JP2022515290A - 改変t細胞、その調製方法および使用 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明において、本明細書で使用される科学用語および技術用語は、他に明記しない限り、当業者によって通常に理解される意味を有する。また、本明細書で使用されるタンパク質および核酸化学、分子生物学、細胞および組織培養、微生物学、免疫学に関連する用語および検査法は、当該分野で広く使用されている用語および慣例ステップのものである。例えば、本発明で使用される標準的な組換えDNAおよび分子クローン技術は、当業者によく知られており、以下の文書:Sambrook, J., Fritsch, E.F. and Maniatis, T., Molecular Cloning: A Laboratory Manual; Cold Spring Harbor Laboratory Press: Cold Spring Harbor, 1989(以下、「Sambrook」と称する)により完全に記載されている。一方、本発明のよりよい理解のために、関連用語の定義および説明を以下に示す。
第1の態様では、本発明は、改変T細胞を調製するための方法であって、T細胞における少なくとも1種の抑制タンパク質の発現を低減(ノックダウン)または消失(ノックアウト)させるステップを含む方法を提供する。
i)CRISPRヌクレアーゼ、および少なくとも1種のガイドRNA;
ii)CRISPRヌクレアーゼをコードするヌクレオチド配列を含む発現コンストラクト、および少なくとも1種のガイドRNA;
iii)CRISPRヌクレアーゼ、および少なくとも1種のガイドRNAをコードするヌクレオチド配列を含む発現コンストラクト;
iv)CRISPRヌクレアーゼをコードするヌクレオチド配列を含む発現コンストラクト、および少なくとも1種のガイドRNAをコードするヌクレオチド配列を含む発現コンストラクト;
v)CRISPRヌクレアーゼをコードするヌクレオチド配列および少なくとも1種のガイドRNAをコードするヌクレオチド配列を含む発現コンストラクト。
上記において、少なくとも1種のガイドRNAは、T細胞で抑制タンパク質をコードしている遺伝子を標的にし、前記抑制タンパク質は、TGFβ受容体(TGFBRIIなど)、TIGIT、BTLA、2B4、CD160、CD200R、A2aR、IL10RA、ADRB2、BATF、GATA3、IRF4、RARA、LAYN、MYO7A、PHLDA1、RGS1、RGS2、SHP1、DGKa、Fas、FasL、またはこれらの組合せなど、T細胞表面抑制受容体またはT細胞疲弊関連タンパク質から選択される。一部の実施形態では、少なくとも1種のガイドRNAが、T細胞でPD1をコードする遺伝子を標的にするガイドRNAをさらに含む。一部の実施形態では、少なくとも1種のガイドRNAが、T細胞でTGFβ受容体(TGFBRIIなど)をコードする遺伝子およびPD1をコードする遺伝子を標的にするガイドRNAを含む。
別の態様では、本発明は、改変T細胞であって、改変T細胞の抑制タンパク質の発現が、改変されていないT細胞と比較して低減または消失している、改変T細胞を提供する。一部の実施形態では、改変T細胞が、本発明の方法によって調製される。
別の態様では、本発明は、がんを処置するための医薬組成物であって、本発明の改変T細胞と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。さらに、本発明は、がんの処置のための医薬の製造における、本発明の改変T細胞の使用も提供する。
本発明は、本明細書に記載の改変T細胞を調製するためのCRISPR遺伝子編集システムと、遺伝子編集システムを細胞に導入するのに適した試薬とを含む、本発明の改変T細胞を調製する方法で使用するためのキットも提供する。
1.sgRNAのインビトロ転写
まず、バイオテクノロジー会社によって、T7プロモーターおよび20bpの標的配列(sgRNA)を含有するフォワードプライマーが合成された。次いで、pX330プラスミド(Addgeneプラスミド#4223)をPCRテンプレートとして用いて、T7-sgRNA PCR産物をインビトロで増幅させ、PCR精製キットを用いてPCR産物を精製した。次いで、精製されたT7-sgRNA PCR産物をテンプレートとして用い、MEGAshortscript T7キット(Thermo Fisher Scientific)を用いてsgRNAをインビトロで転写し、MEGAclearカラム(Thermo Fisher Scientific)でsgRNAを回収し、sgRNAをRNaseフリーの脱イオン水に溶解させ、別々に凍結させるか、以降の使用のために貯蔵した。
まず、適量の対応sgRNAをRNaseフリーのEPチューブに添加し、次いで、Cas9タンパク質をゆっくり添加し、穏やかに混合し、室温で15分間インキュベートして、以降の使用のためのRNPを形成させた。
1)P3 Primary Cell 4D-Nucleofector X Kitを用いた。
2)1.5ml/ウェルの完全培地を12ウェルプレートに添加し、37℃で30分間超予熱した。同時に、15mlの遠心分離機チューブ内の培地を予熱した。50mlのPBSを予熱した。
3)対応sgRNAをRNaseフリーのEPチューブに添加し、次いで、対応量のCas9タンパク質をゆっくり添加し、穏やかに混合し、室温で20分間インキュベートして、RNP複合体を形成させた。
4)電気回転バッファー(electrorotation buffer)の調製:100ul系中に、82μl Nuclepfector溶液+18μlサプリメント。
5)sgRNAとcas9タンパク質のインキュベーション中に、エレクトロポレーションに必要とされる細胞を同時調製した。
6)3日間活性化させたT細胞を収集し、計数し、必要量の細胞(3e6細胞/試料)を取り出した。
7)溶液を、室温で5分間、200gで遠心処理した。
8)上清を除去し、予熱したPBSで細胞を1回洗浄し、次いで、室温で5分間、200gで遠心処理した。
9)上清を除去し、残留液を、さらに、できるだけ多く取り除いた。
10)細胞を予め調製したエレクトロポレーションバッファーで再懸濁し、穏やかに混合した。
11)200μl/試料(二連のウェルを含む)を再懸濁細胞から取り出し、インキュベートされたRNPの中に入れ、穏やかに混合し、次いで、100μl/試料の混合物をエレクトロポレーションキュベットに添加した。
12)エレクトロポレーション用のプログラムは、刺激されたT細胞(EO-115)である。
13)エレクトロポレーションの後、500μlの予熱された培地をキュベットに迅速に添加し、ピペットで穏やかに混合し、細胞懸濁液を予熱された12ウェルプレート内にピペットで移し、インキュベーターに入れ、5%CO2、37℃でインキュベートした。
14)エレクトロポレーションの6時間後に、半分の培地を新たにし、震とうさせないように慎重に細胞をインキュベーターから取り出し、ウェル壁に沿って1ml/ウェルの培地をピペットから慎重に出し、次いで、1mlの予熱されたT細胞培養培地を各ウェルに添加した。
15)その後、細胞成長の状態に応じて、時間通りに継代接種を行い、細胞密度を1e6細胞/mlに維持した。
末梢血または臍帯血をリンパ球セパレーター(Histopaque-1077)で単核細胞(PBMC)にソーティングした後、次いで、EasySeqヒトT細胞濃縮キットを用いて、PBMCをCD3+細胞から分離した。CD3+細胞を得た後、CAR-T細胞を得るために、CARレンチウイルス感染を行った。
腫瘍細胞CRL5826(NCI-H226ヒト肺扁平上皮細胞系)、OVCAR3(ヒト卵巣がん細胞)、およびHCT116(ヒト結腸がん細胞)は、ATCCから購入した。これらはすべて、メソテリンという抗原を発現する。ルシフェラーゼを発現するように、細胞系をウイルスに感染させて、ルシフェラーゼを安定して発現する細胞系(CRL5826-luci、OVCAR3-luci、HCT116-luci)を得た。これに基づいて、PDL1を発現するウイルスをトランスフェクションし、PDL1の発現が高い細胞系(CRL5826-PDL1-luci)を得た。
腫瘍細胞を、104/100ulの密度で、96ウェルマイクロアッセイプレート(greiner bio-one)に入れた。CAR-T細胞を正確に計数し、エフェクター細胞:標的細胞の様々な比率に応じて希釈し、対応するウェルに100ulを添加した。対照群用に、100ulの培養培地を添加した。指定された時点に、10ulのSteady-Glo(登録商標)Luciferase Assay System=をすべてのウェルに添加し、5分後にマイクロプレートリーダーで読みとった。読取り値を得た後に、次のように殺滅の百分率を計算した。殺滅(%)=100-(実験群の読取り値/対照群の読取り値)×100。
図1に構造を示し、図中、P4が抗メソテリンscFvである、4タイプのCAR(P4-z、P4-BBz、P4-28z、およびP4-28BBz)を設計し、CAR-T細胞を調製した。
この例では、CAR-T細胞における抑制受容体TIGIT、BTLA、CD160、2B4、およびCD200Rを、遺伝子編集を介してノックアウトし、それらが腫瘍殺滅に及ぼす効果を研究した。
この例では、CAR-T細胞におけるT細胞疲弊関連転写因子BATF、GATA3、IRF4、およびRARAを、遺伝子編集を介してノックアウトし、それらが腫瘍殺滅に及ぼす効果を研究した。
この例では、CAR-T細胞における腫瘍微小環境関連受容体A2aR、IL10RA、およびADRB2を、遺伝子編集を介してノックアウトし、それらが腫瘍殺滅に及ぼす効果を研究した。
この例では、CAR-T細胞における、メチル基転移酵素DNMT3AなどのT細胞疲弊関連のエピジェネティック遺伝子を、遺伝子編集を介してノックアウトし、それらが腫瘍殺滅に及ぼす効果を研究した。
この例では、CAR-T細胞における疲弊したT細胞で高度に発現される未知の機能を有するいくつかの遺伝子を、遺伝子編集を介してノックアウトし、それらが腫瘍殺滅に及ぼす効果を研究した。これらの遺伝子には、LAYN、MYO7A、PHLDA1、RGS1、RGS2が含まれる。
この例では、CAR-T細胞における、SHP1、DGKa、Fas、およびFasLなどのT細胞疲弊の内因性メカニズムに関係する遺伝子を、遺伝子編集を介してノックアウトし、それらが腫瘍殺滅に及ぼす効果を研究した。
1.TGFβ1は、P4-CAR-T細胞の効果を負に調節し、P4-CAR-T細胞を誘導して、機能的な調節性T細胞(Treg)に変えることができる。
TGFβ1がCAR-T細胞の殺滅効果に影響を及ぼすかどうか確かめるために、本発明者らは、5ng/mlのTGFβ1を添加したまたは添加しない培養系で、メソテリンを標的とするP4-CAR-T細胞をCRL5826中皮腫細胞と1:1の比率でインキュベートした。結果は、24時間の共インキュベーションの後、TGFβ1群におけるP4-CAR-T細胞の標的指向殺滅能力が、非添加群のものより有意に低かったことを示した(図33A)。TGFβ1群におけるP4-CAR-T細胞の殺滅能力が低減している理由を、最初に探索する目的で、培養培地中のIL-2およびIFN-γの放出を検出した。P4-CAR-T細胞をCRL5826と共にインキュベートしたときに、大量のIL-2およびIFN-γが産出されたことが見出された。しかし、TGFβ1が添加されたときには、IL-2およびIFN-γの放出が約50%低減した(図33 BおよびC)。
2.TGFBR IIまたはFOXP3のノックアウトは、P4-CAR-T細胞の影響を改善することができる。
この実験は、P4-CAR-T細胞におけるCD4およびCD8サブグループにTGFβ1が及ぼす効果を調査した。CD4+ CAR-T細胞とCRL5826の共インキュベーション系で、様々な濃度のTGFβ1を添加した。5または10ng/mlのTGFβ1が添加したとき、P4-CAR-T細胞の標的指向殺滅能力を有意に抑制できたことが見出された(図41A)が、TGFBR IIまたはFOXP3のノックアウトは、CD4+ CAR-T細胞の殺滅能力を有意に改善することができた(図41B)。また、TGFβ1は、CD4+ CAR-T細胞で、FOXP3の上方制御ならびにIL-2およびIFN-γの下方制御など、多くの遺伝子の発現を転写レベルで調節できることが見出された。TGBR IIをノックアウトした後、FOXP3が低減され、IL-2およびIFN-γが上方制御された(図41C~E)。しかし、GZMBの発現は、TGFβ1によって有意に影響を受けなかった(図41F)。IL-2およびIFN-γの発現における類似の変化が、タンパク質レベルでも観察された(図42A)。加えて、TGFβ1は、抗原によって誘導されるCD4+ CAR-T細胞の増殖能を有意に抑制できることも観察された。TGFBR IIノックアウトは、この現象を有意に改善することができるが、FOXP3ノックアウトの効果は明らかでない(図42B)。また、複数ラウンドの抗原刺激の後にTGBR IIまたはFOXP3がノックアウトされたCD4+ CAR-T細胞の殺滅能力は、編集されていないCD4+ CAR-T細胞のものより有意によかった(図42C)。
CD8+ CAR-T細胞とCRL5826の共インキュベーション系で、様々な濃度のTGFβ1を添加した。添加される濃度が増大するにつれて、CD8+ CAR-T細胞の腫瘍殺滅能力の抑制が、より明らかになる(図43A)が、TGFBR IIまたはFOXP3ノックアウトは、CD8+ CAR-T細胞の殺滅能力を有意に改善できることが見出された(図43B)。また、TGFβ1は、CD8+ CAR-T細胞で、IL-2、IFN-γ、GZMA、およびGZMBの下方制御など、多くの遺伝子の発現を転写レベルで調節できることが見出された。TGBR IIをノックアウトした後、これらの遺伝子の発現を上方制御することができる(図43C~F)。本発明者らは、タンパク質レベルでも、IFN-γ発現の類似の変化を観察した(図44A)。しかし、TGBR IIがノックアウトされているCD8+ CAR-T細胞における明らかなIL-2発現を除いて、他のすべての群は、明らかな発現を示さなかった(図44A)。加えて、TGFβ1は、抗原によって誘導されるCD8+ CAR-T細胞の増殖能を有意に抑制できることも観察された。TGFBR IIノックアウトは、この現象を有意に改善することができるが、FOXP3ノックアウトの効果は明らかでない(図44B)。また、複数ラウンドの抗原刺激の後にTGBR IIまたはFOXP3がノックアウトされたCD8+ CAR-T細胞の殺滅能力は、編集されていないCD8+ CAR-T細胞のものより有意によかった(図44C)。しかし、CD8+ CAR-T細胞の抗原刺激性増殖能および複数ラウンドの殺滅能力が、CD4+ CAR-T細胞のものより有意に弱いことは言及に値する。
9.1 TGFβ1は、PD1を上方制御することによってCAR-T細胞消耗を加速する
T細胞シグナリングの連続的活性化によって消耗がもたらされる。消耗したT細胞は、増殖能力およびエフェクター機能が低減しており、免疫チェックポイント遺伝子(例えばPD1)の過剰発現を有する。TGFβ1添加の後、M28zにおけるPD1 mRNAの発現が有意に増大したことが観察され(図46)、複数ラウンドの抗原刺激アッセイを用いて、TGFβ1がCAR-T細胞消耗を加速するかどうかさらに調査した。TGFβ1は、複数回の腫瘍細胞攻撃の後、CAR-T細胞の増殖に有意に影響を及ぼしたことが見出された。4回目のチャレンジでは、TGFβ1の存在下で、ほとんどすべてのCAR-T細胞が死滅したが、対照細胞は良好に生存した。TGFBR IIのノックアウトは、CAR-T細胞をTGFβ1効果に対して非応答性にし、対照群のものに類似した生存をもたらした(図47Aおよび47B)。TGFβ1の存在下では、2回のチャレンジの後、CAR-T細胞の腫瘍溶解活性がゼロまで低減したが、M28z-TKO(TGFBR II KO)細胞は、活性のままだった(図47C)。したがって、3ラウンドの腫瘍チャレンジの後、TGFβ1の添加は、CAR-T細胞におけるPD-1の発現を有意に増大させ、TGFBR IIのノックアウトは、この効果を低減した。一方、TIM3、LAG3、およびCTLA4の発現では、TGFβ1に対する反応が、より弱く、これは、PD1が、TGFβ1駆動のCAR-T消耗によって誘導される主な標的であることをさらに示している(図47D)。M28z-TKOに、有意な数のPD1発現細胞がまだあることは留意するに値する。これは、それらがTGFβ1シグナリングに応答しないが、TME(腫瘍微小環境)内で、対応するリガンドによって抑制される傾向があることを示している。
TGFβ1およびPDL1の二重免疫抑制に対するCAR-T細胞へのTGFBR IIおよびPD1の二重KOの相乗効果をインビトロで確認した後、CRL5826-PDL1 CDXモデルにおけるM28z-DKOのインビボ腫瘍排除における利点をさらに論じた(図48Aおよび48B)。PBS群における急速な増大およびM28z群における遅い増大と比較して、腫瘍体積は、基底レベルに制御され、M28z-TKO群では、腫瘍の20%が除去された。しかし、実験の終わりには、M28z-PKO群および-DKO群の腫瘍の80%が、それぞれ完全に消失した(図48C)。腫瘍サイズおよび腫瘍重量でも同じ傾向が検出された(図48Dおよび48E)。GvHD症状を有するマウスが観察されず、すべてのマウスが良好な体重を維持したことは留意するに値する(図48F)。末梢血分析は、hCD3陽性およびGFP陽性の細胞の割合が低く、それらが、M28z群と比較して、編集CAR-T細胞処置群では増大したが、有意には増大しなかったことを示した(図48G)。
Claims (24)
- 改変T細胞を調製するための方法であって、T細胞における少なくとも1種の抑制タンパク質の発現を低減または消失させる工程を含み、抑制タンパク質がT細胞表面抑制受容体および/またはT細胞疲弊関連タンパク質であり、例えば、抑制タンパク質が、TGFβ受容体(TGFBRIIなど)、TIGIT、BTLA、2B4、CD160、CD200R、A2aR、IL10RA、ADRB2、BATF、GATA3、IRF4、RARA、LAYN、MYO7A、PHLDA1、RGS1、RGS2、SHP1、DGKa、Fas、FasL、またはこれらの任意の組合せから選択される、方法。
- T細胞におけるPD1の発現を低減または消失させる工程をさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記T細胞が、外来性のT細胞受容体(TCR)またはキメラ抗原受容体(CAR)を含むT細胞である、請求項1または2に記載の方法。
- 前記低減または消失が、アンチセンスRNA、アンタゴミル、siRNA、shRNA、メガヌクレアーゼ、Znフィンガーヌクレアーゼ、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ、またはCRISPRシステムによって達成される、請求項1~3のいずれか一項に記載の方法。
- 前記CRISPRシステムが、CRISPR/Cas9システムである、請求項4に記載の方法。
- 前記CRISPR/Cas9システムが、配列番号1~21および28~31からなる群から選択される細胞内のヌクレオチド配列の1つまたは複数を標的とする、請求項5に記載の方法。
- TCRまたはCARが、腫瘍関連抗原に対する抗原結合ドメインを含む、請求項3~6のいずれか一項に記載の方法。
- 腫瘍関連抗原が、CD16、CD64、CD78、CD96、CLL1、CD116、CD117、CD71、CD45、CD71、CD123、CD138、ErbB2(HER2/neu)、癌胎児抗原(CEA)、上皮細胞接着分子(EpCAM)、上皮増殖因子受容体(EGFR)、EGFR変異体III(EGFRvIII)、CD19、CD20、CD30、CD40、ジシアリルガングリオシドGD2、管上皮ムチン、gp36、TAG-72、グリコスフィンゴリピド、神経膠腫関連抗原、β-ヒト絨毛性ゴナドトロピン、α-胎児グロブリン(AFP)、レクチン応答性AFP、チログロブリン、RAGE-1、MN-CA IX、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、RU1、RU2(AS)、腸カルボキシルエステラーゼ、mut hsp70-2、M-CSF、プロスターゼ、前立腺特異抗原(PSA)、PAP、NY-ESO-1、LAGA-1a、p53、プロステイン、PSMA、生存およびテロメラーゼ、前立腺がん腫瘍抗原-1(PCTA-1)、MAGE、ELF2M、好中球エラスターゼ、エフリンB2、CD22、インシュリン成長因子(IGF1)-I、IGF-II、IGFI受容体、メソテリン、腫瘍特異性ペプチドエピトープを提示する主要組織適合複合体(MHC)分子、5T4、ROR1、Nkp30、NKG2D、腫瘍間質抗原、フィブロネクチン・エクストラドメインA(EDA)およびエクストラドメインB(EDB)、テネイシン-C A1ドメイン(TnC A1)、線維芽細胞関連タンパク質(fap)、CD3、CD4、CD8、CD24、CD25、CD33、CD34、CD133、CD138、Foxp3、B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、GM-CSF、サイトカイン受容体、内皮因子、BCMA(CD269、TNFRSF17)、TNFRSF17(UNIPROT Q02223)、SLAMF7(UNIPROT Q9NQ25)、GPRC5D(UNIPROT Q9NZD1)、FKBP11(UNIPROT Q9NYL4)、KAMP3、ITGA8(UNIPROT P53708)、ならびにFCRL5(UNIPROT Q68SN8)からなる群から選択される、請求項7に記載の方法。
- 抗原結合性ドメインが、モノクローナル抗体、合成抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、シングルドメイン抗体、抗体単鎖可変領域、およびこれらの抗原結合性断片から選択される、請求項7または8に記載の方法。
- CARが、メソテリン、CD8ヒンジ領域、CD28膜貫通ドメイン、CD28共刺激ドメイン、およびCD3ζシグナル伝達ドメインに対するscFvを含む、請求項3~9のいずれか一項に記載の方法。
- CARが、配列番号27に記載のアミノ酸配列を含む、請求項10に記載の方法。
- 請求項1~11のいずれか一項に記載の方法によって調製される改変T細胞。
- T細胞の少なくとも1種の抑制タンパク質の発現が、改変されていないT細胞と比較して低減または消失しており、抑制タンパク質がT細胞表面抑制受容体および/またはT細胞疲弊関連タンパク質であり、例えば、抑制タンパク質が、TGFβ受容体(TGFBRIIなど)、TIGIT、BTLA、2B4、CD160、CD200R、A2aR、IL10RA、ADRB2、BATF、GATA3、IRF4、RARA、LAYN、MYO7A、PHLDA1、RGS1、RGS2、SHP1、DGKa、Fas、FasL、またはこれらの任意の組合せから選択される、改変T細胞。
- 改変されていないT細胞と比較して、改変T細胞におけるPD1の発現が低減または消失している、請求項13に記載の改変T細胞。
- 前記T細胞が、外来性のT細胞受容体(TCR)またはキメラ抗原受容体(CAR)を含むT細胞である、請求項13または14に記載の改変T細胞。
- TCRまたはCARが、腫瘍関連抗原に対する抗原結合ドメインを含む、請求項15に記載の改変T細胞。
- 腫瘍関連抗原が、CD16、CD64、CD78、CD96、CLL1、CD116、CD117、CD71、CD45、CD71、CD123、CD138、ErbB2(HER2/neu)、癌胎児抗原(CEA)、上皮細胞接着分子(EpCAM)、上皮増殖因子受容体(EGFR)、EGFR変異体III(EGFRvIII)、CD19、CD20、CD30、CD40、ジシアリルガングリオシドGD2、管上皮ムチン、gp36、TAG-72、グリコスフィンゴリピド、神経膠腫関連抗原、β-ヒト絨毛性ゴナドトロピン、α-胎児グロブリン(AFP)、レクチン応答性AFP、チログロブリン、RAGE-1、MN-CA IX、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、RU1、RU2(AS)、腸カルボキシルエステラーゼ、mut hsp70-2、M-CSF、プロスターゼ、前立腺特異抗原(PSA)、PAP、NY-ESO-1、LAGA-1a、p53、プロステイン、PSMA、生存およびテロメラーゼ、前立腺がん腫瘍抗原-1(PCTA-1)、MAGE、ELF2M、好中球エラスターゼ、エフリンB2、CD22、インシュリン成長因子(IGF1)-I、IGF-II、IGFI受容体、メソテリン、腫瘍特異性ペプチドエピトープを提示する主要組織適合複合体(MHC)分子、5T4、ROR1、Nkp30、NKG2D、腫瘍間質抗原、フィブロネクチン・エクストラドメインA(EDA)およびエクストラドメインB(EDB)、テネイシン-C A1ドメイン(TnC A1)、線維芽細胞関連タンパク質(fap)、CD3、CD4、CD8、CD24、CD25、CD33、CD34、CD133、CD138、Foxp3、B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、GM-CSF、サイトカイン受容体、内皮因子、BCMA(CD269、TNFRSF17)、TNFRSF17(UNIPROT Q02223)、SLAMF7(UNIPROT Q9NQ25)、GPRC5D(UNIPROT Q9NZD1)、FKBP11(UNIPROT Q9NYL4)、KAMP3、ITGA8(UNIPROT P53708)、ならびにFCRL5(UNIPROT Q68SN8)からなる群から選択される、請求項16に記載の改変T細胞。
- 抗原結合性ドメインが、モノクローナル抗体、合成抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、シングルドメイン抗体、抗体単鎖可変領域、およびこれらの抗原結合性断片から選択される、請求項16または17に記載の改変T細胞。
- CARが、メソテリン、CD8ヒンジ領域、CD28膜貫通ドメイン、CD28共刺激ドメイン、およびCD3ζシグナル伝達ドメインに対するscFvを含む、請求項15~18のいずれか一項に記載の改変T細胞。
- CARが、配列番号27に記載のアミノ酸配列を含む、請求項19に記載の改変T細胞。
- がんの処置のための医薬の製造における、請求項13~20のいずれか一項に記載の改変T細胞の使用。
- がんを処置するための医薬組成物であって、請求項13~20のいずれか一項に記載の改変T細胞と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
- がんが、肺がん、卵巣がん、結腸がん、直腸がん、黒色腫、腎がん、膀胱がん、乳がん、肝がん、リンパ腫、血液系腫瘍、頭頸部がん、グリア系腫瘍、胃がん、上咽頭がん、喉頭がん、子宮頸がん、子宮体部腫瘍、および骨肉腫からなる群から選択される、請求項21に記載の使用または請求項22に記載の医薬組成物。本発明の方法または医薬組成物で処置できる他のがんの例には、骨がん、膵がん、皮膚がん、前立腺がん、皮膚または眼内悪性黒色腫、子宮がん、肛門がん、精巣がん、卵管がん、子宮体がん、腟がん、腟がん、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道がん、小腸がん、内分泌系がん、甲状腺がん、副甲状腺がん、副腎がん、軟部組織肉腫、尿道がん、陰茎がん、慢性または急性白血病(急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、および慢性リンパ性白血病を含む)、小児固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱がん、腎または尿管がん、腎盂がん、中枢神経系(CNS)腫瘍、原発性CNSリンパ腫、腫瘍血管新生、脊椎腫瘍、脳幹部神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、表皮癌、扁平上皮癌、T細胞リンパ腫、およびアスベスト誘発性がんを含めた環境誘発性がん、ならびにこれらのがんの組合せが含まれる。
- 改変T細胞を調製するための、請求項1~12のいずれか一項に記載の方法で使用されるキット。
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