JP2021524232A - オリゴ糖産生におけるグリコシダーゼの使用 - Google Patents
オリゴ糖産生におけるグリコシダーゼの使用 Download PDFInfo
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Abstract
Description
第一の側面において、所望のオリゴ糖を産生可能である遺伝子操作された微生物宿主細胞を用いて、所望のオリゴ糖を産生するための方法であって、前記微生物宿主細胞が所望のオリゴ糖の細胞内生合成中に生成される代謝性糖副産物を細胞内で分解可能である異種グリコシダーゼを発現する、前記方法を開示する。
第四の側面において、第一の側面にしたがった方法によって、そして/または第二の側面にしたがった遺伝子操作された微生物宿主細胞を用いることによって産生されるオリゴ糖、すなわち所望のオリゴ糖を開示する。
第六の側面において、第四の側面にしたがった所望のオリゴ糖を含有する栄養組成物を開示する。
(i)所望のオリゴ糖を産生可能であり、所望のオリゴ糖の細胞内生合成中に生成される代謝性糖副産物を細胞内で分解可能である異種グリコシダーゼを発現するように遺伝子操作されており、そして前記グリコシダーゼの酵素活性から生じる分解産物をリサイクル可能である、遺伝子操作された微生物宿主細胞を提供し;
(ii)所望のオリゴ糖の産生を許容する条件下および培地中で、遺伝子操作された微生物宿主細胞を培養し、それによって所望のオリゴ糖を産生し;そして
(iii)随意に、所望のオリゴ糖を回収する
工程を含む、前記方法を提供する。
さらなるおよび/または代替態様において、所望のオリゴ糖は、好ましくは2’−フコシルラクトース(2’−FL)、3−フコシルラクトース(3−FL)、2’,3−ジフコシルラクトース(DFL)、ラクト−N−トリオースII、ラクト−N−テトラオース(LNT)、ラクト−N−ネオテトラオース(LNnT)、ラクト−N−フコペンタオースI(LNFP−I)、ラクト−N−ネオフコペンタオースI(LNnFP−I)、ラクト−N−フコペンタオースII(LNFP−II)、ラクト−N−フコペンタオースIII(LNFP−III)、ラクト−N−フコペンタオースV(LNFP−V)、ラクト−N−ネオフコペンタオースV(LNnFP−V)、ラクト−N−ジフコヘキサオースI、ラクト−N−ジフコシルヘキサオースII、パラ−ラクト−N−フコシル−ヘキサオース、フコシル−ラクト−N−シアリルペンタオースb、フコシル−ラクト−N−シアリルペンタオースc、フコシル−ラクト−N−シアリルペンタオースc、ジシアリル−ラクト−N−フコペンタオース、3−フコシル−3’−シアリルラクトース、3−フコシル−6’−シアリルラクトース、ラクト−N−ネオジフコヘキサオースI、3’−シアリルラクトース(3−SL)、6’−シアリルラクトース(6−SL)、シアリルラクト−N−テトラオースa(LST−a)、シアリルラクト−N−テトラオースb(LST−b)、シアリルラクト−N−テトラオースc(LST−c)、およびジシアリルラクト−N−テトラオースからなる群より選択されるHMOである。
用語「遺伝子操作された」は、本明細書において、分子生物学の方法を用いた、細胞の遺伝子構成の修飾を指す。細胞の遺伝子構成の修飾には、種境界内のおよび/または種境界を渡る遺伝子のトランスファー、ヌクレオチド、トリプレット、遺伝子、オープンリーディングフレーム、プロモーター、エンハンサー、ターミネーターおよび遺伝子発現を仲介しそして/または調節する他のヌクレオチド配列の挿入、欠失、置換および/または修飾が含まれてもよい。細胞の遺伝子構成の修飾は、特定の所望の特性を所持する遺伝子修飾された生物を生成することを目的とする。遺伝子操作された微生物宿主細胞は、細胞の天然(遺伝子操作されていない)型には存在しない、1つまたはそれより多い遺伝子を含有してもよい。細胞の遺伝情報のヌクレオチド配列に挿入するか、該配列から欠失させるかまたは該配列を改変するため、細胞の遺伝情報内に外因性核酸分子を導入し、そして/または外因性核酸分子(組換え、異種)を挿入するための技術が、当業者に知られる。遺伝子操作された細胞は、細胞の天然型に存在する1つまたはそれより多い遺伝子を含有してもよく、ここで、前記遺伝子は、人工的手段によって修飾され、そして細胞内に再導入される。用語「遺伝子操作された」はまた、細胞に内因性である核酸分子を含有し、そして細胞から核酸分子を除去することなく修飾されている、細胞もまた含む。こうした修飾には、遺伝子置換、部位特異的突然変異、および「遺伝子編集」と一般的に称されるものを含めた関連技術によって得られるものが含まれる。
さらなるおよび/または代替態様において、原核細胞は、細菌細胞、好ましくは、バチルス属(Bacillus)、ビフィドバクテリウム属(Bifidobacterium)、クロストリジウム属(Clostridium)、コリネバクテリウム属(Corynebacterium)、エンテロコッカス属(Enterococcus)、ラクトバチルス属(Lactobacillus)、ラクトコッカス属(Lactococcus)、ミクロコッカス属(Micrococcus)、ミクロモノスポラ属(Micromonospora)、シュードモナス属(Pseudomonas)、ロードコッカス属(Rhodococcus)およびスポロラクトバチルス属(Sporolactobacillus)からなる群より選択される属の細菌より選択される細菌細胞である。適切な細菌種は、枯草菌(Bacillus subtilis)、B.リケニフォルミス(B. licheniformis)、B.コアグランス(B. coagulans)、B.サーモフィルス(B. thermophilus)、B.ラテロスポルス(B. laterosporus)、B.メガテリウム(B. megaterium)、B.ミコイデス(B. mycoides)、B.プミルス(B. pumilus)、B.レントゥス(B. lentus)、セレウス菌(B. cereus)、B.シルクランス(B. circulans)、ビフィドバクテリウム・ロングム(Bifidobacterium longum)、B.インファンティス(B. infantis)、ビフィズス菌(B. bifidum)、シトロバクター・フロインディ(Citrobacter freundii)、クロストリジウム・セルロリティクム(Clostridium cellulolyticum)、C.ルジュングダーリー(C. ljungdahlii)、C.アウトエタノゲヌム(C. autoethanogenum)、C.アセトブチリクム(C. acetobutylicum)、コリネバクテリウム・グルタミクム(Corynebacterium glutamicum)、フェカリス菌(Enterococcus faecium)、E.サーモフィレス(E. thermophiles)、大腸菌(Escherichia coli)、エルウィニア・ヘルビコラ(Erwinia herbicola)(パントエア・アグロメランス(Pantoea agglomerans))、アシドフィルス菌(Lactobacillus acidophilus)、L.サリバリウス(L. salivarius)、L.プランタルム(L. plantarum)、L.ヘルベティクス(L. helveticus)、L.デルブルエッキー(L. delbrueckii)、L.ラムノスス(L. rhamnosus)、L.ブルガリクス(L. bulgaricus)、L.クリスパトゥス(L. crispatus)、ガセリ菌(L. gasseri)、カゼイ菌(L. casei)、ロイテリ菌(L. reuteri)、L.ジェンセニ(L. jensenii)、L.ラクティス(L. lactis)、パントエア・シトレア(Pantoea citrea)、ペクトバクテリウム・カロトボルム(Pectobacterium carotovorum)、プロピオニバクテリウム・フロイデンライヒ(Proprionibacterium freudenreichii)、シュードモナス・フルオレセンス(Pseudomonas fluorescens)、緑膿菌(P. aeruginosa)、ストレプトコッカス・サーモフィレス(Streptococcus thermophiles)およびキサントモナス・カンペストリス(Xanthomonas campestris)である。
さらなるおよび/または代替態様において、異種グリコシダーゼは、α−1,2−フコシダーゼおよびα−1,3−フコシダーゼを含むフコシダーゼ、シアリダーゼ、例えばα−2,3−シアリダーゼ、α−2,6−シアリダーゼ、α−2,8−シアリダーゼ、ガラクトシダーゼ、例えばβ−1,3−ガラクトシダーゼ、β−1,4−ガラクトシダーゼおよびβ−1,6−ガラクトシダーゼ、β−N−アセチルヘキソサミニダーゼ、ならびにグルコシダーゼ、例えばβ−1,3―グルコシダーゼからなる群より選択される。
−配列番号1に示されるようなヌクレオチド配列;
−配列番号1に示されるようなヌクレオチド配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列;
−配列番号1に示されるようなヌクレオチド配列に、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%または99%の配列同一性を有するヌクレオチド配列;
−配列番号2に示されるようなアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列;および
−配列番号2に示されるようなポリペプチド配列の機能的変異体をコードするヌクレオチド配列であって、機能的変異体のアミノ酸配列が、配列番号2に示されるようなアミノ酸配列に、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%または99%の配列同一性を有する、前記ヌクレオチド配列
からなる群より選択されるヌクレオチド配列である。
別の適切なフコシダーゼは、α−1,3−フコシダーゼである。α−1,3−フコシダーゼは、α−1,3−連結L−フコピラノシル残基のオリゴ糖からの加水分解を触媒する非常に特異的なグリコシダーゼである。好ましいα−1,3−フコシダーゼは、ビフィズス菌由来のAfcB(配列番号4)である。
−配列番号3に示されるようなヌクレオチド配列;
−配列番号3に示されるようなヌクレオチド配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列;
−配列番号3に示されるようなヌクレオチド配列に、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%または99%の配列同一性を有するヌクレオチド配列;
−配列番号4に示されるようなアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列;および
−配列番号4に示されるようなポリペプチド配列の機能的変異体をコードするヌクレオチド配列であって、機能的変異体のアミノ酸配列が、配列番号4に示されるようなアミノ酸配列に、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%または99%の配列同一性を有する、前記ヌクレオチド配列
からなる群より選択されるヌクレオチド配列である。
−配列番号3に示されるようなヌクレオチド配列;
−配列番号3に示されるようなヌクレオチド配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列;
−配列番号3に示されるようなヌクレオチド配列に、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%または99%の配列同一性を有するヌクレオチド配列;
−配列番号4に示されるようなアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列;および
−配列番号4に示されるようなポリペプチド配列の機能的変異体をコードするヌクレオチド配列であって、機能的変異体のアミノ酸配列が、配列番号4に示されるようなアミノ酸配列に、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%または99%の配列同一性を有する、前記ヌクレオチド配列
からなる群より選択されるヌクレオチド配列である。
−配列番号5に示されるようなヌクレオチド配列;
−配列番号5に示されるようなヌクレオチド配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列;
−配列番号5に示されるようなヌクレオチド配列に、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%または99%の配列同一性を有するヌクレオチド配列;
−配列番号6に示されるようなアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列;および
−配列番号6に示されるようなポリペプチド配列の機能的変異体をコードするヌクレオチド配列であって、機能的変異体のアミノ酸配列が、配列番号6に示されるようなアミノ酸配列に、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%または99%の配列同一性を有する、前記ヌクレオチド配列
からなる群より選択されるヌクレオチド配列である。
−配列番号7に示されるようなヌクレオチド配列;
−配列番号7に示されるようなヌクレオチド配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列;
−配列番号7に示されるようなヌクレオチド配列に、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%または99%の配列同一性を有するヌクレオチド配列;
−配列番号8に示されるようなアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列;および
−配列番号8に示されるようなポリペプチド配列の機能的変異体をコードするヌクレオチド配列であって、機能的変異体のアミノ酸配列が、配列番号8に示されるようなアミノ酸配列に、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%または99%の配列同一性を有する、前記ヌクレオチド配列
からなる群より選択されるヌクレオチド配列である。
−配列番号9に示されるようなヌクレオチド配列;
−配列番号9に示されるようなヌクレオチド配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列;
−配列番号9に示されるようなヌクレオチド配列に、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%または99%の配列同一性を有するヌクレオチド配列;
−配列番号10に示されるようなアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列;および
−配列番号10に示されるようなポリペプチド配列の機能的変異体をコードするヌクレオチド配列であって、機能的変異体のアミノ酸配列が、配列番号10に示されるようなアミノ酸配列に、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%または99%の配列同一性を有する、前記ヌクレオチド配列
からなる群より選択されるヌクレオチド配列である。
−配列番号11に示されるようなヌクレオチド配列;
−配列番号11に示されるようなヌクレオチド配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列;
−配列番号11に示されるようなヌクレオチド配列に、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%または99%の配列同一性を有するヌクレオチド配列;
−配列番号12に示されるようなアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列;および
−配列番号12に示されるようなポリペプチド配列の機能的変異体をコードするヌクレオチド配列であって、機能的変異体のアミノ酸配列が、配列番号10に示されるようなアミノ酸配列に、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%または99%の配列同一性を有する、前記ヌクレオチド配列
からなる群より選択されるヌクレオチド配列である。
栄養組成物は、薬用組成物、食餌組成物、乳児用調製乳等である。
大腸菌BL21(DE3)(Novagen)を、2’−FL産生のため、宿主株の構築のための親株として用いた。親株の遺伝子操作には、遺伝子破壊および欠失事象、ならびに異種遺伝子の組込みが含まれた。
2’−フコシルラクトース産生のための株Aを用いた流加培養法によって、培養ブロスにおける副産物(3−フコシルラクトースおよび2’3−ジフコシルラクトース)の存在が明らかになった。これらの副産物の産生を最小限にするとともに、炭素収量を改善するため、α−1,3−フコシダーゼを恒常的プロモーターの後ろにサブクローニングし、そして株Aのゲノム内に組み込んだ。したがって、ビフィズス菌のafcB遺伝子(寄託番号AB474964)を恒常性Pandプロモーターおよびゲンタマイシン耐性遺伝子に融合させた。マリナー様要素Himar1トランスポザーゼが特異的に認識する末端逆位配列が隣接する、生じたトランスポゾンカセット<Pand−afcB−lox−aacC1−lox>(配列番号20)を、pEcomar afcB−aacC1から大腸菌ゲノム内に挿入して、「株B」を生成した。
HPLC系(Shimadzu、ドイツ)に連結された示差屈折率検出器(RID−10A)(Shimadzu、ドイツ)およびWaters XBridgeアミドカラム3.5μm(250x4.6mm)(Eschborn、ドイツ)を用いて、HPLCによる分析を行った。溶出剤として、30%A:ddH2O中、50%(v/v)ACN、0.1%(v/v)NH4OHおよび70%B:ddH2O中、80%(v/v)ACN、0.1%(v/v)NH4OH(v/v)を用い、35℃および1.4ml・min−1の流速で、溶出を均一濃度で行った。HPLC試料を無菌濾過(0.22μm孔サイズ)し、そしてイオン交換マトリックス(Strata ABW、Phenomenex)上で固相抽出によって清澄化した。10μlの試料をカラムに適用し、そして標準曲線にしたがって2’−フコシルラクトース濃度を計算した。L−フコースおよび/または他の単糖、ラクトースおよび/または他の二糖、3−フコシルラクトースおよび/または他の三糖、2’3−ジフコシルラクトースおよび/または他の四糖、ならびにグリセロールのような他の糖もまた、これらの分析条件を用いて検出可能である。クロマトグラム中のすべてのピークのAUC(曲線下面積)を比較することによって、検出された糖の相対量を決定することができる。水対照中にもやはり存在するピークは、この計算から除外される。
3g/L KH2PO4、12g/L K2HPO4、5g/L(NH4)2SO4、0.3g/Lクエン酸、2g/L MgSO4x7・H2O、0.1g/L NaClおよび0.015g/L CaCl2x6・H2Oを含有し、1g/L微量元素溶液(54.4g・L−1クエン酸第二鉄アンモニウム、9.8g/L MnCl2x4・H2O、1.6g/L CoCl2x6・H2O、1g/L CuCl2x2・H2O、1.9g/L H3BO3、9g/L ZnSO4x7・H2O、1.1g/L Na2MoO4x2・H2O、1.5g/L Na2SeO3、1.5g/L NiSO4x6・H2O)を補充され、そして炭素供給源としての2%(v/v)グリセロール、60mMラクトースおよび抗生物質カナマイシン(25μg/mL)を含有する、1000mL無機塩培地で出発して、3L発酵装置(New Brunswick、米国エジソン)中、33℃で発酵を行った。3L/分で通気を維持した。攪拌速度を調節することによって、溶解酸素を20〜30%飽和で維持した。25%アンモニア溶液を添加することによって、pHを7.0に維持した。培地を含有するがラクトースを欠く同じグリセロール中で培養したプレ培養からの2.5%(v/v)接種で培養を開始した。溶解酸素レベルの上昇によって示されるように、バッチ期を離れた後、出発体積を参照して、7.0〜8.0mL/hの流速で、グリセロール供給(60%(v/v)、2g/L MgSO4x7・H2O、0.015g/L CaCl2x6・H2Oおよび1mL/L微量元素溶液を補充)を行った。培養全体で、ラクトース供給(0.66M)を行い、そして培養ブロス中の一定のラクトース供給を達成するため、これを直感的に(intuitively)調節した。発酵終了に向けてラクトース供給を停止し、そしてラクトースが完全に2’−フコシルラクトースに変換されるまで培養を続けた。発酵装置に接種したおよそ94時間後、実施例1で記載した株(株A)を用いた際、細胞培地中の2’−フコシルラクトース力価は約150g/Lに到達した。実施例2に記載するように遺伝子修飾した2’−フコシルラクトース産生株(株B)を比較として培養し、そしてこれもまた、約150g/Lの2’−フコシルラクトース力価を生じた。しかし、副産物の量は、株Aを培養した後よりも有意に低かった(表2)。株Aの培養上清中の糖含量は、2’−フコシルラクトース94.22%しか構成しなかったが、株Bの培養上清中では5.50%増加し、99.72%の純度を示した。
Claims (15)
- 遺伝子操作された微生物宿主細胞を用いて、所望のオリゴ糖を産生するための方法であって:
(i)所望のオリゴ糖を産生可能であり、所望のオリゴ糖の細胞内生合成中に生成される代謝性糖副産物を細胞内で分解可能である少なくとも1つの異種グリコシダーゼを発現するように遺伝子操作されており、そして所望のオリゴ糖の産生のために前記グリコシダーゼの酵素活性から生じる分解産物をリサイクル可能である、遺伝子操作された微生物宿主細胞を提供し;
(ii)所望のオリゴ糖の産生を許容する条件下および培地中で、遺伝子操作された微生物宿主細胞を培養し、それによって所望のオリゴ糖を産生し;そして
(iii)随意に、所望のオリゴ糖を回収する
工程を含む、前記方法。 - 所望のオリゴ糖を産生するための遺伝子操作された微生物宿主細胞であって
a)所望のオリゴ糖を産生可能であり;
b)所望のオリゴ糖の細胞内生合成中に生成される代謝性糖副産物を細胞内で分解可能である少なくとも1つの異種グリコシダーゼを発現するように遺伝子操作されており;そして
c)所望のオリゴ糖の産生のために前記グリコシダーゼの酵素活性から生じる分解産物をリサイクル可能である
前記微生物宿主細胞。 - 異種グリコシダーゼが、フコシダーゼ、シアリダーゼ、ヘキソサミニダーゼ、ガラクトシダーゼおよびグルコシダーゼからなる群より選択される、請求項1記載の方法または請求項2記載の遺伝子操作された微生物宿主細胞。
- 異種グリコシダーゼが、α−1,2−フコシダーゼ、α−1,3−フコシダーゼ、α−2,3−シアリダーゼ、α−2,6−シアリダーゼ、α−2,8−シアリダーゼ、β−1,3−ガラクトシダーゼ、β−1,4−ガラクトシダーゼ、β−1,6−ガラクトシダーゼ、β−N−アセチルヘキソサミニダーゼおよびβ−1,3−グルコシダーゼからなる群より選択される、請求項1〜3のいずれか一項記載の方法または遺伝子操作された微生物宿主細胞。
- 遺伝子操作された微生物宿主細胞が、好ましくは、フコシルトランスフェラーゼ、シアリルトランスフェラーゼ、ガラクトシルトランスフェラーゼ、N−アセチル−グルコサミニルトランスフェラーゼおよびグルコシルトランスフェラーゼからなる群より選択されるグリコシルトランスフェラーゼとして、異種グリコシルトランスフェラーゼを発現するように遺伝子操作されている、請求項1〜4のいずれか一項記載の方法または遺伝子操作された微生物宿主細胞。
- 微生物宿主細胞が、異種α−1,3−フコシルトランスフェラーゼおよび異種α−1,2−フコシダーゼを発現するように遺伝子操作されている、請求項1〜5のいずれか一項記載の方法または遺伝子操作された微生物宿主細胞。
- 微生物宿主細胞が、異種α−1,2−フコシルトランスフェラーゼおよび異種α−1,3−フコシダーゼを発現するように遺伝子操作されている、請求項1〜5のいずれか一項記載の方法または遺伝子操作された微生物宿主細胞。
- 微生物宿主細胞が、異種β−1,3−N−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、異種α−1,2−フコシルトランスフェラーゼ、異種β−1,3−ガラクトシルトランスフェラーゼおよび異種α−1,3−フコシダーゼを発現するように遺伝子操作されている、請求項1〜5のいずれか一項記載の方法または遺伝子操作された微生物宿主細胞。
- 微生物宿主細胞が、異種α−2,6−シアリルトランスフェラーゼおよび異種α−2,3−シアリダーゼを発現するように遺伝子操作されている、請求項1〜5のいずれか一項記載の方法または遺伝子操作された微生物宿主細胞。
- 微生物宿主細胞が、異種β−1,3−N−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、異種β−1,4−ガラクトシルトランスフェラーゼおよび異種β1,3−ガラクトシダーゼおよび/またはβ−1,3−グルコシダーゼおよび/またはガラクタン−β−1,3−ガラクトシダーゼを発現するように遺伝子操作されている、請求項1〜5のいずれか一項記載の方法または遺伝子操作された微生物宿主細胞。
- 微生物宿主細胞が、異種β−1,3−N−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、異種β−1,3−ガラクトシルトランスフェラーゼおよび異種β−1,3−グルコシダーゼおよび/またはガラクタン−β−1,3−ガラクトシダーゼを発現するように遺伝子操作されている、請求項1〜5のいずれか一項記載の方法または遺伝子操作された微生物宿主細胞。
- 所望のオリゴ糖が、ヒト母乳オリゴ糖、好ましくは2’−フコシルラクトース(2’−FL)、3−フコシルラクトース(3−FL)、2’,3−ジフコシルラクトース、ラクト−N−トリオースII、ラクト−N−テトラオース、ラクト−N−ネオテトラオース、ラクト−N−フコペンタオースI、ラクト−N−ネオフコペンタオースI、ラクト−N−フコペンタオースII、ラクト−N−フコペンタオースIII、ラクト−N−フコペンタオースV、ラクト−N−ネオフコペンタオースV、ラクト−N−ジフコヘキサオースI、ラクト−N−ジフコシルヘキサオースII、パラ−ラクト−N−フコシル−ヘキサオース、フコシル−ラクト−N−シアリルペンタオースb、フコシル−ラクト−N−シアリルペンタオースc、フコシル−ラクト−N−シアリルペンタオースc、ジシアリル−ラクト−N−フコペンタオース、3−フコシル−3’−シアリルラクトース、3−フコシル−6’−シアリルラクトース、ラクト−N−ネオジフコヘキサオースI、3’−シアリルラクトース、6’−シアリルラクトース、シアリルラクト−N−テトラオースa(LST−a)、シアリルラクト−N−テトラオースb(LST−b)、シアリルラクト−N−テトラオースc(LST−c)、およびジシアリルラクト−N−テトラオースからなる群より選択される、ヒト母乳オリゴ糖である、請求項1〜11のいずれか一項記載の方法または遺伝子操作された微生物宿主細胞。
- 所望のオリゴ糖、好ましくはHMOの群より選択されるオリゴ糖の産生のための、請求項2〜12のいずれか一項記載の遺伝子操作された微生物宿主細胞の使用。
- 栄養組成物の製造のための、請求項1〜12のいずれか一項記載の方法によってまたは遺伝子操作された微生物宿主細胞の使用によって、産生されるオリゴ糖、好ましくはHMOの群より選択されるオリゴ糖。
- 請求項1〜12のいずれか一項記載の方法によってまたは遺伝子操作された微生物宿主細胞の使用によって産生される少なくとも1つのオリゴ糖を含有する、栄養組成物であって、少なくとも1つのオリゴ糖が好ましくはHMOである、前記栄養組成物。
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