JP2022513367A - Ｋｒａｓ腫瘍遺伝子の活性化を阻害するためのフラバグリン誘導体 - Google Patents
Ｋｒａｓ腫瘍遺伝子の活性化を阻害するためのフラバグリン誘導体 Download PDFInfo
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Abstract
本発明は、ＫＲＡＳ腫瘍遺伝子の活性化の阻害剤に関し、これは、ＫＲＡＳ活性化を阻害するためにプロヒビチンを標的にする能力を有するフラバグリン誘導体である。本発明によるフラバグリン誘導体は、一般式（Ｉ）JPEG2022513367000012.jpg60161（式中、Ｒ１は、－ＨＯ、－ＣＯＯ、－Ｃ（ＮＨ）Ｏ、－ＣＯ（ＮＨ）Ｎ－（ＣＨ3）2、－ＣＯ（ＮＨ）（ＮＨ2）であり、Ｒ２は、－Ｈ、－ＣＯＯ－ＣＨ3、－ＣＯ（ＮＨ）－ＣＨ3、－ＮＯ（ＣＨ3）2であり、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、それぞれ独立に、－Ｈ、－ＯＨであり、Ｒ６は、－Ｈ、－ＨＯ、－Ｆであり、Ｒ７は、－Ｈ、－ＨＯであり、Ｒ８は、－Ｈ、－ＯＣＨ3、－Ｂｒ、－Ｆ、－Ｃｌであり、Ｒ９は、－Ｏ－ＣＨ3、－Ｏ－（ＣＨ2）2－ＮＨ－ＣＨ3である）を有する。本発明はさらに、１つまたは複数の前記フラバグリン誘導体を含む医薬組成物およびＫＲＡＳ活性化を阻害するための方法における使用に関する。
Description
本発明は、ＫＲＡＳ腫瘍遺伝子の活性化の新規な阻害剤に関し、これは、ＫＲＡＳ腫瘍遺伝子の活性化を特異的および効果的に阻害するためにプロヒビチンを標的にする能力を有するフラバグリン誘導体である。本発明はさらに、１つまたは複数の前記フラバグリン誘導体を含む医薬組成物ならびにｉｎ ｖｉｔｒｏとｅｘ ｖｉｖｏの両方でＫＲＡＳ活性化を阻害するための方法におけるそれらの使用に関する。本発明はさらに、ＲＡＳシグナル伝達が病理学的に関与している疾患、特にＫＲＡＳ変異型増殖性障害または遺伝子障害の予防または治療における前記フラバグリン誘導体の使用に関する。
ＲＡＳタンパク質は、原形質膜と会合し、ＧＤＰまたはＧＴＰのいずれかと結合できる、密接に関連した単量体球状タンパク質群を表す。結合したＧＤＰを含有するＲＡＳは、「不活性」状態を表すが、ＧＤＰの代わりのＧＴＰとＲＡＳとの結合は、「活性」状態を表すので、タンパク質が下流標的の他のタンパク質と相互作用することができる。ＲＡＳタンパク質は、種々のエフェクタータンパク質による細胞の外から核への細胞外シグナルの伝達を制御する分子スイッチとして機能する小ＧＴＰアーゼと考えることができる（Ｄｏｗｎｗａｒｄ，Ｊ． Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ＲＡＳ ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙｓ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ ｔｈｅｒａｐｙ． Ｎａｔ Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ ３、１１～２２頁（２００３））。３つのＲＡＳイソ型（ＫＲＡＳ、ＨＲＡＳおよびＮＲＡＳ）があり、それらの活性化サイクルは、ＧＤＰまたはＧＴＰの結合によって調節されており、同様にＧＡＰまたはＧＥＦによって制御されている（Ｒａｊａｌｉｎｇａｍ，Ｋ．、Ｓｃｈｒｅｃｋ，Ｒ．、Ｒａｐｐ，Ｕ．Ｒ．＆Ａｌｂｅｒｔ，Ｓ． Ｒａｓ ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ ｔａｒｇｅｔｓ． Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １７７３、１１７７～１１９５頁（２００７））。それらのＧＴＰ結合型形態では、それらは、それらのエフェクタータンパク質と結合し、種々の基本的な細胞プロセスを制御する複数のシグナル伝達経路の引き金となる。ヒト癌のほぼ３０％が、ＲＡＳ腫瘍遺伝子に機能獲得突然変異を有しており、３つのイソ型の中で、ＫＲＡＳ（８５％）は、最も頻繁に変異した腫瘍遺伝子の１つであり、それにＮＲＡＳ（１１％）およびＨＲＡＳ（４％）が続く（ＣＯＳＭＩＣデータベース）。多くの研究は、いくつかの癌で「発癌性ドライバー」としてのＲＡＳの役割を示している（Ｈｏｂｂｓ，Ｇ．Ａ．、Ｄｅｒ，Ｃ．Ｊ．＆Ｒｏｓｓｍａｎ，Ｋ．Ｌ． ＲＡＳ ｉｓｏｆｏｒｍｓ ａｎｄ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ ａｔ ａ ｇｌａｎｃｅ． Ｊ Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ １２９、１２８７～１２９２頁、ｄｏｉ：１０．１２４２／ｊｃｓ．１８２８７３（２０１６））。通常、ＲＡＳの変異は、ＧＡＰ媒介ＧＴＰ加水分解に欠陥を生じさせ、したがって、ＧＴＰ結合活性状態のＲＡＳの蓄積をもたらす。ＲＡＳイソ型における変異のほとんどは、３つのホットスポット残基（Ｇ１２、Ｇ１３およびＱ６１）に影響を及ぼし、最近の研究から、これらの変異の生物学的結果は同一ではないことが明らかになった（Ｍｉｌｌｅｒ，Ｍ．Ｓ．＆Ｍｉｌｌｅｒ，Ｌ．Ｄ． ＲＡＳ Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ｏｎｃｏｇｅｎｅｓｉｓ：Ｎｏｔ ａｌｌ ＲＡＳ Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ａｒｅ Ｃｒｅａｔｅｄ Ｅｑｕａｌｌｙ． Ｆｒｏｎｔ Ｇｅｎｅｔ ２、１００、ｄｏｉ：１０．３３８９／ｆｇｅｎｅ．２０１１．００１００（２０１１））。
３０年間の熱心な努力にもかかわらず、ＲＡＳ腫瘍遺伝子を直接標的化している薬物は、臨床応用に達していない。３つのＲＡＳイソ型は、８２～９０％の配列同一性を示し、違いのほとんどはＣ末端のＨＶＲ領域に限定されている。ＨＶＲ領域におけるアミノ酸配列の相違が、これらの３つのＲＡＳイソ型によって誘発される生物学的応答の違いに直接寄与するかどうかは、十分に理解されていない。選択的スプライシングによって、２つのＫＲＡＳイソ型が生成され（ＫＲＡＳ４ＡおよびＫＲＡＳ４Ｂ）、ＫＲＡＳ４Ｂは癌で主に発現される。ＫＲＡＳ変異は、膵癌、肺癌および結腸癌で頻繁に確認されるが、ＮＲＡＳ変異は黒色腫でしばしば起こり、ＨＲＡＳ変異は頭頸部癌で顕著である。ＲＡＳイソ型特異的変異の背後にある根本的なメカニズムとそれらの組織に特異的な役割は、現在明らかではない。さらに、それらの翻訳後修飾および細胞内局在に関して、ＲＡＳイソ型間で有意差がある（Ｓｉｍａｎｓｈｕ，Ｄ．Ｋ．、Ｎｉｓｓｌｅｙ，Ｄ．Ｖ．＆ＭｃＣｏｒｍｉｃｋ，Ｆ． ＲＡＳ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｄｉｓｅａｓｅ． Ｃｅｌｌ １７０、１７～３３頁、ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｅｌｌ．２０１７．０６．００９（２０１７））。
ＫＲＡＳ４ＡおよびＫＲＡＳ４Ｂは、原形質膜の脂質ナノクラスター内のリン脂質へのそれらの親和性に関与している多塩基性ストレッチを有する（Ｚｈｏｕ，Ｙ．＆Ｈａｎｃｏｃｋ，Ｊ．Ｆ． Ｒａｓ ｎａｎｏｃｌｕｓｔｅｒｓ：Ｖｅｒｓａｔｉｌｅ ｌｉｐｉｄ－ｂａｓｅｄ ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ ｐｌａｔｆｏｒｍｓ． Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ １８５３、８４１～８４９頁、ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｂｂａｍｃｒ．２０１４．０９．００８（２０１５））。ＫＲＡＳ４Ｂはまた、内膜へのその局在化を表し得るＳ１８１でリン酸化される可能性がある（Ｐｒｉｏｒ，Ｉ．Ａ．＆Ｈａｎｃｏｃｋ，Ｊ．Ｆ． Ｒａｓ ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ， ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔａｌｉｚｅｄ ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ． Ｓｅｍｉｎ Ｃｅｌｌ Ｄｅｖ Ｂｉｏｌ ２３、１４５～１５３頁、ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｓｅｍｃｄｂ．２０１１．０９．００２（２０１２））。ＨＲＡＳは、２つの残基でパルミトイル化されるが、ＫＲＡＳ４ＡおよびＮＲＡＳは、ＨＶＲ領域における単一残基でパルミトイル化される。これらの修飾は、同様に、下流シグナル伝達を同様に表す原形質膜マイクロドメインへのそれらの分布を決定する。
ＫＲＡＳは、ヒト癌で最も一般的に変異した腫瘍遺伝子であり、膵癌、結腸癌および肺癌で特に高頻度であるため、治療戦略を進化させるための努力がなされてきた。ＷＯ ２０１７／０５８７６８ Ａ１は、Ｇ１２Ｃ変異体ＫＲＡＳタンパク質の阻害剤としての活性を有する化合物について記載している。類似の化合物も、ＵＳ ２０１４／２８８０４５ Ａ１に記載されている。ＫＲＡＳ変異は、純粋な予後に関連しているが、ＫＲＡＳ腫瘍性タンパク質の変異体形態を発現する癌を特異的に治療するのに有効な治療法はない。
最近の研究では、フラバグリンは、天然の抗腫瘍薬であり、プロヒビチン１（ＰＨＢ１）－ＣＲＡＦ相互作用を直接標的にし、その結果、ＣＲＡＦが不活性化され、ＲＡＳ媒介腫瘍形成に必要とされるＭＡＰＫ経路が遮断されることが明らかになった。キナーゼドメインの構造が類似しているので、小分子キナーゼ阻害剤は、しばしば望ましくない副作用をもたらす。さらに、癌患者は、キナーゼ阻害剤に対する耐性を頻繁に生じる（Ｌｏｖｌｙ ＣＭ、Ｓｈａｗ ＡＴ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐａｔｈｗａｙｓ：ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ａｎｄ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ． Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２０１４；２０：２２４９～２２５６頁）。したがって、発癌性キナーゼを不活性化するためにキナーゼドメインまたはタンパク質間相互作用ドメインの外側の発癌性キナーゼを標的にすることは、ヒト癌または他のＫＲＡＳシグナル伝達関連障害と闘うための魅力的な戦略になる。
ロカグラミドを用いた治療は、ＫＲＡＳ変異型細胞株のＲＡＳ活性化を阻害するが、物質は、ＫＲＡＳと密接に関連するイソ型ＨＲＡＳおよびＮＲＡＳとを区別するのに十分なほど特異的ではない（Ｈ Ｙｕｒｕｇｉら、ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｐｒｏｈｉｂｉｔａｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｌｉｇａｎｄｓ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ＫＲＡＳ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｌｕｎｇ ｔｕｍｏｕｒｓ、ｏｎｃｏｇｅｎｅ（２０１７）、Ｖｏｌ．３６：４７７８～４７８９頁））。
種々のフラバグリン誘導体は、細胞毒性を示すことも知られている。ＷＯ ２０１０／０６０８９１ Ａ１は、ロカグラオール誘導体および抗悪性腫瘍薬の心毒性を予防または制限するためのこれらの誘導体の使用について記載している。
ＷＯ ２０１２／０６６６００２ Ａ１は、フラバグリン誘導体ならびに神経保護剤および／または心保護剤および／または制癌剤としてのそれらの使用について記載している。
ＷＯ ２００５／１１３５２９ Ａ２は、シクロペンタ「ｂ」ベンゾフラン誘導体ならびに医薬品の製造、特に急性または慢性疾患の予防および／または治療のためのそれらの利用について記載している。さらに、フラバグリンは、強力な抗癌剤および細胞保護剤として記載されている（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、ｖｏｌ．５５、ｎｏ．２２、２０１２年１１月２６日（２０１２－１１－２６）、１００６４～１００７３頁；Ｙｕｒｕｇｉ Ｈら、「Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｐｒｏｈｉｂｉｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｌｉｇａｎｄｓ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ＫＲＡＳ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｌｕｎｇ ｔｕｍｏｕｒｓ」（ｖｏｌ．３６、４７７８頁、２０１９）、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、ｖｏｌ．３６、ｎｏ．４２、２０１７年１０月１９日（２０１７－１０－１９）、５９１４頁）。
Ｄｏｗｎｗａｒｄ，Ｊ． Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ＲＡＳ ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙｓ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ ｔｈｅｒａｐｙ． Ｎａｔ Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ ３、１１～２２頁（２００３）
Ｒａｊａｌｉｎｇａｍ，Ｋ．、Ｓｃｈｒｅｃｋ，Ｒ．、Ｒａｐｐ，Ｕ．Ｒ．＆Ａｌｂｅｒｔ，Ｓ． Ｒａｓ ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ ｔａｒｇｅｔｓ． Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １７７３、１１７７～１１９５頁（２００７）
Ｈｏｂｂｓ，Ｇ．Ａ．、Ｄｅｒ，Ｃ．Ｊ．＆Ｒｏｓｓｍａｎ，Ｋ．Ｌ． ＲＡＳ ｉｓｏｆｏｒｍｓ ａｎｄ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ ａｔ ａ ｇｌａｎｃｅ． Ｊ Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ １２９、１２８７～１２９２頁、ｄｏｉ：１０．１２４２／ｊｃｓ．１８２８７３（２０１６）
Ｍｉｌｌｅｒ，Ｍ．Ｓ．＆Ｍｉｌｌｅｒ，Ｌ．Ｄ． ＲＡＳ Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ｏｎｃｏｇｅｎｅｓｉｓ：Ｎｏｔ ａｌｌ ＲＡＳ Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ａｒｅ Ｃｒｅａｔｅｄ Ｅｑｕａｌｌｙ． Ｆｒｏｎｔ Ｇｅｎｅｔ ２、１００、ｄｏｉ：１０．３３８９／ｆｇｅｎｅ．２０１１．００１００（２０１１）
Ｓｉｍａｎｓｈｕ，Ｄ．Ｋ．、Ｎｉｓｓｌｅｙ，Ｄ．Ｖ．＆ＭｃＣｏｒｍｉｃｋ，Ｆ． ＲＡＳ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｄｉｓｅａｓｅ． Ｃｅｌｌ １７０、１７～３３頁、ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｅｌｌ．２０１７．０６．００９（２０１７
Ｚｈｏｕ，Ｙ．＆Ｈａｎｃｏｃｋ，Ｊ．Ｆ． Ｒａｓ ｎａｎｏｃｌｕｓｔｅｒｓ：Ｖｅｒｓａｔｉｌｅ ｌｉｐｉｄ－ｂａｓｅｄ ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ ｐｌａｔｆｏｒｍｓ． Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ １８５３、８４１～８４９頁、ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｂｂａｍｃｒ．２０１４．０９．００８（２０１５）
Ｐｒｉｏｒ，Ｉ．Ａ．＆Ｈａｎｃｏｃｋ，Ｊ．Ｆ． Ｒａｓ ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ， ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔａｌｉｚｅｄ ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ． Ｓｅｍｉｎ Ｃｅｌｌ Ｄｅｖ Ｂｉｏｌ ２３、１４５～１５３頁、ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｓｅｍｃｄｂ．２０１１．０９．００２（２０１２）
Ｌｏｖｌｙ ＣＭ、Ｓｈａｗ ＡＴ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐａｔｈｗａｙｓ：ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ａｎｄ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ． Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２０１４；２０：２２４９～２２５６頁）
Ｈ Ｙｕｒｕｇｉら、ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｐｒｏｈｉｂｉｔａｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｌｉｇａｎｄｓ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ＫＲＡＳ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｌｕｎｇ ｔｕｍｏｕｒｓ、ｏｎｃｏｇｅｎｅ（２０１７）、Ｖｏｌ．３６：４７７８～４７８９頁）
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、ｖｏｌ．５５、ｎｏ．２２、２０１２年１１月２６日（２０１２－１１－２６）、１００６４～１００７３頁
Ｙｕｒｕｇｉ Ｈら、「Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｐｒｏｈｉｂｉｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｌｉｇａｎｄｓ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ＫＲＡＳ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｌｕｎｇ ｔｕｍｏｕｒｓ」（ｖｏｌ．３６、４７７８頁、２０１９）
Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、ｖｏｌ．３６、ｎｏ．４２、２０１７年１０月１９日（２０１７－１０－１９）、５９１４頁
したがって、本発明の目的は、特異性の高い、ナノモル濃度で細胞のＫＲＡＳの活性化を阻害する能力を有する、薬学的に活性な化合物を提供することである。この目的は、請求項１に記載のフラバグリン誘導体によって解決される。本発明の好ましい実施形態は、従属クレームの一部である。
本発明の新規なフラバグリン誘導体は、プロヒビチン経路を阻害することにより、特に細胞におけるＥＧＦ誘導ＲＡＳ－ＧＴＰ付加（ｌｏａｄｉｎｇ）を阻害することにより、ＲＡＳ腫瘍遺伝子活性化の阻害剤として適格である。発明者らはさらに、本発明のフラバグリン誘導体が、ナノモル濃度で、変異したＫＲＡＳを保有する細胞のＫＲＡＳへのＧＴＰ付加を損なうことを示す。可能性のある候補物質を特定するために、発明者らは、活性化されたＫＲＡＳ（ＥＧＦおよび変異活性化の両方による）と細胞内のＣＲＡＦキナーゼのＲａｓ結合ドメイン（ＲＢＤ）との間の相互作用を直接破壊することにより、ＲＡＳの活性化を阻害することができるフラバグリン化合物のスクリーニングを実施した。このスクリーニングの１つの結果として、発明者らは、ＫＲＡＳの阻害剤として適格なフラバグリンのいくつかの誘導体を特定した。特定されたフラバグリン化合物は、共通のコア構造に基づいているが、側鎖が異なることによって互いに異なる。
用語「フラバグリン誘導体」は、本発明では、ＫＲＡＳのＧＴＰ付加を阻害し、それによってＧＴＰアーゼの不活性化をもたらすフラバグリン群に関する。
本発明のフラバグリン誘導体は、アグライア属の植物から単離した天然フラバグリンからも見つけることができる、シクロペンタベンゾフラン環を含む（Ｂａｓｍａｄｊｉａｎ，Ｃ．、Ｔｈｕａｕｄ，Ｆ．、Ｒｉｂｅｉｒｏ，Ｎ．＆Ｄｅｓａｕｂｒｙ，Ｌ． Ｆｌａｖａｇｌｉｎｅｓ： ｐｏｔｅｎｔ ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ｄｒｕｇｓ ｔｈａｔ ｔａｒｇｅｔ ｐｒｏｈｉｂｉｔｉｎｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｈｅｌｉｃａｓｅ ｅｌＦ４Ａ． Ｆｕｔｕｒｅ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ５、２１８５～２１９７頁、ｄｏｉ：１０．４１５５／ｆｍｃ．１３．１７７（２０１３））。したがって、本発明による所望の活性を有するフラバグリン誘導体は、以下の一般式（Ｉ）
（式中、
Ｒ１は、－ＨＯ、－ＣＯＯ、－Ｃ（ＮＨ）Ｏ、－ＣＯ（ＮＨ）Ｎ－（ＣＨ3）2、－ＣＯ（ＮＨ）（ＮＨ2）であり、
Ｒ２は、－Ｈ、－ＣＯＯ－ＣＨ3、－ＣＯ（ＮＨ）－ＣＨ3、－ＮＯ（ＣＨ3）2であり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、それぞれ独立に、－Ｈ、－ＯＨであり、
Ｒ６は、－Ｈ、－ＨＯ、－Ｆであり、
Ｒ７は、－Ｈ、－ＨＯであり、
Ｒ８は、－Ｈ、－ＯＣＨ3、－Ｂｒ、－Ｆ、－Ｃｌであり、
Ｒ９は、－Ｏ－ＣＨ3、－Ｏ－（ＣＨ2）2－ＮＨ－ＣＨ3である）
に基づいている。
Ｒ１は、－ＨＯ、－ＣＯＯ、－Ｃ（ＮＨ）Ｏ、－ＣＯ（ＮＨ）Ｎ－（ＣＨ3）2、－ＣＯ（ＮＨ）（ＮＨ2）であり、
Ｒ２は、－Ｈ、－ＣＯＯ－ＣＨ3、－ＣＯ（ＮＨ）－ＣＨ3、－ＮＯ（ＣＨ3）2であり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、それぞれ独立に、－Ｈ、－ＯＨであり、
Ｒ６は、－Ｈ、－ＨＯ、－Ｆであり、
Ｒ７は、－Ｈ、－ＨＯであり、
Ｒ８は、－Ｈ、－ＯＣＨ3、－Ｂｒ、－Ｆ、－Ｃｌであり、
Ｒ９は、－Ｏ－ＣＨ3、－Ｏ－（ＣＨ2）2－ＮＨ－ＣＨ3である）
に基づいている。
最も驚くべきことに、特定のフラバグリンのセットだけが、非常に低いナノモル濃度で、ＫＲＡＳを特異的に阻害することができる。これは、本発明の化合物が、ＲＡＳシグナル伝達が病理学的に関与している疾患の治療において、効果的な治療薬であると認定する。本発明のフラバグリン誘導体は、動物モデルを使用して示されているように、ＫＲＡＳ活性化を効率的に阻害し、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏでの腫瘍細胞の発癌性増殖を防止する。
ロカグラミド以外の本発明による最も強力なＫＲＡＳ阻害剤は、以下の構造
の１つを含むＦＬ３、ＦＬ１０、ＦＬ１３、ＦＬ１５、ＦＬ１９、ＦＬ２３、ＦＬ３２、ＦＬ３７、ＦＬ４０、ＦＬ４２、またはＩＭＤ－２６２６０のいずれか１つである。
本発明のフラバグリン誘導体は、ＫＲＡＳのナノ・クラスタリングを効率的に阻害し、それによってエフェクタータンパク質活性化を防ぐ。これらの効果は、プロヒビチンの減少によって再現され、ＫＲＡＳ活性化の調節におけるプロヒビチンの直接的な役割を示唆している。さらにより具体的には、本発明の化合物は、特定のＫＲＡＳ変異体とＣＲＡＦ－ＲＢＤ、特に少なくとも１つまたは複数のＫＲＡＳ Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１３Ｃ、Ｇ１３Ｄ、Ｇ１３Ｓ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｒ、Ｑ６１Ｋ変異を有する変異したＫＲＡＳ遺伝子との相互作用を阻害する。驚くべきことに、ナノ分子濃度は、本発明のフラバグリン化合物が、変異したＫＲＡＳに対する所望の阻害効果を誘発するのに十分である。ナノ・ビットアッセイおよび反応速度論実験の実施によって明らかになったように、ＫＲＡＳ活性化は、２５ｎＭのＩＣ５０において効果的に阻害される。
別の態様では、本発明は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで細胞内のＫＲＡＳ活性化を阻害するための特定されたフラバグリン誘導体の使用に関する。好ましい実施形態では、本発明の化合物は、ＫＲＡＳを特異的に標的にすることによって細胞集団の増殖を特異的に阻害する方法で使用することができる。本発明の好ましい変形形態では、ＫＲＡＳ４ＡまたはＫＲＡＳ４Ｂは、特異的に阻害されるが、ＨＲＡＳまたはＮＲＡＳナノクラスタリングは阻害されない。方法は、細胞集団と本発明のフラバグリン誘導体とを接触させるステップを含む。好ましくは、細胞集団の増殖の阻害が、細胞集団の細胞生存率の低下として測定される。好ましくは、方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏ方法である。
本発明はまた、ＲＡＳシグナル伝達が病理学的に関与している疾患の予防または治療における使用のための、一般式（Ｉ）
（式中、
Ｒ１は、－ＨＯ、－ＣＯＯ、－Ｃ（ＮＨ）Ｏ、－ＣＯ（ＮＨ）Ｎ－（ＣＨ3）2、－ＣＯ（ＮＨ）（ＮＨ2）であり、
Ｒ２は、－Ｈ、－ＣＯＯ－ＣＨ3、－ＣＯ（ＮＨ）－ＣＨ3、－ＮＯ（ＣＨ3）2であり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、それぞれ独立に、－Ｈ、－ＯＨであり、
Ｒ６は、－Ｈ、－ＨＯ、－Ｆであり、
Ｒ７は、－Ｈ、－ＨＯであり、
Ｒ８は、－Ｈ、－ＯＣＨ3、－Ｂｒ、－Ｆ、－Ｃｌであり、
Ｒ９は、－Ｏ－ＣＨ3、－Ｏ－（ＣＨ2）2－ＮＨ－ＣＨ3である）
を有するフラバグリン誘導体である化合物、および薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤、アジュバントまたは賦形剤を含む、医薬組成物に関する。好ましくは、疾患は、ＫＲＡＳ変異型増殖性障害または遺伝子障害である。
Ｒ１は、－ＨＯ、－ＣＯＯ、－Ｃ（ＮＨ）Ｏ、－ＣＯ（ＮＨ）Ｎ－（ＣＨ3）2、－ＣＯ（ＮＨ）（ＮＨ2）であり、
Ｒ２は、－Ｈ、－ＣＯＯ－ＣＨ3、－ＣＯ（ＮＨ）－ＣＨ3、－ＮＯ（ＣＨ3）2であり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、それぞれ独立に、－Ｈ、－ＯＨであり、
Ｒ６は、－Ｈ、－ＨＯ、－Ｆであり、
Ｒ７は、－Ｈ、－ＨＯであり、
Ｒ８は、－Ｈ、－ＯＣＨ3、－Ｂｒ、－Ｆ、－Ｃｌであり、
Ｒ９は、－Ｏ－ＣＨ3、－Ｏ－（ＣＨ2）2－ＮＨ－ＣＨ3である）
を有するフラバグリン誘導体である化合物、および薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤、アジュバントまたは賦形剤を含む、医薬組成物に関する。好ましくは、疾患は、ＫＲＡＳ変異型増殖性障害または遺伝子障害である。
好ましい実施形態では、医薬組成物は、フラバグリン誘導体を含み、それは以下の化学構造
を有するＦＬ３、ＦＬ１０、ＦＬ１３、ＦＬ１５、ＦＬ１９、ＦＬ２３、ＦＬ３２、ＦＬ３７、ＦＬ４０、ＦＬ４２、またはＩＭＤ－２６２６０である。
好ましい実施形態では、薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤、アジュバントまたは賦形剤は当業者に公知であり、ヒトまたは家畜での使用に許容されている、任意の担体、希釈剤、防腐剤、染料／着色剤、調味料、界面活性剤、分散剤、懸濁化剤、安定剤、等張剤、溶媒、または乳化剤であってよい。
本発明による「医薬組成物」は、本発明の１種または複数の化合物と、生物学的に活性な化合物を哺乳動物、例えばヒトまたは動物に送達するために当技術分野で一般に受け入れられている培地との配合物を意味する。
用語「ｅｘ ｖｉｖｏ」は、本発明の範疇において、ヒトまたは動物の体外で行われる事象を意味する。
本発明が示すとおり、本発明のフラバグリン誘導体を用いた治療は、細胞におけるＫＲＡＳ ＧＴＰ付加を直接阻害し、これは化合物を、ＲＡＳシグナル伝達が病理学的に関与している疾患、特にＫＲＡＳ変異型増殖性障害または遺伝子障害の予防または治療における使用のための生物学的および薬学的に有効な薬剤として適したものにする。このような疾患は、新生物増殖性疾患、癌、ＲＡＳ病または頭蓋顔面症候群のいずれかであってよい。特に、変異したＫＲＡＳまたは他のＲＡＳイソ型が役割を果たす任意の癌は、本発明の化合物の適切な標的であり、好ましくは結腸直腸癌、肺癌、血液癌、ＭＹＨ関連ポリポーシス、膀胱癌、黒色腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、または膵癌などの癌である。ＲＡＳシグナル伝達が病理学的に関与している疾患の好ましい標的は、変異したＫＲＡＳ遺伝子、特にＧ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１３Ｃ、Ｇ１３Ｄ、Ｇ１３Ｓ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｒ、Ｑ６１Ｋ変異を有するようなものである。しかしながら、ＫＲＡＳ阻害に敏感な他のＫＲＡＳ変異体、特にＣＲＡＦ－ＲＢＤまたは他のＲａｓエフェクタータンパク質との相互作用がフラバグリン誘導体によって阻害されるＫＲＡＳ変異体も、本発明によって包含される。
本発明は、以下の実施例によってより詳細に説明される。
以下の実験は、本発明のフラバグリン誘導体のｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏ効果を示す。
以下では、発明者らは、本発明のフラバグリン誘導体を用いた原形質膜関連プロヒビチンの標的化が、ＫＲＡＳのＧＴＰ付加を阻害し、ＧＴＰアーゼ活性の不活性化をもたらすことを示す。
データは、本発明のフラバグリン誘導体がＫＲＡＳナノクラスターの形成を破壊するが、ＨＲＡＳまたはＮＲＡＳナノクラスターを破壊しないことを例示する。したがって、本発明の化合物は、おそらく原形質膜内の脂質のプロヒビチン依存性分離に影響を与えることにより、ＫＲＡＳ阻害に特異的である。
データはまた、癌細胞の増殖が、ＭＴＴおよび軟寒天アッセイを使用することにより、ｉｎ ｖｉｔｒｏで阻害できることを例示する。本発明のフラバグリン誘導体は、ＩＣ５０が低ナノ分子範囲（６～２０ｎＭ）の、ＫＲＡＳ変異を有する、ＨＣＴ－１１６、ＡＳＰＣ－１およびＣａｌｕ－１細胞の増殖を阻止するのに効果的である。
これらの研究は、自発性マウスモデルを使用することにより、ｉｎ ｖｉｖｏ動物モデルに拡張された。ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ－駆動ＮＳＣＬＣマウスモデルを使用した。ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄの発現は、約２か月間のドキシサイクリン処理によって誘導され、それに続いて２，５ｍｇ／ｋｇで本発明のフラバグリン誘導体を用いてマウスの処理を６週間行った。フラバグリン誘導体処理は、肺結節の数の大幅な減少をもたらし、ｉｎ ｖｉｖｏにおけるＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ－由来のＮＳＣＬＣの増殖および維持がうまく阻害されたことを示唆している（データは示さず）。
データは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養モデルならびに自発性マウスモデルの両方において、ナノモル濃度でＫＲＡＳを特異的に阻害する自然な抗腫瘍薬を明らかにする。したがって、本発明の化合物は、ＲＡＳシグナル伝達が病理学的に関与している疾患、特に新生物増殖性疾患、癌、ＲＡＳ病または頭蓋顔面症候群に適している。変異したＫＲＡＳを特徴とする悪性癌疾患は、結腸直腸癌、肺癌、血液癌、ＭＹＨ関連ポリポーシス、膀胱癌、黒色腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、または膵癌である。
材料および方法
細胞
４８２Ｔ１細胞は、Ｔｙｌｅｒ Ｊａｃｋの研究室からの厚意による贈与であり、ＤＭＥＭ（１０％熱不活性化ＦＢＳ）で培養した。Ｃａｌｕ－１細胞は、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈから入手し、ＭｃＣｏｙの５Ａ培地（１０％熱不活性化ＦＢＳ）で培養した。ＨｅＬａ（ＤＳＭＺ）およびＨＣＴ－１１６（Ｕｌｆ Ｒａｐｐからの贈与）は、Ｅｕｒｏｆｉｎ ｇｅｎｏｍｉｃｓによって認証されており、ＤＭＥＭ（１０％熱不活性化ＦＢＳ）で培養した。ＡＳＰＣ－１細胞は、ＤＳＭＺから購入し、ＲＰＭＩ－１６４０（１０％熱不活性化ＦＢＳ）で培養した。ＨｅＬａ細胞は、ロカグラミドまたはフラバグリンを含んだ無血清培地中で４時間飢餓状態にさせ、ＥＧＦ（１００ｎｇ／ｍｌ）で３０分間刺激した。ＫＲＡＳ変異保有細胞は、完全増殖培地中で２４時間Ｒｏｃを用いて処理した。
細胞
４８２Ｔ１細胞は、Ｔｙｌｅｒ Ｊａｃｋの研究室からの厚意による贈与であり、ＤＭＥＭ（１０％熱不活性化ＦＢＳ）で培養した。Ｃａｌｕ－１細胞は、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈから入手し、ＭｃＣｏｙの５Ａ培地（１０％熱不活性化ＦＢＳ）で培養した。ＨｅＬａ（ＤＳＭＺ）およびＨＣＴ－１１６（Ｕｌｆ Ｒａｐｐからの贈与）は、Ｅｕｒｏｆｉｎ ｇｅｎｏｍｉｃｓによって認証されており、ＤＭＥＭ（１０％熱不活性化ＦＢＳ）で培養した。ＡＳＰＣ－１細胞は、ＤＳＭＺから購入し、ＲＰＭＩ－１６４０（１０％熱不活性化ＦＢＳ）で培養した。ＨｅＬａ細胞は、ロカグラミドまたはフラバグリンを含んだ無血清培地中で４時間飢餓状態にさせ、ＥＧＦ（１００ｎｇ／ｍｌ）で３０分間刺激した。ＫＲＡＳ変異保有細胞は、完全増殖培地中で２４時間Ｒｏｃを用いて処理した。
ＤＮＡ／ｓｉＲＮＡトランスフェクション
ＨｅＬａ細胞を、ＰＢＳ中０．０５％トリプシン／０．０２％ＥＤＴＡと一緒に回収し、６ウェルまたは１２ウェル細胞培養プレート内に、完全ＤＭＥＭ中細胞５×１０4個の濃度（６ウェルプレートに２ｍｌおよび１２ウェルプレートに１ｍｌ）で播種した。播種から１日後、ＤＮＡまたはｓｉＲＮＡを種々のトランスフェクション試薬（後述）と混合し、１～２日間ウェルに加えた。培地を無血清ＤＭＥＭと交換し、フラバグリン（１００ｎＭ）と一緒に３７℃で４時間インキュベートした。細胞を飢餓状態にさせた後、細胞をＥＧＦ（１００ｎｇ／ｍｌ）で３０分刺激した。次いで細胞を溶解させ、後述のＲＡＦ－ＲＢＤビーズを用いて活性化させたＲＡＳを細胞から捕捉した。ＨＣＴ－１１６細胞を、ＰＢＳ中０．０５％トリプシン／０．０２％ＥＤＴＡと一緒に回収し、細胞５×１０4個／ｍｌの濃度、６ウェルプレート中２ｍｌで、６ウェル細胞培養皿内に播種した。１日後、ｓｉＲＮＡトランスフェクション試薬をウェルに加え、細胞をさらに２日間培養した。細胞をＰＢＳで洗浄し、活性Ｒａｓプルダウンアッセイに使用した。
ＨｅＬａ細胞を、ＰＢＳ中０．０５％トリプシン／０．０２％ＥＤＴＡと一緒に回収し、６ウェルまたは１２ウェル細胞培養プレート内に、完全ＤＭＥＭ中細胞５×１０4個の濃度（６ウェルプレートに２ｍｌおよび１２ウェルプレートに１ｍｌ）で播種した。播種から１日後、ＤＮＡまたはｓｉＲＮＡを種々のトランスフェクション試薬（後述）と混合し、１～２日間ウェルに加えた。培地を無血清ＤＭＥＭと交換し、フラバグリン（１００ｎＭ）と一緒に３７℃で４時間インキュベートした。細胞を飢餓状態にさせた後、細胞をＥＧＦ（１００ｎｇ／ｍｌ）で３０分刺激した。次いで細胞を溶解させ、後述のＲＡＦ－ＲＢＤビーズを用いて活性化させたＲＡＳを細胞から捕捉した。ＨＣＴ－１１６細胞を、ＰＢＳ中０．０５％トリプシン／０．０２％ＥＤＴＡと一緒に回収し、細胞５×１０4個／ｍｌの濃度、６ウェルプレート中２ｍｌで、６ウェル細胞培養皿内に播種した。１日後、ｓｉＲＮＡトランスフェクション試薬をウェルに加え、細胞をさらに２日間培養した。細胞をＰＢＳで洗浄し、活性Ｒａｓプルダウンアッセイに使用した。
ＤＮＡトランスフェクション試薬
ｓｉＲＮＡトランスフェクション試薬
ＰＨＢ１：５’－ＣＣＣＡＧＡＡＡＵＣＡＣＵＧＵＧＡＡＡ－３，５’－ＵＵＵＣＡＣＡＧＵＧＡＵＵＵＣＵＧＧＧ．ＣＲＡＦ：５’－ＧＧＡＵＧＵＵＧＡＵＧＧＵＡＧＵＡＣＡＴＴ－３’，５’－ＵＧＵＡＣＵＡＣＣＡＵＣＡＡＣＡＵＣＣＡＣ－３’
ＰＨＢ１：５’－ＣＣＣＡＧＡＡＡＵＣＡＣＵＧＵＧＡＡＡ－３，５’－ＵＵＵＣＡＣＡＧＵＧＡＵＵＵＣＵＧＧＧ．ＣＲＡＦ：５’－ＧＧＡＵＧＵＵＧＡＵＧＧＵＡＧＵＡＣＡＴＴ－３’，５’－ＵＧＵＡＣＵＡＣＣＡＵＣＡＡＣＡＵＣＣＡＣ－３’
活性Ｒａｓプルダウンアッセイ
刺激または処理後、活性Ｒａｓプルダウンアッセイ緩衝液（２５ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ ｐＨ７．２、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＭｇＣｌ2、１％ＮＰ－４０、５％グリセリンとプロテアーゼ阻害剤カクテル）を各ウェルに加え、氷上で３０分間インキュベートした。細胞を３秒間超音波処理し、細胞溶解物を４℃、１３０００ｒｐｍで１５分間遠心分離した。タンパク質濃度を６６０ｎｍタンパク質アッセイ試薬（Ｔｈｅｒｍｏｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）によって調整し、全細胞溶解物対照のために溶解物の２０％を捕集した。１０μｌのＣＲＡＦ－ＲＢＤタンパク質コートアガロースビーズを残りの溶解物に加え、４℃で６０分間回転させた。インキュベーション後、ビーズを結合緩衝液で２回洗浄し、５０μｌのＳＤＳ－ＰＡＧＥ試料緩衝液（１２５ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣＩ ｐＨ６．８、４％ＳＤＳ、１０％グリセリン、ＢＰＢ）を加えた。
刺激または処理後、活性Ｒａｓプルダウンアッセイ緩衝液（２５ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ ｐＨ７．２、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＭｇＣｌ2、１％ＮＰ－４０、５％グリセリンとプロテアーゼ阻害剤カクテル）を各ウェルに加え、氷上で３０分間インキュベートした。細胞を３秒間超音波処理し、細胞溶解物を４℃、１３０００ｒｐｍで１５分間遠心分離した。タンパク質濃度を６６０ｎｍタンパク質アッセイ試薬（Ｔｈｅｒｍｏｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）によって調整し、全細胞溶解物対照のために溶解物の２０％を捕集した。１０μｌのＣＲＡＦ－ＲＢＤタンパク質コートアガロースビーズを残りの溶解物に加え、４℃で６０分間回転させた。インキュベーション後、ビーズを結合緩衝液で２回洗浄し、５０μｌのＳＤＳ－ＰＡＧＥ試料緩衝液（１２５ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣＩ ｐＨ６．８、４％ＳＤＳ、１０％グリセリン、ＢＰＢ）を加えた。
ＳＤＳ－ＰＡＧＥおよびウェスタンブロット法
試料を１４％ＳＤＳ－ＰＡＧＥに載せ、続いてウェスタンブロット法を行った。移した後、膜を、室温で１時間、３％ＢＳＡ／ＴＢＳＴ（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣＩ、ｐＨ７．５、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ－２０）でブロックした。膜を、１％ＢＳＡ／ＴＢＳＴで希釈した一次抗体とインキュベートし、４℃で終夜インキュベートした。終夜のインキュベーション後、膜をＴＢＳＴで洗浄し（５分×５）、ＴＢＳＴ中でＨＲＰ標識二次抗体と室温で１時間インキュベートした。二次抗体処理後、膜を洗浄し、化学ルミネセンス基質（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）およびＣｈｅｍｉｄｏｃｔｏｕｃｈ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）でシグナルを可視化した。
試料を１４％ＳＤＳ－ＰＡＧＥに載せ、続いてウェスタンブロット法を行った。移した後、膜を、室温で１時間、３％ＢＳＡ／ＴＢＳＴ（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣＩ、ｐＨ７．５、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ－２０）でブロックした。膜を、１％ＢＳＡ／ＴＢＳＴで希釈した一次抗体とインキュベートし、４℃で終夜インキュベートした。終夜のインキュベーション後、膜をＴＢＳＴで洗浄し（５分×５）、ＴＢＳＴ中でＨＲＰ標識二次抗体と室温で１時間インキュベートした。二次抗体処理後、膜を洗浄し、化学ルミネセンス基質（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）およびＣｈｅｍｉｄｏｃｔｏｕｃｈ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）でシグナルを可視化した。
顕微鏡分析
トランスフェクションの１日後、細胞を回収し、カバースリップ（１８ｍｍ×１８ｍｍ）に播種し、２４時間培養した。培地を無血清ＤＭＥＭに交換し、化合物（１００ｎＭ）と一緒に３７℃で４時間インキュベートした。飢餓状態後、細胞をＥＧＦ（１００ｎｇ／ｍｌ）で３０分間刺激した。スライドを、室温で１５分間Ｒｉｔｉ ＨｉｓｔｏＦｉｘで固定し、続いてＰＢＳ中０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ－１００を用いた透過化処理を３分間行い、スライドを０．５％ＢＳＡ／ＰＢＳで室温で１時間ブロックした。カバースリップを、０．５％ＢＳＡ／ＰＢＳ中の一次抗体（１／５００、抗ＦＬＡＧ Ｍ２抗体、Ｓｉｇｍａ）と一緒に室温で２時間インキュベートした。続いてこれを、０．５％ＢＳＡ／ＰＢＳ中のＨｏｅｃｈｓｔ（５μｇ／ｍｌ）を含むＣｙ３標識抗マウスＩｇＧと一緒に室温で１時間インキュベートした。カバースリップをＰＢＳで洗浄し（５回）、Ｍｏｗｉｏｌ／ＤＡＢＣＯ溶液でガラススライドに装着した。
トランスフェクションの１日後、細胞を回収し、カバースリップ（１８ｍｍ×１８ｍｍ）に播種し、２４時間培養した。培地を無血清ＤＭＥＭに交換し、化合物（１００ｎＭ）と一緒に３７℃で４時間インキュベートした。飢餓状態後、細胞をＥＧＦ（１００ｎｇ／ｍｌ）で３０分間刺激した。スライドを、室温で１５分間Ｒｉｔｉ ＨｉｓｔｏＦｉｘで固定し、続いてＰＢＳ中０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ－１００を用いた透過化処理を３分間行い、スライドを０．５％ＢＳＡ／ＰＢＳで室温で１時間ブロックした。カバースリップを、０．５％ＢＳＡ／ＰＢＳ中の一次抗体（１／５００、抗ＦＬＡＧ Ｍ２抗体、Ｓｉｇｍａ）と一緒に室温で２時間インキュベートした。続いてこれを、０．５％ＢＳＡ／ＰＢＳ中のＨｏｅｃｈｓｔ（５μｇ／ｍｌ）を含むＣｙ３標識抗マウスＩｇＧと一緒に室温で１時間インキュベートした。カバースリップをＰＢＳで洗浄し（５回）、Ｍｏｗｉｏｌ／ＤＡＢＣＯ溶液でガラススライドに装着した。
ナノ・ビットアッセイ
Ｎ末端ＬｇＢｉｔおよびＣ末端ｓｍＢｉｔ構築物は、Ｐｒｏｍｅｇａから購入し、ＫＲＡＳ（全長）は、Ｘｈｏ ＩおよびＢｇｌ ＩＩでＬｇＢｉｔにクローン化し、ＣＲＡＦ－ＲＢＤ（１～１４９）は、ＥｃｏＲＩおよびＢｇｌ ＩＩでＳｍＢｉｔにクローン化した。構築物は、ＨｅＬａ細胞にトランスフェクトし、トランスフェクションの１日後に細胞を回収し、９６ウェル白色プレートに播種した。細胞を９６ウェルプレートで１日間培養し、次いで培地を、化合物を含む無血清ＤＭＥＭと０～４時間交換した。前処理後、ＫＲＡＳ ＷＴ－トランスフェクト細胞をＥＧＦで３０分間刺激した。Ｎａｎｏ Ｇｌｏアッセイを、製造業者の使用説明書に従って、ＥＧＦ刺激ＫＲＡＳ ＷＴトランスフェクト細胞またはＫＲＡＳ Ｇ１２Ｖ－トランスフェクト細胞について行った。Ｔｅｃａｎ ｉｎｆｉｎｉｔｅ（Ｔｅｃａｎ）を使用してルミネセンスを測定した。
Ｎ末端ＬｇＢｉｔおよびＣ末端ｓｍＢｉｔ構築物は、Ｐｒｏｍｅｇａから購入し、ＫＲＡＳ（全長）は、Ｘｈｏ ＩおよびＢｇｌ ＩＩでＬｇＢｉｔにクローン化し、ＣＲＡＦ－ＲＢＤ（１～１４９）は、ＥｃｏＲＩおよびＢｇｌ ＩＩでＳｍＢｉｔにクローン化した。構築物は、ＨｅＬａ細胞にトランスフェクトし、トランスフェクションの１日後に細胞を回収し、９６ウェル白色プレートに播種した。細胞を９６ウェルプレートで１日間培養し、次いで培地を、化合物を含む無血清ＤＭＥＭと０～４時間交換した。前処理後、ＫＲＡＳ ＷＴ－トランスフェクト細胞をＥＧＦで３０分間刺激した。Ｎａｎｏ Ｇｌｏアッセイを、製造業者の使用説明書に従って、ＥＧＦ刺激ＫＲＡＳ ＷＴトランスフェクト細胞またはＫＲＡＳ Ｇ１２Ｖ－トランスフェクト細胞について行った。Ｔｅｃａｎ ｉｎｆｉｎｉｔｅ（Ｔｅｃａｎ）を使用してルミネセンスを測定した。
ＭＴＴアッセイ
ＨＣＴ－１１６、Ｃａｌｕ－１およびＡＳＰＣ－１細胞を、細胞５×１０4個／ｍｌの濃度、９６ウェル細胞培養プレート中５０μｌで、９６ウェルプレートに播種し、１日間培養した。５０μｌの化合物含有増殖培地をウェルに加え、プレートを４８時間培養した。１０μｌのＭＴＴ溶液をウェルに加え、２～３時間インキュベートした。ＭＴＴとのインキュベーション後、可溶化緩衝液を加え、終夜インキュベートした。プレートリーダー（ＴＥＣＡＮ）を用いて、Ｏ．Ｄ．５７０ｎｍでＭＴＴを測定した。
ＨＣＴ－１１６、Ｃａｌｕ－１およびＡＳＰＣ－１細胞を、細胞５×１０4個／ｍｌの濃度、９６ウェル細胞培養プレート中５０μｌで、９６ウェルプレートに播種し、１日間培養した。５０μｌの化合物含有増殖培地をウェルに加え、プレートを４８時間培養した。１０μｌのＭＴＴ溶液をウェルに加え、２～３時間インキュベートした。ＭＴＴとのインキュベーション後、可溶化緩衝液を加え、終夜インキュベートした。プレートリーダー（ＴＥＣＡＮ）を用いて、Ｏ．Ｄ．５７０ｎｍでＭＴＴを測定した。
軟寒天コロニー形成アッセイ
１．５％アガロース溶液を、２Ｘ増殖培地（１００ｎＭロカグラミドを含むまたは含まない２０％ＦＢＳ）と混合し、６ウェルプレート中に１．５ｍｌの０．７５％アガロース／１×増殖培地と入れ、少なくとも１０分間室温でインキュベートしてアガロースを凝固させた。ＨＣＴ－１１６およびＡＳＰＣ－１細胞を、２Ｘ増殖培地（１００ｎＭロカグラミドを含むまたは含まない２０％ＦＢＳ）で希釈し、０．９％アガロース溶液と混合した。１×増殖培地中の０．４５％アガロース中の１．５ｍｌの細胞懸濁液を、下部のアガロース層に加えた。軟寒天中に播種した細胞は、２～４週間培養し、続いてクリスタルバイオレット溶液で染色した。画像をＣｈｅｍｉＤｏｃ Ｔｏｕｃｈ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）装置で撮影し、コロニー数をｉｍａｇｅ Ｊソフトウェアによってカウントした。
１．５％アガロース溶液を、２Ｘ増殖培地（１００ｎＭロカグラミドを含むまたは含まない２０％ＦＢＳ）と混合し、６ウェルプレート中に１．５ｍｌの０．７５％アガロース／１×増殖培地と入れ、少なくとも１０分間室温でインキュベートしてアガロースを凝固させた。ＨＣＴ－１１６およびＡＳＰＣ－１細胞を、２Ｘ増殖培地（１００ｎＭロカグラミドを含むまたは含まない２０％ＦＢＳ）で希釈し、０．９％アガロース溶液と混合した。１×増殖培地中の０．４５％アガロース中の１．５ｍｌの細胞懸濁液を、下部のアガロース層に加えた。軟寒天中に播種した細胞は、２～４週間培養し、続いてクリスタルバイオレット溶液で染色した。画像をＣｈｅｍｉＤｏｃ Ｔｏｕｃｈ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）装置で撮影し、コロニー数をｉｍａｇｅ Ｊソフトウェアによってカウントした。
自発性マウスモデル
自発性モデルはＤｒ．Ｂｏｃｋａｍｐによって作製され、厚意により贈与された。Ｄｒ．Ｊｅｆｆｒｅｙ Ａ．Ｗｈｉｔｓｔｅｔｔによって作製されたＳＰ－Ｃ／ｒｔＴＡ（ＳＰ－Ｃ）マウスは、Ｔｅｔ－ｏｐ－Ｋ－Ｒａｓ４ｂG12D（Ｋ－ＲａｓG12D）マウス16（Ｆｉｓｈｅｒ、Ｗｅｌｌｅｎら ２００１）と交配させた。導入遺伝子活性化のために、マウスにＤＯＸを含有する餌を与えた。ＤＯＸ食餌を調製するために、３ｇのＤＯＸを３ｌ ｄｄＨ2Ｏに溶解させた。次いで、９００ｍｌのＤＯＸ溶液（６００ｍｇ／ｍｌ）を２ｋｇの餌ペレットに加えた。浸漬させたペレットを３７℃で２日間インキュベートし、給餌には乾燥食餌を使用した。腫瘍の成長のために、治療の前にマウスにｄｏｘ食餌を２か月間給餌し、ロカグラミド（２．５ｍｇ／ｋｇ）を６週間腹腔内に投与した。
自発性モデルはＤｒ．Ｂｏｃｋａｍｐによって作製され、厚意により贈与された。Ｄｒ．Ｊｅｆｆｒｅｙ Ａ．Ｗｈｉｔｓｔｅｔｔによって作製されたＳＰ－Ｃ／ｒｔＴＡ（ＳＰ－Ｃ）マウスは、Ｔｅｔ－ｏｐ－Ｋ－Ｒａｓ４ｂG12D（Ｋ－ＲａｓG12D）マウス16（Ｆｉｓｈｅｒ、Ｗｅｌｌｅｎら ２００１）と交配させた。導入遺伝子活性化のために、マウスにＤＯＸを含有する餌を与えた。ＤＯＸ食餌を調製するために、３ｇのＤＯＸを３ｌ ｄｄＨ2Ｏに溶解させた。次いで、９００ｍｌのＤＯＸ溶液（６００ｍｇ／ｍｌ）を２ｋｇの餌ペレットに加えた。浸漬させたペレットを３７℃で２日間インキュベートし、給餌には乾燥食餌を使用した。腫瘍の成長のために、治療の前にマウスにｄｏｘ食餌を２か月間給餌し、ロカグラミド（２．５ｍｇ／ｋｇ）を６週間腹腔内に投与した。
（式中、
Ｒ１は、－ＯＨ、－Ｏ－ＣＨ＝Ｏ、－ＮＨ－ＣＨ＝Ｏ、－ＮＨ－（Ｃ＝Ｏ）－Ｎ（ＣＨ 3 ） 2 、－ＮＨ－（Ｃ＝Ｏ）－ＮＨ 2 であり、
Ｒ２は、－Ｈ、－ＣＯＯ－ＣＨ3、－ＣＯ（ＮＨ）－ＣＨ3、－ＮＯ（ＣＨ3）2であり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、それぞれ独立に、－Ｈ、－ＯＨであり、
Ｒ６は、－Ｈ、－ＨＯ、－Ｆであり、
Ｒ７は、－Ｈ、－ＨＯであり、
Ｒ８は、－Ｈ、－ＯＣＨ3、－Ｂｒ、－Ｆ、－Ｃｌであり、
Ｒ９は、－Ｏ－ＣＨ3、－Ｏ－（ＣＨ2）2－ＮＨ－ＣＨ3である）
に基づいている。
Ｒ１は、－ＯＨ、－Ｏ－ＣＨ＝Ｏ、－ＮＨ－ＣＨ＝Ｏ、－ＮＨ－（Ｃ＝Ｏ）－Ｎ（ＣＨ 3 ） 2 、－ＮＨ－（Ｃ＝Ｏ）－ＮＨ 2 であり、
Ｒ２は、－Ｈ、－ＣＯＯ－ＣＨ3、－ＣＯ（ＮＨ）－ＣＨ3、－ＮＯ（ＣＨ3）2であり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、それぞれ独立に、－Ｈ、－ＯＨであり、
Ｒ６は、－Ｈ、－ＨＯ、－Ｆであり、
Ｒ７は、－Ｈ、－ＨＯであり、
Ｒ８は、－Ｈ、－ＯＣＨ3、－Ｂｒ、－Ｆ、－Ｃｌであり、
Ｒ９は、－Ｏ－ＣＨ3、－Ｏ－（ＣＨ2）2－ＮＨ－ＣＨ3である）
に基づいている。
（式中、
Ｒ１は、－ＯＨ、－Ｏ－ＣＨ＝Ｏ、－ＮＨ－ＣＨ＝Ｏ、－ＮＨ－（Ｃ＝Ｏ）－Ｎ（ＣＨ 3 ） 2 、－ＮＨ－（Ｃ＝Ｏ）－ＮＨ 2 であり、
Ｒ２は、－Ｈ、－ＣＯＯ－ＣＨ3、－ＣＯ（ＮＨ）－ＣＨ3、－ＮＯ（ＣＨ3）2であり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、それぞれ独立に、－Ｈ、－ＯＨであり、
Ｒ６は、－Ｈ、－ＨＯ、－Ｆであり、
Ｒ７は、－Ｈ、－ＨＯであり、
Ｒ８は、－Ｈ、－ＯＣＨ3、－Ｂｒ、－Ｆ、－Ｃｌであり、
Ｒ９は、－Ｏ－ＣＨ3、－Ｏ－（ＣＨ2）2－ＮＨ－ＣＨ3である）
を有するフラバグリン誘導体である化合物、および薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤、アジュバントまたは賦形剤を含む、医薬組成物に関する。好ましくは、疾患は、ＫＲＡＳ変異型増殖性障害または遺伝子障害である。
Ｒ１は、－ＯＨ、－Ｏ－ＣＨ＝Ｏ、－ＮＨ－ＣＨ＝Ｏ、－ＮＨ－（Ｃ＝Ｏ）－Ｎ（ＣＨ 3 ） 2 、－ＮＨ－（Ｃ＝Ｏ）－ＮＨ 2 であり、
Ｒ２は、－Ｈ、－ＣＯＯ－ＣＨ3、－ＣＯ（ＮＨ）－ＣＨ3、－ＮＯ（ＣＨ3）2であり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、それぞれ独立に、－Ｈ、－ＯＨであり、
Ｒ６は、－Ｈ、－ＨＯ、－Ｆであり、
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Ｒ８は、－Ｈ、－ＯＣＨ3、－Ｂｒ、－Ｆ、－Ｃｌであり、
Ｒ９は、－Ｏ－ＣＨ3、－Ｏ－（ＣＨ2）2－ＮＨ－ＣＨ3である）
を有するフラバグリン誘導体である化合物、および薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤、アジュバントまたは賦形剤を含む、医薬組成物に関する。好ましくは、疾患は、ＫＲＡＳ変異型増殖性障害または遺伝子障害である。
Claims (14)
- ＫＲＡＳ変異型増殖性障害または遺伝子障害の予防または治療における使用のための、一般式（Ｉ）
Ｒ１は、－ＨＯ、－ＣＯＯ、－Ｃ（ＮＨ）Ｏ、－ＣＯ（ＮＨ）Ｎ－（ＣＨ3）2、－ＣＯ（ＮＨ）（ＮＨ2）であり、
Ｒ２は、－Ｈ、－ＣＯＯ－ＣＨ3、－ＣＯ（ＮＨ）－ＣＨ3、－ＮＯ（ＣＨ3）2であり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、それぞれ独立に、－Ｈ、－ＯＨであり、
Ｒ６は、－Ｈ、－ＨＯ、－Ｆであり、
Ｒ７は、－Ｈ、－ＨＯであり、
Ｒ８は、－Ｈ、－ＯＣＨ3、－Ｂｒ、－Ｆ、－Ｃｌであり、
Ｒ９は、－Ｏ－ＣＨ3、－Ｏ－（ＣＨ2）2－ＮＨ－ＣＨ3である）
を有するフラバグリン誘導体である、ＫＲＡＳ腫瘍遺伝子の活性化の阻害剤。 - フラバグリン誘導体が、以下の構造：
- ＲＡＳシグナル伝達に、変異したＫＲＡＳ遺伝子が関与する、請求項１または請求項２に記載のＫＲＡＳ腫瘍遺伝子の活性化の阻害剤。
- ＫＲＡＳ遺伝子が、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１３Ｃ、Ｇ１３Ｄ、Ｇ１３Ｓ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｒ、および／またはＱ６１Ｋ変異を含有する、請求項３に記載のＫＲＡＳ腫瘍遺伝子の活性化の阻害剤。
- ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで細胞内のＫＲＡＳ活性化を阻害するための、請求項１から４のいずれか一項に記載の構造のいずれか１つを含む化合物の使用。
- ＫＲＡＳを標的にすることによって細胞集団の増殖を特異的に阻害する方法であって、細胞集団と請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物とを接触させるステップを含む、方法。
- 細胞集団の増殖の阻害が、細胞集団の細胞生存率の低下として測定される、請求項６に記載の方法。
- ＲＡＳシグナル伝達が病理学的に関与している疾患の予防または治療における使用のための、一般式（Ｉ）
Ｒ１は、－ＨＯ、－ＣＯＯ、－Ｃ（ＮＨ）Ｏ、－ＣＯ（ＮＨ）Ｎ－（ＣＨ3）2、－ＣＯ（ＮＨ）（ＮＨ2）であり、
Ｒ２は、－Ｈ、－ＣＯＯ－ＣＨ3、－ＣＯ（ＮＨ）－ＣＨ3、－ＮＯ（ＣＨ3）2であり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、それぞれ独立に、－Ｈ、－ＯＨであり、
Ｒ６は、－Ｈ、－ＨＯ、－Ｆであり、
Ｒ７は、－Ｈ、－ＨＯであり、
Ｒ８は、－Ｈ、－ＯＣＨ3、－Ｂｒ、－Ｆ、－Ｃｌであり、
Ｒ９は、－Ｏ－ＣＨ3、－Ｏ－（ＣＨ2）2－ＮＨ－ＣＨ3である）
を有するフラバグリン誘導体である化合物、および薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤、アジュバントまたは賦形剤を含む、医薬組成物。 - 疾患が、ＫＲＡＳ変異型増殖性障害または遺伝子障害である、請求項８に記載の医薬組成物。
- フラバグリン誘導体が、以下の構造
- 疾患が、新生物増殖性疾患、癌、ＲＡＳ病または頭蓋顔面症候群である、請求項８に記載の医薬組成物。
- 癌が、結腸直腸癌、肺癌、血液癌、ＭＹＨ関連ポリポーシス、膀胱癌、黒色腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、または膵癌である、請求項１１に記載の医薬組成物。
- ＲＡＳシグナル伝達に、変異したＫＲＡＳ遺伝子が関与する、請求項８に記載の医薬組成物。
- 変異したＫＲＡＳ遺伝子が、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１３Ｃ、Ｇ１３Ｄ、Ｇ１３Ｓ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｒ、および／またはＱ６１Ｋ変異を含有する、請求項１３に記載の医薬組成物。
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Citations (4)
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|---|---|---|---|---|
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| JP2007538031A (ja) * | 2004-05-18 | 2007-12-27 | バイエル・ヘルスケア・アクチェンゲゼルシャフト | 新規なシクロペンタ［ｂ］ベンゾフラン誘導体およびその使用 |
| JP2012509923A (ja) * | 2008-11-25 | 2012-04-26 | ユニヴェルシテ・ドゥ・ストラスブール | 心臓保護剤及び抗腫瘍剤としてのロカグラオール誘導体 |
| WO2012066002A1 (en) * | 2010-11-16 | 2012-05-24 | Universite De Strasbourg | Flavagline derivatives as neuroprotective agents |
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| ONCOGENE, vol. Vol.36, pp.4778-4789, JPN6023000641, 2017, ISSN: 0004966279 * |
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