JP2021505610A - ウイルス粒子のための製剤最適化 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、2017年12月5日に出願された米国特許仮出願第62/594,833号に基づく優先権を主張するものであり、該出願の内容は全て参照により本明細書に明示的に組み込まれる。
本開示は、ウイルス粒子を安定な状態で維持するための製剤を提供する。特定の実施形態において、製剤は、少なくとも1種の塩基性アミノ酸及びバッファー溶液を含有し、該ウイルス粒子は1mLあたり約1×1011〜約5×1013個のDNase耐性ウイルス粒子の濃度で存在する。
本開示の他の実施形態は以下に提供される。
本開示がより容易に理解され得るために、特定の用語を最初に定義する。更に、あるパラメーターの値又は値の範囲が記載されている場合は、記載された値の間に介在する値及び範囲も本開示の一部であることが意図されていることに留意すべきである。文脈から他の意味であることが明らかでない場合、本明細書で提供された全ての数値は、用語「約」によって修正され得る。
本開示は、ウイルス粒子のための最適化された製剤を特徴とする。特定の態様において、本開示は、ウイルス粒子を安定な形態で維持するための、塩基性アミノ酸及びバッファー溶液を含有する製剤であって、ウイルス粒子が1mLあたり約1×1011〜約5×1013個のDNase耐性ウイルス粒子(DRP/mL)の濃度で存在する製剤を特徴とする。
製剤のために好適なpHは、ウイルス粒子が保存期間にわたって望ましい状態(すなわち生存性、感染力価等)に維持される任意のpHである。例えば、製剤のpHは、望ましくは約6〜9、6〜8.5、6.5〜8.5、7〜8.5、7.5〜8.5、6〜8、6.5〜8、7〜8、7.5〜8、又は7〜7.5である。好ましい実施形態において、製剤は約7.5のpHを有する。
本開示の製剤は安定であり、品質、効力、又は純度において許容できない変化なしに保存することができる。
一実施形態において、製剤は高強度での振とう後に安定である。
ウイルス粒子の安定性の保持(例えば維持)が特に好ましい。ウイルス粒子の安定性、効力(活性)及び純度は、任意の好適な技術によって決定することができる。そのような技術の多くが当分野において公知である。
本明細書に記載する通り、本開示は、ウイルス粒子のための新規かつ進歩性を有する製剤を提供する。
特定の実施形態において、ウイルス粒子は約1×1011 DRP/mLの濃度で製剤中に存在する。特定の実施形態において、ウイルス粒子は約5×1011 DRP/mL以上の濃度で製剤中に存在する。特定の実施形態において、ウイルス粒子は約1×1012 DRP/mL以上の濃度で製剤中に存在する。特定の実施形態において、ウイルス粒子は約5×1012 DRP/mL以上の濃度で製剤中に存在する。特定の実施形態において、ウイルス粒子は約1×1013 DRP/mL以上の濃度で製剤中に存在する。特定の実施形態において、ウイルス粒子は約5×1013 DRP/mL以上の濃度で製剤中に存在する。特定の実施形態において、ウイルス粒子は約1×1011〜約5×1013 DRP/mLの濃度で製剤中に存在する。
本試験の目的は、AAV粒子のための異なる製剤を比較し、多数のDNA耐性粒子(DPR)/mLを収容し、厳しい条件に曝された後に安定性を維持することができる製剤を最適化することである。
表1に示す以下の実験的製剤を、以下の条件:(1)凍結/融解、(2)加熱(45℃)及び(3)撹拌、下で試験した。
実験計画
3種の条件(凍結/融解、加熱(45℃)及び振とう)を、各条件に付いて4つのサンプル(製剤1(Form 1)、製剤2(Form 2)、製剤3(Form 3)及び対照)で試験する。全ての製剤及び対照を、3.0×109 DRP/ウェルで試験する。
銀染色手順に従って、サンプルは2.5×1011 DRP/ml以上の濃度、12μl/ウェルで添加する必要がある。
濁度試験からの試験したサンプルを、速やかに銀染色に供する。簡単に記載すると、ウイルスサンプルを、色素及び変性剤を含有するバッファーと混合する。変性させた試験品を、陽性対照及び分子量ラダーと共にタンパク質電気泳動ゲルのウェル中にロードする。ゲルをサイズによるタンパク質の分離のために電気泳動に供する。次いでゲルを固定し、染色し、イメージングのために現像する。標準作業手順。
簡単に記載すると、ウイルスサンプル及び陽性対照をDNAse及びプロテイナーゼ処理、続いて酵素賦活化ステップに供する。試験品を、ウイルスゲノム中のSV40配列に特異的なプライマー及び蛍光プローブを含むバッファーと混合する。PCRを使用してウイルスDNAを増幅して検出し、DNA標準曲線に対して試験品を定量化する。
濁度試験及びSDS-PAGE試験からの3つの条件下での3種の製剤の結果を評価し、対照(1×BSST)と比較する。最良の安定性を示す1種又は2種の製剤をTCID50試験のために予定し、選択した条件(凍結/融解、加熱又は振とう)で処理した後にその感染性を評価する。
当業者は、慣用的な実験を使用して、本明細書に記載された具体的な実施形態及び方法に対する多くの等価物を認識し、これを確かめることができるであろう。そのような等価物は、以下の請求請求の範囲に包含されることが意図される。
本出願において参照された各文献、特許及び特許出願は、各文献が個々に組み込まれることが記載されているように参照により本明細書に組み込まれる。
Claims (23)
- 少なくとも1種の塩基性アミノ酸及びバッファー溶液を含有する、ウイルス粒子を安定な形態で維持するための製剤であって、該ウイルス粒子が1mLあたり約1×1011〜約5×1013個のDNase耐性ウイルス粒子(DRP/mL)の濃度で存在する、上記製剤。
- 塩基性アミノ酸が、アルギニン、ヒスチジン及びリジンからなる群から選択される、請求項1記載の製剤。
- アルギニンが約2mM〜約10mMの量で製剤中に存在する、請求項2記載の製剤。
- アルギニンが約5mMの量で製剤中に存在する、請求項3記載の製剤。
- ヒスチジンが約2mM〜約10mMの量で製剤中に存在する、請求項2記載の製剤。
- ヒスチジンが約5mMの量で製剤中に存在する、請求項5記載の製剤。
- リジンが約2mM〜約10mMの量で製剤中に存在する、請求項2記載の製剤。
- リジンが約5mMの量で製剤中に存在する、請求項7記載の製剤。
- 非イオン性界面活性剤を更に含有する、請求項1記載の製剤。
- 非イオン性界面活性剤がtween-20である、請求項1記載の製剤。
- tween-20が約0.005%〜約0.025%(v/v)の量で製剤中に存在する、請求項10記載の製剤。
- tween-20が約0.014%(v/v)の量で製剤中に存在する、請求項11記載の製剤。
- バッファー溶液がリン酸緩衝生理食塩水(PBS)である、請求項1記載の製剤。
- ウイルス粒子が1mLあたり約5×1012〜約5×1013個のDNase耐性ウイルス粒子(DRP/mL)の濃度で存在する、請求項1記載の製剤。
- 製剤のpHが約7.0〜約7.5である、請求項1記載の製剤。
- 製剤のpHが約7.5である、請求項15記載の製剤。
- ウイルス粒子がアデノ随伴ウイルス(AAV)である、請求項1記載の製剤。
- ウイルス粒子が組換えアデノ随伴ウイルス(rAAV)である、請求項17記載の製剤。
- 製剤が-80℃での保存後に安定である、請求項1記載の製剤。
- 製剤が45℃への加熱後に安定である、請求項1記載の製剤。
- 製剤が高強度の振とう後に安定である、請求項1記載の製剤。
- 製剤が治療薬の送達のために使用される、請求項1記載の製剤。
- 治療薬が遺伝子治療ベクターである、請求項22記載の製剤。
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