JP2022526714A - 粒子の区別に使用するためのパラメータ - Google Patents
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Abstract
Description
本開示の態様は、サンプルの粒子(例えば、生物学的サンプル中の細胞)を特徴付けるための方法を含む。特定の実施形態による方法を実施する際に、流れ中の細胞を有するサンプルに光源で照射し、サンプルからの光を検出して、調査領域での流れ内の対象の空間データを生成し、空間データに基づいて対象が粒子の凝集体(例えば、細胞の凝集体)であるか否かを決定する。実施形態では、方法で、対象の空間データに基づいて、単一細胞と2つ以上の細胞の凝集体とを区別する。「空間データ」という用語は、本明細書では、流れの照射調査領域の空間位置を符号化するデータ信号を説明するために使用される。以下でより詳細に説明するように、いくつかの実施形態では、例えば流れ内の対象からの周波数符号化蛍光データの変換を実行することによって(例えば、フーリエ変換を実行するか、又はデジタルロックインアンプを使用して周波数符号化蛍光データのヘテロダイン及び逆多重化を行って空間データを計算することによって)、流れ内の対象からの周波数符号化蛍光データから空間データは計算される。いくつかの実施形態では、サンプルは生物学的サンプルである。「生物学的サンプル」という用語は、生物全体、植物、真菌、又は、特定の例では血液、粘液、リンパ液、滑液、脳脊髄液、唾液、気管支肺胞洗浄液、羊水、臍帯血、尿、膣液及び精液に見られ得る、動物組織、細胞又は構成要素部分のサブセットを指すべく、従来の意味で使用される。従って、「生物学的サンプル」は、天然生物又はその組織のサブセット、並びに、生物又はその組織のサブセットから調製されたホモジネート、溶解物又は抽出物の両方を指し、これには、例えば、血漿、血清、髄液、リンパ液、皮膚の切片、呼吸器、胃腸、心臓血管及び尿生殖路、涙、唾液、乳汁、血球、腫瘍、臓器が含まれるが、これらに限定されない。生物学的サンプルは、健康な組織及び罹患した組織(例えば、癌性、悪性、壊死など)の両方を含む、任意のタイプの生物組織であり得る。特定の実施形態では、生物学的サンプルは、血液又はその誘導体、例えば、血漿、涙、尿、精液などの液体サンプルであり、いくつかの例では、サンプルは、静脈穿刺又は指先から得られる血液などの全血を含む血液サンプルである(血液はアッセイ前に保存剤、抗凝固剤などの任意の試薬と組み合わされてもよく又は組み合わされなくてもよい)。
重心=M1,0/M0,0
上に要約したように、本開示の態様は、サンプルの粒子(例えば、生物学的サンプル中の細胞)を特徴付けるためのシステムを含む。特定の実施形態によるシステムは、流れ中の細胞を有するサンプルに照射するように構成された光源、光検出器を有する光検出システム、及びメモリが格納された命令を含むようにプロセッサに動作可能に結合されたメモリを有するプロセッサを備えており、命令は、プロセッサによって実行されると、プロセッサに調査領域での流れ内の対象の空間データを生成させ、空間データに基づいて流れ内の対象が細胞凝集体であるか否かを決定させる。
重心=M1,0/M0,0
本開示の態様はまた、流れ内の対象の空間データを生成し、空間データに基づいて対象が凝集体(例えば、細胞凝集体)であるか否かを決定するようにプログラムされた集積回路デバイスを含む。特定の実施形態では、本集積回路デバイスは、対象を選別するように構成される。いくつかの実施形態では、着目する集積回路デバイスは、フィールドプログラマブルゲートアレイ(FPGA)を含む。他の実施形態では、集積回路デバイスは、特定用途向け集積回路(ASIC)を含む。更に他の実施形態では、集積回路デバイスは、コンプレックスプログラマブルロジックデバイス(CPLD)を含む。
重心=M1,0/M0,0
本開示の態様は、キットを更に含み、キットは、本明細書に記載の集積回路デバイスのうちの1つ以上を含む。いくつかの実施形態では、キットは、コンピュータ可読媒体(例えば、フラッシュドライブ、USBストレージ、コンパクトディスク、DVD、Blu-ray(登録商標)ディスクなど)の形態などの、本システムのためのプログラム、又はそのプログラムをインターネットウェブプロトコル若しくはクラウドサーバからダウンロードするための説明書を更に含み得る。キットには、本方法を実施するための説明書が更に含まれ得る。これらの説明書は、様々な形態で本キットに存在し得、そのうちの1つ以上がキットに存在し得る。これらの説明書が存在し得る1つの形態は、適切な媒体又は基板上に印刷された情報、例えば、情報が印刷された一枚又は複数枚の紙、キットの包装体、添付文書などである。これらの説明書の更に別の形態は、情報が記録されているコンピュータ可読媒体、例えば、ディスケット、コンパクトディスク(CD)、ポータブルフラッシュドライブなどである。存在し得るこれらの説明書の更に別の形態は、離れた場所で情報にアクセスするためにインターネットを介して使用され得るウェブサイトアドレスである。
本システム、本方法、及び本コンピュータシステムは、生物学的サンプルなどの流体媒体中のサンプルの粒子成分を分析して選別することが望ましい様々な用途に使用される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるシステム及び方法は、蛍光タグで標識された生物学的サンプルのフローサイトメトリー特徴付けに使用される。他の実施形態では、システム及び方法は、放出された光の分光法に使用される。更に、本システム及び本方法は、(例えば、流れ中の)サンプルから収集された光から得られる信号を増加させる際に使用される。特定の例では、本開示は、フローサイトメータ内の流れに照射されるサンプルから収集された光の測定を高める際に使用される。本開示の実施形態は、細胞選別中の、改善された細胞選別精度、向上した粒子収集、粒子帯電効率、より正確な粒子帯電、及び向上した粒子偏向を有するフローサイトメータを提供することが望ましい場合に使用される。
流れ内の細胞を含むサンプルからの光を検出し、
調査領域での流れ内の対象の空間データを生成して対象の空間データを取得し、
空間データに基づいて流れ内の対象が細胞凝集体であるか否かを決定する、方法。
流れ内の対象のグレースケール画像を生成し、
グレースケール画像からピクセル強度閾値を決定し、
グレースケール画像からの各ピクセルを決定された閾値と比較し、
各ピクセルをバイナリピクセル値に変換する、付記14に記載の方法。
音響光学デバイスにレーザで照射して、周波数シフト光の第1のビーム及び周波数シフト光の第2のビームを生成する、付記27~28のいずれか1つに記載の方法。
光検出器を含む光検出システム、及び
プロセッサに動作可能に結合されたメモリを含むプロセッサ
を備えており、
メモリに命令が格納されており、命令は、プロセッサによって実行されると、プロセッサに、
調査領域での流れ内の対象の空間データを生成させて、対象の空間データを生成させ、
空間データに基づいて流れ内の対象が細胞凝集体であるか否かを決定させる、システム。
流れ内の対象のグレースケール画像を生成させ、
グレースケール画像からピクセル強度閾値を決定させ、
グレースケール画像からの各ピクセルを、決定された閾値と比較させ、
各ピクセルをバイナリピクセル値に変換させる、付記50に記載のシステム。
流れ内の対象の画像、又は
対象の画像マスク
のうちの1つ以上を生成するようにプログラムされた集積回路要素を含む、付記37~59のいずれか1つに記載のシステム。
流れ中のサンプルに光源で照射するためのフローセルノズルオリフィスと流体連通しているサンプル調査領域
を更に備える、付記37~80のいずれか1つに記載のシステム。
空間データに基づいて、流れ内の対象が細胞凝集体であるか否かを決定する
ようにプログラムされた、集積回路。
グレースケール画像からピクセル強度閾値を決定し、
グレースケール画像からの各ピクセルを、決定された閾値と比較し、
各ピクセルをバイナリピクセル値に変換する
ようにプログラムされた、付記93に記載の集積回路。
本願は、2019年3月29日に出願された米国仮特許出願第62/826646号に関し、その開示内容が参照により本明細書に組み込まれる。
Claims (15)
- 流れ内の対象が細胞凝集体であるか否かを決定するための方法であって、
流れ内の細胞を含むサンプルからの光を検出し、
調査領域での前記流れ内の対象の空間データを生成して、前記対象の空間データを得て、
前記空間データに基づいて前記流れ内の前記対象が細胞凝集体であるか否かを決定する、方法。 - 前記流れ内の前記サンプルからの光を検出する際に、前記流れ内の前記サンプルからの光散乱を検出する、請求項1に記載の方法。
- 前記流れ内の前記サンプルからの前方散乱光又は前記流れ内の前記サンプルからの側方散乱光を検出する、請求項2に記載の方法。
- 前記空間データに基づいて前記対象のサイズを決定する、請求項1~3のいずれか1つに記載の方法。
- 前記空間データに基づいて前記対象の重心を決定する、請求項1~4のいずれか1つに記載の方法。
- 前記空間データに基づいて前記対象の偏心度を決定する、請求項1~5のいずれか1つに記載の方法。
- 前記空間データに基づいて前記対象の画像モーメントを計算する、請求項1~6のいずれか1つに記載の方法。
- 前記空間データから前記対象の画像を生成する、請求項1~7のいずれか1つに記載の方法。
- 前記対象が単一細胞であると決定するか、又は前記対象が2つ以上の細胞を含む細胞凝集体であると決定する、請求項1~8のいずれか1つに記載の方法。
- 周波数符号化画像を生成する、請求項1~9のいずれか1つに記載の方法。
- 前記周波数符号化画像を生成する際に、周波数シフト光の第1のビーム及び周波数シフト光の第2のビームを前記流れに照射する、請求項10に記載の方法。
- 周波数シフト光の前記第1のビームは局部発振器(LO)ビームを含み、周波数シフト光の前記第2のビームは高周波コムビームを含む、請求項11に記載の方法。
- 前記対象を選別する、請求項1~12のいずれか1つに記載の方法。
- 流れ内の細胞を有するサンプルに照射するように構成された光源、
光検出器を含む光検出システム、及び
プロセッサに動作可能に結合されたメモリを含む前記プロセッサ
を備えており、
前記メモリに命令が格納されており、前記命令は、前記プロセッサによって実行されると、前記プロセッサに、
調査領域での前記流れ内の対象の空間データを生成させて、前記対象の空間データを生成させ、
請求項1~13のいずれか1つに記載の方法に従って、前記空間データに基づいて前記流れ内の前記対象が細胞凝集体であるか否かを決定させる、システム。 - 調査領域での流れ内の対象の空間データを生成して、前記対象の空間データを生成し、
請求項1~13のいずれか1つに記載の方法に従って、前記空間データに基づいて、前記流れ内の前記対象が細胞凝集体であるか否かを決定する
ようにプログラムされた、集積回路。
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