JP2022505663A - ＩｇＭ－Ｆｃベース及びＩｇＡ－Ｆｃベースの多価結合分子 - Google Patents

ＩｇＭ－Ｆｃベース及びＩｇＡ－Ｆｃベースの多価結合分子 Download PDF

Info

Publication number
JP2022505663A
JP2022505663A JP2021522078A JP2021522078A JP2022505663A JP 2022505663 A JP2022505663 A JP 2022505663A JP 2021522078 A JP2021522078 A JP 2021522078A JP 2021522078 A JP2021522078 A JP 2021522078A JP 2022505663 A JP2022505663 A JP 2022505663A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
binding
fragment
binding molecule
multimer
domain
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2021522078A
Other languages
English (en)
Other versions
JPWO2020086745A5 (ja
Inventor
ラメシュ バリガ
ポール ヒントン
ディーン エン
ブルース アラン キート
Original Assignee
アイジーエム バイオサイエンシズ インコーポレイテッド
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by アイジーエム バイオサイエンシズ インコーポレイテッド filed Critical アイジーエム バイオサイエンシズ インコーポレイテッド
Publication of JP2022505663A publication Critical patent/JP2022505663A/ja
Publication of JPWO2020086745A5 publication Critical patent/JPWO2020086745A5/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2827—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against B7 molecules, e.g. CD80, CD86
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70521—CD28, CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70532—B7 molecules, e.g. CD80, CD86
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70578—NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636—T lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/528—CH4 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Figure 2022505663000001
本開示は、多量体化ＩｇＭ定常領域または多量体化ＩｇＡ定常領域に融合された結合ポリペプチド、例えば、受容体外部ドメイン、リガンド、またはその受容体結合フラグメントなどを含む、ＩｇＭ由来結合分子及びＩｇＡ由来結合分子を提供する。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年１０月２３日に出願された米国仮特許出願第６２／７４９，４２９号の利益を主張し、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。このＡＳＣＩＩの写しは、２０１９年１０月２３日に作成されたものであり、０９７８９－０２１ＷＯ１－Ｓｅｑｕｅｎｃｅ－Ｌｉｓｔｉｎｇと名付けられ、１９０，３９６バイトのサイズである。
背景
多量体化することができる抗体及び抗体様分子（例えば、ＩｇＡ抗体及びＩｇＭ抗体）は、例えば、免疫腫瘍学及び感染性疾患の分野で、特異性の改善、アビディティーの改善、及び複数の結合標的への結合能を可能にする有望な薬物候補として浮上している。例えば、米国特許第９，９５１，１３４号（特許文献1）、米国特許第１０，４００，０３８号（特許文献2）、及び米国特許第９，９３８，３４７号（特許文献3）、米国特許出願公開第ＵＳ２０１９０１００５９７Ａ１号（特許文献4）、米国特許出願公開第ＵＳ２０１８０１１８８１４Ａ１号（特許文献5）、米国特許出願公開第ＵＳ２０１８０１１８８１６Ａ１号（特許文献6）、米国特許出願公開第ＵＳ２０１９０１８５５７０Ａ１号（特許文献7）、及び米国特許出願公開第ＵＳ２０１８０２６５５９６Ａ１号（特許文献8）、ならびにＰＣＴ公開第ＷＯ２０１８／０１７８８８号（特許文献9）、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１８／０１７７６３号（特許文献10）、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１８／０１７８８９号（特許文献11）、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１８／０１７７６１号（特許文献12）、及びＰＣＴ公開第ＷＯ２０１９／１６５３４０号（特許文献13）を参照されたく、これらの内容は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
ＩｇＧのＦｃ領域は、治療用ポリペプチドのための融合パートナーとして長い間使用されてきた。記載された最初のＦｃ融合タンパク質は、ＨＩＶの細胞への侵入を阻止するのに使用するためのＣＤ４－Ｆｃ融合体であった（Ｃａｐｏｎ，ＤＪ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３７：５１５－５３１（１９８９）（非特許文献1））。治療用タンパク質のＩｇＧ Ｆｃへの融合は、治療用ポリペプチドを安定化し、その半減期を延長すると共に、ＩｇＧ特異的エフェクター機能を提供する（Ｃｚａｊｋｏｗｓｋｙ，ＤＭ，ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．４：１０１５－１０２８（２０１２）（非特許文献2））。１９９８年にＦＤＡにより承認された二量体ＩｇＧ１－ｆｃ－ヒトＴＮＦ受容体融合体である、エタネルセプトから始まり、今では多種多様なＦｃ融合タンパク質が治療薬として市販されている（例えば、Ｃｚａｊｋｏｗｓｋｙ ｅｔ ａｌ．，Ｔａｂｌｅ １を参照されたい）。しかしながら、ＩｇＧ融合体は、ＩｇＧ融合タンパク質が単量体または二量体として発現されることしかできず、一部の状況において有効性が限定されるため、限定的である。実際、ＴＮＦ受容体Ｆｃ融合タンパク質の単量体形態は、ＴＮＦα阻害活性が二量体と比較して大幅に低減された（Ｐｅｐｅｌ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７４：１４８３－１４８９（１９９１）（非特許文献3））。
多くの報告が、様々な方法により重合された治療用タンパク質－Ｆｃ融合体について記載している。１つの報告では、ＩｇＧ Ｆｃ領域を操作してマラリア抗原－ＩｇＧ融合体の六量体化を容易にしたが、ＩｇＧ融合部分のエフェクター機能が変化し、この分子は、対応する単量体融合タンパク質とは対照的に、動物を免疫するために使用されたときに免疫原性でなかった（Ｍｅｋｈａｉｅｌ，ＤＮ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ １，Ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓｒｅｐ００１２４（２０１１）（非特許文献4））。別の研究では、ヒトＰＤ－Ｌ１の外部ドメインが野生型ヒトＩｇＭ定常領域に融合され、ヒトＪ鎖と共にまたはヒトＪ鎖なしのいずれかで発現させられ、インビトロフローサイトメトリー及びプレートベースのイムノアッセイにおいて試験されたが、この構築物がＰＤ－１発現細胞においてシグナル伝達を誘導する能力は試験されなかった（Ａｍｍａｎｎ，ＪＵ．，ｅｔ ａｌ，Ｅｕｒ。Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ ４２：１３５４－１３５６（２０１２）（非特許文献5）。
ＩｇＧ Ｆｃ融合タンパク質の安定性及び血清半減期特性を維持する、アビディティーのより高いＦｃ融合治療薬に対する必要性が残っている。
米国特許第９，９５１，１３４号 米国特許第１０，４００，０３８号 米国特許第９，９３８，３４７号 米国特許出願公開第ＵＳ２０１９０１００５９７Ａ１号 米国特許出願公開第ＵＳ２０１８０１１８８１４Ａ１号 米国特許出願公開第ＵＳ２０１８０１１８８１６Ａ１号 米国特許出願公開第ＵＳ２０１９０１８５５７０Ａ１号 米国特許出願公開第ＵＳ２０１８０２６５５９６Ａ１号 ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１８／０１７８８８号 ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１８／０１７７６３号 ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１８／０１７８８９号 ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１８／０１７７６１号 ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１９／１６５３４０号
Ｃａｐｏｎ，ＤＪ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３７：５１５－５３１（１９８９） Ｃｚａｊｋｏｗｓｋｙ，ＤＭ，ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．４：１０１５－１０２８（２０１２） Ｐｅｐｅｌ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７４：１４８３－１４８９（１９９１） Ｍｅｋｈａｉｅｌ，ＤＮ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ １，Ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓｒｅｐ００１２４（２０１１） Ａｍｍａｎｎ，ＪＵ．，ｅｔ ａｌ，Ｅｕｒ。Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ ４２：１３５４－１３５６（２０１２）
概要
この開示は、２個、５個、もしくは６個の二価結合ユニットまたはそのバリアントもしくはフラグメントを含む、多量体結合分子であって、各結合ユニットが、細胞の表面上に発現している結合パートナーに特異的に結合する結合ポリペプチドまたはそのフラグメントに各々融合された２個のＩｇＡもしくはＩｇＭ重鎖定常領域またはその多量体化フラグメントもしくはバリアントを含み、該結合ポリペプチドが、抗体でも抗体の抗原結合フラグメントでもなく、該結合ポリペプチドの該結合パートナーへの結合が、該細胞におけるシグナル伝達を調節する、該多量体結合分子を提供する。ある特定の実施形態において、該結合ポリペプチドのうちの少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、または１２個は、同じ結合パートナーに結合して、その結合パートナーのシグナル伝達を調節する。その上、ある特定の実施形態において、該結合分子は、該同じ結合パートナーに結合する１個または２個の結合ポリペプチドを有する当量の一価または二価結合分子よりも高い効力で、該細胞におけるシグナル伝達を誘導し得るかまたは阻害し得る。
この開示はさらに、２個、５個、もしくは６個の二価結合ユニットまたはそのバリアントもしくはフラグメントを含む、多量体結合分子であって、各結合ユニットが、結合ポリペプチドに各々融合された２個のＩｇＡもしくはＩｇＭ重鎖定常領域またはその多量体化フラグメントもしくはバリアントを含み、該結合ポリペプチドのうちの少なくとも３個が、リガンドまたはその受容体結合フラグメントを含む結合パートナーに特異的に結合する受容体外部ドメインを含み、該受容体外部ドメインが、抗体でも抗体の抗原結合フラグメントでもなく、該受容体外部ドメインの該リガンドへの結合が、該受容体を発現する細胞におけるシグナル伝達を調節し得る、該多量体結合分子を提供する。ある特定の実施形態において、該受容体外部ドメインのうちの少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、または１２個は、同じリガンドに結合する。その上、ある特定の実施形態において、該結合分子は、該同じリガンドに結合する１個または２個の受容体外部ドメインを有する当量の単量体または二量体結合分子よりも高い効力で、シグナル伝達を調節し得る。
本開示によって提供される結合多量体結合分子のうちのある特定のものにおいて、各結合ユニットは、各々ＩｇＡ Ｃα３ドメイン及びＩｇＡテールピース（ｔａｉｌｐｉｅｃｅ）ドメインを含む、２個のＩｇＡ重鎖定常領域またはその多量体化フラグメントもしくはバリアントを含み、該多量体結合分子は、Ｊ鎖またはその機能的フラグメントもしくはバリアントをさらに含む。ある特定の実施形態において、各ＩｇＡ重鎖定常領域またはその多量体化フラグメントもしくはバリアントは、該ＩｇＡ Ｃα３ドメイン及び該ＩｇＡテールピースドメインのＮ末端側に位置するＩｇＡ Ｃα２ドメインをさらに含む。例えば、該多量体結合分子の重鎖定常領域は、配列番号：２４のアミノ酸１２５～３５３、または配列番号：２５のアミノ酸１１３～３４０を含み得る。ある特定の実施形態において、各ＩｇＡ重鎖定常領域またはその多量体化フラグメントもしくはバリアントは、該ＩｇＡ Ｃα２ドメインのＮ末端側に位置するＩｇＡヒンジ領域をさらに含む。例えば、該多量体結合分子の重鎖定常領域は、配列番号：２４のアミノ酸１０２～３５３、または配列番号：２５のアミノ酸１０２～３４０を含み得る。
本開示によって提供される結合多量体結合分子のうちのある特定のものにおいて、各結合ユニットは、ＩｇＭ Ｃμ４ドメイン及びＩｇＭテールピースドメインを各々含む２個のＩｇＭ重鎖定常領域またはその多量体化フラグメントもしくはバリアントを含む。ある特定の実施形態において、各ＩｇＭ重鎖定常領域またはその多量体化フラグメントもしくはバリアントは、該ＩｇＭ Ｃμ４ドメイン及び該ＩｇＭテールピースドメインのＮ末端側に位置するＩｇＭ Ｃμ３ドメインをさらに含む。ある特定の実施形態において、各ＩｇＭ重鎖定常領域またはその多量体化フラグメントもしくはバリアントは、該ＩｇＭ Ｃμ３ドメインのＮ末端側に位置するＩｇＭ Ｃμ２ドメインをさらに含む。例えば、該多量体結合分子の重鎖定常領域は、アミノ酸配列、配列番号：３を含み得る。他の実施形態において、各ＩｇＭ重鎖定常領域またはその多量体化フラグメントもしくはバリアントは、アミノ酸配列、配列番号：４を含み、これは、該多量体結合分子に、配列番号：３のヒトＩｇＭ定常領域の野生型多量体化フラグメントを含む対応する結合分子と比べて低減された補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性を与える。各ＩｇＭ重鎖定常領域またはその多量体化フラグメントもしくはバリアントが、該ＩｇＭ Ｃμ４ドメイン及び該ＩｇＭテールピースドメインのＮ末端側に位置するＩｇＭ Ｃμ３ドメインを含む、ある特定の実施形態において、各ＩｇＭ重鎖定常領域またはその多量体化フラグメントもしくはバリアントは、該ＩｇＭ Ｃμ３ドメインのＮ末端側に位置するＩｇＧヒンジ領域またはその機能的バリアントをさらに含む。ある特定の実施形態において、該ＩｇＧヒンジ領域は、該Ｃμ３ドメイン、該Ｃμ４ドメイン、及び該ＴＰドメインを含む該ヒトＩｇＭ定常領域の多量体化フラグメントに融合されたバリアントヒトＩｇＧ１ヒンジ領域である。例えば、該多量体化ヒンジ－ＩｇＭ定常領域フラグメントは、アミノ酸配列、配列番号：６、またはアミノ酸配列、配列番号：７を含み得、このうち後者の配列は、該結合分子に、配列番号：６の多量体化ヒンジ－ＩｇＭフラグメントを含む対応する結合分子と比べて低減されたＣＤＣ活性を与える、Ｃμ３領域を含む。
ある特定の実施形態において、この開示によって提供されるＩｇＭ－Ｆｃベースの多量体結合分子は、五量体であり、Ｊ鎖またはその機能的フラグメントもしくはバリアントをさらに含む。該Ｊ鎖またはその機能的フラグメントもしくはバリアントは、バリアントＪ鎖であり、野生型Ｊ鎖と比べて、例えば、該多量体結合分子の血清半減期に影響を及ぼし得る、１つまたは複数の単一アミノ酸置換、欠失、または挿入を含み得る。例えば、ある特定の実施形態において、該多量体結合分子は、動物に投与される場合、該１つまたは複数の単一アミノ酸置換、欠失、または挿入を除いて同一でありかつ同じ動物種に同じ方法で投与される参照多量体結合分子と比べて、増加した血清半減期を示す。ある特定の実施形態において、該Ｊ鎖またはその機能的フラグメントもしくはバリアントは、該野生型ヒトＪ鎖（配列番号：１５）のアミノ酸Ｙ１０２に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。ある特定の実施形態において、配列番号：１５のＹ１０２に対応するアミノ酸は、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、またはアルギニン（Ｒ）で置換される。ある特定の実施形態において、配列番号：１５のＹ１０２に対応するアミノ酸は、アラニン（Ａ）で置換される。ある特定の実施形態において、該Ｊ鎖は、アミノ酸配列、配列番号：１６を含むバリアントヒトＪ鎖である。ある特定の実施形態において、該Ｊ鎖またはその機能的フラグメントは、該ヒトＪ鎖（配列番号：１５）のアミノ酸Ｎ４９、アミノ酸Ｓ５１、またはＮ４９及びＳ５１の両方に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含むが、ただし、配列番号：１５の位置Ｓ５１に対応する単一アミノ酸置換は、トレオニン（Ｔ）置換ではない。ある特定の実施形態において、配列番号：１５のＮ４９に対応する位置は、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、トレオニン（Ｔ）、セリン（Ｓ）、またはアスパラギン酸（Ｄ）で置換される。ある特定の実施形態において、配列番号：１５のＮ４９に対応する位置は、アラニン（Ａ）で置換される。ある特定の実施形態において、該Ｊ鎖はバリアントヒトＪ鎖であり、アミノ酸配列、配列番号：１７を含む。ある特定の実施形態において、配列番号：１５のＳ５１に対応する位置は、アラニン（Ａ）またはグリシン（Ｇ）で置換される。ある特定の実施形態において、配列番号：１５のＳ５１に対応する位置は、アラニン（Ａ）で置換される。ある特定の実施形態において、該Ｊ鎖はバリアントヒトＪ鎖であり、アミノ酸配列、配列番号：１８を含む。
この開示によって提供される多量体結合分子がＪ鎖またはその機能的フラグメントもしくはバリアントを含む、ある特定の実施形態において、該Ｊ鎖またはその機能的フラグメントもしくはバリアントは、異種ポリペプチドをさらに含み得、該異種ポリペプチドは、例えば、少なくとも５アミノ酸を含み得るが、ただし２５アミノ酸を超え得ないペプチドリンカーを介して、該Ｊ鎖またはその機能的フラグメントもしくはバリアントに直接的または間接的に融合されている。ある特定の実施形態において、該ペプチドリンカーは、
Figure 2022505663000002
からなる。ある特定の実施形態において、該異種ポリペプチドは、該Ｊ鎖またはそのフラグメントもしくはバリアントのＮ末端、該Ｊ鎖またはそのフラグメントもしくはバリアントのＣ末端に融合され得るか、あるいは同一のまたは同一でない異種ポリペプチドが、該Ｊ鎖またはそのフラグメントもしくはバリアントのＮ末端及びＣ末端の両方に融合され得る。ある特定の実施形態において、該異種ポリペプチドは、該多量体結合分子の吸収、分布、代謝、及び／または排泄（ＡＤＭＥ）に影響を与え得る。ある特定の実施形態において、該異種ポリペプチドは、抗原結合ドメイン、例えば、抗体またはその抗原結合フラグメントを含み得、該抗原結合フラグメントは、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｄフラグメント、Ｆｖフラグメント、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）フラグメント、ジスルフィド結合したＦｖ（ｓｄＦｖ）フラグメント、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。ある特定の実施形態において、該抗原結合フラグメントは、ｓｃＦｖフラグメントである。
ある特定の実施形態において、本明細書に提供されるようなＩｇＡ－Ｆｃベースの結合分子は、４個の同一の結合ポリペプチドを含み得る。ある特定の実施形態において、本明細書に提供されるようなＩｇＭ－Ｆｃベースの結合分子は、五量体であり得、１０個の同一の結合ポリペプチドを含み得る。ある特定の実施形態において、本明細書に提供されるようなＩｇＭ－Ｆｃベースの結合分子は、五量体であり得、１２個の同一の結合ポリペプチドを含み得る。
本開示によって提供される結合多量体結合分子のうちのある特定のものにおいて、各結合ポリペプチドは、リガンドもしくはその受容体結合フラグメント、サイトカインもしくはその受容体結合フラグメント、成長因子もしくはその受容体結合フラグメント、神経伝達物質もしくはその受容体結合フラグメント、ペプチドもしくはタンパク質ホルモンもしくはその受容体結合フラグメント、免疫チェックポイントモジュレーターリガンドもしくはその受容体結合フラグメント、または細胞外マトリックスタンパク質の受容体結合フラグメントである。該リガンドまたはその受容体結合フラグメントには、ケモカイン、補体タンパク質、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）ファミリーリガンド、免疫チェックポイントモジュレーターリガンド、上皮成長因子（ＥＧＦ）、インターフェロン、腫瘍壊死因子スーパーファミリー（ＴＮＦＳＦ）リガンド、血管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）ファミリーリガンド、形質転換成長因子－βスーパーファミリー（ＴＧＦβｓｆ）リガンド、それらの任意の受容体結合フラグメント、またはそれらの任意の組み合わせが含まれ得るが、これらに限定されない。該結合ポリペプチドがＴＮＦＳＦリガンドまたはその受容体結合フラグメントを含む、ある特定の実施形態において、該ＴＮＦＳＦリガンドには、ＴＲＡＩＬ、ＯＸ４０リガンド、ＣＤ４０リガンド、グルココルチコイド誘導性腫瘍壊死因子受容体リガンド（ＧＩＴＲＬ）、４－１ＢＢリガンド、それらの任意の受容体結合フラグメント、またはそれらの任意の組み合わせが含まれ得るが、これらに限定されない。該結合ポリペプチドが免疫チェックポイントモジュレーターリガンドタンパク質もしくはその受容体結合フラグメントを含む、ある特定の実施形態において、該免疫チェックポイントモジュレータータンパク質は、ＣＤ８６もしくはその受容体結合フラグメント、ＣＤ８０もしくはその受容体結合フラグメント、ＰＤ－Ｌ１もしくはその受容体結合フラグメント、またはそれらの任意の組み合わせを含み得る。
例示的な実施形態において、該結合ポリペプチドは、ヒトＰＤ－Ｌ１の受容体結合フラグメント、例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１のＶタイプドメインを含む配列番号：８のアミノ酸１９～１２７、またはヒトＰＤ－Ｌ１のＶタイプドメイン及びＣ２タイプドメインを含む配列番号：９を含む。例示的な実施形態において、本開示によって提供される多量体結合分子は、アミノ酸配列、配列番号：１１または配列番号：１３を含むポリペプチドの１０個または１２個のコピーを含み、アミノ酸配列、配列番号：１６を含むバリアントＪ鎖をさらに含み得る。この例示的な実施形態による結合分子は、ＰＤ－１のアゴニストであり得る。
ある特定の実施形態において、該結合パートナーは、細胞表面受容体タンパク質または免疫チェックポイントモジュレーターであり得る。
該結合ポリペプチドが受容体外部ドメインを含む、ある特定の実施形態において、該結合ポリペプチドには、腫瘍壊死因子スーパーファミリー受容体（ＴＮＦｒＳＦ）のリガンド結合フラグメント、免疫チェックポイントモジュレーター受容体のリガンド結合フラグメント、ＴＧＦβ受容体のリガンド結合フラグメント、またはそれらの任意の組み合わせが含まれ得るが、これらに限定されない。例えば、ＴＮＦｒＳＦ受容体フラグメントには、デスドメイン含有受容体－４（ＤＲ４）のリガンド結合フラグメント、デスドメイン含有受容体－５（ＤＲ５）のリガンド結合フラグメント、ＯＸ－４０のリガンド結合フラグメント、ＣＤ４０のリガンド結合フラグメント、４－１ＢＢのリガンド結合フラグメント、グルココルチコイド誘導性腫瘍壊死因子受容体（ＧＩＴＲ）のリガンド結合フラグメント、またはそれらの任意の組み合わせが含まれ得るが、これらに限定されない。さらなる例として、免疫チェックポイントモジュレーター受容体外部ドメインには、ＰＤ－１のリガンド結合フラグメント、ＣＴＬＡ４のリガンド結合フラグメント、ＬＡＧ３のリガンド結合フラグメント、ＣＤ２８のリガンド結合フラグメント、免疫グロブリン様ドメイン含有受容体２（ＩＬＤＲ２）のリガンド結合フラグメント、Ｔ細胞免疫グロブリンムチンファミリーメンバー３（ＴＩＭ－３）のリガンド結合フラグメント、またはそれらの任意の組み合わせが含まれ得るが、これらに限定されない。さらなる例として、ＴＧＦβ受容体には、ＴＧＦβＲ－１のリガンド結合フラグメント、ＴＧＦβＲ－２のリガンド結合フラグメント、ＴＧＦβＲ３のリガンド結合フラグメント、またはそれらの任意の組み合わせが含まれ得るが、これらに限定されない。
本開示はさらに、本明細書に提供されるような多量体結合分子のサブユニットをコードする核酸配列を含む、単離されたポリヌクレオチドであって、各サブユニットが、
結合パートナーに特異的に結合する結合ポリペプチドもしくはそのフラグメントまたはリガンドに特異的に結合する受容体外部ドメインに融合された、ＩｇＡもしくはＩｇＭ重鎖定常領域またはその多量体化フラグメントもしくはバリアント
を含む、該単離されたポリヌクレオチドを提供する。さらに、提供されるポリヌクレオチドを含むベクター、及び提供されるベクターまたはポリヌクレオチドを含む宿主細胞が開示される。ある特定の実施形態において、提供される宿主細胞は、
本開示によって提供されるようなＪ鎖またはその機能的フラグメントもしくはバリアントをコードする核酸配列を含む、単離されたポリヌクレオチド
をさらに含み得る。
本開示はさらに、治療の必要がある対象において自己免疫障害、炎症性障害、またはそれらの組み合わせを治療するための方法を提供し、該方法は、有効量の本明細書に提供されるような多量体結合分子を該対象に投与する工程を含み、該多量体結合分子は、同じ結合パートナーに結合する当量の単量体または二量体結合分子よりも大きい効力を示す。
本開示はさらに、移植レシピエントにおいて移植拒絶反応を防止するための方法を提供し、該方法は、有効量の本明細書に提供されるような多量体結合分子を対象に投与する工程を含み、該多量体結合分子は、同じ結合パートナーに結合する当量の単量体または二量体結合分子よりも大きい効力を示す。
Ａは、Ｃμ２ドメイン、Ｃμ３ドメイン、及びＣμ４－ｔｐドメインを含む２個のＩｇＭ由来の重鎖フラグメントを各々有する、６個のＩｇＭ由来結合ユニットを有する六量体結合分子の原型を示し、該ＩｇＭ由来の重鎖フラグメントは、リガンドまたは受容体結合ポリペプチドのＣ末端に融合されている。Ｂは、Ｃμ２ドメイン、Ｃμ３ドメイン、及びＣμ４－ｔｐドメインを含む２個のＩｇＭ由来の重鎖フラグメントを各々有する、５個のＩｇＭ由来結合ユニットを有する五量体結合分子の原型を示し、該ＩｇＭ由来の重鎖フラグメントは、結合ポリペプチドのＣ末端に融合され、該五量体結合分子は、Ｎ末端及びＣ末端に任意選択的な異種ポリペプチド、例えば、ｓｃＦｖ抗体結合ドメインの融合をもつ、修飾されたＪ鎖をさらに含む。 Ｃμ２ドメイン、Ｃμ３ドメイン、及びＣμ４－ｔｐドメインを有する２個のＩｇＭ由来の重鎖フラグメントを各々有する、５個のＩｇＭ由来結合ユニットを有する五量体結合分子の原型を示し、該ＩｇＭ由来の重鎖フラグメントは、結合ポリペプチドのＣ末端に融合され、該結合ポリペプチドは、受容体外部ドメインであり、該五量体結合分子は、Ｎ末端及びＣ末端に任意選択的な異種ポリペプチド、例えば、ｓｃＦｖ抗体結合ドメインの融合をもつ、修飾されたＪ鎖をさらに含む。 Ａ～Ｃは、実施例１に従って生成されたＰＤ－Ｌ１結合分子の構造を示す。Ａ：ＰＤ－Ｌ１－ＩｇＭ、Ｂ：ＰＤ－Ｌ１－Ｈ－ＩｇＭ、Ｃ：ＰＤ－Ｌ１－Ｆｃ。 種々のＰＤ－Ｌ１結合分子がレポーターＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞においてＰＤ－１活性を刺激する能力を示すグラフである。
定義
「１個の」（「ａ」または「ａｎ」）実体という用語は、１個または複数個のその実体を指す。例えば、「１個の結合分子（ａ ｂｉｎｄｉｎｇ ｍｏｌｅｃｕｌｅ）」は、１個または複数個の結合分子を表すように理解される。したがって、「１個の」（「ａ」または「ａｎ」）、「１個または複数個」、及び「少なくとも１個」という用語は、本明細書では互換的に使用することができる。
さらに、本明細書で使用する場合の「及び／または」は、他方を伴うまたは伴わない２個の指定された特徴または構成要素の各々を具体的に開示するものとして解釈するものとする。したがって、「及び／または」という用語は、本明細書で「Ａ及び／またはＢ」のような表現で使用される場合、「Ａ及びＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（単独）、ならびに「Ｂ」（単独）を含むように意図されている。同様に、「及び／または」という用語は、「Ａ、Ｂ、及び／またはＣ」のような表現で使用される場合、以下の実施形態の各々を包含するように意図されている：Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）。
別途定義されない限り、本明細書で使用する技術用語及び科学用語は、本開示が関連する技術分野の当業者によって一般的に理解されている意味と同じ意味を有する。例えば、ｔｈｅ Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｕｏ，Ｐｅｉ－Ｓｈｏｗ，２ｎｄ ｅｄ．，２００２，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｈｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ ｅｄ．，１９９９，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、及びｔｈｅ Ｏｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｒｅｖｉｓｅｄ，２０００，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓは、本開示で使用されている用語の多くについての全般的辞書を当業者に提供する。
単位、接頭語、及び記号は、国際単位系（ＳＩ）で承認された形態で表される。数値範囲は、その範囲を画定する数字を含む。別途指示されない限り、アミノ酸配列はアミノ（「Ｎ」）からカルボキシ（「Ｃ」）の向きに左から右に記載される。本明細書に提供される見出しは、本明細書を全体的に参照することによって得ることができる、本開示の種々の実施形態または実施形態の制限ではない。したがって、すぐ後に定義される用語は、明細書全体を参照することによって、より十分に定義される。
本明細書で使用する場合、「ポリペプチド」という用語は、単数形の「ポリペプチド」ならびに複数形の「ポリペプチド」を包含するように意図されており、アミド結合（ペプチド結合の別名でも知られている）によって直線的に結合した単量体（アミノ酸）から構成される分子を指す。「ポリペプチド」という用語は、２個以上のアミノ酸からなる任意の鎖（単数または複数）を指し、特定の長さの生成物を指すわけではない。したがって、ペプチド、ジペプチド、トリペプチド、オリゴペプチド、「タンパク質」、「アミノ酸鎖」、または２個以上のアミノ酸からなる鎖（単数または複数）を指すために使用される他の用語が、「ポリペプチド」の定義内に含まれ、「ポリペプチド」という用語は、これらの用語のうちのいずれかの代わりに、またはこれらの用語のうちのいずれかと互換的に使用することができる。また、「ポリペプチド」という用語は、ポリペプチドの発現後修飾の産物を指すようにも意図されており、発現後修飾としては、限定されるものではないが、グリコシル化、アセチル化、リン酸化、アミド化、及び既知の保護／ブロッキング基による誘導体化、タンパク質切断、または非天然アミノ酸による修飾が挙げられる。ポリペプチドは、生物学的供給源から誘導するか、または組換え技術によって生成することができるが、指定された核酸配列から必ずしも翻訳されるわけではない。ポリペプチドは、化学合成を含む任意の様態で生成することができる。
本明細書に開示されるポリペプチドのサイズは、約３アミノ酸以上、５アミノ酸以上、１０アミノ酸以上、２０アミノ酸以上、２５アミノ酸以上、５０アミノ酸以上、７５アミノ酸以上、１００アミノ酸以上、２００アミノ酸以上、５００アミノ酸以上、１，０００アミノ酸以上、または２，０００アミノ酸以上であり得る。ポリペプチドは定義された３次元構造を有し得るが、必ずしもそのような構造を有するわけではない。定義された３次元構造を有するポリペプチドは折り畳まれていると言われ、定義された３次元構造を有するのではなく、多くの異なる立体構造をとり得るポリペプチドは、折り畳まれていないと言われる。本明細書で使用する場合、糖タンパク質という用語は、アミノ酸（例えば、セリンまたはアスパラギン）の酸素含有側鎖または窒素含有側鎖を介してタンパク質に付着されている少なくとも１個の炭水化物部分に結合したタンパク質を指す。
「単離された」ポリペプチドまたはそのフラグメント、バリアント、もしくは誘導体とは、その天然の環境にあるのではないポリペプチドが意図されている。特定の精製レベルは要求されない。例えば、単離されたポリペプチドは、その本来のまたは天然の環境から取り出されていることが可能である。宿主細胞内で発現させた組換え生成ポリペプチド及びタンパク質は、本明細書に開示される場合、単離されているとみなされ、任意の好適な技法によって分離、分画、または部分的もしくは実質的に精製されたネイティブまたは組換えポリペプチドも同様である。
本明細書で使用する場合、「非天然ポリペプチド」という用語またはその任意の文法上の変化形は、「天然」である、あるいは裁判官、または行政機関もしくは司法機関によって「天然」であると判定または解釈され得るポリペプチドの形態を明示的に除外し、ただしこのような形態のみを除外する、条件付き定義である。
本明細書に開示される他のポリペプチドは、前述のポリペプチドのフラグメント、誘導体、類似体、またはバリアント、及びこれらの任意の組み合わせである。本明細書に開示される場合、「フラグメント」、「バリアント」、「誘導体」、及び「類似体」という用語は、対応するネイティブポリペプチドの特性のうちの少なくともいくつか（例えば、結合パートナーに特異的に結合すること）を保持する任意のポリペプチドを含む。ポリペプチドのフラグメントとしては、例えば、タンパク質分解フラグメント、ならびに欠失フラグメントが挙げられる。バリアント、例えばポリペプチドのバリアントには、上述のフラグメントが含まれ、また、アミノ酸の置換、欠失、または挿入による改変アミノ酸配列を有するポリペプチドも含まれる。ある特定の実施形態において、バリアントは非天然であり得る。非天然バリアントは、当該技術分野で既知の変異誘発技法を用いて生成することができる。バリアントポリペプチドは、保存的または非保存的なアミノ酸の置換、欠失、または付加を含み得る。誘導体は、元のポリペプチドには見られない追加の特徴を示すように改変されたポリペプチドである。例としては、融合タンパク質または化学的コンジュゲートが挙げられる。バリアントポリペプチドは、本明細書で「ポリペプチド類似体」とも呼ばれ得る。本明細書で使用する場合、ポリペプチドの「誘導体」は、官能性側鎖の反応によって化学的に誘導体化された１個または複数個のアミノ酸を有する主題ポリペプチドも指すことができる。また、２０種の標準的なアミノ酸の１つまたは複数の誘導体を含有するペプチドも「誘導体」として含まれる。例えば、４－ヒドロキシプロリンはプロリンの代用とすることができ、５－ヒドロキシリジンはリジンの代用とすることができ、３－メチルヒスチジンはヒスチジンの代用とすることができ、ホモセリンはセリンの代用とすることができ、オルニチンはリジンの代用とすることができる。
「保存的アミノ酸置換」とは、あるアミノ酸が、類似の側鎖を有する別のアミノ酸で置換される置換である。塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、極性無電荷側鎖（例えば、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）、及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を含めた、類似の側鎖を有するアミノ酸のファミリーが当該技術分野で定義されている。例えば、チロシンのフェニルアラニンへの置換は保存的置換である。ある特定の実施形態において、本開示のポリペプチド及び結合分子の配列における保存的置換は、当該アミノ酸配列を含有するポリペプチドまたは結合分子が、結合分子が結合する結合パートナーに結合するのを抑止しない。結合パートナーへの結合を排除しないヌクレオチド及びアミノ酸の保存的置換を特定する方法は、当該技術分野で周知されている（例えば、Ｂｒｕｍｍｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．３２：１１８０－１ １８７（１９９３）、Ｋｏｂａｙａｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１２（１０）：８７９－８８４（１９９９）、及びＢｕｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９４：．４１２－４１７（１９９７）を参照されたい）。
「ポリヌクレオチド」という用語は、単数形の核酸ならびに複数形の核酸を包含するように意図されており、単離された核酸分子または構築物、例えば、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、ｃＤＮＡ、またはプラスミドＤＮＡ（ｐＤＮＡ）を指す。ポリヌクレオチドは、従来的なホスホジエステル結合または従来的でない結合（例えば、ペプチド核酸（ＰＮＡ）に見られるようなアミド結合）を含み得る。「核酸」または「核酸配列」という用語は、ポリヌクレオチドに存在する任意の１個または複数個の核酸セグメント、例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡフラグメントを指す。
「単離された」核酸またはポリヌクレオチドとは、その本来の環境から分離されている任意の形態の核酸またはポリヌクレオチドが意図されている。例えば、ゲル精製されたポリヌクレオチド、またはベクターに含有されるポリペプチドをコードする組換えポリヌクレオチドは、「単離された」とみなされよう。また、クローニングのための制限部位を有するように操作されたポリヌクレオチドセグメント（例えば、ＰＣＲ産物）も、「単離された」とみなされる。単離されたポリヌクレオチドのさらなる例としては、異種宿主細胞中で維持された組換えポリヌクレオチド、または緩衝液もしくは食塩水などの非ネイティブ溶液中にある（部分的もしくは実質的に）精製されたポリヌクレオチドが挙げられる。単離されたＲＮＡ分子としては、その転写物が自然界で見られるものではない、ポリヌクレオチドのインビボまたはインビトロＲＮＡ転写物が挙げられる。単離されたポリヌクレオチドまたは核酸は、合成により生成されたそのような分子をさらに含む。加えて、ポリヌクレオチドまたは核酸は、プロモーター、リボソーム結合部位、または転写ターミネーターなどの調節エレメントであり得るか、またはそれを含み得る。
本明細書で使用する場合、「非天然ポリヌクレオチド」という用語またはその任意の文法上の変化形は、「天然」である、あるいは裁判官、または行政機関もしくは司法機関によって「天然」であると判定または解釈され得る核酸またはポリヌクレオチドの形態を明示的に除外し、ただしこのような形態のみを除外する、条件付き定義である。
本明細書で使用する場合、「コード領域」は、アミノ酸に翻訳されるコドンからなる核酸の部分である。「ストップコドン」（ＴＡＧ、ＴＧＡ、またはＴＡＡ）はアミノ酸に翻訳されないものの、コード領域の一部とみなすことができる。ただし、任意の隣接する配列、例えば、プロモーター、リボソーム結合部位、転写ターミネーター、イントロンなどは、コード領域の一部ではない。２個以上のコード領域が、（例えば、単一のベクター上の）単一のポリヌクレオチド構築物内に、または（例えば、別々の（異なる）ベクター上の）別々のポリヌクレオチド構築物内に存在し得る。さらに、任意のベクターが単一のコード領域を含有する場合もあれば、２個以上のコード領域を含む場合もある。加えて、ベクター、ポリヌクレオチド、または核酸は、別のコード領域に融合されたまたは融合されていない異種コード領域を含み得る。異種コード領域としては、限定されるものではないが、分泌シグナルペプチドまたは異種機能的ドメインのような、特化したエレメントまたはモチーフをコードする領域が挙げられる。
ある特定の実施形態において、ポリヌクレオチドまたは核酸はＤＮＡである。ＤＮＡの場合、ポリペプチドをコードする核酸を含むポリヌクレオチドは、通常、プロモーター及び／または、１個もしくは複数個のコード領域と作動可能に連結された他の転写もしくは翻訳制御エレメントを含み得る。作動可能な連結とは、遺伝子産物の発現が調節配列（複数可）の影響下または制御下に置かれるような方式で、遺伝子産物（例えば、ポリペプチド）のためのコード領域が１個または複数個の調節配列と連結されている場合のことである。２個のＤＮＡフラグメント（例えば、ポリペプチドコード領域及びそれと連結されたプロモーター）は、プロモーター機能の誘導が所望の遺伝子産物をコードするｍＲＮＡの転写をもたらす場合、かつ、当該２個のＤＮＡフラグメント間の結合の性質が、発現調節配列が遺伝子産物の発現を指示する能力を妨害しない、またはＤＮＡテンプレートが転写される能力を妨害しない場合、「作動可能に連結され」ている。したがって、プロモーター領域が、ポリペプチドをコードする核酸と作動可能に連結されているとされるのは、当該プロモーターが当該核酸の転写に影響を及ぼすことができた場合である。プロモーターは、所定の細胞におけるＤＮＡの実質的な転写を指示する細胞特異的プロモーターであり得る。プロモーター以外の他の転写制御エレメント、例えばエンハンサー、オペレーター、リプレッサー、及び転写終結シグナルが、細胞特異的転写を指示するためにポリヌクレオチドと作動可能に連結されている可能性がある。
様々な転写制御領域が当業者に知られている。このような領域としては、限定されるものではないが、脊椎動物細胞内で機能する転写制御領域、例えば、限定されるものではないが、サイトメガロウイルス（最初期プロモーター、イントロンＡと連携）、シミアンウイルス４０（初期プロモーター）、及びレトロウイルス（例えば、ラウス肉腫ウイルス）由来のプロモーター及びエンハンサーセグメントが挙げられる。他の転写制御領域としては、アクチン、ヒートショックタンパク質、ウシ成長ホルモン、及びウサギβ－グロビンなどの脊椎動物遺伝子に由来するもの、ならびに真核細胞内で遺伝子発現を制御可能な他の配列が挙げられる。追加の好適な転写制御領域としては、組織特異的プロモーター及びエンハンサー、ならびにリンホカイン誘導性プロモーター（例えば、インターフェロンまたはインターロイキンによって誘導可能なプロモーター）が挙げられる。
同様に、様々な翻訳制御エレメントが当業者に知られている。このようなエレメントとしては、リボソーム結合部位、翻訳開始及び終止コドン、ならびにピコルナウイルスに由来するエレメント（特に、内部リボソーム進入部位またはＩＲＥＳ（ＣＩＴＥ配列とも呼ばれる））が挙げられるが、これらに限定されない。
他の実施形態において、ポリヌクレオチドは、ＲＮＡ、例えば、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、トランスファーＲＮＡ、またはリボソームＲＮＡの形態のＲＮＡであり得る。
ポリヌクレオチド及び核酸コード領域は、本明細書に開示されるポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドの分泌を指示する分泌またはシグナルペプチドをコードする追加のコード領域と連結され得る。シグナル仮説によれば、哺乳類細胞によって分泌されるタンパク質は、シグナルペプチドまたは分泌リーダー配列を有し、これは、粗面小胞体を通した伸長中のタンパク質鎖の搬出が開始されると成熟タンパク質から切断される。当業者は、脊椎動物細胞によって分泌されるポリペプチドが、ポリペプチドのＮ末端に融合されたシグナルペプチドを有し得、このシグナルペプチドが完成したまたは「完全長」ポリペプチドから切断されて、ポリペプチドの分泌または「成熟」形態をもたらすことを認識している。ある特定の実施形態において、ネイティブシグナルペプチド、例えば、免疫グロブリン重鎖または軽鎖シグナルペプチド、または、配列に作動可能に連結されているポリペプチドの分泌を指示する能力を保持するその配列の機能的誘導体が使用される。代替的に、異種哺乳類シグナルペプチドまたはその機能的誘導体を使用することができる。例えば、野生型リーダー配列は、ヒト組織プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）またはマウスβ－グルクロニダーゼのリーダー配列で置換することができる。
本明細書では、ある特定の結合分子、またはその結合パートナー結合フラグメント、バリアント、もしくは誘導体が開示される。本明細書で使用する場合、「結合分子」という用語は、その最も広義において、１個の「結合パートナー」標的もしくは分子決定基、または２個以上の「結合パートナー」標的もしくは分子決定基に特異的に結合する、１個の「結合ポリペプチド」、または２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、もしくは１２個の「結合ポリペプチド」を含む分子を指す。本明細書にさらに記載されるように、結合分子は、本明細書に記載されるような１個または複数個の「結合ポリペプチド」またはそのフラグメントを含み得る。結合分子の非限定的な例は、抗体、または抗原特異的結合を保持するそのフラグメントである。ただし、本開示のある特定の実施形態によれば、該結合分子の１個または複数個の「結合ポリペプチド」は、抗体でも、抗体に由来する抗原結合ドメインでもない。つまり、該結合ポリペプチドは、抗体分子の抗原結合ドメイン、例えば、ＶＨ及び／またはＶＬを含まない。
本明細書で使用する場合、「結合ポリペプチド」という用語は、ＩｇＭもしくはＩｇＡ定常領域またはその多量体化フラグメントのＮ末端側に位置し、結合パートナー、例えば、細胞の表面上に発現している受容体に特異的に結合するのに十分である結合分子の領域、あるいは、該結合ポリペプチドが受容体外部ドメインを含む場合には、リガンド結合パートナーに特異的に結合するのに十分である部分を指す。例えば、受容体ＰＤ－１に特異的に結合するＰＤ－Ｌ１などのリガンド、またはその受容体結合フラグメントは、本明細書で定義されるような「結合ポリペプチド」であるが、一方で、ＰＤ－１は、ＰＤ－Ｌ１結合ポリペプチドが結合する、細胞上に発現している「結合パートナー」としてＰＤ－Ｌ１に対して定義される。
本明細書で使用する場合の「免疫グロブリン」という用語は、免疫グロブリン分子であるか、または免疫グロブリン分子に由来するポリペプチドを指し、本明細書に提供されるような結合分子の部分を含む。この開示は、抗体の典型的な抗体抗原結合ドメインを含まないが、本明細書に提供される結合分子が二量体、五量体、または六量体へと容易に多量体化することを可能にするある特定の免疫グロブリン定常領域ドメインは含むという点で、慣習的な「抗体」ではない、結合分子を提供する。脊椎動物系における基本的な免疫グロブリン構造は、比較的よく理解されている。（例えば、Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ ｅｄ．１９８８を参照されたい）。
以下でより詳細に論じられるように、「免疫グロブリン」という用語は、生化学的に識別することができるポリペプチドの種々の広範なクラスを含む。免疫グロブリンポリペプチドのあるサブセットのみが、多量体化する能力を有する。当業者であれば、重鎖が、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロン（γ、μ、α、δ、ε）に分類され、それらの間にいくつかのサブクラス（例えば、γ１～γ４またはα１～α２）が存在することを理解しよう。この鎖の性質が、抗体の「アイソタイプ」をそれぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＧ、またはＩｇＥとして決定する。免疫グロブリンのサブクラス（サブタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２は、特徴がよく解明されており、機能的な特殊化を与えることが知られている。これらの免疫グロブリンの各々の修飾バージョンは、本開示を考慮すれば当業者に容易に認識可能であり、したがって、本開示の範囲内である。ある特定の実施形態において、この開示は、修飾されたヒトＩｇＭ定常領域を提供する。
軽鎖は、カッパまたはラムダ（κ、λ）のいずれかとして分類され、本明細書に提供される結合分子においては任意選択的または不必要なものである。各重鎖クラスは、カッパ軽鎖またはラムダ軽鎖のいずれかと結合し得る。一般に、軽鎖（存在する場合）及び重鎖は互いに共有結合しており、免疫グロブリンが発現されるとき、２本の重鎖の「テール」部分は、共有結合性のジスルフィド結合または非共有結合によって互いに結合している。重鎖において、アミノ酸配列は、Ｙ配置の分岐した端部のＮ末端から各鎖の底部のＣ末端まで続く。本明細書に提供されるような多量体結合分子の基本的なサブユニット構造、例えば、各々結合ポリペプチドのＣ末端に融合された２本のＩｇＭ重鎖は、ジスルフィド結合を介して共有結合性で連結されて「Ｙ」構造を形成する、２個の重鎖サブユニット（本明細書で「結合ユニット」とも呼ばれる）を含む。
「結合ユニット」という用語は、本明細書で、標準的な「Ｈ２Ｌ２」免疫グロブリン構造、すなわち、２本の重鎖またはそのフラグメント（これは２本の軽鎖またはそのフラグメントをさらに含み得る）に対応する、標準的な免疫グロブリン構造、例えば、抗体様分子、及び抗体由来の分子、その結合パートナー結合フラグメント、またはその多量体化フラグメントに対応する、結合分子の部分を指して使用される。ある特定の実施形態において、例えば、結合分子がＩｇＧ免疫グロブリンである場合、「結合分子」及び「結合ユニット」という用語は、同等である。他の実施形態において、例えば、結合分子が多量体、例えば、二量体ＩｇＡ免疫グロブリン由来分子、五量体ＩｇＭ免疫グロブリン由来分子、または六量体ＩｇＭ免疫グロブリン由来分子である場合、該結合分子は、２個の、４個、または５個の「結合ユニット」を含む。結合ユニットは、完全長の免疫グロブリン重鎖を含む必要はないが、本明細書に提供される多量体結合分子において、各結合ユニットは、多量体化を可能にするのに十分なＩｇＡまたはＩｇＭ免疫グロブリン定常領域の部分（「多量体化フラグメント」）を含むことになる。この開示に提供されるある特定のＩｇＭ由来結合分子は、五量体または六量体であり、ＩｇＭ定常領域、例えば、修飾されたヒトＩｇＭ定常領域、または「その多量体化フラグメント」、すなわち、ＩｇＭ定常領域の少なくともＣμ４領域及びテールピース領域を含む、５個または６個の二価結合ユニットを含む。本明細書で使用する場合、２個以上の結合ユニット、例えば、２個、５個、もしくは６個の結合ユニットを含む結合分子は、「多量体」と呼ばれる。
本明細書で使用する場合の「Ｊ鎖」という用語は、本明細書に配列番号：１５として提供される成熟ヒトＪ鎖のアミノ酸配列を含めた、任意の動物種のネイティブ配列ＩｇＭまたはＩｇＡ抗体のＪ鎖、その任意の機能的フラグメント、その誘導体、及び／またはそのバリアントを指す。種々のＪ鎖バリアント及び修飾されたＪ鎖誘導体が本明細書に開示される。当業者であれば、「機能的フラグメント」または「機能的バリアント」が、ＩｇＭ重鎖定常領域と会合して、五量体ＩｇＭ由来結合分子もしくは二量体ＩｇＡ結合分子を形成し得る、及び／または重合体Ｉｇ受容体（ＰＩｇＲ）などの細胞上のある特定の免疫グロブリン受容体と会合し得る、フラグメント及びバリアントを含むことを認識しよう。
「バリアントＪ鎖」という用語は、本明細書で、ポリペプチドの物理的特性または生理的特性を改変するアミノ酸置換、欠失、または挿入を含むＪ鎖を指して使用される。例えば、Ｊ鎖のグリコシル化パターンを改変する、またはバリアントＪ鎖を含むＩｇＭ結合分子の血清半減期を増加させる、ある特定のバリアントＪ鎖のアミノ酸配列が本明細書に提供される。例示的なバリアントＪ鎖が、例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１９／１６９３１４号に提供され、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
「修飾されたＪ鎖」という用語は、本明細書で、ネイティブ配列に導入される異種部分、例えば、異種ポリペプチド、例えば、外来性結合ドメインを含む、Ｊ鎖ポリペプチドを指して使用される。導入は、異種ポリペプチドもしくは他の部分の直接的もしくは間接的融合を含む手段、またはペプチドもしくは化学リンカーを介した付着による手段を含む、任意の手段によって達成することができる。「修飾されたヒトＪ鎖」という用語は、限定されるものではないが、異種部分、例えば、異種ポリペプチド、例えば、外来性結合ドメインの付加によって修飾された、配列番号：１５のアミノ酸配列のネイティブ配列成熟ヒトＪ鎖またはその機能的フラグメントを包含する。ある特定の実施形態において、異種部分は、ＩｇＭの五量体への効率的な重合、及びそのような重合体の標的への結合を妨害しない。例示的な修飾されたＪ鎖は、例えば、米国特許第９，９５１，１３４号及び同第１０，４００，０３８号、米国特許出願公開第ＵＳ－２０１９－０１８５５７０号及び同第ＵＳ－２０１８－０２６５５９６号に見出すことができ、これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本明細書で使用する場合、「ＩｇＭ由来結合分子」という用語は、総称的に、ネイティブＩｇＭ抗体、ＩｇＭ様抗体、ならびに、抗体抗原結合ドメインまたはそのサブユニットの代わりに非抗体結合ドメイン及び／または機能的ドメインを含む他のＩｇＭ由来結合分子、ならびにそれらの任意のフラグメント、例えば、多量体化フラグメント、バリアント、または誘導体を指す。
本明細書で使用する場合、「ＩｇＭ様結合分子」という用語は、一般に、六量体を形成するかまたはＪ鎖と会合して五量体を形成する能力を依然として保持する、バリアント抗体由来結合分子を指す。ＩｇＭ様結合分子または他のＩｇＭ由来結合分子は、典型的には、ＩｇＭ定常領域の少なくともＣμ４－ｔｐドメインを含むが、同じ種由来または異なる種由来の他の抗体アイソタイプ、例えば、ＩｇＧからの重鎖定常領域ドメインを含み得る。ＩｇＭ様結合分子または他のＩｇＭ由来結合分子は、同様に、ＩｇＭ様抗体が六量体及び／または五量体を形成可能である限り、１個または複数個の定常領域ドメインが欠失しているフラグメントであることができる。故に、ＩｇＭ様結合分子または他のＩｇＭ由来結合分子は、例えば、ハイブリッドＩｇＭ／ＩｇＧ抗体であり得るか、またはＩｇＭ由来結合分子の「多量体化フラグメント」であり得る。
「価数」、「二価」、「多価」という用語及び文法上の同等物は、本明細書に提供されるような所与の結合分子または結合ユニットにおける結合ポリペプチドドメインの数を指す。そのため、所与の結合分子、例えば、ＩｇＭ由来結合分子またはそのフラグメントを参照しての「二価」、「四価」、及び「六価」という用語は、それぞれ２個の結合ポリペプチド、４個の結合ポリペプチド、及び６個の結合ポリペプチドの存在を表す。各結合ユニットが二価である典型的なＩｇＭ由来結合分子において、結合分子自体は１０または１２の価数を有することができる。二価または多価結合分子は、単一特異的である（すなわち、結合ポリペプチドの全てが同じである）場合もあれば、二重特異的または多重特異的である（例えば、２個以上の結合ポリペプチドが異なる場合、例えば、同じ結合パートナー上の異なるエピトープに結合するか、または全く異なる結合パートナーに結合する）場合もある。
本明細書で使用する場合の「エピトープ」という用語は、本明細書で定義されるような結合ポリペプチドに特異的に結合することが可能な、結合パートナー上の任意の分子決定基を含む。ある特定の実施形態において、エピトープは、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル、またはスルホニルなどの分子の化学的に活性な表面グルーピングを含むことができ、ある特定の実施形態においては、３次元構造特性、及びまたは特定の電荷特性を有することができる。
「結合パートナー」という用語は、最も広義において、本明細書に提供されるような結合ポリペプチドの標的であるように使用され、本明細書に提供されるような結合分子が結合し得る物質を含む。結合パートナーは、例えば、ポリペプチド、核酸、炭水化物、脂質、または他の分子であり得る。ある特定の実施形態において、結合パートナーは、細胞の表面上に発現しているかまたは存在する受容体または他の部分である。他の実施形態において、結合ポリペプチドが受容体外部ドメインである場合、結合パートナーは、可溶性もしくは細胞結合性リガンド、またはその受容体結合フラグメントであり得る。その上、「結合パートナー」は、例えば、本明細書に提供されるような結合分子または結合ポリペプチドが結合し得るエピトープを含む細胞、臓器、または生物、例えば、動物、植物、微生物、もしくはウイルスであり得る。
免疫グロブリンの軽鎖及び重鎖はいずれも、構造的及び機能的に相同な領域または「ドメイン」に分類される。例えば、ＩｇＭ重鎖の定常領域ドメイン（例えば、ＣＨ１もしくはＣμ１、ＣＨ２もしくはＣμ２、ＣＨ３もしくはＣμ３、ＣＨ４もしくはＣμ４、またはテールピース）は、分泌、経胎盤移動（ｔｒａｎｓｐｌａｃｅｎｔａｌ ｍｏｂｉｌｉｔｙ）、Ｆｃ受容体結合、補体結合、多量体化する能力などといった生物学的特性を与える。慣例により、定常領域ドメインの付番は、定常領域ドメインが典型的な免疫グロブリンのアミノ末端からより遠位になるにつれて増加する。
ヒトＩｇＭ定常ドメインに対するＫａｂａｔ付番体系は、Ｋａｂａｔ，ｅｔ．ａｌ．“Ｔａｂｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ａｎｄ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｅｃｕｒｓｏｒｓ，Ｖ－Ｒｅｇｉｏｎｓ，Ｃ－Ｒｅｇｉｏｎｓ，Ｊ－Ｃｈａｉｎ，Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｆｏｒ Ａｎｔｉｇｅｎ，Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｓｕｒｆａｃｅ Ａｎｔｉｇｅｎｓ，β－２ Ｍｉｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ，Ｍａｊｏｒ Ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ Ａｎｔｉｇｅｎｓ，Ｔｈｙ－１，Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ，Ｃ－Ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ，Ｔｈｙｍｏｐｏｉｅｔｉｎ，Ｉｎｔｅｇｒｉｎｓ，Ｐｏｓｔ－ｇａｍｍａ Ｇｌｏｂｕｌｉｎ，α－２ Ｍａｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ，ａｎｄ Ｏｔｈｅｒ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，” Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（１９９１）に見出すことができる。ＩｇＭ定常領域は、連続的に（すなわち、アミノ酸１番が定常領域の第１のアミノ酸から開始する）、またはＫａｂａｔ付番方式を用いることによって付番され得る。ヒトＩｇＭ定常領域の２つのアレルの連続的な付番（本明細書で配列番号：１（アレルＩＧＨＭ＊０３）及び配列番号：６０（アレルＩＧＨＭ＊０４）として提示される）と、Ｋａｂａｔ体系による付番との比較が下記に記載される。ＩｇＭ重鎖定常領域またはその多量体化フラグメントを含む、本明細書に提供される各配列において、任意のアレルをアレルＩＧＨＭ＊０３の代用とすることができ、これは、例えば、配列番号：２～４、及び１１に提示される。下線付きのアミノ酸残基は、Ｋａｂａｔ体系においては考慮されない（下記の二重下線付きの「Ｘ」は、セリン（Ｓ）（配列番号：１）またはグリシン（Ｇ）（配列番号：６０）であり得る）。
ＩｇＭ重鎖についての連続的（配列番号：１または配列番号：６０）／ＫＡＢＡＴ付番検索表
Figure 2022505663000003
「特異的に結合する」とは、一般に、本明細書に提供されるような結合分子が結合ポリペプチドを介して結合パートナー上のエピトープに結合すること、及びその結合が当該結合ポリペプチドと当該結合パートナーとの間の何らかの相補性を必要とすることを意味する。この定義によれば、結合分子がその結合ポリペプチドを介し、ランダムな無関係の結合パートナーに結合するよりも容易にある結合パートナーに結合する場合、結合分子はその結合パートナーに対し「特異的に結合する」と言われる。「特異性」という用語は、本明細書では、ある特定の結合分子がある特定の結合パートナーに結合する相対的親和性を称するために使用される。例えば、結合分子「Ａ」は、所与の結合パートナーに対して結合分子「Ｂ」よりも高い特異性を有するとみなされる場合があるか、または結合分子「Ａ」は、関連する結合パートナー「Ｄ」に対するよりも高い特異性で結合パートナー「Ｃ」に結合すると言われる場合がある。
本明細書に提供されるような結合分子は、トリ及び哺乳動物を含む任意の動物起源に由来し得る。結合分子は、ヒト、マウス、ロバ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ラマ、ウマ、またはニワトリの結合分子であり得る。
本明細書で使用する場合、「重鎖サブユニット」という用語は、免疫グロブリン重鎖に由来するアミノ酸配列を含み、重鎖サブユニットを含む本明細書に提供されるような結合分子は、結果として生じる結合分子が多量体化することができる限り、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ（例えば、上部、中部、及び／または下部ヒンジ領域）ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、ＣＨ４ドメイン、テールピース、またはそのバリアントもしくはフラグメントのうちの少なくとも１個を含み得る。例えば、結合分子、またはそのフラグメント、例えば、多量体化フラグメント、バリアント、もしくは誘導体は、限定されるものではないが、ＣＨ１ドメイン；ＣＨ１ドメイン、ヒンジ、及びＣＨ２ドメイン；ＣＨ１ドメイン及びＣＨ３ドメイン；ＣＨ１ドメイン、ヒンジ、及びＣＨ３ドメイン；またはＣＨ１ドメイン、ヒンジドメイン、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインを含み得る。ある特定の実施形態において、結合分子またはそのフラグメント、例えば、多量体化フラグメント、バリアント、もしくは誘導体は、ＣＨ３ドメイン及びＣＨ４ドメイン；またはＣＨ３ドメイン、ＣＨ４ドメイン、及びＪ鎖を含み得る。さらに、結合分子は、ある特定の定常領域部分、例えば、ＣＨ２ドメインの全部または一部が欠如している可能性がある。当業者には、これらのドメイン（例えば、重鎖サブユニット）が、元の免疫グロブリン分子とはアミノ酸配列が異なるように修飾され得ることが理解されよう。本開示の実施形態によれば、本明細書に提供されるようなＩｇＭ抗体、ＩｇＭ様抗体、または他のＩｇＭ由来結合分子は、ＩｇＭ抗体、ＩｇＭ様抗体、または他のＩｇＭ由来結合分子が多量体、例えば、六量体または五量体を形成することを可能にするのに十分なＩｇＭ重鎖定常領域の部分を含む。本明細書で使用する場合、そのようなフラグメントは、「多量体化フラグメント」を含む。
本明細書で使用する場合、「軽鎖サブユニット」という用語は、免疫グロブリン軽鎖に由来するアミノ酸配列を含む。軽鎖サブユニットは、ＣＬ（例えば、ＣκまたはＣλ）ドメインを含む。
本明細書に提供されるような結合分子は、それらが認識するかまたは特異的に結合する結合パートナー（複数可）の観点から説明または指定され得る。結合パートナーは、単一のエピトープまたは少なくとも２個のエピトープを含むことができ、結合パートナーのサイズ、立体構造、及びタイプに応じて、任意の数のエピトープを含み得る。
本明細書で使用する場合、「ジスルフィド結合」という用語は、例えば、ポリペプチドのシステイン残基における、２個の硫黄原子の間に形成された共有結合を含む。アミノ酸システインはチオール基を含み、このチオール基によって第２のチオール基とのジスルフィド結合または架橋が形成され得る。ジスルフィド結合は、「鎖内」（すなわち、単一のポリペプチドまたはポリペプチドサブユニットにおいてシステイン残基に結合する）であり得るか、または「鎖間」（すなわち、２個の別々のポリペプチドサブユニット、例えば、抗体重鎖及び抗体軽鎖、２本の抗体重鎖、またはＩｇＭもしくはＩｇＡ抗体重鎖定常領域及びＪ鎖を結合する）であり得る。
「多重特異的結合分子」、例えば、「二重特異的結合分子」という用語は、２個以上の異なる結合パートナー、または単一の結合パートナーの異なるエピトープに結合する結合ポリペプチドを有する、本明細書に提供されるような結合分子を指す。
本明細書で使用する場合、「結合した」、「融合された」、もしくは「融合」という用語、または他の文法上の同等物は、互換的に使用することができる。これらの用語は、化学的コンジュゲーションまたは組換え手段を含めた任意の手段により、２つ以上のエレメントまたは構成要素が一緒に連結することを指す。「インフレーム融合」とは、２つ以上のポリヌクレオチドオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）が連結して、元のＯＲＦの翻訳リーディングフレームを維持する様態で、連続的なより長いＯＲＦを形成することを指す。したがって、組換え融合タンパク質は、元のＯＲＦによってコードされたポリペプチドに対応する２個以上のセグメントを含有する単一のタンパク質である（これらのセグメントは、自然界では通常そのように連結されることはない）。リーディングフレームは、融合されたセグメント全体にわたってこのように連続的に作製されるものの、セグメントは、例えば、インフレームリンカー配列によって、物理的または空間的に分離され得る。
ポリペプチドの文脈において、「線状配列」または「配列」とは、アミノ末端からカルボキシル末端への方向におけるポリペプチド内のアミノ酸の順序であり、配列内で隣り合ったアミノ酸は、ポリペプチドの一次構造内で連続している。ポリペプチドの別の部分に対し「アミノ末端側」または「Ｎ末端側」であるポリペプチドの部分は、連続したポリペプチド鎖内で先に現れる部分である。同様に、ポリペプチドの別の部分に対し「カルボキシ末端側」または「Ｃ末端側」であるポリペプチドの部分は、連続したポリペプチド鎖内で後に現れる部分である。例えば、本明細書に提供されるような典型的な結合分子において、結合ポリペプチドは、免疫グロブリン定常領域に対し「Ｎ末端側」であり、定常領域は、結合ポリペプチドに対し「Ｃ末端側」である。
本明細書で使用する場合、「発現」という用語は、遺伝子が生化学物質、例えばポリペプチドをもたらすプロセスを指す。このプロセスは、細胞内における遺伝子の機能的存在の任意の顕在化を含み、これには、限定されるものではないが、遺伝子ノックダウンならびに一過性発現及び安定性発現の両方が含まれる。これには、限定されるものではないが、ＲＮＡ（例えば、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ））への遺伝子の転写、及びポリペプチド（複数可）へのこのようなｍＲＮＡの翻訳が含まれる。最終的な所望の産物が生化学物質である場合、発現にはその生化学物質及び任意の前駆体の創出が含まれる。遺伝子の発現は「遺伝子産物」をもたらす。本明細書で使用する場合、遺伝子産物は、核酸（例えば、遺伝子の転写によってもたらされるメッセンジャーＲＮＡ）、または転写物から翻訳されるポリペプチドのいずれかであり得る。本明細書に記載される遺伝子産物には、転写後修飾（例えば、ポリアデニル化）を伴う核酸、または翻訳後修飾（例えば、メチル化、グリコシル化、脂質の付加、他のタンパク質サブユニットとの会合、タンパク質分解切断など）を伴うポリペプチドがさらに含まれる。
本明細書で使用する場合、「シグナル伝達（ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ）」または「細胞シグナル伝達（ｃｅｌｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）」という用語は、例えば、細胞の表面上に発現している受容体へのリガンドの結合を介した、細胞の外部から細胞の内部への分子または生化学シグナルの伝達を指す。シグナルは、細胞における１つまたは複数の生化学的事象、例えば、種々のタンパク質キナーゼによるタンパク質リン酸化を介して伝達され得、最終的には、限定されないが、細胞活性化（例えば、サイトカインの産生）、細胞増殖、アポトーシス、または形態形成などの細胞応答をもたらす。例えば、リガンドが細胞の表面上に露出した受容体の部分に接触するとき、細胞における受容体の細胞内部分を通して生化学的カスケードが開始されて、例えば、遺伝子もしくは遺伝子産物の転写もしくは翻訳、タンパク質における翻訳後修飾もしくは立体構造変化、またはタンパク質の移行をもたらす。例えば、Ｂｒａｄｓｈａｗ，Ｒａｌｐｈ Ａ．；Ｄｅｎｎｉｓ，Ｅｄｗａｒｄ Ａ．，ｅｄｓ．（２０１０）．Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ（２ｎｄ ｅｄ．）．Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ：Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓを参照されたい。
本明細書で使用する場合、シグナル伝達の「調節」は、通常のシグナル伝達に影響を及ぼす、例えば、シグナル伝達を強化する、シグナル伝達が通常は遮断される場所でシグナル伝達を開始する、シグナル伝達を阻害するかもしくは妨げる、またはシグナル伝達が通常は活性である場所でシグナル伝達を遮断する、任意の介入を含み得る。本明細書で使用する場合、シグナル伝達経路の「アゴニスト」は、シグナル伝達が通常は遮断される場所でシグナル伝達を強化するかまたはシグナル伝達を開始し、シグナル伝達の「アンタゴニスト」は、シグナル伝達を阻害するかまたは遮断する。シグナル伝達アゴニストは、典型的には、例えば、ネイティブリガンドが作用するのと同じ程度に細胞の表面上の受容体と相互作用することによって、シグナル伝達経路に直接的に作用する。シグナル伝達のアンタゴニストは、例えば、受容体がそのネイティブリガンドに結合するのを遮断することによって、シグナル伝達経路に直接的に作用し得るか、あるいは、例えば、リガンドに結合し、それによってリガンドがその受容体に結合しないようそらすことによって（例えば、「デコイ受容体」または「受容体外部ドメイン」）、またはシグナル伝達がもはや生じ得ないようにリガンドもしくは受容体結合ドメインをアロステリックに変化させることによって、間接的に作用し得る。
「治療する」もしくは「治療」もしくは「治療すること」、または「緩和する」もしくは「緩和すること」などの用語は、既存の診断された病的状態または障害を、その障害または病的状態を有する対象において治癒する、減速する、その症状を軽減する、及び／またはその進行を停止もしくは減速する治療的措置を指す。「防止する」、「防止」、「回避する」、「阻止」などといった用語は、診断されていない標的とされる病的状態または障害の発症を防止する予防的または防止的措置を指す。故に、「治療を必要とする対象」には、障害であるとすでに診断された対象、障害を有する傾向にある対象、及び障害が防止されるべきである対象が含まれ得る。
「対象」または「個体」または「動物」または「患者」または「哺乳動物」とは、診断、予後判定、または療法が所望される任意の対象、特に哺乳類対象またはヒト対象を意味する。哺乳類対象には、ヒト、飼育動物、家畜、及び動物園、スポーツ、または愛玩動物、例えば、イヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、ブタ、ウシ、クマなどが含まれる。
本明細書で使用する場合、「療法が有益であろう対象」及び「治療を必要とする動物」のような表現は、１個または複数個の抗原結合ドメインを含む、本明細書に提供されるような結合分子の投与が有益であろう対象（例えば、哺乳類対象）を含む。このような結合分子（例えば、抗体）は、例えば、疾患の診断手順及び／または疾患の治療もしくは防止のために使用することができる。
本明細書で使用する場合、「血清半減期」または「血漿半減期」という用語は、投与後に薬物（例えば、本明細書に提供されるような多量体結合分子）の血清中または血漿中濃度が５０％減少するのにかかる時間（例えば、分、時間、または日単位）を指す。下記の２つの半減期が説明され得る：中央コンパートメント（例えば、静脈内送達の場合は血液）から末梢コンパートメント（例えば、組織または臓器）への薬物の再分布プロセスに起因する血漿中濃度の低下速度である、アルファ半減期、α半減期、またはｔ１／２α、及び排泄または代謝プロセスに起因する低下速度である、ベータ半減期、β半減期、またはｔ１／２β。
本明細書で使用する場合、「血漿中薬物濃度－時間曲線下面積」または「ＡＵＣ」という用語は、ある用量の薬物を投与した後の薬物への実際の身体曝露を反映し、ｍｇ＊ｈ／Ｌ単位で表される。この曲線下面積は、０時間（ｔ０）から無限大時間（∞）まで測定され、身体からの薬物の排出速度及び投与された用量に依存する。本明細書で使用する場合、「平均滞留時間」または「ＭＲＴ」という用語は、薬物が体内に留まる平均的な時間の長さを指す。
多量体結合分子
この開示は、２個以上、例えば、２個、５個、もしくは６個の二価結合ユニットまたはそのバリアントもしくはフラグメントを含む多量体結合分子であって、該多量体結合分子の各結合ユニットが、２個のＩｇＡもしくはＩｇＭ重鎖定常領域またはその多量体化フラグメントもしくはバリアントを含み、該ＩｇＡもしくはＩｇＭ定常領域もしくはそのフラグメントの少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、またはある特定の実施形態においては各ＩｇＡもしくはＩｇＭ重鎖定常領域またはそのフラグメントが、結合パートナーに特異的に結合する結合ポリペプチドまたはそのフラグメントに融合されている、該多量体結合分子を提供する。例示的な結合ポリペプチド及び結合パートナーは、本明細書の他の箇所で詳述される。ある特定の実施形態において、本明細書に提供される結合分子の一部である結合ポリペプチドまたはそのフラグメントは、抗体でも、抗体の抗原結合フラグメントでも、または抗体もしくは抗体の抗原結合フラグメントのバリアントもしくは誘導体でもない。ある特定の実施形態において、本明細書に提供されるような結合分子に含まれる結合ポリペプチドのうちの少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、または１２個は、同じ結合パートナーに結合する。ある特定の実施形態において、本明細書に提供されるような結合分子に含まれる結合ポリペプチドのうちの少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、または１２個は、同一である。この開示によって提供される例示的な六量体及び五量体ＩｇＭ由来結合分子の構造は、図１Ａ及び図１Ｂに図解される。
本明細書に提供されるような多量体結合分子は、ある特定の実施形態において、細胞（例えば、表面上に結合ポリペプチドを典型的に発現する細胞、または表面上に結合パートナーを典型的に発現する細胞）におけるシグナル伝達を調節することができる。「シグナル伝達を調節する」とは、細胞においてシグナル伝達に影響を及ぼすこと、例えば、シグナル伝達経路が現在不活性である細胞においてシグナル伝達を開始すること、活性であるがレベルがより低い経路においてシグナル伝達活性を増加させること、シグナル伝達経路を遮断するかもしくは阻害すること、または活性なシグナル伝達経路の活性レベルを低減することを意味する。シグナル伝達の調節は、一部の事例において、直接的であり得る（例えば、結合分子が細胞の表面上の結合パートナーに直接的に結合し、それによってその結合パートナーを介したシグナル伝達に影響を及ぼす場合）。シグナル伝達の調節は、一部の事例において、間接的であり得る（例えば、結合分子が、シグナル伝達経路が影響を及ぼされる細胞に直接的に結合するのではなく、シグナル伝達経路の一部として当該細胞にさもなければ結合するであろう部分に結合する場合）。それにより、結合分子は、その部分が当該細胞に結合するのを防止することによって、または細胞への結合に利用可能なその部分の濃度を低減することによって、シグナル伝達に間接的に影響を及ぼすことができる。細胞においてある特定のシグナル伝達経路を開始するかまたはその活性を増加させる、本明細書に提供されるような多量体結合分子は、その経路の「アゴニスト」である。シグナル伝達経路の活性を低減するかまたはシグナル伝達経路を遮断する、本明細書に提供されるような多量体結合分子は、そのシグナル伝達経路の「アンタゴニスト」である。ある特定の実施形態において、本明細書に提供されるような多量体結合分子は、同じ結合パートナーに結合する１個または２個の結合ポリペプチド（例えば、同じ結合ポリペプチドの２個のコピーのうちの１個）を含む当量の単量体または二量体結合分子よりも高い効力で、細胞のシグナル伝達を調節することができる。
ある特定の実施形態において（これらの例は本明細書に提供される）、結合パートナーが細胞の表面上に発現し、結合ポリペプチドの結合パートナーへの結合が、その細胞におけるシグナル伝達を調節する。例えば、結合ポリペプチドは、リガンドまたはリガンドの受容体結合フラグメントであり得、結合パートナーは、細胞の表面上に発現している受容体であり得、リガンド及び受容体の結合が、例えば、受容体を介したシグナル伝達を誘導し得るか、増加させ得るか、阻害し得るか、または遮断し得る。他の実施形態において、結合ポリペプチドは、例えば、サイトカインもしくはその受容体結合フラグメント、成長因子もしくはその受容体結合フラグメント、神経伝達物質もしくはその受容体結合フラグメント、ペプチドもしくはタンパク質ホルモンもしくはその受容体結合フラグメント、免疫チェックポイントモジュレーターリガンドもしくはその受容体結合フラグメント、または細胞外マトリックスタンパク質の受容体結合フラグメントであり得る。ある特定の実施形態において、結合分子の結合ポリペプチドのうちの少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、または１２個は、当該細胞の同じ結合パートナーに結合して、当該結合パートナーを介したシグナル伝達を調節する。ある特定の実施形態において、結合分子の結合ポリペプチドのうちの少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、または１２個は、同一である。ある特定の実施形態において、細胞上の結合パートナーの、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、または１２個のコピーを有する結合分子の接触は、同じ結合パートナーに結合する１個または２個の結合ポリペプチドのみを有する当量の一価または二価結合分子よりも高い効力で、例えば、当該細胞におけるシグナル伝達を誘導し得るか、増加させ得るか、阻害し得るか、または遮断し得る。
ある特定の実施形態において（これらの例は本明細書に提供される）、結合分子の結合ポリペプチドのうちの少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、または１２個は、リガンドまたはその受容体結合フラグメントを含む結合パートナーに特異的に結合し得る、受容体外部ドメインを含む。本明細書で使用する場合、「受容体外部ドメイン」は、細胞外に露出している、細胞上に典型的に発現している受容体の部分を指す。したがって、「受容体外部ドメイン」は、受容体タンパク質の膜貫通または細胞内部分は含まない。これらの実施形態によれば、結合パートナーは、細胞と会合している（例えば、細胞の表面上に発現している）可能性があるか、または細胞会合部分の細胞外部分もしくは可溶性フラグメントであり得る。ある特定の実施形態において、受容体外部ドメインは、抗体でも抗体の抗原結合フラグメントでもない。また、これらの実施形態によれば、受容体外部ドメインの、リガンドまたはそのフラグメントへの結合は、典型的には間接的に、当該受容体を発現する細胞におけるシグナル伝達を調節することができる。例えば、結合分子の受容体外部ドメインの、それぞれ対応するリガンドまたはそのフラグメントへの結合は、リガンドが細胞で発現している受容体と会合するのを競合的に阻害し、それによって当該細胞におけるシグナル伝達を阻害することができる。競合的阻害は、例えば、リガンド結合に対する親和性の増加、細胞で発現している受容体の数と比べた受容体外部ドメインの量の増加、またはそれらの組み合わせによるものであり得る。ある特定の実施形態において、受容体外部ドメインのうちの少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、または１２個は、同じリガンドに結合する。ある特定の実施形態において、受容体外部ドメインのうちの少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、または１２個は、同一である。ある特定の実施形態において、結合分子の受容体外部ドメインによる、そのそれぞれ対応するリガンドまたはそのフラグメントとの接触は、同じリガンドに結合する１個または２個の受容体外部ドメインのみを有する当量の一価または二価結合分子よりも高い効力で、例えば、当該受容体を発現する細胞におけるシグナル伝達を阻害し得るか、または遮断し得る。結合ポリペプチドが受容体外部ドメインである多量体結合分子の概略図が、図２として提示される。
ＩｇＭ由来の多量体結合分子
ある特定の実施形態において、この開示によって提供される多量体結合分子は、本明細書に記載されるような結合ポリペプチドに融合されたＩｇＭ重鎖定常領域またはその多量体化フラグメントを含む、六量体または五量体結合分子である。本明細書に提供されるように、ＩｇＭ由来結合分子は、多量体結合分子のＩｇＭ重鎖定常領域またはその多量体化フラグメントのＮ末端側に融合された、結合パートナーに特異的に結合する少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、または１２個の結合ポリペプチドを含む。ある特定の実施形態において、多量体結合分子の少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、または１２個の結合ポリペプチドは、同じ結合パートナーに結合する。ある特定の実施形態において、多量体結合分子の少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、または１２個の結合ポリペプチドは、同一である。
本明細書に提供されるような二価ＩｇＭ由来結合ユニットは、２個のＩｇＭ重鎖定常領域を含み、ＩｇＭ由来結合分子は、典型的には、５個または６個の結合ユニットを含む。完全長ＩｇＭ重（μ）鎖定常領域は、４個の定常領域ドメインであるＣμ１（ＣＭ１、ＣＭｕ１、またはＣＨ１とも呼ばれる）、Ｃμ２（ＣＭ２、ＣＭｕ２、またはＣＨ２とも呼ばれる）、Ｃμ３（ＣＭ３、ＣＭｕ３、またはＣＨ３とも呼ばれる）、及びＣμ４（ＣＭ４、ＣＭｕ４、またはＣＨ４とも呼ばれる）、ならびに「テールピース」（ｔｐ）を含む。ヒトＩｇＭ定常領域は、典型的には、アミノ酸配列、配列番号：１（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ｐｉｒ｜｜Ｓ３７７６８、ＣＡＡ４７７０８．１、及びＣＡＡ４７７１４．１、アレルＩＧＨＭ＊０３と同一）、または配列番号：６０（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ｓｐ｜Ｐ０１８７１．４、アレルＩＧＨＭ＊０４と同一）を含む。ヒトＣμ１ドメインは、配列番号：１または配列番号：６０のおよそアミノ酸５からおよそアミノ酸１０２に及び、ヒトＣμ２ドメインは、配列番号：１または配列番号：６０のおよそアミノ酸１１４からおよそアミノ酸２０５に及び、ヒトＣμ３ドメインは、配列番号：１または配列番号：６０のおよそアミノ酸２２４からおよそアミノ酸３１９に及び、Ｃμ４ドメインは、配列番号：１または配列番号：６０のおよそアミノ酸３２９からおよそアミノ酸４３０に及び、テールピース（ｔｐ）は、配列番号：１または配列番号：６０のおよそアミノ酸４３１からおよそアミノ酸４５３に及ぶ。
５個のＩｇＭ由来結合ユニットが、追加の小さなポリペプチド鎖（Ｊ鎖）と複合体を形成して、ＩｇＭ結合分子を形成することができる。前駆体ヒトＪ鎖は、アミノ酸配列、配列番号：１４を含む。
成熟ヒトＪ鎖は、アミノ酸配列、配列番号：１５を含む。Ｊ鎖を伴わない場合、ＩｇＭ由来結合ユニットは、典型的には集合して六量体を形成する。理論に束縛されることを望むものではないが、ＩｇＭ結合ユニットが集合して五量体または六量体の結合分子を形成することには、少なくともＣμ４及び／またはｔｐドメインが関与すると考えられている。例えば、Ｂｒａａｔｈｅｎ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：４２７５５－４２７６２（２００２）を参照されたい。したがって、この開示に提供される五量体または六量体結合分子は、典型的には、少なくともＣμ４及び／またはｔｐドメインを含むＩｇＭ定常領域を含む。
ＩｇＭ重鎖定常領域は、Ｃμ３ドメインもしくはそのフラグメント、Ｃμ２ドメインもしくはそのフラグメント、Ｃμ１ドメインもしくはそのフラグメント、及び／または他のＩｇＭもしくは他の免疫グロブリン重鎖ドメインを追加的に含み得る。ある特定の実施形態において、本明細書に提供されるような結合分子は、完全なＩｇＭ重（μ）鎖定常領域、例えば、配列番号：１または配列番号：６０、またはそのバリアント、誘導体、もしくは類似体を含み得る。
ある特定の実施形態において、本明細書に提供されるような多量体結合分子の各結合ユニットは、少なくともＩｇＭ Ｃμ４ドメイン及びＩｇＭテールピースドメインを各々含む２個のＩｇＭ重鎖定常領域またはその多量体化フラグメントもしくはバリアントを含む。ある特定の実施形態において、ＩｇＭ重鎖定常領域は各々、ＩｇＭ Ｃμ４ドメイン及びＩｇＭテールピースドメインのＮ末端側に位置するＩｇＭ Ｃμ３ドメインをさらに含み得る。
ある特定の実施形態において、ＩｇＭ重鎖定常領域は各々、ＩｇＭ Ｃμ３ドメインのＮ末端側に位置するＩｇＭ Ｃμ２ドメインをさらに含み得る。本明細書に提供される例示的な多量体結合分子は、野生型ヒトＣμ２、Ｃμ３、Ｃμ４－ＴＰドメインを含む配列番号：３を含む、ヒトＩｇＭ定常領域を含む。
本明細書に提供されるようなある特定のＩｇＭ由来の多量体結合分子において、各ＩｇＭ定常領域は、ＩｇＭ Ｃμ２ドメインの代わりに、またはそれに加えて、ＩｇＭ Ｃμ３ドメインのＮ末端側に位置するＩｇＧヒンジ領域またはその機能的バリアントを含み得る。６位のシステインがセリンで置換されている、例示的なバリアントヒトＩｇＧ１ヒンジ領域のアミノ酸配列は、ＶＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰ（配列番号：５）である。このタイプの例示的なＩｇＭ定常領域は、Ｃμ３、Ｃμ４、及びＴＰドメインを含むヒトＩｇＭ定常領域の多量体化フラグメントに融合された、バリアントヒトＩｇＧ１ヒンジ領域を含み、アミノ酸配列、配列番号：６を含む。
低減されたＣＤＣ活性、変化したグリコシル化、または増加した血清半減期を有する、修飾されたヒトＩｇＭ定常領域
ある特定の実施形態において、修飾されたヒトＩｇＭ定常領域は、本明細書に提供されるような修飾されたヒトＩｇＭ由来結合分子の一部として発現されるとき、対応する野生型ヒトＩｇＭ定常領域と比べて、補体の存在下で細胞に対して低減された補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性を示す。「対応する野生型ヒトＩｇＭ定常領域」とは、ＣＤＣ活性に影響を及ぼす定常領域における修飾（単数または複数）を除いて、修飾されたＩｇＭ定常領域と同一である野生型ＩｇＭ定常領域を意味する。例えば、「対応する野生型ヒトＩｇＭ定常領域」は、同一の結合ポリペプチドに融合されることになり、修飾されたヒトＩｇＭ定常が有する場合がある、ＣＤＣ活性に影響を及ぼす修飾以外の任意の他の修飾または短縮化。ある特定の実施形態において、修飾されたヒトＩｇＭ定常領域は、例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１８／１８７７０２号（これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されるように、野生型ヒトＩｇＭ定常領域と比べて、例えばＣμ３ドメインにおいて、１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。ＣＤＣを測定するためのアッセイが当業者に周知されており、例示的なアッセイが、例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１８／１８７７０２号に記載されている。
ある特定の実施形態において、本明細書に提供されるような修飾されたヒトＩｇＭ定常領域は、野生型ヒトＩｇＭ定常領域と比べて、配列番号：１または配列番号：６０の位置Ｐ３１１に置換を含む。他の実施形態において、本明細書に提供されるような修飾されたＩｇＭ定常領域は、野生型ヒトＩｇＭ定常領域と比べて、配列番号：１または配列番号：６０の位置Ｐ３１３に置換を含有する。他の実施形態において、本明細書に提供されるような修飾されたＩｇＭ定常領域は、野生型ヒトＩｇＭ定常領域と比べて、配列番号：１または配列番号：６０の位置Ｐ３１１及び配列番号：１または配列番号：６０の位置Ｐ３１３に置換の組み合わせを含有する。配列番号：１または配列番号：６０の位置Ｐ３１１にて修飾されたＩｇＭ定常領域アミノ酸は、アラニン（Ｐ３１１Ａ）、セリン（Ｐ３１１Ｓ）、またはグリシン（Ｐ３１１Ｇ）で置換されていることが可能である。配列番号：１または配列番号：６０の位置Ｐ３１３にて修飾されたＩｇＭ定常領域アミノ酸は、アラニン（Ｐ３１３Ａ）、セリン（Ｐ３１３Ｓ）、またはグリシン（Ｐ３１３Ｇ）で置換されていることが可能である。配列番号：１または配列番号：６０の位置Ｐ３１１及びＰ３１３にて修飾されたＩｇＭ定常領域アミノ酸は、それぞれアラニン（Ｐ３１１Ａ）及びセリン（Ｐ３１３Ｓ）（配列番号：２）またはアラニン、セリン、及び／またはグリシンの任意の組み合わせで置換されていることが可能である。
一実施形態において、Ｐ３１１及び／またはＰ３１３にアミノ酸置換（例えば、Ｐ３１１Ａ、Ｐ３１１Ｓ、Ｐ３１１Ｇ、Ｐ３１３Ａ、Ｐ３１３Ｓ、及び／またはＰ３１３Ｇ、またはそれらの任意の組み合わせ）を含む修飾されたヒトＩｇＭ定常領域を含む、本明細書に提供されるような結合分子は、対応する野生型ＩｇＭ定常領域を含む結合分子と比べて、用量－応答アッセイにおいて達成される最大ＣＤＣが少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％減少している。
したがって、この開示は、少なくとも１個の結合ユニットが、２個以上の結合ユニットが、または各結合ユニットが、２個の修飾されたＩｇＭ重鎖定常領域またはその多量体化フラグメントもしくはバリアントを含む、低減されたＣＤＣ活性を示す多量体ＩｇＭ由来結合分子を提供する。ある特定の実施形態において、修飾されたＩｇＭ定常領域は、ＩｇＭ Ｃμ４ドメイン及びＩｇＭテールピースドメインを含み、ＩｇＭ Ｃμ４ドメイン及びＩｇＭテールピースドメインのＮ末端側に位置する修飾されたＩｇＭ Ｃμ３ドメインをさらに含む。ある特定の実施形態において、ＩｇＭ重鎖定常領域は各々、修飾されたＩｇＭ Ｃμ３ドメインのＮ末端側に位置するＩｇＭ Ｃμ２ドメインをさらに含み得る。本明細書に提供される例示的な多量体結合分子は、ヒトＣμ２ドメイン、Ｐ３１１Ａ及びＰ３１３Ｓ変異を含む修飾されたヒトＣμ３ドメイン、ならびにヒトＣμ４－ＴＰドメインを含む配列番号：４を含む、ヒトＩｇＭ定常領域を含む。ある特定の実施形態において、ＩｇＭ重鎖定常領域がアミノ酸配列、配列番号：４を含む多量体結合分子は、ＩｇＭ重鎖定常領域がアミノ酸配列、配列番号：３を含む対応する結合分子と比べて低減されたＣＤＣ活性を有する。
本明細書に提供されるような低減されたＣＤＣ活性を有するある特定のＩｇＭ由来の多量体結合分子において、各ＩｇＭ定常領域は、ＩｇＭ Ｃμ２ドメインの代わりに、またはそれに加えて、バリアントＩｇＭ Ｃμ３ドメインのＮ末端側に位置するＩｇＧヒンジ領域またはその機能的バリアントを含み得る。例示的なバリアントヒトＩｇＧ１ヒンジ領域のアミノ酸配列は、ＶＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰ（配列番号：５）である。本明細書に提供される例示的な多量体結合分子は、修飾されたヒトＩｇＧ１ヒンジ領域、Ｐ３１１Ａ及びＰ３１３Ｓ変異を含む修飾されたヒトＣμ３ドメイン、ならびにヒトＣμ４－ＴＰドメインを含む配列番号：７を含む、ヒトＩｇＭ定常領域を含む。ある特定の実施形態において、ＩｇＭ重鎖定常領域がアミノ酸配列、配列番号：７を含む多量体結合分子は、ＩｇＭ重鎖定常領域がアミノ酸配列、配列番号：６を含む対応する結合分子と比べて低減されたＣＤＣ活性を有する。
本明細書に提供されるようなある特定のＩｇＭ由来結合分子は、強化された血清半減期を有するように操作することができる。ＩｇＭ由来結合分子の血清半減期を強化し得る例示的なＩｇＭ重鎖定常領域変異は、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１９／１６９３１４号に開示され、その内容は、参照によりその全体が本明細書に援用される。例えば、本明細書の他の箇所に記載されるグリコシル化変異のうちの１つまたは複数に加えて、本明細書に提供されるようなＩｇＭ由来結合分子のバリアントＩｇＭ重鎖定常領域は、野生型ヒトＩｇＭ定常領域（例えば、配列番号：１または配列番号：６０）のアミノ酸Ｓ４０１、Ｅ４０２、Ｅ４０３、Ｒ３４４、及び／またはＥ３４５に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含み得る。「野生型ヒトＩｇＭ定常領域のアミノ酸Ｓ４０１、Ｅ４０２、Ｅ４０３、Ｒ３４４、及び／またはＥ３４５に対応するアミノ酸」とは、ヒトＩｇＭ定常領域におけるＳ４０１、Ｅ４０２、Ｅ４０３、Ｒ３４４、及び／またはＥ３４５に相同である、任意の種のＩｇＭ定常領域の配列におけるアミノ酸を意味する。ある特定の実施形態において、配列番号：１または配列番号：６０のＳ４０１、Ｅ４０２、Ｅ４０３、Ｒ３４４、及び／またはＥ３４５に対応するアミノ酸は、任意のアミノ酸、例えば、アラニンで置換されていることが可能である。
本明細書に提供されるようなヒトＩｇＭ定常領域、及び同じくある特定の非ヒト霊長類ＩｇＭ定常領域は、典型的には、５個の天然アスパラギン（Ｎ）－結合型グリコシル化モチーフまたは部位を含む。本明細書で使用する場合、「Ｎ－結合型グリコシル化モチーフ」は、アミノ酸配列Ｎ－Ｘ１－Ｓ／Ｔを含むか、またはそれからなり、ここで、Ｎはアスパラギンであり、Ｘ１は、プロリン（Ｐ）を除く任意のアミノ酸であり、Ｓ／Ｔはセリン（Ｓ）またはトレオニン（Ｔ）である。グリカンは、アスパラギン残基の窒素原子に付着している。例えば、Ｄｒｉｃｋａｍｅｒ Ｋ，Ｔａｙｌｏｒ ＭＥ（２００６），Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ（２ｎｄ ｅｄ．）．Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，ＵＳＡ．を参照されたい。Ｎ－結合型グリコシル化モチーフは、配列番号：１または配列番号：６０のヒトＩｇＭ重鎖定常領域において生じ、４６位（「Ｎ１」）、２０９位（「Ｎ２」）、２７２位（「Ｎ３」）、２７９位（「Ｎ４」）、及び４４０位（「Ｎ５」）で開始する。これらの５個のモチーフは、非ヒト霊長類ＩｇＭ重鎖定常領域において保存されており、５個のうちの４個は、マウスＩｇＭ重鎖定常領域において保存されている。ヒトＩｇＭ重鎖定常領域における、Ｎ４を除くこれらの部位の各々は、その部位でのグリコシル化を防止しながらも、依然としてＩｇＭ発現、及び六量体または五量体への集合を可能にするように変異させることができる。２０１９年８月２３日に出願された米国特許出願第６２／８９１，２６３号を参照されたく、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
ＩｇＡ由来結合分子
ある特定の実施形態において、この開示によって提供される多量体結合分子は、ＩｇＡ重鎖定常領域またはその多量体化フラグメントを含む二量体結合分子である。本明細書に提供されるように、ＩｇＡ由来結合分子は、多量体結合分子のＩｇＡ重鎖定常領域またはその多量体化フラグメントのＮ末端側に融合された、結合パートナーに特異的に結合する少なくとも３個または４個全ての結合ポリペプチドを含む。ある特定の実施形態において、多量体結合分子の少なくとも３個または４個全ての結合ポリペプチドは、同じ結合パートナーに結合する。ある特定の実施形態において、多量体結合分子の少なくとも３個または４個全ての結合ポリペプチドは、同一である。
二価ＩｇＡ由来結合ユニットは、２個のＩｇＡ重鎖定常領域を含み、二量体ＩｇＡ由来結合分子は、２個の結合ユニットを含む。ＩｇＡは、以下の重鎖定常ドメイン、すなわち、Ｃα１（または代替的にＣＡ１もしくはＣＨ１）、ヒンジ領域、Ｃα２（または代替的にＣＡ２もしくはＣＨ２）、及びＣα３（または代替的にＣＡ３もしくはＣＨ３）、及びＣ末端「テールピース」を含有する。ヒトＩｇＡは２個のサブタイプ、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２を有する。ヒトＩｇＡ１定常領域は、典型的には、アミノ酸配列、配列番号：２４を含む。ヒトＣα１ドメインは、配列番号：２４のおよそアミノ酸６からおよそアミノ酸９８に及び、ヒトＩｇＡ１ヒンジ領域は、配列番号：２４のおよそアミノ酸１０２からおよそアミノ酸１２４に及び、ヒトＣα２ドメインは、配列番号：２４のおよそアミノ酸１２５からおよそアミノ酸２１９に及び、ヒトＣα３ドメインは、配列番号：２４のおよそアミノ酸２２８からおよそアミノ酸３３０に及び、テールピースは、配列番号：２４のおよそアミノ酸３３１からおよそアミノ酸３５２に及ぶ。ヒトＩｇＡ２定常領域は、典型的には、アミノ酸配列、配列番号：２５を含む。ヒトＣα１ドメインは、配列番号：２５のおよそアミノ酸６からおよそアミノ酸９８に及び、ヒトＩｇＡ２ヒンジ領域は、配列番号：２５のおよそアミノ酸１０２からおよそアミノ酸１１１に及び、ヒトＣα２ドメインは、配列番号：２５のおよそアミノ酸１１３からおよそアミノ酸２０６に及び、ヒトＣα３ドメインは、配列番号：２５のおよそアミノ酸２１５からおよそアミノ酸３１７に及び、テールピースは、配列番号：２５のおよそアミノ酸３１８からおよそアミノ酸３４０に及ぶ。
２個のＩｇＡ結合ユニットが、２個の追加のポリペプチド鎖、Ｊ鎖（配列番号：１５）、及び分泌成分（前駆体：配列番号：２６、成熟型：配列番号：２７）と複合体を形成して、本明細書に提供されるような二価の分泌型ＩｇＡ（ｓＩｇＡ）由来結合分子を形成することができる。理論に束縛されることを望むものではないが、２個のＩｇＡ結合ユニットが集合して二量体ＩｇＡ由来結合分子を形成することには、Ｃα３ドメイン及びテールピースドメインが関与すると考えられている。例えば、Ｂｒａａｔｈｅｎ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：４２７５５－４２７６２（２００２）を参照されたい。したがって、この開示に提供される多量体化二量体ＩｇＡ由来結合分子は、典型的には、少なくともＣα３ドメイン及びテールピースドメインを含むＩｇＡ定常領域を含む。
ＩｇＡ重鎖定常領域は、Ｃα２ドメインもしくはそのフラグメント、ＩｇＡヒンジ領域もしくはそのフラグメント、Ｃα１ドメインもしくはそのフラグメント、及び／または、例えばＩｇＧヒンジ領域を含む、他のＩｇＡ（または他の免疫グロブリン、例えばＩｇＧ）重鎖ドメインを追加的に含み得る。ある特定の実施形態において、本明細書に提供されるような結合分子は、完全なＩｇＡ重（α）鎖定常ドメイン（例えば、配列番号：２４または配列番号：２５）、またはそのバリアント、誘導体、もしくは類似体を含み得る。
ある特定の実施形態において、本明細書に提供されるような多量体結合分子の各結合ユニットは、少なくともＩｇＡ Ｃα３ドメイン及びＩｇＡテールピースドメインを各々含む２個のＩｇＡ重鎖定常領域またはその多量体化フラグメントもしくはバリアントを含む。ある特定の実施形態において、ＩｇＡ重鎖定常領域は各々、ＩｇＡ Ｃα３ドメイン及びＩｇＡテールピースドメインのＮ末端側に位置するＩｇＡ Ｃα２ドメインをさらに含み得る。例えば、ＩｇＡ重鎖定常領域は、配列番号：２４のアミノ酸１２５～３５３または配列番号：２５のアミノ酸１１３～３４０を含み得る。ある特定の実施形態において、ＩｇＡ重鎖定常領域は各々、ＩｇＡ Ｃα２ドメインのＮ末端側に位置するＩｇＡまたはＩｇＧヒンジ領域をさらに含み得る。例えば、ＩｇＡ重鎖定常領域は、配列番号：２４のアミノ酸１０２～３５３または配列番号：２５のアミノ酸１０２～３４０を含み得る。ある特定の実施形態において、ＩｇＡ重鎖定常領域は各々、ＩｇＡヒンジ領域のＮ末端側に位置するＩｇＡ Ｃα１ドメインをさらに含み得る。
結合ポリペプチド及び結合パートナー
本明細書に提供されるような多量体結合分子は、多岐にわたる非限定的な結合ポリペプチドを含み得る。例えば、結合パートナーが細胞の表面上に発現している場合、結合ポリペプチドは、例えば、リガンドもしくはリガンドの受容体結合フラグメント（例えば、リガンドが、それ自体、別の細胞の表面上に典型的に発現している場合）、サイトカインもしくはその受容体結合フラグメント、成長因子もしくはその受容体結合フラグメント、神経伝達物質もしくはその受容体結合フラグメント、ペプチドもしくはタンパク質ホルモンもしくはその受容体結合フラグメント、免疫チェックポイントモジュレーターリガンドもしくはその受容体結合フラグメント、または細胞外マトリックスタンパク質の受容体結合フラグメントであり得る。本明細書に提供されるような結合分子は、結合パートナーに結合するのに必要とされる結合ポリペプチドの部分を含むこと、及び細胞におけるシグナル伝達を直接的または間接的のいずれかで調節することのみが必要である。
「リガンド」とは、広義に、細胞表面受容体に結合し、それによって受容体において変化、例えば、立体構造の変化を引き起こして、それによって当該受容体を発現する細胞において事象を誘発することができるシグナル伝達分子を意味する。数千でないにせよ数百の個々のリガンドが特定及び特性解析されており、これらは典型的には、構造または機能によってファミリー別に系統立てられる。リガンドファミリーには、アクチビン及びインヒビンリガンド、骨形成タンパク質、ケモカイン、補体成分、エフリン、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）ファミリーリガンド、ガレクチン、糖タンパク質ホルモン、免疫チェックポイントモジュレーター、インターフェロン、インターロイキン、神経ペプチド、腫瘍壊死因子スーパーファミリー（ＴＮＦＳＦ）リガンド、血管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）ファミリーリガンド、ＴＮＦ－βスーパーファミリーリガンド、及びＷｎｔファミリーリガンドが含まれるが、これらに限定されない。例えば、ＩＵＰＨＡＲ／ＢＰＳ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ ＰＨＡＲＭＡＣＯＬＯＧＹ（ｗｗｗ＿ｄｏｔ＿ｇｕｉｄｅｔｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ＿ｄｏｔ＿ｏｒｇ／ＧＲＡＣ／ＬｉｇａｎｄＦａｍｉｌｉｅｓＦｏｒｗａｒｄ、及びｗｗｗ＿ｄｏｔ＿ｇｕｉｄｅｔｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ＿ｄｏｔ＿ｏｒｇ／ＧＲＡＣ／ＬｉｇａｎｄＬｉｓｔＦｏｒｗａｒｄ（両サイトの最終アクセス日は２０１８年７月２３日である））を参照されたい。リガンドは、細胞外環境にある可溶性分子であり得るか、またはそれら自体が細胞の表面上に発現している可能性がある。
ある特定の実施形態において、本明細書に提供されるような多量体結合分子の結合ポリペプチドは、腫瘍壊死因子スーパーファミリー（ＴＮＦＳＦ）リガンドであり得る。これらのリガンドは、ＴＮＦ受容体スーパーファミリー（ＴＮＦｒＳＦ）の受容体に結合し、それを活性化して、受容体発現細胞において多岐にわたる機能、例えば、炎症、アポトーシス、細胞増殖、細胞侵入、血管新生、または細胞分化を誘発する。例えば、Ａｇｇａｒｗａｌ，Ｂ．Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １１９：６５１－６６５（２０１２）を参照されたい。ＴＮＦスーパーファミリーは、ＴＮＦ－α（カケクチンの別名でも知られており、例示的なヒト配列は配列番号：２８として提示される、外部ドメイン：配列番号：２８のアミノ酸５７～２３３）、ＴＮＦ－β（リンホトキシン－アルファの別名でも知られており、例示的なヒト配列は配列番号：２９として提示される、成熟可溶性タンパク質：配列番号：２９のアミノ酸３５～２０５）、リンホトキシン－β（ＬＴ－β）（例示的なヒト配列は配列番号：３０として提示される、外部ドメイン：配列番号：３０のアミノ酸４９～２４４）、ＯＸ４０Ｌ（ｇｐ３４またはＣＤ２５２の別名でも知られており、例示的なヒト配列は配列番号：３１として提示される、外部ドメイン：配列番号：３１のアミノ酸５１～１８３）、ＣＤ４０Ｌ（例示的なヒト配列は配列番号：３２として提示される、外部ドメイン：配列番号：３２のアミノ酸４７～２６１）、ＦａｓＬ（アポトーシス抗原リガンドまたはＡＰＴＬの別名でも知られており、例示的なヒト配列は配列番号：３３として提示される、外部ドメイン：配列番号：３３の１０３～２８１）、４－１ＢＢＬ（例示的なヒト配列は配列番号：３４として提示される、外部ドメイン：配列番号：３４のアミノ酸５０～２５４）、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）（例示的なヒト配列は配列番号：３５として提示される、外部ドメイン：配列番号：３５のアミノ酸３９～２８１）、及びグルココルチコイド誘導性ＴＮＦ受容体リガンド（ＧＩＴＲＬ）（例示的なヒト配列は配列番号：３６として提示される、外部ドメイン：配列番号：３６のアミノ酸７２～１９９）を含むがこれらに限定されない、少なくとも１９個のリガンド及び２９個の相互作用受容体を含む。当業者であれば、これらの提示された配列の種々の関連するヒトアイソフォームが存在し、また他の種においてオルソログが存在することを理解しよう。その上、これらのリガンドは、文献において多くの異なる名称及び頭字語で現れるが、それらの主要な構造及び機能によって識別することができる。これらのリガンドによって活性化されるシグナル伝達経路のうちの多くは、例えば、がん、感染疾患、炎症性疾患、及び／または神経変性疾患の治療において、治療上の重要性をもつ。
ＴＮＦＳＦ－ＴＮＦｒＳＦ相互作用の共通の特徴は、シグナル伝達が生じるために、リガンドが細胞表面上の少なくとも３個の受容体単量体に結合することを必要とする点である。典型的にホモ三量体として集合するＴＮＦＳＦリガンドが、この課題を遂行するように適合させられる。例えば、Ｌｏｃｋｓｌｅｙ，Ｒ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ １０４：４８７－５０１（２００１）を参照されたい。そのため、ＴＮＦｒＳＦ結合パートナーと結合することができる３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、または１２個のＴＮＦＳＦリガンド結合ポリペプチドを含み得る、本明細書に提供されるような結合分子は、受容体活性化のためのスーパーアゴニストとして作用し得る。例えば、ＴＲＡＩＬの受容体結合フラグメント（例えば、配列番号：３５のアミノ酸３９～２８１）の最大１２個のコピーを含む、本明細書に提供されるような六量体結合分子は、デスドメイン含有受容体ＤＲ４及び／またはＤＲ５を過剰発現している腫瘍細胞と会合すると、非常に効率的にそれらの腫瘍細胞のアポトーシスを誘導することが可能である。
ある特定の実施形態において、本明細書に提供されるような多量体結合分子の結合ポリペプチドは、免疫チェックポイントモジュレーターリガンドまたはその受容体結合フラグメントであり得る。免疫チェックポイントモジュレーターリガンドには、プログラム細胞死１リガンド１（ＰＤ－Ｌ１（ＣＤ２７４、Ｂ７ホモログ１、またはＢ７－Ｈ１とも呼ばれる）、例示的なヒト配列は配列番号：８として提示される、外部ドメイン：配列番号：８のアミノ酸１９～２３８、または配列番号：９）、ＣＤ８０（Ｂ７－１とも呼ばれ、例示的なヒト配列は配列番号：３７として提示される、外部ドメイン：配列番号：３７のアミノ酸３５～２４２）、及びＣＤ８６（Ｂ７－２とも呼ばれ、例示的なヒト配列は配列番号：３８として提示される）が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態において、結合パートナーは、例えば、免疫チェックポイントモジュレーター経路における受容体である。例えば、結合パートナーは、ＰＤ－１またはＣＴＬＡ４であり得る。
ＰＤ－Ｌ１は、樹状細胞及び単球を含めた種々の細胞上に典型的に発現している４０ｋＤａの膜貫通タンパク質である。ＰＤ－Ｌ１は、プログラム細胞死タンパク質－１（ＰＤ－１）のリガンドである。例えば活性化Ｔ細胞上のＰＤ－１受容体への、ＰＤ－Ｌ１の結合は、抗原特異的Ｔ細胞の増殖を低減し、また、制御性Ｔ細胞（Ｔレグ）のアポトーシスも低減し得る。腫瘍細胞は、ＰＤ－Ｌ１を過剰発現して、抗腫瘍免疫の抑制をもたらし得るが（例えば、Ｄｏｎｇ Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．８：７９３－８００（２００２）を参照されたい）、ＰＤ－Ｌ１の低減された発現もまた自己免疫に関連する（例えば、Ａｎｓａｒｉ，Ｍ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９８：６３－６９（２００３）、Ｍｏｚａｆｆａｒｉａｎ，Ｎ．，ｅｔ ａｌ．，Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ ４７：１３３５－１３４１（２００８）を参照されたい）。前駆体ヒトＰＤ－Ｌ１の例示的なアミノ酸配列は、配列番号：８として提示される。
ヒトＰＤ－Ｌ１のシグナルペプチドは、配列番号：８のアミノ酸１からおよそアミノ酸１８に及ぶ。成熟ヒトＰＤ－Ｌ１タンパク質は、配列番号：８のおよそアミノ酸１９からアミノ酸２９０に及ぶ。ヒトＰＤ－Ｌ１は、２個の細胞外ドメイン、すなわち、配列番号：８のおよそアミノ酸１９から配列番号：８のおよそアミノ酸１２７に及ぶＩｇ様Ｖタイプドメイン、及び配列番号：８のおよそアミノ酸１３３からおよそアミノ酸２２５に及ぶＩｇ様Ｃ２タイプドメインを有する。ヒトＰＤ－Ｌ１の膜貫通ドメインは、配列番号：８のおよそアミノ酸２３９からおよそアミノ酸２５９に及ぶ。ヒトＰＤ－Ｌ１の細胞質ドメインは、配列番号：８の約２６０からアミノ酸２９０に及ぶ。膜貫通タンパク質として、ＰＤ－Ｌ１の受容体結合可溶性フラグメントは典型的には、この開示によって提供される多価結合分子に含まれることが当業者には理解されよう。また、当業者であれば、ヒトＰＤ－Ｌ１の異なる受容体結合アイソフォーム及び／またはスプライスバリアントが存在し、本明細書に提供されるような結合分子に含まれ得ることも理解しよう。その上、他の種においてヒトＰＤ－Ｌ１のオルソログが存在し、任意の種のＰＤ－Ｌ１の受容体結合フラグメントが、本明細書に提供されるような多価結合分子に含まれ得る。
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される多量体結合分子の結合ポリペプチドは、ＰＤ－Ｌ１（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１）の受容体結合フラグメントを含む。ある特定の実施形態において、結合ポリペプチドは、ＰＤ－Ｌ１（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１）のＶタイプ外部ドメイン、例えば、配列番号：８のアミノ酸１８～１２７または１９～１２７を含む。ある特定の実施形態において、結合ポリペプチドは、配列番号：８のアミノ酸１８～１３４または１９～１３４を含む。例えば、Ｚａｋ ｅｔ ａｌ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２３：２３４１－２３４８（２０１５）を参照されたい。ある特定の実施形態において、結合ポリペプチドは、ＰＤ－Ｌ１（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１）のＶタイプ及びＣ２タイプ外部ドメイン、例えば、配列番号：８のアミノ酸１８～２３８または１９～２３８を含む（ヒトＰＤ－Ｌ１の例示的な外部ドメインは、本明細書で配列番号：９として提示される）。
ある特定の実施形態において、本明細書に提供されるような多量体結合分子の結合ポリペプチドは、受容体外部ドメインであり得る。例としては、ＴＮＦスーパーファミリー受容体の外部ドメイン、免疫チェックポイントモジュレーター受容体の外部ドメイン、ＴＧＦ－β受容体の外部ドメイン、血管内皮細胞成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ）の外部ドメイン、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
例えば、結合ポリペプチドは、ＴＮＦスーパーファミリー受容体（ＴＮＦｒＳＦ）の可溶性リガンド結合フラグメント、例えば、デスドメイン含有受容体－４（ＤＲ４（ＴＲＡＩＬ－Ｒ１またはＡＰＯ２の別名でも知られている）、例示的なヒト配列は配列番号：３９として提示される、外部ドメイン：配列番号：３９のアミノ酸２４～２３９）、デスドメイン含有受容体－５（ＤＲ５（ＴＲＡＩＬ－Ｒ２、Ｌｙ９８、またはＣＤ２６２の別名でも知られている）、例示的なヒト配列は配列番号：４０として提示される、外部ドメイン：配列番号：４０のアミノ酸５６～２１０）、ＯＸ－４０（例示的なヒト配列は配列番号：４１として提示される、外部ドメイン：配列番号：４１のアミノ酸２９～２１４）、ＣＤ４０（例示的なヒト配列は配列番号：４２として提示される、外部ドメイン：配列番号：４２のアミノ酸２１～１９３）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７の別名でも知られており、例示的なヒト配列は配列番号：４３として提示される、外部ドメイン：配列番号：４３のアミノ酸２４～１８６）、及び／またはグルココルチコイド誘導性腫瘍壊死因子受容体（ＧＩＴＲ（ＡＩＴＲまたはＣＤ３５７の別名でも知られている）、例示的なヒト配列は配列番号：４４として提示される、外部ドメイン：配列番号：４４のアミノ酸２６～１６２）の可溶性フラグメント、またはそれらの任意の組み合わせを含み得る。
結合ポリペプチドはまた、例えば、免疫チェックポイントモジュレーター受容体の外部ドメイン、例えば、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質－４（ＣＴＬＡ４（ＣＤ１５２の別名でも知られている）、例示的なヒト配列は配列番号：４５として提示される、外部ドメイン：配列番号：４５のアミノ酸３６～１６１）、ＰＤ－１（例示的なヒト配列は配列番号：４６として提示される、外部ドメイン：配列番号：４６のアミノ酸２１～１７０）、ＬＡＧ３（ＣＤ２２３の別名でも知られており、例示的なヒト配列は配列番号：４７として提示される、外部ドメイン：配列番号：４７のアミノ酸２９～４５０）、ＣＤ２８（例示的なヒト配列は配列番号：４８として提示される、外部ドメイン：配列番号：４８のアミノ酸１９～１５２）、免疫グロブリン様ドメイン含有受容体２（ＩＬＤＲ２、例示的なヒト配列は配列番号：４９として提示される、外部ドメイン：配列番号：４９のアミノ酸２１～１８６）、Ｔ細胞免疫グロブリンムチンファミリーメンバー３（ＴＩＭ－３（ＣＤ３６６の別名でも知られている）、例示的なヒト配列は配列番号：５０として提示される、外部ドメイン：配列番号：５０のアミノ酸２２～２０２）の可溶性リガンド結合フラグメント、またはそれらの任意の組み合わせでもあり得る。
結合ポリペプチドはまた、例えば、形質転換成長因子ベータ受容体（ＴＧＦβＲ）の外部ドメインでもあり得る。３種のヒト受容体タンパク質がＴＧＦβと結合することが知られている。これらには、ＴＧＦβ受容体１型（ＴＧＦβＲ１（アクチビン受容体様キナーゼ５またはＡＬＫ５の別名でも知られており、例示的なヒト配列は配列番号：５１として提示される、外部ドメイン：配列番号：５１のアミノ酸３４～１２６）、ＴＧＦβ受容体２型（ＴＧＦβＲ２、例示的なヒト配列は配列番号：５２として提示される、外部ドメイン：配列番号：５２のアミノ酸２３～１６６）、及びＴＧＦβ受容体３型（ＴＧＦβＲ３、例示的なヒト配列は配列番号：５３として提示される、外部ドメイン：配列番号：５３のアミノ酸２１～７８７）が含まれる。
結合ポリペプチドはまた、例えば、血管内皮細胞成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ）の外部ドメインでもあり得る。血管内皮細胞成長因子スーパーファミリーのメンバーに結合することが知られているヒト受容体には、血管内皮細胞成長因子受容体２（ＶＥＧＦＲ－２、例示的なヒト配列は配列番号：５４として提示される、外部ドメイン、配列番号：５４のアミノ酸２０～７６４）、血管内皮細胞成長因子受容体３（ＶＥＧＦＲ－３（ＦＬＴ４の別名でも知られている）、例示的なヒト配列は配列番号：５５として提示される、外部ドメイン、配列番号：５５のアミノ酸２５～７７５）、及び血管内皮細胞成長因子受容体１（ＶＥＧＦＲ－１（ＦＬＴ１の別名でも知られている）、例示的なヒト配列は配列番号：５６として提示される、外部ドメイン、配列番号：５６のアミノ酸２７～７５８）が含まれるが、これらに限定されない。ＶＥＧＦＲ－２－外部ドメイン－Ｆｃγタンパク質は、頭蓋内ヒト多形膠芽腫のマウスモデルにおいて血管新生を阻害することが示された。例えば、Ｓｚｅｎｔｉｒｍａｉ，Ｏ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ １０８：９７９－９８８（２００８）を参照されたい。ＶＥＧＦ受容体のリガンド結合外部ドメインを含むＦｃγ融合タンパク質（アフリベルセプト（配列番号：５７）は、配列番号：５６のアミノ酸１２９～２３０（ＶＥＧＦＲ－１）、配列番号：５４のアミノ酸２２５～３２７（ＶＥＧＦＲ－２）、及びヒトＩｇＧ１Ｆｃ定常領域を含有する）は、例えば加齢性黄斑変性症に関連する、眼血管新生の予防に使用される。例えば、Ｓａｗａｒ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ．５５：２８２－２９４（２０１６）を参照されたい。
修飾されたＪ鎖
ある特定の実施形態において、本明細書に提供されるような五量体ＩｇＭ由来結合分子のＪ鎖は、五量体ＩｇＭ由来結合分子が集合して、その結合パートナー（複数可）に結合する能力を妨害することなく、例えば、１個の異種部分または２個以上の異種部分の導入によって、修飾され得る。例えば、米国特許第９，９５１，１３４号及び同第１０，４００，０３８号、米国特許出願公開第ＵＳ－２０１９－０１８５５７０号及び同第ＵＳ－２０１８－０２６５５９６号を参照されたく、これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。したがって、本明細書に提供されるような五量体ＩｇＭ由来結合分子は、Ｊ鎖またはそのフラグメントに導入された１個の異種部分または２個以上の異種部分を含む、修飾されたＪ鎖またはその機能的フラグメントを含み得る。ある特定の実施形態において、修飾されたＪ鎖に組み込まれた異種部分は、Ｊ鎖にインフレームで融合されたまたはＪ鎖に化学的にコンジュゲートされたペプチドまたはポリペプチド配列であり得る。ある特定の実施形態において、修飾されたＪ鎖に組み込まれた異種部分は、Ｊ鎖にコンジュゲートされた化学部分であり得る。Ｊ鎖に付着される異種部分には、限定されるものではないが、結合部分、例えば、抗体またはその抗原結合フラグメント、例えば、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子、五量体ＩｇＭ由来結合分子の半減期を増加させることができる安定化ペプチド、またはポリマーもしくは細胞毒素などの化学部分が含まれ得る。
いくつかの実施形態において、修飾されたＪ鎖は、抗原結合ドメインを含み得、抗原結合ドメインには、限定されるものではないが、標的抗原に特異的に結合することができるポリペプチド（低分子ペプチドを含む）が含まれ得る。ある特定の実施形態において、修飾されたＪ鎖と会合した抗原結合ドメインは、本明細書の他の箇所に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントであり得る。ある特定の実施形態において、抗原結合ドメインは、例えば、ラクダ科抗体またはコンドリクトイド（ｃｏｎｄｒｉｃｔｈｏｉｄ）抗体からの、ｓｃＦｖ結合ドメインまたは一本鎖結合ドメインであり得る。抗原結合ドメインは、Ｊ鎖の機能または会合したＩｇＭもしくはＩｇＡ結合分子の機能を妨害することなく、抗原結合ドメインのその結合パートナーへの結合を可能にする任意の箇所でＪ鎖に導入することができる。挿入箇所としては、限定されるものではないが、Ｃ末端もしくはその付近、Ｎ末端もしくはその付近、またはＪ鎖の３次元構造に基づいてアクセス可能な内部の箇所が挙げられる。ある特定の実施形態において、抗原結合ドメインは、配列番号：１５のシステイン残基９２と１０１との間で配列番号：１５の成熟ヒトＪ鎖に導入することができる。さらなる実施形態において、抗原結合ドメインは、グリコシル化部位またはその付近で配列番号：１５のヒトＪ鎖に導入することができる。さらなる実施形態において、抗原結合ドメインは、Ｎ末端またはＣ末端から約１０アミノ酸残基以内で配列番号：１５のヒトＪ鎖に導入することができる。
血清半減期を変化させるＪ鎖変異を有する五量体ＩｇＭ由来結合分子
この開示は、ＩｇＭ重鎖定常領域またはその多量体化フラグメントを含むＩｇＭ由来の五量体結合分子を提供し、結合分子は、ＩｇＭ抗体またはＩｇＭ由来結合分子で典型的に観察される血清半減期と比べて強化された血清半減期を有する。本明細書に提供されるような五量体ＩｇＭ由来結合分子は、５個の二価ＩｇＭ由来結合ユニットまたはそのバリアントもしくは多量体化フラグメント、ならびにＪ鎖の機能的バリアント及び／または誘導体またはその機能的フラグメントを含む。Ｊ鎖の「機能的バリアント、誘導体、またはフラグメント」とは、５個のＩｇＭ由来結合ユニットと会合して五量体を形成することが依然として可能である、Ｊ鎖バリアント、誘導体、またはフラグメントを意味する。提供されるＩｇＭ由来結合分子の各結合ユニットは、２個のＩｇＭ重鎖定常領域またはその多量体化フラグメントもしくはバリアントを含み、該定常領域が、本明細書の他の箇所に記載されるような結合ポリペプチドに融合されている。本明細書に提供されるように、バリアント及び／または誘導体Ｊ鎖またはその機能的フラグメントは、Ｊ鎖またはその機能的フラグメント、バリアント、及び／または誘導体を含むＩｇＭ由来結合分子の血清半減期に影響を及ぼし得る、１つまたは複数の単一アミノ酸置換、欠失、または挿入を含み得る。「１つまたは複数の単一アミノ酸置換、挿入、及び欠失」という用語は、Ｊ鎖またはその機能的フラグメント、バリアント、及び／または誘導体のアミノ酸配列の各アミノ酸が個々に、置換され得るか、欠失させられ得るか、またはそれに隣接して挿入された単一アミノ酸を有し得るが、Ｊ鎖またはその機能的フラグメント、バリアント、及び／または誘導体が、ＩｇＭ重鎖またはＩｇＭ由来の重鎖と集合してＩｇＭ由来の五量体結合分子を形成する機能を果たすことが依然として可能でなければならないことを意味する。ある特定の実施形態において、本明細書に提供されるようなＪ鎖またはその機能的フラグメント、バリアント、及び／または誘導体は、１つの単一アミノ酸置換、挿入、もしくは欠失、２つの単一アミノ酸置換、挿入、もしくは欠失の組み合わせ（例えば、２つの単一アミノ酸置換、または１つの単一アミノ酸置換及び１つの単一アミノ酸挿入もしくは欠失）、３つの単一アミノ酸置換、挿入、もしくは欠失の組み合わせ、４つの単一アミノ酸置換、挿入、もしくは欠失の組み合わせ、またはそれよりも多くを有し得、該１つ、２つ、３つ、４つ、またはそれよりも多くの単一アミノ酸置換、挿入、または欠失は、Ｊ鎖またはその機能的フラグメント、バリアント、及び／または誘導体を含むＩｇＭ由来結合分子の血清半減期に影響を及ぼし得る。したがって、提供されるＩｇＭ由来結合分子は、動物に投与される場合、Ｊ鎖またはその機能的フラグメント、バリアント、及び／または誘導体における１つまたは複数の単一アミノ酸置換、欠失、または挿入を除いて同一である参照ＩｇＭ由来結合分子と比べて、増加した血清半減期を示し、ここで、提供される結合分子及び参照結合分子の両方は、同じ動物種に同じ方法で投与される。本明細書に提供されるようなＩｇＭ由来結合分子の血清半減期を改善し得る、修飾されたＪ鎖またはバリアントＪ鎖が本明細書に開示されていると共に、そのようなＪ鎖の作製方法及び使用方法が、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１９／１６９３１４号に開示され、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
ある特定の実施形態において、ＩｇＭ由来結合分子の血清半減期、例えば、α半減期、β半減期、または全体的な半減期は、参照結合分子に対して少なくとも０．１倍、少なくとも０．５倍、少なくとも１倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも３０倍、少なくとも４０倍、少なくとも５０倍、少なくとも６０倍、少なくとも７０倍、少なくとも８０倍、少なくとも９０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５００倍、少なくとも１０００倍、またはそれを超えて増加させることができる。
ある特定の実施形態において、本明細書に提供されるようなＩｇＭ由来結合分子のＪ鎖は、成熟ヒトＪ鎖（配列番号：１５）のアミノ酸Ｙ１０２に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。「野生型ヒトＪ鎖のアミノ酸Ｙ１０２に対応するアミノ酸」とは、ヒトＪ鎖におけるＹ１０２に相同である任意の種のＪ鎖の配列におけるアミノ酸を意味する。配列番号：１５におけるＹ１０２に対応する位置は、少なくとも４３の他の種のＪ鎖アミノ酸配列において保存されている。米国特許第９，９５１，１３４号の図４を参照されたく、これは参照により本明細書に組み込まれる。理論に束縛されることを望むものではないが、この変異は、ある特定の免疫グロブリン受容体、例えば、Ｆｃαμ受容体及び／または重合体Ｉｇ受容体（ｐＩｇ受容体）の結合に影響を及ぼすと考えられている。ある特定の実施形態において、配列番号：１５のＹ１０２は、任意のアミノ酸で置換されていることが可能である。ある特定の実施形態において、配列番号：１５のＹ１０２は、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）またはアルギニン（Ｒ）で置換されていることが可能である。特定の実施形態において、配列番号：１５のＹ１０２は、アラニンで置換されていることが可能である。一実施形態において、Ｊ鎖またはその機能的フラグメント、バリアント、及び／または誘導体はバリアントヒトＪ鎖であり、アミノ酸配列、配列番号：１６を含む。
ある特定の実施形態において、本明細書に提供されるようなＩｇＭ由来結合分子のＪ鎖またはその機能的フラグメント、バリアント、及び／または誘導体は、成熟ヒトＪ鎖（配列番号：１５）のアミノ酸Ｎ４９またはアミノ酸Ｓ５１に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含むか（ここで、Ｓ５１は、トレオニン（Ｔ）で置換されることはない）、またはＪ鎖は、ヒトＪ鎖（配列番号：１５）のアミノ酸Ｎ４９及びＳ５１の両方に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。ここでもまた、「野生型ヒトＪ鎖の配列番号：１５のＮ４９に対応するアミノ酸または配列番号：１５のアミノ酸Ｓ５１に対応するアミノ酸」とは、ヒトＪ鎖におけるＮ４９及び／またはＳ５１に相同である任意の種のＪ鎖の配列におけるアミノ酸を意味する。配列番号：１５におけるＮ４９及びＳ５１に対応する位置は、少なくとも４３の他の種のＪ鎖アミノ酸配列において保存されている。ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１５／１５３９１２号の図４を参照されたく、これは参照により本明細書に組み込まれる。理論に束縛されることを望むものではないが、配列番号：１５のＮ４９及びＳ５１に対応するアミノ酸が、配列番号：１５のＩ５０に対応するアミノ酸と共にして、Ｊ鎖におけるＮ－結合型グリコシル化モチーフを含み、Ｎ４９及び／またはＳ５１の変異（Ｓ５１のトレオニン置換を除く）がこのモチーフにおけるグリコシル化を防止し得ると考えられている。ある特定の実施形態において、配列番号：１５のＮ４９に対応する位置のアスパラギンは、任意のアミノ酸で置換されていることが可能である。ある特定の実施形態において、配列番号：１５のＮ４９に対応する位置のアスパラギンは、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、トレオニン（Ｔ）、セリン（Ｓ）、またはアスパラギン酸（Ｄ）で置換されていることが可能である。特定の実施形態において、配列番号：１５のＮ４９に対応する位置は、アラニン（Ａ）で置換されていることが可能である。特定の実施形態において、Ｊ鎖はバリアントヒトＪ鎖であり、アミノ酸配列、配列番号：１７を含む。
ある特定の実施形態において、配列番号：１５のＳ５１に対応する位置のセリンは、任意のアミノ酸で置換されていることが可能である。ある特定の実施形態において、配列番号：１５のＳ５１に対応する位置のセリンは、アラニン（Ａ）またはグリシン（Ｇ）で置換されていることが可能である。特定の実施形態において、配列番号：１５のＳ５１に対応する位置は、アラニン（Ａ）で置換されていることが可能である。特定の実施形態において、Ｊ鎖またはその機能的フラグメント、バリアント、及び／または誘導体はバリアントヒトＪ鎖であり、アミノ酸配列、配列番号：１８を含む。
ある特定の実施形態において、本明細書に提供されるような改善された血清半減期を有するＩｇＭ由来結合分子はさらに、参照結合分子と比べて、他の修飾された薬物動態パラメータ、例えば、増加したピーク血漿中濃度（Ｃｍａｘ）、増加した曲線下面積（ＡＵＣ）、低減されたクリアランス時間、またはそれらの任意の組み合わせを示す。
ある特定の実施形態において、本明細書に提供されるようなＩｇＭ由来結合分子のＪ鎖またはその機能的フラグメント、バリアント、及び／または誘導体は、例えば米国特許第９，９５１，１３４号に、例えば提供されるような、修飾されたＪ鎖であり得る。ある特定の実施形態において、修飾されたＪ鎖は、異種ポリペプチドをさらに含み、異種ポリペプチドは、Ｊ鎖またはその機能的フラグメント、バリアント、及び／または誘導体に直接的または間接的に融合されている。ある特定の実施形態において、異種ポリペプチドは、リンカー、例えば、少なくとも５アミノ酸からなるが、ただし２５アミノ酸を超えないペプチドリンカーを介して、Ｊ鎖またはその機能的フラグメント、バリアント、及び／または誘導体ペプチドに融合されている。ある特定の実施形態において、ペプチドリンカーは、
Figure 2022505663000004
からなる。異種ポリペプチドは、Ｊ鎖またはその機能的フラグメント、バリアント、及び／または誘導体のＮ末端、Ｊ鎖またはその機能的フラグメント、バリアント、及び／または誘導体のＣ末端に融合され得るか、または異種ポリペプチドは、Ｊ鎖またはその機能的フラグメント、バリアント、及び／または誘導体のＮ末端及びＣ末端の両方に融合され得る。ある特定の実施形態において、異種ポリペプチドは、結合ドメインを含む。ある特定の実施形態において、異種ポリペプチドの結合ドメインは、抗体またはその抗原結合フラグメント、例えば、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｄフラグメント、Ｆｖフラグメント、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）フラグメント、ジスルフィド結合したＦｖ（ｓｄＦｖ）フラグメント、もしくはそれらの任意の組み合わせである。
ある特定の実施形態において、修飾されたＪ鎖に融合された異種ポリペプチドは、１個または複数個の本明細書に提供されるような結合ポリペプチドを含み得る。ある特定の実施形態において、修飾されたＪ鎖に融合された異種ポリペプチドは、多量体結合分子の吸収、分布、代謝、及び／または排泄（ＡＤＭＥ）に影響を与えるポリペプチドを含み得る。本明細書に提供されるような修飾されたＪ鎖に融合させるための例示的な異種ポリペプチドは、例えば、米国特許第９，９５１，１３４号及び同第１０，４００，０３８号、米国特許出願公開第ＵＳ－２０１９－０１８５５７０号及び同第ＵＳ－２０１８－０２６５５９６号に開示され、これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
一実施形態において、修飾されたＪ鎖に融合された異種ポリペプチドは、本明細書に提供されるような結合分子を特定の細胞、組織、または臓器に標的指向化することができる。例えば、本明細書に提供されるような修飾されたＪ鎖を含む五量体結合分子は、ＶＥＧＦへの結合及びその阻害に関して上述したような少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、または１０個のＶＥＧＦ－Ｒ２受容体外部ドメイン結合ポリペプチド、ならびに眼を標的とするポリペプチド、例えば、ヒアルロン酸結合ペプチド（ＨＡＢＰ）、例えば、腫瘍壊死因子誘導性遺伝子６タンパク質のＬＩＮＫドメイン、例えば、配列番号：５８のアミノ酸３６～１２９を含む、修飾されたＪ鎖を含み得る。例えば、Ｇｈｏｓｈ，ＪＧ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍ．８：１４８３７（２０１７）を参照されたい。そのような多量体結合分子を使用して、変性眼疾患、例えば、加齢性黄斑変性症を治療することができる。
組織標的化の別の例は、滑膜を標的とさせるための滑膜内皮標的化ペプチド（ＳｖＥＴＰ、ＣＫＳＴＨＤＲＬＣ、配列番号：５９）である。例えば、Ｗｙｔｈｅ，ＳＥ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ Ｄｉｓ．７２：１２９－１３５（２０１３）を参照されたい。
別の実施形態において、本明細書に提供されるような多量体結合分子の修飾されたＪ鎖に融合された異種ポリペプチドは、腫瘍微小環境における腫瘍誘導性の免疫抑制を遮断するための、ＴＧＦ－βへの結合及びその阻害に関して上述したような少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、または１０個のＴＧＦ－β－受容体外部ドメイン結合ポリペプチドを含む多量体結合分子における、免疫チェックポイント遮断物質（例えば、ＰＤ－Ｌ１）を標的とするｓｃＦｖ抗体フラグメントであり得る。例えば、Ｋｎｕｄｓｏｎ，ＫＭ，ｅｔ ａｌ，Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ７：１４２６５１９；ＤＯＩ：１０．１０８０／２１６２４０２Ｘ．２０１８．１４２６５１９（２０１８）を参照されたい。様々な抗ＰＤ－Ｌ１抗体が当該技術分野で知られている。例示的な抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ／２０１７／１９６８６７号に記載され、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
ＰＤ－Ｌ１結合ポリペプチドを含む六量体及び五量体ＩｇＭ由来結合分子
ある特定の実施形態において、本明細書に提供されるような結合分子は、１０個または１２個のＩｇＭ由来の重鎖定常領域またはその多量体化フラグメントを含み、該ＩｇＭ由来の重鎖定常領域のうちの少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、または１２個が、ＰＤ－Ｌ１タンパク質（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１タンパク質）のＶタイプ及びＣ２タイプ外部ドメインを含む結合ポリペプチド、例えば、アミノ酸配列、配列番号：９を含む結合ポリペプチドに融合されている。
ある特定の実施形態において、ＩｇＭ由来の重鎖定常領域は、ヒトＩｇＭ定常領域の野生型Ｃμ２、Ｃμ３、Ｃμ４、及びｔｐドメインを含む。例えば、ある特定の実施形態において、本明細書に提供されるような結合分子は、配列番号：１０のアミノ酸１９～５８７を含むポリペプチドの少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、または１２個のコピーを含む。結合分子の構成要素ポリペプチドの前駆体は、タンパク質の分泌を容易にするためのシグナルペプチドをさらに含み得、例えば、該ポリペプチドは、アミノ酸配列、配列番号：１０を含み得る。ある特定の実施形態において、ＩｇＭ由来の重鎖定常領域は、修飾されたヒトＩｇＭ由来の定常領域を含み、該修飾が、結合分子のＣＤＣ活性を低減するかまたは抑止し、該ＩｇＭ由来の重鎖定常領域は、Ｃμ３ドメインにおいてＰ３１１Ａ及びＰ３１３Ｓアミノ酸置換を有するヒトＩｇＭ定常領域のＣμ２、Ｃμ３、Ｃμ４、及びｔｐドメインを含む。例えば、ある特定の実施形態において、本明細書に提供されるような結合分子は、配列番号：１１のアミノ酸１９～５８７を含むポリペプチドの少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、または１２個のコピーを含む。結合分子の構成要素ポリペプチドの前駆体は、タンパク質の分泌を容易にするためのシグナルペプチドをさらに含み得、例えば、該ポリペプチドは、アミノ酸配列、配列番号：１１を含み得る。
ある特定の実施形態において、ＩｇＭ由来の重鎖定常領域は、修飾されたＩｇＧヒンジ領域、ならびにヒトＩｇＭ定常領域の野生型Ｃμ３、Ｃμ４、及びｔｐドメインを含む。例えば、ある特定の実施形態において、本明細書に提供されるような結合分子は、配列番号：１２のアミノ酸１９～４９３を含むポリペプチドの少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、または１２個のコピーを含む。結合分子の構成要素ポリペプチドの前駆体は、タンパク質の分泌を容易にするためのシグナルペプチドをさらに含み得、例えば、該ポリペプチドは、アミノ酸配列、配列番号：１２を含み得る。ある特定の実施形態において、ＩｇＭ由来の重鎖定常領域は、修飾されたＩｇＧヒンジ領域及び修飾されたヒトＩｇＭ由来の定常領域を含み、該修飾が、該修飾されたＩｇＧヒンジ領域、ならびにＣμ３ドメインにおいてＰ３１１Ａ及びＰ３１３Ｓアミノ酸置換を有する該ヒトＩｇＭ定常領域のＣμ３、Ｃμ４、及びｔｐドメインを含む、結合分子のＣＤＣ活性を低減するかまたは抑止する。例えば、ある特定の実施形態において、本明細書に提供されるような結合分子は、配列番号：１３のアミノ酸１９～４９３を含むポリペプチドの少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、または１２個のコピーを含む。結合分子の構成要素ポリペプチドの前駆体は、タンパク質の分泌を容易にするためのシグナルペプチドをさらに含み得、例えば、該ポリペプチドは、アミノ酸配列、配列番号：１３を含み得る。
ＰＤ－Ｌ１結合ポリペプチドを含む結合分子が五量体である場合、結合分子は、Ｊ鎖、または機能的フラグメント、バリアント、またはその誘導体をさらに含み得る。例えば、結合分子は、アミノ酸配列、配列番号：１５を含む野生型ヒトＪ鎖、または、結合分子の血清半減期に影響を及ぼす、例えば、それを増加させるかもしくは延長する１つもしくは複数のアミノ酸置換を含むバリアントＪ鎖、例えば、アミノ酸配列、配列番号：１６、配列番号：１７、もしくは配列番号：１８を含むバリアントヒトＪ鎖を含み得る。特定の実施形態において、結合分子は、配列番号：１１のアミノ酸１９～５８７を含むアミノ酸配列の１０個のコピーまたは配列番号：１３のアミノ酸１９～４９３を含むアミノ酸配列の１０個のコピー、及びアミノ酸配列、配列番号：１６を含むバリアントＪ鎖を含む。
本明細書に提供されるようなＰＤ－Ｌ１結合ポリペプチドを含む六量体及び五量体ＩｇＭ由来結合分子は、結合パートナーである（例えばＴ細胞上に発現している）ＰＤ－１の複数のコピーに結合し、それによってＰＤ－１を介したシグナル伝達をもたらすことができる。したがって、これらの結合分子は、ＰＤ－１シグナル伝達のアゴニストとして機能し得る。そのような結合分子は、例えば、自己免疫障害及び／または炎症性障害、または移植片拒絶症の防止に有用であり得る。単量体または二量体ＰＤ－Ｌ１外部ドメイン－ＩｇＧ ｆｃ融合タンパク質によるＰＤ－１の結合は、Ｔ細胞受容体媒介性のリンパ球増殖及びサイトカイン分泌を阻害することが実証された。例えば、Ｆｒｅｅｍａｎ，Ｇ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９２：１０２７－１０３４（２０００）を参照されたい。本明細書に提供されるような多量体結合分子は、当量（例えば、モル当量または重量当量）の単量体または二量体ＰＤ－Ｌ１外部ドメインベースの結合分子、例えば、ＩｇＧ Ｆｃ領域に融合されたＰＤ－Ｌ１外部ドメインを含む結合分子よりも高い効力、例えば、それよりも５倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、５００倍、または１０００倍高い効力で、ＰＤ－１アゴニストとして機能し得る。
ポリヌクレオチド、ベクター、及び宿主細胞
本開示はさらに、本明細書に記載されるような多量体結合分子のポリペプチドサブユニットをコードする核酸配列を含む、ポリヌクレオチド、例えば、単離された、組換え、及び／または非天然ポリヌクレオチドを提供する。「ポリペプチドサブユニット」とは、独立して翻訳され得る結合分子、結合ユニット、またはＩｇＭ由来もしくはＩｇＡ由来の重鎖融合タンパク質の部分を意味する。例としては、限定されるものではないが、結合ポリペプチドまたはそのフラグメントに融合されたＩｇＡもしくはＩｇＭ重鎖定常領域またはその多量体化フラグメントもしくはバリアントを含む融合タンパク質、Ｊ鎖、分泌成分、または本明細書に記載されるようなそれらの任意のバリアント及び／または誘導体が挙げられる。
ある特定の実施形態において、ポリペプチドサブユニットは、本明細書に記載されるような結合ポリペプチドに融合された、ＩｇＭもしくはＩｇＭ様重鎖定常領域またはその多量体化フラグメント及び／またはフラグメントを含み得る。ある特定の実施形態において、ポリヌクレオチドは、結合ポリペプチドのＣ末端に融合されたヒトＩｇＭもしくはＩｇＭ様定常領域またはその多量体化フラグメント及び／またはバリアントを含むポリペプチドサブユニットをコードすることができる。
簡潔に述べると、本明細書に提供されるような多量体結合分子のポリペプチドサブユニットをコードする核酸配列は、既存の分子から合成するかまたは増幅し、発現時にベクターが完全長ポリペプチドサブユニットを産出するように適切な向きでかつインフレームで１個または複数個のベクターに挿入することができる。これらの目的に有用なベクターが当該技術分野で知られている。そのようなベクターはまた、エンハンサー、及び所望の鎖の発現を達成するのに必要とされる他の配列を含み得る。複数のベクターまたは単一のベクターを使用することができ、これらはＪ鎖またはその機能的フラグメント、バリアント、及び／または誘導体をさらにコードすることができる。この（またはこれらの）ベクター（単数または複数）を宿主細胞にトランスフェクトすることができ、次いで、本明細書に提供されるようなＩｇＭ由来もしくはＩｇＡ由来の融合タンパク質、ならびにＪ鎖またはその機能的フラグメント、バリアント、及び／または誘導体を発現させ、多量体結合分子へと集合させ、それを精製する。発現すると、鎖は、本明細書に提供されるような完全に機能的な多量体結合分子を形成する。次いで、完全に集合した多量体結合分子は、標準的方法によって精製することができる。発現及び精製プロセスは、必要であれば商業規模で行うことができる。
本開示はさらに、２個以上のポリヌクレオチドを含む組成物を提供し、該２個以上のポリヌクレオチドが合わせて、本明細書に提供されるような多量体結合分子をコードすることができる。ある特定の実施形態において、該組成物は、結合ポリペプチドまたはそのフラグメントに融合されたＩｇＡもしくはＩｇＭ重鎖定常領域またはその多量体化フラグメントもしくはバリアントをコードするポリヌクレオチド、ならびにＪ鎖またはその機能的フラグメント、バリアント、及び／または誘導体をコードするポリヌクレオチドを含み得る。ある特定の実施形態において、本明細書に提供されるような組成物を構成するポリヌクレオチドは、２個の別々のベクター、例えば、発現ベクター上に位置することができる。そのようなベクターは本開示によって提供される。ある特定の実施形態において、本明細書に提供されるような組成物を構成するポリヌクレオチドのうちの２個以上が、単一のベクター、例えば、発現ベクター上に位置することができる。そのようなベクターは本開示によって提供される。
本開示はさらに、本明細書に提供されるような多量体結合分子もしくはその任意のサブユニットをコードする１個のポリヌクレオチドもしくは２個以上のポリヌクレオチド、本明細書に提供されるようなポリヌクレオチド組成物、または１個のベクター、もしくは本明細書に提供されるような多量体結合分子もしくはその任意のサブユニットを合わせてコードする２個、３個、もしくはそれよりも多くのベクターを含む、宿主細胞、例えば、原核または真核宿主細胞を提供する。
関連する実施形態において、本開示は、この開示によって提供されるような多量体結合分子を生成する方法を提供し、該方法は、本明細書に提供されるような宿主細胞を培養することと、多量体結合分子を回収することとを含む。
使用方法
本開示はさらに、治療の必要がある対象において疾患または障害を治療するための方法を提供し、該方法は、治療上有効量の本明細書に提供されるような多量体結合分子を対象に投与する工程を含む。「治療上有効な用量または量」または「有効量」とは、投与されたときに、対象の治療に関して正の治療応答をもたらす多量体結合分子の量が意図されている。
疾患または障害の治療のための組成物の有効用量は、投与手段、標的部位、対象の生理的状態、対象がヒトであるか動物であるか、投与される他の薬剤、及び治療が予防的なものであるか治療的なものであるかを含めた、多くの異なる因子に応じて変動する。通常、対象はヒトであるが、トランスジェニック哺乳動物を含めた非ヒト哺乳動物もまた治療することができる。当業者に知られている通例の方法を用いて治療用量を滴定して、安全性及び有効性を最適化することができる。
ある特定の実施形態において、本開示は、治療の必要がある対象において自己免疫障害、炎症性障害、またはそれらの組み合わせを治療するための方法を提供し、該方法は、有効量の本明細書に提供されるような多量体結合分子を対象に投与する工程を含む。ある特定の実施形態において、本明細書に提供されるような多量体結合分子の対象への投与は、同じ結合パートナーに結合する当量の単量体または二量体結合分子の投与よりも大きい効力をもたらす。ある特定の実施形態において、単量体または二量体結合分子は、本明細書に提供されるような多量体結合分子と同一の結合ポリペプチドを含む。「当量」とは、例えば、分子量によって測定される量（例えば、総ミリグラム単位で）、または代替的な、例えば、当量数の分子が投与される場合における、モル当量を意味する。
ある特定の実施形態において、自己免疫疾患は、例えば、関節炎、例えば、関節リウマチ、骨関節炎、もしくは強直性脊椎炎、多発性硬化症（ＭＳ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、例えば、クローン病もしくは潰瘍性大腸炎、または全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）であり得る。ある特定の実施形態において、炎症性疾患または障害は、例えば、関節炎、例えば、関節リウマチ、もしくは骨関節炎、もしくは乾癬性関節炎、ライム病、ＳＬＥ、ＭＳ、シェーグレン症候群、喘息、炎症性腸疾患、虚血、アテローム性動脈硬化症、または脳卒中であり得る。
他の実施形態において、本開示は、移植レシピエントにおいて移植拒絶反応を防止する方法を提供し、該方法は、有効量の本明細書に提供されるような多量体結合分子を対象に投与することを含む。ある特定の実施形態において、本明細書に提供されるような多量体結合分子の対象への投与は、同じ結合パートナーに結合する当量の単量体または二量体結合ポリペプチドの投与よりも大きい効力をもたらす。ある特定の実施形態において、単量体または二量体結合分子は、本明細書に提供されるような多量体結合分子と同一の結合ポリペプチドを含む。「当量」とは、例えば、分子量によって測定される量（例えば、総ミリグラム単位で）、または代替的な、例えば、当量数の分子が投与される場合における、モル当量を意味する。
治療が行われる対象は、治療を必要とする任意の動物、例えば哺乳動物であり得、ある特定の実施形態において、対象はヒト対象である。
その最も単純な形態において、対象に投与される調製物は、従来的な剤形で投与される本明細書に提供されるような多量体結合分子であり、この多量体結合分子は、本明細書の他の箇所に記載されるような医薬賦形剤、担体、または希釈剤と組み合わせることができる。
本開示の多量体結合分子は、任意の好適な方法により、例えば、非経口的に、脳室内に、経口的に、吸入スプレーによって、局所的に、直腸に、鼻腔に、頬側に、膣内に、または移植リザーバーを介して、投与することができる。本明細書で使用する場合、「非経口的」という用語は、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑液内、胸骨内、髄腔内、肝臓内、病巣内、及び頭蓋内の注射または輸注技法を含む。
医薬組成物及び投与方法
本明細書に提供されるような多量体結合分子を調製する方法及びそれを必要とする対象に投与する方法は、当業者に周知されているか、または本開示を考慮して当業者によって容易に決定される。投与経路は、例えば、経口、非経口、吸入によるもの、または局所であり得る。本明細書で使用する場合の非経口という用語は、例えば、静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、直腸、または膣内の投与を含む。これらの投与形態は好適な形態として企図されているが、別の投与形態の例として、注射用溶液、特に静脈内または動脈内の注射または点滴用の溶液が考えられる。好適な医薬組成物は、緩衝液（例えば酢酸、リン酸、またはクエン酸緩衝液）、界面活性剤（例えば、ポリソルベート）、任意選択で安定化剤（例えば、ヒトアルブミン）などを含むことができる。
本明細書で論じられるように、本明細書に提供されるような多量体結合分子は、それを必要とする対象の治療のための医薬有効量で投与することができる。この点において、開示される多量体結合分子は、投与を容易にし、かつ活性薬剤の安定性を促進するように製剤化され得ることが理解されよう。したがって、医薬組成物は、医薬的に許容される非毒性の滅菌担体、例えば、生理食塩水、非毒性緩衝液、防腐剤などを含むことができる。本明細書に提供されるような多量体結合分子の医薬有効量は、標的に対する有効な結合を達成し、かつ治療上の有益性を達成するのに十分な量を意味する。好適な製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．）１６ｔｈ ｅｄ．（１９８０）に記載されている。
本明細書で提供されるある特定の医薬組成物は、許容される剤形で経口投与することができ、このような剤形には、例えば、カプセル、錠剤、水性懸濁液または水溶液が含まれる。ある特定の医薬組成物は、経鼻エアロゾルまたは吸入によって投与することもできる。そのような組成物は、食塩水溶液として、ベンジルアルコールもしくは他の好適な防腐剤、生物学的利用能を強化するための吸収促進剤、及び／または他の従来的な可溶化剤もしくは分散剤を用いて調製され得る。
単一の剤形をもたらすために担体材料と組み合わされ得る多量体結合分子の量は、例えば、治療される対象及び特定の投与様式に応じて変動する。組成物は、単回用量、複数回用量として、または輸注において確立された期間にわたり、投与することができる。薬用量レジメンも、最適な所望の応答（例えば、治療または予防応答）を提供するように調整され得る。
本開示の範囲に従って、本明細書に提供されるような多量体結合分子は、治療効果をもたらすのに十分な量で療法を必要とする対象に投与することができる。本明細書に提供されるような多量体結合分子は、既知の技法に従って、本開示の多量体結合分子を従来的な医薬的に許容される担体または希釈剤と組み合わせることにより調製した従来的な剤形で、対象に投与することができる。医薬的に許容される担体または希釈剤の形態及び特性は、それが組み合わされる活性成分の量、投与経路、及び他の周知の可変要素によって規定され得る。
この開示はまた、疾患もしくは障害、例えば、自己免疫疾患、炎症性疾患を治療するか、防止するか、もしくは管理するため、または移植拒絶反応を防止するための医薬品の製造における、本明細書に提供されるような多量体結合分子の使用を可能にする。
この開示は、別段の指示がない限り、細胞生物学、細胞培養、分子生物学、トランスジェニック生物学、微生物学、組換えＤＮＡ、及び免疫学の従来的技法を採用し、このような技法は当業者の技能の範囲内である。そのような技法は、文献において十分に説明されている。例えば、Ｇｒｅｅｎ ａｎｄ Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｄ．（２０１２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（４ｔｈ ｅｄ．；Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ）、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．（１９９２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇｓ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＮＹ）、Ｄ．Ｎ．Ｇｌｏｖｅｒ ａｎｄ Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ，ｅｄｓ．，（１９９５）ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ ２ｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ），Ｖｏｌｕｍｅｓ １－４；Ｇａｉｔ，ｅｄ．（１９９０）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ）、Ｍｕｌｌｉｓらの米国特許第４，６８３，１９５号、Ｈａｍｅｓ ａｎｄ Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．（１９８５）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ）、Ｈａｍｅｓ ａｎｄ Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．（１９８４）Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ）、Ｆｒｅｓｈｎｅｙ（２０１６）Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ，７ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｗｉｌｅｙ－Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ）、Ｗｏｏｄｗａｒｄ，Ｊ．，Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ Ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ）（１９８５）、Ｐｅｒｂａｌ（１９８８）Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ Ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ；２ｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ）；Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｃａｌｏｓ ｅｄｓ．（１９８７）Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ Ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）、Ｓ．Ｃ．Ｍａｋｒｉｄｅｓ（２００３）Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ）、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｓ．１５１－１５５（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎ．Ｙ．）、Ｍａｙｅｒ ａｎｄ Ｗａｌｋｅｒ，ｅｄｓ．（１９８７）Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ）、Ｗｅｉｒ ａｎｄ Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．、及びＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ）を参照されたい。
抗体工学の一般原理は、例えば、Ｓｔｒｏｈｌ，Ｗ．Ｒ．，ａｎｄ Ｌ．Ｍ．Ｓｔｒｏｈｌ（２０１２），Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（Ｗｏｏｄｈｅａｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ）に記載されている。タンパク質工学の一般原理は、例えば、Ｐａｒｋ ａｎｄ Ｃｏｃｈｒａｎ，ｅｄｓ．（２００９），Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ａｎｄ Ｄｅｓｉｇｎ（ＣＤＣ Ｐｒｅｓｓ）に記載されている。免疫学の一般原理は、例えば、Ａｂｂａｓ ａｎｄ Ｌｉｃｈｔｍａｎ（２０１７）Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ９ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ）に記載されている。追加として、当該技術分野で既知の免疫学の標準的方法は、例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ Ｏｎｌｉｎｅ Ｌｉｂｒａｒｙ）、Ｗｉｌｄ，Ｄ．（２０１３），Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ）、Ｇｒｅｅｎｆｉｅｌｄ，ｅｄ．（２０１３），Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，２ｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ）、及びＯｓｓｉｐｏｗ ａｎｄ Ｆｉｓｃｈｅｒ，ｅｄｓ．，（２０１４），Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ）に従って得ることができる。
上記で引用された参考文献の全て、ならびに本明細書で引用された全ての参考文献は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
以下の実施例は、限定としてではなく例示説明として提供されるものである。
実施例１：多価ＰＤ－Ｌ１－ＩｇＭ融合タンパク質の構築
ＰＤ－Ｌ１－ＩｇＭ融合タンパク質サブユニットをコードする２個のＤＮＡ構築物は、商業的供給業者によって構築された。概略図が図３のＡ及びＢとして提供される。
第１の構築物は、補体媒介性細胞傷害性を低減するかまたは排除するためにＣμ３ドメインにおけるＰ３１１Ａ及びＰ３１３Ｓアミノ酸置換により修飾されたヒトＩｇＭ定常領域のＣμ２、Ｃμ３、Ｃμ４、及びテールピース（ｔｐ）ドメインをコードするＤＮＡに融合された、シグナルペプチド、ヒトＰＤ－Ｌ１のＶ１及びＣ２ドメイン（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ：Ｑ９ＮＺＱ７．１のアミノ酸１～２３８、本明細書で配列番号：８として提示される）をコードするＤＮＡを含む（ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１８／１８７７０２号を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。該構築物によってコードされる前駆体融合タンパク質のアミノ酸配列は、本明細書で配列番号：１１として提示され、シグナルペプチドの切断後の、該構築物によってコードされる成熟融合タンパク質のアミノ酸配列（「ＰＤ－Ｌ１－ＩｇＭ」）は、本明細書で配列番号：１１のアミノ酸１９～５８７として提示される。該結合分子の六量体形態の概略図が図３のＡとして示される。
第２の構築物は、バリアントヒトＩｇＧ２ヒンジ領域（配列番号：５）をコードするＤＮＡならびに上記のようにＣμ３ドメインにおけるＰ３１１Ａ及びＰ３１３Ｓアミノ酸置換により修飾されたヒトＩｇＭ定常領域のＣμ３、Ｃμ４、及びテールピース（ｔｐ）ドメインをコードするＤＮＡ（ヒンジ－修飾Ｃμ３、Ｃμ４、ｔｐのアミノ酸配列は配列番号：６として提示される）に融合された、シグナルペプチド、ヒトＰＤ－Ｌ１のＶ１及びＣ２ドメイン（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ：Ｑ９ＮＺＱ７．１のアミノ酸１～２３８、本明細書で配列番号：８として提示される）をコードするＤＮＡを含む。該構築物によってコードされる前駆体融合タンパク質のアミノ酸配列は、本明細書で配列番号：１３として提示され、シグナルペプチドの切断後の、該構築物によってコードされる成熟融合タンパク質のアミノ酸配列（「ＰＤ－Ｌ１－Ｈ－ＩｇＭ」）は、本明細書で配列番号：１３のアミノ酸１９～４９３として提示される。該該結合分子の六量体形態の概略図が図３のＢとして示される。
結果として得られたＤＮＡ構築物を使用して、標準的方法を用いてＥｘｐｉ２９３細胞（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）に一過性でトランスフェクトした。ＤＮＡ構築物は単独でトランスフェクトして六量体タンパク質を生成したか、または野生型ヒトＪ鎖とコトランスフェクトして五量体タンパク質を生成したかのいずれかであった。多量体融合タンパク質を、製造業者の推奨に従ってＣａｐｔｕｒｅ Ｓｅｌｅｃｔ ＩｇＭ親和性マトリックス（ＢＡＣ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒカタログ番号２８９０．０５）を用いて精製した。得られたタンパク質を、以前に記載されたように非還元ポリアクリルアミドゲル電気泳動及びウェスタンブロッティングによって適切な発現及び集合に関して評価した（例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ／２０１８／０１７８８８号を参照されたい）。
ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域（「ＰＤ－Ｌ１－Ｆｃ」）に融合されたヒトＰＤ－Ｌ１の外部ドメインを含む精製された融合タンパク質をＲ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ（カタログ番１５６－Ｂ７）から購入した。ＩｇＧ－Ｆｃ構築物の概略図が図３のＣに示される。
実施例２：ＰＤ－Ｌ１－ＩｇＭ及びＰＤ－Ｌ１－Ｈ－ＩｇＭによるＰＤ－１発現Ｔ細胞の活性化
ＰＤ－Ｌ１－ＩｇＭ及びＰＤ－Ｌ１－Ｈ－ＩｇＭ融合タンパク質の六量体及び五量体バージョンがＰＤ－１発現Ｔ細胞を活性化する能力を以下のように評価した。ＰＤ－１を介して活性化されると光を生じるレポーターＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞をＤｉｓｃｏｖｅｒＸ（ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ（登録商標）ＰＤ－１アッセイ、カタログ番号９３－１１０４Ｃ１９）から購入し、製造業者の指示に従って使用した。これらの細胞において、完全長ＰＤ－１受容体は、そのＣ末端に小さなβ－ｇａｌフラグメントを融合させることにより操作されており、ＳＨＰ－１のＳＨ２－ドメインは、補完的なβ－ｇａｌフラグメント（ＥＡ）により操作されている。これらの構築物は、Ｊｕｒｋａｔ細胞において安定に発現される。ＰＤ－Ｌ１がこれらの細胞の表面上のＰＤ－１に結合すると、ＰＤ－１融合タンパク質はリン酸化されて、ＳＨＰ－１融合タンパク質の動員につながり、活性なβ－ｇａｌ酵素がもたらされる。この活性酵素は、基質を加水分解して、受容体活性の尺度としての化学発光を生み出す。
これらの細胞を、実施例１に記載されるように購入または生成した単量体、五量体、及び六量体構築物に接触させた。ＰＤ－１及びＳＨＰ－１（ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ）が操作されたＪｕｒｋａｔ細胞をＰＤ－Ｌ１融合タンパク質と混合し、５％ＣＯ２下、３７℃で１時間おいた。ＰＤ－１の結合及び活性化により、ＳＨＰ１とＰＤ－Ｌ１の細胞内ドメインとの会合がもたらされ、これによりβ－ガラクトシダーゼのドナー構成要素及びアクセプター構成要素が一緒に結び付いた。化学発光基質を暗所で、室温で３時間インキュベーションした後、β－ガラクトシダーゼ活性を測定した。結果が図４及び表１に提示される。
（表１）ＰＤ－１活性化アッセイからのＥＣ５０
Figure 2022505663000005
ＩｇＭベースの融合タンパク質の全てが、ＩｇＧ融合タンパク質と比べて改善された活性化ＥＣ５０を有した。
（表２）本明細書に提示される配列
Figure 2022505663000006
Figure 2022505663000007
Figure 2022505663000008
Figure 2022505663000009
Figure 2022505663000010
Figure 2022505663000011
Figure 2022505663000012
Figure 2022505663000013
Figure 2022505663000014
Figure 2022505663000015
Figure 2022505663000016
Figure 2022505663000017
Figure 2022505663000018
本開示の広がり及び範囲は、上述の例示的な実施形態のいずれによっても限定されるべきではなく、添付の特許請求の範囲及びそれらの均等物に従ってのみ定義されるべきである。

Claims (62)

  1. ２個、５個、もしくは６個の二価結合ユニットまたはそのバリアントもしくはフラグメントを含む、多量体結合分子であって、
    各結合ユニットが、細胞の表面上に発現している結合パートナーに特異的に結合する結合ポリペプチドまたはそのフラグメントに各々融合された２個のＩｇＡもしくはＩｇＭ重鎖定常領域またはその多量体化フラグメントもしくはバリアントを含み、前記結合ポリペプチドが、抗体でも抗体の抗原結合フラグメントでもなく、前記結合ポリペプチドの前記結合パートナーへの結合が、前記細胞におけるシグナル伝達を調節し、
    前記結合ポリペプチドのうちの少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、または１２個が、同じ結合パートナーに結合して、その結合パートナーのシグナル伝達を調節し、
    前記結合分子が、前記同じ結合パートナーに結合する１個または２個の結合ポリペプチドを有する当量の一価または二価結合分子よりも高い効力で、前記細胞におけるシグナル伝達を誘導し得るかまたは阻害し得る、前記多量体結合分子。
  2. ２個、５個、もしくは６個の二価結合ユニットまたはそのバリアントもしくはフラグメントを含む、多量体結合分子であって、
    各結合ユニットが、結合ポリペプチドに各々融合された２個のＩｇＡもしくはＩｇＭ重鎖定常領域またはその多量体化フラグメントもしくはバリアントを含み、前記結合ポリペプチドのうちの少なくとも３個が、リガンドまたはその受容体結合フラグメントを含む結合パートナーに特異的に結合する受容体外部ドメインを含み、前記受容体外部ドメインが、抗体でも抗体の抗原結合フラグメントでもなく、前記受容体外部ドメインの前記リガンドへの結合が、前記受容体を発現する細胞におけるシグナル伝達を調節し得、
    前記受容体外部ドメインのうちの少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、または１２個が、同じリガンドに結合し、
    前記結合分子が、前記同じリガンドに結合する１個または２個の受容体外部ドメインを有する当量の単量体または二量体結合分子よりも高い効力で、シグナル伝達を調節し得る、前記多量体結合分子。
  3. 各結合ユニットが、ＩｇＡ Ｃα３ドメイン及びＩｇＡテールピース（ｔａｉｌｐｉｅｃｅ）ドメインを各々含む２個のＩｇＡ重鎖定常領域またはその多量体化フラグメントもしくはバリアントを含み、前記多量体結合分子が、Ｊ鎖またはその機能的フラグメントもしくはバリアントをさらに含む、請求項１または２に記載の多量体結合分子。
  4. 各ＩｇＡ重鎖定常領域またはその多量体化フラグメントもしくはバリアントが、前記ＩｇＡ Ｃα３ドメイン及び前記ＩｇＡテールピースドメインのＮ末端側に位置するＩｇＡ Ｃα２ドメインをさらに含む、請求項３に記載の多量体結合分子。
  5. 配列番号：２４のアミノ酸１２５～３５３、または配列番号：２５のアミノ酸１１３～３４０を含む、請求項４に記載の多量体結合分子。
  6. 各ＩｇＡ重鎖定常領域またはその多量体化フラグメントもしくはバリアントが、前記ＩｇＡ Ｃα２ドメインのＮ末端側に位置するＩｇＡヒンジ領域をさらに含む、請求項４または５に記載の多量体結合分子。
  7. 配列番号：２４のアミノ酸１０２～３５３、または配列番号：２５のアミノ酸１０２～３４０を含む、請求項６に記載の多量体結合分子。
  8. 各結合ユニットが、ＩｇＭ Ｃμ４ドメイン及びＩｇＭテールピースドメインを各々含む２個のＩｇＭ重鎖定常領域またはその多量体化フラグメントもしくはバリアントを含む、請求項１または２に記載の多量体結合分子。
  9. 各ＩｇＭ重鎖定常領域またはその多量体化フラグメントもしくはバリアントが、前記ＩｇＭ Ｃμ４ドメイン及び前記ＩｇＭテールピースドメインのＮ末端側に位置するＩｇＭ Ｃμ３ドメインをさらに含む、請求項８に記載の多量体結合分子。
  10. 各ＩｇＭ重鎖定常領域またはその多量体化フラグメントもしくはバリアントが、前記ＩｇＭ Ｃμ３ドメインのＮ末端側に位置するＩｇＭ Ｃμ２ドメインをさらに含む、請求項９に記載の多量体結合分子。
  11. 配列番号：３を含むヒトＩｇＭ定常領域の多量体化フラグメントを含む、請求項１０に記載の多量体結合分子。
  12. 配列番号：４を含むヒトＩｇＭ定常領域の多量体化バリアントフラグメントを含み、前記多量体結合分子が、配列番号：３のヒトＩｇＭ定常領域の野生型多量体化フラグメントを含む対応する結合分子と比べて、低減された補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性を有する、請求項１０に記載の多量体結合分子。
  13. 各ＩｇＭ重鎖定常領域またはその多量体化フラグメントもしくはバリアントが、前記ＩｇＭ Ｃμ３ドメインのＮ末端側に位置するＩｇＧヒンジ領域またはその機能的バリアントをさらに含む、請求項９に記載の多量体結合分子。
  14. 前記Ｃμ３ドメイン、前記Ｃμ４ドメイン、及び前記ＴＰドメインを含む前記ヒトＩｇＭ定常領域の多量体化フラグメントに融合されたバリアントヒトＩｇＧ１ヒンジ領域を含み、前記多量体化ヒンジ－ＩｇＭ定常領域フラグメントが、配列番号：６を含む、請求項１３に記載の多量体結合分子。
  15. 前記Ｃμ３ドメイン、前記Ｃμ４ドメイン、及び前記ＴＰドメインを含む前記ヒトＩｇＭ定常領域の多量体化フラグメントに融合されたバリアントヒトＩｇＧ１ヒンジ領域を含み、前記多量体化ヒンジ－ＩｇＭ定常領域フラグメントが、配列番号：７を含み、前記多量体結合分子が、配列番号：６の多量体化ヒンジ－ＩｇＭフラグメントを含む対応する結合分子と比べて、低減されたＣＤＣ活性を有する、請求項１３に記載の多量体結合分子。
  16. 五量体であり、Ｊ鎖またはその機能的フラグメントもしくはバリアントをさらに含む、請求項８～１５のいずれか１項に記載の多量体結合分子。
  17. 前記Ｊ鎖またはその機能的フラグメントもしくはバリアントが、野生型Ｊ鎖と比べて、前記多量体結合分子の血清半減期に影響を及ぼし得る１つまたは複数の単一アミノ酸置換、欠失、または挿入を含むバリアントＪ鎖であり、前記多量体結合分子が、動物に投与される場合、前記１つまたは複数の単一アミノ酸置換、欠失、または挿入を除いて同一でありかつ同じ動物種に同じ方法で投与される参照多量体結合分子と比べて、増加した血清半減期を示す、請求項１６に記載の多量体結合分子。
  18. 前記Ｊ鎖またはその機能的フラグメントが、前記野生型ヒトＪ鎖（配列番号：１５）のアミノ酸Ｙ１０２に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む、請求項１７に記載の多量体結合分子。
  19. 配列番号：１５のＹ１０２に対応するアミノ酸が、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、またはアルギニン（Ｒ）で置換される、請求項１８に記載の多量体結合分子。
  20. 配列番号：１５のＹ１０２に対応するアミノ酸が、アラニン（Ａ）で置換される、請求項１９に記載の多量体結合分子。
  21. 前記Ｊ鎖が、バリアントヒトＪ鎖であり、配列番号：１６のアミノ酸配列を含む、請求項２０に記載の多量体結合分子。
  22. 前記Ｊ鎖またはその機能的フラグメントが、前記ヒトＪ鎖（配列番号：１５）のアミノ酸Ｎ４９、アミノ酸Ｓ５１、またはＮ４９及びＳ５１の両方に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含み、配列番号：１５の位置Ｓ５１に対応する単一アミノ酸置換が、トレオニン（Ｔ）置換ではない、請求項１７に記載の多量体結合分子。
  23. 配列番号：１５のＮ４９に対応する位置が、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、トレオニン（Ｔ）、セリン（Ｓ）、またはアスパラギン酸（Ｄ）で置換される、請求項２２に記載の多量体結合分子。
  24. 配列番号：１５のＮ４９に対応する位置が、アラニン（Ａ）で置換される、請求項２３に記載の多量体結合分子。
  25. 前記Ｊ鎖が、バリアントヒトＪ鎖であり、配列番号：１７のアミノ酸配列を含む、請求項２４に記載の多量体結合分子。
  26. 配列番号：１５のＳ５１に対応する位置が、アラニン（Ａ）またはグリシン（Ｇ）で置換される、請求項２２に記載の多量体結合分子。
  27. 配列番号：１５のＳ５１に対応する位置が、アラニン（Ａ）で置換される、請求項２６に記載の多量体結合分子。
  28. 前記Ｊ鎖が、バリアントヒトＪ鎖であり、配列番号：１８のアミノ酸配列を含む、請求項２７に記載の多量体結合分子。
  29. 前記Ｊ鎖またはその機能的フラグメントもしくはバリアントが、異種ポリペプチドをさらに含み、前記異種ポリペプチドが、前記Ｊ鎖またはその機能的フラグメントもしくはバリアントに直接的または間接的に融合されている、請求項３～７または１６～２８のいずれか１項に記載の多量体結合分子。
  30. 前記異種ポリペプチドが、ペプチドリンカーを介して前記Ｊ鎖またはそのフラグメントに融合されている、請求項２９に記載の多量体結合分子。
  31. 前記ペプチドリンカーが、少なくとも５アミノ酸を含むが、ただし２５アミノ酸を超えない、請求項３０に記載の多量体結合分子。
  32. 前記ペプチドリンカーが、
    Figure 2022505663000019
    からなる、請求項３１に記載の多量体結合分子。
  33. 前記異種ポリペプチドが、前記Ｊ鎖またはそのフラグメントもしくはバリアントのＮ末端、前記Ｊ鎖またはそのフラグメントもしくはバリアントのＣ末端、あるいは前記Ｊ鎖またはそのフラグメントもしくはバリアントのＮ末端及びＣ末端の両方に融合されている、請求項２９～３２のいずれか１項に記載の多量体結合分子。
  34. 前記異種ポリペプチドが、前記多量体結合分子の吸収、分布、代謝、及び／または排泄（ＡＤＭＥ）に影響を与え得る、請求項２９～３３のいずれか１項に記載の多量体結合分子。
  35. 前記異種ポリペプチドが、抗原結合ドメインを含む、請求項２９～３３のいずれか１項に記載の多量体結合分子。
  36. 前記異種ポリペプチドの抗原結合ドメインが、抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項３５に記載の多量体結合分子。
  37. 前記抗原結合フラグメントが、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｄフラグメント、Ｆｖフラグメント、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）フラグメント、ジスルフィド結合したＦｖ（ｓｄＦｖ）フラグメント、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項３６に記載の多量体結合分子。
  38. 前記抗原結合フラグメントが、ｓｃＦｖフラグメントである、請求項３７に記載の多量体結合分子。
  39. ４個の同一の結合ポリペプチドを含む、請求項３～７のいずれか１項に記載の多量体結合分子。
  40. 五量体であり、１０個の同一の結合ポリペプチドを含む、請求項８～３８のいずれか１項に記載の多量体結合分子。
  41. 六量体であり、１２個の同一の結合ポリペプチドを含む、請求項８～３８のいずれか１項に記載の多量体結合分子。
  42. 各結合ポリペプチドが、リガンドもしくはその受容体結合フラグメント、サイトカインもしくはその受容体結合フラグメント、成長因子もしくはその受容体結合フラグメント、神経伝達物質もしくはその受容体結合フラグメント、ペプチドもしくはタンパク質ホルモンもしくはその受容体結合フラグメント、免疫チェックポイントモジュレーターリガンドもしくはその受容体結合フラグメント、または細胞外マトリックスタンパク質の受容体結合フラグメントである、請求項１または３～４１のいずれか１項に記載の多量体結合分子。
  43. 前記リガンドまたはその受容体結合フラグメントが、ケモカイン、補体タンパク質、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）ファミリーリガンド、免疫チェックポイントモジュレーターリガンド、上皮成長因子（ＥＧＦ）、インターフェロン、腫瘍壊死因子スーパーファミリー（ＴＮＦＳＦ）リガンド、血管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）ファミリーリガンド、形質転換成長因子－βスーパーファミリー（ＴＧＦβｓｆ）リガンド、それらの任意の受容体結合フラグメント、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項４２に記載の多量体結合分子。
  44. 前記結合ポリペプチドが、ＴＮＦＳＦリガンドを含み、前記ＴＮＦＳＦリガンドが、ＴＲＡＩＬ、ＯＸ４０リガンド、ＣＤ４０リガンド、グルココルチコイド誘導性腫瘍壊死因子受容体リガンド（ＧＩＴＲＬ）、４－１ＢＢリガンド、それらの任意の受容体結合フラグメント、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項４３に記載の多量体結合分子。
  45. 前記結合ポリペプチドが、免疫チェックポイントモジュレーターリガンドタンパク質もしくはその受容体結合フラグメントを含み、前記免疫チェックポイントモジュレータータンパク質が、ＣＤ８６もしくはその受容体結合フラグメント、ＣＤ８０もしくはその受容体結合フラグメント、ＰＤ－Ｌ１もしくはその受容体結合フラグメント、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項４２に記載の多量体結合分子。
  46. 前記結合ポリペプチドが、ヒトＰＤ－Ｌ１の受容体結合フラグメントを含む、請求項４５に記載の多量体結合タンパク質。
  47. 前記結合ポリペプチドが、ヒトＰＤ－Ｌ１のＶタイプドメインを含む配列番号：８のアミノ酸１９～１２７を含む、請求項４６に記載の多量体結合タンパク質。
  48. 前記結合ポリペプチドが、ヒトＰＤ－Ｌ１のＶタイプドメイン及びＣ２タイプドメインを含む配列番号：９を含む、請求項４７に記載の多量体結合タンパク質。
  49. 配列番号：１１または配列番号：１３のアミノ酸配列を含むポリペプチドの１０個または１２個のコピーを含む、請求項４８に記載の多量体結合分子。
  50. 配列番号：１６のアミノ酸配列を含むバリアントＪ鎖をさらに含む、請求項４９に記載の多量体結合分子。
  51. ＰＤ－１のアゴニストである、請求項４６～５０のいずれか１項に記載の多量体結合分子。
  52. 前記結合パートナーが、細胞表面受容体タンパク質または免疫チェックポイントモジュレーターである、請求項１または３～５１のいずれか１項に記載の多量体結合分子。
  53. 前記受容体外部ドメインが、腫瘍壊死因子スーパーファミリー受容体（ＴＮＦｒＳＦ）のリガンド結合フラグメント、免疫チェックポイントモジュレーター受容体のリガンド結合フラグメント、ＴＧＦβ受容体のリガンド結合フラグメント、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項２～４１のいずれか１項に記載の多量体結合分子。
  54. 前記ＴＮＦｒＳＦ受容体フラグメントが、デスドメイン含有受容体－４（ＤＲ４）のリガンド結合フラグメント、デスドメイン含有受容体－５（ＤＲ５）のリガンド結合フラグメント、ＯＸ－４０のリガンド結合フラグメント、ＣＤ４０のリガンド結合フラグメント、４－１ＢＢのリガンド結合フラグメント、グルココルチコイド誘導性腫瘍壊死因子受容体（ＧＩＴＲ）のリガンド結合フラグメント、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項５３に記載の多量体結合分子。
  55. 前記免疫チェックポイントモジュレーター受容体外部ドメインが、ＰＤ－１のリガンド結合フラグメント、ＣＴＬＡ４のリガンド結合フラグメント、ＬＡＧ３のリガンド結合フラグメント、ＣＤ２８のリガンド結合フラグメント、免疫グロブリン様ドメイン含有受容体２（ＩＬＤＲ２）のリガンド結合フラグメント、Ｔ細胞免疫グロブリンムチンファミリーメンバー３（ＴＩＭ－３）のリガンド結合フラグメント、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項５３に記載の多量体結合分子。
  56. 前記ＴＧＦβ受容体が、ＴＧＦβＲ－１、ＴＧＦβＲ－２、ＴＧＦβＲ３、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項５３に記載の多量体結合分子。
  57. 請求項１～５６のいずれか１項に記載の多量体結合分子のサブユニットをコードする核酸配列を含む、単離されたポリヌクレオチドであって、
    各サブユニットが、
    結合パートナーに特異的に結合する結合ポリペプチドもしくはそのフラグメントまたはリガンドに特異的に結合する受容体外部ドメインに融合された、ＩｇＡもしくはＩｇＭ重鎖定常領域またはその多量体化フラグメントもしくはバリアント
    を含む、前記単離されたポリヌクレオチド。
  58. 請求項５７に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
  59. 請求項５８に記載のベクターを含む、宿主細胞。
  60. 請求項１６～３８のいずれか１項に記載のＪ鎖またはその機能的フラグメントもしくはバリアントをコードする核酸配列を含む、単離されたポリヌクレオチド
    をさらに含む、請求項５９に記載の宿主細胞。
  61. 治療の必要がある対象において自己免疫障害、炎症性障害、またはそれらの組み合わせを治療するための方法であって、前記方法が、有効量の請求項４５～５５のいずれか１項に記載の多量体結合分子を前記対象に投与する工程を含み、前記多量体結合分子が、同じ結合パートナーに結合する当量の単量体または二量体結合分子よりも大きい効力を示す、前記方法。
  62. 移植レシピエントにおいて移植拒絶反応を防止するための方法であって、前記方法が、有効量の請求項４５～５５のいずれか１項に記載の多量体結合分子を対象に投与する工程を含み、前記多量体結合分子が、同じ結合パートナーに結合する当量の単量体または二量体結合分子よりも大きい効力を示す、前記方法。
JP2021522078A 2018-10-23 2019-10-23 ＩｇＭ－Ｆｃベース及びＩｇＡ－Ｆｃベースの多価結合分子 Pending JP2022505663A (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862749429P 2018-10-23 2018-10-23
US62/749,429 2018-10-23
PCT/US2019/057702 WO2020086745A1 (en) 2018-10-23 2019-10-23 MULTIVALENT IgM- AND IgA-Fc-BASED BINDING MOLECULES

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2022505663A true JP2022505663A (ja) 2022-01-14
JPWO2020086745A5 JPWO2020086745A5 (ja) 2022-10-28

Family

ID=70331240

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2021522078A Pending JP2022505663A (ja) 2018-10-23 2019-10-23 ＩｇＭ－Ｆｃベース及びＩｇＡ－Ｆｃベースの多価結合分子

Country Status (11)

Country Link
US (1) US20210380701A1 (ja)
EP (1) EP3870223A4 (ja)
JP (1) JP2022505663A (ja)
KR (1) KR20210083260A (ja)
CN (1) CN112839677A (ja)
AU (1) AU2019368289A1 (ja)
CA (1) CA3113268A1 (ja)
IL (1) IL281901A (ja)
MX (1) MX2021004660A (ja)
SG (1) SG11202103720XA (ja)
WO (1) WO2020086745A1 (ja)

Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015120474A1 (en) 2014-02-10 2015-08-13 Igm Biosciences, Inc. Iga multi-specific binding molecules
SG11201608194VA (en) 2014-04-03 2016-10-28 Igm Biosciences Inc Modified j-chain
SG10202001779UA (en) 2015-01-20 2020-04-29 Igm Biosciences Inc Tumor necrosis factor (tnf) superfamily receptor binding molecules and uses thereof
SG11201707144VA (en) 2015-03-04 2017-09-28 Igm Biosciences Inc Cd20 binding molecules and uses thereof
AU2016238246B2 (en) 2015-03-25 2021-05-13 Igm Biosciences, Inc. Multi-valent hepatitis B virus antigen binding molecules and uses thereof
CN107847591B (zh) 2015-04-17 2023-07-28 Igm生物科学股份有限公司 多价人免疫缺陷病毒抗原结合分子及其应用
EP3356401B1 (en) 2015-09-30 2020-06-24 IGM Biosciences, Inc. Binding molecules with modified j-chain
EP3355913A1 (en) 2015-09-30 2018-08-08 IGM Biosciences A/S Binding molecules with modified j-chain
KR102343742B1 (ko) 2016-05-09 2021-12-24 아이쥐엠 바이오사이언스 인코포레이티드 항-pd-l1 항체
EP3607091A4 (en) 2017-04-07 2021-01-20 IGM Biosciences, Inc. MODIFIED HUMAN CONSTANT IGM REGIONS FOR THE MODULATION OF COMPLEMENT-DEPENDENT CYTOLYSIS EFFECTOR FUNCTION
KR20200128391A (ko) * 2018-03-01 2020-11-12 아이쥐엠 바이오사이언스 인코포레이티드 IgM 혈청 반감기에 영향을 미치는 IgM Fc 및 J-쇄 돌연변이
US20210284716A1 (en) 2020-03-11 2021-09-16 Immunitybio, Inc. ACE2-Fc Trap
US11857620B2 (en) 2020-03-11 2024-01-02 Immunitybio, Inc. Method of inducing immunity against SARS-CoV-2 using spike (s) and nucleocapsid (N)-ETSD immunogens delivered by a replication-defective adenovirus
WO2021216756A2 (en) * 2020-04-22 2021-10-28 Igm Biosciences, Inc. Pd-1 agonist multimeric binding molecules
CN116813759A (zh) * 2022-03-21 2023-09-29 中国科学院微生物研究所 纳米抗体r14的构建体及其应用
WO2023196995A1 (en) * 2022-04-07 2023-10-12 Repertoire Immune Medicines, Inc. T cell receptor multimers and uses thereof
WO2023200311A1 (ko) * 2022-04-15 2023-10-19 주식회사 아이엠바이오로직스 반감기가 향상된 융합단백질 플랫폼

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0975355A2 (en) * 1996-06-14 2000-02-02 Smithkline Beecham Corporation Hexameric fusion proteins and uses therefor
WO2013049254A1 (en) * 2011-09-26 2013-04-04 Jn Biosciences Llc Hybrid constant regions
WO2018017889A1 (en) * 2016-07-20 2018-01-25 Igm Biosciences, Inc. Multimeric gitr binding molecules and uses thereof
EP3607091A4 (en) * 2017-04-07 2021-01-20 IGM Biosciences, Inc. MODIFIED HUMAN CONSTANT IGM REGIONS FOR THE MODULATION OF COMPLEMENT-DEPENDENT CYTOLYSIS EFFECTOR FUNCTION

Also Published As

Publication number Publication date
AU2019368289A1 (en) 2021-04-29
KR20210083260A (ko) 2021-07-06
EP3870223A1 (en) 2021-09-01
US20210380701A1 (en) 2021-12-09
SG11202103720XA (en) 2021-05-28
WO2020086745A1 (en) 2020-04-30
EP3870223A4 (en) 2022-08-24
MX2021004660A (es) 2021-05-28
CA3113268A1 (en) 2020-04-30
CN112839677A (zh) 2021-05-25
IL281901A (en) 2021-05-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2022505663A (ja) ＩｇＭ－Ｆｃベース及びＩｇＡ－Ｆｃベースの多価結合分子
US20230203173A1 (en) Tumor necrosis factor (tnf) superfamily receptor igm antibodies and uses thereof
JP6929827B2 (ja) Ａｓｇｐｒ抗体およびその使用
WO2020163646A1 (en) Anti-gitr antigen-binding domains and uses thereof
JP2019524053A (ja) Ｔｎｆファミリーリガンドトリマーとｐｄ１結合部分とを含む抗原結合分子
US20130230525A1 (en) Protein complexes for antigen binding and methods of use
KR20200079492A (ko) 이중특이성 2+1 컨터체
AU2020329301A1 (en) Immunostimulatory multimeric binding molecules
KR20230005228A (ko) Pd-1 효능제 다량체 결합 분자
US20200277392A1 (en) Bispecific antigen binding molecule for a costimulatory tnf receptor
KR20220050166A (ko) Igm 글리코변이체
JP2020536552A5 (ja)
JP2020536552A (ja) Ｃｔｌａ−４変異型免疫調節タンパク質およびそれらの使用
KR20230113752A (ko) Cd39 및 tgf베타를 표적화하는 신규 접합체 분자
JP2022532430A (ja) Ｎｋ細胞指向性キメラタンパク質
TWI837156B (zh) 新穎的cd137及pd-l1特異性融合蛋白
WO2023045977A1 (zh) 白介素2突变体以及其融合蛋白
AU2022358565A2 (en) Immunocytokine containing il-21r mutein
TW202334203A (zh) 新穎的ox40及pd-l1特異性融合蛋白

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821

Effective date: 20210423

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20221020

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20221020

RD04 Notification of resignation of power of attorney

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424

Effective date: 20230714

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20230830

A977 Report on retrieval

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007

Effective date: 20230831

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20231110

A02 Decision of refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02

Effective date: 20240422