JP2022515960A - 抗配列類似性１９を持つファミリー、メンバーａ５抗体及びその使用方法 - Google Patents

抗配列類似性１９を持つファミリー、メンバーａ５抗体及びその使用方法 Download PDF

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Abstract

本開示内容は、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する抗体及び該抗体を含む組成物を提供する。一部の具現例において、抗体は、ヒト対象で免疫原性を減少させるために脱免疫化される。特定の具現例において、抗体は親和度成熟を経た。一部の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体はＦＡＭ１９Ａ５活性を調節し、例えば、当該抗体を用いて反応性神経膠症の発病及び／又は反応性星状細胞の過剰増殖を阻害、抑制、減少又は反転させることができる。本開示内容はまた、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する抗体を投与することによって中枢神経系損傷、退行性脳障害、神経病性疼痛又は癌のような障害を治療するための方法を提供する。

Description

発明の詳細な説明
［技術分野］
関連出願に関する相互参照事項
本ＰＣＴ出願は、２０１９年１月２日付に出願された米国仮出願第６２／７８７，７１１号及び２０１９年４月２４日付に出願された第６２／８３８，１９０号の優先権を主張し、これらはそれぞれ、その全文が本明細書に参照によって組み込まれる。
電子提出された配列目録に関する参照事項
本出願と共に提出されたＡＳＣＩＩテキストファイル（名：３７６３＿０１６ＰＣ０２＿ＳｅｑＬｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ；サイズ：９０，２３１バイト；及び、生成日：２０１９年１２月３０日）の電子提出された配列目録の内容は、その全体が本明細書に参照によって組み込まれる。
政府支援の陳述
本研究は、大韓民国産業通商資源部（ＭＯＴＩＥ）の産業技術革新事業（１００８１３００、虚血性脳卒中に対する神経膠傷痕形成の阻害機序を用いた治療用単クローン性抗体新薬開発）の研究費支援を受けて行われた。
本開示内容は、配列類似性１９を持つファミリー、メンバーＡ５（ＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合する抗体（例えば、脱免疫化又は親和度成熟した抗体）、当該抗体を含む組成物、及び対象の中枢神経系損傷に起因した障害又は疾患のような障害又は疾患を予防又は治療するために前記抗体を使用する方法を提供する。
［背景技術］
ＦＡＭ１９Ａ５は、５個の相同性が高い小さなタンパク質で構成されているタンパク質のＴＡＦＡサブファミリーに属する一種である。Ｔａｎｇ Ｔ．Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ８３（４）：７２７－３４（２００４）を参照されたい。これらのタンパク質は、所定位置に保存されたシステイン残基を含有し、ＣＣ－ケモカインファミリーに属する一種である大食細胞炎症タンパク質１－アルファ（ＭＩＰ－１－アルファ）とかすかに関連がある。前記ＴＡＦＡタンパク質は脳と脊髄の特定領域で主に発現する。これらのタンパク質神経発生過程で成体神経幹細胞によって生成及び分泌されるものとされている。
ＦＡＭ１９Ａ５は、脊椎動物の脳で主に発現し、完全な中枢神経系の発生、分化、形成に重要であり、中枢神経系損傷及び／又は疾患の予防又は治療に用いられ得る。米国特許公開番号２０１５／０１１８２３０を参照する。
［発明の概要］
［発明が解決しようとする課題］
ＦＡＭ１９Ａ５阻害は、中枢神経系を治療するのに重要な役割を担うことができるが、ＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合し、ＦＡＭ１９Ａ５活性を調節できる抗体、特に、副作用無しでヒト対象に使用できる抗体を開発する必要が依然としてある。
［課題を解決するための手段］
本明細書は、配列類似性１９を持つヒトファミリー、メンバーＡ５（ＦＡＭ１９Ａ５）タンパク質に特異的に結合し、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む分離された抗体（“抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体”）又はその抗原結合部分であって、前記重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれ、配列番号５、６及び７に示したアミノ酸配列を含み、前記配列のそれぞれは、場合によって１、２、３、４又は５個の突然変異を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれ、配列番号８、９及び１０に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３の少なくとも一つは、１、２、３、４又は５個の突然変異を含み、前記抗体は、配列番号１１に示したＶＨ及び配列番号１２に示したＶＬを含む基準抗体に比べて、ヒトにおいて減少した免疫原性を有する分離された抗体又はその抗原結合部分を提供する。
一部の具現例において、本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の重鎖ＣＤＲ３は、配列番号７に示したアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の重鎖ＣＤＲ１は、１又は２個の突然変異を持つ配列番号５に示したアミノ酸配列を含む。特定具現例で、前記突然変異は、配列番号５のアミノ酸３においてトレオニンの酸性アミノ酸への置換を含む。他の具現例において、前記突然変異は、配列番号５のアミノ酸５においてセリンの酸性アミノ酸への置換を含む。特定の具現例において、前記酸性アミノ酸は、アスパラギン酸又はグルタミン酸を含む。
一部の具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の重鎖ＣＤＲ２は、１、２、３、４又は５個の突然変異を持つ、配列番号６に示したアミノ酸配列を含む。一部の具現例において、前記突然変異は、配列番号６のアミノ酸１６においてアルギニンの塩基性アミノ酸への置換を含む。特定の具現例において、前記塩基性アミノ酸は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ）を含む。他の具現例において、前記突然変異は、次のいずれか一つ以上を含む：（ａ）配列番号６のアミノ酸６においてグリシンの酸性アミノ酸への置換；（ｂ）配列番号６のアミノ酸７においてセリンの酸性アミノ酸への置換；（ｃ）配列番号６のアミノ酸８においてセリンの酸性アミノ酸への置換；（ｄ）配列番号６のアミノ酸９においてトレオニンの酸性アミノ酸への置換；及び（ｅ）配列番号６のアミノ酸１６においてアルギニンの塩基性アミノ酸への置換。特定の具現例において、前記酸性アミノ酸は、アスパラギン酸又はグルタミン酸を含む。特定の具現例において、前記塩基性アミノ酸は、リシンを含む。
一部の具現例において、本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の軽鎖ＣＤＲ３は、１、２、３、４又は５個の突然変異を持つ、配列番号１０に示したアミノ酸配列を含む。一部の具現例において、前記突然変異は、次のいずれか一つ以上を含む：（ａ）配列番号１０のアミノ酸６においてセリンの酸性アミノ酸又は脂肪族アミノ酸への置換；（ｂ）配列番号１０のアミノ酸７においてアスパラギンの酸性アミノ酸又はヒドロキシル又は硫黄／セレニウム含有アミノ酸への置換；（ｃ）配列番号１０のアミノ酸８においてグリシンの酸性アミノ酸又はヒドロキシル又は硫黄／セレニウム含有アミノ酸への置換；（ｄ）配列番号１０のアミノ酸９においてグリシンの酸性アミノ酸又はヒドロキシル又は硫黄／セレニウム含有アミノ酸への置換；及び（ｅ）配列番号１０のアミノ酸１０においてイソロイシンの塩基性アミノ酸への置換。特定の具現例において、前記酸性アミノ酸は、アスパラギン酸又はグルタミン酸を含む。一部の具現例において、前記ヒドロキシル又は硫黄／セレニウム含有アミノ酸は、セリンを含む。他の具現例において、前記塩基性アミノ酸は、ヒスチジンを含む。
一部の具現例において、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の軽鎖ＣＤＲ１は、１、２、３又は４個の突然変異を持つ、配列番号８に示したアミノ酸配列を含む。特定の具現例において、前記突然変異は、次のいずれか一つ以上を含む：（ａ）配列番号８のアミノ酸６においてチロシンの酸性アミノ酸への置換；（ｂ）配列番号８のアミノ酸７においてアルギニンの酸性アミノ酸への置換；（ｃ）配列番号８のアミノ酸８においてグリシンの酸性アミノ酸への置換；及び（ｄ）配列番号８のアミノ酸９においてセリンの酸性アミノ酸への置換。一部の具現例において、前記酸性アミノ酸は、グルタミン酸又はグルタミンを含む。
一部の具現例において、前記軽鎖ＣＤＲ２は、１、２、３又は４個の突然変異を持つ、配列番号９に示したアミノ酸配列を含む。一部の具現例において、前記突然変異は、次のいずれか一つ以上を含む：（ａ）配列番号９のアミノ酸１においてグルタミン酸の酸性アミノ酸への置換；（ｂ）配列番号９のアミノ酸２においてセリンの酸性アミノ酸への置換；（ｃ）配列番号９のアミノ酸３においてアスパラギンの酸性アミノ酸、塩基性アミノ酸又は脂肪族アミノ酸への置換；及び（ｄ）配列番号９のアミノ酸４においてリシンの酸性アミノ酸又は脂肪族アミノ酸への置換。特定の具現例において、前記酸性アミノ酸は、グルタミン、アスパラギン、アスパラギン酸又はグルタミン酸を含む。一部の具現例において、前記塩基性アミノ酸は、ヒスチジンを含む。他の具現例において、前記脂肪族アミノ酸は、ロイシンを含む。特定の具現例において、前記突然変異は、配列番号９のアミノ酸２においてセリンの酸性アミノ酸への置換を含む。一部の具現例において、前記酸性アミノ酸は、アスパルテート、グルタメート、アスパラギン、グルタミン又はこれらの組合せを含む。特定の具現例において、前記酸性アミノ酸はアスパラギンである。
本明細書はまた、ヒトＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に特異的に結合し、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む、分離された抗体又はその抗原結合部分であって、（ｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号５に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１３に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号７に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｖ）前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号８に示したアミノ酸配列を含み；（ｖ）前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号２０に示したアミノ酸配列を含み；（ｖｉ）前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号１０に示したアミノ酸配列を含む、分離された抗体又はその抗原結合部分を提供する。
本明細書は、ヒトＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に特異的に結合し、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む、分離された抗体又はその抗原結合部分であって、（ｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１４に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１５に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号７に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｖ）前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号２１に示したアミノ酸配列を含み；（ｖ）前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号２２に示したアミノ酸配列を含み；（ｖｉ）前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号２３に示したアミノ酸配列を含む、分離された抗体又はその抗原結合部分を提供する。
本明細書は、ヒトＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に特異的に結合し、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む、分離された抗体又はその抗原結合部分であって、（ｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１４に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１５に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号７に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｖ）前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号２１に示したアミノ酸配列を含み；（ｖ）前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号２４に示したアミノ酸配列を含み；（ｖｉ）前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号２３に示したアミノ酸配列を含む、分離された抗体又はその抗原結合部分を提供する。
本明細書は、ヒトＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に特異的に結合し、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む、分離された抗体又はその抗原結合部分であって、（ｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１４に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１５に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号７に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｖ）前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号８に示したアミノ酸配列を含み；（ｖ）前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号２５に示したアミノ酸配列を含み；（ｖｉ）前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号２３に示したアミノ酸配列を含む、分離された抗体又はその抗原結合部分を提供する。
本明細書は、ヒトＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に特異的に結合し、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む、分離された抗体又はその抗原結合部分であって、（ｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１４に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１５に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号７に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｖ）前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号８に示したアミノ酸配列を含み；（ｖ）前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号２４に示したアミノ酸配列を含み；（ｖｉ）前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号２３に示したアミノ酸配列を含む、分離された抗体又はその抗原結合部分を提供する。
本明細書は、ヒトＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に特異的に結合し、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む、分離された抗体又はその抗原結合部分であって、（ｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１４に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１５に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号７に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｖ）前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号８に示したアミノ酸配列を含み；（ｖ）前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号２６に示したアミノ酸配列を含み；（ｖｉ）前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号２７に示したアミノ酸配列を含む、分離された抗体又はその抗原結合部分を提供する。
本明細書は、ヒトＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に特異的に結合し、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む、分離された抗体又はその抗原結合部分であって、（ｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１４に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１５に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号７に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｖ）前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号８に示したアミノ酸配列を含み；（ｖ）前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号２８に示したアミノ酸配列を含み；（ｖｉ）前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号２９に示したアミノ酸配列を含む、分離された抗体又はその抗原結合部分を提供する。
一部の具現例において、本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、前記ＶＨは、配列番号１１に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同じアミノ酸配列を含み、及び／又は前記ＶＬは、配列番号１２に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同じアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む基準抗体と交差競合し、（ａ）前記ＶＨは、配列番号３３に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号３８に示したアミノ酸配列を含むか；（ｂ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号３９に示したアミノ酸配列を含むか；（ｃ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４１に示したアミノ酸配列を含むか；（ｄ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４０に示したアミノ酸配列を含むか；（ｅ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４２に示したアミノ酸配列を含むか；（ｆ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４３に示したアミノ酸配列を含むか；又は（ｇ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４４に示したアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む基準抗体と同じヒトＦＡＭ１９Ａ５エピトープに結合し、（ａ）前記ＶＨは、配列番号３３に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号３８に示したアミノ酸配列を含むか；（ｂ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号３９に示したアミノ酸配列を含むか；（ｃ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４１に示したアミノ酸配列を含むか；（ｄ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４０に示したアミノ酸配列を含むか；（ｅ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４２に示したアミノ酸配列を含むか；（ｆ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４３に示したアミノ酸配列を含むか；又は（ｇ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４４に示したアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、前記ヒトＦＡＭ１９Ａ５エピトープは、配列番号９０、９１又は９２に示したアミノ酸配列を含む。
本開示内容はまた、配列類似性１９を持つヒトファミリー、メンバーＡ５（ＦＡＭ１９Ａ５）タンパク質に特異的に結合し、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む分離された抗体（“抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体”）又はその抗原結合部分であって、前記重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれ、配列番号１６、１７及び１８に示したアミノ酸配列を含み、前記配列のそれぞれは、場合によって１、２又は３個の突然変異を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれ、配列番号３０、３１及び３２に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３の少なくとも一つは、１、２又は３個の突然変異を含み、前記抗体は、配列番号３５に示したＶＨ及び配列番号４５に示したＶＬを含む基準抗体に比べて、ヒトにおいて減少した免疫原性及びヒトＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に対してより高い結合親和度を有する、分離された抗体又はその抗原結合部分を提供する。
一部の具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１８、１２８又は１２９に示したアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１６に示したアミノ酸配列を含む。他の具現例において、前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１９に示したアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１８に示したアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号３２に示したアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号３１に示したアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の軽鎖ＣＤＲ１は、一つの突然変異を持つ、配列番号３０に示したアミノ酸配列を含む。特定の具現例において、前記突然変異は、配列番号３０のアミノ酸４においてセリンの脂肪族アミノ酸への置換を含む。一部の具現例において、前記脂肪族アミノ酸はバリンを含む。
一部の具現例において、本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、前記ＶＨは、配列番号３５に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同じアミノ酸配列を含み、及び／又は前記ＶＬは、配列番号４５に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同じアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む基準抗体と交差競合し、前記ＶＨは、配列番号３６に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４６に示したアミノ酸配列を含む。他の具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む基準抗体と交差競合し、前記ＶＨは、配列番号３７に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４６に示したアミノ酸配列を含む。他の具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む基準抗体と交差競合し、前記ＶＨは、配列番号１３０に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４６に示したアミノ酸配列を含む。一部の具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む基準抗体と交差競合し、前記ＶＨは、配列番号１３１に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４６に示したアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、これらの変異体及びこれらの任意の組合せからなる群から選ばれる。特定の具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、キメラ抗体、ヒト抗体又はヒト化抗体である。一部の具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を含む。
一部の具現例において、本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ｓｃＦｖである。特定の具現例において、前記ｓｃＦｖはＶＨ及びＶＬを含み：（ａ）前記ＶＨは、配列番号３３に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号３８に示したアミノ酸配列を含むか；（ｂ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号３９に示したアミノ酸配列を含むか；（ｃ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４１に示したアミノ酸配列を含むか；（ｄ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４０に示したアミノ酸配列を含むか；（ｅ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４２に示したアミノ酸配列を含むか；（ｆ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４３に示したアミノ酸配列を含むか；（ｇ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４４に示したアミノ酸配列を含むか；（ｈ）前記ＶＨは、配列番号３６に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４６に示したアミノ酸配列を含むか；（ｉ）前記ＶＨは、配列番号３７に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４６に示したアミノ酸配列を含むか；（ｊ）前記ＶＨは、配列番号１３０に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４６に示したアミノ酸配列を含むか；又は（ｋ）前記ＶＨは、配列番号１３１に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４６に示したアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、次の特性のいずれか一つ以上を示す：（ａ）酵素結合免疫吸着分析法（ＥＬＩＳＡ）によって測定したとき、ＫＤが１０ｎＭ以下である可溶性ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合する特性；（ｂ）ＥＬＩＳＡによって測定したとき、ＫＤが１０ｎＭ以下である膜結合ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合する特性；（ｃ）反応性神経膠症の発病を減少、反転、遅延及び／又は予防する特性；（ｄ）反応性星状細胞の過剰増殖を抑制する特性；（ｅ）ニューロカン及び神経膠抗原２（ＮＧ２）を含むコンドロイチン硫酸プロテオグリカンの発現を減少させる特性；（ｆ）神経細胞の核内ｃ－ｆｏｓ及びｐＥＲＫの発現を増加させる特性；（ｇ）神経細胞の生存を促進する特性；（ｈ）神経細胞内ＧＡＰ４３の発現を増加させる特性；（ｉ）軸索の再成長を促進する特性；（ｊ）例えば、腫瘍内血管の正常化を誘導する特性；（ｋ）腫瘍の成長を抑制する特性；（ｌ）免疫細胞の腫瘍内浸潤を増大させる特性；（ｍ）神経細胞の腫瘍内浸潤を増大させる特性；（ｎ）大食細胞又は小膠細胞の食細胞活性を増進させる特性；（ｏ）大食細胞又は小膠細胞のミトコンドリア膜電位を増加させる特性；（ｐ）腫瘍に対する骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の動員（ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ）を減少させる特性；（ｑ）腫瘍において壊死と浮腫を減少させる特性；（ｒ）腫瘍の組織透過性を減少させる特性；及び（ｓ）腫瘍において血流速度を増加させる特性。
本明細書はまた、本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体をコードする核酸、前記核酸を含むベクター、前記ベクターを含む細胞及び本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を含む免疫接合体（ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）を提供する。本明細書はまた、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体、核酸、ベクター、細胞又は免疫接合体及び担体を含む組成物を開示する。本開示内容はまた、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体、核酸、ベクター、細胞又は免疫接合体及び使用説明書を含むキットを提供する。
本明細書はまた、ヒトＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に特異的に結合する抗体を生産する方法であって、本明細書に開示の細胞を適切な条件で培養し、前記抗体を分離することを含む方法を提供する。
本開示内容はまた、必要とする対象で疾患又は症状を治療する方法であって、前記対象に、本明細書に記載の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体、核酸、ベクター、細胞又は免疫接合体を投与することを含む方法を提供する。一部の具現例において、前記疾患又は症状は、腫瘍、線維症、緑内障、感情障害、網膜病症、老化関連黄斑変性又は神経病性疼痛を含む。特定の具現例において、前記疾患又は症状は腫瘍である。
一部の具現例において、前記腫瘍は、黒色腫、膵癌、神経膠腫、乳癌、リンパ腫、肺癌、腎臓癌、前立腺癌、線維肉腫、結腸腺癌腫、肝癌又は卵巣癌を含む。特定の具現例において、前記神経膠腫は、多形成膠芽細胞腫（ＧＢＭ）である。
一部の具現例において、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体、核酸、ベクター、細胞又は免疫接合体は、血管の正常化を誘導する。特定の具現例において、前記血管の正常化は、連結性（ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｉｔｙ）増加、壁厚増加、血管径減少、より規則的な血管方向及び分布パターン、血管数増加、漏れ及び透過性減少、血管上で血管周囲細胞カバレッジ及び近接性増加、酸素供給増加又はこれらの組合せを含む血管の特性変化を伴う。
一部の具現例において、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体、核酸、ベクター、細胞又は免疫接合体は、腫瘍の成長を抑制する。
一部の具現例において、本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体、核酸、ベクター、細胞又は免疫接合体は、免疫細胞の腫瘍内浸潤を増大させる。特定の具現例において、前記免疫細胞は、大食細胞、樹状細胞、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、自然殺害（ＮＫ）細胞又はこれらの組合せを含む。一部の具現例において、前記免疫細胞はさらに肥大（ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｙ）を示す。一部の具現例において、前記免疫細胞の腫瘍内増大した浸潤は、神経細胞の腫瘍内浸潤増加を伴う。特定の具現例において、前記神経細胞は、星状細胞、膠細胞又はこれらの組合せを含む。
一部の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体、核酸、ベクター、細胞又は免疫接合体は、大食細胞又は小膠細胞の食細胞活性を増進させる。一部の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体、核酸、ベクター、細胞又は免疫接合体は、大食細胞又は小膠細胞のミトコンドリア膜電位を増加させる。
一部の具現例において、本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体、核酸、ベクター、細胞又は免疫接合体は、腫瘍に対する骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の動員を減少させる。一部の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体、核酸、ベクター、細胞又は免疫接合体は、腫瘍において壊死と浮腫を減少させる。一部の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体、核酸、ベクター、細胞又は免疫接合体は、腫瘍の組織透過性を減少させる。一部の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体、核酸、ベクター、細胞又は免疫接合体は、腫瘍において血流速度を増加させる。
一部の具現例において、前記疾患又は障害を治療する方法は、追加の治療剤を投与することをさらに含む。特定の具現例において、前記追加の治療剤は、化学療法、免疫療法、放射線療法又はこれらの組合せを含む。
［図面の簡単な説明］
図１Ａ～図１Ｃは、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に対する個別ｓｃＦｖクローンの結合を分析して提供している。４０５ｎｍで吸光度を測定した。Ｘ軸にはクローン番号が提供されている。図１Ａ～図１Ｃはそれぞれ、４次、５次又は６次バイオパンニングによって第１ニワトリ、第２ニワトリ及び第３ニワトリから由来した９６個クローンの分析を示している。図１Ａ～図１Ｃに示すそれぞれのクローンに対して、垂直棒は、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質、陰性対照群タンパク質、血球凝集素タンパク質及びＢＳＡ（左から右の順に）に該当する。図１Ａ、図１Ｂ及び図１Ｃのそれぞれにおいて、ボックス中のクローンは、追加分析のために選別された８個のクローンである（実施例４参照）。
図２Ａ及び図２Ｂはそれぞれ、異なる抗ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖの概略サイズ及び結合能を提供している。抗体のサイズはＳＤＳ－Ｐａｇｅを用いて示し、結合能はＥＬＩＳＡを用いて測定した。示されている抗体は（左から右へ）：１－２８、１－８５、２－１３、２－１４、２－２０、２－２９、３－２及び３－２６を含む。図２Ｂにおいて、示されている各抗体に対して左側の棒は、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に対する抗体の結合を表す。右側の棒は、陰性対照群を表す（ブロッキング緩衝液が単独で存在、すなわち、組換えＦＡＭ１９Ａ５タンパク質がない状態で測定した結合）。“２ｎｄ ｏｎｌｙ”と表示された列は、前記分析法の背景レベルを示すさらに他の陰性対照群を表す（１次抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体がない状態で測定した結合）。
図３Ａ及び図３Ｂはそれぞれ、マウス及びヒト膠細胞においてＦＡＭ１９Ａ５発現を中和させる異なる抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の能力を比較して提供している。中和は、平均蛍光強度（ＭＦＩ）として示すＦＡＭ１９Ａ５発現の減少率として示す。減少率は、次の式を用いて計算できる：１００％－［（（ＦＡＭ１９Ａ５のＭＦＩ＋抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体）／（ＦＡＭ１９Ａ５のＭＦＩ＋対照抗体））×１００］。各抗体に対する減少率は、括弧中に示した。
図４は、エピトープＦ１－Ｆ６（ＢＳＡに接合された）のアミノ酸配列及びヒトＦＡＭ１９Ａ５ポリペプチドにおいてそれらの位置を提供している。示されている上端のアミノ酸配列は、野生型ＦＡＭ１９Ａ５アイソ型２（信号ペプチド無し）である。示されている２番目のアミノ酸配列は、同じ配列であるが、ペプチド合成中に、非特異的活性を減らすためにシステイン残基がセリンに突然変異されている。
図５は、エピトープ断片Ｆ１～Ｆ６に対する３－２抗体の結合に対するＥＬＩＳＡ結果を提供している。最左列（“ＦＡＭ１９Ａ５”）は、陽性対照群を表し、全体ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に対する３－２抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の結合を示している。“無関連タンパク質”及び“ブロッキング単独”（すなわち、ブロッキング緩衝液単独、すなわちＦＡＭ１９Ａ５タンパク質無し）群は、陰性対照群を表す。それぞれの群に対して左側の棒はアイソ型対照群に該当し、右側の棒は３－２抗体に該当する。
図６Ａ～図６Ｊは、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に対する様々な３－２抗体変異体の結合に重要なエピトープＦ２断片内特定アミノ酸残基を示すアラニンスキャニング分析結果を提供している。図６Ａ～図６Ｄはそれぞれ、ＨＥＫ２９３Ｆ細胞で生成された（Ａ）野生型３－２抗体、（Ｂ）１－３０抗体、（Ｃ）１－３２抗体及び（Ｄ）６－１０抗体に対する結果を示している。図６Ｅ～図６Ｊはそれぞれ、ＣＨＯ細胞で生成された（Ｅ）１－１７抗体、（Ｆ）１－３０抗体、（Ｇ）１－３２抗体、（Ｈ）４－１１抗体、（Ｉ）６－１０抗体及び（Ｊ）低ＰＩ抗体に対する結果を示している。実施例７で論議されるように、エピトープ断片Ｆ２内単一アミノ酸残基においてそれぞれアラニン置換を持つ突然変異体ペプチドが生成された。前記異なる突然変異体ペプチドに対する抗体の結合は、ＥＬＩＳＡを用いて測定した。
図７は、３－２抗体の軽鎖可変領域（ＶＬ）（上の３行）及び重鎖可変領域（ＶＨ）（下の３行）において潜在的免疫原性部位を識別している。前記ＶＬは配列番号１２に該当し、前記ＶＨは配列番号１１に該当する。３－２抗体のフレームワーク領域に対して使用されたヒト生殖系に対する配列も示されている：ＶＬ＝免疫グロブリンラムダ可変１－５１（ＩＧＬＶ１－５１＊０２）及び免疫グロブリンラムダ結合２（ＩＧＬＪ２＊０１）；ＶＨ＝免疫グロブリン重鎖可変３－６４（ＩＧＨＶ３－６４＊０４）及び免疫グロブリン重鎖結合１（ＩＧＨＪ１＊０１）。使用したヒト生殖系は、３－２クローンに対して最も相同性であるヒト生殖系（ＩｇＢＬＡＳＴ、ＮＣＢＩ）であった。ＩＴＯＰＥＴＭ分析によって決定したとき、高い免疫原性潜在力及び中間の免疫原性潜在力を持つ無差別（ｐｒｏｍｉｓｃｕｏｕｓ）ＭＨＣクラスＩＩ結合ペプチドが示されている。具体的に、前記高い免疫原性潜在力を持つＭＨＣＩＩ結合ペプチドは、次の通りである：（ｉ）ペプチド＃３：配列番号１２の残基８５－９３（ＩＹＹＣＧＳＷＤＳ）；（ｉｉ）ペプチド＃９：配列番号１１の残基６４－７２（ＶＲＧＲＡＴＩＳＲ）；及び（ｉｉｉ）ペプチド＃１０：配列番号１１の残基７９－８７（ＶＲＬＱＬＮＮＰＧ）。前記中間の免疫原性潜在力を持つＭＨＣＩＩ結合ペプチドは、次の通りである：（ｉ）配列番号１２の残基１６－２４（ＶＫＩＴＣＳＧＧＧ）；（ｉｉ）ペプチド＃２：配列番号１２の残基４８－５６（ＩＹＥＳＮＫＲＰＳ）；（ｉｉｉ）ペプチド＃４：配列番号１１の残基１８－２６（ＬＳＬＶＣＫＡＳＧ）；（ｉｖ）ペプチド＃５：配列番号１１の残基１９－２７（ＳＬＶＣＫＡＳＧＦ）；（ｖ）ペプチド＃６：配列番号１１の残基３２－４０（ＦＮＭＦＷＶＲＱＡ）；（ｖｉ）ペプチド＃７：配列番号１１の残基４５－５３（ＬＥＹＶＡＱＩＳＳ）；（ｖｉｉ）ペプチド＃８：配列番号１１の残基４８－５６（ＶＡＱＩＳＳＳＧＳ）；及び（ｖｉｉｉ）ペプチド＃１１：配列番号１１の残基８１－８９（ＬＱＬＮＮＰＧＡＥ）。Ｔ細胞エピトープデータベースからの相同性ペプチドは、次の通りである：ペプチド＃５、ペプチド＃６及びペプチド＃９。総１１個の結合ペプチドが同定され、これらはペプチド＃１～＃１１と表示されている。前記結合ペプチドそれぞれに対して“Ｐ１”は一番目のアンカー位置を示す。
図８は、２－１３抗体の軽鎖可変領域（ＶＬ）（上の３行）及び重鎖可変領域（ＶＨ）（下の３行）において潜在的免疫原性部位を識別している。前記ＶＬは配列番号４５に該当し、前記ＶＨは配列番号３５に該当する。２－１３抗体のフレームワーク領域に対して使用されたヒト生殖系に対する配列も示されている：ＶＬ＝免疫グロブリンラムダ可変３－２７（ＩＧＬＶ３－２７＊０１）及び免疫グロブリンラムダ結合２（ＩＧＬＪ２＊０１）；ＶＨ＝免疫グロブリン重鎖可変３－６４（ＩＧＨＶ３－６４＊０４）及び免疫グロブリン重鎖結合１（ＩＧＨＪ１＊０１）。使用したヒト生殖系は、２－１３クローンに対して最も相同性であるヒト生殖系（ＩｇＢＬＡＳＴ、ＮＣＢＩ）であった。ＩＴＯＰＥＴＭ分析によって決定したとき、高い免疫原性潜在力及び中間の免疫原性潜在力を持つ無差別ＭＨＣクラスＩＩ結合ペプチドが示されている。具体的に、前記高い免疫原性潜在力を持つＭＨＣＩＩ結合ペプチドは、次の通りである：（ｉ）ペプチド＃１：配列番号４５の残基１６－２４（ＶＫＩＴＣＳＧＧＳ）；（ｉｉ）ペプチド＃２：配列番号４５の残基８０－８８（ＶＹＦＣＧＴＥＤＩ）；及び（ｉｉｉ）ペプチド＃８：配列番号３５の残基７９－８７（ＶＲＬＱＬＮＮＬＲ）。中間の免疫原性潜在力を持つＭＨＣＩＩ結合ペプチドは次の通りである：（ｉ）ペプチド＃３：配列番号３５の残基１８－２６（ＬＳＬＶＣＫＡＳＧ）；（ｉｉ）ペプチド＃４：配列番号３５の残基２０－２８（ＬＶＣＫＡＳＧＦＴ）；（ｉｉｉ）ペプチド＃５：配列番号３５の残基３６－４４（ＷＶＲＱＴＰＧＫＧ）；（ｉｖ）ペプチド＃６：配列番号３５の残基４７－５５（ＹＶＡＥＩＴＮＤＧ）；（ｖ）ペプチド＃７：配列番号３５の残基６４－７２（ＶＫＧＲＡＴＩＳＲ）；（ｖｉ）ペプチド＃９：配列番号３５の残基８１－８９（ＬＱＬＮＮＬＲＡＥ）；及び（ｖｉｉ）ペプチド＃１０：配列番号３５の残基８６－９４（ＬＲＡＥＤＴＧＴＹ）。Ｔ細胞エピトープデータベースからの相同性ペプチドは、次の通りである：ペプチド＃４及びペプチド＃５。総１０個の結合ペプチドが同定され、これらはペプチド＃１－＃１０と表示されている。前記結合ペプチドのそれぞれに対して“Ｐ１”は一番目のアンカー位置を示す。
図９Ａ～図９Ｃは、脱免疫化された３－２抗体の結合を分析して提供している。図９Ａは、３－２抗体を脱免疫化するために異なるアミノ酸突然変異が作られた位置を示す概略図を提供している。図９Ｂは、（ｉ）野生型３－２抗体（“クローン３－２”）、（ｉｉ）完全に脱免疫化された３－２抗体（“完全脱免疫化されたクローン３－２”）及び（ｉｉｉ）重鎖ＣＤＲ２内一つのアミノ酸を除いて脱免疫化された抗体（“脱免疫化されたクローン３－２”）の中で軽鎖可変領域（ＶＬ）及び重鎖可変領域（ＶＨ）の配列を比較して提供している。ＩＴＯＰＥＴＭ分析によって決定したとき、高い免疫原性潜在力及び中間の免疫原性潜在力を持つアミノ酸残基はボックスで表示されており、それぞれ“１”及び“２”と表示されている。図９Ｃは、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に対する（ｉ）野生型３－２抗体、（ｉｉ）完全脱免疫化された３－２抗体及び（ｉｉｉ）一つのアミノ酸を除いて重鎖ＣＤＲ２によって脱免疫化された抗体（“脱免疫化されたクローン－３－２”）の結合をＥＬＩＳＡで測定して比較している。ファージ（ｐｈａｇｅ）をディスプレイするそれぞれの単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を、ＦＡＭ１９Ａ５（黒塗り四角）又は抗ＨＡ抗体（□）でコートした微細力価プレートのウェルに添加した。ＢＳＡでコートした対照群ウェルにＳＵ背景信号を測定した。ウェルをＨＲＰ接合抗Ｍ１３抗体でプローブした。４０５ｎｍで吸光度を測定した。結果は、４回繰り返し行った実験から得た平均±ＳＤとして示した。
図１０Ａ及び図１０Ｂは、２個の異なる脱免疫化された２－１３抗体である（ｉ）完全脱免疫化された２－１３抗体、及び（ｉｉ）重鎖ＣＤＲ２内一のつのアミノ酸を除いて脱免疫化された抗体（“脱免疫化されたクローン２－１３”）に対する分析を提供している。図１０Ａは、野生型２－１３抗体（“クローン２－１３”）対比２個の脱免疫化された２－１３抗体に対する軽鎖可変領域（ＶＬ）（上の３行）及び重鎖可変領域（ＶＨ）（下の３行）を比較して提供している。ＩＴＯＰＥＴＭ分析によって決定した時、高い免疫原性潜在力及び中間の免疫原性潜在力を持つアミノ酸残基は、ボックスで表示されており、それぞれ“１”及び“２”と表示されている。図１０Ｂは、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に対する（ｉ）野生型２－１３抗体、（ｉｉ）完全に脱免疫化された２－１３抗体、及び（ｉｉｉ）一つのアミノ酸を除いて重鎖ＣＤＲ２によって脱免疫化された抗体（脱免疫化されたクローン２－１３）抗体の結合を、ＥＬＩＳＡで測定して比較している。ファージ（ｐｈａｇｅ）をディスプレイするそれぞれの単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を、ＦＡＭ１９Ａ５（黒塗り四角）又は抗ＨＡ抗体（□）でコートした微細力価プレートのウェルに添加した。ＢＳＡでコートした対照群ウェルから背景信号を測定した。ウェルをＨＲＰ接合抗Ｍ１３抗体でプローブした。４０５ｎｍで吸光度を測定した。結果は、４回繰り返し行った実験から得た平均±ＳＤとして示した。
図１１は、異なる脱免疫化されたクローン２－１３変異体の結合能を比較して提供している。異なる変異体抗体の正体はｘ軸に沿って提供されている。ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１及びＣＤＲＨ２のそれぞれのアミノ酸残基をグルタミン酸及びアスパラギン酸に置換した。７０個の変異体抗体の反応性は、ファージ酵素免疫分析法によって分析した。ファージをディスプレイしたそれぞれのｓｃＦｖは、ＦＡＭ１９Ａ５（黒塗り四角）又は抗ＨＡ抗体（□）でコートした微細力価プレートのウェルに添加した。ＢＳＡでコートした対照群ウェルから背景信号を測定した。ウェルをＨＲＰ接合抗Ｍ１３抗体でプローブした。４０５ｎｍで吸光度を測定した。結果は、４回繰り返し行った実験から得た平均±ＳＤとして示した。
図１２は、向上した物理化学的特性を持つ脱免疫化された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を生成するために用いた方法の概略図を提供している。
図１３Ａ及び図１３Ｂは、野生型（すなわち、脱免疫化されていない）３－２抗体（“原抗体”）対比いくつかの脱免疫化された３－２変異体の物理化学的特性を比較して提供している。示されている変異体抗体は：（ｉ）等電点の低い抗体（“Ｌｏｗ＿ＰＩ”）、（ｉｉ）１－１７、（ｉｉｉ）１－３０、（ｉｖ）１－３２、（ｖ）４－１１、及び（ｖｉ）６－１０を含む。図１３Ａは、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に対する前記抗体の結合を分析して示している。結果は、平均±ＳＤと表示した。図１３Ｂは、溶解度（ＣａｍＳｏｌ点数）及び疎水性（ＧＲＡＶＹ点数）データを示している。
図１４Ａ及び図１４Ｂは、異なる脱免疫化された３－２抗体変異体に対する重鎖可変領域（図１４Ａ）及び軽鎖可変領域（図１４Ｂ）の配列整列を提供している。提示された脱免疫化された変異体抗体は、ヒトを対象に投与時に前記抗体が免疫原性を減少させるために脱免疫化された以外は、前記抗体が３－２抗体と同一であるという点で３－２抗体と関連がある。ＩＴＯＰＥＴＭ分析によって決定した時、高い免疫原性潜在力及び中間の免疫原性潜在力を持つアミノ酸残基は、ボックスで表示されており、それぞれ“１”及び“２”と表示されている。他の関心あるアミノ酸残基も表示されている：“３”＝最も近接したヒト生殖系配列の差異；“４”＝潜在的アルギニン又はリシンメチル化；“５”＝潜在的トリプトファン又はメチオニン酸化；“６”＝潜在的アスパラギン脱アミド化；“７”＝潜在的アスパルテート異性質化；“８”＝希アミノ酸挿入；及び“９”＝遊離システイン又は非標準（ｎｏｎ－ｃａｎｏｎｉｃａｌ）システイン対。このようなアミノ酸残基は、自然細胞処理及び分解反応中に産物変異体として現れ得る。
図１５は、異なる脱免疫化され及び／又は親和度成熟した２－１３抗体変異体に対する軽鎖可変領域（上の３行）及び重鎖可変領域（下の３行）の配列整列を提供している。これらの変異体抗体は、それらが脱免疫化及び／又は親和度成熟を経た以外は２－１３抗体と同一であるという点で２－１３抗体と関連がある。ＩＴＯＰＥＴＭ分析によって決定した時、高い免疫原性潜在力及び中間の免疫原性潜在力を持つアミノ酸残基は、ボックスで表示されており、それぞれ“１”及び“２”と表示されている。他の関心あるアミノ酸残基も表示されている：“３”＝潜在的アルギニン又はリシンメチル化；“４”＝潜在的トリプトファン又はメチオニン酸化；“５”＝潜在的アスパラギン脱アミド化；“６”＝潜在的アスパルテート異性質化；“７”＝希アミノ酸挿入；及び“８”＝遊離システイン又は非標準システイン対。このようなアミノ酸残基は、自然細胞処理及び分解反応中に産物変異体として現れ得る。
図１６Ａ～図１６Ｃは、脱免疫化された２－１３Ｄ－３７抗体の２個の変異体（２－１３Ｄ－３７－１．５Ｗ－４１及び２－１３Ｄ－３７－３Ｗ－１６）の発現レベルを、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及びウェスタンブロッティングで測定して提供している。図１６Ａ及び図１６Ｂは、培養された培地及び精製されたタンパク質からの抗体に対してＳＤＳ－ＰＡＧＥを用いた結果を示している。図１６Ｃは、ウェスタンブロットを用いた結果を示している。図１６Ａ～図１６Ｃのそれぞれにおいて、レーン“１”及び“２”はそれぞれ、抗体２－１３Ｄ－３７－１．５Ｗ－４１及び２－１３Ｄ－３７－３Ｗ－１６に該当する。レーン“１”及び“２”において“Ａ”及び“Ｂ”はそれぞれ、遠心分離前と遠心分離後に該当する。図１６Ｂで、左パネルは還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥを示し、右パネルは非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥを示している。
図１７Ａ及び図１７Ｂは、親和度成熟によって生成された脱免疫化された２－１３Ｄ－３７抗体の２個の変異体（２－１３Ｄ－３７－１．５Ｗ－４１及び２－１３Ｄ－３７－３Ｗ－１６）を分析して提供している。図１７Ａは、次のような抗体に対する軽鎖可変領域（上の３つのボックス）及び重鎖可変領域（下の３つのボックス）のアミノ酸配列整列を示している：脱免疫化されたクローン２－１３Ｄ－３７、脱免疫化されたクローン２－１３Ｄ－３７－１．５Ｗ－４１及び脱免疫化されたクローン２－１３Ｄ－３７－３Ｗ－１６．ＩＴＯＰＥＴＭ分析によって決定した時、高い免疫原性潜在力及び中間の免疫原性潜在力を持つアミノ酸残基は、ボックスで表示され、それぞれ“１”及び“２”と表示されている。他の関心あるアミノ酸残基も表示されている。“３”＝潜在的トリプトファン又はメチオニン酸化；“４”＝潜在的アスパラギン脱アミド化；“５”＝潜在的アスパルテート異性質化；及び“６”＝非標準システイン対。このようなアミノ酸残基は、自然細胞処理及び分解反応中に産物変異体として現れ得る。図１７Ｂは、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に対する脱免疫化されたクローン２－１３Ｄ－３７、脱免疫化されたクローン２－１３Ｄ－３７－１．５Ｗ－４１及び脱免疫化されたクローン２－１３Ｄ－３７－３Ｗ－１６の結合を分析して示している。ファージをディスプレイするそれぞれの単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を、ＦＡＭ１９Ａ５（黒塗り四角）又は抗ＨＡ抗体（□）でコートした微細力価プレートのウェルに添加した。ＢＳＡでコートした対照群ウェルから背景信号を測定した。ウェルをＨＲＰ接合抗Ｍ１３抗体でプローブした。４０５ｎｍで吸光度を測定した。結果は、４回繰り返し行った実験から得た平均±ＳＤとして示した。
図１８は、実施例１１で用いたＨＤＸ－ＭＳ分析法の全体的なワークフローの概略図を提供している。
図１９は、実施例１１に記載されたＨＤＸ－ＭＳ分析法に対して試験した、異なる実験条件で達成されたカバレッジ率を要約した表を提供している。次のようなパラメータのいずれか一つ以上を調整した：（ｉ）試料濃度、（ｉｉ）クエンチング条件、（ｉｉｉ）ペプシン濃度及び／又は分解期間、及び（ｖ）クエンチング維持時間（分）。前記分析によって、図１９に示しているように、オンライン（ｏｎ）又はオフライン（ｏｆｆ）分解と共にＣ１８又はＣ８ペプシン固定カラムを使用した。
図２０Ａ及び図２０Ｂは、実施例１１に記載された最適化された条件を用いてＦＡＭ１９Ａ５タンパク質のペプシン分解結果を提供している。図２０Ａは、成熟したＦＡＭ１９Ａ５タンパク質（配列番号１０１、すなわち、配列番号２から最初の２５個アミノ酸に該当する信号ペプチドを引いた配列番号）対比同定された４４個ペプチドのカバレッジ率及び重複率を示している。水平棒はそれぞれ、個別ペプチドを示す。図２０Ｂは、配列番号１０１対比開始及び末端部位を含む４４個ペプチドのアミノ酸配列、単一イオン質量（ＭＨＰ）及び滞留時間（ＲＴ）を提供している。
図２１は、実施例１１に記載されているように、重水素標識後にＦＡＭ１９Ａ５タンパク質のペプシン分解で同定された２２個ペプチドのカバレッジ率及び重複率を示している。水平棒のそれぞれは、個別ペプチドを示す。
図２２Ａ～図２２Ｅは、時間関数として単一（抗原単独、“１”）及び抗原－抗体（２－１３）複合体（“２”）間の重水素吸収率を比較して提供している。ｙ軸は、最大重水素吸収率を示す（ペプチドにプロリンが含まれた場合、最大値は［（アミノ酸数－１）－（プロリン数）］）。ｘ軸は、重水素標識期間を提供する。図２２Ａは、次のようなペプチドに対するデータを提供している：（ｉ）ＦＬＫＥＧＱＬ（配列番号１０２）（左上端グラフ）、（ｉｉ）ＦＬＫＥＧＱＬＡＡＧＴＣＥ（配列番号１０３）（右上端グラフ）、（ｉｉｉ）ＬＫＥＧＱＬＡＡＧ（配列番号１０４）（左中間グラフ）、（ｉｖ）ＬＫＥＧＱＬＡＡＧＴＣＥＩ（配列番号１０５）（右中間グラフ）、（ｖ）ＬＫＥＧＱＬＡＡＧＴＣＥＩＶＴＬ（配列番号１０６）（左下端グラフ）、及び（ｖｉ）ＡＡＧＴＣＥＩ（配列番号１０７）（右下端グラフ）。図２２Ｂは、次のようなペプチドに対するデータを提供している：（ｉ）ＲＤＳＳＱＰＰＲＴＩＡＲＱＴＡＲＣＡＣ（配列番号１０８）（左上端グラフ）、（ｉｉ）ＱＰＰＲＴＩＡＲＱＴＡ（配列番号１０９）（右上端グラフ）、（ｉｉｉ）ＡＣＲＫＧＱＩＡＧＴＴＲＡＲＰＡＣ（配列番号１１０）（左中間グラフ）、（ｉｖ）ＡＣＲＫＧＱＩＡＧＴＴＲＡＲＰＡＣＶＤ（配列番号１１１）（右中間グラフ）、（ｖ）ＡＣＲＫＧＱＩＡＧＴＴＲＡＲＰＡＣＶＤＡ（配列番号１１２）（左下端グラフ）、及び（ｖｉ）ＡＲＩＩＫＴＫＱＷＣ（配列番号１１３）（右下端グラフ）。図２２Ｃは、次のようなペプチドに対するデータを提供している：（ｉ）ＡＲＩＩＫＴＫＱＷＣＤＭ（配列番号１１４）（左上端グラフ）、（ｉｉ）ＡＲＩＩＫＴＫＱＷＣＤＭＬ（配列番号１１５）（右上端グラフ）、（ｉｉｉ）ＡＲＩＩＫＴＫＱＷＣＤＭＬＰＣＬ（配列番号１１６）（左中間グラフ）、（ｉｖ）ＲＩＩＫＴＫＱＷＣＤＭ（配列番号１１７）（右中間グラフ）、（ｖ）ＲＩＩＫＴＫＱＷＣＤＭＬ（配列番号１１８）（左下端グラフ）及び（ｖｉ）ＷＣＤＭＬＰＣＬ（配列番号１１９）（右下端グラフ）。図２２Ｄは、次のようなペプチドに対するデータを提供している：（ｉ）ＬＰＣＬＥＧＥＧ（配列番号１２０）（左上端グラフ）、（ｉｉ）ＰＣＬＥＧＥＧ（配列番号１２１）（右上端グラフ）、（ｉｉｉ）ＰＣＬＥＧＥＧＣＤ（配列番号１２２）（左中間グラフ）、（ｉｖ）ＰＣＬＥＧＥＧＣＤＬ（配列番号１２３）（右中間グラフ）、（ｖ）ＥＧＥＧＣＤＬ（配列番号１２４）（左下端グラフ）、及び（ｖｉ）ＥＧＥＧＣＤＬＬ（配列番号１２５）（右下端グラフ）。図２２Ｅは、次のようなペプチドに対するデータを提供している：（ｉ）ＬＬＩＮＲＳＧＷＴＣＴＱＰＧＧＲＩＫＴＴＴ（配列番号１２６）（左グラフ）及び（ｉｉ）ＬＩＮＲＳＧＷＴＣＴＱＰＧＧＲＩＫＴＴＴ（配列番号１２７）（右グラフ）。前記グラフのそれぞれにおいて、ペプチドに関する追加情報（すなわち、開始及び末端部位（配列番号１０１、すなわち、配列番号２から最初の２５個アミノ酸に該当する信号ペプチドを引いた配列番号の）及びサイズ）が各グラフの上端隅に提供されている。
図２３Ａ～図２３Ｃは、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に沿って単一及び複合試料間に有意の重水素吸収率差（すなわち、±０．５Ｄａ超過）がある主要アミノ酸残基を示している。図２３Ａは、単一（抗原単独、上グラフ）及び抗原－抗体（２－１３）複合体（下グラフ）の重水素吸収率に対するバタフライマップ（Ｂｕｔｔｅｒｆｌｙ ｍａｐ）分析を提供している。図２３Ｂは、単一及び複合試料間の重水素吸収率差のプロットを提供している。図２３Ｃは、データを１．５Ｄａ未満の重水素吸収率差の和として示している。図２３Ａ～図２３Ｃで、それぞれの線は、異なる重水素標識期間を示す：（ｉ）“１”（０．３３分又は２０秒）、（ｉｉ）“２”（１０分）、（ｉｉｉ）“３”（６０分）及び（ｉｖ）“４”（２４０分）。また、それぞれの地点は個別ペプチドに該当する。図２３Ｂ及び２３Ｃで、単一（抗原単独）及び抗原－ペプチド複合体間に±０．５Ｄａを越える重水素吸収率差があるペプチドの（配列番号１０１の）開始及び末端部位が示されている。図２３Ｂ及び図２３Ｃにおいて破線で描いたボックスは、±０．５Ｄａ未満の重水素吸収率差を示している。
図２４は、単一（抗原単独）及び抗原－抗体（２－１３）複合体試料間に有意の重水素吸収率差があるＦＡＭ１９Ａ５タンパク質の領域を示すヒートマップ分析を提供している。赤色の破線で囲まれた残基は、主要アミノ酸残基を示す：（ｉ）ＣＲＫＧＱＩＡＧＴＴＲＡＲ（配列番号１０１のアミノ酸残基３８－５０又は配列番号２のアミノ酸残基６３－７５）、及び（ｉｉ）ＰＡＣＶＤＡＲＩＩＫＴＫＱＷ（配列番号１０１のアミノ酸残基５１－６４又は配列番号２のアミノ酸残基７６－８５）。
図２５は、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質の３次元構造及び２－１３抗体に対する主要結合エピトープの位置を提供している。
［発明を実施するための形態］
本明細書は、配列類似性１９を持つヒトファミリー、メンバーＡ５（ＦＡＭ１９Ａ５）タンパク質に特異的に結合して本明細書に開示の特性のいずれか一つ以上を示す分離された単クローン性抗体（“抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体”）又はその抗原結合部分を開示する。具体的に、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ヒト対象において免疫原性を減少させるために脱免疫化された。
本明細書に開示された開示内容の理解を容易にするために、多数の用語及び語句を定義する。追加の定義は、詳細な説明全般にわたって記載されている。
［Ｉ．定義］
本開示内容全般にわたって、用語“一つの”又は“ある”実体は、その実体の１つ以上をいうもので、例えば、“一つの抗体”は１つ以上の抗体を表すものと理解される。このように、用語“一つ”（又は“ある”）、“１つ以上の”及び“少なくとも１つの”は、本明細書で同じ意味で使われる。
また、本明細書で使う“及び／又は”は、２個の特定された特徴又は構成要素のそれぞれ一つを、もう一つの特徴又は構成要素と共に又は単独で具体的に開示するものと見なされるべきである。したがって、本明細書で“Ａ及び／又はＢ”のような語句において使われる用語“及び／又は”は、“Ａ及びＢ”、“Ａ又はＢ”、“Ａ”（単独）及び“Ｂ”（単独）を含むものとして意図される。同様に、“Ａ、Ｂ及び／又はＣ”のような語句において使われる用語“及び／又は”は、次のような態様のそれぞれを含むものとして意図される：Ａ、Ｂ及びＣ；Ａ、Ｂ又はＣ；Ａ又はＣ；Ａ又はＢ；Ｂ又はＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；及びＣ（単独）。
本明細書において、態様を、用語“含む”で記載すれば、“なる”及び／又は“本質的になる”の観点で記載された他の類似の態様も提供されるものと理解される。
特に定義しない限り、本明細書で使われる全ての技術及び科学用語は、本開示内容と関連した技術分野における通常の技術者にとって通常理解されるのと同じ意味を有する。例えば、Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｕｏ，Ｐｅｉ－Ｓｈｏｗ，２ｎｄ ｅｄ．，２００２，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ；Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ ｅｄ，１９９９，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；及びＯｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ Ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｒｅｖｉｓｅｄ，２０００，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓは、当業者に、本開示内容で使われている用語の多数を提供している。
単位、接頭辞及び記号は、これらのＳｙｓｔｅｍｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｄｅ Ｕｎｉｔｅｓ（ＳＩ）で認めた形態で表示される。数値範囲は、当該範囲を限定する数字を含む。特に表示されない限り、アミノ酸配列は、アミノからカルボキシに向かって左側から右側に書かれる。本明細書で提供された表題は、開示内容の様々な態様の制限ではなく、それらは全体的に明細書を参照したものであり得る。したがって、次に定義された用語は、明細書全般を参照してより完全に定義される。
本明細書において用語“約”は、ほぼ、概略、程度又はその領域内を意味するものとして使われる。用語“約”が数値範囲と共に使われる場合、記載されている数値の上と下へ境界を拡張して当該範囲を変更する。一般に、用語“約”は、明示された値の上と下の数値を、例えば、上又は下の（より高かいかより低い）１０％の変化量だけ変更可能である。
用語“配列類似性１９を持つファミリー、メンバーＡ５”又は“ＦＡＭ１９Ａ５”は、相同性の高い５個のタンパク質のＴＡＦＡファミリー（ＦＡＭ１９ファミリーとも知られている）に属し、主に脳と脊髄で発現するタンパク質を指す。ＦＡＭ１９Ａ５は、ＴＡＦＡ５又はケモカイン様タンパク質ＴＡＦＡ－５とも知られている。
ヒトにおいてＦＡＭ１９Ａ５をコードする遺伝子は、染色体２２に位置している。選択的スプライシングによって生産されるとみられる、次のような複数のヒトＦＡＭ１９Ａ５（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｑ７Ｚ５Ａ７）アイソ型がある：１３２個のアミノ酸からなるアイソ型１（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｑ７Ｚ５Ａ７－１）、１２５個のアミノ酸からなるアイソ型２（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｑ７Ｚ５Ａ７－２）及び５３個のアミノ酸からなるアイソ型３（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｑ７Ｚ５Ａ７－３）。ヒトＦＡＭ１９Ａ５タンパク質は、膜結合及び可溶性（分泌）の形態で存在するとされる。アイソ型１は、一つの膜貫通領域を持つ膜であるとされる。Ｔａｎｇ Ｔ．Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ８３（４）：７２７－３４（２００４）に、分泌されたタンパク質（可溶性）として報告されたアイソ型２は、アミノ酸位置１－２５番に信号ペプチドを含有している。アイソ型１は、膜タンパク質であるとされ、ＥＳＴデータに基づいて予測される。下記は、３個の公知されたヒトＦＡＭ１９Ａ５アイソ型のアミノ酸配列である。
（Ｉ）アイソ型１（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｑ７Ｚ５Ａ７－１、膜貫通タンパク質）：このアイソ型を標準配列として選定した。
ＭＡＰＳＰＲＴＧＳＲ ＱＤＡＴＡＬＰＳＭＳ ＳＴＦＷＡＦＭＩＬＡ ＳＬＬＩＡＹＣＳＱＬ ＡＡＧＴＣＥＩＶＴＬ ＤＲＤＳＳＱＰＲＲＴ ＩＡＲＱＴＡＲＣＡＣ ＲＫＧＱＩＡＧＴＴＲ ＡＲＰＡＣＶＤＡＲＩ ＩＫＴＫＱＷＣＤＭＬ ＰＣＬＥＧＥＧＣＤＬ ＬＩＮＲＳＧＷＴＣＴ ＱＰＧＧＲＩＫＴＴＴ ＶＳ（配列番号１）
（ＩＩ）アイソ型２（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｑ７Ｚ５Ａ７－２、可溶性タンパク質）：
ＭＱＬＬＫＡＬＷＡＬ ＡＧＡＡＬＣＣＦＬＶ ＬＶＩＨＡＱＦＬＫＥ ＧＱＬＡＡＧＴＣＥＩ ＶＴＬＤＲＤＳＳＱＰ ＲＲＴＩＡＲＱＴＡＲ ＣＡＣＲＫＧＱＩＡＧ ＴＴＲＡＲＰＡＣＶＤ ＡＲＩＩＫＴＫＱＷＣ ＤＭＬＰＣＬＥＧＥＧ ＣＤＬＬＩＮＲＳＧＷ ＴＣＴＱＰＧＧＲＩＫ ＴＴＴＶＳ（配列番号２）
（ＩＩＩ）アイソ型３（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｑ７Ｚ５Ａ７－３）：
ＭＹＨＨＲＥＷＰＡＲ ＩＩＫＴＫＱＷＣＤＭ ＬＰＣＬＥＧＥＧＣＤ ＬＬＩＮＲＳＧＷＴＣ ＴＱＰＧＧＲＩＫＴＴ ＴＶＳ（配列番号３）
用語“ＦＡＭ１９Ａ５”は、細胞によって自然的に発現するＦＡＭ１９Ａ５の任意の変異体又はアイソ型を含む。したがって、本明細書に記載された抗体は、同一種内の異なるアイソ型（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５の異なるアイソ型）と交差反応したり、或いはヒト以外の種のＦＡＭ１９Ａ５（例えば、マウスＦＡＭ１９Ａ５）と交差反応し得る。これと違い、前記抗体は、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的であり得、異なる種とはいかなる交差反応も示さないことがある。ＦＡＭ１９Ａ５又はその任意の変異体及びアイソ型は、これらを自然的に発現させる細胞又は組織から分離されたり、或いは組換えによって生産され得る。ヒトＦＡＭ１９Ａ５をコードするポリヌクレオチドは、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＢＣ０３９３９６、及び次のような配列を有する：
Figure 2022515960000002
用語“抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）”及び“抗体（ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）”は、当業界の用語であり、本明細書で互換して使用可能であり、抗原に特異的に結合する抗原結合部位を持つ分子を指す。本明細書で使う用語は、全抗体及びこれらの任意の抗原結合断片（すなわち、“抗原結合部分”）又は単鎖を含む。一具現例において、“抗体”は、二硫化結合によって互いに連結された少なくとも２個の重（Ｈ）鎖及び２個の軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質又はその抗原結合部分を指す。さらに他の具現例において、“抗体”は、単一可変ドメイン、例えばＶＨＨドメインを含む単鎖抗体を指す。それぞれの重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＶＨと略す。）及び重鎖定常領域からなっている。特定の自然発生抗体において、前記重鎖定常領域は３個のドメインＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３からなっている。特定の自然発生抗体においてそれぞれの軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶＬと略す。）及び軽鎖定常領域からなっている。前記軽鎖定常領域は、一つのドメインＣＬからなっている。
前記ＶＨ及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称する、より保存された領域が散在している、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称する超可変性領域にさらに細分化できる。ＶＨ及びＶＬのそれぞれは、アミノ末端からカルボキシ末端まで次のような順序で配置されている３個のＣＤＲ及び４個のＦＲからなっている：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３及びＦＲ４。前記重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。前記抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、効果器細胞）及び古典的補体系の第１成分（Ｃｌｑ）をはじめとする宿主組織又は因子に免疫グロブリンが結合することを媒介できる。
用語“Ｋａｂａｔ番号表記（Ｋａｂａｔ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ）”及び類似の用語は、当業界で認定されており、抗体又はその抗原結合部分の重鎖及び軽鎖可変領域においてアミノ酸残基の番号を表記する体系のことを指す。特定の態様において、抗体のＣＤＲはＫａｂａｔ番号表記体系にしたがって決定され得る（例えば、Ｋａｂａｔ ＥＡ ＆ Ｗｕ ＴＴ（１９７１）Ａｎｎ ＮＹ Ａｃａｄ Ｓｃｉ １９０：３８２－３９１ ａｎｄ Ｋａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２参照）。Ｋａｂａｔ番号表記体系を用いると、抗体重鎖分子内ＣＤＲは、典型的に、アミノ酸位置３１～３５番（ＣＤＲ１）（場合によって３５番以降に１個又は２個の追加アミノ酸を含んでもよい（Ｋａｂａｔ番号表記方式では３５Ａ及び３５Ｂと称する。）、アミノ酸位置５０～６５番（ＣＤＲ２）及びアミノ酸位置９５～１０２番（ＣＤＲ３）に存在する。Ｋａｂａｔ番号表記体系用いると、抗体軽鎖分子内ＣＤＲは、典型的に、アミノ酸位置２４～３４番（ＣＤＲ１）、アミノ酸位置５０～５６番（ＣＤＲ２）及びアミノ酸位置８９～９７番（ＣＤＲ３）に存在する。特定の具現例において、本明細書に記載の抗体のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号表記方式によって決定している。
語句“Ｋａｂａｔにおけると同じアミノ酸位置番号表記”、“Ｋａｂａｔ位置”及びこれらの文法的変形は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）において抗体コンピレーションの重鎖可変ドメイン又は軽鎖可変ドメインに対して使われる番号表記体系のことを指す。この番号表記体系を用いると、実際の線形アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＷ又はＣＤＲの短縮又はこれに挿入することに該当するものに該当する追加アミノ酸を含有することができる。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２番以降に挿入された単一アミノ酸（Ｋａｂａｔによれば、残基５２ａ番）及び重鎖ＦＷ残基８２番以降に挿入された残基（例えば、Ｋａｂａｔによれば、残基８２ａ番、８２ｂ番及び８２ｃ番など）を含むことができる。表１Ｂを参照されたい。
Figure 2022515960000003
所定の抗体に対する残基のＫａｂａｔ番号表記は、“標準”Ｋａｂａｔ番号表記された配列と前記抗体の配列の相同性の領域において整列によって決定され得る。代わりに、Ｃｈｏｔｈｉａは、構造ループの位置のことを指す（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７））。Ｋａｂａｔ番号表記慣例を用いて番号表記した時、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ１ループの末端は、ループの長さによってＨ３２～Ｈ３４の間で変わる（これは、Ｋａｂａｔ番号表記方式がＨ３５ＡとＨ３５Ｂで挿入（ｉｎｓｅｒｔｉｏｎｓ）を置くためである；３５Ａも３５Ｂもないと、ループは３２で終わる；３５Ａだけあると、ループは３３で終わる；３５Ａと３５Ｂの両方があると、ループは３４で終わる）。ＡｂＭ超可変領域は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造ループ間の折衝を代弁するもので、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって用いられる。
ＩＭＧＴ（ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ）も、ＣＤＲを含む免疫グロブリン可変領域に対する番号表記体系を提供する。例えば、本明細書に参考として含まれるＬｅｆｒａｎｃ，Ｍ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：５５－７７（２００３）を参照されたい。ＩＭＧＴ番号表記体系は、５，０００個を超える配列の整列、構造データ及び超可変ループの特性分析に基づくものであり、全ての種に対して可変及びＣＤＲ領域の比較を容易にする。ＩＭＧＴ番号表記スキーマによれば、ＶＨ－ＣＤＲ１は２６番～３５番位置にあり、ＶＨ－ＣＤＲ２は位置５１番～５７番位置にあり、ＶＨ－ＣＤＲ３は９３番～１０２番位置にあり、ＶＬ－ＣＤＲ１は２７番～３２番位置にあり、ＶＬ－ＣＤＲ２は５０番～５２番位置にあり、ＶＬ－ＣＤＲ３は８９番～９７番位置にある。
本開示内容で論議される全ての重鎖定常領域アミノ酸位置に対して、番号表記は、配列分析された最初のヒトＩｇＧ１である骨髄腫タンパク質ＥＵのアミノ酸配列を記載したＥｄｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９６９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ６３（１）：７８－８５）に最初に記載されたＥＵインデックスに従う。Ｅｄｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．のＥＵインデックスはまた、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．，Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａに提示されている。これによって、語句“Ｋａｂａｔに提示されたＥＵインデックス”又は“ＫａｂａｔのＥＵインデックス”及び“Ｋａｂａｔに提示されたＥＵインデックスに従う位置．．．”及びこれらの文法的変形は、Ｋａｂａｔ １９９１に提示されたＥｄｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．のヒトＩｇＧ１ＥＵ抗体に基づく残基番号表記体系のことを指す。
可変ドメイン（重鎖及び軽鎖両方）及び軽鎖定常領域アミノ酸配列に用いられた番号表記体系は、Ｋａｂａｔ １９９１に提示されているものである。
抗体は、免疫グロブリン分子の任意の類型（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ又はＩｇＹ）、任意の類型（例えば、ＩｇＤ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１又はＩｇＡ２）、又は任意の亜型（例えば、ヒトにおいてＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４；及びマウスにおいてＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ及びＩｇＧ３）を有することができる。免疫グロブリン、例えば、ＩｇＧ１は、最大限でいくつかのアミノ酸において互いに異なる様々な同種異因子型（ａｌｌｏｔｙｐｅ）で存在する。本明細書に開示の抗体は、通常知られたアイソ型、類型、亜型又は同種異因子型のいずれかからなり得る。特定の具現例において、本明細書に記載の抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４亜型又はこれらの任意の混成型である。特定の具現例において、前記抗体は、ＩｇＧ２、ＩｇＧ又はＩｇＧ２／ＩｇＧ４亜型を有する。
“抗体”は、例えば、自然発生及び非自然発生抗体；単クローン性及び多クローン性抗体；キメラ及びヒト化抗体；ヒト及び非ヒト抗体、全合成抗体；単鎖抗体；単一特異的抗体；多重特異的抗体（二重特異的抗体を含む）；２個の重鎖と２個の軽鎖分子を含むテトラマー抗体；抗体軽鎖モノマー；抗体重鎖モノマー；抗体軽鎖ダイマー；抗体重鎖ダイマー；抗体軽鎖－抗体重鎖対；細胞内抗体（ｉｎｔｒａｂｏｄｙ）；ヘテロコンジュゲート（ｈｅｔｅｒｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）抗体；１価抗体；単鎖抗体；ラクダ化（ｃａｍｅｌｉｚｅｄ）抗体；アフィボディ（ａｆｆｙｂｏｄｙ）；抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、抗抗Ｉｄ抗体を含む）、及び完全に抗原結合可能な単一モノマー可変抗体ドメイン（例えば、ＶＨドメイン又はＶＬドメイン）からなる結合分子を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含む（Ｈａｒｍｅｎ Ｍ．Ｍ．ａｎｄ Ｈａａｒｄ Ｈ．Ｊ．Ａｐｐｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７７（１）：１３－２２（２００７））。
本明細書で使う用語、抗体の“抗原結合部分”は、抗原（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合する能力を保有した抗体の１つ以上の断片のことを指す。このような“断片”は、例えば、約８～約１５００個のアミノ酸長であり、好適には、約８～約７４５個アミノ酸長、好適には約８～約３００個、例えば、約８～約２００個アミノ酸又は約１０個～約５０個又は１００個アミノ酸長である。抗体の抗原結合機能は全長抗体の断片によって行われ得るということが明らかにされた。抗体、例えば、本明細書に記載の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の“抗原結合部分”という用語に含まれる結合断片の例は、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなる１価断片であるＦａｂ断片；（ｉｉ）ヒンジ領域で二硫化連結部によって連結された２個のＦａｂ断片を含む２価断片であるＦ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一腕のＶＬ及びＶＨドメイン及び二硫化連結されたＦｖｓ（ｓｄＦｖ）からなるＦｖ断片；（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４－５４６）；及び（ｖｉ）分離された相補性決定領域（ＣＤＲ）又は（ｖｉｉ）場合によって合成リンカーによって接合され得る２個以上の分離されたＣＤＲの組合せを含む。また、Ｆｖ断片の２個のドメインであるＶＬとＶＨは、別個の遺伝子によってコードされるが、これらは、組換え方法を用いてこれらをＶＬとＶＨ領域が対をなして１価分子を形成する単一タンパク質鎖（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られている）として作り得る合成リンカーによって接合され得る；例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６；及びＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３参照。このような単鎖抗体はまた、抗体の“抗原結合部分”という用語内に含まれるものと意図される。これらの抗体断片は、当業者に公知の従来技術を用いて得られ、前記断片は、無損傷抗体と同じ方式で有用性に対してスクリーニングされる。抗原結合部分は、組換えＤＮＡ技術によって又は無損傷免疫グロブリンの酵素的又は化学的切断によって生成され得る。
本明細書で使われる用語“可変領域”と“可変ドメイン”は互換され、当業界において普遍的である。前記可変領域とは、典型的に抗体の一部、一般に軽鎖又は重鎖の一部を指すものであり、典型的に、前記成熟した重鎖内には約アミノ末端１１０～１２０個のアミノ酸があり、前記成熟した軽鎖内には約９０～１１５個のアミノ酸があり、これらは、抗体間において配列が広範囲に異なり、特定抗体の特定抗原に対する結合と特異性において使用される。前記配列可変性は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる領域に集中するが、前記可変ドメインにおいてより高度に保存された領域はフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。
特定機転又は理論に限定されるわけではないが、前記軽鎖及び重鎖のＣＤＲは、抗原と抗体の相互作用及び特異性を主に担当するものとみられる。特定の具現例において、前記可変領域は、ヒト可変領域である。特定の具現例において、前記可変領域は、齧歯類又はネズミ科のＣＤＲとヒトフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。特定の具現例において、前記可変領域は、霊長類（例えば、非ヒト霊長類）可変領域である。特定の具現例において、前記可変領域は、齧歯類又はネズミ科のＣＤＲと霊長類（例えば、非ヒト霊長類）フレームワーク領域（ＦＲ）を含む。
本明細書で使う用語“重鎖（ＨＣ）”は、抗体と関連して用いたとき、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいてＩｇＧの亜型、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４を含み、それぞれ抗体のＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭ類型を発生させる任意の別個のタイプ、例えば、アルファ（α）、デルタ（δ）、エプシロン（ε）、ガンマ（γ）及びミュー（μ）を指すことができる。
本明細書で使う用語“軽鎖（ＬＣ）”は、抗体と関連して用いたとき、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて任意の別個のタイプ、例えば、カッパ（κ）及びラムダ（λ）のことを指すことができる。軽鎖アミノ酸配列は、当業界によく公知されている。特定の具現例において、前記軽鎖は、ヒト軽鎖である。
用語“ＶＬ”及び“ＶＬドメイン”は、抗体の軽鎖可変領域のことを指すために互換的に使われる。
用語“ＶＨ”及び“ＶＨドメイン”は、抗体の重鎖可変領域のことを指すために互換的に使われる。
本明細書で使う用語“定常領域”又は“定常ドメイン”は互換的であり、当業界における通常の意味を有する。前記定常ドメインは、抗体部分、例えば、抗原に対する抗体の結合に直接関与することはないが、Ｆｃ受容体との相互作用のような様々な効果器機能を示し得る軽鎖及び／又は重鎖のカルボキシ末端部分である。免疫グロブリン分子の定常領域は一般に、免疫グロブリン可変ドメインに比べてより保存されたアミノ酸配列を有する。
“Ｆｃ領域”（断片結晶化可能な領域）又は“Ｆｃドメイン”又は“Ｆｃ”は、免疫系の様々な細胞（例えば、効果器細胞）上に位置しているＦｃ受容体又は古典的補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）に対する結合を含み、宿主組織又は因子に免疫グロブリンが結合することを媒介する抗体の重鎖のＣ末端領域のことを指す。これによって、Ｆｃ領域は、第１定常領域免疫グロブリンドメイン（例えば、ＣＨ１又はＣＬ）を除く抗体の定常領域を含む。ＩｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇＤ抗体アイソ型において、Ｆｃ領域は、抗体の２個の重鎖の第２（ＣＨ２）及び第３（ＣＨ３）定常ドメインから由来した２個の同じタンパク質断片を含み；ＩｇＭ及びＩｇＥ Ｆｃ領域は、それぞれのポリペプチド鎖にある３個の重鎖定常ドメイン（ＣＨドメイン２～４）を含む。ＩｇＧの場合、Ｆｃ領域は免疫グロブリンドメインＣγ２とＣγ３との間及びＣγ１とＣγ２との間のヒンジを含む。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変わり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は一般に、Ｃ２２６番又はＰ２３０番の位置にあるアミノ酸残基（又は、これら２個のアミノ酸の間のアミノ酸）から重鎖のカルボキシ末端まで伸長されるものに限定されるが、番号表記は、Ｋａｂａｔにおけると同様にＥＵインデックスに従う。ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、約アミノ酸２３１番から約アミノ酸３４０番に延長されており、ＣＨ３ドメインは、Ｆｃ領域においてＣｍドメインのＣ末端側に位置しているところ、すなわち、ＩｇＧの約アミノ酸３４１番から約アミノ酸４４７番に延長されている。本明細書で使うＦｃ領域は、任意の同種異因子型変異体を含む天然配列Ｆｃ、又は変異体Ｆｃ（例えば、非自然発生Ｆｃ）であり得る。Ｆｃはまた、この領域が分離状態にあるか、又は“Ｆｃ融合タンパク質”（例えば、抗体又は免疫癒着（ｉｍｍｕｎｏａｄｈｅｓｉｏｎ））とも呼ばれる“Ｆｃ領域を含む結合タンパク質”のようなＦｃ含有タンパク質ポリペプチドと関連して意味するものであり得る。
“天然配列Ｆｃ領域”又は“天然配列Ｆｃ”は、自然から発見されたＦｃ領域のアミノ酸配列と同じアミノ酸配列を含む。天然配列ヒトＦｃ領域は、天然配列ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域；天然配列ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域；天然配列ヒトＩｇＧ３ Ｆｃ領域；及び天然配列ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域だけでなく、これらの自然発生変異体も含む。天然配列Ｆｃは、Ｆｃの様々な同種異因子型を含む（例えば、Ｊｅｆｆｅｒｉｓ ｅｔ ａｌ．（２００９）ｍＡｂｓ １：１；Ｖｉｄａｒｓｓｏｎ Ｇ．ｅｔ ａｌ．Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（２０１４年１０月２０日オンライン公開）参照）。
“Ｆｃ受容体”又は“ＦｃＲ”は、免疫グロブリンのＦｃ領域に結合する受容体である。ＩｇＧ抗体に結合するＦｃＲは、ＦｃγＲファミリーの受容体とこれら受容体の対立遺伝子変異体及び他の方式でスプライシングされた形態を含む。前記ＦｃγＲファミリーは、３個の活性化受容体（マウスのＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＩ及びＦｃγＲＩＶ；ヒトのＦｃγＲＩＡ、ＦｃγＲＩＩＡ及びＦｃγＲＩＩＩＡ）と一つの阻害受容体（ＦｃγＲＩＩＢ）からなっている。ヒトＩｇＧ１は、大部分のヒトＦｃ受容体と結合し、最も強いＦｃ効果器機能を導き出す。ヒトＩｇＧ１は、それが結合する活性化Ｆｃ受容体の類型と関連してネズミのＩｇＧ２ａと同等なものと見なすことができる。逆に、ヒトＩｇＧ４は、最小のＦｃ効果器機能を導き出す（Ｖｉｄａｒｓｓｏｎ Ｇ．ｅｔ ａｌ．Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（２０１４年１０月２０日オンライン公開）参照）。
前記定常領域は、１つ以上の効果器機能を除去するために、例えば組換え技術によって操作され得る。“効果器機能”は、抗体Ｆｃ領域とＦｃ受容体又はリガンドの相互作用又はそれから生じる生化学的反応を指す。例示的な“効果器機能”は、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、ＡＤＣＣ及び抗体依存性細胞媒介食作用（ＡＤＣＰ）のようなＦｃγＲ媒介効果器機能及び細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体；ＢＣＲ）の下向き調節を含む。このような効果器機能は一般に、Ｆｃ領域が結合ドメイン（例えば、抗体可変ドメイン）と組み合わせられることを必要とする。したがって、用語“Ｆｃ機能のない定常領域”は、Ｆｃ領域によって媒介された１つ以上の効果器機能が減少したり又は存在しない定常領域を含む。
抗体の効果器機能は、互いに異なる接近法によって減少又は回避され得る。抗体の効果器機能は、Ｆｃ領域が欠如している抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）又はモノマーＶＨ又はＶＬドメインからなるｓｄＡｂのような）を使用することによって減少又は回避され得る。これと違い、Ｆｃ領域の他の価値ある特性（例えば、長い半減期及びヘテロダイマー化）は保有しながらＦｃ領域において特定残基に連結されている糖を除去して抗体の効果器機能を減少させることによって、いわゆる無糖化（ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ）抗体が生成され得る。無糖化抗体は、例えば、糖が付着している残基を欠失又は変更することによって、糖を酵素的に除去することによって、グリコシル化阻害剤の存在の下に培養された細胞に抗体を生産することによって、又はタンパク質をグリコシル化できない細胞（例えば、バクテリア宿主細胞）において抗体を発現させることによって生成され得る。例えば、米国特許公開番号２０１２０１００１４０を参照する。他の接近法は、効果器機能が減少したＩｇＧ亜型のＦｃ領域を利用することであり、例えば、ＩｇＧ２及びＩｇＧ４抗体は、ＩｇＧ１及びＩｇＧ３に比べてより低いレベルのＦｃ効果器機能を有することを特徴とする。Ｆｃ部分のＣＨ２ドメインにおいてヒンジ領域の最も近くにある残基が抗体の効果器機能を担当するが、先天免疫系の効果器細胞上でＣ１ｑ（補体）及びＩｇＧ－Ｆｃ受容体（ＦｃγＲ）に対して大きく重なった結合部位を含有しているわけである（Ｖｉｄａｒｓｓｏｎ Ｇ．ｅｔ ａｌ．Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（２０１４年１０月２０日オンライン公開））。したがって、Ｆｃ効果器機能が減少したり或いは存在しない抗体は、例えば、ＩｇＧ４アイソ型のＩｇＧ抗体のＣＨ２ドメインとＩｇＧ１アイソ型のＩｇＧ抗体のＣＨ３ドメインを含むキメラＦｃ領域、又はＩｇＧ２のヒンジ領域とＩｇＧ４のＣＨ２領域を含むキメラＦｃ領域（例えば、Ｌａｕ Ｃ．ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９１：４７６９－４７７７（２０１３）参照）、又はＦｃ効果器機能を変更、例えばＦｃ機能を減少させたり或いはなくす突然変異を持つＦｃ領域を生成させることによって製造され得る。突然変異があるこのようなＦｃ領域は、当業界に公知されている。例えば、開示内容が全体的に本明細書に参考として含まれる米国特許公開番号２０１２０１００１４０とそこに引用されている米国出願とＰＣＴ出願及びＡｎ ｅｔ ａｌ．，ｍＡｂｓ １：６，５７２－５７９（２００９）を参照する。
“ヒンジ”、“ヒンジドメイン”又は“ヒンジ領域”又は“抗体ヒンジ領域”は、ＣＨ１ドメインをＣＨ２ドメインと接合させてヒンジの上、中及び下部を含む重鎖定常領域のドメインのことを指す（Ｒｏｕｘ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９８ １６１：４０８３）。前記ヒンジは抗体の結合及び効果器領域間の可撓性のレベル変化を提供し、また２個の重鎖定常領域間の分子間二硫化結合のための部位を提供する。本明細書で用いられるヒンジは、全てのＩｇＧアイソ型に対してＧｌｕ２１６から始まってＧｌｙ２３７で終わる（Ｒｏｕｘ ｅｔ ａｌ．，１９９８ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６１：４０８３）。野生型ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４ヒンジの配列は当業界に知られている。例えば、Ｋａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２；Ｖｉｄａｒｓｓｏｎ Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（２０１４年１０月２０日オンライン公開）を参照する。
用語“ＣＨ１ドメイン”は、重鎖定常ドメインにおいてヒンジに可変ドメインを連結する重鎖定常領域のことを指す。本明細書で使うＣＨ１ドメインは、Ａ１１８から始まってＶ２１５で終わる。用語“ＣＨ１ドメイン”は、野生型ＣＨ１ドメインだけでなく、その自然に存在する変異体（例えば、同種異因子型）を含む。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４（野生型及び同種異因子型を含む）のＣＨ１ドメイン配列は、当業界に公知されている（例えば、上のＫａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）及びＶｉｄａｒｓｓｏｎ Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（２０１４年１０月２０日オンライン公開参照）。例示的なＣＨ１ドメインは、例えば、米国特許公開第２０１２０１００１４０号及びそこに引用されている米国特許、公開公報及びＰＣＴ公報に記載されている抗体の生物学的活性、例えば、半減期を変更する突然変異を持つＣＨ１ドメインを含む。
用語“ＣＨ２ドメイン”は、重鎖定常ドメインでＣＨ３ドメインにヒンジを連結する重鎖定常領域のことを指す。本明細書で使うＣＨ２ドメインは、Ｐ２３８から始まってＫ３４０で終わる。用語“ＣＨ２ドメイン”は、野生型ＣＨ２ドメインだけでなく、その自然に存在する変異体（例えば、同種異因子型）を含む。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４（野生型及び同種異因子型を含む）のＣＨ２ドメイン配列は、当業界に公知されている（例えば、上のＫａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）及びＶｉｄａｒｓｓｏｎ Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（２０１４年１０月２０日オンライン公開参照）。例示的なＣＨ２ドメインは、例えば、米国特許公開第２０１２０１００１４０号及びそこに引用されている米国特許、公開公報及びＰＣＴ公報に記載されている抗体の生物学的活性、例えば、半減期及び／又は減少したＦｃ効果器機能を変更する突然変異を持つＣＨ２ドメインを含む。
用語“ＣＨ３ドメイン”は、重鎖定常ドメインにおいてＣＨ２ドメインに対してＣ末端である重鎖定常領域のことを指す。本明細書で使うＣＨ３ドメインは、Ｇ３４１から始まってＫ４４７で終わる。用語“ＣＨ３ドメイン”は、野生型ＣＨ３ドメインだけでなく、その自然に存在する変異体（例えば、同種異因子型）を含む。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４（野生型及び同種異因子型を含む）のＣＨ３ドメイン配列は、当業界に公知されている（例えば、上のＫａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）及びＶｉｄａｒｓｓｏｎ Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（２０１４年１０月２０日オンライン公開参照）。例示的なＣＨ３ドメインは、例えば、米国特許公開第２０１２０１００１４０号及びそこに引用されてい米国特許、公開公報及びＰＣＴ公報に記載されている抗体の生物学的活性、例えば半減期を変更する突然変異を持つＣＨ３ドメインを含む。
本明細書で使う“アイソ型”は、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる抗体類型（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、及びＩｇＥ抗体）のことを指す。
“同種異因子型”は、いくつのアミノ酸を異にする特定アイソ型グループ内自然発生変異体のことを指す（例えば、Ｊｅｆｆｅｒｉｓ ｅｔ ａｌ．，（２００９）ｍＡｂｓ １：１参照）。本明細書に記載されている抗体は、任意の同種異因子型を有することができる。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４の同種異因子型は、当業界に公知されている。例えば、上のＫａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）；Ｖｉｄａｒｓｓｏｎ Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（２０１４年１０月２０日オンライン公開）；及びＬｅｆｒａｎｃ ＭＰ，ｍＡｂｓ １：４，１－７（２００９）を参照する。
語句“抗原を認識する抗体”及び“抗原に特異的な抗体”は、用語“抗原に特異的に結合する抗体”と本明細書で互換して使われる。
本明細書で使う“分離された抗体”は、互いに異なる抗原特異性を持つ他の抗体が実質的にない抗体を意味する（例えば、ＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する分離された抗体は、ＦＡＭ１９Ａ５以外の抗原に特異的に結合する抗体が実質的にない）。しかし、ＦＡＭ１９Ａ５のエピトープに特異的に結合する分離された抗体は、互いに異なる種の他のＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に交差反応性を有することができる。
“結合親和性”は、一般に、分子（例えば、抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）間の非共有相互作用の総和の強度を意味する。別段の提示がない限り、本明細書で使う“結合親和性”は、結合対のメンバー（例えば、抗体と抗原）間１：１相互作用を反映した固有結合親和性を意味する。パートナーＹに対する分子Ｘの親和性は、一般に、解離定数（ＫＤ）によって表現され得る。親和性は、平衡解離定数（ＫＤ）と平衡結合定数（ＫＡ）を含むが、これに限定されない当業界に公知の多数の方法で測定及び／又は表示され得る。前記ＫＤは、ｋｏｆｆ／ｋｏｎの商から計算され、モル濃度（Ｍ）で表示され、ＫＡはｋｏｎ／ｋｏｆｆの商から計算される。ｋｏｎは、例えば、抗原に対する抗体の結合速度定数を意味し、ｋｏｆｆは、例えば、抗原に対する抗体の解離を意味する。ｋｏｎ及びｋｏｆｆは、免疫分析（例えば、酵素結合免疫吸着分析（ＥＬＩＳＡ））、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）又は力学的排除分析（ＫｉｎＥｘＡ）のように当業者に公知の技術によって決定され得る。
本明細書で使う用語“特異的に結合”、“特異的に認識”、“特異的結合”、“選択的結合”及び“選択的に結合”は、抗体と関連して類似の用語であり、抗原（例えば、エピトープ又は免疫複合体）に結合する分子（例えば、抗体）のことを指し、結合は、当業者によって理解されるものである。例えば、抗原に特異的に結合する分子は、例えば免疫分析、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標），ＫｉｎＥｘＡ ３０００機器（Ｓａｐｉｄｙｎｅ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｂｏｉｓｅ，ＩＤ）又は当業界に公知されている他の分析法によって決定したとき、通常、より低い親和度を持つ他のペプチド又はポリペプチドに結合し得る。特定の具現例において、抗原に特異的に結合する分子は、この分子が他の抗原に結合するとき、ＫＡに比べて、少なくとも２ｌｏｇｓ、２．５ｌｏｇｓ、３ｌｏｇｓ、４ｌｏｇｓ以上さらに大きいＫＡで前記抗原に結合する。
抗体は典型的に、１０－５～１０－１１Ｍ以下の解離定数（ＫＤ）によって反映される高い親和度でこれらの同族抗原（ｃｏｇｎａｔｅ ａｎｔｉｇｅｎ）に特異的に結合する。約１０－４Ｍを超える任意のＫＤは一般に、非特異的結合を意味すると見なされる。本明細書で使う抗原に“特異的に結合する”抗体は、高い親和度で抗原及び実質的に同じ抗原に結合する抗体のことを指し、これは、例えば、前記所定の抗原を使用するＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）２０００機器で免疫分析（例えば、ＥＬＩＳＡ）又は表面プラズマ共鳴（ＳＰＲ）技術によって決定したとき、１０－７Ｍ以下、好ましくは１０－８Ｍ以下、より好ましくは１０－９Ｍ以下、最も好ましくは１０－８Ｍ～１０－１０Ｍ以下のＫＤを有することを意味するが、この抗体は、関連のない抗原には高い親和度で結合しない。
本明細書で使う“抗原”は、タンパク質、ペプチド又はハプテン（ｈａｐｔｅｎ）のような任意の天然又は合成免疫原性物質のことを指す。抗原は、ＦＡＭ１９Ａ５又はその断片であり得る。
本明細書で使う“エピトープ”は、当業界の用語で、抗体が特異的に結合できる抗原の局在化された領域を指す。エピトープは、例えばポリペプチドの隣接アミノ酸（線形又は隣接エピトープ）であるか、又はエピトープは、例えばポリペプチド又はポリペプチドの２個以上の隣接しない領域が集合したもの（立体形態、非線形、不連続又は非隣接エピトープ）であり得る。隣接アミノ酸から形成されたエピトープは、いつもではないが、典型的に変性（ｄｅｎａｔｕｒｉｎｇ）溶媒に露出時に維持されるのに対し、３次フォルディングによって形成されたエピトープは、典型的に変性溶媒で処理時に喪失される。エピトープは典型的に、特有の空間的立体形態内に少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又は２０個のアミノ酸を含む。所定の抗体によってどのエピトープが結合するかを決定するための方法（すなわち、エピトープマッピング）は、当業界によく公知されており、例えば（例えば、ＦＭＡ１９Ａ５の）重複又は隣接ペプチドを所定の抗体（例えば、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体）との反応性に対して試験する免疫ブロットと免疫沈殿分析を含む。エピトープの空間的立体形態を決定する方法は、当業界における技術及び本明細書に記載の技術、例えばｘ線結晶学、２次元核磁気共鳴及びＨＤＸ－ＭＳを含む（例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６，Ｇ．Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．（１９９６）参照）。
特定の具現例において、前記抗体が結合するエピトープは、例えば、ＮＭＲ分光法、Ｘ線回折結晶学研究、ＥＬＩＳＡ分析、質量分光分析と結合した水素／重水素交換（例えば、液体クロマトグラフィー電子噴霧質量分光分析）、アレイベースのオリゴペプチドスキャニング分析及び／又は突然変異誘発マッピング（例えば、部位指向突然変異誘発マッピング）によって決定され得る。Ｘ線結晶学の場合、結晶化は当業界に公知の方法のいずれかを用いて達成され得る（例えば、Ｇｉｅｇｅ Ｒ ｅｔ ａｌ，（１９９４）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ５０（Ｐｔ４）：３３９－３５０；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ Ａ（１９９０）Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ １８９：１－２３；Ｃｈａｙｅｎ ＮＥ（１９９７）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ５：１２６９－１２７４；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ Ａ（１９７６）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２５１：６３００－６３０３参照）。抗体：抗原結晶は、周知のＸ線回折技術を用いて研究でき、Ｘ－ＰＬＯＲ（Ｙａｌｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，１９９２，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．によって配布；例えば、Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ（１９８５）ｖｏｌｕｍｅｓ １１４ ＆ １１５，ｅｄｓ Ｗｙｃｋｏｆｆ Ｈ．Ｗ．ｅｔ ａｌ．，；Ｕ．Ｓ．２００４／００１４１９４参考）及びＢＵＳＴＥＲ（Ｂｒｉｃｏｇｎｅ Ｇ．（１９９３）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ４９（Ｐｔ１）：３７－６０；Ｂｒｉｃｏｇｎｅ Ｇ．（１９９７）Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ ２７６Ａ：３６１－４２３，ｅｄ Ｃａｒｔｅｒ ＣＷ；Ｒｏｖｅｒｓｉ Ｐ．ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ５６（Ｐｔ １０）：１３１６－１３２３）のようなコンピュータソフトウェアを用いて精製（ｒｅｆｉｎｅ）され得る。突然変異誘発マッピング研究は、当業者に公知された任意の方法を用いて行うことができる。アラニンスキャニング突然変異誘発技術を含む突然変異誘発技術の記載については、例えば、Ｃｈａｍｐｅ Ｍ．ｅｔ ａｌ．，（１９９５）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７０：１３８８－１３９４及びＣｕｎｎｉｎｇｈａｍ Ｂ．Ｃ． ＆ Ｗｅｌｌｓ Ｊ．Ａ．（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１０８１－１０８５を参考する。
用語“エピトープマッピング”は、抗体抗原認識に対する分子決定要因の同定過程を指す。
２個以上の抗体と関連して用語“同一エピトープに結合”は、所定の方法によって決定するとき、抗体がアミノ酸残基の同一セグメントに結合するということを意味する。抗体が本明細書に記載の抗体と“ＦＡＭ１９Ａ５上の同一エピトープ”に結合するか否かを決定するための技術は、エピトープマッピング方法、例えばエピトープの原子分解能を提供する抗原：抗体複合体の結晶のｘ線分析及び水素／重水素交換質量分光分析（ＨＤＸ－ＭＳ）を含む。他の方法は、抗原断片又は抗原の突然変異した変異体に対する抗体の結合をモニタリングすることであり、ここで、前記抗原配列内のアミノ酸残基の変形による結合損失は、だいてい、エピトープ成分の表示として見なされる。また、エピトープマッピングのための電算組合せ法も利用可能である。これらの方法は、組合せファージディスプレイペプチドライブラリーから特定の短いペプチドを親和性分離する関心抗体の能力に依存する。同じＶＨ及びＶＬ又は同じＣＤＲ１、２及び３配列を有する抗体は、同じエピトープに結合すると予想される。
“標的との結合に対して他の抗体と競合”する抗体は、前記他の抗体の標的結合を（部分的に又は完全に）阻害する抗体を指す。２個の抗体が標的との結合に対して互いに競合するか否か、すなわち一つの抗体が他の抗体の標的結合を阻害するか否か、及び阻害する程度は、公知の競合実験を用いて決定することができる。特定の具現例において、一つの抗体は他の抗体の標的結合において競合し、この結合を少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は１００％まで阻害する。阻害又は競合レベルは、抗体が“遮断抗体”（すなわち、標的とまず培養される低温抗体）であるかどうかによって異なり得る。競合分析は、例えば、Ｅｄ．Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄａｖｉｄ Ｌａｎｅ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ Ｐｒｏｔｏｃ；２００６；ｄｏｉ：１０．１１ ０１／ｐｄｂ．ｐｒｏｔ ４２７７又はＥｄ．Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄａｖｉｄ Ｌａｎｅ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，ＵＳＡ １９９９による“Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ”の第１１章に記載されたとおりに実施できる。競合抗体は、同一エピトープ、重複エピトープ又は隣接エピトープ（例えば、立体障害で立証される）に結合する。
他の競合結合分析としては、固相直接又は間接放射性免疫分析（ＲＩＡ）、固相直接又は間接酵素免疫分析（ＥＩＡ）、サンドウィッチ競合分析（Ｓｔａｈｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ９：２４２（１９８３）参照）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（Ｋｉｒｋｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４（１９８６）参照）；固相直接標識化分析、固相直接標識化サンドウィッチ分析（Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ（１９８８）参照）；１－１２５標識を使用する固相直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｒｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５（１）：７（１９８８）参照）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（Ｃｈｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７６：５４６（１９９０）参照）；及び直接標識化ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：７７（１９９０）参照）を含む。
“二重特異的”又は“二重機能性抗体”は、２個の異なる重鎖／軽鎖対が２個の異なる結合部位を持つ人工混成抗体である。二重特異的抗体は、ハイブリドーマの融合又はＦａｂ’断片の連結を含む様々な方法によって生産され得る。例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ ＆ Ｌａｃｈｍａｎｎ，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７９：３１５－３２１（１９９０）；Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８，１５４７－１５５３（１９９２）を参照する。
本明細書で使う“単クローン性抗体”は、特定エピトープに対して単一結合特異性と親和性を示す抗体であるか、又は全ての抗体が特定エピトープに対して単一結合特異性と親和性を示す抗体組成のことを指す。したがって、用語“ヒト単クローン性抗体”は、単一結合特異性を示し、ヒト生殖系（ｇｅｒｍｌｉｎｅ）免疫グロブリン配列から由来した可変及び選択的定常領域を有する抗体又は抗体組成のことを指す。一部の具現例において、ヒト単クローン性抗体は、例えば、不滅化細胞に融合されたヒト重鎖転移遺伝子と軽鎖転移遺伝子を含むゲノムを持つ遺伝子導入（ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ）非ヒト動物、例えば遺伝子導入マウスから得たＢ細胞を含むハイブリドーマによって生産される。
本明細書で使う用語“組換えヒト抗体”は、（ａ）ヒト免疫グロブリン遺伝子に対して遺伝子導入又は染色体導入（ｔｒａｎｓｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ）動物（例えば、マウス）から分離された抗体又はそれから製造されたハイブリドーマ、（ｂ）抗体を発現させるために形質転換された宿主細胞から、例えばトランスフェクトーマ（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｏｍａ）から分離された抗体、（ｃ）組換え組合せヒト抗体ライブラリーから分離された抗体、及び（ｄ）他のＤＮＡ配列にヒト免疫グロブリン遺伝子配列をスプライシングすることを伴う任意の他の手段によって製造、発現、生成又は分離された抗体、のような組換え手段によって製造、発現、生成又は分離された全てのヒト抗体を含む。このような組換えヒト抗体は、生殖系遺伝子によってコードされる特定のヒト生殖系免疫グロブリン配列を用いるが、例えば、抗体成熟化中に起こる後続再配列と突然変異を含む可変及び定常領域を含む。当業界に公知された通り（例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇ（２００５）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３（９）：１１１７－１１２５参照）、前記可変領域は、外来抗原に対して特異的な抗体を形成するように再配列される様々な遺伝子によってコードされる抗原結合ドメインを含有する。再配列の他にも、前記可変領域は、外来抗原に対する抗体の親和性を増加させるために多数の単一アミノ酸変化（体細胞突然変異又は超突然変異という）によってさらに変形され得る。前記定常領域は、抗原に対する追加反応にしたがって変わるだろう（すなわち、アイソ型変化）。したがって、抗原に反応して軽鎖及び重鎖免疫グロブリンポリペプチドをコードする、再配列され体細胞突然変異した核酸分子は、本来の核酸分子と配列同一性を有することはできないが、その代わりに、実質的に同一又は類似するであろう（すなわち、少なくとも８０％同一性を有する）。
“ヒト”抗体（ＨｕＭＡｂ）は、フレームワークとＣＤＲ領域が両方ともヒト生殖系免疫グロブリン配列から由来した可変領域を有する抗体のことを指す。また、前記抗体が定常領域を含有すると、前記定常領域もヒト生殖系免疫グロブリン配列から由来する。本明細書に記載の抗体は、ヒト生殖系免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、試験管内無作為又は部位特異的突然変異誘発によって又は生体内体細胞突然変異によって導入された突然変異）を含むことができる。しかし、本明細書で使用する用語“ヒト抗体”は、マウスのような他の哺乳類種の生殖系から由来したＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列に移植された抗体を含もうとするものではない。用語“ヒト”抗体と“完全なヒト”抗体は同じ意味で使われる。
“ヒト化”抗体は、非ヒト抗体のＣＤＲドメイン外部のアミノ酸の一部、大部分又は全部が、ヒト免疫グロブリンから由来した相応するアミノ酸に置換された抗体のことを指す。抗体のヒト化された形態の一部の具現例において、ＣＤＲドメイン外部のアミノ酸の一部、大部分又は全部がヒト免疫グロブリンのアミノ酸に置換されており、１つ以上のＣＤＲ領域内部のアミノ酸の一部、大部分又は全部は変わらずに残っている。アミノ酸の小さい添加、欠失、挿入、置換又は変形は、これらが特定抗原に結合する抗体の能力をなくさない限り、許容可能である。“ヒト化”抗体は、原抗体の抗原特異性に類似する抗原特異性を維持する。
本明細書で使う用語“脱免疫化された”又は“脱免疫化”とは、抗体又はその抗原結合部分が、例えばヒト対象においてそれの免疫原性を減少させるために変形される過程のことを指す。例えば、原抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を分析することができ、それぞれのＶ領域から前記配列内相補性決定領域（ＣＤＲ）及び他の主要残基に対してエピトープの位置を示すヒトＴ細胞エピトープ“マップ”を生成することができる。最終抗体の活性を変化させる恐れが少ない代替アミノ酸置換を同定するために、Ｔ細胞エピトープマップから個別Ｔ細胞エピトープを分析する。アミノ酸置換の組合せを含む様々な代替ＶＨ及びＶＬ配列を設計し、続いて、これらの配列を本明細書に開示の診断及び治療方法に使用するために、広範なＦＡＭ１９Ａ５特異的抗体又はその抗原結合部分に導入した後、機能について試験する。次に、変形されたＶ及びヒトＣ領域を含む完全な重鎖及び軽鎖遺伝子を、発現ベクター及び全抗体（ｗｈｏｌｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ）生産のために細胞株に導入された後続プラスミドにクローニングする。次に、前記抗体を適切な生化学及び生物学的分析法で比較し、最適の変異体を同定する。抗体は、本明細書に記載の方法又は当業界に公知の任意の他の方法によって脱免疫化れ得る。例えば、ＷＯ９８／５２９７６又はＷＯ００／３４３１７を参照する。
“キメラ抗体”は、マウス抗体から可変領域が由来し、ヒト抗体から定常領域が由来した抗体のように、一つの種から可変領域が由来し、他の種から定常領域が由来した抗体のことを指す。
本明細書で使う用語“交差反応”は、異なる種のＦＡＭ１９Ａ５に結合する本明細書に記載の抗体の能力を指す。例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合する本明細書に記載の抗体は、他の種のＦＡＭ１９Ａ５（例えば、マウスＦＡＭ１９Ａ５）にも結合できる。本明細書で使う交差反応性は、結合分析（例えば、ＳＰＲ、ＥＬＩＳＡ）で精製された抗原との特異的反応性を検出することによって又はＦＡＭ１９Ａ５を生理学的に発現する細胞に結合したり又はそれとも前記細胞と機能的に相互作用することによって測定され得る。交差反応性を決定するための方法は、本明細書に記載されている標準結合分析、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）２０００ ＳＰＲ機器（Ｂｉａｃｏｒｅ ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ、スウェーデン）を用いたＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）表面プラズマ共鳴（ＳＰＲ）分析、又は流細胞計数技術を含む。
本明細書で使う用語“自然発生”を対象に適用時に、対象体が自然から発見され得るという事実を意味する。例えば、自然のソースから分離可能であり、実験室で人によって意図的に変形されない有機体（ウイルスを含む）内に存在するポリペプチド又はポリヌクレオチド配列は自然発生である。
“ポリペプチド”は、少なくとも２個の連続連結されたアミノ酸残基を含む鎖のことを指し、前記鎖の長さに上限はない。タンパク質内の１つ以上のアミノ酸残基は、グリコシル化、ホスホリル化又は二硫化結合形成のような変形を含有できるが、これに限定されるものではない。“タンパク質”は、１つ以上のポリペプチドを含むことができる。
本発明で使用する用語“核酸分子”は、ＤＮＡ分子及びＲＮＡ分子を含むものと意図される。核酸分子は、単鎖又は二重鎖であり得、ｃＤＮＡであり得る。
本明細書で使う用語“ベクター”は、連結されたさらに他の核酸を輸送できる核酸分子を意味しようとするものである。ベクターの一類型は、追加ＤＮＡ片が結紮され得る円形の二重鎖ＤＮＡループを指す“プラスミド”である。ベクターのさらに他の類型は、追加ＤＮＡ片がウイルスゲノムに結紮され得るウイルスベクターである。特定ベクターは、それらが導入される宿主細胞で自己複製できる（例えば、バクテリア性複製起源を持つバクテリアベクター及びエピソーマル（ｅｐｉｓｏｍａｌ）哺乳類動物）。他のベクター（例えば、非エピソーマル哺乳類ベクター）は、宿主細胞に導入時に宿主細胞のゲノムに統合されてよく、これによって宿主ゲノムに沿って複製される。さらに、特定ベクターは、それらが作動的に連結された遺伝子の発現を指示できる。このようなベクターを本明細書では“組換え発現ベクター”（又は単に“発現ベクター”）という。一般に、組換えＤＮＡ技術において活用性がある発現ベクターは、しばしばプラスミドの形態である。本明細書において、“プラスミド”と“ベクター”は、プラスミドがベクターの最も普遍的に使用される形態であるので、互換して使用可能である。しかし、等価の機能を行う他の形態の発現ベクター、例えば、ウイルスベクター（例えば、複製欠陥レトロウイルス、アデノウイルス及びアデノ関連ウイルス）も含まれる。
本発明で使用する用語“組換え宿主細胞”（又は、簡単に“宿主細胞”）は、細胞内自然的に存在しない核酸を含む細胞のことを指し、組換え発現ベクターが導入された細胞であり得る。このような用語は、特定の対象細胞だけでなく、このような細胞の子孫のことも指すものとして理解すべきである。突然変異や環境的な影響によって次の世代には特定の変形が起き得る点から、このような子孫は実際に親細胞と同一であるとはいえないが、本明細書で使う用語“宿主細胞”の範囲内に依然として含まれる。
本発明で使用する用語“連結された”は、２個以上の分子の会合を指す。前記連結は、共有連結又は非共有連結であり得る。前記連結はまた、遺伝子連結（すなわち、組換えによる融合）であり得る。このような連結は、化学的コンジュゲーション及び組換えタンパク質生産のような、当業界で認める様々な技術を用いて達成され得る。
本明細書で使われる“投与”とは、当業者に公知の様々な方法と伝達系の任意のものを用いて対象に治療剤又は治療剤を含む組成物を物理的に導入することを指す。本明細書に記載の抗体に対する好ましい投与経路は、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、脊椎、又は例えば注射又は注入による他の非経口投与経路を含む。本明細書で使われる語句“非経口投与”とは、一般に注射による腸内及び局所投与以外の投与方式を意味し、これに制限されないが、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、脊髄腔内、リンパ内、病変内、被膜内、眼窩内、心臓内、血内、経気管、皮下、表皮下、関節内、皮膜下、蜘蛛膜下、脊髄内、硬膜外及び胸骨内注射及び注入の他、生体内電気穿孔も含む。これと違い、本明細書に記載の抗体は、非経口経路、例えば、局所、表皮又は粘膜投与経路、例えば、鼻腔内、経口、膣内、職場、舌下又は局所投与され得る。投与はまた、例えば、１回、複数回、及び／又は１回以上の延長された期間にわたって行われ得る。
本明細書で使われる用語“治療する（ｔｒｅａｔ）”、“治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）”及び“治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）”とは、疾患関連症候群、合併症、症状又は生化学的徴候の進行、発達、重症度又は再発を反転、緩和、改善、阻害又は遅延又は予防しようとする目的で、対象に対して行われた任意の類型の介入若しくは過程、又は対象に活性剤を投与することを指す。治療は、疾患がある対象又は疾患がない対象（例えば、予防用）に対して行われ得る。
本明細書で使われる用語“対象”は、任意のヒト又は非ヒト動物を含む。用語“非ヒト動物”は、あらゆる脊椎動物、例えば、哺乳類及び非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ニワトリ、両棲類、爬虫類などのような非哺乳類を含む。
本明細書で使われる用語“神経膠症の発病”又は“反応性神経膠症の発病”は、神経膠症の始まり又は開始を含む。神経膠症は、例えば、外傷、脳脊髓損傷、脳腫瘍、感染、虚血、脳卒中、反応及び／又は神経退行性疾患から傷害又は損傷による中枢神経系（ＣＮＳ、例えば、脳及び／又は脊髄）内膠細胞の非特異的反応性変化であり、星状細胞、小膠細胞及び稀突起膠細胞を含む異なる様々な類型の膠細胞の増殖又は肥大を含む。神経膠症の発病は、外傷又は損傷を受けたＣＮＳの一部で軸索再生を阻害する傷痕が形成されることがある。神経膠症の発病の有害な影響には、非可逆的又は永久的神経細胞の損傷及び／又は周辺神経細胞の回復妨害を含む。したがって、用語“神経膠症の発病遅延”及び“反応性神経膠症の発病遅延”は、神経膠症の始まり又は開始及びこれに関連したＣＮＳの有害な影響の阻害、遅延、抑制又は予防を含む。
本明細書で使われる用語“反応性星状細胞の過剰増殖”は、例えば、ＣＮＳ損傷、外傷、傷害、脳脊髓損傷、脳腫瘍、感染、虚血、脳卒中、反応及び／又は神経退行性疾患から周辺神経細胞の破壊による星状細胞の数が異常増加することを含む。反応性星状細胞の過剰増殖は、外傷又は損傷を受けたＣＮＳの一部で軸索再生を阻害する傷痕の形成、炎症の悪化、神経毒性レベルの活性酸素種の生成及び放出、潜在的に興奮毒性であるグルタメートの放出、発作発生に対する潜在的寄与、血液－脳障壁機能の損傷、外傷及び脳卒中における細胞毒性浮腫、慢性疼痛に寄与する星状細胞の慢性サイトカイン活性化可能性及びＣＮＳ損傷後２次変性を含め、ＣＮＳに有害な影響を及ぼすことがある。Ｓｏｆｒｏｎｉｅｗ，Ｍｉｃｈａｅｌ Ｖ．（２００９）Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，３２（１２）：６３８－４７；ＭｃＧｒａｗ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ６３（２）：１０９－１５；及びＳｏｆｒｏｎｉｅｗ，Ｍ．Ｖ．（２００５）Ｔｈｅ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｔｉｓｔ １１（５）：４００－７．したがって、用語“反応性星状細胞の過剰増殖抑制”は、反応性星状細胞の過剰又は異常増殖及びこれに関連したＣＮＳの有害な影響を阻害、遅延、抑制、制限又は防止することを含む。
本明細書で使われる用語“コンドロイチン硫酸プロテオグリカン”は、タンパク質コア及びコンドロイチン硫酸で構成されたプロテオグリカンを含む。ＣＳＰＧとも知られているコンドロイチン硫酸プロテオグリカンは、成長期及び成人ＣＮＳ全般にわたって広範に発現した細胞外基質分子である。ＣＳＧＰは、神経発達及び神経膠傷痕形成に重要な役割をし、それらはＣＮＳにおいて損傷後軸索再生を阻害する。知られたＣＳＰＧには、アグレカン（ＣＳＰＧ１）、バーシカン（ＣＳＰＧ２）、ニューロカン（ＣＳＰＧ３）、ＣＳＰＧ４（又は、神経細胞膠抗原２（ＮＧ２））、ＣＳＰＧ５、ＳＭＣ３（ＣＳＰＧ６、染色体３の構造維持）、ブレビカン（ＣＳＰＧ７）及びＣＤ４４（ＣＳＰＧ８、分化クラスター４４）、ホスファカンニューロカン（ＣＳＰＧ３）が含まれる。Ｒｈｏｄｅｓ，Ｋ．Ｅ．ａｎｄ Ｆａｗｃｅｔｔ，Ｊ．Ｗ．（２００４）Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎａｔｏｍ．２０４（１）：３３－４８．これによって、用語“コンドロイチン硫酸プロテオグリカンの発現減少”は、一つ以上のＣＳＧＰのレベルを減少、阻害、抑制したり、又は一つ以上のＣＳＧＰの活性を減少させたり、又は一つ以上のＣＳＧＰを不活性化することを含む。特定の具現例において、前記用語は、ニューロカン、ＮＧ２又は両者のレベルを減少、阻害、抑制したり、又はニューロカン、ＮＧ２又は両者の活性を減少させたり、又はニューロカン、ＮＧ２又は両者を不活性させることを含む。
本明細書で使われる用語“神経細胞”は、電気及び化学的信号によって情報を処理し伝達する電気興奮性細胞を含む。神経細胞は、ＣＮＳの脳と脊髄、末梢神経系（ＰＮＳ）の神経節の主要構成要素であり、相互に連結されて神経網を形成することができる。典型的な神経細胞は、体細胞（細胞体）、樹状突起及び軸索で構成されている。神経細胞の体細胞（細胞体）は、核を含む。神経細胞の樹状突起は、神経細胞入力の大部分が起きる枝の多い細胞延長部である。軸索は、体細胞から延長されている相対的に微細なケーブル形状の突出部であり、神経信号を体細胞から遠くまで伝達し、特定類型の情報を体細胞にさらに伝達する。用語“神経細胞の再成長促進”は、好ましくは、傷害又は損傷後に神経細胞の成長を刺激、促進、増加又は活性化させることを含む。
本明細書で使われる用語“ｃ－ｆｏｓ”は、神経伝達物質の刺激によって速く誘導される原腫瘍遺伝子（ｐｒｏｔｏｏｎｃｏｇｅｎｅ）ｃ－ｆｏｓを含む。ｃ－ｆｏｓは、マウスとヒトを含む多くの種に存在する。前記ｃ－ｆｏｓ遺伝子とタンパク質は公知されており、特性が分析されている。Ｃｕｒｒａｎ，Ｔ，Ｔｈｅ ｃ－ｆｏｓ ｐｒｏｔｏ－ｏｎｃｏｇｅｎｅ，ｐｐ ３０７－３２７（Ｔｈｅ Ｏｎｃｏｇｅｎｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ，Ｒｅｄｄｙ ＥＰ ｅｔ ａｌ．，（ｅｄｓ．）Ｅｌｓｅｖｉｅｒ）（１９８８）を参照する。ｃ－ｆｏｓの発現は、当業界に公知の方法、例えば、ノーザンブロット、定量的ＰＣＲ又は免疫組織化学的方法によって決定されてよい。用語“ｃ－ｆｏｓの発現増加”は、ｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡ、ｃ－ｆｏｓタンパク質又はｃ－ｆｏｓタンパク質活性レベルの増加を含む。
本明細書で使われる用語“ｐＥＲＫ”は、リン酸化された細胞外信号－調節キナーゼを含む。細胞外信号－調節キナーゼ、又はＥＲＫ１及びＥＲＫ２を含むＥＲＫは、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）系の一種である。ＥＲＫは、その上流（ｕｐｓｔｒｅａｍ）キナーゼによるリン酸化によって活性化されてｐＥＲＫを形成した後、下流（ｄｏｗｎ－ｓｔｒｅａｍ）標的を活性化する。ＥＲＫは、学習、記憶及び疼痛感受性の基礎となる神経及びシナプス可塑性に関与する。Ｊｉ Ｒ．Ｒ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ（１９９９）２：１１１４－１１１９．前記ＥＲＫ遺伝子、タンパク質、リン酸化及び活性化は公知されており、特性が分析されており、ＥＲＫ及びｐＥＲＫの発現は当業界に公知の方法（例えば、ノーザンブロット、定量的ＰＣＲ又は免疫組織化学的方法）によって決定され得る。Ｇａｏ Ｙ．Ｊ．ａｎｄ Ｊｉ Ｒ．Ｒ．，Ｏｐｅｎ Ｐａｉｎ Ｊ．（２００９）２：１１－１７を参照する。用語“ｐＥＲＫ発現増加”は、ＥＲＫ ｍＲＮＡ、ＥＲＫタンパク質又はｐＥＲＫ活性レベルの増加を含む。
本明細書で使われる用語“ＧＡＰ４３”は、“成長関連タンパク質４３”とも知られており、神経突起の形成、再生及び可塑性を促進する神経組織特異的タンパク質である。Ｂｅｎｏｗｉｔｚ Ｌ．Ｉ．ａｎｄ Ｒｏｕｔｔｅｎｂｅｒｇ Ａ．（１９９７）Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ２０（２）：８４－９１；Ａａｒｔｓ Ｌ．Ｈ．ｅｔ ａｌ．，（１９９８）Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ ４４６：８５－１０６を参照する。ヒトＧＡＰ４３は、ＧＡＰ４３遺伝子によってコードされる。ヒトＧＡＰ４３ポリペプチド配列（ＵｎｉＰｒｏｔ：ＫＢ－Ｐ１７６７７）及び前記ポリペプチドをコードするｃＤＮＡ配列は、当業界に公知されている。Ｋｏｓｉｋ Ｋ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｎｅｕｒｏｎ １（２）：１２７－３２；Ｎｇ Ｓ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｎｅｕｒｏｎ １（２）：１３３－９．ＧＡＰ４３の発現は、当業界に公知の方法（例えば、ノーザンブロット、定量的ＰＣＲ又は免疫組織化学的方法）によって決定され得る。用語“神経細胞においてＧＡＰ４３増加”は、ＧＡＰ４３ ｍＲＮＡ、ＧＡＰ４３タンパク質のレベル増進又は増加又はＧＡＰ４３タンパク質の活性増加を含む。
本明細書で使われる用語“治療有効量”は、対象の疾患又は障害を“治療”したり、或いは疾患又は障害（例えば、中枢神経系損傷）の危険、潜在性、可能性又は発生を減少させるのに効果的な薬物単独又は別の治療剤と組み合わせた薬物の量を指す。“治療有効量”は、疾患又は障害（例えば、外傷性脳損傷のような中枢神経系損傷又は本明細書に開示の他の疾患）を有するか或いは有する危険がある対象に、一部の改善又は実益を提供する薬物又は治療剤の量を含む。これによって、“治療有効量”は、疾患又は障害の危険、潜在性、可能性又は発生を減少させたり或いは一部の緩和、軽減を提供し、及び／又は少なくとも一つの指標（例えば、反応性神経膠症の発病）を減少させ、及び／又は疾患又は障害の少なくとも一つの臨床症状を減少させる量である。
［ＩＩ．抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体］
本明細書は、特定機能的特徴又は特性を特徴とする抗体、例えば、単クローン性抗体を開示する。例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する前記抗体は、ヒトにおいて高度に免疫原性である領域又は残基を除去及び／又は変形することによって突然変異（例えば、置換又は欠失）されている（すなわち、脱免疫化されている）。したがって、本明細書に開示の抗体、すなわち、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、基準抗体（例えば、脱免疫化されていない対応抗体、例えば、３－２又は２－１３抗体）に比べて、ヒトを対象に投与時に免疫原性が減少する。
また、本明細書に記載の抗体は、次の機能的特性のいずれか一つ以上を示す：
（ａ）ＫＤが１０ｎＭ以下である可溶性ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合する特性；
（ｂ）ＫＤが１０ｎＭ以下である膜結合ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合する特性；
（ｃ）反応性神経膠症の発病を減少、反転、遅延及び／又は予防する特性；
（ｄ）反応性星状細胞の過剰増殖を抑制する特性；
（ｅ）ニューロカン及び神経膠抗原２（ＮＧ２）を含むコンドロイチン硫酸プロテオグリカンの発現を減少させる特性；
（ｆ）神経細胞の核内ｃ－ｆｏｓ及びｐＥＲＫの発現を増加させる特性；
（ｇ）神経細胞の生存を促進する特性；
（ｈ）神経細胞内ＧＡＰ４３の発現を増加させる特性；及び
（ｉ）軸索の再成長を促進する特性。
一部の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ヒトを対象に投与時に、基準抗体（例えば、脱免疫化されていない対応抗体、例えば、抗体３－２又は２－１３）に比べて抗体が少なく免疫原性となるように脱免疫化された。一部の具現例において、前記抗体の免疫原性は、基準抗体（例えば、脱免疫化されていない対応抗体、例えば、抗体３－２又は２－１３）に比べて、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％又は少なくとも約１００％減少した。一部の具現例において、前記脱免疫化過程は抗体の結合親和性を変化させない。
一部の具現例において、本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、基準抗体（例えば、親和度成熟を経ていない対応抗体、例えば、抗体２－１３）に比べて、抗体がより大きい親和度でＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に結合するように親和度成熟を経た。特定の具現例において、前記抗体の結合親和度は、基準抗体（例えば、親和度成熟を経ていない対応抗体、例えば、抗体２－１３）に比べて、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％増加した。一部の具現例において、前記親和度成熟過程は、抗体の免疫原性を変化させない。
一部の具現例において、本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ヒトを対象に投与時に、基準抗体（例えば、脱免疫化されていない対応抗体、例えば、抗体３－２又は２－１３）に比べて少ない免疫原性を有する他、より大きい親和度でＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に結合するように脱免疫化及び親和度成熟を全て経た。一部の具現例において、前記抗体の免疫原性は、基準抗体に比べて少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％又は少なくとも約１００％減少した。一部の具現例において、前記抗体の結合親和度は、基準抗体に比べて少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、又は少なくとも１００％以上増加した。
一部の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、高い親和度、例えば、ＫＤが１０－７Ｍ以下、１０－８Ｍ（１０ｎＭ）以下、１０－９Ｍ（１ｎＭ）以下、１０－１０Ｍ（０．１ｎＭ）以下、１０－１１Ｍ以下又は１０－１２Ｍ以下、例えば１０－１２Ｍ～１０－７Ｍ、１０－１１Ｍ～１０－７Ｍ、１０－１０Ｍ～１０－７Ｍ又は１０－９Ｍ～１０－７Ｍ、例えば１０－１２Ｍ、５×１０－１２Ｍ、１０－１１Ｍ、５×１０－１１Ｍ、１０－１０Ｍ、５×１０－１０Ｍ、１０－９Ｍ、５×１０－９Ｍ、１０－８Ｍ、５×１０－８Ｍ、１０－７Ｍ又は５×１０－７Ｍである可溶性ヒトＦＡＭ１９Ａ５又は膜結合ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する。多様な種のヒトＦＡＭ１９Ａ５に対する抗体の結合能を評価するための標準分析法は、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロット及びＲＩＡを含め、当業界に公知されている。適切な分析法は、実施例欄に詳細に記載されている。前記抗体の結合動力学（例えば、結合親和度）は、ＥＬＩＳＡ、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析又はＫｉｎＥｘＡのような当業界に公知のの標準分析法によって評価され得る。ＦＡＭ１９Ａ５の機能的特性（例えば、リガンド結合）に対する抗体の効果を評価するための分析法は、下記及び実施例欄にさらに詳細に記載されている。
一部の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、例えばＥＬＩＳＡによって決定したとき、ＫＤが１０－７Ｍ以下、１０－８Ｍ（１０ｎＭ）以下、１０－９Ｍ（１ｎＭ）以下、１０－１０Ｍ以下、１０－１２Ｍ～１０－７Ｍ、１０－１１Ｍ～１０－７Ｍ、１０－１０Ｍ～１０－７Ｍ、１０－９Ｍ～１０－７Ｍ、又は１０－８Ｍ～１０－７Ｍである可溶性ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合する。一部の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＫＤが１０ｎＭ以下、例えば０．１～１０ｎＭ、０．１～５ｎＭ、０．１～１ｎＭ、０．５～１０ｎＭ、０．５～５ｎＭ、０．５～１ｎＭ、１～１０ｎＭ、１～５ｎＭ又は５～１０ｎＭである可溶性ＦＡＭ１９Ａ５に結合する。一部の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＥＬＩＳＡによって決定したとき、ＫＤが約１ｐＭ、約２ｐＭ、約３ｐＭ、約４ｐＭ、約５ｐＭ、約６ｐＭ、約７ｐＭ、約８ｐＭ、約９ｐＭ、約１０ｐＭ、約２０ｐＭ、約３０ｐＭ、約４０ｐＭ、約５０ｐＭ、約６０ｐＭ、約７０ｐＭ、約８０ｐＭ、約９０ｐＭ、約１００ｐＭ、約２００ｐＭ、約３００ｐＭ、約４００ｐＭ、約５００ｐＭ、約６００ｐＭ、約７００ｐＭ、約８００ｐＭ又は約９００ｐＭ、又は約１ｎＭ、約２ｎＭ、約３ｎＭ、約４ｎＭ、約５ｎＭ、約６ｎＭ、約７ｎＭ、約８ｎＭ又は約９ｎＭ又は約１０ｎＭ、約２０ｎＭ、約３０ｎＭ、約４０ｎＭ、約５０ｎＭ、約６０ｎＭ、約７０ｎＭ、約８０ｎＭ又は約９０ｎＭである可溶性ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する。
一部の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＫＤが、例えばＥＬＩＳＡによって決定したとき、１０－７Ｍ以下、１０－８Ｍ（１０ｎＭ）以下、１０－９Ｍ（１ｎＭ）以下、１０－１０Ｍ以下、１０－１２Ｍ～１０－７Ｍ、１０－１１Ｍ～１０－７Ｍ、１０－１０Ｍ～１０－７Ｍ、１０－９Ｍ～１０－７Ｍ又は１０－８Ｍ～１０－７Ｍである膜結合ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合する。特定の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＥＬＩＳＡによって決定したとき、ＫＤが１０ｎＭ以下、例えば、０．１～１０ｎＭ、０．１～５ｎＭ、０．１～１ｎＭ、０．５～１０ｎＭ、０．５～５ｎＭ、０．５～１ｎＭ、１～１０ｎＭ、１～５ｎＭ又は５～１０ｎＭである膜結合ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する。一部の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＥＬＩＳＡによって決定したとき、ＫＤが約１ｐＭ、約２ｐＭ、約３ｐＭ、約４ｐＭ、約５ｐＭ、約６ｐＭ、約７ｐＭ、約８ｐＭ、約９ｐＭ、約１０ｐＭ、約２０ｐＭ、約３０ｐＭ、約４０ｐＭ、約５０ｐＭ、約６０ｐＭ、約７０ｐＭ、約８０ｐＭ、約９０ｐＭ、約１００ｐＭ、約２００ｐＭ、約３００ｐＭ、約４００ｐＭ、約５００ｐＭ、約６００ｐＭ、約７００ｐＭ、約８００ｐＭ又は約９００ｐＭ、又は約１ｎＭ、約２ｎＭ、約３ｎＭ、約４ｎＭ、約５ｎＭ、約６ｎＭ、約７ｎＭ、約８ｎＭ又は約９ｎＭ、又は約１０ｎＭ、約２０ｎＭ、約３０ｎＭ、約４０ｎＭ、約５０ｎＭ、約６０ｎＭ、約７０ｎＭ、約８０ｎＭ又は約９０ｎＭである膜結合ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合する。
本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、神経膠症の発病を遅延又は阻害、例えば、外傷、脳脊髓損傷、脳腫瘍、感染、虚血、脳卒中、反応及び／又は神経退行性疾患による傷害又は損傷による中枢神経系（ＣＮＳ、例えば、脳及び／又は脊髄）において膠細胞の非特異的反応性変化の始まり又は開始を遅延、減速又は阻害できる。
本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、反応性星状細胞の過剰又は異常増殖及びこれに関連したＣＮＳの有害な効果を遅延、阻害、減速、抑制、制限又は予防できる。例えば、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、例えば、ＣＮＳ損傷、外傷、傷害、脳脊髓損傷、脳腫瘍、感染、虚血、脳卒中、反応及び／又は神経退行性疾患から神経細胞の破壊による星状細胞数の異常増加を阻害又は予防し、ＣＮＳにおいて傷痕形成を阻害又は予防し、神経毒性レベルの活性酸素種の放出又は潜在的に興奮毒性であるグルタメートの放出を阻害又は減少させ、ＣＮＳ損傷後発作、疼痛及び／又は２次変性を減少又は阻害させることができる。本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、好ましくは、ＣＮＳ傷害又は損傷後に神経細胞及び／又は軸索の再成長を促進、刺激、増加又は活性化させることができる。
本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、タンパク質コア及びコンドロイチン硫酸で構成されたプロテオグリカン（ＣＳＧＰ）、例えば、アグレカン（ＣＳＰＧ１）、バーシカン（ＣＳＰＧ２）、ニューロカン（ＣＳＰＧ３）、ＣＳＰＧ４（又は、神経細胞膠抗原２（ＮＧ２））、ＣＳＰＧ５、ＳＭＣ３（ＣＳＰＧ６、染色体３の構造維持）、ブレビカン（ＣＳＰＧ７）、ＣＤ４４（ＣＳＰＧ８、分化クラスター４４）及びホスファカンニューロカン（ＣＳＰＧ３）の発現を阻害できる。一部の具現例において、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ニューロカン及び／又はＮＧ２のレベル、又はニューロカン及び／又はＮＧ２の活性を阻害、減少又は低下させる。
本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、神経細胞の核においてｃ－ｆｏｓ及びｐＥＲＫの発現を増加させ得るところ、例えば、ｃ－ｆｏｓ及びｐＥＲＫのｍＲＮＡ、タンパク質及び／又はタンパク質活性を増加させることができる。本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体はまた、ＧＡＰ４３ ｍＲＮＡ、ＧＡＰ４３タンパク質の発現レベルを増加又は増進させたり、或いはＧＡＰ４３タンパク質活性を増加又は増進させることができる。
一部の具現例において、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、前記重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれ、配列番号５、６及び７に示したアミノ酸配列を含み、前記配列のそれぞれは、場合によって１個、２個、３個、４個又は５個の突然変異を含む前記軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれ、配列番号８、９及び１０に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３の少なくとも一つは、１個、２個、３個、４個又は５個の突然変異を含み、前記抗体は、配列番号１１に示したＶＨ及び配列番号１２に示したＶＬを含む基準抗体に比べて、ヒトにおいて減少した免疫原性を有する。
一部の具現例において、前記抗体に含まれる突然変異は、置換、欠失及び／又は挿入である。一具現例において、前記突然変異は、置換、例えば保存的置換である。本明細書で使われる“保存的置換”（保存的代替ともいう。）は、所定のアミノ酸を類似の生化学的特性（例えば、電荷、疎水性及びサイズ）を持つ他のアミノ酸に変化させるアミノ酸代替を意味する。アミノ酸を分類する方法は、多くの方法があるが、これらはその構造及びそのＲ基の一般の化学的特性に基づいて６個の主要群に分類される場合が多い。
Figure 2022515960000004
逆に、ラジカル代替又はラジカル置換は、初期アミノ酸を、異なる物理化学的特性を持つ最終アミノ酸に交換するアミノ酸代替である。特定の具現例において、前記ＦＡＭ１９Ａ５抗体において、アミノ酸突然変異はラジカル置換である。他の具現例において、前記ＦＡＭ１９Ａ５抗体において、アミノ酸突然変異は保存的置換及びラジカル置換の組合せである。
一部の具現例において、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号７に示したアミノ酸配列を含む。特定の具現例において、前記重鎖ＣＤＲ３は、１個、２個又は３個の突然変異を持つ、配列番号７に示したアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、前記重鎖ＣＤＲ１は、場合によって、１個又は２個の突然変異を持つ、配列番号５に示したアミノ酸配列を含む。特定の具現例において、前記突然変異は、配列番号５のアミノ酸３においてトレオニンの酸性アミノ酸への置換を含む。他の具現例において、前記突然変異は、配列番号５のアミノ酸５においてセリンの酸性アミノ酸への置換を含む。一部の具現例において、前記酸性アミノ酸は、アスパラギン酸又はグルタミン酸を含む。
一部の具現例において、前記重鎖ＣＤＲ２は、場合によって、１個、２個、３個、４個又は５個の突然変異を持つ、配列番号６に示したアミノ酸配列を含む。特定の具現例において、前記突然変異は、配列番号６のアミノ酸１６においてアルギニンの塩基性アミノ酸への置換を含む。一部の具現例において、前記塩基性アミノ酸は、リシンを含む。一部の具現例において、前記突然変異は、次のいずれか一つ以上を含む：
（ａ）配列番号６のアミノ酸６においてグリシンの酸性アミノ酸への置換；
（ｂ）配列番号６のアミノ酸７においてセリンの酸性アミノ酸への置換；
（ｃ）配列番号６のアミノ酸８においてセリンの酸性アミノ酸への置換；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸９においてトレオニンの酸性アミノ酸への置換；及び
（ｅ）配列番号６のアミノ酸１６においてアルギニンの塩基性アミノ酸への置換。
特定の具現例において、前記酸性アミノ酸は、アスパラギン酸又はグルタミン酸を含む。一部の具現例において、前記塩基性アミノ酸は、リシンを含む。
一部の具現例において、前記軽鎖ＣＤＲ３は、場合によって、１、２、３、４又は５個の突然変異を持つ、配列番号１０に示したアミノ酸配列を含む。特定の具現例において、前記突然変異は、次のいずれか一つ以上を含む：
（ａ）配列番号１０のアミノ酸６においてセリンの酸性アミノ酸又は脂肪族アミノ酸への置換；
（ｂ）配列番号１０のアミノ酸７においてアスパラギンの酸性アミノ酸又はヒドロキシル又は硫黄／セレニウム含有アミノ酸への置換；
（ｃ）配列番号１０のアミノ酸８においてグリシンの酸性アミノ酸又はヒドロキシル又は硫黄／セレニウム含有アミノ酸への置換；
（ｄ）配列番号１０のアミノ酸９においてグリシンの酸性アミノ酸又はヒドロキシル又は硫黄／セレニウム含有アミノ酸への置換；及び
（ｅ）配列番号１０のアミノ酸１０においてイソロイシンの塩基性アミノ酸への置換。
一部の具現例において、前記酸性アミノ酸は、アスパラギン酸又はグルタミン酸を含む。特定の具現例において、前記ヒドロキシル又は硫黄／セレニウム含有アミノ酸は、セリンを含む。他の具現例において、前記塩基性アミノ酸は、ヒスチジンを含む。
一部の具現例において、前記軽鎖ＣＤＲ１は、１個、２個、３個又は４個の突然変異を持つ、配列番号８に示したアミノ酸配列を含む。特定の具現例において、前記突然変異は、次のいずれか一つ以上を含む：
（ａ）配列番号８のアミノ酸６においてチロシンの酸性アミノ酸への置換；
（ｂ）配列番号８のアミノ酸７においてアルギニンの酸性アミノ酸への置換；
（ｃ）配列番号８のアミノ酸８においてグリシンの酸性アミノ酸への置換；及び
（ｄ）配列番号８のアミノ酸９においてセリンの酸性アミノ酸への置換。
一部の具現例において、前記酸性アミノ酸は、グルタミン酸又はグルタミンを含む。
一部の具現例において、前記軽鎖ＣＤＲ２は、１個、２個、３個又は４個の突然変異を持つ、配列番号９に示したアミノ酸配列を含む。特定の具現例において、前記突然変異は、次のいずれか一つ以上を含む：
（ａ）配列番号９のアミノ酸１においてグルタミン酸の酸性アミノ酸への置換；
（ｂ）配列番号９のアミノ酸２においてセリンの酸性アミノ酸への置換；
（ｃ）配列番号９のアミノ酸３においてアスパラギンの酸性アミノ酸、塩基性アミノ酸又は脂肪族アミノ酸への置換；及び
（ｄ）配列番号９のアミノ酸４においてリシンの酸性アミノ酸又は脂肪族アミノ酸への置換。
一部の具現例において、前記酸性アミノ酸は、グルタミン、アスパラギン、アスパラギン酸又はグルタミン酸を含む。特定の具現例において、前記塩基性アミノ酸は、ヒスチジンを含む。他の具現例において、前記脂肪族アミノ酸は、ロイシンを含む。
一部の具現例において、前記突然変異は、配列番号９のアミノ酸２においてセリンの酸性アミノ酸への置換を含む。特定の具現例において、前記酸性アミノ酸は、アスパルテート、グルタメート、アスパラギン、グルタミン又はこれらの組合せを含む。他の具現例において、前記酸性アミノ酸は、アスパラギンである。
一部の具現例において、本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み：（ｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号５に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１３に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号７に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｖ）前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号８に示したアミノ酸配列を含み；（ｖ）前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号２０に示したアミノ酸配列を含み；（ｖｉ）前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号１０に示したアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み：（ｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１４に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１５に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号７に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｖ）前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号２１に示したアミノ酸配列を含み；（ｖ）前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号２２に示したアミノ酸配列を含み；（ｖｉ）前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号２３に示したアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み：（ｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１４に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１５に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号７に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｖ）前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号２１に示したアミノ酸配列を含み；（ｖ）前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号２４に示したアミノ酸配列を含み；（ｖｉ）前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号２３に示したアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み：（ｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１４に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１５に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号７に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｖ）前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号８に示したアミノ酸配列を含み；（ｖ）前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号２５に示したアミノ酸配列を含み；（ｖｉ）前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号２３に示したアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み：（ｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１４に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１５に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号７に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｖ）前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号８に示したアミノ酸配列を含み；（ｖ）前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号２４に示したアミノ酸配列を含み；（ｖｉ）前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号２３に示したアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み：（ｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１４に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１５に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号７に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｖ）前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号８に示したアミノ酸配列を含み；（ｖ）前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号２６に示したアミノ酸配列を含み；（ｖｉ）前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号２７に示したアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み：（ｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１４に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１５に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号７に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｖ）前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号８に示したアミノ酸配列を含み；（ｖ）前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号２８に示したアミノ酸配列を含み；（ｖｉ）前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号２９に示したアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ヒト化される。他の具現例において、前記ヒト化抗ＦＡＭ１９Ａ５は、ヒト抗体のフレームワーク領域を含む。特定の具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、フレームワーク領域（すなわち、ＶＨのＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４及び／又はＶＬのＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４）内の一つ以上の（例えば、１、２、３、４、５、６、７個以上の）突然変異を含む。
一部の具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＶＨのＦＲ１内に突然変異を含む。特定の具現例において、前記突然変異は、配列番号１１の残基１９においてアミノ酸置換（例えば、セリンの塩基性アミノ酸、例えばアルギニンへの置換）及び／又は残基２１においてアミノ酸置換（例えば、バリンのヒドロキシル又は硫黄／セレニウム含有アミノ酸、例えばセリンへの置換）を含む。
一部の具現例において、本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＶＨのＦＲ２内に突然変異を含む。特定の具現例において、前記突然変異は、配列番号１１の残基４９においてアミノ酸置換（例えば、アラニンのヒドロキシル又は硫黄／セレニウム含有アミノ酸、例えばセリンへの置換）を含む。
一部の具現例において、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＶＨのＦＲ３内に突然変異を含む。特定の具現例において、前記突然変異は、配列番号１１の残基７９においてアミノ酸置換（例えば、バリンの脂肪族アミノ酸、例えばロイシンへの置換）、残基８０においてアミノ酸置換（例えば、アルギニンの芳香族アミノ酸、例えばチロシンへの置換）、残基８３においてアミノ酸置換（例えば、ロイシンのヒドロキシル又は硫黄／セレニウム含有アミノ酸、例えばメチオニンへの置換）、残基８５においてアミノ酸置換（例えば、アスパラギンのヒドロキシル又は硫黄／セレニウム含有アミノ酸、例えばセリンへの置換）、残基８６においてアミノ酸置換（例えば、プロリンの脂肪族アミノ酸、例えばロイシンへの置換）及び／又は残基８７においてアミノ酸置換（例えば、グリシンの塩基性アミノ酸、例えばアルギニンへの置換）を含む。
一部の具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＶＬのＦＲ２内に突然変異を含む。特定の具現例において、前記突然変異は、配列番号１２のアミノ酸残基３９の欠失を含む。
一部の具現例において、本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＶＬのＦＲ３内に突然変異を含む。一部の具現例において、前記突然変異は、配列番号１２の残基８１においてアミノ酸置換（例えば、アスパラギン酸の脂肪族アミノ酸、例えばグリシンへの置換）及び／又は残基８５においてアミノ酸置換（例えば、イソロイシンの酸性アミノ酸、例えばアスパラギン酸への置換）を含む。
一部の具現例において、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、前記ＶＨは、配列番号１１に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同じアミノ酸配列を含み、及び／又は前記ＶＬは、配列番号１２に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同じアミノ酸配列を含み、前記抗体は、配列番号１１に示したＶＨ及び配列番号１２に示したＶＬを含む基準抗体に比べて減少した免疫原性を有する。
一部の具現例において、本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む基準抗体と交差競合し、
（ａ）前記ＶＨは、配列番号３３に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号３８に示したアミノ酸配列を含むか；
（ｂ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号３９に示したアミノ酸配列を含むか；
（ｃ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４１に示したアミノ酸配列を含むか；
（ｄ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４０に示したアミノ酸配列を含むか；
（ｅ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４２に示したアミノ酸配列を含むか；
（ｆ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４３に示したアミノ酸配列を含むか；又は
（ｇ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４４に示したアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む基準抗体と同じヒトＦＡＭ１９Ａ５エピトープに結合し；
（ａ）前記ＶＨは、配列番号３３に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号３８に示したアミノ酸配列を含むか；
（ｂ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号３９に示したアミノ酸配列を含むか；
（ｃ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４１に示したアミノ酸配列を含むか；
（ｄ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４０に示したアミノ酸配列を含むか；
（ｅ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４２に示したアミノ酸配列を含むか；
（ｆ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４３に示したアミノ酸配列を含むか；又は
（ｇ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４４に示したアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、前記重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれ、配列番号１６、１７及び１８に示したアミノ酸配列を含み、前記配列のそれぞれは、場合によって１個、２個又は３個の突然変異を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれ、配列番号３０、３１及び３２に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３の少なくとも一つは、１個、２個又は３個の突然変異を含み、前記抗体は、配列番号３５に示したＶＨ及び配列番号４５に示したＶＬを含む基準抗体に比べて、ヒトにおいて減少した免疫原性及び／又はヒトＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に対するより高い結合親和度を有する。
一部の具現例において、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１８に示したアミノ酸配列を含む。特定の具現例において、前記重鎖ＣＤＲ３は、場合によって、一つ又は２個の突然変異を持つ、配列番号１８に示したアミノ酸配列を含む。一部の具現例において、前記突然変異は、次のいずれか一つ以上を含む：（ａ）配列番号１８のアミノ酸２においてトレオニンのヒドロキシル又は硫黄／セレニウム含有アミノ酸への置換；及び（ｂ）配列番号１８のアミノ酸４においてグルタミン酸の脂肪族アミノ酸への置換。特定の具現例において、前記ヒドロキシル又は硫黄／セレニウム含有アミノ酸は、セリンを含む。一部の具現例において、前記脂肪族アミノ酸は、バリンを含む。一部の具現例において、前記突然変異は、次のいずれか一つ以上を含む：（ａ）配列番号１８のアミノ酸２においてトレオニンの酸性アミノ酸への置換；及び（ｂ）配列番号１８のアミノ酸４においてグルタミン酸の脂肪族アミノ酸への置換。特定の具現例において、前記酸性アミノ酸は、アスパラギンを含む。特定の具現例において、前記脂肪族アミノ酸は、アラニンを含む。
一部の具現例において、前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１６に示したアミノ酸配列を含む。特定の具現例において、前記重鎖ＣＤＲ１は、場合によって、一つの突然変異を持つ、配列番号１６に示したアミノ酸配列を含む。一部の具現例において、前記突然変異は、配列番号１６のアミノ酸３においてトレオニンの酸性アミノ酸への置換を含む。特定の具現例において、前記酸性アミノ酸は、アスパラギン酸を含む。
一部の具現例において、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１７に示したアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号３２に示したアミノ酸配列を含む。特定の具現例において、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号３１に示したアミノ酸配列を含む。一部の具現例において、前記軽鎖ＣＤＲ２は、１個、２個又は３個の突然変異を持つ、配列番号３１に示したアミノ酸配列を含む。
他の具現例において、前記軽鎖ＣＤＲ１は、場合によって、一つの突然変異を持つ、配列番号３０に示したアミノ酸配列を含む。特定の具現例において、前記突然変異は、配列番号３０のアミノ酸４においてセリンの脂肪族アミノ酸への置換を含む。一部の具現例において、前記脂肪族アミノ酸は、バリンを含む。
一部の具現例において、本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み：（ｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１６に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１７に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１８に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｖ）前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号８０に示したアミノ酸配列を含み；（ｖ）前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号３１に示したアミノ酸配列を含み；（ｖｉ）前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号３２に示したアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み：（ｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１９に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１７に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１８に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｖ）前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号８０に示したアミノ酸配列を含み；（ｖ）前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号３１に示したアミノ酸配列を含み；（ｖｉ）前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号３２に示したアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み：（ｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１９に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１７に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１２８に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｖ）前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号８０に示したアミノ酸配列を含み；（ｖ）前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号３１に示したアミノ酸配列を含み；（ｖｉ）前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号３２に示したアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み：（ｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１９に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１７に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１２９に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｖ）前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号８０に示したアミノ酸配列を含み；（ｖ）前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号３１に示したアミノ酸配列を含み；（ｖｉ）前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号３２に示したアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ヒト化される。他の具現例において、前記ヒト化抗ＦＡＭ１９Ａ５は、ヒト抗体のフレームワーク領域を含む。特定の具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、前記抗体のフレームワーク領域（すなわち、ＶＨのＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４及び／又はＶＬのＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４）内に一つ以上の（例えば、１、２、３、４、５、６、７個以上の）突然変異を含む。
一部の具現例において、本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＶＨのＦＲ１内に突然変異を含む。特定の具現例において、前記突然変異は、配列番号３５の残基１９においてアミノ酸置換（例えば、セリンの塩基性アミノ酸、例えばアルギニンへの置換）、残基２１においてアミノ酸置換（例えば、バリンのヒドロキシル又は硫黄／セレニウム含有アミノ酸、例えばセリンへの置換）及び／又は残基２３においてアミノ酸置換（例えば、リシンのヒドロキシル又は硫黄／セレニウム含有アミノ酸、例えばセリンへの置換）を含む。
一部の具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＶＨのＦＲ２内に突然変異を含む。特定の具現例において、前記突然変異は、配列番号３５の残基４０においてアミノ酸置換（例えば、チロシンの脂肪族アミノ酸、例えばアラニンへの置換）及び／又は残基４９においてアミノ酸置換（例えば、アラニンのヒドロキシル又は硫黄／セレニウム含有アミノ酸、例えばセリンへの置換）を含む。
一部の具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＶＨのＦＲ３内に突然変異を含む。特定の具現例において、前記突然変異は、配列番号３５の残基７９においてアミノ酸置換（例えば、バリンの脂肪族アミノ酸、例えばロイシンへの置換）、残基８０においてアミノ酸置換（例えば、アルギニンの芳香族アミノ酸、例えばチロシンへの置換）、残基８３においてアミノ酸置換（例えば、ロイシンのヒドロキシル又は硫黄／セレニウム含有アミノ酸、例えばメチオニンへの置換）及び／又は残基８５においてアミノ酸置換（例えば、アスパラギンのヒドロキシル又は硫黄／セレニウム含有アミノ酸、例えばセリンへの置換）を含む。
一部の具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＶＬのＦＲ１内に突然変異を含む。特定の具現例において、前記突然変異は、配列番号４５の残基１６においてアミノ酸置換（例えば、バリンの脂肪族アミノ酸、例えばアラニンへの置換）を含む。
一部の具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＶＬのＦＲ２内に突然変異を含む。特定の具現例において、前記突然変異は、配列番号４５のアミノ酸残基３４の欠失を含む。
一部の具現例において、本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＶＬのＦＲ３内に突然変異を含む。一部の具現例において、前記突然変異は、配列番号４５の残基７６においてアミノ酸置換（例えば、アスパラギン酸の酸性アミノ酸、例えばグルタミン酸への置換）、残基８０においてアミノ酸置換（例えば、バリンの酸性アミノ酸、例えばアスパラギン酸への置換）及び／又は残基８２においてアミノ酸置換（例えば、フェニルアラニンの芳香族アミノ酸、例えばチロシンへの置換）を含む。
一部の具現例において、本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、前記ＶＨは、配列番号３５に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同じアミノ酸配列を含み、及び／又は前記ＶＨは、配列番号４５に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同じアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む基準抗体と交差競合し、（ｉ）前記ＶＨは、配列番号３６に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４６に示したアミノ酸配列を含むか；（ｉｉ）前記ＶＨは、配列番号３７に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４６に示したアミノ酸配列を含むか；（ｉｉｉ）前記ＶＨは、配列番号１３０に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４６に示したアミノ酸配列を含むか；又は（ｉｖ）前記ＶＨは、配列番号１３１に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４６に示したアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む基準抗体と同じヒトＦＡＭ１９Ａ５エピトープに結合し、（ｉ）前記ＶＨは、配列番号３６に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４６に示したアミノ酸配列を含むか；（ｉｉ）前記ＶＨは、配列番号３７に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４６に示したアミノ酸配列を含むか；（ｉｉｉ）前記ＶＨは、配列番号１３０に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４６に示したアミノ酸配列を含むか；又は（ｉｖ）前記ＶＨは、配列番号１３１に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４６に示したアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、基準抗体（例えば、３－２又は２－１３抗体）とヒトＦＡＭ１９Ａ５エピトープに対する結合に対して交差競合する（又は、結合を阻害する）。
一部の具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に対するこのような基準抗体（例えば、３－２又は２－１３抗体）の結合を、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％又は少なくとも約１００％阻害する。競合抗体は、同一エピトープ、重複エピトープ又は隣接エピトープに結合する（例えば、立体障害によって立証される）。２個の抗体が標的に対する結合のために互いに競合するか否かは、ＲＩＡ及びＥＩＡのような当業界に公知の競合実験を用いて決定できる。
２個の抗体が同一のエピトープに結合するか否かを決定するための技術は、例えば、エピトープの原子分解能を提供する抗原：抗体複合体の結晶のｘ線分析及び水素／重水素交換質量分光分析（ＨＤＸ－ＭＳ）のようなエピトープマッピング方法、抗原配列内アミノ酸残基の変形による結合損失を一般にエピトープ成分の表示として見なす抗原断片又は抗原の突然変異された変異体に対する抗体の結合をモニタリングする方法、エピトープマッピングのためのコンビナトリアル計算法を含む。
本明細書に開示の方法に有用な抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５の断片に対する抗体の結合によって決定されたように、成熟したヒトＦＡＭ１９Ａ５の少なくとも一つのエピトープに結合し得る。一部の具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＴＬＤＲＤＳＳＱＰＲＲＴＩＡＲＱＴＡＲＣ（配列番号９０又は配列番号２のアミノ酸残基４２～６１）のアミノ酸配列を持つ少なくとも一つのエピトープに結合したり又は、配列番号９０のアミノ酸配列内位置している断片、例えば配列番号９０の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個のアミノ酸を持つエピトープに結合する。一部の具現例において、本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、配列番号２のアミノ酸残基４４～５２（すなわち、ＤＲＤＳＳＱＰＲＲ）、例えばアミノ酸残基４５、４６、５０、５１及び５２（すなわち、ＲＤ－－－ＰＲＲ）、例えばアミノ酸残基４５、５０、５１及び５２（すなわち、Ｒ－－－－ＰＲＲ）、アミノ酸残基４５、５０及び５１（すなわち、Ｒ－－－－ＰＲ）に該当する一つ以上のアミノ酸に結合する。
一部の具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＴＡＲＣＡＣＲＫＧＱＩＡＧＴＴＲＡＲＰＡ（配列番号９１又は、配列番号２のアミノ酸残基５８～７７）のアミノ酸配列を持つ少なくとも一つのエピトープに結合したり、又は配列番号９１のアミノ酸配列内位置している断片、例えば配列番号９１の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個のアミノ酸を持つエピトープに結合する。一部の具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、配列番号２のアミノ酸残基６３～７５（すなわち、ＣＲＫＧＱＩＡＧＴＴＲＡＲ）に該当する一つ以上のアミノ酸において結合する。一部の具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＡＲＰＡＣＶＤＡＲＩＩＫＴＫＱＷＣＤＭＬ（配列番号９２又は配列番号２のアミノ酸残基７４～９３）のアミノ酸配列を持つ一つ以上のエピトープに結合したり、又は配列番号９２のアミノ酸配列内に位置している断片、例えば、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個のアミノ酸を持つエピトープに結合する。一部の具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、配列番号２のアミノ酸残基７６～８９（すなわち、ＰＡＣＶＤＡＲＩＩＫＴＫＱＷ）に該当する一つ以上のアミノ酸において結合する。
一部の具現例において、前記少なくとも一つのエピトープは、配列番号９０、９１又は９２と少なくとも９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同じアミノ酸配列を有する。
一部の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、配列番号８９、９０、９１、９２、９３又は９４であるヒトＦＡＭ１９Ａ５エピトープ、又は配列番号８９、９０、９１、９２、９３又は９４のアミノ酸配列内に位置している断片、例えば、配列番号８９、９０、９１、９２、９３又は９４の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個のアミノ酸を持つエピトープにのみ結合する。
一部の具現例において、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、配列番号９０又は天然立体形態（すなわち、未変性）のその断片に結合する。一部の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、グリコシル化及び非グリコシル化したヒトＦＡＭ１９Ａ５の両方に結合する。
一部の具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、一つ以上の追加ＦＡＭ１９Ａ５エピトープに結合する。一部の具現例において、前記一つ以上の追加ＦＡＭ１９Ａ５エピトープは、ＱＬＡＡＧＴＣＥＩＶＴＬＤＲ（配列番号８９、エピトープＦ１）、ＴＬＤＲＤＳＳＱＰＲＲＴＩＡＲＱＴＡＲＣ（配列番号９０、エピトープＦ２）、ＴＡＲＣＡＣＲＫＧＱＩＡＧＴＴＲＡＲＰＡ（配列番号９１、エピトープＦ３）、ＡＲＰＡＣＶＤＡＲＩＩＫＴＫＱＷ ＣＤＭＬ（配列番号９２、エピトープＦ４）、ＣＤＭＬＰＣＬＥＧＥＧＣＤＬＬＩＮＲＳＧ（配列番号９３、エピトープＦ５）又はＮＲＳＧＷＴＣＴＱＰＧＧＲＩＫＴＴＴＶＳ（配列番号９４、エピトープＦ６）。或いは、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３又は配列番号９４のアミノ酸配列内に位置している断片、又はこれらの任意の組合せから選択される。配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３又は配列番号９４のアミノ酸配列内に位置している断片は、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３又は配列番号９４のうち一部の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個アミノ酸を持つ断片を含む。一部の具現例において、前記一つ以上の追加ＦＡＭ１９Ａ５エピトープは、配列番号８９、９０、９１、９２、９３又は９４、又は配列番号８９、９０、９１、９２、９３又は９４のアミノ酸配列内に位置している断片、例えば、配列番号８９、９０、９１、９２、９３又は９４の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個のアミノ酸配列を持つ断片、又はこれらの組合せから選択される。一部の具現例において、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、天然立体形態（すなわち、未変性）の前記一つ以上の追加エピトープのうち一部に結合する。一部の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、前記グリコシル化及び非グリコシル化した一つ以上の追加ＦＡＭ１９Ａ５エピトープの両方に結合する。
一部の具現例において、本明細書は、例えば、免疫分析（例えば、ＥＬＩＳＡ）、表面プラズマ共鳴又は力学的排除分析によって測定したとき、ＦＡＭ１９Ａファミリー内の他のタンパク質に比べて２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又はより高い親和度でＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に結合する抗体又はその抗原結合断片を提供する。特定の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合断片は、例えば免疫分析によって測定したとき、ＦＡＭ１９Ａファミリー内の他のタンパク質との交差反応性無しでＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に結合する。
一部の具現例において、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、天然抗体でないか或いは自然発生抗体でない。例えば、一部の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、より多い、より少ない或いは異なる類型の翻訳後変形を有することによって、自然発生抗体とは異なる翻訳後変形を有する。
本開示内容の例示的な抗体のＶＨ及びＶＬ ＣＤＲのアミノ酸配列がそれぞれ、表３及び４に提供されている。前記ＶＨ及びＶＬアミノ酸配列はそれぞれ、表５及び６に提供されている。
Figure 2022515960000005
Figure 2022515960000006
Figure 2022515960000007
Figure 2022515960000008
一部の具現例において、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域（ＶＨ）は、配列番号３３の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、及び／又は前記軽鎖可変領域（ＶＬ）は、配列番号３８の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む。他の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＶＨ及びＶＬを含み、前記ＶＨは、配列番号３３に示したアミノ酸配列を含み、及び／又は前記ＶＬは、配列番号３８に示したアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域（ＶＨ）は、配列番号３４の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、及び／又は前記軽鎖可変領域（ＶＬ）は、配列番号３９の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む。他の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＶＨ及びＶＬを含み、前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、及び／又は前記ＶＬは、配列番号３９に示したアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域（ＶＨ）は、配列番号３４の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、及び／又は前記軽鎖可変領域（ＶＬ）は、配列番号４１の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む。他の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＶＨ及びＶＬを含み、前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、及び／又は前記ＶＬは、配列番号４１に示したアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域（ＶＨ）は、配列番号３４の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、及び／又は前記軽鎖可変領域（ＶＬ）は、配列番号４０の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む。他の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＶＨ及びＶＬを含み、前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、及び／又は前記ＶＬは、配列番号４０に示したアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域（ＶＨ）は、配列番号３４の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、及び／又は前記軽鎖可変領域（ＶＬ）は、配列番号４２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む。他の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＶＨ及びＶＬを含み、前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、及び／又は前記ＶＬは、配列番号４２に示したアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域（ＶＨ）は、配列番号３４の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、及び／又は前記軽鎖可変領域（ＶＬ）は、配列番号４３の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む。他の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＶＨ及びＶＬを含み、前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、及び／又は前記ＶＬは、配列番号４３に示したアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域（ＶＨ）は、配列番号３４の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、及び／又は前記軽鎖可変領域（ＶＬ）は、配列番号４４の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む。他の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＶＨ及びＶＬを含み、前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、及び／又は前記ＶＬは、配列番号４４に示したアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域（ＶＨ）は、配列番号３６の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、及び／又は前記軽鎖可変領域（ＶＬ）は、配列番号４６の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む。他の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＶＨ及びＶＬを含み、前記ＶＨは、配列番号３６に示したアミノ酸配列を含み、及び／又は前記ＶＬは、配列番号４６に示したアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域（ＶＨ）は、配列番号３７の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、及び／又は前記軽鎖可変領域（ＶＬ）は、配列番号４６の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む。他の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＶＨ及びＶＬを含み、前記ＶＨは、配列番号３７に示したアミノ酸配列を含み、及び／又は前記ＶＬは、配列番号４６に示したアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域（ＶＨ）は、配列番号１３０の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、及び／又は前記軽鎖可変領域（ＶＬ）は、配列番号４６の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む。他の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＶＨ及びＶＬを含み、前記ＶＨは、配列番号３７に示したアミノ酸配列を含み、及び／又は前記ＶＬは、配列番号４６に示したアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域（ＶＨ）は、配列番号１３１の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、及び／又は前記軽鎖可変領域（ＶＬ）は、配列番号４６の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む。他の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＶＨ及びＶＬを含み、前記ＶＨは、配列番号３７に示したアミノ酸配列を含み、及び／又は前記ＶＬは、配列番号４６に示したアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＶＨ及びＶＬを含み、前記ＶＨは、配列番号３３、３４、３６、３７、１３０又は１３１に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同じアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＶＨ及びＶＬを含み、前記ＶＬは、配列番号３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４又は４６に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同じアミノ酸配列を含む。
一部の具現例において、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＶＨ及びＶＬを含み：
（ａ）前記ＶＨは、配列番号３３に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号３８に示したアミノ酸配列を含むか；
（ｂ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号３９に示したアミノ酸配列を含むか；
（ｃ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４１に示したアミノ酸配列を含むか；
（ｄ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４０に示したアミノ酸配列を含むか；
（ｅ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４２に示したアミノ酸配列を含むか；
（ｆ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４３に示したアミノ酸配列を含むか；
（ｇ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４４に示したアミノ酸配列を含むか；
（ｈ）前記ＶＨは、配列番号３６に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４６に示したアミノ酸配列を含むか；
（ｉ）前記ＶＨは、配列番号３７に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４６に示したアミノ酸配列を含むか；
（ｊ）前記ＶＨは、配列番号１３０に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４６に示したアミノ酸配列を含むか；又は
（ｋ）前記ＶＨは、配列番号１３１に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４６に示したアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載のＶＨドメイン又はその一つ以上のＣＤＲは、重鎖、例えば全長（ｆｕｌｌ ｌｅｎｇｔｈ）重鎖を形成するための定常ドメインに連結され得る。類似に、本明細書に記載のＶＬドメイン又はその一つ以上のＣＤＲは、軽鎖、例えば全長軽鎖を形成するための定常ドメインに連結され得る。全長重鎖及び全長軽鎖は組み合わせて全長抗体を生成する。
したがって、特定の具現例において、本明細書は、抗体軽鎖及び重鎖、例えば、別個の軽鎖及び重鎖を含む抗体を提供する。前記軽鎖と関連して、特定の具現例において、本明細書に記載の抗体の軽鎖は、カッパ（ｋａｐｐａ）軽鎖である。他の特定の具現例において、本明細書に記載の抗体の軽鎖は、ラムダ（ｌａｍｂｄａ）軽鎖である。さらに他の特定の具現例において、本明細書に記載の抗体の軽鎖は、ヒトカッパ軽鎖又はヒトラムダ軽鎖である。特定の具現例において、ＦＡＭ１９Ａ５ポリペプチド（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、本明細書に記載された任意のＶＬ又はＶＬ ＣＤＲアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、前記軽鎖の定常領域は、ヒトカッパ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。特定の具現例において、ＦＡＭ１９Ａ５ポリペプチド（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、本明細書に記載されたＶＬ又はＶＬ ＣＤＲアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、前記軽鎖の定常領域は、ヒトラムダ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。ヒト定常領域配列の非制限的な例は、当業界に記載されている。例えば、米国特許番号５，６９３，７８０及び上のＫａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ，（１９９１）を参照されたい。
前記重鎖と関連して一部の具現例において、本明細書に記載の抗体の重鎖は、アルファ（α）、デルタ（δ）、エプシロン（ε）、ガンマ（γ）又はミュー（μ）重鎖であり得る。他の特定の具現例において、記載された抗体の重鎖は、ヒトアルファ（α）、デルタ（δ）、エプシロン（ε）、ガンマ（γ）又はミュー（μ）重鎖を含むことができる。一部の具現例において、ＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合する本明細書に開示の抗体は、本明細書に記載されたＶＨ又はＶＨ ＣＤＲアミノ酸配列を含む重鎖を含み、前記重鎖の定常領域は、ヒトガンマ（γ）重鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。さらに他の具現例において、ＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、本明細書に記載されたＶＨ又はＶＨ ＣＤＲアミノ酸配列を含む重鎖を含み、前記重鎖の定常領域は、本明細書に記載又は当業界に公知のヒト重鎖のアミノ酸を含む。ヒト定常領域配列の非制限的な例は、当業界に記載されている。例えば、米国特許番号５，６９３，７８０及び上のＫａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）を参照されたい。
一部の具現例において、ＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、本明細書に記載されたＶＨ又はＶＨ ＣＤＲとＶＬ及びＶＬ ＣＤＲを含むＶＬドメイン及びＶＨドメインを含み、前記定常領域は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ又はＩｇＹ免疫グロブリン分子又はヒトＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ又はＩｇＹ免疫グロブリン分子の定常領域のアミノ酸配列を含む。他の特定の具現例において、ＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、本明細書に記載された任意のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン及びＶＨドメインを含み、前記定常領域は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ又はＩｇＹ免疫グロブリン分子、任意の亜型の免疫グロブリン分子（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡｌ及びＩｇＡ２）の定常領域のアミノ酸配列を含む。一部の具現例において、前記定常領域は、亜型（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４）及び同種異因子型（例えば、Ｇｌｍ、Ｇ２ｍ、Ｇ３ｍ及びｎＧ４ｍ）及びこれらの変種を含む天然ヒトＩｇＧの定常領域のアミノ酸配列を含む。例えば、Ｖｉｄａｒｓｓｏｎ Ｇ．ｅｔ ａｌ．Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（２０１４年１０月２０日オンライン公開）及びＪｅｆｆｅｒｉｓ Ｒ．ａｎｄ Ｌｅｆｒａｎｃ ＭＰ，ｍＡｂｓ １：４，１－７（２００９）を参照されたい。一部の具現例において、前記定常領域は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４又はこれらの変種の定常領域のアミノ酸配列を含む。
特定の具現例において、本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、Ｆｃ効果器機能、例えば、補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）及び／又は抗体依存性細胞性食菌作用（ＡＤＣＰ）を持たない。効果器機能は、Ｆｃ領域によって媒介され、前記Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインにおいてヒンジ領域に最も近接した残基は、先天性免疫系の効果器細胞上でＣｌｑ（補体）及びＩｇＧ－Ｆｃ受容体（ＦｃγＲ）に対して大きく重なる結合部位を含むので、抗体の効果器機能を担当する。また、ＩｇＧ２及びＩｇＧ４抗体は、ＩｇＧ１及びＩｇＧ３抗体よりも低いレベルのＦｃ効果器機能を有する。抗体の効果器機能は、（１）Ｆｃ領域が欠如している抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）又はモノマーＶＨ又はＶＬドメインからなるｓｄＡｂのような）を用い；（２）例えば、糖が付着している残基を欠失又は変更することによって、糖を酵素的に除去することによって、グリコシル化阻害剤の存在の下に培養された細胞において抗体を生成することによって、又はタンパク質をグリコシル化できない細胞（例えば、バクテリア宿主細胞、例えば米国特許公開第２０１２０１００１４０号参照）において抗体を発現させることによって、無糖化抗体を生成し；（３）効果器機能が減少したＩｇＧ亜型のＦｃ領域を用い（例えば、ＩｇＧ２及びＩｇＧ４抗体のＦｃ領域又はＩｇＧ２又はＩｇＧ４抗体のＣＨ２ドメインを含むキメラＦｃ領域、例えば米国特許公開第２０１２０１００１４０号及びＬａｕ Ｃ．ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９１：４７６９－４７７７（２０１３）参照）；及び（４）Ｆｃ機能を減少させたり或いはなくす突然変異を持つＦｃ領域を生成させることを含めて当業界に公知の異なる接近法によって減少又は回避され得る。例えば、米国特許公開第２０１２０１００１４０号及びそこに引用されている米国及びＰＣＴ出願及びＡｎ ｅｔ ａｌ，ｍＡｂｓ １：６，５７２－５７９（２００９）を参照されたい。
これによって、一部の具現例において、本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）又は単量体ＶＨ又はＶＬドメインからなるｓｄＡｂである。このような抗体断片は当業界によく知られており、上に記載されている。
一部の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、単鎖Ｆｖである。例示的な抗ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖのアミノ酸配列が、下記表７に提供されている。
Figure 2022515960000009
Figure 2022515960000010
一部の具現例において、本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、Ｆｃ効果器機能が減少したり或いは存在しないＦｃ領域を含む。一部の具現例において、前記定常領域は、ヒトＩｇＧ２又はＩｇＧ４のＦｃ領域のアミノ酸配列を含み、一部の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＩｇＧ２／ＩｇＧ４アイソ型を有する。一部の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＩｇＧ４アイソ型のＩｇＧ抗体のＣＨ２ドメイン及びＩｇＧ１アイソ型のＩｇＧ抗体のＣＨ３ドメインを含むキメラＦｃ領域、又はＩｇＧ２のヒンジ領域とＩｇＧ４のＣＨ２領域を含むキメラＦｃ領域、又はＦｃ効果器機能が減少したり或いは存在しない突然変異を持つＦｃ領域を含む。Ｆｃ効果器機能が減少したり或いは存在しないＦｃ領域は、当業界に公知されたものを含む。例えば、Ｌａｕ Ｃ．ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９１：４７６９－４７７７（２０１３）；Ａｎ ｅｔ ａｌ，ｍＡｂｓ １：６，５７２－５７９（２００９）；及び米国特許公開番号２０１２０１００１４０及びそこに引用されている米国特許及び公開公報及びＰＣＴ公開公報を参照されたい。また、Ｆｃ効果器機能が減少したり或いは存在しないＦｃ領域は、当業者であれば容易に作ることができる。
［ＩＩＩ．核酸分子］
本明細書に記載のさらに他の態様は、本明細書に記載の抗体のいずれか一つをコードする一つ以上の核酸分子に関する。前記核酸は、全細胞、細胞溶解物、又は部分的に精製されたり或いは実質的に純粋な形態で存在し得る。核酸は、他の細胞成分又は他の汚染物質、例えば他の細胞核酸（例えば、他の染色体ＤＮＡ、例えば、自然で分離されたＤＮＡに連結された染色体ＤＮＡ）又はタンパク質からアルカリ／ＳＤＳ処理、ＣｓＣｌバンディング（ｂａｎｄｉｎｇ）、カラムクロマトグラフィー、制限酵素、アガロースゲル電気泳動及び当業界によく知られたその他の技術を含む標準技術によって精製される時、“分離”されたり或いは“実質的に純粋になる”。Ｆ．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．（１９８７）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照する。本明細書に記載の核酸は、例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡであり、イントロン配列を含有しても含有しなくてもよい。特定の具現例において、前記核酸は、ｃＤＮＡ分子である。
本明細書に記載の核酸は、標準分子生物学技術を用いて得ることができる。ハイブリドーマ（例えば、下にさらに記載されているように、ヒト免疫グロブリン遺伝子を保有している遺伝子導入マウスから製造されたハイブリドーマ）によって発現した抗体の場合、ハイブリドーマによって製造された抗体の軽鎖及び重鎖をコードするｃＤＮＡは、標準ＰＣＲ増幅又はｃＤＮＡクローニング技術によって得ることができる。免疫グロブリン遺伝子ライブラリーから得た抗体の場合に（例えば、ファージディスプレイ技術を利用）、抗体をコードする核酸を前記ライブラリーから回収することができる。
本明細書に記載の特定核酸分子は、本開示内容の様々な抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体のＶＨ及びＶＬ配列をコードするものである。これらの抗体のＶＨ及びＶＬ配列をコードする例示的なＤＮＡ配列がそれぞれ表８及び表９に示されている。
Figure 2022515960000011
Figure 2022515960000012
Figure 2022515960000013
Figure 2022515960000014
本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を製造するための方法は、前記重鎖及び軽鎖を信号ペプチドと共に、前記重鎖及び軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む細胞株において発現させることを含むことができる。これらのヌクレオチド配列を含む宿主細胞は、本明細書に含まれる。
ＶＨ及びＶＬセグメントをコードするＤＮＡ断片が得られると、これらのＤＮＡ断片は、標準組換えＤＮＡ技術によってさらに操作し、例えば、可変領域遺伝子を全長抗体鎖遺伝子、Ｆａｂ断片遺伝子又はｓｃＦｖ遺伝子に変換できる。これらの操作においてＶＬ又はＶＨ－コーディングＤＮＡ断片は、抗体定常領域又は可撓性リンカーのようなさらに他のタンパク質をコードするさらに他のＤＮＡ断片に作動的に連結される。これと関連して使われた用語“作動的に連結”は、２個のＤＮＡ断片が接合して前記２個のＤＮＡ断片によってコードされたアミノ酸配列がフレーム内残っていることを意味するよう意図される。
前記ＶＨ領域をコードする分離されたＤＮＡは、ＶＨ－コーディングＤＮＡを重鎖定常領域（ヒンジ、ＣＨ１、ＣＨ２及び／又はＣＨ３）をコードするさらに他のＤＮＡ分子に作動的に連結することによって、全長重鎖遺伝子に転換可能である。ヒト重鎖定常領域遺伝子の配列は、当業界に公知であり（例えば、Ｋａｂａｔ，ＥＡ，ｅｌ ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＵＳ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２参考）、これらの領域を含むＤＮＡ断片は、標準ＰＣＲ増幅によって得ることができる。前記重鎖定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ又はＩｇＤ定常領域、例えばＩｇＧ２及び／又はＩｇＧ４定常領域であり得る。Ｆａｂ断片重鎖遺伝子の場合、前記ＶＨ－コーディングＤＮＡは、重鎖ＣＨ１定常領域だけをコードするさらに他のＤＮＡ分子に作動的に連結され得る。
前記ＶＬ領域をコードする分離されたＤＮＡは、ＶＬ－コーディングＤＮＡを軽鎖定常領域（ＣＬ）をコードするさらに他のＤＮＡ分子に作動的に連結することによって、全長軽鎖遺伝子（のみならず、Ｆａｂ軽鎖遺伝子）に転換可能である。ヒト軽鎖定常領域遺伝子の配列は当業界に公知であり（例えば、Ｋａｂａｔ，ＥＡ，ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＵＳ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２）、これらの領域を含むＤＮＡ断片は、標準ＰＣＲ増幅によって得ることができる。軽鎖定常領域は、カッパ又はラムダ定常領域であり得る。
ｓｃＦｖ抗体を生成するために、前記ＶＨ－及びＶＬ－コーディングＤＮＡ断片は、可撓性リンカー、例えばアミノ酸配列（Ｇｌｙ４－Ｓｅｒ）３をコードするさらに他の断片に作動的に連結され、前記ＶＨ及びＶＬ配列が、ＶＬ及びＶＨ領域が可撓性リンカーによって接合された隣接単鎖タンパク質として発現し得る（例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ、（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６；Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５４参照）。例示的な抗ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖのアミノ酸配列が表７に提供されている。
一部の具現例において、本開示内容は、抗体をコードするヌクレオチド配列を含む分離された核酸分子を含むベクターを提供する。他の具現例において、前記ベクターは、遺伝子治療のために用いることができる。
本開示内容に適するベクターは、発現ベクター、ウイルスベクター及びプラスミドベクターを含む。一具現例において、前記ベクターは、ウイルスベクターである。
本明細書で用いる発現ベクターとは、挿入されたコーディング配列の転写及び翻訳に必要な要素を含む任意の核酸構造体のことを指すか、或いはＲＮＡウイルスベクターでは、適切な宿主細胞への導入時、複製と翻訳に必要な要素のことを指す。発現ベクターは、プラスミド、ファージミド、ウイルス及びこれらの誘導体を含むことができる。
本開示内容の発現ベクターは、本明細書に記載の抗体をコードするポリヌクレオチドを含むことができる。一具現例において、前記抗体をコードする配列は、発現調節配列に作動可能に連結される。本明細書で用いる２個の核酸配列は、各成分核酸配列がその機能性を維持するように許容する方式で共有結合される時に作動可能に連結される。コーディング配列及び遺伝子発現調節配列は、コーディング配列の発現又は転写及び／又は翻訳を遺伝子発現調節配列の影響又は制御の下にあるように共有結合される時に作動可能に連結されているとする。５’遺伝子発現配列においてプロモーターの誘導がコーディング配列の転写を起こし、２個のＤＮＡ配列間の結合特性が、（１）フレーム－移動（ｆｒａｍｅ－ｓｈｉｆｔ）突然変異の導入を起こさいか、（２）コーディング配列の転写を指示するプロモーター領域の能力を妨害しないか、又は（３）タンパク質に翻訳される相応するＲＮＡ転写体の能力を妨害しない場合に、２個のＤＮＡ配列が作動可能に連結されているとする。これによって、遺伝子発現配列がコーディング核酸配列の転写に影響を及ぼし得る場合、前記遺伝子発現配列は、コーディング核酸配列に作動可能に連結されて生成された転写体が所望の抗体に翻訳される。
ウイルスベクターは、次のようなウイルスの核酸配列を含むが、これに限定されるものではない：レトロウイルス、例えば、モロニー（Ｍｏｌｏｎｅｙ）ネズミ白血病ウイルス、ハーベイ（Ｈａｒｖｅｙ）ネズミ肉腫ウイルス、ネズミ乳癌ウイルス及びラウス（Ｒｏｕｓ）肉腫ウイルス；レンチウイルス；アデノウイルス；アデノ関連ウイルス；ＳＶ４０型ウイルス；ポリオーマウイルス；エプスタインバール（Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ）ウイルス；乳頭腫ウイルス；ヘルペスウイルス；ワクシニアウイルス；小児痲痺ウイルス；及びレトロウイルスのようなＲＮＡウイルス。当業界に公知の他のベクターを容易に用いることができる。特定ウイルスベクターは、非必須遺伝子が関心遺伝子に代替された非細胞病性真核ウイルスに基づく。非細胞病性ウイルスには、ライフサイクルがゲノムウイルスＲＮＡをＤＮＡに逆転写した後、続いて宿主細胞ＤＮＡにプロウイルス統合することを伴うレトロウイルスが含まれる。レトロウイルスは、ヒト遺伝子治療試験のために承認された。最も有用なのは、複製欠陥のあるレトロウイルスである（すなわち、所望のタンパク質の合成を指示できるが、感染性粒子は生成できない。）。このような遺伝的に変形されたレトロウイルス発現ベクターは、生体内で遺伝子の高効率形質導入において一般的に有用である。複製欠陥のあるレトロウイルスの生産のための標準プロトコル（外因性遺伝物質をプラスミドに混入する段階、プラスミドを用いてパッケージ細胞株を形質注入させる段階、パッケージ細胞株によって組換えレトロウイルスを生産する段階、組織培養培地からウイルス粒子を回収する段階、及びウイルス粒子に標的細胞を感染させる段階を含む。）は、Ｋｒｉｅｇｌｅｒ，Ｍ．，Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｗ．Ｈ Ｆｒｅｅｍａｎ Ｃｏ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９０）ａｎｄ Ｍｕｒｒｙ，Ｅ．Ｔ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．７，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｃｌｉｆｆｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．（１９９１）に提供されている。
一具現例において、前記ウイルスは、二重鎖ＤＮＡウイルスであるアデノ関連ウイルスである。アデノ関連ウイルスは、複製欠陥があるように操作されてよく、広範囲な細胞類型及び種を感染させることができる。また、熱及び脂質溶媒安定性；造血細胞を含む様々な系統の細胞で高い形質導入頻度；重複感染阻害が欠如し、様々な一連の形質導入が可能であるという長所がある。報告によれば、アデノ関連ウイルスは、部位特異的方式でヒト細胞ＤＮＡに統合され得るので、挿入突然変異の誘発可能性とレトロウイルス感染の挿入された遺伝子発現特性の可変性を最小化できる。また、野生型アデノ関連ウイルス感染は、選択的圧力がない状態で１００回も超える継代中に組織培養で追跡され、これは、アデノ関連ウイルスゲノム統合が比較的安定した反応であることを意味する。アデノ関連ウイルスは、染色体外方式で作用してもよい。
他の具現例において、前記ベクターは、レンチウイルスから由来する。特定の具現例において、前記ベクターは、非分裂細胞を感染させ得る組換えレンチウイルスのベクターである。
レンチウイルスゲノムとプロウイルスＤＮＡは一般に、レトロウイルスから発見する２個の長い末端反復（ＬＴＲ）配列が両側にある３個の遺伝子であるｇａｇ、ｐｏｌ及びｅｎｖを有する。前記ｇａｇ遺伝子は、内部構造（マトリックス、カプシド及びヌクレオカプシド）タンパク質をコードし；前記ｐｏｌ遺伝子は、ＲＮＡ－指向ＤＮＡ重合酵素（逆転写酵素）、プロテアーゼ及びインテグラーゼをコードし；前記ｅｎｖ遺伝子は、ウイルス外皮糖タンパク質をコードする。５’及び３’ＬＴＲは、ビリオンＲＮＡの転写及びポリアデニル化を促進する役割を担う。ＬＴＲは、ウイルス複製に必要な他の全てのシス－作用（ｃｉｓ－ａｃｔｉｎｇ）配列を含む。レンチウイルスは、ｖｉｆ、ｖｐｒ、ｔａｔ、ｒｅｖ、ｖｐｕ、ｎｅｆ及びｖｐｘ（ＨＩＶ－１、ＨＩＶ－２及び／又はＳＩＶにおいて）を含む追加遺伝子を持っている。
前記ゲノム（ｔＲＮＡプライマー結合部位）の逆転写及びウイルスＲＮＡを粒子（Ｐｓｉ部位）に効率的に封入するために必要な配列が５’ＬＴＲに隣接している。封入（又は、レトロウイルスＲＮＡを感染性ビリオンにパッケージング）に必要な配列がウイルスゲノムから欠落している場合、シス欠陥（ｃｉｓ ｄｅｆｅｃｔ）はゲノムＲＮＡの封入を防ぐ。
しかし、その結果、得られた突然変異体は、全てのビリオンタンパク質の合成を指示できる状態で残っている。本開示内容は、パッケージング機能を保有している２個以上のベクター、すなわち、ｇａｇ、ｐｏｌ及びｅｎｖだけでなく、ｒｅｖ及びｔａｔを用いて好適な宿主細胞を形質注入させることを含む、非分裂細胞を感染させ得る組換えレンチウイルスを生産する方法を提供する。下に開示されるように、機能性ｔａｔ遺伝子が欠如したベクターは、特定用途に好適である。これによって、例えば、第１ベクターは、ウイルスｇａｇ及びウイルスｐｏｌをコードする核酸を提供でき、さらに他のベクターは、パッケージング細胞を生産するためにウイルスｅｎｖをコードする核酸を提供できる。本明細書において、伝達ベクターとして同定された異種遺伝子を提供するベクターをパッケージング細胞に導入すれば、関心外来遺伝子を運搬する感染性ウイルス粒子を放出するプロデューサー細胞（ｐｒｏｄｕｃｅｒ ｃｅｌｌ）が得られる。
上に述べたベクター及び外来遺伝子の構成によれば、第２ベクターは、ウイルス外皮（ｅｎｖ）遺伝子をコードする核酸を提供することができる。前記ｅｎｖ遺伝子は、レトロウイルスを含む略全ての好適なウイルスから由来し得る。一部の具現例において、前記ｅｎｖタンパク質は、ヒト及び他の種の細胞の形質導入を可能にする両種性外皮タンパク質である。
レトロウイルス由来のｅｎｖ遺伝子の例は、次を含むが、これに限定されない：モロニーネズミ白血病ウイルス（ＭｏＭｕＬＶ又はＭＭＬＶ）、ハーベイネズミ肉腫ウイルス（ＨａＭｕＳＶ又はＨＳＶ）、ネズミ乳癌ウイルス（ＭｕＭＴＶ又はＭＭＴＶ）、テナガザル白血病ウイルス（Ｇｉｂｂｏｎ Ａｐｅ Ｌｅｕｋｅｍｉａ Ｖｉｒｕｓ）、ヒト免疫欠乏ウイルス（ＨＩＶ）、及びラウス肉腫ウイルス。水疱性口内炎（Ｖｅｓｉｃｕｌａｒ ｓｔｏｍａｔｉｔｉｓ）ウイルス（ＶＳＶ）タンパク質Ｇ（ＶＳＶ Ｇ）のような他のｅｎｖ遺伝子、肝炎ウイルス及びインフルエンザーの遺伝子も用いられ得る。
ウイルスｅｎｖ核酸配列を提供するベクターは、本明細書の他の箇所に記載されている調節配列と作動可能に関連される。
特定の具現例において、前記ベクターは、ベクターが非分裂細胞を形質導入させる能力を損傷させずにＨＩＶ毒性遺伝子ｅｎｖ、ｖｉｆ、ｖｐｒ、ｖｐｕ及びｎｅｆが欠失されたレンチウイルスベクターを含む。
一部の具現例において、前記ベクターは、３’ＬＴＲのＵ３領域の欠失を含むレンチウイルスベクターを含む。Ｕ３領域の欠失は、全体欠失又は部分欠失であり得る。
一部の具現例において、本明細書に記載のＦＶＩＩＩヌクレオチド配列を含む本開示内容のレンチウイルスベクターは、（ａ）ｇａｇ、ｐｏｌ又はｇａｇ及びｐｏｌ遺伝子を含む第１ヌクレオチド配列、及び（ｂ）異種ｅｎｖ遺伝子を含む第２ヌクレオチド配列を用いて形質注入されてよく；このとき、前記レンチウイルスベクターは、機能性ｔａｔ遺伝子が欠如している。他の具現例において、前記細胞は、ｒｅｖ遺伝子を含む第４ヌクレオチド配列を用いてさらに形質注入される。特定の具現例において、前記レンチウイルスベクターは、ｖｉｆ、ｖｐｒ、ｖｐｕ、ｖｐｘ及びｎｅｆ又はこれらの組合せから選択される機能性遺伝子が欠如している。
特定の具現例において、レンチウイルスベクターは、ｇａｇタンパク質、Ｒｅｖ反応要素、中心ポリプリントラック（ｃＰＰＴ）、又はこれらの任意の組合せをコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含む。
レンチウイルスベクターの例は、Ｗ０９９３１２５１、Ｗ０９７１２６２２、Ｗ０９８１７８１５、Ｗ０９８１７８１６及びＷ０９８１８９３４に開示されており、これらはその全文が本明細書に参考として含まれる。
他のベクターは、プラスミドベクターを含む。プラスミドベクターは、当業界に広範囲に記述されており、本技術分野の当業者には周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｌ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，１９８９参照。ここ数年間、プラスミドベクターは宿主ゲノム内で複製して宿主ゲノムに統合できないことから、生体内で細胞に遺伝子を伝達するのに特に有利なものとして明らかになった。しかし、宿主細胞と相溶性であるプロモーターを有するこれらのプラスミドは、プラスミド内に作動可能にコードされた遺伝子からペプチドを発現することができる。商業用供給社から入手でき、一般的に用いられる一部のプラスミドは、ｐＢＲ３２２、ｐＬＴＣｌ８、ｐＬＴＣｌ９、様々なｐｃＤＮＡプラスミド、ｐＲＣ／ＣＭＶ、様々なｐＣＭＶプラスミド、ｐＳＶ４０及びｐＢｌｕｅＳｃｒｉｐｔを含む。特定プラスミドの追加例は、ｐｃＤＮＡ３．１、カタログ番号Ｖ７９０２０；ｐｃＤＮＡ３．１／ｈｙｇｒｏ、カタログ番号Ｖ８７０２０；ｐｃＤＮＡ４／ｍｙｃ－Ｈｉｓ、カタログ番号Ｖ８６３２０；及びｐＢｕｄＣＥ４．ｌ、カタログ番号Ｖ５３２２０（いずれも、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）社製）である。他のプラスミドは当業者によく知られている。さらに、プラスミドはＤＮＡの特定断片を除去及び／又は追加するために標準分子生物学技術を用いてカスタマイズ設計され得る。
［ＶＩ．抗体生産］
ＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に免疫特異的に結合する抗体又はその断片は、抗体の合成のために当業界に公知の任意の方法、例えば化学的合成又は組換え発現技術によって生成され得る。本明細書に開示された方法は、特に言及がない限り、分子生物学、微生物学、遺伝子分析、組換えＤＮＡ、有機化学、生化学、ＰＣＲ、オリゴヌクレオチド合成及び変形、核酸混成化、及び当業界の関連技術分野における従来の技術を利用する。これらの技術は、例えば、本明細書で援用された参考文献に完全に説明されている。例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓ Ｔ ｅｔ ａｌ．，（１９８２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ；Ｓａｍｂｒｏｏｋ Ｊ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ；Ｓａｍｂｒｏｏｋ Ｊ ｅｔ ａｌ．，（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；Ａｕｓｕｂｅｌ ＦＭ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ（１９８７ ａｎｄ ａｎｎｕａｌ ｕｐｄａｔｅｓ）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ（１９８７ ａｎｄ ａｎｎｕａｌ ｕｐｄａｔｅｓ）Ｇａｉｔ（ｅｄ．）（１９８４）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ；Ｅｃｋｓｔｅｉｎ（ｅｄ．）（１９９１）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ；Ｂｉｒｒｅｎ Ｂ ｅｔ ａｌ．，（ｅｄｓ．）（１９９９）Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓを参考されたい。
特定の具現例において、本明細書に記載の抗体は、例えば、合成、ＤＮＡ配列の遺伝子操作を用いた生成を伴う任意の手段によって製造、発現、生成又は分離した抗体（例えば、組換え抗体）である。特定の実施形態において、このような抗体は、生体内動物又は哺乳類（例えば、ヒト）の抗体ジャームライン（ｇｅｒｍｌｉｎｅ）レパートリー内に自然的に存在しない配列（例えば、ＤＮＡ配列又はアミノ酸配列）を含む。一部の具現例において、本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は脱免疫化された。
実施例欄（例えば、実施例２）に記載されているように、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体はまず、合成ＦＡＭ１９Ａ５ペプチドでニワトリを免疫化することによって生成した。したがって、ヒトを対象に投与時に免疫原性の危険を最小化するために、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（例えば、３－２及び２－１３）をヒト抗体の免疫原性配列とより近似するように変形させた。一部の具現例において、本明細書に開示の脱免疫化された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、脱免疫化されていないそれらの対応する相対抗体に比べてヒトＦＡＭ１９Ａ５に対して類似の結合親和度を有する。一部の具現例において、本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体はまた、親和度成熟を経た。抗体を脱免疫化するための方法は、本明細書に開示されており、且つ当業界に公知されている。
特定の態様において、本明細書は、本明細書に記載の細胞又は宿主細胞を培養することを含む、ＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に免疫特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片を製造する方法を提供する。特定の態様において、本明細書は、ＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に免疫特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片を製造する方法であって、前記抗体又はその抗原結合断片を本明細書に記載の細胞又は宿主細胞（例えば、本明細書に記載の抗体をコードするポリヌクレオチドを含む細胞又は宿主細胞）を用いて発現（例えば、組換えによって発現）させる段階を含む方法を提供する。特定の具現例において、前記細胞は、分離された細胞である。特定の具現例において、前記細胞に外因性ポリヌクレオチドを導入した。特定の具現例において、前記方法は、細胞又は宿主細胞から得た抗体又はその抗原結合断片を精製する段階をさらに含む。
多クローン性抗体を生産するための方法は、当業界に公知されている（例えば、Ｃｈａｐｔｅｒ １１ ｉｎ：Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，（２００２）５ｔｈ Ｅｄ．，Ａｕｓｕｂｅｌ ＦＭ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ参照）。
単クローン性抗体は、ハイブリドーマ、組換え及びファージディスプレイ技術、又はこれらの組合せの使用を含め、当業界に公知の様々な技術を用いて製造できる。例えば、単クローン性抗体は当業界に公知されており、例えば、Ｈａｒｌｏｗ Ｅ ＆ Ｌａｎｅ Ｄ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ ｅｄ．１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ ＧＪ ｅｔ ａｌ．，ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ５６３６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１）に教示されている技術を含め、ハイブリドーマ技術を用いて生産できる。本明細書で使われる用語“単クローン性抗体”は、ハイブリドーマ技術によって生産された抗体に制限されない。例えば、単クローン性抗体は、本明細書に記載の抗体又はその断片、例えばそれら抗体の軽鎖及び／又は重鎖を外因的に発現させる宿主細胞から組換えによって生産できる。
特定の具現例において、本明細書で使われる“単クローン性抗体”は、単一細胞（例えば、組換え抗体を生産するハイブリドーマ又は宿主細胞）によって生産される抗体であり、前記抗体は、例えば、ＥＬＩＳＡ、又は当業界に公知されているか或いは本明細書に提供されている実施例欄に記載されている他の抗原結合又は競合的結合分析法によって決定されたように、ＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に免疫特異的に結合する。特定の具現例において、単クローン性抗体はキメラ抗体又はヒト化抗体でよい。特定の具現例において、単クローン性抗体は、１価抗体又は多価（例えば、２価）抗体である。特定の具現例において、単クローン性抗体は、単一特異的又は多重特異的抗体（例えば、二重特異的抗体）である。本明細書に記載の単クローン性抗体は、例えば、Ｋｏｈｌｅｒ Ｇ ＆ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ Ｃ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５に記載されたとおり、ハイブリドーマ方法によって作ってもよく、例えば、本明細書に記載の技術を用いてファージライブラリーから分離されてもよい。クローン細胞株及びこれによって発現する単クローン性抗体を製造するための他の方法は、当業界によく知られている（例えば、上のＣｈａｐｔｅｒ １１ ｉｎ：Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，（２００２）５ｔｈ Ｅｄ．，Ａｕｓｕｂｅｌ ＦＭ ｅｔ ａｌ．を参照）。
ハイブリドーマ技術を用いて特定抗体を生産及びスクリーニングするための方法は通常のものであり、当業界によく知られている。例えば、ハイブリドーマ方法では、マウス、又はヒツジ、ヤギ、ウサギ、ラット、ハムスター又はマカクサルのような他の適切な宿主動物を免疫化し、免疫化のために使用したタンパク質（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合する抗体を生産する又は生産できるリンパ球を誘導する。これと違い、リンパ球は、試験管内免疫化できる。次いで、リンパ球は、ポリエチレングリコールのような適切な融合剤により骨髄腫細胞と融合してハイブリドーマ細胞を形成する（Ｇｏｄｉｎｇ ＪＷ（Ｅｄ）、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９－１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８６））。さらに、ＲＩＭＭＳ（反復免疫多重部位）技術を用いて動物を免疫化できる（Ｋｉｌｐａｔｒｉｃｋ ＫＥ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ １６：３８１－９、その全体が参照として含まれる）。
一部の具現例において、マウス（又は、その他ニワトリ、ラット、サル、ロバ、ブタ、ヒツジ、ハムスター又はイヌのような動物）は、抗原（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５のようなＦＡＭ１９Ａ５）で免疫化でき、免疫反応が検出されると、例えば、抗原に特異的な抗体がマウス血清から検出されると、マウス脾臓を回収して脾臓細胞を分離する。その後、前記脾臓細胞を任意の適切な骨髄腫細胞、例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ（登録商標））（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から入手できる細胞株ＳＰ２０の細胞に周知の技術によって融合してハイブリドーマを形成する。ハイブリドーマは、希釈を制限して選別及びクローニングする。特定の具現例において、免疫化されたマウスのリンパ節を回収し、ＮＳＯ骨髄腫細胞と融合させる。
このように製造したハイブリドーマ細胞を、好ましくは、融合していない親骨髄腫細胞の成長又は生存を阻害する一つ以上の物質を含有した適切な培養培地で接種及び成長させる。例えば、親骨髄腫細胞に酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴ又はＨＰＲＴ）が欠如している場合に、ハイブリドーマ用培養培地は、典型的に、ＨＧＰＲＴ欠乏細胞の成長を妨害する物質であるヒポキサンチン、アミノプテリン及びチミジン（ＨＡＴ培地）を含むだろう。
特定の具現例は、効率的に融合し、選別された抗体生産細胞によって抗体の安定した高レベルの生産に一助し、ＨＡＴ培地のような培地に感受性がある骨髄腫細胞を使用する。これらの骨髄腫細胞株には、ＮＳＯ細胞株、又はＳａｌｋ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡから入手可能なＭＯＰＣ－２１及びＭＰＣ－１１マウス腫瘍、及びＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ，ＵＳＡから入手可能なＳＰ－２又はＸ６３－Ａｇ８．６５３細胞から由来したもののようなネズミ骨髄腫細胞株がある。ヒト骨髄腫及びマウス－ヒト異種骨髄腫細胞株も、ヒト単クローン性抗体生産について記述されている（Ｋｏｚｂｏｒ Ｄ（１９８４）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １３３：３００１－５；Ｂｒｏｄｅｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１－６３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７））。
ハイブリドーマ細胞が成長する培養培地をＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に対して指向された単クローン性抗体の生産について分析する。ハイブリドーマ細胞によって生産された単クローン性抗体の結合特異性は、当業界に公知の方法、例えば免疫沈殿又は試験管内結合分析法、例えば放射性免疫分析（ＲＩＡ）又は酵素結合免疫吸着分析（ＥＬＩＳＡ）によって決定される。
所望の特異性、親和性及び／又は活性の抗体を生産するハイブリドーマ細胞を同定した後、クローンは、希釈手順を制限してサブクローニング（ｓｕｂｃｌｏｎｉｎｇ）でき、標準方法（上のＧｏｄｉｎｇ ＪＷ（Ｅｄ）、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ参照）によって成長させることができる。このような目的に適する培養培地は、例えば、Ｄ－ＭＥＭ又はＲＰＭＩ １６４０培地を含む。また、ハイブリドーマ細胞は、動物において複数腫瘍として生体内成長され得る。
サブクローンによって分泌された単クローン性抗体を、例えばタンパク質Ａ－セファロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析又は親和性クロマトグラフィーのような従来の免疫グロブリン精製手順によって培養培地、腹水液又は血清から適切に分離する。
本明細書に記載の抗体は、特定ＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）を認識し、当業者に公知の任意の技術によって生成可能な抗体断片を含む。例えば、本明細書に記載のＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片は、パパイン（Ｆａｂ断片を生成するための）又はペプシン（Ｆ（ａｂ’）２断片を生成するための）のような酵素を用いて免疫グロブリン分子のタンパク質分解切断によって生成できる。Ｆａｂ断片は、抗体分子の２個の同じアーム（ａｒｍ）の一つに該当し、重鎖のＶＨ及びＣＨ１ドメインと対なす完全な軽鎖を含む。Ｆ（ａｂ’）２断片は、ヒンジ領域で二硫化結合によって連結された抗体分子の２個の抗原結合アームを含む。
また、本明細書に記載の抗体又はその抗原結合断片は、当業界に公知の様々なファージディスプレイ方法を用いて生成してもよい。ファージディスプレイ方法において、機能性抗体ドメインは、それをコードするポリヌクレオチド配列を運搬するファージ粒子の表面に表示される。特に、ＶＨ及びＶＬドメインをコードするＤＮＡ配列は、動物ｃＤＮＡライブラリー（例えば、ヒトｃＤＮＡライブラリー又は感染された組織のネズミ又はニワトリｃＤＮＡライブラリーのような非ヒトｃＤＮＡライブラリー）から増幅される。前記ＶＨ及びＶＬドメインをコードするＤＮＡは、ＰＣＲによってｓｃＦｖリンカーとともに組み換えられ、ファージミドベクターにクローニングされる。前記ベクターは、Ｅ．ｃｏｌｉで電気穿孔され、前記Ｅ．ｃｏｌｉはヘルパーファージによって感染される。これらの方法に使用されるファージは、典型的に、ｆｄ及びＭ１３を含む糸状ファージ（ｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓ ｐｈａｇｅ）であり、前記ＶＨ及びＶＬドメインは、一般に、ファージ遺伝子ＩＩＩ又は遺伝子ＶＩＩＩに組換えによって融合する。特定の抗原に結合する抗原結合ドメインを発現させるファージは、抗原、例えば標識された抗原又は固体表面又はビーズに結合又は捕獲された抗原を用いて選別又は同定できる。本明細書に記載の抗体を製造するために利用可能なファージディスプレイ方法の例は、Ｂｒｉｎｋｍａｎ Ｕ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ １８２：４１－５０；Ａｍｅｓ ＲＳ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ １８４：１７７－１８６；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ ＣＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２４：９５２－９５８；Ｐｅｒｓｉｃ Ｌ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｇｅｎｅ １８７：９－１８；Ｂｕｒｔｏｎ ＤＲ ＆ Ｂａｒｂａｓ ＣＦ（１９９４）Ａｄｖａｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ ５７：１９１－２８０；ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＧＢ９１／００１１３４；国際公開番号ＷＯ９０／０２８０９、ＷＯ９１／１０７３７、ＷＯ９２／０１０４７、ＷＯ９２／１８６１９、ＷＯ９３／１１２３６、ＷＯ９５／１５９８２、ＷＯ９５／２０４０１及びＷＯ９７／１３８４４；米国特許番号第５，６９８，４２６号、第５，２２３，４０９号、第５，４０３，４８４号、第５，５８０，７１７号、第５，４２７，９０８号、第５，７５０，７５３号、第５，８２１，０４７号、第５，５７１，６９８号、第５，４２７，９０８号、第５，５１６，６３７号、第５，７８０，２２５号、第５，６５８，７２７号、第５，７３３，７４３号及び第５，９６９，１０８号に開示されているものを含む。
前記参考文献に記載されているように、ファージ選択後に前記ファージの抗体コーディング領域を分離及び使用して、ヒト抗体を含めて全抗体又は任意の他の所望の抗原結合断片を生成でき、例えば、下に記載されているように、哺乳類細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母及びバクテリアを含む任意の所望の宿主で発現し得る。ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／２２３２４；Ｍｕｌｌｉｎａｘ ＲＬ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １２（６）：８６４－９；Ｓａｗａｉ Ｈ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）Ａｍ Ｊ Ｒｅｐｒｏｄ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３４：２６－３４；及びＢｅｔｔｅｒ Ｍ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０４１－１０４３に開示されているように、当業界に公知の方法を用いてＦａｂ、Ｆａｂ’及びＦ（ａｂ’）２断片のような抗体断片を組換えによって生産するための技術を採用することもできる。
一態様において、全抗体を生成するためにＶＨ又はＶＬヌクレオチド配列、制限部位及び制限部位を保護するための側面配列を含むＰＣＲプライマーを使用して鋳型、例えば、ｓｃＦｖクローンから前記ＶＨ又はＶＬ配列を増幅させることができる。当業者に公知のクローニング技術を用いて、前記ＰＣＲ増幅されたＶＨドメインをＶＨ定常領域を発現させるベクターにクローニングでき、前記ＰＣＲ増幅されたＶＬドメインをＶＬ定常領域を発現させるベクター、例えばヒトカッパ又はラムダ定常領域にクローニングできる。前記ＶＨ及びＶＬドメインは、必要な定常領域を発現させる一つのベクターにクローニングできる。次いで、前記重鎖変換ベクター及び軽鎖変換ベクターを当業者に公知の技術を用いて細胞株に共－形質注入させ、全長抗体、例えば、ＩｇＧを発現させる安定した又は一時的な細胞株を生成する。
キメラ抗体は、前記抗体の異なる各部分が異なる各免疫グロブリン分子から由来した分子である。例えば、キメラ抗体は、ヒト抗体の定常領域に融合した非ヒト動物（例えば、マウス、ラット又はニワトリ）単クローン性抗体の可変領域を含むことができる。キメラ抗体を生産するための方法は、当業界に知られている。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ＳＬ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２－７；Ｏｉ ＶＴ ＆ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ＳＬ（１９８６）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４－２２１；Ｇｉｌｌｉｅｓ ＳＤ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ １２５：１９１－２０２；及び米国特許番号第５，８０７，７１５号、第４，８１６，５６７号、第４，８１６，３９７号及び第６，３３１，４１５号を参照する。
ヒト化抗体は、所定の抗原に結合でき、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を実質的に有するフレームワーク領域及び非ヒト免疫グロブリン（例えば、ネズミ又はニワトリ免疫グロブリン）のアミノ酸配列を実質的に有するＣＤＲを含む。特定の具現例において、ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にヒト免疫グロブリンの少なくとも一部を含む。前記抗体はまた、重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３及びＣＨ４領域を含むことができる。ヒト化抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＥを含む全ての類型の免疫グロブリン及びＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４を含む任意のアイソ型から選択され得る。ヒト化抗体は、次を含む当業界に公知の様々な技術を用いて生産できるが、これらの技術に限定されるものではない：ＣＤＲ－グラフティング（ヨーロッパ特許番号ＥＰ２３９４００；国際公開番号ＷＯ９１／０９９６７；及び米国特許番号第５，２２５，５３９号、第５，５３０，１０１号及び第５，５８５，０８９号）、ベニヤリング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）又はリサーフェシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）（ヨーロッパ特許番号ＥＰ５９２１０６及びＥＰ５１９５９６；Ｐａｄｌａｎ ＥＡ（１９９１）Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２８（４／５）：４８９－４９８；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ ＧＭ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ｐｒｏｔ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ７（６）：８０５－８１４；及びＲｏｇｕｓｋａ ＭＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）ＰＮＡＳ ９１：９６９－９７３）、チェーンシャッフリング（米国特許番号５，５６５，３３２）及び例えば米国特許番号６，４０７，２１３、米国特許番号５，７６６，８８６、国際公開番号ＷＯ９３／１７１０５；Ｔａｎ Ｐ ｅｔ ａｌ．，（２００２）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６９：１１１９－２５；Ｃａｌｄａｓ Ｃ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１３（５）：３５３－６０；Ｍｏｒｅａ Ｖ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０（３）：２６７－７９；Ｂａｃａ Ｍ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７２（１６）：１０６７８－８４；Ｒｏｇｕｓｋａ ＭＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９６）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ ９（１０）：８９５－９０４；Ｃｏｕｔｏ ＪＲ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５５（２３Ｓｕｐｐ）：５９７３ｓ－５９７７ｓ；Ｃｏｕｔｏ ＪＲ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５５（８）：１７１７－２２；Ｓａｎｄｈｕ ＪＳ（１９９４）Ｇｅｎｅ １５０（２）：４０９－１０及びＰｅｄｅｒｓｅｎ ＪＴ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２３５（３）：９５９－７３に開示された技術。また、米国出願公開番号ＵＳ２００５／００４２６６４Ａ１（２００５年２月２４日）を参照する。
多重特異的（例えば、二重特異的抗体）を製造するための方法が記載されている（例えば、米国特許番号第７，９５１，９１７号；第７，１８３，０７６号；第８，２２７，５７７号；第５，８３７，２４２号；第５，９８９，８３０号；第５，８６９，６２０号；第６，１３２，９９２号及び第８，５８６，７１３号参照）。
単一ドメイン抗体、例えば、軽鎖が欠如した抗体は、当業界によく知られた方法によって生産できる。Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ Ｌ ＆ Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ Ｓ（１９９９）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２３１：２５－３８；Ｎｕｔｔａｌｌ ＳＤ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｃｕｒｒ Ｐｈａｒｍ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １（３）：２５３－２６３；Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ Ｓ，（２００１）Ｊ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ７４（４）：２７７－３０２；米国特許番号第６，００５，０７９号；及び国際公開番号ＷＯ９４／０４６７８、ＷＯ９４／２５５９１及びＷＯ０１／４４３０１を参照する。
また、ＦＡＭ１９Ａ５抗原に免疫特異的に結合する抗体も、当業者によく知られた技術を用いて、抗原を“摸倣”する抗遺伝子型抗体を生成するのに用いることができる（例えば、Ｇｒｅｅｎｓｐａｎ ＮＳ ＆ Ｂｏｎａ ＣＡ（１９８９）ＦＡＳＥＢ Ｊ ７（５）：４３７－４４４；及びＮｉｓｓｉｎｏｆｆ Ａ（１９９１）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １４７（８）：２４２９－２４３８参照）。
特定の具現例において、本明細書に記載の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体と同じＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）のエピトープに結合する本明細書に記載の抗体は、ヒト抗体又はその抗原結合断片である。特定の具現例において、本明細書に記載の抗体がＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に結合することを競合的に遮断（例えば、投与量依存的方式で）する本明細書に記載の抗体は、ヒト抗体又はその抗原結合断片である。
ヒト抗体は、当業界に公知された任意の方法を用いて生産できる。例えば、機能的内因性免疫グロブリンは発現できないが、ヒト免疫グロブリン遺伝子は発現できる遺伝子導入マウスを使用することができる。特に、ヒト重鎖及び軽鎖免疫グロブリン遺伝子複合体は無作為に又は相同性組換えによってマウス胚幹細胞に導入され得る。これと違い、前記ヒト重鎖及び軽鎖遺伝子の他にも、ヒト可変領域、定常領域及び多様性領域をマウス胚幹細胞に導入することができる。前記マウス重鎖及び軽鎖免疫グロブリン遺伝子は、相同性組換えによってヒト免疫グロブリン遺伝子座（ｌｏｃｉ）の導入と別個に又は同時に非機能的になり得る。特に、ＪＨ領域の同型接合（ｈｏｍｏｚｙｇｏｕｓ）欠失は、内因性抗体生産を不可能にする。前記変形された胚幹細胞を拡張し、胚盤胞（ｂｌａｓｔｏｃｙｓｔ）に微細注射してキメラマウスを生成する。前記キメラマウスを飼育してヒト抗体を発現させる同型接合子孫を生成する。前記遺伝子導入マウスは、選択された抗原、例えば抗原（例えば、ＦＡＭ１９Ａ５）の全部又は一部によって正常な方式で免疫化する。抗原に対して指向された単クローン性抗体は、従来のハイブリドーマ技術を用いて免疫化された遺伝子導入マウスから得ることができる。前記遺伝子導入マウスの保有しているヒト免疫グロブリン転移遺伝子は、Ｂ細胞分化中に再配列され、続いて、類型変換（ｃｌａｓｓ ｓｗｉｔｃｈｉｎｇ）及び体細胞突然変異を経る。これによって、このような技術を用いれば、治療的に有用なＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ及びＩｇＥ抗体が生産できる。ヒト抗体生産のための当該技術に関する概要についてＬｏｎｂｅｒｇ Ｎ ＆ Ｈｕｓｚａｒ Ｄ（１９９５）Ｉｎｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ １３：６５－９３を参照する。ヒト抗体及びヒト単クローン性抗体を生産するための当該技術及び当該抗体を生産するためのプロトコルに関する詳細な議論については、例えば、国際公開番号ＷＯ９８／２４８９３、ＷＯ９６／３４０９６及びＷＯ９６／３３７３５；及び米国特許番号第５，４１３，９２３号、５，６２５，１２６号、第５，６３３，４２５号、第５，５６９，８２５号、第５，６６１，０１６号、第５，５４５，８０６号、第５，８１４，３１８号及び第５，９３９，５９８号を参照する。ヒト抗体を生産できるマウスの例としては、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥＴＭ（Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．；米国特許番号第６，０７５，１８１号及び第６，１５０，１８４号）、ＨＵＡＢ－ＭＯＵＳＥＴＭ（Ｍｅｄｅｒｅｘ，Ｉｎｃ．／Ｇｅｎ Ｐｈａｒｍ；米国特許番号第５，５４５，８０６号及び第５，５６９，８２５号）、ＴＲＡＮＳ ＣＨＲＯＭＯ ＭＯＵＳＥＴＭ（Ｋｉｒｉｎ）及びＫＭ ＭＯＵＳＥＴＭ（Ｍｅｄａｒｅｘ／Ｋｉｒｉｎ）を参照する。
ＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合するヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列から由来した抗体ライブラリーを用いて、上述のファージディスプレイ方法を含む当業界に公知の様々な方法によって作ることができる。また、米国特許番号第４，４４４，８８７号、第４，７１６，１１１号及び第５，８８５，７９３号；及び国際公開番号ＷＯ９８／４６６４５、ＷＯ９８／５０４３３、ＷＯ９８／２４８９３、ＷＯ９８／１６６５４、ＷＯ９６／３４０９６、ＷＯ９６／３３７３５及びＷＯ９１／１０７４１を参照する。
一部の具現例において、ヒト抗体は、マウス－ヒトハイブリドーマを用いて生産することができる。例えば、エプスタインバールウイルス（ＥＢＶ）で形質転換されたヒト末梢血液リンパ球は、マウス骨髄腫細胞と融合し、ヒト単クローン性抗体を分泌するマウス－ヒトハイブリドーマを生産でき、これらのマウス－ヒトハイブリドーマをスクリーニングして、標的抗原（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５のようなＦＡＭ１９Ａ５）に免疫特異的に結合するヒト単クローン性抗体を分泌するものを決定することができる。これらの方法は公知されており、当業界に記載されている（例えば、Ｓｈｉｎｍｏｔｏ Ｈ ｅｔ ａｌ．，（２００４）Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ４６：１９－２３；Ｎａｇａｎａｗａ Ｙ ｅｔ ａｌ．，（２００５）Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ １４：２７－３１参照）。
［Ｖ．抗体を操作する方法］
上で議論したとおり、本明細書に開示のＶＨ及びＶＬ配列を持つ抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＶＨ及び／又はＶＬ配列又はこれに付着した定常領域を変形させることによって新しい抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を生成するために使用することができる。これによって、本明細書に記載のさらに他の態様では、本明細書に記載の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の構造的特徴は、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に対する結合のように本明細書に記載の抗体の少なくとも一つの機能的特性を保有する構造的に関連した抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を生成するために用いられる。例えば、前記操作方法のための出発物質は、本明細書に提供されたＶＨ及び／又はＶＬ配列又はその一つ以上のＣＤＲ領域である。前記操作された抗体を生成するために、本明細書に提供された一つ以上のＶＨ及び／又はＶＬ配列又はその一つ以上のＣＤＲ領域を持つ抗体を実際に製造（すなわち、タンパク質として発現）する必要がない。その代わりに、前記配列に含まれた情報を出発物質として使用し、本来の配列から派生した“２世代”配列を生成した後、“２世代”配列を製造し、タンパク質として発現させる。
したがって、本明細書には、
（ａ）（ｉ）表３に示したＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３配列又は表５に示した重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３を含む重鎖可変領域配列；及び（ｉｉ）表４に示したＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３配列又は表６に示した重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域配列を提供し；
（ｂ）前記重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列内の少なくとも一つのアミノ酸残基を変形して少なくとも一つの変形された抗体配列を生成し；
（ｃ）前記変形された抗体配列をタンパク質として発現させることを含む、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を製造するための方法が提供される。
標準分子生物学技術を用いて変形された抗体配列を製造及び発現させることができる。
一部の具現例において、前記変形された抗体配列によってコードされた抗体は、次を含む本明細書に記載の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の機能的特性の一つ、一部又は全部を保有する抗体である：
（１）ヒト対象で減少した免疫原性；
（２）例えば、Ｂｉａｃｏｒｅによって測定したとき、ＫＤが１０ｎＭ以下（例えば、０．０１ｎＭ～１０ｎＭ）である可溶性ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合；
（３）例えば、ＥＬＩＳＡによって測定したとき、ＫＤが１０ｎＭ以下（例えば、０．０１ｎＭ～１ｎＭ）である膜結合ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合；
（４）例えば、ＥＬＩＳＡによって測定したとき、ＥＣ５０が１ｎＭ以下（例えば、０．０１ｎＭ～１ｎＭ）である膜結合ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合；
（５）反応性神経膠症の発病を減少、反転、遅延及び／又は予防；
（６）反応性星状細胞の過剰増殖抑制；
（７）ニューロカン及び神経細胞膠抗原２（ＮＧ２）を含むコンドロイチン硫酸プロテオグリカンの発現減少；
（８）神経細胞の核においてｃ－ｆｏｓ及びｐＥＲＫの発現増加；
（９）神経細胞の生存促進；
（１０）神経細胞においてＧＡＰ４３の発現増加；
（１１）軸索の再成長促進；及び
（１２）ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合に対していずれか一方向又は両方向に本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体と競合。
前記変形された抗体は、上の（１）～（１２）に示した全ての機能的特性のうち１個以上、２個以上、３個以上、４個以上、５個以上、６個以上、７個以上、８個以上、９個以上、１０個以上、１１個又は全部を示すことができる。前記変形された抗体の機能的特性は、実施例欄に示されているのと同様に、当業界で利用可能であり及び／又は本明細書に記載された標準分析法（例えば、ＥＬＩＳＡ、ＦＡＣＳ）を用いて評価できる。
本明細書に記載の抗体を操作する方法の特定の具現例において、突然変異は、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体コーディング配列の全部又は一部に沿って無作為に又は選択的に導入されてよく、その結果として得た変形された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を、本明細書に記載の結合活性及び／又は他の機能的特性に対してスクリーニングすることができる。突然変異方法は当業界に記載されている。例えば、ＳｈｏｒｔのＰＣＴ公開ＷＯ０２／０９２７８０は、飽和突然変異誘発、合成結紮アセンブリー又はこれらの組合せを用いて抗体突然変異を生成及びスクリーニングする方法を記載している。これと違い、ＬａｚａｒなどのＰＣＴ公開ＷＯ０３／０７４６７９は、抗体の物理化学的特性を最適化するためにコンピュータスクリーニング方法を利用する方法を記載している。
［ＶＩ．細胞及びベクター］
特定の態様において、本明細書は、ＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）及び関連ポリヌクレオチド及び発現ベクターに特異的に結合する本明細書に記載の抗体（又はその抗原結合断片）を発現させる（例えば、組換えによって）細胞（例えば、宿主細胞）を提供する。本明細書は、宿主細胞、例えば、哺乳類細胞において組換え発現のための抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又は断片をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含むベクター（例えば、発現ベクター）を提供する。また、本明細書は、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（例えば、ヒト又はヒト化抗体）を組換えによって発現させるための当該ベクターを含む宿主細胞を提供する。特定の態様において、本明細書は、宿主細胞から当該抗体を発現させることを含む、本明細書に記載の抗体を生産するための方法を提供する。
ＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体（例えば、本明細書に記載の全長抗体、抗体の重鎖及び／又は軽鎖又は単鎖抗体）の組換えは、前記抗体をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターの作製を伴う。本明細書に記載の抗体分子、抗体の重鎖及び／又は軽鎖又はその断片（例えば、重鎖及び／又は軽鎖可変ドメイン）をコードするポリヌクレオチドが得られると、前記抗体分子の生産のためのベクターを、当業界によく知られた技術を用いた組換えＤＮＡ技術によって製造できる。これによって、抗体又は抗体断片（例えば、軽鎖又は重鎖）をコードするヌクレオチド配列を含有しているポリヌクレオチドを発現させることによってタンパク質を製造するための方法が、本明細書に記載されている。当業者によく知られている方法を用いて抗体又は抗体断片（例えば、軽鎖又は重鎖）コーディング配列及び適切な転写及び翻訳制御信号を含有する発現ベクターを作製できる。これらの方法は、例えば、試験管内組換えＤＮＡ技術、合成技術及び生体内遺伝子組換えを含む。また、本明細書に記載の抗体分子、抗体の重鎖又は軽鎖、抗体の重鎖又は軽鎖可変ドメイン又はその断片、又はプロモーターに作動可能に連結された重鎖又は軽鎖ＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む複製可能なベクターが提供される。このようなベクターは、例えば、前記抗体分子の定常領域をコードするヌクレオチド配列を含むことができ（例えば、国際公開番号ＷＯ８６／０５８０７及びＷＯ８９／０１０３６；及び米国特許番号５，１２２，４６４参照）、前記抗体の可変ドメインを、全体重鎖、全体軽鎖、又は全体重鎖及び軽鎖両方の発現のために当該ベクターにクローニングすることができる。
発現ベクターは、従来の技術によって細胞（例えば、宿主細胞）に伝達でき、その後、その結果として得た細胞を従来の技術によって培養して、本明細書に記載の抗体（例えば、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体のＶＨ及び／又はＶＬ、又はＶＨ及び／又はＶＬ ＣＤＲのいずれか一つ以上を含む抗体）又はその断片を生産できる。したがって、本明細書は、ポリヌクレオチドを含有する宿主細胞を提供することであり、前記ポリヌクレオチドは、前記宿主細胞において当該配列の発現のためのプロモーターに作動可能に連結された本明細書に記載の抗体又はその断片、又はその重鎖又は軽鎖、又はその断片、又は本明細書に記載の単鎖抗体をコードする。特定の具現例において、二重鎖抗体の発現のために個別に重鎖及び軽鎖の両方をコードするベクターは、詳細に後述されているように、全体免疫グロブリン分子の発現のために宿主細胞で共発現できる。特定の具現例において、宿主細胞は、本明細書に記載の抗体の重鎖及び軽鎖の両方又はその断片をコードするポリヌクレオチドを含むベクターを含有する。特定の具現例において、宿主細胞は、２個の異なるベクター、すなわち、本明細書に記載の抗体の重鎖又は重鎖可変領域又はその断片をコードするポリヌクレオチドを含む第１ベクター及び本明細書に記載の抗体の軽鎖又は軽鎖可変領域又はその断片をコードするポリヌクレオチドを含む第２ベクターを含有する。他の具現例において、第１宿主細胞は、本明細書に記載の抗体の重鎖又は重鎖可変領域又はその断片をコードするポリヌクレオチドを含む第１ベクターを含み、第２宿主細胞は、本明細書に記載の抗体の軽鎖又は軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第２ベクターを含む。特定の具現例において、第１細胞によって発現する重鎖／重鎖可変領域は第２細胞の軽鎖／軽鎖可変領域と会合して本明細書に記載の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合断片を形成する。特定の具現例において、本明細書は、当該第１宿主細胞及び当該第２宿主細胞を含む宿主細胞の集団を提供する。
特定の具現例において、本明細書は、本明細書に記載の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の軽鎖／軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第１ベクター及び本明細書に記載の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の重鎖／重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第２ベクターを含むベクター集団を提供する。
本明細書に記載の抗体分子を発現させるために様々な宿主－発現ベクターシステムを使用することができる。該宿主－発現システムは、関心あるコーディング配列を生成し、次いで精製できる伝達体（ｖｅｈｉｃｌｅ）に該当するが、また、適切なヌクレオチドコーディング配列によって形質転換又は形質注入時のに、本明細書に記載の抗体分子をインシチュ（ｉｎ ｓｉｔｕ）発現させることができる細胞に該当する。これらは、抗体コーディング配列を含む組換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ又はコスミドＤＮＡ発現ベクターによって形質転換されたバクテリア（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ及びＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）のような微生物；抗体コーディング配列を含有した組換え酵母発現ベクターによって形質転換された酵母（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ Ｐｉｃｈｉａ）；抗体コーディング配列を含有した組換えウイルス発現ベクター（例えば、ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ）によって感染された昆虫細胞システム；組換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ；タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）によって感染されたり抗体コーディング配列を含有した組換えプラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）によって形質転換された植物細胞システム（例えば、Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉのような緑藻類）；又は、哺乳類細胞のゲノムから由来したプロモーター（例えば、メタルロチオネインプロモーター）又は哺乳類ウイルスから由来したプロモーター（例えば、アデノウイルス後期プロモーター；牛痘ウイルス７．５Ｋプロモーター）を含有した組換え発現構造体を保有した哺乳類細胞システム（例えば、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ１又はＣＯＳ）、ＣＨＯ、ＢＨＫ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ２９３、ＮＳＯ、ＰＥＲ．Ｃ６、ＶＥＲＯ、ＣＲＬ７０３０、ＨｓＳ７８Ｂｓｔ、ＨｅＬａ及びＮＩＨ３Ｔ３、ＨＥＫ－２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２１０、Ｒ１．１、Ｂ－Ｗ、Ｌ－Ｍ、ＢＳＣｌ、ＢＳＣ４０、ＹＢ／２０及びＢＭＴ１０細胞）を含むが、これに限定されない。特定の具現例において、本明細書に記載の抗体又はその抗原結合断片を発現させるための細胞は、ＣＨＯ細胞、例えばＣＨＯ ＧＳ ＳＹＳＴＥＭＴＭ（Ｌｏｎｚａ）のＣＨＯ細胞である。特定の具現例において、本明細書に記載の抗体を発現させるための細胞は、ヒト細胞、例えばヒト細胞株である。特定の具現例において、哺乳類発現ベクターは、ＰＯＰＴＩＶＥＣＴＭ又はｐｃＤＮＡ３．３である。特定の具現例において、特に、全体組換え抗体分子の発現のための大腸菌のようなバクテリア細胞又は真核細胞（例えば、哺乳類細胞）が、組換え抗体分子の発現のために用いられる。例えば、中国ハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞のような哺乳類細胞は、ヒト巨大細胞ウイルスの主要中間初期遺伝子プロモーター要素のようなベクターと共に抗体に対して有効な発現システムである（Ｆｏｅｃｋｉｎｇ ＭＫ ＆ Ｈｏｆｓｔｅｔｔｅｒ Ｈ（１９８６）Ｇｅｎｅ ４５：１０１－５；及びＣｏｃｋｅｔｔ ＭＩ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ８（７）：６６２－７）。特定の具現例において、本明細書に記載の抗体は、ＣＨＯ細胞又はＮＳＯ細胞によって生産される。特定の具現例において、ＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列の発現は、構成的プロモーター、誘導性プロモーター又は組織特異的プロモーターによって調節される。
バクテリアシステムにおいて、多数の発現ベクターは、発現する抗体分子に対して意図的用途によって有利に選択されてよい。例えば、当該抗体を、抗体分子の薬剤学的組成物を作るために大量で生産しようとするとき、容易に精製される高レベルの融合タンパク質生成物の発現を指示するベクターが好ましいであろう。当該ベクターには、抗体コーディング配列がｌａｃ Ｚコーディング領域を有する構成でベクターに個別に結紮して融合タンパク質が生成されるＥ．ｃｏｌｉ発現ベクターｐＵＲ２７８（Ｒｕｅｔｈｅｒ Ｕ ＆ Ｍｕｅｌｌｅｒ－Ｈｉｌｌ Ｂ（１９８３）ＥＭＢＯ Ｊ ２：１７９１－１７９４）；ｐＩＮベクター（Ｉｎｏｕｙｅ Ｓ ＆ Ｉｎｏｕｙｅ Ｍ（１９８５）Ｎｕｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ １３：３１０１－３１０９；Ｖａｎ Ｈｅｅｋｅ Ｇ ＆ Ｓｃｈｕｓｔｅｒ ＳＭ（１９８９）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２４：５５０３－５５０９）；などが含まれるが、これに制限されるものではない。例えば、グルタチオン５－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）によって融合タンパク質として外来ポリペプチドを発現させるためにｐＧＥＸベクターを使用してもよい。一般に、当該融合タンパク質は可溶性であり、マトリックスグルタチオンアガロースビーズに吸着及び結合した後、遊離グルタチオンが存在する状態で溶出することによって、溶解された細胞から容易に精製され得る。前記ｐＧＥＸベクターは、トロンビン又は因子Ｘａプロテアーゼ切断部位を含むように構成され、クローニングされた標的遺伝子産物がＧＳＴモイエティから放出され得る。
昆虫システムおにいて、例えばＡｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多面体ウイルス（ＡｃＮＰＶ）は、外来遺伝子を発現させるベクターとして用いられ得る。前記ウイルスは、ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞で成長する。前記抗体コーディング配列は、ウイルスの非必須領域（例えば、ポリヘドリン遺伝子）に個別にクローニングされ、ＡｃＮＰＶプロモーター（例えば、ポリヘドリンプロモーター）の制御状態にあり得る。
哺乳類宿主細胞では多数のウイルス系発現システムを用いることができる。アデノウイルスを発現ベクターとして使用する場合に、関心ある抗体コーディング配列を、アデノウイルス転写／翻訳制御複合体、例えば、後期プロモーター及び３部（ｔｒｉｐａｒｔｉｔｅ）リーダ配列に結紮させることができる。次に、このキメラ遺伝子を試験管内又は生体内組換えによってアデノウイルスゲノムに挿入することができる。前記ウイルスゲノムの非必須領域（例えば、領域Ｅ１又はＥ３）に挿入すれば、生存可能であり且つ感染された宿主において抗体分子を発現できる組換えウイルスが生成されるであろう（例えば、Ｌｏｇａｎ Ｊ ＆ Ｓｈｅｎｋ Ｔ（１９８４）ＰＮＡＳ ８１（１２）：３６５５－９参照）。挿入された抗体コーディング配列の効率的な翻訳のために特定開始信号も必要であり得る。これらの信号は、ＡＴＧ開始コドン及び隣接配列を含む。また、前記開始コドンは、全体挿入物の翻訳が可能となるように、所望のコーディング配列のリーディングフレームと互いに合わなければならない。これらの外因性翻訳制御信号及び開始コドンは、天然、合成の両方の様々な起源を有することができる。発現効率は、適切な転写エンハンサー要素、転写終結因子などを含むことによって増大し得る（例えば、Ｂｉｔｔｅｒ Ｇ ｅｔ ａｌ．，（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５３：５１６－５４４参照）。
また、前記挿入された配列の発現を調節したり或いは所望の特定方式で遺伝子産物を変形及び処理する宿主細胞菌株を選別できる。タンパク質生成物の当該変形（例えば、グリコシル化）及び処理（例えば、切断）は、タンパク質の機能に重要であり得る。異なる宿主細胞は、タンパク質及び遺伝子産物の翻訳後処理及び変形に対する特徴的且つ特異的な機序を有する。発現した外来タンパク質の正しい変形及び処理が可能となるように適切な細胞株又は宿主システムを選択できる。そのために、１次転写体の適切な処理、遺伝子産物のグリコシル化及びリン酸化に対する細胞機構を保有した真核宿主細胞を使用することができる。当該哺乳類宿主細胞は、ＣＨＯ、ＶＥＲＯ、ＢＨＫ、Ｈｅｌａ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ２９３、ＮＩＨ３Ｔ３、Ｗ１３８、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２０及びＴ４７Ｄ、ＮＳＯ（いかなる免疫グロブリン鎖も体内生成しないネズミ骨髄腫細胞株）、ＣＲＬ７０３０、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ１又はＣＯＳ）、ＰＥＲ．Ｃ６、ＶＥＲＯ、ＨｓＳ７８Ｂｓｔ、ＨＥＫ－２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２１０、Ｒ１．１、Ｂ－Ｗ、Ｌ－Ｍ、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＹＢ／２０、ＢＭＴ１０及びＨｓＳ７８Ｂｓｔ細胞を含むが、これに制限されるものではない。特定の具現例において、本明細書に記載の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＣＨＯ細胞のような哺乳類細胞で生産される。
特定の具現例において、本明細書に記載の抗体又はその抗原結合部分は、減少したフコース含有量を有するか或いは全くフコース含有量を有しない。当該抗体は、当業者に公知の技術を用いて生産できる。例えば、前記抗体はフコシル化能力が不足又は欠如した細胞で発現し得る。特定例において、１，６－フコシルトランスフェラーゼの２個の対立遺伝子がノックアウトされた細胞株を、フコース含有量が減少した抗体又はその抗原結合部分を生産するために使用することができる。ＰＯＴＥＬＬＩＧＥＮＴ（登録商標）システム（Ｌｏｎｚａ）は、フコース含有量が減少した抗体又はその抗原結合部分を生産するために使用するできる当該システムの一例である。
長期間に高収率で組換えタンパク質を生産するために安定した発現細胞を作ることができる。例えば、本明細書に記載の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分を安定的に発現する細胞株を操作することができる。特定の具現例において、本明細書に提供された細胞は、会合して本明細書に記載の抗体又はその抗原結合部分を形成する軽鎖／軽鎖可変ドメイン及び重鎖／重鎖可変ドメインを安定して発現させる。
特定の態様において、宿主細胞を、ウイルス複製起源を含有する発現ベクターを使用する代わりに、適切な発現制御要素（例えば、プロモーター、エンハンサー、配列、転写終結因子、ポリアデニル化部位など）によって制御されたＤＮＡ及び選択マーカーを用いて形質転換することができる。外来ＤＮＡ／ポリヌクレオチドの導入後、操作された細胞を濃縮培地で１～２日間成長させることができ、その後、選択的培地に変える。組換えプラスミドにおいて選択マーカーは選択に対する耐性を付与し、細胞がこれらの染色体にプラスミドを安定して統合させ成長させることによって細胞株にクローニング及び膨脹され得る焦点（ｆｏｃｉ）を形成する。この方法は、本明細書に記載の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗体結合部分を発現させる細胞株を操作するために有利に用いることができる。このように操作された細胞株は、抗体分子と直間接的に相互作用する組成物のスクリーニング及び評価に特に有用であり得る。
それぞれｔｋ－、ｈｇｐｒｔ－又はａｐｒｔ－細胞で使用可能なヘルパス単純ウイルスチミジンキナーゼ（Ｗｉｇｌｅｒ Ｍ ｅｔ ａｌ．，（１９７７）Ｃｅｌｌ １１（１）：２２３－３２）、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｓｚｙｂａｌｓｋａ ＥＨ ＆ Ｓｚｙｂａｌｓｋｉ Ｗ（１９６２）ＰＮＡＳ ４８（１２）：２０２６－２０３４）及びアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｌｏｗｙ Ｉ ｅｔ ａｌ．，（１９８０）Ｃｅｌｌ ２２（３）：８１７－２３）遺伝子を含む多数の選択システムを使用できるが、これらに限定されるものではない。また、抗代謝産物耐性は、次のような遺伝子に対する選択の土台として用いることができる：メトトレキサート耐性を付与するｄｈｆｒ（Ｗｉｇｌｅｒ Ｍ ｅｔ ａｌ．，（１９８０）ＰＮＡＳ ７７（６）：３５６７－７０；Ｏ’Ｈａｒｅ Ｋ ｅｔ ａｌ．，（１９８１）ＰＮＡＳ ７８：１５２７－３１）；ミコフェノール酸耐性を付与するｇｐｔ（Ｍｕｌｌｉｇａｎ ＲＣ ＆ Ｂｅｒｇ Ｐ（１９８１）ＰＮＡＳ ７８（４）：２０７２－６）；アミノグリコシドＧ－４１８耐性を付与するｎｅｏ（Ｗｕ ＧＹ ＆ Ｗｕ ＣＨ（１９９１）Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ３：８７－９５；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ Ｐ（１９９３）Ａｎｎ Ｒｅｖ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｏｘｉｃｏｌ ３２：５７３－５９６；Ｍｕｌｌｉｇａｎ ＲＣ（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６０：９２６－９３２；及びＭｏｒｇａｎ ＲＡ ＆ Ａｎｄｅｒｓｏｎ ＷＦ（１９９３）Ａｎｎ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ ６２：１９１－２１７；Ｎａｂｅｌ ＧＪ ＆ Ｆｅｉｇｎｅｒ ＰＬ（１９９３）Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １１（５）：２１１－５）；及びハイグロマイシン耐性を付与するｈｙｇｒｏ（Ｓａｎｔｅｒｒｅ ＲＦ ｅｔ ａｌ．，（１９８４）Ｇｅｎｅ ３０（１－３）：１４７－５６）。組換えＤＮＡ技術分野で知られた通常の方法は、所望の組換えクローンを選別するために一般に適用されてよく、当該方法は、例えばその全体が本明細書に参照によって含まれるＡｕｓｕｂｅｌ ＦＭ ｅｔ ａｌ．，（ｅｄｓ．）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９３）；Ｋｒｉｅｇｌｅｒ Ｍ，Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９０）；及びＣｈａｐｔｅｒｓ １２ ａｎｄ １３，Ｄｒａｃｏｐｏｌｉ ＮＣ ｅｔ ａｌ．，（ｅｄｓ．）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９４）；Ｃｏｌｂｅｒｅ－Ｇａｒａｐｉｎ Ｆ ｅｔ ａｌ．，（１９８１）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １５０：１－１４に記載されている。
抗体分子の発現レベルは、ベクター増幅によって増加し得る（検討のために、Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ ＣＲ ＆ Ｈｅｎｔｓｃｈｅｌ ＣＣＧ，Ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ｖｅｃｔｏｒｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｇｅｎｅ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｌｏｎｅｄ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ＤＮＡ ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｖｏｌ ３（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７を参照））。抗体を発現させるベクターシステム内マーカーが増幅可能なとき、宿主細胞培養物に存在する阻害剤のレベル増加は、マーカー遺伝子の複製数を増加させるであろう。増幅された領域は抗体遺伝子と関連しているので、抗体の生産も増加するであろう（Ｃｒｏｕｓｅ ＧＦ ｅｔ ａｌ．，（１９８３）Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ３：２５７－６６）。
前記宿主細胞は、本明細書に記載の２個以上の発現ベクターである重鎖由来ポリペプチドをコードする第１ベクター及び軽鎖由来ポリペプチドをコードする第２ベクターによって共形質注入され得る。前記２個のベクターは、重鎖及び軽鎖ポリペプチドの同一の発現を可能にする同一の選択マーカーを含有し得る。前記宿主細胞は、前記２個以上の発現ベクターの異なる量によって共形質注入され得る。例えば、宿主細胞は、第１発現ベクター及び第２発現ベクターの次の比のうちいずれか一つによって形質注入され得る。１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１２、１：１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５又は１：５０。
これと違い、重鎖及び軽鎖ポリペプチドの両方をコードし発現できる単一ベクターを使用することができる。このような状況で、前記軽鎖は、過量の毒性遊離重鎖を防止するために重鎖前方に位置しなければならない（Ｐｒｏｕｄｆｏｏｔ ＮＪ（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ ３２２：５６２－５６５；及びＫｏｈｌｅｒ Ｇ（１９８０）ＰＮＡＳ ７７：２１９７－２１９９）。前記重鎖及び軽鎖をコードする配列は、ｃＤＮＡ又はゲノムＤＮＡを含むことができる。前記発現ベクターは、モノシストロン性又はマルチシストロン生であり得る。マルチシストロン性核酸構造体は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個以上、又は２～５、５～１０又は１０～２０個範囲の遺伝子／ヌクレオチド配列をコードできる。例えば、ビシストロン性核酸構造体は、プロモーター、第１遺伝子（例えば、本明細書に記載の抗体の重鎖）及び第２遺伝子（例えば、本明細書に記載の抗体の軽鎖）の順に含むことができる。このような発現ベクターにおいて前記２個の遺伝子の転写は、前記プロモーターによって駆動されるのに対し、第１遺伝子からｍＲＮＡの翻訳はキャップ依存的（ｃａｐ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ）スキャニング機序によって駆動されてよく、第２遺伝子からｍＲＮＡの翻訳はキャップ－独立的機序、例えばＩＲＥＳによって駆動されてよい。
組換え発現によって本明細書に記載の抗体分子が生成されると、免疫グロブリン分子の精製のための当業界に公知された任意の方法、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、親和性、特にタンパク質Ａ以降特異的抗原に対する親和性、及びサイジング（ｓｉｚｉｎｇ）カラムクロマトグラフィー）、遠心分離、示差溶解度又はタンパク質精製のためのその他の標準技術によって精製され得る。また、本明細書に記載の抗体を、本明細書に記載の又はその他当業界に公知の異種ポリペプチド配列に融合させて精製を容易にすることができる。
特定の具現例において、本明細書に記載の抗体又はその抗原結合部分は分離又は精製される。一般に、分離された抗体は、抗原特異性が前記分離された抗体と異なる他の抗体が実質的にない抗体である。例えば、特定の具現例において、本明細書に記載の抗体の製剤には、細胞物質及び／又は化学的前駆体が実質的にない。用語“細胞物質が実質的にない”とは、細胞から分離されたり又は組換えによって生産され、細胞の細胞成分から分離された抗体の製剤を含む。したがって、細胞物質が実質的にない抗体は、異種タンパク質（本明細書では“汚染タンパク質”ともいう。）及び／又は抗体の変異体、例えば、抗体の異なる翻訳後変形された形態又は抗体（又は、抗体結合部分）の他の異なる変形形態を約３０％、２０％、１０％、５％、２％、１％、０．５％又は０．１％（乾燥重量基準）未満で持つ抗体の製剤を含む。前記抗体を組換えによって生産するとき、前記抗体にはまた一般に培養培地が実質的にない、すなわち、培養培地がタンパク質製剤体積の約２０％＞、１０％＞、２％、１％、０．５％又は０．１％未満に相当する。前記抗体を化学的合成によって生産するとき、前記抗体は一般に、化学的前駆体又は他の化学物質が実質的にない、すなわちタンパク質合成に関与する化学的前駆体又は他の化学物質から分離される。したがって、このような抗体製剤は、化学前駆体又は関心ある抗体以外の化合物を約３０％、２０％、１０％又は５％（乾燥重量基準）未満で有する。特定の具現例において、本明細書に記載の抗体は分離又は精製される。
［ＶＩＩ．分析法］
本明細書に記載の抗体は、ＦＡＭ１９Ａ５に対する結合を、例えば標準ＥＬＩＳＡによって試験できる。簡単にいえば、微細力価プレートを、ＰＢＳ中１～２μｇ／ｍｌの精製されたＦＡＭ１９Ａ５でコートした後、ＰＢＳ中５％ウシ血清アルブミンでブロッキングする。抗体希釈液（例えば、ＦＡＭ１９Ａ５－免疫化マウスの血漿希釈液）をそれぞれのウェルに添加し、３７℃で１～２時間培養する。プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎで洗浄した後、３７℃で１時間セイヨウワサビ過酸化酵素（ＨＲＰ）に接合された２次試薬（例えば、ヒト抗体の場合、ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ特異的多クローン試薬）と共に培養する。洗浄後、プレートをＡＢＴＳ基質（Ｍｏｓｓ Ｉｎｃ，ｐｒｏｄｕｃｔ：ＡＢＴＳ－１０００）で発色させ、ＯＤ ４１５～４９５で分光光度計によって分析する。次に、ヒトＦＡＭ１９Ａ５を発現させる細胞株には結合するが、ＦＡＭ１９Ａ５を発現しない対照群細胞株には結合しないものに対して免疫化されたマウスの血清を流細胞分析法によってさらにスクリーニングする。簡単にいえば、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の結合を１：２０希釈比で抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体と共にＦＡＭ１９Ａ５発現ＣＨＯ細胞を培養することによって評価する。細胞を洗浄し、結合をＰＥ－標識抗ヒトＩｇＧ Ａｂによって検出する。流細胞分析は、ＦＡＣＳ ｃａｎ流細胞分析法（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）を用いて行う。好ましくは、最も高い力価を示すマウスを融合用に使用するであろう。
抗体及びこれと関連してＦＡＭ１９Ａ５免疫源と陽性反応性を示す抗体を生産するハイブリドーマをスクリーニングするために、上に説明したＥＬＩＳＡ分析法を用いることができる。次に、好ましくは、高い親和度でＦＡＭ１９Ａ５に結合する抗体を生産するハイブリドーマをサブクローニングし、さらに特性を分析することができる。次に、親細胞の反応性を保有している（ＥＬＩＳＡによって）ハイブリドーマのそれぞれから一つのクローンを細胞銀行を作り、抗体精製のために選別することができる。
抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を精製する目的で、単クローン性抗体精製のために２Ｌスピンナー－フラスコで選別されたハイブリドーマを成長させることができる。タンパク質Ａ－セファロース（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用した親和性クロマトグラフィー前に上澄液を濾過及び濃縮することができる。純度を確保するために、溶出されたＩｇＧを、ゲル電気泳動及び高性能液体クロマトグラフィーで確認することができる。緩衝液はＰＢＳに交換でき、濃度は１．４３吸光係数を使用するＯＤ ２８０によって決定できる。単クローン性抗体を分取して－８０℃で保管できる。
選別された抗ＦＡＭ１９Ａ５単クローン性抗体が固有なエピトープに結合するかどうか決定するために、市販の試薬（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）を用いてそれぞれの抗体をビオチン化することができる。ビオチン化されたＭＡｂ結合は、ストレプトアビジン標識されたプローブで検出できる。未標識されたた単クローン性抗体及びビオチン化された単クローン性抗体を使用する競合研究を、上述したようにＦＡＭ１９Ａ５コーティングＥＬＩＳＡプレートを用いて行うことができる。
精製された抗体のアイソ型を決定するために、特定アイソ型の抗体に特異的な試薬を用いてアイソ型ＥＬＩＳＡを行うことができる。例えば、ヒト単クローン性抗体のアイソ型を決定するために、微細力価プレートのウェルに１μｇ／ｍｌの抗ヒト免疫グロブリンを４℃で一晩コートすることができる。１％ ＢＳＡでブロッキングした後、プレートを１μｇ／ｍｌ以下の試験用単クローン性抗体又は精製されたアイソ型対照群と周囲温度で１～２時間反応させる。次に、ウェルをヒトＩｇＧ１又はヒトＩｇＭ－特異的アルカリ性フォスファターゼ接合プローブと反応させることができる。プレートを上述のように発色及び分析する。
ＦＡＭ１９Ａ５を発現させる生細胞に対する単クローン性抗体の結合を試験するために、実施例欄に記載されているとおり、流細胞分析法を用いることができる。簡単にいえば、膜結合ＦＡＭ１９Ａ５（標準成長条件で成長される）を発現させる細胞株を、４℃で１時間、０．１％ ＢＳＡを含有したＰＢＳ中様々な濃度の単クローン性抗体と混合する。洗浄後、細胞を１次抗体染色と同じ条件でフルオレセイン標識抗ＩｇＧ抗体と反応させる。単一細胞をゲーティングオン（ｇａｔｉｎｇ ｏｎ）する光及び側面散乱特性を用いたＦＡＣＳｃａｎ機器によって試料を分析することができ、標識された抗体の結合を決定する。流細胞分析法に加えて又は代えて蛍光顕微鏡を使用する他の分析法を用いてもよい。上に記載したとおりに細胞を正確に染色し、蛍光顕微鏡によって検査できる。この方法は、個別細胞を可視化できるが、抗原の密度によって感度が減少することがある。
抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＦＡＭ１９Ａ５抗原との反応性に対してウェスタンブロッティングによってさらに試験できる。簡単にいえば、ＦＡＭ１９Ａ５を発現させる細胞から細胞抽出物を製造し、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動を行うことができる。電気泳動後に、分離された抗原をニトロセルロース膜に移し、２０％マウス血清でブロッキングし、試験する単クローン性抗体でプローブする。ＩｇＧ結合は、抗ＩｇＧアルカリフォスファターゼを用いて検出でき、ＢＣＩＰ／ＮＢＴ基質精製（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で発色させることができる。
様々な抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の結合親和度、交差反応性及び結合動力学を分析するための方法は、当業界に知られた標準分析法、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥＴＭ ２０００ ＳＰＲ機器（Ｂｉａｃｏｒｅ ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）を使用したＢＩＡＣＯＲＥＴＭ表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析を含む。
一具現例において、抗体は、可溶性形態のヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する。一具現例において、抗体は、膜結合形態のヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する。抗体はＦＡＭ１９Ａ５の特定エピトープ（例えば、配列番号９０又は配列番号９０内の断片）に特異的に結合できる。特定の具現例において、前記抗体は、好ましくは、高い親和度でヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合し、タンパク質のＦＡＭ１９サブファミリーの他のメンバーと交差反応しない。
［ＶＩＩＩ．二重特異的分子］
本明細書に記載の抗体を、二重特異的分子を形成するために使用することができる。抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は誘導体化されたり、或いは別の機能性分子、例えば他のペプチド又はタンパク質（例えば、受容体に対する他の抗体又はリガンド）に連結されて少なくとも２個の異なる結合部位又は標的分子に結合する二重特異的分子を生成できる。ＩＬ－６、ＣＮＴＦ、ＬＩＦ、ＥＧＦ及びＴＧＦαのようなサイトカインは、以降、ＣＮＳ損傷後反応性星状膠細胞症の多い様相を調節する転写のタンパク質信号伝達因子及び活性化因子３（ＳＴＡＴ３）を活性化することによって神経膠症及び／又は反応性星状膠細胞症の発病促進因子として関与した（Ｂａｌａｓｉｎｇａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１４（２）：８４６－５６（１９９４）；Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．２０；９２（１３）：５８６５－９（１９９５））。Ｈｅｒｒｍａｎｎ Ｊ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２８（２８）：７２３１－７２４３（２００８）を参照する。例えば、ＳＴＡＴ３が存在しないか減少すると、神経膠繊維質酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）の上向き調節弱化、星状細胞肥大の失敗及び炎症の拡散増加、病変体積の増加、ＣＮＳ損傷後運動機能回復の部分的な弱化として現れる。Ｈｅｒｒｍａｎｎ Ｊ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２８（２８）：７２３１－７２４３（２００８）を参照する。これによって、例えば、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、例えば、ＩＬ－６、ＣＮＴＦ、ＬＩＦ、ＥＧＦ又はＴＧＦαに対する抗体のように、組合せ治療のための神経膠症の発病及び／又は反応性星状膠細胞症の過剰増殖の阻害に関与する任意のタンパク質に特異的に結合する抗体又はｓｃＦｖに連結され得る。
また、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、対象の中枢神経系損傷（例えば、外傷性脳損傷、脳脊髓損傷、脳卒中又は脳腫瘍）、脳脊髓系損傷、退行性脳障害（例えば、ハンチントン病、パーキンソン病、アルツハイマー病、多発性硬化症、ＡＬＳ）、退行性脳脊髓又は神経障害又は神経病性疼痛を含む疾患又は障害を治療する抗体又はｓｃＦｖに連結され得る（下のＸＩＩ節における疾患又は障害参照）。例えば、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、多発性硬化症を治療する抗体又はｓｃＦｖ、例えば、ナタリズマブ（ＴＹＳＡＢＲＩ（登録商標））、アレムツズマブ（ＬＥＭＴＲＡＤＡ（登録商標））に連結され得る。
本明細書に記載の抗体は実際に誘導体化されたり或いは１個を超える他の機能性分子に連結され、２個を超える異なる結合部位及び／又は標的分子に結合する多重特異的分子を生成でき；このような多重特異的分子はまた、本明細書で使われる用語“二重特異的分子”に含まれるものと意図される。本明細書に記載の二重特異的分子を生成するために、本明細書に記載の抗体は、他の抗体、その抗体結合部分、ペプチド又は結合模倣体のような一つ以上の他の結合分子に機能的に連結され（例えば、化学的結合、遺伝的融合、非共有会合などによって）二重特異的分子を得ることができる。一具現例において、二重特異的分子は、ＦＡＭ１９Ａ５及びＶＥＧＦに結合する。さらに他の具現例において、二重特異的分子は、ＦＡＭ１９Ａ５及びＥＧＦに結合する。
したがって、本明細書は、ＦＡＭ１９Ａ５に対する少なくとも一つの第１結合特異体及び第２標的エピトープに対する第２結合特異体を含む二重特異的分子を提供する。前記二重特異的分子が多重特異的である本明細書に記載の具現例において、前記分子は第３結合特異体をさらに含むことができる。
一具現例において、本明細書に記載の二重特異的分子は、結合特異体として、例えばＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を含む少なくとも一つの抗体又はその抗体結合部分を含む。前記抗体はまた、その内容が参照によって明確に含まれるＬａｄｎｅｒ等の米国特許番号４，９４６，７７８に記載されている軽鎖又は重鎖二量体、又はＦｖ又は単鎖構造体のようなその任意の最小断片であってもよい。
ヒト単クローン性抗体が好ましいが、本明細書に記載の二重特異的分子に使用可能な他の抗体は、ネズミ、キメラ及びヒト化単クローン性抗体である。
本明細書に記載の二重特異的分子は、当業界に公知の方法を用いて構成結合特異体を接合させることによって製造することができる。例えば、前記二重特異的分子のそれぞれの結合特異体を別個に生成した後、互いに接合させることができる。前記結合特異体がタンパク質又はペプチドであるとき、様々な結合剤又は架橋剤を共有接合のために使用することができる。架橋剤の例は、タンパク質Ａ、カルボジイミド、Ｎ－サクシニミジル－Ｓ－アセチル－チオ酢酸（ＳＡＴＡ）、５，５’－ジチオビス（２－ニトロ安息香酸）（ＤＴＮＢ）、ｏ－フェニレンジマレイミド（ｏＰＤＭ）、Ｎ－サクシニミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）及びスルホサクシニミジル４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ｓｕｌｆｏ－ＳＭＣＣ）を含む（例えば、Ｋａｒｐｏｖｓｋｙ ｅｔ ａｌ．，（１９８４）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６０：１６８６；Ｌｉｕ，ＭＡ ｅｔ ａｌ．，（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：８６４８）。他の方法としては、Ｐａｕｌｕｓ（１９８５）Ｂｅｈｒｉｎｇ Ｉｎｓ．Ｍｉｔｔ．Ｎｏ．７８，１１８－１３２；Ｂｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：８１－８３）及びＧｌｅｎｎｉｅ ｅｔ ａｌ．，（１９８７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：２３６７－２３７５）に記載されている方法を含む。好ましい接合剤はＳＡＴＡ及びｓｕｌｆｏ－ＳＭＣＣであり、いずれもＰｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）から入手できる。
前記結合特異体が抗体であるとき、これらは２個の重鎖のＣ末端ヒンジ領域のスルフィドリル結合によって接合され得る。特に好ましい具現例において、前記ヒンジ領域は、接合前に奇数個、好ましくは１個のスルフィドリル残基を含有するように変形される。
これと違い、２個の結合特異体が同一のベクターでコードされ、同一の宿主細胞で発現し且つ合わせられ得る。この方法は、二重特異的分子がｍＡｂ×ｍＡｂ、ｍＡｂ×Ｆａｂ、ｍＡｂ×（ｓｃＦｖ）２、Ｆａｂ×Ｆ（ａｂ’）２又はリガンド×Ｆａｂ融合タンパク質である場合に特に有用である。二重特異的抗体は、各重鎖のＣ末端にｓｃＦｖを含む抗体を含むことができる。本明細書に記載の二重特異的分子は、一つの単鎖抗体及び結合決定基を含む単鎖分子、又は２個の結合決定基を含む単鎖二重特異的分子であってよい。二重特異的分子は、少なくとも２個の単鎖分子を含むことができる。二重特異的分子を製造するための方法は、例えば、米国特許番号５，２６０，２０３；米国特許番号５，４５５，０３０；米国特許番号４，８８１，１７５；米国特許番号５，１３２，４０５；米国特許番号５，０９１，５１３；米国特許番号５，４７６，７８６；米国特許番号５，０１３，６５３；米国特許番号５，２５８，４９８；及び米国特許番号５，４８２，８５８に記載されている。
前記二重特異的分子のその特異的標的に対する結合は、酵素－結合免疫吸着分析（ＥＬＩＳＡ）、放射性免疫分析（ＲＩＡ）、ＦＡＣＳ分析、生物分析（例えば、成長阻害）又はウェスタンブロット分析のような当業界で認定された方法を用いて確認することができる。これらの分析法はそれぞれ一般に、特別な関心のあるタンパク質－抗体複合体に特異的な標識された試薬（例えば、抗体）を用いることによって前記複合体の存在を検出する。
［ＩＸ．診断］
一具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体に付着したモイエティは、結合モイエティ、標識モイエティ及び生物学的活性モイエティからなる群から選ばれる。
本明細書に記載の抗体は、試料テスト及び生体内映像化を含む診断目的で使用することができ、この目的のために前記抗体（又は、その結合部分）を適切な検出可能な製剤に接合させて免疫接合体を形成することができる。診断目的のために適切な製剤は、全身映像化のための放射性同位元素及び試料テストのための放射性同位元素、酵素、蛍光標識及びその他適切な抗体タグを含む、検出可能な標識である。
前記検出可能な標識は、コロイド性金のような金属ゾルを含む微粒子標識、例えば、Ｎ２Ｓ２，Ｎ３Ｓ又はＮ４類型のペプチドキレート化剤で提示されたＩ１２５又はＴｃ９９のような同位元素、蛍光マーカー、発光マーカー、燐光マーカーなどを含む発色団などだけでなく、所定の基質を検出可能なマーカーに転換させる酵素標識及び例えば重合酵素連鎖反応による増幅後確認されるポリヌクレオチドタグを含め、試験管内診断分野で現在用いられている様々な類型の任意のものであってよい。適切な酵素標識にはセイヨウワサビ過酸化酵素、アルカリ性フォスファターゼなどが含まれる。例えば、前記標識は、アダマンチルメトキシホスホリルオキシフェニルジオキセタン（ＡＭＰＰＤ）、ジソジウム３－（４－（メトキシスピロ｛１，２－ジオキセタン－３，２’－（５’－クロロ）トリシクロ｛３．３．１．１３，７｝デカン｝－４－イル）フェニルホスフェート（ＣＳＰＤ）だけでなく、ＣＤＰ及びＣＤＰ－ｓｔａｒ（登録商標）のような１，２－ジオキセタン基質又は当業者によく知られた他の発光基質、例えば、テルビウム（ＩＩＩ）及びユウロピウム（ＩＩＩ）のような適切なランタン系キレートの転換後に化学発光の存在又は形成を測定して検出される酵素アルカリ性フォスファターゼであってもよい。検出手段は、選択された標識によって決定される。前記標識又はその反応生成物の外観は、前記標識が微粒子であり、適切なレベルに蓄積される場合に、肉眼を用いたり或いは分光光度計、発光計、蛍光計などのような機器を用いるが、いずれも標準施行によって得ることができる。
本明細書に記載の抗体はまた、抗体－薬物接合体（ＡＤＣ）のような免疫接合体を形成するために治療剤に接合させることができる。適切な治療剤は、神経膠症及び／又は反応性星状膠細胞症の発病を調節し及び／又は退行性脳障害、中枢神経系損傷又は神経病性疼痛を治療する製剤を含む。退行性脳障害を治療するための治療剤には、ハンチントン病、パーキンソン病、アルツハイマー病、多発性硬化症及び筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）治療用薬物が含まれる。ここには、このような退行性脳障害を治療するために一般的に使われる薬物、例えば、下のＸＩＩ節に開示されている薬物が含まれる。
免疫接合体は、当業界に公知の方法によって製造できる。好ましくは、接合方法の結果として、実質的に（又は、殆ど）非免疫原性である結合、例えばペプチド－（すなわち、アミド－）、スルフィド－、（立体障害）、ジスルフィド－、ヒドラゾン－及びエーテル結合が現れる。これらの結合はほとんど非免疫原性であり、血清内で相当な安定性を示す（例えば、Ｓｅｎｔｅｒ，Ｐ．Ｄ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１３（２００９）２３５－２４４；ＷＯ２００９／０５９２７８；ＷＯ９５／１７８８６参照）。
前記モイエティ及び抗体の生化学的属性によって異なる接合戦略を用いることができる。前記モイエティが自然発生であるか、５０～５００個アミノ酸の組換えである場合、タンパク質接合体の合成のための化学的方法を説明する標準手順が教材にあり、当業者であれば容易に従うことができる（例えば、Ｈａｃｋｅｎｂｅｒｇｅｒ，Ｃ．Ｐ．Ｒ．，ａｎｄ Ｓｃｈｗａｒｚｅｒ，Ｄ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．４７（２００８）１００３０－１００７４）。一具現例において、前記抗体又はモイエティ内システイン残基とマレインイミドモイエティの反応を利用する。これは、例えば、抗体のＦａｂ又はＦａｂ’断片を使用する場合に特に適切なカップリング化学である。これと違い、一具現例では、前記抗体又はモイエティのＣ末端にカップリングを行う。タンパク質、例えばＦａｂ－断片のＣ末端変形は、例えば、Ｓｕｎｂｕｌ，Ｍ．ａｎｄ Ｙｉｎ，Ｊ．，Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．７（２００９）３３６１－３３７１に記載されたとおりに行うことができる。
一般に、部位特異的反応及び共有結合は、天然アミノ酸を、存在する他の官能基の反応性と直交（ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ）する反応性を有するアミノ酸に変換することに基盤する。例えば、希配列コンテクスト（ｃｏｎｔｅｘｔ）内特定システインはアルデヒドに酵素的に変換され得る（Ｆｒｅｓｅ，Ｍ．Ａ．ａｎｄ Ｄｉｅｒｋｓ，Ｔ．，ＣｈｅｍＢｉｏＣｈｅｍ．１０（２００９）４２５－４２７参照）。所定の配列コンテクスト内天然アミノ酸と特定酵素の特異的酵素反応性を用いて所望のアミノ酸変形を得ることもできる（例えば、Ｔａｋｉ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．１７（２００４）１１９－１２６；Ｇａｕｔｉｅｒ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１５（２００８）１２８－１３６；ａｎｄ Ｐｒｏｔｅａｓｅ－ｃａｔａｌｙｚｅｄ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃ－Ｎ ｂｏｎｄｓ ｉｓ ｕｓｅｄ ｂｙ Ｂｏｒｄｕｓａ，Ｆ．，Ｈｉｇｈｌｉｇｈｔｓ ｉｎ Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００４）３８９－４０３参照）。
部位特異的反応及び共有結合はまた、適切な変形試薬と末端アミノ酸の選択的反応によって達成され得る。ベンゾニトリルとＮ末端システインの反応性（Ｒｅｎ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．４８（２００９）９６５８－９６６２参照）を用いて部位－特異的共有結合を得ることができる。天然化学結紮はまた、Ｃ末端システイン残基に依存し得る（Ｔａｙｌｏｒ，Ｅ．Ｖｏｇｅｌ；Ｉｍｐｅｒｉａｌｉ，Ｂ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（２００９）、２２（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ）、６５－９６）。
ＥＰ １ ０７４ ５６３は、一連の正に荷電されたアミノ酸内位置したシステインと一連の負に荷電されたアミノ酸内システインのより速い反応を基盤とする接合方法を記載している。
前記モイエティは、合成ペプチド又はペプチド模倣体であってもよい。ポリペプチドが化学的に合成される場合、このような合成中に直交する化学反応性を有するアミノ酸が導入され得る（例えば、ｄｅ Ｇｒａａｆ，Ａ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．２０（２００９）１２８１－１２９５参照）。非常に様々な直交する官能基は不安定であり、合成ペプチドに導入され得るので、当該ペプチドをリンカーに接合することは標準化学的方法である。
単一標識ポリペプチドを得るために１：１化学量論比を持つ接合体を、他の接合副産物からクロマトグラフィーによって分離できる。この過程は、染料標識された結合対メンバー及び荷電されたリンカーを用いることによって容易になり得る。このような種類の標識及び高く負に荷電された結合対メンバーを使用することによって、分離のために電荷と分子量差を利用できるので、非標識ポリペプチド及び１個よりも多いリンカーを保有しているポリペプチドから、単一接合されたポリペプチドが容易に分離される。前記蛍光染料は、標識された１価結合剤のように、未結合成分から複合体を精製するのに有用できる。
［Ｘ．薬剤学的組成物］
本明細書は、生理学的に許容される担体、賦形剤又は安定化剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）において所望の程度の純度を持つ、本明細書に記載された抗体又はその抗原結合部分を含む組成物を提供する。許容される担体、賦形剤又は安定化剤は、使用された投与量及び濃度において、受容者に非毒性であり、ホスフェート、シトレート及びその他の有機酸のような緩衝剤；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；保存剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；ヘキサメトニウムクロリド；ベンザルコニウムクロリド；フェノール、ブチル又はベンジルアルコール；メチル又はプロピルパラベンのようなアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；及びｍ－クレゾールのような）；低分子量（約１０個未満の残基）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリンのようなタンパク質；ポリビニルピロリドンのような親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン又はリジン（ｌｙｓｉｎｅ）のようなアミノ酸；単糖類、二糖類及びグルコース、マンノース又はデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡのようなキレート化剤；スクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトールのような糖；ナトリウムのような塩形成対イオン；金属複合体（例えば、Ｚｎ－タンパク質複合体）；及び／又はＴＷＥＥＮＴＭ（登録商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）のような非イオン性界面活性剤を含む。
特定の具現例において、薬剤学的組成物は、薬剤学的に許容される担体に、本明細書に記載された抗体又はその抗原結合部分、二重特異的分子又は免疫複合体、及び場合によって一つ以上の追加の予防剤又は治療剤を含む。特定の具現例において、薬剤学的組成物は、薬剤学的に許容される担体に、本明細書に記載の抗体又はその抗原結合部分の有効量及び場合によって１つ以上の追加予防剤又は治療剤を含む。一部の具現例において、前記抗体は、前記薬剤学的組成物に含まれた唯一の活性成分である。本明細書に記載の薬剤学的組成物は、ＦＡＭ１９Ａ５活性を増進、誘導又は活性化し、中枢神経系損傷、退行性脳障害又は神経病性疼痛のような症状を治療するのに有用であり得る。
非経口製剤において用いられる薬剤学的に許容される担体は、水性ビークル、非水性ビークル、抗微生物剤、等張化剤、緩衝剤、抗酸化剤、局所痲酔剤、懸濁及び分散剤、乳化剤、金属イオン封鎖剤又はキレート化剤及びその他の薬剤学的に許容される物質を含む。水性ビークルの例は、塩化ナトリウム注射液、点滴注射液、等張デキストロース注射液、滅菌水注射液、デキストロース及びラクテート点滴注射液を含む。非水性非経口ビークルは、植物起源の固定油、綿実油、トウモロコシ油、ゴマ油及びピーナッツ油を含む。静菌又は静真菌濃度の抗微細物剤がフェノール又はクレゾール、水銀含有物質、ベンジルアルコール、クロロブタノール、メチル及びプロピルｐ－ヒドロキシベンゾ酸エステル、チメロサール、ベンザルコニウムクロリド及びベンゼトニウムクロリドを含む多回容量容器にパッケージされた非経口製剤に添加され得る。等張化剤は、塩化ナトリウム及びデキストロースを含む。緩衝剤は、ホスフェート及びシトレートを含む。抗酸化剤は、硫酸水素ナトリウムを含む。局所痲酔剤は、プロカイン塩酸塩を含む。懸濁及び分散剤は、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース及びポリビニルピロリドンを含む。乳化剤は、Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ ８０（ＴＷＥＥＮ（登録商標） ８０）を含む。金属イオンの封鎖剤又はキレート化剤は、ＥＤＴＡを含む。薬剤学的担体はまた、水混和性ビークル用エチルアルコール、ポリエチレングリコール及びプロピレングリコール；及びｐＨ調整のための水酸化ナトリウム、塩酸、クエン酸又は乳酸を含む。
薬剤学的組成物は、対象に対する任意の投与経路のために剤形化できる。投与経路の特定例は、鼻内、経口、非経口、脊髄腔内、脳室内、肺、皮下又は心室内を含む。本明細書では、皮下、筋肉内又は静脈内注射を特徴とする非経口投与も考慮される。注射剤は、従来の形態であり、液体溶液や懸濁液、注射前に液体中溶液又は懸濁液に適した固体形態で製造されたり又は乳化液として製造され得る。注射剤、溶液及び乳化液はまた、１つ以上の賦形剤を含有する。適切な賦形剤は、例えば、水、食塩水、デキストロース、グリセロール又はエタノールである。また、必要な場合、投与する薬剤学的組成物はまた、少量の湿潤又は乳化剤、ｐＨ緩衝剤、安定化剤、溶解度増進剤のような非毒性補助物質及び例えば酢酸ナトリウム、ソルビタンモノラウレート、トリエタノールアミンオレート及びシクロデキストリンのような製剤を含有できる。
抗体の非経口投与用製剤は、注射用即席滅菌液、皮下注射用錠剤を含めて使用直前に溶媒と即席で調合できる凍結乾燥粉末のような滅菌乾燥可溶性製品、注射用即席滅菌懸濁液、使用直前にビークルと即席調合できる滅菌乾燥不溶性製品及び滅菌乳化液を含む。前記溶液は、水性又は非水性であり得る。
静脈内投与の場合、適切な担体は、生理食塩水又はリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）及びグルコース、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール及びこれらの混合物のような増粘剤と可溶化剤を含有する溶液を含む。
抗体を含む局所用混合物は、局所及び全身投与に対して記載の通りに製造される。その結果として得た混合物は、溶液、懸濁液、乳化液などであり得、クリーム、ゲル、軟膏、乳化液、溶液、エリキシル、ローション、懸濁液、チンキ、ペースト、フォーム、エアゾール、灌注液（ｉｒｒｉｇａｔｉｏｎ）、スプレー、坐薬、包帯、皮膚パッチ又は局所投与に適した任意の他の剤形として剤形化できる。
本明細書に記載の抗体又はその抗原結合部分は、例えば、吸入による局所用エアゾールとして剤形化できる（例えば、炎症性疾患、特に、喘息治療に有用なステロイド伝達用エアゾールを記載している米国特許第４，０４４，１２６，４，４１４，２０９号及び第４，３６４，９２３号を参照）。気道投与用のこれらの剤形は、噴霧器用エアゾール又は溶液形態であるか、吸入剤用微細粉末であり、単独又はラクトースのような非活性担体と組み合わせることができる。このような場合、剤形の粒子は、一具現例において、５０ミクロン未満の直径、一具現例では１０ミクロン未満の直径を有する。
本明細書に記載の抗体又はその抗原結合部分は、目におけるような皮膚と粘膜への局所塗布のように局所用又は局部用に、ゲル、クリーム及びローションの形態で、及び目に適用又は槽内（ｉｎｔｒａｃｉｓｔｅｒｎａｌ）又は脊髄内適用のために製剤化できる。局所投与は、経皮伝達用にそして目や粘膜投与用又は吸入療法用にも考慮される。前記抗体の点鼻液（ｎａｓａｌ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）は、単独で、或いは他の薬剤学的に許容される賦形剤との組合せで投与できる。
イオン泳動及び電気泳動デバイスを含む経皮パッチは、当業者には周知であり、抗体を投与するために用いることができる。例えば、このようなパッチは、米国特許番号第６，２６７，９８３号、第６，２６１，５９５号、第６，２５６，５３３号、第６，１６７，３０１号、第６，０２４，９７５号、第６，０１０，７１５号、第５，９８５，３１７号、第５，９８３，１３４号、第５，９４８，４３３号及び第５，８６０，９５７号に開示されている。
特定の具現例において、本明細書に記載の抗体又はその抗原結合部分を含む薬剤学的組成物は、溶液、乳化液及びその他の混合物として投与用に再構成できる凍結乾燥粉末である。前記凍結乾燥粉末はまた、固体又はゲルとして再構成及び剤形化できる。前記凍結乾燥粉末は、本明細書に記載の抗体又はその抗原結合部分、又はその薬剤学的に許容される誘導体を適切な溶媒に溶解させてなる。一部の具現例において、前記凍結乾燥粉末は、滅菌性である。前記溶媒は、前記粉末又は前記粉末から製造された再構成溶液の安定性又はその他の薬理学的成分を改善する賦形剤を含有できる。使用可能な賦形剤は、デキストロース、ソルビトール、フルクトース、トウモロコシシロップ、キシリトール、グリセリン、グルコース、スクロース又はその他の適切な製剤を含むが、これに限定されるものではない。前記溶媒はまた、シトレート、リン酸ナトリウム又はリン酸カリウムのような緩衝剤、又は一具現例において略中性ｐＨの周知の他の緩衝剤を含有できる。次いで、前記溶液を滅菌濾過した後、当業者に公知された標準条件で凍結乾燥させ、所望の剤形を提供する。一具現例において、前記得られた溶液は、凍結乾燥用バイアルに配分され得る。それぞれのバイアルは、前記化合物の単一投与量又は多回の投与量を含有できる。前記凍結乾燥した粉末は、約４℃～常温のような適切な条件で保管され得る。
このような凍結乾燥した粉末を注射用水によって再構成し、非経口投与用に使用するための剤形を提供する。再構成のために、前記凍結乾燥した粉末を、滅菌水又は他の適切な担体に添加する。その正確な量は、選択した化合物によって異なる。このような量は、経験的に決定できる。
本明細書に記載の抗体又はその抗原結合部分、二重特異的分子又は免疫複合体、及び本明細書に提供された他の組成物はまた、治療する対象の特定組織、受容体又は他の身体領域を標的にするよう剤形化されてもよい。このような標的化方法の多数が当業者によく知られている。本明細書において、このような標的化方法はいずれも、本組成物に使用することが考慮される。標的化方法の非制限的な例については、例えば、米国特許第６，３１６，６５２号、第６，２７４，５５２号、第６，２７１，３５９号、第６，２５３，８７２号、第６，１３９，８６５号、第６，１３１，５７０号、第６，１２０，７５１号、第６，０７１，４９５号、第６，０６０，０８２号、第６，０４８，７３６号、第６，０３９，９７５号、第６，００４，５３４号、第５，９８５，３０７号、第５，９７２，３６６号、第５，９００，２５２号、第５，８４０，６７４号、第５，７５９，５４２号及び第５，７０９，８７４号を参照する。特定の具現例において、本明細書に記載の抗体又はその抗原結合部分は、中枢神経系損傷、退行性脳障害又は神経病性疼痛を治療するために標的化され得る。
生体内投与のために用いられる組成物は、滅菌性であり得る。これは、例えば滅菌濾過膜を用いた濾過によって容易に行われる。
［ＶＩＩＩ．キット］
本明細書は、本明細書に記載の一つ以上の抗体又はその抗原結合部分を含むキットを提供する。特定の具現例において、本明細書は、本明細書に提供された一つ以上の抗体又はその抗原結合部分のような、本明細書に記載の薬剤学的組成物の成分の一つ以上が満たされた一つ以上の容器、及び場合によって使用説明書を含む、薬剤学的パック又はキットを提供する。一部の具現例において、前記キットは、本明細書に記載の薬剤学的組成物及び本明細書に記載されたような任意の予防剤又は治療剤を含有する。
［ＸＩＩ．治療用途及び方法］
本明細書はまた、必要とする対象（例えば、ヒト）にＣＮＳに対する傷害又は損傷を軽減させるための方法として、前記対象に本明細書に記載の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体、二重特異的分子又は免疫接合体又はその組成物を投与することを含む方法を提供する。
他の態様において、本明細書は、対象において神経膠症の始まり又は開始及びこれに関連したＣＮＳの有害な影響を阻害、遅延、抑制、制限、減少、反転又は予防するための方法として、前記対象に本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を投与することを含む方法を提示する。一部の具現例において、本明細書は、対象で反応性星状細胞の過度又は異常の増殖及びこれに関連したＣＮＳの有害な影響を阻害、遅延、抑制、制限、減少、反転又は予防するための方法として、前記対象に本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を投与することを含む方法を提示する。一部の具現例において、本明細書は、対象でコンドロイチン硫酸プロテオグリカン（ニューロカン、ＮＧ２、又はこれら両方のレベルを含む）の発現を減少、阻害又は低減するか、又はニューロカン、ＮＧ２又は両方の活性を減少させたり或いは不活性化するための方法として、前記対象に本明細書に記載の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を投与することを含む方法を提示する。一部の具現例において、本明細書は、対象で好ましくは傷害又は損傷後に神経細胞の成長を刺激、促進、増加又は活性化するための方法として、前記対象に本明細書に記載の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を投与することを含む方法を提示する。他の具現例において、本明細書は、必要とする対象でｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡ、ｃ－ｆｏｓタンパク質又はｃ－ｆｏｓタンパク質活性のレベルを増加させ、好ましくは神経細胞の核内ＥＲＫ ｍＲＮＡ、ＥＲＫタンパク質又はｐＥＲＫ活性のレベルを増加させるための方法として、前記対象に本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を投与することを含む方法を提示する。特定の具現例において、本明細書は、必要とする対象でＧＡＰ４３ ｍＲＮＡ、ＧＡＰ４３タンパク質のレベルを増大又は増加させるか、好ましくは神経細胞においてＧＡＰ４３タンパク質の活性を増加させるための方法として、前記対象に本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を投与することを含む方法を提示する。特定の具現例において、本明細書は、必要とする対象で神経細胞の生存を増進又は促進し及び／又は軸索の再成長を促進させるための方法として、前記対象に本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を投与することを含む方法を提示する。一部の具現例において、前記対象はヒト、好ましくは、例えばＣＮＳ損傷、外傷、傷害、脳脊髓損傷、脳腫瘍、感染、虚血、脳卒中、反応及び／又は神経退行性疾患から神経細胞が傷害又は損傷したヒトである。
一部の態様において、本明細書はまた、必要とする対象で疾患、障害又は症状を治療するための方法として、前記対象に本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を投与することを含む方法を提示する。一部の具現例において、前記疾患、障害又は症状は、中枢神経系損傷、脳脊髓系損傷、退行性脳障害、退行性脳脊髓又は神経障害又は神経病性疼痛を含む。一部の具現例において、前記中枢神経系損傷は、外傷性脳傷害、脳脊髓損傷、脳卒中、脳腫瘍又はこれらの組合せである。一部の具現例において、前記退行性脳障害は、ハンチントン病、パーキンソン病、アルツハイマー病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）又はこれらの組合せである。これによって、特定の具現例において、本明細書は、必要とする対象で外傷性脳損傷、脳脊髓損傷、脳卒中、脳腫瘍又はこれらの組合せを治療するための方法として、前記対象に本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその組成物を投与することを含む方法を開示する。一部の具現例において、本明細書は、必要とする対象でハンチントン病、パーキンソン病、アルツハイマー病、多発性硬化症、ＡＬＳを治療するための方法として、前記対象に本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその組成物を投与することを含む方法を開示する。一部の具現例において、前記対象は、ヒトである。
一部の具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、中枢神経系損傷（例えば、外傷性脳損傷、脳脊髓損傷、脳卒中又は脳腫瘍）、脳脊髓系損傷、退行性脳障害（例えば、ハンチントン病、パーキンソン病、アルツハイマー病、多発性硬化症、ＡＬＳ）、退行性脳脊髓又は神経障害又は神経病性疼痛を治療するための一つ以上の追加製剤と組み合わせて投与され得る。
一部の具現例において、前記疾患、障害又は症状は、腫瘍、線維症、緑内障、網膜症、老化関連黄斑変性又は気分障害を含む。特定の具現例において、前記疾患、障害又は状態は、腫瘍を含む。一部の具現例において、前記腫瘍は、黒色腫、膵癌、神経膠腫（例えば、多形成膠芽細胞腫（ＧＢＭ））、乳癌、リンパ腫、肺癌、腎臓癌、前立腺癌、線維肉腫、結腸腺癌、肝癌又は卵巣癌を含む。
一部の具現例において、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、例えば腫瘍内で血管の正常化を誘導する。一部の具現例において、前記血管の正常化は、連結性増加、壁厚増加、血管径減少、より規則的な血管方向及び分布パターン、血管数増加、漏れ及び透過性減少、血管上で血管周囲細胞カバレッジ及び近接性増加、酸素供給増加又はこれらの組合せを含む血管の特性変化を伴う。
一部の具現例において、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、腫瘍の成長を抑制する。一部の具現例において、前記腫瘍の成長は、基準（例えば、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を非投与した対象において腫瘍の成長）に比べて少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は１００％まで抑制される。
一部の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、免疫細胞の腫瘍浸潤を増大させる。一部の具現例において、前記免疫細胞の腫瘍浸潤は、基準（例えば、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を非投与した癌対象）に比べて少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は１００％増大／増加する。特定の具現例において、前記免疫細胞は、大食細胞、樹状細胞、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、自然殺害（ＮＫ）細胞又はこれらの組合せを含む。一部の具現例において、前記免疫細胞は、肥大を表す。一部の具現例において、前記免疫細胞の腫瘍浸潤は、神経細胞の腫瘍浸潤増加を伴う。特定の具現例において、前記神経細胞は、星状細胞、膠細胞又はこれらの組合せを含む。
一部の具現例において、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、大食細胞又は小膠細胞の食細胞活性を増進させる。一部の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、大食細胞又は小膠細胞のミトコンドリア膜電位を増加させる。特定の具現例において、前記食細胞活性又はミトコンドリア膜電位は、基準（例えば、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を非投与した癌対象）に比べて少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は１００％増進又は増加する。
一部の具現例において、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、腫瘍において壊死及び浮腫を減少させる。他の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、腫瘍の組織透過性を減少させる。一部の具現例において、前記腫瘍の壊死及び浮腫又は組織透過性は、基準（例えば、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を非投与した癌対象）に比べて少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は１００％減少する。
一部の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、腫瘍において血流速度を増加させる。特定の具現例において、前記血流速度は、基準（例えば、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を非投与した癌対象）に比べて少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は１００％増加する。
一部の具現例において、前記腫瘍治療方法は、追加の治療剤を投与することを含む。特定の具現例において、前記追加の治療剤は、化学療法、免疫療法、放射線療法又はこれらの組合せを含む。一部の具現例において、前記免疫療法は、単クローン性抗体、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）療法、Ｔ－細胞療法、ＮＫ－細胞療法、樹状細胞（ＤＣ）療法、養子細胞伝達（ＡＣＴ）、免疫関門調節剤（ｉｍｍｕｎｅ ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ ｍｏｄｕｌａｔｏｒ）、サイトカイン、癌ワクチン、補助剤、腫瘍溶解性ウイルス又はこれらの組合せを含む。一部の具現例において、前記化学療法は、テモゾロミド、ゲムシタビン、パクリタキセル、カルボプラチン、シスプラチン、エロツズマブ、レナリドマイド、デキサメタゾン、オキサリプラチン又はこれらの組合せを含む。
一部の具現例において、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその組成物の治療有効量が投与される。対象（例えば、ヒト）治療時に、本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の治療有効量は、年齢、性別、疾患重症度のような因子によって変わる。
一部の具現例において、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその組成物は、静脈内、経口、非経口、硬膜内、脊髄腔内、脳室内、肺、皮下、血内、筋肉内又は心室内投与される。
後述する実施例は限定されない例示として提供される。
［実施例］
〔実施例１ ヒトＦＡＭ１９Ａ５タンパク質の発現及び精製〕
下に記載の通りに組換えヒトＦＡＭ１９Ａ５タンパク質を生産及び精製し、精製されたタンパク質を結合親和度分析に基づいて抗体スクリーニング分析に使用した。まず、ＦＡＭ１９Ａ５遺伝子を発現させるＬＰＳ－ｈＴプラスミドをバクテリアに形質転換させ、タンパク質過発現を誘導した。生産後、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質を、Ｎｉ－ＮＴＡ親和性クロマトグラフィー（Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ，ＵＳＡ）を用いて精製した。次第により高い濃度のイミダゾールを用いてＨｉｓ－標識ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質をＮｉ－カラムから除去した。前記溶液においてタンパク質発現は、Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ Ｂｌｕｅ Ｒ－２５０染料を用いて測定する。ＦＡＭ１９Ａ５イミダゾール含有溶液だけを取り、ＰＢＳを用いてＦＡＭ１９Ａ５タンパク質を濃縮させた。濃縮が完了すれば、ウェスタンブロット分析法を用いてＦＡＭ１９Ａ５タンパク質の純度及び濃度を測定した。次いで、濃縮したタンパク質を用いてＦＡＭ１９Ａ５特異的抗体をスクリーニングした。
〔実施例２ 抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体ライブラリーの製造〕
１．免疫化
ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質をホワイトレグホンニワトリの免疫化のための抗原として使用し、５０μｇの合成ペプチドＫＬＨ接合体を７５０μＬのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で混合し、３７℃で３０分間培養した。その後、油中水乳化補助剤（ＲＩＢＩ＋ＭＰＬ＋ＴＤＭ＋ＣＷＳアジュバント、Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ，ＵＳＡ）を含有するＴＤＷ及びＣＷＳの細胞壁成分の２％スクアレン耐毒素ＭＰＬ（モノホスホリルリピドＡ種）及びミコバクテリア（ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ）から毒素を除去し、乳化させた後、ニワトリに皮下注射した。免疫化中にニワトリを略２～３週間隔で総４回免疫化させた。免疫化した動物から得た抗体の力価を、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質を過発現させたＨＥＫ２９３Ｔ細胞の溶解物を使用する免疫ブロッティングで測定した。
２．免疫化されたニワトリから単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）ライブラリーの製造
ＴＲＩ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ ＵＳＡ）を用いて、上述の免疫化されたニワトリの脾臓、骨髄及びファブリキウス嚢からＲＮＡを抽出した。オリゴ－ｄＴプライマーとＳＵＰＥＲＳＣＲＩＰＴＴＭ ＩＩＩ Ｆｉｒｓｔ－Ｓｔｒａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて第１鎖ｃＤＮＡを合成した。前記動物の免疫系から得たｃＤＮＡの場合、Ｅｘｐａｎｄ Ｈｉｇｈ Ｆｉｄｅｌｉｔｙ ＰＣＲシステム（Ｒｏｃｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＩＮ，ＵＳＡ）を用いて単鎖可変領域ライブラリーを製造した。各反応において、１μＬのｃＤＮＡ、６０ｐｍｏｌの各プライマー、１０μＬの１０×反応緩衝液、８μＬの２．５ｍＭ ｄＮＴＰ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ，ＵＳＡ）及び０．５μＬのＴａｑ ＤＮＡ重合酵素を水と混合した。最終体積は１００μＬであった。次のような条件を用いてＰＣＲ反応を行った：（ｉ）９４℃で１５秒、（ｉｉ）５６℃で３０秒、（ｉｉｉ）７２℃で９０秒の３０サイクル後、最後に７２℃で１０分間延長した。約３５０ｂｐ長さの断片を含むＰＣＲ産物を１．５％アガロースゲルにローディングし、電気泳動後にＱＩＡＧＥＮ Ｇｅｌ ＩＩ抽出キット（ＱＩＡＧＥＮ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ，ＵＳＡ）を用いてヌクレオチド断片を精製した。精製されたＰＣＲ産物をＯＤ２６０ｎｍで判読して定量化した（１単位ＯＤ＝５０μｇ／ｍｌ）。
２番目のＰＣＲで２個のＶＨ及びＶＬ第１産物を重複延長ＰＣＲ（Ｏｖｅｒｌａｐ ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ ＰＣＲ）によって無作為に連結した。それぞれのＰＣＲ反応産物を、精製された１００ｎｇのＶＬ及びＶＨ産物、６０ｐｍｏｌの各プライマー、１０μＬの１０×反応緩衝液、８μＬの２．５ｍＭ ｄＮＴＰ、０．５μＬのＴａｑ ＤＮＡ重合酵素及び水と最終体積１００μＬで混合した。次のような条件を用いてＰＣＲ反応を行った：（ｉ）９４℃で１５秒、（ｉｉ）５６℃で３０秒、（ｉｉｉ）７２℃で２分の２５サイクル後、最後に７２℃で１０分間延長した。約７００ｂｐ長の単鎖可変領域断片を含むＰＣＲ産物を１．５％アガロースゲルにローディングし、電気泳動後にＱＩＡＧＥＮ ＩＩゲル抽出キット（ＱＩＡＧＥＮ）を用いてヌクレオチド断片を精製した。精製されたＰＣＲ産物をＯＤ ２６０ｎｍで判読して定量化した（１単位ＯＤ＝５０μｇ／ｍｌ）。
３．ライブラリー、結紮及び形質転換
前記ＰＣＲ産物のｓｃＦｖ断片とベクターｐＣｏｍｂ３Ｘ－ＳＳ（Ｔｈｅ Ｓｃｒｉｐｐｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）をＳｆｉ Ｉ制限酵素で分解した。１０μｇの精製された重複ＰＣＴ産物を、３６０ユニットのＳｉｆ Ｉ（１６単位当たりのＤＮＡ（μｇ）、Ｒｏｃｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｐｌｅａｓａｎｔｏｎ，ＣＡ，ＵＳＡ）、２０μＬの１０×反応緩衝液及び水と最終体積２００μＬまで混合した。２０μｇのｐＣｏｍｂ３Ｘ－ＳＳベクターを１２０ユニットのＳｆｉ Ｉ（６ユニット当たりのＤＮＡ（μｇ））、２０μＬの１０×反応緩衝液及び水と最終体積２００μＬまで混合した。この混合物を５０℃で８時間分解した。その後、ｓｃＦｖ断片（約７００ｂｐ）とベクター（約３４００ｂｐ）を含む分解産物を１％アガロースゲルにローディングし、Ｇｅｌ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ＩＩ ＱＩＡＧＥＮ（ＱＩＡＧＥＮ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ，ＵＳＡ）を用いて精製した。１４００ｎｇのＳｆｉ Ｉ－制限ｐＣｏｍｂ３Ｘベクター及び７００ｎｇの分解されたｓｃＦｖ断片を５×リガーゼ緩衝液、１０μＬのＴ４ＤＮＡリガーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ，ＵＳＡ）及び水と最終体積２００μＬまで混合した。この混合物を１６℃で１６時間培養して結紮を行った。
エタノールで沈殿させた後、ＤＮＡペレットを１５μＬの水に溶解させた。ライブラリーを生成するために、結紮試料を、バイブレーター遺伝子（Ｇｅｎｅ ｐｕｌｓｅｒ：Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用する電気穿孔によってＥ．ｃｏｌｉ菌株ＥＲ２７３８（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ Ｉｎｃ．，Ｈｉｔｃｈｉｎ，Ｈｅｒｔｆｏｒｄｓｈｉｎｅ，ＳＧ４ ＯＴＹ，Ｅｎｇｌａｎｄ，ＵＫ）に形質転換した。細胞を５ｍｌスーパーブロス（ＳＢ）培地で混合し、３７℃で１時間、２５０ｒｐｍで撹拌しつつ培養した。次に、３μＬの１００ｍｇ／ｍＬカナマイシンを１０ｍＬのＳＢ培地に添加した。ライブラリーサイズを決定するために、０．１μＬ、１μＬ及び１０μＬの培養試料を、５０μｇ／ｍｌのカナマイシンが含まれているルリアブロス（ＬＢ）寒天プレートに塗抹した。１時間撹拌した後、４．５μＬの１００ｍｇ／ｍＬカナマイシンをＬＢ培養物に添加し、さらに１時間撹拌した。次に、水中２ｍｌのＶＣＭ１３ヘルパーファージ（＞１０１１ｃｆｕ／ｍｌ）を、９２．５μＬの１００ｍｇ／ｍｌカナマイシンを含有している予熱されたＬＢ（１８３ｍＬ）と共にＬＢ培地に添加した。この混合物をさらに２時間３７℃で２５０ｒｐｍで撹拌した。次に、２８０μＬ（５０ｍｇ／ｍＬ）のカナマイシンを培養物に添加し、３７℃で一晩撹拌した。翌日、バクテリアペレットを高速遠心分離機（Ｂｅｃｋｍａｎ，ＪＡ－１０ ｒｏｔｏｒ）を用いて３，０００ｇ、４℃で遠心分離した。その後、バクテリアペレットを用いてファージミドＤＮＡを抽出する一方、上澄液は滅菌遠心分離瓶に移した。次に、上澄液に８ｇのポリエチレングリコール－８０００（ＰＥＧ－８０００，Ｓｉｇｍａ）と６ｇの塩化ナトリウム（ＮａＣｌ，Ｍｅｒｃｋ）を添加した後、３０分間氷で保管した。その後、上澄液を１５，０００ｇ、４℃で１５分間遠心分離した。その後、上澄液を捨て、ファージペレットを、１％ ＢＳＡを含有しているトリス－緩衝食塩水（ＴＢＳ）に再懸濁した。
〔実施例３ 固定化された抗原上でライブラリーパンニング（バイオパンニング）〕
磁気ビーズ（Ｄｙｎａｂｅａｄｓ Ｍ－２７０ Ｅｐｏｘｙ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いてバイオパンニングを行った。約１×１０７個のビーズを５μｇの組換えＦＡＭ１９Ａ５タンパク質と共に２０時間常温で回転させながら前記タンパク質でビーズを撹拌によってコートした。コーティングが完了すれば、ビーズをリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で４回洗浄し、常温で３％ ＢＳＡ含有ＰＢＳで１時間ブロッキングした。次に、コートしたビーズを、上記のファージ－ディスプレイされたｓｃＦｖと共に常温で２時間培養した。抗原コーティングされたビーズに結合していないファージを除去するために、ビーズを０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０／ＰＢＳで洗浄した。次に、結合したファージを５０μＬの０．１Ｍグリシン／塩化水素（０．１Ｍ Ｇｌｙｃｉｎｅ－ＨＣｌ、ｐＨ ２．２）で溶出させ、塩化水素と共に３μＬの２Ｍトリス（ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ ９．１）で中和させた。このファージ含有上澄液を用いてＥ．ｃｏｌｉ ＥＲ２７３８細胞を感染させ、ＶＣＳＭ１３ヘルパーファージを用いて一晩増幅及び救出（ｒｅｓｃｕｅ）した。また、５０μｇ／ｍｌのカナマイシンを含有したＬＢ寒天プレートでファージ－感染培養物をブロッティングし、ファージ－感染培養物からファージ力価による投入（ｉｎｐｕｔ）及び生産（ｏｕｔｐｕｔ）を決定した。翌日、ＰＥＧ－８０００とＮａＣｌを用いてファージを沈殿させ、続いて、バイオパンニングのために使用した。上の過程を反復して総５回までバイオパンニングを行った。それぞれの増幅によってＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に対する高い親和性に対してファージをスクリーニング及び選別した。
〔実施例４ ファージＥＬＩＳＡによるクローン選別〕
バイオパンニングから選別したクローンを分析するために、ファージ－ディスプレイｓｃＦｖから個別クローンを無作為に選別し、前記クローンがＦＡＭ１９Ａ５組換えタンパク質に結合するか否かをＥＬＩＳＡで確認した。前記ＦＡＭ１９Ａ５組換えタンパク質を０．１Ｍ ＮａＨＣＯ３緩衝液に希釈し、１００ｎｇ／ｗｅｌｌのタンパク質を用いて４℃で１６時間９６ウェル微細力価プレートをコートした。翌日、前記プレートを３７℃で３％ ＢＳＡ／ＰＢＳで１時間ブロッキングした。その後、ファージ上澄液を６％ ＢＳＡ／ＰＢＳと混合し、３７℃で２時間培養した。次に、前記上澄液を含有したプレートを０．０５％ Ｔｗｅｅｎ－２０／ＰＢＳで洗浄した。ＨＲＰ接合Ｍ１３抗体（ａ－Ｍ１３－ＨＲＰ，Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ，ＵＳＡ）を１／５０００に希釈した。５０μｌの希釈された抗体をプレートに入れ、３７℃で１時間培養した。培養及び洗浄後に、発色のためにプレートに０．０５Ｍクエン酸塩緩衝液、１μｇ／ｍｌの２，２’－アジノ－ビス（３－エチルベンゾチアゾリン－６－スルホン酸）（ＡＢＴＳ，Ａｍｒｅｓｃｏ，Ｓｏｌｏｎ，ＯＨ，ＵＳＡ）及び０．１％ Ｈ２Ｏ２を添加した。各ウェルに対する吸光度を４０５ｎｍで測定した。
初期同定した９６個のクローンから、固有の重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）配列及びＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に対する高い結合を持つ８個のｓｃＦｖクローンを、追加分析のために選別した。図１Ａ～図１Ｃを参照する。
〔実施例５ 抗ＦＡＭ１９Ａ５－ＩＧＧ２／４抗体の生産〕
抗ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖを哺乳類発現ベクターにサブクローニングした。ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖ遺伝子配列において、ヒトＣκ遺伝子を軽鎖可変ドメインに連結し、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３遺伝子のヒト免疫グロブリンアイソ型ＩｇＧ２／４を重鎖可変領域に連結した。制限部位（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ，ＵＳＡ）を追加して各軽鎖及び各重鎖を持つ抗体を合成した。変形された制限部位を持つ哺乳類細胞発現ベクターに合成された遺伝子を挿入してクローニングを容易にさせた。まず、Ｈｉｎｄ ＩＩＩ及びＸｂａ Ｉ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ，ＵＫ）制限酵素を用いてベクターに軽鎖遺伝子を挿入した後、ＮｈｅＩ及びＢａｍＨＩ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ，ＵＫ）制限酵素を用いてベクターに重鎖遺伝子を追加した。
抗ＦＡＭ１９Ａ５－ＩｇＧ２／４抗体を発現及び精製するために、哺乳類細胞形質注入及び過発現注入システムを使用した。約２μｇ／ｍｌの哺乳類発現ベクターを細胞培養体積の１／１０に該当する１５０ｍＭ塩化ナトリウム（ＮａＣｌ，Ｍｅｒｃｋ）で４μｇのポリエチレンイミン（ＰＥＩ，Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ，ＰＡ，ＵＳＡ）と混合した。混合物を常温で１５分間放置した。混合物をＨＥＫ２９３Ｆ細胞（２×１０６細胞／ｍｌ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に添加した後、７％ ＣＯ２及び３７℃と１３５ｒｐｍの撹拌条件で、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン及びストレプトマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含有したＦＲＥＥＳＴＹＬＥＴＭ ２９３発現培養培地で６日間培養した。細胞培養上澄液から発現した抗ＦＡＭ１９Ａ５ ＩｇＧ２／４抗体を精製するために、タンパク質Ａビーズ（ＲｅｐｌｉＧｅｎ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ）親和性ゲルクロマトグラフィーを用いた。タンパク質Ａクロマトグラフィーは、４～１２％ Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ勾配ゲル電気泳動で行った。タンパク質のサイズ及び収率は、クーマシーブリリアントブル染色によって確認した。抗体の結合能は、ＥＬＩＳＡ分析法を用いて測定した。
図２Ａに示すように、試験した異なる抗体（すなわち、１－２８、１－８５、２－１３、２－１４、２－２０、２－２９、３－２及び３－２６）は、サイズが類似であった。１－８５抗体の他に、試験した抗体はＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に様々なレベルで結合できた。図２Ｂを参照する。
〔実施例６ 抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の中和能分析〕
抗体の機能的特性をさらに評価するために、次のような方法を用いた。
１．組換えＦＡＭ１９Ａ５ウサギＦｃ融合タンパク質の製造
ＦＡＭ１９Ａ５発現ベクターを作製するためにヒトＦＡＭ１９Ａ５をコードする遺伝子を化学的に合成した（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ，Ｐｉｃａｔａｗａｙ，ＮＪ，ＵＳＡ）。前記遺伝子を、従来に報告されたとおり、３’領域でヒトＩｇＧ１のヒンジ領域及びウサギＩｇＧのＣＨ２－ＣＨ３ドメインをコードする変形された哺乳類発現ベクターにサブクローニングした。Ｈａｎ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐ Ｍｏｌ Ｍｅｄ．４８（１１）：ｅ２７１（２０１６）を参照する。
ＦＡＭ１９Ａ５ウサギＦｃ融合体をコードする発現ベクターを、従来に報告されたとおり、２５－ｋＤａ線形ポリエチレンイミン（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅ，Ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ，ＰＡ，ＵＳＡ）を用いてＨＥＫ２９３Ｆ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ，ＵＳＡ）に形質注入した。Ｂｏｕｓｓｉｆ，Ｏ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．９２（１６）：７２９７－３０１（１９９５）を参照する。ＦＡＭ１９Ａ５ウサギ融合タンパク質は、メーカー指針に従ってタンパク質Ａセファロースカラム（Ｒｅｐｌｉｇｅｎ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ）を用いて、一時的に形質注入されたＨＥＫ２９３Ｆ細胞の培養上澄液から精製した。
２．組換え抗ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖヒトＣκ融合タンパク質の製造
選別されたクローンの遺伝子を、従来に報告されたとおり、５’領域でＣκドメイン（ヒト免疫グロブリンκ軽鎖定常ドメイン）をコードする変形されたｐＣＥＰ４ベクターにサブクローニングした。Ｌｅｅ，Ｙ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐ Ｍｏｌ Ｍｅｄ．４６：ｅ１１４（２０１４）を参照する。抗ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖヒトＣκ融合タンパク質をコードする発現ベクターを、上述のとおりにＨＥＫ２９３Ｆ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に形質注入した。ｓｃＦｖ－ｈＣκ融合タンパク質は、メーカー指針に従ってタンパク質Ａセファロースカラム（Ｒｅｐｌｉｇｅｎ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ）を用いて、一時的に形質注入されたＨＥＫ２９３Ｆ細胞の培養上澄液から精製した。
３．膠細胞に対する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の中和効能
抗体の中和効能を評価するために、前述した通りに流細胞分析法によって確認した。Ｋｉｍ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ．７（４）：ｅ３５１００（２０１２）を参照する。マウス及びヒト膠細胞を、ウェル当たりに最終密度が３×１０５細胞であるｖ型底９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃ．，Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｎｙ，ＵＳＡ）に接種した。細胞を流細胞分析緩衝液［０．０５％（ｗ／ｖ）アジ化ナトリウムを含有したＰＢＳ中１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ］で１μＭの組換えＦＡＭ１９Ａ５ウサギＦｃ及び５μＭの抗ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖヒトＣκ融合タンパク質で３７℃で１時間処理した。流細胞分析緩衝液で洗浄した後、細胞をＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８－接合抗ウサギＩｇＧ（Ｆｃ特異的）抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｃ．，ＰＡ，ＵＳＡ）と共に３７℃で１時間、暗い所で培養した。同一緩衝液でさらに洗浄した後、細胞を３００μＬ ＰＢＳに再懸濁し、４８８－ｎｍレーザー付きＦＡＣＳＣＡＮＴＯＴＭ ＩＩ機器（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用する流細胞分析法によって分析した。データは、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（ＴｒｅｅＳｔａｒ，Ａｓｈｌａｎｄ，ＯＲ，ＵＳＡ）で分析した。
図３Ａに示すように、試験した全ての抗体（すなわち、１－２８、１－８５、２－１３、２－１４、２－２０、２－２９、３－２及び３－２６）は、マウス１次膠細胞に対するＦＡＭ１９Ａ５の相互作用を様々なレベルに抑制できた。ヒト膠芽細胞腫細胞株において２－２０抗体は細胞株に対するＦＡＭ１９Ａ５の相互作用を中和させることができなかった。図３Ｂを参照する。他の抗体は、程度は異なるが、ＦＡＭ１９Ａ５活性を中和させることができた。１－２８、２－１３及び３－２抗体は、ヒト膠芽細胞腫細胞株で最大の中和効能を示した。
〔実施例７ ＦＡＭ１９Ａ５エピトープ断片Ｆ１－Ｆ６を用いたエピトープマッピング分析〕
マウス及びヒト膠細胞の両方でＦＡＭ１９Ａ５発現を中和させる能力から、３－２抗体をエピトープマッピング分析のために選択した。ヒトＦＡＭ１９Ａ５タンパク質の重複ペプチド断片（Ｆ１～Ｆ６、図４参照）を合成してＢＳＡに接合させた。ＢＳＡ－接合ペプチド断片Ｆ１～Ｆ６に対する異なる抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の結合は、ＥＬＩＳＡ分析法によって決定した。簡単にいえば、ＦＡＭ１９Ａ５断片Ｆ１～Ｆ６（５０ｍＭ炭酸緩衝液（Ｂｉｏｓｅｓａｎｇ）で１μｇ／ｍＬに希釈又は高農度分析のために２０μｇ／ｍＬに希釈）を用いて４℃で一晩９６ウェル免疫プレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）のウェルをコートし（１００μＬ／ウェル）、その後、１ＸＰＢＳで２回洗浄した。次に、プレートを常温で１時間、ブロッキング緩衝液（１００μＬ／ウェル）でブロッキングした。１時間培養中に、関連抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を希釈緩衝液で１μｇ／ｍＬ（又は、高農度分析の場合に２０μｇ／ｍＬ）まで希釈した。プレートが洗浄されると（１×ＰＢＳを用いて２×）、希釈した抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を適切なウェルに添加し、プレートを常温で１時間培養した。次いで、プレートを洗浄緩衝液を用いて総５回洗浄した。次に、ＯＤＰ基質（ＯＤＰ精製（Ｏ－フェニレンジアミンジヒドロクロリド、Ｔｈｅｒｍｏ）１個を９ｍＬの滅菌された脱イオン数と１ｍＬの１０Ｘ安定した過酸化水素安定（Ｐｅｒｏｘｉｄｅ Ｓｔａｂｌｅ）緩衝液（Ｔｈｅｒｍｏ）に溶解させて準備）を各ウェルに添加し、１０分間変色反応がおきるようにした。この反応は、ウェルに１００ｍＬの２Ｎ Ｈ２ＳＯ４（Ｄａｅｊｕｎｇ）を添加して中断させた。各ウェルの吸収値を９６ウェルマイクロプレートリーダ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅ）を用いて４９２ｎｍで検出した。
図５に示すように、３－２抗体は、エピトープ断片Ｆ２に強く結合し、他の断片には最小限で結合した。
次に、３－２抗体が結合するエピトープ断片Ｆ２内特定アミノ酸残基を同定するためにアラニンスキャニング分析を行った。図６Ａに示すように、アミノ酸残基Ｒ４、Ｄ５、Ｐ９、Ｒ１０又はＲ１１がアラニンに突然変異したとき、エピトープ断片Ｆ２に結合する３－２抗体の能力が大きく減少した。３－２抗体の複数の脱免疫化された変異体に対して類似の分析を行った（脱免疫化過程に関する細部内容については実施例８を参照）。図６Ｂ、図６Ｃ、図６Ｄ、図６Ｆ、図６Ｇ、図６Ｉ及び図６Ｊに示すように、アミノ酸残基Ｒ４、Ｐ９、Ｒ１０及びＲ１１は、ＦＡＭ１９Ａ５に対する抗体１－３０、１－３２及び６－１０の結合のために重要であった。抗体１－１７及び４－１１の場合、アミノ酸残基Ｒ４、Ｐ９及びＲ１０が重要であった（図６Ｅ及び図６Ｈ参照）。
〔実施例８ 抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の脱免疫化〕
１．免疫原性インシリコ（ｉｎ ｓｉｌｉｃｏ）評価
ヒトを対象に投与時に免疫原性の危険を下げるために、インシリコ分析を行って３－２及び２－１３抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体内高い免疫原性の特定領域を同定した。
無差別ＭＨＣクラスＩＩペプチドを同定するために、全体配列にわたって重複している９－ｍｅｒペプチドに対するｉＴｏｐｅＴＭ（Ａｂｚｅｎａ ｐｌｃ．，ＵＫ）分析を行った。３４個の異なるＭＨＣクラスＩＩ対立遺伝子に対する相互作用の分析によって潜在的Ｔ細胞エピトープを予測した。図７及び図８にそれぞれ示すように、クローン３－２は、総１１個の結合ペプチドを含有し、クローン２－１３は、総１０個の非生殖系無差別ＭＨＣクラスＩＩ結合ペプチドを含有した。
さらに、無差別ＭＨＣクラスＩＩ結合ペプチドを、１００００個を超えるペプチドに対してＴ細胞刺激分析法によって作製したＣＤ４＋ Ｔ細胞エピトープデータベースであるＴＣＥＤＴＭ（Ａｂｚｅｎａ ｐｌｃ．，ＵＫ）によって分析した。クローン２－１３は、２個の無差別ＭＨＣクラスＩＩ結合ペプチドが、公知のＴ細胞エピトープと高い相同性を有するものと示された。図８（緑色で強調表示）を参照する。クローン３－２は、公知のＴ細胞エピトープと相同性が高い３個の無差別ＭＨＣクラスＩＩ結合ペプチドを有している。図７（緑色で強調表示）を参照する。
２．複合抗体ライブラリーの作製
免疫原性と関連しているＣＤ４＋ Ｔ細胞エピトープを回避するために、複合抗体ライブラリーを設計した。ライブラリー作製のために、最も相同的なヒト生殖系を選択するためにクローン２－１３及びクローン３－２のフレームワークをＩｇＢＬＡＳＴデータベース（ＮＣＢＩ）に対して分析した。クローン３－２に対してヒト生殖系ＩＧＬＶ１－２７５１＊０２、ＩＧＬＪ２＊０１、ＩＧＨＶ３－６４＊０４及びＩＧＨＪ１＊０１遺伝子を選択した（図９Ａ及び図９Ｂ）。クローン２－１３に対してヒト生殖系ＩＧＬＶ３－２７＊０１、ＩＧＬＪ２＊０１、ＩＧＨＶ３－６４＊０４及びＩＧＨＪ１＊０１遺伝子を選択した（図１０）。
クローン２－１３及びクローン３－２のＭＨＣクラスＩＩ結合領域の特定の非同一アミノ酸残基を、最も相同性であるヒト生殖系配列内対応アミノ酸に置換するようにライブラリーを作製した。ヒト及びニワトリアミノ酸を両方とも含む縮退性コドンをコードするオリゴヌクレオチドの連続重複延長重合酵素連鎖反応（ＰＣＲ）を行い、前述した通り、部位指向突然変異誘発ライブラリーを生成した。Ｂａｅｋ ＤＳ，Ｋｉｍ ＹＳ．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ．４６３（３）：４１４－２０（２０１５）を参照する。ＰＣＲ産物を、前述した通り、ファージ製造のためにファージミドベクターにサブクローニングし、大腸菌菌株ＥＲ２７３８（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ ＢｉｏＬａｂｓ，Ｉｐｓｗｉｃｈ，ＭＡ，ＵＳＡ）に形質転換した。Ｈａｎ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐ Ｍｏｌ Ｍｅｄ．４８（１１）：ｅ２７１（２０１６）を参照する。
３．バイオパンニング及びクローン選択
陽性クローンを分離するために、前述の通りにバイオパンニング及びファージ酵素免疫分析を行った（Ｂａｒｂａｓ ＣＦ．，Ｐｈａｇｅ ｄｉｓｐｌａｙ：ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ：Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ；２００１）。ＦＡＭ１９Ａ５に対する反応性を有するファージクローンを選択し、これらのヌクレオチド配列をサンガーシーケンシングによって決定した。ＦＡＭ１９Ａ５に対する親和性を有する最も少ない数の無差別ＭＨＣクラスＩＩ結合エピトープを持つｓｃＦｖクローンを最終的に選択した。
図９Ｂに示すように、クローン３－２内７個の無差別ＭＨＣクラスＩＩ結合エピトープが、脱免疫化されたクローン３－２から除去された。図７から確認されたように、除去したエピトープは、結合ペプチド＃２、３、４、５、９、１０及び１１に該当する。ＣＤＲＨ１内無差別ＭＨＣクラスＩＩ結合エピトープは除去できなかった（すなわち、図７において結合ペプチド＃６）。また、ＣＤＲＨ２に位置しているｐ３残基が結合活性に重要な役割を担うため、ＨＦＲ２内無差別ＭＨＣクラスＩＩ結合エピトープを除去できなかった（すなわち、図７において結合ペプチド＃８）。図９Ｃに示すように、前記残基を全て突然変異させて３－２抗体を完全に脱免疫化したため、３－２抗体がＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に結合できなくなった。しかし、ＶＨのアミノ酸残基Ｑ５０が突然変異しなかったとき、脱免疫化された３－２抗体は、野生型３－２抗体と類似のＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に結合できた。
図１０Ａに示すように、クローン２－１３内７個の無差別ＭＨＣクラスＩＩ結合エピトープが、脱免疫化されたクローン２－１３から除去された。図８から確認されたように、除去されたエピトープは、結合ペプチド＃１、２、３、４，５，８及び９に該当する。ＣＤＲＨ２に位置しているｐ４残基が結合活性に重要な役割を担うため、ＨＦＲ２内無差別ＭＨＣクラスＩＩ結合エピトープを除去できなかった（すなわち、図８において結合ペプチド＃６）。３－２抗体と同様に、２－１３抗体の完全な脱免疫化はＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に対する結合にも否定的な影響を及ぼす。図１０Ｂを参照する。
前記結果は、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の免疫原性を、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に対するそれらの結合能に否定的な影響を与えないで減少させることができることを示唆する。
〔実施例９ 脱免疫化された２－１３抗体の親和度成熟〕
抗体と抗原の結合において静電気的相互作用は重要である。Ｌｅｅ Ｊ．Ｙ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ．７：１３３５４（２０１６）。脱免疫化されたクローン２－１３のＣＤＲＨ３を除く５個のＣＤＲ内の各アミノ酸をグルタミン酸とアスパラギン酸に置換し、人為的に負に荷電されたＲグループを導入した。点突然変異したｓｃＦｖをコードする総７０個の遺伝子を化学的に合成し（Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃｏｒａｌｖｉｌｌｅ，ＩＡ，ＵＳＡ）、前述した通りにファージミドベクターにサブクローニングしてファージをディスプレイする突然変異ｓｃＦｖを作製した。Ｙｏｏｎ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ．１１（１）：ｅ０１４６９０７（２０１６）。
ファージをディスプレイする電荷変異突然変異体ｓｃＦｖを救出し、前述した通りにファージ酵素免疫分析を行った（Ｂａｒｂａｓ ＣＦ．Ｐｈａｇｅ ｄｉｓｐｌａｙ：ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ：Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ；２００１）。図１１に示すように、全てのクローンが様々なレベルにＦＡＭ１９Ａ５結合活性を示した。２個のクローン（３６．Ｈ１－３ＴＥ及び３７．Ｈ１－３ＴＤ）は、脱免疫化されたクローン２－１３よりも高い結合親和度を示した。（ｉ）野生型２－１３抗体、（ｉｉ）脱免疫化されたクローン２－１３抗体、及び（ｉｉｉ）脱免疫化及び親和度成熟した２－１３抗体（２－１３Ｄ－３７）のＶＨ及びＶＬの配列を比較して図１５に提供した。
〔実施例１０ 脱免疫化された２－１３Ｄ－３７抗体の親和度成熟〕
ＣＤＲ－Ｈ３部位指向突然変異誘発ライブラリーを作製するために、脱免疫化されたクローン２－１３Ｄ－３７ｓｃＦｖをコードする遺伝子をＰＣＲ用鋳型として使用した。ＣＤＲ－Ｈ３内３個の連続している残基を、前述した通り、ＮＮＫ縮退コドン（Ｎ＝Ａ、Ｔ、Ｇ又はＣ、Ｋ＝Ｇ又はＴ）をコードするオリゴヌクレオチドで無作為化した（Ｌｅｅ Ｙ，Ｋｉｍ Ｈ，Ｃｈｕｎｇ Ｊ．Ｅｘｐ Ｍｏｌ Ｍｅｄ．２０１４；４６：ｅ１１４）。無作為化されたコドンをＰＣＲによってＣＤＲ－Ｈ３に導入した。重複延長ＰＣＲによって増幅されたｓｃＦｖ断片をファージミドベクターにサブクローニングし、上述の通り、ファージ製造のためにＥＲ２７３８（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ ＢｉｏＬａｂｓ）に形質転換した。総８個のＣＤＲ－Ｈ３無作為化されたライブラリーが生成された。
陽性クローンを分離するために、前述の通りにバイオパンニング及びファージ酵素免疫分析法を行った（Ｂａｒｂａｓ ＣＦ．Ｐｈａｇｅ ｄｉｓｐｌａｙ：ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ：Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ；２００１；及び実施例８参照）。ＦＡＭ１９Ａ５に対してより高い反応性を示すファージクローンを選択し、これらのヌクレオチド配列をサンガーシーケンシングによって決定した。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及びウェスタンブロッティングを用いて測定した候補クローン（すなわち、２－１３Ｄ－３７－１．５Ｗ－４１及び２－１３Ｄ－３７－３Ｗ－１６）のサイズ及び発現レベルが、図１６Ｂ～図１６Ｃに提供されている。脱免疫化されたクローン２－１３Ｄ－３７に対する候補クローン（すなわち、２－１３Ｄ－３７－１．５Ｗ－４１及び２－１３Ｄ－３７－３Ｗ－１６）の配列比較が、図１７Ａに提供されている。２－１３Ｄ－３７抗体と比較して、これらの親和度成熟した脱免疫化された抗体は、ＥＬＩＳＡで測定したとき、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に、より大きい結合を示した（図１７Ｂ）。
〔実施例１１ 脱免疫化された３－２抗体の物理化学的特性改善〕
脱免疫化された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の物理化学的特性を改善するために、３－２抗体の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３及び重鎖ＣＤＲ１及びＣＤＲ２の無作為化された配列を用いてファージディスプレイライブラリーを作製した。ＣＤＲ部位指向突然変異誘発ライブラリーを作製するために、脱免疫化されたクローン３－２ｓｃＦｖをコードする遺伝子をＰＣＲ用鋳型として使用した。ＣＤＲ内４個又は５個の連続している残基を、前述した通り、ＮＮＫ縮退コドン（Ｎ＝Ａ、Ｔ、Ｇ又はＣ、Ｋ＝Ｇ又はＴ）をコードするオリゴヌクレオチドで無作為化した。Ｌｅｅ，Ｙ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ Ｍｏｌ Ｍｅｄ．４６：ｅ１１４（２０１４）。無作為コドンをＰＣＲによってＣＤＲＨ３以外の５個のＣＤＲに導入した。重複延長ＰＣＲによって増幅されたｓｃＦｖ断片をファージミドベクターにサブクローニングし、上述の通りにファージ製造のためにＥＲ２７３８（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ ＢｉｏＬａｂｓ）に形質転換した。図１２を参照する。
陽性クローンを分離するために、前述の通りにバイオパンニング及びファージ酵素免疫分析法を行った（Ｂａｒｂａｓ ＣＦ．Ｐｈａｇｅ ｄｉｓｐｌａｙ：ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ：Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ；２００１）。ＦＡＭ１９Ａ５に対する反応性を有するファージクローンを選択し、それらのヌクレオチド配列をサンガーシーケンシングによって決定した。前述した通り、個別クローンの固有溶解度点数及びＧＲＡＶＹ点数を計算した。Ｓｏｒｍａｎｎｉ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉ Ｒｅｐ．７（１）：８２００（２０１７）。ＦＡＭ１９Ａ５に対する類似の反応性を示すとともに溶解度が向上したクローンを選択した：（ｉ）低い等電点を持つ抗体（“Ｌｏｗ＿ＰＩ”）、（ｉｉ）１－１７、（ｉｉｉ）１－３０、（ｉｖ）１－３２、（ｖ）４－１１、及び（ｖｉ）６－１０。結果を図１３Ａ及び図１３Ｂに示した。野生型３－２抗体に対する異なる脱免疫化された変異体３－２抗体のＶＨ及びＶＬの配列を比較し、図１４Ａ及び図１４Ｂにそれぞれ提供した。
〔実施例１２ ２－１３抗体のＨＤＸ－ＭＸエピトープマッピング〕
クローン２－１３抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体に対するヒトＦＡＭ１９Ａ５の結合エピトープをプローブするために、後述するように水素／重水素交換質量分光分析法（ＨＤＸ－ＭＳ）を用いた。図１８を参照する。
１．最大ＦＡＭ１９Ａ５カバレッジのための条件最適化
エピトープマッピング実験前に、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に対する一般のペプチドの目録を作るために非重水素化実験を行った。オフライン及びオンラインペプシン分解を用いてＦＡＭ１９Ａ５タンパク質を分解した。Ｈｏｕｄｅ，Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ９８８：２６９－８９（２０１３）。オンライン分解を利用時に、ペプシン固定カラムを使用し（～２０℃）、流速を調整して反応効率を調節した。オフライン方法を利用時に、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質を４℃で５分間ペプシンによって手動で分解した後、分析のために混合物を液体クロマトグラフィーカラムにローディングした。最大タンパク質カバレッジのための条件を確認するために、次のようなパラメータのいずれか一つ以上を調整した：リン酸カリウム、リン酸ナトリウム、クエンチング維持時間、還元試薬（ＴＣＥＰ）、尿素濃度及びペプシン濃度。Ｗａｔｅｒｓ ＰＬＧＳソフトウェアを用いて生成された質量分光分析（ＭＳ）未加工（ｒａｗ）データを分析し、最大タンパク質カバレッジを得たか否か確認した。実験の再現性を確認するために、それぞれの実験条件を少なくとも２回反復し、生成されたペプチドを確認した。図１９は、使用した異なる実験条件及び得られたカバレッジ率を示している。
次の条件を使用した時に最大カバレッジが観察された：１Ｍ ＴＣＥＰ、２Ｍ尿素（ｐＨ２．６６）及びペプシン（濃度比１：２）。図２０Ａ及び図２０Ｂに示すように、これらの条件を用いてＦＡＭ１９Ａ５タンパク質の略９７％をカバーする４４個のペプチド断片が同定された。
２．ＦＡＭ１９Ａ５エピトープマッピング
抗体－タンパク質複合体を標識化緩衝液で１５倍希釈する時にも、最大（１００％）結合（ＫＤ＝１ｎＭ）を得るために、水素／重水素標識前に抗原－抗体複合体試料を少なくとも３時間培養した。標識後、平衡緩衝液を用いて試料を同一体積となるようにした。
標識化反応を開始するために、１：１５標識化緩衝液で希釈した製造試料（抗原単独、抗体単独、又は抗原－抗体複合体）２．５μＬをＤ２Ｏ標識化溶液（１．８μＭ）と混合した。０分（すなわち、非重水素）、２０秒、１０分、６０分及び２４０分の異なる期間の間に反応を行った。非重水素反応のために、代わりに、製造した試料を平衡緩衝液と混合した。それぞれの標識化期間が終わるとき、反応をクエンチング緩衝液で中止させた。次に、試料をボルテックスし、液体窒素で直ちに凍結させ、分析するまで－８０℃で保管した。
質量分光分析器で分析する前に、保管された冷凍試料を溶かした後、氷で約５分間ペプシンで分解した（すなわち、上述のオフライン方法）。得られた相対的重水素レベルを、ソフトウェアプログラムＤｙｎａｍＸ ３．０ＴＭ（Ｗａｔｅｒｓ）を用いて交換時間対比プロットした。最終配列カバレッジ及び重複データを図２１に示した。
同定されたペプチド（図２１参照）のそれぞれに対する重水素吸収率データ（単一抗原／抗体対比抗原－抗体複合体）の比較を、図２２Ａ～図２２Ｅ及び図２３Ａ～図２３Ｃに示した。図示のように、次のようなペプチド配列に対して有意の重水素吸収率が観察された：（ｉ）ＡＣＲＫＧＱＩＡＧＴＴＲＡＲＰＡＣ（配列番号１０１の残基３７～５３）、（ｉｉ）ＡＣＲＫＧＱＩＡＧＴＴＲＡＲＰＡＣＶＤ（配列番号１０１の残基３７～５５）、（ｉｉｉ）ＡＣＲＫＧＱＩＡＧＴＴＲＡＲＰＡＣＶＤＡ（配列番号１０１の残基３７～５６）、（ｉｖ）ＡＲＩＩＫＴＫＱＷＣ（配列番号１０１の残基５６～６５）、（ｖ）ＡＲＩＩＫＴＫＱＷＣＤＭ（配列番号１０１の残基５６～６７）、（ｖｉ）ＡＲＩＩＫＴＫＱＷＣＤＭＬ（配列番号１０１の残基５６～６８）、（ｖｉｉ）ＡＲＩＩＫＴＫＱＷＣＤＭＬＰＣＬ（配列番号１０１の残基５６～７１）、（ｖｉｉｉ）ＲＩＩＫＴＫＱＷＣＤＭ（配列番号１０１の残基５７～６７）及び（ｉｘ）ＲＩＩＫＴＫＱＷＣＤＭＬ（配列番号１０１の残基５７～６８）。
前記結果を用いて単一抗原／抗体試料と抗原－抗体複合体間の最も有意の重水素吸収率差があるＦＡＭ１９Ａ５タンパク質内領域を同定するためにヒートマップを作製した。図２４に示すように、配列番号１０１のアミノ酸残基３８～５０（ＣＲＫＧＱＩＡＧＴＴＲＡＲ）及び５１～６４（ＰＡＣＶＤＡＲＩＩＫＴＫＱＷ）は、２－１３抗体に対する重要な結合残基として同定された。図２５は、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質の３次元構造内でこれらの残基の位置を示している。
概要及び要約欄以外の詳細な説明欄は、特許請求の範囲を解釈するために用いられると理解されるべきである。概要及び要約欄は、発明者によって考慮される本開示内容の例示的な具現例の一つ以上を示すが、全ての例示的な具現例を示すものではないので、本開示内容と添付する特許請求の範囲をいかなる方式でも制限しようとするものではない。
本開示内容は、特定機能及びそれらの関係の具現を説明する機能的構成要素を用いて上に説明した。それらの機能的構成要素の境界は、説明の便宜のために、本明細書では任意に定義した。前記特定機能とそれらの関係が適切に行われる限り、代替境界が定義されてもよい。
特定具現例に関する上の説明は、他人が当業界技術における知識を応用することによって、本開示内容の一般的な概念を超えない範囲で過度な実験なしで様々な応用のためにこのような特定具現例を容易に変形及び／又は調整することができるように、本開示内容の一般的な属性を完全に表すものであろう。したがって、このような調整及び変形は、本明細書に提示された教示及び指針に立って開示された具現例の均等物の意味及び範囲内にあるものと意図される。本明細書の語句又は用語は、本明細書の用語又は語句が本発明の教示及び指針に照らして当業者によって解釈され得るように、制限ではなく説明しようとする目的であることが理解できよう。
本開示内容の幅と範囲は、上述した例示的な具現例のいずれによっても制限されてはならず、後述する特許請求の範囲及びその等価物によってのみ定義されるべきである。
本明細書に引用された全ての刊行物、特許、特許出願、インターネットサイト及び受託番号／データベース配列（ポリヌクレオチド及びポリペプチド配列の両方とも）は、あたかもそれぞれの個別刊行物、特許、特許出願、インターネットサイト又は受託番号／データベース配列が具体的にそして個別的に参考として含まれると表示されたのと同じ程度に、全ての目的のためにその全体が本明細書に参考として組み込まれる。
図１Ａ～図１Ｃは、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に対する個別ｓｃＦｖクローンの結合を分析して提供している。 図１Ａ～図１Ｃは、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に対する個別ｓｃＦｖクローンの結合を分析して提供している。 図１Ａ～図１Ｃは、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に対する個別ｓｃＦｖクローンの結合を分析して提供している。 図２Ａ及び図２Ｂはそれぞれ、異なる抗ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖの概略サイズ及び結合能を提供している。 図２Ａ及び図２Ｂはそれぞれ、異なる抗ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖの概略サイズ及び結合能を提供している。 図３Ａ及び図３Ｂはそれぞれ、マウス及びヒト膠細胞においてＦＡＭ１９Ａ５発現を中和させる異なる抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の能力を比較して提供している。 図３Ａ及び図３Ｂはそれぞれ、マウス及びヒト膠細胞においてＦＡＭ１９Ａ５発現を中和させる異なる抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の能力を比較して提供している。 図４は、エピトープＦ１－Ｆ６（ＢＳＡに接合された）のアミノ酸配列及びヒトＦＡＭ１９Ａ５ポリペプチドにおいてそれらの位置を提供している。 図５は、エピトープ断片Ｆ１～Ｆ６に対する３－２抗体の結合に対するＥＬＩＳＡ結果を提供している。 図６Ａ～図６Ｊは、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に対する様々な３－２抗体変異体の結合に重要なエピトープＦ２断片内特定アミノ酸残基を示すアラニンスキャニング分析結果を提供している。 図６Ａ～図６Ｊは、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に対する様々な３－２抗体変異体の結合に重要なエピトープＦ２断片内特定アミノ酸残基を示すアラニンスキャニング分析結果を提供している。 図６Ａ～図６Ｊは、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に対する様々な３－２抗体変異体の結合に重要なエピトープＦ２断片内特定アミノ酸残基を示すアラニンスキャニング分析結果を提供している。 図６Ａ～図６Ｊは、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に対する様々な３－２抗体変異体の結合に重要なエピトープＦ２断片内特定アミノ酸残基を示すアラニンスキャニング分析結果を提供している。 図６Ａ～図６Ｊは、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に対する様々な３－２抗体変異体の結合に重要なエピトープＦ２断片内特定アミノ酸残基を示すアラニンスキャニング分析結果を提供している。 図６Ａ～図６Ｊは、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に対する様々な３－２抗体変異体の結合に重要なエピトープＦ２断片内特定アミノ酸残基を示すアラニンスキャニング分析結果を提供している。 図６Ａ～図６Ｊは、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に対する様々な３－２抗体変異体の結合に重要なエピトープＦ２断片内特定アミノ酸残基を示すアラニンスキャニング分析結果を提供している。 図６Ａ～図６Ｊは、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に対する様々な３－２抗体変異体の結合に重要なエピトープＦ２断片内特定アミノ酸残基を示すアラニンスキャニング分析結果を提供している。 図６Ａ～図６Ｊは、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に対する様々な３－２抗体変異体の結合に重要なエピトープＦ２断片内特定アミノ酸残基を示すアラニンスキャニング分析結果を提供している。 図６Ａ～図６Ｊは、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に対する様々な３－２抗体変異体の結合に重要なエピトープＦ２断片内特定アミノ酸残基を示すアラニンスキャニング分析結果を提供している。 図７は、３－２抗体の軽鎖可変領域（ＶＬ）（上の３行）及び重鎖可変領域（ＶＨ）（下の３行）において潜在的免疫原性部位を識別している。 図８は、２－１３抗体の軽鎖可変領域（ＶＬ）（上の３行）及び重鎖可変領域（ＶＨ）（下の３行）において潜在的免疫原性部位を識別している。 図９Ａ～図９Ｃは、脱免疫化された３－２抗体の結合を分析して提供している。 図９Ａ～図９Ｃは、脱免疫化された３－２抗体の結合を分析して提供している。 図９Ａ～図９Ｃは、脱免疫化された３－２抗体の結合を分析して提供している。 図１０Ａ及び図１０Ｂは、２個の異なる脱免疫化された２－１３抗体である（ｉ）完全脱免疫化された２－１３抗体、及び（ｉｉ）重鎖ＣＤＲ２内一のつのアミノ酸を除いて脱免疫化された抗体（“脱免疫化されたクローン２－１３”）に対する分析を提供している。 図１０Ａ及び図１０Ｂは、２個の異なる脱免疫化された２－１３抗体である（ｉ）完全脱免疫化された２－１３抗体、及び（ｉｉ）重鎖ＣＤＲ２内一のつのアミノ酸を除いて脱免疫化された抗体（“脱免疫化されたクローン２－１３”）に対する分析を提供している。 図１１は、異なる脱免疫化されたクローン２－１３変異体の結合能を比較して提供している。 図１２は、向上した物理化学的特性を持つ脱免疫化された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を生成するために用いた方法の概略図を提供している。 図１３Ａ及び図１３Ｂは、野生型（すなわち、脱免疫化されていない）３－２抗体（“原抗体”）対比いくつかの脱免疫化された３－２変異体の物理化学的特性を比較して提供している。 図１３Ａ及び図１３Ｂは、野生型（すなわち、脱免疫化されていない）３－２抗体（“原抗体”）対比いくつかの脱免疫化された３－２変異体の物理化学的特性を比較して提供している。 図１４Ａ及び図１４Ｂは、異なる脱免疫化された３－２抗体変異体に対する重鎖可変領域（図１４Ａ）及び軽鎖可変領域（図１４Ｂ）の配列整列を提供している。 図１４Ａ及び図１４Ｂは、異なる脱免疫化された３－２抗体変異体に対する重鎖可変領域（図１４Ａ）及び軽鎖可変領域（図１４Ｂ）の配列整列を提供している。 図１５は、異なる脱免疫化され及び／又は親和度成熟した２－１３抗体変異体に対する軽鎖可変領域（上の３行）及び重鎖可変領域（下の３行）の配列整列を提供している。 図１６Ａ～図１６Ｃは、脱免疫化された２－１３Ｄ－３７抗体の２個の変異体（２－１３Ｄ－３７－１．５Ｗ－４１及び２－１３Ｄ－３７－３Ｗ－１６）の発現レベルを、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及びウェスタンブロッティングで測定して提供している。 図１６Ａ～図１６Ｃは、脱免疫化された２－１３Ｄ－３７抗体の２個の変異体（２－１３Ｄ－３７－１．５Ｗ－４１及び２－１３Ｄ－３７－３Ｗ－１６）の発現レベルを、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及びウェスタンブロッティングで測定して提供している。 図１６Ａ～図１６Ｃは、脱免疫化された２－１３Ｄ－３７抗体の２個の変異体（２－１３Ｄ－３７－１．５Ｗ－４１及び２－１３Ｄ－３７－３Ｗ－１６）の発現レベルを、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及びウェスタンブロッティングで測定して提供している。 図１７Ａ及び図１７Ｂは、親和度成熟によって生成された脱免疫化された２－１３Ｄ－３７抗体の２個の変異体（２－１３Ｄ－３７－１．５Ｗ－４１及び２－１３Ｄ－３７－３Ｗ－１６）を分析して提供している。 図１７Ａ及び図１７Ｂは、親和度成熟によって生成された脱免疫化された２－１３Ｄ－３７抗体の２個の変異体（２－１３Ｄ－３７－１．５Ｗ－４１及び２－１３Ｄ－３７－３Ｗ－１６）を分析して提供している。 図１８は、実施例１１で用いたＨＤＸ－ＭＳ分析法の全体的なワークフローの概略図を提供している。 図１９は、実施例１１に記載されたＨＤＸ－ＭＳ分析法に対して試験した、異なる実験条件で達成されたカバレッジ率を要約した表を提供している。 図２０Ａ及び図２０Ｂは、実施例１１に記載された最適化された条件を用いてＦＡＭ１９Ａ５タンパク質のペプシン分解結果を提供している。 図２０Ａ及び図２０Ｂは、実施例１１に記載された最適化された条件を用いてＦＡＭ１９Ａ５タンパク質のペプシン分解結果を提供している。 図２１は、実施例１１に記載されているように、重水素標識後にＦＡＭ１９Ａ５タンパク質のペプシン分解で同定された２２個ペプチドのカバレッジ率及び重複率を示している。水平棒のそれぞれは、個別ペプチドを示す。 図２２Ａ～図２２Ｅは、時間関数として単一（抗原単独、“１”）及び抗原－抗体（２－１３）複合体（“２”）間の重水素吸収率を比較して提供している。 図２２Ａ～図２２Ｅは、時間関数として単一（抗原単独、“１”）及び抗原－抗体（２－１３）複合体（“２”）間の重水素吸収率を比較して提供している。 図２２Ａ～図２２Ｅは、時間関数として単一（抗原単独、“１”）及び抗原－抗体（２－１３）複合体（“２”）間の重水素吸収率を比較して提供している。 図２２Ａ～図２２Ｅは、時間関数として単一（抗原単独、“１”）及び抗原－抗体（２－１３）複合体（“２”）間の重水素吸収率を比較して提供している。 図２２Ａ～図２２Ｅは、時間関数として単一（抗原単独、“１”）及び抗原－抗体（２－１３）複合体（“２”）間の重水素吸収率を比較して提供している。 図２３Ａ～図２３Ｃは、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に沿って単一及び複合試料間に有意の重水素吸収率差（すなわち、±０．５Ｄａ超過）がある主要アミノ酸残基を示している。 図２３Ａ～図２３Ｃは、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に沿って単一及び複合試料間に有意の重水素吸収率差（すなわち、±０．５Ｄａ超過）がある主要アミノ酸残基を示している。 図２３Ａ～図２３Ｃは、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に沿って単一及び複合試料間に有意の重水素吸収率差（すなわち、±０．５Ｄａ超過）がある主要アミノ酸残基を示している。 図２４は、単一（抗原単独）及び抗原－抗体（２－１３）複合体試料間に有意の重水素吸収率差があるＦＡＭ１９Ａ５タンパク質の領域を示すヒートマップ分析を提供している。 図２５は、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質の３次元構造及び２－１３抗体に対する主要結合エピトープの位置を提供している。

Claims (88)

  1. 配列類似性１９を持つヒトファミリー、メンバーＡ５（ＦＡＭ１９Ａ５）タンパク質に特異的に結合し、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む分離された抗体（“抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体”）又はその抗原結合部分であって、
    前記重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれ、配列番号５、６及び７に示したアミノ酸配列を含み、前記配列のそれぞれは、場合によって１、２、３、４又は５個の突然変異を含み、
    前記軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれ、配列番号８、９及び１０に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３の少なくとも一つは、１、２、３、４又は５個の突然変異を含み、
    前記抗体は、配列番号１１に示したＶＨ及び配列番号１２に示したＶＬを含む基準抗体に比べて、ヒトにおいて減少した免疫原性を有する、分離された抗体又はその抗原結合部分。
  2. 前記重鎖ＣＤＲ３が配列番号７に示したアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
  3. 前記重鎖ＣＤＲ１が１個又は２個の突然変異を持つ、配列番号５に示したアミノ酸配列を含む、請求項１又は２に記載の抗体。
  4. 前記突然変異が配列番号５のアミノ酸３においてトレオニンの酸性アミノ酸への置換を含む、請求項３に記載の抗体。
  5. 前記突然変異が配列番号５のアミノ酸５においてセリンの酸性アミノ酸への置換を含む、請求項３又は４に記載の抗体。
  6. 前記酸性アミノ酸がアスパラギン酸又はグルタミン酸を含む、請求項４又は５に記載の抗体。
  7. 前記重鎖ＣＤＲ２が１、２、３、４又は５個の突然変異を持つ、配列番号６に示したアミノ酸配列を含む、請求項１～６のいずれかに記載の抗体。
  8. 前記突然変異が配列番号６のアミノ酸１６においてアルギニンの塩基性アミノ酸への置換を含む、請求項７に記載の抗体。
  9. 前記塩基性アミノ酸がリシンを含む、請求項８に記載の抗体。
  10. 前記突然変異が次のいずれか一つ以上を含む、請求項８又は９に記載の抗体：
    （ａ）配列番号６のアミノ酸６においてグリシンの酸性アミノ酸への置換；
    （ｂ）配列番号６のアミノ酸７においてセリンの酸性アミノ酸への置換；
    （ｃ）配列番号６のアミノ酸８においてセリンの酸性アミノ酸への置換；
    （ｄ）配列番号６のアミノ酸９においてトレオニンの酸性アミノ酸への置換；及び
    （ｅ）配列番号６のアミノ酸１６においてアルギニンの塩基性アミノ酸への置換。
  11. 前記酸性アミノ酸がアスパラギン酸又はグルタミン酸を含む、請求項１０に記載の抗体。
  12. 前記塩基性アミノ酸がリシンを含む、請求項８～１１のいずれかに記載の抗体。
  13. 前記軽鎖ＣＤＲ３が１、２、３、４又は５個の突然変異を持つ、配列番号１０に示したアミノ酸配列を含む、請求項１～１２のいずれかに記載の抗体。
  14. 前記突然変異が次のいずれか一つ以上を含む、請求項１３に記載の抗体：
    （ａ）配列番号１０のアミノ酸６においてセリンの酸性アミノ酸又は脂肪族アミノ酸への置換；
    （ｂ）配列番号１０のアミノ酸７においてアスパラギンの酸性アミノ酸又はヒドロキシル又は硫黄／セレニウム含有アミノ酸への置換；
    （ｃ）配列番号１０のアミノ酸８においてグリシンの酸性アミノ酸又はヒドロキシル又は硫黄／セレニウム含有アミノ酸への置換；
    （ｄ）配列番号１０のアミノ酸９においてグリシンの酸性アミノ酸又はヒドロキシル又は硫黄／セレニウム含有アミノ酸への置換；及び
    （ｅ）配列番号１０のアミノ酸１０においてイソロイシンの塩基性アミノ酸への置換。
  15. 前記酸性アミノ酸がアスパラギン酸又はグルタミン酸を含む、請求項１４に記載の抗体。
  16. 前記ヒドロキシル又は硫黄／セレニウム含有アミノ酸がセリンを含む、請求項１４又は１５に記載の抗体。
  17. 前記塩基性アミノ酸がヒスチジンを含む、請求項１４～１６のいずれかに記載の抗体。
  18. 前記軽鎖ＣＤＲ１が１、２、３又は４個の突然変異を持つ、配列番号８に示したアミノ酸配列を含む、請求項１～１７のいずれかに記載の抗体。
  19. 前記突然変異が次のいずれか一つ以上を含む、請求項１８に記載の抗体：
    （ａ）配列番号８のアミノ酸６においてチロシンの酸性アミノ酸への置換；
    （ｂ）配列番号８のアミノ酸７においてアルギニンの酸性アミノ酸への置換；
    （ｃ）配列番号８のアミノ酸８においてグリシンの酸性アミノ酸への置換；及び
    （ｄ）配列番号８のアミノ酸９においてセリンの酸性アミノ酸への置換。
  20. 前記酸性アミノ酸がグルタミン酸又はグルタミンを含む、請求項１９に記載の抗体。
  21. 前記軽鎖ＣＤＲ２が１、２、３又は４個の突然変異を持つ、配列番号９に示したアミノ酸配列を含む、請求項１～２０のいずれかに記載の抗体。
  22. 前記突然変異が次のいずれか一つ以上を含む、請求項２１に記載の抗体：
    （ａ）配列番号９のアミノ酸１においてグルタミン酸の酸性アミノ酸への置換；
    （ｂ）配列番号９のアミノ酸２においてセリンの酸性アミノ酸への置換；
    （ｃ）配列番号９のアミノ酸３においてアスパラギンの酸性アミノ酸、塩基性アミノ酸又は脂肪族アミノ酸への置換；及び
    （ｄ）配列番号９のアミノ酸４においてリシンの酸性アミノ酸又は脂肪族アミノ酸への置換。
  23. 前記酸性アミノ酸がグルタミン、アスパラギン、アスパラギン酸又はグルタミン酸を含む、請求項２２に記載の抗体。
  24. 前記塩基性アミノ酸がヒスチジンを含む、請求項２２又は２３に記載の抗体。
  25. 前記脂肪族アミノ酸がロイシンを含む、請求項２２～２４のいずれかに記載の抗体。
  26. 前記突然変異が配列番号９のアミノ酸２においてセリンの酸性アミノ酸への置換を含む、請求項２２に記載の抗体。
  27. 前記酸性アミノ酸がアスパルテート、グルタメート、アスパラギン、グルタミン又はこれらの組合せを含む、請求項２６に記載の抗体。
  28. 前記酸性アミノ酸がアスパラギンである、請求項２６又は２７に記載の抗体。
  29. ヒトＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に特異的に結合し、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む、分離された抗体又はその抗原結合部分であって、（ｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号５に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１３に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号７に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｖ）前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号８に示したアミノ酸配列を含み；（ｖ）前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号２０に示したアミノ酸配列を含み；（ｖｉ）前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号１０に示したアミノ酸配列を含む、分離された抗体又はその抗原結合部分。
  30. ヒトＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に特異的に結合し、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む、分離された抗体又はその抗原結合部分であって、（ｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１４に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１５に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号７に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｖ）前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号２１に示したアミノ酸配列を含み；（ｖ）前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号２２に示したアミノ酸配列を含み；（ｖｉ）前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号２３に示したアミノ酸配列を含む、分離された抗体又はその抗原結合部分。
  31. ヒトＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に特異的に結合し、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む、分離された抗体又はその抗原結合部分であって、（ｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１４に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１５に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号７に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｖ）前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号２１に示したアミノ酸配列を含み；（ｖ）前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号２４に示したアミノ酸配列を含み；（ｖｉ）前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号２３に示したアミノ酸配列を含む、分離された抗体又はその抗原結合部分。
  32. ヒトＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に特異的に結合し、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む、分離された抗体又はその抗原結合部分であって、（ｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１４に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１５に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号７に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｖ）前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号８に示したアミノ酸配列を含み；（ｖ）前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号２５に示したアミノ酸配列を含み；（ｖｉ）前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号２３に示したアミノ酸配列を含む、分離された抗体又はその抗原結合部分。
  33. ヒトＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に特異的に結合し、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む、分離された抗体又はその抗原結合部分であって、（ｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１４に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１５に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号７に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｖ）前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号８に示したアミノ酸配列を含み；（ｖ）前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号２４に示したアミノ酸配列を含み；（ｖｉ）前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号２３に示したアミノ酸配列を含む、分離された抗体又はその抗原結合部分。
  34. ヒトＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に特異的に結合し、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む、分離された抗体又はその抗原結合部分であって、（ｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１４に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１５に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号７に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｖ）前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号８に示したアミノ酸配列を含み；（ｖ）前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号２６に示したアミノ酸配列を含み；（ｖｉ）前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号２７に示したアミノ酸配列を含む、分離された抗体又はその抗原結合部分。
  35. ヒトＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に特異的に結合し、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む、分離された抗体又はその抗原結合部分であって、（ｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１４に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１５に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号７に示したアミノ酸配列を含み；（ｉｖ）前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号８に示したアミノ酸配列を含み；（ｖ）前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号２８に示したアミノ酸配列を含み；（ｖｉ）前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号２９に示したアミノ酸配列を含む、分離された抗体又はその抗原結合部分。
  36. 重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、前記ＶＨは、配列番号１１に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同じアミノ酸配列を含み、及び／又は前記ＶＬは、配列番号１２に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同じアミノ酸配列を含む、請求項１～３５のいずれかに記載の抗体。
  37. 前記抗体が重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む基準抗体と交差競合し、
    （ａ）前記ＶＨは、配列番号３３に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号３８に示したアミノ酸配列を含むか；
    （ｂ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号３９に示したアミノ酸配列を含むか；
    （ｃ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４１に示したアミノ酸配列を含むか；
    （ｄ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４０に示したアミノ酸配列を含むか；
    （ｅ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４２に示したアミノ酸配列を含むか；
    （ｆ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４３に示したアミノ酸配列を含むか；又は
    （ｇ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４４に示したアミノ酸配列を含む、請求項１～３６のいずれかに記載の抗体。
  38. 前記抗体が重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む基準抗体と同じヒトＦＡＭ１９Ａ５エピトープに結合し、
    （ａ）前記ＶＨは、配列番号３３に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号３８に示したアミノ酸配列を含むか；
    （ｂ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号３９に示したアミノ酸配列を含むか；
    （ｃ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４１に示したアミノ酸配列を含むか；
    （ｄ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４０に示したアミノ酸配列を含むか；
    （ｅ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４２に示したアミノ酸配列を含むか；
    （ｆ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４３に示したアミノ酸配列を含むか；又は
    （ｇ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４４に示したアミノ酸配列を含む、請求項１～３７のいずれかに記載の抗体。
  39. 前記ヒトＦＡＭ１９Ａ５エピトープが配列番号９０、９１又は９２に示したアミノ酸配列を含む、請求項３８に記載の抗体。
  40. 配列類似性１９を持つヒトファミリー、メンバーＡ５（ＦＡＭ１９Ａ５）タンパク質に特異的に結合し、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む分離された抗体（“抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体”）又はその抗原結合部分であって、
    前記重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれ、配列番号１６、１７及び１８に示したアミノ酸配列を含み、前記配列のそれぞれは、場合によって１、２又は３個の突然変異を含み、
    前記軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれ、配列番号３０、３１及び３２に示したアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３の少なくとも一つは、１、２又は３個の突然変異を含み、
    前記抗体は、配列番号３５に示したＶＨ及び配列番号４５に示したＶＬを含む基準抗体に比べて、ヒトにおいて減少した免疫原性及びヒトＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に対してより高い結合親和度を有する、分離された抗体又はその抗原結合部分。
  41. 前記重鎖ＣＤＲ３が配列番号１８、１２８又は１２９に示したアミノ酸配列を含む、請求項４０に記載の抗体。
  42. 前記重鎖ＣＤＲ１が配列番号１６に示したアミノ酸配列を含む、請求項４０又は４１に記載の抗体。
  43. 前記重鎖ＣＤＲ１が配列番号１９に示したアミノ酸配列を含む、請求項４０又は４１に記載の抗体。
  44. 前記重鎖ＣＤＲ２が配列番号１７に示したアミノ酸配列を含む、請求項４０～４３のいずれかに記載の抗体。
  45. 前記軽鎖ＣＤＲ３が配列番号３２に示したアミノ酸配列を含む、請求項４０～４４のいずれかに記載の抗体。
  46. 前記軽鎖ＣＤＲ２が配列番号３１に示したアミノ酸配列を含む、請求項４０～４５のいずれかに記載の抗体。
  47. 前記軽鎖ＣＤＲ１が一つの突然変異を持つ、配列番号３０に示したアミノ酸配列を含む、請求項４０～４６のいずれかに記載の抗体。
  48. 前記突然変異が配列番号３０のアミノ酸４においてセリンの脂肪族アミノ酸への置換を含む、請求項４７に記載の抗体。
  49. 前記脂肪族アミノ酸がバリンを含む、請求項４８に記載の抗体。
  50. 重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、前記ＶＨは、配列番号３５に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同じアミノ酸配列を含み、及び／又は前記ＶＬは、配列番号４５に示したアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同じアミノ酸配列を含む、請求項４０～４９のいずれかに記載の抗体。
  51. 前記抗体が重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む基準抗体と交差競合し、前記ＶＨは、配列番号３６に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４６に示したアミノ酸配列を含む、請求項４０～５０のいずれかに記載の抗体。
  52. 前記抗体が重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む基準抗体と交差競合し、前記ＶＨは、配列番号３７に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４６に示したアミノ酸配列を含む、請求項４０～５０のいずれかに記載の抗体。
  53. 前記抗体が重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む基準抗体と交差競合し、前記ＶＨは、配列番号１３０に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４６に示したアミノ酸配列を含む、請求項４０～５０のいずれかに記載の抗体。
  54. 前記抗体が重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む基準抗体と交差競合し、前記ＶＨは、配列番号１３１に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４６に示したアミノ酸配列を含む、請求項４０～５０のいずれかに記載の抗体。
  55. 前記抗体がＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、これらの変異体及びこれらの任意の組合せからなる群から選ばれる、請求項１～５４のいずれかに記載の抗体。
  56. キメラ抗体、ヒト抗体又はヒト化抗体である、請求項１～５５のいずれかに記載の抗体。
  57. Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を含む、請求項１～５６のいずれかに記載の抗体。
  58. ｓｃＦｖである、請求項５７に記載の抗体。
  59. 前記ｓｃＦｖがＶＨ及びＶＬを含み：
    （ａ）前記ＶＨは、配列番号３３に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号３８に示したアミノ酸配列を含むか；
    （ｂ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号３９に示したアミノ酸配列を含むか；
    （ｃ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４１に示したアミノ酸配列を含むか；
    （ｄ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４０に示したアミノ酸配列を含むか；
    （ｅ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４２に示したアミノ酸配列を含むか；
    （ｆ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４３に示したアミノ酸配列を含むか；
    （ｇ）前記ＶＨは、配列番号３４に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４４に示したアミノ酸配列を含むか；
    （ｈ）前記ＶＨは、配列番号３６に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４６に示したアミノ酸配列を含むか；
    （ｉ）前記ＶＨは、配列番号３７に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４６に示したアミノ酸配列を含むか；
    （ｊ）前記ＶＨは、配列番号１３０に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４６に示したアミノ酸配列を含むか；又は
    （ｋ）前記ＶＨは、配列番号１３１に示したアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号４６に示したアミノ酸配列を含む、請求項５８に記載の抗体。
  60. 次の特性のいずれか一つ以上を示す、請求項１～５９のいずれかに記載の抗体：
    （ａ）酵素結合免疫吸着分析法（ＥＬＩＳＡ）によって測定したとき、ＫＤが１０ｎＭ以下である可溶性ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合する特性；
    （ｂ）ＥＬＩＳＡによって測定したとき、ＫＤが１０ｎＭ以下である膜結合ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合する特性；
    （ｃ）反応性神経膠症の発病を減少、反転、遅延及び／又は予防する特性；
    （ｄ）反応性星状細胞の過剰増殖を抑制する特性；
    （ｅ）ニューロカン及び神経膠抗原２（ＮＧ２）を含むコンドロイチン硫酸プロテオグリカンの発現を減少させる特性；
    （ｆ）神経細胞の核内ｃ－ｆｏｓ及びｐＥＲＫの発現を増加させる特性；
    （ｇ）神経細胞の生存を促進する特性；
    （ｈ）神経細胞内ＧＡＰ４３の発現を増加させる特性；
    （ｉ）軸索の再成長を促進する特性；
    （ｊ）例えば腫瘍内血管の正常化を誘導する特性；
    （ｋ）腫瘍の成長を抑制する特性；
    （ｌ）免疫細胞の腫瘍内浸潤を増大させる特性；
    （ｍ）神経細胞の腫瘍内浸潤を増大させる特性；
    （ｎ）大食細胞又は小膠細胞の食細胞活性を増進させる特性；
    （ｏ）大食細胞又は小膠細胞のミトコンドリア膜電位を増加させる特性；
    （ｐ）腫瘍に対する骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の動員を減少させる特性；
    （ｑ）腫瘍において壊死及び浮腫を減少させる特性；
    （ｒ）腫瘍の組織透過性を減少させる特性；及び
    （ｓ）腫瘍において血流速度を増加させる特性。
  61. 請求項１～６０のいずれか一項の抗体をコードする、核酸。
  62. 請求項６１の核酸を含む、ベクター。
  63. 請求項６２のベクターを含む、細胞。
  64. 作用剤に連結された請求項１～６０のいずれか一項の抗体を含む、免疫接合体。
  65. 請求項１～６０のいずれか一項の抗体、請求項６１の核酸、請求項６２のベクター、請求項６３の細胞又は請求項６４の免疫接合体、及び担体を含む、組成物。
  66. 請求項１～６０のいずれか一項の抗体、請求項６１の核酸、請求項６２のベクター、請求項６３の細胞又は請求項６４の免疫接合体及び使用説明書を含む、キット。
  67. ヒトＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に特異的に結合する抗体を生産する方法であって、請求項６３の細胞を適切な条件で培養して前記抗体を分離することを含む、方法。
  68. 必要とする対象で疾患又は症状を治療する方法であって、前記対象に請求項１～６０のいずれか一項の抗体、請求項６１の核酸、請求項６２のベクター、請求項６３の細胞又は請求項６４の免疫接合体を投与することを含む、方法。
  69. 前記疾患又は症状が腫瘍、線維症、緑内障、感情障害、網膜病症、老化関連黄斑変性又は神経病性疼痛を含む、請求項６８に記載の方法。
  70. 前記疾患又は症状が腫瘍である、請求項６９に記載の方法。
  71. 前記腫瘍が黒色腫、膵癌、神経膠腫、乳癌、リンパ腫、肺癌、腎臓癌、前立腺癌、線維肉腫、結腸腺癌腫、肝癌又は卵巣癌を含む、請求項６９又は７０に記載の方法。
  72. 前記神経膠腫が多形成膠芽細胞腫である、請求項７１に記載の方法。
  73. 前記抗体、前記核酸、前記ベクター、前記細胞又は前記免疫接合体が血管の正常化を誘導する、請求項６８～７２のいずれかに記載の方法。
  74. 前記血管の正常化が連結性増加、壁厚増加、血管径減少、より規則的な血管方向及び分布パターン、血管数増加、漏れ及び透過性減少、血管上で血管周囲細胞カバレッジ及び近接性増加、酸素供給増加又はこれらの組合せを含む血管の特性変化を伴う、請求項７３に記載の方法。
  75. 前記抗体、前記核酸、前記ベクター、前記細胞又は前記免疫接合体が腫瘍の成長を抑制する、請求項６９～７４のいずれかに記載の方法。
  76. 前記抗体、前記核酸、前記ベクター、前記細胞又は前記免疫接合体が免疫細胞の腫瘍内浸潤を増大させる、請求項６９～７５のいずれかに記載の方法。
  77. 前記免疫細胞が大食細胞、樹状細胞、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、自然殺害（ＮＫ）細胞又はこれらの組合せを含む、請求項７６に記載の方法。
  78. 前記免疫細胞がさらに肥大を示す、請求項７６又は７７に記載の方法。
  79. 前記免疫細胞の腫瘍内増大した浸潤が神経細胞の腫瘍内浸潤増加を伴う、請求項７６～７８のいずれかに記載の方法。
  80. 前記神経細胞が星状細胞、膠細胞又はこれらの組合せを含む、請求項７９に記載の方法。
  81. 前記抗体、前記核酸、前記ベクター、前記細胞又は前記免疫接合体が、大食細胞又は小膠細胞の食細胞活性を増進させる、請求項６８～８０のいずれかに記載の方法。
  82. 前記抗体、前記核酸、前記ベクター、前記細胞又は前記免疫接合体が、大食細胞又は小膠細胞のミトコンドリア膜電位を増加させる、請求項６８～８１のいずれかに記載の方法。
  83. 前記抗体、前記核酸、前記ベクター、前記細胞又は前記免疫接合体が、腫瘍に対する骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の動員を減少させる、請求項６９～８１のいずれかに記載の方法。
  84. 前記抗体、前記核酸、前記ベクター、前記細胞又は前記免疫接合体が、腫瘍において壊死及び浮腫を減少させる、請求項６９～８３のいずれかに記載の方法。
  85. 前記抗体、前記核酸、前記ベクター、前記細胞又は前記免疫接合体が、腫瘍の組織透過性を減少させる、請求項６９～８４のいずれかに記載の方法。
  86. 前記抗体、前記核酸、前記ベクター、前記細胞又は前記免疫接合体が、腫瘍において血流速度を増加させる、請求項６９～８５のいずれかに記載の方法。
  87. 追加の治療剤を投与することを含む、請求項６８～８６のいずれかに記載の方法。
  88. 前記追加の治療剤が化学療法、免疫療法、放射線療法又はこれらの組合せを含む、請求項８７に記載の方法。

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