JP2022510634A - 除去レジメンに抵抗性の遺伝的に改変されたｈｓｐｃ - Google Patents

Abstract

本発明は、遺伝的に改変された造血幹細胞または前駆細胞（ＨＳＰＣ）および幹細胞置換療法において、上記ＨＳＰＣを使用する方法を提供する。上記ＨＳＰＣは、改変なしの内因性ＨＳＰＣまたはコントロールＨＳＰＣと比較して、導入される細胞に選択的利点を付与するレセプターを発現するように、遺伝的に改変される。このようなレセプターの存在は、内因性ＨＳＰＣを排除するために使用される免疫療法レジメンに抵抗性を提供する。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年１１月２８日出願の米国仮特許出願第６２／７７２，５４５号（これは、全ての目的のためにその全体において参考として援用される）の利益を主張する。

配列表の言及
本出願は、テキストファイル ５３９５０－ＳＥＱＬＳＴ（１１キロバイト、作成日：２０１９年１１月２６日）において開示された配列（参考として援用される）を含む。

背景
幹細胞は、生物に、増殖を通じて、分化した細胞を生成するためにある特定の組織を維持および修復する手段を提供する。造血幹細胞移植は、患者に血球を生成する能力を提供するために、通常は、上記患者が、化学療法、または他のコンディショニングレジメンによって内因性造血幹細胞が除去されている場合に、使用されている。

造血細胞移植は、一般に、造血幹細胞を含む自家または同種異系の血液形成細胞の静脈内注入を含む。これらは、骨髄、末梢血、または臍帯血から集められ、骨髄または免疫系が損傷したかまたは欠陥がある患者において造血機能を再確立するために移植される。この手順はしばしば、骨髄浸潤プロセス（例えば、白血病）を排除するために、または先天性の免疫不全障害を補正するために、治療の一部として行われる。造血細胞移植はまた、がんを有する患者が、骨髄が通常寛容し得るより高用量の化学療法を受容することを可能にするために使用される；次いで、骨髄機能は、その骨髄を、以前に採取した幹細胞で置き換えることによって救助される（一般には、ＷＯ ２００４／００２４２５およびＷＯ２０１８／１４０９４０を参照のこと）。

国際公開第２００４／００２４２５号 国際公開第２０１８／１４０９４０号

特許請求された発明の要旨
本発明は、内因性ＨＳＰＣと比較して、被験体に導入した際に、遺伝的に改変されたＨＳＰＣに選択的増殖の利点を付与するレセプターを発現するように遺伝的に改変された造血幹または前駆細胞（ＨＳＰＣ）を提供する。必要に応じて、上記細胞は、原始幹細胞である。

本発明は、上記または下記で定義されるように、少なくとも１０^５のＨＳＰＣの集団をさらに提供する。必要に応じて、上記少なくとも１０^５のＨＳＰＣは、ＣＤ３４^＋である。必要に応じて、上記集団は、クローン性である。必要に応じて、上記集団は、原始幹細胞および共通前駆細胞を含む。

いくつかの細胞では、上記レセプターは、Ｂ２Ｍ／ＭＨＣ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ２４、ＧＡＳ６、ＣＤ４７、ｃ－Ｋｉｔまたは複数のこのようなレセプターの組み合わせのうちのいずれかである。いくつかの細胞では、上記レセプターは、上記レセプターの変異体形態であり、ここで上記変異体は、上記レセプターの野生型形態と比較して、抗体への結合が低減している。いくつかの細胞では、上記レセプターは、ＣＤ４７またはｃ－Ｋｉｔである。いくつかの細胞はさらに、機能的ヒトタンパク質を発現するように遺伝的に改変され、その結果として、上記ＨＳＰＣは、遺伝的障害を緩和し得る。上記遺伝的障害は、上記障害を有する被験体においてヒトタンパク質をコードする遺伝子の変異に起因し得る。いくつかの細胞では、上記ヒトタンパク質は、ヘモグロビンである。

いくつかのＨＳＰＣは、標的化構築物と内因性遺伝子座との間の相同組換えによって遺伝的に改変される。いくつかのＨＳＰＣでは、上記遺伝的改変は、ヘテロ接合性である。いくつかのＨＳＰＣでは、上記遺伝的改変は、ホモ接合性である。

本発明はさらに、ＨＳＰＣを改変する方法であって、上記方法は、上記ＨＳＰＣに、改変前のＨＳＰＣと比較して、遺伝的に改変されたＨＳＰＣに選択的増殖の利点を付与するレセプターを発現し得る転写ユニットを形成するＨＳＰＣのゲノムに組み込まれる構築物を導入する工程を包含する方法を提供する。必要に応じて、上記構築物は、その発現に関する調節配列に作動可能に連結されたレセプターをコードするセグメントを含む転写ユニットを含む。必要に応じて、上記構築物は、内因性遺伝子座との相同組換えを受ける。必要に応じて、上記方法は、ヌクレアーゼを上記ＨＳＰＣに導入する工程を包含し、上記ヌクレアーゼは、上記相同組換えの遺伝子座に近いゲノムＤＮＡを切断し、それによって、上記相同組換えを刺激する。必要に応じて、上記ヌクレアーゼは、上記ヌクレアーゼをコードする構築物を導入することによって導入され、上記ヌクレアーゼは、上記ＨＳＰＣにおいて発現される。

本発明はさらに、被験体を処置する方法であって、上記方法は、（ａ）ｃ－Ｋｉｔに特異的に結合する免疫治療剤を投与して、ｃ－Ｋｉｔを発現する内因性ＨＳＰＣを枯渇させる工程；および（ｂ）内因性ＨＳＰＣと比較して、遺伝的に改変されたＨＳＰＣに選択的増殖の利点を付与するレセプターを発現するように遺伝的に改変された置換ＨＳＰＣを投与し、それによって、上記ｃ－Ｋｉｔに特異的に結合する免疫治療剤による枯渇に耐える工程を包含し、ここで上記置換ＨＳＰＣは、上記内因性ＨＳＰＣを少なくとも部分的に置換する方法を提供する。必要に応じて、選択的増殖の利点を付与する上記レセプターは、ＣＤ４７である。必要に応じて、上記ＣＤ４７レセプターは、変異を含み、上記方法は、野生型ＣＤ４７に結合し、存在する場合、ＳＩＲＰαへの上記変異したレセプターのその結合およびアンタゴニズムより強く、ＳＩＲＰαとのその相互作用をアンタゴナイズする抗体またはＳＩＲＰα Ｆｃ融合タンパク質を投与する工程をさらに包含する。必要に応じて、内因性ＨＳＰＣは、工程（ｂ）を行う前に、部分的にのみ枯渇される。必要に応じて、工程（ａ）は、工程（ｂ）の前に行われる。必要に応じて、工程（ａ）は、工程（ｂ）と同時に、または工程（ｂ）の後に行われる。必要に応じて、上記ｃ－Ｋｉｔに特異的に結合する免疫治療剤は、上記導入する工程が行われるときに血清中で検出可能である。必要に応じて、上記ｃ－Ｋｉｔに特異的に結合する免疫治療剤は、工程（ｂ）の前および工程（ｂ）の後に、複数の機会に投与される。必要に応じて、上記ｃ－Ｋｉｔに特異的に結合する免疫治療剤は、抗体である。必要に応じて、上記抗体は、ＡＤＣＣまたはＡＤＰを促進するために有効なＦｃドメインを有する。

必要に応じて、上記被験体は、血球のタイプの遺伝的障害を有し、上記置換ＨＳＰＣは、上記障害のないタイプの血球へと発生する。必要に応じて、上記置換ＨＳＰＣは、上記障害がないようにさらに遺伝的に改変された自家細胞である。必要に応じて、上記遺伝的障害は、鎌状赤血球貧血である。必要に応じて、上記被験体は、がんを有する。必要に応じて、上記がんは、血球のがんであり、上記血球は、ｃ－Ｋｉｔを発現するか、またはｃ－Ｋｉｔを発現するＨＳＰＣに由来する。必要に応じて、上記被験体は、がんを有し、上記がんに対する化学療法を受けたことがある。必要に応じて、上記被験体は、工程（ａ）の後に臓器移植片を受容する。

定義
被験体は、開示される方法によって処置されるヒトおよび他の動物、特に、哺乳動物（ペットおよび実験動物、例えば、マウス、ラット、ウサギを含む）の両方を含む。従って、上記方法は、ヒト治療および獣医学的適用の両方に適用可能である。

免疫治療剤とは、指定された標的に対する抗体またはＦｃ融合タンパク質に言及する。例えば、ＣＤ４７に対する抗体およびＳＩＲＰα－Ｆｃ融合物は、ＣＤ４７に対する免疫治療剤である。

核酸またはアミノ酸の作動可能な連結とは、各々がその意図された機能を果たし得るように、上記配列が連結されることを意味する。例えば、コード配列に対するプロモーターの作動可能な連結は、上記コード配列が上記プロモーターから発現され得ることを示唆する。シグナルペプチドへのタンパク質の作動可能な連結は、上記シグナルペプチドが上記タンパク質の分泌を指向し得るか、またはそれを、細胞膜への組み込みのために標的化し得ることを示唆する。

機能的な核酸または上記核酸によってコードされるタンパク質とは、上記核酸を上記タンパク質に発現する被験体の正常な生理機能を支持し得る、上記核酸の野生型形態、または天然のもしくは誘導されたその改変体に言及する。言い換えると、被験体における上記核酸の発現は、部分的または完全な浸透度を有する病的状態を生じない。例えば、野生型の機能に対していかなる顕著な影響をも有しない１またはこれより多くのバリエーションを含む野生型核酸またはタンパク質の改変体は、機能的な核酸またはタンパク質と考えられる。このようなものは、変異を含む核酸またはこれから発現されるタンパク質とは対照をなすことになり、ヘテロ接合性またはホモ接合性の形態での被験体におけるその存在は、部分的または完全な浸透度を有する病的状態の発生と関連付けられる。そのコードされるタンパク質を発現し得るように、置換ＨＳＰＣに導入される機能的核酸は、従って、内因性ＨＳＰＣにおいて上記核酸および／またはタンパク質の変異した形態から生じる病理を少なくとも部分的に緩和し得る。

免疫治療剤は、代表的には、単離された形態で提供される。これは、このような薬剤が、代表的には、その生成または精製から生じる干渉タンパク質および他の夾雑物から少なくとも５０％ ｗ／ｗ 純粋であるが、上記薬剤が、その使用を促進することが意図された、過剰の薬学的に受容可能なキャリアまたは他のビヒクルと組み合わされるという可能性を排除しないことを意味する。ときおり、薬剤は、生成または精製由来の干渉タンパク質および夾雑物から少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９９％ ｗ／ｗ 純粋である。しばしば、薬剤は、その精製後に残っている優勢な高分子種である。

免疫治療剤の、その標的抗原に対する特異的結合は、少なくとも１０^６、１０^７、１０^８、１０^９、または１０^１０ Ｍ^－１の親和性を意味する。特異的結合は、大きさが検出可能により高く、少なくとも１つの関連しない標的に対して起こる非特異的結合から区別可能である。特異的結合は、特定の官能基の間の結合または特定の空間的適合の形成（例えば、鍵と鍵穴タイプ）の結果であり得るのに対して、非特異的結合は、通常は、ファン・デル・ワールス力の結果である。その標的抗原に特異的に結合する免疫治療剤はまた、その標的抗原に対するものであると記載され得る。

基本的な抗体構造単位は、サブユニットのテトラマーである。各テトラマーは、ポリペプチド鎖の２個の同一の対を含み、各対は、１本の「軽」鎖（約２５ｋＤａ）および１本の「重」鎖（約５０～７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、抗原認識を主に担う約１００～１１０個またはより多くのアミノ酸の可変領域を含む。この可変領域は、最初に、切断可能なシグナルペプチドに連結されて発現される。そのシグナルペプチドのない可変領域は、ときおり、成熟可変領域といわれる。従って、例えば、軽鎖成熟可変領域は、軽鎖シグナルペプチドのない軽鎖可変領域を意味する。しかし、可変領域への言及は、シグナル配列が必ず存在することを意味しない；そして実際に、シグナル配列は、本発明の抗体または他の免疫治療剤が一旦発現されかつ分泌された後に、切断される。重鎖可変領域および軽鎖可変領域の対は、抗体の結合領域を規定する。上記軽鎖および重鎖のカルボキシ末端部分は、それぞれ、軽鎖および重鎖の定常領域を規定する。重鎖定常領域は、主にエフェクター機能を担う。ＩｇＧ抗体では、重鎖定常領域は、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、およびＣＨ３領域に分けられる。ＩｇＡでは、重鎖定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３に分けられる。上記ＣＨ１領域は、ジスルフィド結合および非共有結合的な結合によって軽鎖定常領域に結合する。上記ヒンジ領域は、抗体の結合領域とエフェクター領域との間で可撓性を提供し、テトラマーサブユニットにおいて２つの重鎖低量域の間の分子間ジスルフィド結合の部位も提供する。上記ＣＨ２およびＣＨ３領域は、エフェクター機能およびＦｃＲｎ結合の主な部位である。

軽鎖は、κまたはλのいずれかとして分類される。重鎖は、γ、μ、α、δ、またはεとして分類され、それぞれ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥとして抗体のアイソタイプを規定する。軽鎖および重鎖の中で、可変領域および定常領域は、約１２個またはこれより多くのアミノ酸の「Ｊ」セグメントによって結合され、重鎖はまた、約１０個またはこれより多くのアミノ酸の「Ｄ」セグメントを含む（一般には、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ （Ｐａｕｌ， Ｗ．編， 第２版． Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ， Ｎ．Ｙ．， １９８９， 第７章（全ての目的のためにその全体において参考として援用される）を参照のこと）。

各軽鎖／重鎖対の成熟可変領域は、抗体結合部位を形成する。従って、無傷の抗体は、２個の結合部位を有する、すなわち、２価である。天然の抗体では、上記結合部位は同じである。しかし、二重特異性では、上記結合部位は異なる（例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ ａｎｄ Ｌａｃｈｍａｎｎ， Ｃｌｉｎ． Ｅｘｐ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ７９：３１５－３２１ （１９９０）； Ｋｏｓｔｅｌｎｙら， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １４８：１５４７－５３ （１９９２）を参照のこと）。上記可変領域は、全て、３個の超可変領域（相補性決定領域またはＣＤＲともいわれる）によって結合される比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）の同じ一般的構造を示す。各対の２つの鎖のＣＤＲは、フレームワーク領域によって整列され、特異的エピトープへの結合を可能にする。Ｎ末端からＣ末端へと、軽鎖および重鎖の両方は、以下のドメイン、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４を含む。各ドメインへのアミノ酸の割り当ては、Ｋａｂａｔ， Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ （Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ， Ｍｄ．， １９８７および１９９１）、またはＣｈｏｔｈｉａ ＆ Ｌｅｓｋ， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． １９６：９０１－９１７ （１９８７）； Ｃｈｏｔｈｉａら， Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７８－８８３ （１９８９）の定義に従う。Ｋａｂａｔはまた、異なる重鎖可変領域の間または異なる軽鎖可変領域の間の対応する残基が同じ番号に割り当てられる、広く使用される番号付けの慣習（Ｋａｂａｔ番号付け）を提供する。Ｋａｂａｔ番号付けが抗体定常領域に使用され得るが、本出願と同様に、ＥＵインデックスはより一般的に使用される。

用語「エピトープ」とは、二重特異的抗体のアームが結合する抗原上の部位に言及する。エピトープは、連続するアミノ酸から形成され得るか、または１もしくはこれより多くのタンパク質の三次折りたたみによって近くに並ぶ非連続アミノ酸から形成され得る。連続するアミノ酸から形成されるエピトープ（直線状エピトープとしても公知）は、代表的には、変性溶媒への曝露の際に維持されるのに対して、三次折りたたみによって形成されるエピトープ（コンフォメーションエピトープとしても公知）は、代表的には、変性溶媒での処理の際に失われる。いくつかの抗体は、末端特異的エピトープ（ｅｎｄ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｅｐｉｔｏｐｅ）に結合し、これは、抗体が、別のポリペプチドに融合されて、遊離末端の喪失を生じるその同じポリペプチドと比較して、遊離末端を有するポリペプチドに優先的に結合することを意味する。エピトープは、代表的には、特有の空間的コンフォメーションにおいて、少なくとも３個、およびより通常は、少なくとも５個または８～１０個のアミノ酸を含む。エピトープの空間的コンフォメーションを決定する方法としては、例えば、ｘ線結晶学および２次元核磁気共鳴が挙げられる。例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ， ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｖｏｌ． ６６， Ｇｌｅｎｎ Ｅ． Ｍｏｒｒｉｓ， 編． （１９９６）を参照のこと。

用語「抗原」または「標的抗原」は、二重特異的抗体の１つの結合部位によって結合される標的分子を示す。抗原は、分子の中でもとりわけ、任意の長さのタンパク質（天然の、合成の、または組換え発現される）、核酸または炭水化物であり得る。抗原としては、レセプター、リガンド、カウンターレセプター、およびコートタンパク質が挙げられる。

同じまたは重なり合うエピトープを認識する抗体は、１つの抗体が、標的抗原に対して別の抗体の結合と競合する能力を示す単純なイムノアッセイにおいて同定され得る。抗体のエピトープはまた、接触残基を同定するために、その抗原に結合した抗体のＸ線結晶学によって規定され得る。あるいは、２つの抗体は、一方の抗体の結合を低減または排除する抗原における全てのアミノ酸変異が、他方の結合を低減または排除する場合に同じエピトープを有する。２つの抗体は、一方の抗体の結合を低減または排除するいくつかのアミノ酸変異が、他方の結合を低減または排除する場合に、重なり合うエピトープを有する。

抗体間の競合は、試験中の抗体が、共通する抗原への参照抗体の特異的結合を阻害するアッセイによって決定される（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓら， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ５０：１４９５， １９９０を参照のこと）。試験抗体は、過剰な試験抗体（例えば、少なくとも２倍、５倍、１０倍、２０倍、または１００倍）が、競合結合アッセイにおいて測定される場合、参照抗体の結合を少なくとも５０％、しかし好ましくは７５％、９０％または９９％阻害する場合に、参照抗体と競合する。競合アッセイによって同定される抗体（競合抗体）は、参照抗体と同じエピトープに結合する抗体および立体障害が起こるほど参照抗体によって結合されるエピトープに十分近くに隣接するエピトープに結合する抗体が挙げられる。

保存的または非保存的としてアミノ酸置換を分類する目的のために、アミノ酸は、以下のようにグループ分けされる：グループＩ（疎水性側鎖）：ｍｅｔ、ａｌａ、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ；グループＩＩ（中性親水性側鎖）：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；グループＩＩＩ（酸性側鎖）：ａｓｐ、ｇｌｕ；グループＩＶ（塩基性側鎖）：ａｓｎ、ｇｌｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ；グループＶ（鎖の配向に影響を及ぼす残基）：ｇｌｙ、ｐｒｏ；およびグループＶＩ（芳香族側鎖）：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅ。保存的置換は、同じクラスの中でのアミノ酸間での置換を含む。非保存的置換は、これらのクラスのうちの１個のメンバーを、別のクラスのメンバーと交換することを構成する。

パーセンテージ配列同一性は、可変領域に関するＫａｂａｔ番号付けの慣習または定常領域に関するＥＵ番号付けによって最大に整列された抗体配列で決定される。整列後に、主題の抗体領域（例えば、重鎖または軽鎖の成熟可変領域全体）が、参照抗体の同じ領域と比較される場合、その主題の抗体領域と参照抗体領域との間のパーセンテージ配列同一性は、その主題の抗体領域と参照抗体領域の両方における同じアミノ酸によって占有される位置の数を、ギャップをカウントせずにその２つの領域の整列された位置の全数で除算し、それに１００をかけてパーセンテージに変換したものである。

１またはこれより多くの記載される要素を「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」組成物または方法は、具体的に記載されていない他の要素を含み得る。例えば、抗体を含む組成物は、その抗体を単独で、または他の成分と組み合わせて含み得る。

用語「抗体依存性細胞傷害」、またはＡＤＣＣは、抗体でコーティングした標的細胞（すなわち、抗体が結合した細胞）と溶解活性を有する免疫細胞（エフェクター細胞ともいわれる）との相互作用に依存する細胞死を誘導するための機構である。このようなエフェクター細胞としては、ナチュラルキラー細胞、単球／マクロファージおよび好中球が挙げられる。ＡＤＣＣは、細胞に結合した抗体のＦｃ領域と免疫エフェクター細胞（例えば、好中球、マクロファージおよびナチュラルキラー細胞）上のＦｃγレセプター、特に、ＦｃγＲＩおよびＦｃγＲＩＩＩとの間の相互作用によって誘発される。上記標的細胞は、エフェクター細胞を媒介するタイプに依存して、ファゴサイトーシスまたは溶解によって排除される。抗体でコーティングされた標的細胞の死滅は、エフェクター細胞活性の結果として起こる。

用語「抗体依存性細胞ファゴサイトーシス（ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ）」またはＡＤＣＰとは、抗体でコーティングされた細胞が、免疫グロブリンＦｃ領域に結合する貪食性の免疫細胞（例えば、マクロファージ、好中球および樹状細胞）によって、全体的にまたは部分的に、のいずれかで内部移行されるプロセスに言及する。

用語「補体依存性細胞傷害」またはＣＤＣとは、標的に結合した抗体のＦｃエフェクタードメインが、標的細胞膜において孔を形成することになる一連の酵素反応を活性化する細胞死を誘導するための機構に言及する。代表的には、抗原－抗体複合体（例えば、抗体でコーティングされた標的細胞上のもの）が、補体成分Ｃ１ｑを結合および活性化し、これは次に、補体カスケードを活性化し、標的細胞の死滅をもたらす。補体の活性化はまた、白血球上の補体レセプター（例えば、ＣＲ３）を結合することによって、ＡＤＣＣを促進する、標的細胞表面上の補体成分の沈着を生じ得る。

詳細な説明
Ｉ．概略
本発明は、遺伝的に改変された造血幹または前駆細胞（ＨＳＰＣ）および幹細胞置換療法において上記ＨＳＰＣを使用する方法を提供する。上記ＨＳＰＣは、改変のない内因性ＨＳＰＣまたはコントロールＨＳＰＣと比較して、導入された細胞に選択的な利点を付与するレセプターを発現するように遺伝的に改変される。このようなレセプターの存在は、内因性ＨＳＰＣを排除するために使用される免疫療法レジメンに対する抵抗性を提供する。従って、上記免疫療法レジメンは、内因性ＨＳＰＣと比較して、導入されるＨＳＰＣの増殖に都合が良い。上記遺伝的に改変されたＨＳＰＣは、遺伝的障害を被りやすい内因性ＨＳＰＣを置換するために、血液悪性疾患もしくは自己免疫疾患を被りやすい内因性ＨＳＰＣを置換するために、適用の中でもとりわけ、化学療法レジメンによって損傷した内因性ＨＳＰＣを置換するために、または臓器移植前に除去された内因性ＨＳＰＣを置換するために、使用され得る。

ＩＩ．ＨＳＰＣ
適用に依存して、被験体に導入されるべきＨＳＰＣは、自家（すなわち、その被験体に由来する）、同種異系（同じ種の別の個体に由来する）、または異種（異なる種に由来する）であり得る。同種異系である場合、上記ＨＳＰＣは、ＭＨＣアレルに関して完全にマッチし得るか、部分的にマッチし得るか、またはマッチしていない可能性がある。マッチしたＨＳＰＣが、親類または全くの他人から得られ得る。

全てのＨＳＰＣは、増殖し、骨髄系統またはリンパ系統または両方へと分化する能力があるが、ＨＳＰＣは、異なる分化ステージの細胞を含む。原始幹細胞は、無限に増殖し得、骨髄系統およびリンパ系統の全ての細胞タイプを形成し得る。原始幹細胞は、多能性前駆細胞（ｍｕｌｔｉ－ｐｏｔｅｎｔ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ）へと分化し、これは、骨髄系統およびリンパ系統の両方の全ての細胞を生じ得るが、無限には増殖できない。多能性前駆細胞は、共通リンパ系前駆細胞、ＣＬＰを含む少能性前駆細胞（ｏｌｉｇｏ－ｐｏｔｅｎｔ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ）を生じ、これは、成熟Ｂリンパ球、Ｔリンパ球、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を生じる。多能性前駆細胞はまた、共通骨髄系前駆細胞（ＣＭＰ）を生じ、これはさらに、単球／マクロファージおよび顆粒球へと分化する顆粒球-マクロファージ前駆細胞へと、ならびに巨核球／血小板および赤血球へと分化する巨核球／赤血球前駆細胞へと分化する（Ｂｒｙｄｅｒら， Ａｍ． Ｊ． Ｐａｔｈｏｌ． １６９， ３３８－３４６ （２００６）の図１を参照のこと）。

原始ＨＣおよび多能性前駆細胞は、例えば、Ｃｏｂｂｌｅｓｔｏｎｅ－Ｆｏｒｍｉｎｇ Ａｒｅａ Ｃｅｌｌ Ａｓｓａｙ（Ｐｌｏｅｍａｃｈｅｒら． Ｂｌｏｏｄ． ７８：２５２７－３３ （１９９１））を行うことによって、実験上は互いから区別され得る。前駆細胞は、培養において１～３週間の期間に早期に出現するのに対して、原始造血幹細胞は、培養において４～５週間で出現する。原始幹細胞および多能性前駆細胞の両方が、置換療法に有用である。さらに分化した細胞（例えば、ＣＭＰまたはＣＬＰ）がまた使用され得るが、それらの制限された増殖能およびそれらが形成し得る細胞の系統が制限されることから、それほど用途が広いわけではない。

ＨＳＰＣは、骨髄から、末梢血または臍帯血から採取することによって得られ得る。骨髄は一般に、ドナーが局所麻酔または全身麻酔のいずれかの下にある間に、後腸骨稜から吸引される。さらなる骨髄は、前腸骨稜から得られ得る。骨髄は、幹細胞数を増大させるために、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ；フィルグラスチム［Ｎｅｕｐｏｇｅｎ］）で刺激され得る。全骨髄（ｗｈｏｌｅ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ）」への言及は、一般に、特異的免疫細胞部分セットに関して選択されていない骨髄に由来する単核細胞の組成物に言及する。「分画された骨髄（ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｅｄ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ）」とは、例えば、Ｔ細胞、例えば、ＣＤ８＋細胞、ＣＤ５２＋細胞、ＣＤ３＋細胞などが枯渇されていてもよいし；ＣＤ３４＋細胞などが富化されていてもよい。

ＨＳＰＣはまた、サイトカイン（例えば、Ｇ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦまたはＰｌｅｒｉｘａｆｏｒ（ＡＭＤ３１００またはＭｏｚｏｂｉｌとしても公知）によって、骨髄から末梢血へと幹細胞を動員することによって得られ得る。動員に使用されるＧ－ＣＳＦの例示的用量は、１０μｇ／ｋｇ／日であるが、例えば、４０μｇ／ｋｇ／日までのより高い用量が与えられ得る。Ｍｏｚｏｂｉｌは、収集用にＨＳＰＣを末梢血へと動員するためにＧ－ＣＳＦとともに使用され得る。ＨＳＰＣは、アフェレーシスデバイスで末梢血から採取され得る。

ＨＳＰＣはまた、臍帯血（ＵＢＣ）から、代表的には同種異系移植片のために得られ得る。ＵＣＢは、インビボで長期間再生息する幹細胞を生成する能力がある原始幹／前駆細胞において富化される。

これらの手順から単離された血球は、ＨＳＰＣまたはその部分セット、例えば、特徴的な細胞表面マーカーに関するアフィニティー富化による原始幹細胞および／または共通前駆細胞に関する富化を、受け得る。このようなマーカーとしては、ＣＤ３４；ＣＤ９０（ｔｈｙ－１）；ＣＤ５９；ＣＤ１１０（ｃ－ｍｐｌ）；ｃ－Ｋｉｔ（ＣＤ－１１７）が挙げられる。細胞は、磁性ビーズ選択、フローサイトメトリーなどを含むアフィニティー方法によって、ドナー造血細胞サンプルから選択され得る。Ｃｅｐａｒｔｅ、Ｉｓｏｌｅｘ ３００ｉ、およびＣｌｉｎｉＭＡＣＳ Ｐｒｏｄｉｇｙ（登録商標）を含むいくつかの免疫選択デバイスは、ＣＤ３４＋細胞選択のために市販されている。

ＨＳＰＣ組成物は、集団中のＣＤ３４^＋である細胞のパーセンテージによって規定される場合、少なくとも約５０％純粋であり得、少なくとも約７５％純粋、少なくとも約８５％純粋、少なくとも約９５％純粋、またはそれより高く純粋であり得る（同様に規定される）。

ＩＩＩ．除去レジメンに対する抵抗性を付与するレセプター
ＨＳＰＣは、１またはこれより多くのレセプター（内因性ＨＳＰＣを含む被験体への置換ＨＳＰＣの導入後に、置換ＨＳＰＣの割合が時間を経て増大するように、内因性ＨＳＰＣよりも、置換ＨＳＰＣに選択的増殖の利点を付与する）を発現するように遺伝的に改変される。適切なレセプターとしては、ｄｏｎ’ｔ ｅａｔ ｍｅレセプターが挙げられる。ｄｏｎ’ｔ ｅａｔ ｍｅレセプターは、細胞が代表的に存在する生物の免疫系から、そのレセプターを発現する細胞を保護するレセプターである。本方法において、ｄｏｎ’ｔ ｅａｔ ｍｅレセプターは、置換ＨＳＰＣを、レシピエント被験体における免疫系に対して、特に、その被験体から内因性ＨＳＰＣを除去するにあたって使用される免疫療法に対して保護する。適切なレセプターの例は、ＣＤ４７（例えば、Ｓｗｉｓｓ Ｐｒｏｔ Ｑ０８７２２）、ｃ－Ｋｉｔ（例えば、Ｓｗｉｓｓ Ｐｒｏｔ Ｐ１０７２１）、β２Ｍ（例えば、Ｓｗｉｓｓ Ｐｒｏｔ Ｐ６１７６９）／ＭＨＣ－１（多くの異なるアクセッション番号）、ＰＤ－Ｌ１（Ｑ９ＮＺＱ７）、ＣＤ２４（Ｓｗｉｓｓ Ｐｒｏｔ Ｐ２５０６３）、ＧＡＳ６（例えば、Ｓｗｉｓｓ Ｐｒｏｔ Ｑ１４３９３）およびＣＤ３１（例えば、Ｓｗｉｓｓ Ｐｒｏｔ Ｐ１６２８４）である。このようなレセプターへの言及は、ヒト形態（例えば、提供されるアクセッション番号のもの）への言及として理解されるべきである。しかし、これらのレセプターの非ヒト形態はまた、獣医学的適用またはモデル化実験において使用され得る。

貪食細胞上のＳＩＲＰαへのＨＳＰＣ上のＣＤ４７の結合は、ＨＳＰＣをファゴサイトーシスから保護するｄｏｎ’ｔ ｅａｔ ｍｅシグナル（内因性ＨＳＰＣの除去レジメンにおいて使用される抗体によって誘導されるものを含む）を生成する。

ＣＤ３１は、ｄｏｎ’ｔ ｅａｔ ｍｅレセプターの別の例である。Ｂｒｏｗｎら， Ｎａｔｕｒｅ． ２００２；４１８（６８９４）：２００-２０３。

ＭＨＣクラスＩ分子は、２つのポリペプチド鎖、αおよびβ２－ミクログロブリン（ｂ２ｍ）からなるヘテロダイマーである。その２つの鎖は、ｂ２ｍおよびα３ドメインの相互作用を介して非共有結合的に連結される。ＭＨＣクラスＩタンパク質は、マクロファージ上でＬＩＬＲＢ１といわれるタンパク質に結合することによって、「ｄｏｎ’ｔ ｅａｔ ｍｅ」シグナルを生成する。ＭＨＣクラスＩタンパク質またはＬＩＬＲＢ１のいずれかが遮断される場合、その「ｄｏｎ’ｔ ｅａｔ ｍｅ」シグナルは高められ、マクロファージがＭＨＣクラスＩを有する細胞を殺滅する能力が回復された。ＭＨＣクラスＩはまた、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）の阻害性リガンドとしても働き得る。表面クラスＩ ＭＨＣの正常レベルにおける低減（いくつかのウイルスおよびある特定の腫瘍によって、ＣＴＬ応答から逃れるために使用される機構）は、ＮＫ細胞殺滅を活性化する。

プログラム死－リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）は、適応免疫系に「ｄｏｎ’ｔ ｆｉｎｄ ｍｅ」シグナルを提供する。

増殖停止特異的６（ｇｒｏｗｔｈ ａｒｒｅｓｔ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ６）（ＧＡＳ６としても公知）は、Ｇａｓ６タンパク質をコードするヒト遺伝子である。ＧＡＳ６は、ある特定のがん（ＡＭＬを含む）で発現される。ＷＵら， Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ ＆ Ｄｉｓｅａｓｅ ｖｏｌｕｍｅ ８， ｐａｇｅ ｅ２７００ （２０１７）。

ＣＤ２４は、種々のがんおよびがん幹細胞によって発現される小さな細胞表面タンパク質であり、細胞接着およびがん転移に関与する。Ｊａｇｇｕｐｉｌｌｉら， Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｖｏｌｕｍｅ ２０１２， Ａｒｔｉｃｌｅ ＩＤ ７０８０３６。

上記で記載されるとおりの保護的レセプターは、野生型配列（代表的にはヒト）またはこのような配列の変異体バージョンの形態で存在し得る。野生型でない場合、レセプターは、代表的には、改変体または野生型の全長にわたって、どちらがより短かかろうが、野生型と少なくとも９０％、９５％または９９％の配列同一性を示す。任意の差異が、保存的置換であり得るが、そうである必要はない。保護的レセプターは、野生型であっても変異体配列であっても、代表的には、細胞外ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインを含む。保護的レセプターは、全長であり得る（シグナルペプチドの除外はあり得る）か、または保護的機能が維持されることを条件として、短縮型であり得る（例えば、末端から）。例えば、上記保護の役割が、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間のようなリガンド結合を要する場合、このような結合は、保持されるべきである。

保護的レセプターの野生型バージョンは、除去レジメンが、保護的レセプターに対する抗体を含まない場合に、特に有用である。例えば、除去レジメンが、ｃ－Ｋｉｔに対するが、ＣＤ４７に対するものではない抗体を使用する場合、野生型ＣＤ４７は、置換ＨＳＰＣ上の保護的レセプターとして使用され得る。

保護的レセプターの変異体バージョンは、内因性ＨＰＳＣに対するかまたは上記レセプターを有するがん細胞に対するかのいずれかの除去レジメンの一部として、抗体が指向されるレセプターにとって特に有用である。上記保護的レセプターへの変異の導入は、内因性ＨＳＰＣの除去またはがん処置のために使用されるレセプターに対する抗体または他の免疫治療剤への上記レセプターの結合を低減または排除する。同様に、上記変異は、上記抗体または他の免疫治療剤が、上記レセプターをアンタゴナイズする能力を低減する。言い換えると、上記抗体または他の免疫治療剤は、野生型レセプターに結合しかつ変異体レセプターより強くアンタゴナイズする（あるとすれば）。上記変異は、このような抗体によって結合されるエピトープを形成する保護的レセプターの１またはこれより多くのアミノ酸位置に存在し得る。例えば、除去レジメンに、エピトープＸに結合するｃ－Ｋｉｔに対する抗体が関わる場合、ＨＳＰＣは、上記抗体が変異したｃ－Ｋｉｔに結合しないかまたは低減した程度でのみ結合するように、エピトープＸにおいて変異を有するｃ－Ｋｉｔを発現するように遺伝的に操作され得る。あるいは、上記変異は、アロステリックに結合する抗体を低減または排除し得る。このような変異は、好ましくは、そのリガンド、幹細胞因子へのｃ－Ｋｉｔの結合を顕著に低減しない。同様に、除去レジメンに、内因性ＨＳＰＣの除去を促進するためにエピトープＹに結合するＣＤ４７に対する抗体が関わる場合、ＨＳＰＣは、上記抗体が、ＣＤ４７に結合しないかまたは低減した程度でのみ結合するように、エピトープＹの中で変異したＣＤ４７を発現するように遺伝的に改変され得る。あるいは、上記変異は、アロステリックに結合する抗ＣＤ４７抗体を低減または排除し得る。このような変異は、好ましくは、ＳＩＲＰαに対するＣＤ４７の結合を顕著に低減しない。他の保護的レセプターの同様に変異した形態は、同様に、除去、またはこのようなレセプターのうちの１もしくはこれより多くに対する抗体が関わる抗がん治療との組み合わせにおいて使用され得る。

ＩＶ．除去レジメン
除去レジメンは、内因性ＨＳＰＣを低減または排除するように働く。内因性ＨＳＰＣは、置換ＨＳＰＣを導入する前に、例えば、少なくとも１０％、２５％、５０％または９０％程度低減され得る。いくつかのレジメンは、置換ＨＳＰＣを導入する前に、例えば、５０％、２５％または１０％を超えて内因性ＨＳＰＣを低減させない。

このような除去レジメンは、ｃ－Ｋｉｔ（ＣＤ１１７）に特異的に結合する抗体の投与を含む（一般には、ＷＯ ２００８０６７１１５を参照のこと）。Ｃ－Ｋｉｔは、骨髄においてＨＳＰＣのある特定のタイプを同定するために使用される細胞表面マーカーである。造血幹細胞（ＨＳＣ）、多能性前駆細胞（ＭＰＰ）、および共通骨髄系前駆細胞（ＣＭＰ）は、高レベルのｃ－Ｋｉｔを発現する。このような抗体は、ｃ－Ｋｉｔとそのリガンドの間の相互作用を阻害することによって、およびエフェクター媒介性機構（例えば、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰおよびＣＤＣ）によって、内因性ＨＳＰＣを低減し得る。ｃ－Ｋｉｔは、レセプターチロシンキナーゼタイプＩＩＩであり、これは、幹細胞因子（ある特定のタイプの細胞を増殖させる物質）（「ｓｔｅｅｌ ｆａｃｔｏｒ」または「ｃ－Ｋｉｔリガンド」としても公知）に結合する。このレセプターが幹細胞因子に結合する場合、それは、その固有のキナーゼ活性を活性化させるダイマーを形成し、これは、次に、細胞においてそのシグナルを伝播するシグナル伝達分子をリン酸化し、活性化する。ヒトｃ－Ｋｉｔに特異的に結合する多くの抗体は、市販されている（ＳＲ１、２Ｂ８、ＡＣＫ２、ＹＢ５－Ｂ８、５７Ａ５、１０４Ｄ２（ＵＳ２０１８０２１４５２５）が挙げられる）。ＡＭＧ１９１は、ＳＲ１のヒト化形態である（米国特許第８，４３６，１５０号および同第７，９１５，３９１号）。ＳＲ１のさらなるヒト化形態は、２０１９年１１月２５日出願のＰＣＴ／ＵＳ１９／６３０９１（全ての目的のためにその全体において参考として援用される）に記載される。本発明のいくつかの抗体は、配列番号１３、１７または２１と指定される鎖（それぞれ、２０１９年１１月２５日出願のＰＣＴ／ＵＳ１９／６３０９１のＡＨ２、ＡＨ３、およびＡＨ４と指定される）のうちのいずれかの配列を有する成熟重鎖可変領域、およびＰＣＴ／ＵＳ１９／６３０９１の配列番号５３、ＮＬ２（本明細書中、配列番号１３～１６）の配列を有する成熟軽鎖可変領域を有する。これらの抗体（キメラ形態、ベニア形態またはヒト化形態を含む）またはｃ－Ｋｉｔへの結合に関して同じエピトープを結合するかまたはこれと競合する抗体のうちのいずれかは、開示される方法において使用され得る。ｃ－Ｋｉｔに対する他の抗体は、以下にさらに記載されるとおりの標準的な免疫学的技術によって新規に生成され得る。

上記除去レジメンはまた、ｃ－Ｋｉｔに対する抗体との組み合わせにおける使用のための、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα相互作用を阻害する免疫治療剤を含み得る（一般には、ＷＯ２０１６０３３２０１を参照のこと）。このような薬剤は、抗ｃ－Ｋｉｔによって媒介される内因性ＨＳＰＣのエフェクター媒介性排除を促進する。このような薬剤としては、ＣＤ４７またはＳＩＲＰαに特異的に結合する抗体が挙げられる。このような薬剤はまた、Ｆｃに融合したＣＤ４７ ＥＣＤ（これは、ＳＩＲＰαに対する抗体と同様に機能する）、またはＦｃに融合したＳＩＲＰα（これは、ＣＤ４７に対する抗体と同様に機能する）を含む（Ｚｈａｎｇら， Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， Ｖｏｌｕｍｅ １， Ｉｓｓｕｅ ２， ２１ Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２０１８， Ｐａｇｅｓ ２７-３２を参照のこと）。好ましい抗体は、いずれかのレセプターを介する活性化シグナルを与えることなく、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα相互作用をアンタゴナイズする。

適切な抗ＣＤ４７抗体の例としては、クローンＢ６Ｈ１２、５Ｆ９、８Ｂ６、Ｃ３（例えば、ＷＯ ２０１１／１４３６２４に記載されるとおり）、ＣＣ９００２（Ｖｏｎｄｅｒｈｅｉｄｅ， Ｎａｔ Ｍｅｄ ２０１５； ２１： １１２２-３．， ２０１５）、およびＳＲＦ２３（Ｓｕｒｆａｃｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）が挙げられる。適切な抗ＣＤ４７抗体としては、このような抗体、ＣＤ４７への結合に関して同じエピトープに結合するか、またはそれと競合する抗体のヒト、ヒト化、またはキメラバージョンが挙げられる。ヒト化抗体（例えば、ｈｕ５Ｆ９－ＩｇＧ４－ＷＯ２０１１／１４３６２４）は、それらの低い抗原性に起因して、ヒトにおいてインビボ適用に特に有用である。同様にイヌ化、ネコ化抗体などは、それぞれ、イヌ、ネコ、および他の種における適用に特に有用である。ＷＯ２０１１／１４３６２４（本明細書で、配列番号１～６）の、配列番号２０、２１および２２にそれぞれ示されるＶＨ相補性領域、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む可変性重鎖（ＶＨ）領域；ならびに配列番号２３、２４および２５にそれぞれ示されるＶＬ相補性領域、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む可変性軽鎖（ＶＬ）領域を含むいくつかのヒト化抗体は、ヒトＣＤ４７に特異的に結合する。いくつかのヒト化抗体は、ＷＯ２０１１／１４３６２４（本明細書で配列番号７～１２）に示される、配列番号３６、配列番号３７および配列番号３８から選択される重鎖可変領域ならびに配列番号４１、配列番号４２および配列番号４３から選択される軽鎖可変領域を含む。例示的な抗体は、マグロリマブ（ｍａｇｒｏｌｉｍａｂ）である。

適切な抗ＳＩＲＰα抗体は、ＳＩＲＰαに、好ましくはファゴサイトーシスを阻害するために十分なシグナル伝達応答を活性化／刺激することなく特異的に結合し、ＳＩＲＰαとＣＤ４７との間の相互作用を阻害する。適切な抗ＳＩＲＰα抗体は、このような抗体の完全ヒト、ヒト化またはキメラバージョンを含む。例示的な抗体は、ＫＷＡＲ２３（Ｒｉｎｇら， Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ２０１７ Ｄｅｃ ５； １１４（４９）：Ｅ１０５７８-Ｅ１０５８５、ＷＯ２０１５／１３８６００）、ＭＹ－１（Ｙａｎａｇｉｔａら， ＪＣＩ Ｉｎｓｉｇｈｔ． ２０１７ Ｊａｎ １２； ２（１）： ｅ８９１４０）、およびＥｆｆｉ－ＤＥＭ（Ｚｈａｎｇら， Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， Ｖｏｌｕｍｅ １， Ｉｓｓｕｅ ２， ２１ Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２０１８， ｐａｇｅｓ ２７-３２）である。ヒト化抗体は、それらの低い抗原性に起因して、ヒトにおけるインビボ適用に特に有用である。同様にイヌ化、ネコ化抗体などは、それぞれ、イヌ、ネコ、および他の種における適用に特に有用である。

免疫治療剤はまた、ＳＩＲＰαに特異的に結合する可溶性ＣＤ４７ポリペプチドを含み、ＨＳＰＣ上のＣＤ４７と貪食細胞上のＳＩＲＰαとの間の相互作用を低減する（例えば、ＷＯ２０１６１７９３９９を参照のこと）。このようなポリペプチドは、ＥＣＤ全体または上記の機能性を有するその一部を含み得る。適切な可溶性ＣＤ４７ポリペプチドは、ＳＩＲＰαに、ＳＩＲＰαを介するシグナル伝達を活性化も刺激もすることなく特異的に結合する。なぜならＳＩＲＰαの活性化は、ファゴサイトーシスを阻害するからである。代わりに、適切な可溶性ＣＤ４７ポリペプチドは、内因性ＨＣＳＰのファゴサイトーシスを促進する。可溶性ＣＤ４７ポリペプチドは、Ｆｃに融合され得る（例えば、ＵＳ２０１００２３９５７９に記載されるとおり）。

免疫療法試薬としてはまた、ＣＤ４７に特異的に結合しかつそのＳＩＲＰαとの相互作用を阻害する可溶性ＳＩＲＰαポリペプチドが挙げられる。例示的な薬剤としては、ＡＬＸ１４８（Ｋａｕｄｅｒら， Ｂｌｏｏｄ ２０１７ １３０：１１２）ならびにＴＴＩ－６２２およびＴＴＩ－６６１（Ｔｒｉｌｌｉｕｍ）が挙げられる。このような薬剤は、ＳＩＲＰα ＥＣＤ全体または上記の機能性を有するそれらの任意の部分を含み得る。上記ＳＩＲＰα試薬は通常、ＳＩＲＰαの少なくともｄ１ドメインを含む。上記可溶性ＳＩＲＰαポリペプチドは、Ｆｃ領域に融合され得る。「高親和性ＳＩＲＰα試薬（ｈｉｇｈ ａｆｆｉｎｉｔｙ ＳＩＲＰα ｒｅａｇｅｎｔ）」といわれる例示的なＳＩＲＰαポリペプチドは、ＳＩＲＰα由来ポリペプチドおよびそのアナログを含む（例えば、ＣＶ１－ｈｌｇＧ４、およびＣＶ１モノマーは、ＷＯ２０１３／１０９７５２に記載される）。高親和性ＳＩＲＰα試薬は、天然のＳＩＲＰαタンパク質の改変体である。増大した親和性を提供するアミノ酸変化は、ｄ１ドメインに位置し、従って、高親和性ＳＩＲＰα試薬は、ｄ１ドメイン内の野生型配列と比較して、少なくとも１個のアミノ酸変化を有するヒトＳＩＲＰαのｄ１ドメインを含む。このような高親和性ＳＩＲＰα試薬は、必要に応じて、さらなるアミノ酸配列、例えば、抗体Ｆｃ配列；ｄ１ドメイン以外の野生型ヒトＳＩＲＰαタンパク質の一部（天然タンパク質の残基１５０～３７４またはそのフラグメント、通常は、ｄ１ドメインと連続するフラグメント；などが挙げられるが、これらに限定されない）を含む。高親和性ＳＩＲＰα試薬は、モノマーまたはマルチマー、すなわち、ダイマー、トリマー、テトラマー、などであり得る。いくつかの実施形態において、高親和性ＳＩＲＰα試薬は可溶性であり、ここで上記ポリペプチドは、ＳＩＲＰα膜貫通ドメインを欠いており、野生型ＳＩＲＰα配列と比較して、少なくとも１個のアミノ酸変化を含み、そしてここで上記アミノ酸変化は、例えば、多くとも１０／１、多くとも２０／１、多くとも５０／１、多くとも１００／１、多くとも５００／１またはこれより低くオフレートを減少させることによって、ＣＤ４７に結合するＳＩＲＰαポリペプチドの親和性を増大させる。ＣＤ４７またはＳＩＲＰαに指向され、Ｆｃ領域を有する免疫治療剤は、ヒトアイソタイプのうちのいずれか、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４を有し得る。ヒトＩｇＧ４もしくはＩｇＧ２アイソタイプまたはエフェクター機能を低減するように変異したＩｇＧ１が使用され得る。なぜならエフェクター機能は、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα相互作用を阻害するために必要とされないからである。

免疫治療剤（抗体およびＦｃ融合タンパク質を含む）は、内因性ＨＳＰＣを低減または排除するという所望の目的を達成するために有効なレジメンにおいて投与される。有効なレジメンとは、用量、投与頻度および投与経路の組み合わせに言及する。このような薬剤の有効な用量は、上記薬剤に伴って変動し得る。抗ｃ－Ｋｉｔ抗体に関する例示的な用量は、少なくとも０．０５ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇまで、例えば、約０．０５～１０ｍｇ／ｋｇ、または０．１～５ｍｇ／ｋｇである。ＣＤ４７－ＳＩＲＰαを阻害する免疫療法薬剤に関する例示的な用量は、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇまたは５０ｍｇ／ｋｇのうちのいずれかまでで、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇのうちの少なくともいずれかである。いくつかの例示的な範囲は、０．０５ｍｇ／ｋｇ～５０ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ～２０ｍｇ／ｋｇまたは１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇである。必要に応じて、このような免疫治療剤は、最初に、１またはこれより多くの刺激用量において、続いて、１またはこれより多くの治療用量において投与されて、例えば、ＷＯ２０１７１８１０３３によって記載されるように、赤血球の不要な架橋を低減し得る。

免疫療法薬剤は、内因性ＨＳＰＣを所望のレベルへと低減するか、または内因性ＨＳＰＣを排除するために、置換ＨＳＰＣを導入する前に、１回またはより多くの複数回、投与され得る。上記レジメンは、置換ＨＳＰＣを導入する例えば、１ヶ月、２週間、１週間またはより短い期間前に始まり得る。上記免疫療法薬剤はまた、ＨＳＰＣを、残りの内因性ＨＳＰＣに対して選択するために、置換ＨＳＰＣを導入した後に、１回または複数回投与され得る。あるいは、上記除去レジメンは、置換ＨＳＰＣの導入と同時または導入後に、始まり得る。

複数の免疫治療剤が使用される場合、上記薬剤または薬剤の組み合わせは、置換ＨＳＰＣを導入する前および導入した後で、同じであってもよいし、そうでなくてもよい。例えば、抗ｃ－Ｋｉｔは、置換ＨＳＰＣの導入前に単独で、および抗ｃ－Ｋｉｔおよび抗ＣＤ４７の両方が後に投与され得る。置換ＨＳＰＣの導入後に、内因性ＨＳＰＣに対する除去レジメンが、内因性ＨＳＰＣが所望のレベルへと低減されるまで継続され得る。遺伝的に改変されたＨＳＰＣを、遺伝的に改変されたＨＳＰＣに関する選択が進行中の、いくらかの内因性ＨＳＰＣを保持する被験体に導入することは、結果的に、どんなときにも感染のリスクがあるＨＳＰＣの被験体を完全には欠乏させないということにおいて有利である。

免疫治療剤は、代表的には、上記薬剤が１またはこれより多くの薬学的に受容可能なキャリアと組み合わされる薬学的組成物として投与される。種々の水性キャリアが使用され得る（例えば、緩衝化食塩水など）。これらの溶液は無菌であり、概して不要な物質を含まない。これらの組成物は、従来の技術によって滅菌され得る。上記組成物は、生理学的条件に近づけるために必要とされるとおりの薬学的に受容可能な補助物質（例えば、ｐＨ調節剤および緩衝化剤）、張度調節剤など（例えば、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウムなど）を含み得る。これらの製剤中の活性薬剤の濃度は、広く変動し得、選択される特定の投与様式および患者のニーズに従って、流体の容積、粘性、体重などに主に基づいて選択される（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ（第１５版， １９８０）およびＧｏｏｄｍａｎ ＆ Ｇｉｌｌｍａｎ， Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（Ｈａｒｄｍａｎら，編， １９９６））。

Ｖ．抗体の一般的特徴
抗原に対する他の非ヒトモノクローナル抗体（例えば、マウス、モルモット、霊長類、ウサギ、またはラット）の生成は、例えば、上記動物を上記抗原もしくはそのフラグメント、または上記抗原を有する細胞で免疫することによって達成され得る。Ｈａｒｌｏｗ ＆ Ｌａｎｅ， Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ， Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ （ＣＳＨＰ ＮＹ， １９８８）（全ての目的のために参考として援用される）を参照のこと。このような抗原は、天然の供給源から、ペプチド合成によって、または組換え発現によって得られ得る。必要に応じて、上記抗原は、キャリアタンパク質と融合されて、または別の方法で複合体化されて投与され得る。必要に応じて、上記抗原は、アジュバントとともに投与され得る。いくつかのタイプのアジュバントが、以下で記載されるように使用され得る。完全フロイントアジュバント、続いて、不完全アジュバントが、実験動物を免疫するために好ましい。

ヒト化抗体は、非ヒト「ドナー」抗体に由来するＣＤＲが、ヒト「アクセプター」抗体配列にグラフト化される遺伝的に操作された抗体である（例えば、Ｑｕｅｅｎ， 米国特許第５，５３０，１０１号および同第５，５８５，０８９号； Ｗｉｎｔｅｒ， 米国特許第５，２２５，５３９号、Ｃａｒｔｅｒ， 米国特許第６，４０７，２１３号、Ａｄａｉｒ， 米国特許第５，８５９，２０５号、同第６，８８１，５５７号、Ｆｏｏｔｅ， 米国特許第６，８８１，５５７号を参照のこと）。上記アクセプター抗体配列は、例えば、成熟ヒト抗体配列、このような配列の複合物、ヒト抗体配列のコンセンサス配列、または生殖細胞系列領域配列であり得る。従って、ヒト化抗体は、ドナー抗体に完全にまたは実質的に由来するいくつかまたは全てのＣＤＲならびにヒト抗体配列に完全にまたは実質的に由来する可変領域フレームワーク配列および定常領域（存在する場合）を有する抗体である。同様に、ヒト化重鎖は、ドナー抗体重鎖に完全にまたは実質的に由来する少なくとも１個、２個および通常は３個全てのＣＤＲ、ならびにヒト重鎖可変領域フレームワークおよび定常領域配列に実質的に由来する重鎖可変領域フレームワーク配列および重鎖定常領域（存在する場合）を有する。同様に、ヒト化軽鎖は、ドナー抗体軽鎖に完全にまたは実質的に由来する少なくとも１個、２個および通常は３個全てのＣＤＲ、ならびにヒト軽鎖可変領域フレームワークおよび定常領域配列に実質的に由来する軽鎖可変領域フレームワーク配列および軽鎖定常領域（存在する場合）を有する。ナノボディーおよびｄＡｂ以外は、ヒト化抗体は、ヒト化重鎖およびヒト化軽鎖を含む。ヒト化抗体におけるＣＤＲは、相当する残基（Ｋａｂａｔによって定義されるとおり）のうちの少なくとも８５％、９０％、９５％または１００％が、それぞれのＣＤＲ間で同一である場合に、非ヒト抗体における相当するＣＤＲに実質的に由来する。抗体鎖の可変領域フレームワーク配列または抗体鎖の定常領域は、Ｋａｂａｔによって定義される相当する残基のうちの少なくとも８５％、９０％、９５％または１００％が同一である場合、それぞれ、ヒト可変領域フレームワーク配列またはヒト定常領域に実質的に由来する。

ヒト化抗体はしばしば、マウス抗体に由来する全６個のＣＤＲ（好ましくはＫａｂａｔによって定義されるとおり）を組み込むが、それらはまた、全てより少ないＣＤＲ（例えば、マウス抗体に由来する少なくとも３個、４個、または５個のＣＤＲ）で作製され得る（例えば、Ｐａｓｃａｌｉｓら， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １６９：３０７６， ２００２； Ｖａｊｄｏｓら， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， ３２０： ４１５－４２８， ２００２； Ｉｗａｈａｓｈｉら， Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ３６：１０７９－１０９１， １９９９； Ｔａｍｕｒａら， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， １６４：１４３２－１４４１， ２０００）。

キメラ抗体は、非ヒト抗体（例えば、マウスの）軽鎖および重鎖の成熟可変領域が、ヒト軽鎖および重鎖定常領域と組み合われる抗体である。このような抗体は、マウス抗体の結合特異性を実質的にまたは完全に保持し、約２／３のヒト配列が存在する。

ベニア化抗体は、ＣＤＲのうちのいくつかおよび通常は全て、ならびに非ヒト抗体の非ヒト可変領域フレームワーク残基のうちのいくつかを保持するが、Ｂ細胞エピトープまたはＴ細胞エピトープに寄与し得る他の可変領域フレームワーク残基（例えば、露出した残基）（Ｐａｄｌａｎ， Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２８：４８９， １９９１）をヒト抗体配列の相当する位置に由来する残基で置き換えるヒト化抗体のタイプである。その結果は、ＣＤＲが、非ヒト抗体に完全にまたは実質的に由来し、非ヒト抗体の可変領域フレームワークが、置換によってよりヒト様にされる抗体である。

ヒト抗体は、ヒトから単離され得るか、またはさもなければ、ヒト免疫グロブリン遺伝子の発現から生じ得る（例えば、トランスジェニックマウスにおいて、インビトロでまたはファージティスプレイによって）。ヒト抗体を生成するための方法としては、以下が挙げられる： Ｏｅｓｔｂｅｒｇら， Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ２：３６１－３６７ （１９８３）； Ｏｅｓｔｂｅｒｇ， 米国特許第４，６３４，６６４号；およびＥｎｇｌｅｍａｎら， 米国特許第４，６３４，６６６号のトリオーマ法、ヒト免疫グロブリン遺伝子を含むトランスジェニックマウスの使用（例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇら， ＷＯ９３／１２２２７（１９９３）； 米国特許第５，８７７，３９７号、同第５，８７４，２９９号、同第５，８１４，３１８号、同第５，７８９，６５０号、同第５，７７０，４２９号、同第５，６６１，０１６号、同第５，６３３，４２５号、同第５，６２５，１２６号、同第５，５６９，８２５号、同第５，５４５，８０６号、Ｎａｔｕｒｅ １４８， １５４７－１５５３ （１９９４）、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４， ８２６ （１９９６）、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ， ＷＯ ９１／１０７４１（１９９１）を参照のこと）およびファージディスプレイ法（例えば、Ｄｏｗｅｒら， ＷＯ ９１／１７２７１およびＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら， ＷＯ ９２／０１０４７、米国特許第５，８７７，２１８号、同第５，８７１，９０７号、同第５，８５８，６５７号、同第５，８３７，２４２号、同第５，７３３，７４３号、および同第５，５６５，３３２を参照のこと）。

抗体は、それらの意図された標的への特異的結合に関してスクリーニングされる。抗体は、標的の特異的領域への結合（例えば、所望のエピトープを含む）、参照抗体との競合、抗原を有する細胞のアゴニズムまたはアンタゴニズムに関してさらにスクリーニングされ得る。非ヒト抗体は、上記で記載されるとおりのキメラ形態、ベニア化形態またはヒト化形態に変換され得る。

定常領域の選択は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害、抗体依存性細胞ファゴサイトーシスおよび／または補体依存性細胞傷害が望ましいか否かに一部依存する。例えば、ヒトアイソタイプＩｇＧ１およびＩｇＧ３は、補体依存性細胞傷害を有し、ヒトアイソタイプＩｇＧ２およびＩｇＧ４は有しない。軽鎖定常領域は、λまたはκであり得る。ヒトＩｇＧ１およびＩｇＧ３はまた、ヒトＩｇＧ２およびＩｇＧ４より強い細胞媒介性エフェクター機能を誘導する。

ヒト定常領域は、異なる個体間でのアロタイプバリエーションおよびアイソアロタイプ（ｉｓｏａｌｌｏｔｙｐｉｃ）バリエーションを示す。すなわち、定常領域は、１またはこれより多くの多型位置において個体が異なれば異なり得る。アイソアロタイプは、アイソアロタイプを認識する血清が、１またはこれより多くの他のアイソタイプの非多型領域に結合するという点で、アロタイプとは異なる。ヒト定常領域への言及は、任意の天然のアロタイプまたは天然のアロタイプにおいて多型位置を占有する残基の任意の並べ替えを有する定常領域を含む。

軽鎖および／または重鎖のアミノ末端またはカルボキシ末端における１またはいくつかのアミノ酸（例えば、重鎖のＣ末端リジン）は、分子のある割合または全てにおいて失われてもよいし、誘導体化されてもよい。置換は、エフェクター機能（例えば、補体媒介性細胞傷害またはＡＤＣＣ（例えば、Ｗｉｎｔｅｒら， 米国特許第５，６２４，８２１号； Ｔｓｏら， 米国特許第５，８３４，５９７号；およびＬａｚａｒら， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ １０３：４００５， ２００６を参照のこと）を低減もしくは増大させるために、またはヒトにおいて半減期を長くするために（例えば、Ｈｉｎｔｏｎら， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２７９：６２１３， ２００４を参照のこと）、定常領域において作製され得る。例示的な置換としては、位置２５０におけるＧｌｎおよび／または位置４２８におけるＬｅｕ、位置４３４におけるＳもしくはＮ、位置２５２におけるＹ、位置２５４におけるＴ、および位置２５６におけるＥが挙げられる。Ｎ４３４Ａ（ＥＵ番号付け）。増大したＦｃＲｎ結合は、本発明のハイブリッドタンパク質を、ＦｃＲｎへの結合に関して内因性ＩｇＧとより強く競合させるのに有利である。また、多くの変異は、ＡＤＣＣ、ＡＤＰまたはＣＭＣのうちのいずれかを低減することに関して公知である（例えば、Ｗｉｎｔｅｒら， 米国特許第５，６２４，８２１号； Ｔｓｏら， 米国特許第５，８３４，５９７号；およびＬａｚａｒら， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ １０３：４００５， ２００６を参照のこと）。例えば、位置２３４、２３５、２３６および／または２３７のうちのいずれかの置換は、Ｆｃγレセプター、特に、ＦｃγＲＩレセプターに対する親和性を低減する（例えば、米国特許第６，６２４，８２１号を参照のこと）。必要に応じて、ヒトＩｇＧ２における位置２３４、２３６および／または２３７は、アラニンで置換され、位置２３５は、グルタミンまたはグルタミン酸で置換される（例えば、米国特許第５，６２４，８２１号を参照のこと）。エフェクター機能を低減する他の置換としては、位置２６８におけるＡ、位置２９７におけるＧまたはＡ、位置３０９におけるＬ、位置３２２におけるＡ、位置３２７におけるＧ、位置３３０におけるＳ、位置３３１におけるＳ、位置２３８におけるＳ、位置２６８におけるＡ、位置３０９におけるＬが挙げられる。エフェクター機能を増強する変異のいくつかの例としては、Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ、Ａ３３０Ｌおよびこれらの組み合わせが挙げられる。

除去のための目的の抗体は、ＡＤＣＣを誘導するそれらの能力に関して試験され得る。抗体関連ＡＤＣＣ活性は、溶解した細胞からの標識もしくは乳酸デヒドロゲナーゼのいずれかの放出の検出、または低減した標的細胞生存度の検出（例えば、アネキシンアッセイ）を通じて、モニタリングまたは定量され得る。アポトーシスのアッセイは、末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ媒介性ジゴキシゲニン－１ １－ｄＵＴＰニック末端標識（ＴＵＮＥＬ）アッセイ（Ｌａｚｅｂｎｉｋら， Ｎａｔｕｒｅ： ３７１ ， ３４６ （１９９４））によって行われ得る。細胞傷害はまた、検出キット（例えば、Ｒｏｃｈｅ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ， Ｉｎｄ．）のＣｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ）によって直接検出され得る。抗体は、同様に、ＷＯ／２００９／０９１６０１によって記載されるように、例えば、ＡＭＬ ＬＳＣに対して抗体依存性ファゴサイトーシス（ＡＤＰ）を誘導するそれらの能力に関して試験され得る。

いくつかの実施形態において、免疫治療剤は、エフェクター部分に結合体化される。上記エフェクター部分は、放射性標識または蛍光標識のような標識部分を含む、任意の数の分子であり得るか、または細胞傷害性部分であり得る。細胞傷害性薬剤としては、細胞傷害性薬物または毒素もしくはこのような毒素の活性フラグメントが挙げられる。適切な毒素およびそれらの相当するフラグメントとしては、ジフテリアＡ鎖、外毒素Ａ鎖、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、クルシン（ｃｕｒｃｉｎ）、クロチン（ｃｒｏｔｉｎ）、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）、サポリン、オーリスタチン－Ｅなどが挙げられる。細胞傷害性薬剤としてはまた、放射性同位体を抗体に結合体化させることによって作製される放射性化学物質が挙げられる。細胞傷害性部分を膜貫通タンパク質に標的化すると、標的化された領域におけるその細胞傷害性部分の局所濃度が増大するように働く。

ＶＩ．血球の遺伝的障害
本方法は、血球の遺伝的障害、特に、単一のタンパク質の変異から生じる単一遺伝子の障害を補正するために使用され得る。このような障害は、優性または非優性であり得、部分的または完全な浸透度を生じ得る。概して、このような障害は、内因性ＨＰＬＣを除去し、その障害の根底にあるタンパク質の機能する（例えば、野生型）形態を含む置換ＨＰＬＣを投与することによって処置され得る。このような細胞は、野生型タンパク質、および／または代わりに、遺伝的改変がどのように行われるかに依存して、そのタンパク質の変異体形態を発現し得る。

血球の遺伝的障害としては、以下が挙げられる：ヘモグロビン異常症（例えば、サラセミアおよび鎌状赤血球症）、Ｘ連鎖重症複合免疫不全症（Ｘ－ＳＣＩＤ）、アデノシンデアミナーゼ欠損症（ＡＤＡ－ＳＣＩＤ）、ＳＣＩＤの他の遺伝子形態（ａｒｔｅｍｉｓ、Ｒａｇ１／２）、ウィスコット・アルドリッチ症候群（ＷＡＳ）、慢性肉芽腫症、血球貪食性リンパ組織球増多症、Ｘ連鎖高ＩｇＭ症候群、Ｘ連鎖リンパ増殖症（Ｘ－ｌｉｎｋｅｄ ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅ）、Ｘ連鎖無ガンマグロブリン血症、Ｘ連鎖副腎脳白質ジストロフィー、異染性白質ジストロフィー、血友病、フォン・ビルブランド病、鎌状赤血球性貧血（ｄｒｅｐａｎｏｃｙｔｉｃ ａｎｅｍｉａ）、遺伝性再生不良性貧血、赤芽球癆、発作性夜間ヘモグロビン尿症、ファンコーニ貧血、血球貪食性リンパ組織球増多症（ＨＬＨ）、先天代謝異常（例えば、ムコ多糖症、ゴーシェ病および他のリピドーシス）、表皮水疱症、重症先天性好中球減少症、シュワッハマン・ダイアモンド症候群、ダイアモンド・ブラックファン貧血、コストマン症候群、および白血球接着不全症。

鎌状赤血球貧血において、バリンは、ヘモグロビンβ鎖の６番目のアミノ酸においてグルタミンの代わりに使用されている。ヘモグロビンのバリン変異体形態は、グルタミン形態より遙かに可溶性が低い；それは、低Ｐ０２の部位においてＲＢＣを鎌状にするロッド様ファクトイド（ｆａｃｔｏｉｄ）の半固体ゲルを形成する。ゆがんだ、可撓性のないＲＢＣは、血管内皮に接着し、小さな細動脈および毛細管を詰まらせ、これは、閉塞および梗塞をもたらす。鎌状ＲＢＣは、脆すぎて循環の機械的外傷に耐えられないことから、それらが循環に入った後に溶血が起こる。ホモ接合体では、臨床的症状発現は、組織虚血および梗塞を生じる貧血および血管閉塞事象によって引き起こされる。成長および発生は障害され、感染症への罹りやすさが増大する。貧血は通常、重症であるが、患者間で非常に変動する。鎌状赤血球貧血（ｓｉｃｋ ｃｅｌｌ ａｎｅｍｉａ）は、遺伝的欠損を補正し、さらなる機能的ヘモグロビン転写ユニットを発現するか、またはＢＣＬ１１Ａ赤血球系増強を破壊することによって救済され得、これは、胎児グロビン発現を抑制し、鎌状赤血球貧血（またはベータサラセミア）の処置のために胎児ヘモグロビンの増大したレベルを生じる。

サラセミアは、欠陥のあるヘモグロビン合成および無効な赤血球生成によって特徴づけられ、特に、地中海、アフリカ、および東南アジアに祖先を持つ個体に共通する、慢性、遺伝性、小球性の貧血の群である。サラセミアは、最も一般的な遺伝性の溶血性障害の中にある。それは、少なくとも１つのグロビンポリペプチド鎖（β、α、γ、δ）の減少した生成によって引き起こされるアンバランスなＨｂ合成から生じる。これは、遺伝子の調節領域における変異を通じて、または低減した発現を生じるグロビンコード配列における変異から起こり得る。

複合免疫不全症は、先天的なおよび通常は遺伝性のＢ細胞系およびＴ細胞系両方の欠陥、リンパ系形成不全、および胸腺異形成によって特徴づけられる障害の群である。複合免疫不全症としては、重症複合免疫不全症、スイス型無ガンマグロブリン血症、アデノシンデアミナーゼ欠損症またはヌクレオシドホスホリラーゼ欠損症を伴う複合免疫不全症、および免疫グロブリンを伴う複合免疫不全症（ネゼロフ症候群）が挙げられる。大部分の患者は、鵞口瘡、肺炎、および下痢を伴う感染の早期発生を有する。処置されないままであれば、大部分は、２歳前に死亡する。大部分の患者は、Ｂ細胞および免疫グロブリンの顕著な欠損を有する。以下は、特徴である：リンパ球減少、Ｔ細胞レベルが低いまたは存在しない、マイトジェンに対する増殖応答が不十分、皮膚アネルギー、胸腺の映像がない、およびリンパ系組織の減少。ニューモシスチス肺炎および他の日和見感染が一般的である。

本方法はまた、ウイルスを感染させることによって使用される免疫細胞レセプター（例えば、ＨＩＶの場合にはＣＣＲ５）を改変することによって、感染症の処置のために使用され得る。

これら本方法はまた、病理が少なくとも部分的に血球にある血液の悪性疾患および自己免疫疾患を処置するために使用され得る。血液の悪性疾患としては、白血病、リンパ腫および骨髄腫が挙げられる。このような悪性疾患のより具体的な例としては、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄性白血病；慢性リンパ性白血病、骨髄増殖性障害、および多発性骨髄腫が挙げられる。自己免疫障害としては、Ｂ細胞およびＴ細胞媒介性障害が挙げられる。一般的な例は、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、炎症性腸疾患、多発性硬化症、１型糖尿病、ギラン・バレー症候群、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー、乾癬、グレーブス病、橋本甲状腺炎、重症筋無力症、血管炎および全身性硬化症である。

本方法はまた、他のタイプのがん（例えば、固形腫瘍）を有し、内因性ＨＳＰＣに損傷を引き起こす化学療法を受けたことがある患者において、内因性ＨＳＰＣを置換するために使用され得る。固形腫瘍としては、とりわけ、乳房、前立腺、脳、肺、腎臓、肝臓、胃、腸、結腸、甲状腺、胸腺、卵巣、メラノーマ、および膵臓のものが挙げられる。置換幹細胞は、内因性ＨＳＰＣの機能を（例えば、感染と戦うことにおいて）供給し、同種異系である場合には、残りのがん細胞に対してさらなる活性を有し得る。

本方法はまた、臓器移植、特に、同種移植においてＨＳＰＣを置換するために使用され得る。内因性ＨＳＰＣは、ＭＨＣがマッチしていない同種移植片に対する宿主対移植片応答を発生させる可能性が高い。宿主対移植片応答は、臓器移植の前に内因性ＨＳＰＣを除去し、移植された臓器と同時に増殖の利点を付与するように遺伝的に改変された置換ＨＳＰＣを、好ましくは同じ供給源（すなわち、被験体）から導入することによって低減され得る。

自家供給源と同種異系供給源との間の置換ＨＳＰＣの選択は、いくつかの要因に依存する。自家移植は容易に利用可能であり、ＨＬＡがマッチしたドナーを同定する必要はない。自家移植片は、生命を脅かす合併症のリスクが低い；ＧＶＨＤのリスクはなく、ＧＶＨＤおよび移植片拒絶を防止する免疫抑制治療の必要性もない。免疫再構成は、同種異系移植の後より迅速であり、日和見感染のリスクはより低い。移植の失敗は希にしか起こらない。しかし、がん患者に由来する自家移植片は、がん細胞で汚染されるというリスクがある。

同種異系移植は、その移植片に、夾雑する腫瘍細胞がないという利点を有する。その移植片はまた、免疫移植片対悪性疾患効果（ｉｍｍｕｎｅ ｇｒａｆｔ－ｖｅｒｓｕｓ－ｍａｌｉｇｎａｎｃｙ ｅｆｆｅｃｔ）を生じ得るドナー由来の免疫適格細胞を含む。自家移植と比較して、同種異系移植片の後に疾患再発のリスクは概して低い。しかし、同種異系移植片は、多くの潜在的に致命的な合併症、例えば、レジメン関連臓器毒性（ｒｅｇｉｍｅｎ－ｒｅｌａｔｅｄ ｏｒｇａｎ ｔｏｘｉｃｉｔｙ）、移植の失敗、および移植片対宿主病と関連し得る。

一般に、同種異系移植片は、白血病および骨髄異形成症候群の処置において主に使用されてきた。自家移植片は、固形腫瘍、リンパ腫、および骨髄腫においてより頻繁に使用されてきた。遺伝的障害の補正のために、自家移植片は、その障害に関する遺伝的基礎を補正するように遺伝的改変とともに、または補正の必要なしに同種異系移植片とともに使用され得る。

ＶＩＩ．ＨＳＰＣの遺伝子操作
ＨＳＰＣは、ＨＳＰＣに、被験体において内因性ＨＳＰＣに対して選択的利点を提供する１またはこれより多くのタンパク質を発現することを可能にするように遺伝的に改変される。ＨＳＰＣはまた、内因性ＨＰＬＣにおいて欠損しているタンパク質の機能的形態を発現して、欠陥の根底にある遺伝的障害を処置するように遺伝的に改変され得る。遺伝的改変は、レセプターまたは発現されるべき他のタンパク質をコードする外因性核酸の導入を含む。次いで、このような外因性核酸は、エピソームとして存在し得るか、または好ましくは遺伝的に改変されたＨＳＰＣのゲノムに組み込まれ得る。このような組み込みは、ランダムであり得るか、または通常は、相当する内因性配列に標的化され得る。その外因性核酸は、調節配列（例えば、発現されるべき配列に隣接するプロモーター）を含み得るか、または発現されるべき配列は、内因性調節配列と作動可能に連結した状態で染色体の位置において組み込むように設計され得る。いずれかの形式において、ＨＳＰＣのゲノムは、選択的利点を、または内因性ＨＳＰＣにおいて欠損したタンパク質の機能的形態を付与するレセプターを発現し得る転写ユニットを含むように改変される。

遺伝的改変はまた、レセプターまたはタンパク質をコードする内因性遺伝子を改変する、例えば、遺伝子欠損の根底にある変異を除去するか、または内因性遺伝子を不活性化するために、遺伝子標的化構築物の導入を含み得る。このような改変は、標的化構築物と内因性アレルとの間での組換えによって概してもたらされる。その標的化構築物は、代表的には、相同組換えを媒介するために、相同性アームが隣接した内因性核酸（例えば、変異体コドンの代わりに野生型コドンを有する）のセグメントを置き換える核酸を含む。改変による標的化の頻度は、ＣＲＩＳＰＲ、またはヌクレアーゼドメインに融合されるジンクフィンガータンパク質、ｔａｌeｎなどによってもたらされる組換えに近い標的化された切断によって増大され得る（Ｓｈｉｍら， Ａｃｔａ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ ｖｏｌｕｍｅ ３８， ｐａｇｅｓ ７３８-７５３ （２０１７））；米国特許第８，５８６，５２６号；同第６，５３４，２６１号；同第６，５９９，６９２号；同第６，５０３，７１７号；同第６，６８９，５５８号；同第７，０６７，３１７号；同第７，２６２，０５４号；同第７，８８８，１２１号；同第７，９７２，８５４号；同第７，９１４，７９６号；同第７，９５１，９２５号；同第８，１１０，３７９号；同第８，４０９，８６１号；米国特許公開２００３０２３２４１０；同第２００５０２０８４８９；同第２００５００２６１５７；同第２００５００６４４７４；同第２００６００６３２３１；同第２００８０１５９９９６；同第２０１０００２１８２６４；同第２０１２００１７２９０；同第２０１１０２６５１９８；同第２０１３０１３７１０４；同第２０１３０１２２５９１；同第２０１３０１７７９８３および同第２０１３０１７７９６０）。

遺伝的改変はまた、内因性レセプターまたはタンパク質の発現を活性化または抑制することを含み得る。発現は、ＤＮＡ結合ドメインならびに転写アクチベーターまたはリプレッサーの融合タンパク質を発現する構築物を導入することによって、活性化または抑制され得る（例えば、米国特許第６，９３３，１３３号を参照のこと）。上記ＤＮＡ結合ドメインは、切断なしに、標的部位に結合するように変異したジンクフィンガータンパク質、ｔａｌｅｎまたはＣａｓ９であり得る。

遺伝的改変は、細胞に１または複数の改変エレメント（例えば、改変をもたらす標的化ベクターおよび相同組換えを促進するヌクレアーゼ、またはランダム挿入をもたらす転写ユニットをコードするウイルスベクター）の導入を含む。複数のエレメントが導入される場合、それらは、同じ構築物または異なる構築物の内部に含まれ得る。複数の改変が行われる（例えば、保護的レセプターをコードする核酸およびタンパク質の野生型形態をコードする核酸の両方を導入して、遺伝的障害を補正する）場合のように、上記改変核酸は、同じベクターまたは異なるベクターの中に含まれ得、異なるベクターの中にある場合、上記改変は、同時にまたは逐次的に行われ得る。遺伝的改変後のＨＳＰＣは、クローン性の集団またはポリクローナルであり得る。遺伝的改変は、その改変に関してヘテロ接合性またはホモ接合性の細胞を生じ得る。細胞は、被験体に導入する前に増殖を受け得る。

標的哺乳動物細胞へと外因性遺伝子を移入するために有用な多くのベクターが、利用可能である（例えば、ＷＯ２０１８／１４０９４０； Ｍｏｒｇａｎら， Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ ２１， ５７４－５９０（２０１８）を参照のこと）。ベクターは、エピソームであってもよいし、相同組換えまたはランダム組み込みを通じて標的細胞ゲノムに組み込まれてもよい。ベクターは、改変された細胞を選択するために選択マーカーをコードしてもよいし、そうでなくてもよい。ベクターは、プラスミド、ウイルス由来ベクター（例えば、サイトメガロウイルス、アデノウイルスなど）、レトロウイルス由来ベクター（例えば、ＭＭＬＶ、ＨＩＶ－１、およびＡＬＶ）を含む。レンチウイルスベクター（例えば、ＨＩＶまたはＦＩＶ ｇａｇ配列に基づくもの）は、分裂しない細胞（例えば、休止相のＨＳＰＣ）をトランスフェクトするために使用され得る。

細胞は、適切なベクターでのトランスフェクション（例えば、エレクトロポレーション）、形質導入などによって、遺伝的に変化され得る。レトロウイルスおよび適切なパッケージング株の組み合わせは、キャプシドタンパク質が標的細胞に感染するために機能的である場合に使用され得る。通常は、上記細胞およびウイルスは、培養培地中で少なくとも約２４時間インキュベートされる。次いで、上記細胞は、いくつかの適用において、短い間隔で、例えば、２４～７３時間、または少なくとも２週間にわたって、培養培地中で増殖させられ、分析する前に、５週間またはより長く増殖させられ得る。一般に使用されるレトロウイルスベクターは、「欠陥がある（ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ）」、すなわち、生産的な感染に必要とされるウイルスタンパク質を生成できない。ベクターの複製は、パッケージング細胞株の中での増殖、またはトランスフェクションを必要とし、細胞は、例えば、８～１６時間の期間にわたってベクターを含む上清を使用して遺伝的に変更され得、次いで、必要に応じて、薬物選択因子（例えば、ピューロマイシン、Ｇ４１８、またはブラストサイジン）を使用する選択ととともに、１～２日にわたり増殖培地へと交換され得、次いで、再度培養され得る。ウイルスまたはプラスミドベクターは、例えば、リコンビナーゼシステム（例えば、Ｃｒｅ／Ｌｏｘ）、またはそれらを発現する細胞を使用して後に除去されなければならない、例えば、選択的毒性を可能にする遺伝子（例えば、とりわけヘルペスウイルスＴＫ、ｂｃｌ－ｘｓ）を含めることによって、破壊されなければならない遺伝子を含み得る。

ＶＩＩＩ．置換幹細胞を投与するためのレジメン
置換幹細胞は、非経口的に、代表的には、静脈内注入によって投与される。投与される幹細胞の用量は、注入される細胞組成物の所望の純度、および細胞の供給源に依存し得る。その用量はまた、ＨＳＰＣの遺伝的改変のタイプに依存し得る。ＨＳＰＣの保護が原因で、および置換ＨＳＰＣを導入する前に内因性ＨＳＰＣの実質的に完全な排除が不要であることから、投与量は、ときおり、１～２×１０^６ ＣＤ３４＋ 細胞／ｋｇ 体重が最小と考えられた以前の方法より少ない可能性がある。再導入のための細胞の例示的な投与量は、少なくとも１×１０^５、１×１０^６、２×１０^６、５×１０^６、１０^７、２×１０^７ ＣＤ３４＋ 細胞／ｋｇ 体重である。例示的な範囲は、１×１０^５～５×１０^７、１×１０^６×２×１０^７、または５×１０^５～６×１０^６ ＣＤ３４＋細胞／ｋｇ 体重である。上記用量は、利用可能な細胞の数によって制限され得る。代表的には、供給源に拘わらず、上記用量は、存在するＣＤ３４＋ 細胞の数によって計算される。ＣＤ３４^＋ 細胞のパーセントの数字は、未分画骨髄または動員された末梢血に関しては低い可能性がある；その場合、投与される細胞の総数は、遙かに多い。

ＶＩＩＩ．モニタリング
遺伝的に改変された置換ＨＳＰＣを被験体に導入した後に、置換ＨＳＰＣ 対 全ＨＳＰＣの比は、モニタリングされ得る。ＨＳＰＣのサンプルは、以前に記載されるように、骨髄または末梢血から得られ得る。置換ＨＳＰＣは、例えば、核酸ハイブリダイゼーションアッセイまたはイムノアッセイによって、内因性のものから区別され得る。置換ＨＳＰＣが同種異系または異種である場合、置換細胞と内因性細胞との間には、差次的プローブ結合アッセイの根拠を形成し得る多くの遺伝的差異が存在し、そしてときおりイムノアッセイを可能にするレセプターにおける差異が存在する。置換ＨＳＰＣが自家である場合、その置換ＨＳＰＣの遺伝的改変は、核酸ハイブリダイゼーションアッセイまたはイムノアッセイのいずれかによって、それらを内因性ＨＳＰＣから区別し得る。全ＨＳＰＣに対する置換ＨＳＰＣの割合は、導入後の時間とともに増大し得る。好ましくは、その割合は、６ヶ月後に、３０％、５０％、７５％、９０％または９５％を超える。

上記または下記で引用される全ての特許出願、ウェブサイト、他の刊行物、アクセッション番号などは、各個々の項目が、具体的にかつ個々に、そのように参考として援用されることを示されるのと同程度に、全ての目的のためにそれらの全体において参考として援用される。配列の異なるバージョンが、異なるときにアクセッション番号と関連付けられる場合、本出願の有効な出願日に、そのアクセッション番号と関連付けられるバージョンが意味される。有効な出願日は、実際の出願日または適用可能な場合に、そのアクセッション番号に言及する優先権主張の基礎となる出願の出願日の早い方を意味する。刊行物、ウェブサイトなどの異なるバージョンが異なる時に刊行される場合のように、別段示されなければ、本出願の有効な出願日に最も近く刊行されたバージョンが、意味される。本開示の任意の特徴、工程、要素、実施形態、または局面は、別段具体的に示されなければ、任意の他のものと組み合わせて使用され得る。本開示は、明瞭さおよび理解を目的として、例証および例示によっていくぶん詳細に記載されてきたが、ある特定の変更および改変が、添付の特許請求の範囲内で実施され得ることは、明らかである。

必要に応じて、上記被験体は、血球のタイプの遺伝的障害を有し、上記置換ＨＳＰＣは、上記障害のないタイプの血球へと発生する。必要に応じて、上記置換ＨＳＰＣは、上記障害がないようにさらに遺伝的に改変された自家細胞である。必要に応じて、上記遺伝的障害は、鎌状赤血球貧血である。必要に応じて、上記被験体は、がんを有する。必要に応じて、上記がんは、血球のがんであり、上記血球は、ｃ－Ｋｉｔを発現するか、またはｃ－Ｋｉｔを発現するＨＳＰＣに由来する。必要に応じて、上記被験体は、がんを有し、上記がんに対する化学療法を受けたことがある。必要に応じて、上記被験体は、工程（ａ）の後に臓器移植片を受容する。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
内因性ＨＳＰＣと比較して、被験体に導入する際に、遺伝的に改変されたＨＳＰＣに選択的増殖の利点を付与するレセプターを発現するように遺伝的に改変された造血幹または前駆細胞（ＨＳＰＣ）。
（項目２）
少なくとも１０ ^５ の項目１に記載のＨＳＰＣの集団。
（項目３）
前記１０ ^５ のＨＳＰＣは、ＣＤ３４ ^＋ である、項目２に記載の集団。
（項目４）
クローン性である、項目２に記載の集団。
（項目５）
原始幹細胞および共通前駆細胞を含む、項目２に記載の集団。
（項目６）
原始幹細胞である、項目１に記載のＨＳＰＣ。
（項目７）
前記レセプターは、Ｂ２Ｍ／ＭＨＣ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ２４、ＧＡＳ６、ＣＤ４７、ｃ－Ｋｉｔまたは複数のこのようなレセプターの組み合わせのうちのいずれかである、項目１に記載のＨＳＰＣ。
（項目８）
前記レセプターは、変異体形態であり、前記変異体は、前記レセプターの野生型形態と比較して抗体への結合が低減している、項目７に記載のＨＳＰＣ。
（項目９）
前記レセプターは、ＣＤ４７またはｃ－Ｋｉｔである、項目８に記載のＨＳＰＣ。
（項目１０）
前記ＨＳＰＣは、機能的ヒトタンパク質を発現するようにさらに遺伝的に改変され、その結果として、前記ＨＳＰＣが遺伝的障害を緩和し得る、前述の項目のいずれかに記載のＨＳＰＣまたは集団。
（項目１１）
前記遺伝的障害は、前記障害を有する被験体において前記ヒトタンパク質をコードする遺伝子の変異に起因する、項目１０に記載のＨＳＰＣまたは集団。
（項目１２）
前記ヒトタンパク質は、ヘモグロビンである、項目１１に記載のＨＳＰＣまたは集団。
（項目１３）
前記ＨＳＰＣは、標的化構築物と内因性遺伝子座との間の相同組換えによって遺伝的に改変される、前述の項目のうちのいずれかに記載のＨＳＰＣまたは集団。
（項目１４）
前記遺伝的改変は、ヘテロ接合性である、項目１～１３のいずれか１項に記載のＨＳＰＣまたは集団。
（項目１５）
前記遺伝的改変は、ホモ接合性である、項目１～１３のいずれか１項に記載のＨＳＰＣまたは集団。
（項目１６）
ＨＳＰＣを改変する方法であって、前記方法は、前記ＨＳＰＣに、改変する前のＨＳＰＣと比較して、遺伝的に改変されたＨＳＰＣに選択的増殖の利点を付与するレセプターを発現し得る転写ユニットを形成する前記ＨＳＰＣのゲノムへと組み込まれる構築物を導入する工程を包含する、方法。
（項目１７）
前記構築物は、その発現のために調節配列に作動可能に連結された前記レセプターをコードするセグメントを含む転写ユニットを含む、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
前記構築物は、内因性遺伝子座との相同組換えを受ける、項目１６に記載の方法。
（項目１９）
前記ＨＳＰＣへとヌクレアーゼを導入する工程であって、前記ヌクレアーゼは、前記相同組換えの遺伝子座に近いゲノムＤＮＡを切断し、それによって前記相同組換えを刺激する、工程をさらに包含する、項目１６に記載の方法。
（項目２０）
前記ヌクレアーゼは、前記ヌクレアーゼをコードする構築物を導入することによって導入され、前記ヌクレアーゼは、前記ＨＳＰＣにおいて発現される、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
被験体を処置する方法であって、前記方法は、
（ａ）ｃ－Ｋｉｔに特異的に結合する免疫治療剤を投与して、ｃ－Ｋｉｔを発現する内因性ＨＳＰＣを枯渇させる工程；および
（ｂ）内因性ＨＳＰＣと比較して、遺伝的に改変されたＨＳＰＣに選択的増殖の利点を付与するレセプターを発現するように遺伝的に改変された置換ＨＳＰＣを投与し、それによって、前記ｃ－Ｋｉｔに特異的に結合する免疫治療剤による枯渇に抵抗する工程であって、ここで前記置換ＨＳＰＣは、前記内因性ＨＳＰＣを少なくとも部分的に置換する、工程、
を包含する方法。
（項目２２）
前記選択的増殖の利点を付与するレセプターは、ＣＤ４７である、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
前記ＣＤ４７レセプターは変異を含み、前記方法は、野生型ＣＤ４７に結合し、存在する場合、ＳＩＲＰαへの前記変異したレセプターのその結合およびアンタゴニズムより強く、ＳＩＲＰαとのその相互作用をアンタゴナイズする抗体またはＳＩＲＰα Ｆｃ融合タンパク質を投与する工程をさらに包含する、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
内因性ＨＳＰＣは、工程（ｂ）を行う前に、部分的にのみ枯渇される、項目２１～２３のいずれか１項に記載の方法。
（項目２５）
工程（ａ）は、工程（ｂ）の前に行われる、項目２１～２４のいずれか１項に記載の方法。
（項目２６）
工程（ａ）は、工程（ｂ）と同時に、または工程（ｂ）の後に行われる、項目２１～２４のいずれか１項に記載方法。
（項目２７）
前記ｃ－Ｋｉｔに特異的に結合する免疫治療剤は、前記導入する工程が行われるときに血清中で検出可能である、項目２１～２６のいずれか１項に記載の方法。
（項目２８）
前記ｃ－Ｋｉｔに特異的に結合する免疫治療剤は、工程（ｂ）の前および工程（ｂ）の後に、複数の機会に投与される、項目２１～２７のいずれか１項に記載の方法。
（項目２９）
前記ｃ－Ｋｉｔに特異的に結合する免疫治療剤は、抗体である、項目２１～２８のいずれか１項に記載の方法。
（項目３０）
前記抗体は、ＡＤＣＣまたはＡＤＰを促進するために有効なＦｃドメインを有する、項目２１～２９のいずれか１項に記載の方法。
（項目３１）
前記被験体は、血球のタイプの遺伝的障害を有し、前記置換ＨＳＰＣは、前記障害のないタイプの血球へと発生する、項目２１～３０のいずれか１項に記載の方法。
（項目３２）
前記置換ＨＳＰＣは、前記障害がないようにさらに遺伝的に改変された自家細胞である、項目２１～３１のいずれか１項に記載の方法。
（項目３３）
前記遺伝的障害は、鎌状赤血球貧血である、項目３１または３２に記載の方法。
（項目３４）
前記被験体は、がんを有する、項目２１～３０のいずれか１項に記載の方法。
（項目３５）
前記がんは、血球のがんであり、前記血球は、ｃ－Ｋｉｔを発現するか、またはｃ－Ｋｉｔを発現するＨＳＰＣに由来する、項目３４に記載の方法。
（項目３６）
前記被験体は、がんを有し、前記がんに対する化学療法を受けたことがある、項目２１～３０のいずれか１項に記載の方法。
（項目３７）
前記被験体は、工程（ａ）の後に臓器移植片を受容する、項目２１～３０のいずれか１項に記載の方法。

Claims (37)

1. 内因性ＨＳＰＣと比較して、被験体に導入する際に、遺伝的に改変されたＨＳＰＣに選択的増殖の利点を付与するレセプターを発現するように遺伝的に改変された造血幹または前駆細胞（ＨＳＰＣ）。
2. 少なくとも１０^５の請求項１に記載のＨＳＰＣの集団。
3. 前記１０^５のＨＳＰＣは、ＣＤ３４^＋である、請求項２に記載の集団。
4. クローン性である、請求項２に記載の集団。
5. 原始幹細胞および共通前駆細胞を含む、請求項２に記載の集団。
6. 原始幹細胞である、請求項１に記載のＨＳＰＣ。
7. 前記レセプターは、Ｂ２Ｍ／ＭＨＣ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ２４、ＧＡＳ６、ＣＤ４７、ｃ－Ｋｉｔまたは複数のこのようなレセプターの組み合わせのうちのいずれかである、請求項１に記載のＨＳＰＣ。
8. 前記レセプターは、変異体形態であり、前記変異体は、前記レセプターの野生型形態と比較して抗体への結合が低減している、請求項７に記載のＨＳＰＣ。
9. 前記レセプターは、ＣＤ４７またはｃ－Ｋｉｔである、請求項８に記載のＨＳＰＣ。
10. 前記ＨＳＰＣは、機能的ヒトタンパク質を発現するようにさらに遺伝的に改変され、その結果として、前記ＨＳＰＣが遺伝的障害を緩和し得る、前述の請求項のいずれかに記載のＨＳＰＣまたは集団。
11. 前記遺伝的障害は、前記障害を有する被験体において前記ヒトタンパク質をコードする遺伝子の変異に起因する、請求項１０に記載のＨＳＰＣまたは集団。
12. 前記ヒトタンパク質は、ヘモグロビンである、請求項１１に記載のＨＳＰＣまたは集団。
13. 前記ＨＳＰＣは、標的化構築物と内因性遺伝子座との間の相同組換えによって遺伝的に改変される、前述の請求項のうちのいずれかに記載のＨＳＰＣまたは集団。
14. 前記遺伝的改変は、ヘテロ接合性である、請求項１～１３のいずれか１項に記載のＨＳＰＣまたは集団。
15. 前記遺伝的改変は、ホモ接合性である、請求項１～１３のいずれか１項に記載のＨＳＰＣまたは集団。
16. ＨＳＰＣを改変する方法であって、前記方法は、前記ＨＳＰＣに、改変する前のＨＳＰＣと比較して、遺伝的に改変されたＨＳＰＣに選択的増殖の利点を付与するレセプターを発現し得る転写ユニットを形成する前記ＨＳＰＣのゲノムへと組み込まれる構築物を導入する工程を包含する、方法。
17. 前記構築物は、その発現のために調節配列に作動可能に連結された前記レセプターをコードするセグメントを含む転写ユニットを含む、請求項１６に記載の方法。
18. 前記構築物は、内因性遺伝子座との相同組換えを受ける、請求項１６に記載の方法。
19. 前記ＨＳＰＣへとヌクレアーゼを導入する工程であって、前記ヌクレアーゼは、前記相同組換えの遺伝子座に近いゲノムＤＮＡを切断し、それによって前記相同組換えを刺激する、工程をさらに包含する、請求項１６に記載の方法。
20. 前記ヌクレアーゼは、前記ヌクレアーゼをコードする構築物を導入することによって導入され、前記ヌクレアーゼは、前記ＨＳＰＣにおいて発現される、請求項１９に記載の方法。
21. 被験体を処置する方法であって、前記方法は、
    （ａ）ｃ－Ｋｉｔに特異的に結合する免疫治療剤を投与して、ｃ－Ｋｉｔを発現する内因性ＨＳＰＣを枯渇させる工程；および
    （ｂ）内因性ＨＳＰＣと比較して、遺伝的に改変されたＨＳＰＣに選択的増殖の利点を付与するレセプターを発現するように遺伝的に改変された置換ＨＳＰＣを投与し、それによって、前記ｃ－Ｋｉｔに特異的に結合する免疫治療剤による枯渇に抵抗する工程であって、ここで前記置換ＨＳＰＣは、前記内因性ＨＳＰＣを少なくとも部分的に置換する、工程、
    を包含する方法。
22. 前記選択的増殖の利点を付与するレセプターは、ＣＤ４７である、請求項２１に記載の方法。
23. 前記ＣＤ４７レセプターは変異を含み、前記方法は、野生型ＣＤ４７に結合し、存在する場合、ＳＩＲＰαへの前記変異したレセプターのその結合およびアンタゴニズムより強く、ＳＩＲＰαとのその相互作用をアンタゴナイズする抗体またはＳＩＲＰα Ｆｃ融合タンパク質を投与する工程をさらに包含する、請求項２２に記載の方法。
24. 内因性ＨＳＰＣは、工程（ｂ）を行う前に、部分的にのみ枯渇される、請求項２１～２３のいずれか１項に記載の方法。
25. 工程（ａ）は、工程（ｂ）の前に行われる、請求項２１～２４のいずれか１項に記載の方法。
26. 工程（ａ）は、工程（ｂ）と同時に、または工程（ｂ）の後に行われる、請求項２１～２４のいずれか１項に記載方法。
27. 前記ｃ－Ｋｉｔに特異的に結合する免疫治療剤は、前記導入する工程が行われるときに血清中で検出可能である、請求項２１～２６のいずれか１項に記載の方法。
28. 前記ｃ－Ｋｉｔに特異的に結合する免疫治療剤は、工程（ｂ）の前および工程（ｂ）の後に、複数の機会に投与される、請求項２１～２７のいずれか１項に記載の方法。
29. 前記ｃ－Ｋｉｔに特異的に結合する免疫治療剤は、抗体である、請求項２１～２８のいずれか１項に記載の方法。
30. 前記抗体は、ＡＤＣＣまたはＡＤＰを促進するために有効なＦｃドメインを有する、請求項２１～２９のいずれか１項に記載の方法。
31. 前記被験体は、血球のタイプの遺伝的障害を有し、前記置換ＨＳＰＣは、前記障害のないタイプの血球へと発生する、請求項２１～３０のいずれか１項に記載の方法。
32. 前記置換ＨＳＰＣは、前記障害がないようにさらに遺伝的に改変された自家細胞である、請求項２１～３１のいずれか１項に記載の方法。
33. 前記遺伝的障害は、鎌状赤血球貧血である、請求項３１または３２に記載の方法。
34. 前記被験体は、がんを有する、請求項２１～３０のいずれか１項に記載の方法。
35. 前記がんは、血球のがんであり、前記血球は、ｃ－Ｋｉｔを発現するか、またはｃ－Ｋｉｔを発現するＨＳＰＣに由来する、請求項３４に記載の方法。
36. 前記被験体は、がんを有し、前記がんに対する化学療法を受けたことがある、請求項２１～３０のいずれか１項に記載の方法。
37. 前記被験体は、工程（ａ）の後に臓器移植片を受容する、請求項２１～３０のいずれか１項に記載の方法。