JP2021511020A - 21−ヒドロキシラーゼ欠損症のためのアデノ随伴ウイルス遺伝子療法 - Google Patents
21−ヒドロキシラーゼ欠損症のためのアデノ随伴ウイルス遺伝子療法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2021511020A JP2021511020A JP2020537156A JP2020537156A JP2021511020A JP 2021511020 A JP2021511020 A JP 2021511020A JP 2020537156 A JP2020537156 A JP 2020537156A JP 2020537156 A JP2020537156 A JP 2020537156A JP 2021511020 A JP2021511020 A JP 2021511020A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- raav
- aav
- vector
- promoter
- cyp21
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 title claims abstract description 19
- 206010000021 21-hydroxylase deficiency Diseases 0.000 title claims description 10
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 title description 12
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims abstract description 163
- 239000013608 rAAV vector Substances 0.000 claims abstract description 121
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 95
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 78
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 58
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 35
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 35
- 108010011732 Steroid 21-Hydroxylase Proteins 0.000 claims abstract description 26
- 102000014169 Steroid 21-Hydroxylase Human genes 0.000 claims abstract description 26
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 claims description 154
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 111
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 97
- 101000861263 Homo sapiens Steroid 21-hydroxylase Proteins 0.000 claims description 84
- 102100027545 Steroid 21-hydroxylase Human genes 0.000 claims description 83
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 78
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 69
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 68
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 55
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 55
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 55
- 230000001919 adrenal effect Effects 0.000 claims description 37
- 241001634120 Adeno-associated virus - 5 Species 0.000 claims description 34
- 241001655883 Adeno-associated virus - 1 Species 0.000 claims description 33
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims description 31
- 241000702423 Adeno-associated virus - 2 Species 0.000 claims description 30
- 241000972680 Adeno-associated virus - 6 Species 0.000 claims description 30
- 208000005676 Adrenogenital syndrome Diseases 0.000 claims description 28
- 208000008448 Congenital adrenal hyperplasia Diseases 0.000 claims description 28
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 26
- 210000004404 adrenal cortex Anatomy 0.000 claims description 20
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 claims description 17
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 claims description 17
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 claims description 16
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 claims description 16
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 16
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 claims description 15
- 241001164825 Adeno-associated virus - 8 Species 0.000 claims description 13
- 241000649045 Adeno-associated virus 10 Species 0.000 claims description 12
- 208000019237 Classic congenital adrenal hyperplasia due to 21-hydroxylase deficiency Diseases 0.000 claims description 12
- 241000202702 Adeno-associated virus - 3 Species 0.000 claims description 11
- 241000580270 Adeno-associated virus - 4 Species 0.000 claims description 11
- 241001164823 Adeno-associated virus - 7 Species 0.000 claims description 11
- 241000649046 Adeno-associated virus 11 Species 0.000 claims description 11
- 241000649047 Adeno-associated virus 12 Species 0.000 claims description 11
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 claims description 10
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 claims description 10
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 claims description 10
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 7
- 210000002556 adrenal cortex cell Anatomy 0.000 claims description 7
- 210000001943 adrenal medulla Anatomy 0.000 claims description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 6
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 6
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 5
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 claims description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 4
- 238000002357 laparoscopic surgery Methods 0.000 claims description 4
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 claims description 4
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 claims description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 abstract description 11
- 238000010586 diagram Methods 0.000 abstract description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 155
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 104
- 101150024941 Cyp21 gene Proteins 0.000 description 97
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 67
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 67
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 60
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 57
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 51
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 50
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 44
- 101001040800 Homo sapiens Integral membrane protein GPR180 Proteins 0.000 description 32
- 102100021244 Integral membrane protein GPR180 Human genes 0.000 description 32
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 31
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 30
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 30
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 29
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 28
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 27
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 23
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 23
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 23
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 23
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 23
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 22
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 21
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 20
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 19
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 19
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 18
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 18
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 17
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 230000006870 function Effects 0.000 description 16
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 16
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 15
- 108010079892 phosphoglycerol kinase Proteins 0.000 description 15
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 14
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 14
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 14
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 13
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 12
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 12
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 12
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 12
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 12
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 12
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 12
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 12
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 12
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 12
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 11
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 11
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 11
- 101800000414 Corticotropin Proteins 0.000 description 10
- 102400000739 Corticotropin Human genes 0.000 description 10
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 10
- IDLFZVILOHSSID-OVLDLUHVSA-N corticotropin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO)C1=CC=C(O)C=C1 IDLFZVILOHSSID-OVLDLUHVSA-N 0.000 description 10
- 229960000258 corticotropin Drugs 0.000 description 10
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 9
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 206010015548 Euthanasia Diseases 0.000 description 9
- 206010047486 Virilism Diseases 0.000 description 9
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 9
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 9
- 239000000275 Adrenocorticotropic Hormone Substances 0.000 description 8
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 8
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 description 8
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 8
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 239000013607 AAV vector Substances 0.000 description 7
- 101150110011 CYP21A2 gene Proteins 0.000 description 7
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 7
- 239000003098 androgen Substances 0.000 description 7
- 210000005161 hepatic lobe Anatomy 0.000 description 7
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 7
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 7
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- DBPWSSGDRRHUNT-CEGNMAFCSA-N 17α-hydroxyprogesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@@](C(=O)C)(O)[C@@]1(C)CC2 DBPWSSGDRRHUNT-CEGNMAFCSA-N 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 6
- 108700039887 Essential Genes Proteins 0.000 description 6
- 108020004684 Internal Ribosome Entry Sites Proteins 0.000 description 6
- 108091007780 MiR-122 Proteins 0.000 description 6
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 210000002149 gonad Anatomy 0.000 description 6
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 6
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 6
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 6
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 6
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 6
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 6
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 6
- 108090000783 Renin Proteins 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 5
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 5
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- 230000003938 response to stress Effects 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 5
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 5
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 5
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 5
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 4
- 101150051357 CYP17A1 gene Proteins 0.000 description 4
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 4
- 101150070803 Cyp11b2 gene Proteins 0.000 description 4
- 101000834253 Gallus gallus Actin, cytoplasmic 1 Proteins 0.000 description 4
- HVLSXIKZNLPZJJ-TXZCQADKSA-N HA peptide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 HVLSXIKZNLPZJJ-TXZCQADKSA-N 0.000 description 4
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 4
- 101150090652 PRKAR2A gene Proteins 0.000 description 4
- 102100028255 Renin Human genes 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 4
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 4
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 4
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 4
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 4
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 description 4
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 4
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 4
- 108091051828 miR-122 stem-loop Proteins 0.000 description 4
- 239000002395 mineralocorticoid Substances 0.000 description 4
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 4
- WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N pentobarbital Chemical compound CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 238000003762 quantitative reverse transcription PCR Methods 0.000 description 4
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 239000003270 steroid hormone Substances 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 4
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 4
- -1 50-55 Chemical class 0.000 description 3
- PQSUYGKTWSAVDQ-ZVIOFETBSA-N Aldosterone Chemical compound C([C@@]1([C@@H](C(=O)CO)CC[C@H]1[C@@H]1CC2)C=O)[C@H](O)[C@@H]1[C@]1(C)C2=CC(=O)CC1 PQSUYGKTWSAVDQ-ZVIOFETBSA-N 0.000 description 3
- PQSUYGKTWSAVDQ-UHFFFAOYSA-N Aldosterone Natural products C1CC2C3CCC(C(=O)CO)C3(C=O)CC(O)C2C2(C)C1=CC(=O)CC2 PQSUYGKTWSAVDQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010009911 Cytochrome P-450 CYP11B2 Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 3
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 101150000326 Prkar1a gene Proteins 0.000 description 3
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 3
- 208000020221 Short stature Diseases 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 108020004566 Transfer RNA Proteins 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 3
- 229960002478 aldosterone Drugs 0.000 description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 238000004422 calculation algorithm Methods 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 3
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 3
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 3
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 3
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 3
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 3
- 238000005192 partition Methods 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 3
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 3
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 229940037128 systemic glucocorticoids Drugs 0.000 description 3
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 3
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 3
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 3
- DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N (2R)-6-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2R,3S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-amino-1-hydroxyethylidene)amino]-3-carboxy-1-hydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1,5-dihydroxy-5-iminopentylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=N[C@@H](CS)C(=N[C@@H](C)C(=N[C@@H](CO)C(=NCC(=N[C@@H](CCC(=N)O)C(=NC(CS)C(=N[C@H]([C@H](C)O)C(=N[C@H](CS)C(=N[C@H](CO)C(=NCC(=N[C@H](CS)C(=NCC(=N[C@H](CCCCN)C(=O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)N=C([C@H](CS)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](C)N=C(CN=C([C@H](CO)N=C([C@H](CS)N=C(CN=C(C(CS)N=C(C(CC(=O)O)N=C(CN)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N 0.000 description 2
- 206010001367 Adrenal insufficiency Diseases 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 101150017665 CYP11A1 gene Proteins 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 108700010070 Codon Usage Proteins 0.000 description 2
- 102100024329 Cytochrome P450 11B2, mitochondrial Human genes 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010020112 Hirsutism Diseases 0.000 description 2
- 101150009245 Hsd3b1 gene Proteins 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010020880 Hypertrophy Diseases 0.000 description 2
- 102000003792 Metallothionein Human genes 0.000 description 2
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 2
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 description 2
- 101000933313 Mus musculus Brain-derived neurotrophic factor Proteins 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 230000001780 adrenocortical effect Effects 0.000 description 2
- 208000017515 adrenocortical insufficiency Diseases 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 229940030486 androgens Drugs 0.000 description 2
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 2
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 2
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 2
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 2
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 2
- 238000009227 behaviour therapy Methods 0.000 description 2
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N chlorobutanol Chemical compound CC(C)(O)C(Cl)(Cl)Cl OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 210000001840 diploid cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000007598 dipping method Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 2
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- QWTDNUCVQCZILF-UHFFFAOYSA-N isopentane Chemical compound CCC(C)C QWTDNUCVQCZILF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 2
- 229960001412 pentobarbital Drugs 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 2
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 2
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 2
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 210000001235 zona fasciculata Anatomy 0.000 description 2
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- DBPWSSGDRRHUNT-UHFFFAOYSA-N 17alpha-hydroxy progesterone Natural products C1CC2=CC(=O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(=O)C)(O)C1(C)CC2 DBPWSSGDRRHUNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000002874 Acne Vulgaris Diseases 0.000 description 1
- 208000006468 Adrenal Cortex Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 208000002267 Anti-neutrophil cytoplasmic antibody-associated vasculitis Diseases 0.000 description 1
- 208000019901 Anxiety disease Diseases 0.000 description 1
- 102100034524 Apoptotic protease-activating factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- OMFXVFTZEKFJBZ-UHFFFAOYSA-N Corticosterone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(O)CC(C)(C(CC4)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 OMFXVFTZEKFJBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000008064 Corticotropin Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010074311 Corticotropin Receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 102000008130 Cyclic AMP-Dependent Protein Kinases Human genes 0.000 description 1
- 241000754465 Cypha Species 0.000 description 1
- 102000002004 Cytochrome P-450 Enzyme System Human genes 0.000 description 1
- 108010015742 Cytochrome P-450 Enzyme System Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 101100239628 Danio rerio myca gene Proteins 0.000 description 1
- 206010058314 Dysplasia Diseases 0.000 description 1
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 108091005904 Hemoglobin subunit beta Proteins 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 208000028782 Hereditary disease Diseases 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000924629 Homo sapiens Apoptotic protease-activating factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000000421 Lepidium meyenii Nutrition 0.000 description 1
- 240000000759 Lepidium meyenii Species 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 102000008109 Mixed Function Oxygenases Human genes 0.000 description 1
- 108010074633 Mixed Function Oxygenases Proteins 0.000 description 1
- 108090000143 Mouse Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000713333 Mouse mammary tumor virus Species 0.000 description 1
- 101100214527 Mus musculus Hsd3b1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000891651 Mus musculus TATA-box-binding protein Proteins 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 101150068407 PRKACB gene Proteins 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 241000009328 Perro Species 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 229920002685 Polyoxyl 35CastorOil Polymers 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 101150004005 Prkaca gene Proteins 0.000 description 1
- 238000011530 RNeasy Mini Kit Methods 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 101100214538 Rattus norvegicus Hsd3b5 gene Proteins 0.000 description 1
- 108091081062 Repeated sequence (DNA) Proteins 0.000 description 1
- 239000012891 Ringer solution Substances 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 101001056836 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) cAMP-dependent protein kinase regulatory subunit Proteins 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 1
- 101710195626 Transcriptional activator protein Proteins 0.000 description 1
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241001492404 Woodchuck hepatitis virus Species 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 206010000496 acne Diseases 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003484 anatomy Anatomy 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 230000036506 anxiety Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000037007 arousal Effects 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003855 balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 1
- 238000012742 biochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N bis-tris Chemical compound OCCN(CCO)C(CO)(CO)CO OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 238000010805 cDNA synthesis kit Methods 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 229960004926 chlorobutanol Drugs 0.000 description 1
- 150000001860 citric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000001447 compensatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- OMFXVFTZEKFJBZ-HJTSIMOOSA-N corticosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@H](CC4)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 OMFXVFTZEKFJBZ-HJTSIMOOSA-N 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 230000007711 cytoplasmic localization Effects 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K dihydroxy(stearato)aluminium Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[Al](O)O UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- AFABGHUZZDYHJO-UHFFFAOYSA-N dimethyl butane Natural products CCCC(C)C AFABGHUZZDYHJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002224 dissection Methods 0.000 description 1
- 230000008482 dysregulation Effects 0.000 description 1
- 230000002996 emotional effect Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001508 eye Anatomy 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 229960002011 fludrocortisone Drugs 0.000 description 1
- AAXVEMMRQDVLJB-BULBTXNYSA-N fludrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@@]3(F)[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 AAXVEMMRQDVLJB-BULBTXNYSA-N 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 108091006104 gene-regulatory proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000034356 gene-regulatory proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000009395 genetic defect Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 108060003196 globin Proteins 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001744 histochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000012333 histopathological diagnosis Methods 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 102000050423 human CYP21A2 Human genes 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000010066 hyperandrogenism Diseases 0.000 description 1
- 230000004179 hypothalamic–pituitary–adrenal axis Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000010185 immunofluorescence analysis Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 235000012902 lepidium meyenii Nutrition 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 230000006742 locomotor activity Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 description 1
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000007431 microscopic evaluation Methods 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 238000007479 molecular analysis Methods 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000346 nonvolatile oil Substances 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- QUANRIQJNFHVEU-UHFFFAOYSA-N oxirane;propane-1,2,3-triol Chemical compound C1CO1.OCC(O)CO QUANRIQJNFHVEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 235000021401 pellet diet Nutrition 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 229960003742 phenol Drugs 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 239000008389 polyethoxylated castor oil Substances 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 208000037821 progressive disease Diseases 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N rapamycin Natural products COCC(O)C(=C/C(C)C(=O)CC(OC(=O)C1CCCCN1C(=O)C(=O)C2(O)OC(CC(OC)C(=CC=CC=CC(C)CC(C)C(=O)C)C)CCC2C)C(C)CC3CCC(O)C(C3)OC)C ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000014493 regulation of gene expression Effects 0.000 description 1
- 239000003488 releasing hormone Substances 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000010845 search algorithm Methods 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 108091006024 signal transducing proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000034285 signal transducing proteins Human genes 0.000 description 1
- 229960002930 sirolimus Drugs 0.000 description 1
- QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N sirolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N 0.000 description 1
- 239000007909 solid dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
- 230000005026 transcription initiation Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
- 210000005166 vasculature Anatomy 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000003368 zona glomerulosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000002327 zona reticularis Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0071—Oxidoreductases (1.) acting on paired donors with incorporation of molecular oxygen (1.14)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/14011—Parvoviridae
- C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
- C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2750/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/14011—Parvoviridae
- C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
- C12N2750/14171—Demonstrated in vivo effect
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
- C12N2830/008—Vector systems having a special element relevant for transcription cell type or tissue specific enhancer/promoter combination
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y114/00—Oxidoreductases acting on paired donors, with incorporation or reduction of molecular oxygen (1.14)
- C12Y114/14—Oxidoreductases acting on paired donors, with incorporation or reduction of molecular oxygen (1.14) with reduced flavin or flavoprotein as one donor, and incorporation of one atom of oxygen (1.14.14)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Description
本明細書と共に電子的に提出されたテキストファイルの内容は参照することにより全体が本明細書に組み込まれる:配列表のコンピューターで読取り可能な形式のコピー(ファイル名:21OH_001_02WO_SeqList_ST25.txt、記録日:2019年1月13日、ファイルサイズ18,056バイト)。
21OHDの持続的矯正を可能とする療法の必要性が依然として存在する。
一態様では、本発明は、処置を必要とする細胞への21−ヒドロキシラーゼ(21OH)核酸配列の送達用のウイルスベクターを提供する。したがって、一実施形態では、本発明は、少なくとも1つのAAV逆末端反復配列(ITR)および21OHタンパク質をコードする非AAVヌクレオチド配列(異種ポリヌクレオチドとも称される)を含む核酸分子を含む組換えアデノ随伴ウイルス(rAAV)ベクターであって、非AAVヌクレオチド配列がプロモーターに作動可能に連結されている、rAAVベクターに関する。本明細書において使用される場合、「作動可能な連結」または「作動可能に連結された」という用語は、そのように記載される成分がそれらの意図される方式で機能することを可能とするようなそれらの成分の物理的または機能的並置を指す。ポリヌクレオチドとの作動可能な連結における発現制御エレメント(例えば、プロモーターまたはエンハンサー)の例において、関係性は、制御エレメントが核酸の発現をモジュレ―トするようなものである。より詳細には、例えば、作動可能に連結された2つのDNA配列は、DNA配列の少なくとも1つが他の配列に対して生理学的効果を発揮できるような関係性で2つのDNAが並んでいること(シスまたはトランス)を意味する。「作動可能に連結された」は、連結されている核酸配列が、連続し、または実質的に連続し、および、2つのタンパク質コーディング領域を連結するために必要な場合には連続し、かつリーディングフレームが揃っていることを意味することができる。
本発明は、21OHの欠損または機能不良により特徴付けられる障害または疾患を有する対象に治療的利益を提供するための本明細書に記載されるような21OHをコードする核酸分子を含むrAAVの方法および使用を包含する。一部の態様では、方法は、必要とする対象に治療有効量の本明細書に記載のrAAVを投与し、それにより、対象において21OHの欠損または機能不良により特徴付けられる前記障害または前記疾患を治療することを含む。
本発明のrAAVベクターまたは粒子は、投与のために好適な医薬組成物中に組み込まれ得る。一態様では、本発明は、本明細書に開示されるrAAVベクターまたはrAAV粒子(例えば、21OHをコードする核酸配列を含むrAAV粒子)および薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む医薬組成物を提供する。本明細書において使用される場合、「薬学的に許容される」という用語は、当該技術分野において周知の経路を使用して投与された場合に概してアレルギー性または他の重篤な有害反応を生じさせない分子実体および組成物を指す。動物、およびより詳細にはヒトにおいて使用するために米国連邦政府もしくは米国州政府の規制機関により承認されたまたは米国薬局方もしくは他の一般に認識される薬局方に列記された分子実体および組成物は、「薬学的に許容される」ものであると考えられる。本明細書において使用される場合、「薬学的に許容される担体」という用語は、薬学的投与と適合性の、任意および全ての溶媒、分散媒体、コーティング剤、抗菌剤、抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを含むことが意図される。好適な担体は、当該分野における標準的な参照テキストであるRemington’s Pharmaceutical Sciencesの最新版(参照することにより本明細書に組み込まれる)に記載されている。そのような担体または希釈剤の一部の例としては、水、生理食塩水、緩衝生理食塩水、リンガー溶液、デキストロース溶液、5%のヒト血清アルブミンおよび適切な生理学的レベルにpHを維持するための他の緩衝液、例えば、HEPESが挙げられるがそれに限定されない。薬学的に活性の物質(例えば、組換えウイルス粒子)のためのそのような媒体および剤の使用は当該技術分野において周知である。任意の従来の媒体または剤が活性化合物と不適合な場合を除いて、組成物におけるその使用が想定される。補助活性化合物もまた組成物中に組み込まれ得る。
ヒト21−ヒドロキシラーゼ(CYP21A2)cDNAをヘマグルチニン(HA)タグに融合し、pAAV2−CAGプラスミドにサブクローニングして、AAV2からのウイルス逆末端反復配列およびサイトメガロウイルス/β−アクチンハイブリッド(CAG)プロモーターを含むpAAV2−CAG−CYP21A2−HAプラスミドを製造した。CAGプロモーターは、サイトメガロウイルス最初期遺伝子からのエンハンサー、ニワトリβ−アクチン遺伝子からのプロモーター、スプライスドナーおよびイントロン、ならびにウサギβ−グロビン遺伝子からのスプライスアクセプターからなるものであった。偽ベクターを生成するために使用したCAGプロモーター下のβ−ガラクトシダーゼcDNAの非コーディング配列を用いて偽プラスミドを構築した。AAVrh10−CAG−CYP21A2−HA(「CYP21」)および偽ベクターをUniversity Hospital of NantesのVector Coreにおいて以前に記載された通りに製造した。例えば、Gao,G.P.、およびSena−Esteves,M.(2012).Introducing Genes into Mammalian Cells: Viral Vectors.In Molecular Cloning、Vol 2: A Laboratory Manual(M.R.GreenおよびJ.Sambrook eds.) pp.1209〜1313.Cold Spring Harbor Laboratory Press、New York;Rabinowitz et al.、J Virol,76(2):791〜801(2002)を参照。AAVrh10−CAG−CYP21A2−HAウイルスは、AAV2 ITR配列を有するゲノムを含有し、rh10キャプシドタンパク質をコードする。
21−ヒドロキシラーゼ欠損症(21OHD)のマウスモデルは、21OH活性を欠いたH−2aw18マウス(Cyp21−/−)により提供される。遺伝的欠陥は、活性のCyp21a1遺伝子と偽遺伝子との不均等な乗換えにより引き起こされて、Cyp21a1の部分欠失を含むハイブリッドCyp21a1−Cyp21a2−p遺伝子を結果としてもたらす(Riepe et al.、Endocrinology 2005;146:2563〜2574)。Cyp21−/−マウスは、異常な視床下部−下垂体−副腎フィードバック、副腎髄質および皮質の構造および機能の変化を有することが公知である(Tajima et al.、Endocrinology 1999;140:3354〜3362;Bornstein et al.、FASEB J 1999;13:1185〜1194)。グルココルチコイドを投与しない場合、このマウスモデルにおけるCyp21a1遺伝子の欠失は致死的であることが公知である。Cyp21−/−マウスは、母親および子への早期のグルココルチコイド投与にもかかわらず極めて脆弱なままである。虚弱は、新生期を生き延びた成体Cyp21−/−マウスにおいて原則のままである(Tajima et al.、Endocrinology 1999;140:3354〜3362)。
動物手順
組織化学分析のために、ヘマトキシリンおよびエオシンを用いて10μmの凍結切片を染色した。
緑色蛍光によるGFP検出を通じてAAVrh10−CAG−GFPベクターの発現を評価した。Nikon Eclipse TI倒立顕微鏡(Champigny sur Marne、France)上で顕微鏡解析を行った。
製造者のプロトコールにしたがってDNeasy Blood&Tissue kit(Qiagen、Courtaboeuf、France)を使用して異なる組織からDNAを抽出した。標準的な条件を使用してPlatinum Quantitative PCR SuperMix−UDG(Thermo Fisher Scientific、Courtaboeuf、France)を用いるqPCRにより各組織について二倍体細胞当たりのベクターゲノムの量を決定した。CYP21A2導入遺伝子(フォワード5’−ACAGTCATCATTCCGAACCTCCA−3’(配列番号:4)、リバース5’−AAGGCCAGAGCTCTGGAGTTCTT−3’(配列番号:5))および宿主ゲノムのマウス脳由来神経栄養因子(フォワード5’−TGCTGGATGAGGACCAGAAGGTT−3’(配列番号:6)、リバース5’−AGGAGGCTCCAAAGGCACTTGA−3’(配列番号:7))に対してプライマーを標的化した。Light Cycler 480(Roche Diagnostics、Meylan、France)を使用して増幅を行った。
製造者のプロトコールにしたがってPrecellys24 homogenizer(Ozyme、Saint−Quentin−en−Yvelines、France)およびRNeasy mini kit(Qiagen)を使用してスナップ冷却した組織からトータルRNAを抽出し、DNAse I(Promega)を用いて処理した。SuperScript VILO cDNA Synthesis Kit(Thermo Fisher Scientific)を使用して逆転写によりcDNAを生成した。表1に記載のプライマーを用いてPlatinum Quantitative PCR SuperMix−UDG(Thermo Fisher Scientific)およびLight Cycler 480(Roche Biosciences)を使用して定量的RT−PCRを行った。マウスTATAボックス結合タンパク質(Tbp)をコードする遺伝子を内部標準として使用した。各遺伝子型について皮質細胞の量にしたがって未加工データを正規化した。
表1.プライマーペア
組織またはY1細胞の抽出物を溶解緩衝液(Promega)中でホモジナイズした。総タンパク質抽出物(5μg)をnupage 4−12% Bis−Tris Gels NP0323BOX(ThermoFisher Scientific)上で分析した。タンパク質をニトロセルロース膜に転写し、5%の脱脂乳を用いてブロッキングした後、以下の一次抗体:ヒトおよびマウスタンパク質を検出する21−ヒドロキシラーゼに対するポリクローナル抗体(Corgen、Taipei、Taiwan)、GAPDHに対する抗体(Abcam、Cambridge、UK;Ab9484、1:3000)とインキュベートした。ペルオキシダーゼ(peroxydase)に連結させた二次抗体抗マウスIgG(GE Healthcare、Velizy Villacoublay、France)を1:3000に希釈し、Clarity Western ECL Substrate(Bio−rad、Marnes la Coquette、France)を用いる反応の検出のために使用した。
商用のプロゲステロンEIA(Arbor Assays、Ann Arbor、MI、USA)を使用してY1上清およびマウス尿中のプロゲステロン濃度を測定した。クレアチニン濃度(Urinary Creatinine Detection Kit;Arbor Assays)を使用して尿中プロゲステロン濃度を正規化した。
12%のCyp21−/−マウスのみが新生期を生き延びた。マウスを成体期の間に試験した。雌親および子のグルココルチコイド(glucorticoid)処置にもかかわらず、それらのCyp21−/−生存マウスは、対照またはヘテロ接合マウスと比較してより軽くかつ虚弱に成長した(図1Aおよび図1B)。Cyp21+/−マウスおよびCyp21+/+マウスは研究の間に体重の同等の進展を有したので、それらのデータを比較用の「対照」群としてプールした。ロータロッドを用いて試験したCyp21−/−マウス自発運動活動性は正常であった(図2A)。予想外なことに、Cyp21−/−マウスは、尾懸垂試験の間の行動的絶望および高架式十字迷路試験における成績の低下などの不安およびうつ病様行動の形質を示した(図2B〜2F)。
Y1細胞株はステロイドを11/8,20a−ジヒドロキシプロゲステロンに代謝するが、21−ヒドロキシル化ステロイド生成物を産生しない(Parker et al.、Proc Natl Acad Sci USA 1985;82:7860〜7864)。in vitroにおいて、pCYP21プラスミドをトランスフェクトしたY1細胞は21OHタンパク質を発現し(図4A)、非機能的なpLucプラスミドをトランスフェクトしたY1細胞より低い上清中のプロゲステロン濃度を示した(図4B)。これらの細胞へのpCYP21のトランスフェクションは21OHの発現を結果としてもたらした。これは、トランスフェクトした細胞培養物において上清中のプロゲステロン濃度の減少を結果としてもたらし、形質導入された21OHがプロゲステロンの代謝を増加させたことを指し示す。これは、CAGプロモーターは機能的なレベルまでの21OH遺伝子の発現を可能とすることを含意していた。
表2.CYP21ベクターを用いて処置したCyp21−/−マウスの末梢臓器における細胞当たりのCYP21ベクターコピー数(VCN)およびCYP21 mRNA含量(n=16)。
機能的なCYP21ベクターを用いて処置したCyp21−/−マウスは、偽ベクターを注射したCyp21−/−マウスと比較した場合に、体重の早期かつ持続的な増加(図1A)および身体的外見の向上を示した(図1B)。CYP21ベクターの注射後5週以内に、Cyp21−/−マウスにおいてプロゲステロンレベルは42%減少した後、研究の15週まで正常に近いままであった(図1C)。CYP21ベクターを用いて処置したCyp21−/−マウスは尾懸垂試験に対する正常な反応を回復し、高架式十字迷路試験における成績の向上を示した(図2B〜2F)。
ssAAV5−PGK−CYP21HAベクターおよびssAAV5−PGK−GFPベクターを製造した。これらのベクターは、AAV2 ITR配列を有するゲノムを含有し、AAV5キャプシドタンパク質をコードする。表3に示すように、野生型マウス(B6)の静脈内(i.v.)および副腎内注射を介して3匹の非ヒト霊長動物(NHP)(カニクイザル(Macaca fascicularis))にこれらのrAAVを投与した。
表3.AAV5−PGK rAAVの投与
ssAAV6−CAG−GFPベクターを製造した。このベクターは、AAV2 ITR配列を有するゲノムを含有し、AAV6キャプシドタンパク質をコードする。表5に示すように、野生型マウス(B6)の静脈内(i.v.)および副腎内注射を介して2匹の非ヒト霊長動物(NHP)(カニクイザル)にこのrAAVを投与した。
表5.AAV6−CAG rAAVの投与
表6.AAV6−CAG rAAVの効果
ssAAV1−CB6−GFPベクターおよびssAAV1−PGK−CYP21HAベクターを製造した。これらのベクターは、AAV2 ITR配列を有するゲノムを含有し、AAV1キャプシドタンパク質をコードする。表7に示すように、野生型マウス(B6)の静脈内(i.v.)および副腎内注射を介して1匹の非ヒト霊長動物(NHP)(カニクイザル)にこれらのrAAVを投与した。
表7.AAV1 rAAVの投与
表8.AAV1 rAAVの効果
AAV6−CAG−GFP、AAV1−CB6−GFPまたはAAV5−PGK−CYPHAの投与の3週後にマウス性腺および副腎においてGFPまたはCYP21HA VGCを測定した。結果を表9に示す。性腺は、使用したベクターに依存して、有意であるが副腎よりはるかに低いVGC含量を示した。
表9.rAAVの投与後のマウス性腺および副腎におけるVGC
ssAAVrh10−CAG−CYP21HAベクターを製造した。このベクターは、AAV2 ITR配列を有するゲノムを含有し、AAV rh10キャプシドタンパク質をコードする。このrAAVベクターをCyp21−/−マウスの静脈内(i.v.)に投与した。
表11.ssAAVrh10−CAG−CYP21HAの注射の15週後の7か月齢Cyp21−/−マウスの副腎におけるCYP21 VGC
表12.2×1010vg/g体重または1×1010vg/g体重においてssAAVrh10−CAG−CYP21HAを用いて処置した2〜3か月齢Cyp21−/−マウスにおける尿中プロゲステロンレベル
非ヒト霊長動物(NHP)(カニクイザル)へのヒト野生型CYP21導入遺伝子(hCYP21)またはGFPの送達におけるAAV1、AAV5またはAAV6血清型を有する組換えベクターの有効性を比較した。処置および選択した結果を表13に要約する。ベクターにおいて使用したプロモーターはCAG、PGKまたはCB6であった。hCYP21導入遺伝子をヘマグルチニン(HA)タグに融合させた。非ヒト霊長動物識別記号を「NHP ID」とラベルした列に提供する。投与経路は副腎内(IA)注射または静脈注射(IV)であった。「注射した腺」の列は、右副腎または左副腎のいずれに注射したかを指し示す。一部の場合には、ベクターは、IA注射から循環中に逃れ、注射していない腺に形質導入した。表13はまた、ベクターについての注射した用量を提供する。ベクターゲノムコピー(VGC)測定値は、臓器を解剖および加工した後に行った。臓器を解剖および加工した後に定量的逆転写PCR(qRT−PCR)によりCYP21またはGFPのmRNAレベルを測定した。mRNA値は、GAPDHと比べたhCYP21の発現である。HAまたはGFP発現をまた、免疫蛍光(IF)により可視化した。発現のレベルを「IF」とラベルした列に提供する。
野生型(WT)ヒトCYP21導入遺伝子またはコドン最適化(CO)ヒトCYP21導入遺伝子(配列番号:50)のいずれかを含有する組換え血清型AAV5ベクターを製造した。これらの各rAAVベクターは、CBAプロモーター、Kozak配列および脱標的化のためのmiR−122 miRNA結合部位(ThakralおよびGhoshal、Curr Gene Ther.2015;15(2):142〜150)を含んでいた。野生型導入遺伝子を含有するベクターをAAV5−CBA−Kozak−hCYP21−miR122と称する。コドン最適化導入遺伝子を含有するベクターをAAV5−CBA−Kozak−COhCYP21−miR122と称する。野生型カニクイザルCYP21導入遺伝子を含有する対照AAV5ベクターを製造した(AAV5−CBA−Kozak−CynoCYP21)。
Claims (28)
- 少なくとも1つのAAV逆末端反復配列(ITR)および21−ヒドロキシラーゼ(21OH)タンパク質をコードする非AAVヌクレオチド配列を含む核酸分子を含む組換えアデノ随伴ウイルス(rAAV)ベクターであって、前記非AAVヌクレオチド配列がプロモーターに作動可能に連結されている、rAAVベクター。
- 前記21OHタンパク質がヒト21OHタンパク質である、請求項1に記載のrAAVベクター。
- 21OHタンパク質をコードする前記非AAVヌクレオチド配列がヒト21OH(CYP21A2)cDNAを含むまたはからなる、請求項1に記載のrAAVベクター。
- 21OHタンパク質をコードする前記非AAVヌクレオチド配列がコドン最適化ヌクレオチド配列を含むまたはからなる、請求項3に記載のrAAVベクター。
- 21OHタンパク質をコードする前記非AAVヌクレオチド配列が配列番号:50を含むまたはからなる、請求項1〜4のいずれか1項に記載のrAAVベクター。
- 21OHタンパク質をコードする前記非AAVヌクレオチド配列が、配列番号:1のアミノ酸配列または配列番号:1に対して少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%もしくは少なくとも99%同一のアミノ酸配列をコードする、請求項1〜5のいずれか1項に記載のrAAVベクター。
- 前記プロモーターが宿主細胞中での前記21OHタンパク質の発現を指令する、請求項1〜6のいずれか1項に記載のrAAVベクター。
- 前記宿主細胞が副腎細胞または副腎皮質細胞である、請求項7に記載のrAAVベクター。
- 前記プロモーターが、サイトメガロウイルス/β−アクチンハイブリッドプロモーター、PGKプロモーターまたは発現が副腎皮質細胞において特異的なプロモーターである、請求項1〜8のいずれか1項に記載のrAAVベクター。
- 前記サイトメガロウイルス/β−アクチンハイブリッドプロモーターが、CAG、CB6またはCBAプロモーターである、請求項9に記載のrAAVベクター。
- 前記プロモーターが、配列番号:2、配列番号:3、配列番号:48または配列番号:49のヌクレオチド配列を含むまたはからなる、請求項1〜10のいずれか1項に記載のrAAVベクター。
- 前記ITRが、AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、rh10またはrh74血清型ITRである、請求項1〜11のいずれか1項に記載のrAAVベクター。
- 前記rAAVが、AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、rh10またはrh74血清型である、請求項1〜12のいずれか1項に記載のrAAVベクター。
- 21−ヒドロキシラーゼ(21OH)タンパク質をコードする非AAVヌクレオチド配列を含む核酸分子を含む組換えアデノ随伴ウイルス(rAAV)ベクターであって、前記非AAVヌクレオチド配列がプロモーターに作動可能に連結されており、
前記rAAVベクターが少なくとも1つのAAV逆末端反復配列(ITR)を含み、前記ITRが、血清型AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、rh10またはrh74のAAVからのものであり、かつ
前記プロモーターが、サイトメガロウイルス/β−アクチンハイブリッドプロモーター、PGKプロモーターまたは発現が副腎皮質細胞において特異的なプロモーターである、
rAAVベクター。 - 前記サイトメガロウイルス/β−アクチンハイブリッドプロモーターが、CAG、CB6またはCBAプロモーターである、請求項14に記載のrAAVベクター。
- 請求項1〜15のいずれか1項に記載のrAAVベクターを含むrAAV粒子。
- AAV血清型AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、rh10またはrh74からの少なくとも1つのキャプシドタンパク質をさらに含む、請求項16に記載のrAAV粒子。
- 請求項1〜15のいずれか1項に記載のrAAVベクターまたは請求項16もしくは17に記載のrAAV粒子、および薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む、医薬組成物。
- rAAV粒子を製造する方法であって、(a)請求項1〜15のいずれか1項に記載のrAAVベクター、(b)AAV repをコードする核酸分子、(c)少なくとも1つのAAVキャプシドタンパク質をコードする核酸分子および(d)前記rAAV粒子をパッケージングするための充分なヘルパー機能を含有する宿主細胞を培養することを含む、方法。
- それを必要とする対象において21−ヒドロキシラーゼ(21OH)を発現させる方法であって、前記対象に治療有効量の、請求項1〜15のいずれか1項に記載のrAAVベクター、請求項16もしくは17に記載のrAAV粒子または請求項18に記載の医薬組成物を投与し、それにより、前記対象において21OHを発現させることを含む、方法。
- 前記21OHが、前記対象の副腎皮質、副腎髄質、副腎幹細胞、副腎前駆細胞、肝臓または卵巣中で発現される、請求項20に記載の方法。
- 21−ヒドロキシラーゼ欠損症(21OHD)を有する対象を治療する方法であって、前記対象に治療有効量の、請求項1〜15のいずれか1項に記載のrAAVベクター、請求項16もしくは17に記載のrAAV粒子または請求項18に記載の医薬組成物を投与し、それにより、前記対象において21OHDを治療することを含む、方法。
- 前記投与するステップの前に21OHDを有する対象を選択することをさらに含む、請求項22に記載の方法。
- 前記rAAVベクター、前記rAAV粒子または前記医薬組成物が、静脈内に、直視下手術もしくは腹腔鏡検査法を介して副腎への直接注射によりまたはカテーテル法を介して副腎動脈への注射により前記対象に投与される、請求項19〜23のいずれか1項に記載の方法。
- 副腎への前記直接注射が副腎皮質への直接注射である、請求項24に記載の方法。
- 前記対象が、プラダーのステージIVまたはVの形態の21OHDを罹患している、請求項22〜25のいずれか1項に記載の方法。
- 前記対象が、先天性副腎過形成症(CAH)を罹患している、請求項22〜26のいずれか1項に記載の方法。
- 21−ヒドロキシラーゼ欠損症を治療するための医薬の製造における、請求項1〜15のいずれか1項に記載のrAAVベクターまたは請求項16もしくは17に記載のrAAV粒子の使用。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2023062403A JP2023076698A (ja) | 2018-01-17 | 2023-04-06 | 21-ヒドロキシラーゼ欠損症のためのアデノ随伴ウイルス遺伝子療法 |
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201862618307P | 2018-01-17 | 2018-01-17 | |
US62/618,307 | 2018-01-17 | ||
US201862640311P | 2018-03-08 | 2018-03-08 | |
US62/640,311 | 2018-03-08 | ||
PCT/US2019/013991 WO2019143803A1 (en) | 2018-01-17 | 2019-01-17 | Adeno-associated virus gene therapy for 21-hydroxylase deficiency |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2023062403A Division JP2023076698A (ja) | 2018-01-17 | 2023-04-06 | 21-ヒドロキシラーゼ欠損症のためのアデノ随伴ウイルス遺伝子療法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2021511020A true JP2021511020A (ja) | 2021-05-06 |
JPWO2019143803A5 JPWO2019143803A5 (ja) | 2022-01-26 |
Family
ID=65494499
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020537156A Pending JP2021511020A (ja) | 2018-01-17 | 2019-01-17 | 21−ヒドロキシラーゼ欠損症のためのアデノ随伴ウイルス遺伝子療法 |
JP2023062403A Pending JP2023076698A (ja) | 2018-01-17 | 2023-04-06 | 21-ヒドロキシラーゼ欠損症のためのアデノ随伴ウイルス遺伝子療法 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2023062403A Pending JP2023076698A (ja) | 2018-01-17 | 2023-04-06 | 21-ヒドロキシラーゼ欠損症のためのアデノ随伴ウイルス遺伝子療法 |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20210277365A1 (ja) |
EP (1) | EP3740244A1 (ja) |
JP (2) | JP2021511020A (ja) |
KR (1) | KR20200110376A (ja) |
CN (1) | CN111601620A (ja) |
BR (1) | BR112020014404A2 (ja) |
CA (1) | CA3088323A1 (ja) |
WO (1) | WO2019143803A1 (ja) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA3212876A1 (en) | 2021-03-19 | 2022-09-22 | Adrenas Therapeutics, Inc. | Gene therapies for 21-hydroxylase deficiency |
WO2023064811A1 (en) | 2021-10-12 | 2023-04-20 | Aspa Therapeutics, Inc. | Methods and compositions for treating leukodystrophies |
CN115976004A (zh) * | 2022-12-27 | 2023-04-18 | 天津科技大学 | 一种黄体酮17α-羟化酶突变体及其应用 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002516092A (ja) * | 1998-05-28 | 2002-06-04 | アメリカ合衆国 | Aav5ベクターおよびその使用 |
Family Cites Families (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5478745A (en) | 1992-12-04 | 1995-12-26 | University Of Pittsburgh | Recombinant viral vector system |
US6136597A (en) | 1997-09-18 | 2000-10-24 | The Salk Institute For Biological Studies | RNA export element |
AU2002359284A1 (en) | 2001-12-17 | 2003-06-30 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Adeno-associated virus (aav) serotype 9 sequences, vectors containing same, and uses therefor |
AU2002360291A1 (en) | 2001-12-17 | 2003-06-30 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Adeno-associated virus (aav) serotype 8 sequences |
EP1486567A1 (en) | 2003-06-11 | 2004-12-15 | Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts | Improved adeno-associated virus (AAV) vector for gene therapy |
JP5054975B2 (ja) | 2003-09-30 | 2012-10-24 | ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア | アデノ随伴ウイルス(aav)の同源系統群、配列、それらを含有するベクターおよびそれらの用途 |
EP2678433B1 (en) | 2011-02-22 | 2017-05-03 | California Institute of Technology | Delivery of proteins using adeno-associated virus (aav) vectors |
KR102380265B1 (ko) | 2013-07-22 | 2022-03-29 | 더 칠드런스 호스피탈 오브 필라델피아 | 변종 aav 및 조성물, 세포, 기관 및 조직으로의 유전자 전이를 위한 방법 및 용도 |
WO2015041718A1 (en) * | 2013-09-20 | 2015-03-26 | The General Hospital Corporation | Uses of modified mullerian inhibiting substance (mis) proteins for the treatment of neurodegenerative diseases |
EP3054006A1 (en) | 2015-02-09 | 2016-08-10 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) | Recombinant adeno-associated virus particle purification with multiple-step anion exchange chromatography |
-
2019
- 2019-01-17 KR KR1020207023328A patent/KR20200110376A/ko unknown
- 2019-01-17 CN CN201980008414.XA patent/CN111601620A/zh active Pending
- 2019-01-17 US US16/962,552 patent/US20210277365A1/en active Pending
- 2019-01-17 EP EP19706059.3A patent/EP3740244A1/en active Pending
- 2019-01-17 JP JP2020537156A patent/JP2021511020A/ja active Pending
- 2019-01-17 WO PCT/US2019/013991 patent/WO2019143803A1/en unknown
- 2019-01-17 BR BR112020014404-5A patent/BR112020014404A2/pt unknown
- 2019-01-17 CA CA3088323A patent/CA3088323A1/en active Pending
-
2023
- 2023-04-06 JP JP2023062403A patent/JP2023076698A/ja active Pending
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002516092A (ja) * | 1998-05-28 | 2002-06-04 | アメリカ合衆国 | Aav5ベクターおよびその使用 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
ENDOCR. J., vol. Vol. 63, Issue 10, JPN6023000132, 2016, pages 897 - 904, ISSN: 0005088736 * |
GENE THER., vol. 24, JPN7023000003, 2017, pages 275 - 281, ISSN: 0005088737 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2019143803A1 (en) | 2019-07-25 |
CA3088323A1 (en) | 2019-07-25 |
BR112020014404A2 (pt) | 2020-12-29 |
CN111601620A (zh) | 2020-08-28 |
US20210277365A1 (en) | 2021-09-09 |
EP3740244A1 (en) | 2020-11-25 |
KR20200110376A (ko) | 2020-09-23 |
JP2023076698A (ja) | 2023-06-01 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6831779B2 (ja) | 修飾された第ix因子、並びに、細胞、器官及び組織への遺伝子導入のための組成物、方法及び使用 | |
US20240131093A1 (en) | Compositions and methods of treating huntington's disease | |
US20220333131A1 (en) | Modulatory polynucleotides | |
US11603542B2 (en) | Compositions and methods of treating amyotrophic lateral sclerosis (ALS) | |
AU2018365677A1 (en) | Means and method for preparing viral vectors and uses of same | |
JP2023076698A (ja) | 21-ヒドロキシラーゼ欠損症のためのアデノ随伴ウイルス遺伝子療法 | |
JP2022088656A (ja) | 眼疾患のための遺伝子療法 | |
JP2022500066A (ja) | 操作されたプロモータを有するフラタキシン発現コンストラクトおよびその使用方法 | |
TW202144575A (zh) | 使用aav及治療調配物之苯酮尿症治療 | |
US20230285596A1 (en) | Compositions and methods for the treatment of niemann-pick type c1 disease | |
TW202035689A (zh) | 測量病毒載體粒子的效價及強度之方法 | |
US20230136699A1 (en) | Gene therapy for maple syrup urine disease | |
JP7287611B2 (ja) | 改良型アデノ随伴ウイルスベクター | |
TWI813851B (zh) | 具有工程化之啟動子之共濟蛋白(frataxin)表現構築體及其使用方法 | |
KR20230159837A (ko) | 21-하이드록실라제 결핍에 대한 유전자 요법 | |
TW202330914A (zh) | 用於鳥胺酸胺甲醯基轉移酶(otc)缺乏症之活體內核酸酶介導的治療之組成物及方法 | |
JP2021520231A (ja) | シュタルガルト病の処置のための組成物及び方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220117 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20220117 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20221228 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20230106 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230406 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20230621 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20230920 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20231030 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20240119 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20240520 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20240610 |