは－Ｉ）アルキル、－ＳＨ、－Ｓ－Ｃ_１～６アルキル、－Ｎ_３、－ＮＯ_２、－ハロ（例えば、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒまたは－Ｉ）、－ＣＯＯＨ、および／また
は－ＣＯＯＲ_２（式中、Ｒ_２は置換または非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル）から選択され得る。

本明細書において、「アリール」は、全環にわたって全局在化π電子系を有する炭素環式（全炭素）単環式または多環式芳香族環系（２つの炭素環式環が化学結合を共有する縮合環系を含む）を表す。アリール基中の炭素原子数は様々である。例えば、アリール基は、Ｃ_６～Ｃ_１４アリール基、Ｃ_６～Ｃ_１０アリール基、またはＣ_６アリール基であり得る。アリール基の例としては、ベンゼン、ナフタレンおよびアズレンが挙げられるが、これらに限定されない。アリール基は、一置換もしくは多置換または非置換であってよい。典型的置換基は、－ＯＨ、－Ｏ－Ｃ_１～６（任意に、ハロ、例えば、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒまたは－Ｉ）アルキル、－ＳＨ、－Ｓ－Ｃ_１～６アルキル、－Ｎ_３、－ＮＯ_２、－ハロ（例えば、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒまたは－Ｉ）、－ＣＯＯＨ、および／または－ＣＯＯＲ_２（式中、Ｒ_２は置換または非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル）から選択され得る。

本明細書において、本明細書で使用される「アルカノイル」は、「アルキル」基で置換されている「カルボニル」を表し、「アルカノイル」基は「カルボニル」基の炭素により親分子と共有結合する。

本明細書において、本明細書で使用される「シクロアルカノイル」は、「アルキル」基で置換されている「カルボニル」を表し、「シクロアルカノイル」基は「カルボニル」基の炭素により親分子と共有結合する。

本明細書において、本明細書で使用される「アルケノイル」は、「アルケニル」基で置換されている「カルボニル」を表し、「アルケノイル」基は「カルボニル」基の炭素により親分子と共有結合する。

本明細書において、本明細書で使用される「アルキノイル」は、「アルキニル」基で置換されている「カルボニル」を表し、「アルキノイル」基は「カルボニル」基の炭素により親分子と共有結合する。

本明細書において、「アルケニル」は、１つ以上の二重結合を含む直鎖または分岐鎖炭化水素鎖を表す。アルケニル基は、本定義が数値範囲を指定しない用語「アルケニル」である場合も包含するが、２～２０個の炭素原子を有してよい。アルケニル基は、２～９個の炭素原子を有する中程度の大きさのアルケニルであってもよい。アルケニル基は、２～４個の炭素原子を有する低級アルケニルであってもよい。アルケニル基は、「Ｃ_２～４アルケニル」または同様の呼称で呼んでもよい。ほんの一例として、「Ｃ_２～４アルケニル」は、アルケニル鎖中に２～４個の炭素原子があることを示し、すなわち、アルケニル鎖は、エテニル、プロペン－１－イル、プロペン－２－イル、プロペン－３－イル、ブテン－１－イル、ブテン－２－イル、ブテン－３－イル、ブテン－４－イル、１－メチルプロペン－１－イル、２－メチルプロペン－１－イル、１－エチルエテン－１－イル、２－メチルプロペン－３－イル、ブタ－１，３－ジエニル、ブタ－１，２－ジエニル、およびブタ－１，２－ジエン－４－イルからなる群から選択される。典型的アルケニル基としては、エテニル、プロペニル、ブテニル、ペンテニル、およびヘキセニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。アルケニル基は、一置換もしくは多置換または非置換であってよい。典型的置換基は、－ＯＨ、－Ｏ－Ｃ_１～６（任意に、ハロ、例えば、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒまたは－Ｉ）アルキル、－ＳＨ、－Ｓ－Ｃ_１～６アルキル、－Ｎ_３、－ＮＯ_２、－ハロ（例えば、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒまたは－Ｉ）、－ＣＯＯＨ、および／または－ＣＯＯＲ_２（式中、Ｒ_２は置換または非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル）から選択され得る。

本明細書において、「アルキニル」は、１つ以上の三重結合を含む直鎖または分岐鎖炭
化水素鎖を表す。アルキニル基は、本定義が数値範囲を指定しない用語「アルキニル」である場合も包含するが、２～２０個の炭素原子を有してよい。アルキニル基は、２～９個の炭素原子を有する中程度の大きさのアルキニルであってもよい。アルキニル基は、２～４個の炭素原子を有する低級アルキニルであってもよい。アルキニル基は、「Ｃ_２～４アルキニル」または同様の呼称で呼んでもよい。一例として、「Ｃ_２～４アルキニル」は、アルキニル鎖中に２～４個の炭素原子があることを示し、すなわち、アルキニル鎖は、エチニル、プロピン－１－イル、プロピン－２－イル、ブチン－１－イル、ブチン－３－イル、ブチン－４－イル、および２－ブチニルからなる群から選択される。典型的アルキニル基としては、エチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチニル、およびヘキシニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。アルキニル基は、一置換もしくは多置換または非置換であってよい。典型的置換基は、－ＯＨ、－Ｏ－Ｃ_１～６（任意に、ハロ、例えば、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒまたは－Ｉ）アルキル、－ＳＨ、－Ｓ－Ｃ_１～６アルキル、－Ｎ_３、－ＮＯ_２、－ハロ（例えば、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒまたは－Ｉ）、－ＣＯＯＨ、および／または－ＣＯＯＲ_２（式中、Ｒ_２は置換または非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル）から選択され得る。

本明細書において、「ピラノースサッカリド」は、５個の炭素原子および１個の酸素原子からなる６員環を有するサッカリドを表す。環外の他の炭素があってもよい。ピラノースサッカリドの１つの非限定的例は、α－Ｄ－グルコピラノース：

である。
ピラノースサッカリド基は、一置換もしくは多置換または非置換であってよい。典型的置換基は、－ＯＨ、－Ｏ－Ｃ_１～６（任意に、ハロ、例えば、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒまたは－Ｉ）アルキル、－ＳＨ、－Ｓ－Ｃ_１～６アルキル、－Ｎ_３、－ＮＯ_２、－ハロ（例えば、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒまたは－Ｉ）、－ＣＯＯＨ、および／または－ＣＯＯＲ_２（式中、Ｒ_２は置換または非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル）から選択され得る。

本明細書において、「フラノースサッカリド」は、４個の炭素原子および１個の酸素原子からなる５員環を有するサッカリドを表す。環外の他の炭素があってもよい。フラノースサッカリドの１つの非限定的例は、β－Ｄ－フルクトフラノース：

である。
フラノースサッカリド基は、一置換もしくは多置換または非置換であってよい。典型的置換基は、－ＯＨ、－Ｏ－Ｃ_１～６（任意に、ハロ、例えば、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒまたは－Ｉ）アルキル、－ＳＨ、－Ｓ－Ｃ_１～６アルキル、－Ｎ_３、－ＮＯ_２、－ハロ（例えば、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒまたは－Ｉ）、－ＣＯＯＨ、および／または－ＣＯＯＲ_２（式中、Ｒ_２は置換または非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル）から選択され得る。

用語「薬剤的に許容可能な塩」は、投与される生物に対する著しい刺激を引き起こさず、生物活性および化合物特性を抑制しない化合物の塩を表す。いくつかの実施形態では、塩は、化合物の酸付加塩である。医薬塩は、化合物をハロゲン化水素酸（例えば、塩酸または臭化水素酸）、硫酸、硝酸およびリン酸などの無機酸と反応させることにより得ることができる。医薬塩は、化合物を脂肪族もしくは芳香族カルボン酸またはスルホン酸、例えば、ギ酸、酢酸、コハク酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、ニコチン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、サリチル酸またはナフタレンスルホン酸などの有機酸と反応させることによっても得ることができる。医薬塩は、化合物を塩基と反応させてアンモニウム塩、ナトリウム塩またはカリウム塩などのアルカリ金属塩、カルシウム塩またはマグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ－メチル－Ｄ－グルカミン、トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミン、Ｃ_１～Ｃ_７アルキルアミン、シクロヘキシルアミン、トリエタノールアミン、エチレンジアミンなどの有機塩基の塩、およびアルギニンおよびリジンなどのアミノ酸との塩を生成することによって得ることができる。

１つ以上のキラル中心を有する本明細書に記載されている任意の化合物において、絶対立体化学が明示的に示されていない場合、各中心は独立してＲ－配置もしくはＳ配置またはその混合物であってよいと理解される。したがって、本明細書で提供されている化合物は、エナンチオマーのみであってよく、エナンチオマーがより多くてよく、ラセミ混合物であってよく、ジアステレオマーのみであってよく、ジアステレオマーがより多くてよく、または立体異性体混合物であってよい。加えて、ＥまたはＺと定義することができる幾何異性体を生じる１つ以上の二重結合を有する本明細書に記載されている任意の化合物において、各二重結合は独立してそのＥまたはＺ混合物であってよい。

本明細書に開示されている化合物が少なくとも１つのキラル中心を有する場合、個々のエナンチオマーおよびジアステレオマーまたはラセミ体を含むかかる異性体の混合物として存在し得る。個々の異性体の分離または個々の異性体の選択的合成を、当業者に周知の様々な方法の応用によって行う。特に指定されない限り、全てのかかる異性体およびその混合物は、本明細書に開示されている化合物の範囲に含まれる。さらに、本明細書に開示されている化合物は、１つ以上の結晶または非晶形で存在し得る。特に指定されない限り、全てのかかる形態は、任意の多形相を含む本明細書に開示されている化合物の範囲に含まれる。加えて、本明細書に開示されている化合物のいくつかは、水と（すなわち、水和物）または一般的有機溶媒の溶媒和物を形成し得る。特に指定されない限り、かかる溶媒和物は、本明細書に開示されている化合物の範囲に含まれる。

本明細書に開示されている化合物が無充填結合価を有する場合、結合価は水素またはその同位体、例えば、水素－１（軽水素）および水素－２（重水素）で充填されるものと理解されるべきである。

これは、本明細書に記載されている化合物が、同位体的に標識することができると理解される。重水素などの同位体による置換は、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏ半減期の延長または投与必要量の減少などのより大きな代謝安定性から得られる特定の治療上の利点を提供し得る。化合物構造中に示されている各化学元素としては、前記元素のいずれかの同位体を含み得る。例えば、化合物構造中、水素原子は明示的に開示されているか、または化合物
中に存在するものと理解され得る。水素原子が存在し得る化合物の任意の位置において、水素原子は水素のいずれかの同位体であり得、これに限定されないが、水素－１（軽水素）および水素－２（重水素）が挙げられる。したがって、本明細書で化合物と言う場合は、文脈上他の意味に明白に指示されない限り、全ての可能性ある同位体の形態を包含する。

本明細書において、用語「プロドラッグ」は、薬剤的に許容でき、投与により所望の活性化合物、ここではゲムシタビンに転換する化合物を一般的に表す。いくつかの実施形態では、プロドラッグは、切断されて活性化合物を放出するまで治療的に不活性にすることができる。プロドラッグは、「有効」成分、この場合ゲムシタビン、およびゲムシタビンの４－（Ｎ）位と結合された部位（例えば、保護基）を含む。この部位のいくつかまたは全ての除去は、不活性体から活性薬にプロドラッグを転換する。化学または生物反応によって体内でこれが行われる。

ゲムシタビンの４－（Ｎ）位と結合された部分（例えば、保護基）に応じて、生成された少なくとも１つのプロドラッグは、中性（無電荷）、遊離酸、遊離塩基または薬剤的に許容可能なアニオンもしくはカチオン塩形態または陽性および陰性成分間のいずれかの比の塩混合物のいずれかであり得る。これらのアニオン塩形態としては、例えば、酢酸塩、ｌ－アスパラギン酸塩、ベシル酸塩、重炭酸塩、炭酸塩、ｄ－カンシラート、ｌ－カンシラート、クエン酸塩、エジシル酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、臭化水素酸塩／臭化物、塩化水素酸塩／塩化物、ｄ－乳酸塩、ｌ－乳酸塩、ｄ，ｌ－乳酸塩、ｄ，ｌ－リンゴ酸塩、ｌ－リンゴ酸塩、メシル酸塩、パモ酸塩、リン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、ｄ－酒石酸塩、ｌ－酒石酸塩、ｄ，ｌ－酒石酸塩、メソ酒石酸塩、安息香酸塩、グルセプト酸塩、ｄ－グルクロン酸塩、ヒベンゼート、イセチオン酸塩、マロン酸塩、メチル硫酸塩（ｍｅｔｈｙｌｓｕｆａｔｅ）、２－ナプシレート、ニコチン酸塩、硝酸塩、オロト酸塩、ステアリン酸塩、トシル酸塩、チオシアネート、アセフィリネート、アセチュレート、アミノサリチル酸塩、アスコルビン酸塩、ホウ酸塩、ブチル酸塩、樟脳酸塩、樟脳炭酸塩、デカン酸塩、ヘキサン酸塩、コール酸塩、シピオン酸塩、ジクロロ酢酸塩、エデンテート、エチル硫酸塩、フレート、フシジン酸塩、ガラクタル酸塩（ムチン酸塩）、ガラクツロン酸塩、没食子酸塩、ゲンチジン酸塩、グルタミン酸塩、グルタミン酸塩、グルタル酸塩、グリセロリン酸塩、ヘプタン酸塩（エナント酸塩）、ヒドロキシ安息香酸塩、馬尿酸塩、フェニルプロピオン酸塩、ヨウ化物、キシナホ酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリン酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メタンスルホン酸塩、ミリスチン酸塩、ナパジシル酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ピロリン酸塩、サリチル酸塩、サリチル硫酸塩、スルホサリチル酸塩、タンニン酸塩、テレフタル酸塩、チオサリチル酸塩、トリブロフェネート、吉草酸塩、バルプロ酸塩、アジピン酸塩、４‐アセトアミド安息香酸塩、カンシラート、オクタン酸塩、エストレート、エシレート、グリコール酸塩、チオシアネート、ウンデシレン酸塩を挙げることができるが、これらに限定されない。カチオン塩形態としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、亜鉛塩、アルミニウム塩、リチウム塩、塩素酸塩、リジニウム塩、アンモニウム塩、またはトロメタミンを挙げることができるが、これらに限定されない。

用語「薬剤的に許容可能な担体」としては、０．０１～０．１Ｍ、好ましくは０．０５Ｍリン酸緩衝液、または別の実施形態では、０．８％食塩水が挙げられるが、これらに限定されない。加えて、かかる薬剤的に許容可能な担体は、別の実施形態では、水性または非水性溶液、懸濁液、およびエマルジョンであってよい。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油などの植物油、およびオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルである。水性担体としては、水、アルコール性／水性溶液、食塩水および緩衝媒体を含むエマルジョンまたは懸濁液が挙げられる。いくつかの実
施形態では、担体は、ａ）１０％ＰＥＧ（ポリエチレングリコール）４００（ｖ／ｖ）＋３０％（ｖ／ｖ）ＨＰβＣＤ（ヒドロキシプロピルβ－シクロデキストリン）、５０％ｗ／ｖ＋６０％（ｖ／ｖ）滅菌注射用水またはｂ）Ｔｗｅｅｎ８０＋０．５％（ｗ／ｖ）カルボキシメチルセルロース水溶液であり得る。

用語「被験者」は、ヒトなどの哺乳類、ネコ科またはイヌ科などの飼育動物、ウシ科、ウマ科、ヤギ科、ヒツジ科、およびブタ科などの家畜、野生動物（野生または動物園にいるかにかかわらず）、マウス、ラット、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、ブタ、イヌ、およびネコなどの研究用動物、ニワトリ、および鳴鳥類などの鳥類を表すが、これらに限定されない。被験者は、例えば、青年などの小児、または成人であり得る。

用語「治療」は、哺乳類、特にヒトなどの被験者における病態の治療を表し、（ｉ）病態に罹りやすい可能性があるが、まだ該病態と診断されていない被験者において起こる病態の危険性を防止および／もしくは低減し、したがって、治療は該病態のための予防的治療と成ること；（ｉｉ）病態の発症速度を阻害および／または遅延すること、例えばその発症を停止すること；（ｉｉｉ）病態を緩和、例えば、病態の後退を引き起こすこと；または（ｉｖ）病態を媒介とした状態および／もしくは病態の症状を緩和することを含む。がん治療を前に受けた、および／または現在受けている、および／または受けようとしている被験者の治療が本明細書において考えられる。

用語「治療有効量」は、かかる治療を必要としている被験者に投与される場合、治療を達成するのに充分な本発明の化合物の量を表す。治療有効量は、治療しようとする被験者および病態、被験者の体重および年齢、病態の重症度、投与方法などに応じて変わり、当業者により容易に決定することができる。

次の理論に限定されないが、本明細書で提供されているプロドラッグ／複合体の実施形態のいくつかは、ｉｎ ｖｉｖｏでカルバメート結合の酵素加水分解を受け、次いで、これにより、ゲムシタビンおよびそれぞれその代謝物ならびに／またはその誘導体および／もしくは成分が提供される。ブロック部分、すなわち、本開示のカルバメート結合によるゲムシタビンと結合された部分は無毒性であるか、または所与の投与レベルにおいて非常に低毒性であり、好ましくは公知の薬剤、天然産物、代謝物、またはＧＲＡＳ（Ｇｅｎｅｒａｌｌｙ Ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ Ａｓ Ｓａｆｅ）化合物（例えば、防腐剤、染料、香料、その他）またはその無毒性模倣物もしくは誘導体である。

本明細書に記載されている方法および組合せとしては、結晶体（同じ元素組成の化合物の異なる結晶充填配置を含む多形としても知られている）、非晶相、塩、溶媒和物、および水和物を含むと理解される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されている化合物は、水、エタノールなど薬剤的に許容可能な溶媒と溶媒和された形態で存在する。他の実施形態では、本明細書に記載されている化合物は、溶媒和されていない形態で存在する。溶媒和物は、化学量論的な量または非化学量論的な量のいずれかの溶媒を含み、水、エタノールなど薬剤的に許容可能な溶媒を用いた結晶化の過程で生成され得る。溶媒が水の場合は水和物が生成され、溶媒がアルコールの場合はアルコラートが生成される。加えて、本明細書で提供されている化合物は、溶媒和された形態だけでなく、溶媒和されていない形態で存在することができる。概して、溶媒和された形態は、本明細書で提供されている化合物および方法の目的のため、溶媒和されていない形態と均等であると見做される。

値の範囲が提供される場合、上限値および下限値、ならびに範囲の上限値および下限値間の各途中の値は、実施形態内に包含される。

化合物
いくつかの実施形態では、ゲムシタビン誘導体を提供する。本明細書に開示されている特定のゲムシタビン誘導体を下表１に示す。表１に示されている各ゲムシタビン誘導体を示す番号は、本明細書において同じ化合物を表すために使用されている。

表１：ゲムシタビン誘導体

合成方法
Ａ．ゲムシタビン誘導体１～１１の製造のための一般的合成手順：窒素雰囲気下、ゲムシタビン（３０ｍｇ、０．１１４ｍｍｏｌ）を、還流下で１時間、１５ｍｌ酢酸エチル／
アセトニトリル溶液（２：１、ｖ／ｖ）と混合した（観察：ゲムシタビンは溶解し、反応混合物はほとんど透明になる）。クロロギ酸エチル（誘導体１を生成する場合）（５．４４０μｌ、０．０５７ｍｍｏｌ）を混合物に添加し、還流を継続した。反応の進行を、ＴＬＣ（ＤＣＭ／アセトニトリ／エタノール、５／５／０．５、ｖ／ｖ）を用いてモニターした。２時間後、反応混合物を遠心分離し、母液を高真空下で濃縮・乾燥して、１４．６ｍｇ（９８．３１％）の白色固体を得た。（クロロギ酸エチルでなく臭化第一級アルキルを用いて同様な反応を試みたが、反応は上手くいかなかった）。反応物に含まれるクロロギ酸エチルの量の範囲は、任意に０．３～０．７当量（モル基準）；任意に０．５当量（モル基準）であった。０．７モルを超えると、ゲムシタビン３’－および／または５’－ＯＨ基は部分的に保護され、０．３モル未満であると、ゲムシタビンの４－（Ｎ）位が充分に保護されなかった。

他の化合物１～１１については、下表２に示された条件を追加して、同じ一般的手順に従った（対応する塩化アシルまたは塩化ホスホリルのモル量は同じ）。化合物９からヨウ化トリメチルシリル（ＴＭＳＩ）を用いたエチル基の切断後、化合物１０を得ることができる

表２：ゲムシタビン誘導体１～１１の製造：

Ｂ．クリック反応の一般的手順（誘導体１１の生成）：プロパルギル－（４－Ｎ－ゲムシタビン）カルバメート（１０ｍｇ、０．０２８９８ｍｍｏｌ）、クマリンアジド（５．８８ｍｇ、０．０２８９８ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン１０％、ＣｕＩ １％およびＴＨＰＴＡ（０．１％）（触媒）を、室温で一夜、メタノール／Ｈ_２Ｏ（２：１ ｖ／ｖ）の溶液１ｍｌ中に溶解した。最終生成物のＴＬＣ分析を、アセトン／ＤＣＭ（ジクロロメタン）１：１ ｖ／ｖで行い、その結果、出発物質の全ては消費され、新しいスポットが生成したことを示した（３６５ｎｍにおける蛍光活性が発生した）。反応溶媒を、ロータリーエバポレーターを使用して蒸発乾固し、残渣をジエチルエーテル溶液で数回洗浄した。ＴＬＣ分析に基づいて、不純物をジエチルエーテル溶液で除去し、最終生成物は褐色固体（収率７０．５％）であった。

Ｃ．ゲムシタビン誘導体１２～２２の製造のためのアセチル化の一般的手順：窒素雰囲気下、ピリジン（２ｍｌ）中の本発明者らの出発クロロホルメート（１当量）およびＤＭＡＰ（４－（ジメチルアミノ）－ピリジン；触媒量）の溶液に、無水酢酸（ｎ当量、ｎ＝－ＯＨ基の数）を添加し、反応物を室温で３時間撹拌した。透明な溶液を蒸留で濃縮した。粗混合物をＥｔＯＡｃ中に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ_３および塩水で洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ₄で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮して所望の化合物を得た。反応物をＴＬＣアセトン／ＤＣＭ １：１を用いてモニターし、出発物質の変換を示す。

ゲムシタビン誘導体１２～２２については、下表３に示されている条件を追加して、同様の一般的手順を行った。

表３：ゲムシタビン誘導体１２～２２の製造：

中間体
本願における生物学的データがこれらの化合物の多くの生物活性を示す一方で、化合物のいくつかは、ゲムシタビンのさらに誘導体化された変形体、例えば、ゲムシタビン複合体の製造における有用な中間体となる。４－（Ｎ）保護ゲムシタビン誘導体の本開示のワンポット合成は、４－（Ｎ）ゲムシタビン複合体化合物への合成経路を提供する。

光ケージ化ゲムシタビン
光化学は、標的薬物送達を目的として、がん部位への選択的薬物放出を能動的に制御するメカニズムを提供する。化合物７は、光分解性結合ストラテジーを用いたゲムシタビンの照射放出から検出することができる。不透明とは、保護性用の光分解性基を用いた生物活性分子の一時的な不活性化を指す。光分解性結合基として、本発明者らは、ゲムシタビンの第一級アミンに選択的修飾したオルトニトロベンジル（ＣＮＢ）基を使用した。

３５０～５００ｎｍの範囲（または２光子励起を利用する場合は７００ｎｍより長波長）の特定光分解基波長における紫外線照射後、カプセル化分子の活性体を不可逆的に放出する。生物学的プロセスの時空制御および光誘発ペイロードの放出のために、光封入（Ｐｈｏｔｏ－ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ）はしばしばｉｎ ｖｉｔｒｏで行われた。この二重の薬物放出手法（細胞標的化および光制御放出）は、いずれかのメカニズム単独よりも抗がん薬の治療指数を高めるのに効果的であり得る。本発明者らは、この二重ストラテジーは、非侵襲的かつ時空間的な薬物活性化を要する一方で、治療応用のために大きな価値があると考えている。この二重薬物放出メカニズムを示すために、本発明者らは、光分解実験を行った（図２）。

図２．光開裂性ゲムシタビン誘導体（誘導体７）の応用。

酵素活性化および薬物放出
活性薬の選択的放出を起こすことができる別のメカニズムは、がん細胞内で過剰発現される特定の酵素の作用下であり、細胞内または細胞外のいずれかで検出される。プロドラッグ設計は、これらの酵素が特定の基質を認識する事実に基づいている。これらの酵素の代表的分類は、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）である。ＡＬＰは、メタロプロテイナーゼファミリーのメンバーであり、これはリン酸エステル加水分解反応を触媒する。ＡＬＰの増加は、様々な形態のがん、特に乳がん発生と直接的に関連づけられた。ＡＬＰの作用機序に基づいて、その親化合物と比較して、がん細胞内に放出される場合に水可溶性の増大を示すいくつかのプロドラッグを設計した（図３）。

図３．リン酸化ゲムシタビン誘導体の想定し得る作用機序（例えば、誘導体９および１０）。

図３に示されているメカニズムは、リン酸基（リン酸誘導体中の）がアルカリホスファターゼにより認識されるので、リン酸誘導体を利用する。本発明者らは、同じメカニズムを利用して、これに限定されないがニトロ還元酵素およびβ－ガラクトシダーゼを含む他の酵素への刺激として異なる化学種を導入することができる。酵素に加えて、これに限定されないが、それぞれ、チオールエーテルまたはエステル基もしくはホウ素エステルを用いてグルタチオンまたはＨ_２Ｏ_２を含む他の分子をトリガーとして利用することができる。

細胞イメージングおよび局所化
本発明者らは、クロロホルム酸エステルを用いたゲムシタビンのプロドラッグの開発に触発され、クマリンという蛍光体を備えたゲムシタビンのｉｎ ｖｉｖｏモニタリング用の分子を構築した。アルキン（表１の誘導体５）およびアジド（７－ヒドロキシ－３－アジドクマリン）をクリック化学反応で反応させ、化合物１１を製造した（図４）。

図４．Ａ．アルキンを有するゲムシタビン誘導体およびクマリンアジド間のクリック反応。Ｂ．合成化合物（誘導体１１）の蛍光スペクトル。

誘導体１１、および関連誘導体は、それ単独で、またはゲムシタビンおよび／もしくは他のゲムシタビン誘導体と組み合わせて使用することで、特定の蛍光スペクトルを有する化合物を提供する（図４Ｂ）。このスペクトルを、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏでモニターすることにより、ゲムシタビンおよびゲムシタビンプロドラッグの存在および／または作用を調べることができる。これは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ試験において特に有用である。クマリンは色素としての発光波長が短いため、ｉｎ ｖｉｖｏ用途では余り有用でない可能性がある。近赤外線が組織に深く浸透することで、ｉｎ ｖｉｖｏのイメージングに利用できるため、ｉｎ ｖｉｔｒｏ用途では近赤外線で発光する色素が好ましい。

特性決定データ
上記合成方法にしたがって製造された表１に示されているゲムシタビン誘導体について、以下の特性評価データを得た。

核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルを、重水素化ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ－ｄ_６）溶液中、Ｂｒｕｋｅｒ ＡＶ５００、ＡＶ４００およびＡＶ２５０ ＮＭＲ分光計（Ｂｒｕｋｅｒ，独国）に記録し、化学シフトは残渣溶媒ピークに対して決定した（ＤＭＳＯについてはδＨ２．５０）。次の略語を使用してシグナル多重度を示す：ｓ、一重線；ｄ、二重線；ｔ、三重線；ｑ、四重線；ｍ、多重線；ｄｄ、二重線の二重線。エレクトロスプレーイオン化質量分析（ＥＳＩ－ＭＳ）を、Ａｇｉｌｅｎｔ １１００シリーズＬＣ／ＭＳＤ装置およびＥＶＯＱ Ｅｌｉｔｅ ＥＲ三連四重極型質量分析計（Ｂｒｕｋｅｒ Ｄａｌｔｏｎｉｃｓ、独国）で行った。

誘導体１
誘導体１の^１Ｈ－ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６，２５℃）：δ＝１０．８６（ｓ，１Ｈ，７ＮＨ），８．２５（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ，６－Ｈ），７．１４（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ，５－Ｈ），６．３４（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，１Ｈ，３’－ＯＨ），６．１９（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ，１’－Ｈ），５．３２（ｔ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１Ｈ，５’－ＯＨ），４．２２（ｍ，１Ｈ，３’－Ｈ），４．２０（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，７．０Ｈｚ，２Ｈ，１０－Ｈ），２．９２（ｍ，１Ｈ，４’－Ｈ），２．８３（ｄ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ，１Ｈ，５’ａ－Ｈ），２．６８（ｍ，１Ｈ，５’ｂ－Ｈ）１．２６
（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ，１１－Ｈ）ｐｐｍ。
誘導体１の^１３Ｃ－ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６，２５℃）：δ＝１６４．３（Ｃ４），１５４．９９（Ｃ２），１５４．０４（Ｃ８），１４５．１９（Ｃ６），１２２．８６（Ｃ２’），９５．６３（Ｃ５），８４．８６（Ｃ１’），８１．７３（Ｃ４’），６９．１４（Ｃ３’），６２．２２（Ｃ１０），５９．６（Ｃ５’），１５．０１（Ｃ１１）ｐｐｍ。
ＭＳ（ＥＳＩ＋） ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ_１２Ｈ_１５Ｆ_２Ｎ_３Ｏ_６：計算値３３５．０９；実測値３３６．５１，［Ｍ＋Ｎａ］＋ Ｃ_１２Ｈ_１５Ｆ_２Ｎ_３Ｏ_６Ｎａ：計算値３５７．４９；実測値３５８．４９，［Ｍ＋Ｋ］＋ Ｃ_１２Ｈ_１５Ｆ_２Ｎ_３Ｏ_６Ｋ：計算値３７３．０９；実測値３７４．５１。

誘導体２
誘導体２の^１Ｈ－ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６，２５℃）：δ＝１０．８５（ｓ，１Ｈ，７－ＮＨ），８．２５（ｄ，Ｊ＝７．６５Ｈｚ，１Ｈ，６－Ｈ），７．１３（ｄ，Ｊ＝７．６５Ｈｚ，１Ｈ，５－Ｈ），６．３４（ｄ，Ｊ＝６．５０Ｈｚ，１Ｈ，３’－ＯＨ），６．１９（ｔ，Ｊ＝７．５０Ｈｚ，１Ｈ，１’－Ｈ），５．３２（ｔ，Ｊ＝５．５０Ｈｚ，１Ｈ，５’－ＯＨ），４．２２（ｍ，１Ｈ，３’－Ｈ），４．１５（ｔ，Ｊ＝６．６０Ｈｚ，２Ｈ，１０－Ｈ），２．９１（ｍ，１Ｈ，４’－Ｈ），２．８３（ｍ，１Ｈ，５’ａ－Ｈ），２．６８（ｍ，１Ｈ，５’ｂ－Ｈ）１．６２（ｍ，２Ｈ，１１－Ｈ），１．３９（ｍ，２Ｈ，１２－Ｈ），０．９４（ｔ，Ｊ＝７．３５Ｈｚ，３Ｈ，１３－Ｈ）ｐｐｍ。
誘導体２の^１３Ｃ－ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６，２５℃）：δ＝１６４．３８（Ｃ４），１５４．８８（Ｃ２），１５４．１８（Ｃ８），１４５．３３（Ｃ６），１２２．９（Ｃ２’），９５．５５（Ｃ５），８４．７６（Ｃ１’），８１．６５（Ｃ４’），６９．０９（Ｃ３’），６５．７５（Ｃ１０），５９．４８（Ｃ５’），３０．９４（Ｃ１１），１９．１４（Ｃ１２），１４．１６（Ｃ１３）ｐｐｍ。

誘導体３Ａ
誘導体３Ａの^１Ｈ－ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６，２５℃）：δ＝１１．０３（ｓ，１Ｈ，７－ＮＨ），８．２７（ｄ，Ｊ＝７．７０Ｈｚ，１Ｈ，６－Ｈ），７．１１（ｄ，Ｊ＝７．７０Ｈｚ，１Ｈ，５－Ｈ），６．２０（ｔ，Ｊ＝７．６０Ｈｚ，１Ｈ，１’－Ｈ），４．４３（ｔ，Ｊ＝５．３０Ｈｚ，２Ｈ，１０－Ｈ），４．２２（ｍ，１Ｈ，３’－Ｈ），２．９２（ｍ，１Ｈ，４’－Ｈ），２．８９（ｔ，Ｊ＝５．３０Ｈｚ，２Ｈ，１１－Ｈ），２．８４（ｍ，１Ｈ，５’ａ－Ｈ），２．６９（ｍ，１Ｈ，５’ｂ－Ｈ）ｐｐｍ。
誘導体３Ａの^１３Ｃ－ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６，２５℃）：δ＝１６４．３（Ｃ４），１５４．８２（Ｃ２），１５２．６８（Ｃ８），１４５．５（Ｃ６），１２９．８９（Ｃ２’），９５．６４（Ｃ５），８４．７９（Ｃ１’），８１．６８（Ｃ４’），６９．０３（Ｃ３’），６５．９３（Ｃ１０），５９．４５（Ｃ５’），４２．１６（Ｃ１１）ｐｐｍ。

誘導体３Ｂ
誘導体３Ｂの^１Ｈ－ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６，２５℃）：δ＝８．２９（ｄ，Ｊ＝７．７０Ｈｚ，１Ｈ，６－Ｈ），７．３６（ｄ，Ｊ＝７．７０Ｈｚ，１Ｈ，５－Ｈ），６．２２（ｔ，Ｊ＝７．６０Ｈｚ，１Ｈ，１’－Ｈ），４．４８（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ，１０－Ｈ），４．２２（ｍ，１Ｈ，３’－Ｈ），４．１０（ｍ，２Ｈ，１１－Ｈ），２．９２（ｍ，１Ｈ，４’－Ｈ），２．８４（ｍ，１Ｈ，５’ａ－Ｈ），２．６９（ｍ，１Ｈ，５’ｂＨ）ｐｐｍ。
誘導体３Ｂの^１３Ｃ－ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６，２５℃）：δ＝１６２．０（Ｃ４），１５５．０３（Ｃ８），１５４．８２（Ｃ２），１４４．４５（Ｃ６）
，１２２．８９（Ｃ２’），９５．６４（Ｃ５），８４．７９（Ｃ１’），８１．６８（Ｃ４’），６９．０３（Ｃ３’），６２．３７（Ｃ１０），５９．４５（Ｃ５’），４２．２０（Ｃ１１）ｐｐｍ。

誘導体４
誘導体４の^１Ｈ－ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６，２５℃）：δ＝１１．３７（ｓ，１Ｈ，７ＮＨ），８．２８（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ，６－Ｈ），７．０６（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ，５－Ｈ），６．３４（ｓ ｂｒｏａｄ，１Ｈ，３’－ＯＨ），６．１６（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ，１’－Ｈ），５．９４（ｓ，２Ｈ，１０－Ｈ），５．３２（ｂｒｏａｄ，１Ｈ，５’－ΟＨ），４．１９（ｍ，１Ｈ，３’－Ｈ），２．８９（ｍ，１Ｈ，４’－Ｈ），２．８１（ｄ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ，１Ｈ，５’ａ－Ｈ），２．６４（ｍ，１Ｈ，５’ｂ－Ｈ）ｐｐｍ。
誘導体４の^１３Ｃ－ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６，２５℃）：δ＝１６４．３（Ｃ４），１５４．８２（Ｃ２），１５２．６８（Ｃ８），１４６．１（Ｃ６），１２９．８９（Ｃ２’），９６（Ｃ５），８４．８（Ｃ１’），７１．８（Ｃ１０），６８．９（Ｃ３’），８１，９（Ｃ４’），５９，６（Ｃ５’）ｐｐｍ。

誘導体５
誘導体５の^１Ｈ－ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６，２５℃）：δ＝１１．１０（ｓ，１Ｈ，７－ＮＨ），８．２８（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ，６－Ｈ），７．１１（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ，５－Ｈ），６．２０（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ，１’－Ｈ），４．８３（ｄ，Ｊ＝２．３５Ｈｚ，２Ｈ，１０－Ｈ），４．２２（ｍ，１Ｈ，３’－Ｈ），２．９２（ｍ，１Ｈ，４’－Ｈ），２．８４（ｍ，１Ｈ，５’ａ－Ｈ），２．６９（ｍ，１Ｈ，５’ｂＨ）２．６５（ｔ，Ｊ＝２．３５Ｈｚ，１Ｈ，１２－Ｈ）ｐｐｍ。
誘導体５の^１３Ｃ－ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６，２５℃）：δ＝１６４．２０（Ｃ４），１５４．８１（Ｃ２），１５２．３１（Ｃ８），１４５．９５（Ｃ６），１２２．９３（Ｃ２’），９５．５３（Ｃ５），８４．８３（Ｃ１’），８１．６８（Ｃ４’），７９．１７（Ｃ１１），７８．９１（Ｃ１２），６９．０５（Ｃ３’），５９．４５（Ｃ５’）ｐｐｍ。

誘導体６
誘導体６の^１Ｈ－ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６，２５℃）：δ＝１０．８９（ｓ，１Ｈ，７－ＮＨ），８．２３（ｄ，Ｊ＝７．６５Ｈｚ，１Ｈ，６－Ｈ），７．８７（ｄ，Ｊ＝７．７５Ｈｚ，１Ｈ，１５－Ｈ），７．８１（ｄ，Ｊ＝７．７５Ｈｚ，１Ｈ，１８－Ｈ），７．７２（ｔ，Ｊ＝７．７５Ｈｚ，１Ｈ，１７－Ｈ），７．５２（ｔ，Ｊ＝７．７５Ｈｚ，１Ｈ，１６－Ｈ），７．０３（ｍ，１Ｈ，５－Ｈ），６．１９（ｔ，Ｊ＝７．５０Ｈｚ，１Ｈ，１’－Ｈ），４．３６（ｍ，２Ｈ，１０－Ｈ），４．２２（ｍ，１Ｈ，３’－Ｈ），２．９１（ｍ，１Ｈ，４’－Ｈ），２．８３（ｍ，１Ｈ，５’ａ－Ｈ），２．６８（ｍ，１Ｈ，５’ｂ－Ｈ）２．５４（ｍ，１Ｈ，１１－），１．３５（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ，１２－Ｈ）ｐｐｍ。
誘導体６の^１３Ｃ－ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６，２５℃）：δ＝１６４．１７（Ｃ４），１５４．７８（Ｃ２），１５２．８６（Ｃ８），１５０（Ｃ１８），１４５．３３（Ｃ６），１３７．３１（Ｃ１３），１３２．７１（Ｃ１５），１２９．７５（Ｃ１７），１２８．６１（Ｃ１６），１２４．４６（Ｃ１４），１２２．７４（Ｃ２’），９５．５３（Ｃ５），８４．８０（Ｃ１’），８１．６８（Ｃ４’），６９．４７（Ｃ１０），６９．０５（Ｃ３’），５９．４７（Ｃ５’），３２．６１（Ｃ１１），１８．４９（Ｃ１２）ｐｐｍ。

誘導体７
誘導体７の^１Ｈ－ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６，２５℃）：δ＝１１．３
０（ｓ，１Ｈ，７－ＮＨ），８．３０（ｄ，Ｊ＝７．５５Ｈｚ，１Ｈ，６－Ｈ），７．７８（ｓ，１Ｈ，１３－Ｈ），７．４４（ｓ，１Ｈ，１６－Ｈ），７．１７（ｄ，Ｊ＝７．５５Ｈｚ，１Ｈ，５－Ｈ），６．３５（ｄ，Ｊ＝６．３２Ｈｚ，１Ｈ，３’－ＯＨ），６．２１（ｔ，Ｊ＝７．５０Ｈｚ，１Ｈ，１’－Ｈ），５．５５（ｓ，２Ｈ，１０－Ｈ），５．３３（ｔ，Ｊ＝５Ｈｚ，１Ｈ，５’－ＯＨ），４．２３（ｍ，１Ｈ，３’－Ｈ），２．９９（ｓ，３Ｈ，１８－Ｈ），２．９３（ｍ，１Ｈ，４’－Ｈ），２．９２（ｓ，３Ｈ，１７－Ｈ），２．８４（ｍ，１Ｈ，５’ａ－Ｈ），２．６９（ｍ，１Ｈ，５’ｂ－Ｈ）ｐｐｍ。
誘導体７の^１３Ｃ－ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６，２５℃）：δ＝１６４．２６（Ｃ４），１５４．８（Ｃ２），１５４．５２（Ｃ１５），１５２．４２（Ｃ８），１４８．６４（Ｃ１４），１４５．５１（Ｃ６），１３９．８４（Ｃ１２），１２７．５２（Ｃ１１），１２２．９（Ｃ２’），１１１．０４（Ｃ１６），１０８．７８（Ｃ１３），９５．４２（Ｃ５），８４．７７（Ｃ１’），８１．６８（Ｃ４’），６９．０６（Ｃ３’），６４．５５（Ｃ１０），５９．４５（Ｃ５’），５７．１８（Ｃ１８），５６．７５（Ｃ１７）ｐｐｍ。

誘導体７（１０μＭ）およびゲムシタビン（５μＭ）のスペクトルを、室温においてＰｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｌａｍｂｄａ２５分光光度計を用いて記録した。サンプルをＨＰＬＣグレートのＭｅＯＨに溶解し、２４０分間３６６ｎｍのＵＶランプで照射した。結果を図５に示す。本発明者らは、２８０～２９０ｎｍおよび３２０～３３０ｎｍの範囲において吸収強度の減少があり、同時に２５０～２７０ｎｍに強度増加があることに注目した。理論に束縛されることを望まないが、この領域の増加は、ゲムシタビンの放出によるものと観察される。この理論は、ゲムシタビンに相当する吸収帯の増加によって支持される。比較として、ゲムシタビンのＵＶスペクトルを図６に示す。

図６．メタノール中のゲムシタビンＵＶスペクトル。

誘導体８
誘導体８の^１Ｈ－ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６，２５℃）：δ＝１０．８４（ｓ，１Ｈ，７－ＮＨ），８．２０（ｄ，Ｊ＝７．６５Ｈｚ，１Ｈ，６－Ｈ），７．０８（ｄ，Ｊ＝７．６５Ｈｚ，１Ｈ，５－Ｈ），６．２９（ｄ，Ｊ＝６．５０Ｈｚ，１Ｈ，３’－ＯＨ），６．１６（ｔ，Ｊ＝７．５４Ｈｚ，１Ｈ，１’－Ｈ），５．２７（ｔ，Ｊ＝５．３２Ｈｚ，１Ｈ，５’－ＯＨ），４．１８（ｍ，１Ｈ，３’－Ｈ），２．９０（ｄ，Ｊ＝６．６４Ｈｚ，２Ｈ，１０－Ｈ），２．８８（ｍ，１Ｈ，４’－Ｈ），２．８０（ｍ，１Ｈ，５’ａ－Ｈ），２．６５（ｍ，１Ｈ，５’ｂ－Ｈ）１．９０（ｍ，１Ｈ，１１－Ｈ），０．９０（ｄ，Ｊ＝６．６８Ｈｚ，６Ｈ，１２，１３－Ｈ）ｐｐｍ。

誘導体９
誘導体９の^１Ｈ－ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６，２５℃）：δ＝δ＝１１．８４（ｓ，１Ｈ，７－ＮＨ），８．２５（ｄ，Ｊ＝７．６８Ｈｚ，１Ｈ，６－Ｈ），７．３３（ｄ，Ｊ＝７．６８Ｈｚ，１Ｈ，５－Ｈ），６．３２（ｄ，Ｊ＝６．５２Ｈｚ，１Ｈ，３’－ＯＨ），６．１８（ｔ，Ｊ＝７．４６Ｈｚ，１Ｈ，１’－Ｈ），５．３０（ｔ，Ｊ＝５．４０Ｈｚ，１Ｈ，５’－ＯＨ），４．１９（ｍ，１Ｈ，３’－Ｈ），４．０６（ｍ，４Ｈ，１０，１３－Ｈ），２．９０（ｍ，１Ｈ，４’－Ｈ），２．８１（ｍ，１Ｈ，５’ａ－Ｈ），２．６６（ｍ，１Ｈ，５’ｂ－Ｈ），１．２４（ｔ，Ｊ＝１２．９１Ｈｚ，６Ｈ，１１，１４－Ｈ）。
誘導体９の質量：ＭＳ（ＥＳＩ＋） ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ^＋］ Ｃ_１３Ｈ_２０Ｆ_２Ｎ_３Ｏ_７Ｐ：計算値３９９．１ 実測値４００，［Ｍ＋Ｎａ^＋］ Ｃ_１３Ｈ_２０Ｆ_２Ｎ_３Ｏ_７ＰＮａ：計算値４２２．０８；実測値４２２．１，［Ｍ＋Ｋ^＋］ Ｃ_１３Ｈ_２０Ｆ_２Ｎ_３Ｏ_７ＰＫ：計算値４３８．０６ 実測値４３７．９。

誘導体１０
誘導体１０の^１Ｈ－ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６，２５℃）：δ＝８．７５（ｓ，１Ｈ，７－ＮＨ），８．１３（ｓ，２Ｈ，９，１０－Ｈ），７．９４（ｄ，Ｊ＝７．６３Ｈｚ，１Ｈ，５－Ｈ），６．３４（ｂｒｏａｄ，１Ｈ，３’－ＯＨ），６．１０（ｔ，Ｊ＝１５，１９Ｈｚ，１Ｈ，１’－Ｈ），５．９９（ｄ，Ｊ＝７．６６Ｈｚ，１Ｈ，６－Ｈ），４．１５（ｍ，１Ｈ，３’－Ｈ），２．９１（ｍ，１Ｈ，４’－Ｈ），２．８６（ｍ，１Ｈ，５’ａ－Ｈ），２．７７（ｍ，１Ｈ，５’ｂ－Ｈ）。

誘導体１１
誘導体１１の^１Ｈ－ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６，２５℃）：δ＝１１．０３（ｓ，１Ｈ，７－ＮＨ），８．６８（ｓ，１Ｈ，１２－Ｈ），８．６５（ｓ，１Ｈ，１９－Ｈ），８．２８（ｄ，Ｊ＝７．６０Ｈｚ，１Ｈ，６－Ｈ），７．７８（ｄ，Ｊ＝８．５０Ｈｚ，１Ｈ，２３－Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝７．６０Ｈｚ，１Ｈ，５－Ｈ），６．９４（ｄｄ，Ｊ＝８．５０，２．２０Ｈｚ，１Ｈ，２２－Ｈ），６．８８（ｄ，Ｊ＝２．２０Ｈｚ，１Ｈ，２０－Ｈ），６．３５（ｄ，Ｊ＝６．５０Ｈｚ，１Ｈ，３’－ＯＨ），６．１９（ｔ，Ｊ＝７．５０Ｈｚ，１Ｈ，１’－Ｈ），５．３９（ｓ，２Ｈ，１０－Ｈ），５．３４（ｔ，Ｊ＝５．５０Ｈｚ，５’－ＯＨ），４．２２（ｍ，１Ｈ，３’－Ｈ），２．９２（ｍ，１Ｈ，４’－Ｈ），２．８４（ｍ，１Ｈ，５’ａ－Ｈ），２．６９（ｍ，１Ｈ，５’ｂ－Ｈ）ｐｐｍ。
誘導体１１の^１３Ｃ－ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６，２５℃）：δ＝１６４．３０（Ｃ４），１６２．５８（Ｃ２’），１５６．７７（Ｃ１５），１５５．６１（Ｃ１７），１５４．７６（Ｃ２），１５２．７１（Ｃ８），１４５．５１（Ｃ６），１４２．６８（Ｃ１１），１３７．２９（Ｃ１９），１３１．７６（Ｃ２３），１２６．８５（Ｃ１２），１２０．１２（Ｃ１４），１１５．１（Ｃ２２），１１１．１７（Ｃ１８），１０２．９１（Ｃ２０），９５．６５（Ｃ５），８４．８１（Ｃ１’），８１．６９（Ｃ４’），６９．０７（Ｃ３’），５９．４９（Ｃ５’），５８．９１（Ｃ１０）ｐｐｍ。

図７．ＨｅＬａ細胞内の誘導体１１の共焦点顕微鏡実験の結果。図７は、誘導体１１がその高極性のせいで細胞に入らないことを示す。次いで、本発明者らは、誘導体１１をアセチル化してその親油性を増大した。アセチル化された形態で同じ実験を行った。結果を図８に示す。

誘導体１２
誘導体１２の^１Ｈ－ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６，２５℃）：δ＝１１．０７（ｓ，１Ｈ，７－ＮＨ），８．７５（ｓ，１Ｈ，１２－Ｈ），８．６７（ｓ，１Ｈ，１９－Ｈ），８．０９（ｄ，Ｊ＝７．７０Ｈｚ，１Ｈ，６－Ｈ），７．９９（ｄ，Ｊ＝８．５０Ｈｚ，１Ｈ，２３－Ｈ），７．３０（ｄ，Ｊ＝７．６０Ｈｚ，１Ｈ，５－Ｈ），７．３０（ｄ，Ｊ＝８．５５Ｈｚ，１Ｈ，２２－Ｈ），６．３２（ｔ，Ｊ＝８．５５Ｈｚ，１Ｈ，１’－Ｈ），５．４６（ｍ，１Ｈ，３’－Ｈ），５．２６（ｓ，２Ｈ，１０－Ｈ），３．４１（ｍ，１Ｈ，４’－Ｈ），３．４０（ｍ，１Ｈ，５’ａ－Ｈ），３．３５（ｍ，１Ｈ，５’ｂ－Ｈ），２．１６（ｓ，３Ｈ，１１’－Ｈ），２．１２（ｓ，３Ｈ，２６－Ｈ），２．０７（ｓ，３Ｈ，８’－Ｈ）ｐｐｍ。
誘導体１２の^１３Ｃ－ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６，２５℃）：δ＝１６３．３０（Ｃ４），１６３．５８（Ｃ２’），１５６．７７（Ｃ１５），１５５．６１（Ｃ１７），１５３．７６（Ｃ２），１５３．７１（Ｃ８），１３５．６（Ｃ１２），１２６．９（Ｃ１９），１４７．２（Ｃ６），１３１．５（Ｃ２３），１２０．７（Ｃ５），９７．１（Ｃ２２），８６．２（Ｃ１’），７１．６（Ｃ３’），５７．８（Ｃ１０），７６．７（Ｃ４’），６３．１（Ｃ５’），２１．１（Ｃ１１’），２５．２（Ｃ２６）
，２１．６（Ｃ８’）ｐｐｍ。

図８．ＨｅＬａ細胞内の誘導体１２の共焦点顕微鏡実験の結果。図８は、細胞内部の蛍光シグナルを示す。これは、誘導体１１のアセチル化により細胞に入る能力が増大し、同時に、アセチル基が切断されたことを意味する。理論に束縛されることを望まないが、脱アセチル化は、がん細胞内でより高レベルである（非がん細胞と比較して）ことが通常見られるエステラーゼ酵素によって行われた。本発明者らは、誘導体１２がセラグノスティック特性（治療と診断）を有すると考えている。フェノール性ヒドロキシル基のアセチル化による蛍光は、ＩＣＴ（内部電荷移動）メカニズムの妨害のせいでクエンチされる。エステラーゼ酵素による切断により、蛍光が回復することが共焦点実験により確認されている。

誘導体１３
誘導体１３の^１Ｈ－ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６，２５℃）：δ＝１０．８８（ｓ，１Ｈ，７－ＮＨ），８．０６（ｄ，Ｊ＝７．８４Ｈｚ，１Ｈ，６－Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝７．５１Ｈｚ，１Ｈ，５－Ｈ），６．３０（ｔ，Ｊ＝１６．１４Ｈｚ，１Ｈ，１’－Ｈ），５，４４（ｍ，１Ｈ，３’－Ｈ），３．４５（ｍ，１Ｈ，４’－Ｈ），３．３７（ｍ，１Ｈ，５’ａ－Ｈ），３．３４（ｍ，１Ｈ，５’ｂ－Ｈ），３．１６（ｑ，Ｊ＝２１．２Ｈｚ，２Ｈ，１０－Ｈ），２．１６（ｓ，３Ｈ，１１’），２．０５（ｓ，３Ｈ，８’），１．２３（ｓ，３Ｈ，１１－Ｈ）。
誘導体１３の^１３Ｃ－ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６，２５℃）：δ＝１６３．３（Ｃ４），１５３．９９（Ｃ２），１５３．０４（Ｃ８），１４５．１９（Ｃ２’），１４７．５（Ｃ６），９６．５（Ｃ５），８５．９（Ｃ１’），７１．６（Ｃ３’），７６．７（Ｃ４’），６２．９（Ｃ５’），６２．１２（Ｃ１０），２０．９（Ｃ１１’），２１．２５（Ｃ８’），１５（Ｃ１１）。
誘導体１３の質量スペクトル：ＭＳ（ＥＳＩ－） ｍ／ｚ：［Ｍ－Ｈ］－ Ｃ_１６Ｈ_１９Ｆ_２Ｎ_３Ｏ_８：計算値４１９．３４ 実測値４１８．１１，［Ｍ＋Ｃｌ－］ Ｃ_１６Ｈ_１９Ｆ_２Ｎ_３Ｏ_８Ｃｌ：計算値４５３．３０ 実測値４５２．０７。

誘導体１４
誘導体１４の^１Ｈ－ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６，２５℃）：δ＝１０．８９（ｓ，１Ｈ，７－ＮＨ），８．０５（ｄ，Ｊ＝７．７１Ｈｚ，１Ｈ，６－Ｈ），７．１４（ｄ，Ｊ＝７．３５Ｈｚ，１Ｈ，５－Ｈ），６．３０（ｔ，Ｊ＝１５．９６Ｈｚ，１Ｈ，１’－Ｈ），５．４５（ｍ，１Ｈ，３’－Ｈ），３．４３（ｍ，１Ｈ，４’－Ｈ），３．４０（ｍ，１Ｈ，５’ａ－Ｈ），３．３３（ｍ，１Ｈ，５’ｂ－Ｈ），３．１２（ｔ，Ｊ＝１３．２７Ｈｚ，２Ｈ，１０－Ｈ），２．１６（ｓ，３Ｈ，１１’－Ｈ），２．０６（ｓ，３Ｈ，８’－Ｈ），１．５９（ｍ，２Ｈ，１１－Ｈ），１．３５（ｍ，２Ｈ，１２－Ｈ），０．９（ｔ，Ｊ＝１３．３４Ｈｚ，３Ｈ，１３－Ｈ）。
誘導体１４の^１３Ｃ－ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６，２５℃）：δ＝１６３．３８（Ｃ４），１５３．８８（Ｃ２），１５３．１８（Ｃ８） １２３．９（Ｃ２’），１４６．５（Ｃ６），９５．６（Ｃ５），８５．８（Ｃ１’），７１．３（Ｃ３’），７６．２（Ｃ４’），６３．０（Ｃ５’），６５．６（Ｃ１０），２１．１（Ｃ１１’），２１．３（Ｃ８’），３０．９（Ｃ１１），１９．１４（Ｃ１２），１３．１９（Ｃ１３）。
誘導体１４の質量：ＭＳ（ＥＳＩ＋） ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ＋］ Ｃ_１８Ｈ_２３Ｆ_２Ｎ_３Ｏ_８：計算値４４７．３９ 実測値４４８．８，［Ｍ＋Ｎａ＋］ Ｃ_１８Ｈ_２３Ｆ_２Ｎ_３Ｏ_８Ｎａ：計算値４７０．３７ 実測値４７０．７，［Ｍ＋Ｋ＋］ Ｃ_１８Ｈ_２３Ｆ_２Ｎ_３Ｏ_８Ｋ：計算値４８６．３５ 実測値４８６．８。

誘導体１５
誘導体１５の^１Ｈ－ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６，２５℃）：δ＝１１．１４（ｓ，１Ｈ，７－ＮＨ），８．１４（ｄ，Ｊ＝７．３７Ｈｚ，１Ｈ，６－Ｈ），７．１８（ｄ，Ｊ＝７．５５Ｈｚ，１Ｈ，５－Ｈ），６．３８（ｔ，Ｊ＝１６．８Ｈｚ，１Ｈ，１’－Ｈ），５．５０（ｍ，１Ｈ，３’－Ｈ），３．４４（ｍ，１Ｈ，４’－Ｈ），３．４１（ｍ，１Ｈ，５’ａ－Ｈ），３．３６（ｍ，１Ｈ，５’ｂ－Ｈ），３．３９（ｍ，２Ｈ，１０－Ｈ），３．８５（ｔ，Ｊ＝１０．２５Ｈｚ，１１－Ｈ），２．１７（ｓ，３Ｈ，１１’－Ｈ），２．０８（ｓ，３Ｈ，８’－Ｈ）。
誘導体１５の^１３Ｃ－ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６，２５℃）：δ＝１６３．３（Ｃ４），１５３．８２（Ｃ２），１５３．６８（Ｃ８），１２９．８９（Ｃ２’１４６．５（Ｃ６），９６．３（Ｃ５），８５．９（Ｃ１’），７１（Ｃ３’），７７（Ｃ４’），６３．２（Ｃ５’），６６（Ｃ１０），４２．９（Ｃ１１），２０．９（Ｃ１１’），２１．４（Ｃ８’）。
誘導体１５の質量スペクトル：ＭＳ（ＥＳＩ－） ｍ／ｚ：［Ｍ－Ｈ－］ Ｃ_１６Ｈ_１８ＣｌＦ_２Ｎ_３Ｏ_８：計算値４５２．０８ 実測値４５２．０７，［Ｍ＋Ｃｌ－］ Ｃ_１６Ｈ_１８ＣｌＦ_２Ｎ_３Ｏ_８Ｃｌ：計算値４８８．０４ 実測値４８８．０４。

誘導体１６
誘導体１６の^１Ｈ－ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６，２５℃）：δ＝８．０９（ｄ，Ｊ＝７．９２Ｈｚ，１Ｈ，６－Ｈ），７．３８（ｄ，Ｊ＝７．６５Ｈｚ，１Ｈ，５－Ｈ），６．３５（ｔ，Ｊ＝１６．６７Ｈｚ，１Ｈ，１’－Ｈ），５．４４（ｍ，１Ｈ，３’），３．４５（ｍ，２Ｈ，１１－Ｈ），３．４１（ｍ，１Ｈ，４’－Ｈ），３．４０（ｍ，１Ｈ，５’ａ－Ｈ），３．３４（ｍ，１Ｈ，５’ｂ－Ｈ），３．０７（ｔ，Ｊ＝１５．０８Ｈｚ，２Ｈ，１０－Ｈ），２．１７（ｓ，３Ｈ，１１’－Ｈ），２．０７（ｓ，３Ｈ，８’－Ｈ）。
誘導体１６の^１３Ｃ－ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６，２５℃）：δ＝１６２．０（Ｃ４），１５５．０３（Ｃ８），１５３．８２（Ｃ２），１２３．８９（Ｃ２’） １４５．９（Ｃ６），９３．９（Ｃ５），８５．４（Ｃ１’），７１（Ｃ３’），６２．６（Ｃ１１），７６．４（Ｃ４’），６２．３（Ｃ５’），４３．１（Ｃ１０），２０．９（Ｃ１１’），２０．２（Ｃ８’）。
誘導体１６の質量：ＭＳ（ＥＳＩ＋） ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｎａ^＋］ Ｃ_１６Ｈ_１７Ｆ_２Ｎ_３Ｏ_８Ｎａ：計算値４４０．３ 実測値４４０．０８，［２Ｍ＋Ｎａ^＋］ ［２Ｃ_１６Ｈ_１７Ｆ_２Ｎ_３Ｏ_８］ Ｎａ：計算値８５７．６２ 実測値８５７．１８。

誘導体１７
誘導体１７の^１Ｈ－ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６，２５℃）：δ＝１１．４６（ｓ，１Ｈ，７ＮＨ），８．１３（ｄ，Ｊ＝７．６０Ｈｚ，１Ｈ，６－Ｈ），７．１２（ｄ，Ｊ＝７．４７Ｈｚ，１Ｈ，５－Ｈ），６．３２（ｔ，Ｊ＝１７．３６Ｈｚ，１Ｈ，１’－Ｈ），５，９６（ｓ，２Ｈ，１０－Ｈ），５．４４（ｍ，１Ｈ，３’Ｈ），３．４５（ｍ，１Ｈ，４’－Ｈ），３．４０（ｍ，１Ｈ，５’ａ－Ｈ），３．３６（ｍ，１Ｈ，５’ｂ－Ｈ），２．１７（ｓ，３Ｈ，１１’－Ｈ），２．０７（ｓ，３Ｈ，８’－Ｈ）ｐｐｍ。

誘導体１８
誘導体１８の^１Ｈ－ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６，２５℃）：δ＝１１．１２（ｓ，１Ｈ，７－ＮＨ），８．０８（ｄ，Ｊ＝７．６５Ｈｚ，１Ｈ，６－Ｈ），７．１２（ｄ，Ｊ＝７．２１Ｈｚ，１Ｈ，５－Ｈ），６．３０（ｔ，Ｊ＝１６．６２Ｈｚ，１Ｈ，１’Ｈ），５．４３（ｍ，１Ｈ，３’－Ｈ），３．７９（ｄ，Ｊ＝２．６５Ｈｚ，２Ｈ，１０－Ｈ），３．４５（ｍ，１Ｈ，４’），３．４１（ｍ，１Ｈ，５’ａ－Ｈ），３．３４（ｍ，１Ｈ，５’ｂ－Ｈ），３．６（ｔ，Ｊ＝３．７０Ｈｚ），２．１６（ｓ，３Ｈ，１１’－Ｈ），２．０６（ｓ，３Ｈ，８’－Ｈ）。
誘導体１８の^１３Ｃ－ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６，２５℃）：δ＝１６３．２０（Ｃ４），１５３．８１（Ｃ２），１５３．３１（Ｃ８），１２３．９３（Ｃ２’），７９．１７（Ｃ１１），１４９．９（Ｃ６），９６．８（Ｃ５），８６．６（Ｃ１’），７１．４（Ｃ３’），５４（Ｃ１０），７６．６（Ｃ４’），６３．４（Ｃ５’），７８．９（Ｃ１２），２０．７（Ｃ１１’），２０．８（Ｃ８’）。
誘導体１８の質量スペクトル：ＭＳ（ＥＳＩ＋） ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ＋］ Ｃ_１７Ｈ_１７Ｆ_２Ｎ_３Ｏ_８：計算値４３０．３３ 実測値４３０．８，［Ｍ＋Ｎａ＋］ Ｃ_１７Ｈ_１７Ｆ_２Ｎ_３Ｏ_８Ｎａ：計算値４５２．３ 実測値４５２．６。

誘導体１９
誘導体１９の^１Ｈ－ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６，２５℃）：δ＝１０．９３（ｓ，１Ｈ，７－ＮＨ），８．０４（ｄ，Ｊ＝７．８８Ｈｚ，１Ｈ，６－Ｈ），７．８４（ｄ，Ｊ＝７．９４Ｈｚ，１Ｈ，１５－Ｈ），７．７７（ｄ，Ｊ＝７．４４Ｈｚ，１Ｈ，１８－Ｈ），７．６９（ｔ，Ｊ＝１５．３７Ｈｚ，１Ｈ，１６－Ｈ），７．４８（ｔ，Ｊ＝１３．３８Ｈｚ，１Ｈ，１７－Ｈ），７．０６（ｄ，Ｊ＝７．８９Ｈｚ，５－Ｈ），６．３１（ｔ，Ｊ＝１５．７２Ｈｚ，１’－Ｈ），５．４３（ｍ，１Ｈ，３’Ｈ），３．４５（ｍ，１Ｈ，４’－Ｈ），３．４０（ｍ，１Ｈ，５’ａ－Ｈ），３．３３（ｍ，１Ｈ，５’ｂ－Ｈ），３．３２（ｍ，２Ｈ，１０－Ｈ），３．５１（ｑ，Ｊ＝１７．６４Ｈｚ，１Ｈ，１１－Ｈ），２．１６（ｓ，３Ｈ，１１’－Ｈ），２．０６（ｓ，３Ｈ，８’－Ｈ），１．３１（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ，１２－Ｈ）。
誘導体１９の^１３Ｃ－ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６，２５℃）：δ＝１６３．１７（Ｃ４），１５３．７８（Ｃ２），１５３．８６（Ｃ８） １３７．３１（Ｃ１３），１２３．４６（Ｃ１４），１２３．７４（Ｃ２’），１４６．８（Ｃ６），１２３．５１（Ｃ１５），１２９．４３（Ｃ１８），１３３．６５（Ｃ１６），１２８．３８（Ｃ１７），９５．７（Ｃ５），８５．２（Ｃ１’），７１．３（Ｃ３’），７６．３（Ｃ４’），６３．２（Ｃ５’），３３．３（Ｃ１１），２１．１（Ｃ１１’），２１．５（Ｃ８’），１８．５（Ｃ１２）。

誘導体２０
誘導体２０の^１Ｈ－ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６，２５℃）：δ＝１１．３３（ｓ，１Ｈ，７－ＮＨ），８．１１（ｄ，Ｊ＝７．９１，１Ｈ，６－Ｈ），７．７４（ｓ，１Ｈ，１３－Ｈ），７．４０（ｓ，１Ｈ，１６－Ｈ），７．１６（ｄ，Ｊ－７．１９Ｈｚ，１Ｈ，５－Ｈ），６．３３（ｔ，Ｊ＝１６．４１Ｈｚ，１Ｈ，１’－Ｈ），５．５３（ｓ，２Ｈ，１０－Ｈ），５．４５（ｍ，１Ｈ，３’－Ｈ），３．４５（ｍ，１Ｈ，４’－Ｈ），３．４０（ｍ，１Ｈ，５’ａ－Ｈ），３．３４（ｍ，１Ｈ，５’ｂ－Ｈ），３．９６（ｓ，３Ｈ，１８－Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ，２０－Ｈ），２．１７（ｓ，３Ｈ，１１’－Ｈ），２．０７（ｓ，３Ｈ，８’－Ｈ）。
誘導体２０の^１３Ｃ－ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６，２５℃）：δ＝１６３．２６（Ｃ４），１５３．８（Ｃ２），１５３．５２（Ｃ１５），１５３．４２（Ｃ８），１４８．６４（Ｃ１４） １３９．８４（Ｃ１２），１２７．５２（Ｃ１１），１２３．９（Ｃ２’），１４７．３（Ｃ６），１０９．１（Ｃ１３），１１１．３（Ｃ１６），９５．９（Ｃ５），８５．７（Ｃ１’），６３．２（Ｃ１０），７１．５（Ｃ３’），７６．６（Ｃ４’），６３．１（Ｃ５’），５７．１（Ｃ１８），５６．８（Ｃ２０），２０．８（Ｃ１１’），２１．２３（Ｃ８’）。
誘導体２０の質量スペクトル：ＭＳ（ＥＳＩ＋） ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ＋］ Ｃ_２３Ｈ_２４Ｆ_２Ｎ_４Ｏ_１２：計算値５８７．４６ 実測値５８７．１４，［２Ｍ＋Ｈ＋］ ２［Ｃ_２３Ｈ_２４Ｆ_２Ｎ_４Ｏ_１２］：計算値１１７３．９２ 実測値１１７３．２８ ［２Ｍ＋Ｋ＋］ ２［Ｃ_２３Ｈ_２４Ｆ_２Ｎ_４Ｏ_１２］ Ｋ：計算値１２１１．８８ 実測値１２１１．２３。

誘導体２１
誘導体２１の^１Ｈ－ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６，２５℃）：δ＝１０．９２（ｓ，１Ｈ，７－ＮＨ），８．０６（ｄ，Ｊ＝７．３１Ｈｚ，６－Ｈ），７．１４（ｄ，Ｊ＝７．７６Ｈｚ，１Ｈ，５－Ｈ），６．３０（ｔ，Ｊ＝１６．４４Ｈｚ，１Ｈ，１’－Ｈ），５．４４（ｍ，１Ｈ，３’－Ｈ），３．４４（ｍ，１Ｈ，４’－Ｈ），３．４０（ｍ，１Ｈ，５’ａ－Ｈ），３．３４（ｍ，１Ｈ，５’ｂ－Ｈ），３．９１（ｄ，Ｊ＝６．８５Ｈｚ，２Ｈ，１０－Ｈ），２．１６（ｓ，３Ｈ，１１’－Ｈ），２．０６（ｓ，３Ｈ，８’－Ｈ），１．９０（ｍ，１Ｈ，１１－Ｈ），０．９１（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，６Ｈ，１２，１３－Ｈ）。

誘導体２２
誘導体２２の^１Ｈ－ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６，２５℃）：δ＝１１．０５（ｓ，１Ｈ，７－ＮＨ），８．０３（ｄ，Ｊ＝７．７４Ｈｚ，１Ｈ，６－Ｈ），７．３２（ｄ，Ｊ＝７．７５Ｈｚ，１Ｈ，５－Ｈ），６．３１（ｔ，Ｊ＝１６．５９Ｈｚ，１Ｈ，１’－Ｈ），５．４５（ｍ，１Ｈ，３’），３．４４（ｍ，１Ｈ，４’－Ｈ），３．４（ｍ，１Ｈ，５’ａ－Ｈ），３．３４（ｍ，１Ｈ，５’ｂ－Ｈ），２．１６（ｓ，３Ｈ，１１’－Ｈ），２．１２（ｓ，３Ｈ，９－Ｈ），２．０６（ｓ，３Ｈ，８’－Ｈ）。
誘導体２２の^１３Ｃ－ＮＭＲ：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６，２５℃）：δ＝１４６．７（Ｃ６），９６．８（Ｃ５），８５．７（Ｃ１’），７１．１（Ｃ３’），７６．５（Ｃ４’），６３．１（Ｃ５’），２５．２（Ｃ９），２１．２（Ｃ１１’），２１．４（Ｃ８’）。

生物活性の評価
上記ゲムシタビン誘導体（類似体と呼んでもよい）の生物活性を２つのアッセイで評価した：
１．細胞株Ａ５４９／ＷＴ、ＳＷ１５７３／ＷＴ、ＰＡＮＣ－０１およびＢＸＰＣ－３におけるＳＲＢアッセイを用いた細胞増殖アッセイ。
２．ヒト膀胱がん細胞株Ｔ－２４におけるＭＴＴアッセイ。

１．細胞増殖アッセイ
次の細胞株を試験した：
・Ａ５４９／ＷＴ－野生型ヒト肺腺がん細胞株（１）、
・ＳＷ１５７３／ＷＴ－野生型非小肺ヒト細胞株（２）、
・ＰＡＮＣ－０１－ヒト膵がん細胞株（３）、
・ＢＸＰＣ－３－上皮ヒト膵臓腺がん細胞（４）。

図９．４つの異なる細胞株における４－（Ｎ）－アシル誘導体および４－（Ｎ）－ホスホリル誘導体のＩＣ_５０値。

表４．４つの異なる細胞株における特定のゲムシタビン４－（Ｎ）－アシル誘導体および４－（Ｎ）－ホスホリル誘導体のＩＣ_５０（μＭ）値。

ジピリダモールは、赤血球、血小板および血管内皮細胞によりｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏでアデノシン取込みを阻害する。したがって、本発明者らは、腫瘍細胞のヌクレオシド輸送体の阻害薬としてジピリダモールを採用して、現在記載されているゲムシタビン誘導体の挙動を観察した。

ジピリダモールの存在下での各化合物のＩＣ_５０を、ジピリダモールの非存在下での各化合物のＩＣ_５０で割ることによって、本発明者らは、ジピリダモールの類似体の存在がもたらす有効性を比較する比率を算出した。

比率＝ジピリダモールの存在下のＩＣ_５０／ジピリダモールの非存在下のＩＣ_５０

図１０．４つの異なる細胞株における、ジピリダモールの存在下の４－（Ｎ）－アシル誘導体のＩＣ_５０の比率（ジピリダモールの非存在下対比）。

表５．４つの異なる細胞株における、ジピリダモールの存在下の４－（Ｎ）－アシル誘導体のＩＣ_５０の比率値（ジピリダモールの非存在下対比）

図１１．４つの異なる細胞株におけるアセチル化４－Ｎ－アシル誘導体のＩＣ_５０値。

表６．４つの異なる細胞株におけるアセチル化４－Ｎ－アシル誘導体のＩＣ_５０（μＭ）値。

図１２．４つの異なる細胞株における、ジピリダモールの存在下のアセチル化４－（Ｎ）－アシル誘導体のＩＣ_５０の比率（ジピリダモールの非存在下対比）。

表７．４つの異なる細胞株における、ジピリダモールの存在下のアセチル化４－（Ｎ）－アシル誘導体のＩＣ_５０の比率値（ジピリダモールの非存在下対比）。

ＩＣ_５０値が低いほど、細胞傷害性誘導体はより強力である。さらに、ジピリダモールの比がより低いほど、ヌクレオシド輸送体（ＮＴ）に対する細胞への誘導体取込みの依存性はより低い。

Ａ５４９／ＷＴ細胞株に関し、３つのより強力な細胞傷害性非アセチル化誘導体は、１０＞４＞３Ｂであり、ＩＣ_５０値はそれぞれ、０．０１６、０．１および０．１６である。この特定の細胞株では、ゲムシタビンＩＣ_５０値は、０．０１８である。

ＮＴに対するより低い依存性は、誘導体２＜９＜４であることを示し、それぞれ、比率値は３．４、６．２および６．３であった。ゲムシタビンの比率値は、１５である。

ＳＷ１５７３／ＷＴ細胞株に関し、３つのより強力な細胞傷害性非アセチル化誘導体は、１０＞４≧３Ｂであり、ＩＣ_５０値はそれぞれ、０．０１４、０．１および０．１である。この特定の細胞株では、ゲムシタビンＩＣ_５０値は、０．０１１である。

ＮＴに対するより低い依存性は、誘導体２＜４．９＜６．７であることを示し、それぞれ、比率値は８、１０および１１であった。ゲムシタビンの比率値は、２２．７である。

ＰＡＮＣ－０１細胞株に関し、３つのより強力な細胞傷害性非アセチル化誘導体は、４＞１０＞３Ｂであり、ＩＣ_５０値は、それぞれ、０．０４５、０．０５５および０．３８である。この特定の細胞株では、ゲムシタビンＩＣ_５０値は、０．０５２である。

ＮＴに対するより低い依存性は、誘導体３Ａ＜２＜５であることを示し、それぞれ、比
率値は０．６、２．４および２．７であった。ゲムシタビン値は３．４である。

ＢＸＰＣ－３細胞株に関し、３つのより強力な細胞傷害性非アセチル化誘導体は、１０＞４≧３Ｂであり、ＩＣ_５０値は、それぞれ、０．０１４、０．１および０．１である。この細胞株では、ゲムシタビンＩＣ_５０値は、０．００９である。

ＮＴに対するより低い依存性は、誘導体２＜４＜９であることを示し、それぞれ、比率値は３．７、４．５および１３であった。ゲムシタビンの値は、２６．６である。

Ａ５４９／ＷＴ細胞株に関し、３つのより強力な細胞傷害性アセチル化誘導体は、１２＞２２＞２０であり、ＩＣ_５０値は、それぞれ、０．２２、０．４および０．６２である。この特定の細胞株では、ゲムシタビンＩＣ_５０値は、０．０１５である。

ＮＴに対するより低い依存性は、誘導体は１４＜１２＜１７＜２１であることを示し、それぞれ、比率値は０．８３、２．２、２．４および２．６であった。ゲムシタビン値は１８である。

ＳＷ１５７３／ＷＴ細胞株に関し、３つのより強力な細胞傷害性アセチル化誘導体は、１７＞１２＞２２であり、ＩＣ_５０値はそれぞれ、０．１４、０．１６および０．２６である。この特定の細胞株では、ゲムシタビンＩＣ_５０値は、０．００９６である。

ＮＴに対するより低い依存性は、誘導体１４＜１９＜１７であることを示し、それぞれ、比率値は１．４、３．５および３．６であった。ゲムシタビンの比率値は、１である。

ＰＡＮＣ－０１細胞株に関し、３つのより強力な細胞傷害性アセチル化誘導体は、１７＞１２＞２２であり、ＩＣ_５０値は、それぞれ、０．７、０．９および３．７である。この細胞株では、ゲムシタビンＩＣ_５０値は、０．０３１である。

ＮＴに対するより低い依存性は、誘導体１４＜１３、１６、２１＜１９であることを示し、それぞれ、比率値は０．９、１および１．１であった。ゲムシタビン値は７．４である。

ＢＸＰＣ－３細胞株に関し、３つのより強力な細胞傷害性アセチル化誘導体は、１７＞１２＞２２であり、ＩＣ_５０値は、それぞれ、０．０９５、０．１３および０．４５である。この細胞株では、ゲムシタビンＩＣ_５０値は、０．０１３である。

ＮＴに対するより低い依存性は、誘導体１４＜１３、２１＜１２であることを示し、それぞれ、値１．７７、２．８および３．１であった。ゲムシタビンの比率値は、２４．３である。

２．ＭＴＴアッセイ
ゲムシタビン誘導体で処理したＴ－２４膀胱がん細胞の細胞生存率を、ＭＴＴアッセイを用いて評価した。Ｔ２４がん細胞を、５％ＣＯ_２の加湿雰囲気中３７℃で、１０％ＦＢＳおよび１％ペニシリン／ストレプトマイシン（１００Ｕ／ｍＬペニシリンおよび１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン）を添加したＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）高グルコース中で培養した。

ＭＴＴアッセイでは、５０００または１００００個の細胞を、３回に分けて９６ウェルプレートに播種した。各誘導体の母液を、ＤＭＳＯ／ＥｔＯＨ（１：１ ｖ／ｖ）中に調製した。次いで、細胞を処理し、１００μＭの各化合物と共に２４時間または４８時間イ
ンキュベートした。インキュベーション時間完了後、１０μＬのＭＴＴ溶液（ＰＢＳ緩衝液中５ｍｇ／ｍｌ）を各ウェルに添加し、４時間インキュベートした。最終的に、反応を停止するため、各ウェルから上澄み液を除去し、１００μＬの停止混合溶液（５０％ジメチルホルムアミド水溶液中２０％ＳＤＳ）を添加した。プレートを２時間暗所に保管し、マイクロプレートＥＬＩＳＡリーダー（Ａｗａｒｅｎｅｓｓ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｃ．）により５４０ｎｍにおける吸光度を測定し、６３０ｎｍを基準にして算出した。各化合物の細胞生存率％を、未治療細胞（コントロール）の吸光度に対して相対的に算出した。

図１３．１００μＭゲムシタビン誘導体で処理したＴ－２４細胞（５０００細胞／ウェル）の２４時間培養後の細胞生存率（％）をＭＴＴアッセイで測定したプロット。

図１４．１００μＭゲムシタビン誘導体で処理したＴ－２４細胞（５０００細胞／ウェル）の４８時間培養後の細胞生存率（％）をＭＴＴアッセイで測定したプロット。

２セットの実験を１００μＭの濃度で行い、ホルマザンの吸収を２４時間後および４８時間後に測定した。

２４時間における１００μＭの濃度について、本発明者らは、親薬物ゲムシタビンより大きな効力で細胞増殖の有意な阻害を観察し、誘導体の順は４＞１１＞１７であった。４８時間における同濃度について、効力の明らかな順は、１７＞４＞１１、次いでゲムシタビンであった。

図１５．１００μＭゲムシタビン誘導体で処理したＴ－２４細胞（１００００細胞／ウェル）の４８時間培養後の細胞生存率（％）をＭＴＴアッセイで測定したプロット。

別の実験をＭＴＴアッセイで行い、化合物を１００μＭ誘導体濃度において４８時間インキュベートし、ウェル当たり播種された細胞数を１００００とした。最も強力な誘導体は、１４、４および１１であることが分かった。

選択された誘導体の濃度依存性効果

最終的に、最も強力な誘導体を選択後、本発明者らは、１～１００μＭ濃度の範囲の細胞生存率に対する濃度の影響をさらに調査した。細胞を４８時間誘導体と共にインキュベートした。選択された誘導体は、４、１７および１１であった。

図１６．Ｔ－２４細胞株における異なる濃度での最も効果的なゲムシタビン誘導体の細胞傷害性。

４－Ｎ－エチルカルバメートのヒト血漿安定性

実験ノート：
１．ヒト血漿中の４－Ｎ－エチルカルバメートゲムシタビンの最終濃度は、０．１μＭであった。
２．各サンプルを３回測定した。
３．本発明者らが誘導体濃度を評価したインキュベーション中の時点は：０、１、２、４、１８および２４時間であった（図１６）。２４時間インキュベーション後も、誘導体は安定であった（９６％残存）。
４．ヒト血漿中の誘導体濃度を定量化するために検量線を作成した。（図１７）。０．０１、０．０５、０．１、０．２および０．４μＭの濃度範囲において５つの検量用試料
を使用した。決定係数（ｒ^２）を算出し、０．９９９４１８であった。
５．真度および精度に関する正確性を、３濃度レベル（低：０．０２５μＭ、中：０．０８μＭおよび高：０．３μＭ）における３反復試験の分析により評価した。真度は算出濃度および理論的調製濃度間の％差として表し、精度はＣＶ％として表した。
６．ＬＯＱを、真度および精度、それぞれ、８．４９％および９．６６％、およびＬＯＱの許容限界内（＜２０％）で０．０１μＭにおいて決定した。
７．１日のうちにおよび日間で起こる真度および精度は、≦１０．２および≦１２．７、かつ許容限界内（＜１５％）であることが分かった。

図１７．３７℃におけるヒト血漿中の２４時間インキュベーション後のエチル－（４－Ｎ－ゲムシタビン）カルバメート（誘導体１）のｉｎ ｖｉｔｒｏ安定性。

図１８．エチル－（４－Ｎ－ゲムシタビン）カルバメート（誘導体１）の検量線。

結論
上記データから、いくつかの結論を導くことができるが、４－（Ｎ）－アシルおよび４－Ｎ－ホスホリルゲムシタビンプロドラッグの両方およびこれらの３’、５’－アセチル誘導体の活性構造の相関関係も導くことができる。

非アセチル化誘導体と対照的に誘導体１０および４は、著しい細胞傷害活性を示し、ＩＣ_５０値は、アデノシン取込み阻害剤であるジピリダモールの存在下ゲムシタビンより低かった。したがって、本発明者らは、ゲムシタビンの４－Ｎ位におけるホスフェートおよびクロロメチルカルバメート基の存在は、細胞に侵入するとき、薬物作用を増大することを発見した。

ジピリダモールの存在下、本発明者らは、細胞傷害性の比率により、誘導体の活性プロファイルは著しく変化することを発見した。これは、少なくとも誘導体１０の活性の差によって示されている。誘導体１０の比率値は、化合物の親油性を増大するｎ－ブチル基を有する誘導体２と同様な作用を実証した。安定した活性を持つのは、より親油性の特徴を持つ誘導体であり、このことは、比較的疎水性の分子である誘導体１０の前駆体である化合物９が、試験したすべての細胞株で効果を発揮したことからも分かる。誘導体４はかかる高比率を有しなかった。誘導体４では、ヌクレオシド輸送体懸濁液に対して良好な応答が示された；これは、これが有する炭素短鎖との組合せで役割を果たし得る塩素原子の存在を示唆している。

本明細書に開示されているアセチル化誘導体に対する同実験から、本発明者らは、親油性増大は、ゲムシタビンプロドラッグのプロファイルを改良する助けとなると考えている。アセチル化二官能性プロドラッグのＩＣ_５０値は、比較的ゲムシタビンと同様である。本発明者らは、ジピリダモールの存在下における活性の著しい増大を観察し、これは、親油性の増加と分子の作用に関する上記見解を裏付けるものである。

異なる濃度および暴露時間におけるＭＴＴ実験は、以下を有する４－Ｎ－アシルプロドラッグの活性の相関関係についての上記知見を裏付けた：
ａ）４－Ｎ部位における炭素短鎖の存在；
ｂ）塩素原子の存在；および
ｃ）親油性の規則的かつ過剰でない増大。

本発明者らは、この細胞株におけるセラグノスティック分子（誘導体１２）において同じ挙動を観察しなかった。

本明細書およびクレームで使用されるとき、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」ならびにこの変化形は、特定の特徴、工程または整数が含まれることを意味する。該用語は、他の特徴、工程または成分の存在を排除しないと解釈されるべきである。

ゲムシタビン誘導体に関する本明細書に開示されている結果は、他のヌクレオシド誘導体、例えば、式（ＩＩＩＢ）および（ＩＩＩＢＰ）に記載のシチジン誘導体にも適用することができる。

前述の説明、または以下のクレーム、または添付の図面に開示された特徴は、それらの具体的な形態で、または開示された機能を実行するための手段、または開示された結果を達成するための方法またはプロセスの観点から、適切に表現されており、別々に、またはそのような特徴の任意の組み合わせで、本発明をその多様な形態で実現するために利用することができる。

本発明の特定の実施例である実施形態を説明したが、附属のクレームの範囲を単にこれらの実施形態に限定することを目的としていない。クレームは、文献的に、目的を持って、解釈されるべきであり、および／または均等物を包含するべきである。

Claims (40)

1. 式（ＩＢ）の化合物の４－（Ｎ）保護誘導体、またはその薬剤的に許容可能な塩の製造方法であって、前記方法は：
   式（ＩＢ）の化合物と：
   

   

   式（ＩＩ）の塩化アシルとを反応させて、：
   

   

   式（ＩＩＩＢ）の化合物を製造することを含み、：
   

   

   前記式中、
   Ｒ_１は：置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６ハロアルキル、例えば、クロロアルキル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ベンジル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルケニル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルキニル、１つ以上の置換もしくは非置換ベンジル基で置換されているＣ_１～Ｃ
   _２６アルキル、１つ以上の置換もしくは非置換トリアゾール基で置換されているＣ_１～Ｃ_２６アルキルからなる群から選択され；
   Ｒ_２Ｂは：５個の炭素原子を有する置換もしくは非置換芳香環、６個の炭素原子を有する置換もしくは非置換芳香環、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、置換もしくは非置換αピラノースサッカリド、置換もしくは非置換βピラノースサッカリド、置換もしくは非置換αフラノースサッカリド、または置換もしくは非置換βフラノースサッカリドからなる群から選択され；
   Ｒ_３Ｂは：水素、５個の原子を有する一置換芳香族環、６個の原子を有する一置換芳香族環、５個の原子を有する二置換芳香族環、６個の原子を有する二置換芳香族環、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換アルコキシアルカン、カルボニル、ハロゲン、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、アジド、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルキニル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルケニル、ヒドロキシル、アミノ、または硫黄からなる群から選択され；および
   Ｒ_４Ｂは：水素、５個の原子を有する一置換芳香族環、６個の原子を有する一置換芳香族環、５個の原子を有する二置換芳香族環、６個の原子を有する二置換芳香族環、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換アルコキシアルカン、カルボニル、ハロゲン、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、アジド、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルキニル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルケニル、ヒドロキシル、アミノ、または硫黄からなる群から選択される、
   方法。
2. 式（ＩＢ）の化合物の４－（Ｎ）保護誘導体、またはその薬剤的に許容可能な塩の製造方法であって、前記方法は：
   式（ＩＢ）の化合物と：
   

   

   式（ＩＩＰ）の塩化ホスホリルとを反応させて、：
   

   

   式（ＩＩＩＢＰ）の化合物を製造することを含み、：
   

   

   前記式中、
   Ｒ_３およびＲ_４は、共にＨであるか；Ｒ_３はＨであり、Ｒ_４は置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキルであるか；またはＲ_３およびＲ_４は各々独立して置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキルであり；
   Ｘは、ＯまたはＳ、特にＯであり；
   各Ｙは独立してＯまたはＳであり、特に各ＹはＯであり；
   Ｒ_２Ｂは：５個の炭素原子を有する置換もしくは非置換芳香環、６個の炭素原子を有する置換もしくは非置換芳香環、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、置換もしくは非置換αピラノースサッカリド、置換もしくは非置換βピラノースサッカリド、置換もしくは非置換αフラノースサッカリド、または置換もしくは非置換βフラノースサッカリドからなる群から選択され；
   Ｒ_３Ｂは：水素、５個の原子を有する一置換芳香族環、６個の原子を有する一置換芳香族環、５個の原子を有する二置換芳香族環、６個の原子を有する二置換芳香族環、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換アルコキシアルカン、カルボニル、ハロゲン、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、アジド、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルキニル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルケニル、ヒドロキシル、アミノ、または硫黄からなる群から選択され；および
   Ｒ_４Ｂは：水素、５個の原子を有する一置換芳香族環、６個の原子を有する一置換芳香族環、５個の原子を有する二置換芳香族環、６個の原子を有する二置換芳香族環、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換アルコキシアルカン、カルボニル、ハロゲン、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、アジド、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルキニル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルケニル、ヒドロキシル、アミノ、または硫黄からなる群から選択される、
   方法。
3. Ｒ_２Ｂは以下の群から選択され、：
   

   

   前記式中、
   波線は、それぞれ、Ｒ_２Ｂの結合点を示し；
   Ｒ_７は：アルコキシアルカン、カルボニル、ハロゲン、水素、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、アジド、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキニル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルケニル、ヒドロキシル、アミノ、硫黄、または置換もしくは非置換アリールからなる群から選択され；
   Ｒ_８は：アルコキシアルカン、カルボニル、ハロゲン、水素、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、アジド、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキニル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルケニル、ヒドロキシル、アミノ、硫黄、または置換もしくは非置換アリールからなる群から選択され；
   Ｒ_９は：アルコキシアルカン、カルボニル、ハロゲン、水素、置換もしくは非置換Ｃ_１
   ～Ｃ_２６アルキル、アジド、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキニル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルケニル、ヒドロキシル、アミノ、硫黄、または置換もしくは非置換アリールからなる群から選択され；
   Ｒ_１０は：アルコキシアルカン、カルボニル、ハロゲン、水素、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、アジド、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキニル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルケニル、ヒドロキシル、アミノ、硫黄、または置換もしくは非置換アリールからなる群から選択され；
   Ｒ_１１は：アルコキシアルカン、カルボニル、ハロゲン、水素、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、アジド、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキニル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルケニル、ヒドロキシル、アミノ、硫黄、または置換もしくは非置換アリールからなる群から選択され；
   Ｒ_１２は：アルコキシアルカン、カルボニル、ハロゲン、水素、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、アジド、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキニル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルケニル、ヒドロキシル、アミノ、硫黄、または置換もしくは非置換アリールからなる群から選択され；
   Ｒ_１３は：アルコキシアルカン、カルボニル、ハロゲン、水素、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、アジド、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキニル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルケニル、ヒドロキシル、アミノ、硫黄、または置換もしくは非置換アリールからなる群から選択され；
   Ｒ_１４は：アルコキシアルカン、カルボニル、ハロゲン、水素、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、アジド、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキニル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルケニル、ヒドロキシ、アミノ、硫黄、または置換もしくは非置換アリールからなる群から選択され；
   Ｘは、独立してハロゲンであり；
   Ｙは、独立して水素、ヒドロキシル、アミノまたは硫黄であり；
   Ｚは、独立してヒドロキシル、アミノまたは硫黄である、
   請求項１または２に記載の方法。
4. Ｒ_３ＢおよびＲ_４Ｂは、共に水素である、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
5. 各入射点のそれぞれのハロゲンは、独立してＦ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
6. Ｒ_３Ｂは水素であり、Ｒ_４Ｂは水素であり、Ｒ_２Ｂは、
   

   

   である、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
7. Ｙは水素であり、Ｒ_１１はハロゲンであり、Ｒ_１２はハロゲンであり、Ｒ_９は水素であり、Ｒ_１３はヒドロキシル（－ＯＨ）であり、Ｒ_１０は水素であり、Ｒ_７は水素であり、Ｒ_８は水素であり、Ｒ_１４はヒドロキシル（－ＯＨ）である、請求項６に記載の方法。
8. ゲムシタビンの４－（Ｎ）保護誘導体、もしくはその薬剤的に許容可能な塩の製造方法
   、または請求項１もしくは３～７のいずれか一項に記載の方法であって、前記方法は：
   ゲムシタビン（Ｉ）を：
   

   

   式（ＩＩ）の塩化アシルと反応させて、：
   

   

   式（ＩＩＩ）の化合物を製造することを含み、：
   

   

   前記式中、
   Ｒ_１は：置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６ハロアルキル、例えば、クロロアルキル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルケニル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ベンジル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルキニル、１つ以上の置換もしくは非置換ベンジル基で置換されているＣ_１～Ｃ_２６アルキル、１つ以上の置換もしくは非置換トリアゾール基で置換されているＣ_１～Ｃ_２６アルキルからなる群から選択される、
   方法。
9. Ｒ_３Ｂはハロゲンであり、Ｒ_４Ｂは水素であり、Ｒ_１は－（ＣＨ_２）_４ＣＨ_３であり、Ｒ_２Ｂは
   

   

   である、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
10. Ｒ_３Ｂは、Ｆである、請求項９に記載の方法。
11. Ｙは水素であり、Ｒ_１１は水素であり、Ｒ_１２はヒドロキシル（－ＯＨ）であり、Ｒ_９は水素であり、Ｒ_１３はヒドロキシル（－ＯＨ）であり、Ｒ_１０は水素であり、Ｒ_７は水素であり、Ｒ_８は水素であり、Ｒ_１４は水素である、請求項９または１０に記載の方法。
12. ゲムシタビンの４－（Ｎ）保護誘導体、もしくはその薬剤的に許容可能な塩の製造方法、または請求項２～７もしくは９～１１のいずれか一項に記載の方法であって、前記方法は：
    ゲムシタビン（Ｉ）を、：
    

    

    式（ＩＩＰ）の塩化ホスホリルと反応させて、：
    

    

    式（ＩＩＩＰ）の化合物を製造することを含み、：
    

    

    前記式中、
    Ｒ_３およびＲ_４は、共にＨであるか；Ｒ_３はＨであり、Ｒ_４は置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキルであるか；またはＲ_３およびＲ_４は各々独立して置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキルであり；
    Ｘは、ＯまたはＳ、特にＯであり；
    各Ｙは独立してＯまたはＳであり、特に各ＹはＯである、
    方法
13. 前記方法をワンポットで行い；任意に、前記方法を、中間体を単離しないで一段階で行う、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
14. 前記式（ＩＩ）の塩化アシルまたは前記式（ＩＩＰ）の塩化ホスホリルは、前記方法において、０．３～０．７当量（モル基準）で存在する、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。
15. 前記式（ＩＩ）の塩化アシルまたは前記式（ＩＩＰ）の塩化ホスホリルは、前記方法において、０．５当量（モル基準）で存在する、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。
16. 式（ＩＢ）の化合物、任意にゲムシタビン（Ｉ）と前記式（ＩＩ）の塩化アシルまたは前記式（ＩＩＰ）の塩化ホスホリルとの反応を、酢酸エチル、シアン化アセチルまたは酢酸エチルとシアン化アセチルとの混合物の溶媒中で行う、請求項１～１５のいずれか一項に記載の方法。
17. 式（ＩＢ）の化合物、任意にゲムシタビン（Ｉ）と前記式（ＩＩ）の塩化アシルまたは前記式（ＩＩＰ）の塩化ホスホリルとの反応を、１～４時間；任意に３時間還流条件下で行い；任意に還流条件は７０℃～９０℃、または８０℃で起こる、請求項１～１６のいずれか一項に記載の方法。
18. Ｒ_１は、－ＣＨ_２ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_２ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_３ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_４ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_５ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_６ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－（ＣＨ_２）_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－（ＣＨ_２）_３ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－（ＣＨ_２）_４ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－（ＣＨ_２）_２Ｃｌ、－（ＣＨ_２）_３Ｃｌ、－（ＣＨ_２）_４Ｃｌ、－（ＣＨ_２）_５Ｃｌ、－（ＣＨ_２）_６Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－（ＣＨ_２）_２Ｂｒ、－（ＣＨ_２）_３Ｂｒ、－（ＣＨ_２）_４Ｂｒ、－（ＣＨ_２）_５Ｂｒ、－（ＣＨ_２）_６
    Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｉ、－（ＣＨ_２）_２Ｉ、－（ＣＨ_２）_３Ｉ、－（ＣＨ_２）_４Ｉ、－（ＣＨ_２）_５Ｉ、－（ＣＨ_２）_６Ｉ、－ＣＨ_２ＣＣＨ、－（ＣＨ_２）_２ＣＣＨ、－（ＣＨ_２）_３ＣＣＨ、－（ＣＨ_２）_４ＣＣＨ、－（ＣＨ_２）_５ＣＣＨ、－（ＣＨ_２）_６ＣＣＨ、－ＣＨ_２Ｎ_３、－（ＣＨ_２）_２Ｎ_３、－（ＣＨ_２）_３Ｎ_３、－（ＣＨ_２）_４Ｎ_３、－（ＣＨ_２）_５Ｎ_３、－（ＣＨ_２）_６Ｎ_３、－ＣＨ_２ＳＨ、－（ＣＨ_２）_２ＳＨ、－（ＣＨ_２）_３ＳＨ、－（ＣＨ_２）_４ＳＨ、－（ＣＨ_２）_５ＳＨ、－（ＣＨ_２）_６ＳＨ、－ＣＨ_２ＣＯＯＨ、－（ＣＨ_２）_２ＣＯＯＨ、－（ＣＨ_２）_３ＣＯＯＨ、－（ＣＨ_２）_４ＣＯＯＨ、－（ＣＨ_２）_５ＣＯＯＨ、－（ＣＨ_２）_６ＣＯＯＨ、－ＣＨ_２ＣＯＯＲ_２、－（ＣＨ_２）_２ＣＯＯＲ_２、－（ＣＨ_２）_３ＣＯＯＲ_２、－（ＣＨ_２）_４ＣＯＯＲ_２、－（ＣＨ_２）_５ＣＯＯＲ_２、－（ＣＨ_２）_６ＣＯＯＲ_２、－ＣＨ_２Ａｒ、－（ＣＨ_２）_２Ａｒ、－（ＣＨ_２）_３Ａｒ、－（ＣＨ_２）_４Ａｒ、－（ＣＨ_２）_５Ａｒ、－（ＣＨ_２）_６Ａｒ、－ＣＨ_２ＣＨＡｒＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨＡｒＣＨ_２ＣＨ_３、－ＣＨ_２Ｔｒ、－（ＣＨ_２）_２Ｔｒ、－（ＣＨ_２）_３Ｔｒ、－（ＣＨ_２）_４Ｔｒ、－（ＣＨ_２）_５Ｔｒ、－（ＣＨ_２）_６Ｔｒ、－ＣＨ_２ＣＨＴｒＣＨ_３または－ＣＨ_２ＣＨＴｒＣＨ_２ＣＨ_３からなる群から選択され；
    Ｒ_２は、置換または非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキルであり；
    Ａｒは、
    

    

    式中、
    Ａ_１、Ａ_２、Ａ_３、Ａ_４およびＡ_５は、各々独立して、Ｈ、ＮＯ_２、ＯＨ、Ｏ－アルキルもしくはＯ－メチルであり；任意に、Ａ_１はＮＯ_２であり、Ａ_２、Ａ_３、Ａ_４およびＡ_５はＨであり；またはＡ_１はＮＯ_２であり、Ａ_３およびＡ_４はＯ－メチルであり、Ａ_２およびＡ_５はＨである、
    であり；ならびに／または
    Ｔｒは、
    

    

    式中、
    Ｂは、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ハロアルキル、例えば、クロロアルキル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ベンジル、置換もしくは非置換アルケニル、置換もしくは非置換アルキニル、１つ以上のベンジルもしくは置換
    ベンジル基で置換されているアルキルまたは
    

    

    である、
    請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法。
19. Ｒ_１は、４－（Ｎ）においてＨ原子と反応する置換基を含み、例えば、Ｒ_１は、クロロアルキルであり、前記方法は、式（ＩＩＩ）の化合物を、：
    

    

    適切な条件、例えば、還流条件下、溶媒、例えば、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン中、反応させて、式（ＩＶ）の化合物を生成する工程をさらに含み、：
    

    

    式中、ｎは、０、１または２である、
    請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
20. 前記方法は、式（ＩＩＩ）または（ＩＩＩＰ）の化合物を、ＯＨ反応性誘導体化剤と反応させて、化合物式（ＩＩＩ）または（ＩＩＩＰ）の３’－および／もしくは５’－置換誘導体を生成する工程をさらに含み；
    任意に、前記方法は、式（ＩＩＩ）の化合物を無水酢酸と反応させて、式（Ｖ）：
    

    

    または、
    式（ＶＰ）の化合物を生成する工程をさらに含み、：
    

    

    式中、Ａｃは－ＣＯＣＨ_３である、
    請求項１～１９のいずれか一項に記載の方法
21. 請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法により得られる、または得られた化合物。
22. 式（ＩＩＩ）の化合物、：
    

    

    またはその３’－および／もしくは５’－置換誘導体であって、例えば、式（ＶＡ）の化合物：
    

    

    式中、Ｒ_２０およびＲ_２１の少なくとも１つは、Ｈではなく、
    Ｒ_２０はＨまたは－ＣＯＲ_２０１であり、Ｒ_２０１は、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６ハロアルキル、例えば、クロロアルキル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ベンジル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルケニル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルキニル、１つ以上の置換もしくは非置換ベンジル基で置換されているＣ_１～Ｃ_２６アルキル、１つ以上の置換もしくは非置換トリアゾール基で置換されているＣ_１～Ｃ_２６アルキルからなる群から選択され；
    Ｒ_２１はＨまたは－ＣＯＲ_２０２であり、Ｒ_２０２は、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６ハロアルキル、例えば、クロロアルキル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ベンジル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルケニル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルキニル、１つ以上の置換もしくは非置換ベンジル基で置換されているＣ_１～Ｃ_２６アルキル、１つ以上の置換もしくは非置換トリアゾール基で置換されているＣ_１～Ｃ_２６アルキルからなる群から選択される；
    もしくは式（Ｖ）の化合物：
    

    

    式中、Ａｃは－ＣＯＣＨ_３であり；
    Ｒ_１は：置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_{２
    ６}ハロアルキル、例えば、クロロアルキル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ベンジル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルケニル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルキニル、１つ以上の置換もしくは非置換ベンジル基で置換されているＣ_１～Ｃ_２６アルキル、１つ以上の置換もしくは非置換トリアゾール基で置換されているＣ_１～Ｃ_２６アルキルからなる群から選択される、
    化合物、またはその薬剤的に許容可能な塩。
23. Ｒ_１は、－ＣＨ_２ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_２ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_３ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_４ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_５ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_６ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－（ＣＨ_２）_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－（ＣＨ_２）_３ＣＨ（ＣＨ_３）_２または－（ＣＨ_２）_４ＣＨ（ＣＨ_３）_２からなる群から選択される、請求項２２に記載の化合物。
24. Ｒ_１は、－ＣＨ_２Ｃｌ、－（ＣＨ_２）_２Ｃｌ、－（ＣＨ_２）_３Ｃｌ、－（ＣＨ_２）_４Ｃｌ、－（ＣＨ_２）_５Ｃｌ、－（ＣＨ_２）_６Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－（ＣＨ_２）_２Ｂｒ、－（ＣＨ_２）_３Ｂｒ、－（ＣＨ_２）_４Ｂｒ、－（ＣＨ_２）_５Ｂｒ、－（ＣＨ_２）_６Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｉ、－（ＣＨ_２）_２Ｉ、－（ＣＨ_２）_３Ｉ、－（ＣＨ_２）_４Ｉ、－（ＣＨ_２）_５Ｉまたは－（ＣＨ_２）_６Ｉからなる群から選択される、請求項２２に記載の化合物。
25. Ｒ_１は、－ＣＨ_２ＣＣＨ、－（ＣＨ_２）_２ＣＣＨ、－（ＣＨ_２）_３ＣＣＨ、－（ＣＨ_２）_４ＣＣＨ、－（ＣＨ_２）_５ＣＣＨまたは－（ＣＨ_２）_６ＣＣＨからなる群から選択される、請求項２２に記載の化合物。
26. Ｒ_１は、－ＣＨ_２Ｎ_３、－（ＣＨ_２）_２Ｎ_３、－（ＣＨ_２）_３Ｎ_３、－（ＣＨ_２）_４Ｎ_３、－（ＣＨ_２）_５Ｎ_３または－（ＣＨ_２）_６Ｎ_３からなる群から選択される、請求項２２に記載の化合物。
27. Ｒ_１は、－ＣＨ_２ＳＨ、－（ＣＨ_２）_２ＳＨ、－（ＣＨ_２）_３ＳＨ、－（ＣＨ_２）_４ＳＨ、－（ＣＨ_２）_５ＳＨまたは－（ＣＨ_２）_６ＳＨからなる群から選択される、請求項２２に記載の化合物。
28. Ｒ_１は、－ＣＨ_２ＣＯＯＨ、－（ＣＨ_２）_２ＣＯＯＨ、－（ＣＨ_２）_３ＣＯＯＨ、－（ＣＨ_２）_４ＣＯＯＨ、－（ＣＨ_２）_５ＣＯＯＨ、－（ＣＨ_２）_６ＣＯＯＨ、－ＣＨ_２ＣＯＯＲ_２、－（ＣＨ_２）_２ＣＯＯＲ_２、－（ＣＨ_２）_３ＣＯＯＲ_２、－（ＣＨ_２）_４ＣＯＯＲ_２、－（ＣＨ_２）_５ＣＯＯＲ_２または－（ＣＨ_２）_６ＣＯＯＲ_２からなる群から選択され；
    Ｒ_２は、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキルである、
    請求項２２に記載の化合物。
29. Ｒ_１は、－ＣＨ_２Ａｒ、－（ＣＨ_２）_２Ａｒ、－（ＣＨ_２）_３Ａｒ、－（ＣＨ_２）_４Ａｒ、－（ＣＨ_２）_５Ａｒ、－（ＣＨ_２）_６Ａｒ、－ＣＨ_２ＣＨＡｒＣＨ_３または－ＣＨ_２ＣＨＡｒＣＨ_２ＣＨ_３からなる群から選択され；
    Ａｒは、
    

    

    式中、Ａ_１、Ａ_２、Ａ_３、Ａ_４およびＡ_５は、各々独立して、Ｈ、ＮＯ_２、ＯＨ、Ｏ－アルキルもしくはＯ－メチルであり；任意に、Ａ_１はＮＯ_２であり、Ａ_２、Ａ_３、Ａ_４およびＡ_５はＨであり；またはＡ_１はＮＯ_２であり、Ａ_３およびＡ_４はＯ－メチルであり、Ａ_２およびＡ_５はＨである、
    である、
    請求項２２に記載の化合物。
30. Ｒ_１は、－ＣＨ_２Ｔｒ、－（ＣＨ_２）_２Ｔｒ、－（ＣＨ_２）_３Ｔｒ、－（ＣＨ_２）_４Ｔｒ、－（ＣＨ_２）_５Ｔｒ、－（ＣＨ_２）_６Ｔｒ、－ＣＨ_２ＣＨＴｒＣＨ_３または－ＣＨ_２ＣＨＴｒＣＨ_２ＣＨ_３からなる群から選択され；
    Ｔｒは、
    

    

    式中、Ｂは：置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６ハロアルキル、例えば、クロロアルキル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ベンジル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルケニル、置換もしくは非置換Ｃ_２～Ｃ_２６アルキニル、１つ以上のベンジル基もしくは置換ベンジル基で置換されているＣ_１～Ｃ_２６アルキル、または
    

    

    からなる群から選択される、
    である、
    請求項２２に記載の化合物。
31. 前記化合物は：
    

    

    
    

    

    
    からなる群から選択される、請求項２２～３０のいずれか一項に記載の化合物。
32. 前記化合物は：
    

    

    
    

    

    
    からなる群から選択されない、請求項２２～３０のいずれか一項に記載の化合物。
33. 式（ＩＩＩＰ）の化合物であって、：
    

    

    
    
    前記式中、Ｒ_３およびＲ_４は、共にＨであるか；Ｒ_３はＨであり、Ｒ_４は置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキルであるか；またはＲ_３およびＲ_４は各々独立して置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキルであり；
    Ｘは、ＯまたはＳ、特にＯであり；
    各Ｙは独立してＯまたはＳであり、特に各ＹはＯである、
    化合物、もしくはその薬剤的に許容可能な塩、またはその３’－および／もしくは５’－置換誘導体。
34. 式（ＶＩ）の化合物であって、：
    

    

    前記式中、
    Ｒ_３およびＲ_４は、共にＨであり；
    Ｒ_３はＨであり、Ｒ_４は置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキルであり；または
    Ｒ_３およびＲ_４は、各々独立して置換もしくは非置換Ｃ_１～Ｃ_２６アルキルである、
    請求項３３に記載の化合物もしくはその薬剤的に許容可能な塩、またはその３’－および／もしくは５’－置換誘導体。
35. Ｒ_３およびＲ_４の１つまたは両方は、－ＣＨ_２ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_２ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_３ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_４ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_５ＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_６ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－（ＣＨ_２）_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－（ＣＨ_２）_３ＣＨ（ＣＨ_３）_２または－（ＣＨ_２）_４ＣＨ（ＣＨ_３）_２からなる群から選択される、請求項３３または３４に記載の化合物。
36. 式（ＩＶ）の化合物であって、：
    

    

    式中、ｎは、０、１または２である、
    化合物、またはその薬剤的に許容可能な塩。
37. 請求項２１～３６のいずれか一項に記載の化合物および薬剤的に許容可能な担体を含む医薬組成物。
38. 治療において使用するための、請求項２１～３６のいずれか一項に記載の化合物、または請求項３７に記載の医薬組成物。
39. がん治療において使用するための、請求項２１～３６のいずれか一項に記載の化合物、または請求項３７に記載の医薬組成物。
40. 請求項３９に記載の使用のための化合物または医薬組成物であって、前記がんは、乳がん、卵巣がん、非小細胞肺がん、膵がんおよび膀胱がんからなる群から選択される、化合物または医薬組成物。

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