JP2022518568A - クレアチニンを検出するための分析物センサ及び検出方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本開示は、概して、1つ以上の分析物を検出するために複数の酵素を使用する分析物センサ、より具体的には、少なくともクレアチニン、及び任意選択で他の分析物を検出するために複数の酵素を使用する分析物センサ、ならびにそれらを使用するための対応する方法を説明する。
反応1
生体内で利用可能な乳酸の濃度は、グルコースの濃度よりも低いが、それでも酸素除去を促進するのに十分である。
A.クレアチニン応答性分析物センサ。分析物センサは:少なくとも第1の作用電極を含むセンサテール;第1の作用電極の表面に配置されたクレアチニン応答性活性領域であって、第1の電子移動剤、第1のポリマー、及びクレアチニンの検出を容易にするために協調して作用することができる複数の酵素を含む酵素系であって、クレアチニンアミドヒドロラーゼ、クレアチンアミドヒドロラーゼ、及びサルコシンオキシダーゼを含む酵素系を含むクレアチニン応答性活性領域;クレアチニンに対して透過性であり、クレアチニン応答性活性領域を覆う第1の膜;及びセンサテール上かつクレアチニン応答性活性領域の近くに配置された酸素スカベンジャーを含む。
要素1:酸素スカベンジャーは、第1の膜によってクレアチニン応答性活性領域から離隔される。
要素3:酸素スカベンジャーはグルコースオキシダーゼを含む。
要素4:グルコースオキシダーゼは、第2のポリマーに共有結合している。
要素7:分析物センサは、第2の作用電極;第2の作用電極の表面に配置されたグルコース応答性活性領域であって、第2の電子移動剤、第3のポリマー、及び第3のポリマーに共有結合したグルコースオキシダーゼを含むグルコース応答性活性領域;及びグルコースに対して透過性であり、グルコース応答性活性領域を覆う第2の膜をさらに含む。
要素9:第1の膜及び第2の膜は、組成的に同じである。
要素11:第1の膜、第2の膜、及び第3の膜は、組成的に同じである。
要素13:酸素スカベンジャーは、第2のポリマーに共有結合したグルコースオキシダーゼを含む。
要素16:第1のシグナル及び第2のシグナルは、第1のチャネル及び第2のチャネルを介して同時に取得される。
式1に示す構造を有するポリ(ビニルピリジン)結合遷移金属錯体を調製した。この遷移金属錯体及びそれによる電子移動に関するさらなる詳細は、上記の参照により組み込まれた、共通に所有されている米国特許第6,605,200号に提供されている。各モノマーの下付き文字は、例示的な原子比を表し、特定のモノマーの順序を示すものではない。
様々な量のクレアチニン(20μM、40μM、60μM、80μM、100μM、130μM、及び200μM)を含む5mMグルコース溶液に電極を浸漬し、電流応答を測定することによって、クレアチニン分析を行った。クレアチニン応答性活性領域にグルコースオキシダーゼのない対照電極も同じ条件下で試験した。図8は、33℃で様々なクレアチニン濃度に曝露したときの、グルコースオキシダーゼで覆われたクレアチニン応答性活性領域を含む分析物センサの3つの複製の電流応答の例示的なプロットを示す。示されているように、電流応答は、新しいクレアチニン濃度への曝露後、数分の間に増加し、その後安定した。対照的に、クレアチニン応答性活性領域がグルコースオキシダーゼで覆われていない2つの対照センサは、どの濃度でもクレアチニンに応答しなかった。図9は、様々なクレアチニン濃度(20μM、40μM、60μM、80μM、100μM、130μM、及び200μM)に曝露したときの、グルコースオキシダーゼで覆われたクレアチニン応答性活性領域を含む単一分析物センサの電流応答の例示的なプロットを示す。示されているように、センサの応答は、試験した濃度範囲にわたり本質的に線形であった。ここでも、グルコースオキシダーゼで覆われていない対照センサは、おそらく酵素系との酸素干渉のために、クレアチニンに対して本質的に応答を示さなかった。
Claims (25)
- 分析物センサであって:
少なくとも第1の作用電極を含むセンサテール;
第1の作用電極の表面に配置されたクレアチニン応答性活性領域であって、第1の電子移動剤、第1のポリマー、及びクレアチニンの検出を容易にするために協調して作用することができる複数の酵素を含む酵素系であって、
クレアチニンアミドヒドロラーゼ、
クレアチンアミドヒドロラーゼ、及び
サルコシンオキシダーゼ
を含む酵素系を含むクレアチニン応答性活性領域;
クレアチニンに対して透過性であり、クレアチニン応答性活性領域を覆う第1の膜;及び
センサテール上かつクレアチニン応答性活性領域の近くに配置された酸素スカベンジャーを含む、分析物センサ。 - 酸素スカベンジャーは、第1の膜によってクレアチニン応答性活性領域から離隔されている、請求項1に記載の分析物センサ。
- 酸素スカベンジャーはオキシダーゼ酵素を含む、請求項1に記載の分析物センサ。
- 酸素スカベンジャーはグルコースオキシダーゼを含む、請求項3に記載の分析物センサ。
- グルコースオキシダーゼは、第2のポリマーに共有結合している、請求項4に記載の分析物センサ。
- 酸素スカベンジャーは第1の膜上に配置されている、請求項1に記載の分析物センサ。
- 酸素スカベンジャーはオキシダーゼ酵素を含む、請求項6に記載の分析物センサ。
- 酸素スカベンジャーはグルコースオキシダーゼを含む、請求項7に記載の分析物センサ。
- グルコースオキシダーゼは、第2のポリマーに共有結合している、請求項8に記載の分析物センサ。
- クレアチニンアミドヒドロラーゼ、クレアチンアミドヒドロラーゼ、及びサルコシンオキシダーゼはそれぞれ、第1のポリマーに共有結合している、請求項1に記載の分析物センサ。
- 第2の作用電極;
第2の作用電極の表面に配置されたグルコース応答性活性領域であって、第2の電子移動剤、第3のポリマー、及び第3のポリマーに共有結合したグルコースオキシダーゼを含むグルコース応答性活性領域;及び
グルコースに対して透過性であり、グルコース応答性活性領域を覆う第2の膜をさらに含む、請求項1に記載の分析物センサ。 - 第2のポリマーに共有結合され、第1の膜上に配置されたグルコースオキシダーゼをさらに含む、請求項11に記載の分析物センサ。
- 第1の膜及び第2の膜は、組成的に同じである、請求項11に記載の分析物センサ。
- 分析物センサであって:
第1の作用電極及び第2の作用電極を含むセンサテール;
第1の作用電極の表面に配置されたクレアチニン応答性活性領域であって、第1の電子移動剤、第1のポリマー、及びクレアチニンの検出を容易にするために協調して作用することができる複数の酵素を含む酵素系であって、
クレアチニンアミドヒドロラーゼ、
クレアチンアミドヒドロラーゼ、及び
サルコシンオキシダーゼ
を含む酵素系を含むクレアチニン応答性活性領域;
クレアチニンに対して透過性であり、クレアチニン応答性活性領域を覆う第1の膜;
第2のポリマーに共有結合し、第1の膜上に配置されたグルコースオキシダーゼ;
第2の作用電極の表面に配置されたグルコース応答性活性領域であって、第2の電子移動剤、第3のポリマー、及び第3のポリマーに共有結合したグルコースオキシダーゼを含むグルコース応答性活性領域;及び
グルコースに対して透過性であり、グルコース応答性活性領域を覆う第2の膜を含む、分析物センサ。 - 第1の膜上に配置されたグルコースオキシダーゼは、クレアチニンに対して透過性である第3の膜によって覆われている、請求項14に記載の分析物センサ。
- 第1の膜、第2の膜、及び第3の膜は、組成的に同じである、請求項15に記載の分析物センサ。
- 第1の膜及び第2の膜は、組成的に同じである、請求項14に記載の分析物センサ。
- クレアチニンアミドヒドロラーゼ、クレアチンアミドヒドロラーゼ、及びサルコシンオキシダーゼはそれぞれ、第1のポリマーに共有結合している、請求項14に記載の分析物センサ。
- 方法であって:
分析物センサを、少なくともクレアチニンを含む流体に曝露すること;
ここで、分析物センサは、少なくとも第1の作用電極を含むセンサテール、第1の作用電極の表面に配置されたクレアチニン応答性活性領域、クレアチニンに対して透過性であり、クレアチニン応答性活性領域を覆う第1の膜、及び、センサテール上かつクレアチニン応答性活性領域の近くに配置された酸素スカベンジャーを含み;
クレアチニン応答性活性領域は、第1の電子移動剤、第1のポリマー、及びクレアチニンの検出を容易にするために協調して作用することができる複数の酵素を含む酵素系であって、
クレアチニンアミドヒドロラーゼ、
クレアチンアミドヒドロラーゼ、及び
サルコシンオキシダーゼ
を含む酵素系を含むこと;
第1の作用電極に電位を印加すること;
クレアチニン応答性活性領域の酸化還元電位以上で、流体中のクレアチニンの濃度に比例する第1のシグナルを取得すること;及び
第1のシグナルを流体中のクレアチニンの濃度に相関させることを含む方法。 - クレアチニンアミドヒドロラーゼ、クレアチンアミドヒドロラーゼ、及びサルコシンオキシダーゼはそれぞれ、第1のポリマーに共有結合している、請求項19に記載の方法。
- 酸素スカベンジャーは、第1の膜上に配置されている、請求項19に記載の方法。
- 酸素スカベンジャーは、第2のポリマーに共有結合したグルコースオキシダーゼを含む、請求項21に記載の方法。
- センサテールは、第2の作用電極の表面に配置されたグルコース応答性活性領域を有する第2の作用電極をさらに含み、グルコース応答性活性領域は、第2の電子移動剤、第3のポリマー、及び第3のポリマーに共有結合したグルコースオキシダーゼを含み、前記方法はさらに:
第2の作用電極に電位を印加すること;
グルコース応答性活性領域の酸化還元電位以上で、流体中のグルコースの濃度に比例する第2のシグナルを取得すること;及び
第2のシグナルを流体中のグルコースの濃度に相関させることを含む、請求項20に記載の方法。 - 第1のシグナル及び第2のシグナルは、異なる時間に取得される、請求項23に記載の方法。
- 第1のシグナル及び第2のシグナルは、第1のチャネル及び第2のチャネルを介して同時に取得される、請求項23に記載の方法。
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