JP2021159047A - ＰＰＡＲγ活性化剤 - Google Patents

Abstract

【課題】新規なＰＰＡＲγ活性化剤を提供すること。【解決手段】１’−アセトキシチャビコールアセテートを有効成分として含有する、ＰＰＡＲγ活性化剤。１’−アセトキシチャビコールアセテートを有効成分として含有する、ＰＰＡＲγ活性用食品組成物。【選択図】なし

Description

本発明は、ＰＰＡＲγ活性化剤に関する。

ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体（ＰＰＡＲ：Ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｅ−Ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ）は、核内受容体の一種であり、α（ＰＰＡＲα）、β（ＰＰＡＲβ）及びγ（ＰＰＡＲγ）の３種類のサブタイプが知られている。また、ＰＰＡＲγには、選択的スプライシングによる３つのアイソフォーム（ＰＰＡＲγ１、ＰＰＡＲγ２及びＰＰＡＲγ３）が知られている。

ＰＰＡＲγは、転写因子として機能することにより、標的遺伝子の発現を通じて様々な生理機能に関与する。ＰＰＡＲγは、心臓、骨格筋、肝臓、脂肪組織等で発現していること、多くの標的遺伝子があることが知られており、例えば、インスリン抵抗性の改善、抗肥満、抗動脈硬化、皮膚の再生など様々な生理機能に関与していることが知られている。

ＰＰＡＲγ活性化作用を示すＰＰＡＲγアゴニストとして、例えば、特許文献１には、クローブ、ベイ、シトロネラ、ケシ、ロベージ、ダバナ、アサ、エレミ及びそれらの抽出物、並びにアシタバカルコンから選ばれる１種以上を有効成分とするＰＰＡＲγ活性化剤が開示されている。

特開２０１６−２７０１４号公報

本発明者らは、１’−アセトキシチャビコールアセテートがＰＰＡＲγ活性化作用を示すことを見出した。本発明はこの新規な知見に基づくものであり、新規なＰＰＡＲγ活性化剤を提供することを目的とする。

本発明は、１’−アセトキシチャビコールアセテートを有効成分として含有する、ＰＰＡＲγ活性化剤に関する。

本発明に係るＰＰＡＲγ活性化剤は、１’−アセトキシチャビコールアセテートを有効成分として含有するため、ＰＰＡＲγ活性化作用を示す。

本発明はまた、１’−アセトキシチャビコールアセテートを有効成分として含有する、ＰＰＡＲγ活性化用食品組成物にも関する。

本発明によれば、新規なＰＰＡＲγ活性化剤を提供することができる。

以下、本発明を実施するための形態について詳細に説明する。なお、本発明は、以下の実施形態に限定されるものではない。

本実施形態に係るＰＰＡＲγ活性化剤は、１’−アセトキシチャビコールアセテート（以下、「ＡＣＡ」ともいう。）を有効成分として含有する。

１’−アセトキシチャビコールアセテートは、下記構造式で示される化合物である。

本実施形態に係るＰＰＡＲγ活性化剤の有効成分とするＡＣＡは、（Ｒ）体であってもよく、（Ｓ）体であってもよく、（Ｒ）体と（Ｓ）体の混合物（例えば、ラセミ体）であってもよい。

ＡＣＡは、例えば、４−ヒドロキシベンズアルデヒドを原料とし、ヒドロキシ基を保護した後、グリニャール試薬等の有機金属試薬を用いて、ビニル基を導入した２級アルコールを合成し、次いで、脱保護及びアシル化を行うことで合成することができる。

また、ＡＣＡは、ショウガ科の植物であるガランガル（例えば、Ａｌｐｉｎｉａ ｇａｌａｎｇａ、Ａｌｐｉｎｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｒｕｍ、Ｋａｅｍｐｆｅｒｉａ ｇａｌａｎｇａ、Ｂｏｅｓｅｎｂｅｒｇｉａ ｒｏｔｕｎｄａ）に含まれる香気成分の一種でもあるため、これら植物から単離又は抽出してもよい。

本実施形態に係るＰＰＡＲγ活性化剤は、固体（例えば、粉末）、液体（水溶性又は脂溶性の溶液又は懸濁液）、ペースト等のいずれの形状であってもよい。また、本実施形態に係るＰＰＡＲγ活性化剤は、例えば、錠剤（口腔内崩壊錠、チュアブル錠、フィルムコーティング錠等）、カプセル剤、散剤、顆粒剤、液剤（シロップ剤、ゼリー剤等）、軟膏剤、硬膏剤等のいずれの剤形であってもよい。

本実施形態に係るＰＰＡＲγ活性化剤は、有効成分であるＡＣＡのみからなるものであってもよく、またＰＰＡＲγ活性化剤の具体的態様に応じて、有効成分の他、食品、医薬部外品又は医薬品に許容されるその他成分を含有するものであってもよい。

その他成分としては、例えば、賦形剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、乳化剤、界面活性剤、基剤、溶解補助剤、懸濁化剤等、また着色料、香料、甘味料、苦味料、塩味料、酸味料、保存料、防カビ剤、酸化防止剤、乳化剤、ｐＨ調整剤、増粘安定剤等が挙げられる。

例えば、賦形剤としては、ラクトース、スクロース、デンプン、デキストリン等が挙げられる。結合剤としては、ポリビニルアルコール、アラビアゴム、トラガント、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリビニルピロリドン等が挙げられる。滑沢剤としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、タルク等が挙げられる。崩壊剤としては、結晶セルロース、寒天、ゼラチン、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、デキストリン等が挙げられる。乳化剤又は界面活性剤としては、Ｔｗｅｅｎ６０、Ｔｗｅｅｎ８０、Ｓｐａｎ８０、モノステアリン酸グリセリン等が挙げられる。基剤としては、セトステアリルアルコール、ラノリン、ポリエチレングリコール、米糠油、魚油（ＤＨＡ、ＥＰＡ等）、オリーブ油等が挙げられる。溶解補助剤としては、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、Ｔｗｅｅｎ８０等が挙げられる。懸濁化剤としては、Ｔｗｅｅｎ６０、Ｔｗｅｅｎ８０、Ｓｐａｎ８０、モノステアリン酸グリセリン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム等が挙げられる。

また例えば、着色料としては、ベータカロチン、カラメル、紅麹色素等が挙げられる。香料としては、アセト酢酸エチル、アセトフェノン、アニスアルデヒド等が挙げられる。甘味料としては、糖類、糖アルコール類、ステビア、アスパルテーム等が挙げられる。苦味料としては、カフェイン等が挙げられる。塩味料としては、食塩、塩化カリウム等が挙げられる。酸味料としては、酢酸、乳酸、グルコン酸等が挙げられる。保存料としては、メチルパラベン、プロピルパラベン等が挙げられる。防カビ剤としては、イマザリル、オルトフェニルフェノール、チアベンダゾール、フルジオキソニル等が挙げられる。酸化防止剤としては、トコフェロール、茶抽出物等が挙げられる。乳化剤としては、グリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、グリセリン有機酸脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ステアロイル乳酸カルシウム、ステアロイル乳酸ナトリウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル等が挙げられる。ｐＨ調整剤としては、クエン酸、リンゴ酸、リン酸等が挙げられる。増粘安定剤としては、ローカストビーンガム、カラギーナン、アルギン酸類、ペクチン、キサンタンガム、結晶セルロース、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、寒天、グルコマンナン、ゼラチン、澱粉、化工澱粉等が挙げられる。

本実施形態に係るＰＰＡＲγ活性化剤は、これに限られるものではないが、有効成分であるＡＣＡがＰＰＡＲγのリガンド結合部位に結合することで、ＰＰＡＲγの核内への移行を促進することにより、ＰＰＡＲγの機能（ＰＰＡＲγの標的遺伝子の発現）を活性化する作用を発揮すると推察される。ＰＰＡＲγは、多くの標的遺伝子があることが知られており、標的遺伝子の発現を通じて、例えば、インスリン抵抗性の改善、抗肥満、抗動脈硬化、皮膚の再生など様々な生理機能に関与していることが知られている。したがって、本実施形態に係るＰＰＡＲγ活性化剤は、ＰＰＡＲγの機能を活性化する結果、例えば、インスリン抵抗性の改善、抗肥満、抗動脈硬化、皮膚の再生等を図ることができる。

本実施形態に係るＰＰＡＲγ活性化剤は、上述の作用効果を示すことから、インスリン抵抗性の改善用、抗肥満用、抗動脈硬化用、又は皮膚の再生用であってもよい。

本実施形態に係るＰＰＡＲγ活性化剤は、例えば、食品組成物（飲料及び食品）、医薬部外品又は医薬品として調製することができる。すなわち、本発明の一実施形態として、１’−アセトキシチャビコールアセテートを有効成分として含有するＰＰＡＲγ活性化用食品組成物（飲料及び食品）、医薬部外品又は医薬品が提供される。

飲料の具体的な形態としては、例えば、水、清涼飲料水、果汁飲料、炭酸飲料、乳飲料、アルコール飲料、スポーツドリンク、栄養ドリンク等が挙げられる。食品の具体的な形態としては、パン類、麺類、米類、豆腐、乳製品、醤油、味噌、菓子類等が挙げられる。また、食品組成物には、例えば、健康食品、機能性表示食品、特別用途食品、栄養補助食品、サプリメント及び特定保健用食品等が含まれる。

本実施形態に係るＰＰＡＲγ活性化剤は、日常的に手軽に摂取できることから、食品組成物（ＰＰＡＲγ活性化用食品組成物）であることが好ましい。本実施形態に係るＰＰＡＲγ活性化用食品組成物の形態としては、上述したものが挙げられ、日常的に手軽に摂取できるという観点から、飲料（ＰＰＡＲγ活性化用飲料）であることが好ましい。

本実施形態に係るＰＰＡＲγ活性化用食品組成物には、例えば、「お腹の脂肪（内臓脂肪）をはじめとする体脂肪を減らすことをサポートし、高めのＢＭＩの改善に役立つ」、「体脂肪が気になる方及び肥満気味の方に適する」、「肌の調子を整える」、「肌の水分保持に役立つ」等の表示が付されていてもよい。

本実施形態に係るＰＰＡＲγ活性化剤における有効成分の含有量は、ＰＰＡＲγ活性化剤の具体的態様に応じて、適宜設定することができる。

例えば、本実施形態に係るＰＰＡＲγ活性化剤が経口投与（経口摂取）される場合、有効成分が１日あたり１ｍｇ以上経口投与（経口摂取）されるように用いられるものであってよい。有効成分が１日あたり１ｍｇ以上経口投与（経口摂取）されることによって、充分なＰＰＡＲγ活性化作用が得られる。例えば、本実施形態に係るＰＰＡＲγ活性化剤が、１日あたり３回経口投与（経口摂取）されるように用いられるものである場合、ＰＰＡＲγ活性化剤が３３４μｇ以上の有効成分を含有することで、１日あたりの経口投与（経口摂取）量が１ｍｇ以上となる。

上記の１日あたりの経口投与（経口摂取）量は、例えば、２ｍｇ以上、３ｍｇ以上、４ｍｇ以上、５ｍｇ以上、６ｍｇ以上、７ｍｇ以上、８ｍｇ以上、９ｍｇ以上、又は１０ｍｇ以上であってよい。また、ＰＰＡＲγ活性化作用の観点からは、上述の１日あたりの経口投与（経口摂取）量の上限に特に制限はないが、製造原価を下げるという観点から、例えば、３０００ｍｇ以下、２５００ｍｇ以下、２０００ｍｇ以下、１５００ｍｇ以下、１０００ｍｇ以下、又は５００ｍｇ以下であってよい。また、上記の１日あたりの経口投与（経口摂取）量は、体重６０ｋｇあたりの量とするのが好ましい。

本実施形態に係るＰＰＡＲγ活性化剤における有効成分の含有量は、ＰＰＡＲγ活性化剤の具体的態様に応じて、適宜設定されるものであるが、一態様において、本実施形態に係るＰＰＡＲγ活性化剤における有効成分の含有量は、ＰＰＡＲγ活性化剤全量を基準として、例えば、２ｍｇ以上、３ｍｇ以上、４ｍｇ以上、５ｍｇ以上、６ｍｇ以上、７ｍｇ以上、８ｍｇ以上、９ｍｇ以上、又は１０ｍｇ以上であってよい。これにより、上述した１日あたりの経口投与（経口摂取）量を簡便に達成することができる。本実施形態に係るＰＰＡＲγ活性化剤における有効成分の含有量の上限は、例えば、３０００ｍｇ以下、２５００ｍｇ以下、２０００ｍｇ以下、１５００ｍｇ以下、１０００ｍｇ以下、又は５００ｍｇ以下であってよい。

本実施形態に係るＰＰＡＲγ活性化剤は、ヒトに摂取されても、非ヒト哺乳動物に摂取されてもよい。

本実施形態に係るＰＰＡＲγ活性化剤は、経口投与（経口摂取）されてもよく、非経口投与（非経口摂取）されてもよいが、経口投与（経口摂取）されることが好ましい。本実施形態に係るＰＰＡＲγ活性化剤は、１日あたりの有効成分量が上記範囲内にあれば、１日１回投与（摂取）されてもよく、１日複数回に分けて投与（摂取）されてもよい。

本実施形態に係るＰＰＡＲγ活性化剤は、その具体的態様（例えば、ＰＰＡＲγ活性化用食品組成物、ＰＰＡＲγ活性化用医薬部外品又はＰＰＡＲγ活性化用医薬品）に応じて、例えば、有効成分であるＡＣＡを配合することで得ることができる。このとき、有効成分であるＡＣＡとして、ＡＣＡそのものを使用してもよいし、ＡＣＡを含有する組成物（例えば、ガランガル抽出物等）を使用してもよい。

以下、実施例に基づいて本発明をより具体的に説明する。ただし、本発明は、以下の実施例により限定されるものではない。

〔試験例１：ＰＰＡＲγ活性化作用の評価〕
１’−アセトキシチャビコールアセテート（ＡＣＡ）のＰＰＡＲγ活性化作用は、培養細胞を使用したレポータージーンアッセイにより評価した。

ＡＣＡ標品をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解した後、５％チャコール処理済みＦＢＳ入りＤＭＥＭ培地にて、１μＭ、２μＭ、又は５μＭとなるように調製し、ＡＣＡ試料とした。陽性対照として、ロシグリタゾンをＤＭＳＯに溶解した後、５％チャコール処理済みＦＢＳ入りＤＭＥＭ培地にて、１μＭとなるように調製し、陽性対照試料とした。また、陰性対照として、同量のＤＭＳＯを５％チャコール処理済みＦＢＳ入りＤＭＥＭ培地に溶解し、陰性対照試料とした。

ヒト胎児腎細胞由来ＨＥＫ２９３Ｔ細胞は、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、１％ペニシリン及びストレプトマイシンを含有したＤＭＥＭ（高グルコース）培地にて、５％ＣＯ_２雰囲気下、３７℃で培養した。

ＰＰＡＲγ発現プラスミドは、以下の手順で作製した。ヒト骨格筋ｃＤＮＡ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社製）を鋳型として、ＰＰＡＲγ２遺伝子をＰＣＲ法により増幅した。Ｉｎ−Ｆｕｓｉｏｎ ＨＤ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｋｉｔ（ＴａＫａＲａ Ｂｉｏ社製）を用いて、増幅したＤＮＡ断片を酵母由来の転写因子であるＧＡＬ４配列を持つｐＣＭＸベクターに組み込み、ＰＰＡＲγ発現プラスミドを得た。ルシフェラーゼ発現プラスミドは、ＧＡＬ４認識配列であるＵＡＳ配列を持つホタルルシフェラーゼ発現ベクターであるｐＧＬ４．３５プラスミド（Ｐｒｏｍｅｇａ社製）、及び内部標準としてウミシイタケルシフェラーゼ発現ベクターであるｐＧＬ４．７４プラスミド（Ｐｒｏｍｅｇａ社製）を使用した。ＰＰＡＲγ２と試験物質との結合により生じたシグナルが核内に伝わることで、ホタルルシフェラーゼの発現が活性化される。

まず、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を６０ｍｍディッシュに７．５×１０^５ｃｅｌｌｓ／ディッシュとなるように播種し、ＣＯ_２インキュベーターにて一晩培養した。培養後、Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ培地で洗浄した後にＯｐｔｉ−ＭＥＭ培地に培地交換し、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）３０００（サーモフィッシャーサイエンティフィック株式会社製）を使用し、当該製品の標準プロトコ−ルに従って、上記の３種のプラスミドをトランスフェクションした。１ディッシュあたり、ＰＰＡＲγ発現プラスミドを０．５μｇ、ｐＧＬ４．３５プラスミドを０．５μｇ、及びｐＧＬ４．７４プラスミドを０．２５μｇ使用した。

トランスフェクションから３時間後に細胞を回収し、５％チャコール処理済みＦＢＳを加えたＤＭＥＭ培地で１×１０^４ｃｅｌｌｓ／ウェルとなるように９６ウェルプレートに播種し、ＣＯ_２インキュベーターにて静置した。次いで、培養細胞の上から各試料（ＡＣＡ試料、陽性対照試料、又は陰性対照試料）を加え、ＣＯ_２インキュベーターで２４時間インキュベートを行った。

培地を除去後、１×Ｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒ（Ｐｒｏｍｅｇａ社製）を４０μＬ／ウェル加え、４℃で２０分以上振とうさせ、細胞を溶解させた。細胞溶解液５μＬをＬＵＭＩＴＲＡＣ ９６ｗｅｌｌ マイクロプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ−Ｏｎｅ社製）にアプライし、ルミノメーター（ＧｌｏＭａｘ（登録商標） Ｎａｖｉｇａｔｏｒ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｌｕｍｉｎｏｍｅｔｅｒ ＃ＧＭ２０１０，Ｐｒｏｍｅｇａ社製）にセットした。ルミノメーターのインジェクターにより、ホタルルシフェラーゼ及びウミシイタケルシフェラーゼそれぞれのルシフェラーゼ基質を５０μＬ／ウェルずつ加え、感光時間１秒にて測定を行った。ホタルルシフェラーゼの発光強度をウミシイタケルシフェラーゼの発光強度で除した値を測定結果とした。

測定結果を表１に示す。なお、表１に示した結果は、陰性対照試料の測定結果を１とした相対値である。

表１に示すとおり、ＡＣＡはＰＰＡＲγ２活性化作用を有している。ＡＣＡによるＰＰＡＲγ２活性化作用は、レポータージーンアッセイ系の構成から、少なくともその一部は、ＡＣＡがＰＰＡＲγ２のリガンド結合部位に結合することでＰＰＡＲγ２の核内への移行を促進することによるものであると考えられる。ＰＰＡＲγには、３つのアイソフォーム（ＰＰＡＲγ１、ＰＰＡＲγ２及びＰＰＡＲγ３）が知られているが、これらは選択的スプライシングによりＮ末端側のアミノ酸配列のみが異なるものであり、エキソン１〜６でコードされるアミノ酸配列は共通しており、リガンド結合部位のアミノ酸配列に違いはない。よって、ＡＣＡは、ＰＰＡＲγ２のみならず、ＰＰＡＲγ１及びＰＰＡＲγ３の活性化作用も有していると考えられる。

Claims (2)

1. １’−アセトキシチャビコールアセテートを有効成分として含有する、ＰＰＡＲγ活性化剤。
2. １’−アセトキシチャビコールアセテートを有効成分として含有する、ＰＰＡＲγ活性用食品組成物。