JP2022033762A - ダイナミックヒト抗体軽鎖ライブラリー - Google Patents
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- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
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Abstract
Description
本明細書中に記載されるまたは参照される技法及び手順は、当業者によって一般に十分に理解されており、従来の方法論、例えば、Sambrook et al.,Molecular Cloning:A Laboratory Manual 3d edition(2001)Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.;Current Protocols in Molecular Biology(F.M.Ausubel,et al.eds.,(2003));the series Methods in Enzymology(Academic Press,Inc.):PCR 2:A Practical Approach(M.J.MacPherson,B.D.Hames and G.R.Taylor eds.(1995)),Harlow and Lane,eds.(1988)Antibodies,A Laboratory Manual,and Animal Cell Culture(R.I.Freshney,ed.(1987));Oligonucleotide Synthesis(M.J.Gait,ed.,1984);Methods in Molecular Biology,Humana Press;Cell Biology:A Laboratory Notebook(J.E.Cellis,ed.,1998)Academic Press;Animal Cell Culture(R.I.Freshney),ed.,1987);Introduction to Cell and Tissue Culture(J.P.Mather and P.E.Roberts,1998)Plenum Press;Cell and Tissue Culture:Laboratory Procedures(A.Doyle,J.B.Griffiths,and D.G.Newell,eds.,1993-8)J.Wiley and Sons;Handbook of Experimental Immunology(D.M.Weir and C.C.Blackwell,eds.);Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells(J.M.Miller and M.P.Calos,eds.,1987);PCR:The Polymerase Chain Reaction,(Mullis et al.,eds.,1994);Current Protocols in Immunology(J.E.Coligan et al.,eds.,1991);Short Protocols in Molecular Biology(Wiley and Sons,1999);Immunobiology(C.A.Janeway and P.Travers,1997);Antibodies(P.Finch,1997);Antibodies:A Practical Approach(D.Catty.,ed.,IRL Press,1988-1989);Monoclonal Antibodies:A Practical Approach(P.Shepherd and C.Dean,eds.,Oxford University Press,2000);Using Antibodies:A Laboratory Manual(E.Harlow and D.Lane(Cold Spring Harbor Laboratory Press,1999);The Antibodies(M.Zanetti and J.D.Capra,eds.,Harwood Academic Publishers,1995);及びCancer:Principles and Practice of Oncology(V.T.DeVita et al.,eds.,J.B.Lippincott Company,1993)に記載される、広く利用されている方法論などを使用して、一般的に用いられる。
本発明を詳述する前に、本発明は、特定の組成物または生物系に限定されず、当然のことながら、変わり得ることを理解されたい。また、本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を記載する目的でのみ使用され、限定を意図するものではないことを理解されたい。
本開示のある特定の態様は、ポリヌクレオチド、例えば、抗体重鎖可変領域(VH)または軽鎖可変領域(VL)をコードするポリヌクレオチドのライブラリーに関する。本開示のライブラリーは、HVR-L1、HVR-L2、及びHVR-L3を含む軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを1つ以上含有し得、本明細書に記載されるHVR配列(例えば、表1に示されるHVR配列)をそれぞれ独立して含む。
FW-L1は、DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC(配列番号24)であり、
FW-L2は、WYQQKPGKAPKLLIY(配列番号25)であり、
FW-L3は、PSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATY(配列番号26)であり、
FW-L4は、FGQGTKVEIKR(配列番号27)である。
本明細書で提供されるのは、本明細書に記載されるライブラリーから定義及び選択される抗体である。本開示のある特定の態様は、抗体の軽鎖もしくは重鎖のHVR、HVRを含む可変領域及び/またはそれをコードするポリヌクレオチド(複数可)に関する。いくつかの実施形態において、HVR及び/または可変領域は、抗体フラグメント、全長抗体、または単鎖可変フラグメント(scFv)の一部である。
FW-L1は、DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC(配列番号24)であり、
FW-L2は、WYQQKPGKAPKLLIY(配列番号25)であり、
FW-L3は、PSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATY(配列番号26)であり、
FW-L4は、FGQGTKVEIKR(配列番号27)である。
本明細書で更に提供されるのは、本開示の同一の軽鎖可変領域を有する二重特異性抗体である(例えば、異なる結合特異性を有する2つの重鎖可変領域と、2つの同一の軽鎖可変領域とを有する)。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体は、2つの抗体重鎖可変領域及び2つの同一の軽鎖可変領域を含み、当該二重特異性抗体は、第1の標的または抗原に結合し、第1の抗体重鎖可変領域及び第1の軽鎖可変領域を含む、第1の結合ドメインと、第2の標的または抗原に結合し、第2の抗体重鎖可変領域及び第2の抗体軽鎖可変領域を含む、第2の結合ドメインと、を含み、当該第2の抗体軽鎖可変領域は、当該第1の抗体軽鎖可変領域配列と同一の配列を有する。いくつかの実施形態において、第1及び第2の結合ドメインは、異なる標的生体分子に結合する。いくつかの実施形態において、第1及び第2の結合ドメインは、同じ生体分子上の異なるエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、第1の抗体重鎖可変領域は、第1の重鎖可変領域及び第1の重鎖定常領域(例えば、CH1、ヒンジ、CH2及びCH3を含む)を含む第1の抗体重鎖の一部である。いくつかの実施形態において、第2の抗体重鎖可変領域は、第2の重鎖可変領域及び第2の重鎖定常領域(例えば、CH1、ヒンジ、CH2及びCH3を含む)を含む第2の抗体重鎖の一部である。いくつかの実施形態において、第1の抗体軽鎖可変領域は、第1の軽鎖可変領域及び第1の軽鎖定常領域を含む第1の抗体軽鎖の一部である。いくつかの実施形態において、第2の抗体軽鎖可変領域は、第2の軽鎖可変領域及び第2の軽鎖定常領域を含む第2の抗体軽鎖の一部である。いくつかの実施形態において、第1及び第2の抗体軽鎖は、本開示の軽鎖と同一の配列を有する。
変異は、元の残基、次いでKabatナンバリングシステムを使用した位置、続いて移入残基によって示される(残基は全て一文字のアミノ酸コードで示す)。複数の変異は、コロンで分けられている。
別の態様において、本明細書で提供されるのは、本開示のポリヌクレオチドのライブラリーを含むキットである。いくつかの実施形態において、キットは、例えば、目的の抗体HVRまたは可変領域を特定するために、ライブラリーを発現、修飾、スクリーニング、または別の方法で使用するための説明を含む、添付文書を更に含む。いくつかの実施形態において、キットは、例えば、ポリヌクレオチド(例えば、合成ポリヌクレオチド)のうちの1つ以上を保存、移動、トランスフェクト、または別の方法で使用するための1つ以上のバッファーを更に含む。いくつかの実施形態において、キットは、ポリヌクレオチドのうちの1つ以上を保存するための1つ以上の容器を更に含む。いくつかの実施形態において、キットは、例えば、ポリヌクレオチドのうちの1つ以上を宿主細胞にトランスフェクションするための1つ以上のベクターを更に含む。
抗体可変ドメインの可変性を構造レベルで理解するために、抗体可変ドメインの幾何学的アラインメントをマッピングし、更に、その幾何学的アラインメントに基づいて、構造エントロピー及び配列エントロピーを計算するアルゴリズムを開発した。そのようなアプローチを取ることは、よく確立されたV(D)J遺伝子再構成プロセスによって決定される抗体多様性の古典的理論を、ダイナミックユニットによる立体構造多様性(Linus Paulingによる鋳型指向立体構造選択;例えば、James,L.and Tawfik,D.“Conformational diversity and protein evolution-a 60-year-old hypothesis revisited”,Trends Biochem Sci.2003 Jul;28(7):361-8参照)と組み合わせて併用し、抗体結合部位の選択及び適合によって、ほぼ無限のエピトープ空間のサンプリングを可能にするものである。一例として、本アルゴリズムを使用して、81のヒト抗体可変軽鎖ドメインの高解像度結晶構造に関する構造及び配列の可変性を解析した。可変軽鎖ドメインの全ての位置について、エントロピーを計算し、それをプロットした(図1A;構造エントロピーは太線、配列エントロピーは点線)。幾何学的アラインメントに基づいた構造エントロピー及び配列エントロピーの計算によって得られた結果を使用して、超可変(HVR)領域を特定し、これらの可変領域上の重要な位置を特定した。比較のために、例示的な抗体軽鎖可変ドメイン配列のHVR(上記の方法によって定義)及びCDR(Kabatによって定義)を特定した(図1B)。
軽鎖ライブラリーDL280の構築
DL280軽鎖ライブラリーの構築を開始するために、20のHVR-L1配列とHVR-L2配列(表1)の組み合わせをコードする20のミニ遺伝子を合成した。次いで、合成したミニ遺伝子をPvuI及びBamHIで消化し、同じ2つの制限酵素で消化した標的ベクターFad22にライゲートした。このライゲーション混合物を用いてDH10B細胞の形質転換を行い、20のコンストラクトを精製し、次の構築段階のために配列を検証した。
次のプロトコルにより、VH_vr1及びVH_vr2をコードする複数の縮重オリゴを設計し、合成し、二本鎖DNAに変換した。0.75μLの0.2μM鋳型オリゴを、10μLの5x PrimeSTARバッファー、4μLのdNTP混合物、1μLの100μMフォワードプライマー、1μLの100μMリバースプライマー、0.5μLのPrimeSTAR HS DNA Polymerase(2.5U/μL)、及び33μLの水と混合した。PCR溶液を96℃で5分間予熱し、次いで、14サイクル(96℃で15秒、60℃で15秒、72℃で6秒)を実施し、続いて、72℃で3分間伸長した。VH_vr1は、プライマーペアF_1999(CGTTTGTCCTGTGCAGCTTCCGG)(配列番号61)及びR_1999(CGAGGCCCTTACCCGGGGCCTGACG)(配列番号62)を使用して増幅し、一方、VH_vr2は、プライマーペアF_2003(CCGGGTAAGGGCCTCGAGTGG)(配列番号63)及びR_2003(GAGCACGTCCGTTCGAATTGTCGCGACTTATAG)(配列番号64)を使用して増幅した(表4)。
共通軽鎖ライブラリーは、VH-VR123ライブラリーに由来する重鎖ライブラリーと、DL280ライブラリーに由来する軽鎖ライブラリーとから構成された。VH-VR123ライブラリープラスミドとDL280ライブラリープラスミドの両方をBspEI及びSpeI(Thermo Scientific)で消化した。VH-VR123ライブラリーに由来する重鎖をコードするDNAフラグメントを、DL280ライブラリーに由来するベクター骨格にクローニングした。ローリングサークル増幅(RCA)前に、ライゲーション産物を脱塩した(QIAquick(登録商標)PCR Purification Kit(QIAGEN))。RCAは、以下のように実施した。40ngのライゲーション産物を、10μLの10x NEBuffer4、50μLの100μM pd(N)8、及び水(最大88.5μL)と混合し、95℃で3分間加熱し、1サイクルずつ1℃下がる65サイクル(各サイクル30秒)でアニーリングした。10μLの10mM dNTPミックス、1μLの100×BSA、及び0.5μLのPhi29DNAポリメラーゼを添加した後、アニーリングした反応物を30℃で一晩インキュベートした。RCA産物を最初にNotIで消化し、DNAフラグメントを精製し(QIAquick(登録商標)PCR Purification Kit)、Acc65Iで更に消化した。次いで、消化した産物をT4 DNAリガーゼ(Thermo Scientific)でライゲートした。エタノール沈殿による精製後、ライゲーション産物でER2738細胞をエレクトロポレーションによって形質転換した。プレートから合計3.5*109のコロニーを回収した(2xYT、1%グルコース、100μg/mLのアンピシリン)。
共通軽鎖ライブラリーファージミド粒子の調製
抗原パンニングのための共通軽鎖ライブラリーファージミド粒子を調製するために、共通軽鎖ライブラリーを含むER2738細胞(上の実施例2に記載)1.6リットルを、0.1の開始OD600で、2xYT、2%グルコース、100μg/mLのアンピシリン及び12.5μg/mLのテトラサイクリンを含む培地中に播種した。培養液を、250rpmで振盪しながら、0.6~0.8のOD600に達するまで、37℃で成長させた。次いで、多重感染度(MOI)10で、37℃で30分間、細胞にM13KO7ヘルパーファージを感染させた。感染したER2738細胞を、2xYT、100μg/mLのアンピシリン及び50μg/mLのカナマイシンを含む3.2リットルの培地中、22℃で一晩、成長させた。次いで、培養上清を10,000rpmで15分間、遠心分離によって回収し、0.45μmの低結合メンブレンフィルター(Corning)に通して濾過した。次いで、PEG/NaClを使用して、濾過した上清からファージミド粒子を沈殿させ、PBS中に再懸濁した。PEG/NaClによる沈殿と、それに続くPBS中への再懸濁のラウンドを追加で実施した。ファージ濃度をOD268の測定(OD268の1単位を約1*1013ファージ粒子/mLと仮定)によって決定し、プラークアッセイによって確認した。ライブラリーファージミド粒子を、20%グリセロール中、-80℃で保存した。
1~30μg/mlの濃度の抗原タンパク質をMaxisorpストリップ(Thermo Scientific、カタログ番号446469)上に4℃で一晩コーティングした。各ライブラリーに対して、複数の抗原ウェルを準備した。コーティングしたウェルを、まず、5%ミルク含有PBSを用いて、室温で1~2時間ブロッキングし、PBSで洗浄した。次いで、1,100μL/ウェルのファージミド粒子溶液(典型的に、2%ミルク含有PBS中、1~5*1012個のファージ)を4つの平行ウェルに添加し、1~2時間インキュベートした。次いで、Tween 20の濃度を上げながら(0.1%から0.3%)、PBSでウェルを数回洗浄し、最後にPBSだけで洗浄した。結合したファージミド粒子を、100μLの0.2Mグリシン-HClを用いて、室温で10分間、ウェルから溶出した。溶出したファージを、直ちに、18μLの1M Tris-HClで中和した(pH9.1)。
溶出した濃縮ファージプールを次のように更に増幅した。溶出したファージミド粒子をER2738細胞に37℃で30分間、感染させた。次いで、感染細胞を、2%グルコース、100μg/mLのアンピシリン及び12.5μg/mLのテトラサイクリンを含む2xYT寒天プレート上に播種した。プレートからコロニーを回収し、100mlの2%グルコース、100μg/mLのアンピシリン及び12.5μg/mLのテトラサイクリン中で成長させ、M13KO7ヘルパーファージを感染させた。増幅したファージを上記プロセスによって精製及び定量した。通常、パンニングの最終ラウンド後に溶出したファージを使用してER2738細胞の感染を行い、得られたER2738コロニーを上清ELISAスクリーニングアッセイのために採取した。
細菌上清中に存在するFabを測定するために、高感度サンドイッチElisaアッセイを構築した。マイクロプレートをポリクローナル抗ヒトIgG(Fab特異的)(Sigma I5260)でコーティングして、細菌上清中に存在するFabを捕捉し、次いで、HRP標識ヤギ抗ヒトFcを使用して、Fabの捕捉量を検出した。各ウェルのA450を測定して、Fab結合活性を決定した。一次ヒットは、ELISAシグナルがバックグラウンドの少なくとも2倍であるものと定義し、以下の実施例(実施例4)で更に特徴付けた。
上の実施例3で特定された一次ヒットに対応するFabに、His6タグをCH1ドメインのC末端にタグ付けし、E.coliで過剰発現させ、Ni-NTA樹脂(Thermo Fisher Scientific)により、製造元の説明書に従って精製した。親和性をForteBio Octet RED96 Systemによって測定した。簡潔に述べれば、抗原を捕捉するために、AHCセンサー(抗ヒトIgG-Fc捕捉ディップ及び読み取りバイオセンサー)を使用し、カイネティクスバッファーで5~10μg/mLまで希釈した精製Fabを含有するウェル中に浸漬させた(更なる説明については、例えば、ForteBio,Anti-human IgG Capture(AHC)Biosensors,Product Insert 41-0072-PD(2008)を参照されたい)。取得したForteBioデータをData Acquisitionソフトウェア7.1で処理し、カイネティクスデータを1:1 Langmuir結合モデルにフィッティングさせた。標的TAGT-1、TAGT-2、及びTAGT-3について、25℃で測定したFabの親和性を表5及び図3に示す。これらの3つの標的抗原(TAGT-1、TAGT-2、及びTAGT-3)は、17%未満の配列同一性を有する無関係のタンパク質であった。
表5:TAGT-1、TAGT-2、及びTAGT-3への結合が確認されたFabの、25℃における親和性測定値
実施例2で組み立てたDL280軽鎖ライブラリーのアプリケーションを異なるシナリオで実証するために、DL280軽鎖ライブラリーを使用して、3つの抗体ライブラリーを構築した:
DPL5:大規模VHライブラリーとペアリングされたDL280軽鎖のセット全体
VH:多様性は、>109 VH
VL:DL280のセット全体
SEL021:小規模VHライブラリーとペアリングされたDL280軽鎖のセット全体
VH:20のVH
VL:DL280のセット全体
DPL16~DPL34:大規模VHライブラリーとペアリングされたDL280軽鎖のサブセット
VH:多様性は、>1010 VH
VL:DL280の単一種
表8:DPL5、SEL021、及びDPL16~34から確認されたヒットにおけるDL280のセグメント使用率
表9:HVR-L1、HVR-L2、及びHVR-L3の2つのセグメントの組み合わせ使用率
表10:HVR-L1、HVR-L2、及びHVR-L3の3つのセグメントの組み合わせ使用率
Claims (62)
- ポリヌクレオチドを含むライブラリーであって、前記ポリヌクレオチドのうちの1つは、HVR-L1、HVR-L2及びHVR-L3を含む抗体軽鎖可変領域をコードし、前記抗体軽鎖可変領域の前記HVR-L1、HVR-L2、及びHVR-L3のうちの少なくとも2つは、配列番号1~4からなる群から選択されるHVR-L1配列、配列番号5~9からなる群から選択されるHVR-L2配列、及び配列番号10~23からなる群から選択されるHVR-L3配列から選択されるアミノ酸配列を含む、前記ライブラリー。
- 前記ポリヌクレオチドのうちの少なくとも2つ、少なくとも3つ、少なくとも4つ、少なくとも5つ、または少なくとも10が、HVR-L1、HVR-L2及びHVR-L3を含む軽鎖可変領域をコードし、前記抗体軽鎖可変領域の前記HVR-L1、HVR-L2、及びHVR-L3のうちの少なくとも2つは、配列番号1~4からなる群から選択されるHVR-L1配列、配列番号5~9からなる群から選択されるHVR-L2配列、及び配列番号10~23からなる群から選択されるHVR-L3配列から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項1に記載のライブラリー。
- 前記ポリヌクレオチドのそれぞれが、HVR-L1、HVR-L2及びHVR-L3を含む軽鎖をコードし、前記抗体軽鎖可変領域の前記HVR-L1、HVR-L2、及びHVR-L3のうちの少なくとも2つは、配列番号1~4からなる群から選択されるHVR-L1配列、配列番号5~9からなる群から選択されるHVR-L2配列、及び配列番号10~23からなる群から選択されるHVR-L3配列から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項1に記載のライブラリー。
- 前記ポリヌクレオチドが、約1000未満のHVR-L1配列、HVR-L2配列、及びHVR-L3配列のユニークな組み合わせを含む、請求項1~3のいずれか1項に記載のライブラリー。
- 前記ポリヌクレオチドが、約280以下のHVR-L1配列、HVR-L2配列、及びHVR-L3配列のユニークな組み合わせを含む、請求項4に記載のライブラリー。
- 前記軽鎖可変領域が、配列番号5~9からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号10~23からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む前記抗体のHVR-L3と、を含む、請求項1~5のいずれか1項に記載のライブラリー。
- 前記軽鎖可変領域が、配列番号1~4からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L1を含み、前記抗体のHVR-L2が、配列番号5~9からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項1~6のいずれか1項に記載のライブラリー。
- 前記軽鎖可変領域が、配列番号1~4からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号10~23からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む前記抗体のHVR-L3と、を含む、請求項1~7のいずれか1項に記載のライブラリー。
- 前記軽鎖可変領域が、配列番号1~4からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号5~9からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号10~23からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L3と、を含む、請求項1~8のいずれか1項に記載のライブラリー。
- 前記軽鎖可変領域が、(1)配列番号1のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号9のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号10~23からなる群から選択されるHVR-L3;(2)配列番号4のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号9のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号10~23からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L3;(3)配列番号2のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号9のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号10~23からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L3;(4)配列番号2のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号5~9からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号18のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(5)配列番号1のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号5~9からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号23のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(6)配列番号1のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号5~9からなる群から選択されるHVR-L2配列と、配列番号20のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(7)配列番号1~4からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号9のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号18のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(8)配列番号1~4からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号9のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号23のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(9)配列番号1~4からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号9のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号20のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(10)配列番号3のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号9のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号10~23からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L3;(11)配列番号4のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号6のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号10~23からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L3;(12)配列番号4のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号5~9からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号23のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(13)配列番号4のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号5~9からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号14のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(14)配列番号1のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号5~9からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号18のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(15)配列番号3のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号5~9からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号20のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(16)配列番号1~4からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号9のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号14のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(17)配列番号1~4からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号6のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号23のアミノ酸配列を含むHVR-L3;及び(18)配列番号1~4からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号7のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号23のアミノ酸配列を含むHVR-L3からなる群から選択されるHVR-L1、HVR-L2、及びHVR-L3の3つを含む、請求項1に記載のライブラリー。
- 前記軽鎖可変領域が、(1)配列番号2のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号9のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号18のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(2)配列番号1のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号9のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号23のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(3)配列番号1のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号9のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号20のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(4)配列番号4のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号9のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号14のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(5)配列番号3のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号9のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号20のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(6)配列番号1のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号9のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号18のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(7)配列番号4のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号7のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号23のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(8)配列番号4のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号6のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号23のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(9)配列番号4のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号6のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号17のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(10)配列番号4のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号5のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号20のアミノ酸配列を含むHVR-L3;及び(11)配列番号4のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号8のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号11のアミノ酸配列を含むHVR-L3からなる群から選択されるHVR-L1、HVR-L2、及びHVR-L3の3つを含む、請求項1に記載のライブラリー。
- 前記軽鎖可変領域が、表2に列挙される抗体のHVR-L1、HVR-L2、及びHVR-L3を含む、請求項1に記載のライブラリー。
- 前記軽鎖可変領域が、配列番号24のアミノ酸配列を含むFW-L1と、配列番号25のアミノ酸配列を含むFW-L2と、配列番号26のアミノ酸配列を含むFW-L3と、配列番号27のアミノ酸配列を含むFW-L4と、を含む、請求項1~12のいずれか1項に記載のライブラリー。
- 前記軽鎖可変領域が、配列番号28~50からなる群から選択される配列を含む、請求項1に記載のライブラリー。
- 前記ポリヌクレオチドが、全長抗体軽鎖をコードする、請求項1~14のいずれか1項に記載のライブラリー。
- 抗体重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを更に含む、請求項1~15のいずれか1項に記載のライブラリー。
- 抗体重鎖可変領域をコードする前記ポリヌクレオチドが、少なくとも1つのユニーク配列、少なくとも100のユニーク配列、少なくとも1000のユニーク配列、または少なくとも約109のユニーク配列を含む、請求項16に記載のライブラリー。
- 複数のユニーク抗体をコードするポリヌクレオチドを含む、ライブラリーであって、各抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記複数の各抗体の前記軽鎖可変領域は、同一の配列を含み、HVR-L1、HVR-L2及びHVR-L3を含み、前記HVR-L1、HVR-L2、及びHVR-L3のうちの少なくとも2つは、配列番号1~4からなる群から選択されるHVR-L1配列、配列番号5~9からなる群から選択されるHVR-L2配列、及び配列番号10~23からなる群から選択されるHVR-L3配列から選択されるアミノ酸配列を含む、前記ライブラリー。
- 前記軽鎖可変領域が、配列番号5~9からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号10~23からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L3と、を含む、請求項17に記載のライブラリー。
- 前記軽鎖可変領域が、配列番号1~4からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L1を含み、前記抗体のHVR-L2は、配列番号5~9からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項17に記載のライブラリー。
- 前記軽鎖可変領域が、配列番号1~4からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号10~23からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む抗体のHVR-L3と、を含む、請求項17に記載のライブラリー。
- 前記軽鎖可変領域が、配列番号1~4からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号5~9からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号10~23からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L3と、を含む、請求項17に記載のライブラリー。
- 前記軽鎖可変領域が、(1)配列番号1のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号9のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号10~23からなる群から選択されるHVR-L3;(2)配列番号4のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号9のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号10~23からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L3;(3)配列番号2のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号9のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号10~23からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L3;(4)配列番号2のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号5~9からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号18のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(5)配列番号1のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号5~9からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号23のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(6)配列番号1のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号5~9からなる群から選択されるHVR-L2配列と、配列番号20のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(7)配列番号1~4からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号9のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号18のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(8)配列番号1~4からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号9のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号23のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(9)配列番号1~4からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号9のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号20のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(10)配列番号3のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号9のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号10~23からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L3;(11)配列番号4のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号6のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号10~23からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L3;(12)配列番号4のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号5~9からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号23のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(13)配列番号4のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号5~9からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号14のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(14)配列番号1のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号5~9からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号18のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(15)配列番号3のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号5~9からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号20のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(16)配列番号1~4からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号9のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号14のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(17)配列番号1~4からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号6のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号23のアミノ酸配列を含むHVR-L3;及び(18)配列番号1~4からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号7のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号23のアミノ酸配列を含むHVR-L3からなる群から選択されるHVR-L1、HVR-L2、及びHVR-L3の3つを含む、請求項17に記載のライブラリー。
- 前記軽鎖可変領域が、(1)配列番号2のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号9のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号18のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(2)配列番号1のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号9のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号23のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(3)配列番号1のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号9のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号20のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(4)配列番号4のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号9のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号14のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(5)配列番号3のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号9のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号20のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(6)配列番号1のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号9のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号18のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(7)配列番号4のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号7のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号23のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(8)配列番号4のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号6のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号23のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(9)配列番号4のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号6のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号17のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(10)配列番号4のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号5のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号20のアミノ酸配列を含むHVR-L3;及び(11)配列番号4のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号8のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号11のアミノ酸配列を含むHVR-L3からなる群から選択されるHVR-L1、HVR-L2、及びHVR-L3の3つを含む、請求項17に記載のライブラリー。
- 前記軽鎖可変領域が、表2に列挙される抗体のHVR-L1、HVR-L2、及びHVR-L3を含む、請求項17に記載のライブラリー。
- 前記軽鎖可変領域が、配列番号24のアミノ酸配列を含むFW-L1と、配列番号25のアミノ酸配列を含むFW-L2と、配列番号26のアミノ酸配列を含むFW-L3と、配列番号27のアミノ酸配列を含むFW-L4と、を含む、請求項17~25のいずれか1項に記載のライブラリー。
- 前記軽鎖可変領域が、配列番号28~50からなる群から選択される配列を含む、請求項17に記載のライブラリー。
- 前記ライブラリー中の前記抗体の前記重鎖可変領域が、少なくとも1つのユニーク配列、少なくとも100のユニーク配列、少なくとも1000のユニーク配列、または少なくとも約109のユニーク配列を有する、請求項17~27のいずれか1項に記載のライブラリー。
- 前記ライブラリーの前記ポリヌクレオチドが合成ポリヌクレオチドである、請求項1~28のいずれか1項に記載のライブラリー。
- 前記抗体軽鎖可変領域の前記HVR-L1、HVR-L2、及びHVR-L3のうちの少なくとも1つが、構造決定及び/またはコンピューターモデリングによって評価されたとき、複数の立体構造を取る、請求項1~29のいずれか1項に記載のライブラリー。
- 前記抗体軽鎖可変領域をコードする前記ポリヌクレオチドのうちの少なくとも1つが、ベクター中にある、請求項1~30のいずれか1項に記載のライブラリー。
- 前記ベクターが、発現ベクターである、請求項31に記載のライブラリー。
- 前記ベクターが、ディスプレイベクターである、請求項31に記載のライブラリー。
- 前記抗体軽鎖可変領域をコードする前記ポリヌクレオチドのうちの少なくとも1つが、細胞中にある、請求項1~33のいずれか1項に記載のライブラリー。
- 前記細胞が、細菌、酵母、または哺乳類の細胞である、請求項34に記載のライブラリー。
- ポリヌクレオチドを含む非ヒト動物であって、前記ポリヌクレオチドのうちの1つは、HVR-L1、HVR-L2及びHVR-L3を含む抗体軽鎖可変領域をコードし、前記抗体軽鎖可変領域の前記HVR-L1、HVR-L2、及びHVR-L3のうちの少なくとも2つは、配列番号1~4からなる群から選択されるHVR-L1配列、配列番号5~9からなる群から選択されるHVR-L2配列、及び配列番号10~23からなる群から選択されるHVR-L3配列から選択されるアミノ酸配列を含む、前記非ヒト動物。
- 前記非ヒト動物が、哺乳類である、請求項36に記載の非ヒト動物。
- 表面上に提示された少なくとも1つのポリペプチドを含むファージであって、前記少なくとも1つのポリペプチドは、HVR-L1、HVR-L2及びHVR-L3を含む抗体軽鎖可変領域を含む抗原結合ドメインを含み、前記抗体軽鎖可変領域の前記HVR-L1、HVR-L2、及びHVR-L3のうちの少なくとも2つは、配列番号1~4からなる群から選択されるHVR-L1配列、配列番号5~9からなる群から選択されるHVR-L2配列、及び配列番号10~23からなる群から選択されるHVR-L3配列から選択されるアミノ酸配列を含む、前記ファージ。
- HVR-L1、HVR-L2及びHVR-L3を含む軽鎖可変領域を含む抗体軽鎖であって、前記HVR-L1、HVR-L2、及びHVR-L3のうちの少なくとも2つは、配列番号1~4からなる群から選択されるHVR-L1配列、配列番号5~9からなる群から選択されるHVR-L2配列、及び配列番号10~23からなる群から選択されるHVR-L3配列から選択されるアミノ酸配列を含む、前記抗体軽鎖。
- 前記軽鎖可変領域が、配列番号5~9からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号10~23からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む前記抗体のHVR-L3と、を含む、請求項39に記載の抗体軽鎖。
- 前記軽鎖可変領域が、配列番号1~4からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L1を含み、前記抗体のHVR-L2は、配列番号5~9からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項39に記載の抗体軽鎖。
- 前記軽鎖可変領域が、配列番号1~4からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号10~23からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む抗体のHVR-L3と、を含む、請求項39に記載の抗体軽鎖。
- 前記軽鎖可変領域が、配列番号1~4からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号5~9からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号10~23からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L3と、を含む、請求項39に記載の抗体軽鎖。
- 前記軽鎖可変領域が、(1)配列番号1のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号9のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号10~23からなる群から選択されるHVR-L3;(2)配列番号4のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号9のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号10~23からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L3;(3)配列番号2のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号9のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号10~23からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L3;(4)配列番号2のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号5~9からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号18のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(5)配列番号1のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号5~9からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号23のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(6)配列番号1のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号5~9からなる群から選択されるHVR-L2配列と、配列番号20のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(7)配列番号1~4からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号9のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号18のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(8)配列番号1~4からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号9のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号23のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(9)配列番号1~4からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号9のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号20のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(10)配列番号3のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号9のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号10~23からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L3;(11)配列番号4のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号6のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号10~23からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L3;(12)配列番号4のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号5~9からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号23のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(13)配列番号4のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号5~9からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号14のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(14)配列番号1のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号5~9からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号18のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(15)配列番号3のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号5~9からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号20のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(16)配列番号1~4からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号9のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号14のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(17)配列番号1~4からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号6のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号23のアミノ酸配列を含むHVR-L3;及び(18)配列番号1~4からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号7のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号23のアミノ酸配列を含むHVR-L3からなる群から選択されるHVR-L1、HVR-L2、及びHVR-L3の3つを含む、請求項39に記載の抗体軽鎖。
- 前記軽鎖可変領域が、(1)配列番号2のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号9のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号18のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(2)配列番号1のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号9のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号23のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(3)配列番号1のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号9のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号20のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(4)配列番号4のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号9のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号14のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(5)配列番号3のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号9のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号20のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(6)配列番号1のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号9のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号18のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(7)配列番号4のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号7のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号23のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(8)配列番号4のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号6のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号23のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(9)配列番号4のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号6のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号17のアミノ酸配列を含むHVR-L3;(10)配列番号4のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号5のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号20のアミノ酸配列を含むHVR-L3;及び(11)配列番号4のアミノ酸配列を含むHVR-L1と、配列番号8のアミノ酸配列を含むHVR-L2と、配列番号11のアミノ酸配列を含むHVR-L3からなる群から選択されるHVR-L1、HVR-L2、及びHVR-L3の3つを含む、請求項39に記載の抗体軽鎖。
- 前記軽鎖可変領域が、表2に列挙される抗体のHVR-L1、HVR-L2、及びHVR-L3の3つを含む、請求項39に記載の抗体軽鎖。
- 前記軽鎖可変領域が、配列番号24のアミノ酸配列を含むFW-L1と、配列番号25のアミノ酸配列を含むFW-L2と、配列番号26のアミノ酸配列を含むFW-L3と、配列番号27のアミノ酸配列を含むFW-L4と、を含む、請求項39~46のいずれか1項に記載の抗体軽鎖。
- 前記軽鎖可変領域が、配列番号28~50からなる群から選択される配列を含む、請求項39に記載の抗体軽鎖。
- 前記抗体軽鎖可変領域の前記HVR-L1、HVR-L2、及びHVR-L3のうちの少なくとも1つが、構造決定及び/またはコンピューターモデリングによって評価されたとき、複数の立体構造を取る、請求項39~48のいずれか1項に記載の抗体軽鎖。
- 重鎖及び軽鎖を含む抗体であって、前記軽鎖が、請求項39~49のいずれか1項に記載の軽鎖である、前記抗体。
- 前記抗体が、約10-7~約10-11Mの平衡解離定数(Kd)で、少なくとも1つの標的に結合する、請求項50に記載の抗体。
- 抗原結合ドメインを含むライブラリーであって、前記抗原結合ドメインのうちの1つは、HVR-L1、HVR-L2及びHVR-L3を含む抗体軽鎖可変領域を含み、前記抗体軽鎖可変領域の前記HVR-L1、HVR-L2、及びHVR-L3のうちの少なくとも2つは、配列番号1~4からなる群から選択されるHVR-L1配列、配列番号5~9からなる群から選択されるHVR-L2配列、及び配列番号10~23からなる群から選択されるHVR-L3配列から選択されるアミノ酸配列を含む、前記ライブラリー。
- 前記抗原結合ドメインが、抗体重鎖可変領域を更に含む、請求項52に記載のライブラリー。
- 前記ライブラリーがファージを含み、前記抗原結合ドメインが前記ライブラリーの少なくとも1つのファージの表面上に提示される、請求項52または53に記載のライブラリー。
- 請求項1~35のいずれか1項に記載のライブラリーのポリヌクレオチド配列を準備し、組み立てることを含む、ライブラリーの調製方法。
- (a)複数の立体構造を有する配列を含む、1つ、2つまたは3つの軽鎖HVRを選択するステップと、(b)ポリヌクレオチド配列を組み立てて、複数の抗体軽鎖可変領域配列をコードするポリヌクレオチドのライブラリーを生成するステップと、を含む、抗体ライブラリーの作製方法。
- 前記抗体軽鎖可変領域配列が、ヒト抗体配列である、請求項56に記載の方法。
- 前記抗体軽鎖可変領域が、HVR-L1、HVR-L2及びHVR-L3を含み、前記軽鎖可変領域の前記HVR-L1、HVR-L2、及びHVR-L3のうちの少なくとも2つは、配列番号1~4からなる群から選択されるHVR-L1配列、配列番号5~9からなる群から選択されるHVR-L2配列、及び配列番号10~23からなる群から選択されるHVR-L3配列から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項56に記載の方法。
- 2つの抗体重鎖可変領域及び2つの同一の軽鎖可変領域を含む、二重特異性抗体の生成方法であって、
(a)第1の抗原に結合する第1の抗原結合ドメインをスクリーニングすることであって、前記第1の抗原結合ドメインは、第1の抗体重鎖可変領域及び第1の抗体軽鎖可変領域を含み、前記第1の抗体軽鎖可変領域は、HVR-L1、HVR-L2及びHVR-L3を含み、前記抗体軽鎖可変領域の前記HVR-L1、HVR-L2、及びHVR-L3のうちの少なくとも2つは、配列番号1~4からなる群から選択されるHVR-L1配列、配列番号5~9からなる群から選択されるHVR-L2配列、及び配列番号10~23からなる群から選択されるHVR-L3配列から選択されるアミノ酸配列を含む、前記スクリーニングすることと、
(b)第2の抗原に結合する第2の抗原結合ドメインをスクリーニングすることであって、前記第2の抗原結合ドメインは、第2の抗体重鎖可変領域及び第2の抗体軽鎖可変領域を含み、前記第2の抗体軽鎖可変領域は、前記第1の抗体軽鎖可変領域と同じ配列を有する、前記スクリーニングをすることと、
(c)前記第1の抗原結合ドメイン及び前記第2の抗原結合ドメインを含む二重特異性抗体を生成することと、を含む、
前記生成方法。 - 二重特異性抗体であって、(a)第1の重鎖可変領域及び第1の軽鎖可変領域を含む第1の結合ドメインであって、第1の標的に結合する、前記第1の結合ドメインと、(b)第2の重鎖可変領域及び第2の軽鎖可変領域を含む第2の結合ドメインであって、前記第2の結合ドメインは、第2の標的に結合し、前記第2の軽鎖可変領域は、前記第1の軽鎖可変領域配列と同一の配列を有する、前記第2の結合ドメインと、を含み、前記第1及び第2の軽鎖可変領域のそれぞれは、HVR-L1、HVR-L2及びHVR-L3を含み、前記HVR-L1、HVR-L2、及びHVR-L3のうちの少なくとも2つは、配列番号1~4からなる群から選択されるHVR-L1配列、配列番号5~9からなる群から選択されるHVR-L2配列、及び配列番号10~23からなる群から選択されるHVR-L3配列から選択されるアミノ酸配列を含む、前記二重特異性抗体。
- 前記第1の重鎖可変領域が、第1の重鎖定常領域に連結され、前記第2の重鎖可変領域が、第2の重鎖定常領域に連結され、前記第1の抗体軽鎖可変領域が、第1の軽鎖定常領域に連結され、前記第2の抗体軽鎖可変領域が、第2の軽鎖定常領域に連結され、前記第1及び前記第2の抗体軽鎖が、同一の配列を有する、請求項60に記載の二重特異性抗体。
- 請求項1~35のいずれか1項に記載のポリヌクレオチドのライブラリーを含む、キット。
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