JP2021512154A - ［１，２，４］トリアゾロ［４、３−ａ］ピラジン−８−オン誘導体 - Google Patents

Abstract

本発明は、ＰＤＥ１阻害剤としての使用のための、式Ｉ：【化１】（式中、Ｒ１は、メチル、エチルまたはシクロプロピルであり；Ｒ２は、水素、メチル、またはエチルであり；Ｒ３は、メチルまたは【化２】であり、Ｒ４は、Ｃ２−Ｃ４アルキル、【化３】である）の化合物、またはその薬理学的に許容可能な塩を提供する。【選択図】なし

Description

本発明は特定のヒトＰＤＥ１阻害剤、組成物を含む医薬組成物、化合物を用いて生理的障害を治療する化合物の使用方法、および化合物の合成において有用な中間体およびプロセスに関する。

ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）は、環状ヌクレオチドが加水分化される速度を制御することにより、ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰの細胞レベルを調節する酵素である。ＰＤＥ１、カルシウムおよびカルモジュリン依存性ＰＤＥは公知のＰＤＥファミリーの少なくとも１１の一つである。ＰＤＥ１は、脳、心臓、肺、腎臓および平滑筋を含む多くの組織で発現される。ＰＤＥ１は、三つの公知のアイソフォーム、ＰＤＥ１Ａ、ＰＤＥ１Ｂ、およびＰＤＥ１Ｃからなる。

糖尿病を罹患する患者は多くの場合、糖尿病性腎臓病（または糖尿病性腎症）と称される慢性腎臓病の一種を発症する。糖尿病性腎臓病は、糖尿病患者の４０％に影響を与え得ると推定される。糖尿病性腎臓病のための治療選択肢は限られ、血圧を下げる薬剤、血糖値、食事および体重の管理、ならびに通常の肉体的活動の実施を含む。したがって、慢性腎臓病、特に糖尿病性腎臓病に罹患する患者のための追加的な治療選択肢に対するニーズがある。

米国特許出願公開第２０１７／０２３３３９６ Ａ１は、特定の［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］キノキサリン−４−オンならびに慢性腎臓病および糖尿病性腎臓病などの特定の疾患の治療におけるその使用を開示する。ＷＯ ２０１６／０５５６１８ Ａ１は、ＰＤＥ１阻害剤としてのトリアゾロピラジノンならびに神経変性疾患および精神疾患の治療のためのその使用を開示する。

本発明は、ヒトＰＤＥ１の阻害剤である特定の新規化合物を提供する。本発明は、ＰＤＥ３Ａ、ＰＤＥ４Ｄ、およびＰＤＥ６ＡＢなどのその他のヒトＰＤＥに対する、ヒトＰＤＥ１Ａ、ＰＤＥ１Ｂ、およびＰＤＥ１Ｃの選択的阻害剤である特定の新規化合物を提供する。

したがって、本発明は式Ｉ：

（式中、Ｒ^１は、メチル、エチルまたはシクロプロピルであり；
Ｒ^２は、水素、メチル、またはエチルであり；
Ｒ^３は、メチルまたは

であり；
Ｒ^４は、Ｃ２−Ｃ４アルキル、

である）の化合物、
または、その薬理学的に許容可能な塩を提供する。

本発明はまた、有効量の式Ｉの化合物をそのような治療を必要とする患者に投与することを含む、患者における慢性腎臓病を治療する方法に関する。本発明はまた、有効量の式Ｉの化合物をそのような治療を必要とする患者に投与することを含む、患者における糖尿病性腎臓病を治療する方法に関する。本発明はまた、有効量の式Ｉの化合物をそのような治療を必要とする患者に投与することを含む、患者における高血圧症を治療する方法に関する。本発明はまた、有効量の式Ｉの化合物をそのような治療を必要とする患者に投与することを含む、患者における心不全を治療する方法に関する。

さらに、本発明は治療における使用のための式Ｉの化合物を提供する。本発明はさらに、慢性腎臓病の治療における使用のための式Ｉの化合物を提供する。さらに、本発明は糖尿病性腎臓病の治療における使用のための式Ｉの化合物を提供する。さらに、本発明は高血圧症の治療における使用のための式Ｉの化合物を提供する。本発明はまた、心不全の治療における使用のための式Ｉの化合物を提供する。さらに、本発明は慢性腎臓病の治療用薬剤の製造のための式Ｉの化合物の使用を提供する。さらに、本発明は糖尿病性腎臓病の治療用薬剤の製造のための式Ｉの化合物の使用を提供する。本発明はさらに、高血圧症の治療用薬剤の製造のための式Ｉの化合物の使用を提供する。本発明はまた、心不全の治療用薬剤の製造のための式Ｉの化合物の使用を提供する。

本発明はさらに、一つまたは複数の薬理学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤を有する式Ｉの化合物を含む医薬組成物を提供する。本発明はさらに、一つまたは複数の薬理学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤を有する式Ｉの化合物を混合することを含む、医薬組成物を調製するためのプロセスを提供する。本発明はまた式Ｉの化合物の合成のための新規中間体およびプロセスを含む。

本明細書で使用される用語「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」または「治療する（ｔｏ ｔｒｅａｔ）」は、既存の症状または障害の進行または重度を阻害する、抑制する、減速する、止める、または逆転させることを含む。

本明細書で使用される用語「患者」は、ヒトが好ましいが、イヌまたはヒトなどの哺乳類を指す。

本明細書で使用される用語「有効量」は、患者に対する単回または複数回の投与時、診断もしくは治療下の患者において望ましい効果を提供する本発明の化合物の分量もしくは用量、またはその薬理学的に許容可能な塩を指す。

本明細書で使用される用語「Ｃ２−Ｃ４アルキル」は、エチル、ｎ−プロピル、シクロプロピル、ｎ−ブチルおよびシクロブチルが好ましいが、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、シクロプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、およびシクロブチルから選択される直鎖、分枝、および環状アルキル基を指す。

有効量は公知の技術を使用して、および類似の状況下で得られた結果を観察することによって、当業者によって容易に決定され得る。患者に対する有効量の決定において、限定するものではないが、患者の大きさ、年齢、および全体的な健康、関与する特定の疾患または障害、疾患または障害の関与または重度の度合い、個別の患者の応答性、投与される特定の化合物、投与方法、投与される製剤のバイオアベイラビリティ特性、選択された投与レジメン、併用薬の使用、およびその他の関連する状況を含む、多くの要因が当業者によって考慮される。

本発明の化合物は、１日当たりの用量での有効量は、体重１ｋｇあたり約０．０１〜約２０ｍｇ／ｋｇの範囲内である。一部の例では、上述の範囲の下限以下の投与レベルは十分すぎるほどであり得、その他の場合では、許容可能な副作用を有するさらにより大きな用量が採用され得、そのため上記の用量範囲は決して本発明の範囲を限定する意図はない。

本発明の化合物は、化合物が生体利用可能となる、経口および非経口を含む任意の経路によって投与される医薬組成物として製剤化される。最も好ましくは、そのような組成物は経口投与用である。そのような医薬組成物およびそれを調製するための方法は当技術分野で周知である（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ： Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｌ．Ｖ．Ａｌｌｅｎ，Ｅｄｉｔｏｒ，２２^ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ，２０１２参照）

式Ｉの化合物は本発明の治療法において特に有用であるが、特定の基、置換基、および化合物が好ましい。以下の段落はそのような好ましい基、置換基、および化合物を説明する。これらの好ましい例は治療方法、および本発明の新しい化合物の両方に対して適用可能であることが理解されよう。

Ｒ^１はシクロプロピルであることが好ましい。

Ｒ^２はメチルであることが好ましい。

Ｒ^３はメチルであることが好ましい。

Ｒ^１はシクロプロピル、Ｒ^２はメチルであることがさらに好ましい。

Ｒ^２はメチル、Ｒ^３はメチルであることがさらに好ましい。

Ｒ^１はシクロプロピル、Ｒ^２およびＲ^３はメチルであることがさらに好ましい。

下記の化合物：

およびその薬理学的に許容可能な塩が特に好ましく、それぞれの化合物の対応する遊離塩基が最も特に好ましい。

本発明の化合物の薬理学的に許容可能な塩は、例えば、当該技術分野で周知の標準的な条件下、本発明の化合物の適切な遊離塩基と、適切な溶媒中の適切な薬理学的に許容可能な酸との反応によって形成され得る。例えば、Ｇｏｕｌｄ，Ｐ．Ｌ．，“Ｓａｌｔ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｂａｓｉｃ ｄｒｕｇｓ，”Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，３３：２０１−２１７（１９８６）；Ｂａｓｔｉｎ，Ｒ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．“Ｓａｌｔ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ ｆｏｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｎｅｗ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｔｉｔｉｅｓ，”Ｏｒｇａｎｉｃ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，４：４２７−４３５（２０００）；ａｎｄ Ｂｅｒｇｅ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ，”Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，６６：１−１９，（１９７７）参照。

個別の異性体、鏡像体、およびジアステレオマーは、本発明の化合物の合成における任意の時点で、選択的結晶化技術またはキラルクロマトグラフィー（Ｓｅｅ ｆｏｒ ｅｘａｍｐｌｅ，Ｊ．Ｊａｃｑｕｅｓ，ｅｔ ａｌ．，“Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ，Ｒａｃｅｍａｔｅｓ，ａｎｄ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ”，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，１９８１，ａｎｄ Ｅ．Ｌ．Ｅｌｉｅｌ ａｎｄ Ｓ．Ｈ．Ｗｉｌｅｎ，”Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ”，Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，１９９４）などの方法により、当業者により分離または分解され得る。呼称「異性体１」および「異性体２」は、第一および第二にそれぞれ、特定の条件下でキラルクロマトグラフィーから溶出する化合物を指す。

特定の略語は下記の通り定義される：「ＡＣＮ」はアセトニトリルを指し、「ＢＳＡ」はウシ血清アルブミンを指し、「ｃＡＭＰ」は環状アデノシン−３’，５’−一リン酸を指し、「ＣＤＩ」は１，１’−カルボニルジイミダゾールを指し、「ｃＧＭＰ」は環状グアノシン一リン酸を指し、「ＤＣＣ」は１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミドを指し、「ＤＣＭ」はジクロロメタンまたは塩化メチレンを指し、「ＤＩＣ」は１，３−ジイソプロピルカルボジイミドを指し、「ＤＩＰＥＡ」はＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを指し、「ＤＭＦ」はＮ’Ｎ−ジメチルホルムアミドを指し、「ＤＭＡＰ」はジメチルアミノピリジンを指し、「ＤＭＳＯ」はジメチルスルホキシドを指し、「ＥＤＣＩ」は１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩を指し、「ＥＤＴＡ」はエチレンジアミン四酢酸を指し、「ＥＳ／ＭＳ」はエレクトロスプレー質量分析を指し、「ＥｔＯＡｃ」は酢酸エチルを指し、「Ｅｔ_２Ｏ」はジエチルエーテルを指し、「ＥｔＯＨ」はエタノールまたはエチルアルコールを指し、「ＨＡＴＵ」は１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム ３−オキシド ヘキサフルオロホスフェートを指し、「ＨＢＴＵ」は（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）（ジメチルアミノ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルメタンイミニウムヘキサフルオロホスフェート、「ＨＩＳ」はヒスチジンを指し、「ＨＯＡｔ」は１−ヒドロキシ−７−アゾベンゾトリアゾールを指し、「ＨＯＢｔ」は１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物を指し、「ＩＣ_５０」はその薬剤で可能な最大阻害応答の５０％をもたらす薬剤の濃度を指し、「ＭｅＯＨ」はメタノールまたはメチルアルコールを指し、「ＭＴＢＥ」はメチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテルを指し、「ＮｉＮＴＡ」はキレート剤としてニトリロ三酢酸で官能化されたアガロース固定相を用いたクロマトグラフィーを指し、「ＰＤＥ」はホスホジエステラーゼを指し、「ＰｙＢＯＰ」は（ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート）を指し、「ＰｙＢｒＯＰ」はブロモ（トリ−ピロリジニル）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート、「ｔ_（Ｒ）」は保持時間を指し、「ＳＦＣ」は超臨界流体クロマトグラフィーを指し、「ＳＰＡ」はシンチレーション近接アッセイを指し、「ＴＥＡ」はトリエチルアミンを指し、「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランを指し、「Ｔｒｉｓ」は２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−プロパン−１，３−ジオールを指し、「Ｕ／ｍＬ」はミリリットル当たりの単位を指し、「ＸＰｈｏｓ Ｐｄ Ｇ２」はクロロ（２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピル−１，１’−ビフェニル）［２−（２’−アミノ−１，１’−ビフェニル）］パラジウム（ＩＩ）を指し、「ｅｅ」はエナンチオマー過剰を指す。

本発明の化合物は当業者に公知の態様な手順により調製され得、その一部が下記のスキール、調製物、および実施例に説明される。当業者は説明された経路のそれぞれのための特定の合成工程は異なる様式で組み合わされて、また異なるスキームの工程と併せて本発明の化合物を調製し得ることを認識する。各工程の生成物は、抽出、留去、析出、クロマトグラフィー、濾過、粉砕、および結晶化を含む、当業者に公知の従来的な方法により回収され得る。下記のスキームにおいて、すべての置換基は別段に示さない限り、上で定義した通りである。試薬および開始物質は当業者には容易に入手可能である。本発明の範囲を限定することなく、下記のスキーム、調製物、および実施例は本発明をさらに説明するために提供される。

スキーム１

スキーム１は、工程１に示す通り、置換されたニトリルを用いたアミン（１）のアルキル化による化合物（２）の生成を示す。シアン化トリメチルシリルは、１，２−ジメトキシエタンなどの溶媒中でアルデヒドとともにニトリル源として使用され得、アルキル化を達成するために約７０℃に加熱され得る。生成物は、酸塩として化合物（２）を単離するために、ＨＣｌなどの酸で処理され得る。代わりに、アルキル化は、ヒドロキシニトリル源を使用して完成され得、室温でＴＨＦなどの溶媒中で攪拌され、化合物（２）を生成するためにＨＣｌなどの酸により処理され得る。工程２では、化合物（２）は塩化オキサリルなどの酸塩化物を約０℃で滴下して処理し得、続いてニトリルを１，６−置換−３，５−ジクロロ−ピラジン−２−オン、化合物（３）に環化するために反応物質を５０〜１００℃に加熱し得る。工程３では、化合物（３）はその後室温にてＴＨＦなどの溶媒中でヒドラジン一水和物を用いて、またはＥｔＯＨ中で約１００℃に加熱してヒドラジドに変換し、対応する化合物（４）を生成し得る。工程４では、アミドカップリングは、適切なカルボン酸、ＤＭＦまたはＤＣＭなどの溶媒中のＤＩＰＥＡなどの有機塩基、およびＮ−［（５−クロロ−３−オキシド−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−４−モルホリニルメチレン］−Ｎ−メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートなどのカップリング剤を用いて化合物（４）で達成され得、化合物（５）を生成し得る。当業者はカルボン酸とアミンの反応から得られるアミド形成のための多くの方法および試薬があることを認識するだろう。例えば、ＤＩＰＥＡまたはＴＥＡなど有機塩基あり／なしで、カップリング試薬の存在下、適切なカルボン酸とのアミン化合物を反応させることにより工程４の化合物を生成し得る。カップリング試薬は、ＤＣＣ、ＤＩＣ，ＥＤＣＩまたはＣＤＩなどのカルボニルジイミダゾールなどのカルボジイミドを含む。ＨＯＢｔおよびＨＯＡｔなどのアミドカップリング添加剤はまた、反応を強化するために使用され得る。さらに、ＨＢＴＵ、ＨＡＴＵ，ＰｙＢＯＰ、およびＰｙＢｒＯＰなどの非求核性アニオンのウロニウムまたはホスホニウム塩をより従来的なカップリング試薬の代わりに使用され得る。ＤＭＡＰなどの添加剤が反応を強化するために使用され得る。代わりに、化合物（４）を、ＴＥＡまたはピリジンなどの塩基の存在下、適切な酸塩化物を使用してアシル化し、化合物（５）を生成し得る。工程５では、化合物（５）を塩基性または酸性条件下、トリアゾール（６）に環化し得る。例えば、化合物（５）をＴＥＡなどの塩基および塩化チオニルを用いて１，４−ジオキサンなどの溶媒中で処理し、閉鎖システムで約８０℃に加熱することにより、トリアゾール（６）を生成し得る。代わりに、ヘキサメチルジシラザンを塩基として使用し得、反応物質は約１２０℃に加熱し得る。室温に冷却した後、ＭｅＯＨを添加して環化を促進させ得る。代わりに、マイクロ波条件下、温度約１３０℃にて、酢酸などの酸を使用して酸性条件下で化合物（５）をトリアゾールに環化してトリアゾール（６）を生成し得る。工程６では、二つの反応が達成され得る。化合物（６）の５−クロロ置換基を置換して、水素のＲ^２置換基を生成し、Ｒ^３は、炭酸カリウムなどの塩基、適切なボロン酸試薬、およびビス−（ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィノ）フェロセンパラジウムジクロリドなどのパラジウム触媒を用いて、さらにスズキパラジウムクロスカップリング条件下さらに官能化され得る。反応物質を、ＤＭＦなどの溶媒中で温度約１２０℃で加熱し、式Ｉの化合物を生成し得る。当業者はそのようなクロスカップリング反応を促進するために有用な、多様な条件があることを認識するだろう。適切なパラジウム試薬は、ＸＰｈｏｓ Ｐｄ Ｇｅｎ ２、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロリド、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）とトリシクロヘキシルホスフィン、（１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン）パラジウム（ＩＩ）クロリド、パラジウムテトラキストリフェニルホスフィン、または酢酸パラジウム（ＩＩ）を含む。適切な塩基は、炭酸セシウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、リチウムｔｅｒｔ−ブトキシド、またはリン酸カリウム三塩基酸一水和物を含む。

スキーム２

スキーム２、工程１では、スキーム１で調製された通り、化合物（３）の３−クロロ置換基を、ＭｅＯＨなどの溶媒中、約０℃でナトリウムメトキシドを用いてメトキシと置換し、化合物（７）を生成し得る。工程２では、化合物（７）の５−クロロ置換基をその後、［１，３−ビス（ジフェニルホスフィノ）プロパン］ジクロロニッケル（ＩＩ）などの溶媒およびヘキサンなどの溶媒中の適切な亜鉛試薬などを用い、約８０℃まで加熱することによる、ネギシクロスカップリング反応においてＲ^２の置換基に官能化され、化合物（８）を生成し得る。当業者は、遷移金属触媒クロスカップリングを含むネギシカップリングに精通しているであろう。反応は、有機ハロゲン化物またはトリフレートを有機亜鉛化合物と結合させ、炭素−炭素結合を形成する。パラジウム（０）種は金属触媒として一般に使用されるが、ニッケル触媒もまた上述の通り利用され得る。工程３では、三臭化ホウ素などの強いルイス酸が、ヒドロキシを脱保護し、２，３−ジオンの化合物（９）を生成するために使用され得る。工程４では、触媒量のＤＭＦ中、塩化チオニルおよび塩化オキサリルなどの塩素源を用いて２位のケトンが選択的に塩素化され、化合物（１０）を生成し得る。工程５では、化合物（１０）のクロロ置換基がその後、ＴＨＦなどの溶媒中、約１００℃に加熱されて、適切なカルボヒドラジドで置換され、化合物（１１）を生成し得る。工程６では、化合物（１１）がその後、スキーム１、工程５に記載される通り、環化されて式Ｉの化合物を生成し得る。

スキーム３

スキーム３、工程１では、置換された２，３−ジクロロピラジン（１２）の２−クロロ置換基が、スキーム１、工程３に類似した方式で化合物（１３）に変換され得る。スキーム３、工程２では、化合物（１３）が、ＨＡＴＵなどのカップリング剤を用いてＤＣＭなどの溶媒中のＤＩＰＥＡなどの塩基を使用したアミドカップリングにより、スキーム１、工程４に類似した方式で化合物（１４）に変換され得る。スキーム３、工程３では、化合物（１４）が、スキーム１、工程５に類似した方式で環化され、化合物（１５）を生成し得る。スキーム３、工程４では、ピラジンアミドの窒素、化合物（１５）が、ＤＭＦなどの溶媒中、リチウムビス（トリメチルシリル）アミドなどの強い非求核塩基を使用し、ヨウ化カリウムが求核触媒として作用して、Ｒ^４ハライドでアルキル化され、式Ｉの化合物を生成し得る。代わりに、炭酸セシウムまたは水素化ナトリウムなどの他の塩基も、リチウムビス（トリメチルシリル）アミドに代替でき、混合物は室温で攪拌されるかまたは約６０〜８０℃で加熱され得る。ＤＭＳＯは他の溶媒として作用し得、求核触媒は反応成功のために必要でない場合もある。

調製１
２−（シクロプロピルメチルアミノ）プロパンニトリルヒドロクロリド

スキーム１、工程１：アセトアルデヒド（７．８９ｇ，１７９．１ｍｍｏｌ）を、０℃で１，２−ジメトキシエタン（７８．４０ｍＬ、７５６．４ｍｍｏｌ）中のシクロプロパンメチルアミン（１０．００ｇ、１３７．７ｍｍｏｌ）の溶液にゆっくりと加え、室温で３０分攪拌し、次にシアン化トリメチルシリル（２０．２９ｍＬ、１５１．５ｍｍｏｌ）を滴下した。得られた反応混合物を７０℃で４時間加熱し、室温で冷却した。反応物質を０℃に冷却し、ＨＣｌ（３７．８９３ｍＬ、１５１．５７０ｍｍｏｌ）をＮ_２雰囲気下で滴下した。得られた沈殿物を濾過し、エーテル（２００ｍＬ）で洗浄し、表題化合物（２２．３１ｇ、９７％）を生成した。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ １１．０８−１１．０４（ｂｓ，１Ｈ），４．４２（ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），３．１９（ｄｄ，Ｊ＝７．１，１３．０Ｈｚ，１Ｈ），２．９７（ｄｄ，Ｊ＝７．８，１２．７Ｈｚ，１Ｈ），１．９５（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ），１．３７−１．２９（ｍ，１Ｈ），０．８１−０．７３（ｍ，２Ｈ），０．５８−０．５２（ｍ，２Ｈ）。

調製２
２−（ブチルアミノ）プロパンニトリル；ヒドロクロリド

スキーム１、工程１：ブチルアミンの溶液（６．７７ｍＬ、６８．４ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（６８．４ｍＬ）中の２−ヒドロキシプロパンニトリル（７．３９ｍＬ、１０３ｍｍｏｌ）を室温で一夜攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、Ｅｔ_２Ｏで希釈し、ＨＣｌ（Ｅｔ_２Ｏ中、６８ｍＬ、１．０ｍｏｌ／Ｌ）を滴下した。固体が形成され、濾過により収集して表題化合物（９．６７ｇ、８６．９％）を生成する。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｄ_６−ＤＭＳＯ）δ ９．９６（ｂｒ ｓ，２Ｈ），４．６２（ｂｒ ｓ，１Ｈ），２．９６（ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），１．６４−１．５６（ｍ，５Ｈ），１．３９−１．３０（ｍ，２Ｈ），０．８８５（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）。

調製３
１−シクロプロピルシクロプロパンカルボヒドラジドヒドロクロリド

１−シクロプロピルシクロプロパンカルボン酸（９．６３ｇ、７６．３ｍｍｏｌ）、およびＤＭＦ（３００ｍＬ）中のＨＡＴＵ（３２．３ｇ、８３．２ｍｍｏｌ）の攪拌した溶液に、ｔｅｒｔ−ブチルカルバゼート（５．００ｇ、３７．８ｍｍｏｌ）、次いでＤＩＰＥＡ（１４．５ｍＬ、８３．１ｍｍｏｌ）を加え、反応物質は室温で５日間攪拌される。反応物質はＥｔＯＡｃで希釈され、１．０Ｎ ＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ_３、および水で洗浄した。有機層を単離し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過して、減圧下で濃縮した。１，４−ジオキサン（５０ｍＬ）を残渣に加え、１，４−ジオキサン（１００ｍＬ、４００ｍｍｏｌ）中のＨＣｌ（４ｍｏｌ／Ｌ）を２０分間にわたって加え、反応物質を室温で１時間攪拌した。溶液を濾過し、濾過ケークをＭＴＢＥで洗浄し、減圧下で乾燥して表題化合物（８．０１ｇ、５８．７％）を生成した。ＭＳ（ｍ／ｚ）１４１（Ｍ＋Ｈ）。

調製４
（１−メチルシクロプロピル）メチルメタンスルホナート

ＤＣＭ（３０ｍＬ）中の（１−メチルシクロプロピル）メタノール（５００ｍｇ、５．８０５ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（０．８９ｍＬ、６．３９ｍｍｏｌ）の攪拌された溶液を、氷／水浴中で０℃に冷却した。メタンスルホニルクロリド（０．５ｍＬ、６．４６ｍｍｏｌ）をシリンジで滴下した。反応混合物を室温に戻し、その後１時間攪拌した。反応物質を飽和ＮａＨＣＯ_３で希釈し、ＤＣＭで抽出した。有機物を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して表題化合物（１．００ｇ、９４％）を生成した。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｄ_６−ＤＭＳＯ）δ ３．９７（ｓ，２Ｈ），３．１１（ｓ，３Ｈ），１．０９（ｓ，３Ｈ），０．５３４−０．５０９（ｍ，２Ｈ），０．４０４−０．３７８（ｍ，２Ｈ）。

調製５
３，５−ジクロロ−１−（シクロプロピルメチル）−６−メチル−ピラジン−２−オン

スキーム１、工程２：１，２−ジメトキシエタン（２１６．４１ｍＬ；２．０９モル）中の２−（シクロプロピルメチルアミノ）プロパンニトリル；ヒドロクロリド（２２．３１ｇ、１３４．７１ｍｍｏｌ）の溶液を０℃に冷却し、Ｎ_２雰囲気下、塩化オキサリル（２３．３７ｍＬ、２６９．４２ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物をその後室温まで戻し、１００℃で６時間加熱した。反応物質を室温に冷却して、一夜攪拌した。減圧下、過剰な塩化オキサリルを除去した。混合物を飽和重炭酸溶液（１００ｍＬ）で中和し、ＥｔＯＡｃ（３ｘ３５０ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を合わせて、食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して原料を生成した。残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで精製し、ＥｔＯＡｃ：ヘキサンで溶出して表題化合物（２１．３３ｇ、６７．９３％）を生成した。ＭＳ（ｍ／ｚ）２３５（Ｍ＋Ｈ）．

調製６
１−ブチル−３，５−ジクロロ−６−メチル−ピラジン−２−オン

スキーム１、工程２：トルエン（３００ｍＬ）中の２−（ブチルアミノ）プロパンニトリルヒドロクロリド（９．６７ｇ、５９．４ｍｍｏｌ）の攪拌した懸濁液を、氷／水浴中で０℃に冷却した。塩化オキサリル（２６．０ｍＬ，２９９．７ｍｍｏｌ）を滴下した。反応物質を５５℃で１６時間攪拌し、室温に冷却し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカのフラッシュクロマトグラフィーで精製し、ヘキサン中の０〜２０％ ＥｔＯＡｃで溶出して表題化合物（１４．９３ｇ，＞９９％）を生成した。ＭＳ（ｍ／ｚ）２３５（Ｍ＋Ｈ）。

調製７
１−ブチル−５−クロロ−３−メトキシ−６−メチル−ピラジン−２−オン

スキーム２、工程１：ＭｅＯＨ（１５ｍＬ）中の１−ブチル−３，５−ジクロロ−６−メチル−ピラジン−２−オン（１２．６１ｇ，５０．４２ｍｍｏｌ）の攪拌された溶液を、氷／水浴中で０℃に冷却した。ナトリウムメトキシド（ＭｅＯＨ中、１５ｍＬ，６７ｍｍｏｌ，２５質量％）を加え、混合物を２０分攪拌した。反応物質を水で希釈し、濾過により固形物を収集し、減圧下で乾燥し、表題化合物（９．３９ｇ，８０．８％）を生成した。ＭＳ（ｍ／ｚ）２３１（Ｍ＋Ｈ）．

調製８
１−ブチル−５−エチル−３−メトキシ−６−メチル−ピラジン−２−オン

スキーム２、工程２：１−ブチル−５−クロロ−３−メトキシ−６−メチル−ピラジン−２−オン（５００ｍｇ，２．１６ｍｍｏｌ）および［１，３−ビス（ジフェニルホスフィノ）プロパン］ジクロロニッケル（ＩＩ）（１２０ｍｇ，０．２２１ｍｍｏｌ）を薬瓶中で合わせる。バイアルはＮ_２下で密封され、ＴＨＦ（５．５ｍＬ）およびジエチル亜鉛（ヘキサン中、６．５ｍＬ，６．５ｍｍｏｌ，１ｍｏｌ／Ｌ）を加え、反応物質を８０℃で一夜攪拌した。反応物質を室温に冷却し、同じ方法で本質的に調製した物質（５０ｍｇスケール反応物質）と合わせ、珪藻土で濾過した。珪藻土はＭＴＢＥおよび水で洗浄し、炉液を収集した。水性物質をＭＴＢＥ（２ｘ）で抽出し、合わされた有機物を食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカのフラッシュクロマトグラフィーで精製し、ヘキサン中の０〜７０％ ＥｔＯＡｃで溶出して表題化合物（３４３．１ｍｇ，合計収率６４％）を生成した。ＭＳ（ｍ／ｚ）２２５（Ｍ＋Ｈ）。

調製９
４−ブチル−６−エチル−５−メチル−１Ｈ−ピラジン−２，３−ジオン

スキーム２、工程３：ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の１−ブチル−５−エチル−３
−メトキシ−６−メチル−ピラジン−２−オン（３４３．１ｍｇ，１．５３ｍｍｏｌ）の攪拌された溶液を、氷／水浴中で０℃に冷却する。三臭化ホウ素（３ｍＬ，３ｍｍｏｌ，ＤＣＭ中１ｍｏｌ／Ｌ）を加え、反応物質を２時間攪拌し、その後、室温に戻して４５分間攪拌する。反応物質を飽和ＮａＨＣＯ_３で急冷し、水層をＤＣＭ（３ｘ）で抽出する。合わされた有機抽出物を食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して表題化合物（３２０．３ｍｇ，８９％）を生成する。ＭＳ（ｍ／ｚ）２１１（Ｍ＋Ｈ）。

調製１０
１−ブチル−３−クロロ−５−エチル−６−メチル−ピラジン−２−オン

スキーム２、工程４：ＤＣＭ（６ｍＬ）中の４−ブチル−６−エチル−５−メチル−１Ｈ−ピラジン−２，３−ジオン（３０１．３ｍｇ，１．２９ｍｍｏｌ）、塩化チオニル（１．０ｍＬ，１３．７３ｍｍｏｌ）、および触媒ＤＭＦ（３滴）の溶液を室温で４５分間攪拌する。追加的な塩化チオニル（１．０ｍＬ，１３．７３ｍｍｏｌ）を加え、反応物質をさらに４５分間攪拌する。反応物質を減圧下で濃縮する。残渣をトルエン中に懸濁し、減圧下で濃縮し（２ｘ）表題化合物（４７５．９ｍｇ，９６．８％，６０質量％）を生成する。ＭＳ（ｍ／ｚ）２２９（Ｍ＋Ｈ）。

調製１１
５−ジクロロ−１−（シクロプロピルメチル）−３−ヒドラジノ−６−メチル−ピラジン−２−オン

スキーム１、工程３：ヒドラジン一水和物（１５．３ｍＬ，２０１．３ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１０６．７ｍＬ，１３１１ｍｍｏｌ）中の３，５−ジクロロ−１−（シクロプロピルメチル）−６−メチル−ピラジン−２−オン（２１．３３ｇ，９１．５１ｍｍｏｌ）溶液に滴下し、０℃に冷却して、１５分攪拌し、その後室温で１６時間攪拌する。水（１００ｍＬ）を加え、混合物をＤＣＭ（３００ｍＬ）で抽出する。有機抽出物を減圧下で濃縮し、Ｅｔ_２Ｏ（１００ｍＬ）中で粉砕し、次いで濾過して生成される化合物（０．２６ｇ，８２％）である黄色固体を生成した。ＭＳ（ｍ／ｚ）２２９（Ｍ＋Ｈ）。

調製１２
Ｎ’［６−クロロ−４−（シクロプロピルメチル）−５−メチル−３−オキソ−ピラジン−２−イル］−１−シクロプロピル−シクロプロパンカルボヒドラジド

スキーム１、工程４：１−シクロプロピルシクロプロパンカルボン酸（１０．１３ｇ，８０．２８ｍｍｏｌ）を、室温にてＮ_２雰囲気下で、乾燥ＤＭＦ（４１７．３ｍＬ）中の５−クロロ−１−（シクロロプロピルメチル）−３−ヒドラジノ−６−メチル−ピラジン−２−オン（１６．６９ｇ，７２．９８ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（４２．００ｍＬ，２４０．８ｍｍｏｌ）の攪拌した溶液に加え、その後、Ｎ−［（５−クロロ−３−オキシド−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−４−モルホリニルメチレン］−Ｎ−メチルメタンアミニウム六フッ化リン酸塩（３６．５９ｇ，８０．２８ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を、室温で２時間攪拌する。水（１．４Ｌ）を反応混合物に加え、沈殿物が形成される。反応混合物を濾過し、単離した固体をＥｔ_２Ｏ（１Ｌ）で洗浄し、表題化合物を生成する（１６．０６ｇ，６５％）。ＭＳ（ｍ／ｚ）３３９（Ｍ＋Ｈ）。

調製１３
Ｎ’−（４−ブチル−６−エチル−５−メチル−３−オキソ―ピラジン−２−イル）−１−シクロプロピル−シクロプロパンカルボヒドラジド

スキーム２、工程５：１−ブチル−３−クロロ−５−エチル−６−メチル−ピラジン−２−オン（４７５．９ｍｇ、１．２５ｍｍｏｌ、６０質量％）、１−シクロプロピルシクロプロパンカルボヒドラジド；ヒドロクロリド（２２１ｍｇ、１．２５ｍｍｏｌ）、およびＴＨＦ（４ｍＬ）をマイクロ波バイアル中で合わせ、Ｎ_２下で密封し、マイクロ波条件下、１００℃で２時間攪拌する。反応物質を水で希釈し、ＤＣＭ（３ｘ）で抽出した。合わされた有機抽出物を食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して表題化合物（３２０．３ｍｇ、８９％、７０質量％）を生成する。ＭＳ（ｍ／ｚ）３３３（Ｍ＋Ｈ）。

調製１４
（３−クロロ−５，６−ジメチル−ピラジン−２−イル）ヒドラジン

スキーム３、工程１：ＥｔＯＨ（１５ｍＬ）中の２，３−ジクロロ−５，６−ジメチル−ピラジン（２．０ｇ、１１．２９８ｍｍｏｌ）およびヒドラジン（０．９４３ｍＬ、２８．２ｍｍｏｌ、９５質量％）の攪拌した水溶液を１００℃で一夜加熱する。反応混合物を減圧下で濃縮し、表題化合物（１．９４ｇ，８４．６％）を生成する。ＭＳ（ｍ／ｚ）１７３（Ｍ＋Ｈ）。

調製１５
Ｎ’−（３−クロロ−５，６−ジメチル−ピラジン−２−イル）−１−シクロプロピル−シクロプロパンカルボヒドラジド

スキーム３、工程２：（３−クロロ−５，６−ジメチル−ピラジン−２−イル）ヒドラジン（４．０８ｇ，２３．６ｍｍｏｌ）、１−シクロプロピルシクロプロパンカルボン酸（４．７７ｇ，３７．８ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１４．７ｇ，３７．９ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１４．４ｍＬ，８２．６ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１２０ｍｌ）中に溶解し、室温で４５分間攪拌する。反応混合物を水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮する。残渣をシリカのフラッシュクロマトグラフィーで精製し、ヘキサン中の０〜１００％ ＥｔＯＡｃで溶出して表題化合物（４．３７ｇ、６５．８％）を生成する。ＭＳ（ｍ／ｚ）２８０（Ｍ＋Ｈ）。

下記の化合物を調製１５の方法と本質的に類似の方式で調製する。

調製１８
５−クロロ−３−（１−シクロプロピルシクロプロピル）−７−（シクロプロピルメチル）−６−メチル−［１，２、４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−８−オン

スキーム１、工程５：Ｎ’−［６−クロロ−４−（シクロプロピルメチル）−５−メチル−３−オキソ−ピラジン−２−イル］−１−シクロプロピル−シクロプロパンカルボヒドラジド（１８．４４ｇ、５４．７５ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（５４７．５ｍＬ、６４１３ｍｍｏｌ）に加え、その後ＴＥＡ（３０．５２ｍＬ、２１９．０ｍｍｏｌ）および塩化チオニル（７．９８ｍＬ、１０９．５ｍｍｏｌ）を加える。反応器を閉鎖し、室温で３０分間攪拌し、その後８０℃で２時間加熱する。反応物質を室温に冷却し、水（１Ｌ）を加える。混合物質をＤＣＭ（２ｘ７５０ｍｌ）で抽出する。有機抽出物を合わせて、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して残渣を生成する。残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで精製し、ＥｔＯＡｃ：ヘキサンで溶出して表題化合物（９．２ｇ，５２％）を生成した。ＭＳ（ｍ／ｚ）３２１（Ｍ＋Ｈ）。

調製１９
３−（１−シクロプロピルシクロプロピル）−５，６−ジメチル−７Ｈ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−８−オン

スキーム３、工程３：Ｎ’−（３−クロロ−５，６−ジメチル−ピラジン−２−イル）−１−シクロプロピル−シクロプロパンカルボヒドラジド（３．７４ｇ、７．９９ｍｍｏｌ、６０質量％）を酢酸（１５ｍＬ）中で溶解し、１３０℃にてマイクロ波照射下で３時間加熱する。反応物質を室温に冷却し、固体を濾過で収集し、ヘキサンで洗浄して表題化合物（１．９８ｇ、１００％）を生成する。ＭＳ（ｍ／ｚ）２４５（Ｍ＋Ｈ）。

下記の化合物を調製１９の方法と本質的に類似の方式で調製する。

実施例１
３−（１−シクロプロピルシクロプロピル）−７−（シクロプロピルメチル）−６−［（１−メチルピラゾール−４−イル）メチル］−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−８−オン

スキーム１、工程６：炭酸カリウム（０．１２７ｇ，０．９２２ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（４．０ｍＬ）中の５−クロロ−３−（１−シクロプロピルシクロプロピル）−７−（シクロプロピルメチル）−６−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−８−オン（０．０９８ｇ，０．３０７ｍｍｏｌ）および１−メチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピラゾール（０．０４７６ｇ，０．２２９ｍｍｏｌ）の溶液に加える。反応物質を脱気してＮ_２で１０分間パージする。１−１’−ビス（ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィノ）フェロセンパラジウムジクロリド（０．０１５ｇ，０．０２２ｍｍｏｌ）を反応物質に加え、混合物を１２０℃で１６時間加熱する。反応物質をＥｔＯＡｃとＮａＨＣＯ_３の冷却飽和溶液に分配し、分離する。有機層を５％塩化リチウム（水溶液）、次いで食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで精製し、ヘキサン中の０〜１００％ アセトンで溶出して表題化合物（０．０１５ｍｇ、１３％）を生成する。ＭＳ（ｍ／ｚ）３６５（Ｍ＋Ｈ）。

実施例２
３−（１−シクロプロピルシクロプロピル）−７−（シクロプロピルメチル）−５，６−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−８−オン

スキーム３、工程４：リチウムビス（トリメチルシリル）アミド（２．５ｍＬ，２．５ｍｍｏｌ，ＭＴＢＥ中１ｍｏｌ／Ｌ）をＤＭＦ（８ｍＬ）中の３−（１−シクロプロピルシクロプロピル）−５，６−ジメチル−７Ｈ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−８−オン（２０２ｍｇ、０．８２７ｍｍｏｌ）の溶液に加え、反応物質を室温で１時間攪拌する。（ブロモメチル）シクロプロパン（４００μＬ、４ｍｍｏｌ）およびヨウ化カリウム（１５ｍｇ、０．０９０９ｍｍｏｌ）を加え、反応物質を室温で一夜攪拌する。さらに（ブロモメチル）シクロプロパン（８０μＬ、０．８ｍｍｏｌ）およびヨウ化カリウム（１５ｍｇ、０．０９０９ｍｍｏｌ）を加え、反応物質を室温で４時間攪拌し、その後３５℃で一夜攪拌する。反応物質をＥｔＯＡｃと水とに分配し、分離する。水性物質をＥｔＯＡｃで抽出する。有機層を５％塩化リチウム（水溶液）、次いで食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。残渣を代替的な実施例２に記載したものと本質的に同様の方式で調製された既存の物質と合わせ、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで精製し、ＤＣＭ中、０〜１０％ ＭｅＯＨで溶出する。単離された物質を本質的に同様の方式で調製された既存の物質（５１ｍｇスケール反応物質）と合わせ、ＥｔＯＡｃから再結晶化し、真空オーブン中で乾燥させ、表題化合物（１４０．３ｍｇ，合計収率１６％）を生成する。ＭＳ（ｍ／ｚ）２９９（Ｍ＋Ｈ）。

下記の化合物を実施例２の方法と本質的に類似の方式で調製する。

代替的実施例２
３−（１−シクロプロピルシクロプロピル）−７−（シクロプロピルメチル）−５，６−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−８−オン
スキーム３、工程４：５，６−ジメチル−３−［１−メチルシクロプロピル）−７Ｈ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−８−オン（２５ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（１００ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）、ヨウ化カリウム（３ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）およびブロモメチルシクロプロパン（２５μＬ、０．２６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１ｍＬ）中で合わせる。混合物をＮ_２下、８０℃で一夜攪拌する。反応物質を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃで希釈して水（２ｘ）で洗浄する。有機層を５％塩化リチウム（水溶液）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、分離し、減圧下で濃縮する。残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで精製し、ＤＣＭ中の０〜１５％ ＭｅＯＨで溶出して表題化合物（８ｍｇ、３．７％）を生成する。ＭＳ（ｍ／ｚ）２９９（Ｍ＋Ｈ）。

実施例５
７−ブチル−３−（１−シクロプロピルシクロプロピル）−５，６−ジメチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−８−オン

スキーム３、工程４：水素化ナトリウム（９５０ｍｇ，２３．７５ｍｍｏｌ，鉱油中６０質量％）を、０℃でＤＭＦ（５０ｍＬ）中の３−（１−シクロプロピルシクロプロピル）−５，６−ジメチル−７Ｈ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−８−オン（１．９５ｇ、７．９８ｍｍｏｌ）に加える。１−ブロモブタン（２．１５ｍＬ、１９．９ｍｍｏｌ）を加え、反応物質を室温で一夜攪拌する。反応物質をその後６０℃で２時間攪拌する。反応物質を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃで希釈する。有機層を食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。残渣をシリカのフラッシュクロマトグラフィーで精製し、ヘキサン中の０〜５０％ ＥｔＯＡｃで、次いでＤＣＭ中の０〜１０％ ＭｅＯＨで溶出する。生成物を含有するクロマトグラフィー画分を合わせ、減圧下で濃縮する。不純物を含む残渣をシリカのフラッシュクロマトグラフィーで精製し、ＤＣＭ中の０〜１００％ ＥｔＯＡｃで溶出する。生成物を含有するクロマトグラフィー画分を合わせ、減圧下で濃縮し、凍結乾燥して表題化合物（１００ｍｇ、４．７％）を生成する。ＭＳ（ｍ／ｚ）３０１（Ｍ＋Ｈ）。

実施例６
ラセミック３−（１−シクロプロピルシクロプロピル）−５，６−ジメチル−７−（テトラヒドロピラン−２−イルメチル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−８−オン

スキーム３、工程４：３−（１−シクロプロピルシクロプロピル）５，６−ジメチル−７Ｈ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−８−オン（１．９５ｇ、７．９８ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（７．７５ｇ、２３．８ｍｍｏｌ）、ヨウ化カリウム（１３１ｍｇ、０．７８９ｍｍｏｌ）および２−（ブロモメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン（１．８０ｍＬ、１７．８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（６６ｍＬ）中で合わせる。混合物をＮ_２下、８０℃で６時間攪拌する。反応物質を室温に冷却し、３：１の割合のクロロホルム：イソプロパノールで希釈する。有機物を飽和ＮａＨＣＯ_３で、その後食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで精製し、ヘキサン中の０〜１００％ ＥｔＯＡｃで、次いでＤＣＭ中の０〜１０％ ＭｅＯＨで溶出して表題化合物（２７５ｍｇ、１０％）を生成する。ＭＳ（ｍ／ｚ）３４３（Ｍ＋Ｈ）。

下記の化合物を実施例６の方法と本質的に類似の方式で調製する。

実施例９
ラセミック３−（１−シクロプロピルシクロプロピル）−５，６−ジメチル−７−（テトラヒドロピラン−２−イルメチル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−８−オン；異性体１
および
実施例１０
ラセミック３−（１−シクロプロピルシクロプロピル）−５，６−ジメチル−７−（テトラヒドロピラン−２−イル］メチル］−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−８−オン；異性体２

ラセミック３−（１−シクロプロピルシクロプロピル）−５，６−ジメチル−７−（テトラヒドロピラン−２−イル］メチル］−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−８−オン（２５０ｍｇ、０．７３０ｍｍｏｌ）を、下記の条件でキラルクロマトグラフィーによりその構成エナンチオマーに分離する：カラム（Ｓ、Ｓ）Ｗｈｅｌｋ−０１ ２５ｃｍｘ２１．２ｍｍ、１０μ；２１ｘ２５０ｍｍ、移動相３５％ ＭｅＯＨ：６５％ ＣＯ_２、カラム温度４０℃、流量５ｍＬ／分、ＵＶ ２２５。第一の溶出物質を凍結乾燥して実施例９の表題化合物（９５ｍｇ、３８％）を生成する、ＭＳ（ｍ／ｚ）３４３（Ｍ＋Ｈ），ｔ_（Ｒ）＝１．８１分，ｅｅ＞９９％。第二の溶出異性体を凍結乾燥して実施例１０の表題化合物（９５ｍｇ、３８％）を生成する、ＭＳ（ｍ／ｚ）３４３（Ｍ＋Ｈ），ｔ_（Ｒ）＝２．６２分，ｅｅ＞９９％。

実施例１１
ラセミック３−（１−エチルシクロプロピル）−５，６−ジメチル−７−（テトラヒドロピラン−２−イルメチル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−８−オン、異性体１
および
実施例１２
ラセミック３−（１−エチルシクロプロピル）−５，６−ジメチル−７−（テトラヒドロピラン−２−イルメチル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−８−オン；異性体２

ラセミック３−（１−エチルシクロプロピル）−５，６−ジメチル−７−（テトラヒドロピラン−２−イルメチル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−８−オン（５６４ｍｇ、１．７１ｍｍｏｌ）を、下記の条件でキラルＳＦＣによりその構成エナンチオマーに分離する：カラム（Ｓ、Ｓ）Ｗｈｅｌk−０１ ２５ｃｍｘ２１．２ｍｍ、１０μ、移動相 ４０％ ＥｔＯＨ ７５％ ＣＯ_２、流量 ５ｍＬ／分、ＵＶ ２２５ｎｍ、カラム温度 ３５℃。第一の溶出物質を実施例１１の表題化合物（２６２ｍｇ、４６．５％）として単離する、ＭＳ（ｍ／ｚ）３３１（Ｍ＋Ｈ）、ｔ_（Ｒ）＝１．９９分、ｅｅ＞９９％。第二の溶出物質を実施例１２の表題化合物（２４８ｍｇ、４４％）として単離する、ＭＳ（ｍ／ｚ）３３１（Ｍ＋Ｈ）、ｔ_（Ｒ）＝３．０３分、ｅｅ＞９９％。

実施例１３
５，６−ジメチル−３−（１−メチルシクロプロピル）−７−（テトラヒドロピラン−２−イルメチル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−８−オン；異性体１
および
実施例１４
５，６−ジメチル−３−（１−メチルシクロプロピル）−７−（テトラヒドロピラン−２−イルメチル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−８−オン；異性体２

ラセミック５，６−ジメチル−３−（１−エチルシクロプロピル）−７−（テトラヒドロピラン−２−イルメチル）−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−８−オン（２１０ｍｇ、０．６６４ｍｍｏｌ）を、下記の条件でキラルＳＦＣによりその構成エナンチオマーに分離する：カラム（Ｓ、Ｓ）Ｗｈｅｌk−０１ ２５ｃｍｘ２１．２ｍｍ、１０μ、移動相 ３５％ ＥｔＯＨ／ＣＯ_２、流量 ５ｍＬ／分、ＵＶ ２２５ｎｍ、カラム温度 ４０℃。第一の溶出物質を単離して実施例１３の表題化合物（６０ｍｇ、２８．６％）を生成する、ＭＳ（ｍ／ｚ）３１７（Ｍ＋Ｈ）、ｔ_（Ｒ）＝１．８４分、ｅｅ＞９９％。第二の溶出物質を単離して実施例１４の表題化合物（５５ｍｇ、２６．２％）を生成する、ＭＳ（ｍ／ｚ）３１７（Ｍ＋Ｈ）、ｔ_（Ｒ）＝２．６５分、ｅｅ＞９９％。

実施例１５
３−（１−シクロプロピルシクロプロピル）−５，６−ジメチル−７−［（１−メチルシクロプロピル）メチル］−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−８−オン

スキーム３、工程４：３−［１−シクロプロピルシクロプロピル）−５，６−ジメチル−７Ｈ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−８−オン（３５０ｍｇ、１．４３ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（１．４０ｇ、４．３ｍｍｏｌ）、および（１−メチルシクロプロピル）メチルメタンスルホナート（２５０ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（７ｍＬ）中で合わせる。混合物をＮ_２下、室温で一夜攪拌する。反応物質をＥｔＯＡｃで希釈し、食塩水で洗浄する。水層をＥｔＯＡｃで抽出し、合わされた有機物を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。残渣をＣ１８での逆相フラッシュクロマトグラフィーで精製し、Ｈ_２Ｏ中の１０〜６０％ ＡＣＮで溶出して凍結乾燥させ、表題化合物（２ｍｇ、０．４５％）を生成する。ＭＳ（ｍ／ｚ）３１３（Ｍ＋Ｈ）。

実施例１６
７−ブチル−３−（１−シクロプロピルシクロプロピル）−５−エチル−６−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−８−オン

スキーム２、工程６：ヘキサメチルジシラザン（４ｍＬ）中のＮ’−（４−ブチル−６−エチル−５−メチル−３−オキソ−ピラジン−２−イル）−１−シクロプロピル−シクロプロパンカルボヒドラジド（５７６．１ｍｇ、１．２１３ｍｍｏｌ、７０質量％）を１２０℃で一夜攪拌する。反応混合物を室温に冷却し、ＭｅＯＨに注ぐ。ＭｅＯＨに加える際、反応混合物は激しく噴出する。得られた残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで精製し、ＤＣＭ中の０〜１０％ ＭｅＯＨで溶出する。得られた残渣をヘキサメチルジシラザン（４ｍＬ）中に溶解して１２０℃で一夜攪拌する。反応混合物を室温に冷却し、ＭｅＯＨを加え、反応物質を５０℃で３０分間攪拌し、減圧下で濃縮する。残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで精製し、ＤＣＭ中の０〜１０％ ＭｅＯＨで溶出する。物質をさらにＣ１８での逆相フラッシュクロマトグラフィーで精製し、Ｈ_２Ｏ（０．１％重炭酸アンモニウム）中の１０〜１００％ ＡＣＮで溶出し、表題化合物（１０１．７ｍｇ、２７％）を生成する。ＭＳ（ｍ／ｚ）３１５（Ｍ＋Ｈ）。

ＰＤＥタンパク質の生成
完全長ヒトＰＤＥ１Ａ（ＮＰ＿００１００３６８３．１）およびＰＤＥ１Ｃ（ＮＰ＿００５０１１．１）をコードするヌクレオチド配列を、Ｎ末端ＨＩＳタグを有するｐＦａｓｔＢａｃ１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）ベクターに挿入する。完全長ヒトＰＤＥ４Ｄ（ＮＰ＿００６１９４．２）およびＰＤＥ３Ａ（ＮＰ＿０００９１２．３）の触媒ドメイン（残基６４１−１１４１）をコードするヌクレオチド配列を、Ｃ末端ＨＩＳタグを有するｐＦａｓｔＢａｃ１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）ベクターに挿入する。完全長ヒトＰＤＥ６Ａ（ＮＰ＿０００４３１．２）およびＰＤＥ６Ｂ（ＡＡＨ００２４９．１）をコードするヌクレオチド配列を、ＰＤＥ６Ａ／６Ｂ二量体の生成のために、Ｎ末端ＨＩＳタグおよびＮ末端フラグタグを有するｐＦａｓｔＢａｃＤｕａｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）ベクターに挿入する。Ｓｆ９細胞におけるバキュロウイルスの生成およびタンパク質発現がＢａｃ−ｔｏ−Ｂａｃ Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）のプロトコルによって実行される。完全長ヒトＰＤＥ１Ｂ（ＮＰ＿０００９１５．１）をコードするヌクレオチド配列をＣ末端ＨＩＳタグを有するｐＩＥＸ４（Ｎｏｖａｇｅｎ）に挿入し、Ｓｆ９細胞内の両方のタンパク質生成が供給元のプロトコル（Ｎｏｖａｇｅｎ）によって実行される。Ｈｉｓタグ付けされたＰＤＥタンパク質はＮｉ−ＮＴＡ ａｇａｒｏｓｅ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて精製され、次いで、ストレージバッファー（２０ｍＭ トリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１０％グリセロール）中で、ＳＵＰＥＲＤＥＸ（登録商標）２００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）でのサイズ排除クロマトグラフィーを実施する。ＰＤＥ６Ａ／６Ｂを含むフラグタグ付けされたＰＤＥタンパク質をａｎｔｉ−Ｆｌａｇ Ｍ２−ａｇａｒｏｓｅ（Ｓｉｇｍａ）で精製し、ＮｉＮＴＡカラムクロマトグラフィーによる精製後、ストレージバッファー（５０ｍＭ トリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１０％ グリセロール、０．１ｍｇ／ｍｌ フラグペプチド）中で溶出する。精製されたタンパク質全てを小アリコートで−８０℃で保存する。

ホスホジエステラーゼ酵素アッセイ
３’、５’環状ヌクレオチドＰＤＥ酵素活性をＳＰＡ検出システムに基づき、放射酵素アッセイで測定する。試験対象の化合物を１０点濃度反応曲線を用いて純粋ＤＭＳＯ中で希釈する。反応混合物における最大化合物濃度は１０または１００μＭである。適切な濃度の化合物を、ＰＤＥ酵素のいずれかで３０分間事前インキュベートしてから、基質を加えて反応を開始する。反応は室温で６０分間にわたって進められる。次にＳＰＡビーズを加えることにより反応を停止する。試料を１２時間後、ＭＩＣＲＯＢＥＴＡ（商標）ＴＲＩＬＵＸ（登録商標）カウンターで読み込む。ＩＣ_５０値は正規化されたデータと対数［複合］をプロットし、４つのパラメータのロジスティック方程式を利用してデータを近似することによって計算される。

Ｃａ^２＋カルモジュリン依存ＰＤＥ酵素アッセイ
ＰＤＥ１Ｂ、ＰＤＥ１Ａ、およびＰＤＥ１Ｃをクローン化し、標準的なタンパク質生成手順に従って精製する。アッセイバッファーは、ｐＨ ７．５で、５０ｍＭ トリス−ＨＣｌ、５０ｍＭ ＭｇＣｌ_２、４ｍＭ ＣａＣｌ_２、０．１％ ＢＳＡおよび６Ｕ／ｍＬ 水中カルモジュリンのアッセイの最終濃度が得られるように調製される。最終酵素濃度は、ＰＤＥ１Ａ、ＰＤＥ１ＢおよびＰＤＥ１Ｃについて、それぞれ０．２５、０．０７４および０．００１２ｎＭである。反応は基質［^３Ｈ］ｃＡＭＰを加えることにより開始され、最終濃度４７ｎＭを得る。

ヒトＰＤＥ１Ａ、ＰＤＥ１Ｂ、およびＰＤＥ１Ｃに対する実施例化合物のＩｎ ｖｉｔｒｏでの有効性

表５のデータは、実施例１〜１６の化合物が、ｉｎ ｖｉｔｒｏでヒトＰＤＥ１Ａ、ＰＤＥ１Ｂ、およびＰＤＥ１Ｃ酵素活性を阻害することを示す。

基質として［^３Ｈ］ｃＡＭＰを用いたＰＤＥ酵素アッセイ
下記のＰＤＥ活性を反応基質として［^３Ｈ］ｃＡＭＰを用いて測定する：ヒトＰＤＥ３Ａ（触媒ドメイン）およびヒトＰＤＥ４Ｄ。両方の酵素はクローン化され、標準的な手順によって精製される。アッセイバッファーは、ｐＨ ７．５で、５０ｍＭ トリス−ＨＣｌ、８．３ｍＭ ＭｇＣｌ_２、１．７ｍＭ ＥＤＴＡ、０．１％ ＢＳＡのアッセイの最終濃度が得られるように調製される。最終酵素濃度は、ＰＤＥ３ＡおよびＰＤＥ４Ｄについて、それぞれ０．００８および０．０２１ｎＭである。反応は基質［^３Ｈ］ｃＡＭＰを加えることにより開始され、最終濃度４７ｎＭを得る。

ヒトＰＤＥ３Ａ（触媒ドメイン）およびＰＤＥ４Ｄに対する実施例化合物のＩｎ ｖｉｔｒｏでの有効性

基質として［^３Ｈ］ｃＧＭＰを使用したＰＤＥ酵素アッセイ
下記のホスホジエステラーゼ活性を反応基質として［^３Ｈ］ｃＧＭＰを使用して測定する：ヒトＰＤＥ６Ａ／６Ｂ ヒトＰＤＥ６の触媒活性型は、α（ヒトＰＤＥ６Ａ）およびβサブユニット（ヒトＰＤＥ６Ｂ）からなる二量体である。ヒトＰＤＥ６Ａ／６Ｂの二量体は、二つの精製工程、つまりＮｉＮＴＡおよびａｎｔｉ−ＦＬＡＧ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅクロマトグラフィーを用いて、共発現および精製ストラテジーにより生成される。アッセイバッファーは、ｐＨ７．５で、５０ｍＭ トリス−ＨＣｌ、８．３ｍＭ ＭｇＣｌ_２、１．７ｍＭ ＥＤＴＡ、０．１％ ＢＳＡのアッセイの最終濃度が得られるように調製される。最終酵素濃度は５ｎＭである。反応は基質［^３Ｈ］ｃＧＭＰを加えることにより開始され、最終濃度８０ｎＭを得る。

ＰＤＥ６ＡＢに対する実施例化合物のＩｎ ｖｉｔｒｏでの有効性

表５、６、および７のデータは、実施例１〜１６の化合物が、Ｉｎ ｖｉｔｒｏでのヒトＰＤＥ３Ａ、ＰＤＥ４Ｄ、およびＰＤＥ６ＡＢに対する、ヒトＰＤＥ１Ａ、ＰＤＥ１Ｂ、およびＰＤＥ１Ｃの選択的阻害剤であることを示す。

表５、６、および７のデータは、実施例１〜１６の化合物が、Ｉｎ ｖｉｔｒｏでのヒトＰＤＥ３Ａ、ＰＤＥ４Ｄ、およびＰＤＥ６ＡＢに対する、ヒトＰＤＥ１Ａ、ＰＤＥ１Ｂ、およびＰＤＥ１Ｃの選択的阻害剤であることを示す。
本発明の様々な実施形態を以下に示す。
１．式：

（式中、Ｒ ^１ は、メチル、エチルまたはシクロプロピルであり；
Ｒ ^２ は、水素、メチル、またはエチルであり；
Ｒ ^３ は、メチルまたは

であり、
Ｒ ^４ は、Ｃ２−Ｃ４アルキル、

である）の化合物、
またはその薬理学的に許容可能な塩。
２．Ｒ ^１ はシクロプロピルである、上記１に記載の化合物または塩。
３．Ｒ ^２ はメチルである、上記１または上記２に記載の化合物または塩。
４．Ｒ ^３ はメチルである、上記１〜３のいずれかに記載の化合物または塩。
５．前記化合物は

である、上記１に記載の化合物または塩。
６．前記化合物は

である、上記１に記載の化合物または塩。
７．前記化合物は

である、上記１に記載の化合物または塩。
８．前記化合物は

である、上記１に記載の化合物または塩。
９．それを必要とする患者に、有効量の上記１〜８のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容可能な塩を投与することを含む、患者における慢性腎臓病を治療する方法。
１０．それを必要とする患者に、有効量の上記１〜８のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容可能な塩を投与することを含む、患者における糖尿病性腎臓病を治療する方法。
１１．治療に使用するための上記１〜８のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容可能な塩。
１２．慢性腎臓病の治療に使用するための上記１〜８のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容可能な塩。
１３．糖尿病性腎臓病の治療に使用するための上記１〜８のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容可能な塩。
１４．１つ以上の薬理学的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤を有する、上記１〜８のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容可能な塩を含む、医薬組成物。
１５．１つ以上の薬理学的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤を、上記１〜８のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容可能な塩と混合することを含む、医薬組成物を調製するための方法。

Claims (15)

1. 式：
   
   （式中、Ｒ^１は、メチル、エチルまたはシクロプロピルであり；
   Ｒ^２は、水素、メチル、またはエチルであり；
   Ｒ^３は、メチルまたは
   
   であり、
   Ｒ^４は、Ｃ２−Ｃ４アルキル、
   
   である）の化合物、
   またはその薬理学的に許容可能な塩。
2. Ｒ^１はシクロプロピルである、請求項１に記載の化合物または塩。
3. Ｒ^２はメチルである、請求項１または請求項２に記載の化合物または塩。
4. Ｒ^３はメチルである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物または塩。
5. 前記化合物は
   
   である、請求項１に記載の化合物または塩。
6. 前記化合物は
   
   である、請求項１に記載の化合物または塩。
7. 前記化合物は
   
   である、請求項１に記載の化合物または塩。
8. 前記化合物は
   
   である、請求項１に記載の化合物または塩。
9. それを必要とする患者に、有効量の請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物またはその薬理学的に許容可能な塩を投与することを含む、患者における慢性腎臓病を治療する方法。
10. それを必要とする患者に、有効量の請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物またはその薬理学的に許容可能な塩を投与することを含む、患者における糖尿病性腎臓病を治療する方法。
11. 治療に使用するための請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物またはその薬理学的に許容可能な塩。
12. 慢性腎臓病の治療に使用するための請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物またはその薬理学的に許容可能な塩。
13. 糖尿病性腎臓病の治療に使用するための請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物またはその薬理学的に許容可能な塩。
14. １つ以上の薬理学的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤を有する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物またはその薬理学的に許容可能な塩を含む、医薬組成物。
15. １つ以上の薬理学的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤を、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物またはその薬理学的に許容可能な塩と混合することを含む、医薬組成物を調製するための方法。