JP2022502439A - 細菌を用いる感染症治療の方法 - Google Patents

Abstract

本開示は、概して、組成物、剤形、及び感染症を予防及び治療する方法に関する。組成物は、無傷かつほぼ生き残れないグラム陰性の細菌性細胞を含み、これら細菌性細胞は、リポ多糖類（ＬＰＳ）随伴内毒素活性を低減させるよう処理済みであり、免疫細胞のサイトカイン産生を誘発する活性が驚くほど増大している。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、参照によりその内容全体が本明細書に組み入れられるものとする、２０１８年9月２７日出願の米国仮出願第６２／７３７,７６２号の米国特許法§１１９の下における優先権の恩典を主張する。
本開示は、細菌を用いる感染症治療の方法（METHODS OF TREATMENT OF INFECTIONS USING BACTERIA）に関する。

Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）及びヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）のようなウイルス感染症に対して、既存の治療法は、ウイルス複製を制御し、大多数の治療済み患者における臨床症状を改善し、また結果として低減した死亡率及び罹患率をもたらすことができる。しかし、抗ウイルス療法は、治療の中断及び突然の薬剤耐性突然変異後にウイルス血がリバウンドすることによって阻まれる。大多数の患者は、生涯にわたる治療を必要とし、また慢性ＨＢＶ又はＨＩＶ感染症の治癒を達成するのはまれである。

サイトカイン及びケモカインは、肝炎及びＨＩＶを含む広範囲にわたるウイルス感染症に対する宿主防御に重要な役割を果たすことが知られている。インターフェロン-アルファ（ＩＦＮ-α）はＢ型肝炎の治療に認められ、またインターフェロン-ガンマ（ＩＦＮ-γ）、インターロイキン-１２（ＩＬ-１２）、インターロイキン-２３（ＩＬ-２３）、ＧＭ-ＣＳＦ、及び腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ-α）を含む数個の追加的サイトカインが肝炎及びＨＩＶのようなウイルス感染症に対する宿主防御に関与されてきた。

病原体に対する予防ワクチン接種は、病原体及びアジュバントから抗原決定基を得ることが必要であり、抗原決定基は、病原体の抗原に対する免疫反応の活性化に必要な危険信号又は下流因子を免疫系に対して供給する。先在感染症の治療を意図する治療ワクチンは、既存感染症における病原体の抗原決定基に関する宿主認識に基づき、また危険信号介在による免疫活性化を生ずるためにアジュバント又はそれらの下流因子を必要とする。場合によっては、外因性病原体由来の抗原を設けることによって治療ワクチンの効果を高めることができる。自然免疫系及び適応免疫系双方における免疫細胞は、病原体関連の分子パターン（ＰＡＭＰｓ）形態における危険を察知するパターン認識受容体（ＰＲＲｓ）を使用する。ＰＲＲｓの多くの代表的な科（ファミリー）は、ほぼすべての免疫細胞で見られるトール様受容体（ＴＬＲｓ）から成る。これら受容体（ＴＬＲｓ １、２、３、４、５、６、７、８及び９）は、細菌及びウイルスを含む病原体の多くの異なるタイプで見られる生成物に応答する。ＴＬＲ受容体の活性化は、免疫細胞機能及び免疫反応の直接的又は間接的双方ともにおける活性化をもたらす。直接的活性化は、細胞の成熟、増殖及び分化の促進により生ずるとともに、間接的活性化は、サイトカイン及びケモカイン分泌の誘発により生ずる。１０番目のＴＬＲ（ＴＬＲ１０）は免疫機能の負の調節因子として機能することができる。

宿主が介在する抗病原体免疫反応におけるＴＬＲｓの役割に起因して、感染症に対するＴＬＲ作動薬（アゴニスト）アジュバント及び治療法を生み出すことに大きな努力がなされてきた。広範囲にわたる単一特異性の精製又は合成ＴＬＲアゴニストが生み出され、また予備臨床的及び臨床的環境で試験されてきた。ＴＬＲアゴニストは予防ワクチンにおけるアジュバントとして使用される。しかし、抗病原体活性は治療ワクチン環境で観察されてきたが、これら努力は大きな難題に直面してきた。直面した問題としては、予防及びとくに、ＴＬＲアゴニストによる既存感染症治療における更なる改善を必要とすることを示唆する、有効性欠如及び過剰毒性の双方があった。

最適免疫防御に対する自然免疫反応及び適応免疫反応双方における活性化の要件、及び病原体が複数のＴＬＲアゴニスト及び他の危険信号関連の構成要素を含むという事実に起因して、抗ウイルス治療薬を含めて最適な抗感染薬のために複数ＴＬＲアゴニスト治療手法を必要とすることが考えられる。グラム陰性細菌は、複数ＴＬＲアゴニストを含有し、またサイトカイン分泌を含めて有意なＴＬＲアゴニスト関連免疫反応を誘発することが知られている。しかし、ＴＬＲ-４アゴニスであるリポ多糖類（ＬＰＳ）又は内毒素を高レベルに含む野生型グラム陰性細菌は、静脈内投与されるとき高い毒性を示し、これは主に免疫細胞による過剰サイトカイン分泌を誘発することに起因する。グラム陰性細菌は、さらに、免疫系刺激及び全身毒性の双方に関与するおそれがあるＴＬＲｓ１／２、５及び９に対するアゴニストも含有する。

本開示の驚くべきまた予期していなかった発見は、ＬＰＳ随伴内毒素活性を低減するため、例えば、細菌を致死させかつ細菌の無欠性を維持し、またＬＰＳレベルを大幅に低減することができるポリミキシン及びグルタルアルデヒドによりグラム陰性細菌を処理することが、同時にヒト免疫細胞からのサイトカイン分泌を誘発する細菌の能力を増大することができるという点である。少なくともＬＰＳの大幅な低減は、未処理野生型細菌に比べて、処理済み細菌に曝露される免疫細胞が放出する複数サイトカイン各々の量の大幅な低減につながると想定していたことに起因して、このことは予想されていなかった。

驚くべきことに、テーブル１に示すように、同一濃度（未処理及び処理済み）の細菌で試験したとき、未処理の野生型細菌と比べて、ヒト免疫細胞が分泌する９個のサイトカインのうち８個はより高いレベルを誘発され、これは処理済み細菌が未処理細菌で見られるＬＰＳレベルの４.９４％しか有していなかったという事実にも係わらずであった。加えて、ＬＰＳの大幅な低減にも係わらず、処理済み細菌は単一特異性ＴＬＲアゴニストよりも高いレベルのサイトカインを誘発した（テーブル２）。インビトロ（体外）リムルス変形細胞溶解物（ＬＡＬ）検定（アッセイ）によって測定されるとき、未処理野生型細菌に比べて約７５％〜９９％となり得る、処理によるＬＰＳ随伴内毒素活性の低減は、結果として毒性低減をもたらすことができる。いかなる特定理論にも拘泥されず、処理済み細菌細胞の無傷構造は宿主被験体における何らかの隔室内へのフリーＬＰＳ放出を防止又は最小化するのに役立つことができる。この結果は、処理済み細菌が未処理細菌又は単一特異性アゴニストよりも優れた免疫反応を誘発することができ、未処理細菌に比べて低減した全身毒性を有することを示唆する。

動物研究は、さらに、このような処理済み細菌がＨＢＶ及びＨＩＶの既存ウイルス感染症双方を阻害できることを裏付ける。さらに、標準ケア（例えば、ＨＢＶのエンテカビル）と比べると、処理済み細菌は、初期的阻害効果が見られるのに時間がより長くかかるとしても、治療中断後長期にわたり持続可能で有意な阻害効果を示した。さらに興味深いことに、ＮＳＡＩＤｓ（例えば、インドメタシン）単独での治療が観測可能な抗ウイルス効果を示さなかったとしても、ＮＳＡＩＤとの組合せは処理済み細菌の有効性を相乗効果で向上させることができる。

したがって、一実施形態において、本開示は治療を必要とする患者の感染症を治療する方法を提供し、この方法は、無傷かつほぼ生き残れない（生存不能な）グラム陰性の細菌性細胞であって、リポ多糖類（ＬＰＳ）随伴内毒素活性が少なくとも７５％低減した結果となるよう処理してある、該細菌性細胞を複数含む組成物の有効量を前記患者に投与するステップを備える。

他の実施形態において、本開示はそれを必要とする被験体の感染症を予防する方法を提供し、この方法は、無傷かつほぼ生き残れないグラム陰性の細菌性細胞であって、リポ多糖類（ＬＰＳ）随伴内毒素活性及び病原体由来又は病原体関連の抗原が少なくとも９０％低減した結果となるよう処理してある、該細菌性細胞を複数含む組成物の有効量を前記被験体に投与するステップを備える。

一実施形態において、本開示はそれを必要とする患者の感染症を予防又は治療する方法を提供する。この方法は、無傷かつほぼ生き残れないグラム陰性の細菌性細胞であって、リポ多糖類（ＬＰＳ）随伴内毒素活性（活性ＬＰＳ）が、リムルス変形細胞溶解物（ＬＡＬ）検定によって測定されるとき、未処理野生型グラム陰性の細菌性細胞に比べて約７５％〜９９％低減した結果となるよう処理してある、該細菌性細胞を複数含む組成物の有効量を前記患者に投与するステップを備える。

幾つかの実施形態において、組成物は、患者の体重１ｋｇあたり約０.０１〜１００ｎｇの活性ＬＰＳを含有する。幾つかの実施形態において、組成物は患者の体重１ｋｇあたり約０.０２〜２０ｎｇの活性ＬＰＳを含有する。幾つかの実施形態において、組成物は患者の体重１ｋｇあたり約０.１〜１０ｎｇの活性ＬＰＳを含有する。

幾つかの実施形態において、組成物は、１×１０^８個の細胞あたり約２〜２００ｎｇの活性ＬＰＳを含有する。幾つかの実施形態において、組成物は１×１０^８個の細胞あたり約１０〜１２０ｎｇの活性ＬＰＳを含有する。幾つかの実施形態において、組成物は１×１０^８個の細胞あたり約２０〜１００ｎｇの活性ＬＰＳを含有する。

幾つかの実施形態において、無傷かつほぼ生き残れないグラム陰性の細菌性細胞は、ＬＰＳ随伴内毒素が約８５％〜９８％低減した結果となるよう処理しておく。幾つかの実施形態において、無傷かつほぼ生き残れないグラム陰性の細菌性細胞は、ＬＰＳ随伴内毒素が約９０％〜９８％低減した結果となるよう処理しておく。

幾つかの実施形態において、感染症は、表Ａから選択されるウイルスのようなウイルス感染症とする。幾つかの実施形態において、ウイルス感染症はＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）又はヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）によるものとする。

さらに、一実施形態において、本開示は、無傷かつほぼ生き残れないグラム陰性の細菌性細胞であり、リポ多糖類（ＬＰＳ）随伴内毒素活性（活性ＬＰＳ）が、リムルス変形細胞溶解物（ＬＡＬ）検定によって測定されるとき、未処理野生型グラム陰性の細菌性細胞に比べて約７５％〜９９％低減した結果となるよう処理してある、該細菌性細胞を複数含む医薬剤形であって、総ＬＰＳ随伴内毒素活性が、約０.７ｎｇ〜７０００ｎｇの活性ＬＰＳに等しい、好適には、約７ｎｇ〜１４００ｎｇの活性ＬＰＳに等しい、該医薬剤形を提供する。

一実施形態において、治療用組成物、ワクチン、及びそれらにおける剤形を記載する。

図１Ａは、生体内ＨＢＶ ＤＮＡ産生阻害における、治療（処理）を施さないときのグラフを示す。図１Ｂは、生体内ＨＢＶ ＤＮＡ産生阻害における、エンテカビルの効果を示すグラフである。図１Ｃは、生体内ＨＢＶ ＤＮＡ産生阻害における、処理済み細菌（デコイ細菌）の効果を示すグラフである。図１Ｄは、生体内ＨＢＶ ＤＮＡ産生阻害における、エンテカビルとデコイ細菌との組合せの効果を示すグラフである。 エンテカビルなしでデコイ細菌が生体内ＨＢｅＡｇレベルを低減したことを示すグラフである。 図３Ａは、生体内ＨＢＶ ＤＮＡ産生阻害における、長期研究の結果を示すグラフである。図３Ｂは、生体内ＨＢＶ ＤＮＡ産生阻害における、長期研究の結果を示すグラフである。図３Ｃは、生体内ＨＢＶ ＤＮＡ産生阻害における、長期研究の結果を示すグラフである。図３Ｄは、生体内ＨＢＶ ＤＮＡ産生阻害における、長期研究の結果を示すグラフである。 図４Ａ〜４Ｄは、生体内ＨＢｓＡｇ発現阻害結果を示すグラフである。 図５Ａ〜図5Ｄは、生体内ＨＢｓＡｇ発現阻害結果を示すグラフである。 インドメタシン及びデコイ細菌（エンテカビル有り又は無し）の組合せが治療中止後２７週間のマウス肝臓におけるＨＢｓＡｇ発現を阻害したことを示すグラフである。 インドメタシン及びデコイ細菌（エンテカビル有り又は無し）の組合せが治療中止後２７週間のマウス肝臓におけるＨＢｃＡｇ発現の免疫組織化学的分析を示す。 インドメタシン及びデコイ細菌（エンテカビル有り又は無し）の組合せが治療中止後２７週間のマウス肝臓におけるＨＢｃＡｇ発現の免疫組織化学的分析を示す。 インドメタシン及びデコイ細菌（エンテカビル有り又は無し）の組合せが治療中止後２７週間のマウス肝臓におけるＨＢｃＡｇ発現の免疫組織化学的分析を示す。 インドメタシン及びデコイ細菌（エンテカビル有り又は無し）の組合せが治療中止後２７週間のマウス肝臓におけるＨＢｃＡｇ発現の免疫組織化学的分析を示す。 インドメタシン及びデコイ細菌（エンテカビル有り又は無し）の組合せが治療中止後２７週間のマウス肝臓におけるＨＢｃＡｇ発現の免疫組織化学的分析を示す。 インドメタシン及びデコイ細菌（エンテカビル有り又は無し）の組合せが治療中止後２７週間のマウス肝臓におけるＨＢｃＡｇ発現の免疫組織化学的分析を示す。 図８Ａ〜図8Ｃは、ＨＩＶに感染したヒト化マウスにおける、標準ケア治療又は処理済み細菌によるＨＩＶ血液レベルの阻害を示すグラフである。

以下の説明は本技術の例示的実施形態を記載する。しかし、このような説明は本開示の範囲を限定することは意図せず、その代わり例示的実施形態の説明として提示するものである。

本開示で使用される以下の単語、語句及び符号は、概して、それらが使用される文脈がそれ以外を示す程度を除いて、以下に述べる意味を有することを意図している。

免疫反応を刺激する組成物及び方法
本開示の実験例は、ＬＰＳ随伴内毒素を大幅に低減するよう処理した無傷かつほぼ生き残れないグラム陰性の細菌性細胞は、免疫細胞からのサイトカイン分泌を誘発する能力が驚くほど増大したことを実証している。したがって、このような処理済み細菌性細胞は、被験体の免疫反応を刺激する安全かつ有効な手段を提供するのに適している。免疫反応は、細菌性、真菌性、寄生虫による、又はウイルス性の感染症に対抗するものであり得る。

したがって、本開示の一実施形態によれば、それを必要とする被験体における免疫反応を刺激する方法を提供する。他の実施形態において、それを必要とする患者における感染症を予防又は治療する方法を提供する。他の実施形態において、それを必要とする患者における免疫不全を治療する方法を提供する。他の実施形態において、感染リスクがある被験体にワクチン接種する方法を提供する。

幾つかの実施形態において、本開示方法は、本明細書記載のような複数の処理済み細菌性細胞を含む組成物の有効量を被験体／患者に投与するステップを備える。幾つかの実施形態において、処理済み細菌性細胞は、リポ多糖類（ＬＰＳ）随伴内毒素活性及び／又は発熱性が低減するよう処理してある、無傷かつほぼ生き残れないグラム陰性の細菌性細胞である。

本開示方法が採用し得る細菌性生命体候補は、グラム陰性であり、野生型生命体のようなＬＰＳ随伴内毒素活性を有する生命体由来である。用語「グラム陰性細菌（Gram-negative bacteria）」は、グラム染色として知られている手順の一部である初期基礎染料（例えば、クリスタル・バイオレット）の染みを保持しない細菌に言及する。例示的グラム染色において、細胞は、先ず熱によってスライドに定着させ、基礎染料（例えば、クリスタル・バイオレット）で染み付けし、この染みはグラム陰性及びグラム陽性双方の細菌によって吸収される。次にこのスライドを媒染剤（例えば、グラム染色ヨウ素）で処理し、この媒染剤は、基礎染料（例えば、クリスタル・バイオレット）に結合し、またそれを細胞内に閉じ込める。この後、細胞をアセトン又はアルコールにより洗浄し、次いで異なる色（サフラニン）の第２染料により対比染色する。グラム陽性生命体は初期バイオレット染みを保持するが、グラム陰性生命体は洗浄有機溶剤によって脱色され、対比染色を示す。例示的グラム陰性細菌としては、限定しないが、エシェリキア属種、シゲラ属種、サルモネラ属種、カンピロバクター属種、ナイセリア属種、ヘモフィルス属種、アエロモナス属種、フランシセラ属種、エルシニア属種、クレブシエラ属種、ボルデテラ属種、レジオネラ属種、コリネバクテリウム属種、シトロバクター属種、クラミジア属種、ブルセラ属種、シュードモナス属種、ヘリコバクター属種、及びビブリオ属種がある。

グラム陰性生命体内で腸内細菌科が大きな科（ファミリー）をなし、この科としては、多くの無害共生生物とともに、多くの周知の病原体、例えば、サルモネラ菌、大腸菌、エルシニア属ペスト菌、クレブシエラ及び赤痢菌、プロテウス属、エンテロバクター属、セラチア属、及びシトロバクター属がある。腸内細菌科のメンバーは、数種類のメンバーが動物の腸内で生きているため腸内細菌と称されてきた。

一実施形態において、大腸菌は生命体として選択される。１つの特定菌株としては、大腸菌株2617-143-312, (Migula) Castellani and Chalmers (ATCC（登録商標）13070（商標）)が考慮される。使用し得る付加的大腸菌株としては、MG1655 (ATCC（登録商標）47076) and KY8284 (ATCC（登録商標）（登録商標）21272)がある。

本開示方法に使用されるグラム陰性生命体は、生命体の野生型形態とは異なるＤＮＡを含む又は発現する組み換え型生命体である必要はない。しかし、幾つかの実施形態において、生命体は、例えば、病原体抗原又は免疫刺激タンパク質を含む幾つかの非天然分子を発現するよう修飾することができる。

用語「リポ多糖類（ＬＰＳ：Lipopolysaccharide）」は、共有結合によって結合された脂質及び多糖類（糖リン脂質：glycophospholipid）から成る巨大分子に言及する。ＬＰＳは、３つの部分、すなわち、1) Ｏ抗原、2) コアオリゴ糖、及び3) リピドＡを含む。Ｏ抗原は、コアオリゴ糖に付着した反復グリカン重合体であり、ＬＰＳ分子の最外側域（ドメイン）をなす。コアオリゴ糖は、直接的にリピドＡに付着し、また、ヘプトース及び3-デオキシ-Ｄ-マンノオクツロソン酸塩（ＫＤＯ, keto-deoxyoctulosonateとしてもしられている）のような糖類を一般的に含む。リピドＡは、多様な脂肪酸に結び付くリン酸化したグルコサミン・二糖類である。脂肪酸は、ＬＰＳを細菌外膜内にしっかりと固定し、またＬＰＳの残りの部分を細胞表面から突出させる。

内毒素活性は、ＬＰＳのリピドＡ域部分に存在し、またしたがって、「ＬＰＳ随伴内毒素活性（LPS-associated endotoxin activity）」とも称される。細菌性細胞が免疫系によって溶解されるとき、ＬＰＳ及びリピドＡを含む膜断片（フラグメント）が血液循環内に放出され、このことは、熱（発熱性）及び潜在的に致命的であるショック（いわゆる内毒素性又は敗血症性ショック）を生ぜしめる。ＬＰＳの毒性は、リピドＡの哺乳類免疫系の細胞に対する相互作用、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ-α）及びインターロイキン-１β（ＩＬ-１β）を含む炎症性サイトカイン分泌に至るプロセスにより発現し、このことは、宿主の致命的結果をもたらすことがあり得る。

ＬＰＳ随伴内毒素活性は、例えば、カブトガニからの血液を利用する検定であって、極めて低レベルのＬＰＳを検出することができるリムルス変形細胞溶解物（ＬＡＬ）検定を含む、従来周知の方法によって測定することができる。内毒素活性の存在は、結果として、酵素カスケードによる増幅に起因するカブトガニ血液溶解物の凝固を生ずる。ゲル凝結、濁度測定法、及びＬＡＬ検定の発色形態が市場で入手可能である。

酵素結合免疫吸着剤検定をベースとする内毒素活性検定は、例えば、独国ミュンヘンのヒグロス社からのＥｎｄｏＬＩＳＡ（登録商標）が知られている。この検定は、固相に付着してＬＰＳを捕捉するＬＰＳ特異的ファージ・タンパク質を採用し、また洗浄ステップに続いて、ＬＰＳの存在を組み換え因子Ｃを添加することによって決定し、この因子Ｃは、ＬＰＳによって活性化されるとき、後に蛍光を発する化合物開裂を行う。リムルス変形細胞溶解物に存在する因子Ｃは、通常酵素前駆体として存在し、またＬＡＬ試験で生ずる凝固カスケードのプライマーである。

発熱性は、被験体に熱を生ぜしめる作用因子の能力に言及する。発熱性は、静脈内投与したＴＬＲアゴニスト、生命体又はその誘導体に反応するウサギにおける直腸温として測定することができる。

種々の方法がグラム陰性生命体の内毒素活性及び／又は発熱性を低減させるのに利用可能である。これら方法としては、ＬＰＳに結合する又はその形成を破壊する作用因子による生命体処理がある。

一実施形態において、内毒素活性又は発熱性の低減は、内毒素を不活化する抗生物質で細菌性生命体を処理することによって達成する。このような適当な抗生物質は、ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥを含むポリミキシンである。抗生物質の量及び処理条件の決定は当業者の技能範囲内である。一実施形態において、ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥのいずれかのポリミキシンは、１ミリリットルあたり約３マイクログラム〜５,０００マイクログラムの濃度を採用することができる。他の実施形態において、ポリミキシンの濃度は、１ミリリットルあたり約２００マイクログラム〜５,０００マイクログラムとすることができる。一実施形態において、抗生物質は、１０分〜４時間又は約３０分〜約３時間にわたり細菌に供給する。

一実施形態において、細菌は、ＭｇＣｌ_２の形態におけるマグネシウム（Ｍｇ）の存在下で成長する。一実施形態において、細菌は、ＭｇＣｌ_２存在下、並びに細菌の無欠性を維持するのに適当な温度にある、ポリミキシンにより処理する。一実施形態において、成長媒体内におけるＭｇＣｌ_２濃度は、約０.５ｍＭ〜約５.０ｍＭ、又は約２ｍＭであり、処理媒体内におけるＭｇＣｌ_２濃度は、約５ｍＭ〜約３０ｍＭ、又は約２０ｍＭである。一実施形態において、処理媒体温度は、約２°Ｃ〜約１０°Ｃ、又は約４°Ｃである。細菌無欠性は、３,０００×ｇの遠心分離を１０分間にわたり行った後の十分規定されたペレットでの回収効率によって、またグラム染色での電子顕微鏡又は光学顕微鏡によって決定される。好適な実施形態において、処理及び洗浄後の細菌回収は、約８０％より多く、また細菌は光学又は電子顕微鏡によって無傷に見える。

他の実施形態において、内毒素活性の低減は、ＫＤＯ２-リピドＩＶ_Ａの生合成を破壊することが知られている抗生物質により細菌性生命体を処理することによって達成される。例えば、ゴールドマン氏らの非特許文献（J Bacteriol. 170(5):2185-91, 1988）は、抗菌剤IIIを含む抗菌剤について記載しており、この抗菌剤IIIは、とくに、ＣＴＰ：ＣＭＰ-3-デオキシ-Ｄ-マンノオクツロソン酸塩シチジリルトランスフェラーゼ活性を阻害し、また3-デオキシ-Ｄ-マンノオクツロソン酸塩（ＫＤＯ）をグラム陰性生命体のＬＰＳ内に取り込むのを遮断するのに有用である。ＬＰＳ合成が止むとき、細菌成長は止まる。ＬＰＳ前駆体種のリピドＩＶ_Ａに対するＫＤＯ添加は、ネズミチフス菌及び大腸菌の双方におけるリピドＡ-ＫＤＯ形成の大きな経路である。一実施形態において、抗生物質は抗菌剤IIIであり、またグラム陰性細菌は、適量、例えば１ミリリットルあたり５マイクログラム〜１ミリリットルあたり５００マイクログラムの量で、適当な時間、例えば２〜８時間にわたり処理する。

同様に、化合物α-Ｃ-(1,5-無水-7-アミノ-2,7-ジデオキシ-Ｄ-マンノ-ヘプトピラノシル)- カルボン酸塩が、3-デオキシ-Ｄ-マンノオクツロソン酸塩シチジリルトランスフェラーゼ（ＣＭＰ-ＫＤＯ合成酵素）、ＬＰＳ内への取り込みのために3-デオキシ-Ｄ-マンノオクツロソン酸塩（ＫＤＯ）を活性化する細胞質酵素を阻害することが知られている（Nature. 1987 10-16;329(6135):162-4）。したがって、生命体をその化合物で処理することは、同様にＬＰＳ随伴内毒素活性を低減できる。

他の実施形態において、内毒素活性低減は生命体をＬＰＳ阻害剤で処理することによって達成される。例えば、細菌性環状リポペプチドサーファクチンはリピドＡに結合してその活性を抑制することが示された（J Antibiot 2006 59(1):35-43）。

ＬＰＳ随伴内毒素活性に加えて、グラム陰性生命体の様々な他の構成要素も発熱性及び敗血性ショックを誘発又は関与することができ、これら他の構成要素としては、外膜タンパク質、采毛、線毛、リポペプチド、及びリポタンパク質があり得る（Jones, M., Int. J. Pharm. Compd., 5(4):259-263, 2001参照）。発熱性は、推定発熱性物質の静脈内投与後に直腸温度評価を含む従来周知のラビット法によって測定することができる。

グラム陰性生命体をポリミキシンＢ及びグルタルアルデヒドの組合せで処理することが、ラビット法で測定したとき３０倍の発熱性低減を生ずることが分かった。一実施形態において、１ミリリットルあたり１,０００マイクログラム（μｇ／ｍＬ）のポリミキシンＢ及び１％グルタルアルデヒドを採用してラビット法で測定したとき３０倍の発熱性低減を生じた。発熱性は、ＬＰＳに対するポリミキシンＢ反応と、ＬＰＳ及び他の細菌性構成要素に対するグルタルアルデヒドの反応性との組合せにより低減される。グルタルアルデヒドは、この設定で細菌を致死化させることによっても２重の役目を果たす。

したがって、一実施形態において、グラム陰性細菌性微生物を、１,０００μｇ／ｍＬのポリミキシンＢ及び１％グルタルアルデヒドの組合せで処理することによって、該グラム陰性細菌性微生物の内毒素活性及び発熱性を低減し、また致死化する方法を提供する。他の実施形態において、グラム陰性細菌は、約３μｇ／ｍＬ〜約１,０００μｇ／ｍＬの間における用量のポリミキシンＢ、及び約０.１％〜約１.０％の間における用量のグルタルアルデヒドの組合せで処理する。別の実施形態において、ポリミキシンＢの用量範囲は約１００μｇ／ｍＬ〜約１,０００μｇ／ｍＬの間であり、またグルタルアルデヒドの用量範囲は約０.５％〜約１.０％の間である。さらに、グラム陰性細菌は、例えば、約１,０００μｇ／ｍＬ〜約３,０００μｇ／ｍＬの間におけるポリミキシンＢの用量範囲で処理することができ、またグルタルアルデヒドは約０.５％〜約１.０％の間における用量範囲にする。他の態様においてグラム陰性細菌は、例えば、約３,０００μｇ／ｍＬ〜約５,０００μｇ／ｍＬの間におけるポリミキシンＢの用量範囲で処理することができ、またグルタルアルデヒドは約０.５％〜約２.０％の間における用量範囲にする。

幾つかの実施形態において、無傷かつほぼ生き残れないグラム陰性の細菌性細胞は、未処理の野生型細菌と比べて、ＬＰＳ随伴内毒素活性が（例えば、ＬＡＬ検定で測定したとき）少なくとも約７０％低減している。幾つかの実施形態において、この低減は、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９.５％、９９.９％、９９.９５％又は９９.９８％である。幾つかの実施形態において、この低減は、約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９.５％、９９.９％、９９.９５％、９９.９８％又は９９.９９％より大きくない。幾つかの実施形態において、この低減は、制限なく、約７０％〜約９９.９９％、約８０％〜約９９.９９％、約９０％〜約９９.５％若しくは９９％、約９１％〜約９９％、約９２％〜約９８％、約９３％〜約９７％、約９４％〜約９６％、約９４.５％〜約９５.５％、約９４％〜約９７％、約９５％〜約９８％、約９６％〜約９９％、約９７％〜約９９.５％、約９８％〜約９９.９％にわたる。

幾つかの実施形態において、若干の残留活性ＬＰＳレベルは好ましくある。例えば、幾つかの実施形態において、本開示の組成において、１×１０^８個の細胞あたり約１〜２００ｎｇ活性ＬＰＳが存在する。幾つかの実施形態において、１×１０^８個の細胞あたり約２〜２００ｎｇ、約５〜１５０ｎｇ、約５〜１２０ｎｇ、約１０〜１２０ｎｇ、約２０〜１００ｎｇ、約２０〜５０ｎｇ、約１０〜５０ｎｇの活性ＬＰＳが存在する。

幾つかの実施形態において、無傷かつほぼ生き残れないグラム陰性の細菌性細胞は、未処理の野生型細菌と比べて、発熱性が少なくとも約７０％低減している。幾つかの実施形態において、この低減は、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９.５％、９９.９％、９９.９５％又は９９.９８％である。幾つかの実施形態において、この低減は、約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９.５％、９９.９％、９９.９５％、９９.９８％又は９９.９９％より大きくない。幾つかの実施形態において、この低減は、制限なく、約７０％〜約９９.９９％、約８０％〜約９９.９９％、約９０％〜約９９.５％若しくは９９％、約９１％〜約９９％、約９２％〜約９８％、約９３％〜約９７％、約９４％〜約９６％、約９４.５％〜約９５.５％、約９４％〜約９７％、約９５％〜約９８％、約９６％〜約９９％、約９７％〜約９９.５％、約９８％〜約９９.９％にわたる。

上述したように、ＬＰＳ随伴内毒素活性に加えて、グラム陰性生命体の様々な他の構成要素も発熱性を誘発又は関与することができ、これら他の構成要素としては、外膜タンパク質、采毛、線毛、リポペプチド、及びリポタンパク質があり得る。幾つかの実施形態において、無傷かつほぼ生き残れないグラム陰性の細菌性細胞は、発熱性低減がＬＰＳ随伴内毒素活性及び非ＬＰＳ随伴発熱性双方における低減、例えば、外膜タンパク質、采毛、線毛、リポペプチド、及びリポタンパク質の不活化、除去又は遮断によって達成されるよう処理する。幾つかの実施形態において、非ＬＰＳ随伴発熱性の低減は、少なくとも約５０％、約６０％、約７０％、約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９.５％、９９.９％、９９.９５％又は９９.９８％である。幾つかの実施形態において、この低減は、約６０％、約７０％、約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９.５％、９９.９％、９９.９５％、９９.９８％又は９９.９９％より大きくない。

本開示方法による投与対象の細菌は、投与前又は投与時のいずれかで生き残れない若しくはほぼ生き残れないようにされる、又は生き残れないようになる。「生き残れない（non-viable）」が意味するのは、生命体が外因性要素で処理することによって致死化する、及び／又は生命体の哺乳類宿主内で生き延びる能力の不能化を招く結果となる突然変異株を含むことである。ほぼ生き残れない細菌は、その生存能力が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、又はそれ以上低減している菌株である。

細菌は、ポリミキシンのような化合物で処理することにより、生き残れないようにすることができる。ポリミキシンはＬＰＳに結合し、細菌分裂のような膜無欠性に干渉し、細胞外皮の透過上昇の結果として生存能力が低下することになる。この方法により生存能力が低下する場合、細胞溶解を防止し、かつ細胞を無傷に維持するステップをとることが必要となる。他のアプローチは、成長中に抑制され、次に突然変異株を活性化しかつＬＰＳ生合成を破壊する非許容条件に転換するようＬＰＳ生合成経路で条件付けされた突然変異株を有する細菌株を成長させることである。各場合において、適用する手順は、各設定において、重要な細菌性細胞無欠性を保持した状態で生存能力がほぼ失われるように、処理の最適時間又は化合物の用量を決定することによって細菌を生き残れなくすることである。生存能力の無さがが１００％未満である場合、哺乳類宿主内で生存可能な細菌の更なる増殖を防止する突然変異株（例えば、以下の非特許文献に記載のようなジアミノピメリン酸栄養要求株；Bukhari and Taylor, J. Bacteriol. 105(3):844-854, 1971 and Curtiss et al., Immunol. Invest. 18(1-4):583-596, 1989）を含む細菌を使用することができる。

疾患及び病態
本明細書に開示される無傷かつほぼ生き残れないグラム陰性の細菌性細胞は、被験体の免疫系を強化するのに有用であり、また改善された免疫反応により疾患及び病態を防止又は治療するのに有用である。本明細書に開示される無傷かつほぼ生き残れないグラム陰性の細菌性細胞は、このような疾患又は病態を発症するリスクのある被験体に対するワクチン又は免疫学的アジュバントとして使用することもできる。

「治療（treatment）」又は「治療すること（treating）」は、臨床的結果を含む有益又は望ましい結果を得るためのアプローチである。有益又は望ましい臨床的結果としては以下のもの、すなわち、a) 疾患又は病態を阻害する（例えば、疾患又は病態から生ずる１つ又はそれ以上の症状を減退させる、及び／又は疾患又は病態の程度を減少させる）、b) 疾患又は病態に関連する１つ又はそれ以上の臨床的症状の発症を緩やかにする又は停滞させる（例えば、疾患又は病態を安定化する、疾患又は病態の悪化若しくは進行を予防若しくは遅延化する、及び／又は疾患又は病態の拡散（例えば、転移）を予防若しくは遅延化する）、及び／又はc) 疾患を軽減する、すなわち、臨床的症状を退行させる（例えば、疾患状態を改善させる、疾患又は病態の部分的若しくは全体的な寛解をさせる、他の薬剤の効果を高める、疾患の進行を遅延化する、生活の質を向上させる、及び／又は延命を長くする）ことのうち、１つ又はそれ以上がある。

「予防（Prevention）」又は「予防すること（preventing）」は、疾患又は病態の臨床的症状を発症させない疾患又は病態の任意な治療を意味する。細菌性細胞は、一実施形態において、リスクがある、又は疾患若しくは病態の家族歴を有する被験体（人間を含む）に投与することができる。

「被験体（Subject）」は、治療、観察若しくは実験の対象物であった又はである哺乳類（ヒトを含む）のような動物に言及する。本明細書記載の方法は、人間療法及び／又は獣医学的用途に有用であり得る。幾つかの実施形態においては、被験体は、人間、犬、猫、牛、ヒツジ、等々のような哺乳類である。一実施形態において、被験体は人間である。

幾つかの実施形態において、治療すべき疾患又は病態は感染性疾患である。幾つかの実施形態において、感染症は、細菌、菌類、寄生虫又はウイルスによって引き起こされる。とくに、本明細書に開示される細菌性細胞は、以下の表Ａに挙げたウイルスによって引き起こされるようなウイルス感染症を、随意的に抗感染症薬とともに治療する上で比類なく好適なものであり得る。

幾つかの実施形態において、治療される疾患はＨＢＶ感染症である。幾つかの実施形態において、治療される疾患はＨＩＶ感染症である。

用量及び時期
幾つかの実施形態において、被験体に投与される無傷かつほぼ生き残れないグラム陰性の細菌性細胞ＬＰＳ随伴内毒素活性レベルを決定することができる。一実施形態において、投与される組成物は、被験体の体重１ｋｇあたり約０.０１〜２００ｎｇの活性ＬＰＳを含む。

用語「活性ＬＰＳ（active LPS）」は、例えば、ＬＡＬ検定で測定するとき、標準ＬＰＳ調合に基づいて５〜９の内毒素単位（ＥＵ）が１ｎｇの活性ＬＰＳに等価であると見なされるＬＰＳ随伴内毒素活性を示すことができる組成物内のＬＰＳに言及する。組成物内における活性ＬＰＳの量は、その組成物と同一レベルのＬＰＳ随伴内毒素活性を示すことができる非阻害ＬＰＳの重量として記述することができる。

幾つかの実施形態において、投与される組成物（例えば、無傷かつほぼ生き残れないグラム陰性の細菌性細胞ＬＰＳ随伴内毒素活性を含む組成物）は、被験体の体重１ｋｇあたり約０.０１〜１５０ｎｇの活性ＬＰＳを含む。幾つかの実施形態において、投与される組成物は、被験体の体重１ｋｇあたり約０.０２〜１５０ｎｇ、約０.０２〜１００ｎｇ、約０.０５〜１００ｎｇ、約０.０５〜１００ｎｇ、約０.０５〜５０ｎｇ、約０.０５〜２０ｎｇ、約０.１〜２０ｎｇ、約０.１〜１０ｎｇ、約０.１〜５ｎｇ、約０.２〜１００ｎｇ、約０.２〜５０ｎｇ、約０.２〜２０ｎｇ、約０.２〜１０ｎｇ、約０.２〜５ｎｇ、約０.３〜９０ｎｇ、約０.４〜８０ｎｇ、約０.５〜７０ｎｇ、約０.６〜６０ｎｇ、約０.７〜５０ｎｇ、約０.８〜４０ｎｇ、約０.９〜３０ｎｇ、約１〜２０ｎｇ、約２〜１５ｎｇ、又は約３〜１２ｎｇ、の活性ＬＰＳを含む。

被験体に投与される活性ＬＰＳの量は、被験体及び疾患のタイプに基づいて変化し得る。マウス、ラット及び犬のような若干の動物は、より多い量（例えば、ヒト及びうさぎに比べて２５０〜５００倍）の活性ＬＰＳを活用することができる。したがって、幾つかの実施形態において、投与される組成物は、被験体の体重１ｋｇあたり約１０〜１０,０００ｎｇの活性ＬＰＳを含む。幾つかの実施形態において、投与される組成物は、被験体の体重１ｋｇあたり約２０〜５０,０００ｎｇ、約３０〜４０,０００ｎｇ、約４０〜３０,０００ｎｇ、約５０〜２０,０００ｎｇ、約０.７〜１０,０００ｎｇ、約８０〜８,０００ｎｇ、約９０〜７,０００ｎｇ、約１００〜６,０００ｎｇ、約２００〜５,０００ｎｇ、又は約５００〜５０００ｎｇ、の活性ＬＰＳを含む。

被験体に投与される細菌性細胞の数値は、細菌性細胞の必要とされる活性ＬＰＳの量及び内毒素活性レベルに基づいて決定することができる。数値は、年齢、体重、総体的健康状態、性別、食事療法、投与時間、投与ルート、排泄率、薬剤の組合せ、被験体が受けている療法における特定疾患の重篤度にも依存し得る。例えば、用量は、被験体の体重のキログラムあたりの本明細書記載の細菌性細胞の数量（ｍｇ／ｋｇ）として表現することができる。約１０,０００〜１００,０００,０００個の細胞／ｋｇにおける用量が適切であり得る。幾つかの実施形態において、約１００,０００〜１０,０００,０００個の細胞／ｋｇが適切であり得る。他の実施形態において、約１,０００,０００〜５,０００,０００個の細胞／ｋｇの用量が適切であり得る。正規化は、平方メートル（ｍ^２）単位で表現される体表面積に基づいて行うこともできる。約１０,０００〜１００,０００,０００個の細胞／ｍ^２が適切であり得る。幾つかの実施形態において、約１００,０００〜１０,０００,０００個の細胞／ｍ^２が適切であり得る。他の実施形態において、約１,０００,０００〜５,０００,０００個の細胞／ｍ^２の用量が適切であり得る。被験体の体重による正規化は、とくに、幅広く異なるサイズの被験体間で用量を調整するとき、例えば、人間の子供と大人の双方に使用するとき、又は犬のような非ヒトに有効な用量を人間被験体に適当な用量に変換するときに、とくに有用である。

細菌性細胞は、疾患又は病態が診断された後に投与されるのが一般的である。幾つかの実施形態において、投与は、感染してから２４時間以内、又は感染後の２日以内、３日以内、４日以内、５日以内、６日以内若しくは７日以内に開始する。幾つかの実施形態において、投与は、感染してから少なくとも２４時間後、又は感染してから少なくとも２日後、３日後、４日後、５日後、６日後若しくは７日後に開始する。幾つかの実施形態において、投与は、感染前又は後の任意な時点で開始し、また必要とされるときに実施することができる。

投与は、実際の感染後に開始する、又は予防ワクチン又は予防として感染が診断される前に開始することもできる。

併用療法
一実施形態において、本明細書記載の細菌性細胞は、感染症治療のために使用及び／又は開発されている１つ又はそれ以上の追加的治療薬との組合せで使用することができる。

幾つかの実施形態において、１つ又はそれ以上の追加的治療薬は、ＮＳＡＩＤＳのようなシクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）酵素の阻害剤とすることができ、６ＭＮＡ、アスピリン、カルプロフェン、ジクロフェナク、フェノプロフェン、フルフェナメート、フルビプロフェン、イブプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、ケトロラク、メクロフェナメート、メフェナム酸、ナプロキセン、ニフルム酸、ピロキシカム、硫化スリンダク、スプロフェン、テニダップ、トルメチン、トモキシプロル、ゾメピラク、セレクソシブ、エトドラク、メロキシカム、ニメスリド、フルオロリン酸ジイソプロピル、Ｌ７４５,３３７、ＮＳ３９８、ロフェコキシブ、ＳＣ５８１２５、Ｓ-アミノサリチル酸、アンピロン、ジフルニサル、ナブメトン、パラセタモール、レスベラトロル、サリシン、サリチルアルデヒド、サリチル酸ナトリウム、スルファサラジン、スリンダク、タモキシフェン、チクロピジン、及びサリチル酸バレリルがある。

幾つかの実施形態において、１つ又はそれ以上の追加的治療薬は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ及びＩＣＯＳのような刺激性免疫チェックポイントのアゴニスト、又はＡ２ＡＲ、Ｂ７-Ｈ３、Ｂ７-Ｈ４、ＣＴＬＡ-４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ-１、ＰＤ-Ｌ１、ＴＩＭ-３及びＶＩＳＴＡのような抑制性免疫チェックポイントのアゴニストとすることができる。

１つ又はそれ以上の追加的治療薬の非限定的な例としては、さらに、アバカビル、アシクロビル、アデフォビル、アマンタジン、アムプレナビル、アムプリゲン、アルビドール、アタザナビル、アトリプラ、バラビル、シドフォビル、コンビビル、ドルテグラビル、ダルナビル、デラビルジン、ジダノシン、ドコサノール、エドクスジン、エファビレンツ、エムトリシタビン、エンフビルチド、エンテカビル、エコリーベル、ファムシクロビル、ホミビルセン、フォスアンプレナビル、フォスカネット、フォスフォネット、ガンシクロビル、イバシタビン、イムノビル、ドクスウリジン、イミキモド、インジナビル、イノシン、インテグラーゼ阻害剤、III型インターフェロン、II型インターフェロン、I型インターフェロン、インターフェロン、ラミブジン、ロピナビル、ロビライド、マラビロク、モロキシジン、メチサゾン、ネルフィナビル、ネビラピン、ネクサビル、ニタゾクサナイド、ヌクレオシド類似体、ノービア、オセルタミビル（タミフル(登録商標)）、ペグインターフェロンα-２ａ、ペンシクロビル、ペラミビル、プレコナリル、ポドフィロトキシン、プロテアーゼ阻害剤、ラルテグラビル、リバビリン、リマンタジン、リトナビル、ピラミジン、サキナビル、ソフォスブビル、スタブジン、テラプレビル、テノホビル、テノホビルジソプロキシル、チプラナビル、トリフルリジン、トリジビル、トロマンタジン、ツルバダ、バラシクロビル、バルガンシクロビル、ビクリビロク、ビダラビン、ビラミジン、ザルシタビン、ザナミビル、及びジドブジンがある。

一実施形態において、追加的治療薬はインターフェロンαである。

幾つかの実施形態において、グラム陰性生命体はポリヌクレオチドを含み、このポリヌクレオチドは、ウイルス特異的抗原又は免疫系刺激タンパク質のような非細菌性タンパク質のためにコード化する。幾つかの実施形態において、グラム陰性生命体は、グラム陽性生命体又は他の病原体を含む同一又は異なる細菌性生命体由来であり得る細菌性抗原のためにコード化するポリヌクレオチドを含む。本明細書に使用する抗原は、抗体又は免疫細胞のいずれかによる免疫反応で認識できる任意な分子である。

医薬組成物、剤形及び投与モード
疾患又は病態の治療に適している種々の組成物を本開示に記載してきた。一実施形態において、無傷かつほぼ生き残れないグラム陰性の細菌性細胞であって、リポ多糖類（ＬＰＳ）随伴内毒素活性が、リムルス変形細胞溶解物（ＬＡＬ）検定によって測定されるとき、未処理野生型グラム陰性の細菌性細胞に比べて約９０％〜９９％低減し、総ＬＰＳ随伴内毒素活性が、約０.７ｎｇ〜７,０００ｎｇの活性ＬＰＳ、約７ｎｇ〜７,０００ｎｇの活性ＬＰＳ、約７ｎｇ〜１４００ｎｇの活性ＬＰＳ、又は約７０ｎｇ〜１４００ｎｇの活性ＬＰＳに等しい結果となるよう処理してある、該細菌性細胞を複数含む組成物又は剤形を提供する。

組成物は、アジュバント又は生物反応修飾物質として使用することができる。本開示に使用される用語「アジュバント（adjuvant）」「生物反応修飾物質（biological response modifier）」は、抗原に対する免疫反応を高める任意な物質に言及する。したがって、アジュバント又は生物反応修飾物質は、外来（異種）抗原、又は病原性若しくは疾患随伴生命体に対してより一層活発に反応するよう免疫系を刺激するのに使用される。しかし、幾つかの実施形態において、例えば、ウイルス性タンパク質又はサイトカイン又はケモカインのようなヒト免疫活性化タンパク質を発現する組み換え型のグラム陰性細菌は、本開示方法における使用は考えていない。他の実施形態において、サイトカイン又はケモカインのような精製した免疫活性化タンパク質は、投与前にグラム陰性生命体に混合する、又はグラム陰性生命体よりも前若しくは後に投与する。

幾つかの実施形態において、剤形内における無傷かつほぼ生き残れないグラム陰性の細菌性細胞は、未処理の野生型細菌と比べて、ＬＰＳ随伴内毒素活性が（例えば、ＬＡＬ検定で測定したとき）少なくとも約７０％低減している。幾つかの実施形態において、この低減は、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９.５％、９９.９％、９９.９５％又は９９.９８％である。幾つかの実施形態において、この低減は、約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９.５％、９９.９％、９９.９５％、９９.９８％又は９９.９９％より大きくない。幾つかの実施形態において、この低減は、制限なく、約７０％〜約９９.９９％、約８０％〜約９９.９９％、約９０％〜約９９.５％若しくは９９％、約９１％〜約９９％、約９２％〜約９８％、約９３％〜約９７％、約９４％〜約９６％、約９４.５％〜約９５.５％、約９４％〜約９７％、約９５％〜約９８％、約９６％〜約９９％、約９７％〜約９９.５％、約９８％〜約９９.９％にわたる。

幾つかの実施形態において、剤形内における無傷かつほぼ生き残れないグラム陰性の細菌性細胞は、未処理の野生型細菌と比べて、発熱性が（例えば、生体内で測定したとき）少なくとも約７０％低減している。幾つかの実施形態において、この低減は、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９.５％、９９.９％、９９.９５％又は９９.９８％である。幾つかの実施形態において、この低減は、約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９.５％、９９.９％、９９.９５％、９９.９８％又は９９.９９％より大きくない。幾つかの実施形態において、この低減は、制限なく、約７０％〜約９９.９９％、約８０％〜約９９.９９％、約９０％〜約９９.５％若しくは９９％、約９１％〜約９９％、約９２％〜約９８％、約９３％〜約９７％、約９４％〜約９６％、約９４.５％〜約９５.５％、約９４％〜約９７％、約９５％〜約９８％、約９６％〜約９９％、約９７％〜約９９.５％、約９８％〜約９９.９％にわたる。

幾つかの実施形態において、非ＬＰＳ随伴発熱性の低減は、少なくとも約５０％、約６０％、約７０％、約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９.５％、９９.９％、９９.９５％又は９９.９８％である。幾つかの実施形態において、この低減は、約６０％、約７０％、約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９.５％、９９.９％、９９.９５％、９９.９８％又は９９.９９％より大きくない。

幾つかの実施形態において、ほぼ生き残れない細菌は、その生存能力が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、又はそれ以上低減している。

幾つかの実施形態において、剤形はこのような細菌性細胞を約１０,０００〜約１×１０^８個含む。幾つかの実施形態において、剤形はこのような細菌性細胞を約１００,０００〜約１×１０^８個含む。幾つかの実施形態において、剤形はこのような細菌性細胞を約１０００,０００〜約１×１０^７個含む。幾つかの実施形態において、剤形はこのような細菌性細胞を約１×１０^６〜約１×１０^８個含む。

幾つかの実施形態において、組成物は、さらに第２治療／抗ウイルス薬を含む。幾つかの実施形態において、この第２治療薬はＮＳＡＩＤ（非ステロイド系抗炎症薬）である。幾つかの実施形態において、この第２治療薬は、好適には、６ＭＮＡ、アスピリン、カルプロフェン、ジクロフェナク、フェノプロフェン、フルフェナメート、フルビプロフェン、イブプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、ケトロラク、メクロフェナメート、メフェナム酸、ナプロキセン、ニフルム酸、ピロキシカム、硫化スリンダク、スプロフェン、テニダップ、トルメチン、トモキシプロル、ゾメピラク、セレクソシブ、エトドラク、メロキシカム、ニメスリド、フルオロリン酸ジイソプロピル、Ｌ７４５,３３７、ＮＳ３９８、ロフェコキシブ、ＳＣ５８１２５、Ｓ-アミノサリチル酸、アンピロン、ジフルニサル、ナブメトン、パラセタモール、レスベラトロル、サリシン、サリチルアルデヒド、サリチル酸ナトリウム、スルファサラジン、スリンダク、タモキシフェン、チクロピジン、サリチル酸バレリル及びそれらの組合せより成るグループから選択される、シクロオキシゲナーゼ阻害剤である。

幾つかの実施形態において、第２治療薬は、好適には、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ及びＩＣＯＳより成るグループから選択される、刺激性免疫チェックポイントのアゴニストである。幾つかの実施形態において、第２治療薬は、好適には、Ａ２ＡＲ、Ｂ７-Ｈ３、Ｂ７-Ｈ４、ＣＴＬＡ-４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ-１、ＰＤ-Ｌ１、ＴＩＭ-３及びＶＩＳＴＡより成るグループから選択される、抑制性免疫チェックポイントのアゴニストである。

幾つかの実施形態において、第２治療薬は、アバカビル、アシクロビル、アデフォビル、アマンタジン、アムプレナビル、アムプリゲン、アルビドール、アタザナビル、アトリプラ、バラビル、シドフォビル、コンビビル、ドルテグラビル、ダルナビル、デラビルジン、ジダノシン、ドコサノール、エドクスジン、エファビレンツ、エムトリシタビン、エンフビルチド、エンテカビル、エコリーベル、ファムシクロビル、ホミビルセン、フォスアンプレナビル、フォスカネット、ガンシクロビル、イバシタビン、イムノビル、ドクスウリジン、イミキモド、インジナビル、イノシン、インテグラーゼ阻害剤、III型インターフェロン、II型インターフェロン、I型インターフェロン、インターフェロン、ラミブジン、ロピナビル、ロビライド、マラビロク、モロキシジン、メチサゾン、ネルフィナビル、ネビラピン、ネクサビル、ニタゾクサナイド、ヌクレオシド類似体、ノービア、オセルタミビル（タミフル(登録商標)）、ペグインターフェロンアルファ-２ａ、ペンシクロビル、ペラミビル、プレコナリル、ポドフィロトキシン、プロテアーゼ阻害剤、ラルテグラビル、リバビリン、リマンタジン、リトナビル、ピラミジン、サキナビル、ソフォスブビル、スタブジン、テラプレビル、テノホビル、テノホビルジソプロキシル、チプラナビル、トリフルリジン、トリジビル、トロマンタジン、ツルバダ、バラシクロビル、バルガンシクロビル、ビクリビロク、ビダラビン、ビラミジン、ザルシタビン、ザナミビル、ジドブジン、及びそれらの組合せより成るグループから選択する。

幾つかの実施形態において、第２治療薬はインターフェロンαである。

本明細書記載の組成物は、本明細書記載の方法に使用するための様々なやり方で調製することができる。一実施形態において、組成物は、本明細書全体にわたり記載した生命体及び医薬的に容認可能な担体（キャリヤ）を有する。

「医薬的に容認可能な担体（Pharmaceutically acceptable carriers）」は、組成物に使用することができる任意な希釈剤、賦形剤、又は担体に言及する。医薬的に容認可能な担体としては、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミンのような血清タンパク質、リン酸塩のような緩衝物質、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和野菜脂肪酸の部分的グリセリド混合物、水、硫酸マグネシウムのような塩又は電解質、硫酸プロタミン、リン酸１水素２ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニル・ピロリドン、セルロースをベースとする物質、ポリエチレン・グリコール、カルボキシルメチル・セルロース・ナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン・ポリオキシプロピレン・ブロック重合体、ポリエチレン・グリコール、トレハロース及びマニトールのような低温保存物質、並びに羊毛脂がある。好適な医薬担体は、マック・パブリッシング社の「Remington's Pharmaceutical Sciences」におけるこの分野の標準参考テキストに記載されている。

組成物は、哺乳類動物、好適には、人間に医薬投与するよう調製される。本発明のこのような医薬組成物は、非経口を含めて様々なやり方で投与することができる。本明細書で使用される用語「非経口の（parenteral）」は、皮下内、静脈内、筋肉内、関節内、滑液嚢内、髄腔内、肝内、病巣内、及び頭蓋内における注射又は点滴技術を含む。

組成物の無菌注射可能剤形は、水性又は油性の懸濁液とすることができる。これら懸濁液は、適当な分散又は湿潤剤及び懸濁化剤を用いて従来既知の技術により調製することができる。無菌注射可能調合液は、さらに、例えば、1,3-ブタンジオールにおける溶液のような、非毒性で非経口的に容認可能な希釈液又は溶剤における無菌注射可能溶液又は懸濁液とすることもできる。採用することができる容認可能な媒剤（vehicles）及び溶剤は、水、リンガー溶液、及び生理食塩液である。それに加えて、無菌固定オイルが溶媒又は懸濁化媒体として都合よく採用される。この目的のために、合成モノ-又はジ-グリセリドを含む任意なブランドの固定オイルを採用することができる。オレイン酸及びそのグリセリド誘導体のような脂肪酸が、注射可能であり、とくに、オリーブ油又はヒマシ油のような天然で医薬的に容認可能な、とくにそれらのポリオキシエチル化されたバージョンにおけるオイルの調合に有用である。これらオイル溶液又は懸濁液は、さらに、カルボキシメチルセルロースのような長鎖アルコール希釈剤又は分散剤又はエマルション及び懸濁液を含む医薬的に容認可能剤形の調製に一般的に使用される同様の分散剤を含むことができる。医薬的に容認可能な固形、液体又は他の剤形の製造に一般的に使用されるトゥイーンズ（Tweens）、スパンズ（Spans）及び他の乳化剤又は生物学的に利用可能なエンハンサーのような、他の一般的に使用される界面活性剤も調製目的に使用することができる。組成物は、ボーラス注射又は連続的点滴によるような、非経口注入投与用に調製することができる。

医薬組成物は単独又は複数回投与のいずれかで投与することができる。医薬組成物は、例えば、直腸、口腔内、経鼻及び経皮によるルートを含む種々の方法によって投与することができる。若干の実施形態において、医薬組成物は、動脈内注射、静脈内、腹腔内、非経口的、筋肉内、又は皮下内注射によって投与することができる。

１つの投与モードは、例えば、注射による非経口のモードである。本明細書記載の医薬組成物を注射投与用に組み込むことができる剤形としては、例えば、水性若しくは油性懸濁液、又はゴマ油、コーン油、綿実油、若しくはピーナッツ油、並びにエリキシル剤、マンニトール、Ｄ形グルコースを含むエマルション、又は無菌水溶液、及び同様の医薬媒剤がある。

適当な賦形剤の幾つかの例としては、ラクトース、Ｄ形グルコース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、トレハロース、でんぷん、アカシア・ゴム、リン酸カルシウム、アルギン酸塩、トラガカント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶性セルロース、ポリビニル・ピロリドン、セルロース、無菌水、シロップ、及びメチルセルロースがある。調製は、付加的に、タルク、ステアリン酸マグネシウム、及び鉱油のような潤滑剤、湿潤剤、乳化及び懸濁剤、メチル及びプロピルヒドロキシ-安息香酸エステルのような保存剤、甘味剤、並びに香味剤がある。

以下の実施例は、本開示の特定実施形態を実証するのに含めている。当業者には当然のことながら、以下の実施例に開示される技術は、本開示の実施上に十分機能する技術を代表し、したがって、その実施の特定モードを構成すると見なすことができる。しかし、当業者であれば、本開示を考慮すると、開示した特定実施形態に多くの改変を行うことができ、また依然として同じ又は類似の結果が本開示の精神及び範囲から逸脱することなく得ることができると理解すべきである。

実施例１.全身投与される多重トール様受容体（ＴＬＲ）アゴニストの前臨床有効性に関する特性
この実施例は、非病原性のグラム陰性細菌の致死化及び安定化と同時に、ＬＰＳ活性の完全な排除をすることがない有意な低減が、点滴（i.v.）投与により抗腫瘍免疫反応を安全かつ効果的に誘発できるという仮説を検証した。

非病原性のグラム陰性大腸菌を、細胞を致死化させ及び安定化する条件の下でポリミキシンＢ及びグルタルアルデヒドにより処理し、ＬＰＳ内毒素活性及び発熱性に関して９０％より多い（＞９０％）低減を生じた（「デコイ細菌（Decoy bacteria）」又は単に「デコイ（Decoy）」とも称される「処理済み細菌（treated bacteria）」）。内毒素活性及び発熱性は、リムルス変形細胞溶解物及びインビボ（生体内）ラビット検定（アッセイ）を用いて定量化した。細菌の無欠性は、電子及び光学顕微鏡法によって評価した。抗腫瘍活性は、標準の同系及び異種移植腫瘍モデルを用いて決定した。

処理済み細菌は、未処理細菌に対して急性インビボ毒性に３倍低減を呈した。驚くべきことに、ネズミ科動物及びヒトの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣｓ）による抗腫瘍サイトカイン分泌の誘発は、未処理細菌と比べて、損なわれていなかった。処理済み細菌による治療（点滴）は、同所性ネズミ科動物結腸直腸がん及び転移性ネズミ科動物膵臓がんに対して、有意な単剤抗腫瘍活性を生じた。

確立した腫瘍の根絶を含む、１０倍にも達する治療指数を有する組合せによる相乗活性は、ネズミ科動物結腸直腸がんモデルにおけるＩＬ-２又は低用量シクロホスファミド（ＬＤＣ）と、皮下的（s.c.）ネズミ科動物非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）モデルにおけるＬＤＣと、及びs.c.ヒトＮＨＬモデルにおけるＬＤＣ＋リツキシマブとの組合せで観測された。相乗抗腫瘍活性は、さらに、ネズミ科動物転移性膵臓がんモデルにおける低用量の非ステロイド系抗炎症薬剤（ＮＳＡＩＤ）との組合せでも観測された。加えて、腫瘍根絶は、ＮＳＡＩＤとの組合せで観測され、またs.c.ネズミ科動物肝細胞がんモデルに抗ＰＤ１療法を追加することによって高められた。最適な（）腫瘍根絶は、ナチュラルキラー（ＮＫ）ＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞によって媒介されることが示された。その後における腫瘍抗原投与の拒絶反応によって決定される免疫記憶（８０〜１００％及び部分的）は、免疫適任セッティング及び先天性単独セッティングの双方でそれぞれ実証された。

実施例２.処理済み細菌によるサイトカイン分泌誘発
この実施例は、ヒト末梢血単核細胞からのサイトカイン分泌誘発における処理済み細菌の能力を試験した。

非病原性のグラム陰性大腸菌を、細胞を致死化させ及び安定化する条件の下でポリミキシンＢ及びグルタルアルデヒドにより処理し、ＬＰＳ内毒素活性及び発熱性に関して９０％より多い（＞９０％）低減を生じた（「処理済み細菌（treated bacteria）」、「デコイ細菌（Decoy bacteria）」又は単に「デコイ（Decoy）」）（実施例１及び米国特許第９,２６５,８０４号参照）。内毒素活性及び発熱性は、リムルス変形細胞溶解物及びインビボ（生体内）ラビット検定（アッセイ）を用いて定量化した。細菌の無欠性は、グラム染色後に光学顕微鏡によって評価した。

１０倍毎の１×１０〜１×１０^８個の未処理又は処理済みの細菌を、２.５ｍＭのグルタミン、１０％のヒト血清並びに１％のペニシリン及びストレプトマイシンを含むＲＰＭＩ培地内で３７°Ｃ、５％ＣＯ_２にして４８時間にわたり、２.５×１０^５個のヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣｓ）とともに培養した。１,０００ｒｐｍで１０分間にわたる遠心分離プレートによって上澄みを収穫し、また−８０°Ｃで保管した。サイトカインレベルのルミネックス（登録商標）検定を、ミリボア・ヒューマン・サイトカイン／ケモカイン・マグネット・ビードのパネルであるＨＣＹＴＯＭＡＧ-６０Ｋ及びＨＳＴＣＭＡＧ-２８ＳＫで実施した。サイトカインのレベルは、５ポイント非線形回帰分析を用いて標準曲線から補間し、その適合（fit）は、
fit = (A+((B-A)/(1+(((B-E)/(E-A))*((x/C)^D)))))
であった。補間データは、媒剤（vehicle）比較対照（control）又は非刺激比較対照に対して正規化し、また分析した。新鮮な正常末梢血の白血球除去輸血ピークからのＰＢＭＣｓを、フィコール階調度（Ficoll-Paque PLUS, Cat #17-144-02, density 1.077+/-0.001 g/mL from GE Healthcare Bio-Sciences, Pittsburgh, PA）を用いて単離した。細菌媒剤は、カルシウムがなくまた２ｍＭのＭｇＣｌ_２を含むリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）であった。

示された結果は、同一の未処理又は処理済み細菌用量を使用して各サイトカインに対して決定されたピークレベルである。処理済み細菌は、インビトロ（体外）リムルス変形細胞溶解物（ＬＡＬ）検定で測定した細菌毎ベースとして、未処理細菌と同程度である４.９４％のＬＰＳを含んでいた。

*示された結果は各サイトカインにつき決定されたピークレベルであり、これはＩＦＮ_γを除いて未処理及び処理済みの細菌を同一用量にして生じ、同一用量の処理済み細菌と比べると未処理細菌に関しては少ない用量でピークを示した。

処理済み細菌の活性は、少数のトール様受容体アゴニスト（ＴＬＲａ）及び単離したＬＰＳと比較した。実験はテーブル１に記載のようにして実施した。トール様受容体アゴニスト（ＴＬＲａ）は、InvivoGen（カリフォルニア州サンディエゴ）から取得し、また以下のような実験、すなわち、CpG ODN 2006 (#tlrl-2006, 0.005〜5ミクロモル, ポリ(I:C) (#tlrl-pic, 0.001〜100マイクログラム/mL), R848 (#tlrl-r848, 0.1〜100 マイクログラム/mL) and 大腸菌LPS (#tlrl-pb5lps, 10〜1x10⁶ ピコグラム/mL) で滴定した。ＴＬＲアゴニストのストックは、製造業者が推奨するように推奨溶解度限界に至るまで準備し、また結果は各ＴＬＲａ及び処理済み細菌に対して決定されたピークのサイトカインレベルである。この結果を以下のテーブル２に示す。

実施例３. 処理済み細菌によるウイルス感染症治療の動物試験
この実施例は、動物のウイルス感染症治療における処理済み細菌活性を調べるため実施例１及び２に示すように準備することができる処理済み細菌を試験する。

この実施例に採用したＢ型肝炎感染症動物モデルは、以下のモデル、すなわち、流体力学的注射モデル、ＦＶＢ／Ｎモデル、アデノウイルス送達モデル、アデノ随伴ウイルスモデル、ウッドチャック肝炎ウイルス感染症モデル、チンパンジーモデル、ツパイモデル、ＨＢＶ遺伝子組み換えマウスモデル、ＨＢＶ-トリメーラモデル及びヒト肝臓キメラモデルのうち任意な１つとすることができる。ＨＩＶ感染症の予防又は治療における処理済み細菌の活性を試験するため、適当なＨＩＶ動物モデルも使用することができる。

インビトロ（体外）リムルス変形細胞溶解物（ＬＡＬ）検定で異なる範囲において測定した処理済み細菌の調製物を、ウイルス感染した又はウイルス遺伝子発現した動物に投与する。幾つかの動物において、追加的免疫刺激又は抗ウイルス薬剤を併用療法として使用する。治療を受けていない動物及び他の免疫刺激又は抗ウイルス薬剤で治療した動物を比較対照（コントロール）として使用する。処理済み細菌はこれら動物モデルで効果的な抗ウイルス活性を示すことが考えられる。

実施例４. マウスにおけるＨＢＶ阻害
アデノ随伴ウイルス／Ｂ型肝炎ウイルス（ＡＡＶ／ＨＢＶ）は、複製可能なヒトＨＢＶゲノムを担持する組み換え型ＡＡＶである。遺伝子型８ＡＡＶの高い肝臓指向性を示す特徴を活用して、ヒトＨＢＶゲノムをマウスの肝細胞に効率的に送達することができる。免疫能力があるマウスのＡＡＶ／ＨＢＶによる感染は、ヒトＨＢＶウイルス粒子、ＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの血液内への放出が含まれる長期にわたりウイルス血症を発症する結果となるおそれがあり、これは、患者に慢性ＨＢＶ感染症に似た症状を呈する。このＡＡＶ／ＨＢＶモデルは、種々のタイプの抗-ＨＢＶ薬剤のインビボ（生体内）活性を評価するのに使用することができる。さらに、これは、免疫変調成分の評価における適切なモデルである（例えば、以下の非特許文献参考されたい：Huang et al., Int. J. Onc. v39 pp1511-1519, 2011）。

遺伝子Ｄ型であるｒＡＡＶ８-１.３ＨＢＶは、北京ファイブプラス・モレキュラー・メディシン・インスティテュート社から購入した（バッチ番号Ａ2018092406）。１×１０^１２ウイルスゲノム（v.g.）／ｍＬのストックウイルスを無菌リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）により５×１０^１１v.g.／ｍＬまで希釈し、また１×１０^１１v.g. ＡＡＶ／ＨＢＶを２００μＬ、投与開始前に３１日経過した生後５週間の雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスにつき注射した。

−１７日、−７日、及び−４日目における顎下腺抽出によりＫ２-ＥＤＴＡコーティングしたチューブに血液サンプル（約１００μＬ）を採取した。血漿採取のために、サンプルを７,０００ｇ（４°Ｃ）で１０分間遠心分離した。ｑＰＣＲによるＨＢＶ-ＤＮＡのレベル、酵素免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）によるＨＢｓ抗原（ＨＢｓＡｇ）及びＨＢｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）のレベルを決定するため、少なくとも４０μＬの血漿サンプルを準備した。残りの血漿サンプルは、ポストライフ検定のため、−８０°Ｃで保存した。ＨＢＶ ＤＮＡ、ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇの血漿レベル及び−１７日、−７日、及び−４日目における体重に基づいて、ウイルス感染レベルを等しくしたマウスを選択し、−１日目に各グループに５匹のマウスが含まれるようランダムに７グループに区分した。−４日目のＨＢＶ ＤＮＡ、ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇレベル及び体重を考慮して各グループ間に存在する有意な相違がないことを確実にするため、すべてのマウスを各グループに均等に分配した。

デコイ細菌は、実施例１及び米国特許第９,２６５,８０４号に記載したように、ＬＰＳ内毒素活性範囲が約２,０００〜６,０００の内毒素単位（ＥＵ）、１０^９個の致死細菌性細胞あたり約２５０〜７５０ｎｇのＬＰＳにより準備した。動物グループは、治療しないグループ、０〜３４日にわたり毎日０.００５ｍｇ／ｋｇのエンテカビル（ＥＴＶ）を経口（ｐ.ｏ.）で治療したグループ、１、２、８、９、１５、１６、２２、２３、２９、及び３０目にマウス１匹あたり２×１０^８個の致死細胞のデコイを尻尾の静脈ｉ.ｖ.投与したグループ、又はＥＴＶ及びデコイで治療したグループであった。上述したようにＨＢＶ-ＤＮＡ、ＨＢｓＡｇ、及びＨＢｅＡｇのために、血漿サンプルを週毎に採取しまた分析した。治療したグループからのマウスにおけるＨＢＶ-ＤＮＡ（複製）、ＨＢｓＡｇ、及びＨＢｅＡｇのレベルを、比較可能な各時点で不対ノンパラメトリックのマン-ホイットニー統計学的分析によって治療なしグループにおけるレベルと比較した。

図１は、標準ケア療法（ＥＴＶ）が投与開始の３日以内にＨＢＶ ＤＮＡ産生を有意に阻害し、毎日投与の２８日目（感染後５９日目）に５／５のマウスにおける血漿レベルを定量下限（１２０複製／μＬの血漿）まで低下させたことを実証している（図１Ｂ参照）。デコイもＨＢＶ ＤＮＡ産生を阻害し、週２回投与の２８日目（感染後５９日目）に３／５のマウスにおける血漿レベルを定量下限まで低下させた（図１Ｃ参照）。ＥＴＶ＋デコイによるＨＢＶ ＤＮＡ阻害は、ＥＴＶ単独のときに類似し、複合投与でのこの時点にいたるまで拮抗的相互作用がなかったことを実証している（図１Ｄ参照）。

ＥＴＶではＨＢｓＡｇ又はＨＢｅＡｇ産生の阻害は観察されなかった。しかし、デコイは投与の２８日目（感染後５９日目）にＨＢｅＡｇの産生を阻害することが分かった（図２参照）。

したがって、この実施例は、標準ケア（ＥＴＶ）と同様に、デコイ細菌はＨＢＶ複製を有意に阻害するが、ただしデコイ細菌は阻害活性を示すのに時間が長くかかり、このことは、デコイの作用メカニズムに関する免疫学的根拠と一致する。しかし、ＨＢＶ ＤＮＡ産生だけを阻害するＥＴＶとは異なり、デコイ細菌はＨＢｅ抗原の産生も阻害する利点を有する。

実施例５. 長期ＨＢＶ阻害
この実施例は、非ステロイド系抗炎症薬剤（ＮＳＡＩＤ）がデコイ細胞による抗ウイルス活性を高めるか、デコイの抗ウイルス活性が治療中断後に失われるか、またＥＴＶ、デコイ、及びＥＴＶ＋デコイの治療による潜在的毒性を決定するために行った。実験は、実施例４に記載したように実施し、ただしＡＡＶ／ＨＢＶウイルスは、投与開始に対して−２９日目に注射した。血漿におけるＨＢＶ-ＤＮＡ、ＨＢｓＡｇ、及びＨＢｅＡｇのレベルは、投与開始の０日目に対して−１５、−８、及び−１日目に決定し、またＥＴＶ投与は０.１ｍｇ／ｋｇに増加した。さらに、図３、４、５及び６に示したすべてのグループには、インドメタシン（ＮＳＡＩＤ）を毎日（飲料水内に１０μｇ／ｍＬ）投与した。投与は実施例４におけるように５週間にわたり実施し、ＨＢＶ-ＤＮＡ、ＨＢｓＡｇ、及びＨＢｅＡｇの血漿レベルは毎週決定し、並びに治療中断後２７週にわたり隔週で決定した。阻害活性は、治療したグループを各時点で、同一時点における比較対照（インドメタシン単独）グループに対して不対ノンパラメトリックのマン-ホイットニー統計学的分析によって比較することによって決定した。

終了の際に、各マウスからの肝臓を複数切片に分割し、収集と同時に液体窒素内に即座に冷凍し、また−８０°Ｃで保存した。肝臓切片はＨＢＶ ＤＮＡ検出のために使用し、各マウスからの追加的切片は１０％中性緩衝ホルマリン（ＮＢＦ）内に約２４時間定着させ、次に通常の脱水及びパラフィン包埋に移行した。パラフィンブロックは、ヘマトキシリン-エオシン（Ｈ＆Ｅ）染色及び病理学分析並びにＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの免疫組織化学（ＩＨＣ）分析のために切片化した。

図３Ａは、インドメタシン単独ではＨＢＶ ＤＮＡ産生を阻害しないことを実証している。図３（Ｂ、Ｃ及びＤ）は、インドメタシンがないときに観察された（図１参照）と同様に、ＥＴＶ、デコイ、又はＥＴＶ＋デコイは、インドメタシンの存在下でＨＢＶ ＤＮＡ産生を阻害したことを実証している。一日につき一過性の６％の体重減少がデコイ治療（±ＥＴＶ）の第１週目中に観察され、デコイ治療の第２週目中に一日につき１.３％（ＥＴＶなし）及び３.４％（＋ＥＴＶ）が観察され、治療の第３週目中に一日につき０.８％（ＥＴＶなし）及び２.０％（＋ＥＴＶ）が観察され、デコイ治療（±ＥＴＶ）の第４及び５週目中には体重減少は観察されなかった。

統計学的に有意なＨＢＶ ＤＮＡ阻害は、ＥＴＶ治療中断後２７週間の終了時（２５３日目）に喪失したが、デコイ（図３Ｃ）グループ及びデコイ＋ＥＴＶ（図３Ｄ）グループでは２５３日目に阻害は統計学的に有意のままであった。このことは、デコイはＥＴＶよりも阻害効果が長く持続することを実証している。

インドメタシン＋ＥＴＶは、インドメタシン単独よりもＨＢｓＡｇ又はＨＢｅＡｇを阻害しなかった（図４Ａ、Ｂ及び５Ａ、Ｂ）。しかし、デコイ追加（すなわち、インドメタシン＋デコイ又はインドメタシン＋デコイ＋ＥＴＶ）はインドメタシン単独よりもＨＢｓＡｇ又はＨＢｅＡｇ産生を阻害した（図４Ａ、Ｃ、Ｄ及び５Ａ、Ｃ、Ｄ）。デコイ単独又はインドメタシン単独のどちらもＨＢｓＡｇ産生を阻害しないため、これらの結果は、ＨＢｓＡｇ阻害に関してデコイ及びインドメタシン間に相乗的相互作用があることを実証している。

図６は、インドメタシンの存在の下で、デコイ又はデコイ＋ＥＴＶは、治療中断後の２７週でマウスの肝臓におけるＨＢｅＡｇ発現を阻害した（ただしＥＴＶではない）。図７は、デコイ媒剤（すなわち、デコイ組成物にのみ使用される緩衝液）及び複合治療したマウスの肝臓内ＨＢｅＡｇ発現のＩＨＣ分析を示す。インドメタシン及びデコイの組合せは、やはりインドメタシン単独よりも５匹のマウス中２匹にＨＢｅＡｇ発現を減少し、またインドメタシン、デコイ及びＥＴＶの組合せは、インドメタシン＋ＥＴＶ又はインドメタシン＋デコイによる治療よりも、５匹のマウス中５匹にＨＢｅＡｇ発現を減少した。

この実施例は、インドメタシンのようなＮＳＡＩＤｓはＨＢＶを阻害することはできないが、デコイ細菌の抗ウイルス活性を有意に相乗効果的に高めることを実証している。ＥＴＶの標準ケアに比べると、デコイ細菌はより長くかつより持続的な治療効果を示した。デコイ及びＥＴＶの組合せは、結果としてそれぞれの単独治療よりも有意な改善を生ずるとともに、とくに、治療中断後に長期にわたり観察された。

実施例６. ＨＩＶ感染症阻害
デコイ細菌のヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染症をインビボ（生体内）で阻害する潜在能力を試験するため、ＮＯＤ／Shi-scid／ＩＬ-２Ｒγnull-特異性（ＮＣＧ）免疫不全雌マウス（チャールス・リバー社）において、ヒト臍帯血から単離した造血幹細胞でヒト免疫系を再構成した。骨髄機能廃絶化学療法（Manfroi et al., Can. Res. v77, pp1097-1107 2017）後に、臍帯血由来ＣＤ３４＋造血幹細胞及び前駆細胞（フレンチ・ブラッド・インスティテュート社）をマウスに移植した。生着は、１０５ＣＤ３４＋細胞の静脈注射で構成される。生着レベルは、ローサイトメトリーによる全血白血球におけるヒトＣＤ４５＋の分析によってモニタリングした。

生着の１４週間後、適格なヒト遺伝子導入マウス（hu-mice）に８０ｎｇのＨＩＶ-１（ＮＬ４-３ＨＩＶ１／クレードＢ；Ｘ４向性ウイルス）を腹腔内（i.p.）注射によって注射した。血漿ウイルス血症はｑＲＴ-ＰＣＲにより５週目に決定した。他の方法は、ベンツェル氏らによる非特許文献（J. Virol. Doi:10.1128/JVI.00907-19：２０１９年８月２日に投稿された承認原稿）に記載された。１０^４複製／ｍＬ以上のウイルス量を有するＨＩＶマウスのみを試験に使用した。５週目に、血液におけるヒューマン化率、ＨＩＶ負荷、及びＣＤ４＋Ｔ細胞に基づいてマウスをランダムにグループ分けした。

グループは、５週間にわたり週2回の割合でデコイ媒剤（vehicle）の静注（i. v.）により治療したグループ、1日あたり２.４ｍｇのラミブジン、２.３５ｍｇのテノホビルジソプロキシル及び１９.２ｍｇのラルテグラビルから成るフードペレットによる高活性抗レトロウイルス療法を６週間行ったグループ、又は５週間にわたり週2回の割合でデコイ致死細菌（実施例４に記載のように準備した）６×１０^７個の静注（尻尾の静脈）により治療したグループであった。

血液（１００μＬ）を2週毎に後眼窩静脈洞からＥＤＴＡコーティングしたチューブ内に採取した。血漿は細胞から遠心分離により分離し、−８０°Ｃで冷凍する前にＨＩＶを不活化するため５６°Ｃで３０分間培養した。自動核酸精製装置（Nordiag社製Arrow）及びウイルスＲＮＡ抽出キット（DiaSorin, #12-08-02）を用いて４０μＬの冷凍不活化血漿からウイルスのＲＮＡを抽出した。ＨＩＶ血漿のウイルス量は、「Generic HIV Charge Virale」キット（Biocentric, #TR001-440IC, Batch 0089/08A）を用いてｑＲＴ-ＰＣＲによって決定した。感度の限界は１０００個複製／ｍＬとして設定した。この閾値以下の値は不検出と見なした。阻害活性は、不対ノンパラメトリックのマン-ホイットニー統計学的分析により、各時点で治療したグループを同一時点における媒剤グループと比較することで決定した。アスタリスク記号は統計学的に有意な阻害を示す。

図８は、ＨＡＡＲＴ療法が治療開始後２週間でＨＩＶ血液レベルを阻害し、また治療中断後３週間にわたり持続したことを実証している（図８Ｂ）。デコイ細菌は治療中ＨＩＶレベルを阻害しなかったが、治療中断後４週間で阻害開始が観察され、１９週目を除いて、１１週間持続したことが観察された（図８Ｃ）。この遅延した阻害反応は、デコイ細菌がＨＩＶ感染症に対する免疫反応を誘発できることを示唆する。デコイ媒剤グループ及びＨＡＡＲＴで治療したグループではそれぞれ１匹のマウスの死亡を記録した。デコイ処理グループでは死亡が観察されなかった。

それ以外を定義しない限り、本明細書で使用するすべての技術的及び科学的用語は本発明が属する当業者によって共通に理解されるのと同一の意味を有する。

本明細書に説明目的で記載した本発明は、本明細書で特別に開示しなかった任意な要素、制限がなくても適切に実施することができる。したがって、例えば、用語「備える（comprising）」、「含む（including）」、「含有する（containing）」等々は、制限なく拡大して読むことができる。さらに、本明細書に採用される用語及び表現は、限定なく説明目的で使用され、このような用語及び表現の使用は図示及び記載された特徴又はその一部のいかなる均等物を排除することは意図せず、種々の変更は特許請求の範囲内であり得ると理解されたい。

したがって、本発明は、好適な実施形態及び随意的な特徴によって特別に開示してきたが、本明細書に開示される実施形態の変更、改善及び改変は当業者には想到することができ、またこのような変更、改善及び改変は本発明の範囲内であると見なされると理解すべきである。本明細書に提示した材料、方法又は実施例は好適な実施形態を代表し、例示的であり、また本発明の範囲に対する制限するつもりはない。

本発明は、本明細書において広くかつ概括的に記載してきた。包括的な開示内にあるより狭い種及び下位のグループ分けの各々も本発明の一部を形成する。このことは、削除された材料が本明細書に特別に記載されたか否かに係わらず、属からいかなる要旨をも排除する条件付き又はネガティブな制限を有する本発明の包括的記載を含む。

さらに、本発明の特徴又は態様がマーカッシュグループの観点から記載される場合、当業者であれば、本発明は、マーカッシュグループの任意な個別要素又はサブグループの要素の観点からも記載されていることは認識するであろう。

本明細書に記載したすべての公報、特許出願、特許、及び他の参考資料は、個別に参照することによって組み入れられると同程度に、参照により全体が本明細書に組み入れられるものとする。矛盾する場合、定義を含む本明細書が統括する。

本開示は、上述した実施形態につき説明してきたが、上述した記載及び実施例は説明を目的とし、本開示の範囲を制限するつもりはない。本開示の範囲内にある他の態様、利点及び変更は、本開示に関与する当業者には明らかであろう。

Claims (40)

1. 予防又は治療が必要な患者の感染症を予防又は治療する方法において、無傷かつほぼ生き残れないグラム陰性の細菌性細胞であって、リポ多糖類（ＬＰＳ）随伴内毒素活性が、リムルス変形細胞溶解物（ＬＡＬ）検定によって測定されるとき、未処理野生型グラム陰性の細菌性細胞に比べて約７５％〜９０％低減した結果となるよう処理してある、該細菌性細胞を複数含む組成物の有効量を前記患者に投与するステップを備える、方法。
2. 請求項１記載の方法において、前記組成物は、患者の体重１ｋｇあたり約０.０１〜１００ｎｇの活性ＬＰＳを含有する、方法。
3. 請求項２記載の方法において、前記組成物は、患者の体重１ｋｇあたり約０.０２〜２０ｎｇの活性ＬＰＳを含有する、方法。
4. 請求項２記載の方法において、前記組成物は、患者の体重１ｋｇあたり約０.１〜１０ｎｇの活性ＬＰＳを含有する、方法。
5. 請求項１〜４のうちいずれか１項記載の方法において、前記組成物は、１×１０^８個の細胞あたり約２〜２００ｎｇの活性ＬＰＳを含有する、方法。
6. 請求項５記載の方法において、前記組成物は、１×１０^８個の細胞あたり約１０〜１２０ｎｇの活性ＬＰＳを含有する、方法。
7. 請求項５記載の方法において、前記組成物は、１×１０^８個の細胞あたり約２０〜１００ｎｇの活性ＬＰＳを含有する、方法。
8. 請求項１〜７のうちいずれか１項記載の方法において、前記無傷かつほぼ生き残れないグラム陰性の細菌性細胞は、ＬＰＳ随伴内毒素が約８５％〜９８％低減した結果となるよう処理しておく、方法。
9. 請求項８記載の方法において、前記無傷かつほぼ生き残れないグラム陰性の細菌性細胞は、ＬＰＳ随伴内毒素が約９０％〜９８％低減した結果となるよう処理しておく、方法。
10. 請求項１〜９のうちいずれか１項記載の方法において、前記感染症はウイルス感染症とする、方法。
11. 請求項１０記載の方法において、前記ウイルス感染症は、表Ａから選択されるウイルスによる感染症とする、方法。
12. 請求項１０記載の方法において、前記ウイルス感染症は、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）又はヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）によるものとする、方法。
13. 請求項１０〜１２のうちいずれか１項記載の方法において、さらに、前記患者に第２治療剤を投与するステップを備える、方法。
14. 請求項１３記載の方法において、前記第２治療剤は、シクロオキシゲナーゼ阻害剤であって、６ＭＮＡ、アスピリン、カルプロフェン、ジクロフェナク、フェノプロフェン、フルフェナメート、フルビプロフェン、イブプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、ケトロラク、メクロフェナメート、メフェナム酸、ナプロキセン、ニフルム酸、ピロキシカム、硫化スリンダク、スプロフェン、テニダップ、トルメチン、トモキシプロル、ゾメピラク、セレクソシブ、エトドラク、メロキシカム、ニメスリド、フルオロリン酸ジイソプロピル、Ｌ７４５,３３７、ＮＳ３９８、ロフェコキシブ、ＳＣ５８１２５、Ｓ-アミノサリチル酸、アンピロン、ジフルニサル、ナブメトン、パラセタモール、レスベラトロル、サリシン、サリチルアルデヒド、サリチル酸ナトリウム、スルファサラジン、スリンダク、タモキシフェン、チクロピジン、サリチル酸バレリル及びそれらの組合せより成るグループから選択するのが好ましい、該シクロオキシゲナーゼ阻害剤である、方法。
15. 請求項１３記載の方法において、前記第２治療剤は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ及びＩＣＯＳより成るグループから選択するのが好ましい、刺激性免疫チェックポイントのアゴニストである、方法。
16. 請求項１３記載の方法において、前記第２治療剤は、Ａ２ＡＲ、Ｂ７-Ｈ３、Ｂ７-Ｈ４、ＣＴＬＡ-４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ-１、ＰＤ-Ｌ１、ＴＩＭ-３及びＶＩＳＴＡより成るグループから選択するのが好ましい、抑制性免疫チェックポイントのアゴニストである、方法。
17. 請求項１３記載の方法において、前記第２治療剤は、アバカビル、アシクロビル、アデフォビル、アマンタジン、アムプレナビル、アムプリゲン、アルビドール、アタザナビル、アトリプラ、バラビル、シドフォビル、コンビビル、ドルテグラビル、ダルナビル、デラビルジン、ジダノシン、ドコサノール、エドクスジン、エファビレンツ、エムトリシタビン、エンフビルチド、エンテカビル、エコリーベル、ファムシクロビル、ホミビルセン、フォスアンプレナビル、フォスカネット、フォスフォネット、ガンシクロビル、イバシタビン、イムノビル、ドクスウリジン、イミキモド、インジナビル、イノシン、インテグラーゼ阻害剤、III型インターフェロン、II型インターフェロン、I型インターフェロン、インターフェロン、ラミブジン、ロピナビル、ロビライド、マラビロク、モロキシジン、メチサゾン、ネルフィナビル、ネビラピン、ネクサビル、ニタゾクサナイド、ヌクレオシド類似体、ノービア、オセルタミビル（タミフル(登録商標)）、ペグインターフェロンα-２ａ、ペンシクロビル、ペラミビル、プレコナリル、ポドフィロトキシン、プロテアーゼ阻害剤、ラルテグラビル、リバビリン、リマンタジン、リトナビル、ピラミジン、サキナビル、ソフォスブビル、スタブジン、テラプレビル、テノホビル、テノホビルジソプロキシル、チプラナビル、トリフルリジン、トリジビル、トロマンタジン、ツルバダ、バラシクロビル、バルガンシクロビル、ビクリビロク、ビダラビン、ビラミジン、ザルシタビン、ザナミビル、ジドブジン及びそれらの組合せより成るグループから選択される、方法。
18. 請求項１３記載の方法において、前記第２治療剤は、インターフェロンα又はペグインターフェロンである、方法。
19. 請求項１〜１８のうちいずれか１項記載の方法において、前記グラム陰性の細菌性細胞は統合された又は外来性のポリヌクレオチドを含み、該ポリヌクレオチドは病原体特異的抗原又は免疫系刺激タンパク質をコード化する、方法。
20. 請求項１〜１９のうちいずれか１項記載の方法において、前記投与は、感染してから２４時間以内、又は感染後の２日以内、３日以内、４日以内、５日以内、６日以内若しくは７日以内に開始する、方法。
21. 請求項１〜２０のうちいずれか１項記載の方法において、前記投与は、感染してから少なくとも２４時間後、又は感染してから少なくとも２日後、３日後、４日後、５日後、６日後若しくは７日後に開始する、方法。
22. 請求項１〜２１のうちいずれか１項記載の方法において、前記細菌性細胞のうち少なくとも９０％、９５％又は１００％は生き残れないものである、方法。
23. 請求項１〜２２のうちいずれか１項記載の方法において、前記処理は、ポリミキシン、好適には、ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥにより行う、方法。
24. 請求項２３記載の方法において、前記処理は、約２°Ｃ〜約１０°Ｃ、好適には、約４°Ｃで行う、方法。
25. 請求項１〜２４のうちいずれか１項記載の方法において、前記処理は、ポリミキシン及びグルタルアルデヒドで行う、方法。
26. 請求項２５記載の方法において、前記処理は、約３μｇ／ｍＬ〜約１,０００μｇ／ｍＬの用量範囲におけるポリミキシンＢ、及び約０.１％〜約１.０％の用量範囲におけるグルタルアルデヒドで行う、方法。
27. 請求項１〜２６のうちいずれか１項記載の方法において、前記細菌性細胞は、サルモネラ細胞又はエシェリキア細胞である、方法。
28. 無傷かつほぼ生き残れないグラム陰性の細菌性細胞であり、リポ多糖類（ＬＰＳ）随伴内毒素活性が、リムルス変形細胞溶解物（ＬＡＬ）検定によって測定されるとき、未処理野生型グラム陰性の細菌性細胞に比べて約７５％〜９９％低減した結果となるよう処理してある、該細菌性細胞を複数含む医薬剤形であって、総ＬＰＳ随伴内毒素活性が、約０.７ｎｇ〜７０００ｎｇの活性ＬＰＳに等しい、好適には、約７ｎｇ〜１４００ｎｇの活性ＬＰＳに等しい、医薬剤形。
29. 請求項２８記載の医薬剤形において、さらに、第２治療剤を含む、医薬剤形。
30. 請求項２９記載の医薬剤形において、前記第２治療剤は、シクロオキシゲナーゼ阻害剤であって、６ＭＮＡ、アスピリン、カルプロフェン、ジクロフェナク、フェノプロフェン、フルフェナメート、フルビプロフェン、イブプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、ケトロラク、メクロフェナメート、メフェナム酸、ナプロキセン、ニフルム酸、ピロキシカム、硫化スリンダク、スプロフェン、テニダップ、トルメチン、トモキシプロル、ゾメピラク、セレクソシブ、エトドラク、メロキシカム、ニメスリド、フルオロリン酸ジイソプロピル、Ｌ７４５,３３７、ＮＳ３９８、ロフェコキシブ、ＳＣ５８１２５、Ｓ-アミノサリチル酸、アンピロン、ジフルニサル、ナブメトン、パラセタモール、レスベラトロル、サリシン、サリチルアルデヒド、サリチル酸ナトリウム、スルファサラジン、スリンダク、タモキシフェン、チクロピジン、サリチル酸バレリル及びそれらの組合せより成るグループから選択するのが好ましい、該シクロオキシゲナーゼ阻害剤である、医薬剤形。
31. 請求項２９記載の医薬剤形において、前記第２治療剤は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ及びＩＣＯＳより成るグループから選択するのが好ましい、刺激性免疫チェックポイントのアゴニストである、医薬剤形。
32. 請求項２９記載の医薬剤形において、前記第２治療剤は、Ａ２ＡＲ、Ｂ７-Ｈ３、Ｂ７-Ｈ４、ＣＴＬＡ-４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ-１、ＰＤ-Ｌ１、ＴＩＭ-３及びＶＩＳＴＡより成るグループから選択するのが好ましい、抑制性免疫チェックポイントのアゴニストである、医薬剤形。
33. 請求項２９記載の医薬剤形において、前記第２治療剤は、アバカビル、アシクロビル、アデフォビル、アマンタジン、アムプレナビル、アムプリゲン、アルビドール、アタザナビル、アトリプラ、バラビル、シドフォビル、コンビビル、ドルテグラビル、ダルナビル、デラビルジン、ジダノシン、ドコサノール、エドクスジン、エファビレンツ、エムトリシタビン、エンフビルチド、エンテカビル、エコリーベル、ファムシクロビル、ホミビルセン、フォスアンプレナビル、フォスカネット、フォスフォネット、ガンシクロビル、イバシタビン、イムノビル、ドクスウリジン、イミキモド、インジナビル、イノシン、インテグラーゼ阻害剤、III型インターフェロン、II型インターフェロン、I型インターフェロン、インターフェロン、ラミブジン、ロピナビル、ロビライド、マラビロク、モロキシジン、メチサゾン、ネルフィナビル、ネビラピン、ネクサビル、ニタゾクサナイド、ヌクレオシド類似体、ノービア、オセルタミビル（タミフル(登録商標)）、ペグインターフェロンα-２ａ、ペンシクロビル、ペラミビル、プレコナリル、ポドフィロトキシン、プロテアーゼ阻害剤、ラルテグラビル、リバビリン、リマンタジン、リトナビル、ピラミジン、サキナビル、ソフォスブビル、スタブジン、テラプレビル、テノホビル、テノホビルジソプロキシル、チプラナビル、トリフルリジン、トリジビル、トロマンタジン、ツルバダ、バラシクロビル、バルガンシクロビル、ビクリビロク、ビダラビン、ビラミジン、ザルシタビン、ザナミビル、ジドブジン及びそれらの組合せより成るグループから選択される、医薬剤形。
34. 請求項２９記載の医薬剤形において、前記第２治療剤は、インターフェロンα又はペグインターフェロンである、医薬剤形。
35. 請求項２８〜３４のうちいずれか１項記載の医薬剤形において、前記グラム陰性の細菌性細胞は統合された又は外来性のポリヌクレオチドを含み、該ポリヌクレオチドは病原体特異的抗原又は免疫系刺激タンパク質をコード化する、医薬剤形。
36. 請求項２８〜３５のうちいずれか１項記載の医薬剤形において、１×１０^８個の細胞あたり約２〜２００ｎｇの活性ＬＰＳを含有する、医薬剤形。
37. 請求項３６記載の医薬剤形において、１×１０^８個の細胞あたり約１０〜１２０ｎｇの活性ＬＰＳを含有する、医薬剤形。
38. 請求項３６記載の医薬剤形において、１×１０^８個の細胞あたり約２０〜１００ｎｇの活性ＬＰＳを含有する、医薬剤形。
39. 請求項２８〜３８のうちいずれか１項記載の医薬剤形において、前記無傷かつほぼ生き残れないグラム陰性の細菌性細胞は、ＬＰＳ随伴内毒素が約８５％〜９８％低減した結果となるよう処理しておく、医薬剤形。
40. 請求項３９記載の医薬剤形において、前記無傷かつほぼ生き残れないグラム陰性の細菌性細胞は、ＬＰＳ随伴内毒素が約９０％〜９８％低減した結果となるよう処理しておく、医薬剤形。
    

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