JP2021531804A - 原発性高シュウ酸尿症1型(ph1)を治療するためのヒドロキシ酸オキシダーゼ1(hao1)遺伝子編集のための組成物および方法 - Google Patents
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Abstract
Description
実施形態1 HAO1遺伝子内で二本鎖切断(DSB)または一本鎖切断(SSB)を誘導する方法であって、組成物を細胞に送達することを含み、組成物が、
a.ガイドRNAであって、
i.配列番号1〜146から選択されるガイド配列、または
ii.配列番号1〜146から選択される配列の少なくとも17、18、19、もしくは20個の連続ヌクレオチド、または
iii.配列番号1〜146から選択される配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、もしくは90%同一であるガイド配列、または
iv.配列番号4、5、6、8、22、35、38、39、56、73、84、100、105、113、117、129、145のうちのいずれか1つを含むガイド配列、または
v.配列番号8、22、35、39、73、84、100、105、113、145のうちのいずれか1つを含むガイド配列を含む、ガイドRNAと、任意選択で、
b.RNAガイドDNA結合剤、またはRNAガイドDNA結合剤をコードする核酸と、を含む、方法。
実施形態2 HAO1遺伝子の発現を低減する方法であって、組成物を細胞に送達することを含み、組成物が、
a.ガイドRNAであって、
i.配列番号1〜146から選択されるガイド配列、または
ii.配列番号1〜146から選択される配列の少なくとも17、18、19、もしくは20個の連続ヌクレオチド、または
iii.配列番号1〜146から選択される配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、もしくは90%同一であるガイド配列、または
iv.配列番号4、5、6、8、22、35、38、39、56、73、84、100、105、113、117、129、145のうちのいずれか1つを含むガイド配列、または
v.配列番号8、22、35、39、73、84、100、105、113、145のうちのいずれか1つを含むガイド配列を含む、ガイドRNAと、任意選択で、
b.RNAガイドDNA結合剤、またはRNAガイドDNA結合剤をコードする核酸と、を含む、方法。
実施形態3 原発性高シュウ酸尿症1型(PH1)を治療または予防する方法であって、それを必要とする対象に組成物を投与することを含み、組成物が、
a.ガイドRNAであって、
i.配列番号1〜146から選択されるガイド配列、または
ii.配列番号1〜146から選択される配列の少なくとも17、18、19、もしくは20個の連続ヌクレオチド、または
iii.配列番号1〜146から選択される配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、もしくは90%同一であるガイド配列、または
iv.配列番号4、5、6、8、22、35、38、39、56、73、84、100、105、113、117、129、145のうちのいずれか1つを含むガイド配列、または
v.配列番号8、22、35、39、73、84、100、105、113、145のうちのいずれか1つを含むガイド配列を含む、ガイドRNAと、任意選択で、
b.RNAガイドDNA結合剤、またはRNAガイドDNA結合剤をコードする核酸と、を含み、それによってPH1を治療または予防する、方法。
実施形態4 PH1によって引き起こされる末期腎疾患(ESRD)を治療または予防する方法であって、それを必要とする対象に組成物を投与することを含み、組成物が、
a.ガイドRNAであって、
i.配列番号1〜146から選択されるガイド配列、または
ii.配列番号1〜146から選択される配列の少なくとも17、18、19、もしくは20個の連続ヌクレオチド、または
iii.配列番号1〜146から選択される配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、もしくは90%同一であるガイド配列、または
iv.配列番号4、5、6、8、22、35、38、39、56、73、84、100、105、113、117、129、145のうちのいずれか1つを含むガイド配列、または
v.配列番号8、22、35、39、73、84、100、105、113、145のうちのいずれか1つを含むガイド配列を含む、ガイドRNAと、任意選択で、
b.RNAガイドDNA結合剤、またはRNAガイドDNA結合剤をコードする核酸と、を含み、それによって、PH1によって引き起こされる(ESRD)を治療または予防する、方法。
実施形態5 シュウ酸カルシウム産生および沈着、高シュウ酸尿症、シュウ酸症、ならびに血尿のうちのいずれか1つを治療または予防する方法であって、それを必要とする対象に組成物を投与することを含み、組成物が、
a.ガイドRNAであって、
i.配列番号1〜146から選択されるガイド配列、または
ii.配列番号1〜146から選択される配列の少なくとも17、18、19、もしくは20個の連続ヌクレオチド、または
iii.配列番号1〜146から選択される配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、もしくは90%同一であるガイド配列、または
iv.配列番号4、5、6、8、22、35、38、39、56、73、84、100、105、113、117、129、145のうちのいずれか1つを含むガイド配列、または
v.配列番号8、22、35、39、73、84、100、105、113、145のうちのいずれか1つを含むガイド配列を含む、ガイドRNAと、任意選択で、
b.RNAガイドDNA結合剤、またはRNAガイドDNA結合剤をコードする核酸と、を含み、それによって、シュウ酸カルシウム産生および沈着、高シュウ酸尿症、シュウ酸症、ならびに血尿のうちのいずれか1つを治療または予防する、方法。
実施形態6 血清グリコレート濃度を高める方法であって、それを必要とする対象に組成物を投与することを含み、組成物が、
a.ガイドRNAであって、
i.配列番号1〜146から選択されるガイド配列、または
ii.配列番号1〜146から選択される配列の少なくとも17、18、19、もしくは20個の連続ヌクレオチド、または
iii.配列番号1〜146から選択される配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、もしくは90%同一であるガイド配列、または
iv.配列番号4、5、6、8、22、35、38、39、56、73、84、100、105、113、117、129、145のうちのいずれか1つを含むガイド配列、または
v.配列番号8、22、35、39、73、84、100、105、113、145のうちのいずれか1つを含むガイド配列を含む、ガイドRNAと、任意選択で、
b.RNAガイドDNA結合剤、またはRNAガイドDNA結合剤をコードする核酸と、を含み、それによって血清グリコレート濃度を高める、方法。
実施形態7 対象において尿内のオキシレートを低減する方法であって、それを必要とする対象に組成物を投与することを含み、組成物が、
a.ガイドRNAであって、
i.配列番号1〜146から選択されるガイド配列、または
ii.配列番号1〜146から選択される配列の少なくとも17、18、19、もしくは20個の連続ヌクレオチド、または
iii.配列番号1〜146から選択される配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、もしくは90%同一であるガイド配列、または
iv.配列番号4、5、6、8、22、35、38、39、56、73、84、100、105、113、117、129、145のうちのいずれか1つを含むガイド配列、または
v.配列番号8、22、35、39、73、84、100、105、113、145のうちのいずれか1つを含むガイド配列を含む、ガイドRNAと、任意選択で、
b.RNAガイドDNA結合剤、またはRNAガイドDNA結合剤をコードする核酸と、を含み、それによって対象の尿内のオキサレートを低減する、方法。
実施形態8 RNAガイドDNA結合剤、またはRNAガイドDNA結合剤をコードする核酸が投与される、実施形態1〜7のいずれか1つに記載の方法。
実施形態9 組成物であって、
a.ガイドRNAであって、
i.配列番号1〜146から選択されるガイド配列、または
ii.配列番号1〜146から選択される配列の少なくとも17、18、19、もしくは20個の連続ヌクレオチド、または
iii.配列番号1〜146から選択される配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、もしくは90%同一であるガイド配列、または
iv.配列番号4、5、6、8、22、35、38、39、56、73、84、100、105、113、117、129、145のうちのいずれか1つを含むガイド配列、または
v.配列番号8、22、35、39、73、84、100、105、113、145のうちのいずれか1つを含むガイド配列を含む、ガイドRNAと、任意選択で、
b.RNAガイドDNA結合剤、またはRNAガイドDNA結合剤をコードする核酸と、を含む、組成物。
実施形態10 短いシングルガイドRNA(短いsgRNA)を含む組成物であって、
a.ガイド配列であって、
i.配列番号1〜146から選択されるガイド配列のいずれか1つ、または
ii.配列番号1〜146から選択されるガイド配列のいずれか1つの少なくとも17、18、19、もしくは20個の連続ヌクレオチド、または
iii.配列番号1〜146から選択される配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、もしくは90%同一であるか、または
iv.配列番号4、5、6、8、22、35、38、39、56、73、84、100、105、113、117、129、145のいずれか1つ、または
v.配列番号8、22、35、39、73、84、100、105、113、145のいずれか1つを含む、ガイド配列と、
b.ヘアピン領域を含むsgRNAの保存部分であって、ヘアピン領域が、少なくとも5〜10個のヌクレオチドを欠失しており、任意選択で、短いsgRNAが、5’末端修飾および3’末端修飾のうちの1つ以上を含む、保存部分と、を含む、組成物。
実施形態11 配列番号202の配列を含む、実施形態10に記載の組成物。
実施形態12 5’末端修飾を含む、実施形態10または実施形態11に記載の組成物。
実施形態13 短いsgRNAが、3’末端修飾を含む、実施形態10〜12のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態14 短いsgRNAが、5’末端修飾および3’末端修飾を含む、実施形態10〜13のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態15 短いsgRNAが、3’テールをさらに含む、実施形態10〜14のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態16 3’テールが、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10個のヌクレオチドを含む、実施形態15に記載の組成物。
実施形態17 3’テールが、約1〜2、1〜3、1〜4、1〜5、1〜7、1〜10、少なくとも1〜2、少なくとも1〜3、少なくとも1〜4、少なくとも1〜5、少なくとも1〜7、または少なくとも1〜10を含む、実施形態15に記載の組成物。
実施形態18 短いsgRNAが、3’テールを含まない、実施形態10〜17のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態19 ヘアピン領域内に修飾を含む、実施形態10〜18のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態20 3’末端修飾と、ヘアピン領域内の修飾と、を含む、実施形態10〜19のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態21 3’末端修飾と、ヘアピン領域内の修飾と、5’末端修飾と、を含む、実施形態10〜20のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態22 5’末端修飾と、ヘアピン領域内の修飾と、を含む、実施形態10〜21のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態23 ヘアピン領域が、少なくとも5個の連続ヌクレオチドを欠失している、実施形態10〜22のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態24 少なくとも5〜10個の欠失しているヌクレオチドが、
a.ヘアピン1内にある、
b.ヘアピン1およびヘアピン1とヘアピン2との間の「N」内にある、
c.ヘアピン1およびヘアピン1の直ぐ3’側の2個のヌクレオチド内にある、
d.ヘアピン1の少なくとも一部を含む、
e.ヘアピン2内にある、
f.ヘアピン2の少なくとも一部を含む、
g.ヘアピン1およびヘアピン2内にある、
h.ヘアピン1の少なくとも一部を含み、ヘアピン1とヘアピン2との間の「N」を含む、
i.ヘアピン2の少なくとも一部を含み、ヘアピン1とヘアピン2との間の「N」を含む、
j.ヘアピン1の少なくとも一部を含み、ヘアピン1とヘアピン2との間の「N」を含み、ヘアピン2の少なくとも一部を含む、
k.ヘアピン1もしくはヘアピン2内にあり、任意選択で、ヘアピン1とヘアピン2との間の「N」を含む、
l.連続している、
m.連続しており、ヘアピン1とヘアピン2との間の「N」を含む、
n.連続しており、少なくともヘアピン1の一部およびヘアピン2の一部に及ぶ、
o.連続しており、ヘアピン1の少なくとも一部およびヘアピン1とヘアピン2との間の「N」に及ぶ、
p.連続しており、ヘアピン1の少なくとも一部およびヘアピン1の直ぐ3’側の2個のヌクレオチドに及ぶ、
q.5〜10個のヌクレオチドからなる、
r.6〜10個のヌクレオチドからなる、
s.5〜10個の連続ヌクレオチドからなる、
t.6〜10個の連続ヌクレオチドからなる、または
u.配列番号400のヌクレオチド54〜58からなる、実施形態10〜23のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態25 ネクサス領域を含むsgRNAの保存部分を含み、ネクサス領域が、少なくとも1個のヌクレオチドを欠失している、実施形態10〜24のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態26 ネクサス領域内で欠失しているヌクレオチドが、
a.ネクサス領域内の少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、または10個のヌクレオチド、
b.ネクサス領域内の少なくともまたは正確に1〜2個のヌクレオチド、1〜3個のヌクレオチド、1〜4個のヌクレオチド、1〜5個のヌクレオチド、1〜6個のヌクレオチド、1〜10個のヌクレオチド、または1〜15個のヌクレオチド、および
c.ネクサス領域内の各ヌクレオチドのうちのいずれか1つ以上を含む、実施形態25に記載の組成物。
実施形態27 修飾シングルガイドRNA(sgRNA)を含む組成物であって、
a.ガイド配列であって、
i.配列番号1〜146から選択されるガイド配列のいずれか1つ、または
ii.配列番号1〜146から選択されるガイド配列のいずれか1つの少なくとも17、18、19、もしくは20個の連続ヌクレオチド、または
iii.配列番号1〜146から選択される配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、もしくは90%同一であるか、または
iv.配列番号4、5、6、8、22、35、38、39、56、73、84、100、105、113、117、129、145のいずれか1つ、または
v.配列番号8、22、35、39、73、84、100、105、113、145のいずれか1つを含む、ガイド配列を含み、さらに、
b.以下
1.1つ以上のガイド領域YA部位におけるYA修飾、
2.1つ以上の保存領域YA部位におけるYA修飾、
3.1つ以上のガイド領域YA部位および1つ以上の保存領域YA部位におけるYA修飾、
4.i)2つ以上のガイド領域YA部位におけるYA修飾、
ii)保存領域YA部位2、3、4、および10のうちの1つ以上におけるYA修飾、ならびに
iii)保存領域YA部位1および8のうちの1つ以上におけるYA修飾、
5.i)1つ以上のガイド領域YA部位におけるYA修飾であって、ガイド領域YA部位が、5’末端部の5’末端から8番目のヌクレオチド、またはその後にある、YA修飾、
ii)保存領域YA部位2、3、4、および10のうちの1つ以上におけるYA修飾、ならびに任意選択で、
iii)保存領域YA部位1および8のうちの1つ以上におけるYA修飾、
6.i)1つ以上のガイド領域YA部位におけるYA修飾であって、ガイド領域YA部位が、ガイド領域の3’末端部ヌクレオチドの13個のヌクレオチド内にある、YA修飾、
ii)保存領域YA部位2、3、4、および10のうちの1つ以上におけるYA修飾、ならびに
iii)保存領域YA部位1および8のうちの1つ以上におけるYA修飾、
7.i)5’末端修飾および3’末端修飾、
ii)保存領域YA部位2、3、4、および10のうちの1つ以上におけるYA修飾、ならびに
iii)保存領域YA部位1および8のうちの1つ以上におけるYA修飾、
8.i)ガイド領域YA部位におけるYA修飾であって、ガイド領域YA部位の修飾が、ガイド領域YA部位の5’に位置する少なくとも1個のヌクレオチドが含まない修飾を含む、YA修飾、
ii)保存領域YA部位2、3、4、および10のうちの1つ以上におけるYA修飾、ならびに
iii)保存領域YA部位1および8のうちの1つ以上におけるYA修飾、または
9.i)保存領域YA部位2、3、4、および10のうちの1つ以上におけるYA修飾、ならびに
ii)保存領域YA部位1および8におけるYA修飾、または
10.i)1つ以上のガイド領域YA部位におけるYA修飾であって、YA部位が、5’末端部の8番目のヌクレオチド、またはその後にある、YA修飾、
ii)保存領域YA部位2、3、4、および10のうちの1つ以上におけるYA修飾、ならびに
iii)H1−1およびH2−1のうちの1つ以上における修飾、または
11.i)保存領域YA部位2、3、4、および10のうちの1つ以上におけるYA修飾、ii)保存領域YA部位1、5、6、7、8、および9のうちの1つ以上におけるYA修飾、ならびにiii)H1−1およびH2−1のうちの1つ以上における修飾、または
12.i)5’末端部から6番目のヌクレオチド、またはその後に位置する1つ以上のヌクレオチドにおける修飾、例えば、YA修飾、
ii)1つ以上のガイド配列YA部位におけるYA修飾、
iii)B3、B4、およびB5のうちの1つ以上における修飾であって、B6が、2’−OMe修飾を含まないか、または2’−OMe以外の修飾を含む、修飾、
iv)LS10における修飾であって、LS10が、2’−フルオロ以外の修飾を含む、修飾、および/または
v)N2、N3、N4、N5、N6、N7、N10、またはN11における修飾、から選択される1つ以上の修飾を含み、
以下
i.1つ以上のガイド領域YA部位におけるYA修飾、
ii.1つ以上の保存領域YA部位におけるYA修飾、
iii.1つ以上のガイド領域YA部位および1つ以上の保存領域YA部位におけるYA修飾、
iv.5’末端部の5’末端からのヌクレオチド8〜11、13、14、17、または18のうちの少なくとも1つが、2’−フルオロ修飾を含まない、
v.5’末端部の5’末端からのヌクレオチド6〜10のうちの少なくとも1つが、ホスホロチオエート連結を含まない、
vi.B2、B3、B4、もしくはB5のうちの少なくとも1つが、2’−OMe修飾を含まない、
vii.LS1、LS8、もしくはLS10のうちの少なくとも1つが、2’−OMe修飾を含まない、
viii.N2、N3、N4、N5、N6、N7、N10、N11、N16、もしくはN17のうちの少なくとも1つが、2’−OMe修飾を含まない、
ix.H1−1が、修飾を含む、
x.H2−1が、修飾を含む、または
xi.H1−2、H1−3、H1−4、H1−5、H1−6、H1−7、H1−8、H1−9、H1−10、H2−1、H2−2、H2−3、H2−4、H2−5、H2−6、H2−7、H2−8、H2−9、H2−10、H2−11、H2−12、H2−13、H2−14、もしくはH2−15のうちの少なくとも1つが、ホスホロチオエート連結を含まない、のうちの少なくとも1つが真である、組成物。
実施形態28 配列番号450を含む、実施形態27に記載の組成物。
実施形態29 細胞または対象においてHAO1遺伝子内で二本鎖切断(DSB)または一本鎖切断を誘導する際に使用するための、実施形態9〜28のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態30 細胞または対象においてHAO1遺伝子の発現を低減する際に使用するための、実施形態9〜28のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態31 対象においてPH1を治療または予防する際に使用するための、実施形態9〜28のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態32 対象において血清および/または血漿グリコレート濃度を高める際に使用するための、実施形態9〜28のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態33 対象において尿オキサレート濃度を低減する際に使用するための、実施形態9〜28のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態34 オキサレート産生、臓器におけるシュウ酸カルシウム沈着、高シュウ酸尿症、全身性シュウ酸症を含むシュウ酸症、血尿、末期腎疾患(ESRD)を治療もしくは予防する、および/または腎臓もしくは肝臓移植の必要性を遅らせるか、もしくは改善する際に使用するための、実施形態9〜28のいずれか1つに記載の組成物。
実施形態35 さらに、
a.細胞または対象においてHAO1遺伝子内で二本鎖切断(DSB)を誘導すること、
b.細胞または対象においてHAO1遺伝子の発現を低減すること、
c.対象においてPH1を治療または予防すること、
d.対象において血清および/または血漿グリコレート濃度を高めること、
e.対象において尿オキサレート濃度を低減すること、
f.オキサレート産生を低減すること、
g.臓器におけるシュウ酸カルシウム沈着を低減すること、
h.高シュウ酸尿症を低減すること、
i.全身性シュウ酸症を含むシュウ酸症を治療または予防すること、
j.血尿を治療または予防すること、
k.末期腎疾患(ESRD)を予防すること、および/または
l.腎臓または肝臓移植の必要性を遅らせるか、または改善すること、を含む、実施形態1〜8のいずれか1つに記載の方法。
実施形態36 組成物が、血清および/または血漿グリコレートレベルを高める、実施形態1〜8または29〜35のいずれか1つに記載の方法または使用するための組成物。
実施形態37 組成物が、HAO1遺伝子の編集を引き起こす、実施形態1〜8または29〜35のいずれか1つに記載の方法または使用するための組成物。
実施形態38 編集が、編集される集団の割合(編集率)として計算される、実施形態37に記載の方法または使用するための組成物。
実施形態39 編集率が、集団の30〜99%である、実施形態38に記載の方法または使用するための組成物。
実施形態40 編集率が、集団の30〜35%、35〜40%、40〜45%、45〜50%、50〜55%、55〜60%、60〜65%、65〜70%、70〜75%、75〜80%、80〜85%、85〜90%、90〜95%、または95〜99%である、実施形態38に記載の方法または使用するための組成物。
実施形態41 組成物が、尿オキサレート濃度を低減する、実施形態1〜8または実施形態29〜35のいずれか1つに記載の方法または使用するための組成物。
実施形態42 尿オキサレートの減少が、腎臓結石および/または腎臓、肝臓、膀胱、心臓、皮膚、または眼におけるシュウ酸カルシウム沈着を減少させる、実施形態41に記載の方法または使用するための組成物。
実施形態43 ガイド配列が、
a.配列番号1〜146、
b.配列番号4、5、6、8、22、35、38、39、56、73、84、100、105、113、117、129、145、および
c.配列番号8、22、35、39、73、84、100、105、113、145から選択される、実施形態1〜42のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態44 組成物が、
a.配列番号151〜168のうちのいずれか1つ、または
b.配列番号251〜268のうちのいずれか1つ、または
c.配列番号4、5、6、8、22、35、38、39、56、73、84、100、105、113、117、129、145から選択されるガイド配列、または
d.配列番号8、22、35、39、73、84、100、105、113、145から選択されるガイド配列、を含むsgRNAを含む、実施形態1〜43のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態45 標的配列が、ヒトHAO1遺伝子のエクソン1、3、4、5、6、または8の中にある、実施形態1〜44のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態46 標的配列が、ヒトHAO1遺伝子のエクソン1の中にある、実施形態45に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態47 標的配列が、ヒトHAO1遺伝子のエクソン3の中にある、実施形態45に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態48 標的配列が、ヒトHAO1遺伝子のエクソン4の中にある、実施形態45に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態49 標的配列が、ヒトHAO1遺伝子のエクソン6の中にある、実施形態45に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態50 標的配列が、ヒトHAO1遺伝子のエクソン8の中にある、実施形態45に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態51 ガイド配列が、HAO1のプラス鎖内の標的配列に対して相補的である、実施形態1〜50のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態52 ガイド配列が、HAO1のマイナス鎖内の標的配列に対して相補的である、実施形態1〜50のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態53 第1のガイド配列が、HAO1遺伝子のプラス鎖内の第1の標的配列に対して相補的であり、組成物が、HAO1遺伝子のマイナス鎖内の第2の標的配列に対して相補的である第2のガイド配列をさらに含む、実施形態1〜50のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態54 ガイドRNAが、配列番号1〜146のうちのいずれか1つから選択されるガイド配列を含み、配列番号200のヌクレオチド配列をさらに含み、配列番号200のヌクレオチドが、その3’末端にある前記ガイド配列の後にある、実施形態1〜53のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態55 ガイドRNAが、配列番号1〜146のうちのいずれか1つから選択されるガイド配列を含み、配列番号201、配列番号202、配列番号203、または配列番号400〜450のうちのいずれか1つのヌクレオチド配列をさらに含み、配列番号201、配列番号202、配列番号203、または配列番号400〜450のうちのいずれか1つのヌクレオチドが、その3’末端にあるガイド配列の後にある、実施形態1〜54のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態56 ガイドRNAが、シングルガイド(sgRNA)である、実施形態1〜55のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態57 sgRNAが、配列番号4、5、6、8、22、35、38、39、56、73、84、100、105、113、117、129、145のうちのいずれか1つを含むガイド配列を含む、実施形態56に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態58 sgRNAが、配列番号151〜168または251〜268のうちのいずれか1つを含む、実施形態56に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態59 ガイドRNAが、配列番号300のパターンに従って修飾され、Nが、まとめて、表1のガイド配列(配列番号1〜146)のうちのいずれか1つである、実施形態1〜58のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態60 配列番号300の各Nが、任意の天然または非天然ヌクレオチドであり、Nが、ガイド配列を形成し、ガイド配列が、HAO1遺伝子に対してCas9を標的とする、実施形態59に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態61 sgRNAが、配列番号1〜146のガイド配列のうちのいずれか1つと、配列番号201、配列番号202、または配列番号203のヌクレオチドと、を含み、配列番号201、配列番号202、または配列番号203のヌクレオチドが、その3’末端にあるガイド配列の後にある、実施形態1〜60のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態62 sgRNAが、配列番号1〜146から選択される配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、もしくは90%同一であるガイド配列を含む、実施形態1〜61のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態63 sgRNAが、配列番号8、22、35、39、73、84、100、105、113、145、151〜168、および251〜268から選択される配列を含む、実施形態62に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態64 ガイドRNAが、少なくとも1つの修飾を含む、実施形態1〜63のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態65 少なくとも1つの修飾が、2’−O−メチル(2’−O−Me)修飾ヌクレオチドを含む、実施形態64に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態66 ヌクレオチドの間にホスホロチオエート(PS)結合を含む、実施形態63〜65のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態67 2’−フルオロ(2’−F)修飾ヌクレオチドを含む、実施形態63〜66のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態68 ガイドRNAの5’末端での最初の5個のヌクレオチドのうちの1つ以上における修飾を含む、実施形態63〜67のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態69 ガイドRNAの3’末端での最後の5個のヌクレオチドのうちの1つ以上における修飾を含む、実施形態63〜68のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態70 ガイドRNAの最初の4個のヌクレオチドの間にPS結合を含む、実施形態63〜69のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態71 ガイドRNAの最後の4個のヌクレオチドの間にPS結合を含む、実施形態63〜70のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態72 ガイドRNAの5’末端での最初の3個のヌクレオチドに2’−O−Me修飾ヌクレオチドを含む、実施形態63〜71のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態73 ガイドRNAの3’末端での最後の3個のヌクレオチドに2’−O−Me修飾ヌクレオチドを含む、実施形態63〜72のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態74 ガイドRNAが、配列番号300の修飾ヌクレオチドを含む、実施形態63〜73のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態75 組成物が、薬学的に許容可能な賦形剤をさらに含む、実施形態1〜74のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態76 ガイドRNAが、脂質ナノ粒子(LNP)と会合している、実施形態1〜75のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態77 LNPが、陽イオン性脂質を含む、実施形態76に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態78 陽イオン性脂質が、(9Z,12Z)−3−((4,4−ビス(オクチルオキシ)ブタノイル)オキシ)−2−((((3−(ジエチルアミノ)プロポキシ)カルボニル)オキシ)メチル)プロピルオクタデカ−9,12−ジエノエートであり、3−((4,4−ビス(オクチルオキシ)ブタノイル)オキシ)−2−((((3−(ジエチルアミノ)プロポキシ)カルボニル)オキシ)メチル)プロピル(9Z,12Z)−オクタデカ−9,12−ジエノエートとも呼ばれる、実施形態77に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態79 LNPが、中性脂質を含む、実施形態76〜78のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態80 中性脂質が、DSPCである、実施形態79に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態81 LNPが、ヘルパー脂質を含む、実施形態76〜80のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態82 ヘルパー脂質が、コレステロールである、実施形態81に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態83 LNPが、ステルス脂質を含む、実施形態76〜82のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態84 ステルス脂質が、PEG2k−DMGである、実施形態83に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態85 組成物が、RNAガイドDNA結合剤をさらに含む、実施形態1〜84のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態86 組成物が、RNAガイドDNA結合剤をコードするmRNAをさらに含む、実施形態1〜85のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態87 RNAガイドDNA結合剤が、Cas9である、実施形態85または86に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態88 組成物が、薬学的製剤であり、薬学的に許容可能な担体をさらに含む、実施形態1〜87のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態89 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号1である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態90 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号2である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態91 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号3である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態92 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号4である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態93 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号5である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態94 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号6である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態95 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号7である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態96 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号8である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態97 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号9である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態98 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号10である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態99 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号11である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態100 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号12である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態101 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号13である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態102 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号14である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態103 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号15である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態104 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号16である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態105 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号17である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態106 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号18である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態107 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号19である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態108 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号20である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態109 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号21である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態110 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号22である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態111 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号23である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態112 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号24である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態113 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号25である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態114 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号26である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態115 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号27である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態116 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号28である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態117 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号29である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態118 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号30である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態119 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号31である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態120 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号32である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態121 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号33である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態122 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号34である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態123 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号35である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態124 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号36である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態125 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号37である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態126 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号38である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態127 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号39である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態128 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号40である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態129 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号41である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態130 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号42である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態131 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号43である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態132 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号44である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態133 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号45である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態134 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号46である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態135 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号47である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態136 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号48である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態137 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号49である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態138 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号50である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態139 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号51である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態140 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号52である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態141 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号53である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態142 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号54である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態143 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号55である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態144 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号56である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態145 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号57である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態146 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号58である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態147 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号59である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態148 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号60である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態149 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号61である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態150 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号62である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態151 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号63である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態152 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号64である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態153 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号65である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態154 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号66である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態155 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号67である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態156 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号68である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態157 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号69である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態158 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号70である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態159 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号71である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態160 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号72である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態161 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号73である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態162 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号74である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態163 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号75である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態164 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号76である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態165 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号77である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態166 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号78である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態167 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号79である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態168 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号80である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態169 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号81である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態170 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号82である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態171 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号83である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態172 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号84である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態173 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号85である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態174 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号86である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態175 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号87である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態176 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号88である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態177 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号89である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態178 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号90である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態179 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号91である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態180 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号92である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態181 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号93である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態182 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号94である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態183 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号95である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態184 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号96である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態185 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号97である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態186 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号98である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態187 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号99である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態188 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号100である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態189 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号101である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態190 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号102である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態191 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号103である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態192 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号104である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態193 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号105である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態194 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号106である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態195 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号107である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態196 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号108である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態197 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号109である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態198 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号110である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態199 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号111である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態200 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号112である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態201 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号113である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態202 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号114である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態203 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号115である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態204 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号116である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態205 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号117である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態206 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号118である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態207 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号119である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態208 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号120である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態209 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号121である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態210 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号122である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態211 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号123である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態212 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号124である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態213 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号125である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態214 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号126である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態215 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号127である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態216 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号128である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態217 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号129である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態218 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号130である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態219 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号131である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態220 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号132である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態221 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号133である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態222 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号134である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態223 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号135である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態224 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号136である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態225 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号137である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態226 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号138である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態227 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号139である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態228 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号140である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態229 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号141である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態230 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号142である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態231 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号143である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態232 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号144である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態233 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号145である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態234 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号146である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態235 配列番号1〜146から選択される配列が、配列番号146である、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態236 ガイドRNAが、配列番号251を含むsgRNAである、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態237 ガイドRNAが、配列番号252を含むsgRNAである、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態238 ガイドRNAが、配列番号253を含むsgRNAである、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態239 ガイドRNAが、配列番号254を含むsgRNAである、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態240 ガイドRNAが、配列番号255を含むsgRNAである、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態241 ガイドRNAが、配列番号256を含むsgRNAである、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態242 ガイドRNAが、配列番号257を含むsgRNAである、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態243 ガイドRNAが、配列番号258を含むsgRNAである、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態244 ガイドRNAが、配列番号259を含むsgRNAである、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態245 ガイドRNAが、配列番号260を含むsgRNAである、実施形態1〜88のいずれか1つに記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
実施形態246 組成物が、単回用量として投与される、実施形態1〜245のいずれか1つに記載の方法または組成物。
実施形態247 組成物が、一度投与される、実施形態1〜246のいずれか1つに記載の方法または組成物。
実施形態248 単回用量または一度投与が、
a.DSBを誘導する、および/または
b.HAO1遺伝子の発現を低減する、および/または
c.PH1を治療もしくは予防する、および/または
d.PH1によって引き起こされるESRDを治療もしくは予防する、および/または
e.シュウ酸カルシウム産生および沈着を治療もしくは予防する、および/または
f.高シュウ酸尿症を治療もしくは予防する、および/または
g.シュウ酸症を治療もしくは予防する、および/または
h.血尿を治療もしくは予防する、および/または
i.血清グリコレート濃度を高める、および/または
j.尿内のオキシレートを低減する、実施形態246または247のいずれか1つに記載の方法または組成物。
実施形態249 単回用量または一度投与が、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、または15週間にわたって、a)〜j)のうちのいずれか1つ以上を達成する、実施形態248に記載の方法または組成物。
実施形態250 単回用量または一度投与が、永続的な効果を達成する、実施形態248に記載の方法または組成物。
実施形態251 永続的な効果を達成することをさらに含む、実施形態1〜250のいずれか1つに記載の方法または組成物。
実施形態252 永続的な効果が、少なくとも1ヶ月、少なくとも3ヶ月、少なくとも6ヶ月、少なくとも1年、または少なくとも5年持続する、実施形態251に記載の方法または組成物。
実施形態253 組成物の投与によって、尿内のオキサレートの治療的に関連する減少がもたらされる、実施形態1〜252のいずれか1つに記載の方法または組成物。
実施形態254 組成物の投与によって、治療範囲内の尿オキサレートレベルがもたらされる、実施形態1〜253のいずれか1つに記載の方法または組成物。
実施形態255 組成物の投与によって、正常範囲の100、120、または150%以内のオキサレートレベルがもたらされる、実施形態1〜254のいずれか1つに記載の方法または組成物。
実施形態256 PH1を有するヒト対象を治療するための医薬の調製のための、実施形態9〜255のいずれかに記載の組成物または製剤の使用。
特に明記しない限り、本明細書で使用される以下の用語および句は、以下の意味を有することを意図する。
A.ガイドRNA(gRNA)を含む組成物
例えば、RNAガイドDNA結合剤(例えば、CRISPR/Cas系)を有するガイドRNAを使用して、HAO1遺伝子内で二本鎖切断(DSB)を誘導するのに有用な組成物が本明細書に提供される。組成物は、PH1を有するか、またはPH1を有する疑いのある対象に投与され得る。組成物は、尿オキサレート出力が増加しているか、または血清グリコレート出力が減少している対象に投与され得る。HAO1遺伝子を標的とするガイド配列を、表1に配列番号1〜146で示す。
いくつかの実施形態では、gRNAは、化学修飾されている。1つ以上の修飾ヌクレオシドまたはヌクレオチドを含むgRNAは、標準的なA、G、C、およびU残基の代わりに、またはそれらに加えて使用される1つ以上の非天然および/または天然に存在する成分または構造の存在を記載するために、「修飾」gRNAまたは「化学修飾」gRNAと呼ばれる。いくつかの実施形態では、修飾gRNAは、非標準的なヌクレオシドまたはヌクレオチドを用いて合成され、本明細書では「修飾された」と呼ばれる。修飾ヌクレオシドまたはヌクレオチドは、(i)ホスホジエステル骨格結合における改変、例えば、非架橋のリン酸酸素の1つもしくは両方、および/または、架橋リン酸酸素の1つ以上の置き換え(例示的な骨格修飾)、(ii)リボース糖の成分、例えば、リボース糖の2’ヒドロキシルの改変、例えば、置き換え(例示的な糖修飾)、(iii)リン酸部分の「脱リン酸型」リンカーによる大規模な置き換え(例示的な骨格修飾)、(iv)非標準的な核酸塩基によるものを含め、天然に存在する核酸塩基の修飾または置き換え(例示的な塩基修飾)、(v)リボースリン酸骨格の置き換えまたは修飾(例示的な骨格修飾)、(vi)オリゴヌクレオチドの3’末端または5’末端の修飾、例えば、末端リン酸基の除去、修飾または置き換え、または部分、キャップ、またはリンカーのコンジュゲーション(そのような3’または5’のキャップ修飾は、糖および/または骨格の修飾を含み得る)、ならびに(vii)糖の修飾または置き換え(例示的な糖修飾)の1つ以上を含み得る。
YA部位における修飾(本明細書でYA修飾とも称される)は、ヌクレオシド間連結の修飾、例えば、化学修飾、置換、または他の方法による、塩基(ピリミジンまたはアデニン)の修飾、および/または糖の修飾(例えば、2位での修飾、例えば、2’−O−アルキル、2’−F、2’−moe、2’−Fアラビノース、2’−H(デオキシリボース)等)であり得る。いくつかの実施形態では、「YA修飾」は、例えば、RNaseによるYA部位の認識もしくは切断を妨害することによって、および/またはRNaseに対する切断部位の接近性を低減するRNA構造(例えば、二次構造)を安定化させることによって、RNAエンドヌクレアーゼ活性を低減するためにジヌクレオチドモチーフの構造を変化させる任意の修飾である。Peacock et al.,J Org Chem.76:7295−7300(2011)、Behlke、Oligonucleotides 18:305−320(2008)、Ku et al.,Adv.Drug Delivery Reviews 104:16−28(2016)、Ghidini et al.,Chem.Commun.,2013、49、9036を参照のこと。Peacock et al.,Belhke,KuおよびGhidiniは、YA修飾として好適な例示的な修飾を提供する。エンドヌクレオチド分解を低減するための当業者に既知の修飾が包含される。RNase切断に関与する2’ヒドロキシル基に影響を与える例示的な2’リボース修飾は、2’−Hおよび2’−O−アルキル(2’−O−Meを含む)である。YA部位における残基の二環式リボースアナログUNA、および修飾ヌクレオシド間連結等の修飾は、YA修飾であり得る。RNA構造を安定化させることができる例示的な塩基修飾は、プソイドウリジンおよび5−メチルシトシンである。いくつかの実施形態では、YA部位のうちの少なくとも1個のヌクレオチドが修飾されている。いくつかの実施形態では、YA部位のピリミジン(「ピリミジン位置」とも称される)は、修飾(ピリミジンの糖の直ぐ3’側のヌクレオシド間連結を変化させる修飾、ピリミジン塩基の修飾、およびリボースの、例えばその2’位での修飾を含む)を含む。いくつかの実施形態では、YA部位のアデニン(「アデニン位置」とも称される)は、修飾(ピリミジンの糖の直ぐ3’側のヌクレオシド間連結を変化させる修飾、ピリミジン塩基の修飾、およびリボースの、例えばその2’位での修飾を含む)を含む。いくつかの実施形態では、YA部位のピリミジンおよびアデニンは、修飾を含む。いくつかの実施形態では、YA修飾は、RNAエンドヌクレアーゼ活性を低減する。
いくつかの実施形態では、表1からの1つ以上のガイド配列を含む1つ以上のgRNA、または表2からの1つ以上のsgRNA、およびRNAガイドDNA結合剤、例えば、ヌクレアーゼ、例えば、Casヌクレアーゼ、例えば、Cas9を含む組成物を包含する。いくつかの実施形態では、RNAガイドDNA結合剤は、切断活性を有し、これは二本鎖エンドヌクレアーゼ活性とも称され得る。いくつかの実施形態では、RNAガイドDNA結合剤は、Casヌクレアーゼを含む。Cas9ヌクレアーゼの例としては、S.pyogenes、S.aureus、および他の原核生物のII型CRISPR系のもの(例えば、次の段落のリストを参照のこと)、ならびにそれらの修飾(例えば、操作型または変異体)態様が挙げられる。例えば、US2016/0312198(A1)、US2016/0312199(A1)を参照のこと。Casヌクレアーゼの他の例としては、III型CRISPR系のCsmもしくはCmr複合体、またはCas10、Csm1、もしくはそのCmr2サブユニット、およびI型CRISPR系のカスケード複合体、またはそのCas3サブユニットが挙げられる。いくつかの実施形態では、Casヌクレアーゼは、IIA型、IIB型、またはIIC型の系に由来していてもよい。様々なCRISPR系およびCasヌクレアーゼの考察については、例えば、Makarova et al.,NAT.REV.MICROBIOL.9:467−477(2011)、Makarova et al.,NAT.REV.MICROBIOL、13:722−36(2015)、Shmakov et al.,MOLECULAR CELL、60:385−397(2015)を参照のこと。
いくつかの実施形態では、gRNAの有効性は、送達されたとき、またはRNPを形成する他の構成要素と共に発現されたときに決定される。いくつかの実施形態では、gRNAは、RNAガイドDNA結合剤、例えば、Casタンパク質、例えば、Cas9と共に発現される。いくつかの実施形態では、gRNAは、RNAガイドDNAヌクレアーゼ、例えば、Casヌクレアーゼまたはニッカーゼ、例えば、Cas9ヌクレアーゼまたはニッカーゼを既に安定に発現する細胞株に送達されるか、またはその細胞株において発現される。いくつかの実施形態では、gRNAは、RNPの一部として細胞に送達される。いくつかの実施形態では、gRNAは、RNAガイドDNAヌクレアーゼ、例えば、Casヌクレアーゼまたはニッカーゼ、例えば、Cas9ヌクレアーゼまたはニッカーゼをコードするmRNAと共に細胞に送達される。
本明細書に開示されるgRNAならびに関連する方法および組成物は、PH1を治療および予防し、PH1の症状を予防するのに有用である。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるgRNAは、シュウ酸カルシウム産生、臓器におけるシュウ酸カルシウム沈着、高シュウ酸尿症、全身性シュウ酸症を含むシュウ酸症、および血尿を治療および予防するのに有用である。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるgRNAは、腎臓または肝臓移植の必要性を遅らせるか、または改善するのに有用である。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるgRNAは、末期腎疾患(ESRD)の予防に有用である。本明細書に開示されるgRNAの投与は、尿内に排泄されるオキサレートが少なくなるように、血清または血漿グリコレートを高め、オキサレートの産生または蓄積を低減する。したがって、一態様では、治療/予防の有効性は、血清または血漿グリコレートを測定することによって評価することができ、グリコレートレベルの増加が有効性を示す。いくつかの実施形態では、治療/予防の有効性は、試料内のオキサレート(例えば、尿オキサレート)を測定することによって評価することができ、尿オキサレートの減少が有効性を示す。
いくつかの実施形態では、本発明は、上述のように、表1に開示されるガイド配列のうちのいずれか1つ以上を含むgRNAのいずれか1つ(例えば、本明細書で提供される組成物で)を、PH1およびその症状を緩和するのに適した追加の療法と併せて含む、併用療法を含む。
脂質ナノ粒子(LNP)は、ヌクレオチドおよびタンパク質カーゴの送達のための周知の手段であり、本明細書に開示されるガイドRNA、組成物、または薬学的製剤の送達に使用されてもよい。いくつかの実施形態では、LNPは、核酸、タンパク質、または核酸をタンパク質と共に送達する。
ヌクレアーゼmRNAのインビトロ転写(「IVT」)
N1−メチルプソイド−Uを含有するキャップされたポリアデニル化Streptococcus pyogenes(「Spy」)Cas9 mRNAを、線状プラスミドDNAテンプレートおよびT7 RNAポリメラーゼを用いたインビトロ転写によって生成した。T7プロモーターおよび100ntポリ(A/T)領域を含有するプラスミドDNAを、200ng/μLのプラスミド、2U/μLのXbaI(NEB)、および1x反応緩衝液の条件で、37℃で2時間インキュベートすることによって線状化した。XbaIを、反応物を65℃で20分間加熱することによって不活性化した。線状プラスミドを、シリカマキシスピンカラム(Epoch Life Sciences)を用い、酵素および緩衝塩から精製され、アガロースゲルによって分析し、線状化を確認した。50ng/μLの線状プラスミド、GTP、ATP、CTP、およびN1−メチルプソイド−UTP(Trilink)の各々2mM、10mMのARCA(Trilink)、5U/μLのT7 RNAポリメラーゼ(NEB)、1U/μLのMurine RNase阻害剤(NEB)、0.004U/μLのInorganic E.coliピロホスファターゼ(NEB)、および1x反応緩衝液の条件で、Cas9修飾mRNAを生成するためのIVT反応物を37℃で4時間インキュベートした。4時間のインキュベーション後、TURBO DNase(ThermoFisher)を、最終濃度が0.01U/μLになるように添加し、反応物をさらに30分間インキュベートして、DNAテンプレートを除去した。MegaClear Transcription Clean−upキットを使用し、製造者のプロトコル(ThermoFisher)に従って、Cas9 mRNAを酵素およびヌクレオチドから精製した。あるいは、Cas9 mRNAをLiCl沈殿法で精製し、いくつかの場合では、これに続いてタンジェンシャルフロー濾過によりさらなる精製を行った。転写物濃度を、260nmでの光吸光度を測定することによって決定し(Nanodrop)、転写物をBioanlayzer(Agilent)によるキャピラリー電気泳動によって分析した。
配列番号500
ATGGATAAGAAGTACTCAATCGGGCTGGATATCGGAACTAATTCCGTGGGTTGGGCAGTGATCACGGATGAATACAAAGTGCCGTCCAAGAAGTTCAAGGTCCTGGGGAACACCGATAGACACAGCATCAAGAAAAATCTCATCGGAGCCCTGCTGTTTGACTCCGGCGAAACCGCAGAAGCGACCCGGCTCAAACGTACCGCGAGGCGACGCTACACCCGGCGGAAGAATCGCATCTGCTATCTGCAAGAGATCTTTTCGAACGAAATGGCAAAGGTCGACGACAGCTTCTTCCACCGCCTGGAAGAATCTTTCCTGGTGGAGGAGGACAAGAAGCATGAACGGCATCCTATCTTTGGAAACATCGTCGACGAAGTGGCGTACCACGAAAAGTACCCGACCATCTACCATCTGCGGAAGAAGTTGGTTGACTCAACTGACAAGGCCGACCTCAGATTGATCTACTTGGCCCTCGCCCATATGATCAAATTCCGCGGACACTTCCTGATCGAAGGCGATCTGAACCCTGATAACTCCGACGTGGATAAGCTTTTCATTCAACTGGTGCAGACCTACAACCAACTGTTCGAAGAAAACCCAATCAATGCTAGCGGCGTCGATGCCAAGGCCATCCTGTCCGCCCGGCTGTCGAAGTCGCGGCGCCTCGAAAACCTGATCGCACAGCTGCCGGGAGAGAAAAAGAACGGACTTTTCGGCAACTTGATCGCTCTCTCACTGGGACTCACTCCCAATTTCAAGTCCAATTTTGACCTGGCCGAGGACGCGAAGCTGCAACTCTCAAAGGACACCTACGACGACGACTTGGACAATTTGCTGGCACAAATTGGCGATCAGTACGCGGATCTGTTCCTTGCCGCTAAGAACCTTTCGGACGCAATCTTGCTGTCCGATATCCTGCGCGTGAACACCGAAATAACCAAAGCGCCGCTTAGCGCCTCGATGATTAAGCGGTACGACGAGCATCACCAGGATCTCACGCTGCTCAAAGCGCTCGTGAGACAGCAACTGCCTGAAAAGTACAAGGAGATCTTCTTCGACCAGTCCAAGAATGGGTACGCAGGGTACATCGATGGAGGCGCTAGCCAGGAAGAGTTCTATAAGTTCATCAAGCCAATCCTGGAAAAGATGGACGGAACCGAAGAACTGCTGGTCAAGCTGAACAGGGAGGATCTGCTCCGGAAACAGAGAACCTTTGACAACGGATCCATTCCCCACCAGATCCATCTGGGTGAGCTGCACGCCATCTTGCGGCGCCAGGAGGACTTTTACCCATTCCTCAAGGACAACCGGGAAAAGATCGAGAAAATTCTGACGTTCCGCATCCCGTATTACGTGGGCCCACTGGCGCGCGGCAATTCGCGCTTCGCGTGGATGACTAGAAAATCAGAGGAAACCATCACTCCTTGGAATTTCGAGGAAGTTGTGGATAAGGGAGCTTCGGCACAAAGCTTCATCGAACGAATGACCAACTTCGACAAGAATCTCCCAAACGAGAAGGTGCTTCCTAAGCACAGCCTCCTTTACGAATACTTCACTGTCTACAACGAACTGACTAAAGTGAAATACGTTACTGAAGGAATGAGGAAGCCGGCCTTTCTGTCCGGAGAACAGAAGAAAGCAATTGTCGATCTGCTGTTCAAGACCAACCGCAAGGTGACCGTCAAGCAGCTTAAAGAGGACTACTTCAAGAAGATCGAGTGTTTCGACTCAGTGGAAATCAGCGGGGTGGAGGACAGATTCAACGCTTCGCTGGGAACCTATCATGATCTCCTGAAGATCATCAAGGACAAGGACTTCCTTGACAACGAGGAGAACGAGGACATCCTGGAAGATATCGTCCTGACCTTGACCCTTTTCGAGGATCGCGAGATGATCGAGGAGAGGCTTAAGACCTACGCTCATCTCTTCGACGATAAGGTCATGAAACAACTCAAGCGCCGCCGGTACACTGGTTGGGGCCGCCTCTCCCGCAAGCTGATCAACGGTATTCGCGATAAACAGAGCGGTAAAACTATCCTGGATTTCCTCAAATCGGATGGCTTCGCTAATCGTAACTTCATGCAATTGATCCACGACGACAGCCTGACCTTTAAGGAGGACATCCAAAAAGCACAAGTGTCCGGACAGGGAGACTCACTCCATGAACACATCGCGAATCTGGCCGGTTCGCCGGCGATTAAGAAGGGAATTCTGCAAACTGTGAAGGTGGTCGACGAGCTGGTGAAGGTCATGGGACGGCACAAACCGGAGAATATCGTGATTGAAATGGCCCGAGAAAACCAGACTACCCAGAAGGGCCAGAAAAACTCCCGCGAAAGGATGAAGCGGATCGAAGAAGGAATCAAGGAGCTGGGCAGCCAGATCCTGAAAGAGCACCCGGTGGAAAACACGCAGCTGCAGAACGAGAAGCTCTACCTGTACTATTTGCAAAATGGACGGGACATGTACGTGGACCAAGAGCTGGACATCAATCGGTTGTCTGATTACGACGTGGACCACATCGTTCCACAGTCCTTTCTGAAGGATGACTCGATCGATAACAAGGTGTTGACTCGCAGCGACAAGAACAGAGGGAAGTCAGATAATGTGCCATCGGAGGAGGTCGTGAAGAAGATGAAGAATTACTGGCGGCAGCTCCTGAATGCGAAGCTGATTACCCAGAGAAAGTTTGACAATCTCACTAAAGCCGAGCGCGGCGGACTCTCAGAGCTGGATAAGGCTGGATTCATCAAACGGCAGCTGGTCGAGACTCGGCAGATTACCAAGCACGTGGCGCAGATCTTGGACTCCCGCATGAACACTAAATACGACGAGAACGATAAGCTCATCCGGGAAGTGAAGGTGATTACCCTGAAAAGCAAACTTGTGTCGGACTTTCGGAAGGACTTTCAGTTTTACAAAGTGAGAGAAATCAACAACTACCATCACGCGCATGACGCATACCTCAACGCTGTGGTCGGTACCGCCCTGATCAAAAAGTACCCTAAACTTGAATCGGAGTTTGTGTACGGAGACTACAAGGTCTACGACGTGAGGAAGATGATAGCCAAGTCCGAACAGGAAATCGGGAAAGCAACTGCGAAATACTTCTTTTACTCAAACATCATGAACTTTTTCAAGACTGAAATTACGCTGGCCAATGGAGAAATCAGGAAGAGGCCACTGATCGAAACTAACGGAGAAACGGGCGAAATCGTGTGGGACAAGGGCAGGGACTTCGCAACTGTTCGCAAAGTGCTCTCTATGCCGCAAGTCAATATTGTGAAGAAAACCGAAGTGCAAACCGGCGGATTTTCAAAGGAATCGATCCTCCCAAAGAGAAATAGCGACAAGCTCATTGCACGCAAGAAAGACTGGGACCCGAAGAAGTACGGAGGATTCGATTCGCCGACTGTCGCATACTCCGTCCTCGTGGTGGCCAAGGTGGAGAAGGGAAAGAGCAAAAAGCTCAAATCCGTCAAAGAGCTGCTGGGGATTACCATCATGGAACGATCCTCGTTCGAGAAGAACCCGATTGATTTCCTCGAGGCGAAGGGTTACAAGGAGGTGAAGAAGGATCTGATCATCAAACTCCCCAAGTACTCACTGTTCGAACTGGAAAATGGTCGGAAGCGCATGCTGGCTTCGGCCGGAGAACTCCAAAAAGGAAATGAGCTGGCCTTGCCTAGCAAGTACGTCAACTTCCTCTATCTTGCTTCGCACTACGAAAAACTCAAAGGGTCACCGGAAGATAACGAACAGAAGCAGCTTTTCGTGGAGCAGCACAAGCATTATCTGGATGAAATCATCGAACAAATCTCCGAGTTTTCAAAGCGCGTGATCCTCGCCGACGCCAACCTCGACAAAGTCCTGTCGGCCTACAATAAGCATAGAGATAAGCCGATCAGAGAACAGGCCGAGAACATTATCCACTTGTTCACCCTGACTAACCTGGGAGCCCCAGCCGCCTTCAAGTACTTCGATACTACTATCGATCGCAAAAGATACACGTCCACCAAGGAAGTTCTGGACGCGACCCTGATCCACCAAAGCATCACTGGACTCTACGAAACTAGGATCGATCTGTCGCAGCTGGGTGGCGAT
配列番号501
GGGTCCCGCAGTCGGCGTCCAGCGGCTCTGCTTGTTCGTGTGTGTGTCGTTGCAGGCCTTATTCGGATCCGCCACCATGGACAAGAAGTACAGCATCGGACTGGACATCGGAACAAACAGCGTCGGATGGGCAGTCATCACAGACGAATACAAGGTCCCGAGCAAGAAGTTCAAGGTCCTGGGAAACACAGACAGACACAGCATCAAGAAGAACCTGATCGGAGCACTGCTGTTCGACAGCGGAGAAACAGCAGAAGCAACAAGACTGAAGAGAACAGCAAGAAGAAGATACACAAGAAGAAAGAACAGAATCTGCTACCTGCAGGAAATCTTCAGCAACGAAATGGCAAAGGTCGACGACAGCTTCTTCCACAGACTGGAAGAAAGCTTCCTGGTCGAAGAAGACAAGAAGCACGAAAGACACCCGATCTTCGGAAACATCGTCGACGAAGTCGCATACCACGAAAAGTACCCGACAATCTACCACCTGAGAAAGAAGCTGGTCGACAGCACAGACAAGGCAGACCTGAGACTGATCTACCTGGCACTGGCACACATGATCAAGTTCAGAGGACACTTCCTGATCGAAGGAGACCTGAACCCGGACAACAGCGACGTCGACAAGCTGTTCATCCAGCTGGTCCAGACATACAACCAGCTGTTCGAAGAAAACCCGATCAACGCAAGCGGAGTCGACGCAAAGGCAATCCTGAGCGCAAGACTGAGCAAGAGCAGAAGACTGGAAAACCTGATCGCACAGCTGCCGGGAGAAAAGAAGAACGGACTGTTCGGAAACCTGATCGCACTGAGCCTGGGACTGACACCGAACTTCAAGAGCAACTTCGACCTGGCAGAAGACGCAAAGCTGCAGCTGAGCAAGGACACATACGACGACGACCTGGACAACCTGCTGGCACAGATCGGAGACCAGTACGCAGACCTGTTCCTGGCAGCAAAGAACCTGAGCGACGCAATCCTGCTGAGCGACATCCTGAGAGTCAACACAGAAATCACAAAGGCACCGCTGAGCGCAAGCATGATCAAGAGATACGACGAACACCACCAGGACCTGACACTGCTGAAGGCACTGGTCAGACAGCAGCTGCCGGAAAAGTACAAGGAAATCTTCTTCGACCAGAGCAAGAACGGATACGCAGGATACATCGACGGAGGAGCAAGCCAGGAAGAATTCTACAAGTTCATCAAGCCGATCCTGGAAAAGATGGACGGAACAGAAGAACTGCTGGTCAAGCTGAACAGAGAAGACCTGCTGAGAAAGCAGAGAACATTCGACAACGGAAGCATCCCGCACCAGATCCACCTGGGAGAACTGCACGCAATCCTGAGAAGACAGGAAGACTTCTACCCGTTCCTGAAGGACAACAGAGAAAAGATCGAAAAGATCCTGACATTCAGAATCCCGTACTACGTCGGACCGCTGGCAAGAGGAAACAGCAGATTCGCATGGATGACAAGAAAGAGCGAAGAAACAATCACACCGTGGAACTTCGAAGAAGTCGTCGACAAGGGAGCAAGCGCACAGAGCTTCATCGAAAGAATGACAAACTTCGACAAGAACCTGCCGAACGAAAAGGTCCTGCCGAAGCACAGCCTGCTGTACGAATACTTCACAGTCTACAACGAACTGACAAAGGTCAAGTACGTCACAGAAGGAATGAGAAAGCCGGCATTCCTGAGCGGAGAACAGAAGAAGGCAATCGTCGACCTGCTGTTCAAGACAAACAGAAAGGTCACAGTCAAGCAGCTGAAGGAAGACTACTTCAAGAAGATCGAATGCTTCGACAGCGTCGAAATCAGCGGAGTCGAAGACAGATTCAACGCAAGCCTGGGAACATACCACGACCTGCTGAAGATCATCAAGGACAAGGACTTCCTGGACAACGAAGAAAACGAAGACATCCTGGAAGACATCGTCCTGACACTGACACTGTTCGAAGACAGAGAAATGATCGAAGAAAGACTGAAGACATACGCACACCTGTTCGACGACAAGGTCATGAAGCAGCTGAAGAGAAGAAGATACACAGGATGGGGAAGACTGAGCAGAAAGCTGATCAACGGAATCAGAGACAAGCAGAGCGGAAAGACAATCCTGGACTTCCTGAAGAGCGACGGATTCGCAAACAGAAACTTCATGCAGCTGATCCACGACGACAGCCTGACATTCAAGGAAGACATCCAGAAGGCACAGGTCAGCGGACAGGGAGACAGCCTGCACGAACACATCGCAAACCTGGCAGGAAGCCCGGCAATCAAGAAGGGAATCCTGCAGACAGTCAAGGTCGTCGACGAACTGGTCAAGGTCATGGGAAGACACAAGCCGGAAAACATCGTCATCGAAATGGCAAGAGAAAACCAGACAACACAGAAGGGACAGAAGAACAGCAGAGAAAGAATGAAGAGAATCGAAGAAGGAATCAAGGAACTGGGAAGCCAGATCCTGAAGGAACACCCGGTCGAAAACACACAGCTGCAGAACGAAAAGCTGTACCTGTACTACCTGCAGAACGGAAGAGACATGTACGTCGACCAGGAACTGGACATCAACAGACTGAGCGACTACGACGTCGACCACATCGTCCCGCAGAGCTTCCTGAAGGACGACAGCATCGACAACAAGGTCCTGACAAGAAGCGACAAGAACAGAGGAAAGAGCGACAACGTCCCGAGCGAAGAAGTCGTCAAGAAGATGAAGAACTACTGGAGACAGCTGCTGAACGCAAAGCTGATCACACAGAGAAAGTTCGACAACCTGACAAAGGCAGAGAGAGGAGGACTGAGCGAACTGGACAAGGCAGGATTCATCAAGAGACAGCTGGTCGAAACAAGACAGATCACAAAGCACGTCGCACAGATCCTGGACAGCAGAATGAACACAAAGTACGACGAAAACGACAAGCTGATCAGAGAAGTCAAGGTCATCACACTGAAGAGCAAGCTGGTCAGCGACTTCAGAAAGGACTTCCAGTTCTACAAGGTCAGAGAAATCAACAACTACCACCACGCACACGACGCATACCTGAACGCAGTCGTCGGAACAGCACTGATCAAGAAGTACCCGAAGCTGGAAAGCGAATTCGTCTACGGAGACTACAAGGTCTACGACGTCAGAAAGATGATCGCAAAGAGCGAACAGGAAATCGGAAAGGCAACAGCAAAGTACTTCTTCTACAGCAACATCATGAACTTCTTCAAGACAGAAATCACACTGGCAAACGGAGAAATCAGAAAGAGACCGCTGATCGAAACAAACGGAGAAACAGGAGAAATCGTCTGGGACAAGGGAAGAGACTTCGCAACAGTCAGAAAGGTCCTGAGCATGCCGCAGGTCAACATCGTCAAGAAGACAGAAGTCCAGACAGGAGGATTCAGCAAGGAAAGCATCCTGCCGAAGAGAAACAGCGACAAGCTGATCGCAAGAAAGAAGGACTGGGACCCGAAGAAGTACGGAGGATTCGACAGCCCGACAGTCGCATACAGCGTCCTGGTCGTCGCAAAGGTCGAAAAGGGAAAGAGCAAGAAGCTGAAGAGCGTCAAGGAACTGCTGGGAATCACAATCATGGAAAGAAGCAGCTTCGAAAAGAACCCGATCGACTTCCTGGAAGCAAAGGGATACAAGGAAGTCAAGAAGGACCTGATCATCAAGCTGCCGAAGTACAGCCTGTTCGAACTGGAAAACGGAAGAAAGAGAATGCTGGCAAGCGCAGGAGAACTGCAGAAGGGAAACGAACTGGCACTGCCGAGCAAGTACGTCAACTTCCTGTACCTGGCAAGCCACTACGAAAAGCTGAAGGGAAGCCCGGAAGACAACGAACAGAAGCAGCTGTTCGTCGAACAGCACAAGCACTACCTGGACGAAATCATCGAACAGATCAGCGAATTCAGCAAGAGAGTCATCCTGGCAGACGCAAACCTGGACAAGGTCCTGAGCGCATACAACAAGCACAGAGACAAGCCGATCAGAGAACAGGCAGAAAACATCATCCACCTGTTCACACTGACAAACCTGGGAGCACCGGCAGCATTCAAGTACTTCGACACAACAATCGACAGAAAGAGATACACAAGCACAAAGGAAGTCCTGGACGCAACACTGATCCACCAGAGCATCACAGGACTGTACGAAACAAGAATCGACCTGAGCCAGCTGGGAGGAGACGGAGGAGGAAGCCCGAAGAAGAAGAGAAAGGTCTAGCTAGCCATCACATTTAAAAGCATCTCAGCCTACCATGAGAATAAGAGAAAGAAAATGAAGATCAATAGCTTATTCATCTCTTTTTCTTTTTCGTTGGTGTAAAGCCAACACCCTGTCTAAAAAACATAAATTTCTTTAATCATTTTGCCTCTTTTCTCTGTGCTTCAATTAATAAAAAATGGAAAGAACCTCGAG
一般に、脂質ナノ粒子の構成要素を、種々のモル比で、100%エタノールに溶解した。RNAカーゴ(例えば、Cas9 mRNAおよびsgRNA)を25mMのクエン酸塩、100mMのNaCl(pH5.0)に溶解して、約0.45mg/mLのRNAカーゴ濃度を得た。実施例2−4で使用されるLNPは、3−((4,4−ビス(オクチルオキシ)ブタノイル)オキシ)−2−((((3−(ジエチルアミノ)プロポキシ)カルボニル)オキシ)メチル)プロピル(9Z,12Z)−オクタデカ−9,12−ジエノエート)とも称される、イオン化可能な脂質((9Z,12Z)−3−((4,4−ビス(オクチルオキシ)ブタノイル)オキシ)−2−((((3−(ジエチルアミノ)プロポキシ)カルボニル)オキシ)メチル)プロピルオクタデカ−9,12−ジエノエート、コレステロール、DSPC、およびPEG2k−DMGをそれぞれ50:38:9:3のモル比で含んでいた。LNPを、約6のRNAホスフェートに対する脂質アミンの(N:P)モル比、gRNAとmRNAの重量比1:1で製剤化した。実施例2〜4で使用したLNPは、配列番号501に由来するCas9 mRNAを含有していた。
目的の領域においてPAMを同定するために、ヒト参照ゲノム(例えば、hg38)および目的のユーザが規定したゲノム領域(例えば、HAO1タンパク質コードエクソン)を用い、初期のガイド選択をインシリコで行った。同定された各PAMについて、分析を行い、統計を報告した。gRNA分子をさらに選択し、当該技術分野において公知のいくつかの基準(例えば、GC含有量、予測されるオンターゲット活性、および潜在的オフターゲット活性)に基づいてランク付けした。
Spy Cas9を構成的に発現するヒト胚性腎臓腺癌細胞株HEK293(「HEK293 Cas9」)を、10%のウシ胎児血清および500μg/mlのG418を追加したDMEM培地中で培養した。トランスフェクションの20時間前に、細胞を96ウェルプレート中で、10,000細胞/ウェルの密度でプレーティングした(トランスフェクション時に約70%のコンフルエント)。製造者のプロトコルに従って、細胞を、Lipofectamine RNAiMAX(ThermoFisher、カタログ番号13778150)でトランスフェクトした。細胞を、個々のガイド(25nM)、trRNA(25nM)、Lipofectamine RNAiMAX(0.3μL/ウェル)、およびOptiMemを含むリポプレックスによってトランスフェクトした。
HEK293 Cas9、HUH7、PHH、およびPCHでトランスフェクトした細胞を、トランスフェクション後、24、48、72、または96時間で回収した。gDNAを、製造者のプロトコルに従って、96ウェルプレートの各々のウェルから50μL/ウェルのBuccalAmp DNA Extraction溶液(Epicentre、カタログ番号QE09050)を用いて抽出した。全てのDNA試料に対し、本明細書に記載されるように、PCRおよびその後のNGS分析を行った。
ゲノム中の標的位置における編集効率を定量的に決定するために、ディープシーケンシングを使用して、遺伝子編集によって導入された挿入および欠失(「インデル」)の存在を同定した。目的の遺伝子(例えば、HAO1)内の標的部位周辺でPCRプライマーを設計し、目的のゲノム領域を増幅させた。プライマー配列設計は、現場で標準として行われた。
実施例3にさらに記載されるように、初代ヒト肝細胞および初代カニクイザル肝細胞を、表2から選択された修飾ガイドを用いて製剤化されたLNPで処理した。LNPを、3%カニクイザル血清を含む培地(Takara、カタログ番号Y20020)中、37℃で10分間インキュベートした。インキュベーション後、LNPを、ヒトまたはカニクイザル肝細胞に添加した。処理から21日後、培地を除去し、50μL/ウェルのTripleE(Gibco、カタログ番号12563−029)を細胞に添加し、次いで37℃で10分間インキュベートした。50μL/ウェルの培地を細胞に添加して、TripleEをクエンチし、細胞をプレートから解離させた。次いで、細胞を2,000rpmでペレットになるまで遠心分離し、上清を試料から吸引した。mRNAを単離するために、Qiagen RNeasy Mini Kit(Qiagen、カタログ番号74106)を使用した。製造者のプロトコルに従って、RNeasy Mini Kitの手順を完了した。RNAを、Nanodrop 8000(Thermofisher Scientific、カタログ番号ND−8000−GL)を使用して定量化した。製造者のプロトコルに従って、RNA定量化の手順を完了した。使用前に、RNA試料を−20℃で保存した。
実施例3にさらに記載されるように、初代ヒト肝細胞および初代カニクイザル肝細胞を、表2から選択された修飾ガイドを用いて製剤化されたLNPで処理した。LNPを、3%カニクイザル血清を含む培地(Takara、カタログ番号Y20020)中、37℃で10分間インキュベートした。インキュベーション後、LNPを、ヒトまたはカニクイザル肝細胞に添加した。トランスフェクションから21日後、培地を除去し、細胞を、50μL/ウェルのRIPA緩衝液(Boston Bio Products、カタログ番号BP−115)と、完全なプロテアーゼ阻害剤カクテル(Sigma、カタログ番号11697498001)、1mMのDTT、および250U/mlのBenzonase(EMD Millipore、カタログ番号71206−3)からなる新しく添加したプロテアーゼ阻害剤混合物で溶解させた。細胞を氷上で30分間維持し、そのときに、NaCl(1M最終濃度)を添加した。細胞溶解物を完全に混合し、氷上で30分間保持した。全細胞抽出物(「WCE」)をPCRプレートに移し、遠心分離してペレットデブリにした。Bradfordアッセイ(Bio−Rad、カタログ番号500−0001)を使用して、溶解物のタンパク質含有量を評価した。製造者のプロトコルに従って、Bradfordアッセイの手順を完了した。使用前に、抽出物を−20℃で保存した。
複数の細胞型におけるHAO1ガイドの交差スクリーニング
ヒトHAO1を標的とするガイド、およびカニクイザルにおける相同性を有するものを、HEK293 Cas9およびHUH7細胞株、および実施例1に記載したように初代ヒトおよびカニクイザル肝細胞にトランスフェクトした。各細胞型にわたって、各ガイド配列を含むcrRNAについて編集率を決定した。4種類全ての細胞株において、表1のガイド配列のスクリーニングデータを以下に列挙する(表7B〜10)。
オリゴ挿入に基づくアッセイ(例えば、Tsai et al.,Nature Biotechnology.33、187−197;2015を参照)を使用して、HAO1を標的とするCas9によって切断される潜在的なオフターゲットゲノム部位を決定した。表11の17種類のdgRNA(および既知のオフターゲットプロファイルを有する3種類の対照ガイド)を、上述のHEK293−Cas9細胞においてスクリーニングし、オフターゲットの結果を図2にプロットした。このアッセイは、いくつかのdgRNAについての潜在的なオフターゲット部位を特定し、検出可能なオフターゲットを有しない他の部位を特定した。特定された潜在的なオフターゲット部位がないか、またはほとんどなかった修飾ガイドを、さらなる分析のためにsgRNAとして合成した(表2)。
潜在的なオフターゲットを検出するために使用されるHEK293 Cas9細胞は、Cas9を構成的に過剰発現し、様々な細胞型における一過性送達パラダイムと比較して、より多くの潜在的なオフターゲット「ヒット」をもたらす。さらに、この生化学アッセイは、典型的には、細胞環境を含まない精製された高分子量ゲノムDNAを利用し、使用されるCas9 RNPの用量に依存するため、潜在的なオフターゲット部位の数を過剰に表す。したがって、これらの方法によって特定された潜在的なオフターゲット部位は、特定された潜在的なオフターゲット部位の標的シークエンシングを使用して検証され得る。
用量応答アッセイにおいて、初代ヒト肝細胞および初代カニクイザル肝細胞に対して、ヒトHAO1を標的とする修飾sgRNAおよびカニクイザル適合sgRNA配列の脂質ナノ粒子(LNP)製剤を試験した。LNPを実施例1に記載のように製剤化した。初代ヒトおよびカニクイザル肝細胞を、実施例1に記載されるようにプレーティングした。LNPで処理する前に、両方の細胞株を37℃、5%CO2で48時間インキュベートした。LNPを、6%カニクイザル血清を含む培地中、37℃で10分間インキュベートした。インキュベーション後、LNPを、300ng Cas9 mRNAで始まる8点の3倍用量応答曲線において、ヒトまたはカニクイザル肝細胞に添加した。細胞を、実施例1に記載されるようにNGS分析のために処理後96時間かけて溶解させた。両方の細胞株におけるガイド配列の用量応答曲線データを図4および5に示す。14.7nM濃度での編集%を以下の表12および13に列挙する。
HAO1転写物の定量PCR分析
初代ヒト肝細胞を、表2からの修飾sgRNAを用いて製剤化されたLNP(実施例1に記載されるような)で処理した。LNPを実施例1に記載のように製剤化した。トランスフェクションから21日後、細胞を収穫し、RNAを単離し、実施例1に記載の定量PCRによる分析を行った。
HAO1の定量PCR分析からの細胞の一部を、トランスフェクションの21日後にも収穫し、全細胞抽出物(WCE)を調製し、実施例1に記載したようにウェスタンブロットによる分析を行った。
本試験では、野生型およびAGT欠損マウス(Agxt1−/−)、例えば、肝臓AGXT mRNAおよびタンパク質を欠いたヌル変異体マウスの両方を使用した。AGT欠損マウスは、以前にSalido et al.,Proc Natl Acad Sci USA.2006 Nov 28;103(48):18249−54に記載されているように、高シュウ酸尿症および結晶尿を示し、したがって、PH1の表現型モデルを代表するものである。野生型マウスを使用して、AGT欠損マウスにおいてどの製剤を試験するかを決定した。
Claims (264)
- HAO1遺伝子内で二本鎖切断(DSB)または一本鎖切断(SSB)を誘導する方法であって、組成物を細胞に送達することを含み、前記組成物が、
a.ガイドRNAであって、
i.配列番号1〜146から選択されるガイド配列、または
ii.配列番号1〜146から選択される配列の少なくとも17、18、19、もしくは20個の連続ヌクレオチド、または
iii.配列番号1〜146から選択される配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、もしくは90%同一であるガイド配列、または
iv.配列番号4、5、6、8、22、35、38、39、56、73、84、100、105、113、117、129、145のうちのいずれか1つを含むガイド配列、または
v.配列番号8、22、35、39、73、84、100、105、113、145のうちのいずれか1つを含むガイド配列を含む、ガイドRNAと、任意選択で、
b.RNAガイドDNA結合剤、またはRNAガイドDNA結合剤をコードする核酸と、を含む、方法。 - HAO1遺伝子の発現を低減する方法であって、組成物を細胞に送達することを含み、前記組成物が、
a.ガイドRNAであって、
i.配列番号1〜146から選択されるガイド配列、または
ii.配列番号1〜146から選択される配列の少なくとも17、18、19、もしくは20個の連続ヌクレオチド、または
iii.配列番号1〜146から選択される配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、もしくは90%同一であるガイド配列、または
iv.配列番号4、5、6、8、22、35、38、39、56、73、84、100、105、113、117、129、145のうちのいずれか1つを含むガイド配列、または
v.配列番号8、22、35、39、73、84、100、105、113、145のうちのいずれか1つを含むガイド配列を含む、ガイドRNAと、任意選択で、
b.RNAガイドDNA結合剤、またはRNAガイドDNA結合剤をコードする核酸と、を含む、方法。 - 原発性高シュウ酸尿症1型(PH1)を治療または予防する方法であって、それを必要とする対象に組成物を投与することを含み、前記組成物が、
a.ガイドRNAであって、
i.配列番号1〜146から選択されるガイド配列、または
ii.配列番号1〜146から選択される配列の少なくとも17、18、19、もしくは20個の連続ヌクレオチド、または
iii.配列番号1〜146から選択される配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、もしくは90%同一であるガイド配列、または
iv.配列番号4、5、6、8、22、35、38、39、56、73、84、100、105、113、117、129、145のうちのいずれか1つを含むガイド配列、または
v.配列番号8、22、35、39、73、84、100、105、113、145のうちのいずれか1つを含むガイド配列を含む、ガイドRNAと、任意選択で、
b.RNAガイドDNA結合剤、またはRNAガイドDNA結合剤をコードする核酸と、を含み、それによってPH1を治療または予防する、方法。 - PH1によって引き起こされる末期腎疾患(ESRD)を治療または予防する方法であって、それを必要とする対象に組成物を投与することを含み、前記組成物が、
a.ガイドRNAであって、
i.配列番号1〜146から選択されるガイド配列、または
ii.配列番号1〜146から選択される配列の少なくとも17、18、19、もしくは20個の連続ヌクレオチド、または
iii.配列番号1〜146から選択される配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、もしくは90%同一であるガイド配列、または
iv.配列番号4、5、6、8、22、35、38、39、56、73、84、100、105、113、117、129、145のうちのいずれか1つを含むガイド配列、または
v.配列番号8、22、35、39、73、84、100、105、113、145のうちのいずれか1つを含むガイド配列を含む、ガイドRNAと、任意選択で、
b.RNAガイドDNA結合剤、またはRNAガイドDNA結合剤をコードする核酸と、を含み、それによって、PH1によって引き起こされる(ESRD)を治療または予防する、方法。 - シュウ酸カルシウム産生および沈着、高シュウ酸尿症、シュウ酸症、ならびに血尿のうちのいずれか1つを治療または予防する方法であって、それを必要とする対象に組成物を投与することを含み、前記組成物が、
a.ガイドRNAであって、
i.配列番号1〜146から選択されるガイド配列、または
ii.配列番号1〜146から選択される配列の少なくとも17、18、19、もしくは20個の連続ヌクレオチド、または
iii.配列番号1〜146から選択される配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、もしくは90%同一であるガイド配列、または
iv.配列番号4、5、6、8、22、35、38、39、56、73、84、100、105、113、117、129、145のうちのいずれか1つを含むガイド配列、または
v.配列番号8、22、35、39、73、84、100、105、113、145のうちのいずれか1つを含むガイド配列を含む、ガイドRNAと、任意選択で、
b.RNAガイドDNA結合剤、またはRNAガイドDNA結合剤をコードする核酸と、を含み、それによって、シュウ酸カルシウム産生および沈着、高シュウ酸尿症、シュウ酸症、ならびに血尿のうちのいずれか1つを治療または予防する、方法。 - 血清グリコレート濃度を高める方法であって、それを必要とする対象に組成物を投与することを含み、前記組成物が、
a.ガイドRNAであって、
i.配列番号1〜146から選択されるガイド配列、または
ii.配列番号1〜146から選択される配列の少なくとも17、18、19、もしくは20個の連続ヌクレオチド、または
iii.配列番号1〜146から選択される配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、もしくは90%同一であるガイド配列、または
iv.配列番号4、5、6、8、22、35、38、39、56、73、84、100、105、113、117、129、145のうちのいずれか1つを含むガイド配列、または
v.配列番号8、22、35、39、73、84、100、105、113、145のうちのいずれか1つを含むガイド配列を含む、ガイドRNAと、任意選択で、
b.RNAガイドDNA結合剤、またはRNAガイドDNA結合剤をコードする核酸と、を含み、それによって血清グリコレート濃度を高める、方法。 - 対象において尿内のオキシレートを低減する方法であって、それを必要とする対象に組成物を投与することを含み、前記組成物が、
a.ガイドRNAであって、
i.配列番号1〜146から選択されるガイド配列、または
ii.配列番号1〜146から選択される配列の少なくとも17、18、19、もしくは20個の連続ヌクレオチド、または
iii.配列番号1〜146から選択される配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、もしくは90%同一であるガイド配列、または
iv.配列番号4、5、6、8、22、35、38、39、56、73、84、100、105、113、117、129、145のうちのいずれか1つを含むガイド配列、または
v.配列番号8、22、35、39、73、84、100、105、113、145のうちのいずれか1つを含むガイド配列を含む、ガイドRNAと、任意選択で、
b.RNAガイドDNA結合剤、またはRNAガイドDNA結合剤をコードする核酸と、を含み、それによって対象の尿内のオキサレートを低減する、方法。 - RNAガイドDNA結合剤、またはRNAガイドDNA結合剤をコードする核酸が投与される、請求項1〜7のいずれか一項に記載の方法。
- 組成物であって、
a.ガイドRNAであって、
i.配列番号1〜146から選択されるガイド配列、または
ii.配列番号1〜146から選択される配列の少なくとも17、18、19、もしくは20個の連続ヌクレオチド、または
iii.配列番号1〜146から選択される配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、もしくは90%同一であるガイド配列、または
iv.配列番号4、5、6、8、22、35、38、39、56、73、84、100、105、113、117、129、145のうちのいずれか1つを含むガイド配列、または
v.配列番号8、22、35、39、73、84、100、105、113、145のうちのいずれか1つを含むガイド配列を含む、ガイドRNAと、任意選択で、
b.RNAガイドDNA結合剤、またはRNAガイドDNA結合剤をコードする核酸と、を含む、組成物。 - 短いシングルガイドRNA(短いsgRNA)を含む組成物であって、
a.ガイド配列であって、
i.配列番号1〜146から選択されるガイド配列のいずれか1つ、または
ii.配列番号1〜146から選択されるガイド配列のいずれか1つの少なくとも17、18、19、もしくは20個の連続ヌクレオチド、または
iii.配列番号1〜146から選択される配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、もしくは90%同一であるか、または
iv.配列番号4、5、6、8、22、35、38、39、56、73、84、100、105、113、117、129、145のうちのいずれか1つ、または
v.配列番号8、22、35、39、73、84、100、105、113、145のうちのいずれか1つを含む、ガイド配列と、
b.ヘアピン領域を含むsgRNAの保存部分であって、前記ヘアピン領域が、少なくとも5〜10個のヌクレオチドを欠失しており、任意選択で、前記短いsgRNAが、5’末端修飾および3’末端修飾のうちの1つ以上を含む、保存部分と、を含む、組成物。 - 配列番号202の配列を含む、請求項10に記載の組成物。
- 5’末端修飾を含む、請求項10または請求項11に記載の組成物。
- 前記短いsgRNAが、3’末端修飾を含む、請求項10〜12のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記短いsgRNAが、5’末端修飾および3’末端修飾を含む、請求項10〜13のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記短いsgRNAが、3’テールをさらに含む、請求項10〜14のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記3’テールが、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10個のヌクレオチドを含む、請求項15に記載の組成物。
- 前記3’テールが、約1〜2、1〜3、1〜4、1〜5、1〜7、1〜10、少なくとも1〜2、少なくとも1〜3、少なくとも1〜4、少なくとも1〜5、少なくとも1〜7、または少なくとも1〜10個のヌクレオチドを含む、請求項15に記載の組成物。
- 前記短いsgRNAが、3’テールを含まない、請求項10〜17のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記ヘアピン領域内に修飾を含む、請求項10〜18のいずれか一項に記載の組成物。
- 3’末端修飾と、前記ヘアピン領域内の修飾と、を含む、請求項10〜19のいずれか一項に記載の組成物。
- 3’末端修飾と、前記ヘアピン領域内の修飾と、5’末端修飾と、を含む、請求項10〜20のいずれか一項に記載の組成物。
- 5’末端修飾と、前記ヘアピン領域内の修飾と、を含む、請求項10〜21のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記ヘアピン領域が、少なくとも5個の連続ヌクレオチドを欠失している、請求項10〜22のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記少なくとも5〜10個の欠失しているヌクレオチドが、
a.ヘアピン1内にある、
b.ヘアピン1およびヘアピン1とヘアピン2との間の「N」内にある、
c.ヘアピン1およびヘアピン1の直ぐ3’側の2個のヌクレオチド内にある、
d.ヘアピン1の少なくとも一部を含む、
e.ヘアピン2内にある、
f.ヘアピン2の少なくとも一部を含む、
g.ヘアピン1およびヘアピン2内にある、
h.ヘアピン1の少なくとも一部を含み、ヘアピン1とヘアピン2との間の「N」を含む、
i.ヘアピン2の少なくとも一部を含み、ヘアピン1とヘアピン2との間の「N」を含む、
j.ヘアピン1の少なくとも一部を含み、ヘアピン1とヘアピン2との間の「N」を含み、ヘアピン2の少なくとも一部を含む、
k.ヘアピン1もしくはヘアピン2内にあり、任意選択で、ヘアピン1とヘアピン2との間の「N」を含む、
l.連続している、
m.連続しており、ヘアピン1とヘアピン2との間の「N」を含む、
n.連続しており、少なくともヘアピン1の一部およびヘアピン2の一部に及ぶ、
o.連続しており、ヘアピン1の少なくとも一部およびヘアピン1とヘアピン2との間の「N」に及ぶ、
p.連続しており、ヘアピン1の少なくとも一部およびヘアピン1の直ぐ3’側の2個のヌクレオチドに及ぶ、
q.5〜10個のヌクレオチドからなる、
r.6〜10個のヌクレオチドからなる、
s.5〜10個の連続ヌクレオチドからなる、
t.6〜10個の連続ヌクレオチドからなる、または
u.配列番号400のヌクレオチド54〜58からなる、請求項10〜23のいずれか一項に記載の組成物。 - ネクサス領域を含むsgRNAの保存部分を含み、前記ネクサス領域が、少なくとも1個のヌクレオチドを欠失している、請求項10〜24のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記ネクサス領域内で欠失している前記ヌクレオチドが、
a.前記ネクサス領域内の少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、または10個のヌクレオチド、
b.前記ネクサス領域内の少なくともまたは正確に1〜2個のヌクレオチド、1〜3個のヌクレオチド、1〜4個のヌクレオチド、1〜5個のヌクレオチド、1〜6個のヌクレオチド、1〜10個のヌクレオチド、または1〜15個のヌクレオチド、および
c.前記ネクサス領域内の各ヌクレオチドのうちのいずれか1つ以上を含む、請求項25に記載の組成物。 - 修飾シングルガイドRNA(sgRNA)を含む組成物であって、
a.ガイド配列であって、
i.配列番号1〜146から選択されるガイド配列のいずれか1つ、または
ii.配列番号1〜146から選択されるガイド配列のいずれか1つの少なくとも17、18、19、または20個の連続ヌクレオチド、または
iii.配列番号1〜146から選択される配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、または90%同一であるか、または
iv.配列番号4、5、6、8、22、35、38、39、56、73、84、100、105、113、117、129、145のうちのいずれか1つ、または
v.配列番号8、22、35、39、73、84、100、105、113、145のうちのいずれか1つを含む、ガイド配列を含み、さらに、
b.以下
1.1つ以上のガイド領域YA部位におけるYA修飾、
2.1つ以上の保存領域YA部位におけるYA修飾、
3.1つ以上のガイド領域YA部位および1つ以上の保存領域YA部位におけるYA修飾、
4.i)2つ以上のガイド領域YA部位におけるYA修飾、
ii)保存領域YA部位2、3、4、および10のうちの1つ以上におけるYA修飾、ならびに
iii)保存領域YA部位1および8のうちの1つ以上におけるYA修飾、または
5.i)1つ以上のガイド領域YA部位におけるYA修飾であって、前記ガイド領域YA部位が、5’末端部の5’末端から8番目のヌクレオチド、またはその後にある、YA修飾、
ii)保存領域YA部位2、3、4、および10のうちの1つ以上におけるYA修飾、ならびに任意選択で、
iii)保存領域YA部位1および8のうちの1つ以上におけるYA修飾、または
6.i)1つ以上のガイド領域YA部位におけるYA修飾であって、前記ガイド領域YA部位が、前記ガイド領域の3’末端部ヌクレオチドの13個のヌクレオチド内にある、YA修飾、
ii)保存領域YA部位2、3、4、および10のうちの1つ以上におけるYA修飾、ならびに
iii)保存領域YA部位1および8のうちの1つ以上におけるYA修飾、または
7.i)5’末端修飾および3’末端修飾、
ii)保存領域YA部位2、3、4、および10のうちの1つ以上におけるYA修飾、ならびに
iii)保存領域YA部位1および8のうちの1つ以上におけるYA修飾、または
8.i)ガイド領域YA部位におけるYA修飾であって、前記ガイド領域YA部位の前記修飾が、前記ガイド領域YA部位の5’に位置する少なくとも1個のヌクレオチドが含まない修飾を含む、YA修飾
ii)保存領域YA部位2、3、4、および10のうちの1つ以上におけるYA修飾、ならびに
iii)保存領域YA部位1および8のうちの1つ以上におけるYA修飾、または
9.i)保存領域YA部位2、3、4、および10のうちの1つ以上におけるYA修飾、ならびに
ii)保存領域YA部位1および8におけるYA修飾、または
10.i)1つ以上のガイド領域YA部位におけるYA修飾であって、前記YA部位が、前記5’末端部の8番目のヌクレオチド、またはその後にある、YA修飾、
ii)保存領域YA部位2、3、4、および10のうちの1つ以上におけるYA修飾、ならびに
iii)H1−1およびH2−1のうちの1つ以上における修飾、または
11.i)保存領域YA部位2、3、4、および10のうちの1つ以上におけるYA修飾、ii)保存領域YA部位1、5、6、7、8、および9のうちの1つ以上におけるYA修飾、ならびにiii)H1−1およびH2−1のうちの1つ以上における修飾、または
12.i)YA修飾などの、前記5’末端部から6番目のヌクレオチド、またはその後に位置する1つ以上のヌクレオチドにおける修飾、
ii)1つ以上のガイド配列YA部位におけるYA修飾、
iii)B3、B4、およびB5のうちの1つ以上における修飾であって、B6が、2’−OMe修飾を含まないか、もしくは2’−OMe以外の修飾を含む、修飾、
iv)LS10における修飾であって、LS10が、2’−フルオロ以外の修飾を含む、修飾、ならびに/または
v)N2、N3、N4、N5、N6、N7、N10、もしくはN11における修飾、から選択される1つ以上の修飾を含み、
以下
i.1つ以上のガイド領域YA部位におけるYA修飾、
ii.1つ以上の保存領域YA部位におけるYA修飾、
iii.1つ以上のガイド領域YA部位および1つ以上の保存領域YA部位におけるYA修飾、
iv.前記5’末端部の前記5’末端からのヌクレオチド8〜11、13、14、17、または18のうちの少なくとも1つが、2’−フルオロ修飾を含まない、
v.前記5’末端部の前記5’末端からのヌクレオチド6〜10のうちの少なくとも1つが、ホスホロチオエート連結を含まない、
vi.B2、B3、B4、もしくはB5のうちの少なくとも1つが、2’−OMe修飾を含まない、
vii.LS1、LS8、もしくはLS10のうちの少なくとも1つが、2’−OMe修飾を含まない、
viii.N2、N3、N4、N5、N6、N7、N10、N11、N16、もしくはN17のうちの少なくとも1つが、2’−OMe修飾を含まない、
ix.H1−1が、修飾を含む、
x.H2−1が、修飾を含む、または
xi.H1−2、H1−3、H1−4、H1−5、H1−6、H1−7、H1−8、H1−9、H1−10、H2−1、H2−2、H2−3、H2−4、H2−5、H2−6、H2−7、H2−8、H2−9、H2−10、H2−11、H2−12、H2−13、H2−14、もしくはH2−15のうちの少なくとも1つが、ホスホロチオエート連結を含まない、のうちの少なくとも1つが真である、組成物。 - 配列番号450を含む、請求項27に記載の組成物。
- 細胞または対象において前記HAO1遺伝子内で二本鎖切断(DSB)または一本鎖切断を誘導する際に使用するための、請求項9〜28のいずれか一項に記載の組成物。
- 細胞または対象において前記HAO1遺伝子の発現を低減する際に使用するための、請求項9〜28のいずれか一項に記載の組成物。
- 対象においてPH1を治療または予防する際に使用するための、請求項9〜28のいずれか一項に記載の組成物。
- 対象において血清および/または血漿グリコレート濃度を高める際に使用するための、請求項9〜28のいずれか一項に記載の組成物。
- 対象において尿オキサレート濃度を低減する際に使用するための、請求項9〜28のいずれか一項に記載の組成物。
- オキサレート産生、臓器におけるシュウ酸カルシウム沈着、高シュウ酸尿症、全身性シュウ酸症を含むシュウ酸症、血尿、末期腎疾患(ESRD)を治療もしくは予防する、および/または腎臓もしくは肝臓移植の必要性を遅らせるか、もしくは改善する際に使用するための、請求項9〜28のいずれか一項に記載の組成物。
- さらに、
a.細胞または対象において前記HAO1遺伝子内で二本鎖切断(DSB)を誘導すること、
b.細胞または対象において前記HAO1遺伝子の発現を低減すること、
c.対象においてPH1を治療または予防すること、
d.対象において血清および/または血漿グリコレート濃度を高めること、
e.対象において尿オキサレート濃度を低減すること、
f.オキサレート産生を低減すること、
g.臓器におけるシュウ酸カルシウム沈着を低減すること、
h.高シュウ酸尿症を低減すること、
i.全身性シュウ酸症を含むシュウ酸症を治療または予防すること、
j.血尿を治療または予防すること、
k.末期腎疾患(ESRD)を予防すること、および/または
l.腎臓または肝臓移植の必要性を遅らせるか、または改善すること、を含む、請求項1〜8のいずれか一項に記載の方法。 - 前記組成物が、血清および/または血漿グリコレートレベルを高める、請求項1〜8または請求項29〜35のいずれか一項に記載の方法または使用するための組成物。
- 前記組成物が、前記HAO1遺伝子の編集を引き起こす、請求項1〜8または請求項29〜35のいずれか一項に記載の方法または使用するための組成物。
- 前記編集が、編集される集団の割合(編集率)として計算される、請求項37に記載の方法または使用するための組成物。
- 前記編集率が、前記集団の30〜99%である、請求項38に記載の方法または使用するための組成物。
- 前記編集率が、前記集団の30〜35%、35〜40%、40〜45%、45〜50%、50〜55%、55〜60%、60〜65%、65〜70%、70〜75%、75〜80%、80〜85%、85〜90%、90〜95%、または95〜99%である、請求項38に記載の方法または使用するための組成物。
- 前記組成物が、尿オキサレート濃度を低減する、請求項1〜8または請求項29〜35のいずれか一項に記載の方法または使用するための組成物。
- 尿オキサレートの減少が、腎臓結石および/または腎臓、肝臓、膀胱、心臓、皮膚、または眼におけるシュウ酸カルシウム沈着を減少させる、請求項41に記載の方法または使用するための組成物。
- 前記ガイド配列が、
a.配列番号1〜146、
b.配列番号4、5、6、8、22、35、38、39、56、73、84、100、105、113、117、129、145、および
c.配列番号8、22、35、39、73、84、100、105、113、145から選択される、請求項1〜42のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。 - 前記組成物が、
a.配列番号151〜168のうちのいずれか1つ、または
b.配列番号251〜268のうちのいずれか1つ、または
c.配列番号4、5、6、8、22、35、38、39、56、73、84、100、105、113、117、129、145から選択されるガイド配列、または
d.配列番号8、22、35、39、73、84、100、105、113、145から選択されるガイド配列、を含むsgRNAを含む、請求項1〜43のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。 - 前記標的配列が、前記ヒトHAO1遺伝子のエクソン1、3、4、5、6、または8の中にある、請求項1〜44のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記標的配列が、前記ヒトHAO1遺伝子のエクソン1の中にある、請求項45に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記標的配列が、前記ヒトHAO1遺伝子のエクソン3の中にある、請求項45に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記標的配列が、前記ヒトHAO1遺伝子のエクソン4の中にある、請求項45に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記標的配列が、前記ヒトHAO1遺伝子のエクソン6の中にある、請求項45に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記標的配列が、前記ヒトHAO1遺伝子のエクソン8の中にある、請求項45に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記ガイド配列が、HAO1のプラス鎖内の標的配列に対して相補的である、請求項1〜50のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記ガイド配列が、HAO1のマイナス鎖内の標的配列に対して相補的である、請求項1〜50のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記第1のガイド配列が、前記HAO1遺伝子の前記プラス鎖内の第1の標的配列に対して相補的であり、前記組成物が、前記HAO1遺伝子の前記マイナス鎖内の第2の標的配列に対して相補的である第2のガイド配列をさらに含む、請求項1〜50のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記ガイドRNAが、配列番号1〜146のうちのいずれか1つから選択されるガイド配列を含み、配列番号200のヌクレオチド配列をさらに含み、前記配列番号200のヌクレオチドが、その3’末端にある前記ガイド配列の後にある、請求項1〜53のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記ガイドRNAが、配列番号1〜146のうちのいずれか1つから選択されるガイド配列を含み、配列番号201、配列番号202、配列番号203、または配列番号400〜450のうちのいずれか1つのヌクレオチド配列をさらに含み、前記配列番号201、配列番号202、配列番号203、または配列番号400〜450のうちのいずれか1つのヌクレオチドが、その3’末端にある前記ガイド配列の後にある、請求項1〜54のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記ガイドRNAが、シングルガイド(sgRNA)である、請求項1〜55のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記sgRNAが、配列番号4、5、6、8、22、35、38、39、56、73、84、100、105、113、117、129、または145のうちのいずれか1つを含むガイド配列を含む、請求項56に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記sgRNAが、配列番号151〜168または251〜268のうちのいずれか1つを含む、請求項56に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記ガイドRNAが、配列番号300のパターンに従って修飾され、前記Nが、まとめて、表1のガイド配列(配列番号1〜146)のうちのいずれか1つである、請求項1〜58のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号300の各Nが、任意の天然または非天然ヌクレオチドであり、前記Nが、前記ガイド配列を形成し、前記ガイド配列が、前記HAO1遺伝子に対してCas9を標的とする、請求項59に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記sgRNAが、配列番号1〜146の前記ガイド配列、および配列番号201、配列番号202、もしくは配列番号203の前記ヌクレオチドのうちのいずれか1つを含む、請求項1〜60のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記sgRNAが、配列番号1〜146から選択される配列に対して少なくとも99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、もしくは90%同一であるガイド配列を含む、請求項1〜61のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記sgRNAが、配列番号8、22、35、39、73、84、100、105、113、145、151〜168、および251〜268から選択される配列を含む、請求項62に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記ガイドRNAが、少なくとも1つの修飾を含む、請求項1〜63のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記少なくとも1つの修飾が、2’−O−メチル(2’−O−Me)修飾ヌクレオチドを含む、請求項64に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- ヌクレオチドの間にホスホロチオエート(PS)結合を含む、請求項63〜65のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 2’−フルオロ(2’−F)修飾ヌクレオチドを含む、請求項63〜66のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記ガイドRNAの5’末端での最初の5個のヌクレオチドのうちの1つ以上における修飾を含む、請求項63〜67のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記ガイドRNAの3’末端での最後の5個のヌクレオチドのうちの1つ以上における修飾を含む、請求項63〜68のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記ガイドRNAの最初の4個のヌクレオチドの間にPS結合を含む、請求項63〜69のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記ガイドRNAの最後の4個のヌクレオチドの間にPS結合を含む、請求項63〜70のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記ガイドRNAの5’末端での最初の3個のヌクレオチドに2’−O−Me修飾ヌクレオチドを含む、請求項63〜71のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記ガイドRNAの3’末端での最後の3個のヌクレオチドに2’−O−Me修飾ヌクレオチドを含む、請求項63〜72のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記ガイドRNAが、配列番号300の修飾ヌクレオチドを含む、請求項63〜73のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記組成物が、薬学的に許容可能な賦形剤をさらに含む、請求項1〜74のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記ガイドRNAが、脂質ナノ粒子(LNP)と会合している、請求項1〜75のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記LNPが、陽イオン性脂質を含む、請求項76に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記陽イオン性脂質が、(9Z,12Z)−3−((4,4−ビス(オクチルオキシ)ブタノイル)オキシ)−2−((((3−(ジエチルアミノ)プロポキシ)カルボニル)オキシ)メチル)プロピルオクタデカ−9,12−ジエノエートであり、3−((4,4−ビス(オクチルオキシ)ブタノイル)オキシ)−2−((((3−(ジエチルアミノ)プロポキシ)カルボニル)オキシ)メチル)プロピル(9Z,12Z)−オクタデカ−9,12−ジエノエートとも呼ばれる、請求項77に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記LNPが、中性脂質を含む、請求項76〜78のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記中性脂質が、DSPCである、請求項79に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記LNPが、ヘルパー脂質を含む、請求項76〜80のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記ヘルパー脂質が、コレステロールである、請求項81に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記LNPが、ステルス脂質を含む、請求項76〜82のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記ステルス脂質が、PEG2k−DMGである、請求項83に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記組成物が、RNAガイドDNA結合剤をさらに含む、請求項1〜84のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記組成物が、RNAガイドDNA結合剤をコードするmRNAをさらに含む、請求項1〜85のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記RNAガイドDNA結合剤が、Cas9である、請求項85または86に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記組成物が、薬学的製剤であり、薬学的に許容可能な担体をさらに含む、請求項1〜87のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号1である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号2である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号3である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号4である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号5である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号6である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号7である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号8である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号9である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号10である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号11である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号12である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号13である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号14である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号15である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号16である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号17である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号18である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号19である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号20である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号21である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号22である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号23である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号24である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号25である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号26である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号27である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号28である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号29である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号30である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号31である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号32である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号33である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号34である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号35である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号36である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号37である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号38である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号39である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号40である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号41である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号42である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号43である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号44である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号45である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号46である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号47である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号48である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号49である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号50である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号51である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号52である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号53である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号54である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号55である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号56である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号57である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号58である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号59である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号60である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号61である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号62である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号63である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号64である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号65である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号66である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号67である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号68である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号69である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号70である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号71である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号72である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号73である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号74である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号75である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号76である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号77である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号78である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号79である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号80である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号81である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号82である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号83である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号84である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号85である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号86である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号87である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号88である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号89である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号90である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号91である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号92である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号93である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号94である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号95である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号96である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号97である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号98である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号99である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号100である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号101である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号102である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号103である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号104である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号105である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号106である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号107である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号108である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号109である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号110である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号111である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号112である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号113である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号114である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号115である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号116である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号117である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号118である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号119である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号120である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号121である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号122である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号123である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号124である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号125である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号126である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号127である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号128である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号129である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号130である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号131である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号132である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号133である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号134である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号135である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号136である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号137である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号138である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号139である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号140である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号141である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号142である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号143である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
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- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号145である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号146である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 配列番号1〜146から選択される前記配列が、配列番号146である、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記ガイドRNAが、配列番号251を含むsgRNAである、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記ガイドRNAが、配列番号252を含むsgRNAである、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記ガイドRNAが、配列番号253を含むsgRNAである、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記ガイドRNAが、配列番号254を含むsgRNAである、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記ガイドRNAが、配列番号255を含むsgRNAである、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記ガイドRNAが、配列番号256を含むsgRNAである、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記ガイドRNAが、配列番号257を含むsgRNAである、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記ガイドRNAが、配列番号258を含むsgRNAである、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記ガイドRNAが、配列番号259を含むsgRNAである、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記ガイドRNAが、配列番号260を含むsgRNAである、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記ガイドRNAが、配列番号261を含むsgRNAである、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記ガイドRNAが、配列番号262を含むsgRNAである、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記ガイドRNAが、配列番号263を含むsgRNAである、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記ガイドRNAが、配列番号264を含むsgRNAである、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記ガイドRNAが、配列番号265を含むsgRNAである、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記ガイドRNAが、配列番号266を含むsgRNAである、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記ガイドRNAが、配列番号267を含むsgRNAである、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記ガイドRNAが、配列番号268を含むsgRNAである、請求項1〜88のいずれか一項に記載の方法、使用するための組成物、または組成物。
- 前記組成物が、単回用量として投与される、請求項1〜253のいずれか一項に記載の方法または組成物。
- 前記組成物が、一度投与される、請求項1〜254のいずれか一項に記載の方法または組成物。
- 前記単回用量または一度投与が、
a.DSBを誘導する、および/または
b.HAO1遺伝子の発現を低減する、および/または
c.PH1を治療もしくは予防する、および/または
d.PH1によって引き起こされるESRDを治療もしくは予防する、および/または
e.シュウ酸カルシウム産生および沈着を治療もしくは予防する、および/または
f.高シュウ酸尿症を治療もしくは予防する、および/または
g.シュウ酸症を治療もしくは予防する、および/または
h.血尿を治療もしくは予防する、および/または
i.血清グリコレート濃度を高める、および/または
J.尿内のオキシレートを低減する、請求項254または255のいずれか一項に記載の方法または組成物。 - 前記単回用量または一度投与が、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、または15週間にわたって、a)〜j)のうちのいずれか1つ以上を達成する、請求項256に記載の方法または組成物。
- 前記単回用量または一度投与が、永続的な効果を達成する、請求項256または257に記載の方法または組成物。
- 永続的な効果を達成することをさらに含む、請求項1〜258のいずれか一項に記載の方法または組成物。
- 前記永続的な効果が、少なくとも1ヶ月、少なくとも3ヶ月、少なくとも6ヶ月、少なくとも1年、または少なくとも5年持続する、請求項259に記載の方法または組成物。
- 前記組成物の投与によって、尿内のオキサレートの治療的に関連する減少がもたらされる、請求項1〜260のいずれか一項一項に記載の方法または組成物。
- 前記組成物の投与によって、治療範囲内の尿オキサレートレベルがもたらされる、請求項1〜261のいずれか一項に記載の方法または組成物。
- 前記組成物の投与によって、正常範囲の100、120、または150%以内のオキサレートレベルがもたらされる、請求項1〜262のいずれか一項に記載の方法または組成物。
- PH1を有するヒト対象を治療するための医薬の調製のための、請求項9〜263のいずれかに記載の組成物または製剤の使用。
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