JP2021505619A - 発作障害の治療におけるｍｉｒ１０１またはｍｉｒ１２８の使用 - Google Patents

Abstract

患者の脳細胞内のマイクロＲＮＡ−１０１分子のレベルを増加させる有効量の組成物を患者に送達することを含む、それを必要とする患者における発作障害を治療する方法が提供される。患者の脳細胞内のマイクロＲＮＡ−１２８分子のレベルを増加させる有効量の組成物を患者に送達することを含む、それを必要とする患者における発作障害を治療する方法が提供される。マイクロＲＮＡ−１０１、プリｍｉＲ１０１、またはプレｍｉＲ１０１をコードするベクターを患者に投与することを含む、それを必要とする患者における発作障害を治療する方法が提供される。マイクロＲＮＡ−１２８、プリｍｉＲ１２８、またはプレｍｉＲ１２８をコードするベクターを患者に投与することを含む、それを必要とする患者における発作障害を治療する方法が提供される。実施形態では、マイクロＲＮＡ−１０１および／またはマイクロＲＮＡ−１２８のレベルの増加は、発作障害の一つまたは複数の症状の改善を引き起こす。【選択図】図１

Description

関連出願への相互参照
本出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、２０１７年１２月６日に出願された米国仮特許出願第６２／５９５，２５５号の利益および優先権を主張するものである。

技術分野
マイクロＲＮＡのＭＩＲ１０１またはＭＩＲ１２８を用いた発作障害の治療。

背景
発作障害は、典型的には、脳における異常な神経細胞の活動を伴い、この活動は、異常な挙動、感覚、痙攣、意識の減損、および時には意識の喪失の期間により顕在化される発作を引き起こす。発作は、脳に影響を及ぼす可能性のある数多くの異なる障害の症状でありうる。てんかんは、反復発作という特徴を有する発作障害である。例えば、Ｂｌｕｍｅ ｅｔ ａｌ．，Ｅｐｉｌｅｐｓｉａ．２００１；４２：１２１２−１２１８を参照されたい。てんかん発作は、通常、脳内の異常な放電を特徴とし、典型的には、意識の変化もしくは減損、不随意運動、または痙攣の、突然の短期のエピソードによって現れる。

発作は、焦点発作（部分発作とも呼ばれる）および全般発作として分類することができる。焦点発作は脳の片側にのみ影響を及ぼすのに対し、全般発作は脳の両側に影響を及ぼす。具体的な焦点発作の型としては、単純焦点発作、複雑焦点発作、および二次性の全般発作が挙げられる。単純な焦点発作は、特定の葉（例えば、側頭葉、前頭葉、頭頂葉、または後頭葉）に限定または集中されうる。複雑焦点発作は、概して、単純焦点発作よりも片方の半球の大きな部分に影響を及ぼすが、一般的には側頭葉または前頭葉に起因する。焦点発作が脳の片側（半球）から脳の両側に広がる場合に、発作は、二次性の全般発作と呼ばれる。具体的な全般発作の型としては、欠神（小発作ともよばれる）、強直性発作、弛緩性発作、ミオクローヌス発作、強直間代発作（大発作とも呼ばれる）、および間代発作が挙げられる。

発作障害の例としては、てんかん、全般的な強直間代性発作を伴うてんかん、ミオクロニー欠神てんかん、前頭葉てんかん、側頭葉てんかん、ランドウ・クレフナー症候群、ラスムッセン症候群、ドラベ症候群、ドゥーゼ症候群、ＣＤＫＬ５障害、点頭てんかん（ウェスト症候群）、若年性ミオクローヌスてんかん（ＪＭＥ）、ワクチン関連脳症、難治性小児てんかん（ＩＣＥ）、レノックス・ガストー症候群（ＬＧＳ）、レット症候群、大田原症候群、ＣＤＫＬ５障害、小児欠神てんかん、本態性振戦、急性反復性発作、良性ローランドてんかん、てんかん重積、難治性てんかん重積、超難治性てんかん重積（ＳＲＳＥ）、ＰＣＤＨ１９小児てんかん、限局性皮質異形成、および発作活動の増加またはブレークスルー発作（連続発作または群発発作ともよばれる）が挙げられる。発作障害は、ナトリウムチャネルタンパク質１型サブユニットアルファ（Ｓｃｎ１ａ）関連障害と関連しうる。

全ての脳腫瘍の型は、発作障害と関連しうる。ある特定の腫瘍は、より大きな発作頻度と関連する。例えば、神経節膠腫は、脊髄および／または側頭葉で発生しうる成長の遅い良性腫瘍である。神経節膠腫は、新生物性の膠細胞と神経節細胞との両方から構成され、それらは混在し可変的な細胞であり非浸潤性である。神経節膠腫は、一般に発作に関連する。神経膠腫は、脳の膠細胞から発生する脳腫瘍である。神経膠腫は、四つのグレード（Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩおよびＩＶ）に分類され、治療および予後はこの腫瘍グレードに依存する。グレードの低い神経膠腫は、星状膠細胞と乏突起膠細胞という二種類の異なる型の脳細胞を起源とする。グレードの低い神経膠腫は、グレード２の腫瘍として分類され、最も成長の遅い型の神経膠腫であるものとされる。グレードの低い神経膠腫を有する者の６０から８５パーセントは、発作を経験する可能性がある。グレードの高い神経膠腫（グレード３または４）は、典型的に予後不良を呈する増殖の速い神経膠種である。グレード３の神経膠腫としては、退形成星状細胞腫、退形成乏突起膠腫、退形成乏突起星状細胞腫、および退形成上衣腫が挙げられる。神経膠芽腫は、グレード４の神経膠腫である。発作は、グレードＩＩＩの神経膠腫を有する患者の半分超、およびグレードＩＶの神経膠腫を有する患者の約四分の一に発生する。髄膜腫は、髄膜、すなわち脳および脊髄を取り囲む膜から起こる腫瘍である。専門的には脳に位置しないが、髄膜腫は、隣接する脳、神経、および血管を圧縮または圧迫しうる。髄膜腫は、頭部に形成される最も一般的な型の腫瘍である。殆どの髄膜腫はゆっくりと成長している。発作は髄膜腫に関連する。

限局性皮質異形成は、皮質発達の奇形であり、この異常は、小児集団における医学的に難治性のてんかんの共通の原因であり、かつ成人における医学的に不応性の発作の共通の病因である。限局性皮質異形成（ＦＣＤ）は、三つの型とさらに亜型とに分類されている。Ｉ型は、典型的には側頭葉に関連するものであり−ニューロンの異常な放射状移動および成熟の結果として異常な皮質の積層を呈する奇形（Ｉａ型ＦＣＤ）、または未成熟なニューロンを含む皮質の典型的な６層の接線方向の構成の崩壊（Ｉｂ型ＦＣＤ）、または両方の構築的異常、すなわち放射状および接線方向の皮質の積層（Ｉｃ型ＦＣＤ）である。ＩＩ型は、一般に前頭葉において見出されるものであり−皮質の積層の崩壊と特定の細胞学的異常との結果として生じる奇形であり、ＩＩａ型−異形成のニューロン（気球細胞を含まない）、ＩＩｂ型−異形成のニューロンおよび気球細胞である。ＩＩＩ型−同じ領域／葉内の主病変を伴う、異なる皮質の層間剥離および細胞学的異常に関連のある奇形である。ＩＩＩａ型−側頭葉における、海馬萎縮を伴う皮質の層間剥離であり、ＩＩＩｂ型−膠細胞または神経膠細胞の腫瘍（ＤＮＥＴ、神経節膠腫）であり、ＩＩＩｃ型−血管奇形（血管腫、動静脈奇形、毛細血管拡張症など）に隣接するものであり、ＩＩＩｄ型−若齢期に獲得するものである（外傷、虚血または周産期出血、感染症または炎症性疾患）。Ｋａｂａｔ ａｎｄ Ｋｒｏｌ，Ｐｏｌ Ｊ Ｒａｄｉｏｌ，２０１２，７７（２）３５−４３を参照されたい。ＦＣＤは、脳のどの部分でも関わることがあり、サイズおよび位置が異なることがあり、多巣性であることがある。発作は、ＦＣＤの主な症状であり、時として精神遅滞を、具体的には早期の発作の発症を伴う。症状は、どの年齢でも、殆どが小児期に出現しうるが、成人にも発生しうる。ＦＣＤに関連する発作は、薬剤耐性である場合がある。

過誤腫は、その起源の組織における新生物に似た、大部分が良性の限局性奇形である。それらは、その部位で通常見出される組織要素から構成されているが、無秩序な様式で成長する。過誤腫は脳を起源としうる。結節性硬化症（ＴＳＣ）は、様々な器官における過誤腫の成長という特徴を有する遺伝的発作障害である。この障害を有する患者は、高率のてんかんと、脳内の複数の病変に起因する認知的な問題とを呈することがある。ＴＳＣ病変（皮質結節）は、典型的には、異形成のニューロン、明るい好酸球性の巨細胞、および白質の変質を含有する。ＴＳＣに伴う発作は不応性であることがある。灰白隆起過誤腫（視床下部過誤腫としても知られる）は、ニューロンおよび膠細胞の無秩序な集まりが視床下部の灰白隆起に蓄積する良性腫瘍である。症状としては笑い発作が挙げられ、これは、間欠的な易刺激性と抑うつ気分とを伴う非随意性のひとしきりの笑いという特徴を有する障害である。

発作障害の治療に使用される医薬は、抗てんかん薬（「ＡＥＤ」）とよばれることがある。再発性発作の治療は、主に少なくとも一つのＡＥＤの利用を中心としており、単剤療法が失敗した場合には第二の薬剤または第三の薬剤さえ補助的に使用する可能性がある。Ｔｏｌｍａｎ ａｎｄ Ｆａｕｌｋｎｅｒ，Ｔｈｅｒ Ｃｌｉｎ Ｒｉｓｋ Ｍａｎａｇ．２０１１；７： ３６７−３７５を参照されたい。しかし、てんかん患者のおよそ３０％〜４０％は、一つのＡＥＤのみでは発作の制御が不十分であり、補助剤の使用を要する。同上。このグループのサブセットは、複数のＡＥＤを合理的に用量投与するにも関わらず、定期的かつ持続的な発作活動を有するものとなる。これらの発作は、治療に対し難治性であるものと考えられる。同上。したがって、発作障害を治療するための改善されたおよび／または追加的な治療が依然として求められている。

マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）は、ｍＲＮＡの安定性と翻訳との両方に影響を及ぼすことにより、多細胞生物における遺伝子発現の転写後調節に関与する短い（２０〜２４ｎｔ）非コードＲＮＡである。ｍｉＲＮＡは、タンパク質をコードしていることも非コードであることもどちらもありうるキャッピングおよびポリアデニル化された一次転写物（プリｍｉＲＮＡ）の一部として、ＲＮＡポリメラーゼＩＩによって転写される。プリｍｉＲＮＡは、前駆体として知られる約７０ｎｔのヘアピン構造（プレｍｉＲＮＡ）へとプロセッシングされる。プレｍｉＲＮＡは、核から細胞質へと輸送され、それらはそこで、ＲＩＳＣ装填複合体によって約２２ｂｐの二本鎖ＲＮＡへとプロセッシングされる。成熟ｍｉＲＮＡは、ＲＮＡ誘発性サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）に組み込まれるが、この複合体は、ｍｉＲＮＡとの不完全な塩基対形成を介して標的ｍＲＮＡを認識し、最も一般的には標的ｍＲＮＡの翻訳阻害または不安定化をもたらす。

マイクロＲＮＡ１０１（ＭＩＲ１０１、ｍｉＲ１０１、ｍｉＲ−１０１、またはｍｉＲＮＡ−１０１ともよばれる）は、がん細胞株におけるＥＺＨ２の発現および機能の阻害に関連して特定されている。Ｖａｒａｍｂａｌｌｙ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２００８，３２２： １６９５−１６９９を参照されたい。二つのｍｉＲ−１０１アイソフォームがあり、それらはヒトではｍｉＲ−１０１−１およびｍｉＲ−１０１−２であり、マウスではｍｉＲ−１０１ａおよびｍｉＲ−１０１ｂである。Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１７，２９２，１６４２０−１６４３９を参照されたい。全てのｍｉＲ−１０１アイソフォームは、１塩基の差異を有するｍｉＲ−１０１ｂを除いて、同じ成熟配列を有する。同上。ヒトｍｉＲ１０１の成熟配列は、ＵＡＣＡＧＵＡＣＵＧＵＧＡＵＡＡＣＵＧＡＡ［配列番号１］である。Ｌｉｐｐｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ ２０１６，９２（６），１３３７−１３５１は、ｍｉＲ−１０１が、複数の出生後発達プログラムを並行で調節して、成獣の齧歯類における興奮性活動を制約することを示している。Ｌｉｐｐｉらは、マウス海馬のＲＮＡシーケンシングから、出生後１２日目に高発現されるものとして、ｍｉＲ−１０１ａおよびｍｉＲ−１０１ｂを同定した。Ｌｉｐｐｉらは、若齢期で一過的にｍｉＲ−１０１を阻害することにより、成獣で過興奮性のネットワークが生じるものと断定している。ｍｉＲ−１０１の阻害により、自然発生の発作様の事象に似た自然発生の高頻回のバースト発火に至ったものの、Ｌｉｐｐｉらは、このネットワークがてんかん表現型の全体を呈していないものと結論付けている。

マイクロＲＮＡ１２８（ＭＩＲ１２８、ｍｉＲ−１２８またはｍｉＲＮＡ−１２８ともよばれる）は、二つの別々の遺伝子ｍｉＲ−１２８−１およびｍｉＲ−１２８−２によってコードされており、それらは、マウス１番染色体および９番染色体もしくはヒト２番染色体および３番染色体にそれぞれ座乗する。Ｔａｎ，ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２０１３，３４２（６１６３）：１２５４−１２５８。マイクロＲＮＡ１２８−２（ＭＩＲ１２８−２またはｍｉＲ１２８−２ともよばれる）は、成年のマウスおよびヒトの脳において最も豊富で最も高濃縮されたｍｉＲＮＡの一つである。同上。ｍｉＲ１２８の成熟配列は、ＧＧＧＧＧＣＣＧＡＵＡＣＡＣＵＧＵＡＣＧＡＧＡ［配列番号２］である。マウスでは、生殖系列ｍｉＲ−１２８−２の欠損は、大脳にｍｉＲ−１２８発現の８０％の減少をもたらすのに対し、ｍｉＲ−１２８−１遺伝子は、ｍｉＲ−１２８の２０％を排除するに過ぎない。同上。Ｔａｎらは、マウスにおいて、出生後ニューロン中のｍｉＲ−１２８発現の減少が、運動活性および致死的てんかんの増加を引き起こすものと決定した。ｍｉＲ−１２８の過剰発現は、神経学的応答性を弱め、運動活性を抑制し、マウスにおけるパーキンソン様疾患および発作に伴う運動異常を軽減する。同上。
血液脳関門（ＢＢＢ）は、血流中の数多くの化合物が脳の組織および流体に進入することを防ぐ。ＢＢＢは、脳特異的内皮細胞によって形成され、神経血管ユニットの細胞によって支持されて、脳間質内または外への極性分子、またはタンパク質やペプチドなどの大分子の通過を制限する。しかし、ＢＢＢはまた、脳の状態および疾患の有効な治療に干渉する可能性のある数多くの治療化合物が脳に進入することも防ぐ。

ＢＢＢを介した治療薬の輸送を支援する方法の一つは、ＢＢＢに超音波エネルギーを送達することを伴うが、この超音波エネルギーは、ＢＢＢを「開放して」、脳内への治療剤の輸送を防ぐＢＢＢの能力に干渉する。例えば、ＢＢＢを介した化合物の画像誘導型超音波送達を対象とした米国特許第５，７５２，５１５号を参照されたい。一態様では、超音波によって中枢神経系（ＣＮＳ）組織および／または流体に誘発される変化は、加熱または空洞現象によるものである。このような加熱または空洞現象は、組織に損傷を引き起こすことがあり、治療上の利益のために送達される化合物を分解する可能性があることから、欠点を示すことがある。超音波は有機化合物の分解も引き起こす。例えば、Ｂｒｅｍｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１５（２）：１６８−１７７（２０１１）（「Ｂｒｅｍｎｅｒら」）を参照されたい。Ｂｒｅｍｎｅｒらによれば、水溶液に超音波を照射すると、水のＨ−Ｏ結合がホモリシスにより切断されて、ヒドロキシルラジカルおよび水素原子を形成する。このプロセスは空洞現象の結果であり、この現象により、内側に破裂している気泡内に非常に高い温度および圧力が生成される。同上。したがって、脳への治療化合物の送達を引き起こすかまたは増加させるためにＢＢＢを開放しようと超音波を使用することにより、それらが分解し、治療処置が妨げられるかまたは阻止されるものとなりうる。

概要
患者の脳細胞内のマイクロＲＮＡ−１０１分子のレベルを増加させる有効量の組成物を患者に送達することを含む、それを必要とする患者における発作障害を治療する方法が提供される。患者の脳細胞内のマイクロＲＮＡ−１２８分子のレベルを増加させる有効量の組成物を患者に送達することを含む、それを必要とする患者における発作障害を治療する方法が提供される。マイクロＲＮＡ−１０１、プリｍｉＲ１０１、またはプレｍｉＲ１０１をコードするベクターを患者に投与することを含む、それを必要とする患者における発作障害を治療する方法が提供される。マイクロＲＮＡ−１２８、プリｍｉＲ１２８、またはプレｍｉＲ１２８をコードするベクターを患者に投与することを含む、それを必要とする患者における発作障害を治療する方法が提供される。実施形態では、マイクロＲＮＡ−１０１またはマイクロＲＮＡ−１２８のレベルの増加は、発作障害の一つまたは複数の症状の改善を引き起こす。

実施形態では、マイクロＲＮＡ−１０１、プリｍｉＲ１０１、またはプレｍｉＲ１０１をコードするベクターは、発作障害を有する患者にマイクロＲＮＡ−１０１のレベルの増加を引き起こし、発作障害の症状の低減に関連する。実施形態では、マイクロＲＮＡ−１２８、プリｍｉＲ１２８、またはプレｍｉＲ１２８をコードするベクターは、発作障害を有する患者にマイクロＲＮＡ−１２８のレベルの増加を引き起こし、発作障害の症状の低減に関連する。

実施形態では、マイクロＲＮＡ−１０１、プリｍｉＲ１０１、またはプレｍｉＲ１０１をコードする核酸を含むベクターは、マイクロＲＮＡ−１０１、プリｍｉＲ１０１、またはプレｍｉＲ１０１をコードする核酸に動作可能に連結されたプロモーターを含む。実施形態では、ベクターは、ウッドチャック転写後調節因子（ＷＰＲＥ）を含む。実施形態では、ベクターは、ウシ成長ホルモンポリアデニル化配列（ＢＧＨｐＡ）を含む。実施形態では、ベクターは蛍光レポーターカセットを含む。実施形態では、ベクターはアデノ関連ウイルスである。実施形態では、ベクターはレンチウイルスである。実施形態では、マイクロＲＮＡ−１２８、プリｍｉＲ１２８、またはプレｍｉＲ１２８をコードする核酸を含むベクターは、マイクロＲＮＡ−１２８、プリｍｉＲ１２８、またはプレｍｉＲ１２８をコードする核酸に動作可能に連結されたプロモーターを含む。実施形態では、マイクロＲＮＡ−１２８をコードする核酸は、マイクロＲＮＡ−１２８−２である。実施形態では、ベクターは、ウッドチャック転写後調節因子（ＷＰＲＥ）を含む。実施形態では、ベクターは、ウシ成長ホルモンポリアデニル化配列（ＢＧＨｐＡ）を含む。実施形態では、ベクターは蛍光レポーターカセットを含む。実施形態では、ベクターはアデノ関連ウイルスである。実施形態では、ベクターはレンチウイルスである。実施形態では、ベクターはｐＡＭ／ＣＢＡ−ｍｉＲ１０１−１−ＷＰＲＥ−ＢＧＨｐＡである。実施形態では、ベクターはｐＡＭ／ＣＢＡ−ｍｉＲ１２８−２−ＷＰＲＥ−ＢＧＨｐＡである。

実施形態では、ベクターは患者の脳内の標的位置に送達される。実施形態では、標的位置は、前頭葉、側頭葉、後頭葉、または頭頂葉である。実施形態では、ベクターの投与経路は、経口、頬側、舌下、直腸、局所的、鼻腔内、膣、または非経口である。実施形態では、ベクターは標的位置に直接的に投与される。

実施形態では、発作障害は焦点発作という特徴を有する。実施形態では、発作障害は限局性皮質異形成である。実施形態では、発作障害は、てんかん、全般的な強直間代性発作を伴うてんかん、ミオクロニー欠神てんかん、前頭葉てんかん、側頭葉てんかん、後頭葉てんかん、頭頂葉てんかん、ランドウ・クレフナー症候群、ラスムッセン症候群、ドラベ症候群、ドゥーゼ症候群、ＣＤＫＬ５障害、点頭てんかん（ウェスト症候群）、若年性ミオクローヌスてんかん（ＪＭＥ）、ワクチン関連脳症、難治性小児てんかん（ＩＣＥ）、レノックス・ガストー症候群（ＬＧＳ）、レット症候群、大田原症候群、ＣＤＫＬ５障害、小児欠神てんかん、本態性振戦、急性反復性発作、良性ローランドてんかん、てんかん重積、難治性てんかん重積、超難治性てんかん重積（ＳＲＳＥ）、ＰＣＤＨ１９小児てんかん、脳腫瘍誘発性発作、過誤腫誘発性発作、薬物離脱誘発性発作、アルコール離脱誘発性発作、発作活動の増加またはブレークスルー発作である。

実施形態では、超音波は、患者の脳内の標的位置に適用されて、標的位置で患者の血液脳関門の浸透性を増強し、その場合、マイクロＲＮＡ−１０１またはマイクロＲＮＡ−１２８が標的位置に送達される。

図１は、ｐＡＭ／ＣＢＡ−ｍｉＲ１０１−１−ＷＰＲＥ−ＢＧＨｐＡのプラスミドマップである。 図２Ａ、図２Ｂ、図２Ｃ、および図２Ｄは、ｐＡＭ／ＣＢＡ−ｍｉＲ１０１−１−ＷＰＲＥ−ＢＧＨｐＡ［配列番号３］のヌクレオチド配列を示す。 同上。 同上。 同上。 図３は、ｐＣＭＶ−ＭＩＲ１０１−１のプラスミドマップである。 図４は、ｐＡＭ＿ＣＢＡ−ｐｌ−ＷＰＲＥ−ＢＧＨｐＡのプラスミドマップである。 図５は、ｐＡＭ／ＣＢＡ−ｍｉＲ１２８−２−ＷＰＲＥ−ＢＧＨｐＡのプラスミドマップである。 図６Ａ、図６Ｂ、図６Ｃ、および図６Ｄは、ｐＡＭ／ＣＢＡ−ｍｉＲ１２８−２−ＷＰＲＥ−ＢＧＨｐＡ［配列番号４］のヌクレオチド配列を示す。 同上。 同上。 同上。 図７は、ｐＣＭＶ−ＭＩＲ１２８−２のプラスミドマップである。 図８は、ＡＡＶＲｅｃ３［配列番号５］のアミノ酸配列を図示する。

詳細な説明
本明細書に記載されるのは、発作障害を有する患者にマイクロＲＮＡ−１０１、プリｍｉＲ１０１、またはプレｍｉＲ１０１を投与することを含む、発作障害を治療するための方法および組成物である。また、本明細書に記載されるのは、発作障害を有する患者にマイクロＲＮＡ−１２８、プリｍｉＲ１２８、またはプレｍｉＲ１２８を投与することを含む、発作障害を治療するための方法および組成物である。実施形態では、マイクロＲＮＡ−１０１、プリｍｉＲ１０１、またはプレｍｉＲ１０１をコードするベクターが提供される。実施形態では、マイクロＲＮＡ−１０１、プリｍｉＲ１０１、またはプレｍｉＲ１０１をコードするベクターは、発作障害を有する患者に投与され、その場合、患者は発作障害の一つまたは複数の症状の改善を呈する。実施形態では、マイクロＲＮＡ−１２８、プリｍｉＲ１２８、またはプレｍｉＲ１２８をコードするベクターが提供される。実施形態では、マイクロＲＮＡ−１２８、プリｍｉＲ１２８、またはプレｍｉＲ１２８をコードするベクターは、発作障害を有する患者に投与され、その場合、患者は発作障害の一つまたは複数の症状の改善を呈する。実施形態では、超音波は、患者の脳内の標的位置に適用されて、標的位置で患者の血液脳関門の浸透性を増強し、その場合、マイクロＲＮＡ−１０１またはマイクロＲＮＡ−１２８が標的位置に送達される。

マイクロＲＮＡ−１０１、プリｍｉＲ１０１、プレｍｉＲ１０１、マイクロＲＮＡ−１２８、プリｍｉＲ１２８、および／またはプレｍｉＲ１２８は、本明細書ではマイクロＲＮＡ、またはマイクロＲＮＡｓと総称される。マイクロＲＮＡ−１０１、プリｍｉＲ１０１、プレｍｉＲ１０１、マイクロＲＮＡ−１２８、プリｍｉＲ１２８、および／またはプレｍｉＲ１２８の患者への投与は、本明細書ではマイクロＲＮＡ治療と総称される。マイクロＲＮＡ治療は、細胞内のそれぞれの活性マイクロＲＮＡ分子のレベルを増加させる。この増加は、マイクロＲＮＡを細胞に直接的に提供することによって生じることができるか、またはベクターを介するなどマイクロＲＮＡを細胞に間接的に提供することによって生じうる。マイクロＲＮＡは、追加的な配列も含むＲＮＡ分子またはＤＮＡ分子を含みうる。患者の脳細胞におけるそれぞれの活性マイクロＲＮＡ分子のレベルの増加は、発作障害の一つまたは複数の症状の改善と関連する。

一つまたは複数のプリｍｉＲＮＡを、本明細書に記載される組成物および方法で使用することができる。任意の適切な形態のプリｍＲＮＡを使用することができる。プリｍＲＮＡは、細胞内でプロセッシングされ、ｍｉＲＮＡのための機能を高めるように作用しうるが、例えば、プレｍＲＮＡに変換され、次いで成熟体に変換されうる。あるいは、ｍｉＲＮＡは、最初にｍｉＲＮＡ前駆体であることがある。実施形態では、組成物および方法はプレｍｉＲＮＡを含み、プレｍｉＲＮＡは、ＤｉｃｅｒとよばれるＲＮａｓｅＩＩＩ型二重鎖エンドヌクレアーゼによる切断に供され、その結果、約２０〜２５ヌクレオチドのサイズである不完全なｍｉＲＮＡ：ｍｉＲＮＡ＊二重鎖を生じる。この二重鎖は、成熟ｍｉＲＮＡ鎖とその対向する相補的ｍｉＲＮＡ＊鎖とを含有する。一つまたは複数のプレｍｉＲＮＡを、本明細書に記載される組成物および方法で使用することができる。プレｍｉＲＮＡは、ｍｉＲＮＡのための機能を高めるように作用しうる。任意の適切な形態のプレｍｉＲＮＡを使用することができる。また、本明細書に記載される組成物および方法のｍｉＲＮＡが成熟ｍｉＲＮＡでありうることも意図されている。

マイクロＲＮＡは、非発現ベクターまたは発現ベクターの様式で細胞に送達されうる。一つの発現ベクターと複数の発現ベクターとは、本明細書で互換的に使用される。実施形態では、マイクロＲＮＡは、以降のステップで使用する前に単離または精製されてもよい。マイクロＲＮＡは、細胞への導入の前に単離または精製されてもよい。細胞への「導入」は、トランスフェクション、形質導入、感染、および発現ベクターまたは異種核酸を細胞に導入するためのその他の方法の、公知の方法を含む。鋳型核酸または増幅プライマーは、転写または増幅される前に単離または精製されてもよい。分離または精製は、核酸に関する当業者に公知の多数の方法によって実施することができる。マイクロＲＮＡの送達は、いくつかの形態を介して、例えば、化学修飾物の被包化を介するか、またはウイルス性もしくは非ウイルス性の伝達容器内の未修飾のＲＮＡ部分を介するなどで、発生しうる。非発現ベクターの送達様式としては、脳細胞を標的としうるナノ粒子、マイクロ粒子、リポソーム、ポリマー、マイクロスフェアなどが挙げられる。マイクロＲＮＡはまた、プラスミドまたはミニベクターベースの発現系として送達されることがあり、その系では、マイクロＲＮＡは、次いで、細胞内のＲＮＡｉ機構によって発現およびプロセッシングされて、成熟マイクロＲＮＡを形成することができる。

ｍｉＲＮＡ発現のための核酸構築物は、組換えにより作製されてもよい。そのような発現ベクターは本明細書に提供される。発現ベクターとは、それを複製できる細胞への導入のために核酸配列を挿入することのできる担体核酸である。発現ベクターとしては、プラスミド、コスミド、組換えウイルス、例えばアデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）、アデノウイルス、レトロウイルス、ポックスウイルス、および当分野の他の公知のウイルス（バクテリオファージ、動物ウイルス、植物ウイルス）など、ならびに人工染色体（例えばＹＡＣ）が挙げられる。当業者は、標準的な組み換え手法を介して発現ベクターを構築するために十分に装備を有している。実施形態では、マイクロＲＮＡを有する発現ベクターは、患者の細胞に送達される。核酸分子は、それらの取り込まれ得る形態で患者の細胞に送達され、治療上有効なレベルが達成できるように有利に発現される。

当業者に公知の任意の適切な発現ベクターを利用して、本明細書のマイクロＲＮＡを脳内の標的位置に送達してもよい。このような送達があると、標的位置のニューロンがマイクロＲＮＡによりトランスフェクトされ、それによって、患者の脳内のそれらのマイクロＲＮＡのレベルが増加する。ウイルス（例えば、レトロウイルス、アデノウイルス、レンチウイルス、およびアデノ関連ウイルス）ベクターの形質導入は、特に感染の効率が高くまた安定的に組み込まれ発現されることから、体細胞の遺伝子療法に使用することができる。

実施形態では、発現ベクターは、安定組込みベクターであっても安定非組込みベクターであってもよい。適切なベクターの例は、レンチウイルスおよびアデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）である。レンチウイルスは、レトロウイルスのサブクラスである。レンチウイルスは、ニューロンなどの非分裂細胞のゲノムに組み込むことができる。レンチウイルスは、高効率の感染、導入遺伝子の長期の安定的発現、および低い免疫原性という特徴を有する。実施形態では、レンチウイルスベクターを利用して、マイクロＲＮＡを脳に送達してもよい。

ＡＡＶ は、数多くの細胞型に感染することが知られる欠損性パルボウイルスであり、ヒトに非病原性である。ＡＡＶは、分裂細胞と非分裂細胞との両方に感染することができる。 実施形態では、ＡＡＶベクターを本明細書で利用して、マイクロＲＮＡを脳に送達してもよい。任意の公知のアデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）が、本明細書で使用されてもよく、例えば、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、およびＡＡＶＲｅｃ３が、ニューロンに関連して利用されてもよい。適した追加的なＡＡＶセロタイプは、シュードタイピング、すなわち、異なるウイルスセロタイプ由来のカプシドおよびゲノムを混合することによって開発されてきた。したがって、例えば、ＡＡＶ２／７とは、セロタイプ７由来のカプシドにパッケージングされたセロタイプ２のゲノムを含有するウイルスを示す。他の例は、ＡＡＶ２／５、ＡＡＶ２／８、ＡＡＶ２／９などである。ハイブリッドＡＡＶカプシドセロタイプｒｅｃ１、ｒｅｃ２、ｒｅｃ３、およびｒｅｃ４は、全三つの非ヒト霊長類ＡＡＶセロタイプｃｙ５、ｒｈ２０、およびｒｈ３９においてＡＡＶ８に合致するカプシド配列の断片をシャッフリングすることによって生成された。Ｃｈａｒｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ．２０１３ Ａｐｒ ９；８（４）：ｅ６０３６１を参照されたい。用語ｒｅｃ３ＡＡＶとＡＡＶＲｅｃ３とは、本明細書では互換的に使用されうる。ＡＡＶＲｅｃ３のアミノ酸配列を図８に図示する。自己相補的なアデノ関連ウイルス（ｓｃＡＡＶ）もベクターとして利用されうる。ＡＡＶが、ＤＮＡの一本鎖をパッケージングしており、第二鎖合成のプロセスを必要とするのに対し、ｓｃＡＡＶは、互いにアニーリングして二本鎖ＤＮＡを形成する両方の鎖をパッケージングしている。第二鎖合成を省略することにより、ｓｃＡＡＶは、細胞内での速やかな発現を可能にする。

適切なベクターは、公知の技術を使用して当業者によって構築されうる。適切なベクターは、マイクロＲＮＡに加えて適切な調節配列を含有して選定または構築することができ、そのような調節配列としては、プロモーター配列、ターミネーター断片、ポリアデニル化配列、マーカー遺伝子、および適宜他の配列が挙げられる。当業者は、プロモーター配列、ターミネーター断片、ポリアデニル化配列、マーカー遺伝子、および他の適した配列を含めて、適切な調節配列に精通している。

本明細書の発現ベクターは、標的宿主細胞においてその発現を促進するための、コード配列またはＯＲＦに動作可能に連結された適切な配列を含む。「動作可能に連結された」配列には、コード配列に連なるプロモーターなどの発現調節配列、およびトランスまたは遠位に作用して所望の産物の発現を調節する発現調節配列の両方が含まれる。

典型的には、ベクターは、標的細胞内のマイクロＲＮＡの発現を容易にするためのプロモーターを含む。プロモーターは、脳内の選択された導入遺伝子の発現を駆動することができる多数の恒常的プロモーターまたは誘導性プロモーターから選択されてもよい。恒常的プロモーターの例としては、ＣＭＶ最初期エンハンサー／ニワトリベータアクチン（ＣＢＡ）プロモーター−エクソン１−イントロン１因子、ＲＳＶ ＬＴＲプロモーター／エンハンサー、ＳＶ４０プロモーター、ＣＭＶプロモーター、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）プロモーター、およびホスホグリセロールキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーターが挙げられる。

特異性は、例えば、組織特異的または領域特異的なプロモーターを使用する、受容体の領域特異的および細胞型特異的な発現によって専一に達成することができる。ウイルス遺伝子プロモーター因子は、マイクロＲＮＡを発現する細胞のタイプを規定するのに役立ち得る。非特異的なプロモーター（例えば、ＣＡＧ、合成プロモーター）もあれば、神経細胞特異的であるものもある。ＣＡＧプロモーターは、高いレベルの発現を駆動するために使用できる強力な合成プロモーターである。ＣＡＧプロモーターは、１）サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）の初期エンハンサー因子、２）プロモーター、第一エクソン、およびニワトリベータアクチン遺伝子の第一イントロン、および３）ウサギベータグロビン遺伝子のスプライシングアクセプターからなる。実施形態では、プロモーターはＣＡＧプロモーターである。神経細胞特異的プロモーターは、（例えば、シナプシン、ｈＳｙｎ）を含むか、または特定の神経細胞型に選好的であり、例えば、ダイノルフィン、エンセファリン（ｅｎｃｅｐｈａｌｉｎ）、星状膠細胞に選好的なＧＦＡＰ（グリア線維酸性タンパク質）、皮質のグルタミン酸作動性細胞に選好的であるが皮質下のＧＡＢＡ作動性細胞を標的とすることもできるＣａＭＫＩＩａがある。実施形態では、プロモーターは、ＣａｍｋＩＩａ（アルファＣａＭキナーゼＩＩ遺伝子）プロモーターであり、これは前脳内で発現を駆動し得る。他の神経細胞型特異的プロモーターとしては、ＮＳＥプロモーター、チロシンヒドロキシラーゼプロモーター、ミエリン塩基性タンパク質プロモーター、グリア線維酸性タンパク質プロモーター、および神経フィラメント遺伝子（重鎖、中鎖、軽鎖）プロモーターが挙げられる。

発現制御配列としては、適切な転写開始配列、終結配列、およびエンハンサー配列；スプライシングシグナルおよびポリアデニル化シグナルなどの効率的なＲＮＡプロセッシングシグナル；細胞質ｍＲＮＡを安定化する配列；翻訳効率を増強する配列（例えばＫｏｚａｋコンセンサス配列）；核酸またはタンパク質の安定性を増強する配列；ならびに所望に応じて産物のプロセッシングおよび／または分泌を増強する配列が挙げられうる。天然および非天然、恒常的、誘導性、ならびに／または組織特異的なものを含む数多くの様々な発現制御配列が、当技術分野で公知であり、所望の発現タイプに応じて本明細書で利用されうる。

プロモーターに加えて、真核細胞の発現制御配列としては、典型的には、イムノグロブリン遺伝子、ＳＶ４０、ＣＭＶなど、ならびにスプライシングのドナー部位およびアクセプター部位を含みうるポリアデニル化配列などのエンハンサーが挙げられる。ポリアデニル化配列は、一般に、コード配列の３’側および３’ＩＴＲ配列の５’側に挿入される。本明細書のベクターで使用できるポリＡシグナルの例示的な例としては、ポリＡ配列（例えば、ＡＡＴＡＡＡ、ＡＴＴＡＡＡ、またはＡＧＴＡＡＡ）、ウシ成長ホルモンポリＡ配列（ＢＧＨｐＡ）、ウサギベータグロビンポリＡ配列（ｒβｇｐＡ）、または当分野に公知の別の適切な異種または内因性のポリＡ配列が挙げられる。

また、本明細書に有用な調節配列は、プロモーター／エンハンサー配列とコード配列との間に位置するものなど、イントロンを含有してもよい。有用なイントロン配列の一つは、ＳＶ４０に由来し、ＳＶ４０ Ｔイントロン配列とよばれる。別のものとしては、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後因子（ＷＰＲＥ）が挙げられる。ＷＰＲＥは、転写された際に、発現を増強する三次構造を作り出すＤＮＡ配列である。

本明細書のベクターは、レポーター遺伝子、例えば、発蛍光団をコードするものを含有してもよい。発蛍光団は、通常は特定の周波数で、励起されると光を再放射できる蛍光化合物である。それらは、例えば、タンパク質に取り付けてそのタンパク質を位置させることのできる、タグまたはマーカーとして使用することができる。多くの適した発蛍光団が当技術分野で公知である。それらは、発する色、例えば、青色、シアン、緑、黄色、オレンジ、赤などで分類されてもよい。例えば、ｍＣｈｅｒｒｙ、ｍＲａｓｂｅｒｒｙ、ｍＴｏｍａｔｏ、およびｍＲｕｂｙは赤色発蛍光団タンパク質であり、シトリン、ビーナス、およびＥＹＦＰは黄色発蛍光団タンパク質である。緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）は、一般的に使用される発蛍光団である。

実施形態では、発現ベクターはｐＡＭ／ＣＢＡ−ｍｉＲ１０１−１−ＷＰＲＥ−ＢＧＨｐＡである。ｐＡＭ／ＣＢＡ−ｍｉＲ１０１−１−ＷＰＲＥ−ＢＧＨｐＡのプラスミドマップを図１に図示する。核酸配列［配列番号３］を図２Ａ〜図２Ｄに示す。表Ｉは、ｐＡＭ／ＣＢＡ−ｍｉＲ１０１−１−ＷＰＲＥ−ＢＧＨｐＡを注釈する。

ｐＡＭ／ＣＢＡ−ｍｉＲ１０１−１−ＷＰＲＥ−ＢＧＨｐＡを構築するために、ＯｒｉＧｅｎｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，９６２０ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｅｎｔｅｒ Ｄｒ．，Ｓｕｉｔｅ ２００、ロックビル、メリーランド州２０８５０から市販されているｐＣＭＶ−ＭＩＲ１０１−１プラスミド（７７２ｂｐ）（ＳＣ４０００１３）から得られるＥｃｏＲＩ−ＥｃｏＲＶ断片が、ＥｃｏＲＩ＋ＥｃｏＲＶにより切り出されたｐＡＭ＿ＣＢＡ−ｐｌ−ＷＰＲＥ−ＢＧＨｐＡベクターに挿入される。ｐＣＭＶ−ＭＩＲ１０１−１のプラスミドマップを図３に図示する。ｐＡＭ＿ＣＢＡ−ｐｌ−ＷＰＲＥ−ＢＧＨｐＡのプラスミドマップを図４に図示する。

実施形態では、発現ベクターはｐＡＭ／ＣＢＡ−ｍｉＲ１２８−２−ＷＰＲＥ−ＢＧＨｐＡである。ｐＡＭ／ＣＢＡ−ｍｉＲ１２８−２−ＷＰＲＥ−ＢＧＨｐＡのプラスミドマップを図５に図示する。核酸配列［配列番号４］を図６Ａ〜図６Ｄに示す。表ＩＩは、ｐＡＭ／ＣＢＡ−ｍｉＲ１２８−２−ＷＰＲＥ−ＢＧＨｐＡを注釈する。

ｐＡＭ／ＣＢＡ−ｍｉＲ１２８−２−ＷＰＲＥ−ＢＧＨｐＡを構築するために、ＯｒｉＧｅｎｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，９６２０ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｅｎｔｅｒ Ｄｒ．，Ｓｕｉｔｅ ２００、ロックビル、メリーランド州２０８５０から市販されているｐＣＭＶ−ＭＩＲ１２８−２プラスミド（７５５ｂｐ）（ＳＣ４００１１２）から得られるＥｃｏＲＩ−ＥｃｏＲＶ断片が、ＥｃｏＲＩ＋ＥｃｏＲＶにより切り出されたｐＡＭ＿ＣＢＡ−ｐｌ−ＷＰＲＥ−ＢＧＨｐＡベクターに挿入される。ｐＣＭＶ−ＭＩＲ１２８−２のプラスミドマップを図７に図示する。ｐＡＭ＿ＣＢＡ−ｐｌ−ＷＰＲＥ−ＢＧＨｐＡのプラスミドマップを図４に図示する。

本明細書に記載されるマイクロＲＮＡは、発現ベクター様式により送達されるかまたは非発現ベクター様式により送達されるかにかかわらず、発作障害を治療するために使用される。複雑部分発作、例えば側頭葉てんかん（ＴＬＥ）を伴うものを含めた発作障害は、最も難治性のてんかんの形態の一つでありうる。特定の実例では、ある側頭葉が、発作の起源となる部位（てんかん原性領域）として画定されることがあり、海馬前部を含む中側頭葉が、本明細書の方法に従って標的化されることがある。発作障害は、興奮と抑制との不均衡の結果として生じる場合がある。興奮の拮抗および抑制の増強により、発作障害の少なくとも一つの症状の改善をもたらすことができる。

発作障害の例としては、てんかん、全般的な強直間代性発作を伴うてんかん、ミオクロニー欠神てんかん、前頭葉てんかん、側頭葉てんかん、ランドウ・クレフナー症候群、ラスムッセン症候群、ドラベ症候群、ドゥーゼ症候群、ＣＤＫＬ５障害、点頭てんかん（ウェスト症候群）、若年性ミオクローヌスてんかん（ＪＭＥ）、ワクチン関連脳症、難治性小児てんかん（ＩＣＥ）、レノックス・ガストー症候群（ＬＧＳ）、レット症候群、大田原症候群、ＣＤＫＬ５障害、小児欠神てんかん、本態性振戦、急性反復性発作、良性ローランドてんかん、てんかん重積、難治性てんかん重積、超難治性てんかん重積（ＳＲＳＥ）、ＰＣＤＨ１９小児てんかん、脳腫瘍誘発性発作、過誤腫誘発性発作、薬物離脱誘発性発作、アルコール離脱誘発性発作、発作活動の増加またはブレークスルー発作（連続発作または群発発作ともよばれる）が挙げられる。実施形態では、発作障害は、ナトリウムチャネルタンパク質１型サブユニットアルファ（Ｓｃｎ１ａ）関連障害に関連する。実施形態では、発作障害は焦点発作という特徴を有する。実施形態では、発作障害は限局性皮質異形成である。実施形態では、ＦＣＤはＩ型ＦＣＤである。実施形態では、ＦＣＤはＩａ型ＦＣＤである。実施形態では、ＦＣＤはＩｂ型ＦＣＤである。実施形態では、ＦＣＤはＩｃ型ＦＣＤである。実施形態では、ＦＣＤはＩＩ型ＦＣＤである。実施形態では、ＦＣＤはＩＩａ型ＦＣＤである。実施形態では、ＦＣＤはＩＩｂ型ＦＣＤである。実施形態では、ＦＣＤはＩＩＩ型ＦＣＤである。実施形態では、ＦＣＤはＩＩＩａ型ＦＣＤである。実施形態では、ＦＣＤはＩＩＩｂ型ＦＣＤである。実施形態では、ＦＣＤはＩＩＩｃ型ＦＣＤである。実施形態では、発作障害は、脳腫瘍、すなわち、低グレードおよび高グレードの神経節膠腫、神経膠腫などの脳腫瘍誘発性発作に関連し、そのようなものとしては、退形成星状細胞腫、退形成乏突起神経膠腫、退形成乏星状細胞腫、退形成上衣腫、神経膠芽腫、または髄膜腫が挙げられる。実施形態では、発作障害は、脳過誤腫、すなわち、過誤腫誘発性発作、例えば結節性硬化症（ＴＳＣ）または灰白隆起過誤腫などに関連する。

実施形態では、発作障害はてんかん重積（ＳＥ）である。ＳＥは、五分以上のてんかん発作、または五分以内に一回を超えその間に人が正常に戻ることのない発作という特徴を有する。ＳＥは、治療が遅延した場合に死につながる可能性がある、危険な状態であることがある。ＳＥは、腕と脚の規則的な収縮と伸展とを伴う痙攣性であるか、または、比較的長時間の人の意識のレベルの変化を伴うが発作活動に起因する四肢の大規模な屈曲と伸展のない非痙攣性であることがある。痙攣性のＳＥ（ＣＳＥ）は、（ａ）強直間代性ＳＥ、（ｂ）強直性ＳＥ、（ｃ）間代性ＳＥ、および（ｄ）ミオクローヌス性ＳＥにさらに分類されうる。非痙攣性のＳＥ（ＮＣＳＥ）は、異常な精神状態、無応答性、眼球運動異常、持続性電気記録性発作、および抗痙攣剤への潜在的応答という特徴を有する。

発作障害の症状としては、以下に限定されないが、失調、歩行機能障害、発話機能障害、啼鳴、認知障害、異常運動活動、臨床性発作、無症候性発作、筋緊張低下、筋緊張亢進、流涎、しゃぶり行動、前兆、反復運動、笑い、および異常感覚を含むエピソードが挙げられる。実施形態では、提供される方法および組成物は、一つまたは複数の異なるタイプの発作を低減または防止することがある。一般に、発作は、反復運動、異常感覚、およびそれらの組み合わせを含みうる。発作は、焦点発作（部分発作とも呼ばれる）および全般発作として分類することができる。焦点発作は脳の片側にのみ影響を及ぼすのに対し、全般発作は脳の両側に影響を及ぼす。具体的な焦点発作の型としては、単純焦点発作、複雑焦点発作、および二次性の全般発作が挙げられる。単純な焦点発作は、特定の葉（例えば、側頭葉、前頭葉、頭頂葉、または後頭葉）に限定または集中されうる。複雑焦点発作は、概して、単純焦点発作よりも片方の半球の大きな部分に影響を及ぼすが、一般的には側頭葉または前頭葉に起因する。焦点発作が脳の片側（半球）から脳の両側に広がる場合に、発作は、二次性の全般発作と呼ばれる。具体的な全般発作の型としては、欠神（小発作ともよばれる）、強直性発作、弛緩性発作、ミオクローヌス発作、強直間代発作（大発作とも呼ばれる）、および間代発作が挙げられる。本明細書における治療の方法は、前述の症状のうちの一つまたは複数の改善を提供することを含みうる。

患者の発作障害に関連する異常な電気インパルスの位置または疑いのある位置の決定が行われると、本開示による標的化治療を実施することができる。脳内の異常な電気活性の位置を決定する方法は、当技術分野で周知である。脳内の異常な電気を呈するあらゆる領域を、本明細書における治療のための標的とすることができるが、発作障害と関連することが知られておりかつ標的化治療を受けることのできる脳の領域としては、以下に限定されないが、側頭葉、前頭葉、後頭葉、および頭頂葉が挙げられる。例えば、側頭葉は、限局性てんかん発作の共通部位とすることができる。特定の実例では、側頭葉で始まる発作は、脳の他の部分まで広がることがある。実施形態では、治療のための標的とすることのできる側頭葉の具体的な範囲としては、海馬、聴覚−前庭野、中側頭葉、および扁桃体などの辺縁系の構造が挙げられる。実施形態では、後頭葉の特定の領域、例えば一次視覚的野も標的とすることができる。実施形態では、頭頂葉の特定の領域、例えば中心後回を標的とすることができる。実施形態では、標的とすることができる一次体性感覚野の位置。実施形態では、前頭葉の特定の領域、例えば、運動野、嗅覚−味覚野を標的とすることができる。実施形態では、異常な電気活性を呈することが特定されている脳の大きな範囲を標的とすることができる。特定の実例では、発作障害の徴候は、脳の特定の領域内で始まり、他に広がりうる。例えば、発作障害の徴候は、海馬またはその周囲の構造内で始まりうる。実施形態では、異常な電気活性の開始部位として決定される領域を標的とすることができる。

脳内の標的位置に直接的に物質を投与する方法は周知である。例えば、穴、例として穿頭孔を頭蓋骨にドリルで穿つことができ、適切にサイズ調整された針を使用して、ベクターまたは非ベクター媒体を標的位置に送達してもよい。実施形態では、頭蓋骨の一部は、標的位置でまたはその近くで硬膜物質を露出させるために除去されてもよく（開頭術）、ベクターまたは非ベクター媒体は、標的位置に直接的に投与されうる。実施形態では、ベクターまたは非ベクター媒体は、周囲組織への損傷を最小限にして所望の範囲にベクターまたは非ベクター媒体を正確に送達するために、定位脳座標系、マイクロピペット、および自動ポンプを用いて頭蓋内に注射される。実施形態では、マイクロポンプを利用して、マイクロＲＮＡを含有するベクターまたは非ベクター媒体を含有する医薬組成物を脳内の標的範囲に送達してもよい。組成物は、直ちに、または長時間にわたって、例えば１分間、２分間、３分間、４分間、５分間、６分間、７分間、８分間、９分間、１０分間、またはそれ以上にわたって、送達することができる。脳内の標的位置へのベクター送達の後、十分な時間により、標的位置におけるマイクロＲＮＡの発現が可能となりうる。

実施形態では、本明細書におけるベクターまたは非ベクター送達媒体は、全身的に投与することができる。全身送達には、経口、頬側、舌下、直腸、局所的、鼻腔内、膣、および非経口の投与様式が含まれる。非経口の投与様式の例としては、静脈内、腹腔内、筋肉内、および皮下の投与様式が挙げられる。実施形態では、ベクターまたは非ベクター送達媒体は、マイクロＲＮＡを送達する脳内の標的位置に接触するまで、またはマイクロＲＮＡを発現させて、例えば、ネットワーク形成を助けるおよび／もしくはニューロンシグナル伝達ネットワークを調節するように作用させるまで、循環するものとなる。

マイクロＲＮＡは、患者の発作障害に対して有効な量で使用される。活性成分の投与量は、患者の年齢、重量、および個別の状態、個別の薬物動態データ、ならびに投与様式に依存する。約７０ｋｇの体重を有するヒト個体の場合、マイクロＲＮＡの毎日の投与用量は、０．０１ｍｇ／体重ｋｇから１００ｍｇ／体重ｋｇまで、例えば、０．１ｍｇ／体重ｋｇから５０ｍｇ／体重ｋｇまで、１ｍｇ／体重ｋｇから２０ｍｇ／体重ｋｇまで、単回用量として、または複数回用量として、投与することができる。マイクロＲＮＡは、単独でまたは他のＡＥＤ薬剤と組み合わせて使用することができる。

実施形態では、超音波を用いた処置が、血管脳関門を撹乱することにより脳内の標的位置へのマイクロＲＮＡの送達を増強するために使用される。本明細書における集束超音波エネルギーの使用は、ベクター、非ベクター送達媒体、マイクロＲＮＡ、および／または脳組織自体に悪影響を及ぼすことなく、ＢＢＢを撹乱する。これは、超音波エネルギーによる有機化合物および組織に対する潜在的な損傷の観点からは驚くべきことと考えられうる。本明細書における超音波エネルギーの使用は、脳内の標的位置へのベクター、非ベクター送達媒体、および／またはマイクロＲＮＡの送達速度を増加させ、脳内の標的位置へのベクター、非ベクター送達媒体、および／またはマイクロＲＮＡの送達に伴うことがある副作用を低減させ、標的位置にベクター、非ベクター送達媒体、および／またはマイクロＲＮＡを濃縮するともに投与量を低減させることができ、標的位置でのベクター、非ベクター送達媒体、および／またはマイクロＲＮＡの量の制御放出を可能にすることができる。

本開示によれば、実施形態では、超音波エネルギーは、脳内の標的位置へのマイクロＲＮＡを担持するベクターの貫通を支援および／または推進する。実施形態では、超音波エネルギーは、本明細書におけるベクター、非ベクター送達媒体、および／またはマイクロＲＮＡに対して血液脳関門を透過性にするために使用される。したがって、実施形態では、超音波エネルギーは、ベクター、非ベクター送達媒体、および／またはマイクロＲＮＡの投与の前に標的位置に適用することができる。実施形態では、本明細書におけるベクター、非ベクター送達媒体、および／またはマイクロＲＮＡは、超音波エネルギーの投与と同時に脳内の標的範囲に投与することができる。実施形態では、本明細書におけるベクター、非ベクター送達媒体、および／またはマイクロＲＮＡは、超音波エネルギーの投与の前に脳内の標的範囲に投与することができる。

前述のように、本明細書におけるベクター、非ベクター送達媒体、および／またはマイクロＲＮＡは、全身的に投与することができる。この様式では、血流中を循環するベクター、非ベクター送達媒体、および／またはマイクロＲＮＡは、超音波エネルギーによって撹乱されるＢＢＢの一部を通じて、脳内の標的位置に送達される。実施形態では、本明細書におけるベクター、非ベクター送達媒体、および／またはマイクロＲＮＡは、標的位置の超音波エネルギー処置の後に全身的に投与することができ、ベクター、非ベクター送達媒体、および／またはマイクロＲＮＡは、撹乱されたＢＢＢを貫通して標的位置に配されてゆく。実施形態では、本明細書におけるベクター、非ベクター送達媒体、および／またはマイクロＲＮＡは、脳の標的位置に直接的に投与することができる。実施形態では、本明細書におけるベクター、非ベクター送達媒体、および／またはマイクロＲＮＡは、標的位置の超音波エネルギー処置の後に、脳内の標的位置に直接的に投与して、標的位置に配してゆくことができる。実施形態では、本明細書におけるベクター、非ベクター送達媒体、および／またはマイクロＲＮＡは、超音波処置なく脳内の標的位置に直接的に投与することができる。

実施形態では、超音波エネルギーは、頭蓋骨の一部分を除去して（開頭術）標的位置でまたはその近くで硬膜物質を露出し、露出された硬膜物質でまたはその下に超音波エネルギーを送達することによって、標的範囲に投与することができる。実施形態では、超音波エネルギーは、頭蓋骨を通して標的位置に投与することができ、標的位置への超音波エネルギーの送達に関連する手術の必要性を排除する。頭蓋骨を通して超音波エネルギーを送達する方法は、当技術分野で公知である。例えば、両方が参照によりそれぞれの全体をここに援用される米国特許第５，７５２，５１５号および米国特許出願公開第２００９／０００５７１１号を参照されたい。Ｈｙｎｙｎｅｎ ｅｔ ａｌ．，ＮｅｕｒｏＩｍａｇｅ ２４（２００５）１２−１２０も参照されたい。

実施形態では、超音波エネルギーは、約２０ｋＨｚから約５ＭＨｚまでに及ぶ周波数で、および約１００ナノ秒から約１分までに及ぶ超音波処理持続時間により、脳内の標的位置に適用できる。実施形態では、超音波エネルギーは、約２０ｋＨｚから約１０ＭＨｚまでに及ぶ周波数、および約１００ナノ秒から約３０分までに及ぶ超音波処理持続時間で、連続波またはバーストモードオペレーションを用いて、脳内の標的位置に適用でき、その場合、バーストモード反復は、０．０１Ｈｚから約１ＭＨｚまで様々である。実施形態では、超音波エネルギーは、約２００ｋＨｚから約１０ＭＨｚまでに及ぶ周波数で、および約１００ミリ秒から約３０分までに及ぶ超音波処理持続時間により、脳内の標的位置に適用できる。実施形態では、超音波エネルギーは、約２５０ｋＨｚから約１０ＭＨｚまでに及ぶ周波数で、および約０．１０マイクロ秒から約３０分までに及ぶ超音波処理持続時間により、脳内の標的位置に適用できる。実施形態では、超音波エネルギーは、約１．５２５ＭＨｚの周波数で脳内の標的位置に適用できる。実施形態では、超音波エネルギーは、約０．６９ＭＨｚの周波数で脳内の標的位置に適用できる。実施形態では、超音波エネルギーによって生成される圧力振幅は、約０．５から約２．７ＭＰａとしうる。実施形態では、超音波エネルギーによって生成される圧力振幅は、約０．８から約１Ｍｐａとしうる。実施形態では、超音波エネルギーは、本明細書におけるベクター、非ベクター送達媒体、および／またはマイクロＲＮＡが送達される組織および／または流体の体積に合わせて、例えば、約０．１ｍｍ^３から約５ｃｍ^３までにサイズ調整された病巣域で、脳内の標的位置に適用される。

実施形態では、標的位置とそこへのアクセスは、標的位置への超音波エネルギーの適用前、適用中、または適用後に造影剤を患者に導入し、造影剤をＢＢＢに浸透させるのに十分な時間をおき、造影剤が標的位置に存在するか否かを決定することによって、確認される。造影剤は周知であり、例えば、ヨウ素系化合物、バリウム系化合物、およびランタニド系化合物を含む。ヨウ素系剤としては、例えば、イオヘキソール、イオプロミド、イオジキサノール、イオシメノール、イオキサグレート、イオタラメート、およびイオパミドールが挙げられる。バリウム系化合物としては、硫酸バリウムが挙げられる。ランタニド系化合物としては、例えば、ガドベルセタミド、ガドペンテト酸ジメグルミン、ガドブトロール、ガドベン酸ジメグルミン、ガドテル酸メグルミン、およびガドキセト酸二ナトリウムなどのガドリニウム系キレートが挙げられる。検出様式としては、標的位置における造影剤の有無を確認するために利用されうる周知の技術である、２次元Ｘ線放射線撮影、Ｘ線コンピュータ断層撮影、および磁気共鳴撮像が挙げられる。

本開示によれば、マイクロＲＮＡ治療は、患者への投与後１時間以上にわたって、発作障害の一つまたは複数の症状の改善をもたらす。実施形態では、マイクロＲＮＡ治療は、患者への投与後２時間以上にわたって、上記障害の一つまたは複数の症状の改善をもたらす。実施形態では、マイクロＲＮＡ治療は、患者への投与後３時間以上にわたって、上記障害の一つまたは複数の症状の改善をもたらす。実施形態では、マイクロＲＮＡ治療は、患者への投与後４時間以上にわたって、上記障害の一つまたは複数の症状の改善をもたらす。実施形態では、マイクロＲＮＡ治療は、患者への投与後６時間以上にわたって、上記障害の一つまたは複数の症状の改善をもたらす。実施形態では、マイクロＲＮＡ治療は、患者への投与後８時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、または２４時間にわたって、上記障害の一つまたは複数の症状の改善をもたらす。実施形態では、本開示に従って、患者への投与後１２時間にわたって少なくとも一つの症状の改善がもたらされる。実施形態では、マイクロＲＮＡ治療は、患者の翌日機能の改善をもたらす。例えば、マイクロＲＮＡは、投与および一晩睡眠から起床後の、例えば、約２時間超、約４時間超、約６時間超、約８時間超、約１０時間超、約１２時間超、約１４時間超、約１６時間超、約１８時間超、約２０時間超、約２２時間超、または約２４時間超にわたって、上記障害の一つまたは複数の症状の改善をもたらしうる。

実施形態では、本明細書で提供されるのは、発作活動を低減または防止するための切迫発作の警告サインが検出された後に、マイクロＲＮＡを、それを必要とする患者に投与することを含む、発作障害を治療する方法である。

実施形態では、本明細書に記載される方法は、発作障害の一つまたは複数の他の臨床症状を減少、遅延、または防止するために有効である。例えば、特定の症状、薬理学的指標、または生理学的指標に関して超音波エネルギーによって任意選択的に送達が増強される、脳の標的位置におけるマイクロＲＮＡ治療の患者における効果が、非治療患者、または治療前の患者の状態と比較されうる。実施形態では、症状、薬理学的指標、および／または生理学的指標は、治療前に患者で測定され、治療が開始された後に一回または複数回繰り返される。実施形態では、対照は、治療される疾患または状態のない一人または複数の患者（例えば健康な患者）の症状、薬理学的指標、または生理学的指標を測定することに基づいて決定される、参照レベルまたは平均である。実施形態では、治療前の脳組織中のｍｉＲ−１０１および／またはｍｉＲ−１２８の量は、治療後の脳組織中のｍｉＲ−１０１および／またはｍｉＲ−１２８の量と比較される。実施形態では、治療の効果は、当業者の専門範囲内にある従来の治療と比較される。

本明細書における発作障害の有効な治療（例えば、難治性焦点発作、限局性皮質異形成、急性反復発作、てんかん重積など）は、ベースラインと比較して、一定の期間の後の症状の頻度または重症度の減少（例えば、１０％超、２０％超、３０％超、４０％超、または５０％超）を示すことによって、確立されうる。例えば、１ヶ月のベースライン期間後、マイクロＲＮＡ治療を行っている患者は、２カ月の二重盲検期間中、標準療法に対する追加療法として、プラセボを無作為に割り当てることができる。主要転帰の測定量は、ベースラインと比較して、二重盲検期間の二ヶ月目の間に、少なくとも１０％から５０％の症状の低減を経験してきたものとして定義される、マイクロＲＮＡおよびプラセボへの応答者のパーセンテージを含みうる。

実施形態では、ベクター、非ベクター送達媒体、および／またはマイクロＲＮＡを含有する医薬組成物は、従来の放出プロファイルまたは調節放出プロファイルを付与されてもよい。医薬組成物は、安全かつ有効であると考えられる材料から構成される医薬的に許容可能な「担体」を使用して調製されてもよい。「担体」は、活性の物質または成分以外の医薬製剤中に存在する全ての構成要素を含む。活性物質の例としては、マイクロＲＮＡ、マイクロＲＮＡを含有する発現ベクター、およびＡＥＤが挙げられる。用語「担体」には、希釈剤、結合剤、潤滑剤、崩壊剤、充填剤、および被覆組成物が含まれるが、これらに限定されない。当業者は、そのような医薬担体およびそのような担体を使用する医薬組成物を配合する方法に精通している。

実施形態では、ベクター、非ベクター送達媒体、および／またはマイクロＲＮＡを含有する医薬組成物は、非経口投与に適しており、そのような投与としては、例えば、筋肉内（ｉ．ｍ．）、静脈内（ｉ．ｖ．）、皮下（ｓ．ｃ．）、腹腔内（ｉ．ｐ．）、またはくも膜下腔内（ｉ．ｔ．）が挙げられる。非経口組成物は、注射、注入、または身体内への移植によって投与するために滅菌する必要があり、単回投与容器または複数回投与容器のどちらかに包装されうる。実施形態では、患者への非経口投与のための液体医薬組成物は、活性物質、例えば、ベクター、非ベクター送達媒体、および／またはマイクロＲＮＡを、上記に記載された任意のそれぞれの量で含む。実施形態では、非経口投与のための医薬組成物は、総量で例えば、約０．１ｍｌ、約０．２５ｍｌ、約０．５ｍｌ、約０．７５ｍｌ、約１ｍｌ、約１．２５ｍｌ、約１．５ｍｌ、約１．７５ｍｌ、約２ｍｌ、約２．２５ｍｌ、約２．５ｍｌ、約２．７５ｍｌ、約３ｍｌ、約３．２５ｍｌ、約３．５ｍｌ、約３．７５ｍｌ、約４ｍｌ、約４．２５ｍｌ、約４．５ｍｌ、約４．７５ｍｌ、約５ｍｌ、約１０ｍｌ、約２０ｍｌ、約２５ｍｌ、約５０ｍｌ、約１００ｍｌ、約２００ｍｌ、約２５０ｍｌ、または約５００ｍｌとして製剤化される。実施形態では、発現ベクターを含有する医薬組成物の体積は、マイクロリットル量である。例えば、０．１マイクロリットルから１０マイクロリットル以上を注射することができる。例えば、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．２５、１．５、１．７５、２．０、２．２５、２．５、２．７５、３．０、３．２５、３．５、３．７５、４．０、４．２５、４．５、４．７５、５．０、５．２５、５．５、５．７５、６．０、６．２５、６．５、６．７５、７．０、８．２５、８．５、８．７５、９．０、９．２５、９．５、９．７５、または１０マイクロリットルである。実施形態では、組成物は、マイクロピペット、バッグ、ガラスバイアル、プラスチックバイアル、またはボトルに収められる。

実施形態では、非経口投与のための医薬組成物は、上記に記載されたそれぞれの量を含む。実施形態では、非経口投与のための医薬組成物は、約０．０００１ｍｇから約５００ｍｇの活性物質、例えば、ベクター、非ベクター送達媒体、および／またはマイクロＲＮＡを含む。実施形態では、患者への非経口投与のための医薬組成物は、活性物質、例えば、ベクター、非ベクター送達媒体、および／またはマイクロＲＮＡを、約０．００１ｍｇ／ｍｌから約５００ｍｇ／ｍｌのそれぞれの濃度で含む。実施形態では、非経口投与のための医薬組成物は、活性物質をそれぞれの濃度、例えば、約０．００５ｍｇ／ｍｌから約５０ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌから約５０ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌから約１０ｍｇ／ｍｌ、約０．０５ｍｇ／ｍｌから約２５ｍｇ／ｍｌ、約０．０５ｍｇ／ｍｌから約１０ｍｇ／ｍｌ、約０．０５ｍｇ／ｍｌから約５ｍｇ／ｍｌ、または約０．０５ｍｇ／ｍｌから約１ｍｇ／ｍｌで含む。実施形態では、非経口投与のための医薬組成物は、活性物質をそれぞれの濃度、例えば、約０．０５ｍｇ／ｍｌから約１５ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌから約１０ｍｇ／ｍｌ、約０．２５ｍｇ／ｍｌから約５ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌから約７ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌから約１０ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌから約１０ｍｇ／ｍｌ、または約５ｍｇ／ｍｌから約１５ｍｇ／ｍｌで含む。

実施形態では、医薬組成物が少なくとも六ヶ月間安定している、非経口投与のための医薬組成物が提供される。実施形態では、非経口投与のための医薬組成物は、少なくとも、例えば、３ヶ月間または６ヶ月間、活性物質中で約５％以下の減少を呈する。実施形態では、ベクターまたは非ベクター媒体の量は、例えば、約２．５％以下、約１％以下、約０．５％、または約０．１％以下で分解する。実施形態では、この分解は、少なくとも６ヶ月間、例えば、約５％未満、約２．５％未満、約１％未満、約０．５％未満、約０．２５％未満、約０．１％未満である。

実施形態では、医薬組成物が可溶性のままである、非経口投与のための医薬組成物が提供される。実施形態では、安定であり、可溶性であり、局所的な部位に適合性があり、および／またはすぐに使用可能である、非経口投与のための医薬組成物が提供される。実施形態では、本明細書の医薬組成物は、それを必要とする患者への直接的な投与のためにすぐに使用可能である。

本明細書に提供される非経口投与のための医薬組成物は、一つまたは複数の賦形剤、例えば、溶媒、溶解性促進剤、懸濁剤、緩衝剤、等張剤、安定剤、または抗菌防腐剤を含みうる。使用される場合、非経口組成物の賦形剤は、組成物で使用されるベクター、非ベクター送達媒体、および／またはマイクロＲＮＡの安定性、生物学的利用能、安全性、および／または有効性に悪影響を及ぼさないものとなる。したがって、剤形の構成要素のいずれかの間に不適合性のない、非経口組成物が提供される。

実施形態では、ベクター、非ベクター送達媒体、および／またはマイクロＲＮＡを含む非経口組成物は、安定化量の少なくとも一つの賦形剤を含む。例えば、賦形剤は、緩衝剤、可溶化剤、等張化剤、抗酸化剤、キレート剤、抗菌剤、および防腐剤からなる群から選択されうる。当業者は、賦形剤が一つを超える機能を有し、一つまたは複数の定義された群に分類されうることを理解するものとなる。

実施形態では、非経口組成物は、ベクター、非ベクター送達媒体、および／またはマイクロＲＮＡ、ならびに賦形剤を含み、その場合、賦形剤は、例えば、約１０％未満、約５％未満、約２．５％未満、約１％未満、または約０．５％未満の重量パーセント（ｗ／ｖ）で存在する。実施形態では、賦形剤は、例えば、約１．０％から約１０％、約１０％から約２５％、約１５％から約３５％、約０．５％から約５％、約０．００１％から約１％、約０．０１％から約１％、約０．１％から約１％、または約０．５％から約１％の間の重量パーセントで存在する。実施形態では、賦形剤は、例えば、約０．００１％から約１％、約０．０１％から約１％、約１．０％から約５％、約１０％から約１５％、または約１％から約１５％の間の重量パーセントで存在する。

実施形態では、非経口組成物は、必要に応じて、例えば、一日一回、二回、三回、四回、五回、六回、もしくはそれ以上の回数で、または患者の必要に応じて継続的に、投与されうる。

実施形態では、活性物質の非経口組成物が提供され、その場合、組成物のｐＨは約４．０から約８．０の間にある。実施形態では、組成物のｐＨは、例えば、約５．０から約８．０、約６．０から約８．０、約６．５から約８．０の間にある。実施形態では、組成物のｐＨは、例えば、約６．５から約７．５、約７．０から約７．８、約７．２から約７．８、または約７．３から約７．６の間にある。実施形態では、水溶液のｐＨは、例えば、約６．８、約７．０、約７．２、約７．４、約７．６、約７．７、約７．８、約８．０、約８．２、約８．４、または約８．６である。

別段に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本明細書の開示が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。

本明細書で使用される際の「約」または「およそ」という用語は、当業者によって決定される特定の値についての許容誤差範囲内であり、この範囲は、部分的には、値がどのように測定または決定されるか、すなわち測定系の限界に依存するものとなる。例えば、「約」は、当該技術分野における実践による、３または３を超える標準偏差以内であることを意味しうる。あるいは、「約」は、所与の値の最大２０％、最大１０％、最大５％、および／または最大１％の範囲を意味しうる。あるいは、特に生物学的な系または過程に関しては、この用語は、値の一桁以内、好ましくは５倍以内、より好ましくは２倍以内であることを意味しうる。

「改善」とは、例えば、焦点てんかん、難治性焦点てんかん、限局性皮質異形成、てんかん、全般的な強直間代性発作を伴うてんかん、ミオクロニー欠神てんかん、前頭葉てんかん、側頭葉てんかん、ランドウ・クレフナー症候群、ラスムッセン症候群、ドラベ症候群、ドゥーゼ症候群、ＣＤＫＬ５障害、点頭てんかん（ウェスト症候群）、若年性ミオクローヌスてんかん（ＪＭＥ）、ワクチン関連脳症、難治性小児てんかん（ＩＣＥ）、レノックス・ガストー症候群（ＬＧＳ）、レット症候群、大田原症候群、ＣＤＫＬ５障害、小児欠神てんかん、本態性振戦、急性反復性発作、良性ローランドてんかん、てんかん重積、難治性てんかん重積、超難治性てんかん重積（ＳＲＳＥ）、ＰＣＤＨ１９小児てんかん、脳腫瘍誘発性発作、過誤腫誘発性発作、薬物離脱誘発性発作、アルコール離脱誘発性発作、発作活動の増加またはブレークスルー発作（連続発作または群発発作ともよばれる）などの発作障害の少なくとも一つの症状に対して相対的に測定される、前述の障害の治療を指す。

「翌日機能の改善」または「翌日機能の改善がある」とは、一晩の睡眠時間から起床した後の改善を指し、その場合、患者へのマイクロＲＮＡ療法の投与の有益な効果は、本明細書における症候群または障害の少なくとも一つの症状に及ぼされ、患者によって主観的にまたは観察者によって客観的に、ある期間にわたって、例えば、起床後２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、１２時間、２４時間などにわたって、識別可能である。

「治療すること」、「治療」、または「治療する」とは、以下を指しうる：疾患または状態に罹患するかまたは罹りやすい可能性があるが、疾患または状態の臨床症状または不顕性症状を依然として経験または提示しない患者において、疾患または状態の臨床症状の出現を軽減するかまたは遅延させること。特定の実施形態では、「治療すること」、「治療」、または「治療する」とは、疾患または状態に罹患するかまたは罹りやすい可能性があるが、疾患または状態の臨床症状または不顕性症状を依然として経験または提示しない患者において、疾患または状態の臨床症状の出現を防止することを指す。また、「治療すること」、「治療」、または「治療する」とは、疾患または症状を阻害すること、例えば、その進展または少なくとも一つのそれらの臨床症状または不顕性症状を停止または低減することを指す。「治療すること」、「治療」または「治療する」とは、さらに、疾患または状態を緩和すること、例えば、その疾患または状態の退行、またはその臨床症状もしくは不顕性症状の少なくとも一つの退行を引き起こすことを指す。治療される患者に対する利益は、統計的に有意であるか、数学的に有意であるか、または患者および／もしくは医師に少なくとも知覚できるものでありうる。そうであっても、予防的（防止的）治療と治療的（治癒的）治療とは、本明細書の開示の二つの別々の実施形態である。

「医薬的に許容可能」とは、「概ね安全であるものとされる」、例えば、ヒトに投与された際に、生理学的に忍容性があり、典型的にはアレルギーまたは同様の有害な反応、例えば胃の不調などを生じない、分子実体および組成物を指す。実施形態では、この用語は、連邦政府または州政府の規制当局により承認された分子実体および組成物であり、それらは、ＦＤＡによる市販前審査および承認に付される米国連邦食品・医薬品・化粧品法の第２０４（ｓ）条および４０９条の下のＧＲＡＳリスト、または同様のリスト、米国薬局方または動物、より具体的にはヒトにおける使用のための一般的に認識されている別の薬局方にある通りである。

「有効量」または「治療有効量」は、治療されている症候群、障害、疾患、もしくは状態の一つもしくは複数の症状を軽減するために、または所望の薬理学的および／もしくは生理的な効果をその他提供するために、十分な投与量を意味しうる。「有効量」または「治療有効量」は、本明細書では互換的に使用されうる。

「と共投与された」、「と併用で投与された」、「の組合せ」または「併せて投与される」は、互換的に使用されてよく、二つ以上の薬剤が療法の過程で投与されることを意味する。薬剤は、共に同時に投与されてもよいし、別々に間隔を空けて投与されてもよい。薬剤は、単一の剤形で投与されてもよいし、別々の剤形で投与されてもよい。

「それを必要とする患者」としては、発作障害、例えば、てんかん、全般的な強直間代性発作を伴うてんかん、ミオクロニー欠神てんかん、焦点てんかん、難治性焦点てんかん、限局性皮質異形成、前頭葉てんかん、側頭葉てんかん、ランドウ・クレフナー症候群、ラスムッセン症候群、ドラベ症候群、ドゥーゼ症候群、ＣＤＫＬ５障害、点頭てんかん（ウェスト症候群）、若年性ミオクローヌスてんかん（ＪＭＥ）、ワクチン関連脳症、難治性小児てんかん（ＩＣＥ）、レノックス・ガストー症候群（ＬＧＳ）、レット症候群、大田原症候群、ＣＤＫＬ５障害、小児欠神てんかん、本態性振戦、急性反復性発作、良性ローランドてんかん、てんかん重積、難治性てんかん重積、超難治性てんかん重積（ＳＲＳＥ）、ＰＣＤＨ１９小児てんかん、脳腫瘍誘発性発作、過誤腫誘発性発作、薬物離脱誘発性発作、アルコール離脱誘発性発作、発作活動の増加またはブレークスルー発作（連続発作または群発発作ともよばれる）などに罹っていると診断されている個体、例えば、ヒト、イヌ、ネコ、ブタ、齧歯類などの哺乳動物を挙げることができる。発作障害は、ナトリウムチャネルタンパク質１型サブユニットアルファ（Ｓｃｎ１ａ）関連障害と関連しうる。方法は、以下を含む任意の個人に提供されてよく、例えば、前記患者は、新生児、幼児、小児患者（６ヶ月から１２歳）、青年患者（年齢１２〜１８歳）または成人（１８歳超）である。患者は哺乳動物を含む。

「プロドラッグ」とは、非活性の（または著しく活性の低い）形態で患者に投与される薬理学的物質（薬物）を指す。投与されると、プロドラッグは、身体内で（ｉｎ ｖｉｖｏ）、所望の薬理活性を有する化合物に代謝される。

「類似体」および「誘導体」は、互換的に使用されてもよく、親化合物と同じコアを有する化合物を指すが、結合順序、一つまたは複数の原子および／または原子群の有無、ならびにそれらの組み合わせで異なる場合がある。エナンチオマーは誘導体の例である。誘導体は、例えば、一つまたは複数の原子、官能基または部分構造を含みうるコア上に存在する一つまたは複数の置換基において、親化合物とは異なることがある。一般に、誘導体は、少なくとも理論的には、化学的プロセスおよび／または物理的プロセスを介して親化合物から形成されるものと想像されうる。

用語「医薬的に許容可能な塩」は、本明細書で使用される際に、本明細書に定義される化合物の誘導体を指し、その場合、親化合物は酸性塩または塩基性塩によって改変される。医薬的に許容可能な塩の例としては、以下に限定されないが、無機塩基との非毒性の塩基付加塩が挙げられる。アルカリおよびアルカリ土類金属塩基などの適切な無機塩基としては、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなどの金属陽イオンが挙げられる。医薬的に許容可能な塩は、従来の化学的方法によって親化合物から合成することができる。

本明細書に提供される実施例は、本明細書の開示を増やすためのみに含まれるものであって、いかなる点においても限定されるものと考えられるべきではない。

実施例Ｉ
下記に記載されるＨｕ−ｐｒｉ−ｍｉＲ配列を、ＡＡＶ ｐＡＭ−プラスミド骨格にクローニングする。各プラスミドを、シーケンシングおよび制限消化によって検証するものとする。
１．ｐＡＭ−ＣＢＡ−ｈｕ−ｐｒｉ−ｍｉＲ１２８−２−ＷＰＲＥ−ｂＧＨ
２．ｐＡＭ−ＣＢＡ−ｈｕ−ｐｒｉ−ｍｉＲ１０１−ＷＰＲＥ−ｂＧＨ
３．ｐＡＭ−ＣＢＡ−ｓｃ−ｈｕ−ｐｒｉ−ｍｉＲ１２８−２−ＧＦＰ−ＷＰＲＥ−ｂＧＨ
ＧＦＰレポーターを発現するプラスミドによって、マウス脳内への注入以降のｍｉＲ発現のｉｎ ｖｉｖｏでの広がりの分析が容易になる。

上記のプラスミド１〜３およびｐＡＭ空プラスミドを、ＡＡＶＲｅｃ３ベクター（約３００μＬのＡＡＶベクター；＞１×１０^１２ｖｇ／ｍＬ）内にパッケージングし、標準イオジキサノール精製法を用いて精製するものとする。ＡＡＶベクターストックの純度を、標準ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびクマシー染色法によって確認するものとする。ＡＡＶベクターの力価を、定量的ＲＴ−ＰＣＲにより決定するものとする。

試験１：ＡＡＶベクター用量の最適化
ＡＡＶ ｍｉＲ−１２８−２−ＧＦＰおよびＡＡＶ ｍｉＲ１２８−２ベクターを、２ベクター用量（ベクター当たりｎ＝４の動物、および２用量）（ＧＦＰとの相乗的毒性効果がある場合にはｍｉＲ１２８−２のみのベクターを含める）でマウス脳内に注射するものとする。脳は、導入遺伝子の発現（ＧＦＰについて）および広がりおよび何らかの毒性（ＧＦＡＰ、Ｃｄ１１ｂ、ＮｅｕＮ ＩＨＣ、フルオロジェイド）の証拠を分析するため、ベクター注入の４週間後に、標準化された実験室方法を用いて採取するものとする。

試験２：ＡＡＶベクター用量の最適化
ＡＡＶ ｍｉＲ−１０１−１−ＧＦＰおよびＡＡＶ ｍｉＲ１０１−１ベクターを、２ベクター用量（ベクター当たりｎ＝４の動物、および２用量）（ＧＦＰとの相乗的毒性効果がある場合にはｍｉＲ１０１−１のみのベクターを含める）でマウス脳内に注射するものとする。脳は、導入遺伝子の発現（ＧＦＰについて）および広がりおよび何らかの毒性（ＧＦＡＰ、Ｃｄ１１ｂ、ＮｅｕＮ ＩＨＣ、フルオロジェイド）の証拠を分析するため、ベクター注入の４週間後に、標準化された実験室方法を用いて採取するものとする。

試験３：
以下の治療群を生じるものとする。脳は、分析のためにベクター注入後の３〜４週間で採取するものとする。
治療群：
ＡＡＶ−ｍｉＲ１２８−２
ＡＡＶ−ｍｉＲ１０１
ＡＡＶ−ｍｉＲ１２８−２／ｍｉＲ１０１
動物群のサイズ：ベクター当たりｎ＝８。
解析：
・ 毒性−ＮｅｕＮ ＩＨＣ、フルオロジェイド染色。
・ ＲＴ−ｑＰＣＲ／デジタルドロップＰＣＲによって決定される標的遺伝子発現の発現に及ぼされる効果。これらの標的に対する抗体を利用できる場合には、ウェスタンブロットおよび／またはＩＨＣ方法を実施するものとする。
・ ｍｉＲ−１２８−２標的
ｏ ｓｌｃ６ａ１（ＥＡＡＴ３）、ＴＡＲＰＰ、Ｐｅａ１５ａ、ＥＲＫ１／２の活性化−線条体試料。
・ ｍｉＲ−１０１標的
ｏ ＮＫＣＣ１、Ａｎｋ２、Ｋｉｆ１ａ（シナプス前）、Ａｂｃａ１、Ｎｄｒｇ２（膠細胞）、ｘＣＴ、ＰＭＣＡ２

実施例２
マウス発作モデルにおけるマイクロＲＮＡ治療の有効性の前向き評価
１日目に、５０頭のマウスに、イソフルラン麻酔下で海馬にカイニン酸（ＫＡ、２００ｎｇ／ｎＬ）を注射するものとする。２１日目に、硬化した海馬にＡＡＶＲｅｃ３−ｐＡＭ／ＣＢＡ−ｍｉＲ１０１−１−ＷＰＲＥ−ＢＧＨｐＡ（４．６６Ｅ ＋１３ゲノムコピー／ｍＬ）を注射する（５００ｎＬ）ものとする。２５頭のＩＨＫＡ対照マウスでは、ＡＡＶＲｅｃ３−ｐＡＭ＿ＣＢＡ−ｐｌ−ＷＰＲＥ−ＢＧＨｐＡ対照ベクターを注射するものとする。同時に、双極記録電極を海馬に移植するものとする。２５日目、２７日目、３０日目、３２日目、および３５日目に、マウスを評価のために選択するものとする。約２０％から２５％の動物（５頭から６頭のマウス／群）を調べるものとする。ＥＥＧを連続的に記録し、記録された信号をさらに処理して発作の数を定量するものとする。マウスは、副作用なく発作抑制の延長をもたらす投与量を決定するために評価するものとする。エンドポイントは、少なくとも８時間の発作抑制である。

実施例３
マウス発作モデルにおけるマイクロＲＮＡ治療の有効性の前向き評価
１日目に、５０頭のマウスに、イソフルラン麻酔下で海馬にカイニン酸（ＫＡ、２００ｎｇ／ｎＬ）を注射するものとする。２１日目に、硬化した海馬にＡＡＶＲｅｃ３−ｐＡＭ／ＣＢＡ−ｍｉＲ１２８−２−ＷＰＲＥ−ＢＧＨｐＡ（４．６６Ｅ ＋１３ゲノムコピー／ｍＬ）を注射する（５００ｎＬ）ものとする。２５頭のＩＨＫＡ対照マウスでは、ＡＡＶＲｅｃ３−ｐＡＭ＿ＣＢＡ−ｐｌ−ＷＰＲＥ−ＢＧＨｐＡ対照ベクターを注射するものとする。同時に、双極記録電極を海馬に移植するものとする。２５日目、２７日目、３０日目、３２日目、および３５日目に、マウスを評価のために選択するものとする。約２０％から２５％の動物（５頭から６頭のマウス／群）を調べるものとする。ＥＥＧを連続的に記録し、記録された信号をさらに処理して発作の数を定量するものとする。マウスは、副作用なく発作抑制の延長をもたらす投与量を決定するために評価するものとする。エンドポイントは、少なくとも８時間の発作抑制である。

実施例４
マウス発作モデルにおける超音波増強マイクロＲＮＡ治療の有効性の前向き評価
１日目に、５０頭のマウスに、２％イソフルラン麻酔下で海馬にカイニン酸（ＫＡ、２００ｎｇ／ｎＬ）を注射するものとする。２１日目に、硬化した海馬にＡＡＶＲｅｃ３−ｐＡＭ／ＣＢＡ−ｍｉＲ１０１−１−ＷＰＲＥ−ＢＧＨｐＡ（４．６６Ｅ ＋１３ゲノムコピー／ｍＬ）を注射する（５００ｎＬ）ものとする。２５頭のＩＨＫＡ対照マウスでは、ＡＡＶＲｅｃ３−ｐＡＭ＿ＣＢＡ−ｐｌ−ＷＰＲＥ−ＢＧＨｐＡ対照ベクターを注射するものとする。

ＡＡＶＲｅｃ３−ｐＡＭ／ＣＢＡ−ｍｉＲ１０１−１−ＷＰＲＥ−ＢＧＨｐＡの投与前に、超音波エネルギーを、改変された受容体のある海馬部位に近接したＢＢＢに適用するものとする。各マウスは、２％イソフルランを用いて麻酔し、マウスの頭部ホルダー、耳バー、およびガス麻酔マスクを含む定位脳手術装置によって頭部を固定し、うつ伏せにして配置するものとする。マウスの毛を、電気トリマーおよび脱毛クリームを用いて除去するものとする。脱気水充填容器を、音響的かつ光学的に透明な薄いプラスチックラップにより底部で密封し、マウスの頭の上部に配置するものとする。また、超音波カップリングゲルを、残りのあらゆるインピーダンスミスマッチを除去するために使用するものとする。

超音波は、単一素子球状部集束超音波トランスデューサ（中央周波数：１．５２５ＭＨｚ、焦点深度：９０ｍｍ、半径：３０ｍｍ、平均、例えば、Ｒｉｖｅｒｓｉｄｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、ニューヨーク、ニューヨーク州、米国から入手）によって生成するものとする。パルス−エコー診断トランスデューサ（中央周波数：７．５ＭＨｚ、焦点距離：６０ｍｍ）を、集束超音波トランスデューサの中央の円形穴（半径１１．２ｍｍ）を通して整列させて、二つのトランスデューサの焦点が完全に重なるようにするものとする。脱気蒸留水で充填された円錐体を、トランスデューサシステムの上へ、円錐体内に含まれる水を用いて、音響的に透明なポリウレタン膜キャップによって取り付けるものとする。トランスデューサシステムを、コンピュータ制御された三次元位置決定システム（例えば、Ｖｅｌｍｅｘ Ｉｎｃ．、ラシーヌ、ケベック州、カナダから入手可能）に取り付けるものとする。集束超音波トランスデューサを、整合回路に接続し、コンピュータ制御ファンクションジェネレータおよび５０ｄＢ電力増幅器によって駆動するものとする。パルスエコートランスデューサを、パーソナルコンピュータのデジタライザに接続されたパルサーレシーバシステムによって駆動するものとする。

集束超音波トランスデューサを、頭蓋骨の表面に対しそのビーム軸を直角にして、脱気水充填容器に沈めるものとする。トランスデューサの焦点を、例えば、グリッド位置決め方法を用いてマウス脳の内側に位置させるものとする。トランスデューサのビーム軸を、頭蓋の頭頂骨の上部の３ｍｍ下に焦点が配されるように整列させるものとする。この配置では、集束超音波ビームの焦点は、左海馬および左後方大脳動脈（ＰＣＡ）に重なるものとなる。右海馬は標的とはならず、対照として用いることができる。

微小気泡（平均直径：３．０〜４．５μｍ、濃度：１ｍＬ当たり気泡５．０〜８．０×１０^８個）を成す２５μｌのボーラスの超音波造影剤を、超音波処理の１〜４分前に、尾静脈内に注射するものとする。パルスされた集束超音波（パルスレート：１０Ｈｚ、パルス持続時間：２０ｍｓ、負荷サイクル２０％）を、次いで、単一の位置（すなわち海馬）での３０秒間の超音波処理からなる一連の二つのバーストで、ピーク間０．６４ＭＰａで印加するものとする。各バーストの間、３０秒の間隔をおくことにより、パルス間のあらゆる余熱を消散させるものとする。この集束超音波処理の手順を、各マウス脳で１回または複数回実施することができる。
ＢＢＢの開放後、双極記録電極を海馬に移植するものとする。マウスは、副作用なく発作抑制の延長をもたらす投与量を決定するために評価するものとする。エンドポイントは、少なくとも８時間の発作抑制である。

実施例５
マウス発作モデルにおける超音波増強マイクロＲＮＡ治療の有効性の前向き評価
１日目に、５０頭のマウスに、２％イソフルラン麻酔下で海馬にカイニン酸（ＫＡ、２００ｎｇ／ｎＬ）を注射するものとする。２１日目に、硬化した海馬にＡＡＶＲｅｃ３−ｐＡＭ／ＣＢＡ−ｍｉＲ１２８−２−ＷＰＲＥ−ＢＧＨｐＡ（４．６６Ｅ ＋１３ゲノムコピー／ｍＬ）を注射する（５００ｎＬ）ものとする。２５頭のＩＨＫＡ対照マウスでは、ＡＡＶＲｅｃ３−ｐＡＭ＿ＣＢＡ−ｐｌ−ＷＰＲＥ−ＢＧＨｐＡ対照ベクターを注射するものとする。

ＡＡＶＲｅｃ３−ｐＡＭ／ＣＢＡ−ｍｉＲ１２８−２−ＷＰＲＥ−ＢＧＨｐＡの投与前に、超音波エネルギーを、改変された受容体のある海馬部位に近接したＢＢＢに適用するものとする。各マウスは、２％イソフルランを用いて麻酔し、マウスの頭部ホルダー、耳バー、およびガス麻酔マスクを含む定位脳手術装置によって頭部を固定し、うつ伏せにして配置するものとする。マウスの毛を、電気トリマーおよび脱毛クリームを用いて除去するものとする。脱気水充填容器を、音響的かつ光学的に透明な薄いプラスチックラップにより底部で密封し、マウスの頭の上部に配置するものとする。また、超音波カップリングゲルを、残りのあらゆるインピーダンスミスマッチを除去するために使用するものとする。

超音波は、単一素子球状部集束超音波トランスデューサ（中央周波数：１．５２５ＭＨｚ、焦点深度：９０ｍｍ、半径：３０ｍｍ、平均、例えば、Ｒｉｖｅｒｓｉｄｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、ニューヨーク、ニューヨーク州、米国から入手）によって生成するものとする。パルス−エコー診断トランスデューサ（中央周波数：７．５ＭＨｚ、焦点距離：６０ｍｍ）を、集束超音波トランスデューサの中央の円形穴（半径１１．２ｍｍ）を通して整列させて、二つのトランスデューサの焦点が完全に重なるようにするものとする。脱気蒸留水で充填された円錐体を、トランスデューサシステムの上へ、円錐体内に含まれる水を用いて、音響的に透明なポリウレタン膜キャップによって取り付けるものとする。トランスデューサシステムを、コンピュータ制御された三次元位置決定システム（例えば、Ｖｅｌｍｅｘ Ｉｎｃ．、ラシーヌ、ケベック州、カナダから入手可能）に取り付けるものとする。集束超音波トランスデューサを、整合回路に接続し、コンピュータ制御ファンクションジェネレータおよび５０ｄＢ電力増幅器によって駆動するものとする。パルスエコートランスデューサを、パーソナルコンピュータのデジタライザに接続されたパルサーレシーバシステムによって駆動するものとする。

集束超音波トランスデューサを、頭蓋骨の表面に対しそのビーム軸を直角にして、脱気水充填容器に沈めるものとする。トランスデューサの焦点を、例えば、グリッド位置決め方法を用いてマウス脳の内側に位置させるものとする。トランスデューサのビーム軸を、頭蓋の頭頂骨の上部の３ｍｍ下に焦点が配されるように整列させるものとする。この配置では、集束超音波ビームの焦点は、左海馬および左後方大脳動脈（ＰＣＡ）に重なるものとなる。右海馬は標的とはならず、対照として用いることができる。

微小気泡（平均直径：３．０〜４．５μｍ、濃度：１ｍＬ当たり気泡５．０〜８．０×１０^８個）を成す２５μｌのボーラスの超音波造影剤を、超音波処理の１〜４分前に、尾静脈内に注射するものとする。パルスされた集束超音波（パルスレート：１０Ｈｚ、パルス持続時間：２０ｍｓ、負荷サイクル２０％）を、次いで、単一の位置（すなわち海馬）での３０秒間の超音波処理からなる一連の二つのバーストで、ピーク間０．６４ＭＰａで印加するものとする。各バーストの間、３０秒の間隔をおくことにより、パルス間のあらゆる余熱を消散させるものとする。この集束超音波処理の手順を、各マウス脳で一回または複数回実施することができる。

ＢＢＢの開放後、双極記録電極を海馬に移植するものとする。マウスは、副作用なく発作抑制の延長をもたらす投与量を決定するために評価するものとする。エンドポイントは、少なくとも８時間の発作抑制である。

実施例６
マウス発作モデルにおける超音波増強マイクロＲＮＡ治療の有効性の前向き評価
１日目に、５０頭のマウスに、２％イソフルラン麻酔下で海馬にカイニン酸（ＫＡ、２００ｎｇ／ｎＬ）を注射するものとする。２１日目に、硬化した海馬にＡＡＶ９−ｐＡＭ／ＣＢＡ−ｍｉＲ１０１−１−ＷＰＲＥ−ＢＧＨｐＡ（４．６６Ｅ ＋１３ゲノムコピー／ｍＬ）を注射する（５００ｎＬ）ものとする。２５頭のＩＨＫＡ対照マウスでは、ＡＡＶ９−ｐＡＭ＿ＣＢＡ−ｐｌ−ＷＰＲＥ−ＢＧＨｐＡ対照ベクターを注射するものとする。ＥＥＧを連続的に記録し、記録された信号をさらに処理して発作の数を定量するものとする。

ＡＡＶ９−ｐＡＭ／ＣＢＡ−ｍｉＲ１０１−１−ＷＰＲＥ−ＢＧＨｐＡの投与前に、超音波エネルギーを、改変された受容体のある海馬部位に近接したＢＢＢに適用するものとする。各マウスは、２％イソフルランを用いて麻酔し、マウスの頭部ホルダー、耳バー、およびガス麻酔マスクを含む定位脳手術装置によって頭部を固定し、うつ伏せにして配置するものとする。マウスの毛を、電気トリマーおよび脱毛クリームを用いて除去するものとする。脱気水充填容器を、音響的かつ光学的に透明な薄いプラスチックラップにより底部で密封し、マウスの頭の上部に配置するものとする。また、超音波カップリングゲルを、残りのあらゆるインピーダンスミスマッチを除去するために使用するものとする。

超音波は、単一素子球状部集束超音波トランスデューサ（中央周波数：１．５２５ＭＨｚ、焦点深度：９０ｍｍ、半径：３０ｍｍ、平均、例えば、Ｒｉｖｅｒｓｉｄｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、ニューヨーク、ニューヨーク州、米国から入手）によって生成するものとする。パルス−エコー診断トランスデューサ（中央周波数：７．５ＭＨｚ、焦点距離：６０ｍｍ）を、集束超音波トランスデューサの中央の円形穴（半径１１．２ｍｍ）を通して整列させて、二つのトランスデューサの焦点が完全に重なるようにするものとする。脱気蒸留水で充填された円錐体を、トランスデューサシステムの上へ、円錐体内に含まれる水を用いて、音響的に透明なポリウレタン膜キャップによって取り付けるものとする。トランスデューサシステムを、コンピュータ制御された三次元位置決定システム（例えば、Ｖｅｌｍｅｘ Ｉｎｃ．、ラシーヌ、ケベック州、カナダから入手可能）に取り付けるものとする。集束超音波トランスデューサを、整合回路に接続し、コンピュータ制御ファンクションジェネレータおよび５０ｄＢ電力増幅器によって駆動するものとする。パルスエコートランスデューサを、パーソナルコンピュータのデジタライザに接続されたパルサーレシーバシステムによって駆動するものとする。

集束超音波トランスデューサを、頭蓋骨の表面に対しそのビーム軸を直角にして、脱気水充填容器に沈めるものとする。トランスデューサの焦点を、例えば、グリッド位置決め方法を用いてマウス脳の内側に位置させるものとする。トランスデューサのビーム軸を、頭蓋の頭頂骨の上部の３ｍｍ下に焦点が配されるように整列させるものとする。この配置では、集束超音波ビームの焦点は、左海馬および左後方大脳動脈（ＰＣＡ）に重なるものとなる。右海馬は標的とはならず、対照として用いることができる。

微小気泡（平均直径：３．０〜４．５μｍ、濃度：１ｍＬ当たり気泡５．０〜８．０×１０^８ 個）を成す２５μｌのボーラスの超音波造影剤を、超音波処理の１〜４分前に、尾静脈内に注射するものとする。パルスされた集束超音波（パルスレート：１０Ｈｚ、パルス持続時間：２０ｍｓ、負荷サイクル２０％）を、次いで、単一の位置（すなわち海馬）での３０秒間の超音波処理からなる一連の二つのバーストで、ピーク間０．６４ＭＰａで印加するものとする。各バーストの間、３０秒の間隔をおくことにより、パルス間のあらゆる余熱を消散させるものとする。この集束超音波処理の手順を、各マウス脳で一回または複数回実施することができる。

ＢＢＢの開放後、双極記録電極を海馬に移植するものとする。ＭＲＩ造影剤、例えばガドリニウムを投与するものとする。集束超音波処置によってＢＢＢが開放されているか否かを判断するために、造影剤を使用するものとする。この作用剤は、９．４ Ｔシステムを用いて、ＴＩ加重およびＴ２加重ＭＲＩスキャンを使用することによって観察するものとする。マウスを、直径３．８ｃｍのバードケージコイルを取り付けられたプラスチックチューブ内に配するものとし、磁石内に垂直に挿入した。超音波処理のおよそ１５分後であるがＭＲＩ造影剤の注射前に、ＴＩ加重スピンエコーＭＲＩスキャンを得るものとする（ＴＲ／ＴＥ：２４６．１ｍｓ／１０ｍｓ；ＢＷ：５０，５０５．１Ｈｚ；マトリックスサイズ：２５６×２５６；ＦＯＶ：１．９２×１．９２ｃｍ；スライス厚さ：０．６ｍｍ：ＮＥＸ：１０、１５、および４５）。最初のスキャンが完了したら、ＢＢＢの開放を描き出すために、カテーテルを介して０．５ｍＬのＭＲＩ造影剤ガドリニウムを腹腔内投与する。腹腔内注射により、ＭＲＩ造影剤を血流内へ低速で取り込ませることが可能になる。ＭＲＩ造影剤の注射後、一連の六つの交互のＴ１加重とＴ２加重の高速スピンエコー画像スキャン（ＴＲ／ＴＥ：４０００ｍｓ／９．２ｍｓ；緩和増強を伴う高速取得（ｒａｐｉｄ ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｒｅｌａｘａｔｉｏｎ ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ）：１６；ＦＯＶ：１．９２×１．９２ｃｍ；マトリックスサイズ：２５６×２５６；スライスの数：１０；スライス厚さ：０．６ｍｍ；スライスギャップ：０．１ｍｍ；ＮＥＸ：１０、１５および４５）を各マウスについて得る。

マウスは、副作用なく発作抑制の延長をもたらす投与量を決定するために評価するものとする。エンドポイントは、少なくとも８時間の発作抑制である。

本明細書に提供される実施例および実施形態は、例示的な実施例および実施形態であることが理解されるべきである。当業者は、本明細書の開示の範囲と一致する実施例および実施形態の様々な改変を想定するものとなる。このような改変は、特許請求の範囲に包含されることが意図されている。

Claims (107)

1. マイクロＲＮＡ−１０１、プリｍｉＲ１０１、またはプレｍｉＲ１０１をコードする核酸を含むベクターを患者に投与することを含み、前記核酸がプロモーターに動作可能に連結され、前記発作障害の一つまたは複数の症状が改善される、それを必要とする前記患者における発作障害を治療する方法。
2. 前記投与後、前記患者におけるマイクロＲＮＡ−１０１、プリｍｉＲ１０１、またはプレｍｉＲ１０１の発現が、前記発作障害の症状の減少と関連している、請求項１に記載の方法。
3. 前記プロモーターが、ＣＡＧプロモーター、ＣＭＶプロモーター、ヒトシナプシン１遺伝子プロモーター（ｈＳｙｎ）、ダイノルフィンプロモーター、エンセファリン（ｅｎｃｅｐｈａｌｉｎ）プロモーター、およびＣａＭＫＩＩプロモーターからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
4. 前記プロモーターがＣＡＧプロモーターである、請求項１に記載の方法。
5. 前記ベクターが、ウッドチャック転写後調節因子（ＷＰＲＥ）を含む、請求項１に記載の方法。
6. 前記ベクターが、ウシ成長ホルモンポリアデニル化配列（ＢＧＨｐＡ）を含む、請求項１に記載の方法。
7. 前記ベクターが蛍光レポーターカセットを含む、請求項１に記載の方法。
8. 前記ベクターがアデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）である、請求項１に記載の方法。
9. 前記アデノ関連ウイルスが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、またはＡＡＶＲｅｃ３である、請求項８に記載の方法。
10. 前記ベクターがレンチウイルスである、請求項１に記載の方法。
11. 前記ベクターが、前記患者の脳内の標的位置に送達される、請求項１に記載の方法。
12. 前記標的位置が、前頭葉、側頭葉、後頭葉、または頭頂葉である、請求項１に記載の方法。
13. 前記ベクターが、経口、頬側、舌下、直腸、局所的、鼻腔内、膣および非経口からなる群から選択される経路を介して投与される、請求項１１に記載の方法。
14. 前記ベクターが、前記標的位置に直接的に投与される、請求項１１に記載の方法。
15. 前記ベクターがｐＡＭ／ＣＢＡ−ｍｉＲ１０１−１−ＷＰＲＥ−ＢＧＨｐＡである、請求項１に記載の方法。
16. 前記発作障害が、てんかん、全般的な強直間代性発作を伴うてんかん、ミオクロニー欠神てんかん、前頭葉てんかん、側頭葉てんかん、後頭葉てんかん、頭頂葉てんかん、ランドウ・クレフナー症候群、ラスムッセン症候群、ドラベ症候群、ドゥーゼ症候群、ＣＤＫＬ５障害、点頭てんかん（ウェスト症候群）、若年性ミオクローヌスてんかん（ＪＭＥ）、ワクチン関連脳症、難治性小児てんかん（ＩＣＥ）、レノックス・ガストー症候群（ＬＧＳ）、レット症候群、大田原症候群、ＣＤＫＬ５障害、小児欠神てんかん、本態性振戦、急性反復性発作、良性ローランドてんかん、てんかん重積、難治性てんかん重積、超難治性てんかん重積（ＳＲＳＥ）、ＰＣＤＨ１９小児てんかん、脳腫瘍誘発性発作、過誤腫誘発性発作、薬物離脱誘発性発作、アルコール離脱誘発性発作、発作活動の増加およびブレークスルー発作からなる群から選択される、請求項１に記載の発作障害を治療する方法。
17. 前記発作障害が焦点発作という特徴を有する、請求項１に記載の発作障害を治療する方法。
18. 前記発作障害が限局性皮質異形成である、請求項１に記載の発作障害を治療する方法。
19. 前記方法が、失調、歩行機能障害、発話機能障害、啼鳴、認知障害、異常運動活動、臨床性発作、無症候性発作、筋緊張低下、筋緊張亢進、流涎、しゃぶり行動、前兆、痙攣、反復運動、異常感覚、発作の頻度、および発作の重症度からなる群から選択される少なくとも一つの症状の改善をもたらす、請求項１に記載の発作障害を治療する方法。
20. 超音波を前記患者の脳の標的位置に適用して、前記標的位置での前記患者の血液脳関門の浸透性を増強することをさらに含み、前記ベクターが前記標的位置に送達される、請求項１に記載の方法。
21. 前記超音波が頭蓋骨を通して投与される、請求項２０に記載の方法。
22. 前記脳の硬膜物質を露出させ、前記露出された硬膜物質でまたはその下に前記超音波を送達することをさらに含む、請求項２０に記載の方法。
23. 前記超音波が、前記ベクターを投与する前に前記患者の脳内の前記標的位置に投与される、請求項２０に記載の方法。
24. 前記ベクターが、前記超音波を適用する前に投与される、請求項２０に記載の方法。
25. 患者の脳内のマイクロＲＮＡ−１０１分子のレベルを増加させる有効量の医薬組成物を前記患者に投与することを含む、それを必要とする前記患者における発作障害を治療する方法。
26. 前記組成物が、マイクロＲＮＡ−１０１、プリｍｉＲ１０１、またはプレｍｉＲ１０１を含む、請求項２５に記載の方法。
27. 前記組成物が、マイクロＲＮＡ−１０１、プリｍｉＲ１０１、またはプレｍｉＲ１０１をコードする核酸を含むベクターを含む、請求項２５に記載の方法。
28. 前記投与後、前記患者におけるマイクロＲＮＡ−１０１、プリｍｉＲ１０１、またはプレｍｉＲ１０１の発現が、前記発作障害の症状の減少と関連している、請求項２７に記載の方法。
29. マイクロＲＮＡ−１０１、プリｍｉＲ１０１、またはプレｍｉＲ１０１をコードする前記核酸が、プロモーターに動作可能に連結されている、請求項２７に記載の方法。
30. 前記プロモーターが、ＣＡＧプロモーター、ＣＭＶプロモーター、ヒトシナプシン１遺伝子プロモーター（ｈＳｙｎ）、ダイノルフィンプロモーター、エンセファリン（ｅｎｃｅｐｈａｌｉｎ）プロモーター、およびＣａＭＫＩＩプロモーターからなる群から選択される、請求項２９に記載の方法。
31. 前記ベクターが、ウッドチャック転写後調節因子（ＷＰＲＥ）を含む、請求項２７に記載の方法。
32. 前記ベクターが蛍光レポーターカセットを含む、請求項２７に記載の方法。
33. 前記ベクターがアデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）である、請求項２７に記載の方法。
34. 前記アデノ関連ウイルスが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、またはＡＡＶＲｅｃ３である、請求項３１に記載の方法。
35. 前記ベクターがレンチウイルスである、請求項２７に記載の方法。
36. 前記ベクターがｐＡＭ／ＣＢＡ−ｍｉＲ１０１−１−ＷＰＲＥ−ＢＧＨｐＡである、請求項２７に記載の方法。
37. 前記ベクターが、前記患者の脳内の標的位置に送達される、請求項２７に記載の方法。
38. 前記標的位置が、前頭葉、側頭葉、後頭葉、または頭頂葉である、請求項３８に記載の方法。
39. 前記ベクターが、経口、頬側、舌下、直腸、局所的、鼻腔内、膣、および非経口からなる群から選択される経路を介して投与される、請求項２７に記載の方法。
40. 前記ベクターが、前記標的位置に直接的に投与される、請求項３７に記載の方法。
41. 前記発作障害が、てんかん、全般的な強直間代性発作を伴うてんかん、ミオクロニー欠神てんかん、前頭葉てんかん、側頭葉てんかん、後頭葉てんかん、頭頂葉てんかん、ランドウ・クレフナー症候群、ラスムッセン症候群、ドラベ症候群、ドゥーゼ症候群、ＣＤＫＬ５障害、点頭てんかん（ウェスト症候群）、若年性ミオクローヌスてんかん（ＪＭＥ）、ワクチン関連脳症、難治性小児てんかん（ＩＣＥ）、レノックス・ガストー症候群（ＬＧＳ）、レット症候群、大田原症候群、ＣＤＫＬ５障害、小児欠神てんかん、本態性振戦、急性反復性発作、良性ローランドてんかん、てんかん重積、難治性てんかん重積、超難治性てんかん重積（ＳＲＳＥ）、ＰＣＤＨ１９小児てんかん、脳腫瘍誘発性発作、過誤腫誘発性発作、薬物離脱誘発性発作、アルコール離脱誘発性発作、発作活動の増加およびブレークスルー発作からなる群から選択される、請求項２５に記載の方法。
42. 前記発作障害が焦点発作という特徴を有する、請求項２５に記載の方法。
43. 前記発作障害が限局性皮質異形成である、請求項２５に記載の方法。
44. 前記方法が、失調、歩行機能障害、発話機能障害、啼鳴、不随意性の笑い、認知障害、異常運動活動、臨床性発作、無症候性発作、筋緊張低下、筋緊張亢進、流涎、しゃぶり行動、前兆、痙攣、反復運動、異常感覚、発作の頻度、および発作の重症度からなる群から選択される少なくとも一つの症状の改善をもたらす、請求項２５に記載の方法。
45. 超音波を前記患者の脳の標的位置に適用して、前記標的位置での前記患者の血液脳関門の浸透性を増強することをさらに含み、前記ベクターが前記標的位置に送達される、請求項２５に記載の方法。
46. 前記超音波が頭蓋骨を通して投与される、請求項４５に記載の方法。
47. 前記脳の硬膜物質を露出させ、前記露出された硬膜物質でまたはその下に前記超音波を送達することをさらに含む、請求項４５に記載の方法。
48. 前記超音波が、前記ベクターを投与する前に前記患者の脳内の前記標的位置に投与される、請求項４５に記載の方法。
49. 前記ベクターが、前記超音波を適用する前に投与される、請求項４５に記載の方法。
50. 前記組成物が、非ウイルスベクターであるベクターを含む、請求項２５に記載の方法。
51. 前記非ウイルスベクターがリポソーム媒介性送達ベクターである、請求項５０に記載の方法。
52. ＣＡＧプロモーター、ウッドチャック転写後調節因子（ＷＰＲＥ）、およびウシ成長ホルモンポリアデニル化配列（ＢＧＨｐＡ）の制御下のマイクロＲＮＡ−１０１、プリｍｉＲ１０１、またはプレｍｉＲ１０１をコードする核酸を含むベクター。
53. マイクロＲＮＡ−１２８、プリｍｉＲ１２８、またはプレｍｉＲ１２８をコードする核酸を含むベクターを患者に投与することを含み、前記核酸がプロモーターに動作可能に連結され、前記発作障害の一つまたは複数の症状が改善される、それを必要とする患者における発作障害を治療する方法。
54. 前記投与後、前記患者におけるマイクロＲＮＡ−１２８の発現が、前記発作障害の症状の減少と関連している、請求項５３に記載の方法。
55. 前記プロモーターが、ＣＡＧプロモーター、ＣＭＶプロモーター、ヒトシナプシン１遺伝子プロモーター（ｈＳｙｎ）、ダイノルフィンプロモーター、エンセファリン（ｅｎｃｅｐｈａｌｉｎ）プロモーター、およびＣａＭＫＩＩプロモーターからなる群から選択される、請求項５３に記載の方法。
56. 前記プロモーターがＣＡＧプロモーターである、請求項５３に記載の方法。
57. 前記ベクターが、ウッドチャック転写後調節因子（ＷＰＲＥ）を含む、請求項５３に記載の方法。
58. 前記ベクターが、ウシ成長ホルモンポリアデニル化配列（ＢＧＨｐＡ）を含む、請求項５３に記載の方法。
59. 前記ベクターが蛍光レポーターカセットを含む、請求項５３に記載の方法。
60. 前記ベクターがアデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）である、請求項５３に記載の方法。
61. 前記アデノ関連ウイルスが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、またはＡＡＶＲｅｃ３である、請求項６０に記載の方法。
62. 前記ベクターがレンチウイルスである、請求項５３に記載の方法。
63. 前記ベクターが、前記患者の脳内の標的位置に送達される、請求項５３に記載の方法。
64. 前記標的位置が、前頭葉、側頭葉、後頭葉、または頭頂葉である、請求項５３に記載の方法。
65. 前記ベクターが、経口、頬側、舌下、直腸、局所的、鼻腔内、膣、および非経口からなる群から選択される経路を介して投与される、請求項６３に記載の方法。
66. 前記ベクターが、前記標的位置に直接的に投与される、請求項６３に記載の方法。
67. 前記ｍｉＲ１２８がｍｉＲＮＡ１２８−２によってコードされる、請求項５３に記載の方法。
68. 前記ベクターがｐＡＭ／ＣＢＡ−ｍｉＲ１２８−２−ＷＰＲＥ−ＢＧＨｐＡである、請求項６７に記載の方法。
69. 前記発作障害が、てんかん、全般的な強直間代性発作を伴うてんかん、ミオクロニー欠神てんかん、前頭葉てんかん、側頭葉てんかん、後頭葉てんかん、頭頂葉てんかん、ランドウ・クレフナー症候群、ラスムッセン症候群、ドラベ症候群、ドゥーゼ症候群、ＣＤＫＬ５障害、点頭てんかん（ウェスト症候群）、若年性ミオクローヌスてんかん（ＪＭＥ）、ワクチン関連脳症、難治性小児てんかん（ＩＣＥ）、レノックス・ガストー症候群（ＬＧＳ）、レット症候群、大田原症候群、ＣＤＫＬ５障害、小児欠神てんかん、本態性振戦、急性反復性発作、良性ローランドてんかん、てんかん重積、難治性てんかん重積、超難治性てんかん重積（ＳＲＳＥ）、ＰＣＤＨ１９小児てんかん、脳腫瘍誘発性発作、過誤腫誘発性発作、薬物離脱誘発性発作、アルコール離脱誘発性発作、発作活動の増加およびブレークスルー発作からなる群から選択される、請求項５３に記載の発作障害を治療する方法。
70. 前記発作障害が焦点発作という特徴を有する、請求項５３に記載の発作障害を治療する方法。
71. 前記発作障害が限局性皮質異形成である、請求項５３に記載の発作障害を治療する方法。
72. 失調、歩行機能障害、発話機能障害、啼鳴、不随意性の笑い、認知障害、異常運動活動、臨床性発作、無症候性発作、筋緊張低下、筋緊張亢進、流涎、しゃぶり行動、前兆、痙攣、反復運動、異常感覚、発作の頻度、および発作の重症度からなる群から選択される少なくとも一つの症状の改善をもたらす、請求項５３に記載の発作障害を治療する方法。
73. 超音波を前記患者の脳の標的位置に適用して、前記標的位置での前記患者の血液脳関門の浸透性を増強することをさらに含み、前記ベクターが前記標的位置に送達される、請求項５３に記載の方法。
74. 前記超音波が頭蓋骨を通して投与される、請求項７３に記載の方法。
75. 前記脳の硬膜物質を露出させ、前記露出された硬膜物質でまたはその下に前記超音波を送達することをさらに含む、請求項７３に記載の方法。
76. 前記超音波が、前記ベクターを投与する前に前記患者の脳内の前記標的位置に投与される、請求項７３に記載の方法。
77. 前記ベクターが、前記超音波を適用する前に投与される、請求項７３に記載の方法。
78. 前記患者の脳細胞内のマイクロＲＮＡ−１２８分子のレベルを増加させる有効量の医薬組成物を前記患者に投与することを含む、それを必要とする患者における発作障害を治療する方法。
79. 前記組成物が、マイクロＲＮＡ−１２８、プリｍｉＲ１２８、またはプレｍｉＲ１２８を含む、請求項７８に記載の方法。
80. 前記組成物が、マイクロＲＮＡ−１２８、プリｍｉＲ１２８、またはプレｍｉＲ１２８をコードする核酸を含むベクターを含む、請求項７８に記載の方法。
81. 前記投与後、前記患者におけるマイクロＲＮＡ−１２８、プリｍｉＲ１２８、またはプレｍｉＲ１２８の発現が、前記発作障害の症状の減少と関連している、請求項８０に記載の方法。
82. マイクロＲＮＡ−１２８をコードする前記核酸が、ｍｉＲ−１２８−２である、請求項８０に記載の方法。
83. マイクロＲＮＡ−１２８をコードする前記核酸が、プロモーターに動作可能に連結されている、請求項８０に記載の方法。
84. 前記プロモーターが、ＣＡＧプロモーター、ＣＭＶプロモーター、ヒトシナプシン１遺伝子プロモーター（ｈＳｙｎ）、ダイノルフィンプロモーター、エンセファリン（ｅｎｃｅｐｈａｌｉｎ）プロモーター、およびＣａＭＫＩＩプロモーターからなる群から選択される、請求項８０に記載の方法。
85. 前記ベクターが、ウッドチャック転写後調節因子（ＷＰＲＥ）を含む、請求項８０に記載の方法。
86. 前記ベクターが、蛍光レポーターカセットを含む、請求項８０に記載の方法。
87. 前記ベクターが、アデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）である、請求項８０に記載の方法。
88. 前記アデノ関連ウイルスが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、またはＡＡＶＲｅｃ３である、請求項８７に記載の方法。
89. 前記ベクターがレンチウイルスである、請求項８０に記載の方法。
90. 前記ベクターがｐＡＭ／ＣＢＡ−ｍｉＲ１０１−１−ＷＰＲＥ−ＢＧＨｐＡである、請求項８０に記載の方法。
91. 前記ベクターが、前記患者の脳内の標的位置に送達される、請求項８０に記載の方法。
92. 前記標的位置が、前頭葉、側頭葉、後頭葉、または頭頂葉である、請求項９１に記載の方法。
93. 前記ベクターが、経口、頬側、舌下、直腸、局所的、鼻腔内、膣、および非経口からなる群から選択される経路を介して投与される、請求項９１に記載の方法。
94. 前記ベクターが、前記標的位置に直接的に投与される、請求項９１に記載の方法。
95. 前記発作障害が、てんかん、全般的な強直間代性発作を伴うてんかん、ミオクロニー欠神てんかん、前頭葉てんかん、側頭葉てんかん、後頭葉てんかん、頭頂葉てんかん、ランドウ・クレフナー症候群、ラスムッセン症候群、ドラベ症候群、ドゥーゼ症候群、ＣＤＫＬ５障害、点頭てんかん（ウェスト症候群）、若年性ミオクローヌスてんかん（ＪＭＥ）、ワクチン関連脳症、難治性小児てんかん（ＩＣＥ）、レノックス・ガストー症候群（ＬＧＳ）、レット症候群、大田原症候群、ＣＤＫＬ５障害、小児欠神てんかん、本態性振戦、急性反復性発作、良性ローランドてんかん、てんかん重積、難治性てんかん重積、超難治性てんかん重積（ＳＲＳＥ）、ＰＣＤＨ１９小児てんかん、脳腫瘍誘発性発作、過誤腫誘発性発作、薬物離脱誘発性発作、アルコール離脱誘発性発作、発作活動の増加およびブレークスルー発作からなる群から選択される、請求項７８に記載の方法。
96. 前記発作障害が焦点発作という特徴を有する、請求項７８に記載の方法。
97. 前記発作障害が限局性皮質異形成である、請求項７８に記載の方法。
98. 失調、歩行機能障害、発話機能障害、啼鳴、不随意性の笑い、認知障害、異常運動活動、臨床性発作、無症候性発作、筋緊張低下、筋緊張亢進、流涎、しゃぶり行動、前兆、痙攣、反復運動、異常感覚、発作の頻度、および発作の重症度からなる群から選択される少なくとも一つの症状の改善をもたらす、請求項７８に記載の方法。
99. 超音波を前記患者の脳の標的位置に適用して、前記標的位置での前記患者の血液脳関門の浸透性を増強することをさらに含み、前記ベクターが前記標的位置に送達される、請求項７８に記載の方法。
100. 前記超音波が頭蓋骨を通して投与される、請求項９９に記載の方法。
101. 前記脳の硬膜物質を露出させ、前記露出された硬膜物質でまたはその下に前記超音波を送達することをさらに含む、請求項９９に記載の方法。
102. 前記超音波が、前記ベクターを投与する前に前記患者の脳内の前記標的位置に投与される、請求項９９に記載の方法。
103. 前記ベクターが、前記超音波を適用する前に投与される、請求項９９に記載の方法。
104. 前記組成物が、非ウイルスベクターであるベクターを含む、請求項７８に記載の方法。
105. 前記非ウイルスベクターがリポソーム媒介性送達ベクターである、請求項１０４に記載の方法。
106. ＣＡＧプロモーター、ウッドチャック転写後調節因子（ＷＰＲＥ）、およびウシ成長ホルモンポリアデニル化配列（ＢＧＨｐＡ）の制御下のマイクロＲＮＡ−１２８、プリｍｉＲ１２８、またはプレｍｉＲ１２８をコードする核酸を含むベクター。
107. マイクロＲＮＡ−１２８が、マイクロＲＮＡ−１２８−２によってコードされる、請求項１０２に記載のベクター。