JP2022069740A - オートファジー阻害剤及び抗癌剤 - Google Patents

Abstract

【課題】癌組織における間質細胞の活性化を抑制することができるオートファジー阻害剤及び抗癌剤を提供する。【解決手段】オートファジー阻害剤は、フラボピリドール、トリコスタチンＡ、ＰＤ－１６１５７０、ニトラリン、フルスピリレン、セルチンドール、ＣＰ－３１３９８、２－ＣＭＤＯ、ピペラセタジン、ペンブトロール、アミトリプチリン、アリメマジン、ナホキシジン、チオチキセン、ズクロペンチキソール、ＭＳ－２７５、ハイカントン、ＣＰ－５３６３１、チエチルペラジン、ゾテピン、ＣＩＳ－（Ｚ）－フルペンチキソール、デュロキセチン、ＩＣＩ－１９９４４１、デプトロピン、３－ＣＰＭＴ、メトトリメプラジン、アゼラスチン、デスロラタジン、パロキセチン、ハロファントリン、３，４’，５ートリメトキシ－ｔｒａｎｓ－スチルベン、及びその塩、並びにそれらの溶媒和物からなる群から選択される少なくとも１種を含む。【選択図】図９

Description

本発明は、オートファジー阻害剤及び抗癌剤に関する。

膵癌の５年生存率は１０％と極めて低く、膵癌の予後の改善が社会的急務となっている。膵癌は過剰な間質を特徴とする。膵癌細胞と様々な間質細胞との相互作用が膵癌細胞の悪性度を高めている。膵癌細胞との癌間質相互作用における主要な間質細胞は膵星細胞（Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ Ｓｔｅｌｌａｔｅ Ｃｅｌｌ；ＰＳＣ）と呼ばれる線維芽細胞である。

ＰＳＣは、ＩＬ－６及びＴＧＦ－β等のサイトカインを産生し、癌間質相互作用により癌細胞の浸潤及び転移を促進する。さらに、ＰＳＣがコラーゲン及びフィブロネクチン等の細胞外基質を産生することによって、乏血管組織が形成される。乏血管組織によって、膵癌組織への薬剤送達性が低下するため、抗癌剤治療抵抗性が亢進する。

膵癌細胞との直接の接触、及び膵癌細胞から分泌される増殖因子等の液性因子との癌間質相互作用によって、ＰＳＣは休眠（ｑｕｉｅｓｃｅｎｔ）状態から活性化状態に移行する。

非特許文献１において、ＰＳＣの活性化にオートファジーが関与しており、ＰＳＣの活性を抑制することで膵癌の浸潤及び転移が抑制されることが報告されている。このことから、オートファジーの抑制が膵癌の治療に有効であることが示唆された。

特許文献１には、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）で標識したｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｉｇｈｔ ｃｈａｉｎ ３（ＬＣ３）と、赤色蛍光タンパク質（ＲＦＰ）で標識したＬＣ３のグリシン欠損体（ＬＣ３ΔＧ）と、を発現するＨｅＬａ細胞を使用したスクリーニング方法で同定されたオートファジー阻害剤が開示されている。ＧＦＰで標識されたＬＣ３はオートファジーによって分解されるが、ＲＦＰで標識されたＬＣ３ΔＧは分解されずに細胞内にとどまる。オートファジーが阻害されるとＧＦＰ／ＲＦＰ比が上昇するため、ＧＦＰ／ＲＦＰ比を指標にオートファジーの阻害が評価できる。

特開２０１８－００２６１９号公報

Ｓｈｏ Ｅｎｄｏ、外２０名、"Ａｕｔｏｐｈａｇｙ Ｉｓ Ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ Ｓｔｅｌｌａｔｅ Ｃｅｌｌｓ， Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｗｉｔｈ Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ Ｃａｎｃｅｒ Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ Ｐｒｏｍｏｔｅｓ Ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ Ｔｕｍｏｒｓ ｉｎ Ｍｉｃｅ"、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ、２０１７年、１５２（６）、ｐ．１４９２－１５０６

上記の特許文献１に開示されたスクリーニング方法では、ＰＳＣではない子宮頸部癌細胞株であるＨｅＬａ細胞を使用している。このため、同定されたオートファジー阻害剤が癌間質相互作用において重要なＰＳＣ等の間質細胞の活性化を抑制するか不明である。

本発明は上述の事情に鑑みてなされたものであり、癌組織における間質細胞の活性化を抑制することができるオートファジー阻害剤及び抗癌剤を提供することを目的とする。

ＰＳＣは正常膵ではビタミンＡ含有脂肪滴を細胞質に有する休眠状態で存在する。炎症が生じるとＰＳＣは活性化され、脂肪滴が消失し、筋線維芽細胞様に形態変化する。本発明者は、オートファジーの阻害及びＰＳＣの活性化抑制のマーカーとして脂肪滴に着目し、鋭意研究を重ね、オートファジーを抑制し、かつＰＳＣの休眠状態を誘導できる化合物を同定した。

本発明の第１の観点に係るオートファジー阻害剤は、
フラボピリドール、トリコスタチンＡ、ＰＤ－１６１５７０、ニトラリン、フルスピリレン、セルチンドール、ＣＰ－３１３９８、２－ＣＭＤＯ、ピペラセタジン、ペンブトロール、アミトリプチリン、アリメマジン、ナホキシジン、チオチキセン、ズクロペンチキソール、ＭＳ－２７５、ハイカントン、ＣＰ－５３６３１、チエチルペラジン、ゾテピン、ＣＩＳ－（Ｚ）－フルペンチキソール、デュロキセチン、ＩＣＩ－１９９４４１、デプトロピン、３－ＣＰＭＴ、メトトリメプラジン、アゼラスチン、デスロラタジン、パロキセチン、ハロファントリン、３，４’，５ートリメトキシ－ｔｒａｎｓ－スチルベン、及びその塩、並びにそれらの溶媒和物からなる群から選択される少なくとも１種を含む。

上記本発明の第１の観点に係るオートファジー阻害剤は、
セルチンドール、ナホキシジン、ズクロペンチキソール、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を含む、
こととしてもよい。

本発明の第２の観点に係る抗癌剤は、
フラボピリドール、トリコスタチンＡ、ＰＤ－１６１５７０、ニトラリン、フルスピリレン、セルチンドール、ＣＰ－３１３９８、２－ＣＭＤＯ、ピペラセタジン、ペンブトロール、アミトリプチリン、アリメマジン、ナホキシジン、チオチキセン、ズクロペンチキソール、ＭＳ－２７５、ハイカントン、ＣＰ－５３６３１、チエチルペラジン、ゾテピン、ＣＩＳ－（Ｚ）－フルペンチキソール、デュロキセチン、ＩＣＩ－１９９４４１、デプトロピン、３－ＣＰＭＴ、メトトリメプラジン、アゼラスチン、デスロラタジン、パロキセチン、ハロファントリン、３，４’，５ートリメトキシ－ｔｒａｎｓ－スチルベン、及びその塩、並びにそれらの溶媒和物からなる群から選択される少なくとも１種を含む。

上記本発明の第２の観点に係る抗癌剤は、
セルチンドール、ナホキシジン、ズクロペンチキソール、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を含む、
こととしてもよい。

上記本発明の第１の観点に係るオートファジー阻害剤又は上記本発明の第２の観点に係る抗癌剤は、
膵癌を有する対象に投与される、
こととしてもよい。

上記本発明の第１の観点に係るオートファジー阻害剤又は上記本発明の第２の観点に係る抗癌剤は、
膵癌治療薬と併用される、
こととしてもよい。

本発明によれば、癌組織における間質細胞の活性化を抑制することができる。

試験例１に係る脂肪滴蓄積アッセイにおけるＰＳＣの画像を示す図である。（Ａ）はクロロキンによって誘導された休眠様状態のＰＳＣを示す。（Ｂ）は活性化状態のＰＳＣを示す図である。 試験例２で同定したＰＳＣを休眠様状態に誘導する化合物で処理したＰＳＣの画像を示す図である。 試験例３に係るＰＳＣの活性化抑制及びオートファジー阻害のマーカーの発現を示す図である。 試験例４に係る異なる膵癌患者からそれぞれ樹立した細胞株ＰＳＣ１及びＰＳＣ２を用いた細胞増殖アッセイの結果を示す図である。（Ａ）及び（Ｂ）は、ナホキシジンによるＰＳＣ１及びＰＳＣ２の増殖抑制をそれぞれ示す。（Ｃ）及び（Ｄ）は、セルチンドールによるＰＳＣ１及びＰＳＣ２の増殖抑制をそれぞれ示す。（Ｅ）及び（Ｆ）は、ズクロペンチキソールによるＰＳＣ１及びＰＳＣ２の増殖抑制をそれぞれ示す。 試験例５における化合物によるＰＳＣの遊走の抑制を示す図である。（Ａ）は膜の光学顕微鏡像を示す図である。（Ｂ）は視野ごとの細胞数を示す図である。 試験例６に係る膜の光学顕微鏡像を示す図である。 試験例６における化合物による膵癌細胞（ＰＣＣ）の浸潤及び遊走の抑制を示す図である。（Ａ）は浸潤を評価するための視野ごとの細胞数を示す図である。（Ｂ）は遊走を評価するための視野ごとの細胞数を示す図である。 実施例１に係る同所移植マウスモデルにおける腫瘍の外観を示す図である。 実施例１に係る同所移植マウスモデルの腫瘍体積を示す図である。 実施例１に係る皮下移植モデルマウスにおける腫瘍の外観を示す図である。 実施例１に係る皮下移植モデルマウスの腫瘍体積の経時変化を示す図である。

本発明に係る実施の形態について図面を参照して説明する。なお、本発明は下記の実施の形態及び図面によって限定されるものではない。なお、下記の実施の形態において、“有する”、“含む”又は“含有する”といった表現は、“からなる”又は“から構成される”という意味も包含する。

（実施の形態１）
本実施の形態に係るオートファジー阻害剤は、フラボピリドール、トリコスタチンＡ、ＰＤ－１６１５７０、ニトラリン、フルスピリレン、セルチンドール、ＣＰ－３１３９８、２－ＣＭＤＯ、ピペラセタジン、ペンブトロール、アミトリプチリン、アリメマジン、ナホキシジン、チオチキセン、ズクロペンチキソール、ＭＳ－２７５、ハイカントン、ＣＰ－５３６３１、チエチルペラジン、ゾテピン、ＣＩＳ－（Ｚ）－フルペンチキソール、デュロキセチン、ＩＣＩ－１９９４４１、デプトロピン、３－ＣＰＭＴ、メトトリメプラジン、アゼラスチン、デスロラタジン、パロキセチン、ハロファントリン、３，４’，５ートリメトキシ－ｔｒａｎｓ－スチルベン、及びその塩、並びにそれらの溶媒和物からなる群から選択される少なくとも１種の化合物を含む。

好ましくは、オートファジー阻害剤に有効成分として含有される化合物は、セルチンドール、ナホキシジン、ズクロペンチキソール、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物である。

本実施の形態に係るオートファジー阻害剤は、既知の方法で製造され、有効成分として０．０００００１～９９．９重量％、０．００００１～９９．８重量％、０．０００１～９９．７重量％、０．００１～９９．６重量％、０．０１～９９．５重量％、０．１～９９重量％、０．５～６０重量％、１～５０重量％又は１～２０重量％の上記化合物を含む。オートファジー阻害剤は、固形製剤であっても、液状製剤であってもよい。

化合物は、塩又は溶媒和物の形態であってもよい。塩は、薬理学上許容され、かつオートファジー阻害活性を示す塩であれば特に限定されない。塩としては、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、及びリン酸塩などの無機酸塩、並びに酢酸塩、プロピオン酸塩、ヘキサン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、グリコール酸塩、ピルビン酸塩、乳酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、リンゴ酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、安息香酸塩、ｏ－（４－ヒドロキシベンゾイル）安息香酸塩、桂皮酸塩、マンデル酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、１，２－エタンジスルホン酸塩、２－ヒドロキシエタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ－クロロベンゼンスルホン酸塩、２－ナフタレンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、カンファースルホン酸塩、４－メチルビシクロ［２．２．２］オクト－２－エン－１－カルボン酸塩、グルコヘプタン酸塩、４，４’－メチレンビス（３－ヒドロキシ－２－エン－１－カルボン酸塩）、３－フェニルプロピオン酸塩、トリメチル酢酸塩、第三級ブチル酢酸塩、ラウリル硫酸塩、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、及びムコン酸塩などの有機酸塩が挙げられる。

溶媒和物は、薬理学上許容され、かつオートファジー阻害活性を示す溶媒和物であれば特に限定されない。溶媒和物は、化合物が溶媒と、共有結合、水素結合、イオン結合、ファンデルワールス力、錯体及びインクルーション等を形成して安定化したものである。溶媒は、限定されず、例えば、水、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、エチレングリコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、アセトン、アセトニトリル、エチルエーテル及びメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル等が挙げられる。溶媒和物は、好ましくは水和物である。

オートファジー阻害剤は上記化合物に加え、薬理学上許容される任意の成分を含んでもよい。任意の成分は、例えば、賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、溶剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤及び無痛化剤等である。また、必要に応じて、防腐剤、抗酸化剤、着色剤及び甘味剤等の添加物がオートファジー阻害剤に配合されてもよい。

賦形剤としては、乳糖、白糖、Ｄ－マンニトール、Ｄ－ソルビトール、デンプン、α化デンプン、デキストリン、結晶セルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、アラビアゴム、プルラン、軟質無水ケイ酸、合成ケイ酸アルミニウム、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、キシリトール、ソルビトール及びエリスリトール等が挙げられる。

滑沢剤は、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、タルク、コロイドシリカ及びポリエチレングリコール等である。

結合剤としては、α化デンプン、ショ糖、ゼラチン、アラビアゴム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、結晶セルロース、白糖、Ｄ－マンニトール、トレハロース、デキストリン、プルラン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース及びポリビニルピロリドン等が例示される。

崩壊剤は、例えば、乳糖、白糖、デンプン、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、低置換ヒドロキシプロピルセルロース、軟質無水ケイ酸及び炭酸カルシウム等である。

溶剤としては、注射用水、生理食塩水、リンゲル液、アルコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ゴマ油、トウモロコシ油、オリーブ油及び綿実油等が挙げられる。溶解補助剤は、例えば、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、Ｄ－マンニトール、トレハロース、安息香酸ベンジル、エタノール、トリスアミノメタン、コレステロール、トリエタノールアミン、炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム及び酢酸ナトリウム等である。

懸濁化剤としては、例えば、ステアリルトリエタノールアミン、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリルアミノプロピオン酸、レシチン、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム及びモノステアリン酸グリセリン等の界面活性剤、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース及びヒドロキシプロピルセルロース等の親水性高分子、ポリソルベート類、並びにポリオキシエチレン硬化ヒマシ油等が挙げられる。

等張化剤は、例えば、塩化ナトリウム、グリセリン、Ｄ－マンニトール、Ｄ－ソルビトール、ブドウ糖、キシリトール及び果糖等が挙げられる。緩衝剤は、例えば、リン酸塩、酢酸塩、炭酸塩及びクエン酸塩等の緩衝液等である。無痛化剤は、例えば、プロピレングリコール、塩酸リドカイン及びベンジルアルコール等が挙げられる。

防腐剤としては、パラオキシ安息香酸エステル類、クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェネチルアルコール、デヒドロ酢酸及びソルビン酸等が挙げられる。抗酸化剤としては、亜硫酸塩及びアスコルビン酸塩等が例示される。着色剤としては、水溶性着色タール色素、不溶性レーキ色素及び天然色素等が挙げられる。甘味剤は、例えば、サッカリンナトリウム、グリチルリチン酸二カリウム、アスパルテーム及びステビア等である。

オートファジー阻害剤の投与量は、投与対象の性別、年齢、体重及び症状等によって適宜決定される。オートファジー阻害剤は、上記化合物が有効量となるように投与される。有効量とは、所望の結果を得るために必要な化合物の量であり、治療又は処置する疾患に係る状態の進行の遅延、阻害、予防、逆転又は治癒をもたらすのに必要な量である。

オートファジー阻害剤の投与量は、例えば、０．０１ｍｇ／ｋｇ～１０００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．１ｍｇ／ｋｇ～２００ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは０．２ｍｇ／ｋｇ～２０ｍｇ／ｋｇであり、１日に１回、又はそれ以上に分割して投与することができる。オートファジー阻害剤を分割して投与する場合、オートファジー阻害剤は、１日に１～４回投与される。また、オートファジー阻害剤は、毎日、隔日、１週間に１回、隔週及び１ヶ月に１回等の様々な投与頻度で投与してもよい。なお、必要に応じて、上記の範囲外の量を用いることもできる。

オートファジー阻害剤の投与経路は特に限定されない。オートファジー阻害剤は、例えば非経口又は経口で投与される。非経口投与の場合、静脈注射、皮下注射、腹腔内注射、筋肉内注射、経皮投与、経鼻投与、経肺投与、経腸投与、口腔内投与及び経粘膜投与等であってもよい。オートファジー阻害剤は、点滴を介して投与されてもよい。

オートファジー阻害剤は、任意の形態の製剤とすることができる。オートファジー阻害剤は、経口投与の場合、糖衣錠、バッカル錠、コーティング錠及びチュアブル錠等の錠剤、トローチ剤、丸剤、散剤及びソフトカプセルを含むカプセル剤、顆粒剤、懸濁剤、乳剤及びドライシロップを含むシロップ剤、並びにエリキシル剤等の液剤であってもよい。非経口投与の場合、オートファジー阻害剤は、注射剤、経皮吸収テープ、エアゾール剤及び坐剤等であってもよい。

オートファジー阻害剤の投与対象は、脊椎動物が好ましく、哺乳類動物がより好ましい。哺乳類動物としては、例えば、ヒト、チンパンジー及びその他の霊長類、イヌ、ネコ、ウサギ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ブタ、ラット、マウス及びモルモット等の家畜動物、愛玩動物及び実験用動物等が挙げられる。特に好ましくは、哺乳類動物はヒトである。

本実施の形態に係るオートファジー阻害剤は、オートファジーを抑制するのに加え、下記実施例に示すように、ＰＳＣの活性化を抑制し、ＰＳＣを休眠様状態に誘導する。また、当該オートファジー阻害剤は、腫瘍の増大を抑制する。このため、オートファジー阻害剤は癌の治療において有用である。対象となる癌は特に制限されないが、例えば、頭頚部癌、食道癌、胃癌、十二指腸癌、結腸癌、直腸癌、肝臓癌、胆嚢癌、胆管癌、胆道癌、膵癌、肺癌、乳癌、卵巣癌、子宮頚癌、子宮体癌、腎癌、膀胱癌、前立腺癌、精巣腫瘍、骨・軟部肉腫、血液癌、多発性骨髄腫、皮膚癌、脳腫瘍、中皮腫及び血液癌等が挙げられる。当該オートファジー阻害剤は、癌細胞の生存又は増殖にオートファジーが重要な役割を果たしている癌において、癌細胞の増殖を阻害することにより、癌を治療することができる。好ましくは、オートファジー阻害剤は、膵癌を有する対象に投与される。

ＰＳＣによって形成される乏血管組織は、膵癌組織への薬剤送達性を低下させ、抗癌剤治療抵抗性を亢進させる。本実施の形態に係るオートファジー阻害剤は、ＰＳＣの活性化を抑制するため、当該オートファジー阻害剤は、膵癌治療薬と併用されてもよい。下記実施例に示すように、オートファジー阻害剤と膵癌治療薬とを併用することで、腫瘍の増大を抑制することができる。

膵癌治療薬は、特に限定されず、例えば、ゲムシタビン、イリノテカン、エルロチニブ、オキサリプラチン、シクロフォスファミド、シタラビン、ドキソルビシン、フルオロウラシル、マイトマイシンＣ、テガフール・ウラシル配合剤、テガフール・ギメラシル・オテラシルカリウム配合剤及びパクリタキセル等である。

“併用”とは、膵癌治療薬の投与の前、膵癌治療薬の投与と同時又は膵癌治療薬の投与の後にオートファジー阻害剤を投与することを意味する。膵癌治療薬とオートファジー阻害剤の両方を使用する限り、それらの投与順序及び投与形態は限定されない。例えば、併用では、膵癌治療薬とオートファジー阻害剤とを同時に投与しても、一方の効果が残っている間に他方を投与する等して時間を前後させてそれぞれ単独で投与してもよい。併用においては、膵癌治療薬及びオートファジー阻害剤の投与経路は同一であってもよいし、異なってもよい。

併用の態様としては、例えば膵癌治療薬とオートファジー阻害剤とを投与前に製剤化して得られる単一の製剤の投与、膵癌治療薬とオートファジー阻害剤とを別々に製剤化して得られる２種の製剤の同一投与経路での同時投与、当該２種の製剤の同一投与経路での時間差をおいての投与、当該２種の製剤の異なる投与経路での同時投与、当該２種の製剤の異なる投与経路での時間差をおいての投与が挙げられる。例えば併用では、膵癌治療薬及びオートファジー阻害剤それぞれの用量及び用法が規定された１つのレジメンに従って、所定の期間に渡って、膵癌治療薬及びオートファジー阻害剤が同時に又は時間を前後させて投与される。

本実施の形態に係るオートファジー阻害剤は、抗癌剤又は膵癌治療薬に治療抵抗性を示す癌を有する対象に投与されてもよい。

本実施の形態に係るオートファジー阻害剤は、下記実施例に示すように、オートファジーを阻害し、ＰＳＣの活性化を抑制し、ＰＳＣを休眠様状態に誘導する。これにより、当該オートファジー阻害剤は、癌組織における間質細胞の活性化を抑制することができる。さらに、ＰＳＣの活性を抑制することで癌の浸潤及び転移を抑制することができる。

本実施の形態に係るオートファジー阻害剤は、抗癌剤であってもよい。この場合、抗癌剤は、上記化合物を有効成分として含む。また、本実施の形態に係るオートファジー阻害剤は、下記実施例に示すようにＰＳＣを休眠様状態に誘導するため、ＰＳＣの休眠状態誘導剤であってもよい。

別の実施の形態では、上記オートファジー阻害剤の有効成分とは別の成分を有効成分として含む抗癌剤と、当該オートファジー阻害剤と、を組み合わせた抗癌併用剤が提供される。

抗癌剤とオートファジー阻害剤とを組み合わせるとは、これらを配合剤として提供すること、及びこれらのそれぞれを含む製剤をキットとして提供することを包含する。本実施の形態に係る抗癌併用剤が配合剤である場合、抗癌剤及びオートファジー阻害剤は、複数の薬剤を混合して配合剤とする通常の方法によって配合剤とすることができる。配合剤には、抗癌剤及びオートファジー阻害剤以外の任意の成分をさらに含んでもよい。任意の成分は、上述したオートファジー阻害剤に含まれ得る任意の成分である。配合剤の形態は、液体、固体、半固形状及び粉末状等、任意である。抗癌剤とオートファジー阻害剤との配合割合は、それぞれの効果を発揮することができる適切な配合割合とすればよい。

本実施の形態に係る抗癌併用剤が、抗癌剤を含む製剤とオートファジー阻害剤を含む製剤とのキットである場合、抗癌剤を含む製剤とオートファジー阻害剤を含む製剤とは、同一の形態であってもよいし、異なる形態であってもよい。また、抗癌剤を含む製剤とオートファジー阻害剤を含む製剤とは、投与経路又は投与方法が同じ製剤であっても異なる製剤であってもよい。例えば、抗癌剤を含む製剤とオートファジー阻害剤を含む製剤とが両方とも経口投与製剤又は非経口投与製剤であってもよいし、抗癌剤を含む製剤が経口投与製剤で、オートファジー阻害剤を含む製剤が非経口投与製剤であってもよいし、抗癌剤を含む製剤が非経口投与製剤で、オートファジー阻害剤を含む製剤が経口投与製剤であってもよい。

他の実施の形態では、癌を治療、改善又は予防する方法が提供される。癌を治療、改善又は予防する方法は、上記の化合物を有効成分として含むオートファジー阻害剤又は抗癌剤を対象に投与する工程を含む。癌を治療、改善又は予防する方法は、オートファジー阻害剤の有効成分とは別の成分を有効成分として含む抗癌剤と、オートファジー阻害剤とを組み合わせて対象に投与する工程を含んでもよい。

また、別の実施の形態は、オートファジー阻害剤、抗癌剤又は抗癌併用剤の製造のための上記化合物の使用である。また、別の実施の形態では、オートファジー阻害剤と、抗癌剤と、を組み合わせる工程を含む、抗癌併用剤の製造方法が提供される。

本実施の形態に係る抗癌剤及び抗癌併用剤は、膵癌治療薬又は膵癌治療薬抵抗性癌の治療用医薬としても提供され得る。

以下の実施例により、本発明をさらに具体的に説明するが、本発明は実施例によって限定されるものではない。

（試験例１：脂肪滴蓄積アッセイ）
ヒトＰＳＣとして、膵癌手術標本から得られる細切した膵癌組織を６ウェルプレート上にのせ、２０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含有するＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ）で培養することで組織の周囲に増生する細胞を分離し、継代した。以下の試験例及び実施例では継代数３～８のＰＳＣを使用した。

ＰＳＣを１×１０^４個／ウェルの密度でガラスボトムディッシュ（＃８１１５６、ｉｂｉｄｉ社製）上に撒き、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解したリン酸クロロキン（１０μＭ、＃ＰＨＲ１２５８、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）又はコントロールとしてのＤＭＳＯの存在下で２４時間培養し、１０％緩衝ホルマリン（＃１３３－１０３１１、富士フイルム和光純薬社製）で固定した。続いて、遮光した状態で、１μｇ／ｍＬの脂溶性蛍光色素であるＢＯＤＩＰＹ（４，４－ジフルオロ－１，３，５，７，８－ペンタメチル－４－ボラ－３ａ、４－ジアザ－ｓ－インダセン、ＢＯＤＩＰＹ ４９３／５０３、＃Ｄ－３９２２、Ｌｉｆｅｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製）及びＤＡＰＩ（４’、６－ジアミジノ－２－フェニルインドール、１μｇ／ｍＬ、＃Ｄ５２３、同仁化学研究所製）で室温にて３０分間、細胞を染色した。ＰＢＳで洗浄後、顕微鏡（ＢＺ－Ｘ７００、ＫＥＹＥＮＣＥ社製）を用いて細胞の画像を取得した。

なお、ＢＯＤＩＰＹは、１ｍｇ／ｍＬの濃度でＤＭＳＯに溶解し、使用時にＰＢＳで１μｇ／ｍＬに希釈して使用した。

（結果）
オートファジーを阻害することが知られているクロロキンによって、図１（Ａ）に示されたように、ＰＳＣは脂肪滴が蓄積しており休眠様状態となった。一方、図１（Ｂ）に示されたコントロールのＰＳＣでは脂肪滴が蓄積しておらず活性化状態となった。脂肪滴は、ＰＳＣの休眠状態のマーカーとなることが示された。

（試験例２：ＰＳＣを休眠様状態に誘導する化合物の同定）
不死化ＰＳＣの作製
初代培養ＰＳＣは、継代を繰り返すことにより劣化し増殖能が低下するため、安定した再現性が求められるスクリーニングでの使用には適していない。そこで、不死化ＰＳＣを作製した。

不死化構築物としてＳＶ４０ラージＴ抗原遺伝子とヒトテロメラーゼ逆転写酵素タンパク質（ｈＴＥＲＴ）遺伝子を合成し、次のようにレンチウイルスベクター（ｐＬＶＳＩＮベクター、タカラバイオ社製）にクローニングした。Ｔ２２５フラスコ１枚に２×１０^７個の２９３Ｔ細胞（ＣＲＬ－３２１６、ＡＴＣＣ）を播種した。約２４時間後にＬｅｎｔｉｖｉｒａｌ Ｈｉｇｈ ＴｉｔｅｒＰａｃｋａｇｉｎｇ Ｍｉｘ（６１９４、タカラバイオ社製）の説明書に従い、レンチウイルスベクタープラスミド（ｐＬＶＳＩＮ－ＥＦ１α Ｎｅｏ＿ｈＴＥＲＴ／ＳＶ４０ ＬａｒｇｅＴ）とＬｅｎｔｉｖｉｒａｌ Ｈｉｇｈ Ｔｉｔｅｒ Ｐａｃｋａｇｉｎｇ Ｍｉｘとを、２９３Ｔ細胞にＴｒａｎｓＩＴ－２９３ Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔ（ＭＩＲ２７００、Ｍｉｒｕｓ Ｂｉｏ社製）を用いて共導入した。トランスフェクション約２４時間後に新たな培地に交換し、さらに約２４時間培養後にフラスコの上清を回収し、０．４５μｍフィルターで濾過したものを組換えレンチウイルスベクター溶液とした。

得られたレンチウイルスベクターＤＮＡをＬｅｎｔｉ－Ｘ ２９３Ｔ細胞（＃６３２１８０、タカラバイオ社製）に導入し、初代培養ＰＳＣにレンチウイルス粒子を感染させた。３００μｇ／ｍＬのＧ－４１８（富士フイルム和光純薬社製）を用いて細胞を選択した。ＳＶ４０ラージＴ抗原の発現は、抗ＳＶ４０ラージＴ抗原抗体（＃１５７２９Ｓ、セルシグナリングテクノロジージャパン社製）を用いたウエスタンブロッティング法で確認した。ｈＴＥＲＴ遺伝子の発現は、常法に従って定量的ＲＴ－ＰＣＲ（ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ）によって確認した。定量的ＲＴ－ＰＣＲに使用したフォワードプライマー及びリバースプライマーの塩基配列を配列番号１及び配列番号２に示す。

化合物スクリーニング
各ウェルに１０μＭの化合物をあらかじめ添加した３８４ウェルプレート（＃７８１０９１、Ｇｒｅｉｎｅｒ社製）の各ウェルに、１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭに３．７５×１０^４個／ｍＬになるように調製した不死化ＰＳＣの懸濁液を４０μＬずつ分注した。コントロール及びバックグラウンドとして、化合物の代わりに同濃度のＤＭＳＯを含む溶液を１０ｕＬずつ加えた。

遠心機でスピンダウンし（１５００ｒｐｍ、１０秒）、プレートシェイカーで（２０００ｒｐｍ、５分）撹拌した。ＣＯ_２インキュベーターで４８時間培養し、培養液を吸引し、ＰＢＳで１回洗浄した。４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）で室温にて１５分間固定し、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で２回洗浄した。プレートを逆さにして遠心機でスピンダウンし、ＢＯＤＩＰＹ及び細胞核染色蛍光色素であるＨｏｃｈｅｓｔを加え、暗室下、室温で３０分間染色した。なお、Ｈｏｃｈｅｓｔは、Ｃｅｌｌｓｔａｉｎ Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３３４２ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（１ｍｇ／ｍＬ、Ｎｏ．２３４９１－５２－３、富士フイルム和光純薬社製）を使用時に１μｇ／ｍＬに希釈して使用した。

染色後、ＰＢＳで３回洗浄し、３回目のＰＢＳを吸引せず残した。Ｉｎ ｃｅｌｌ ａｎａｌｙｚｅｒ２０００（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社製）を用いて細胞を撮影し、解析した。

データの品質管理については、コントロール及びバックグラウンドの測定値からプレート毎に以下のＳ／Ｂ、ＣＶ、（コントロール及びバックグラウンド）及びＺ’を算出した（ｎ≧４）。
Ｓ／Ｂ＝コントロールの平均値／バックグラウンドの平均値
バックグラウンドのＣＶ（％）＝１００（バックグラウンドの標準偏差／バックグラウンドの平均値）
コントロールのＣＶ（％）＝１００（コントロールの標準偏差／コントロールの平均値）
Ｚ’＝１－（３×バックグラウンドの標準偏差＋３×コントロールの標準偏差）／（コントロールの平均値－バックグラウンドの平均値）

化合物の評価では、ＰＳＣの休眠状態の指標として脂肪滴の数及び蛍光強度を数値化し、単位細胞あたりで比較した。

（結果）
化合物として、３３９８種の既承認薬で構成された化合物ライブラリを評価したところ、１５４種の化合物に脂肪滴の蓄積を認めた。１５４種の化合物について、同じスクリーニング系で再現性と低用量での活性とを指標に、ＰＳＣを休眠状態に誘導する化合物として表１に示す３２種の化合物を同定した。

同定した化合物の中から、ナホキシジン、セルチンドール及びズクロペンチキソールを上述の脂肪滴蓄積アッセイで評価した結果を図２に示す。なお、ナホキシジン、セルチンドール及びズクロペンチキソールとして、それぞれナホキシジン塩酸塩（＃ＰＺ０１１８、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）、セルチンドール（＃ＳＣ－２１５８４６、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製）及びズクロペンチキソール（＃２４９６１、Ｃａｙｍａｎ ｃｈｅｍｉｃａｌ社製）をＤＭＳＯで１０ｍＭに溶解してから使用した。図２に示すように、低濃度でも脂肪滴の発現が確認され、これらの化合物がＰＳＣの休眠様状態を誘導することが示された。

（試験例３：化合物によるＰＳＣの活性化抑制及びオートファジー阻害）
ＰＳＣを所定濃度の化合物又は０．０２５％ＤＭＳＯ（コントロール）で４８時間インキュベートした後、ＰＲＯ－ＰＲＥＰタンパク質抽出溶液（＃１７０８１、ｉＮｔＲＯＮ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｋｙｕｎｇｋｉ社製）を使用してタンパク質を抽出した。タンパク質濃度は、ＮａｎｏＤｒｏｐ １０００分光光度計（バージョン３．８．１、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）で測定した。

細胞培養上清の採取では、４８時間のインキュベーション後、細胞を洗浄し、ＦＢＳを含まないＤＭＥＭに培地を交換し、一晩培養した。上清を１５００×ｇで５分間遠心分離して不純物を除去し、遠心チューブ（＃ＵＦＣ９００３２４、ＡｍｉｃｏｎＵｌｔｒａ、Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）に収集した。次に７５００×ｇで３０分間遠心分離し、濃縮された上清を集め、ホルトプロテアーゼ及びホスファターゼインヒビター（＃７８４４２、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を１：１０００希釈で添加した。

ＳＤＳ－ＰＡＧＥに関しては、２０μｇのタンパク質を４－１５％ Ｍｉｎｉ－ＰＲＯＴＥＡＮ ＴＧＸ Ｐｒｅｃａｓｔ Ｇｅｌｓ（＃４５６－１０８４、Ｂｉｏ－Ｒａｄ ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）を用いたゲル電気泳動により分離し、Ｔｒａｎｓ－Ｂｌｏｔ Ｔｕｒｂｏ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｓｔａｒｔｅｒ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）を用いてＴｒａｎｓ－Ｂｌｏｔ Ｔｕｒｂｏ Ｍｉｎｉ ＰＶＤＦ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｐａｃｋｓ（＃１７０－４１５６、Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）に転写した。

得られたメンブレンを、抗フィブロネクチン（１：１０００、＃ａｂ２４１３、Ａｂｃａｍ社製）、抗αＳＭＡ抗体（１：２０００、＃Ｍ０８５１、Ｄａｋｏ社製）、抗ＬＣ３Ｂ抗体（１：１０００、＃２７７５Ｓ、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製）、抗ｐ６２抗体（１：１０００、＃ＢＭＬ－ＰＷ９８６０、Ｅｎｚｏ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社製）、又は抗β－アクチン抗体（１：１００００、＃８１１７８、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製）に、４℃で一晩反応させた後、西洋ワサビペルオキシダーゼ結合二次抗体（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製）で標識した。ＣｈｅｍｉＤｏｃ ＸＲＳ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）による化学発光を用いてバンドを検出した。

（結果）
図３に示すように、ナホキシジン及びズクロペンチキソールは、ＰＳＣの活性指標であるαＳＭＡの発現を低下させた。また、ナホキシジン、セルチンドール及びズクロペンチキソールは、ＬＣ３及びｐ６２の発現を亢進させたため、オートファジーを抑制することが示された。

（試験例４：細胞増殖アッセイ）
Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ－Ｇｌｏ発光細胞生存アッセイを用いて化合物が細胞増殖に及ぼす影響を検討した。１×１０^３個／ウェルの密度で９６ウェルｐｏｌｙｓｔｙｒｅｎｅ ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅｓ（＃６５５０８３、Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ－Ｏｎｅ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ社製）に、異なる膵癌患者からそれぞれ樹立した細胞株であるＰＳＣ１及びＰＳＣ２を撒き、２４時間後に化合物又は０．０２５％ＤＭＳＯ（コントロール）を含む１００μＬの１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地と交換した。１日、２日、及び３日間培養の後、マイクロプレートリーダー（Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｆ２００、Ｔｅｃａｎ、Ｍａｎｎｅｄｏｒｆ社製）を用いて細胞増殖を評価した。

（結果）
図４（Ａ）～（Ｆ）に示すように、ナホキシジン、セルチンドール及びズクロペンチキソールはいずれもＰＳＣ１及びＰＳＣ２の増殖を抑制した。

（試験例５：ＰＳＣのマトリゲル遊走アッセイ）
ＰＳＣの遊走を評価するために、８ｍｍ孔を有するトランスウェルチャンバー（＃３５３０９７、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社製）を使用した。２５０μＬの２％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地に懸濁したＰＳＣをトランスウェルチャンバーに撒いた。トランスウェルチャンバーにおける細胞の密度はコントロールが５×１０^４細胞／ウェルとし、化合物添加群が１×１０^５細胞／ウェルとした。７５０μＬの１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地を各ウェルに入れた２４ウェルプレート（＃３５３５０４、Ｃｏｒｎｉｎｇ社製）に、トランスウェルチャンバーをセットした。トランスウェルチャンバー及び２４ウェルプレートの各ウェルにそれぞれ５μＭの化合物又は０．０２５％ＤＭＳＯ（コントロール）を添加し、２４時間培養した。トランスウェルチャンバーの膜を７０％エタノールで固定し、膜上面を綿棒で拭き取り、ヘマトキシリン・エオジン（Ｈ＆Ｅ）で染色した。膜をスライドグラスに固定した後、光学顕微鏡によって１００倍で観察し、ランダムな視野で細胞数を計測した。

（結果）
図５（Ａ）は光学顕微鏡像を示す。図５（Ｂ）にも示されるように、コントロールと比較して、ナホキシジン、セルチンドール及びズクロペンチキソールはいずれもＰＳＣの遊走を抑制した。

（試験例６：ＰＣＣのマトリゲル浸潤アッセイ）
ＰＣＣの遊走を評価するために、上記トランスウェルチャンバーに２５０μＬの２％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地に懸濁したＳＵＩＴ－２細胞（Ｊａｐａｎ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ Ｂａｎｋより取得）を撒いた。トランスウェルチャンバーにおける細胞の密度を、コントロールが４×１０^４細胞／ウェルとし、化合物添加群が８×１０^４細胞／ウェルとした。トランスウェルチャンバーを、７５０μＬの１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地を各ウェルに入れた２４ウェルプレートにセットした。トランスウェルチャンバー及び２４ウェルプレートの各ウェルにそれぞれ５μＭの化合物又は０．０２５％ＤＭＳＯ（コントロール）を添加し、２４時間培養した。培養後、試験例５と同様に細胞数を計測した。

ＰＣＣの浸潤を評価するために、２０μｇ／ウェルのＭａｔｒｉｇｅｌ（＃３５４２３４、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社製）でコーティングしたトランスウェルチャンバーを使用した。当該トランスウェルチャンバーに２５０μＬの２％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地に懸濁したＳＵＩＴ－２細胞を撒いた。トランスウェルチャンバーにおける細胞の密度を、コントロールが４×１０^４細胞／ウェルとし、化合物添加群が８×１０^４細胞／ウェルとした。トランスウェルチャンバーを、７５０μＬの１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地を各ウェルに入れた２４ウェルプレートにセットした。２４ウェルプレートには４×１０^４細胞／ウェルの密度でＰＳＣを播種した。トランスウェルチャンバー及び２４ウェルプレートの各ウェルにそれぞれ５μＭの化合物又は０．０２５％ＤＭＳＯ（コントロール）を添加し、４８時間培養した。培養後、試験例５と同様に細胞数を計測した。

（結果）
図６は光学顕微鏡像を示す。図７（Ａ）及び図７（Ｂ）は、それぞれ浸潤及び遊走の程度を示す１視野あたりの細胞数を示す。コントロールと比較して、ナホキシジン、セルチンドール及びズクロペンチキソールはいずれも単独で培養されたＰＣＣの遊走及び浸潤を抑制した。また、ナホキシジン、セルチンドール及びズクロペンチキソールはいずれもコントロールと比較して、ＰＳＣと共に培養された際のＰＣＣの遊走及び浸潤を抑制した。

（実施例１：マウスモデルでの評価）
同所移植マウスモデルで化合物を次のように評価した。ＤＭＥＭで混合したＳＵＩＴ－２細胞（１×１０^６）とＰＳＣ（１×１０^６）とを、５週齢のＢＡＬＢ／ｃ－ｎｕ／ｎｕ雌マウス（日本クレア社製）の膵臓の尾に同所的に注入した。１週間後、マウスを２群（ｎ＝３／群）に分け、薬物治療を開始した。ズクロペンチキソール（１００μＬＰＢＳに溶解、１０ｍｇ／ｋｇ）を週３回腹腔内投与し、陰性対照として０．０１％ＤＭＳＯを含む１００μＬ ＰＢＳを腹腔内投与した。治療開始から２８日後、マウスを安楽死させ、すべての同所性腫瘍を切除して腫瘍体積を測定した。最大の腫瘍直径Ｌ、最小の腫瘍直径Ｗとして、腫瘍体積をπ／６×（Ｌ×Ｗ×Ｗ）で算出した。

皮下移植モデルマウスで化合物を次のように評価した。１００ｕＬのマトリゲル（＃３５４２３４、Ｃｏｒｎｉｎｇ社製）に懸濁したＳＵＩＴ－２細胞（５×１０^５）とＰＳＣ（２×１０^６）を、５週齢のＢＡＬＢ／ｃ－ｎｕ／ｎｕ雄マウスの左側腹部に移植した。皮下移植の１週間後、マウスをランダムに４群（ｎ＝５／群）に分けた（対照群、ゲムシタビン群、ズクロペンチキソール群、及び併用治療群）。マウスにゲムシタビン（１０ｍｇ／ｋｇ、週に１回）、ズクロペンチキソール（２０ｍｇ／ｋｇ／日、週に３回）、又はＰＢＳ １００μＬを腹腔内投与した。併用治療群には、ゲムシタビン（１０ｍｇ／ｋｇ、週に１回）及びズクロペンチキソール（２０ｍｇ／ｋｇ／日、週に３回）を併用した。治療から一定期間ごとにマウスを安楽死させ、腫瘍を採取し腫瘍体積を測定した。なお、ゲムシタビンは、ゲムシタビン塩酸塩（日本イーライリリー社製）をＰＢＳで１０ｍｇ／ｍｌの濃度で溶解して用いた。

（結果）
図８は、同所移植マウスモデルの同所性腫瘍の外観を示す。図９に示すように、同所移植マウスモデルの腫瘍体積は、ズクロペンチキソール（Ｚｕｃ）で抑制された。図１０は、治療開始から３５日後の皮下移植モデルマウスの腫瘍の外観を示す。図１１に示すように、ズクロペンチキソールとゲムシタビン（ＧＥＭ）との併用は、ゲムシタビン単独投与よりも有意に腫瘍抑制効果が強かった。

上述した実施の形態は、本発明を説明するためのものであり、本発明の範囲を限定するものではない。すなわち、本発明の範囲は、実施の形態ではなく、特許請求の範囲によって示される。そして、特許請求の範囲内及びそれと同等の発明の意義の範囲内で施される様々な変形が、本発明の範囲内とみなされる。

本発明は、癌の治療に使用される医薬組成物に好適である。

Claims (6)

1. フラボピリドール、トリコスタチンＡ、ＰＤ－１６１５７０、ニトラリン、フルスピリレン、セルチンドール、ＣＰ－３１３９８、２－ＣＭＤＯ、ピペラセタジン、ペンブトロール、アミトリプチリン、アリメマジン、ナホキシジン、チオチキセン、ズクロペンチキソール、ＭＳ－２７５、ハイカントン、ＣＰ－５３６３１、チエチルペラジン、ゾテピン、ＣＩＳ－（Ｚ）－フルペンチキソール、デュロキセチン、ＩＣＩ－１９９４４１、デプトロピン、３－ＣＰＭＴ、メトトリメプラジン、アゼラスチン、デスロラタジン、パロキセチン、ハロファントリン、３，４’，５ートリメトキシ－ｔｒａｎｓ－スチルベン、及びその塩、並びにそれらの溶媒和物からなる群から選択される少なくとも１種を含む、
   オートファジー阻害剤。
2. セルチンドール、ナホキシジン、ズクロペンチキソール、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を含む、
   請求項１に記載のオートファジー阻害剤。
3. フラボピリドール、トリコスタチンＡ、ＰＤ－１６１５７０、ニトラリン、フルスピリレン、セルチンドール、ＣＰ－３１３９８、２－ＣＭＤＯ、ピペラセタジン、ペンブトロール、アミトリプチリン、アリメマジン、ナホキシジン、チオチキセン、ズクロペンチキソール、ＭＳ－２７５、ハイカントン、ＣＰ－５３６３１、チエチルペラジン、ゾテピン、ＣＩＳ－（Ｚ）－フルペンチキソール、デュロキセチン、ＩＣＩ－１９９４４１、デプトロピン、３－ＣＰＭＴ、メトトリメプラジン、アゼラスチン、デスロラタジン、パロキセチン、ハロファントリン、３，４’，５ートリメトキシ－ｔｒａｎｓ－スチルベン、及びその塩、並びにそれらの溶媒和物からなる群から選択される少なくとも１種を含む、
   抗癌剤。
4. セルチンドール、ナホキシジン、ズクロペンチキソール、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を含む、
   請求項３に記載の抗癌剤。
5. 膵癌を有する対象に投与される、
   請求項１若しくは２に記載のオートファジー阻害剤、又は請求項３若しくは４に記載の抗癌剤。
6. 膵癌治療薬と併用される、
   請求項１若しくは２に記載のオートファジー阻害剤、又は請求項３若しくは４に記載の抗癌剤。

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