JP2022527994A - 三重特異性結合性タンパク質、方法、およびその使用 - Google Patents

三重特異性結合性タンパク質、方法、およびその使用 Download PDF

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Abstract

三重特異性および／または三価結合性タンパク質であって、１つまたはそれ以上の標的タンパク質に特異的に結合する３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、該結合性タンパク質を形成するポリペプチドの第１のペアは、クロスオーバー配向性を有する二重可変ドメインを持ち、ポリペプチドの第２のペアは、単一の抗原結合性部位を形成する単一の可変ドメインを持つ、前記結合性タンパク質が本明細書において提供される。一部の実施形態において、結合性タンパク質は、ＣＤ２８ポリペプチドに結合する結合性部位、ＣＤ３ポリペプチドに結合する結合性部位、および第３のポリペプチド、例えば腫瘍標的タンパク質に結合する結合性部位を含む。本開示はまた、三重特異性および／または三価結合性タンパク質を作製する方法ならびにそのような結合性タンパク質の使用に関する。【選択図】図１Ａ

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年４月９日に出願された米国仮出願第６２／８３１，５７２号、および２０１９年１０月８日に出願されたＥＰ出願第ＥＰ１９３０６３１１．２号に対する優先権を主張し、これらのそれぞれの開示を参照によって全体として本明細書に組み入れる。
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの以下の提出の内容を参照によって全体として本明細書に組み入れる：コンピュータ読取り可能な形態（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：１８３９５２０３２０４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴ、記録日：２０２０年４月６日、サイズ：５２６ＫＢ）。
分野
本開示は、三重特異性および／または三価結合性タンパク質であって、１つまたはそれ以上の標的タンパク質に特異的に結合する３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、結合性タンパク質を形成するポリペプチドの第１のペアは、クロスオーバー配向性を有する二重可変ドメインを持つ、前記結合性タンパク質に関する。本開示はまた、三重特異性および／または三価結合性タンパク質を作製する方法ならびにそのような結合性タンパク質の使用に関する。
モノクローナル抗体ベースのバイオ医薬品は新たな薬物開発のための重要な手段となった。モノクローナル抗体技術は、特有の細胞集団に向けて特異的標的化、精密なシグナル伝達および／またはペイロードを与え、そのＦｃ機能を通じて長期持続性の生物学的効果を提供する。抗体工学における努力は、様々な生物学的応用のために２つのモノクローナル抗体の特異性を組み合わせた二重特異性抗体を開発することを可能とし、抗体薬物開発の範囲を拡大した。向上した広さおよび効力を有する新たに発見される中和抗体は、複雑な疾患、例えばがん、関節炎、および／または炎症性障害を処置するためのバイオ医薬品を開発するためのより多くのオプションを提供し得る。
免疫腫瘍学は、がんにおける疾患管理のための有望な、新興の治療アプローチである。免疫系は、がんの発症および進行に対する防御の最前線である。Ｔ細胞は腫瘍成長を制御し、疾患の早期および後期の両方のステージにおいてがん患者の生存を長期化させることができることの大きい証拠が現在存在する。しかしながら、腫瘍に特異的なＴ細胞は、それらが疾患を制御することを防止する多数のやり方で制限される。
ヒト適応免疫の部分として、Ｔ細胞免疫はウイルス感染症およびがんの制御において決定的な役割を果たし、感染した細胞および悪性細胞を場合により排除して、ウイルス感染のクリアランスまたはがんの治癒を結果としてもたらす。慢性感染性疾患、例えばヘルペスウイルス感染症（ＨＳＶ、ＣＭＶ、ＥＢＶなど）、ＨＩＶ、およびＨＢＶにおいて、ウイルスは、免疫抑制、Ｔ細胞疲弊、および潜伏確立を含めて様々な機構によりヒトにおいてそれらの持続を確立する。それにもかかわらず、ウイルス感染は、サイトカイン放出または細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）媒介性殺滅プロセスを通じた制御または殺滅のために感染した細胞を容易に認識することができる抗原特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を含むウイルス抗原特異的免疫を一般に誘導する。
そのため、ｉｎ ｖｉｖｏおよび／またはｅｘ ｖｉｖｏでのウイルス抗原特異的Ｔ細胞の活性化および／または増幅は、慢性ウイルス感染症に対する治療戦略を提供し得る。
特許出願、特許公報、およびＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔアクセッション番号を含めて、本明細書において参照される全ての参考文献を、各個々の参考文献が参照によって組み入れることを特におよび個々に指し示されたのと同様に、参照によって全体として本明細書に組み入れる。
これらおよび他の必要性を満たすために、３つの抗原結合性部位を形成する三重特異性結合性タンパク質（例えば、抗体）が本明細書において提供される。これらの結合性タンパク質は、１、２、または３つの抗原標的または標的タンパク質、例えばＣＤ２８、ＣＤ３、および腫瘍標的タンパク質に特異的に結合することができる。一部の腫瘍は特異的な抗原を発現する。例えば、ＨＥＲ２の増幅および過剰発現は、乳がんの分子サブタイプ、そしてまた胃、卵巣、肺および前立腺癌において見出すことができる。Ｔ細胞の最適な活性化は、２つの要因：１．抗原認識および２．共刺激を要求する。本明細書に記載の三重特異性ＨＥＲ２／ＣＤ２８×ＣＤ３三重特異性結合性タンパク質を使用すると、シグナル１はアゴニスト抗ＣＤ３結合性部位により提供され、シグナル２はアゴニスト抗ＣＤ２８結合性部位により提供される。三重特異性結合性タンパク質は、ＨＥＲ２、ＣＤ３８、または別の腫瘍標的タンパク質を認識する結合性部位を介してＴ細胞を腫瘍に動員し、係合したＴ細胞を抗ＣＤ３およびＣＤ２８を介して活性化させる。結果としてもたらされた活性化は、近くの腫瘍細胞に対する免疫細胞の殺滅潜在性を誘導する。追加的に、抗ＣＤ３結合性部位は、ヒトＣＤ３ポリペプチドに対する高親和性結合および除去された潜在的な製造的不都合（例えば、脱アミド部位）と共に記載される。
Ｔ細胞の活性化、ならびに抗原特異的Ｔ細胞のその後の増殖および／または増幅におけるそれらの潜在能力のために開発および評価された抗ＣＤ３８／ＣＤ２８×ＣＤ３三重特異性抗体が本明細書においてさらに提供される。これらの三重特異性Ａｂは、抗原特異的ＣＤ８ Ｔセントラルメモリーおよびエフェクターメモリー細胞を含めて、ＣＤ４およびＣＤ８エフェクターおよびメモリー集団をｉｎ ｖｉｔｒｏで有効に拡大増殖させることができる。特に、ＣＭＶ、ＥＢＶ、ＨＩＶ－１、インフルエンザ特異的なＣＤ８セントラルメモリーおよびエフェクターメモリー細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ拡大増殖が実証された。本明細書に記載の抗ＣＤ３８／ＣＤ２８×ＣＤ３三重特異性抗体は、ＣＤ３／ＣＤ２８／ＣＤ３８に係合し、Ｔ細胞を刺激し拡大増殖させるためのシグナル伝達経路を提供することにより新規の特性を呈し、これは慢性感染性疾患、例えばＨＳＶ、ＣＭＶ、ＥＢＶ、ＨＩＶ－１、およびＨＢＶ感染症を処置する有効な戦略を与え得る。
これらおよび他の必要性を満たすために、ＣＤ３８ポリペプチドに結合する少なくとも１つの抗原結合性部位を有する単一特異性、二重特異性、または三重特異性結合性タンパク質を含めて、ＣＤ３８ポリペプチド（例えば、ヒトおよびカニクイザルＣＤ３８ポリペプチド）に結合する結合性タンパク質が本明細書において提供される。有利には、これらの結合性タンパク質は、Ｔ細胞をがん細胞の近くに動員し、その後にＴ細胞を活性化させ、グランザイム／パーフォリン機構を通じて隣接するがん細胞の活性化Ｔ細胞殺滅を促進する能力を有し、抗ＣＤ３８抗体、例えばＤＡＲＺＡＬＥＸ（登録商標）（ダラツムマブ）とは異なる抗腫瘍活性のための作用モードを提供する。さらに、ヒトおよびカニクイザルの両方のＣＤ３８ポリペプチドに結合する能力は、例えば、後の臨床使用のためにそれらの安全性プロファイルを評価するために、前臨床毒物学研究において結合性タンパク質を容易に試験することを可能とする。
一部の実施形態において、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含む結合性タンパク質であって、第１のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＣＬ ［Ｉ］
により表される構造を含み、
第２のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２－Ｌ４－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩ］
により表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ３－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩＩ］
により表される構造を含み、
第４のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ３－ＣＬ ［ＩＶ］
により表される構造を含み、
ここで、
ＶＬ１は第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ２は免疫グロブリンＣＨ２重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ３は免疫グロブリンＣＨ３重鎖定常ドメインであり；
ヒンジは、ＣＨ１およびＣＨ２ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４はアミノ酸リンカーであり；
式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドはクロスオーバー軽鎖－重鎖ペアを形成し；
ＶＨ１およびＶＬ１は第１の抗原結合性部位を形成し；
ＶＨ２およびＶＬ２は、ＣＤ３ポリペプチドに結合する第２の抗原結合性部位を形成し、ＶＨ２ドメインは、ＧＦＴＦＴＫＡＷ（配列番号５５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＫＤＫＳＮＳＹＡＴ（配列番号５６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＲＧＶＹＹＡＬＳＰＦＤＹ（配列番号５７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ２ドメインは、ＱＳＬＶＨＸ１ＮＸ２Ｘ３ＴＹであって、ここで、Ｘ１はＥまたはＱであり、Ｘ２はＡまたはＬであり、Ｘ３はＱ、Ｒ、またはＦである、ＱＳＬＶＨＸ１ＮＸ２Ｘ３ＴＹ（配列番号１８０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＫＶＳ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＧＱＧＴＱＹＰＦＴ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含み；ならびに
ＶＨ３およびＶＬ３は第３の抗原結合性部位を形成する、
前記結合性タンパク質が本明細書において提供される。
一部の実施形態において、第１の結合性部位はＣＤ２８ポリペプチドに結合する。一部の実施形態において、ＶＨ１ドメインは、ＧＹＴＦＴＳＹＹ（配列番号４９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＧＮＶＮＴ（配列番号５０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＴＲＳＨＹＧＬＤＷＮＦＤＶ（配列番号５１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ１ドメインは、ＱＮＩＹＶＷ（配列番号５２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＫＡＳ（配列番号５３）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＧＱＴＹＰＹ（配列番号５４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。一部の実施形態において、ＶＨ１ドメインは
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＶＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＳＩＹＰＧＮＶＮＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＡＴＬＴＶＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＴＲＳＨＹＧＬＤＷＮＦＤＶＷＧＫＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号９１）のアミノ酸配列を含み、かつ／またはＶＬ１ドメインは
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＮＩＹＶＷＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＫＡＳＮＬＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＧＱＴＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号９２）のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態において、ＶＬ２ドメインのＣＤＲ－Ｌ１配列は、ＱＳＬＶＨＱＮＡＱＴＹ（配列番号５９）、ＱＳＬＶＨＥＮＬＱＴＹ（配列番号６０）、ＱＳＬＶＨＥＮＬＦＴＹ（配列番号６１）、およびＱＳＬＶＨＥＮＬＲＴＹ（配列番号６２）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、ＧＦＴＦＴＫＡＷ（配列番号５５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＫＤＫＳＮＳＹＡＴ（配列番号５６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＲＧＶＹＹＡＬＳＰＦＤＹ（配列番号５７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびに／またはＱＳＬＶＨＱＮＡＱＴＹ（配列番号５９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＫＶＳ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＧＱＧＴＱＹＰＦＴ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む抗原結合性部位を含む。一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、ＧＦＴＦＴＫＡＷ（配列番号５５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＫＤＫＳＮＳＹＡＴ（配列番号５６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＲＧＶＹＹＡＬＳＰＦＤＹ（配列番号５７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびに／またはＱＳＬＶＨＥＮＬＱＴＹ（配列番号６０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＫＶＳ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＧＱＧＴＱＹＰＦＴ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む抗原結合性部位を含む。一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、ＧＦＴＦＴＫＡＷ（配列番号５５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＫＤＫＳＮＳＹＡＴ（配列番号５６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＲＧＶＹＹＡＬＳＰＦＤＹ（配列番号５７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびに／またはＱＳＬＶＨＥＮＬＦＴＹ（配列番号６１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＫＶＳ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＧＱＧＴＱＹＰＦＴ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む抗原結合性部位を含む。一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、ＧＦＴＦＴＫＡＷ（配列番号５５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＫＤＫＳＮＳＹＡＴ（配列番号５６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＲＧＶＹＹＡＬＳＰＦＤＹ（配列番号５７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびに／またはＱＳＬＶＨＥＮＬＲＴＹ（配列番号６２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＫＶＳ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＧＱＧＴＱＹＰＦＴ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む抗原結合性部位を含む。一部の実施形態において、ＶＨ２ドメインは
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＴＫＡＷＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＱＬＥＷＶＡＱＩＫＤＫＳＮＳＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＲＧＶＹＹＡＬＳＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号９３）のアミノ酸配列を含み、かつ／またはＶＬ２ドメインは、
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＶＨＱＮＡＱＴＹＬＳＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＳＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＧＱＧＴＱＹＰＦＴＦＧＳＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号９５）、ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＶＨＥＮＬＱＴＹＬＳＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＳＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＧＱＧＴＱＹＰＦＴＦＧＳＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号９６）、ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＶＨＥＮＬＦＴＹＬＳＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＳＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＧＱＧＴＱＹＰＦＴＦＧＳＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号９７）、およびＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＶＨＥＮＬＲＴＹＬＳＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＳＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＧＱＧＴＱＹＰＦＴＦＧＳＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号９８）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＶＨ２ドメインは
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＴＫＡＷＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＱＬＥＷＶＡＱＩＫＤＫＳＮＳＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＲＧＶＹＹＡＬＳＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号９３）またはＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＴＫＡＷＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＱＬＥＷＶＡＱＩＫＤＫＳＮＳＹＡＴＹＹＡＳＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＲＧＶＹＹＡＬＳＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３０２）のアミノ酸配列を含み、かつ／またはＶＬ２ドメインは、
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＶＨＱＮＡＱＴＹＬＳＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＳＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＧＱＧＴＱＹＰＦＴＦＧＳＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号９５）、ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＶＨＥＮＬＱＴＹＬＳＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＳＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＧＱＧＴＱＹＰＦＴＦＧＳＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号９６）、ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＶＨＥＮＬＦＴＹＬＳＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＳＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＧＱＧＴＱＹＰＦＴＦＧＳＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号９７）、およびＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＶＨＥＮＬＲＴＹＬＳＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＳＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＧＱＧＴＱＹＰＦＴＦＧＳＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号９８）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、配列番号９３のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または配列番号９５のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む抗原結合性部位を含む。一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、配列番号３０２のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または配列番号９５のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む抗原結合性部位を含む。一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、配列番号９３のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または配列番号９６のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む抗原結合性部位を含む。一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、配列番号９３のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または配列番号９７のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む抗原結合性部位を含む。一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、配列番号９３のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または配列番号９８のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む抗原結合性部位を含む。
一部の実施形態において、第３の抗原結合性部位は腫瘍標的タンパク質に結合する。一部の実施形態において、腫瘍標的タンパク質はＣＤ３８ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ３８ポリペプチド）である。一部の実施形態において、腫瘍標的タンパク質はＨＥＲ２ポリペプチド（例えば、ヒトＨＥＲ２ポリペプチド）である。一部の実施形態において、本開示の腫瘍標的タンパク質としては、Ａ２ＡＲ、ＡＰＲＩＬ、ＡＴＰＤａｓｅ、ＢＡＦＦ、ＢＡＦＦＲ、ＢＣＭＡ、ＢｌｙＳ、ＢＴＫ、ＢＴＬＡ、Ｂ７ＤＣ、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７Ｈ４（ＶＴＣＮ１としても公知）、Ｂ７Ｈ５、Ｂ７Ｈ６、Ｂ７Ｈ７、Ｂ７ＲＰ１、Ｂ７－４、Ｃ３、Ｃ５、ＣＣＬ２（ＭＣＰ－１としても公知）、ＣＣＬ３（ＭＩＰ－１ａとしても公知）、ＣＣＬ４（ＭＩＰ－１ｂとしても公知）、ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳとしても公知）、ＣＣＬ７（ＭＣＰ－３としても公知）、ＣＣＬ８（ｍｃｐ－２としても公知）、ＣＣＬ１１（エオタキシンとしても公知）、ＣＣＬ１５（ＭＩＰ－１ｄとしても公知）、ＣＣＬ１７（ＴＡＲＣとしても公知）、ＣＣＬ１９（ＭＩＰ－３ｂとしても公知）、ＣＣＬ２０（ＭＩＰ－３ａとしても公知）、ＣＣＬ２１（ＭＩＰ－２としても公知）、ＣＣＬ２４（ＭＰＩＦ－２／エオタキシン－２としても公知）、ＣＣＬ２５（ＴＥＣＫとしても公知）、ＣＣＬ２６（エオタキシン－３としても公知）、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２３（ＦＣＥＲ２、ＩｇＥの受容体としても公知）、ＣＤ２４、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８０（Ｂ７－１としても公知）、ＣＤ８６（Ｂ７－２としても公知）、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７（４１ＢＢとしても公知）、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４としても公知）、ＣＤ１５４（ＣＤ４０Ｌとしても公知）、ＣＤ１６０、ＣＤ２７２、ＣＤ２７３（ＰＤＬ２としても公知）、ＣＤ２７４（ＰＤＬ１としても公知）、ＣＤ２７５（Ｂ７Ｈ２としても公知）、ＣＤ２７６（Ｂ７Ｈ３としても公知）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳとしても公知）、ＣＤ２７９（ＰＤ－１としても公知）、ＣＤＨ１（Ｅ－カドヘリンとしても公知）、キチナーゼ、ＣＬＥＣ９、ＣＬＥＣ９１、ＣＲＴＨ２、ＣＳＦ－１（Ｍ－ＣＳＦとしても公知）、ＣＳＦ－２（ＧＭ－ＣＳＦとしても公知）、ＣＳＦ－３（ＧＣＳＦとしても公知）、ＣＸ３ＣＬ１（ＳＣＹＤ１としても公知）、ＣＸＣＬ１２（ＳＤＦ１としても公知）、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ３、ＤＮＧＲ－１、エクトヌクレオシド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ１、ＥＧＦＲ、ＥＮＴＰＤ１、ＦＣＥＲ１Ａ、ＦＣＥＲ１、ＦＬＡＰ、ＦＯＬＨ１、Ｇｉ２４、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｈｅｒ２、ＨＨＬＡ２、ＨＭＧＢ１、ＨＶＥＭ、ＩＣＯＳＬＧ、ＩＤＯ、ＩＦＮα、ＩｇＥ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＬ２Ｒｂｅｔａ、ＩＬ１、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１Ｆ１０、ＩＬ２、ＩＬ４、ＩＬ４Ｒａ、ＩＬ５、ＩＬ５Ｒ、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ７Ｒａ、ＩＬ８、ＩＬ９、ＩＬ９Ｒ、ＩＬ１０、ｒｈＩＬ１０、ＩＬ１２、ＩＬ１３、ＩＬ１３Ｒａ１、ＩＬ１３Ｒａ２、ＩＬ１５、ＩＬ１７、ＩＬ１７Ｒｂ（ＩＬ２５の受容体としても公知）、ＩＬ１８、ＩＬ２２、ＩＬ２３、ＩＬ２５、ＩＬ２７、ＩＬ３３、ＩＬ３５、ＩＴＧＢ４（ｂ４インテグリンとしても公知）、ＩＴＫ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＬＡＭＰ１、レプチン、ＬＰＦＳ２、ＭＨＣクラスＩＩ、ＭＵＣ－１、ＮＣＲ３ＬＧ１、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＴＰＤａｓｅ－１、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＰＤ－１Ｈ、血小板受容体、ＰＲＯＭ１、Ｓ１５２、ＳＩＳＰ１、ＳＬＣ、ＳＰＧ６４、ＳＴ２（ＩＬ３３の受容体としても公知）、ＳＴＥＡＰ２、Ｓｙｋキナーゼ、ＴＡＣＩ、ＴＤＯ、Ｔ１４、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、ＴＬＲ、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ９、ＴＭＥＦ１、ＴＮＦａ、ＴＮＦＲＳＦ７、Ｔｐ５５、ＴＲＥＭ１、ＴＳＬＰ（ＩＬ７Ｒａの補助受容体としても公知）、ＴＳＬＰＲ、ＴＷＥＡＫ、ＶＥＧＦ、ＶＩＳＴＡ、Ｖｓｔｍ３、ＷＵＣＡＭ、およびＸＣＲ１（ＧＰＲ５／ＣＣＸＣＲ１としても公知）が挙げられるがこれらに限定されない。一部の実施形態において、上記の抗原標的の１つまたはそれ以上はヒト抗原標的である。
一部の実施形態において、第３の抗原結合性部位はヒトＣＤ３８ポリペプチドに結合する。一部の実施形態において、ＶＨ３ドメインは、ＧＹＴＦＴＳＹＡ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＧＱＧＧＴ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＡＲＴＧＧＬＲＲＡＹＦＴＹ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ３ドメインは、ＱＳＶＳＳＹＧＱＧＦ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＧＡＳ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＮＫＥＤＰＷＴ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。一部の実施形態において、ＶＨ３ドメインは、ＧＹＴＬＴＥＦＳ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＦＤＰＥＤＧＥＴ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＴＴＧＲＦＦＤＷＦ（配列番号２１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ３ドメインは、ＱＳＶＩＳＲＦ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＧＡＳ（配列番号２３）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＤＳＮＬＰＩＴ（配列番号２４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。一部の実施形態において、ＶＨ３ドメインは、ＧＹＡＦＴＴＹＬ（配列番号２５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＮＰＧＳＧＳＴ（配列番号２６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＡＲＹＡＹＧＹ（配列番号２７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ３ドメインは、ＱＮＶＧＴＡ（配列番号２８）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳ（配列番号２９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＹＳＴＹＰＦＴ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。一部の実施形態において、ＶＨ３ドメインは、ＧＹＳＦＴＮＹＡ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＳＰＹＹＧＤＴ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＡＲＲＦＥＧＦＹＹＳＭＤＹ（配列番号３３）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ３ドメインは、ＱＳＬＶＨＳＮＧＮＴＹ（配列番号３４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＫＶＳ（配列番号３５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＳＱＳＴＨＶＰＬＴ（配列番号３６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。
一部の実施形態において、ＶＨ３ドメインは、ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号３７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＷＹＤＧＳＮＫ（配列番号３８）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＡＲＤＰＧＬＲＹＦＤＧＧＭＤＶ（配列番号３９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ３ドメインは、ＱＧＩＳＳＹ（配列番号４０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＡＡＳ（配列番号４１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＬＮＳＦＰＹＴ（配列番号４２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。一部の実施形態において、ＶＨ３ドメインは、ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号４３）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＷＹＤＧＳＮＫ（配列番号４４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＡＲＭＦＲＧＡＦＤＹ（配列番号４５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ３ドメインは、ＱＧＩＲＮＤ（配列番号４６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＡＡＳ（配列番号４７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＬＱＤＹＩＹＹＰＴ（配列番号４８）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。一部の実施形態において、ＶＨ３ドメインは
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＶＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＡＭＨＷＶＫＥＡＰＧＱＲＬＥＷＩＧＹＩＹＰＧＱＧＧＴＮＹＮＱＫＦＱＧＲＡＴＬＴＡＤＴＳＡＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＦＣＡＲＴＧＧＬＲＲＡＹＦＴＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７９）のアミノ酸配列を含み、かつ／またはＶＬ３ドメインは
ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＩＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＧＱＧＦＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＰＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＮＫＥＤＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号８０）のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＶＨ３ドメインは
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＶＳＧＹＴＬＴＥＦＳＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＦＤＰＥＤＧＥＴＩＹＡＱＫＦＱＧＲＶＩＭＴＥＤＴＳＴＤＴＡＹＭＥＭＮＳＬＲＳＥＤＴＡＩＹＹＣＴＴＧＲＦＦＤＷＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８１）のアミノ酸配列を含み、かつ／またはＶＬ３ドメインは
ＥＩＩＬＴＱＳＰＡＩＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＩＳＲＦＬＳＷＹＱＶＫＰＧＬＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＴＲＡＴＧＩＰＶＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＳＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＣＡＶＹＹＣＱＱＤＳＮＬＰＩＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫ（配列番号８２）のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＶＨ３ドメインは
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＡＦＴＴＹＬＶＥＷＩＲＱＲＰＧＱＧＬＥＷＭＧＶＩＮＰＧＳＧＳＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＶＤＲＳＳＴＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＹＡＹＧＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８３）のアミノ酸配列を含み、かつ／またはＶＬ３ドメインは
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＮＶＧＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＳＰＫＱＬＩＹＳＡＳＮＲＹＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＬＡＴＹＹＣＱＱＹＳＴＹＰＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号８４）のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＶＨ３ドメインは
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＹＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＷＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＨＣＡＲＤＰＧＬＲＹＦＤＧＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含み、かつ／またはＶＬ３ドメインは
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＦＡＡＳＴＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＬＮＳＦＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号８８）のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＶＨ３ドメインは
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＷＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＧＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＭＦＲＧＡＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８９）のアミノ酸配列を含み、かつ／またはＶＬ３ドメインは
ＡＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＧＬＱＰＥＤＳＡＴＹＹＣＬＱＤＹＩＹＹＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号９０）のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＶＨ３ドメインは
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＮＹＡＶＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＶＩＳＰＹＹＧＤＴＴＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＦＥＧＦＹＹＳＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８５）のアミノ酸配列を含み、かつ／またはＶＬ３ドメインは
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＲＰＳＱＳＬＶＨＳＮＧＮＴＹＬＮＷＹＱＱＲＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＫＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＳＱＳＴＨＶＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号８６）のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態において、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１５６のアミノ酸配列または配列番号１５６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１５７のアミノ酸配列または配列番号１５７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１５８のアミノ酸配列または配列番号１５８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１５９のアミノ酸配列または配列番号１５９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１６０のアミノ酸配列または配列番号１６０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１６１のアミノ酸配列または配列番号１６１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１６２のアミノ酸配列または配列番号１６２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１６３のアミノ酸配列または配列番号１６３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１６４のアミノ酸配列または配列番号１６４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１６５のアミノ酸配列または配列番号１６５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１６６のアミノ酸配列または配列番号１６６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１６７のアミノ酸配列または配列番号１６７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１６８のアミノ酸配列または配列番号１６８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１６９のアミノ酸配列または配列番号１６９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１７０のアミノ酸配列または配列番号１７０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１７１のアミノ酸配列または配列番号１７１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１７２のアミノ酸配列または配列番号１７２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１７３のアミノ酸配列または配列番号１７３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１７４のアミノ酸配列または配列番号１７４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１７５のアミノ酸配列または配列番号１７５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１７６のアミノ酸配列または配列番号１７６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１７７のアミノ酸配列または配列番号１７７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１７８のアミノ酸配列または配列番号１７８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１７９のアミノ酸配列または配列番号１７９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１８１のアミノ酸配列または配列番号１８１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１８２のアミノ酸配列または配列番号１８２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１８３のアミノ酸配列または配列番号１８３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１８４のアミノ酸配列または配列番号１８４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１８５のアミノ酸配列または配列番号１８５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１８６のアミノ酸配列または配列番号１８６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１８７のアミノ酸配列または配列番号１８７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１８８のアミノ酸配列または配列番号１８８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態において、第３の抗原結合性部位はヒトＨＥＲ２ポリペプチドに結合する。一部の実施形態において、ＶＨ３ドメインは、ＧＦＮＩＫＤＴＹ（配列番号１）またはＧＦＮＩＲＤＴＹ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＴＮＧＹＴ（配列番号３）、ＩＹＰＴＱＧＹＴ（配列番号４）、またはＩＹＰＴＮＡＹＴ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号６）、ＳＲＷＧＧＥＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号７）、またはＳＲＷＧＧＳＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ３ドメインは、ＱＤＶＮＴＡ（配列番号９）またはＱＤＶＱＴＡ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＨＹＴＴＰ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。一部の実施形態において、ＶＨ３ドメインは、ＧＦＮＩＫＤＴＹ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＴＮＧＹＴ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ３ドメインは、ＱＤＶＮＴＡ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＨＹＴＴＰ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。一部の実施形態において、ＶＨ３ドメインは、ＧＦＮＩＲＤＴＹ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＴＱＧＹＴ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＳＲＷＧＧＥＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ３ドメインは、ＱＤＶＮＴＡ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＨＹＴＴＰ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。一部の実施形態において、ＶＨ３ドメインは、ＧＦＮＩＲＤＴＹ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＴＮＡＹＴ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＳＲＷＧＧＳＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ３ドメインは、ＱＤＶＮＴＡ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＨＹＴＴＰ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。一部の実施形態において、ＶＨ３ドメインは、ＧＦＮＩＲＤＴＹ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＴＱＧＹＴ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＳＲＷＧＧＳＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ３ドメインは、ＱＤＶＮＴＡ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＨＹＴＴＰ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。一部の実施形態において、ＶＨ３ドメインは、ＧＦＮＩＲＤＴＹ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＴＮＡＹＴ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＳＲＷＧＧＥＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ３ドメインは、ＱＤＶＮＴＡ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＨＹＴＴＰ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。一部の実施形態において、ＶＨ３ドメインは、ＧＦＮＩＫＤＴＹ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＴＮＧＹＴ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ３ドメインは、ＱＤＶＱＴＡ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＨＹＴＴＰ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。一部の実施形態において、ＶＨ３ドメインは、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７２）、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＲＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＱＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＥＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７３）、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＲＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＱＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＳＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７４）、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＲＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＡＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＳＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７５）、またはＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＲＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＡＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＥＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７６）のアミノ酸配列を含み、かつ／またはＶＬ３ドメインは、
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号７７）またはＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＱＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号７８）のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＶＨ３ドメインは
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７２）のアミノ酸配列を含み、かつ／またはＶＬ３ドメインは
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号７７）のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＶＨ３ドメインは
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＲＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＱＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＥＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７３）のアミノ酸配列を含み、かつ／またはＶＬ３ドメインは
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号７７）のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＶＨ３ドメインは
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＲＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＡＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＳＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７５）のアミノ酸配列を含み、かつ／またはＶＬ３ドメインは
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号７７）のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＶＨ３ドメインは
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＲＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＱＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＳＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７４）のアミノ酸配列を含み、かつ／またはＶＬ３ドメインは
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号７７）のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＶＨ３ドメインは
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＲＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＡＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＥＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７６）のアミノ酸配列を含み、かつ／またはＶＬ３ドメインは
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号７７）のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＶＨ３ドメインは
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７２）、のアミノ酸配列を含み、かつ／またはＶＬ３ドメインは
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＱＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号７８）のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態において、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１００のアミノ酸配列または配列番号１００のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１０１のアミノ酸配列または配列番号１０１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１０２のアミノ酸配列または配列番号１０２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１０３のアミノ酸配列または配列番号１０３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１０４のアミノ酸配列または配列番号１０４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１０５のアミノ酸配列または配列番号１０５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１０６のアミノ酸配列または配列番号１０６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１０７のアミノ酸配列または配列番号１０７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１１２のアミノ酸配列または配列番号１１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１１３のアミノ酸配列または配列番号１１３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１１４のアミノ酸配列または配列番号１１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１１５のアミノ酸配列または配列番号１１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１１６のアミノ酸配列または配列番号１１６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１１７のアミノ酸配列または配列番号１１７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１１８のアミノ酸配列または配列番号１１８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１１９のアミノ酸配列または配列番号１１９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１２０のアミノ酸配列または配列番号１２０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１２１のアミノ酸配列または配列番号１２１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１２２のアミノ酸配列または配列番号１２２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１２３のアミノ酸配列または配列番号１２３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１２４のアミノ酸配列または配列番号１２４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１２５のアミノ酸配列または配列番号１２５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１２６のアミノ酸配列または配列番号１２６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１２７のアミノ酸配列または配列番号１２７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１２８のアミノ酸配列または配列番号１２８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１２９のアミノ酸配列または配列番号１２９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１３０のアミノ酸配列または配列番号１３０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１３１のアミノ酸配列または配列番号１３１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１３２のアミノ酸配列または配列番号１３２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１３３のアミノ酸配列または配列番号１３３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１３４のアミノ酸配列または配列番号１３４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１３５のアミノ酸配列または配列番号１３５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１３６のアミノ酸配列または配列番号１３６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１３７のアミノ酸配列または配列番号１３７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１３８のアミノ酸配列または配列番号１３８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１３９のアミノ酸配列または配列番号１３９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１４０のアミノ酸配列または配列番号１４０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１４１のアミノ酸配列または配列番号１４１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１４２のアミノ酸配列または配列番号１４２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１４３のアミノ酸配列または配列番号１４３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１４４のアミノ酸配列または配列番号１４４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１４５のアミノ酸配列または配列番号１４５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１４６のアミノ酸配列または配列番号１４６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１４７のアミノ酸配列または配列番号１４７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１４８のアミノ酸配列または配列番号１４８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１４９のアミノ酸配列または配列番号１４９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１５０のアミノ酸配列または配列番号１５０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１５１のアミノ酸配列または配列番号１５１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１５２のアミノ酸配列または配列番号１５２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１５３のアミノ酸配列または配列番号１５３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１５４のアミノ酸配列または配列番号１５４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１５５のアミノ酸配列または配列番号１５５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、第１のポリペプチド鎖は、配列番号２８６のアミノ酸配列または配列番号２８６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号２８７のアミノ酸配列または配列番号２８７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号２８８のアミノ酸配列または配列番号２８８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号２８９のアミノ酸配列または配列番号２８９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、第１のポリペプチド鎖は、配列番号２９０のアミノ酸配列または配列番号２９０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号２９１のアミノ酸配列または配列番号２９１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号２９２のアミノ酸配列または配列番号２９２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号２９３のアミノ酸配列または配列番号２９３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、第１のポリペプチド鎖は、配列番号２９４のアミノ酸配列または配列番号２９４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号２９５のアミノ酸配列または配列番号２９５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号２９６のアミノ酸配列または配列番号２９６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号２９７のアミノ酸配列または配列番号２９７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、第１のポリペプチド鎖は、配列番号２９８のアミノ酸配列または配列番号２９８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号２９９のアミノ酸配列または配列番号２９９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号３００のアミノ酸配列または配列番号３００のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号３０１のアミノ酸配列または配列番号３０１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の任意の他の実施形態と組み合わせることができる一部の実施形態において、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３またはＬ４の少なくとも１つは独立して０アミノ酸の長さである。一部の実施形態において、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４はそれぞれ独立して、０アミノ酸の長さであり、またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号６９）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号７０）、Ｓ、ＲＴ、ＴＫＧＰＳ（配列番号６８）、ＧＱＰＫＡＡＰ（配列番号６７）、およびＧＧＳＧＳＳＧＳＧＧ（配列番号７１）からなる群から選択される配列を含む。一部の実施形態において、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４はそれぞれ独立して、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号６９）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号７０）、Ｓ、ＲＴ、ＴＫＧＰＳ（配列番号６８）、ＧＱＰＫＡＡＰ（配列番号６７）、およびＧＧＳＧＳＳＧＳＧＧ（配列番号７１）からなる群から選択される配列を含む。一部の実施形態において、Ｌ１は配列ＧＱＰＫＡＡＰ（配列番号６７）を含み、Ｌ２は配列ＴＫＧＰＳ（配列番号６８）を含み、Ｌ３は配列Ｓを含み、Ｌ４は配列ＲＴを含む。一部の実施形態において、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３またはＬ４の少なくとも１つは配列ＤＫＴＨＴ（配列番号６６）を含む。一部の実施形態において、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は配列ＤＫＴＨＴ（配列番号６６）を含む。
本明細書に記載の任意の他の実施形態と組み合わせることができる一部の実施形態において、第２および第３のポリペプチド鎖のヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインはヒトＩｇＧ４ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインであり、ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインはそれぞれ、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ４の２３４および２３５位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換はＦ２３４ＡおよびＬ２３５Ａである。一部の実施形態において、第２および第３のポリペプチド鎖のヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインはヒトＩｇＧ４ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインであり、ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインはそれぞれ、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ４の２３３～２３６位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、および２３６における欠失である。一部の実施形態において、第２および第３のポリペプチド鎖のヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインはヒトＩｇＧ４ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインであり、ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインはそれぞれ、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ４の２２８および４０９位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換はＳ２２８ＰおよびＲ４０９Ｋである。一部の実施形態において、第２および第３のポリペプチド鎖のヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインはヒトＩｇＧ１ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインであり、ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインはそれぞれ、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ１の２３４、２３５、および３２９位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＰ３２９Ａである。一部の実施形態において、第２および第３のポリペプチド鎖のヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインはヒトＩｇＧ１ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインであり、ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインはそれぞれ、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ１の２９８、２９９、および３００位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｓ２９８Ｎ、Ｔ２９９Ａ、およびＹ３００Ｓである。一部の実施形態において、第２のポリペプチド鎖のヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖであり；第３のポリペプチド鎖のヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の３５４および３６６位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換はＳ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗである。一部の実施形態において、第２のポリペプチド鎖のヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の３５４および３６６位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換はＳ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗであり；第３のポリペプチド鎖のヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖである。
一部の実施形態において、上記の実施形態のいずれか１つの結合性タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子が本明細書において提供される。一部の実施形態において、上記の実施形態のいずれか１つの核酸分子を含む発現ベクターが本明細書において提供される。一部の実施形態において、上記の実施形態のいずれか１つの核酸分子または上記の実施形態のいずれか１つの発現ベクターを含む単離された宿主細胞が本明細書において提供される。一部の実施形態において、宿主細胞は哺乳動物または昆虫細胞である。
一部の実施形態において、上記の実施形態のいずれか１つの結合性タンパク質および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物が本明細書において提供される。
一部の実施形態において、患者においてがんを予防および／または処置する方法であって、患者に治療有効量の少なくとも１つの上記の実施形態のいずれか１つの結合性タンパク質または医薬組成物を投与することを含む、前記方法が本明細書において提供される。一部の実施形態において、患者においてがんを予防および／または処置する方法における使用のための上記の実施形態のいずれか１つによる結合性タンパク質または医薬組成物であって、方法は、患者に治療有効量の結合性タンパク質または医薬組成物を投与することを含む、前記使用のための結合性タンパク質または医薬組成物が本明細書において提供される。一部の実施形態において、患者においてがんを予防および／または処置するための医薬の製造における使用のための上記の実施形態のいずれか１つによる結合性タンパク質または医薬組成物が本明細書において提供される。
一部の実施形態において、少なくとも１つの結合性タンパク質は化学療法剤と併用投与される。一部の実施形態において、患者はヒトである。
一部の実施形態において、第３の抗原結合性部位はヒトＣＤ３８ポリペプチドに結合し、個体または患者からのがん細胞はＣＤ３８を発現する。一部の実施形態において、がんは多発性骨髄腫である。一部の実施形態において、がんは、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、またはＢ細胞リンパ腫である。一部の実施形態において、結合性タンパク質の投与前に、患者は、ウォッシュアウト期間なしにダラツムマブを用いて処置されている。
一部の実施形態において、第３の抗原結合性部位はヒトＨＥＲ２ポリペプチドに結合し、個体または患者からのがん細胞はＨＥＲ２を発現する。一部の実施形態において、がんは、乳がん、結腸直腸がん、胃がん、または非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）である。
一部の実施形態において、ウイルス特異的メモリーＴ細胞を拡大増殖させる方法であって、ウイルス特異的メモリーＴ細胞を結合性タンパク質と接触させることを含み、結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＣＬ ［Ｉ］
により表される構造を含み、
第２のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２－Ｌ４－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩ］
により表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ３－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩＩ］
により表される構造を含み、
第４のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ３－ＣＬ ［ＩＶ］
により表される構造を含み、
ここで、
ＶＬ１は第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ２は免疫グロブリンＣＨ２重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ３は免疫グロブリンＣＨ３重鎖定常ドメインであり；
ヒンジは、ＣＨ１およびＣＨ２ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４はアミノ酸リンカーであり；
式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドはクロスオーバー軽鎖－重鎖ペアを形成し；
ＶＨ１およびＶＬ１は、ＣＤ２８ポリペプチドに結合する第１の抗原結合性部位を形成し、ＶＨ２およびＶＬ２は、ＣＤ３ポリペプチドに結合する第２の抗原結合性部位を形成し、ＶＨ２ドメインは、ＧＦＴＦＴＫＡＷ（配列番号５５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＫＤＫＳＮＳＹＡＴ（配列番号５６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＲＧＶＹＹＡＬＳＰＦＤＹ（配列番号５７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ２ドメインは、ＱＳＬＶＨＸ１ＮＸ２Ｘ３ＴＹであって、ここで、Ｘ１はＥまたはＱであり、Ｘ２はＡまたはＬであり、Ｘ３はＱ、Ｒ、またはＦである、ＱＳＬＶＨＸ１ＮＸ２Ｘ３ＴＹ（配列番号１８０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＫＶＳ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＧＱＧＴＱＹＰＦＴ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含み、ＶＨ３およびＶＬ３は、ＣＤ３８ポリペプチドに結合する第３の抗原結合性部位を形成する、
前記方法が本明細書において提供される。
一部の実施形態において、ウイルス特異的メモリーＴ細胞の拡大増殖における使用のための結合性タンパク質であって、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＣＬ ［Ｉ］
により表される構造を含み、
第２のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２－Ｌ４－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩ］
により表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ３－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩＩ］
により表される構造を含み、
第４のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ３－ＣＬ ［ＩＶ］
により表される構造を含み、
ここで、
ＶＬ１は第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ２は免疫グロブリンＣＨ２重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ３は免疫グロブリンＣＨ３重鎖定常ドメインであり；
ヒンジは、ＣＨ１およびＣＨ２ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４はアミノ酸リンカーであり；
式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドはクロスオーバー軽鎖－重鎖ペアを形成し；
ＶＨ１およびＶＬ１は、ＣＤ２８ポリペプチドに結合する第１の抗原結合性部位を形成し、ＶＨ２およびＶＬ２は、ＣＤ３ポリペプチドに結合する第２の抗原結合性部位を形成し、ＶＨ２ドメインは、ＧＦＴＦＴＫＡＷ（配列番号５５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＫＤＫＳＮＳＹＡＴ（配列番号５６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＲＧＶＹＹＡＬＳＰＦＤＹ（配列番号５７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ２ドメインは、ＱＳＬＶＨＸ１ＮＸ２Ｘ３ＴＹであって、ここで、Ｘ１はＥまたはＱであり、Ｘ２はＡまたはＬであり、Ｘ３はＱ、Ｒ、またはＦである、ＱＳＬＶＨＸ１ＮＸ２Ｘ３ＴＹ（配列番号１８０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＫＶＳ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＧＱＧＴＱＹＰＦＴ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含み、ＶＨ３およびＶＬ３は、ＣＤ３８ポリペプチドに結合する第３の抗原結合性部位を形成する、前記使用のための結合性タンパク質が本明細書において提供される。
一部の実施形態において、ウイルス特異的メモリーＴ細胞はｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで結合性タンパク質と接触する。一部の実施形態において、ウイルス特異的メモリーＴ細胞を結合性タンパク質と接触させることはウイルス特異的メモリーＴ細胞の活性化および／または増殖を引き起こす。
一部の実施形態において、Ｔ細胞を拡大増殖させる方法であって、Ｔ細胞を結合性タンパク質とｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで接触させることを含み、結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＣＬ ［Ｉ］
により表される構造を含み、
第２のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２－Ｌ４－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩ］
により表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ３－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩＩ］
により表される構造を含み、
第４のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ３－ＣＬ ［ＩＶ］
により表される構造を含み、
ここで、
ＶＬ１は第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ２は免疫グロブリンＣＨ２重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ３は免疫グロブリンＣＨ３重鎖定常ドメインであり；
ヒンジは、ＣＨ１およびＣＨ２ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４はアミノ酸リンカーであり；
式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドはクロスオーバー軽鎖－重鎖ペアを形成し；
ＶＨ１およびＶＬ１は、ＣＤ２８ポリペプチドに結合する第１の抗原結合性部位を形成し、ＶＨ２およびＶＬ２は、ＣＤ３ポリペプチドに結合する第２の抗原結合性部位を形成し、ＶＨ２ドメインは、ＧＦＴＦＴＫＡＷ（配列番号５５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＫＤＫＳＮＳＹＡＴ（配列番号５６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＲＧＶＹＹＡＬＳＰＦＤＹ（配列番号５７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ２ドメインは、ＱＳＬＶＨＸ１ＮＸ２Ｘ３ＴＹであって、ここで、Ｘ１はＥまたはＱであり、Ｘ２はＡまたはＬであり、Ｘ３はＱ、Ｒ、またはＦである、ＱＳＬＶＨＸ１ＮＸ２Ｘ３ＴＹ（配列番号１８０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＫＶＳ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＧＱＧＴＱＹＰＦＴ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含み、ＶＨ３およびＶＬ３は、ＣＤ３８ポリペプチドに結合する第３の抗原結合性部位を形成する、
前記方法が本明細書において提供される。
一部の実施形態において、Ｔ細胞を拡大増殖させる方法における使用のための結合性タンパク質であって、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＣＬ ［Ｉ］
により表される構造を含み、
第２のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２－Ｌ４－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩ］
により表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ３－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩＩ］
により表される構造を含み、
第４のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ３－ＣＬ ［ＩＶ］
により表される構造を含み、
ここで、
ＶＬ１は第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ２は免疫グロブリンＣＨ２重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ３は免疫グロブリンＣＨ３重鎖定常ドメインであり；
ヒンジは、ＣＨ１およびＣＨ２ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４はアミノ酸リンカーであり；
式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドはクロスオーバー軽鎖－重鎖ペアを形成し；
ＶＨ１およびＶＬ１は、ＣＤ２８ポリペプチドに結合する第１の抗原結合性部位を形成し、ＶＨ２およびＶＬ２は、ＣＤ３ポリペプチドに結合する第２の抗原結合性部位を形成し、ＶＨ２ドメインは、ＧＦＴＦＴＫＡＷ（配列番号５５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＫＤＫＳＮＳＹＡＴ（配列番号５６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＲＧＶＹＹＡＬＳＰＦＤＹ（配列番号５７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ２ドメインは、ＱＳＬＶＨＸ１ＮＸ２Ｘ３ＴＹであって、ここで、Ｘ１はＥまたはＱであり、Ｘ２はＡまたはＬであり、Ｘ３はＱ、Ｒ、またはＦである、ＱＳＬＶＨＸ１ＮＸ２Ｘ３ＴＹ（配列番号１８０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＫＶＳ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＧＱＧＴＱＹＰＦＴ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含み、ＶＨ３およびＶＬ３は、ＣＤ３８ポリペプチドに結合する第３の抗原結合性部位を形成する、
前記使用のための結合性タンパク質が本明細書において提供される。
一部の実施形態において、Ｔ細胞はメモリーＴ細胞またはエフェクターＴ細胞である。一部の実施形態において、Ｔ細胞は、その細胞表面上にキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現し、またはＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む。
一部の実施形態において、慢性ウイルス感染症を処置する方法であって、それを必要とする個体または患者に有効量の結合性タンパク質を投与することを含み、結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＣＬ ［Ｉ］
により表される構造を含み、
第２のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２－Ｌ４－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩ］
により表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ３－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩＩ］
により表される構造を含み、
第４のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ３－ＣＬ ［ＩＶ］
により表される構造を含み、
ここで、
ＶＬ１は第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ２は免疫グロブリンＣＨ２重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ３は免疫グロブリンＣＨ３重鎖定常ドメインであり；
ヒンジは、ＣＨ１およびＣＨ２ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４はアミノ酸リンカーであり；
式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドはクロスオーバー軽鎖－重鎖ペアを形成し；
ＶＨ１およびＶＬ１は、ＣＤ２８ポリペプチドに結合する第１の抗原結合性部位を形成し、ＶＨ２およびＶＬ２は、ＣＤ３ポリペプチドに結合する第２の抗原結合性部位を形成し、ＶＨ２ドメインは、ＧＦＴＦＴＫＡＷ（配列番号５５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＫＤＫＳＮＳＹＡＴ（配列番号５６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＲＧＶＹＹＡＬＳＰＦＤＹ（配列番号５７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ２ドメインは、ＱＳＬＶＨＸ１ＮＸ２Ｘ３ＴＹであって、ここで、Ｘ１はＥまたはＱであり、Ｘ２はＡまたはＬであり、Ｘ３はＱ、Ｒ、またはＦである、ＱＳＬＶＨＸ１ＮＸ２Ｘ３ＴＹ（配列番号１８０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＫＶＳ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＧＱＧＴＱＹＰＦＴ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含み、ＶＨ３およびＶＬ３は、ＣＤ３８ポリペプチドに結合する第３の抗原結合性部位を形成する、
前記方法が本明細書において提供される。
一部の実施形態において、慢性ウイルス感染症を処置する方法における使用のための結合性タンパク質であって、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＣＬ ［Ｉ］
により表される構造を含み、
第２のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２－Ｌ４－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩ］
により表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ３－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩＩ］
により表される構造を含み、
第４のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ３－ＣＬ ［ＩＶ］
により表される構造を含み、
ここで、
ＶＬ１は第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ２は免疫グロブリンＣＨ２重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ３は免疫グロブリンＣＨ３重鎖定常ドメインであり；
ヒンジは、ＣＨ１およびＣＨ２ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４はアミノ酸リンカーであり；
式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドはクロスオーバー軽鎖－重鎖ペアを形成し；
ＶＨ１およびＶＬ１は、ＣＤ２８ポリペプチドに結合する第１の抗原結合性部位を形成し、ＶＨ２およびＶＬ２は、ＣＤ３ポリペプチドに結合する第２の抗原結合性部位を形成し、ＶＨ２ドメインは、ＧＦＴＦＴＫＡＷ（配列番号５５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＫＤＫＳＮＳＹＡＴ（配列番号５６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＲＧＶＹＹＡＬＳＰＦＤＹ（配列番号５７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ２ドメインは、ＱＳＬＶＨＸ１ＮＸ２Ｘ３ＴＹであって、ここで、Ｘ１はＥまたはＱであり、Ｘ２はＡまたはＬであり、Ｘ３はＱ、Ｒ、またはＦである、ＱＳＬＶＨＸ１ＮＸ２Ｘ３ＴＹ（配列番号１８０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＫＶＳ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＧＱＧＴＱＹＰＦＴ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含み、ＶＨ３およびＶＬ３は、ＣＤ３８ポリペプチドに結合する第３の抗原結合性部位を形成し、
前記方法は、それを必要とする個体または患者に有効量の結合性タンパク質を投与することを含む、
前記使用のための結合性タンパク質が本明細書において提供される。
一部の実施形態において、個体または患者はヒトである。一部の実施形態において、結合性タンパク質は、結合性タンパク質および薬学的に許容される担体を含む医薬製剤で個体または患者に投与される。一部の実施形態において、結合性タンパク質の投与は、個体または患者においてウイルス特異的メモリーＴ細胞の活性化および／または増殖を結果としてもたらす。
本明細書に記載の任意の他の実施形態と組み合わせることができる一部の実施形態において、メモリーＴ細胞はＣＤ８＋またはＣＤ４＋メモリーＴ細胞である。一部の実施形態において、メモリーＴ細胞はセントラルメモリーＴ細胞（ＴＣＭ）またはエフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）である。
本明細書に記載の任意の他の実施形態と組み合わせることができる一部の実施形態において、ウイルスは、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、インフルエンザウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、ヒトフォーミーウイルス（ＨＦＶ）、単純ヘルペスウイルス１（ＨＳＶ－１）、または単純ヘルペスウイルス２（ＨＳＶ－２）である。
本明細書に記載の任意の他の実施形態と組み合わせることができる一部の実施形態において、ＣＤ２８ポリペプチドはヒトＣＤ２８ポリペプチドであり、ＣＤ３ポリペプチドはヒトＣＤ３ポリペプチドであり、ＣＤ３８ポリペプチドはヒトＣＤ３８ポリペプチドである。
一部の実施形態において、上記の実施形態のいずれか１つの結合性タンパク質の第１、第２、第３、および第４のポリペプチド鎖をコードする１つまたはそれ以上のベクターを含む、ベクターシステムが本明細書において提供される。一部の実施形態において、ベクターシステムは、結合性タンパク質の第１のポリペプチド鎖をコードする第１のベクター、結合性タンパク質の第２のポリペプチド鎖をコードする第２のベクター、結合性タンパク質の第３のポリペプチド鎖をコードする第３のベクター、および結合性タンパク質の第４のポリペプチド鎖をコードする第４のベクターを含む。
一部の実施形態において、キットであって、上記の実施形態のいずれか１つによる結合性タンパク質の１、２、３、または４つのポリペプチド鎖を含む、前記キットが本明細書において提供される。一部の実施形態において、キットは、本明細書に記載の、例えば、上記の方法または使用のいずれかに従ってポリペプチド鎖または結合性タンパク質を使用するための使用説明書をさらに含む。
一部の実施形態において、キットであって、上記の実施形態のいずれか１つによる１、２、３、または４つのポリヌクレオチドを含む、前記キットが本明細書において提供される。一部の実施形態において、ポリヌクレオチドのキットであって、（ａ）配列番号１８９のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号１９０のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号１９１のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号１９２のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；（ｂ）配列番号１９３のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号１９４のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号１９５のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号１９６のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；（ｃ）配列番号１９７のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号１９８のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号１９９のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２００のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；（ｄ）配列番号２０１のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２０２のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２０３のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２０４のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；（ｅ）配列番号２０５のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２０６のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２０７のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２０８のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；（ｆ）配列番号２０９のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２１０のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２１１のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２１２のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；（ｇ）配列番号２１３のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２１４のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２１５のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２１６のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；（ｈ）配列番号２１７のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２１８のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２１９のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２２０のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；（ｉ）配列番号２２１のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２２２のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２２３のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２２４のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；（ｊ）配列番号２２５のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２２６のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２２７のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２２８のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；（ｋ）配列番号２２９のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２３０のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２３１のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２３２のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；（ｌ）配列番号２３３のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２３４のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２３５のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２３６のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；（ｍ）配列番号２３７のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２３８のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２３９のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２４０のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；（ｎ）配列番号２４１のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２４２のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２４３のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２４４のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；（ｏ）配列番号２４５のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２４６のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２４７のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２４８のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；（ｐ）配列番号２４９のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２５０のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２５１のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２５２のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；（ｑ）配列番号２５３のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２５４のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２５５のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２５６のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；（ｒ）配列番号２５７のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２５８のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２５９のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２６０のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；（ｓ）配列番号２６１のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２６２のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２６３のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２６４のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；（ｔ）配列番号２６５のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２６６のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２６７のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２６８のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；（ｕ）配列番号２６９のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２７０のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２７１のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２７２のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；または（ｖ）配列番号２７３のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２７４のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２７５のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２７６のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチドのキットの１、２、３、または４つのポリヌクレオチドを含む、前記キットが本明細書において提供される。
本明細書に記載の様々な実施形態の特性の１つ、一部、または全てを組み合わせて本発明の他の実施形態を形成させることができることが理解されるべきである。本発明のこれらおよび他の態様は当業者に明らかとなる。本発明のこれらおよび他の実施形態は、後続する詳細な説明によりさらに記載される。
３つの標的タンパク質：ＣＤ２８、ＣＤ３、およびＨＥＲ２に結合する３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含む三重特異性結合性タンパク質の概略図を提供する。ポリペプチドの第１のペアは、ＣＤ３およびＣＤ２８を認識する２つの抗原結合性部位を形成するクロスオーバーする方向（ＶＨ１－ＶＨ２およびＶＬ２－ＶＬ１）を有する二重可変ドメインを有し、ポリペプチドの第２のペアは、ＨＥＲ２を認識する単一の抗原結合性部位を形成する単一の可変ドメイン（ＶＨ３およびＶＬ３）を有する。図１Ａに示される三重特異性結合性タンパク質は、「ノブ－イントゥー－ホール」突然変異を有する定常領域を使用し、この場合、ノブは、単一の可変ドメインと共にポリペプチドの第２のペアにある。 図１Ｂは、示された抗ＨＥＲ２、抗ＣＤ３、および抗ＣＤ２８結合ドメインを使用した抗ＣＤ２８／ＣＤ３／ＨＥＲ２三重特異性抗体バリアントの結合親和性における変化倍数（親に対する）を提供する。突然変異３２３３ＱＱ～ＱＥＱ（上から下へ）は、抗ＣＤ３結合性部位のＶＬドメインの残基３２～３５に導入された突然変異（＊によって示される）を指す；残りの突然変異を、トラスツズマブ抗ＨＥＲ２結合性部位のＶＨまたはＶＬドメイン（＃によって示される；番号付けはＫａｂａｔに従う）に導入した。抗ＨＥＲ２結合性部位における突然変異の場合、突然変異３０ＱをＶＬドメインに導入し、残りの突然変異をＶＨドメインに導入した。結合親和性をＥＬＩＳＡによって測定し、提供される値は、親の三重特異性抗体に関連する。 図１Ｃは、ＥＬＩＳＡによって決定した場合の示されたヒトＨＥＲ２、ヒトＣＤ２８、およびＣＤ３に結合する三重特異性抗体の結合曲線を提供する。 図１Ｄは、ＨＥＲ２／ＣＤ２８×ＣＤ３三重特異性抗体媒介Ｔ細胞活性化およびＨＥＲ２＋がん細胞殺滅の提唱されている作用機序を提供する。 図２Ａは、３つの標的タンパク質：ＣＤ２８、ＣＤ３、およびＣＤ３８に結合する３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含む三重特異性結合性タンパク質の概略図を提供する。ポリペプチドの第１のペアは、ＣＤ３およびＣＤ２８を認識する２つの抗原結合性部位を形成するクロスオーバーする方向（ＶＨ１－ＶＨ２およびＶＬ２－ＶＬ１）を有する二重可変ドメインを有し、ポリペプチドの第２のペアは、ＣＤ３８を認識する単一の抗原結合性部位を形成する単一の可変ドメイン（ＶＨ３およびＶＬ３）を有する。図２Ａに示される三重特異性結合性タンパク質は、「ノブ－イントゥー－ホール」突然変異を有するＩｇＧ４定常領域を使用し、この場合、ノブは、単一の可変ドメインと共にポリペプチドの第２のペアにある。図２Ｂ～２Ｅは、ＥＬＩＳＡによって測定した場合の、標的抗原であるヒトＣＤ３８（図２Ｂ）、カニクイザルＣＤ３８（図２Ｃ）、ヒトＣＤ３（図２Ｄ）、およびヒトＣＤ２８（図２Ｅ）に対する、示された抗ＣＤ３８結合ドメインを有するＣＤ３８／ＣＤ２８ｓｕｐ×ＣＤ３ｍｉｄ＿ＥＮＬＱ ＤＫＴＨＴ ＩｇＧ４ ＦＡＬＡ三重特異性抗体の結合親和性を示す。 図２－１の続き。 図２－２の続き。 図３は、示された抗ＣＤ３８結合ドメインを有するダラツムマブおよび抗ＣＤ３８単一特異性抗体によるＣＤ３８への結合に関するＳＰＲ競合アッセイを示す。抗体がダラツムマブのものとは異なるＣＤ３８上のエピトープを認識した場合、抗体の注射はＳＰＲシグナルの増加をもたらした。抗体がダラツムマブとしてオーバーラップするエピトープを認識した場合、抗体の注射は、ＳＰＲシグナルを増加させなかった。 図４Ａ～４Ｂは、ヒト多発性骨髄腫ＮＣＩ－Ｈ９２９細胞（ＣＤ３８＋／ＣＤ２８＋）に対する、示された抗ＣＤ３８結合ドメインを有するＣＤ３８／ＣＤ２８ｓｕｐ×ＣＤ３ｍｉｄ＿ＥＮＬＱ ＤＫＴＨＴ ＩｇＧ４ ＦＡＬＡ三重特異性抗体のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞殺滅活性を示す。アッセイは、５ｎＭのアイソタイプ対照抗体（図４Ａ）またはダラツムマブ（図４Ｂ）の存在下で行われた。ダラツムマブの存在下で、三重特異性抗体は、細胞殺滅活性を呈示し続けた。 図５Ａ～５Ｂは、ヒトリンパ腫ＯＣＩ－Ｌｙ１９細胞（ＣＤ３８＋／ＣＤ２８－）に対する、示された抗ＣＤ３８結合ドメインを有するＣＤ３８／ＣＤ２８ｓｕｐ×ＣＤ３ｍｉｄ＿ＥＮＬＱ ＤＫＴＨＴ ＩｇＧ４ ＦＡＬＡ三重特異性抗体のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞殺滅活性を示す。アッセイは、５ｎＭのアイソタイプ対照抗体（図５Ａ）またはダラツムマブ（図５Ｂ）の存在下で行われた。ダラツムマブは、抗ＣＤ３８／ＣＤ２８×ＣＤ３三重特異性抗体の細胞殺滅活性における減少を引き起こした。 図６Ａ～６Ｊは、示された代替抗ＣＤ３８結合ドメインを有するＣＤ３８／ＣＤ２８ｓｕｐ×ＣＤ３ｍｉｄ＿ＥＮＬＱ ＤＫＴＨＴ ＩｇＧ４ ＦＡＬＡ三重特異性抗体に応答するＣＭＶ感染ドナーＤから収集されたＰＢＭＣ中のｉｎ ｖｉｔｒｏＴ細胞サブセット拡大増殖の特徴付けを示す。ＣＤ３８ＶＨ１抗ＣＤ３８結合ドメインが欠失した三重特異性抗体を、陰性対照として使用した（ΔＣＤ３８ＶＨ１／ΔＣＤ２８ｓｕｐ×ΔＣＤ３ｍｉｄ ＩｇＧ４ ＦＡＬＡ）。Ｔ細胞集団を示された時点で測定した（Ｄ３は３日目を指し；Ｄ７は７日目を指す）。示された三重特異性抗体を、０．２ｎＭおよび１ｎＭの示された濃度で試験した。フローサイトメトリーを使用して、ＣＭＶ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞（図６Ａ～６Ｂ）、ＣＭＶ特異的Ｔｃｍ ＣＤ８＋細胞（図６Ｃ～６Ｄ）、およびＣＭＶ特異的Ｔｅｍ ＣＤ８＋細胞（図６Ｅ～６Ｆ）を定量した。加えて、ＣＭＶ特異的Ｔｃｍ（図６Ｇ～６Ｈ）およびＴｅｍ（図６Ｉ～６Ｊ）ＣＤ８＋細胞のパーセンテージを示された時点で定量化した。全ての試験された三重特異性抗体は、ＣＭＶ特異的メモリーＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を、用量反応性の方式で異なる効力および動態で促進した。 図６－１の続き。 図６－２の続き。 図６－３の続き。 図６－４の続き。 図７Ａ～７Ｊは、示された抗ＣＤ３８結合ドメインを有するＣＤ３８／ＣＤ２８ｓｕｐ×ＣＤ３ｍｉｄ＿ＥＮＬＱ ＤＫＴＨＴ ＩｇＧ４ ＦＡＬＡ三重特異性抗体に応答する、ＣＭＶ感染ドナーＥから収集されたＰＢＭＣ中のｉｎ ｖｉｔｒｏＴ細胞サブセット拡大増殖の特徴付けを示す。ＣＤ３８ＶＨ１抗ＣＤ３８結合ドメインが欠失した三重特異性抗体を、陰性対照として使用した（ΔＣＤ３８ＶＨ１／ΔＣＤ２８ｓｕｐ×ΔＣＤ３ｍｉｄ ＩｇＧ４ ＦＡＬＡ）。凡例で上から下に示される抗体は、グラフ中で左から右に示される。Ｔ細胞集団を示された時点で測定した（Ｄ３は３日目を指し；Ｄ７は７日目を指す）。示された三重特異性抗体を、０．２ｎＭ、１ｎＭ、および２ｎＭの示された濃度で試験した。フローサイトメトリーを使用して、ＣＭＶ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞（図７Ａ～７Ｂ）、ＣＭＶ特異的Ｔｃｍ ＣＤ８＋細胞（図７Ｃ～７Ｄ）、およびＣＭＶ特異的Ｔｅｍ ＣＤ８＋細胞（図７Ｅ～７Ｆ）を定量した。加えて、ＣＭＶ特異的Ｔｃｍ（図７Ｇ～７Ｈ）およびＴｅｍ（図７Ｉ～７Ｊ）ＣＤ８＋細胞のパーセンテージを示された時点で定量化した。全ての試験された三重特異性抗体は、ＣＭＶ特異的メモリーＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を、用量応答の方式で異なる効力および動態で促進した。 図７－１の続き。 図７－２の続き。 図７－３の続き。 図７－４の続き。 図８Ａ～８Ｊは、示された代替抗ＣＤ３８結合ドメインを有するＣＤ３８／ＣＤ２８ｓｕｐ×ＣＤ３ｍｉｄ＿ＥＮＬＱ ＤＫＴＨＴ ＩｇＧ４ ＦＡＬＡ三重特異性抗体に応答する、ＥＢＶ感染ドナーＣから収集されたＰＢＭＣ中のｉｎ ｖｉｔｒｏＴ細胞サブセット拡大増殖の特徴付けを示す。ＣＤ３８ＶＨ１抗ＣＤ３８結合ドメインが欠失した三重特異性抗体を、陰性対照として使用した（ΔＣＤ３８ＶＨ１／ΔＣＤ２８ｓｕｐ×ΔＣＤ３ｍｉｄ ＩｇＧ４ ＦＡＬＡ）。Ｔ細胞集団を示された時点で測定した（Ｄ３は３日目を指し；Ｄ７は７日目を指す）。示された三重特異性抗体を、０．２ｎＭおよび１ｎＭの示された濃度で試験した。フローサイトメトリーを使用して、ＥＢＶ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞（図８Ａ～８Ｂ）、ＣＭＶ特異的Ｔｃｍ ＣＤ８＋細胞（図８Ｃ～８Ｄ）、およびＣＭＶ特異的Ｔｅｍ ＣＤ８＋細胞（図８Ｅ～８Ｆ）を定量した。加えて、ＥＢＶ特異的Ｔｃｍ（図８Ｇ～８Ｈ）およびＴｅｍ（図８Ｉ～８Ｊ）ＣＤ８＋細胞のパーセンテージを示された時点で定量化した。全ての試験された三重特異性抗体は、ＣＭＶ特異的メモリーＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を、用量応答の方式で異なる効力および動態で促進した。 図８－１の続き。 図８－２の続き。 図８－３の続き。 図８－４の続き。 図９Ａ～１２は、示された代替抗ＣＤ３８結合ドメインを有するＣＤ３８／ＣＤ２８ｓｕｐ×ＣＤ３ｍｉｄ＿ＥＮＬＱ ＤＫＴＨＴ ＩｇＧ４ ＦＡＬＡ三重特異性抗体に応答する、ＥＢＶ感染ドナーＤから収集されたＰＢＭＣ中のｉｎ ｖｉｔｒｏＴ細胞サブセット拡大増殖の特徴付けを示す。ＣＤ３８ＶＨ１抗ＣＤ３８結合ドメインが欠失した三重特異性抗体を、陰性対照として使用した（ΔＣＤ３８ＶＨ１／ΔＣＤ２８ｓｕｐ×ΔＣＤ３ｍｉｄ ＩｇＧ４ ＦＡＬＡ）。Ｔ細胞集団を示された時点で測定した（Ｄ３は３日目を指し；Ｄ７は７日目を指す）。示された三重特異性抗体を、０．２ｎＭおよび１ｎＭの示された濃度で試験した。フローサイトメトリーを使用して、ＥＢＶ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞（図９Ａ～９Ｂ）、ＥＢＶ特異的Ｔｃｍ ＣＤ８＋細胞（図９Ｃ～９Ｄ）、およびＥＢＶ特異的Ｔｅｍ ＣＤ８＋細胞（図９Ｅ～９Ｆ）を定量した。加えて、ＥＢＶ特異的Ｔｃｍ（図９Ｇ～１０）およびＴｅｍ（図１１～１２）ＣＤ８＋細胞のパーセンテージを示された時点で定量化した。全ての試験された三重特異性抗体は、ＥＢＶ特異的メモリーＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を、用量応答の方式で異なる効力および動態で促進した。 図９－１の続き。 図９－２の続き。 図９－３の続き。 図９Ａ～１２は、示された代替抗ＣＤ３８結合ドメインを有するＣＤ３８／ＣＤ２８ｓｕｐ×ＣＤ３ｍｉｄ＿ＥＮＬＱ ＤＫＴＨＴ ＩｇＧ４ ＦＡＬＡ三重特異性抗体に応答する、ＥＢＶ感染ドナーＤから収集されたＰＢＭＣ中のｉｎ ｖｉｔｒｏＴ細胞サブセット拡大増殖の特徴付けを示す。ＣＤ３８ＶＨ１抗ＣＤ３８結合ドメインが欠失した三重特異性抗体を、陰性対照として使用した（ΔＣＤ３８ＶＨ１／ΔＣＤ２８ｓｕｐ×ΔＣＤ３ｍｉｄ ＩｇＧ４ ＦＡＬＡ）。Ｔ細胞集団を示された時点で測定した（Ｄ３は３日目を指し；Ｄ７は７日目を指す）。示された三重特異性抗体を、０．２ｎＭおよび１ｎＭの示された濃度で試験した。フローサイトメトリーを使用して、ＥＢＶ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞（図９Ａ～９Ｂ）、ＥＢＶ特異的Ｔｃｍ ＣＤ８＋細胞（図９Ｃ～９Ｄ）、およびＥＢＶ特異的Ｔｅｍ ＣＤ８＋細胞（図９Ｅ～９Ｆ）を定量した。加えて、ＥＢＶ特異的Ｔｃｍ（図９Ｇ～１０）およびＴｅｍ（図１１～１２）ＣＤ８＋細胞のパーセンテージを示された時点で定量化した。全ての試験された三重特異性抗体は、ＥＢＶ特異的メモリーＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を、用量応答の方式で異なる効力および動態で促進した。 図９Ａ～１２は、示された代替抗ＣＤ３８結合ドメインを有するＣＤ３８／ＣＤ２８ｓｕｐ×ＣＤ３ｍｉｄ＿ＥＮＬＱ ＤＫＴＨＴ ＩｇＧ４ ＦＡＬＡ三重特異性抗体に応答する、ＥＢＶ感染ドナーＤから収集されたＰＢＭＣ中のｉｎ ｖｉｔｒｏＴ細胞サブセット拡大増殖の特徴付けを示す。ＣＤ３８ＶＨ１抗ＣＤ３８結合ドメインが欠失した三重特異性抗体を、陰性対照として使用した（ΔＣＤ３８ＶＨ１／ΔＣＤ２８ｓｕｐ×ΔＣＤ３ｍｉｄ ＩｇＧ４ ＦＡＬＡ）。Ｔ細胞集団を示された時点で測定した（Ｄ３は３日目を指し；Ｄ７は７日目を指す）。示された三重特異性抗体を、０．２ｎＭおよび１ｎＭの示された濃度で試験した。フローサイトメトリーを使用して、ＥＢＶ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞（図９Ａ～９Ｂ）、ＥＢＶ特異的Ｔｃｍ ＣＤ８＋細胞（図９Ｃ～９Ｄ）、およびＥＢＶ特異的Ｔｅｍ ＣＤ８＋細胞（図９Ｅ～９Ｆ）を定量した。加えて、ＥＢＶ特異的Ｔｃｍ（図９Ｇ～１０）およびＴｅｍ（図１１～１２）ＣＤ８＋細胞のパーセンテージを示された時点で定量化した。全ての試験された三重特異性抗体は、ＥＢＶ特異的メモリーＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を、用量応答の方式で異なる効力および動態で促進した。 図９Ａ～１２は、示された代替抗ＣＤ３８結合ドメインを有するＣＤ３８／ＣＤ２８ｓｕｐ×ＣＤ３ｍｉｄ＿ＥＮＬＱ ＤＫＴＨＴ ＩｇＧ４ ＦＡＬＡ三重特異性抗体に応答する、ＥＢＶ感染ドナーＤから収集されたＰＢＭＣ中のｉｎ ｖｉｔｒｏＴ細胞サブセット拡大増殖の特徴付けを示す。ＣＤ３８ＶＨ１抗ＣＤ３８結合ドメインが欠失した三重特異性抗体を、陰性対照として使用した（ΔＣＤ３８ＶＨ１／ΔＣＤ２８ｓｕｐ×ΔＣＤ３ｍｉｄ ＩｇＧ４ ＦＡＬＡ）。Ｔ細胞集団を示された時点で測定した（Ｄ３は３日目を指し；Ｄ７は７日目を指す）。示された三重特異性抗体を、０．２ｎＭおよび１ｎＭの示された濃度で試験した。フローサイトメトリーを使用して、ＥＢＶ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞（図９Ａ～９Ｂ）、ＥＢＶ特異的Ｔｃｍ ＣＤ８＋細胞（図９Ｃ～９Ｄ）、およびＥＢＶ特異的Ｔｅｍ ＣＤ８＋細胞（図９Ｅ～９Ｆ）を定量した。加えて、ＥＢＶ特異的Ｔｃｍ（図９Ｇ～１０）およびＴｅｍ（図１１～１２）ＣＤ８＋細胞のパーセンテージを示された時点で定量化した。全ての試験された三重特異性抗体は、ＥＢＶ特異的メモリーＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を、用量応答の方式で異なる効力および動態で促進した。 図１３Ａ～１３Ｄは、ｉｎ ｖｉｔｒｏで拡大増殖されたヒトＣＤ３＋Ｔ細胞が植え付けられたＺＲ－７５－１腫瘍を有するＮＳＧマウスにおける腫瘍体積（図１３Ａ）および体重（図１３Ｂ）における経時変化（日）を示す。マウス１０匹のグループを、ビヒクルまたはＨｅｒ２／ＣＤ２８×ＣＤ３三重特異性抗体のいずれかで、示された投薬量で処置した。矢印の先は、投与の日を示す。腫瘍体積は、平均±ＳＥＭ、ｍｍ３として描写される。体重変化は、変化％、平均±ＳＥＭとして描写される。Ｘ軸は、ＺＲ－７５－１細胞埋め込み後の日数を示す。図１３Ｃに、各処置グループにおける個々のマウス当たりの経時的な腫瘍体積（ｍｍ３）を示す。図１３Ｄに、各処置グループの腫瘍重量（ｍｇ）を示す。＊＊＝ｐ＜０．００１；＊＊＊＝ｐ＜０．０００３（二元配置ＡＮＯＶＡ、対照対１００および１０ｕｇ／ｋｇ）。 図１３－１の続き。 図１３－２の続き。 図１３－３の続き。 図１４Ａ～１４Ｃは、全血からのＴ細胞へのＨｅｒ２／ＣＤ２８×ＣＤ３三重特異性抗体処置の作用を示す。図１４Ａは、フローサイトメトリーによるｈＣＤ４５＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４＋、およびｍＣＤ４５＋細胞の分析を示す。図１４Ｂは、ｈＣＤ４５＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４＋、およびｍＣＤ４５＋細胞数への対照またはＨｅｒ２／ＣＤ２８×ＣＤ３三重特異性抗体処置（示された用量での）の作用を示す。図１４Ｃは、ヒト細胞比率（ＣＤ４＋／ＣＤ４５＋およびＣＤ８＋／ＣＤ４５＋）への対照またはＨｅｒ２／ＣＤ２８×ＣＤ３三重特異性抗体処置（示された用量での）の作用を示す。図１４Ｂおよび１４Ｃに示される各ｘ軸パラメーターにつき、条件は、（左から右へ）：対照、１００ｕｇ／ｋｇの三重特異性抗体、１０ｕｇ／ｋｇの三重特異性抗体、１ｕｇ／ｋｇの三重特異性抗体、および０．１ｕｇ／ｋｇの三重特異性抗体である。図１４Ｂおよび１４Ｃに示されるパーセンテージは、対照サンプル対１００ｕｇ／ｋｇに基づく。 図１４－１の続き。 図１５Ａ～１５Ｃは、免疫組織化学（ＩＨＣ）によって検査した場合の、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）へのＨｅｒ２／ＣＤ２８×ＣＤ３三重特異性抗体処置の作用を示す。矢印は、ＺＲ－７５－１乳房腫瘍で同定された腫瘍浸潤性Ｔ細胞を示す。上の画像は、１×倍率である；下の画像は、２０×倍率である。画像の両方のセットにおいて、ヒトＣＤ４５、ヒトＣＤ４、およびヒトＣＤ８の染色は左から右に示される。ビヒクル対照（図１５Ａ）、１００ｕｇ／ｋｇの三重特異性抗体（図１５Ｂ）、または０．１ｕｇ／ｋｇの三重特異性抗体（図１５Ｃ）で処置したマウスからの腫瘍を示す。 図１５－１の続き。 図１５－２の続き。 図１６Ａ～１６Ｃは、ＩＨＣによって測定した場合の、ＴＩＬへのＨｅｒ２／ＣＤ２８×ＣＤ３三重特異性抗体処置の作用の定量を示す。各ドットは、個々のマウスからの１つの腫瘍を表す；長方形は、グループ平均を表す；エラーバーは、標準偏差を示す。ビヒクル対照グループと比較した＊＝ｐ＜０．０５（ＡＮＯＶＡ）。ＣＤ４５＋（図１６Ａ）、ＣＤ４＋（図１６Ｂ）、またはＣＤ８＋（図１６Ｃ）細胞の数が示される。図１６Ｃにおいて、ＣＤ８のＩＨＣスライドにおける過剰な非特異的シグナルのために、細胞計数アルゴリズムの代わりに、＄領域定量アプローチをＣＤ８＋細胞に使用した。 図１６－１の続き。 図１６－２の続き。 図１７Ａ～１７Ｆは、抗ＨＥＲ２アームおよび抗ＣＤ３アームのＶＬドメイン中に突然変異を有するＨｅｒ２／ＣＤ２８×ＣＤ３三重特異性抗体と比較した、野生型トラスツズマブ抗原結合ドメインおよび抗ＣＤ３抗原結合ドメインを有し、ＶＬドメイン中に３２／３５ＱＱ突然変異を有さないＨｅｒ２／ＣＤ２８×ＣＤ３三重特異性抗体（「ｃｔｌ」）による、ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞の存在下におけるＨＥＲ２＋乳がん標的細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞溶解を示す（表１で示した通りの番号付け）。ＨＥＲ２の様々な発現を示す細胞株に対する細胞殺滅活性が描写される：高いＨＥＲ２発現の場合、ＨＣＣ１９５４（図１７Ａ）、中程度のＨＥＲ２発現の場合、ＢＴ２０（図１７Ｃ）、および低いＨＥＲ２発現の場合、ＭＤＡ－ＭＤ－２３１（図１７Ｅ）。結合性タンパク質＃２と対照または結合性タンパク質＃１および＃５と対照を比較した、標的細胞ＨＣＣ１９５４（図１７Ｂ）、ＢＴ２０（図１７Ｄ）、およびＭＤＡ－ＭＤ－２３１（図１７Ｆ）に対する抗体濃度の関数としての細胞殺滅を描写するグラフが示される。 図１７－１の続き。 図１７－２の続き。 図１７－３の続き。 図１７－４の続き。 図１７－５の続き。 図１８Ａおよび１８Ｂは、示された乳がん（図１８Ａ）または胃がん細胞株（図１８Ｂ）に対する実験または対照Ｈｅｒ２／ＣＤ２８×ＣＤ３三重特異性抗体によるｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞殺滅の平均ＥＣ５０（ｐＭ）を要約する。示された三重特異性抗体のアミノ酸配列は、表１に提供される。 図１８－１の続き。
本開示は、三重特異性および／または三価結合性タンパク質であって、１つまたはそれ以上の標的タンパク質に特異的に結合する３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、該結合性タンパク質を形成するポリペプチドの第１のペアは、クロスオーバー配向性を有する二重可変ドメインを持つ、前記結合性タンパク質を提供する。
一般的定義
本開示に従って利用される場合、以下の用語は、他に指し示されなければ、以下の意味を有するものと理解される。文脈により他に要求されなければ、単数の用語は複数を含み、複数の用語は単数を含む。
本明細書に記載の開示の態様および実施形態は、「含む」、「からなる」、および「から本質的になる」態様および実施形態を含むことが理解される。
「ポリヌクレオチド」という用語は、本明細書において使用される場合、少なくとも１０ヌクレオチドの長さの一本鎖または二本鎖核酸ポリマーを指す。ある特定の実施形態において、ポリヌクレオチドを構成するヌクレオチドは、リボヌクレオチドもしくはデオキシリボヌクレオチドまたはいずれかの種類のヌクレオチドの修飾形態であり得る。そのような修飾としては、塩基修飾、例えばブロモウリジン、リボース修飾、例えばアラビノシドおよび２’，３’－ジデオキシリボース、ならびにヌクレオチド間連結修飾、例えばホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレノエート、ホスホロジセレノエート、ホスホロアニロチオエート、ホスホロアニラデートおよびホスホロアミデートを挙げることができる。「ポリヌクレオチド」という用語は、ＤＮＡの一本鎖および二本鎖形態を特に含む。
「単離されたポリヌクレオチド」は、ゲノム、ｃＤＮＡ、もしくは合成起源またはこれらの何らかの組合せのポリヌクレオチドであって、（１）単離されたポリヌクレオチドが天然において見出されるポリヌクレオチドの全てもしくは部分と会合しておらず、（２）天然において連結していないポリヌクレオチドに連結しており、または（３）より大きい配列の部分として天然において存在しないものである。
「単離されたポリペプチド」は、（１）通常それと共に見出される少なくとも一部の他のポリペプチドから遊離しており、（２）同じ供給源、例えば、同じ種からの他のポリペプチドから本質的に遊離しており、（３）異なる種からの細胞により発現され、（４）天然においてそれに会合しているポリヌクレオチド、脂質、炭水化物、もしくは他の材料の少なくとも約５０パーセントから分離されており、（５）「単離されたポリペプチド」が天然において会合しているポリペプチドの部分と（共有もしくは非共有相互作用により）会合しておらず、（６）天然において会合していないポリペプチドと（共有もしくは非共有相互作用により）作動可能に会合しており、または（７）天然において存在しない、ポリペプチドである。そのような単離されたポリペプチドを、合成起源の、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡもしくは他のＲＮＡ、またはこれらの任意の組合せはコードすることができる。好ましくは、単離されたポリペプチドは、その使用（治療的、診断的、予防的、研究またはその他）に干渉するその天然の環境において見出されるポリペプチドまたは他の夾雑物から実質的に遊離している。
天然に存在する抗体は典型的には四量体を含む。各そのような四量体は、典型的には、各ペアが１つの全長「軽」鎖（典型的には約２５ｋＤａの分子量を有する）および１つの全長「重」鎖（典型的には約５０～７０ｋＤａの分子量を有する）を有する、ポリペプチド鎖の２つの同一のペアから構成される。「重鎖」および「軽鎖」という用語は、本明細書において使用される場合、標的抗原に対する特異性を付与するために十分な可変ドメイン配列を有する任意の免疫グロブリンポリペプチドを指す。各軽鎖および重鎖のアミノ末端部分は、典型的には、典型的には抗原認識の原因となる約１００～１１０またはそれより多くのアミノ酸の可変ドメインを含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、典型的には、エフェクター機能の原因となる定常ドメインを定義する。そのため、天然に存在する抗体において、全長重鎖免疫グロブリンポリペプチドは可変ドメイン（ＶＨ）ならびに３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３）を含み、ＶＨドメインはポリペプチドのアミノ末端にあり、ＣＨ３ドメインはカルボキシル末端にあり、全長軽鎖免疫グロブリンポリペプチドは可変ドメイン（ＶＬ）および定常ドメイン（ＣＬ）を含み、ＶＬドメインはポリペプチドのアミノ末端にあり、ＣＬドメインはカルボキシル末端にある。
ヒト軽鎖は典型的にはカッパおよびラムダ軽鎖として分類され、ヒト重鎖は、典型的には、ミュー、デルタ、ガンマ、アルファ、またはイプシロンとして分類され、それぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＥとして抗体のアイソタイプを定義する。ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４が挙げられるがこれらに限定されない、いくつかのサブクラスを有する。ＩｇＭは、ＩｇＭ１およびＩｇＭ２が挙げられるがこれらに限定されない、サブクラスを有する。ＩｇＡは同様に、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２が挙げられるがこれらに限定されない、サブクラスにさらに分けられる。全長軽鎖および重鎖内で、可変および定常ドメインは、典型的には、約１２またはそれより多くのアミノ酸の「Ｊ」領域により接合されており、重鎖はまた、約１０個のさらなるアミノ酸の「Ｄ」領域を含む。例えば、ＦＵＮＤＡＭＥＮＴＡＬ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ（Ｐａｕｌ， Ｗ．， ｅｄ．、Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ、２ｎｄ ｅｄ．、１９８９）（参照によって全ての目的のために全体として組み入れる）を参照。各軽鎖／重鎖ペアの可変領域は典型的には抗原結合性部位を形成する。天然に存在する抗体の可変ドメインは、典型的には、相補性決定領域またはＣＤＲとも呼ばれる３つの超可変領域により接合された相対的に保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）という同じ全体構造を呈する。各ペアの２つの鎖からのＣＤＲは典型的にはフレームワーク領域によりアライメントされ、これは特異的なエピトープへの結合を可能にし得る。アミノ末端からカルボキシル末端へ、軽鎖および重鎖の両方の可変ドメインは、典型的には、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、およびＦＲ４を含む。
「ＣＤＲセット」という用語は、抗原に結合することができる単一の可変領域中に存在する３つのＣＤＲの群を指す。これらのＣＤＲの正確な境界は、異なるシステムに従って異なって定義されている。Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．、ＳＥＱＵＥＮＣＥＳ ＯＦ ＰＲＯＴＥＩＮＳ ＯＦ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＩＣＡＬ ＩＮＴＥＲＥＳＴ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ． （１９８７）および（１９９１））により記載されるシステムは、抗体の任意の可変領域に適用可能な明瞭な残基ナンバリングシステムを提供するだけではなく、３つのＣＤＲを定義する精密な残基境界も提供する。これらのＣＤＲをＫａｂａｔ ＣＤＲと称することができる。Ｃｈｏｔｈｉａおよび共同研究者ら（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ、１９８７、Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． １９６：９０１～１７頁；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．、１９８９、Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７～８３頁）は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ内のある特定の下位部分は、アミノ酸配列のレベルで大きな多様性を有するにもかかわらず、同一に近いペプチド骨格コンホメーションをとっていることを見出した。これらの下位部分は、Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３またはＨ１、Ｈ２、およびＨ３と呼称され、「Ｌ」および「Ｈ」はそれぞれ軽鎖および重鎖領域を指す。これらの領域をＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲと称することができ、Ｋａｂａｔ ＣＤＲとオーバーラップする境界を有する。Ｋａｂａｔ ＣＤＲとオーバーラップするＣＤＲを定義する他の境界は、Ｐａｄｌａｎ、１９９５、ＦＡＳＥＢ Ｊ． ９：１３３～３９頁；ＭａｃＣａｌｌｕｍ、１９９６、Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２６２（５）：７３２～４５頁；およびＬｅｆｒａｎｃ、２００３、Ｄｅｖ． Ｃｏｍｐ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２７：５５～７７頁により記載されている。さらに他のＣＤＲ境界定義は、本明細書におけるシステムの１つに厳密には従っていないことがあるが、それにもかかわらずＫａｂａｔ ＣＤＲとオーバーラップし、但し、特定の残基または残基の群またはさらにはＣＤＲ全体は抗原結合に有意に影響しないという予測または実験的発見に照らして短鎖化または長鎖化されていることがある。本明細書において使用される方法は、これらのシステムのいずれかに従って定義されるＣＤＲを利用することができるが、ある特定の実施形態はＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａ定義のＣＤＲを使用する。アミノ酸配列を使用する予測されるＣＤＲの同定は、Ｍａｒｔｉｎ， Ａ．Ｃ．、「Ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｍａｉｎｓ」、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、Ｖｏｌ． ２． Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ Ｒ．、Ｄｕｂｅｌ Ｓ．編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ、Ｂｅｒｌｉｎ、３３～５１頁（２０１０）などにおけるように、当該分野において周知である。他の従来の方法により、例えば、他の重鎖および軽鎖可変領域の既知のアミノ酸配列と比較して配列超可変性の領域を決定することにより、重鎖および／または軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列を精査して、ＣＤＲの配列を同定することができる。ナンバリングされた配列は、目視により、またはアライメントプログラム、例えば、Ｔｈｏｍｐｓｏｎ、１９９４、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． ２２：４６７３～８０頁に記載されるようなＣＬＵＳＴＡＬスイートのプログラムの１つを用いることにより、アライメントすることができる。フレームワークおよびＣＤＲ領域、ならびにそのため正確な配列ベースの割り当てを正確に描写するために分子モデルが従来使用されている。
「Ｆｃ」という用語は、本明細書において使用される場合、単量体または多量体のいずれの形態であれ、抗体の消化の結果としてもたらされるまたは他の手段により産生される非抗原結合性断片の配列を含む分子を指し、ヒンジ領域を含有することができる。ネイティブなＦｃの元々の免疫グロブリン供給源は好ましくはヒト起源であり、免疫グロブリンのいずれかであり得るが、ＩｇＧ１およびＩｇＧ２が好ましい。Ｆｃ分子は、共有性（すなわち、ジスルフィド結合）および非共有性の会合により連結されて二量体または多量体形態となることができる単量体ポリペプチドから構成される。ネイティブなＦｃ分子の単量体サブユニットの間の分子間ジスルフィド結合の数は、クラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＥ）またはサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＡ１、およびＩｇＧＡ２）に依存して、１～４の範囲内である。Ｆｃの１つの例は、ＩｇＧのパパイン消化の結果としてもたらされるジスルフィド結合した二量体である。「ネイティブなＦｃ」という用語は、本明細書において使用される場合、単量体、二量体、および多量体形態に対して包括的である。
Ｆ（ａｂ）断片は、典型的には、１つの軽鎖ならびに１つの重鎖のＶＨおよびＣＨ１ドメインを含み、Ｆ（ａｂ）断片のＶＨ－ＣＨ１重鎖部分は別の重鎖ポリペプチドとジスルフィド結合を形成することができない。本明細書において使用される場合、Ｆ（ａｂ）断片はまた、アミノ酸リンカーにより分離された２つの可変ドメインを含有する１つの軽鎖ならびにアミノ酸リンカーにより分離された２つの可変ドメインおよびＣＨ１ドメインを含有する１つの重鎖を含むことができる。
Ｆ（ａｂ’）断片は、典型的には、１つの軽鎖ならびに（ＣＨ１およびＣＨ２ドメインの間に）さらなる定常領域を含有する１つの重鎖の部分を含み、その結果、鎖間ジスルフィド結合が２つの重鎖の間に形成されてＦ（ａｂ’）２分子を形成することができる。
「結合性タンパク質」という用語は、本明細書において使用される場合、少なくとも１つの標的抗原に特異的に結合する天然に存在しない（または組換えもしくは工学的に操作された）分子を指す。本開示の三重特異性結合性タンパク質は、他に指定されなければ、典型的には、少なくとも３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＣＬ ［Ｉ］
により表される構造を有し、
第２のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２－Ｌ４－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩ］
により表される構造を有し、
第３のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ３－ＣＨ１ ［ＩＩＩ］
により表される構造を有し、
第４のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ３－ＣＬ ［ＩＶ］
により表される構造を有し、
ここで、
ＶＬ１は第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
ヒンジは、ＣＨ１およびＣＨ２ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４はアミノ酸リンカーであり；
式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドはクロスオーバー軽鎖－重鎖ペアを形成する。
「組換え」分子は、組換え手段により製造、発現、作出、または単離された分子である。
本開示の１つの実施形態は、１～３個の標的抗原に対して生物学的および免疫学的特異性を有する結合性タンパク質を提供する。本開示の別の実施形態は、そのような結合性タンパク質を形成するポリペプチド鎖をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を提供する。本開示の別の実施形態は、そのような結合性タンパク質を形成するポリペプチド鎖をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を含む発現ベクターを提供する。本開示のさらに別の実施形態は、そのような結合性タンパク質を発現する（すなわち、そのような結合性タンパク質を形成するポリペプチド鎖をコードする核酸分子またはベクターを含む）宿主細胞を提供する。
「スワップ可能性」という用語は、本明細書において使用される場合、結合性タンパク質フォーマット内の、ならびにフォールディングおよび究極的な結合親和性の保持を伴う、可変ドメインの互換性を指す。「全スワップ可能性」は、結合親和性の保持により立証されるような結合性タンパク質の全機能性を維持しながら式Ｉのポリペプチド鎖または式ＩＩのポリペプチド鎖におけるＶＨ１およびＶＨ２の両方のドメインの順序、ならびにしたがってＶＬ１およびＶＬ２ドメインの順序をスワップする（すなわち、順序を逆転させる）能力を指す。さらには、ＶＨおよびＶＬという呼称は、最終のフォーマットにおける特定のタンパク質鎖上のドメインの位置を指すに過ぎないことを留意すべきである。例えば、ＶＨ１およびＶＨ２は、親抗体中のＶＬ１およびＶＬ２ドメインに由来することができ、結合性タンパク質中のＶＨ１およびＶＨ２位置に置くことができる。同様に、ＶＬ１およびＶＬ２は、親抗体中のＶＨ１およびＶＨ２ドメインに由来することができ、結合性タンパク質中のＶＨ１およびＶＨ２位置に置くことができる。そのため、ＶＨおよびＶＬという呼称は現在の位置を指し、親抗体中の元々の位置を指すものではない。ＶＨおよびＶＬドメインはしたがって「スワップ可能」である。
「抗原」または「標的抗原」または「抗原標的」という用語は、本明細書において使用される場合、結合性タンパク質が結合することができ、追加的に動物において使用されてその抗原のエピトープに結合することができる抗体を産生することができる、分子または分子の部分を指す。標的抗原は１つまたはそれ以上のエピトープを有してもよい。結合性タンパク質により認識される各標的抗原に関して、結合性タンパク質は、標的抗原を認識するインタクトな抗体と競合することができる。
「Ｈｅｒ２」という用語は、上皮増殖因子受容体ファミリーのメンバーであるヒト上皮増殖因子受容体２を指す。
「ＣＤ３」は、分化抗原群因子３ポリペプチドであり、典型的にはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体の部分であるＴ細胞表面タンパク質である。
「ＣＤ２８」は、分化抗原群２８ポリペプチドであり、Ｔ細胞活性化および生存のための共刺激シグナルを提供するＴ細胞表面タンパク質である。
「ＣＤ３８」は、分化抗原群３８ポリペプチドであり、多くの免疫細胞の表面上に見出される糖タンパク質である。
「Ｔ細胞エンゲージャー」という用語は、宿主の免疫系、より特にはＴ細胞の細胞傷害活性に方向付けられている他に、腫瘍標的タンパク質に方向付けられた結合性タンパク質を指す。
「単一特異性結合性タンパク質」という用語は、１つの抗原標的に特異的に結合する結合性タンパク質を指す。
「一価結合性タンパク質」という用語は、１つの抗原結合性部位を有する結合性タンパク質を指す。
「二重特異性結合性タンパク質」という用語は、２つの異なる抗原標的に特異的に結合する結合性タンパク質を指す。
「二価結合性タンパク質」という用語は、２つの結合性部位を有する結合性タンパク質を指す。
「三重特異性結合性タンパク質」という用語は、３つの異なる抗原標的に特異的に結合する結合性タンパク質を指す。
「三価結合性タンパク質」という用語は、３つの結合性部位を有する結合性タンパク質を指す。特定の実施形態において、三価結合性タンパク質は１つの抗原標的に結合することができる。他の実施形態において、三価結合性タンパク質は２つの抗原標的に結合することができる。他の実施形態において、三価結合性タンパク質は３つの抗原標的に結合することができる。
「単離された」結合性タンパク質は、同定ならびにその天然の環境の成分から分離および／または回収された結合性タンパク質である。その天然の環境の夾雑物成分は、結合性タンパク質の診断的または治療的使用に干渉する材料であり、酵素、ホルモン、および他のタンパク質性または非タンパク質性溶質を挙げることができる。一部の実施形態において、結合性タンパク質は、（１）ローリー法による決定で９５重量％より高い、最も好ましくは９９重量％より高い抗体まで、（２）スピニングカップシークエネーターの使用によりＮ末端もしくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５個の残基を得るために十分な程度まで、または（３）クマシーブルーもしくは好ましくは銀染色剤を使用する還元もしくは非還元条件下でのＳＤＳ－ＰＡＧＥにより均質状態まで、精製される。結合性タンパク質の天然の環境の少なくとも１つの成分が存在しないので、単離された結合性タンパク質としては、組換え細胞内のｉｎ ｓｉｔｕの結合性タンパク質が挙げられる。
「実質的に純粋な」または「実質的に精製された」という用語は、本明細書において使用される場合、存在する優勢な種である化合物または種を指す（すなわち、それは、モル濃度を基準にして組成物中の任意の他の個々の種よりも豊富に存在する）。一部の実施形態において、実質的に精製された画分は、種が、存在する全ての高分子種の少なくとも約５０％（モル濃度を基準にして）を構成する組成物である。他の実施形態において、実質的に純粋な組成物は、組成物中に存在する全ての高分子種が約８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％より多くを構成する組成物である。さらに他の実施形態において、種は、組成物が単一の高分子種から本質的になる本質的な均質状態まで精製される（夾雑物種は従来の検出方法により組成物中に検出することができない）。
「エピトープ」という用語は、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体に特異的に結合することができる任意の決定因子、好ましくはポリペプチド決定因子を含む。ある特定の実施形態において、エピトープ決定因子は、分子の化学的活性表面グループ分け、例えばアミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基、またはスルホニル基を含み、ある特定の実施形態において、特有の三次元構造的特徴および／または特有の電荷的特徴を有してもよい。エピトープは、抗体または結合性タンパク質により結合される抗原の領域である。ある特定の実施形態において、結合性タンパク質は、タンパク質および／または高分子の複雑な混合物中でその標的抗原を優先的に認識する場合に、抗原に特異的に結合するといわれる。一部の実施形態において、平衡解離定数が≦１０－８Ｍである場合に、より好ましくは平衡解離定数が≦１０－９Ｍである場合に、最も好ましくは解離定数が≦１０－１０Ｍである場合に、結合性タンパク質は抗原に特異的に結合するといわれる。
結合性タンパク質の解離定数（ＫＤ）は、例えば、表面プラズモン共鳴により決定することができる。一般に、表面プラズモン共鳴分析は、ＢＩＡｃｏｒｅシステム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ；Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を使用して表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によりリガンド（バイオセンサーマトリックス上の標的抗原）およびアナライト（溶液中の結合性タンパク質）の間のリアルタイム結合相互作用を測定する。表面プラズモン分析はまた、アナライト（バイオセンサーマトリックス上の結合性タンパク質）を固定化することおよびリガンド（標的抗原）を提示することにより行うことができる。「ＫＤ」という用語は、本明細書において使用される場合、特定の結合性タンパク質および標的抗原の間の相互作用の解離定数を指す。
「特異的に結合する」という用語は、本明細書において使用される場合、約１×１０－６Ｍ、１×１０－７Ｍ、１×１０－８Ｍ、１×１０－９Ｍ、１×１０－１０Ｍ、１×１０－１１Ｍ、１×１０－１２Ｍ、もしくはそれ以下のＫｄでエピトープを含有する抗原に結合する、かつ／または非特異的な抗原に対するその親和性よりも少なくとも２倍高い親和性でエピトープに結合する結合性タンパク質またはその抗原結合性断片の能力を指す。
一部の実施形態において、本開示の抗原結合性ドメインおよび／または結合性タンパク質は、ヒトおよびカニクイザルＣＤ３８ポリペプチド、例えば、ＣＤ３８細胞外ドメイン、ヒトＣＤ３８アイソフォームＡ、ヒトＣＤ３８アイソフォームＥ、およびカニクイザルＣＤ３８と「交差反応」する。ＥＣ５０が両方の抗原について類似した範囲内にある場合に、抗原１（Ａｇ１）に対する結合性タンパク質の結合は抗原２（Ａｇ２）に対して「交差反応性」である。本出願において、Ａｇ１の親和性に対するＡｇ２の親和性の比が等しいまたは２０未満である場合に、Ａｇ１に対する結合性タンパク質の結合はＡｇ２に対して交差反応性であり、ここで親和性は両方の抗原について同じ方法を用いて測定される。
「リンカー」という用語は、本明細書において使用される場合、免疫グロブリンドメインの間に挿入されて、クロスオーバー二重可変領域免疫グロブリンにフォールディングさせるために十分なモビリティを軽鎖および重鎖のドメインに提供する、１つまたはそれ以上のアミノ酸残基を指す。リンカーは、配列レベルでの、可変ドメインの間または可変ドメインおよび定常ドメインの間の転移で挿入される。免疫グロブリンドメインのおおよそのサイズはよく理解されているので、ドメインの間の転移を同定することができる。ドメイン転移の精密な位置は、実験データにより実証されるようなまたはモデリングもしくは二次構造予測の技術により推定できるような二次構造要素、例えばベータシートまたはアルファ－ヘリックスを形成しないペプチドストレッチを位置決めすることにより決定することができる。本明細書に記載のリンカーは、ＶＬ２ドメインのＣ末端およびＶＬ１ドメインのＮ末端の間で軽鎖上に位置するＬ１；ならびにＶＬ１ドメインのＣ末端およびＣＬドメインのＮ末端の間で軽鎖上に位置するＬ２と称される。重鎖リンカーは、ＶＨ１ドメインのＣ末端およびＶＨ２ドメインのＮ末端の間に位置するＬ３；ならびにＶＨ２ドメインのＣ末端およびＣＨ１ドメインのＮ末端の間に位置するＬ４として知られる。
「ベクター」という用語は、本明細書において使用される場合、コーディング情報を宿主細胞に伝達するために使用される任意の分子（例えば、核酸、プラスミド、またはウイルス）を指す。「ベクター」という用語は、それが連結された別の核酸を輸送することができる核酸分子を含む。ベクターの１つの種類は「プラスミド」であり、これは、追加のＤＮＡセグメントをその中に挿入することができる環状二本鎖ＤＮＡ分子を指す。ベクターの別の種類はウイルスベクターであり、ウイルスベクターでは、追加のＤＮＡセグメントをウイルスゲノムに挿入することができる。ある特定のベクターは、それらが導入される宿主細胞中で自律複製することができる（例えば、細菌複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入で宿主細胞のゲノムに組み込むことができ、それにより宿主ゲノムと共に複製される。追加的に、ある特定のベクターは、それらが作動可能に連結された遺伝子の発現を指令することができる。そのようなベクターは本明細書において「組換え発現ベクター」（または単純に、「発現ベクター」）と称される。一般に、組換えＤＮＡ技術において有用な発現ベクターは多くの場合にプラスミドの形態である。プラスミドは最も一般的に使用されるベクターの形態であるので、「プラスミド」および「ベクター」という用語は本明細書において交換可能に使用されることがある。しかしながら、本開示は、同等の機能に役立つ発現ベクターの他の形態、例えばウイルスベクター（例えば、複製欠陥性レトロウイルス、アデノウイルス、およびアデノ随伴ウイルス）を含むことが意図される。
「組換え宿主細胞」（または「宿主細胞」）という語句は、本明細書において使用される場合、組換え発現ベクターが導入された細胞を指す。組換え宿主細胞または宿主細胞は、特定の対象細胞だけではなく、そのような細胞の子孫も指すことが意図される。突然変異または環境上の影響のいずれかに起因してある特定の改変が連続する世代において起こり得るので、そのような子孫は実際には親細胞と同一でないことがあるが、そのような細胞は依然として、本明細書において使用される場合の「宿主細胞」という用語の範囲内に含まれる。多様な宿主細胞発現系を使用して結合性タンパク質を発現させることができ、該発現系としては、細菌、酵母、バキュロウイルス、および哺乳動物発現系（ならびにファージディスプレイ発現系）が挙げられる。好適な細菌発現ベクターの例はｐＵＣ１９である。結合性タンパク質を組換えにより発現させるために、結合性タンパク質のポリペプチド鎖をコードするＤＮＡ断片を有する１つまたはそれ以上の組換え発現ベクターを用いて宿主細胞は形質転換またはトランスフェクトされ、その結果、ポリペプチド鎖は宿主細胞中で発現され、好ましくは、宿主細胞が培養される培地中に分泌され、該培地から結合性タンパク質を回収することができる。
「形質転換」という用語は、本明細書において使用される場合、細胞の遺伝学的特徴における変化を指し、細胞は、新たなＤＮＡを含有するように改変されている場合に、形質転換されている。例えば、細胞は形質転換され、そのネイティブな状態から遺伝学的に改変される。形質転換後に、形質転換性ＤＮＡは、細胞の染色体に物理的に組み込まれることにより細胞のＤＮＡと組換えを起こすことができ、または複製されることなくエピソームエレメントとして一過的に維持することができ、またはプラスミドとして独立して複製することができる。ＤＮＡが細胞の分裂と共に複製される場合に、細胞は安定的に形質転換されたと考えられる。「トランスフェクション」という用語は、本明細書において使用される場合、細胞による外来性または外因性ＤＮＡの取込みを指し、外因性ＤＮＡが細胞膜の内側に導入された場合に、細胞は「トランスフェクト」されている。多数のトランスフェクション技術が当技術分野において周知である。そのような技術を使用して、１つまたはそれ以上の外因性ＤＮＡ分子を好適な宿主細胞に導入することができる。
「天然に存在するという用語」は、本明細書において使用され、物体に適用される場合、物体は天然において見出すことができ、人間により操作されていないという事実を指す。例えば、天然における供給源から単離することができ、人間により意図的に改変されていない生物（ウイルスを含む）中に存在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは天然に存在する。同様に、「天然に存在しない」は、本明細書において使用される場合、天然において見出されないか、または人間により構造的に改変もしくは合成されている物体を指す。
本明細書において使用される場合、２０個の従来型アミノ酸およびそれらの略語は従来の用法に従う。２０個の従来型アミノ酸の立体異性体（例えば、Ｄ－アミノ酸）；非天然アミノ酸およびアナログ、例えばα－、α－二置換アミノ酸、Ｎ－アルキルアミノ酸、乳酸、および他の非従来型アミノ酸もまた、結合性タンパク質のポリペプチド鎖のための好適な成分であり得る。非従来型アミノ酸の例としては、４－ヒドロキシプロリン、γ－カルボキシグルタメート、ε－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチルリジン、ε－Ｎ－アセチルリジン、Ｏ－ホスホセリン、Ｎ－アセチルセリン、Ｎ－ホルミルメチオニン、３－メチルヒスチジン、５－ヒドロキシリジン、σ－Ｎ－メチルアルギニン、ならびに他の類似したアミノ酸およびイミノ酸（例えば、４－ヒドロキシプロリン）が挙げられる。本明細書において使用されるポリペプチド表記において、標準的な用法および慣習に従って、左手方向はアミノ末端方向であり、右手方向はカルボキシル末端方向である。
天然に存在する残基は、共通の側鎖特性に基づいてクラスに分けることができる：
（１）疎水性：Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｒｏ；
（２）極性親水性：Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；
（３）脂肪族：Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｐｒｏ；
（４）脂肪族疎水性：Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｐｒｏ；
（５）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（６）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（７）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（８）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（９）芳香族：Ｈｉｓ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ；および
（１０）芳香族疎水性：Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ。
保存的アミノ酸置換は、これらの１つのクラスのメンバーの、同じクラスの別のメンバーでの交換を伴ってもよい。非保存的置換は、これらの１つのクラスのメンバーの、別のクラスのメンバーでの交換を伴ってもよい。
当業者は、周知の技術を使用して結合性タンパク質のポリペプチド鎖の好適なバリアントを決定することができる。例えば、当業者は、活性のために重要であるとは思われない領域を標的化することにより活性を破壊することなく変化させることができるポリペプチド鎖の好適な区画を同定してもよい。代替的に、当業者は、類似したポリペプチドの間で保存された残基および分子の部分を同定することができる。追加的に、生物学的活性または構造のために重要であり得る区画であっても、生物学的活性を破壊することなくまたはポリペプチド構造に不利に影響することなく保存的アミノ酸置換に供することができる。
「患者」という用語は、本明細書において使用される場合、ヒトおよび動物対象を含む。
「処置」または「処置する」という用語は、本明細書において使用される場合、治療的処置および予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）または予防的（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）手段の両方を指す。処置を必要とする者としては、障害を有する者の他に、障害を有する素因がある者または障害が予防されるべき者が挙げられる。特定の実施形態において、結合性タンパク質を使用して、がんを有するヒト、もしくはがんに罹りやすいヒトを処置することができ、またはヒト対象においてがんを寛解させることができる。結合性タンパク質を使用して、ヒト患者においてがんを予防することもできる。特定の実施形態において、がんは、多発性骨髄腫、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、リンパ腫、乳がん、例えばＨｅｒ２＋乳がん、胚中心Ｂ細胞リンパ腫またはＢ細胞急性リンパ芽球性白血病であり、他の実施形態において、結合性タンパク質を使用して、炎症性障害を有するヒト、もしくは炎症性障害に罹りやすいヒトを処置することができ、またはヒト対象において炎症性障害を寛解させることができる。
「医薬組成物」または「治療用組成物」という用語は、本明細書において使用される場合、患者に適切に投与された場合に所望の治療効果を誘導することができる化合物または組成物を指す。
「薬学的に許容される担体」または「生理学的に許容される担体」という用語は、本明細書において使用される場合、結合性タンパク質の送達を達成または増強するために好適な１つまたはそれ以上の製剤材料を指す。
「有効量」および「治療有効量」という用語は、１つまたはそれ以上の結合性タンパク質を含む医薬組成物に関して使用される場合、所望の治療結果を生成するために十分な量または投薬量を指す。より特には、治療有効量は、処置されている状態に伴う臨床的に定義される病理学的プロセスの１つまたはそれ以上を何らかの時間的期間にわたり阻害するために十分な結合性タンパク質の量である。有効量は、使用されている特異的結合性タンパク質に依存して、ならびに処置されている患者に関する様々な要因および条件ならびに障害の重症度にも依存して、変動し得る。例えば、結合性タンパク質がｉｎ ｖｉｖｏで投与される場合、患者の年齢、体重、および健康の他に、前臨床動物実験において得られた用量応答曲線および毒性データなどの要因は、考慮される要因に含まれる。所与の医薬組成物の有効量または治療有効量の決定は十分に当業者の能力の範囲内である。
本開示の１つの実施形態は、薬学的に許容される担体および治療有効量の結合性タンパク質を含む医薬組成物を提供する。
三重特異性および／または三価結合性タンパク質
本開示のある特定の態様は、三重特異性および／または三価結合性タンパク質であって、１つまたはそれ以上の標的タンパク質に特異的に結合する３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、該結合性タンパク質を形成するポリペプチドの第１のペアは、クロスオーバー配向性を有する二重可変ドメインを持ち、該結合性タンパク質を形成するポリペプチドの第２のペアは単一の可変ドメインを持つ、前記結合性タンパク質に関する。本明細書に記載の任意の抗原結合性タンパク質の任意のＣＤＲまたは可変ドメインは、本開示の三重特異性結合性タンパク質において用途を有し得る。
一部の実施形態において、３つの抗原結合性部位のそれぞれは異なる標的（例えば、ポリペプチド抗原）に結合する。一部の実施形態において、三重特異性結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＣＬ ［Ｉ］
により表される構造を含み、
第２のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２－Ｌ４－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩ］
により表される構造を含み、
第３のポリペプチド鎖は、式：
ＶＨ３－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩＩ］
により表される構造を含み、
第４のポリペプチド鎖は、式：
ＶＬ３－ＣＬ ［ＩＶ］
により表される構造を含み、
ここで、
ＶＬ１は第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ２は第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＬ３は第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶＨ１は第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ２は第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶＨ３は第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣＬは免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣＨ１は免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ２は免疫グロブリンＣＨ２重鎖定常ドメインであり；
ＣＨ３は免疫グロブリンＣＨ３重鎖定常ドメインであり；
ヒンジは、ＣＨ１およびＣＨ２ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４はアミノ酸リンカーであり；
式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドはクロスオーバー軽鎖－重鎖ペアを形成する。
本明細書に記載の任意の抗原結合性部位は、例えば、上記の構造を有する４つのポリペプチド鎖を含む、本開示の三重特異性結合性タンパク質において用途を有し得ることが企図される。例えば、一部の実施形態において、本開示の三重特異性結合性タンパク質は、第１の抗原結合性部位を形成するＶＨ１およびＶＬ１ドメインペア、ＣＤ３ポリペプチドに結合する第２の抗原結合性部位を形成するＶＨ２およびＶＬ２ドメインペア、ならびに第３の抗原結合性部位を形成するＶＨ３およびＶＬ３ドメインペアを含む。一部の実施形態において、本開示の三重特異性結合性タンパク質は、ＣＤ２８ポリペプチドに結合する第１の抗原結合性部位を形成するＶＨ１およびＶＬ１ドメインペア、ＣＤ３ポリペプチドに結合する第２の抗原結合性部位を形成するＶＨ２およびＶＬ２ドメインペア、ならびに第３の抗原結合性部位を形成するＶＨ３およびＶＬ３ドメインペアを含む。一部の実施形態において、本開示の三重特異性結合性タンパク質は、第１の抗原結合性部位を形成するＶＨ１およびＶＬ１ドメインペア、ＣＤ３ポリペプチドに結合する第２の抗原結合性部位を形成するＶＨ２およびＶＬ２ドメインペア、ならびに腫瘍標的タンパク質に結合する第３の抗原結合性部位を形成するＶＨ３およびＶＬ３ドメインペアを含む。一部の実施形態において、本開示の三重特異性結合性タンパク質は、ＣＤ２８ポリペプチドに結合する第１の抗原結合性部位を形成するＶＨ１およびＶＬ１ドメインペア、ＣＤ３ポリペプチドに結合する第２の抗原結合性部位を形成するＶＨ２およびＶＬ２ドメインペア、ならびに腫瘍標的タンパク質に結合する第３の抗原結合性部位を形成するＶＨ３およびＶＬ３ドメインペアを含む。一部の実施形態において、本開示の三重特異性結合性タンパク質は、ＣＤ２８ポリペプチドに結合する第１の抗原結合性部位を形成するＶＨ１およびＶＬ１ドメインペア、ＣＤ３ポリペプチドに結合する第２の抗原結合性部位を形成するＶＨ２およびＶＬ２ドメインペア、ならびにＣＤ３８ポリペプチドに結合する第３の抗原結合性部位を形成するＶＨ３およびＶＬ３ドメインペアを含む。一部の実施形態において、本開示の三重特異性結合性タンパク質は、ＣＤ２８ポリペプチドに結合する第１の抗原結合性部位を形成するＶＨ１およびＶＬ１ドメインペア、ＣＤ３ポリペプチドに結合する第２の抗原結合性部位を形成するＶＨ２およびＶＬ２ドメインペア、ならびにＨＥＲ２ポリペプチドに結合する第３の抗原結合性部位を形成するＶＨ３およびＶＬ３ドメインペアを含む。
一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、１つまたはそれ以上の腫瘍標的タンパク質および１つまたはそれ以上のＴ細胞標的タンパク質に結合する。一部の実施形態において、結合性タンパク質は、１つの腫瘍標的タンパク質および単一のＴ細胞標的タンパク質上の２つの異なるエピトープに特異的に結合することができる。一部の実施形態において、結合性タンパク質は、１つの腫瘍標的タンパク質ならびに２つの異なるＴ細胞標的タンパク質（例えば、ＣＤ２８およびＣＤ３）に特異的に結合することができる。一部の実施形態において、結合性タンパク質の第１および第２のポリペプチド鎖は、２つのＴ細胞標的タンパク質を特異的に標的化する２つの抗原結合性部位を形成し、結合性タンパク質の第３および第４のポリペプチド鎖は、腫瘍標的タンパク質に特異的に結合する抗原結合性部位を形成する。一部の実施形態において、標的タンパク質はＣＤ３８またはＨＥＲ２である。追加の腫瘍標的タンパク質は下記において提供される。一部の実施形態において、１つまたはそれ以上のＴ細胞標的タンパク質はＣＤ３およびＣＤ２８のうちの１つまたはそれ以上である。本明細書に記載の任意の三重特異性結合性タンパク質において用途を有し得る例示的かつ非限定的なポリペプチドは表１において提供される。
一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１５６のアミノ酸配列または配列番号１５６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１５７のアミノ酸配列または配列番号１５７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１５８のアミノ酸配列または配列番号１５８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１５９のアミノ酸配列または配列番号１５９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１６０のアミノ酸配列または配列番号１６０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１６１のアミノ酸配列または配列番号１６１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１６２のアミノ酸配列または配列番号１６２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１６３のアミノ酸配列または配列番号１６３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１６４のアミノ酸配列または配列番号１６４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１６５のアミノ酸配列または配列番号１６５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１６６のアミノ酸配列または配列番号１６６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１６７のアミノ酸配列または配列番号１６７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１６８のアミノ酸配列または配列番号１６８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１６９のアミノ酸配列または配列番号１６９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１７０のアミノ酸配列または配列番号１７０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１７１のアミノ酸配列または配列番号１７１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１７２のアミノ酸配列または配列番号１７２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１７３のアミノ酸配列または配列番号１７３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１７４のアミノ酸配列または配列番号１７４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１７５のアミノ酸配列または配列番号１７５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１７６のアミノ酸配列または配列番号１７６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１７７のアミノ酸配列または配列番号１７７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１７８のアミノ酸配列または配列番号１７８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１７９のアミノ酸配列または配列番号１７９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１８１のアミノ酸配列または配列番号１８１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１８２のアミノ酸配列または配列番号１８２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１８３のアミノ酸配列または配列番号１８３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１８４のアミノ酸配列または配列番号１８４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１８５のアミノ酸配列または配列番号１８５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１８６のアミノ酸配列または配列番号１８６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１８７のアミノ酸配列または配列番号１８７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１８８のアミノ酸配列または配列番号１８８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１００のアミノ酸配列または配列番号１００のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１０１のアミノ酸配列または配列番号１０１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１０２のアミノ酸配列または配列番号１０２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１０３のアミノ酸配列または配列番号１０３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１０４のアミノ酸配列または配列番号１０４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１０５のアミノ酸配列または配列番号１０５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１０６のアミノ酸配列または配列番号１０６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１０７のアミノ酸配列または配列番号１０７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１１２のアミノ酸配列または配列番号１１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１１３のアミノ酸配列または配列番号１１３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１１４のアミノ酸配列または配列番号１１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１１５のアミノ酸配列または配列番号１１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１１６のアミノ酸配列または配列番号１１６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１１７のアミノ酸配列または配列番号１１７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１１８のアミノ酸配列または配列番号１１８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１１９のアミノ酸配列または配列番号１１９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１２０のアミノ酸配列または配列番号１２０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１２１のアミノ酸配列または配列番号１２１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１２２のアミノ酸配列または配列番号１２２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１２３のアミノ酸配列または配列番号１２３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１２４のアミノ酸配列または配列番号１２４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１２５のアミノ酸配列または配列番号１２５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１２６のアミノ酸配列または配列番号１２６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１２７のアミノ酸配列または配列番号１２７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１２８のアミノ酸配列または配列番号１２８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１２９のアミノ酸配列または配列番号１２９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１３０のアミノ酸配列または配列番号１３０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１３１のアミノ酸配列または配列番号１３１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１３２のアミノ酸配列または配列番号１３２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１３３のアミノ酸配列または配列番号１３３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１３４のアミノ酸配列または配列番号１３４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１３５のアミノ酸配列または配列番号１３５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１３６のアミノ酸配列または配列番号１３６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１３７のアミノ酸配列または配列番号１３７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１３８のアミノ酸配列または配列番号１３８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１３９のアミノ酸配列または配列番号１３９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１４０のアミノ酸配列または配列番号１４０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１４１のアミノ酸配列または配列番号１４１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１４２のアミノ酸配列または配列番号１４２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１４３のアミノ酸配列または配列番号１４３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１４４のアミノ酸配列または配列番号１４４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１４５のアミノ酸配列または配列番号１４５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１４６のアミノ酸配列または配列番号１４６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１４７のアミノ酸配列または配列番号１４７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１４８のアミノ酸配列または配列番号１４８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１４９のアミノ酸配列または配列番号１４９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１５０のアミノ酸配列または配列番号１５０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１５１のアミノ酸配列または配列番号１５１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖は、配列番号１５２のアミノ酸配列または配列番号１５２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１５３のアミノ酸配列または配列番号１５３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１５４のアミノ酸配列または配列番号１５４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１５５のアミノ酸配列または配列番号１５５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖は、配列番号２８６のアミノ酸配列または配列番号２８６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号２８７のアミノ酸配列または配列番号２８７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号２８８のアミノ酸配列または配列番号２８８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号２８９のアミノ酸配列または配列番号２８９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖は、配列番号２９０のアミノ酸配列または配列番号２９０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号２９１のアミノ酸配列または配列番号２９１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号２９２のアミノ酸配列または配列番号２９２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号２９３のアミノ酸配列または配列番号２９３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖は、配列番号２９４のアミノ酸配列または配列番号２９４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号２９５のアミノ酸配列または配列番号２９５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号２９６のアミノ酸配列または配列番号２９６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号２９７のアミノ酸配列または配列番号２９７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖は、配列番号２９８のアミノ酸配列または配列番号２９８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号２９９のアミノ酸配列または配列番号２９９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号３００のアミノ酸配列または配列番号３００のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号３０１のアミノ酸配列または配列番号３０１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。
抗ＣＤ３８結合性部位
本開示の特定の態様は、ＣＤ３８ポリペプチドに結合する抗原結合性部位を含む結合性タンパク質に関する。一部の実施形態において、ＣＤ３８ポリペプチドは、ＡＤＰＲＣ１としても公知のヒトＣＤ３８ポリペプチドである。ヒトＣＤ３８ポリペプチドは、当技術分野において公知であり、これらに限定されないが、ＮＣＢＩ受託番号ＮＰ＿００１７６６．２によって表されるポリペプチド、またはＮＣＢＩ遺伝子識別番号９５２から産生されたポリペプチドが挙げられる。一部の実施形態において、抗原結合性部位は、ヒトＣＤ３８ポリペプチド、非ヒト霊長類（例えば、カニクイザル）ＣＤ３８ポリペプチド、またはヒトＣＤ３８ポリペプチドおよび非ヒト霊長類（例えば、カニクイザル）ＣＤ３８ポリペプチドに結合する。一部の実施形態において、ＣＤ３８ポリペプチドに結合する抗原結合性部位を含む結合性タンパク質は、単一特異性および／もしくは１価、二重特異性および／もしくは２価、三重特異性および／もしくは３価、または多重特異性および／もしくは多価である。
一部の実施形態において、後述される抗ＣＤ３８結合性部位のＣＤＲおよび／または可変ドメインのいずれかが、単一特異性抗体において使用されていてもよい。
他の実施形態において、後述される抗ＣＤ３８結合性部位のＣＤＲおよび／または可変ドメインのいずれかが、例えば上記で説明した３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチドを含む三重特異性結合性タンパク質のいずれの結合性部位で使用されていてもよい。特定の実施形態において、ＣＤ３８ポリペプチドに結合する抗原結合性部位を含む結合性タンパク質は、上記で説明した３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチドを含む三重特異性結合性タンパク質であり、ＶＨ３およびＶＬ３ドメインの対は、ＣＤ３８ポリペプチドに結合する第３の抗原結合性部位を形成する。
例示的な結合性部位および結合性タンパク質の様々な特色を本明細書に記載する。例えば、一部の実施形態において、抗ＣＤ３８結合性部位は、ヒトＣＤ３８（例えば、ヒトＣＤ３８アイソフォームＡおよび／またはアイソフォームＥポリペプチド）およびカニクイザルＣＤ３８と交差反応する。一部の実施形態において、抗ＣＤ３８結合性部位を含む結合性タンパク質は、ＣＤ３８＋細胞のアポトーシスを誘導する。一部の実施形態において、抗ＣＤ３８結合性部位を含む結合性タンパク質は、Ｔ細胞をＣＤ３８＋細胞に動員し、任意選択でＴ細胞を活性化する（例えば、ＴＣＲ刺激および／または共刺激を介して）。
一部の実施形態において、ＣＤ３８に結合する結合性部位は、ＧＹＴＦＴＳＹＡ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＧＱＧＧＴ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＡＲＴＧＧＬＲＲＡＹＦＴＹ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびに／またはＱＳＶＳＳＹＧＱＧＦ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＧＡＳ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＮＫＥＤＰＷＴ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ３８に結合する結合性部位は、ＧＹＴＦＴＳＹＡ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＧＱＧＧＴ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＡＲＴＧＧＬＲＲＡＹＦＴＹ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびにＱＳＶＳＳＹＧＱＧＦ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＧＡＳ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＮＫＥＤＰＷＴ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
一部の実施形態において、ＣＤ３８に結合する結合性部位は、ＧＹＴＬＴＥＦＳ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＦＤＰＥＤＧＥＴ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＴＴＧＲＦＦＤＷＦ（配列番号２１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびに／またはＱＳＶＩＳＲＦ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＧＡＳ（配列番号２３）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＤＳＮＬＰＩＴ（配列番号２４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ３８に結合する結合性部位は、ＧＹＴＬＴＥＦＳ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＦＤＰＥＤＧＥＴ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＴＴＧＲＦＦＤＷＦ（配列番号２１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびにＱＳＶＩＳＲＦ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＧＡＳ（配列番号２３）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＤＳＮＬＰＩＴ（配列番号２４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
一部の実施形態において、ＣＤ３８に結合する結合性部位は、ＧＹＡＦＴＴＹＬ（配列番号２５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＮＰＧＳＧＳＴ（配列番号２６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＡＲＹＡＹＧＹ（配列番号２７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびに／またはＱＮＶＧＴＡ（配列番号２８）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳ（配列番号２９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＹＳＴＹＰＦＴ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ３８に結合する結合性部位は、ＧＹＡＦＴＴＹＬ（配列番号２５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＮＰＧＳＧＳＴ（配列番号２６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＡＲＹＡＹＧＹ（配列番号２７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびにＱＮＶＧＴＡ（配列番号２８）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳ（配列番号２９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＹＳＴＹＰＦＴ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
一部の実施形態において、ＣＤ３８に結合する結合性部位は、ＧＹＳＦＴＮＹＡ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＳＰＹＹＧＤＴ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＡＲＲＦＥＧＦＹＹＳＭＤＹ（配列番号３３）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびに／またはＱＳＬＶＨＳＮＧＮＴＹ（配列番号３４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＫＶＳ（配列番号３５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＳＱＳＴＨＶＰＬＴ（配列番号３６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ３８に結合する結合性部位は、ＧＹＳＦＴＮＹＡ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＳＰＹＹＧＤＴ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＡＲＲＦＥＧＦＹＹＳＭＤＹ（配列番号３３）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびにＱＳＬＶＨＳＮＧＮＴＹ（配列番号３４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＫＶＳ（配列番号３５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＳＱＳＴＨＶＰＬＴ（配列番号３６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
一部の実施形態において、ＣＤ３８に結合する結合性部位は、ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号３７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＷＹＤＧＳＮＫ（配列番号３８）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＡＲＤＰＧＬＲＹＦＤＧＧＭＤＶ（配列番号３９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびに／またはＱＧＩＳＳＹ（配列番号４０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＡＡＳ（配列番号４１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＬＮＳＦＰＹＴ（配列番号４２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ３８に結合する結合性部位は、ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号３７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＷＹＤＧＳＮＫ（配列番号３８）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＡＲＤＰＧＬＲＹＦＤＧＧＭＤＶ（配列番号３９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびにＱＧＩＳＳＹ（配列番号４０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＡＡＳ（配列番号４１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＬＮＳＦＰＹＴ（配列番号４２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
一部の実施形態において、ＣＤ３８に結合する結合性部位は、ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号４３）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＷＹＤＧＳＮＫ（配列番号４４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＡＲＭＦＲＧＡＦＤＹ（配列番号４５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびに／またはＱＧＩＲＮＤ（配列番号４６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＡＡＳ（配列番号４７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＬＱＤＹＩＹＹＰＴ（配列番号４８）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ３８に結合する結合性部位は、ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号４３）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＷＹＤＧＳＮＫ（配列番号４４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＡＲＭＦＲＧＡＦＤＹ（配列番号４５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびにＱＧＩＲＮＤ（配列番号４６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＡＡＳ（配列番号４７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＬＱＤＹＩＹＹＰＴ（配列番号４８）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
一部の実施形態において、ＣＤ３８に結合する結合性部位は、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＶＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＡＭＨＷＶＫＥＡＰＧＱＲＬＥＷＩＧＹＩＹＰＧＱＧＧＴＮＹＮＱＫＦＱＧＲＡＴＬＴＡＤＴＳＡＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＦＣＡＲＴＧＧＬＲＲＡＹＦＴＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７９）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または
ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＩＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＧＱＧＦＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＰＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＮＫＥＤＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号８０）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ３８に結合する結合性部位は、配列番号７９のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または配列番号８０のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ３８に結合する結合性部位は、配列番号７９のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および配列番号８０のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
一部の実施形態において、ＣＤ３８に結合する結合性部位は、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＶＳＧＹＴＬＴＥＦＳＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＦＤＰＥＤＧＥＴＩＹＡＱＫＦＱＧＲＶＩＭＴＥＤＴＳＴＤＴＡＹＭＥＭＮＳＬＲＳＥＤＴＡＩＹＹＣＴＴＧＲＦＦＤＷＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８１）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または
ＥＩＩＬＴＱＳＰＡＩＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＩＳＲＦＬＳＷＹＱＶＫＰＧＬＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＴＲＡＴＧＩＰＶＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＳＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＣＡＶＹＹＣＱＱＤＳＮＬＰＩＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫ（配列番号８２）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ３８に結合する結合性部位は、配列番号８１のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または配列番号８２のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ３８に結合する結合性部位は、配列番号８１のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および配列番号８２のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
一部の実施形態において、ＣＤ３８に結合する結合性部位は、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＡＦＴＴＹＬＶＥＷＩＲＱＲＰＧＱＧＬＥＷＭＧＶＩＮＰＧＳＧＳＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＶＤＲＳＳＴＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＹＡＹＧＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８３）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＮＶＧＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＳＰＫＱＬＩＹＳＡＳＮＲＹＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＬＡＴＹＹＣＱＱＹＳＴＹＰＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号８４）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ３８に結合する結合性部位は、配列番号８３のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または配列番号８４のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ３８に結合する結合性部位は、配列番号８３のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および配列番号８４のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
一部の実施形態において、ＣＤ３８に結合する結合性部位は、
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＹＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＷＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＨＣＡＲＤＰＧＬＲＹＦＤＧＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号８７）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＦＡＡＳＴＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＬＮＳＦＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号８８）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ３８に結合する結合性部位は、配列番号８７のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または配列番号８８のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ３８に結合する結合性部位は、配列番号８７のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および配列番号８８のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
一部の実施形態において、ＣＤ３８に結合する結合性部位は、
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＷＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＧＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＭＦＲＧＡＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８９）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または
ＡＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＧＬＱＰＥＤＳＡＴＹＹＣＬＱＤＹＩＹＹＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号９０）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ３８に結合する結合性部位は、配列番号８９のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または配列番号９０のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ３８に結合する結合性部位は、配列番号８９のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および配列番号９０のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
一部の実施形態において、ＣＤ３８に結合する結合性部位は、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＮＹＡＶＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＶＩＳＰＹＹＧＤＴＴＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＦＥＧＦＹＹＳＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８５）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＲＰＳＱＳＬＶＨＳＮＧＮＴＹＬＮＷＹＱＱＲＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＫＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＳＱＳＴＨＶＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号８６）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ３８に結合する結合性部位は、配列番号８５のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または配列番号８６のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ３８に結合する結合性部位は、配列番号８５のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および配列番号８６のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
一部の実施形態において、ＣＤ３８に結合する結合性部位は、
ＱＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＲＰＧＴＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＡＦＴＴＹＬＶＥＷＩＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＶＩＮＰＧＳＧＳＴＮＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＬＴＶＤＲＳＳＴＴＡＹＭＨＬＳＧＬＴＳＤＤＳＡＶＹＦＣＡＲＹＡＹＧＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号２７７）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または
ＤＩＶＭＴＱＳＱＫＦＭＳＡＳＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＮＶＧＴＡＶＡＷＹＱＱＱＰＧＨＳＰＫＱＬＩＹＳＡＳＮＲＹＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＡＧＴＤＦＴＬＴＩＳＮＩＱＳＥＤＬＡＤＹＦＣＱＱＹＳＴＹＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号２７８）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ３８に結合する結合性部位は、配列番号２７７のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または配列番号２７８のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ３８に結合する結合性部位は、配列番号２７７のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および配列番号２７８のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＶＨおよび／またはＶＬドメインは、ヒト化されている。
一部の実施形態において、ＣＤ３８に結合する結合性部位は、
ＱＶＱＬＬＱＳＧＡＥＬＶＲＰＧＶＳＶＫＩＳＣＴＧＳＧＹＳＦＴＮＹＡＶＨＷＶＫＱＳＨＶＫＳＬＥＷＩＧＶＩＳＰＹＹＧＤＴＴＹＮＱＫＦＴＧＫＡＴＭＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＡＲＬＴＳＥＤＳＡＩＹＦＣＡＲＲＦＥＧＦＹＹＳＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ（配列番号２７９）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または
ＤＶＶＭＩＱＴＰＬＳＬＰＶＳＬＧＤＱＡＳＩＳＣＲＰＳＱＳＬＶＨＳＮＧＮＴＹＬＮＷＹＬＱＲＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＫＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＬＣＳＱＳＴＨＶＰＬＴＦＧＳＧＴＱＬＥＩＫ（配列番号２８０）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ３８に結合する結合性部位は、配列番号２７９のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または配列番号２８０のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ３８に結合する結合性部位は、配列番号２７９のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および配列番号２８０のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＶＨおよび／またはＶＬドメインは、ヒト化されている。
上記実施形態のいずれかの一部の実施形態において、結合性タンパク質は、三重特異性結合性タンパク質である。一部の実施形態において、三重特異性結合性タンパク質は、ＣＤ３８ポリペプチドに結合する抗原結合性部位、ＣＤ２８ポリペプチドに結合する抗原結合性部位、およびＣＤ３ポリペプチドに結合する抗原結合性部位を含む。一部の実施形態において、結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を含む４つのポリペプチドを含む三重特異性結合性タンパク質であり、式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、クロスオーバー軽鎖－重鎖ペア（例えば、本明細書に記載される通り）を形成する。一部の実施形態において、上述される抗ＣＤ３８抗原結合性部位のいずれかのＶＨおよびＶＬドメインは、ＶＨ３およびＶＬ３を表し、ＣＤ３８ポリペプチドに結合する第３の抗原結合性部位を形成する。一部の実施形態において、ＶＨ１およびＶＬ１は、ＣＤ２８ポリペプチドに結合する第１の抗原結合性部位を形成し、ＶＨ２およびＶＬ２は、ＣＤ３ポリペプチドに結合する第２の抗原結合性部位を形成し、上述されるおよび／または表２における抗ＣＤ３８抗原結合性部位のいずれかのＶＨおよびＶＬドメインは、ＶＨ３およびＶＬ３を表し、ＣＤ３８ポリペプチドに結合する第３の抗原結合性部位を形成する。
例示的な抗ＣＤ３８抗原結合性部位の配列は、表２に提供される。一部の実施形態において、本開示の抗ＣＤ３８抗原結合性部位を含む結合性タンパク質は、表２に記載される抗ＣＤ３８抗体の、１、２、３、４、５、または６つ全てのＣＤＲ配列を含む。一部の実施形態において、本開示の抗ＣＤ３８抗原結合性部位を含む結合性タンパク質は、表２に記載される抗ＣＤ３８抗体のＶＨドメイン配列および／またはＶＬドメイン配列を含む。
Figure 2022527994000002
Figure 2022527994000003
Figure 2022527994000004
さらに、上記で記載された抗ＣＤ３８のＣＤＲおよび／または可変ドメインのいずれかを含む抗体（例えば、単一特異性抗体）が本明細書において提供される。
一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、ヒトＣＤ３８ポリペプチドの細胞外ドメインおよびカニクイザルＣＤ３８ポリペプチドの細胞外ドメインに結合する抗原結合性部位を含む。抗原結合性部位が抗原に結合するかどうかを決定するための例示的なアッセイは本明細書に記載されており、当技術分野において公知であり、その例としては、（限定されないが）ＥＬＩＳＡ、ＳＰＲ、およびフローサイトメトリーアッセイが挙げられる。
抗ＨＥＲ２結合性部位
本開示の特定の態様は、ＨＥＲ２ポリペプチドに結合する抗原結合性部位を含む結合性タンパク質に関する。一部の実施形態において、ＨＥＲ２ポリペプチドは、ＮＥＵ、ＮＧＬ、ＥＲＢＢ２、ＴＫＲ１、ＣＤ３４０、ＨＥＲ－２、ＭＬＮ１９、およびＨＥＲ－２／ｎｅｕとしても公知のヒトＨＥＲ２ポリペプチドである。ヒトＨＥＲ２ポリペプチドは、当技術分野において公知であり、これらに限定されないが、ＮＣＢＩ受託番号ＸＰ＿０２４３０６４１１．１、ＸＰ＿０２４３０６４１０．１、ＸＰ＿０２４３０６４０９．１、ＮＰ＿００１２７６８６７．１、ＮＰ＿００１２７６８６６．１、ＮＰ＿００１２７６８６５．１、ＮＰ＿００１００５８６２．１、もしくはＮＰ＿００４４３９．２によって表されるポリペプチド、またはＮＣＢＩ遺伝子識別番号２０６４から産生されたポリペプチドが挙げられる。一部の実施形態において、ＨＥＲ２ポリペプチドに結合する抗原結合性部位を含む結合性タンパク質は、単一特異性および／もしくは１価、二重特異性および／もしくは２価、三重特異性および／もしくは３価、または多重特異性および／もしくは多価である。一部の実施形態において、ＨＥＲ２ポリペプチドに結合する抗原結合性部位を含む結合性タンパク質は、上記で説明した３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチドを含む三重特異性結合性タンパク質であり、ＶＨ３およびＶＬ３ドメイン対は、ＨＥＲ２ポリペプチドに結合する第３の抗原結合性部位を形成する。
一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、ＧＦＮＩＫＤＴＹ（配列番号１）またはＧＦＮＩＲＤＴＹ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＴＮＧＹＴ（配列番号３）、ＩＹＰＴＱＧＹＴ（配列番号４）、またはＩＹＰＴＮＡＹＴ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号６）、ＳＲＷＧＧＥＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号７）、またはＳＲＷＧＧＳＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびに／またはＱＤＶＮＴＡ（配列番号９）またはＱＤＶＱＴＡ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＨＹＴＴＰ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、ＧＦＮＩＫＤＴＹ（配列番号１）またはＧＦＮＩＲＤＴＹ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＴＮＧＹＴ（配列番号３）、ＩＹＰＴＱＧＹＴ（配列番号４）、またはＩＹＰＴＮＡＹＴ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号６）、ＳＲＷＧＧＥＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号７）、またはＳＲＷＧＧＳＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびにＱＤＶＮＴＡ（配列番号９）またはＱＤＶＱＴＡ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＨＹＴＴＰ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、ＧＦＮＩＫＤＴＹ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＴＮＧＹＴ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびに／またはＱＤＶＮＴＡ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＨＹＴＴＰ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、ＧＦＮＩＫＤＴＹ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＴＮＧＹＴ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびにＱＤＶＮＴＡ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＨＹＴＴＰ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、ＧＦＮＩＲＤＴＹ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＴＱＧＹＴ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＳＲＷＧＧＥＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびに／またはＱＤＶＮＴＡ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＨＹＴＴＰ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、ＧＦＮＩＲＤＴＹ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＴＱＧＹＴ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＳＲＷＧＧＥＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびにＱＤＶＮＴＡ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＨＹＴＴＰ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、ＧＦＮＩＲＤＴＹ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＴＮＡＹＴ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＳＲＷＧＧＳＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびに／またはＱＤＶＮＴＡ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＨＹＴＴＰ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、ＧＦＮＩＲＤＴＹ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＴＮＡＹＴ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＳＲＷＧＧＳＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびにＱＤＶＮＴＡ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＨＹＴＴＰ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、ＧＦＮＩＲＤＴＹ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＴＱＧＹＴ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＳＲＷＧＧＳＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびに／またはＱＤＶＮＴＡ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＨＹＴＴＰ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、ＧＦＮＩＲＤＴＹ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＴＱＧＹＴ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＳＲＷＧＧＳＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびにＱＤＶＮＴＡ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＨＹＴＴＰ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、ＧＦＮＩＲＤＴＹ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＴＮＡＹＴ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＳＲＷＧＧＥＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびに／またはＱＤＶＮＴＡ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＨＹＴＴＰ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、ＧＦＮＩＲＤＴＹ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＴＮＡＹＴ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＳＲＷＧＧＥＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびにＱＤＶＮＴＡ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＨＹＴＴＰ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、ＧＦＮＩＫＤＴＹ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＴＮＧＹＴ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびに／またはＱＤＶＱＴＡ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＨＹＴＴＰ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、ＧＦＮＩＫＤＴＹ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＴＮＧＹＴ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびにＱＤＶＱＴＡ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＨＹＴＴＰ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、ＧＦＮＩＲＤＴＹ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＴＱＧＹＴ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＳＲＷＧＧＥＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列、およびＳＲＷＧＧＳＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびに／またはＱＤＶＱＴＡ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＨＹＴＴＰ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、ＧＦＮＩＲＤＴＹ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＴＱＧＹＴ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＳＲＷＧＧＥＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列、およびＳＲＷＧＧＳＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびにＱＤＶＱＴＡ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＨＹＴＴＰ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、ＧＦＮＩＲＤＴＹ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＴＮＡＹＴ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＳＲＷＧＧＳＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびに／またはＱＤＶＱＴＡ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＨＹＴＴＰ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、ＧＦＮＩＲＤＴＹ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＴＮＡＹＴ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＳＲＷＧＧＳＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびにＱＤＶＱＴＡ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＨＹＴＴＰ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、ＧＦＮＩＲＤＴＹ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＴＱＧＹＴ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＳＲＷＧＧＳＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびに／またはＱＤＶＱＴＡ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＨＹＴＴＰ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、ＧＦＮＩＲＤＴＹ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＴＱＧＹＴ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＳＲＷＧＧＳＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびにＱＤＶＱＴＡ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＨＹＴＴＰ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、ＧＦＮＩＲＤＴＹ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＴＮＡＹＴ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＳＲＷＧＧＥＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびに／またはＱＤＶＱＴＡ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＨＹＴＴＰ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、ＧＦＮＩＲＤＴＹ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＴＮＡＹＴ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＳＲＷＧＧＥＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびにＱＤＶＱＴＡ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＨＹＴＴＰ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７２）、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＲＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＱＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＥＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７３）、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＲＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＱＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＳＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７４）、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＲＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＡＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＳＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７５）、またはＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＲＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＡＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＥＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７６）；のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；および／または
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号７７）またはＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＱＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号７８）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、もしくは配列番号７６のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；および／または配列番号７７もしくは配列番号７８のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、もしくは配列番号７６のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；および配列番号７７もしくは配列番号７８のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７２）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号７７）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、配列番号７２のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または配列番号７７のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、配列番号７２のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および配列番号７７のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＲＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＱＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＥＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７３）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号７７）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、配列番号７３のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または配列番号７７のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、配列番号７３のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および配列番号７７のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＲＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＡＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＳＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７５）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号７７）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、配列番号７５のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または配列番号７７のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、配列番号７５のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および配列番号７７のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＲＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＱＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＳＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７４）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号７７）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、配列番号７４のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または配列番号７７のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、配列番号７４のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および配列番号７７のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＲＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＡＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＥＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７６）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号７７）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、配列番号７６のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または配列番号７７のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、配列番号７６のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および配列番号７７のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７２）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＱＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号７８）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、配列番号７２のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または配列番号７８のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＨＥＲ２に結合する結合性部位は、配列番号７２のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および配列番号７８のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
一部の実施形態において、本開示の抗ＨＥＲ２抗原結合性部位は、抗ＨＥＲ２抗体トラスツズマブの１、２、３、４、５、もしくは６つ全てのＣＤＲ配列、３０Ｒ／５５Ｑ／１０２Ｅ、３０Ｒ／５６Ａ／１０２Ｓ、３０Ｒ／５５Ｑ／１０２Ｓ、３０Ｒ／５６Ａ／１０２Ｅ、または３０Ｑを含む。一部の実施形態において、本開示の抗ＨＥＲ２抗原結合性部位は、抗ＨＥＲ２抗体トラスツズマブのＶＨドメイン配列および／もしくはＶＬドメイン配列、３０Ｒ／５５Ｑ／１０２Ｅ、３０Ｒ／５６Ａ／１０２Ｓ、３０Ｒ／５５Ｑ／１０２Ｓ、３０Ｒ／５６Ａ／１０２Ｅ、または３０Ｑを含む。
例示的な抗ＨＥＲ２抗原結合性部位の配列は、表３に提供される。一部の実施形態において、本開示の抗ＨＥＲ２抗原結合性部位は、表３に記載される抗ＨＥＲ２抗体の１、２、３、４、５、または６つ全てのＣＤＲ配列を含む。一部の実施形態において、本開示の抗ＨＥＲ２抗原結合性部位は、表３に記載される抗ＨＥＲ２抗体のＶＨドメイン配列および／またはＶＬドメイン配列を含む。
Figure 2022527994000005
Figure 2022527994000006
他の抗腫瘍標的結合性部位
一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、腫瘍標的タンパク質に結合する抗原結合性部位を含む。一部の実施形態において、腫瘍標的タンパク質はＣＤ３８ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ３８ポリペプチド）である。一部の実施形態において、腫瘍標的タンパク質はＨＥＲ２ポリペプチド（例えば、ヒトＨＥＲ２ポリペプチド）である。一部の実施形態において、本開示の腫瘍標的タンパク質としては、Ａ２ＡＲ、ＡＰＲＩＬ、ＡＴＰＤａｓｅ、ＢＡＦＦ、ＢＡＦＦＲ、ＢＣＭＡ、ＢｌｙＳ、ＢＴＫ、ＢＴＬＡ、Ｂ７ＤＣ、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７Ｈ４（ＶＴＣＮ１としても公知）、Ｂ７Ｈ５、Ｂ７Ｈ６、Ｂ７Ｈ７、Ｂ７ＲＰ１、Ｂ７－４、Ｃ３、Ｃ５、ＣＣＬ２（ＭＣＰ－１としても公知）、ＣＣＬ３（ＭＩＰ－１ａとしても公知）、ＣＣＬ４（ＭＩＰ－１ｂとしても公知）、ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳとしても公知）、ＣＣＬ７（ＭＣＰ－３としても公知）、ＣＣＬ８（ｍｃｐ－２としても公知）、ＣＣＬ１１（エオタキシンとしても公知）、ＣＣＬ１５（ＭＩＰ－１ｄとしても公知）、ＣＣＬ１７（ＴＡＲＣとしても公知）、ＣＣＬ１９（ＭＩＰ－３ｂとしても公知）、ＣＣＬ２０（ＭＩＰ－３ａとしても公知）、ＣＣＬ２１（ＭＩＰ－２としても公知）、ＣＣＬ２４（ＭＰＩＦ－２／エオタキシン－２としても公知）、ＣＣＬ２５（ＴＥＣＫとしても公知）、ＣＣＬ２６（エオタキシン－３としても公知）、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２３（ＦＣＥＲ２、ＩｇＥの受容体としても公知）、ＣＤ２４、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８０（Ｂ７－１としても公知）、ＣＤ８６（Ｂ７－２としても公知）、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７（４１ＢＢとしても公知）、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４としても公知）、ＣＤ１５４（ＣＤ４０Ｌとしても公知）、ＣＤ１６０、ＣＤ２７２、ＣＤ２７３（ＰＤＬ２としても公知）、ＣＤ２７４（ＰＤＬ１としても公知）、ＣＤ２７５（Ｂ７Ｈ２としても公知）、ＣＤ２７６（Ｂ７Ｈ３としても公知）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳとしても公知）、ＣＤ２７９（ＰＤ－１としても公知）、ＣＤＨ１（Ｅ－カドヘリンとしても公知）、キチナーゼ、ＣＬＥＣ９、ＣＬＥＣ９１、ＣＲＴＨ２、ＣＳＦ－１（Ｍ－ＣＳＦとしても公知）、ＣＳＦ－２（ＧＭ－ＣＳＦとしても公知）、ＣＳＦ－３（ＧＣＳＦとしても公知）、ＣＸ３ＣＬ１（ＳＣＹＤ１としても公知）、ＣＸＣＬ１２（ＳＤＦ１としても公知）、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ３、ＤＮＧＲ－１、エクトヌクレオシド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ１、ＥＧＦＲ、ＥＮＴＰＤ１、ＦＣＥＲ１Ａ、ＦＣＥＲ１、ＦＬＡＰ、ＦＯＬＨ１、Ｇｉ２４、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｈｅｒ２、ＨＨＬＡ２、ＨＭＧＢ１、ＨＶＥＭ、ＩＣＯＳＬＧ、ＩＤＯ、ＩＦＮα、ＩｇＥ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＬ２Ｒｂｅｔａ、ＩＬ１、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１Ｆ１０、ＩＬ２、ＩＬ４、ＩＬ４Ｒａ、ＩＬ５、ＩＬ５Ｒ、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ７Ｒａ、ＩＬ８、ＩＬ９、ＩＬ９Ｒ、ＩＬ１０、ｒｈＩＬ１０、ＩＬ１２、ＩＬ１３、ＩＬ１３Ｒａ１、ＩＬ１３Ｒａ２、ＩＬ１５、ＩＬ１７、ＩＬ１７Ｒｂ（ＩＬ２５の受容体としても公知）、ＩＬ１８、ＩＬ２２、ＩＬ２３、ＩＬ２５、ＩＬ２７、ＩＬ３３、ＩＬ３５、ＩＴＧＢ４（ｂ４インテグリンとしても公知）、ＩＴＫ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＬＡＭＰ１、レプチン、ＬＰＦＳ２、ＭＨＣクラスＩＩ、ＭＵＣ－１、ＮＣＲ３ＬＧ１、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＴＰＤａｓｅ－１、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＰＤ－１Ｈ、血小板受容体、ＰＲＯＭ１、Ｓ１５２、ＳＩＳＰ１、ＳＬＣ、ＳＰＧ６４、ＳＴ２（ＩＬ３３の受容体としても公知）、ＳＴＥＡＰ２、Ｓｙｋキナーゼ、ＴＡＣＩ、ＴＤＯ、Ｔ１４、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、ＴＬＲ、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ９、ＴＭＥＦ１、ＴＮＦａ、ＴＮＦＲＳＦ７、Ｔｐ５５、ＴＲＥＭ１、ＴＳＬＰ（ＩＬ７Ｒａの補助受容体としても公知）、ＴＳＬＰＲ、ＴＷＥＡＫ、ＶＥＧＦ、ＶＩＳＴＡ、Ｖｓｔｍ３、ＷＵＣＡＭ、およびＸＣＲ１（ＧＰＲ５／ＣＣＸＣＲ１としても公知）が挙げられるがこれらに限定されない。一部の実施形態において、上記の抗原標的の１つまたはそれ以上はヒト抗原標的である。
抗ＣＤ２８結合性部位
本開示の特定の態様は、ＣＤ２８ポリペプチドに結合する抗原結合性部位を含む結合性タンパク質に関する。一部の実施形態において、ＣＤ２８ポリペプチドは、Ｔｐ４４としても公知のヒトＣＤ２８ポリペプチドである。ヒトＣＤ２８ポリペプチドは、当技術分野において公知であり、これらに限定されないが、ＮＣＢＩ受託番号ＸＰ＿０１１５１０４９９．１、ＸＰ＿０１１５１０４９７．１、ＸＰ＿０１１５１０４９６．１、ＮＰ＿００１２３０００７．１、ＮＰ＿００１２３０００６．１、もしくはＮＰ＿００６１３０．１によって表されるポリペプチド、またはＮＣＢＩ遺伝子識別番号９４０から産生されたポリペプチドが挙げられる。一部の実施形態において、ＣＤ２８ポリペプチドに結合する抗原結合性部位を含む結合性タンパク質は、単一特異性および／もしくは１価、二重特異性および／もしくは２価、三重特異性および／もしくは３価、または多重特異性および／もしくは多価である。一部の実施形態において、ＣＤ２８ポリペプチドに結合する抗原結合性部位を含む結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチドを含む三重特異性結合性タンパク質である。一部の実施形態において、ＣＤ２８ポリペプチドに結合する抗原結合性部位を含む結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチドを含む三重特異性結合性タンパク質であり、３つの抗原結合性部位のうちの１つは、ＣＤ２８ポリペプチドに結合し、そのうちの１つは、ＣＤ３ポリペプチドに結合する。一部の実施形態において、ＣＤ３ポリペプチドに結合する抗原結合性部位を含む結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチドを含む三重特異性結合性タンパク質であり、３つの抗原結合性部位のうちの１つは、ＣＤ２８ポリペプチドに結合し、そのうちの１つは、ＣＤ３ポリペプチドに結合し、そのうちの１つは、ＣＤ３８ポリペプチドに結合する。一部の実施形態において、ＣＤ３ポリペプチドに結合する抗原結合性部位を含む結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチドを含む三重特異性結合性タンパク質であり、３つの抗原結合性部位のうちの１つは、ＣＤ２８ポリペプチドに結合し、そのうちの１つは、ＣＤ３ポリペプチドに結合し、そのうちの１つは、ＨＥＲ２ポリペプチドに結合する。一部の実施形態において、ＣＤ３ポリペプチドに結合する抗原結合性部位を含む結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチドを含む三重特異性結合性タンパク質であり、３つの抗原結合性部位のうちの１つは、ＣＤ２８ポリペプチドに結合し、そのうちの１つは、ＣＤ３ポリペプチドに結合し、そのうちの１つは、腫瘍標的タンパク質に結合する。
一部の実施形態において、ＣＤ２８に結合する結合性部位は、ＧＹＴＦＴＳＹＹ（配列番号４９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＧＮＶＮＴ（配列番号５０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＴＲＳＨＹＧＬＤＷＮＦＤＶ（配列番号５１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／またはＱＮＩＹＶＷ（配列番号５２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＫＡＳ（配列番号５３）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＧＱＴＹＰＹ（配列番号５４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ２８に結合する結合性部位は、ＧＹＴＦＴＳＹＹ（配列番号４９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＧＮＶＮＴ（配列番号５０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＴＲＳＨＹＧＬＤＷＮＦＤＶ（配列番号５１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびにＱＮＩＹＶＷ（配列番号５２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＫＡＳ（配列番号５３）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＧＱＴＹＰＹ（配列番号５４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
一部の実施形態において、ＣＤ２８に結合する結合性部位は、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＶＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＳＩＹＰＧＮＶＮＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＡＴＬＴＶＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＴＲＳＨＹＧＬＤＷＮＦＤＶＷＧＫＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号９１）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＮＩＹＶＷＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＫＡＳＮＬＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＧＱＴＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号９２）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ２８に結合する結合性部位は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または配列番号９２のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ２８に結合する結合性部位は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および配列番号９２のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
上記実施形態のいずれかの一部の実施形態において、結合性タンパク質は、三重特異性結合性タンパク質である。一部の実施形態において、三重特異性結合性タンパク質は、腫瘍標的タンパク質（これらに限定されないが、ＣＤ３８またはＨＥＲ２など）に結合する抗原結合性部位、ＣＤ２８ポリペプチドに結合する抗原結合性部位、およびＣＤ３ポリペプチドに結合する抗原結合性部位を含む。一部の実施形態において、結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を含む４つのポリペプチドを含む三重特異性結合性タンパク質であり、式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、クロスオーバー軽鎖－重鎖ペア（例えば、本明細書に記載される通り）を形成する。一部の実施形態において、上述される抗ＣＤ２８抗原結合性部位のいずれかのＶＨおよびＶＬドメインは、ＶＨ１およびＶＬ１を表し、ＣＤ２８ポリペプチドに結合する第１の抗原結合性部位を形成する。一部の実施形態において、上述されるおよび／または表４における抗ＣＤ２８抗原結合性部位のいずれかのＶＨおよびＶＬドメインは、ＶＨ１およびＶＬ１を表し、ＣＤ２８ポリペプチドに結合する第１の抗原結合性部位を形成し、ＶＨ２およびＶＬ２は、ＣＤ３ポリペプチドに結合する第２の抗原結合性部位を形成し、ＶＨ３およびＶＬ３は、腫瘍標的タンパク質（これらに限定されないが、ＣＤ３８またはＨＥＲ２など）に結合する第３の抗原結合性部位を形成する。
例示的な抗ＣＤ２８抗原結合性部位の配列は、表４に提供される。一部の実施形態において、本開示の抗ＣＤ２８抗原結合性部位は、表４に記載される抗ＣＤ２８抗体の１、２、３、４、５、または６つ全てのＣＤＲ配列を含む。一部の実施形態において、本開示の抗ＣＤ２８抗原結合性部位は、表４に記載される抗ＣＤ２８抗体のＶＨドメイン配列および／またはＶＬドメイン配列を含む。
Figure 2022527994000007
抗ＣＤ３結合性部位
本開示の特定の態様は、ＣＤ３ポリペプチドに結合する抗原結合性部位を含む結合性タンパク質に関する。一部の実施形態において、ＣＤ３ポリペプチドは、ヒトＣＤ３ポリペプチド、例えば、ＣＤ３－デルタ（Ｔ３Ｄ、ＩＭＤ１９、およびＣＤ３－デルタとしても公知）、ＣＤ３－イプシロン（Ｔ３Ｅ、ＩＭＤ１８、およびＴＣＲＥとしても公知）、およびＣＤ３－ガンマ（Ｔ３Ｇ、ＩＭＤ１７、およびＣＤ３－ガンマとしても公知）などである。ヒトＣＤ３ポリペプチドは、当技術分野において公知であり、これらに限定されないが、ＮＣＢＩ受託番号ＸＰ＿００６５１００２９．１もしくはＮＰ＿０３１６７４．１によって表されるポリペプチド、またはＮＣＢＩ遺伝子識別番号９１５、９１６、もしくは９１７から産生されたポリペプチドが挙げられる。一部の実施形態において、ＣＤ３ポリペプチドに結合する抗原結合性部位を含む結合性タンパク質は、単一特異性および／もしくは１価、二重特異性および／もしくは２価、三重特異性および／もしくは３価、または多重特異性および／もしくは多価である。一部の実施形態において、ＣＤ３ポリペプチドに結合する抗原結合性部位を含む結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチドを含む三重特異性結合性タンパク質である。一部の実施形態において、ＣＤ３ポリペプチドに結合する抗原結合性部位を含む結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチドを含む三重特異性結合性タンパク質であり、３つの抗原結合性部位のうちの１つは、ＣＤ２８ポリペプチドに結合し、そのうちの１つは、ＣＤ３ポリペプチドに結合する。一部の実施形態において、ＣＤ３ポリペプチドに結合する抗原結合性部位を含む結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチドを含む三重特異性結合性タンパク質であり、３つの抗原結合性部位のうちの１つは、ＣＤ２８ポリペプチドに結合し、そのうちの１つは、ＣＤ３ポリペプチドに結合し、そのうちの１つは、ＣＤ３８ポリペプチドに結合する。一部の実施形態において、ＣＤ３ポリペプチドに結合する抗原結合性部位を含む結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチドを含む三重特異性結合性タンパク質であり、３つの抗原結合性部位のうちの１つは、ＣＤ２８ポリペプチドに結合し、そのうちの１つは、ＣＤ３ポリペプチドに結合し、そのうちの１つは、ＨＥＲ２ポリペプチドに結合する。一部の実施形態において、ＣＤ３ポリペプチドに結合する抗原結合性部位を含む結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチドを含む三重特異性結合性タンパク質であり、３つの抗原結合性部位のうちの１つは、ＣＤ２８ポリペプチドに結合し、そのうちの１つは、ＣＤ３ポリペプチドに結合し、そのうちの１つは、腫瘍標的タンパク質に結合する。
一部の実施形態において、ＣＤ３に結合する結合性部位は、ＧＦＴＦＴＫＡＷ（配列番号５５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＫＤＫＳＮＳＹＡＴ（配列番号５６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＲＧＶＹＹＡＬＳＰＦＤＹ（配列番号５７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびに／またはＱＳＬＶＨＸ１ＮＸ２Ｘ３ＴＹであって、ここで、Ｘ１はＥまたはＱであり、Ｘ２はＡまたはＬであり、Ｘ３はＱ、Ｒ、またはＦである、ＱＳＬＶＨＸ１ＮＸ２Ｘ３ＴＹ（配列番号１８０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＫＶＳ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＧＱＧＴＱＹＰＦＴ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＶＬ２ドメインのＣＤＲ－Ｌ１配列は、ＱＳＬＶＨＱＮＡＱＴＹ（配列番号５９）、ＱＳＬＶＨＥＮＬＱＴＹ（配列番号６０）、ＱＳＬＶＨＥＮＬＦＴＹ（配列番号６１）、およびＱＳＬＶＨＥＮＬＲＴＹ（配列番号６２）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態において、ＣＤ３に結合する結合性部位は、ＧＦＴＦＴＫＡＷ（配列番号５５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＫＤＫＳＮＳＹＡＴ（配列番号５６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＲＧＶＹＹＡＬＳＰＦＤＹ（配列番号５７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびに／またはＱＳＬＶＨＱＮＡＱＴＹ（配列番号５９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＫＶＳ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＧＱＧＴＱＹＰＦＴ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ３に結合する結合性部位は、ＧＦＴＦＴＫＡＷ（配列番号５５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＫＤＫＳＮＳＹＡＴ（配列番号５６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＲＧＶＹＹＡＬＳＰＦＤＹ（配列番号５７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびにＱＳＬＶＨＱＮＡＱＴＹ（配列番号５９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＫＶＳ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＧＱＧＴＱＹＰＦＴ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
一部の実施形態において、ＣＤ３に結合する結合性部位は、ＧＦＴＦＴＫＡＷ（配列番号５５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＫＤＫＳＮＳＹＡＴ（配列番号５６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＲＧＶＹＹＡＬＳＰＦＤＹ（配列番号５７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびに／またはＱＳＬＶＨＥＮＬＱＴＹ（配列番号６０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＫＶＳ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＧＱＧＴＱＹＰＦＴ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ３に結合する結合性部位は、ＧＦＴＦＴＫＡＷ（配列番号５５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＫＤＫＳＮＳＹＡＴ（配列番号５６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＲＧＶＹＹＡＬＳＰＦＤＹ（配列番号５７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびにＱＳＬＶＨＥＮＬＱＴＹ（配列番号６０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＫＶＳ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＧＱＧＴＱＹＰＦＴ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
一部の実施形態において、ＣＤ３に結合する結合性部位は、ＧＦＴＦＴＫＡＷ（配列番号５５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＫＤＫＳＮＳＹＡＴ（配列番号５６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＲＧＶＹＹＡＬＳＰＦＤＹ（配列番号５７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびに／またはＱＳＬＶＨＥＮＬＦＴＹ（配列番号６１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＫＶＳ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＧＱＧＴＱＹＰＦＴ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ３に結合する結合性部位は、ＧＦＴＦＴＫＡＷ（配列番号５５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＫＤＫＳＮＳＹＡＴ（配列番号５６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＲＧＶＹＹＡＬＳＰＦＤＹ（配列番号５７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびにＱＳＬＶＨＥＮＬＦＴＹ（配列番号６１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＫＶＳ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＧＱＧＴＱＹＰＦＴ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
一部の実施形態において、ＣＤ３に結合する結合性部位は、ＧＦＴＦＴＫＡＷ（配列番号５５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＫＤＫＳＮＳＹＡＴ（配列番号５６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＲＧＶＹＹＡＬＳＰＦＤＹ（配列番号５７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびに／またはＱＳＬＶＨＥＮＬＲＴＹ（配列番号６２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＫＶＳ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＧＱＧＴＱＹＰＦＴ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ３に結合する結合性部位は、ＧＦＴＦＴＫＡＷ（配列番号５５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＫＤＫＳＮＳＹＡＴ（配列番号５６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＲＧＶＹＹＡＬＳＰＦＤＹ（配列番号５７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；ならびにＱＳＬＶＨＥＮＬＲＴＹ（配列番号６２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＫＶＳ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＧＱＧＴＱＹＰＦＴ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
一部の実施形態において、ＣＤ３に結合する結合性部位は、
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＴＫＡＷＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＱＬＥＷＶＡＱＩＫＤＫＳＮＳＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＲＧＶＹＹＡＬＳＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号９３）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、ならびに／または
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＶＨＱＮＡＱＴＹＬＳＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＳＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＧＱＧＴＱＹＰＦＴＦＧＳＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号９５）、ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＶＨＥＮＬＱＴＹＬＳＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＳＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＧＱＧＴＱＹＰＦＴＦＧＳＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号９６）、ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＶＨＥＮＬＦＴＹＬＳＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＳＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＧＱＧＴＱＹＰＦＴＦＧＳＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号９７）、およびＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＶＨＥＮＬＲＴＹＬＳＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＳＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＧＱＧＴＱＹＰＦＴＦＧＳＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号９８）からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ３に結合する結合性部位は、配列番号９３のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、ならびに／または配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、および配列番号９８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ３に結合する結合性部位は、配列番号９３のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、ならびに配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、および配列番号９８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
一部の実施形態において、ＣＤ３に結合する結合性部位は、
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＴＫＡＷＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＱＬＥＷＶＡＱＩＫＤＫＳＮＳＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＲＧＶＹＹＡＬＳＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号９３）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＶＨＱＮＡＱＴＹＬＳＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＳＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＧＱＧＴＱＹＰＦＴＦＧＳＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号９５）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ３に結合する結合性部位は、配列番号９３のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または配列番号９５のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ３に結合する結合性部位は、配列番号９３のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および配列番号９５のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
一部の実施形態において、ＣＤ３に結合する結合性部位は、
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＴＫＡＷＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＱＬＥＷＶＡＱＩＫＤＫＳＮＳＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＲＧＶＹＹＡＬＳＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号９３）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＶＨＥＮＬＱＴＹＬＳＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＳＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＧＱＧＴＱＹＰＦＴＦＧＳＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号９６）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ３に結合する結合性部位は、配列番号９３のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または配列番号９６のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ３に結合する結合性部位は、配列番号９３のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および配列番号９６のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
一部の実施形態において、ＣＤ３に結合する結合性部位は、
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＴＫＡＷＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＱＬＥＷＶＡＱＩＫＤＫＳＮＳＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＲＧＶＹＹＡＬＳＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号９３）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＶＨＥＮＬＦＴＹＬＳＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＳＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＧＱＧＴＱＹＰＦＴＦＧＳＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号９７）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ３に結合する結合性部位は、配列番号９３のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または配列番号９７のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ３に結合する結合性部位は、配列番号９３のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および配列番号９７のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
一部の実施形態において、ＣＤ３に結合する結合性部位は、
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＴＫＡＷＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＱＬＥＷＶＡＱＩＫＤＫＳＮＳＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＲＧＶＹＹＡＬＳＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号９３）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＶＨＥＮＬＲＴＹＬＳＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＳＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＧＱＧＴＱＹＰＦＴＦＧＳＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号９８）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ３に結合する結合性部位は、配列番号９３のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または配列番号９８のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ３に結合する結合性部位は、配列番号９３のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および配列番号９８のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
一部の実施形態において、ＣＤ３に結合する結合性部位は、
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＴＫＡＷＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＱＬＥＷＶＡＱＩＫＤＫＳＮＳＹＡＴＹＹＡＳＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＲＧＶＹＹＡＬＳＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３０２）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＶＨＱＮＡＱＴＹＬＳＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＳＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＧＱＧＴＱＹＰＦＴＦＧＳＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号９５）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ３に結合する結合性部位は、配列番号３０２のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または配列番号９５のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。一部の実施形態において、ＣＤ３に結合する結合性部位は、配列番号３０２のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および配列番号９５のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
上記実施形態のいずれかの一部の実施形態において、結合性タンパク質は、三重特異性結合性タンパク質である。一部の実施形態において、三重特異性結合性タンパク質は、腫瘍標的タンパク質（これらに限定されないが、ＣＤ３８またはＨＥＲ２など）に結合する抗原結合性部位、ＣＤ２８ポリペプチドに結合する抗原結合性部位、およびＣＤ３ポリペプチドに結合する抗原結合性部位を含む。一部の実施形態において、結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を含む４つのポリペプチドを含む三重特異性結合性タンパク質であり、式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドは、クロスオーバー軽鎖－重鎖ペア（例えば、本明細書に記載される通り）を形成する。一部の実施形態において、上述される抗ＣＤ３抗原結合性部位のいずれかのＶＨおよびＶＬドメインは、ＶＨ２およびＶＬ２を表し、ＣＤ３ポリペプチドに結合する第２の抗原結合性部位を形成する。一部の実施形態において、ＶＨ１およびＶＬ１は、ＣＤ２８ポリペプチドに結合する第１の抗原結合性部位を形成する、上述されるおよび／または表５における抗ＣＤ３抗原結合性部位のいずれかのＶＨおよびＶＬドメインは、ＶＨ２およびＶＬ２を表し、ＣＤ３ポリペプチドに結合する第２の抗原結合性部位を形成し、ＶＨ３およびＶＬ３は、腫瘍標的タンパク質（これらに限定されないが、ＣＤ３８またはＨＥＲ２など）に結合する第３の抗原結合性部位を形成する。
例示的な抗ＣＤ３抗原結合性部位の配列は、表５に提供される。一部の実施形態において、本開示の抗ＣＤ３抗原結合性部位は、表５に記載される抗ＣＤ３抗体の１、２、３、４、５、または６つ全てのＣＤＲ配列を含む。一部の実施形態において、本開示の抗ＣＤ３抗原結合性部位は、表５に記載される抗ＣＤ３抗体のＶＨドメイン配列および／またはＶＬドメイン配列を含む。
Figure 2022527994000008
Figure 2022527994000009
リンカー
一部の実施形態において、リンカーＬ１、Ｌ２、Ｌ３、およびＬ４は、アミノ酸なし（長さ＝０）から約１００アミノ酸の長さの範囲であるか、または１００未満、５０未満、４０未満、３０未満、２０未満、もしくは１５未満のアミノ酸であるか、またはそれより少ない。リンカーは、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１アミノ酸の長さであってもよい。１つの結合性タンパク質におけるＬ１、Ｌ２、Ｌ３、およびＬ４は、全て同じアミノ酸配列を有していてもよいし、または全て異なるアミノ酸配列を有していてもよい。
好適なリンカーの例としては、例えば、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号６９）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号７０）、Ｓ、ＲＴ、ＴＫＧＰＳ（配列番号６８）、ＧＱＰＫＡＡＰ（配列番号６７）、ＧＧＳＧＳＳＧＳＧＧ（配列番号７１）、ならびにＤＫＴＨＴ（配列番号６６）、加えて、国際公報ＷＯ２０１７／０７４８７８号およびＷＯ２０１７／１８０９１３号で開示されたものが挙げられる。上記で列挙された例は、開示の範囲をいかなるようにも限定することを意図しておらず、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、スレオニン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン、グリシン、およびプロリンからなる群から選択されるランダムに選択されたアミノ酸を含むリンカーは、結合性タンパク質において好適であることが示されている。
リンカーにおけるアミノ酸残基の同一性および配列は、リンカーにおいて達成する必要がある二次的な構造エレメントのタイプに応じて変更することができる。例えば、グリシン、セリン、およびアラニンは、最大のフレキシビリティーを有するリンカーにとって最良である。より硬く長いリンカーが必要な場合、グリシン、プロリン、スレオニン、およびセリンの一部の組合せが有用である。所望の特性に応じて必要なより大きいペプチドリンカーを構築するために、あらゆるアミノ酸残基を他のアミノ酸残基と組み合わせてリンカーとして考慮することができる。
一部の実施形態において、Ｌ１の長さは、Ｌ３の長さの少なくとも２倍である。一部の実施形態において、Ｌ２の長さは、Ｌ４の長さの少なくとも２倍である。一部の実施形態において、Ｌ１の長さは、Ｌ３の長さの少なくとも２倍であり、Ｌ２の長さは、Ｌ４の長さの少なくとも２倍である。一部の実施形態において、Ｌ１は、３～１２アミノ酸残基の長さであり、Ｌ２は、３～１４アミノ酸残基の長さであり、Ｌ３は、１～８アミノ酸残基の長さであり、Ｌ４は、１～３アミノ酸残基の長さである。一部の実施形態において、Ｌ１は、５～１０アミノ酸残基の長さであり、Ｌ２は、５～８アミノ酸残基の長さであり、Ｌ３は、１～５アミノ酸残基の長さであり、Ｌ４は、１～２アミノ酸残基の長さである。一部の実施形態において、Ｌ１は、７アミノ酸残基の長さであり、Ｌ２は、５アミノ酸残基の長さであり、Ｌ３は、１アミノ酸残基の長さであり、Ｌ４は、２アミノ酸残基の長さである。
一部の実施形態において、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、それぞれ独立して、ゼロアミノ酸の長さであり、またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号６９）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号７０）、Ｓ、ＲＴ、ＴＫＧＰＳ（配列番号６８）、ＧＱＰＫＡＡＰ（配列番号６７）、およびＧＧＳＧＳＳＧＳＧＧ（配列番号７１）からなる群から選択される配列を含む。一部の実施形態において、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、それぞれ独立して、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号６９）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号７０）、Ｓ、ＲＴ、ＴＫＧＰＳ（配列番号６８）、ＧＱＰＫＡＡＰ（配列番号６７）、およびＧＧＳＧＳＳＧＳＧＧ（配列番号７１）からなる群から選択される配列を含む。一部の実施形態において、Ｌ１は、配列ＧＱＰＫＡＡＰ（配列番号６７）を含み、Ｌ２は、配列ＴＫＧＰＳ（配列番号６８）を含み、Ｌ３は、配列Ｓを含み、Ｌ４は、配列ＲＴを含む。
一部の実施形態において、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３またはＬ４の少なくとも１つは、配列ＤＫＴＨＴ（配列番号６６）を含む。一部の実施形態において、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は、配列ＤＫＴＨＴ（配列番号６６）を含む。
Ｆｃ領域および定常ドメイン
一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、ＣＨ１に連結されたＦｃ領域をさらに含む第２のポリペプチド鎖を含み、Ｆｃ領域は、免疫グロブリンのヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む。一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、ＣＨ１に連結されたＦｃ領域をさらに含む第３のポリペプチド鎖を含み、Ｆｃ領域は、免疫グロブリンのヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む。一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、ＣＨ１に連結されたＦｃ領域をさらに含む第２のポリペプチド鎖であって、Ｆｃ領域は、免疫グロブリンのヒンジ領域およびＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む、第２のポリペプチド鎖、ならびにＣＨ１に連結されたＦｃ領域をさらに含む第３のポリペプチド鎖であって、Ｆｃ領域は、免疫グロブリンのヒンジ領域およびＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む、第３のポリペプチド鎖を含む。
一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、全長抗体重鎖またはＦｃ領域を含むポリペプチド鎖を含む。一部の実施形態において、Ｆｃ領域は、ヒトＦｃ領域、例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４のＦｃ領域である。一部の実施形態において、Ｆｃ領域は、抗体ヒンジ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、および任意選択でＣＨ４ドメインを含む。一部の実施形態において、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域である。一部の実施形態において、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ４のＦｃ領域である。一部の実施形態において、Ｆｃ領域は、以下に記載される突然変異の１つまたはそれ以上を含む。一部の実施形態において、Ｆｃ領域は、表４に示される結合性タンパク質の重鎖ポリペプチド（例えば、ポリペプチド２または３）の１つのＦｃ領域である。一部の実施形態において、重鎖定常領域は、表４に示される結合性タンパク質の重鎖ポリペプチド（例えば、ポリペプチド２または３）の１つの定常領域である。一部の実施形態において、軽鎖定常領域は、表４に示される結合性タンパク質の軽鎖ポリペプチド（例えば、ポリペプチド１または４）の１つの定常領域である。
一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、１または２つのＦｃバリアントを含む。用語「Ｆｃバリアント」は、本明細書で使用される場合、天然Ｆｃから改変されているが、それでもなおサルベージ受容体、ＦｃＲｎ（新生児Ｆｃ受容体）のための結合性部位を含む分子または配列を指す。例示的なＦｃバリアント、およびそのサルベージ受容体との相互作用は、当技術分野において公知である。したがって、用語「Ｆｃバリアント」は、非ヒト天然Ｆｃからヒト化された分子または配列を含む場合がある。さらに、天然Ｆｃは、本発明の抗体様の結合性タンパク質に必要ではない構造的特色または生物学的活性を提供するため除去することができる領域を含む。したがって、用語「Ｆｃバリアント」は、（１）ジスルフィド結合形成、（２）選択された宿主細胞との不適合、（３）選択された宿主細胞における発現でのＮ末端の不均一性、（４）グリコシル化、（５）補体との相互作用、（６）サルベージ受容体以外のＦｃ受容体への結合、または（７）抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に影響を与えるかまたはそれに関与する、１つまたはそれ以上の天然Ｆｃ部位または残基を欠如した、または１つまたはそれ以上のＦｃ部位または残基が改変された分子または配列を含む。
一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質（例えば、三重特異性結合性タンパク質）は、第２のポリペプチド鎖における「ノブ」突然変異および第３のポリペプチド鎖における「ホール」突然変異を含む。一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、第３のポリペプチド鎖における「ノブ」突然変異および第２のポリペプチド鎖における「ホール」突然変異を含む。一部の実施形態において、「ノブ」突然変異は、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の３５４位および／または３６６位に対応する位置における置換を含む。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｔ３６６Ｙ、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗ、またはＳ３５４ＣおよびＴ３６６Ｙである。一部の実施形態において、「ノブ」突然変異は、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の３５４位および３６６位に対応する位置における置換を含む。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗである。一部の実施形態において、「ホール」突然変異は、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の４０７位、および任意選択で３４９、３６６、および／または３６８位に対応する位置における置換を含む。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｙ４０７ＶまたはＹ４０７Ｔおよび任意選択でＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、および／またはＬ３６８Ａである。一部の実施形態において、「ホール」突然変異は、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置における置換を含む。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖである。
一部の実施形態において、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンのヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、第１のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の３６６位および任意選択で３５４位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｔ３６６ＷまたはＴ３６６Ｙおよび任意選択でＳ３５４Ｃであり；第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンのヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の４０７位ならびに任意選択で３４９、３６６、および／または３６８位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｙ４０７ＶまたはＹ４０７Ｔならびに任意選択でＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、および／またはＬ３６８Ａである。
一部の実施形態において、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンのヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、第１のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の４０７位ならびに任意選択で３４９、３６６、および／または３６８位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｙ４０７ＶまたはＹ４０７Ｔならびに任意選択でＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、および／またはＬ３６８Ａであり；第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンのヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の３６６位および任意選択で３５４位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｔ３６６ＷまたはＴ３６６Ｙおよび任意選択でＳ３５４Ｃである。
一部の実施形態において、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンのヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、第１のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の３６６位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｔ３６６Ｗであり；第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンのヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の３６６、３６８、および／または４０７位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、および／またはＹ４０７Ｖである。
一部の実施形態において、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンのヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、第１のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の３６６、３６８、および／または４０７位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、および／またはＹ４０７Ｖであり；第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンのヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の３６６位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｔ３６６Ｗである。
一部の実施形態において、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンのヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、第１のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の３５４位および３６６位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗであり；第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンのヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖである。一部の実施形態において、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンのヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、第１のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖであり；第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンのヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み、第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の３５４位および３６６位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗである。一部の実施形態において、第１および／または第２のＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域である。一部の実施形態において、第１および／または第２のＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ４のＦｃ領域である。
一部の実施形態において、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンのヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域であり、第１のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ４の２２８、３５４、３６６、および４０９位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｓ２２８Ｐ、Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＲ４０９Ｋであり；第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンのヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域であり、第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ４の２２８、３４９、３６６、３６８、４０７、および４０９位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｓ２２８Ｐ、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＲ４０９Ｋである。一部の実施形態において、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンのヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域であり、第１のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ４の２２８、３４９、３６６、３６８、４０７、および４０９位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｓ２２８Ｐ、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＲ４０９Ｋであり；第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンのヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域であり、第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ４の２２８、３５４、３６６、および４０９位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｓ２２８Ｐ、Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＲ４０９Ｋである。
一部の実施形態において、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンのヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域であり、第１のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ４の２３４、２３５、３５４、および３６６位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｓ３５４Ｃ、およびＴ３６６Ｗであり；第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンのヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域であり、第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ４の２３４、２３５、３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖである。一部の実施形態において、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンのヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域であり、第１のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ４の２３４、２３５、３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖであり；第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンのヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域であり、第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ４の２３４、２３５、３５４、および３６６位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｓ３５４Ｃ、およびＴ３６６Ｗである。
一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、エフェクター機能、例えば、Ｆｃ受容体によって媒介される抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、および／または抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を低減することができる１つまたはそれ以上の突然変異を含む。一部の実施形態において、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンのヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み；第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンのヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み；第１および第２のＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域であり；第１および第２のＦｃ領域はそれぞれ、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ１の２３４位および２３５位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａである。一部の実施形態において、第２および第３のポリペプチド鎖のＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域であり、Ｆｃ領域はそれぞれ、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ１の２３４位および２３５位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａである。一部の実施形態において、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンのヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み；第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンのヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含み；第１および第２のＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域であり；第１および第２のＦｃ領域はそれぞれ、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ１の２３４、２３５、および３２９位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＰ３２９Ａである。一部の実施形態において、第２および第３のポリペプチド鎖のＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域であり、Ｆｃ領域はそれぞれ、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ１の２３４、２３５、および３２９位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＰ３２９Ａである。一部の実施形態において、第２および第３のポリペプチド鎖のＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ４のＦｃ領域であり、Ｆｃ領域はそれぞれ、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ４の２３４位および２３５位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｆ２３４ＡおよびＬ２３５Ａである。一部の実施形態において、結合性タンパク質は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含む第２のポリペプチド鎖であって、第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンのヒンジ領域およびＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む、第２のポリペプチド鎖、ならびにＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含む第３のポリペプチド鎖であって、第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンのヒンジ領域およびＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む、第３のポリペプチド鎖を含み；第１および第２のＦｃ領域はそれぞれ、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ４の２３４位および２３５位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｆ２３４ＡおよびＬ２３５Ａである。
一部の実施形態において、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンのヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域であり、第１のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ４の２２８、２３４、２３５、３５４、３６６、および４０９位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＲ４０９Ｋであり；第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンのヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域であり、第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ４の２２８、２３４、２３５、３４９、３６６、３６８、４０７、および４０９位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＲ４０９Ｋである。一部の実施形態において、第２のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含み、第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンのヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域であり、第１のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ４の２２８、２３４、２３５、３４９、３６６、３６８、４０７、および４０９位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、およびＲ４０９Ｋであり；第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含み、第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンのヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域であり、第２のＦｃ領域は、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ４の２２８、２３４、２３５、３５４、３６６、および４０９位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、およびＲ４０９Ｋである。
一部の実施形態において、Ｆｃ領域は、ＦｃγＩおよび／またはＦｃγＩＩの結合を低減または消去する１つまたはそれ以上の突然変異を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域である。一部の実施形態において、Ｆｃ領域は、ＦｃγＩおよび／またはＦｃγＩＩの結合を低減または消去するがＦｃＲｎの結合に影響を与えない１つまたはそれ以上の突然変異を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域である。一部の実施形態において、Ｆｃ領域は、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ４の２２８位および／または４０９位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域である。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｓ２２８Ｐおよび／またはＲ４０９Ｋである。一部の実施形態において、Ｆｃ領域は、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ４の２３４位および／または２３５位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域である。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｆ２３４Ａおよび／またはＬ２３５Ａである。一部の実施形態において、Ｆｃ領域は、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ４の２２８、２３４、２３５、および／または４０９位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域である。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、および／またはＲ４０９Ｋである。一部の実施形態において、Ｆｃ領域は、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ４の２３３～２３６位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域である。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、および２３６における欠失である。一部の実施形態において、Ｆｃ領域は、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ４の２２８、２３３～２３６、および／または４０９位に対応する位置におけるアミノ酸突然変異を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域である。一部の実施形態において、アミノ酸突然変異は、Ｓ２２８Ｐ；Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、および２３６における欠失；ならびに／またはＲ４０９Ｋである。
一部の実施形態において、Ｆｃ領域は、Ｆｃ領域のＦｃ受容体結合および／またはエフェクター機能（例えば、Ｆｃ受容体によって媒介される抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、および／または抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ））を低減または消去する１つまたはそれ以上の突然変異を含む。
一部の実施形態において、Ｆｃ領域は、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ１の２３４、２３５、および／または３２９位に対応する位置における１つまたはそれ以上のアミノ酸置換を含むヒトＩｇＧ１のＦｃ領域である。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、および／またはＰ３２９Ａである。一部の実施形態において、Ｆｃ領域は、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ１の２９８、２９９、および／または３００位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含むヒトＩｇＧ１のＦｃ領域である。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｓ２９８Ｎ、Ｔ２９９Ａ、および／またはＹ３００Ｓである。
一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、安定性、例えば、ＩｇＧ４のヒンジ領域および／または二量体境界の安定性を改善するための１つまたはそれ以上の突然変異を含む（例えば、Ｓｐｉｅｓｓ，Ｃ．ら（２０１３）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８８：２６５８３～２６５９３を参照）。一部の実施形態において、突然変異は、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ４の２２８位および４０９位に対応する位置における置換を含み、アミノ酸置換は、Ｓ２２８ＰおよびＲ４０９Ｋである。一部の実施形態において、結合性タンパク質は、ＣＨ１に連結された第１のＦｃ領域をさらに含む第２のポリペプチド鎖であって、第１のＦｃ領域は、免疫グロブリンのヒンジ領域およびＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む、第２のポリペプチド鎖、ならびにＣＨ１に連結された第２のＦｃ領域をさらに含む第３のポリペプチド鎖であって、第２のＦｃ領域は、免疫グロブリンのヒンジ領域およびＣＨ２およびＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む、第３のポリペプチド鎖を含み；第１および第２のＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ４のＦｃ領域であり；第１および第２のＦｃ領域はそれぞれ、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ４の２２８位および４０９位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｓ２２８ＰおよびＲ４０９Ｋである。一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、ノブおよびホールの突然変異ならびに安定性を改善するための１つまたはそれ以上の突然変異を含む。一部の実施形態において、第１および／または第２のＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ４のＦｃ領域である。
一部の実施形態において、Ｆｃ領域は、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ１の２３４、２３５、および／または３２９位に対応する位置における１つまたはそれ以上のアミノ酸置換を含むヒトＩｇＧ１のＦｃ領域である。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、および／またはＰ３２９Ａである。一部の実施形態において、Ｆｃ領域は、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ１の２９８、２９９、および／または３００位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含むヒトＩｇＧ１のＦｃ領域である。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｓ２９８Ｎ、Ｔ２９９Ａ、および／またはＹ３００Ｓである。
核酸
本開示の他の態様は、単離された核酸分子であって、本明細書に記載の任意の結合性タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、前記単離された核酸分子に関する。例示的および非限定的な核酸配列は表５に提供される。
本開示の他の態様は、ポリヌクレオチドのキットであって、ポリヌクレオチドが、例えば、本明細書に記載されるような結合性タンパク質の１つまたはそれ以上のポリペプチドをコードする、前記キットに関する。一部の実施形態において、本開示のポリヌクレオチドのキットは、（ａ）配列番号１８９のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号１９０のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号１９１のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号１９２のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；（ｂ）配列番号１９３のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号１９４のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号１９５のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号１９６のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；（ｃ）配列番号１９７のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号１９８のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号１９９のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２００のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；（ｄ）配列番号２０１のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２０２のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２０３のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２０４のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；（ｅ）配列番号２０５のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２０６のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２０７のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２０８のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；（ｆ）配列番号２０９のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２１０のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２１１のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２１２のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；（ｇ）配列番号２１３のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２１４のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２１５のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２１６のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；（ｈ）配列番号２１７のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２１８のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２１９のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２２０のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；（ｉ）配列番号２２１のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２２２のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２２３のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２２４のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；（ｊ）配列番号２２５のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２２６のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２２７のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２２８のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；（ｋ）配列番号２２９のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２３０のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２３１のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２３２のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；（ｌ）配列番号２３３のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２３４のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２３５のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２３６のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；（ｍ）配列番号２３７のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２３８のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２３９のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２４０のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；（ｎ）配列番号２４１のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２４２のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２４３のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２４４のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；（ｏ）配列番号２４５のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２４６のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２４７のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２４８のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；（ｐ）配列番号２４９のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２５０のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２５１のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２５２のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；（ｑ）配列番号２５３のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２５４のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２５５のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２５６のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；（ｒ）配列番号２５７のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２５８のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２５９のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２６０のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；（ｓ）配列番号２６１のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２６２のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２６３のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２６４のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；（ｔ）配列番号２６５のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２６６のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２６７のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２６８のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；（ｕ）配列番号２６９のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２７０のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２７１のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２７２のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；または（ｖ）配列番号２７３のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２７４のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２７５のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２７６のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチドのキットの１、２、３、または４つのポリヌクレオチドを含む。
本開示の他の態様は、本明細書に記載の任意の結合性タンパク質の第１、第２、第３、および第４のポリペプチド鎖をコードする１つまたはそれ以上のベクターを含む、ベクターシステムに関する。一部の実施形態において、例えば、表６のポリヌクレオチドに示されるように、ベクターシステムは、結合性タンパク質の第１のポリペプチド鎖をコードする第１のベクター、結合性タンパク質の第２のポリペプチド鎖をコードする第２のベクター、結合性タンパク質の第３のポリペプチド鎖をコードする第３のベクター、および結合性タンパク質の第４のポリペプチド鎖をコードする第４のベクターを含む。一部の実施形態において、ベクターシステムは、結合性タンパク質の第１および第２のポリペプチド鎖をコードする第１のベクター、ならびに結合性タンパク質の第３および第４のポリペプチド鎖をコードする第２のベクターを含む。一部の実施形態において、ベクターシステムは、結合性タンパク質の第１および第３のポリペプチド鎖をコードする第１のベクター、ならびに結合性タンパク質の第２および第４のポリペプチド鎖をコードする第２のベクターを含む。一部の実施形態において、ベクターシステムは、結合性タンパク質の第１および第４のポリペプチド鎖をコードする第１のベクター、ならびに結合性タンパク質の第２および第３のポリペプチド鎖をコードする第２のベクターを含む。一部の実施形態において、ベクターシステムは、結合性タンパク質の第１、第２、第３、および第４のポリペプチド鎖をコードする第１のベクターを含む。ベクターシステムの１つまたはそれ以上のベクターは、本明細書に記載の任意のベクターであってもよい。一部の実施形態において、１つまたはそれ以上のベクターは発現ベクターである。一部の実施形態において、第１、第２、第３、および第４のポリヌクレオチドは、１つまたはそれ以上の発現ベクター、例えば、１、２、３、または４つの発現ベクター上に存在する。
結合性タンパク質を形成するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを構築し、これらのポリヌクレオチドを組換え発現ベクターに組み込み、そのようなベクターを宿主細胞に導入するために標準的な組換えＤＮＡ方法論が使用される。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．、２００１、ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＣＬＯＮＩＮＧ： Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、３ｒｄ ｅｄ．）を参照。酵素反応および精製技術は、当技術分野において一般的に達成されるように、または本明細書に記載されるように、製造者の仕様書に従って行うことができる。特有の定義が提供されなければ、本明細書に記載の分析化学、合成有機化学、ならびに医薬品および薬化学との繋がりにおいて利用される学術用語、ならびにその実験室手順および技術は、当技術分野において周知かつ一般的に使用されるものである。同様に、化学合成、化学分析、医薬製造、製剤、送達、および患者の処置のために従来技術を使用することができる。
一部の実施形態において、単離された核酸は、結合性タンパク質コーディング核酸配列の転写を指令するために異種プロモーターに作動可能に連結している。プロモーターは、核酸の転写を指令する核酸制御配列を指すことができる。第１の核酸配列が第２の核酸配列と機能的な関係性に置かれている場合に、第１の核酸配列は第２の核酸配列に作動可能に連結している。例えば、プロモーターがコーディング配列の転写または発現に影響する場合に、プロモーターは結合性タンパク質のコーディング配列に作動可能に連結している。プロモーターの例としては、ウイルス（例えばポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス、アデノウイルス（例えばアデノウイルス２）、ウシパピローマウイルス、トリ肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、およびシミアンウイルス４０（ＳＶ４０）など）のゲノム、異種真核性プロモーター（例えばアクチンプロモーター、免疫グロブリンプロモーター、および熱ショックプロモーターなど）、ＣＡＧ－プロモーター（Ｎｉｗａ ｅｔ ａｌ．、Ｇｅｎｅ １０８（２）：１９３～９頁、１９９１）、ホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）－プロモーター、テトラサイクリン誘導性プロモーター（Ｍａｓｕｉ ｅｔ ａｌ．、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．３３：ｅ４３、２００５）、ｌａｃシステム、ｔｒｐシステム、ｔａｃシステム、ｔｒｃシステム、ファージラムダの主要なオペレーターおよびプロモーター領域、３－ホスホグリセリン酸キナーゼのプロモーター、酵母酸ホスファターゼのプロモーター、ならびに酵母アルファ接合因子のプロモーターから得られるプロモーターを挙げることができるがこれらに限定されない。本開示の結合性タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、構成的プロモーター、誘導性プロモーター、または本明細書に記載の任意の他の好適なプロモーターまたは当業者により容易に認識される他の好適なプロモーターの制御下にあってもよい。
一部の実施形態において、単離された核酸はベクターに組み込まれる。一部の実施形態において、ベクターは発現ベクターである。発現ベクターは、発現されるべきポリヌクレオチドに作動可能に連結した１つまたはそれ以上の調節配列を含んでもよい。「調節配列」という用語は、プロモーター、エンハンサーおよび他の発現制御エレメント（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含む。好適なエンハンサーの例としては、哺乳動物遺伝子（例えばグロビン、エラスターゼ、アルブミン、α－フェトプロテイン、インスリンなど）からのエンハンサー配列、ならびに真核細胞ウイルスからのエンハンサー配列（例えば複製起点の後期側（ｂｐ １００～２７０）のＳＶ４０エンハンサー、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後期側のポリオーマエンハンサー、アデノウイルスエンハンサーなど）を挙げることができるがこれらに限定されない。好適なベクターの例としては、例えば、プラスミド、コスミド、エピソーム、トランスポゾン、およびウイルスベクター（例えば、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、シンドビスウイルス、麻疹、ヘルペスウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノ随伴ウイルスベクターなど）を挙げることができる。発現ベクターを使用して、宿主細胞、例えば、細菌細胞、酵母細胞、昆虫細胞、および哺乳動物細胞などへのトランスフェクトを行うことができる。宿主における発現および複製が可能な生物学的に機能的なウイルスおよびプラスミドＤＮＡベクターは当技術分野において公知であり、関心対象の任意の細胞へのトランスフェクトを行うために使用することができる。
宿主細胞
本開示の他の態様は、宿主細胞（例えば、単離された宿主細胞）であって、本明細書に記載の１つまたはそれ以上の単離されたポリヌクレオチド、ベクター、および／またはベクターシステムを含む、前記宿主細胞（例えば、単離された宿主細胞）に関する。一部の実施形態において、本開示の単離された宿主細胞はｉｎ ｖｉｔｒｏで培養される。一部の実施形態において、宿主細胞は細菌細胞（例えば、Ｅ． ｃｏｌｉ細胞）である。一部の実施形態において、宿主細胞は酵母細胞（例えば、Ｓ． ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ細胞）である。一部の実施形態において、宿主細胞は昆虫細胞である。昆虫宿主細胞の例としては、例えば、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ細胞（例えば、Ｓ２細胞）、Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉ細胞（例えば、Ｈｉｇｈ Ｆｉｖｅ（商標）細胞）、およびＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞（例えば、Ｓｆ２１またはＳｆ９細胞）を挙げることができる。一部の実施形態において、宿主細胞は哺乳動物細胞である。哺乳動物宿主細胞の例としては、例えば、ヒト胎児腎臓細胞（例えば、２９３細胞または懸濁培養での増殖のためにサブクローニングされた２９３細胞）、Ｅｘｐｉ２９３（商標）細胞、ＣＨＯ細胞、ベビーハムスター腎臓細胞（例えば、ＢＨＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）、マウスセルトリ細胞（例えば、ＴＭ４細胞）、サル腎臓細胞（例えば、ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）、アフリカミドリザル腎臓細胞（例えば、ＶＥＲＯ－７６、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５８７）、ヒト子宮頸癌細胞（例えば、ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）、イヌ腎臓細胞（例えば、ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）、バッファローラット肝細胞（例えば、ＢＲＬ ３Ａ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２）、ヒト肺細胞（例えば、Ｗ１３８、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５）、ヒト肝細胞（例えば、Ｈｅｐ Ｇ２、ＨＢ ８０６５）、マウス乳腺腫瘍細胞（例えば、ＭＭＴ ０６０５６２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）、ＴＲＩ細胞、ＭＲＣ ５細胞、ＦＳ４細胞、ヒトヘパトーマ系（例えば、Ｈｅｐ Ｇ２）、ならびに骨髄腫細胞（例えば、ＮＳ０およびＳｐ２／０細胞）を挙げることができる。
本開示の他の態様は、本明細書に記載の任意の結合性タンパク質を産生する方法に関する。一部の実施形態において、方法は、ａ）単離された核酸、ベクター、および／またはベクターシステム（例えば、本明細書に記載の任意の単離された核酸、ベクター、および／またはベクターシステム）を含む宿主細胞（例えば、本明細書に記載の任意の宿主細胞）を、宿主細胞が結合性タンパク質を発現するような条件下で培養すること；ならびにｂ）宿主細胞から結合性タンパク質を単離することを含む。タンパク質を発現させるための条件下で宿主細胞を培養する方法は当業者に周知である。培養された宿主細胞からタンパク質を単離する方法は当業者に周知であり、例えば、アフィニティークロマトグラフィー（例えば、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィー、続いてサイズ排除クロマトグラフィーを含む２工程アフィニティークロマトグラフィー）が挙げられる。
医薬組成物
結合性タンパク質を含む治療用または医薬組成物は本開示の範囲内である。そのような治療用または医薬組成物は、投与のモードとの好適性のために選択される薬学的または生理学的に許容される製剤化剤（ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ａｇｅｎｔ）との組合せで、治療有効量の結合性タンパク質、または結合性タンパク質－薬物コンジュゲートを含むことができる。
許容される製剤材料は、用いられる投薬量および濃度においてレシピエントに対して非毒性である。
医薬組成物は、例えば、組成物のｐＨ、容量オスモル濃度、粘性、透明性、色、等張性、匂い、無菌状態、安定性、溶解もしくは放出の速度、吸着、または透過を改変、維持、または保存するための製剤材料を含有することができる。好適な製剤材料は、アミノ酸（例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、もしくはリジン）、抗微生物剤、抗酸化剤（例えばアスコルビン酸、亜硫酸ナトリウム、もしくは亜硫酸水素ナトリウム）、緩衝剤（例えばホウ酸、重炭酸、Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、クエン酸、リン酸、もしくは他の有機酸）、増量剤（例えばマンニトールもしくはグリシン）、キレート剤（例えばエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ））、錯化剤（例えばカフェイン、ポリビニルピロリドン、ベータ－シクロデキストリン、もしくはヒドロキシプロピル－ベータ－シクロデキストリン）、充填剤、単糖、二糖、および他の炭水化物（例えばグルコース、マンノース、もしくはデキストリン）、タンパク質（例えば血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリン）、着色剤、香味剤および希釈剤、乳化剤、親水性ポリマー（例えばポリビニルピロリドン）、低分子量ポリペプチド、塩形成対イオン（例えばナトリウム）、防腐剤（例えば塩化ベンザルコニウム、安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸、もしくは過酸化水素）、溶媒（例えばグリセリン、プロピレングリコール、もしくはポリエチレングリコール）、糖アルコール（例えばマンニトールもしくはソルビトール）、懸濁化剤、界面活性剤もしくは湿潤剤（例えばｐｌｕｒｏｎｉｃｓ；ＰＥＧ；ソルビタンエステル；ポリソルベート、例えばポリソルベート２０もしくはポリソルベート８０；ｔｒｉｔｏｎ；トロメタミン；レシチン；コレステロールもしくはｔｙｌｏｘａｐｏｌ）、安定性増強剤（例えばスクロースもしくはソルビトール）、張度増強剤（例えばハロゲン化アルカリ金属、例えば塩化ナトリウムもしくはカリウム、もしくはマンニトール、ソルビトール）、送達媒体、希釈剤、賦形剤ならびに／または薬学的アジュバントを含むがこれらに限定されない（例えば、参照によって任意の目的のために本明細書に組み入れる、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ（１８ｔｈ Ｅｄ．、Ａ．Ｒ． Ｇｅｎｎａｒｏ編、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ １９９０）、およびそれのその後の版を参照）。
最適な医薬組成物は、例えば、意図される投与の経路、送達フォーマット、および所望の投薬量に依存して、当業者により決定される。そのような組成物は、結合性タンパク質の物理的状態、安定性、ｉｎ ｖｉｖｏ放出の速度、およびｉｎ ｖｉｖｏクリアランスの速度に影響を及ぼすことができる。
医薬組成物中の主要な媒体または担体は、水性または非水性のいずれかの性質であり得る。例えば、注射用の好適な媒体または担体は、水、生理食塩水溶液、または人工脳脊髄液であり得、これらは場合により、非経口投与用の組成物において一般的な他の材料を補足されている。中性緩衝化食塩水または血清アルブミンと混合された食塩水はさらなる例示的な媒体である。他の例示的な医薬組成物は、約ｐＨ ７．０～８．５のＴｒｉｓ緩衝液、または約ｐＨ ４．０～５．５の酢酸緩衝液を含み、これらはソルビトールまたは好適な代用物をさらに含むことができる。本開示の１つの実施形態において、結合性タンパク質組成物は、所望の純度を有する選択された組成物を、凍結乾燥ケーキまたは水性溶液の形態の任意選択的な製剤化剤と混合することにより貯蔵のために製造することができる。さらに、結合性タンパク質は、適切な賦形剤、例えばスクロースを使用して凍結乾燥物として製剤化することができる。
本開示の医薬組成物は、非経口送達または皮下のために選択することができる。代替的に、組成物は、吸入のためまたは消化管を通じた、例えば経口的な送達のために選択することができる。そのような薬学的に許容される組成物の製造は当技術分野の技術的範囲内である。
製剤成分は、投与の部位にとって許容される濃度で存在する。例えば、生理的ｐＨまたはわずかにより低いｐＨ、典型的には約５～約８のｐＨ範囲内に組成物を維持するために緩衝剤が使用される。
非経口投与が企図される場合、使用のための治療用組成物は、薬学的に許容される媒体中に所望の結合性タンパク質を含む、発熱物質非含有の、非経口的に許容される、水性溶液の形態であり得る。非経口注射のための特に好適な媒体は無菌蒸留水であり、無菌蒸留水中で、結合性タンパク質は、適切に保存された無菌の等張溶液として製剤化される。さらに別の生成物は、デポー注射を介して送達することができる製造物の制御されたまたは持続した放出を提供する剤、例えば注射可能なマイクロスフェア、生体内分解性粒子、ポリマー化合物（例えばポリ乳酸もしくはポリグリコール酸）、ビーズ、またはリポソームを用いる所望の分子の製剤化を伴うことができる。ヒアルロン酸を使用することもでき、これは循環中の持続された持続期間を促進する効果を有することができる。所望の分子の導入のための他の好適な手段としては、埋め込み可能な薬物送達デバイスが挙げられる。
１つの実施形態において、医薬組成物は、吸入のために製剤化することができる。例えば、結合性タンパク質は、吸入用の乾燥粉末として製剤化することができる。結合性タンパク質吸入溶液はまた、エアロゾル送達用の噴射剤を用いて製剤化することができる。さらに別の実施形態において、溶液は噴霧することができる。
ある特定の製剤を経口的に投与できることも企図される。本開示の１つの実施形態において、この様式で投与される結合性タンパク質は、固体投薬形態、例えば錠剤およびカプセルの調合において慣習的に使用される担体を用いてまたは用いずに製剤化することができる。例えば、カプセルは、バイオアベイラビリティが最大化され、前全身性分解が最小化される胃腸管中の位置において製剤の活性部分を放出するように設計することができる。結合性タンパク質の吸収を促すために追加の剤を含めることができる。希釈剤、香味剤、低融点ワックス、植物油、滑沢剤、懸濁化剤、錠剤崩壊剤、および結合剤もまた用いることができる。
別の医薬組成物は、錠剤の製造のために好適な非毒性賦形剤との混合物中に有効量の結合性タンパク質を伴うことができる。無菌水、または別の適切な媒体中に錠剤を溶解させることにより、溶液を単位用量形態に製造することができる。好適な賦形剤としては、不活性希釈剤、例えば炭酸カルシウム、炭酸もしくは重炭酸ナトリウム、ラクトース、もしくはリン酸カルシウム；または結合剤、例えばデンプン、ゼラチン、もしくはアカシア；または潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、もしくはタルクが挙げられるがこれらに限定されない。
本開示の追加の医薬組成物は当業者に明らかであり、持続または制御送達製剤中に結合性タンパク質を伴う製剤が挙げられる。様々な他の持続または制御送達手段、例えばリポソーム担体、生体内分解性マイクロ粒子または多孔性ビーズおよびデポー注射を製剤化するための技術もまた当業者に公知である。持続放出製造物の追加の例としては、成形品、例えば、フィルム、またはマイクロカプセルの形態の半透性ポリマーマトリックスが挙げられる。持続放出マトリックスは、ポリエステル、ハイドロゲル、ポリラクチド、Ｌ－グルタミン酸およびガンマエチル－Ｌ－グルタメートのコポリマー、ポリ（２－ヒドロキシエチル－メタクリレート）、エチレン酢酸ビニル、またはポリ－Ｄ（－）－３－ヒドロキシ酪酸を含むことができる。持続放出組成物はまた、当技術分野において公知のいくつかの方法のいずれかにより製造することができるリポソームを含むことができる。
ｉｎ ｖｉｖｏ投与のために使用される医薬組成物は典型的には無菌でなければならない。これは、無菌濾過膜を通じた濾過により達成することができる。組成物が凍結乾燥される場合、この方法を使用する滅菌は、凍結乾燥および再構成の前、または後のいずれかに実行することができる。非経口投与用の組成物は、凍結乾燥形態で、または溶液中に貯蔵することができる。追加的に、非経口組成物は、一般に、無菌アクセスポートを有する容器、例えば、静脈内溶液バッグまたは皮下注射針により貫通可能なストッパーを有するバイアル中に入れられる。
医薬組成物が製剤化されると、それを無菌バイアル中に溶液、懸濁液、ゲル、エマルション、固体として、または脱水もしくは凍結乾燥粉末として貯蔵することができる。そのような製剤は、使用準備済み形態または投与の前に再構成を要求する形態（例えば、凍結乾燥された形態）のいずれかで貯蔵することができる。
本開示はまた、単回用量投与単位を生成するためのキットを包含する。キットはそれぞれ、乾燥タンパク質を有する第１の容器および水性製剤を有する第２の容器の両方を含有することができる。単一および複数チャンバー事前充填シリンジ（例えば、液体シリンジおよびリオシリンジ（ｌｙｏｓｙｒｉｎｇｅｓ））を含有するキットもまた本開示の範囲内に含まれる。
治療的に用いられる結合性タンパク質医薬組成物の有効量は、例えば、治療的な文脈および目的に依存する。処置のための適切な投薬量レベルはそのため、送達される分子、結合性タンパク質が使用されている適応症、投与の経路、ならびに患者のサイズ（体重、身体表面、または臓器サイズ）および状態（年齢および全般的健康状態）に部分的に依存して変動することを当業者は理解する。よって、臨床医は、投薬量を滴定し、投与の経路を改変して最適な治療効果を得ることができる。
投薬頻度は、使用されている製剤中の結合性タンパク質の薬物動態パラメーターに依存する。典型的には、臨床医は、所望の効果を達成する投薬量に達するまで組成物を投与する。組成物はしたがって、単一の用量として、経時的に２つもしくはそれより多くの用量（同じ量の所望の分子を含有してもよいし、そうでなくてもよい）として、または埋め込みデバイスもしくはカテーテルを介して連続注入として、投与することができる。適切な投薬量のさらなる精密化は、当業者により日常的に為され、当業者により日常的に行われるタスクの範囲内である。適切な投薬量は、適切な用量応答データの使用を通じて確認することができる。
医薬組成物の投与の経路は公知の方法に従い、例えば、経口的に；注射を通じて静脈内、腹腔内、脳内（実質内）、脳室内、筋肉内、眼内、動脈内、門脈内、もしくは病巣内経路により；持続放出システムにより；または埋め込みデバイスにより為される。所望の場合、組成物は、ボーラス注射によりまたは注入により連続的に、または埋め込みデバイスにより投与することができる。
組成物はまた、所望の分子が吸収または被包された膜、スポンジ、または他の適切な材料の埋め込みを介して局所的に投与することができる。埋め込みデバイスが使用される場合、デバイスを任意の好適な組織または臓器に埋め込むことができ、所望の分子の送達を拡散、時限放出ボーラス、または連続的な投与を介して行うことができる。
医薬組成物を使用して、ＨＩＶ感染症を予防および／または処置することができる。医薬組成物は、スタンドアロンの療法としてまたは標準的な抗レトロウイルス療法と組み合わせて使用することができる。
本開示はまた、キットであって、結合性タンパク質および生物学的試料中の標的抗原レベルを検出するために有用な他の試薬を含む、前記キットに関する。そのような試薬は、検出可能な標識、ブロッキング血清、陽性および陰性対照試料、ならびに検出試薬を含むことができる。一部の実施形態において、キットは、本明細書に記載の任意の結合性タンパク質、ポリヌクレオチド、ベクター、ベクターシステム、および／または宿主細胞を含む組成物を含む。一部の実施形態において、キットは、容器および容器上のまたは容器に付随した標識またはパッケージ挿入物を含む。好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ溶液バッグなどが挙げられる。容器は、様々な材料、例えばガラスまたはプラスチックから形成することができる。容器は、単独の、または状態（例えば、ＨＩＶ感染症）を処置、予防および／もしくは診断するために有効な別の組成物と組み合わせた組成物を保持し、無菌アクセスポートを有してもよい（例えば、容器は、静脈内溶液バッグまたは皮下注射針により貫通可能なストッパーを有するバイアルであってもよい）。一部の実施形態において、標識またはパッケージ挿入物は、組成物は、選択された状態を予防、診断、および／または処置するために使用されることを指し示す。代替的に、または追加的に、製品またはキットは、薬学的に許容される緩衝液、例えば注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝化食塩水、リンゲル溶液およびデキストロース溶液を含む第２（または第３の）容器をさらに含んでもよい。それは、他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針、およびシリンジを含めて、商業的およびユーザーの観点から望ましい他の材料をさらに含んでもよい。
方法および結合性タンパク質の使用
ウイルス
本開示のある特定の態様は、ウイルス特異的メモリーＴ細胞を拡大増殖させる方法に関する。一部の実施形態において、方法は、ウイルス特異的メモリーＴ細胞を本開示の結合性タンパク質、例えば、ＣＤ２８ポリペプチドに結合する第１の抗原結合性部位、ＣＤ３ポリペプチドに結合する第２の抗原結合性部位、およびＣＤ３８ポリペプチドに結合する第３の抗原結合性部位を含む三重特異性結合性タンパク質と接触させることを含む。
一部の実施形態において、ウイルス特異的メモリーＴ細胞はｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで結合性タンパク質と接触する。
一部の実施形態において、ウイルス特異的メモリーＴ細胞を結合性タンパク質と接触させることはウイルス特異的メモリーＴ細胞の活性化および／または増殖を引き起こす。
本開示の他の態様は、Ｔ細胞を拡大増殖させる方法に関する。一部の実施形態において、方法は、Ｔ細胞を本開示の結合性タンパク質、例えば、ＣＤ２８ポリペプチドに結合する第１の抗原結合性部位、ＣＤ３ポリペプチドに結合する第２の抗原結合性部位、およびＣＤ３８ポリペプチドに結合する第３の抗原結合性部位を含む三重特異性結合性タンパク質と接触させることを含む。
一部の実施形態において、Ｔ細胞はメモリーＴ細胞またはエフェクターＴ細胞である。
一部の実施形態において、Ｔ細胞は、その細胞表面上にキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現し、またはＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む。
本開示の他の態様は、例えば、それを必要とする個体において、慢性ウイルス感染症を処置する方法に関する。一部の実施形態において、方法は、それを必要とする個体に有効量の本開示の結合性タンパク質、例えば、ＣＤ２８ポリペプチドに結合する第１の抗原結合性部位、ＣＤ３ポリペプチドに結合する第２の抗原結合性部位、およびＣＤ３８ポリペプチドに結合する第３の抗原結合性部位を含む三重特異性結合性タンパク質を投与することを含む。
一部の実施形態において、個体はヒトである。
一部の実施形態において、結合性タンパク質は、結合性タンパク質および薬学的に許容される担体を含む医薬製剤で個体に投与される。
一部の実施形態において、結合性タンパク質の投与は、個体においてウイルス特異的メモリーＴ細胞の活性化および／または増殖を結果としてもたらす。
上記の任意の方法において、メモリーＴ細胞はＣＤ８＋またはＣＤ４＋メモリーＴ細胞であり得る。上記の任意の方法において、メモリーＴ細胞はセントラルメモリーＴ細胞（ＴＣＭ）またはエフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）であり得る。
がん
本開示のある特定の態様は、患者においてがんを予防および／または処置する方法に関する。一部の実施形態において、方法は、患者に治療有効量の本開示の結合性タンパク質または医薬組成物を投与することを含む。
一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、がんの処置または予防のためにそれを必要とする患者に投与される。一部の実施形態において、本開示は、増殖性疾患または障害（例えば、がん）を予防および／または処置する方法に関する。一部の実施形態において、方法は、患者に治療有効量の本明細書に記載の結合性タンパク質、またはそれに関連する医薬組成物の少なくとも１つを投与することを含む。一部の実施形態において、本開示は、それを必要とする患者において増殖性疾患または障害（例えば、がん）を予防および／または処置するための、本明細書に記載の結合性タンパク質、またはそれに関連する医薬組成物の少なくとも１つの使用に関する。一部の実施形態において、本開示は、それを必要とする患者において増殖性疾患または障害（例えば、がん）を予防および／または処置するための医薬の製造における使用のための、本明細書に記載の結合性タンパク質、またはそれに関連する医薬組成物の少なくとも１つに関する。一部の実施形態において、患者はヒトである。
一部の実施形態において、少なくとも１つの結合性タンパク質は、１つまたはそれ以上の抗がん療法（例えば、当技術分野において公知の任意の抗がん療法、例えば化学療法剤または療法）と組み合わせて投与される（または投与されることになる）。一部の実施形態において、少なくとも１つの結合性タンパク質は、１つまたはそれ以上の抗がん療法の前に投与される（または投与されることになる）。一部の実施形態において、少なくとも１つの結合性タンパク質は、１つまたはそれ以上の抗がん療法と並行して投与される（または投与されることになる）。一部の実施形態において、少なくとも１つの結合性タンパク質は、１つまたはそれ以上の抗がん療法の後に投与される（または投与されることになる）。
一部の実施形態において、結合性タンパク質は、Ｔ細胞表面タンパク質に結合する１または２つの抗原結合性部位およびヒトＨＥＲ２ポリペプチドの細胞外ドメインに結合する別の抗原結合性部位を含む。一部の実施形態において、結合性タンパク質は、ヒトＨＥＲ２ポリペプチドの細胞外ドメインに結合する抗原結合性部位、ヒトＣＤ２８ポリペプチドに結合する抗原結合性部位、およびヒトＣＤ３ポリペプチドに結合する抗原結合性部位を含む。
一部の実施形態において、個体からのがん細胞はＨＥＲ２を発現する。一部の実施形態において、患者は、がんの細胞がヒトＨＥＲ２ポリペプチドを発現することに基づいて処置のために選択される。がん細胞によるＨＥＲ２発現を検出するために好適な当技術分野において公知のアッセイとしては、免疫組織化学（ＩＨＣ）および蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）アッセイが挙げられるがこれらに限定されない。
一部の実施形態において、がん（例えば、ＨＥＲ２陽性がん）は、乳がん、結腸直腸がん、胃がん、または非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）である。
一部の実施形態において、結合性タンパク質は、Ｔ細胞表面タンパク質に結合する１または２つの抗原結合性部位およびヒトＣＤ３８ポリペプチドの細胞外ドメインに結合する別の抗原結合性部位を含む。一部の実施形態において、結合性タンパク質は、ヒトＣＤ３８ポリペプチドの細胞外ドメインに結合する抗原結合性部位、ヒトＣＤ２８ポリペプチドに結合する抗原結合性部位、およびヒトＣＤ３ポリペプチドに結合する抗原結合性部位を含む。
一部の実施形態において、個体からのがん細胞はＣＤ３８を発現する。一部の実施形態において、がんの細胞はそれらの細胞表面上にヒトＣＤ３８アイソフォームＡポリペプチドを発現する。一部の実施形態において、がんの細胞はそれらの細胞表面上にヒトＣＤ３８アイソフォームＥポリペプチドを発現する。一部の実施形態において、患者は、がんの細胞がそれらの細胞表面上にヒトＣＤ３８アイソフォームＥポリペプチドを発現することに基づいて処置のために選択される。一部の実施形態において、がん細胞はＣＤ３８およびＣＤ２８を発現する。一部の実施形態において、がん細胞はＣＤ３８を発現し、ＣＤ２８を発現しない。
一部の実施形態において、がん（例えば、ＣＤ３８陽性がん）は、多発性骨髄腫、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、リンパ腫、乳がん、例えばＨｅｒ２＋乳がん、前立腺がん、胚中心Ｂ細胞リンパ腫またはＢ細胞急性リンパ芽球性白血病である。ある特定の実施形態において、がんは多発性骨髄腫である。ある特定の実施形態において、がんは、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、またはＢ細胞リンパ腫である。
ある特定の実施形態において、がんは多発性骨髄腫である。抗ＣＤ３８抗体、例えばダラツムマブは、多発性骨髄腫の処置のために試験されている。しかしながら、多発性骨髄腫は処置可能であると考えられるが、ほぼ全ての患者において再発が不可避であり、処置難治性疾患の発症に繋がる。一部の実施形態において、がんは再発性または難治性多発性骨髄腫である。一部の実施形態において、患者は、以前の多発性骨髄腫処置を用いて処置されている。一部の実施形態において、本開示の結合性タンパク質は、多発性骨髄腫のファースト、セカンド、またはサードライン処置として患者に投与される。理論に縛られることを望まないが、本開示の抗ＣＤ３８×抗ＣＤ２８×抗ＣＤ３結合性タンパク質は、例えば、抗ＣＤ３８（もしくは抗ＣＤ２８／抗ＣＤ３８）を介する腫瘍細胞へのＴ細胞の動員、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８を介する係合したＴ細胞の活性化、および／またはパーフォリン／グランザイムベースの機構を通じた腫瘍細胞の殺滅により、多発性骨髄腫の処置において有用であり得ると考えられる。ＣＤ２８は、多発性骨髄腫の新規のがんマーカーとして報告されている。Ｎａｉｒ， Ｊ． Ｒ． ｅｔ ａｌ． （２０１１） Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １８７：１２４３～１２５３頁を参照。
本明細書に記載の任意の結合性タンパク質は、本開示の方法において用途を有し得る。
本開示の任意の方法の一部の実施形態において、結合性タンパク質の投与前に、患者はダラツムマブを用いて処置されている。本明細書に記載されるように、本開示は、ＣＤ３８への結合についてダラツムマブと競合しない抗ＣＤ３８結合性タンパク質および部位を提供する。理論に縛られることを望まないが、ダラツムマブを用いて以前に処置された患者は、例えば、処置前のウォッシュアウト期間なしに、本開示の結合性タンパク質を用いて処置することができるので、これは有利であると考えられる。
結合性タンパク質は、任意の公知のアッセイ方法、例えば１つまたはそれ以上の標的抗原の検出および定量のための競合結合アッセイ、直接および間接サンドイッチアッセイ、ならびに免疫沈降アッセイにおいて用いることができる。結合性タンパク質は、用いられているアッセイ方法のために適切な親和性で１つまたはそれ以上の標的抗原に結合する。
診断応用のために、ある特定の実施形態において、結合性タンパク質は、検出可能な部分を用いて標識することができる。検出可能な部分は、直接的または間接的のいずれかで、検出可能なシグナルを生成することができる任意の部分であり得る。例えば、検出可能な部分は、放射性同位体、例えば３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、１２５Ｉ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、もしくは６７Ｇａ；蛍光もしくは化学発光化合物、例えばフルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、もしくはルシフェリン；または酵素、例えばアルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、もしくはホースラディッシュペルオキシダーゼであり得る。
結合性タンパク質はまた、ｉｎ ｖｉｖｏイメージングのために有用である。検出可能な部分を用いて標識された結合性タンパク質を動物に、好ましくは血流中に投与することができ、宿主中での標識された抗体の存在および位置をアッセイすることができる。結合性タンパク質は、核磁気共鳴、放射線学、または当技術分野において公知の他の検出手段のいずれによるものであれ、動物中で検出可能な任意の部分を用いて標識することができる。
臨床または研究応用のために、ある特定の実施形態において、結合性タンパク質は細胞毒性剤にコンジュゲートすることができる。細胞毒性ペイロードを特異的な腫瘍細胞に標的化するために、細胞毒性剤に連結した様々な抗体（すなわち、抗体－薬物コンジュゲート）が使用されている。細胞毒性剤および剤を抗体にコンジュゲートするリンカーは当技術分野において公知である；例えば、Ｐａｒｓｌｏｗ， Ａ．Ｃ． ｅｔ ａｌ． （２０１６） Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅｓ ４：１４およびＫａｌｉｍ， Ｍ． ｅｔ ａｌ． （２０１７） Ｄｒｕｇ Ｄｅｓ． Ｄｅｖｅｌ． Ｔｈｅｒ． １１：２２６５～２２７６頁を参照。
結合性タンパク質治療用組成物およびその投与
結合性タンパク質を含む治療用または医薬組成物は本開示の範囲内である。そのような治療用または医薬組成物は、投与のモードとの好適性のために選択される薬学的または生理学的に許容される製剤化剤との組合せで、治療有効量の結合性タンパク質、または結合性タンパク質－薬物コンジュゲートを含むことができる。これらの医薬組成物は、本明細書に記載の任意の方法および使用（例えば、ｅｘ ｖｉｖｏ、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、および／またはｉｎ ｖｉｖｏ）において用途を有し得る。
許容される製剤材料は、好ましくは、用いられる投薬量および濃度においてレシピエントに対して非毒性である。
医薬組成物は、例えば、組成物のｐＨ、容量オスモル濃度、粘性、透明性、色、等張性、匂い、無菌状態、安定性、溶解もしくは放出の速度、吸着、または透過を改変、維持、または保存するための製剤材料を含有することができる。好適な製剤材料は、アミノ酸（例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、もしくはリジン）、抗微生物剤、抗酸化剤（例えばアスコルビン酸、亜硫酸ナトリウム、もしくは亜硫酸水素ナトリウム）、緩衝剤（例えばホウ酸、重炭酸、Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、クエン酸、リン酸、もしくは他の有機酸）、増量剤（例えばマンニトールもしくはグリシン）、キレート剤（例えばエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ））、錯化剤（例えばカフェイン、ポリビニルピロリドン、ベータ－シクロデキストリン、もしくはヒドロキシプロピル－ベータ－シクロデキストリン）、充填剤、単糖、二糖、および他の炭水化物（例えばグルコース、マンノース、もしくはデキストリン）、タンパク質（例えば血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリン）、着色剤、香味剤および希釈剤、乳化剤、親水性ポリマー（例えばポリビニルピロリドン）、低分子量ポリペプチド、塩形成対イオン（例えばナトリウム）、防腐剤（例えば塩化ベンザルコニウム、安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸、もしくは過酸化水素）、溶媒（例えばグリセリン、プロピレングリコール、もしくはポリエチレングリコール）、糖アルコール（例えばマンニトールもしくはソルビトール）、懸濁化剤、界面活性剤もしくは湿潤剤（例えばｐｌｕｒｏｎｉｃｓ；ＰＥＧ；ソルビタンエステル；ポリソルベート、例えばポリソルベート２０もしくはポリソルベート８０；ｔｒｉｔｏｎ；トロメタミン；レシチン；コレステロールもしくはｔｙｌｏｘａｐｏｌ）、安定性増強剤（例えばスクロースもしくはソルビトール）、張度増強剤（例えばハロゲン化アルカリ金属、好ましくは塩化ナトリウムもしくはカリウム、もしくはマンニトール、ソルビトール）、送達媒体、希釈剤、賦形剤ならびに／または薬学的アジュバントを含むがこれらに限定されない（例えば、参照によって任意の目的のために本明細書に組み入れる、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ（１８ｔｈ Ｅｄ．、Ａ．Ｒ． Ｇｅｎｎａｒｏ編、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ １９９０）、およびそれのその後の版を参照）。
最適な医薬組成物は、例えば、意図される投与の経路、送達フォーマット、および所望の投薬量に依存して、当業者により決定される。そのような組成物は、結合性タンパク質の物理的状態、安定性、ｉｎ ｖｉｖｏ放出の速度、およびｉｎ ｖｉｖｏクリアランスの速度に影響を及ぼすことができる。
医薬組成物中の主要な媒体または担体は、水性または非水性のいずれかの性質であり得る。例えば、注射用の好適な媒体または担体は、水、生理食塩水溶液、または人工脳脊髄液であり得、これらは場合により、非経口投与用の組成物において一般的な他の材料を補足されている。中性緩衝化食塩水または血清アルブミンと混合された食塩水はさらなる例示的な媒体である。他の例示的な医薬組成物は、約ｐＨ ７．０～８．５のＴｒｉｓ緩衝液、または約ｐＨ ４．０～５．５の酢酸緩衝液を含み、これらはソルビトールまたは好適な代用物をさらに含むことができる。本開示の１つの実施形態において、結合性タンパク質組成物は、所望の純度を有する選択された組成物を、凍結乾燥ケーキまたは水性溶液の形態の任意選択的な製剤化剤と混合することにより貯蔵のために製造することができる。さらに、結合性タンパク質は、適切な賦形剤、例えばスクロースを使用して凍結乾燥物として製剤化することができる。
本開示の医薬組成物は、非経口送達または皮下のために選択することができる。代替的に、組成物は、吸入のためまたは消化管を通じた、例えば経口的な送達のために選択することができる。そのような薬学的に許容される組成物の製造は当技術分野の技術的範囲内である。
製剤成分は、投与の部位にとって許容される濃度で存在する。例えば、生理的ｐＨまたはわずかにより低いｐＨ、典型的には約５～約８のｐＨ範囲内に組成物を維持するために緩衝剤が使用される。
非経口投与が企図される場合、使用のための治療用組成物は、薬学的に許容される媒体中に所望の結合性タンパク質を含む、発熱物質非含有の、非経口的に許容される、水性溶液の形態であり得る。非経口注射のための特に好適な媒体は無菌蒸留水であり、無菌蒸留水中で、結合性タンパク質は、適切に保存された無菌の等張溶液として製剤化される。さらに別の製造物は、デポー注射を介して送達することができる生成物の制御されたまたは持続した放出を提供する剤、例えば注射可能なマイクロスフェア、生体内分解性粒子、ポリマー化合物（例えばポリ乳酸もしくはポリグリコール酸）、ビーズ、またはリポソームを用いる所望の分子の製剤化を伴うことができる。ヒアルロン酸を使用することもでき、これは循環中の持続された持続期間を促進する効果を有することができる。所望の分子の導入のための他の好適な手段としては、埋め込み可能な薬物送達デバイスが挙げられる。
１つの実施形態において、医薬組成物は、吸入のために製剤化することができる。例えば、結合性タンパク質は、吸入用の乾燥粉末として製剤化することができる。結合性タンパク質吸入溶液はまた、エアロゾル送達用の噴射剤を用いて製剤化することができる。さらに別の実施形態において、溶液は噴霧することができる。
ある特定の製剤を経口的に投与できることも企図される。本開示の１つの実施形態において、この様式で投与される結合性タンパク質は、固体投薬形態、例えば錠剤およびカプセルの調合において慣習的に使用される担体を用いてまたは用いずに製剤化することができる。例えば、カプセルは、バイオアベイラビリティが最大化され、前全身性分解が最小化される胃腸管中の位置において製剤の活性部分を放出するように設計することができる。結合性タンパク質の吸収を促すために追加の剤を含めることができる。希釈剤、香味剤、低融点ワックス、植物油、滑沢剤、懸濁化剤、錠剤崩壊剤、および結合剤もまた用いることができる。
別の医薬組成物は、錠剤の製造のために好適な非毒性賦形剤との混合物中に有効量の結合性タンパク質を伴うことができる。無菌水、または別の適切な媒体中に錠剤を溶解させることにより、溶液を単位用量形態に製造することができる。好適な賦形剤としては、不活性希釈剤、例えば炭酸カルシウム、炭酸もしくは重炭酸ナトリウム、ラクトース、もしくはリン酸カルシウム；または結合剤、例えばデンプン、ゼラチン、もしくはアカシア；または潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、もしくはタルクが挙げられるがこれらに限定されない。
本開示の追加の医薬組成物は当業者に明らかであり、持続または制御送達製剤中に結合性タンパク質を伴う製剤が挙げられる。様々な他の持続または制御送達手段、例えばリポソーム担体、生体内分解性マイクロ粒子または多孔性ビーズおよびデポー注射を製剤化するための技術もまた当業者に公知である。持続放出製造物の追加の例としては、成形品、例えば、フィルム、またはマイクロカプセルの形態の半透性ポリマーマトリックスが挙げられる。持続放出マトリックスは、ポリエステル、ハイドロゲル、ポリラクチド、Ｌ－グルタミン酸およびガンマエチル－Ｌ－グルタメートのコポリマー、ポリ（２－ヒドロキシエチル－メタクリレート）、エチレン酢酸ビニル、またはポリ－Ｄ（－）－３－ヒドロキシ酪酸を含むことができる。持続放出組成物はまた、当技術分野において公知のいくつかの方法のいずれかにより製造することができるリポソームを含むことができる。
ｉｎ ｖｉｖｏ投与のために使用される医薬組成物は典型的には無菌でなければならない。これは、無菌濾過膜を通じた濾過により達成することができる。組成物が凍結乾燥される場合、この方法を使用する滅菌は、凍結乾燥および再構成の前、または後のいずれかに実行することができる。非経口投与用の組成物は、凍結乾燥形態で、または溶液中に貯蔵することができる。追加的に、非経口組成物は、一般に、無菌アクセスポートを有する容器、例えば、静脈内溶液バッグまたは皮下注射針により貫通可能なストッパーを有するバイアル中に入れられる。
医薬組成物が製剤化されると、それを無菌バイアル中に溶液、懸濁液、ゲル、エマルション、固体として、または脱水もしくは凍結乾燥粉末として貯蔵することができる。そのような製剤は、使用準備済み形態または投与の前に再構成を要求する形態（例えば、凍結乾燥された形態）のいずれかで貯蔵することができる。
本開示はまた、キットであって、結合性タンパク質および生物学的試料中の標的抗原レベルを検出するために有用な他の試薬を含む、前記キットに関する。そのような試薬は、検出可能な標識、ブロッキング血清、陽性および陰性対照試料、ならびに検出試薬を含むことができる。一部の実施形態において、キットは、本明細書に記載の任意の結合性タンパク質、ポリヌクレオチド、ベクター、ベクターシステム、および／または宿主細胞を含む組成物を含む。一部の実施形態において、キットは、容器および容器上のまたは容器に付随した標識またはパッケージ挿入物を含む。好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ溶液バッグなどが挙げられる。容器は、様々な材料、例えばガラスまたはプラスチックから形成することができる。容器は、単独の、または状態を処置、予防および／もしくは診断するために有効な別の組成物と組み合わせた組成物を保持し、無菌アクセスポートを有してもよい（例えば、容器は、静脈内溶液バッグまたは皮下注射針により貫通可能なストッパーを有するバイアルであってもよい）。一部の実施形態において、標識またはパッケージ挿入物は、組成物は、選択された状態を予防、診断、および／または処置するために使用されることを指し示す。代替的に、または追加的に、製品またはキットは、薬学的に許容される緩衝液、例えば注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝化食塩水、リンゲル溶液およびデキストロース溶液を含む第２（または第３の）容器をさらに含んでもよい。それは、他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針、およびシリンジを含めて、商業的およびユーザーの観点から望ましい他の材料をさらに含んでもよい。
本開示はまた、単回用量投与単位を生成するためのキットを包含する。キットはそれぞれ、乾燥タンパク質を有する第１の容器および水性製剤を有する第２の容器の両方を含有することができる。単一および複数チャンバー事前充填シリンジ（例えば、液体シリンジおよびリオシリンジ）を含有するキットもまた本開示の範囲内に含まれる。
治療的に用いられる結合性タンパク質医薬組成物の有効量は、例えば、治療的な文脈および目的に依存する。処置のための適切な投薬量レベルはそのため、送達される分子、結合性タンパク質が使用されている適応症、投与の経路、ならびに患者のサイズ（体重、身体表面、または臓器サイズ）および状態（年齢および全般的健康状態）に部分的に依存して変動することを当業者は理解する。よって、臨床医は、投薬量を滴定し、投与の経路を改変して最適な治療効果を得ることができる。
投薬頻度は、使用されている製剤中の結合性タンパク質の薬物動態パラメーターに依存する。典型的には、臨床医は、所望の効果を達成する投薬量に達するまで組成物を投与する。組成物はしたがって、単一の用量として、経時的に２つもしくはそれより多くの用量（同じ量の所望の分子を含有してもよいし、そうでなくてもよい）として、または埋め込みデバイスもしくはカテーテルを介して連続注入として、投与することができる。適切な投薬量のさらなる精密化は、当業者により日常的に為され、当業者により日常的に行われるタスクの範囲内である。適切な投薬量は、適切な用量応答データの使用を通じて確認することができる。
医薬組成物の投与の経路は公知の方法に従い、例えば、経口的に；注射を通じて静脈内、腹腔内、脳内（実質内）、脳室内、筋肉内、眼内、動脈内、門脈内、もしくは病巣内経路により；持続放出システムにより；または埋め込みデバイスにより為される。所望の場合、組成物は、ボーラス注射によりまたは注入により連続的に、または埋め込みデバイスにより投与することができる。
組成物はまた、所望の分子が吸収または被包された膜、スポンジ、または他の適切な材料の埋め込みを介して局所的に投与することができる。埋め込みデバイスが使用される場合、デバイスを任意の好適な組織または臓器に埋め込むことができ、所望の分子の送達を拡散、時限放出ボーラス、または連続的な投与を介して行うことができる。
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以下の実施例は、本開示の具体的な実施形態およびそれらの様々な使用の例示である。それらは説明的な目的でのみ記載され、本発明の範囲をいかなるようにも限定するとして解釈されるべきではない。
三重特異性ＨＥＲ２／ＣＤ２８×ＣＤ３抗体およびバリアント抗ＣＤ３結合性部位の開発
免疫腫瘍学は、がんにおける疾患管理への有望な新興の治療アプローチである。免疫系は、がんの発症および進行に対する防御の最前線である。現在、Ｔ細胞が、腫瘍増殖を制御し、疾患の早期と後期の両方においてがん患者の生存を延長できるという大きい証拠がある。しかしながら、腫瘍特異的なＴ細胞は、その疾患のコントロールを妨げる様々な方法で限定される可能性がある。
制御不能な腫瘍により誘導されたＴ細胞への限定を取り除くために、ＨＥＲ２を発現するがん細胞と係合するようにＴ細胞を特異的に活性化する図１Ａに描写された三重特異性抗体様式で、新規の抗体を開発した。これらの新規の三重特異性抗体は、３つの標的：ＨＥＲ２、ＣＤ３、およびＣＤ２８に結合することができる。高親和性結合と存在し得る製造上の不都合な部分の低減のために、抗ＨＥＲ２および抗ＣＤ３結合性部位をさらに最適化した。
ＨＥＲ２の増幅および過剰発現は、乳がんの分子のサブタイプに見出すことができ、胃、卵巣、肺および前立腺癌にも見出すことができる。Ｔ細胞の最適な活性化は、２つの要因：（１）抗原認識および（２）共刺激を必要とする。本明細書に記載される三重特異性ＨＥＲ２／ＣＤ２８×ＣＤ３三重特異性結合性タンパク質を使用すれば、シグナル１は、アゴニスト抗ＣＤ３結合性部位によって提供され、シグナル２は、アゴニスト抗ＣＤ２８結合性部位によって提供される（例えば、図１Ｄを参照）。以下に記載の実施例に記載される三重特異性抗体は、ＨＥＲ２を介してＴ細胞を腫瘍に動員し、ＣＤ３およびＣＤ２８に結合することによって係合したＴ細胞を活性化すると考えられる。その結果起こる活性化は、近傍の腫瘍細胞に対する免疫細胞の殺滅潜在性を誘導する。
材料および方法
抗体の産生および特徴付け
三重特異性抗体バリアントを、Ｅｘｐｉ２９３細胞への発現プラスミドの一過性トランスフェクションによって産生した。トランスフェクションの５日後、トランスフェクトされた細胞からの上清を収集し、Ｎａｎｏ Ｄｒｏｐで定量化し、２８０ｎｍでの吸光度によって正規化した。上清の対応する抗原への結合をＥＬＩＳＡによって決定し、親ＨＥＲ２ＷＴ三重Ａｂの吸光度を１．０と設定した。他のバリアントの変化倍数を、対応する吸光度を親Ａｂの吸光度で割ることによって計算した。
三重特異性抗体バリアントを、プロテインＡ親和性精製、それに続いてＳＥＣ精製を使用して精製した。精製された抗体の対応する抗原への結合を、ＥＬＩＳＡによって決定した。Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ７によって作成した結合曲線に基づきＥＣ５０を決定した。
結果
存在し得る製造上の不都合な部分、例えば脱アミド部位を少なくするために、結合アームにおける数種の突然変異を用いて、三重特異性Ａｂバリアントを産生した。結合ＥＬＩＳＡアッセイを実行して、示された三重特異性抗体の、３つの標的：ＨＥＲ２、ＣＤ３、およびＣＤ２８のそれぞれへの結合を評価した。図１Ｂにおいて、示された抗ＨＥＲ２または抗ＣＤ３バリアントを有するＨＥＲ２／ＣＤ３×ＣＤ２８三重特異性抗体を親三重特異性Ａｂと比較した。抗ＣＤ３結合性部位のＶＬドメインに突然変異の一部のセット（例えば、３２／３３ＱＱおよび３３／３５ＱＱ）を導入することにより、ＣＤ３への結合を劇的に低減し、それに対して３２／３５ＱＱ突然変異は、野生型の結合をほぼ保持した。ＭＳペプチド分析は、ＣＤＲ－Ｌ１にＤＮＡＱ突然変異を有する結合性部位（配列番号６３）は、それでもなお１５％より大きい脱アミドに供されたが、それに対してＥＮＬＱ（配列番号２８１）、ＥＮＬＦ（配列番号２８２）、およびＥＮＬＲ（配列番号２８３）は５％未満の脱アミドをもたらしたことを示した。重要なことに、これらのバリアントもまたＣＤ３への結合を保持した。
加えて、図１Ｃに、ヒトＨＥＲ２、ヒトＣＤ２８、およびＣＤ３に結合する示された抗体の結合曲線を提供する。表Ｅに、選択された三重特異性抗体バリアントのＥＣ５０値を提供する。
Figure 2022527994000068
Figure 2022527994000069
理論に制限されることは望まないが、図１Ｄに描写された通り、ＨＥＲ２／ＣＤ３／ＣＤ２８三重特異性抗体は、抗ＨＥＲ２および抗ＣＤ３／ＣＤ２８アームを介してＴ細胞をがん細胞に動員すると考えられる。さらに、係合したＴ細胞は、抗ＣＤ２８／ＣＤ３アームによって活性化されると考えられる。がん細胞の殺滅は、理論に制限されることは望まないが、Ｔ細胞媒介メカニズム（例えば、パーフォリン、グランザイム）を介して起こると考えられる。理論に縛られることは望まないが、類似のメカニズムが、他の腫瘍標的タンパク質を認識する抗原結合性部位を置換することによって他のタイプの腫瘍を殺滅することを可能にし得ることが企図される。
三重特異性ＣＤ３８／ＣＤ３×ＣＤ２８抗体の開発
三重特異性ＣＤ３８／ＣＤ３×ＣＤ２８抗体を開発し、ＣＤ３８、ＣＤ３およびＣＤ２８ポリペプチドへの結合について特徴付けた。
材料および方法
ＣＤ３８／ＣＤ２８×ＣＤ３三重特異性抗体の生成
抗ＣＤ３８、抗ＣＤ３、および抗ＣＤ２８抗体、加えてヒトＩｇＧ４Ｆｃドメインのパネルを使用して、図２Ａに描写された三重特異性抗体様式でＣＤ３８／ＣＤ２８×ＣＤ３三重特異性抗体を生成した。
三重特異性結合性タンパク質を、ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２９３トランスフェクションキット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を製造元のプロトコールに従って使用したＥｘｐｉ２９３細胞への４つの発現プラスミドの一過性トランスフェクションによって産生した。簡単に言えば、２５％（ｗ／ｗ）の各プラスミドをＯｐｔｉ－ＭＥＭに希釈し、予め希釈したＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ試薬と室温（ＲＴ）で２０～３０分混合し、Ｅｘｐｉ２９３細胞（細胞２．５×１０６個／ｍｌ）に添加した。三重特異性結合性タンパク質を優れた収量および純度で産生するために、プラスミドの最良の比率を決定するためのトランスフェクションの最適化をしばしば使用した。
トランスフェクションの４～５日後、トランスフェクトされた細胞からの上清を収集し、０．４５μｍのフィルターユニット（Ｎａｌｇｅｎｅ）に通過させてろ過した。上清中の三重特異性結合性タンパク質を、３工程の手順を使用して精製した。第１に、プロテインＡ親和性精製を使用し、結合したＡｂを、「ＩｇＧ溶出緩衝液（ＩｇＧ Ｅｌｕｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ）」（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して溶出させた。第２に、生成物を、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）に対して、ＰＢＳ緩衝液を２回交換して一晩透析した。次の工程の前に、０．４５μｍのフィルターユニット（Ｎａｌｇｅｎｅ）を介したろ過によって全ての沈殿を排除した。第３に、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）精製（Ｈｉｌｏａｄ １６／６００ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００ｐｇ、またはＨｉｌｏａｄ ２６／６００ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００ｐｇ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、調製物中の集合体や異なる種を除去した。還元および非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥで画分を分析して、モノマーの三重特異性結合性タンパク質を含有する分画を同定し、その後、それらを合わせた。精製した抗体は、アリコートにし、－８０℃で長期貯蔵することができる。
ＥＬＩＳＡ結合アッセイ
ＣＤ３８／ＣＤ２８×ＣＤ３Ｔ細胞エンゲージャーによる各標的抗原への結合親和性を、ＥＬＩＳＡによって測定した。簡単に言えば、各抗原を使用して、９６ウェルのイムノプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、各抗原のＰＢＳ（ｐＨ７．４）中で、２００ｎｇ／ウェルを使用して４℃で一晩コーティングした。コーティングされたプレートを、ＰＢＳ中の５％スキムミルク＋２％ＢＳＡを室温で１時間使用してブロックし、続いてＰＢＳ＋０．２５％Ｔｗｅｅｎ２０で３回洗浄した（Ａｑｕａ Ｍａｘ ４００、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）。抗体（三重特異性および対照Ａｂ）の連続希釈を調製し、ＥＬＩＳＡプレート上に添加し（１００μｌ／ウェル、２連）、室温（ＲＴ）で１時間インキュベートし、続いてＰＢＳ＋０．２５％Ｔｗｅｅｎ２０で５回洗浄した。洗浄後、ＨＲＰコンジュゲート二次抗ヒトＦａｂ（１：５０００、カタログ番号１０９－０３５－０９７、Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｃ）を各ウェルに添加し、室温で３０分インキュベートした。ＰＢＳ＋０．２５％Ｔｗｅｅｎ２０で５回洗浄した後、１００μｌのＴＭＢマイクロウェルペルオキシダーゼ基質（ＴＭＢ Ｍｉｃｒｏｗｅｌｌ Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ）（ＫＰＬ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ、ＵＳＡ）を各ウェルに添加した。１ＭのＨ２ＳＯ４ ５０μｌを添加することによって反応を終結させ、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用してＯＤ４５０を測定し、Ｓｏｆｔｍａｘ Ｐｒｏ ６．３ソフトウェア（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用して分析した。最終データをＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ、ＣＡ、ＵＳＡ）に移し、プロットした。同じソフトウェアを使用してＥＣ５０を計算した。
ＳＰＲを使用した三重特異性抗体結合の測定
ヒトＣＤ３８－Ｈｉｓ抗原を、完全動態分析のために使用した（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）。精製した抗体の動態の特徴付けを、ＢＩＡＣＯＲＥ ３０００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）におけるＳＰＲ技術を使用して実行した。ヒトＩｇＧ１特異的抗体による捕捉および調査された抗体の配置を使用した捕捉アッセイを使用した。Ｆｃを含有するタンパク質構築物の捕捉のために、ヒト抗体捕捉キット（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用した。Ｈｉｓタグを有する抗原の捕捉のために、抗Ｈｉｓ抗体捕捉キット（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用した。捕捉抗体を、標準的手順を使用して、調査グレードのＣＭ５チップ（ＧＥ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）への第一アミン基（１１０００ＲＵ）を介して固定した。分析された抗体を、典型的には３０ＲＵの最大の分析物結合シグナルをもたらすと予想される調整されたＲＵ値を用いて、１０μＬ／分の流速で捕捉した。三重特異性抗体に対する結合動態を測定した。アッセイ緩衝液ＨＢＳ ＥＰ（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、および０．００５％界面活性剤Ｐ２０）を３０μｌ／分の流速で使用した。チップ表面を、それぞれの捕捉キットの再生溶液で再生した。動態パラメーターを分析し、参照として捕捉された抗体を含まないフローセルおよび物質移動を用いた１：１のラングミュア結合モデルを使用したＢＩＡ評価プログラムパッケージｖ４．１で計算した。
ダラツムマブ競合結合アッセイ
ダラツムマブ競合結合アッセイのために、ダラツムマブをＣＭ５チップの活性表面にアミンカップリングした。参照表面は、ブランクのままとし、注射された分子のあらゆる非特異的結合を引くのに使用した。組換えＣＤ３８－Ｈｉｓ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、パート＃１０８１８－Ｈ０８Ｈ）をダラツムマブ表面の上に注射し、続いて試験抗体を注射した。単一特異性抗ＣＤ３８抗体がダラツムマブのものとは異なるＣＤ３８上のエピトープを認識した場合、抗体の注射はＳＰＲシグナルの増加をもたらした。抗体がダラツムマブとしてオーバーラップするエピトープを認識した場合、抗体の注射は、ＳＰＲシグナルを増加させなかった。
結果
代替抗ＣＤ３８結合ドメインを有する選択されたＣＤ３８／ＣＤ２８ｓｕｐ×ＣＤ３ｍｉｄ＿ＥＮＬＱ ＤＫＴＨＴ ＩｇＧ４ ＦＡＬＡ三重特異性抗体のヒトＣＤ３８に対する結合親和性を、ＳＰＲによって決定した。会合速度定数（ＫＯｎ）、解離速度定数（ＫＯｆｆ）、および選択された三重特異性抗体のＫＤは、表Ａに提供される。選択された三重特異性抗体は、ヒトＣＤ３８抗原に対して様々な程度の親和性を示した。
Figure 2022527994000070
次いで、代替抗ＣＤ３８結合ドメインを有する選択されたＣＤ３８／ＣＤ２８ｓｕｐ×ＣＤ３ｍｉｄ＿ＥＮＬＱ ＤＫＴＨＴ ＩｇＧ４ ＦＡＬＡ三重特異性抗体の、ヒトＣＤ３、ヒトＣＤ２８、ヒトＣＤ３８およびカニクイザルＣＤ３８に対する結合親和性を、上述した通りにＥＬＩＳＡによって決定した。図２Ｂ～２Ｅで示されるように、代替抗ＣＤ３８結合ドメインを有する選択されたＣＤ３８／ＣＤ２８ｓｕｐ×ＣＤ３ｍｉｄ＿ＥＮＬＱ ＤＫＴＨＴ ＩｇＧ４ ＦＡＬＡ三重特異性抗体は、ヒト（図２Ｂ）およびカニクイザルＣＤ３８（図２Ｃ）に対して様々な親和性を示したが、ヒトＣＤ３（図２Ｄ）およびＣＤ２８（図２Ｅ）に対しては類似の親和性を示した。次いでＥＣ５０値を、４パラメーターロジスティック曲線を用いた可変勾配モデルを使用して、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ７．０２によって計算した。選択された三重特異性抗体のヒトＣＤ３、ヒトＣＤ２８、ヒトＣＤ３８およびカニクイザルＣＤ３８に対するＥＣ５０値は、表Ｂに提供される。対照抗体はヒトＩｇＧ４アイソタイプ対照であった。
Figure 2022527994000071
ＳＰＲ競合アッセイを行って、抗ＣＤ３８抗体ｈｈｙ６２８４、ｈｈｙ９９２、ｈｈｙ５３７９、またはｈｈｙ１１９５（単一特異性抗体様式で試験した）が、ＣＤ３８への結合についてダラツムマブと競合するかどうかを決定した。ダラツムマブ（ＳＰＲセンサーチップに固定された）上へのＣＤ３８注射後、ダラツムマブ／ＣＤ３８複合体上に試験抗体（またはダラツムマブ）を注射した。図３で示されるように、Ｈｙｂ６２６４、ｈｈｙ９９２、Ｈｙｂ５３７９、およびＨｈｙ１１９５の注射はＳＰＲシグナルを増加させたことから、これらの抗体は、ダラツムマブが認識するエピトープとは異なるＣＤ３８上のエピトープを認識したことが示される。予想通りに、遊離のダラツムマブ（競合結合対照）の注射は、ＳＰＲシグナルを増加させなかった。
表Ｂ２に、ヒトまたはカニクイザルＣＤ３８ポリペプチドへの抗ＣＤ３８抗体の結合を要約する。
Figure 2022527994000072
また抗ＣＤ３８抗体は、ＳＰＲアッセイでダラツムマブへの競合結合に関しても試験した。ダラツムマブ競合結合アッセイのために、ダラツムマブをＣＭ５チップの活性表面にアミンカップリングした。参照表面は、ブランクのままとし、注射された分子のあらゆる非特異的結合を引くのに使用した。組換えＣＤ３８－Ｈｉｓ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、パート＃１０８１８－Ｈ０８Ｈ）をダラツムマブ表面の上に注射し、続いて試験抗体を注射した。抗体がダラツムマブのものとは異なるＣＤ３８上のエピトープを認識する場合、抗体の注射は、ＳＰＲシグナルの増加をもたらした。抗体がダラツムマブとしてオーバーラップするエピトープを認識する場合、抗体の注射は、ＳＰＲシグナルを増加させなかった。これらのアッセイの結果によれば、試験した抗体ｈｈｙ９９２、ｈｙｂ６２８４、ｈｈｙ１１９５およびｈｈｙ１３７０はダラツムマブと競合しなかった。
三重特異性ＣＤ３８／ＣＤ３×ＣＤ２８抗体はヒト多発性骨髄腫およびリンパ腫の腫瘍細胞の溶解を促進する。
ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞溶解アッセイを使用して、三重特異性ＣＤ３８／ＣＤ３×ＣＤ２８抗体が抗腫瘍細胞活性を有していたかどうかをヒト多発性骨髄腫およびリンパ腫の細胞を使用して決定した。
材料および方法
ヒトＴ細胞を使用した腫瘍細胞に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ殺滅アッセイ
標的腫瘍細胞を膜色素ＰＫＨ－２６（Ｓｉｇｍａ）で標識し、示された濃度の三重特異的な、または関連する対照抗体の存在下で、エフェクター細胞としてヒトＰＢＭＣまたは濃縮されたＣＤ８Ｔ細胞と共に、１０：１のＥ：Ｔの比率（濃縮されたＣＤ８Ｔ細胞を使用してＥ：Ｔ＝３：１）で２４時間共培養した。末梢血単核細胞を、フィコール分離によって正常なヒトドナーから単離し、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）からのキットを使用して自己ＣＤ８＋または汎Ｔ細胞を濃縮した。標的細胞における細胞溶解の程度を、ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（商標）Ｆｉｘａｂｌｅ Ｖｉｏｌｅｔ Ｄｅａｄ細胞染色キット（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で染色することによって決定し、ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ装置（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）でのサンプルランニングによって標識された標的細胞集団中の死細胞の数によって測定し、それに続いてＦｌｏｗｊｏソフトウェア（Ｔｒｅｅｓｔａｒ）を使用して分析した。
ダラツムマブの存在下におけるヒトＴ細胞を使用した腫瘍細胞に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ殺滅アッセイ
５ｎＭのダラツムマブまたはアイソタイプ対照抗体を、ＰＫＨ－２６で標識された標的腫瘍細胞（細胞１０５個／ウェル）と共に３０分プレインキュベートし、続いて示された濃度での三重特異性ＴＣＥ、およびヒトＰＢＭＣ（Ｅ：Ｔ＝１０：１）を添加した。２４時間後、標的細胞中の細胞溶解の程度を、ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（商標）Ｆｉｘａｂｌｅ Ｖｉｏｌｅｔ Ｄｅａｄ細胞染色キット（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で染色することによって決定し、ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ装置（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）でのサンプルランニングによって標識された標的細胞集団中の死細胞の数によって測定し、それに続いてＦｌｏｗｊｏソフトウェア（Ｔｒｅｅｓｔａｒ）を使用して分析した。
結果
代替抗ＣＤ３８結合ドメインを有するＣＤ３８／ＣＤ２８ｓｕｐ×ＣＤ３ｍｉｄ＿ＥＮＬＱ ＤＫＴＨＴ ＩｇＧ４ ＦＡＬＡ三重特異性抗体のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞殺滅活性を、ＣＤ３８とＣＤ２８の両方を発現するヒト多発性骨髄腫細胞株ＮＣＩ－Ｈ９２９を使用して決定した。アッセイは、５ｎＭのダラツムマブまたはアイソタイプ対照抗体（アッセイ期間中に存在する）の存在下で行われた。図４Ａ～４Ｂで示されるように、全ての試験された三重特異性抗体は、ダラツムマブの存在下および非存在下で濃度依存性の方式で細胞溶解を起こした。次いでＥＣ５０値をダラツムマブの存在下および非存在下で計算した（表Ｃ）。ＣＤ３８ＶＨ１またはＣＤ３８ｈｈｙ１３７０抗ＣＤ３８結合ドメインを有する三重特異性抗体ＣＤ３８／ＣＤ２８ｓｕｐ×ＣＤ３ｍｉｄ＿ＥＮＬＱ ＤＫＴＨＴ ＩｇＧ４ ＦＡＬＡの細胞殺滅活性は、ダラツムマブによって低減したが、ＣＤ３８ｈｙｂ５７３９、ＣＤ３８ｈｙｂ６２８４、またはＣＤ３８ｈｈｙ１１９５抗ＣＤ３８結合ドメインを有する三重特異性抗体は、ダラツムマブの存在下で、細胞殺滅活性の３～８分の１の低減を呈示した（表Ｃ）。
Figure 2022527994000073
加えて、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞溶解アッセイを使用して、代替抗ＣＤ３８結合ドメインを有する選択されたＣＤ３８／ＣＤ２８ｓｕｐ×ＣＤ３ｍｉｄ＿ＥＮＬＱ ＤＫＴＨＴ ＩｇＧ４ ＦＡＬＡ三重特異性抗体の細胞殺滅活性を、ＣＤ３８を発現するがＣＤ２８を発現しないヒトリンパ腫細胞株ＯＣＩ－ＬＹ１９を使用して測定した。アッセイは、アッセイ期間中に存在する５ｎＭのダラツムマブまたはアイソタイプ対照抗体の存在下で行われた。図５Ａ～５Ｂで示されるように、全ての試験された三重特異性抗体は、ダラツムマブの存在下および非存在下で濃度依存性の方式で細胞溶解を起こした。次いでＥＣ５０値をダラツムマブの存在下および非存在下で計算した（表Ｄ）。ＣＤ３８ＶＨ１抗ＣＤ３８結合ドメインを有するＣＤ３８／ＣＤ２８ｓｕｐ×ＣＤ３ｍｉｄ＿ＥＮＬＱ ＤＫＴＨＴ ＩｇＧ４ ＦＡＬＡ三重特異性抗体の細胞殺滅活性は、ダラツムマブによって約２４分の１に低減したが、ＣＤ３８ｈｈｙ９９２、ＣＤ３８ｈｙｂ５７３９、ＣＤ３８ｈｙｂ６２８４、ＣＤ３８ｈｈｙ１１９５、またはＣＤ３８ｈｈｙ１３７０抗ＣＤ３８結合ドメインを有する三重特異性抗体は、ダラツムマブの存在下で細胞殺滅活性の低減も呈示した（表Ｄ）。
Figure 2022527994000074
ＣＤ３８／ＣＤ２８×ＣＤ３三重特異性抗体はＣＭＶ特異的免疫応答を促進する
適応免疫の一部として、Ｔ細胞免疫性は、ウイルス感染およびがんの制御、場合によってはウイルス感染の除去またはがんの治癒をもたらす感染細胞および悪性細胞の排除において重要な役割を果たす。ヘルペスウイルス感染（ＨＳＶ、ＣＭＶ、ＥＢＶなど）などの慢性感染性疾患において、ＨＩＶ、およびＨＢＶウイルスは、免疫抑制、Ｔ細胞枯渇、および潜伏の確立を含む様々なメカニズムによってヒトにおけるそれらの残存を確立する。それにもかかわらず、ウイルス感染は、一般的にサイトカイン放出または細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）媒介殺滅プロセスを介した制御または殺滅のために容易に感染細胞を認識できる抗原特異的ＣＤ８Ｔ細胞を含むウイルス抗原特異的な免疫性を誘導する。したがって、ｉｎ ｖｉｖｏおよび／またはｅｘ ｖｉｖｏにおけるウイルス抗原特異的Ｔ細胞の活性化および／または増幅は、慢性ウイルス感染に対する治療戦略を提供する。
抗ＣＤ３８／ＣＤ２８×ＣＤ３三重特異性抗体を開発し、Ｔ細胞を活性化すること、ならびに抗原特異的Ｔ細胞の増殖および／または増幅を促進することにおけるその可能性について評価した。これらの三重特異性Ａｂは、ｉｎ ｖｉｔｒｏで抗原特異的ＣＤ８Ｔセントラルメモリーおよびエフェクターメモリー細胞を含むＣＤ４およびＣＤ８エフェクターならびにメモリー集団を効果的に拡大増殖させることができる。具体的には、ＣＭＶおよびＥＢＶ特異的ＣＤ８セントラルメモリーおよびエフェクターメモリー細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ拡大増殖を実証した。本明細書に記載される抗ＣＤ３８／ＣＤ２８×ＣＤ３三重特異性抗体は、ＣＤ３／ＣＤ２８／ＣＤ３８と係合し、Ｔ細胞を刺激し拡大増殖するためのシグナル伝達経路を提供することによる新規の特性を呈示し、これは、ＨＳＶ、ＣＭＶ、ＥＢＶ、ＨＩＶ－１、およびＨＢＶ感染などの慢性感染性疾患を処置する有効な戦略を提供する可能性がある。
この実施例では、ＣＭＶ特異的Ｔ細胞の活性化および拡大増殖を促進するＣＤ３８／ＣＤ２８×ＣＤ３三重特異性抗体の能力を決定した。
材料および方法
ｉｎ ｖｉｔｒｏＴ細胞増殖測定
Ｔ細胞を、磁気汎Ｔ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ ＧｍｂＨ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して、陰性選択によりヒトＰＢＭＣドナーから単離した。滅菌ＰＢＳ中で抗体を調製することによって９６ウェルの細胞培養プレート上に抗体をコーティングし、各ウェルに５０μＬで分配した（３５０ｎｇ／ウェル）。次いでプレートを３７℃で少なくとも２時間インキュベートし、次いで滅菌ＰＢＳで洗浄した。未感作の（ｕｎｔｏｕｃｈｅｄ）Ｔ細胞を抗体でコーティングされたプレートに添加し（細胞５×１０５個／ｍＬ）、３７℃で数日インキュベートした。４日目に、新しい細胞培養培地を用いて新鮮な抗体でコーティングされたプレート上に細胞を継代した。７日のインキュベーションを用いた特定の実験では、新鮮な抗体でコーティングされたプレートに交換せずに新鮮な培地のみを添加した。特定の時点で細胞を収集し、ＣｏｕｎｔＢｒｉｇｈｔ（商標）計数ビーズを使用して細胞数を計算した。
ｉｎ ｖｉｔｒｏＴ細胞増殖アッセイおよびＴ細胞サブセット決定
末梢血単核細胞を、Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｂｌｏｏｄ Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ，ＬＬＣ（Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡ）によって収集された健康なヒトドナーの血液から単離した。上記でこれまでに記載されたようにしてＰＢＭＣを抗体でコーティングされたプレートに添加し（３５０ｎｇ／ウェル）（細胞５×１０５個／ｍＬ）、３７℃で３および７日間インキュベートした。細胞を特定の時点で収集し、Ｔ細胞サブセット：ナイーブ（ＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ－）、Ｔｃｍ（ＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ＋）、Ｔｅｍ（ＣＣＲ７－ＣＤ４５ＲＯ＋）、Ｔｒｅｇ（ＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋ＣＤ２５ｈｉ）につきフローサイトメトリーによって分析した。それぞれＰＢＭＣドナーのＨＬＡ／ウイルスペプチド（Ａ＊０２：０１／ＮＬＶＰＭＶＡＴＶ、配列番号２８４）、（Ａ＊０２：０１／ＧＬＣＴＬＶＡＭＬ、配列番号２８５）（ＰｒｏＩｍｍｕｎｅ、Ｏｘｆｏｒｄ、ＵＫ）に拘束された蛍光コンジュゲート五量体を使用して、ＣＭＶ ｐｐ６５特異的およびＥＢＶ ＢＭＬＦ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を検出した。ＣＭＶまたはＥＢＶ感染がわかっているドナーのＰＢＭＣをＨｅｍａＣａｒｅ（Ｖａｎ Ｎｕｙｓ、ＣＡ）から得た。陰性対照として、拘束性ＨＬＡタイプについて陰性のドナーからのＰＭＢＣを使用した。染色を製造元のプロトコールに従って行った。
ＣＭＶ特異的Ｔ細胞の定量化
上記で示したように、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をＣＭＶ感染がわかっているヒトドナーの血液から単離し、三重特異性抗体または対照抗体を含有するプレートに添加した。プレートを３７℃でインキュベートした。細胞を特定の時点で収集し、フローサイトメトリーによって分析した。
結果
代替抗ＣＤ３８結合ドメインΔＶＨ１ＣＤ３８（対照）、ＣＤ３８ＶＨ１、ＣＤ３８ｈｈｙ９９２、ＣＤ３８ｈｙｂ５７３９、ＣＤ３８ｈｙｂ６２８４、ＣＤ３８ｈｈｙ１１９５、およびＣＤ３８ｈｈｙ１３７０を有するＣＤ３８／ＣＤ２８ｓｕｐ×ＣＤ３ｍｉｄ＿ＥＮＬＱ ＤＫＴＨＴ ＩｇＧ４ ＦＡＬＡ三重特異性抗体を、上述した通りに、ＣＭＶ感染ヒトドナーＤ（図６Ａ～６Ｊ）およびＣＭＶ感染ヒトドナーＥ（図７Ａ～７Ｊ）から単離したＰＢＭＣを使用して試験した。全ての試験されたＣＤ３８三重特異性Ａｂは、ＣＭＶ特異的Ｔ細胞を活性化し、その増殖を促進し、それにより７日間の実験にわたり用量応答の方式でＣＭＶ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞における増加（細胞／ウェル）が異なる効力および動態でもたらされた（ＣＭＶドナーＤ、図６Ａ～６Ｂ；ＣＭＶドナーＥ、図７Ａ～７Ｂ）。加えて、全ての試験されたＣＤ３８三重特異性Ａｂが、ＣＭＶ特異的セントラルメモリー（Ｔｃｍ）（ＣＭＶドナーＤ、図６Ｃ～６Ｄ；ＣＭＶドナーＥ、図７Ｃ～７Ｄ）およびエフェクターメモリー（Ｔｅｍ）ＣＤ８＋Ｔ細胞（ＣＭＶドナーＤ、図６Ｅ～６Ｆ；ＣＭＶドナーＥ、図７Ｅ～７Ｆ）の増幅（細胞／ウェル）を促進し、これはどちらも７日で劇的に増幅された。図６Ｇ～６Ｊ（ＣＭＶドナーＤ）および図７Ｇ～７Ｊ（ＣＭＶドナーＥ）は、上述した７日間の実験の０、３、および７日目におけるＣＭＶ特異的ＴｃｍおよびＴｅｍ細胞のパーセントを示す時間経過を提供する。
総合すると、これらのデータは、ＣＤ３８／ＣＤ２８×ＣＤ３三重特異性抗体が、ＣＭＶ特異的Ｔ細胞、例えばＣＭＶ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＭＶ特異的エフェクターメモリー（Ｔｅｍ）ＣＤ８＋Ｔ細胞、およびＣＭＶ特異的セントラルメモリー（Ｔｃｍ）ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化および拡大増殖を促進することを示す。
ＣＤ３８／ＣＤ２８×ＣＤ３三重特異性抗体はＥＢＶ特異的免疫応答を促進する
次に、エプスタイン－バーウイルス（ＥＢＶ）特異的Ｔ細胞の活性化および拡大増殖を促進するＣＤ３８／ＣＤ２８×ＣＤ３三重特異性抗体の能力を決定した。
材料および方法
ＥＢＶ特異的Ｔ細胞の定量化
上記で示したように、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をＥＢＶ感染がわかっているヒトドナーの血液から単離し、三重特異性抗体または対照抗体を含有するプレートに添加した。プレートを３７℃で１１日までインキュベートした。細胞を特定の時点で収集し、フローサイトメトリーによって分析した。
結果
また、代替抗ＣＤ３８結合ドメインΔＶＨ１ＣＤ３８（対照）、ＣＤ３８ＶＨ１、ＣＤ３８ｈｈｙ９９２、ＣＤ３８ｈｙｂ５７３９、ＣＤ３８ｈｙｂ６２８４、ＣＤ３８ｈｈｙ１１９５、およびＣＤ３８ｈｈｙ１３７０を有するＣＤ３８／ＣＤ２８ｓｕｐ×ＣＤ３ｍｉｄ＿ＥＮＬＱ ＤＫＴＨＴ ＩｇＧ４ ＦＡＬＡ三重特異性抗体も、ＥＢＶ感染ドナーＣ（図８Ａ～８Ｊ）およびＥＢＶ感染ドナーＤ（図９Ａ～１２）から単離したＰＢＭＣを使用して上述した通りに試験した。全ての試験されたＣＤ３８三重特異性Ａｂは、Ｔ細胞を活性化し、ＥＢＶ特異的Ｔ細胞の増殖を促進し、それにより７日間の実験にわたり用量応答の方式でＥＢＶ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞における増加（細胞／ウェル）が異なる効力および動態でもたらされた（ＥＢＶドナーＣ、図８Ａ～８Ｂ；ＥＢＶドナーＤ、図９Ａ～９Ｂ）。加えて、全ての試験されたＣＤ３８三重特異性Ａｂは、ＥＢＶ特異的セントラルメモリー（Ｔｃｍ）（ＥＢＶドナーＣ、図８Ｃ～８Ｄ；ＥＢＶドナーＤ、図９Ｃ～９Ｄ）およびエフェクターメモリー（Ｔｅｍ）ＣＤ８＋Ｔ細胞（ＥＢＶドナーＣ、図８Ｅ～８Ｆ；ＥＢＶドナーＤ、図９Ｅ～９Ｆ）の増幅（細胞／ウェル）を促進し、これはどちらも７日で劇的に増幅した。図８Ｇ～８Ｊ（ＥＢＶドナーＣ）および図９Ｇ～１２（ＥＢＶドナーＤ）は、上述した７日間の実験の０、３、および７日目におけるＥＢＶ特異的ＴｃｍおよびＴｅｍ細胞のパーセントを示す時間経過を提供する。
総合すると、これらのデータは、ＣＤ３８／ＣＤ２８×ＣＤ３三重特異性抗体が、ＥＢＶ特異的Ｔ細胞、例えばＥＢＶ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＥＢＶ特異的エフェクターメモリー（Ｔｅｍ）ＣＤ８＋Ｔ細胞、およびＥＢＶ特異的セントラルメモリー（Ｔｃｍ）ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化および拡大増殖を促進することを示す。
腫瘍を有するマウスにおけるＨｅｒ２／ＣＤ２８×ＣＤ３三重特異性抗体の抗腫瘍作用
この実施例では、ｉｎ ｖｉｔｒｏで拡大増殖されたＴ細胞が植え付けられたＺＲ－７５－１腫瘍を有するＮｏｄ ｓｃｉｄガンマ（ＮＳＧ）マウスモデルにおいて、Ｈｅｒ２／ＣＤ２８×ＣＤ３三重特異性抗体を抗腫瘍作用について試験した。
材料および方法
ＮＳＧマウスを、それぞれマウス１０匹の５つのグループに分割した。０日目に、ＺＲ－７５－１ヒト乳がん細胞を、５０％マトリゲルと共に各マウスの乳房の脂肪体に細胞５００万個／マウスで埋め込んだ。１７／１８日目に、ヒトＣＤ３＋Ｔ細胞の拡大増殖を始めた。マウスのランダム化は、腫瘍がおよそ１５０ｍｍ３になった２４日目に行った。２５日目に、全てのマウスに、ｉｎ ｖｉｔｒｏで拡大増殖されたヒトＣＤ３＋Ｔ細胞を、３００μＬ中細胞１０００万個／マウス（１ＱＷ、１回のＩＰ注射）で植え付けた。
２５日目に開始して、マウスの１つのグループはビヒクル単独の用量（８％ｗ／ｖスクロース、０．０５％ｗ／ｖポリソルベート８０、１０ｍＭヒスチジン、ｐＨ５．５）を受け、一方で他の４つのグループは、Ｈｅｒ２／ＣＤ２８×ＣＤ３三重特異性抗体を両方とも１０ｍＬ／ｋｇで受けた。三重特異性抗体を受けるグループは、１００、１０、１、または０．１μｇ／ｋｇで投与された。抗体またはビヒクルを、２回の用量で（例えば、２５日目と３２日目に）、１ＱＷで静脈内投与した。３８日目または３９日目に血液および腫瘍組織を収集した。
結果
Ｈｅｒ２／ＣＤ２８×ＣＤ３三重特異性抗体（表１からの結合性タンパク質＃２、配列番号１０４～１０７に対応する）を、上述したｉｎ ｖｉｔｒｏで拡大増殖されたヒトＴ細胞が植え付けられたＮＳＧマウスモデルにおいて、ヒト乳房腫瘍増殖へのその作用に関してビヒクル対照と比較した。最大用量（１００ｕｇ／ｋｇ）でのＨｅｒ２／ＣＤ２８×ＣＤ３三重特異性抗体での処置は、腫瘍増殖および回復の最も顕著な阻害をもたらしたが、１０ｕｇ／ｋｇの用量は抗腫瘍作用も示した（図１３Ａおよび１３Ｄ）。顕著な体重の喪失は観察されなかった（図１３Ｂ）。各三重特異性抗体処置グループからの経時的な個々の腫瘍体積は、図１３Ｃに提供される。
次に、個々の免疫細胞サブセットへの三重特異性抗体処置の作用を検査した。ヒトＣＤ４５＋、ヒトＣＤ８＋、およびヒトＣＤ４＋細胞集団を、フローサイトメトリー、加えてマウスＣＤ４５＋細胞によって測定した（図１４Ａ～１４Ｃ）。三重特異性抗体の最大用量（１００ｕｇ／ｋｇ）はヒトＣＤ４＋細胞の枯渇をもたらし、この作用は用量依存性であった（図１４Ｂおよび１４Ｃ）。ヒトＣＤ８＋細胞のカウントは三重特異性抗体投与の影響をそれほど受けなかった。
腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）への三重特異性抗体処置の作用も、ヒトＣＤ４５、ＣＤ４、およびＣＤ８の免疫組織化学的（ＩＨＣ）染色によって評価した。Ｈ＆Ｅ染色を使用したところ、低用量グループ（１ｕｇ／ｋｇまたは０．１ｕｇ／ｋｇの三重特異性抗体）からの腫瘍は全般的にビヒクル対照グループと匹敵するサイズを有していた。図１５Ａ～１５Ｃで示されるように、低用量のＨｅｒ２／ＣＤ２８×ＣＤ３三重特異性抗体を受けるグループではヒトＴＩＬが増加したが、高用量グループではヒトＴＩＬは散在していた。またＩＨＣ画像も定量的に検査した（図１６Ａ～１６Ｃ）。これらの結果は、より高い三重特異性抗体用量のグループ（１００ｕｇ／ｋｇおよび１０ｕｇ／ｋｇ）でＣＤ４５＋およびＣＤ８＋細胞の顕著な低減を示した。
高用量の三重特異性抗体処置グループ（１００ｕｇ／ｋｇまたは１０ｕｇ／ｋｇ）からの腫瘍は、ビヒクル対照と比較したところ、散在するＴＩＬを特徴としていた。１ｕｇ／ｋｇおよび０．１ｕｇ／ｋｇの三重特異性抗体処置グループでは、中程度から多数のＣＤ４５＋、ＣＤ４＋、またはＣＤ８＋ヒトＴＩＬが観察された。これらのＴＩＬはほとんど腫瘍の端部に存在していたが、腫瘍のコアに向かってより深く伸長していることもあった。
結論として、これらの結果は、１００ｕｇ／ｋｇまたは１０ｕｇ／ｋｇでのＨＥＲ２を標的化するＴ細胞係合三重特異性抗体の２つの静脈内用量を使用して、ｉｎ ｖｉｔｒｏで活性化されたＴ細胞が植え付けられたＺＲ－７５－１乳房腫瘍を有するＮＳＧマウスを処置することが、腫瘍体積における顕著な低減、付随してＴＩＬの顕著な減少をもたらしたことを実証する。１ｕｇ／ｋｇの三重特異性抗体用量では、ビヒクル対照と比較して増加したＴＩＬについて重要ではない一貫しない傾向を示した。
Ｈｅｒ２／ＣＤ２８×ＣＤ３三重特異性抗体における抗ＨＥＲ２および抗ＣＤ３抗原結合ドメイン配列のがん細胞殺滅への作用
この実施例は、抗Ｈｅｒ２および抗ＣＤ３可変ドメイン配列の標的細胞殺滅への作用を記載する。この実施例において、野生型トラスツズマブ抗原結合ドメインおよび抗ＣＤ３抗原結合ドメインを有し、ＶＬドメイン中に３２／３５ＱＱ突然変異を有さないＨｅｒ２／ＣＤ２８×ＣＤ３三重特異性抗体（「対照」）（実施例１を参照）を、それぞれ配列番号１００～１０３、１０４～１０７、２８６～２８９、２９０～２９３、２９４～２９７、および２９８～３０１に対応する表１からのＨｅｒ２／ＣＤ２８×ＣＤ３三重特異性抗体＃１～６と比較した。
材料および方法
ＣＤ８＋Ｔ細胞を、健康なドナーからのヒトＰＢＭＣから磁気ビーズ単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して単離した。Ｔ細胞を、様々なレベルのＨＥＲ２を発現する乳がん細胞株に対するエフェクター細胞として、３：１（エフェクター：標的）の比率で使用した。生存性色素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）およびＰＫＨ２６標的細胞染色（Ｓｉｇｍａ）を使用するフローサイトメトリーによる獲得の２日前に、細胞を実験または対照三重特異性抗体と共にインキュベートした。標的細胞溶解の平均ＥＣ５０を、２～３人のＰＢＭＣドナーから各三重特異性Ａｂにつき計算した。
結果
全ての三重特異性抗体を、３つのＨＥＲ２＋乳がん標的細胞株：ＨＣＣ１９５４、ＢＴ２０、およびＭＤＡ－ＭＢ－２３１のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞溶解について特徴付けた。ＨＣＣ１９５４乳がん細胞は、フローサイトメトリー（最大約１５０，０００受容体／細胞）、ＩＨＣ（３＋）、またはＨｅｒｃｅｐＴｅｓｔ ＨＥＲ２発現アッセイ（３＋）（図１７Ａ）によって評価した場合、高いレベルのＨＥＲ２を発現することが見出された。ＢＴ２０乳がん細胞は、フローサイトメトリー（約６０，０００受容体／細胞）、ＩＨＣ（１＋）、またはＨｅｒｃｅｐＴｅｓｔ ＨＥＲ２発現アッセイ（１＋）（図１７Ｃ）によって評価した場合、中程度のレベルのＨＥＲ２を発現することが見出された。ＭＤＡ－ＭＤ－２３１乳がん細胞は、フローサイトメトリー（約９，０００受容体／細胞）、ＩＨＣ（０＋）、またはＨｅｒｃｅｐＴｅｓｔ ＨＥＲ２発現アッセイ（０）（図１７Ｅ）によって評価した場合、低いレベルのＨＥＲ２を発現することが見出された。それぞれ図１７Ｂ、１７Ｄ、および１７Ｆに、結合性タンパク質＃２と対照または結合性タンパク質＃１、および＃５と対照を比較した、ＨＣＣ１９５４、ＢＴ２０、またはＭＤＡ－ＭＢ－２３１を標的化する細胞殺滅アッセイの結果を示す。結果は、抗ＨＥＲ２アームにおける３０Ｒ／５５Ｑ／１０２Ｅ突然変異および抗ＣＤ３アームのＶＬドメインにおける３２／３５ＱＱ突然変異を有するＨｅｒ２／ＣＤ２８×ＣＤ３三重特異性抗体が、特により低い抗体濃度で、全ての３つの細胞株に対して改善された標的細胞殺滅を示したことを実証した。
上記の３つの乳がん細胞株（ＨＣＣ１９５４、ＢＴ２０、およびＭＤＡ－ＭＢ－２３１）、加えて胃がん細胞株ＯＥ１９（高いＨＥＲ２発現）およびＧＳＵ（中程度のＨＥＲ２発現）を標的化する全ての三重特異性抗体のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞殺滅の平均ＥＣ５０（ｐＭ）を決定した。全般的に、抗ＨＥＲ２アームおよび抗ＣＤ３アームのＶＬドメインにおける突然変異を有するＨｅｒ２／ＣＤ２８×ＣＤ３三重特異性抗体は、全ての３つの乳がん細胞株（図１８Ａ）および両方の胃がん細胞株（図１８Ｂ）に対して、より低いＥＣ５０（したがって優れた細胞殺滅）を示した。これらの結果は、全ての三重特異性抗体がＨＥＲ２＋細胞の細胞殺滅を誘導することができるが、突然変異した三重特異性抗体は、複数の標的細胞型に対して改善された細胞殺滅の効能を一貫して示したことを実証する。

Claims (89)

  1. ３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含む結合性タンパク質であって、第１のポリペプチド鎖は、式：
    ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＣＬ ［Ｉ］
    により表される構造を含み、
    第２のポリペプチド鎖は、式：
    ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２－Ｌ４－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩ］
    により表される構造を含み、
    第３のポリペプチド鎖は、式：
    ＶＨ３－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩＩ］
    により表される構造を含み、
    第４のポリペプチド鎖は、式：
    ＶＬ３－ＣＬ ［ＩＶ］
    により表される構造を含み、
    ここで、
    ＶＬ１は第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
    ＶＬ２は第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
    ＶＬ３は第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
    ＶＨ１は第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
    ＶＨ２は第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
    ＶＨ３は第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
    ＣＬは免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
    ＣＨ１は免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
    ＣＨ２は免疫グロブリンＣＨ２重鎖定常ドメインであり；
    ＣＨ３は免疫グロブリンＣＨ３重鎖定常ドメインであり；
    ヒンジは、ＣＨ１およびＣＨ２ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
    Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４はアミノ酸リンカーであり；
    式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドはクロスオーバー軽鎖－重鎖ペアを形成し；
    ＶＨ１およびＶＬ１は第１の抗原結合性部位を形成し；
    ＶＨ２およびＶＬ２は、ＣＤ３ポリペプチドに結合する第２の抗原結合性部位を形成し、ＶＨ２ドメインは、ＧＦＴＦＴＫＡＷ（配列番号５５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＫＤＫＳＮＳＹＡＴ（配列番号５６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＲＧＶＹＹＡＬＳＰＦＤＹ（配列番号５７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ２ドメインは、ＱＳＬＶＨＸ１ＮＸ２Ｘ３ＴＹであって、ここで、Ｘ１はＥまたはＱであり、Ｘ２はＡまたはＬであり、Ｘ３はＱ、Ｒ、またはＦである、ＱＳＬＶＨＸ１ＮＸ２Ｘ３ＴＹ（配列番号１８０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＫＶＳ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＧＱＧＴＱＹＰＦＴ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含み；
    ＶＨ３およびＶＬ３は第３の抗原結合性部位を形成する、
    前記結合性タンパク質。
  2. 第１の結合性部位はＣＤ２８ポリペプチドに結合する、請求項１に記載の結合性タンパク質。
  3. ＶＨ１ドメインは、ＧＹＴＦＴＳＹＹ（配列番号４９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＧＮＶＮＴ（配列番号５０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＴＲＳＨＹＧＬＤＷＮＦＤＶ（配列番号５１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ１ドメインは、ＱＮＩＹＶＷ（配列番号５２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＫＡＳ（配列番号５３）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＧＱＴＹＰＹ（配列番号５４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、請求項２に記載の結合性タンパク質。
  4. ＶＨ１ドメインは
    ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＶＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＳＩＹＰＧＮＶＮＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＡＴＬＴＶＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＴＲＳＨＹＧＬＤＷＮＦＤＶＷＧＫＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号９１）のアミノ酸配列を含み、かつ／またはＶＬ１ドメインは
    ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＮＩＹＶＷＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＫＡＳＮＬＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＧＱＴＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号９２）のアミノ酸配列を含む、
    請求項３に記載の結合性タンパク質。
  5. ＶＬ２ドメインのＣＤＲ－Ｌ１配列は、ＱＳＬＶＨＱＮＡＱＴＹ（配列番号５９）、ＱＳＬＶＨＥＮＬＱＴＹ（配列番号６０）、ＱＳＬＶＨＥＮＬＦＴＹ（配列番号６１）、およびＱＳＬＶＨＥＮＬＲＴＹ（配列番号６２）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の結合性タンパク質。
  6. ＶＨ２ドメインは
    ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＴＫＡＷＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＱＬＥＷＶＡＱＩＫＤＫＳＮＳＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＲＧＶＹＹＡＬＳＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号９３）またはＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＴＫＡＷＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＱＬＥＷＶＡＱＩＫＤＫＳＮＳＹＡＴＹＹＡＳＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＲＧＶＹＹＡＬＳＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３０２）のアミノ酸配列を含み、かつ／またはＶＬ２ドメインは、
    ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＶＨＱＮＡＱＴＹＬＳＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＳＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＧＱＧＴＱＹＰＦＴＦＧＳＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号９５）、ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＶＨＥＮＬＱＴＹＬＳＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＳＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＧＱＧＴＱＹＰＦＴＦＧＳＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号９６）、ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＶＨＥＮＬＦＴＹＬＳＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＳＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＧＱＧＴＱＹＰＦＴＦＧＳＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号９７）、およびＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＶＨＥＮＬＲＴＹＬＳＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＳＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＧＱＧＴＱＹＰＦＴＦＧＳＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号９８）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、
    請求項５に記載の結合性タンパク質。
  7. 第３の抗原結合性部位は腫瘍標的タンパク質に結合する、請求項１～６のいずれか１項に記載の結合性タンパク質。
  8. 第３の抗原結合性部位はヒトＣＤ３８ポリペプチドに結合する、請求項１～６のいずれか１項に記載の結合性タンパク質。
  9. （ａ）ＶＨ３ドメインは、ＧＹＴＦＴＳＹＡ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＧＱＧＧＴ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＡＲＴＧＧＬＲＲＡＹＦＴＹ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ３ドメインは、ＱＳＶＳＳＹＧＱＧＦ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＧＡＳ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＮＫＥＤＰＷＴ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含み；
    （ｂ）ＶＨ３ドメインは、ＧＹＴＬＴＥＦＳ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＦＤＰＥＤＧＥＴ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＴＴＧＲＦＦＤＷＦ（配列番号２１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ３ドメインは、ＱＳＶＩＳＲＦ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＧＡＳ（配列番号２３）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＤＳＮＬＰＩＴ（配列番号２４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含み；
    （ｃ）ＶＨ３ドメインは、ＧＹＡＦＴＴＹＬ（配列番号２５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＮＰＧＳＧＳＴ（配列番号２６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＡＲＹＡＹＧＹ（配列番号２７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ３ドメインは、ＱＮＶＧＴＡ（配列番号２８）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳ（配列番号２９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＹＳＴＹＰＦＴ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含み；
    （ｄ）ＶＨ３ドメインは、ＧＹＳＦＴＮＹＡ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＳＰＹＹＧＤＴ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＡＲＲＦＥＧＦＹＹＳＭＤＹ（配列番号３３）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ３ドメインは、ＱＳＬＶＨＳＮＧＮＴＹ（配列番号３４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＫＶＳ（配列番号３５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＳＱＳＴＨＶＰＬＴ（配列番号３６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含み；
    （ｅ）ＶＨ３ドメインは、ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号３７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＷＹＤＧＳＮＫ（配列番号３８）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＡＲＤＰＧＬＲＹＦＤＧＧＭＤＶ（配列番号３９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ３ドメインは、ＱＧＩＳＳＹ（配列番号４０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＡＡＳ（配列番号４１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＬＮＳＦＰＹＴ（配列番号４２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含み；または
    （ｆ）ＶＨ３ドメインは、ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号４３）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＷＹＤＧＳＮＫ（配列番号４４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＡＲＭＦＲＧＡＦＤＹ（配列番号４５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ３ドメインは、ＱＧＩＲＮＤ（配列番号４６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＡＡＳ（配列番号４７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＬＱＤＹＩＹＹＰＴ（配列番号４８）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、
    請求項８に記載の結合性タンパク質。
  10. （ａ）ＶＨ３ドメインは
    ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＶＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＡＭＨＷＶＫＥＡＰＧＱＲＬＥＷＩＧＹＩＹＰＧＱＧＧＴＮＹＮＱＫＦＱＧＲＡＴＬＴＡＤＴＳＡＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＦＣＡＲＴＧＧＬＲＲＡＹＦＴＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７９）のアミノ酸配列を含み、かつ／もしくはＶＬ３ドメインは
    ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＩＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＧＱＧＦＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＰＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＮＫＥＤＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号８０）のアミノ酸配列を含み；
    （ｂ）ＶＨ３ドメインは
    ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＶＳＧＹＴＬＴＥＦＳＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＦＤＰＥＤＧＥＴＩＹＡＱＫＦＱＧＲＶＩＭＴＥＤＴＳＴＤＴＡＹＭＥＭＮＳＬＲＳＥＤＴＡＩＹＹＣＴＴＧＲＦＦＤＷＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８１）のアミノ酸配列を含み、かつ／もしくはＶＬ３ドメインは
    ＥＩＩＬＴＱＳＰＡＩＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＩＳＲＦＬＳＷＹＱＶＫＰＧＬＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＴＲＡＴＧＩＰＶＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＳＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＣＡＶＹＹＣＱＱＤＳＮＬＰＩＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫ（配列番号８２）のアミノ酸配列を含み；
    （ｃ）ＶＨ３ドメインは
    ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＡＦＴＴＹＬＶＥＷＩＲＱＲＰＧＱＧＬＥＷＭＧＶＩＮＰＧＳＧＳＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＶＤＲＳＳＴＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＹＡＹＧＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８３）のアミノ酸配列を含み、かつ／もしくはＶＬ３ドメインは
    ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＮＶＧＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＳＰＫＱＬＩＹＳＡＳＮＲＹＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＬＡＴＹＹＣＱＱＹＳＴＹＰＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号８４）のアミノ酸配列を含み；
    （ｄ）ＶＨ３ドメインは
    ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＮＹＡＶＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＶＩＳＰＹＹＧＤＴＴＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＦＥＧＦＹＹＳＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８５）のアミノ酸配列を含み、かつ／もしくはＶＬ３ドメインは
    ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＲＰＳＱＳＬＶＨＳＮＧＮＴＹＬＮＷＹＱＱＲＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＫＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＳＱＳＴＨＶＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号８６）のアミノ酸配列を含み；
    （ｅ）ＶＨ３ドメインは
    ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＹＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＷＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＨＣＡＲＤＰＧＬＲＹＦＤＧＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含み、かつ／もしくはＶＬ３ドメインは
    ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＦＡＡＳＴＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＬＮＳＦＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号８８）のアミノ酸配列を含み；または
    （ｆ）ＶＨ３ドメインは
    ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＷＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＧＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＭＦＲＧＡＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８９）のアミノ酸配列を含み、かつ／もしくはＶＬ３ドメインは
    ＡＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＧＬＱＰＥＤＳＡＴＹＹＣＬＱＤＹＩＹＹＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号９０）のアミノ酸配列を含む、
    請求項９に記載の結合性タンパク質。
  11. （ａ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１５６のアミノ酸配列もしくは配列番号１５６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１５７のアミノ酸配列もしくは配列番号１５７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１５８のアミノ酸配列もしくは配列番号１５８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１５９のアミノ酸配列もしくは配列番号１５９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｂ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１６０のアミノ酸配列もしくは配列番号１６０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１６１のアミノ酸配列もしくは配列番号１６１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１６２のアミノ酸配列もしくは配列番号１６２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１６３のアミノ酸配列もしくは配列番号１６３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｃ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１６４のアミノ酸配列もしくは配列番号１６４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１６５のアミノ酸配列もしくは配列番号１６５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１６６のアミノ酸配列もしくは配列番号１６６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１６７のアミノ酸配列もしくは配列番号１６７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｄ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１６８のアミノ酸配列もしくは配列番号１６８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１６９のアミノ酸配列もしくは配列番号１６９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１７０のアミノ酸配列もしくは配列番号１７０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１７１のアミノ酸配列もしくは配列番号１７１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｅ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１７２のアミノ酸配列もしくは配列番号１７２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１７３のアミノ酸配列もしくは配列番号１７３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１７４のアミノ酸配列もしくは配列番号１７４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１７５のアミノ酸配列もしくは配列番号１７５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｆ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１７６のアミノ酸配列もしくは配列番号１７６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１７７のアミノ酸配列もしくは配列番号１７７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１７８のアミノ酸配列もしくは配列番号１７８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１７９のアミノ酸配列もしくは配列番号１７９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｇ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１８１のアミノ酸配列もしくは配列番号１８１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１８２のアミノ酸配列もしくは配列番号１８２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１８３のアミノ酸配列もしくは配列番号１８３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１８４のアミノ酸配列もしくは配列番号１８４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；または
    （ｈ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１８５のアミノ酸配列もしくは配列番号１８５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１８６のアミノ酸配列もしくは配列番号１８６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１８７のアミノ酸配列もしくは配列番号１８７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１８８のアミノ酸配列もしくは配列番号１８８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む、
    請求項８に記載の結合性タンパク質。
  12. 第３の抗原結合性部位はヒトＨＥＲ２ポリペプチドに結合する、請求項１～７のいずれか１項に記載の結合性タンパク質。
  13. （ａ）ＶＨ３ドメインは、ＧＦＮＩＫＤＴＹ（配列番号１）もしくはＧＦＮＩＲＤＴＹ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＴＮＧＹＴ（配列番号３）、ＩＹＰＴＱＧＹＴ（配列番号４）、もしくはＩＹＰＴＮＡＹＴ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号６）、ＳＲＷＧＧＥＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号７）、もしくはＳＲＷＧＧＳＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ３ドメインは、ＱＤＶＮＴＡ（配列番号９）もしくはＱＤＶＱＴＡ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＨＹＴＴＰ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含み；
    （ｂ）ＶＨ３ドメインは、ＧＦＮＩＫＤＴＹ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＴＮＧＹＴ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ３ドメインは、ＱＤＶＮＴＡ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＨＹＴＴＰ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含み；
    （ｃ）ＶＨ３ドメインは、ＧＦＮＩＲＤＴＹ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＴＱＧＹＴ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＳＲＷＧＧＥＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ３ドメインは、ＱＤＶＮＴＡ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＨＹＴＴＰ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含み；
    （ｄ）ＶＨ３ドメインは、ＧＦＮＩＲＤＴＹ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＴＮＡＹＴ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＳＲＷＧＧＳＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ３ドメインは、ＱＤＶＮＴＡ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＨＹＴＴＰ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含み；
    （ｅ）ＶＨ３ドメインは、ＧＦＮＩＲＤＴＹ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＴＱＧＹＴ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＳＲＷＧＧＳＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ３ドメインは、ＱＤＶＮＴＡ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＨＹＴＴＰ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含み；
    （ｆ）ＶＨ３ドメインは、ＧＦＮＩＲＤＴＹ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＴＮＡＹＴ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＳＲＷＧＧＥＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ３ドメインは、ＱＤＶＮＴＡ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＨＹＴＴＰ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含み；または
    （ｇ）ＶＨ３ドメインは、ＧＦＮＩＫＤＴＹ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＴＮＧＹＴ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ３ドメインは、ＱＤＶＱＴＡ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＨＹＴＴＰ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、
    請求項１２に記載の結合性タンパク質。
  14. （ａ）ＶＨ３ドメインは
    ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７２）、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＲＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＱＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＥＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７３）、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＲＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＱＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＳＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７４）、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＲＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＡＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＳＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７５）、またはＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＲＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＡＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＥＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７６）のアミノ酸配列を含み、かつ／もしくはＶＬ３ドメインは
    ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号７７）またはＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＱＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号７８）のアミノ酸配列を含み；
    （ｂ）ＶＨ３ドメインは
    ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７２）のアミノ酸配列を含み、かつ／もしくはＶＬ３ドメインは
    ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号７７）のアミノ酸配列を含み；
    （ｃ）ＶＨ３ドメインは
    ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＲＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＱＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＥＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７３）のアミノ酸配列を含み、かつ／もしくはＶＬ３ドメインは
    ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号７７）のアミノ酸配列を含み；
    （ｄ）ＶＨ３ドメインは
    ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＲＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＡＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＳＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７５）のアミノ酸配列を含み、かつ／もしくはＶＬ３ドメインは
    ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号７７）のアミノ酸配列を含み；
    （ｅ）ＶＨ３ドメインは
    ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＲＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＱＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＳＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７４）のアミノ酸配列を含み、かつ／もしくはＶＬ３ドメインは
    ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号７７）のアミノ酸配列を含み；
    （ｆ）ＶＨ３ドメインは
    ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＲＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＡＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＥＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７６）のアミノ酸配列を含み、かつ／もしくはＶＬ３ドメインは
    ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号７７）のアミノ酸配列を含み；または
    （ｇ）ＶＨ３ドメインは
    ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７２）のアミノ酸配列を含み、かつ／もしくはＶＬ３ドメインは
    ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＱＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号７８）のアミノ酸配列を含む、
    請求項１３に記載の結合性タンパク質。
  15. （ａ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１００のアミノ酸配列もしくは配列番号１００のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１０１のアミノ酸配列もしくは配列番号１０１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１０２のアミノ酸配列もしくは配列番号１０２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１０３のアミノ酸配列もしくは配列番号１０３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｂ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１０４のアミノ酸配列もしくは配列番号１０４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１０５のアミノ酸配列もしくは配列番号１０５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１０６のアミノ酸配列もしくは配列番号１０６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１０７のアミノ酸配列もしくは配列番号１０７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｃ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１１２のアミノ酸配列もしくは配列番号１１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１１３のアミノ酸配列もしくは配列番号１１３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１１４のアミノ酸配列もしくは配列番号１１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１１５のアミノ酸配列もしくは配列番号１１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｄ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１１６のアミノ酸配列もしくは配列番号１１６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１１７のアミノ酸配列もしくは配列番号１１７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１１８のアミノ酸配列もしくは配列番号１１８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１１９のアミノ酸配列もしくは配列番号１１９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｅ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１２０のアミノ酸配列もしくは配列番号１２０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１２１のアミノ酸配列もしくは配列番号１２１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１２２のアミノ酸配列もしくは配列番号１２２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１２３のアミノ酸配列もしくは配列番号１２３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｆ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１２４のアミノ酸配列もしくは配列番号１２４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１２５のアミノ酸配列もしくは配列番号１２５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１２６のアミノ酸配列もしくは配列番号１２６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１２７のアミノ酸配列もしくは配列番号１２７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｇ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１２８のアミノ酸配列もしくは配列番号１２８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１２９のアミノ酸配列もしくは配列番号１２９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１３０のアミノ酸配列もしくは配列番号１３０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１３１のアミノ酸配列もしくは配列番号１３１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｈ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１３２のアミノ酸配列もしくは配列番号１３２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１３３のアミノ酸配列もしくは配列番号１３３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１３４のアミノ酸配列もしくは配列番号１３４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１３５のアミノ酸配列もしくは配列番号１３５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｉ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１３６のアミノ酸配列もしくは配列番号１３６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１３７のアミノ酸配列もしくは配列番号１３７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１３８のアミノ酸配列もしくは配列番号１３８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１３９のアミノ酸配列もしくは配列番号１３９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｊ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１４０のアミノ酸配列もしくは配列番号１４０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１４１のアミノ酸配列もしくは配列番号１４１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１４２のアミノ酸配列もしくは配列番号１４２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１４３のアミノ酸配列もしくは配列番号１４３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｋ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１４４のアミノ酸配列もしくは配列番号１４４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１４５のアミノ酸配列もしくは配列番号１４５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１４６のアミノ酸配列もしくは配列番号１４６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１４７のアミノ酸配列もしくは配列番号１４７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｌ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１４８のアミノ酸配列もしくは配列番号１４８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１４９のアミノ酸配列もしくは配列番号１４９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１５０のアミノ酸配列もしくは配列番号１５０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１５１のアミノ酸配列もしくは配列番号１５１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｍ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１５２のアミノ酸配列もしくは配列番号１５２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１５３のアミノ酸配列もしくは配列番号１５３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１５４のアミノ酸配列もしくは配列番号１５４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１５５のアミノ酸配列もしくは配列番号１５５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｎ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号２８６のアミノ酸配列もしくは配列番号２８６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号２８７のアミノ酸配列もしくは配列番号２８７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号２８８のアミノ酸配列もしくは配列番号２８８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号２８９のアミノ酸配列もしくは配列番号２８９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｏ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号２９０のアミノ酸配列もしくは配列番号２９０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号２９１のアミノ酸配列もしくは配列番号２９１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号２９２のアミノ酸配列もしくは配列番号２９２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号２９３のアミノ酸配列もしくは配列番号２９３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｐ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号２９４のアミノ酸配列もしくは配列番号２９４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号２９５のアミノ酸配列もしくは配列番号２９５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号２９６のアミノ酸配列もしくは配列番号２９６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号２９７のアミノ酸配列もしくは配列番号２９７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；または
    （ｑ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号２９８のアミノ酸配列もしくは配列番号２９８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号２９９のアミノ酸配列もしくは配列番号２９９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号３００のアミノ酸配列もしくは配列番号３００のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号３０１のアミノ酸配列もしくは配列番号３０１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む、
    請求項１２に記載の結合性タンパク質。
  16. Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３またはＬ４の少なくとも１つは独立して０アミノ酸の長さである、請求項１～１５のいずれか１項に記載の結合性タンパク質。
  17. （ａ）Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４はそれぞれ独立して、０アミノ酸の長さであり、もしくはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号６９）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号７０）、Ｓ、ＲＴ、ＴＫＧＰＳ（配列番号６８）、ＧＱＰＫＡＡＰ（配列番号６７）、およびＧＧＳＧＳＳＧＳＧＧ（配列番号７１）からなる群から選択される配列を含み；または（ｂ）Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４はそれぞれ独立して、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号６９）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号７０）、Ｓ、ＲＴ、ＴＫＧＰＳ（配列番号６８）、ＧＱＰＫＡＡＰ（配列番号６７）、およびＧＧＳＧＳＳＧＳＧＧ（配列番号７１）からなる群から選択される配列を含む、請求項１～１５のいずれか１項に記載の結合性タンパク質。
  18. Ｌ１は配列ＧＱＰＫＡＡＰ（配列番号６７）を含み、Ｌ２は配列ＴＫＧＰＳ（配列番号６８）を含み、Ｌ３は配列Ｓを含み、Ｌ４は配列ＲＴを含む、請求項１～１５のいずれか１項に記載の結合性タンパク質。
  19. Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３またはＬ４の少なくとも１つは配列ＤＫＴＨＴ（配列番号６６）を含む、請求項１～１５のいずれか１項に記載の結合性タンパク質。
  20. Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４は配列ＤＫＴＨＴ（配列番号６６）を含む、請求項１９に記載の結合性タンパク質。
  21. 第２および第３のポリペプチド鎖のヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインはヒトＩｇＧ４ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインであり、ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインはそれぞれ、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ４の２３４および２３５位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換はＦ２３４ＡおよびＬ２３５Ａである、請求項１～２０のいずれか１項に記載の結合性タンパク質。
  22. 第２および第３のポリペプチド鎖のヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインはヒトＩｇＧ４ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインであり、ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインはそれぞれ、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ４の２３３～２３６位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、および２３６における欠失である、請求項１～２０のいずれか１項に記載の結合性タンパク質。
  23. 第２および第３のポリペプチド鎖のヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインはヒトＩｇＧ４ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインであり、ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインはそれぞれ、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ４の２２８および４０９位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換はＳ２２８ＰおよびＲ４０９Ｋである、請求項１～２２のいずれか１項に記載の結合性タンパク質。
  24. 第２および第３のポリペプチド鎖のヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインはヒトＩｇＧ１ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインであり、ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインはそれぞれ、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ１の２３４、２３５、および３２９位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＰ３２９Ａである、請求項１～２０のいずれか１項に記載の結合性タンパク質。
  25. 第２および第３のポリペプチド鎖のヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインはヒトＩｇＧ１ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインであり、ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインはそれぞれ、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ１の２９８、２９９、および３００位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｓ２９８Ｎ、Ｔ２９９Ａ、およびＹ３００Ｓである、請求項１～２０のいずれか１項に記載の結合性タンパク質。
  26. 第２のポリペプチド鎖のヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖであり；第３のポリペプチド鎖のヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の３５４および３６６位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換はＳ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗである、請求項１～２５のいずれか１項に記載の結合性タンパク質。
  27. 第２のポリペプチド鎖のヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の３５４および３６６位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換はＳ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗであり；第３のポリペプチド鎖のヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインは、ＥＵインデックスに従ってヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の３４９、３６６、３６８、および４０７位に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖである、請求項１～２５のいずれか１項に記載の結合性タンパク質。
  28. 請求項１～２７のいずれか１項に記載の結合性タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子。
  29. 請求項２８に記載の核酸分子を含む、発現ベクター。
  30. 請求項２８に記載の核酸分子または請求項２９に記載の発現ベクターを含む、単離された宿主細胞。
  31. 哺乳動物または昆虫細胞である、請求項３０に記載の単離された宿主細胞。
  32. 請求項１～２７のいずれか１項に記載の結合性タンパク質および薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
  33. 患者においてがんを予防および／または処置する方法であって、患者に治療有効量の少なくとも１つの請求項１～２７のいずれか１項に記載の結合性タンパク質または請求項３２に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
  34. 少なくとも１つの結合性タンパク質は化学療法剤と併用投与される、請求項３３に記載の方法。
  35. 患者はヒトである、請求項３３または請求項３４に記載の方法。
  36. 第３の抗原結合性部位はヒトＣＤ３８ポリペプチドに結合し、患者からのがん細胞はＣＤ３８を発現する、請求項３３～３５のいずれか１項に記載の方法。
  37. がんは多発性骨髄腫である、請求項３６に記載の方法。
  38. がんは、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、またはＢ細胞リンパ腫である、請求項３６に記載の方法。
  39. 結合性タンパク質の投与前に、患者は、ウォッシュアウト期間なしにダラツムマブを用いて処置されている、請求項３６～３８のいずれか１項に記載の方法。
  40. 第３の抗原結合性部位はヒトＨＥＲ２ポリペプチドに結合し、患者からのがん細胞はＨＥＲ２を発現する、請求項３３～３５のいずれか１項に記載の方法。
  41. がんは、乳がん、結腸直腸がん、胃がん、または非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）である、請求項４０に記載の方法。
  42. 患者におけるがんの予防および／または処置における使用のための、請求項７～２７のいずれか１項に記載の結合性タンパク質または請求項３２に記載の医薬組成物。
  43. 少なくとも１つの結合性タンパク質は化学療法剤と併用投与される、請求項４２に記載の使用のための結合性タンパク質または使用のための組成物。
  44. 患者はヒトである、請求項４２または請求項４３に記載の使用のための結合性タンパク質または使用のための組成物。
  45. 第３の抗原結合性部位はヒトＣＤ３８ポリペプチドに結合し、患者からのがん細胞はＣＤ３８を発現する、請求項４２～４４のいずれか１項に記載の使用のための結合性タンパク質または使用のための組成物。
  46. がんは多発性骨髄腫である、請求項４５に記載の使用のための結合性タンパク質または使用のための組成物。
  47. がんは、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、またはＢ細胞リンパ腫である、請求項４５に記載の使用のための結合性タンパク質または使用のための組成物。
  48. 結合性タンパク質の投与前に、患者は、ウォッシュアウト期間なしにダラツムマブを用いて処置されている、請求項４５～４７のいずれか１項に記載の使用のための結合性タンパク質または使用のための組成物。
  49. 第３の抗原結合性部位はヒトＨＥＲ２ポリペプチドに結合し、患者からのがん細胞はＨＥＲ２を発現する、請求項４２～４４のいずれか１項に記載の使用のための結合性タンパク質または使用のための組成物。
  50. がんは、乳がん、結腸直腸がん、胃がん、または非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）である、請求項４９に記載の使用のための結合性タンパク質または使用のための組成物。
  51. Ｔ細胞を拡大増殖させる方法であって、Ｔ細胞を、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含む結合性タンパク質と接触させることを含み、第１のポリペプチド鎖は、式：
    ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＣＬ ［Ｉ］
    により表される構造を含み、
    第２のポリペプチド鎖は、式：
    ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２－Ｌ４－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩ］
    により表される構造を含み、
    第３のポリペプチド鎖は、式：
    ＶＨ３－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩＩ］
    により表される構造を含み、
    第４のポリペプチド鎖は、式：
    ＶＬ３－ＣＬ ［ＩＶ］
    により表される構造を含み、
    ここで、
    ＶＬ１は第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
    ＶＬ２は第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
    ＶＬ３は第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
    ＶＨ１は第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
    ＶＨ２は第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
    ＶＨ３は第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
    ＣＬは免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
    ＣＨ１は免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
    ＣＨ２は免疫グロブリンＣＨ２重鎖定常ドメインであり；
    ＣＨ３は免疫グロブリンＣＨ３重鎖定常ドメインであり；
    ヒンジは、ＣＨ１およびＣＨ２ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
    Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４はアミノ酸リンカーであり；
    式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドはクロスオーバー軽鎖－重鎖ペアを形成し；
    ＶＨ１およびＶＬ１は、ＣＤ２８ポリペプチドに結合する第１の抗原結合性部位を形成し；
    ＶＨ２およびＶＬ２は、ＣＤ３ポリペプチドに結合する第２の抗原結合性部位を形成し、ＶＨ２ドメインは、ＧＦＴＦＴＫＡＷ（配列番号５５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＫＤＫＳＮＳＹＡＴ（配列番号５６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＲＧＶＹＹＡＬＳＰＦＤＹ（配列番号５７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ２ドメインは、ＱＳＬＶＨＸ１ＮＸ２Ｘ３ＴＹであって、ここで、Ｘ１はＥまたはＱであり、Ｘ２はＡまたはＬであり、Ｘ３はＱ、Ｒ、またはＦである、ＱＳＬＶＨＸ１ＮＸ２Ｘ３ＴＹ（配列番号１８０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＫＶＳ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＧＱＧＴＱＹＰＦＴ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含み；
    ＶＨ３およびＶＬ３は、ＣＤ３８ポリペプチドに結合する第３の抗原結合性部位を形成する、
    前記方法。
  52. Ｔ細胞は、その細胞表面上にキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現し、またはＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む、請求項５１に記載の方法。
  53. Ｔ細胞はメモリーＴ細胞またはエフェクターＴ細胞である、請求項５１または請求項５２に記載の方法。
  54. ウイルス特異的メモリーＴ細胞を拡大増殖させる方法であって、ウイルス特異的メモリーＴ細胞を、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含む結合性タンパク質と接触させることを含み、第１のポリペプチド鎖は、式：
    ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＣＬ ［Ｉ］
    により表される構造を含み、
    第２のポリペプチド鎖は、式：
    ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２－Ｌ４－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩ］
    により表される構造を含み、
    第３のポリペプチド鎖は、式：
    ＶＨ３－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩＩ］
    により表される構造を含み、
    第４のポリペプチド鎖は、式：
    ＶＬ３－ＣＬ ［ＩＶ］
    により表される構造を含み、
    ここで、
    ＶＬ１は第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
    ＶＬ２は第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
    ＶＬ３は第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
    ＶＨ１は第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
    ＶＨ２は第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
    ＶＨ３は第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
    ＣＬは免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
    ＣＨ１は免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
    ＣＨ２は免疫グロブリンＣＨ２重鎖定常ドメインであり；
    ＣＨ３は免疫グロブリンＣＨ３重鎖定常ドメインであり；
    ヒンジは、ＣＨ１およびＣＨ２ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
    Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４はアミノ酸リンカーであり；
    式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドはクロスオーバー軽鎖－重鎖ペアを形成し；
    ＶＨ１およびＶＬ１は、ＣＤ２８ポリペプチドに結合する第１の抗原結合性部位を形成し；
    ＶＨ２およびＶＬ２は、ＣＤ３ポリペプチドに結合する第２の抗原結合性部位を形成し、ＶＨ２ドメインは、ＧＦＴＦＴＫＡＷ（配列番号５５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＫＤＫＳＮＳＹＡＴ（配列番号５６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＲＧＶＹＹＡＬＳＰＦＤＹ（配列番号５７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ２ドメインは、ＱＳＬＶＨＸ１ＮＸ２Ｘ３ＴＹであって、ここで、Ｘ１はＥまたはＱであり、Ｘ２はＡまたはＬであり、Ｘ３はＱ、Ｒ、またはＦである、ＱＳＬＶＨＸ１ＮＸ２Ｘ３ＴＹ（配列番号１８０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＫＶＳ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＧＱＧＴＱＹＰＦＴ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含み；
    ＶＨ３およびＶＬ３は、ＣＤ３８ポリペプチドに結合する第３の抗原結合性部位を形成する、
    前記方法。
  55. ウイルス特異的メモリーＴ細胞はｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで結合性タンパク質と接触する、請求項５４に記載の方法。
  56. ウイルス特異的メモリーＴ細胞を結合性タンパク質と接触させることはウイルス特異的メモリーＴ細胞の活性化および／または増殖を引き起こす、請求項５４または請求項５５に記載の方法。
  57. 慢性ウイルス感染症を処置する方法であって、それを必要とする患者に、有効量の、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含む結合性タンパク質を投与することを含み、第１のポリペプチド鎖は、式：
    ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＣＬ ［Ｉ］
    により表される構造を含み、
    第２のポリペプチド鎖は、式：
    ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２－Ｌ４－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩ］
    により表される構造を含み、
    第３のポリペプチド鎖は、式：
    ＶＨ３－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩＩ］
    により表される構造を含み、
    第４のポリペプチド鎖は、式：
    ＶＬ３－ＣＬ ［ＩＶ］
    により表される構造を含み、
    ここで、
    ＶＬ１は第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
    ＶＬ２は第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
    ＶＬ３は第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
    ＶＨ１は第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
    ＶＨ２は第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
    ＶＨ３は第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
    ＣＬは免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
    ＣＨ１は免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
    ＣＨ２は免疫グロブリンＣＨ２重鎖定常ドメインであり；
    ＣＨ３は免疫グロブリンＣＨ３重鎖定常ドメインであり；
    ヒンジは、ＣＨ１およびＣＨ２ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
    Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４はアミノ酸リンカーであり；
    式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドはクロスオーバー軽鎖－重鎖ペアを形成し；
    ＶＨ１およびＶＬ１は、ＣＤ２８ポリペプチドに結合する第１の抗原結合性部位を形成し；
    ＶＨ２およびＶＬ２は、ＣＤ３ポリペプチドに結合する第２の抗原結合性部位を形成し、ＶＨ２ドメインは、ＧＦＴＦＴＫＡＷ（配列番号５５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＫＤＫＳＮＳＹＡＴ（配列番号５６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＲＧＶＹＹＡＬＳＰＦＤＹ（配列番号５７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ２ドメインは、ＱＳＬＶＨＸ１ＮＸ２Ｘ３ＴＹであって、ここで、Ｘ１はＥまたはＱであり、Ｘ２はＡまたはＬであり、Ｘ３はＱ、Ｒ、またはＦである、ＱＳＬＶＨＸ１ＮＸ２Ｘ３ＴＹ（配列番号１８０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＫＶＳ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＧＱＧＴＱＹＰＦＴ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含み；
    ＶＨ３およびＶＬ３は、ＣＤ３８ポリペプチドに結合する第３の抗原結合性部位を形成する、
    前記方法。
  58. 患者はヒトである、請求項５７に記載の方法。
  59. 結合性タンパク質は、該結合性タンパク質および薬学的に許容される担体を含む医薬製剤で患者に投与される、請求項５７または請求項５８に記載の方法。
  60. 結合性タンパク質の投与は、患者においてウイルス特異的メモリーＴ細胞の活性化および／または増殖を結果としてもたらす、請求項５７～５９のいずれか１項に記載の方法。
  61. メモリーＴ細胞はＣＤ８＋またはＣＤ４＋メモリーＴ細胞である、請求項５３～５６および６０のいずれか１項に記載の方法。
  62. メモリーＴ細胞はセントラルメモリーＴ細胞（ＴＣＭ）またはエフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）である、請求項５３～５６、６０、および６１のいずれか１項に記載の方法。
  63. ウイルスは、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、インフルエンザウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、ヒトフォーミーウイルス（ＨＦＶ）、単純ヘルペスウイルス１（ＨＳＶ－１）、または単純ヘルペスウイルス２（ＨＳＶ－２）である、請求項５４～６２のいずれか１項に記載の方法。
  64. ＣＤ２８ポリペプチドはヒトＣＤ２８ポリペプチドであり、ＣＤ３ポリペプチドはヒトＣＤ３ポリペプチドであり、ＣＤ３８ポリペプチドはヒトＣＤ３８ポリペプチドである、請求項５１～６３のいずれか１項に記載の方法。
  65. Ｔ細胞の拡大増殖における使用のための結合性タンパク質であって、該結合性タンパク質はＴ細胞と接触し、該結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖は、式：
    ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＣＬ ［Ｉ］
    により表される構造を含み、
    第２のポリペプチド鎖は、式：
    ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２－Ｌ４－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩ］
    により表される構造を含み、
    第３のポリペプチド鎖は、式：
    ＶＨ３－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩＩ］
    により表される構造を含み、
    第４のポリペプチド鎖は、式：
    ＶＬ３－ＣＬ ［ＩＶ］
    により表される構造を含み、
    ここで、
    ＶＬ１は第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
    ＶＬ２は第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
    ＶＬ３は第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
    ＶＨ１は第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
    ＶＨ２は第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
    ＶＨ３は第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
    ＣＬは免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
    ＣＨ１は免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
    ＣＨ２は免疫グロブリンＣＨ２重鎖定常ドメインであり；
    ＣＨ３は免疫グロブリンＣＨ３重鎖定常ドメインであり；
    ヒンジは、ＣＨ１およびＣＨ２ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
    Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４はアミノ酸リンカーであり；
    式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドはクロスオーバー軽鎖－重鎖ペアを形成し；
    ＶＨ１およびＶＬ１は、ＣＤ２８ポリペプチドに結合する第１の抗原結合性部位を形成し；
    ＶＨ２およびＶＬ２は、ＣＤ３ポリペプチドに結合する第２の抗原結合性部位を形成し、ＶＨ２ドメインは、ＧＦＴＦＴＫＡＷ（配列番号５５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＫＤＫＳＮＳＹＡＴ（配列番号５６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＲＧＶＹＹＡＬＳＰＦＤＹ（配列番号５７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ２ドメインは、ＱＳＬＶＨＸ１ＮＸ２Ｘ３ＴＹであって、ここで、Ｘ１はＥまたはＱであり、Ｘ２はＡまたはＬであり、Ｘ３はＱ、Ｒ、またはＦである、ＱＳＬＶＨＸ１ＮＸ２Ｘ３ＴＹ（配列番号１８０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＫＶＳ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＧＱＧＴＱＹＰＦＴ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含み；
    ＶＨ３およびＶＬ３は、ＣＤ３８ポリペプチドに結合する第３の抗原結合性部位を形成する、
    前記使用のための結合性タンパク質。
  66. Ｔ細胞は、その細胞表面上にキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現し、またはＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む、請求項６５に記載の使用のための結合性タンパク質。
  67. Ｔ細胞はメモリーＴ細胞またはエフェクターＴ細胞である、請求項６５または請求項６６に記載の使用のための結合性タンパク質。
  68. ウイルス特異的メモリーＴ細胞の拡大増殖における使用のための結合性タンパク質であって、該結合性タンパク質はウイルス特異的メモリーＴ細胞と接触し、該結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖は、式：
    ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＣＬ ［Ｉ］
    により表される構造を含み、
    第２のポリペプチド鎖は、式：
    ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２－Ｌ４－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩ］
    により表される構造を含み、
    第３のポリペプチド鎖は、式：
    ＶＨ３－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩＩ］
    により表される構造を含み、
    第４のポリペプチド鎖は、式：
    ＶＬ３－ＣＬ ［ＩＶ］
    により表される構造を含み、
    ここで、
    ＶＬ１は第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
    ＶＬ２は第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
    ＶＬ３は第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
    ＶＨ１は第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
    ＶＨ２は第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
    ＶＨ３は第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
    ＣＬは免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
    ＣＨ１は免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
    ＣＨ２は免疫グロブリンＣＨ２重鎖定常ドメインであり；
    ＣＨ３は免疫グロブリンＣＨ３重鎖定常ドメインであり；
    ヒンジは、ＣＨ１およびＣＨ２ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
    Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４はアミノ酸リンカーであり；
    式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドはクロスオーバー軽鎖－重鎖ペアを形成し；
    ＶＨ１およびＶＬ１は、ＣＤ２８ポリペプチドに結合する第１の抗原結合性部位を形成し；
    ＶＨ２およびＶＬ２は、ＣＤ３ポリペプチドに結合する第２の抗原結合性部位を形成し、ＶＨ２ドメインは、ＧＦＴＦＴＫＡＷ（配列番号５５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＫＤＫＳＮＳＹＡＴ（配列番号５６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＲＧＶＹＹＡＬＳＰＦＤＹ（配列番号５７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ２ドメインは、ＱＳＬＶＨＸ１ＮＸ２Ｘ３ＴＹであって、ここで、Ｘ１はＥまたはＱであり、Ｘ２はＡまたはＬであり、Ｘ３はＱ、Ｒ、またはＦである、ＱＳＬＶＨＸ１ＮＸ２Ｘ３ＴＹ（配列番号１８０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＫＶＳ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＧＱＧＴＱＹＰＦＴ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含み；
    ＶＨ３およびＶＬ３は、ＣＤ３８ポリペプチドに結合する第３の抗原結合性部位を形成する、
    前記使用のための結合性タンパク質。
  69. ウイルス特異的メモリーＴ細胞はｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで結合性タンパク質と接触する、請求項６８に記載の使用のための結合性タンパク質。
  70. ウイルス特異的メモリーＴ細胞を結合性タンパク質と接触させることはウイルス特異的メモリーＴ細胞の活性化および／または増殖を引き起こす、請求項６８または請求項６９に記載の使用のための結合性タンパク質。
  71. 慢性ウイルス感染症の処置における使用のための結合性タンパク質であって、該結合性タンパク質はそれを必要とする患者に投与され、該結合性タンパク質は、３つの抗原結合性部位を形成する４つのポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖は、式：
    ＶＬ２－Ｌ１－ＶＬ１－Ｌ２－ＣＬ ［Ｉ］
    により表される構造を含み、
    第２のポリペプチド鎖は、式：
    ＶＨ１－Ｌ３－ＶＨ２－Ｌ４－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩ］
    により表される構造を含み、
    第３のポリペプチド鎖は、式：
    ＶＨ３－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩＩ］
    により表される構造を含み、
    第４のポリペプチド鎖は、式：
    ＶＬ３－ＣＬ ［ＩＶ］
    により表される構造を含み、
    ここで、
    ＶＬ１は第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
    ＶＬ２は第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
    ＶＬ３は第３の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
    ＶＨ１は第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
    ＶＨ２は第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
    ＶＨ３は第３の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
    ＣＬは免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
    ＣＨ１は免疫グロブリンＣＨ１重鎖定常ドメインであり；
    ＣＨ２は免疫グロブリンＣＨ２重鎖定常ドメインであり；
    ＣＨ３は免疫グロブリンＣＨ３重鎖定常ドメインであり；
    ヒンジは、ＣＨ１およびＣＨ２ドメインを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
    Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３およびＬ４はアミノ酸リンカーであり；
    式Ｉのポリペプチドおよび式ＩＩのポリペプチドはクロスオーバー軽鎖－重鎖ペアを形成し；
    ＶＨ１およびＶＬ１は、ＣＤ２８ポリペプチドに結合する第１の抗原結合性部位を形成し；
    ＶＨ２およびＶＬ２は、ＣＤ３ポリペプチドに結合する第２の抗原結合性部位を形成し、ＶＨ２ドメインは、ＧＦＴＦＴＫＡＷ（配列番号５５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＫＤＫＳＮＳＹＡＴ（配列番号５６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＲＧＶＹＹＡＬＳＰＦＤＹ（配列番号５７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ２ドメインは、ＱＳＬＶＨＸ１ＮＸ２Ｘ３ＴＹであって、ここで、Ｘ１はＥまたはＱであり、Ｘ２はＡまたはＬであり、Ｘ３はＱ、Ｒ、またはＦである、ＱＳＬＶＨＸ１ＮＸ２Ｘ３ＴＹ（配列番号１８０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＫＶＳ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＧＱＧＴＱＹＰＦＴ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含み；
    ＶＨ３およびＶＬ３は、ＣＤ３８ポリペプチドに結合する第３の抗原結合性部位を形成する、
    前記使用のための結合性タンパク質。
  72. 患者はヒトである、請求項７１に記載の使用のための結合性タンパク質。
  73. 結合性タンパク質は、該結合性タンパク質および薬学的に許容される担体を含む医薬製剤で患者に投与される、請求項７１または請求項７２に記載の使用のための結合性タンパク質。
  74. 結合性タンパク質の投与は、患者においてウイルス特異的メモリーＴ細胞の活性化および／または増殖を結果としてもたらす、請求項７１～７３のいずれか１項に記載の使用のための結合性タンパク質。
  75. メモリーＴ細胞はＣＤ８＋またはＣＤ４＋メモリーＴ細胞である、請求項６７～７０および７４のいずれか１項に記載の使用のための結合性タンパク質。
  76. メモリーＴ細胞はセントラルメモリーＴ細胞（ＴＣＭ）またはエフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）である、請求項６７～７０、７４、および７５のいずれか１項に記載の使用のための結合性タンパク質。
  77. ウイルスは、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、インフルエンザウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、ヒトフォーミーウイルス（ＨＦＶ）、単純ヘルペスウイルス１（ＨＳＶ－１）、または単純ヘルペスウイルス２（ＨＳＶ－２）である、請求項６８～７６のいずれか１項に記載の使用のための結合性タンパク質。
  78. ＣＤ２８ポリペプチドはヒトＣＤ２８ポリペプチドであり、ＣＤ３ポリペプチドはヒトＣＤ３ポリペプチドであり、ＣＤ３８ポリペプチドはヒトＣＤ３８ポリペプチドである、請求項６５～７７のいずれか１項に記載の使用のための結合性タンパク質。
  79. ＶＨ１ドメインは、ＧＹＴＦＴＳＹＹ（配列番号４９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＧＮＶＮＴ（配列番号５０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＴＲＳＨＹＧＬＤＷＮＦＤＶ（配列番号５１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ１ドメインは、ＱＮＩＹＶＷ（配列番号５２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＫＡＳ（配列番号５３）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＧＱＴＹＰＹ（配列番号５４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、請求項５１～７８のいずれか１項に記載の方法または使用のための結合性タンパク質。
  80. ＶＨ１ドメインは
    ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＶＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＳＩＹＰＧＮＶＮＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＡＴＬＴＶＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＴＲＳＨＹＧＬＤＷＮＦＤＶＷＧＫＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号９１）のアミノ酸配列を含み、かつ／またはＶＬ１ドメインは
    ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＮＩＹＶＷＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＫＡＳＮＬＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＧＱＴＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号９２）のアミノ酸配列を含む、
    請求項７９に記載の方法または使用のための結合性タンパク質。
  81. ＶＬ２ドメインのＣＤＲ－Ｌ１配列は、ＱＳＬＶＨＱＮＡＱＴＹ（配列番号５９）、ＱＳＬＶＨＥＮＬＱＴＹ（配列番号６０）、ＱＳＬＶＨＥＮＬＦＴＹ（配列番号６１）、およびＱＳＬＶＨＥＮＬＲＴＹ（配列番号６２）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項５１～８０のいずれか１項に記載の方法または使用のための結合性タンパク質。
  82. ＶＨ２ドメインは
    ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＴＫＡＷＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＱＬＥＷＶＡＱＩＫＤＫＳＮＳＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＲＧＶＹＹＡＬＳＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号９３）またはＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＴＫＡＷＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＱＬＥＷＶＡＱＩＫＤＫＳＮＳＹＡＴＹＹＡＳＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＲＧＶＹＹＡＬＳＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３０２）のアミノ酸配列を含み、かつ／またはＶＬ２ドメインは、
    ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＶＨＱＮＡＱＴＹＬＳＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＳＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＧＱＧＴＱＹＰＦＴＦＧＳＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号９５）、ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＶＨＥＮＬＱＴＹＬＳＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＳＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＧＱＧＴＱＹＰＦＴＦＧＳＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号９６）、ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＶＨＥＮＬＦＴＹＬＳＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＳＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＧＱＧＴＱＹＰＦＴＦＧＳＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号９７）、およびＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＶＨＥＮＬＲＴＹＬＳＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＳＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＧＱＧＴＱＹＰＦＴＦＧＳＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号９８）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、
    請求項８１に記載の方法または使用のための結合性タンパク質。
  83. （ａ）ＶＨ３ドメインは、ＧＹＴＦＴＳＹＡ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＹＰＧＱＧＧＴ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＡＲＴＧＧＬＲＲＡＹＦＴＹ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ３ドメインは、ＱＳＶＳＳＹＧＱＧＦ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＧＡＳ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＮＫＥＤＰＷＴ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含み；
    （ｂ）ＶＨ３ドメインは、ＧＹＴＬＴＥＦＳ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＦＤＰＥＤＧＥＴ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＴＴＧＲＦＦＤＷＦ（配列番号２１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ３ドメインは、ＱＳＶＩＳＲＦ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＧＡＳ（配列番号２３）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＤＳＮＬＰＩＴ（配列番号２４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含み；
    （ｃ）ＶＨ３ドメインは、ＧＹＡＦＴＴＹＬ（配列番号２５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＮＰＧＳＧＳＴ（配列番号２６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＡＲＹＡＹＧＹ（配列番号２７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ３ドメインは、ＱＮＶＧＴＡ（配列番号２８）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＳＡＳ（配列番号２９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＹＳＴＹＰＦＴ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含み；
    （ｄ）ＶＨ３ドメインは、ＧＹＳＦＴＮＹＡ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＳＰＹＹＧＤＴ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＡＲＲＦＥＧＦＹＹＳＭＤＹ（配列番号３３）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ３ドメインは、ＱＳＬＶＨＳＮＧＮＴＹ（配列番号３４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＫＶＳ（配列番号３５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＳＱＳＴＨＶＰＬＴ（配列番号３６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含み；
    （ｅ）ＶＨ３ドメインは、ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号３７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＷＹＤＧＳＮＫ（配列番号３８）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＡＲＤＰＧＬＲＹＦＤＧＧＭＤＶ（配列番号３９）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ３ドメインは、ＱＧＩＳＳＹ（配列番号４０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＡＡＳ（配列番号４１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＱＱＬＮＳＦＰＹＴ（配列番号４２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含み；または
    （ｆ）ＶＨ３ドメインは、ＧＦＴＦＳＳＹＧ（配列番号４３）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、ＩＷＹＤＧＳＮＫ（配列番号４４）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、およびＡＲＭＦＲＧＡＦＤＹ（配列番号４５）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列を含み、ＶＬ３ドメインは、ＱＧＩＲＮＤ（配列番号４６）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、ＡＡＳ（配列番号４７）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、およびＬＱＤＹＩＹＹＰＴ（配列番号４８）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、
    請求項５１～８２のいずれか１項に記載の方法または使用のための結合性タンパク質。
  84. （ａ）ＶＨ３ドメインは
    ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＶＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＡＭＨＷＶＫＥＡＰＧＱＲＬＥＷＩＧＹＩＹＰＧＱＧＧＴＮＹＮＱＫＦＱＧＲＡＴＬＴＡＤＴＳＡＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＦＣＡＲＴＧＧＬＲＲＡＹＦＴＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７９）のアミノ酸配列を含み、かつ／もしくはＶＬ３ドメインは
    ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＩＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＧＱＧＦＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＰＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＮＫＥＤＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号８０）のアミノ酸配列を含み；
    （ｂ）ＶＨ３ドメインは
    ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＶＳＧＹＴＬＴＥＦＳＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＦＤＰＥＤＧＥＴＩＹＡＱＫＦＱＧＲＶＩＭＴＥＤＴＳＴＤＴＡＹＭＥＭＮＳＬＲＳＥＤＴＡＩＹＹＣＴＴＧＲＦＦＤＷＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８１）のアミノ酸配列を含み、かつ／もしくはＶＬ３ドメインは
    ＥＩＩＬＴＱＳＰＡＩＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＩＳＲＦＬＳＷＹＱＶＫＰＧＬＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＴＲＡＴＧＩＰＶＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＳＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＣＡＶＹＹＣＱＱＤＳＮＬＰＩＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫ（配列番号８２）のアミノ酸配列を含み；
    （ｃ）ＶＨ３ドメインは
    ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＡＦＴＴＹＬＶＥＷＩＲＱＲＰＧＱＧＬＥＷＭＧＶＩＮＰＧＳＧＳＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＶＤＲＳＳＴＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＹＡＹＧＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８３）のアミノ酸配列を含み、かつ／もしくはＶＬ３ドメインは
    ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＮＶＧＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＳＰＫＱＬＩＹＳＡＳＮＲＹＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＬＡＴＹＹＣＱＱＹＳＴＹＰＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号８４）のアミノ酸配列を含み；
    （ｄ）ＶＨ３ドメインは
    ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＮＹＡＶＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＶＩＳＰＹＹＧＤＴＴＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＦＥＧＦＹＹＳＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８５）のアミノ酸配列を含み、かつ／もしくはＶＬ３ドメインは
    ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＲＰＳＱＳＬＶＨＳＮＧＮＴＹＬＮＷＹＱＱＲＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＫＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＳＱＳＴＨＶＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号８６）のアミノ酸配列を含み；
    （ｅ）ＶＨ３ドメインは
    ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＹＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＷＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＨＣＡＲＤＰＧＬＲＹＦＤＧＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含み、かつ／もしくはＶＬ３ドメインは
    ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＦＡＡＳＴＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＬＮＳＦＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号８８）のアミノ酸配列を含み；または
    （ｆ）ＶＨ３ドメインは
    ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＷＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＧＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＭＦＲＧＡＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８９）のアミノ酸配列を含み、かつ／もしくはＶＬ３ドメインは
    ＡＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＧＬＱＰＥＤＳＡＴＹＹＣＬＱＤＹＩＹＹＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号９０）のアミノ酸配列を含む、
    請求項８３に記載の方法または使用のための結合性タンパク質。
  85. （ａ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１５６のアミノ酸配列もしくは配列番号１５６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１５７のアミノ酸配列もしくは配列番号１５７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１５８のアミノ酸配列もしくは配列番号１５８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１５９のアミノ酸配列もしくは配列番号１５９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｂ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１６０のアミノ酸配列もしくは配列番号１６０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１６１のアミノ酸配列もしくは配列番号１６１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１６２のアミノ酸配列もしくは配列番号１６２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１６３のアミノ酸配列もしくは配列番号１６３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｃ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１６４のアミノ酸配列もしくは配列番号１６４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１６５のアミノ酸配列もしくは配列番号１６５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１６６のアミノ酸配列もしくは配列番号１６６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１６７のアミノ酸配列もしくは配列番号１６７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｄ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１６８のアミノ酸配列もしくは配列番号１６８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１６９のアミノ酸配列もしくは配列番号１６９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１７０のアミノ酸配列もしくは配列番号１７０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１７１のアミノ酸配列もしくは配列番号１７１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｅ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１７２のアミノ酸配列もしくは配列番号１７２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１７３のアミノ酸配列もしくは配列番号１７３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１７４のアミノ酸配列もしくは配列番号１７４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１７５のアミノ酸配列もしくは配列番号１７５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｆ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１７６のアミノ酸配列もしくは配列番号１７６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１７７のアミノ酸配列もしくは配列番号１７７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１７８のアミノ酸配列もしくは配列番号１７８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１７９のアミノ酸配列もしくは配列番号１７９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；
    （ｇ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１８１のアミノ酸配列もしくは配列番号１８１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１８２のアミノ酸配列もしくは配列番号１８２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１８３のアミノ酸配列もしくは配列番号１８３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１８４のアミノ酸配列もしくは配列番号１８４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；または
    （ｈ）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１８５のアミノ酸配列もしくは配列番号１８５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第２のポリペプチド鎖は、配列番号１８６のアミノ酸配列もしくは配列番号１８６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第３のポリペプチド鎖は、配列番号１８７のアミノ酸配列もしくは配列番号１８７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み；第４のポリペプチド鎖は、配列番号１８８のアミノ酸配列もしくは配列番号１８８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む、
    請求項５１～８２のいずれか１項に記載の方法または使用のための結合性タンパク質。
  86. 請求項１～２７のいずれか１項に記載の結合性タンパク質の第１、第２、第３、および第４のポリペプチド鎖をコードする１つまたはそれ以上のベクターを含む、ベクターシステム。
  87. 結合性タンパク質の第１のポリペプチド鎖をコードする第１のベクター、該結合性タンパク質の第２のポリペプチド鎖をコードする第２のベクター、該結合性タンパク質の第３のポリペプチド鎖をコードする第３のベクター、および該結合性タンパク質の第４のポリペプチド鎖をコードする第４のベクターを含む、請求項８６に記載のベクターシステム。
  88. ポリヌクレオチドのキットであって、
    （ａ）配列番号１８９のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号１９０のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号１９１のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号１９２のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；
    （ｂ）配列番号１９３のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号１９４のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号１９５のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号１９６のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；
    （ｃ）配列番号１９７のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号１９８のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号１９９のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２００のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；
    （ｄ）配列番号２０１のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２０２のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２０３のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２０４のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；
    （ｅ）配列番号２０５のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２０６のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２０７のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２０８のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；
    （ｆ）配列番号２０９のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２１０のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２１１のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２１２のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；
    （ｇ）配列番号２１３のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２１４のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２１５のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２１６のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；
    （ｈ）配列番号２１７のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２１８のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２１９のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２２０のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；
    （ｉ）配列番号２２１のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２２２のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２２３のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２２４のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；
    （ｊ）配列番号２２５のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２２６のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２２７のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２２８のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；
    （ｋ）配列番号２２９のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２３０のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２３１のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２３２のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；
    （ｌ）配列番号２３３のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２３４のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２３５のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２３６のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；
    （ｍ）配列番号２３７のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２３８のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２３９のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２４０のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；
    （ｎ）配列番号２４１のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２４２のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２４３のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２４４のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；
    （ｏ）配列番号２４５のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２４６のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２４７のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２４８のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；
    （ｐ）配列番号２４９のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２５０のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２５１のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２５２のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；
    （ｑ）配列番号２５３のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２５４のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２５５のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２５６のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；
    （ｒ）配列番号２５７のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２５８のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２５９のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２６０のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；
    （ｓ）配列番号２６１のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２６２のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２６３のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２６４のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；
    （ｔ）配列番号２６５のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２６６のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２６７のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２６８のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；
    （ｕ）配列番号２６９のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２７０のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２７１のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２７２のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド；または
    （ｖ）配列番号２７３のポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド、配列番号２７４のポリヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチド、配列番号２７５のポリヌクレオチド配列を含む第３のポリヌクレオチド、および配列番号２７６のポリヌクレオチド配列を含む第４のポリヌクレオチド
    を含む、前記キット。
  89. 第１、第２、第３、および第４のポリヌクレオチドは１つまたはそれ以上の発現ベクター上に存在する、請求項８８に記載のキット。
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