JP2021112191A - 細胞培養培地 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、2016年4月26日に出願されたアメリカ合衆国仮特許出願第62/327,964号の優先権を主張するものであり、その開示内容の全体が参照によって本明細書に組み込まれている。
本発明は、全体として、細胞培養培地と、その細胞培養培地を用いて、培養された細胞に由来する産物を産生させる方法の分野に関する。
本発明により、特に、哺乳動物の細胞を培養するための方法、組成物、キットが提供される。本発明の一部は、1種類以上の組み換えポリペプチドを産生するように遺伝子操作された哺乳動物細胞を、1つのリチウムイオン供給源と、1種類以上の脂肪酸と、エタノールのうちの1つ以上を含有する培地の中で培養すると、ポリペプチドの力価が増大するとともに、高分子量種と低分子量種が減少するという発明者の発見に基づいている。それに加え、本明細書に記載した組成物を用いると、本明細書に記載した培地の中で培養されない哺乳動物細胞と比べてより有利なグリコシル化プロファイルを有するポリペプチド産物になった。その帰結として、本明細書に開示した細胞培養培地組成物を用いると、遺伝子操作された細胞によって産生される産物の量を増加させ、そのことによってより好ましい製造を経済的に実現することができるだけでなく、それら産物を生体内投与する上での利点(例えば改善された薬力学(PK)および/または薬物動態(PD))が付加されたグリコシル化プロファイルを有する産物も得ることもできる。
本発明を実施するには、特に断わらない限り、分子生物学、微生物学、細胞生物学、生化学、核酸化学、免疫学において当業者に周知の一般的な技術を利用することになる。そのような技術は文献に十分に説明されており、文献として、例えば『Molecular Cloning: A Laboratory Manual』、第4版(Sambrook他、2012年)と『Molecular Cloning: A Laboratory Manual』、第3版(SambrookとRussel、2001年)、 (その両方を合わせて本明細書では「Sambrook」として言及する);『Current Protocols in Molecular Biology』(P.M. Ausubel他編、1987年、2014年までの補足事項を含む);『PCR: The Polymerase Chain Reaction』、(Mullis他編、1994年);『Antibodies: A Laboratory Manual』、第2版、Cold Spring Harbor Press、コールド・スプリング・ハーバー、ニューヨーク州(Greenfield編、2014年)、Beaucage他編、『Current Protocols in Nucleic Acid Chemistry』、John Wiley & Sons, Inc.社、ニューヨーク、2000年(2014年までの補足事項を含む)、『Gene Transfer and Expression in Mammalian Cells』(Makrides編、Elsevier Sciences B.V.社、アムステルダム、2003年)、『Current Protocols in Immunology』 (Horgan K.とS. Shaw (1994年)(2014年までの補足事項を含む)がある。
本明細書では、「基本培地」は、真核生物の細胞を培養するのに用いる培地であり、その細胞を培養するのにそのまま用いられ、他の培地への添加剤としては使用されない。しかしさまざまな成分を基本培地に添加することができる。例えばCHO細胞をDMEM(市販されている哺乳動物細胞用の周知の培地)の中で培養し、定期的にグルコースその他の栄養素を供給するのであれば、DMEMを基本培地と見なすことができよう。基本培地の非限定的な別の例に含まれるのは、MEM培地、IMDM培地、199/109培地、HamF10/F12培地、マッコイの5A培地、RPMI 1640培地である。
いくつかの側面では、本明細書において、基本培地または流加培地と、(1)リチウムイオンの供給源、(2)エタノール、(3)1種類以上の脂肪酸のうちの1つ以上を含有する、哺乳動物の細胞を培養するための培地が提供される。
培養することのできるどの哺乳動物細胞も本発明で用いるのに適している。その中には、ヒト由来の細胞のほか、齧歯類(例えばマウス、ラット、ハムスター(例えばチャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞)、モルモット)に由来する細胞が含まれる。他の種、特に霊長類種に由来する哺乳動物細胞も含まれる。
別の1つの側面では、本明細書に記載した任意の培地の中で培養された哺乳動物細胞を遺伝子操作して1種類以上の組み換えポリペプチドを産生させることができる。本発明の目的では、本分野で知られている任意の方法に従って哺乳動物細胞を遺伝子操作することができる。例えば、所定の宿主哺乳動物細胞株のために遺伝子発現を最適化する核酸配列を含有する発現ベクターを設計することができる。そのような最適化要素の非限定的な例に含まれるのは、複製起点、プロモーター、エンハンサーである。本明細書で言及するベクターと要素は例示を目的として記載しているのであり、本発明の範囲を狭くする意図はない。適切なベクターは、使用する哺乳動物宿主細胞に適合したベクターである。適切なベクターは、例えば細菌、ウイルス(例えばバクテリオファージT7やM-13由来のファージ)、コスミド、酵母、植物に由来するものが可能である。適切なベクターは、哺乳動物宿主細胞の中でコピー数を少なく、または中程度に、または多く維持することができる。そのようなベクターを取得して用いるためのプロトコルは当業者に知られている(例えばSambrook他、『Molecular Cloning: A Laboratory Manual』、第4版、Cold Spring Harbor、2012年を参照されたい)。
本明細書に記載した任意の哺乳動物細胞培養培地のいくつかの側面では、培地は、1種類以上のリチウムイオン供給源を含有している。どのリチウムイオン供給源も本発明で用いるのに適しており、その中には、リチウム塩、リチウム溶媒和物、金属リチウムが含まれる。
本明細書に記載した任意の哺乳動物細胞培養培地のいくつかの側面では、培地は1種類以上の脂肪酸を含有する。どの脂肪酸も本発明で用いるのに適している。本明細書では、「脂肪酸」は、カルボン酸を含有するとともに、少なくとも1つの飽和した炭素-炭素結合、または不飽和の炭素-炭素結合、または一部が不飽和の炭素-炭素結合、または共役した炭素-炭素結合を含有する天然または合成の炭化水素のファミリーのあらゆるメンバーを意味する。さらに、脂肪酸という用語は、一般に、脂肪酸、C2〜C38脂肪酸、共役型脂肪酸、脂質、リン脂質、油、脂肪、トリアシルグリセリド、脂肪酸誘導体、ジアシルグリセロール、イソプレノイド、スフィンゴ脂質、糖脂質などを記述するのに用いられる。
本明細書に記載した任意の哺乳動物細胞培養培地のさらに別の側面では、培地はエタノールを含有する。
A.組み換えポリペプチドを産生させる方法
いくつかの側面では、本明細書において、操作された哺乳動物細胞から1種類以上の組み換えポリペプチドを産生させる方法が提供される。この方法では、操作された哺乳動物細胞を、1種類以上の組み換えポリペプチドの産生に適した条件下にて、本明細書に記載した任意の哺乳動物細胞培養培地組成物の中で培養し;1種類以上の組み換えポリペプチドを産生させる。
グリカン種は、治療用タンパク質(例えばmAb)の薬力学(PK)と薬物動態(PD)に大きな影響を与えることがわかっている。したがって本発明の別の側面では、本明細書において、遺伝子操作された哺乳動物細胞によって産生される1種類以上の組み換えポリペプチドのグリコシル化プロファイルを変化させる方法が提供される。いくつかの実施態様では、この方法は、哺乳動物細胞を、その1種類以上の組み換えポリペプチドを産生させるのに適した条件下にて、本明細書に記載した任意の細胞培養培地(例えばリチウム含有細胞培養培地、および/またはエタノール含有細胞培養培地、および/または脂肪酸含有細胞培養培地)の中で培養し;その1種類以上の組み換えポリペプチドを産生させることを含んでいて、その1種類以上の組み換えポリペプチドは、本明細書に開示した任意の培地の中で培養されない哺乳動物細胞によって産生される組み換えポリペプチドと比べて変化したグリコシル化プロファイルを持つ。いくつかの実施態様では、「グリコシル化プロファイルを変化させる」は、組み換えポリペプチド上の特定のグリカン種の相対的な割合を増加させることを意味する。しかし別の実施態様では、「グリコシル化プロファイルを変化させる」という表現は、組み換えポリペプチド上の特定のグリカン種の相対的な割合を減少させることを意味する。組み換えポリペプチドが本明細書に開示した方法で産生されたとき、その組み換えポリペプチドに付加することのできる任意のグリカン種の相対的な割合を自由に変えることができる。
さらに別の側面では、本明細書において、遺伝子操作された哺乳動物細胞によって産生される1種類以上の組み換えポリペプチドの高分子量種または低分子量種の量を変化(例えば減少)させる方法が提供される。この方法は、哺乳動物細胞を、その1種類以上の組み換えポリペプチドを産生させるのに適した条件下にて、本明細書に開示した任意の細胞培養培地(例えばリチウム含有細胞培養培地、および/またはエタノール含有細胞培養培地、および/または脂肪酸含有細胞培養培地)の中で培養し;その1種類以上の組み換えポリペプチドを産生させることを伴っていて、その組み換えポリペプチドは、本発明の任意の細胞培養培地の中で培養されない哺乳動物細胞によって産生される組み換えポリペプチドと比べて高分子量種または低分子量種の量が減少している。
さらに別の側面では、本明細書において、遺伝子操作された哺乳動物細胞によって産生される1種類以上の組み換えポリペプチドの酸性または塩基性の電荷種の量を変化(例えば減少)させる方法が提供される。この方法は、哺乳動物細胞を、その1種類以上の組み換えポリペプチドを産生させるのに適した条件下にて、本明細書に開示した任意の細胞培養培地(例えばリチウム含有細胞培養培地、および/またはエタノール含有細胞培養培地、および/または脂肪酸含有細胞培養培地)の中で培養し;その1種類以上の組み換えポリペプチドを産生させることを伴っていて、その組み換えポリペプチドは、本発明の任意の細胞培養培地の中で培養されない哺乳動物細胞によって産生される組み換えポリペプチドと比べて酸性または塩基性の電荷種の量が減少している。
それに加え、本発明は、本明細書に開示した任意の方法で哺乳動物細胞を培養するためのキットを含んでいる。このキットは、哺乳動物細胞培養基本培地および/または哺乳動物細胞培養流加培地のうちの1つ以上を含有することができる。さらに、このキットは、1つのリチウムイオン供給源、エタノール、1種類以上の脂肪酸のうちの1つ以上をさらに含有することができる。このキットは、キットを使用するための指示書(例えば本明細書に開示した任意の哺乳動物細胞培養培地を作製するための指示と、培地を用いて哺乳動物細胞を培養する(例えば1種類以上の組み換えポリペプチドを産生させるように遺伝子操作された哺乳動物細胞を培養する)ための指示)も含むことができる。
この実施例では、培地へのリチウムの添加が組み換えポリペプチドの産生に及ぼす効果を示す。
1回だけボーラスを添加することにより、CHO.DXB11細胞に対する塩化リチウムの細胞毒性を調べた。4 mlのCHO細胞を6×106個/mlの細胞密度で6ウエルの深いプレートに播種し、150 rpmで混合し、塩化リチウムを5 mM〜250 mMの作用濃度で添加した。細胞増殖速度と細胞生存率は、1回だけ添加した塩化リチウムが10 mMを超えたときにマイナスの影響を受けた。
LiClがmAbの特性を変化させるかどうかを調べるため、特性が完全に明確にされている合成流加培地にLiClを組み込むとともに、流加プロセスにおいてマイクロ-(作動容積15 ml)バイオリアクターを用いてLiClを毎日供給した。
モノクローナル抗体1(mAb 1)は、組み換えDNA技術を利用して産生させたモノクローナル抗体である。発現ベクターは完全に合成したものであり、強力な構成的プロモーターによって調節される重鎖遺伝子配列と軽鎖遺伝子配列の両方を有する。遺伝子配列はDNAシークエンシングによって確認した。発現ベクターを制限酵素によって直線状にし、電気穿孔によってCHO.DXB11細胞の中に安定にトランスフェクトした。
リチウムは、使用した高濃度で抗体の力価を増大させることが示された(図2)。より大きな用量のリチウムは、力価をベースラインと比べて21%超増大させた。さらに、より大きな濃度のリチウムは、Man5グリカン種を13%超減少させた(図2)。
JMP統計ソフトウエア(World Wide Web.jmp.com/en_us/home.html)を用いてカスタムDOE設計で作成した実験計画(DOE)でリチウムを用いた。12日間の流加プロセスにおいてリチウムを毎日供給し、バイオリアクターの作用濃度を0.5 mMまたは1 mMだけ増加させた。標準的な最小自乗法を利用して応答モデルを作り、リチウム補充からの応答の有意性を調べた。補充した他の諸成分との潜在的な相互作用も考慮した。
代わりのプロセス条件を利用し、上に記載した実験計画でリチウムを用いた。物理的条件は、温度とpH設定点を変えることによって変化させた。供給調製物を変更し、追加のアミノ酸と微量元素が含まれるようにした。13日間の流加プロセスにおいてリチウムを毎日供給し、バイオリアクターの作用濃度を0.5 mMまたは1 mMだけ増加させた。標準的な最小自乗法を利用して応答モデルを作り、リチウム補充からの応答の有意性を調べた。補充した他の諸成分との潜在的な相互作用も考慮した。
モノクローナル抗体2(mAb 2)は、組み換えDNA技術を利用して産生させたモノクローナル抗体である。発現ベクターは完全に合成したものであり、強力な構成的プロモーターによって調節される重鎖遺伝子配列と軽鎖遺伝子配列の両方を有する。遺伝子配列はDNAシークエンシングによって確認した。発現ベクターを制限酵素によって直線状にし、電気穿孔によってCHO.DG44細胞の中に安定にトランスフェクトした。単一細胞クローニングを2回実施した。単一細胞クローンを増殖させて低温で保管した。
以前、直線状低密度ポリエチレンに基づく廃棄可能なバイオリアクターシステムの中でコレステロール依存性NS0細胞を培養するため、エタノールをベースとしたコレステロールサプリメントが開発された。エタノールをベースとしたこのサプリメントは、コレステロールと、オレイン酸と、リノレン酸を含有していた(Tao他、Biotechnol Lett、2012年;第34巻(8):1453〜1458ページ)。本実施例では、さまざまな脂肪酸の可溶化剤としてエタノールを使用し、mAb産物の産生を調べた。
CHO.DXB11細胞に対するエタノール細胞毒性を、毎日エタノールを供給することによって調べた。4 mlのCHO細胞を3×106個/mlの細胞密度で6ウエルの深いプレートに播種し、150 rpmで混合し、0.1〜0.4%(v/v)の範囲のエタノールを1日1回供給した。細胞増殖速度と細胞生存率は、毎日供給するエタノールが0.3%v/vを超えたときにマイナスの影響を受けた。
II. マイクロスケールのバイオリアクターを用いてエタノールを添加したモノクローナル抗体の産生
エタノールがmAbの特性を変化させるかどうかを調べるため、特性が完全に明確にされている合成流加培地にエタノールを組み込むとともに、流加プロセスにおいてマイクロ-(作動容積15 ml)バイオリアクターを用いてエタノールを毎日供給した。
mAb 1に関して上に説明したようにして抗体を産生させた。
エタノールを補充すると、グリコシル化プロファイルが変化すること、高分子量種と低分子量種が変化すること、酸性と塩基性の電荷種が変化することが観察された。図7と図8に示したように、エタノールは、使用した両方の細胞系でMan5種%を全体として減少させたのに対し、G0%グリカン種とG0F%グリカン種に対する効果は細胞系によって異なっていた(図7と図8)。さらに、エタノールは、全体としてG1F%とG2F%を増加させたが、使用した両方の細胞系で増加の様子は異なっていた(図7と図8)。さらに、エタノールは、調べた両方の細胞系で検出された全電荷種と比べると、酸性電荷バリアントの量を減少させたのに対し、塩基性電荷の相対的な割合をわずかに増加させた(図7と図8)。
JMP統計ソフトウエア(World Wide Web.jmp.com/en_us/home.html)を用いてカスタムDOE設計で作成した実験計画(DOE)でリチウムを用いた。標準的な最小自乗法を利用して応答モデルを作り、リチウム補充からの応答の有意性を調べた。補充した他の諸成分との潜在的な相互作用も考慮した。マイクロスケールのバイオリアクターを用いてエタノールを毎日0.0%〜0.1%供給した。図9は、力価、Man5種%、G0種%、酸性種%、塩基性種%の予測応答プロファイルであり、そのそれぞれの応答値の変化を下記の表4に示す。
材料と方法:
mAb 1に関して上に説明したようにして抗体を産生させた。
図10に示したように、高濃度のエタノールでは、Man5グリカン種とG0グリカン種がより少なく、G1Fグリカン種とG2Fグリカン種がより多く、高分子量種と低分子量種がより少なくなった。
材料と方法:
mAb 1に関して上に説明したようにして抗体を産生させた。
図11に示したように、エタノールを調製物1に補充すると、グリカン種Man5、G1F、G2Fとともに塩基性電荷バリアントが増加した。逆に、この組み合わせでは、グリカン種G0とG0Fとともに酸性電荷バリアントが減少した。エタノールを調製物2に補充すると、グリカン種Man5、G0、G1Fは減少したが、グリカン種G0FとG2Fが増加するとともに、酸性電荷バリアントの量が増加した(図11)。
材料と方法:
mAb 2に関して上に説明したようにして抗体を産生させた。この細胞系は、mAb 2を産生するCHO.DG44由来のクローンである。
図12に示したように、エタノールの濃度がより大きいと、グリカン種Man5とG0Fが減少し、グリカン種G0、G1F、G2Fが増加し、高分子量種が減少した。
外来性脂肪酸を補充すると細胞内のエネルギー消費が低下する可能性がある。なぜならアセチル-CoAがマロニル-CoA(細胞内脂肪酸の主要な建築ブロック)に変換されるときにアデノシン三リン酸(ATP)が消費されるからである。さらに、細胞膜は長さがC16とC18のリン脂質で構成されているため、脂肪酸を補充すると膜の完全性が強化される可能性がある。
CHO.DXB11細胞に対する脂肪酸の細胞毒性を、脂肪酸を毎日供給することによって調べた。4 mlのCHO細胞を細胞密度4×106個/mlで6ウエルの深いプレートに播種し、150 rpmで混合し、脂肪酸を毎日供給した。脂肪酸は、エタノールに溶かして1日1回供給し、プレートのウエル内の濃度を10μMから160μMに上昇させた。細胞増殖速度と細胞生存率は、個々の脂肪酸に応じて異なるレベルでマイナスの影響を受けた。オレイン酸、リノール酸、リノレン酸は、約40μMの濃度で毎日供給すると有毒になった。ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸は、約80μMの濃度で毎日供給すると有毒になった。コレステロールは、約50μMの濃度で毎日供給すると有毒になり始めた。
材料と方法:
mAb 1に関して上に説明したようにして抗体を産生させた。
図13に示したように、培地にオレイン酸を添加するとモノクローナル抗体の力価が大きくなり、グリカン種Man5、G0、G0Fが減少し、グリカン種G1FとG2Fが増加し、高分子量種が減少し、酸性電荷バリアントが減少した。
材料と方法:
mAb 1に関して上に説明したようにして抗体を産生させた。
図14に示したように、オレイン酸を添加するとモノクローナル抗体の力価が減少し、グリカン種Man5、G0、G1F、G2Fが減少し、グリカン種G0Fが増加し、高分子量種と低分子量種が増加し、酸性電荷バリアントが減少し、塩基性電荷バリアントが増加した。オレイン酸の補充により、Man5%のレベルは、エタノールだけを補充した場合からさらに低下するように見えた。それに加え、オレイン酸の補充により、フコシル化されたグリカン種が変化し、酸性電荷バリアントが減少した。
正常な細胞間環境のナトリウムの濃度は、典型的には136〜145 mMであり、塩化物は、典型的には96〜106 mMである。リチウムを補充した上記の培地では、約1 mMの塩化リチウムを毎日添加した。これは、塩化物イオンの濃度のほぼ1%の上昇である。したがってこの実施例では、細胞生産性の改善が、塩化物イオンの量の増加ではなくてリチウムイオンの濃度上昇によって生じることを示す。
モノクローナル抗体3(mAb3)は、組み換えDNA技術を利用して作製したモノクローナル抗体である。発現ベクターは完全に合成したものであり、強力な構成的プロモーターによって調節される重鎖遺伝子配列と軽鎖遺伝子配列の両方を有する。遺伝子配列はDNAシークエンシングによって確認した。発現ベクターを制限酵素によって直線状にし、電気穿孔によってCHO.DXB11細胞の中に安定にトランスフェクトした。メトトレキサートの濃度を増加させながら遺伝子増幅の諸工程を実施した。遺伝子増幅の後に単一細胞クローニングを実施した。選択された単一細胞クローンを増殖させて低温で保管した。使用した細胞系は、CHO.DXB11由来のクローンであった。
図15Aと図15Bに示したように、培地に塩化ナトリウムを添加するとモノクローナル抗体の力価が低下し、G0Fグリカン種が減少した。グリカン種Man5、G0、G1F、G2Fと、酸性および塩基性の電荷バリアントは増加した。
多彩な脂肪酸、メチルエステル、ステロール、グリセリド、イソプレノイドを細胞培養培地に添加し、2つの別々のモノクローナル抗体を産生させた後、力価と産物の品質を評価した。
2つの別々の細胞系を用い、前の実施例に記載した方法に従ってモノクローナル抗体1(mAb1)と4(mAb 4)を産生させた。力価、高分子量種と低分子量種、酸性と塩基性の電荷バリアント、グリコシル化種のプロファイルを前の実施例のようにして評価した。
図16に示したように、チモール、1-オクタノイル-rac-グリセロール、リノール酸、リノレン酸を培地に補充すると、mAb1の力価が上昇したのに対し、リノレン酸は、mAb4の産生を増加させた。HMW種に関しては、mAb1でパルミチン酸が対照と比べて相対的割合を減少させた(図17A)のに対し、mAb4では、チモール、酢酸コレステリル、オクタン酸メチル、1-オクタノイル-rac-グリセロール、パルミチン酸、ステアリン酸、ミリスチン酸が、HMW種の相対的割合を減少させた(図17A)。低分子量種は、mAb1で、チモール、1-オクタノイル-rac-グリセロール、リノール酸、リノレン酸、パルミチン酸、ステアリン酸を用いると減少した(図17B)のに対し、mAb4では、チモール、酢酸コレステリル、リノール酸、パルミチン酸がLMW種を減少させた(図17B)。
Claims (89)
- (a)(i)基本培地または(ii)流加培地と;
(b)リチウムイオンの1種類以上の供給源
を含む、哺乳動物の細胞を培養するための培地。 - 前記細胞が1種類以上の組み換えポリペプチドを産生するように遺伝子操作されている、請求項1に記載の培地。
- (c)エタノールおよび/または(d)1種類以上の脂肪酸をさらに含む、請求項1または2に記載の培地。
- 前記1種類以上の脂肪酸は、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、チモール、酢酸コレステリル、オクタン酸メチル、1-オクタノイル-rac-グリセロール、コレステロール、酪酸(C4)、吉草酸(C5)、カプロン酸(C6)、エナント酸(C7)、カプリル酸(C8)、ペラルゴン酸(C9)、カプリン酸(C10)、ウンデシル酸(C11)、ラウリン酸(C12)、トリデシル酸(C13)、ミリスチン酸(C14)、ペンタデカン酸(C15)、マルガリン酸(C17)、ノナデシル酸(C19)、アラキジン酸(C20)、ヘンイコシル酸(C21)、ベヘン酸(C22)、トリコシル酸(C23)、リグノセリン酸(C24)、ペンタコシル酸(C25)、セロチン酸(C26)、ヘプタコシル酸(C27)、モンタン酸(C28)、ノナコシル酸(C29)、メリシン酸(C30)、ヘントリアコンチル酸(C31)、ラッセル酸(C32)、プシリン酸(C33)、ゲジン酸(C34)、セロプラスチン酸(C35)、ヘキサトリアコンチル酸(C36)、ヘプタトリアコンタン酸(C37)、オクタトリアコンタン酸(C38)からなる群より選択される、請求項3に記載の培地。
- リチウムイオンの前記1種類以上の供給源は、酢酸リチウム、塩化リチウム、炭酸リチウム、オキシ酪酸リチウム、オロチン酸リチウム、臭化リチウム、クエン酸リチウム、フッ化リチウム、ヨウ化リチウム、硝酸リチウム、硫酸リチウムのうちの1種類以上の群より選択される、請求項1〜4のいずれか1項に記載の培地。
- 前記リチウムイオンが約0.1μM〜約25 mMの濃度で存在している、請求項1〜5のいずれか1項に記載の培地。
- 前記1種類以上の組み換えポリペプチドの力価が、この培地の中で培養されない哺乳動物細胞によって産生される組み換えポリペプチドの力価と比べて増大している、請求項2〜6のいずれか1項に記載の培地。
- 前記細胞によって産生される前記1種類以上の組み換えポリペプチドの高分子量種の量が、この培地の中で培養されない哺乳動物細胞によって産生される組み換えポリペプチドと比べて変化している、請求項2〜7のいずれか1項に記載の培地。
- 前記細胞によって産生される前記1種類以上の組み換えポリペプチドの低分子量種の量が、この培地の中で培養されない哺乳動物細胞によって産生される組み換えポリペプチドと比べて変化している、請求項2〜8のいずれか1項に記載の培地。
- 前記細胞によって産生される前記1種類以上の組み換えポリペプチドのグリコシル化プロファイルが、この培地の中で培養されない哺乳動物細胞によって産生される組み換えポリペプチドと比べて変化している、請求項2〜9のいずれか1項に記載の培地。
- 前記変化したグリコシル化プロファイルが、変化した末端マンノースグリカン種を含む、請求項10に記載の培地。
- 前記変化したグリコシル化プロファイルが、マンノース-5-N-アセチルグリコサミン-2(Man5)、マンノース-6-N-アセチルグリコサミン-2(Man6)、マンノース-3-N-アセチルグルコサミン-4(G0)、マンノース-3-N-アセチルグルコサミン-4-フコース(G0F)、マンノース-3-N-アセチルグルコサミン-4-ガラクトース-1-フコース(G1F)、マンノース-3-N-アセチルグルコサミン-4-ガラクトース-2-フコース(G2F)から選択された1種類以上のグリカン種の変化を含む、請求項10に記載の培地。
- 前記細胞によって産生される前記1種類以上の組み換えポリペプチドの酸性または塩基性の電荷バリアントが、この培地の中で培養されない哺乳動物細胞によって産生される組み換えポリペプチドと比べて変化している、請求項2〜12のいずれか1項に記載の培地。
- エタノールが約0.001%〜約4%(v/v)の濃度で存在する、請求項3〜13のいずれか1項に記載の培地。
- 前記1種類以上の脂肪酸が約1μM〜約4 mMの濃度で存在する、請求項3〜14のいずれか1項に記載の培地。
- (a)(i)基本培地または(ii)流加培地と;
(b)エタノール
を含む、哺乳動物の細胞を培養するための培地。 - 前記細胞が1種類以上の組み換えポリペプチドを産生するように遺伝子操作されている、請求項16に記載の培地。
- (c)1種類以上の脂肪酸をさらに含む、請求項16または17に記載の培地。
- 前記1種類以上の脂肪酸は、酪酸(C4)、吉草酸(C5)、カプロン酸(C6)、エナント酸(C7)、カプリル酸(C8)、ペラルゴン酸(C9)、カプリン酸(C10)、ウンデシル酸(C11)、ラウリン酸(C12)、トリデシル酸(C13)、ミリスチン酸(C14)、ペンタデカン酸(C15)、パルミチン酸(C16)、マルガリン酸(C17)、ステアリン酸(C18)、ノナデシル酸(C19)、アラキジン酸(C20)、ヘンイコシル酸(C21)、ベヘン酸(C22)、トリコシル酸(C23)、リグノセリン酸(C24)、ペンタコシル酸(C25)、セロチン酸(C26)、ヘプタコシル酸(C27)、モンタン酸(C28)、ノナコシル酸(C29)、メリシン酸(C30)、ヘントリアコンチル酸(C31)、ラッセル酸(C32)、プシリン酸(C33)、ゲジン酸(C34)、セロプラスチン酸(C35)、ヘキサトリアコンチル酸(C36)、ヘプタトリアコンタン酸(C37)、オクタトリアコンタン酸(C38)からなる群より選択される、請求項18に記載の培地。
- 前記エタノールが約0.001%〜約4%(v/v)の濃度で存在する、請求項16〜19のいずれか1項に記載の培地。
- 前記1種類以上の組み換えポリペプチドの力価が、この培地の中で培養されない哺乳動物細胞によって産生される組み換えポリペプチドの力価と比べて増大している、請求項17〜20のいずれか1項に記載の培地。
- 前記細胞によって産生される前記1種類以上の組み換えポリペプチドの高分子量種の量が、この培地の中で培養されない哺乳動物細胞によって産生される組み換えポリペプチドと比べて変化している、請求項17〜21のいずれか1項に記載の培地。
- 前記細胞によって産生される前記1種類以上の組み換えポリペプチドの低分子量種の量が、この培地の中で培養されない哺乳動物細胞によって産生される組み換えポリペプチドと比べて変化している、請求項17〜22のいずれか1項に記載の培地。
- 前記細胞によって産生される前記1種類以上の組み換えポリペプチドのグリコシル化プロファイルが、この培地の中で培養されない哺乳動物細胞によって産生される組み換えポリペプチドと比べて変化している、請求項17〜23のいずれか1項に記載の培地。
- 前記変化したグリコシル化プロファイルが、変化した末端マンノースグリカン種を含む、請求項24に記載の培地。
- 前記変化したグリコシル化プロファイルが、マンノース-5-N-アセチルグリコサミン-2(Man5)、マンノース-6-N-アセチルグリコサミン-2(Man6)、マンノース-3-N-アセチルグルコサミン-4(G0)、マンノース-3-N-アセチルグルコサミン-4-フコース(G0F)、マンノース-3-N-アセチルグルコサミン-4-ガラクトース-1-フコース(G1F)、マンノース-3-N-アセチルグルコサミン-4-ガラクトース-2-フコース(G2F)から選択された1種類以上のグリカン種の変化を含む、請求項24に記載の培地。
- 前記細胞によって産生される前記1種類以上の組み換えポリペプチドの酸性または塩基性の電荷バリアントが、この培地の中で培養されない哺乳動物細胞によって産生される組み換えポリペプチドと比べて変化している、請求項17〜26のいずれか1項に記載の培地。
- 前記1種類以上の脂肪酸が約1μM〜約4 mMの濃度で存在する、請求項18〜27のいずれか1項に記載の培地。
- (a)(i)基本培地または(ii)流加培地と;
(b)1種類以上の脂肪酸
を含む、哺乳動物の細胞を培養するための培地。 - 前記細胞が1種類以上の組み換えポリペプチドを産生するように遺伝子操作されている、請求項29に記載の培地。
- 前記1種類以上の脂肪酸が毎日供給されて約1μM〜1 mMの濃度で存在する、請求項29または30に記載の培地。
- 前記細胞によって産生される前記1種類以上の組み換えポリペプチドの高分子量種の量が、この培地の中で培養されない哺乳動物細胞によって産生される組み換えポリペプチドと比べて変化している、請求項30〜31のいずれか1項に記載の培地。
- 前記細胞によって産生される前記1種類以上の組み換えポリペプチドの低分子量種の量が、この培地の中で培養されない哺乳動物細胞によって産生される組み換えポリペプチドと比べて変化している、請求項30〜31のいずれか1項に記載の培地。
- 前記細胞によって産生される前記1種類以上の組み換えポリペプチドのグリコシル化プロファイルが、この培地の中で培養されない哺乳動物細胞によって産生される組み換えポリペプチドと比べて変化している、請求項30〜33のいずれか1項に記載の培地。
- 前記変化したグリコシル化プロファイルが、変化した末端マンノースグリカン種を含む、請求項34に記載の培地。
- 前記変化したグリコシル化プロファイルが、マンノース-5-N-アセチルグリコサミン-2(Man5)、マンノース-6-N-アセチルグリコサミン-2(Man6)、マンノース-3-N-アセチルグルコサミン-4(G0)、マンノース-3-N-アセチルグルコサミン-4-フコース(G0F)、マンノース-3-N-アセチルグルコサミン-4-ガラクトース-1-フコース(G1F)、マンノース-3-N-アセチルグルコサミン-4-ガラクトース-2-フコース(G2F)から選択された1種類以上のグリカン種の変化を含む、請求項34に記載の培地。
- 前記細胞によって産生される前記1種類以上の組み換えポリペプチドの酸性または塩基性の電荷バリアントが、この培地の中で培養されない哺乳動物細胞によって産生される組み換えポリペプチドと比べて変化している、請求項30〜36のいずれか1項に記載の培地。
- 前記脂肪酸が、チモール、酢酸コレステリル、オクタン酸メチル、1-オクタノイル-rac-グリセロール、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、コレステロール、パルミチン酸、ステアリン酸、ミリスチン酸のうちの1種類以上である、請求項30〜37のいずれか1項に記載の培地。
- 前記1種類以上の組み換えポリペプチドのグリコシル化プロファイルが、この培地の中で培養されない哺乳動物細胞と比べて変化している、請求項2〜15、17〜28、30〜38のいずれか1項に記載の培地。
- 操作された哺乳動物細胞から1種類以上の組み換えポリペプチドを産生させる方法であって、
(a)その操作された哺乳動物細胞を、その1種類以上の組み換えポリペプチドを産生させるのに適した条件下にて、請求項1〜39のいずれか1項に記載の培地の中で培養し;
(b)その1種類以上の組み換えポリペプチドを産生させること
を含む方法。 - (c)前記1種類以上の組み換えポリペプチドを単離することをさらに含む、請求項40に記載の方法。
- 前記培地が基本培地である、請求項40または41に記載の方法。
- 前記培地が流加培地である、請求項40または41に記載の方法。
- 前記1種類以上の組み換えポリペプチドが、抗体またはそのフラグメントである、請求項40〜43のいずれか1項に記載の方法。
- 前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項44に記載の方法。
- 前記モノクローナル抗体が、増殖している細胞の増殖を抑制する、請求項45に記載の方法。
- 前記抗体またはそのフラグメントが結合するのが、HER2、TNF-α、VEGF-A、α4-インテグリン、CD20、CD52、CD25、CD11a、EGFR、呼吸器系合胞体ウイルス(RSV)、糖タンパク質IIb/IIIa、IgG1、IgE、補体成分5(C5)、B細胞活性化因子(BAFF)、CD19、CD30、インターロイキン-1β(IL-1β)、前立腺特異的膜抗原(PSMA)、CD38、RANKL、GD2、SLAMF7(CD319)、プロタンパク質変換酵素サブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)、ダビガトラン、細胞傷害性Tリンパ球結合タンパク質4(CTLA4)、インターロイキン-5(IL-5)、プログラムされた細胞死タンパク質(PD-1)、VEGFR2(KDR)、炭疽菌の保護抗原(PA)、インターロイキン-17(IL-17)、インターロイキン-6(IL-6)、インターロイキン-6受容体(IL6R)、インターロイキン-12(IL-12)、インターロイキン-23(IL-23)、スクレロスチン(SOST)、ミオスタチン(GDF-8)、アクチビン受容体様キナーゼ1、デルタ様リガンド4(DLL4)、アンジオポエチン3、VEGFR1、セレクチン、酸化された低密度リポタンパク質(oxLDL)、血小板由来増殖因子受容体β、ニューロピリン1、フォンビルブラント因子(vWF)、インテグリンαvβ3、神経アポトーシス調節プロテイナーゼ1、インテグリンαIIbβ3、β-アミロイド、レティキュロン4(RXN4)/神経突起成長インヒビター(NOGO-A)、神経成長因子(NGF)、LINGO-1、ミエリン結合糖タンパク質、インテグリンα4β7のいずれかである、請求項44に記載の方法。
- 前記モノクローナル抗体が、トラスツズマブ、ペルツズマブ、インフリキシマブ、アダリムマブ、ベバシズマブ、ラニビズマブ、ナタリズマブ、リツキシマブ、アレムツズマブ、ダクリズマブ、エファリズマブ、ゴリムマブ、セルトリズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、パリビズマブ、アブシキシマブ、バシリキシマブ、イブリツモマブ、オマリズマブ、エクリズマブ、アブシキシマブ、アリロクマブ、バシリキシマブ、ベリムマブ、ブリナツモマブ、ブレンツキシマブ、カナキヌマブ、カプロマブ、ダラツムマブ、デノスマブ、ジヌツキシマブ、エクリズマブ、エロツズマブ、エボロクマブ、イダルシズマブ、イピリムマブ、メポリズマブ、ネシツムマブ、ニボルマブ、オビヌツズマブ、オファツムマブ、パリビズマブ、ペムブロリズマブ、ラムシルマブ、ラキシバクマブ、エクキヌマブ、シルツキシマブ、トシリズマブ、ウステキヌマブ、アラシズマブ、デノスマブ、ブロソズマブ、ロモソズマブ、スタムルマブ、アリロクマブ、アスクリンバクマブ、エノチクマブ、エビナクマブ、エボロクマブ、イクルクマブ、インクラクマブ、ネスバクマブ、オルチクマブ、ラムシルマブ、リヌクマブ、ベセンクマブ、ボコシズマブ、カプラシズマブ、デムシズマブ、エタラシズマブ、イダルシズマブ、ラルパンシズマブ、タドシズマブ、アデュカヌマブ、アチヌマブ、ファシヌマブ、フルラヌマブ、ガンテネルマブ、オピシヌマブ、バピヌズマブ、クレネズマブ、オザネズマブ、ポネズマブ、レファネズマブ、ソラネズマブ、タネズマブ、ベドリズマブである、請求項45に記載の方法。
- 遺伝子操作された哺乳動物細胞によって産生される1種類以上の組み換えポリペプチドのグリコシル化プロファイルを変化させる方法であって、
(a)その操作された哺乳動物細胞を、その1種類以上の組み換えポリペプチドを産生させるのに適した条件下にて、請求項1〜39のいずれか1項に記載の培地の中で培養し;
(b)その1種類以上の組み換えポリペプチドを産生させることを含んでいて、その1種類以上の組み換えポリペプチドが、請求項1〜39のいずれか1項に記載の培地の中で培養されない哺乳動物細胞によって産生される組み換えポリペプチドと比べて変化したグリコシル化プロファイルを有する方法。 - 前記変化したグリコシル化プロファイルが、変化した末端マンノースグリカン種を含む、請求項49に記載の方法。
- 前記変化したグリコシル化プロファイルが、マンノース-5-N-アセチルグリコサミン-2(Man5)、マンノース-6-N-アセチルグリコサミン-2(Man6)、マンノース-3-N-アセチルグルコサミン-4(G0)、マンノース-3-N-アセチルグルコサミン-4-フコース(G0F)、マンノース-3-N-アセチルグルコサミン-4-ガラクトース-1-フコース(G1F)、マンノース-3-N-アセチルグルコサミン-4-ガラクトース-2-フコース(G2F)から選択された1種類以上のグリカン種の変化を含む、請求項49に記載の方法。
- グリカン種の総和に対する前記末端マンノースグリカン種の比が約40%〜約50%変化する、請求項49〜51のいずれか1項に記載の方法。
- 前記1種類以上の組み換えポリペプチドが、抗体またはそのフラグメントである、請求項49〜52のいずれか1項に記載の方法。
- 前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項53に記載の方法。
- 前記モノクローナル抗体が、増殖している細胞の増殖を抑制する、請求項54に記載の方法。
- 前記抗体またはそのフラグメントが結合するのが、HER2、TNF-α、VEGF-A、α4-インテグリン、CD20、CD52、CD25、CD11a、EGFR、呼吸器系合胞体ウイルス(RSV)、糖タンパク質IIb/IIIa、IgG1、IgE、補体成分5(C5)、B細胞活性化因子(BAFF)、CD19、CD30、インターロイキン-1β(IL-1β)、前立腺特異的膜抗原(PSMA)、CD38、RANKL、GD2、SLAMF7(CD319)、プロタンパク質変換酵素サブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)、ダビガトラン、細胞傷害性Tリンパ球結合タンパク質4(CTLA4)、インターロイキン-5(IL-5)、プログラムされた細胞死タンパク質(PD-1)、VEGFR2(KDR)、炭疽菌の保護抗原(PA)、インターロイキン-17(IL-17)、インターロイキン-6(IL-6)、インターロイキン-6受容体(IL6R)、インターロイキン-12(IL-12)、インターロイキン-23(IL-23)、スクレロスチン(SOST)、ミオスタチン(GDF-8)、アクチビン受容体様キナーゼ1、デルタ様リガンド4(DLL4)、アンジオポエチン3、VEGFR1、セレクチン、酸化された低密度リポタンパク質(oxLDL)、血小板由来増殖因子受容体β、ニューロピリン1、フォンビルブラント因子(vWF)、インテグリンαvβ3、神経アポトーシス調節プロテイナーゼ1、インテグリンαIIbβ3、β-アミロイド、レティキュロン4(RXN4)/神経突起成長インヒビター(NOGO-A)、神経成長因子(NGF)、LINGO-1、ミエリン結合糖タンパク質、インテグリンα4β7のいずれかである、請求項53に記載の方法。
- 前記モノクローナル抗体が、トラスツズマブ、ペルツズマブ、インフリキシマブ、アダリムマブ、ベバシズマブ、ラニビズマブ、ナタリズマブ、リツキシマブ、アレムツズマブ、ダクリズマブ、エファリズマブ、ゴリムマブ、セルトリズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、パリビズマブ、アブシキシマブ、バシリキシマブ、イブリツモマブ、オマリズマブ、エクリズマブ、アブシキシマブ、アリロクマブ、バシリキシマブ、ベリムマブ、ブリナツモマブ、ブレンツキシマブ、カナキヌマブ、カプロマブ、ダラツムマブ、デノスマブ、ジヌツキシマブ、エクリズマブ、エロツズマブ、エボロクマブ、イダルシズマブ、イピリムマブ、メポリズマブ、ネシツムマブ、ニボルマブ、オビヌツズマブ、オファツムマブ、パリビズマブ、ペムブロリズマブ、ラムシルマブ、ラキシバクマブ、エクキヌマブ、シルツキシマブ、トシリズマブ、ウステキヌマブ、アラシズマブ、デノスマブ、ブロソズマブ、ロモソズマブ、スタムルマブ、アリロクマブ、アスクリンバクマブ、エノチクマブ、エビナクマブ、エボロクマブ、イクルクマブ、インクラクマブ、ネスバクマブ、オルチクマブ、ラムシルマブ、リヌクマブ、ベセンクマブ、ボコシズマブ、カプラシズマブ、デムシズマブ、エタラシズマブ、イダルシズマブ、ラルパンシズマブ、タドシズマブ、アデュカヌマブ、アチヌマブ、ファシヌマブ、フルラヌマブ、ガンテネルマブ、オピシヌマブ、バピヌズマブ、クレネズマブ、オザネズマブ、ポネズマブ、レファネズマブ、ソラネズマブ、タネズマブ、ベドリズマブである、請求項54に記載の方法。
- 操作された哺乳動物細胞によって産生される1種類以上の組み換えポリペプチドの高分子量種または低分子量種の量を変化させる方法であって、
(a)その哺乳動物細胞を、その1種類以上の組み換えポリペプチドを産生させるのに適した条件下にて、請求項1〜39のいずれか1項に記載の培地の中で培養し;
(b)その1種類以上の組み換えポリペプチドを産生させることを含んでいて、その1種類以上の組み換えポリペプチドは、請求項1〜39のいずれか1項に記載の培地の中で培養されない哺乳動物細胞によって産生される組み換えポリペプチドと比べて高分子量種または低分子量種の量が減少している方法。 - 前記1種類以上の組み換えポリペプチドは高分子量種の量が減少している、請求項58に記載の方法。
- 前記1種類以上の組み換えポリペプチドは低分子量種の量が減少している、請求項58に記載の方法。
- 前記低分子量種が、完全には組み立てられていない、および/または折り畳まれていないポリペプチドフラグメントを含む、請求項60に記載の方法。
- 前記高分子量種が、組み換えポリペプチドのサブユニットを2つ以上含む、請求項59に記載の方法。
- (1)非凝集物、(2)低分子量種、(3)高分子量種の総和に対する低分子量種のパーセント比が、請求項1〜39のいずれか1項に記載の培地の中で培養されない哺乳動物細胞によって産生される組み換えポリペプチドでのパーセント比と比べて変化している、請求項60または61に記載の方法。
- (1)非凝集物、(2)低分子量種、(3)高分子量種の総和に対する高分子量種のパーセント比が、請求項1〜39のいずれか1項に記載の培地の中で培養されない哺乳動物細胞によって産生される組み換えポリペプチドでのパーセント比と比べて変化している、請求項59または62に記載の方法。
- 前記1種類以上の組み換えポリペプチドが、抗体またはそのフラグメントである、請求項58〜64のいずれか1項に記載の方法。
- 前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項65に記載の方法。
- 前記モノクローナル抗体が、増殖している細胞の増殖を抑制する、請求項66に記載の方法。
- 前記抗体またはそのフラグメントが結合するのが、HER2、TNF-α、VEGF-A、α4-インテグリン、CD20、CD52、CD25、CD11a、EGFR、呼吸器系合胞体ウイルス(RSV)、糖タンパク質IIb/IIIa、IgG1、IgE、補体成分5(C5)、B細胞活性化因子(BAFF)、CD19、CD30、インターロイキン-1β(IL-1β)、前立腺特異的膜抗原(PSMA)、CD38、RANKL、GD2、SLAMF7(CD319)、プロタンパク質変換酵素サブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)、ダビガトラン、細胞傷害性Tリンパ球結合タンパク質4(CTLA4)、インターロイキン-5(IL-5)、プログラムされた細胞死タンパク質(PD-1)、VEGFR2(KDR)、炭疽菌の保護抗原(PA)、インターロイキン-17(IL-17)、インターロイキン-6(IL-6)、インターロイキン-6受容体(IL6R)、インターロイキン-12(IL-12)、インターロイキン-23(IL-23)、スクレロスチン(SOST)、ミオスタチン(GDF-8)、アクチビン受容体様キナーゼ1、デルタ様リガンド4(DLL4)、アンジオポエチン3、VEGFR1、セレクチン、酸化された低密度リポタンパク質(oxLDL)、血小板由来増殖因子受容体β、ニューロピリン1、フォンビルブラント因子(vWF)、インテグリンαvβ3、神経アポトーシス調節プロテイナーゼ1、インテグリンαIIbβ3、β-アミロイド、レティキュロン4(RXN4)/神経突起成長インヒビター(NOGO-A)、神経成長因子(NGF)、LINGO-1、ミエリン結合糖タンパク質、インテグリンα4β7のいずれかである、請求項65に記載の方法。
- 前記モノクローナル抗体が、トラスツズマブ、ペルツズマブ、インフリキシマブ、アダリムマブ、ベバシズマブ、ラニビズマブ、ナタリズマブ、リツキシマブ、アレムツズマブ、ダクリズマブ、エファリズマブ、ゴリムマブ、セルトリズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、パリビズマブ、アブシキシマブ、バシリキシマブ、イブリツモマブ、オマリズマブ、エクリズマブ、アブシキシマブ、アリロクマブ、バシリキシマブ、ベリムマブ、ブリナツモマブ、ブレンツキシマブ、カナキヌマブ、カプロマブ、ダラツムマブ、デノスマブ、ジヌツキシマブ、エクリズマブ、エロツズマブ、エボロクマブ、イダルシズマブ、イピリムマブ、メポリズマブ、ネシツムマブ、ニボルマブ、オビヌツズマブ、オファツムマブ、パリビズマブ、ペムブロリズマブ、ラムシルマブ、ラキシバクマブ、エクキヌマブ、シルツキシマブ、トシリズマブ、ウステキヌマブ、アラシズマブ、デノスマブ、ブロソズマブ、ロモソズマブ、スタムルマブ、アリロクマブ、アスクリンバクマブ、エノチクマブ、エビナクマブ、エボロクマブ、イクルクマブ、インクラクマブ、ネスバクマブ、オルチクマブ、ラムシルマブ、リヌクマブ、ベセンクマブ、ボコシズマブ、カプラシズマブ、デムシズマブ、エタラシズマブ、イダルシズマブ、ラルパンシズマブ、タドシズマブ、アデュカヌマブ、アチヌマブ、ファシヌマブ、フルラヌマブ、ガンテネルマブ、オピシヌマブ、バピヌズマブ、クレネズマブ、オザネズマブ、ポネズマブ、レファネズマブ、ソラネズマブ、タネズマブ、ベドリズマブである、請求項66に記載の方法。
- 操作された哺乳動物細胞によって産生される1種類以上の組み換えポリペプチドの酸性または塩基性の電荷種の量を変化させる方法であって、
(a)その哺乳動物細胞を、その1種類以上の組み換えポリペプチドを産生させるのに適した条件下にて、請求項1〜39のいずれか1項に記載の培地の中で培養し;
(b)その1種類以上の組み換えポリペプチドを産生させることを含んでいて、その1種類以上の組み換えポリペプチドは、請求項1〜39のいずれか1項に記載の培地の中で培養されない哺乳動物細胞によって産生される組み換えポリペプチドと比べて酸性電荷種の量が減少している方法。 - (1)酸性電荷種、(2)主要電荷種、(3)塩基性電荷種の総和に対する酸性または塩基性の電荷種のパーセント比が、請求項1〜39のいずれか1項に記載の培地の中で培養されない哺乳動物細胞によって産生される組み換えポリペプチドと比べて低下している、請求項70に記載の方法。
- 前記1種類以上の組み換えポリペプチドが、抗体またはそのフラグメントである、請求項70または71に記載の方法。
- 前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項70〜72のいずれか1項に記載の方法。
- 前記抗体またはそのフラグメントが結合するのが、HER2、TNF-α、VEGF-A、α4-インテグリン、CD20、CD52、CD25、CD11a、EGFR、呼吸器系合胞体ウイルス(RSV)、糖タンパク質IIb/IIIa、IgG1、IgE、補体成分5(C5)、B細胞活性化因子(BAFF)、CD19、CD30、インターロイキン-1β(IL-1β)、前立腺特異的膜抗原(PSMA)、CD38、RANKL、GD2、SLAMF7(CD319)、プロタンパク質変換酵素サブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)、ダビガトラン、細胞傷害性Tリンパ球結合タンパク質4(CTLA4)、インターロイキン-5(IL-5)、プログラムされた細胞死タンパク質(PD-1)、VEGFR2(KDR)、炭疽菌の保護抗原(PA)、インターロイキン-17(IL-17)、インターロイキン-6(IL-6)、インターロイキン-6受容体(IL6R)、インターロイキン-12(IL-12)、インターロイキン-23(IL-23)、スクレロスチン(SOST)、ミオスタチン(GDF-8)、アクチビン受容体様キナーゼ1、デルタ様リガンド4(DLL4)、アンジオポエチン3、VEGFR1、セレクチン、酸化された低密度リポタンパク質(oxLDL)、血小板由来増殖因子受容体β、ニューロピリン1、フォンビルブラント因子(vWF)、インテグリンαvβ3、神経アポトーシス調節プロテイナーゼ1、インテグリンαIIbβ3、β-アミロイド、レティキュロン4(RXN4)/神経突起成長インヒビター(NOGO-A)、神経成長因子(NGF)、LINGO-1、ミエリン結合糖タンパク質、インテグリンα4β7のいずれかである、請求項72に記載の方法。
- 前記モノクローナル抗体が、トラスツズマブ、ペルツズマブ、インフリキシマブ、アダリムマブ、ベバシズマブ、ラニビズマブ、ナタリズマブ、リツキシマブ、アレムツズマブ、ダクリズマブ、エファリズマブ、ゴリムマブ、セルトリズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、パリビズマブ、アブシキシマブ、バシリキシマブ、イブリツモマブ、オマリズマブ、エクリズマブ、アブシキシマブ、アリロクマブ、バシリキシマブ、ベリムマブ、ブリナツモマブ、ブレンツキシマブ、カナキヌマブ、カプロマブ、ダラツムマブ、デノスマブ、ジヌツキシマブ、エクリズマブ、エロツズマブ、エボロクマブ、イダルシズマブ、イピリムマブ、メポリズマブ、ネシツムマブ、ニボルマブ、オビヌツズマブ、オファツムマブ、パリビズマブ、ペムブロリズマブ、ラムシルマブ、ラキシバクマブ、エクキヌマブ、シルツキシマブ、トシリズマブ、ウステキヌマブ、アラシズマブ、デノスマブ、ブロソズマブ、ロモソズマブ、スタムルマブ、アリロクマブ、アスクリンバクマブ、エノチクマブ、エビナクマブ、エボロクマブ、イクルクマブ、インクラクマブ、ネスバクマブ、オルチクマブ、ラムシルマブ、リヌクマブ、ベセンクマブ、ボコシズマブ、カプラシズマブ、デムシズマブ、エタラシズマブ、イダルシズマブ、ラルパンシズマブ、タドシズマブ、アデュカヌマブ、アチヌマブ、ファシヌマブ、フルラヌマブ、ガンテネルマブ、オピシヌマブ、バピヌズマブ、クレネズマブ、オザネズマブ、ポネズマブ、レファネズマブ、ソラネズマブ、タネズマブ、ベドリズマブである、請求項70〜73のいずれか1項に記載の方法。
- 前記培地が基本培地である、請求項49〜75のいずれか1項に記載の方法。
- 前記培地が流加培地である、請求項49〜75のいずれか1項に記載の方法。
- (a)(i)哺乳動物の細胞を培養する基本培地および/または(ii)哺乳動物の細胞を培養する流加培地と;
(b)リチウムイオンの1種類以上の供給源
を含むキット。 - (c)エタノール、および/または(d)1種類以上の脂肪酸をさらに含む、請求項78に記載のキット。
- 前記1種類以上の脂肪酸は、酪酸(C4)、吉草酸(C5)、カプロン酸(C6)、エナント酸(C7)、カプリル酸(C8)、ペラルゴン酸(C9)、カプリン酸(C10)、ウンデシル酸(C11)、ラウリン酸(C12)、トリデシル酸(C13)、ミリスチン酸(C14)、ペンタデカン酸(C15)、パルミチン酸(C16)、マルガリン酸(C17)、ステアリン酸(C18)、ノナデシル酸(C19)、アラキジン酸(C20)、ヘンイコシル酸(C21)、ベヘン酸(C22)、トリコシル酸(C23)、リグノセリン酸(C24)、ペンタコシル酸(C25)、セロチン酸(C26)、ヘプタコシル酸(C27)、モンタン酸(C28)、ノナコシル酸(C29)、メリシン酸(C30)、ヘントリアコンチル酸(C31)、ラッセル酸(C32)、プシリン酸(C33)、ゲジン酸(C34)、セロプラスチン酸(C35)、ヘキサトリアコンチル酸(C36)、ヘプタトリアコンタン酸(C37)、オクタトリアコンタン酸(C38)からなる群より選択される、請求項79に記載のキット。
- 前記1種類以上の脂肪酸は、チモール、酢酸コレステリル、オクタン酸メチル、1-オクタノイル-rac-グリセロール、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、コレステロール、パルミチン酸、ステアリン酸、ミリスチン酸のうちの1種類以上より選択される、請求項79に記載のキット。
- (e)哺乳動物細胞を培養するための指示書をさらに含む、請求項78〜81のいずれか1項に記載のキット。
- リチウムイオンの前記1種類以上の供給源は、酢酸リチウム、塩化リチウム、炭酸リチウム、オキシ酪酸リチウム、オロチン酸リチウム、臭化リチウム、クエン酸リチウム、フッ化リチウム、ヨウ化リチウム、硝酸リチウム、硫酸リチウムのうちの1種類以上の群より選択される、請求項77〜81のいずれか1項に記載のキット。
- 組み換えポリペプチドであって、操作された哺乳動物細胞を、その組み換えポリペプチドを産生させるのに適した条件下にて、請求項1〜39のいずれか1項に記載の培地の中で培養することによって産生される組み換えポリペプチド。
- 前記ポリペプチドが、抗体またはそのフラグメントである、請求項84に記載の組み換えポリペプチド。
- 前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項84または85に記載の組み換えポリペプチド。
- 前記モノクローナル抗体が、増殖している細胞の増殖を抑制する、請求項86に記載の組み換えポリペプチド。
- 前記抗体またはそのフラグメントが結合するのが、HER2、TNF-α、VEGF-A、α4-インテグリン、CD20、CD52、CD25、CD11a、EGFR、呼吸器系合胞体ウイルス(RSV)、糖タンパク質IIb/IIIa、IgG1、IgE、補体成分5(C5)、B細胞活性化因子(BAFF)、CD19、CD30、インターロイキン-1β(IL-1β)、前立腺特異的膜抗原(PSMA)、CD38、RANKL、GD2、SLAMF7(CD319)、プロタンパク質変換酵素サブチリシン/ケキシン9型(PCSK9)、ダビガトラン、細胞傷害性Tリンパ球結合タンパク質4(CTLA4)、インターロイキン-5(IL-5)、プログラムされた細胞死タンパク質(PD-1)、VEGFR2(KDR)、炭疽菌の保護抗原(PA)、インターロイキン-17(IL-17)、インターロイキン-6(IL-6)、インターロイキン-6受容体(IL6R)、インターロイキン-12(IL-12)、インターロイキン-23(IL-23)、スクレロスチン(SOST)、ミオスタチン(GDF-8)、アクチビン受容体様キナーゼ1、デルタ様リガンド4(DLL4)、アンジオポエチン3、VEGFR1、セレクチン、酸化された低密度リポタンパク質(oxLDL)、血小板由来増殖因子受容体β、ニューロピリン1、フォンビルブラント因子(vWF)、インテグリンαvβ3、神経アポトーシス調節プロテイナーゼ1、インテグリンαIIbβ3、β-アミロイド、レティキュロン4(RXN4)/神経突起成長インヒビター(NOGO-A)、神経成長因子(NGF)、LINGO-1、ミエリン結合糖タンパク質、インテグリンα4β7のいずれかである、請求項85に記載の組み換えポリペプチド。
- 前記モノクローナル抗体が、トラスツズマブ、ペルツズマブ、インフリキシマブ、アダリムマブ、ベバシズマブ、ラニビズマブ、ナタリズマブ、リツキシマブ、アレムツズマブ、ダクリズマブ、エファリズマブ、ゴリムマブ、セルトリズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、パリビズマブ、アブシキシマブ、バシリキシマブ、イブリツモマブ、オマリズマブ、エクリズマブ、アブシキシマブ、アリロクマブ、バシリキシマブ、ベリムマブ、ブリナツモマブ、ブレンツキシマブ、カナキヌマブ、カプロマブ、ダラツムマブ、デノスマブ、ジヌツキシマブ、エクリズマブ、エロツズマブ、エボロクマブ、イダルシズマブ、イピリムマブ、メポリズマブ、ネシツムマブ、ニボルマブ、オビヌツズマブ、オファツムマブ、パリビズマブ、ペムブロリズマブ、ラムシルマブ、ラキシバクマブ、エクキヌマブ、シルツキシマブ、トシリズマブ、ウステキヌマブ、アラシズマブ、デノスマブ、ブロソズマブ、ロモソズマブ、スタムルマブ、アリロクマブ、アスクリンバクマブ、エノチクマブ、エビナクマブ、エボロクマブ、イクルクマブ、インクラクマブ、ネスバクマブ、オルチクマブ、ラムシルマブ、リヌクマブ、ベセンクマブ、ボコシズマブ、カプラシズマブ、デムシズマブ、エタラシズマブ、イダルシズマブ、ラルパンシズマブ、タドシズマブ、アデュカヌマブ、アチヌマブ、ファシヌマブ、フルラヌマブ、ガンテネルマブ、オピシヌマブ、バピヌズマブ、クレネズマブ、オザネズマブ、ポネズマブ、レファネズマブ、ソラネズマブ、タネズマブ、ベドリズマブである、請求項86に記載の組み換えポリペプチド。
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JP2019526265A (ja) | 組換えタンパク質の生産プロファイルを改変するための方法 |
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