JP2022102451A - 空間用ウイルス不活性化剤及びウイルス不活性化方法 - Google Patents
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Abstract
Description
図1は、本発明の実施形態1に係る空間用ウイルス不活性化器具1を上方から見た斜視図である。本実施形態1の空間用ウイルス不活性化器具1の形状や構造はあくまでも一例であり、図示する形状や構造に限られるものではない。
図1及び図2に基づいて装置本体5の構成について説明する。装置本体5は、ベース部材30と、送風機としてのファン50と、ファン50を駆動する電動モーター51と、電動モーター51に電力を供給する電池(図示せず)とを有している。ファン50、電動モーター51及び電池は、装置本体5のベース部材30に収容されるようになっている。
次に、空間用ウイルス不活性化器具1の動作について説明する。空間用ウイルス不活性化器具1の電源を入れると、電動モーター51が作動する。電動モーター51が作動すると、ファン50が回転駆動され、ファン50の上方から空気を吸い込んで側方から流出させる。この空気の流れにより、図2に矢印ロで示すようにカバー40の上方の空気がカバー40の空気流通孔40aからカートリッジ収容空間Rに吸入される。カートリッジ収容空間Rには、カートリッジ2が収容されているので、吸入された空気は、カートリッジ2に向けて流れて、カートリッジ2のケース3の上部に形成されている流入用開口部3aからケース3の内部に流入する。ケース3の内部に流入した空気は、ケース3の下壁部に形成された空気流通孔3bからケース3の外部に流出する。ケース3の外部に流出した液剤を含む空気は、装置本体5の左右の液剤放散孔55、55にそれぞれ流入した後、図2に矢印イで示すように、各液剤放散孔55から外部の空間に放散される。
図4は、本発明の実施形態2に係る空間用ウイルス不活性化エアゾール製品100の斜視図である。エアゾール製品100は、ウイルス不活性化の有効成分としてのベンジルアルコールを含有する空間用ウイルス不活性化剤と、噴射剤と、空間用ウイルス不活性化剤及び噴射剤を収容したエアゾール容器101と、噴射ボタン102と、噴射バルブ103とを備えている。空間用ウイルス不活性化剤には、ベンジルアルコール以外の成分が含まれていてもよい。噴射剤は、エアゾール容器101に収容されている空間用ウイルス不活性化剤を空間へ噴射させるためのものであり、例えば液化石油ガス(LPG)やジメチルエーテル(DME)等である。液化石油ガスとジメチルエーテルの一方のみ用いてもよいし、任意の比率で混合して用いてもよい。
次に、ウイルス不活性化方法について説明する。ウイルス不活性化方法は、実施形態1の空間用ウイルス不活性化器具1を用いて実行することができるとともに、実施形態2のエアゾール製品100を用いて実行することもできる。対象となる空間は、例えば一般家庭の部屋、事務所、店舗、教室、各種イベントスペース、車両の室内、航空機の室内、船舶の室内等を挙げることができるが、これら以外の空間を対象とすることもできる。
本試験は、ベンジルアルコールを有効成分とする空間用ウイルス不活性化剤を空間に揮発させ、当該空間内の物体表面のウイルスへの不活性化効果を確認したものである。
1.容積が10Lのガラスシリンダーを設置し、ガラスシャーレに入れた目的量のベンジルアルコール(空間用消臭剤)をガラスシリンダー内に入れておく。ベンジルアルコールの量は0.002mgであり、ベンジルアルコールの全量が揮発すると、ガラスシリンダー内のベンジルアルコールの気中濃度は0.05ppmとなる。また、ベンジルアルコールの量を0.0009mgとすることで、ガラスシリンダー内のベンジルアルコールの気中濃度は0.02ppmとなる。
2.調湿用の飽和水溶液をガラスシリンダー内に入れる。
3.ウイルス50μLを2cm×2cmの金巾布に塗布する。
4.当該金巾布を前記ガラスシリンダー内に配置し、揮発したベンジルアルコールを含む空気に、30分間または1時間接触させる。
5.接触後の金巾布をガラスシリンダーから取り出し、マイクロチューブに入れる。
6.PBS(リン酸緩衝液)350μLを金巾布に浸透させるように入れ、上下にPBSを移動させるようにマイクロチューブを叩く。
7.金巾布およびPBSを入れたマイクロチューブの底部に熱したピンセットで穴をあけるとともに、その下に別のマイクロチューブを重ねる。2つのマイクロチューブを重ねた状態で、25℃・10000rpmで1分間遠分離する。
8.サンプル数×8のマイクロチューブを用意し、450μLずつDMEMを分注しておく。
9.遠心分離後に、下のマイクロチューブに落ちたウイルス液を50μLとって、DMEMを分注したマイクロチューブの1つに入れて希釈する。希釈後のウイルス液を50μLとって、前記同様に順次8段階希釈する。
10.培養各細胞を培養した培養プレート用意し、各ウェルの培養液をアスピレーターで抜いておく。
11.8段階に希釈したウイルス液を、それぞれ50μLウェルに分注する。
12.37℃、二酸化炭素5%のインキュベーターで60分インキュベートする。
13.反応後に、ウイルス液を除去し、DMEMを各ウェルに100μLずつ打ち、4日間培養する。
14.エタノール:酢酸=4:1(重量比)を各ウェルに100μL程度注ぎ、固定化する。時間は、40分程度である。
15.固定化液を除いた後、アミドブラック0.5%in45%エタノール,10%酢酸を30μLずつ注ぎ、細胞を染色する。
16.水を溜めた容器にプレートごと浸し、細胞が傷つかないように染色液を洗い流す。
17.常法によりウイルス感染価TCID50を求めた。
空間に放散された空間用ウイルス不活性化剤(ベンジルアルコール)は、少なくともその一部が空間内の物体の表面に付着する。本試験は、空間をベンジルアルコールで処理した後、当該空間内の物体表面にベンジルアルコールが付着したことを想定したもので、ベンジルアルコールが付着した後、当該物体表面における抗ウイルス作用がどれだけ持続するかを確認したものである。
1.2×2cmの金巾布に指定量のベンジルアルコールを塗布し、解放空間にて指定日数(3日、7日、14日、21日)静置する。
2.指定日数経過後の金巾布に、インフルエンザウイルス、またはネコカリシウイルスを50μL塗布し、2時間(ISO基準)直接接触させる。
3.接触後の金巾布をマイクロチューブに入れる。
4.PBS(リン酸緩衝液)350μLを金巾布に浸透させるように入れ、上下にPBSを移動させるようにマイクロチューブを叩く。
5.金巾布およびPBSを入れたマイクロチューブの底部に熱したピンセットで穴をあけるとともに、その下に別のマイクロチューブを重ねる。2つのマイクロチューブを重ねた状態で、25℃・10000rpmで1分間遠分離する。
6.サンプル数×8のマイクロチューブを用意し、450μLずつDMEMを分注しておく。
7.遠心分離後に、下のマイクロチューブに落ちたウイルス液を50μLとって、DMEMを分注したマイクロチューブの1つに入れて希釈する。希釈後のウイルス液を50μLとって、前記同様に順次8段階希釈する。
8.培養細胞を培養した培養プレートを用意し、各ウェルの培養液をアスピレーターで抜いておく。
9.8段階に希釈したウイルス液を、それぞれ50μLウェルに分注する。
10.37℃、二酸化炭素5%のインキュベーターで60分インキュベートする。
11.反応後に、ウイルス液を除去し、DMEMを各ウェルに100μLずつ打ち、4日間培養する。
12.エタノール:酢酸=4:1(重量比)を各ウェルに100μL程度注ぎ、固定化する。時間は、40分程度である。
13.固定化液を除いた後、アミドブラック0.5%in45%エタノール,10%酢酸を30μLずつ注ぎ、細胞を染色する。
14.水を溜めた容器にプレートごと浸し、細胞が傷つかないように染色液を洗い流す。
15.常法によりウイルス感染価TCID50を求めた。
次に、空気中に浮遊しているウイルス(浮遊ウイルス)の不活化試験について説明する。本試験における供試剤は、ベンジルアルコールを含む全量噴霧型エアゾールである。具体的には、表2に示すような組成のエアゾール剤としてエアゾール容器に収容し噴射ボタンを押し下げることで内容物の全量を噴霧するように構成されている。試験空間は、2畳程度の部屋を想定したチャンバーであり、具体的には、幅186cm、奥行186cm、高さ186cmの大きさである。この試験空間で供試剤を全量噴霧したときのベンジルアルコールの気中濃度は26ppmである。
1.ディープフリーザーに-40℃で保管している大腸菌ファージを取り出し室温で融解させる。尚、本試験では、インフルエンザウイルス等の代わりに、大腸菌ファージを使用するが、大腸菌ファージはエンベロープウイルスに近い構造をしており、インフルエンザウイルス等の代替になると考えられる。
2.生理食塩水10mLに対して大腸菌ファージ10μLを加え攪拌する。
3.ネブライザーにファージ液を入れ、チャンバー内に15分間噴霧する。
4.ファージ液の噴霧開始とほぼ同時に、供試剤の噴霧を開始する(全量噴霧が完了するまで数十秒程度 )。
5.噴霧開始から15分後、30分後、1時間後、2時間後、3時間、4時間後のそれぞれのタイミングで、浮遊しているファージをインピンジャーにて回収する。
6.1.5mL滅菌チューブにLB 液体培地を450μL加える。
7.回収したファージ液を前記1.5mLチューブに加え、10-5まで段階希釈を行う。
8.ファージ用の大腸菌の前培養液を50mLコニカルチューブに移し1500rpmで15分間遠心分離を行う。
9.遠心後、10mLまでメスアップする。
10.新しい1.5mL滅菌チューブに大腸菌液を350μL分注する。
11.チューブに分注した大腸菌液に、ファージ液の希釈液350μLを加え、混合液とする。
12.LB寒天培地(シャーレまたはLB6穴プレート)を冷蔵庫から取り出し、40℃インキュベーターに移動する。
13.恒温槽で40℃~43℃に調整したLBソフトアガーに混合液を100μL(6穴プレートを用いる場合)または200μL(シャーレを用いる場合)加える。
14.混合液を加えたソフトアガーを寒天培地に全量注ぎ、一定時間放置し固まるまで待つ。
15.固まった後のシャーレ、または6穴プレートを40℃のインキュベーターに保管し、24時間後プラークを確認する。
本願発明者らの検討により、本発明の空間用ウイルス不活性化剤の有効成分であるベンジルアルコールは、空間での消臭効果があることが確認された。以下、この消臭効果について説明する。
1.容積が10Lのガラスシリンダーを用意し、そのガラスシリンダーの上端をガラス製の蓋で閉塞し、下端も同様に閉塞する。
2.ガラスシリンダー内にろ紙(ADVANTEC,No5A,90mm)を入れたシャーレを置いた。ろ紙にアンモニアを塗布した。アンモニアは、0.4%水溶液で準備し、その水溶液を0.25mL塗布した。
3.ガラスシリンダー内にアンモニアが充満するまで待ち、充満した後、ろ紙をガラスシリンダーから取り出す。
4.別のろ紙に供試剤を所定量塗布し、ガラスシリンダー内に置く。供試剤は、空間用ウイルス不活性化剤(ベンジルアルコール)である。0.0022mgのベンジルアルコールをろ紙に塗布した。全量が揮発すると、ガラスシリンダー内のベンジルアルコールの気中濃度は0.05ppmとなる。
5.供試剤を塗布したろ紙をガラスシリンダー内に置いて蓋をした直後から経過時間を測定するとともに、所定時間経過毎に、検知管を使用してガラスシリンダー内の気中の悪臭成分の濃度を測定した。検知管は、「ガステック 気体検知管 No.36L アンモニア」である。
次に、家庭内の各種悪臭の一つであるイソ吉草酸に対する空間用ウイルス不活性化剤による消臭効果確認試験について説明する。試験系はアンモニアの試験と同様である。異なる点は、工程2において、ろ紙にイソ吉草酸を塗布した点である。イソ吉草酸は、0.4%水溶液で準備し、その水溶液を0.3mL塗布した。工程5において濃度測定に用いた検知管は、「ガステック 気体検知管 No.81L 酢酸」である。
次に、家庭内の各種悪臭の一つであるジアセチルに対する空間用ウイルス不活性化剤による消臭効果確認試験について説明する。試験系はアンモニアの試験と同様である。異なる点は、工程2において、ろ紙にジアセチルを塗布した点である。ジアセチルは、0.1%溶液をイオン交換水で希釈し、300μL塗布した。工程5において濃度測定に用いた検知管は、「ガステック 気体検知管 アセトアルデヒド」である。
次に、家庭内の各種悪臭の一つであるトリメチルアミンに対する空間用ウイルス不活性化剤による消臭効果確認試験について説明する。試験系はアンモニアの試験と同様である。異なる点は、工程2において、ろ紙にトリメチルアミンを塗布した点である。トリメチルアミンは、0.1%溶液をイオン交換水で希釈し、300μL塗布した。工程5において濃度測定に用いた検知管は、「ガステック 気体検知管 アミン類」である。
次に、家庭内の各種悪臭の一つであるメルカプタンに対する空間用ウイルス不活性化剤による消臭効果確認試験について説明する。試験系はアンモニアの試験と同様である。異なる点は、工程2において、ろ紙にメルカプタン標準液を200μL塗布した点である。工程5において濃度測定に用いた検知管は、「ガステック 気体検知管 メルカプタン」である。
次に、家庭内の各種悪臭の一つであるトリクロロアニソール(2,4,6-トリクロロアニソール)に対する空間用ウイルス不活性化剤による消臭効果確認試験について説明する。なお、トリクロロアニソールの濃度を測定するための適当な検知管が入手できなかったことから、官能試験により消臭効果を確認した。
1.容積が10Lのガラスシリンダーを用意し、そのガラスシリンダーの上端をガラス製の蓋で閉塞し、下端も同様に閉塞する。
2.4μg/mlトリクロロアニソールin99%エタノール1mLをろ紙に滴下し、このろ紙をガラスシリンダー内に入れる。
3.ガラスシリンダー内にトリクロロアニソールが充満するまで待ち、充満した後、ろ紙をガラスシリンダーから取り出す。
4.別のろ紙に供試剤を所定量塗布し、ガラスシリンダー内に置く。供試剤は、空間用ウイルス不活性化剤(ベンジルアルコール)である。0.0022mgのベンジルアルコールをろ紙に塗布した。全量が揮発すると、ガラスシリンダー内のベンジルアルコールの気中濃度は0.05ppmとなる。
5.供試剤を塗布したろ紙をガラスシリンダー内に置いて蓋をした直後から1時間経過した時点でのガラスシリンダー内のにおいを官能で確認した。尚、トリクロロアニソールの濃度は、東京家政大学オフフレーバー研究会の官能パネルの異臭識別能力測定法でのTCA濃度を参考にして設定した。
次に、家庭内の各種悪臭の一つであるノネナールに対する空間用ウイルス不活性化剤による消臭効果確認試験について説明する。試験系は、トリクロロアニソールの場合と同様である。異なる点は、工程2において、0.4%ノネナールin99%エタノール0.4mLをろ紙に滴下した点である。
また、本願発明者らの検討により、本発明の空間用ウイルス不活性化剤の有効成分であるベンジルアルコールは、除菌・抗菌の効果があることも確認されている。そこで次に、空間用ウイルス不活性化剤による効力試験として、黄色ぶどう球菌に対する効力試験について説明する。供試菌は、Staphlococcus aureus(黄色ブドウ球菌)NBRC12732:グラム陽性球菌である。前培地として、ニュートリエント液体培地(普通寒天培地の寒天抜き)を調製し、坂口フラスコに約300mlずつ分注する。坂口フラスコに綿線をセットし、オートクレーブで滅菌する。液体培地は体温程度まで下がれば使用可とする。継代培養中の菌を1白金耳取り、液体培地中に播種する。培養室の振盪培養器にて、48時間振盪培養する。これにより、およそ10^8CFU/mlになる。なお、ニュートリエント液体培地は、1000ml中、肉エキス5.0g、ペプトン10.0g、塩化ナトリウム5.0g、イオン交換水1000gとしている。
次に、空間用ウイルス不活性化剤による効力試験として、大腸菌に対する効力試験について説明する。供試菌は、Escherichia coli (大腸菌)である。前培地は「黄色ぶどう球菌に対する試験」で使用したものと同じである。ただし、振盪培養器による振盪培養は24時間とする。これにより、およそ10^8CFU/mlになる。
次に、空間用ウイルス不活性化器具1による効力試験として、大腸菌に対する効力試験について説明する。供試菌は、Escherichia coli (大腸菌)である。前培地は、「黄色ぶどう球菌に対する試験」で使用したものと同じである。本試験では、まず、10^7CFU/mlに調製した菌懸濁液10mlを摂取し、遠心分離機にかける。得られた菌の沈殿の上澄みを捨て、1mlの生理食塩水を加えることで10^6CFU/mlの菌液を調製する。10^6CFU/mlに調製した菌液200μlを摂取し、2cm×2cmの金巾布に塗布する。
次に、解放系における大腸菌に対する効力試験結果について説明する。まず、試験片として2cm×2cmの金巾布を用意し、この金巾布をオートクレーブで滅菌する。その後、ベンジルアルコール溶液(132μl)を自然蒸散させ、金巾布に付着させる。この金巾布を3日、7日、10日、14日、23日、36日の間、開放系に静置する。規定日数静置した試験片それぞれに1.0×10^6CFU/mlの大腸菌を100μl塗布した後、24時間培養し、SCDLP液体培地で洗い出し、5段階希釈後、SCDLP寒天培地に塗布し24時間培養する。その後、コロニー数をカウントした。
次に、抗かび試験(真菌に対する試験)について説明する。供試菌は白癬菌である。
2 カートリッジ
4 液剤保持体(含浸体)
50 ファン
Claims (5)
- ベンジルアルコールをウイルス不活性化の有効成分として含有することを特徴とする空間用ウイルス不活性化剤。
- ベンジルアルコールをウイルス不活性化の有効成分として空間に放散することを特徴とするウイルス不活性化方法。
- 請求項2に記載のウイルス不活性化方法におい
て、
前記ベンジルアルコールを噴射剤と共に収容したエアゾール容器から前記ベンジルアルコールを空間に噴射することを特徴とするウイルス不活性化方法。 - 請求項2に記載のウイルス不活性化方法において、
前記ベンジルアルコールを含浸体に含浸させておき、当該含浸体に対して送風することにより、前記ベンジルアルコールを空間に放散させることを特徴とするウイルス不活性化方法。 - 請求項2から4のいずれか1つに記載のウイルス不活性化方法において、
前記ベンジルアルコールの気中濃度が0.05ppm以上となるように前記ベンジルアルコールを空間に放散させることを特徴とするウイルス不活性化方法。
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