JP2022511323A - 抗ヒト心筋型トロポニンi組換え抗体 - Google Patents
抗ヒト心筋型トロポニンi組換え抗体 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2022511323A JP2022511323A JP2021515092A JP2021515092A JP2022511323A JP 2022511323 A JP2022511323 A JP 2022511323A JP 2021515092 A JP2021515092 A JP 2021515092A JP 2021515092 A JP2021515092 A JP 2021515092A JP 2022511323 A JP2022511323 A JP 2022511323A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- complementarity determining
- determining regions
- regions cdr
- cdr
- antigen
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 102000013394 Troponin I Human genes 0.000 title claims description 54
- 108010065729 Troponin I Proteins 0.000 title claims description 54
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 title claims description 44
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 claims abstract description 118
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 59
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 claims abstract description 59
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 43
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 43
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 43
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 39
- 238000009739 binding Methods 0.000 claims abstract description 35
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 16
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 4
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 33
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 23
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 23
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 17
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 17
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 17
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 14
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 14
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims description 12
- 208000004476 Acute Coronary Syndrome Diseases 0.000 claims description 10
- 206010000891 acute myocardial infarction Diseases 0.000 claims description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 10
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 7
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 7
- 206010002388 Angina unstable Diseases 0.000 claims description 6
- 241000272517 Anseriformes Species 0.000 claims description 6
- 208000006193 Pulmonary infarction Diseases 0.000 claims description 6
- 208000007814 Unstable Angina Diseases 0.000 claims description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 6
- 201000004332 intermediate coronary syndrome Diseases 0.000 claims description 6
- 208000037891 myocardial injury Diseases 0.000 claims description 6
- 230000007575 pulmonary infarction Effects 0.000 claims description 6
- 229910052727 yttrium Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 241000700159 Rattus Species 0.000 claims description 5
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 4
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 claims description 3
- 241000282994 Cervidae Species 0.000 claims description 3
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 claims description 3
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 claims description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 claims description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 claims description 3
- 241001494479 Pecora Species 0.000 claims description 3
- 241000288906 Primates Species 0.000 claims description 3
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 claims description 3
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 claims description 3
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 claims description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 3
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 3
- 241000283707 Capra Species 0.000 claims description 2
- 241000282832 Camelidae Species 0.000 claims 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 claims 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 claims 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 claims 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims 1
- 241000282339 Mustela Species 0.000 claims 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 claims 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 claims 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims 1
- 101100537532 Rattus norvegicus Tnni3 gene Proteins 0.000 abstract description 5
- 238000010586 diagram Methods 0.000 abstract 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 17
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 11
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 11
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 11
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 11
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 10
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 8
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 7
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 6
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 6
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 6
- -1 5-carboxyrhodamine Chemical compound 0.000 description 4
- DRBBFCLWYRJSJZ-UHFFFAOYSA-N N-phosphocreatine Chemical compound OC(=O)CN(C)C(=N)NP(O)(O)=O DRBBFCLWYRJSJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 230000036541 health Effects 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- QTWJRLJHJPIABL-UHFFFAOYSA-N 2-methylphenol;3-methylphenol;4-methylphenol Chemical compound CC1=CC=C(O)C=C1.CC1=CC=CC(O)=C1.CC1=CC=CC=C1O QTWJRLJHJPIABL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 3
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 3
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 3
- 238000012197 amplification kit Methods 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 3
- 229930003836 cresol Natural products 0.000 description 3
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ABZLKHKQJHEPAX-UHFFFAOYSA-N tetramethylrhodamine Chemical compound C=12C=CC(N(C)C)=CC2=[O+]C2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C([O-])=O ABZLKHKQJHEPAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- VGIRNWJSIRVFRT-UHFFFAOYSA-N 2',7'-difluorofluorescein Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(F)C(=O)C=C2OC2=CC(O)=C(F)C=C21 VGIRNWJSIRVFRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 4-aminobenzoic acid Chemical compound NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthine Chemical compound O=C1NC(=O)NC2=C1NC=N2 LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 241000272814 Anser sp. Species 0.000 description 2
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 229910052693 Europium Inorganic materials 0.000 description 2
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 2
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- 241000772415 Neovison vison Species 0.000 description 2
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 2
- 241000009328 Perro Species 0.000 description 2
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 2
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- OGPBJKLSAFTDLK-UHFFFAOYSA-N europium atom Chemical compound [Eu] OGPBJKLSAFTDLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 2
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 2
- 230000003680 myocardial damage Effects 0.000 description 2
- 229950007002 phosphocreatine Drugs 0.000 description 2
- XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-N phthalic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1C(O)=O XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 229910052761 rare earth metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 238000013517 stratification Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 2
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- COCMHKNAGZHBDZ-UHFFFAOYSA-N 4-carboxy-3-[3-(dimethylamino)-6-dimethylazaniumylidenexanthen-9-yl]benzoate Chemical compound C=12C=CC(=[N+](C)C)C=C2OC2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC(C([O-])=O)=CC=C1C(O)=O COCMHKNAGZHBDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NJYVEMPWNAYQQN-UHFFFAOYSA-N 5-carboxyfluorescein Chemical compound C12=CC=C(O)C=C2OC2=CC(O)=CC=C2C21OC(=O)C1=CC(C(=O)O)=CC=C21 NJYVEMPWNAYQQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IDLISIVVYLGCKO-UHFFFAOYSA-N 6-carboxy-4',5'-dichloro-2',7'-dimethoxyfluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=C(C(O)=O)C=C2C21C1=CC(OC)=C(O)C(Cl)=C1OC1=C2C=C(OC)C(O)=C1Cl IDLISIVVYLGCKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BZTDTCNHAFUJOG-UHFFFAOYSA-N 6-carboxyfluorescein Chemical compound C12=CC=C(O)C=C2OC2=CC(O)=CC=C2C11OC(=O)C2=CC=C(C(=O)O)C=C21 BZTDTCNHAFUJOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004625 Aspartate Aminotransferases Human genes 0.000 description 1
- 108010003415 Aspartate Aminotransferases Proteins 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- AWZJFZMWSUBJAJ-UHFFFAOYSA-N OG-514 dye Chemical compound OC(=O)CSC1=C(F)C(F)=C(C(O)=O)C(C2=C3C=C(F)C(=O)C=C3OC3=CC(O)=C(F)C=C32)=C1F AWZJFZMWSUBJAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 108010053210 Phycocyanin Proteins 0.000 description 1
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 238000010802 RNA extraction kit Methods 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- KKEYFWRCBNTPAC-UHFFFAOYSA-N Terephthalic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(C(O)=O)C=C1 KKEYFWRCBNTPAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N Thiamine Natural products CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GYDJEQRTZSCIOI-UHFFFAOYSA-N Tranexamic acid Chemical compound NCC1CCC(C(O)=O)CC1 GYDJEQRTZSCIOI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004903 Troponin Human genes 0.000 description 1
- 108090001027 Troponin Proteins 0.000 description 1
- 244000154870 Viola adunca Species 0.000 description 1
- 235000005811 Viola adunca Nutrition 0.000 description 1
- 235000013487 Viola odorata Nutrition 0.000 description 1
- 235000002254 Viola papilionacea Nutrition 0.000 description 1
- 244000172533 Viola sororia Species 0.000 description 1
- FTFBNBMTRFIFLZ-UHFFFAOYSA-N [Eu].NC1=CC=NC(C=2N=CC=CC=2)=C1N.NC1=CC=NC(C=2N=CC=CC=2)=C1N.NC1=CC=NC(C=2N=CC=CC=2)=C1N Chemical compound [Eu].NC1=CC=NC(C=2N=CC=CC=2)=C1N.NC1=CC=NC(C=2N=CC=CC=2)=C1N.NC1=CC=NC(C=2N=CC=CC=2)=C1N FTFBNBMTRFIFLZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000007259 addition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 150000005022 aminoacridines Chemical class 0.000 description 1
- 229960004050 aminobenzoic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000002869 basic local alignment search tool Methods 0.000 description 1
- 239000003150 biochemical marker Substances 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000001045 blue dye Substances 0.000 description 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- CZPLANDPABRVHX-UHFFFAOYSA-N cascade blue Chemical compound C=1C2=CC=CC=C2C(NCC)=CC=1C(C=1C=CC(=CC=1)N(CC)CC)=C1C=CC(=[N+](CC)CC)C=C1 CZPLANDPABRVHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000008828 contractile function Effects 0.000 description 1
- 239000002872 contrast media Substances 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 150000004985 diamines Chemical class 0.000 description 1
- 230000003205 diastolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002961 echo contrast media Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000006862 enzymatic digestion Effects 0.000 description 1
- IINNWAYUJNWZRM-UHFFFAOYSA-L erythrosin B Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(I)C(=O)C(I)=C2OC2=C(I)C([O-])=C(I)C=C21 IINNWAYUJNWZRM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- VYXSBFYARXAAKO-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-[3-(ethylamino)-6-ethylimino-2,7-dimethylxanthen-9-yl]benzoate;hydron;chloride Chemical compound [Cl-].C1=2C=C(C)C(NCC)=CC=2OC2=CC(=[NH+]CC)C(C)=CC2=C1C1=CC=CC=C1C(=O)OCC VYXSBFYARXAAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000037433 frameshift Effects 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 238000012215 gene cloning Methods 0.000 description 1
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 1
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Substances C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 1
- QQVIHTHCMHWDBS-UHFFFAOYSA-N isophthalic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC(C(O)=O)=C1 QQVIHTHCMHWDBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- VYNDHICBIRRPFP-UHFFFAOYSA-N pacific blue Chemical compound FC1=C(O)C(F)=C2OC(=O)C(C(=O)O)=CC2=C1 VYNDHICBIRRPFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 230000005298 paramagnetic effect Effects 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 239000003504 photosensitizing agent Substances 0.000 description 1
- IEQIEDJGQAUEQZ-UHFFFAOYSA-N phthalocyanine Chemical compound N1C(N=C2C3=CC=CC=C3C(N=C3C4=CC=CC=C4C(=N4)N3)=N2)=C(C=CC=C2)C2=C1N=C1C2=CC=CC=C2C4=N1 IEQIEDJGQAUEQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 230000004853 protein function Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000002096 quantum dot Substances 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 150000002910 rare earth metals Chemical class 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N texas red Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC(S(Cl)(=O)=O)=CC=C1C(C1=CC=2CCCN3CCCC(C=23)=C1O1)=C2C1=C(CCC1)C3=[N+]1CCCC3=C2 MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N thiamine Chemical compound CC1=C(CCO)SCN1CC1=CN=C(C)N=C1N KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 description 1
- 235000019157 thiamine Nutrition 0.000 description 1
- 239000011721 thiamine Substances 0.000 description 1
- ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M thionine Chemical compound [Cl-].C1=CC(N)=CC2=[S+]C3=CC(N)=CC=C3N=C21 ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6887—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids from muscle, cartilage or connective tissue
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6854—Immunoglobulins
- G01N33/6857—Antibody fragments
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/55—Fab or Fab'
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/569—Single domain, e.g. dAb, sdAb, VHH, VNAR or nanobody®
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
- G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
- G01N2333/4701—Details
- G01N2333/4712—Muscle proteins, e.g. myosin, actin, protein
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/12—Pulmonary diseases
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/32—Cardiovascular disorders
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/32—Cardiovascular disorders
- G01N2800/324—Coronary artery diseases, e.g. angina pectoris, myocardial infarction
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/32—Cardiovascular disorders
- G01N2800/325—Heart failure or cardiac arrest, e.g. cardiomyopathy, congestive heart failure
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
この開示は、2018年10月10日に中国特許庁に出願された「抗ヒト心筋型トロポニンI組換え抗体」と題された出願第201811179512.3号の優先権を主張し、そのすべての内容は参照により本明細書に組み込まれる。
G-F-N-X1-K-X2-Y-X3-M-Hの配列を有する相補性決定領域CDR-VH1、ここで
X1はLまたはI、X2はDまたはE、X3はFまたはYである;
R-I-X1-P-E-D-X2-E-T-X3-Y-A-P-Eの配列を有する相補性決定領域CDR-VH2、ここで
X1はEまたはD、X2はAまたはG、X3はRまたはKである;
Y-Y-X1-S-Y-X2-P-F-V-Yの配列を有する相補性決定領域CDR-VH3、ここで
X1はTまたはSであり、X2はI、L、またはVである;
Q-S-X1-X2-Y-S-N-X3-H-T-Yの配列を有する相補性決定領域CDR-VL1、ここで
X1はIまたはL、X2はIまたはL、X3はRまたはKである;
Q-X1-S-X2-R-F-Sの配列を有する相補性決定領域CDR-VL2、ここで
X1はI、L、またはVであり、X2はNまたはQである;
S-X1-S-T-H-X2-P-X3-Tの配列を有する相補性決定領域CDR-VL3、ここで
X1はQまたはN、X2はLまたはI、X3はFまたはYである。
重要な利点は、結合タンパク質が強い活性とヒトcTnIタンパク質に対して高い親和性を持っていることである。
1つまたは複数の実施形態では、
前記相補性決定領域CDR-VH1において、X2はDである;
前記相補性決定領域CDR-VH2において、X1はDである;
前記相補性決定領域CDR-VH3において、X1はSである;
前記相補性決定領域CDR-VL1において、X3はRである;
前記相補性決定領域CDR-VL2において、X2はNである;
前記相補性決定領域CDR-VL3において、X1はQである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VH1において、X1はLである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VH1において、X1はIである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VH1において、X3はFである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VH1において、X3はYである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VH2において、X2はAである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VH2において、X2はGである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VH2において、X3はRである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VH2において、X3はKである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VH3において、X2はIである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VH3において、X2はLである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VH3において、X2はVである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VL1において、X1は
Iである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VL1において、X1はLである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VL1において、X2はIである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VL1において、X2はLである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VL2において、X1はIである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VL2において、X1はLである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VL2において、X1はVである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VL3において、X2はLである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VL3において、X2はIである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VL3において、X3はFである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VL3において、X3はYである。
1つまたは複数の実施形態において、相補性決定領域のそれぞれの突然変異部位は、以下の突然変異の組み合わせのいずれか1つから選択される:
1つまたは複数の実施形態において、前記結合タンパク質は少なくとも3つのCDRを含む;または、前記結合タンパク質は少なくとも6つのCDRを含む。
1つまたは複数の実施形態では、前記結合タンパク質は、可変領域および定常領域を含む無傷抗体である。
1つまたは複数の実施形態では、前記結合タンパク質は、例えば、ナノ抗体、F(ab’)2、Fab’、Fab、Fv、scFv、二重特異性抗体、および抗体最小認識ユニットのうちの1つである抗体の「機能的フラグメント」である。
1つまたは複数の実施形態では、前記結合タンパク質は、配列がそれぞれ配列番号(SEQ ID NO:)1-4で示す軽鎖フレームワーク領域FR-L1、FR-L2、FR-L3およびFR-L4、および/または、配列がそれぞれ、配列番号(SEQ ID
NO:)5-8で示す重鎖フレームワーク領域FR-H1、FR-H2、FR-H3およびFR-H4、を含む。
1つまたは複数の実施形態では、前記結合タンパク質は、抗体定常領域配列をさらに含む。
1つまたは複数の実施形態では、前記定常領域配列は、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE、およびIgDからなる群から選択される任意の1つの定常領域配列である。
1つまたは複数の実施形態では、前記定常領域は、以下の種に由来する:ウシ、馬、乳牛、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ラット、マウス、イヌ、ネコ、ウサギ、ラクダ、ロバ、シカ、ミンク、ニワトリ、アヒル、ガチョウ、七面鳥、ゲームコック、またはヒト。
1つまたは複数の実施形態では、前記定常領域はマウスに由来する;
軽鎖の定常領域配列は、配列番号(SEQ ID NO:)9に記載されている通りで
ある;
重鎖の定常領域配列は、配列番号(SEQ ID NO:)10に記載されている通りである。
本開示の一態様によれば、本開示はまた、単離された核酸分子に関し、該核酸分子は、上記結合タンパク質をコードするDNAまたはRNAである。
本開示の一態様によれば、本開示はまた、上記核酸分子を含むベクターに関する。
本開示の一態様によれば、本開示はまた、上記ベクターで形質転換された宿主細胞に関する。
本開示の一態様によれば、本開示はまた、上記結合タンパク質を産生するための方法に関し、該方法は、以下のステップを含む:
適切な培養条件下にて培養培地中で上記宿主細胞を培養し、該培養培地または培養される宿主細胞から産生された結合タンパク質を回収する。
本開示の一態様によれば、本開示はまた、急性心筋梗塞、急性冠症候群、肺梗塞、不安定狭心症、および心筋損傷を診断するための診断薬またはキットの調製における上記結合タンパク質の使用に関する。
本開示の一態様によれば、本開示はまた、試験サンプル中のトロポニンI抗原を検出するための方法に関し、該方法は以下を含む:
a)抗体/抗原結合反応の発生に十分な条件下で、免疫複合体を形成するために、前記試験サンプル中のトロポニンIを前記結合タンパク質と接触させる;および
b)試験サンプル中のトロポニンI抗原の存在を示す前記免疫複合体の存在を検出する。
1つまたは複数の実施形態では、ステップa)において、前記免疫複合体は、前記結合タンパク質に結合する二次抗体をさらに含む。
1つまたは複数の実施形態では、ステップa)において、前記免疫複合体は、前記トロポニンI抗原に結合する二次抗体をさらに含む。
1つまたは複数の実施形態では、前記酵素は、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、およびグルコースオキシダーゼのいずれか1つを含む。
本開示の一態様によれば、本開示はまた、前記結合タンパク質を含むキットに関する。
1つまたは複数の実施形態において、前記トロポニンI抗原は、心筋型トロポニンI抗原である。
本開示はまた、心筋型トロポニンIに関連する疾患の診断における本明細書に記載の結合タンパク質の使用に関する。
本開示はまた、心筋型トロポニンIに関連する疾患を診断するための方法に関し、以下を含む:
A)結合反応の発生に十分な条件下で、結合反応を実行するために、対象からのサンプルと本開示における前記結合タンパク質とを接触させる;および
B)該結合反応によって生成された免疫複合体を検出する;
ここで、上記免疫複合体の存在は、心筋型トロポニンIに関連する疾患の存在を示す。
1つまたは複数の実施形態では、前記方法は、蛍光イムノアッセイ、化学発光イムノアッセイ、金コロイドイムノアッセイ、ラジオイムノアッセイおよび/または酵素結合イムノアッセイに基づく。
1つまたは複数の実施形態では、前記サンプルは、全血、末梢血、血清、血漿、または心筋組織から選択される少なくとも1つである。
1つまたは複数の実施形態では、前記対象は、例えば、ヒトなどの霊長類のような哺乳動物である。
1つまたは複数の実施形態では、前記心筋型トロポニンIに関連する疾患は心血管疾患である。
1つまたは複数の実施形態では、前記心筋型トロポニンIに関連する疾患は、急性心筋梗塞、急性冠症候群、肺梗塞、不安定狭心症、心筋損傷、またはそれらの組み合わせからなる群から選択される疾患である。
本開示をさらに説明する前に、これらの実施形態は必然的に多様であるため、本開示は特定の実施形態に限定されないことを理解されたい。本開示の範囲は添付の特許請求の範囲でのみ定義されるため、本明細書で使用される用語は、限定ではなく、特定の実施形態を説明するためだけのものであることも理解されたい。
「抗原結合ドメインを含む単離された結合タンパク質」は、CDR領域を含むすべてのタンパク質/タンパク質フラグメントを指す。「抗体」という用語には、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、およびこれらの抗体の抗原化合物結合フラグメントが含まれ、Fab、F(ab’)2、Fd、Fv、scFv、二重特異性抗体、および抗体最小認識ユニット、並びにこれらの抗体およびフラグメントの一本鎖誘導体も含まれる。抗体の種類は、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE、IgDからなる群から選択できる。さらに、「抗体」という用語は、天然に存在する抗体、ならびに例えば、キメラ(chimeric)、二機能性(bifunctional)およびヒト化(humanized)抗体、ならびに関連する合成アイソフォーム(isoform)を含む非天然に存在する抗体を含む。「抗体」という用語は、「免疫グロブリン」と交換可能に使用することができる。
CDR2-FR3-CDR3-FR4。
本開示は、抗原結合ドメインを含む単離された結合タンパク質を提供し、ここで、該抗原結合ドメインは、少なくとも1つ以下のアミノ酸配列を有する相補性決定領域を含むか、または以下のアミノ酸配列を有する相補性決定領域に対して少なくとも80%の配列同一性を有し、さらに心筋型トロポニンIに対してKD≦1.41×10-9mol/Lである親和性を有するものである:
G-F-N-X1-K-X2-Y-X3-M-Hの配列を有する相補性決定領域CDR-VH1、ここで
X1はLまたはI、X2はDまたはE、X3はFまたはYである;
R-I-X1-P-E-D-X2-E-T-X3-Y-A-P-Eの配列を有する相補
性決定領域CDR-VH2、ここで
X1はEまたはD、X2はAまたはG、X3はRまたはKである;
Y-Y-X1-S-Y-X2-P-F-V-Yの配列を有する相補性決定領域CDR-VH3、ここで
X1はTまたはSであり、X2はI、L、またはVである;
Q-S-X1-X2-Y-S-N-X3-H-T-Yの配列を有する相補性決定領域CDR-VL1、ここで
X1はIまたはL、X2はIまたはL、X3はRまたはKである;
Q-X1-S-X2-R-F-Sの配列を有する相補性決定領域CDR-VL2、ここで
X1はI、L、またはVであり、X2はNまたはQである;
S-X1-S-T-H-X2-P-X3-Tの配列を有する相補性決定領域CDR-VL3、ここで
X1はQまたはN、X2はLまたはI、X3はFまたはYである。
または、1.68×10-10mol/L≦KD≦1.41×10-9mol/L、
または、KD値は1×10-10mol/L、2×10-10mol/L、3×10-10mol/L、4×10-10mol/L、4.5×10-10mol/L、5×10-10mol/L、6×10-10mol/L、7×10-10mol/L、8×10-10mol/L、9×10-10mol/L、1×10-11mol/L、3×10-11mol/L、5×10-11mol/L、5×10-11mol/L、7×10-11mol/L、または9×10-11mol/L以下である。
ここで、親和性は、本開示の方法に従って測定される。
前記相補性決定領域CDR-VH1において、X2はDである。
前記相補性決定領域CDR-VH2において、X1はDである。
前記相補性決定領域CDR-VH3において、X1はSである。
前記相補性決定領域CDR-VL1において、X3はRである。
前記相補性決定領域CDR-VL2において、X2はNである。
前記相補性決定領域CDR-VL3において、X1はQである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VH1において、X1はLである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VH1において、X1はIである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VH1において、X3は
Fである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VH1において、X3はYである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VH2において、X2はAである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VH2において、X2はGである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VH2において、X3はRである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VH2において、X3はKである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VH3において、X2はIである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VH3において、X2はLである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VH3において、X2はVである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VL1において、X1はIである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VL1において、X1はLである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VL1において、X2はIである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VL1において、X2はLである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VL2において、X1はIである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VL2において、X1はLである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VL2において、X1はVである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VL3において、X2はLである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VL3において、X2はIである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VL3において、X3はFである。
1つまたは複数の実施形態では、前記相補性決定領域CDR-VL3において、X3はYである。
軽鎖の定常領域配列は、配列番号(SEQ ID NO:)9に記載されている通りである;
重鎖の定常領域配列は、配列番号(SEQ ID NO:)10に記載されている通りである。
上記宿主細胞は、哺乳動物細胞などの真核細胞であり得る。
1つまたは複数の実施形態では、上記宿主細胞はCHO細胞である。
適切な培養条件下にて培養培地中で上記宿主細胞を培養し、該培養培地または培養宿主細胞から産生された結合タンパク質を回収する。
a)抗体/抗原結合反応の発生に十分な条件下で、免疫複合体を形成するために、上記試験サンプル中のトロポニンIを上記結合タンパク質と接触させる;および
b)該免疫複合体の存在を検出し、複合体の存在は、試験サンプル中のトロポニンI抗原の存在を示す。
この実施形態では、上記複合体が容易に検出されるように、上記結合タンパク質はシグナル強度を示すためのインジケーターで標識できる。
この実施形態では、上記結合タンパク質は、一次抗体の形態でcTnIの異なるエピトープに結合するために、上記二次抗体と抗体ペアを形成する;
上記二次抗体は、上記複合体が容易に検出されるように、シグナル強度を示すインジケーターで標識できる。
この実施形態では、上記結合タンパク質は、上記二次抗体の抗原として機能する。上記二次抗体は、上記複合体が容易に検出されるように、シグナル強度を示すインジケーターで標識できる。
Blue)、Cy2、Cy3、Cy5、Cy7、6-FAM、ダンシルクロリド、フルオレセイン、HEX、6-JOE、NBD(7-ニトロベンゾ-2-オキサ-1,3-ジアゾール)、オレゴングリーン(Oregon Green)488、オレゴングリーン(Oregon Green)500、オレゴングリーン(Oregon Green)514、パシフィックブルー(Pacific Blue)、o-フタル酸、p-フタル酸、m-フタル酸、クレゾールソリッドバイオレット、クレゾールブルーバイオレット、ブリリアントクレゾールブルー、p-アミノ安息香酸、エリスロシン、フタロシアニン、アゾメチン、シアニン、キサンチン、スクシニルフルオレセイン、希土類金属クリプテート、ユーロピウムトリス-ビピリジンジアミン、ユーロピウムクリプテートまたはキレート、ジアミン、ビスシアニン、ラホラ(La Jolla)ブルー染料、アロフィコシアニン、B-アロコシアニン(allococyanin B)、C-フィコシアニン、R-フィコシアニン、チアミン、フィコエリトリン、R-フィコエリトリン、REG、ローダミングリーン、ローダミンイソチオシアネート、ローダミンレッド、ROX、TAMRA、TET、TRIT(テトラメチルローダミンイソチオール)、テトラメチルローダミンおよびテキサスレッドのいずれか1つを含む。
A)結合反応の発生に十分な条件下で、結合反応を実行するために、対象からのサンプルと本開示における結合タンパク質とを接触させる;および
B)該結合反応によって生成された免疫複合体を検出する。
ここで、上記免疫複合体の存在は、心筋型トロポニンIに関連する疾患の存在を示す。
この実施例は、抗ヒト心筋型トロポニンI組換え抗体を調製するための例示的な方法を提供する。
この実施例では、制限エンドヌクレアーゼとプライムスター(Prime Star)DNAポリメラーゼはタカラ(Takara)会社から購入した;
MagExtractor-RNA抽出キットは東洋紡(TOYOBO)会社から購入した;
BD SMARTERTM RACE cDNA増幅キット(cDNA Amplification Kit)はタカラ(Takara)会社から購入した;
pMD-18Tベクターはタカラ(Takara)会社から購入した;
プラスミド抽出キットは天根会社から購入した;
プライマー合成と遺伝子シークエンシングはInvitrogen会社によって行われた;
Anti-cTnI 5G8モノクローナル抗体を分泌する細胞株は、既存のハイブリドーマ細胞株であり、使用のために復活させた。
重鎖および軽鎖を増幅するための5’RACEフォワードプライマー:
SMARTER II Aオリゴヌクレオチド:
5’>AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTACXXXXX<3’;
5’-RACE CDSプライマー(5’-CDS):5’>(T)25VN<3’(N=A、C、G、またはT;V=A、G、またはC);
ユニバーサルプライマーAミックス(UPM):
5’>CTAATACGACTCACTATAGGGCAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT<3’;
ネスト-ユニバーサルプライマーA(NUP):
5’>AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT<3’;
mIg-kR:5’>CTAACACTCATTCCTGTTGAAGCTCTTGACAAT<3’;
mIg-HR:5’>TCATTTACCAGGAGAGTGGGAGAGGC<3’。
Anti-cTnI5G8モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマ細胞株からRNAを抽出し、SMARTERTM RACE cDNA増幅キット(Amplification Kit)とキットにあるSMARTER II Aオリゴヌクレオチドおよび5’-CDSプライマーを利用して第1鎖cDNAの合成に使用した。得られた第1鎖cDNAの生成物をPCR増幅のテンプレートとして使用した。軽鎖遺伝子はユニバーサルプライマーAミックス(UPM)、ネスト-ユニバーサルプライマーA(NUP)、およびmIg-kRプライマーで増幅され、重鎖遺伝子はユニバーサルプライマーAミックス(UPM)、ネスト-ユニバーサルプライマーA(NUP)およびmIg-HRプライマーで増幅された。サイズが約0.72KBのターゲットバンドは軽鎖のプライマーペアで増幅され、サイズが約1.4KBのターゲットバンドは重鎖のプライマーペアで増幅された。アガロースゲル電気泳動による精製と回収後、生成物をrTaqDNAポリメラーゼでポリAテール付加反応に供し、pMD-18Tベクターに挿入し、その後、DH5αコンピテントセルに形質転換した。コロニーが成長した後、重鎖遺伝子と軽鎖遺伝子のそれぞれについて、4つのクローンを選び、シークエンシングのためにInvitrogen会社に送った。
上記のシーケンシングで得られた遺伝子配列をIMGT抗体データベースに入れ、VNTI11.5ソフトウェアを使用して分析し、重鎖と軽鎖のプライマーペアで増幅された遺伝子が正しいことを確認した。軽鎖のプライマーペアで増幅された遺伝子フラグメントでは、VkII遺伝子ファミリーに属するVL遺伝子は、上流に57bpのリーダーペプチド配列を持つ321bpの配列を持っている;重鎖のプライマーペアで増幅された遺伝子フラグメントでは、VH1遺伝子ファミリーに属するVH遺伝子は、上流に57bpのリーダーペプチド配列を持つ357bpの配列を持っている。
pcDNATM3.4 TOPO(登録商標)ベクターは、HindIII、BamHI、EcoRIなどの複数のクローニングサイトが導入された組換え抗体用に構築された真核生物発現ベクターであり、pcDNA 3.4A発現ベクター(以下、略して3.4A発現ベクター)と呼ばれる;pMD-18Tにおける上記の抗体可変領域遺伝子のシークエンシング結果に従って、Anti-cTnI 5G8抗体のVLおよびVH遺伝子に特異的なプライマーを設計し、両端にHindIIIおよびEcoRI制限酵素切断部位および保護塩基を設けた。プライマーは次のとおりである:
cTnI-5G8-HF: 5’> CCCAAGCTTATGGAATGCAGCTGTGTCATGCTCTTCTTC <3’;
cTnI-5G8-HR: 5’> CCCGAATTCTCATTTACCAGGAGAGTGGGAGAGGC <3’;
cTnI-5G8-LF: 5’> CCCAAGCTTATGAAGTTGCCTGTTAGGCTGTTGG <3’;
cTnI-5G8-LR: 5’> CCCGAATTCCTAACACTCATTCCTGTTGAAGCTCTTGACAA <3’;
CHO細胞への組換え抗体発現プラスミドの一過性トランスフェクションおよび上清中に発現された抗体の活性評価
プラスミドを超純水で400ng/mlに希釈した。CHO細胞は遠心分離管で1.43×107細胞/mLに調整された。100μLのプラスミドを700μLの細胞と混合した後、混合物をエレクトロポレーションキュベットに移してエレクトロポレーションを行い、次に10mL CD CHO AGT培地に移し、37°C(8%CO2、振幅150)のシェーカーで培養した。細胞の生存率をテストするために、培地を毎日サンプリングした。細胞生存率が50%未満になったら、細胞培養物の上清を遠心分離し、抗体(それぞれSEQ ID NO:11および12に記載の配列を有する軽鎖および重鎖を有する)を得た。
CDR-VH1が、G-F-N-L(X1)-K-E(X2)-Y-F(X3)-M-Hである;
CDR-VH2が、R-I-E(X1)-P-E-D-A(X2)-E-T-R(X3)-Y-A-P-Eである;
CDR-VH3が、Y-Y-T(X1)-S-Y-I(X2)-P-F-V-Yである;
軽鎖の相補性決定領域は:
CDR-VL1が、Q-S-I(X1)-I(X2)-Y-S-N-K(X3)-H-T-Yである;
CDR-VL2が、Q-I(X1)-S-Q(X2)-R-F-Sである;
CDR-VL3が、S-N(X1)-S-T-H-L(X2)-P-F(X3)-Tである;
ここで、X1、X2、およびX3は変異が起こる全部位である。
実行プロセス:バッファー1(PBST)で60秒間平衡化し、抗体を抗体溶液に300秒間固定し、バッファー2(PBST)で180秒間インキュベートし、抗原溶液で420秒間結合し、バッファー2で1200秒間解離し、pH1.69の10mM GLY溶液とバッファー3でセンサー再生を行い、データを出力した。
AMCセンサーを使用して、精製した抗体をPBSTで10μg/mlに希釈し、品質管理されたCTNI組換えタンパク質(PK2-CTNI-1、170120、出願者が製造)をPBSTで段階的に希釈した:400nmol/ml、200nmol/ml、100nmol/ml、50nmol/ml、25nmol/ml、12.5nmol/ml、6.25nmol/ml、および0nmol/ml;
実行プロセス:バッファー1(PBST)で60秒間平衡化し、抗体を抗体溶液に300秒間固定し、バッファー2(PBST)で180秒間インキュベートし、抗原溶液で420秒間結合し、バッファー2で1200秒間解離し、pH1.69の10mM GLY溶液とバッファー3でセンサー再生を行い、データを出力した。(KDは平衡解離定数、つまり親和性を表し;konは結合速度を表し;koffは解離速度を表す。)
上記の結果を検証するために、WTをバックボーン配列として上記の実験を繰り返し、突然変異部位の親和性を検証した。結果の一部は次のとおりである。
に、該結合タンパク質は、ヒトcTnIタンパク質に対して高い親和性を有する。したがって、心筋型トロポニンIに関連する疾患の検出および診断を可能にする。
重鎖および軽鎖を増幅するための5’RACEフォワードプライマー:
SMARTER II Aオリゴヌクレオチド:
5’>AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTACXXXXX<3’(配列番号(SEQ ID NO:)13);
5’-RACE CDSプライマー(5’-CDS):5’>(T)25VN<3’(
N=A、C、G、またはT;V=A、G、またはC)(配列番号(SEQ ID NO:)14);
ユニバーサルプライマーAミックス(UPM):
5’>CTAATACGACTCACTATAGGGCAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT<3’(配列番号(SEQ ID NO:)15);
ネスト-ユニバーサルプライマーA(NUP):
5’>AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT<3’(配列番号(SEQ ID NO:)16);
mIg-kR:5’>CTAACACTCATTCCTGTTGAAGCTCTTGACAAT<3’(配列番号(SEQ ID NO:)17);
mIg-HR:5’>TCATTTACCAGGAGAGTGGGAGAGGC<3’(配列番号(SEQ ID NO:)18)。
pcDNATM3.4 TOPO(登録商標)ベクターは、HindIII、BamHI、EcoRIなどの複数のクローニングサイトが導入された組換え抗体用に構築された真核生物発現ベクターであり、pcDNA 3.4A発現ベクター(以下、略して3.4A発現ベクター)と呼ばれる;pMD-18Tにおける上記の抗体可変領域遺伝子のシークエンシング結果に従って、Anti-cTnI 5G8抗体のVLおよびVH遺伝子に特異的なプライマーを設計し、両端にHindIIIおよびEcoRI制限酵素切断部位および保護塩基を設けた。プライマーは次のとおりである:
cTnI-5G8-HF: 5’> CCCAAGCTTATGGAATGCAGCTGTGTCATGCTCTTCTTC <3’(配列番号(SEQ ID NO:)19);
cTnI-5G8-HR: 5’> CCCGAATTCTCATTTACCAGGAGAGTGGGAGAGGC <3’(配列番号(SEQ ID NO:)20);
cTnI-5G8-LF: 5’> CCCAAGCTTATGAAGTTGCCTGTTAGGCTGTTGG <3’(配列番号(SEQ ID NO:)21);
cTnI-5G8-LR: 5’> CCCGAATTCCTAACACTCATTCCTGTTGAAGCTCTTGACAA <3’(配列番号(SEQ ID NO:)22);
Claims (18)
- 抗原結合ドメインを含む単離された結合タンパク質であって、該抗原結合ドメインは、少なくとも1つ以下のアミノ酸配列を有する相補性決定領域を含むか、または、以下のアミノ酸配列を有する相補性決定領域に対して少なくとも80%の配列同一性を有し、さらに心筋型トロポニンIに対してKD≦1.41×10-9mol/Lである親和性を有する抗原結合ドメインを含む単離された結合タンパク質。
G-F-N-X1-K-X2-Y-X3-M-Hの配列を有する相補性決定領域CDR-VH1、ここで
X1はLまたはI、X2はDまたはE、X3はFまたはYである;
R-I-X1-P-E-D-X2-E-T-X3-Y-A-P-Eの配列を有する相補性決定領域CDR-VH2、ここで
X1はEまたはD、X2はAまたはG、X3はRまたはKである;
Y-Y-X1-S-Y-X2-P-F-V-Yの配列を有する相補性決定領域CDR-VH3、ここで
X1はTまたはSであり、X2はI、L、またはVである;
Q-S-X1-X2-Y-S-N-X3-H-T-Yの配列を有する相補性決定領域CDR-VL1、ここで
X1はIまたはL、X2はIまたはL、X3はRまたはKである;
Q-X1-S-X2-R-F-Sの配列を有する相補性決定領域CDR-VL2、ここで
X1はI、L、またはVであり、X2はNまたはQである;
S-X1-S-T-H-X2-P-X3-Tの配列を有する相補性決定領域CDR-VL3、ここで
X1はQまたはN、X2はLまたはI、X3はFまたはYである;
好ましくは、
前記相補性決定領域CDR-VH1において、X2はDである;
前記相補性決定領域CDR-VH2において、X1はDである;
前記相補性決定領域CDR-VH3において、X1はSである;
前記相補性決定領域CDR-VL1において、X3はRである;
前記相補性決定領域CDR-VL2において、X2はNである;
前記相補性決定領域CDR-VL3において、X1はQである;
好ましくは、前記相補性決定領域CDR-VH1において、X1はLである;
好ましくは、前記相補性決定領域CDR-VH1において、X1はIである;
好ましくは、前記相補性決定領域CDR-VH1において、X3はFである;
好ましくは、前記相補性決定領域CDR-VH1において、X3はYである;
好ましくは、前記相補性決定領域CDR-VH2において、X2はAである;
好ましくは、前記相補性決定領域CDR-VH2において、X2はGである;
好ましくは、前記相補性決定領域CDR-VH2において、X3はRである;
好ましくは、前記相補性決定領域CDR-VH2において、X3はKである;
好ましくは、前記相補性決定領域CDR-VH3において、X2はIである;
好ましくは、前記相補性決定領域CDR-VH3において、X2はLである;
好ましくは、前記相補性決定領域CDR-VH3において、X2はVである;
好ましくは、前記相補性決定領域CDR-VL1において、X1はIである;
好ましくは、前記相補性決定領域CDR-VL1において、X1はLである;
好ましくは、前記相補性決定領域CDR-VL1において、X2はIである;
好ましくは、前記相補性決定領域CDR-VL1において、X2はLである;
好ましくは、前記相補性決定領域CDR-VL2において、X1はIである;
好ましくは、前記相補性決定領域CDR-VL2において、X1はLである;
好ましくは、前記相補性決定領域CDR-VL2において、X1はVである;
好ましくは、前記相補性決定領域CDR-VL3において、X2はLである;
好ましくは、前記相補性決定領域CDR-VL3において、X2はIである;
好ましくは、前記相補性決定領域CDR-VL3において、X3はFである;
好ましくは、前記相補性決定領域CDR-VL3において、X3はYである;
好ましくは、前記相補性決定領域のそれぞれの突然変異部位は、以下の突然変異の組み合わせのいずれか1つから選択される:
- 前記結合タンパク質は少なくとも3つのCDRを含むか、または、前記結合タンパク質は少なくとも6つのCDRを含み;
好ましくは、前記結合タンパク質は、ナノ抗体、F(ab’)2、Fab’、Fab、Fv、scFv、二重特異性抗体、および抗体最小認識ユニットのうちの1つであり;
好ましくは、前記結合タンパク質は、配列がそれぞれ配列番号(SEQ ID NO:)1-4で示す軽鎖フレームワーク領域FR-L1、FR-L2、FR-L3およびFR-L4、および/または、配列がそれぞれ配列番号(SEQ ID NO:)5-8で示す重鎖フレームワーク領域FR-H1、FR-H2、FR-H3およびFR-H4を含む、
請求項1に記載の抗原結合ドメインを含む単離された結合タンパク質。 - 前記結合タンパク質が、抗体定常領域配列をさらに含み、
好ましくは、前記定常領域配列は、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE、およびIgDからなる群から選択される任意の1つの定常領域の配列であり、
好ましくは、前記定常領域は、以下の種に由来する:ウシ、馬、乳牛、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ラット、マウス、イヌ、ネコ、ウサギ、ラクダ、ロバ、シカ、ミンク、ニワトリ、アヒル、ガチョウ、七面鳥、ゲームコック、またはヒト;
好ましくは、前記定常領域はマウスに由来する;
軽鎖の定常領域配列は、配列番号(SEQ ID NO:)9に記載されている通りであり、
重鎖の定常領域配列は、配列番号(SEQ ID NO:)10に記載されている通り
である、
請求項1または請求項2に記載の抗原結合ドメインを含む単離された結合タンパク質。 - 単離された核酸分子であり、該核酸分子がDNAまたはRNAである、請求項1乃至請求項3のいずれか一項に記載の結合タンパク質をコードする単離された核酸分子。
- 請求項4に記載の核酸分子を含むベクター。
- 請求項5に記載のベクターで形質転換された宿主細胞。
- 請求項1乃至請求項3のいずれか一項に記載の結合タンパク質を産生するための方法であって、
適切な培養条件下にて培養培地中で請求項6に記載の宿主細胞を培養し、該培養培地または培養宿主細胞から産生された結合タンパク質を回収するステップを含む方法。 - 急性心筋梗塞、急性冠症候群、肺梗塞、不安定狭心症および心筋損傷を診断するための診断薬またはキットの調製における、請求項1乃至請求項3のいずれか一項に記載の結合タンパク質の使用。
- 試験サンプル中のトロポニンI抗原を検出するための方法であって、以下のステップを含む方法。
a)抗体/抗原結合反応の発生に十分な条件下で、免疫複合体を形成するために、試験サンプル中のトロポニンI抗原を請求項3に記載の結合タンパク質と接触させる;および
b)試験サンプル中のトロポニンI抗原の存在を示す前記免疫複合体の存在を検出する;
好ましくは、前記免疫複合体は、前記結合タンパク質に結合する二次抗体をさらに含む;
好ましくは、ステップa)において、前記免疫複合体は、前記トロポニンI抗原に結合する二次抗体をさらに含む - 前記トロポニンI抗原が心筋型トロポニンI抗原である、請求項9に記載の方法。
- 請求項1乃至請求項3のいずれか一項に記載の結合タンパク質を含むキット。
- 心筋型トロポニンIに関連する疾患の診断における、請求項1乃至請求項3のいずれか一項に記載の結合タンパク質の使用。
- 心筋型トロポニンIに関連する疾患を診断するための方法であって、以下のステップを含む方法。
A)結合反応の発生に十分な条件下で、結合反応を実行するために対象からのサンプルと、請求項1乃至請求項3のいずれか一項に記載の結合タンパク質とを接触させる;および
B)該結合反応によって生成された免疫複合体を検出する;
ここで、前記免疫複合体の存在は、心筋型トロポニンIに関連する疾患の存在を示す - 前記方法が、蛍光イムノアッセイ、化学発光イムノアッセイ、金コロイドイムノアッセイ、ラジオイムノアッセイおよび/または酵素結合イムノアッセイに基づく、請求項13に記載の方法。
- 前記サンプルが、全血、末梢血、血清、血漿、または心筋組織から選択される少なくと
も1つである、請求項13または請求項14に記載の方法。 - 前記対象は、哺乳動物、好ましくは霊長類、より好ましくはヒトである、請求項13乃至請求項15のいずれか一項に記載の方法。
- 前記心筋型トロポニンIに関連する疾患が心血管疾患である、請求項12に記載の使用または請求項13乃至請求項16のいずれか一項に記載の方法。
- 前記心筋型トロポニンIに関連する疾患が、急性心筋梗塞、急性冠症候群、肺梗塞、不安定狭心症、心筋損傷、またはそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項12に記載の使用または請求項13乃至請求項16のいずれか一項に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201811179512.3 | 2018-10-10 | ||
CN201811179512.3A CN111018974B (zh) | 2018-10-10 | 2018-10-10 | 一种抗人心肌肌钙蛋白i的重组抗体 |
PCT/CN2019/108682 WO2020073832A1 (zh) | 2018-10-10 | 2019-09-27 | 一种抗人心肌肌钙蛋白i的重组抗体 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2022511323A true JP2022511323A (ja) | 2022-01-31 |
JP7299309B2 JP7299309B2 (ja) | 2023-06-27 |
Family
ID=70164828
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2021515092A Active JP7299309B2 (ja) | 2018-10-10 | 2019-09-27 | 抗ヒト心筋型トロポニンi組換え抗体 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20210340231A1 (ja) |
EP (1) | EP3865509A4 (ja) |
JP (1) | JP7299309B2 (ja) |
KR (1) | KR20210068067A (ja) |
CN (1) | CN111018974B (ja) |
WO (1) | WO2020073832A1 (ja) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN113929777A (zh) * | 2020-07-13 | 2022-01-14 | 东莞市朋志生物科技有限公司 | 抗肌红蛋白的抗体、检测肌红蛋白的试剂盒和方法 |
US20240117024A1 (en) * | 2022-09-30 | 2024-04-11 | Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd. | Cardiac troponin i specific antibody, kit and uses thereof |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101942416A (zh) * | 2010-07-23 | 2011-01-12 | 中国医学科学院放射医学研究所 | 抗人心肌肌钙蛋白i特异性单克隆抗体及其制备方法 |
JP2016141649A (ja) * | 2015-02-02 | 2016-08-08 | 東ソー株式会社 | ペプチド及びそれを用いて作製した抗心筋トロポニンi抗体 |
CN107603955A (zh) * | 2017-09-06 | 2018-01-19 | 暨南大学 | 人心肌肌钙蛋白i的杂交瘤细胞株7h4及单克隆抗体和应用 |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1247615C (zh) * | 2000-03-21 | 2006-03-29 | 上海润东生物科技有限公司 | 人体心肌肌钙蛋白ⅰ的纯化和其单克隆抗体的制备方法 |
FI20030652A0 (fi) * | 2003-04-30 | 2003-04-30 | Susann Eriksson | Parannettu immunomääritys |
CN101105497B (zh) * | 2006-07-13 | 2011-10-19 | 上海凯创生物技术有限公司 | 一种检测心肌肌钙蛋白i的试剂盒及其制备方法 |
US8652788B2 (en) * | 2009-12-02 | 2014-02-18 | Abbott Laboratories | Assay for diagnosis of cardiac myocyte damage |
WO2013175678A1 (ja) * | 2012-05-24 | 2013-11-28 | パナソニック株式会社 | ヒト心筋由来トロポニンiに特異的にかつ速やかに結合できる変異体タンパク質 |
CN103173420B (zh) * | 2013-04-08 | 2015-07-15 | 菲鹏生物股份有限公司 | 可分泌抗心肌肌钙蛋白i单抗的杂交瘤细胞及应用 |
CN103694355B (zh) * | 2013-12-11 | 2016-08-17 | 菲鹏生物股份有限公司 | 抗人心肌肌钙蛋白i的重组抗体及其构建方法和应用 |
CN107557345B (zh) * | 2017-09-06 | 2020-06-16 | 暨南大学 | 人心肌肌钙蛋白i的杂交瘤细胞株7d2及单克隆抗体和应用 |
-
2018
- 2018-10-10 CN CN201811179512.3A patent/CN111018974B/zh active Active
-
2019
- 2019-09-27 EP EP19870959.4A patent/EP3865509A4/en active Pending
- 2019-09-27 JP JP2021515092A patent/JP7299309B2/ja active Active
- 2019-09-27 US US17/284,234 patent/US20210340231A1/en active Pending
- 2019-09-27 KR KR1020217012109A patent/KR20210068067A/ko active Search and Examination
- 2019-09-27 WO PCT/CN2019/108682 patent/WO2020073832A1/zh unknown
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101942416A (zh) * | 2010-07-23 | 2011-01-12 | 中国医学科学院放射医学研究所 | 抗人心肌肌钙蛋白i特异性单克隆抗体及其制备方法 |
JP2016141649A (ja) * | 2015-02-02 | 2016-08-08 | 東ソー株式会社 | ペプチド及びそれを用いて作製した抗心筋トロポニンi抗体 |
CN107603955A (zh) * | 2017-09-06 | 2018-01-19 | 暨南大学 | 人心肌肌钙蛋白i的杂交瘤细胞株7h4及单克隆抗体和应用 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
MONOCLONAL ANTIBODIES IN IMMUNODIAGNOSIS AND IMMUNOTHERAPY, vol. 34, JPN6022018836, 2015, pages 169 - 173, ISSN: 0004922556 * |
PROTEIN ENGINEERING, DESIGN AND SELECTION, vol. 25, JPN6022018837, 2012, pages 295 - 305, ISSN: 0004922555 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP3865509A4 (en) | 2022-07-13 |
WO2020073832A1 (zh) | 2020-04-16 |
JP7299309B2 (ja) | 2023-06-27 |
KR20210068067A (ko) | 2021-06-08 |
US20210340231A1 (en) | 2021-11-04 |
CN111018974A (zh) | 2020-04-17 |
CN111018974B (zh) | 2022-04-01 |
EP3865509A1 (en) | 2021-08-18 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN111217911B (zh) | 一种抗人胃蛋白酶原ii的重组抗体 | |
JP7339338B2 (ja) | 抗ヒトn末端脳性ナトリウム利尿ペプチド前駆体の組換え抗体 | |
JP7299309B2 (ja) | 抗ヒト心筋型トロポニンi組換え抗体 | |
JP7439108B2 (ja) | ヒト心筋トロポニンiに対する組換え抗体 | |
US20210395394A1 (en) | Antibody against pan-species-specific plasmodium lactate dehydrogenase | |
JP7307158B2 (ja) | 抗ヒト心筋型トロポニンi抗体及びその応用 | |
CN110818797B (zh) | 一种抗人ca153蛋白的重组抗体 | |
CN110818796B (zh) | 一种抗人ca153蛋白的重组抗体 | |
CN111018975B (zh) | 一种抗人心肌肌钙蛋白i的重组抗体 | |
CN111018973B (zh) | 一种抗人心肌肌钙蛋白i的重组抗体 | |
CN113004405B (zh) | 一种包含NT-proBNP抗原结合结构域的分离的结合蛋白 | |
CN111363035B (zh) | 一种抗心型脂肪酸结合蛋白的重组抗体 | |
CN111363036B (zh) | 一种抗心型脂肪酸结合蛋白的重组抗体 | |
CN111349172B (zh) | 一种抗人肌酸激酶同工酶ck-mb的重组抗体 | |
CN111018977B (zh) | 一种抗人心肌肌钙蛋白i的重组抗体 | |
WO2020073833A1 (zh) | 一种抗人心肌肌钙蛋白i的抗体及其应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210428 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20210430 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20210928 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20210929 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20211203 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220518 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220817 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20221116 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230314 |
|
C60 | Trial request (containing other claim documents, opposition documents) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C60 Effective date: 20230314 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20230322 |
|
C21 | Notice of transfer of a case for reconsideration by examiners before appeal proceedings |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C21 Effective date: 20230329 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20230517 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20230615 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7299309 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |