JP2021183958A - 上皮系マーカー陰性の腫瘍細胞を検出する方法 - Google Patents
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Abstract
Description
cell adhesion molecule)などの上皮系マーカーが用いられている。すなわち、CTCは、上皮系マーカー陽性の細胞として検出されている。
[1]
試料中の標的細胞を検出する方法であって、
試料中の少なくとも1つの上皮系マーカーが陰性かつTM4SF1(Transmembrane 4 superfamily member 1)が陽性の細胞を標的細胞として検出する工程
を含み、
前記標的細胞が、腫瘍細胞である、方法。
[2]
前記上皮系マーカーが、EpCAM(Epithelial cell adhesion molecule)および/またはサイトケラチンである、前記方法。
[3]
前記標的細胞が、循環腫瘍細胞である、前記方法。
[4]
前記標的細胞が、上皮間葉転換を起こした腫瘍細胞である、前記方法。
[5]
前記標的細胞が、骨転移に関係する前立腺癌由来腫瘍細胞である、前記方法。
[6]
前記試料が、被験体から得られた試料である、前記方法。
[7]
前記被験体が、癌被験体である、前記方法。
[8]
前記被験体が、ヒトである、前記方法。
[9]
前記試料が、血液由来試料である、前記方法。
[10]
前記検出により、前記試料中の前記標的細胞の個数が測定される、前記方法。
[11]
前記試料が、被験体から得られた試料であり、
前記被験体が、癌被験体であり、
前記検出により、前記試料中の前記標的細胞の個数が測定される、
前記方法。
[12]
被験体の予後を予測する方法であって、
前記方法により前記試料中の前記標的細胞の個数を測定する工程、および
前記個数と前記被験体の予後とを関連付ける工程
を含む、方法。
本発明の検出方法は、試料中の標的細胞を検出する方法である。
試料、血液成分を含有し得る試料、およびそれらの分画物(以下、総称して「血液由来試料」ともいう)が挙げられる。血液由来試料は、被験体からの採取が比較的容易であり得る。試料は、例えば、そのまま、あるいは適宜、希釈または濃縮等の操作に供してから、検出工程に用いてよい。試料は、例えば、懸濁液の形態で検出工程に用いてよい。
細胞としては、上皮間葉転換を起こした腫瘍細胞や骨転移に関係する腫瘍細胞が挙げられる。上皮間葉転換を起こした腫瘍細胞としては、ビメンチン(Vimentin)や神経カドヘリン(N−Cadherin)等の間葉系マーカー陽性の腫瘍細胞が挙げられる。骨転移に関係する腫瘍細胞としては、骨転移に関係する前立腺癌由来腫瘍細胞が挙げられる。骨転移に関係する前立腺癌由来腫瘍細胞としては、BMP4(Bone morphogenetic protein 4)等の骨形成因子陽性の腫瘍細胞が挙げられる。「骨転移に関係する」とは、例えば、癌の骨転移の原因となることを意味してよい。標的細胞は、例えば、単一細胞として存在していてもよく、細胞クラスタ(細胞集塊)を形成していてもよい。細胞クラスタは、標的細胞を1個またはそれ以上含んでいてよい。細胞クラスタは、標的細胞に加えて、標的細胞以外の細胞を含んでいてもよく、いなくてもよい。
測定(例えば、発現産物の存在量の測定)であってもよい。測定を「検出」ともいう。
施してもよく、標的細胞を自動で読み取るソフトウェアを用いて自動で実施してもよい。なお、標識した標的細胞の検出および計数の際には、例えば、染色像(例えば蛍光像)に加えて、明視野像による観察結果を参考にしてもよい。
試料が被験体より得られた試料であり、且つ、該被験体が癌被験体である場合、検出工
程の結果に基づいて被験体の予後を予測することができる。すなわち、本発明の予測方法は、被験体の予後を予測する方法である。
の治療状態、ステージI/II/III/IV等の進行度、1年/3年/5年/10年生存率等の生存率、グリーソンスコア(Gleason score)等の悪性度が挙げられる。すなわち、予後として、具体的には、根治群/再発群/要治療群等の治療状態に基づく予後、ステージI/II/III/IV等の進行度に基づく予後、1年/3年/5年/10年生存率等の生存率に基づく予後、グリーソンスコア(Gleason score)等の悪性度に基づく予後も挙げられる。グリーソンスコアは、例えば、前立腺癌の悪性度の判定に用いられる。治療状態、進行度、生存率、悪性度等のパラメータと標的細胞の個数を組み合わせて評価することにより、正確に予後を予測することができると期待される。予後は、特に、治療予後であってよい。すなわち、例えば、癌の治療後の被験体に対して本発明の予測方法を実施することにより、治療予後を予測することができる。
本発明は、本発明の方法に含まれる工程をコンピュータに実行させるプログラムを提供する。同プログラムを、「本発明のプログラム」ともいう。「本発明の方法」とは、本発明の検出方法および本発明の予測方法を総称してよい。
としては、フロッピー(登録商標)ディスク、光磁気ディスク、CD−ROM、CD−R/W、DVD−ROM、DVD−R/W、DVD−RAM、DAT、8mmテープ、メモリカード、ハードディスク、ROM(リードオンリーメモリ)、SSDが挙げられる。また、本発明のプログラムは、コンピュータにより実行される各ステップが別個のプログラムとして記録されていてもよい。
以下の方法により、前立腺癌患者由来血液試料中に含まれるCTCの遺伝子発現解析を行なった。
member 1)抗体溶液50μL(PE−anti−human TM4SF1 Antibody、R&D systems)、PE標識抗TNFRSF12A(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 12A)抗体溶液2.5μL(PE−anti−human TNFRSF12A Antibody、Biolegend)、PE標識抗EpCAM(Epithelial cell adhesion molecule)抗体溶液10μL(PE−anti−human EpCAM Antibody、Miltenyi Biotec)、FITC(フルオレセインイソチオシアネート)標識抗CD45抗体溶液10μL(CD45−BB515、Becton Dickinson)、および細胞核染色試薬として1mg/mL Hoechst 33342 solution 1.1μL(同仁化学研究所)を加え混和した。冷蔵で10分間インキュベート後、バッファで細胞を洗浄し、バッファに懸濁させた。
5陰性で、且つ細胞核を有していた。検出したCTCはマイクロピックシステム(ネッパジーン)を用いて回収した。
TCが含まれていると、上皮間葉転換や骨転移を起こしている可能性があり、全生存予後が悪化していると予測できる。
以下の方法により、前立腺癌細胞の蛍光標識抗体法による検出を行なった。
VCaP:10%(v/v)FBS(ウシ胎児血清)を含むDMEM(Dulbecco’s Modified Eagle Medium)培地
PC3:10%(v/v)FBSを含むHam’s F−12K培地
以下の方法により、血液試料中に含まれる前立腺癌細胞の回収、および蛍光標識抗体法による検出を行なった。
養皿から細胞を剥離することで、癌細胞を回収した。
VCaP:10%(v/v)FBSを含むDMEM培地
PC3:10%(v/v)FBSを含むHam’s F−12K培地
Claims (12)
- 試料中の標的細胞を検出する方法であって、
試料中の少なくとも1つの上皮系マーカーが陰性かつTM4SF1(Transmembrane 4 superfamily member 1)が陽性の細胞を標的細胞として検出する工程
を含み、
前記標的細胞が、腫瘍細胞である、方法。 - 前記上皮系マーカーが、EpCAM(Epithelial cell adhesion molecule)および/またはサイトケラチンである、請求項1に記載の方法。
- 前記標的細胞が、循環腫瘍細胞である、請求項1または2に記載の方法。
- 前記標的細胞が、上皮間葉転換を起こした腫瘍細胞である、請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。
- 前記標的細胞が、骨転移に関係する前立腺癌由来腫瘍細胞である、請求項1〜4のいずれか1項に記載の方法。
- 前記試料が、被験体から得られた試料である、請求項1〜5のいずれか1項に記載の方法。
- 前記被験体が、癌被験体である、請求項6に記載の方法。
- 前記被験体が、ヒトである、請求項6または7に記載の方法。
- 前記試料が、血液由来試料である、請求項1〜8のいずれか1項に記載の方法。
- 前記検出により、前記試料中の前記標的細胞の個数が測定される、請求項1〜9のいずれか1項に記載の方法。
- 前記試料が、被験体から得られた試料であり、
前記被験体が、癌被験体であり、
前記検出により、前記試料中の前記標的細胞の個数が測定される、
請求項1〜10のいずれか1項に記載の方法。 - 被験体の予後を予測する方法であって、
請求項11に記載の方法により前記試料中の前記標的細胞の個数を測定する工程、および
前記個数と前記被験体の予後とを関連付ける工程
を含む、方法。
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