JP2022525843A

JP2022525843A - 抗ｂａｇ２抗体を用いて癌を診断するための方法

Info

Publication number: JP2022525843A
Application number: JP2021547308A
Authority: JP
Inventors: ジンキム，セオン; ヤン，キュン－ミン; ジェオン，ジューン; グウェアン，サン; ヒーパーク，セオク; ウーカン，ドン
Original assignee: メドパクト，インコーポレイテッド; ヨンセイユニバーシティメディカルカリッジ，カンナムセバランスホスピタル，デパートメントオブサージェリー; ソンキュンクヮンユニバーシティ，デパートメントオブバイオロジカルサイエンシズ
Priority date: 2019-02-12
Filing date: 2020-02-12
Publication date: 2022-05-20
Also published as: US20230183324A1; CN114269779A; CA3129748A1; WO2020165794A1; EP3938788A1; BR112021015940A2; EP3938788A4; SG11202108140SA; EP3924382A1; JP2022521706A; US20230194534A1; MX2021009690A; CN114761803A; WO2020165797A1; AU2020222326A1; EP3924382A4

Abstract

本出願は、癌を診断することにおける使用のための組成物を開示し、この組成物は、ＢＡＧ２ポリペプチドまたはそのフラグメントに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。【選択図】図１

Description

発明の背景
１．発明の分野
本開示は、ＢＡＧ２ポリペプチドまたはそのフラグメントに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、癌を診断することにおける使用のための組成物、および癌を診断するために用いられる情報を提供する方法に関する。

２．一般的背景および最新技術
コシャペロンＢｃｌ－２関連アタノジーン（ＢＡＧ）タンパク質ファミリーは、細胞内タンパク質フォールディング、ストレス応答、神経細胞分化、アポトーシス、および細胞増殖を含む種々の生理学的プロセスを媒介し、様々な協調的タンパク質に機能的に結合する。抗アポトーシス活性を有するＢＡＧドメインファミリーのメンバーの１種であるＢＡＧ２は、シャペロン関連ユビキチンリガーゼであるＨｓｃ７０相互作用タンパク質のＣ－末端（ＣＨＩＰ）の負の調節因子である。ＣＨＩＰ活性の阻害を通したタンパク質調節におけるＢＡＧ２の主な役割は、ＰＩＮＫ１およびＣＦＴＲなどのシャペロンに関係するタンパク質の安定化を通して神経変性疾患および常染色体劣性遺伝疾患に関連する。ＢＡＧ２の発現がプロテアソーム阻害剤に誘導されたアポトーシスを増加させ、甲状腺癌細胞がプロテアソーム阻害剤ＭＧ１３２に暴露されるとＢＡＧ２ノックダウンがアポトーシスを部分的に阻害する、というように、ＢＡＧ２がアポトーシス促進活性を有することが報告されている。様々な変異体Ｋ－Ｒａｓに誘導された腫瘍において、ＢＡＧ２の過剰発現が強力な腫瘍遺伝子であるＳＴＫ３３タンパク質の安定化を促進し、これにより腫瘍の発達を促進することも、報告されている。しかし、これらの知見にもかかわらず、癌の進行および転移におけるＢＡＧ２の役割は、明確には知られていない。

したがって、ＢＡＧ２ポリペプチドまたはそのフラグメントに特異的に結合する抗体を用いて癌を診断するための組成物および方法を開発する必要がある。

発明の概要
本発明のこれらおよび他の目的は、本発明の以下の記載、それに付属の参照図面および添付の特許請求の範囲からより完全に理解されよう。

一態様は、ＢＡＧ２ポリペプチドまたはそのフラグメントに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、癌を診断することにおける使用のための組成物を提供する。

別の態様は、この組成物を含む、癌を診断することにおける使用のためのキットを提供する。

別の態様は、癌を診断するために用いられる情報を提供する方法を提供する。

追加の態様は、一部は以下の記載に表され、一部は以下の記載から明白となるか、または本開示で提示された実施形態の実践により学習され得る。

ＢＡＧ２ポリペプチドは、哺乳動物に由来してもよい。哺乳動物は、ヒト（ホモ・サピエンス）、マウス（ハツカネズミ）、サル、ウシ、またはウマであってもよい。ＢＡＧ２は、ＳＥＱＩＤＮＯ：６９のアミノ酸配列を含んでいてもよい。ＳＥＱＩＤＮＯ：６９のアミノ酸配列は、ＮＣＢＩ参照ＳＥＱＩＤＮＯ：ＮＭ＿００４２８２．４に対応する配列である。ＢＡＧ２タンパク質は、ＳＥＱＩＤＮＯ：６９のアミノ酸配列と生物学的に同等の活性を有する変異体を含むが、それらのアミノ酸配列は、ＳＥＱＩＤＮＯ：６９のアミノ酸配列と一致しない。ＢＡＧ２ポリペプチドは、ＳＥＱＩＤＮＯ：６９の配列に対して少なくとも６０％、例えば少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでいてもよい。ＢＡＧ２タンパク質は、少なくとも１つのアミノ酸残基、少なくとも２つのアミノ酸残基、少なくとも３つのアミノ酸残基、少なくとも４つのアミノ酸残基、少なくとも５つのアミノ酸残基、少なくとも６つのアミノ酸残基、または少なくとも７つのアミノ酸残基以外は、ＳＥＱＩＤＮＯ：６９と同じ配列を有するポリペプチドであってもよい。本明細書において、「ポリペプチド」は、「タンパク質」と互換的に用いられてもよい。

抗体は、抗原性部位に対する特異的免疫グロブリンを指す。抗体は、ＢＡＧ２ポリペプチドまたはそのフラグメントに特異的に結合するポリペプチドまたはポリペプチドの組み合わせを指す。抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、または組換え抗体、例えばＳｃＦｖフラグメント、ダイアボディ、一本鎖抗体および同様のものを包含し、全ての免疫グロブリン抗体を包含する。抗体は、２つの完全長軽鎖および２つの完全長重鎖を有する抗体の完全形態を包含してもよく、かつ２つの軽鎖および２つの重鎖を有する完全形態のインタクト抗体の構造が存在しないにもかかわらず、特異的抗原結合部位、即ち結合ドメインを有することの包含により、抗原結合機能を保持する抗体分子の機能的フラグメントを含んでいてもよい。

抗原結合フラグメントは、免疫グロブリンの全構造のフラグメントであり、それに抗原が結合できる部分を含むポリペプチドの部分を指す。例えば、抗原結合フラグメントは、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ＦｖＦ（ａｂ’）２、またはそれらの組み合わせであってもよい。

５種の重鎖γ、δ、α、μおよびεが存在し、重鎖は、抗体の型を決定してもよい。αおよびγはそれぞれ、４５０のアミノ酸を含み、μおよびεはそれぞれ、５５０のアミノ酸を含む。重鎖は、２つの領域、即ち、可変領域および定常領域を有する。

２種の軽鎖カッパおよびラムダが存在し、約２１１のアミノ酸～約２１７のアミノ酸を含んでいてもよい。軽鎖は、定常領域および可変領域を有していてもよい。

抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＳＥＱＩＤＮＯ：３３のアミノ酸配列からなる相補性決定領域（ＶＨ－ＣＤＲ）１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：３９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：４５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３とを含む重鎖可変領域、およびＳＥＱＩＤＮＯ：５１のアミノ酸配列からなる相補性決定領域（ＶＬ－ＣＤＲ）１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：５７のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：６３のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３とを含む軽鎖可変領域；

ＳＥＱＩＤＮＯ：３４のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：４０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：４６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３とを含む重鎖可変領域、およびＳＥＱＩＤＮＯ：５２のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：５８のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：６４のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３とを含む軽鎖可変領域；

ＳＥＱＩＤＮＯ：３５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：４１のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：４７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３とを含む重鎖可変領域、およびＳＥＱＩＤＮＯ：５３のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：５９のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：６５のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３とを含む軽鎖可変領域；

ＳＥＱＩＤＮＯ：３６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：４２のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：４８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３とを含む重鎖可変領域、およびＳＥＱＩＤＮＯ：５４のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：６０のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：６６のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３とを含む軽鎖可変領域；

ＳＥＱＩＤＮＯ：３７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：４３のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：４９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３とを含む重鎖可変領域、およびＳＥＱＩＤＮＯ：５５のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：６１のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：６７のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３とを含む軽鎖可変領域；および

ＳＥＱＩＤＮＯ：３８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：４４のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：５０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３とを含む重鎖可変領域、およびＳＥＱＩＤＮＯ：５６のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：６２のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：６８のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３とを含む軽鎖可変領域；またはそれらの組み合わせを含んでいてもよい。

ＳＥＱＩＤＮＯ：３９中の６番目および７番目のＸａａは、グリシン（Ｇｌｙ）またはアラニン（Ａｌａ）であってもよい。ＳＥＱＩＤＮＯ：３５中の２番目のＸａａは、チロシン（Ｔｙｒ）またはヒスチジン（Ｈｉｓ）であってもよい。ＳＥＱＩＤＮＯ：４１中の８番目のＸａａは、セリン（Ｓｅｒ）またはトレオニン（Ｔｈｒ）であってもよい。ＳＥＱＩＤＮＯ：４７中の１２番目のＸａａは、チロシン（Ｔｙｒ）またはヒスチジン（Ｈｉｓ）であってもよい。ＳＥＱＩＤＮＯ：５３中の３番目のＸａａは、メチオニン（Ｍｅｔ）またはイソロイシン（ｌｉｅ）であってもよい。ＳＥＱＩＤＮＯ：５９中の２番目のＸａａは、ＡｌａまたはＳｅｒであってもよい。

抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＳＥＱＩＤＮＯ：３３のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、６番目および７番目のＸａａがＧｌｙであるＳＥＱＩＤＮＯ：３９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：４５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、ＳＥＱＩＤＮＯ：５１のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：５７のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：６３のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、抗体もしくはその抗原結合フラグメント；または

ＳＥＱＩＤＮＯ：３８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：４４のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：５０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、ＳＥＱＩＤＮＯ：５６のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：６２のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：６８のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、抗体もしくはその抗原結合フラグメント、であってもよい。

抗体またはその抗原結合フラグメントは、２番目のＸａａがＴｙｒであるＳＥＱＩＤＮＯ：３５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、８番目のＸａａがＳｅｒであるＳＥＱＩＤＮＯ：４１のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２、および１２番目のＸａａがＨｉｓであるＳＥＱＩＤＮＯ：４７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、３番目のＸａａがＭｅｔであるＳＥＱＩＤＮＯ：５３のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１、２番目のＸａａがＡｌａであるＳＥＱＩＤＮＯ：５９のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：６５のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、抗体もしくはその抗原結合フラグメント；またはＳＥＱＩＤＮＯ：３７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：４３のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：４９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、ＳＥＱＩＤＮＯ：５５のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：６１のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：６７のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、抗体もしくはその抗原結合フラグメントであってもよい。

抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＳＥＱＩＤＮＯ：３３のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、６番目のＸａａおよび７番目のＸａａがそれぞれＡｌａおよびＧｌｙであるＳＥＱＩＤＮＯ：３９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２、ならびにＳＥＱＩＤＮＯ：４５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、ＳＥＱＩＤＮＯ：５１のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：５７のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：６３のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、抗体もしくはその抗原結合フラグメント；またはＳＥＱＩＤＮＯ：３７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：４３のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：４９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、ＳＥＱＩＤＮＯ：５５のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：６１のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：６７のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、抗体もしくはその抗原結合フラグメントであってもよい。

抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＳＥＱＩＤＮＯ：３６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：４４のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：５０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、ＳＥＱＩＤＮＯ：５６のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：６２のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：６８のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、抗体もしくはその抗原結合フラグメント；またはＳＥＱＩＤＮＯ：３７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：４３のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：４９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、ＳＥＱＩＤＮＯ：５５のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：６１のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：６７のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、抗体もしくはその抗原結合フラグメントであってもよい。

抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＳＥＱＩＤＮＯ：２１～２６から選択される任意の１種のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；ＳＥＱＩＤＮＯ：２７～３２から選択される任意の１種のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；またはその重鎖可変領域およびその軽鎖可変領域を含んでいてもよい。

抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＳＥＱＩＤＮＯ：２１の重鎖可変領域およびＳＥＱＩＤＮＯ：２７の軽鎖可変領域；ＳＥＱＩＤＮＯ：２２の重鎖可変領域およびＳＥＱＩＤＮＯ：２８の軽鎖可変領域；ＳＥＱＩＤＮＯ：２３の重鎖可変領域およびＳＥＱＩＤＮＯ：２９の軽鎖可変領域；ＳＥＱＩＤＮＯ：２４の重鎖可変領域およびＳＥＱＩＤＮＯ：３０の軽鎖可変領域；ＳＥＱＩＤＮＯ：２５の重鎖可変領域およびＳＥＱＩＤＮＯ：３１の軽鎖可変領域；もしくはＳＥＱＩＤＮＯ：２６の重鎖可変領域およびＳＥＱＩＤＮＯ：３２の軽鎖可変領域；またはそれらの組み合わせを含んでいてもよい。

ＳＥＱＩＤＮＯ：２１中の５６番目および５７番目のＸａａは、ＧｌｙまたはＡｌａであってもよい。ＳＥＱＩＤＮＯ：２３において、１番目のＸａａは、グルタミン（Ｇｉｎ）またはグルタミン酸（Ｇｌｕ）であってもよく、７番目のＸａａは、Ｓｅｒまたはプロリン（ｐｒａｌｉｎｅ）（Ｐｒｏ）であってもよく、１２番目のＸａａは、バリン（Ｖａｌ）またはアラニン（Ａｌａ）であってもよく、２７番目のＸａａは、ＴｙｒまたはＨｉｓであってもよく、５８番目のＸａａは、ＳｅｒまたはＴｈｒであってもよく、６１番目のＸａａは、アスパラギン（Ａｓｎ）またはＳｅｒであってもよく、７４番目のＸａａは、アルギニン（Ａｒｇ）またはリシン（Ｌｙｓ）であってもよく、８３番目のＸａａは、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）またはロイシン（Ｌｅｕ）であってもよく、９２番目のＸａａは、ＧｌｙまたはＡｌａであってもよく、１０８番目のＸａａは、ＨｉｓまたはＴｙｒであってもよい。ＳＥＱＩＤＮＯ：２７における５３番目のＸａａは、ｌｉｅまたはＰｈｅであってもよい。ＳＥＱＩＤＮＯ：２９において、２３番目のＸａａは、Ｍｅｔまたはｌｉｅであってもよく、４５番目のＸａａは、ＡｌａまたはＳｅｒであってもよく、７３番目のＸａａは、Ｇｌｕまたはアスパラギン酸（Ａｓｐ）であってもよく、１００番目のＸａａは、Ｍｅｔまたはｌｉｅであってもよい。

抗体またはその抗原結合フラグメントは、モノクローナル抗体であってもよい。

抗体またはその抗原結合フラグメントは、検出可能な標識、または検出可能なシグナルを発することができる標識でマーキングされてもよい。標識は、抗体に直接的または間接的にコンジュゲートされて標識された抗体またはその抗原結合フラグメントを生成する検出可能な化合物または組成物を指す。標識は、それ自体が検出可能であってもよく、検出可能な基質化合物または組成物の化学修飾を触媒してもよい。標識は、免疫蛍光標識、化学発光標識、ホスホレッセント標識、放射性標識、エピトープタグ、アビジン／ビオチン、コロイド金粒子、着色粒子、磁気粒子、クロモフォア標識、ＥＣＬ標識、酵素、または同様のものであってもよい。

抗体またはその抗原結合フラグメントは、アクセッション番号ＫＣＴＣ１３７３７８Ｐ、ＫＣＴＣ１３７３８８Ｐ、ＫＣＴＣ１３７３９８Ｐ、ＫＣＴＣ１３７４０８Ｐ、ＫＣＴＣ１３７４１８Ｐ、ＫＣＴＣ１３７４２８Ｐ、ＫＣＴＣ１３７４３８Ｐ、ＫＣＴＣ１３７４４８Ｐ、ＫＣＴＣ１３７４５８ＰおよびＫＣＴＣ１３７４６８Ｐで寄託されたハイブリドーマ細胞から選択されるハイブリドーマ細胞により生成されてもよい。

ハイブリドーマ細胞は、２種の細胞の人工的融合による腫瘍形成能を有するハイブリッド細胞を指し、一般に、Ｂ細胞と免疫化された対象から単離された形質細胞腫細胞とを融合させることにより抗体を連続的に生成するために用いられてもよい。本明細書において、ハイブリドーマ細胞は、ハイブリドーマ細胞または融合細胞と称される場合がある。

癌は、固形または非固形癌であってもよい。固形癌は、肝臓、肺、乳房および皮膚などの臓器における癌性腫瘍の発達を指す。非固形癌は、血中で発生する癌であり、血液癌とも呼ばれる。癌は、癌腫、肉腫、造血細胞由来の癌、生殖細胞腫瘍、または芽腫であってもよい。癌は、例えば乳癌、大腸癌、頭頸部癌、結腸癌、皮膚癌、膵臓癌、肺癌、胃癌、前立腺癌、膀胱癌、尿道癌、肝臓癌、腎臓癌、淡明細胞肉腫、黒色腫、脳脊髄腫瘍、脳癌、胸腺、中皮腫、食道癌、胆管癌、精巣癌、胚細胞腫瘍、甲状腺癌、副甲状腺癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、リンパ腫、骨髄異形成症候群（ＭＯＳ）、骨髄線維症、急性白血病、慢性白血病、多発性骨髄腫、ホジキン病、内分泌癌、および肉腫から選択されてもよい。

本発明者らは、抗ＢＡＧ２抗体またはその抗原結合フラグメント、詳細にはＢＡＧ２ドメインスクリーニングにより選択される抗ＢＡＧ２抗体またはその抗原結合フラグメントの組み合わせが用いられる場合、正常細胞中と異なり、乳癌細胞株、膵臓癌細胞株、多形性膠芽腫細胞株、胃癌細胞株、卵巣癌細胞株、またはびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫を含む癌細胞株中で、ＢＡＧ２の存在が同定されるか、またはそのレベルが著しく高かったことを見出した。したがって、組成物を用いることにより診断される癌は、乳癌、膵臓癌、膠芽腫、胃癌、卵巣癌、およびリンパ腫から選択されてもよい。

本発明者らは、抗ＢＡＧ２抗体またはその抗原結合フラグメント、詳細には抗ＢＡＧ２抗体またはその抗原結合フラグメントの組み合わせが用いられる場合に、ＢＡＧ２が、正常対象に比較して乳癌患者で過剰発現され、およびＢＡＧ２のレベルが高い場合、乳癌患者が、転移性乳癌を有する確率が高いことを見出した。したがって、組成物で診断された乳癌は、転移性乳癌であってもよい。

乳癌の分子サブタイプのうち、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）は、非常に攻撃的な型であり、全身処置にもかかわらず予後不良であり死亡率が高い。ＴＮＢＣは、ルミナル型またはＨＥＲ２エンリッチ型に比較して不均一型のものである。ほとんどの乳癌標的療法は、ホルモン受容体およびＨＥＲ２陽性乳癌に対する陽性転帰を示したが、ＴＮＢＣ患者はエストロゲン受容体（ＥＲ）、プロゲステロン受容体（ＰＲ）、ヒト上皮成長因子受容体（ＨＥＲ２）、または他の確定された分子標的を含む３つの型の標的受容体を欠くため、効果的処置への限定された選択肢、例えばポリＡＤＰリボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、Ｓｒｃチロシンキナーゼまたは同様のものなど、を含める必要がある。それゆえ、ＴＮＢＣ患者への不要な治療アプローチを防ぎ効果的処置を選択するために、ＴＮＢＣ患者を様々な型の乳癌患者から迅速かつ正確に識別する必要がある。

本発明者らは、抗ＢＡＧ２抗体またはその抗原結合フラグメント、詳細には抗ＢＡＧ２抗体またはその抗原結合フラグメントの組み合わせが用いられる場合、ＢＡＧ２が、乳癌患者で過剰発現され、およびＢＡＧ２のレベルが高い場合、乳癌患者が、ＴＮＢＣ型乳癌と診断される確率が高いことを見出した。したがって、方法を用いることにより診断され得る乳癌は、トリプルネガティブ乳癌またはＴＮＢＣ型乳癌であってもよい。

別の態様は、組成物を含む、癌を診断することにおける使用のためのキットを提供する。

キットは、１種または複数の他の成分の組成物、溶液、またはデバイスをさらに含んでよく、それらは、キットにより用いられる分析法、例えばウェスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡ、放射性免疫測定法、放射性免疫拡散法、オクタロニー免疫拡散法、ロケット免疫電気泳動法、組織免疫染色、免疫沈降アッセイ、補体結合法、ＦＡＧＳ、タンパク質チップ、またはそれらの組み合わせなど、に適する。例えば、試料中のＢＡＧ２の免疫複合体の、それらのそれぞれに特異的な抗体による検出のために、キットは、基質、適切な緩衝液、着色酵素もしくは蛍光物質でマークされる二次抗体、または着色基質をさらに含んでいてもよい。基質は、ニトロセルロース膜、ポリビニル樹脂で合成された９６ウェルプレート、ポリスチレン樹脂で合成された９６ウェルプレート、ガラス製スライドガラス、または同様のものであってもよく、着色酵素は、ペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、または同様のものであってもよく、蛍光物質は、蛍光イソチオシアナート（ＦＩＴＣ）、ローダミンＢ－イソチオシアナート（ＲＩＴＣ）、または同様のものであってもよく、着色基質は、２，２’－アジノ－ビス（３－エチルベンゾチアゾリン－６－スルホン酸）（ＡＢＴＳ）、ｏ－フェニレンジアミン（ＯＰＤ）、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）、または同様のものであってもよい。

方法は、対象におけるＢＡＧ２の存在を検出して対象の体内に存在する癌を診断する、癌を診断するために用いられる情報を提供する方法である。

方法は、対象から単離された試料を、ＢＡＧ２ポリペプチドまたはそのフラグメントに特異的に結合する抗体と接触させること、およびＢＡＧ２ポリペプチドまたはそのフラグメントと抗体とで形成された複合体を測定すること、を含んでいてもよい。

方法は、対象が癌を有するかどうかを決定することをさらに含んでいてもよい。情報は、対象において測定されたＢＡＧ２のレベルが、対照群で測定されたＢＡＧ２より高い、それと同じである、またはより低いかどうかについての情報であってもよい。

試料は、診断される対象から分離された生物学的試料であってもよい。生物学的試料は、細胞、臓器、細胞溶解物、全血、血液、血清、血漿、リンパ液、細胞外液、体液、尿、糞便、組織、骨髄、唾液、痰、脊髄液、またはそれらの組み合わせであってもよい。

試料は、血液、血清、血漿、またはそれらの組み合わせであってもよい。本発明者らは、ＢＡＧ２が細胞から分泌されること、およびＢＡＧ２が実際に乳癌患者の血清中の抗ＢＡＧ２抗体またはその抗原結合フラグメントを用いることにより検出されることを、実証した。それゆえ、ＢＡＧ２は、血液、血清、血漿、またはそれらの組み合わせに可溶性であってもよい。

ＢＡＧ２が対象から単離された試料中に存在する場合、ＢＡＧ２ポリペプチドまたはそのフラグメントに特異的に結合する抗体は、試料中のＢＡＧ２に結合してもよい。抗体は、例えば試料中のＢＡＧ２の存在を視覚化するために、例えばフルオロフォア、クロモフォア、または基質をクロモフォアに変換できる酵素で、標識されてもよい。

結合反応のため、試料中のＢＡＧ２は、ＢＡＧ２ポリペプチドまたはそのフラグメントに特異的に結合する抗体と複合体を形成し、その複合体から、ＢＡＧ２の存在または必要に応じてそのレベルが、当業者に知られる方法を利用することにより同定または測定されてもよい。複合体は、ウェスタンブロッティング、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）、放射性免疫測定法（ＲＩＡ）、放射免疫拡散法、オクタロニー免疫拡散法、ロケット免疫電気泳動法、組織免疫染色、免疫沈降アッセイ、補体結合法、ＦＡＧＳ、タンパク質チップ、またはそれらの組み合わせにより測定されてもよい。測定は、試料中の複合体のレベルを測定するために実施されてもよい。

対照群は、健常対象から回収された試料、または乳癌、膵臓癌、多形性膠芽腫、胃癌、卵巣癌、もしくはびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）から採取された試料であってもよい。したがって、対照群のＢＡＧ２レベルは、健常対象から採取された試料、または必要に応じて乳癌、膵臓癌、多形性膠芽腫、胃癌、卵巣癌、もしくはＤＬＢＣＬから採取された試料の中のＢＡＧ２の濃度の平均値であってもよい。

対照として用いられる試料は、診断のための試料と解剖学的に同じ場所で採取された同じ種類のものであってもよい。例えば試料が、対象の肘正中皮静脈から収集された血液である場合、対照は、対照群の正中口蓋静脈から収集された血液であってもよい。

健常対象は、任意の急性または慢性疾患、少なくとも癌、例えば乳癌、膵臓癌、多形性膠芽腫、胃癌、卵巣癌、またはＤＬＢＣＬに罹患していない対象である。

健常対象から収集された試料中のＢＡＧ２レベルは、ＢＡＧ２を実質的に含まなくてもよい。それゆえ、対照群が健常対象から得られた値を有するように設定されている例では、診断される対象がＢＡＧ２を有すること、またはその対象中のＢＡＧ２のレベルが著しく高いことが見出された場合、対象は、癌を有することが疑われてもよい。その一方で、本明細書の実施例２の第３節に示された通り、転移性乳癌患者、例えば乳癌患者のうちのＴＮＢＣ型患者の血液中で、ＢＡＧ２の存在を同定する確率が高く、ＢＡＧ２の平均値は有意に高い（図７および８）。それゆえ、対照群が乳癌患者、非転移性乳癌患者または非ＴＮＢＣ型乳癌患者から単離された試料に設定される例では、ＢＡＧ２のレベルが、診断される対象において有意に高いと決定された場合、対象は、転移性乳癌またはＴＮＢＣ型乳癌を有することが疑われてもよい。

それゆえ、一態様において、本発明は、個体における癌の存在を検出するための方法であって、個体から単離された生物学的試料を、ＢＡＧ２ポリペプチドまたはそのフラグメントに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントと接触させること、およびＢＡＧ２ポリペプチドまたはそのフラグメントと抗体またはその抗原結合フラグメントとで形成された複合体を測定すること、を含み、試料中で測定されたＢＡＧ２が陰性対照群で測定されたＢＡＧ２のレベルより高ければ、癌の存在が検出される、方法を対象とする。

本特許または出願ファイルは、有色で実行された少なくとも１つの図面を含む。有色の図面を有する本特許または特許出願公開のコピーは、要求に応じて、必要な料金の支払いを受けて、特許事務所により提供されよう。

本発明は、本明細書の以下に与えられた詳細な記載および添付の図面からより完全に理解され、添付の図面は、例示に過ぎず、このため本発明を限定するものではない。

１０種のマウスハイブリドーマ細胞から生成された抗ＢＡＧ２抗体のウェスタンブロッティングの結果を示す。抗ＢＡＧ２抗体またはそのフラグメントの完全長ＢＡＧ２ポリペプチドについてのウェスタンブロッティングの結果を示す。抗ＢＡＧ２抗体またはそのフラグメントの完全長ＢＡＧ２ポリペプチドについてのウェスタンブロッティングの結果を示す。各抗ＢＡＧ２抗体と反応するＢＡＧ２ドメインを示す。抗ＢＡＧ２抗体の考えられる９０の組み合わせにおけるＢＡＧ２タンパク質の標準曲線を示す。ＢＡＧ２タンパク質に関する選択された１４種の抗体組み合わせの特異的結合力を示す図表を示す。２Ａ１１－３Ｆ１２の抗体組み合わせおよび９Ｂ１２－３Ｇ８の抗体組み合わせを用いて観察された様々な癌細胞株におけるＢＡＧ２発現パターンの差を示す。２Ａ１１－３Ｆ１２の抗体組み合わせおよび９Ｂ１２－３Ｇ８の抗体組み合わせを用いることにより観察されたルミナル型およびＴＮＢＣ型乳癌患者の血清におけるＢＡＧ２タンパク質発現の有意差を示す。８Ｃ４－３Ｇ８の抗体組み合わせおよび１０Ｈ７－３Ｇ８の抗体組み合わせを用いることにより観察されたルミナル型およびＴＮＢＣ型乳癌患者の血清におけるＢＡＧ２タンパク質発現の有意差を示す。４種の抗体組み合わせの受信者操作特性曲線（ＲＯＣ）値および曲線下面積（ＡＵＣ）値を示す。４種の抗体組み合わせの受信者操作特性曲線（ＲＯＣ）値および曲線下面積（ＡＵＣ）値を示す。４種の抗体組み合わせの受信者操作特性曲線（ＲＯＣ）値および曲線下面積（ＡＵＣ）値を示す。４種の抗体組み合わせの受信者操作特性曲線（ＲＯＣ）値および曲線下面積（ＡＵＣ）値を示す。

好ましい実施形態の詳細な記載
以下の実施例は、本発明の例示として提供され、限定ではない。

実施例
実施例１：抗Ｂａｇ２抗体の選択、シーケンシングおよび抗原－抗体反応
１．ｂａｇ２を標的とするモノクローナル抗体の選択およびそのアミノ酸配列の解析
本発明者らは、Ｂａｇ２を標的とする抗体を選択し、それらのアミノ酸配列を解析し、抗体のそれぞれの相補性決定領域（ＣＤＲ）を決定した。

詳細には、ＳＥＱＩＤＮＯ：６９のアミノ酸配列からなるヒトＢＡＧ２タンパク質をコードするＳＥＱＩＤＮＯ：７０のヌクレオチド配列からなる遺伝子を、ｐＣＡＧＧＳプラスミドにクローニングし直鎖状にし、直鎖状にされた構築物をその後、電気ショックをあてることにより、５匹の６週齢雌ＢＡＬＢ／ｃマウスの筋肉に接種した。この構築物を、３週間間隔で３回、筋肉内に接種し、それは１００μｌのＰＢＳ中の１００μｇのＤＮＡからなった。この時、対照群のプラスミドも同じ手法に供した。治療抗体および診断抗体を生成するために、タンパク質を基にした抗原注射よりも効率的な、ＤＮＡワクチンを基にした免疫方策を実施した。血液をマウスの眼底大静脈または尾静脈から採取し、酵素免疫測定法により検査し血清抗体価を示し、脾臓を、充分な抗体価を示したマウスから、最後の免疫化の３日後に摘出した。Ｂリンパ球を、脾臓から単離し、単離されたＢリンパ球を、即ちＡＴＣＣのＳＰ２／０－Ａｇ１４細胞株と培養された骨髄腫細胞による融合が続き、それにより融合された細胞を得た。融合された細胞を、ヒポキサンチン、アミノプテリン、およびチミジンを含有するＨＡＴ培地中で培養した後、骨髄腫およびＢリンパ球のみで融合されたハイブリドーマ細胞を、およそ１３０のクローンを選択することにより得た。免疫ブロッティングによる選択工程を通して得られたハイブリドーマ細胞から、ヒトＢＡＧ２タンパク質に特異的に結合する抗体を生成する１０種のハイブリドーマ細胞を、得た。

抗Ｂａｇ２抗体の総ＲＮＡを、５×１０^６ハイブリドーマ細胞から生成し、５’－ＲＡＣＥ－ｃＤＮＡを、製造業者の使用説明に従いＳＭＡＲＴＲＡＣＥｃＤＮＡＡｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎキット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を用いることにより、１００ｎｇの総ＲＮＡから生成した。重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）をコードする領域を、ＰＣＲにより増幅し、増幅された遺伝子をｐＧＥＭ－Ｔベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ、ＵＳＡ）に挿入し、クローニングし、そのヌクレオチド配列を、自動遺伝子解析装置（ＡＢＩＰｒｉｓｍ３１０、ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍＣｏ．）を用いることにより解析した。解析された遺伝子のヌクレオチド配列を、過去に報告されたヌクレオチド配列との比較により同定し、同定されたヌクレオチド配列を、相補性決定領域ＶＨ－ＣＤＲ１、－ＣＤＲ２、および－ＣＤＲ３、ならびにＶＬ－ＣＤＲ１、－ＣＤＲ２、および－ＣＤＲ３の配列を決定することにおける使用のために人工的に翻訳した。相補性決定領域の配列を決定することを、Ｋａｂａｔのデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／）を用いることにより実施した。

結果として、ＢＡＧ２に特異的に結合する１０種の抗ＢＡＧ２抗体を、ハイブリドーマ細胞から得た。１０種の抗ＢＡＧ２抗体は、２Ａ１１、４Ｃ２、８Ｃ４、３Ｂ５、９Ｂ３、９Ｂ１２、３Ｂ１０、１０Ｈ７、３ＧＢ、および３Ｆ１２抗体であった。加えて、表１～３に示された重鎖可変領域、軽鎖可変領域およびそれらの相補性決定領域のアミノ酸配列、ならびに抗体をコードする遺伝子のヌクレオチド配列を、決定した。

２Ａ１１、４Ｃ２、および８Ｃ４抗体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：２１のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域と、ＳＥＱＩＤＮＯ：２７のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域とを含む。２Ａ１１抗体では、ＳＥＱＩＤＮＯ：２１の５６および５７番目のＸａａは、それぞれＧｌｙであり、ＳＥＱＩＤＮＯ：２７の５３番目のＸａａは、ｌｉｅである。４Ｃ２抗体では、ＳＥＱＩＤＮＯ：２１の５６番目のＸａａおよび５７番目のＸａａは、それぞれＧｌｙおよびＡｌａであり、ＳＥＱＩＤＮＯ：２７の５３番目のＸａａは、Ｐｈｅである。８Ｃ４抗体では、ＳＥＱＩＤＮＯ：２１の５６番目のＸａａおよび５７番目のＸａａは、それぞれＡｌａおよびＧｌｙであり、ＳＥＱＩＤＮＯ：２７の５３番目のＸａａは、Ｐｈｅである。

２Ａ１１、４Ｃ２、および８Ｃ４抗体のＶＨ－ＣＤＲ１、－ＣＤＲ２および－ＣＤＲ３は、それぞれＳＥＱＩＤＮＯ：３３、３９および４５のアミノ酸配列からなり、ＶＬ－ＣＤＲ１、－ＣＤＲ２および－ＣＤＲ３は、それぞれＳＥＱＩＤＮＯ：５１、５７および６３のアミノ酸配列からなる。２Ａ１１抗体では、ＳＥＱＩＤＮＯ：２１の５６および５７番目のＸａａは、それぞれＧｌｙである。４Ｃ２抗体に関しては、ＳＥＱＩＤＮＯ：２１では５６番目のＸａａは、Ｇｌｙであり、５７番目のＸａａは、Ａｌａである。８Ｃ４抗体に関しては、ＳＥＱＩＤＮＯ：２１では５６番目のＸａａは、Ａｌａであり、５７番目のＸａａは、Ｇｌｙである。

９Ｂ３、９Ｂ１２および３Ｂ１０抗体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：２３のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域と、ＳＥＱＩＤＮＯ：２９のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域とを含む。９Ｂ３抗体に関しては、ＳＥＱＩＤＮＯ：２３では１番目のＸａａは、Ｇｌｕであり、７番目のＸａａは、Ｓｅｒであり、１２番目のＸａａは、Ｖａｌであり、２７番目のＸａａは、Ｔｙｒであり、５８番目のＸａａは、Ｓｅｒであり、６１番目のＸａａは、Ａｓｎであり、７４番目のＸａａは、Ｌｙｓであり、８３番目のＸａａは、Ｐｈｅであり、９２番目のＸａａは、Ａｌａであり、１０８番目のＸａａは、Ｔｙｒである。９Ｂ３抗体に関しては、ＳＥＱＩＤＮＯ：２９では２３番目のＸａａは、ｌｉｅであり、４５番目のＸａａは、Ａｌａであり、７３番目のＸａａは、Ｇｌｕであり、１００番目のＸａａは、ｌｉｅである。９Ｂ１２抗体に関しては、ＳＥＱＩＤＮＯ：２３では１番目のＸａａは、Ｇｉｎであり、７番目のＸａａは、Ｓｅｒであり、１２番目のＸａａは、Ｖａｌであり、２７番目のＸａａは、Ｔｙｒであり、５８番目のＸａａは、Ｓｅｒであり、６１番目のＸａａは、Ａｓｎであり、７４番目のＸａａは、Ａｒｇであり、８３番目のＸａａは、Ｐｈｅであり、９２番目のＸａａは、Ｇｌｙであり、１０８番目のＸａａは、Ｈｉｓである。９Ｂ１２抗体に関しては、ＳＥＱＩＤＮＯ：２９では２３番目のＸａａは、Ｍｅｔであり、４５番目のＸａａは、Ａｌａであり、７３番目のＸａａは、Ｇｌｕであり、１００番目のＸａａは、Ｍｅｔである。３Ｂ１０抗体に関しては、ＳＥＱＩＤＮＯ：２３では１番目のＸａａは、Ｇｉｎであり、７番目のＸａａは、Ｐｒｏであり、１２番目のＸａａは、Ａｌａであり、２７番目のＸａａは、Ｈｉｓであり、５８番目のＸａａは、Ｔｈｒであり、６１番目のＸａａは、Ｓｅｒであり、７４番目のＸａａは、Ａｒｇであり、８３番目のＸａａは、Ｌｅｕであり、９２番目のＸａａは、Ｇｌｙであり、１０８番目のＸａａは、Ｈｉｓである。３Ｂ１０抗体に関しては、ＳＥＱＩＤＮＯ：２９では２３番目ではＸａａは、Ｍｅｔであり、４５番目のＸａａは、Ｓｅｒであり、７３番目のＸａａは、Ａｓｐであり、１００番目のＸａａは、ｌｉｅである。

９Ｂ３、９Ｂ１２および３Ｂ１０抗体に関しては、ＶＨ－ＣＤＲ１、－ＣＤＲ２、および－ＣＤＲ３は、それぞれＳＥＱＩＤＮＯＳ：３５、４１、および４７のアミノ酸配列からなり、ＶＬ－ＣＤＲ１、－ＣＤＲ２、および－ＣＤＲ３は、それぞれＳＥＱＩＤＮＯＳ：５３、５９、および６５のアミノ酸配列からなる。９Ｂ３抗体に関しては、ＳＥＱＩＤＮＯ：３５の２番目のＸａａは、Ｔｙｒであり、ＳＥＱＩＤＮＯ：４１の８番目のＸａａは、Ｓｅｒであり、ＳＥＱＩＤＮＯ：４７の１２番目のＸａａは、Ｔｙｒであり、ＳＥＱＩＤＮＯ：５３の３番目のＸａａは、ｌｉｅであり、ＳＥＱＩＤＮＯ：５９の２番目のＸａａは、Ａｌａである。９Ｂ１２抗体に関しては、ＳＥＱＩＤＮＯ：３５の２番目のＸａａは、Ｔｙｒであり、ＳＥＱＩＤＮＯ：４１の８番目のＸａａは、Ｓｅｒであり、ＳＥＱＩＤＮＯ：４７の１２番目のＸａａは、Ｈｉｓであり、ＳＥＱＩＤＮＯ：５３の３番目のＸａａは、Ｍｅｔであり、ＳＥＱＩＤＮＯ：５９の２番目のＸａａは、Ａｌａである。３Ｂ１０抗体に関しては、ＳＥＱＩＤＮＯ：３５の２番目のＸａａは、Ｈｉｓであり、ＳＥＱＩＤＮＯ：４１の８番目のＸａａは、Ｔｈｒであり、ＳＥＱＩＤＮＯ：４７の１２番目のＸａａは、Ｈｉｓであり、ＳＥＱＩＤＮＯ：５３の３番目のＸａａは、Ｍｅｔであり、ＳＥＱＩＤＮＯ：５９の２番目のＸａａは、Ｓｅｒである。

２．乳癌細胞における抗ＢＡＧ２抗体の抗原－抗体応答の同定
図１は、１０種のマウスハイブリドーマ細胞から生成された抗ＢＡＧ２抗体の免疫ブロッティングの結果を示す。具体的には、ヒト乳癌細胞であるＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を、１０％ＦＢＳ、１００Ｕ／ｍｌペニシリンおよび１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを含有するＤＭＥＭ（Ｗｅｌｇｅｎｅ）培地中にて、３７℃の温度で培養した。細胞をウェルから剥離し、ＰＢＳで洗浄し、１％Ｂｒｉｊ９７、５ｍＭＥＤＴＡ、０．０２ＭＨＥＰＥＳｐＨ７．３、０．１５ＭＮａＣｌ、１ｍＭＰＭＳＦ、０．５ｍＭＮａＦ、１０μｇ／ｒｎｉアプロチニン、０．２ｍＭオルトバナジン酸ナトリウムを含有する溶解緩衝溶液に溶解した。氷上での１５分のインキュベーション後に、核を、遠心分離により細胞から除去し、上清を、採取した。２０％グリセロール、４．６％ＳＯＳ、０．１２５ＭＴｒｉｓｐＨ６．８、０．１％ブロモフェノールブルーからなる２Ｘ試料緩衝液を、適当な量の上清に添加した。１０μｇのタンパク質試料を、ｍｉｎｉ－ＰｒｏｔｅａｎＩＩシステム（Ｂｉｏ－Ｒａｄ、カリフォルニア州ハーキュリーズ所在）を用いることによる、標準条件下の１２％ゲル上でのＳＯＳ－ＰＡＧＥ解析に供した。免疫ブロッティングのために、タンパク質を、ＭｉｌｌｉｐｏｒｅＰＶＤＦ膜の上に移した。ＴＢＳ中の０．１％Ｔｗｅｅｎ２０および５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）からなるブロッキング溶液を、１時間反応させた。次に一次抗体は、ハイブリドーマ細胞培養物から抽出された抗ＢＡＧ２抗体の１／２０００希釈液であり、二次抗体として用いられるヤギ抗マウスＨＲＰコンジュゲート（Ｄａｋｏ）を、１／５０００に希釈した。フィルム感光を、ＥＧＬ試薬（ＡｍｅｒｓｈａｍＰｈａｒｍａｃｉａＢｉｏｔｅｃｈ）を基質として用い暗所で実施した。感光されたバンドを、標準の分子マーカと比較して、ＢＡＧ２のサイズに対応するバンドを同定した。

結果として図１に示す通り、陽性対照として用いた市販のポリクローナル抗ＢＡＧ２抗体であるａｂ５８６８２（Ａｂｃａｍ）と比較して、抗体２Ａ１１、３Ｂ５、３Ｂ１０、３Ｆ１２、３ＧＢ、４Ｃ２、８Ｃ４、９Ｂ３、９Ｂ１２および１０Ｈ７は、ＢＡＧ２を標的とする抗原－抗体反応を示した。

次いで、それに対し１０種の抗体が先の第１節で同定されたＢＡＧ２抗原のドメインマッピングのために、約２６ｋＤａの分子量を有するＧＳＴ－エンプティベクター（ｐｃＤＮＡ３．１＋／ＧＳＴベクター、ＮｏｖｏＰｒｏＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅＩｎｃ．、中国）が導入された細胞を、陰性対照として用いた。それぞれがヒトＢＡＧ２タンパク質をコードするポリヌクレオチドとＢＡＧ２タンパク質のフラグメントをコードしたポリヌクレオチドを含む、ＧＳＴ－ＢａｇＦｕｌｌベクター、ＧＳＴ－ＢａｇＦ１ベクター、ＧＳＴ－ＢａｇＦ２ベクター、ＧＳＴ－ＢａｇＦ３ベクター、およびＧＳＴ－ＢａｇＦ４ベクターを、細胞に導入し、ベクターが導入された細胞を、培養して遺伝子を発現させ、その後、細胞溶解物を得た。細胞溶解物のために、免疫ブロッティングを１０種の抗体それぞれを用いて実施した。ヒトＢＡＧ２タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、ＳＥＱＩＤＮＯ：７０のヌクレオチド配列を有する。ＧＳＴ－ＢａｇＦ１、－ＢａｇＦ２、－ＢａｇＦ３、および－ＢａｇＦ４ベクターは、それぞれＳＥＱＩＤＮＯ：７１～７４のヌクレオチド配列からなる。

図２Ａおよび２Ｂは、抗ＢＡＧ２抗体またはそのフラグメントの完全長ＢＡＧ２ポリペプチドについての免疫ブロッティングの結果を示す。図２において、Ａは、ベクターおよびＢＡＧ２タンパク質およびそのフラグメントの図表を示し、Ｂは、免疫ブロッティングの結果を示す。詳細には、免疫ブロッティングを、以下のとおり実施した：ベクターのそれぞれを、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅトランスフェクション（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．、米国マサチューセッツ州ウォルサム所在）方法によりＨＥＫ２Ｔ細胞に導入し、得られた形質転換細胞を、１０％ＦＢＳ、１００Ｕ／ｍｌペニシリンおよび１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを含有するＤＭＥＭ（Ｗｅｌｇｅｎｅ）培地中にて、３７℃の温度で３０時間培養し、その後、細胞を単離した。単離された細胞を、図１に関連して記載されたものと同じ方法を利用して破壊し、１２％ゲル上でＳＯＳ－ＰＡＧＥ解析に供した。免疫ブロッティングのために、図１に関連して記載されたものと同じブロッキング溶液で１時間反応させた後、２ｍｇ／ｍｌの濃度を有する１０種の精製抗ＢＡＧ２抗体のそれぞれを、１／１００００希釈して一次抗体として用い、細胞に結合させた。二次抗体として用いたヤギ抗マウスＨＲＰコンジュゲートを、１／５０００希釈濃度で用い、フィルム感光を、ＥＧＬ試薬（ＡｍｅｒｓｈａｍＰｈａｒｍａｃｉａＢｉｏｔｅｃｈ）を基質として用いて暗所で実施した。標準の分子マーカサイズを発現させて、ＢＡＧ２のサイズを確認した。

結果として、図２に示された通り、各抗ＢＡＧ２抗体は、完全長ＢＡＧ２ポリペプチドまたはそのフラグメントに差別的に結合した。特に、１０種の抗ＢＡＧ２抗体のそれぞれについて、シグナルが、ＧＳＴ－ＢａｇＦｕｌｌベクター導入細胞の溶解物において、約５０ｋＤａの位置で共通して検出された。この結果は、これらの抗体の全てが完全長ＢＡＧ２抗体に結合し得ることを示す。最後に、各ＢＡＧ２抗体が反応するＢＡＧ２のドメイン領域を、同定した。

図３は、各抗ＢＡＧ２抗体と反応するＢＡＧ２ドメインを示す。図３に示された通り、９Ｂ３、９Ｂ１２、３Ｂ１０、および１０Ｈ７抗体を、ＢＡＧ２タンパク質のＮ－末端に結合させ、２Ａ１１、３Ｂ５、４Ｃ２および８Ｃ４抗体を、ＢＡＧ２タンパク質の中央領域に結合させ、３Ｆ１２および３ＧＢ抗体を、ＢＡＧ２タンパク質のＣ－末端に結合させた。Ｎ－末端は共通して、２１～６０アミノ酸のコイルドコイル領域を含み、中央領域は、１０９～１８９アミノ酸のＢＮＢ領域の一部に結合される。それゆえ、異なる部位に結合する一組の抗体を用いることにより、試料中に存在するＢＡＧ２タンパク質またはそのフラグメントを、高い感度および特異度で検出してもよい。

実施例２：抗ＢＡＧ２抗体の組み合わせのスクリーニングおよび癌診断有効度の確認

１．癌診断に有用な抗ＢＡＧ２抗体の組み合わせのスクリーニング
図４は、抗ＢＡＧ２抗体の考えられる９０の組み合わせにおけるＢＡＧ２タンパク質の標準曲線を示す。結果として、図４に示された通り、抗ＢＡＧ２抗体の考えられる組み合わせの中から、高い勾配の標準曲線を示す１４種の抗体組み合わせ、２Ａ１１－３Ｆ１２、１０Ｈ７－３Ｇ８、９Ｂ１２－３Ｇ８、１０Ｈ７－３Ｆ１２、９Ｂ８－３Ｇ８、３Ｇ８－３Ｆ１２、３Ｂ５－３Ｆ１２、３Ｇ８－４Ｃ２、３Ｆ１２－３Ｇ８、３Ｂ５－３Ｇ８、３Ｂ５－４Ｃ２、３Ｇ８－８Ｃ４、および９Ｂ３－３Ｆ１２、を選択した。

図５は、ＢＡＧ２タンパク質に関する選択された１４種の抗体組み合わせの特異的結合力を示す図表を示す。詳細には、Ｍｙｃタグ－ＢＡＧ２発現ベクターまたはＭｙｃタグ－エンプティベクターをそれぞれ、製造業者の使用説明に従いＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００（ｌｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて、ヒト乳癌細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－２３１中に形質導入した。１４種の抗体組み合わせを用いて、Ｍｙｃタグ－エンプティベクターが導入された対照細胞およびＭｙｃタグ－ＢＡＧ２発現ベクターが導入されたＢＡＧ２タンパク質を過剰発現する細胞の溶解物３０μｇから分泌されたＢＡＧ２タンパク質の相対量を、決定した。対照細胞を、ＥＶで標識し、ＢＡＧ２過剰発現細胞を、ＯＥで標識した。即ち、ＢＡＧ２過剰発現細胞および対照細胞の分泌されたＢＡＧ２タンパク質の相対量を確認することにより、ＢＡＧ２タンパク質に関する抗体組み合わせの特異的結合能を決定できる。

結果として、図５に示された通り、ＢＡＧ２タンパク質への高い特異的結合能を有する４種の抗体組み合わせ、２Ａ１１－３Ｆ１２、９Ｂ１２－３Ｇ８、８Ｃ４－３Ｇ８、および１０Ｈ７－３Ｆ１２を、選択した。

２．様々な癌の診断における選択された抗ＢＡＧ２抗体組み合わせの有効度の同定
第１節で選択された抗体組み合わせの癌診断有効度を確認するために、抗体組み合わせとＢＡＧ２の抗原抗体反応を、確認した。詳細には、ヒト２９３Ｔ細胞から生成および精製されたＮ－末端への６つのヒスタミン付着を有するヒトＢＡＧ２タンパク質を、抗原として得た。

サンドイッチ酵素免疫測定法（サンドイッチＥＬＩＳＡ）を、２Ａ１１－３Ｆ１２および９Ｂ１２－３Ｇ８抗体組み合わせのそれぞれを用いて実施した。

詳細には、サンドイッチＥＬＩＳＡを、以下の工程を通して実施した。抗体３Ｆ１２および３Ｇ８のそれぞれを１ｍｇの量で、２７μｌの１０ｍＭＮＨＳ－ビオチン（スクシンイミジルビオチン、Ｔｈｅｒｍｏｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｃａｔ＃２１４３５)と反応させて、ビオチン結合検出抗体を調製した。捕捉抗体として抗体２Ａ１１、９Ｂ１２、８Ｃ４、および１０Ｈ７のそれぞれを、ＥＬＩＳＡプレートコーティング緩衝液（Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅｍ、ＤＹ００６）を用いることにより３μｇ／ｍｌの濃度に希釈し、９６ウェルプレートの各ウェルに１００μｌの量で塗布し、その後、４℃の温度で一晩コートした。抗体コートされたプレートを、１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）緩衝液（Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅｍ、ＤＹ９９５）により室温で１時間ブロックした。ＢＡＧ２標準材料として、ヒト由来細胞株ＨＥＫ２９３Ｔ中で生成され精製されたヒトＨｉｓタグ－ＢＡＧ２組換えタンパク質（Ｙｂｉｏｌｏｇｉｃｓ、韓国所在）を、１％ＢＳＡ緩衝液を用いて１００ｎｇ／ｍｌの濃度で調製し、その後、４倍希釈して、０．０２、０．０９７、０．３１、１．５６、６．２５、および２５ｎｇ／ｍｌの標準溶液を調製した。血液試料のために、８ｍｌ以上の血液を健常人１４名、ルミナル型乳癌と診断された患者２０名およびＴＮＢＣ型乳癌と診断された患者３８名のそれぞれから収集し、その後、穏やかに浸透することにより混合し、室温で２０～３０分間放置した。その後、血液を、２，５００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。４℃未満で貯蔵された血清を、１％ＢＳＡ緩衝液を用いて１／２倍希釈した。そこからブロッキング溶液を除去したプレートの各ウェルの中に、０、０．０２、０．０９７、０．３９、１．５６、６．２５、２５、および１００ｎｇ／ｍｌのＢＡＧ２標準溶液および１／２倍希釈された患者試料１００μｌを分配し、室温で１時間反応させ、その後、洗浄緩衝液（Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅｍ、ＷＡ１２６）で洗浄した。１％ＢＳＡ緩衝液を用いることにより１：５００００に希釈されたストレプトアビジン－ＨＲＰ（Ｐｉｅｒｃｅ、２１１３０）１００μｌを、各ウェルに分配し、室温で３０分間反応させた後、洗浄緩衝液で洗浄した。３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ、Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅｍ、ＤＹ９９９）１００μｌを、各ウェルに分配し、フィーメイルカウ（ｆｅｍａｌｅｃｏｗ）において室温で１５分間反応させ、その後、それに停止溶液を添加して、反応を停止させた。患者試料中のＢＡＧ２タンパク質の濃度を、４５０ｎｍで反応溶液の吸光度を測定することにより得られた抗体の標準曲線から計算した。

図６は、抗ＢＡＧ２抗体組み合わせを用いることにより観察された、乳癌、膵臓癌、多形性膠芽腫、胃癌、卵巣癌、およびびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫を含む癌細胞株におけるＢＡＧ２発現パターンの差を示す。図６Ａは、２Ａ１１－３Ｆ１２の抗体組み合わせのサンドイッチＥＬＩＳＡの結果を示し、図６Ｂは、９Ｂ１２－３Ｇ８抗体組み合わせのサンドイッチＥＬＩＳＡの結果を示す。

図６Ａおよび６Ｂに示された通り、２Ａ１１－３Ｆ１２および９Ｂ１２－３Ｇ８抗体組み合わせが用いられた場合、ＢＡＧタンパク質は、乳癌細胞株であるＭＤＡ－ＭＢ－２３１およびＨｓ５７８Ｔ、膵臓癌細胞株であるＳＮＵ２５６４およびＰＡＮＣ１、多形性膠芽腫（ＧＢＭ）細胞株であるＵ２５１ＭＧおよびＴ９８Ｇ、胃癌細胞株であるＳＮＵ１およびＳＮＵ４８４、卵巣癌細胞株であるＳＫＯＶ３およびＡ２７８０、ならびにびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）細胞株であるＳＵ－ＤＨＬ４およびＳＵ－ＤＨＬ６を含む様々な癌細胞株において高レベルで発現された。対照的に、正常細胞株であるＴ４７Ｄ、ＳＮＵ２４６９、Ａ１７２、ＳＮＵ６２０、ＯＶＣＡＲ３、およびＵ２９３２中でＢＡＧ２タンパク質は、全く発現されないか、またはほとんど発現されなかった。言い換えれば、ＢＡＧ２タンパク質は、正常細胞に比較して、２Ａ１１－３Ｆ１２および９Ｂ１２－３Ｇ８抗体組み合わせを用いることにより乳癌、膵臓癌、多形性膠芽腫、胃癌、卵巣癌、およびびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫を含む癌細胞において有意に高度に発現されることが確認された。

それゆえ、上記の抗体組み合わせが用いられる場合、癌は、ＢＡＧ２タンパク質の発現パターンが正常細胞に比較して癌細胞で示されたＢＡＧ２タンパク質の発現パターンと類似しているかどうかを同定することにより、効果的に診断され得る。

３．乳癌の診断における選択された抗ＢＡＧ２抗体組み合わせ有効度の同定
第２節に記載された同じサンドイッチＥＬＩＳＡ法を用いることにより、ルミナル型乳癌患者とＴＮＢＣ型乳癌患者と正常対象の間の血清中ＢＡＧ２タンパク質の発現パターンの差を確認した。詳細には、健常志願者（Ｎ＝４）、ルミナル型乳癌患者（Ｎ＝４）およびＴＮＢＣ型乳癌患者（Ｎ＝３８）の血清を収集し、得られた血清中のＢＡＧ２タンパク質の発現パターンを確認した。

図７Ａおよび７Ｂおよび８Ａおよび８Ｂは、抗ＢＡＧ２抗体組み合わせを用いることにより同定されたルミナル型およびＴＮＢＣ型乳癌患者の血清における、ＢＡＧ２タンパク質発現の有意差を示す。図７Ａは、９Ｂ１２－３Ｇ８抗体組み合わせを用いる例を示し、図７Ｂは、２Ａ１１－３Ｆ１２抗体組み合わせを用いる例を示す。図８Ａは、８Ｇ４－３Ｇ８抗体組み合わせを用いる例を示し、図８Ｂは、１０Ｈ７－３Ｇ８抗体組み合わせを用いる例を示す。

図７Ａおよび７Ｂおよび８Ａおよび８Ｂに示された通り、９Ｂ１２－３Ｇ８、２Ａ１１－３Ｆ１２、８Ｇ４－３Ｇ８、および１０Ｈ７－３Ｆ１２抗体組み合わせが用いられた場合、各抗体組み合わせのｐ値は、ｐ＜０．０００１、ｐ＝０．０３７３、ｐ＝０．０００９、およびｐ＝０．０１９０であり、正常対象に比較してルミナル型およびＴＮＢＣ型乳癌患者の血清におけるＢＡＧ２タンパク質発現パターンに有意差があったことを示す。それゆえ、抗体組み合わせを利用してＢＡＧ２タンパク質発現パターンにおける有意差を観察することにより、乳癌を、効果的に診断できる。

４．乳癌診断における選択された抗ＢＡＧ２抗体組み合わせの有用性の確認
４種の抗体組み合わせのそれぞれを用いて癌診断の感度および特異度を確認するために、第２節の結果を、ＲＯＧ曲線を用いることにより示した。

図９Ａ～９０は、各抗体組み合わせの受信者操作特性曲線（ＲＯＣ）および曲線下面積（ＡＵＣ）を示す。図９Ａは、９Ｂ１２－３Ｇ８抗体組み合わせを用いる例を示し、図９Ｂは、８Ｇ４－３Ｇ８抗体組み合わせを用いる例を示し、図９Ｇは、２Ａ１１－３Ｆ１２抗体組み合わせを用いる例を示し、図９０は、１０Ｈ７－３Ｆ１２抗体組み合わせを用いる例を示す。

図９Ａ～９０に示された通り、９Ｂ１２－３Ｇ８、８Ｇ４－３Ｇ８、２Ａ１１－３Ｆ１２および１０Ｈ７－３Ｇ８抗体組み合わせが用いられた場合、ＡＵＧ値は、０．８５９６、０．８３６８、０．８５５４、および０．６７３６であった。即ち、全ての抗体組み合わせの例で、ＲＯＧ曲線におけるＡＵＧ値は、およそ０．７であり、９Ｂ１２－３Ｇ８、８Ｇ４－３Ｇ８、および２Ａ１１－３Ｆ１２抗体組み合わせが用いられた場合、ＡＵＧ値は、０．８～０．９であると測定された。これらの結果は、高い感度および特異度を利用することにより、各抗体組み合わせを用いて乳癌を診断し得ることを示す。それゆえ、この４種の抗体組み合わせを、乳癌を診断するために、有益に用いることができる。

一態様による抗ＢＡＧ２抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、癌を診断することにおける使用のための組成物は、癌を診断するために用いられる情報を提供してもよい。

別の態様による癌を診断するために用いられる情報を提供する方法によれば、組織を収集する従来の診断方法と異なり、血中のＢＡＧ２ポリペプチドの存在またはレベルを、血液から同定または測定でき、診断有用性は、高い。したがって、様々な組織体が、癌の診断のために方法を用いることができる。

［アクセッション番号］
寄託：韓国生命工学研究院（ＫｏｒｅａＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅａｎｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）
アクセッション番号：ＫＣＴＣ１３７３７ＢＰ
寄託日：２０１８年１１月２８日

寄託：韓国生命工学研究院
アクセッション番号：ＫＣＴＣ１３７３８ＢＰ
寄託日：２０１８年１１月２８日

寄託：韓国生命工学研究院
アクセッション番号：ＫＣＴＣ１３７３９ＢＰ
寄託日：２０１８年１１月２８日

寄託：韓国生命工学研究院

アクセッション番号：ＫＣＴＣ１３７４０ＢＰ
寄託日：２０１８年１１月２８日

寄託：韓国生命工学研究院
アクセッション番号：ＫＣＴＣ１３７４１ＢＰ
寄託日：２０１８年１１月２８日

寄託：韓国生命工学研究院
アクセッション番号：ＫＣＴＣ１３７４２ＢＰ
寄託日：２０１８年１１月２８日

寄託：韓国生命工学研究院
アクセッション番号：ＫＣＴＣ１３７４３ＢＰ
寄託日：２０１８年１１月２８日

寄託：韓国生命工学研究院
アクセッション番号：ＫＣＴＣ１３７４４ＢＰ
寄託日：２０１８年１１月２８日

寄託：韓国生命工学研究院
アクセッション番号：ＫＣＴＣ１３７４５ＢＰ
寄託日：２０１８年１１月２８日

寄託：韓国生命工学研究院
アクセッション番号：ＫＣＴＣ１３７４６ＢＰ
寄託日：２０１８年１１月２８日

本明細書に引用された参考資料は全て、全体として参照により組み入れられる。

当業者は、日常的実験法を利用するだけで、本明細書に具体的に記載された発明の具体的実施形態の多くの均等物を認識する、または確かめることができるであろう。

ＳＥＱＩＤＮＯ：２１中の５６番目および５７番目のＸａａは、ＧｌｙまたはＡｌａであってもよい。ＳＥＱＩＤＮＯ：２３において、１番目のＸａａは、グルタミン（Ｇｌｎ）またはグルタミン酸（Ｇｌｕ）であってもよく、７番目のＸａａは、Ｓｅｒまたはプロリン（Ｐｒｏ）であってもよく、１２番目のＸａａは、バリン（Ｖａｌ）またはアラニン（Ａｌａ）であってもよく、２７番目のＸａａは、ＴｙｒまたはＨｉｓであってもよく、５８番目のＸａａは、ＳｅｒまたはＴｈｒであってもよく、６１番目のＸａａは、アスパラギン（Ａｓｎ）またはＳｅｒであってもよく、７４番目のＸａａは、アルギニン（Ａｒｇ）またはリシン（Ｌｙｓ）であってもよく、８３番目のＸａａは、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）またはロイシン（Ｌｅｕ）であってもよく、９２番目のＸａａは、ＧｌｙまたはＡｌａであってもよく、１０８番目のＸａａは、ＨｉｓまたはＴｙｒであってもよい。ＳＥＱＩＤＮＯ：２７における５３番目のＸａａは、ＩｌｅまたはＰｈｅであってもよい。ＳＥＱＩＤＮＯ：２９において、２９番目のＸａａは、ＭｅｔまたはＩｌｅであってもよく、５１番目のＸａａは、ＡｌａまたはＳｅｒであってもよく、７９番目のＸａａは、Ｇｌｕまたはアスパラギン酸（Ａｓｐ）であってもよく、１０６番目のＸａａは、ＭｅｔまたはＩｌｅであってもよい。

９Ｂ３、９Ｂ１２および３Ｂ１０抗体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：２３のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域と、ＳＥＱＩＤＮＯ：２９のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域と、を含む。９Ｂ３抗体に関しては、ＳＥＱＩＤＮＯ：２３では１番目のＸａａは、Ｇｌｕであり、７番目のＸａａは、Ｓｅｒであり、１２番目のＸａａは、Ｖａｌであり、２７番目のＸａａは、Ｔｙｒであり、５８番目のＸａａは、Ｓｅｒであり、６１番目のＸａａは、Ａｓｎであり、７４番目のＸａａは、Ｌｙｓであり、８３番目のＸａａは、Ｐｈｅであり、９２番目のＸａａは、Ａｌａであり、１０８番目のＸａａは、Ｔｙｒである。９Ｂ３抗体に関しては、ＳＥＱＩＤＮＯ：２９では２９番目のＸａａは、ｌｌｅであり、５１番目のＸａａは、Ａｌａであり、７９番目のＸａａは、Ｇｌｕであり、１０６番目のＸａａは、ｌｌｅである。９Ｂ１２抗体に関しては、ＳＥＱＩＤＮＯ：２３では１番目のＸａａは、Ｇｉｎであり、７番目のＸａａは、Ｓｅｒであり、１２番目のＸａａは、Ｖａｌであり、２７番目のＸａａは、Ｔｙｒであり、５８番目のＸａａは、Ｓｅｒであり、６１番目のＸａａは、Ａｓｎであり、７４番目のＸａａは、Ａｒｇであり、８３番目のＸａａは、Ｐｈｅであり、９２番目のＸａａは、Ｇｌｙであり、１０８番目のＸａａは、Ｈｉｓである。９Ｂ１２抗体に関しては、ＳＥＱＩＤＮＯ：２９では２９番目のＸａａは、Ｍｅｔであり、５１番目のＸａａは、Ａｌａであり、７９番目のＸａａは、Ｇｌｕであり、１０６番目のＸａａは、Ｍｅｔである。３Ｂ１０抗体に関しては、ＳＥＱＩＤＮＯ：２３では１番目のＸａａは、Ｇｌｎであり、７番目のＸａａは、Ｐｒｏであり、１２番目のＸａａは、Ａｌａであり、２７番目のＸａａは、Ｈｉｓであり、５８番目のＸａａは、Ｔｈｒであり、６１番目のＸａａは、Ｓｅｒであり、７４番目のＸａａは、Ａｒｇであり、８３番目のＸａａは、Ｌｅｕであり、９２番目のＸａａは、Ｇｌｙであり、１０８番目のＸａａは、Ｈｉｓである。３Ｂ１０抗体に関しては、ＳＥＱＩＤＮＯ：２９では２９番目ではＸａａは、Ｍｅｔであり、５１番目のＸａａは、Ｓｅｒであり、７９番目のＸａａは、Ａｓｐであり、１０６番目のＸａａは、ｌｌｅである。

Claims

ＢＡＧ２ポリペプチドまたはそのフラグメントに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、癌を診断することにおける使用のための組成物。
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、
ＳＥＱＩＤＮＯ：３３のアミノ酸配列からなる相補性決定領域（ＶＨ－ＣＤＲ）１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：３９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：４５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、およびＳＥＱＩＤＮＯ：５１のアミノ酸配列からなる相補性決定領域（ＶＬ－ＣＤＲ）１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：５７のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：６３のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域、
ＳＥＱＩＤＮＯ：３４のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：４０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：４６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、およびＳＥＱＩＤＮＯ：５２のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：５８のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：６４のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域、
ＳＥＱＩＤＮＯ：３５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：４１のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：４７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、およびＳＥＱＩＤＮＯ：５３のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：５９のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：６５のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域、
ＳＥＱＩＤＮＯ：３６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：４２のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：４８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、およびＳＥＱＩＤＮＯ：５４のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：６０のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：６６のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域、
ＳＥＱＩＤＮＯ：３７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：４３のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：４９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、およびＳＥＱＩＤＮＯ：５５のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：６１のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：６７のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域、およびＳＥＱＩＤＮＯ：３８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：４４のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：５０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、およびＳＥＱＩＤＮＯ：５６のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：６２のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：６８のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域、
を含む、請求項１に記載の組成物。
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、
ＳＥＱＩＤＮＯ：２１～２６から選択される任意の１種のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と；
ＳＥＱＩＤＮＯ：２７～３２から選択される任意の１種のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
を含む、請求項１に記載の組成物。
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、
ＳＥＱＩＤＮＯ：３３のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、６番目のＸａａおよび７番目のＸａａがそれぞれＧｌｙであるＳＥＱＩＤＮＯ：３９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：４５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域とＳＥＱＩＤＮＯ：５１のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：５７のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：６３のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗体またはその抗原結合フラグメント；ならびに
ＳＥＱＩＤＮＯ：３８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：４４のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：５０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、ＳＥＱＩＤＮＯ：５６のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：６２のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：６８のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗体またはその抗原結合フラグメント、
を含む、請求項１に記載の組成物。
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、
２番目のＸａａがＴｙｒであるＳＥＱＩＤＮＯ：３５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、８番目のＸａａがＳｅｒであるＳＥＱＩＤＮＯ：４１のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２、および１２番目のＸａａがＨｉｓであるＳＥＱＩＤＮＯ：４７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と３番目のＸａａがＭｅｔであるＳＥＱＩＤＮＯ：５３のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１、２番目のＸａａがＡｌａであるＳＥＱＩＤＮＯ：５９のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：６５のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗体またはその抗原結合フラグメント；ならびに
ＳＥＱＩＤＮＯ：３７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：４３のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：４９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、ＳＥＱＩＤＮＯ：５５のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：６１のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：６７のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗体またはその抗原結合フラグメント、
を含む、請求項１に記載の組成物。
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、
ＳＥＱＩＤＮＯ：３３のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、６番目のＸａａおよび７番目のＸａａがそれぞれＡｌａおよびＧｌｙであるＳＥＱＩＤＮＯ：３９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２、ならびにＳＥＱＩＤＮＯ：４５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域とＳＥＱＩＤＮＯ：５１のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：５７のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：６３のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗体またはその抗原結合フラグメント；ならびに
ＳＥＱＩＤＮＯ：３７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：４３のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：４９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、ＳＥＱＩＤＮＯ：５５のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：６１のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：６７のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗体またはその抗原結合フラグメント、
を含む、請求項１に記載の組成物。
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、
ＳＥＱＩＤＮＯ：３６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：４４のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：５０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、ＳＥＱＩＤＮＯ：５６のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：６２のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：６８のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗体またはその抗原結合フラグメント；ならびに
ＳＥＱＩＤＮＯ：３７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：４３のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：４９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、ＳＥＱＩＤＮＯ：５５のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：６１のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：６７のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗体またはその抗原結合フラグメント、
を含む、請求項１に記載の組成物。
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、モノクローナル抗体である、請求項１に記載の組成物。
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、検出可能な標識、または検出可能なシグナルを発することができる標識で標識される、請求項１に記載の組成物。
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、アクセッション番号ＫＣＴＣ１３７３７ＢＰ、ＫＣＴＣ１３７３８８Ｐ、ＫＣＴＣ１３７３９８Ｐ、ＫＣＴＣ１３７４０ＢＰ、ＫＣＴＣ１３７４１ＢＰ、ＫＣＴＣ１３７４２ＢＰ、ＫＣＴＣ１３７４３ＢＰ、ＫＣＴＣ１３７４４ＢＰ、ＫＣＴＣ１３７４５ＢＰおよびＫＣＴＣ１３７４６ＢＰで寄託されたハイブリドーマ細胞から選択されるハイブリドーマ細胞により生成される、請求項１に記載の組成物。
前記癌が、例えば、乳癌、大腸癌、頭頸部癌、結腸癌、皮膚癌、膵臓癌、肺癌、胃癌、前立腺癌、膀胱癌、尿道癌、肝臓癌、腎臓癌、淡明細胞肉腫、黒色腫、脳脊髄腫瘍、脳癌、胸腺、中皮腫、食道癌、胆管癌、精巣癌、胚細胞腫瘍、甲状腺癌、副甲状腺癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、リンパ腫、骨髄異形成症候群（ＭＯＳ）、骨髄線維症、急性白血病、慢性白血病、多発性骨髄腫、ホジキン病、内分泌癌、および肉腫から選択される、請求項１に記載の組成物。
請求項１～１１のいずれか１項に記載の組成物を含む、癌を診断することにおける使用のためのキット。
対象の癌を診断するために用いられる情報を提供する方法であって、前記対象から単離された試料をＢＡＧ２ポリペプチドまたはそのフラグメントに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントと接触させること、および前記ＢＡＧ２ポリペプチドまたはそのフラグメントと前記抗体またはその抗原結合フラグメントの形成された複合体を測定すること、を含む、方法。
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、
ＳＥＱＩＤＮＯ：３３のアミノ酸配列からなる相補性決定領域（ＶＨ－ＣＤＲ）１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：３９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：４５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、およびＳＥＱＩＤＮＯ：５１のアミノ酸配列からなる相補性決定領域（ＶＬ－ＣＤＲ）１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：５７のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：６３のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域、
ＳＥＱＩＤＮＯ：３４のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：４０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：４６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、およびＳＥＱＩＤＮＯ：５２のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：５８のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：６４のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域、
ＳＥＱＩＤＮＯ：３５のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：４１のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：４７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、およびＳＥＱＩＤＮＯ：５３のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：５９のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：６５のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域、
ＳＥＱＩＤＮＯ：３６のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：４２のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：４８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、およびＳＥＱＩＤＮＯ：５４のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：６０のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：６６のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域、
ＳＥＱＩＤＮＯ：３７のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：４３のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：４９のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、および
ＳＥＱＩＤＮＯ：５５のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：６１のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：６７のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域、ならびに
ＳＥＱＩＤＮＯ：３８のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：４４のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：５０のアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、およびＳＥＱＩＤＮＯ：５６のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：６２のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：６８のアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域、
を含む、請求項１３に記載の方法。
前記試料が、生物学的試料である、請求項１３に記載の方法。
前記生物学的試料が、細胞、臓器、細胞溶解物、全血、血液、血清、血漿、リンパ液、細胞外液、体液、尿、糞便、組織、骨髄、唾液、痰、脊髄液、またはそれらの組み合わせである、請求項１５に記載の方法。
前記癌が、乳癌、大腸癌、頭頸部癌、結腸癌、皮膚癌、膵臓癌、肺癌、胃癌、前立腺癌、膀胱癌、尿道癌、肝臓癌、腎臓癌、淡明細胞肉腫、黒色腫、脳脊髄腫瘍、脳癌、胸腺、中皮腫、食道癌、胆管癌、精巣癌、胚細胞腫瘍、甲状腺癌、副甲状腺癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、リンパ腫、骨髄異形成症候群、骨髄線維症、急性白血病、慢性白血病、多発性骨髄腫、ホジキン病、内分泌癌、および肉腫から選択される、請求項１３に記載の方法。
前記情報が、前記対象において測定された前記ＢＡＧ２のレベルが陰性対照群で測定されたＢＡＧ２より高い、それと同じであるまたはより低いかどうかについてである、請求項１３に記載の方法。
個体における癌の存在を検出するための方法であって、
前記個体から単離された生物学的試料をＢＡＧ２ポリペプチドまたはそのフラグメントに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントと接触させること、および
前記ＢＡＧ２ポリペプチドまたはそのフラグメントと前記抗体またはその抗原結合フラグメントの形成された複合体を測定することであって、前記試料中で測定された前記ＢＡＧ２が陰性対照群で測定されたＢＡＧ２のレベルより高ければ癌の存在が検出される、測定すること
を含む、方法。