JP2022119897A - ポリグルタミン病の治療 - Google Patents
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Abstract
【課題】脊髄小脳失調症（ＳＣＡ）、マチャド・ジョセフ病（ＭＪＤ／ＳＣＡ３）、ハンチントン病（ＨＤ）、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症（ＤＲＰＬＡ）、または、Ｘ連鎖球脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡＸ１／ＳＢＭＡ）を含む、ポリグルタミン病を治療する方法を提供する。【解決手段】ポリグルタミン病の患者に、単位用量としての有効量の幹細胞を非経口又は局所投与することを含む。前記投与は、１以上の治療サイクルで行われ、１つの治療サイクルは、２～６週間の投与間隔で、それぞれ３単位用量を投与することを含む。【選択図】なし
Description
本発明は、神経変性疾患の治療の分野に関する。本発明は、特に、幹細胞を用いてポリグルタミン病を治療する方法に関する。
運動失調症は、小脳、脳幹、および、脊髄小脳路に可変的に影響を及ぼす神経変性疾患のなかでも、臨床的および遺伝学的に異質である。脊髄小脳失調症（ＳＣＡ）は、進行性かつ変性であり、致命的である。ＳＣＡは、神経組織の変性を含み、病変の首座は、小脳の核もしくは神経経路、脳幹、または、脊髄にある。ＳＣＡでは、広範囲にわたるニューロンの減少だけでなく、疾患の終末期における寝たきりや呼吸不全からも致命的な状態に陥る。最も一般的なＳＣＡの属性のサブタイプは、ポリグルタミン媒介性ＳＣＡ、すなわち、ＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＳＣＡ３、ＳＣＡ６、ＳＣＡ７、および、ＳＣＡ１７である。
特許文献１は、脊髄小脳変性症を治療する方法を提供する。この方法は、脊髄小脳変性症を患う患者に、Ｄ－サイクロセリン、Ｄ－セリンエステル、Ｄ－セリン、および、その塩の中から選ばれた１つ以上を有効用量投与することを含む。特許文献２は、トレハロースを含む水性薬剤を静脈内に投与することによって、ＳＣＡの徴候または症状を緩和する方法に関する。
しかしながら、ＳＣＡに対する有効な薬物療法または潜在的療法は開示されていない。
したがって、ＳＣＡの徴候または症状を緩和する治療法が必要とされている。
本発明は、被検体のポリグルタミン病を治療する方法を提供する。方法は、被検体に、単位用量としての有効量の幹細胞を非経口または局所投与することを含む。投与は、１以上の治療サイクルで行われる。１つの治療サイクルは、２～６週間の投与間隔で、それぞれ３単位用量を投与することを含む。
ある実施形態では、ポリグルタミン病は、これらに限定されないが、脊髄小脳失調症（ＳＣＡ）、マチャド・ジョセフ病（ＭＪＤ／ＳＣＡ３）、ハンチントン病（ＨＤ）、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症（ＤＲＰＬＡ）、および、Ｘ連鎖球脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡＸ１／ＳＢＭＡ）を含む。一実施形態では、ＳＣＡは、ＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＳＣＡ３、ＳＣＡ６、ＳＣＡ７、または、ＳＣＡ１７である。
いくつかの実施形態では、間葉系幹細胞は、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）集団、脂肪組織由来幹細胞（ＡＤＳＣ）集団、眼窩脂肪由来幹細胞（ＯＦＳＣ）集団、または、四重陽性間
質細胞（ＱＰＳＣ）集団である。
質細胞（ＱＰＳＣ）集団である。
いくつかの実施形態では、細胞は、非経口投与、または、局所投与（脳内、または、頭蓋内投与など）されてよい。
いくつかの実施形態では、単位用量は、０．５×１０５～５×１０１０細胞／体重（ｋｇ）である。
一実施形態では、投与は、１以上の治療サイクルで行われる。１つの治療サイクルは、２～６週間（すなわち、２週間、３週間、４週間、５週間、または、６週間）の投与間隔で、それぞれ３単位用量を投与することを含む。さらなる実施形態では、間隔は、２週間である。
ポリグルタミン病を治療するための、幹細胞療法で用いられる方法、および、製品が提供される。ポリグルタミン病は、それぞれのタンパク質内で長いポリグルタミン路をコードするシトシン－アデニン－グアニン（ＣＡＧ）リピートの伸長によって起きる神経変性疾患群である。ポリグルタミン病は、非関連遺伝子の翻訳領域におけるＣＡＧトリヌクレオチドリピートの病的な伸長によって特徴づけられる。翻訳されたポリグルタミンは、特定のニューロンの亜集団の機能不全および変性を引き起こす変性したニューロンに凝集する。本発明は、幹細胞を用いた治療計画によって、ポリグルタミン病で変性および／または損傷したニューロンの機能を回復させる有効な治療を実現する、という驚くべき発見をもたらした。
特に記載がない限り、技術用語は、従来どおりに用いられる。
本願明細書で使用される単数を表す冠詞は、特に明記しない限り単数および複数のどちらも意味する。
本願明細書で使用される用語「および」「または」は、接続語および離接語のいずれを意味してもよい。すなわち、いずれの用語も特に明記しない限り「および／または」と同等であると理解されたい。
本願明細書で使用される用語「治療」または「治療する」は、病気、症状、もしくは、疾患、または、徴候、副作用、もしくは、結果、または、それに関連する表現型を完全にもしくは一部改善する、または、緩和することを意味する。治療の望ましい効果は、これらに限定されないが、病気の発生または再発を防ぎ、症状を緩和し、病気の直接的または間接的な病理学的帰結を防ぎ、病気の進行速度を低下させ、病状を緩和することを含む。
本願明細書で使用される表現「病気の進行を遅らせる」とは、病気の進行を妨げる、遅くする、阻止する、止める、および／または、抑えることを意味する。この遅延の時間の長さは、病歴、および／または、治療される人によって異なってよい。
本願明細書で使用される用語である薬剤の「有効量」、例えば、医薬組成物、細胞、または、組成物の投与における「有効量」は、所望の結果を得るための投与量および必要な期間において有効な量を意味する。
本願明細書で用いられる用語、薬剤の「治療効果のある量」、例えば、医薬製剤、または、細胞などの「治療効果のある量」は、疾病、病気、または、疾患の治療に対して所望の治療結果、および／または、治療の薬物動態もしくは薬力学的効果を達成するために必要な投与量および期間での有効量を意味する。
本願明細書で用いられる「初回投与」とは、連続または逐次投与の前に行う所定の投与のタイミングを示す用語である。この用語は、被検体がそれまでに細胞療法の投与を受けたことがないこと、または、同じ細胞の投与を受けたことがないことを必ずしも意味しない。
本願明細書で用いられる用語「次の投与」とは、前の、例えば、初回投与の後に、他の投与を介在させずに同じ被検体に行う投与のことである。
本願明細書で用いられる用語「被検体」とは、ヒト、または、他の動物などの哺乳類であり、主としてヒトである。いくつかの実施形態では、被検体は、投与前に、疾病または病気を対象とする治療薬で治療されている。
本明細書で用いられる用語「医薬製剤」とは、内部に含まれる活性成分の生物活性を有効にする形態の調製物であり、投与される被検体に受け入れられない有毒な追加成分を含まない製剤を意味する。
本願明細書で用いられる用語「薬学的に許容できる担体」とは、活性成分以外の、被検体に対して毒性を示さない医薬製剤における成分のことを指す。薬学的に許容できる担体とは、これに限定されないが、緩衝液、賦形剤、安定剤、または、防腐剤を含む。
本発明の一側面は、被検体のポリグルタミン病を治療する方法を提供する。方法は、被検体に、単位用量としての有効量の幹細胞を非経口または局所投与することを含む。投与は、１以上の治療サイクルで行われ、１つの治療サイクルは、２～６週間の投与間隔で、それぞれ３単位用量を投与することを含む。
ある実施形態では、ポリグルタミン病は、これらに限定されないが、脊髄小脳失調症（ＳＣＡ）、マチャド・ジョセフ病（ＭＪＤ／ＳＣＡ３）、ハンチントン病（ＨＤ）、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症（ＤＲＰＬＡ）、および、Ｘ連鎖球脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡＸ１／ＳＢＭＡ）を含む。
いくつかの実施形態では、ＳＣＡは、ポリグルタミン媒介性ＳＣＡであり、好ましくは、ＳＣＡは、ＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＳＣＡ３、ＳＣＡ６、ＳＣＡ７、または、ＳＣＡ１７である。より好ましくは、ＳＣＡは、ＳＣＡ３である。
いくつかの実施形態では、間葉系幹細胞は、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）集団、脂肪組織由来幹細胞（ＡＤＳＣ）集団、眼窩脂肪由来幹細胞（ＯＦＳＣ）集団、または、四重陽性間質細胞（ＱＰＳＣ）集団である。
一実施形態では、ＱＰＳＣは、米国特許出願第１４／６１５，７３７に記載されているＱＰＳＣであり、少なくとも７０％の細胞均一性を有し、ＣＤ２７３、ＣＤ４６、ＣＤ５５、および、ＣＸＣＲ４の細胞マーカを発現するが、ＣＤ４５の細胞マーカは発現しない。ＣＤ２７３は、７０％を上回る強度で積極的に発現する。
一実施形態では、ＡＤＳＣは、米国特許公開公報第２０１２０２８８４８０に記載されているＯＦＳＣであり、少なくともＣＤ９０、ＣＤ１０５、ＣＤ２９、ＣＤ４４、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ４９ｅ、ＣＤ５８、および、ＨＬＡ－ＡＢＣは発現するが、ＣＤ１３３、ＣＤ３１、ＣＤ１０６、ＣＤ１４６、ＣＤ４５、ＣＤ１４、ＣＤ１１７は発現しない。好ましくは、幹細胞は、ＱＰＳＣ集団である。
いくつかの実施形態では、細胞は、非経口投与、または、局所投与（脳内もしくは頭蓋内投与）されてよい。非経口投与は、筋肉内、静脈内、動脈内、または、皮下投与を含む。好ましくは、非経口投与は、静脈注射である。
いくつかの実施形態では、単位用量は、０．５×１０５～５×１０１０細胞／体重（ｋｇ）である。いくつかの実施形態では、単位用量は、０．５×１０５～５×１０９、０．５×１０５～５×１０８、０．５×１０５～５×１０７、０．５×１０５～５×１０６、１．０×１０５～５×１０１０、１．０×１０５～５×１０９、１．０×１０５～５×１０８、１．０×１０５～５×１０７、または、１．０×１０５～５×１０６細胞／体重（ｋｇ）である。
一実施形態では、投与は、１以上の治療サイクルで行われる。１つの治療サイクルは、２～６週間（すなわち、２週間、３週間、４週間、５週間、または、６週間）の投与間隔で、それぞれ３単位用量を投与することを含む。さらなる実施形態では、間隔は、２週間である。本発明の治療サイクル数は、運動失調の評価尺度（ＳＡＲＡ）によって決定される（Ｓｕｂｒａｍｏｎｙ ＳＨ、ＳＡＲＡ－運動失調の新しい臨床評価尺度。Ｎａｔ Ｃｌｉｎ Ｐｒａｃｔ Ｎｅｕｒｏｌ． ２００７； ３（３）：１３６－７；Ｋｉｍ ＢＲ， Ｌｉｍ ＪＨ， Ｌｅｅ Ｓ， Ｐａｒｋ Ｓ， Ｋｏｈ ＳＥ， Ｌｅｅ ＩＳ， Ｊｕｎｇ Ｈ， Ｌｅｅ Ｊ．急性期脳卒中患者における運動失調の評価尺度（ＳＡＲＡ）の有用性。Ａｎｎ Ｒｅｈａｂｉｌ Ｍｅｄ．２０１１；３５：７７２－７８０；Ｔａｎ Ｓ，Ｎｉｕ ＨＸ，Ｚｈａｏ Ｌ等。運動失調の評価尺度の中国版の信頼性および有効性。Ｃｈｉｎ Ｍｅｄ Ｊ．２０１３；１２６（１１）：２０４５－８）。ＳＡＲＡは、小脳性運動失調症（脊髄小脳、フリードライヒ、および、散発性運動失調症）の傷害レベルでの半定量評価に基づく臨床尺度である。ＳＡＲＡは、総スコア０（失調なし）～４０（最重度）で表す８つの能力に基づく尺度である。スコアは、歩行、立位、座位、言語障害、指追い試験、鼻－指試験、手の回内・回外運動、および、踵－すね試験の患者の成績に基づく。初回の治療サイクルの後、被検体の１か月間の総ＳＡＲＡスコアが５を上回れば、２回目以降の治療サイクルが実行される。
単位用量の幹細胞は、２～６週間の間隔で投与される。間隔が２～６週間ということは、単位用量の幹細胞が、２、３、４、５、または、６週間に１回投与されることを意味する。一実施形態では、投与間隔は、隔週である。一実施形態では、隔週の投与とは、単位用量の幹細胞が２週間に１回、すなわち、１４日に１回、好ましくは、２週間ごとに同じ曜日に投与されることを意味する。隔週の投薬計画において、単位用量は、一般的に、約１４日ごとに投与される。
幹細胞治療において、単位用量の投与は、単一の組成物としての所定量または数の細胞の投与、および／または、例えば、単回注射または持続注入などのような途切れない単回投与を含む。
いくつかの実施形態では、細胞は、例えば、他の治療的介入と同時に、または、いかなる順序で連続して行われる併用療法の一部として投与されてよい。いくつかの実施形態では、幹細胞は、１つ以上の追加の治療薬と共に、または、他の治療的介入と組み合わせて、同時に、または、いかなる順序で連続して投与される。いくつかの実施形態では、追加の治療薬または他の治療法は、細胞集団の効果を高めるように、細胞の投与と十分近い時間に導入される、または、細胞集団は、追加の治療薬または他の治療法の効果を高めるように、追加の治療薬または他の治療法の導入と十分近い時間に投与される。いくつかの実施形態では、幹細胞は、１つ以上の追加の治療薬の前に投与される。いくつかの実施形態では、幹細胞は、１つ以上の追加の治療薬の後に投与される。
本発明の方法に用いられる幹細胞は、所定の用量またはその一部の量で投与されるための多数の細胞を含む単位用量形態の組成物などの医薬組成物、または、製剤として処方される。医薬組成物および製剤は、一般的に、１つ以上の任意の薬学的に許容できる担体または賦形剤を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、少なくとも１つの追加の治療薬を含む。
担体の選択は、特定の幹細胞、および／または、投与方法によって一部決定される。したがって、さまざまな適切な製剤がある。例えば、医薬組成物は、防腐剤を含んでよい。
薬学的に許容できる担体は、一般的に、用いられる量及び濃度では被検体に対して毒性がなく、これらに限定されないが、リン酸塩、クエン酸塩、および、他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸、および、メチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、ヘキサメトニウムクロリド、ベンザルコニウムクロリド、ベンズエトニウムクロリド、フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール、メチルまたはプロピルパラベン等のアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３－ペンタノール；およびｍ－クレゾール）；低分子量のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、または、免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、または、リジン等のアミノ酸；グルコース、マンノース、または、デキストリンを含む単糖類、二糖類、および、他の炭水化物；ＥＤＴＡ等のキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、または、ソルビトールなどの糖類；ナトリウム等の塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体)；および／または、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤を含む。ある側面では、組成物には、緩衝剤が含まれる。適切な緩衝剤は、例えば、クエン酸、クエン酸ナトリウム、リン酸、リン酸カリウム、および、他のさまざまな酸および塩を含む。いくつかの側面では、２つ以上の緩衝剤の混合物が用いられる。投与可能な医薬組成物の調製方法は、周知である。
製剤は、水溶液を含んでよい。製剤または組成物は、幹細胞で治療される特定の徴候、症状、または、状態に有益な複数の活性成分を含んでもよい。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、疾病または病気を治療するのに有効な量、例えば、治療効果のある量の幹細胞を含む。いくつかの実施形態では、治療効果は、治療対象の定期評価によってモニタされる。所望の用量は、細胞の単回ボーラス投与、複数回ボーラス投与、または、連続注入によって提供されてよい。
幹細胞、および、組成物は、標準的な投与技術、剤形、および／または、装置を用いて投与されてよい。幹細胞の投与は、自己または異種投与であり得る。
滅菌注射液は、細胞を、滅菌水、生理食塩水、グルコース、デキストロースなどの適切な担体、希釈液、または、賦形剤と混合した溶媒に含ませることによって調製され得る。組成物は、投与経路、または、求められる調製によって、湿潤剤、分散剤、または、乳化剤（例えば、メチルセルロース）、ｐＨ緩衝剤、ゲル化または粘性促進添加物、防腐剤、香料、および／または、着色剤などの補助物質を含み得る。いくつかの側面では、適切な調製のために標準的な教科書を参照してよい。
抗菌性保存剤、抗酸化剤、キレート剤、および、緩衝剤を含む、組成物の安定性および無菌性を強化するさまざまな添加剤が添加され得る。さまざまな抗菌物質、および、抗真菌物質、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、および、ソルビン酸によって微生物の活動を確実に予防することができる。注射可能な医薬製剤の持続的吸収は、例えば、モノステアリン酸アルミニウム、および、ゼラチンなどの吸収遅延剤を用いることによってなされ得る。
［実施例］
Ｉ．動物モデル試験
材料および方法
動物および実験計画。
Ｉ．動物モデル試験
材料および方法
動物および実験計画。
・運動機能がほとんど低下していないマウス
ＭＪＤ８４．２（Ｂ６；ＣＢＡ－Ｔｇ（ＡＴＸＮ３＊）８４．２Ｃｃｅ／ＩｂｅｚＪ）マウスを、ヒトの脊髄小脳失調３型としても知られるマチャド・ジョセフ病（ＭＪＤ／ＳＣＡ３）の疾患モデルとした。２０～３４週齢のＭＪＤ８４．２マウスを実験対象とした。これらのマウスに対して、ｍｏｄｉｆｉｅｄ－ＳＨＩＲＰＡ、フットプリント分析、および、ロータロッド試験を含む行動解析を行った。２１、２３、および、２５週齢のマウスには、３回の被験物質の注射を２週間ごとに行った。実験計画の概要は以下のとおりである。
ＭＪＤ８４．２（Ｂ６；ＣＢＡ－Ｔｇ（ＡＴＸＮ３＊）８４．２Ｃｃｅ／ＩｂｅｚＪ）マウスを、ヒトの脊髄小脳失調３型としても知られるマチャド・ジョセフ病（ＭＪＤ／ＳＣＡ３）の疾患モデルとした。２０～３４週齢のＭＪＤ８４．２マウスを実験対象とした。これらのマウスに対して、ｍｏｄｉｆｉｅｄ－ＳＨＩＲＰＡ、フットプリント分析、および、ロータロッド試験を含む行動解析を行った。２１、２３、および、２５週齢のマウスには、３回の被験物質の注射を２週間ごとに行った。実験計画の概要は以下のとおりである。
・運動機能が著しく低下したマウス
１３匹のＳＣＡ３ Ｔｇ／０マウス（Ｂ６；ＣＢＡ－Ｔｇ（ＡＴＸＮ３＊）８４．２Ｃｃｅ／ＩｂｅｚＪ）、および、８匹のＣ５７ＢＬ／６ ０／０野生型マウスは、すべてジャクソン研究所から得た。マウスを無作為に４つの実験群、（１）ＳＣＡ３＋細胞、（２）ＳＣＡ３＋リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、（３）野生型（Ｗｔ）＋細胞、（４）Ｗｔ＋ＰＢＳに分けた。ＳＣＡ３ Ｔｇ／０マウスに著しい疾病表現型を認めた後、３回の被験物質の注射を２週間ごとに行った。実験計画の概要は以下のとおりである。
１３匹のＳＣＡ３ Ｔｇ／０マウス（Ｂ６；ＣＢＡ－Ｔｇ（ＡＴＸＮ３＊）８４．２Ｃｃｅ／ＩｂｅｚＪ）、および、８匹のＣ５７ＢＬ／６ ０／０野生型マウスは、すべてジャクソン研究所から得た。マウスを無作為に４つの実験群、（１）ＳＣＡ３＋細胞、（２）ＳＣＡ３＋リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、（３）野生型（Ｗｔ）＋細胞、（４）Ｗｔ＋ＰＢＳに分けた。ＳＣＡ３ Ｔｇ／０マウスに著しい疾病表現型を認めた後、３回の被験物質の注射を２週間ごとに行った。実験計画の概要は以下のとおりである。
間葉系幹細胞
本実験のＱＰＳＣは、ステミネント社（Ｓｔｅｍｉｎｅｎｔ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｉｎｃ．）により製造された細胞製品であるヒトＡＤＳＣ（ステムカイマル（登録商標））である。ＰＩＣ／ＳのＧＭＰガイドラインに従い構築された細胞工場において、ＡＤＳＣを体外培養拡張し、ステミネント社の標準作業手順によって品質管理を行った。手短に説明すると、健康なドナーから脂肪組織を採取し、低温（０～５℃）に保たれたステミネント社の処理施設に直ちに移動させた。ＡＤＳＣを単離し、精製した後、培養拡張の間は、ステミネント社の培地で維持した。継代１２代のＡＤＳＣは、ＣＤ２７３、ＣＤ４６、ＣＤ５５、および、ＣＸＣＲ４を高度に発現したＱＰＳＣとなり、凍結保存用バックに詰められた。製品（ステムカイマル（登録商標））は、品質証明および凍結保存のために送られた。ステムカイマル（登録商標）の品質管理は、工程内管理、および、製品リリーステストからなる。品質管理は、これらに限定されないが、生死判別試験、無菌性試験、マイコプラズマ試験、内毒検査、ＭＳＣ表現型タイピング（ＣＤ７３、ＣＤ９０、および、ＣＤ１０５に対して陽性、ＣＤ３４、ＣＤ４５、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１９、および、ＨＬＡ－ＤＲに対して陰性）、および、３系統分化能（骨、軟骨、脂質生成分化）を含む。
本実験のＱＰＳＣは、ステミネント社（Ｓｔｅｍｉｎｅｎｔ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｉｎｃ．）により製造された細胞製品であるヒトＡＤＳＣ（ステムカイマル（登録商標））である。ＰＩＣ／ＳのＧＭＰガイドラインに従い構築された細胞工場において、ＡＤＳＣを体外培養拡張し、ステミネント社の標準作業手順によって品質管理を行った。手短に説明すると、健康なドナーから脂肪組織を採取し、低温（０～５℃）に保たれたステミネント社の処理施設に直ちに移動させた。ＡＤＳＣを単離し、精製した後、培養拡張の間は、ステミネント社の培地で維持した。継代１２代のＡＤＳＣは、ＣＤ２７３、ＣＤ４６、ＣＤ５５、および、ＣＸＣＲ４を高度に発現したＱＰＳＣとなり、凍結保存用バックに詰められた。製品（ステムカイマル（登録商標））は、品質証明および凍結保存のために送られた。ステムカイマル（登録商標）の品質管理は、工程内管理、および、製品リリーステストからなる。品質管理は、これらに限定されないが、生死判別試験、無菌性試験、マイコプラズマ試験、内毒検査、ＭＳＣ表現型タイピング（ＣＤ７３、ＣＤ９０、および、ＣＤ１０５に対して陽性、ＣＤ３４、ＣＤ４５、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１９、および、ＨＬＡ－ＤＲに対して陰性）、および、３系統分化能（骨、軟骨、脂質生成分化）を含む。
細胞投与
・運動機能がほとんど低下していないマウスを用いた検査
２．５×１０７細胞／体重（ｋｇ）のステムカイマル（登録商標）を解凍し、準備して１ｍｌのインスリンシリンジ（２９ １／２Ｇ）に充填した。解凍から１時間以内に細胞をゆっくり（１５～２０秒間）注射した。
・運動機能がほとんど低下していないマウスを用いた検査
２．５×１０７細胞／体重（ｋｇ）のステムカイマル（登録商標）を解凍し、準備して１ｍｌのインスリンシリンジ（２９ １／２Ｇ）に充填した。解凍から１時間以内に細胞をゆっくり（１５～２０秒間）注射した。
・運動機能が著しく低下したマウスを用いた検査
マウスを無作為に４つの実験群、（１）ＳＣＡ３＋細胞、（２）ＳＣＡ３＋ＰＢＳ、（３）野生型（Ｗｔ）＋細胞、（４）Ｗｔ＋ＰＢＳに分けた。第１群および第３群のマウスそれぞれに２．５×１０７細胞／体重（ｋｇ）のステムカイマル（登録商標）を静脈注射した。総量１２５ｕｌの細胞懸濁液（クライオソリューション（Ｂｉｏｌｉｆｅ）、または、ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）中で１：１）を各マウスに投与した。
マウスを無作為に４つの実験群、（１）ＳＣＡ３＋細胞、（２）ＳＣＡ３＋ＰＢＳ、（３）野生型（Ｗｔ）＋細胞、（４）Ｗｔ＋ＰＢＳに分けた。第１群および第３群のマウスそれぞれに２．５×１０７細胞／体重（ｋｇ）のステムカイマル（登録商標）を静脈注射した。総量１２５ｕｌの細胞懸濁液（クライオソリューション（Ｂｉｏｌｉｆｅ）、または、ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）中で１：１）を各マウスに投与した。
どちらの実験でも、注射後のマウスを毎日４時間モニタした。合計３回の細胞投与を２週間ごとに行った。
データ収集および解析
最後の被験物質の注射の１か月後にマウスを死亡させた。マウスの体重および落下するまでの滞在時間を全実験分記録した。被験物質の注射後、マウスの歩行能力について足跡の分析も行った。さらなる病理組織学的分析、および、生物学的分布検査のために、マウスの組織（皮質、小脳、心臓、腎臓、肝臓、脾臓、肺、および、尾）を採取した。
最後の被験物質の注射の１か月後にマウスを死亡させた。マウスの体重および落下するまでの滞在時間を全実験分記録した。被験物質の注射後、マウスの歩行能力について足跡の分析も行った。さらなる病理組織学的分析、および、生物学的分布検査のために、マウスの組織（皮質、小脳、心臓、腎臓、肝臓、脾臓、肺、および、尾）を採取した。
統計
データは、平均値±標準誤差として示されている。ロータロッド試験、および、フットプリント分析の結果をスチューデントのｔ検定（有意しきい値ｐ＜０．０５）を用いて解析した。
データは、平均値±標準誤差として示されている。ロータロッド試験、および、フットプリント分析の結果をスチューデントのｔ検定（有意しきい値ｐ＜０．０５）を用いて解析した。
運動協調性およびバランス評価
運動協調性、および、バランスをロータロッド装置（ＭＫ－６７０、室町機械株式会社、日本）で評価した。５分間で４０ｒｐｍまで加速する一定速度（４ｒｐｍ）のロータロッド装置にマウスを配置した。落下するまで、または、回り切るまでの（完全に回り切るまでロッドにしがみついている）時間を記録した。各試験でマウスに３回トライアルさせ、トライアル間の休憩時間は１５分とした。各試験での各マウスの平均滞在時間を計算した。スチューデントのｔ検定を用いて試験の結果を統計的に解析した。
運動協調性、および、バランスをロータロッド装置（ＭＫ－６７０、室町機械株式会社、日本）で評価した。５分間で４０ｒｐｍまで加速する一定速度（４ｒｐｍ）のロータロッド装置にマウスを配置した。落下するまで、または、回り切るまでの（完全に回り切るまでロッドにしがみついている）時間を記録した。各試験でマウスに３回トライアルさせ、トライアル間の休憩時間は１５分とした。各試験での各マウスの平均滞在時間を計算した。スチューデントのｔ検定を用いて試験の結果を統計的に解析した。
ＳＨＩＲＰＡテスト
２０、２４、および、２８週齢のマウスに対してＭｏｄｉｆｉｅｄ ＳＨＩＲＰＡテストを行った。ＳＨＩＲＰＡプロトコルは、理研バイオリソース研究センターのＭｏｄｉｆｉｅｄ ＳＨＩＲＰＡプロトコルを修正したものである。テスト項目、および、採点基準を以下の表３に示す。
２０、２４、および、２８週齢のマウスに対してＭｏｄｉｆｉｅｄ ＳＨＩＲＰＡテストを行った。ＳＨＩＲＰＡプロトコルは、理研バイオリソース研究センターのＭｏｄｉｆｉｅｄ ＳＨＩＲＰＡプロトコルを修正したものである。テスト項目、および、採点基準を以下の表３に示す。
マウスの行動に基づいて採点した。検査群の全マウス数を１００％として計算した。結果を、特定のスコアレベルのマウス数のパーセンテージとして示した。
フットプリント分析
最後の細胞投与後、マウスの足跡を約１か月間解析した。２０１５年１月に出版された刊行物によると、マウスの足をインクに浸した（前足を赤インク、後足を緑のインク）。その結果、マウスは、通路に沿って、ゴールの箱まで歩くまたは走りながら足跡を残した。トンネルの前で、マウスを１枚の紙（長さ５０ｃｍ、幅１０ｃｍ）の上に置いた。歩幅、揺れ、ステップ長、および、前足と後足の重なりによって歩き方がわかる（以下の図を参照）。すべてのマウスを３回走らせた後に死亡させた。
最後の細胞投与後、マウスの足跡を約１か月間解析した。２０１５年１月に出版された刊行物によると、マウスの足をインクに浸した（前足を赤インク、後足を緑のインク）。その結果、マウスは、通路に沿って、ゴールの箱まで歩くまたは走りながら足跡を残した。トンネルの前で、マウスを１枚の紙（長さ５０ｃｍ、幅１０ｃｍ）の上に置いた。歩幅、揺れ、ステップ長、および、前足と後足の重なりによって歩き方がわかる（以下の図を参照）。すべてのマウスを３回走らせた後に死亡させた。
ＭＴＴアッセイ
・ＣＤ３＋Ｔ細胞単離
ヒストパック１０７７（シグマアルドリッチ）を用いて密度勾配遠心分離することによって、健康なドナーのヘパリン化全血からヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を単離した。その後、抗ヒトＣＤ３抗体結合磁気粒子（ＢＤバイオサイエンス）を製造業者の説明書どおりに用いて、ＰＢＭＣからの正の選択によってＣＤ３＋Ｔリンパ球を精製した。
・ＣＤ３＋Ｔ細胞単離
ヒストパック１０７７（シグマアルドリッチ）を用いて密度勾配遠心分離することによって、健康なドナーのヘパリン化全血からヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を単離した。その後、抗ヒトＣＤ３抗体結合磁気粒子（ＢＤバイオサイエンス）を製造業者の説明書どおりに用いて、ＰＢＭＣからの正の選択によってＣＤ３＋Ｔリンパ球を精製した。
・Ｔ細胞増殖アッセイ
精製されたヒトＣＤ３＋Ｔ細胞（１×１０５細胞）を、９６ウェルプレートにおいて、プレートに結合した抗ＣＤ３（２μｇ／ｍｌ）、および、抗ＣＤ２８（２μｇ／ｍｌ）モノクローナル抗体（ＢＤバイオサイエンス）で刺激し、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、２ｍＭｌ－グルタミン、１００Ｕ／ｍｌペニシリン、１００Ｕ／ｍｌストレプトマイシン、および、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳを含有するＲＰＭＩ－１６４０培地（Ｇｉｂｃｏ）において、異なる数のＡＤＳＣと共培養した。４８時間後、各ウェルに５－ブロモ－２－デオキシウリジン（ＢｒｄＵ）を添加し、Ｔ細胞増殖を測定するために、さらに１８時間、プレートをインキュベートした。ＢｒｄＵ細胞増殖ＥＬＩＳＡキット（Ｒｏｃｈｅ）を製造業者の説明書どおりに用いて、Ｔ細胞に含まれるＢｒｄＵの量を測定した。
精製されたヒトＣＤ３＋Ｔ細胞（１×１０５細胞）を、９６ウェルプレートにおいて、プレートに結合した抗ＣＤ３（２μｇ／ｍｌ）、および、抗ＣＤ２８（２μｇ／ｍｌ）モノクローナル抗体（ＢＤバイオサイエンス）で刺激し、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、２ｍＭｌ－グルタミン、１００Ｕ／ｍｌペニシリン、１００Ｕ／ｍｌストレプトマイシン、および、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳを含有するＲＰＭＩ－１６４０培地（Ｇｉｂｃｏ）において、異なる数のＡＤＳＣと共培養した。４８時間後、各ウェルに５－ブロモ－２－デオキシウリジン（ＢｒｄＵ）を添加し、Ｔ細胞増殖を測定するために、さらに１８時間、プレートをインキュベートした。ＢｒｄＵ細胞増殖ＥＬＩＳＡキット（Ｒｏｃｈｅ）を製造業者の説明書どおりに用いて、Ｔ細胞に含まれるＢｒｄＵの量を測定した。
免疫組織染色（ＩＨＣ）
ＱＰＳＣの神経保護効果を評価すべく、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ ＳＣＡ２トランスジェニックマウスの尾静脈から（ＩＶ ｈＭＳＣ－Ｔｇ群）または、大後頭孔を介して小脳位置に（ＩＣ ｈＭＳＣ－Ｔｇ群）ＱＰＳＣを注射した。ヒトβ２ミクログロブリン（Ａｂｃａｍ、コード：ａｂ１５９７６）と反応した特定の抗体を選び、マウス脳の組織におけるヒト細胞を細胞組織染色によって示した。マウス切片（４μｍ）を顕微鏡スライドに載置した。切片を、キシレン、１００％エタノール、９５％エタノール、および、８０％エタノールにおいて５分間隔で２回すすぐことによって再水和した。脱パラフィン後、切片を、ペルオキシダーゼの不活性化のために３％Ｈ２Ｏ２で処理し、抗原回復のために１０ｍＭクエン酸塩緩衝液（０．０５％のＴｗｅｅｎ２０と共に）で加熱し、１％ブロッキング溶液（１％ＢＳＡおよび０．１％トリトンＸ－１００）でブロッキングした（Ｃｈａｎｇ等、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ２０１１、１８：５４、http://www.jbiomedsci.com/content/18/1/54、９ＰＢＳの３ページ）。切片を、ブロッキング溶液で希釈した（１：４００）特定の抗－ヒトβ２ミクログロブリンポリクローナル抗体（Ａｂｃａｍ）と共に室温で４０分間インキュベートした。ＰＢＳで３回よく洗浄した後、切片をブロッキング溶液で希釈した（１：１０００）二次抗体と共に室温で４０分間インキュベートした。ＥｎＶｉｓｉｏｎ検出システム（ＤＡＫＯ）を用いて一次抗体を検出し、ジアミノベンジジン（ＤＡＢ；ＤＡＫＯ）で視覚化した。対比染色剤である水溶性ヘマトキシリン（シグマアルドリッチ）で着色した。直接比較のため、すべてのスライドを単一のバッチで処理してばらつきを最小限に抑えた。
ＱＰＳＣの神経保護効果を評価すべく、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ ＳＣＡ２トランスジェニックマウスの尾静脈から（ＩＶ ｈＭＳＣ－Ｔｇ群）または、大後頭孔を介して小脳位置に（ＩＣ ｈＭＳＣ－Ｔｇ群）ＱＰＳＣを注射した。ヒトβ２ミクログロブリン（Ａｂｃａｍ、コード：ａｂ１５９７６）と反応した特定の抗体を選び、マウス脳の組織におけるヒト細胞を細胞組織染色によって示した。マウス切片（４μｍ）を顕微鏡スライドに載置した。切片を、キシレン、１００％エタノール、９５％エタノール、および、８０％エタノールにおいて５分間隔で２回すすぐことによって再水和した。脱パラフィン後、切片を、ペルオキシダーゼの不活性化のために３％Ｈ２Ｏ２で処理し、抗原回復のために１０ｍＭクエン酸塩緩衝液（０．０５％のＴｗｅｅｎ２０と共に）で加熱し、１％ブロッキング溶液（１％ＢＳＡおよび０．１％トリトンＸ－１００）でブロッキングした（Ｃｈａｎｇ等、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ２０１１、１８：５４、http://www.jbiomedsci.com/content/18/1/54、９ＰＢＳの３ページ）。切片を、ブロッキング溶液で希釈した（１：４００）特定の抗－ヒトβ２ミクログロブリンポリクローナル抗体（Ａｂｃａｍ）と共に室温で４０分間インキュベートした。ＰＢＳで３回よく洗浄した後、切片をブロッキング溶液で希釈した（１：１０００）二次抗体と共に室温で４０分間インキュベートした。ＥｎＶｉｓｉｏｎ検出システム（ＤＡＫＯ）を用いて一次抗体を検出し、ジアミノベンジジン（ＤＡＢ；ＤＡＫＯ）で視覚化した。対比染色剤である水溶性ヘマトキシリン（シグマアルドリッチ）で着色した。直接比較のため、すべてのスライドを単一のバッチで処理してばらつきを最小限に抑えた。
安全性試験
・動物
Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、１／２ｃｃのインスリンシリンジ、および、３０Ｇ×３／８’’の注射針（Ｔｅｒｕｍｏ、または、ＢＤバイオサイエンス）を用いて３用量のＱＰＳＣを静脈注射した。注射の前に、尾静脈を拡張させるため、ケージの下に置いた加温パッドにて１５分～２０分間マウスを温めた。死体解剖の前に、すべての動物をウレタン（２ｇ／体重（ｋｇ）、シグマアルドリッチ）で麻酔し、下顎下静脈から、または、心穿刺によって血液を採取した。
・動物
Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、１／２ｃｃのインスリンシリンジ、および、３０Ｇ×３／８’’の注射針（Ｔｅｒｕｍｏ、または、ＢＤバイオサイエンス）を用いて３用量のＱＰＳＣを静脈注射した。注射の前に、尾静脈を拡張させるため、ケージの下に置いた加温パッドにて１５分～２０分間マウスを温めた。死体解剖の前に、すべての動物をウレタン（２ｇ／体重（ｋｇ）、シグマアルドリッチ）で麻酔し、下顎下静脈から、または、心穿刺によって血液を採取した。
血液サンプルの採集
血液分析のため、血液サンプル全体を、ＥＤＴＡ入り採血管（ＢＤバイオサイエンス、カタログ番号３６５９７４）に集めた。血液化学分析のため、血液サンプル全体を、血清分離剤入り採血管（ＢＤバイオサイエンス、カタログ番号３６５９６７）に集めた。続いて、採血管を室温で２０分立てておき、４℃で５分間、６０００ｒｐｍの遠心分離にかけて血清を分離した。
血液分析のため、血液サンプル全体を、ＥＤＴＡ入り採血管（ＢＤバイオサイエンス、カタログ番号３６５９７４）に集めた。血液化学分析のため、血液サンプル全体を、血清分離剤入り採血管（ＢＤバイオサイエンス、カタログ番号３６５９６７）に集めた。続いて、採血管を室温で２０分立てておき、４℃で５分間、６０００ｒｐｍの遠心分離にかけて血清を分離した。
肉眼的検死および組織採取
採血後、マウスの臓器を採取し、それぞれを２つの部分に分割した。
（１）臓器の半分を－８０℃のフリーザーで保存し、その後、生物学的分布検査のために液体窒素容器に移して保存した。
（２）他の半分を固定し（４％パラホルムアルデヒド、シグマアルドリッチ）、組織病理学的分析のためにパラフィン包埋した。
採血後、マウスの臓器を採取し、それぞれを２つの部分に分割した。
（１）臓器の半分を－８０℃のフリーザーで保存し、その後、生物学的分布検査のために液体窒素容器に移して保存した。
（２）他の半分を固定し（４％パラホルムアルデヒド、シグマアルドリッチ）、組織病理学的分析のためにパラフィン包埋した。
定量ＰＣＲ
トータルＲＮＡミニプレップ精製キット（ＧＭバイオラボ カタログ番号ＴＲ０１）を製造業者の説明書どおりに用いて、ＱＰＳＣまたはマウス組織から全ＲＮＡを抽出した。その後、ｃＤＮＡ合成のために２ステップＭＭＬＶ ＲＴ－ＰＣＲキット（ＧＭバイオラボ カタログ番号ＲＰ０１２－Ｍ）を用いた。選択された遺伝子の相対的発現分析のための定量ＰＣＲを、Ｆａｓｔ ＳＹＢＲ（登録商標）Ｇｒｅｅｎ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｔｈｅｒｍｏ カタログ番号４３８５６１２）を用いて行った。
トータルＲＮＡミニプレップ精製キット（ＧＭバイオラボ カタログ番号ＴＲ０１）を製造業者の説明書どおりに用いて、ＱＰＳＣまたはマウス組織から全ＲＮＡを抽出した。その後、ｃＤＮＡ合成のために２ステップＭＭＬＶ ＲＴ－ＰＣＲキット（ＧＭバイオラボ カタログ番号ＲＰ０１２－Ｍ）を用いた。選択された遺伝子の相対的発現分析のための定量ＰＣＲを、Ｆａｓｔ ＳＹＢＲ（登録商標）Ｇｒｅｅｎ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｔｈｅｒｍｏ カタログ番号４３８５６１２）を用いて行った。
ＥＬＩＳＡ
ＱＰＳＣのＥＧＦ、ＦＧＦ－ｂ、ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ、および、ＴＧＦ－ｂ１の細胞内および分泌濃度を測定すべく、細胞溶解物、および、馴化培地を以下のように準備した。
ＱＰＳＣのＥＧＦ、ＦＧＦ－ｂ、ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ、および、ＴＧＦ－ｂ１の細胞内および分泌濃度を測定すべく、細胞溶解物、および、馴化培地を以下のように準備した。
凍結溶解法によってＱＰＳＣを溶解し、超遠心分離の後、細胞ライセートの上澄みを採取した。そして、馴化培地採取のため、ＱＰＳＣ培養の３日後に培地を採取した。最後に、上記成長因子の濃度を、製造業者の説明書に従い（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）、ＥＬＩＳＡによって決定した。
神経細胞の共培養試験
ヒトアストロサイト細胞株であるＳＶＧ ｐ１２を１２５０ｕＭの１－メチル－４－フェニルピリジン（ＭＰＰ＋）で処理し、異なる比率でＱＰＳＣと共培養した（ＳＶＧ ｐ１２：ＱＰＳＣ＝１：０．１～１：１０）。２４時間後、ＳＶＧ ｐ１２の細胞数を数えた。
ヒトアストロサイト細胞株であるＳＶＧ ｐ１２を１２５０ｕＭの１－メチル－４－フェニルピリジン（ＭＰＰ＋）で処理し、異なる比率でＱＰＳＣと共培養した（ＳＶＧ ｐ１２：ＱＰＳＣ＝１：０．１～１：１０）。２４時間後、ＳＶＧ ｐ１２の細胞数を数えた。
［実施例１］ ＱＰＳＣは、ＳＣＡ３の表現型を変化させる
ＱＰＳＣは、ＳＣＡ３マウスの表現型を変化させた。図１に示すように、ＳＣＡ３マウスの首の付け根は、野生型マウスよりわずかに太く、ＱＰＳＣでの治療後は、ＳＣＡ３マウスの外見は、野生型マウスと同じように見える。ｍｏｄｉｆｉｅｄ ＳＨＩＲＰＡ（図４および図５）、フットプリント分析（図６および図７）、および、ロータロッド試験（図５の（Ｃ））などのさまざまな機能テストにおいても同様の改善結果が観察された。
ＱＰＳＣは、ＳＣＡ３マウスの表現型を変化させた。図１に示すように、ＳＣＡ３マウスの首の付け根は、野生型マウスよりわずかに太く、ＱＰＳＣでの治療後は、ＳＣＡ３マウスの外見は、野生型マウスと同じように見える。ｍｏｄｉｆｉｅｄ ＳＨＩＲＰＡ（図４および図５）、フットプリント分析（図６および図７）、および、ロータロッド試験（図５の（Ｃ））などのさまざまな機能テストにおいても同様の改善結果が観察された。
［実施例２］ 本発明の治療は、臓器組織への副作用なしに体重減少を阻止する
ＱＰＳＣは、疾患が進行中のＳＣＡ３マウスの体重減少を阻止したが（図３）、３用量のＱＰＳＣ（３回のＱＰＳＣ投与）は、個々のＳＣＡ３マウスの完全な血球数（全血球数）（表４）、または、血液生化学（表５）のプロファイルには影響を及ぼさなかった。表４および表５は、ＱＰＳＣを１週間ごとに３用量投与した２５～３０週齢の野生型マウスの完全な血球数／血液生化学プロファイルは、食塩水を１週間ごとに３用量投与したものと何ら違いはないことを示している。組織病理学的分析は、３用量のＱＰＳＣを注射後の、さまざまな重要臓器組織における正常所見を示した（図２）。
ＱＰＳＣは、疾患が進行中のＳＣＡ３マウスの体重減少を阻止したが（図３）、３用量のＱＰＳＣ（３回のＱＰＳＣ投与）は、個々のＳＣＡ３マウスの完全な血球数（全血球数）（表４）、または、血液生化学（表５）のプロファイルには影響を及ぼさなかった。表４および表５は、ＱＰＳＣを１週間ごとに３用量投与した２５～３０週齢の野生型マウスの完全な血球数／血液生化学プロファイルは、食塩水を１週間ごとに３用量投与したものと何ら違いはないことを示している。組織病理学的分析は、３用量のＱＰＳＣを注射後の、さまざまな重要臓器組織における正常所見を示した（図２）。
データは平均値±標準偏差で示している。
データは、平均値±標準偏差で示している。
［実施例３］ 本発明の治療を用いたマウスにおける免疫調節および抗ＲＯＳ能力、および、神経栄養因子および成長因子の発現。
インビトロ検査では、ＱＰＳＣは、免疫調節および抗ＲＯＳ能力を有する（図１０）ばかりでなく、神経栄養因子および成長因子を発現する能力も有する（図１２）。インビトロ検査は、ＱＰＳＣで治療した後に酸化ストレスを受けたＳＣＡマウスのロータロッド能力の向上を示した（図１１）。さらに、ＱＰＳＣは、インビトロ（図１３）でもインビボ（図１４－１および図１４－２）でもニューロンの減少を防ぐことができるだろう。細胞が脳血液関門（ＢＢＢ）を移動する可能性には疑問が呈されてきたが、ＱＰＳＣの静脈注射による頭蓋内局在化能力が示されている（図８および図９）。
したがって、ＱＰＳＣは、静脈注射を介してＢＢＢを通り抜けて小脳に達し、ＳＣＡ患者の神経細胞をＲＯＳおよび免疫過剰反応による損傷から保護する、と結論づけてよいだろう。さらに、ＱＰＳＣは、神経栄養因子および成長因子を発現して多数の神経細胞を維持するので、ポリグルタミン脊髄小脳失調症、マチャド・ジョセフ病、ハンチントン病、ＤＲＰＬＡ、および、ＳＭＡＸ１／ＳＢＭＡなどのポリグルタミン病の進行を遅らせる。
ＩＩ．ヒトの臨床試験
ポリグルタミン媒介性疾患（脊髄小脳失調症、マチャド・ジョセフ病、ハンチントン病、ＤＲＰＬＡ、および、ＳＭＡＸ１／ＳＢＭＡなど）を治療するために、無作為二重盲式プラセボ対照試験設計を用いて、ステムカイマル（登録商標）注射の治療効果および安全性を検査した。適格な被検体にステムカイマル（登録商標）を静脈注射する。
ポリグルタミン媒介性疾患（脊髄小脳失調症、マチャド・ジョセフ病、ハンチントン病、ＤＲＰＬＡ、および、ＳＭＡＸ１／ＳＢＭＡなど）を治療するために、無作為二重盲式プラセボ対照試験設計を用いて、ステムカイマル（登録商標）注射の治療効果および安全性を検査した。適格な被検体にステムカイマル（登録商標）を静脈注射する。
ポリグルタミン脊髄小脳失調症の一例として、被検体は、遺伝子型で確認済みの脊髄小脳失調２型または脊髄小脳失調３型にかかっている。被検体の基準ＳＡＲＡスコアは、５～１５である。
２．５×１０７細胞／体重（ｋｇ）のステムカイマル（登録商標）を解凍し、準備して、シリンジに充填した。解凍から１時間以内に細胞をゆっくり注入した。２週間ごとに３回、各被検体にステムカイマル（登録商標）を静脈注射して細胞を投与した。１以上の治療サイクル後、被検体のＳＡＲＡスコアが低下し、ＳＣＡ２またはＳＣＡ３の状態が改善した。
Claims (16)
- 被検体のポリグルタミン病を治療する方法であって、
前記被検体に、単位用量としての有効量の幹細胞を非経口または局所投与することを含み、
前記投与は、１以上の治療サイクルで行われ、
１つの治療サイクルは、２～６週間の投与間隔で、それぞれ３単位用量を投与することを含む、方法。 - 前記ポリグルタミン病は、脊髄小脳失調症（ＳＣＡ）、マチャド・ジョセフ病（ＭＪＤ／ＳＣＡ３）、ハンチントン病（ＨＤ）、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症（ＤＲＰＬＡ）、または、Ｘ連鎖球脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡＸ１／ＳＢＭＡ）を含む、請求項１に記載の方法。
- 前記ＳＣＡは、ＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＳＣＡ３、ＳＣＡ６、ＳＣＡ７、または、ＳＣＡ１７である、請求項１に記載の方法。
- 前記ＳＣＡは、ＳＣＡ２、ＳＣＡ３、または、ＳＣＡ６である、請求項１に記載の方法。
- 前記ＳＣＡは、ＳＣＡ３である、請求項１に記載の方法。
- 前記幹細胞は、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）集団、脂肪組織由来幹細胞（ＡＤＳＣ）集団、眼窩脂肪由来幹細胞（ＯＦＳＣ）集団、または、四重陽性間質細胞（ＱＰＳＣ）集団である、請求項１に記載の方法。
- 前記ＱＰＳＣ集団は、少なくとも７０％の細胞均一性を有し、ＣＤ２７３、ＣＤ４６、ＣＤ５５、および、ＣＸＣＲ４の細胞マーカを発現するが、ＣＤ４５の細胞マーカは発現せず、
ＣＤ２７３は、７０％を上回る強度で積極的に発現する、請求項１に記載の方法。 - 前記ＡＤＳＣは、少なくともＣＤ９０、ＣＤ１０５、ＣＤ２９、ＣＤ４４、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ４９ｅ、ＣＤ５８、および、ＨＬＡ－ＡＢＣは発現するが、ＣＤ１３３、ＣＤ３１、ＣＤ１０６、ＣＤ１４６、ＣＤ４５、ＣＤ１４、ＣＤ１１７は発現しないＯＦＳＣ集団である、請求項１に記載の方法。
- 前記非経口投与は、筋肉内、静脈内、動脈内、または、皮下投与を含む、請求項１に記載の方法。
- 前記非経口投与は、静脈内投与を含む、請求項１に記載の方法。
- 前記局所投与は、脳内または頭蓋内投与を含む、請求項１に記載の方法。
- 前記局所投与は、頭蓋内投与を含む、請求項１に記載の方法。
- 前記単位用量は、０．５×１０５～５×１０１０細胞／体重（ｋｇ）である、請求項１に記載の方法。
- 初回の治療サイクルの後、前記被検体の総ＳＡＲＡスコアが１か月間で５を上回れば、次の治療サイクルが実行される、請求項１に記載の方法。
- 前記投与間隔は、隔週である、請求項１に記載の方法。
- 前記幹細胞は、１つ以上の追加の治療薬と共に、または、他の治療的介入と組み合わせて、同時に、または、いかなる順序で連続して投与されることができる、請求項１に記載の方法。
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