JP2022525621A - サイトカイン基盤免疫細胞およびその免疫治療用途 - Google Patents

Abstract

【課題】サイトカイン基盤免疫細胞およびその免疫治療用途の提供。【解決手段】サイトカイン基盤免疫細胞およびその免疫治療用途に関し、一態様による免疫細胞によれば、細胞の表面にサイトカインをリンカーにより連結した形態で設計し、サイトカインが免疫細胞を持続的に刺激して増殖および活性化を誘導すると共に、前記サイトカインが周辺細胞に影響を及ぼさず、副作用を最小化できる効果がある。【選択図】図１

Description

本発明は、サイトカイン基盤免疫細胞およびその免疫治療用途に関する。

免疫細胞を用いた抗がん治療は、従来１世代の抗がん治療剤で発生する全身毒性または２世代の抗がん治療剤の再発の危険などの副作用の問題が顕著に少なくて、抗がん効果の優秀性の観点から、従来治療剤に比べて優れていて、最近では、大きな関心を受けている分野である。

その中で、ＮＫ細胞を用いた免疫細胞治療は、第４の抗がん治療と知られた抗がん免疫細胞治療療法の一つであり、副作用なしに他人の免疫細胞を用いることができる唯一の細胞治療という長所を有している。多様な免疫細胞の中でも、ナチュラルキラー細胞は、Ｔ細胞とは異なって、患者本人の細胞でない場合にも、細胞治療剤として投与が可能であり、そのため、相対的に少ない費用で治療剤として開発および利用が可能である。また、細胞毒性が高いため、従来Ｔ細胞を用いて効果を確認した血液がんだけでなく、固形がんの治療にも活用が可能で、より多様な種類のがんの治療のための細胞治療剤としての潜在力が大きい。

去る１０年あまりの間に患者の免疫システムを用いた腫瘍免疫治療が着実に発展しており、これを用いた細胞治療剤も商業化されている。最近では、ＮＫ細胞を健康な正常ヒトの血液から分離、培養し、がん患者に注入して治療する細胞治療剤が開発され、これについての大量培養工程などが活発に研究されている。特に、従来はインターロイキン－２のようなサイトカインを用いてナチュラルキラー細胞を増殖および活性化させた。インターロイキン－２が存在しなければ、ナチュラルキラー細胞は死ぬことになるので、ナチュラルキラー細胞にインターロイキン－２遺伝子を導入し、これを分泌するようにしたり、インターロイキン－２を外部から供給して、ナチュラルキラー細胞を増殖および活性化させた。

しかしながら、このような方式は、高濃度のインターロイキン－２が炎症反応を誘発する可能性があり、インターロイキン－２を分泌する細胞の場合、局所部位で周辺細胞に影響を及ぼして、副作用の可能性が存在した。

これより、ナチュラルキラー細胞の増殖および活性化のためのサイトカインを用いながらも、副作用を起こさないようにするサイトカイン基盤ナチュラルキラー細胞の開発が要求されている。

本発明の一態様は、細胞膜貫通ドメイン；サイトカイン；および前記サイトカインを前記細胞膜貫通ドメインに連結するためのペプチドリンカーを含む遺伝的に操作された免疫細胞を提供する。

本発明の他の態様は、前記免疫細胞またはその細胞集団を有効成分として含む細胞治療剤を提供する。

本発明のさらに他の態様は、前記免疫細胞またはその細胞集団を有効成分として含むがんの予防または治療のための薬学的組成物を提供する。

本発明のさらに他の態様は、前記免疫細胞またはその細胞集団を有効成分として含む感染性疾患の予防または治療のための薬学的組成物を提供する。

本発明のさらに他の態様は、前記免疫細胞またはその細胞集団をそれを必要とする個体に投与する段階を含むがんまたは感染性疾患を予防または治療する方法を提供する。

本発明のさらに他の態様は、がんまたは感染性疾患の予防または治療用薬剤の製造のための前記免疫細胞またはその細胞集団の用途を提供する。

本発明の一態様は、細胞膜貫通ドメイン；サイトカイン；および前記サイトカインを前記細胞膜貫通ドメインに連結するためのペプチドリンカーを含む遺伝的に操作された免疫細胞を提供する。

本明細書において使用される用語「細胞膜貫通ドメイン（Ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ ｄｏｍａｉｎ）」は、細胞膜を突き破って存在するタンパク質において細胞膜を貫通する領域を意味し、大部分は、αヘリックス構造を有する疎水性アミノ酸からなると知られている。前記細胞膜貫通ドメインは、標的細胞の細胞膜または原形質膜にサイトカインを固定させ、これに結合したサイトカインを標的細胞の表面にディスプレイ（ｄｉｓｐｌａｙ）させたり、サイトカインを標的細胞の細胞膜受容体に結合させたりすることによって、サイトカインによる持続的な刺激を可能にする役割をすることができる。前記細胞膜貫通ドメインは、受容体チロシンキナーゼ（Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅｓ：ＲＴＫｓ）の細胞膜貫通ドメインであってもよい。より具体的に、チロシンキナーゼの細胞膜貫通ドメインは、上皮成長因子受容体、インスリン受容体、血小板由来成長因子受容体、血管内皮成長因子受容体、線維芽細胞成長因子受容体、コレシストキニン（Ｃｈｏｌｅｃｙｓｔｏｋｉｎｉｎ：ＣＣＫ）受容体、神経栄養因子（Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ：ＮＧＦ）受容体、肝細胞成長因子（Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ：ＨＧＦ）受容体、エプリン（Ｅｐｈｒｉｎ：Ｅｐｈ）受容体、アンジオポエチン受容体、およびＲＹＫ（ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ）受容体からなる群から選択されたいずれか一つの受容体の細胞膜貫通ドメインであってもよい。

本明細書において使用される用語「サイトカイン」は、細胞シグナル伝達の役割をするタンパク質（５～２０ｋＤａ）を意味する。サイトカインは、細胞により放出され、サイトカインを放出する細胞および／または他の細胞の挙動に影響を与える。サイトカインの非制限的な例としては、ケモカイン、インターフェロン、インターロイキン、リンホカイン、腫瘍壊死因子、モノカイン、およびコロニー刺激因子が含まれる。サイトカインは、免疫細胞、たとえば、マクロファージ、Ｂリンパ球、Ｔリンパ球、肥満細胞および単核球、内皮細胞、線維芽細胞および間質細胞を含む（しかしながら、これらに制限されるものではない）広範囲な細胞により生成されうる。サイトカインは、一つ以上の類型の細胞により生成されうる。サイトカインは、受容体を介して作用し、免疫系で特に重要であり、体液性および細胞性免疫反応間の均衡を調節し、細胞集団の成熟、成長および反応性（ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ）を調節する。本明細書のサイトカインは、自然発生サイトカインであってもよく、または自然発生サイトカインの突然変異バージョンであってもよい。本出願において使用される用語「自然発生」は、また、野生型と呼ばれ、対立遺伝子変種を含む。自然発生サイトカインの突然変異されたバージョンまたは「突然変異」は、サイトカインの機能、活性および／または特異性を変化させるために、自然発生配列に対してなる特定の突然変異を指す。一具体例において、突然変異は、サイトカインの機能、活性および／または特異性を向上させることができる。さらに他の具体例において、突然変異は、サイトカインの機能、活性および／または特異性を減少させることができる。突然変異は、サイトカインの一つ以上のアミノ酸残基の欠失または付加を含むことができる。

前記サイトカインは、ＢＭＰ（Ｂｏｎｅ ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ）ファミリー、ＣＣＬ（Ｃｈｅｏｍｋｉｎｅ ｌｉｇａｎｄｓ）ファミリー、ＣＭＴＭ（ＣＫＬＦ－ｌｉｋｅ ＭＡＲＶＥＬ ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ ｄｏｍａｉｎ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｍｅｍｂｅｒ）ファミリー、ＣＸＣＬ（Ｃ－Ｘ－Ｃ ｍｏｔｉｆ ｌｉｇａｎｄ）ファミリー、ＧＤＦ（Ｇｒｏｗｔｈ／ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ）ファミリー、成長ホルモン、ＩＦＮ（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ）ファミリー、ＩＬ（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ）ファミリー、ＴＮＦ（Ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒｓ）ファミリー、ＧＰＩ（ｇｌｙｃｏｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ）、ＳＬＵＰＲ－１（Ｓｅｃｒｅｔｅｄ Ｌｙ－６／ｕＰＡＲ－Ｒｅｌａｔｅｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ １）、ＳＬＵＰＲ－２（Ｓｅｃｒｅｔｅｄ Ｌｙ－６／ｕＰＡＲ－Ｒｅｌａｔｅｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ ２）およびこれらの組み合わせからなる群から選択されるいずれか一つであってもよい。

一具体例において、前記サイトカインは、インターロイキンまたはその突然変異である。多数のインターロイキンは、補助ＣＤ４ Ｔリンパ球、そして、単核球、マクロファージ、および内皮細胞により合成される。インターロイキンは、ＴおよびＢリンパ球および造血細胞の発達および分化を促進させることができる。インターロイキンの非制限的な例としては、ＩＬ１、ＩＬ２、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ８（ＣＸＣＬ８）、ＩＬ９、ＩＬ１０、ＩＬ１１、ＩＬ１２、ＩＬ１３、ＩＬ１４、ＩＬ１５、ＩＬ１６、ＩＬ１７、ＩＬ１８、ＩＬ１９、ＩＬ２０、ＩＬ２１、ＩＬ２２、ＩＬ２３、ＩＬ２４、ＩＬ２５、ＩＬ２６、ＩＬ２７、ＩＬ２８、ＩＬ２９、ＩＬ３０、ＩＬ３１、ＩＬ３２、ＩＬ３３、ＩＬ３５、またはＩＬ３６が含まれる。したがって、特定の具体例において、前記サイトカインは、ＩＬ１、ＩＬ２、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ８（ＣＸＣＬ８）、ＩＬ９、ＩＬ１０、ＩＬ１１、ＩＬ１２、ＩＬ１３、ＩＬ１４、ＩＬ１５、ＩＬ１６、ＩＬ１７、ＩＬ１８、ＩＬ１９、ＩＬ２０、ＩＬ２１、ＩＬ２２、ＩＬ２３、ＩＬ２４、ＩＬ２５、ＩＬ２６、ＩＬ２７、ＩＬ２８、ＩＬ２９、ＩＬ３０、ＩＬ３１、ＩＬ３２、ＩＬ３３、ＩＬ３５、またはＩＬ３６の野生型および突然変異型を含む（しかしながら、これらに制限されるものではない）インターロイキンまたはその突然変異である。1つの特定の具体例において、前記サイトカインは、ＩＬ２またはその突然変異である。ＩＬ２は、反応Ｔ細胞の増殖を誘導するリンホカインである。また、これは、受容体特異的結合を通じて、成長因子および抗体生成刺激剤として一部Ｂ細胞に作用する。ＩＬ２タンパク質は、糖化した単一ポリペプチドとして分泌され、その活性のためには、シグナル配列の切断が必要である。ＩＬ２の構造は、２本のより短いヘリックスおよび不明確に定義された複数のループにより連接した（ｆｌａｎｋｅｄ）４本のヘリックス（Ａ～Ｄと命名）バンドルを含む。ヘリックスＡ、そしてヘリックスＡとＢの間のループ領域での残基が受容体の結合に重要である。２次構造分析は、ＩＬ４および顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭＣＳＦ）に対する類似性を提示する。１つの特定の具体例において、本組成物のサイトカインは、ＩＬ２またはその変異体である。変異体は、切頭されたまたは突然変異されたＩＬ２であってもよい。

他の具体例において、前記サイトカインは、インターフェロンサブファミリーサイトカインまたはその突然変異である。インターフェロンがシグナルを伝達する受容体類型を基準として、ヒトインターフェロンは、以下のような三つの主要類型に分類されてきた：Ｉ型ＩＦＮ、ＩＩ型ＩＦＮ、およびＩＩＩ型ＩＦＮ。Ｉ型ＩＦＮは、ＩＦＮＡＲ１およびＩＦＮＡＲ２鎖で構成されるＩＦＮ－α／β受容体（ＩＦＮＡＲ）と公知となっている特異的細胞表面受容体複合体に結合する。ヒトに存在するＩ型インターフェロンの非制限的な例としては、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－ε、ＩＦＮ－κおよびＩＦＮ－ωが挙げられる。したがって、特定の具体例において、サイトカインは、野生型およびＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－ε、ＩＦＮ－κおよびＩＦＮ－ωの突然変異型を含む（しかしながら、これらに制限されるものではない）Ｉ型ＩＦＮサイトカインまたはその突然変異である。ＩＩ型ＩＦＮは、ＩＦＮＧＲ１およびＩＦＮＧＲ２鎖で構成されるＩＦＮＧＲに結合する。ヒトに存在するＩＩ型インターフェロンの非制限的な例としては、ＩＦＮ－γが挙げられる。したがって、特定の具体例において、サイトカインは、野生型およびＩＦＮ－γの突然変異型を含む（しかしながら、これらに制限されるものではない）ＩＩ型ＩＦＮサイトカインまたはその突然変異である。ＩＩＩ型ＩＦＮは、ＩＬ１０Ｒ２（ＣＲＦ２－４とも命名される）およびＩＦＮＬＲ１（ＣＲＦ２－１２とも命名される）で構成される受容体複合体を介してシグナルを伝達する。ＩＩＩ型インターフェロンの非制限的な例としては、ＩＦＮ－λ１、ＩＦＮ－λ２およびＩＦＮ－λ３（また、それぞれＩＬ２９、ＩＬ２８ＡおよびＩＬ２８Ｂにも呼ばれる）が含まれる。したがって、特定の具体例において、本組成物のサイトカインは、野生型およびＩＦＮ－λ１、ＩＦＮ－λ２およびＩＦＮ－λ３の突然変異型を含む（しかしながら、これらに制限されるものではない）ＩＩＩ型ＩＦＮサイトカインまたはその突然変異である。

他の具体例において、前記サイトカインは、腫瘍壊死因子スーパーファミリー（ＴＮＦＳＦ）の構成員、またはその突然変異である。ＴＮＦＳＦ構成員は、主に免疫細胞により発現する前炎症性サイトカインで炎症状態を誘導し、免疫細胞機能を刺激する。ＴＮＦ（ＴＮＦα）、ＣＤ４０Ｌ（ＴＮＦＳＦ５）、ＣＤ７０（ＴＮＦＳＦ７；ＣＤ２７Ｌ）、ＥＤＡ、ＦＡＳＬ（ＴＮＦＳＦ６；Ｆａｓリガンド）、ＬＴＡ（ＴＮＦＳＦ１；リンホトキシン－α）、ＬＴＢ（ＴＮＦＳＦ３；リンホトキシン－β）、ＴＮＦＳＦ４（ＯＸ４０Ｌ）、ＴＮＦＳＦ８（ＣＤ１５３）、ＴＮＦＳＦ９（４－１ＢＢＬ）、ＴＮＦＳＦ１０（ＴＲＡＩＬ）、ＴＮＦＳＦ１１（ＲＡＮＫＬ；核内因子κＢリガンドの受容体活性化剤）、ＴＮＦＳＦ１２（ＴＷＥＡＫ）、ＴＮＦＳＦ１３、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＴＮＦＳＦ１４、ＴＮＦＳＦ１５、ＴＮＦＳＦ１８を含む（しかしながら、これらに制限されるものではない）最小１８個のＴＮＦＳＦ相同体が存在する。したがって、特定の具体例において、本組成物のサイトカインは、ＴＮＦ（ＴＮＦα）、ＣＤ４０Ｌ（ＴＮＦＳＦ５）、ＣＤ７０（ＴＮＦＳＦ７；ＣＤ２７Ｌ）、ＥＤＡ、ＦＡＳＬ（ＴＮＦＳＦ６）、ＬＴＡ（ＴＮＦＳＦ１）、ＬＴＢ（ＴＮＦＳＦ３）、ＴＮＦＳＦ４（ＯＸ４０Ｌ）、ＴＮＦＳＦ８（ＣＤ１５３）、ＴＮＦＳＦ９（４－１ＢＢＬ）、ＴＮＦＳＦ１０（ＴＲＡＩＬ）、ＴＮＦＳＦ１１（ＲＡＮＫＬ）、ＴＮＦＳＦ１２（ＴＷＥＡＫ）、ＴＮＦＳＦ１３、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＴＮＦＳＦ１４、ＴＮＦＳＦ１５、ＴＮＦＳＦ１８を含む腫瘍壊死因子スーパーファミリーの構成員またはその突然変異である（しかしながら、これらに制限されるものではない）。
他の具体例において、前記ＣＸＣＬは、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１６、またはＣＸＣＬ１７であってもよい。

他の具体例において、前記ＣＣＬ（ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ（ｃ－ｃ ｍｏｔｉｆ）ｌｉｇａｎｄ）は、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ６、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ９、ＣＣＬ１０、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１２、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、またはＣＣＬ２８であってもよい。

他の具体例において、前記ＢＭＰは、ＢＭＰ１、ＢＭＰ２、ＢＭＰ３、ＢＭＰ４、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ８、ＢＭＰ９、ＢＭＰ１０、ＢＭＰ１１、ＢＭＰ１２、ＢＭＰ１３、ＢＭＰ１４、またはＢＭＰ１５であってもよい。

前記リンカーは、単にサイトカインと細胞膜貫通ドメインを連結させると共に、リンカーの流動性によって標的細胞の表面にサイトカインを露出させる役割を行うことができる。前記リンカーとしては、例えば、可撓性リンカーが適用できる。また、前記リンカーは、タンパク質加水分解酵素に対する抵抗性（Ｐｒｏｔｅａｓｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）を有するものであってもよく、これは、サイトカインまたは標的細胞によって、その種類および／または長さを適宜変更して使用できる。例えば、前記リンカーは、１～４００個、１～２００個、または２～２００個の任意のアミノ酸からなるポリペプチドであってもよい。前記ペプチドリンカーは、Ｇｌｙ、ＡｓｎおよびＳｅｒ残基を含んでもよく、ＴｈｒおよびＡｌａのような中性アミノ酸を含んでもよい。ペプチドリンカーに適合したアミノ酸配列は、当業界において公知となっている。また、機能的一部分間の適切な分離を達成するために、または必須な内部一部分（ｉｎｔｅｒ－ｍｏｉｅｔｙ）の相互作用を維持するためのリンカーの最適化を考慮してコピー数「ｎ」を調節できる。当該技術分野において他の可撓性リンカーが知られているが、例えば受容性を向上させるために、極性アミノ酸残基を追加したものだけでなく、柔軟性を維持するために、ＴおよびＡのようなアミノ酸残基を追加したＧおよびＳリンカーがありえる。したがって、一具体例において、前記リンカーは、Ｇ、Ｓ、および／またはＴ残基を含む柔軟性リンカーであってもよい。前記リンカーは、（Ｇ_ｐＳ_ｓ）_ｎおよび（Ｓ_ｐＧ_ｓ）_ｎから選択される一般式を有することができ、この場合、独立して、ｐは、１～１０の整数であり、ｓ＝０～１０の０または整数であり、ｐ＋ｓは、２０以下の整数であり、かつ、ｎは、１～２０の整数である。より具体的に、リンカーは、（ＧＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１）、（ＳＧＧＧＧ）_ｎ（配列番号２）、（ＳＲＳＳＧ）_ｎ（配列番号３）、（ＳＧＳＳＣ）_ｎ（配列番号４）、（ＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳ）_ｎ（配列番号５）、（ＲＰＰＰＰＣ）_ｎ（配列番号６）、（ＳＳＰＰＰＰＣ）_ｎ（配列番号７）、（ＧＳＴＳＧＳＧＫＳＳＥＧＫＧ）_ｎ（配列番号８）、（ＧＳＴＳＧＳＧＫＳＳＥＧＳＧＳＴＫＧ）_ｎ（配列番号９）、（ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ）_ｎ（配列番号１０）、または（ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＥＦ）_ｎ（配列番号１１）であり、前記ｎは、１～２０、または１～１０の整数である。

一具体例において、前記免疫細胞の非制限的な例としては、マクロファージ、Ｂリンパ球、Ｔリンパ球、肥満細胞、単核球、樹状細胞、好酸球、ナチュラルキラー細胞、好塩基球、好中球が含まれる。したがって、特定の具体例において、前記免疫細胞は、マクロファージ、Ｂリンパ球、Ｔリンパ球（ＣＤ８＋ ＣＴＬ）、肥満細胞、単核球、樹状細胞、好酸球、ナチュラルキラー細胞、好塩基球、または好中球からなる群から選択されたいずれか一つであってもよい。特定の具体例において、免疫細胞は、ナチュラルキラー細胞またはＴリンパ球であってもよい。

本明細書において用語「ナチュラルキラー細胞（Ｎａｔｕｒａｌ Ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌｓ）」または「ＮＫ細胞」は、先天性免疫系の主要成分を構成する細胞毒性リンパ球であり、大顆粒リンパ球（ｌａｒｇｅ ｇｒａｎｕｌａｒ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ，ＬＧＬ）と定義され、リンパ球性共通前駆細胞（ｃｏｍｍｏｎ ｌｙｍｐｈｏｉｄ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ，ＣＬＰ）生成ＢおよびＴリンパ球から分化した第３の細胞を構成する。前記「ナチュラルキラー細胞」または「ＮＫ細胞」は、任意の組織供給源（ｓｏｕｒｃｅ）に由来する追加的な変形がないナチュラルキラー細胞を含み、成熟したナチュラルキラー細胞だけでなく、ナチュラルキラー前駆細胞を含むことができる。前記ナチュラルキラー細胞は、インターフェロンまたはマクロファージ由来サイトカインに対する反応により活性化し、ナチュラルキラー細胞は、「活性化受容体」および「抑制性受容体」で標識される、細胞の細胞毒性活性を制御する二つの類型の表面受容体を含む。ナチュラルキラー細胞は、任意の供給源、例えば胎盤組織、胎盤灌流液、臍帯血、胎盤血、末梢血、脾臓、肝などからの造血細胞、例えば造血幹または前駆体から生成されうる。

一具体例において、前記ナチュラルキラー細胞は、活性化したナチュラルキラー細胞であってもよい。前記活性化したナチュラルキラー細胞は、母細胞、例えば、造血細胞、またはナチュラルキラー前駆細胞に比べて、細胞毒性、またはナチュラルキラー細胞の本来の免疫調節能が活性化した細胞を意味する。具体的な実施様態において、活性化したナチュラルキラー細胞は、ＣＤ３－ＣＤ５６＋である。具体的な実施様態において、活性化したナチュラルキラー細胞は、ＣＤ３－ＣＤ５６＋ＣＤ１６－である。他の具体的な実施様態において、活性化したナチュラルキラー細胞は、追加でＣＤ９４＋ＣＤ１１７＋である。他の具体的な実施様態において、活性化したナチュラルキラー細胞は、追加でＣＤ１６１－である。他の具体的な実施様態において、活性化したナチュラルキラー細胞は、追加でＮＫＧ２Ｄ＋である。他の具体的な実施様態において、活性化したナチュラルキラー細胞は、追加でＮＫｐ４６＋である。他の具体的な実施様態において、活性化したナチュラルキラー細胞は、追加でＣＤ２２６＋である。特定の実施様態において、前記活性化したナチュラルキラー細胞の５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９２％、９４％、９６％、９８％超過は、ＣＤ５６＋およびＣＤ１６－である。他の実施様態において、前記活性化したナチュラルキラー細胞の少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８２％、８４％、８６％、８８％または９０％は、ＣＤ３－およびＣＤ５６＋である。他の実施様態において、前記活性化したナチュラルキラー細胞の少なくとも５０％、５２％、５４％、５６％、５８％または６０％は、ＮＫＧ２Ｄ＋である。他の実施様態において、前記細胞の３０％、２０％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％または３％は、ＮＫＢ１＋である。特定の他の実施様態において、前記活性化したナチュラルキラー細胞の３０％、２０％、１０％、８％、６％、４％または２％未満は、ＮＫＡＴ２＋である。特定の他の実施様態において、前記活性化したナチュラルキラー細胞の３０％、２０％、１０％、８％、６％、４％または２％未満は、ＣＤ５６＋およびＣＤ１６＋である。より具体的な実施様態において、前記ＣＤ３－、ＣＤ５６＋活性化したナチュラルキラー細胞の少なくとも１０％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、５０％、５５％、６０％、６５％または７０％は、ＮＫｐ４６＋である。他のより具体的な実施様態において、前記ＣＤ３－、ＣＤ５６＋活性化したナチュラルキラー細胞の少なくとも１０％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％または８５％は、ＣＤ１１７＋である。他のより具体的な実施様態において、前記ＣＤ３－、ＣＤ５６＋活性化したナチュラルキラー細胞の少なくとも１０％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％または５０％は、ＣＤ９４＋である。他のより具体的な実施様態において、ＣＤ３－、ＣＤ５６＋活性化したナチュラルキラー細胞の少なくとも１０％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％または５０％は、ＣＤ１６１－である。他のより具体的な実施様態において、前記ＣＤ３－、ＣＤ５６＋活性化したナチュラルキラー細胞の少なくとも１０％、１２％、１４％、１６％、１８％または２０％は、ＣＤ２２６＋である。他のより具体的な実施様態において、前記ＣＤ３－、ＣＤ５６＋活性化したナチュラルキラー細胞の少なくとも２０％、２５％、３０％、３５％または４０％は、ＣＤ７＋である。より具体的な実施様態において、前記ＣＤ３－、ＣＤ５６＋活性化したナチュラルキラー細胞の少なくとも３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％または６０％は、ＣＤ５＋である。

一具体例において、活性化したナチュラルキラー細胞または活性化したナチュラルキラー細胞が豊富な（ｅｎｒｉｃｈｅｄ）集団は、１種以上の機能的に関連したマーカー、例えばＣＤ９４、ＣＤ１６１、ＮＫｐ４４、ＤＮＡＭ－１、２Ｂ４、ＮＫｐ４６、ＣＤ９４、ＫＩＲ、および活性化受容体のＮＫＧ２ファミリー（例えば、ＮＫＧ２Ｄ）を検出することによって評価できる。

一具体例において、活性化したナチュラルキラー細胞は、上記に記載された造血細胞から生成されうる。特定の実施様態において、活性化したナチュラルキラー細胞は、増殖した造血細胞、例えば造血幹細胞および／または造血前駆細胞から収得できる。具体的な実施様態において、造血細胞は、栄養細胞の不在下で第１培地で持続的に増殖および分化する。以後、細胞は、栄養細胞の存在下で第２培地で培養される。このような分離（単離）、増殖および分化は、中央施設で行うことができ、これは、使用地点、例えば病院などにおける増殖および分化のための増殖した造血細胞を提供する。

一具体例において、活性化したナチュラルキラー細胞の生成は、造血細胞の集団を増殖させる段階を含む。細胞増殖中に、造血細胞集団内複数個の造血細胞は、ナチュラルキラー細胞に分化する。

本明細書において用語「ナチュラルキラー前駆細胞」、または「ＮＫ前駆細胞」、またはその細胞集団は、例えば、１種以上の表現型マーカー（ｍａｒｋｅｒ）、例えばＣＤ５６、ＣＤ１６、およびＫＩＲの発現レベルで示したような、まだ成熟したナチュラルキラー細胞に発展しないナチュラルキラー細胞系細胞を含む細胞またはその集団を意味する。一実施様態において、ナチュラルキラー前駆細胞集団は、低いＣＤ１６および高いＣＤ５６を有する細胞を含む。例えば、ナチュラルキラー前駆細胞集団は、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、または５０％のＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。他の具体的な実施様態において、前記ナチュラルキラー前駆細胞集団は、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、または５０％以下のＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。他の具体的な実施様態において、前記ナチュラルキラー前駆細胞集団は、０％～５％、５％～１０％、１０％～１５％、１５％～２０％、２０％～２５％、２５％～３０％、３０％～３５％、３５％～４０％、４０％～４５％、または４５％～５０％の間のＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。

一具体例において、前記ナチュラルキラー前駆細胞集団で前記ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、追加でＣＤ１１７＋である。具体的な実施様態において、前記ナチュラルキラー前駆細胞集団で前記ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞の約６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％がＣＤ１１７＋である。他の具体的な実施様態において、前記ナチュラルキラー前駆細胞集団で前記ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞の６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％以上がＣＤ１１７＋である。他の具体的な実施様態において、前記ナチュラルキラー前駆細胞集団で前記ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞の６５％～７０％、７０％～７５％、７５％～８０％、８０％～８５％、８５％～９０％、９０％～９５％、または９５％～９９％の間がＣＤ１１７＋である。

他の具体例において、ナチュラルキラー前駆細胞集団で前記ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、追加でＣＤ１６１＋である。具体的な実施様態において、前記ナチュラルキラー前駆細胞集団で前記ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞の約４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、または７５％がＣＤ１６１＋である。他の具体的な実施様態において、前記ナチュラルキラー前駆細胞集団で前記ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞の４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、または７５％以上がＣＤ１６１＋である。他の具体的な実施様態において、前記ナチュラルキラー前駆細胞集団で前記ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞の４０％～４５％、４５％～５０％、５０％～５５％、５５％～６０％、６０％～６５％、６５％～７０％、または７０％～７５％の間がＣＤ１６１＋である。

さらに他の具体例において、前記ナチュラルキラー前駆細胞集団で前記ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、追加でＮＫｐ４６＋である。具体的な実施様態において、前記ナチュラルキラー前駆細胞集団で前記ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞の約２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％またはそれ以上がＮＫｐ４６＋である。他の具体的な実施様態において、前記ナチュラルキラー前駆細胞集団で前記ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞の約２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、または５５％がＮＫｐ４６＋である。他の具体的な実施様態において、前記ナチュラルキラー前駆細胞集団で前記ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞の２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、または５５％以下がＮＫｐ４６＋である。他の具体的な実施様態において、前記ナチュラルキラー前駆細胞集団で前記ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞の２５％～３０％、３０％～３５％、３５％～４０％、４０％～４５％、４５％～５０％、５０％～５５％、５５％～６０％、６０％～６５％、６５％～７０％、７０％～７５％、７５％～８０％、８０％～８５％、８５％～９０％の間またはそれ以上がＮＫｐ４６＋である。より具体的な実施様態において、前記ナチュラルキラー前駆細胞集団で前記ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞の２５％～３０％、３０％～３５％、３５％～４０％、４０％～４５％、４５％～５０％、または５０％～５５％の間がＮＫｐ４６＋である。

また、例えば、前記ナチュラルキラー前駆細胞集団は、ＣＤ５２＋、ＣＤ１６＋、ＣＤ２４４＋ ＣＤ９４＋、またはＣＤ９４＋についても、上記した通りである。

本明細書において前記免疫細胞（例えば、ナチュラルキラー細胞）は、遺伝的に変形または操作されたものであってもよい。

本明細において「遺伝的変形（ｇｅｎｅｔｉｃａｌ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）」または「遺伝的操作（ｇｅｎｅｔｉｃａｌ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ）」とは、細胞の遺伝物質の構成または構造を人為的に変更させることを含む。

一具体例において、免疫細胞（例えば、ナチュラルキラー細胞）は、遺伝的に変形されて、標的特異性および／またはホーミング特異性が向上したものであってもよい。

一具体例において、遺伝的に変形された免疫細胞（例えば、ナチュラルキラー細胞）は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含むナチュラルキラー細胞である。ＣＡＲは、抗原に対する免疫細胞（例えば、Ｔリンパ球）を誘導し、前記免疫細胞を刺激して抗原を示す細胞を致死させる人工膜結合タンパク質である。ＣＡＲは、抗原、例えば細胞上の抗原に結合する細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、および免疫細胞に１次活性化シグナルを伝送する細胞内（細胞質）シグナル伝達ドメイン（すなわち、細胞内刺激ドメイン）、および／または共刺激ドメインを含む。他のすべての条件が充足され、ＣＡＲが、例えばＴリンパ球、例えば１次Ｔリンパ球の表面上に発現し、ＣＡＲの細胞外ドメインが抗原に結合するとき、細胞外シグナル伝達ドメインは、Ｔリンパ球にシグナルを伝送して活性化および／または増殖させ、また、前記抗原が細胞表面上に存在する場合、抗原を発現する細胞を致死させる。一部の免疫細胞、例えばＴリンパ球およびナチュラルキラー細胞は、最大活性化のために、２つのシグナル、すなわち１次活性化シグナルおよび共刺激シグナルが必要であり、ＣＡＲは、また、細胞外ドメインに対する抗原の結合が１次活性化シグナルおよび共刺激シグナルの両方の伝送を引き起こすように、共刺激ドメインを含むことができる。

他の具体例において、遺伝的に変形された免疫細胞（例えば、ナチュラルキラー細胞）は、ホーミング受容体を含む免疫細胞（例えば、ナチュラルキラー細胞）であってもよい。これは、前記ホーミング受容体を含む細胞が特定の解剖学的区域、特に組織、または特定類型の細胞、例えばリンパ節、消化管、または皮膚のＢ細胞区域に留まるようにする。

さらに他の具体例において、遺伝的に変形された免疫細胞（例えば、ナチュラルキラー細胞）は、本願に記載されるようにＣＡＲおよびホーミング受容体の両方を含む免疫細胞（例えば、ナチュラルキラー細胞）である。

ＣＡＲおよび／またはホーミング受容体を含む免疫細胞（例えば、ナチュラルキラー細胞）は、当業界において公知となっている任意の方法によって生成されうる。一部の実施様態において、ＣＡＲおよび／またはホーミング受容体を含む免疫細胞（例えば、ナチュラルキラー細胞）は、ＣＡＲおよび／またはホーミング受容体をコードする核酸配列を含む１種以上のベクターに免疫細胞（例えば、ナチュラルキラー細胞）を導入（例えば、形質注入（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）により）することで、ＣＡＲおよび／またはホーミング受容体を発現するように操作される。一部の実施様態において、免疫細胞（例えば、ナチュラルキラー細胞）が生成されうる細胞（例えば、ＣＤ３４＋造血幹細胞）は、まず細胞にＣＡＲおよび／またはホーミング受容体をコードする核酸配列を含む１種以上のベクターを導入（例えば、形質注入によって）することで、ＣＡＲおよび／またはホーミング受容体を発現するように操作され、以後、上記したような方法によってＣＡＲおよび／またはホーミング受容体を含む免疫細胞（例えば、ナチュラルキラー細胞）が誘導できる。

一具体例において、ＣＡＲの細胞外ドメインは、抗原結合ドメインである。具体的な実施様態において、抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖドメインである。特定の実施様態において、抗原結合ドメインは、ＴＡＡに特異的に結合する。具体的な実施様態において、ＴＡＡは、ＣＤ１２３、ＣＬＬ－１、ＣＤ３８、ＣＤ２０、およびＣＳ－１からなる群から選択される。より具体的な実施様態において、抗原結合ドメインは、ＣＳ－１に結合する抗体に由来する一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）または抗原結合断片を含む。より具体的な実施様態において、抗原結合ドメインは、エロツズマブの一本鎖および／またはエロツズマブの抗原結合断片を含む。具体的な実施様態において、抗原結合ドメインは、ＣＤ２０に結合する抗体に由来する一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）または抗原結合断片を含む。

一具体例において、ＣＡＲの細胞内刺激ドメインは、ＣＤ３ゼータ（ｚｅｔａ）シグナル伝達ドメインである。

一具体例において、ＣＡＲの共刺激ドメインは、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＰＤ－１、ＯＸ４０、ＣＴＬＡ－４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＤＡＰ１０またはＤＡＰ１２の細胞内ドメインを含む。

一具体例において、ホーミング受容体は、走化性受容体（ｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）である。具体的な実施様態において、走化性受容体は、ＣＸＣＲ４、ＶＥＧＦＲ２、およびＣＣＲ７からなる群から選択される。

特定の具体例において、前記ナチュラルキラー細胞は、ＮＫ－９２細胞であってもよい。

一具体例において、前記サイトカインは、前記免疫細胞の表面に存在するサイトカイン受容体に結合し、持続的に細胞を刺激するものであってもよい。

本明細書において用語「免疫細胞（例えば、ナチュラルキラー細胞）の刺激」は、試験管内または生体内で免疫細胞（例えば、ナチュラルキラー細胞）の活性、例えば、細胞毒性活性を増加させたり、活性化した免疫細胞（例えば、ナチュラルキラー細胞）が生成、増加、または増殖することを意味する。

一具体例による免疫細胞（例えば、ナチュラルキラー細胞）によれば、サイトカインが周辺細胞に影響を及ぼさず、副作用を最小化でき、かつ、増殖および活性化を誘導できる。

一具体例において、前記免疫細胞は、細胞膜貫通ドメイン；サイトカイン；および前記サイトカインを前記細胞膜貫通ドメインに連結するためのペプチドリンカーを含む融合タンパク質をコード化するポリヌクレオチドを含むベクターで形質転換されたものであってもよい。詳細には、前記ベクターを含む免疫細胞であってもよい。したがって、本明細書において用語「遺伝的に操作された免疫細胞」は、前記ベクターにより形質転換されたものを含む意味である。

用語「ポリヌクレオチド（ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）」は、一本鎖または二本鎖の形態で存在するデオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドの重合体を意味する。ＲＮＡゲノム配列、ＤＮＡ（ｇＤＮＡおよびｃＤＮＡ）およびこれから転写されるＲＮＡ配列を包括し、特に別途の言及がない限り、自然のポリヌクレオチドだけでなく、糖または塩基部位が変形されたその類似体（ａｎａｌｏｇｕｅ）も含む。一具体例において、前記 ポリヌクレオチドは、一本鎖ポリヌクレオチドである。

本明細書において使用される用語「ベクター」は、適当な宿主細胞で目的タンパク質を発現できるベクターであり、遺伝子挿入物が発現するように作動可能に連結された調節要素を含む遺伝子作製物を指す。一実施例によるベクターは、プロモーター、オペレーター、開始コドン、終止コドン、ポリアデニル化シグナル、および／またはエンハンサーのような発現調節要素を含むことができ、ベクターのプロモーターは、構成的または誘導的であってもよい。また、前記ベクターは、宿主細胞内で安定して前記融合タンパク質を発現させることができる、発現用ベクターであってもよい。前記発現用ベクターは、当業界において植物、動物または微生物で外来のタンパク質を発現するのに用いられる通常のものが使用できる。前記組み換えベクターは、当業界において公知となった多様な方法を用いて構築できる。例えば、前記ベクターは、ベクターを含有する宿主細胞を選択するための選択マーカーを含み、複製可能なベクターである場合、複製起源を含むことができる。また、ベクターは、自己複製したり宿主ＤＮＡに導入したりすることができ、前記ベクターは、プラスミド、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルス、単純ヘルペスウイルス、およびワクシニアウイルスからなる群から選択されるものであってもよい。

前記ベクターは、動物細胞、例えば、哺乳動物細胞で作動可能なプロモーターを含む。一実施例によって適合したプロモーターは、哺乳動物ウイルスに由来するプロモーターおよび哺乳動物細胞のゲノムに由来するプロモーターを含み、例えば、ＣＭＶ（Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ）プロモーター、Ｕ６プロモーターおよびＨ１プロモーター、ＭＬＶ（Ｍｕｒｉｎｅ Ｌｅｕｋｅｍｉａ Ｖｉｒｕｓ） ＬＴＲ（Ｌｏｎｇ ｔｅｒｍｉｎａｌ ｒｅｐｅａｔ）プロモーター、アデノウイルス初期プロモーター、アデノウイルス後期プロモーター、ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＨＳＶのｔｋプロモーター、ＲＳＶプロモーター、ＥＦ１αプロモーター、メタロチオニンプロモーター、β－アクチンプロモーター、ヒトＩＬ－２遺伝子のプロモーター、ヒトＩＦＮ遺伝子のプロモーター、ヒトＩＬ－４遺伝子のプロモーター、ヒトリンホトキシン遺伝子のプロモーター、ヒトＧＭ－ＣＳＦ遺伝子のプロモーター、ヒトホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）プロモーター、マウスホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）プロモーターおよびスルビビン（Ｓｕｒｖｉｖｉｎ）プロモーターを含むことができる。

また、前記ベクターで、前述した融合タンパク質をコード化するポリヌクレオチド配列は、プロモーターに作動可能に連結されていてもよい。本明細書において使用された用語「作動可能に連結された」は、核酸発現調節配列（例：プロモーター、シグナル配列、または転写調節因子結合位置のアレイ）と他の核酸配列間の機能的な結合を意味し、これによって、前記調節配列は、前記他の核酸配列の転写および／または翻訳を調節することになる。

本発明の他の態様は、前記免疫細胞またはその細胞集団を有効成分として含む細胞治療剤を提供する。

本発明のさらに他の態様は、前記免疫細胞またはその細胞集団を有効成分として含むがんまたは感染性疾患の予防または治療のための薬学的組成物を提供する。

本発明のさらに他の態様は、前記免疫細胞またはその細胞集団を医薬の製造に使用するための用途を提供する。

本発明のさらに他の態様は、前記免疫細胞またはその細胞集団を個体に投与する段階を含む疾患治療方法を提供する。

本明細書において用語「疾患」は、一つの病理的状態、特にがん、感染性疾患、炎症性疾患、代謝性疾患、自己免疫疾患、退行性疾患、フェロトーシス関連疾患および移植片拒絶を意味する。

本明細書において用語「治療」は、疾患、障害または病態、またはその一つ以上の症状の軽減、進行抑制または予防を指したり、それを含み、「有効成分」または「薬剤学的有効量」は、疾患、障害または病態、またはその一つ以上の症状の軽減、進行抑制または予防に十分な本願で提供される発明を実施する過程で用いられる組成物の任意の量を意味する。

本明細書において用語「投与する」、「導入する」および「移植する」は、相互交換的に使用され、一具体例による組成物の所望な部位への少なくとも部分的局所化を招く方法または経路による個体内への一具体例による組成物の配置を意味する。一具体例による組成物の細胞または細胞成分の少なくとも一部を生存個体内で所望な位置に伝達する任意の適切な経路により投与できる。個体への投与後、細胞の生存期間は、短ければ数時間、例えば２４時間～数日、長ければ数年である。

本明細書において用語「分離した細胞」、例えば、「分離した免疫細胞」などは、細胞から生じる組織、例えば、造血細胞から実質的に分離した細胞を意味する。

本発明の組成物は、新生物に由来する腫瘍またはがんを治療または認識する方法で使用できる。新生物は、悪性または陽性であってもよく、がんは、原発性または転移性であってもよく；新生物またはがんは、初期または末期であってもよい。治療できる新生物またはがんの非制限的な例としては、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、副腎皮質がん、ＡＩＤＳ関連がん、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、肛門がん、虫垂がん、星状細胞腫（小児小脳または大脳）、基底細胞がん、胆管がん、膀胱がん、骨がん、脳幹グリオーマ、脳腫瘍（小脳星状細胞腫、大脳星状細胞腫／悪性神経膠腫、脳室上衣細胞腫、髄芽細胞腫、テント上原始神経外胚葉性腫瘍、視覚路および視床下部膠腫）、乳がん、気管支腺腫／カルチノイド、バーキット（Ｂｕｒｋｉｔｔ）リンパ腫、カルチノイド腫瘍（小児、消化管）、原発不明がん、中枢神経系リンパ腫（原発性）、小脳星状細胞腫、大脳星状細胞腫／悪性膠腫、子宮頸がん、小児がん、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄増殖性疾患、結腸がん、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、子宮内膜がん、脳室上衣細胞腫、食道がん、ユーイング肉腫ファミリー腫瘍、頭蓋外胚細胞腫瘍（小児）、性腺外胚細胞腫瘍、肝外胆管がん、眼がん（眼内メラノーマ、網膜芽細胞腫）、胆のうがん、胃（胃腸）がん、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍、胚細胞腫瘍（小児頭蓋外、性腺外、卵巣）、妊娠性絨毛性腫瘍、神経膠腫（成人、小児脳幹、小児大脳星状細胞腫、小児視覚路および視床下部）、胃カルチノイド、ヘアリー細胞白血病、頭頸部がん、肝細胞（肝臓）がん、ホジキンリンパ腫、下咽頭がん、視覚路および視床下部膠腫（小児）、眼内メラノーマ、島細胞がん、カポジ肉腫、腎臓がん（腎細胞がん）、喉頭がん、白血病（急性リンパ芽球性、急性骨髄性、慢性リンパ性、慢性骨髄性、ヘアリー細胞）、口唇および口腔がん、肝臓がん（原発性）、肺がん（非小細胞、小細胞）、リンパ腫（ＡＩＤＳ関連、バーキット（Ｂｕｒｋｉｔｔ）、皮膚Ｔ細胞、ホジキン、非ホジキン、原発性中枢神経系）、マクログロブリン血症（ワルデンストレーム）、骨の悪性線維性組織球腫／骨肉腫、髄芽細胞腫（小児）、メラノーマ、眼内メラノーマ、メルケル細胞がん、中皮腫（成人悪性、小児）、不顕性原発性の転移性頭頸部扁平上皮がん、口腔がん、多発性内分泌腺腫症（小児）、多発性骨髄腫／形質細胞新生物、菌状息肉腫、骨髄異形成症候群、骨髄異形成／骨髄増殖性疾患、骨髄性白血病（慢性）、骨髄性白血病（成人急性、小児急性）、多発性骨髄腫、骨髄増殖性疾患（慢性）、鼻腔および副鼻腔がん、鼻咽腔がん、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺がん、口腔がん（ｏｒａｌ ｃａｎｃｅｒ）、口腔・咽頭がん、骨肉腫／骨悪性線維性組織球腫、卵巣がん、卵巣上皮がん（表面上皮－間質性腫瘍）、卵巣胚細胞腫瘍、卵巣低悪性度腫瘍、すい臓がん、すい臓がん（島細胞）、副鼻腔および鼻腔がん、副甲状腺がん、陰茎がん、咽頭がん、クロム親和性細胞腫、松果体星状細胞腫、松果体胚細胞腫、松果体芽細胞腫およびテント上原始神経外胚葉性腫瘍（小児）、脳下垂体腺腫、形質細胞新生物、胸膜肺芽細胞腫、原発性中枢神経系リンパ腫、前立腺がん、直腸がん、腎細胞がん（腎臓がん）、腎盂および尿管移行上皮癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫（小児）、唾液腺がん、肉腫（ユーイング肉腫ファミリー腫瘍、カポジ、軟部組織、子宮）、セザリー症候群、皮膚がん（非メラノーマ、メラノーマ）、皮膚がん（メルケル細胞）、小細胞肺がん、小腸がん、軟部組織肉腫、扁平上皮癌、不顕性原発性（転移性）の頭頸部扁平上皮がん、胃がん、テント上原始神経外胚葉性腫瘍（小児）、Ｔ細胞リンパ腫（皮膚）、精巣がん、咽喉がん、胸腺腫（小児）、胸腺腫および胸腺がん、甲状腺がん、甲状腺がん（小児）、腎盂および尿管移行上皮癌、絨毛腫瘍（妊娠性）、原発不明がん（成人、小児）、尿管および腎盂移行上皮癌、尿道がん、子宮がん（子宮内膜）、子宮肉腫、膣がん、視覚路および視床下部膠腫（小児）、外陰部がん、ワルデンストレームマクログロブリン血症 、およびウィルムス腫瘍（小児）が含まれる。特定の具体例において、新生物またはがんは、メラノーマ、腎細胞がん、肺がんおよび血液がんからなるグループから選択される。一具体例において、腫瘍は、メラノーマである。さらに他の具体例において、腫瘍は、腎細胞がんである。一具体例において、腫瘍は、肺がん（例えば、ＮＳＣＬＣ）である。さらに他の具体例において、腫瘍は、本出願に記載された血液がんである。本出願において使用される「血液がん」は、血液、骨髄およびリンパ系に影響を与えるがんである。下記のような血液がんの３つの主なグループが存在する：白血病、リンパ腫および骨髄腫。白血病の４つの広範囲な分類は以下の通りである：急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）。リンパ腫は、以下の２つのカテゴリーに分けられる：ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫。多くの非ホジキンリンパ腫は、Ｂ細胞リンパ腫であり、急速に成長したり（高等級）または徐々に成長したりする（低等級）。１４個の類型のＢ細胞非ホジキンリンパ腫が存在する。残りは、異なるがん白血球細胞、またはリンパ球の名前を取ったＴ細胞リンパ腫である。骨髄腫は、骨髄の多くの部位で頻繁に発生するので、たびたび多発性骨髄腫と呼ばれる。一部の具体例において、このような方法は、本出願で提供される併用療法の投与を含む。一部の具体例において、併用療法は、ＰＤ－１抑制剤を含む。他の具体例において、ＰＤ－１抑制剤は、抗ＰＤ－１抗体である。一部の具体例において、併用療法は、ＰＤ－Ｌ１抑制剤を含む。他の具体例において、ＰＤ－Ｌ１抑制剤は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。

本明細書において使用される用語「感染性疾患」は、対象体内または対象体上の病原体の存在を含み、これは、病原体の成長が抑制された場合、対象体に利益をもたらす。病原体の存在を指すこと以外にも、このような用語「感染」は、また、好ましくない正常菌のグループを指す。本出願において使用される用語「病原体」は、病気を生成できる感染性物質を指す。感染性物質の非制限的な例としては、対象体で病気を誘発するウイルス、細菌、プリオン、真菌、ウイロイド、または寄生虫が含まれる。一つの特定の具体例において、感染は、病原体、たとえば、細菌またはウイルスにより誘発される。特定の具体例において、感染は、細胞内感染である。一具体例において、感染は、ウイルス感染である。

一具体例に薬学的組成物の投与方法は、特に制限されるものではないか、目的とする方法によって静脈内、皮下、腹腔内、吸入または局所適用のように非経口投与したり経口投与したりすることができる。投与量は、患者の体重、年齢、性別、健康状態、食事、投与時間、投与方法、排泄率および疾患の重症度などによってその範囲が多様である。一日投与量は、治療を必要とする個体に投与することによって軽減された病気状態に対する治療に十分な一態様による治療用物質の量を意味する。治療用物質の効果的な量は、特定の化合物、病気状態およびその深刻度、治療を必要とする個体によって変わり、これは、当業者が通常的に決定できる。非制限的な例として、一態様による組成物の人体に対する投与量は、患者の年齢、体重、性別、投与形態、健康状態および疾患程度によって変わる。体重が７０ｋｇの成人患者を基準とするとき、例えば約１，０００～１０，０００細胞／回、１，０００～１００，０００細胞／回、１，０００～１，０００，０００細胞／回、１，０００～１０，０００，０００，１，０００～１００，０００，０００細胞／回、１，０００～１，０００，０００，０００細胞／回、１，０００～１０，０００，０００，０００細胞／回で、一定の時間間隔で１日に１回～数回に分割投与でき、または、一定の時間間隔で数回投与できる。

「個体」とは、疾患の治療を必要とする対象を意味し、より具体的には、ヒトまたは非ヒトである霊長類、マウス（ｍｏｕｓｅ）、ラット（ｒａｔ）、犬、猫、馬および牛などの哺乳類を意味する。

一具体例による薬学的組成物は、薬学的に許容可能な担体および／または添加物を含むことができる。例えば、滅菌水、生理食塩水、慣用の緩衝剤（リン酸、クエン酸、その他の有機酸など）、安定剤、塩、酸化防止剤（アスコルビン酸など）、界面活性剤、懸濁剤、等張剤、または保存剤などを含むことができる。局所投与のために、生体高分子（ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒ）などの有機物、ヒドロキシアパタイトなどの無機物、具体的には、コラーゲンマトリックス、ポリ乳酸重合体または共重合体、ポリエチレングリコール重合体または共重合体およびその化学的誘導体などと組み合わせるものを含むことができる。一具体例による薬学的組成物が、注射に適当な剤形に調製される場合には、免疫細胞、免疫細胞、またはその活性を増加させる物質は、薬学的に許容可能な担体中に溶解していたりまたは溶解している溶液状態で凍結したものであってもよい。

一具体例による薬学的組成物は、その投与方法や剤形によって、必要な場合、懸濁剤、溶解補助剤、安定化剤、等張剤、保存剤、吸着防止剤、界面活性化剤、希釈剤、賦形剤、ｐＨ調整剤、無痛化剤、緩衝剤、還元剤、酸化防止剤などを適切に含むことができる。上記に例示されたものなどを含めて本発明に適合した薬学的に許容される担体および製剤は、文献［Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ,１９ｔｈ ｅｄ．,１９９５］に詳細に記載されている。一具体例による薬学的組成物は、当該発明の属する技術分野における通常の知識を有する者が容易に実施できる方法によって、薬学的に許容される担体および／または賦形剤を用いて製剤化することによって、単位用量の形態で製造したりまたは多用量の容器内に内入させて製造したりできる。この際、剤形は、オイルまたは水性媒質中の溶液、懸濁液または乳化液の形態であるか、粉末、顆粒、錠剤またはカプセル形態であってもよい。

一態様による免疫細胞によれば、細胞の表面にサイトカインをリンカーにより連結した形態で設計し、サイトカインが免疫細胞を持続的に刺激して増殖および活性化を誘導すると共に、前記サイトカインが周辺細胞に影響を及ぼさなくて、副作用を最小化できるという効果がある。

一具体例によるナチュラルキラー細胞を図式化して示す図である。 一具体例によるナチュラルキラー細胞の製造のためのレンチウイルスベクターの切断地図である。 一具体例によるナチュラルキラー細胞の増殖能を示すグラフである。 一具体例によるナチュラルキラー細胞の生存能を示すグラフである。

以下、本発明を実施例に基づいてより詳細に説明する。しかしながら、これらの実施例は、本発明を例示的に説明するためのものであり、本発明の範囲がこれらの実施例に限定されるものではない。

実施例１．サイトカインがリンカーにより連結されたナチュラルキラー細胞の製作
サイトカインがリンカーにより連結されたナチュラルキラー細胞を製作するために、細胞膜貫通ドメイン、リンカー、およびサイトカインをコードするポリヌクレオチドを含むベクターを製造した。

具体的に、ＰＣＲプライマーは、レンチウイルスベクターｐＬＶ２－ＥＦ１ａ－ＭＴＡ内ＰＣＲ増幅挿入物（インサート、ｉｎｓｅｒｔ）それぞれの末端と両立できる一対のＳｆｉｌ制限酵素認識部位にそれぞれのｃＤＮＡが導入されるように設計した。Ｓｆｉｌ認識領域を切断（ｄｉｇｅｓｔ）した後、前記インサートをＳｆｉｌ－切断されたレンチウイルスベクターに個別的に連結させて、各サイトカインに対するレンチウイルスサイトカインプラスミドを構築した。前記インサートは、［サイトカイン－可撓性リンカー－細胞膜貫通ドメイン］の構造を含むように設計し、前記プラスミドの具体的な構造は、図２に示された通りである。

次に、ＨＥＫ－２９３ＦＴ細胞にｐＣＭＶＤ８．９およびｐＶＳＶｇウイルスパッケージングベクターとともに、上記で製造されたレンチウイルスプラスミドを１：１：１の割合で同時に形質感染させた。前記細胞を一晩中インキュベーションさせた後、ＤＮＡ脂質複合体を除去し、ここに新鮮な培地を細胞に添加した。これから４８時間後、ウイルスを含有する上澄み液を収集し、前記収集された上澄み液を０．２２μｍポリエーテルスルホンメンブレンフィルターユニット（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して濾過した。これから収得されたレンチウイルスパーティクルを８μｇ／ｍＬのポリブレン（ｐｏｌｙｂｒｅｎｅ）を含有する成長培地内ＮＫ－９２細胞（ＫＣＴＣ，Ｋｏｒｅａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ）に添加し、１２００×ｇの速度で９０分間遠心力を用いて感染させた。３７℃、５％ＣＯ_２条件で２４時間後、新しい培地に交替し、２日以上インキュベーションした。前記培地は、Ｔｈｅｒｍｏ ｆｉｓｈｅｒ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社（Ｗａｌｔｈａｍ，ＵＳＡ）から購入して使用した。

前記方法で製作したサイトカインの種類を下記表１に示した。

その結果、図１に示されたように、細胞膜貫通ドメインによりナチュラルキラー細胞の原形質膜にサイトカインがリンカーにより連結されたナチュラルキラー細胞を製造した。前記サイトカインは、ナチュラルキラー細胞の表面に存在するサイトカイン受容体に結合し、持続的にナチュラルキラー細胞を刺激して細胞の増殖および活性化を誘導できる。

実験例１．サイトカインがリンカーにより連結されたナチュラルキラー細胞の増殖能および生存能の分析
前記実施例１のサイトカインＩＬ－２をリンカーにより連結されるように設計したナチュラルキラー細胞の増殖能および生存能を分析するために、サイトカインを供給することなく、一定時間の間培養後に生きた細胞の割合を確認した。

具体的に、レンチウイルス感染を通じて原形質膜にインターロイキン－２がリンカーにより連結されたナチュラルキラー細胞をフローサイトメトリー（Ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ）を用いて分離し、この細胞をＭＥＭアルファ培地に０．２ｍＭのミオイノシトール、０．１ｍＭの２－メルカプトエタノール、０．０２ｍＭの葉酸、１２．５％ウマ血清、１２．５％ＦＢＳを添加し、１００Ｕ／ｍＬインターロイキン－２を含む培地で１週間培養させた。その後、同じ培地組成においてインターロイキン－２のみを除いた培地に変更して、対照群としてサイトカインが付着していないＮＫ－９２細胞、実験群としてインターロイキン－２が付着したＮＫ－９２細胞を用いて一定時間培養後に生きた細胞の数をトリパンブルー１：１で染色して確認した。前記培地は、Ｔｈｅｒｍｏ ｆｉｓｈｅｒ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社（Ｗａｌｔｈａｍ，ＵＳＡ）から購入し、添加される物質は、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ社（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＵＳＡ）およびＢＤ社（Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＵＳＡ）から購入して使用した。

トリパンブルーで染色されて青色と見える細胞を死んだ細胞として計算し、染色されていない細胞を生きた細胞として計算して、ナチュラルキラー細胞の増殖能および生存能を分析し、その結果をそれぞれ図３および図４に示した。

図３は、一具体例によるナチュラルキラー細胞の増殖能を示すグラフである。

図４は、一具体例によるナチュラルキラー細胞の生存能を示すグラフである。

図３および図４に示されたように、一具体例によるナチュラルキラー細胞は、遺伝的に操作されていない対照群のナチュラルキラー細胞に比べて、外部サイトカインの不在下の環境で２倍以上増殖が増加し、また、細胞生存能力が約１．６倍以上増加することを確認した。

このような結果は、一具体例によるナチュラルキラー細胞の表面に連結されたサイトカインが、他の細胞に影響を及ぼさずに自らを刺激して、別途のサイトカインの供給なくとも増殖および活性化することを意味する。

Claims (17)

1. 細胞膜貫通ドメイン；サイトカイン；および前記サイトカインを前記細胞膜貫通ドメインに連結するためのペプチドリンカーを含む遺伝的に操作された免疫細胞。
2. 前記細胞膜貫通ドメインは、受容体チロシンキナーゼ（Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅｓ：ＲＴＫｓ）の細胞膜貫通ドメインである、請求項１に記載の免疫細胞。
3. 前記受容体チロシンキナーゼの細胞膜貫通ドメインは、上皮成長因子受容体、インスリン受容体、血小板由来成長因子受容体、血管内皮成長因子受容体、線維芽細胞成長因子受容体、コレシストキニン（Ｃｈｏｌｅｃｙｓｔｏｋｉｎｉｎ：ＣＣＫ）受容体、神経栄養因子（Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ：ＮＧＦ）受容体、肝細胞成長因子（Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ：ＨＧＦ）受容体、エプリン（Ｅｐｈｒｉｎ：Ｅｐｈ）受容体、アンジオポエチン受容体、およびＲＹＫ（ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ）受容体からなる群から選択されたいずれか一つの受容体の細胞膜貫通ドメインである、請求項２に記載の免疫細胞。
4. ＢＭＰ（Ｂｏｎｅ ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ）ファミリー、ＣＣＬ（Ｃｈｅｏｍｋｉｎｅ ｌｉｇａｎｄｓ）ファミリー、ＣＭＴＭ（ＣＫＬＦ－ｌｉｋｅ ＭＡＲＶＥＬ ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ ｄｏｍａｉｎ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｍｅｍｂｅｒ）ファミリー、ＣＸＣＬ（Ｃ－Ｘ－Ｃ ｍｏｔｉｆ ｌｉｇａｎｄ ｌｉｇａｎｄ）ファミリー、ＧＤＦ（Ｇｒｏｗｔｈ／ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ）ファミリー、成長ホルモン、ＩＦＮ（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ）ファミリー、ＩＬ（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ）ファミリー、ＴＮＦ（Ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒｓ）ファミリー、ＧＰＩ（ｇｌｙｃｏｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ）、ＳＬＵＰＲ－１（Ｓｅｃｒｅｔｅｄ Ｌｙ－６／ｕＰＡＲ－Ｒｅｌａｔｅｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ １）、ＳＬＵＰＲ－２（Ｓｅｃｒｅｔｅｄ Ｌｙ－６／ｕＰＡＲ－Ｒｅｌａｔｅｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ ２）およびこれらの組み合わせからなる群から選択されるいずれか一つである、請求項１に記載の免疫細胞。
5. 前記インターロイキンは、ＩＬ１、ＩＬ２、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ８（ＣＸＣＬ８）、ＩＬ９、ＩＬ１０、ＩＬ１１、ＩＬ１２、ＩＬ１３、ＩＬ１４、ＩＬ１５、ＩＬ１６、ＩＬ１７、ＩＬ１８、ＩＬ１９、ＩＬ２０、ＩＬ２１、ＩＬ２２、ＩＬ２３、ＩＬ２４、ＩＬ２５、ＩＬ２６、ＩＬ２７、ＩＬ２８、ＩＬ２９、ＩＬ３０、ＩＬ３１、ＩＬ３２、ＩＬ３３、ＩＬ３５、またはＩＬ３６である、請求項４に記載の免疫細胞。
6. 前記ＩＦＮファミリーは、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＩＦＮ－ε、ＩＦＮ－κまたはＩＦＮ－ωである、請求項４に記載の免疫細胞。
7. 前記ＴＮＦＳＦは、ＴＮＦ、ＣＤ４０Ｌ（ＴＮＦＳＦ５）、ＣＤ７０（ＴＮＦＳＦ７；ＣＤ２７Ｌ）、ＥＤＡ、ＦＡＳＬ（ＴＮＦＳＦ６）、ＬＴＡ（ＴＮＦＳＦ１）、ＬＴＢ（ＴＮＦＳＦ３）、ＴＮＦＳＦ４（ＯＸ４０Ｌ）、ＴＮＦＳＦ８（ＣＤ１５３）、ＴＮＦＳＦ９（４－１ＢＢＬ）、ＴＮＦＳＦ１０（ＴＲＡＩＬ）、ＴＮＦＳＦ１１（ＲＡＮＫＬ）、ＴＮＦＳＦ１２（ＴＷＥＡＫ）、ＴＮＦＳＦ１３、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＴＮＦＳＦ１４、ＴＮＦＳＦ１５、またはＴＮＦＳＦ１８である、請求項４に記載の免疫細胞。
8. 前記ペプチドリンカーは、可撓性リンカーであり、１～４００個のアミノ酸残基からなるものである、請求項１に記載の免疫細胞。
9. 前記ペプチドリンカーは、（ＧＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１）、（ＳＧＧＧＧ）_ｎ（配列番号２）、（ＳＲＳＳＧ）_ｎ（配列番号３）、（ＳＧＳＳＣ）_ｎ（配列番号４）、（ＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳ）_ｎ（配列番号５）、（ＲＰＰＰＰＣ）_ｎ（配列番号６）、（ＳＳＰＰＰＰＣ）_ｎ（配列番号７）、（ＧＳＴＳＧＳＧＫＳＳＥＧＫＧ）_ｎ（配列番号８）、（ＧＳＴＳＧＳＧＫＳＳＥＧＳＧＳＴＫＧ）_ｎ（配列番号９）、（ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ）_ｎ（配列番号１０）、または（ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＥＦ）_ｎ（配列番号１１）であり、前記ｎは、１～２０の整数である、請求項１に記載の免疫細胞。
10. 前記細胞膜貫通ドメイン；サイトカイン；および前記サイトカインを前記細胞膜貫通ドメインに連結するためのペプチドリンカーを含む融合タンパク質をコード化するポリヌクレオチドを含むベクターで形質転換されたものである、請求項１に記載の免疫細胞。
11. 前記ベクターは、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルス、単純ヘルペスウイルス、およびワクシニアウイルスからなる群から選択されるものである、請求項１０に記載の免疫細胞。
12. 前記サイトカインは、前記免疫細胞の表面に存在するサイトカイン受容体に結合し、持続的に細胞を刺激するものである、請求項１に記載の免疫細胞。
13. 前記免疫細胞は、マクロファージ、Ｂリンパ球、Ｔリンパ球、肥満細胞、単核球、樹状細胞、好酸球、ナチュラルキラー細胞、好塩基球、および好中球からなる群から選択されたいずれか一つである、請求項１に記載の免疫細胞。
14. ＮＫ－９２細胞である、請求項１に記載の免疫細胞。
15. 請求項１に記載の免疫細胞またはその細胞集団を有効成分として含む細胞治療剤。
16. 請求項１に記載の免疫細胞またはその細胞集団を有効成分として含むがんの予防または治療のための薬学的組成物。
17. 請求項１に記載の免疫細胞またはその細胞集団を有効成分として含む感染性疾患の予防または治療のための薬学的組成物。

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